JP2004532632A - 灰色カビ病に対する耐性を示すトマト植物 - Google Patents
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Abstract
本発明は、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）に対して耐性を示すトマト植物、ならびにボトリティス・シネレアに対する耐性を有し商業的に望ましい特性を有する新規の同系交配、雑種、無配偶生殖および遺伝子操作トマト植物を開発するための方法に関する。
Description
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物の品種改良および分子生物学に関する。より詳しくは、本発明は、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）に対して耐性を示すトマト植物、ならびにボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）に対する耐性を有し商業的に望ましい特性を有する新規の同系交配、雑種、無配偶生殖および遺伝子操作トマト植物を開発するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物の病気である灰色カビ病（ボトリティス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ））は真菌ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）によって引き起こされる。この病気は主にトマトの茎、葉および果実で見られる。灰色カビ病は温室栽培および圃場栽培の両方のトマトで見られるが、温室栽培のトマトにおいて、より蔓延している問題である。灰色カビ病感染においては湿度が最も重要である。該病原体の発芽には、９０％を超える相対湿度が必要である（Ｓｈｅｒｆ，Ａ．Ｆ．ら，Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８６），ｐ．６４５−６４７を参照）。霧および多量の露がよく発生する地域は、激しい雨が日常的に降る地域よりも、該病原体の蔓延には理想的である（同誌）。灰色カビ病菌の生育のための最適温度は華氏６８度〜華氏７６度である。一般的には、華氏７７度を超えると感染はまれであるが、保存された感染果実は華氏３２度の低温でも腐敗することがある。
【０００３】
より古く老化したトマト植物組織は、通常、若い組織よりも灰色カビ病菌による攻撃を受けやすい。典型的には、該疾病は、密集した草冠を有する成熟植物において生じる。葉の病変は薄褐色または灰色の円形斑状に広がり、更に小葉全体を覆うように広がりうる（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｐｅｓｔｓ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ ｉｎ Ｃａｎａｄａ， Ａｎ Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ，Ｈｏｗａｒｄ，Ｒ．ら編，Ｔｈｅ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃａｎａｄａ（１９９４）を参照）。冒された葉は分生子柄および分生子で覆われ、ついには破れ枯れる（同誌）。該真菌は、病変した葉から茎へと広がり、長さが数ミリから数センチの薄褐色の乾いた病変部を形成する（同誌）。病変は茎上の落葉（ｄｅｌｅａｆｉｎｇ）痕においても生じる（同誌）。茎病変部は灰色のカビで覆われることもある。重症の場合には、感染が茎を覆い尽くし、植物を枯らす。
【０００４】
未熟のトマト果実においては、典型的には「ゴーストスポット（ｇｈｏｓｔ ｓｐｏｔ）」が現れ、これは灰色カビ病の最もよく見られる症状である。この「ゴーストスポット」は、典型的には、小さな褐色の、しばしば盛り上がった壊疽斑点であり、薄い色の輪で囲まれている（同誌）。典型的には、該果実が或る大きさになると、具体的には直径約２．５ｃｍになると、その表面は滑らかで光沢を持つようになり、それは感染に抵抗する傾向にある（同誌）。しかし、該表面に付着した花部から（特に、がくの末端において）も該果実に感染することがあり、その結果、開花部の領域に不均一な褐色病変が生じることに注目すべきである。
【０００５】
残念ながら、前記の「ゴーストスポット形成」は熟成果実においても発生することがある。また、成熟果実は、がくの末端から発生する腐敗にも冒されることがある。果実は、感染部位では、水浸状の柔らかな状態になる（同誌）。斑点は不均一であり、直径約３ｃｍ以下であり、薄褐色ないしは灰色である。腐敗した果実は最後には植物から落下する。
【０００６】
灰色カビ病は、トマトに加えて、アスパラガスおよびレタスのような広範囲の他の野菜作物をも冒す。該疾病は地理上任意の地域の多年生植物上に存在することがあり、条件が最適になると胞子形成が生じる（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｔｏｍａｔｏ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｊｏｎｅｓら編，ＡＰＳ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）を参照）。分生子は風媒作用を受けやすく、栽培地から他の栽培地へと飛ばされうる（同誌）。さらに、該病原体は、トマトの木質組織上に生じる菌核の形態で何シーズンも生存することが可能である。また、灰色カビ病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）は非常に効率的な腐生菌であり、土壌中の有機物が該病原体を温存しうる（同誌）。該真菌は該菌核または土壌中の有機物から成長し、地上の落ち葉にも感染することがある（同誌）。
【０００７】
温室栽培のトマトに灰色カビ病を発生させないためには、温室の温度と相対湿度を厳密に制御するべきである。典型的には、華氏７０度より高い温度および９０％より低い湿度が灰色カビ病の発生を防ぐ。また、常に、温室内では、ある程度の換気または強制通風を行うべきである。滴下灌漑または地表水の使用は、葉の乾燥を保ち該病原体の発生を防ぐのに重要である。
【０００８】
圃場栽培作物については、該植物が湿っている時間を最小にするために、良好な排水と雑草の防除を行うべきである。さらには、該植物の栄養レベルを高く保つべきである。栄養レベル（特に窒素）が高く保たれた場合には、圃場栽培トマトの感染および損害が低くなるらしいことが判明している（Ｓｈｅｒｆ，Ａ．Ｆ．ら，Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８６），ｐｇｓ．６４５−６４７を参照）。
【０００９】
温室栽培および圃場栽培のどちらのトマトにおいても、灰色カビ病を防除するために殺真菌剤を使用することができる。使用しうるいくつかの殺真菌剤の具体例には、週単位で施用しうるクロロサロニル（Ｅｘｏｔｈｅｒｍ Ｔｅｒｍｉｌ）、および収穫後のトマト果実に施用しうるＤｏｗｃｉｄｅ ＡまたはＤＣＮＡ（Ｂｏｔｙａｎ）が含まれる。
【００１０】
現在のところ、灰色カビ病菌による感染に耐性を示すトマト品種は商業的に入手できない。したがって、灰色カビ病に対する耐性を有し更には望ましい商業的特性を示す新規トマト品種が、当技術分野において現在必要とされている。
【発明の開示】
【００１１】
発明の概要
１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配からの種子を播き、該種子を植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃの植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおける植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、（ｇ）該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定する工程を含む。好ましくは、該生産方法において使用する受容トマト植物はリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）である。
【００１２】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、前記生産方法による、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。
【００１３】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅの植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、（ｇ）該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を自殖させ、（ｉ）工程ｈにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返す工程を含む。
【００１４】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第２の生産方法に関する。該生産方法は、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を、工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅの植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、（ｇ）該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｉ）工程ｈにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返し、（ｌ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、（ｍ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含む。
【００１５】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、前記生産方法のいずれか１つにより生産された灰色カビ病耐性同系交配トマト植物に関する。
【００１６】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病に対する耐性を示す雑種トマト植物に関する。そのような雑種トマト植物は、前記生産方法の１つにより生産された同系交配トマト植物を、商業的に望ましい特性を示す同系交配トマト植物と交配させることにより生産することができる。
【００１７】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配からの種子を播き、該種子を植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃの植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）病理疾病選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定する工程を含む。好ましくは、該生産方法において使用する受容トマト植物はリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）であり、該供与植物は、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する。
【００１８】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配からの種子を播き、該種子を植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃの植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部（例えば、葉（切断葉または付着葉）、茎など）に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定する工程を含む。好ましくは、該生産方法において使用する受容トマト植物はリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）であり、該供与植物は、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する。
【００１９】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、前記生産方法による、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。
【００２０】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）病理選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定し、（ｇ）工程ｆにおいて同定された植物を自殖させ、（ｈ）工程ｉにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｉ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｈからの植物を同定し、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｉを繰返す工程を含む。
【００２１】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第２の生産方法に関する。該生産方法は、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を工程ｂの受容植物と交配させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）病理選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定し、（ｇ）工程ｆにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｈ）工程ｇにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｉ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｈからの植物を同定し、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｇ〜ｉを繰返し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、（ｌ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含む。
【００２２】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第３の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を自殖させ、（ｉ）工程ｈにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返す工程を含む。
【００２３】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第４の生産方法に関する。該生産方法は、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｉ）工程ｈにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返し、（ｌ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、（ｍ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含む。
【００２４】
該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を自殖させ、（ｉ）工程ｈにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返す工程を含む。
【００２５】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第４の生産方法に関する。該生産方法は、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｉ）工程ｈにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返し、（ｌ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、（ｍ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含む。
【００２６】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、前記生産方法のいずれか１つにより生産された灰色カビ病耐性同系交配トマト植物に関する。
【００２７】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病に対する耐性を示す雑種トマト植物に関する。そのような雑種トマト植物は、前記生産方法の１つにより生産された同系交配トマト植物を、商業的に望ましい特性を示す同系交配トマト植物と交配させることにより生産することができる。
【００２８】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性に連関した第１０染色体由来の少なくとも１つの遺伝子をゲノム内に含有する灰色カビ病耐性トマト植物に関する。そのような灰色カビ病耐性トマト植物は、リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる。
【００２９】
発明の詳細な記載
定義
本明細書中に示す項目名は、本明細書全体を参考にすることにより定められうる本発明の種々の態様または実施形態を限定するものではない。したがって、以下に定義される用語は、本明細書全体を参考にすることにより、より完全に定義される。
【００３０】
本発明で用いる「対立遺伝子」なる語は、ひとつまたは複数の選択可能な遺伝子形態のいずれかを意味し、それらの対立遺伝子のすべては、１つの形質または特性に関連している。二倍体の細胞または生物では、ある与えられた遺伝子の２つの対立遺伝子は、一対の相同染色体上の対応遺伝子座を占める。
【００３１】
本発明で用いる「灰色カビ病（菌）」なる語は、灰色カビまたは灰色斑としても公知であるボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）を意味し、トマトの茎、葉および果実でよく見られる疾病である。
【００３２】
本発明で用いる「ヘテロ接合」なる語は、異なる対立遺伝子が相同染色体上の対応遺伝子座に存在する場合に見られる遺伝子状態を意味する。
【００３３】
本発明で用いる「ホモ接合」なる語は、同一の対立遺伝子が相同染色体上の対応遺伝子座に存在する場合に見られる遺伝子状態を意味する。
【００３４】
本発明で用いる「雑種（ハイブリッド）」なる語は、２つの遺伝的に異なる個体間の交配により生じた任意の後代を意味する（Ｒｉｅｇｅｒ，Ｒ．，Ａ ＭｉｃｈａｅｌｉｓおよびＭ．Ｍ．Ｇｒｅｅｎ，１９６８，Ａ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．）。
