JP2004500883A - 抗原性ポリペプチド - Google Patents

Abstract

本発明は、病原性微生物によって発現される抗原性ポリペプチドの同定のための方法；このポリペプチドを含むワクチン；このポリペプチドを製造するための組換え方法；およびこのポリペプチドに対する治療用抗体に関する。本発明の別の局面において、本発明は、単離された核酸分子によってコードされるポリペプチドであって、該核酸分子は、以下：（ｉ）配列番号１〜１３に示されるＤＮＡ配列；（ｉｉ）上記（ｉ）において同定された配列番号１〜１３に示される配列にハイブリダイズし、そして病原性生物体によって発現されるポリペプチドをコードするＤＮＡ配列；（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）において規定されるＤＮＡ配列に対して遺伝コードの結果として縮重するＤＮＡ配列、からなる群より選択されるＤＮＡ配列を含む、ワクチンとしての使用のためのポリペプチド、に関する。

Description

【０００１】
本発明は、病原性微生物によって発現される抗原性ポリペプチドの同定のための方法；このポリペプチドを含むワクチン；このポリペプチドを製造するための組換え方法；およびこのポリペプチドを指向する治療用抗体、に関する。
【０００２】
微生物生物体は、世界中の何百万もの人々を冒す多数の致命的な疾患または消耗性疾患を引き起こす。微生物生物体を制御する現在の方法は、抗微生物剤（抗生物質）および殺菌剤の使用を含む。これらは、これらの薬剤への曝露が抗微生物剤の効果を無効にし得る耐性菌の発生を生じる顕著な選択圧をかけるため、問題となることが示されてきた。例えば、近年、微生物生物体はトリクロサン（家庭および産業環境において用いられる多数の殺菌剤に添加される薬剤）に対して耐性となってきたことが発見されてきた。
【０００３】
まず間違いなくより重大な問題は、多数の顕著な病原性微生物の抗生物質耐性株の進化である。
【０００４】
限定する目的ではなく例示として、５０００万人に至るまでの世界中の人々が薬物耐性結核（ＴＢ）に感染していると推定されている（世界保健機構、１９９８年提供の図）。従来、ＴＢを処置するための抗生物質の使用は、比較的高頻度の耐性を助長した単一薬物（例えば、エチオナミド）の投与に頼っていた。このため、現在、薬物の組合せを用いて、結核を処置している。しかし、結核を処置するために用いられる薬物の少なくとも１つに耐性である株によって引き起こされる場合の死亡率は、処置される場合でさえ、なお５０％に達する。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＴＢの原因因子）は、低増殖性細菌であり、かつ死滅させるのに長時間かかる。従って、複合薬物を有効にするために、ＴＢを有する人は少なくとも６ヶ月間、毎日この複合薬物を服用しなければならない。従って、患者は、毎日２個以上の丸剤を頻繁に服用しなければならず、そしてこれは、比較的長期間の処置にわたる厳しく管理された投薬を必要とする。多数の患者は、断続的にのみ投薬を受け、それ故、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を完全に根絶するための、治療の全クールを完了しない。さらに、ＴＢは、ＨＩＶ感染に強く関連し、それ故、ＴＢの馴化は、免疫抑制に強く関連する。
【０００５】
ＴＢに対するワクチン接種は、長年利用可能であった。カルメット−ゲラン杆菌（ＢＣＧ）ワクチン接種は、ＴＢに潜在的に罹患し得る多数の人々をワクチン接種するための安全かつ安価な手段であるので、長期間、世界中で広く用いられてきた。ＢＣＧは、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｏｖｉｓの生きた弱毒化株由来である。しかし、ＴＢの感染形態に対するワクチン接種の影響は最小であり、それ故、ＢＣＧは、この疾患の全般的制御をほとんど寄与しない。
【０００６】
抗生物質に対する耐性を発生した病原性生物体のさらなる例は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓである。Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、正常に健常な人々の約２０〜４０％において、通常の生育地が鼻の上皮内壁である細菌であり、そして悪影響を引き起こすことなくたいてい人々の皮膚においても通常見出されている。しかし、特定の環境下で、特に皮膚が損傷を受ける場合、この微生物は、感染を引き起こし得る。これは、患者が外科的処置を受け得、そして／または免疫抑制性薬物を服用し得る病院において特に問題である。これらの患者は、彼らが受けている処置に起因して、Ｓ．ａｕｒｅｕｓに感染に対して非常により無防備である。Ｓ．ａｕｒｅｕｓの耐性株は、近年発生してきた。メチシリン耐性株は、流行しており、そしてこれらの耐性株の多くはまた、いくつかの他の抗生物質に耐性である。現在、Ｓ．ａｕｒｅｕｓに対する有効なワクチン接種手段は存在していない。米国において、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染は、毎年２００万人の院内感染のうちの１３％の原因となっている。これは、２６０，０００人の人々がＳ．ａｕｒｅｕｓ感染を示し、このうちの６０〜８０，０００人が死亡する。
【０００７】
従って、Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、敗血症、心内膜炎、関節炎および中毒性ショックを含む、広範囲な生命を脅かす疾患を引き起こし得る主要なヒト病原体である。この可能性は、生物体の変動性、およびビルレンスに関連した成分のその保有量によって決定される。病原性は、多因子性であり、そしてどの成分も特定の感染の原因であることを示さない（Ｐｒｏｊａｎ，Ｓ．Ｊ．＆　Ｎｏｖｉｃｋ，Ｒ．Ｐ．（１９９７）ｉｎ　Ｔｈｅ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ　ｉｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅ（Ｃｒｏｓｓｌｅｙ，Ｋ．Ｂ．＆　Ａｒｃｈｅｒ，Ｇ．Ｌ．，ｅｄｓ．）５５〜８１頁を参照のこと）。
