JP2007051979A - Periodontic disease diagnosing instrument and detection method of periodontic disease causing bacteria - Google Patents

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健志 武田
Toru Eguchi
徹 江口
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大輔 日野出
Takashi Ara
隆 阿良
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a detection method of periodontic disease causing bacteria, capable of specifying the kinds of causing bacteria of the periodontic disease and capable of being performed in an extremely simple manner, and to provide a periodontic disease diagnostic instrument, capable of being used in the diagnosis of periodontic disease. <P>SOLUTION: The periodontic disease diagnosing instrument is constituted by providing a specimen-receiving part (1), a periodontic disease causing bacteria labelling part (2) for holding an antibody A, having a label provided with respect to the periodontic disease causing bacteria, and held so as to be moved with the movement of the moisture in the specimen to be examined and a periodontic disease causing bacteria detecting part (3), in the order of (1) to (3) where the antibody B to the periodontic disease causing bacteria is fixed. <P>COPYRIGHT: (C)2007,JPO&INPIT

Description

本発明は、歯周疾患を診断するための用具と、イムノクロマト法により歯周疾患原因細菌を検出する方法に関するものである。   The present invention relates to a tool for diagnosing periodontal disease and a method for detecting periodontal disease-causing bacteria by immunochromatography.

歯周疾患は、歯を支持するための組織である歯周組織における疾患の総称であり、主として特定細菌の感染を原因とする。この歯周疾患は、はじめ歯肉の炎症から始まって歯周組織が崩壊し、ついには歯の脱落に至る。この様に歯周疾患は歯に重大な影響を及ぼす一方で、進行が緩慢であり痛み等がほとんどないために自覚症状がないまま悪化してしまう。そこで従来、歯周疾患を診断するための技術が種々開発されている。   Periodontal disease is a general term for diseases in periodontal tissue, which is a tissue for supporting teeth, and is mainly caused by infection with specific bacteria. This periodontal disease begins with inflammation of the gingiva, collapses the periodontal tissue, and eventually leads to tooth loss. As described above, periodontal disease has a serious effect on teeth, but it progresses slowly and there is almost no pain, so it worsens without subjective symptoms. Therefore, conventionally, various techniques for diagnosing periodontal diseases have been developed.

例えば特許文献1には、歯周疾患の原因となるバクテロイデス ジンジバリス(ポルフィロモナス ジンジバリス、以下、「P.ジンジバリス」という場合がある)に対するモノクローナル抗体と被検試料とを反応させる歯周病(歯周疾患)の診断方法が記載されている。また、特許文献2には、歯周疾患原因細菌の菌体表層由来多糖と特異的に反応する抗体と、これを用いた歯周疾患の診断方法が開示されている。これら特許文献には、各診断方法で用いられる測定方法として数種の方法が例示されているが、実施例で具体的に用いられているのは酵素免疫測定法(ELISA)のみである。ところがこの酵素免疫測定法は、例示されている他の方法と同様に操作が非常に煩雑であり、測定には専門性が必要とされるために手軽に行えるものではない。   For example, Patent Document 1 discloses periodontal disease (teeth) in which a monoclonal antibody against Bacteroides gingivalis (porphyromonas gingivalis, hereinafter sometimes referred to as “P. gingivalis”), which causes periodontal disease, is reacted with a test sample. (Periodical disease) diagnosis method is described. Patent Document 2 discloses an antibody that specifically reacts with a polysaccharide derived from the bacterial cell surface of periodontal disease-causing bacteria, and a method for diagnosing periodontal disease using the antibody. In these patent documents, several kinds of methods are exemplified as measurement methods used in each diagnostic method, but only the enzyme immunoassay (ELISA) is specifically used in the examples. However, this enzyme immunoassay method is very complicated in the same manner as the other exemplified methods, and it is not easy to carry out the measurement because it requires expertise.

一方、特許文献3には、イムノクロマトエラスターゼ試薬としての顆粒球エラスターゼ測定試薬であって、歯周病の早期診断に有用なものが記載されている。この測定試薬が用いられるイムノクロマト法は酵素免疫測定法と異なって簡便であり、特に専門知識を要せず実施することができる。しかし、当該技術では顆粒球エラスターゼを測定対象としていることから、歯周疾患の原因とはならない細菌の感染により誘導されたエラスターゼを検出し、歯周疾患に罹患していない場合であっても陽性と判定してしまうおそれがある。そして何よりも、当該技術では歯周疾患原因細菌の種類までは特定することができないという問題がある。   On the other hand, Patent Document 3 describes a granulocyte elastase measuring reagent as an immunochromatographic elastase reagent, which is useful for early diagnosis of periodontal disease. Unlike the enzyme immunoassay method, the immunochromatography method using this measurement reagent is simple and can be carried out without requiring special knowledge. However, since granulocyte elastase is measured in this technology, elastase induced by bacterial infection that does not cause periodontal disease is detected, and even if it is not affected by periodontal disease, it is positive May be judged. Above all, there is a problem that the technique cannot identify the types of periodontal disease-causing bacteria.

即ち、非特許文献1の通り歯周疾患原因細菌としては様々なものが知られているが、これら細菌と歯周疾患との関連度合いも多様である。従って、プラーク(歯垢)中に含まれる細菌の種類を特定できれば歯周疾患の治療に関する重要な情報となり得るが、特許文献3の技術では斯かる情報を得ることができない。
特開昭60−73463号公報(請求項1、第3頁左下欄) 特開平6−43166号公報(特許請求の範囲、段落[0019]) 特開2000−39435号公報(請求項1と11) Socransky SSら,「歯肉縁下プラークにおける細菌複合体(Microbial complexes in subgingival plaque)」,ジャーナル・オブ・クリニカル・ペリオドントロジー(J.Clin.Periodontol.),第25巻,第134〜144頁(1998年)
In other words, as described in Non-Patent Document 1, various bacteria causing periodontal diseases are known, but the degree of association between these bacteria and periodontal diseases is also various. Therefore, if the type of bacteria contained in plaque (dental plaque) can be specified, it can be important information regarding treatment of periodontal disease, but the technology of Patent Document 3 cannot obtain such information.
JP-A-60-73463 (Claim 1, page 3, lower left column) JP-A-6-43166 (Claims, paragraph [0019]) JP 2000-39435 A (Claims 1 and 11) Socransky SS et al., “Microbial complexes in subgingival plaque”, Journal of Clinical Periodontology, Vol. 25, pp. 134-144 (1998). Year)

上述した様に、特定の歯周疾患原因細菌に対するモノクローナル抗体を用いた歯周疾患診断方法は知られていたが、専門的知識を有するなど簡便なものではなかった。その一方でイムノクロマト法という非常に簡便な技術を用いる歯周疾患診断方法はあったが、その原因細菌の種類まで特定できるものではなかった。   As described above, a periodontal disease diagnosis method using a monoclonal antibody against a specific periodontal disease-causing bacterium has been known, but it is not as simple as having specialized knowledge. On the other hand, there was a periodontal disease diagnosis method using a very simple technique called immunochromatography, but the type of the causative bacteria could not be identified.

