JP2004163442A - 中性pH長寿命プレキャスト電気泳動ゲルのためのシステム - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 ゲル電気泳動のためのシステムであって、以下を包含する、システム:
2つの端部を有する電気泳動ゲル;該ゲルは、ゲルバッファー溶液で飽和されており;
該ゲルの一端は、アノードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルの他端は、カソードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルバッファー溶液は、pKが中性付近の一価有機アミンまたは置換アミンを含有し、約6と約7との間のpHにHClで滴定されており;
該カソードバッファーは、MOPS、MES、ACES、MOPSO、TES、HEPES、またはTAPSOからなる群から選択される両性イオンバッファーの溶液を含み、水酸化ナトリウムまたは有機塩基で約7のpHに滴定されている。
【選択図】 なし
Description
Laemmli,U.K.(1970)Nature 227,680−686 Schagger,H.およびvon Jagow,G.,Anal.Biochem.1987,166,368−379
1つの局面において、本発明は、ゲル電気泳動のためのシステムを提供する。このシステムは、以下を包含する:
2つの端部を有する電気泳動ゲル;該ゲルは、ゲルバッファー溶液で飽和されており;
該ゲルの一端は、アノードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルの他端は、カソードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルバッファー溶液は、pKが中性付近の一価有機アミンまたは置換アミンを含有し、約6と約7との間のpHにHClで滴定されており;
該カソードバッファーは、MOPS、MES、ACES、MOPSO、TES、HEPES、またはTAPSOからなる群から選択される両性イオンバッファーの溶液を含み、水酸化ナトリウムまたは有機塩基で約7のpHに滴定されている。
2つの端部を有するプレキャストポリアクリルアミド電気泳動ゲル;
該ゲルは、ゲルバッファー溶液で飽和されており;
該ゲルの一端は、アノードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルの他端は、カソードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルバッファー溶液は、約6と約7との間のpHにHClで滴定されたBis−Trisを含み;
該カソードバッファーは、MOPS、MES、ACES、MOPSO、TES、HEPES、またはTAPSOからなる群から選択される両性イオンバッファーの溶液を含み、水酸化ナトリウムまたは有機塩基で約7のpHに滴定されている。
2つの端部を有するプレキャストポリアクリルアミド電気泳動ゲル;
ここで、該ゲルは、ゲルバッファー溶液で飽和されており;
該ゲルの一端は、アノードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルの他端は、カソードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルバッファー溶液は、一価有機アミンまたは置換アミンを含有し、そして
該カソードバッファーは、亜硫酸塩を含む。
出願人は、分離が中性pHで行われそしてタンパク質が完全に還元されたままである、ゲルおよびバッファーシステムを記載する。好都合なことに、この中性pHでは、タンパク質の第1級アミノ基は、未重合アクリルアミドと容易に反応することがより少ない。なぜなら、タンパク質のアミノ基のプロトン化は、アクリルアミドまたは他の関連したブロッキング剤に対する、これらの反応性を非常に減少させるためである。さらに、この中性pHにおいて、チオール基は、より高いpHにおいてよりも酸化を受けにくく、そしてポリアクリルアミド自身も、より加水分解を受けにくい。
Bis−Tris、MES、およびMOPSを、Sigma(St.Louis,MO)またはResearch Organics(Cleveland,Ohio)から購入した。チオグリコール酸(TGA)、DTT、およびメルカプトエタノール(BME)をSigmaから購入した。全ての他の薬品は、標準的な供給元からの「極めて純粋な(ultra pure)」または「電気泳動用」の試薬であった。ゲルを、Novex(San Diego CA)製の1mm厚のミニゲルカセットにキャストし、そしてNovexミニセルで流した(run)。
タンパク質標準を、還元剤の非存在下でMOPSランニングバッファーを用いて8% Bis−Trisゲル上で分離した。得られた分離パターンは、追跡用色素とともにスタック(stack)中に残っているタンパク質20,000およびそれより小さい残存物について、8% TRIS/グリシンゲル(Laemmli)上で得られたものと非常に類似していた。BSAバンドはいくぶん拡散し、そしてアノードの方にシフトした。オバルブミンのバンドもまた、いくぶん拡散した。
タンパク質標準を、カソードバッファー中のTGAの存在下、MOPSランニングバッファーを用いて8% Bis−Trisゲル上で分離した。これについても、分離パターンは、追跡用色素とともにスタック中に残っているタンパク質20,000およびそれより小さな残存物について、8% TRIS/グリシンゲル(Laemmli)上で得られたものと非常に類似していた。カソードバッファー中、還元剤である5mM TGAの存在により、タンパク質BSAおよびオバルブミンのより良好な分離が、TGAなしのゲル泳動と比較して提供された。
タンパク質標準を、カソードバッファー中の重亜硫酸ナトリウムの存在下、MOPSランニングバッファーを用いて8% Bis−Trisゲル上で分離した。これについても、分離パターンは、追跡用色素とともにスタック中に残っているタンパク質20,000およびそれより小さな残存物について、8% TRIS/グリシンゲル(Laemmli)上で得られたものと非常に類似していた。カソードバッファー中、還元剤である5mM 重亜硫酸ナトリウムの存在により、タンパク質BSAおよびオバルブミンのより良好な分離が、重亜硫酸ナトリウムなしのゲル泳動と比較して提供された。
タンパク質標準を、還元剤の非存在下でMESランニングバッファーを用いて8% Bis−Trisゲル上で分離した。タンパク質の分離は、12% TRIS/トリシン(Schaegger)ゲルから得られたものと非常に類似していた。全てのタンパク質は、インシュリンAおよびB鎖(それぞれ、3500および2500ダルトン)を含むスタックから分かれた。ゲルをTGAなしで泳動する場合には、大豆トリプシンインヒビターは、より目立ったダブレットを有していた。
タンパク質標準を、カソードバッファー中のTGAの存在下で、Bis−Tris/MESランニングバッファーを用いて8% Bis−Tris/Clゲル上で分離した。これについても、全てのタンパク質は、インシュリンAおよびB鎖(それぞれ、3500および2500ダルトン)を含むスタックから分かれた。カソードバッファー中の還元剤である5mM TGAの存在により、タンパク質大豆トリプシンインヒビターのより良好な分離が提供された。炭酸脱水酵素は、試験された全ての条件下で、引き締まって鋭いバンドとして泳動した。
タンパク質標準を、カソードバッファー中の重亜硫酸ナトリウムの存在下で、Bis−Tris/MESランニングバッファーを用いて8% Bis−Tris/Clゲル上で分離した。これについても、全てのタンパク質は、インシュリンAおよびB鎖(それぞれ、3500および2500ダルトン)を含むスタックから分かれた。カソードバッファー中の還元剤である5mM 重亜硫酸ナトリウムの存在により、タンパク質大豆トリプシンインヒビターのより良好な分離が提供された。炭酸脱水酵素は、試験された全ての条件下で、引き締まって鋭いバンドとして泳動した。
Claims (1)
- ゲル電気泳動のためのシステムであって、以下を包含する、システム:
2つの端部を有する電気泳動ゲル;該ゲルは、ゲルバッファー溶液で飽和されており;
該ゲルの一端は、アノードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルの他端は、カソードバッファー溶液と接触しており;
該ゲルバッファー溶液は、pKが中性付近の一価有機アミンまたは置換アミンを含有し、約6と約7との間のpHにHClで滴定されており;
該カソードバッファーは、MOPS、MES、ACES、MOPSO、TES、HEPES、またはTAPSOからなる群から選択される両性イオンバッファーの溶液を含み、水酸化ナトリウムまたは有機塩基で約7のpHに滴定されている。
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