JP2005035899A

JP2005035899A - 発癌予防剤

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Publication number: JP2005035899A
Application number: JP2003197518A
Authority: JP
Inventors: Toshihiro Akihisa; 俊博秋久; Motohiko Ukiya; 基彦浮谷; Harukuni Tokuda; 春邦徳田; Kazuo Koike; 一男小池
Original assignee: Nihon University
Current assignee: Nihon University
Priority date: 2003-07-16
Filing date: 2003-07-16
Publication date: 2005-02-10
Anticipated expiration: 2023-07-16
Also published as: JP4608674B2

Abstract

【課題】安全で有効な発癌予防剤を提供すること。
【解決手段】転位骨格を持つ３，４−ｓｅｃｏ−チルカラン型化合物である、サンポレネノール、（２４Ｓ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール、（２４Ｒ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール、（２３Ｅ）−２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシサンポレナノール、（２４Ｓ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール、及び（２４Ｒ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノールからなる群から選んだ少なくとも１種のトリテルペン系化合物を有効成分とすることを特徴とする発癌予防剤。
【選択図】なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、癌の発生を予防する発癌予防剤に関する。本発明はさらに詳細には、転位骨格を持つ３，４−ｓｅｃｏ−チルカラン型のトリテルペン系化合物を有効成分とする発癌予防剤に関する。本発明の上記化合物は、好ましくはキク科植物花卉及び／又は花粉を処理して得られる。本発明の上記化合物は、さらに好ましくは、ヒマワリの花粉を処理して得られるものである。
【０００２】
【従来の技術】
ある種のトリテルペン系化合物が発癌予防剤として有効であることは、すでに知られている（例えば、特許文献１参照。）。しかし特許文献１は、具体的に発癌予防に関して十分な効果を有するトリテルペン系化合物を開示するものではない。ところが複雑な現代生活に伴って、安全性が高くかつ十分な効果を有する発癌予防剤は、強く求められている。
【０００３】
【特許文献１】
特開平９−２５２３２号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
発癌予防の大きなニーズとに鑑みて、安全で有効な発癌予防剤が得られないものかとの期待は大きい。
そこで本発明の課題は、安全で有効な発癌予防剤を提供することである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
発癌予防剤の探索を行うためには、抗発癌プロモーターの探索を行う方法が最も有用である。この、抗発癌プロモーター探索の一次スクリーニング法としては、ＥＢＶ活性化抑制検定法が知られている。
【０００６】
本発明者等は、キク科植物花卉及び／又は花粉を処理して得られるトリテルペン系化合物に注目して鋭意研究を行った結果、転位骨格を持つ３，４−ｓｅｃｏ−チルカラン型のトリテルペン系化合物からなる群から選ばれた少なくとも１種の上記化合物が優れた発癌予防効果を持ち、安全性の高い発癌予防剤になり得ることを見出し、本発明を完成するに至った。特にキク科植物花卉及び／又は花粉を処理して得られる上記化合物は、安全な天然物であるキク科植物花卉及び／又は花粉を起源とすることで、安全性については注目に値するメリットがある。中でもヒマワリの花粉を処理して得られるものは、発癌予防、安全性ともにとりわけ優れている。
よって本発明は、特にキク科植物花卉及び／又は花粉エキス成分の抗発癌プロモーター活性を見出した点に重要な意義がある。
【０００７】
発明者はＥＢＶのゲノムを内臓するバーキット・リンパ腫由来の培養細胞であるラジ（Ｒａｊｉ）株において、ＥＢＶ・ゲノムの発現を阻害する化合物の多くがマウス皮膚発癌二段階実験において抗発癌プロモーターとして作用する点に注目した。そしてヒマワリ花粉抽出物からＥＢＶ・ゲノムの発現を阻害するウイルス・ゲノム不活性化物質を探索した。
【０００８】
ＥＢＶ・ゲノムの発現阻害作用に着目したこの方法はラジ株培養系に発癌プロモーターであるＴＰＡ（テトラデカノイルホルボールアセテート）と活性発現のために相乗作用として働くｎ−酪酸、それに被検物質を加えて培養し、ＴＰＡにより活性化された細胞由来の抗体を用いる間接蛍光抗体法で検出する方法である。この方法は、迅速、かつ定量性に優れ、加えて、微量活性成分の検出が可能な点で優れた方法である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
活性試験法
以下に、ＥＢＶ活性化抑制効果検定法の操作手順を、図１のスキームを参照しながら詳細に説明する。なお、本手順は、徳田らの方法［ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓ、４０巻、３０９頁（１９８８）］に準拠している。
（１）１ｘ１０^６／ｍＬのラジ細胞に２０ｎｇ／ｍＬ（３２ｐｍｏｌ）の濃度のＴＰＡを加え、さらにｎ−酪酸を加えた。
（２）そこに、水、エタノール、又はジメチルスルホキシドに溶解した所定量の被検物質を添加して、３７℃で４８時間培養した。
（３）培養終了後、上咽頭癌患者の血清を用いた間接蛍光抗体法によりＥＢＶ早期抗原の発現を検出した。
ＴＰＡのみを加えた群（コントロール）のＥＢＶ早期抗原の発現率を１００％として、被検物質添加群のＥＢＶ早期抗原の発現率を求め、次式により被検物質のＥＢＶ早期抗原の発現率（％）を算出した。
【００１０】
【数１】
ＥＢＶ早期抗原の発現阻害率）（％）＝１００ − 被検物質添加群のＥＢＶ早期抗原の発現率（％）
なお、被検物質の濃度が１０００倍モル濃度の欄の括弧内の数値は、ラジ細胞の生存率（％）を示す。この数値が高い方が正常細胞に対する悪影響が小さい、すなわち安全性が高いと言える。
【００１１】
本発明は、好ましくはキク科植物花卉及び／又は花粉を処理して得られるトリテルペン系化合物を含有する発癌予防剤に関する。これらの化合物のうち、トリテルペン系化合物は、転位骨格を持つ３，４−ｓｅｃｏ−チルカラン型の新規化合物である、サンポレネノール（化合物１）、（２４Ｓ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール（化合物２）、（２４Ｒ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール（化合物３）、（２３Ｅ）−２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシサンポレナノール（化合物４）、（２４Ｓ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール（化合物５）、及び（２４Ｒ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール（化合物６）からなる群から選ばれた少なくとも１種のものである。
【００１２】
本発明におけるトリテルペン系化合物を得るためのキク科植物花卉及び／又は花粉としては、ヒマワリ、姫ヒマワリ、食用菊、小菊、菊、ジョ菊、オロシャ菊、紅花、貢菊、毫菊、カミツレ、カワラヨモギ、オグルマ、款冬、コスモス、菊イモ、ゴボウ、利根アザミ、朝鮮アザミ、マリアアザミ、キンセンカ、アルニカ、バッカリス、ブタナ、西洋タンポポ、関東タンポポのようなキク科植物のものが挙げられる。
【００１３】
本発明においては例えば、キク科植物花卉及び／又は花粉を有機溶媒で抽出してトリテルペン系化合物を得る。
【００１４】
抽出用の有機溶媒としては、特にエタノール、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、アセトン、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、イソプロピルエーテル等が好ましく、これらの溶媒を単独又は混合し、または水で希釈して用いることができる。
得られた抽出物はそのまま又は濃縮してエキス状で、又は乾燥して粉末状にして種々の製剤化が可能である。
【００１５】
本発明のキク科植物花卉及び／又は花粉抽出物は、適当な医薬用の担体又は希釈剤と組み合わせて医薬とすることができ、通常の如何なる方法によっても製剤化でき、経口又は非経口投与するための固体、半固体又は液体の剤形に処方することができる。処方にあたっては、他の医薬活性成分との配合剤としてもよい。
【００１６】
例えば、日本薬局方に記載されている各種製剤、即ち、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、乾燥エキス剤、トローチ剤等の内用固形製剤、流エキス剤、エリキシル剤、酒精剤、シロップ剤、リモナーデ剤等の内用液剤、チンキ剤、リニメント剤、ローション剤等の外用液剤、硬膏剤、軟膏剤、パップ剤等の外用剤などに製剤化できる。また、投与可能であるならば、吸入剤、エアゾール剤、注射剤、点眼剤、座剤等にも用途に応じて製剤化してもよい。
【００１７】
経口投与においては、成人に対し体重１ｋｇ当り０．５〜５００ｍｇ／日の範囲で投与するのが好ましい。
【００１８】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。
【００１９】
ヒマワリ花粉３３６ｇをジエチルエーテルによりソックスレー抽出器を用いて４８時間抽出し、２８ｇの抽出物を得た。この抽出物は、シリカゲル（６００ｇ）カラムクロマトグラフィーにより、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒［１：０（２．４Ｌ）、９：１（３．９Ｌ）、１：１（２．４Ｌ）、０：１（１．０Ｌ）］を展開液として用い、順次溶出させながら分画した。これにより、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（９：１）溶出部より画分Ｉ［２．０ｇ；シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ；展開液：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（６：１））でＲｆ値０．５３］、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１：１）溶出部より画分ＩＩ［１．３ｇ；ＴＬＣＲｆ値０．１０］、及び他の５画分が得られた。
【００２０】
画分Ｉからは、メタノールを展開液としたオクタデシルシリカ（ＯＤＳ）カラムクロマトグラフィー、続いてのＯＤＳカラムＨＰＬＣ（２５ｃｍｘ内径１０ｍｍ；展開液：メタノール、４ｍＬ／分）を行い、サンポレネノール（化合物１）（１１７ｍｇ；保持時間１７．１分）、（２３Ｅ）−２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシサンポレナノール（化合物４）（１８ｍｇ；保持時間６．９分）、及び（２４Ｓ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール（化合物２）と（２４Ｒ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール（化合物３）の混合物を得た。後者の混合物からは、順相シリカカラムＨＰＬＣ［２５ｃｍｘ内径４．６ｍｍ；展開液：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（９２：８）、１ｍＬ／分］により化合物２（５ｍｇ；保持時間４８．８分）および化合物３（１１ｍｇ；５１．４分）を単離した。
【００２１】
画分ＩＩは更にＯＤＳカラムクロマトグラフィー［展開液：メタノール／水（８５：１５）］で精製後、ＯＤＳカラムＨＰＬＣ［２５ｃｍｘ内径１０ｍｍ；展開液：メタノール／水（８５：１５）、４ｍＬ／分］を行い、（２４Ｓ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール（化合物５）及び（２４Ｒ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール（化合物６）の混合物（保持時間：１４．７分）を得た。この混合物の順相シリカカラムＨＰＬＣ［２５ｃｍｘ内径１０ｍｍ；展開液：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７：３）、４ｍＬ／分］により、化合物５（３ｍｇ；保持時間３６分）及び化合物６（４ｍｇ；保持時間３８分）を得た。トリテルペンの化学構造式は図２に示した。
【００２２】
６種の新規化合物１〜６の構造はＭＳ，ＩＲ，^１ＨＮＭＲ，^１３ＣＮＭＲ，^１Ｈ−^１ＨＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ及びＮＯＥＳＹ法により決定した。表１に、これらの化合物の^１ＨＮＭＲデータを、表２に、^１３Ｃ−ＮＭＲデータを示す。
【００２３】
【表１】

【００２４】
【表２】

【００２５】
これら６種の新規化合物の化学名を以下に示す。
化合物ｌ：４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌ−２４−ｅｎ−３，５β−ｏｘｉｄｅ
化合物２：（２４Ｓ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎｅ−３，５β：２４，２５−ｄｉｏｘｉｄｅ
化合物３：（２４Ｒ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎｅ−３，５β：２４，２５−ｄｉｏｘｉｄｅ
化合物４：（２３Ｅ）−４，２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌ−２３−ｅｎ−３，５β−ｏｘｉｄｅ
化合物５：（２４Ｓ）−４，２４，２５−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎ−３，５β−ｏｘｉｄｅ
化合物６：（２４Ｒ）−４，２４，２５−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎ−３，５β−ｏｘｉｄｅ
【００２６】
新規化合物１〜６の諸性質およびスペクトルデータ（表１及び表２のＮＭＲデータを除く）を次に示した。
【００２７】
サンポレネノール（化合物１）：無定形固体；［α］^２５ _Ｄ −１０．４°（ＣＨＣｌ_３；ｃ０．５６）；ＩＲ（ＫＢｒ） ν_ｍａｘ３４６５（ＯＨ），１０７９（Ｃ−Ｏ），８２９（＞Ｃ＝ＣＨ−）ｃｍ^−１；ＣＩＭＳｍ／ｚ４４５［ＭＨ］^＋（１３），４２７（１００），３８５（４１），３６９（４）；高分解能ＣＩＭＳｍ／ｚ４４５．４０４０（理論値Ｃ_３０Ｈ_５３Ｏ_２［ＭＨ］^＋，４４５．４０４５）；ＥＩＭＳｍ／ｚ４２９［Ｍ−Ｍｅ］^＋（１），４１１（６），３８５（１００），３１５（１），２８７（６），２７４（２），２７３（２），２０５（１３），１７９（６），１６３（３），１４９（１３），１１１（３２），６９（２０）．
【００２８】
（２４Ｓ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール（化合物２）：無定形固体；［α］^２５ _Ｄ −２７．０°（ＣＨＣｌ_３；ｃ０．２０）；ＩＲ（ＫＢｒ） ν_ｍａｘ３４４５（ＯＨ），１０７６（Ｃ−Ｏ）ｃｍ^−１；ＣＩＭＳｍ／ｚ４４３［ＭＨ−Ｈ_２Ｏ］^＋（１００），４２５（３０），４０１（４５）；高分解能ＣＩＭＳ
ｍ／ｚ４４３．３８８９（理論値Ｃ_３０Ｈ_５１Ｏ_２［ＭＨ−Ｈ_２Ｏ］^＋，４４３．３８８９）．
【００２９】
（２４Ｒ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール（化合物３）：無定形固体；［α］^２５ _Ｄ −２８．１°（ＣＨＣｌ_３；ｃ０．５２）；ＩＲ（ＫＢｒ） ν_ｍａｘ３４８０（ＯＨ），１０７６（Ｃ−Ｏ）ｃｍ^−１；ＥＩＭＳｍ／ｚ４４２［Ｍ−Ｈ_２Ｏ］^＋（１），４０１（７５），３８５（２６），２０３（１３），１７９（２１），１６５（２３），１４９（２８），１３５（２６），１２１（２６），１１１（１００）；高分解能ＥＩＭＳｍ／ｚ４４２．３８１２（理論値Ｃ_３０Ｈ_５０Ｏ_２［Ｍ−Ｈ_２Ｏ］^＋，４４２．３８１１）．
【００３０】
（２３Ｅ）−２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシサンポレナノール（化合物４）：無定形固体；［α］^２５ _Ｄ −２２．０°（ＣＨＣｌ_３；ｃ０．２）；ＩＲ（ＫＢｒ） ν_ｍａｘ３４４３（ＯＨ），１０７５（Ｃ−Ｏ），９７０（−Ｃ＝ＣＨ−）ｃｍ^−１； ^１ＨＮＭＲ（Ｃ_５Ｄ_５Ｎ） δ ０．８３，０．８４，１．２１，１．５３，１．５５，１．５６，１．５７（各３Ｈ及びｓ），０．９８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，Ｈ−２１），３．７８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝４．６，５．６，１１．２Ｈｚ，Ｈ−３），４．４７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝４．６，６．５，１１．２Ｈｚ，Ｈ−３），５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−２４），５．９９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝５．３，７．０，１５．０Ｈｚ，Ｈ−２３）；ＣＩＭＳｍ／ｚ４４３［ＭＨ−Ｈ_２Ｏ］^＋（６），４２５（２３），４０１（８５），３８３（１００）；高分解能ＣＩＭＳｍ／ｚ４４３．３８８２（理論値Ｃ_３０Ｈ_５１Ｏ_２［ＭＨ−Ｈ_２Ｏ］^＋，４４３．３８８９）．
【００３１】
（２４Ｓ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール（化合物５）：無定形固体；［α］^２５ _Ｄ −２３．４°（ＣＨＣｌ_３；ｃ０．６）；ＩＲ（ＫＢｒ） ν_ｍａｘ３４３５（ＯＨ），１０７５（Ｃ−Ｏ）ｃｍ^−１；ＥＩＭＳｍ／ｚ４６０［Ｍ−Ｈ_２Ｏ］^＋（３），４１９（１００），４０１（９０），１１１（９７）；高分解能ＥＩＭＳｍ／ｚ４６０．３９１９（理論値Ｃ_３０Ｈ_５２Ｏ_３［Ｍ−Ｈ_２Ｏ］^＋，４６０．３９１６）．
【００３２】
（２４Ｒ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール（化合物６）：無定形固体；［α］^２５ _Ｄ −１２．９°（ＣＨＣｌ_３；ｃ１．１）；ＩＲ（ＫＢｒ） ν_ｍａｘ３４３４（ＯＨ），１０７５（Ｃ−Ｏ）ｃｍ^−１；ＥＩＭＳｍ／ｚ４６０［Ｍ−Ｈ_２Ｏ］^＋（３），４４５（７），４１９（１００），４０１（８４），３８５（２６），３５９（２０），１１１（９０）；高分解能ＥＩＭＳｍ／ｚ４６０．３９１１（理論値Ｃ_３０Ｈ_５２Ｏ_３［Ｍ−Ｈ_２Ｏ］^＋，４６０．３９１６）．
【００３３】
以下には新規化合物１〜６の構造決定について述べた。
化合物１は高分解能ＣＩＭＳ（［Ｍ＋Ｈ］^＋ｍ／ｚ４４５．４０３９）及びＥＩＭＳ（［Ｍ − Ｍｅ］^＋ｍ／ｚ４２９）、更には^１３ＣＮＭＲより分子式Ｃ_３０Ｈ_５２Ｏ_２を持つ事が示された。ＩＲスペクトルから、水酸基（３４６５ｃｍ^−１）及び三置換二重結合（８２９ｃｍ^−１）の存在が示唆された。本化合物は７個の第３級メチル基［δ_Ｈ０．７９，０．８５，１．０８，１．２７，１．３０，１．６０，１．６８（各ｓ）］、１個の第２級メチル基［δ_Ｈ０．９１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）］、１個の酸素化されたメチレン基［δ_Ｈ３．６５（ｄｄｄ，Ｊ＝６．４，８．７，１１．９Ｈｚ）及び３．８２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．１，８．２，１１．９Ｈｚ）（各１Ｈ）； δ_Ｃ５８．６］、オレフィン性メチン基［δ_Ｈ５．０９（１Ｈ，ｔｔ，Ｊ＝１．４，６．０Ｈｚ）］、及び第３級水酸基［δ_Ｃ７８．５（ｓ）］を有している。これらのうち、酸素化されたメチレンシグナルはピラン環酸素のα‐位に位置するジェミナル結合をしたメチレン基に帰属できる。ＥＩＭＳはｍ／ｚ４２９［Ｍ − Ｍｅ］^＋，３１５［Ｍ − 側鎖（Ｃ_８Ｈ_１５；Ｃ−２０−Ｃ−２７） − Ｈ_２Ｏ］^＋，及び６９［ＣＨ_２ＣＨ＝Ｃ（Ｍｅ）_２］^＋（Ｃ−２３−Ｃ−２７）に開裂イオンを示したが、これは、化合物１が２個の酸素原子を含む四環性骨格にＣ−２４位不飽和のＣ_８側鎖を持つことを示唆している。更に、特徴的なｍ／ｚ３８５［イソプロパニル基（Ｃ_３Ｈ_７Ｏ）の脱離］^＋及びｍ／ｚ２７４（Ｃ_２０Ｈ_３４）イオン（これらはＣ−７−Ｃ−８及びＣ−９−Ｃ１０結合の開裂によるＡ及びＢ環の脱離に相当する）、また、ｍ／ｚ１６３（Ｃ_１２Ｈ_１９；２７４ −側鎖）イオンは、イソプロパノール基がＣ−５位に結合しており、Ｃ−１０位にはメチル基が存在しないことを示している。上記の知見、及び既知化合物のヘリアノール［３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａ−４，２４−ｄｉｅｎ−３−ｏｌ］［秋久ら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．、６１巻、４０９頁（１９９８）］及びターミナリンＡ（４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−ｇｌｕｔｉｎａｎ−３，５β−ｏｘｉｄｅ）［Ａｔｔａ−ｕｒ−Ｒａｈｍａｎら、ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．、４３巻、６２３３頁（２００２）］とのスペクトルデータの比較により、化合物１は４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌ−２４−ｅｎ−３，５−ｏｘｉｄｅ構造を持つことが予想された。この予想構造が正しいことは、^１Ｈ（表１）及び ^１３ＣＮＭＲデータ（表２）、更には^１３ＣＤＥＰＴＮＭＲ， ^１Ｈ−^１ＨＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ及びＨＭＢＣスペクトルの解析により確認した。化合物１の立体化学はＮＯＥＳＹスペクトル法により決定した。化合物１は、図３に示したように、分子のα‐面において［Ｈ−２９−Ｈ−１０α−Ｈ−８α−Ｈ−１８（１３α−Ｍｅ）−Ｈ−２０］の顕著なＮＯＥ相関を、一方、β‐面においては、［Ｈ−３β−Ｈ−１９（９β−Ｍｅ）−Ｈ−３０（１４β−Ｍｅ）−Ｈ−１７β−Ｈ−２１］の相関を示した。また、［Ｈ−１２α−Ｈ−２１］相関も認められることから、化合物１は図２に示した構造を持つことを明らかにした。なお、本化合物はサンポレネノールと命名した。
【００３４】
化合物２及び３は^１３ＣＤＥＰＴＮＭＲ法、並びにＭＳ（２：高分解能ＣＩＭＳｍ／ｚ４４３．３８８９［ＭＨ − Ｈ_２Ｏ］^＋ｉｎ高分解能ＣＩＭＳ；３：高分解能ＥＩＭＳｍ／ｚ４４２．３８１２［Ｍ − Ｈ_２Ｏ］^＋）法により分子式Ｃ_３０Ｈ_５２Ｏ_３を持つことが示された。これらの化合物は、ＩＲスペクトルで水酸基（２：３４４５ｃｍ^−１；３：３４８０ｃｍ^−１）の吸収を示した。化合物２及び３のトリテルペン骨格部の^１Ｈ（表１）及び^１３ＣＮＭＲ（表２）データは化合物１の対応するものとほぼ同一であり、一方、側鎖ＮＭＲシグナルは、２４，２５−エポキシ化されたＣ_８−側鎖を持つ既知化合物である４α，５α：２４，２５−ジエポキシヘリアノール［４α，５α：２４，２５−ｄｉｅｐｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎ−３β−ｏｌ］の２４Ｓ− 及び２４Ｒ−エピマー［浮谷ら、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．、５１巻、２９２９頁（２００３）］に極めて類似していた。化合物２及び３がＣ−２４及びＣ−２５位にエポキシ基を持つことは、ＨＭＢＣスペクトルでＨ−２４（Ｃ−２２，Ｃ−２３，Ｃ−２５，Ｃ−２６，及びＣ−２７と相関），Ｈ−２６（Ｃ−２４，Ｃ−２５，及びＣ−２７と相関），及びＨ−２７（Ｃ−２４，Ｃ−２５，及びＣ−２６と相関）にクロスピークを認めたことにより支持された。