【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、化粧品、衛生用品、医薬部外品及び医薬品分野に於いて使用される新規な外用アトピー性皮膚炎改善剤に関する。より詳細には、優れた生理活性を有し、しかも安全性の高いヒト及び動物用の外用アトピー性皮膚炎改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、花粉症及びアトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患の患者数が増加し、大きな問題となっている。特に、乳幼児の多くが発症するアトピー性皮膚炎は、第1次成長期の心身の発育に於いて深刻な影響を与えている。また、通常、このようなアトピー性皮膚炎は思春期に完治するが、完治に至らず成人型難治性アトピー性皮膚炎に悪化したり、或いは、成人後初めて発症したりするケ−スもあり、それらは何れも増加傾向にある。なお、犬や猫等の小動物におけるアトピー性皮膚炎も決して稀な症例ではなくなってきている。
【０００３】
アトピー性皮膚炎発症の原因としては、遺伝的素因に加えて、住環境や食生活の変化、大気汚染や水質汚染及び心理的ストレスの増加等が挙げられているが、決定的な要因が不明であり、予防や治療の為の十分な手立てはない。病態の研究も多くの研究機関でなされているが、未だ解明されていない点が多く、根本的な治療による完治は困難な状況にあり、現状では、対処療法による症状改善が唯一の治療法となっている。
【０００４】
アトピー性皮膚炎の症状が重篤な場合は、症状の増悪阻止や一時的な治癒を目的として、ステロイド外用剤・非ステロイド系消炎外用剤等の使用、抗アレルギー剤・抗ヒスタミン剤・ステロイド剤等の内服、更には、減感作療法・アレルゲン除去食療法・スキンケア・生活環境の改善等、様々な試みがなされている。しかし、これらの治療によって一時的に異常のない皮膚状態まで改善させることはできても、短期間のうちに症状が再発することが多く、長期にわたる治療期間を必要とすることが多い。更に、長期間の投薬により治療費が嵩む、副作用が懸念される等の問題もある。
例えば、抗ヒスタミン剤はある程度の止痒効果はあるものの持続性に欠け、服用後に倦怠感や眠気を生じるものがあり、日常生活に支障を来す場合がある。また、ステロイド剤は皮膚症状の改善に高い効果を示すものの、大量使用による副腎皮質機能不全などの強い副作用があり、使用にあたっては医師の管理による十分な注意が必要で、長期連用は困難であった。
【０００５】
一方、アトピー性皮膚炎症状が軽度の場合や乳幼児に於いては、薬剤の副作用の問題を避ける為、患部の直接的症状改善を目的として、低濃度の抗炎症剤やステロイド剤等の外用剤が使用されるが、十分な効果は期待出来ない。これはアトピー性皮膚炎が増加傾向にある小動物に於いても同様である。特に、乳幼児や小動物への外用剤の使用は、剤の付着した手や剤の塗布部を直接舐めることによる経口での体内取り込みの危険性、及び薬剤の効果低下の問題がある。
従って、アトピー性皮膚炎に対する改善効果があり、経口で接取した場合でも安全性に問題がなく、日常的且つ簡易に使用可能な外用剤が求められている。
【０００６】
アトピー性皮膚炎改善作用を有する物質として、甜菜由来のオリゴ糖であるラフィノース（特許文献１参照）が提案されているが、外用剤としての効果は不明である。また、ティートリー抽出物（特許文献２参照）、ティシュー インヒビター オブ メタロプロテアーゼ類からなる群から選ばれた少なくとも一つのティシュー インヒビターを有効成分（特許文献３参照）とする外用剤等が提案されているが、何れも物質の安定性及び効果の持続性は定かではない。
【０００７】
キシロオリゴ糖には、コーンコブやバガスから酵素処理により製造されるものや、リグノセルロースから酵素処理及びＮＦ膜濃縮により製造されるものがあり、何れも整腸作用については既に開示されている（特許文献４及び５参照）。
また、酸性キシロオリゴ糖に関しては、水耕栽培に於けるスギ挿穂の発根促進効果の記載（非特許文献１参照）があるが、アトピー性皮膚炎に関する開示はなされていない。
【０００８】
【非特許文献１】
石原光朗 セルラーゼ研究会報第１６巻 ２００１年、ｐ１７〜２６
【特許文献１】
特開平１１−２５５６５６
【特許文献２】
特開平１１−２５５６６１
【特許文献３】
特開２０００−８６５３３
【特許文献４】
特許２６４３３６８
【特許文献５】
特開２０００−３３３６９２
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明に於いては、アトピー性皮膚炎に対する改善効果があり、安全性が高い外用剤を提供することを目的とした。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決する為、アトピー性皮膚炎モデル動物に於ける皮膚炎改善効果を指標として、外用剤としての使用が可能なアトピー性皮膚炎改善剤のスクリーニングを行った。その結果、ウロン酸残基が付加した酸性キシロオリゴ糖組成物が優れたアトピー性皮膚炎改善効果を有することを見出し、安全性も優れることより、本発明を完成するに至った。
【００１１】
本発明は以下の構成を採用する。即ち、本発明の第１は、「キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖を有効成分とする外用アトピー性皮膚炎改善剤」である。
【００１２】
本発明の第２は、前記第１発明において、該酸性キシロオリゴ糖はキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が５．０〜１５．０であることを特徴とする外用アトピー性皮膚炎改善剤である。
【００１３】
本発明の第３は、前記第１または第２の発明において、前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」であることを特徴とする外用アトピー性皮膚炎改善剤である。
【００１４】
本発明の第４は、前記第１〜第３のいずれかの発明において、ウロン酸がグルクロン酸もしくは4-O-メチル-グルクロン酸であることを特徴とする外用アトピー性皮膚炎改善剤である。
【００１５】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の構成について詳述する。
キシロオリゴ糖とは、キシロースの２量体であるキシロビオース、３量体であるキシロトリオース、あるいは４量体〜２０量体程度のキシロースの重合体を言う。本発明で使用する酸性キシロオリゴ糖とは、キシロオリゴ糖１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を有するものを言う。
また、キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であっても良い。一般的には、天然物から製造するために、このような組成物として得られることが多く、以下、主として酸性キシロオリゴ糖組成物について説明する。
該組成物は、平均重合度で示す数値は正規分布をとる酸性キシロオリゴ糖のキシロース鎖長の平均値で、２．０〜１５．０が好ましく、５．０〜１５．０がより好ましい。キシロース鎖長の上限と下限との差は１５以下が好ましく、１０以下がより好ましい。ウロン酸は天然では、ペクチン、ペクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、デルタマン硫酸等の種々の生理活性を持つ多糖の構成成分として知られている。本発明におけるウロン酸としては特に限定されないが、グルクロン酸もしくは4-O-メチル-グルクロン酸が好ましい。
【００１６】
上記のような酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることが出来れば、その製法は特に限定されないが、（１）木材からキシランを抽出し、それを酵素的に分解する方法〔非特許文献１参照〕と、（２）リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離する方法が挙げられる。
特に、（２）の方法が５〜１５量体のように比較的高い重合度のものを大量に安価に製造することが可能である点で好ましく、以下にその概要を示す。
【００１７】
酸性オリゴ糖組成物は、化学パルプ由来のリグノセルロース材料を原料とし、加水分解工程、濃縮工程、希酸処理工程、精製工程を経て得ることができる。加水分解工程では、希酸処理、高温高圧の水蒸気（蒸煮・爆砕）処理もしくは、ヘミセルラーゼによってリグノセルロース中のキシランを選択的に加水分解し、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体として得る。濃縮工程では逆浸透膜等により、キシロオリゴ糖−リグニン様物質複合体が濃縮され、低重合度のオリゴ糖や低分子の夾雑物などを除去することができる。濃縮工程は逆浸透膜を用いることが好ましいが、限外濾過膜、塩析、透析などでも可能である。得られた濃縮液の希酸処理工程により、複合体からリグニン様物質が遊離し、酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖を含む希酸処理液を得ることができる。この時、複合体から切り離されたリグニン様物質は酸性下で縮合し沈殿するのでセラミックフィルターや濾紙などを用いたろ過等により除去することができる。希酸処理工程では、酸による加水分解を用いることが好ましいが、リグニン分解酵素などを用いた酵素分解などでも可能である。
【００１８】
精製工程は、限外濾過工程、脱色工程、吸着工程からなる。一部のリグニン様物質は可溶性高分子として溶液中に残存するが、限外濾過工程で除去され、着色物質等の夾雑物は活性炭を用いた脱色工程によってそのほとんどが取り除かれる。限外濾過工程は限外濾過膜を用いることが好ましいが、逆浸透膜、塩析、透析などでも可能である。こうして得られた糖液中には酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖が溶解している。イオン交換樹脂を用いた吸着工程により、この糖液から酸性キシロオリゴ糖のみを取り出すことができる。糖液をまず強陽イオン交換樹脂にて処理し、糖液中の金属イオンを除去する。ついで強陰イオン交換樹脂を用いて糖液中の硫酸イオンなどを除去する。この工程では、硫酸イオンの除去と同時に弱酸である有機酸の一部と着色成分の除去も同時に行っている。強陰イオン交換樹脂で処理された糖液はもう一度強陽イオン交換樹脂で処理し更に金属イオンを除去する。最後に弱陰イオン交換樹脂で処理し、酸性キシロオリゴ糖を樹脂に吸着させる。
【００１９】
樹脂に吸着した酸性オリゴ糖を、低濃度の塩（NaCl、CaCl2、KCl、MgCl2など）によって溶出させることにより、夾雑物を含まない酸性キシロオリゴ糖溶液を得ることができる。この溶液を、例えば、スプレードライや凍結乾燥処理により、白色の酸性キシロオリゴ糖組成物の粉末を得ることができる。
【００２０】
化学パルプ由来のリグノセルロースを原料とし、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体とした酸性キシロオリゴ糖組成物の上記製造法のメリットは、経済性とキシロースの平均重合度の高い酸性キシロオリゴ糖組成物が容易に得られる点にある。平均重合度は、例えば、希酸処理条件を調節するか、再度ヘミセルラーゼで処理することによって変えることが可能である。また、弱陰イオン交換樹脂溶出時に用いる溶出液の塩濃度を変化させることによって、１分子あたりに結合するウロン酸残基の数が異なる酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることもできる。さらに、適当なキシラナーゼ、ヘミセルラーゼを作用させることによってウロン酸結合部位が末端に限定された酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることも可能である。
【００２１】
このようにして得られた酸性キシロオリゴ糖組成物は、水に溶解させたりまたはスプレードライヤーで乾燥し粉体に加工後、アトピー性皮膚炎改善剤とすることができる。また、外用用途に支障のない材質を用いてマイクロカプセル化したりリポソームに内含させて添加してもよい。アトピー性皮膚炎改善剤に於ける酸性キシロオリゴ糖組成物の含有率としては、０．００１〜５０％（以下全て質量％）の範囲で使用することができるが、０．０１〜２０％がより好ましい。
【００２２】
本発明の酸性キシロオリゴ糖組成物を配合したアトピー性皮膚炎改善剤の形態としては、適当な濃度の水溶液にした酸性キシロオリゴ糖自身を直接外用塗布しても良いが、アトピー性皮膚炎改善作用及び安全性等を損なわない範囲で、化粧水等の化粧品基材、入浴剤や敏感肌用クリーム等の医薬部外品基材、軟膏やローション等の医薬品基材と混合して使用することも出来る。
【００２３】
また、本発明の酸性キシロオリゴ糖組成物を配合したアトピー性皮膚炎改善剤は、ウエットティッシュ等の薬液に混合し、アトピー性皮膚炎改善用や敏感肌用の衛生用品として用いることも可能である。なお、上述の医薬品及び衛生用品の対象としては、ヒトだけではなく、動物用としても用いことも出来る。
【００２４】
【実施例】
以下、本発明について実施例により詳説する。本発明はこれにより限定されるものではない。まず、各測定法の概要、本発明で有効成分として含有させた酸性キシロオリゴ糖組成物ＵＸ１０、キシロース鎖長の短いＵＸ５及びＵＸ２の調製例１〜調製例３を示す。
【００２５】
＜測定法の概要＞
(1) 全糖量の定量：
全糖量は検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、フェノール硫酸法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
(2) 還元糖量の定量：
還元糖量は検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製、ソモジ−ネルソン法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
(3) ウロン酸量の定量：
ウロン酸は検量線をＤ−グルクロン酸（和光純薬工業（株）製）を用いて作製、カルバゾール硫酸法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
(4) 平均重合度の決定法：
サンプル糖液を５０℃に保ち１５０００ｒｐｍにて１５分遠心分離し不溶物を除去し上清液の全糖量を還元糖量（共にキシロース換算）で割って平均重合度を求めた。
(5) 酸性キシロオリゴ糖の分析方法：
オリゴ糖鎖の分布はイオンクロマトグラフ（ダイオネクス社製、分析用カラム：Ｃａｒｂｏ Ｐａｃ ＰＡ−１０）を用いて分析した。分離溶媒には１００ｍＭ ＮａＯＨ溶液を用い、溶出溶媒には前述の分離溶媒に酢酸ナトリウムを５００ｍＭとなるように添加し、溶液比で、分離溶媒：溶出溶媒＝１０：０〜４：６となるような直線勾配を組み分離した。得られたクロマトグラムより、キシロース鎖長の上限と下限との差を求めた。
(6) オリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数の決定法
サンプル糖液を５０℃に保ち１５０００ｒｐｍにて１５分遠心分離し不溶物を除去し上清液のウロン酸量（Ｄ−グルクロン酸換算）を還元糖量（キシロース換算）で割ってオリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数を求めた。
(7) 酵素力価の定義：
酵素として用いたキシラナーゼの活性測定にはカバキシラン（シグマ社製）を用いた。酵素力価の定義はキシラナーゼがキシランを分解することで得られる還元糖の還元力をＤＮＳ法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）を用いて測定し、１分間に１マイクロモルのキシロースに相当する還元力を生成させる酵素量を１ユニットとした。
【００２６】
＜酸性キシロオリゴ糖組成物の調製例＞
＜調整例１＞
混合広葉樹チップ（国内産広葉樹７０％、ユーカリ３０％）を原料として、クラフト蒸解及び酸素脱リグニン工程により、酸素脱リグニンパルプスラリー（カッパー価９．６、パルプ粘度２５．１ｃｐｓ）を得た。スラリーからパルプを濾別、洗浄した後、パルプ濃度１０％、ｐＨ８に調製したパルプスラリーを用いて以下のキシラナーゼによる酵素処理を行った。
【００２７】
バチルスｓｐ.Ｓ−２１１３株（独立行政法人産業技術総合研究所特許微生物寄託センター、寄託菌株FERM BP-5264）の生産するキシラナーゼを１単位／パルプｇとなるように添加した後、６０℃で１２０分間処理した。その後、濾過によりパルプ残渣を除去し、酵素処理液１０５０Ｌを得た。
【００２８】
次に、得られた酵素処理液を濃縮工程、希酸処理工程、精製工程の順に供した。
濃縮工程では、逆浸透膜（日東電工（株）製、RO NTR-7410）を用いて濃縮液（４０倍濃縮）を調製した。希酸処理工程では、得られた濃縮液のｐＨを３．５に調整した後、１２１℃で６０分間加熱処理し、リグニンなどの高分子夾雑物の沈殿を形成させた。さらに、この沈殿をセラミックフィルター濾過で取り除くことにより、希酸処理溶液を得た。
【００２９】
精製工程では、限外濾過・脱色工程、吸着工程の順に供した。限外濾過・脱色工程では、希酸処理溶液を限外濾過膜（オスモニクス社製、分画分子量８０００）を通過させた後、活性炭（和光純薬（株）製）７７０ｇの添加及びセラミックフィルター濾過により脱色処理液を得た。吸着工程では、脱色処理液を強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）、強陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＡ４０８）、強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）各１００ｋｇを充填したカラムに順次通過させた後、弱陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＷＡ３０）１００ｋｇを充填したカラムに供した。この弱陰イオン交換樹脂充填カラムから７５ｍＭ NaCl溶液によって溶出した溶液をスプレードライ処理することによって、酸性キシロオリゴ糖組成物の粉末（全糖量３５３ｇ、回収率１３．１％）を得た。以下、この酸性キシロオリゴ糖組成物をＵＸ１０とする。前述の測定方法により、ＵＸ１０は平均重合度１０．３、キシロース鎖長の上限と下限との差は１０、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を１つ含む糖組成化合物であった。
【００３０】
＜調製例２＞
調整例１と同様にして得られた希酸処理液１１６０ｍｌに、スミチームＸ（新日本化学工業（株）製のキシラナーゼ）２８ｍｇを添加し、４０℃で２０時間の反応させた。加熱処理（７０℃、１時間）により酵素を失活させた後、スミチームＸ処理液を調整例１と同様の精製工程を経て、酸性キシロオリゴ糖粉末（全糖量２１．３ｇ、回収率２２．２％）を得た。以下、この酸性キシロオリゴ糖をＵＸ５とする。前述の測定方法により、ＵＸ５は平均重合度４．８、キシロース鎖長の上限と下限との差は９、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を１つ含む糖組成化合物であった。
