JP2004254707A - 接触浸潤力を有するrnaウイルスベクター - Google Patents
接触浸潤力を有するrnaウイルスベクター Download PDFInfo
- Publication number
- JP2004254707A JP2004254707A JP2004160396A JP2004160396A JP2004254707A JP 2004254707 A JP2004254707 A JP 2004254707A JP 2004160396 A JP2004160396 A JP 2004160396A JP 2004160396 A JP2004160396 A JP 2004160396A JP 2004254707 A JP2004254707 A JP 2004254707A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rna
- cell
- virus
- gene
- crna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 0 CC(*(C1CC1)=N)C(CCCCC1)=NCC=CC(C2CC*=C)[C@@]2C2**C1C(C*)*CCC2 Chemical compound CC(*(C1CC1)=N)C(CCCCC1)=NCC=CC(C2CC*=C)[C@@]2C2**C1C(C*)*CCC2 0.000 description 2
Images
Abstract
本発明は、遺伝子治療に利用できるRNAウイルスベクターを提供することを課題とする。
【解決手段】
本発明は、遺伝子治療に有用なRNAウイルスベクターを提供する。本発明のRNAウイルスベクターは、細胞感染能、RNA自律複製能および接触浸潤力を有するが、伝播力を有さない。本発明のRNAウイルスベクターを利用することにより、遺伝子治療を行う際に、従来よりも効率的に遺伝子導入及び細胞移植を行うことが可能となった。
【選択図】なし
Description
センダイウイルス由来M遺伝子のサブクローニング
以下に実施するすべてのライゲーション反応、末端平滑化反応および脱リン酸化処理にはTakara Ligation Kit Ver.2(宝酒造社、京都)、Takara Blunting Kit(宝酒造社)およびCIAP(宝酒造社)をそれぞれ用い、製品のプロトコルに従うことにより行なった。また、塩基配列の決定には、サンガー法(F.Sanger,Science,214:1205-1210,1981)を用いた。
49merの合成オリゴヌクレオチド5'-ggcgatatctatagattccctaagttctcatagtagatgtgcaccggca-3'(EAリンカーF)(配列番号:1)および5'-tgccggtgcacatctactatgagaacttagggaatctatagatatcgcc-3'(EAリンカーR)(配列番号:2)を合成し、アニール処理後pCR2.1(インビトロジェン社)に挿入することによりpCR-EALを作製した。また、挿入断片の塩基配列が設計どおりであることを確認した。
M遺伝子中の制限酵素部位、BsgI部位中に変異を持ち、M遺伝子の読み枠中に終止コドンが出現するように設計したオリゴヌクレオチドM-1(5'-ttaaaggcctaaaccgatctcagaattacg-3')(配列番号:3)およびM-2(5'-tatcattccctgtctcagcctgcc-3')(配列番号:4)をPCR プライマーとして用い、pUC18/T7(+)HVJRzを鋳型としてPCR反応を行った。PCR産物をpCR2.1にクローニングし、pCR-Mを得た(図6)。
野生型(WT)、M欠失型(dMEA)、M欠損型(dM)の各cDNAからウイルス粒子を再構成するために以下の方法を用いた。
ウイルスが再構成されたか否かを評価するために、発育鶏卵を用いた検定を行なった。実施例4において得られた、200μlのPBSに懸濁した細胞を1x107細胞/mlの溶液とし、これを順次PBSにて希釈し、1x106、1x105細胞/mlの細胞懸濁液を作製した。この懸濁液を100μlずつ発育鶏卵の10日卵に気室側より24Gの注射針を用いて接種した。
CV-1細胞を、6穴プレート(コーニング社、マイクロプレート6well)に5x105細胞ずつ播き、終夜培養した。
大きさ、形状ともに野生型と異なるこれらのプラークが、M欠失型、M欠損型cDNAに由来したものかどうかを、M蛋白質の有無で確認した。すなわち、これらのプラークを、抗Mモノクローナル抗体で染色し蛍光を観察した。
アミドブラックでプラークを染色後、その位置を肉眼で観察し、マーカーペンでマーキングをした。プラークを形成した6穴プレートを、各穴1mlのPBSで一回洗浄後、40倍に希釈した抗Mモノクローナル抗体を200μl重層し、37℃のCO2インキュベーター内で45分間保温した。各穴を1mlのPBSで三回洗浄し、100倍に希釈したFITC結合抗マウスIgG抗体(コスモバイオ社)を200μl重層し、同様に45分間保温した。1mlのPBSで三回洗浄後、各穴1mlのPBSを重層し、蛍光実体顕微鏡下であらかじめマーキングしたプラークが染色されているかどうかを観察した。
Claims (14)
- 接触浸潤力及びRNA自律複製能に関わる遺伝子群を有するが、伝播力に関わる遺伝子群が欠失または不活化された、細胞感染能、RNA自律複製能および接触浸潤力を有するが伝播力を有さない複合体を形成するためのRNA。
- エンベロープとウイルスコアとの両者と相互作用をする蛋白質をコードする遺伝子が欠失または不活化されていることを特徴とする、請求項1記載のRNA。
- エンベロープとウイルスコアとの両者と相互作用をする蛋白質がマトリックス蛋白質(M蛋白質)であることを特徴とする、請求項2記載のRNA。
- RNAが非分節型(−)鎖RNAウイルス由来であることを特徴とする、請求項1記載のRNA。
- RNAがセンダイウイルス由来で、M蛋白質をコードする遺伝子が欠失または不活化されていることを特徴とする、請求項1記載のRNA。
- 外来性遺伝子を含むことを特徴とする、請求項1〜5のいずれかに記載のRNA。
- 請求項1〜6のいずれかに記載のRNAを含有する、該RNAを複製しかつ接触浸潤により該RNAを別の細胞に伝達することができる細胞。
- 請求項1〜6のいずれかに記載のRNAを、試験管内または細胞内で転写することのできる鋳型DNAを含むDNA。
- 請求項1〜6のいずれかに記載のRNAと、核酸を含まないウイルス構造体とを含む複合体で、細胞感染能、RNA自律複製能および接触浸潤力を有するが伝播力を有さない複合体。
- a)請求項1〜6のいずれかに記載のRNAもしくは該RNAのcRNA、または該RNAもしくは該cRNAを生合成しうるユニット、及び
b)該RNAもしくは該cRNAの複製に必要な酵素群、または該酵素群を生合成しうる ユニット
を含むキット。 - a)のユニットが請求項5または6に記載のRNAもしくは該RNAのcRNA、または該RNAもしくは該cRNAを生合成しうるユニット、及び
b)のユニットがセンダイウイルスのNP, P/C, L蛋白質のすべて、または該蛋白質群を生合成しうるユニット
である、請求項10記載のキット。 - 宿主内に、
a)請求項1〜6のいずれかに記載のRNAもしくは該RNAのcRNA、または該RNAもしくは該cRNAを生合成しうるユニット、及び
b)該RNAもしくは該cRNAの複製に必要な酵素群、または該酵素群を生合成しうる ユニット
を導入することを含む、請求項9に記載の複合体の製造方法。 - a)のユニットが請求項5または6に記載のRNAもしくは該RNAのcRNA、または該RNAもしくは該cRNAを生合成しうるユニット、及び
b)のユニットがセンダイウイルスのNP, P/C, L蛋白質のすべて、または該蛋白質群を生合成しうるユニット
である、請求項12記載の製造方法。 - 請求項7に記載の細胞を非ヒト哺乳動物に接種し、該細胞が接触する細胞に外来遺伝子を発現させる方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004160396A JP4350593B2 (ja) | 1998-08-11 | 2004-05-31 | 接触浸潤力を有するrnaウイルスベクター |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP22739898 | 1998-08-11 | ||
JP2004160396A JP4350593B2 (ja) | 1998-08-11 | 2004-05-31 | 接触浸潤力を有するrnaウイルスベクター |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1999551521 Division | 1999-08-10 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009091936A Division JP2009148301A (ja) | 1998-08-11 | 2009-04-06 | 接触浸潤力を有するrnaウイルスベクター |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004254707A true JP2004254707A (ja) | 2004-09-16 |
JP4350593B2 JP4350593B2 (ja) | 2009-10-21 |
Family
ID=33133308
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004160396A Expired - Fee Related JP4350593B2 (ja) | 1998-08-11 | 2004-05-31 | 接触浸潤力を有するrnaウイルスベクター |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4350593B2 (ja) |
-
2004
- 2004-05-31 JP JP2004160396A patent/JP4350593B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4350593B2 (ja) | 2009-10-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR100754091B1 (ko) | 자율 복제 능력을 갖는 (-)쇄 rna 바이러스 벡터 | |
Casjens et al. | Virus assembly | |
RU2581910C2 (ru) | Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов | |
JP2019213528A (ja) | 祖先ウイルス配列を予測する方法およびその使用 | |
JP5679620B2 (ja) | ワクチンとしての複製欠損rna−ウイルス | |
WO1997016539A1 (fr) | Virus sendai recombinant | |
NZ272883A (en) | Recombinant viral vectors comprising a promoter, recombinase gene and a poly(a) sequence or two recombinase recognizing sequences, origin of replication, promoter, foreign gene and poly(a) sequence and their use in transducing animal cells | |
Ayllon et al. | Rescue of recombinant Newcastle disease virus from cDNA | |
JP2000509268A (ja) | Celoウイルス | |
JP2009148301A (ja) | 接触浸潤力を有するrnaウイルスベクター | |
JP4350593B2 (ja) | 接触浸潤力を有するrnaウイルスベクター | |
JPWO2007007921A1 (ja) | 分節ゲノム型組換えモノネガウイルスベクター | |
JP2010022338A (ja) | ボルナ病ウイルスを利用するベクター及びその利用 | |
JPS6244178A (ja) | 組換えワクチニアウイルス | |
JP3732204B2 (ja) | 自律複製能を有する(−)鎖rnaウイルスベクター | |
JP2009195136A (ja) | 新規な組換え七面鳥ヘルペスウイルス、及びそれを利用した家禽用ワクチン | |
JP2001275684A (ja) | 組換え体イヌジステンパーウイルスおよびその作製方法 | |
CA2236113C (en) | Negative strand rna viral vector having autonomous replication capability | |
KR20220149476A (ko) | 바이러스 백신 생산용 조류 세포 제조용 조성물 및 바이러스 저항성 조류 세포 제조용 조성물 | |
Rennick et al. | Modification of measles virus and application to pathogenesis studies | |
Kong | Establishment of an immortal turkey turbinate cell line for propagation of avian metapneumovirus | |
JP2005102702A (ja) | 組換え体センダイウイルス | |
JP2004254708A (ja) | 組換え体センダイウイルス | |
JP2006051036A (ja) | 組換え体センダイウイルス | |
MXPA04012878A (es) | Caracterizacion y aislamiento de cepas variantes del virus del sindrome del ojo azul (soa) y aislamiento del gen hn de las mismas. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060720 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080416 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080530 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20090204 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090306 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090331 |
|
A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20090416 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090706 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090722 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120731 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120731 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130731 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |