JP2004502449A5

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Publication number: JP2004502449A5
Application number: JP2002509374A
Authority: JP
Filing date: 2001-07-10
Publication date: 2008-07-17
Anticipated expiration: 2021-07-10

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】Ｆｕｓ１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、発現カセットであって、
該ポリヌクレオチドが、真核生物細胞において作動可能なプロモーターの制御下にある、
発現カセット。
【請求項２】前記プロモーターが前記コード配列に対して異種である、請求項１に記載の発現カセット。
【請求項３】前記プロモーターが組織特異的プロモーターである、請求項２に記載の発現カセット。
【請求項４】前記プロモーターが誘導性プロモーターである、請求項２に記載の発現カセット。
【請求項５】前記発現カセットがウイルスベクターに含まれている、請求項２に記載の発現カセット。
【請求項６】前記発現カセットがウイルス性ではないベクターに含まれている、請求項２に記載の発現カセット。
【請求項７】前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、およびヘルペスウイルスベクターからなる群より選択される、請求項５に記載の発現カセット。
【請求項８】前記発現カセットが、ポリアデニル化シグナルをさらに含む、請求項１に記載の発現カセット。
【請求項９】Ｆｕｓ１をコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含む、細胞であって、
該ポリヌクレオチドが、真核生物細胞において作動可能なプロモーターの制御下にあり、該プロモーターが、該ポリヌクレオチドに対して異種である、
細胞。
【請求項１０】組換えアデノウイルスを構築するための方法であって、以下：
（ａ）シャトルベクターを提供する工程であって、該シャトルベクターが、アデノウイルス逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列；プロモーターおよびポリＡ配列を含む発現カセット；該プロモーターの制御下にあるＦｕｓ１導入遺伝子；ならびに該ＩＴＲ−プロモーター−導入遺伝子−ポリＡセグメントの５’末端および３’末端における独特の制限部位を含む、工程；
（ｂ）該制限酵素部位を切断する工程；
（ｃ）遊離したセグメントを、Ｅ１領域およびＥ３領域の全体を欠くアデノウイルスベクターに連結し、そして得られるベクターを細菌宿主細胞に形質転換する工程；
（ｄ）該細菌宿主細胞からベクターを得、そして該ベクターを消化して、Ｅ１／Ｅ３欠失アデノウイルスゲノムを遊離させる工程；ならびに
（ｅ）該アデノウイルスゲノムをＥ１発現宿主細胞にトランスフェクトする工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】前記プロモーターがサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターであり、そして前記ポリＡ配列が、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡ配列である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】組換えアデノウイルスを構築するための方法であって、以下：
（ａ）アデノウイルス逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列；プロモーターおよびポリＡシグナル配列を含む発現カセット；該プロモーターの制御下にあるＦｕｓ１導入遺伝子；テトラサイクリン耐性ｏｆｆ応答性エレメント；ならびに該ＩＲＴ−プロモーター−導入遺伝子−ポリＡセグメントの５’末端および３’末端における独特の制限部位を含む、シャトルベクターを提供する工程；
（ｂ）該制限酵素部位を切断する工程；
（ｃ）遊離したセグメントを、テトラサイクリン耐性ｏｆｆトランス活性化因子遺伝子を含みかつＥ１領域およびＥ３領域の全体を欠く、アデノウイルスベクターに連結し、そして得られるベクターを、宿主細胞に形質転換する工程；
（ｄ）該細菌宿主細胞からベクターを得、そして該ベクターを消化して、Ｅ１／Ｅ３欠失アデノウイルスゲノムを遊離させる工程；ならびに
（ｅ）該アデノウイルスゲノムをＥ１発現宿主細胞にトランスフェクトする工程、
を包含する、方法。
【請求項１３】前記プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターであり、そして前記ポリＡ配列が、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡ配列である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】被験体における癌を診断するのを支援するための方法であって、以下の工程：
該被験体から得た生物学的サンプルにおいて、機能的Ｆｕｓ１産物の発現を評価する工程、
を包含する、方法。
