JP2004113136A - 非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するｍｍｐ−１プロモーターのｓｎｐを用いた腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】ＭＭＰ−１は腫瘍細胞の浸潤や転移と相関しており、転写のレベルに影響するＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムと相関している。本発明は、腎細胞がんの発症リスクとこのポリモルフィズムとの相関を明らかにし、腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法を確立することが課題である。
【解決手段】本発明では、転写のレベルに影響するＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムと腎細胞がんの発症リスクとの相関に着目し、非乳頭状腎細胞がんの患者群と健康なボランティア群との間で、ＭＭＰ−１遺伝子のプロモーター ポリモルフィズムに有意差があるか否かを調査した。
【解決手段】本発明では、転写のレベルに影響するＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムと腎細胞がんの発症リスクとの相関に着目し、非乳頭状腎細胞がんの患者群と健康なボランティア群との間で、ＭＭＰ−１遺伝子のプロモーター ポリモルフィズムに有意差があるか否かを調査した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するＭＭＰ−１プロモーターのＳＮＰを用いた、腎細胞がんまたは非乳頭状腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
Ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ により大腸がん患者集団と正常対照群とを比較解析することにより、大腸がんの原因遺伝子の ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＮＰ）の内から、モンゴロイド特に日本人を対象とした、大腸がんの発症、浸潤、転移のし易さを判定できる検査方法の確立に寄与し得るＳＮＰとして、ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１（ＭＭＰ−１）遺伝子と ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３（ＭＭＰ−３）遺伝子のＳＮＰが適していることが知られている。ＭＭＰ−１およびＭＭＰ−３遺伝子のＳＮＰ解析結果からは、発症前診断に利用することにより、日本人における大腸発がんのリスクを推定することが可能となっている（特願２００２−４００４９）。腎細胞がん（ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ； ＲＣＣ）は、泌尿器の悪性腫瘍の原因としては３番目に多く、また成人の悪性腫瘍の約２％を占めている（非特許文献１）。超音波、ＣＴおよびＭＲＩのような非侵襲イメージング法が広く用いられるようになって、偶然にＲＣＣという診断が下されるケースが、着実に増加している（非特許文献２）。これらスクリーニング用の検出ツールの改良にもかかわらず、生命を脅かすＲＣＣ（局所浸潤性腫瘍または転移性腫瘍）の比率は、減少してはいない（非特許文献３）。ＲＣＣ患者の約２５％は、プレゼンテーションの時点で転移性の疾患を有しているが、転移性の傷害の治療はほとんど成功しないか、あるいはリスク患者における遠方への転移の予防もできない状態である（非特許文献４）。がんのステージＩからＩＶのそれぞれにおける５年生存率は、９１％、７４％、６７％および３２％であることが報告されている（非特許文献２）。ＩＮＦαの間歇的な筋肉内注射は、ＩＬ−２併用の有無にかかわらず、転移性ＲＣＣ治療のゴールドスタンダードであり、患者の約２０％が、この治療法の恩恵を受けているに過ぎない（特許文献５−非特許文献９）。この事実が、遺伝子診断を含めた新規なスクリーニングシステムが、ＲＣＣ早期発見のために必須であることを示している。
【０００３】
【非特許文献１】Ｇｒｅｅｎｌｅｅ，Ｒ．Ｔ．，Ｍｕｒｒａｙ，Ｔ．，Ｂｏｌｄｅｎ，Ｓ．，Ｗｉｎｇｏ，Ｐ．Ａ Ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ， ２０００．ＣＡ． Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ． ５０： ７， ２０００．
【非特許文献２】Ａｌｌａｎ， Ｊ．Ｐ．， Ａｍｎｏｎ， Ｚ．， Ａｒｉｅ， Ｓ．Ｂ．Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｉｎｇｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊ．Ｕｒｏｌ． １６６：１６１１−１６２３，２００１．
【非特許文献３】Ｈｏｃｋ， Ｌ．Ｍ．， Ｌｙｎｃｈ， Ｊ．， ａｎｄ Ｂａｌａｊｉ， Ｋ．Ｃ． Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ａｌｌ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｓｔ ２ ｄｅｃａｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ： ａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ， ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｎｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｇｒａｍ ｄａｔａ． Ｊ．Ｕｒｏｌ， １６７：５７−６０，２００２．
