JP2005181316A5 - - Google Patents

Description

前記の必要性や他の長年にわたる要求に応えて、本発明は、一般に、外部刺激に対する細胞の運動性応答を定量するための電気光学的方法を提供し、その方法では、標的細胞群（前記応答の関数として形成される）が光学的分別溶液の添加によって後に光学的に分別され、それによって標的細胞群は電気光学的読み取り装置に対して、より検出しやすくなるか、またはより検出しににくなる。

前記方法は、特に、多孔質膜（例えばトラックエッチングした同多孔質ポリカーボネート膜）に細胞（例えば接着性腫瘍誘導細胞）を付着させること；前記多孔質膜からの前記細胞の一部の移動を促進すること（例えばあらかじめ選択した化学誘引物質の濃度勾配を作製し、細胞をその中に入れることによって）；移動又は非移動細胞部分のいずれかに光学的分別溶液を加えて、前記処理部分を電気光学的読み取り装置（例えば走査型蛍光光度計）によって、より検出しやすくするか、またはより検出しににくすること；次に前記電気光学的読み取り装置を使用して移動及び／又は非移動細胞群のいずれかを「計数すること」（直接又は間接的に）の工程を含む。

前記方法は、図１ｃに示すように、出発表面に残存する細胞の部分（すなわち前記の非移動細胞群ＮＭＣ）又は行き先表面に移動した細胞の部分（すなわち前記移動細胞群ＭＣ）のいずれかに「光学的分別溶液」を加えて、あらかじめ選択した電気光学的読み取り装置によって前記処理部分をより検出しやすくするか、またはより検出しににくすることによって継続される。この工程の最後に、移動細胞群ＭＣと非移動細胞群ＮＭＣは「光学的に分別」される。

Claims (17)

1. （ａ）「出発表面（ｓｔａｒｔｉｎｇ ｓｕｒｆａｃｅ）」と「行き先表面（ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎ ｓｕｒｆａｃｅ）」を有する多孔質膜を提供すること；
   （ｂ）前記多孔質膜の出発表面に細胞を付着させ、前記多孔質膜を通る前記出発表面から前記行き先表面への前記細胞の一部の移動を促進すること；
   （ｃ）前記出発表面に残存する細胞の部分又は前記行き先表面に移動した細胞の部分のいずれかに光学的分別溶液を加えて、前記光学的分別溶液を加えた部分を電気光学的読み取り装置によって、より検出しやすくするか、またはより検出しににくすること；及び
   （ｄ）前記電気光学的読み取り装置を使用して、前記出発表面に残存する又は前記行き先表面に移動した又はその両方の前記細胞の光学特性を読み取ること
   の工程をこの順序で含む、細胞の光学特性を検出することができる電気光学的読み取り装置を使用して細胞を分析するための方法。
2. 前記多孔質膜の出発表面上の工程（ｂ）にある細胞を、異なる所定暴露バンド幅の放射線への暴露時に所定蛍光バンド幅の放射線を放射する化合物で標識する、請求項１に記載の方法。
3. 前記化合物がカルセイン、カルセイン前駆体又はカルセイン誘導体である、請求項２に記載の方法。
4. 少なくとも前記所定蛍光バンド幅内の光を吸収することができる着色剤を含み、及び少なくとも工程（ｃ）及び（ｄ）の間前記多孔質膜を通って実質的に流動することができない、前記光学的分別溶液を、前記行き先表面に移動しない細胞と前記出発表面に適用することによって、前記出発表面に残存する細胞の部分をより検出しにくくする、請求項２に記載の方法。
5. 前記光学的分別溶液がグリセロール中の前記着色剤の懸濁液を含み、及び前記着色剤がカーボンブラックである、請求項４に記載の方法。
6. 工程（ｄ）の電気光学的読み取り装置を、前記所定暴露バンド幅の照射による前記細胞の移動部分の暴露後の前記所定蛍光バンド幅内の放射を検出するために利用し、前記暴露が前記細胞の移動部分への入射前に前記多孔質膜を通過しない、請求項５に記載の方法。
7. 前記多孔質膜が同多孔質ポリカーボネート膜である、請求項１に記載の方法。
8. 前記多孔質膜が入れ子になった頭部液体容器と底部液体容器の間に存在し、前記入れ子式液体容器が前記多孔質膜によって上部区域と下部区域に分けられている、請求項１に記載の方法。
9. 前記方法を、前記入れ子式液体容器のアレイを含むマルチウエルアレイを使用して実施する、請求項８に記載の方法。
10. 前記マルチウエルアレイが２４個の前記入れ子式液体容器を含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記多孔質膜を通る前記出発表面から前記行き先表面への前記細胞の一部の工程（ｂ）での移動が、化学誘引物質含有溶液を前記下部区域内に入れることによって促進される、請求項８に記載の方法。
12. 前記多孔質膜の出発表面上の工程（ｂ）にある細胞を、異なる所定暴露バンド幅の放射線への暴露時に所定蛍光バンド幅の放射線を放射する化合物で標識する、請求項１１に記載の方法であって、
    少なくとも前記所定蛍光バンド幅内の光を吸収することができる着色剤を含み、及び少なくとも工程（ｃ）及び（ｄ）の間前記多孔質膜を通って実質的に流動することができない、前記光学的分別溶液を、前記上部区域に添加することによって、前記出発表面に残存する細胞の部分を電気光学的読み取り装置によってより検出しにくくする、請求項１１に記載の方法。
13. １％のカーボンブラックと５０％グリセロールを含む水性マスキング溶液。
14. 共通の包装内に納められた、
    各々の対が、入れ子にしたとき、半透明の同多孔質膜によって分けられた上部区域と下部区域を有する、入れ子式又は入れ子可能な液体容器の対を含むマルチウエルアレイ；及び
    カーボンブラックとグリセロールを含む水溶液
    を含む、細胞を分析するのに適した走化性アッセイキット。
15. カーボンブラックの濃度が少なくとも０．０５％（重量／容積）であり、グリセロールの濃度が５％から７５％（重量／容積）の範囲内である、請求項１４に記載の走化性アッセイキット。
16. 異なる所定暴露バンド幅の放射線に暴露したとき所定蛍光バンド幅の放射線を放射する化合物を含む細胞標識溶液
    をさらに含む、請求項１４に記載の走化性アッセイキット。
17. 前記化合物がカルセイン、カルセイン前駆体又はカルセイン誘導体である、請求項１６に記載の走化性アッセイキット。