【請求項１５】前記サンプルが組織サンプルである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】前記組織サンプルが、脳、肺、肝臓、脾臓、腎臓、リンパ節、小腸、血液細胞、膵臓、結腸、胃、子宮頸部、乳房、子宮内膜、前立腺、精巣、卵巣、皮膚、頭頸部、食道、口腔組織、骨髄および血液組織からなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】前記評価する工程が、Ｆｕｓ１をコードする核酸を検出する工程を包含する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】前記検出する工程が、前記核酸を増幅する工程を包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】前記検出する工程が、核酸ハイブリダイゼーションを包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】前記検出する工程が、配列決定する工程を包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】前記評価する工程が、Ｆｕｓ１ポリペプチドを検出する工程を包含する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】ＥＬＩＳＡをさらに包含する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】免疫組織化学をさらに包含する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】前記評価する工程が、野生型または変異体のオリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションを包含し、そして該オリゴヌクレオチドが、チップまたはウエハ上にアレイ状に配置される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】正常サンプルにおけるＦｕｓ１の発現を比較する工程をさらに包含する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】前記比較する工程が、Ｆｕｓ１発現のレベルを評価する工程を包含する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】腫瘍細胞の増殖を抑制するための方法であって、
該細胞を、
（ａ）Ｆｕｓ１をコードする核酸；および
（ｂ）該腫瘍細胞において活性なプロモーター、
を含む発現カセットと、該腫瘍細胞による該核酸の取り込みを可能にする条件下で接触させる工程
を包含する、方法。
【請求項２８】前記腫瘍細胞が、脳腫瘍、肺腫瘍、肝臓腫瘍、脾臓腫瘍、腎臓腫瘍、リンパ節腫瘍、小腸腫瘍、血液細胞腫瘍、膵臓腫瘍、結腸腫瘍、胃腫瘍、子宮頸部腫瘍、乳房腫瘍、子宮内膜腫瘍、前立腺腫瘍、精巣腫瘍、卵巣腫瘍、皮膚腫瘍、頭頸部の腫瘍、食道腫瘍、口腔組織腫瘍、ならびに骨髄腫瘍からなる群より選択される腫瘍由来である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】前記核酸がウイルスベクターに含まれている、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、またはヘルペスウイルスベクターである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクターである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】前記核酸がリポソームに含まれている、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】腫瘍細胞の表現型を変更する方法であって、
該細胞を、
（ａ）Ｆｕｓ１をコードする核酸；および
（ｂ）該腫瘍細胞において活性な、プロモーター、
を含む発現カセットと、該腫瘍細胞による該核酸の取り込みを可能にする条件下で接触させる工程
を包含する、方法。
【請求項３４】前記表現型が、増殖、移動、接触阻害、軟寒天増殖、細胞周期、浸潤性、腫瘍形成、および転移可能性からなる群より選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】前記プロモーターがサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】癌に罹患している被験体において癌を阻害するための組成物であって、
（ａ）Ｆｕｓ１ポリペプチドをコードする核酸；および
（ｂ）該被験体の腫瘍細胞において活性なプロモーター、
を含む発現カセット
を含み、該ポリペプチドの発現が該癌を阻害することを特徴とする、組成物。
【請求項３７】前記被験体がヒトである、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】前記癌が、脳癌、肺癌、肝臓癌、脾臓癌、腎臓癌、リンパ節癌、小腸癌、血液細胞癌、膵臓癌、結腸癌、胃癌、子宮頸部癌、乳癌、子宮内膜癌、前立腺癌、精巣癌、卵巣癌、皮膚癌、頭頸部の癌、食道癌、口腔組織癌、ならびに骨髄癌からなる群より選択される、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】前記発現カセットが、ウイルスベクターに含まれている、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４０】前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、またはヘルペスウイルスベクターである、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】前記ウイルスベクターがアデノウイルスベクターである、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】前記発現カセットがリポソームに含まれている、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４３】前記発現カセットが、ポリＡ配列をさらに含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４４】前記ポリＡ配列がウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡ配列である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】前記発現カセットが、腫瘍内に、腫瘍脈管構造内に、腫瘍に局在させて、腫瘍に局所的に、または全身に投与されることを特徴とする、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４６】前記被験体に化学療法剤と組合わせて投与されることを特徴とする、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４７】前記化学療法剤が、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトセシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲンレセプター結合因子、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビター、トランスプラチナ、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびメトトレキサートを含む、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】前記被験体に放射線と組合わせて投与されることを特徴とする、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４９】前記放射線が、癌の部位に局所的に送達されることを特徴とする、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】前記放射線が全身放射線である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５１】前記放射線が、γ線、Ｘ線、加速されたプロトン、マイクロ波放射線、ＵＶ放射線、または腫瘍細胞に指向された放射性同位体の送達を含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５２】前記被験体に第２の抗癌遺伝子と組合わせて投与されることを特徴とする、請求項３６に記載の組成物。
【請求項５３】前記第２の抗癌遺伝子が、腫瘍サプレッサーである、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】前記第２の抗癌遺伝子が、アポトーシスのインヒビターである、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５５】前記第２の抗癌遺伝子が、癌遺伝子アンチセンス構築物である、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５６】癌を有する被験体を処置するための組成物であって、
Ｆｕｓ１ポリペプチド
を含む、組成物。
【請求項５７】前記癌が、脳癌、肺癌、肝臓癌、脾臓癌、腎臓癌、リンパ節癌、小腸癌、血液細胞癌、膵臓癌、結腸癌、胃癌、子宮頸部癌、乳癌、子宮内膜癌、前立腺癌、精巣癌、卵巣癌、皮膚癌、頭頸部の癌、食道癌、口腔組織癌、ならびに骨髄癌からなる群より選択される、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】前記ポリペプチドがリポソーム内に含まれる、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５９】前記リポソームが、Ｎ−（１−［２，３−ジオレオイルオキシ］プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＡＰ）およびコレステロールから構成される、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】前記被験体がヒトである、請求項５６に記載の組成物。
【請求項６１】抗腫瘍活性について候補物質をスクリーニングする方法であって、以下の工程：
（ｉ）機能的Ｆｕｓ１ポリペプチドを欠く細胞を提供する工程；
（ｉｉ）該細胞を、該候補物質と接触させる工程；および
（ｉｉｉ）該細胞に対する該候補物質の影響を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項６２】前記細胞が腫瘍細胞である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】前記決定する工程が、前記候補物質の存在下での前記細胞の１つ以上の特徴を、該候補物質の非存在下での類似の細胞の同じ１つ以上の特徴と比較する工程を包含する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】前記特徴が、Ｆｕｓ１の発現、ホスファターゼ活性、増殖、転移、接触阻害、軟寒天増殖、細胞周期調節、腫瘍形成、腫瘍進行、転移および組織浸潤である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】前記候補物質が、化学療法剤または放射線治療剤である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】前記候補物質が、低分子ライブラリーから選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６７】前記細胞がインビトロで接触される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６８】前記細胞がインビボで接触される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】抗腫瘍活性について候補物質をスクリーニングする方法であって、以下の工程：
（ｉ）細胞を提供する工程；
（ｉｉ）該細胞を、該候補物質と接触させる工程；および
（ｉｉｉ）Ｆｕｓ１ポリペプチドの発現に対する、該候補物質の影響を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項７０】被験体における癌を診断するのを支援するための方法であって、
Ｆｕｓ１のプロモーター領域の過剰のメチル化を検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項７１】脂質ビヒクルまたはリポソームに含まれている、請求項１に記載の発現カセット。
【請求項７２】前記発現カセットが脂質ビヒクルまたはリポソームに含まれている、請求項３３に記載の方法。