【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、植物抽出物中のクロシンを加水分解して得られるクロセチンを精製する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
クチナシ（梔子）の果実、サフランの柱頭の乾燥物より抽出されるクロシンは、クロセチンのジゲンチオビオースエステルであり、クロシンをアルカリ等で加水分解することによりクロシンのジゲンチオビオースがはずれ、クロセチンが得られる（例えば、非特許文献１参照）。
また、これとは別に酵素を用いてクロシンを加水分解し、クロセチンを得る方法も提案されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
クロシンは水溶性であり、我が国ではクチナシ黄色素の主色素成分として広範囲な食品の着色に利用されている。一方、クロセチンは水に不溶で希アルカリ水に可溶のため、従来、中華麺（例えば、特許文献２参照）、或いは清涼飲料水（例えば、特許文献３参照）等の着色料として限定的に用いられてきた。
【０００４】
近年カロテノイド色素の機能性に関する研究の進歩に伴い、クロセチンについても、一重項酸素消去剤（例えば、特許文献４参照）、コラーゲン産生促進剤（例えば、特許文献５参照）、皮膚免疫賦活剤（例えば、特許文献６参照）として皮膚に対する作用が示されている他、コレステロールの低下作用、腫瘍形成の阻止効果、肝毒性の抑制効果等の生理活性が報告されている（例えば、非特許文献２参照）。
【０００５】
こうした作用・効果を目的とする皮膚化粧料或いは医薬品類にクロセチンを利用するため、単にクロシンを加水分解しただけではなく、不純物を除去し精製された高純度のクロセチンが求められている。
しかし、これまでのところ、分析用の試料を得る目的で実験室的に作製する方法が開示されているが（例えば、非特許文献３、４、５、６参照）、これらの方法は操作ならびに工程管理が複雑であって、工業的な生産に適していない。従って、工業的規模で工業的に有利に簡単かつ低コストで高純度のクロセチンを製造する方法はいまだ知られていない。
【０００６】
【特許文献１】特開平０７−０１８１９４号公報
【特許文献２】特開昭５４−０６４６５２号公報
【特許文献３】特開平０６−２４８１９３号公報
【特許文献４】特開平０５−３２００３６号公報
【特許文献５】特開平０７−２８５８４６号公報
【特許文献６】特開平１１−２４６３９６号公報
【非特許文献１】谷村顕雄、外４名，「天然着色料ハンドブック」，株式会社光琳，昭和５４年６月２５日，ｐ．２１５
【非特許文献２】近雅代，「くちなしカロテノイド色素について」，福岡女子短大紀要，１９９９，Ｎｏ．５７，３１−３４
【非特許文献３】神蔵美枝子、外１名，「食品衛生学雑誌」，１９８５，２６，Ｎｏ．２，ｐ．１５１
【非特許文献４】Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，１９９６，４４，Ｎｏ．９，ｐ．２６１３，ｌｅｆｔ ｃｏｌｕｍｎ，ｌｉｎｅ４６−６１
【非特許文献５】Ｓｐｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａ Ａｃｔａ Ｐａｒｔ Ａ，１９９８，５４，ｐ．６５４，ｌｅｆｔ ｃｏｌｕｍｎ，ｌｉｎｅ１６−２４
【非特許文献６】Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，２００１，３８，Ｎｏ．４，ｐ．３２５，ｌｅｆｔ ｃｏｌｕｍｎ，ｌｉｎｅ３６−４２
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
この発明は、簡単な操作で、しかも工業的に有利なクロセチンの精製方法を提供するためになされたものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、植物抽出物中のクロシンを加水分解して得られる不純物を含んだクロセチンを特定の有機溶剤で処理することにより、目的とする精製された高純度のクロセチンが効率的に得られることを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【０００９】
即ち、本発明の方法は、次の１〜９からなっている。
１．植物抽出物中のクロシンを加水分解して得られるクロセチンを、低級アルコール或いは低級アルコールを５０容量％以上含む混合溶剤で処理し、該溶剤可溶の成分を除く工程を実施することを特徴とする、クロセチンの精製方法、
２．植物抽出物中のクロシンを加水分解して得られるクロセチンを、クロセチンを結晶化しうる非プロトン性極性溶剤で処理し、該溶剤からクロセチンを結晶化する工程を実施することを特徴とする、クロセチンの精製方法、
３．非プロトン性極性溶剤がジメチルホルムアミド或いはジメチルスルホキシド或いはそれらの混合物であることを特徴とする、上記２に記載のクロセチンの精製方法、
４．植物抽出物中のクロシンを加水分解して得られるクロセチンを、低級アルコール或いは低級アルコールを５０容量％以上含む混合溶剤で処理して該溶剤可溶の成分を除き、クロセチンを結晶化しうる非プロトン性極性溶剤からクロセチンを結晶化する工程を実施することを特徴とする、クロセチンの精製方法、
５．非プロトン性極性溶剤がジメチルホルムアミド或いはジメチルスルホキシド或いはそれらの混合物であることを特徴とする、上記４に記載のクロセチンの精製方法、
６．上記１〜５のいずれかに記載の方法で得られる、精製されたクロセチン、
７．色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）が２７０００〜３５７００の範囲にある精製クロセチン、
８．上記６または７に記載の精製されたクロセチンを配合したことを特徴とする、化粧料及び医薬品類、
９．上記６または７に記載の精製されたクロセチンを配合したことを特徴とする、食品及び健康食品、
に関する。
【００１０】
【発明の実施の形態】
カロテノイド系の黄色色素であるクロシンは、アカネ科クチナシ（Ｇａｒｄｅｎｉａ ａｕｇｕｓｔａ ＭＥＲＲＩＬ ｖａｒ． ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ ＨＯＲＴ．、Ｇａｒｄｅｎｉａ ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ ＥＬＬＩＳ）の果実、サフランの柱頭の乾燥物などに含まれるが、クロシンを得るための工業的原料としてはクチナシの果実が好ましく用いられる。
本発明では、クロシンは、粉砕されたクチナシの乾燥果実から、水またはアルコール及びそれらの混合液を用いて抽出される。抽出溶媒としては水が安全性の面からは好ましいが、抽出速度が遅い。そこで工業的には水とアルコールの混合液が、通常用いられる。アルコールとしては、例えばエタノール、メタノール等が挙げられるが、メタノールが好ましく用いられる。水とアルコールとの混合割合は、例えば５０容量％以上が好ましく用いられる。抽出終了後、抽出液は一つに集められ、必要なら珪藻土等のろ過助剤を用いて、ろ紙或いはろ布を通して、ろ過される。ろ液はアルコールを回収するため濃縮され、濃縮物が得られる。
【００１１】
本発明においてクチナシからの抽出液は、更に吸着樹脂処理或いは膜分離処理等によりゲニポサイド等のイリドイド配糖体を除去することが、好ましく行われる。
【００１２】
吸着樹脂処理は、カラムに多孔性吸着剤を充填し、濃縮物を適当な濃度に希釈した液を供給することにより行われる。例えば、カラムが色素で飽和されるまで色素溶液を流した後、水または低濃度のアルコールと水の混合液で不純物を洗い流し、次に、５０〜７０容量％のアルコールで色素を脱着・溶出し、溶出液は濃縮され、ゲニポサイドが可及的に低減された濃縮物が得られる。ここで、アルコールとしては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｉ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等の炭素数１〜４の低級アルコールが挙げられるが、エタノールが好ましく用いられる。また、多孔性吸着剤としては、例えばアンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−７（製品名；オルガノ（株））、ダイヤイオンＨＰ−２０、ＨＰ−２１、ＨＰ−４０（製品名；三菱化学（株））等が挙げられる。
【００１３】
膜分離処理は、例えば分画分子量２，０００〜２０，０００の限外ろ過膜を用いたモジュールに、濃縮物を適当な濃度に希釈した液を供給することにより行われる。不純物は水と共に膜を透過し、クロシンを含む色素は濃縮される。途中水を補給しながら、目的とする精製度が得られるまで操作を繰り返す。最後に液を抜き出して濃縮し、ゲニポサイドが可及的に低減された濃縮物が得られる。
【００１４】
濃縮は濃縮釜を用いて常法により行われ、濃縮により水分約１０〜８０質量％、好ましくは約１５〜４０質量％、また色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）約１００〜６５０、好ましくは約４００〜６００の濃縮物が通常得られる。
【００１５】
本発明において、クロセチンは前記抽出液、濃縮物或いはゲニポサイドが可及的に低減された濃縮物を加水分解することにより得られる。その際濃縮物は、必要であれば、水で適当な濃度に希釈された後、加水分解される。
【００１６】
加水分解は酸、アルカリ或いは適当な加水分解酵素の作用で行われる。ここで酸としては、例えば塩酸、硫酸、リン酸等が挙げられ、アルカリとしては例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等が挙げられる。又加水分解酵素としては、β−グルコシダーゼ等が挙げられる。
【００１７】
工業的には、通常アルカリによる加水分解が好ましく行われる。その方法は常法に従って良く、特に限定されるものではない。加水分解は、反応液を攪拌してもしなくても良いし、又加熱してもしなくても良いが、好ましくは攪拌下適当な温度に加熱することにより、分解が促進される。
【００１８】
アルカリによる加水分解終了後、反応液に塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸、或いはクエン酸等の有機酸の水溶液を適当量加え、液性を約ｐＨ４．０以下、好ましくは約ｐＨ３．０以下にするか、又は反応液を塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸、或いはクエン酸等の有機酸の水溶液に加え、液性を約ｐＨ４．０以下、好ましくは約ｐＨ３．０以下にすることで、クロセチンが析出する。クロセチンを含む混合液はろ紙或いはろ布を通してろ過され、クロセチンを含むペースト状の固形物が回収される。
また、酸による加水分解では、分解と同時にクロセチンが析出し、懸濁状となる。反応終了後、クロセチンを含む混合液はろ紙或いはろ布を通してろ過され、クロセチンを含むペースト状の固形物が回収される。
【００１９】
該固形物は、表面に付着している酸、中和塩或いは原料由来の不純物を除くため、十分量の水で水洗された後、例えば棚式の真空乾燥機を用いて、５０℃を越えない温度で、好ましくは窒素ガスの雰囲気下で、残留する水が除去される。
このようにして得られたクロセチンは、クロセチン以外の物質、例えば脂質及びその分解物、クロロゲン酸等のポリフェノール類、或いは加水分解により生成し、水洗で完全には除去されなかったグルコース、ゲンチオビオース等の糖類を含んでいるため純度が低く、そのままでは化粧料、皮膚化粧料、食品、健康食品或いは医薬品類に利用するのは難しい。
【００２０】
本発明は、該クロセチンを更に特定の溶剤で処理することにより、高純度のクロセチンを得る方法に関するものである。
【００２１】
本発明において、第一の方法では、該クロセチンは低級アルコールで処理される。ここで低級アルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｉ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等、炭素数１〜４の低級アルコールの群から選ばれた一種或いは二種以上の混合物が挙げられるが、メタノールが好ましく用いられる。メタノールの量はクロセチン１質量部に対して、約１〜２０００容量部、好ましくは約１０〜２５０容量部、更に好ましくは約１０〜４０容量部である。
該クロセチンとメタノールの混合液は、約３０〜６５℃、好ましくは約４５〜５０℃で緩やかな還流状態を維持しながら、約０．５〜１時間攪拌される。次に混合液は室温まで冷却され、ろ紙或いはろ布を通して、ろ過される。ろ過の方法としては、吸引ろ過、加圧ろ過、或いは遠心分離等が挙げられる。ろ紙或いはろ布上のクロセチンは回収され、メタノール可溶の不純物を含むろ液は廃棄される。
【００２２】
本発明の方法において、該クロセチンは低級アルコールを約５０容量％以上、好ましくは約７０容量％以上含む混合溶剤でも処理することができる。ここで低級アルコールと混合される溶剤としては、低級アルコールと相溶性の高い溶剤、例えば水、飽和或いは不飽和の脂肪族アルコール類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類、ジエチルエーテル等のエーテル類、酢酸エチル等が挙げられる。
該クロセチンと低級アルコールを５０容量％以上含む混合溶剤の混合液は、混合溶剤の沸点以下の温度で、好ましくは緩やかな還流状態を維持しながら、０．５〜１時間攪拌される。次に混合液は室温まで冷却され、ろ紙或いはろ布を通してろ過される。ろ紙或いはろ布上のクロセチンは回収され、混合溶媒可溶の不純物を含むろ液は廃棄される。
【００２３】
上記の方法により精製されたクロセチンは、例えば棚式の真空乾燥機を用いて、約８０℃を越えない温度、好ましくは約６０℃以下、更に好ましくは約５０℃以下の温度で、好ましくは窒素ガスの雰囲気下で、残留する溶剤が除去される。
【００２４】
本発明において、第二の方法では、該クロセチンはクロセチンを結晶化しうる非プロトン性極性溶剤（例えばジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセタミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、γ―ブチロラクトン、ヘキサメチルリン酸トリアミド、スルホラン、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン、Ｎ−メチルカプロラクタム、アセトン、テトラヒドロフランなど）中で、好ましくはジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド或いはこれらの混合物、より好ましくはジメチルホルムアミドで結晶化処理される。これらの非プロトン性極性溶剤は単独もしくは１種以上の混合溶剤として使用できる。なお、上記の非プロトン性極性溶剤はクロセチンを結晶化できる限りにおいて、無極性溶剤又は他の溶剤との混合物であってもよい。そのような無極性溶剤としては例えばベンゼン、トルエン、ヘキサン等が、他の溶剤としては例えば水、メタノール、エタノール、クロロホルム等が挙げられる。
結晶化の方法は常法に従って良く、特に限定されるものではない。即ち、使用する溶剤の量はクロセチンを溶解する温度で飽和溶液をつくり得る量であればよく、例えばジメチルホルムアミドの量はクロセチン１質量部に対して、約１０〜４０容量部、好ましくは約１５〜２０容量部である。
【００２５】
該クロセチンとジメチルホルムアミドの混合液は、室温〜１００℃、好ましくは約５０〜８０℃に加熱され、約０．５〜１時間攪拌しながらクロセチンが溶解される。なお、上記の溶解は溶液中クロセチンが飽和するまでクロセチンを非プロトン性極性溶剤に溶解させるのが好ましい。溶解される際、クロセチンの濃度が飽和に達しない場合、溶解後に好ましくは減圧下に溶液を濃縮してもよい。溶液は、不溶物がある場合には一旦溶液をろ過し不溶物を除いた後、室温（約１℃〜３０℃）又はそれ以下まで緩やかに冷却される。好ましくはその温度で静かに保ち結晶を成長させ、生成したクロセチン結晶を含む混合液はろ紙或いはろ布を通して、ろ過される。ろ紙或いはろ布上のクロセチンは回収され、ジメチルホルムアミド可溶の不純物を含むろ液は廃棄される。
ジメチルスルホキシドでは、使用した溶剤の量によっては、溶液を室温まで冷却しても結晶が発生しない場合があるが、例えば適当量の水を加えることにより結晶を析出させることができる。
【００２６】
本発明の方法において、得られたクロセチン結晶はメタノール又はエタノール、好ましくはエタノールで洗浄される。エタノールの量はクロセチン結晶１重量部に対して、約５〜８０容量部、好ましくは約１０〜４０容量部である。エタノール洗浄により、クロセチン結晶の表面に付着するジメチルホルムアミド等の溶剤が除かれ、仕上げ工程における脱溶剤が容易となる。
尚、第二の方法において、出発原料を該クロセチンに代えて第一の方法で得られた精製クロセチンを用いてもよい。精製クロセチンを用いることにより、より高純度のクロセチン結晶が得られる可能性が高くなる。
【００２７】
上記の方法により精製されたクロセチン結晶は、例えば棚式の真空乾燥機を用いて、約８０℃を越えない温度、好ましくは約６０℃以下、更に好ましくは約５０℃以下の温度で、好ましくは窒素ガスの雰囲気下で、残留する溶剤が除去される。
【００２８】
本発明の方法により得られるクロセチンは、第一の方法により純度約７０質量％以上、しばしば約８０質量％以上のものが、第二の方法により純度約９０質量％以上、しばしば約９５質量％以上のものが得られる。尚、本発明では、結晶化して得た高純度のクロセチン精製品の色価を後述の方法で測定して、３５，７００の値を得、この値を基準として上記純度を算出した。
クロセチンは、前記したように一重項酸素消去剤、コラーゲン産生促進剤、皮膚免疫賦活剤として皮膚に対する作用が示されている他、コレステロールの低下作用、腫瘍形成の阻止効果、肝毒性の抑制効果等の生理活性が報告されており、本発明の精製クロセチンは医薬品（組成物）或いは化粧料、皮膚化粧料として有用である。また、本発明の精製クロセチンは、例えば特開平６−２４８１９３、特開平７−２３７３６記載のサイクロデキストリン包接物、特公昭５６−２５０９７記載の噴霧乾燥粉末、乳化液、或いは可溶化液などとすることにより、黄色着色料として菓子類、麺類、乳製品、練り製品或いはその他の漬物、酢の物、練り羊羹、水羊羹、ういろう、煮豆、練りウニ、ふりかけ等の食品、健康食品に添加して使用することができる（参照：非特許文献２）。
【００２９】
クロセチンは、自体公知の医薬担体、賦形剤或いはその他の添加剤と共に使用形態及び使用目的に応じて適宜、当業者が選択できる。具体的には、医薬品、化粧料の場合は、賦形剤、崩壊剤、結合剤、界面活性剤、乳化剤、可塑剤、湿潤剤、滑沢剤、糖類、ｐＨ調節剤、防腐剤、香料もしくは着色料などが挙げられる。食品、健康食品の場合には、各種の栄養素、ビタミン類、香料、着色料、酸化防止剤、チーズやチョコレート等の風味物質もしくは合成甘味料等が挙げられる。
【００３０】
本発明に係る医薬組成物は、摂取方法および摂取経路に応じてシロップ剤、散剤、顆粒剤、丸剤、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤の剤型で経口的に、或いは座剤、注射剤、輸液剤などの形態で非経口的に投与することができる。化粧料の場合には、クロセチンを適宜添加してクリーム、ローション、軟膏、液剤、ペースト等の剤型とすることができる。クロセチンを食品或いは健康食品に適用する場合には、顆粒、錠菓、ガム、キャンディ、ゼリ−、飲料等の形で提供できるが、その形態は上記に限定されない。
【００３１】
クロセチンの摂取量は、摂取する人の性別、年齢、健康状態などによって異なるので一概には言えないが、経口剤の場合、吸収率を考慮して有効成分クロセチンを成人１日当たり約０．１ｍｇ〜５００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜３００ｍｇ、さらに好ましくは約２ｍｇ〜１００ｍｇの投与量となるよう、設定するのが望ましい。注射剤または輸液剤などの非経口剤の場合は、成人１日当たりクロセチンを約０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約０．１ｍｇ〜５０ｍｇ、さらに好ましくは約０．５ｍｇ〜１０ｍｇの投与量となるよう、設定するのが望ましい。皮膚化粧料の場合には、皮膚化粧料全質量に対してクロセチンを約０．００１〜１０質量％含有させるのがよい。食品、健康食品の場合には、クロセチンを食品あるいは健康食品の全質量に対して一般に約０．００００３〜１０質量％、好ましくは約０．０１〜５質量％添加するのがよい。
なお、上記クロセチン含有医薬、皮膚化粧料、化粧料、食品、健康食品は、一日当たり１回から複数回、投与、使用または摂取することができる。
【００３２】
【実施例】
以下、実施例をもって本発明を具体的に説明する。
【００３３】
［色価測定方法］
『化学的合成品以外の食品添加物 自主規格（第二版）』、日本食品添加物協会編、「クチナシ黄色素」を参考にして、以下の方法で測定した。
測定する吸光度が０．３〜０．７の範囲になるように、試料を精密に量り、Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（５０ｍＭ Ｎａ２ＣＯ３−５０ｍＭ Ｎａ２Ｂ４Ｏ７、ｐＨ１０．０）に溶かして正確に５００ｍｌとする。溶解しにくい場合は、超音波処理により溶解する。その１０ｍｌを正確に量り、Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（５０ｍＭ Ｎａ２ＣＯ３−５０ｍＭ Ｎａ２Ｂ４Ｏ７、ｐＨ１０．０）を加えて５０ｍｌとし、試験溶液とする。Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（５０ｍＭ Ｎａ２ＣＯ３−５０ｍＭ Ｎａ２Ｂ４Ｏ７、ｐＨ１０．０）を対照とし、液層の長さ１ｃｍで４２０ｎｍ付近の極大吸収部における吸光度Ａを測定し、次式により色価を求める。
色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）＝（Ａ×２５０）÷試料の採取量（ｇ）
【００３４】
〔比較例１〕
粉砕したクチナシの乾燥果実１５０ｇにメタノール・水混合液（１：１）３００ｍｌを加え、室温で３時間攪拌した後吸引ろ過した。抽出残にメタノール・水混合液（１：１）３００ｍｌを加え、室温で３０分間攪拌した後吸引ろ過する操作を２回繰り返し、ろ液として計約９００ｍｌの抽出液を得た。この抽出液を、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下、６０℃で濃縮し、クロシンを含む濃縮物（色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）＝５７３）約５０ｇを得た。
得られた濃縮物と４０質量％水酸化ナトリウム水溶液１７ｇとを混合し、撹拌下５０℃で３．５時間加水分解反応を行った。反応終了後、反応液を４質量％リン酸水溶液４２０ｍｌに加えて酸性とした後、そのまま約３時間室温で放置した。
析出した沈殿を遠心分離（１０，０００×ｇ、１０分間）により回収し、更に水１００ｍｌで洗浄と遠心分離操作を２回繰り返した。
得られたペースト状の固形物を５０℃で８時間真空乾燥し、クロセチン約１．２ｇを得た。このものの色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）は約１２，５００であった。
【００３５】
〔実施例１〕
比較例１と同様にして得たクロセチン１ｇにメタノール２５０ｍｌを加え、５０℃で３０分間攪拌した。次に、遠心分離（１０，０００×ｇ、１０分間）により沈殿を回収し、得られたペースト状の固形物を５０℃で８時間真空乾燥し、精製クロセチン約０．３２ｇを得た。このものの色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）は約３０，１００であった。
【００３６】
〔実施例２〕
比較例１と同様にして得たクロセチン１ｇにメタノール・水混合液（４：１）２５０ｍｌを加え、５０℃で３０分間攪拌した。次に、遠心分離（１０，０００×ｇ、１０分間）により沈殿を回収し、得られたペースト状の固形物を５０℃で８時間真空乾燥し、精製クロセチン約０．３９ｇを得た。このものの色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）は約２７，０００であった。
【００３７】
〔実施例３〕
比較例１と同様にして得たクロセチン１ｇにジメチルホルムアミド１８ｍｌを加え、８０℃で溶解した。不溶物を定量ろ紙（Ｎｏ．５Ｃ，アドバンテック東洋社）でろ過し、ろ液を１０℃で３日間放置した。次に生成したクロセチンの結晶を含む母液をガラスろ過器Ｎｏ．３でろ過し、メタノール２０ｍｌで洗浄後、結晶を５０℃で真空乾燥し、精製クロセチン約０．１６ｇを得た。このものの色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）は約３４，２００であった。
【００３８】
〔実施例４〕
実施例１で得られた精製クロセチン０．１５ｇにジメチルホルムアミド６．５ｍｌを加え、８０℃で攪拌溶解した。不溶物を定量ろ紙Ｎｏ．５Ｃでろ過し、１０℃で３日間放置した。次に生成したクロセチンの結晶を含む母液をガラスろ過器Ｎｏ．３でろ過し、メタノール１０ｍｌで洗浄後、結晶を５０℃で真空乾燥し、精製クロセチン約０．０９ｇを得た。このものの色価（Ｅ１０％ １ｃｍ）は約３５，７００であった。
【００３９】
〔試験例１〕
実施例４で得られた結晶の融点測定と元素分析を外部機関に依頼した。結果を次に示す。
融点：２８５℃〜２８６℃
元素分析：炭素７２．６０％、水素７．５１％、酸素１９．８９％
この結果から、該結晶は文献値とほぼ一致することが確認された。
【００４０】
【発明の効果】
本発明の方法により、高純度のクロセチンが工業的に容易に得られ、化粧料、皮膚化粧料或いは医薬品類等の用途に好ましく用いることができる。また、精製されたことにより異味・異臭が可及的に減少し、そのためより広範囲な食品或いは健康食品への展開も可能となった。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for purifying crocetin obtained by hydrolyzing crocin in a plant extract.
[0002]
[Prior art]
Crocin extracted from gardenia fruit and dried saffron stigma is a digentiobiose ester of crocetin. Digestiobiose of crocin comes off by hydrolyzing crocin with an alkali or the like. Crocetin is obtained (for example, see Non-Patent Document 1).
In addition, another method has been proposed in which crocin is hydrolyzed using an enzyme to obtain crocetin (for example, see Patent Document 1).
[0003]
Crocin is water-soluble and is used in Japan as a main pigment component of gardenia yellow pigment for coloring a wide range of foods. On the other hand, since crocetin is insoluble in water and soluble in diluted alkaline water, it has conventionally been limited as a coloring agent for Chinese noodles (for example, see Patent Document 2) or soft drinks (for example, see Patent Document 3). Has been used.
[0004]
In recent years, with the progress of research on the functionality of carotenoid pigments, crocetin is also used as a singlet oxygen scavenger (for example, see Patent Document 4), a collagen production promoter (for example, see Patent Document 5), and a skin immunostimulator (for example, see Patent Document 5). In addition to its activity on the skin as described in Patent Document 6, physiological activities such as a cholesterol lowering effect, an inhibitory effect on tumor formation, and an inhibitory effect on hepatotoxicity have been reported (for example, see Non-Patent Document 2). ).
[0005]
In order to use crocetin in skin cosmetics or pharmaceuticals for the purpose of such actions and effects, high purity crocetin purified not only by hydrolyzing crocin but also by removing impurities is required.
However, so far, methods for making samples in a laboratory for the purpose of obtaining a sample for analysis have been disclosed (for example, see Non-Patent Documents 3, 4, 5, and 6). Process control is complicated and not suitable for industrial production. Therefore, a method for producing crocetin of high purity at an industrial scale on an industrial scale, advantageously at low cost, has not yet been known.
[0006]
[Patent Document 1] JP-A-07-018194 [Patent Document 2] JP-A-54-064652 [Patent Document 3] JP-A 06-248193 [Patent Document 4] JP-A 05-320036 [ [Patent Document 5] Japanese Patent Application Laid-Open No. 07-285846 [Patent Document 6] Japanese Patent Application Laid-Open No. 11-246396 [Non-Patent Document 1] Akio Tanimura, 4 others, "Natural Coloring Handbook", Korin Co., Ltd., 1979 June 25, p. 215
[Non-Patent Document 2] Masayo Chika, "On the Carotenoid Pigmentless", Bulletin of Fukuoka Women's Junior College, 1999, No. 57, 31-34
[Non-Patent Document 3] Mieko Kanzo, 1 other person, "Food Hygiene Magazine", 1985, 26, No. 2, p. 151
[Non-Patent Document 4] Agric. Food Chem. , 1996, 44, no. 9, p. 2613, left column, line 46-61
[Non-Patent Document 5] Spectrochemica Acta Part A, 1998, 54, p. 654, left column, line 16-24
[Non-Patent Document 6] Food Sci. Technol. , 2001, 38, no. 4, p. 325, left column, line 36-42
[0007]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention has been made to provide an industrially advantageous method for purifying crocetin with a simple operation.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have conducted intensive studies to solve the above problems, and as a result, by treating crocetin containing impurities obtained by hydrolyzing crocin in a plant extract with a specific organic solvent, the purpose and It has been found that purified high-purity crocetin can be efficiently obtained, and the present invention has been accomplished based on this finding.
[0009]
That is, the method of the present invention comprises the following items 1 to 9.
1. Crocetin obtained by hydrolyzing crocin in a plant extract is treated with a lower alcohol or a mixed solvent containing the lower alcohol in an amount of 50% by volume or more to remove the solvent-soluble component. , Crocetin purification method,
2. Crocetin obtained by hydrolyzing crocin in a plant extract is treated with an aprotic polar solvent capable of crystallizing crocetin, and characterized by performing a step of crystallizing crocetin from the solvent, Purification method,
3. The method for purifying crocetin according to the above 2, wherein the aprotic polar solvent is dimethylformamide or dimethylsulfoxide or a mixture thereof,
4. Crocetin obtained by hydrolyzing crocin in a plant extract is treated with a lower alcohol or a mixed solvent containing at least 50% by volume of a lower alcohol to remove the solvent-soluble components and to crystallize crocetin. A method for purifying crocetin, which comprises performing a step of crystallizing crocetin from a polar solvent,
5. The method for purifying crocetin according to the above 4, wherein the aprotic polar solvent is dimethylformamide or dimethylsulfoxide or a mixture thereof,
6. A purified crocetin obtained by the method according to any one of the above 1 to 5,
7. Purified crocetin having a color value (E 10% 1cm ) in the range of 27000 to 35700,
8. Cosmetics and pharmaceuticals, characterized by blending the purified crocetin according to 6 or 7 above,
9. A food and a health food, characterized by containing the purified crocetin according to the above 6 or 7.
About.
[0010]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Crocin, a carotenoid-based yellow pigment, is contained in fruits of Gardenia augusta MERRIRL var. Gardenia fruit is preferably used.
In the present invention, crocin is extracted from the ground dried gardenia fruits using water or alcohol and mixtures thereof. As an extraction solvent, water is preferable from the viewpoint of safety, but the extraction speed is low. Therefore, a mixed solution of water and alcohol is usually used industrially. Examples of the alcohol include ethanol, methanol and the like, and methanol is preferably used. The mixing ratio of water and alcohol is preferably, for example, 50% by volume or more. After completion of the extraction, the extracts are collected together and, if necessary, filtered through filter paper or filter cloth using a filter aid such as diatomaceous earth. The filtrate is concentrated to recover the alcohol and a concentrate is obtained.
[0011]
In the present invention, the extract from gardenia is preferably further subjected to adsorption resin treatment or membrane separation treatment to remove iridoid glycosides such as geniposide.
[0012]
The adsorption resin treatment is performed by filling a column with a porous adsorbent and supplying a liquid obtained by diluting a concentrate to an appropriate concentration. For example, after flowing the dye solution until the column is saturated with the dye, the impurities are washed away with water or a mixture of a low concentration of alcohol and water, and then the dye is desorbed and eluted with 50 to 70% by volume of alcohol. The eluate is concentrated to give a concentrate with as low a geniposide as possible. Here, examples of the alcohol include lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, n-butanol, i-butanol, sec-butanol and tert-butanol, and ethanol is preferably used. Can be As the porous adsorbent, for example, Amberlite XAD-4, Amberlite XAD-7 (product name; Organo Co., Ltd.), Diaion HP-20, HP-21, HP-40 (product name; Mitsubishi Chemical Corporation) Co., Ltd.).
[0013]
The membrane separation treatment is performed by, for example, supplying a liquid obtained by diluting the concentrate to an appropriate concentration to a module using an ultrafiltration membrane having a molecular weight cutoff of 2,000 to 20,000. Impurities penetrate the membrane with water, and the dye containing crocin is concentrated. The operation is repeated while replenishing water on the way until the desired degree of purification is obtained. Finally, the liquid is withdrawn and concentrated to obtain a concentrate in which geniposide is reduced as much as possible.
[0014]
Concentration is carried out by a conventional method using a concentrator, and the water content is about 10 to 80% by mass, preferably about 15 to 40% by mass, and the color value (E 10% 1 cm ) is about 100 to 650, preferably about 400 %. ~ 600 concentrates are usually obtained.
[0015]
In the present invention, crocetin is obtained by hydrolyzing the extract, the concentrate or the concentrate in which geniposide is reduced as much as possible. The concentrate is then, if necessary, diluted with water to an appropriate concentration and then hydrolyzed.
[0016]
The hydrolysis is carried out by the action of an acid, an alkali or a suitable hydrolase. Here, examples of the acid include hydrochloric acid, sulfuric acid, and phosphoric acid, and examples of the alkali include sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, and potassium carbonate. Examples of the hydrolase include β-glucosidase.
[0017]
Industrially, hydrolysis with an alkali is usually preferably performed. The method may be in accordance with a conventional method, and is not particularly limited. In the hydrolysis, the reaction solution may or may not be stirred, and may or may not be heated. Preferably, heating to an appropriate temperature with stirring accelerates the decomposition.
[0018]
After completion of the hydrolysis with an alkali, an appropriate amount of an aqueous solution of an inorganic acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid or the like or an organic acid such as citric acid is added to the reaction solution to adjust the liquidity to about pH 4.0 or less, preferably about pH 3.0. Alternatively, the reaction solution is added to an aqueous solution of an inorganic acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid or the like, or an organic acid such as citric acid, to adjust the liquid property to about pH 4.0 or less, preferably to about pH 3.0 or less. As a result, crocetin precipitates. The mixed solution containing crocetin is filtered through a filter paper or a filter cloth, and a paste-like solid containing crocetin is recovered.
In addition, in the case of hydrolysis with an acid, crocetin precipitates at the same time as the decomposition, and becomes a suspension. After completion of the reaction, the mixed solution containing crocetin is filtered through filter paper or filter cloth, and a paste-like solid containing crocetin is recovered.
[0019]
The solid is washed with a sufficient amount of water to remove acids, neutralized salts or impurities derived from the raw materials adhering to the surface. At no temperature, preferably under an atmosphere of nitrogen gas, residual water is removed.
Crocetin thus obtained is a substance other than crocetin, for example, lipids and their degradation products, polyphenols such as chlorogenic acid, or glucose, gentiobiose, etc., which are produced by hydrolysis and are not completely removed by washing with water. Since it contains saccharides, its purity is low and it is difficult to use it as it is in cosmetics, skin cosmetics, foods, health foods, or pharmaceuticals.
[0020]
The present invention relates to a method for obtaining high-purity crocetin by further treating the crocetin with a specific solvent.
[0021]
In the present invention, in the first method, the crocetin is treated with a lower alcohol. Here, as the lower alcohol, for example, one selected from the group consisting of lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms, such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, n-butanol, i-butanol, sec-butanol, tert-butanol and the like. Although a mixture of two or more kinds is mentioned, methanol is preferably used. The amount of methanol is about 1 to 2000 parts by volume, preferably about 10 to 250 parts by volume, more preferably about 10 to 40 parts by volume, based on 1 part by mass of crocetin.
The mixture of crocetin and methanol is stirred for about 0.5 to 1 hour while maintaining a gentle reflux at about 30 to 65 ° C, preferably about 45 to 50 ° C. Next, the mixture is cooled to room temperature and filtered through filter paper or filter cloth. Examples of the filtration method include suction filtration, pressure filtration, and centrifugation. Crocetin on the filter paper or filter cloth is recovered, and the filtrate containing methanol-soluble impurities is discarded.
[0022]
In the method of the present invention, the crocetin can be treated with a mixed solvent containing a lower alcohol in an amount of about 50% by volume or more, preferably about 70% by volume or more. Here, as the solvent mixed with the lower alcohol, a solvent having high compatibility with the lower alcohol, for example, water, saturated or unsaturated aliphatic alcohols, ketones such as acetone and ethyl methyl ketone, and ethers such as diethyl ether , Ethyl acetate and the like.
The mixed solution of the mixed solvent containing the crocetin and the lower alcohol in an amount of 50% by volume or more is stirred for 0.5 to 1 hour at a temperature lower than the boiling point of the mixed solvent, preferably while maintaining a gentle reflux state. Next, the mixture is cooled to room temperature and filtered through filter paper or filter cloth. The crocetin on the filter paper or cloth is collected, and the filtrate containing impurities soluble in the mixed solvent is discarded.
[0023]
The crocetin purified by the above-mentioned method is heated at a temperature not exceeding about 80 ° C., preferably at about 60 ° C. or less, more preferably at about 50 ° C. or less, for example, using a tray-type vacuum dryer. Under a gas atmosphere, the remaining solvent is removed.
[0024]
In the present invention, in the second method, the crocetin is an aprotic polar solvent capable of crystallizing crocetin (for example, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, acetonitrile, γ-butyrolactone, Hexamethylphosphoric acid triamide, sulfolane, 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone, N-methylcaprolactam, acetone, tetrahydrofuran, etc.), preferably dimethylformamide or dimethylsulfoxide or a mixture thereof, more preferably dimethylformamide Is crystallized. These aprotic polar solvents can be used alone or as a mixture of one or more solvents. The aprotic polar solvent may be a nonpolar solvent or a mixture with another solvent as long as crocetin can be crystallized. Such non-polar solvents include, for example, benzene, toluene, hexane and the like, and other solvents include, for example, water, methanol, ethanol, chloroform and the like.
The crystallization method may be in accordance with a conventional method, and is not particularly limited. That is, the amount of the solvent used may be an amount capable of forming a saturated solution at a temperature at which crocetin is dissolved. For example, the amount of dimethylformamide is about 10 to 40 parts by volume, preferably about 15 ２０20 parts by volume.
[0025]
The mixed solution of crocetin and dimethylformamide is heated to room temperature to 100 ° C, preferably about 50 to 80 ° C, and crocetin is dissolved with stirring for about 0.5 to 1 hour. In the above dissolution, crocetin is preferably dissolved in an aprotic polar solvent until crocetin in the solution is saturated. If the concentration of crocetin does not reach saturation when dissolved, the solution may be concentrated after dissolution, preferably under reduced pressure. The solution is cooled slowly to room temperature (about 1 ° C. to 30 ° C.) or lower after the solution is once filtered to remove the insoluble matter, if any. Preferably, the temperature is kept quiet at that temperature to grow the crystals, and the mixture containing the formed crocetin crystals is filtered through filter paper or filter cloth. The crocetin on the filter paper or filter cloth is recovered, and the filtrate containing dimethylformamide-soluble impurities is discarded.
With dimethyl sulfoxide, depending on the amount of the solvent used, crystals may not be generated even when the solution is cooled to room temperature. However, for example, crystals can be precipitated by adding an appropriate amount of water.
[0026]
In the method of the present invention, the obtained crocetin crystals are washed with methanol or ethanol, preferably ethanol. The amount of ethanol is about 5 to 80 parts by volume, preferably about 10 to 40 parts by volume, based on 1 part by weight of the crocetin crystal. The ethanol washing removes a solvent such as dimethylformamide adhering to the surface of the crocetin crystal, and facilitates the removal of the solvent in the finishing step.
In the second method, the purified crocetin obtained by the first method may be used in place of the crocetin as a starting material. The use of purified crocetin increases the possibility of obtaining higher purity crocetin crystals.
[0027]
The crocetin crystal purified by the above method is heated at a temperature not exceeding about 80 ° C., preferably at about 60 ° C. or less, more preferably at about 50 ° C. or less, for example, using a shelf-type vacuum dryer. Under an atmosphere of nitrogen gas, the remaining solvent is removed.
[0028]
Crocetin obtained by the method of the present invention has a purity of about 70% by weight or more, often about 80% by weight or more by the first method, and a purity of about 90% by weight or more, often about 95% by weight or more by the second method. Is obtained. In the present invention, the color value of the purified crocetin purified product obtained by crystallization was measured by the method described below to obtain a value of 35,700, and the purity was calculated based on this value.
Crocetin has been shown to act on the skin as a singlet oxygen scavenger, collagen production enhancer, and skin immunostimulant as described above, as well as a cholesterol lowering effect, an inhibitory effect on tumor formation, an inhibitory effect on hepatotoxicity, etc. The purified crocetin of the present invention is useful as pharmaceuticals (compositions), cosmetics, and skin cosmetics. The purified crocetin of the present invention is, for example, a cyclodextrin clathrate described in JP-A-6-248193 and JP-A-7-23736, a spray-dried powder described in JP-B-56-25097, an emulsion, or a solubilized solution. By using it as a yellow colorant, it can be added to foods such as confectionery, noodles, dairy products, kneaded products or other pickles, vinegared products, kneaded yokan, mizuyokan, uiro, boiled beans, kneaded sea urchin, sprinkled sea urchin, etc. (See Non-Patent Document 2).
[0029]
Crocetin can be appropriately selected by those skilled in the art depending on the form and purpose of use, together with known pharmaceutical carriers, excipients or other additives. Specifically, in the case of pharmaceuticals and cosmetics, excipients, disintegrants, binders, surfactants, emulsifiers, plasticizers, wetting agents, lubricants, sugars, pH regulators, preservatives, flavors or Coloring agents and the like. In the case of foods and health foods, various nutrients, vitamins, flavors, coloring agents, antioxidants, flavor substances such as cheese and chocolate, or synthetic sweeteners are exemplified.
[0030]
The pharmaceutical composition according to the present invention may be orally in the form of syrup, powder, granule, pill, tablet, hard capsule, soft capsule, or suppository, injection, depending on the method and route of ingestion. It can be administered parenterally in the form of preparations, infusions and the like. In the case of cosmetics, crocetin can be added as appropriate to form creams, lotions, ointments, liquid preparations, pastes and the like. When crocetin is applied to food or health food, it can be provided in the form of granules, tablet confectionery, gum, candy, jelly, beverage, etc., but the form is not limited to the above.
[0031]
The amount of crocetin intake depends on the gender, age, health condition, etc. of the person taking the crocetin, and cannot be specified unconditionally. The dosage is desirably set to be 500 mg, preferably about 1 mg to 300 mg, more preferably about 2 mg to 100 mg. In the case of parenteral preparations such as injections and infusions, the dose of crocetin per adult per day is about 0.1 mg to 100 mg, preferably about 0.1 mg to 50 mg, more preferably about 0.5 mg to 10 mg. , It is desirable to set. In the case of skin cosmetics, crocetin is preferably contained in an amount of about 0.001 to 10% by mass based on the total mass of the skin cosmetics. In the case of foods and health foods, crocetin is generally added in an amount of about 0.00003 to 10% by weight, preferably about 0.01 to 5% by weight, based on the total weight of the food or health food.
The crocetin-containing medicine, skin cosmetic, cosmetic, food, and health food can be administered, used, or ingested once to a plurality of times per day.
[0032]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to examples.
[0033]
[Color value measurement method]
The measurement was carried out by the following method with reference to "Food Additives Other than Chemically Synthetic Products Voluntary Standard (Second Edition)", edited by the Japan Food Additives Association, "Gardenia Yellow".
The sample is precisely weighed and dissolved in Kolthoff buffer (50 mM Na 2 CO 3 -50 mM Na 2 B 4 O 7 , pH 10.0) so that the absorbance to be measured is in the range of 0.3 to 0.7. Make exactly 500 ml. If it is difficult to dissolve, dissolve it by ultrasonic treatment. 10 ml of the solution is accurately weighed, and Kolthoff's buffer (50 mM Na 2 CO 3 -50 mM Na 2 B 4 O 7 , pH 10.0) is added to 50 ml to prepare a test solution. Kolthoff said buffer (50mM Na 2 CO 3 -50mM Na 2 B 4 O 7, pH10.0) as a control, by measuring the absorbance A at the maximum absorption of 420nm near the length 1cm of the liquid layer, by the following equation Find the color value.
Color value (E 10% 1 cm ) = (A × 250) ÷ Sample collection amount (g)
[0034]
[Comparative Example 1]
300 ml of a mixed solution of methanol and water (1: 1) was added to 150 g of the crushed dried gardenia fruit, followed by stirring at room temperature for 3 hours, followed by suction filtration. The operation of adding 300 ml of a mixture of methanol and water (1: 1) to the extraction residue, stirring at room temperature for 30 minutes, and then performing suction filtration was repeated twice to obtain a total of about 900 ml of the extract as a filtrate. The extract was concentrated at 60 ° C. under reduced pressure using a rotary evaporator to obtain about 50 g of a concentrate containing crocin (color value (E 10% 1 cm 2 ) = 573).
The obtained concentrate and 17 g of a 40% by mass aqueous sodium hydroxide solution were mixed, and a hydrolysis reaction was performed at 50 ° C. for 3.5 hours with stirring. After completion of the reaction, the reaction solution was added to 420 ml of a 4% by mass aqueous solution of phosphoric acid to make the solution acidic, and then left at room temperature for about 3 hours.
The deposited precipitate was collected by centrifugation (10,000 × g, 10 minutes), and washing and centrifugation operations were repeated twice with 100 ml of water.
The obtained paste-like solid was vacuum-dried at 50 ° C. for 8 hours to obtain about 1.2 g of crocetin. Its color value (E 10% 1 cm 2 ) was about 12,500.
[0035]
[Example 1]
250 ml of methanol was added to 1 g of crocetin obtained in the same manner as in Comparative Example 1, and the mixture was stirred at 50 ° C. for 30 minutes. Next, the precipitate was collected by centrifugation (10,000 × g, 10 minutes), and the obtained paste-like solid was vacuum-dried at 50 ° C. for 8 hours to obtain about 0.32 g of purified crocetin. Its color value (E 10% 1 cm 2 ) was about 30,100.
[0036]
[Example 2]
250 ml of a mixed solution of methanol and water (4: 1) was added to 1 g of crocetin obtained in the same manner as in Comparative Example 1, and the mixture was stirred at 50 ° C. for 30 minutes. Next, the precipitate was recovered by centrifugation (10,000 × g, 10 minutes), and the obtained paste-like solid was vacuum-dried at 50 ° C. for 8 hours to obtain about 0.39 g of purified crocetin. Its color value (E 10% 1 cm 2 ) was about 27,000.
[0037]
[Example 3]
To 1 g of crocetin obtained in the same manner as in Comparative Example 1, 18 ml of dimethylformamide was added and dissolved at 80 ° C. The insolubles were filtered with a quantitative filter paper (No. 5C, Advantech Toyo) and the filtrate was left at 10 ° C. for 3 days. Next, the mother liquor containing the generated crocetin crystals was passed through a glass filter No. 2 (see FIG. 1). After filtration with 3, and washing with 20 ml of methanol, the crystals were dried in vacuo at 50 ° C. to obtain about 0.16 g of purified crocetin. Its color value (E 10% 1 cm 2 ) was about 34,200.
[0038]
[Example 4]
6.5 ml of dimethylformamide was added to 0.15 g of the purified crocetin obtained in Example 1, and the mixture was stirred and dissolved at 80 ° C. The insolubles were quantitatively determined using filter paper No. The mixture was filtered at 5C and left at 10 ° C for 3 days. Next, the mother liquor containing the generated crocetin crystals was passed through a glass filter No. 2 (see FIG. 1). After filtration with 3 and washing with 10 ml of methanol, the crystals were dried in vacuo at 50 ° C. to obtain about 0.09 g of purified crocetin. Its color value (E 10% 1 cm 2 ) was about 35,700.
[0039]
[Test Example 1]
The measurement of the melting point and the elemental analysis of the crystal obtained in Example 4 were requested to an external organization. The results are shown below.
Melting point: 285 ° C to 286 ° C
Elemental analysis: carbon 72.60%, hydrogen 7.51%, oxygen 19.89%
From this result, it was confirmed that the crystal almost agreed with the literature value.
[0040]
【The invention's effect】
By the method of the present invention, high-purity crocetin can be easily obtained industrially and can be preferably used for applications such as cosmetics, skin cosmetics, and pharmaceuticals. In addition, the refinement has reduced unpleasant tastes and odors as much as possible, so that it can be applied to a wider range of foods or health foods.