【００３５】
本発明で用いる「同系交配（体）」なる語は、実質的にホモ接合である個体または品種を意味する。
【００３６】
本発明で用いる「（遺伝子）移入」なる語は、１つの植物からもう１つの植物への遺伝子の進入または導入を意味する。本発明で用いる「（遺伝子）移入する」なる語は、１つの植物からもう１つの植物へ遺伝子を進入させること又は導入することを意味する．
本発明で用いる「分子マーカー」なる語は、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）、増幅断片長多型（ＡＦＬＰ）、一塩基多型（ＳＮＰ）、マイクロサテライト、ＳＣＡＲ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｒｅｐｅａｔｓ）またはアイソザイムマーカー、またはさらに特定の遺伝子および染色体の位置を決定する本明細書に記載のマーカーの組合せを意味する。
【００３７】
本発明で用いる「植物」なる語は、植物細胞、植物原形質体、トマト植物が再生されうる植物細胞組織培養、植物カルス、植物細胞凝集塊、および植物内の損なわれていない植物細胞、または胚、花粉、胚珠、花、葉、種子、根、根端などのような植物の一部を含む。
【００３８】
本発明で用いる「集団」なる語は、共通の遺伝子起源を有する植物の遺伝的に不均質な集まりを意味する。
【００３９】
本発明で用いる「制限断片長多型」または「ＲＦＬＰ」なる語は、特異的制限酵素により切断されたＤＮＡ断片のサイズにおける個体間の変異を意味する。ＲＦＬＰを引き起こす配列多型は、物理的地図および遺伝子連鎖地図の両者においてマーカーとして使用される。
【００４０】
本発明で用いる「トマト」なる語は、リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）の任意の品種、栽培品種または集団を意味する。
【００４１】
本発明で用いる「品種」または「栽培品種」なる語は、構造的特徴および作物のできばえにより同じ種内の他の品種から識別されうる同様の植物の群を意味する。
【００４２】
発明の記載
１つの実施形態においては、本発明は、新規灰色カビ病耐性トマト植物およびトマト系統、ならびに選択的育種技術における本明細書に記載の分子マーカーおよび遺伝子を使用してそれらを生産するための改良された生産方法に関する。より詳しくは、本発明者らは、ある新規灰色カビ病耐性トマト植物を同定した。これらのトマト植物は、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を含有する。これらの遺伝子を含有しないトマト植物は、灰色カビ病による感染に対して感受性がある。好ましくは、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子が第１０染色体上に位置する。
【００４３】
灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を表す第１０染色体上に位置する分子マーカーは、マーカーによる選択方法（これは当技術分野において良く知られた技術である）を用いて同定することができる。灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域に連鎖していると考えられる第１０染色体上の幾つかのマーカーの具体例には、ＴＧ３１３、ＣＴ２３４、ＴＧ４０８、ＣＴ２０、ＣＴ５７、ＴＧ２４１、ＴＧ２３３およびＣＤ３２Ｂのうちの少なくとも１つが含まれるが、これらに限定されるものでない（図１を参照）。
【００４４】
本明細書に記載の第１０染色体上の遺伝子を含有する灰色カビ病耐性トマト植物の起源の１つは、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）受託番号ＬＡ１７７７である。受託番号ＬＡ１７７７はペルー原産の野生種のトマトであり、Ｃ． Ｍ． Ｒｉｃｋ Ｔｏｍａｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｏｎｅ Ｓｈｉｅｌｄｓ Ａｖｅｎｕｅ，Ｄａｖｉｓ，ＣＡ ９５６１６（ｈｔｔｐ：／／ｔｇｉｃ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ）より公的に入手可能である。灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を含有し灰色カビ病耐性を示す他の関連トマト植物を利用することが、本発明によりこの物質が同定されたために可能となった。より詳しくは、２以上の種において、実際には２以上の属において、同じ耐性遺伝子が存在しうることが、当技術分野において公知である［Ｋｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．ら，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．，１２６（１）：５６−６３（２００１）を参照；この研究において、同じ耐性遺伝子でワタ−メロンアブラムシ（Ａｐｈｉｓ ｇｏｓｓｙｐｉｉ Ｇｌｏｖｅｒ）に対する耐性を付与するＶａｔが、メロン生殖質の２つの起源（インド受託番号ＰＩ３７１７９５および韓国受託番号ＰＩ１６１３７５）において発見された；さらにＧｒｕｂｅ，Ｒら，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５５：８７３−８８７（２０００）においては、クローニングされたＲ遺伝子Ｓｗ−５、Ｎ、Ｐｔｏ、ＰｒｆおよびＩ２のコショウホモログが他のナス科植物のゲノムのシンテニーな位置に見出され、いくつかの場合には、表現型により定められるナス科Ｒ．遺伝子の近傍の更なる位置にもマッピングされた］。したがって、関連したトマト種の他の受託物（例えば、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない）を、灰色カビ病耐性に関して調べることが可能である：リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）。
【００４５】
灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子に連鎖した、第１０染色体上のひとつまたは複数の領域に連関していることが確認された分子マーカーを使用して、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を最初の供与植物から受容植物へと移入させることができる。何ら限定するものではないが例えば、前記の遺伝子移入において、ＲＦＬＰスクリーニング技術を用いることができる。本発明により開発されたトマト植物は、その形質の大部分を受容植物から有利に受け継ぎ、灰色カビ病耐性を最初の供与植物から受け継ぐことが可能である。
【００４６】
本発明の１つの態様においては、耐性量的形質座位に連鎖した分子マーカーを同定することにより、灰色カビ病耐性をコードする遺伝子をマッピングする。該マッピングにおいては、表現型を評価するために、灰色カビ病に対して耐性および感受性の同系交配トマト植物の混合体を利用する。そのような系統の分子的特徴づけは、ＭｏｎｆｏｒｔｅおよびＴａｎｋｓｌｅｙがＧｅｎｏｍｅ誌４３：８０３−８１３（２０００）に記載した技術を用いて行うことができる。何ら限定するものではないが例えば、灰色カビ病耐性表現型とマーカー遺伝子型との連関は、ソフトウェアパッケージＱＧＥＮＥを使用する回帰分析により調べることができる（Ｎｅｌｓｏｎ Ｃ．Ｊ．，“ＱＧＥＮＥ：Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ Ｍａｒｋｅｒ−Ｂａｓｅｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，３：２３９−２４５（１９９７））。
【００４７】
本発明のもう１つの実施形態においては、本発明は、優れた新規灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。本発明の方法においては、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を、灰色カビ病に対して耐性の供与親植物から、灰色カビ病による感染に対して非耐性である受容トマト植物または該感染に対して中間レベルの耐性を有する植物へと移入させる。本発明の方法により生産された灰色カビ病耐性トマト植物は、同系交配、雑種、半数体、無配偶生殖または遺伝子操作トマト植物のいずれかでありうる。
【００４８】
灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子の、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有する受容トマト植物への移入は、当技術分野で公知の技術を用いて行うことができる。例えば、通常の育種技術、遺伝子操作またはプロトプラスト融合を用いて、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を、灰色カビ病に対して非耐性である受容株トマト植物または灰色カビ病に対して中間レベルの耐性を有する植物へ移入させることができる。
【００４９】
前記において簡潔に説明したとおり、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有する受容トマト植物へ移入させるためには、通常の育種技術を用いることができる。系統育種と称される１つの方法においては、灰色カビ病耐性を示し灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を含有する第１トマト植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は灰色カビ病に対して中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性（例えば、耐病性、耐虫性、価値のある果実特性などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）を有する第２トマト植物と交配させる。ついで、得られた植物集団（これはＦ１雑種である）に自家受粉させて播種させる（Ｆ２種子）。ついで、該Ｆ２種子から成長したＦ２植物が、灰色カビ病に対し耐性であるものを選別する。該集団は、多種多様な方法により選別することができる。まず第１に、通常の病理疾病選別法を用いて、該集団を選別することができる。そのような病理疾病選別法は当技術分野において公知である。具体的には、個々の植物またはその一部をインキュベーターまたは温室内で灰色カビ病菌で攻撃し、各植物の、生じた耐性または感受性の表現型を評価することができる。何ら限定するものではないが例えば、以下のようにして、植物を温室内で選別することができる。
【００５０】
まず第１に、温室内（以後「ＧＨ」と称される）でトマト種子を播き、実生にまで成長させる（大体の期間 〜６週間）。１系統ごとにそれぞれ１０個の植物を３回反復して、合計３０個の植物を評価する。葉、茎、花および果実を、１〜５段階の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して別々に評価することができる。播種の１０週間後、灰色カビ病菌の分生子懸濁液（１，０００，０００分生子／ｍｌ）を該植物に接種する。茎および果実上の発病を促すために、もう一度接種が必要かもしれない。
【００５１】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、灰色カビ病胞子形成および病変発生について、接種の１週間後に該葉を評価することができる：
１−症状なし。
２−壊死および胞子形成が１〜２枚の葉に認められる。
３−壊死および胞子形成が葉群の１０％に認められる。
４−壊死および胞子形成が葉群の２０％に認められる。
５−壊死および胞子形成が葉群の２０％より多くに認められる。
【００５２】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、灰色カビ病胞子形成および病変発生について、接種の４週間後に該茎を評価することができる：
１−症状なし。
２−茎上の限定的な表面の病変。
３−限定的な胞子形成を伴う直径１０ｍｍまでの病変の拡大。
４−直径４０ｍｍまでの病変の拡大があり、胞子形成により衰弱。
５−直径４０ｍｍ超に病変が拡大し、胞子形成により衰弱または茎が完全に病変部に覆われる。
【００５３】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、少なくとも３つの花房が発生した際に、灰色カビ病の発生および胞子形成について該花を評価することができる：
１−症状なし。
２−１つの花房の花の５０％未満で落花、壊死および または胞子形成。
３−２以上の花房の花の５０％未満で落花、壊死および または胞子形成。
４−２以上の花房の花の５０％〜７５％で落花、壊死および または胞子形成。
５−すべての花房の花の７５％超で落花、壊死および または胞子形成。
【００５４】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、果実の５０％が発生の限界期にある際に、灰色カビ病の病変発生について該果実を評価することができる：
１−症状なし。
２−病変は花柄のみ。
３−病変は１つの果実にのみに発生。
４−病変は１つの植物につき、４個以下の果実に発生。
５−病変は１つの植物につき、４個を超える果実に発生。
【００５５】
第２に、灰色カビ病をコードする遺伝子の１以上を含有する雑種植物を同定するために、前記の分子マーカーの１以上を使用して、マーカーによる選択を行うことができる。あるいは、該病理選別法により得られた結果を確認するために、マーカーによる選別を行うことができる。
【００５６】
灰色カビ病耐性表現型を示すＦ２雑種植物は、灰色カビ病耐性をコードする必須遺伝子を含有し、商業的に望ましい特性を有する。したがって該Ｆ２雑種植物を、何世代にもわたり選択し自殖させて、更に同系交配されたトマト植物を得ることが可能である。この連続的な自殖および選択の過程は、５世代以上にわたり行うことができる。そのような育種および選択の結果、灰色カビ病耐性に関連した遺伝子および商業的に関心が持たれる形質に関連した他の遺伝子に関して遺伝的に均一である系統が得られる。
【００５７】
あるいは、反復選択および戻し交配の技術を用いて、新規かつ優れた灰色カビ病耐性同系交配トマト植物系統を開発することができる。この方法においては、標的受容植物（これは反復親と称される）への灰色カビ病耐性の遺伝子移入を、反復親を第１供与植物（これは該反復親とは別物であり、本発明では「非反復親」と称される）と交配させることにより行うことが可能である。反復親は、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性（例えば、耐病性、耐虫性、価値のある果実の特性などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）を有する植物である。非反復親は灰色カビ病耐性を示し、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を含有する。非反復親は、反復親と他家受精した任意の植物品種または同系交配系統（同系繁殖系）でありうる。反復親と非反復親との交配により生じた後代を反復親と戻し交配させる。ついで、得られた植物集団を選別する。該集団は多種多様な方法で選別することができる。第１に、本明細書に既に記載されている通常の病理選別法を用いて、該集団を選別することができる。
【００５８】
第２に、灰色カビ病耐性をコードする遺伝子の１以上を含有する後代を同定するために、前記分子マーカーの１以上を使用して、マーカーによる選択を行うことができる。あるいは、該病理選別法から得られた結果を確認するために、マーカーによる選択を行うことができる。
【００５９】
適当な選択を行ったら、該工程を繰返す。反復親への戻し交配および灰色カビ病耐性のあるものを選択していく工程を約５世代以上にわたって繰返す。この工程によって得られる後代は、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子に関してヘテロ接合である。次いで、灰色カビ病耐性のあるホモ接合純粋品種後代を得るために、最後の戻し交配世代を自殖させる。
【００６０】
本明細書に記載の灰色カビ病耐性同系交配トマト系統は、灰色カビ病耐性雑種植物を作製するための更なる交配において使用することができる。例えば、第１灰色カビ病耐性同系交配トマト植物を、商業的に望ましい形質（例えば、耐病性、耐虫性、望ましい果実特性などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）を有する第２同系交配トマト植物と交配させることができる。この第２同系交配トマト系統は、灰色カビ病に対して耐性であっても耐性でなくてもよい。
【００６１】
前記方法において行うマーカーによる選択は、例えば、異なる灰色カビ病耐性遺伝子が２以上の世代において選択されるよう段階的に行うことが可能であり、あるいは、もう１つの例として、すべての耐性遺伝子が同じ世代において選択されるよう同時に行うことが可能である。灰色カビ病耐性に関する、マーカーによる選択は、他の商業的に望ましい形質（例えば、耐病性、耐虫性、望ましい果実特性など）に関する試験および選択の前に、またはそれらと共に、またはそれらの後に行うことができる。
【００６２】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性をコードするトマト由来のひとつまたは複数の遺伝子の同定、単離および精製に関する。そのような遺伝子が単離されうる材料の１つの起源はリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）受託番号ＬＡ１７７７である。また、本発明は更に、灰色カビ病感染に対して耐性を示すトランスジェニック（形質転換）植物を得るために、当技術分野で公知の技術を用いて、トマトまたは他の植物に、そのような単離および精製された遺伝子を挿入することを意図する。
【００６３】
植物の形質転換は、植物細胞内で機能する発現ベクターの構築を含む。本発明においては、そのようなベクターは、プロモーターのような調節要素の制御下にある又はそれに機能しうる形で連結された灰色カビ病耐性をコードする遺伝子を含むＤＮＡを含む。該発現ベクターは、ひとつまたは複数のそのような機能しうる形で連結された遺伝子／調節要素の組合せを含有しうるが、この場合、該組合せに含有される遺伝子の少なくとも１つは灰色カビ病耐性をコードしていなければならない。後記の形質転換の方法を用いて、灰色カビ病に対して耐性であるトランスジェニック植物を得るためには、該ベクターはプラスミドの形態であることが可能であり、単独で又は他のプラスミドと組合せて使用することが可能である。
【００６４】
発現ベクターは少なくとも１つの遺伝マーカーを含有することが可能であり、該遺伝マーカーは、該マーカーを有する形質転換細胞が負の選択（該選択マーカー遺伝子を含有しない細胞の増殖を抑制することによる）または正の選択（該遺伝マーカーにコードされる産物に関してスクリーニングすることによる）により回収されることを可能にする調節要素（例えばプロモーター）に機能しうる形で連結されている。植物の形質転換のために一般に使用される多数の選択マーカー遺伝子が当技術分野において公知であり、それらには、例えば、選択的化学物質（それは抗生物質または除草剤でありうる）を代謝的に解毒する酵素をコードする遺伝子、またはインヒビターに対して非感受性である改変された標的をコードする遺伝子が含まれる。マンノース選択のような幾つかの正の選択方法が当技術分野で公知である。あるいは、マーカーを使用しない形質転換を用いることも可能であり、その技術は当技術分野で公知である。
【００６５】
植物の形質転換のために一般に使用される選択マーカー遺伝子の一例としては、ある植物調節シグナルの制御下に配置された場合にカナマイシン耐性を付与する、トランスポゾンＴｎ５から単離されたネオマイシンホスホトランスフェラーゼＩＩ（ｎｐｔＩＩ）遺伝子（Ｆｒａｌｅｙら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，８０：４８０３（１９８３）を参照）が挙げられる。もう１つの一般に使用される選択マーカー遺伝子としては、抗生物質ヒグロマイシンに対する耐性を付与するヒグロマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子（Ｖａｎｄｅｎ Ｅｌｚｅｎら，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：２９９（１９８５）を参照）が挙げられる。使用されうる他の選択マーカーの具体例には、β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼおよびクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼが含まれる。
【００６６】
発現ベクターは、プロモーターのような調節要素を含むヌクレオチド配列により駆動しなければならない。プロモーターの幾つかの型は当技術分野でよく知られており、単独で又はプロモーターと組合せて使用されうる他の調節要素も当技術分野でよく知られている。本発明で用いる「プロモーター」なる語は、ＲＮＡポリメラーゼおよび転写を開始させる他のタンパク質の認識および結合に関与し転写の開始点の上流に存在するＤＮＡの領域に対する言及を含む。「植物プロモーター」は、植物細胞において転写を開始させうるプロモーターである。発生制御下のプロモーターの具体例には、葉、根、種子、繊維、道管、仮道管または厚壁組織のような或る組織において転写を優先的に開始させるプロモーターが含まれる。そのようなプロモーターは「組織優先的」と称される。ある組織においてのみ転写を開始させるプロモーターは「組織特異的」と称される。「細胞型」特異的プロモーターは、主として、ひとつまたは複数の器官における或る細胞型（例えば、根または葉における維管束細胞）において発現を駆動する。「誘導性」プロモーターは、環境制御下にあるプロモーターである。誘導性プロモーターによる転写に影響を及ぼしうる環境条件の具体例には、嫌気的条件または光の存在が含まれる。組織特異的、組織優先的、細胞型特異的および誘導性プロモーターは「非構成的」プロモーターのクラスを形成する。「構成的」プロモーターは、ほとんどの環境条件下で活性であるプロモーターである。
【００６７】
誘導性プロモーターは、トマトにおける発現のために、灰色カビ病耐性をコードする単離され精製された遺伝子に機能しうる形で連結される。誘導性プロモーターを用いると、誘導因子に応答して転写率が増加する。任意の誘導性プロモーターを本発明で使用することができる。
【００６８】
構成的プロモーターは、トマトにおける発現のために、灰色カビ病耐性をコードする単離され精製された遺伝子に機能しうる形で連結されうる。いくつかの異なる構成的プロモーターが当技術分野で公知であり、本発明において使用することができる。本発明で使用されうる構成的プロモーターの一例には、ＣａＭＶ由来の１９Ｓまたは３５Ｓプロモーター（Ｏｄｅｌら，Ｎａｔｕｒｅ，３１３：８１０−８１２（１９８５）を参照）のような植物ウィルス由来のプロモーターが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００６９】
組織特異的プロモーターは、トマトにおける発現のために、灰色カビ病耐性をコードする単離され精製された遺伝子に機能しうる形で連結される。灰色カビ病耐性をコードし組織特異的プロモーターに機能しうる形で連結された単離され精製された遺伝子で形質転換された植物は、特異的組織において、トランスジーンのタンパク質産物を独占的または優先的に産生する。
【００７０】
任意の組織特異的または組織優先的プロモーターを本発明で使用することができる。典型的な組織特異的または組織優先的プロモーターには、ｃａｂまたはｒｕｂｉｓｃｏ由来のプロモーターである葉特異的および光誘導性プロモーター（Ｓｉｍｐｓｏｎら，ＥＭＢＯ Ｊ．，４（１１）：２７２３−２７２９（１９８５）およびＴｉｍｋｏら，Ｎａｔｕｒｅ，３１８：５７９−５８２（１９８５）を参照）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００７１】
生物学的および物理的植物形質転換プロトコールを含む、植物形質転換のための多数の方法が開発されている。例えば、Ｍｉｋｉら,“Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｆｏｒｅｉｇｎ ＤＮＡ ｉｎｔｏ Ｐｌａｎｔｓ”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌｉｃｋ，Ｂ．Ｒ．およびＴｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｅ．編（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９３）ｐ．６７−８８を参照。また、植物の細胞または組織の形質転換および植物の再生のためのインビトロ培養方法および発現ベクターが利用可能である（Ｇｒｕｂｅｒら，“Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,Ｇｌｉｃｋ，Ｂ．Ｒ．およびＴｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｅ．編（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９３）ｐ．８９−１１９を参照）。
【００７２】
植物に発現ベクターを導入するための１つの方法は、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）の天然形質転換系に基づいている（Ｈｏｒｓｃｈら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２７：１２２９（１９８５）を参照）。エイ・ツメファシエンス（Ａ．Ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）およびエイ・リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）は、植物細胞を遺伝的に形質転換する植物病原性土壌細菌である。エイ・ツメファシエンス（Ａ．Ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）およびエイ・リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）のそれぞれＴｉプラスミドおよびＲｉプラスミドは、植物の遺伝的形質転換を引き起こす遺伝子を運ぶ（Ｋａｄｏ，Ｃ．Ｉ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ．Ｓｃｉ．，１０：１（１９９１）を参照）。アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ベクター系およびアグロバクテリウム媒介遺伝子導入方法の説明は、Ｇｕｒｂｅｒら（前掲）、Ｍｉｋｉら（前掲）およびＭｏｌｏｎｅｙら編、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ８：２３８（１９８９）になされている。また、１９９７年１月７日付け発行の米国特許第５，５９１，６１６号も参照。
【００７３】
発現ベクターを植物に導入するためのもう１つの方法は、ＤＮＡが微小発射体の表面に乗って運ばれる微小発射体媒介形質転換に基づくものである。植物細胞壁および細胞膜を貫くのに十分な３００〜６００ｍ／ｓの速度に微小発射体を加速するバイオリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）装置を用いて、発現ベクターを植物組織内に導入する（Ｓａｎｆｏｒｄら，Ｐａｒｔ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５：２７（１９８７），Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｊ．Ｃ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，．６：２９９（１９８８），Ｋｌｅｉｎら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６：５５９−５６３（１９８８），Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｊ．Ｃ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｌａｎｔ，７９：２０６（１９９０），Ｋｌｅｉｎら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：２６８（１９９２）を参照）。
【００７４】
ＤＮＡを植物に導入するためのもう１つの方法は、標的細胞の超音波処理によるものである（Ｚｈａｎｇら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：９９６（１９９１）を参照）。あるいは、発現ベクターを植物内に導入するためにリポソームまたはスフェロプラスト融合が用いられている（Ｄｅｓｈａｙｅｓら，ＥＭＢＯ Ｊ．，４：２７３１（１９８５），Ｃｈｒｉｓｔｏｕら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，８４：３９６２（１９８７）を参照）。ＣａＣｌ２沈殿、ポリビニルアルコールまたはポリ−Ｌ−オルニチンを使用したプロトプラスト内へのＤＮＡの直接取り込みも報告されている（Ｈａｉｎら，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９：１６１（１９８５）およびＤｒａｐｅｒら，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２３：４５１（１９８２）を参照）。プロトプラストならびに全細胞および組織のエレクトロポレーションも記載されている（Ｄｏｎｎら，Ｉｎ ａｂｓｔｒａｃｔｓ ｏｆ ＶＩＩｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｏｎ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＩＡＰＴＣ，Ａ２−３８，ｐ ５３（１９９０）；Ｄ’Ｈａｌｌｕｉｎら，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，４：１４９５−１５０５（１９９２）およびＳｐｅｎｃｅｒら，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２４：５１−６１（１９９４））。
【００７５】
トマト標的細胞の形質転換の後、今や当技術分野ではよく知られている再生および選択方法を用いて、前記選択的マーカー遺伝子の発現が、形質転換された細胞、組織および／または植物の優先的な選択を可能にする。
【００７６】
形質転換のための既に記載されている方法は、灰色カビ病耐性をコードする外来（異種）遺伝子を含有するトランスジェニックトマト植物または他の植物種、例えば、野菜（すなわち、アスパラガス、レタスなど）、果物（すなわち、イチゴ）または観賞植物（すなわち、アフリカスミレ、ベゴニア、ブーゲンビレア、シクラメン、ダリア、ゼラニウム、ブッソウゲ、ツリフネソウ、カランコエ、観賞用コショウ、エクサクム、プリムローズ、ポインセチヤ、バーベナ、ニチニチソウなど）（これらに限定されるものでない）を生産するために用いることが可能であろう。ついで、そのようなトランスジェニック植物を、もう１つの（未形質転換または形質転換）植物と交配させて、灰色カビ病感染に対して耐性であるトマトまたは他の植物種のトランスジェニック雑種を生産することが可能である。あるいは、灰色カビ病耐性をコードする外来（異種）遺伝子を含有するよう本明細書に記載の形質転換技術により操作されたトランスジェニックトマトまたは他の植物種における灰色カビ病耐性外来（異種）遺伝子を、当技術分野でよく知られた通常の育種技術（例えば、戻し交配）を用いて、もう１つの植物内に移入することが可能であろう。例えば、本明細書で既に記載されているように、灰色カビ病耐性をコードする外来（異種）遺伝子を含有するトランスジェニック灰色カビ病耐性同系交配トマトまたは他の植物系統から、その遺伝子を有しない非耐性のトマト植物または他の作物へ、あるいは、灰色カビ病耐性をコードする外来遺伝子を含有するトランスジェニック雑種灰色カビ病耐性トマト植物または他の植物から、その遺伝子を含有しない系統へ、灰色カビ病耐性を遺伝子移入させるために、戻し交配を用いることが可能であろう。
【００７７】
もう１つの実施形態においては、優れた新規灰色カビ病耐性植物を作製するために、プロトプラスト融合を用いることができる。より詳しくは、灰色カビ病菌による感染に耐性を示し本明細書に記載の遺伝子を含有するトマト植物または他の植物系統から、第１のプロトプラストを得ることができる。例えば、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）受託番号ＬＡ１７７７由来のプロトプラストを使用することができる。商業的に望ましい特性（例えば、耐病性、耐虫性、有益な果実特性などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）を含有する第２のトマトまたは他の植物品種から、第２のプロトプラストを得ることができる。ついで、当技術分野で公知の通常のプロトプラスト融合法を用いて、それらのプロトプラストを融合する。例えば、膜の融合を促進するためにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）溶液を使用することにより、プロトプラスト融合を行うことが可能である。そのような体細胞交雑（体細胞ハイブリダイセーション）は、種間雑種の生産のためのＳｕｎｄｂｅｒｇら（Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，４３：１５５（１９８６））により公開された条件下またはその修飾条件下で達成されうる。しかし、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の使用以外の他の方法によりプロトプラスト融合が達成されうることが、当業者に認識されているであろう。例えば、Ｋｏｏｐら，“Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｉｅｌｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ−ｗｉｔｈ Ｐｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｓｉｎｇｌｅ Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ａｎｄ Ｓｕｂｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ｏｆ Ｈｉｇｈｅｒ Ｐｌａｎｔｓ”ｉｎ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｅｕｍａｎら編，ｐ．３５５−２６５（１９８９）に記載の電場誘発性融合技術を用いて、プロトプラストを融合することができる。さらに、Ｈａｕｐｔｍａｎｎら，“Ｃａｒｒｏｔ ｘ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｓ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｂｙ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｏｇ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ”，６ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，Ａｕｇ．１２−１６，１９８３に記載のとおり、デキストランおよびポリビニルアルコールを使用してプロトプラスト融合を行うことができる。
【００７８】
もう１つの実施形態においては、本発明は、トマト植物またはトマト種子中の灰色カビ病耐性の存在または非存在を判定するための方法を提供する。これらの方法は、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した染色体上の少なくとも１つの領域に連関したひとつまたは複数の分子マーカーの存在に関して、植物または種子由来のＤＮＡを分析することを含む。さらに詳しくは、該分子マーカーは好ましくは第１０染色体由来であり、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を同定するために使用される。そのようなマーカーの具体例には、以下のものの少なくとも１つが含まれるが、それらに限定されるものではない：第１０染色体上のＴＧ３１３、ＣＴ２３４、ＴＧ４０８、ＣＴ２０、ＣＴ５７、ＴＧ２４１、ＴＧ２３３およびＣＤ３２Ｂ。この方法においては、該分析は、ＲＦＬＰ分析により該トマト植物または種子を分析することを含む。
【００７９】
もう１つの実施形態においては、本発明は、前記方法に従い生産された種子、植物および／または植物系統に関する。さらに詳しくは、本発明は、第１植物系統からの第１ゲノムＤＮＡ（該第１ゲノムＤＮＡは該植物系統に灰色カビ病耐性を付与する）と第２植物系統からの第２ゲノムＤＮＡ（該第２ゲノムＤＮＡは該植物系統に他の望ましい形質を付与する）とを含む、選択的育種により得られた灰色カビ病耐性トマト植物または植物系統、例えば、野菜（すなわち、アスパラガス、レタスなど）、果物（すなわち、イチゴ）または観賞植物（すなわち、アフリカスミレ、ベゴニア、ブーゲンビレア、シクラメン、ダリア、ゼラニウム、ブッソウゲ、ツリフネソウ、カランコエ、観賞用コショウ、エクサクム、プリムローズ、ポインセチヤ、バーベナ、ニチニチソウなど）（これらに限定されるものでない）に関する。本発明のこの態様では、トマトにおいては、第１ゲノムＤＮＡ量は、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来の分子マーカーを含む。より詳しくは、トマトにおいては、該分子マーカーは、第１０染色体上のＴＧ３１３、ＣＴ２３４、ＴＧ４０８、ＣＴ２０、ＣＴ５７、ＴＧ２４１、ＴＧ２３３およびＣＤ３２Ｂの少なくとも１つを含むが、これらに限定されるものではない。
【００８０】
限定的でない例示として、本発明の実施例を以下に記載する。
【実施例１】
【００８１】
Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ × Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ準同質遺伝子系統における灰色カビ病耐性
温室条件下で耐性を評価するために、２０００年に、以下のリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）×リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）準同質遺伝子系統（以後「ＮＩＬ」と称される）の種子をイタリアのＬａｔｉｎａへ送った。種子を移植トレイ中の土壌に播き、２０℃〜２４℃の温室内で約６週間成長させた。具体的には、該種子は、以下の系統に由来するものであった：ＬＡ１７７７、ＴＡ１５５１、ＴＡ１３３０、ＴＡ１２７６、ＴＡ１１０５、ＴＡ１２７７、ＴＡ１２８７、ＴＡ１５４１、ＴＡ１３２４、ＴＡ５１７、ＴＡ１２６６、ＴＡ１５４４、ＴＡ１３１６、ＴＡ１５３９、ＴＡ１１２１、ＴＡ１１１２、ＴＡ１５４５、ＴＡ１５６２、ＴＡ１２５８、ＴＡ１３０４、ＴＡ１２８０、ＴＡ１５４８、ＴＡ１１２７、ＴＡ１５３５、ＴＡ１５４０およびＥ６２０３。それらの系統のすべては、ｔｈｅ Ｃ．Ｍ．Ｒｉｃｋ Ｔｏｍａｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｏｎｅ Ｓｈｉｅｌｄｓ Ａｖｅｎｕｅ，Ｄａｖｉｓ，ＣＡ ９５６１６（ｈｔｔｐ：／／ｔｇｒｃ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ）から公的に入手可能である。
【００８２】
播種の約６週間後、実生を温室（以後「ＧＨ」と称される）に移植した。１系統ごとにそれぞれ１０本の植物を３回反復して、合計３０本の植物を評価した。葉および茎を、１〜５段階の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して別々に評価した。
【００８３】
移植の４週間後、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の分生子懸濁液（１，０００，０００分生子／ｍｌ）を該植物に接種した。最初の接種の５週間後、茎上の発病を促すために、もう一度接種を行った。
【００８４】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の胞子形成および病変発生について、接種の１週間後に該葉を評価した：
１−症状なし。
２−壊死および胞子形成が１〜２枚の葉に認められる。
３−壊死および胞子形成が葉群の１０％に認められる。
４−壊死および胞子形成が葉群の２０％に認められる。
５−壊死および胞子形成が葉群の２０％より多くに認められる。
【００８５】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の胞子形成および病変発生について、接種の４週間後に該茎を評価した：
１−症状なし。
２−茎上の限定的な表面の病変。
３−限定的な胞子形成を伴う直径１０ｍｍまでの病変の拡大。
４−直径４０ｍｍまでの病変の拡大があり、胞子形成により衰弱。
５−直径４０ｍｍ超に病変が拡大し、胞子形成により衰弱または茎が完全に病変部に覆われる。
【００８６】
以下の表１および２は、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）による感染に対するリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ）由来の種々の遺伝子移入断片を含有するリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）準同質遺伝子系統からの葉および茎の疾病評価を示す。
【００８７】
【表１】
【００８８】
【表２】
系統ＴＡ１５５１において葉（ｐ＝０．０６５）および茎（ｐ＝０．００９）の両者で観察された耐性のレベルは、それが、その親系統であるＥ６２０３より有意に耐性であることを示している（表１および表２を参照）。
【００８９】
系統ＴＡ１５５１は、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ）の第１０染色体由来の遺伝子移入セグメントを含有する（図１を参照）。
【００９０】
灰色カビ病に対する耐性を付与するＱＴＬが位置する第１０染色体上の特異的領域の位置を決定するために、Ｑｇｅｎｅ統計パッケージを使用して、第１０染色体ＲＦＬＰマーカーと灰色カビ病耐性との間の連関を評価した。統計的に有意であり灰色カビ病耐性に連関していたＲＦＬＰマーカーを、以下の表３および４に示す。
【００９１】
【表３】
【００９２】
【表４】
【実施例２】
【００９３】
Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ × Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ準同質遺伝子系統における灰色カビ病耐性
温室条件下で耐性を評価するために、２００１年に、以下のリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）×リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）準同質遺伝子系統の種子をイタリアのＬａｔｉｎａへ送った。種子を移植トレイ中の土壌に播き、２０℃〜２４℃の温室内で約６週間成長させた。具体的には、該種子は、以下の系統に由来するものであった：ＬＡ１７７７、ＴＡ１５５１、ＴＡ１５５１−Ｆ１、ＴＡ１３３９、Ｅ６２０３およびＭａｘ。ＴＡ１５５１−Ｆ１およびＭａｘ以外のそれらの系統は、ｔｈｅ Ｃ．Ｍ．Ｒｉｃｋ Ｔｏｍａｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｏｎｅ Ｓｈｉｅｌｄｓ Ａｖｅｎｕｅ，Ｄａｖｉｓ，ＣＡ ９５６１６（ｈｔｔｐ：／／ｔｇｒｃ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ）から公的に入手可能である。
【００９４】
播種の約６週間後、実生を温室に移植した。１系統ごとにそれぞれ１０本の植物を３回反復して、合計３０本の植物を評価した。葉および茎、花および果実を、１〜５段階の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して別々に評価した。
【００９５】
移植の４週間後、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の分生子懸濁液（１，０００，０００分生子／ｍｌ）を該植物に接種した。最初の接種の５週間後、茎および果実上の発病を促すために、もう一度接種を行った。
【００９６】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の胞子形成および病変発生について、接種の１週間後に該葉を評価した：
１−症状なし。
２−壊死および胞子形成が１〜２枚の葉に認められる。
３−壊死および胞子形成が葉群の１０％に認められる。
４−壊死および胞子形成が葉群の２０％に認められる。
５−壊死および胞子形成が葉群の２０％より多くに認められる。
【００９７】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の胞子形成および病変発生について、接種の４週間後に該茎を評価した：
１−症状なし。
２−茎上の限定的な表面の病変。
３−限定的な胞子形成を伴う直径１０ｍｍまでの病変の拡大。
４−直径４０ｍｍまでの病変の拡大があり、胞子形成により衰弱。
５−直径４０ｍｍ超に病変が拡大し、胞子形成により衰弱または茎が完全に病変部に覆われる。
【００９８】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、少なくとも３つの花房が発生した際に、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の発生および胞子形成について該花を評価した：
１−症状なし。
２−１つの花房の花の５０％未満で落花、壊死および または胞子形成。
３−２以上の花房の花の５０％未満で落花、壊死および または胞子形成。
４−２以上の花房の花の５０％〜７５％で落花、壊死および または胞子形成。
５−すべての花房の花の７５％超で落花、壊死および または胞子形成。
【００９９】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、果実の５０％が発生の限界期にある際に、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の病変発生について該果実を評価した：
１−症状なし。
２−病変は花柄のみ。
３−病変は１つの果実にのみに発生。
４−病変は１つの植物につき、４個以下の果実に発生。
５−病変は１つの植物につき、４個を超える果実に発生。
【０１００】
以下の表５は、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）による感染に対するリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ）由来の遺伝子移入断片を含有するリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）準同質遺伝子系統からの葉、茎、花および果実の疾病評価を示す。
【０１０１】
【表５】
系統ＴＡ１５５１において葉（ｐ＝０．０１）、茎（ｐ＝０．００）、花（ｐ＝０．０１）および果実（ｐ＝０．０１）で観察された耐性のレベルは、それが、その親系統であるＥ６２０３より有意に耐性であることを示している（表５を参照）。
【０１０２】
また、ＴＡ１３３９系統は、平均葉（ｐ＝０．０７）および茎（ｐ＝０．０６）スコアに関しては、感受性であるＥ６２０３より軽い発病（α０．１において有意）を示した。
【０１０３】
系統ＴＡ１５５１およびＴＡ１３３９は、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ）の第１０染色体由来の遺伝子移入セグメントを含有する（図１を参照）。
【０１０４】
灰色カビ病に対する耐性を付与するＱＴＬが位置する第１０染色体上の特異的領域の位置を決定するために、Ｑｇｅｎｅ統計パッケージを使用して、第１０染色体ＲＦＬＰマーカーと灰色カビ病耐性との間の連関を評価した。統計的に有意であり灰色カビ病耐性に連関していたＲＦＬＰマーカーを、以下の表６〜８に示す。
【０１０５】
【表６】
【０１０６】
【表７】
【０１０７】
【表８】
【０１０８】
本明細書において言及されているすべての抄録、参考文献、特許および公開された特許出願を、参照により本明細書に組み入れることとする。
【０１０９】
本発明は、前記の説明および実施例により例示される。前記の説明を考慮して多数の変化が当業者に明らかとなるため、前記の説明は非限定的な例示であるとみなされる。
【０１１０】
本発明の概念および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の本発明の方法の組成、操作および配置に対して変更を施すことが可能である。
【図面の簡単な説明】
【０１１１】
【図１】図１は、トマトにおける第１０染色体の分子マーカー地図である。
【０００１】
本発明は、植物の品種改良および分子生物学に関する。より詳しくは、本発明は、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）に対して耐性を示すトマト植物、ならびにボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）に対する耐性を有し商業的に望ましい特性を有する新規の同系交配、雑種、無配偶生殖および遺伝子操作トマト植物を開発するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物の病気である灰色カビ病（ボトリティス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ））は真菌ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）によって引き起こされる。この病気は主にトマトの茎、葉および果実で見られる。灰色カビ病は温室栽培および圃場栽培の両方のトマトで見られるが、温室栽培のトマトにおいて、より蔓延している問題である。灰色カビ病感染においては湿度が最も重要である。該病原体の発芽には、９０％を超える相対湿度が必要である（Ｓｈｅｒｆ，Ａ．Ｆ．ら，Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８６），ｐ．６４５−６４７を参照）。霧および多量の露がよく発生する地域は、激しい雨が日常的に降る地域よりも、該病原体の蔓延には理想的である（同誌）。灰色カビ病菌の生育のための最適温度は華氏６８度〜華氏７６度である。一般的には、華氏７７度を超えると感染はまれであるが、保存された感染果実は華氏３２度の低温でも腐敗することがある。
【０００３】
より古く老化したトマト植物組織は、通常、若い組織よりも灰色カビ病菌による攻撃を受けやすい。典型的には、該疾病は、密集した草冠を有する成熟植物において生じる。葉の病変は薄褐色または灰色の円形斑状に広がり、更に小葉全体を覆うように広がりうる（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｐｅｓｔｓ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ ｉｎ Ｃａｎａｄａ， Ａｎ Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ，Ｈｏｗａｒｄ，Ｒ．ら編，Ｔｈｅ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃａｎａｄａ（１９９４）を参照）。冒された葉は分生子柄および分生子で覆われ、ついには破れ枯れる（同誌）。該真菌は、病変した葉から茎へと広がり、長さが数ミリから数センチの薄褐色の乾いた病変部を形成する（同誌）。病変は茎上の落葉（ｄｅｌｅａｆｉｎｇ）痕においても生じる（同誌）。茎病変部は灰色のカビで覆われることもある。重症の場合には、感染が茎を覆い尽くし、植物を枯らす。
【０００４】
未熟のトマト果実においては、典型的には「ゴーストスポット（ｇｈｏｓｔ ｓｐｏｔ）」が現れ、これは灰色カビ病の最もよく見られる症状である。この「ゴーストスポット」は、典型的には、小さな褐色の、しばしば盛り上がった壊疽斑点であり、薄い色の輪で囲まれている（同誌）。典型的には、該果実が或る大きさになると、具体的には直径約２．５ｃｍになると、その表面は滑らかで光沢を持つようになり、それは感染に抵抗する傾向にある（同誌）。しかし、該表面に付着した花部から（特に、がくの末端において）も該果実に感染することがあり、その結果、開花部の領域に不均一な褐色病変が生じることに注目すべきである。
【０００５】
残念ながら、前記の「ゴーストスポット形成」は熟成果実においても発生することがある。また、成熟果実は、がくの末端から発生する腐敗にも冒されることがある。果実は、感染部位では、水浸状の柔らかな状態になる（同誌）。斑点は不均一であり、直径約３ｃｍ以下であり、薄褐色ないしは灰色である。腐敗した果実は最後には植物から落下する。
【０００６】
灰色カビ病は、トマトに加えて、アスパラガスおよびレタスのような広範囲の他の野菜作物をも冒す。該疾病は地理上任意の地域の多年生植物上に存在することがあり、条件が最適になると胞子形成が生じる（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｔｏｍａｔｏ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｊｏｎｅｓら編，ＡＰＳ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）を参照）。分生子は風媒作用を受けやすく、栽培地から他の栽培地へと飛ばされうる（同誌）。さらに、該病原体は、トマトの木質組織上に生じる菌核の形態で何シーズンも生存することが可能である。また、灰色カビ病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）は非常に効率的な腐生菌であり、土壌中の有機物が該病原体を温存しうる（同誌）。該真菌は該菌核または土壌中の有機物から成長し、地上の落ち葉にも感染することがある（同誌）。
【０００７】
温室栽培のトマトに灰色カビ病を発生させないためには、温室の温度と相対湿度を厳密に制御するべきである。典型的には、華氏７０度より高い温度および９０％より低い湿度が灰色カビ病の発生を防ぐ。また、常に、温室内では、ある程度の換気または強制通風を行うべきである。滴下灌漑または地表水の使用は、葉の乾燥を保ち該病原体の発生を防ぐのに重要である。
【０００８】
圃場栽培作物については、該植物が湿っている時間を最小にするために、良好な排水と雑草の防除を行うべきである。さらには、該植物の栄養レベルを高く保つべきである。栄養レベル（特に窒素）が高く保たれた場合には、圃場栽培トマトの感染および損害が低くなるらしいことが判明している（Ｓｈｅｒｆ，Ａ．Ｆ．ら，Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８６），ｐｇｓ．６４５−６４７を参照）。
【０００９】
温室栽培および圃場栽培のどちらのトマトにおいても、灰色カビ病を防除するために殺真菌剤を使用することができる。使用しうるいくつかの殺真菌剤の具体例には、週単位で施用しうるクロロサロニル（Ｅｘｏｔｈｅｒｍ Ｔｅｒｍｉｌ）、および収穫後のトマト果実に施用しうるＤｏｗｃｉｄｅ ＡまたはＤＣＮＡ（Ｂｏｔｙａｎ）が含まれる。
【００１０】
現在のところ、灰色カビ病菌による感染に耐性を示すトマト品種は商業的に入手できない。したがって、灰色カビ病に対する耐性を有し更には望ましい商業的特性を示す新規トマト品種が、当技術分野において現在必要とされている。
【発明の開示】
【００１１】
発明の概要
１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配からの種子を播き、該種子を植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃの植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおける植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、（ｇ）該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定する工程を含む。好ましくは、該生産方法において使用する受容トマト植物はリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）である。
【００１２】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、前記生産方法による、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。
【００１３】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅの植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、（ｇ）該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を自殖させ、（ｉ）工程ｈにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返す工程を含む。
【００１４】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第２の生産方法に関する。該生産方法は、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を、工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅの植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、（ｇ）該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｉ）工程ｈにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返し、（ｌ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、（ｍ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含む。
【００１５】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、前記生産方法のいずれか１つにより生産された灰色カビ病耐性同系交配トマト植物に関する。
【００１６】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病に対する耐性を示す雑種トマト植物に関する。そのような雑種トマト植物は、前記生産方法の１つにより生産された同系交配トマト植物を、商業的に望ましい特性を示す同系交配トマト植物と交配させることにより生産することができる。
【００１７】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配からの種子を播き、該種子を植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃの植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）病理疾病選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定する工程を含む。好ましくは、該生産方法において使用する受容トマト植物はリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）であり、該供与植物は、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する。
【００１８】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配からの種子を播き、該種子を植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃの植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部（例えば、葉（切断葉または付着葉）、茎など）に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定する工程を含む。好ましくは、該生産方法において使用する受容トマト植物はリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）であり、該供与植物は、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する。
【００１９】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、前記生産方法による、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。
【００２０】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）病理選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定し、（ｇ）工程ｆにおいて同定された植物を自殖させ、（ｈ）工程ｉにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｉ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｈからの植物を同定し、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｉを繰返す工程を含む。
【００２１】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第２の生産方法に関する。該生産方法は、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を工程ｂの受容植物と交配させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）病理選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定し、（ｇ）工程ｆにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｈ）工程ｇにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｉ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｈからの植物を同定し、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｇ〜ｉを繰返し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、（ｌ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含む。
【００２２】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第３の生産方法に関する。該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を自殖させ、（ｉ）工程ｈにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返す工程を含む。
【００２３】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第４の生産方法に関する。該生産方法は、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｉ）工程ｈにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返し、（ｌ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、（ｍ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含む。
【００２４】
該生産方法は少なくとも、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を自殖させ、（ｉ）工程ｈにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返す工程を含む。
【００２５】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の第４の生産方法に関する。該生産方法は、（ａ）リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病耐性供与植物を同定し、（ｂ）該灰色カビ病耐性供与植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、（ｃ）工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｄ）工程ｃにおいて得られた植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｅ）工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｆ）工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、（ｇ）灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、（ｈ）工程ｇにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、（ｉ）工程ｈにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、（ｊ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、（ｋ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返し、（ｌ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、（ｍ）灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含む。
【００２６】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、前記生産方法のいずれか１つにより生産された灰色カビ病耐性同系交配トマト植物に関する。
【００２７】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病に対する耐性を示す雑種トマト植物に関する。そのような雑種トマト植物は、前記生産方法の１つにより生産された同系交配トマト植物を、商業的に望ましい特性を示す同系交配トマト植物と交配させることにより生産することができる。
【００２８】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性に連関した第１０染色体由来の少なくとも１つの遺伝子をゲノム内に含有する灰色カビ病耐性トマト植物に関する。そのような灰色カビ病耐性トマト植物は、リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる。
【００２９】
発明の詳細な記載
定義
本明細書中に示す項目名は、本明細書全体を参考にすることにより定められうる本発明の種々の態様または実施形態を限定するものではない。したがって、以下に定義される用語は、本明細書全体を参考にすることにより、より完全に定義される。
【００３０】
本発明で用いる「対立遺伝子」なる語は、ひとつまたは複数の選択可能な遺伝子形態のいずれかを意味し、それらの対立遺伝子のすべては、１つの形質または特性に関連している。二倍体の細胞または生物では、ある与えられた遺伝子の２つの対立遺伝子は、一対の相同染色体上の対応遺伝子座を占める。
【００３１】
本発明で用いる「灰色カビ病（菌）」なる語は、灰色カビまたは灰色斑としても公知であるボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）を意味し、トマトの茎、葉および果実でよく見られる疾病である。
【００３２】
本発明で用いる「ヘテロ接合」なる語は、異なる対立遺伝子が相同染色体上の対応遺伝子座に存在する場合に見られる遺伝子状態を意味する。
【００３３】
本発明で用いる「ホモ接合」なる語は、同一の対立遺伝子が相同染色体上の対応遺伝子座に存在する場合に見られる遺伝子状態を意味する。
【００３４】
本発明で用いる「雑種（ハイブリッド）」なる語は、２つの遺伝的に異なる個体間の交配により生じた任意の後代を意味する（Ｒｉｅｇｅｒ，Ｒ．，Ａ ＭｉｃｈａｅｌｉｓおよびＭ．Ｍ．Ｇｒｅｅｎ，１９６８，Ａ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．）。
【００３５】
本発明で用いる「同系交配（体）」なる語は、実質的にホモ接合である個体または品種を意味する。
【００３６】
本発明で用いる「（遺伝子）移入」なる語は、１つの植物からもう１つの植物への遺伝子の進入または導入を意味する。本発明で用いる「（遺伝子）移入する」なる語は、１つの植物からもう１つの植物へ遺伝子を進入させること又は導入することを意味する．
本発明で用いる「分子マーカー」なる語は、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）、増幅断片長多型（ＡＦＬＰ）、一塩基多型（ＳＮＰ）、マイクロサテライト、ＳＣＡＲ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｒｅｐｅａｔｓ）またはアイソザイムマーカー、またはさらに特定の遺伝子および染色体の位置を決定する本明細書に記載のマーカーの組合せを意味する。
【００３７】
本発明で用いる「植物」なる語は、植物細胞、植物原形質体、トマト植物が再生されうる植物細胞組織培養、植物カルス、植物細胞凝集塊、および植物内の損なわれていない植物細胞、または胚、花粉、胚珠、花、葉、種子、根、根端などのような植物の一部を含む。
【００３８】
本発明で用いる「集団」なる語は、共通の遺伝子起源を有する植物の遺伝的に不均質な集まりを意味する。
【００３９】
本発明で用いる「制限断片長多型」または「ＲＦＬＰ」なる語は、特異的制限酵素により切断されたＤＮＡ断片のサイズにおける個体間の変異を意味する。ＲＦＬＰを引き起こす配列多型は、物理的地図および遺伝子連鎖地図の両者においてマーカーとして使用される。
【００４０】
本発明で用いる「トマト」なる語は、リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）の任意の品種、栽培品種または集団を意味する。
【００４１】
本発明で用いる「品種」または「栽培品種」なる語は、構造的特徴および作物のできばえにより同じ種内の他の品種から識別されうる同様の植物の群を意味する。
【００４２】
発明の記載
１つの実施形態においては、本発明は、新規灰色カビ病耐性トマト植物およびトマト系統、ならびに選択的育種技術における本明細書に記載の分子マーカーおよび遺伝子を使用してそれらを生産するための改良された生産方法に関する。より詳しくは、本発明者らは、ある新規灰色カビ病耐性トマト植物を同定した。これらのトマト植物は、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を含有する。これらの遺伝子を含有しないトマト植物は、灰色カビ病による感染に対して感受性がある。好ましくは、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子が第１０染色体上に位置する。
【００４３】
灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を表す第１０染色体上に位置する分子マーカーは、マーカーによる選択方法（これは当技術分野において良く知られた技術である）を用いて同定することができる。灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域に連鎖していると考えられる第１０染色体上の幾つかのマーカーの具体例には、ＴＧ３１３、ＣＴ２３４、ＴＧ４０８、ＣＴ２０、ＣＴ５７、ＴＧ２４１、ＴＧ２３３およびＣＤ３２Ｂのうちの少なくとも１つが含まれるが、これらに限定されるものでない（図１を参照）。
【００４４】
本明細書に記載の第１０染色体上の遺伝子を含有する灰色カビ病耐性トマト植物の起源の１つは、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）受託番号ＬＡ１７７７である。受託番号ＬＡ１７７７はペルー原産の野生種のトマトであり、Ｃ． Ｍ． Ｒｉｃｋ Ｔｏｍａｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｏｎｅ Ｓｈｉｅｌｄｓ Ａｖｅｎｕｅ，Ｄａｖｉｓ，ＣＡ ９５６１６（ｈｔｔｐ：／／ｔｇｉｃ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ）より公的に入手可能である。灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を含有し灰色カビ病耐性を示す他の関連トマト植物を利用することが、本発明によりこの物質が同定されたために可能となった。より詳しくは、２以上の種において、実際には２以上の属において、同じ耐性遺伝子が存在しうることが、当技術分野において公知である［Ｋｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．ら，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．，１２６（１）：５６−６３（２００１）を参照；この研究において、同じ耐性遺伝子でワタ−メロンアブラムシ（Ａｐｈｉｓ ｇｏｓｓｙｐｉｉ Ｇｌｏｖｅｒ）に対する耐性を付与するＶａｔが、メロン生殖質の２つの起源（インド受託番号ＰＩ３７１７９５および韓国受託番号ＰＩ１６１３７５）において発見された；さらにＧｒｕｂｅ，Ｒら，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５５：８７３−８８７（２０００）においては、クローニングされたＲ遺伝子Ｓｗ−５、Ｎ、Ｐｔｏ、ＰｒｆおよびＩ２のコショウホモログが他のナス科植物のゲノムのシンテニーな位置に見出され、いくつかの場合には、表現型により定められるナス科Ｒ．遺伝子の近傍の更なる位置にもマッピングされた］。したがって、関連したトマト種の他の受託物（例えば、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない）を、灰色カビ病耐性に関して調べることが可能である：リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）。
【００４５】
灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子に連鎖した、第１０染色体上のひとつまたは複数の領域に連関していることが確認された分子マーカーを使用して、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を最初の供与植物から受容植物へと移入させることができる。何ら限定するものではないが例えば、前記の遺伝子移入において、ＲＦＬＰスクリーニング技術を用いることができる。本発明により開発されたトマト植物は、その形質の大部分を受容植物から有利に受け継ぎ、灰色カビ病耐性を最初の供与植物から受け継ぐことが可能である。
【００４６】
本発明の１つの態様においては、耐性量的形質座位に連鎖した分子マーカーを同定することにより、灰色カビ病耐性をコードする遺伝子をマッピングする。該マッピングにおいては、表現型を評価するために、灰色カビ病に対して耐性および感受性の同系交配トマト植物の混合体を利用する。そのような系統の分子的特徴づけは、ＭｏｎｆｏｒｔｅおよびＴａｎｋｓｌｅｙがＧｅｎｏｍｅ誌４３：８０３−８１３（２０００）に記載した技術を用いて行うことができる。何ら限定するものではないが例えば、灰色カビ病耐性表現型とマーカー遺伝子型との連関は、ソフトウェアパッケージＱＧＥＮＥを使用する回帰分析により調べることができる（Ｎｅｌｓｏｎ Ｃ．Ｊ．，“ＱＧＥＮＥ：Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ Ｍａｒｋｅｒ−Ｂａｓｅｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，３：２３９−２４５（１９９７））。
【００４７】
本発明のもう１つの実施形態においては、本発明は、優れた新規灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法に関する。本発明の方法においては、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を、灰色カビ病に対して耐性の供与親植物から、灰色カビ病による感染に対して非耐性である受容トマト植物または該感染に対して中間レベルの耐性を有する植物へと移入させる。本発明の方法により生産された灰色カビ病耐性トマト植物は、同系交配、雑種、半数体、無配偶生殖または遺伝子操作トマト植物のいずれかでありうる。
【００４８】
灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子の、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有する受容トマト植物への移入は、当技術分野で公知の技術を用いて行うことができる。例えば、通常の育種技術、遺伝子操作またはプロトプラスト融合を用いて、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を、灰色カビ病に対して非耐性である受容株トマト植物または灰色カビ病に対して中間レベルの耐性を有する植物へ移入させることができる。
【００４９】
前記において簡潔に説明したとおり、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有する受容トマト植物へ移入させるためには、通常の育種技術を用いることができる。系統育種と称される１つの方法においては、灰色カビ病耐性を示し灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を含有する第１トマト植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は灰色カビ病に対して中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性（例えば、耐病性、耐虫性、価値のある果実特性などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）を有する第２トマト植物と交配させる。ついで、得られた植物集団（これはＦ１雑種である）に自家受粉させて播種させる（Ｆ２種子）。ついで、該Ｆ２種子から成長したＦ２植物が、灰色カビ病に対し耐性であるものを選別する。該集団は、多種多様な方法により選別することができる。まず第１に、通常の病理疾病選別法を用いて、該集団を選別することができる。そのような病理疾病選別法は当技術分野において公知である。具体的には、個々の植物またはその一部をインキュベーターまたは温室内で灰色カビ病菌で攻撃し、各植物の、生じた耐性または感受性の表現型を評価することができる。何ら限定するものではないが例えば、以下のようにして、植物を温室内で選別することができる。
【００５０】
まず第１に、温室内（以後「ＧＨ」と称される）でトマト種子を播き、実生にまで成長させる（大体の期間 〜６週間）。１系統ごとにそれぞれ１０個の植物を３回反復して、合計３０個の植物を評価する。葉、茎、花および果実を、１〜５段階の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して別々に評価することができる。播種の１０週間後、灰色カビ病菌の分生子懸濁液（１，０００，０００分生子／ｍｌ）を該植物に接種する。茎および果実上の発病を促すために、もう一度接種が必要かもしれない。
【００５１】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、灰色カビ病胞子形成および病変発生について、接種の１週間後に該葉を評価することができる：
１−症状なし。
２−壊死および胞子形成が１〜２枚の葉に認められる。
３−壊死および胞子形成が葉群の１０％に認められる。
４−壊死および胞子形成が葉群の２０％に認められる。
５−壊死および胞子形成が葉群の２０％より多くに認められる。
【００５２】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、灰色カビ病胞子形成および病変発生について、接種の４週間後に該茎を評価することができる：
１−症状なし。
２−茎上の限定的な表面の病変。
３−限定的な胞子形成を伴う直径１０ｍｍまでの病変の拡大。
４−直径４０ｍｍまでの病変の拡大があり、胞子形成により衰弱。
５−直径４０ｍｍ超に病変が拡大し、胞子形成により衰弱または茎が完全に病変部に覆われる。
【００５３】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、少なくとも３つの花房が発生した際に、灰色カビ病の発生および胞子形成について該花を評価することができる：
１−症状なし。
２−１つの花房の花の５０％未満で落花、壊死および または胞子形成。
３−２以上の花房の花の５０％未満で落花、壊死および または胞子形成。
４−２以上の花房の花の５０％〜７５％で落花、壊死および または胞子形成。
５−すべての花房の花の７５％超で落花、壊死および または胞子形成。
【００５４】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、果実の５０％が発生の限界期にある際に、灰色カビ病の病変発生について該果実を評価することができる：
１−症状なし。
２−病変は花柄のみ。
３−病変は１つの果実にのみに発生。
４−病変は１つの植物につき、４個以下の果実に発生。
５−病変は１つの植物につき、４個を超える果実に発生。
【００５５】
第２に、灰色カビ病をコードする遺伝子の１以上を含有する雑種植物を同定するために、前記の分子マーカーの１以上を使用して、マーカーによる選択を行うことができる。あるいは、該病理選別法により得られた結果を確認するために、マーカーによる選別を行うことができる。
【００５６】
灰色カビ病耐性表現型を示すＦ２雑種植物は、灰色カビ病耐性をコードする必須遺伝子を含有し、商業的に望ましい特性を有する。したがって該Ｆ２雑種植物を、何世代にもわたり選択し自殖させて、更に同系交配されたトマト植物を得ることが可能である。この連続的な自殖および選択の過程は、５世代以上にわたり行うことができる。そのような育種および選択の結果、灰色カビ病耐性に関連した遺伝子および商業的に関心が持たれる形質に関連した他の遺伝子に関して遺伝的に均一である系統が得られる。
【００５７】
あるいは、反復選択および戻し交配の技術を用いて、新規かつ優れた灰色カビ病耐性同系交配トマト植物系統を開発することができる。この方法においては、標的受容植物（これは反復親と称される）への灰色カビ病耐性の遺伝子移入を、反復親を第１供与植物（これは該反復親とは別物であり、本発明では「非反復親」と称される）と交配させることにより行うことが可能である。反復親は、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性（例えば、耐病性、耐虫性、価値のある果実の特性などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）を有する植物である。非反復親は灰色カビ病耐性を示し、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子を含有する。非反復親は、反復親と他家受精した任意の植物品種または同系交配系統（同系繁殖系）でありうる。反復親と非反復親との交配により生じた後代を反復親と戻し交配させる。ついで、得られた植物集団を選別する。該集団は多種多様な方法で選別することができる。第１に、本明細書に既に記載されている通常の病理選別法を用いて、該集団を選別することができる。
【００５８】
第２に、灰色カビ病耐性をコードする遺伝子の１以上を含有する後代を同定するために、前記分子マーカーの１以上を使用して、マーカーによる選択を行うことができる。あるいは、該病理選別法から得られた結果を確認するために、マーカーによる選択を行うことができる。
【００５９】
適当な選択を行ったら、該工程を繰返す。反復親への戻し交配および灰色カビ病耐性のあるものを選択していく工程を約５世代以上にわたって繰返す。この工程によって得られる後代は、灰色カビ病耐性をコードするひとつまたは複数の遺伝子に関してヘテロ接合である。次いで、灰色カビ病耐性のあるホモ接合純粋品種後代を得るために、最後の戻し交配世代を自殖させる。
【００６０】
本明細書に記載の灰色カビ病耐性同系交配トマト系統は、灰色カビ病耐性雑種植物を作製するための更なる交配において使用することができる。例えば、第１灰色カビ病耐性同系交配トマト植物を、商業的に望ましい形質（例えば、耐病性、耐虫性、望ましい果実特性などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）を有する第２同系交配トマト植物と交配させることができる。この第２同系交配トマト系統は、灰色カビ病に対して耐性であっても耐性でなくてもよい。
【００６１】
前記方法において行うマーカーによる選択は、例えば、異なる灰色カビ病耐性遺伝子が２以上の世代において選択されるよう段階的に行うことが可能であり、あるいは、もう１つの例として、すべての耐性遺伝子が同じ世代において選択されるよう同時に行うことが可能である。灰色カビ病耐性に関する、マーカーによる選択は、他の商業的に望ましい形質（例えば、耐病性、耐虫性、望ましい果実特性など）に関する試験および選択の前に、またはそれらと共に、またはそれらの後に行うことができる。
【００６２】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明は、灰色カビ病耐性をコードするトマト由来のひとつまたは複数の遺伝子の同定、単離および精製に関する。そのような遺伝子が単離されうる材料の１つの起源はリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）受託番号ＬＡ１７７７である。また、本発明は更に、灰色カビ病感染に対して耐性を示すトランスジェニック（形質転換）植物を得るために、当技術分野で公知の技術を用いて、トマトまたは他の植物に、そのような単離および精製された遺伝子を挿入することを意図する。
【００６３】
植物の形質転換は、植物細胞内で機能する発現ベクターの構築を含む。本発明においては、そのようなベクターは、プロモーターのような調節要素の制御下にある又はそれに機能しうる形で連結された灰色カビ病耐性をコードする遺伝子を含むＤＮＡを含む。該発現ベクターは、ひとつまたは複数のそのような機能しうる形で連結された遺伝子／調節要素の組合せを含有しうるが、この場合、該組合せに含有される遺伝子の少なくとも１つは灰色カビ病耐性をコードしていなければならない。後記の形質転換の方法を用いて、灰色カビ病に対して耐性であるトランスジェニック植物を得るためには、該ベクターはプラスミドの形態であることが可能であり、単独で又は他のプラスミドと組合せて使用することが可能である。
【００６４】
発現ベクターは少なくとも１つの遺伝マーカーを含有することが可能であり、該遺伝マーカーは、該マーカーを有する形質転換細胞が負の選択（該選択マーカー遺伝子を含有しない細胞の増殖を抑制することによる）または正の選択（該遺伝マーカーにコードされる産物に関してスクリーニングすることによる）により回収されることを可能にする調節要素（例えばプロモーター）に機能しうる形で連結されている。植物の形質転換のために一般に使用される多数の選択マーカー遺伝子が当技術分野において公知であり、それらには、例えば、選択的化学物質（それは抗生物質または除草剤でありうる）を代謝的に解毒する酵素をコードする遺伝子、またはインヒビターに対して非感受性である改変された標的をコードする遺伝子が含まれる。マンノース選択のような幾つかの正の選択方法が当技術分野で公知である。あるいは、マーカーを使用しない形質転換を用いることも可能であり、その技術は当技術分野で公知である。
【００６５】
植物の形質転換のために一般に使用される選択マーカー遺伝子の一例としては、ある植物調節シグナルの制御下に配置された場合にカナマイシン耐性を付与する、トランスポゾンＴｎ５から単離されたネオマイシンホスホトランスフェラーゼＩＩ（ｎｐｔＩＩ）遺伝子（Ｆｒａｌｅｙら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，８０：４８０３（１９８３）を参照）が挙げられる。もう１つの一般に使用される選択マーカー遺伝子としては、抗生物質ヒグロマイシンに対する耐性を付与するヒグロマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子（Ｖａｎｄｅｎ Ｅｌｚｅｎら，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：２９９（１９８５）を参照）が挙げられる。使用されうる他の選択マーカーの具体例には、β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼおよびクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼが含まれる。
【００６６】
発現ベクターは、プロモーターのような調節要素を含むヌクレオチド配列により駆動しなければならない。プロモーターの幾つかの型は当技術分野でよく知られており、単独で又はプロモーターと組合せて使用されうる他の調節要素も当技術分野でよく知られている。本発明で用いる「プロモーター」なる語は、ＲＮＡポリメラーゼおよび転写を開始させる他のタンパク質の認識および結合に関与し転写の開始点の上流に存在するＤＮＡの領域に対する言及を含む。「植物プロモーター」は、植物細胞において転写を開始させうるプロモーターである。発生制御下のプロモーターの具体例には、葉、根、種子、繊維、道管、仮道管または厚壁組織のような或る組織において転写を優先的に開始させるプロモーターが含まれる。そのようなプロモーターは「組織優先的」と称される。ある組織においてのみ転写を開始させるプロモーターは「組織特異的」と称される。「細胞型」特異的プロモーターは、主として、ひとつまたは複数の器官における或る細胞型（例えば、根または葉における維管束細胞）において発現を駆動する。「誘導性」プロモーターは、環境制御下にあるプロモーターである。誘導性プロモーターによる転写に影響を及ぼしうる環境条件の具体例には、嫌気的条件または光の存在が含まれる。組織特異的、組織優先的、細胞型特異的および誘導性プロモーターは「非構成的」プロモーターのクラスを形成する。「構成的」プロモーターは、ほとんどの環境条件下で活性であるプロモーターである。
【００６７】
誘導性プロモーターは、トマトにおける発現のために、灰色カビ病耐性をコードする単離され精製された遺伝子に機能しうる形で連結される。誘導性プロモーターを用いると、誘導因子に応答して転写率が増加する。任意の誘導性プロモーターを本発明で使用することができる。
【００６８】
構成的プロモーターは、トマトにおける発現のために、灰色カビ病耐性をコードする単離され精製された遺伝子に機能しうる形で連結されうる。いくつかの異なる構成的プロモーターが当技術分野で公知であり、本発明において使用することができる。本発明で使用されうる構成的プロモーターの一例には、ＣａＭＶ由来の１９Ｓまたは３５Ｓプロモーター（Ｏｄｅｌら，Ｎａｔｕｒｅ，３１３：８１０−８１２（１９８５）を参照）のような植物ウィルス由来のプロモーターが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００６９】
組織特異的プロモーターは、トマトにおける発現のために、灰色カビ病耐性をコードする単離され精製された遺伝子に機能しうる形で連結される。灰色カビ病耐性をコードし組織特異的プロモーターに機能しうる形で連結された単離され精製された遺伝子で形質転換された植物は、特異的組織において、トランスジーンのタンパク質産物を独占的または優先的に産生する。
【００７０】
任意の組織特異的または組織優先的プロモーターを本発明で使用することができる。典型的な組織特異的または組織優先的プロモーターには、ｃａｂまたはｒｕｂｉｓｃｏ由来のプロモーターである葉特異的および光誘導性プロモーター（Ｓｉｍｐｓｏｎら，ＥＭＢＯ Ｊ．，４（１１）：２７２３−２７２９（１９８５）およびＴｉｍｋｏら，Ｎａｔｕｒｅ，３１８：５７９−５８２（１９８５）を参照）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００７１】
生物学的および物理的植物形質転換プロトコールを含む、植物形質転換のための多数の方法が開発されている。例えば、Ｍｉｋｉら,“Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｆｏｒｅｉｇｎ ＤＮＡ ｉｎｔｏ Ｐｌａｎｔｓ”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌｉｃｋ，Ｂ．Ｒ．およびＴｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｅ．編（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９３）ｐ．６７−８８を参照。また、植物の細胞または組織の形質転換および植物の再生のためのインビトロ培養方法および発現ベクターが利用可能である（Ｇｒｕｂｅｒら，“Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,Ｇｌｉｃｋ，Ｂ．Ｒ．およびＴｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｅ．編（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９３）ｐ．８９−１１９を参照）。
【００７２】
植物に発現ベクターを導入するための１つの方法は、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）の天然形質転換系に基づいている（Ｈｏｒｓｃｈら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２７：１２２９（１９８５）を参照）。エイ・ツメファシエンス（Ａ．Ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）およびエイ・リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）は、植物細胞を遺伝的に形質転換する植物病原性土壌細菌である。エイ・ツメファシエンス（Ａ．Ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）およびエイ・リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）のそれぞれＴｉプラスミドおよびＲｉプラスミドは、植物の遺伝的形質転換を引き起こす遺伝子を運ぶ（Ｋａｄｏ，Ｃ．Ｉ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ．Ｓｃｉ．，１０：１（１９９１）を参照）。アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ベクター系およびアグロバクテリウム媒介遺伝子導入方法の説明は、Ｇｕｒｂｅｒら（前掲）、Ｍｉｋｉら（前掲）およびＭｏｌｏｎｅｙら編、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ８：２３８（１９８９）になされている。また、１９９７年１月７日付け発行の米国特許第５，５９１，６１６号も参照。
【００７３】
発現ベクターを植物に導入するためのもう１つの方法は、ＤＮＡが微小発射体の表面に乗って運ばれる微小発射体媒介形質転換に基づくものである。植物細胞壁および細胞膜を貫くのに十分な３００〜６００ｍ／ｓの速度に微小発射体を加速するバイオリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）装置を用いて、発現ベクターを植物組織内に導入する（Ｓａｎｆｏｒｄら，Ｐａｒｔ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５：２７（１９８７），Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｊ．Ｃ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，．６：２９９（１９８８），Ｋｌｅｉｎら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６：５５９−５６３（１９８８），Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｊ．Ｃ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｌａｎｔ，７９：２０６（１９９０），Ｋｌｅｉｎら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：２６８（１９９２）を参照）。
【００７４】
ＤＮＡを植物に導入するためのもう１つの方法は、標的細胞の超音波処理によるものである（Ｚｈａｎｇら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：９９６（１９９１）を参照）。あるいは、発現ベクターを植物内に導入するためにリポソームまたはスフェロプラスト融合が用いられている（Ｄｅｓｈａｙｅｓら，ＥＭＢＯ Ｊ．，４：２７３１（１９８５），Ｃｈｒｉｓｔｏｕら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，８４：３９６２（１９８７）を参照）。ＣａＣｌ２沈殿、ポリビニルアルコールまたはポリ−Ｌ−オルニチンを使用したプロトプラスト内へのＤＮＡの直接取り込みも報告されている（Ｈａｉｎら，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９：１６１（１９８５）およびＤｒａｐｅｒら，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２３：４５１（１９８２）を参照）。プロトプラストならびに全細胞および組織のエレクトロポレーションも記載されている（Ｄｏｎｎら，Ｉｎ ａｂｓｔｒａｃｔｓ ｏｆ ＶＩＩｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｏｎ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＩＡＰＴＣ，Ａ２−３８，ｐ ５３（１９９０）；Ｄ’Ｈａｌｌｕｉｎら，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，４：１４９５−１５０５（１９９２）およびＳｐｅｎｃｅｒら，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２４：５１−６１（１９９４））。
【００７５】
トマト標的細胞の形質転換の後、今や当技術分野ではよく知られている再生および選択方法を用いて、前記選択的マーカー遺伝子の発現が、形質転換された細胞、組織および／または植物の優先的な選択を可能にする。
【００７６】
形質転換のための既に記載されている方法は、灰色カビ病耐性をコードする外来（異種）遺伝子を含有するトランスジェニックトマト植物または他の植物種、例えば、野菜（すなわち、アスパラガス、レタスなど）、果物（すなわち、イチゴ）または観賞植物（すなわち、アフリカスミレ、ベゴニア、ブーゲンビレア、シクラメン、ダリア、ゼラニウム、ブッソウゲ、ツリフネソウ、カランコエ、観賞用コショウ、エクサクム、プリムローズ、ポインセチヤ、バーベナ、ニチニチソウなど）（これらに限定されるものでない）を生産するために用いることが可能であろう。ついで、そのようなトランスジェニック植物を、もう１つの（未形質転換または形質転換）植物と交配させて、灰色カビ病感染に対して耐性であるトマトまたは他の植物種のトランスジェニック雑種を生産することが可能である。あるいは、灰色カビ病耐性をコードする外来（異種）遺伝子を含有するよう本明細書に記載の形質転換技術により操作されたトランスジェニックトマトまたは他の植物種における灰色カビ病耐性外来（異種）遺伝子を、当技術分野でよく知られた通常の育種技術（例えば、戻し交配）を用いて、もう１つの植物内に移入することが可能であろう。例えば、本明細書で既に記載されているように、灰色カビ病耐性をコードする外来（異種）遺伝子を含有するトランスジェニック灰色カビ病耐性同系交配トマトまたは他の植物系統から、その遺伝子を有しない非耐性のトマト植物または他の作物へ、あるいは、灰色カビ病耐性をコードする外来遺伝子を含有するトランスジェニック雑種灰色カビ病耐性トマト植物または他の植物から、その遺伝子を含有しない系統へ、灰色カビ病耐性を遺伝子移入させるために、戻し交配を用いることが可能であろう。
【００７７】
もう１つの実施形態においては、優れた新規灰色カビ病耐性植物を作製するために、プロトプラスト融合を用いることができる。より詳しくは、灰色カビ病菌による感染に耐性を示し本明細書に記載の遺伝子を含有するトマト植物または他の植物系統から、第１のプロトプラストを得ることができる。例えば、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）受託番号ＬＡ１７７７由来のプロトプラストを使用することができる。商業的に望ましい特性（例えば、耐病性、耐虫性、有益な果実特性などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）を含有する第２のトマトまたは他の植物品種から、第２のプロトプラストを得ることができる。ついで、当技術分野で公知の通常のプロトプラスト融合法を用いて、それらのプロトプラストを融合する。例えば、膜の融合を促進するためにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）溶液を使用することにより、プロトプラスト融合を行うことが可能である。そのような体細胞交雑（体細胞ハイブリダイセーション）は、種間雑種の生産のためのＳｕｎｄｂｅｒｇら（Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，４３：１５５（１９８６））により公開された条件下またはその修飾条件下で達成されうる。しかし、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の使用以外の他の方法によりプロトプラスト融合が達成されうることが、当業者に認識されているであろう。例えば、Ｋｏｏｐら，“Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｉｅｌｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ−ｗｉｔｈ Ｐｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｓｉｎｇｌｅ Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ａｎｄ Ｓｕｂｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ｏｆ Ｈｉｇｈｅｒ Ｐｌａｎｔｓ”ｉｎ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｅｕｍａｎら編，ｐ．３５５−２６５（１９８９）に記載の電場誘発性融合技術を用いて、プロトプラストを融合することができる。さらに、Ｈａｕｐｔｍａｎｎら，“Ｃａｒｒｏｔ ｘ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｓ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｂｙ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｏｇ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ”，６ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，Ａｕｇ．１２−１６，１９８３に記載のとおり、デキストランおよびポリビニルアルコールを使用してプロトプラスト融合を行うことができる。
【００７８】
もう１つの実施形態においては、本発明は、トマト植物またはトマト種子中の灰色カビ病耐性の存在または非存在を判定するための方法を提供する。これらの方法は、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した染色体上の少なくとも１つの領域に連関したひとつまたは複数の分子マーカーの存在に関して、植物または種子由来のＤＮＡを分析することを含む。さらに詳しくは、該分子マーカーは好ましくは第１０染色体由来であり、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を同定するために使用される。そのようなマーカーの具体例には、以下のものの少なくとも１つが含まれるが、それらに限定されるものではない：第１０染色体上のＴＧ３１３、ＣＴ２３４、ＴＧ４０８、ＣＴ２０、ＣＴ５７、ＴＧ２４１、ＴＧ２３３およびＣＤ３２Ｂ。この方法においては、該分析は、ＲＦＬＰ分析により該トマト植物または種子を分析することを含む。
【００７９】
もう１つの実施形態においては、本発明は、前記方法に従い生産された種子、植物および／または植物系統に関する。さらに詳しくは、本発明は、第１植物系統からの第１ゲノムＤＮＡ（該第１ゲノムＤＮＡは該植物系統に灰色カビ病耐性を付与する）と第２植物系統からの第２ゲノムＤＮＡ（該第２ゲノムＤＮＡは該植物系統に他の望ましい形質を付与する）とを含む、選択的育種により得られた灰色カビ病耐性トマト植物または植物系統、例えば、野菜（すなわち、アスパラガス、レタスなど）、果物（すなわち、イチゴ）または観賞植物（すなわち、アフリカスミレ、ベゴニア、ブーゲンビレア、シクラメン、ダリア、ゼラニウム、ブッソウゲ、ツリフネソウ、カランコエ、観賞用コショウ、エクサクム、プリムローズ、ポインセチヤ、バーベナ、ニチニチソウなど）（これらに限定されるものでない）に関する。本発明のこの態様では、トマトにおいては、第１ゲノムＤＮＡ量は、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来の分子マーカーを含む。より詳しくは、トマトにおいては、該分子マーカーは、第１０染色体上のＴＧ３１３、ＣＴ２３４、ＴＧ４０８、ＣＴ２０、ＣＴ５７、ＴＧ２４１、ＴＧ２３３およびＣＤ３２Ｂの少なくとも１つを含むが、これらに限定されるものではない。
【００８０】
限定的でない例示として、本発明の実施例を以下に記載する。
【実施例１】
【００８１】
Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ × Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ準同質遺伝子系統における灰色カビ病耐性
温室条件下で耐性を評価するために、２０００年に、以下のリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）×リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）準同質遺伝子系統（以後「ＮＩＬ」と称される）の種子をイタリアのＬａｔｉｎａへ送った。種子を移植トレイ中の土壌に播き、２０℃〜２４℃の温室内で約６週間成長させた。具体的には、該種子は、以下の系統に由来するものであった：ＬＡ１７７７、ＴＡ１５５１、ＴＡ１３３０、ＴＡ１２７６、ＴＡ１１０５、ＴＡ１２７７、ＴＡ１２８７、ＴＡ１５４１、ＴＡ１３２４、ＴＡ５１７、ＴＡ１２６６、ＴＡ１５４４、ＴＡ１３１６、ＴＡ１５３９、ＴＡ１１２１、ＴＡ１１１２、ＴＡ１５４５、ＴＡ１５６２、ＴＡ１２５８、ＴＡ１３０４、ＴＡ１２８０、ＴＡ１５４８、ＴＡ１１２７、ＴＡ１５３５、ＴＡ１５４０およびＥ６２０３。それらの系統のすべては、ｔｈｅ Ｃ．Ｍ．Ｒｉｃｋ Ｔｏｍａｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｏｎｅ Ｓｈｉｅｌｄｓ Ａｖｅｎｕｅ，Ｄａｖｉｓ，ＣＡ ９５６１６（ｈｔｔｐ：／／ｔｇｒｃ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ）から公的に入手可能である。
【００８２】
播種の約６週間後、実生を温室（以後「ＧＨ」と称される）に移植した。１系統ごとにそれぞれ１０本の植物を３回反復して、合計３０本の植物を評価した。葉および茎を、１〜５段階の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して別々に評価した。
【００８３】
移植の４週間後、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の分生子懸濁液（１，０００，０００分生子／ｍｌ）を該植物に接種した。最初の接種の５週間後、茎上の発病を促すために、もう一度接種を行った。
【００８４】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の胞子形成および病変発生について、接種の１週間後に該葉を評価した：
１−症状なし。
２−壊死および胞子形成が１〜２枚の葉に認められる。
３−壊死および胞子形成が葉群の１０％に認められる。
４−壊死および胞子形成が葉群の２０％に認められる。
５−壊死および胞子形成が葉群の２０％より多くに認められる。
【００８５】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の胞子形成および病変発生について、接種の４週間後に該茎を評価した：
１−症状なし。
２−茎上の限定的な表面の病変。
３−限定的な胞子形成を伴う直径１０ｍｍまでの病変の拡大。
４−直径４０ｍｍまでの病変の拡大があり、胞子形成により衰弱。
５−直径４０ｍｍ超に病変が拡大し、胞子形成により衰弱または茎が完全に病変部に覆われる。
【００８６】
以下の表１および２は、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）による感染に対するリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ）由来の種々の遺伝子移入断片を含有するリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）準同質遺伝子系統からの葉および茎の疾病評価を示す。
【００８７】
【表１】
【表２】
【００８９】
系統ＴＡ１５５１は、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ）の第１０染色体由来の遺伝子移入セグメントを含有する（図１を参照）。
【００９０】
灰色カビ病に対する耐性を付与するＱＴＬが位置する第１０染色体上の特異的領域の位置を決定するために、Ｑｇｅｎｅ統計パッケージを使用して、第１０染色体ＲＦＬＰマーカーと灰色カビ病耐性との間の連関を評価した。統計的に有意であり灰色カビ病耐性に連関していたＲＦＬＰマーカーを、以下の表３および４に示す。
【００９１】
【表３】
【表４】
【００９３】
Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ × Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ準同質遺伝子系統における灰色カビ病耐性
温室条件下で耐性を評価するために、２００１年に、以下のリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）×リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）準同質遺伝子系統の種子をイタリアのＬａｔｉｎａへ送った。種子を移植トレイ中の土壌に播き、２０℃〜２４℃の温室内で約６週間成長させた。具体的には、該種子は、以下の系統に由来するものであった：ＬＡ１７７７、ＴＡ１５５１、ＴＡ１５５１−Ｆ１、ＴＡ１３３９、Ｅ６２０３およびＭａｘ。ＴＡ１５５１−Ｆ１およびＭａｘ以外のそれらの系統は、ｔｈｅ Ｃ．Ｍ．Ｒｉｃｋ Ｔｏｍａｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｏｎｅ Ｓｈｉｅｌｄｓ Ａｖｅｎｕｅ，Ｄａｖｉｓ，ＣＡ ９５６１６（ｈｔｔｐ：／／ｔｇｒｃ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ）から公的に入手可能である。
【００９４】
播種の約６週間後、実生を温室に移植した。１系統ごとにそれぞれ１０本の植物を３回反復して、合計３０本の植物を評価した。葉および茎、花および果実を、１〜５段階の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して別々に評価した。
【００９５】
移植の４週間後、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の分生子懸濁液（１，０００，０００分生子／ｍｌ）を該植物に接種した。最初の接種の５週間後、茎および果実上の発病を促すために、もう一度接種を行った。
【００９６】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の胞子形成および病変発生について、接種の１週間後に該葉を評価した：
１−症状なし。
２−壊死および胞子形成が１〜２枚の葉に認められる。
３−壊死および胞子形成が葉群の１０％に認められる。
４−壊死および胞子形成が葉群の２０％に認められる。
５−壊死および胞子形成が葉群の２０％より多くに認められる。
【００９７】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の胞子形成および病変発生について、接種の４週間後に該茎を評価した：
１−症状なし。
２−茎上の限定的な表面の病変。
３−限定的な胞子形成を伴う直径１０ｍｍまでの病変の拡大。
４−直径４０ｍｍまでの病変の拡大があり、胞子形成により衰弱。
５−直径４０ｍｍ超に病変が拡大し、胞子形成により衰弱または茎が完全に病変部に覆われる。
【００９８】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、少なくとも３つの花房が発生した際に、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の発生および胞子形成について該花を評価した：
１−症状なし。
２−１つの花房の花の５０％未満で落花、壊死および または胞子形成。
３−２以上の花房の花の５０％未満で落花、壊死および または胞子形成。
４−２以上の花房の花の５０％〜７５％で落花、壊死および または胞子形成。
５−すべての花房の花の７５％超で落花、壊死および または胞子形成。
【００９９】
以下の疾病評価スケール（１＝耐性および５＝感受性）を使用して、果実の５０％が発生の限界期にある際に、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）の病変発生について該果実を評価した：
１−症状なし。
２−病変は花柄のみ。
３−病変は１つの果実にのみに発生。
４−病変は１つの植物につき、４個以下の果実に発生。
５−病変は１つの植物につき、４個を超える果実に発生。
【０１００】
以下の表５は、ボトリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）による感染に対するリコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ）由来の遺伝子移入断片を含有するリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）準同質遺伝子系統からの葉、茎、花および果実の疾病評価を示す。
【０１０１】
【表５】
【０１０２】
また、ＴＡ１３３９系統は、平均葉（ｐ＝０．０７）および茎（ｐ＝０．０６）スコアに関しては、感受性であるＥ６２０３より軽い発病（α０．１において有意）を示した。
【０１０３】
系統ＴＡ１５５１およびＴＡ１３３９は、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ）の第１０染色体由来の遺伝子移入セグメントを含有する（図１を参照）。
【０１０４】
灰色カビ病に対する耐性を付与するＱＴＬが位置する第１０染色体上の特異的領域の位置を決定するために、Ｑｇｅｎｅ統計パッケージを使用して、第１０染色体ＲＦＬＰマーカーと灰色カビ病耐性との間の連関を評価した。統計的に有意であり灰色カビ病耐性に連関していたＲＦＬＰマーカーを、以下の表６〜８に示す。
【０１０５】
【表６】
【表７】
【表８】
本明細書において言及されているすべての抄録、参考文献、特許および公開された特許出願を、参照により本明細書に組み入れることとする。
【０１０９】
本発明は、前記の説明および実施例により例示される。前記の説明を考慮して多数の変化が当業者に明らかとなるため、前記の説明は非限定的な例示であるとみなされる。
【０１１０】
本発明の概念および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の本発明の方法の組成、操作および配置に対して変更を施すことが可能である。
【図面の簡単な説明】
【０１１１】
【図１】図１は、トマトにおける第１０染色体の分子マーカー地図である。
Claims (38)
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃの植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．工程ｅの植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、
ｇ．該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定する工程を含んでなる、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法。 - 該受容トマト植物がリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）である、請求項１記載の生産方法。
- 請求項１記載の生産方法により生産された、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する耐性を示すトマト植物。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃの植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．工程ｅの植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、
ｇ．該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定する工程を含んでなる、商業的に望ましい特性を有する灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法。 - 該受容トマト植物がリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）である、請求項４記載の生産方法。
- 請求項４記載の生産方法により生産された、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する耐性を示すトマト植物。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．工程ｅの植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、
ｇ．該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定し、
ｈ．工程ｇにおいて同定された植物を自殖させ、
ｉ．工程ｈにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｊ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、
ｋ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返す工程を含んでなる、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法。 - ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃにおいて得られた植物を、工程ｂからの受容植物と交配させ、
ｅ．工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．工程ｅの植物から遺伝物質を単離し、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上の少なくとも１つの領域に連関した第１０染色体由来のひとつまたは複数の分子マーカーでマーカーによる選択を行い、
ｇ．該供与植物から移入されたＤＮＡ（該移入ＤＮＡは、灰色カビ病耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体由来の領域を含有する）を含有する植物を同定し、
ｈ．工程ｇにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、
ｉ．工程ｈにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｊ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、
ｋ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返し、
ｌ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、
ｍ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含んでなる、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法。 - 請求項８記載の生産方法により生産された灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性同系交配トマト植物。
- 請求項７または８記載の同系交配トマト植物を、商業的に望ましい特性を示す同系交配トマト植物と交配させる工程を含む生産方法により生産された、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する耐性を示す雑種トマト植物。
- 灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性に連関した第１０染色体由来の少なくとも１つの遺伝子をゲノム内に含有する灰色カビ病耐性トマト植物。
- 該トマト植物が、リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる、請求項１１記載のトマト植物。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃの植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．病理疾病選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定する工程を含んでなる、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法。 - 該受容トマト植物がリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）である、請求項１３記載の生産方法。
- 該供与植物が、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する、請求項１３記載の生産方法。
- 請求項１３記載の生産方法により生産された、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する耐性を示すトマト植物。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃの植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．病理疾病選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定する工程を含んでなる、商業的に望ましい特性を有する灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法。 - 該受容トマト植物がリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）である、請求項１７記載の生産方法。
- 該供与植物が、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する、請求項１７記載の生産方法。
- 請求項１７記載の生産方法により生産された、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する耐性を示すトマト植物。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃの植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、
ｇ．灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定する工程を含んでなる、灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法。 - 該受容トマト植物がリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）である、請求項２１記載の生産方法。
- 該供与植物が、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する、請求項２１記載の生産方法。
- 請求項２１記載の生産方法により生産された、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する耐性を示すトマト植物。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃの植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、
ｇ．灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定する工程を含んでなる、商業的に望ましい特性を有する灰色カビ病耐性トマト植物の生産方法。 - 該受容トマト植物がリコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）である、請求項２５記載の生産方法。
- 該供与植物が、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する、請求項２５記載の生産方法。
- 請求項２５記載の生産方法により生産された、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する耐性を示すトマト植物。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．病理疾病選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定し、
ｇ．工程ｆにおいて同定された植物を自殖させ、
ｈ．工程ｇにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｉ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｈからの植物を同定し、
ｊ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｇ〜ｉを繰返す工程を含んでなる、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法。 - 該供与植物が、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する、請求項２９記載の生産方法。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃにおいて得られた植物を、工程ｂからの受容植物と交配させ、
ｅ．工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．病理疾病選別法を用いて、灰色カビ病に対して耐性である植物を同定し、
ｇ．工程ｆにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、
ｈ．工程ｇにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｉ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｈからの植物を同定し、
ｊ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｇ〜ｉを繰返し、
ｋ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、
ｌ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含んでなる、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法。 - 該供与植物が、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する、請求項３１記載の生産方法。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃにおいて得られた植物を自殖させ、
ｅ．工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、
ｇ．灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、
ｈ．工程ｇにおいて同定された植物を自殖させ、
ｉ．工程ｈにおける自殖から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｊ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、
ｋ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返す工程を含んでなる、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法。 - 該供与植物が、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する、請求項３３記載の生産方法。
- ａ．リコペルシコン・エスキュレントゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、リコペルシコン・セラシフォルメ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）、リコペルシコン・ピムピネリフォリウム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ）、リコペルシコン・チーズマニイ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｅｅｓｍａｎｉｉ）、リコペルシコン・パルビフロルム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐａｒｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リコペルシコン・クミエレウスキィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉｉ）、リコペルシコン・ヒルストゥム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、リコペルシコン・ペンネリィ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｎｎｅｌｌｉｉ）、リコペルシコン・ペルビアヌム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ）、リコペルシコン・チレンセ（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｃｈｉｌｅｎｓｅ）およびソラヌム・リコペルシコイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ）よりなる群から選ばれる灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性供与植物を同定し、
ｂ．工程ａからの灰色カビ病耐性植物を、灰色カビ病に対して非耐性であるか又は中間レベルの耐性を有し商業的に望ましい特性を有する受容トマト植物と交配させ、
ｃ．工程ｂにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｄ．工程ｃにおいて得られた植物を、工程ｂからの受容植物と交配させ、
ｅ．工程ｄにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｆ．工程ｅにおいて成長した植物または植物の一部に灰色カビ病菌を接種し、
ｇ．灰色カビ病に対して耐性である、工程ｆにおいて接種された植物を同定し、
ｈ．工程ｇにおいて同定された植物を工程ｂの受容トマト植物と交配させ、
ｉ．工程ｈにおける交配から得られた種子を播き、植物にまで成長させ、
ｊ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する、工程ｉからの植物を同定し、
ｋ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有する同系交配トマト植物が得られるまで工程ｈ〜ｊを繰返し、
ｌ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するトマト植物を自殖させ、
ｍ．灰色カビ病耐性を示し商業的に望ましい特性を有するホモ接合同系交配トマト植物を選択する工程を含んでなる、灰色カビ病耐性同系交配トマト植物の生産方法。 - 該供与植物が、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子に連鎖した第１０染色体上のひとつまたは複数の領域を含有する、請求項３５記載の生産方法。
- 請求項２９、３１、３３または３５記載の生産方法により生産された灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）耐性同系交配トマト植物。
- 請求項２９、３１、３３または３５記載の同系交配トマト植物を、商業的に望ましい特性を示す同系交配トマト植物と交配させる工程を含む生産方法により生産された、灰色カビ病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する耐性を示す雑種トマト植物。
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