JP2005176628A - 細胞培養用基板と生物活性物質移送シートからなる細胞培養用キット、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法 - Google Patents
細胞培養用基板と生物活性物質移送シートからなる細胞培養用キット、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005176628A JP2005176628A JP2003418535A JP2003418535A JP2005176628A JP 2005176628 A JP2005176628 A JP 2005176628A JP 2003418535 A JP2003418535 A JP 2003418535A JP 2003418535 A JP2003418535 A JP 2003418535A JP 2005176628 A JP2005176628 A JP 2005176628A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- culture
- region
- cell culture
- biologically active
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【解決手段】 複数の生物活性物質の組み合わせかつ/または密度が異なる生物活性物質の固定化領域からなる細胞培養用基板および、複数の生物活性物質の組み合わせかつ/または密度が異なる領域からなる生物活性物質を遊離可能な生物活性物質移送シートを用いて細胞培養用キットを構成する。
【選択図】 図2
Description
細胞を培養するための培養領域を有する基板と、該基板上に載置可能であり、該細胞領域の覆い領域を有するシート媒体と、を有する細胞培養用キットであって、
前記培養領域及び前記シート媒体の該培養領域に対する覆い領域の両方が、細胞に対して生理活性を有する1種以上の生物活性物質を有し、これらの領域の一方が有する生物活性物質が該領域内に固定されていることを特徴とする細胞培養用キットである。
(1)基板上の所望の領域での細胞の形態変化を評価する。
(2)基板上の所望の領域での細胞内に取り込まれた物質の定量を行う。
(3)基板上の所望の領域での細胞内で合成された物質の定量を行う。
(4)細胞を染色して形態評価や物質の定量を行う。
(5)レポーター遺伝子によるシグナルを検出する。
(6)サイトブロットアッセイにより評価を行う。
(7)放射線量測定により物質の定量を行う。
(8)蛍光量測定により物質の定量を行う。
(9)発光量測定により物質の定量を行う。
(10)吸光度測定により物質の定量を行う。
実施例1
生物活性物質を組み合わせて細胞に作用させるため、以下の方法を用いた。生物活性物質として塩基性繊維芽細胞成長因子(bFGF)、インスリン様成長因子-I(IGF-I)、骨形成タンパク質-2(BMP-2)を用いた。まず、生物活性物質を基板上に固定化するために、ポリスチレン製の96穴の細胞培養用プレートに、以下の方法により、基板に処理を施した。
生物活性物質としては上皮細胞成長因子(EGF)と神経細胞成長因子(NGF)を用いた。まず、実施例1と同様の手法を用いて、ポリスチレン製の96穴の細胞培養用プレートに、段階的に密度を変えてEGFが固定化された領域および非固定化領域を作成し、細胞スクリーニング用基板を作製した。次に、伸縮性のポリオレフィンシートに担持層としてヒドロキシプロピルセルロースをバーコーターを用いて塗布し、60℃10分間の加熱を行い担持層を形成した。次に、シートにキヤノン製インクジェットプリンターPIXUS 950iを用いてEGFとNGFをシートに配置し、複数の生物活性物質の領域を持つ生物活性物質移送用シートを作製した。これらの細胞培養用基板および生物活性物質移送シートを用いて細胞のスクリーニングを行った。
ラットにマウスbFGFを抗原として免疫し、2ヵ月後にマウス脾臓細胞を取り出し、ミエローマ細胞と融合することで得られたハイブリドーマから、多数のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを得、そこから96種類のモノクローナル抗体を精製した。次に、培養用基板として、ポリスチレン製96穴プレートにマウスbFGFを200pg/mm2で固定化した。次に、パラフィルム上にヒドロキシプロピルセルロースをバーコーターを用いて全面に塗布し、得られたモノクローナル抗体を前記96穴プレートの各穴に対応する位置にキヤノン製インクジェットプリンターPIXUS 950iを用いて配置したシートを作製した。上記培養基板上にDMEM培養液を75μl加え、さらにシートをかぶせ密着させ、培養液とスクリーニングシートの抗体配置領域に基板を接触させ、抗体を培養液中に移送した。
実施例3において得られた3つの中和抗体のbFGFの機能抑制効果の濃度依存性を調べるために、bFGFをポリスチレン製96穴プレートに異なる濃度で固定化された細胞培養用基板を用意した。次に、パラフィルム上にヒドロキシプロピルセルロースをバーコーターを用いて前面に塗布し、インクジェットプリンターを用いてbFGFの中和抗体A、B、Cを、前記細胞培養用基板の各穴に対応する位置に印字したシートを得た。次に、スクリーニング基板に培養液を75μl加え、スクリーニング用シートをかぶせ、中和抗体の配置領域と培養液を接触させ、攪拌し、中和抗体を培養液中に移送した。次に、筋細胞株C2C12細胞を6×104個/ml含むDMEMを細胞培養用基板の各穴に75μl加え、5%CO2湿潤空気中、37℃で培養を行った。
48時間後、培養液を取り除き、メタノールで細胞を30分処理、乾燥させて固定した。次に、増殖の状況を評価するために、Hoechst33258を一万倍に希釈し、5分反応させ、核を染色した。余分な染色液をリン酸等張緩衝液で洗った。このようにして調製した基板を蛍光顕微鏡で観察、染色されている核の数を評価した。その結果、bFGFの中和抗体が移送された区画において、中和抗体の濃度が高くなるほど細胞の数が少ないことがわかり、bFGFの増殖促進効果が抑制されていることがわかった。また、細胞数の比較から、抑制効果はB、C、Aの順に強いことがわかった。
