JP2006256994A - 育毛養毛有効成分、育毛養毛剤、及びこれらのスクリーニング方法 - Google Patents

Abstract

【課題】 男性型脱毛に対し優れた育毛養毛効果を有する育毛養毛有効成分、これを配合する育毛養毛剤、ならびに男性型脱毛に対する、高精度の育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング法を提供する。
【解決手段】 トリヨードサイロニン又はその誘導体が封入されたリポソームからなる育毛養毛有効成分、毛髪成長期を誘導したマウスに、ジヒドロテストステロンを皮下投与し、該毛髪成長期を誘導した部分に被験物質を塗布した際の毛再生を指標とする、育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング方法。
【選択図】 なし

Description

本発明は、哺乳類の育毛養毛を促進する育毛養毛有効成分、及びこれを配合する育毛養毛剤、ならびにこれらのスクリーニング方法に関する。詳しくは、特に男性型脱毛に対する育毛、発毛、養毛の効果に優れ、かつ長期にわたる使用に十分耐え得る安全性を備えた育毛養毛有効成分、及びこれを配合する育毛養毛剤、ならびにこれらのスクリーニング方法に関する。

毛髪は、容姿を大きく左右し、美容上非常に重要な位置を占めているが、男性型脱毛には未だに的確な治療法がなく、深い悩みの種となっている。男性型脱毛の最も大きな要因は男性ホルモンと考えられているが、その発症メカニズムは不明な点が多く、その解明が望まれている。

従来から、多くの育毛養毛剤が男性型脱毛の予防又は治療に用いられている。これらの育毛養毛剤の薬効成分としては、センブリエキス、ビタミンＥアセテート等の血管拡張剤、トウガラシチンキ等の刺激剤、パントテン酸、ビオチン類、さらには、抗炎症剤、殺菌剤等が使用されている。また、奇数の炭素鎖長を有する脂肪酸、アルコール及びそれらの誘導体が優れた養育毛作用を有することも知られている。

さらに、これらの有効成分を脱毛の様々な原因に対応して適宜組み合わせた育毛養毛剤が開発されており、脱毛症の予防又は治療に用いられている。しかしながら、従来の育毛養毛剤は、フケ、カユミの改善や、抜毛等の予防に有効で、発毛や育毛を促進するとされているが、非常に個人差が大きく、作用も十分とはいえないため、さらに効果を発揮するものが望まれていた。

その理由として、前述の育毛養毛剤の薬効成分は男性型脱毛の本質的な原因である男性ホルモンの作用を見ることができる評価方法で必ずしも評価されてきたわけではなく、従来からの評価方法すなわち毛包構成細胞である、毛乳頭細胞や外毛根鞘細胞の増殖を指標とした評価方法あるいはマウスを用いた小川らの評価方法（非特許文献１：フレグランスジャーナル，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．５，ｐ２０−２９，１９８９．参照）等によって評価されてきたものであった。以上のことから、男性型脱毛に対する育毛養毛効果を、高精度で評価できるスクリーニング法が望まれていた。

一方、トリヨードサイロニンに発毛促進作用があることはこれまでにも報告されており、例えば、「ポリアルキレングリコール及び陽イオン系ポリマー含有抗ふけ及びコンディショニングシャンプー」（特許文献１：特表２００２−５４３１０５号公報、参照）や「育毛調節のためのトリペルテンを含む成分」（特許文献２：特開２００２−５２０３７５号公報、参照）が提案されている。しかしながら、これらの効果も必ずしも高くはないということから、使用者に必ずしも満足できる効果は与えておらず、さらなる育毛養毛効果に優れた育毛養毛有効成分の提供が望まれていた。

特表２００２−５４３１０５号公報 特開２００２−５２０３７５号公報 特開昭６１−１６５３１１号 特表２００２−５２０３７５号公報 特表２００２−５２０３７６号公報 特表２００２−５４３１０２号公報 特表２００３−５００４３０号公報 「フレグランスジャーナル」、１９８９、Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．５、ｐ２０−２９

本発明は上記事情に鑑みなされたもので、特に男性型脱毛に対し優れた育毛養毛効果を有する育毛養毛有効成分、及び該育毛養毛有効成分を配合する育毛養毛剤、ならびに男性型脱毛に対する、高精度の育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング法を提供することを目的とする。

本発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討し、男性型脱毛の原因究明を進めた結果、特定の男性ホルモンを皮下投与したマウスを用いた育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング方法によれば、より高精度で信頼性の高い育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング方法が得られることを知見した。さらに、トリヨードサイロニンを、トリヨードサイロニンが封入されたリポソームとすることにより、優れた育毛養毛効果が得られることを知見し、本発明をなすに至ったものである。

従って、下記発明を提供する。
［１］．トリヨードサイロニン又はその誘導体が封入されたリポソームからなる育毛養毛有効成分。
［２］．［１］記載の育毛養毛有効成分を配合してなる育毛養毛剤。
［３］．毛髪成長期を誘導したマウスに、ジヒドロテストステロンを皮下投与し、該毛髪成長期を誘導した部分に被験物質を塗布した際の毛再生を指標とする、育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング方法。
［４］．下記第１〜５の工程を含む［３］記載のスクリーニング方法。
（１）マウスを毛髪成長期誘導する、第１工程。
（２）第１工程で毛髪成長期を誘導されたマウスに、ジヒドロテストステロンを皮下投与する、第２工程。
（３）マウスの毛髪成長期を誘導された部分に被験物質を塗布する、第３工程。
（４）被験物質を塗布後、毛髪成長期誘導部分された部分における毛再生を測定する、第３工程。
（５）第４工程で測定された毛再生と、第３工程において被験物質を塗布しない場合の毛再生とを比較し、被験物質の育毛養毛効果を検出する、第４工程
［５］．［４］記載のスクリーニング法において、毛髪成長期誘導された部分の面積に対する毛再生が始まった部分の面積が５０％以上に達する第２工程からの日数が、第３工程において被験物質を塗布しない場合の日数に比べ１／２以下である育毛養毛有効成分。

本発明によれば、特に男性型脱毛に対し優れた育毛養毛効果を有する育毛養毛有効成分、及び該育毛養毛剤を配合する育毛養毛剤、ならびに男性型脱毛に対する、高精度の育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング法を提供することができる。

本発明にかかる育毛養毛有効成分、これを配合してなる育毛養毛剤及び育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング方法を述べるが、まず、スクリーニング方法について説明する。本発明の育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング方法は、毛髪成長期を誘導したマウスに、ジヒドロテストステロンを皮下投与し、該毛髪成長期を誘導した部分に被験物質を塗布した際の毛再生を指標とするものである。この方法によれば、男性型脱毛をマウスで再現でき、男性ホルモンを体表面に塗布しないため、被験物質の効果を高精度で測定することができる。

さらに具体的に説明すると、下記工程を含む育毛養毛剤のスクリーニング方法である。
（１）マウスを毛髪成長期誘導する、第１工程。
（２）第１工程で毛髪成長期を誘導されたマウスに、ジヒドロテストステロンを皮下投与する、第２工程。
（３）マウスの毛髪成長期を誘導された部分に被験物質を塗布する、第３工程。
（４）被験物質を塗布後、毛髪成長期が誘導された部分における毛再生を測定する、第４工程。
（５）第４工程で測定された毛再生と、第３工程において被験物質を塗布しない場合の毛再生とを比較し、被験物質の育毛養毛効果を検出する、第５工程

（１）マウスを毛髪成長期誘導する第１工程。
マウスの種類は特に限定されないが、Ｃ５７ＢＬ／６マウス、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウス等が好ましい。年齢はヘアサイクルが休止期にある日齢であれば特に限定されず、例えば除毛、抜毛等により成長期を誘導できればよい。１被験物質あたり４〜１０匹用いることが好ましい。マウスの体表を毛髪成長期誘導する方法としては、除毛、抜毛等が挙げられる。毛髪成長期誘導する体表部分は特に限定されないが、首元から背部全体が好ましい。

（２）第１工程で毛髪成長期を誘導されたマウスに、ジヒドロテストステロンを皮下投与する、第２工程。
男性ホルモンとしては、活性型男性ホルモンであるジヒドロテストステロン等が挙げられる。本発明においては、ジヒドロテストステロンを用いる。これまでマウスは男性ホルモンに対して感受性がないといわれていたが、ジヒドロテストステロンを投与したマウスは投与していない対照群と比較して、有意に毛の再生が遅れる（後述の試験例１参照）。これは本発明者の新知見である。

