JP2006519220A

JP2006519220A - 異なる型の肥満細胞症に適合可能なテイラーメイド治療方法

Info

Publication number: JP2006519220A
Application number: JP2006502496A
Authority: JP
Inventors: ジーン−ピエールキネト; アランムーシー
Original assignee: アブサイエンス
Priority date: 2003-02-27
Filing date: 2004-02-27
Publication date: 2006-08-24
Also published as: CA2517308A1; WO2004076693A1; EP1597398A1; DE602004013283D1; EP1597398B1; ATE393243T1; US20080025916A1

Abstract

本発明は、肥満細胞症のテイラーメイド治療のための方法に関し、この方法は、a)816位のc-kit変異が患者の試料中で検出されるか否かを評価する段階、およびb)変異が段階a)において検出される場合に、特異的816変異体c-kitインヒビターを投与するか、または段階a)において変異が検出されない場合に、野生型c-kitに対して効力を示すインヒビターを投与する段階を含む。本発明は、カテゴリーII、IIIおよびIVの肥満細胞症を治療するために特に適している。

Description

本発明は、肥満細胞症のテイラーメイド治療(tailored treatment)のための方法に関し、この方法は、a)816位のc-kit変異が患者の試料中で検出されるか否かを評価する段階、およびb)変異が段階a)において検出される場合に、特異的816変異体c-kitインヒビターを投与するか、または段階a)において変異が検出されない場合に、野生型c-kitに対して効力を示すインヒビターを投与する段階を含む。本発明は、カテゴリーII、IIIおよびIVの肥満細胞症を治療するために、特に適している。

肥満細胞症は、主として皮膚および骨髄に存在するが、疾患の性質に依存して、脾臓、肝臓、リンパ節、および胃腸管にも存在する、異なる組織における肥満細胞の異常な蓄積によって特徴付けられる障害の非常に異質な群である。これらは、いかなる年齢のいずれの性別のヒトにも影響を与え得る。肥満細胞(mast cell：MC)の新生物は、急性または慢性であり得る。急性肥満細胞新生物は、MC白血病と呼ばれる。慢性肥満細胞新生物は、局在化または一般化される可能性がある。皮膚の肥満細胞症は、最も一般化された局在化した新生物であり、しばしば子供において見い出され、ここではしばしばこれは軽減され、再発しない。肥満細胞症は、通常は後天的な疾患であるが、いくつかのまれな家族性の症例が記載されている。

肥満細胞新生物の極度な異質性に関して、これらの疾患を分類することが重要である。最も使用されている分類の1つは、Metcalfe(Metcalfe, J Invest Dermatol. 96：2S-4S, 1991)によるものであり、これは肥満細胞症の4つのカテゴリーを区別する。

カテゴリーIは、2つのサブカテゴリー(IAおよびIB)によって構成される。カテゴリーIAは、肥満細胞の浸潤が皮膚に厳密に局在化されている疾患からなる。このカテゴリーは、最も頻発する型の疾患を表し、以下を含む：i)色素性じんま疹、皮膚性肥満細胞症の最も一般的な型、特に子供において見い出される、ii)散在性皮膚性肥満細胞症、iii)孤立性肥満細胞腫、ならびにiv)水疱性の、紅皮症の肥満細胞症および毛細血管拡張症の肥満細胞症のようないくつかのまれなサブタイプ。これらの型は、子供における自発性寛解を伴うそれらの優秀な予後、および成体における非常に無痛性の経過によって特徴付けられる。この型の疾患の長期的な生存は、一般的には正常な集団のものと比較可能であり、別の型の肥満細胞症への移行はまれである。カテゴリーIBは、皮膚の関与を伴うかまたは伴わない、無痛性の全身性疾患(SM)によって表される。これらの型は、子供よりも成体においてはるかにより通常である。この疾患の経過はしばしば無痛性であるが、時折、攻撃的なまたは悪性の肥満細胞症の徴候が起こる可能性があり、これは進行性の損なわれた器官機能をもたらす。

カテゴリーIIは、骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、または急性白血病のような、関連する血液学的障害を有する肥満細胞症を含む。これらの悪性の肥満細胞症は、通常皮膚を含まない。この疾患の進行は、一般的に、予後を条件付ける関連する血液学的障害の型に依存する。

カテゴリーIIIは、異常な肥満細胞による複数の器官の大量の浸潤が一般的である攻撃的な全身性肥満細胞症によって表される。この種の攻撃性の臨床経過を進む患者において、骨髄増殖性障害を示す末梢血の特徴がより顕著である。この疾患の進行は、非常に急速で、急性白血病に類似する可能性があり、またはある患者はより長い生存時間を示すことが可能である。

最後に、肥満細胞症のカテゴリーIVは、10％を超える白血球細胞を示す循環している肥満細胞および肥満細胞前駆細胞の存在によって特徴付けられる肥満細胞白血病を含む。この実体は、ヒトにおけるおそらく最もまれな型の白血病を表し、かつ迅速に進行する悪性肥満細胞症の異形に類似する、非常に乏しい予後を有する。肥満細胞白血病は、デノボで、または色素性じんま疹もしくは全身性肥満細胞症の末期のいずれかで起こり得る。

カテゴリーIIおよびIIIは予後的に異なっていないので、Metcalfeの分類は、Hornyら(Horny et al., Am J Surg Pathol. 22：1132-40, 1998)の提案に従って、表1に示されるようにさらに単純化することができる。

肥満細胞は、組織局在化および構造に関連してのみならず、機能的および組織化学的レベルでもまた、それらの異質性によって特徴付けされる(Aldenborg and Enerback, Histochem. J. 26：587-96, 1994 ； Bradding et al., J Immunol. 155：297-307,1995 ； Irani et al., J Immunol. 147：247-53,1991 ； Miller et al., Curr Opin Immunol. 1：637-42, 1989；およびWelle et al., J Leukoc Biol. 61：233-45, 1997)。MCの分化、生存、および増殖は、多くはSCFに依存する(Torrey et al., 1990)。SCFについてのレセプターは、プロトオンコジーンc-kitによってコードされるc-kitであり；これはIII型レセプターチロシンキナーゼサブファミリーに属する(Baghestanian et al., 1996)。c-kitの遺伝的異常(変異、欠失)について探求している、肥満細胞症の新生物性メカニズムに関する多数の研究が実行されてきた。このような異常の存在が、以前に齧歯類またはヒトの白血球MC系統において見い出されたので示唆された。ヒトの肥満細胞症において、c-kitの変異は、種々の型の肥満細胞症においてインビボで記載されてきた(皮膚性肥満細胞症、全身性無痛性肥満細胞症、または全身性攻撃的肥満細胞症)。見い出された変異の中で、最も一般的なものは、コドン816におけるAspからValへの活性化変異である。さらに、1つの報告は、ヒトの肥満細胞症において、c-kitの膜近傍ドメインにおける変異(コドン560においてValからGly)を記載している(Valent et al., 1994)。さらに、Longley et al. (Pauls et al., 1999)は、816位における点変異を示した。

現在では、肥満細胞症の臨床的な疑いは、組織学的試験（特に皮膚および骨髄の試験）によって確証される。テュルイジンブルーなどの色素が、それらの異染色性顆粒を染色することによって、肥満細胞を同定するために使用可能である。また、クロロ酢酸−エステラーゼ反応は、染色を完了させることが可能である。さらに、トリプターゼについての免疫細胞化学は、細胞性浸潤の性質を決定するために有用である。最終的に、診断は、骨髄吸引液中のMCの免疫表現型検査の使用によって補助され得る。実際、正常細胞ならびに肥満細胞症関連肥満細胞は、CD117抗原を強力に発現し(Arber et al., Hum Pathol. 29：498-504, 1998； Escribano et al., Cytometry. 30：98-102, 1997)、かつ正常なMCでは見い出されないいくつかの抗原は、CD2、CD25、およびCD35のような新生物肥満細胞によって異常に発現されることが可能である(Escribano et al., Blood. 91：2731-6, 1998, Ormerod et al., British Journal of Dermatology. 122：737-44, 1990)。他の知見は、CD69活性化抗原が、正常な肥満細胞と比較して、全身性肥満細胞症を有する患者からのMCで過剰発現されることを示した(Diaz-Agustin et al., Br J Haematol. 106：400-5, 1999)。

肥満細胞メディエーターの生化学的決定は、肥満細胞症の診断を補助することもまた可能である：これらは、血液および尿中のヒスタミンレベル、SMの大部分の症例において増加している尿中のプロスタグランジンD2およびヒスタミンの代謝物、ならびに血液中のトリプターゼのレベルである(Hogan and Schwartz, Methods 13：43-52, 1997〜 Van Gysel et al., J Am Acad Dermatol. 35：556-8, 1996〜 Morrow et al., J Invest Dermatol. 104：937-40, 1995； Marone et al., Chem Immnunol. 62：1-21, 1995)。しかし、これらの試験を用いると、ある程度の偽陽性(アレルギー)または偽陰性(メディエーター放出を伴わない肥満細胞症)が存在する可能性がある。

c-kitの変異が異なる臨床型の肥満細胞疾患と関連するか否かを解明するために、多くの研究が行われている。実際、c-kitの変異は、インビボで種々の型の肥満細胞症(皮膚性肥満細胞症、全身性無痛性肥満細胞症、または全身性攻撃的肥満細胞症)において記載されてきた。見い出された変異の中には、コドン816におけるAspからValへの変異、および膜近傍変異がある。

Asp816Val変異は初期の前駆細胞において存在し、成熟肥満細胞においては存在しない。なぜなら、これは、MCに加えて、骨髄単球性細胞、T細胞、およびB細胞によって運ばれるからである。c-kit遺伝子のコドン816における同じ活性化点変異は、孤立型の肥満細胞症を有する患者のみならず、血液学的障害(例えば、骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、または急性白血病など)と関連した肥満細胞症である患者においてもまた記載されてきた(Boissan and Arock, Leukoc Biol. 67：135-48, 2000)。

より最近では、本発明者らは、所定の患者における活性化変異を正確に決定するために、本発明者らの特許出願WO 03/002114において、PCRに基づく標準的な分子生物学的技術を使用することを提案している。プローブおよびプライマーは、このような変異分析に特異的であるように設計された。本発明者らはまた、本発明者らの出願であるWO 03/003006において、SCF活性化c-kitまたは構成的に活性化されたc-kitのいずれかで、特に816変異c-kitで活性である、非毒性特異的c-kitインヒビターを同定するための方法を記載した。

本発明者はここで、異なる型の肥満細胞症に罹患していると疑われる60%の患者がc-kitの816位に変異を有することを発見した。この観察は、約200人の患者に対する遺伝子型決定を実行することによって可能となった。

予想外であるが、本発明者らはまた、骨髄を試料として使用する診断方法が、患者をi)816変異を有するカテゴリー、またはii)816変異を有しないカテゴリーのいずれかに分類するためには十分に正確かつ予測可能ではないことを見出した。これに反して、皮膚試料に基づく方法は、この目的のために正確であることが明らかとなった。

したがって、本発明は、関連するc-kitインヒビターの投与を可能にする、i)またはii)のカテゴリーのいずれかに属する患者に対するテイラーメイド治療を提供する。これは、c-kitインヒビターが、816変異c-kit、または野生型c-kit、または他の型のc-kitに対して活性であり得るが、両方に対しては活性でないので、特に有用である。不適切に投与されたc-kitインヒビターの非効率性および潜在的な副作用を考慮する、適切なインヒビターの選択は特に重要である。

説明
第1の態様において、本発明は、肥満細胞症のテイラーメイド治療のための方法を意図し、この方法は、a)816位のc-kit変異が患者の試料中で検出されるか否かを評価する段階、およびb)変異が段階a)において検出される場合に、特異的816変異体c-kitインヒビターを投与するか、または段階a)において変異が検出されない場合に、野生型c-kitおよび/もしくは膜近傍で変異したc-kitに対して効力を示すインヒビターを投与する段階を含む。

さらに、本発明は、ヒトにおけるカテゴリーI、II、IIIおよびIVの肥満細胞症、ならびにカテゴリーI、II、IIIおよびIVの肥満細胞症と関連する任意の徴候を治療するための上記に定義した方法に関する。より詳細には、本発明に係る方法は、ヒトにおける色素性じんま疹、びまん性皮膚肥満細胞症、孤立性肥満細胞腫、ならびにイヌの肥満細胞腫、ならびに水疱性の、紅皮症の肥満細胞症および毛細血管拡張症の肥満細胞症のようないくつかのまれなサブタイプ、骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、または急性白血病、肥満細胞症と関連した骨髄増殖性障害、および肥満細胞白血病のような、関連する血液学的障害を有する肥満細胞腫を治療するために有用である。

816変異型c-kitの特異的インヒビター、または野生型c-kitもしくは膜近傍で変異したc-kitの特異的インヒビターは、WO 03/003006において記載されるような方法に従って同定することができる。この開示に従って、当業者は、2単環式、二環式、または複素環式のアリール化合物(WO 92/20642)、ビニレン-アザインドール誘導体(WO 94/14808)、および1-シクロプロピル-4-ピリジル-キノロン(US 5,330,992)、スチリル化合物(US 5,217,999)、スチリル置換ピリジル化合物(US 5,302,606)、セレオインドールおよびセレナイド(WO 94/03427)、三環式ポリヒドロキシル化合物(WO 92/21660)およびベンジルホスホン酸化合物(WO 91/15495)、ピリミジン誘導体(US 5,521,184およびWO 99/03854)、インドリノン誘導体およびピロール置換インドリノン(US 5,792,783、EP 934 931、US 5,834,504、US 5,883,116、US 5,883,113、US 5,886,020、WO 96/40116、およびWO 00/38519)、ならびに2単環式、二環式アリール、およびヘテロアリール化合物(EP 584 222、US 5,656,643、およびWO 92/20642)、キナゾリン誘導体(EP 602 851、EP 520 722、US 3,772,295、およびUS 4,343,940)、ならびにアリールおよびヘテロアリールキナゾリン(US 5,721,237、US 5,714,493、US 5,710,158、およびWO 95/15758)から選択される試験化合物を日常的に試験することができる。

本発明に関連して、c-kitインヒビターは、816変異体または野生型c-kitまたは膜近傍変異型のいずれかの、非毒性、選択的、潜在的、かつ特異的なインヒビターである。

このようなインヒビターは、2-(3-アミノ)アリールアミノ-4-アリール-チアゾール、N-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体などのピリミジン誘導体(US 5,521,184およびWO 99/03854)、インドリノン誘導体およびピロール置換インドリノン(US 5,792,783、EP 934 931、US 5,834,504、US 5,883,116、US 5,883,113、US 5,886,020、WO 96/40116およびWO 00/38519)、ならびに2単環式、二環式アリール、およびヘテロアリール化合物(EP 584 222、US 5,656,643、およびWO 92/20642)、キナゾリン誘導体(EP 602 851、EP 520 722、US 3,772,295、およびUS 4,343,940)、4-アミノ置換キナゾリン(US 3,470,182)、4-チエニル-2-(1H)-キナゾリン、6,7-ジアルコキシキナゾリン(US 3,800,039)、アリールおよびヘテロアリールキナゾリン(US 5,721,237、US 5,714,493、US 5,710,158、およびWO 95/15758)、4-アニリノキナゾリン化合物(US 4,464,375)、ならびに4-チエニル-2-(1H)-キナゾリン(US 3,551,427)からなる群より選択されることができる。

特定の態様において、特異的インヒビターは野生型c-kitのインヒビターであり、かつc-kit 816変異体の潜在的なインヒビターではない。これはピリミジン誘導体、特に式I

のN-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体から選択されてもよく、式中、R1基、R2基、R3基、R13基からR17基は、本明細書に組み入れられるEP 564 409 B1に示される意味を有する。

好ましくは、N-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体は、式II

に対応する化合物から選択され、R1、R2、およびR3は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル、または環式基もしくは複素環式基、特にピリジル基から独立して選択され；
R4、R5、およびR6は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル基、特にメチル基から独立して選択され；ならびに
R7は、少なくとも1つの置換基を有するフェニル基であり、これは次にアミノ官能基のような少なくとも1つの塩基性部位を有する。

好ましくは、R7は以下の基である。

これらの化合物の間で、好ましいものは以下に定義される：
R1は複素環式基、特にピリジル基であり、
R2およびR3はHであり、
R4はC1〜C3アルキル、特にメチル基であり、
R5およびR6はHであり、ならびに
R7は、少なくとも1つの置換基を有するフェニル基であり、これは次にアミノ官能基、例えば以下の基

のような少なくとも1つの塩基性部位を有する。

したがって、好ましい態様において、本発明は上記に定義したような方法に関し、以下の式

に対応する、CGP57148BまたはSTI571として当技術分野において公知である化合物：4-(4-メチルピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル)ピリミジン-2イルアミノ)フェニル]-ベンズアミドの有効量の投与を含む。

この化合物の調製は、EP 564 409の実施例21に記載されており、特に有用であるβ型はWO 99/03854に記載されている。STI571は、本発明に係る方法の段階a)が816位に変異を有しないことを明らかにする場合において使用可能である。実際、この化合物は、WO 02/080925において、膜近傍に変異を有するc-kitに対して非常に活性であり、かつ野生型c-kitに対して活性であることが示されており、本発明者らは、816変異型c-kitに対して活性でないことを実証した(図1および図2を参照のこと)。

別の態様において、本発明は、カテゴリーII、IIIおよびIVの肥満細胞症、特に、関連する血液学的障害、例えば、骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、または急性白血病、肥満細胞症と関連した骨髄増殖性障害、および肥満細胞白血病を伴う肥満細胞症に罹患した816変異を有する患者のカテゴリーを治療するための薬剤を製造するための、816変異体c-kitを特異的に阻害することができる化合物の使用を目的とする。用語「特異的に阻害する」とは、「816」変異型C-KITについて1μM未満、好ましくは0.1 1μM未満のIC50を有し、かつ野生型C-KITについて5 1μMより上、好ましくは10 1μMより上のIC50を有する化合物を示すことを意味する。

このようなインヒビターは、式III、IV、V、VI、VII、VIIbisおよびVIIIから選択されるものなどの2-(3-アミノ)アリールアミノ-4-アリール-チアゾールから選択してもよく、出願人らはこれらについてPCT IB03/03685を出願した。

代替的に、式III、IV、V、VI、VII、VIIbisおよびVIIIのこれらの化合物から、ここで、野生型C-KITを特異的に阻害するものを同定することができる。本明細書において、用語「特異的に阻害する」とは、野生型C-KITについて1μM未満、好ましくは0.1μM未満のIC50を有し、かつ「816」変異型C-KITについて5μMより上、好ましくは10μMより上のIC50を有する化合物を示すことを意味する。

式III

式中、
R¹は、
a)少なくとも1つのヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい1個から10個の炭素原子を含むか、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、直鎖または分枝アルキル基；
b)ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル基またはアリール基によって置換されていてもよい、アリール基またはヘテロアリール基；
c)スルホニル基または-SO₂-R-基であって、ここでRは、ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されているか、またはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
d)-CO-NH-R基、-CO-R基、-CO-OR基、または-CO-NRR'基であって、ここでRおよびR'は、H、または少なくとも1つのヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよく、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有するアリール基、ヘテロアリール基、アルキル基、およびシクロアルキル基から独立して選択され；
R²は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R³は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁴は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁵は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁶は以下の1つであり：
(i)任意の1つの環の位置に、ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを有する、フェニルまたはその置換変種などのアリール基；
(ii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、2、3、または4-ピリジル基などのヘテロアリール基；
(iii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、例えば、2-チエニル、3-チエニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、5-チアゾリルなどの5員環芳香族複素環基、
(iv)H；I、F、Cl、またはBrから選択されるハロゲン；NH2、NO2、またはSO2；ならびに
R⁷は以下の1つである：
(i)任意の1つの環の位置に、ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを有する、フェニルまたはその置換変種などのアリール基；
(ii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、2、3、または4-ピリジル基などのヘテロアリール基；
(iii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、例えば、2-チエニル、3-チエニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、5-チアゾリルなどの5員環芳香族複素環基、
(iv)H；I、F、Cl、またはBrから選択されるハロゲン；NH2、NO2、またはSO2。

R1がa)(アルキル)、b)(アリール)およびd)(アミド)において示される定義に対応する式IIIの化合物の例は、以下に示される：
AB1
4-ジエチルアミノメチル-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB2
N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-4-モルホリン-4-イルメチル-ベンズアミド
AB3
4-ジプロピルアミノメチル-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB4
N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-4-ピペリジン-1-イルメチル-ベンズアミド
AB5
3-ヨード-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB6
4-ヒドロキシメチル-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB8
4-{[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニルアミノ]-メチル}-安息香酸メチルエステル
AB11
3-フェニル-プロピン酸[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-アミド
AB14
4-アミノ-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB16
2-ヨード-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB17
4-ヨード-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB18
4-(3-{4-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニルカルバモイル]-フェニル}-ウレイド)-安息香酸エチルエステル
AB20
N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-4-[3-(4-トリフルオロメチルフェニル)-ウレイド]-ベンズアミド
AB21
4-[3-(4-ブロモ-フェニル)-ウレイド]-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB23
{4-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニルカルバモイル]-ベンジル}-カルバミン酸tert-ブチルエステル
AB24
4-ヒドロキシ-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB26
4-[(ジイソプロピルアミノ)-メチル]-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB34
N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-4-(3-チオフェン-2-イル-ウレイド)-ベンズアミド
AB35
4-[3-(3,5-ジメチル-イソキサゾール-4-イル)-ウレイド]-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB37
4-[3-(4-メトキシ-フェニル)-ウレイド]-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB38
4-[3-(4-ジフルオロメトキシ-フェニル)-ウレイド]-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB39
チオフェン-2-スルホン酸4-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニルカルバモイル]-フェニルエステル
AB40
4-ヨード-ベンゼンスルホン酸4-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニルカルバモイル]-フェニルエステル
AB41
N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-4-ピロリジン-1-イルメチル-ベンズアミド
AB42
3-メチル-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB43
N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-3-トリフルオロメチル-ベンズアミド
AB44
4-[3-(2,4-ジメトキシ-フェニル)-ウレイド]-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB45
N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-4-[3-(4-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレイドメチル]-ベンズアミド
AB46
N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-4-[3-(3,4,5-トリメトキシ-フェニル)-ウレイド]-ベンズアミド
AB48
4-[3-(2-ヨード-フェニル)-ウレイド]-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB49
4-[3-(4-フルオロ-フェニル)-ウレイド]-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド
AB50
2-フルオロ-ベンゼンスルホン酸4-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニルカルバモイル]-フェニルエステル
AB51
3-フルオロ-ベンゼンスルホン酸4-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニルカルバモイル]-フェニルエステル

R¹が上記のd)に示される意味を有する別の好ましい態様において、本発明は、以下の式IV

の化合物に関し、
式中、Rは、H、または例えば、以下から選択することができる有機基である：少なくとも1つのヘテロ原子で置換されていてもよい1個から10個の炭素原子を含むか、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、直鎖または分枝アルキル基；ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル基、シクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基によって置換されていてもよいシクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基。

このような化合物は、例えば以下から選択することができる：

R1が上記のd)に示される意味を有する特定の化合物の中で、本発明は、以下の式V

のアミド-アニリン化合物に関し、
式中、Rは、H、または例えば、以下から選択することができる有機基である：少なくとも1つのヘテロ原子で置換されていてもよい1個から10個の炭素原子を含むか、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、直鎖または分枝アルキル基；ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、シクロアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基；ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有するシクロアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基で置換されていてもよいシクロアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基；
スルホニル基または-SO₂-R-基であって、ここでRは、H、またはヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよく、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール；または-CO-R基または-CO-NRR'基であって、ここでRおよびR'は、H、または特にI、Cl、Br、およびFから選択される少なくとも1つのヘテロ原子で置換されていてもよく、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル基、シクロアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基から独立して選択される。

このような化合物の例は以下の通りである：

R1が上記のd)に示される意味を有する特定の化合物の中で、本発明は、以下の式VI

のアミド-ベンジルアミン化合物に関し、
式中、Rは、H、または例えば、以下から選択することができる有機基である：少なくとも1つのヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい1個から10個の炭素原子を含むか、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、直鎖もしくは分枝アルキル基；ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、シクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基；またはヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル基、シクロアルキル基、アリール基もしくはヘテロアリール基で置換されている、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基；
スルホニル基または-SO₂-R-基であって、ここでRは、H、またはヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよく、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有する、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基；または-CO-R基もしくは-CO-NRR'基であって、ここでRおよびR'は、H、または少なくとも1つのヘテロ原子で置換されていてもよく、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有するアリール基、ヘテロアリール基、アルキル基、ならびにシクロアルキル基から独立して選択される。

例えば、この化合物は以下の式を有する：

のアミド-フェノール化合物に関し、
式中、Rは、H、または例えば、以下から選択することができる有機基である：少なくとも1つのヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい1個から10個の炭素原子を含むか、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有する直鎖もしくは分枝アルキル基；
ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有するシクロアルキル基、アリール基もしくはヘテロアリール基；またはヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル基、シクロアルキル基、アリール基もしくはヘテロアリール基で置換されているアルキル基、シクロアルキル基、アリール基もしくはヘテロアリール基；
スルホニル基または-SO₂-R-基であって、ここでRは、H、またはヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよく、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有する、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基；または-CO-R基もしくは-CO-NRR'基であって、ここでRおよびR'は、H、または少なくとも1つのヘテロ原子で置換されていてもよく、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有する、アリール基、ヘテロアリール基、アルキル基、およびシクロアルキル基から独立して選択される。

このような化合物の例は以下の通りである：

R1が上記のd)に示される意味を有する特定の化合物の中で、本発明は、以下の式VII：

の尿素化合物に関し、
式中、Rは、H、または例えば、以下から選択することができる有機基である：少なくとも1つのヘテロ原子(例えば、ハロゲン)で置換されていてもよい1個から10個の炭素原子を含むか、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、直鎖または分枝アルキル基；少なくとも1つのヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、シクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基；またはヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル基、シクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基で置換されている、シクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基。

このような化合物の例は以下の通りである：
AB7
1-(4-メトキシ-フェニル)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB9
1-(4-ブロモ-フェニル)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB10
1-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-3-(4-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア
AB12
1-(4-フルオロ-フェニル)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB13
1-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-3-(3,4,5-トリメトキシ-フェニル)-ウレア
AB15
4{3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレイド}-安息香酸エチルエステル
AB19
1-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-3-チオフェン-2-イル-ウレア
AB22
1-シクロヘキシル-1-(N-シクロヘキシル-ホルムアミド)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB25
1-(2,4-ジメトキシ-フェニル)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB27
1-(2-ヨード-フェニル)-1-(N-(2-ヨード-フェニル)-ホルムアミド)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB28
1-(3,5-ジメチル-イソキサゾール-4-イル)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB32
1-(2-ヨード-フェニル)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB36
1-(4-ジフルオロメトキシ-フェニル)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア
AB47
1-(4-ジメチルアミノ-フェニル)-3-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ウレア

R1が上記のd)に示される意味を有する特定の化合物の中で、本発明は、以下の式VIIbis

の化合物に関し、
式中、R、およびR2、R3、R4、R5、およびR6は上記に定義した通りである。

例えば、本発明は、

を目的とする。

式IIIの化合物の中で、本発明は、以下の式VIII

の化合物によって特に具体的に示され、
式中、XはRまたはNRR'であり、かつRおよびR'は、H、または少なくとも1つのヘテロ原子(例えば、F、I、Cl、およびBrから選択されるハロゲンなど)で置換されていてもよいか、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有してもよい、アリール基、ヘテロアリール基、アルキル基、およびシクロアルキル基；または少なくとも1つのヘテロ原子(例えば、F、I、Cl、およびBrから選択されるハロゲンなど)で置換されていてもよく、かつペンダント塩基窒素官能基を有してもよいアリール基、ヘテロアリール基、アルキル基、およびシクロアルキル基で置換されたアリール基、ヘテロアリール基、アルキル基、およびシクロアルキル基から独立して選択され、
R²は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R³は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁴は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁵は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁶は以下の1つである：
(i)任意の1つの環の位置に、ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを有する、フェニルまたはその置換変種などのアリール基；
(ii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、2、3、または4-ピリジル基などのヘテロアリール基；
(iii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、例えば、2-チエニル、3-チエニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、5-チアゾリルなどの5員環芳香族複素環基。
フェニル基に結合するNH-CO-Xはまた、CO-NH-X基であり得ることが理解されると思われる。

式VIIIに対応する好ましい化合物の中で、本発明は、Xが、例えば、以下に示す構造a〜f：

によって表されるペンダント塩基窒素官能基を有する、置換されたアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基である化合物に関し、ここで、波線は式VIIIのコア構造への結合点に対応する。

基a〜fの中では、R¹は優先的にdである。

さらに、式IVまたは式XIの好ましい化合物の中で、本発明は、R²およびR³が水素である化合物に関する。優先的に、R⁴はメチル基であり、R⁵はHである。さらに、R⁶は優先的に3-ピリジル基であり(以下の構造gを参照のこと)、ここで、波線は式IIIまたは式VIIIのコア構造への結合点に対応する。

より詳細には、本発明は、カルシトリオールもしくはその類似体、および上記に示した式IXの化合物から選択されるc-kitインヒビターの、混合投与、順次的な投与、同時投与、または別々の投与をさらに含む方法に関し、
- Xは基dであり、かつR⁶は3-ピリジル基であり、
- Xは基dであり、かつR⁴はメチル基であり、
- R¹は基dであり、かつR²はHであり、
- R¹は基dであり、かつR³はHであり、
- R¹は基dであり、かつR²および／またはR³および／またはR⁵はHであり、
- R⁶は3-ピリジル基であり、かつR³はメチル基であり、
- R⁶は3-ピリジル基であり、かつR²はHであり、
- R²および／またはR³および／またはR⁵はHであり、かつR⁴はメチル基であり、
- R²および／またはR³および／またはR⁵はHであり、R⁴はメチル基であり、かつR⁶は3-ピリジル基である。

式VIIIの1つの化合物は、

であり得る。

上記の式III、IV、V、VI、VII、VIIIおよびIXにおいて、本発明はまた、1つのセトン(cetone)基がチアゾールコアに付加されている化合物を意図する。さらに、C1〜C10アルキル基に参照がなされる場合、これはC1〜C3、C2〜C4、C2〜C5、C3〜C6、C2またはC3〜C10を包含することが理解されると考えられる。

さらに、本発明は、816変異を有さず、かつ、カテゴリーI、II、IIIおよびIVの肥満細胞症、特に骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、または急性白血病、肥満細胞症と関連した骨髄増殖性障害、および肥満細胞白血病のような、関連する血液学的障害を伴う肥満細胞症に罹患した患者のカテゴリーを治療するための薬剤を製造するための、野生型c-kitまたは野生型c-kitおよび/または膜近傍で変異したc-kitの両方を特異的に阻害することができる化合物の使用に関する。

本発明において利用される薬学的組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、くも膜下腔内、脳室内、経皮的、皮下、腹腔内、鼻内、腸内、局所的、舌下、または直腸の手段を含むがこれらに限定されない、任意の数の経路によって投与されることが可能である。カテゴリーII、IIIおよびIVの肥満細胞症を治療するために、経口、静脈内、および筋肉内の投与の経路が好ましい。

活性成分に加えて、これらの薬学的組成物は、薬学的に使用可能である調製物中への活性化合物の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む、適切な薬学的に許容されるキャリアを含んでもよい。製剤および投与のための技術に関するさらなる詳細を「Remington's Pharmaceutical Sciences」 (Maack Publishing Co., Easton, Pa.)の最新版において見い出すことができる。

経口投与のための薬学的組成物は、経口投与のために適切である投薬量で、当技術分野において周知である薬学的に許容されるキャリアを使用して製剤化することができる。このようなキャリアは、薬学的組成物が、患者による摂取のために、錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化されることを可能にする。

経口使用のための薬学的調製物を、活性化合物の固体賦形剤との組み合わせを通して入手することができる。適切な賦形剤は、炭水化物またはタンパク質の増量剤(例えば、糖(ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む)；トウモロコシ、コムギ、イネ、ポテト、または他の植物からのデンプン；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル-セルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース；アラビアガムおよびトラガカントを含むガム；ならびにゼラチンおよびコラーゲンなどのタンパク質)である。望ましい場合、崩壊剤または可溶化剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、またはこれらの塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)）を加えてもよい。

糖衣錠コアは、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポル(carbopol)ゲル、ポリエチレングリコール、および/または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物をまた含んでもよい、濃縮された糖溶液などの適切なコーティングと併せて使用されてもよい。染料および色素を、製品の同定のため、または活性化合物の量(すなわち、用量)を特徴付けるために錠剤または糖衣錠コーティングに加えてもよい。

経口的に使用可能な薬学的調製物は、ゼラチンから形成されるカプセル、ならびにゼラチンおよびコーティング(例えば、グリセロールまたはソルビトール)から作られるシールされたソフトカプセルを含む。押し込み型カプセルは、増量剤または結合剤(例えば、ラクトースまたはデンプン)、滑沢剤(例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウム)、および任意に安定剤と混合された活性成分を含んでもよい。ソフトカプセルにおいては、活性化合物は、安定剤を有するかまたは有しない、適切な液体(例えば、脂肪油、液体、または液体ポリエチレングリコール)中で溶解または懸濁されてもよい。

非経口投与のための適切な薬学的処方物は、水溶液中で、好ましくは、Hanks溶液、Ringer溶液、または生理学的に緩衝化された生理食塩水などの生理学的に適合性の緩衝液中で製剤化されてもよい。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどの、懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでもよい。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注射懸濁液として調製されてもよい。適切な親油性溶媒またはビヒクルは、ゴマ油などの脂肪油、またはエチルオレエートもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームを含む。非脂質ポリカチオン性アミノポリマーもまた送達のために使用してもよい。任意に、懸濁液はまた、高度に濃縮された溶液の調製のために、適切な安定剤または化合物の溶解性を増加させる物質を含んでよい。

薬学的組成物は、塩として提供されてもよく、多くの酸とともに形成されることが可能であり、これには、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、およびコハク酸などが含まれるがこれらに限定されない。塩は、水性溶媒または他のプロトン性溶媒中で、対応する遊離の塩基型よりも溶解性である傾向がある。他の場合において、好ましい調製物は、4.5〜5.5のpH範囲で、使用前に緩衝液と組み合わされる、以下のいずれかまたはすべてを含み得る凍結乾燥粉末であってもよい：1〜50mMヒスチジン、0.1%〜2%スクロース、および2〜7%マンニトール。

本発明における使用のために適切な薬学的組成物は、意図される目的を達成するために有効量でc-kitインヒビターが含有される組成物を含む。有効用量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内にある。治療的な有効用量とは、徴候または状態を緩和する活性成分の量をいう。治療的な効力および毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定することが可能であり、例えば、ED50(集団の50%において治療的に有効である用量)およびLD50(集団の50%に対して致死的である用量)である。治療的効果に対する毒性の用量比が治療指数であり、これを、比率、LD50/ED50として表現することができる。大きな治療指数を示す薬学的組成物が好ましい。

なおさらなる態様において、本発明は、局所的適用のためにc-kitインヒビターを含む組成物に関する。このような組成物は、孤立性肥満細胞症、ならびに水疱性の、紅皮症の肥満細胞症および毛細血管拡張症の肥満細胞症などの皮膚障害を治療するために適合される。

本発明に係る組成物は、局所適用のために通常使用されるすべての形態、特に以下の形態で提供され得る：ゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ローション、水性液体懸濁物、水性アルコール性溶液もしくは油性溶液、またはローションもしくは血清型の分散物、または無水もしくは親油性のゲル、または液体の乳化物もしくはミルク型の半固体粘稠度の乳化物(水相中で脂肪相を分散させること、もしくは逆に分散させることによって得られる)、またはクリームもしくはゲル型の軟らかい半固体粘稠度の懸濁液もしくは乳化物、または代替的に、イオン型および/もしくは非イオン型へのマイクロエマルジョン、マイクロカプセル、微粒子、もしくはベシクル性分散(vesicular dispersion)。これらの組成物は、標準的な方法に従って調製される。

本発明に係る組成物は、皮膚科学および化粧品において一般的に使用される任意の成分を含む。これは、以下から選択される少なくとも1つの成分を含んでもよい：親水性または親油性ゲル化剤、親水性または親油性活性薬剤、保存剤、皮膚軟化剤、粘度増強ポリマー、保湿剤、界面活性剤、保存剤、抗酸化剤、溶剤、および増量剤、抗酸化剤、溶剤、香料、増量剤、スクリーニング剤、抗菌剤、臭気吸収剤、および着色物質。

本発明において使用可能なオイルとしては、ミネラルオイル(流動パラフィン)、植物油(シアバターの液体画分、ヒマワリ油)、動物油、合成油、シリコーン油(シクロメチコーン(cyclomethicone))、およびフッ素化オイルが言及されてもよい。脂肪アルコール、脂肪酸(ステアリン酸)、およびワックス(パラフィン、カルナバ、蜜ろう)もまた、脂肪性物質として使用可能である。

本発明において使用可能な乳化剤としては、ステアリン酸グリセロール、ポリソルベート60、およびPEG-6/PEG-32/ステアリン酸グリコール混合物が意図される。親水性ゲル化剤としては、カルボキシビニルポリマー(カルボマー)、アクリルコポリマー(例えば、アクリル酸/アルキルアクリル酸コポリマー)、ポリアクリルアミド、ポリサッカリド(例えば、ヒドロキシプロピルセルロース)、粘土、および天然のガムが言及されてもよく、親油性ゲル化剤としては、改変粘土(例えば、ベントン(bentone))、脂肪酸の金属塩(例えば、ステアリン酸アルミニウム)、および疎水性シリカ、または代替的に、エチルセルロースおよびポリエチレンが言及されてもよい。

親水性活性薬剤として、タンパク質またはタンパク質加水分解物、アミノ酸、ポリオール、尿素、アラントイン、糖および糖誘導体、ビタミン、デンプン、および植物抽出物、特にアロエベラのものを使用してもよい。

親油性活性薬剤として、レチノール(ビタミンA)およびその誘導体、トコフェロール(ビタミンE)およびその誘導体、必須脂肪酸、セラミド、および必須オイルを使用してもよい。これらの薬剤は、使用された場合に、特別な加湿性または皮膚の柔軟化の特徴を加える。

さらに、界面活性剤を、c-kitインヒビターの成分のより深い浸透を提供するために組成物中に含めることが可能である。

意図される成分の中で、本発明は、例えば、ミネラルオイル、水、エタノール、トリアセチン、グリセリン、およびプロピレングリコールからなる群より選択される浸透増強剤；例えば、ポリイソブチレン、ポリビニルアセテートおよびポリビニルアルコール、ならびに濃化剤からなる群より選択される粘着剤を包含する。

薬剤の局所的吸収を増強するための化学的方法は当技術分野において周知である。例えば、浸透増強特性を有する化合物には以下が含まれる：ラウリル硫酸ナトリウム(Dugard, P.H. and Sheuplein, R.J.,「Effects of Ionic Surfactants on the Permeability of Human Epidermis：An Electrometric Study」J. Ivest. Dermatol., V.60, pp. 263-69, 1973)、ラウリルアミンオキサイド(Johnson et. al., US 4,411,893)、アゾン(azone)(Rajadhyaksha, US 4,405,616および3,989,816)およびデシルメチルスルホキサイド(Sekura, D.L.およびScala,J.,「The Percutaneous Absorption of Alkylmethy Sulfides」Pharmacology of the Skin, Advances In Biolocy of Skin, (Appleton-Century Craft) V.12, pp. 257-69, 1972)。両性分子中の頭部基の極性を増加させることは、それらの浸透増強特性を増加させるが、それらの皮膚刺激特性を増加させるという代償を払うことが観察されている(Cooper, E.R. and Berner, B.,「Interaction of Surfactants with Epidermal Tissues：Physiochemical Aspects」Surfactant Science Series, V.16, Reiger, M.M.編(Marcel Dekker, Inc.)pp. 195-210, 1987)。

第2のクラスの化学エンハンサーは、一般的に共溶媒と呼ばれる。これらの物質は、比較的容易に局所的に吸収され、かつ種々のメカニズムによって、ある薬物についての浸透の増強を達成する。エタノール(Gale et al., U.S. Pat. No. 4,615,699ならびにCampbell et. al., U.S. Pat. Nos. 4,460,372および4,379,454)、ジメチルスルホキシド(US 3,740,420および3,743,727、ならびにUS 4,575,515)、およびグリセリン誘導体(US 4,322,433)は、種々の化合物の吸収を増強する能力を示した化合物のいくつかの例である。

本発明はまた、肥満細胞白血病を含むカテゴリーIV肥満細胞症を治療するための方法に関し、この方法は、c-kit中の816変異の存在または非存在に依存して上記に定義されたc-kitインヒビター、ならびに2-クロロ-2'-デスオキシアデノシンおよびその類似体から選択される化合物を投与する段階を含む。2-クロロ-2'-デスオキシアデノシン(2-CDA)、クラドリビン、Merck Index(第12版)#2397は以下の式を有する：

別の態様において、本発明は、カテゴリーI、II、IIIおよびIVの肥満細胞症または肥満細胞増殖と関連する徴候に罹患していると疑われる個体を診断するための方法に関し、この方法は、a)皮膚試料からRNAを抽出する段階、b)オリゴdTプライマーおよびランダムプライマーを使用するRNAの逆転写、c)プライマー

を使用して段階b)において得られたcDNAを増幅する段階、ならびにC-KITの816位におけるc-kit cDNAの変異の存在または非存在を検出する段階を含む。換言すれば、本発明は、逆転写された皮膚全体のRNA試料から得られたcDNAからC-KITの「816」変異に対応するcDNAの存在または非存在を増幅および特異的に検出するための配列番号：1および配列番号：2の使用を含む方法に関する。以下のプライマーもまた使用可能である：

本発明は、これらのプライマーならびに配列フレームまたは長さに有意な違いを示さない任意のプライマーに関することが理解される。

本発明の有用性は、以下の詳細な説明からさらに確実にされると思われる。

実施例1：患者における変異の評価
材料および方法
RNA抽出
-80℃で凍結した皮膚の切片を500μlのRLT培地(+5μlのβメルカプトエタノール)に注ぐ。これはQIAGEN Rneasy Miniキットの緩衝液に対応する。これを、T25 basic ultra-turraxホモジナイザーおよび0.8cmのultra-turrax axis(ref B35333 de Fisher Bioblock Scientific)中ですりつぶす。次いで、すりつぶした皮膚切片をRNA抽出の前に凍結する。

各すりつぶしの前に、ultra-turraxロッドを、オートクレーブしていない、およびDEPC処理していないmilli Q水を含む2つの50mlチューブ中で2回すすぐ。次いで、ロッドを250mlの70%エタノールで5分間すすぎ、かつ清浄化する。次いで、インキュベーター中、37℃で45分間配置し(乾燥段階)、次の抽出の直前に取り出す。さらなる段階が、すりつぶしの間のRNAの分解がないことを確実にするために必要である。

次の試験のために、陰性対照を使用する。2つの皮膚切片を患者から連続的に抽出し、かつKITレセプターの816位のバリン変異の存在についてチェックする。

RNAを、QIAGEN(Rneasy Mini)キットを用いて、すりつぶした皮膚腫瘍から抽出する。各試料を融解する。抽出を、RNA分解のリスクを最小化するために最低限4つの試料を用いて実行する。983μlのmilli Q水を、500μlのRLT緩衝液および17μlのプロテイナーゼK(ref 19133 QIAGEN)に加える。55℃で10分間インキュベートし、10 000 gで3分間、室温で遠心分離する。上清を750mlの無水エタノールと混合する。700μlの上清をRneasyミニスピンカラム上にのせ、室温にて、8000gで15秒間遠心分離する。残りの上清を同じカラムにのせる。350μlのRW1緩衝液で清浄化する。8000q、15秒間の遠心分離後、10μlのDNAseおよび70μlのRDD緩衝液をカラムに注ぐ(RNAseフリーDNAseセット：ref 79254 de QIAGEN SA)。DNAseは、室温で15分間反応する。次いで、350μlのRW1緩衝液を、すすぐためにカラムに加える(8000gで15秒間の遠心分離)。カラムをRPE緩衝液ですすぎ、次いで8000gで2分間遠心分離してRPE緩衝液を除去する。次いで、RNAを、30μlのDEPC処理水を用いて洗浄して抽出し、-80℃で凍結して保存する。

逆転写段階
cDNAの合成のために20ngのRNAを使用する。StratageneのProStar(商標)第1鎖RT-PCRキットを使用する。次いで、逆転写酵素反応の最終容量は25μlである。

200ngのRNAを含有する17.5μlの最終容量において、1.5μlのオリゴdTおよび1.5μlのランダムプライマーを加える。反応混液を65℃で5分間インキュベートし、次いで、室温で10分間インキュベートする。第1鎖の合成は、2.5μlの第1鎖10×緩衝液、0.5μlのRNAseブロックリボヌクレアーゼインヒビター、1μlのdNTP 100mM、0.5μlの逆転写酵素StrataScript(商標)を加えた後に実行し、これを42℃で1時間インキュベートする。

c-kit遺伝子の増幅
2.5μlの逆転写反応を増幅のために使用する。増幅プログラムは以下の通りである：

プライマーはU2およびL1である：

増幅したcDNAの品質が配列決定のために十分でない場合には、上記のプログラムおよび以下のプライマーを使用してネスト化PCRを使用する：

PCR産物の精製
この段階は、GENECLEAN III(登録商標)キットを使用して実行する。

配列決定
配列決定反応のために、プライマーU2およびL1を使用する。以下のプライマーもまた使用可能である：

実施例2：ヒトのc-kit 816を有する肥満細胞は、STI-571の抗増殖性活性に対して耐性である
以下の実験は、ヒトのkit 816変異を有する肥満細胞が、STI-571(野生型kit活性のインヒビター)の抗増殖性活性に耐性であることを確認するために実施された。

この目的のために、ヒトc-kitの変異型D816Vを因子非依存的に発現する(ヒトc-kitの変異型について特異的なプライマーを用いてRT-PCRによって評価される)マウス骨髄由来肥満細胞株(BMMC)が、ヒトc-kitの変異型についてトランスジェニックであるマウスからの骨髄由来前駆細胞の長期間液体培地によって生成した。次いで、この細胞株(約48時間の倍加時間)は、3日間の間、増加濃度(0〜10^-5M)のSTI-571で処理された。24時間、48時間、および72時間において、生存細胞の数を、トリパンブルー排除アッセイを使用して、各条件において決定した。ヒトc-kitの変異型D816Vを有するBMMC株の増殖は、どの時点においても、1μM以下のSTI-571によって影響されなかった(図2)。対照的に、これらのBMMCの増殖は、1μMより上のSTI-571の濃度によって、用量依存的かつ時間依存的に阻害された。この濃度において、「816」変異型C-KITを発現する増殖性マストに罹患した患者を治療するためにSTI-571を使用することは不可能である。この結果はまた、ヒトc-kitのD816V変異型でトランスフェクトされたリンパBaF/3マウス細胞を使用して観察される。

結論として、ヒトc-kitレセプターのD816V変異型は、STI571の薬理学的な用量に対して耐性である。

次いで、本発明者らは、「816」変異型C-KITを発現する増殖性マストに罹患した患者を特異的に治療するための他の化合物をスクリーニングすることを選択する。この点に関して、本発明者らは、式IIIの化合物およびを示した。

STI571。変異型D816V C-KITを発現するマウス肥満細胞に対するSTI571の効果。

Claims

肥満細胞症のテイラーメイド治療のための方法であって、a)816位のc-kit変異が患者の試料中で検出されるか否かを評価する段階、およびb)変異が段階a)において検出される場合に、特異的816変異体c-kitインヒビターを投与するか、または段階a)において変異が検出されない場合に、野生型c-kitおよび/もしくは膜近傍で変異したc-kitに対して効力を示すインヒビターを投与する段階を含む、方法。
ヒトにおけるカテゴリーI、II、IIIおよびIVの肥満細胞症、ならびにカテゴリーI、II、IIIおよびIVの肥満細胞症と関連する任意の徴候を治療するための、請求項1に記載の方法。
ヒトにおける色素性じんま疹、びまん性皮膚肥満細胞症、孤立性肥満細胞腫、ならびにイヌの肥満細胞腫、ならびに水疱性の、紅皮症の肥満細胞症および毛細血管拡張症の肥満細胞症のようないくつかのまれなサブタイプ、骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、または急性白血病、肥満細胞症と関連した骨髄増殖性障害、および肥満細胞白血病のような、関連する血液学的障害を有する肥満細胞腫を治療するための、請求項1に記載の方法。
2-クロロ-2'-デスオキシアデノシンおよびその類似体から選択される化合物を投与する段階をさらに含む、肥満細胞白血病を含むカテゴリーIV肥満細胞症を治療するための、請求項1に記載の方法。
カテゴリーII、IIIおよびIVの肥満細胞症、特に骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、または急性白血病、肥満細胞症と関連した骨髄増殖性障害、および肥満細胞白血病のような、関連する血液学的障害を伴う肥満細胞症に罹患した816変異を有する患者のカテゴリーを治療するための薬剤を製造するための、816変異体c-kitを特異的に阻害することが可能である化合物の使用。
816変異を有さず、かつカテゴリーI、II、IIIおよびIVの肥満細胞症、特に骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、または急性白血病、肥満細胞症と関連した骨髄増殖性障害、および肥満細胞白血病のような、関連する血液学的障害を伴う肥満細胞症に罹患した患者のカテゴリーを治療するための薬剤を製造するための、野生型c-kitまたは野生型c-kitおよび/もしくは膜近傍で変異したc-kitの両方を特異的に阻害することができる化合物の使用。
特異的インヒビターが下記式III

の化合物から選択される、請求項5または6に記載の使用：
式中、
R¹は、
a)少なくとも1つのヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい1個から10個の炭素原子を含むか、またはペンダント塩基窒素官能基を有する、直鎖または分枝アルキル基；
b)ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、またはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル基またはアリール基によって置換されていてもよい、アリール基またはヘテロアリール基；
c)スルホニル基または-SO₂-R基であって、ここでRは、ヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されているか、またはペンダント塩基窒素官能基を有するアルキル、アリール、またはヘテロアリールである；
d)-CO-NH-R基、-CO-R基、-CO-OR基、または-CO-NRR'基であって、ここでRおよびR'は、H、または少なくとも1つのヘテロ原子、特にI、Cl、Br、およびFから選択されるハロゲンで置換されていてもよい、もしくはペンダント塩基窒素官能基を有するアリール基、ヘテロアリール基、アルキル基、およびシクロアルキル基から独立して選択され；
R²は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R³は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁴は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁵は、水素、ハロゲン、または1個から10個の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり；
R⁶は以下の1つであり：
(i)任意の1つの環の位置に、ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを有する、フェニルまたはその置換変種などのアリール基；
(ii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、2、3、または4-ピリジル基などのヘテロアリール基；
(iii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、例えば、2-チエニル、3-チエニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、5-チアゾリルなどの5員環芳香族複素環基、
(iv)H；I、F、Cl、またはBrから選択されるハロゲン；NH2、NO2、またはSO2；ならびに
R⁷は以下の1つである：
(i)任意の1つの環の位置に、ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを有する、フェニルまたはその置換変種などのアリール基；
(ii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、2、3、または4-ピリジル基などのヘテロアリール基；
(iii)ハロゲン、1個から10個の炭素原子を含むアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシのような1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせをさらに有してもよい、例えば、2-チエニル、3-チエニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、5-チアゾリルなどの5員環芳香族複素環基、
(iv)H；I、F、Cl、またはBrから選択されるハロゲン；NH2、NO2、またはSO2。
特異的インヒビターが、下記式II

に対応する化合物から選択されるN-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体から選択される、請求項6に記載の使用：
式中、
R1、R2、およびR3は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル基または環式基または複素環式基、特にピリジル基から独立して選択され；
R4、R5、およびR6は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル基、特にメチル基から独立して選択され；ならびに
R7は、少なくとも1つの置換基を有するフェニル基であり、これは次にアミノ官能基のような少なくとも1つの塩基性部位を有し、
好ましくは、R7は以下の基

であり、
これらの化合物の間で、好ましいものは以下に定義される：
R1は複素環式基、特にピリジル基であり、
R2およびR3はHであり、
R4はC1〜C3アルキル、特にメチル基であり、
R5およびR6はHであり、ならびに
R7は、少なくとも1つの置換基を有するフェニル基であり、これは次にアミノ官能基、例えば以下の基

のような少なくとも1つの塩基性部位を有する。
カテゴリーI、II、IIIおよびIVの肥満細胞症または肥満細胞増殖に関連する徴候に罹患していると疑われる個体を診断するための方法であって、a)オリゴdTプライマーおよびランダムプライマーを使用する皮膚由来のRNA試料の逆転写、b)プライマー

を使用する段階c)において得られたcDNAを増幅する段階、d)C-KITの816位に対応するc-kit cDNAの変異の存在または非存在を検出する段階を含む、方法。