2 生物活性物質移送シート
3 吐出手段
4 培養液
11 ベース
12 生物活性物質
21 シート
22 生物活性物質
23 凸部
Claims (28)
- 細胞を培養するための培養領域を有する基板と、該基板上に載置可能であり、該細胞領域の覆い領域を有するシート媒体と、を有する細胞培養用キットであって、
前記培養領域及び前記シート媒体の該培養領域に対する覆い領域の両方が、細胞に対して生理活性を有する1種以上の生物活性物質を有し、これらの領域の一方が有する生物活性物質が該領域内に固定されている
ことを特徴とする細胞培養用キット。 - 前記培養領域と該培養領域に対する前記シートと媒体側の覆い領域との組み合わせの2以上を有する請求項1に記載の細胞培養用キット。
- 前記培養領域に生物活性物質が固定されおり、該培養領域に対する覆い領域に生物活性物質が培養液との接触により、該培養液中に放出可能に付着しており、前記シート媒体が生物活性物質の該培養領域への移送用シートとなっている請求項1に記載の細胞培養用キット。
- 前記培養領域と該培養領域の覆い領域との組み合わせの2以上を有する請求項3に記載の細胞培養用キット。
- 前記生物活性物質の種類または2種以上の生物活性物質の組み合わせが異なる2以上の培養領域を有する請求項2〜4のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 前記生物活性物質の密度が異なる2以上の培養領域を有する請求項2〜5のいずれかにに記載の細胞培養用キット。
- 前記生物活性物質の種類または2種以上の生物活性物質の組み合わせが異なる2以上の覆い領域を有する請求項2〜6のいずれかにに記載の細胞培養用キット。
- 前記生物活性物質の密度が異なる2以上の覆い領域を有する請求項2〜7のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 前記培養領域が前記基板に設けられた凹部内に形成されている請求項1〜8のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 前記培養領域が凸状の壁状構造物により囲まれている請求項1〜9のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 前記シート媒体が少なくとも前記覆い領域において伸縮性または可撓性のあるフィルムからなる部分を有する請求項1〜10のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 前記シート媒体上に生物活性物質を担持する担持層が部分的にまたは全面に形成されている請求項1〜11のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 前記担持層が生物活性物質の徐放が可能、もしくは徐放性を付与した生物活性物質を遊離できる請求項12に記載の細胞培養用キット。
- 前記覆い領域が前記シート媒体に設けられた凹部内に形成されている請求項1〜13のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 前記覆い領域が前記シート媒体上に形成された凸状の部分に形成されている請求項1〜13のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 前記覆い領域が前記シート媒体上に形成された凸状の壁状構造物により囲まれている請求項1〜15のいずれかに記載の細胞培養用キット。
- 請求項1〜16のいずれかに記載の細胞培養キットの製造方法であって、
前記培養領域及び前記覆い領域への生物活性物質の付与に、少なくとも液体吐出手段を用いることを特徴とする細胞培養キットの製造方法。 - 前記液体吐出手段が、サーマルインクジェット方式による吐出手段である請求項17に記載の細胞培養用キットの製造方法。
- 前記液体吐出手段が、ピエゾインクジェット方式による吐出手段である請求項17に記載の細胞培養用キットの製造方法。
- 前記生物活性物質の固定を外部から固定用のエネルギーを加えて行う工程をさらに含む請求項17〜19のいずれかに記載の細胞培養用キットの製造方法。
- 請求項1〜16のいずれかに記載の細胞培養用キットを用いた細胞スクリーニング法であって、前記基板に前記シート媒体を載置して、該基板の有する培養領域を該培養領域に対応する覆い領域で覆い、該細胞領域内に配置した培養液中でこれらの領域の一方に固定した生物活性物質と細胞とを接触させて細胞を培養する工程と、これらの領域の他方に付着させた生物活性物質を培養液に供給する工程を、有することを特徴とする細胞スクリーニング方法。
- 前記培養液中に前記細胞のスクリーニングに必要な物質を補充する工程を有する請求項21に記載の細胞スクリーニング法。
- 前記シート媒体を同一または異なるシート媒体と交換する工程を有する請求項21または22に記載の細胞スクリーニング方法。
- 前記細胞の形態変化を観察する工程を更に含む請求項21〜23のいずれかに記載の細胞スクリーニング法。
- 評価の際に細胞を染色する請求項24に記載の細胞スクリーニング法。
- 前記細胞内で合成された物質の定量を行う工程を含む請求項21〜25のいずれかに記載の細胞スクリーニング法。
- 前記細胞内に取り込まれた物質の定量を行う工程を含む請求項21〜26のいずれかに記載の細胞スクリーニング法。
- 前記放射線量測定、蛍光量測定、発光量測定および吸光度測定の少なくとも1種により前記物質の定量を行う工程を含む請求項26または27に記載の細胞スクリーニング法。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003418535A JP4148516B2 (ja) | 2003-12-16 | 2003-12-16 | 細胞培養用基板と生物活性物質移送シートからなる細胞培養用キット、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法 |
