JP2006524505A - 多剤耐性を調節することができる抗体フラグメント、ならびにこの抗体フラグメントを使用する組成物およびキットおよび方法 - Google Patents
多剤耐性を調節することができる抗体フラグメント、ならびにこの抗体フラグメントを使用する組成物およびキットおよび方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006524505A JP2006524505A JP2006507575A JP2006507575A JP2006524505A JP 2006524505 A JP2006524505 A JP 2006524505A JP 2006507575 A JP2006507575 A JP 2006507575A JP 2006507575 A JP2006507575 A JP 2006507575A JP 2006524505 A JP2006524505 A JP 2006524505A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody fragment
- cells
- glycoprotein
- cell
- polynucleotide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
本発明は、例としてだけであるが、添付されている図面を参照して、本明細書中に記載される。次に図面を詳しく具体的に参照して、示されている細目は、例としてであり、また、本発明の好ましい実施形態の例示的な議論のためだけのものであり、従って、本発明の原理および概念的局面の最も有用かつ容易に理解された記述であると考えられるものを提供するために示されていることが強調される。これに関して、記述を図面と一緒に理解することにより、本発明のいくつかの形態が実際にどのように具体化され得るかが当業者には明らかになるので、発明の構造的詳細を、発明の基本的な理解のために必要であるよりも詳細に示すことは試みられていない。
図1a〜図1dは、精製されたA2単鎖Fv(scFv)の特異性および結合特質を明らかにする。図1aは、中央および右側のレーンにおいてA2scFvが単一バンドであることを表し、同時に、左側レーンが分子量サイズ標準のバンドを示すSDS−PAGE分析の写真である。図1bは、ビオチン化された標的のPgp由来ペプチド(配列番号1のアミノ酸配列を含む;Pgp)、またはビオチン化された非標的ペプチド(PRP)、またはストレプトアビジン(streptA)に対するA2scFv結合のELISAの棒グラフである。グラフは、A2scFvが標的のPgp由来ペプチドと用量依存的な様式で反応したことを示している。A2scFvは非標的ペプチドまたはストレプトアビジンとは反応しなかった。図1cは、ビオチン化標的のPgp由来ペプチドに対するA2scFvの結合の用量応答曲線を表すELISAのプロットである。50%の結合のために要求されるA2scFvの濃度は約150nMとして内挿された。図1dは競合放射免疫アッセイプロットである。このプロットは、一定量の[125I]標識されたA2scFvと、増大する量の標識されていないA2scFv(競合剤として)とを使用することに基づいている。A2scFvの50%の結合阻害のための要求される濃度は約130nMとして内挿された。
図2a〜図2hは、多剤耐性(MDR)を示し、かつP−糖タンパク質(Pgp)を過剰発現する腫瘍細胞に対するA2scFv結合の能力および選択性を明らかにする。図2aは、薬物感受性のヒト卵巣ガン腫細胞2780と反応するA2scFvの免疫蛍光フローサイトメーター分析を表すプロットである。このプロットは、A2scFv処置が蛍光強度に対して何ら影響を有しなかったことを示しており、これは、抗体−細胞の結合がないことを示している。図2bは、MDRの、Pgpを過剰発現する卵巣ガン腫細胞2780ADRと反応するA2scFvの免疫蛍光フローサイトメーター分析を表すプロットである。このプロットは、A2scFv処置が蛍光強度の10倍の増大をもたらしたことを示しており、これは抗体−細胞の強い結合を示している。図2cは、薬物感受性のヒトガン腫細胞KB3−1と反応するA2scFvの免疫蛍光フローサイトメーター分析を表すプロットである。このプロットは、A2scFv処置が蛍光強度に対して何ら影響を有しなかったことを示しており、これは、抗体−細胞の結合がないことを示している。図2dは、MDRの、Pgpを過剰発現するヒトガン腫細胞KBV−1(薬物感受性のヒトガン腫細胞KB3−1に由来する)と反応するA2scFvの免疫蛍光フローサイトメーター分析を表すプロットである。このプロットは、A2scFv処置が蛍光強度の実質的な増大をもたらしたことを示しており、これは抗体−細胞の強い結合を示している。図2eは、A2scFvで処置された、MDRの、Pgpを過剰発現する卵巣ガン腫細胞2780ADR(薬物感受性の卵巣ガン腫細胞株2780に由来する)の免疫組織化学的染色を例示する顕微鏡写真である。この顕微鏡写真は、陽性の抗体−細胞反応を示す染色された細胞を示している。図2fは、A2scFvで処置された薬物感受性細胞2780の免疫組織化学的染色を例示する顕微鏡写真である。細胞は染色されないままであった。これは、抗体−細胞の反応がないことを示している。図2gは、A2scFvで処置された、MDRの、Pgpを過剰発現するヒトガン腫細胞KB3−1(薬物感受性のヒトガン腫細胞KBV−1に由来する)の免疫組織化学的染色を例示する顕微鏡写真である。この顕微鏡写真は、陽性の抗体−細胞反応を示す染色された細胞を示している。図2hは、A2scFvで処置された薬物感受性のヒトガン腫細胞KBV−1(MDRの、Pgpを過剰発現するヒトガン腫細胞KB3−1の親株)の免疫組織化学的染色を例示する顕微鏡写真である。細胞は染色されないままであった。これは、抗体−細胞の反応がないことを示している。
