JP2005508386A6 - Heterocyclic compounds based on N6-substituted adenines and methods for their preparation and use for the preparation of drugs, cosmetics, growth regulators and pharmaceuticals, cosmetics, growth regulators containing the compounds - Google Patents

Abstract

A novel heterocyclic derivative based on N ⁶ -substituted adenine having anticancer, mitotic, immunosuppressive and aging resistant properties against plant, animal and human cells, and a method for preparing the same. Also included are pharmaceutical compositions, cosmetics, growth regulators comprising the derivatives as active compounds and the use of the derivatives for the preparation of drugs and cosmetics in biotechnological processes, the cosmetic industry or agriculture.

Description

【０００８】
化学式Ｉを有する一般化学式ＩのＮ⁶−置換アデニンに基づく複素環状化合物またはその薬学的に受容可能なその塩である。
【０００９】
以下の誘導体が特に好ましい。すなわち：６−（２−ヒドロキシ−３−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−４−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−５−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−６−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−３−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−４−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−５−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−６−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−３−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−４−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−５−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−６−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−３−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−４−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−５−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−５−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−６−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３−ジヒドロキシ−４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，５−ジヒドロキシ−４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリン、
６−（２，３−ジヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，５−ジヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，３−ジヒドロキシ−４−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３−ジヒドロキシ−４−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，５−ジヒドロキシ−４−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−４−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−４−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−４−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（２、６−ジヒドロキシ−３−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−３−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−３−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−３−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−３，５−ジクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−３，５−ジブロモベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシ−３，５−ジヨードベンジルアミノ）プリン、
６−（２，６−ジヒドロキシ−３，５−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（３−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（４−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（３−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（４−ブロモベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（３−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（４−ヨードベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（３−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（４−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２−アセチルベンジルアミノ）プリン、６−（３−アセチルベンジルアミノ）プリン、６−（４−アセチルベンジルアミノ）プリン、６−（３−カルボキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−カルボキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−アセトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−アセトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−アセトキシベンジルアミノ）プリン、
６−（２−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（３−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（４−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（２−スルホベンジルアミノ）プリン、６−（３−スルホベンジルアミノ）プリン、６−（４−スルホベンジルアミノ）プリン、６−（２−キアノベンジルアミノ）プリン、６−（３−キアノベンジルアミノ）プリン、６−（４−キアノベンジルアミノ）プリン、６−（５−ニトロ−２−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（２−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（３−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（４−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（４−メチルアミノベンジルアミノ）プリン、６−（２−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−ヘキシルベンジルアミノ）プリン、６−（４−ヘキシルオキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−ホルミルベンジルアミノ）プリン、６−（３−ホルミルベンジルアミノ）プリン、６−（４−ホルミルベンジルアミノ）プリン、６−（２−エトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−エトキシベンジルアミノ）プリン、
６−（４−エトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−エチルベンジルアミノ）プリン、６−（４−ペンチルベンジルアミノ）プリン、６−（４−ペンチルオキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−フェノキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−フェニルベンジルアミノ）プリン、６−（４−プロピルベンジルアミノ）プリン、６−（４−プロピルオキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−オクチルベンジルアミノ）プリン、６−（４−オクチルオキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−エチルオキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジアセトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジアセトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，５−ジアミノベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジブロモベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジブロモ−４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，３−ジクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，４−ジクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，５−ジクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジクロロベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジクロロベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，４，５−テトラフルオロベンジルアミノ）プリン、
６−（２−クロロ−３，６−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（５−クロロ−２−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，４−トリフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，５−トリフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，５−トリフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（３，４，５−トリフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，６−トリフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（３−クロロ−２，６−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−６−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，４−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２，５−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（５−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−（ジフルオロメトキシ）ベンジルアミノ）プリン、６−（３−（ジフルオロメトキシ）ベンジルアミノ）プリン、
６−（４−（ジフルオロメトキシ）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（３−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−トリフルオロメチルチオ）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−フルオロ−（３−トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−６−フルオロ−３−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（６−クロロ−２−フルオロ−３−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（３−クロロ−２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（３−クロロ−２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（２，３−ジフルオロ−４−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジフルオロ−３−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（３−クロロ−２，６−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（３−（トリフルオロメチルチオ）ベンジルアミノ）プリン、６−（３−フルオロ−４−メチルベンジルアミノ）プリン、
６−（４−フルオロ−３−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（５−フルオロ−２−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−３，６−ジフルオロベンジルアミノ）プリン、６−（４−トリフルオロメチルチオ）ベンジルアミノ）プリン、６−（３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ）プリン、６−（３−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（２−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（４−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（３−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ）プリン、６−（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ）プリン、６−（４−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）プリン、６−（４−ジエチルアミノベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジヒドロキシベンジルアミノ）プリン、
６−（２，３−エチレンジオキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，４−ジヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，５−ジヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，３−ジメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，４−ジメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，５−ジメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−ヒドロキシ−２−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−５−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−ヒドロキシ−６−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−ヒドロキシ−５−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジメチルベンジルアミノ）プリン、６−（２，３−ジメチルベンジルアミノ）プリン、６−（２，４−ジメチルベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジメチルベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジメチル−４−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジメチル−４−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−フルオロ−４−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、
６−（３−フルオロ−４−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジニトロベンジルアミノ）プリン、６−（３，５−ジニトロベンジルアミノ）プリン、６−（２−メチル−５−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（３−メチル−４−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（３，４−ジヨード−４−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−クロロ−３，５−ジニトロベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（３−クロロ−２−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（３−クロロ−４−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（５−クロロ−２−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）プリン、６−（４−クロロメチルベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−５−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（２−クロロ−６−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（４−クロロ−３−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（５−クロロ−２−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、
６−（３，５−ジブロモ−４−ヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−ジブロモ−４−メトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−ブロモメチルベンジルアミノ）プリン、６−（４−ブトキシベンジルアミノ）プリン、６−（４−／ｔ−ブチル／ベンジルアミノ）プリン、６−（４−ｔ−ブチル−２，６−ジメチルベンジルアミノ）プリン、６−（２−アミノベンジルアミノ）プリン、６−（３−アミノベンジルアミノ）プリン、６−（４−アミノベンジルアミノ）プリン、６−（２−アミノ−６−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（３−アミノ−４−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２−アミノ−３−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２−アミノ−４−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２−アミノ−６−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジアミノ−３−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，６−ジアミノ−４−クロロベンジルアミノ）プリン、
６−（４−アミノ−３−クロロベンジルアミノ）プリン、６−（４−アミノ−５−クロロベンジルアミノ）プリン、
６−（５−アミノ−２−メチルベンジルアミノ）プリン、６−（２−アミノ−３−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（４−アミノ−３−ニトロベンジルアミノ）プリン、６−（４−ベンジルオキシベンジルアミノ）プリン、６−（３−アセチルベンジルアミノ）プリン、６−（２−アセチルベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，４−トリメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，５−トリメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，４，５−トリメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，４−トリヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，６−トリヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，４−トリヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（３，４，５−トリヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，６−トリヒドロキシベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，５−トリクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，５−トリクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，４，６−トリクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，４−トリクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，５−トリクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，３，６−トリクロロベンジルアミノ）プリン、６−（２，５，６−トリクロロベンジルアミノ）プリン、
６−アニリノプリン、６−（２，４−ビス（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（２，５−ビス（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（２，４−ビス（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（２−ブロモアニリノ）プリン、６−（３−ブロモアニリノ）プリン、６−（４−ブロモアニリノ）プリン、６−（４−ブロモ−２−クロロアニリノ）プリン、６−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）プリン、６−（２−ブロモ−６−クロロ−（４−（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（４−ブロモ−５，６−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（２−ブロモ−４，６−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）プリン、６−（２−ブロモ−４−フルオロアニリノ）プリン、６−（２−ブロモ−４−メチルアニリノ）プリン、６−（３−ブロモ−２−メチルアニリノ）プリン、６−（４−ブロモ−３−メチルアニリノ）プリン、６−（２−ブロモ−４−（トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、６−（３−ブロモ−４−（トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、６−（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、６−（２−ブロモ−４，５，６−トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、６−（２，４−ジブロモアニリノ）プリン、
６−（２，５−ジブロモアニリノ）プリン、６−（２，４−ジブロモ−３，６−ジクロロアニリノ）プリン、６−（２，６−ジブロモ−４−フルオロアニリノ）プリン、６−（２，６−ジブロモ−４−（トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、６−（２，４−ジブロモ−６−（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（２，６−ジブロモ−４−（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（２，３−ジクロロアニリノ）プリン、６−（２，４−ジクロロアニリノ）プリン、６−（２，５−ジクロロアニリノ）プリン、６−（２，６−ジクロロアニリノ）プリン、６−（３，４−ジクロロアニリノ）プリン、６−（３，５−ジクロロアニリノ）プリン、６−（２，６−ジクロロ−４−（トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、６−（２，４−ジクロロ−６−（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（２，６−ジクロロ−４−（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（２，３−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（２，４−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（２，５−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（２，６−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（３，４−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（３，５−ジフルオロアニリノ）プリン、６−（２−ジフルオロメトキシアニリノ）プリン、６−（２−ジフルオロメトキシ−５−ニトロアニリノ）プリン、６−（２，３−ジフルオロ−６−ニトロアニリノ）プリン、６−（２，４−ジフルオロ−６−ニトロアニリノ）プリン、６−（２，４−ジヨードアニリノ）プリン、
６−（２，３−ジメチルアニリノ）プリン、６−（２，４−ジメチルアニリノ）プリン、６−（２，３−ジメチル−６−ニトロアニリノ）プリン、６−（２，４−ジメトキシアニリノ）プリン、６−（２，３−ジメトキシアニリノ）プリン、６−（２，３−ジニトロ−６−メチルアニリノ）プリン、６−（４−ヒドロキシ−２−メチルアニリノ）プリン、６−（２−クロロアニリノ）プリン、６−（３−クロロアニリノ）プリン、６−（４−クロロアニリノ）プリン、（３−クロロ−２，６−ジブロモ−４−フルオロアニリノ）プリン、６−（２−クロロ−４−フルオロアニリノ）プリン、６−（２−クロロ−５−フルオロアニリノ）プリン、６−（２−クロロ−６−フルオロアニリノ）プリン、６−（３−クロロ−２−フルオロアニリノ）プリン、６−（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）プリン、６−（４−クロロ−２−フルオロアニリノ）プリン、６−（５−クロロ−２−フルオロアニリノ）プリン、６−（２−クロロ−４−フルオロ−５−メチルアニリノ）プリン、６−（５−クロロ−４−フルオロ−２−ニトロアニリノ）プリン、６−（５−クロロ−２−ヒドロキシアニリノ）プリン、６−（４−クロロ−２−ヨードアニリノ）プリン、６−（２−クロロ−４−ヨードアニリノ）プリン、６−（２−クロロ−６−メチルアニリノ）プリン、６−（３−クロロ−２−メチルアニリノ）プリン、６−（３−クロロ−４−（トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、６−（４−クロロ−２−（トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、
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６−（２−ニトロアニリノ）プリン、６−（３−ニトロアニリノ）プリン、６−（４−ニトロアニリノ）プリン、６−（２−ニトロ−４，５，６−トリフルオロアニリノ）プリン、６−（２−ニトロ−４−（トリフルオロメトキシ）アニリノ）プリン、６−（２−ニトロテトラフルオロアニリノ）プリン、６−（２，３，４，５，６−ペンタブロモアニリノ）プリン、６−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロアニリノ）プリン、６−（２，３，４，５−テトラクロロアニリノ）プリン、６−（２，３，５，６−テトラクロロアニリノ）プリン、６−（４−（１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ）アニリノ）プリン、６−（２，３，４，５−テトラフルオロアニリノ）プリン、６−（２，３，４，６−テトラフルオロアニリノ）プリン、６−（２，３，５，６−テトラフルオロアニリノ）プリン、６−（２，３，５，６−テトラフルオロ−４−（トリフルオロメチル）アニリノ）プリン、６−（２，４，６−トリブロモアニリノ）プリン、６−（２，４，６−トリブロモ−３，５−ジヨードアニリノ）プリン、６−（２，３，４−トリクロロアニリノ）プリン、６−（２，４，５−トリクロロアニリノ）プリン、６−（２，４，６−トリクロロアニリノ）プリン、
６−（２，４，５−トリフルオロアニリノ）プリン、６−（２，３，５−トリフルオロアニリノ）プリン、６−（２，３，６−トリフルオロアニリノ）プリン、６−（２，３，４−トリフルオロアニリノ）プリン、６−（２−トリフルオロメトキシアニリノ）プリン、６−（３−トリフルオロメトキシアニリノ）プリン、６−（４−トリフルオロメトキシアニリノ）プリン、６−（２，３，４−トリフルオロ−６−ニトロアニリノ）プリン、６−（２，４，５−トリメチルアニリノ）プリン、６−（２，４，６−トリメチルアニリノ）プリン、６−（３−クロロ−４−カルボキシアニリノ）プリン、６−（３−アミノ−４−クロロアニリノ）プリン、６−（３−クロロ−４−アミノアニリノ）プリン、６−（３−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリノ）である。
【００１０】
一般化学式Ｉの化合物の調製のための出発物質は、文献（Ｄａｖｏｌｌ ａｎｄ Ｂｌｏｗｙ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ，Ｓｏｃ．７３：２９３６（１９５７））に従ってハイポックスアンチンからＰＯＣｌ₃を使用して合成される６−クロロプリン、または市販品（シグマ、アルドリッチ、フルカ）の６−クロロプリンである。
【００１１】
一般化学式Ｉの化合物の調製のための別の出発物質は、トリブロモメタン中でハイポックスアンチンからｎ−ペンチルニトリルを使用して合成される６−ブロモプリン、または市販品の６−ブロモプリンである。
【００１２】
本発明によると、化学式Ｉを有するＮ₆−置換アデニンに基づく新しい複素環状誘導体は、Ｒ２およびＲ６は前にここで述べた通りで、化学式Ｉを有する複素環状誘導体から調製されるとともに、Ｒ６は臭素、塩素、またはメチルメルカプト基を示し、Ｒ２は、求核置換反応によりＲ６の位置の塩素、臭素、メチルメルカプトが前にここで述べたようにその他の性質の置換基Ｒ６に変換されており前にここで述べた通りで、これにより、化学式Ｉを有する化合物が得られる。
【００１３】
本発明のさらなる方法は、Ｒ２は水素でＲ６はアミノ基を示す化学式Ｉを有する複素環状誘導体が、化学式Ｒ６’−ＣＨＯを有するアルデヒドとの反応により、Ｒ６の位置で置換されるとともに、Ｒ６’は、Ｒ６の位置のアミノ基を、前にここで述べたようにその他の性質の置換基Ｒ６に変換するために、前に述べられた通りであり、化学式Ｉの化合物を得ることを特徴とする、化学式Ｉの化合物の調製である。
【００１４】
本発明はまた、医薬品として使用される化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物に関する。
【００１５】
本発明はさらに、植物、哺乳類、微生物、酵母、真菌の細胞の成長調節剤として使用される請求項１記載の化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物に関する。
【００１６】
本発明はまた、化粧品として使用される請求項１記載の化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物に関する。
【００１７】
本発明の目的はまた、薬学担体をはじめとする化学式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む医薬品、化粧品または成長調節剤である。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、親和性吸収細胞間質（ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｃｅｓ）、過程制御用の固定化酵素、免疫学的検定剤、診断試料、また、¹⁴Ｃ、³Ｈで標識された化合物やオリゴヌクレチオド、アビジンやビオチンの調製のための、請求項１記載の化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物の使用である。
【００１９】
本発明はまた、有糸分裂または抗有糸分裂化合物として使用される予定の薬学組成物調製用の薬学担体をはじめ、特に、がん、乾癬、慢性関節リューマチ、狼蒼、１型糖尿病、多重硬化症、再狭窄症（ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ）、多発性嚢胞腎、移植拒絶反応、移植片対宿主病や痛風、菌類や原生生物により引き起こされる寄生虫病や、アルツハイマー病の治療のため、または抗神経発生薬（ａｎｔｉｎｅｕｒｏｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｒｕｇ）として、あるいは免疫賦活を抑制するためや、増殖性皮膚病の治療のための、化学式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用方法に関する。
【００２０】
本発明の目的はさらに、農業で、特に、農産物の収量や品質を増進させるための成長調節剤として使用される請求項１記載の化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物の使用である。
【００２１】
本発明はまた、ケラチノサイトや線維芽細胞のような、哺乳類の細胞表皮の経年変化や老化を抑制する化粧品として使用される、化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物に関する。
【００２２】
本発明の目的はさらに、増殖や形態発生の賦活のための組織培養における成長調節剤としての、化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物の使用である。
【００２３】
本発明はまた、植物や哺乳類の胚細胞や胚（特に卵母細胞）のクローニング用の組成物の調製または上記組成物の使用のための、化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物に関する。
【００２４】
本発明はまた、関節炎のような免疫賦活の抑制や哺乳類の移植拒絶反応の抑制のための組成物の調製または上記組成物の使用のための、請求項１記載の化学式ＩのＮ₆−置換アデニンに基づく複素環状化合物に関する。
（治療投与）
投与の適切な経路は、経口、直腸内、局所（皮膚、眼球、口内、舌下など）、経膣、非経口（皮下、筋肉内、硝子体内、静脈内、皮内、くも膜内、硬膜外など）を含む。好ましい投与経路は、患者の状態、化合物の毒性や患部の場所によって臨床医に知られた他の検討事項から決まる。
【００２５】
治療組成物は、約１％から約９５％の有効成分を含み、単一容量投与形態は、好ましくは約２０％から約９０％の活性含有を含み、単一容量でない投与形態は約５％から約２０％の有効成分を含む。単位容量形態は、例えば、コーティング錠、錠剤、アンプル、ガラス瓶、座薬やカプセルである。その他の投与形態は、例えば、軟膏、クリーム、糊状物、発泡剤、チンキ、口紅、ドロップ、スプレー、分散液などである。例として、約０．０５ｇから約１．０ｇの有効成分を含むカプセルが挙げられる。
【００２６】
本発明の薬学組成物は、例えば、混合、造粒、被覆加工、溶解、凍結乾燥工程などの従来の手段により、それ自体知られた方法で調製される。
【００２７】
好適には、活性成分の溶液、また懸濁液や分散液に加えて、特に等張性の水溶性溶液、分散液や懸濁液が使用され、例えば、単独でまたは担体とともに活性成分、例えばマニトールを含む凍結乾燥された組成物の場合、これらは使用前に調製されることが可能である。薬学組成物は殺菌される、および／または賦形剤を含み、例えば、防腐剤、安定剤、湿化剤、および／または乳化剤、可溶剤、浸透圧を制御するための塩および／または緩衝液で、これらは、例えば、溶解や凍結乾燥工程といった従来の手段により、公知の方法で調製される。上記溶液や懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ゼラチンなどの増粘性物質を含んでいてもよい。
【００２８】
オイル中の懸濁液は、油性成分として、注入の目的のために一般的な植物、合成、半合成油を含む。オイルは上記のように、特に、酸成分として８−２２、特に１２−２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸を含む液体の脂肪酸エステルが適しており、例えば、ラウリル酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリル酸、アラキドン酸、ベヘン酸や、対応する不飽和酸、例えば、オレイン酸、エライジン酸、ユーリック酸、ブラシディック酸、リノレン酸、酸化防止剤に付えて適当なものは、ビタミンＥ、β−カロチンや３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエンである。これらの脂肪酸エステルのアルコール成分は、６個以下の炭素原子を有し、単価または多価アルコールであり、例えば、１、２、または３個のヒドロキシル基を有するアルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、これらの異性体であるが、特にグリコールやグリセロールが適している。脂肪酸エステルはしたがって、例えば、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、「ラブラフィル（Ｌａｂｒａｆｉｌ）Ｍ２３７５」（パリ、ガテフォシュ社製のトリオレイン酸ポリオキシエチレングリセロール）、「ラブラフィル１９４４ ＣＳ」（アプリコット仁油（ａｐｒｉｃｏｔ ｋｅｒｎｅｌ ｏｉｌ）のアルコール分解により調製され、グリセリドとポリエチレングリコールエステルからなる不飽和ポリグリコール酸塩化されたグリセリド；パリ、ガテフォシュ社製）、「ラブラソル」（ＴＣＭのアルコール分解により調製され、グリセリドとポリエチレングリコールエステルからなる飽和ポリグリコール酸塩化されたグリセリド。パリ、ガテフォシュ社製）、および／または「ミグリオール８１２」（長鎖Ｃ₈からＣ₁₂の飽和脂肪酸のトリグリセリド、ドイツ、ヒュールＡＧ社製）であり、また、特に植物油、綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、ダイズ油、特にラッカセイ油が適している。
【００２９】
注入組成物の調製は、殺菌条件下で例えば、アンプルやガラス瓶中への瓶詰め工程、容器の密封のような従来の方法で行なわれる。
【００３０】
例えば、経口用の医薬品は、活性成分を一種類以上の固体の担体と組み合わせることにより得られ、適当な場合には最終生成混合物の造粒、また望む場合には、混合物や顆粒を錠剤やコーティング錠に加工すること、適当な場合には追加の賦形剤の添加が行なわれる。
【００３１】
適当な基材は、特に、充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、マニトール、ソルビトール、セルロース調製物などの糖、および／または、カルシウムホスフェート、例えば、トリカルシウムジホスフェート、カルシウム水素ホスフェート、さらには、トウモロコシ、小麦、米、ジャガイモの澱粉、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムといった澱粉などの結合剤、および／または、ポリビニルピロリジン、および／または、望む場合には、上記澱粉などの不溶化剤（ｄｅｓｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ）、さらにはカルボキシメチル澱粉、架橋ポリビニルピロリドン、アリジン酸またはアリジン酸ナトリウムなどのその塩などである。追加の賦形剤は、特に流動制御剤や潤滑剤が適しており、例えば、サリチル酸、タルク、ステアリル酸や、ステアリル酸マグネシウム、ステアリル酸カルシウムなどのその塩、および／またはポリエチレングリコールまたはその誘導体などである。
【００３２】
コーティング錠の核は、適当な場合には胃液に抵抗性にある適当なコーティングで設けられ、使用される上記コーティングは、とりわけ、濃縮糖溶液、適当な場合には、ガムアラビック、タルク、ポリビニルピロリジン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタンを含み、コーティング溶液は適当な有機溶媒または溶媒混合物中にあり、アセチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの胃酸に抵抗性のある適当なセルロース調製物溶液である。染料や顔料は、例えば様々な活性成分の容量の検証や特性解析のため、錠剤やコーティング錠に混合される。
【００３３】
医薬品は、経口で使用され、また、ゼラチンの硬カプセル剤や、ゼラチンの閉型軟カプセル剤、グリセロールやソルビトールなどの可塑剤である。硬カプセルは活性成分を顆粒の形で含み、例えば、トウモロコシ澱粉などの充填剤や、タルクやステアリル酸マグネシウムなどの結合剤および／または潤滑剤、適当な場合には安定剤とともに混合される。軟カプセル剤では、活性成分は、好適には、グリース油、パラフィン油、液体ポリエチレングリコール、エチレングリコールやプロピレングリコールの脂肪酸エステルなどの適当な液体賦形剤に溶解されるか懸濁されており、同様に、例えばポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル型の安定剤や洗剤を加えることができる。
【００３４】
その他の投与の経口形態は、例えば、活性成分を例えば懸濁した形で約５％から２０％、好適には約１０％の濃度だけ含む従来の方法で調製されたシロップであり、また、例えば５から１０ｍＬが割り当てられた場合には、適当な個別用の容量となる同様の濃度を含む。他の形態は、例えば、また、例えばミルクでシェーキ（ｓｈａｋｅｓ）を調製するための微粉や液体濃縮物である。このような濃縮物はまた、単位容量分量だけ充填することができる。
【００３５】
薬学組成物は、直腸内から使用でき、例えば、活性成分の座薬基剤との混合物を含む座薬である。適当な座薬基剤は、例えば、天然存在物や、合成トリグリセリド、パラフィン炭化水素、ポリエチレングリコール、または高級アルカノールである。
【００３６】
非経口投与用に適当な組成物は、水溶解性型の活性成分の水溶性溶液で、例えば、カルボキシメチルセルロース、ソルビトール、および／またはデキストランなどの増粘性物質を含む水溶解性の塩や水溶性注入懸濁物で、適当な場合には安定剤を含む。活性成分はまたここで、適当な場合には賦形剤とともに、凍結乾燥物質の形で存在し、非経口投与の前に適当な溶媒を加えることにより溶解される。非経口投与用のこのような溶液は、例えば、輸液としても使用される、好ましい防腐剤は、例えば、アスコルビン酸や、ソルビン酸や安息香酸などの殺菌剤である。
【００３７】
軟膏は、油−水−乳濁物で、７０％以下、好適には、２０−５０％の水または水溶性層を含む。脂肪酸は特に、例えば、ワセリン、パラフィン油、硬パラフィンを含み、これらは好適には、例えば、セチルアルコールやウールワックスなどのウールワックスアルコールなどの脂肪酸アルコールやそのエステルなどの適当なヒドロキシ化合物を含み、水との結合能力を改善する。乳化剤は、ソルビタン脂肪酸（スパンズ（Ｓｐａｎｓ））などの対応する親油性物質で、例えば、オレイン酸ソルビタンおよび／またはイソステアリル酸ソルビタンなどである。水溶性層への添加剤は、例えば、グリセロール、プロプレングリコール、ソルビトールおよび／またはポリエチレングリコールなどのポリアルコールのような湿潤剤または、防腐剤や芳香性物質である。
【００３８】
脂肪軟膏は無水性で、基剤として、特に、例えば、パラフィン、ワセリンやパラフィン油などの炭化水素を含み、さらには天然存在物や半合成脂肪、例えば、硬化ヤシ脂肪酸トリグリセリド、また好適には、例えば、硬化ラッカセイ油やヒマシ油などの硬化油、またさらには、例えば、モノおよび／またはジステアリル酸グリセロールの脂肪酸部分エステルや、例えば、上記脂肪アルコールなどを含む。これらは水の取り込みを増加させる軟膏とともに乳化剤および／または上記添加剤をも含む。
【００３９】
クリームは油−水の乳濁物で、５０％以上の水を含む。使用される油性の基剤は、特に、脂肪アルコール、ラウリル、セチル、ステアリルアルコール、脂肪酸、例えばパルミチン酸やステアリル酸、固体ワックスに対する液体、例えば、ミリスチン酸イソプロピル、ウールワックスや、ハチワックス、および／または炭化水素、例えば、ワセリン（石油）やパラフィン油である。乳化剤は、優先的に親水性を持つ界面活性物質で、対応する非イオン性乳化剤、例えば、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレンソルビタン脂肪エステル（ツウィーン（Ｔｗｅｅｎ））（登録商標）などの脂肪酸エステル、ポリアルコールの脂肪酸エステル、上記化合物のエチレンオキシ付加物、また、さらにはポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテルポリオキシエチレン脂肪酸エステルや、例えば、ラウリル酸硫酸ナトリウム、セチル硫酸ナトリウム、ステアリル硫酸ナトリウムなどの脂肪アルコール硫酸塩のアルカリ金属塩のような対応するイオン性乳化剤で、これらは、セチルステアリルアルコールやステアリルアルコールなどの脂肪アルコールの存在下で通常使用される。水溶性層への添加剤は、とりわけ、クリームが完全に乾燥することを防止する作用物質で、例えば、グリセロール、ソルビトール、プロピレングリコールおよび／またはポリエチレングリコールなどのポリアルコール、さらには防腐剤や芳香性物質である。
【００４０】
糊状物は、例えば、酸化チタンや酸化亜鉛、さらにはタルクおよび／または珪酸アルミニウムなどの金属酸化物のような分泌−吸収性の粉末構成成分を有するクリームまたは軟膏で、存在する湿度と分泌物とを結びつける役割を果たす。
【００４１】
発泡剤は、加圧容器から投与され、煙霧剤の形で存在する液体の油−水の乳濁物である。噴霧ガスとして、ジクロロフルオロメタンやジクロロテトラフルオロエタンなどのポリハロゲン化アルカンなどのハロゲン化炭化水素や、好適には非ハロゲン化ガス性炭化水素気体、ＮＯ₂、二酸化炭素が使用される。使用される油性層は、とりわけ、軟膏やクリーム用の上記のものであり、上記添加剤が同様に使用される。
【００４２】
チンキや溶液は通常、水溶性−エタノール性の基剤を含み、上記基剤に、グリセロール、グリコールおよび／またポリエチレングリコールなどのポリアルコールのような蒸発を減少させる湿潤剤、再油化物質、低級ポリエチレングリコールとの脂肪酸エステル、すなわち、皮膚から除去された脂肪物質をエタノールで置換するための水溶性混合物に溶解する親油性物質、また必要ならば、その他の賦形剤や添加剤が混合される。
【００４３】
本発明はさらに、このため獣医学用担体とともに上記のような少なくとも１種の活性成分を含む獣医学用組成物を提供する。獣医学用担体は、組成物を投与するための材料で、固体でも、液体でも、ガス材料であってもよく、獣医学的技術で不活性または受容可能であるとともに、また活性成分に対して適合性がある。獣医学用組成物は、経口、非経口、その他何らかの所望の経路で投与されてもよい。
【００４４】
本発明はまた、上記疾病状態の治療のための工程および方法に関する。上記化合物は、予防的または治療的に医薬品の形で、好適には、上記疾病に対して効果的な量だけ、投与することができる。このような治療を必要とする恒温動物、例えばヒトに、上記化合物は、特に医薬品の形で使用される。約０．１ｇから約５ｇ、好適には０．５ｇから約２ｇである本発明の化合物の一日あたりの用量が、このように体重約７０ｋｇに対して投与される。
（図面）
図１は、試験化合物によるＫ５６２（Ａ）およびＣＥＭ（Ｂ）の腫瘍細胞株の成長の抑制を示す。カルセイン（Ｃａｌｃｅｉｎ）ＡＭの存在下で細胞毒性を測定した。活性は、最大活性のパーセントで表わされている（抑制剤非存在下）。ｉＰ：イオペンチルアデニン；２ＦＢＡＰ：６−（２−フルオロベンジルアミノ）プリン；２ＣｌＢＡＰ：６−（２−クロロベンジルアミノ）プリン；２ＯＨ−３ＯＣＨ₃ＢＡＰ：６−（２−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリン。
【００４５】
図２は、基質Ｘ−ｇａｌ（５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド）のβ−グラクトシダーゼの作用により青色に変色したヒトの線維芽細胞（Ｂ）（他の細胞（Ａ））の培養液中の老化細胞を示す。
【００４６】
図３は、サイトカイニン６−（２−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリンの適用後の腫瘍細胞ＭＣＦ−７細胞株中の誘導アポトーシスを示す。Ａ：ＭＣＦ−７、アポトーシス細胞：６ｈ、１２、２０μＭ、Ｂ：ＭＣＦ−７、２級ネクローシス細胞（すなわちアポトーシス後のネクローシス）、１２ｈ、１２、４０μＭ、Ｃ：ＭＣＦ−７、ネクローシス細胞、２４ｈ、１２、４０μＭである。アネキシン（Ａｎｅｘｉｎ）ＦＩＴＣＶ（モルプローブ（Ｍｏｌ．Ｐｒｏｂｅｓ））およびヨウ化プロピジウムの変色：アネキシン−緑、ＰＩ−赤）
図４はアネキシン（緑色蛍光）およびヘーヒステム（Ｈｏｅｃｈｓｔｅｍ）３３２８５（青色蛍光）の株を使用したアポトーシス細胞の検出を示す。６−（２−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリンによるＭＣＦ−７腫瘍細胞の処理後、「オリンパス画像解析」を使用して分析した。Ａ，Ｂ−制御細胞は、処理なし。Ｃ，Ｄ−アポトーシス細胞（クロマチン凝縮）。Ａ，Ｃ−蛍光顕微鏡；Ｂ，Ｄ−蛍光画像解析。
【００４７】
図５は、切り取られた小麦葉片中のクロロフィルの保持力に対する試験化合物の効果を示す。値は、培養前の新鮮な葉の最初のクロロフィル含有量が％で示されている。誤差線は、５回の反復測定に対する平均の標準偏差を示す。点線は、サイトカイニンなしの制御培養を示し、３１．７±０．９である。
【００４８】
図６は、タバコカルス培養液の生体重収率についての試験化合物の効果を示す。誤差線は、５回の反復測定に対する平均の標準偏差を示す。点線は、サイトカイニンなしのなしの制御処理の値を示し、２．２±０．４である。
【００４９】
図７は、アマランタスコーダタス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ ｃａｕｄａｔｕｓ）の子葉／胚軸の外植片のベータシアニン合成の暗分化誘導についての試験化合物の効果を示す。誤差線は、５回の反復測定に対する平均の標準偏差を示す。点線は、追加のサイトカイニンなしの制御培養の値を示し、０．０４３±０．０９である。値は、Ｏ．Ｄ．単位での５３７と６２０ｎｍとの差を表す。
【００５０】
図８は、培養時間の関数である少なくとも１つの褐色葉を有する外植片の相対数を示す。（□：ＢＡ，○：ｍＴ，△：ｍＭｅＯＢＡＰ）
図９には、培養時間の関数である少なくとも１つの枯れた葉の外植片の相対数が示されている。（□：ＢＡ，○：ｍＴ，△：ｍＭｅＯＢＡＰ）
図１０では、左にＢＡを含む培養液による枯れたローザハイブリア（Ｒｏｓａ ｈｙｂｒｉａ）の外植片が、右にｍＭｅＯＢＡを含む培養液による１２１日の培養後の繁茂したローザハイブリアの苗が示されている。（（□：ＢＡ，○：ｍＴ，△：ｍＭｅＯＢＡＰ）
次の実施例は、本発明を例示するものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００５１】
実施例１
６−（２−クロロベンジルアミノ）プリン
６−クロロプリン３ｍｍｏｌを１５ｍＬのブタノールに溶解した。続いて４ｍｍｏｌの３−クロロベンジルアミンと５ｍｍｏｌのトリエチルアミンを加え、混合物を９０℃で４時間加熱した。冷却後、沈殿物を濾別し、冷水およびｎ−ブタノールで洗浄し、エタノールまたはジメチルホルムアミドで再結晶した。Ｍ．ｐ．２５２℃、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ：濃ＮＨ₄ＯＨ、８：２：０．２、ｖ／ｖ／ｖ）、単独スポット；ＨＰＬＣ：純度＞９８％。収率９５％）
【００５２】
【表１】

