JP2006502726A - 改善された免疫療法 - Google Patents
改善された免疫療法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006502726A JP2006502726A JP2004544436A JP2004544436A JP2006502726A JP 2006502726 A JP2006502726 A JP 2006502726A JP 2004544436 A JP2004544436 A JP 2004544436A JP 2004544436 A JP2004544436 A JP 2004544436A JP 2006502726 A JP2006502726 A JP 2006502726A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vector
- product
- heat shock
- prodrug
- tumor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 97
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims abstract description 60
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims abstract description 60
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 48
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims abstract description 29
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims abstract description 29
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 22
- 101710127774 Stress response protein Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 127
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 66
- WOCXQMCIOTUMJV-UHFFFAOYSA-N cb1954 Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)N)=CC(N2CC2)=C1[N+]([O-])=O WOCXQMCIOTUMJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 61
- 108020001162 nitroreductase Proteins 0.000 claims description 54
- 102000004459 Nitroreductase Human genes 0.000 claims description 51
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 38
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 25
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 claims description 21
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 claims description 21
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 claims description 20
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 claims description 20
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 claims description 15
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 claims description 15
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims description 15
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 14
- 102100038222 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 12
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- -1 gp96 Proteins 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 10
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 9
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 9
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004328 Cytochrome P-450 CYP3A Human genes 0.000 claims description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 claims description 8
- 101001016865 Homo sapiens Heat shock protein HSP 90-alpha Proteins 0.000 claims description 8
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 claims description 8
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 claims description 7
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 7
- 102100024341 10 kDa heat shock protein, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 6
- 101710154868 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 6
- 108010059013 Chaperonin 10 Proteins 0.000 claims description 6
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100024889 Cytochrome P450 2E1 Human genes 0.000 claims description 6
- 101100339887 Drosophila melanogaster Hsp27 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 108010036652 HSC70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000012215 HSC70 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 101150096895 HSPB1 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101150051208 HSPH1 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101100497140 Homo sapiens CYP2E1 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101000855342 Homo sapiens Cytochrome P450 1A2 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000745711 Homo sapiens Cytochrome P450 3A4 Proteins 0.000 claims description 6
- 241000589242 Legionella pneumophila Species 0.000 claims description 6
- 101100451677 Mus musculus Hspa4 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 108010035988 Mycobacterium heat-shock protein 65 Proteins 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- 108010008714 glucose-regulated protein 170 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000057459 human CYP1A2 Human genes 0.000 claims description 6
- 229940115932 legionella pneumophila Drugs 0.000 claims description 6
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 claims description 6
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 5
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 5
- 108010074922 Cytochrome P-450 CYP1A2 Proteins 0.000 claims description 4
- 102000008144 Cytochrome P-450 CYP1A2 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010001202 Cytochrome P-450 CYP2E1 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010081668 Cytochrome P-450 CYP3A Proteins 0.000 claims description 4
- 101100125027 Dictyostelium discoideum mhsp70 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101150031823 HSP70 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 4
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 4
- 101150052825 dnaK gene Proteins 0.000 claims description 4
- 102000044284 human CYP3A4 Human genes 0.000 claims description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 4
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 claims description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 claims description 3
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 claims description 3
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 claims description 3
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 claims description 3
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 claims description 3
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000868215 Homo sapiens CD40 ligand Proteins 0.000 claims description 2
- 101000932478 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710151803 Mitochondrial intermediate peptidase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 102000004082 Calreticulin Human genes 0.000 claims 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 abstract description 16
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 abstract description 12
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 abstract description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 47
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 34
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 13
- 108010016283 TCF Transcription Factors Proteins 0.000 description 12
- 102000000479 TCF Transcription Factors Human genes 0.000 description 12
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 8
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 7
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 7
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 description 7
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 description 7