これらの事実から、化合物２及び３は４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎｅ−３，５β：２４，２５−ｄｉｏｘｉｄｅのＣ−２４エピマーであることが予想された。Ｃ−２４位の立体化学の帰属には、化合物２及び３の側鎖^１３Ｃシグナルの^１３ＣＮＭＲ化学シフト差を用いることが有用である。表２の^１３ＣＮＭＲデータから、化学シフト差は次のように計算された：Ｃ−２０（δ_３−δ_２＝０．１），Ｃ−２１（０．１），Ｃ−２２（０．２），Ｃ−２３（０．３），Ｃ−２４（０．１），Ｃ−２５（−０．３），Ｃ−２６（−０．３），及びＣ−２７（０．０）。これらは、４α，５α：２４，２５−ジエポキシヘリアノールのδ_Ｒ − δ_Ｓ差に一致しており、従って、化合物２及び３はそれぞれ４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎｅ−３，５β：２４，２５−ｄｉｏｘｉｄｅの２４Ｓ− 及び２４Ｒ−エピマーであることが示された。化合物２及び３の ^１３ＣＤＥＰＴ， ^１Ｈ−^１ＨＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析によりこれらの構造が確認された。なお、化合物２及び３はそれぞれ（２４Ｓ）− 及び（２４Ｒ）−２４，２５−エポキシサンポレネノールと命名した。
【００３５】
化合物４は^１３ＣＤＥＰＴＮＭＲ及び高分解能ＣＩＭＳにおける［ＭＨ − Ｈ_２Ｏ］^＋イオンをｍ／ｚ４４３．３８８２に観測した事から分子式Ｃ_３０Ｈ_５２Ｏ_３を持つことを確認した。ＩＲスペクトルからは、水酸基（３４４３ｃｍ^−１）及び二置換二重結合（９７０ｃｍ^−１）の存在が示唆された。^１Ｈ（表１）及び ^１３ＣＮＭＲ（表２）データから、本化合物が化合物１と同一の骨格構造を持つことが示された。本化合物は更に、側鎖部分に起因する、含酸素炭素と結合した２個の第３級メチル基［δ_Ｈ１．３１（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６，Ｈ−２７）］、１個の第２級メチル基［δ_Ｈ０．８９（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ；Ｈ−２１）］、及び２個のオレフィン性メチン基［δ_Ｈ（ＣＤＣｌ_３）５．５９（２Ｈ，ｍ；Ｈ−２３，Ｈ−２４）； δ_Ｈ（Ｃ_５Ｄ_５Ｎ）５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−２４），５．９９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝５．３，７．０，１５．０Ｈｚ，Ｈ−２３）］のＮＭＲシグナルを与えた。これは、本化合物がＣ−２３不飽和２５−ヒドロキシ−Ｃ_８−側鎖を持つことを示唆し、また、Ｈ−２３及びＨ−２４シグナル間の大きな結合定数（Ｃ_５Ｄ_５Ｎ中でＪ￣１５Ｈｚ）は、Ｃ−２３位の立体配置が“Ｅ”（トランス）である事を示している。以上の事実及び^１Ｈ−^１ＨＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，及びＨＭＢＣスペクトルの解析結果から、化合物４は（２３Ｅ）−４，２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌ−２３−ｅｎ−３，５β−ｏｘｉｄｅ（（２３Ｅ）−２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシサンポレナノール）構造を持つ事が明らかとなった。
【００３６】
化合物５は、^１３ＣＤＥＰＴＮＭＲデータ及び高分解能ＥＩＭＳにおける［Ｍ − Ｈ_２Ｏ］^＋イオンがｍ／ｚ４６０．３９１９に観察されたことから、分子式Ｃ_３０Ｈ_５４Ｏ_４を持つ事が明らかとなった。ＩＲ吸収（３４３５ｃｍ^−１）からは水酸基の存在が示唆された。化合物５の骨格部の^１Ｈ（表１）及び ^１３ＣＮＭＲ（表２）シグナルは化合物１の対応するシグナルにほぼ一致することから、化合物１と同一の骨格構造を持つ事が示された。一方、化合物５は、１個の第２級メチル基［δ_Ｈ０．９１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）］、１個の酸素化されたメチン基［δ_Ｈ３．