【非特許文献４】Ｒｉｔｃｈｉｅ， Ａ．Ｗ．， Ｃｈｉｓｈｏｌｍ， Ｇ．Ｄ． Ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ．１０： ３９０−４００， １９８３．
【非特許文献５】Ｋｉｒｋｗｏｏｄ， Ｊ．Ｍ．， Ｈａｒｒｉｓ， Ｊ．Ｅ．， Ｖｅｒａ， Ｒ．， Ｓａｎｄｌｅｒ， Ｓ．， Ｆｉｓｃｈｅｒ， Ｄ．Ｓ．， Ｋｈａｎｄｅｋａｒ， Ｊ．， Ｅｒｎｓｔｏｆｆ， Ｍ．Ｓ．， Ｇｏｒｄｏｎ， Ｌ．， Ｌｕｔｅｓ， Ｒ．， Ｂｏｎｏｍｉ， Ｐ．， Ｌｙｔｔｏｎ， Ｂ．， Ｃｏｂｌｅｉｇｈ， Ｍ．， Ｔａｙｌｏｒ，Ｓ．Ｊ． Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｓｔｕｄｙｏｆ ｌｏｗ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅα−ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ： Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｔｒｉａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４５： ８６３−８７１，１９８５．
【非特許文献６】Ｆｉｇｌｉｎ， Ｒ．Ａ．， Ａｂｉ−Ａａｄ， Ａ．Ｓ．， Ｂｅｌｌｄｅｒｒｕｎ， Ａ．， ｄｅＫｅｒｎｉｏｎ， Ｊ．Ｂ． Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ， １８：１０２−１０７，１９９１．
【非特許文献７】Ｆｏｓｓａ， Ｓ．Ｄ．， Ｋｒａｍａｒ， Ａ．， Ｄｒｏｚ， Ｊ．Ｐ．， Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ． Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ． ３０：１３１０−１３１４，１９９４．
【非特許文献８】Ｃａｎｏｂｂｉｏ， Ｌ．， Ｒｕｂａｇｏｔｔｉ， Ａ．， Ｍｉｇｌｉｅｔｔａ， Ｌ．， Ｃａｎｎａｔａ， Ｄ．， Ｃｕｒｏｔｔｏ， Ａ．， Ａｍｏｒｏｓｏ， Ｄ．， Ｂｏｃｃａｄｏ， Ｆ． Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．１２１： ７５３−７５６，１９９５．
【非特許文献９】Ｇｒａｔａｍａ， Ｊ．Ｗ．， Ｓｃｈｍｉｔｚ， Ｐ．Ｉ．， Ｇｏｅｙ， Ｓ．Ｈ．， Ｌａｍｅｒｓ， Ｃ．Ｈ．， Ｓｔｏｔｅｒ， Ｇ．， Ｂｏｌｈｕｉｓ， Ｒ．Ｌ． Ｍｏｄｕｌａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ−ｃｅｌｌ ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ （ＩＬ−２， ＩＦＮ ａｌｐｈａ ａｎｄ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ＩＬ−２−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）． Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．６５： １５２−１５６，１９９６．
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
ＭＭＰ−１は腫瘍細胞の浸潤や転移と相関しており、転写のレベルに影響するＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムと相関している。本発明は、腎細胞がんの発症リスクとこのポリモルフィズムとの相関を明らかにし、腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法を確立することが課題である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
腫瘍の浸潤と転移のプロセスは、腫瘍細胞の周囲の細胞外マトリックス（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ； ＥＣＭ）や結合組織の分解または切断を必要とする（Ｈａｒｔ，Ｉ． Ｒ． ａｎｄ Ｓａｉｎｉ， Ａ． Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｌａｎｃｅｔ， ３３９：１４５３−１４５７，１９９２．；Ｋｏｈｎ， Ｅ． Ｃ． ａｎｄ Ｌｉｏｔｔａ， Ｌ． Ａ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ： ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５５： １８５６−１８６２， １９９５．）。ＭＭＰは、一般的に、ＥＣＭや基底膜コンポーメントを分解することができる（Ｃｈａｍｂｅｒｓ， Ａ．Ｆ．， ａｎｄ Ｍａｔｒｉｓｉａｎ， Ｌ．Ｍ． Ｃｈａｎｇｉｎｇ ｖｉｅｗｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． （Ｂｅｔｈｅｓｄａ）， ８９： １２６０−１２７０，１９９７）。染色体１１ｑ２２に位置するＭＭＰ−１遺伝子は、種々の腫瘍細胞で発現されているとともに、正常細胞（ ｓｔｒｏｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ， ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ， ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ， ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ）において最も広く発現している（Ｚｈｕ， Ｙ．， Ｓｐｉｔｚ， Ｍ． Ｒ．， Ｌｅｉ， Ｌ．， Ｍｉｌｌｓ， Ｇ， Ｂ．， ａｎｄ Ｗｕ， Ｘ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：７８２５−７８２９，２００１；Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｙ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｉｓｈｉｏｋａ， Ｓ．， Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， Ａ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ．， Ｔｏｋｉｎｏ， Ｔ．， ａｎｄ Ｋｕｄｏ， Ｒ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊｐｎ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ９１：６１２−６１５， ２０００．；Ｓｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ， Ｗ． Ｇ．，Ｌｉｏｔｔａ， Ｌ． Ａ．， ａｎｄ Ｋｌｅｉｎｅｒ， Ｄ． Ｅ． Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ６： ｒｏｌｅ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． ＦＡＳＥＢ Ｊ．， ７：１４３４−１４４１， １９９３；Ｂｒｉｎｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ． Ｅ．， Ｒｕｔｔｅｒ， Ｊ． Ｌ．， ａｎｄ Ｂｅｎｂｏｗ， Ｕ． Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ． Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６：４８２３−４８３０， ２０００．）。Ｍｕｒｒａｙ らは、結腸直腸がんや食道がんの予後の悪さとＭＭＰ−１の発現との相関を示した（Ｍｕｒｒａｙ， Ｇ． Ｉ．， Ｄｕｎｃａｎ， Ｍ． Ｅ．， Ｏｎｅｉｌ， Ｐ．， Ｍｅｌｖｉｎ， Ｗ． Ｔ． ａｎｄ Ｆｏｒｔｈｅｒｇｉｌｌ， Ｊ． Ｅ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ． Ｎａｔ． Ｍｅｄ．， ２：４６１−４６２， １９９６．；Ｍｕｒｒａｙ， Ｇ． Ｉ．， Ｄｕｎｃａｎ， Ｍ． Ｅ．， Ｏｎｅｉｌ， Ｐ．， Ｍｃｋａｙ， Ｊ． Ａ．， Ｍｅｌｖｉｎ， Ｗ． Ｔ． ａｎｄ Ｆｏｒｔｈｅｒｇｉｌｌ， Ｊ． Ｅ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｏｅｓｏｐｈａｇｉａｌ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ． １８５：２５６−２６１， １９９８．）。
【０００６】
最近の文献は、ＭＭＰ−１プロモーター領域の −１６０７ ｂｐ におけるグアニン挿入ポリモルフィズム（２Ｇアリル）によって、Ｅｔｓ転写因子の結合サイトにおけるコア認識配列である５’‐ＧＧＡ‐３’配列（Ｒｕｔｔｅｒ， Ｊ． Ｌ．， Ｍｉｔｃｈｅｌｌ， Ｔ． Ｉ．， Ｂｕｔｔｉｃｅ， Ｇ．， Ｍｅｙｅｒｓ， Ｊ．， Ｇｕｓｅｌｌａ， Ｊ． Ｆ．， Ｏｚｅｌｉｕｓ， Ｌ．Ｊ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ． Ｅ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｃｒｅａｔｅｓ ａｎ Ｅｔｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ａｎｄ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５８： ５３２１−５３２５， １９９８．）が生ずることを報告している（Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．；Ｇｒａｖｅｓ， Ｂ．Ｊ． Ｉｎｎｅｒ ｗｏｒｋｉｎｇｓ ｏｆ ａ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｐａｒｔｎｅｒｓｈｉｐ． Ｓｃｉｅｎｃｅ （Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ）， ２７９： １０００−１００１． １９９８；Ｂｕｔｔｉｃｅ， Ｇ．