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 102100029968 Calreticulin Human genes 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 6
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 6
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 5
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 5
- 238000010914 gene-directed enzyme pro-drug therapy Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 4
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 4
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 4
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 4
- 102000019058 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Human genes 0.000 description 3
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 230000004637 cellular stress Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N flavin mononucleotide Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 3
- 229940013640 flavin mononucleotide Drugs 0.000 description 3
- FVTCRASFADXXNN-UHFFFAOYSA-N flavin mononucleotide Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O FVTCRASFADXXNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011768 flavin mononucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 3
- 235000019231 riboflavin-5'-phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 2
- 101100339431 Arabidopsis thaliana HMGB2 gene Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 108010040163 CREB-Binding Protein Proteins 0.000 description 2
- 102100021975 CREB-binding protein Human genes 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000000311 Cytosine Deaminase Human genes 0.000 description 2
- 108010080611 Cytosine Deaminase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 description 2
- 101150021904 HMGB1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 2
- 101000899111 Homo sapiens Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 2
- 101001043564 Homo sapiens Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- 108090000908 Interferon regulatory factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100029838 Interferon regulatory factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 2
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 2
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 2
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 2
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 108010048992 Transcription Factor 4 Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102100023489 Transcription factor 4 Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000000723 mammalian artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 108091003724 mouse cytochrome P-450 1A2 Proteins 0.000 description 2
- 108091005856 mouse cytochrome P-450 2E1 Proteins 0.000 description 2
- 108010077741 mouse cytochrome P450 3A4 Proteins 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- OAALBIMEFVOQBY-UHFFFAOYSA-N 5-(aziridin-1-yl)-4-(hydroxyamino)-2-nitrobenzamide Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)N)=CC(N2CC2)=C1NO OAALBIMEFVOQBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 108010002913 Asialoglycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101710197851 B1 protein Proteins 0.000 description 1
- 238000000035 BCA protein assay Methods 0.000 description 1
- 102100023962 Bifunctional arginine demethylase and lysyl-hydroxylase JMJD6 Human genes 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700020911 DNA-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000388186 Deltapapillomavirus 4 Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010028196 Dihydropteridine Reductase Proteins 0.000 description 1
- 102100022317 Dihydropteridine reductase Human genes 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 description 1
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 description 1
- 108010027992 HSP70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018932 HSP70 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000993321 Homo sapiens Complement C2 Proteins 0.000 description 1
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 101150101999 IL6 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 208000000592 Nasal Polyps Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 101710173693 Short transient receptor potential channel 1 Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108050005285 Transcription factor 7-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100038313 Transcription factor E2-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039094 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 208000021096 adenomatous colon polyp Diseases 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000000947 anti-immunosuppressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 230000009925 apoptotic mechanism Effects 0.000 description 1
- 108010048088 aromatic NADH-dependent nitroreductase Proteins 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 1
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000981 bystander Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M deoxycholate Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 231100000741 direct peptid reactivity assay Toxicity 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000000799 fusogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000010189 intracellular transport Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 231100000668 minimum lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- RLKHFSNWQCZBDC-UHFFFAOYSA-N n-(benzenesulfonyl)-n-fluorobenzenesulfonamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1S(=O)(=O)N(F)S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 RLKHFSNWQCZBDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004987 nonapoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 108010077613 phosphatidylserine receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055896 polyornithine Proteins 0.000 description 1
- 229920002714 polyornithine Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000006432 protein unfolding Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 101150065190 term gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 230000002476 tumorcidal effect Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 108090000195 villin Proteins 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0026—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5)
- C12N9/0028—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5) with NAD or NADP as acceptor (1.5.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0036—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on NADH or NADPH (1.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- C12N9/0077—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14) with a reduced iron-sulfur protein as one donor (1.14.15)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本発明は、標的細胞に対する免疫応答を誘導する改善された方法を提供する。標的細胞種を殺す手段として毒素またはプロドラッグ変換酵素およびストレス応答タンパク質(特に、ヒートショックタンパク質)の両方を発現するために遺伝子治療を使用すると、このような細胞に対するその後の免疫応答を増強する。本発明の方法は、標的細胞に対する免疫応答の誘導に特に適用可能である。このような方法に使用するためのポリヌクレオチド、産物およびベクターも提供される。