ジヒドロテストステロンの皮下投与の方法は、ジヒドロテストステロンを粉末状態又はＭＩＣＲＯ−ＯＳＭＯＴＩＣ ＰＯＭＰ（ａｌｚｅｔ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）等の浸透圧ポンプ等に注入した状態で皮下に投与する。投与量はマウスの日齢や体重により変動させてもよいが、１０〜２００ｍｇの範囲が好ましい。このように、ジヒドロテストステロンを皮下投与することにより、ヒトの男性型脱毛に近い評価系とすることができる。さらに、皮下投与することにより、後に塗布する被験物質と混じることがないため、精度の高い育毛養毛評価が可能となる。

（３）マウスの毛髪成長期を誘導された部分に被験物質を塗布する、第３工程。
被験物質は物質の溶解度や塗り易さなどを考慮して、適宜水、エタノール等の有機溶媒又はこれらの混合物等の溶剤に溶解して塗布することができる。被験物質の塗布は、上記第２工程の翌日から始めることが好ましく、被験物質にもよるが、１日１〜数回、週５〜７回、１０〜６０日間サンプル塗布すればよい。

（４）被験物質を塗布後、毛髪成長期が誘導された部分における毛再生を測定する、第４工程。
毛再生の測定は、例えば、毛再生が始まった部分の面積が、除毛した面積に占める割合を目視にて確認することにより行う。また、毛再生が始まった部分の面積が除毛した面積に占める割合がある一定の値になるまでの日数を測定してもよい。

（５）第４工程で測定された毛再生と、第３工程において被験物質を塗布しない場合の毛再生とを比較し、被験物質の育毛養毛効果を検出する、第５工程
第２工程において被験物質を塗布しない場合とは、例えば被験物質を５０％エタノール等の溶剤に溶かして塗布した場合には、５０％エタノールのみを塗布すればよい。この場合、上記第２工程で被験物質を５０％エタノールに代える以外は、被験物質と同様に第１〜第４工程を行い、毛再生を測定する。このようにして得られた被験物質の毛再生効果と、５０％エタノールでの毛再生効果を比較することにより、被験物質の毛再生効果を検出することができる。

このように、本スクリーニング法によれば、男性型脱毛をマウスで再現でき、男性ホルモンを体表面に塗布しないため、被験物質の育毛養毛効果を高精度で測定することができる。また、このスクリーニング法により、男性型脱毛に対する育毛養毛効果が認められた被験物質は、育毛養毛有効成分、又はこれを配合してなる育毛養毛剤として提供することができる。例えば、ジヒドロテストステロン皮下投与から発毛スコア５（毛髪成長期誘導された面積に対する毛再生が始まった部分の面積が５０％以上）に達するまでの日数が、第３工程において被験物質を塗布しない以外は同様に試験した場合の日数に比べ１／２以下であるような物質であれば、男性型脱毛に対する育毛養毛効果が期待されることとなる。

上記スクリーニング方法で評価したところ、トリヨードサイロニン又はその誘導体が封入されたリポソームに、育毛養毛効果が認められた。
トリヨードサイロニンとは、甲状腺から分泌されるホルモンの一種であり、下記式（１）で表される。より具体的には、視床下部から分泌される甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）の作用を受け、下垂体前葉から分泌される甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）によって刺激を受けた甲状腺で産生され、ホルモンの貯蔵場所である濾胞腔のコロイドから放出される甲状腺ホルモンである。トリヨードサイロニンの大部分はチロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）・チロキシン結合グロブリン（ＴＢＰＡ）・アルブミンと結合しており、血液によって全身に運ばれ、さらに下垂体や視床下部にも運ばれる。

トリヨードサイロニンの誘導体としては、３，３´，５−トリヨードサイロニン酸（ＴＥＴＲＡＣ）やトリヨードプロピオン酸（ＴＲＩＰＲＯＰ）等が挙げられる。トリヨードサイロニン又はその誘導体は１種単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。

一般的に、リポソームは、リン脂質と水とを混合して得られる脂質の単層又は複数層からなる閉鎖小胞であり、内部の水層又は脂質層に種々の物質を保持できるので、その有用性は大きい。例えば、医薬品を包み込んだリポソームはドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）に用いられる。

本発明のリポソームはトリヨードサイロニン又はその誘導体が封入されたものであり、このようにリポソーム化することにより、トリヨードサイロニン又はその誘導体の経皮吸収性、毛包特異性、安定性等、育毛養毛効果が向上するものである。

リン脂質としては、レシチン（ホスファチジルコリン）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ジホスファチジルグリセロール等が挙げられる。この中でもレシチンが好ましく、水素添加レシチン、卵黄レシチン、大豆レシチン等が挙げられ、１種単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。

本発明のリポソームには、リン脂質や水以外に、プロピレングリコール等の多価アルコール、コレステロール、ラノステロール、シトステロール等のステロール、アミノ酸、糖、ビタミンＡ、ビタミンＣ及びビタミンＥから選ばれる１種又は２種以上を配合してもよい。

トリヨードサイロニン又はその誘導体のリポソーム中の含有量は、０．００１〜１０質量％が好ましく、より好ましくは０．１〜１質量％である。トリヨードサイロニン又はその誘導体とリン脂質との質量比率は、１：１００００〜１：１０が好ましく、より好ましくは１：１０００〜１：１００である。

本発明のリポソームの粒径は、１０〜３５００ｎｍ程度であり、５０〜１０００ｎｍが好ましい。なお、リポソームの粒径は動的光散乱法等の粒径測定法で測定することができる。

本発明のリポソームの作製には、市販されているリポソーム組成成分の混合物を用いてもよい。このような混合物には、例えば、水素添加レシチン、アラニン、マルチトール、ジプロピレングリコール、グリセリン、コレステロール及び水を配合成分とするアクアソームＬＡ、水素添加レシチン、ブチレングリコール、パルミチン酸レチノール、ピーナッツ油、トコフェノール、ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油及び水を配合成分とするアクアソームＡＥ、水素添加レシチン、ブチレングリコール、ＰＥＧ６０水添ヒマシ油及び水を配合成分とするアクアソームＢＨ、水素添加レシチン、ブチレングリコール、酢酸トコフェノール、ＰＥＧ−１００水添ヒマシ油、リン酸アスコルビンマグネシウム、ジヒドロコレス−２０（ポリオキシエチレン（２０）ジヒドロコレスタノールエーテル）、トリエチルヘキサノイン、コレステロール及び水を配合成分とするアクアソームＥＣ−５、水素添加レシチン、ブチレングリコール、酢酸トコフェノール、ＰＥＧ−１００水添ヒマシ油、リン酸アスコルビンマグネシウム、ジヒドロコレス−３０、トリエチルヘキサノイン、コレステロール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、水を配合成分とするアクアソームＥＣ−３０、水素添加レシチン、ブチレングリコール、パルミチン酸レチノール、ピーナッツ油、トコフェノール、ＰＥＧ６０水添ヒマシ油、水を配合成分とするアクアソームＶＡ、水素添加レシチン、ブチレングリコール、酢酸トコフェノール、ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油、水を配合成分とするアクアソームＶＥ（いずれも商品名：日光ケミカルズ（株）製）が挙げられる。

トリヨードサイロニン又はその誘導体が封入されたリポソームは、常法に基づいて調製することができる。例えば、リン脂質をエタノール等の適当な溶媒で可溶化し、減圧下で溶媒を留去して脂質膜を形成し、これにトリヨードサイロニン又はその誘導体を含む水溶液を添加して、５０〜２４０ｒｐｍで３０〜１２０分撹拌して得ることができる。

トリヨードサイロニン又はその誘導体が封入されたリポソームからなる育毛養毛剤は、優れた育毛養毛効果を有することから、これを、哺乳類の育毛養毛させたい部分に与え、育毛養毛を促進する育毛養毛方法に用いることができる。この方法によれば、よって、脱毛の防止、発毛の促進等により育毛養毛を図り、美容上の毛髪容姿を改善し、脱毛症等の治療、特に男性型脱毛の治療が可能となる。