図3a〜図3eはMDR細胞における薬物排出活性に対するA2scFvの影響を明らかにする。図3aは、カルセインの蓄積速度を、(i)薬物感受性のヒト卵巣ガン腫細胞2780(黒塗り棒により表される)、および(ii)MDRの、Pgpを過剰発現する卵巣ガン腫細胞2780ADR(灰色棒により表される)において比較する蛍光計アッセイによって得られたデータを表す棒グラフである。このグラフは、5分間または15分間のインキュベーションの後において蛍光強度の1/5および1/10への低下(これはカルセイン取り込みの低下を示す)をそれぞれ示している。図3bは、カルセインの蓄積を、(i)薬物感受性のヒト卵巣ガン腫細胞2780、および(ii)MDRの、Pgpを過剰発現するヒト卵巣ガン腫細胞2780ADRにおいて比較するフローサイトメーターアッセイを表すプロットである。このプロットは、2780ADR細胞が実質的に低下した平均蛍光強度を示したことを示している。これは、薬物感受性の2780細胞によるカルセイン取り込みと比較して、MDR細胞によるカルセイン取り込みのレベルが実質的に低下していることを示している。図3cは、MDRの、Pgpを過剰発現する2780ADR細胞におけるカルセインの蓄積に対するA2scFvの影響を蛍光計アッセイにおいて明らかにする棒グラフである。このグラフは、2780ADR細胞によるカルセインの取り込みに対する、カルセイン添加前に投与されたA2scFvの正の用量応答効果を示している。図3dは、MDRの、Pgpを過剰発現する2780ADR細胞によるカルセイン取り込みに対するA2scFvの影響を明らかにするプロットである。A2scFvをカルセイン添加前に投与した。このプロットは、蛍光強度の平均値が実質的に大きくなっていること(4倍〜5倍)を示している。これは、A2scFvで処置されていない細胞と比較して、A2scFvで処置されたMDR細胞によるカルセイン取り込みの実質的な増大を示している。図3eは、scFvの特異性を例示する棒グラフである。このグラフは、蛍光計アッセイによって得られたデータを表しており、2780ADR細胞に対するA2scFvの投与、続くカルセインの添加は、細胞の蛍光強度を実質的に増大させたことを示している。これは、細胞におけるカルセイン取り込みが増大していることを示している。比較において、2780ADR細胞に対する非標的scFv G1(これはメラノーマ腫瘍抗原に対して単離された)の投与は細胞におけるカルセイン取り込みを増大させなかった。
図4a〜図4eは様々なMDR細胞株およびそれらの薬物感受性の親細胞株における薬物排出活性に対するA2scFvの影響を明らかにする。図4aは、齧歯類(CHO)MDR細胞株EMTR1におけるカルセイン取り込みを比較する蛍光計アッセイによって得られたデータを表す棒グラフである。このグラフは、A2scFvで処置され、続いてカルセインが添加された細胞が、実質的に大きくなったレベルの蛍光を示したことを示しており、これは、非処置(陰性)コントロールと比較したとき、細胞におけるカルセイン取り込みが大きくなっていることを示している。A2scFvの効果はベラパミル(陽性コントロールとして使用された基準のMDR調節剤)の効果と類似していた。図4bは、MDRヒト類表皮細胞株KB−V1におけるカルセイン取り込みを比較する蛍光計アッセイによって得られたデータを表す棒グラフである。このグラフは、A2scFvで処置され、続いてカルセインが添加された細胞が、実質的に大きくなったレベルの蛍光を示したことを示しており、これは、非処置(陰性)コントロールと比較したとき、細胞における大きくなったカルセイン取り込みを示している。A2scFvの効果はベラパミル(陽性コントロールとして使用された基準のMDR調節剤)の効果と類似していた。図4cは、薬物感受性の2780細胞株(2780ADRの親株)におけるカルセイン取り込みを比較する蛍光計アッセイによって得られたデータを表す棒グラフである。このグラフは、A2scFvによって処置された細胞、非処置(陰性)コントロール、またはベラパミル(陽性)コントロールにおいて観測された蛍光強度が類似していることを示した。従って、これは、薬物感受性細胞におけるカルセイン取り込みに対して、A2scFvは影響を及ぼさなかったことを示している。図4dは、薬物感受性のヒト類表皮細胞株KB3−1(KBV−1の親株)におけるカルセイン取り込みを比較する蛍光計アッセイによって得られたデータを表す棒グラフである。このグラフは、A2scFvによって処置された細胞、非処置(陰性)コントロール、またはベラパミル(陽性)コントロールにおいて観測された蛍光強度が類似していることを示している。従って、これは、薬物感受性細胞におけるカルセイン取り込みに対して、A2scFvは影響を及ぼさなかったことを示している。図4eは、薬物感受性の齧歯類(CHO)細胞株A8(EMTR1の親株)におけるカルセイン取り込みを比較する蛍光計アッセイによって得られたデータを表す棒グラフである。このグラフは、A2scFvによって処置された細胞、非処置(陰性)コントロール、またはベラパミル(陽性)コントロールにおいて観測された蛍光強度が類似していることを示している。従って、これは、薬物感受性細胞におけるカルセイン取り込みに対して、A2scFvは影響を及ぼさなかったことを示している。
図5は様々な濃度のA2scFvで処置された2780ADR細胞におけるカルセイン取り込みを表すプロットである。このプロットは、カルセイン取り込みを示す蛍光強度の用量応答曲線を示している。推定される飽和(IC100)濃度およびIC50濃度はそれぞれ、1mlあたり0.1mgおよび0.065mgのA2scFvである(すなわち、それぞれ、4μMおよび2.6μM)。