そこで本発明が解決すべき課題は、歯周疾患の原因細菌の種類まで特定でき且つ非常に簡便に実施できる歯周疾患原因細菌の検出方法と、当該方法に用いることができるものであって、歯周疾患の疾患活動性、疾患の重篤度、疾患リスク等の診断に用いることができる歯周疾患診断用具を提供することにある。   Thus, the problem to be solved by the present invention is a method for detecting periodontal disease-causing bacteria that can be specified up to the kind of periodontal disease-causing bacteria and can be carried out very easily, and can be used in the method, An object of the present invention is to provide a periodontal disease diagnostic tool that can be used for diagnosis of periodontal disease activity, disease severity, disease risk, and the like.

本発明者は、上記課題を解決すべく、歯周疾患を診断するための用具の構成につき鋭意研究を重ねた。その結果、目的とする歯周疾患原因細菌へ特異的に反応する抗体を2種用いてイムノクロマト法を行なうことにより上記課題を解決できることを見出して本発明を完成した。   In order to solve the above-mentioned problems, the present inventor has conducted extensive research on the configuration of a tool for diagnosing periodontal diseases. As a result, the present invention was completed by finding that the above-mentioned problems can be solved by performing an immunochromatography method using two types of antibodies that specifically react with the target periodontal disease-causing bacteria.

即ち、本発明の歯周疾患診断用具は、
吸水性基材上に、
(1) 被検試料受領部、
(2) 歯周疾患原因細菌に対するものであり且つ標識を有する抗体Aが、被検試料中の水分の移動に伴って移動できるように保持されている歯周疾患原因細菌標識部、および
(3) 歯周疾患原因細菌に対する抗体Bが固定されている歯周疾患原因細菌検出部、
を(1)〜(3)の順番で有することを特徴とする。
That is, the periodontal disease diagnostic tool of the present invention,
On the water-absorbing substrate,
(1) Test specimen receiver
(2) Periodontal disease-causing bacteria labeling part, which is held against the periodontal disease-causing bacteria and has antibody A so that it can move with the movement of moisture in the test sample; ) Periodontal disease-causing bacteria detector, to which antibody B against periodontal disease-causing bacteria is fixed,
In the order of (1) to (3).

上記歯周疾患診断用具には、さらに、(4) 被検試料中の水分が上記歯周疾患原因細菌検出部を通過したことを確認するための確認部を(3)に続く位置に設けることが好ましい。目的とする歯周疾患原因細菌が被検試料中に存在しない場合であっても、検査が終了したことを容易に確認できるからである。   In the periodontal disease diagnostic tool, (4) a confirmation unit for confirming that water in the test sample has passed the periodontal disease-causing bacteria detection unit is provided at a position following (3). Is preferred. This is because even when the target periodontal disease-causing bacteria is not present in the test sample, it can be easily confirmed that the test has been completed.

また、吸水性基材としては非イオン界面活性剤を含むものが好適である。被検試料の展開が速やかであり、診断時間を短縮できるからである。   A water-absorbing substrate containing a nonionic surfactant is suitable. This is because the test sample can be rapidly developed and the diagnosis time can be shortened.

上記歯周疾患診断用具においては、その抗体Aと抗体Bが、歯周疾患原因細菌の膜タンパク質、表層多糖類、表層脂質類、表層リポ多糖類、分泌物質およびこれらの複合体と特異的に反応するものであることが好ましい。被検試料を超音波処理等することなく、そのまま検査に付しても目的とする歯周疾患原因細菌を検出できるからである。   In the periodontal disease diagnostic tool, the antibody A and the antibody B specifically bind to membrane proteins, surface polysaccharides, surface lipids, surface lipopolysaccharides, secreted substances and their complexes of periodontal disease-causing bacteria. It is preferable to react. This is because the target periodontal disease-causing bacteria can be detected even if the test sample is directly subjected to the test without subjecting it to ultrasonic treatment or the like.

抗体Aと抗体Bとしては、ポルフィロモナス ジンジバリス、バクテロイデス フォーサイサス、トレポネーマ デンティコラ、フゾバクテリウム ヌクレアタム、プレボテラ インターメディア、ストレプトコッカス サンギス、ストレプトコッカス オラーリス、エイケネラ コローデンス、アクチノバチラス アクチノミセテムコミタンスおよびアクチノマイセス ネスランディよりなる群から選択される1または2以上の歯周疾患原因細菌と特異的に反応するものが好適である。これら細菌は、その存在量、菌種の組合わせ、同一菌種における免疫型、抗原の種類等により、歯周疾患の疾患活動性、疾患の重篤度、疾患リスク等との相関性が高く、口腔内におけるこれら細菌の有無を確認することは、歯周疾患の診断において極めて重要だからである。   Antibody A and Antibody B include Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Fusobacterium nucleatum, Prevotella intermedia, Streptococcus sangis, Streptococcus oralis, Aikenella colodense and Actinobacterium acetimidum accinomyces Those that react specifically with one or more periodontal disease-causing bacteria selected from the group are preferred. These bacteria are highly correlated with periodontal disease activity, disease severity, disease risk, etc., depending on their abundance, combination of species, immune type in the same species, type of antigen, etc. This is because confirming the presence or absence of these bacteria in the oral cavity is extremely important in the diagnosis of periodontal diseases.

上記抗体Aと抗体Bとしては、1種または2種以上のモノクローナル抗体が好適である。歯周疾患の原因となっている細菌を、より正確に特定できるからである。   As said antibody A and antibody B, 1 type, or 2 or more types of monoclonal antibodies are suitable. This is because the bacteria causing periodontal disease can be identified more accurately.

本発明に係る歯周疾患原因細菌の検出方法は、イムノクロマト法により歯周疾患原因細菌を検出する方法であって、歯周疾患原因細菌に対するものであり且つ標識を有する抗体Aと、歯周疾患原因細菌に対する抗体Bを用いることを特徴とする。   The method for detecting periodontal disease-causing bacteria according to the present invention is a method for detecting periodontal disease-causing bacteria by an immunochromatography method, which is against periodontal disease-causing bacteria and has a label, and periodontal disease It is characterized by using antibody B against causative bacteria.

本発明によれば、歯周疾患の原因となる細菌のうち特定の種類のものを被検試料から検出することができる。しかもその操作は極めて簡便であり、例えば歯科医師が専門的な生化学等の知識を有しない場合であっても容易に特定細菌の有無を判断することができる。よって、本発明は、多くの人が自覚のないまま罹患し且つ病状が進行し得る歯周疾患の診断を容易にするものとして非常に有用である。   According to the present invention, it is possible to detect a specific type of bacteria that cause periodontal disease from a test sample. Moreover, the operation is extremely simple, and for example, even if the dentist has no knowledge of specialized biochemistry, the presence or absence of specific bacteria can be easily determined. Therefore, the present invention is very useful for facilitating the diagnosis of periodontal diseases in which many people are unaware and can progress.

本発明の歯周疾患診断用具は、
吸水性基材上に、
(1) 被検試料受領部、
(2) 歯周疾患原因細菌に対するものであり且つ標識を有する抗体Aが、被検試料中の水分の移動に伴って移動できるように保持されている歯周疾患原因細菌標識部、および
(3) 歯周疾患原因細菌に対する抗体Bが固定されている歯周疾患原因細菌検出部、
を(1)〜(3)の順番で有することを特徴とする。
The periodontal disease diagnostic tool of the present invention,
On the water-absorbing substrate,
(1) Test specimen receiver
(2) Periodontal disease-causing bacteria labeling part, which is held against the periodontal disease-causing bacteria and has antibody A so that it can move with the movement of moisture in the test sample; ) Periodontal disease-causing bacteria detector, to which antibody B against periodontal disease-causing bacteria is fixed,
In the order of (1) to (3).

本発明で用いる吸水性基材は、毛細管現象により被検試料に含まれる水分を吸収し展開できるものであればよい。その材質は特に問わないが、例えばナイロン多孔質シート、ガラス繊維濾紙、織布、不織布、濾紙等を用いることができる。また、歯周疾患原因細菌標識部と歯周疾患原因細菌検出部等とで別の基材を用い、両者を結合させてもよい。例えば、ニトロセルロース多孔質シートへは、抗体の水溶液または分散液を塗布して乾燥させることによって、抗体をシート状へ容易に固定できることから、歯周疾患原因細菌検出部として有用である。一方、歯周疾患原因細菌標識部には抗体を固定化せず単に保持する必要があるため、ニトロセルロース多孔質シートは不向きである。   The water-absorbing substrate used in the present invention may be any material that can absorb and expand moisture contained in the test sample by capillary action. Although the material in particular is not ask | required, a nylon porous sheet, glass fiber filter paper, a woven fabric, a nonwoven fabric, a filter paper etc. can be used, for example. Moreover, you may combine both by using another base material by a periodontal disease cause bacteria label | marker part, a periodontal disease cause bacteria detection part, etc. For example, the antibody can be easily fixed to a sheet by applying an aqueous solution or dispersion of the antibody to the porous sheet of nitrocellulose and drying it, so that it is useful as a periodontal disease-causing bacteria detection unit. On the other hand, the nitrocellulose porous sheet is not suitable because it is necessary to simply retain the antibody in the periodontal disease-causing bacteria labeling portion without immobilizing the antibody.

吸水性基材の形状も特に問わないが、被検試料に対して吸水性基材が大き過ぎると水分が十分に展開できない場合があり、一方、小さ過ぎると判定が難しくなるおそれがある。そこで一般的には、用具全体の長軸方向長さを40〜70mm、歯周疾患原因細菌標識部の用具長軸方向長さを5〜12mm、歯周疾患原因細菌検出部は後述する確認部と合わせて同長さを17〜30mmとし、それぞれの幅を3〜12mm、厚さを0.1〜3mmとすることができる。但し、これら長さ等は目的や用途に応じて適宜調整することができ、例示した大きさに限られるものではない。   The shape of the water-absorbing substrate is not particularly limited, but if the water-absorbing substrate is too large for the test sample, the moisture may not be sufficiently developed, whereas if it is too small, the determination may be difficult. Therefore, generally, the length of the entire tool in the long axis direction is 40 to 70 mm, the length of the tool in the long axis direction of the periodontal disease-causing bacteria marker is 5 to 12 mm, and the periodontal disease-causing bacteria detection unit is a confirmation unit described later The same length can be set to 17 to 30 mm, the width can be set to 3 to 12 mm, and the thickness can be set to 0.1 to 3 mm. However, these lengths and the like can be appropriately adjusted according to the purpose and application, and are not limited to the exemplified sizes.

吸水性基材には、非イオン界面活性剤を含ませることが好ましい。被検試料の展開が速やかになり、診断をより迅速に行なえるからである。ここで用いることができる非イオン界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートに代表されるポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等のポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ラウリン酸モノエタノールアミド、ミリスチン酸モノエタノールアミド、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン脂肪酸エステルアルキルグリコシド(例えばアルキル鎖:C8-16程度)、ポリグリセリン脂肪酸エステル(例えば脂肪酸部分のアルキル鎖:C8-16程度)、ショ糖脂肪酸エステル(例えば脂肪酸部分のアルキル鎖:C8-16程度)等を例示することができ、この中でもポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートに代表されるポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等のポリオキシエチレン脂肪酸エステルが好適である。 The water-absorbing substrate preferably contains a nonionic surfactant. This is because the test sample can be quickly developed and diagnosed more quickly. Examples of the nonionic surfactant that can be used here include polyoxyethylene fatty acid esters such as polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters represented by polyoxyethylene sorbitan monolaurate, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, and lauric acid monoester. Ethanolamide, myristic acid monoethanolamide, polyoxyethylene higher alcohol ether, polyoxyethylene polyoxypropylene copolymer, polyoxyethylene polyoxypropylene fatty acid ester alkyl glycoside (eg alkyl chain: about C 8-16 ), polyglycerin fatty acid esters (e.g. fatty acid moiety of the alkyl chain: about C 8-16), sucrose fatty acid esters (e.g. fatty acid moiety of the alkyl chain: about C 8-16), etc. can be exemplified, among the polyoxyethylene Polyoxyethylene fatty acid esters such as polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters typified by Nso sorbitan monolaurate is preferred.

吸水性基材に非イオン界面活性剤を含ませるには、非イオン界面活性剤の水溶液に吸水性基材を浸漬し、乾燥すればよい。その際における非イオン界面活性剤水溶液の濃度としては、1質量%以上とすることが好ましい。1質量%未満であると非イオン界面活性剤の効果が十分に発揮されない場合がある。   In order to include the nonionic surfactant in the water-absorbing substrate, the water-absorbing substrate may be dipped in an aqueous solution of the nonionic surfactant and dried. In this case, the concentration of the nonionic surfactant aqueous solution is preferably 1% by mass or more. If it is less than 1% by mass, the effect of the nonionic surfactant may not be sufficiently exhibited.

吸水性基材は、操作性を向上させるために、被検試料受領部を外部に露出させ歯周疾患原因細菌検出部等を外部に露出させるか或いは外部から確認できる範囲で、プラスチックケースなどにより被覆してもよい。   In order to improve the operability, the water-absorbing substrate can be exposed to the outside by exposing the test sample receiving part and exposing the periodontal disease-causing bacteria detecting part to the outside, or by a plastic case or the like. It may be coated.