【００５３】

【００５４】
実施例２
アデニン１０ｍｍｏｌ、メトキシベンズアルデヒド１２ｍＬ、９８−１００％のギ酸５ｍＬの混合物を３日間還流した。ギ酸を蒸発させた後、最終生成物を冷却し、続いて４０ｍＬのジエチルエーテルで洗浄した。固体残留物を６０ｍＬの水で煮沸し濾別し、さらに組成生物をエタノールで再結晶した。収率４５％
【００５５】
【表２】

【００５６】
実施例３
新規化合物の試験管内細胞毒性活性
使用したパラメータの１つは、細胞毒性検定用の基準として、生細胞の代謝活性である。例えば、カルセインＡＭを使用するマイクロタイター検定は、細胞増殖や細胞毒性を定量するために広く使用されている。例えば、この検定は、薬の適正審査（ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）プログラムや、化学受容性検査で使用される。代謝的に活性な細胞のみがカルセインＡＭを開裂させるため、これらの検定は生細胞を単独で検出する。減少したカルセインＡＭの量は、培養液中の生細胞の数に対応する。
【００５７】
ヒトのＴ−リンパ芽球性白血病の細胞株ＣＥＭ；前骨髄性ＨＬ−６０または単球性Ｕ９３７白血病；乳癌細胞株ＭＣＦ−７、ＢＴ５４９、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１；グリア芽腫Ｕ８７ＭＧ細胞；子宮ガン細胞ＨＥＬＡ；肉腫細胞Ｕ２ＯＳやＳａｏｓ２；肝臓ガンＨｅｐＧ２；マウス線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３、マウス不随骨髄マクロファージＢ２．４やＢ１０Ａ．４；Ｐ３８８Ｄ１やＬ１２１０白血病；Ｂ１６やＢ１６Ｆ１０黒色腫が、化合物の通常の適正審査に使用される。細胞は、ヌンク／コーニング８０ｃｍ²プラスチック組織培養フラスコ中で保持され、細胞培養液（５ｇ／ｌグルコース入りのＤＭＥＭ、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、１０％ウシ胎仔血清や炭酸水素ナトリウム）中で培養される。
【００５８】
特有の細胞型や期待した目標細胞密度（細胞成長特性に基づき、穴（ｗｅｌｌ）あたり２．５００−３０．０００個の細胞）に従って調製され希釈された細胞懸濁液を、ピペット（８０μｌ）により９６／穴マイクロタイタープレート中に加えた。接種は安定化のため２４時間３７℃で５％ＣＯ₂の前段階培養期間にした。予定の検査濃度の４回希釈液を、時間０で一定分量２０μｌだけマイクロタイタープレートの穴に加えた。通常、検査化合物は、６の４回希釈液で評価される。通常の検査では、最高の穴の濃度は、２６６．７μＭであったが、作用物質に依存する変化の問題であることがある。全ての薬の濃度は反復して調査した。検査化合物による細胞の培養は、７２時間３７℃、５％ＣＯ₂雰囲気下、１００％の湿度で持続させた。培養期間の終わりに、細胞をカルセインＡＭを使用することにより検定した。１０マイクロリットルの原液を、ピペットで各穴に入れ、さらに１時間培養した。蛍光（ＦＤ）は、ラボシステムＦＩＡ読取蛍光走査計（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍ ＦＩＡ Ｒｅａｄｅｒ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｅ Ａｓｃｅｎｔ）（ＵＫ）により測定した。腫瘍細胞の活着（ＧＩ₅₀）は、以下の式を用いて計算した：ＴＣＳ＝（ＦＤ_{drug exposed wells}／ｍｅａｎＦＤ_{control wells}）×１００％。ＧＩ₅₀値、すなわち、５０％の腫瘍細胞の致死薬濃度は、得られた用量応答曲線から計算した（図１）。
【００５９】
新規化合物の細胞毒性は、様々な組織発生源または種起源の細胞株パネルで検査した（表３）。検査した全ての腫瘍細胞株で等しい活性が見出だされたことがここでわかるが、悪性細胞、例えば、ＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞はや普通のヒトのリンパ球は、細胞毒性を誘導する合成抑制剤に対して抵抗性があった。表３に示すように、ＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞や普通のヒトのリンパ球のＧＩ₅₀は２５０μＭより常に大きい。有効な新規誘導体は１０−５０μＭに近い濃度で腫瘍細胞を殺した。
【００６０】
【表３】

【００６１】

【００６２】
実施例４
腫瘍細胞中のアポトーシス誘導新規化合物
新規化合物による誘導細胞毒性の機構を分析するため、細胞死の主な他の形態、ネクローシスから、アポトーシスを識別することが重要である。まず、組織レベルでは、アポトーシスは、わずかにまたは全く炎症性を起こさないが、これは、隣接する細胞、特にマクロファージは、むしろ細胞外の流体、細胞の取り込み収縮部分中に放出されるためである。これに対してネクローシスでは、細胞成分は細胞外の流体中に放出され、これにより、近傍の細胞に刺激性の効果を与え、炎症を起こす。第２に、細胞レベルでは、アポトーシス細胞は、細胞質の収縮や水疱形成、ミトコンドリアなどの細胞小器官の構造の保存、染色体の凝縮やマージネーション（ｍａｒｇｉｎａｔｉｏｎ）、核分裂、アポトーシス体の形成を示すが、これらのすべてが全細胞の型で見られるわけではない。第３に、分子レベルでは、生化学処理工程の数は、アポトーシスの誘導において重要な役割を果たす。しかしながら、これらの大部分は、良く理解されておらず、また、蛋白分解酵素や核酸分解酵素の活性化の原因となり、最終的には、鍵となる生化学高分子である蛋白質やＤＮＡを破壊する。
【００６３】
細胞死のネクローシス様態に対してアポトーシスを検出するためには、２つの独立した方法が用いられる：電子顕微鏡による形態の評価や、流動細胞数測定によるＤＮＡ断片の分析である。
【００６４】
ＨＬ−６０細胞株は、７０μＭの濃度の新規誘導体入りの、または新規誘導体なしの６−穴型の培養プレート中で３７℃、５％ＣＯ₂で３−２４時間培養される。次の培養では、細胞が粒状化され、ハンクの緩衝塩溶液で洗浄され、以下に述べるように処理される。
【００６５】
細胞は２％のグルタールアルデヒド／ＰＢＳ中に懸濁させ、一晩４℃で定着させ、その後、粒状化し１％の寒天（新規の寒天、ディフコ社製）中に埋め込んだ。定着された細胞を含む寒天の塊は、エポキシド重合させ、超薄型に分割し、オスミウムテトラオキシドを後で添加し、酢酸ウランと対比し、電子顕微鏡で調査した。
【００６６】
初期層対比の顕微鏡調査は、処理されたＨＬ−６０株がアポトーシス細胞の典型的な形態学的特徴を示すことを示唆しており、このことは、後に電子顕微鏡で確認された（図２および３）。アポトーシスの典型的な形態的基準は、検査した全ての新規誘導体で処理した細胞中で見られた。すなわち、染色体凝縮、核分裂、細胞質の小疱形成、またはアポトーシス体の形成などである。
【００６７】
実施例５
免疫抑制活性
特異的な細胞の免疫の最も重要なパラメータの１つは、抗原や多クローン性の有糸分裂促進剤に対するリンパ球の増殖性応答である。普通の哺乳類の末梢リンパ球の大多数は、休止細胞を有する。抗原や非特異的な多クローン性の有糸分裂促進剤は、リンパ球細胞を活性化する能力を有しており、このことは、細胞内の新陳代謝の劇的な変化をともなう（ミトコンドリアの活性、蛋白質合成、核酸合成、芽細胞形成や細胞分裂）。リンパ球の増殖を選択的に抑制する能力を持つ化合物は、有効な免疫抑制剤である。試験管内の様々な検定が、リンパ球の増殖性応答を測定するために開発されている。最も使用されている方法は、³Ｈ−チミジン組替え法である。
【００６８】
細胞増殖の間、ＤＮＡは、細胞が２つの娘細胞に分割される前に複製される。細胞倍加とＤＮＡ合成との間のこの密接した関連性は、細胞分裂を評価するために非常に魅力的である。標識されたＤＮＡが細胞培養液中に加えられると、分裂しやすい細胞は標識したヌクレチオドをＤＮＡ中に組み込む。従来では、これらの検定は、通常、放射性同位体で標識したヌクレチオド、特にトリチウム化したチミジン（［³Ｈ］−ＴｄＲ）の使用を含む。組み込まれた［³Ｈ］−ＴｄＲの量は、液体シンチレーション計数により定量化される。
【００６９】
ヒトのヘパリン化された末梢血液は、肘脈に針を刺すことにより健康な有志者から得られた。血液は、ＰＢＳ中で（１：３）に希釈され、単核細胞はフィコール−ヒパーク密度勾配（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ ｄｅｎｓｉｔｙ ｇｒａｄｉｅｎｔ）（ファルマシア製、１．０７７ｇ／ｍｌ）で２２００ｒｐｍで３０分間遠心分離により分離した。遠心分離の後、リンパ球はＰＢＳで洗浄し、細胞培養液（ＲＭＰＩ１６４０、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、１０％仔ウシ血清および炭酸水素ナトリウム）中に再懸濁させた。
【００７０】
細胞は目標密度１，１００，０００セル／ｍｌに希釈され、ピペット（１８０μｌ）により９６穴のマイクロタイタープレート中に加えた。予定した検査濃度の４回希釈液を、時間０で一定分量２０μｌだけマイクロタイタープレートの穴に加えた。通常、検査化合物は６の４回希釈液で評価される。通常の検査では、最高の穴濃度は、２６６．７μＭであった。全ての薬の濃度は反復して調査した。全ての穴は、非賦活制御は例外として、５０μｌのコンカナバリンＡ（２５μｇ／ｍｌ）で活性化した。検査化合物による細胞の培養は、３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂雰囲気下、湿度１００％で持続した。培養期間の終わりに、細胞を［³Ｈ］−ＴｄＲを使用することにより検定した。
【００７１】
細胞培養液は、３７℃で６時間、５％ＣＯ₂雰囲気下、穴あたり０．５μＣｉ（５００μＣｉ／ｍｌの原液の２０μｌ）で培養した。自動セル・ハーベスターが細胞を水中に溶解させるために使用され、マイクロタイタープレートの形式でグラスファイバーフィルター上にＤＮＡを吸着させた。組み込まれていない材料が通過する間、［³Ｈ］−ＴｄＲを組み込んだＤＮＡは、フィルター上に保持された。フィルターを室温で一晩乾燥し、蛍光発光液１０−１２ｍｌとともに試料袋中に密封した。各フィルターに存在する［³Ｈ］−ＴｄＲの量（カウント毎分（ｃｐｍ））は、ベータプレート液体シンチレーション計数器でシンチレーション計数によって測定した。免疫抑制剤の有効用量（ＥＤ）は、以下の式を使用することにより計算した：ＥＤ＝（ＣＣＰＭ_{drug exposed well}／ｍｅａｎＣＣＰＭ_{control wells} ）×１００％。ＥＤ₅₀値、つまりリンパ球の５０％の増殖を抑制する薬の濃度は、得られた用量応答曲線から計算した。
【００７２】
置換アデニンの免疫抑制活性を評価するために、置換アデニンの、通常のヒトリンパ球の増殖を誘導する多クローン性の有糸分裂促進剤を抑制する能力を分析した（表３）。我々のデータは、これらの化合物が、³Ｈ−チミジン組み込みについてほんのわずかな活性のみを有することを示しているが、にもかかわらず、活性化されたリンパ球の増殖を効率的に抑制する。試験管内条件下における新規誘導体の有効免疫抑制用量は、ほぼ１−２０μＭである。
【００７３】
【表４】

【００７４】
実施例６
新規化合物の老化の抑制
本実施例で、ヒトの２倍体線維芽細胞（異なる継代接種（ｐａｓｓａｇｅ）水準におけるＨＣＡ細胞：継代接種２５−指定のＨＣＡ２５；継代接種４５−指定のＨＣＡ４５；継代接種８０−指定のＨＣＡ８０）がβ−グラクトシダーゼ活性のため変色された。細胞培養に使用される培養液は除去され、細胞はＰＮＳで２回洗浄され、ＰＢＳ中、２％ホルムアルデヒドおよび０．２％グルタールアルデヒドを含む２−３ｍｌの定着溶液で定着された。細胞は室温で５分間培養され、その後ＰＢＳで２回洗浄した。細胞は、続いて、ｐＨ６．０のクエン酸／リン酸緩衝液（５ｍＭ）中にカリウムフェリシアニド（５ｍＭ）、カリウムフェロシアニド（５ｍＭ）、ＭｇＣｌ₂（２ｍＭ）、Ｘ−ｇａｌ（５−ブロモ−４−クロロ−３−インドール−β−Ｄ−グラクトピラノシド）（１ｍｇ／ｍｌ）））を含む２−３ｍｌの溶液中、３７℃で（ＣＯ₂なしで）１から１６時間培養した。上記培養期間の後、細胞試料が観察され、青い細胞の存在が検出された。このことは、Ｘ−ｇａｌが開裂したことを示唆している（老化細胞陽染）。この実験で、老化細胞は青色に変色したが、基質のβ−グラクトシダーゼの作用のためにその他の細胞は青色に変色しなかった（図４）。
【００７５】
【表５】

【００７６】
表５に示すように、継代接種の数の増加にともなって、染色も濃くなった。最も古い細胞では、明るい青からほとんどくすんだ色までの青い細胞のみ存在した。Ｎ₆−置換アデニン誘導体は、８０継代接種後、老化細胞の極めて低い水準を維持する際に非常に有効であった。長期の持続的培養の場合には、処理された細胞は制御された細胞よりも３０％長い期間生存することができた。
【００７７】
実施例７
冬小麦葉片で試験した新規化合物の老化抑制性
冬小麦の種、トリチカム アエスチバム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ）、ｃｖ．ヒアワード（Ｈｅｒｅｗａｒｄ）を流水下で２４時間洗浄し、その後、クノープ液で浸したバーミキュライト上に蒔いた。これらを５０μｍｏｌ．ｍ^-2．ｓ^-1で１６／８時間の光周期で２５℃の成長室に配置した。７日後、最初の葉が十分に発育し、第２の葉が成長し始めた。第１の葉の切片部分は、およそ長さ３５ｍｍで、５つの苗から取り除かれ、総重量１００ｍｇになるまでわずかに刈り込んだ。５つの葉片の根元の端部は、それぞれ１５０μｌのサイトカイニン溶液を含むマイクロタイターポリスチレンプレートの穴に配置した。プレート全体は、葉の部分が乾燥するのを防ぐため蒸留水を浸したティッシュペーパーで裏地をつけたプラスチックの箱に入れた。２５℃の暗闇中での９６時間の培養後、葉を取り除き、５ｍｌの８０％エタノール（ｖ／ｖ）中、８０℃で１０分間加熱することによりクロロフィルを抽出した。試料の容積は、８０％エタノール（ｖ／ｖ）を５ｍｌ加えることにより回復させた。
【００７８】
抽出物の吸光度は６６５ｎｍで記録した。さらに、脱イオン化された水中で培養された新鮮な葉および葉片からのクロロフィル抽出物を測定した。得られたデータから、最高活性の濃度は各試験化合物に対して選択された。上記濃度における化合物の相対的な活性を計算した（表６）。１０^-4Ｍの６−ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）で得られた活性を１００％と見なす。示された値は５回の反復測定の平均で、実験全体は２回繰り返した。試験されるサイトカイニンは、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させ、溶液は蒸留水で１０^-3Ｍとした。この株は、さらに蒸留水で１０^-8Ｍから１０^-4の濃度に希釈した。ＤＭＳＯの最終的な濃度は０．２％を超えず、それゆえ、使用した検定系の生化学活性に影響を与えなかった。
【００７９】
【表６】

【００８０】

【００８１】
実施例８
植物細胞分裂の新規化合物の賦活効果
サイトカイニン依存性タバコカルスニコチアーナタバカム（ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）Ｌ．ｃｖ．ウィスコンシン３８を、２５℃の暗闇中、１リットルあたり、４μｍｏｌニコチン酸、２．４μｍｏｌ塩酸ピロリドキシン、１．２μｍｏｌチアミン、２６．６μｍｏｌグリシ、１．３７μｍｏｌグルタミン、１．８μｍｏｌミオ−イノシトール、３０ｇスクロース、８ｇ寒天、５．３７μｍｏｌα−ナフチル酢酸（ＮＡＡ）、０．５μｍｏｌベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を含む改良型のムラシゲ−スコーグ培養液に維持した。継代培養は３週間ごとに行なった。生物学検定の前の１４日目に、カルス組織は６−ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）なしの培養液に移した。生物学活性は、４週間培養後の新鮮なカルス重量の増加から決定した。５回の反復測定が各サイトカイニン濃度に対して行なわれ、試験全体は２回繰り返した。得られたデータから、最高活性の濃度トカイニン濃は各試験化合物に対して選択された。この濃度における化合物の相対的な活性を計算した（表６）。１０^-4Ｍの６−ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）で得られた活性を１００％と見なす。試験されるサイトカイニンは、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させ、溶液は蒸留水で１０^-3Ｍとした。この株は、さらに生試験のために使用した各溶媒液で水で１０^-8Ｍから１０^-4Ｍの濃度に希釈した。ＤＭＳＯの最終的な濃度は０．２％を超えず、それゆえ、使用された検定系の生化学活性に影響を与えなかった。
【００８２】
【表７】

【００８３】
実施例９
アマランタス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ）の生物検定における新規化合物の試験
標準的なアマランタス生物検定はいくつかの改良をともなって行われた。
【００８４】
アマランタスコーダタスの変種のアストロパープレア（ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅａ）の種を１０％Ｎ−クロロベンゼンスルホンアミド（ｗ／ｖ）中で１０分間表面殺菌し、脱イオン水で５回洗浄した。これを脱イオン水で飽和させたティッシュを入れた１４ｃｍのぺトリ皿に配置した。２５℃の暗闇中、７２時間培養後、苗の根を切り取った。２つの子葉と胚軸からなる外植片は、５ｃｍのぺトリ皿内の、ｐＨ６．８の１０μｍｏｌＮＡ₂ＨＰＯ₄−ＫＨ₂ＰＯ₄、５μｍｏｌチロシンおよび試験されるサイトカイニンを含む培養液１ｍｌ中に浸した２層のろ紙上に置いた。１皿あたり２０個の外植片が存在している。実験手順は暗室中、緑色の安全な光のもとで行なわれた。２５℃の暗闇中、４８時間の培養後、ベータシアニンは３．３３μＭの酢酸４ｍｌ中で外植片を凍結させることにより抽出される。ベータシアニンの濃度は、５３７ｎｍおよび６２０ｎｍにおける吸光度を測定することにより以下のようにして決定される：ΔＡ＝Ａ_537nm−Ａ_620nm。得られたデータから、この濃度における最高活性の濃度が各化合物に対して選択された（表６）。１０^-4Ｍの６−ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）で得られた活性を１００％と見なす。表８に示された値は、５回の反復測定の平均で、実験全体は２回繰り返した。
【００８５】
試験されるサイトカイニンはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させ、溶液は蒸留水で１０^-3Ｍとした。この株は、さらに生試験に使用される各溶媒液中で１０^-8から１０^-4Ｍの濃度にさらに希釈された。ＤＭＳＯの最終的な濃度は０．２％を超えず、それゆえ、使用された検定系の生化学活性に影響を与えなかった。
【００８６】
【表８】

【００８７】
実施例１０
バラ（ローザマルチフローラ（Ｒｏｓａ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ））の根の試験管内および試験管後の増殖についての新規誘導体の効果
本実験の目的な、新規化合物が組織培養実用において実用性を有しているかどうかを試験することである。ローザハイブリア（植木鉢用バラ栽培品種）はポリカーボネ−ト蓋にネジのついた３５０ｍｌの容器で培養した。各培養容器は１００ｍｌの高圧滅菌（１２０℃、２０分）した培養液を含む。培養液は、４０μＭｍ^-2ｓ^-1ＰＡＲにおける１６時間の光周期のもとで２３±２℃に維持した。基礎培養液（ＢＭＲ）は、ムラシゲ、スコーグ（１９６２）マクロ元素、マクロ元素およびビタミン、９５μＭのＮａＦｅＥＤＴＡ、５５５μＭミオ−イノシトール、１１１ｍＭスクロース、１．３３２ｍＭグリシン、６８４μＭのＬ−グルタミンおよび７ｇ／ｌの寒天を含む。この培養液は、１０μＭのＢＡ、ｏＭｅＯＢＡＰまたはｍＭｅＯＢＡＰ（それぞれ化合物ｎｏ．１４および１５）で補充された。制御培養液は、サイトカイニンを全く含まない。８週間の培養期間の後、外植片１つあたりの誘導された芽条（ｓｈｏｏｔｓ）の数が、根の数／外植片、および根の全長／外植片とともに測定された。根は取り除かれ、外植片（芽条の塊）は、肥沃でない泥炭に植えられた。被覆部（ｆｏｇ）単位で４週間の順化後、根の数および根の長さを測定した。
【００８８】
予想したように、サイトカイニンを含まない培養液はほとんど芽を発芽させなかった。もとの芽の外植片は、よく根を張った良質な単独の芽を発芽させた。ＢＡＰは、芽の高い増殖率を与えたが、芽はうまく根づかなかった。検査した新しいＢＡＰ誘導体は、ＢＡＰ自身と比較した場合、新芽の生成や発根を著しくより良好に誘導する（表９）。
【００８９】
【表９】

【００９０】
実施例１１
組織培養バラ（ローザハイブリア）の早期芽条老化抑制性
組織培養バラは、老化症状によって傷む。葉は褐変し始め、数週間後には、容器中の全外力片が枯れる。例えば、プラスチックの覆いにより、容器の空気混和が抑制されると、この症状は早期に始まる。このことは、エチレンやその他のガス成分が含まれていることを示す。培養液に適用されるサイトカイニンはエチレンを誘発するため、有望な新しいサイトカイニン化合物をこの系で試験する価値があると思われた。
【００９１】
ローザハイブリアは「パイリン（Ｐａｉｌｉｎ）」（切バラ）はポリカーボネ−ト蓋にネジのついた３５０ｍＬの容器で培養された。各培養容器は１００ｍｌの高圧滅菌した培養液を含む。培養液は、４０μＭｍ^-2ｓ^-1ＰＡＲにおける１６時間の光周期のもとで２３±２℃に維持した。基礎培養液（ＢＭＲ）は、ムラシゲ、スコーグ（１９６２）マクロ元素、マクロ元素およびビタミン、３６．７ｍｇ／ｌのＮａＦｅＥＤＴＡ、５０ｍｇ／ｌのＮａＦｅＥＤＤＨＡ、１００ｍｇ／ｌμＭミオ−イノシトール、３０ｇ／ｌスクロース、１００ｍｇ／ｌグリシン、５０ｍｇ／ｌパントテン酸ナトリウム、１００ｍｇ／ｌのＬ−グルタミンおよび７ｇ／ｌの寒天を含む。この培養液は１０μＭのＢＡ、ｍＴ、ｍＭｅＯＢＡＰで補充された。制御培養液はサイトカイニンを全く含まない。６週間の培養期間の後、老化症状の計測を開始した。各植物体に最初の褐色の葉が見られた日（図８）、植物体全体が完全に枯れた日（図９、１０）が示されている。
【００９２】
ＢＡ入りの培養液で、枯れた植物体の相対数はＳ字状曲線のようになり、おそらくエチレンにより引き起こされる、自己触媒的な老化効果を示唆している。上部空間のエチレン濃度を測定することは興味深い。ｍＴやｍＭｅＯＢＡＰでは状況は改善された。ｍＭｅＯＢＡＰは明らかに最も良好な化合物である。１２１日後でさえ、ほとんど全ての植物体がまだ生存していた。ｍＭｅＯＢＡＰを含む培養液ではいくつかの褐色の葉は避けることができるが、これらの植物体は、容易に次の継代培養に使用できる。ｍＭｅＯＢＡＰの使用は、バラ（ローザハイブリア）の微細繁殖の著しい改善である。
【００９３】
実施例１２
乾燥カプセル
５０００個のカプセルは、それぞれが前に述べたまたは以下の実施例の化学式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩの化合物のうち１種の０．２５ｇを活性成分として含み、以下のようにして調製される。
【００９４】
組成
活性成分１２５０ｇ
タルク１８０ｇ
小麦澱粉１２０ｇ
ステアリル酸マグネシウム８０ｇ
ラクトース２０ｇ
調製工程：上記粉末物質を０．６ｍｍメッシュの篩を通して圧縮した。カプセル充填機を用いて混合物の０．３３ｇの分量をゼラチンカプセルに移した。
【００９５】
実施例１３
軟カプセル
５０００個の軟ゼラチンカプセルは、それぞれが前に述べたまたは以下の実施例の化学式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩの化合物のうち１種の０．０５ｇを活性成分として含み、以下のようにして調製される。
組成
活性成分２５０ｇ
ラウログリコール２リットル
調製工程：粉末活性含有物をラウログリコール（登録商標）（プロピレングリコールラウレート、ガテフォシュＳ．Ａ．社製、セントプリ−スト、フランス）中に懸濁させ、湿式粉砕機で１から３μｍの粒子径に砕粒した。その後、各カプセル容器に混合物の０．４１９ｇの分量を、カプセル充填機を用いて軟ゼラチンカプセルに移した。
【００９６】
実施例１４
軟カプセル
５０００個の軟ゼラチンカプセルは、それぞれが前に述べたまたは以下の実施例の化学式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩの化合物のうち１種の０．０５ｇを活性成分として含み、以下のようにして調製される。
組成
活性成分２５０ｇ
ＰＥＧ、１リットル
ツウィーン８０、１リットル
調製工程：粉末活性含有物をＰＥＧ４００（分子量３８０から約４２０のポリエチレングリコール、シグマ社製、フルカ社製、アルドリッチ社製、ＵＳＡ）およびツウィーン（登録商標）８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、アトラスケミカル株式会社製や、ＵＳＡ、ＵＳＡのシグマ社、フルカ社、アルドリッチ社により供給される）に懸濁させ、湿式粉砕機で１から３μｍの粒子径に挽きつぶした。その後、各カプセル容器に混合物の０．４３ｇの分量を、カプセル充填機を用いて軟ゼラチンカプセルに移した。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明の新しいＮ⁶−置換アデニンに基づくヘテロ環状化合物は、特に薬学産業における診断や治療方法、化粧品産業、生物工学や農業の分野で有用である。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】試験化合物によるＫ５６２（Ａ）およびＣＥＭ（Ｂ）の腫瘍細胞株の成長の抑制を示す図である。
【図２】基質Ｘ−ｇａｌのβ−グラクトシダーゼの作用により青色に変色したヒトの線維芽細胞（Ｂ）および他の細胞（Ａ）の培養液中の老化細胞を示す図である。
【図３】サイトカイニン６−（２−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）プリンの適用後の腫瘍細胞ＭＣＦ−７細胞株中の誘導アポトーシスを示す図である。
【図４】アネキシンおよび３３２８５の株を使用したアポトーシス細胞の検出を示す図である。
【図５】小麦葉片中のクロロフィルの保持力に対する試験化合物の効果を示す図である。
【図６】タバコカルス培養液の生体重収率についての試験化合物の効果を示す図である。
【図７】アマランタスコーダタスの子葉／胚軸の外植片のベータシアニン合成の暗分化誘導についての試験化合物の効果を示す図である。
【図８】培養時間の関数である少なくとも１つの褐色葉を有する外植片の相対数を示す図である。
【図９】培養時間の関数である少なくとも１つの枯れた葉の外植片の相対数が示す図である。
【図１０】ＢＡを含む培養液による枯れたローザハイブリアの外植片およびｍＭｅＯＢＡを含む培養液による１２１日の培養後の繁茂したローザハイブリアの苗を示す図である。【Technical field】
[0001]
The present invention is a novel N having properties of anticancer, mitonic, immunosuppressive and anti-senescence on plant, animal and human cells. ⁶ -Heterocyclic derivatives based on substituted adenines and methods for their preparation, as well as drugs containing these derivatives as active compounds, use of pharmaceutical compositions, biotechnological processes, cosmetics, medicine in agriculture, use of derivatives for the preparation of cosmetics About.
[Background]
[0002]
A well-studied plant regulatory compound is a plant hormone. Among them, cytokinin occupies an important position. Structurally, all compounds that naturally generate cytokinins are N ⁶ -Belongs to the family of substituted adenine heterocyclic derivatives and plays an important role in many different industrial processes, including cell division, growth and differentiation as well as flower and fruit growth. In application, they can interrupt seed dormancy, suppress apical dominance, stimulate side shoot growth, delay cell senescence, increase stress tolerance, It can affect cell membrane permeability and cause the accumulation of various metabolites (letham a Palni 1983-Ann. Rev. Plant. Physiol. 34: 163-197, 1983, Mok, D.W. S., Mok, MC: Cytokinins: Chemistry, Activity and Function. CRC Press, Boca Raton, London, Tokyo 1994).
[0003]
Interaction with auxin is particularly important in stimulating cell division and controlling cell differentiation in plant tissue culture (SKOOG, Miller 1957). The general differentiation of cytokinins as a collection of plant growth regulators is also based on this effect (Skoog, F., Armstrong, DJ: Cytokinins.-Ann. Rev. Plant Physiol. 21: 359- 384, 1970). 6-Benzylaminopurine (BAP) is commonly used in culture in vitro as an active cytokinin for plants with chitenin. Although this compound has long been considered a pure synthetic material, its natural presence in plants has recently been revealed. There are also compounds that usually have limited or no biological activity shown as cytokinins (7- or 9-glucosides, amino acid combinations, some hyperdenatured cytokinins in tRNAs). For the above reasons, N ⁶ -Compounds structurally derived from substituted adenine are designated as cytokinins in the above application.
[0004]
Since all living microorganisms on the planet have evolved together for millions of years, the existence of regulatory interactions of plant compounds exists in animals and humans, like cytokinins. Can be considered. Cytokinin-derived compounds preferably affect many different molecular mechanisms in animal and human cells. In recent years, a new generation of antiinflammation, anticancer, immunosuppressive, antiviral and other drugs ⁶ -Found to be based on substituted purines or derivatives thereof.
[0005]
The object of the present invention is an anti-cancer, immunosuppressive, growth-regulatory, morphogenic, with improved selectivity and efficiency index, ie less toxic and more potent than previously known homologous compounds It is to provide a chemically active and aging resistant heterocyclic compound.
DISCLOSURE OF THE INVENTION
[0006]
The object of the present invention is that R2 is hydrogen, halogen, hydroxy, alkoxy, amino, hydrazo, mercapto, carboxyl, cyano, nitro, amide, sulfo, sulfoamide, acylamino, acyloxy, alkylamino, dialkylamino, alkylmercapto, cycloalkyl In the carbamoyl group, R6 is alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloalkylalkyl, arylalkyl, heteroalkyl, heteroarylalkyl, cycloheteroalkylalkyl, or R6′-X where X is — O—, —S—, —NH—, —N (C 1-6 alkyl) —, wherein R 6 ′ is hydrogen, alkyl, substituted alkyl, acyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, aryl, substituted aryl, heterocycle, Hetero ant Le, substituted heteroaryl, arylalkyl, cycloheteroalkyl, substituted cycloheteroalkyl, heteroarylalkyl, heteroalkyl, cycloalkylalkyl, cycloheteroalkyl, amido or sulfo group,
General substituents have the same meaning as the corresponding reactive groups defined in this description, “halogen” refers to fluorine, bromine, chlorine, iodine atoms, and “hydroxy” refers to —OH A “mercapto” group refers to a —SH group, “alkyl” is a reaction that exemplifies the above terms such as methyl, propyl, tert-butyl, allyl, vinyl, ethynyl, propargyl, hexen-2-yl, and the like. Saturated or unsaturated, branched or unbranched C selected from the group ₁ -C ₆ “Substituted alkyl” refers to a chain and includes 1 to 5 substituents such as hydroxyl, mercapto, alkylmercapto, halogen, alkoxy, acyloxy, amino, acylamino, hydrazino, carbamoyl, amide, carboxyl, sulfo, acyl, guanidino, etc. Refers to alkyl as indicated herein, whereby the reactive group is attached to any carbon atom of the alkyl moiety, “alkoxy” refers to the group —OR, and R is alkyl as defined herein, substituted alkyl. , Aryl, arylalkyl, substituted arylalkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloheteroalkyl or substituted cycloheteroalkyl, where “alkylmercapto” refers to the —SR group and R is as defined for the “alkoxy” group. ,
“Sulfo” is —SO _Three R refers to R, where R is H, alkyl or substituted alkyl as defined herein, and “sulfoamide” is —SO ₂ Refers to an NRR ″ group, R and R ″ are H, alkyl or substituted alkyl, “acyl” refers to a —C (O) R group, where R is hydrogen, alkyl, substituted alkyl, as defined herein; Aryl, arylalkyl, substituted arylalkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, where “aryloxy” refers to the group —OAr, where Ar is aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl as defined herein , “Alkylamino” refers to the group —NRR ′ where R and R ′ are independently hydrogen, alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl as defined herein, "Represents a -C (O) NRR 'group, wherein R and R' are independently hydrogen, alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted R, heteroaryl, substituted heteroaryl, “carboxyl” refers to a —C (O) OR group, where R is hydrogen, alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted hetero, as defined herein. Aryl, “acylamino” refers to —NHCOR, wherein R is alkyl, substituted alkyl, heterocycle, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl as defined herein;
“Carbamoylamino” refers to NHCOOR, R is alkyl or aryl as defined herein, “aryl” or “ar” is phenyl or biphenyl, or at least one ring is 1,2,3 , 4-tetrahydronaphthyl, naphthyl, anthryl, aromatic fused carbocycle having at least one aromatic ring, such as a polycondensed ring, such as phenanthryl, wherein “substituted aryl” is halogen as defined herein, Aryl shown here optionally substituted with 1 to 5 functional groups such as alkyl, hydroxy, amino, acylamino, carbamoylamino, hydrazino, mercapto, alkoxy, alkylmercapto, alkylamino, amide, carboxyl, nitro, sulfo Pointing,
“Heterocycle” refers to an unsaturated or aromatic carbocyclic group having at least one heteroatom such as N, O, S, etc. in the ring, wherein the ring is a single group such as pyranyl, pyridyl, furyl. A ring or a polycondensed ring such as quinazolinyl, purinyl, quinolinyl, benzofuranyl, as defined halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkyl “Heteroaryl” refers to a heterocycle in which at least one heterocycle is aromatic, and may be optionally substituted with mercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, etc. `` Heteroaryl '' means a defined halogen, amino, hydride Optionally mono- or polysubstituted by 1 to 5 functional groups such as xyl, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamido Refers to the heterocyclic ring
“Arylalkyl” refers to the group —R—Ar, where Ar is an aryl group, R is an alkyl or substituted alkyl group, and the aryl group is a halogen, amino, acylamino, carbamoylamino, hydrazino, acyloxy as defined herein. , Alkyl, hydroxyl, alkoxy, alkyl mercapto, alkylamino, amide, carboxyl, hydroxy, aryl, nitro, mercapto, sulfo, and the like, which may be optionally substituted, “heteroalkyl” means — R-Het refers to Het is a heterocycle group, R is an alkyl group, and the heteroalkyl group is a halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino as defined herein before , Carbamoylamino, acylo Shi, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amido, sulfo, due sulfonamide, may also be also be substituted without optionally substituted,
“Heteroarylalkyl” refers to —R—Het-Ar, where HetAr is a heteroaryl group, R is an alkyl or substituted alkyl group, wherein the heteroarylalkyl group is a halogen, as hereinbefore defined, “Cycloalkyl” is a divalent group containing 3 to 15 carbon atoms, optionally substituted with alkyl, substituted alkyl, alkoxy, alkyl mercapto, nitro, thiol, sulfo, etc. Cyclic or polycyclic alkyl groups, wherein “substituted cycloalkyl” is as defined herein before, halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkyl Amino, alkyl mercapto, carboxyl, amide, sulfo It refers to a cycloalkyl group comprising from 1 to 5 substituents selected from the group consisting of a sulfonamide,
“Cycloheteroalkyl” refers to a cycloalkyl group that is defined as having at least one ring methylene group replaced by a reactive group selected from the group NH, OH, SH; 1 to 5 such as halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, etc. as defined hereinbefore Refers to a cycloheteroalkyl group defined as containing two substituents, “cycloalkylalkyl” refers to a —R-cycloalkyl group where cycloalkyl is a cycloalkyl group and R is alkyl or substituted alkyl; The cycloalkyl group is defined here. Optionally substituted with halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, etc. May be replaced,
“Cycloheteroalkylalkyl” refers to the group —R-cycloheteroalkyl wherein R is alkyl or substituted alkyl, where the cycloheteroalkyl group is halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, as previously defined herein. Racemates of the above compounds, which may be optionally substituted with mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, etc. Are optical isomers and salts,
[0007]
[Chemical 1]

[0008]
N of general formula I having formula I ⁶ -A heterocyclic compound based on substituted adenine or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0009]
The following derivatives are particularly preferred: That is: 6- (2-hydroxy-3-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5-chlorobenzylamino) purine, 6- ( 2-hydroxy-6-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-3-iodobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-4-iodobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5) -Iodobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-6-iodobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-3-bromobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-4-bromobenzylamino) Purine, 6- (2-hydroxy-5-bromobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-6-bromobenzyl) Mino) purine, 6- (2-hydroxy-3-fluorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-4-fluorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5-fluorobenzylamino) purine, 6 -(2-hydroxy-5-fluorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-6-fluorobenzylamino) purine, 6- (2,3-dihydroxy-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (2 , 5-dihydroxy-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-methoxybenzylamino) purine,
6- (2,3-dihydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,5-dihydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-4-methoxybenzylamino) purine 6- (2,3-dihydroxy-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2,3-dihydroxy-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2,5-dihydroxy-4-chlorobenzylamino) purine Purine, 6- (2,6-dihydroxy-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-4-bromobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-4-iodobenzylamino) ) Purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-chlorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-bromobe) Dilamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-iodobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-fluorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3,5 -Dichlorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3,5-dibromobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3,5-diiodobenzylamino) purine,
6- (2,6-dihydroxy-3,5-difluorobenzylamino) purine, 6- (2-fluorobenzylamino) purine, 6- (3-fluorobenzylamino) purine, 6- (4-fluorobenzylamino) Purine, 6- (2-bromobenzylamino) purine, 6- (3-bromobenzylamino) purine, 6- (4-bromobenzylamino) purine, 6- (2-iodobenzylamino) purine, 6- (3 -Iodobenzylamino) purine, 6- (4-iodobenzylamino) purine, 6- (2-chlorobenzylamino) purine, 6- (3-chlorobenzylamino) purine, 6- (4-chlorobenzylamino) purine , 6- (2-acetylbenzylamino) purine, 6- (3-acetylbenzylamino) purine, 6- (4-acetylbenzyl) Mino) purine, 6- (3-carboxybenzylamino) purine, 6- (4-carboxybenzylamino) purine, 6- (2-acetoxybenzylamino) purine, 6- (3-acetoxybenzylamino) purine, 6- (4-acetoxybenzylamino) purine,
6- (2-nitrobenzylamino) purine, 6- (3-nitrobenzylamino) purine, 6- (4-nitrobenzylamino) purine, 6- (2-sulfobenzylamino) purine, 6- (3-sulfo Benzylamino) purine, 6- (4-sulfobenzylamino) purine, 6- (2-chianobenzylamino) purine, 6- (3-chianobenzylamino) purine, 6- (4-chianobenzylamino) Purine, 6- (5-nitro-2-methylbenzylamino) purine, 6- (2-methylbenzylamino) purine, 6- (3-methylbenzylamino) purine, 6- (4-methylbenzylamino) purine, 6- (4-methylaminobenzylamino) purine, 6- (2-methoxybenzylamino) purine, 6- (3-methoxybenzylamino) purine, 6- 4-methoxybenzylamino) purine, 6- (2-hydroxybenzylamino) purine, 6- (3-hydroxybenzylamino) purine, 6- (4-hydroxybenzylamino) purine, 6- (4-hexylbenzylamino) Purine, 6- (4-hexyloxybenzylamino) purine, 6- (2-formylbenzylamino) purine, 6- (3-formylbenzylamino) purine, 6- (4-formylbenzylamino) purine, 6- ( 2-ethoxybenzylamino) purine, 6- (3-ethoxybenzylamino) purine,
6- (4-Ethoxybenzylamino) purine, 6- (4-ethylbenzylamino) purine, 6- (4-pentylbenzylamino) purine, 6- (4-pentyloxybenzylamino) purine, 6- (4- Phenoxybenzylamino) purine, 6- (4-phenylbenzylamino) purine, 6- (4-propylbenzylamino) purine, 6- (4-propyloxybenzylamino) purine, 6- (4-octylbenzylamino) purine , 6- (4-octyloxybenzylamino) purine, 6- (4-ethyloxybenzylamino) purine, 6- (3,4-diacetoxybenzylamino) purine, 6- (3,5-diacetoxybenzylamino) ) Purine, 6- (2,5-diaminobenzylamino) purine, 6- (3,5-dibromobenzylamino) Purine, 6- (3,5-dibromo-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,3-dichlorobenzylamino) purine, 6- (2,4-dichlorobenzylamino) purine, 6- (2, 5-dichlorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dichlorobenzylamino) purine, 6- (3,4-dichlorobenzylamino) purine, 6- (3,5-dichlorobenzylamino) purine, 6- ( 2,3,4,5-tetrafluorobenzylamino) purine,
6- (2-chloro-3,6-difluorobenzylamino) purine, 6- (5-chloro-2-fluorobenzylamino) purine, 6- (2,3,4-trifluorobenzylamino) purine, 6- (2,3,5-trifluorobenzylamino) purine, 6- (2,4,5-trifluorobenzylamino) purine, 6- (3,4,5-trifluorobenzylamino) purine, 6- (2 , 3,6-trifluorobenzylamino) purine, 6- (3-chloro-2,6-difluorobenzylamino) purine, 6- (2-chloro-6-fluorobenzylamino) purine, 6- (2,6 -Difluorobenzylamino) purine, 6- (2,4-difluorobenzylamino) purine, 6- (3,4-difluorobenzylamino) purine, 6- (2,5-difluoro Ndylamino) purine, 6- (3,5-difluorobenzylamino) purine, 6- (5-fluoro-2- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (4-fluoro-2- (trifluoromethyl) Benzylamino) purine, 6- (2-chloro-5- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (2- (difluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (3- (difluoromethoxy) benzylamino) Pudding,
6- (4- (difluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (2-fluoro-5- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (3-fluoro-4- (trifluoromethyl) benzylamino) Purine, 6- (2-fluoro-4- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (2-trifluoromethylthio) benzylamino) purine, 6- (2-fluoro- (3-trifluoromethyl) benzyl Amino) purine, 6- (2-chloro-6-fluoro-3-methylbenzylamino) purine, 6- (6-chloro-2-fluoro-3-methylbenzylamino) purine, 6- (3-chloro-2) -Fluoro-5- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (3-chloro-2-fluoro-6- (trifluoromethyl) Ndylamino) purine, 6- (2,3-difluoro-4-methylbenzylamino) purine, 6- (2,6-difluoro-3-methylbenzylamino) purine, 6- (2-fluoro-6- (trifluoro) Methyl) benzylamino) purine, 6- (3-chloro-2,6-difluorobenzylamino) purine, 6- (3- (trifluoromethylthio) benzylamino) purine, 6- (3-fluoro-4-methylbenzyl) Amino) purine,
6- (4-fluoro-3-methylbenzylamino) purine, 6- (5-fluoro-2-methylbenzylamino) purine, 6- (2-chloro-3,6-difluorobenzylamino) purine, 6- ( 4-trifluoromethylthio) benzylamino) purine, 6- (3-fluoro-5- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (2-chloro-4-fluorobenzylamino) purine, 6- (2- (Trifluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (3- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (2- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (4- (trifluoromethyl) Benzylamino) purine, 6- (4-chloro-3- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (4-fluoro-3) (Trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (3,5-bis (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (3- (trifluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (4- (tri Fluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (4- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (4-diethylaminobenzylamino) purine, 6- (3,4-dihydroxybenzylamino) purine, 6- ( 3,5-dihydroxybenzylamino) purine, 6- (3,4-dihydroxybenzylamino) purine,
6- (2,3-ethylenedioxybenzylamino) purine, 6- (2,4-dihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,5-dihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxybenzyl) Amino) purine, 6- (3,4-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (3,5-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,3-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,4- Dimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,5-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,6-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (3-hydroxy-4-methoxybenzylamino) purine, 6- ( 2-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, 6- (4-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, -(2-hydroxy-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (4-hydroxy-2-methoxybenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5-methoxybenzylamino) purine, 6- (3-hydroxy -4-methoxybenzylamino) purine, 6- (4-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-6-methoxybenzylamino) purine, 6- (3-hydroxy-5-methoxybenzyl) Amino) purine, 6- (4,5-dimethoxy-2-nitrobenzylamino) purine, 6- (3,4-dimethylbenzylamino) purine, 6- (2,3-dimethylbenzylamino) purine, 6- ( 2,4-dimethylbenzylamino) purine, 6- (2,6-dimethylbenzylamino) purine, 6- (2,6-di) Chill-4-hydroxy-benzylamino) purine, 6- (3,5-dimethyl-4-hydroxy-benzylamino) purine, 6- (2-fluoro-4-hydroxy-benzylamino) purine,
6- (3-Fluoro-4-methylbenzylamino) purine, 6- (3,4-dinitrobenzylamino) purine, 6- (3,5-dinitrobenzylamino) purine, 6- (2-methyl-5- Nitrobenzylamino) purine, 6- (3-methyl-4-nitrobenzylamino) purine, 6- (3,4-diiodo-4-hydroxybenzylamino) purine, 6- (2-chloro-3,4-dimethoxy) Benzylamino) purine, 6- (4-chloro-3,5-dinitrobenzylamino) purine, 6- (2-chloro-4-fluorobenzylamino) purine, 6- (3-chloro-4-fluorobenzylamino) Purine, 6- (2-chloro-6-methylbenzylamino) purine, 6- (3-chloro-2-methylbenzylamino) purine, 6- (3-chloro-4-methyl) Rubenzylamino) purine, 6- (5-chloro-2-methoxybenzylamino) purine, 6- (2-chloro-4-fluorobenzylamino) purine, 6- (4-chloromethylbenzylamino) purine, 6- (2-chloro-5-nitrobenzylamino) purine, 6- (2-chloro-6-nitrobenzylamino) purine, 6- (4-chloro-3-nitrobenzylamino) purine, 6- (5-chloro- 2-nitrobenzylamino) purine, 6- (3-bromo-4-hydroxybenzylamino) purine,
6- (3,5-dibromo-4-hydroxybenzylamino) purine, 6- (3-dibromo-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (4-bromomethylbenzylamino) purine, 6- (4-butoxy Benzylamino) purine, 6- (4- / t-butyl / benzylamino) purine, 6- (4-t-butyl-2,6-dimethylbenzylamino) purine, 6- (2-aminobenzylamino) purine, 6- (3-aminobenzylamino) purine, 6- (4-aminobenzylamino) purine, 6- (2-amino-6-chlorobenzylamino) purine, 6- (3-amino-4-chlorobenzylamino) Purine, 6- (2-amino-3-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-amino-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-amino-6- Lolo benzylamino) purine, 6- (2,6-diamino-3-chloro-benzylamino) purine, 6- (2,6-diamino-4-chloro-benzylamino) purine,
6- (4-amino-3-chlorobenzylamino) purine, 6- (4-amino-5-chlorobenzylamino) purine,
6- (5-amino-2-methylbenzylamino) purine, 6- (2-amino-3-nitrobenzylamino) purine, 6- (4-amino-3-nitrobenzylamino) purine, 6- (4- Benzyloxybenzylamino) purine, 6- (3-acetylbenzylamino) purine, 6- (2-acetylbenzylamino) purine, 6- (2,3,4-trimethoxybenzylamino) purine, 6- (2, 4,5-trimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,4,6-trimethoxybenzylamino) purine, 6- (3,4,5-trimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,4,4) 6-trimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,3,4-trihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,4,6-trihydroxybenzylamino) purine 6- (2,3,4-trihydroxybenzylamino) purine, 6- (3,4,5-trihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,4,6-trihydroxybenzylamino) purine, 6 -(2,4,5-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,4,5-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,4,6-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,3 , 4-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,3,5-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,3,6-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,5,6-trichlorobenzyl) Amino) purine,
6-anilinopurine, 6- (2,4-bis (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,5-bis (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,4-bis (trifluoromethyl) ) Anilino) purine, 6- (3,5-bis (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2-bromoanilino) purine, 6- (3-bromoanilino) purine, 6- (4-bromoanilino) purine, 6 -(4-bromo-2-chloroanilino) purine, 6- (4-bromo-3-chloroanilino) purine, 6- (2-bromo-6-chloro- (4- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (4-bromo-5,6-difluoroanilino) purine, 6- (2-bromo-4,6-difluoroanilino) purine, 6- (4-bromo-2,6-difluoro Nilino) purine, 6- (4-bromo-2-fluoroanilino) purine, 6- (2-bromo-4-fluoroanilino) purine, 6- (2-bromo-4-methylanilino) purine, 6- ( 3-bromo-2-methylanilino) purine, 6- (4-bromo-3-methylanilino) purine, 6- (2-bromo-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (3-bromo-4-) (Trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (4-bromo-2- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2-bromo-4,5,6-trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2,4-dibromoanilino) purine,
6- (2,5-dibromoanilino) purine, 6- (2,4-dibromo-3,6-dichloroanilino) purine, 6- (2,6-dibromo-4-fluoroanilino) purine, 6 -(2,6-dibromo-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2,4-dibromo-6- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,6-dibromo-4- (Trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,3-dichloroanilino) purine, 6- (2,4-dichloroanilino) purine, 6- (2,5-dichloroanilino) purine, 6- (2,6-dichloroanilino) purine, 6- (3,4-dichloroanilino) purine, 6- (3,5-dichloroanilino) purine, 6- (2,6-dichloro-4- (tri) Fluoromethoxy) anilino) purine 6- (2,4-dichloro-6- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,6-dichloro-4- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,3-difluoroanilino) ) Purine, 6- (2,4-difluoroanilino) purine, 6- (2,5-difluoroanilino) purine, 6- (2,6-difluoroanilino) purine, 6- (3,4-difluoro) Anilino) purine, 6- (3,5-difluoroanilino) purine, 6- (2-difluoromethoxyanilino) purine, 6- (2-difluoromethoxy-5-nitroanilino) purine, 6- (2,3 -Difluoro-6-nitroanilino) purine, 6- (2,4-difluoro-6-nitroanilino) purine, 6- (2,4-diiodoanilino) purine,
6- (2,3-dimethylanilino) purine, 6- (2,4-dimethylanilino) purine, 6- (2,3-dimethyl-6-nitroanilino) purine, 6- (2,4-dimethoxyanisine) Lino) purine, 6- (2,3-dimethoxyanilino) purine, 6- (2,3-dinitro-6-methylanilino) purine, 6- (4-hydroxy-2-methylanilino) purine, 6- (2- Chloroanilino) purine, 6- (3-chloroanilino) purine, 6- (4-chloroanilino) purine, (3-chloro-2,6-dibromo-4-fluoroanilino) purine, 6- (2-chloro-4-) Fluoroanilino) purine, 6- (2-chloro-5-fluoroanilino) purine, 6- (2-chloro-6-fluoroanilino) purine, 6- (3-chloro-2-fluoroanilino) Phosphorus, 6- (3-chloro-4-fluoroanilino) purine, 6- (4-chloro-2-fluoroanilino) purine, 6- (5-chloro-2-fluoroanilino) purine, 6- ( 2-chloro-4-fluoro-5-methylanilino) purine, 6- (5-chloro-4-fluoro-2-nitroanilino) purine, 6- (5-chloro-2-hydroxyanilino) purine, 6- (4 -Chloro-2-iodoanilino) purine, 6- (2-chloro-4-iodoanilino) purine, 6- (2-chloro-6-methylanilino) purine, 6- (3-chloro-2-methylanilino) purine, 6- (3-chloro-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (4-chloro-2- (trifluoromethoxy) anilino) purine,
6- (2-fluoroanilino) purine, 6- (3-fluoroanilino) purine, 6- (4-fluoroanilino) purine, 6- (2-fluoro-4-iodoanilino) purine, 6- (2 -Fluoro-5-nitroanilino) purine, 6- (2-fluoro-4-methylanilino) purine, 6- (3-fluoro-2-methylanilino) purine, 6- (3-fluoro-4-methylanilino) purine, 6- (4-fluoro-2-methylanilino) purine, 6- (3-fluoro-4-methylanilino) purine, 6- (5-fluoro-2-methylanilino) purine, 6- (4-fluoro-2-nitroanilino) purine, 6- (4-Fluoro-3-nitroanilino) purine, 6- (2-iodoanilino) purine, 6- (2-fluoro-4- (trifluoromethyl) Anilino) purine, 6- (4-iodo-2-methylanilino) purine, 6- (2-methoxyanilino) purine, 6- (3-methoxyanilino) purine, 6- (4-methoxyanilino) purine, 6- (2-methoxy-5-methylanilino) purine, 6- (2-methoxy-6-methylanilino) purine, 6- (4-methoxy-2-methylanilino) purine, 6- (5-methoxy-2-methylanilino) Purine, 6- (4-methoxy-3- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2-methylanilino) purine, 6- (4-methylanilino) purine, 6- (3-methylanilino) purine, 6- ( 2-methyl-3- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2-methyl-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- ( - (methylthio) anilino) purine, 6- (4- (methylthio) anilino) purine,
6- (2-nitroanilino) purine, 6- (3-nitroanilino) purine, 6- (4-nitroanilino) purine, 6- (2-nitro-4,5,6-trifluoroanilino) purine, 6- ( 2-nitro-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2-nitrotetrafluoroanilino) purine, 6- (2,3,4,5,6-pentabromoanilino) purine, 6- (2,3,4,5,6-pentafluoroanilino) purine, 6- (2,3,4,5-tetrachloroanilino) purine, 6- (2,3,5,6-tetrachloroani) Lino) purine, 6- (4- (1,1,2,2-tetrafluoroethoxy) anilino) purine, 6- (2,3,4,5-tetrafluoroanilino) purine, 6- (2,3 , 4,6-tetrafluoroanilino) pre 6- (2,3,5,6-tetrafluoroanilino) purine, 6- (2,3,5,6-tetrafluoro-4- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,4 , 6-tribromoanilino) purine, 6- (2,4,6-tribromo-3,5-diiodoanilino) purine, 6- (2,3,4-trichloroanilino) purine, 6- (2,4 , 5-trichloroanilino) purine, 6- (2,4,6-trichloroanilino) purine,
6- (2,4,5-trifluoroanilino) purine, 6- (2,3,5-trifluoroanilino) purine, 6- (2,3,6-trifluoroanilino) purine, 6- (2,3,4-trifluoroanilino) purine, 6- (2-trifluoromethoxyanilino) purine, 6- (3-trifluoromethoxyanilino) purine, 6- (4-trifluoromethoxyanilino) ) Purine, 6- (2,3,4-trifluoro-6-nitroanilino) purine, 6- (2,4,5-trimethylanilino) purine, 6- (2,4,6-trimethylanilino) purine 6- (3-chloro-4-carboxyanilino) purine, 6- (3-amino-4-chloroanilino) purine, 6- (3-chloro-4-aminoanilino) purine, 6- (3-carboxy-4) -Hydroxy It is a Nirino).
[0010]
The starting materials for the preparation of compounds of general formula I are from hypoxanthine to POCl according to the literature (Davoll and Blowy, J. Am. Chem, Soc. 73: 2936 (1957)). _Three 6-chloropurine synthesized using a 6-chloropurine or a commercially available product (Sigma, Aldrich, Fluka).
[0011]
Another starting material for the preparation of compounds of general formula I is 6-bromopurine synthesized from hypoxanthine using n-pentylnitrile in tribromomethane or commercially available 6-bromopurine. is there.
[0012]
According to the present invention, N having the formula I ₆ A new heterocyclic derivative based on a substituted adenine is prepared from a heterocyclic derivative having the formula I, where R2 and R6 are as previously described herein, and R6 represents a bromine, chlorine or methyl mercapto group; R2 is a nucleophilic substitution reaction in which the chlorine, bromine or methyl mercapto at position R6 has been converted to a substituent R6 of other nature as described hereinbefore, To obtain a compound having formula I.
[0013]
A further method of the invention is that a heterocyclic derivative having formula I wherein R2 is hydrogen and R6 is an amino group is substituted at the R6 position by reaction with an aldehyde having the formula R6′-CHO, and R6 ′ Is as previously described to convert the amino group at position R6 to a substituent R6 of other properties as previously described, and is characterized by obtaining a compound of formula I The preparation of a compound of formula I.
[0014]
The present invention also provides N of formula I for use as a medicament. ₆ -Relates to heterocyclic compounds based on substituted adenines.
[0015]
The present invention is further used as a growth regulator for plants, mammals, microorganisms, yeasts, fungi cells and N of formula I according to claim 1 ₆ -Relates to heterocyclic compounds based on substituted adenines.
[0016]
The invention also relates to N of formula I according to claim 1 for use as a cosmetic. ₆ -Relates to heterocyclic compounds based on substituted adenines.
[0017]
The object of the present invention is also a pharmaceutical, cosmetic or growth regulator comprising a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, including a pharmaceutical carrier.
[0018]
Further objects of the invention include affinity absorption matrixes, immobilized enzymes for process control, immunoassays, diagnostic samples, ¹⁴ C, ^Three N of formula I according to claim 1 for the preparation of compounds labeled with H, oligonucleotides, avidin and biotin. ₆ -Use of heterocyclic compounds based on substituted adenines.
[0019]
The present invention also includes pharmaceutical carriers for the preparation of pharmaceutical compositions intended to be used as mitotic or anti-mitotic compounds, particularly cancer, psoriasis, rheumatoid arthritis, lupus, type 1 diabetes, multiple To treat sclerosis, restenosis, polycystic kidney disease, transplant rejection, graft-versus-host disease and gout, parasitic diseases caused by fungi and protists, Alzheimer's disease, or anti-neurogenesis The present invention relates to a method of using a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a drug, to suppress immunostimulation, or to treat proliferative skin disease.
[0020]
The object of the present invention is further used in agriculture, in particular as a growth regulator for enhancing the yield and quality of agricultural products, as defined in claim 1 ₆ -Use of heterocyclic compounds based on substituted adenines.
[0021]
The present invention also provides N of formula I for use as a cosmetic product that inhibits aging and aging of mammalian cell epidermis, such as keratinocytes and fibroblasts. ₆ -Relates to heterocyclic compounds based on substituted adenines.
[0022]
The object of the present invention is further to formula N as a growth regulator in tissue culture for activation of proliferation and morphogenesis. ₆ -Use of heterocyclic compounds based on substituted adenines.
[0023]
The present invention also provides for the preparation of a composition for the cloning of plant or mammalian embryonic cells and embryos (especially oocytes) or the use of the formula I N ₆ -Relates to heterocyclic compounds based on substituted adenines.
[0024]
The invention also relates to the preparation of a composition for the suppression of immunostimulation such as arthritis or the suppression of transplant rejection in mammals or the use of N of formula I according to claim 1 for the use of said composition. ₆ -Relates to heterocyclic compounds based on substituted adenines.
(Therapeutic administration)
Suitable routes of administration are oral, rectal, topical (skin, eyeball, mouth, sublingual, etc.), vaginal, parenteral (subcutaneous, intramuscular, intravitreal, intravenous, intradermal, intrathecal, dura mater) Etc.). The preferred route of administration depends on other considerations known to the clinician depending on the condition of the patient, the toxicity of the compound and the location of the affected area.
[0025]
The therapeutic composition contains from about 1% to about 95% active ingredient, the single volume dosage form preferably contains from about 20% to about 90% active content, and the non-single volume dosage form is about 5% To about 20% active ingredient. Unit volume forms are, for example, coated tablets, tablets, ampoules, glass bottles, suppositories and capsules. Other dosage forms are, for example, ointments, creams, pastes, foaming agents, tinctures, lipsticks, drops, sprays, dispersions and the like. Examples include capsules containing from about 0.05 g to about 1.0 g of active ingredient.
[0026]
The pharmaceutical composition of the present invention is prepared in a manner known per se by conventional means such as mixing, granulating, coating, dissolving, lyophilizing process.
[0027]
Preferably, in addition to solutions of the active ingredients, also suspensions and dispersions, isotonic aqueous solutions, dispersions and suspensions are used, for example active ingredients such as alone or with a carrier, eg In the case of lyophilized compositions containing mannitol, these can be prepared prior to use. The pharmaceutical composition is sterilized and / or contains excipients such as preservatives, stabilizers, wetting agents and / or emulsifiers, solubilizers, salts and / or buffers for controlling osmotic pressure. These are prepared in a known manner by conventional means such as, for example, dissolution or freeze-drying processes. The solution or suspension may contain a thickening substance such as sodium carboxymethylcellulose, dextran, polyvinylpyrrolidone, gelatin.
[0028]
The suspension in oil contains, as an oily component, common plant, synthetic and semi-synthetic oils for infusion purposes. As described above, the oil is particularly suitable as a liquid fatty acid ester containing a long-chain fatty acid having 8-22, especially 12-22 carbon atoms as the acid component, such as lauric acid, tridecylic acid, myristic acid. Attached to pentadecylic acid, palmitic acid, margaric acid, stearic acid, arachidonic acid, behenic acid and corresponding unsaturated acids such as oleic acid, elaidic acid, eulic acid, brassic acid, linolenic acid, antioxidants Suitable are vitamin E, β-carotene and 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxytoluene. The alcohol component of these fatty acid esters is a unitary or polyhydric alcohol having 6 or fewer carbon atoms, such as alcohols having 1, 2, or 3 hydroxyl groups such as methanol, ethanol, propanol, Butanol, pentanol, and isomers thereof, but glycol and glycerol are particularly suitable. Fatty acid esters are therefore, for example, ethyl oleate, isopropyl myristate, isopropyl palmitate, “Labrafil M2375” (polyoxyethylene glycerol trioleate from Gatefos, Paris), “Labrafil 1944 CS” (apricot Unsaturated polyglycolated glycerides prepared by alcoholysis of oil (apricot kernel oil), consisting of glycerides and polyethylene glycol esters; manufactured by Gatefos, Paris), “Labrasol” (prepared by alcoholysis of TCM, glycerides Polyglycolic acidified glycerides consisting of polyethylene glycol ester and Paris, manufactured by Gatefosh), and / or “Miglyol 81 "(Long-chain C ₈ To C ₁₂ Saturated fatty acid triglycerides (manufactured by Huhr AG, Germany), and vegetable oil, cottonseed oil, almond oil, olive oil, castor oil, sesame oil, soybean oil, especially peanut oil are particularly suitable.
[0029]
The preparation of the injectable composition is carried out under conventional conditions such as, for example, bottling into ampoules or glass bottles and sealing of the containers under sterile conditions.
[0030]
For example, oral pharmaceuticals can be obtained by combining the active ingredient with one or more solid carriers, granulating the final product mixture where appropriate, and if desired, blending the granules or granules into tablets or coatings. Processing into tablets and, where appropriate, additional excipients are added.
[0031]
Suitable substrates are in particular fillers such as sugars such as lactose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose preparations and / or calcium phosphates such as tricalcium diphosphate, calcium hydrogen phosphate, and even corn. , Wheat, rice, potato starch, binders such as starch such as methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, and / or polyvinylpyrrolidine and / or desinteator if desired And carboxymethyl starch, cross-linked polyvinyl pyrrolidone, allysic acid or a salt thereof such as sodium allysate, and the like. Additional excipients are particularly suitable flow control agents and lubricants, such as salicylic acid, talc, stearyl acid, salts thereof such as magnesium stearate, calcium stearyl, and / or polyethylene glycol or derivatives thereof, etc. It is.
[0032]
The core of the coated tablet is provided with a suitable coating which, if appropriate, is resistant to gastric juices, and the coating used is, inter alia, a concentrated sugar solution, where appropriate gum arabic, talc, polyvinylpyrrolidine. , Polyethylene glycol and / or titanium dioxide, and the coating solution is in a suitable organic solvent or solvent mixture and is a suitable cellulose preparation solution resistant to gastric acid such as acetylcellulose phthalate, hydroxypropylmethylcellulose phthalate. Dyes and pigments are mixed into tablets and coated tablets, for example, for verifying the capacity and characterization of various active ingredients.
[0033]
Pharmaceuticals are used orally, and are hard gelatin capsules, closed soft capsules of gelatin, and plasticizers such as glycerol and sorbitol. Hard capsules contain the active ingredient in the form of granules and are admixed with a filler such as corn starch, a binder and / or lubricant such as talc or magnesium stearylate and, where appropriate, a stabilizer. In soft capsules, the active ingredient is preferably dissolved or suspended in a suitable liquid excipient such as grease oil, paraffin oil, liquid polyethylene glycol, fatty acid esters of ethylene glycol or propylene glycol, Similarly, for example, a polyethylene sorbitan fatty acid ester type stabilizer or detergent can be added.
[0034]
Other oral forms of administration are, for example, syrups prepared in a conventional manner containing the active ingredient in a suspended concentration, for example in a concentration of about 5% to 20%, preferably about 10%, and for example If 5 to 10 mL is allocated, it contains a similar concentration that results in a suitable individual volume. Other forms are fine powders and liquid concentrates, for example, for preparing shakes with eg milk. Such concentrates can also be filled in unit volume quantities.
[0035]
The pharmaceutical composition can be used rectally, for example a suppository comprising a mixture of the active ingredient with a suppository base. Suitable suppository bases are, for example, natural products, synthetic triglycerides, paraffin hydrocarbons, polyethylene glycols or higher alkanols.
[0036]
Compositions suitable for parenteral administration are water-soluble solutions of water-soluble active ingredients, eg water-soluble salts or water-soluble salts containing thickening substances such as carboxymethylcellulose, sorbitol and / or dextran. Injection suspension, containing stabilizer where appropriate. The active ingredient is also present here in the form of a lyophilized material, where appropriate with excipients, and is dissolved by adding a suitable solvent prior to parenteral administration. Such a solution for parenteral administration is also used, for example, as an infusion. Preferred preservatives are, for example, ascorbic acid, bactericides such as sorbic acid and benzoic acid.
[0037]
The ointment is an oil-water-emulsion and contains up to 70%, preferably 20-50% water or water-soluble layers. Fatty acids in particular include, for example, petroleum jelly, paraffin oil, hard paraffins, which preferably include, for example, suitable hydroxy compounds such as fatty alcohols such as wool wax alcohols such as cetyl alcohol and wool wax and their esters, Improve water binding ability. Emulsifiers are the corresponding lipophilic substances such as sorbitan fatty acids (Spans), for example sorbitan oleate and / or sorbitan isostearyl. Additives to the water-soluble layer are, for example, wetting agents such as glycerol, propylene glycol, sorbitol and / or polyalcohols such as polyethylene glycol, or preservatives and aromatic substances.
[0038]
Fat ointments are anhydrous and contain, as a base, in particular hydrocarbons such as paraffin, petroleum jelly and paraffin oil, and also natural products and semi-synthetic fats such as hardened coconut fatty acid triglycerides, and preferably For example, hydrogenated oils such as hydrogenated peanut oil and castor oil, and further, for example, fatty acid partial esters of mono- and / or distearyl glycerol, for example, the above fatty alcohols. These also contain emulsifiers and / or the above-mentioned additives together with ointments that increase water uptake.
[0039]
A cream is an oil-water emulsion containing more than 50% water. The oily bases used are, in particular, fatty alcohols, lauryl, cetyl, stearyl alcohol, fatty acids such as palmitic acid or stearyl acid, liquids for solid waxes such as isopropyl myristate, wool wax, bee wax, and / or Or it is hydrocarbon, for example, petroleum jelly (petroleum) and paraffin oil. Emulsifiers are preferentially hydrophilic surfactants, and corresponding nonionic emulsifiers, for example, polyglycerol fatty acid esters, fatty acid esters such as polyethylene sorbitan fatty ester (Tween) (registered trademark), polyalcohols Fatty acid esters of the above compounds, ethyleneoxy adducts of the above compounds, and also polyoxyethylene fatty alcohol ether polyoxyethylene fatty acid esters and fatty alcohol sulfates such as sodium laurate sulfate, sodium cetyl sulfate, sodium stearyl sulfate, etc. Corresponding ionic emulsifiers such as alkali metal salts, these are usually used in the presence of fatty alcohols such as cetyl stearyl alcohol and stearyl alcohol. Additives to the water-soluble layer are, inter alia, agents that prevent the cream from drying out completely, for example polyalcohols such as glycerol, sorbitol, propylene glycol and / or polyethylene glycol, as well as preservatives and aromatics It is a substance.
[0040]
Paste is a cream or ointment with a secreted-absorbable powder component such as, for example, titanium oxide, zinc oxide, and also metal oxides such as talc and / or aluminum silicate, the humidity and secretions present. It plays a role to connect.
[0041]
Foaming agents are liquid oil-water emulsions administered from pressurized containers and present in the form of an aerosol. As atomizing gas, halogenated hydrocarbons such as polyhalogenated alkanes such as dichlorofluoromethane and dichlorotetrafluoroethane, preferably non-halogenated hydrocarbon gases, NO ₂ Carbon dioxide is used. The oily layer used is, inter alia, those mentioned above for ointments and creams, and the above additives are used as well.
[0042]
A tincture or solution usually contains a water-soluble-ethanolic base, to which the wetting agent, re-oiling substance, lower oil, such as glycerol, glycol and / or polyalcohols such as polyethylene glycol are reduced. Fatty acid esters with polyethylene glycol, that is, lipophilic substances that dissolve in water-soluble mixtures to replace fatty substances removed from the skin with ethanol, and if necessary, other excipients and additives are mixed .
[0043]
The present invention further provides veterinary compositions thus comprising at least one active ingredient as described above together with a veterinary carrier. A veterinary carrier is a material for administering the composition, which may be a solid, liquid or gas material, inert or acceptable by veterinary techniques, and against active ingredients. There is suitability. The veterinary composition may be administered orally, parenterally, or any other desired route.
[0044]
The invention also relates to processes and methods for the treatment of the above disease states. The compound can be administered prophylactically or therapeutically in the form of a medicament, preferably in an amount effective for the disease. In the homeothermic animals in need of such treatment, such as humans, the compounds are used in particular in the form of pharmaceuticals. A daily dose of a compound of the invention of from about 0.1 g to about 5 g, preferably from 0.5 g to about 2 g is thus administered for a body weight of about 70 kg.
(Drawing)
FIG. 1 shows the inhibition of growth of K562 (A) and CEM (B) tumor cell lines by test compounds. Cytotoxicity was measured in the presence of calcein AM. Activity is expressed as a percentage of maximum activity (in the absence of inhibitor). iP: iopentyladenine; 2FBAP: 6- (2-fluorobenzylamino) purine; 2ClBAP: 6- (2-chlorobenzylamino) purine; 2OH-3OCH _Three BAP: 6- (2-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine.
[0045]
FIG. 2 shows human fibroblasts (B) that have turned blue due to the action of β-gractosidase on the substrate X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside). ) Shows senescent cells in the culture of (other cells (A)).
[0046]
FIG. 3 shows induced apoptosis in tumor cell MCF-7 cell line after application of cytokinin 6- (2-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine. A: MCF-7, apoptotic cells: 6 h, 12, 20 μM, B: MCF-7, secondary necrotic cells (ie, necrosis after apoptosis), 12 h, 12, 40 μM, C: MCF-7, necrotic cells, 24 h, 12, 40 μM. Annexin FITCV (Mole Probes) and propidium iodide discoloration: Annexin-green, PI-red)
FIG. 4 shows the detection of apoptotic cells using strains of annexin (green fluorescence) and Hoechstem 33285 (blue fluorescence). After treatment of MCF-7 tumor cells with 6- (2-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, analysis was performed using “Olympus image analysis”. A, B-regulated cells are untreated. C, D-apoptotic cells (chromatin condensation). A, C-fluorescence microscope; B, D-fluorescence image analysis.
[0047]
FIG. 5 shows the effect of the test compound on the retention of chlorophyll in the cut wheat leaf pieces. Values are given in% of the initial chlorophyll content of fresh leaves before cultivation. The error line shows the average standard deviation for 5 replicate measurements. The dotted line indicates a controlled culture without cytokinin, 31.7 ± 0.9.
[0048]
FIG. 6 shows the effect of the test compound on the biological weight yield of tobacco callus culture. The error line shows the average standard deviation for 5 replicate measurements. The dotted line indicates the value of the control process without or without cytokinin, which is 2.2 ± 0.4.
[0049]
FIG. 7 shows the effect of test compounds on the induction of dark differentiation of beta cyanine synthesis in cotyledon / hypocotyl explants of Amaranthus caudatus. The error line shows the average standard deviation for 5 replicate measurements. The dotted line shows the value of the control culture without additional cytokinin, which is 0.043 ± 0.09. Values are O.D. D. It represents the difference between 537 and 620 nm in units.
[0050]
FIG. 8 shows the relative number of explants with at least one brown leaf as a function of culture time. (□: BA, ○: mT, Δ: mMeOBAP)
FIG. 9 shows the relative number of at least one dead leaf explant as a function of culture time. (□: BA, ○: mT, Δ: mMeOBAP)
FIG. 10 shows an explant of a dead Rosa hybrid (Rosa hybria) in the culture medium containing BA on the left, and a grown Rosa Hybrid hybrid seedling after 121 days of culture in the culture medium containing mMeOBA on the right. Has been. ((□: BA, ○: mT, Δ: mMeOBAP)
The following examples illustrate the present invention and are not intended to limit the scope of the invention.
【Example】
[0051]
Example 1
6- (2-Chlorobenzylamino) purine
6 mmol of 6-chloropurine was dissolved in 15 mL of butanol. Subsequently, 4 mmol of 3-chlorobenzylamine and 5 mmol of triethylamine were added and the mixture was heated at 90 ° C. for 4 hours. After cooling, the precipitate was filtered off, washed with cold water and n-butanol, and recrystallized from ethanol or dimethylformamide. M.M. p. 252 ° C., TLC (CHCl _Three : MeOH: concentrated NH _Four OH, 8: 2: 0.2, v / v / v), single spot; HPLC: purity> 98%. Yield 95%)
[0052]
[Table 1]