【００３１】
＜調製例３＞
調整例１より得られたＵＸ１０の１０％水溶液１００ｍｌに、スミチームＸ（新日本化学工業（株）製のキシラナーゼ）５０ｍｇを添加し、６０℃、２０時間反応後、弱アニオン交換樹脂（ＷＡ３０）１０ｇを充填したカラムに供した。カラムを水洗した後、７５ｍＭ NaCl溶液によって溶出した溶液を凍結乾燥することによって、酸性キシロオリゴ糖粉末（全糖量２．１ｇ、回収率２１％）を得た。以下、この酸性キシロオリゴ糖をＵＸ２とする。前述の測定方法により、ＵＸ２は平均重合度２．３、キシロース鎖長の上限と下限との差は２、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を１つ含む糖組成化合物であった。
【００３２】
次に、得られた酸性キシロオリゴ糖組成物を用いて実施したアトピー性皮膚炎改善試験、安定性及び安全性試験の概要と結果を、それぞれ、実施例１（動物試験）、実施例２（ヒト試験）、実施例３（安全性試験）及び実施例４（安定性試験）に示す。
【００３３】
＜実施例１：動物試験＞
アトピー性皮膚炎改善試験を、アトピー性皮膚炎モデル動物として汎用されているＮＣ／ＮｇａＴｎｄＣｒｊマウス（以下ＮＣマウスと略：日本チャールズ・リバー（株））を用いて実施した。以下にその概要を示す。
【００３４】
ＮＣマウス（雄、６週齢、ＳＰＦグレード）を購入し、１週間の予備飼育終了後、毛刈りしたＮＣマウス腹部に５％の２，４，６−トリニトロクロロベンゼン（以下ＰｉＣｌと略）を塗布することにより、感作させた。更に、１週間後、毛刈りしたＮＣマウス背部に０．８％ＰｉＣｌ溶液を塗布して、アトピー性皮膚炎を誘発させた。誘発処理は週１回（毎週金曜日）実施し、試験終了まで継続した。
誘発開始から５週目に皮膚炎症状及び体重が同じになるようにＮＣマウスを揃え、対照群、酸性キシロオリゴ糖組成物ＵＸ１０塗布群（以下ＵＸ１０群と略）、ＵＸ５塗布群（以下ＵＸ５群と略）、ＵＸ２塗布群（以下ＵＸ２群と略）の４群（各群６匹）に群分けした。なお、全飼育期間中の餌〔ＭＦ固形飼料（オリエンタル酵母工業（株）製）〕と水は自由摂取とし、飼育は通常の環境下（温度２３±１℃、湿度５５％±５％）で実施した。
各サンプルは、ピペットを用いてＮＣマウス背部に外用塗布した。塗布期間及び頻度は、誘発処理開始後５週目から試験終了までの５週間の期間中、２回／週（毎週月・水曜日）とした。また、１回の塗布量は、基材に溶解させた５％の酸性キシロオリゴ糖組成物２００μｌ（ＵＸ１０群、ＵＸ５群、ＵＸ２群）、或いは、基材２００μｌ（対照群）とした。基材としては、市販ローション（資生堂（株）製、肌水）を用いた。
【００３５】
試験期間終了後のマウス皮膚病変部の状態を観察、写真撮影し、下記基準に従って各マウス皮膚炎症状のスコア判定を実施した。スコアは、▲１▼掻痒症、▲２▼発赤・出血、▲３▼浮腫、▲４▼擦傷・組織欠損、▲５▼痂皮形成・乾燥の各項目について、症状の軽い順から０〜５の５段階評価の和とした。また、写真の第三者によるスコア判定確認も実施した。結果を表１に示す。
【００３６】
【表１】
【００３７】
ＵＸ１０群及びＵＸ５群に於いて、皮膚炎改善効果が見られた。特に、ＵＸ１０の皮膚炎改善作用は非常に強いということが判明した。
【００３８】
＜実施例２：ヒト試験＞
酸性キシロオリゴ糖組成物ＵＸ１０を用いて、以下の要領でヒト効果試験を実施した。軽度から中程度の皮膚炎症症状を呈したアトピー性皮膚炎患者３０名（年齢：２３〜３５歳、性別：女性１９名・男性１１名）を１５名ずつ２群に分け、上記と同基材に溶解した１％ＵＸ１０或いは基材を適量、患部に外用塗布させた（１日１回、３ヶ月間）。３ヶ月後に、皮膚炎症状態を観察し、試験開始前と比較した。なお、判定基準は、著効、有効、やや有効、無効及び悪化の５段階とした。結果を表２に示す。
【００３９】
【表２】
【００４０】
ＵＸ１０投与群に於いて、アトピー性皮膚炎の明らかな改善が認められた。
【００４１】
＜実施例３：安全性試験＞
＜皮膚刺激性試験＞
各酸性キシロオリゴ糖組成物の５％溶液１００μｌ（溶媒：上記基材）を、それぞれ、除毛後のＣ３Ｈマウス（雄、６週齢、日本チャールズリバー（株）製）の背皮に、約１ヶ月間、連日塗布した（各群１０匹）。塗布期間及び塗布期間後の２週間、マウス背皮において、紅斑、浮腫、炎症等の異状は特に観察されなかった。また、対照（上記基材塗布群）と比較し、体重推移においても有意な差が認められなかった。これは、皮膚塗布における酸性キシロオリゴ糖の安全性の高さを示す。
【００４２】
＜急性経口毒性試験＞
各酸性キシロオリゴ糖組成物の６０％水溶液を、それぞれ、ＩＣＲ系マウス（雄、６週齢、日本チャールズリバー（株）製）に胃ゾンデを用いて、２週間、連日経口投与した（投与量：５ｇ／マウス体重１Ｋｇ／日、各群１０匹）。投与期間及び投与後の２週間、マウス死亡例はなかった。また、ブランク（水投与群）と比較し、体重推移においても有意な差が認められなかった。これは、経口摂取における酸性キシロオリゴ糖の安全性の高さを示す。
【００４３】
＜実施例４：安定性試験＞
酸性キシロオリゴ糖組成物の６０％水溶液を調整後、室温で保存した。６ヶ月後、イオンクロマトグラムに於ける変化は認められなかった。これは、酸性キシロオリゴ糖の安定性の高さを示す。
【００４４】
【発明の効果】
本発明で得られる酸性キシロオリゴ糖組成物を含有した外用アトピー性皮膚炎改善剤は、安全性が高く、優れた薬理活性を有しており、化粧品、衛生用品、医薬部外品及び医薬品分野に於いて利用することが出来る。また、動物用の衛生用品や医薬品としても用いることが可能である。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel external atopic dermatitis ameliorating agent used in the cosmetics, hygiene articles, quasi-drugs and pharmaceutical fields. More specifically, the present invention relates to an external atopic dermatitis ameliorating agent for humans and animals having excellent physiological activity and high safety.
[0002]
[Prior art]
In recent years, the number of patients with allergic diseases such as allergic rhinitis, allergic conjunctivitis, bronchial asthma, hay fever, and atopic dermatitis has increased, and has become a major problem. In particular, atopic dermatitis, which occurs in many infants, has a serious effect on the mental and physical development during the first growth period. Usually, such atopic dermatitis is completely cured in puberty, but in some cases, it does not reach complete cure and worsens into adult-type intractable atopic dermatitis, or develops for the first time after adulthood. , All of them tend to increase. Atopic dermatitis in small animals such as dogs and cats is no longer a rare case.
[0003]
Causes of atopic dermatitis include genetic predisposition, changes in living environment and dietary habits, air and water pollution, and increased psychological stress, but the definitive factors are unknown. And there is no adequate measure for prevention or treatment. Although pathological research has been conducted by many research institutes, there are many points that have not been elucidated yet, and it is difficult to completely cure by fundamental treatment.Currently, symptomatic improvement by coping therapy is the only treatment method. Has become.
[0004]
If the symptoms of atopic dermatitis are severe, use of external steroids, non-steroidal anti-inflammatory agents, antiallergic agents, antihistamines, steroids, etc. for the purpose of preventing exacerbation of the symptoms and temporarily curing Various attempts have been made for oral administration, furthermore, desensitization therapy, allergen-removing diet therapy, skin care, improvement of living environment, and the like. However, although these treatments can temporarily improve normal skin conditions, the symptoms often recur within a short period of time, and often require a long treatment period. Furthermore, there are also problems such as an increase in treatment costs due to long-term administration and a fear of side effects.
For example, an antihistamine has a certain antipruritic effect but lacks persistence, and may cause fatigue and drowsiness after taking the drug, which may hinder daily life. In addition, although steroids are highly effective in improving skin symptoms, they have strong side effects such as adrenocortical dysfunction due to large-volume use. Was.
[0005]
On the other hand, in the case of mild atopic dermatitis or in infants, low-concentration external preparations such as anti-inflammatory drugs and steroids are used for the purpose of improving the direct symptoms of the affected area in order to avoid the side effects of the drug. Is used, but a sufficient effect cannot be expected. This is the same in small animals in which atopic dermatitis tends to increase. In particular, the use of an external preparation for infants and small animals has a risk of ingestion into the body orally by directly licking the hand to which the preparation is adhered or the application area of the preparation, and a reduction in the effect of the preparation.
Therefore, there is a need for an external preparation that has an effect of improving atopic dermatitis, has no problem in safety even when taken orally, and can be used routinely and easily.
[0006]
Raffinose which is an oligosaccharide derived from sugar beet (see Patent Document 1) has been proposed as a substance having an atopic dermatitis ameliorating effect, but its effect as an external preparation is unknown. Also, there have been proposed external preparations including an extract of tea tree (see Patent Document 2) and at least one tissue inhibitor selected from the group consisting of tissue inhibitors of metalloproteases as an active ingredient (see Patent Document 3). In any case, the stability of the substance and the persistence of the effect are not clear.
[0007]
Xylooligosaccharides include those produced from corn cob and bagasse by enzymatic treatment, and those produced from lignocellulose by enzymatic treatment and NF membrane concentration. 4 and 5).
As for acidic xylo-oligosaccharides, there is a description of a root-promoting effect of Japanese cedar cuttings in hydroponics (see Non-Patent Document 1), but there is no disclosure about atopic dermatitis.
[0008]
[Non-patent document 1]
Mitsuaki Ishihara Cellulase Research Bulletin Vol.16, 2001, pp.17-26
[Patent Document 1]
JP-A-11-255656
[Patent Document 2]
JP-A-11-255661
[Patent Document 3]
JP 2000-86533
[Patent Document 4]
Patent 2643368
[Patent Document 5]
JP 2000-333892
[0009]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a highly safe external preparation having an effect of improving atopic dermatitis.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
In order to solve the above-mentioned problems, screening for an atopic dermatitis ameliorating agent that can be used as an external preparation was performed using the dermatitis ameliorating effect in an atopic dermatitis model animal as an index. As a result, they have found that an acidic xylo-oligosaccharide composition to which a uronic acid residue has been added has an excellent atopic dermatitis ameliorating effect, and that the present invention has been completed because of its excellent safety.
[0011]
The present invention employs the following configuration. That is, the first aspect of the present invention is an "external atopic dermatitis ameliorating agent comprising an acidic xylo-oligosaccharide having a uronic acid residue in a xylo-oligosaccharide molecule as an active ingredient".
[0012]
In a second aspect of the present invention, in the first aspect, the acidic xylo-oligosaccharide is a mixed composition of oligosaccharides having different degrees of polymerization of xylose, and has an average degree of polymerization of 5.0 to 15.0. It is a topical atopic dermatitis improving agent.
[0013]
A third aspect of the present invention is the method according to the first or second aspect, wherein the acidic xylo-oligosaccharide is obtained by treating a lignocellulosic material enzymatically and / or physicochemically to form a complex of a xylo-oligosaccharide component and a lignin component. Then, the complex is subjected to an acid hydrolysis treatment to obtain a xylooligosaccharide mixture. From the obtained xylooligosaccharide mixture, a xylooligosaccharide having at least one uronic acid residue as a side chain in one molecule is separated from the resulting xylooligosaccharide mixture. A topical atopic dermatitis ameliorating agent.
[0014]
A fourth aspect of the present invention is the external atopic dermatitis ameliorating agent according to any one of the first to third aspects, wherein the uronic acid is glucuronic acid or 4-O-methyl-glucuronic acid. .
[0015]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in detail.
The xylooligosaccharide refers to xylobiose, which is a dimer of xylose, xylotriose, which is a trimer, or a polymer of xylose of about 4 to 20 mer. The acidic xylo-oligosaccharide used in the present invention refers to an xylo-oligosaccharide having at least one uronic acid residue in one molecule.
Further, a mixed composition of oligosaccharides having different degrees of polymerization of xylose may be used. In general, such a composition is often obtained because it is produced from a natural product. Hereinafter, the acidic xylo-oligosaccharide composition will be mainly described.
In the composition, the value indicated by the average degree of polymerization is an average value of the xylose chain length of the acidic xylo-oligosaccharide having a normal distribution, and is preferably 2.0 to 15.0, more preferably 5.0 to 15.0. The difference between the upper and lower limits of the xylose chain length is preferably 15 or less, more preferably 10 or less. Uronic acid is naturally known as a constituent component of polysaccharides having various physiological activities such as pectin, pectic acid, alginic acid, hyaluronic acid, heparin, chondroitin sulfate, and deltaman sulfate. The uronic acid in the present invention is not particularly limited, but is preferably glucuronic acid or 4-O-methyl-glucuronic acid.
[0016]
As long as the acidic xylo-oligosaccharide composition as described above can be obtained, its production method is not particularly limited, but (1) a method of extracting xylan from wood and enzymatically decomposing it, [see Non-patent Document 1] (2) treating the lignocellulosic material enzymatically and / or physicochemically to obtain a complex of a xylo-oligosaccharide component and a lignin component, and then subjecting the complex to acid hydrolysis treatment to obtain a xylo-oligosaccharide mixture; A method of separating a xylo-oligosaccharide having at least one or more uronic acid residue in one molecule from a resulting xylo-oligosaccharide mixture.
In particular, the method (2) is preferable in that it can produce a large amount of a polymer having a relatively high degree of polymerization such as a 5- to 15-mer at a low cost, and the outline thereof is described below.
[0017]
The acidic oligosaccharide composition can be obtained using a lignocellulose material derived from chemical pulp as a raw material, and undergoing a hydrolysis step, a concentration step, a dilute acid treatment step, and a purification step. In the hydrolysis step, xylan in lignocellulose is selectively hydrolyzed by dilute acid treatment, high-temperature high-pressure steam (steaming / explosion) treatment, or hemicellulase, and a high-molecular-weight complex consisting of xylo-oligosaccharide and lignin is converted into an intermediate. Get as a body. In the concentration step, the xylo-oligosaccharide-lignin-like substance complex is concentrated by a reverse osmosis membrane or the like, so that oligosaccharides having a low degree of polymerization and low molecular impurities can be removed. It is preferable to use a reverse osmosis membrane for the concentration step, but it is also possible to use an ultrafiltration membrane, salting out, dialysis, or the like. A lignin-like substance is released from the complex by the dilute acid treatment step of the obtained concentrate, and a dilute acid treatment liquid containing acidic xylo-oligosaccharide and neutral xylo-oligosaccharide can be obtained. At this time, the lignin-like substance separated from the complex is condensed and precipitated under acidic conditions, and can be removed by filtration using a ceramic filter, filter paper, or the like. In the dilute acid treatment step, it is preferable to use hydrolysis with an acid, but enzymatic decomposition using a lignin-degrading enzyme or the like is also possible.
[0018]
The purification step includes an ultrafiltration step, a decolorization step, and an adsorption step. Some lignin-like substances remain in the solution as soluble polymers, but are removed in an ultrafiltration step, and most of impurities such as coloring substances are removed in a decolorization step using activated carbon. It is preferable to use an ultrafiltration membrane in the ultrafiltration step, but it is also possible to use a reverse osmosis membrane, salting out, dialysis or the like. Acid xylo-oligosaccharide and neutral xylo-oligosaccharide are dissolved in the sugar solution thus obtained. By the adsorption step using an ion exchange resin, only the acidic xylo-oligosaccharide can be extracted from the sugar solution. The sugar solution is first treated with a strong cation exchange resin to remove metal ions in the sugar solution. Next, sulfate ions and the like in the sugar solution are removed using a strong anion exchange resin. In this step, a part of the organic acid, which is a weak acid, and the coloring component are simultaneously removed at the same time as the removal of the sulfate ion. The sugar solution treated with the strong anion exchange resin is again treated with the strong cation exchange resin to further remove metal ions. Finally, the resin is treated with a weak anion exchange resin to adsorb the acidic xylo-oligosaccharide to the resin.
[0019]
The acidic xylo-oligosaccharide solution containing no impurities can be obtained by eluting the acidic oligosaccharide adsorbed on the resin with a low-concentration salt (NaCl, CaCl 2 , KCl, MgCl 2 or the like). A white powder of the acidic xylo-oligosaccharide composition can be obtained by, for example, spray-drying or freeze-drying this solution.
[0020]
Using lignocellulose derived from chemical pulp as a raw material, the advantages of the above-described method for producing an acidic xylo-oligosaccharide composition using a high-molecular-weight complex consisting of xylo-oligosaccharide and lignin as intermediates are economical and acidic with high average degree of polymerization of xylose. The xylo-oligosaccharide composition is easily obtained. The average degree of polymerization can be changed by, for example, adjusting the dilute acid treatment conditions or treating again with hemicellulase. In addition, by changing the salt concentration of the eluate used for elution of the weak anion exchange resin, an acidic xylo-oligosaccharide composition having a different number of uronic acid residues bound per molecule can be obtained. Furthermore, it is also possible to obtain an acidic xylo-oligosaccharide composition in which the uronic acid binding site is restricted at the terminal by reacting an appropriate xylanase or hemicellulase.
[0021]
The acidic xylo-oligosaccharide composition thus obtained can be used as an atopic dermatitis ameliorating agent after being dissolved in water or dried with a spray drier and processed into powder. Alternatively, the material may be microencapsulated using a material that does not hinder external use, or may be added by being included in the liposome. The content of the acidic xylo-oligosaccharide composition in the atopic dermatitis ameliorating agent can be used in the range of 0.001 to 50% (hereinafter, all mass%), but 0.01 to 20% is more preferable. preferable.
[0022]
As a form of the atopic dermatitis improving agent containing the acidic xylo-oligosaccharide composition of the present invention, the acidic xylo-oligosaccharide itself in an aqueous solution of an appropriate concentration may be directly externally applied, but the atopic dermatitis improving effect and As long as safety is not impaired, it can be used by mixing with cosmetic bases such as lotion, quasi-drug bases such as bath salts and creams for sensitive skin, and pharmaceutical bases such as ointments and lotions. .
[0023]
Further, the atopic dermatitis improving agent containing the acidic xylo-oligosaccharide composition of the present invention can be mixed with a chemical solution such as a wet tissue and used as an atopic dermatitis improving or sensitive skin hygiene product. . The above-mentioned pharmaceuticals and hygiene articles can be used not only for humans but also for animals.
[0024]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples. The present invention is not limited by this. First, an outline of each measurement method, and Preparation Examples 1 to 3 of the acidic xylo-oligosaccharide composition UX10 and UX5 and UX2 having a short xylose chain length, which are contained as active ingredients in the present invention, are shown.
[0025]
<Outline of measurement method>
(1) Determination of total sugar content:
The total sugar amount was prepared using a calibration curve using D-xylose (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and quantified by the phenol-sulfuric acid method (reducing sugar quantification method, published by Gakkai Shuppan Center).
(2) Quantification of reducing sugar amount:
The amount of reducing sugar was prepared by using a calibration curve with D-xylose (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and quantified by the Somogyi-Nelson method (a method for determining reducing sugar, published by Gakkai Shuppan Center).
(3) Determination of uronic acid content:
For uronic acid, a calibration curve was prepared using D-glucuronic acid (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and quantified by the carbazole sulfate method (a method for determining reducing sugars, published by Gakkai Shuppan Center).
(4) Determination of average degree of polymerization:
The sample sugar solution was kept at 50 ° C. and centrifuged at 15000 rpm for 15 minutes to remove insolubles, and the total amount of sugar in the supernatant was divided by the amount of reducing sugar (both in terms of xylose) to determine the average degree of polymerization.
(5) Method for analyzing acidic xylo-oligosaccharides:
The distribution of the oligosaccharide chains was analyzed using an ion chromatograph (manufactured by Dionex, analytical column: Carbo Pac PA-10). As a separation solvent, a 100 mM NaOH solution is used, and as an elution solvent, sodium acetate is added to the above-mentioned separation solvent so as to have a concentration of 500 mM, and the separation solvent: elution solvent = 10: 0 to 4: 6 in a solution ratio. A linear gradient was set and separated. From the obtained chromatogram, the difference between the upper and lower limits of the xylose chain length was determined.
(6) Method for determining the number of uronic acid residues per oligosaccharide molecule The sample sugar solution was kept at 50 ° C. and centrifuged at 15,000 rpm for 15 minutes to remove insolubles, and the amount of uronic acid in the supernatant (D-glucuronic acid) ) Was divided by the reducing sugar amount (xylose conversion) to obtain the number of uronic acid residues per oligosaccharide molecule.
(7) Definition of enzyme titer:
The activity of xylanase used as the enzyme was measured using Kabaxylan (Sigma). The enzyme titer is defined by measuring the reducing power of reducing sugars obtained by xylanase by decomposing xylan using the DNS method (quantifying method for reducing sugars, published by Gakkai Shuppan Center) and measuring 1 micromole of xylose per minute. The amount of the enzyme that generates a reducing power corresponding to was set to 1 unit.
[0026]
<Preparation example of acidic xylo-oligosaccharide composition>
<Adjustment example 1>
Using mixed hardwood chips (domestic hardwood 70%, eucalyptus 30%) as raw materials, an oxygen delignified pulp slurry (Kappa number 9.6, pulp viscosity 25.1 cps) was obtained by a kraft digestion and oxygen delignification step. After the pulp was separated from the slurry by filtration and washed, a pulp slurry prepared at a pulp concentration of 10% and a pH of 8 was subjected to the following enzyme treatment with xylanase.
[0027]
After adding xylanase produced by Bacillus sp. Strain S-2113 (Patent Microorganisms Depositary Center, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, deposited strain FERM BP-5264) at 1 unit / g of pulp, the mixture was added at 120 ° C at 60 ° C. Minutes. Thereafter, the pulp residue was removed by filtration to obtain 1050 L of an enzyme-treated solution.
[0028]
Next, the obtained enzyme-treated solution was subjected to a concentration step, a dilute acid treatment step, and a purification step in this order.
In the concentration step, a concentrated liquid (40-fold concentration) was prepared using a reverse osmosis membrane (RO NTR-7410, manufactured by Nitto Denko Corporation). In the dilute acid treatment step, the pH of the obtained concentrated solution was adjusted to 3.5, followed by heat treatment at 121 ° C. for 60 minutes to form precipitates of high molecular impurities such as lignin. Further, the precipitate was removed by filtration with a ceramic filter to obtain a dilute acid-treated solution.
[0029]
In the purification step, the ultrafiltration / decolorization step and the adsorption step were performed in this order. In the ultrafiltration / decolorization step, the diluted acid-treated solution was passed through an ultrafiltration membrane (manufactured by Osmonix, fractionation molecular weight: 8000), and then added with 770 g of activated carbon (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and filtered by a ceramic filter. As a result, a decolorization treatment liquid was obtained. In the adsorption step, a strong cation exchange resin (PK218 manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), a strong anion exchange resin (PA408 manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), and a strong cation exchange resin (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) PK218) was sequentially passed through a column packed with 100 kg, and then supplied to a column filled with 100 kg of a weak anion exchange resin (WA30, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation). The solution eluted with the 75 mM NaCl solution from the column packed with the weak anion exchange resin was spray-dried to obtain an acidic xylo-oligosaccharide composition powder (total saccharide amount: 353 g, recovery rate: 13.1%). Hereinafter, this acidic xylo-oligosaccharide composition is referred to as UX10. According to the measurement method described above, UX10 was a saccharide composition compound having an average degree of polymerization of 10.3, a difference between the upper and lower limits of the xylose chain length of 10, and one uronic acid residue per molecule of acidic xylooligosaccharide.
[0030]
<Preparation Example 2>
To 1160 ml of the diluted acid treatment solution obtained in the same manner as in Preparation Example 1, 28 mg of Sumiteam X (xylanase manufactured by Shin Nippon Chemical Industry Co., Ltd.) was added, and reacted at 40 ° C. for 20 hours. After deactivating the enzyme by heat treatment (70 ° C., 1 hour), the Sumiteam X-treated solution was subjected to the same purification step as in Preparation Example 1 to obtain acidic xylo-oligosaccharide powder (total sugar amount: 21.3 g, recovery rate: 22.30 g). 2%). Hereinafter, this acidic xylo-oligosaccharide is referred to as UX5. According to the measurement method described above, UX5 was a sugar composition compound containing an average degree of polymerization of 4.8, a difference between the upper and lower limits of the xylose chain length of 9, and one uronic acid residue per acidic xylooligosaccharide molecule.
[0031]
<Preparation Example 3>
To 100 ml of a 10% aqueous solution of UX10 obtained from Preparation Example 1, 50 mg of Sumiteam X (xylanase manufactured by Shin Nippon Chemical Co., Ltd.) was added, and after reaction at 60 ° C. for 20 hours, 10 g of a weak anion exchange resin (WA30). Was applied to the column packed with. After washing the column with water, the solution eluted with a 75 mM NaCl solution was lyophilized to obtain an acidic xylo-oligosaccharide powder (total sugar amount 2.1 g, recovery rate 21%). Hereinafter, this acidic xylo-oligosaccharide is referred to as UX2. According to the measurement method described above, UX2 was a saccharide composition compound having an average degree of polymerization of 2.3, a difference between the upper and lower limits of the xylose chain length of 2, and one uronic acid residue per molecule of acidic xylooligosaccharide.
[0032]
Next, the outlines and results of the atopic dermatitis improvement test, stability and safety test performed using the obtained acidic xylo-oligosaccharide composition were described in Example 1 (animal test) and Example 2 (human Test), Example 3 (safety test) and Example 4 (stability test).
[0033]
<Example 1: Animal test>
The atopic dermatitis improvement test was carried out using NC / NgaTndCrj mice (hereinafter abbreviated as NC mice: Charles River Japan Co., Ltd.), which are widely used as atopic dermatitis model animals. The outline is shown below.
[0034]
An NC mouse (male, 6 weeks old, SPF grade) was purchased, and after 1 week of preliminary breeding, 5% 2,4,6-trinitrochlorobenzene (hereinafter abbreviated as PiCl) was placed on the abdomen of the shaved NC mouse. It was sensitized by application. Further, one week later, a 0.8% PiCl solution was applied to the back of the shaved NC mouse to induce atopic dermatitis. The induction treatment was performed once a week (every Friday) and continued until the end of the test.
Five weeks after the start of the induction, NC mice were prepared so that the skin irritations and body weights were the same. UX2 application group (hereinafter abbreviated as UX2 group) and four groups (six in each group). The feed (MF solid feed (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.)) and water during the whole breeding period are freely available, and breeding is carried out in a normal environment (temperature 23 ± 1 ° C., humidity 55% ± 5%). Carried out.
Each sample was externally applied to the back of the NC mouse using a pipette. The application period and frequency were set to twice a week (every month and Wednesday) during the five weeks from the start of the induction treatment to the end of the test. In addition, the amount of one application was 200 μl of the 5% acidic xylo-oligosaccharide composition dissolved in the substrate (UX10 group, UX5 group, UX2 group) or 200 μl of the substrate (control group). As a base material, a commercially available lotion (Shiseido Co., Ltd., skin water) was used.
[0035]
At the end of the test period, the state of the mouse skin lesions was observed and photographed, and the score of each mouse skin inflammatory condition was determined according to the following criteria. The score was 0 to 5 for each item of (1) pruritus, (2) redness / bleeding, (3) edema, (4) abrasion / tissue loss, (5) crust formation / drying, in order of lightness of symptoms. Of five-step evaluation. In addition, a third party of the photograph confirmed the score judgment. Table 1 shows the results.
[0036]
[Table 1]
[0037]
In the UX10 group and the UX5 group, the dermatitis improving effect was observed. In particular, it has been found that UX10 has a very strong dermatitis ameliorating effect.
[0038]
<Example 2: Human test>
Using the acidic xylo-oligosaccharide composition UX10, a human effect test was performed in the following manner. 30 atopic dermatitis patients with mild to moderate skin inflammatory symptoms (age: 23-35 years old, gender: 19 women, 11 men) were divided into two groups of 15 each, An appropriate amount of 1% UX10 or a base material dissolved in the above was externally applied to the affected area (once a day, for 3 months). Three months later, the skin inflammatory state was observed and compared with that before the start of the test. In addition, the criterion was set to five levels of significant, effective, slightly effective, invalid, and worse. Table 2 shows the results.
[0039]
[Table 2]
[0040]
In the UX10 administration group, a clear improvement in atopic dermatitis was observed.
[0041]
<Example 3: Safety test>
<Skin irritation test>
100 μl of a 5% solution of each acidic xylo-oligosaccharide composition (solvent: the above-mentioned base material) was applied to the back skin of a C3H mouse (male, 6 weeks old, manufactured by Charles River Japan Co., Ltd.) after hair removal for about 1 hour. It was applied daily for 10 months (10 animals per group). No abnormalities such as erythema, edema and inflammation were observed in the mouse spine for the application period and two weeks after the application period. Further, no significant difference was observed in the change in body weight as compared with the control (the above-mentioned substrate-coated group). This indicates the high safety of acidic xylo-oligosaccharides in skin application.
[0042]
<Acute oral toxicity test>
A 60% aqueous solution of each acidic xylo-oligosaccharide composition was orally administered to ICR mice (male, 6 weeks old, manufactured by Charles River Japan Co., Ltd.) for 2 weeks using a gastric tube (dose: 5 g / mouse weight 1 kg / day, 10 mice per group). No mice died during the administration period and 2 weeks after the administration. Also, no significant difference was observed in the change in body weight as compared with the blank (water-administered group). This indicates the high safety of acidic xylo-oligosaccharides when taken orally.
[0043]
<Example 4: Stability test>
After adjusting a 60% aqueous solution of the acidic xylo-oligosaccharide composition, it was stored at room temperature. After 6 months, no change in the ion chromatogram was observed. This indicates a high stability of the acidic xylo-oligosaccharide.
[0044]
【The invention's effect】
The topical atopic dermatitis ameliorating agent containing the acidic xylo-oligosaccharide composition obtained by the present invention has high safety and excellent pharmacological activity, and is used in the cosmetics, hygiene articles, quasi-drugs and pharmaceutical fields. Can be used in It can also be used as animal hygiene products and pharmaceuticals.