本発明の歯周疾患診断用具は、吸水性基材上に被検試料受領部を有するが、この被検試料受領部は特別な処理をする必要はなく、吸水性基材の一端であればよい。但し、被検試料を滴下したり或いは被検試料に浸漬する部位として、目印を設けておいてもよい。   The periodontal disease diagnostic tool of the present invention has a test sample receiving part on the water-absorbing base material, but this test sample receiving part does not need to be specially treated and is only one end of the water-absorbing base material. Good. However, a mark may be provided as a portion where the test sample is dropped or immersed in the test sample.

本発明の歯周疾患診断用具は、図1に示す様に、上記被検試料受領部2(吸水性基材1の一端)よりも内側(被検試料受領部とは逆側)に歯周疾患原因細菌標識部3を有する。この歯周疾患原因細菌標識部3には、歯周疾患原因細菌に対するものであり且つ標識を有する抗体A31が、被検試料中の水分の移動に伴って移動できるように保持されている。   As shown in FIG. 1, the periodontal disease diagnostic tool of the present invention has a periodontium inside the test sample receiving part 2 (one end of the water-absorbing substrate 1) (on the opposite side to the test sample receiving part). It has a disease-causing bacterium marker 3. The periodontal disease-causing bacteria labeling section 3 holds an antibody A31 that is against the periodontal disease-causing bacteria and has a label so that it can move with the movement of moisture in the test sample.

検出対象となる歯周疾患原因細菌に対する抗体は、溶血プラーク法などの常法により調製することができる。   An antibody against periodontal disease-causing bacteria to be detected can be prepared by a conventional method such as a hemolytic plaque method.

抗体としてはモノクローナル抗体が好適である。歯周疾患の原因となっている細菌を、より正確に特定できるからである。モノクローナル抗体の調製は、常法に従えばよい。例えば、歯周疾患原因細菌のうち検出を目的とする細菌または細菌群に特有のタンパク質等を単離精製し、これを用いてマウスを免疫してその脾細胞や抗体産生細胞と骨髄腫細胞とを融合させてハイブリドーマを得る。このハイブリドーマをクローニングし、上記タンパク質等へ特異的に反応する抗体を産生しているクローンをスクリーニングする。このクローンを培養し、分泌されるモノクローナル抗体を精製すればよい。   A monoclonal antibody is suitable as the antibody. This is because the bacteria causing periodontal disease can be identified more accurately. Monoclonal antibodies can be prepared according to conventional methods. For example, among bacteria causing periodontal disease, a protein or the like peculiar to the bacteria or bacteria group to be detected is isolated and purified, and the mouse is used to immunize the spleen cells, antibody-producing cells, myeloma cells, To obtain a hybridoma. The hybridoma is cloned, and a clone producing an antibody that specifically reacts with the protein or the like is screened. This clone may be cultured and the secreted monoclonal antibody may be purified.

本発明の抗体は、歯周疾患原因細菌の膜タンパク質、表層多糖類、表層脂質類、表層リポ多糖類、分泌物質およびこれらの複合体のうち1または2以上と特異的に反応するものであることが好ましく、膜タンパク質、表層リポ多糖類およびこれらの複合体のうち1または2以上と特異的に反応するものがより好ましく、膜タンパク質の1または2以上と特異的に反応するものがさらに好ましい。歯周疾患原因細菌の細胞質等に存在するタンパク質等と特異的に反応する抗体の場合には、被検試料を超音波処理するなどによって細菌を破壊しなければならないが、膜タンパク質等に対する抗体を用いれば、被検試料をそのまま検査に付すことができるからである。   The antibody of the present invention specifically reacts with one or more of membrane proteins, surface polysaccharides, surface lipids, surface lipopolysaccharides, secreted substances, and complexes of periodontal disease-causing bacteria. Preferably, those that specifically react with one or more of membrane proteins, surface lipopolysaccharides, and complexes thereof, more preferably those that specifically react with one or more of the membrane proteins . In the case of an antibody that reacts specifically with proteins, etc. present in the cytoplasm of periodontal disease-causing bacteria, the bacteria must be destroyed by sonicating the test sample. This is because if used, the test sample can be directly subjected to the test.

また、本発明の抗体が特異的に結合する歯周疾患原因細菌は、歯周疾患との関係がより深いものであることが好ましい。歯周疾患の診断をより正確にするためである。斯かる歯周疾患原因細菌としては、P.ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)、バクテロイデス フォーサイサス(Bacteroides forsythus)、トレポネーマ デンティコラ(Treponema denticola)、フゾバクテリウム ヌクレアタム(Fusobacterium nucleatum)、プレボテラ インターメディア(Prevotella intermedia)、ストレプトコッカス サンギス(Streptococcus sanguis)、ストレプトコッカス オラーリス(Streptococcus oralis)、エイケネラ コローデンス(Eikenella corrodens)、アクチノバチラス アクチノミセテムコミタンス(Actinobacillus actinomycetemcomitans)、アクチノマイセス ネスランディ(Actinomyces naeslundii)を例示することができる。   The periodontal disease-causing bacteria to which the antibody of the present invention specifically binds are preferably those having a deeper relationship with periodontal diseases. This is to make the diagnosis of periodontal disease more accurate. Such periodontal disease-causing bacteria include P.I. Gindivaris (Porphyromonas gingivalis), Bacteroides forsythus (Treponema denticola), Fusobacterium nucleatum (Fusobacterium nucleatum), Prevotella intermedia (Prevotella intermedia), Streptococcus Examples include Eikenella corrodens, Actinobacillus actinomycetemcomitans, and Actinomyces naeslundii.

検出対象となる上記歯周疾患原因細菌としては、P.ジンジバリス、バクテロイデス フォーサイサス、トレポネーマ デンティコラ、フゾバクテリウム ヌクレアタム、プレボテラ インターメディア、エイケネラ コローデンス、アクチノバチラス アクチノミセテムコミタンスおよびアクチノマイセス ネスランディよりなる群から選択される1または2以上がより好ましく、P.ジンジバリス、バクテロイデス フォーサイサス、アクチノバチラス アクチノミセテムコミタンスおよびトレポネーマ デンティコラよりなる群から選択される1または2以上がさらに好ましく、P.ジンジバリスが特に好ましい。   Examples of the periodontal disease-causing bacteria to be detected include P.I. More preferably, one or more selected from the group consisting of Gingivalis, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Fusobacterium nucleatum, Prevotella intermedia, Aikenella collodense, Actinobacillus actinomycetemcomitans and Actinomyces nesrandi. 1 or 2 or more selected from the group consisting of Gingivalis, Bacteroides forsythus, Actinobathiras Actinomycetemcomitans and Treponema denticola is more preferred. Gingivalis is particularly preferred.

得られた抗体は、歯周疾患原因細菌の検出のために標識する必要がある。抗体の標識方法は公知のものを用いればよく、例えば、金コロイド粒子等の金属コロイド粒子やラテックス粒子等の合成ゴム樹脂粒子の溶液に抗体を添加し、この抗体を吸水性基材に塗布または浸漬し、自然乾燥または凍結乾燥することにより標識できる。   The obtained antibody needs to be labeled for detection of periodontal disease-causing bacteria. The antibody labeling method may be a known one. For example, the antibody is added to a solution of metal colloid particles such as gold colloid particles or synthetic rubber resin particles such as latex particles, and this antibody is applied to a water-absorbing substrate. It can be labeled by soaking, air drying or freeze drying.

歯周疾患原因細菌に対するものであり且つ標識を有する抗体Aを、吸湿性基材上へ被検試料中の水分の移動に伴って移動できるように保持する方法は、常法を用いることができる。例えば、水溶性ポリマーや糖類の水溶液に抗体Aを分散させ、所定位置へ吸収させた後に乾燥すればよい。ここで用いる水溶性ポリマーとしてはポリビニルアルコール等が挙げられ、糖類としてはサッカロース等を挙げることができる。さらに抗体Aの移動を容易にするために、歯周疾患原因細菌標識部の予定部位へ事前に界面活性剤溶液を塗布しておいた上で抗体Aの分散液を塗布し、乾燥させてもよい。   As a method for holding antibody A, which is against periodontal disease-causing bacteria and has a label, on the hygroscopic substrate so that it can be moved along with the movement of moisture in the test sample, a conventional method can be used. . For example, antibody A may be dispersed in an aqueous solution of a water-soluble polymer or saccharide, absorbed at a predetermined position, and then dried. Examples of the water-soluble polymer used here include polyvinyl alcohol, and examples of the saccharide include sucrose. Furthermore, in order to facilitate the movement of antibody A, a surfactant solution may be applied in advance to the planned site of the periodontal disease-causing bacterial marker, and then a dispersion of antibody A may be applied and dried. Good.

本発明の歯周疾患診断用具には、歯周疾患原因細菌標識部3に続く位置、即ち歯周疾患原因細菌標識部3の被検試料受領部2とは反対側に歯周疾患原因細菌検出部4を設ける。この歯周疾患原因細菌検出部4には歯周疾患原因細菌に対する抗体B41が固定されている。   In the periodontal disease diagnostic tool of the present invention, the periodontal disease-causing bacteria is detected at a position following the periodontal disease-causing bacteria labeling unit 3, that is, on the side opposite to the test sample receiving unit 2 of the periodontal disease-causing bacteria labeling unit 3. Part 4 is provided. The periodontal disease-causing bacteria detection unit 4 is fixed with an antibody B41 against periodontal disease-causing bacteria.

抗体Bは、抗体Aと同様の方法により調製することができ、抗体Aと同一の歯周疾患原因細菌に結合するものである必要がある。抗体Aと結合した歯周疾患原因細菌或いはその破砕物へ結合する必要があるからである。抗体Bの結合対象は抗体Aと同一であってもよいが、抗体Aとは別の結合対象へ結合することが好ましい。歯周疾患原因細菌の検出感度をより一層向上させることができるからである。   Antibody B can be prepared by the same method as antibody A, and should bind to the same periodontal disease-causing bacteria as antibody A. This is because it is necessary to bind to the periodontal disease-causing bacteria bound to the antibody A or a fragment thereof. The binding target of antibody B may be the same as that of antibody A, but it is preferable to bind to a binding target different from antibody A. This is because the detection sensitivity of periodontal disease-causing bacteria can be further improved.

抗体Bの固定化方法は特に問わないが、用いる吸水性基材の種類に応じた方法を採用することができる。例えば、吸水性基材としてニトロセルロースからなるものを用いる場合には、抗体Bの水溶液または分散液を塗布した上で乾燥するのみで固定することができる。なお、ここでいう「固定」は、被検試料に含まれる水分の移動に伴って抗体Bが移動しない程度をいう。   The method for immobilizing antibody B is not particularly limited, and a method corresponding to the type of the water-absorbing substrate to be used can be employed. For example, in the case of using a nitrocellulose substrate as the water-absorbing substrate, it can be fixed simply by applying an aqueous solution or dispersion of antibody B and then drying. Here, “fixation” refers to the degree to which antibody B does not move with the movement of moisture contained in the test sample.

本発明の歯周疾患診断用具には、歯周疾患原因細菌検出部4に続く位置、即ち歯周疾患原因細菌検出部4の被検試料受領部2とは反対側に、被検試料中の水分が上記歯周疾患原因細菌検出部を通過したことを確認するための確認部5を設けることが好ましい。被検試料中に歯周疾患原因細菌が含まれておらず歯周疾患原因細菌検出部に変化が表れない場合であっても、検査の終了を知ることができるからである。   In the periodontal disease diagnostic tool of the present invention, the position following the periodontal disease-causing bacteria detection unit 4, that is, on the side opposite to the test sample receiving unit 2 of the periodontal disease-causing bacteria detection unit 4, It is preferable to provide a confirmation unit 5 for confirming that water has passed through the periodontal disease-causing bacteria detection unit. This is because it is possible to know the end of the test even if the test sample does not contain periodontal disease-causing bacteria and the periodontal disease-causing bacteria detection unit does not change.

本発明の確認部の態様としては、所定の位置に水溶性色素の線を設けておくことがある。その結果、被検試料中の水分が確認部を通過した場合、水溶性色素が溶解して水分の展開と共に移動するので、歯周疾患原因細菌検出部に変化が生じない場合であっても、被検試料が歯周疾患原因細菌標識部と歯周疾患原因細菌検出部を通過したことを確認できるからである。   As an aspect of the confirmation unit of the present invention, a line of a water-soluble dye may be provided at a predetermined position. As a result, when the water in the test sample passes through the confirmation part, the water-soluble dye dissolves and moves with the development of the water, so even if there is no change in the periodontal disease-causing bacteria detection part, This is because it can be confirmed that the test sample has passed through the periodontal disease-causing bacteria labeling part and the periodontal disease-causing bacteria detection part.

確認部を設ける方法としては、水溶性色素の水溶液を所定位置に塗布し、乾燥すればよい。また、水溶性色素としては、ブロムフェノールブルーなどを使用することができる。   As a method for providing the confirmation unit, an aqueous solution of a water-soluble dye may be applied at a predetermined position and dried. As the water-soluble dye, bromophenol blue or the like can be used.

