JP2004184282A

JP2004184282A - 色素標識化合物およびこれを用いた糖化ヘモグロビンの測定方法

Info

Publication number: JP2004184282A
Application number: JP2002352841A
Authority: JP
Inventors: Osayuki Shigefuji; 修行重藤
Original assignee: Matsushita Electric Industrial Co Ltd
Current assignee: Panasonic Holdings Corp
Priority date: 2002-12-04
Filing date: 2002-12-04
Publication date: 2004-07-02

Abstract

【課題】ＨｂＡ１ｃの従来の免疫的測定法である酵素免疫測定法に比して、操作が容易で測定時間の短いＨｂＡ１ｃの測定方法を提供する。
【解決手段】抗ＨｂＡ１ｃ抗体が結合するＨｂＡ１ｃ上の特徴的部位の構造Ａ、色素の構造Ｂ、および前記構造Ａと前記構造Ｂとを結合する部位を有することを特徴とする色素標識化合物、例えば化学式（１）：
【化１】

に示す色素標識化合物を用いてＨｂＡ１ｃを光学的に測定する。
【選択図】なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、糖尿病管理に有効なマーカーとなる糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）の免疫的検出に有用な色素標識化合物、および当該色素標識化合物を用いたＨｂＡ１ｃの測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＨｂＡ１ｃは血液中に存在するヘモグロビンの一種で、糖尿病管理のマーカーとして有用である。しかし、その構造は、他のヘモグロビン（大部分はＨｂＡ０）と非常に似ており、違いはアミノ酸β鎖のＮ末端にフルクトースが結合しているか否かという点だけである。ＨｂＡ１ｃの測定にはこのわずかな違いを見分けることのできる技術が必要とされる。
【０００３】
現在、ＨｂＡ１ｃ測定方法の主流はＨＰＬＣ法であるが、操作の容易性および特異性の観点からみると、抗原抗体反応を利用した免疫的測定法のほうが有利である。従来、ＨｂＡ１ｃを免疫的に測定する方法としては、抗ＨｂＡ１ｃ抗体とこれに結合する酵素標識二次抗体とを用いた酵素免疫測定法が主流であった。例えば特許文献１には、ＨｂＡ１ｃの測定方法として、炭素数２〜６のアルデヒド化合物の存在下で行う酵素免疫測定法が開示されている。
【０００４】
【特許文献１】
特開平９−１７１０１６号公報
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、上述の酵素免疫測定法は、免疫的測定の特徴である特異性は発揮できるものの、その操作が煩雑で測定完了に３時間程度の長時間を要するという問題がある。そこで、本発明の目的は、操作が容易で測定時間の短い糖化ヘモグロビンの測定方法を実現すること、およびこれに用いる新規な色素標識化合物を提案することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決すべく、本発明は、抗ＨｂＡ１ｃ抗体が結合するＨｂＡ１ｃ上の特徴的部位の構造Ａ、色素の構造Ｂ、および前記構造Ａと前記構造Ｂとを結合する部位を有することを特徴とする色素標識化合物を提供する。
前記色素標識化合物は、化学式（１）：
【０００７】
【化２】

【０００８】
（式中、Ｘは蛍光を発する色素の構造Ｂ、ｎおよびｍはそれぞれ独立して１〜５の整数）で表されるのが好ましい。
【０００９】
前記構造Ｂが発する蛍光の波長が４００〜８００ｎｍであるのが好ましい。
また、前記構造Ｂがシアニン系色素またはメロシアニン系色素の構造を有するのが好ましい。
また、前記構造Ａがフルクトース−バリン−ヒスチジンの構造を有するのが好ましい。
【００１０】
前記色素標識化合物は、化学式（２）：
【００１１】
【化３】

【００１２】
（式中、ｎは１、３、５または７、ｍは１〜５の整数、ｘは塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子）で表されるのが好ましい。
【００１３】
また、本発明は、上記色素標識化合物および抗糖化ヘモグロビン抗体を含む緩衝溶液の蛍光強度と、前記緩衝溶液に検体試料を添加した後の蛍光強度との強度変化を測定することを特徴とする検体試料中の糖化ヘモグロビンの測定方法を提供する。
この場合も、前記蛍光強度が４００〜８００ｎｍの波長の蛍光の強度であるのが有効である。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明は、上述のような課題を解決するために、抗ＨｂＡ１ｃ抗体が結合するＨｂＡ１ｃ上の特徴的部位の構造Ａ、色素の構造Ｂ、および前記構造Ａと前記構造Ｂとを結合する部位を有することを特徴とする色素標識化合物を提供する。
本発明に係る色素標識化合物を用いて、血液中または尿中のＨｂＡ１ｃを測定する場合、血液または尿は水溶液であるので、水溶性に富むペプチド結合を有する部位（スペーサー）を用いると、色素標識化合物の水溶性が向上するので好ましい。
また、本発明の色素標識化合物は、化学式（１）：
【００１５】
【化４】

【００１６】
（式中、ｘは蛍光を発する色素の構造Ｂ、ｎおよびｍはそれぞれ独立して１〜５の整数）で表されるフルクトシルアミノ酸色素標識化合物であるのが好ましい。
ここで、ｘは、光励起によって蛍光を発する色素の構造Ｂ（化合物）であり、例えば、シアニン系、メロシアニン系、フルオレセイン系、またはダンシル系などの色素化合物が挙げられる。なかでも、シアニン系およびメロシアニン系の色素化合物は、不純物の影響を受け難い長波長領域の蛍光を発することや、比較的水溶性が良好であることなどから好ましい。
【００１７】
また、ｎおよびｍは、それぞれ独立して１〜５の整数である。抗体が結合する際の立体障害、化合物の水溶性、および化合物合成時の効率などの観点から、ｎは３であるのが好ましく、ｍは２であるのが好ましい。
本発明に係るフルクトシルアミノ酸色素標識化合物は、色素骨格よりのびる原子鎖の末端に、ＨｂＡ１ｃの特徴的部位であり、かつ抗ＨｂＡ１ｃ抗体が結合する部位と同様の構造Ａ（フルクトース−バリン−ヒスチジン）を有している。したがって、このフルクトシルアミノ酸色素標識化合物は抗ＨｂＡ１ｃ抗体に結合する擬似抗原となる。
【００１８】
さらに、本発明に係る色素標識化合物は、化学式（２）：
【００１９】
【化５】

【００２０】
で表されるのが好ましい。
本発明に係る色素標識化合物を示す化学式（２）において、ｍは、ある程度の水溶性を保持しておくという理由から、１〜５の整数であればよい。なかでも、水溶性に加えて合成の容易性という理由から、ｍは３であるのが好ましい。
また、ｎは、骨格に蛍光を発する機能を付与するという理由から、１、３、５または７であればよい。なかでも、実際の測定時に、不純物の影響を受けにくく、長波長の蛍光を発するという理由から、ｎは５であるのが好ましい。
【００２１】
また、塩素原子、臭素原子およびヨウ素原子のいずれか１種のハロゲン原子であればよいが、化合物の安定性を考慮し、臭素原子であるのが好ましい。
なお、上記化学式（１）および（２）で表される色素標識化合物の合成方法については、以下の実施例において具体的に説明する。
【００２２】
つぎに、本発明は、上記色素標識化合物を用いて検体試料に含まれるＨｂＡ１ｃを測定する方法にも関する。具体的には、上記化学式（１）または（２）で表される色素標識化合物および抗ＨｂＡ１ｃ抗体を含む緩衝溶液の蛍光強度（第一の蛍光強度）を測定し、ついで前記緩衝溶液にＨｂＡ１ｃを含む検体試料を添加した後の蛍光強度（第二の蛍光強度）を測定する。そして、第一の蛍光強度から第二の蛍光強度への強度変化を測定して、前記検体試料中のＨｂＡ１ｃを測定する。
【００２３】
本発明に係る化学式（１）および（２）で表される色素標識化合物は、インドレニン環内の窒素原子よりのびる原子鎖の末端に、ＨｂＡ１ｃの特徴的部位でありかつ抗ＨｂＡ１ｃ抗体が結合する部位と同様の構造Ａ（フルクトース−バリン−ヒスチジン）を有する。したがって、この色素標識化合物は抗ＨｂＡ１ｃ抗体に結合する擬似抗原となる。
【００２４】
したがって、本発明のＨｂＡ１ｃの測定方法は、色素標識化合物が抗ＨｂＡ１ｃ抗体と結合したときに、結合していない場合に比べて色素の放つ蛍光強度が強くなる現象を利用するものである。
まず、抗ＨｂＡ１ｃ抗体と上記色素標識化合物とをあらかじめ混合した緩衝溶液を調製しておく。こうすると抗体と色素標識化合物とは結合する。この緩衝溶液に適当な波長の励起光を照射して蛍光強度（第一の蛍光強度）を測定する。
【００２５】
次に、前記緩衝溶液に、本当の抗原であるＨｂＡ１ｃを含む検体試料を加える。そうすると結合力の高いＨｂＡ１ｃが、色素標識化合物にとってかわって前記抗体と結合する。この状態で上記と同様にして蛍光強度（第二の蛍光強度）を測定する。抗体との結合がなくなった色素標識化合物は、蛍光の増強効果がなくなるため、全体として蛍光強度は下がる。この強度の変化を測定することで、前記検体試料中のＨｂＡ１ｃの量を測定することができる。
【００２６】
【実施例】
以下、具体的に実施例を用いて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。なお、以下の実施例１においては、化学式（１）で表され、ｍ＝２、ｎ＝３、Ｘがメロシアニン系色素化合物である色素標識化合物を合成した。また、実施例３においては、化学式（２）で表され、ｍ＝３、ｎ＝５、Ｘが臭素原子のペンタメチンシアニン系色素標識化合物を合成した。
【００２７】
《実施例１：色素標識化合物の合成》
本実施例においては、図１の（ｇ）に示すシアニン系色素標識化合物の合成を行った。図１は、かかるシアニン系色素標識化合物の合成経路を示す図である。まず、１０ｇの図１の（ａ）に示すトリメチルインドレニン（分子量１５９．２、０．０６３モル）と１６．８ｇのブロモプロピルフタルイミド（分子量２６８．１、０．０６３モル）とを、ベンゼン２０ｍｌ中に混合し、得られた混合液を窒素気流下、１２０℃で３時間加熱した。ベンゼンは反応中に蒸発した。反応生成物を冷却し、ジエチルエーテルで繰り返し洗浄することにより、図１の（ｂ）で示される淡赤色の粉末（化合物ｂ）を得た。収量は２６．５ｇ（９９％）であった。
【００２８】
次に、２６ｇの化合物ｂ（分子量４２７．３、０．０６１モル）と９．１ｇのＮ，Ｎ−ジメチルアミノベンズアルデヒド（分子量１４９．２、０．０６１モル）とを、１００ｍｌの乾燥ピリジンに溶解し、得られた混合溶液を３０分間還流した。得られた反応液が赤く呈色したのを確認した後、室温にもどし、当該反応液を２Ｌのジエチルエーテル中に滴下し、生じた固体を濾別し、図１の（ｃ）で示される化合物ｃ（２７．３ｇ、０．０４９モル）を得た。
【００２９】
さらに、２７ｇの化合物ｃ（分子量５５８．５、０．０４９モル）を、１００ｍｌの９０％エタノールに溶解し、これに４．９１ｇのヒドラジン一水和物（分子量５０．１、０．０９８モル）を加えて、得られた混合溶液を２時間還流した。得られた反応液を室温まで冷却した後、約５０ｍｌの１Ｎ塩酸を加えてクロロホルムで３回洗浄した。水層に水酸化ナトリウム水溶液を加えてアルカリ性とした後、クロロホルムで３回抽出した。クロロホルム層に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した後、クロロホルムを減圧下で溜去して図１の（ｄ）で示される化合物ｄ（２１．０ｇ、０．０４９モル）を得た。
【００３０】
ついで、２１ｇの化合物ｄ（分子量４２８．４、０．０４９モル）を１００ｍｌのエタノールに溶解し、得られた混合溶液を室温で攪拌しながら、１０ｍｌのエタノールに溶解した２３．１ｇのスクシンイミジルピリジルジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）（分子量３１２．４、０．０７４モル）を滴下した。室温で３時間攪拌した後、得られた反応液を約１Ｌのジエチルエーテル中に滴下し、生じた固体を濾別した。得られた固体の洗浄を繰り返すことにより、図１の（ｅ）に示される化合物ｅ（２９．１ｇ、０．０４７モル）を得た。
【００３１】
２９ｇの化合物ｅ（分子量６２５．７、０．０４６モル）を１００ｍｌのエタノールに溶解し、得られた混合溶液を室温で攪拌しながら、１０ｍｌのエタノールに溶解した２８．６ｇの化合物ｆ（分子量５１９．６、０．０５５モル）を滴下した。室温で３時間攪拌した後、得られた反応液を濃縮し、中圧液体クロマトグラフィー（ＮＨ_２タイプ、展開溶媒：メタノール／アセトニトリル＝１／５）で精製し、４２．４ｇの図１の（ｇ）に示す本発明に係る色素標識化合物ｇ（分子量１０３４．１、０．０４１モル）を得た。得られた化合物ｇの^１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）のケミカルシフトを図２に示した。図２の（ａ）に化合物ｇの各部位を示し、図２の（ｂ）に結果を示した。
【００３２】
《実施例２：色素標識化合物の蛍光強度変化の測定》
実施例１で合成した本発明に係る色素標識化合物（化合物ｇ）（３×１０^−７Ｍ）と抗ＨｂＡ１ｃ抗体（５×１０^−７Ｍ）とを、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ溶液）に混合して混合緩衝溶液を調製し、この溶液を１．７ｍｌ取り、２５℃で１分間攪拌した後、励起波長５６０ｎｍで５９０ｎｍの蛍光強度を測定した。得られた蛍光強度（第一の蛍光強度）は１３８．４５であった。
【００３３】
次に、この溶液に最終濃度１０^−４．５ＭのＨｂＡ１ｃを含むＰＢＳ溶液（検体試料）を加え、励起波長５６０ｎｍで５９０ｎｍの蛍光強度を測定した。得られた蛍光強度（第二の蛍光強度）は８０．３０であった。
蛍光強度の変化率を、以上の第一の蛍光強度および第二の蛍光強度から、式：｛１−（第二の蛍光強度／第一の蛍光強度）｝×１００にしたがって求めたところ、（１−８０．３０／１３８．４５）×１００＝４２．０（％）であった。
【００３４】
ＨｂＡ１ｃの最終濃度が１０^−５．２Ｍ、１０^−６．２Ｍ、１０^−６．９Ｍ、１０^−７．３Ｍ、１０^−８Ｍの検体試料についても、それぞれ上記と同様の方法で蛍光強度を測定し、変化率を計算した。変化率はそれぞれ３７．９％（１０−^５．２Ｍ）、２６．３％（１０^−６．２Ｍ）、１４．５％（１０^−６．９Ｍ）、６．５％（１０^−７．３Ｍ）、１．９％（１０^−８Ｍ）であった。結果を図３に示す。図３において、縦軸は蛍光強度変化率（％）で、横軸はＨｂＡ１ｃ濃度の対数である。
【００３５】
これにより、本発明に係る色素標識化合物を用いれば、検体試料のＨｂＡ１ｃ濃度（最終濃度）に応じた蛍光強度の変化率が得られる。したがって、あらかじめＨｂＡ１ｃ濃度（最終濃度）と蛍光強度の変化率との関係を求めて、例えば検量線を作成しておけば、蛍光強度の変化率を測定することによって、検体試料のＨｂＡ１ｃ濃度を求めることができる。すなわち、本発明によれば、操作の容易性に加え、迅速性をも発揮できる効果がある。これにより、より簡単、迅速にＨｂＡ１ｃを測定することが可能となる。
【００３６】
《実施例３：シアニン系色素標識化合物の合成》
本実施例においては、図４の（ｇ）に示す色素標識化合物の合成を行った。図４は、かかるシアニン系色素標識化合物の合成経路を示す図である。
まず、１０ｇの図４の（ａ）に示すトリメチルインドレニン（分子量１５９．２、０．０６３モル）と１６．８ｇのブロモプロピルフタルイミド（分子量２６８．１、０．０６３モル）とを、ベンゼン２０ｍｌ中に混合し、得られた混合液を窒素気流下、１２０℃で３時間加熱した。ベンゼンは反応中に蒸発した。反応生成物を冷却し、ジエチルエーテルで繰り返し洗浄し、図４の（ｂ）で示される淡赤色の粉末（化合物ｂ）を得た。収量は２６．５ｇ（９９％）であった。
【００３７】
次に、２６ｇの化合物ｂ（分子量４２７．３、０．０６１モル）と１０ｇのテトラメトキシプロパン（分子量１６４．２、０．０６１モル）とを、１００ｍｌの乾燥ピリジンに溶解し、得られた混合溶液を３０分間還流した。得られた反応液が青く呈色したのを確認した後、室温にもどし、当該反応液を２リットルのジエチルエーテル中に滴下し、生じた固体を濾別し、図４の（ｃ）で示される化合物ｃ（４５．６ｇ）を得た。
【００３８】
さらに、４０ｇの化合物ｃ（分子量８０９．８、０．０４９モル）を、１００ｍｌの９０％エタノールに溶解し、これに４．９１ｇのヒドラジン一水和物（分子量５０．１、０．０９８モル）を加えて、得られた混合溶液を２時間還流した。得られた反応液を室温まで冷却した後、約５０ｍｌの１Ｎ塩酸を加えてクロロホルムで３回洗浄した。水層に水酸化ナトリウム水溶液を加えてアルカリ性とした後、クロロホルムで３回抽出した。クロロホルム層に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した後、クロロホルムを減圧下で溜去して図４の（ｄ）で示される化合物ｄ（２４．７ｇ）を得た。
【００３９】
ついで、２０ｇの化合物ｄ（分子量５４９．６、０．０３６モル）を１００ｍｌのエタノールに溶解し、得られた混合溶液を室温で攪拌しながら、１０ｍｌのエタノールに溶解した２８．４ｇのスクシンイミジルピリジルジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）（分子量３１２．４、０．０９１ｍｏｌ）を滴下した。室温で３時間攪拌した後、得られた反応液を約１リットルのジエチルエーテル中に滴下し、生じた固体をろ別した。得られた固体の洗浄を繰り返すことにより、図４の（ｅ）に示される化合物ｅ（２８．３ｇ）を得た。
【００４０】
２０ｇの化合物ｅ（分子量９４４．２、０．０２１モル）を１００ｍｌのエタノールに溶解し、得られた混合溶液を室温で攪拌しながら、１０ｍｌのエタノールに溶解した２２．４ｇの化合物ｆ（分子量５３３．６、０．０４２モル）を滴下した。室温で３時間攪拌した後、得られた反応液を濃縮し、中圧液体クロマトグラフィー（ＮＨ_２タイプ、展開溶媒：メタノール／アセトニトリル＝１／５）で精製し、図４の（ｇ）に示す本発明に係る色素標識化合物ｇ（１７．６ｇ、分子量１７６１．０）を得た。得られた化合物ｇの^１Ｈ−ＮＭＲのケミカルシフトを図５に示した。図５の（ａ）に化合物ｇの各部位を示し、図５の（ｂ）に結果を示した。
【００４１】
《実施例４：色素標識化合物の蛍光強度変化の測定》
実施例３で合成した本発明に係る色素標識化合物（化合物ｇ）（３×１０−^７Ｍ）と抗ＨｂＡ１ｃ抗体（５×１０−^７Ｍ）とをリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ溶液）に混合して混合緩衝溶液を調製し、この溶液を１．７４ｍｌ取り、２５℃で１分間攪拌した後、励起波長６００ｎｍで６６０ｎｍの蛍光強度を測定した。得られた蛍光強度（第一の蛍光強度）は５８．０１であった。
【００４２】
次に、この溶液に最終濃度１０^−４．５ＭのＨｂＡ１ｃを含むＰＢＳ溶液（検体試料）を加え、励起波長６００ｎｍで６６０ｎｍの蛍光強度を測定した。得られた蛍光強度（第二の蛍光強度）は３８．５２であった。
蛍光強度の変化率を、以上の第一の蛍光強度および第二の蛍光強度から、式：｛１−（第二の蛍光強度／第一の蛍光強度）｝×１００にしたがって求めたところ、（１−３８．５２／５８．０１）×１００＝３３．６（％）であった。
【００４３】
ＨｂＡ１ｃの最終濃度が１０^−５．２Ｍ、１０^−６．２Ｍ、１０^−６．９Ｍ、１０^−７．３Ｍ、１０^−８Ｍの検体試料についても、それぞれ上記と同様の方法で蛍光強度を測定し、変化率を計算した。変化率はそれぞれ３１．２％（１０^−５．２Ｍ）、２３．５％（１０^−６．２Ｍ）、１１．０％（１０^−６．９Ｍ）、５．３％（１０^−７．３Ｍ）、３．０％（１０^−８Ｍ）であった。
【００４４】
これにより、本発明に係る色素標識化合物を用いれば、検体試料のＨｂＡ１ｃ濃度（最終濃度）に応じた蛍光強度の変化率が得られる。したがって、あらかじめＨｂＡ１ｃ濃度（最終濃度）と蛍光強度の変化率との関係を求めて、例えば検量線を作成しておけば、蛍光強度の変化率を測定することによって、検体試料のＨｂＡ１ｃ濃度を求めることができる。すなわち、本発明によれば、操作の容易性に加え、迅速性をも発揮できる効果がある。これにより、より簡単、迅速にＨｂＡ１ｃを測定することが可能となる。
【００４５】
【発明の効果】
以上のように、本発明に係る色素標識化合物は、抗ＨｂＡ１ｃ抗体が結合するＨｂＡ１ｃ上の特徴的部位（エピトープ）の構造を有する化合物であるため、抗ＨｂＡ１ｃ抗体と比較的弱く結合することができ、ＨｂＡ１ｃ測定の際の有用な擬似抗原となる。また、本発明に係るＨｂＡ１ｃの測定方法を用いれば、免疫的測定の特徴である特異性を活かしつつ、操作の容易性に加え、迅速性をも発揮できる効果がある。これにより、簡単かつ迅速にＨｂＡ１ｃを測定することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係る色素標識化合物の合成経路を示す図である。
【図２】本発明に係る色素標識化合物の１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトを表す図である。
【図３】本発明の実施例２における蛍光強度変化率（％）とＨｂＡ１ｃ濃度の対数との関係を示すグラフである。
【図４】本発明に係る別の色素標識化合物の合成経路を示す図である。
【図５】本発明に係る別の色素標識化合物の１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトを表す図である。

Claims

抗ＨｂＡ１ｃ抗体が結合するＨｂＡ１ｃ上の特徴的部位の構造Ａ、色素の構造Ｂ、および前記構造Ａと前記構造Ｂとを結合する部位を有することを特徴とする色素標識化合物。
化学式（１）：

（式中、Ｘは蛍光を発する色素の構造Ｂ、ｎおよびｍはそれぞれ独立して１〜５の整数）で表されることを特徴とする請求項１記載の色素標識化合物。
前記構造Ｂが発する蛍光の波長が４００〜８００ｎｍであることを特徴とする請求項１または２記載の色素標識化合物。
前記構造Ｂがシアニン系色素またはメロシアニン系色素の構造を有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の色素標識化合物。
前記構造Ａがフルクトース−バリン−ヒスチジンの構造を有することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の色素標識化合物。
抗ＨｂＡ１ｃ抗体が結合するＨｂＡ１ｃ上の特徴的部位の構造Ａ、色素の構造Ｂ、および前記構造Ａと前記構造Ｂとを結合する部位を有することを特徴とする色素標識化合物、および抗糖化ヘモグロビン抗体を含む緩衝溶液の蛍光強度と、前記緩衝溶液に糖化ヘモグロビンを含む検体試料を添加した後の蛍光強度との強度変化を測定する工程を含むことを特徴とする糖化ヘモグロビンの測定方法。
前記蛍光強度が４００〜８００ｎｍの波長の蛍光の強度である請求項６記載の糖化ヘモグロビンの測定方法。