Description
[発明の分野]
本発明は免疫療法の分野に関し、特に抗腫瘍免疫応答の増強に関する。
本発明は免疫療法の分野に関し、特に抗腫瘍免疫応答の増強に関する。
[発明の背景]
癌を治療する1つの方法は、比較的低毒性のプロドラッグを強力な細胞傷害薬に変換することができる酵素をコードする遺伝子を腫瘍細胞に導入することである。プロドラッグはプロドラッグ変換酵素を発現する細胞によって腫瘍内で局所的に毒性の誘導体に変換されるので、プロドラッグの全身投与は耐容される。この方法は遺伝子運搬酵素プロドラッグ療法(GDEPT:gene-directed enzyme prodrug therapy)、または遺伝子が組換えウイルスベクターによって送達される場合には、ウイルス運搬プロドラッグ療法(VDEPT:virus-directed prodrug therapy)として知られている(McNeishら、1997年)。
癌を治療する1つの方法は、比較的低毒性のプロドラッグを強力な細胞傷害薬に変換することができる酵素をコードする遺伝子を腫瘍細胞に導入することである。プロドラッグはプロドラッグ変換酵素を発現する細胞によって腫瘍内で局所的に毒性の誘導体に変換されるので、プロドラッグの全身投与は耐容される。この方法は遺伝子運搬酵素プロドラッグ療法(GDEPT:gene-directed enzyme prodrug therapy)、または遺伝子が組換えウイルスベクターによって送達される場合には、ウイルス運搬プロドラッグ療法(VDEPT:virus-directed prodrug therapy)として知られている(McNeishら、1997年)。
この方法に使用されるプロドラッグおよびプロドラッグ変換酵素の例には、ガンシクロビルとHSVチミジンキナーゼ、5−フルオロシトシンとシトシンデアミナーゼ、シクロホスファミドまたはパラセタモールとチトクロームP450および本発明に特に関連のあるアジリジニルプロドラッグCB1954(5−(アジリジン−1−イル)−2,4−ジニトロベンズアミドとニトロレダクターゼが挙げられる(Konoxら1988年)。Walkerラット癌細胞系統がCB1954に特に感受性であったという観察により、これはラットニトロレダクターゼDHジアフォラーゼの発現によるものであることが示された。しかし、CB1954はヒト型のこの酵素のすぐれた基質ではないので、ヒト腫瘍細胞はCB1954に対する感受性がかなり低い。GDEPTは、標的細胞を敏感にするために、好ましくはCB1954に対する活性が大きい好適なニトロレダクターゼを導入する方法と考えられた。NFSB遺伝子(またはNFNB、NFSIもしくはDPRAとして知られている)によってコードされる大腸菌ニトロレダクターゼ(EC1.6.99.7、または酸素非感受性NAD(P)Hニトロレダクターゼもしくはジヒドロプテリジンレダクターゼとして知られており、NTRと略されることが多い)はこの目的のために広範に使用されている(Groveら、1999年に総説が示されている)。NFSBにコードされるニトロレダクターゼ(NTR)は、2つのフラビンモノヌクレオチド(FMN)補因子分子に結合するホモダイマーである。電子ドナーとしてのNADHまたはNADPHおよび還元型中間体としての結合型FMNを使用して、NTRはCB1954の2つのニトロ基の一方または他方を還元して、毒性の高い4−ヒドロキシルアミン誘導体または比較的無毒性の2−ヒドロキシルアミンを生ずる。細胞内では、5−(アジリジン−1−イル)−4−ヒドロキシルアミノ−2−ニトロベンズアミドは、おそらくさらに別の毒性代謝物を介して、非常に遺伝毒性となる(Knoxら、1991年)。生じる障害の正確な性質は明らかではないが、他の薬剤によって生じるものとは異なる。特に高い割合のストランド間の架橋が生じ、損傷は修復が不良であると思われ、その結果としてCB1954は格別に影響力のある抗腫瘍剤である(Friedlosら、1992年)。このシステムは、ヌードマウスに異種移植したヒト腫瘍を含む数多くのモデルシステムにおいて有用な抗腫瘍応答を生ずる際に有効であることが示されている(Djehaら、2000年)。
とは言うものの、酵素−プロドラッグ方法に免疫治療法を組み合わせることによって、このような酵素−プロドラッグ方法の殺腫瘍性作用を増強する試みがなされている。根本的な根拠は、腫瘍部位および転移部位に残存する細胞が(主に)細胞傷害性T細胞応答によって殺されることを期待して、細胞傷害剤で殺される細胞における腫瘍特異的抗原に対する抗腫瘍免疫応答を形成しようとすることである。このような応答を刺激する助けとするために、数多くの免疫賦活分子(immunostimulatory molecule)を使用する遺伝子治療がGDEPT/VDEPTと併用して試みられている。他よりすぐれた候補の1つはGM−CSFであると思われ、チミジンキナーゼ(Jonesら)と併用しておよびシトシンデアミナーゼ(Caoら)と併用して使用されている。一方または両方と併用して試みられる他の候補には、IL−2、Il−6、B7−1(Felzmanら)、IFN−γ(Santodonatoら)およびMCP−1(Sakaiら)が挙げられる。
しかし、一般に、結果はばらついており、信頼できる治療の改善に至っていない。癌の免疫治療を改善する明白な必要性が存在している。
細胞のストレスに応答して、遺伝子のサブセットが誘導されて、ストレス応答タンパク質が発現される。これらのタンパク質は多様な機能を有し、NFκBおよび高移動度群B1(HMGB1、Bustin、2002年)などの細胞内メッセンジャーおよび転写因子並びにIL−1β、IL−1α、IL−6、IL−8、TNF−α、GM−CSF、IL−12およびIL−15などのサイトカインを含む。しかし、最も重要なものには、ヒートショックタンパク質として知られるタンパク質グループが挙げられる。
ヒートショックタンパク質は、偏在的な細胞内タンパク質で、進化の過程中高度に保存されており、タンパク質の折り畳み、アンフォールディングおよび変性並びに多サブユニットタンパク質複合体の集合などの基本的な細胞過程に関与することが知られている。それらの発現は細胞ストレス(熱、毒素、飢餓、低酸素)によって厳しくアップレギュレーションされており、それらは細胞ストレス中に生じるタンパク質損傷を修復および改善する際に役割を果たす(ParsellおよびLindquist、1993年に総説が示されている)。ヒートショックタンパク質の発現は、ヒートショックタンパク質プロモーターのエレメントに結合している数多くの上流ファクターによって制御される。これらには、HSF−1(ヒートショックファクター−1、Balerら、1993年)、HSF−2(Mathewら、2001年)およびHSF−3(NakaiおよびMorimoto、1993年)並びにIRF−1および2を含むインターフェロン反応ファクター(Taniguchiら、2001年およびMamaneら、1999年)が挙げられる。
さらに最近、それらはまた、細胞内タンパク質由来のペプチドの処理および発現並びに抗原提示細胞へのこれらの送達に役割を果たすことが明らかになった。特に、ヒートショックタンパク質Hsp70、Hsp90およびカルレチクリン(calreticulin)は極めて大きな親和性で自己ペプチドに結合し、細胞の溶解によって細胞から放出されると、Hsp受容体CD91を発現している抗原提示細胞にそれらを送達する(Basuら、2001年)。細胞溶解前の細胞ストレスはヒートショックタンパク質のレベルを増加するので、この作用を増強する。細胞内抗原に対する免疫応答の刺激は、アポトーシス細胞死またはプログラムされた細胞死ではなく壊死性細胞死に関連することおよびこれは、少なくとも部分的には、抗原提示細胞レベルで制御されることが提唱されている(Matzinger、1994年)。抗腫瘍応答に具体的に適用すると、腫瘍細胞の非アポトーシス(すなわち、壊死性)細胞死は高レベルのHsp70を誘導し、免疫原性の増加、炎症細胞内容物の放出、炎症誘発性Th1型サイトカインの分泌増加およびマクロファージ活性化に関連することが示されている(Goughら、2001年)。一方、一般に細胞外環境に接触する前に細胞内高分子が分解され、Hsp70、Hsp90およびカルレチクリンがあまり大量に放出されない(Basuら、2000年)アポトーシス細胞死は炎症および免疫応答を開始しない。壊死性細胞溶解液は、樹状細胞、免疫応答の開始時において未処理のT細胞を活性化するための主要な抗原提示細胞の成熟を生じるが、アポトーシス細胞溶解液は生じない(Galucciら、1999年;Sauterら、2000年。Hsp70そのものが樹状細胞の成熟因子であることが示されている(Kuppnerら、2001年;Gastparら、欧州特許出願EP1209226号)。また、アポトーシス細胞は、例えば、ホスファチジルセリン受容体により、抗−炎症および免疫抑制シグナルを抗原提示細胞に直接送達することができる(Fadokら、2000年)。
[発明の概要]
ニトロレダクターゼ/CB1954酵素/プロドラッグシステムの使用は、溶解した細胞から放出される活性型CB1954の毒性産物に接触した標的腫瘍細胞およびバイスタンダー細胞を死滅する以外に、同じ種類の腫瘍細胞による後の攻撃に対する大きな保護作用も生じたことを本発明者らは見出した。早期の研究はこのような死滅作用はアポトーシス機序によるものであると示唆しており(Djehaら、2000年)、アポトーシス細胞死は比較的弱い免疫応答しか生じないと考えられていたので、これは予想しなかった。抗腫瘍作用をさらに増強する目的で、その研究者らは、ニトロレダクターゼおよびHsp70の両方を発現することができるポリヌクレオチドをコードするアデノウイルス遺伝子治療ベクターを構築した。根拠は、ベクターが標的として感染し、CB1954の投与によって死滅させられる腫瘍細胞は、腫瘍細胞の死滅によって誘発され、Hsp70の過剰発現によって増強される抗腫瘍免疫応答を開始する作用をするということである。これにより、Hsp70が結合した細胞内ペプチドが、CD91を発現する抗原提示細胞に効率的に送達される。このように送達されるペプチドの一部は、腫瘍細胞内の体細胞突然変異によって生じる腫瘍特異的な「非自己」エピトープを含有するので、(主に)MHCクラスI分子に関連するこれらの提示により、CD8+細胞傷害性T細胞抗腫瘍応答が開始される。しかし、Hsp送達されるペプチドの一部はMHCクラスII提示経路に進入するので、CD4+ヘルパーT細胞応答が増加する。細胞応答の両方の能力は抗腫瘍免疫において重要である。
ニトロレダクターゼ/CB1954酵素/プロドラッグシステムの使用は、溶解した細胞から放出される活性型CB1954の毒性産物に接触した標的腫瘍細胞およびバイスタンダー細胞を死滅する以外に、同じ種類の腫瘍細胞による後の攻撃に対する大きな保護作用も生じたことを本発明者らは見出した。早期の研究はこのような死滅作用はアポトーシス機序によるものであると示唆しており(Djehaら、2000年)、アポトーシス細胞死は比較的弱い免疫応答しか生じないと考えられていたので、これは予想しなかった。抗腫瘍作用をさらに増強する目的で、その研究者らは、ニトロレダクターゼおよびHsp70の両方を発現することができるポリヌクレオチドをコードするアデノウイルス遺伝子治療ベクターを構築した。根拠は、ベクターが標的として感染し、CB1954の投与によって死滅させられる腫瘍細胞は、腫瘍細胞の死滅によって誘発され、Hsp70の過剰発現によって増強される抗腫瘍免疫応答を開始する作用をするということである。これにより、Hsp70が結合した細胞内ペプチドが、CD91を発現する抗原提示細胞に効率的に送達される。このように送達されるペプチドの一部は、腫瘍細胞内の体細胞突然変異によって生じる腫瘍特異的な「非自己」エピトープを含有するので、(主に)MHCクラスI分子に関連するこれらの提示により、CD8+細胞傷害性T細胞抗腫瘍応答が開始される。しかし、Hsp送達されるペプチドの一部はMHCクラスII提示経路に進入するので、CD4+ヘルパーT細胞応答が増加する。細胞応答の両方の能力は抗腫瘍免疫において重要である。
抗腫瘍免疫応答を形成する際のこの方法の成功性は、GDEPT媒介性の死滅が少なくともある割合の細胞においては壊死性であるからであるかどうか、死滅の主要な機序はアポトーシス性であるが、かなりのレベルの二次的な壊死が生じるかどうか、またはアポトーシス細胞死の抗炎症性および非免疫原性はヒートショック因子の過剰発現によってある程度克服されうるかどうかは不明である。しかし、本発明者らは、マウス腫瘍モデルにおいて、原発性腫瘍を、NTR遺伝子を送達するベクターと共に注射し、その後CB1954を全身投与すると、腫瘍を死滅させるだけでなく、同じ種類の腫瘍細胞のその後の負荷に対するある程度の保護作用を与えることを実証した。彼らはさらに、この保護作用は、便利なことに同じ遺伝子治療ベクターにおいて、Hsp70の発現を誘導する遺伝子を同時投与することによって大幅に増強されることを実証した。
本発明は、プロドラッグ変換酵素としてのニトロ還元酵素の使用に限定されず、プロドラッグ変換に依存する細胞死滅方法に限定されない。原則として、細胞を死滅させることができる分子をコードするポリヌクレオチドを含む、任意の細胞死滅方法を、内因的アジュバントとして作用し、抗腫瘍応答を促進する際にヒートショックタンパク質様の機能を有する任意の分子と併用使用することができる。コードされ、この方法に使用できると思われる毒素には、リシン、アブリン、ジフテリア毒素およびボツリヌス毒素がある。別の好適なプロドラッグ変換酵素には、チトクロームP450/アセトアミノフェン酵素/プロドラッグ組み合わせがある。このようなシステムが腫瘍細胞を死滅させる手段として有用であることは既知であり(国際特許出願国際公開公報第00/40272号)、アセトアミノフェンを毒性代謝物N−アセチルベンゾキノミニン(N-asetylbenzoquinoneimine)(NABQI)に活性化することによって生ずる細胞死滅はアポトーシス性であるといういくつかの証拠がある(Baeら、2001年;Boularesら、2002年)。にもかかわらず、治療レベルのアセトアミノフェンの存在下におけるチトクロームP450とhsp70の同時発現は、チトクロームP450単独で得られるものよりかなり改善された抗腫瘍応答を与えるということを出願人らは見出した。
実際、ヒートショックタンパク質の発現を提供するベクターを送達する開示の方法は、種々の方法のいずれかによって死滅される腫瘍細胞(限定されない)などの細胞に対する免疫応答を増強するために使用することができることが明らかである。従って、化学療法または放射線療法と併用するアジュバント免疫療法としてのヒートショックタンパク質のDNA送達は有用である可能性がある。
使用することができる好適なアジュバント特性を有する分子には、Hsp70、Hsp90、Hsp110、カルレチクリン、gp96、grp170、Hsp27、Hsc70、マイコバクテリウム(Mycobacterium)Hsp65、レジオネラ・ニューモフィラ(Legionella pneumophila)Hsp60、大腸菌(Escherichia coli)GroELおよびGroESがある。
さらに、壊死性細胞死を生ずるGDEPTに基づいた方法の使用(NTR/CB1954併用など)は、関連するHsp導入遺伝子によって提供されるHsp発現のアップレギュレーションの別の有用な影響がなくても、大きな免疫原性を示すことが本明細書に開示されているデータから明らかである。
ベクターは細胞にDNAを導入することができる任意のベクターであってもよい。好ましくは、ベクターは組込みベクターまたはエピソームベクターである。
好ましい組込みベクターには、組換えレトロウイルスベクターが挙げられる。組換えレトロウイルスベクターは、その一部が標的細胞に感染することができるレトロウイルスゲノムの少なくとも一部のDNAを含む。「感染」という用語は、ウイルスが遺伝物質を宿主または標的細胞に導入する過程を意味するために使用される。好ましくは、本発明のベクターを構築する際に使用するレトロウイルスも、標的細胞のウイルス複製性を除去するために複製欠損型にされる。このような場合には、複製欠損型ウイルスゲノムは従来の技法によりヘルパーウイルスによってパッケージングされうる。一般に、感染性および機能的遺伝子導入能力に関する上記の基準を満たす任意のレトロウイルスを本発明を実施する際に使用することができる。
好適なレトロウイルスベクターには、当業者に既知のpLJ、pZip、pWeおよびpEMが挙げられるが、これらに限定されない。複製欠損型レトロウイルスに好適なパッケージングウイルス系統には、例えば、ΨCrip、ΨCre、Ψ2およびΨAmが挙げられる。特に好適なレトロウイルスベクターはレンチウイルスベクター、特にHIV、SIVおよびFIVである。
本発明に有用な他のベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、SV40ウイルス、ワクシニアウイルス、HSVおよびポックスウイルスベクターが挙げられる。好ましいベクターはアデノウイルスである。アデノウイルスベクターは当業者に既知であり、気道上皮、骨格筋、肝臓、脳および皮膚を含む数多くの細胞種(Hittら、1997年;Anderson、1998年)並びに腫瘍(Mountain、2000年)に遺伝子を送達するために使用されている。
さらに別の好ましいベクターはアデノ随伴(AAV)ベクターである。AAVベクターは当業者に既知であり、遺伝子治療適用のためにヒトTリンパ球、線維芽細胞、鼻ポリープ、骨格筋、脳、赤血球および造血幹細胞に安定して形質導入するために使用されている(Philipら、1994年;Russelら、Flotteら、1993年;Walshら、1994年;Millerら、1994年;Emerson、1996年)。国際特許出願国際公開公報第91/18088号は具体的なAAV系ベクターを記載している。
好ましいエピソームベクターには、EBV、ヒトパポバウイルス(BK)およびBPV−1由来のものなどのウイルスの複製開始点由来の機能を有する一過的な非複製エピソームベクターおよび自己複製エピソームベクターが挙げられる。
このような組込みベクターおよびエピソームベクターは当業者に既知であり、当業者に既知の多数の文献に十分に記載されている。特に、好適なエピソームベクターは国際公開公報第98/07876号に記載されている。
哺乳類人工染色体も本発明においてベクターとして使用することができる。哺乳類人工染色体の使用はCalos(1996年)によって考察されている。
好ましい実施態様において、本発明のベクターはプラスミドである。プラスミドは非複製で、組込まれないプラスミドである。
本明細書において使用する「プラスミド」という用語は、発現可能な遺伝子をコードする任意の核酸をいい、鎖状または環状核酸および2本鎖または1本鎖核酸を含む。核酸はDNAまたはRNAであってもよく、修飾ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドを含んでもよく、メチル化、または保護基またはキャップ−もしくはテール構造の導入などの手段によって化学的に修飾してもよい。
非複製で組込まれないプラスミドは、宿主細胞にトランスフェクトされたとき、複製せず、特に宿主細胞のゲノムに組込まない(すなわち、高い頻度で組込まず、特定の部位に組込まない)核酸である。
複製するプラスミドは、Ustavら(1991年)の標準的な複製アッセイを含む標準的なアッセイを使用して同定することができる。
本発明はまた、本発明のベクターをトランスフェクトした宿主細胞を提供する。宿主細胞は任意の哺乳類細胞であってもよい。好ましくは、宿主細胞は齧歯類または哺乳類細胞である。
核酸縮合剤の使用、エレクトロポレーション、アスベストとの複合体形成、ポリブレン、DEAEセルロース、デキストラン、リポソーム、陽イオンリポソーム、リポポリアミン、ポリオルニチン、微粒子銃および直接マイクロインジェクション(KucherlapatiおよびSkoultchi(1984年)による総説;Keownら(1990年)を含む、数多くの技法が既知であり、本明細書に記載されているベクターを細胞に送達するために本発明により有用である。
本発明のベクターは、ウイルス性または非ウイルス性送達手段により非特異的または特異的に(すなわち、宿主細胞の指定したサブセットに)宿主細胞に送達することができる。ウイルス起源の好ましい送達方法には、アデノウイルス、ヘルペスウイルスおよびパポバウイルスのものなどの、ウイルスのパッケージングシグナルが工作されている本発明のベクターのトランスフェクションレシピエントとしてのウイルス粒子産生パッケージング細胞系統が挙げられる。好ましい非ウイルス系遺伝子送達手段および方法も本発明に使用することができ、裸の核酸の直接注射、核酸縮合ペプチドおよび非ペプチド、陽イオンリポソーム並びにリポソームへの封入化が挙げられる。
組織へのベクターの直接送達が記載されており、いくつかの短期遺伝子発現が達成されている。筋肉(Wolffら、1990年)、甲状腺(Sikesら、1994年)、黒色腫(Vileら、1993年)、皮膚(Henggeら、(1995年)、肝臓(Hickmanら(1994年)へのベクターの直接送達および気道上皮の暴露(Meyerら、1995年)によるベクターの直接送達は従来技術に明白に記載されている。
ウイルスエンベロープタンパク質のアミノ酸配列由来の種々のペプチドが、ポリリジンDNA複合体と同時投与される場合に遺伝子導入に使用されており(Plankら、1994年;Trubetskoyら、1992年;国際公開公報第91/17773号;国際公開公報第92/19287号およびMackら、1994年)、ポリリジン複合体と陽イオン脂質の共縮合により遺伝子導入効率を改善することができることを示唆している。国際特許出願国際公開公報第95/02698号は、陽イオン脂質による遺伝子導入効率を増加する試みにウイルス成分を使用することを開示している。
本発明に有用な核酸縮合剤には、ポリエチレンイミン(PEI)およびポリリジンなどの、スペルミン、スペルミン誘導体、ヒストン、陽イオンペプチド、陽イオン非ペプチドが挙げられる。「スペルミン誘導体」はスペルミンの類似物および誘導体をいい、国際特許出願国際公開公報第93/18759号(1993年9月30日公開)に記載されている化合物が挙げられる。
ジスルフィド結合は送達媒体のペプチド成分を結合するために使用されている(Cottenら、1992年)。Trubetskoyら(上記)も参照されたい。
DNA構築物を細胞に送達するための送達媒体は当技術分野において既知であり、例えば、WuおよびWu(1988年)、Wilsonら(1992年)および米国特許第5,166,320号に記載されている細胞表面受容体に特異的であるDNA/ポリカチオン複合体が挙げられる。
本発明によるベクターの送達は、核酸縮合ペプチドを使用することが考慮されている。ベクターを縮合し、ベクターを細胞に送達するのに特に有用である核酸縮合ペプチドは国際特許出願国際公開公報第96/41606号に記載されている。国際公開公報第96/41606号に記載されているように、本発明によるベクターの送達に有用なペプチドに官能基を結合することができる。これらの官能基には、モノクローナル抗体、インスリン、トランスフェリン、アシアロ糖タンパク質または糖などの特定の細胞種を標的とするリガンドを挙げることができる。従って、リガンドは、非特異的または細胞種に関して制限される特異的に細胞を標的とすることができる。
官能基はまた、パルミトイル、オレイルもしくはステアロイルなどの脂質;ポリエチレングリコール(PEG)もしくはポリビニルピロリドン(PVP)などの中性親水性ポリマー;インフルエンザウイルスのHAペプチドなどの膜融合性ペプチド;またはリコンビナーゼもしくはインテグラーゼを含んでもよい。官能基はまた、核局在化配列(NLS)などの細胞内輸送タンパク質、膜破壊ペプチドなどのエンドソームエスケープシグナルまたは細胞質に直接タンパク質を誘導するシグナルを含んでもよい。
従って、本発明は以下を提供する:毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチド配列とストレス応答タンパク質またはストレス応答タンパク質発現のインデューサーをコードするポリヌクレオチド配列を含む産物。このようなストレス応答タンパク質には、NFκB、高移動度群B1タンパク質HMGB1、IL−1β、IL−1α、IL−6、IL−8、TNF−α、GM−CSF、IL−12およびIL−15などのサイトカイン並びにHsp70、Hsp90、Hsp110、カルレチクリン、gp96、grp170、Hsp27、Hsc70、マイコバクテリウムHsp65、レジオネラ・ニューモフィラHsp60、大腸菌GroELおよびGroESなどのヒートショックタンパク質が挙げられる。ストレスタンパク質発現のインデューサーにはHSF−1、HSF−2、HSF−3、IRF−1およびIRF−2が挙げられる。
好ましい一実施態様において、毒素またはプロドラッグ変換酵素は細胞を壊死的に死滅することができることが好ましい。「壊死的」または「壊死性細胞死」という用語は、プログラムされていないまたはアポトーシス性ではない全ての形態の細胞死を含む。
第二の好ましい実施態様において、このような産物は免疫応答、さらに好ましくは抗腫瘍免疫応答を増強する際に使用する。
別の実施態様において、毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチド配列およびストレス応答タンパク質もしくはストレス応答タンパク質発現インデューサーをコードするポリヌクレオチド配列は、1つのポリヌクレオチド分子の両方の要素である。さらに別の実施態様において、このような配列は、同時投与または連続投与することができる別個のポリヌクレオチドに存在する。
好ましくは、毒素またはプロドラッグ変換酵素は、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼである。または、それは、好ましくは哺乳類起源、さらに好ましくはヒト起源のチトクロームP450酵素である。最も好ましくは、それはヒトCYP1A2である。または、それはヒトCYP2E1またはCYP3A4である。
別の好ましい実施態様において、コードされる酵素は齧歯類チトクロームP450であり、好ましくはマウス由来である。最も好ましくは、それはマウスCYP1A2、CYP2E1またはCYP3A4である。
好ましくは、ポリヌクレオチドにコードされるストレス応答タンパク質はヒートショックタンパク質である。さらに好ましくは、ヒートショックタンパク質は、Hsp70、Hsp90、Hsp110、カルレチクリン、gp96、grp170、Hsp27、Hsc70、マイコバクテリウムHsp65、レジオネラ・ニューモフィラHsp60、大腸菌GroELおよびGroESからなるリストから選択され、最も好ましくは、それはHsp70である。または、ポリヌクレオチドは、ヒートショックタンパク質の発現を誘導するストレスタンパク質発現インデューサーをコードする。好ましくは、それは、ヒートショック因子−1(HSF−1)、ヒートショック因子−2(HSF−2)、ヒートショック因子−1(HSF−3)、インターフェロン応答因子−1(IRF−1)またはインターフェロン応答因子−1(IRF−2)を含むリストから選択される。
第二の態様において、本発明は、上記に記載する産物を含むDNAワクチンを提供する。「DNAワクチン」は、免疫原性またはアジュバント特性を有するタンパク質またはペプチドをコードするまたは発現することができる1つ以上のポリヌクレオチドを含む治療的免疫応答を誘導または増強することが意図されている産物を意味する。
第三の態様において、DNAワクチンは、抗腫瘍免疫応答を増強するための毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチドを含む。好ましくは、毒素またはプロドラッグ変換酵素は、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼである。または、毒素またはプロドラッグ変換酵素はチトクロームP450である。好ましくは、チトクロームP450は、ヒトCYP1A2、ヒトCYP2E1、ヒトCYP3A4、齧歯類CYP1A2、齧歯類CYP2E1および齧歯類CYP3A4からなるリストから選択される。
好ましくは、毒素またはプロドラッグ変換酵素は壊死性細胞死を誘導することができる。
第四の態様において、本発明は、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼをコードするポリヌクレオチドと、抗腫瘍免疫応答を増強する際に使用するための免疫賦活分子をコードするポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。「免疫賦活性」という用語には、免疫抑制因子または作用の阻害剤として機能すると思われる(IL−10およびTGF−βなどの)因子が含まれる。
好ましくは、免疫賦活分子は、GM−CSF、IL−1、IL−2、IL−4、IL−6、IL−10、IL−12、IL−18、B7−2、TNFα、γ−IFN、MCP−1、MIP−2、RANTES、TGF−β、CD154(CD40リガンド)、CD134リガンド(OX40L)、MHCクラスI、MHCクラスII、CD135リガンド(Flt3L)およびTNF関連アポトーシス誘導受容体(TRAIL、Apo−2リガンド)からなるリストから選択される。
本発明の特定の実施態様は、免疫応答を増強する際に使用するための、
a)毒素またはプロドラッグ変換酵素と
b)ストレス応答タンパク質と
をコードするベクターである。
a)毒素またはプロドラッグ変換酵素と
b)ストレス応答タンパク質と
をコードするベクターである。
好ましくは、免疫応答は抗腫瘍免疫応答である。
ストレス応答タンパク質がヒートショックタンパク質であることも好ましい。さらに好ましくは、ヒートショックタンパク質は、Hsp70、Hsp90、Hsp110、カルレチクリン、gp96、grp170、Hsp27、Hsc70、マイコバクテリウムHsp65、レジオネラ・ニューモフィラHsp60、大腸菌GroELおよびGroESからなるリストから選択される。最も好ましくは、それはHsp70である。
好ましくは、毒素またはプロドラッグ変換酵素は、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼである。最も好ましくは、ベクターは、図1に示すCTL102/mCMV−mHSP70である。
または、それは、好ましくは哺乳類起源、さらに好ましくはヒト起源のチトクロームP450酵素である。最も好ましくは、ヒトCYP1A2である。または、それはヒトCYP2E1またはCYP3A4である。
別の好ましい実施態様において、コードされる酵素は齧歯類チトクロームP450であり、好ましくはマウス由来である。最も好ましくは、それはマウスCYP1A2、CYP2E1またはCYP3A4である。
上記のベクターのいずれかが、腫瘍選択的発現を提供する1つ以上のプロモーターに機能的に結合し、一方で毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチド配列および他方でストレス応答タンパク質またはストレス応答タンパク質発現インデューサーをコードするするポリヌクレオチドの一方または両方を有することがさらに好ましい。