本発明に係る歯周疾患原因細菌の検出方法は、イムノクロマト法により歯周疾患原因細菌を検出する方法であって、歯周疾患原因細菌に対するものであり且つ標識を有する抗体Aと、歯周疾患原因細菌に対する抗体Bを用いることを特徴とする。当該方法は、上記で説明した本発明の歯周疾患診断用具を使用して実施できることから、以下では本発明の歯周疾患診断用具を模式的に表した図1を参照して説明する。   The method for detecting periodontal disease-causing bacteria according to the present invention is a method for detecting periodontal disease-causing bacteria by an immunochromatography method, which is against periodontal disease-causing bacteria and has a label, and periodontal disease It is characterized by using antibody B against causative bacteria. Since the method can be performed using the periodontal disease diagnostic tool of the present invention described above, the method will be described below with reference to FIG. 1 schematically showing the periodontal disease diagnostic tool of the present invention.

被検試料としては、被験者が歯周疾患に罹患している場合に歯周疾患原因細菌が存在すると考えられる唾液、洗口吐出液、歯肉縁上および歯肉縁下プラークの懸濁液、歯肉溝滲出液を挙げることができる。被検試料に含まれる水分が少ない場合は、精製水や蒸留水等を加えてもよい。   Test samples include saliva, mouthwash discharge, suspension of gingival and subgingival plaque, gingival crevice, which is considered to contain periodontal disease-causing bacteria when the subject suffers from periodontal disease. Exudate can be mentioned. If the test sample contains a small amount of water, purified water or distilled water may be added.

本発明の歯周疾患診断用具を使用する場合には、図1中2の被検試料受領部へ被検試料を適量滴下するか、或いは被検試料受領部を被検試料に浸漬する。被検試料中に含まれる水分は毛細管現象により他端側へ向かって展開し、それに伴って被検試料に含まれる細菌等も移動する。   When the periodontal disease diagnostic tool of the present invention is used, an appropriate amount of the test sample is dropped on the test sample receiving part 2 in FIG. 1, or the test sample receiving part is immersed in the test sample. Moisture contained in the test sample is developed toward the other end side by capillary action, and bacteria and the like contained in the test sample move accordingly.

被検試料中に抗体と特異的に反応する歯周疾患原因細菌が存在する場合には、当該歯周疾患原因細菌は歯周疾患原因細菌標識部3で抗体A31と結合する。この歯周疾患原因細菌標識部3と抗体A31との結合体は、水分の展開に伴いさらに移動する。そして、歯周疾患原因細菌検出部4において、抗体A31と結合している歯周疾患原因細菌は、さらに抗体B41と結合する。この抗体B41は基材1に固定されているため、歯周疾患原因細菌はそれ以上移動することができない。その結果、歯周疾患原因細菌と結合している抗体A上の標識がこの部位で濃縮されるため、歯周疾患原因細菌検出部4が発色等することになる。   When a periodontal disease-causing bacterium that specifically reacts with an antibody is present in the test sample, the periodontal disease-causing bacterium binds to the antibody A31 at the periodontal disease-causing bacteria labeling unit 3. The conjugate of the periodontal disease-causing bacterial marker 3 and antibody A31 further moves with the development of moisture. In the periodontal disease-causing bacteria detecting unit 4, the periodontal disease-causing bacteria that are bound to the antibody A31 are further bound to the antibody B41. Since this antibody B41 is fixed to the base material 1, periodontal disease-causing bacteria cannot move any further. As a result, since the label on the antibody A bound to the periodontal disease-causing bacteria is concentrated at this site, the periodontal disease-causing bacteria detection unit 4 develops color or the like.

その後、さらに被検試料中の水分が展開して確認部5へ達すると、確認部5に変化が表れる。例えば水溶性マーカーを用いた場合には、水溶性マーカーは水分に溶解して水分の移動につれ移動することから、水分が確認部5に達したことを確認できる。よって、被検試料中に所定の歯周疾患原因細菌が存在せず歯周疾患原因細菌検出部4に何ら変化が生じない場合であっても、確認部5に変化が生じれば検査が終了したことを知ることができる。   Thereafter, when the moisture in the test sample further develops and reaches the confirmation unit 5, a change appears in the confirmation unit 5. For example, when a water-soluble marker is used, since the water-soluble marker dissolves in water and moves as the water moves, it can be confirmed that the water has reached the confirmation unit 5. Therefore, even if there is no change in the periodontal disease-causing bacteria detection unit 4 without any predetermined periodontal disease-causing bacteria in the test sample, the test is completed if the confirmation unit 5 changes. You can know what you did.

以上の通り、本発明によれば特定の歯周疾患原因細菌を非常に簡便に検出することができることから、本発明に係る歯周疾患診断用具および歯周疾患原因細菌の検出方法は非常に有用である。   As described above, according to the present invention, a specific periodontal disease-causing bacterium can be detected very easily. Therefore, the periodontal disease diagnostic tool and the periodontal disease-causing bacterium detection method according to the present invention are very useful. It is.

以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例により制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に含まれる。   EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited by the following examples, but may be appropriately modified within a range that can meet the purpose described above and below. It is also possible to implement, and they are all included in the technical scope of the present invention.

製造例1−1 モノクローナル抗体の調製
歯周疾患と非常に強い関係を有する細菌の1つであるポルフィロモナス ジンジバリスが産生するトリプシン様酵素の一つであるPase−Cに対するモノクローナル抗体を調製した。具体的には、先ずPase−Cを精製し、これによりマウスを免疫した。当該マウスから脾細胞を得、常法に従ってこの脾細胞とミエローマを融合させてハイブリドーマを得た。このハイブリドーマを96穴のマルチプレートに1ウェル当たりの細胞数が1個となる様に播き、コロニーの形成が観察されたウェルの培養上清を採取し、Pase−Cの粗抽出液との反応性を調べてスクリーニングを行なった。再クローニングの後、抗原との反応性が強い抗体産生株であるハイブリドーマを得た。より強く安定した反応性を有するクローンを選ぶため、ハイブリドーマの再クローニングを行なった。Pase−Cの粗抽出液を抗原とし、同時にP.ジンジバリス381株の精製酵素Pase−Sを抗原のネガティブコントロールとして酵素免疫測定法を行ない、特に反応性が強いサブクローンであるハイブリドーマをモノクローナル抗体の作製のためのハイブリドーマとして選択し、このハイブリドーマが産生する抗Pase−Cモノクローナル抗体が含まれるマウス腹水を得た。このマウス腹水を濾過した上で56℃、30分の条件で非働化し、この非働化したものを抗Pase−Cモノクローナル抗体とした。当該抗体を、金コロイド粒子の溶液に浸漬することにより標識した。また、別途P.ジンジバリスに対するモノクローナル抗体を調製し、こちらは標識しなかった。
Production Example 1-1 Preparation of Monoclonal Antibody A monoclonal antibody against Pase-C, one of trypsin-like enzymes produced by Porphyromonas gingivalis, one of the bacteria having a very strong relationship with periodontal diseases, was prepared. Specifically, Pase-C was first purified and mice were immunized. Spleen cells were obtained from the mouse, and hybridomas were obtained by fusing the spleen cells and myeloma according to a conventional method. This hybridoma is seeded in a 96-well multiplate so that the number of cells per well is one, and the culture supernatant of the well in which the formation of colonies has been observed is collected and reacted with the Pase-C crude extract. Screening was conducted by examining sex. After recloning, a hybridoma that is an antibody-producing strain having a strong reactivity with the antigen was obtained. In order to select a clone with stronger and more stable reactivity, the hybridoma was recloned. A crude extract of Pase-C was used as an antigen, and P.P. An enzyme immunoassay is performed using the purified enzyme Pase-S of Gindivarius 381 as a negative antigen control, and a hybridoma that is a particularly reactive subclone is selected as a hybridoma for production of a monoclonal antibody, and this hybridoma is produced. Mouse ascites containing anti-Pase-C monoclonal antibody was obtained. The mouse ascites was filtered and inactivated at 56 ° C. for 30 minutes, and this inactivated was designated as an anti-Pase-C monoclonal antibody. The antibody was labeled by immersing it in a solution of colloidal gold particles. Separately, P.A. A monoclonal antibody against Gingivalis was prepared, which was not labeled.