本発明のトリヨードサイロニン又はその誘導体を封入されたリポソームからなる育毛養毛有効成分は、これを配合してなる育毛養毛剤とすることができる。なお、育毛養毛剤とは、一般に頭部等毛髪を有する体の部分に使用し、脱毛の防止、発毛の促進等の育毛養毛効果を有する外用剤のことをいう。

トリヨードサイロニン及びその誘導体が封入されたリポソームの配合量は、投与形態、投与方法、所望の効果及び処置期間等により変化するが、トリヨードサイロニン及びその誘導体として、育毛養毛剤中０．０００１〜２０質量％、好ましくは０．００１〜１０質量％である。配合量が０．０００１質量％未満では、本発明の効果が十分得られない場合があり、２０質量％を超える場合はそれ以上の効果の増加が得られず、不経済となる場合がある。

本発明の育毛養毛剤には、トリヨードサイロニン及びその誘導体が封入されたリポソーム以外にも、育毛養毛効果増強のため、他の育毛養毛有効成分を１種単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。他の育毛養毛有効成分としては、発毛、育毛又は養毛促進作用を有するものであれば、特に限定されない。炭素鎖が奇数の炭素鎖長を有する脂肪酸、特にペンタデカン酸グリセリド（ＰＤＧ）、アルコール類及びそれらの誘導体、コレウス・フォルスコリィ抽出物（特開平０９−１５７１３６号公報）、ローヤルゼリー抽出物、クマザサ抽出物、ゲンチアナ抽出物、マツカサ抽出物（以上、特開平１０−４５５３９号公報）、６−ベンジルアミノプリン、トコトリエノール、ミノキシジル類、フィナステリド、及びトランス−３，４´−ジメチル−３−ヒドロキシフラバノンからなる群から選ばれる１種単独で又は２種以上の化合物及び抽出物が挙げられる。中でも育毛養毛効果の点から、炭素鎖が奇数の炭素鎖長を有する脂肪酸、コレウス・フォルスコリィ抽出物が好ましい。

本発明の育毛養毛剤には、さらに他の植物抽出物や薬剤も適宜配合することができる。例えば、トウガラシ、ヨウテイ、アロエ、クコ、ヨモギ、カラシ、イネ、マンケイシ、マンネンロウ、コッサイホ、エニシダ、リンドウ、タンジン、ヘチマ、キキョウ、マツ、クジン、ベニバナ、メギ、ビンロウジ、ユーカリ、カゴソウ、モクツウ、ゴシツ、サイコ、チャ、シンイ、ワサビ、ジョテイシ、オランダセンニチ、クチナシ、ウスバサイシン、ニンニク、ハッカ、ヨクイニン、キリンケツヤシ、ゴボウ、カンゾウ、ホップ、キク、ラッキョ、ニラ、ネギ、タマネギ、セネガ、アマチャズル、マンネンタケ、ジオウ、グリチルリチン酸モノアンモニウム、グリチルレチン酸、グリチルリチン、ゴマ、センキュウ、カシュウ等が挙げられる。

本発明の育毛養毛剤は、各種の外用製剤類（動物用に使用する製剤も含む）全般において利用できる。外用製剤としては、医薬品、医薬部外品、化粧品が挙げられ、その適用場所は、全身用、頭皮・頭髪等特に限定されない。この中でも、毛髪化粧料、医薬組成物とすることが好ましく、本発明の効果を損なわない範囲において、既知の薬効成分や任意成分を適宜配合することができる。

既知の薬効成分としては、抗菌剤、抗炎症剤、保湿剤、ビタミン類、ホルモン類、アミノ酸類、皮膚機能亢進剤、角質向上剤、酸化防止剤等が挙げられる。また、上記薬効成分以外の任意の成分としては、例えば、精製水、エタノール、多価アルコール、セルロース類、界面活性剤、エステル油、高分子樹脂、色材、香料、紫外線吸収剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、増粘剤等が挙げられる。

本発明の育毛養毛剤は、その形態、調製方法、使用方法などが特に制限されるものではなく、例えば均一溶液、ローション、ジェル、クリーム、エアゾール等の形態として用いることができ、各形態の常法に準じて製造することができる。そして、各形態の常法に従って常用量で使用することによって、優れた育毛養毛効果が速やかに発揮される。なお、エアゾールの形態をとる場合には、上記成分以外に、ｎ−プロピルアルコール又はイソプロピルアルコール等の低級アルコール、ブタン、プロパン、イソブタン、液化石油ガス、ジメチルエーテル等の可燃性ガス、窒素ガス、酸素ガス、炭酸ガス、亜酸化窒素ガス等の圧縮ガスを配合することができる。

特に、毛髪化粧料の剤形としては、シャンプー、リンス、トリートメント、ヘアトニック、ヘアクリームの如くのヘアケア製品に配合した養育毛シャンプー、養育毛リンス、養育毛ヘアリキッド、育毛料、養育毛ヘアクリーム、養毛料、養育毛スプレー、養育毛トニック、養育毛ヘアローション、養育毛ヘアジェル、養育毛ヘアフォーム等、パーマネント液、染毛料等が挙げられる。

以下、調製例、試験例、実施例、比較例及び処方例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。なお、下記の例において特に明記のない場合は、組成の「％」は質量％である。

［試験例１］
マウスの発毛試験
雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢）を用い、小川らの方法（フレグランスジャーナル，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．５，ｐ２０−２９，１９８９．参照）を参考にして実験を行った。
マウスの背部体毛を約２〜４ｃｍの大きさに電気バリカン及び電気シェーバーにて除毛し、毛髪成長期を誘導した。除毛後、活性型男性ホルモンであるジヒドロテストステロン（ＤＨＴと略す）３０ｍｇを皮下に投与した。除毛、皮下投与後８０日間、除毛部分に対し毛再生が始まった部分の面積比の変化を求め、毛再生の早さを非投与群と比較した。各サンプル（被験物質）ともマウス６匹ずつを用い、その発毛状態の変化を観察した。育毛養毛効果の評価は毛再生が始まった部分の面積が除毛した面積に占める割合を目視にて確認し下記１０段階評価で行った。結果を図１に示し、除毛、皮下投与後から、発毛スコアが５点、７点、１０点に至るまでに要した日数を表１に示す。

<発毛スコア>
除毛された部分の全体面積に対する毛再生が始まった部分の面積の割合
１点：１０％
２点：２０％
３点：３０％
４点：４０％
５点：５０％
６点：６０％
７点：７０％
８点：８０％
９点：９０％
１０点：１００％

＊ＤＨＡ：ジヒドロテストステロン

上記結果からも明らかなように、ジヒドロテストステロンを投与したマウスは、非投与のマウスと比較し、発毛が有意に遅れることが認められた。

［調製例１］
トリヨードサイロニンが封入されたリポソームの調製
７．８ｍｇのトリヨードサイロニンを５０μＬの１［（１０³ｍｏｌ／ｍ³）／ｚ（ｚはイオンの電荷数）］のＮａＯＨに溶解した。１０ｍＬのアクアソームＬＡ（日光ケミカルズ（株）製）を減圧下、有機溶媒を完全に留去し脂質薄膜を作製した。そこに、前述のトリヨードサイロニンのＮａＯＨ溶液２４μＬを含む蒸留水２５ｍＬを添加し、ボルテックスミキサーにより短時間（１０〜６０分）で水和した。さらに２５ｍＬのエタノール溶液を添加し、トリヨードサイロニン封入リポソームの５０％エタノール溶液を得た。

［実施例１、比較例１，２］
雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢）を用い、小川らの方法（フレグランスジャーナル，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．５，ｐ．２０−２９，１９８９．参照）を参考にして実験を行った。マウスの背部体毛を約２〜４ｃｍの大きさに電気バリカン及び電気シェーバーにて除毛し、毛髪成長期を誘導した。除毛後、活性型男性ホルモンであるジヒドロテストステロン３０ｍｇを皮下に投与し、翌日より１日１回１００μＬずつ週５回、２０日間サンプル塗布を行い、除毛、皮下投与後８０日間、毛再生が始まった部分の面積比の変化を求めて毛再生の早さの比較を行った。塗布サンプルは、上記調製例１で得られたトリヨードサイロニンが封入されたリポソーム（実施例１）、及び０．０７４９ｍｇ／ｍＬのトリヨードサイロニンの５０％エタノール溶液（比較例２）とした。対照として５０％エタノール（比較例１）を用いた。試験には各試料ともマウス６匹ずつを用い、評価は上記試験例１と同様に行った。結果を図２に示し、除毛、皮下投与から発毛スコアが５点、７点、１０点に至るまでに要した日数を表２に示す。

上記結果からも明らかなように、本発明のトリヨードサイロニンが封入されたリポソームは、トリヨードサイロニンよりも毛の再生が有意に高く認められた。

［実施例２〜６］
さらに、調製例１で得られたトリヨードサイロニンが封入されたリポソームと、ペンタデカン酸グリセリド（ＰＤＧ）、コレウス・フォルスコリィ抽出物、６−ベンジルアミノプリン、ミノキシジル、及びトコトリエノールとを、それぞれ併用した場合について実施例１と同様に評価した。結果を下記評価基準で評価した。結果を実施例１、比較例２及び対照の５０％エタノール（比較例１）の結果と共に表３に示す。なお、トリヨードサイロニンが封入されたリポソームは、調製例１で得られたものを使用し、表中にはトリヨードサイロニン濃度を示す。

<評価基準>
除毛、皮下投与後からスコア５になるまでの日数を、対照と比較した。
４：著効，発毛を著しく早めた ：対照に比べ２／３より短い。
３：有効，発毛を早めた ：対照に比べ２／３〜３／４未満
２：やや有効，発毛を若干早めた：対照に比べ３／４〜１未満
１：無効，使用前と変化無し ：対照に比べ１倍以上

上記結果からもわかるように、本発明のトリヨードサイロニンが封入されたリポソームは、ペンタデカン酸グリセリド及びコレウス・フォルスコリィ抽出物との併用により、より高い育毛養毛効果が認められた。

［実施例７〜１３、比較例３，４］
実施例１〜６のようにエタノールに溶解した溶液の状態でも、トリヨードサイロニンが封入されたリポソームは、育毛養毛有効成分としての目的は達成することができるが、使用性を考慮した製剤中での効果を確認するため、表４に示す組成の製剤を調製した。得られた製剤について、実施例１〜６で示した方法と同様に評価を行い、育毛養毛効果も同様の基準にて示した。結果を表４に示す。トリヨードサイロニンが封入されたリポソームは、調製例１で得られたものを使用し、表中にはトリヨードサイロニン濃度を示す。

上記結果からもわかるように、本発明のトリヨードサイロニンが封入されたリポソームを配合した製剤に、高い育毛養毛効果が認められた。本発明のトリヨードサイロニンが封入されたリポソームは、ペンタデカン酸グリセリド及びコレウス・フォルスコリィ抽出物との併用により、比較例３，４に比べ、より高い育毛・育毛効果が認められた。

使用効果試験
上記実施例７、８及び１０、ならびに比較例３，４について、下記方法で実際の使用効果を評価した。結果を表５に示す。
薄毛症、脱毛症を訴えるパネラー（２５〜５０歳）１０名が、毎日、朝と夜（夜は洗髪後）の２回、頭皮や髪の生え際に、実施例７、８及び１０、ならびに比較例３，４の製剤適量（２ｍＬ）を、３ヶ月間及び６ヶ月間に渡って塗布した。使用効果を下記評価基準で評価した。結果を表５に示す。なお、表内の数値は人数を表す。

<評価基準>
著効 ：うぶ毛が非常に多く生じた。
有効 ：うぶ毛が多少生じた。
やや有効：発毛を若干生じた。
無効 ：使用前と変化無し。

その結果、本発明のスクリーニング方法で有効であった実施例７、８及び１０の製剤は、ヒトにおいても高い育毛養毛効果を示すことが分かった。

［処方例１〜６６］
下記にトリヨードサイロニン又はその誘導体を封入されたリポソームを配合してなる育毛養毛剤の処方例を示す。なお、下記処方例に使用した香料は、特開２００３−７３２４９号公報の第４頁〜第２４頁に記載の香料を用いた。なお、処方例１〜６６のヘアケア製品においては、各化合物に限定されることなく他の化合物にしてもよい。なお、トリヨードサイロニンが封入されたリポソームは、調製例１で得られたものを使用し、表中にはトリヨードサイロニン濃度を示す。

＊１：ＰＯＥアルキルエーテル硫酸ナトリウム（ライオン（株）製）
粧配規に準拠したポリオキシエチレンアルキル（１２，１３）エーテル硫酸ナトリウム液（３Ｅ．Ｏ．）で、純分約２７％の水溶液。表中にはＰＯＥアルキルエーテル硫酸ナトリウムの純分相当量を記載した。
＊２：α−オレフィンスルホン酸ナトリウム：Ｃ₁₄−Ｃ₁₈のアルキル鎖をもつα−オレフィンスルホン酸ナトリウム（純分７０％の水性ペースト）。表中には、純分相当量を記載した。
＊３エナジコールＬ３０Ｂ（ライオン（株）製）
粧配規に準拠したラウリン酸アミドプロピルベタイン液で、純分約３０％の水溶液。表中にはラウリン酸アミドプロピルベタインの純分相当量を記載した。
＊４：ＣＤＥ−１００（川研ファインケミカル（株）製）
＊５：ジメチルシリコーン：レオフローＤＭＳ−５５（ライオン（株）製）
粘度１０万ｃＳｔ、平均分子量約１３万
＊６：ＸＥ−５１１Ｋ（ライオン（株）製）、塩化Ｏ−［ヒドロキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロピル］ヒドロキシエチルセルロース
＊７：Ｇｃｎａｐｏｌ ＰＭＳ（クラリアントジャパン（株）製）、Ｃ₁₆とＣ₁₈の混合比は６：４。
＊８：安息香酸ナトリウム：粧原基に準拠した安息香酸ソーダ（ＢＦＧｏｏｄｒｉｃｈ Ｋａｌａｍａ Ｉｎｃ．社製）

＊１：アーカードＴ８３３（ライオン（株）製）
＊２：Ｌｏｒｏｌ Ｃ１６（コグニスジャパン（株）製）
＊３：コノール３０ＳＳ（新日本理科（株）製）
＊４：ＥＭＡＬＥＸ ６１１（日本エマルジョン（株）製）
＊５：ネオコールＬＡ（クローダジャパン（株）製）
＊６：メチルパラベン：（吉富ファインケミカル（株）製）

＊１：ユニルーブＭＢ−２（旭電化（株）製）
＊２：精製ラノリン（クローダジャパン（株）製）
＊３：カーボポール１３４２（中外貿易（株）製）
＊４：ＥＳＣＡＬＯＬ ５６７（アイエスピージャパン（株）製）

＊１：ネオコールＬＡ（クローダジャパン（株）製）
＊２：セトステアリルアルコール（高級アルコール（株）製）

＊１：イオネットＳ−２０（三洋化成工業（株）製）

＊１：Ｎ−メタクリロイルエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム・α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン・メタクリル酸アルキル共重合体

＊１：ＥＭＡＬＥＸ ＨＣ−４０（日本エマルジョン（株）製）

試験例１の結果を示すグラフである。 実施例及び比較例の発毛スコアを示すグラフである。

Claims (5)

1. トリヨードサイロニン又はその誘導体が封入されたリポソームからなる育毛養毛有効成分。
2. 請求項１記載の育毛養毛有効成分を配合してなる育毛養毛剤。
3. 毛髪成長期を誘導したマウスに、ジヒドロテストステロンを皮下投与し、該毛髪成長期を誘導した部分に被験物質を塗布した際の毛再生を指標とする、育毛養毛有効成分又は育毛養毛剤のスクリーニング方法。
4. 下記第１〜５の工程を含む請求項３記載のスクリーニング方法。
   （１）マウスを毛髪成長期誘導する、第１工程。
   （２）第１工程で毛髪成長期を誘導されたマウスに、ジヒドロテストステロンを皮下投与する、第２工程。
   （３）マウスの毛髪成長期を誘導された部分に被験物質を塗布する、第３工程。
   （４）被験物質を塗布後、毛髪成長期が誘導された部分における毛再生を測定する、第４工程。
   （５）第４工程で測定された毛再生と、第３工程において被験物質を塗布しない場合の毛再生とを比較し、被験物質の育毛養毛効果を検出する、第５工程
5. 請求項４記載のスクリーニング法において、毛髪成長期誘導された部分の面積に対する毛再生が始まった部分の面積が５０％以上に達する第２工程からの日数が、第３工程において被験物質を塗布しない場合の日数に比べ１／２以下である育毛養毛有効成分。
   

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