図6は様々な濃度のドキソルビシンで処置された2780ADR細胞の生存性に対するA2scFvの影響を表す棒グラフである。細胞生存性が細胞タンパク質内への[3H]−ロイシン取り込みによって測定された。グラフは、ドキソルビシン添加前に細胞をA2scFvで処置することにより、A2scFvで処置されていない細胞と比較して、細胞生存性の実質的な喪失がもたらされたことを示している。
A2単鎖Fvの単離
免疫化のためのペプチドディスプレイ構築物の作製:
ヒトP−糖タンパク質(Pgp、GenBankアクセッション番号NM000927.2)の1番目の推定される細胞外ループのアミノ酸73〜85に対応するペプチド配列GEMTDIFANAGNL(配列番号1)を、Niv他(19)によって記載されるように合成した。このアミノ酸配列を呈示する組換えファージを、FrenkelおよびSolomon(17)によって記載されるように、繊維状バクテリオファージf88のHinDIIIおよびPstIのクローニング部位を使用して作製した。組換え繊維状バクテリオファージf88を使用して、14日間隔で、1回の注射につきPBSでの1011ファージユニットの3回の腹腔内注射でマウスを免疫化した。免疫化マウスから集められた血清サンプルを、このペプチドとの免疫反応性についてELISAによって調べた。標的ペプチドに対する特異的な免疫応答を示したマウスを選択して、単鎖Fv(scFv)ファージディスプレイライブラリーを構築した。
scFvファージディスプレイライブラリーを、Clackson他[Nature、352:624〜628(1991)]によって記載される手法に従って、上記に記載されるファージ免疫化マウスの脾臓細胞から抽出されたRNAを使用して作製した。簡単に記載すると、免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン(VH)および軽鎖可変ドメイン(VL)に対応するポリヌクレオチド配列を、縮重プライマーの特定のセットを使用して、RT−PCRによって免疫化マウスの脾臓B細胞のmRNAから増幅した。VHおよびVLのPCRプールをPCR重複伸長反応によって単鎖Fvレパートリーに組み立て、続いてSfiI−NotIフラグメントとしてpCANTAB6ファージミドベクターにクローン化した。ライブラリーの複雑性は1x107個の独立したクローンであった。パンニングのために、ライブラリーを最初に、ストレプトアビジンでコーティングされた磁石ビーズとのインキュベーションによってストレプトアビジン結合物質の枯渇処理に供した。その後、配列番号1のアミノ酸配列を含むビオチン化ペプチド(1μM)を1011cfuの枯渇化ライブラリーと(1時間、室温で)インキュベーションし、その後、ストレプトアビジンでコーティングされた磁石ビーズを加えた。結合したファージを、室温で5分間、1mlのトリエチルアミン(100mM、pH12)を使用することによって溶出し、その後、0.1mlの1M Tris−HCl(pH7.4)で中和した。溶出されたファージを指数増殖中の大腸菌TG1細胞において拡大し、その後、大腸菌TG1細胞に、Hoogenboom他(16)によって記載されるように、M13KO7ヘルパーファージを重複感染させた。
A2scFv配列(配列番号2)をPCRによってファージクローンから回収し、SfiI−NotIクローニング部位を使用してファージミドベクターpCANTAB6にサブクローン化した。Mycタグ(配列番号3)およびヘキサヒスチジンタグをscFv遺伝子のC末端に融合した。scFv抗体をBL21(λDE3)細胞において発現させ、そして、C末端に融合されたヘキサヒスチジンタグを使用して、金属イオンアフィニティークロマトグラフィーによってペリプラズム画分から精製した。精製されたA2scFvのSDS−PAGE分析が図1aに示される。
A2scFvの特異性および結合特性
A2scFv抗体の分子プロフィルをサイズ排除クロマトグラフィーによって分析し、約30kDaの予想分子量を有するモノマー形態での単一タンパク質ピークが明らかにされた(データ示さず)。A2scFvの収率は約2%であった(1リットルの培養において2mgの高純度タンパク質)。
A2scFvの生物学的機能
Pgpの薬物排出活性に対するA2scFvの影響を一連の発色体排出アッセイで評価した。逆の関係が、MDR細胞におけるPgp活性のレベルと、カルセインの蓄積との間には存在する[Hollo他、(20)]ので、アッセイでは、蛍光性のPgp疎水性基質カルセイン−AM(Molecular Probes、Eugene、Oregon)を利用した。A2scFvを、下記の表3に記載されるような、安定なPgp依存的MDR表現型を呈示するヒト細胞株および齧歯類(CHO)細胞株、ならびに、それらのそれぞれの薬物感受性の親細胞に加えた。
配列番号2はA2単鎖Fvコード配列である。
配列番号3はMyc−tagコード配列である。
Claims (53)
- P−糖タンパク質の細胞外部分と結合することができる抗原結合領域を含み、多剤耐性細胞における薬物排出活性を少なくとも部分的に阻害することができる抗体フラグメント。
- 抗体フラグメントはFvフラグメントである請求項1に記載の抗体フラグメント。
- 抗体フラグメントは単鎖Fvである請求項2に記載の抗体フラグメント。
- 抗体フラグメントはFabである請求項1に記載の抗体フラグメント。
- 抗体フラグメントはF(ab’)2である請求項1に記載の抗体フラグメント。
- 抗体フラグメントはF(ab’)2である請求項1に記載の抗体フラグメント。
- 前記P−糖タンパク質は、mdr1遺伝子によって発現される170kDaのポリペプチドである請求項1に記載の抗体フラグメント。
- 前記抗原結合領域は、前記P−糖タンパク質の前記細胞外部分の第1のループに存在するエピトープに対して向けられている請求項7に記載の抗体フラグメント。
- 前記エピトープは、配列番号1に示されるアミノ酸配列を含む請求項8に記載の抗体フラグメント。