３４（ｔ）］、及び２個の含酸素炭素に結合した第３級メチル基［δ_Ｈ１．１７（ｓ，Ｈ−２６）及び１．２２（ｓ，Ｈ−２７）］の^１ＨＮＭＲシグナルを持ち、これは２４，２５−ジヒドロキシル− Ｃ_８−側鎖構造と矛盾しない。この推定側鎖構造は、ＨＭＢＣ実験においてＨ−２４（Ｃ−２２，Ｃ−２３，Ｃ−２５，Ｃ−２６，及びＣ−２７と相関），Ｈ−２６（Ｃ−２４，Ｃ−２５，及びＣ−２７と相関），及びＨ−２７（Ｃ−２４，Ｃ−２５，及びＣ−２６と相関）のクロスピークが認められたことから支持された。従って、化合物５は４，２４，２５−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎ−３，５β−ｏｘｉｄｅ（２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール）の構造を持つことが明らかとなった。
【００３７】
化合物６は、^１３ＣＤＥＰＴＮＭＲデータ及び高分解能ＥＩＭＳで［Ｍ − Ｈ_２Ｏ］^＋イオンをｍ／ｚ４６０．３９１１に示す事により、化合物５と同一の分子式Ｃ_３０Ｈ_５４Ｏ_４，を持つ事が明らかとなった。また、^１Ｈ（表１）及び ^１３ＣＮＭＲ（表２）は化合物５と殆ど同一であったことから、化合物６は化合物５のＣ−２４位立体異性体である事が示唆された。化合物５と６の立体化学の帰属は、^１３ＣＮＭＲにおける側鎖^１３Ｃシグナルの化学シフト差から行うことができる。側鎖^１３Ｃシグナルの化学シフト差（δ_６ − δ_５）は次のような値を示し、Ｃ−２０（０．４），Ｃ−２１（０．３），Ｃ−２２（０．４），Ｃ−２３（０．３），Ｃ−２４（０．９），Ｃ−２５（０．０），Ｃ−２６（−０．１），及びＣ−２７（０．０）、これらは２４，２５−ジヒドロキシヘリアノール［３，４−ｓｅｃｏ−１９（１０→９）−ａｂｅｏ−８α，９β，１０α−ｔｉｒｕｃａｌｌａｎｅ−３，２４，２５−ｔｒｉｏｌ］の（δ_Ｒ − δ_Ｓ）値に一致している。化合物５および６は、従って、それぞれ２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノールの２４Ｓ−及び２４Ｒ−エピマーである。これらの構造は^１３ＣＤＥＰＴ， ^１Ｈ−^１ＨＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルから支持された。
【００３８】
結果は、下記表３にみられるように、いずれも高いＥＢＶ早期抗原発現阻害率を示す。これらの大部分は従来から知られているグリチルレチン酸やグリチルレチン酸誘導体以上の高い活性を示している。また、これらは検定において高いラジ細胞生存率を示したことから、高い安全性を持つ発癌予防剤として期待できる。
【００３９】
【表３】

【図面の簡単な説明】
【図１】ＥＢＶ活性化抑制検定法の概略を示す。
【図２】化合物１〜６の化学構造式を示す。
【図３】化合物１の最安定立体配座と代表的なＮＯＥ相関を示す。

Claims

転位骨格を持つ３，４−ｓｅｃｏ−チルカラン型化合物である、サンポレネノール、（２４Ｓ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール、（２４Ｒ）−２４，２５−エポキシサンポレネノール、（２３Ｅ）−２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシサンポレナノール、（２４Ｓ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノール、及び（２４Ｒ）−２４，２５−ジヒドロキシサンポレネノールからなる群から選んだ少なくとも１種のトリテルペン系化合物を有効成分とすることを特徴とする発癌予防剤。
エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）活性化抑制効果を有することを特徴とする請求項１に記載の発癌予防剤。
トリテルペン系化合物がキク科植物花卉及び／又は花粉を処理して得られることを特徴とする請求項１又は２に記載の発癌予防剤。
トリテルペン系化合物がヒマワリ花粉を処理して得られることを特徴とする請求項１又は２に記載の発癌予防剤。