[0053]

[0054]
Example 2
A mixture of 10 mmol of adenine, 12 mL of methoxybenzaldehyde, 5 mL of 98-100% formic acid was refluxed for 3 days. After evaporating the formic acid, the final product was cooled and subsequently washed with 40 mL diethyl ether. The solid residue was boiled with 60 mL of water and filtered off, and the composition was recrystallized with ethanol. Yield 45%
[0055]
[Table 2]

[0056]
Example 3
In vitro cytotoxic activity of new compounds
One of the parameters used is the metabolic activity of living cells as a reference for cytotoxicity assays. For example, microtiter assays using calcein AM are widely used to quantify cell proliferation and cytotoxicity. For example, this assay is used in drug screening programs and chemosensitivity tests. Since only metabolically active cells cleave calcein AM, these assays detect live cells alone. The amount of calcein AM reduced corresponds to the number of viable cells in the culture.
[0057]
Human T-lymphoblastic leukemia cell line CEM; promyelocytic HL-60 or monocytic U937 leukemia; breast cancer cell lines MCF-7, BT549, MDA-MB-231; glioblastoma U87MG cells; uterine cancer Cell HELA; sarcoma cell U2OS and Saos2; liver cancer HepG2; mouse fibroblast NIH3T3, mouse-independent bone marrow macrophage B2.4 and B10A. 4; P388D1 and L1210 leukemias; B16 and B16F10 melanomas are used for normal screening of compounds. Cells are Nunc / Corning 80cm ² Retained in a plastic tissue culture flask and cultured in cell culture (DMEM with 5 g / l glucose, 2 mM glutamine, 100 U / mL penicillin, 100 μg / ml streptomycin, 10% fetal bovine serum or sodium bicarbonate).
[0058]
The cell suspension prepared and diluted according to the specific cell type and expected target cell density (2.500-30.000 cells per well, based on cell growth characteristics) is pipetted (80 μl) In 96 / well microtiter plates. The inoculation is stabilized for 24 hours at 37 ° C with 5% CO ₂ The pre-stage culture period. Four dilutions of the expected test concentration were added to the microtiter plate wells in aliquots of 20 μl at time zero. Normally, test compounds are evaluated in 6 4 dilutions. In normal testing, the highest hole concentration was 266.7 μM, but it can be a matter of agent-dependent change. All drug concentrations were investigated repeatedly. Incubation of cells with test compounds is carried out for 72 hours at 37 ° C., 5% CO ₂ The atmosphere was maintained at 100% humidity. At the end of the culture period, the cells were assayed by using calcein AM. Ten microliters of the stock solution was pipetted into each well and incubated for an additional hour. Fluorescence (FD) was measured with a Labsystem FIA Reader Fluorescent Ascent (UK). Tumor cell survival (GI ₅₀ ) Was calculated using the following formula: TCS = (FD _{drug exposed wells} / MeanFD _{control wells} ) × 100%. GI ₅₀ The value, ie the lethal concentration of 50% of the tumor cells, was calculated from the resulting dose response curve (FIG. 1).
[0059]
The cytotoxicity of the new compounds was examined in a panel of cell lines from various tissue sources or species (Table 3). Although it can be seen here that equal activity was found in all the tumor cell lines examined, malignant cells such as NIH3T3 fibroblasts and normal human lymphocytes are synthetic inhibitors that induce cytotoxicity. There was resistance to. As shown in Table 3, the GI of NIH3T3 fibroblasts and normal human lymphocytes ₅₀ Is always greater than 250 μM. Effective new derivatives killed tumor cells at concentrations approaching 10-50 μM.
[0060]
[Table 3]

[0061]

[0062]
Example 4
Novel compounds that induce apoptosis in tumor cells
In order to analyze the mechanism of induced cytotoxicity by novel compounds, it is important to distinguish apoptosis from other major forms of cell death, necrosis. First, at the tissue level, apoptosis causes little or no inflammation, because neighboring cells, especially macrophages, are rather released into the extracellular fluid, the uptake and contraction part of the cell . In contrast, in necrosis, cellular components are released into the extracellular fluid, thereby providing a stimulating effect on nearby cells and causing inflammation. Second, at the cellular level, apoptotic cells exhibit cytoplasmic contraction and blistering, preservation of the structure of organelles such as mitochondria, chromosome condensation and margination, nuclear division, and formation of apoptotic bodies. Not all of these are found in all cell types. Third, at the molecular level, the number of biochemical processing steps plays an important role in inducing apoptosis. However, most of these are not well understood, cause activation of proteolytic and nucleolytic enzymes, and ultimately destroy proteins and DNA, which are key biochemical macromolecules. To do.
[0063]
Two independent methods are used to detect apoptosis for the necrotic mode of cell death: evaluation of morphology by electron microscopy and analysis of DNA fragments by measuring the number of flowing cells.
[0064]
The HL-60 cell line was cultured at 37 ° C., 5% CO 2 in 6-well culture plates with or without a new derivative at a concentration of 70 μM. ₂ Incubate for 3-24 hours. In the next culture, the cells are granulated, washed with Hank's buffered salt solution, and processed as described below.
[0065]
The cells were suspended in 2% glutaraldehyde / PBS, allowed to settle overnight at 4 ° C., then granulated and embedded in 1% agar (new agar, Difco). The agar mass containing the fixed cells was epoxide polymerized and divided into ultrathin, osmium tetraoxide was added later, compared with uranium acetate, and examined with an electron microscope.
[0066]
Microscopic examination of the early layer contrasts suggests that the treated HL-60 strain exhibits typical morphological features of apoptotic cells, which was later confirmed by electron microscopy (Figure 2 and 3). Typical morphological criteria for apoptosis was found in cells treated with all new derivatives tested. That is, chromosome condensation, nuclear fission, cytoplasmic blebbing, or apoptotic body formation.
[0067]
Example 5
Immunosuppressive activity
One of the most important parameters of specific cellular immunity is the proliferative response of lymphocytes to antigens and polyclonal mitogens. The majority of normal mammalian peripheral lymphocytes have resting cells. Antigens and non-specific polyclonal mitogens have the ability to activate lymphocyte cells, which is accompanied by dramatic changes in intracellular metabolism (mitochondrial activity). Protein synthesis, nucleic acid synthesis, blast formation and cell division). Compounds with the ability to selectively inhibit lymphocyte proliferation are effective immunosuppressants. Various assays in vitro have been developed to measure the proliferative response of lymphocytes. The most used method is ^Three H-thymidine recombination method.
[0068]
During cell growth, DNA is replicated before the cell is split into two daughter cells. This close link between cell doubling and DNA synthesis is very attractive for assessing cell division. When labeled DNA is added to the cell culture, cells that are prone to division incorporate the labeled nucleotide into the DNA. Traditionally, these assays typically involve a radioisotope-labeled nucleotide, particularly tritiated thymidine ([[ ^Three H] -TdR). Built-in [ ^Three The amount of H] -TdR is quantified by liquid scintillation counting.
[0069]
Human heparinized peripheral blood was obtained from healthy volunteers by inserting a needle into the elbow vein. Blood is diluted (1: 3) in PBS and mononuclear cells are separated by centrifugation at 2200 rpm for 30 minutes at Ficoll-Hypaque density gradient (Pharmacia, 1.077 g / ml). did. After centrifugation, lymphocytes were washed with PBS and resuspended in cell culture (RMPI 1640, 2 mM glutamine, 100 U / mL penicillin, 100 μg / mL streptomycin, 10% calf serum and sodium bicarbonate).
[0070]
Cells were diluted to a target density of 1,100,000 cells / ml and added by pipette (180 μl) into a 96 well microtiter plate. Four dilutions of the planned test concentration were added to the microtiter plate wells in aliquots of 20 μl at time zero. Usually, test compounds are evaluated in 6 4 dilutions. In normal examination, the highest hole concentration was 266.7 μM. All drug concentrations were investigated repeatedly. All holes were activated with 50 μl of concanavalin A (25 μg / ml) with the exception of non-activated control. Incubation of cells with test compounds is carried out at 37 ° C. for 72 hours, 5% CO 2. ₂ The atmosphere was maintained at a humidity of 100%. At the end of the culture period, the cells are [ ^Three Assayed by using [H] -TdR.
[0071]
Cell cultures were incubated at 37 ° C for 6 hours, 5% CO ₂ Cultured at 0.5 μCi per well (20 μl of 500 μCi / ml stock solution) under atmosphere. An automated cell harvester was used to lyse the cells in water and adsorb the DNA on a glass fiber filter in the form of a microtiter plate. While unincorporated material passes, ^Three H] -TdR incorporated DNA was retained on the filter. The filter was dried overnight at room temperature and sealed in a sample bag with 10-12 ml of fluorescent luminescent solution. Exists in each filter [ ^Three The amount of H] -TdR (counts per minute (cpm)) was measured by scintillation counting on a beta plate liquid scintillation counter. The effective dose (ED) of the immunosuppressant was calculated by using the following formula: ED = (CCPM _{drug exposed well} / MeanCCPM _{control wells} ) × 100%. ED ₅₀ The value, the concentration of drug that inhibits 50% proliferation of lymphocytes, was calculated from the resulting dose response curve.
[0072]
To evaluate the immunosuppressive activity of substituted adenine, the ability of substituted adenine to inhibit polyclonal mitogens that induce proliferation of normal human lymphocytes was analyzed (Table 3). Our data show that these compounds ^Three Although it shows only little activity for H-thymidine incorporation, it nevertheless effectively suppresses the proliferation of activated lymphocytes. The effective immunosuppressive dose of the new derivative under in vitro conditions is approximately 1-20 μM.
[0073]
[Table 4]

[0074]
Example 6
Inhibiting aging of new compounds
In this example, human diploid fibroblasts (HCA cells at different passage levels: passage 25-designated HCA25; passage 45-designated HCA45; passage 80-designation Of HCA80) were discolored due to β-gractosidase activity. The culture medium used for cell culture was removed and the cells were washed twice with PNS and fixed with 2-3 ml fixing solution containing 2% formaldehyde and 0.2% glutaraldehyde in PBS. The cells were incubated for 5 minutes at room temperature and then washed twice with PBS. The cells were subsequently transferred to potassium ferricyanide (5 mM), potassium ferrocyanide (5 mM), MgCl 2 in citrate / phosphate buffer (5 mM) at pH 6.0. ₂ (2 mM), X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-gractopyranoside) (1 mg / ml))) at 37 ° C. ( CO ₂ Incubated for 1 to 16 hours. After the culture period, cell samples were observed and the presence of blue cells was detected. This suggests that X-gal was cleaved (senescent cell positive staining). In this experiment, senescent cells turned blue, but other cells did not turn blue due to the action of the substrate β-gluctosidase (FIG. 4).
[0075]
[Table 5]

[0076]
As shown in Table 5, staining increased with increasing number of passages. In the oldest cells, there were only blue cells from light blue to almost dull color. N ₆ -Substituted adenine derivatives were very effective in maintaining very low levels of senescent cells after 80 passages. In the case of long-term continuous culture, the treated cells were able to survive for 30% longer than the controlled cells.
[0077]
Example 7
Aging inhibition of new compounds tested in winter wheat leaf pieces
Winter wheat seed, Triticum aestivum, cv. Hereward was washed under running water for 24 hours and then spread on vermiculite soaked with Knoop solution. These are 50 μmol. m ^-2 . s ^-1 And placed in a growth chamber at 25 ° C. with a photoperiod of 16/8 hours. After 7 days, the first leaf was fully developed and the second leaf began to grow. The first leaf section was approximately 35 mm long and was removed from the five seedlings and trimmed slightly to a total weight of 100 mg. The root ends of the five leaf pieces were placed in holes of a microtiter polystyrene plate each containing 150 μl of cytokinin solution. The entire plate was placed in a plastic box lined with tissue paper soaked with distilled water to prevent the leaf portion from drying. After 96 hours of culture in the dark at 25 ° C., the leaves were removed and chlorophyll was extracted by heating in 5 ml of 80% ethanol (v / v) at 80 ° C. for 10 minutes. Sample volume was restored by adding 5 ml of 80% ethanol (v / v).
[0078]
The absorbance of the extract was recorded at 665 nm. In addition, chlorophyll extracts from fresh leaves and leaf pieces cultured in deionized water were measured. From the data obtained, the highest active concentration was selected for each test compound. The relative activity of the compounds at the above concentrations was calculated (Table 6). 10 ^-Four The activity obtained with M 6-benzylaminopurine (BAP) is considered 100%. The values shown are the average of 5 replicate measurements and the entire experiment was repeated twice. The cytokinin to be tested is dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and the solution is 10% in distilled water. ^-3 M. This strain is further diluted with distilled water. ^-8 M to 10 ^-Four Diluted to a concentration of The final concentration of DMSO did not exceed 0.2% and therefore did not affect the biochemical activity of the assay system used.
[0079]
[Table 6]

[0080]

[0081]
Example 8
Activating effect of new compounds on plant cell division
Cytokinin-dependent tobacco nicotiana tabacum L. cv. Wisconsin 38 in the dark at 25 ° C., 4 μmol nicotinic acid, 2.4 μmol pyrrolidoxine hydrochloride, 1.2 μmol thiamine, 26.6 μmol glycy, 1.37 μmol glutamine, 1.8 μmol myo-inositol, 30 g sucrose, 8 g per liter It was maintained in an improved Murashige-Skoog broth containing agar, 5.37 μmol α-naphthylacetic acid (NAA), 0.5 μmol benzylaminopurine (BAP). Subculture was performed every 3 weeks. On day 14 prior to the biological assay, callus tissue was transferred to culture medium without 6-benzylaminopurine (BAP). Biological activity was determined from the increase in fresh callus weight after 4 weeks of culture. Five replicate measurements were made for each cytokinin concentration and the entire test was repeated twice. From the data obtained, the highest active concentration of tocainin concentration was selected for each test compound. The relative activity of the compound at this concentration was calculated (Table 6). 10 ^-Four The activity obtained with M 6-benzylaminopurine (BAP) is considered 100%. The cytokinin to be tested is dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and the solution is 10% in distilled water. ^-3 M. This strain was further diluted with water in each solvent solution used for the live test. ^-8 M to 10 ^-Four Dilute to M concentration. The final concentration of DMSO did not exceed 0.2% and therefore did not affect the biochemical activity of the assay system used.
[0082]
[Table 7]

[0083]
Example 9
Testing of new compounds in the Amaranthus bioassay
The standard amaranth bioassay was performed with several improvements.
[0084]
Amaranthus chodatus variant atropurpurea seeds were surface sterilized in 10% N-chlorobenzenesulfonamide (w / v) for 10 minutes and washed 5 times with deionized water. This was placed in a 14 cm Petri dish containing a tissue saturated with deionized water. After culturing for 72 hours in the dark at 25 ° C., the roots of the seedlings were cut off. Explants consisting of two cotyledons and hypocotyls are 10 μmol NA at pH 6.8 in a 5 cm Petri dish. ₂ HPO _Four -KH ₂ PO _Four It was placed on two layers of filter paper soaked in 1 ml of culture broth containing 5 μmol tyrosine and the cytokinin to be tested. There are 20 explants per dish. The experimental procedure was performed in a dark room under green safe light. After 48 hours of culture in the dark at 25 ° C., betacyanin is extracted by freezing the explants in 4 ml of 3.33 μM acetic acid. The concentration of beta cyanine is determined by measuring the absorbance at 537 nm and 620 nm as follows: ΔA = A _537nm -A _620nm . From the data obtained, the highest active concentration at this concentration was selected for each compound (Table 6). 10 ^-Four The activity obtained with M 6-benzylaminopurine (BAP) is considered 100%. The values shown in Table 8 are the average of 5 replicate measurements and the entire experiment was repeated twice.
[0085]
The cytokinin to be tested is dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and the solution is made up to 10% with distilled water. ^-3 M. This strain is further 10% in each solvent solution used for live testing. ^-8 To 10 ^-Four Further dilution to M concentration. The final concentration of DMSO did not exceed 0.2% and therefore did not affect the biochemical activity of the assay system used.
[0086]
[Table 8]

[0087]
Example 10
Effect of novel derivatives on in vitro and post-test growth of rose (Rosa multiflora) roots
The purpose of this experiment is to test whether the novel compounds have utility in tissue culture practice. Rosahybria (a rose cultivar for flowerpots) was cultured in a 350 ml container with a polycarbonate lid screwed. Each culture vessel contains 100 ml of a high-pressure sterilized culture solution (120 ° C., 20 minutes). The culture solution is 40 μMm ^-2 s ^-1 Maintained at 23 ± 2 ° C. under a 16 hour photoperiod in PAR. Basal medium (BMR) was Murashige, Skoog (1962) macroelements, macroelements and vitamins, 95 μM NaFeEDTA, 555 μM myo-inositol, 111 mM sucrose, 1.332 mM glycine, 684 μM L-glutamine and 7 g / l agar. including. The culture was supplemented with 10 μM BA, oMeOBAP or mMeOBAP (compounds no. 14 and 15 respectively). The control culture medium does not contain any cytokinin. After an 8 week culture period, the number of induced shoots per explant was measured along with the number of roots / explants and the total length of roots / explants. The roots were removed and the explants (bud stumps) were planted in non-fertile peat. After acclimatization for 4 weeks in units of fog, the number of roots and the length of the roots were measured.
[0088]
As expected, the culture broth without cytokinin caused almost no germination. The original shoot explants germinated high quality single shoots with good roots. BAP gave a high growth rate of buds, but the buds did not root well. The new BAP derivatives examined induce significantly better shoot formation and rooting when compared to BAP itself (Table 9).
[0089]
[Table 9]

[0090]
Example 11
Inhibition of early bud aging of tissue culture roses (rosahybria)
Tissue culture roses are damaged by aging symptoms. The leaves begin to turn brown, and after a few weeks, all external force pieces in the container wither. For example, if the plastic wrap suppresses the aeration of the container, this symptom begins early. This indicates that ethylene and other gas components are contained. Since cytokinin applied to the culture broth induced ethylene, it seemed worthwhile to test promising new cytokinin compounds in this system.
[0091]
Rosahybria was “Pailin” (cut rose) and was cultured in a 350 mL vessel with a polycarbonate lid screwed. Each culture vessel contains 100 ml of high-pressure sterilized culture solution. The culture solution is 40 μMm ^-2 s ^-1 Maintained at 23 ± 2 ° C. under a 16 hour photoperiod in PAR. Basal medium (BMR) was Murashige, Skoog (1962) macroelements, macroelements and vitamins, 36.7 mg / l NaFeEDTA, 50 mg / l NaFeEDDDHA, 100 mg / l μM myo-inositol, 30 g / l sucrose, 100 mg / l Contains 1 glycine, 50 mg / l sodium pantothenate, 100 mg / l L-glutamine and 7 g / l agar. The culture was supplemented with 10 μM BA, mT, mMeOBAP. The control medium does not contain any cytokinin. After a 6 week culture period, the measurement of aging symptoms was started. The day when the first brown leaf was seen in each plant (FIG. 8), the day when the entire plant completely withered (FIGS. 9 and 10) is shown.
[0092]
In BA-containing cultures, the relative number of withered plants looks like a sigmoidal curve, suggesting an autocatalytic aging effect possibly caused by ethylene. It is interesting to measure the ethylene concentration in the headspace. The situation improved with mT and mMeOBAP. mMeOBAP is clearly the best compound. Even after 121 days, almost all plants were still alive. Although some brown leaves can be avoided in cultures containing mMeOBAP, these plants can be easily used for the next subculture. The use of mMeOBAP is a significant improvement in rose (rosahybria) micropropagation.
[0093]
Example 12
Dry capsule
5000 capsules are prepared as follows, each containing 0.25 g of one of the compounds of formulas I, II, III of the formulas I, II, III described above or in the following examples as active ingredients.
[0094]
composition
Active ingredient 1250g
Talc 180g
120g wheat starch
Magnesium stearylate 80g
Lactose 20g
Preparation step: The powder material was compressed through a 0.6 mm mesh sieve. A 0.33 g portion of the mixture was transferred to gelatin capsules using a capsule filling machine.
[0095]
Example 13
Soft capsule
5000 soft gelatin capsules each contain 0.05 g of one of the compounds of formulas I, II, III as described above or in the following examples as active ingredients and are prepared as follows: .
composition
Active ingredient 250g
2 liters of lauroglycol
Preparation step: The powdered active substance is suspended in Lauroglycol (registered trademark) (propylene glycol laurate, manufactured by Gatefosh SA, St. Priest, France), and a particle size of 1 to 3 μm with a wet pulverizer Granulated. Thereafter, an amount of 0.419 g of the mixture in each capsule container was transferred to soft gelatin capsules using a capsule filling machine.
[0096]
Example 14
Soft capsule
5000 soft gelatin capsules each contain 0.05 g of one of the compounds of formulas I, II, III as described above or in the following examples as active ingredients and are prepared as follows: .
composition
Active ingredient 250g
PEG, 1 liter
Tween 80, 1 liter
Preparation step: PEG400 (polyethylene glycol having a molecular weight of 380 to about 420, manufactured by Sigma, manufactured by Fluka, manufactured by Aldrich, USA) and Tween® 80 (polyoxyethylene sorbitan monolaurate, atlas) (Supplied by Chemical Co., Ltd., USA, supplied by Sigma, Fluka, Aldrich, USA) and ground to a particle size of 1 to 3 μm with a wet pulverizer. Thereafter, an amount of 0.43 g of the mixture in each capsule container was transferred to a soft gelatin capsule using a capsule filling machine.
[Industrial applicability]
[0097]
New N of the present invention ⁶ -Heterocyclic compounds based on substituted adenines are particularly useful in the fields of diagnostics and therapeutics in the pharmaceutical industry, cosmetics industry, biotechnology and agriculture.
[Brief description of the drawings]
[0098]
BRIEF DESCRIPTION OF DRAWINGS FIG. 1 shows inhibition of growth of tumor cell lines of K562 (A) and CEM (B) by a test compound.
FIG. 2 shows senescent cells in the culture medium of human fibroblasts (B) and other cells (A) that have turned blue due to the action of the substrate X-gal β-gractosidase.
FIG. 3 shows induced apoptosis in tumor cell MCF-7 cell line after application of cytokinin 6- (2-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine.
FIG. 4 shows the detection of apoptotic cells using annexin and 33285 strains.
FIG. 5 shows the effect of test compounds on the retention of chlorophyll in wheat leaf pieces.
FIG. 6 is a graph showing the effect of a test compound on the biological weight yield of a tobacco callus culture solution.
FIG. 7 shows the effect of test compounds on the induction of dark differentiation of beta cyanine synthesis in cotyledon / hypocotyl explants of amaranth codatus.
FIG. 8 shows the relative number of explants with at least one brown leaf as a function of culture time.
FIG. 9 shows the relative number of at least one dead leaf explant as a function of culture time.
FIG. 10 is a diagram showing explanted withered Rosahybria with a culture solution containing BA and an overgrown Rosahybria seedling after 121 days of culture with a culture solution containing mMeOBA.

Claims (15)

R2 is a hydrogen, halogen, hydroxy, alkoxy, amino, hydrazo, mercapto, carboxyl, cyano, nitro, amide, sulfo, sulfoamide, acylamino, acyloxy, alkylamino, dialkylamino, alkylmercapto, cycloalkyl or carbamoyl group;
R6 is alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloalkylalkyl, arylalkyl, heteroalkyl, heteroarylalkyl, cycloheteroalkylalkyl, or R6′-X where X is —O—, —S -, -NH-, -N (C1-6 alkyl)-,
R6 ′ is hydrogen, alkyl, substituted alkyl, acyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, aryl, substituted aryl, heterocycle, heteroaryl, substituted heteroaryl, arylalkyl, cycloheteroalkyl, substituted cycloheteroalkyl, heteroarylalkyl, A heteroalkyl, cycloalkylalkyl, cycloheteroalkyl, amide or sulfo group,
General substituents have the same meaning as the corresponding reactive groups defined in this description, “halogen” refers to fluorine, bromine, chlorine, iodine atoms, and “hydroxy” refers to —OH A “mercapto” group refers to a —SH group, “alkyl” is a reaction that exemplifies the above terms such as methyl, propyl, tert-butyl, allyl, vinyl, ethynyl, propargyl, hexen-2-yl, and the like. Refers to a saturated or unsaturated, branched or unbranched C ₁ -C ₆ chain selected from the group
“Substituted alkyl” is shown herein containing 1 to 5 substituents such as hydroxyl, mercapto, alkylmercapto, halogen, alkoxy, acyloxy, amino, acylamino, hydrazino, carbamoyl, amide, carboxyl, sulfo, acyl, guanidino, etc. Refers to alkyl, whereby the reactive group is attached to any carbon atom of the alkyl moiety,
“Alkoxy” refers to the group —OR, where R is alkyl, substituted alkyl, aryl, arylalkyl, substituted arylalkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloheteroalkyl or substituted cycloheteroalkyl as defined herein;
“Alkyl mercapto” refers to a —SR group where R is as defined for an “alkoxy” group;
“Sulfo” refers to the group —SO ₃ R, where R is H, alkyl or substituted alkyl as defined herein;
“Sulfoamido” refers to the group —SO ₂ NRR ″ where R and R ″ are H, alkyl or substituted alkyl,
“Acyl” refers to the group —C (O) R, where R is hydrogen, alkyl, substituted alkyl, aryl, arylalkyl, substituted arylalkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl as defined herein;
“Aryloxy” refers to the group —OAr where Ar is aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl as defined herein;
“Alkylamino” refers to the group —NRR ′ where R and R ′ are independently hydrogen, alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl as defined herein;
“Amido” refers to the group —C (O) NRR ′ where R and R ′ are independently hydrogen, alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl as defined herein;
“Carboxyl” refers to the group —C (O) OR where R is hydrogen, alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl as defined herein;
“Acylamino” refers to —NHCOR, where R is alkyl, substituted alkyl, heterocycle, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl as defined herein;
“Carbamoylamino” refers to NHCOOR, where R is alkyl or aryl as defined herein;
“Aryl” or “ar” means at least one such as phenyl or biphenyl, or a polycondensed ring in which at least one ring is aromatic such as 1,2,3,4-tetrahydronaphthyl, naphthyl, anthryl, phenanthryl. An aromatic carbocyclic ring having two aromatic rings,
“Substituted aryl” refers to one to five functional groups such as halogen, alkyl, hydroxy, amino, acylamino, carbamoylamino, hydrazino, mercapto, alkoxy, alkylmercapto, alkylamino, amide, carboxyl, nitro, sulfo, etc. as defined herein. Refers to an aryl as shown herein optionally substituted with a group,
“Heterocycle” refers to an unsaturated or aromatic carbocyclic group having at least one heteroatom such as N, O, S, etc. in the ring, wherein the ring is a single group such as pyranyl, pyridyl, furyl. A ring or a polycondensed ring such as quinazolinyl, purinyl, quinolinyl, benzofuranyl, as defined halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkyl Optionally substituted by mercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, etc.
“Heteroaryl” refers to a heterocycle in which at least one heterocycle is aromatic;
“Substituted heteroaryl” is a defined halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, etc. Refers to a heterocycle optionally mono- or polysubstituted by five functional groups,
“Arylalkyl” refers to the group —R—Ar, where Ar is an aryl group, R is an alkyl or substituted alkyl group, and the aryl group is a halogen, amino, acylamino, carbamoylamino, hydrazino, acyloxy as defined herein. , Alkyl, hydroxyl, alkoxy, alkyl mercapto, alkylamino, amide, carboxyl, hydroxy, aryl, nitro, mercapto, sulfo, etc., and optionally substituted,
“Heteroalkyl” refers to —R-Het, where Het is a heterocycle group, R is an alkyl group, and the heteroalkyl group is a halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto as previously defined herein. , Alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkyl mercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, and the like, which may be optionally substituted,
“Heteroarylalkyl” refers to —R—Het-Ar, where HetAr is a heteroaryl group, R is an alkyl or substituted alkyl group, wherein the heteroarylalkyl group is a halogen, as hereinbefore defined, Optionally substituted with alkyl, substituted alkyl, alkoxy, alkyl mercapto, nitro, thiol, sulfo, etc.
“Cycloalkyl” refers to a divalent cyclic or polycyclic alkyl group containing from 3 to 15 carbon atoms;
“Substituted cycloalkyl” refers to halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amide, sulfo, as previously defined herein. A cycloalkyl group having 1 to 5 substituents selected from the group consisting of sulfoamide and the like,
“Cycloheteroalkyl” refers to a cycloalkyl group defined as having at least one ring methylene group replaced by a reactive group selected from the group NH, OH, SH;
“Substituted cycloheteroalkyl” refers to halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amide, as previously defined herein. Refers to a cycloheteroalkyl group defined to contain 1 to 5 substituents such as sulfo, sulfoamide, etc.
“Cycloalkylalkyl” refers to an —R-cycloalkyl group where cycloalkyl is a cycloalkyl group and R is alkyl or substituted alkyl, where the cycloalkyl group is halogen, amino, hydroxy, as defined herein; Optionally substituted with cyano, nitro, mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkylmercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, etc.
“Cycloheteroalkylalkyl” refers to the group —R-cycloheteroalkyl wherein R is alkyl or substituted alkyl, where the cycloheteroalkyl group is halogen, amino, hydroxy, cyano, nitro, as previously defined herein. Mercapto, alkoxy, alkylamino, acylamino, carbamoylamino, acyloxy, dialkylamino, alkyl mercapto, carboxyl, amide, sulfo, sulfoamide, etc., which may be optionally substituted or not,
Racemic compounds, optical isomers and salts of the above compounds,