- 前記多剤耐性細胞はガン細胞である請求項1に記載の抗体フラグメント。
- 前記多剤耐性細胞はヒトガン細胞である請求項1に記載の抗体フラグメント。
- P−糖タンパク質の細胞外部分と結合することができる抗原結合領域を含み、多剤耐性細胞における薬物排出活性を少なくとも部分的に阻害することができる抗体フラグメントを有効成分として含み、かつ、医薬的に許容され得るキャリアを含む医薬組成物。
- 前記多剤耐性細胞はガン細胞である請求項12に記載の医薬組成物。
- 化学療法薬物をさらに含む請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記化学療法薬物はガン細胞に対して毒性である請求項14に記載の医薬組成物。
- 前記P−糖タンパク質はmdr1遺伝子によって発現される170kDaのポリペプチドである請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記抗原結合領域は、前記P−糖タンパク質の前記細胞外部分の第1のループに存在するエピトープに対して向けられている請求項16に記載の医薬組成物。
- 前記エピトープは、配列番号1に示されるアミノ酸配列を含む請求項17に記載の医薬組成物。
- 個体におけるガンを治療する方法であって、
(a)多剤耐性ガン細胞における薬物排出活性を少なくとも部分的に阻害することができる抗体フラグメントを個体に与えること、および
(b)治療効果的な量の抗ガン剤を個体に投与し、それにより個体におけるガンを治療すること
を含む方法。 - 前記抗体フラグメントは、医薬的に許容され得るキャリアとともに投与される請求項19に記載の方法。
- 工程(b)は工程(a)の前に、工程(a)と同時に、または工程(a)の後に実施される請求項19に記載の方法。
- 前記抗ガン剤は前記抗体フラグメントと複合体化される請求項21に記載の方法。
- 工程(a)は、個体の細胞内において前記抗体フラグメントを発現させることによって実施される請求項19に記載の方法。
- 前記抗体フラグメントは、P−糖タンパク質の細胞外部分と結合することができる抗原結合領域を含む請求項19に記載の方法。
- 前記抗原結合領域は、前記P−糖タンパク質の前記細胞外部分の第1のループに存在するエピトープに対して向けられている請求項24に記載の方法。
- 前記エピトープは、配列番号1に示されるアミノ酸配列を含む請求項25に記載の方法。
- P−糖タンパク質を過剰発現する細胞を診断するためのキットであって、前記P−糖タンパク質と結合することができる抗原結合領域を含有する抗体フラグメントと、前記抗体フラグメントを検出するための試薬とを含むキット。
- 細胞外P−糖タンパク質を過剰発現する細胞を診断する際に使用される前記抗体フラグメントを識別する包装材をさらに含む請求項27に記載のキット。
- 前記抗体フラグメントは検出可能な成分で標識される請求項27に記載のキット。
- 前記検出可能な成分は、発色成分、蛍光発生成分、発光成分および放射性成分からなる群から選択される請求項29に記載のキット。
- 前記P−糖タンパク質はmdr1遺伝子によって発現される170kDaのポリペプチドである請求項27に記載のキット。
- 前記抗原結合領域は、前記P−糖タンパク質の前記細胞外部分の第1のループに存在するエピトープに対して向けられている請求項31に記載のキット。
- 前記エピトープは、配列番号1に示されるアミノ酸配列を含む請求項32に記載のキット。
- P−糖タンパク質を過剰発現する細胞を検出する方法であって、
(a)P−糖タンパク質の細胞外部分と結合することができる抗原結合領域を含む抗体フラグメントに細胞をさらすこと、および
(b)前記P−糖タンパク質の前記細胞外部分に結合した前記抗体フラグメントを検出し、それにより、細胞外P−糖タンパク質を過剰発現する細胞を同定すること
を含む方法。 - 細胞は個体の細胞であり、方法は工程(a)の前に個体から生物学的サンプルを得ることをさらに含む請求項34に記載の方法。
- 前記抗体フラグメントは検出可能な成分で標識される請求項34に記載の方法。
- 前記検出可能な成分は、発色成分、蛍光発生成分、発光成分および放射性成分からなる群から選択される請求項36に記載の方法。
- 前記P−糖タンパク質はmdr1遺伝子によって発現される170kDaのポリペプチドである請求項34に記載の方法。
- 前記抗原結合領域は、前記P−糖タンパク質の前記細胞外部分の第1のループに存在するエピトープに対して向けられている請求項38に記載の方法。
- 前記エピトープは、配列番号1に示されるアミノ酸配列を含む請求項39に記載の方法。
- P−糖タンパク質の細胞外部分と結合することができる抗原結合領域を含み、多剤耐性細胞における薬物排出活性を少なくとも部分的に阻害することができる抗体フラグメントをコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
- 前記P−糖タンパク質はmdr1遺伝子によって発現される170kDaのポリペプチドである請求項41に記載のポリヌクレオチド。
- 前記抗原結合領域は、前記P−糖タンパク質の前記細胞外部分の第1のループに存在するエピトープに対して向けられている請求項42に記載のポリヌクレオチド。
- 前記エピトープは、配列番号1に示されるアミノ酸配列を含む請求項43に記載のポリヌクレオチド。
- 前記抗体フラグメントはFvフラグメントである請求項41に記載のポリヌクレオチド。
- 前記抗体フラグメントは単鎖Fvである請求項45に記載のポリヌクレオチド。
- 前記抗体フラグメントはFabである請求項41に記載のポリヌクレオチド。
- 前記抗体フラグメントはF(ab’)2である請求項41に記載のポリヌクレオチド。
- 前記抗体フラグメントはF(ab’)である請求項41に記載のポリヌクレオチド。