製造例1−2 本発明に係る歯周疾患診断用具の作成
ガラス繊維濾紙からなるシートを長さ10mmに裁断して、上記製造例1−1で得た金コロイド粒子標識抗体の水溶液を塗布し、50℃で一昼夜乾燥した。これを、歯周疾患原因細菌標識部とした。
Production Example 1-2 Preparation of Periodontal Disease Diagnosis Tool According to the Present Invention A sheet made of glass fiber filter paper is cut into a length of 10 mm, and an aqueous solution of gold colloid particle-labeled antibody obtained in Production Example 1-1 is applied. And dried at 50 ° C. all day and night. This was used as a periodontal disease-causing bacterial marker.

また、ニトロセルロースからなるシートを長さ25mmに裁断し、所定位置に製造例1−1で得たモノクローナル抗体(標識無し)の水溶液を塗布し、自然乾燥させた。乾燥後、牛乳由来タンパク質製剤10%を含む水溶液に浸漬し、自然乾燥させたものを歯周疾患原因細菌検出部とした。さらに同じシート上の所定位置にブロムフェノールブルー水溶性色素を塗布した上で自然乾燥し、これを確認部とした。   Moreover, the sheet | seat which consists of nitrocellulose was cut | judged to 25 mm in length, the aqueous solution of the monoclonal antibody (no label | marker) obtained by manufacture example 1-1 was apply | coated to the predetermined position, and it was made to dry naturally. After drying, the product was dipped in an aqueous solution containing 10% of a milk-derived protein preparation and allowed to dry naturally to obtain a periodontal disease-causing bacteria detection unit. Further, a bromophenol blue water-soluble dye was applied to a predetermined position on the same sheet, followed by natural drying, which was used as a confirmation part.

別途、ポリエステルからなるシートを長さ15mmに裁断し、1%ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート含有20mMトリス緩衝液を塗布し、25℃で一昼夜乾燥したものを被検試料受領部(被検試料吸収パッド)とした。また、セルロースからなるシートを長さ20mmに裁断したものを、検査完了後における被検試料吸収パッドとした。   Separately, a sheet made of polyester is cut into a length of 15 mm, a 20 mM Tris buffer solution containing 1% polyoxyethylene sorbitan monolaurate is applied, and dried at 25 ° C. all day and night. Pad). Moreover, what cut | disconnected the sheet | seat which consists of cellulose to length 20mm was used as the test sample absorption pad after completion | finish of a test | inspection.

表面に粘着剤が塗布されたプラスチックシートを長さ60mmに裁断し、これを土台用シートとした。この土台用シートの中央部へ、歯周疾患原因細菌検出部と確認部を有するニトロセルロースシートを貼付けした。このニトロセルロースシートと端部が重なる様に、歯周疾患原因細菌検出部側の端へ歯周疾患原因細菌標識部を有するガラス繊維濾紙シートを貼付けし、確認部側の端へ検査完了後における被検試料吸収パッドを貼付けした。さらに、歯周疾患原因細菌標識部を有するガラス繊維濾紙シートと端部が重なる様に、被検試料受領部を有するポリエステルシートを土台用シート上に貼付けした。最後に、ポリエチレンテレフタレートよりなる粘着ラミネーションフィルムを長さ30mmに裁断し、乾燥を防止するために、当該フィルムを歯周疾患原因細菌検出部と検査完了後における被検試料吸収パッドの一部が覆われる様に貼付けした。得られたシートを幅8mmに整え、本発明に係る歯周疾患診断用具とした。   A plastic sheet having a surface coated with an adhesive was cut to a length of 60 mm and used as a base sheet. A nitrocellulose sheet having a periodontal disease-causing bacteria detection part and a confirmation part was attached to the center part of the base sheet. Paste the glass fiber filter paper sheet with the periodontal disease-causing bacteria labeling part to the end of the periodontal disease-causing bacteria detection part side so that the end part overlaps with this nitrocellulose sheet, and after the completion of the inspection to the end on the confirmation part side A test sample absorption pad was attached. Furthermore, a polyester sheet having a test sample receiving part was stuck on the base sheet so that the end overlapped with the glass fiber filter paper sheet having the periodontal disease-causing bacteria labeling part. Lastly, an adhesive lamination film made of polyethylene terephthalate is cut to a length of 30 mm, and the film is covered with a periodontal disease-causing bacteria detection part and a part of the test sample absorption pad after completion of the test. It was pasted as if The obtained sheet was adjusted to a width of 8 mm to obtain a periodontal disease diagnostic tool according to the present invention.

試験例1
上記製造例1−2で得られた歯周疾患診断用具について、細菌種に対する特異性を試験した。即ち、表1に示す各細菌株を細菌数濃度が107cell/mLとなる様に細菌浮遊液を調製し、当該細菌浮遊液を上記製造例1〜3の歯周疾患診断用具の被検試料受領部へ適量滴下し、滴下後15分後、30分後および60分後に判定を行なった。結果を表1に示す。
Test example 1
The periodontal disease diagnostic tool obtained in Production Example 1-2 was tested for specificity against bacterial species. That is, a bacterial suspension was prepared so that each bacterial strain shown in Table 1 had a bacterial number concentration of 10 7 cells / mL, and the bacterial suspension was used to test the periodontal disease diagnostic tool of Production Examples 1 to 3 above. An appropriate amount was dropped on the sample receiving part, and the determination was made 15 minutes, 30 minutes and 60 minutes after dropping. The results are shown in Table 1.

