JP2006282521A - ニワトリキメラ抗体およびその利用 - Google Patents
ニワトリキメラ抗体およびその利用 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】 本発明にかかるニワトリキメラ抗体は、ニワトリ抗体のヒンジ領域に相当する領域の代わりに哺乳動物、好ましくはヒト由来のヒンジ領域を付加している。これにより、分子量の小さい2価の抗体を得ることができるとともに、当該2価抗体を大腸菌等の原核生物で発現させることが可能となる。さらに、哺乳動物由来のヒンジ部を有しているため、抗体のフレキシビリティをより一層向上させることが可能となる。
【選択図】 図1
Description
本発明にかかるニワトリキメラ抗体は、少なくとも可変領域がニワトリ由来であるとともに、ヒンジ部が哺乳動物由来である構造を有している。具体的には、図1に示すように、例えば、ヒンジ部がヒト由来であり、重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLが少なくともニワトリ由来であるニワトリ−ヒトキメラ抗体を挙げることができる。なお、図1に示すニワトリ−ヒトキメラ抗体では、ヒンジ部を除く重鎖定常領域CHおよび軽鎖定常領域CLがニワトリ由来となっているが、本発明にかかるニワトリキメラ抗体の構造は特にこの構造に限定されるものではなく、その利用分野等に応じて適宜設計することができる。
上記ニワトリヒトキメラ抗体の生産方法は特に限定されるものではないが、特に本発明では、原核細胞に発現ベクターを導入して原核細胞内で生産させることができる。これは、一般的なニワトリ抗体に比べて、本発明にかかるニワトリキメラ抗体の分子量が小さいためである。一般的なニワトリキメラ抗体の分子量は、2価の場合、約180kDaであるが、本発明にかかるニワトリキメラ抗体の分子量は、例えば、約95kDa程度とすることができる(後述する実施例参照)。
本発明の利用分野は特に限定されるものではなく、ニワトリキメラ抗体およびその生産方法抗体を用いたあらゆる用途に利用することができる。
本発明で用いられる発現用ベクターであるプラスミドpFabHL−2は、図6に示すように、L鎖をコードする配列(便宜上、L鎖フラグメントと称し、図中ではVLおよびCLと表記)およびH鎖をコードする配列(便宜上、H鎖フラグメントと称し、図中ではVHおよびCHと表記)のそれぞれ上流にgene IIIリーダー配列(図中L)を有しており、さらにその上流にlacプロモーター(図中P)を有している。また、H鎖フラグメントの下流にはヒト由来のヒンジ部をコードする配列(ヒンジ配列)にStrepTagIIをつないだ配列(図中H)を有している。
上記pFabHL−2を用いて大腸菌(E. coli)JM109株を形質転換し、本発明にかかるニワトリ−ヒトキメラ抗体を大腸菌で発現させた。大腸菌のペリプラスミの画分を、非還元条件下でSDS−PAGEにより分離し、ウエスタンブロッティングにより抗体を検出した。約90kDaの2価の抗体(F(ab’)2 )と約50kDaのFabを検出することができた。
Claims (13)
- 少なくとも可変領域がニワトリ由来であるとともに、ヒンジ部が哺乳動物由来であることを特徴とするニワトリキメラ抗体。
- 上記ヒンジ部がヒト由来であることを特徴とする請求項1に記載のニワトリキメラ抗体。
- 2価の抗体であることを特徴とする請求項1または2に記載のニワトリキメラ抗体。
- ニワトリ由来の可変領域をコードするポリヌクレオチドと、ヒト由来のヒンジ部をコードするポリヌクレオチドとを少なくとも有する発現ベクターを用いて、原核細胞を形質転換することにより生産されることを特徴とする請求項2または3に記載のニワトリキメラ抗体。
- 上記原核細胞が大腸菌であることを特徴とする請求項4に記載のニワトリキメラ抗体。
- 配列番号1に示されるアミノ酸配列、または、配列番号1に示されるアミノ酸配列において、1個もしくは数個のアミノ酸が欠失、挿入、置換、もしくは付加されたアミノ酸配列を有するポリペプチドを重鎖とし、
配列番号2に示されるアミノ酸配列、または、配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1個もしくは数個のアミノ酸が欠失、挿入、置換、もしくは付加されたアミノ酸配列を有するポリペプチドを軽鎖とすることを特徴とするニワトリ−ヒトキメラ抗体。 - 少なくともニワトリ由来の可変領域を含むニワトリキメラ抗体の生産方法であって、
宿主細胞として原核細胞を用いるとともに、
原核細胞内で機能するプロモーターと、ニワトリ由来の可変領域をコードするポリヌクレオチドと、哺乳動物由来のヒンジ部をコードするポリヌクレオチドとを含んでいる発現ベクターを用いて、原核細胞を形質転換することを特徴とするニワトリキメラ抗体の生産方法。 - 上記原核細胞が大腸菌であり、プロモーターがlacプロモーターであることを特徴とする請求項7に記載のニワトリキメラ抗体の生産方法。
- 上記ヒンジ部がヒト由来であることを特徴とする請求項7または8に記載のニワトリキメラ抗体の生産方法。
- 上記発現ベクターには、さらに、タグとして機能するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれていることを特徴する請求項7ないし9の何れか1項に記載のニワトリキメラ抗体の生産方法。
- 上記発現ベクターには、さらに、ファージディスプレイ法で利用可能なファージをコードするポリヌクレオチドが含まれていることを特徴とする請求項7ないし10の何れか1項に記載のニワトリキメラ抗体の生産方法。
- 請求項7ないし11の何れか1項に記載のニワトリキメラ抗体の生産方法を行うためのキット。
- 請求項7ないし11の何れか1項に記載のニワトリキメラ抗体の生産方法に用いられる発現ベクター。
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