本明細書において使用する「機能的に結合する」という用語は、プロモーターの制御下において遺伝子を発現させるcis結合をいう。
好ましい腫瘍選択性プロモーターには、TRP−1、HER2、HER3、ERBB2、ERBB3、CEA、MUC−1、α−フェトプロテイン、前立腺特異的抗原(PSA)、ビリン、膵臓アミラーゼ、チロシナーゼ関連ペプチド、腫瘍拒絶抗原前駆体およびT細胞因子(TCF)応答プロモーターが挙げられる。好ましくは、プロモーターは1つ以上のTCF応答要素を含む。
TCFは、DNA結合タンパク質の高移動度群(HMG)の転写因子ファミリーである(Loveら、Nature,376,791-795,1995)。ファミリーには、van der Weteringら(EMBO J.10,123-132,1991)、欧州特許出願第0 939 122号およびKorinekら(Science,275,1784-1787,1997)に記載されているTCF−1、TCF−3およびTCF−4が含まれる。TCF−4は、Wnt/Winglessシグナル伝達系に関連する腫瘍形成に関与することが示されている。TCFおよびLEF−1(リンパ系増強因子−1)は、β−カテニンと相互作用することによってWnt信号に対する核応答を媒介すると考えられる。β−カテニンの安定性を増加するWntシグナル伝達系および他の細胞事象は、β−カテニンと関連したLEF−1およびTCFタンパク質による遺伝子の転写活性化を生じると考えられる。Wntシグナル伝達系が存在しない場合には、LEF−1/TCFタンパク質はGrouchoおよびCBP(CREB結合タンパク質)と関連する転写を抑制する。
Wntシグナル伝達系が存在しない場合には、β−カテニンは2つの別個の多タンパク質複合体に見られる。細胞膜に位置する一方の複合体はカドヘリン(カルシウム依存的接着分子)とアクチン細胞骨格を結合するが、他方の複合体(タンパク質、腺腫性結腸ポリープタンパク質(APC)、アクシンおよびグリコーゲン合成酵素キナーゼ3β(GSK3β)を含有する)は分解のためにβ−カテニンを標的とする。Wntシグナル伝達系はAPC−アクシンGSK3β複合体と拮抗して、遊離の細胞質内β−カテニンの貯蔵を増加する。遊離の細胞質内β−カテニンは核に転位して、LEF−1/TCF因子に結合し、Wnt標的遺伝子を活性化する。Wntおよび他の信号によるLEF−1/TCF因子の調節はEastmanら(Current Opin.Cell Biology,11,233-240,1999)に考察されている。
TCFは、ヌクレオチド配列CTTTGNN(式中、NはAまたはTを示す)を有するTCF結合要素を認識し、結合することが知られている(van der Weteringら、上記)。
TCF応答要素は、特に結腸および肝臓腫瘍において機能的に結合した遺伝子の腫瘍選択性の高い発現を提供することが示されている(国際公開公報第01/64739号)。
好ましくは、ベクターはウイルスベクターであり、さらに好ましくはアデノウイルスベクターである。特に好ましい実施態様は、抗腫瘍免疫応答を増強する際に使用するための(a)プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼおよび(b)hsp70をコードし、発現を可能にするアデノウイルスベクターである。最も好ましくは、それはCTL102/mCMV−mHSP70である。
または、ウイルスベクターはレトロウイルスベクターであり、さらに好ましくはレンチウイルスベクターである。
さらに別の実施態様は、上記ベクターのいずれかを含む宿主細胞である。
本発明の別の態様は、上記の産物または組成物、ベクターまたは宿主細胞を含むワクチンである。
医薬品またはワクチンとして使用するための上記の産物または組成物、ベクターまたは宿主細胞も提供される。
本発明のさらに別の態様は、上記の産物、組成物、DNAワクチン、ベクターまたは宿主細胞のいずれかと、製薬学的に許容されうる希釈剤、緩衝剤、補助剤または賦形剤を含む製薬学的組成物である。
また、癌を治療するための医薬品を製造するためまたは癌を治療するためのワクチンを製造するための上記産物、組成物、DNAワクチン、ベクターまたは宿主細胞のいずれかの使用も提供する。
本発明は、毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチドとヒートショックタンパク質またはヒートショックタンパク質発現インデューサーをコードするポリヌクレオチドを含む治療量の産物を投与するステップを含む、免疫応答を増強する方法を提供する。好ましくは、免疫応答は抗腫瘍免疫応答である。
毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチドとヒートショックタンパク質またはヒートショックタンパク質発現インデューサーをコードするポリヌクレオチドを含む治療量の産物を投与するステップを含む、ある形態の癌に罹患している患者を治療する方法も提供される。
好ましい一実施態様において、本発明の方法は、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼをコードするポリヌクレオチドとヒートショックタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む治療量の産物を投与するステップと、産物が腫瘍細胞に進入し、コードされているニトロレダクターゼおよびヒートショックタンパク質が発現される時間をおくステップと、治療量のCB1954を投与するステップとを含む。
または、本発明の方法は、チトクロームP450をコードするポリヌクレオチドおよびヒートショックタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む治療量の産物を投与するステップと、産物が腫瘍細胞に進入し、コードされているチトクロームP450およびヒートショックタンパク質が発現される時間をおくステップと、治療量のプロドラッグを投与するステップとを含む。好ましくは、プロドラッグはアセトアミノフェンである。
上記方法のいずれにおいても、ヒートショックタンパク質がHsp70であることが好ましい。
本発明の別の態様において、治療的な抗腫瘍免疫応答が誘導されるように、ヒートショックタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む治療量の産物と治療量の抗癌細胞傷害薬を投与するステップを含む、ある形態の癌に罹患している患者を治療する方法が提供される。
好ましい実施態様において、抗癌細胞傷害薬は、腫瘍細胞に壊死性細胞死を誘導することができる。
本発明の最後の態様において、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼをコードするポリヌクレオチドを含む治療量の産物を投与するステップと、組成物が腫瘍細胞に進入して、コードされているニトロレダクターゼが発現される時間をおくステップと、治療量のCB1954を投与するステップとを含む抗腫瘍免疫応答を誘発する方法が提供される。
本発明の産物、DNAワクチン、ベクターもしくは宿主細胞または製薬学的組成物は、全身、筋肉内、皮下、皮内、静脈内、エアゾール、経口(固体または液体剤形)、局所、点眼、坐剤、腹腔内および/またはくも膜下腔内および局所的な直接注射を含む経路によって投与することができる。
当然のことながら、正確な用法用量は、個々の患者について個々の医師が決定する必要があり、治療用遺伝子が発現するタンパク質の性質および治療対象の組織の種類によって制御される。
用量はまた、適応症および投与経路に依存する。
本発明による効果的な治療のために送達される核酸構築物またはベクターの量は、好ましくは、約50μg〜1000μgのベクターDNA/体重1kgの範囲内であり、さらに好ましくは約1〜100μgベクターDNA/kgの範囲内である。
インビボにおける細胞への取り込みのために核酸構築物、ベクターまたは宿主細胞を哺乳類に投与することが本発明により好ましいが、細胞を動物から取り出し、核酸構築物またはベクターを形質導入し、次いで動物に再植え込みする半ビボ方法を使用することができる。
[発明の詳細な説明]
本発明は以下の実施例を使用することによって詳細に説明される。これらは例示的にすぎず、限定するものと考えられるべきではない。
本発明は以下の実施例を使用することによって詳細に説明される。これらは例示的にすぎず、限定するものと考えられるべきではない。
[実施例1]
〔材料と方法〕
(細胞培養)
4T1、マウス乳癌細胞はATCC(CRL−2539)から入手した。EJ−6−2−Bam−6aはATCC(CRL−1888)から入手し、ヒトEJ膀胱癌のDNAをNIH/3T3にトランスフェクトすることによって作製した。PER.C6細胞(lit)はIntroGene(Leiden、オランダ)から入手した。911細胞はProf.L.Young(CRC Institute for Cancer Studies、University of Birmingham、英国)の親切な提供を受け、10%FCS、10mMのMgCl2および抗生物質を含有するDMEMで維持した。4T1およびEJ−6−2−Bam−6aは、供給元が推奨するように培養した。
〔材料と方法〕
(細胞培養)
4T1、マウス乳癌細胞はATCC(CRL−2539)から入手した。EJ−6−2−Bam−6aはATCC(CRL−1888)から入手し、ヒトEJ膀胱癌のDNAをNIH/3T3にトランスフェクトすることによって作製した。PER.C6細胞(lit)はIntroGene(Leiden、オランダ)から入手した。911細胞はProf.L.Young(CRC Institute for Cancer Studies、University of Birmingham、英国)の親切な提供を受け、10%FCS、10mMのMgCl2および抗生物質を含有するDMEMで維持した。4T1およびEJ−6−2−Bam−6aは、供給元が推奨するように培養した。
(プラスミド構築)
pTX0374は、大腸菌(E. coli)ntr遺伝子(NTR:ゲノムDNAから増幅した大腸菌(E. coli)B/rニトロレダクターゼ遺伝子)に融合させたヒトCMVプロモーターを含有する1.6kbのBglII−BamHIフラグメントをpSW107にクローニングすることによって構築した。pRAJ43BP4は、マウスGM−CSF cDNAを含有するpUC19プラスミドであり、Prof.L.Young(CRC Institute for Cancer Studies、University of Birmingham、英国)の親切な提供を受けた。CET902は、マウスCMV 1Eエンハンサー/プロモーターおよび後期SV40ポリ(A)シグナルを含有するpUC19プラスミドである。
pTX0374は、大腸菌(E. coli)ntr遺伝子(NTR:ゲノムDNAから増幅した大腸菌(E. coli)B/rニトロレダクターゼ遺伝子)に融合させたヒトCMVプロモーターを含有する1.6kbのBglII−BamHIフラグメントをpSW107にクローニングすることによって構築した。pRAJ43BP4は、マウスGM−CSF cDNAを含有するpUC19プラスミドであり、Prof.L.Young(CRC Institute for Cancer Studies、University of Birmingham、英国)の親切な提供を受けた。CET902は、マウスCMV 1Eエンハンサー/プロモーターおよび後期SV40ポリ(A)シグナルを含有するpUC19プラスミドである。
CET902/mCMV−mHSP70は、ストレス誘導性マウスHSP70タンパク質の発現カセットを含有し、記載するように構築した。先ず、完全長(1.4kb)のマウスCMVプロモーターをpUC19系ベクターにクローニングした。第二に、後期SV40ポリ(A)シグナルをプロモーターの下流にクローニングした。最後に、マウスHsp70をコードするcDNAを、SmaI部位を使用して、プロモーターとポリ(A)シグナルの間にクローニングした。マウスHSP70のcDNAを含有するプラスミドは、Dr.R.Vile(Molecular Medicine Program、Mayo Clinic、200 First Street SW、Rochester、Minnesota、米国)の親切な提供を受け、NheI/BamHIフラグメントとして切断し、T4 DNAポリメラーゼを使用して、平滑末端化した。
CET902/mCMV−mGM−CSFは、pRAJ 43 BP4をEcoRIおよびBamHIで消化して、465bpのフラグメントを放出することによって作製した。フラグメントを平滑末端化し、SmaIにライゲーションしてCET902を作製した。
pPS1128はDr.P.Searle、CRC Institue of Cancer Studies、University of Birminghamの親切な提供を受けた。pPS1128は左側ITRからnt359およびnt3525から10,579のアデノウイルス配列を含有し、従ってE1欠損ベクターである。pPS1128は、ポリ(A)付加シグナルおよびヒト補体C2遺伝子の転写停止シグナルを含有する240bpのHincII−BamHIフラグメントに結合したヒトβ−グロビン遺伝子の917bpフラグメント(エクソン2のBamHI部位からエクソン3のEcoRI部位)をpBluescript(Stratagene)にクローニングすることによって構築した。このプラスミドは2段階で構築した。第1の段階において、pPS971の左側EcoRI部位(Weedonら、Int.J.Cancer、印刷中)をSwaI部位に変換してpPS115を作製した。第2の段階において、2つのオリゴヌクレオチド:
5’−CTAGTATCGATTGTTAATTAAGGGCGTGGCC−3’および
5’−TTAAGGCCACGCCCTTAATTAACAATCGATA−3’
をアニーリングすることによって、pPS115の350bpのSpe1−AflIIフラグメントをリンカーと置換した。
5’−CTAGTATCGATTGTTAATTAAGGGCGTGGCC−3’および
5’−TTAAGGCCACGCCCTTAATTAACAATCGATA−3’
をアニーリングすることによって、pPS115の350bpのSpe1−AflIIフラグメントをリンカーと置換した。
pPS1022は、右側EcoRI部位をSwaI部位に変換することによってpPS972から構築した。
pTX0375、CTL102を作製するために使用する導入ベクターは、pTX0374の全発現カセットにわたるSpeIフラグメント(hCMV−NTR−IVSII−p(A))をSpeI消化したpPS1128にクローニングすることによって構築し、左から右方向にカセットを含有するクローンを同定した。pPS1128/mCMV−mHSP70およびpTX0375/mCMV−mHSP70は、それぞれ、pTX0375の平滑末端化したpPS1128部位または平滑末端化したPacI部位にCET902/mHSP70のmCMV−mHSP70−SV40p(A)発現カセットを導入することによって構築した。mCMV−mHSP−SV40p(A)発現カセットは、CET902/mHSP70プラスミドをXmnI、AscIおよびBstZ171で消化し、T4 DNAポリメラーゼで平滑末端化することによって作製した。従って、最終的なカセットは約500bpのマウスCMVプロモーターを含有し、このピースは活性の大半を提供する。pPS118/mCMV−mGM−CSFはCET902/mCMV−mGM−CSFから作製した完全な発現カセット(1.3kb)(BstZ171およびAscI消化し、平滑末端化)をpPS1128にクローニングすることによって構築した。
アデノウイルス「バックボーン」ベクターpPS1160は、pPS1128をPacI鎖状化し、XbaI部位を含有するPacI−適合性アダプター(オリゴ1:5’−TACATCTAGATAAT−3’、オリゴ2:5’−TTATCTAGATGTA−3’)をライゲーションし、次にXbaI消化して、Ad5配列3524〜10589を含有する約7kbのXbaIフラグメントを遊離することによって構築した。次いで、これをXbaI鎖状化したpPS1022(Dr.Peter Searle)、nt10,589から右側ITRのAd5配列を含有するが、nt28,592から30,470(E3領域)を欠損するpUC18系プラスミドにクローニングした。
(アデノウイルスベクター構築)
組換えウイルスCTL102(Ad.hCMV−NTR)、CTL102/mCMV−mHSP70、Ad.mCMV−mHSP70およびAd.mCMV−mGM−CSFは、Per.C6細胞における相同組換えによって構築した。これらの細胞に、pTX0375、pTX0375/mCMV−mHSP70、pPS1128/mCMV−HSP70またはpPS1128/mCMV−mGM−CSFおよびpPS1160の等モル混合物を同時形質移入し、PER.C6細胞を90%集密化させた。組換えウイルスは、感染培地(DMEM、1%FCS、2mMのMgCl2)中で凍結−融解を3サイクル実施することによって約7日後に回収した。感染/回収サイクルを反復することによって、ウイルスを大量に増殖させ、次いで標準的なCsCl密度勾配遠心分離によって精製し、過剰量の保存緩衝液(10mMのTris pH7.4、140mMのNaCl、5mMのKCl、0.6mMのNa2HPO4、0.9mMのCaCl2、0.5mMのMgCl2および5%スクロース)で透析し、最後に液体窒素中でスナップ凍結し、−80℃において保存した。粒子濃度は、BCA Protein Assay Reagent(Perbio Science UK,LTD、Tattenhall、Cheshire、UK)を使用して測定した。プラーク形成単位(p.f.u.)力価は911細胞のプラークアッセイによって測定した。
組換えウイルスCTL102(Ad.hCMV−NTR)、CTL102/mCMV−mHSP70、Ad.mCMV−mHSP70およびAd.mCMV−mGM−CSFは、Per.C6細胞における相同組換えによって構築した。これらの細胞に、pTX0375、pTX0375/mCMV−mHSP70、pPS1128/mCMV−HSP70またはpPS1128/mCMV−mGM−CSFおよびpPS1160の等モル混合物を同時形質移入し、PER.C6細胞を90%集密化させた。組換えウイルスは、感染培地(DMEM、1%FCS、2mMのMgCl2)中で凍結−融解を3サイクル実施することによって約7日後に回収した。感染/回収サイクルを反復することによって、ウイルスを大量に増殖させ、次いで標準的なCsCl密度勾配遠心分離によって精製し、過剰量の保存緩衝液(10mMのTris pH7.4、140mMのNaCl、5mMのKCl、0.6mMのNa2HPO4、0.9mMのCaCl2、0.5mMのMgCl2および5%スクロース)で透析し、最後に液体窒素中でスナップ凍結し、−80℃において保存した。粒子濃度は、BCA Protein Assay Reagent(Perbio Science UK,LTD、Tattenhall、Cheshire、UK)を使用して測定した。プラーク形成単位(p.f.u.)力価は911細胞のプラークアッセイによって測定した。
(4T1のインビトロにおける感染)
4T1細胞は、感染培地(通常培地であるが、1%FCSを含有する)中で細胞あたり示したp.f.u.(MOI)を、細胞密度1×107/mlのときに加湿したCO2インキュベーター中で約2.5時間感染させた。感染中、30分ごとに細胞をゆっくり混合した。次いで、細胞をペレット化(300×g、5分)し、洗浄してからPBSに再懸濁させた。ワクチン化実験では、使用したMOIは200〜300であり、ウイルスの組み合わせを使用する場合には、ベクターの最終用量は、用量依存的な細胞変性作用を回避するために一定にした。
4T1細胞は、感染培地(通常培地であるが、1%FCSを含有する)中で細胞あたり示したp.f.u.(MOI)を、細胞密度1×107/mlのときに加湿したCO2インキュベーター中で約2.5時間感染させた。感染中、30分ごとに細胞をゆっくり混合した。次いで、細胞をペレット化(300×g、5分)し、洗浄してからPBSに再懸濁させた。ワクチン化実験では、使用したMOIは200〜300であり、ウイルスの組み合わせを使用する場合には、ベクターの最終用量は、用量依存的な細胞変性作用を回避するために一定にした。
(ウェスタンブロット分析)
3×105のHeLa細胞に、5%CO2雰囲気下で37℃において2時間インキュベーションすることによって感染培地中で示したMOIを感染させた。次いで、細胞に完全培地(10%FCS)を供給し、24時間培養した。次いで、細胞をPBS中で洗浄し、次いで6ウェルあたり200μlRIPA緩衝液(10mMのTris pH8.0、150mMのNaCl、1.0%NP40、0.1%SDS、0.5%Na−デスオキシコラット(Desoxycholat)プラス完全プロテアーゼ阻害剤カクテル、Roche)を添加することによって全細胞溶菌液を調製した。細胞を室温において10分間インキュベーションし、4℃において13,000RPMで遠心分離した。透明な溶菌液を別の試験管に移し、Biorad DC Protein Assayキット(Hercules、CA、米国)を使用してタンパク質濃度を測定した。High Rainbowタンパク質サイズマーカー(Amersham Pharmacia、Piscataway、NJ、米国)を使用して、30μgの各溶菌液試料を11%SDS−PAGEで分解した。次いで、タンパク質をニトロセルロース膜(Gelma Sciences、Ann Arbor、MI、米国)に移した。TBS(10mMのTris pH7.5、150mMのNaCl)/0.1%Tween20/5%粉乳中で室温において1時間膜をブロッキングした。以下のようにブロッキング緩衝液で一次抗体を希釈した:ヒツジ抗NTR(ポリクローナル抗体、Dyfed、英国):1:2000、マウス抗HSP70(SPA-810、Stressgen Biotechnologies、Victoria BC、カナダ)1:1000およびヤギ抗GM−CSF(SantaCruz、CA、米国;sc−1322):1:1000。膜は室温において1時間一次抗体と共にインキュベーションし、次いで十分に洗浄し、次いで以下のようにTBS/0.1%Tween20/0.5%粉乳中で室温において30分間二次抗体と共にインキュベーションした:ロバ抗ヤギHRP(1:7,500;Sigma)、抗マウスHRP(1:10,000;Sigma A-9917)および抗ヤギHRP(Sigma、A-5420)。十分に洗浄後、Pierce「SuperSignal West Pico Chemiluminescence基質」(Perbio Science UK Ltd.、Tattenhall、英国)を使用して高感度化学発光を実施し、Alpha Innotech Imager Model#2.3.1で分析した。
3×105のHeLa細胞に、5%CO2雰囲気下で37℃において2時間インキュベーションすることによって感染培地中で示したMOIを感染させた。次いで、細胞に完全培地(10%FCS)を供給し、24時間培養した。次いで、細胞をPBS中で洗浄し、次いで6ウェルあたり200μlRIPA緩衝液(10mMのTris pH8.0、150mMのNaCl、1.0%NP40、0.1%SDS、0.5%Na−デスオキシコラット(Desoxycholat)プラス完全プロテアーゼ阻害剤カクテル、Roche)を添加することによって全細胞溶菌液を調製した。細胞を室温において10分間インキュベーションし、4℃において13,000RPMで遠心分離した。透明な溶菌液を別の試験管に移し、Biorad DC Protein Assayキット(Hercules、CA、米国)を使用してタンパク質濃度を測定した。High Rainbowタンパク質サイズマーカー(Amersham Pharmacia、Piscataway、NJ、米国)を使用して、30μgの各溶菌液試料を11%SDS−PAGEで分解した。次いで、タンパク質をニトロセルロース膜(Gelma Sciences、Ann Arbor、MI、米国)に移した。TBS(10mMのTris pH7.5、150mMのNaCl)/0.1%Tween20/5%粉乳中で室温において1時間膜をブロッキングした。以下のようにブロッキング緩衝液で一次抗体を希釈した:ヒツジ抗NTR(ポリクローナル抗体、Dyfed、英国):1:2000、マウス抗HSP70(SPA-810、Stressgen Biotechnologies、Victoria BC、カナダ)1:1000およびヤギ抗GM−CSF(SantaCruz、CA、米国;sc−1322):1:1000。膜は室温において1時間一次抗体と共にインキュベーションし、次いで十分に洗浄し、次いで以下のようにTBS/0.1%Tween20/0.5%粉乳中で室温において30分間二次抗体と共にインキュベーションした:ロバ抗ヤギHRP(1:7,500;Sigma)、抗マウスHRP(1:10,000;Sigma A-9917)および抗ヤギHRP(Sigma、A-5420)。十分に洗浄後、Pierce「SuperSignal West Pico Chemiluminescence基質」(Perbio Science UK Ltd.、Tattenhall、英国)を使用して高感度化学発光を実施し、Alpha Innotech Imager Model#2.3.1で分析した。
(マウス)
雌BALB/cマウス(H−2d、6〜8週齢)はHarlan(Oxion、米国)から入手し、温度制御し、明暗サイクルを行える部屋で、飼料と水は随時与えて管理した。マウスは1週間休息させてから任意の処理を実施した。注意および全ての実験手法は、UK Home Office規則に遵守して実施した。
雌BALB/cマウス(H−2d、6〜8週齢)はHarlan(Oxion、米国)から入手し、温度制御し、明暗サイクルを行える部屋で、飼料と水は随時与えて管理した。マウスは1週間休息させてから任意の処理を実施した。注意および全ての実験手法は、UK Home Office規則に遵守して実施した。
(マウス腫瘍モデル)
4T1は、BALB/cfC3Hマウスにおいて自然に発生した乳腺癌から樹立された攻撃性が高く転移性の細胞系統である(Dexterら、1978年)。H−2dクラスIを発現するが、クラスII分子を発現しない4T1細胞系統は、インビトロまたはインビボにおいて同質遺伝子的な抗腫瘍応答を刺激しない非免疫原性腫瘍モデルである。BALB/cマウスにおける100%腫瘍誘導最小量は5×102細胞である。4T1細胞は、BALB/cマウスに皮下注射すると、攻撃的な固形腫瘍を形成し、主に肺に自然転移することがあるが、原発腫瘍もその場で増殖を続ける。線維芽細胞系統である、EJ−6−2−Bam−6a(Shinら、1981年)を対照腫瘍として使用した。
4T1は、BALB/cfC3Hマウスにおいて自然に発生した乳腺癌から樹立された攻撃性が高く転移性の細胞系統である(Dexterら、1978年)。H−2dクラスIを発現するが、クラスII分子を発現しない4T1細胞系統は、インビトロまたはインビボにおいて同質遺伝子的な抗腫瘍応答を刺激しない非免疫原性腫瘍モデルである。BALB/cマウスにおける100%腫瘍誘導最小量は5×102細胞である。4T1細胞は、BALB/cマウスに皮下注射すると、攻撃的な固形腫瘍を形成し、主に肺に自然転移することがあるが、原発腫瘍もその場で増殖を続ける。線維芽細胞系統である、EJ−6−2−Bam−6a(Shinら、1981年)を対照腫瘍として使用した。
(ワクチン化プロトコール)
示した数のアデノウイルス−形質導入した4T1細胞を、合計100μlの容量で各未処理のマウスの右横腹に皮下注射した(0日目)。異なる実験群に、ニトロレダクターゼおよび/または同時刺激遺伝子を含有するアデノウイルスの1つの組み合わせまたは異なる組み合わせを注射した。導入遺伝子の最大の発現が生じうることが実証されている2日目まで導入遺伝子の発現をインビボにおいて進行させてから、400μMのCB1954溶液を総容量500μlで腫瘍周囲に注射した。特に記載しない限り、21日目に全てのマウスに5.0×103親4T1細胞の2回目の対側注射により腫瘍を負荷した。この量は、未処理のマウスにおける最小致死量より10倍多い。未処理のマウス群にも同じ経過時点にこれらの細胞を注射した。長期抗腫瘍免疫応答の誘導は、ワクチン後80日目にマウスに腫瘍負荷することによって実証した。任意の1つの実験における全てのマウス群は、同じ細胞調製物を使用して同じ日に腫瘍負荷した。動物は触診によって腫瘍の出現を定期的に調査した;以降は、2〜3回/週ノギスを使用して腫瘍の直交方向の2つの寸法を測定した。腫瘍サイズは個々の腫瘍の2つの径の積として表した。マウスは、窮迫徴候を示し、腫瘍が過剰に壊死的になったときまたは腫瘍サイズが160mm2を越えたとき、人道的な理由により処分した。
示した数のアデノウイルス−形質導入した4T1細胞を、合計100μlの容量で各未処理のマウスの右横腹に皮下注射した(0日目)。異なる実験群に、ニトロレダクターゼおよび/または同時刺激遺伝子を含有するアデノウイルスの1つの組み合わせまたは異なる組み合わせを注射した。導入遺伝子の最大の発現が生じうることが実証されている2日目まで導入遺伝子の発現をインビボにおいて進行させてから、400μMのCB1954溶液を総容量500μlで腫瘍周囲に注射した。特に記載しない限り、21日目に全てのマウスに5.0×103親4T1細胞の2回目の対側注射により腫瘍を負荷した。この量は、未処理のマウスにおける最小致死量より10倍多い。未処理のマウス群にも同じ経過時点にこれらの細胞を注射した。長期抗腫瘍免疫応答の誘導は、ワクチン後80日目にマウスに腫瘍負荷することによって実証した。任意の1つの実験における全てのマウス群は、同じ細胞調製物を使用して同じ日に腫瘍負荷した。動物は触診によって腫瘍の出現を定期的に調査した;以降は、2〜3回/週ノギスを使用して腫瘍の直交方向の2つの寸法を測定した。腫瘍サイズは個々の腫瘍の2つの径の積として表した。マウスは、窮迫徴候を示し、腫瘍が過剰に壊死的になったときまたは腫瘍サイズが160mm2を越えたとき、人道的な理由により処分した。
〔結果〕
(4T1のCTL102/CB1954死滅は、4T1細胞負荷に対する大きな長期的防御を誘導することができる)
インサイチューにおけるNTR/CB1954腫瘍死滅が特異的な抗腫瘍免疫の形成に寄与する可能性を試験するために、ワクチン化実験を実施した。細胞接種の用量範囲(5.0×102〜5.0×106NTR発現4T1細胞)および用量を100から400μMの範囲で増加させたCB1954によるその後のインビボ処理を試した最適死滅条件を確立するための最適化実験(データは示していない)において、腫瘍を保有しないマウスをワクチン化した。5.0×103または5.0×104NTR発現4T1細胞でそれぞれワクチン化した2つの群の腫瘍細胞の最初の接種を拒絶したマウスに、細胞接種後21日目に反対側の横腹に5.0×103の未改変の4T1細胞を負荷した。長期抗腫瘍免疫応答の誘導を評価するために、ワクチン化後80日目にもマウスへの細胞負荷を実施した。全ての未処理のマウスは、10日目までに進行的に増殖する腫瘍を発生し、負荷後25日目までに強制的な犠牲に処した。細胞負荷を拒絶するワクチンの用量依存的な応答は、細胞負荷の時期に関係なく、NTR/CB1954死滅細胞でワクチン化したマウスにおいて観察された(図4A)。低用量の5.0×103細胞によるワクチン化は、未処理のマウスと比較して低いレベルの防御を与えるが、高ワクチン化用量(5.0×104)は4T1細胞の免疫原性をかなり増強し、マウスの大半を細胞負荷から防御した。
(4T1のCTL102/CB1954死滅は、4T1細胞負荷に対する大きな長期的防御を誘導することができる)
インサイチューにおけるNTR/CB1954腫瘍死滅が特異的な抗腫瘍免疫の形成に寄与する可能性を試験するために、ワクチン化実験を実施した。細胞接種の用量範囲(5.0×102〜5.0×106NTR発現4T1細胞)および用量を100から400μMの範囲で増加させたCB1954によるその後のインビボ処理を試した最適死滅条件を確立するための最適化実験(データは示していない)において、腫瘍を保有しないマウスをワクチン化した。5.0×103または5.0×104NTR発現4T1細胞でそれぞれワクチン化した2つの群の腫瘍細胞の最初の接種を拒絶したマウスに、細胞接種後21日目に反対側の横腹に5.0×103の未改変の4T1細胞を負荷した。長期抗腫瘍免疫応答の誘導を評価するために、ワクチン化後80日目にもマウスへの細胞負荷を実施した。全ての未処理のマウスは、10日目までに進行的に増殖する腫瘍を発生し、負荷後25日目までに強制的な犠牲に処した。細胞負荷を拒絶するワクチンの用量依存的な応答は、細胞負荷の時期に関係なく、NTR/CB1954死滅細胞でワクチン化したマウスにおいて観察された(図4A)。低用量の5.0×103細胞によるワクチン化は、未処理のマウスと比較して低いレベルの防御を与えるが、高ワクチン化用量(5.0×104)は4T1細胞の免疫原性をかなり増強し、マウスの大半を細胞負荷から防御した。
NTR/CB1954死菌ワクチンで見られる防御の特異性を評価するために、5.0×103または5.0×104NTR発現4T1細胞でワクチン化したマウスに、別の同系腫瘍、EJ6、マウス線維肉腫を負荷した。4T1細胞による免疫化は、EJ6細胞の負荷から全てのマウスを防御しなかった(図4B)。
(マウスHSP70同時刺激分子の発現によるNTR/CB1954死滅の抗腫瘍免疫の増強)
ワクチン化モデルにおけるNTR/CB1954死滅の影響が同時刺激分子HSP70の発現によって改善されるかどうかを判定するために、NTR遺伝子を保有するシングル組換えウイルスまたはNTRとHSP70遺伝子の両方を保有するダブル組換えウイルスを形質導入した4T1細胞からなる単回免疫化をマウスに実施した。動物にCB1954を2日目に腫瘍周囲に注射し、次いで動物の反対側の横腹に5.0×103未改変4T1細胞を負荷した(免疫化プロトコールを参照されたい)。2つの異なるワクチン化用量、5.0×104の低用量および5.0×105の高用量を使用した。細胞接種後21日目に全ての動物に5.0×103未改変4T1細胞を負荷し、腫瘍の出現、腫瘍の増殖および生存率について追跡調査した。結果は、HSP70を発現する細胞のNTR/CB1954死滅作用は、NTR/CB1954死滅細胞単独でワクチン化したマウスより、免疫応答を刺激する際により強力であることを示唆している(図5A)。ワクチン化細胞の数が多いことは、4T1細胞のその後の負荷からマウスを防御する際にすぐれていると思われる。結果として、NTR−HSP70を発現する細胞でワクチン化した動物は有意な生存率を示した(図5C)。一方、NTRを発現する細胞を与えた動物は、中程度の生存という利点を示しただけで、1匹のマウスが腫瘍を形成しないで3ヶ月より長く生存する。HSP70を発現する細胞単独による免疫化およびCB1954による処理は、接種部位における腫瘍の出現からどのマウスも防御せず、接種部位では進行的に増殖する腫瘍が形成され、約30日で強制的な犠牲の対象となるサイズに達し、マウスは細胞接種後21日目の免疫化時から間もなく犠牲にしなければならなかった。
ワクチン化モデルにおけるNTR/CB1954死滅の影響が同時刺激分子HSP70の発現によって改善されるかどうかを判定するために、NTR遺伝子を保有するシングル組換えウイルスまたはNTRとHSP70遺伝子の両方を保有するダブル組換えウイルスを形質導入した4T1細胞からなる単回免疫化をマウスに実施した。動物にCB1954を2日目に腫瘍周囲に注射し、次いで動物の反対側の横腹に5.0×103未改変4T1細胞を負荷した(免疫化プロトコールを参照されたい)。2つの異なるワクチン化用量、5.0×104の低用量および5.0×105の高用量を使用した。細胞接種後21日目に全ての動物に5.0×103未改変4T1細胞を負荷し、腫瘍の出現、腫瘍の増殖および生存率について追跡調査した。結果は、HSP70を発現する細胞のNTR/CB1954死滅作用は、NTR/CB1954死滅細胞単独でワクチン化したマウスより、免疫応答を刺激する際により強力であることを示唆している(図5A)。ワクチン化細胞の数が多いことは、4T1細胞のその後の負荷からマウスを防御する際にすぐれていると思われる。結果として、NTR−HSP70を発現する細胞でワクチン化した動物は有意な生存率を示した(図5C)。一方、NTRを発現する細胞を与えた動物は、中程度の生存という利点を示しただけで、1匹のマウスが腫瘍を形成しないで3ヶ月より長く生存する。HSP70を発現する細胞単独による免疫化およびCB1954による処理は、接種部位における腫瘍の出現からどのマウスも防御せず、接種部位では進行的に増殖する腫瘍が形成され、約30日で強制的な犠牲の対象となるサイズに達し、マウスは細胞接種後21日目の免疫化時から間もなく犠牲にしなければならなかった。
(mGM−CSF同時刺激分子の発現によるNTR/CB1954死滅の抗腫瘍免疫の増強)
NTR/CB1954死滅の免疫活性化特性に対するGM−CSF発現の影響を評価するために、4T1細胞にNTRおよびGM−CSFを保有するアデノウイルスベクターを同時形質導入し、マウスに注射し(5.0×105)、CB1954でインビボにおいて処理した(免疫化プロトコールを参照されたい)。GM−CSF単独は細胞負荷の拒絶に大きな影響を示し、NTR/CB1954死滅細胞によるワクチン化よりかなり優れていたが、NTR/CB1954死滅時に腫瘍環境にGM−CSFが存在すると、細胞負荷に対するかなり良好な防御を生じ、マウスの57%が細胞負荷後30日目に細胞負荷を拒絶した(図5A)。免疫化しない未処理のマウスは全て、腫瘍負荷後1ヶ月も経過しないうちに腫瘍組織量のために犠牲にしなければならなかった。
NTR/CB1954死滅の免疫活性化特性に対するGM−CSF発現の影響を評価するために、4T1細胞にNTRおよびGM−CSFを保有するアデノウイルスベクターを同時形質導入し、マウスに注射し(5.0×105)、CB1954でインビボにおいて処理した(免疫化プロトコールを参照されたい)。GM−CSF単独は細胞負荷の拒絶に大きな影響を示し、NTR/CB1954死滅細胞によるワクチン化よりかなり優れていたが、NTR/CB1954死滅時に腫瘍環境にGM−CSFが存在すると、細胞負荷に対するかなり良好な防御を生じ、マウスの57%が細胞負荷後30日目に細胞負荷を拒絶した(図5A)。免疫化しない未処理のマウスは全て、腫瘍負荷後1ヶ月も経過しないうちに腫瘍組織量のために犠牲にしなければならなかった。
Claims (49)
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチド配列と、ストレス応答タンパク質またはストレス応答タンパク質発現インデューサーをコードするポリヌクレオチド配列とを含む産物。
- 免疫応答を増強する際に使用するための、請求項1に記載の産物。
- 増強される免疫応答が抗腫瘍応答である請求項1または2に記載の産物。
- 壊死性細胞死を誘導することができる毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチド配列、およびストレス応答タンパク質またはストレス応答タンパク質発現インデューサーをコードするポリヌクレオチド配列が、1つのポリヌクレオチド分子の要素である請求項1〜3のいずれかに記載の産物。
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素が、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼである請求項1〜4のいずれかに記載の産物。
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素がチトクロームP450である請求項1〜4のいずれかに記載の産物。
- チトクロームP450が、ヒトCYP1A2、ヒトCYP2E1、ヒトCYP3A4、齧歯類CYP1A2、齧歯類CYP2E1および齧歯類CYP3A4からなるリストから選択される請求項5に記載の産物。
- コードされるまたは誘導されるストレス応答タンパク質が、ヒートショックタンパク質である請求項1〜7のいずれかに記載の産物。
- ヒートショックタンパク質が、Hsp70、Hsp90、Hsp110、カルレチクリン、gp96、grp170、Hsp27、Hsc70、マイコバクテリウムHsp65、レジオネラ・ニューモフィラHsp60、大腸菌GroELおよびGroESからなるリストから選択される請求項8に記載の産物。
- ヒートショックタンパク質がHsp70である請求項9に記載の産物。
- 請求項1〜10のいずれかに記載の産物を含むDNAワクチン。
- 抗腫瘍免疫応答を増強するための、毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチドを含むDNAワクチン。
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素が、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼである請求項12に記載のDNAワクチン。
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素がチトクロームP450である請求項13に記載のDNAワクチン。
- チトクロームP450が、ヒトCYP1A2、ヒトCYP2E1、ヒトCYP3A4、齧歯類CYP1A2、齧歯類CYP2E1および齧歯類CYP3A4からなるリストから選択される請求項14に記載のDNAワクチン。
- 抗腫瘍免疫応答を増強する際に使用するための、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼをコードするポリヌクレオチドと、免疫賦活分子をコードするポリヌクレオチドとを含む産物。
- 抗腫瘍免疫応答を増強する際に使用するための、チトクロームP450をコードするポリヌクレオチドと、免疫賦活分子をコードするポリヌクレオチドとを含む産物。
- 免疫賦活分子が、GM−CSF、IL−1、IL−2、IL−4、IL−6、IL−10、IL−12、IL−18、B7−2、TNFα、γ−IFN、MCP−1、MIP−2、RANTES、TGF−β、CD154、CD134リガンド、MHCクラスI、MHCクラスII、CD135リガンドおよびTRAILからなるリストから選択される請求項16または17に記載の産物。
- 免疫応答を増強する際に使用するための、
a)毒素またはプロドラッグ変換酵素と
b)ストレス応答タンパク質と
をコードし、これらの発現を可能にするベクター。 - 免疫応答が抗腫瘍応答である請求項19に記載のベクター。
- ストレス応答タンパク質がヒートショックタンパク質である請求項19または20に記載のベクター。
- ヒートショックタンパク質が、Hsp70、Hsp90、Hsp110、カルレチクリン、gp96、grp170、Hsp27、Hsc70、マイコバクテリウムHsp65、レジオネラ・ニューモフィラHsp60、大腸菌GroELおよびGroESからなるリストから選択される請求項21に記載のベクター。
- ヒートショックタンパク質がhsp70である請求項22に記載のベクター。
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素が、プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼである請求項19〜23のいずれかに記載のベクター。
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素がチトクロームP450である請求項19〜23のいずれかに記載のベクター。
- チトクロームP450が、ヒトCYP1A2、ヒトCYP2E1、ヒトCYP3A4、齧歯類CYP1A2、齧歯類CYP2E1および齧歯類CYP3A4からなるリストから選択される請求項25に記載のベクター。
- 一方で毒素またはプロドラッグ変換酵素を、他方でストレス応答タンパク質またはストレスタンパク質のインデューサーをコードするポリヌクレオチドの一方または両方が、腫瘍選択性発現を提供する1つ以上のプロモーターに機能的に結合している請求項19〜26のいずれかに記載のベクター。
- プロモーターが、1つ以上のTCF応答要素を含む請求項27に記載のベクター。
- ベクターがウイルスベクターである請求項19〜29のいずれかに記載のベクター。
- ベクターがアデノウイルスベクターである請求項29に記載のベクター。
- ベクターがレトロウイルスベクターである請求項29に記載のベクター。
- ベクターがレンチウイルスベクターである請求項31に記載のベクター。
- 抗腫瘍免疫応答を増強する際に使用するための、
a)プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼと
b)hsp70と
をコードし、これらの発現を可能にするアデノウイルスベクター。 - 請求項19〜33のいずれかに記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1〜10もしくは16〜18のいずれかに記載の産物、請求項19〜33のいずれかに記載のベクターまたは請求項34に記載の宿主細胞を含むワクチン。
- 医薬品として使用するための、請求項1〜10もしくは16〜18のいずれかに記載の産物、請求項10〜15のいずれかに記載のDNAワクチン、請求項19〜33のいずれかに記載のベクターまたは請求項34に記載の宿主細胞。
- ワクチンとして使用するための、請求項1〜10もしくは16〜18のいずれかに記載の産物、請求項19〜33のいずれかに記載のベクターまたは請求項34に記載の宿主細胞。
- 請求項1〜10もしくは16〜18のいずれかに記載の組成物、請求項10〜15のいずれかに記載のDNAワクチン、請求項19〜33のいずれかに記載のベクターまたは請求項34に記載の宿主細胞と、製薬学的に許容可能な希釈剤、緩衝剤、アジュバントまたは賦形剤とを含む製薬学的組成物。
- 癌を治療するための医薬品を製造するための、請求項1〜10もしくは16〜18のいずれかに記載の産物、請求項10〜15のいずれかに記載のDNAワクチン、請求項19〜33のいずれかに記載のベクターまたは請求項34に記載の宿主細胞の使用。
- 癌を治療するためのワクチンを製造するための、請求項1〜10もしくは16〜18のいずれかに記載の産物、請求項10〜15のいずれかに記載のDNAワクチン、請求項19〜33のいずれかに記載のベクターまたは請求項23に記載の宿主細胞の使用。
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチドとヒートショックタンパク質またはヒートショックタンパク質発現インデューサーをコードするポリヌクレオチドとを含む治療量の産物を投与するステップを含む、免疫応答を増強する方法。
- 免疫応答が抗腫瘍免疫応答である、請求項41に記載の方法。
- 毒素またはプロドラッグ変換酵素をコードするポリヌクレオチドとヒートショックタンパク質またはヒートショックタンパク質発現インデューサーをコードするポリヌクレオチドとを含む治療量の産物を投与するステップを含む、ある形態の癌に罹患している患者を治療する方法。
- a)プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼをコードするポリヌクレオチドとヒートショックタンパク質をコードするポリヌクレオチドとを含む治療量の産物を投与するステップと、
b)産物が腫瘍細胞に進入し、コードされているニトロレダクターゼおよびヒートショックタンパク質が発現される時間をおくステップと、
c)治療量のCB1954を投与するステップと
を含む、請求項41〜43のいずれかに記載の方法。 - a)チトクロームP450をコードするポリヌクレオチドとヒートショックタンパク質をコードするポリヌクレオチドとを含む治療量の産物を投与するステップと、
b)産物が腫瘍細胞に進入し、コードされているチトクロームP450およびヒートショックタンパク質が発現される時間をおくステップと、
c)治療量のプロドラッグを投与するステップと
を含む、請求項40〜42のいずれかに記載の方法。 - プロドラッグがアセトアミノフェンである請求項43に記載の方法。
- ヒートショックタンパク質がHsp70である請求項40〜44のいずれかに記載の方法。
- 治療的な抗腫瘍免疫応答が誘導されるように、ヒートショックタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む治療量の産物と治療量の抗癌細胞傷害薬とを投与するステップを含む、ある形態の癌に罹患している患者を治療する方法。
- a)プロドラッグCB1954を活性化することができるニトロレダクターゼをコードするポリヌクレオチドを含む治療量の産物を投与するステップと、
b)組成物が腫瘍細胞に進入して、コードされているニトロレダクターゼが発現される時間をおくステップと、
c)治療量のCB1954を投与するステップと
を含む抗腫瘍免疫応答を誘発する方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB0223696.6A GB0223696D0 (en) | 2002-10-14 | 2002-10-14 | Improved immunotherapy |
PCT/GB2003/004388 WO2004035769A1 (en) | 2002-10-14 | 2003-10-10 | Improved immunotherapy |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006502726A true JP2006502726A (ja) | 2006-01-26 |
JP2006502726A5 JP2006502726A5 (ja) | 2006-10-05 |
Family
ID=9945763
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004544436A Withdrawn JP2006502726A (ja) | 2002-10-14 | 2003-10-10 | 改善された免疫療法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20070105794A1 (ja) |
EP (1) | EP1551963A1 (ja) |
JP (1) | JP2006502726A (ja) |
CN (1) | CN1705741A (ja) |
AU (1) | AU2003301316A1 (ja) |
CA (1) | CA2500336A1 (ja) |
GB (1) | GB0223696D0 (ja) |
WO (1) | WO2004035769A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018512158A (ja) * | 2015-04-14 | 2018-05-17 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーJanssen Vaccines & Prevention B.V. | 双方向性プロモーターを有する2つの導入遺伝子を発現する組換えアデノウイルス |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101215780B1 (ko) | 2004-10-15 | 2012-12-26 | 죠 지바 | 동물의 면역 방법, 면역용 조성물, 항체의 제조 방법,하이브리도마의 제조 방법 및 모노클로날 항체의 제조 방법 |
GB0517957D0 (en) | 2005-09-03 | 2005-10-12 | Morvus Technology Ltd | Method of combating infection |
GB0526552D0 (en) | 2005-12-29 | 2006-02-08 | Morvus Technology Ltd | New use |
GB2442202A (en) | 2006-09-30 | 2008-04-02 | Morvus Technology Ltd | Vermin poison |
WO2012008860A2 (en) | 2010-07-16 | 2012-01-19 | Auckland Uniservices Limited | Bacterial nitroreductase enzymes and methods relating thereto |
CN102766654A (zh) * | 2012-06-20 | 2012-11-07 | 深圳市疾病预防控制中心 | 特异促进肝细胞cyp1a2基因高表达的慢病毒表达载体及其构建方法与应用 |
CN102876716B (zh) * | 2012-09-28 | 2015-07-01 | 深圳市疾病预防控制中心 | 特异促进肝细胞cyp2e1基因高表达的慢病毒表达载体及其构建方法与应用 |
GB201317609D0 (en) | 2013-10-04 | 2013-11-20 | Cancer Rec Tech Ltd | Inhibitor compounds |
GB201505658D0 (en) | 2015-04-01 | 2015-05-13 | Cancer Rec Tech Ltd | Inhibitor compounds |
GB201617103D0 (en) | 2016-10-07 | 2016-11-23 | Cancer Research Technology Limited | Compound |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2849632B2 (ja) * | 1988-04-08 | 1999-01-20 | 社団法人北里研究所 | ワクチン製剤 |
DE4431401A1 (de) * | 1994-08-24 | 1996-02-29 | Max Delbrueck Centrum | Lebendvakzine gegen Tumorerkrankungen |
WO1998017799A1 (en) * | 1996-10-23 | 1998-04-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Immunotherapy and improved vaccines |
US5830464A (en) * | 1997-02-07 | 1998-11-03 | Fordham University | Compositions and methods for the treatment and growth inhibition of cancer using heat shock/stress protein-peptide complexes in combination with adoptive immunotherapy |
WO2001035810A2 (en) * | 1999-11-15 | 2001-05-25 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Cancer immunotherapy and diagnosis using cytochrome p450 1b1 |
EP1268536A1 (en) * | 2000-03-02 | 2003-01-02 | ML Laboratories PLC | Tcf responsive element |
-
2002
- 2002-10-14 GB GBGB0223696.6A patent/GB0223696D0/en not_active Ceased
-
2003
- 2003-10-10 WO PCT/GB2003/004388 patent/WO2004035769A1/en not_active Application Discontinuation
- 2003-10-10 EP EP03756569A patent/EP1551963A1/en not_active Withdrawn
- 2003-10-10 JP JP2004544436A patent/JP2006502726A/ja not_active Withdrawn
- 2003-10-10 CN CNA2003801013988A patent/CN1705741A/zh active Pending
- 2003-10-10 US US10/531,002 patent/US20070105794A1/en not_active Abandoned
- 2003-10-10 AU AU2003301316A patent/AU2003301316A1/en not_active Abandoned
- 2003-10-10 CA CA002500336A patent/CA2500336A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018512158A (ja) * | 2015-04-14 | 2018-05-17 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーJanssen Vaccines & Prevention B.V. | 双方向性プロモーターを有する2つの導入遺伝子を発現する組換えアデノウイルス |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1551963A1 (en) | 2005-07-13 |
AU2003301316A1 (en) | 2004-05-04 |
US20070105794A1 (en) | 2007-05-10 |
CA2500336A1 (en) | 2004-04-29 |
CN1705741A (zh) | 2005-12-07 |
WO2004035769A1 (en) | 2004-04-29 |
GB0223696D0 (en) | 2002-11-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9744224B2 (en) | Methods for treating cancer by administration of nucleic acids encoding FAP and cancer antigens | |
AU784605B2 (en) | Chimeric immunogenic compositions and nucleic acids encoding them | |
Ciernik et al. | Induction of cytotoxic T lymphocytes and antitumor immunity with DNA vaccines expressing single T cell epitopes. | |
AU2017297610B2 (en) | Compositions and methods for alphavirus vaccination | |
KR102351555B1 (ko) | Hpv 및 관련 질환용 면역 증강 치료 백신 | |
JP5148116B2 (ja) | 癌胎児性抗原融合タンパク質及びその使用 | |
US20080292592A1 (en) | Oncolytic Adenovirus Armed with Therapeutic Genes | |
STEINER et al. | Gene therapy for prostate cancer: where are we now? | |
JP2007531519A5 (ja) | ||
JP2006502726A (ja) | 改善された免疫療法 | |
KR20230029673A (ko) | 핵산 인공 미니-프로테옴 라이브러리 | |
MacRae et al. | Gene therapy for prostate cancer: Current strategies and new cell‐based approaches | |
JP2004500097A (ja) | Tcf応答性エレメント | |
Foley et al. | Gene-based therapy in prostate cancer | |
Scholl et al. | Gene therapy applications to cancer treatment | |
CN111630159A (zh) | 重组腺病毒及包含此病毒的干细胞 | |
JP4423507B2 (ja) | 癌遺伝子治療薬 | |
Castro et al. | Gene therapy strategies for intracranial tumours: glioma and pituitary adenomas | |
Kumar et al. | Applications of gene therapy | |
Brooks et al. | Gene therapy in gynecological cancer | |
Abdeta | Review on Gene Therapy of Prostate Cancer | |
Del Papa | Assessing the Oncolytic Capacity of Conditionally Replicating Adenovirus Armed with p14 Fusion Associated Small Transmembrane Protein and the Adenovirus Death Protein | |
JP5494916B2 (ja) | 腫瘍特異的プロモーターおよびその用途 | |
WO2004050112A1 (fr) | Administration intratumorale de proteine de choc thermique et sa therapie tumorale de combinaison avec une toxine cellulaire | |
Vattemi et al. | Advances and perspectives in gene-based therapy for breast cancer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060816 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060816 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20070726 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070730 |