Figure 2007051979
Figure 2007051979

当該結果の通り、P.ジンジバリスに対するモノクローナル抗体を有する本発明の歯周疾患診断用具を用いることによって、被検試料を滴下するのみで歯周疾患の主要な原因細菌であるP.ジンジバリスを非常に簡便且つ特異的に検出することができた。   As the result, P.I. By using the periodontal disease diagnostic tool of the present invention having a monoclonal antibody against gingivalis, P. p. Gingivalis could be detected very simply and specifically.

試験例2
上記製造例1−3で使用した吸水性基材シートをTween20の0、1、3、5または10質量%水溶液に浸漬し、自然乾燥した。また、特定の被験者(年齢:48歳、性別:男)から1日に3回(10時、14時と17時)ずつ3日間洗口吐出液を採取し、上記吸水性基材シートの一端に適量滴下し、10分後と30分後における試料の展開を観察した。他端(試料を滴下した端と反対側の端)まで水分が非常に速やかに展開する場合を○、水分が他端まで展開するものの多少速さが劣る場合を△、展開速度が遅く水分が他端まで展開しきらない場合を×として、結果を表2に示す。
Test example 2
The water-absorbent substrate sheet used in Production Example 1-3 was immersed in a 0, 1, 3, 5 or 10% by mass aqueous solution of Tween 20 and dried naturally. In addition, a mouthwash discharge solution was collected from a specific subject (age: 48 years old, sex: male) three times a day (10 o'clock, 14:00 and 17:00) for 3 days, and one end of the water-absorbent substrate sheet was collected. An appropriate amount was dropped on the sample, and the development of the sample after 10 minutes and 30 minutes was observed. ○ when the moisture spreads very quickly to the other end (the end opposite to the end where the sample is dropped), △ when the moisture spreads to the other end, but slightly slower, and the spreading speed is slow The results are shown in Table 2, where x indicates that the other end cannot be fully developed.

Figure 2007051979
Figure 2007051979

当該結果の通り、非イオン界面活性剤を吸水性基材に含ませない場合であっても、試料中に含まれる水分は展開できる。しかし非イオン界面活性剤を基材に添加することによって、水分の展開を非常に速やかにできることが実証された。   As the result, even when the nonionic surfactant is not contained in the water-absorbing substrate, the moisture contained in the sample can be developed. However, it has been demonstrated that the development of moisture can be made very rapid by adding a nonionic surfactant to the substrate.

本発明の歯周疾患診断用具の一例を模式的に示す図である。It is a figure which shows typically an example of the periodontal disease diagnostic tool of this invention.

符号の説明Explanation of symbols

1 : 吸水性基材
2 : 被検試料受領部
3 : 歯周疾患原因細菌標識部、 31 : 抗体A
4 : 歯周疾患原因細菌検出部、 41 : 抗体B
5 : 確認部
1: Water-absorbing base material 2: Test specimen receiving part 3: Periodontal disease-causing bacterial labeling part 31: Antibody A
4: Periodontal disease-causing bacteria detection part 41: Antibody B
5: Confirmation part

Claims (8)

歯周疾患を診断するための用具であって、
吸水性基材上に、
(1) 被検試料受領部、
(2) 歯周疾患原因細菌に対するものであり且つ標識を有する抗体Aが、被検試料中の水分の移動に伴って移動できるように保持されている歯周疾患原因細菌標識部、および
(3) 歯周疾患原因細菌に対する抗体Bが固定されている歯周疾患原因細菌検出部、
を(1)〜(3)の順番で有することを特徴とする歯周疾患診断用具。
A tool for diagnosing periodontal disease,
On the water-absorbing substrate,
(1) Test specimen receiver
(2) Periodontal disease-causing bacteria labeling part, which is held against the periodontal disease-causing bacteria and has antibody A so that it can move with the movement of moisture in the test sample; ) Periodontal disease-causing bacteria detector, to which antibody B against periodontal disease-causing bacteria is fixed,
In the order of (1) to (3).
さらに、(4) 被検試料中の水分が上記歯周疾患原因細菌検出部を通過したことを確認するための確認部を有する請求項1に記載の歯周疾患診断用具。   Furthermore, (4) The periodontal disease diagnostic tool of Claim 1 which has a confirmation part for confirming that the water | moisture content in a test sample passed the said periodontal disease cause bacteria detection part. 上記吸水性基材が非イオン界面活性剤を含むものである請求項1または2に記載の歯周疾患診断用具。   The periodontal disease diagnostic tool according to claim 1 or 2, wherein the water-absorbing substrate contains a nonionic surfactant. 上記抗体Aと抗体Bが、歯周疾患原因細菌の膜タンパク質、表層多糖類、表層脂質類、表層リポ多糖類、分泌物質およびこれらの複合体からなる1または2以上と特異的に反応するものである請求項1〜3のいずれかに記載の歯周疾患診断用具。   Antibody A and antibody B specifically react with one or more of membrane proteins, surface polysaccharides, surface lipids, surface lipopolysaccharides, secreted substances and complexes of periodontal disease-causing bacteria The periodontal disease diagnostic tool according to any one of claims 1 to 3. 上記抗体Aと抗体Bが、ポルフィロモナス ジンジバリス、バクテロイデス フォーサイサス、トレポネーマ デンティコラ、フゾバクテリウム ヌクレアタム、プレボテラ インターメディア、ストレプトコッカス サンギス、ストレプトコッカス オラーリス、エイケネラ コローデンス、アクチノバチラス アクチノミセテムコミタンスおよびアクチノマイセス ネスランディよりなる群から選択される1または2以上の歯周疾患原因細菌と特異的に反応するものである請求項1〜4のいずれかに記載の歯周疾患診断用具。   Antibody A and Antibody B are Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Fusobacterium nucleatum, Prevotella intermedia, Streptococcus sangis, Streptococcus oralis, Aikenella colodens, Actinobacteriacem The periodontal disease diagnostic tool according to any one of claims 1 to 4, which specifically reacts with one or more periodontal disease-causing bacteria selected from the group. 上記抗体Aが1種または2種以上のモノクローナル抗体である請求項1〜5のいずれかに記載の歯周疾患診断用具。   The periodontal disease diagnostic tool according to any one of claims 1 to 5, wherein the antibody A is one or more monoclonal antibodies. 上記抗体Bが1種または2種以上のモノクローナル抗体である請求項1〜6のいずれかに記載の歯周疾患診断用具。   The periodontal disease diagnostic tool according to any one of claims 1 to 6, wherein the antibody B is one or more monoclonal antibodies. イムノクロマト法により歯周疾患原因細菌を検出する方法であって、
歯周疾患原因細菌に対するものであり且つ標識を有する抗体Aと、歯周疾患原因細菌に対する抗体Bを用いることを特徴とする歯周疾患原因細菌の検出方法。
A method of detecting periodontal disease-causing bacteria by immunochromatography,
A method for detecting a periodontal disease-causing bacterium, comprising using an antibody A against a periodontal disease-causing bacterium and having a label, and an antibody B against the periodontal disease-causing bacterium.
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