JP2004215567A

JP2004215567A - Microorganism belonging to genus bacillus and controlling agent using the same

Info

Publication number: JP2004215567A
Application number: JP2003006366A
Authority: JP
Inventors: Yoshikatsu Kawamoto; 義勝川本
Original assignee: KANSAI KK
Current assignee: KANSAI KK
Priority date: 2003-01-14
Filing date: 2003-01-14
Publication date: 2004-08-05
Anticipated expiration: 2023-01-14
Also published as: JP4189224B2

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a microorganism having either property of the property of exhibiting antimicrobial activities against two or more plant pathogenic microbes, or the property of growing in the environment near to the growth environment of a plant such as a crop; and to provide a controlling agent capable of controlling diseases of the plant caused by two or more plant pathogenic microbes, an yeast of a fungus, an insect pest or the like. <P>SOLUTION: The microorganism belonging to the genus Bacillus has an ability for suppressing the growth of the plant pathogenic disease. The controlling agent of an organism harmful to the plant contains at least one kind of the microorganism, a cultured product thereof and an extract thereof as an active ingredient. The method for controlling the harmful organism involves feeding at least one kind of the microorganism, the cultured product and the extract to a soil for growing the plant. The nucleic acid having a specific base sequence is also provided. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO&NCIPI

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、有害生物、特に、植物病原菌の生育の抑制能を有する微生物、該微生物を用いた防除剤等に関する。さらに詳しくは、本発明は、有害生物、特に、植物病原菌の生育を抑制する物質を産生する微生物、植物病原菌の生育を抑制すること及び／又は害虫を忌避することができる防除剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近代農業、特に、大規模な生産を目的とする農業においては、虫食いや病変部等がない見栄えのよい作物を得、かつ高収量を達成するために、化学合成農薬が使用されている場合があり、作物への該化学合成農薬の残留、該化学合成農薬による土壌、水等の環境の汚染等が懸念されている。そのため、いわゆる無農薬野菜、減農薬野菜等に注目が集まっている。
【０００３】
しかしながら、無農薬栽培には、手間がかかること、病害虫による被害を被りやすく、そのため、収量も減ること等の欠点があり、無農薬栽培を行なっている農家は、全体の数％にとどまっている。したがって、実質的に必要となる手間を減らす観点から、ほとんど化学合成農薬に頼っているのが現状である。
【０００４】
一方、化学合成農薬の代わりに、微生物を用いて、タバコ立枯病の病原菌、ナス科植物青枯病の病原菌、芝草病原菌、病原性糸状菌等の生育の抑制が試みられている。
【０００５】
具体的には、エンテロバクター属に属する微生物、例えば、タバコ根部から分離されたエンテロバクタークロアカエＨ１８４株（ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅＨ１８４）（ＦＥＲＭＢＰ−５０５７）の培養物は、タバコ植物の根部やナス科植物の根部に灌注することにより、タバコ立枯病の病原菌、ナス科植物青枯病の病原菌等の防除に用いられうることが知られている（特許文献１、特許文献２）。しかしながら、前記特許文献１及び特許文献２に記載のエンテロバクター属に属する微生物は、青枯病菌に対する拮抗作用を示すにすぎず、他の病原菌に対する拮抗作用を有するかどうかは不明である。
【０００６】
また、ストレプトミセスアルブラスは、スクレロティニア属、リゾクトニア属、ピシウム属、カーブラリア属、ゴイマイノマイセス属、コレットリカム属等に拮抗性を有しており、植物病原菌防除材等に利用されうることが知られている（特許文献３）。しかしながら、前記特許文献３に記載の植物病原菌防除材等は、芝草における病害に適用するためのものであり、他の植物に対する病原菌に適用できるかどうかは不明である。
【０００７】
さらに、バチルス属に属し、かつアフラトキシン分解性を有する微生物、具体的には、アフラトキシン分解性を有するバチルスサブチルスＤＢ９０１１株、及びバチルスプルミルスに属し、かつアフラトキシン分解性を有する微生物は、アフラトキシン生成能を有する真菌、特に、病原性糸状菌に対する発育抑制剤として使用されることが知られている（特許文献４、特許文献５）。特許文献４及び特許文献５に記載の発育抑制剤は、真菌、なかでも、アフラトキシン生成能を有する真菌、特に、病原性糸状菌の発育を抑制するものである。
【０００８】
【特許文献１】特開平９−３７７７５号公報段落番号００１０、表３及び表４
【特許文献２】特開平１０−１３９６１０号公報表５
【特許文献３】特開平８−２４２８４６号公報段落番号００４２、００４９
【特許文献４】特開平５−１４６２８９号公報段落番号００４６〜００５２
【特許文献５】特開平５−２６８９４５号公報段落番号００４８〜００５０
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、有害生物、特に、植物病原菌、真菌の酵母の生育を抑制する性質、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対する抗菌活性を発揮する性質、作物等の植物の生育環境に近い環境に生育する性質の少なくともいずれかの性質を有する微生物を提供することを目的とする。さらに、本発明は、広範囲、例えば、複数又はそれ以上の有害生物、具体的には、植物病原菌、真菌の酵母、害虫等により引き起こされる植物の病害を防ぐことが可能な防除剤を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明の要旨は、
〔１〕植物病原菌の生育の抑制能を有する、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔２〕植物病原菌が、アスペルギルスフラバスリンクフリーズエフグレーバー（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓＬｉｎｋＦｒｉｅｓｆｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルスフラバスリンクフリーズバー．オリゼ（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓＬｉｎｋＦｒｉｅｓｖａｒ．ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルスナイジャーファンティーゲム（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒｖａｎＴｉｅｇｈｅｍ）、ムコルヘマリスヴェーマーエフ．ヘマリス（ＭｕｃｏｒｈｉｅｍａｌｉｓＷｅｈｍｅｒｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウムクリソゲナムゾーム（ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍＴｈｏｍ）、リゾプスオリゼウェントアンドプリンセンギーリングズ（ＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅＷｅｎｔ＆ＰｒｉｎｓｅｎＧｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダアルビカンス（ロビン）バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ（Ｒｏｂｉｎ）Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカスネオフォーマンス（サンフェリス）ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ（Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ）Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキアメンブラニファシエンス（イー．シー．ハンセン）イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａｍｅｍｂｒａｎｉｆａｃｉｅｎｓ（Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ）Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセスセルビジエマイヤーイーエクッスイー．シー．ハンセン〔ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＭｅｙｅｒｅｘＥ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、リゾクトニアソラニケーンＯ−２８株（ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉｋｕｅｈｎＯ−２８）、ロセリニアネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｎｅｃａｔｒｉｘ）、フザリウムオキシスプラムエフ．スピーシーズスプナシエＯ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｒｕｍｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅＯ−２７）、及びフザリウムオキシスプラムエフ．スピーシーズラディシス−ライコペルシチＯ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｒｕｍｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉＯ−３４）からなる群より選ばれた少なくとも１種の微生物である、前記〔１〕記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔３〕ＦＥＲＭＰ−１９１７８、ＦＥＲＭＰ−１９１７９及びＦＥＲＭＰ−１９１８０からなる群より選ばれた微生物である、前記〔１〕又は〔２〕記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔４〕下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の馴化培地、及び
ｃ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有してなる、植物に対する有害生物の防除剤、
〔５〕キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分をさらに含有してなる、前記〔４〕記載の防除剤、
〔６〕害虫忌避成分が、キク科植物の抽出物又はショウガ植物の抽出物である、前記〔５〕記載の防除剤、
〔７〕下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の培養物、及び
ｃ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給することを特徴とする、有害生物の防除方法、
〔８〕キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分を植物又は該植物を生育させるための土壌にさらに供給する、前記〔７〕記載の有害生物の防除方法、
〔９〕有害生物が、アスペルギルスフラバスリンクフリーズエフグレーバー（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓＬｉｎｋＦｒｉｅｓｆｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルスフラバスリンクフリーズバー．オリゼ（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓＬｉｎｋＦｒｉｅｓｖａｒ．ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルスナイジャーファンティーゲム（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒｖａｎＴｉｅｇｈｅｍ）、ムコルヘマリスヴェーマーエフ．ヘマリス（ＭｕｃｏｒｈｉｅｍａｌｉｓＷｅｈｍｅｒｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウムクリソゲナムゾーム（ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍＴｈｏｍ）、リゾプスオリゼウェントアンドプリンセンギーリングズ（ＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅＷｅｎｔ＆ＰｒｉｎｓｅｎＧｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダアルビカンス（ロビン）バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ（Ｒｏｂｉｎ）Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカスネオフォーマンス（サンフェリス）ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ（Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ）Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキアメンブラニファシエンス（イー．シー．ハンセン）イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａｍｅｍｂｒａｎｉｆａｃｉｅｎｓ（Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ）Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセスセルビジエマイヤーイーエクッスイー．シー．ハンセン〔ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＭｅｙｅｒｅｘＥ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、リゾクトニアソラニケーンＯ−２８株（ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉｋｕｅｈｎＯ−２８）、ロセリニアネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｎｅｃａｔｒｉｘ）、フザリウムオキシスプラムエフ．スピーシーズスプナシエＯ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｒｕｍｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅＯ−２７）、フザリウムオキシスプラムエフ．スピーシーズラディシス−ライコペルシチＯ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｒｕｍｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉＯ−３４）、エンドウヒゲナガアブラムシ及びコナガからなる群より選ばれた少なくとも１種である、前記〔７〕又は〔８〕記載の有害生物の防除方法、並びに
〔１０〕配列番号：１〜３いずれかに示される塩基配列を有する核酸、
に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の微生物は、肥料から、本発明者らにより単離された微生物であり、植物病原菌の生育の抑制能を有するバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物である。
【００１２】
本発明の微生物は、植物病原菌の生育の抑制能を有するという優れた性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、植物病原菌を防除することができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の微生物によれば、植物病原菌の生育を抑制し、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を発揮する。さらに、本発明の微生物は、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対する抗菌活性を発揮するという優れた性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の微生物は、植物の栽培時に通常用いられる肥料中から単離された微生物であり、作物等の植物の生育環境に近い環境に生育する性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、植物の生育等に及ぼす負の影響（例えば、生育阻害等）が実質的にないという優れた効果を発揮する。
【００１３】
本発明の微生物は、下記微生物学的性質：
（１）桿菌
（２）細胞の大きさ：０．７〜１．０μｍ×０．８〜２．０μｍ
（３）多形性：無
（４）運動性：有（周毛）
（５）胞子の有無：有（中央）
（６）グラム染色：陽性
（７）ＭＲテスト：陽性
（８）インドール産生：無
（９）クエン酸の利用：ｋｏｓｅｒ陰性、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ陽性
（１０）無機窒素源資化性：硝酸塩を資化するが、アンモニウム塩は資化しない
（１１）ウレアーゼ活性：無
（１２）オキシダーゼ活性：無
（１３）カタラーゼ活性：有
（１４）生育の範囲ｐＨ：４．０〜８．５
（１５）生育の範囲温度：３０〜５０℃
（１６）好気性
（１７）Ｏ−Ｆテスト：陰性
を有する。本発明の微生物としては、具体的には、バチルススピーシーズ（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．）Ａ−３、バチルススピーシーズＡ−７及びバチルススピーシーズＡ−１９にさらに分類される。なお、本発明の微生物のさらに詳細な微生物学的性質を、後述の実施例の表１〜表４に示す。
【００１４】
本発明の微生物であるバチルススピーシーズＡ−３は、１６ＳｒＤＮＡが、配列番号：１に示される塩基配列を含むものであり、バチルススピーシーズＡ−７は、１６ＳｒＤＮＡが、配列番号：２に示される塩基配列を含むものであり、バチルススピーシーズＡ−１９は、１６ＳｒＤＮＡが、配列番号：３に示される塩基配列を含むものである。
【００１５】
なお、本発明の微生物は、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．Ａ−３、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．Ａ−７及びＢａｃｉｌｌｕｓｓｐ．Ａ−１９と命名・表示され、それぞれ、ＦＥＲＭＰ−１９１７８、ＦＥＲＭＰ−１９１７９及びＦＥＲＭＰ−１９１８０として、寄託日：２００２年１２月２６日、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター〔日本国茨城県つくば市東１−１−１中央第６（郵便番号３０５−８５６６）〕に寄託されている。
【００１６】
本発明の微生物により生育を抑制する対象となる植物病原菌は、植物に感染し、病害を引き起こす細菌であり、具体的には、例えば、ほうれん草株腐病の病原菌として知られているリゾクトニアソラニケーン〔Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉｋｕｅｈｎ（例えば、Ｏ−２８株等）〕、ほうれん草萎凋病の病原菌として知られているフザリウムオキシスポラムエフ．スピーシーズスピナシエＯ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｒｕｍｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅＯ−２７）、果樹紋羽病の病原菌として知られているロセリニアネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｎｅｃａｔｒｉｘ）、トマト根腐萎凋病の病原菌として知られているフザリウムオキシスプラムエフ．スピーシーズラディシス−ライコペルシチＯ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｒｕｍｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉＯ−３４）、さらには、アスペルギルスフラバスリンクフリーズエフグレーバー（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓＬｉｎｋＦｒｉｅｓｆｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルスフラバスリンクフリーズバー．オリゼ（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓＬｉｎｋＦｒｉｅｓｖａｒ．ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルスナイジャーファンティーゲム（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒｖａｎＴｉｅｇｈｅｍ）、ムコルヘマリスヴェーマーエフ．ヘマリス（ＭｕｃｏｒｈｉｅｍａｌｉｓＷｅｈｍｅｒｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウムクリソゲナムゾーム（ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍＴｈｏｍ）、リゾプスオリゼウェントアンドプリンセンギーリングズ（ＲｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅＷｅｎｔ＆ＰｒｉｎｓｅｎＧｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダアルビカンス（ロビン）バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ（Ｒｏｂｉｎ）Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカスネオフォーマンス（サンフェリス）ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ（Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ）Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキアメンブラニファシエンス（イー．シー．ハンセン）イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａｍｅｍｂｒａｎｉｆａｃｉｅｎｓ（Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ）Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセスセルビジエマイヤーイーエクッスイー．シー．ハンセン〔ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＭｅｙｅｒｅｘＥ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕等が挙げられる。
【００１７】
本発明の微生物の生育範囲温度は、具体的には、バチルススピーシーズＡ−３については、２５〜４５℃であり、好ましくは、３７〜４０℃であり、バチルススピーシーズＡ−７については、２５〜４５℃であり、好ましくは、３７〜４０℃であり、バチルススピーシーズＡ−１９については、２５〜５０℃である。
【００１８】
また、本発明の微生物の生育範囲ｐＨは、具体的には、バチルススピーシーズＡ−３については、ｐＨ４〜１０であり、好ましくは、４〜７であり、バチルススピーシーズＡ−７については、ｐＨ４〜１０であり、好ましくは、ｐＨ４〜８であり、バチルススピーシーズＡ−１９については、４〜８、好ましくは、４〜７である。
【００１９】
本発明の微生物の培養に用いられる培地としては、前記生育範囲ｐＨであり、かつ前記窒素源、炭素源、補助成分等を含有する培地であればよい。前記培地としては、具体的には、例えば、ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号０５７０９、培地１リットルあたりの組成：ポテト抽出液末４．０ｇ、ブドウ糖２０ｇ、寒天１５ｇ（ｐＨ６．０）〕、ＮｕｔｒｉｅｎｔＢｒｏｔｈ〔オキソイド（Ｏｘｏｉｄ）社製、カタログ番号２５０４２７、培地１リットルあたりの組成：Ｌａｂ−Ｌｅｍｃｏｐｏｗｄｅｒ（商品名）１ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス２ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、寒天１５ｇ（ｐＨ６．０）〕等が挙げられる。なお、前記培地、例えば、前記ポテトデキストロース培地及びＮｕｔｒｉｅｎｔＢｒｏｔｈを液体培地として用いる場合、寒天を含まない組成とすればよい。
【００２０】
本発明の微生物による植物病原菌の生育の抑制能は、例えば、植物病原菌を播種した固体培地上に、本発明の微生物の培養物を供し、阻止円の形成の有無、阻止円の大きさを観察する評価方法により、評価されうる。前記固体培地としては、例えば、前記ポテトデキストロース培地等が挙げられ、好ましくは、植物病原菌の生育及び本発明の微生物の生育が良好であり、かつ阻止円の形成が確認可能な培地であることが望ましい。
【００２１】
なお、本発明の微生物による前記植物病原菌の生育の抑制能の発現は、培養条件、具体的には、培養温度、培養ｐＨ、培養時間、培養時における振盪度等について至適化することにより、最適化されうる。かかる培養条件の至適化は、種々の培養条件下に培養して得られた各種培養物について、前記評価方法により、阻止円の大きさを評価することにより容易に行なわれうる。
【００２２】
本発明の微生物は、肥料、コンポスト化過程にある堆積物を滅菌水等に懸濁し、ついで、得られた懸濁液を前記培地に塗布して、培養し、得られたコロニーについて、前記植物病原菌の生育を抑制すること、後述の実施例の表１〜表４に示される微生物学的性質等を指標として単離して、得ることができる。
【００２３】
本発明の微生物によれば、前記したように、植物病原菌の生育を抑制することができるため、本発明の微生物、その馴化培地又はその抽出物を有害生物等に対する防除剤として用いることができる。したがって、本発明により、防除剤が提供されうる。
【００２４】
本発明の防除剤は、下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の馴化培地、及び
ｃ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有する。したがって、本発明の防除剤によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給、種子への供給等の簡便な手法により、有害生物により引き起こされる植物の病害等を防ぐことができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の防除剤によれば、土壌に供給することにより、植物病原菌の生育を抑制し、それにより、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を発揮する。
【００２５】
本発明の防除剤は、キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分をさらに含有してもよい。
【００２６】
本発明の防除剤によれば、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができる。したがって、本発明の防除剤は、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を発揮する。
【００２７】
本発明の防除剤により防除されうる有害生物としては、前記植物病原菌等の微生物；コナガ〔Ｐｌｕｔｅｌｌａｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ（Ｌｉｎｎａｕｓ）〕、エンドウヒゲナガアブラムシ〔Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎｐｉｓｕｍ（Ｈａｒｒｉｓ）〕等が挙げられる。
【００２８】
前記「供給」としては、散布、混合、塗布、浸漬等が挙げられる。
【００２９】
本明細書においては、前記ａ）の「微生物」とは、培養後に得られた培養液又は微生物細胞自体をいう。前記ａ）の微生物は、本発明の微生物を、前述の適切な培地で、適切な培養条件下に培養することにより得られうる。
【００３０】
本明細書においては、前記ｂ）の「馴化培地」とは、培養後の培養液から、微生物細胞を除去して得られた培養産物をいう。前記ｂ）の馴化培地は、例えば、濾過、遠心分離等により、培養液から、微生物細胞を除去することにより得られうる。
【００３１】
本明細書においては、前記ｃ）の「抽出物」とは、前記ａ）の微生物又は前記ｂ）の馴化培地から抽出された産物をいう。前記ｃ）の抽出物は、例えば、
（Ｉ）前記微生物細胞を、リゾチーム等の溶菌性酵素、超音波、圧力、凍結等の手段により破砕し、得られた破砕物を慣用の精製法（例えば、塩析、カラムクロマトグラフィー、有機溶媒抽出等）により精製すること、
（ＩＩ）前記馴化培地を慣用の精製法（例えば、塩析、カラムクロマトグラフィー、有機溶媒抽出等）により精製すること、
等により得られうる。
【００３２】
前記キク科植物としては、アーティチョーク、防虫菊等が挙げられる。また、ショウガ科植物としては、月桃等が挙げられる。
【００３３】
前記キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分としては、例えば、前記キク科植物又はショウガ科植物からアルコール抽出、熱水抽出、水蒸気蒸留方法等により抽出された抽出液（すなわち、エタノール抽出物、熱水抽出物、水蒸気蒸留抽出物等）等が挙げられる。具体的には、アーティチョークのエタノール抽出物、アーティチョークの熱水抽出物、月桃のエタノール抽出物、月桃の熱水抽出物、月桃の水蒸気蒸留抽出物等が挙げられる。
【００３４】
本発明の防除剤中の前記ａ）〜ｃ）の有効成分の含有量は、植物病原菌の生育を抑制するに十分な量であればよい。特に限定されないが、例えば、本発明の防除剤中の前記ａ）〜ｃ）の有効成分の量としては、微生物の量として、１×１０^２〜１×１０^３０ｃｆｕ、好ましくは、１×１０^３〜１×１０^１５ｃｆｕ、より好ましくは、１×１０^５〜１×１０^１２ｃｆｕに相当する量等が挙げられる。また、使用時に、水、培地成分等で希釈して用いるためには、さらに、濃縮されたものであってもよい。
【００３５】
前記害虫忌避成分をさらに含有した本発明の防除剤中における該害虫忌避成分の含有量は、害虫忌避効果を発揮させるに十分な量であればよい。
【００３６】
本発明の防除剤の供給方法としては、例えば、用途に適した濃度で前記ａ）〜ｃ）の有効成分を含有した防除剤、又は用途に適した濃度で前記ａ）〜ｃ）の有効成分と前記害虫忌避成分とを含有した防除剤を、じょうろや噴霧器等を用いて、作物の苗、種子等を植える前の土壌に供給すること、作物の苗、種子等に直接供給すること等が挙げられる。本発明の防除剤を供給した土壌は、土壌病害菌の生育が抑制され、有用微生物の多く存在する環境となり土壌病害の起こりにくい土壌となる。
【００３７】
また、本発明の防除剤は、作物の種類及びその生育時期、植物病原菌の種類及びその活動時期、害虫の種類及びその発生時期等に合わせて施用されうる。
【００３８】
なお、本発明の防除剤の防除効果の評価は、例えば、
（ｉ）防除剤の供給による植物病原菌に対する阻止円の形成の有無又は該阻止円の大きさの測定を行なう評価方法、
（ｉｉ）防除剤を塗布した葉等に集まる害虫の有無又は害虫の死虫率の測定を行なう評価方法、
等により行なわれうる。ここで、前記（ｉ）の評価方法においては、阻止円を形成することが、該防除剤が、防除効果を有することの指標となり、阻止円の大きさが、防除効果の大きさに比例する。また、前記（ｉｉ）の評価方法においては、防除剤を塗布した葉等に害虫が集まらないこと及び害虫が死に至ることが、該防除剤が、防除効果を有することの指標となる。
【００３９】
本発明の微生物によれば、有害生物の防除方法が提供されうる。本発明の防除方法は、前記ａ）〜ｃ）からなる群より選ばれた少なくとも１種を、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給することを特徴とする方法である。本発明の防除方法においては、キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分を植物又は該植物を生育させるための土壌にさらに供給してもよい。
【００４０】
本発明の防除方法において、前記ａ）〜ｃ）の供給量及び前記害虫忌避成分の供給量は、植物の種類、植物への供給箇所の大きさ、植物を生育させるための土壌の面積、防除対象の微生物の種類、防除対象の害虫の種類等により適宜設定することができる。前記ａ）〜ｃ）の供給量は、例えば、ほうれん草株腐れ病病原菌に対しては、土壌１ｍ^３あたり、微生物の量として、１×１０^３〜１×１０^１５ｃｆｕ、好ましくは、１×１０^５〜１×１０^１２ｃｆｕとなる量であればよく、他の病原菌に対しても同様の量であればよい。また、前記害虫忌避成分の供給量は、前記害虫忌避成分を防除剤１Ｌ中２．５ｇ（乾燥重量）含有する場合、水により、５００〜１０，０００倍の濃度とし、防除効果を発揮しうる量となるように、土壌又は植物に撒布すればよい。
【００４１】
本発明の防除方法において、前記ａ）〜ｃ）と前記害虫忌避成分とは、前記防除剤として、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給してもよい。
【００４２】
植物又は該植物を生育させるための土壌への前記ａ）〜ｃ）と前記害虫忌避成分との供給は、散布、混合、塗布、浸漬等により行なわれうる。具体的には、特に限定されないが、例えば、
− 本発明の微生物の培養液を、作物を栽培する前の土壌に混和、又は噴霧器により土壌に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地を、噴霧器により、作物が植えられた土壌又は作物に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地を結晶化又は粉末化させて得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は作物が植えられた土壌に撒布すること、
−本発明の微生物の培養液を、ふすま、もみがら、土壌改良剤に添加し、固定させて得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は該土壌に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地と、キク科植物又はショウガ科植物から、エタノール抽出液又は熱水抽出液とを混合して得られた防除剤又は、該馴化培地とエタノール抽出液又は熱水抽出液とのそれぞれを別々に、噴霧器を用いて、害虫の発生しやすい箇所に撒布するか、あるいは、作物又は土壌に撒布すること
等が挙げられる。
【００４３】
【実施例】
以下、本発明を実施例等により詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例等により限定されるものではない。
【００４４】
実施例１
（１）供試試料の調製
株式会社カンサイ倉橋工場内のコンポスト化過程にある堆積物から１ヵ所あたり約１００ｇの堆積物を採取した。採取した堆積物のうち約１ｇと、滅菌生理食塩水１０ｍｌとを、２６ｍｌ容の試験管に入れた。得られた混合物を、ボルテックスミキサーで約５分間混合し、その後、２０分間室温（約２５℃）で放置し、１０％試料含有懸濁液（供試試料）を得た。得られた供試試料を、植物病原菌に対する阻止円形成試験に供した。
【００４５】
（２）対峙試験
植物病原菌として、
ａ）ほうれん草株腐病の病原菌〔リゾクトニアソラニケーン（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉｋｕｅｈｎ）〕
ｂ）ほうれん草萎凋病の病原菌〔フザリウムオキシスプラムエフ．スピーシーズスピナシエＯ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｒｕｍｆ．ｓｐ．ｓｐｉｎａｃｉａｅＯ−２７）〕
ｃ）果樹紋羽病の病原菌〔ロセリニアネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｎｅｃａｔｒｉｘ）〕、及び
ｄ）トマト根腐萎凋病の病原菌〔フザリウムオキシスプラムエフ．スピーシーズラディシス−リオペルシチＯ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｒｕｍｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｏｐｅｒｓｉｃｉＯ−３４）〕
を用いた。
【００４６】
ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号：０５７０９（１リットルあたりの組成：ポテト抽出液粉末４ｇ、ブドウ糖２０ｇ、寒天粉末１５ｇ）〕３．９ｇを、イオン交換水１００ｍｌに溶解し、得られた溶液を１２１℃で１５分間滅菌した。ついで、得られた滅菌培地２０ｍｌを、滅菌シャーレに入れ、固化させ、試験用培地を得た。
【００４７】
各植物病原菌を、前記試験用培地の中心部分に接種した。ついで、播種箇所から等間隔になるように、試験用培地に円形濾紙（直径８ｍｍ、厚手、アドバンテック社製）を四方に配置した。なお、前記円形濾紙は、使用前に、１２１℃で１５分間処理することにより滅菌された濾紙である。
【００４８】
前記（１）で得られた供試試料１００μｌを、試験用培地の円形濾紙上に滴下した。
【００４９】
ついで、各試験用培地を、３０℃の恒温室内で、約１〜２週間インキュベートした。その後、各試験用培地上の阻止円を観察した。阻止円を形成した供試試料について、画線塗抹培養を繰返し行なうことにより、菌を純粋化した。
【００５０】
ついで、純粋化された菌を用いて、対峙試験を行なった。明確な阻止円の形成を、植物病原菌の生育抑制能を有する菌であることの指標とした。その結果、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９が得られた。
【００５１】
（３）微生物学的性質の検討
得られたＡ−３、Ａ−７及びＡ−１９のそれぞれについて、微生物学的性質を調べた。各微生物学的性質は、慣用の方法により評価された。その結果を表１〜４に示す。
【００５２】
【表１】

【００５３】
【表２】

【００５４】
【表３】

【００５５】
【表４】

【００５６】
前記表１〜４に示される微生物学的性質及び１６ｓｒＤＮＡの塩基配列の解析結果から、前記Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する細菌であることが示唆された。
【００５７】
なお、前記Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、それぞれ、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．Ａ−３、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．Ａ−７及びＢａｃｉｌｌｕｓｓｐ．Ａ−１９と命名・表示され、寄託日：２００２年１２月２６日、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター〔日本国茨城県つくば市東１−１−１中央第６（郵便番号３０５−８５６６）〕に、ＦＥＲＭＰ−１９１７８、ＦＥＲＭＰ−１９１７９及びＦＥＲＭＰ−１９１８０として寄託されている。
【００５８】
実施例２
実施例１で得られたＡ−３、Ａ−７及びＡ−１９を、それぞれ、前記ポテトデキストロース培地に、１白金耳播種し、３０℃で２４時間、２４０ｒｐｍで振盪培養した。
【００５９】
試験例１円形濾紙法
前記防除剤による各種微生物の生育に対する抑制効果を、前記実施例２で得られた各馴化培地による該微生物の生育に対する阻止円の形成及び該阻止円の大きさを測定することにより評価した。
【００６０】
微生物としては、前記ａ）〜ｄ）の植物病原菌、酵母等を用いた。各微生物を、それぞれの培養に適した培地を用い、十分に生育するまで培養し、各微生物の培養物を得た。
【００６１】
ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号：０５７０９（１リットルあたりの組成：ポテト抽出液粉末４ｇ、ブドウ糖２０ｇ、寒天粉末１５ｇ）〕３．９ｇを、イオン交換水１００ｍｌに溶解し、得られた溶液を１２１℃で１５分間滅菌した。ついで、得られた滅菌培地２０ｍｌを、滅菌シャーレに入れ、固化させ、試験用培地を得た。
【００６２】
ついで、得られた試験用培地上の中心部分に、５ｍｍ×５ｍｍ角で各種微生物を播種した。また、播種箇所から等間隔（２ｃｍ）になるように、試験用培地に１２１℃で１５分間滅菌した円形濾紙（直径８ｍｍ、アドバンテック社製、商品名：定性濾紙、厚手）を四方に配置し、該円形濾紙上に、実施例２で得られた培養液１００μｌを滴下した。
【００６３】
ついで、各試験用培地を、３０℃の恒温室内で、前記ａ）及びｃ）については、約１週間インキュベートし、前記ｂ）及びｄ）については、約２週間インキュベートした。その後、各試験用培地上の阻止円の形成を観察した。その結果を表５に示す。
【００６４】
【表５】