EP04807646A EP1694812A4 (en) | 2003-12-16 | 2004-12-16 | BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCE TRANSFER SHEET, CELL CULTURE FORM FOR A CELL CULTURE PLATE AND BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCE TRANSFER SHEET, RELATIVE PRODUCTION METHOD, AND CELL CULTURE CONDITION SCREENING METHOD USING SAME |
PCT/JP2004/019289 WO2005059086A1 (en) | 2003-12-16 | 2004-12-16 | Biologically active substance transfer sheet, cell culture kit constituted of cell culture plate and biologically active substance transfer sheet, producing method thereof and method for screening cell culture conditions utilizing the same |
US10/554,211 US7419820B2 (en) | 2003-12-16 | 2004-12-16 | Transfer sheet for transferring biologically active substance to culture plate |
US12/183,008 US7960168B2 (en) | 2003-12-16 | 2008-07-30 | Biologically active substance transfer sheet, cell culture kit constituted of cell culture plate and biologically active substance transfer sheet, producing method thereof and method for screening cell culture conditions utilizing the same |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003418535A JP4148516B2 (ja) | 2003-12-16 | 2003-12-16 | 細胞培養用基板と生物活性物質移送シートからなる細胞培養用キット、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005176628A true JP2005176628A (ja) | 2005-07-07 |
JP4148516B2 JP4148516B2 (ja) | 2008-09-10 |
Family
ID=34780730
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003418535A Expired - Fee Related JP4148516B2 (ja) | 2003-12-16 | 2003-12-16 | 細胞培養用基板と生物活性物質移送シートからなる細胞培養用キット、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4148516B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018047682A1 (ja) * | 2016-09-09 | 2018-03-15 | 旭化成パックス株式会社 | フィルム、フィルム巻回体、フィルム収納体、及びフィルムを用いた容器の保護方法 |
-
2003
- 2003-12-16 JP JP2003418535A patent/JP4148516B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018047682A1 (ja) * | 2016-09-09 | 2018-03-15 | 旭化成パックス株式会社 | フィルム、フィルム巻回体、フィルム収納体、及びフィルムを用いた容器の保護方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4148516B2 (ja) | 2008-09-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7960168B2 (en) | Biologically active substance transfer sheet, cell culture kit constituted of cell culture plate and biologically active substance transfer sheet, producing method thereof and method for screening cell culture conditions utilizing the same | |
US8148153B2 (en) | Substrate for cell culture, producing method thereof and screening method for cell culture conditions utilizing the same | |
US8709744B2 (en) | Manufacturing process for cellular screening substratum, resultant substratum, and method and apparatus for screening | |
Seo et al. | High-throughput approaches for screening and analysis of cell behaviors | |
