JP2006184042A - アルツハイマー病の検出方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】前記検出方法では、体液中のメタロチオネイン−3(MT−3)を分析する。前記検出用キットは、抗MT−3抗体又はその断片を含む。
【選択図】なし
Description
本発明の課題は、アルツハイマー病の新規の検出方法及び検出用キットを提供することにある。
また、本発明は、MT−3に特異的に結合する抗体又はその断片を含むことを特徴とする、アルツハイマー病の検出用キットに関する。
本発明の検出方法では、MT−3を分析することにより、アルツハイマー病を検出する。
MT−3は、メタロチオネイン−1(MT−1)又はメタロチオネイン−2(MT−2)と類似したアミノ酸配列を有する、分子量約7000の含金属タンパク質である。MT−3は、健常者の脳中に存在するが、アルツハイマー病患者の脳では減少するタンパク質であって、神経栄養活性抑制作用を有するタンパク質であり、成長抑制因子(Growth Inhibitory Factor;GIF)とも称される。MT−3は、哺乳動物を含む種々の生物に存在し、例えば、ヒトMT−3として、68個のアミノ酸残基からなるペプチドが公知である(特許第2904935号明細書)。本発明の検出方法は、ヒトを始めとする種々の生物に適用することができるが、例えば、ヒトに適用する場合には、MT−3として、特許第2904935号明細書に記載のヒトMT−3を分析対象とすることができる。
また、酵素学的測定法を用いる場合には、例えば、特許第2815461号に記載の方法に従って、MT−3の神経栄養活性抑制活性を測定することにより、MT−3の量又は存在の有無を分析することができる。
例えば、被検試料として脳脊髄液を用いる場合、アルツハイマー病の疑いのある患者から脳脊髄液を採取し、脳脊髄液中のMT−3量を測定し、健常者から採取した脳脊髄液中のMT−3量と比較することにより、前記患者がアルツハイマー病であるか否かを判定することができる。なお、前記健常者は、アルツハイマー病でない者であれば、特に限定されるものではないが、好ましくは非痴呆老齢者である。
ここで、健常者のMT−3量は、前記患者と同時に測定することもできるし、あるいは、予め健常者群の平均値及び/又は正常濃度範囲として決定しておくこともできる。好ましくは、予め健常者群におけるMT−3の平均値及び正常濃度範囲から閾値を設定し、前記患者のMT−3量が前記閾値を超えた場合、前記患者はアルツハイマー病であると判定することができる。一方、前記患者のMT−3量が前記閾値を超えない場合、前記患者はアルツハイマー病でないと判定することができる。
本発明の検出用キットは、MT−3に特異的に結合する抗体又はその断片を含む。前記抗体としては、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体のいずれを用いることもできる。前記抗体断片としては、MT−3への特異的結合能を保持する限り、特に限定されるものではなく、例えば、Fab、Fab’、F(ab’)2、又はFvを用いることができる。
例えば、標識化抗体を用いる免疫学的手法、例えば、酵素免疫測定法、化学発光免疫測定法、蛍光抗体法、又は放射免疫測定法などの場合には、標識物質で標識した標識化抗体又は標識化抗体断片の形態で含むことができる。標識物質の具体例としては、酵素としてペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−D−ガラクトシダーゼ、又はグルコースオキシダーゼ等を、蛍光物質としてフルオレセインイソチアネート又は希土類金属キレート等を、放射性同位体として3H、14C、又は125I等を、その他、ビオチン、アビジン、又は化学発光物質等を挙げることができる。酵素又は化学発光物質等の場合には、それ自体単独では測定可能なシグナルをもたらすことはできないことから、それぞれ対応する適当な基質等を選択して含むことが好ましい。
本実施例では、アルツハイマー病患者(9例)、非痴呆老齢患者(10例)、及び進行性核上性麻痺患者(1例)から採取した脳脊髄液について、2種類の抗体を用いるツーサイト(two site)ELISA法により、MT−3濃度を定量した。
図1から明らかなように、このツーサイトELISAでは、78〜2500pg/mLの濃度範囲でMT−3濃度を定量可能であることが判明した。
Claims (2)
- 体液中のメタロチオネイン−3を分析することを特徴とする、アルツハイマー病の検出方法。
- メタロチオネイン−3に特異的に結合する抗体又はその断片を含むことを特徴とする、アルツハイマー病の検出用キット。
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