Heterocyclic compounds based on N ⁶ -substituted adenines of general formula I or pharmaceutically acceptable salts thereof. 6- (2-hydroxy-3-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5-chlorobenzylamino) purine, 6- (2- Hydroxy-6-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-3-iodobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-4-iodobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5-iodo) Benzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-6-iodobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-3-bromobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-4-bromobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5-bromobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-6-bromobenzylamino) purine 6- (2-hydroxy-3-fluorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-4-fluorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5-fluorobenzylamino) purine, 6- ( 2-hydroxy-5-fluorobenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-6-fluorobenzylamino) purine, 6- (2,3-dihydroxy-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,5 -Dihydroxy-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-methoxybenzylamino) purine,
6- (2,3-dihydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,5-dihydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-4-methoxybenzylamino) purine 6- (2,3-dihydroxy-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2,3-dihydroxy-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2,5-dihydroxy-4-chlorobenzylamino) purine Purine, 6- (2,6-dihydroxy-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-4-bromobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-4-iodobenzylamino) ) Purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-chlorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-bromobe) Dilamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-iodobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3-fluorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3,5 -Dichlorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3,5-dibromobenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxy-3,5-diiodobenzylamino) purine,
6- (2,6-dihydroxy-3,5-difluorobenzylamino) purine, 6- (2-fluorobenzylamino) purine, 6- (3-fluorobenzylamino) purine, 6- (4-fluorobenzylamino) Purine, 6- (2-bromobenzylamino) purine, 6- (3-bromobenzylamino) purine, 6- (4-bromobenzylamino) purine, 6- (2-iodobenzylamino) purine, 6- (3 -Iodobenzylamino) purine, 6- (4-iodobenzylamino) purine, 6- (2-chlorobenzylamino) purine, 6- (3-chlorobenzylamino) purine, 6- (4-chlorobenzylamino) purine , 6- (2-acetylbenzylamino) purine, 6- (3-acetylbenzylamino) purine, 6- (4-acetylbenzyl) Mino) purine, 6- (3-carboxybenzylamino) purine, 6- (4-carboxybenzylamino) purine, 6- (2-acetoxybenzylamino) purine, 6- (3-acetoxybenzylamino) purine, 6- (4-acetoxybenzylamino) purine,
6- (2-nitrobenzylamino) purine, 6- (3-nitrobenzylamino) purine, 6- (4-nitrobenzylamino) purine, 6- (2-sulfobenzylamino) purine, 6- (3-sulfo Benzylamino) purine, 6- (4-sulfobenzylamino) purine, 6- (2-chianobenzylamino) purine, 6- (3-chianobenzylamino) purine, 6- (4-chianobenzylamino) Purine, 6- (5-nitro-2-methylbenzylamino) purine, 6- (2-methylbenzylamino) purine, 6- (3-methylbenzylamino) purine, 6- (4-methylbenzylamino) purine, 6- (4-methylaminobenzylamino) purine, 6- (2-methoxybenzylamino) purine, 6- (3-methoxybenzylamino) purine, 6- 4-methoxybenzylamino) purine, 6- (2-hydroxybenzylamino) purine, 6- (3-hydroxybenzylamino) purine, 6- (4-hydroxybenzylamino) purine, 6- (4-hexylbenzylamino) Purine, 6- (4-hexyloxybenzylamino) purine, 6- (2-formylbenzylamino) purine, 6- (3-formylbenzylamino) purine, 6- (4-formylbenzylamino) purine, 6- ( 2-ethoxybenzylamino) purine, 6- (3-ethoxybenzylamino) purine,
6- (4-Ethoxybenzylamino) purine, 6- (4-ethylbenzylamino) purine, 6- (4-pentylbenzylamino) purine, 6- (4-pentyloxybenzylamino) purine, 6- (4- Phenoxybenzylamino) purine, 6- (4-phenylbenzylamino) purine, 6- (4-propylbenzylamino) purine, 6- (4-propyloxybenzylamino) purine, 6- (4-octylbenzylamino) purine , 6- (4-octyloxybenzylamino) purine, 6- (4-ethyloxybenzylamino) purine, 6- (3,4-diacetoxybenzylamino) purine, 6- (3,5-diacetoxybenzylamino) ) Purine, 6- (2,5-diaminobenzylamino) purine, 6- (3,5-dibromobenzylamino) Purine, 6- (3,5-dibromo-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (2,3-dichlorobenzylamino) purine, 6- (2,4-dichlorobenzylamino) purine, 6- (2, 5-dichlorobenzylamino) purine, 6- (2,6-dichlorobenzylamino) purine, 6- (3,4-dichlorobenzylamino) purine, 6- (3,5-dichlorobenzylamino) purine, 6- ( 2,3,4,5-tetrafluorobenzylamino) purine,
6- (2-chloro-3,6-difluorobenzylamino) purine, 6- (5-chloro-2-fluorobenzylamino) purine, 6- (2,3,4-trifluorobenzylamino) purine, 6- (2,3,5-trifluorobenzylamino) purine, 6- (2,4,5-trifluorobenzylamino) purine, 6- (3,4,5-trifluorobenzylamino) purine, 6- (2 , 3,6-trifluorobenzylamino) purine, 6- (3-chloro-2,6-difluorobenzylamino) purine, 6- (2-chloro-6-fluorobenzylamino) purine, 6- (2,6 -Difluorobenzylamino) purine, 6- (2,4-difluorobenzylamino) purine, 6- (3,4-difluorobenzylamino) purine, 6- (2,5-difluoro Ndylamino) purine, 6- (3,5-difluorobenzylamino) purine, 6- (5-fluoro-2- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (4-fluoro-2- (trifluoromethyl) Benzylamino) purine, 6- (2-chloro-5- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (2- (difluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (3- (difluoromethoxy) benzylamino) Pudding,
6- (4- (difluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (2-fluoro-5- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (3-fluoro-4- (trifluoromethyl) benzylamino) Purine, 6- (2-fluoro-4- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (2-trifluoromethylthio) benzylamino) purine, 6- (2-fluoro- (3-trifluoromethyl) benzyl Amino) purine, 6- (2-chloro-6-fluoro-3-methylbenzylamino) purine, 6- (6-chloro-2-fluoro-3-methylbenzylamino) purine, 6- (3-chloro-2) -Fluoro-5- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (3-chloro-2-fluoro-6- (trifluoromethyl) Ndylamino) purine, 6- (2,3-difluoro-4-methylbenzylamino) purine, 6- (2,6-difluoro-3-methylbenzylamino) purine, 6- (2-fluoro-6- (trifluoro) Methyl) benzylamino) purine, 6- (3-chloro-2,6-difluorobenzylamino) purine, 6- (3- (trifluoromethylthio) benzylamino) purine, 6- (3-fluoro-4-methylbenzyl) Amino) purine,
6- (4-fluoro-3-methylbenzylamino) purine, 6- (5-fluoro-2-methylbenzylamino) purine, 6- (2-chloro-3,6-difluorobenzylamino) purine, 6- ( 4-trifluoromethylthio) benzylamino) purine, 6- (3-fluoro-5- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (2-chloro-4-fluorobenzylamino) purine, 6- (2- (Trifluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (3- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (2- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (4- (trifluoromethyl) Benzylamino) purine, 6- (4-chloro-3- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (4-fluoro-3) (Trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (3,5-bis (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (3- (trifluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (4- (tri Fluoromethoxy) benzylamino) purine, 6- (4- (trifluoromethyl) benzylamino) purine, 6- (4-diethylaminobenzylamino) purine, 6- (3,4-dihydroxybenzylamino) purine, 6- ( 3,5-dihydroxybenzylamino) purine, 6- (3,4-dihydroxybenzylamino) purine,
6- (2,3-ethylenedioxybenzylamino) purine, 6- (2,4-dihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,5-dihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,6-dihydroxybenzyl) Amino) purine, 6- (3,4-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (3,5-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,3-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,4- Dimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,5-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,6-dimethoxybenzylamino) purine, 6- (3-hydroxy-4-methoxybenzylamino) purine, 6- ( 2-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, 6- (4-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, -(2-hydroxy-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (4-hydroxy-2-methoxybenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-5-methoxybenzylamino) purine, 6- (3-hydroxy -4-methoxybenzylamino) purine, 6- (4-hydroxy-3-methoxybenzylamino) purine, 6- (2-hydroxy-6-methoxybenzylamino) purine, 6- (3-hydroxy-5-methoxybenzyl) Amino) purine, 6- (4,5-dimethoxy-2-nitrobenzylamino) purine, 6- (3,4-dimethylbenzylamino) purine, 6- (2,3-dimethylbenzylamino) purine, 6- ( 2,4-dimethylbenzylamino) purine, 6- (2,6-dimethylbenzylamino) purine, 6- (2,6-di) Chill-4-hydroxy-benzylamino) purine, 6- (3,5-dimethyl-4-hydroxy-benzylamino) purine, 6- (2-fluoro-4-hydroxy-benzylamino) purine,
6- (3-Fluoro-4-methylbenzylamino) purine, 6- (3,4-dinitrobenzylamino) purine, 6- (3,5-dinitrobenzylamino) purine, 6- (2-methyl-5- Nitrobenzylamino) purine, 6- (3-methyl-4-nitrobenzylamino) purine, 6- (3,4-diiodo-4-hydroxybenzylamino) purine, 6- (2-chloro-3,4-dimethoxy) Benzylamino) purine, 6- (4-chloro-3,5-dinitrobenzylamino) purine, 6- (2-chloro-4-fluorobenzylamino) purine, 6- (3-chloro-4-fluorobenzylamino) Purine, 6- (2-chloro-6-methylbenzylamino) purine, 6- (3-chloro-2-methylbenzylamino) purine, 6- (3-chloro-4-methyl) Rubenzylamino) purine, 6- (5-chloro-2-methoxybenzylamino) purine, 6- (2-chloro-4-fluorobenzylamino) purine, 6- (4-chloromethylbenzylamino) purine, 6- (2-chloro-5-nitrobenzylamino) purine, 6- (2-chloro-6-nitrobenzylamino) purine, 6- (4-chloro-3-nitrobenzylamino) purine, 6- (5-chloro- 2-nitrobenzylamino) purine, 6- (3-bromo-4-hydroxybenzylamino) purine,
6- (3,5-dibromo-4-hydroxybenzylamino) purine, 6- (3-dibromo-4-methoxybenzylamino) purine, 6- (4-bromomethylbenzylamino) purine, 6- (4-butoxy Benzylamino) purine, 6- (4- / t-butyl / benzylamino) purine, 6- (4-t-butyl-2,6-dimethylbenzylamino) purine, 6- (2-aminobenzylamino) purine, 6- (3-aminobenzylamino) purine, 6- (4-aminobenzylamino) purine, 6- (2-amino-6-chlorobenzylamino) purine, 6- (3-amino-4-chlorobenzylamino) Purine, 6- (2-amino-3-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-amino-4-chlorobenzylamino) purine, 6- (2-amino-6- Lolo benzylamino) purine, 6- (2,6-diamino-3-chloro-benzylamino) purine, 6- (2,6-diamino-4-chloro-benzylamino) purine,
6- (4-amino-3-chlorobenzylamino) purine, 6- (4-amino-5-chlorobenzylamino) purine, 6- (5-amino-2-methylbenzylamino) purine, 6- (2- Amino-3-nitrobenzylamino) purine, 6- (4-amino-3-nitrobenzylamino) purine, 6- (4-benzyloxybenzylamino) purine, 6- (3-acetylbenzylamino) purine, 6- (2-acetylbenzylamino) purine, 6- (2,3,4-trimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,4,5-trimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,4,6- Trimethoxybenzylamino) purine, 6- (3,4,5-trimethoxybenzylamino) purine, 6- (2,4,6-trimethoxybenzylamino) purine, 6- 2,3,4-trihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,4,6-trihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,3,4-trihydroxybenzylamino) purine, 6- (3 4,5-trihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,4,6-trihydroxybenzylamino) purine, 6- (2,4,5-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,4,5) -Trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,4,6-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,3,4-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,3,5-trichlorobenzylamino) Purine, 6- (2,3,6-trichlorobenzylamino) purine, 6- (2,5,6-trichlorobenzylamino) purine,
6-anilinopurine, 6- (2,4-bis (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,5-bis (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,4-bis (trifluoromethyl) ) Anilino) purine, 6- (3,5-bis (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2-bromoanilino) purine, 6- (3-bromoanilino) purine, 6- (4-bromoanilino) purine, 6 -(4-bromo-2-chloroanilino) purine, 6- (4-bromo-3-chloroanilino) purine, 6- (2-bromo-6-chloro- (4- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (4-bromo-5,6-difluoroanilino) purine, 6- (2-bromo-4,6-difluoroanilino) purine, 6- (4-bromo-2,6-difluoro Nilino) purine, 6- (4-bromo-2-fluoroanilino) purine, 6- (2-bromo-4-fluoroanilino) purine, 6- (2-bromo-4-methylanilino) purine, 6- ( 3-bromo-2-methylanilino) purine, 6- (4-bromo-3-methylanilino) purine, 6- (2-bromo-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (3-bromo-4-) (Trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (4-bromo-2- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2-bromo-4,5,6-trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2,4-dibromoanilino) purine,
6- (2,5-dibromoanilino) purine, 6- (2,4-dibromo-3,6-dichloroanilino) purine, 6- (2,6-dibromo-4-fluoroanilino) purine, 6 -(2,6-dibromo-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2,4-dibromo-6- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,6-dibromo-4- (Trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,3-dichloroanilino) purine, 6- (2,4-dichloroanilino) purine, 6- (2,5-dichloroanilino) purine, 6- (2,6-dichloroanilino) purine, 6- (3,4-dichloroanilino) purine, 6- (3,5-dichloroanilino) purine, 6- (2,6-dichloro-4- (tri) Fluoromethoxy) anilino) purine 6- (2,4-dichloro-6- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,6-dichloro-4- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,3-difluoroanilino) ) Purine, 6- (2,4-difluoroanilino) purine, 6- (2,5-difluoroanilino) purine, 6- (2,6-difluoroanilino) purine, 6- (3,4-difluoro) Anilino) purine, 6- (3,5-difluoroanilino) purine, 6- (2-difluoromethoxyanilino) purine, 6- (2-difluoromethoxy-5-nitroanilino) purine, 6- (2,3 -Difluoro-6-nitroanilino) purine, 6- (2,4-difluoro-6-nitroanilino) purine, 6- (2,4-diiodoanilino) purine,
6- (2,3-dimethylanilino) purine, 6- (2,4-dimethylanilino) purine, 6- (2,3-dimethyl-6-nitroanilino) purine, 6- (2,4-dimethoxyanisine) Lino) purine, 6- (2,3-dimethoxyanilino) purine, 6- (2,3-dinitro-6-methylanilino) purine, 6- (4-hydroxy-2-methylanilino) purine, 6- (2- Chloroanilino) purine, 6- (3-chloroanilino) purine, 6- (4-chloroanilino) purine, (3-chloro-2,6-dibromo-4-fluoroanilino) purine, 6- (2-chloro-4-) Fluoroanilino) purine, 6- (2-chloro-5-fluoroanilino) purine, 6- (2-chloro-6-fluoroanilino) purine, 6- (3-chloro-2-fluoroanilino) Phosphorus, 6- (3-chloro-4-fluoroanilino) purine, 6- (4-chloro-2-fluoroanilino) purine, 6- (5-chloro-2-fluoroanilino) purine, 6- ( 2-chloro-4-fluoro-5-methylanilino) purine, 6- (5-chloro-4-fluoro-2-nitroanilino) purine, 6- (5-chloro-2-hydroxyanilino) purine, 6- (4 -Chloro-2-iodoanilino) purine, 6- (2-chloro-4-iodoanilino) purine, 6- (2-chloro-6-methylanilino) purine, 6- (3-chloro-2-methylanilino) purine, 6- (3-chloro-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (4-chloro-2- (trifluoromethoxy) anilino) purine,
6- (2-fluoroanilino) purine, 6- (3-fluoroanilino) purine, 6- (4-fluoroanilino) purine, 6- (2-fluoro-4-iodoanilino) purine, 6- (2 -Fluoro-5-nitroanilino) purine, 6- (2-fluoro-4-methylanilino) purine, 6- (3-fluoro-2-methylanilino) purine, 6- (3-fluoro-4-methylanilino) purine, 6- (4-fluoro-2-methylanilino) purine, 6- (3-fluoro-4-methylanilino) purine, 6- (5-fluoro-2-methylanilino) purine, 6- (4-fluoro-2-nitroanilino) purine, 6- (4-Fluoro-3-nitroanilino) purine, 6- (2-iodoanilino) purine, 6- (2-fluoro-4- (trifluoromethyl) Anilino) purine, 6- (4-iodo-2-methylanilino) purine, 6- (2-methoxyanilino) purine, 6- (3-methoxyanilino) purine, 6- (4-methoxyanilino) purine, 6- (2-methoxy-5-methylanilino) purine, 6- (2-methoxy-6-methylanilino) purine, 6- (4-methoxy-2-methylanilino) purine, 6- (5-methoxy-2-methylanilino) Purine, 6- (4-methoxy-3- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2-methylanilino) purine, 6- (4-methylanilino) purine, 6- (3-methylanilino) purine, 6- ( 2-methyl-3- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2-methyl-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- ( - (methylthio) anilino) purine, 6- (4- (methylthio) anilino) purine,
6- (2-nitroanilino) purine, 6- (3-nitroanilino) purine, 6- (4-nitroanilino) purine, 6- (2-nitro-4,5,6-trifluoroanilino) purine, 6- ( 2-nitro-4- (trifluoromethoxy) anilino) purine, 6- (2-nitrotetrafluoroanilino) purine, 6- (2,3,4,5,6-pentabromoanilino) purine, 6- (2,3,4,5,6-pentafluoroanilino) purine, 6- (2,3,4,5-tetrachloroanilino) purine, 6- (2,3,5,6-tetrachloroani) Lino) purine, 6- (4- (1,1,2,2-tetrafluoroethoxy) anilino) purine, 6- (2,3,4,5-tetrafluoroanilino) purine, 6- (2,3 , 4,6-tetrafluoroanilino) pre 6- (2,3,5,6-tetrafluoroanilino) purine, 6- (2,3,5,6-tetrafluoro-4- (trifluoromethyl) anilino) purine, 6- (2,4 , 6-tribromoanilino) purine, 6- (2,4,6-tribromo-3,5-diiodoanilino) purine, 6- (2,3,4-trichloroanilino) purine, 6- (2,4 , 5-trichloroanilino) purine, 6- (2,4,6-trichloroanilino) purine,
6- (2,4,5-trifluoroanilino) purine, 6- (2,3,5-trifluoroanilino) purine, 6- (2,3,6-trifluoroanilino) purine, 6- (2,3,4-trifluoroanilino) purine, 6- (2-trifluoromethoxyanilino) purine, 6- (3-trifluoromethoxyanilino) purine, 6- (4-trifluoromethoxyanilino) ) Purine, 6- (2,3,4-trifluoro-6-nitroanilino) purine, 6- (2,4,5-trimethylanilino) purine, 6- (2,4,6-trimethylanilino) purine 6- (3-chloro-4-carboxyanilino) purine, 6- (3-amino-4-chloroanilino) purine, 6- (3-chloro-4-aminoanilino) purine, 6- (3-carboxy-4) -Hydroxy Nirino) is a compound selected from purine, N ₆ of formula I according to claim 1, wherein - heterocyclic compounds based on substituted adenine. R2 and R6 are as defined in claim 1 and nucleophilic substitution to convert a chlorine, bromine or methylmercapto group at position R6 to a substituent R6 of other nature as previously described herein. A process for the preparation of a heterocyclic compound derived from an N ₆ -substituted adenine composition material of formula I according to claim 1, comprising a reaction to obtain a compound having formula I. Wherein R2 and R6 are as defined in claim 1, wherein R2 is hydrogen and R6 is an amino group, from a heterocyclic derivative having formula I by reaction with an aldehyde having formula R6′-CHO Is substituted at the position of R6 in order to convert it to a substituent R6 of other properties as described hereinbefore, whereby R2 and R6 are as defined in claim 1 A process for preparing a compound which is a composition of formula I according to claim 1 to obtain a compound having formula I. A heterocyclic compound based on an N ₆ -substituted adenine of the formula I according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use as a medicine. Heterocyclic compounds based on N ₆ -substituted adenines of the formula I according to claim 1, used as plant growth regulators for plants, mammals, microorganisms, yeasts, fungi. Heterocyclic compounds based on N ₆ -substituted adenines of the formula I according to claim 1, for use as cosmetics. A pharmaceutical, cosmetic or growth regulator comprising a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, including a pharmaceutical carrier. For the preparation of affinity-absorbing cell stroma, immobilized enzymes for process control, immunoassays, diagnostic samples, ¹⁴ C and ³ H-labeled compounds and oligonucleotides, avidin and biotin A method of using a compound of formula I. In particular, cancer, psoriasis, rheumatoid arthritis, lupus, type 1 diabetes, multiple sclerosis, including pharmaceutical carriers for the preparation of pharmaceutical compositions intended for use as mitotic or antimitotic compounds For the treatment of restenosis, polycystic kidney disease, transplant rejection, graft-versus-host disease and gout, parasitic diseases caused by fungi and protozoa, Alzheimer's disease, or as an anti-neurogenesis drug, or immune Use of a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof for inhibiting activation or treating proliferative skin diseases. Heterocyclic compounds based on N ₆ -substituted adenines of the formula I according to claim 1, used in agriculture, in particular as growth regulators for enhancing the yield and quality of agricultural products. A heterocyclic compound based on an N ₆ -substituted adenine of the formula I according to claim 1, which is used as a cosmetic for suppressing aging and aging of mammalian cell epidermis such as keratinocytes and fibroblasts. A heterocyclic compound based on an N ₆ -substituted adenine of formula I according to claim 1, used as a growth regulator in cell culture for activation of proliferation and morphogenesis. Use of a heterocyclic compound based on an N ₆ -substituted adenine of formula I according to claim 1 for the preparation of a product intended for the cloning of plant or mammalian embryonic cells, in particular oocytes. Use of a heterocyclic compound based on an N ₆ -substituted adenine of formula I according to claim 1 for the preparation of a drug intended to suppress immunostimulation such as arthritis or suppress transplantation rejection in mammals.

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