【００６５】
その結果、表５に示すように、各種微生物に対して、明確な阻止円を形成することがわかった。すなわち、実施例１で得られた各細菌は、防除剤として有用であることが示された。また、実施例１で得られた各細菌は、複数の植物病原菌、植物病原菌等の生育を抑制し、さらには、酵母の生育の抑制能を有することが示され、特に、Ａ−３は、黄色色素を産生したため、新規菌株であることが示唆された。
【００６６】
実施例３
月桃（葉２ｋｇ／エタノール１８Ｌ、茎３．７８ｋｇ／エタノール１０Ｌ）又はアーティチョーク（葉４．３ｇ／エタノール２００ｍｌ）を、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮し、エタノール抽出液〔月桃約２０ｍｇ（月桃抽出物乾燥重量）／ｍｌ、アーティチョーク約１００ｍｇ（アーティチョーク抽出物乾燥重量）／ｍｌ〕を得た。ついで、前記エタノール抽出液と、実施例２で得られた馴化培地とを混合し、エタノール抽出液の最終濃度が、１体積％、１０体積％又は５０体積％である被検試料を得た。
【００６７】
ここで、なお、月桃のエタノール抽出液から得られた１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約０．９３μｇ、約９．３μｇ及び約４６．５μｇである。また、アーティチョークのエタノール抽出液から得られた１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約４．６５μｇ、約４６．５μｇ、約２３２．５μｇである。
【００６８】
また、月桃（葉１ｋｇ／イオン交換水４Ｌ、茎１ｋｇ／イオン交換水１Ｌ）又はアーティチョーク（葉１００ｇ／イオン交換水３００ｍｌ）を沸騰水中で１時間煮沸し、ロータリーエバポレーター等により、熱水抽出液〔１００ｍｇ（抽出物乾燥重量）／ｍｌ〕を得た。ついで、前記熱水抽出液と、実施例２で得られた馴化培地とを混合し、熱水抽出液の最終濃度が、１体積％、１０体積％又は５０体積％である被検試料を得た１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約４．６５μｇ、約４６．５μｇ、約２３２．５μｇである。
【００６９】
試験例２
（１）供試昆虫の調製
供試昆虫として、コナガと、エンドウヒゲナガアブラムシとを用いた。
【００７０】
コナガ及びエンドウヒゲナガアブラムシともに、２５±３℃、明条件１６時間−暗条件８時間の条件下、インキュベーター内で飼育した。
【００７１】
エンドウヒゲナガアブラムシについては、以下のようにして得られた虫体を用いた。ソラマメの芽出し（発芽から約４日〜１週間）の茎部分（豆の直上部分）に、産業用ワイパー〔商品名：キムワイプ（登録商標）（十条キンバリー株式会社製）〕約１ｃｍ×１５ｃｍを巻きつけた。ついで、ワイパーを巻き付けた茎を、試験管（外径２５ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）に入れた。かかる試験管に、成虫数匹を入れ、産子させ、１〜２齢の幼虫を得た。また、同様に、成虫に産子させ、該成虫を除去した後、幼虫を生育して、成虫を得た。得られた１〜２齢の幼虫と成虫とを、以下の試験に用いた。
【００７２】
また、コナガについては、カイワレ大根と人工飼料（ニッチク薬品工業（株）社製、商品名：インセクタコナガ−０１２８）とを併用して累代飼育した個体群の脱皮直後の４齢幼虫を用いた。
【００７３】
（２）エンドウヒゲナガアブラムシに対する忌避効果の評価
有害生物の代表例として、エンドウヒゲナガアブラムシを用い、実施例３で得られた被検試料による該エンドウヒゲナガアブラムシに対する忌避効果を評価した。
【００７４】
ソラマメの芽出しの上部を、前記被検試料に１分間浸漬させ、その後、風乾した。ついで、ソラマメの芽出しと幼虫をカップに入れた。その後、カップに幼虫を入れた時点から開始して、２４時間毎に、観察し、１〜２齢の幼虫及び６〜７齢の成虫が、芽出しに寄りつくかどうかを指標として、忌避効果を評価した。なお、対照として、前記被検試料のかわりに、エタノール又は水に浸漬させたソラマメの芽出しを用いた。
【００７５】
その結果、対照であるエタノール又は水に浸漬させたソラマメの芽出しには、エンドウヒゲナガアブラムシが寄ってきたが、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９のそれぞれから得られた各被検試料に浸漬させたソラマメのいずれにも寄りつかなかった。したがって、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、エンドウヒゲナガアブラムシを忌避する性質を有することがわかった。
【００７６】
（３）コナガに対する忌避効果の評価
有害生物の一例として、コナガを用い、実施例３で得られた被検試料による該コナガに対する忌避効果を評価した。
【００７７】
忌避効果の評価には、キャベツの苗片（直径２ｃｍ）の両面に、前記被検試料２０μｌを塗布し、風乾させ、得られた処理苗片を用いた。前記処理苗片を、直径６ｃｍ、高さ２８ｃｍのカップ内に入れ、コナガ４齢幼虫を１カップあたり１匹を該カップにさらに入れた。２４時間毎にコナガが蛹になるまでの期間観察し、接触後の死虫率を調べた。なお、対照として、前記被検試料のかわりに、エタノール又は水で処理した対照苗片を用いた。また、処理苗片及び対照苗片を、２４時間毎に交換した。結果を表６〜９に示す。
【００７８】
【表６】

【００７９】
【表７】

【００８０】
【表８】

【００８１】
【表９】

【００８２】
その結果、対照であるエタノール又は水で処理した対照苗片には、コナガが寄ってきたが、月桃及びアーティチョークのそれぞれから得られた各被検試料で処理した処理苗片のいずれにも寄りつかなかった。したがって、月桃及びアーティチョークは、コナガを忌避する性質を有することがわかった。
【００８３】
試験例３
有害生物の代表例として、エンドウヒゲナガアブラムシ１〜２齢幼虫を用い、前記実施例３で得られた被検試料に対する該エンドウヒゲナガアブラムシの薬剤感受性を評価した。
【００８４】
ガラス管（直径８ｍｍ×高さ４０ｍｍ）の一端を、ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＦＩＬＭ（商品名：パラフィルム）で覆った。被検試料と人工飼料（組成を表１０に示す）との混合物２０μｌを、前記ガラス管上のパラフィルム部分に滴下し、その上を薄く伸張したパラフィルムで覆った。得られたものを、被検試料の有効量の評価のための餌として用いた。
【００８５】
【表１０】

【００８６】
前記餌に、円筒状に加工したゼラチンカプセル（和光純薬工業株式会社製、商品名：ゼラチンカプセルＮｏ．００を加工し使用した）をかぶせた。前記カプセル内に、エンドウヒゲナガアブラムシを入れ、ゴース（３ｃｍ×３ｃｍ角）とプラスチックチューブ（内径８ｍｍ、外径１１ｍｍ、高さ８ｍｍ）とで蓋をし、飼育瓶を得た。対照として、エタノール又は水と前記人工飼料との混合物２０μｌを用いた。
【００８７】
エンドウヒゲナガアブラムシを入れた後、１つの飼育瓶の中に１〜２齢幼虫を３匹ずつ入れ、２３±３℃の条件下、２４時間毎に、脱皮数及び死虫数を観察し、評価を行なった。結果を表１１〜表１４に示す。
【００８８】
【表１１】

【００８９】
【表１２】

【００９０】
【表１３】

【００９１】
【表１４】

【００９２】
その結果、表１１及び表１２に示されるように、エンドウヒゲナガアブラムシは、月桃の茎のエタノール抽出液の含有量が１０体積％である被検試料に対し、１日目で、３３％の死虫率という高い感受性を示した。また、表１３及び表１４に示されるように、エンドウヒゲナガアブラムシは、アーティチョーク−株のエタノール抽出液又は熱水抽出液の含有量が５０体積％である被検試料に対し、１日目で、３３％の死虫率という高い感受性を示した。
【００９３】
実施例４
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液を含有した防除剤（１×１０^２〜１×１０^３０ｃｆｕ相当量）を調製する。
【００９４】
得られた防除剤を、作物を栽培する前の土壌に混和、又は噴霧器により土壌に撒布する。その結果、土壌の環境を、植物病害に強い土壌に改良できる。
【００９５】
実施例５
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、得られた馴化培地（１×１０^２〜１×１０^３０ｃｆｕ相当量）を含有した防除剤を調製する。
【００９６】
得られた防除剤を、噴霧器により、作物が植えられた土壌又は作物に撒布する。その結果、作物の病害を防ぐことができる。
【００９７】
実施例６
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、得られた馴化培地（１×１０^２〜１×１０^３０ｃｆｕ相当量）を結晶化又は粉末化させ、防除剤を調製する。
【００９８】
得られた防除剤を、作物を栽培する前の土壌に混和又は作物が植えられた土壌に撒布する。その結果、作物の病害を防ぐことができる。
【００９９】
実施例７
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液（１×１０^２〜１×１０^３０ｃｆｕ相当量）を、ふすまやもみがら、土壌改良剤に添加し、固定させる。得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は該土壌に撒布する。その結果、植物病害を防ぐことができる。
【０１００】
実施例８
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、馴化培地を得る。また、実施例３と同様に、キク科植物又はショウガ科植物から、エタノール抽出液又は熱水抽出液を調製する。ついで、馴化培地と、エタノール抽出液又は熱水抽出液とを含有した防除剤を調製する。
【０１０１】
得られた防除剤を、噴霧器を用いて、害虫の発生しやすい箇所に撒布するか、あるいは、作物又は土壌に撒布する。その結果、害虫忌避効果が得られ、かつ植物病害を防ぐことができる。
【０１０２】
【発明の効果】
本発明の微生物によれば、種々の植物病原菌を防除することができ、植物病原菌の生育を抑制し、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができ、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を奏する。また、本発明の防除剤によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給等の簡便な手法により種々の病害等を防ぐことができ、広範囲の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができ、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を奏する。さらに、本発明の防除方法によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給等の簡便な手法により種々の病害等を防ぐことができ、広範囲の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができ、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を奏する。
【０１０３】
【配列表】

[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a microorganism having an ability to inhibit the growth of pests, particularly plant pathogenic bacteria, and a control agent and the like using the microorganism. More specifically, the present invention relates to a microorganism that produces a substance that suppresses the growth of pests, particularly plant pathogens, and a control agent that can suppress the growth of plant pathogens and / or repel pests.
[0002]
[Prior art]
In modern agriculture, especially in agriculture aimed at large-scale production, there are cases where chemically synthesized pesticides are used in order to obtain good-looking crops without worms and lesions and achieve high yields. There is a concern that the chemically synthesized pesticide remains in crops, and that the chemically synthesized pesticide contaminates the environment such as soil and water. For this reason, so-called pesticide-free vegetables, reduced pesticide vegetables and the like have been attracting attention.
[0003]
However, pesticide-free cultivation has drawbacks such as being troublesome, susceptible to damage by pests, and thus reducing yields. Only a few percent of farmers are cultivating pesticide-free cultivation. . Therefore, from the viewpoint of substantially reducing the required labor, the present situation is that almost all of them rely on chemically synthesized pesticides.
[0004]
On the other hand, microorganisms are used instead of chemically synthesized pesticides to control the growth of pathogens of tobacco take-all, pathogens of solanaceous plants, pathogens of turfgrass, and pathogenic fungi.
[0005]
Specifically, a microorganism belonging to the genus Enterobacter, for example, a culture of Enterobacter cloacae H184 (FERM BP-5057) isolated from the tobacco root, is obtained from the roots of tobacco plants and solanaceous plants. It is known that, by irrigating the root, it can be used for controlling pathogens of tobacco take-all, pathogens of solanaceous plants, etc. (Patent Documents 1 and 2). However, the microorganisms belonging to the genus Enterobacter described in Patent Literatures 1 and 2 only show an antagonistic action against bacterial wilt, and it is unclear whether or not they have an antagonistic action against other pathogenic bacteria.
[0006]
Further, Streptomyces albras has antagonism to the genus Sclerotinia, Rhizoctonia, Pysium, Carburaria, Goimainomyces, Colletricum, etc., and can be used as a plant pathogen control material and the like. It is known (Patent Document 3). However, the plant pathogen control material and the like described in Patent Literature 3 are intended to be applied to disease in turfgrass, and it is unclear whether or not it can be applied to pathogens to other plants.
[0007]
Furthermore, microorganisms belonging to the genus Bacillus and having aflatoxin-degrading properties, specifically, Bacillus subtilis DB9011 strain having aflatoxin-degrading properties, and microorganisms belonging to Bacillus plumyls and having aflatoxin-degrading ability have aflatoxin-forming ability. It is known that it is used as a growth inhibitor against fungi, particularly pathogenic fungi (Patent Documents 4 and 5). The growth inhibitors described in Patent Literature 4 and Patent Literature 5 suppress the growth of fungi, especially fungi having aflatoxin-producing ability, particularly pathogenic filamentous fungi.
[0008]
[Patent Document 1] Japanese Patent Laid-Open No. 9-37775 Paragraph No. 0010, Tables 3 and 4
[Patent Document 2] Japanese Patent Application Laid-Open No. 10-139610 Table 5
[Patent Document 3] JP-A-8-242846, paragraphs 0042 and 0049
[Patent Document 4] JP-A-5-146289, paragraphs 0046 to 0052
[Patent Document 5] JP-A-5-268945, paragraphs 0048 to 0050
[0009]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention has the property of inhibiting the growth of pests, especially phytopathogenic fungi and fungal yeast, the property of exhibiting antibacterial activity against a wide range of phytopathogenic bacteria, for example, a plurality or more phytopathogenic fungi, An object of the present invention is to provide a microorganism having at least one property of growing in an environment close to the environment. Furthermore, the present invention provides a control agent capable of preventing plant diseases caused by a wide range, for example, a plurality or more pests, specifically, plant pathogens, fungal yeasts, pests and the like. With the goal.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
The gist of the present invention is:
[1] Bacillus (which has the ability to inhibit the growth of plant pathogens)Bacillus) A microorganism belonging to the genus,
[2] The plant pathogen is Aspergillus flavus link freezeAspergillus  flavus  Link Fries f rubber), Aspergillus flavus link freeze bar. Orize (Aspergillus  flavus  Link Fries var. oryzae), Aspergillus Niger Phan Thiegem (Aspergillus  niger  van Tiechem), Mukol Hemaris Wemer F. Hemaris (Mucor  himalis  Wehmer f. hiemalis), Penicillium chrysogenum somes (Penicillium  chrysogenum  Thom), Rhizops Orize Went and Princen Gillings (Rhizopus  oryzaeWent & Prinsen Geerings), Candida albicans (Robin) Birkhont [Candida  albicans  (Robin) Berkhon], Cryptococcus neoformance (San Ferris) Villemin [Cryptococcus  neoformans  (Sanfelice) Villemin], Pichia Membrani Facience (EC Hansen) C. Hansen [Pichia  membrani  faciens (EC Hansen) C. Hansen], Saccharomyces cerevisiae Meyer EK XE. C. Hansen [Saccharomyces  cerevisiae  Meyerex E. C. Hansen], Rhizoctonia solani cane O-28 strain (Rhizoctonia  solani  kuehn O-28), Roseliner Nekatrix (Rosellinia  necatrix), Fusarium oxysprum F. Species spunsee O-27 strain (Fusarium  oxysprum  f. sp. spnaciae O-27), and Fusarium oxysprum F.P. Species Radisis-Lyco Persiti O-34 strain (Fusarium  oxysprum  f. sp. (Radicis-lycopersici O-34), wherein the bacillus (1) is at least one microorganism selected from the group consisting of:Bacillus) A microorganism belonging to the genus,
[3] The Bacillus according to [1] or [2], which is a microorganism selected from the group consisting of FERM P-19178, FERM P-19179, and FERM P-19180.Bacillus) A microorganism belonging to the genus,
[4] a) to c) below:
a) The Bacillus according to any one of the above [1] to [3] (Bacillus) A microorganism belonging to the genus,
b) The Bacillus according to any one of the above [1] to [3] (Bacillus) A conditioned medium of microorganisms belonging to the genus, and
c) The Bacillus according to any one of the above [1] to [3] (Bacillus) Extracts of microorganisms belonging to the genus
A pest control agent for plants, comprising as an active ingredient at least one selected from the group consisting of:
[5] the control agent of the above-mentioned [4], further comprising a pest repellent component derived from an Asteraceae plant or a Zingiberaceae plant;
[6] the pesticidal composition according to the above [5], wherein the pest repellent component is an extract of asteraceae plants or an extract of a ginger plant;
[7] a) to c) below:
a) The Bacillus according to any one of the above [1] to [3] (Bacillus) A microorganism belonging to the genus,
b) The Bacillus according to any one of the above [1] to [3] (BacillusA) a culture of a microorganism belonging to the genus, and
c) The Bacillus according to any one of the above [1] to [3] (Bacillus) Extracts of microorganisms belonging to the genus
A method for controlling pests, comprising supplying at least one selected from the group consisting of a plant or soil for growing the plant,
[8] The method for controlling pests according to [7], wherein the pest repellent component derived from an Asteraceae plant or a Zingiberaceae plant is further supplied to the plant or soil for growing the plant.
[9] The pest is an Aspergillus flavus rink frieze F grey bar (Aspergillus  flavus  Link Fries fglaber), Aspergillus flavus link freeze bar. Orize (Aspergillus  flavus  Link Fries var. oryzae), Aspergillus Niger Phan Thiegem (Aspergillus  niger  van Tiechem), Mkol Hemariswemer F. Hemaris (Mucor  himalis  Wehmerf. hiemalis), Penicillium chrysogenum somes (Penicillium  chrysogenum  Thom), Rhizops Orize Went and Princen Gillings (Rhizopus  oryzae  Went & Prinsen Geerings), Candida albicans (Robin) Barkhont [Candida  albicans  (Robin) Berkhon], Cryptococcus neoformance (San Ferris) Villemin [Cryptococcus  neoformans  (Sanfelice) Villemin], Pichia Membrani Facience (EC Hansen) C. Hansen [Pichia  membrani  faciens (EC Hansen) C. Hansen], Saccharomyces cerevisiae Meyer EK XE. C. Hansen [Saccharomyces  cerevisiae  Meyer ex E.C. C. Hansen], Rhizoctonia solani cane O-28 strain (Rhizoctonia  solani  kuhn O-28), Roseliner Necatrix (Rosellinia  necatrix), Fusarium oxysprum F. Species spunsee O-27 strain (Fusarium  oxysprum  f. sp. spnaciae O-27), Fusarium oxysprum F.P. Species Radisis-Lyco Persiti O-34 strain (Fusarium  oxysprum  f. sp. Radicis-lycopersici O-34), the method for controlling pests according to the above [7] or [8], which is at least one member selected from the group consisting of pea aphids and moths;
[10] a nucleic acid having the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NOs: 1 to 3,
About.
[0011]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The microorganism of the present invention is a microorganism isolated by the present inventors from a fertilizer, and is a Bacillus (Bacillus) capable of inhibiting the growth of plant pathogenic bacteria.Bacillus) A microorganism belonging to the genus.
[0012]
The microorganism of the present invention has an excellent property of being capable of inhibiting the growth of plant pathogenic bacteria. Therefore, the microorganism of the present invention exerts an excellent effect of controlling plant pathogenic bacteria. Further, the microorganism of the present invention exerts an excellent effect that the growth of plant pathogenic bacteria can be suppressed and the soil can be improved to be less likely to cause soil diseases. Furthermore, the microorganism of the present invention has an excellent property of exhibiting antibacterial activity against a wide range of plant pathogens, for example, a plurality or more plant pathogens. Therefore, the microorganism of the present invention exhibits an excellent effect that various soil diseases can be controlled. In addition, the microorganism of the present invention is a microorganism isolated from fertilizers usually used at the time of plant cultivation, and has a property of growing in an environment similar to a plant growing environment such as a crop. Therefore, the microorganism of the present invention exhibits an excellent effect that there is substantially no negative influence (for example, growth inhibition) on plant growth and the like.
[0013]
The microorganism of the present invention has the following microbiological properties:
(1) Bacillus
(2) Cell size: 0.7-1.0 μm × 0.8-2.0 μm
(3) Polymorphism: None
(4) Mobility: Yes (perihair)
(5) Spore presence: yes (center)
(6) Gram staining: positive
(7) MR test: positive
(8) Indole production: None
(9) Use of citric acid: koser negative, Christensen positive
(10) Utilization of inorganic nitrogen source: Utilizes nitrate, but does not utilize ammonium salt
(11) Urease activity: None
(12) Oxidase activity: None
(13) Catalase activity: Yes
(14) Range of growth pH: 4.0 to 8.5
(15) Range of growth temperature: 30-50 ° C
(16) Aerobic
(17) OF test: negative
Having. Specifically, the microorganism of the present invention is further classified into Bacillus sp. A-3, Bacillus sp. A-7, and Bacillus sp. A-19. In addition, more detailed microbiological properties of the microorganism of the present invention are shown in Tables 1 to 4 in Examples described later.
[0014]
Bacillus species A-3, which is a microorganism of the present invention, has 16S rDNA containing the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1, and Bacillus species A-7 has 16S rDNA shown in SEQ ID NO: 2. Bacillus species A-19 contains a base sequence represented by SEQ ID NO: 3 in 16S rDNA.
[0015]
Incidentally, the microorganism of the present invention,Bacillus  sp. A-3,Bacillus  sp. A-7 andBacillus  sp. A-19, named and displayed as FERM P-19178, FERM P-19179 and FERM P-19180, respectively, deposited on December 26, 2002, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary [ Deposit No. 1-1-1, Higashi 1-1-1, Tsukuba, Ibaraki, Japan (zip code 305-8566)].
[0016]
The phytopathogenic fungus to be inhibited from growing by the microorganism of the present invention is a bacterium that infects a plant and causes a disease.Specifically, for example, Rhizoctonia solani cane [known as a causal fungus of spinach strain rot]Rhizoctoniasolani  kuhn (for example, strain O-28)], Fusarium oxysporum F. known as a causative bacterium of spinach wilt. Species Spinassie O-27 strain (Fusarium  oxysprum  f. sp. spnaciae O-27), Roseneria necatrix (also known as a causal agent of orchard leaf disease)Rosellinia  necatrix), Fusarium oxysprum F., which is known as a pathogen of tomato root wilt. Species Radisis-Lyco Persiti O-34 strain (Fusarium  oxysprum  f. sp. Radicis-lycopersici O-34), and further, Aspergillus flavus rink freeze F gray bar (Aspergillus  flavus  Link Fries f rubber), Aspergillus flavus link freeze bar. Orize (Aspergillus  flavus  Link Fries var. oryzae), Aspergillus Niger Phan Thiegem (Aspergillus  niger  van Tiechem), Mukol Hemaris Wemer F. Hemaris (Mucor  himalis  Wehmer f. hiemalis), Penicillium chrysogenum somes (Penicillium  chrysogenum  Thom), Rhizops Orize Went and Princen Gillings (Rhizopus  oryzae  Went & Prinsen Geerings), Candida albicans (Robin) Birkhont [Candida  albicans  (Robin) Berkhon], Cryptococcus neoformance (San Ferris) Villemin [Cryptococcus  neoformans  (Sanfelice) Villemin], Pichia Membrani Facience (EC Hansen) C. Hansen [Pichia  membrani  faciens (EC Hansen) C. Hansen], Saccharomyces cerevisiae Meyer EK XE. C. Hansen [Saccharomyces  cerevisiae  Meyer ex E.C. C. Hansen] and the like.
[0017]
The growth range temperature of the microorganism of the present invention is specifically 25 to 45 ° C for Bacillus species A-3, preferably 37 to 40 ° C, and 25 to 45 ° C for Bacillus species A-7. It is 45 degreeC, Preferably it is 37-40 degreeC, and is 25-50 degreeC about Bacillus species A-19.
[0018]
In addition, the growth range pH of the microorganism of the present invention is specifically pH 4 to 10 for Bacillus species A-3, preferably 4 to 7, and pH 4 to Bacillus species A-7. 10, preferably 4 to 8, and for Bacillus species A-19, 4 to 8, preferably 4 to 7.
[0019]
The medium used for culturing the microorganism of the present invention may be any medium as long as it has the above-mentioned growth range pH and contains the above-mentioned nitrogen source, carbon source, auxiliary components and the like. As the medium, specifically, for example, potato dextrose medium [manufactured by Nissui, catalog number 05709, composition per liter of medium: potato extract powder 4.0 g, glucose 20 g, agar 15 g (pH 6.0)] Nutrient Broth [manufactured by Oxoid Co., Ltd., catalog number 250427, composition per liter of medium: 1 g of Lab-Lemco powder (trade name) 1 g, peptone 5 g, yeast extract 2 g, sodium chloride 5 g, agar 15 g (pH 6.0) And the like. When the medium, for example, the potato dextrose medium and Nutrient Broth is used as a liquid medium, the composition may be a composition not containing agar.
[0020]
The ability of the microorganism of the present invention to inhibit the growth of phytopathogenic bacteria can be determined by, for example, providing a culture of the microorganism of the present invention on a solid medium inoculated with phytopathogenic bacteria, and observing the presence or absence of an inhibitory circle and observing the size of the inhibitory circle. Can be evaluated by an evaluation method. Examples of the solid medium include the potato dextrose medium and the like, and preferably a medium in which the growth of plant pathogens and the growth of the microorganism of the present invention are favorable and the formation of an inhibition circle can be confirmed. desirable.
[0021]
The expression of the ability of the microorganism of the present invention to inhibit the growth of the plant pathogenic fungi can be achieved by optimizing culture conditions, specifically, culture temperature, culture pH, culture time, shaking degree during culture, and the like. Can be optimized. Optimization of such culture conditions can be easily performed by evaluating the size of the inhibition circle by the above-described evaluation method for various cultures obtained by culturing under various culture conditions.
[0022]
The microorganism of the present invention is a fertilizer, a sediment in a composting process is suspended in sterilized water or the like, and then the obtained suspension is applied to the medium, cultured, and the obtained colony is planted with the plant. Inhibition of the growth of pathogenic bacteria can be obtained by isolation using the microbiological properties and the like shown in Tables 1 to 4 in Examples described later as indices.
[0023]
According to the microorganism of the present invention, as described above, the growth of phytopathogenic bacteria can be suppressed. Therefore, the microorganism of the present invention, a conditioned medium thereof, or an extract thereof can be used as an agent for controlling pests and the like. Therefore, a control agent can be provided by the present invention.
[0024]
The controlling agent of the present invention includes the following a) to c):
a) The Bacillus (Bacillus) A microorganism belonging to the genus,
b) The Bacillus (Bacillus) A conditioned medium of microorganisms belonging to the genus, and
c) The Bacillus (Bacillus) Extracts of microorganisms belonging to the genus
At least one selected from the group consisting of: Therefore, according to the control agent of the present invention, plant diseases and the like caused by pests can be obtained by simple methods such as supply to soil, etc., supply to fertilizers, etc., supply to plant roots, supply to seeds, etc. It has an excellent effect that it can be prevented. Further, the control agent of the present invention exerts an excellent effect of suppressing the growth of plant pathogenic bacteria by supplying the agent to the soil, whereby the soil can be hardly affected by soil diseases.
[0025]
The controlling agent of the present invention may further contain a pest repellent component derived from an Asteraceae plant or a Zingiberaceae plant.
[0026]
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to the control agent of this invention, it exhibits antibacterial activity with respect to a wide range of plant pathogenic bacteria, for example, several or more plant pathogenic bacteria, and can repel pests. Therefore, the controlling agent of the present invention exerts an excellent effect of controlling various soil diseases.
[0027]
Pests that can be controlled by the control agent of the present invention include microorganisms such as the aforementioned plant pathogenic bacteria;Plutella  xylostella(Linnaus)], and a pea aphid [Acyrthosiphon  pisum(Harris)].
[0028]
Examples of the “supply” include spraying, mixing, coating, and dipping.
[0029]
In the present specification, the “microorganism” in the above a) refers to a culture solution obtained after the culture or the microbial cells themselves. The microorganism a) can be obtained by culturing the microorganism of the present invention in the above-mentioned appropriate medium under appropriate culture conditions.
[0030]
In the present specification, the “conditioned medium” of b) refers to a culture product obtained by removing microbial cells from a culture solution after culturing. The conditioned medium of the above b) can be obtained, for example, by removing microbial cells from the culture solution by filtration, centrifugation, or the like.
[0031]
In the present specification, the “extract” in c) refers to the product extracted from the microorganism in a) or the conditioned medium in b). The extract of c) is, for example,
(I) The microbial cells are crushed by means of a lytic enzyme such as lysozyme, ultrasonic waves, pressure, freezing and the like, and the obtained crushed product is purified by a conventional purification method (for example, salting out, column chromatography, organic solvent, etc.). Extraction, etc.)
(II) purifying the conditioned medium by a conventional purification method (for example, salting out, column chromatography, organic solvent extraction, etc.);
And the like.
[0032]
Examples of the Asteraceous plants include artichokes and insect pests. In addition, examples of the ginger family plants include moon peach.
[0033]
Examples of the pest repellent component derived from the Asteraceae plant or the Zingiberaceae plant include, for example, an extract extracted from the Asteraceous plant or the Zingiberaceae plant by alcohol extraction, hot water extraction, a steam distillation method or the like (that is, an ethanol extract) , Hot water extract, steam distillation extract, etc.). Specific examples include an artichoke ethanol extract, an artichoke hot water extract, a moon peach ethanol extract, a moon peach hot water extract, and a moon peach steam distillation extract.
[0034]
The content of the active ingredients a) to c) in the control agent of the present invention may be an amount sufficient to suppress the growth of plant pathogenic bacteria. Although not particularly limited, for example, the amount of the active ingredients a) to c) in the control agent of the present invention is 1 × 10²~ 1 × 10³⁰  cfu, preferably 1 × 10³  ~ 1 × 10^Fifteen    cfu, more preferably 1 × 10⁵~ 1 × 10¹²    An amount corresponding to cfu and the like can be mentioned. In addition, in order to use it by diluting it with water, a medium component or the like at the time of use, it may be further concentrated.
[0035]
The content of the pest repellent component in the control agent of the present invention further containing the pest repellent component may be an amount sufficient to exert the pest repellent effect.
[0036]
As a method for supplying the pesticidal agent of the present invention, for example, a pesticide containing the active ingredients a) to c) at a concentration suitable for the intended use, or the active ingredients a) to c) at a concentration suitable for the intended use And a pesticide containing the pest repellent component, using a watering can, a sprayer, or the like, by supplying the seedlings of the crop, seeds, etc. to the soil before planting, directly supplying the seedlings of the crop, seeds, etc. No. The soil supplied with the pesticide of the present invention suppresses the growth of soil disease-causing bacteria, and becomes an environment where many useful microorganisms are present, resulting in soil in which soil disease hardly occurs.
[0037]
Further, the control agent of the present invention can be applied according to the type of crop and its growth time, the type of plant pathogen and its activity time, the type of pest and its occurrence time, and the like.
[0038]
The evaluation of the control effect of the control agent of the present invention, for example,
(I) an evaluation method for measuring the presence or absence of the inhibition circle or the size of the inhibition circle for plant pathogenic bacteria by supplying the controlling agent,
(Ii) an evaluation method for measuring the presence or absence of harmful insects or the mortality of the harmful insects that gather on leaves or the like to which the control agent has been applied;
And so on. Here, in the evaluation method (i), the formation of the inhibition circle is an indicator that the controlling agent has a controlling effect, and the size of the controlling circle is proportional to the magnitude of the controlling effect. . In the evaluation method (ii), the fact that the pest does not collect on the leaves and the like to which the control agent has been applied and that the pest is killed are indicators that the control agent has a control effect.
[0039]
According to the microorganism of the present invention, a method for controlling pests can be provided. The control method of the present invention is a method characterized in that at least one selected from the group consisting of the above a) to c) is supplied to a plant or soil for growing the plant. In the control method of the present invention, a pest repellent component derived from an Asteraceae plant or a Zingiberaceae plant may be further supplied to the plant or soil for growing the plant.
[0040]
In the control method of the present invention, the supply amounts of the above a) to c) and the supply amount of the pest repellent component include the type of plant, the size of the supply site to the plant, the area of the soil for growing the plant, and the control. It can be set appropriately depending on the type of the target microorganism, the type of the pest to be controlled, and the like. The supply amount of the above a) to c) is, for example, 1 m of soil against the spinach rot pathogen.³Per 1 × 10³  ~ 1 × 10^Fifteencfu, preferably 1 × 10⁵~ 1 × 10¹²  Any amount may be used as long as it becomes cfu, and the same amount may be used for other pathogenic bacteria. In addition, when the amount of the pest repellent component supplied is 2.5 g (dry weight) in 1 L of the control agent, the concentration of the pest repellent component is 500 to 10,000 times as much as that of water, and the control effect can be exhibited. The amount may be sprayed on soil or plants so that the amount is obtained.
[0041]
In the control method of the present invention, the a) to c) and the pest repellent component may be supplied to a plant or soil for growing the plant as the control agent.
[0042]
The supply of the a) to c) and the pest repellent component to a plant or soil for growing the plant can be performed by spraying, mixing, coating, dipping, or the like. Specifically, although not particularly limited, for example,
-Mixing the culture solution of the microorganism of the present invention into the soil before growing the crop, or spraying the soil with a sprayer;
-Spraying the conditioned medium of the microorganism of the invention on the soil or crop where the crop is planted by means of a sprayer;
-Crystallization or pulverization of the conditioned medium of the microorganism of the present invention, the product obtained is mixed with the soil before cultivation of the crop or sprayed on the soil where the crop is planted;
-A culture solution of the microorganism of the present invention, bran, rice husk, added to a soil conditioner, the product obtained by fixing, mixed with the soil before cultivating the crop or sprayed on the soil,
-A control agent obtained by mixing a conditioned medium of the microorganism of the present invention with an ethanol extract or a hot water extract from an Asteraceae plant or a ginger plant, or the conditioned medium and an ethanol extract or hot water extraction Spray each liquid separately with a sprayer on places where pests are likely to occur, or on crops or soil
And the like.
[0043]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples and the like, but the present invention is not limited to the examples and the like.
[0044]
Example 1
(1) Preparation of test sample
Approximately 100 g of sediment was collected from each sediment in the composting process at Kansai Kurahashi Plant. About 1 g of the collected sediment and 10 ml of sterile physiological saline were placed in a 26 ml test tube. The obtained mixture is mixed with a vortex mixer for about 5 minutes, and then left at room temperature (about 25 ° C.) for 20 minutes to prepare a 10% sample-containing suspension.liquid(Test sample) was obtained. The obtained test sample was subjected to an inhibition circle formation test against plant pathogenic bacteria.
[0045]
(2) Confrontation test
As a plant pathogen,
a) Spinach strain rot pathogen [Rhizoctonia solani cane (Rhizoctonia  solani  kuehn)]
b) Pathogen of spinach wilt [Fuzarium oxysprum F .; Species Spinassie O-27 strain (Fusarium  oxysprum  f. sp.spinaciae  O-27)]
c) Pathogens of fruit tree crested wilt disease [Rocerinia Necatrix (Rosellinia  necatrix)〕,as well as
d) Pathogen of tomato root rot [Fusalium oxysprum F .; Species Radisis-Rio Persic O-34 strain (Fusarium  oxysprum  f. sp. Radicis-lyopersici O-34)]
Was used.
[0046]
3.9 g of potato dextrose medium [manufactured by Nissui, catalog number: 05709 (composition per liter: potato extract powder 4 g, glucose 20 g, agar powder 15 g)] was dissolved in ion-exchanged water 100 ml to obtain a solution. Was sterilized at 121 ° C. for 15 minutes. Then, 20 ml of the obtained sterilized medium was placed in a sterilized petri dish and solidified to obtain a test medium.
[0047]
Each plant pathogen was inoculated into the center of the test medium. Next, circular filter paper (diameter 8 mm, thick, manufactured by Advantech Co., Ltd.) was placed on all sides of the test medium at equal intervals from the seeding site. In addition, the said circular filter paper is filter paper sterilized by processing at 121 degreeC for 15 minutes before use.
[0048]
100 μl of the test sample obtained in the above (1) was dropped on a circular filter paper of a test medium.
[0049]
Then, each test medium was incubated in a constant temperature room at 30 ° C. for about 1 to 2 weeks. Thereafter, the inhibition circle on each test medium was observed. Bacteria were purified by repeatedly performing streak smear culture on the test sample in which the inhibition circle was formed.
[0050]
Then, a confrontation test was performed using the purified bacteria. The formation of a clear inhibition circle was used as an indicator that the fungus had the ability to inhibit the growth of plant pathogenic bacteria. As a result, A-3, A-7 and A-19 were obtained.
[0051]
(3) Examination of microbiological properties
Each of the obtained A-3, A-7 and A-19 was examined for microbiological properties. Each microbiological property was evaluated by conventional methods. The results are shown in Tables 1 to 4.
[0052]
[Table 1]

[0053]
[Table 2]

[0054]
[Table 3]

[0055]
[Table 4]

[0056]
The analysis results of the microbiological properties and the base sequence of 16s rDNA shown in Tables 1 to 4 above suggest that the A-3, A-7 and A-19 are bacteria belonging to the genus Bacillus. Was done.
[0057]
In addition, said A-3, A-7, and A-19 are respectively Bacillus sp. A-3, Bacillus sp. A-7 and Bacillus sp. Named and displayed as A-19, Deposit date: December 26, 2002, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary Center [1-1-1, Higashi 1-1-1, Tsukuba-shi, Ibaraki, Japan; -8566)] as FERM P-19178, FERM P-19179 and FERM P-19180.
[0058]
Example 2
One platinum loop of each of A-3, A-7, and A-19 obtained in Example 1 was seeded on the potato dextrose medium, and cultured with shaking at 240 rpm at 30 ° C. for 24 hours.
[0059]
Test Example 1 Circular filter paper method
The inhibitory effect of the control agent on the growth of various microorganisms was evaluated by measuring the formation of a circle of inhibition of the growth of the microorganism by each of the conditioned media obtained in Example 2 and measuring the size of the circle of inhibition.
[0060]
As the microorganism, the phytopathogenic bacteria, yeasts and the like described in a) to d) above were used. Each microorganism was cultured in a medium suitable for each culture until it grew sufficiently to obtain a culture of each microorganism.
[0061]
3.9 g of potato dextrose medium [manufactured by Nissui, catalog number: 05709 (composition per liter: potato extract powder 4 g, glucose 20 g, agar powder 15 g)] was dissolved in ion-exchanged water 100 ml to obtain a solution. Was sterilized at 121 ° C. for 15 minutes. Then, 20 ml of the obtained sterilized medium was placed in a sterilized petri dish and solidified to obtain a test medium.
[0062]
Next, various microorganisms were inoculated in a central portion of the obtained test medium at a size of 5 mm × 5 mm square. Further, circular filter paper (diameter 8 mm, manufactured by Advantech Co., trade name: qualitative filter paper, thick) was placed on all sides of the test medium at an equal interval (2 cm) from the seeding position, and the filter medium was placed on all sides, 100 μl of the culture solution obtained in Example 2 was dropped on the circular filter paper.
[0063]
Then, each test medium was incubated in a constant temperature room at 30 ° C. for a) and c) for about 1 week, and for b) and d) for about 2 weeks. Thereafter, the formation of a circle of inhibition on each test medium was observed. Table 5 shows the results.
[0064]
[Table 5]

[0065]
As a result, as shown in Table 5, it was found that clear inhibition circles were formed for various microorganisms. That is, it was shown that each bacterium obtained in Example 1 was useful as a controlling agent. Further, each bacterium obtained in Example 1 was shown to inhibit the growth of a plurality of plant pathogens, plant pathogens, and the like, and was further shown to have the ability to inhibit the growth of yeast. It produced a yellow pigment, suggesting that it was a novel strain.
[0066]
Example 3
Moon peach (leaf 2 kg / ethanol 18 L, stem 3.78 kg / ethanol 10 L) or artichoke (leaf 4.3 g / ethanol 200 ml) is concentrated using a rotary evaporator, and an ethanol extract [about 20 mg of moon peach (moon peach extraction) Product dry weight) / ml, and about 100 mg of artichoke (artichoke extract dry weight) / ml]. Next, the ethanol extract and the conditioned medium obtained in Example 2 were mixed to obtain a test sample in which the final concentration of the ethanol extract was 1%, 10%, or 50% by volume.
[0067]
Here, the extracts contained in each of the 1% by volume-test sample, 10% by volume-test sample and 50% by volume-test sample obtained from the ethanol extract of moon peach are expressed as dry weight. , About 9.3 μg, about 9.3 μg and about 46.5 μg, respectively. The extracts contained in each of the 1% by volume-test sample, the 10% by volume-test sample and the 50% by volume-test sample obtained from the artichoke ethanol extract were each expressed as a dry weight, each of which was about 4.65 μg, about 46.5 μg, about 232.5 μg.
[0068]
Also, moon peach (leaf 1 kg / ion-exchanged water 4 L, stem 1 kg / ion-exchanged water 1 L) or artichoke (leaf 100 g / ion-exchanged water 300 ml) is boiled in boiling water for 1 hour, and a hot water extract is obtained by a rotary evaporator or the like. [100 mg (extract dry weight) / ml] was obtained. Next, the hot water extract and the conditioned medium obtained in Example 2 were mixed to obtain a test sample in which the final concentration of the hot water extract was 1%, 10%, or 50% by volume. The extract contained in each of 1% by volume-test sample, 10% by volume-test sample, and 50% by volume-test sample was about 4.65 μg, about 46.5 μg, 232.5 μg.
[0069]
Test example 2
(1) Preparation of test insects
As the test insects, Japanese moth and pea aphid were used.
[0070]
Both the moth and the pea aphid were bred in an incubator at 25 ± 3 ° C., under the conditions of 16 hours from light conditions to 8 hours from dark conditions.
[0071]
The insect body obtained as follows was used for the pea aphid. An industrial wiper [trade name: Kimwipe (registered trademark) (manufactured by Jujo Kimberly Co., Ltd.)] is wound about 1 cm × 15 cm around the stem portion (directly above the beans) of the germination (approximately 4 days to 1 week after germination) of broad beans. Wearing. Then, the stem around which the wiper was wound was placed in a test tube (outer diameter 25 mm, length 150 mm). In this test tube, several adults were placed and litters were obtained to obtain 1-2 year old larvae. In the same manner, adult larvae were born and larvae were grown after removing the adult larvae to obtain adult larvae. The obtained 1st to 2nd instar larva and adult were used for the following tests.
[0072]
In addition, the fourth instar larva immediately after molting of a population bred for successive generations using Japanese cabbage radish and artificial feed (trade name: Insector Konaga-0128, manufactured by Nichiku Yakuhin Kogyo Co., Ltd.) was used for Japanese moth. .
[0073]
(2) Evaluation of repellent effect on pea aphid
Using a pea aphid as a representative example of pests, the repellent effect of the test sample obtained in Example 3 on the pea aphid was evaluated.
[0074]
The upper part of the broad bean sprouts was immersed in the test sample for 1 minute and then air-dried. Next, the broad bean sprouting and larvae were placed in a cup. Thereafter, starting from the time when the larva was put in the cup, observation was performed every 24 hours, and the repellent effect was determined based on whether the 1-2 year old larva and the 6-7 year old larva approached the sprouting as an index. evaluated. As a control, sprouting of broad bean immersed in ethanol or water was used instead of the test sample.
[0075]
As a result, pea aphid came to the buds of broad bean immersed in ethanol or water as a control, but each test sample obtained from each of A-3, A-7 and A-19 showed It did not lean on any of the immersed broad beans. Therefore, it was found that A-3, A-7 and A-19 have a property of repelling the pea aphid.
[0076]
(3) Evaluation of repellent effect on Conaga
As an example of pests, Japanese moth was used to evaluate the repellent effect on the Japanese moth by the test sample obtained in Example 3.
[0077]
To evaluate the repellent effect, 20 μl of the test sample was applied to both sides of cabbage seedlings (diameter 2 cm), air-dried, and the obtained treated seedlings were used. The treated seedlings were placed in a cup having a diameter of 6 cm and a height of 28 cm, and one 4th instar larva of P. conifer was further placed in the cup. Observations were made every 24 hours until the Japanese moth turned into a pupa, and the mortality after contact was examined. As a control, a control seedling treated with ethanol or water was used instead of the test sample. The treated seedlings and the control seedlings were replaced every 24 hours. The results are shown in Tables 6-9.
[0078]
[Table 6]

[0079]
[Table 7]

[0080]
[Table 8]

[0081]
[Table 9]

[0082]
As a result, Konaga approached the control seedlings treated with ethanol or water as a control, but did not approach any of the treated seedlings treated with each test sample obtained from each of the moon peach and artichoke. Did not. Therefore, it was found that moon peach and artichoke had a property of repelling diamondback moth.
[0083]
Test example 3
As representative examples of pests, pea aphid first and second instar larvae were used to evaluate the drug sensitivity of the pea aphid to the test sample obtained in Example 3 above.
[0084]
One end of a glass tube (diameter 8 mm × height 40 mm) was covered with LABORATORY FILM (trade name: Parafilm). 20 μl of a mixture of the test sample and the artificial feed (the composition is shown in Table 10) was dropped onto the parafilm portion on the glass tube, and the portion was covered with a thinly stretched parafilm. The obtained product was used as a bait for evaluating the effective amount of the test sample.
[0085]
[Table 10]

[0086]
A gelatin capsule (manufactured and manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., trade name: gelatin capsule No. 00) processed into a cylindrical shape was covered on the bait. A pea aphid was placed in the capsule and covered with a ghost (3 cm × 3 cm square) and a plastic tube (inner diameter 8 mm, outer diameter 11 mm, height 8 mm) to obtain a breeding bottle. As a control, 20 μl of a mixture of ethanol or water and the artificial feed was used.
[0087]
After placing the aphid aphid, three larvae of the first and second instars are placed in one breeding bottle, and the number of molting and the number of dead insects are observed and evaluated every 24 hours at 23 ± 3 ° C. Was performed. The results are shown in Tables 11 to 14.
[0088]
[Table 11]

[0089]
[Table 12]

[0090]
[Table 13]

[0091]
[Table 14]

[0092]
As a result, as shown in Tables 11 and 12, the pea aphid had 33% of the test sample in which the content of the ethanol extract of the moon peach stalk was 10% by volume on the first day. It showed high susceptibility to mortality. Also, as shown in Tables 13 and 14, the pea aphid showed that on the first day, the content of the ethanol extract or hot water extract of the artichoke strain was 50% by volume, It showed a high susceptibility of 33% mortality.
[0093]
Example 4
A-3, A-7, or A-19 was cultured in the same manner as in Example 2, and a control agent (1 × 10²~ 1 × 10³⁰(equivalent to cfu).
[0094]
The obtained control agent is mixed with the soil before cultivating the crop or sprayed on the soil with a sprayer. As a result, the soil environment can be improved to a soil resistant to plant diseases.
[0095]
Example 5
A-3, A-7 or A-19 was cultured in the same manner as in Example 2, cells were removed from the obtained culture, and the obtained conditioned medium (1 × 10²~ 1 × 10³⁰(equivalent to cfu) is prepared.
[0096]
The obtained control agent is sprayed on the soil or the crop where the crop is planted with a sprayer. As a result, crop diseases can be prevented.
[0097]
Example 6
A-3, A-7 or A-19 was cultured in the same manner as in Example 2, cells were removed from the obtained culture, and the obtained conditioned medium (1 × 10²~ 1 × 10³⁰(equivalent to cfu) is crystallized or powdered to prepare a controlling agent.
[0098]
The obtained control agent is mixed with the soil before cultivating the crop or sprayed on the soil where the crop is planted. As a result, crop diseases can be prevented.
[0099]
Example 7
A-3, A-7 or A-19 was cultured in the same manner as in Example 2, and the resulting culture solution (1 × 10²~ 1 × 10³⁰(equivalent to cfu) is added to bran, rice husk, and a soil conditioner and fixed. The obtained product is mixed with or sprayed on the soil before growing the crop. As a result, plant diseases can be prevented.
[0100]
Example 8
A-3, A-7 or A-19 is cultured in the same manner as in Example 2, and the cells are removed from the obtained culture to obtain a conditioned medium. Further, similarly to Example 3, an ethanol extract or a hot water extract is prepared from asteraceae or ginger plants. Next, a controlling agent containing a conditioned medium and an ethanol extract or a hot water extract is prepared.
[0101]
Using the sprayer, the obtained control agent is sprayed on a place where pests are likely to occur or on a crop or soil. As a result, an insect repellent effect can be obtained, and plant diseases can be prevented.
[0102]
【The invention's effect】
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to the microorganism of this invention, various plant pathogenic bacteria can be controlled, the growth of plant pathogenic bacteria can be suppressed, the soil can be improved without causing soil diseases, and various soil diseases can be controlled. It has an excellent effect. Further, according to the control agent of the present invention, various diseases and the like can be prevented by a simple method such as supply to soil, supply to fertilizer, etc., supply to plant roots, etc. On the other hand, it has an excellent effect of exhibiting antibacterial activity, repelling pests, and improving soil that is unlikely to cause soil diseases. Furthermore, according to the control method of the present invention, various diseases and the like can be prevented by a simple method such as supply to soil and the like, supply to fertilizers and the like, and supply to plant roots. On the other hand, it has an excellent effect of exhibiting antibacterial activity, repelling pests, and improving soil that is unlikely to cause soil diseases.
[0103]
[Sequence list]

Claims

A microorganism belonging to the genus Bacillus , which has an ability to inhibit the growth of plant pathogens.

Plant pathogens, Aspergillus flavus link freeze F gray bar (Aspergillus flavus Link Fries f glaber) , Aspergillus flavus link freeze bar. Oryzae ( Aspergillus flavus Link Fries var. Oryzae), Aspergillus niger van Tieghem, Mucor Hemaris Wemerf. Hemarisu (Mucor hiemalis Wehmer f.hiemalis), Penicillium chrysogenum transchromosomic (Penicillium chrysogenum Thom), Rhizopus oryzae Went and Prinsen Giringuzu (Rhizopus oryzae Went & Prinsen Geerings) , Candida albicans (Robin) Burke Really [Candida albicans (Robin) Berkhont], Cryptococcus neoformans (Sanfelice) Villemin, Pichia membrane branifaciens (EC Hansen) C. Hansen [ Pichia membrani faciaens (EC Hansen) C. Hansen], Saccharomyces cerevisiae Meyer EK XE. C. Hansen [ Saccharomyces cerevisiae Meyer ex. C. Hansen], Rhizoctonia solani cane O-28 strain ( Rhizoctonia solani kuehn O-28), Rosellinia necatrix , Fusarium oxysprum F. Species spunsciae O-27 strain ( Fusarium oxysprum f.sp.spnaciae O-27), and Fusarium oxysprum F. Species RadiSys - Raikoperushichi is O-34 strain of at least one microorganism that (Fusarium oxysprum f.sp.Radicis-lycopersici O- 34) selected from the group consisting of microorganisms belonging to Bacillus (Bacillus) genus claim 1, wherein .

FERM P-19178, which is FERM P-19179 and microorganisms selected from the group consisting of FERM P-19180, according to claim 1 or 2 wherein the Bacillus (Bacillus) microorganism belonging to the genus.

The following a) to c):
a) a microorganism belonging to the genus Bacillus according to any one of claims 1 to 3,
b) conditioned medium of a microorganism belonging to Bacillus (Bacillus) genus according to any one of claims 1 to 3, and c) according to any one of claims 1 to 3 Bacillus (Bacillus) genus of microorganisms belonging A pest control agent for plants, comprising as an active ingredient at least one selected from the group consisting of extracts.

The control agent according to claim 4, further comprising a pest repellent component derived from an Asteraceae plant or a Zingiberaceae plant.

The control agent according to claim 5, wherein the pest repellent component is an extract of asteraceae plants or an extract of a ginger plant.

The following a) to c):
a) a microorganism belonging to the genus Bacillus according to any one of claims 1 to 3,
b) culture of a microorganism belonging to Bacillus (Bacillus) genus according to any one of claims 1 to 3, and c) according to claim 1 any one Bacillus (Bacillus) genus of microorganisms belonging A method for controlling pests, comprising supplying at least one selected from the group consisting of extracts to a plant or soil for growing the plant.

The method for controlling pests according to claim 7, further comprising supplying a pest repellent component derived from an Asteraceae plant or a Zingiberaceous plant to the plant or soil for growing the plant.

Pests, Aspergillus flavus link freeze F gray bar (Aspergillus flavus Link Fries f glaber) , Aspergillus flavus link freeze bar. Oryzae, Aspergillus flavus Link Friesvar. Oryzae, Aspergillus niger van Tieghem, Mucor Hemaris Wemer F. Hemarisu (Mucor hiemalis Wehmer f.hiemalis), Penicillium chrysogenum transchromosomic (Penicillium chrysogenum Thom), Rhizopus oryzae Went and Prinsen Giringuzu (Rhizopus oryzae Went & Prinsen Geerings) , Candida albicans (Robin) Burke Really [Candida albicans (Robin) Berkhont], Cryptococcus neoformans (Sanfelice) Villemin, Pichia Membrani Faciens (EC Hansen) E. C. Hansen [ Pichia membrani faciaens (EC Hansen) C. Hansen], Saccharomyces cerevisiae Meyer EK XE. C. Hansen [ Saccharomyces cerevisiae Meyer ex. C. Hansen], Rhizoctonia solani cane O-28 strain ( Rhizoctonia solani kuehn O-28), Rosellinia necatrix , Fusarium oxysprum F. Species spunssiae O-27 strain ( Fusarium oxysprum f.sp.spnaciae O-27), Fusarium oxysprum F. The pest according to claim 7, wherein the pest is at least one selected from the group consisting of Fusarium oxysprum f. Sp. Radicis-lycopersici O-34, Pea genus aphid, and Conaga. How to control.

A nucleic acid having the nucleotide sequence shown in any one of SEQ ID NOs: 1 to 3.