- ポリヌクレオチドが配列番号2に示される通りである請求項46に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項41に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物。
- 前記ポリヌクレオチドの発現を調節するためのプロモーターをさらに含む請求項51に記載の核酸構築物。
- 請求項51に記載の核酸構築物を含む細胞。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US10/405,123 US7294701B2 (en) | 2003-04-02 | 2003-04-02 | Antibody fragment capable of modulating multidrug resistance and compositions and kits and methods using same |
PCT/IL2004/000017 WO2004087041A2 (en) | 2003-04-02 | 2004-01-08 | An antibody fragment capable of modulating multidrug resistance and compositions and kits and methods using same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006524505A true JP2006524505A (ja) | 2006-11-02 |
JP4576375B2 JP4576375B2 (ja) | 2010-11-04 |
Family
ID=33097024
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006507575A Expired - Fee Related JP4576375B2 (ja) | 2003-04-02 | 2004-01-08 | 多剤耐性を調節することができる抗体フラグメント、ならびにこの抗体フラグメントを使用する組成物およびキットおよび方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7294701B2 (ja) |
EP (1) | EP1608307B1 (ja) |
JP (1) | JP4576375B2 (ja) |
AT (1) | ATE511519T1 (ja) |
CA (1) | CA2520936C (ja) |
ES (1) | ES2364462T3 (ja) |
HK (1) | HK1085664A1 (ja) |
WO (1) | WO2004087041A2 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007059143A2 (en) * | 2005-11-15 | 2007-05-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of identifying and treating individuals exhibiting mdr-1 overexpression with protein tyrosine kinase inhibitors and combinations thereof |
US8835608B2 (en) * | 2006-12-01 | 2014-09-16 | Duke University | Anti-MRP3 antibodies and methods of use |
WO2017013172A1 (en) * | 2015-07-23 | 2017-01-26 | Stichting Katholieke Universiteit | Novel inhibitors of p-glycoprotein |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07507202A (ja) * | 1992-03-20 | 1995-08-10 | ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニヴァースティ オブ イリノイ | ヒトmdr1マルチドラッグ耐性遺伝子産物に対するモノクローナル抗体およびその使用 |
JPH08501925A (ja) * | 1992-06-17 | 1996-03-05 | イスティテュート・スペリオーレ・ディ・サニタ | 糖蛋白pに対するモノクローナル抗体 |
Family Cites Families (39)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154600B (nl) | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
NL154599B (nl) | 1970-12-28 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking. |
US3901654A (en) | 1971-06-21 | 1975-08-26 | Biological Developments | Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors |
US3853987A (en) | 1971-09-01 | 1974-12-10 | W Dreyer | Immunological reagent and radioimmuno assay |
US3867517A (en) | 1971-12-21 | 1975-02-18 | Abbott Lab | Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies |
US3879517A (en) | 1972-12-26 | 1975-04-22 | Microdot Inc | Method for making a dual seal insulator for multiple conductor connectors |
US3935074A (en) | 1973-12-17 | 1976-01-27 | Syva Company | Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4034074A (en) | 1974-09-19 | 1977-07-05 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG) |
US3984533A (en) | 1975-11-13 | 1976-10-05 | General Electric Company | Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction |
US4098876A (en) | 1976-10-26 | 1978-07-04 | Corning Glass Works | Reverse sandwich immunoassay |
US4879219A (en) | 1980-09-19 | 1989-11-07 | General Hospital Corporation | Immunoassay utilizing monoclonal high affinity IgM antibodies |
US5011771A (en) | 1984-04-12 | 1991-04-30 | The General Hospital Corporation | Multiepitopic immunometric assay |
US4666828A (en) | 1984-08-15 | 1987-05-19 | The General Hospital Corporation | Test for Huntington's disease |
US4837306A (en) | 1985-02-25 | 1989-06-06 | The Ontario Cancer Institute | Method for selecting hybridomas producing antibodies specific to the P-glycoprotein cell suface antigen and a cDNA clone encoding the C-terminal portion of the antigen |
US4801531A (en) | 1985-04-17 | 1989-01-31 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis |
US4866042A (en) | 1987-11-18 | 1989-09-12 | Neuwelt Edward A | Method for the delivery of genetic material across the blood brain barrier |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5272057A (en) | 1988-10-14 | 1993-12-21 | Georgetown University | Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase |
US5750373A (en) | 1990-12-03 | 1998-05-12 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants |
US5464764A (en) | 1989-08-22 | 1995-11-07 | University Of Utah Research Foundation | Positive-negative selection methods and vectors |
US5192659A (en) | 1989-08-25 | 1993-03-09 | Genetype Ag | Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes |
US5780225A (en) | 1990-01-12 | 1998-07-14 | Stratagene | Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US5698426A (en) | 1990-09-28 | 1997-12-16 | Ixsys, Incorporated | Surface expression libraries of heteromeric receptors |
US5434075A (en) * | 1992-03-20 | 1995-07-18 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Monoclonal antibody to a human MDR1 multidrug resistance gene product, and uses |
DK1471142T3 (da) | 1991-04-10 | 2009-03-09 | Scripps Research Inst | Heterodimere receptor-biblioteker under anvendelse af fagemider |
US5407653A (en) | 1991-06-26 | 1995-04-18 | Brigham And Women's Hospital | Evaluation of the multidrug resistance phenotype |
US5733743A (en) | 1992-03-24 | 1998-03-31 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
US5281521A (en) | 1992-07-20 | 1994-01-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modified avidin-biotin technique |
CZ199593A3 (en) | 1992-10-02 | 1994-04-13 | Asta Medica Ag | Phthalazinone derivatives exhibiting anti-arrhythmic and analgesic activity and eliminating resistance to a plurality of medicaments (mdr) |
EP0669941A1 (en) * | 1992-11-02 | 1995-09-06 | NICOLAU, Yves Claude | Method of reducing multidrug resistance in cells and tissues |
US5541110A (en) | 1994-05-17 | 1996-07-30 | Bristol-Myers Squibb | Cloning and expression of a gene encoding bryodin 1 from Bryonia dioica |
US5516637A (en) | 1994-06-10 | 1996-05-14 | Dade International Inc. | Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage |
US5543423A (en) | 1994-11-16 | 1996-08-06 | Vertex Pharmaceuticals, Incorporated | Amino acid derivatives with improved multi-drug resistance activity |
JP2978435B2 (ja) | 1996-01-24 | 1999-11-15 | チッソ株式会社 | アクリロキシプロピルシランの製造方法 |
AU3482297A (en) * | 1996-06-05 | 1998-01-05 | Eugene Mechetner | Reagents and methods for inhibiting cytokine release by blood cells |
-
2003
- 2003-04-02 US US10/405,123 patent/US7294701B2/en active Active
-
2004
- 2004-01-08 CA CA2520936A patent/CA2520936C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-01-08 WO PCT/IL2004/000017 patent/WO2004087041A2/en active Application Filing
- 2004-01-08 JP JP2006507575A patent/JP4576375B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-01-08 ES ES04700749T patent/ES2364462T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-08 AT AT04700749T patent/ATE511519T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-01-08 EP EP04700749A patent/EP1608307B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-05-16 HK HK06105663.9A patent/HK1085664A1/xx not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07507202A (ja) * | 1992-03-20 | 1995-08-10 | ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニヴァースティ オブ イリノイ | ヒトmdr1マルチドラッグ耐性遺伝子産物に対するモノクローナル抗体およびその使用 |
JPH08501925A (ja) * | 1992-06-17 | 1996-03-05 | イスティテュート・スペリオーレ・ディ・サニタ | 糖蛋白pに対するモノクローナル抗体 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6009049580, Int. J. Cancer, 2001, Vol.94, pp.864−872 * |
JPN6009049582, Int. J. Cancer, 1996, Vol.65, pp.613−619 * |
JPN7009004324, J. Natl. Cancer Inst., 1991, Vol.83, pp.1386−1391 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2364462T3 (es) | 2011-09-02 |