Anderson et al. | Biomaterial microarrays: rapid, microscale screening of polymer–cell interaction | |
Barron et al. | Laser printing of single cells: statistical analysis, cell viability, and stress | |
Chen et al. | Cell patterning without chemical surface modification: Cell–cell interactions between printed bovine aortic endothelial cells (BAEC) on a homogeneous cell-adherent hydrogel | |
Goubko et al. | Patterning multiple cell types in co-cultures: A review | |
Othon et al. | Single-cell printing to form three-dimensional lines of olfactory ensheathing cells | |
Cheng et al. | Three-dimensional polymer scaffolds for high throughput cell-based assay systems | |
Schiele et al. | Laser direct writing of combinatorial libraries of idealized cellular constructs: biomedical applications | |
Hasirci et al. | Novel surface patterning approaches for tissue engineering and their effect on cell behavior | |
CA2539670A1 (en) | Nanoliter-scale synthesis of arrayed biomaterials and screening thereof | |
JP4378069B2 (ja) | 細胞スクリーニング基板とその製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法および細胞スクリーニング装置 | |
Collins et al. | Targeted delivery to single cells in precisely controlled microenvironments | |
US20050136536A1 (en) | Embryonic epithelial cells | |
JP4148500B2 (ja) | 細胞培養用の基体、その製造方法、それを用いた細胞培養法及び細胞培養装置 | |
Mota et al. | High throughput screening with biofabrication platforms | |
JP4148516B2 (ja) | 細胞培養用基板と生物活性物質移送シートからなる細胞培養用キット、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法 | |
JP4148515B2 (ja) | 生物活性物質移送シート、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法 | |
JP5979698B2 (ja) | 細胞接着領域のマイクロパターンを有する細胞固定化基板の製造方法 | |
Buzanska et al. | Neural stem cell fate control on micropatterned substrates | |
WO2023178320A1 (en) | Cell culture application methods of using a separation well microplate | |
Chitsaz et al. | High-throughput microcontact printing of proteins in microwell cell culture plates | |
van Dongen et al. | A reagent-based dynamic trigger for cell adhesion, shape change, or cocultures |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050614 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080326 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080526 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080618 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080623 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110704 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Ref document number: 4148516 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120704 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120704 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130704 Year of fee payment: 5 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |