JP2006158393A - 銀ナノ粒子を利用した標的物質の精製方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】(a)チオール基を有する分子を含む試料と銀ナノ粒子とを混合し、分子と銀ナノ粒子との複合体を含む混合物を形成するステップと、(b)該混合物から複合体を分離して除去するステップと、を含む銀ナノ粒子を利用して標的物質を精製する方法である。これにより、既存の核酸精製法に比べ、チオール基を有する分子を含む試料を溶解する作業を入れたとしても三段階作業で速かにPCR増幅が可能であるDNAを精製できるので、LOCに非常に有用に利用可能である。
【選択図】図3
Description
銀ナノ粒子のPCR増幅に対する阻害効果を知るために、銀ナノ粒子の濃度を変化させ、PCR阻害作用が発生しない濃度を調べた。
SH改質された膜が銀ナノ粒子複合体を除去するか否かを知るために、SH濾過前後の銀ナノ粒子の濃度を測定した。SH改質されたガラスファイバ膜は、室温で、ガラスファイバ膜をMPTS(3−(メルカプトプロピル)トリメトキシシラン)53.8mM含有イソプロパノールに浸漬した後、イソプロパノールで二回洗浄し、80℃のオーブンで5分間乾燥させた後、蒸溜水で洗浄することにより製造した。100質量ppmの銀ナノ粒子水溶液(NANOVER(登録商標)製コロイド溶液の1/10希釈液)を利用し、SHフィルタ濾過前後の銀ナノ粒子の濃度を、誘導結合プラズマ原子放出分光器(ICP)を利用して測定した結果、濾過前の銀ナノ粒子の濃度は、100質量ppmである一方、濾過後の銀ナノ粒子の濃度は、0.0022質量ppmであった。これにより、100質量ppmの銀ナノ粒子は、SHフィルタによりほとんど完全に除去されるということが分かった。
本発明の方法を大腸菌検出のための試料製造法に適用できるか否かを知るために、大腸菌(E.coli)細胞に対して本発明の方法を利用して核酸を精製してPCRを行った。
精製方法および精製するしないに係らず好ましいPCR結果が得られた。しかし、本発明の方法は他の方法に比べて精製ステップ及び精製時間が少なくかかるので、LOCの具現のために大腸菌細胞にも効率的に適用できるということが分かる。
本発明の方法をグラム陽性バクテリア検出のための試料製造法に適用できるか否かを知るために、バチルス メガテリウム細胞から核酸を精製してPCRを行った。
本発明の方法をウイルス検出のための試料製造法に適用できるか否かを知るために、再組合B型肝炎ウイルス(rHBV)から核酸を精製してPCRを行った。PCRは、実施例3と同様に行った。
Claims (10)
- (a)チオール基を有する分子を含む試料と、銀ナノ粒子とを混合し、前記分子と銀ナノ粒子との複合体を含む混合物を形成するステップと、
(b)前記混合物から前記複合体を分離して除去するステップとを、
含む銀ナノ粒子を利用して標的物質を精製する方法。 - 前記試料は、細胞またはウイルスを含み、
前記ステップ(a)の前または後に、更に前記細胞またはウイルスを溶解するステップを含むことを特徴とする請求項1に記載の方法。 - 前記標的物質は、核酸または糖であることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記細胞またはウイルスを溶解する方法は、機械的な粉砕、化学反応、電気化学反応、生化学物質、超音波、音波、極超短波、加熱、レーザ、電場及び電気分解よりなる群から選択される少なくとも1種を含むことを特徴とする請求項2に記載の方法。
- 前記複合体の除去がチオール基を有する構造物を介して行われることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記チオール基を有する構造物が、3−(メルカプトプロピル)トリメトキシシランにより改質されたガラスファイバ膜であることを特徴とする請求項5に記載の方法。
- 銀ナノ粒子のサイズが1nmから100nmであることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 添加される銀ナノ粒子の濃度が、前記混合物の全量に対して10質量ppmから1,000質量ppmであることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 添加される銀ナノ粒子の濃度が、前記混合物に対して100質量ppmから1,000質量ppmであることを特徴とする請求項8に記載の方法。
- 銀ナノ粒子は、
前記試料に直接添加されるか、または
銀電極を介した電気分解により前記試料中に生成されることを特徴とする請求項1に記載の方法。
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