【０００８】
感染の発症時、そしてそれが進行するにつれて、この生物体の必要性および環境は変化し、そしてこれは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓが産生するビルレンス決定因子における対応する変更によって反映される。感染開始時、その病原体が宿主組織に接着することが重要であり、そしてこのようにして豊富なレパートリーの細胞表面関連接着タンパク質が作製される。これらの細胞表面接着タンパク質としては、コラーゲン結合タンパク質、フィブリノーゲン結合タンパク質およびフィブロネクチン結合タンパク質が挙げられる。この病原体はまた、食作用を低下させる因子または抗体を循環させることによって認識されるこれらの細胞の能力を妨害する因子の産生によって宿主の防御を回避する能力を有する。
【０００９】
しばしば、感染の病巣は、膿瘍として発現し、多数の生物体が増加する。Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、クオラムセンシング（ｑｕｏｒｕｍ　ｓｅｎｓｉｎｇ）ペプチドの産生によってそれ自体の細胞密度をモニタリングする能力を有する。おそらくこれらの細胞の飢餓の開始によってもたらされる生理学的変化に関連する、このペプチドの蓄積は、ビルレンス決定因子の産生における付着分子から侵襲および組織穿通に関連する成分への転換を誘発する。これらとしては、広範な溶血素、プロテアーゼおよび他の分解酵素が挙げられる。
【００１０】
任意の感染のプロセスの間、Ｓ．ａｕｒｅｕｓによって作製されるビルレンス決定因子は、環境の刺激および生理学的刺激に応じて産生される。これらの刺激は、身体内のニッチに依存し、そして感染進行につれて変化する。インビボでの条件についてはほとんど知られておらず、そしていくつかの成分はこの環境下で単独で産生されるようである。従って、これらは潜在的なワクチン成分であり、これは、先行技術によって発見され得なかった。
【００１１】
最近の医学史において最も重要な開発の１つは、多種多様な病原性生物体由来の予防的防御を提供するワクチンの開発である。多数のワクチンは、個体に注射される不活化病原体または弱毒化病原体によって生成される。免疫された個体は、体液性応答（抗体）および細胞性応答（細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＴＬ応答）の両方を引き起こすことによって応答する。例えば、肝炎のワクチンは、ウイルスを不活化する加熱、およびホルムアルデヒドのような架橋剤でこれを処理することによって作製される。ワクチンとして有用な弱毒化病原体の例は、生きた病原体を弱毒化することによって産生されるポリオワクチンによって示される。
【００１２】
しかし、特定の疾患に対するワクチン中の弱毒化生物体の使用は、弱毒化の条件および性質の病理学に関する知識の欠如に起因して問題となる。特定のウイルス剤について、これは、特にレトロウイルスにおけるウイルスが、エラー傾向のある複製サイクル（これは、このウイルスを含む遺伝子中に生存可能な変異を生じる）を有するので、特に問題である。これは、結果として既にワクチンとして用いられてきた抗原性決定因子の代替物を生じ得る。不活化病原体または弱毒化病原体の使用に代わるものとしては、この免疫系が特に感受性である病原体エピトープの同定である。これに関して、感染の間に病原性生物体によって産生される多数の病原性毒素は、特定の病原性生物体から個体を防御するワクチンの開発に特に有用である。
【００１３】
いわゆるサブユニットワクチンの開発（その中の免疫原が特定の病原性生物体によって発現されるタンパク質または複合体のフラグメントまたはサブユニットであるワクチン）は、重要な医薬研究の焦点となってきた。サブユニットワクチンの開発に有用な候補分子を同定する必要性は、少なからず明白である。なぜなら、病原性生物体の制御に対する従来の化学療法アプローチが、つい最近、抗生物質耐性の発生によって窮境に立たされてきたからである。多数の方法は、ワクチンとして用いられ得る潜在的な抗原性ポリペプチドを同定するために開発されてきた。１つのこのような方法が、本明細書中に開示される。
【００１４】
長年の間、腫瘍細胞が多数の腫瘍細胞特異的抗原（この抗原のうちのいくつかは、腫瘍細胞表面に提示されている）を産生することは知られていた。免疫系は、これらの抗原を外来性として認識し、これによって、自己抗原に対する抗体（いわゆる、自己抗体または自己抗血清）の産生を生じる。
【００１５】
１つのこのような技術は、組換え体発現クローニングによる抗原の血清学的同定（略して、ＳＥＲＥＸ）である。
【００１６】
代表的に、この技術は、腫瘍組織からのＲＮＡの抽出に続く単離された総ＲＮＡからのｍＲＮＡの選択的富化に関連する。ｍＲＮＡは、ウイルスの逆転写酵素を用いてｃＤＮＡに逆転写される。従って、合成されたｃＤＮＡは、発現ベクターにサブクローニングされ、そして適切な細菌株に形質転換される。形質転換された細菌は、適切な栄養アガーにプレーティングされ、そして適切な増殖条件下で、サブクローニングされたｃＤＮＡは、細菌細胞中の発現ベクターから発現される。これらの細胞は、ファージベースの発現ベクター（例えば、λファージ）またはファージミドベースのベクターの使用によって自然に溶解され、これらの溶解サイクルを通して、これらの細胞は、細胞溶解を引き起こす。放出されたポリペプチドは、適切な膜支持体（すなわち、ニトロセルロース、ナイロン）に転写され、そして腫瘍組織が本来単離された患者由来の自己抗血清に曝露される。免疫スクリーニング方法論は、患者由来の選択された腫瘍組織において過剰に発現されるかまたは不適切に発現される遺伝子の同定を可能にする。
【００１７】
本発明者らは、感染の間に病原性生物体によって発現される抗原性ポリペプチドを同定するこの技術を開発してきた。感染中に産生される自己抗血清を用いて、ゲノムＤＮＡから作製した発現ライブラリーをスクリーニングして抗原を同定およびクローニングする。
【００１８】
その最も広い局面において、本発明は、病原微生物による感染の間に発現される抗原性ポリペプチドの同定に関する。
【００１９】
本発明の第１の局面に従って、抗原性ポリペプチドを同定する方法が提供され、この方法は、以下：
（ｉ）病原性生物体の遺伝子配列または部分的な遺伝子配列をコードする核酸ライブラリーを提供する工程；
（ｉｉ）宿主細胞中にこのライブラリーを形質転換／トランスフェクトする工程；
（ｉｉｉ）この形質転換／トランスフェクトした遺伝子配列または部分的な遺伝子配列の発現に役立つ条件を提供する工程；
（ｉｖ）この遺伝子配列／部分的な遺伝子配列によって発現されるポリペプチドと、この病原性生物体に感染されるかまたは感染された動物由来の自己抗血清とを接触させる工程；および
（ｖ）この自己抗血清に結合しているポリペプチドまたは部分的なポリペプチドをコードする核酸を精製する工程、を包含する。
【００２０】
本発明の好ましい方法において、このライブラリーは、病原性生物体のゲノムＤＮＡを含む。
【００２１】
理想的には、この病原性生物体は、細菌である。
【００２２】
より好ましくは、なおこの細菌性生物体は、以下から選択される：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ；Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｓｉｓ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｃｏｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ；Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｇｏｎｏｒｒｈｅａ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｇｒｏｕｐ　Ａ；Ｂｏｒｒｅｌｉａ　ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ；Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ　ｉｍｍｉｔｉｓ；Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ　ｓａｐｓｕｌａｔｕｍ；Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ　ｔｙｐｅ　Ｂ；Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｆｌｅｘｎｅｒｉ；Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ。
【００２３】
好ましくは、なおこの病原性生物体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐｐ．属である。理想的には、この生物体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓまたはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓである
本発明のさらに好ましい実施形態において、この核酸ライブラリーは、λライブラリーであり、理想的にはλ発現ライブラリーである。
【００２４】
本発明の第２の局面に従って、以下から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸分子が提供される：
（ｉ）配列番号１〜１３に示されるＤＮＡ配列；
（ｉｉ）病原性生物体によって発現されるポリペプチドをコードする上記（ｉ）において同定される配列番号１〜１３に示される配列にハイブリダイズするＤＮＡ配列；および
（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）において規定されるＤＮＡ配列に対して遺伝コードの結果として縮重するＤＮＡ配列。
【００２５】
本発明のなおまださらに好ましい実施形態において、この核酸分子は、ゲノムＤＮＡである。
【００２６】
本発明の好ましい実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号１〜１３に示される配列にアニーリングする単離された核酸分子が提供される。
【００２７】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション／洗浄条件は、当該分野において周知である。例えば、核酸は、６０℃にて０．１×ＳＳＣ、０．１％　ＳＤＳ中で洗浄後、安定にハイブリダイズする。核酸の配列が知られている場合、最適なハイブリダイゼーション条件は、算出され得ることが当該分野において周知である。例えば、ハイブリダイゼーション条件は、ハイブリダイゼーションに共される核酸のＧＣ含有量によって決定され得る。Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｐｐｒｏａｃｈを御参照のこと。特定の相同性のある核酸分子間でハイブリダイゼーションを達成するのに必要とされるストリンジェンシー条件を算出するための一般式は、以下：
Ｔ_ｍ＝８１．５℃＋１６．６Ｌｏｇ［Ｎａ^＋］＋０．４１［Ｇ＋Ｃ（％）］−０．６３（ホルムアミド（％））
である。
【００２８】
本発明の第３の局面に従って、本発明に従う方法によって同定される少なくとも１つのポリペプチドが提供される。
【００２９】
本発明の好ましい実施形態において、このポリペプチドは、本発明の先の任意の局面または実施形態に従う生物体の感染性病原性に関連する。
【００３０】
さらになお好ましくは、このポリペプチドは、配列番号１４〜１９の少なくとも１つ、または配列番号１４〜１９の一部である。
【００３１】
本発明の第４の局面に従って、核酸分子がこの核酸分子によってコードされるポリペプチドの組換え発現を促進するよう適合するベクターの一部であることを特徴とする核酸分子が提供される。
【００３２】
本発明の好ましい実施形態において、このベクターは原核生物の遺伝子発現のために適合する発現ベクターである。あるいは、この発現ベクターは、真核生物の遺伝子発現のために適合される。
【００３３】
代表的には、この適合は、限定する目的ではなく例示として、細胞特異的発現を媒介する転写制御配列（プロモーター配列）の供給を含む。これらのプロモーター配列は、細胞特異的、誘導性または構成的であり得る。
【００３４】
プロモーターは、当該分野で認識されている用語であり、明瞭さのために、限定する目的ではなく例示としてのみ提供される以下の特徴を含む。エンハンサーエレメントは、遺伝子の転写開始部位に対して５’方向にしばしば見出されるシス作用性核酸配列である（エンハンサーはまた、遺伝子配列に対して３’方向に見出され得るかまたはイントロン配列に位置され得、従って独立した位置である）。エンハンサーは、エンハンサーが連結される遺伝子の転写速度を増加させるよう機能する。エンハンサー活性は、エンハンサーエレメントに特異的に結合することが示されてきたトランス作用性転写因子（ポリペプチド）に応答性である。転写因子の結合／活性（Ｄａｖｉｄ　Ｓ　Ｌａｔｃｈｍａｎによる、Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｔｄ，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏを御参照のこと）は、多数の環境の信号（ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｃｕｅ）に応答性であり、これらの信号は、限定する目的ではなく例示として、中間代謝産物（例えば、グルコース、脂質）、環境のエフェクター（例えば、光、熱）を含む。
【００３５】
プロモーターエレメントはまた、いわゆるＴＡＴＡボックスおよび転写開始の部位を選択するよう機能するＲＮＡポリメラーゼ開始選択（ＲＩＳ）配列を含む。これらの配列はまた、とりわけＲＮＡポリメラーゼによる転写開始選択を促進させるよう機能するポリペプチドと結合する。
【００３６】
適合はまた、この選択マーカーおよび自己複製配列の供給を含み、これらは両方とも真核生物細胞または原核生物宿主のいずれかにおけるこのベクターの維持を促進する。自発的に維持されるベクターは、エピソームのベクターと呼ばれる。
【００３７】
ベクターにコードされる遺伝子（ｖｅｃｔｏｒ　ｅｎｃｏｄｅｄ　ｇｅｎｅ）の発現を促進する適合は、転写終結配列／ポリアデニル化配列の提供を含む。これはまた、二シストロン性発現カセットまたは多重シストロン性発現カセットに配置されるベクターにコードされる遺伝子の発現を最大にするよう機能するリボソーム内部侵入領域（ＩＲＥＳ）の提供を含む。
【００３８】
これらの適合は、当該分野において周知である。一般的に、発現ベクター構築および組換えＤＮＡ技術に関する顕著な量の刊行された文献が存在する。Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｕｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｕｒ，ＮＹおよびこの文献中の参考文献；Ｍａｒｓｔｏｎ，Ｆ（１９８７）ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　第ＩＩＩ巻　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ　ＵＫ；ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｆ　Ｍ　Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４）を御参照のこと。
【００３９】
本発明のなおさらなる局面に従って、本発明の先の任意の局面または実施形態に従うポリペプチドの産生のための方法が提供され、この方法は、以下：
（ｉ）本発明に従うベクターで形質転換／トランスフェクトした細胞を提供する工程；
（ｉｉ）このポリペプチドの製造に役立つ条件下でこの細胞を増殖させる工程；および
（ｉｉｉ）この細胞、またはこの細胞の増殖環境由来のこのポリペプチドを精製する工程、を包含する。
【００４０】
本発明の好ましい方法において、このベクターは、このポリペプチドの精製を促進する分泌シグナルをコードし、それ故、この組換えポリペプチドは、このポリペプチドの精製を促進する分泌シグナルと共に提供される。
【００４１】
本発明の第５の局面に従って、本発明に従うベクターで形質転換またはトランスフェクトした細胞または細胞株が提供される。
【００４２】
本発明の好ましい実施形態において、この細胞は、原核生物細胞である。あるいは、この細胞は、以下から選択される真核生物細胞である：真菌；昆虫；両生類；哺乳動物；植物。
【００４３】
本発明のなおさらなる局面に従って、本発明に従う少なくとも１つのポリペプチドを含むワクチンが提供される。
【００４４】
理想的には、このワクチンは、キャリアおよび／またはアジュバントをさらに含む。
【００４５】
用語アジュバントおよび用語キャリアは、以下の様式に解釈される。いくつかのポリペプチド抗原またはペプチド抗原は、Ｂ細胞エピトープを含むがＴ細胞エピトープは含まない。免疫応答は、このポリペプチド／ペプチド中にＴ細胞エピトープを含ませることによってか、または複数のＴ細胞エピトープを含む免疫原性キャリアタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニンもしくは破傷風トキソイド）へのこのポリペプチド／ペプチドの結合体化によって非常に増強され得る。この結合体は、抗原提示細胞によって取り込まれ、プロセスされ、そしてヒト白血球抗原（ＨＬＡの）クラスＩＩ分子によって提示される。これは、キャリアに由来するエピトープに対するＴ細胞の特異性によって、もとの抗原性ポリペプチド／ペプチドに特異的なＢ細胞に対してＴ細胞補助（Ｔ　ｃｅｌｌ　ｈｅｌｐ）が与えられることを可能にする。これは、抗体の産生、分泌およびアイソタイプスイッチの増加を引き起こし得る。
【００４６】
アジュバントは、免疫細胞の活性を調節することによって抗原に対する特異的な免疫応答を増強する物質または手段である。アジュバントの例としては、単なる例として、同時刺激分子に対するアゴニスト性抗体、フロイントアジュバント、ムラミルジペプチド、リポソームが挙げられる。従って、アジュバントは、免疫調節物質である。キャリアは、第２の分子に結合した場合、第２の分子に対する免疫応答を増強する免疫原性分子である。
【００４７】
本発明のなおさらなる局面において、病原性微生物に対して動物を免疫する方法が提供され、この方法は、本発明に従う少なくとも１つのポリペプチドもしくはその一部または本発明に従うワクチンをこの動物に投与する工程を包含する。
【００４８】
本発明の好ましい方法において、この動物はヒトである。
【００４９】
好ましくは、このワクチンまたは抗原性ポリペプチドは、静脈内、筋肉内、皮下のいずれかの直接注射によって送達され得る。さらになお、このワクチンまたは抗原性ポリペプチドは、経口摂取され得る。
【００５０】
好ましくは、このワクチンは、細菌種Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓに対するものである。
【００５１】
このワクチンはまた、細菌種Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓに対するものであり得る。
【００５２】
ワクチンまたは抗原性ポリペプチドが、ヒト以外の動物（限定する目的ではなく例示として、家庭用ペット、家畜、ウマ）において予防する状況または緩和する状況において有効であることもまた、明白である。
【００５３】
本発明のさらなる局面に従って、本発明に従う少なくとも１つのポリペプチドに結合する抗体、または少なくとも有効に結合するその一部が提供される。
【００５４】
本発明の好ましい実施形態において、この抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり、ここで、この抗体はこのポリペプチドに特異的である。
【００５５】
あるいは、この抗体は、ヒト抗体の不変領域または定常領域と共にこの抗体の可変領域を含むよう組換え方法によって産生されたキメラ抗体である。
【００５６】
本発明のさらなる代替実施形態において、この抗体は、この抗体の相補性決定領域を、ヒト抗体の定常（Ｃ）領域および可変（Ｖ）領域由来のフレームワーク領域の両方と結合させる組換え方法によってヒト化される。
【００５７】
好ましくは、この抗体は、従来の標識またはタグ（例えば、放射活性および／もしくは蛍光および／もしくはエピトープの標識もしくはタグ）を含むマーカーと共に提供される。
【００５８】
好ましくは、このポリペプチドに対するこのヒト化モノクローナル抗体は、原核生物細胞または真核生物細胞のトランスフェクションまたは形質転換に適切に適合する発現ベクターにおいて融合ポリペプチドとして産生される。
【００５９】
抗体（免疫グロブリンとしてもまた公知）は、外来分子（抗原）に対する特異性を有するタンパク質分子である。免疫グロブリン（Ｉｇ）は、二対のポリペプチド鎖、一対の軽（Ｌ）（低分子量）鎖（κまたはλ）、ならびに一対の重（Ｈ）鎖（γ、α、μ、δおよびε）からなる、構造的に関連したタンパク質のクラスである（４つ全てが、ジスルフィド結合によって互いに連結されている）。Ｈ鎖およびＬ鎖は両方とも、抗原の結合に寄与し、かつ１つのＩｇ分子から別のＩｇ分子までにわたり高度に可変性である領域を有する。さらに、Ｈ鎖およびＬ鎖は、非可変領域または定常領域を含む。
【００６０】
Ｌ鎖は、２つのドメインからなる。このカルボキシ末端のドメインは、所定の型のＬ鎖の間で本質的に同一であり、そして「定常」（Ｃ）領域と称される。このアミノ末端のドメインは、Ｌ鎖毎に変化し、この抗体の結合部位に寄与する。この可変性に起因して、これは「可変」（Ｖ）領域と称される。
【００６１】
Ｉｇ分子のＨ鎖は、いくつかのクラス（α、μ、σ、αおよびγ）のものである（これらの中に、サブクラスが存在する）。２つの同一のＨ鎖およびＬ鎖の１つ以上のユニットからなるアセンブルされたＩｇ分子は、それが保有するＨ鎖からその名前が由来する。従って、以下の５つのＩｇアイソタイプが存在する：ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＧ（Ｈ鎖における差異に基づく４つのサブクラス（すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）を有する）。抗体構造およびそれらの種々の機能に関するさらなる詳細は、以下において見出され得る：Ｕｓｉｎｇ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｕｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ。
【００６２】
キメラ抗体は、マウス抗体またはラット抗体のＶ領域の全てがヒト抗体Ｃ領域と結合される組換え抗体である。ヒト化抗体は、げっ歯類抗体Ｖ領域由来の相補性決定領域とヒト抗体Ｖ領域由来のフレームワーク領域とを融合する組換えハイブリッド抗体である。ヒト抗体由来のＣ領域もまた用いられる。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、抗体の重鎖および軽鎖の両方のＮ末端ドメイン内にある領域であり、ここにＶ領域の大部分のバリエーションが制限される。これらの領域は、その抗体分子の表面でループを形成する。これらのループは、抗体と抗原との間の結合表面を提供する。
【００６３】
非ヒト動物由来の抗体は、外来抗体に対する免疫応答および循環からのその抗体の除去を誘発する。キメラ抗体およびヒト化抗体は両方とも、ヒト被験体へ注射した場合、抗原性を低減させる。なぜなら、減少した量のげっ歯類（すなわち、外来）抗体が組換えハイブリッド抗体内に存在する上、ヒト抗体領域は免疫応答を誘発（ｉｌｌｉｃｉｔ）しないからである。これは、より弱い免疫応答および抗体のクリアランスにおける減少を生じる。これは、ヒト疾患の処置において治療用抗体を用いる場合、明らかに望ましい。ヒト化抗体は、より少ない「外来性」抗体の領域を有するよう設計され、従って、キメラ抗体よりもより低い免疫原性であると考えられる。
【００６４】
本発明の別の局面において、本発明に従うヒト化抗体またはキメラ抗体の発現に適合するベクターが提供される。
【００６５】
本発明のなおさらなる局面において、本発明に従うヒト化抗体またはキメラ抗体をコードするベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞または細胞株が提供される。
【００６６】
本発明のなおさらなる局面において、本発明に従うヒト化抗体またはキメラ抗体の産生のための方法が提供され、この方法は、以下：
（ｉ）本発明に従うヒト化抗体またはキメラ抗体をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトした細胞を提供する工程；
（ｉｉ）この抗体の製造に役立つ条件下でこの細胞を増殖させる工程；および
（ｉｉｉ）この細胞、またはその増殖環境からこの抗体を精製する工程、を包含する。
【００６７】
本発明のなおさらなる局面において、本明細書中の前記のようなモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株が提供される。
【００６８】
本発明のさらなる局面において、本発明に従うハイブリドーマ細胞株を用いて本発明に従うモノクローナル抗体を産生させる方法が提供される。
【００６９】
本発明のさらなる局面において、本発明に従うモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を調製する方法が提供され、この方法は、以下の工程：ｉ）免疫応答性哺乳動物を、配列番号１４〜１９に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドまたはそのフラグメントを含む免疫原を用いて免疫する工程；
ｉｉ）免疫された免疫応答性哺乳動物のリンパ球を骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマ細胞を形成する工程；
ｉｉｉ）（ｉ）のアミノ酸配列に対する結合活性について、工程（ｉｉ）のハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体をスクリーニングする工程；
ｉｖ）このハイブリドーマ細胞を培養して増殖させ、そして／またはこのモノクローナル抗体を分泌させる工程；および
ｖ）この培養上清からモノクローナル抗体を回収する工程、を包含する。
【００７０】
好ましくは、この免疫応答性哺乳動物は、マウスである。あるいは、この免疫応答性哺乳動物は、ラットである。
【００７１】
ハイブリドーマ細胞を用いたモノクローナル抗体の産生は、当該分野において周知である。モノクローナル抗体を産生するために用いられるこれらの方法は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ　２５６，４９５−４９７（１９７５）ならびにまた、ＤｏｎｉｌｌａｒｄおよびＨｏｆｆｍａｎ，“Ｂａｓｉｃ　Ｆａｃｔｓ　ａｂｏｕｔ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ”，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　第ＶＩＩ版，Ｓｃｈｗａｒｔｚ，１９８１に開示され、これらは参考として援用される。
【００７２】
本発明のさらなる局面において、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ関連敗血症、食中毒または皮膚障害の処置のための医薬の製造のための、抗体の使用が提供される。
【００７３】
本発明の別の局面において、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ関連敗血症、腹膜炎または心内膜炎の処置のための医薬の製造のための、本発明に従う抗体の使用が提供される。
【００７４】
本発明に従う方法によって同定されたポリペプチドは、以下から生じる広範な疾患に対する治療用抗体の産生を容易にすることが明らかである：病原性感染（例えば、敗血症）；結核；細菌関連食中毒；血液感染；腹膜炎；心内膜炎；セプシス；髄膜炎；肺炎；胃潰瘍；淋病；連鎖球菌性咽喉炎（ｓｔｒｅｐ　ｔｈｒｏａｔ）；連鎖球菌関連中毒性ショック；壊死性筋膜炎；膿痂疹；ヒストプラスマ症；ライム病；胃腸炎；赤痢；細菌性赤痢。
【００７５】
既に前で述べたように、微生物は、多種多様な疾患を引き起こす。限定する目的でなく、以下の列挙は、多数の微生物およびこれらが引き起こすいくつかの疾患である。
【００７６】
【表１】

本発明の実施形態を、ここで、単なる実施例によってならびに以下の材料、方法および配列番号１〜１９ならびに表１を参照して記載する。
【００７７】
（材料および方法）
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　８３２５／４のゲノムＤＮＡのλＺＡＰ発現ライブラリーを用いた。これは、全ゲノムＤＮＡの部分的なＳａｕ３Ａ消化由来の２〜１０ｋｂのフラグメントを含む。これを、ベクターのＢａｍＨ１部位中にクローニングした。このライブラリーは、このゲノムの１０倍より高いの達成範囲を含む。このライブラリーを直径９ｃｍのペートリー皿上におよそ２０，０００プラーク形成単位の初期スクリーニングを用いたプラークリフト（ｐｌａｑｕｅ　ｌｉｆｔ）によって探索した。用いたプレーティング細胞、それらの処理、プレーティング手順および緩衝液は、製造業者のハンドブック（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に全く記載されるように行った。プレーティング細胞（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＸＬ１−Ｂｌｕｅ　ＭＲＦ’）を、ファージで感染させ、そしてＬＢプレート（１０ｍＭのＭｇＳＯ_４を含む）上に、３ｍｌのＬＢトップアガー（１０ｍＭのＭｇＳＯ_４を含む）をプレーティングした。次いで、これらのプレートを、４２℃にて４時間、インキュベートした。直径８．５ｃｍのニトロセルロースフィルターディスク（予め１０ｍＭのＩＰＴＧで濡らし、そして風乾した）を、各プレートに配置し、その位置をマークした。次いで、このプレートを３７℃でさらに３．５時間インキュベートした。これらのフィルターを回収し、ＴＢＳＴ緩衝液で洗浄し、次いで、６％ｗ／ｖの乾燥脱脂粉乳および３％ｖ／ｖのブタ血清（Ｓｉｇｍａ）を含有するＴＢＳＴ中で４℃にて一晩ブロッキングした。この血清を用いて、フィルター上の任意のプロテインＡクローンをブロックした。次いで、これらのフィルターを、室温にて９０分間、ブロッキング溶液において患者の血清（１／５０００希釈）で処理した。抗血清を、主要なＳ．ａｕｒｅｕｓ感染から回復に向かっている患者から得た。次いで、これらのフィルターを、３回、ＴＢＳＴ中で１０分間洗浄した。用いた二次抗体は、室温にて３０分間、ブロッキング溶液での１／３０，０００希釈のヤギ抗ヒト全ＩｇＧアルカリホスファターゼ結合物（Ｓｉｇｍａ）であった。次いで、これらのフィルターを上記のように洗浄し、標準的な比色手順を用いて発色させた。
【００７８】
交差反応性プラークをアガープレート上に配置し、そして０．０２ｍｌのクロロホルムを含む０．２ｍｌのファージ緩衝液中に芯をくり抜いて入れた（ｃｏｒｅ）。各コアストックの力価を決定し、そしてファージを１プレートあたりおよそ２００プラークでプレーティングした。プラークリフトおよびスクリーニングを上記のように実施して、単一で純粋な交差反応性クローンを得た。
【００７９】
次いで、この純粋なクローンをプレートにスポット（１μｌ）し、直径０．５ｃｍのコンフルエントなプラークを得た。３０の個々のクローンを、各プレートにスポットし得る。プラークリフトを実施し、このフィルターを適切な血清で探索した。この方法において、クローンを他の患者の血清、非感染ドナーの血清および抗プロテインＡ血清とのこれらの交差反応性について試験し得る。
【００８０】
次いで、個々のクローンを切り出して、製造業者のプロトコル（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いてＥ．ｃｏｌｉ　ＸＬＯＬＲにファージミドを与えた。プラスミドミニプレップを各々実施し、ゲノムのインサートのサイズを制限マッピングによって決定した。このクローニングしたインサートの正体を、ベクター配列に対するプライマー（これは、このインサートにわたる配列決定を可能にする）を用いてＤＮＡ配列決定によって決定した。誘導された配列の公的ドメインデータベースに対する比較によって、クローニングした遺伝子の性質を決定し得る。
【００８１】
（ハイブリダイゼーション溶液／条件）
代表的に、ハイブリダイゼーション条件は、以下を用いる：４〜６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥは、１ｌに溶解させた１７５．３ｇのＮａＣｌ、８８．２ｇのＮａＨ_２ＰＯ_４　Ｈ_２Ｏおよび７．４ｇのＥＤＴＡを含有し、そしてｐＨを７．４に調整した）；５〜１０×デンハルト液（５０×デンハルト液は、５ｇのＦｉｃｏｌｌ（タイプ４００，Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、５ｇのポリビニルピロリドンおよび（ａｂｄ）５ｇのウシ血清アルブミン；ｌ００μｇ〜１．０ｍｇ／ｍｌの超音波処理したサケ／ニシンＤＮＡ；０．１〜１．０％のドデシル硫酸ナトリウム；必要に応じて４０〜６０％の脱イオン化ホルムアミドを含む）。ハイブリダイゼーション温度は、核酸標的配列のＧＣ含有量に依存して変化させるが、代表的には、４２℃〜６５℃である。
【００８２】
【表２】

Claims (33)

1. 単離された核酸分子によってコードされるポリペプチドであって、該核酸分子は、以下：
   （ｉ）配列番号１〜１３に示されるＤＮＡ配列；
   （ｉｉ）上記（ｉ）において同定された配列番号１〜１３に示される配列にハイブリダイズし、そして病原性生物体によって発現されるポリペプチドをコードするＤＮＡ配列；
   （ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）において規定されるＤＮＡ配列に対して遺伝コードの結果として縮重するＤＮＡ配列、
   からなる群より選択されるＤＮＡ配列を含む、ワクチンとしての使用のためのポリペプチド。
2. 配列番号１４〜１９からなる群より選択される、請求項１に記載のポリペプチド。
3. 請求項１または２に記載のポリペプチドを少なくとも１つ含む、ワクチン。
4. 請求項３に記載のワクチンであって、該ワクチンがさらにキャリアおよび／またはアジュバントを含む、ワクチン。
5. 病原性微生物に対して動物を免疫する方法であって、該方法は、請求項１もしくは請求項２に記載のポリペプチドの少なくとも１つ、もしくはその一部、または請求項３もしくは請求項４に記載のワクチン、を該動物に投与する工程、を包含する、方法。
6. 請求項５に記載の方法であって、前記動物がヒトである、方法。
7. 請求項５または請求項６に記載の方法であって、ここで、前記抗原性ポリペプチドまたはワクチンが、静脈内、筋肉内または皮下のいずれかへの直接注射によって送達される、方法。
8. 請求項５または請求項６に記載の方法であって、ここで、前記抗原性ポリペプチドまたはワクチンが経口投与される、方法。
9. 請求項５〜８のいずれか１項に記載の方法であって、ここで、前記ワクチンが、細菌Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐｐ．属に対するものである、方法。
10. 請求項９に記載の方法であって、ここで、前記ワクチンが、細菌種Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓに対するものである、方法。
11. 請求項９に記載の方法であって、ここで、前記ワクチンが、細菌種Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓに対するものである、方法。
12. 抗原性ポリペプチドを同定するための方法であって、該方法は、以下：
    （ｉ）病原性生物体の遺伝子または部分的な遺伝子配列をコードする核酸ライブラリーを提供する工程；
    （ｉｉ）宿主細胞中に該ライブラリーを形質転換／トランスフェクトする工程；
    （ｉｉｉ）該遺伝子／部分的な遺伝子配列によって発現されるポリペプチドと、該病原性生物体に感染されるかまたは感染された動物由来の自己抗血清とを接触させる工程；および
    （ｉｖ）該自己抗血清に結合しているポリペプチドまたは部分的なポリペプチドをコードする核酸を精製する工程、
    を包含する、方法。
13. 請求項１２に記載の方法であって、ここで、前記ライブラリーが、病原性生物体のゲノムＤＮＡを含む、方法。
14. 請求項１２または請求項１３に記載の方法であって、ここで、前記病原性生物体が細菌である、方法。
15. 請求項１４に記載の方法であって、ここで、前記細菌性生物体が、以下：
    Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ；Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｓｉｓ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｃｏｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ；Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｇｏｎｏｒｒｈｅａ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｇｒｏｕｐ　Ａ；Ｂｏｒｒｅｌｉａ　ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ；Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ　ｉｍｍｉｔｉｓ；Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ　ｓａｐｓｕｌａｔｕｍ；Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ　ｔｙｐｅ　Ｂ；Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｆｌｅｘｎｅｒｉ；Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、
    から選択される、方法。
16. 請求項１５に記載の方法であって、ここで、前記病原性生物体が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓである、方法。
17. 請求項１５に記載の方法であって、前記病原性生物体が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓである、方法。
18. 請求項１２〜１７のいずれか１項に記載の方法であって、ここで、前記核酸ライブラリーが、λライブラリーである、方法。
19. 請求項１０〜１８のいずれか１項に記載の方法によって同定されるポリペプチド。
20. 請求項１または請求項２に記載のポリペプチドの選択的部分と少なくとも結合する、抗体、または少なくともその有効な部分。
21. モノクローナル抗体である、請求項２０に記載の抗体。
22. 請求項２０または請求項２１に記載の抗体であって、ここで、前記有効な部分がＦＡｂフラグメントを含む、抗体。
23. キメラ抗体である、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の抗体。
24. ヒト化抗体である、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の抗体。
25. 請求項２０〜２４のいずれか１項に記載の抗体であって、該抗体に、マーカー、標識、またはタグが提供される、抗体。
26. 請求項２５に記載の抗体であって、ここで、該抗体に、放射活性標識、蛍光標識；エピトープタグからなる群より選択されるマーカーが提供される、抗体。
27. 融合ポリペプチドとして産生される、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の抗体。
28. 請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の抗体の発現のために適合する、ベクター。
29. 請求項２８に記載のベクターを用いて形質転換またはトランスフェクトした細胞。
30. 請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の抗体の産生のための方法であって、該方法は、以下：
    （ｉ）請求項２８に記載のベクターを用いて形質転換またはトランスフェクトした細胞を提供し、該細胞に細胞培養条件を提供する工程；
    （ｉｉ）該細胞、またはその増殖環境から、該抗体を精製する工程、
    を包含する、方法。
31. 請求項３０に記載の抗体を産生するハイブリドーマ細胞株。
32. Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ関連敗血症、食中毒または皮膚障害の処置のための医薬品の製造のための、請求項２０〜２７のいずれか１項に記載の抗体の使用。
33. Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ関連敗血症、腹膜炎または心内膜炎の処置のための医薬品の製造のための、請求項２０〜２７のいずれか１項に記載の抗体の使用。