EP1608307A4 (en) | 2007-10-31 |
HK1085664A1 (en) | 2006-09-01 |
CA2520936C (en) | 2013-06-11 |
WO2004087041A2 (en) | 2004-10-14 |
CA2520936A1 (en) | 2004-10-14 |
JP4576375B2 (ja) | 2010-11-04 |
WO2004087041A3 (en) | 2005-11-17 |
EP1608307A2 (en) | 2005-12-28 |
EP1608307B1 (en) | 2011-06-01 |
ATE511519T1 (de) | 2011-06-15 |
US20040197334A1 (en) | 2004-10-07 |
US7294701B2 (en) | 2007-11-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7337864B2 (ja) | マトリプターゼ及びu‐プラスミノーゲン活性化因子の基質及び他の切断可能部分、並びにその使用方法 | |
US20210284721A1 (en) | Modified antibody compositions, methods of making and using thereof | |
AU773568B2 (en) | Antobody to human gastrointestinal epithelial tumor antigen related to alpha 6 beta 4 integrin | |
KR101380570B1 (ko) | 인간 항-인터페론 감마 항체 및 이것의 사용 방법 | |
KR20080113262A (ko) | Gm-csf 수용체에 대한 결합 성분 | |
MXPA04004857A (es) | ANTICUERPOS DE COLáGENA HUMANIZADOS Y METODOS RELACIONADOS. | |
US20030077277A1 (en) | Human antibodies that have MN binding and cell adhesion-neutralizing activity | |
US20220119546A1 (en) | Plectin-1 binding antibodies and uses thereof | |
US7928193B2 (en) | Antigen binding proteins directed against scavenger receptor B1 that inhibit HCV replication | |
EP2149582A1 (en) | Osteopontin functional epitopes, monoclonal antibodies against the epitopes and uses thereof | |
KR20100064985A (ko) | 인간 및 마우스에서 발현하는 l1cam에 특이적으로 결합하는 재조합 단일클론항체 및 그 이용 | |
Sommavilla et al. | Design and construction of a naive mouse antibody phage display library | |
JP4576375B2 (ja) | 多剤耐性を調節することができる抗体フラグメント、ならびにこの抗体フラグメントを使用する組成物およびキットおよび方法 | |
CN114853890B (zh) | 一种prlr抗原结合蛋白及其制备方法和应用 | |
US20210155709A1 (en) | Antibodies anti tumor associated antigens and method for obtaining them | |
IL171028A (en) | Single chain fv antibody capable of modulating multidrug resistance and compositions and kits and methods using same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20061212 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090925 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091224 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100319 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100608 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20100615 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100712 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100813 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100823 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130827 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |