JP2007302702A - 哺乳類における新生物疾患を阻害する薬剤 - Google Patents

Abstract

【課題】肉腫、線維肉腫、膠芽腫、悪性腫瘍、黒色腫、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、白血病及び他の新生物症状を含む幅広いスペクトルの新生物疾患を治療する薬剤を提供すること。
【解決手段】プロラクチン減少剤及びプロラクチン増強剤を用いた哺乳類における新生物の成長を阻害するための薬剤であって、該プロラクチン減少剤は、該哺乳類の概日プロラクチンプロフィールを調整して同種同性の健康な哺乳類の概日プロラクチンプロフィールと一致させ又は近づけるように、２４時間周期のうちの所定の時間に該哺乳類へ投与するものであり、該所定の時間は、２４時間周期のうちの間隔をあけた複数の時点のそれぞれにおける前記哺乳類の血液プロラクチンレベルを、該哺乳類と同種同性の健康な哺乳類の日毎のベースラインプロラクチンプロフィールにおける対応する血液プロラクチンレベルと比較して決定するものである。
【選択図】なし

Description

本発明は、新生物及びその転移を阻害するための薬剤に関する。より詳細には、本発明は、新生物及びその転移を阻害するか又は除くために概日プロラクチンリズムの変更を利用する薬剤に関する。

プロラクチンと概日リズム
研究は、概日リズムがプロラクチン活性の調節に重要な役割を果たし、またその逆もあることを示している。
非特許文献１〜６等の刊行物は、どのように概日リズムがプロラクチン活性を調節しているかを説明している。その結果としての、様々なタイプの細胞のプロラクチンに対する応答性における日毎(daily)の変化は、脂肪貯蔵、インスリンに対する脂肪新生応答、渡りの習性、変態、生殖、成長、ハトのそのうの発達及び乳房の発達を含む数多くの生理学的過程の調節において重要な役割を有している(非特許文献１、５、７)。前記の生理学的活性の一つの調節において、その活性に対しプロラクチンが刺激性又は阻害性の効果をもたらすか、又はそれに対し何の効果も示さないことが観察されうる。これらの変化する効果は、血漿プロラクチン濃度のリズムの日毎の内因性ピークの時間（即ち頂点位相）の働き、又は外因性ホルモン（又はプロラクチンレベルを増加させる物質）の日毎の注射の時間若しくは内因性ピークと誘導された何かのピークとの関係の働きであることが、最近動物において示されている。さらに、区別しうる日毎のインターバルに制限された高いレベルのプロラクチンは、動物において、一日を通じて一定の高レベルで行うよりさらに大きな生理学的（例えば代謝的）な効果を有する(非特許文献８及び９)。このような知見は、あるタイプの細胞による、プロラクチンへの日毎の応答リズムの存在を示す。

何かのホルモンに対する生理学的応答における日毎の変化の第一の証拠は、白首スズメ(white-throated sparrow)におけるプロラクチンに対する肥満応答の劇的な多様性である(非特許文献１０)。１６時間の日毎の光周期の正午における注射は、３倍の体脂肪レベルの増加を刺激した一方、光周期の早いうちに与えられた注射は、脂肪貯蔵を５０％減少させた。このような、プロラクチンに対する肥満応答における日毎的な多様性は、続いて、全ての主要な脊椎動物クラスの多くの種において示された(非特許文献５、６)。これらは、このような一時的な組織の基本的な特質を示している。肥満応答リズムは持続的な光条件下でも維持される(非特許文献１１)。このことは、他の多くの内因性の日毎の変動と同様、これが概日リズムであることを示している。

概日リズムは、脂質代謝及び体脂肪貯蔵等の多くの生理学的活性の調節において重要な役割を果たすことを、追加の研究が示している(非特許文献３、５、６、８、１２、１３、１４)。これらの実験は、（標的細胞における）これらのホルモンに対する脂質調節ホルモン（刺激）の概日リズム及び概日応答の相互作用は、脂質新生及び脂肪貯蔵の量を決定することを示している。従って、太った動物において、プロラクチンに対し最大肥満応答する日毎のインターバルの間に、プロラクチンの高い血漿濃度（刺激として働く）が起こる。しかしやせた動物においては、一日のうちの応答しない他の時間において起こる(非特許文献５、６、１５)。同様に、血漿インスリン（刺激として働く）レベルは、太ったハムスターにおいて、インスリンに対し最大肝臓脂質新生応答する日毎のインターバルの間に最大となるが、やせたハムスターでは一日のうちの異なる時間において最大になる(非特許文献１６)。これらの刺激及び応答リズムの相関係は、太った又はやせた動物のいずれかを産生する、神経伝達物質剤及び（プロラクチンを含む）
ホルモン注射により順番にリセットされうる神経概日中枢の発現であると考えられる(非特許文献２〜４、１７〜１９)。従って、時間をきめたプロラクチンの投与又は増強は、ホルモンに対する応答性の概日リズムを受ける組織に直接（例えば脂質新生において肝臓に）働いて正味の生理学的効果の即座な変動をもたらし(非特許文献８)、また、多重振動概日ペースメーカーシステムの概日神経内分泌振動の一つをリセットすることによって間接的に働き、脂質代謝を制御する（神経、ホルモン及び組織の）多重概日発現間の異なる相関係を確立することが示されている(非特許文献２〜４、１７〜１９)。

本発明者らは、これまで、プロラクチン又は循環するプロラクチンレベルに影響する物質が、概日リズムにも影響を与え、事実このようなリズムを（これらが同性のやせて健康で若い個体のリズムによりよく似るように）修正し、このようなリズムを（修正されたリズムが修正された条件を維持するよう）リセットするのに使用しうることを示してきた。特許文献１〜６等を参照。これらの本発明者らによる従来の研究は、さまざまな生理学的疾患（肥満、糖尿病、じゅく状硬化、高血圧、免疫不全その他）に苦しめられているヒトにおいて臨床的に試験を行い、良好な結果を得ている。
特に、特許文献２及び1994年6月23日に出願されたその一部継続出願である特許文献７において、本発明者らは、脊椎動物又はヒトの被検者において体脂肪貯蔵を減少させ、インスリン耐性、高インスリン症及び高血糖症並びに他の代謝疾患、特に第II型糖尿病に関連するもののうち少なくとも１つを減少させる方法を開示する。より具体的には、前記出願は：（i）正常な（健康な）（肥満、疾患又は他の不全がない）ヒト又は脊椎動物の日毎のプロラクチンレベルのサイクルを評価し；（ii）ヒト又は脊椎動物の異常な日毎のプロラクチンレベルのサイクルを診断し；（iii）そのような異常なプロラクチンレベルのサイクルを正常化するためになされるために必要な適切な調整を決定するための方法を開示している。この方法は、プロラクチン減少剤及び／又はプロラクチン増強剤のうち少なくとも一つを、２４時間の周期内の第１の所定の一つ以上の時間（プロラクチン減少剤のみが投与される場合）、及び／又は２４時間の周期の第２の所定の一つ以上の時間（プロラクチン増強剤が投与される場合）に投与することを含む。この治療は、数日、数週間又は数か月続けられた場合、異常又は非正常なプロラクチンレベルのサイクルの長期的な調整をもたらし、それらが正常なプロラクチンレベルのサイクルに一致（又は近づけられ）る。多くの場合において、この利益は治療を停止した後でさえ長期間持続する。結果として、さまざまな代謝疾患に関連する異常な生理学的パラメーターは正常なレベルに修復されるか正常なレベルに近づくよう修正される。この方法は２４時間周期の内少なくとも一部に異常なプロラクチンレベルを有している全てのヒトに適用されているが、重要なことに、新生物疾患を有するヒトにそれを適用する可能性の教示又はこの方法を新生物症状の治療に適用する可能性の教示は何もなかった。

コルチコステロンと概日リズム
ヒトにおけるコルチコステロンの分泌速度は、早朝において大きいが夜更けには小さい。血漿コルチコステロンのレベルは朝の起床１時間前の０．２ｍｃｇ／ｍｌの高さから１２ＡＭ頃の０．０５ｍｃｇ／ｍｌの低さまでにわたる。この効果は、コルチコステロンの分泌をもたらす視床下部からのシグナルの２４時間の周期的変化の結果である。ある哺乳類が睡眠習慣を変更した場合、この周期は対応して変化する。逆に、周期が変化した場合、睡眠習慣が変化する。従ってコルチコステロン投与は、後述されるいくつかの実施例において行われるように、持続的な光照射により光周期が奪われた多くの実験用哺乳類の概日リズムを同調させるのに使用することができる。コルチコステロンの分泌パターンは、種によって異なるが、光周期の暗い及び光照射された部分の間のさまざまな時間インターバルにおいてホルモンをアッセーすることにより容易に決定することができる。
プロラクチンリズムの調整で多くの代謝疾患を制御することは可能であることは当該技術においてよく知られていたが、新生物及び転移に苦しむ哺乳類におけるプロラクチンリズムを調整して同種同性の若く健康でやせた個体に見いだされるリズムと一致させ又は近づけると、新生物及び転移の成長が、非常に顕著な程度に阻害されたことを見いだしたことはまったく驚くべきことで予期しなかったものである。

米国特許出願第08/158,153号明細書 米国特許出願第07/995,292号明細書 米国特許出願第07/719,745号明細書 米国特許出願第07/999,685号明細書 米国特許出願第08/171,569号明細書 米国特許第5,344,832号明細書 米国特許第08/264,558号明細書 Meier，A.H.，Gen．Comp．Endocrinol．3(Suppl 1):488-508，1972 Meier，A.H.，Trans．Am．Fish．Soc．113:422-431，1984 Meier，A.H．et al.，Current Ornithology II(ed Johnston R.E.)303-343，1984 Cincotta，A.H．et al.，J．Endocrinol．120: 385-391，1989 Meier，A.H.，Amer. Zool．15:905-916，1975 Meier，A.H.，Hormonal Correlates of Behavior（eds．Eleftherton and Sprott）469-549，1975 Meier，A.H．et al.，Science 173:1240-1242，1971 Cincotta，A.H．et al.，Horm．Metab．Res．21:64-68，1989 Borer，K.T．in The Hamster: Reproduction and Behavior（ed．Siegel，H.I.）363-408，1985 Meier，A.H．et al.，Gen．Comp．Endocrinol．8:110-114,1967 Meier，A.H．et al.，Proc．Soc．Exp．Biol．Med．137: 408-415，1971 Meier，A.H．et al.，J．Am．Zool．16: 649-659，1976 Cincotta et al.，Life Sciences 45: 2247-2254，1989 Cincotta et al.，Ann．Nutr．Metab．33:305-14，1989 Speiler，R.E．et al.，Nature 271: 469-471，1978 deSouza，C.J．et al.，Chronobiol．Int．4:141-151，1987; Cincotta，A.H．et al.，J．Endocr．103:141-146，1984 Emata，A.C.et al.，J．Exp．Zool．233:29-34，1985 Cincotta，A.H．et al.，Chronobiol．Int'l 10: 244-258，1993 Miller，L.J．et al.，J．Interdisc．Cycles Res．14:85-94，1983

発明の要約
新生物疾患に苦しむ哺乳類（ヒトを含む）が非正常なプロラクチンプロフィールを有することは、長く知られている。ここに、哺乳類（ヒトを含む）の新生物及びそれらの転移が、新生物疾患に苦しむ哺乳類の非正常なプロラクチンプロフィールを修正し、プロフィールが同種同性のやせた、若い健康な哺乳類のプロラクチンプロフィールに近づくか一致するようにすることにより治療されうることが、意外にも発見された。罹患している哺乳類の非正常なプロラクチンプロフィールは、（i）プロラクチンの直接の投与（ii）プロラクチン変調剤即ちプロラクチン増強剤及び／又は減少剤の時間を決めた投与によるプロラクチンプロフィールの調整、又は（iii）（メラトニン等の）プロラクチン増強剤及び（ブロモクリプチン等の）プロラクチン減少剤の時間を決めた投与による、罹患している哺乳類の概日リズムの正常な相及び振幅へのリセットによって修正できる。

従って、本発明の１つの特徴は哺乳類における新生物及びそれらの転移の治療又は阻害剤であって、哺乳類への２４時間の周期中の所定の１つ以上の時間におけるプロラクチン減少剤及び／又は増強剤の投与、又はプロラクチン増強剤及び減少剤の時間を決めた一連の投与による、哺乳類の非正常なプロラクチンプロフィールの、それが同種同性の若く健康な哺乳類のプロラクチンプロフィールに近づくか一致するような修正をもたらす。
本発明の他の特徴は、変化した被検者のプロラクチンリズムがリセットされこのリセットされた状態が治療終了後であっても延長した期間持続しその結果新生物の成長の阻害が持続するまで、プロラクチン減少剤及び／又は増強剤の前記時間を決めた投与を続けることによる、新生物及びそれらの転移を長期的基準で治療又は阻害する薬剤である。
従って、本発明はプロラクチンの概日リズムを調整することによる、哺乳類における新生物の成長の治療又は阻害に対するものである。本発明は、治療を受けた被検者のプロラクチンの概日リズムを健康な若い被検者のものと似るように正常化することにより新生物成長の阻害を達成する。

本発明の利点は、以下のことを含む： −化学療法剤の衰弱効果なしに新生物に対抗する能力。
一次新生物塊の除去にしばしば伴う新生物の転移的成長を阻害する能力。
本発明の新生物成長阻害及び治療の利益は、プロラクチン変調剤の投与が中止されたあとであっても長期間持続しうる。

本発明の他の特徴及び利点は、添付された図面と関連して理解される以下の記載から明白となる。
本明細書で述べられる全ての特許、特許出願及び文献は、参照によりここに組み込まれる。用語において不一致がある場合、その定義を含む本開示が制御する。
「プロラクチン減少剤」とは、哺乳類に投与された際、循環するプロラクチンレベルを減少させる能力を有する物質又は組成物を示し；「プロラクチン増強剤」とは、循環するプロラクチンレベルを上昇させる能力を有する物質又は組成物を示し、プロラクチン自身を含む。
プロラクチン減少剤及びプロラクチン増強剤は、合わせて「プロラクチン変調剤」と称される。
被検者の「プロラクチンプロフィール」とは、２４時間の周期の全て又は一部分にわたる、循環するプロラクチンレベル及びそれらの変動の図示であり、従って被検者の血漿プロラクチンの日毎のリズムの全部又は一部の表現である。

「健康」とは、悪性疾患、免疫系不全及び代謝の非正常を含む疾患を有しない若くやせた被検者である。健康な被検者とは、正常なプロラクチンプロフィール、即ち、被検者の種及び性のベースラインから１標準誤差（ＳＥＭ）を超えて逸脱しないプロラクチンプロフィールを有する者である。健康な男及び女のヒトの正常即ちベースラインのプロラクチンプロフィールは図１に図示される。
「偽陽性」を回避するために、一般的に被検者は：（ａ）被検者の日中(daytime)の血液プロラクチンレベルが、日中の間の少なくとも１時間好ましくは少なくとも２時間間隔をおいた２つの（またはそれより多い）時点において少なくともベースラインよりＩＳＥＭ高い；又は（ｂ）被検者の日中の血液プロラクチンレベルが日中の間の１つの時点において少なくともベースラインより２ＳＥＭ高い；又は（ｃ）被検者の夜間(night time)の血液プロラクチンレベルが（（ａ）と同様に）間隔をおいた２つの（またはそれより多い）時点におけるベースラインの少なくとも１ＳＥＭ下である；又は（ｄ）被検者の夜間の血液プロラクチンレベルが夜間の１つの時点においてベースラインの少なくとも２ＳＥＭ下である；又はでない限り非正常なプロラクチンプロフィールを有するとはされない。

ヒトの男性及び女性のプロラクチンベースラインは図１に示される。起きている時間（０７：００−２２：００）の１つのＳＥＭは、男性についてはおよそ１−２ｎｇ／ｍｌであり女性についてはおよそ１−３ｎｇ／ｍｌであり；夜間（２２：００−０７：００）の１つのＳＥＭは男性についてはおよそ３ｎｇ／ｍｌであり女性についてはおよそ３−６ｎｇ／ｍｌである。
ヒトにおいて近づけられるか又は一致させられるべきプロラクチンレベルの日毎のリズム即ちプロフィールの特徴は、０７：００と２２：００との間のほとんど又は全ての時点の間の、低いプロラクチンレベル（男性については２−７ｎｇ／ｍｌ、女性については２−１０ｎｇ／ｍｌ血漿）の達成を含む。
理想的には、ピークプロラクチンレベルもまた、２２：００と０７：００との時間の間（好ましくは１：００と４：００との間）に達成される（このピークは、男性については少なくとも１０ｎｇ／ｍｌ及び最も好ましくは１０−１５ｎｇ／ｍｌの間、女性については少なくとも１５ｎｇ／ｍｌ及び最も好ましくは１５と２５ｎｇ／ｍｌとの間である必要がある）。

新生物疾患におけるプロラクチン変調剤の効果
本発明は、実質的な新生物組織の負担を有する又は一時的な新生物組織塊の除去に続く転移成長の可能性を有する哺乳類において、新生物の成長及びそれらの転移を治療及び阻害する（例えば、新生物が固形の場合、新生物組織の量の減少、又は一次的な腫瘍の除去後の転移負担の減少）薬剤を提供する。これは、２４時間の周期中の所定の時間でのプロラクチン変調剤の投与により達成される。プロラクチン変調剤の投与の時間は、治療を受ける哺乳類のプロラクチンプロフィールを調整し、同性同種の健康な哺乳類のプロラクチンプロフィールに一致させるか近づけるよう選択される。
哺乳類におけるプロラクチン増強剤の投与は、健康な哺乳類におけるプロラクチン分泌のピークに対応する２４時間周期中の時間を決めたインターバルにおいて与えられた場合、新生物成長に対し阻害的であることが見いだされている。概日リズムを規定された光周期又はコルチコステロン注射と同調させた、新生物を有するマウスにおける、プロラクチンの時間を決めた注射は、時間を決めたプロラクチン注射を受容しなかった新生物を有するマウスに比べて、新生物組織負担の減少を発現することが示された。ｉｎ ｖｉｖｏ新生物組織及び転移の阻害応答におけるｉｎ ｖｉｖｏプロラクチン変調の効果は、一日のうちの時間に依存する(time-of-day dependent)ことも見いだされた。

新生物疾患の阻害におけるプロラクチンの一日のうちの時間に依存する役割はまた、外因性プロラクチンに対する新生物成長阻害応答が欠如した特定の日毎のインターバル中において（プロラクチン減少剤の投与により）プロラクチン血液レベルを減少させるマウスについての実験結果によって示される。内因性プロラクチン分泌を阻害するＤ２ドパミンアゴニストであるブロモクリプチンを用いた時間−応答研究は、ブロモクリプチンは、健康な動物におけるプロラクチン分泌の最も低いときに対応する、２４時間の周期のうちの所定の時間に投与された際、新生物及び転移の成長の阻害を増加させることを示す。これらの結果は実施例５に示される。
新生物成長阻害におけるプロラクチンの一日のうちの時間に依存する役割のさらなる確証は、実施例６に示される。この実験においてマウスのプロラクチン血液レベルは、前記実施例５に示される通りプロラクチンに対する新生物成長阻害活性の応答性が欠如する特定の日毎のインターバルの間の、プロラクチン減少剤であるブロモクリプチンの投与により減少し、また、プロラクチンレベルは、プロラクチンに対する新生物成長阻害活性の増加した応答性の、特定の日毎のインターバルを決定するためのプロラクチン増強剤であるメラトニンの投与により増加する。２４時間の周期中の、健康なマウスにおいてプロラクチンレベルがピークとなる時間におけるプロラクチン増強剤の投与と、２４時間の周期中の、プロラクチンレベルが最も低くなる時間におけるプロラクチン減少剤の投与との組み合わせが、新生物の成長に有効な阻害効果を発揮することが見いだされる。

前記結果は、プロラクチンレベルの新生物成長阻害効果、及び外因性プロラクチン（又はプロラクチン増強剤又は減少剤）に対する新生物成長阻害とプロラクチン減少又は増強の１日のうちの時間との関係を示す。
前記実験はマウスにおいて行われたが、それらはヒトを含むプロラクチンの日毎のリズムを有する哺乳類に共通な生理の特徴に依存する。
これらの結果は、プロラクチンの血液レベルは、新生物の成長及びそれらの転移の阻害に関して望ましい結果をもたらすために所定のインターバル内で操作しうることを示す。
本発明によれば、一日のうちの特定の時間における被検者のプロラクチンレベルの変更は、被検者中の新生物の成長を阻害する又は被検者中の転移の成長を阻害する薬剤を提供する。これは、肉腫、悪性腫瘍(carcinomas)、膠芽腫(glioblastoma)、黒色腫、リンパ腫、アデノーマ、及び白血病を含むがこれらに限定されない全てのタイプの新生物について使用することができる。

新生物及びそれらの転移を阻害するプロラクチン変調剤の使用 新生物及び／又は転移を有する被検者のプロラクチンリズムの調整
ある種（及び性）の若い成年の健康な哺乳類、例えば（ホルモン性若しくは代謝性疾患、若しくは癌、又は他の感染若しくは疾患のいずれにも苦しんでいない）ヒトは、高度に予想されうる日毎のプロラクチンレベルリズム即ちプロフィールを有していることが知られている。図１の健康なヒトの男性及び女性のベースライン曲線は、このような若く健康な個体に由来するものである。
刺激（血漿プロラクチン）リズムの日毎のピークとプロラクチンに対する応答（新生物成長阻害）との相関係が、新生物成長阻害活性において重要であることが見いだされている。これらのリズムのいずれかに影響する環境的な及び薬剤学的な因子が、新生物成長に打撃を与えることが期待されうる。

乳癌等の新生物疾患を有するヒトは、プロラクチンリズムを乱しており、これは健康な女性のプロラクチンリズムの、乳癌を有する女性のリズムとの比較において明らかである。これらのリズムはそれぞれ図１及び３に示されている。従って新生物疾患を有するヒトは、（彼らのプロラクチンプロフィールとして表現される）彼らのプロラクチンの日毎のリズムを調整し、正常即ち図１のベースラインプロラクチン曲線と一致させ若しくは近づけることにより顕著な程度の利益を受けることができる。全ての又は一部の非正常なプロフィールが正しい方向に少なくとも２ｎｇ／ｍｌ動いた場合、調整されたプロラクチンプロフィールは正常な即ち健康なプロフィールに近づく。
この調節に先立ち、以下のことが達成されうる：（i）新生物を有するヒトのプロラクチンレベルは、新生物を有するヒトの血液試料を２４時間の周期のうちの特定の間隔をおいたインターバルにおいてアッセイすることにより確かめられる必要があり、且つ（ii）得られる新生物を有するヒトのプロラクチンプロフィールは、同性の健康なヒトのプロラクチンプロフィールと比較される必要がある。
（i）及び（ii）の間の差異に応じて、調整はさらに以下のうちの１又は両方の投与を含む。
（ａ）日中(day time)のプロラクチンレベルが高すぎる場合における、１つの、第１の所定の時間（又は１つを超える第１の所定の時間）における、日中のプロラクチンレベルを減少させるのに効果的な第１の量のプロラクチン減少剤；及び（ｂ）夜間のプロラクチンレベルが低すぎる場合における、１つの、第２の所定の時間（又は複数の第２の所定の時間）における、夜間のプロラクチンレベルを増加させるのに効果的な第２の量のプロラクチン増強剤。

一般的に、プロラクチンレベルを変化させる物質が投与される場合、プロラクチンレベルが適切な一日のうちの時間の間修正されるようにその物質（その薬動力学特性に依存する）がプロラクチンレベルに影響を与えることを許容するために、投与時間に対する適切なアローワンス(allowance)が設けられる必要がある。従って、プロラクチンを変化させる物質は、以下の通り投与される：
（ａ）プロラクチンが投与される場合、それは、プロラクチンレベルが上げられる必要がある時間インターバルにおいて、好ましくは注射により投与される；
（ｂ）プロラクチン以外のプロラクチン増強剤が投与される場合、それは、プロラクチンレベルが上げられる必要がある時間インターバルの間もしくはそれに多少先立って投与される（どのくらい先立つかは薬物動力学的特性に依存する：一般的に０−３時間先立つのが効果的であることが見いだされている）；
（ｃ）プロラクチン減少剤が投与される場合、それもまた、プロラクチンレベルが下げられる必要がある時間の間もしくはそれに多少先立って投与される（ここでも、一般的に０−３時間先立つのが効果的であることが見いだされている）。

本発明において、「プロラクチン増強剤」は、プロラクチン並びに循環プロラクチンレベルを増加させる物質（例えばプロラクチン分泌を刺激することによって）を含む。プロラクチン増強剤の非限定的な例は、プロラクチン；メラトニン；ドーパミンアンタゴニスト例えばメトクロプラミド、ハロペリドール、ピモジド、フェノチアジン、ドムペリドン、スルピリド及びクロルプロマジン；
セロトニンアゴニスト即ちＭＡＯ−Ａ阻害剤例えばパルジリン、合成モルヒネ類似物例えばメサドン；制吐剤例えばメトクロプラミド；エストロゲン；及び他の様々なセロトニンアゴニスト例えばトリプトファン、５−ヒドロキシトリプトファン（５−ＨＴＰ）、フルオキセチン(fluoxetine)、及びデキシフェンフルラミン(dexfenfluramine)を含む。さらに、薬剤学的に許容しうる酸から形成された前記プロラクチン増強化合物の非毒性の塩もまた本発明の実施に有用である。メラトニン及び５−ＨＴＰは本発明の実施に特に有用であることが見いだされている。

プロラクチン減少剤の非限定的な例は、プロラクチン阻害ドーパミンアゴニスト（Ｄ２アゴニスト）例えばドーパミン及び特定の麦角関連プロラクチン阻害化合物を含む。ドーパミンアゴニストの非限定的な例は、２−ブロモ−α−エルゴクリプチン；６−メチル−８β−カルボベンジルオキシ−アミノエチル−１０−α−エルゴリン；８−アシルアミノエルゴリンであり、６−メチル−８−α−（Ｎ−アシル）アミノ−９−エルゴリン及び６−メチル−８α−（Ｎ−フェニルアセチル）アミノ−９−エルゴリン；エルゴコルニン；９，１０−ジヒドロエルゴコルニン；及びＤ−２−ハロ−６−アルキル−８−置換エルゴリン例えばＤ−２−ブロモ−６−メチル−８−シアノメチルエルゴリン；カルビードーパ及びＬ−ドーパ；及びリスリドである。さらに、薬剤学的に許容しうる酸から形成されたプロラクチン減少化合物の非毒性の塩もまた、本発明の実施に有用である。ブロモクリプチン、即ち２−ブロモ−α−エルゴクリプチンは、本発明の実施に特に有用であることが見いだされている。

プロラクチン増強剤又は減少剤により誘導される新生物成長阻害の変調は、ある範囲の用量において用量依存的であることが期待される。
哺乳類の治療において、一般的に、プロラクチン減少剤及び／又は増強剤のそれぞれの用量は、一般的に１日１回、一般的に約１か月から約１年の範囲の期間にわたり、それぞれ与えられる。但し治療は（必要若しくは所望の場合）数か月から数年でも不定的に続けることができる。好ましいプロラクチン減少剤（加速放出ブロモクリプチン）は、体重ｋｇあたり約３マイクログラムから約３００マイクログラム、好ましくは約１０マイクログラムから約１００マイクログラムの範囲の日毎の用量レベルで与えられ、好ましいプロラクチン増強剤のメラトニンは、１日当り体重ｋｇあたり約１０マイクログラムから約８００マイクログラム、好ましくは約１０マイクログラムから約２００マイクログラムの範囲の日毎の用量レベルで与えられ、プロラクチンプロフィールを修正又は変更する。他の好ましいプロラクチン増強剤である５−ヒドロキシトリプトファンは、体重ｋｇあたり約５００マイクログラムから約１３ミリグラム、好ましくは体重ｋｇあたり約１ミリグラムから約２．５ミリグラムの範囲の日毎の用量レベルで与えられる。それぞれの被検者に対する、これらの投与範囲内の正確な用量は特定のプロラクチン変調剤、被検者の年齢、疾患の段階、身体的条件及び治療への応答性に依存する。

哺乳類のプロラクチンプロフィールを調整するために、プロラクチン変化物質のいずれか又は両方の投与は、概日血漿プロラクチンリズムを、同性同種の健康な被検者のものの相及び振幅にリセットするのに十分な時間続けることができ、その時点で治療を終了することができる。被検者が再発に苦しむ場合、被検者のプロラクチンプロフィールを調整し同性同種の健康な被検者のプロラクチンプロフィールと一致させまたは近づけるために治療を再開することができる。リセットに必要な時間は様々であるが、一般的には１か月から１年の範囲内である。ある患者（例えば特に弱い身体的条件の患者又は高齢のもの）では、彼らのプロラクチンリズムを前記期間内でリセットするのが不可能であることがあり、そのような患者はプロラクチン増強剤及び／又は減少剤を用いたより長い、又は持続的な治療が必要となるかもしれない。上記の用量及び時間決めの情報は、ブロモクリプチン、メラトニン、及び５−ヒドロキシトリプトファンのために設計されており、他の薬剤のためには、ここに開示される用量及び時間決めの方法論を用いて変更しなければならないであろう。

本発明の実施において、プロラクチン減少化合物、及び／又はプロラクチン増強剤は、好ましくは経口で、又は皮下、経静脈又は筋肉内注射により、被検者に日毎に投与される。減少剤又は増強剤は、吸入により投与することもできる。経皮送達システム例えばスキンパッチ、並びに坐剤及び他のよく知られた薬剤の投与システムも用いることができる。治療は一般的にヒトにおいて平均約１月から約１年の間続く。この態様によるプロラクチン減少剤及び又はプロラクチン増強剤の投与は、かくして、新生物成長を阻害する身体の能力を制御する神経振動の相及び振幅をリセットし、新生物の成長の阻害を長期的基準（例えば数か月又は数年）において促進する。新生物の成長を阻害する能力の改善は、新生物又は一次的新生物の切除後の転移的再成長の部分的又は全ての切除の観察により評価することができる。新生物負担を直接測定する代わりに、よく知られた腫瘍負担のアッセイ（例えば新生物特異的抗原のアッセイ、核磁気共鳴イメージング、ＣＡＴスキャンニング、Ｘ線、超音波、血液試料中の血液が運ぶ新生物細胞の計数等）を、プロラクチン変調剤の時間を決めた投与による治療の効果の評価に用いることができる。

一般的には、ヒト被検者のためのおよそ２６週の治療期間のためのプロラクチン変調剤投与の時間ぎめを最初に決定するために、以下のより具体的なガイドラインに従って行われる。
（i）０６００時から１０００時に、新生物疾患を有しないヒトにおいて見られる昼間の(diurnal)プロラクチンレベルの正常な範囲の１ＳＥＭ以内に、昼間のプロラクチンレベルを減少させるのに十分な用量範囲においてプロラクチン減少剤を与える。
（ii）就寝時間前又は就寝時間において、少なくとも新生物疾患を有しない正常で健康なヒトのレベルまで血清プロラクチンレベルを増加させるのに十分な用量範囲においてプロラクチン増強剤を与える。

異常なプロラクチンプロフィールを有する哺乳類の被検者（動物又はヒト）のプロラクチンプロフィールをリセットしプロラクチンプロフィールを同種同性の若く健康な者（例えば図１のベースライン）に一致させ又は近づけることによる新生物成長の阻害に対する本発明の特徴は、治療される被検者の（治療前の）異常なプロラクチンプロフィールにより決められる所定の用量及び時間におけるプロラクチン減少剤又はプロラクチン増強剤又は両方の投与を含む。この修正をもたらすのに要求されるプロラクチン減少剤及び／又は増強剤の量は前記と同じ範囲内であるが、これらのプロラクチン変調剤の投与時間は、どのくらい及びいつ異常なプロフィールが正常なプロラクチンプロフィール（ベースライン曲線）と異なっているかを参照して決定される。投与の量及び時間ぎめを決定する方法はまた、我々の共係属中の米国特許出願連続番号第０７／９９５，２９２号及び１９９４年６月２３日に出願されたその一部継続出願連続番号第０８／２６４，５５８号に記載されており、これらの両方は参照により組み込まれる。他の方法は、４．８ｍｇ／日までのブロモクリプチンを以下の通り与える；始めの７日間のそれぞれにおいて０．８ｍｇ／日；第８日目に始まりそれから７日間、１．６ｍｇ／日を患者に投与し；第１５日に始まりそれから７日間、２．４ｍｇ／日を投与し；第２２日に始まりそれから７日間、３．２ｍｇ／日を投与し；第２９日に始まりそれから７日間、４．０ｍｇ／日を投与し、第３６日に始まりそれから７日間、日あたり４．８ｍｇを連続７日間投与する。好ましい加速放出ブロモクリプチンの投与剤型は、共係属中の米国特許出願連続番号第０８／１７１，８９７号に開示されており、また参照により組み込まれる。

本発明は以下に記載される実施例を参照することにより、さらに説明され、よりよく理解される。これらの非限定的実施例は、本発明の原理の説明のみに考慮される。さらに、数多くの修正及び変更が当業者によって容易になしうるため、本発明を、示され及び説明された厳密な構成及び操作に限定することは望まれない。従って、全ての適切な修正及び均等物が使用でき、本発明及び添付された請求項の範囲内に入る。

実施例１：正常及び腫瘍（ＥＭＴ−６ 線維肉腫）を有するマウスにおける血漿プロラクチン
１２時間の日毎の光周期において飼育し飼料を自由に摂食させた成年（６−７週令）のＢａｌｂ／Ｃマウス（平均体重２０ｇｍｓ）に、線維肉腫細胞（ＥＭＴ−６）を１．７×１０⁶個の用量で、後四半部で皮下的に注射した。対照群は、注射されずにおかれた。１４から２１日後、腫瘍半径が６−９ｍｍの時、注射された及び注射されない対照の群からの動物を光照射開始後時間（ＨＡＬＯ）０、４、８、１２、１６又は２０において殺し（群当り時点当りｎ＝６−８）、血漿プロラクチン分析のために血漿を回収した。血漿プロラクチン濃度（図２）を、Dr.A.F.Parlow，Torrance，CAからの、相同的(homologous)マウスプロラクチンＲＩＡキットを用いたラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定した。この実験の結果は、新生物を有する哺乳類は、同種同性の健康な、新生物を有しない哺乳類のものに比べて乱れたプロラクチンプロフィールを有することを示す。

実施例２：Ｂａｌｂ／Ｃマウス中の腫瘍成長（ＦＭＴ−６線維肉腫）における時間を決めたプロラクチン注射の効果
成年（６−７週令）のＢａｌｂ／Ｃマウス（平均体重２０ｇｍｓ）に、１．７×１０⁶ＥＭＴ−６細胞（線維肉腫）を、後四半部で注射し、（生後より）１２時間の日毎の光周期中に維持した。接種の翌日、動物を２つの群（群当りｎ＝１０）に分け、日毎にヒツジプロラクチン（２０μｇ／マウス）又はビヒクル（対照群）を１０ＨＡＬＯに、１０日間（実験１）又は１４日間（実験２）注射し、腫瘍成長を、腫瘍サイズをカリパスで測定することによりモニターした。結果を以下の表１に示す。

*対照に対してｐ＜０．０５この実験の結果は、腫瘍を有するマウスへの１０ＨＡＬＯにおけるプロラクチン投与は、得られる腫瘍のサイズの減少をもたらすことを示す。健康な、腫瘍を有しないＢａｌｂ／Ｃマウスの血漿プロラクチンのピークは８−１２ＨＡＬＯにおいて起こる。従って、健康で腫瘍を有しないマウスにおけるピーク血漿プロラクチンの時間の間のプロラクチンの投与は、腫瘍成長の減少をもたらす。

実施例３：Ｂａｌｂ／Ｃマウス中の腫瘍成長における時間を決めたプロラクチン注射の効果
成年（６−７週令）の雄のＢａｌｂ／Ｃマウスを、概日リズムを乱すために１２時間の日毎の光周期から、１０日間の持続的な光の下へ移し、その時点でＥＭＴ−６腫瘍細胞（１．７×１０⁶）を後四半部に注射した。腫瘍細胞の接種に続いて、マウスを７つの群（１０マウス／群）に分け、１０日間日毎にヒツジプロラクチン（２０ｍｃｇ／マウス）を、コルチコステロン注射後０、４、８、１２、１６又は２０時間のいずれかにおいて注射した。対照群は、処理せずにおかれた。
処理の終わりに、動物を、処理期間中において動物がコルチコステロン注射を受けていた時間の２時間後に暗い期間が始まる、日毎１４時間の光周期下に置いた。処理終了２週間後に、腫瘍体積をカリパス測定で決定した。結果を図４に示す。プロラクチン処理による腫瘍成長の阻害が、投与時間に依存することが見いだされた。腫瘍成長の最大の阻害は、８時プロラクチン／コルチコステロン群（即ちコルチコステロン注射８時間後にプロラクチン注射）においてであったことが確認された（８時プロラクチン／コルチコステロン処理マウスにおいて８５±１５ｍｍ³に対し、非処理マウスにおいて３５０±３５ｍｍ³；Ｐ＜０．０１）。この実施例は、腫瘍の減少は、光周期不在時においてマウスの概日リズムをセットする誘導されたコルチコステロンピークに対しての、プロラクチンの投与時間に大きく依存することを示す。

実施例４：腫瘍を有するマウス中の転移的蔓延における時間を決めたプロラクチン注射の効果
成年（６−７週令）のＣ５７Ｂｌａｃｋの雄のマウスを、１２時間光周期から７日間の持続的な光の下へ移し、その時点でＬＬ−２即ちルイス肺悪性腫瘍細胞（Lewis lung carcinoma cell，１×１０⁴／マウス）を肉趾に注射した。マウスは処理期間中持続的な光周期に維持された。腫瘍細胞注射からおよそ３週後、一次腫瘍が半径５−７ｍｍの時に、それを外科的に除去し、マウスを７つの群（５−７マウス／群）に分け、１０日間、プロラクチン（２０ｍｃｇ／マウス）をコルチコステロン（２０ｍｃｇ／マウス）の、４、８、１２、１６又は２０時間後に注射した。対照群は、処理せずにおかれた。処理完了後、暗い期間が動物が処理期間中にコルチコステロン投与を受けていた時間の２時間後に始まる１２時間の日毎の光周期に動物を置いた。処理終了３日後、マウスを殺し、肺への転移的蔓延を決定した（肺重量により決定）。結果を表２に示す。

持続的な光周期下の健康なＣ５７Ｂｌａｃｋマウスにおいては、プロラクチン分泌はコルチコステロンレベルのピークの０時間後にピークとなる。この実験の結果は、ピークコルチコステロンレベル後０−４時間の間、即ち持続的な光周期下の健康なＣ５７Ｂｌａｃｋマウスにおいてコルチコステロン注射後のプロラクチンがピークとなる（正常なＣ５７Ｂｌａｃｋプロラクチンプロフィール）のと同じ時間にプロラクチンを注射することにより、腫瘍成長の最大の阻害が達成されることを示す。
従って、同種同性の健康な動物においてプロラクチンレベルがピークとなる、概日サイクル中の同じ時点に行うプロラクチンの時間を決めた投与は、一次腫瘍除去後の転移成長の度合いを顕著に減少させうる。

実施例５：Ｂａｌｂ／Ｃマウス中の腫瘍成長（ＥＭＴ−６線維肉腫）における時間を決めたブロモクリプチン投与の効果
１２時間の日毎の光周期の下の成年（６−７週令）の雄のＢａｌｂ／Ｃマウスに、後四半部においてＥＭＴ−６腫瘍細胞（１．７×１０⁶）を注射する。腫瘍細胞接種に続いてマウスを７つの群に分ける（１０マウス／群）。３つの群に、日毎に１０日間、光照射開始０、１２及び２０時間後にブロモクリプチン（５０ｍｃｇ／マウス）を注射する。３つの群（対照）は、同時間にビヒクル注射のみを受容する（０、１２及び２０ＨＡＬＯ）。対照群は処理せずにおかれる。処理終了後２週後に、腫瘍体積をカリパス測定にて決定する。腫瘍成長はブロモクリプチン投与により阻害される。ブロモクリプチン処理による腫瘍成長の最大阻害は、光照射開始０時間後にブロモクリプチンを注射されたマウスにおいて起こる。最大プロラクチンレベルは、８−１２ＨＡＬＯにおいて起こる。これは、図２に示される健康なＢａｌｂ／Ｃマウスのプロラクチンプロフィールと対応する。

実施例６：Ｂａｌｂ／Ｃマウス中の腫瘍成長（ＥＭＴ−６線維肉腫）における時間を決めたブロモクリプチン及びメラトニン投与の効果
成年（６−７週令）の雄のＢａｌｂ／Ｃマウスに、後四半部においてＥＭＴ−６腫瘍細胞（１．７×１０⁶）を注射する。腫瘍細胞接種に続いて、マウスを８つの群に分け（１０マウス／群）、日毎に１０日間、実施例５において腫瘍成長の最大の阻害をもたらすと決定された時間である０ ＨＡＬＯにおいてブロモクリプチンを注射する（５０ｍｃｇ／マウス）。マウスにはまたメラトニン（４０ｍｃｇ）を、ブロモクリプチン注射後０、４、８、１２、１６又は２０時間後のいずれかにおいて注射する。１つの対照群は処理されずにおかれ、もう１つの対照群はブロモクリプチンのみで処理される。処理終了後２週後に、腫瘍の体積をカリパス測定で決定する。腫瘍成長は、０ＨＡＬＯにおける時間を決めたブロモクリプチンとブロモクリプチン注射の１２時間後におけるメラトニン投与の組み合わせによって、ブロモクリプチン単独の時間を決めた投与によるものより、より大きい程度阻害されることが分かる。またメラトニン処理による腫瘍成長阻害の増強は、メラトニン投与時間依存であることが分かる。メラトニンの最大効果は、１２ＨＡＬＯにおいてである。なぜならば、これが、一日のうちのプロラクチンが新生物成長に対し最大の阻害活性を示す時間であり、健康な転移を有しないマウスにおけるピークメラトニンレベルの時間でもある時間のプロラクチン放出を刺激するからである。
本発明は、非限定的な例として肉腫、線維肉腫、膠芽腫、悪性腫瘍、黒色腫、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、白血病及び他の新生物症状を含む幅広いスペクトルの新生物疾患を治療するのに使用することができる。

健康な男又は女のヒトの正常即ちベースラインのプロラクチンプロフィールを図示する。 移植されたＥＭＴ−６腫瘍を有する又は有しないマウスのプロラクチンの日毎のリズム即ちプロフィール曲線である。 腫瘍を有する乳癌患者のプロラクチンの日毎のリズム即ちプロフィール曲線である。 コルチコステロン注射により概日リズムをセットされているＢａｌｂ／ＣマウスのＥＭＣ−６腫瘍の成長における時間を決めた注射の効果を図示する棒グラフである。

Claims (15)

1. 哺乳類における新生物の成長を阻害するための薬剤を製造するためのプロラクチン減少剤の使用であって、
   該プロラクチン減少剤は、該哺乳類の概日プロラクチンプロフィールを調整して同種同性の健康な哺乳類の概日プロラクチンプロフィールと一致させ又は近づけるように、２４時間周期のうちの所定の時間に該哺乳類へ投与するものであり、
   該所定の時間は、２４時間周期のうちの間隔をあけた複数の時点のそれぞれにおける前記哺乳類の血液プロラクチンレベルを、該哺乳類と同種同性の健康な哺乳類の日毎のベースラインプロラクチンプロフィールにおける対応する血液プロラクチンレベルと比較して決定するものであり、
   前記使用がさらにプロラクチン増強剤の使用を含む、哺乳類における新生物の成長を阻害するための薬剤を製造するためのプロラクチン減少剤の使用。
2. ヒトにおいて一致させられるか又は近づけられるべきプロラクチンレベルの日毎のリズム即ちプロフィールは、０７：００と２２：００との間のほとんど全ての時点の間における、男性については７ng／ml血漿、女性については10ng／ml血漿という低いプロラクチンレベルの達成を含む、請求項１に記載の使用。
3. 男性については少なくとも10ng／ml、女性については少なくとも15ng／mlのピークプロラクチンレベルが、２２：００と０７：００の間に達成される、請求項１又は２に記載の使用。
4. 前記プロラクチン減少剤が、ドーパミンアゴニストである、請求項１に記載の使用。
5. 前記プロラクチン減少剤が、ブロモクリプチンである、請求項４に記載の使用。
6. 前記哺乳類の日中のプロラクチンレベルが、間隔をおいた二つの時点において、前記ベースラインプロラクチンプロフィールよりも１SEMを越えて高い、若しくは該哺乳類の日中のプロラクチンレベルが、一つの時点において、前記ベースラインプロラクチンプロフィールよりも２SEMを越えて高い場合に、該哺乳類の前記プロラクチンレベルを、前記プロラクチン減少剤を所定時間に投与することによって調整する、請求項１に記載の使用。
7. 前記所定時間が、略０５：００と１３：００との間である、請求項５に記載の使用。
8. 前記哺乳類がヒトであり、前記ブロモクリプチンの投与量が０．８〜８．０ｍｇ／日の範囲内である、請求項５に記載の使用。
9. 前記所定時間が略０５：００と１０：３０との間であり、前記ブロモクリプチンの投与量が患者一人当たり０．８〜３．２mg／日の範囲内である、請求項８に記載の使用。
10. 前記新生物が、肉腫、線維肉腫、悪性腫瘍(carcinomas)、膠芽腫(glioblastomas)及び黒色腫からなる群より選択されるものである、請求項１に記載の使用。
11. 前記プロラクチン増強剤が、２４時間周期のうちの所定の時間に投与されるものである、請求項１に記載の使用。
12. 前記プロラクチン増強剤がメラトニンであり、前記所定の時間が夜間の略就寝時間である、請求項１１に記載の使用。
13. 前記哺乳類がヒトであり、前記メラトニンの投与量が１０〜８００μg／kg／dgの範囲内である、請求項１２に記載の使用。
14. 前記ブロモクリプチンが、略０５：００と略１０：３０との間に、０．８〜８．０mg／日の範囲内の投与量で投与されるものである、請求項５に記載の使用。
15. 前記プロラクチン増強剤がメラトニンであり、前記プロラクチン減少剤がブロモクリプチンである、請求項１に記載の使用。

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