， Ｄｕｔｅｒｑｕｅ−Ｃｏｑｕｉｌｌａｕｄ， Ｍ．， Ｂａｓｕｙａｕｘ， Ｊ．Ｐ．， Ｃａｒｒｅｒｅ， Ｓ．， Ｋｕｒｋｉｎｅｎ， Ｍ．， ａｎｄ Ｓｔｅｈｅｌｉｎ， Ｄ．Ｅｒｇ， ａｎ Ｅｔｓ−ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ １（ＭＭＰ−１） ａｎｄ ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ１ （ＭＭＰ３） ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｐｈｙｓｉｃａｌｌｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅＦｏｓ／Ｊｕｎ ｃｏｍｐｌｅｘ． Ｏｎｃｏｇｅｎｅ， １３：２２９７−２３０６， １９９６；．Ｂａｓｕｙａｕｘ， Ｊ． Ｐ．， Ｆｅｒｒｅｉｒａ， Ｅ．， Ｓｔｅｈｅｌｉｎ， Ｄ．， ａｎｄ Ｂｕｔｔｉｃｅ， Ｇ． Ｔｈｅ Ｅｔｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｔｅｒａｃｔ ｗｉｔｈ ｅａｃｈ ｏｔｈｅｒ ａｎｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃ−Ｆｏｓ／ｃ−Ｊｕｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｖｉａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ ａ ＤＮＡ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｄ −ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２： ２６１８８−２６１９５， １９９７；Ｙｅ， Ｓ．， Ｄｈｉｌｌｏｎ， Ｓ．， Ｔｕｒｎｅｒ， Ｓ． Ｊ．， Ｂａｔｅｍａｎ， Ａ． Ｃ．， Ｔｈｅａｋｅｒ， Ｊ． Ｍ．， Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ， Ｒ． Ｍ．， Ｄａｙ， Ｉ．， ａｎｄ Ｈｏｗｅｌｌ， Ｗ． Ｍ． Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ １ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：１２９６−１２９８， ２００１）。これまでに蓄積された証拠から、プロモーター領域の２Ｇホモザイガス ポリモルフィズムは、１Ｇホモザイゴート（Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．）よりも高い転写活性を有しており、悪性黒色腫（Ｙｅ， Ｓ．， Ｄｈｉｌｌｏｎ， Ｓ．， Ｔｕｒｎｅｒ， Ｓ． Ｊ．， Ｂａｔｅｍａｎ， Ａ． Ｃ．， Ｔｈｅａｋｅｒ， Ｊ． Ｍ．， Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ， Ｒ． Ｍ．， Ｄａｙ， Ｉ．， ａｎｄ Ｈｏｗｅｌｌ， Ｗ． Ｍ． Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ １ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：１２９６−１２９８， ２００１）と同様に、卵巣がん（Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．）、子宮内膜がん（Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｙ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｉｓｈｉｏｋａ， Ｓ．， Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， Ａ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ．， Ｔｏｋｉｎｏ， Ｔ．， ａｎｄ Ｋｕｄｏ， Ｒ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊｐｎ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，９１：６１２−６１５， ２０００．）、大腸がん（Ｇｈｉｌａｒｄｉ， Ｇ．， Ｂｉｏｎｄｉ， Ｍ． Ｌ．， Ｍａｎｇｏｎｉ， Ｊ．， Ｌｅｖｉｔｉ， Ｓ．， ＤｅＭｏｎｔｉ， Ｍ．， Ｇｕａｇｎｅｌｌｉｎｉ， Ｅ．， ａｎｄ Ｓｃｏｒｚａ， Ｒ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ １Ｇ／２Ｇ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ７：２３４４−２３４６， ２００１）および肺がん（Ｚｈｕ， Ｙ．， Ｓｐｉｔｚ， Ｍ． Ｒ．， Ｌｅｉ， Ｌ．， Ｍｉｌｌｓ， Ｇ， Ｂ．， ａｎｄ Ｗｕ， Ｘ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：７８２５−７８２９， ２００１）を含むいくつかのヒト腫瘍の悪性化と相関している。本発明は、ＭＭＰ−１プロモーターポリモルフィズムが、日本人におけるＲＣＣの感受性と有意に相関していることを示した。現時点においては、非乳頭状ＲＣＣの感受性におけるＭＭＰ−１プロモーター ポリモルフィズムの明確な影響を示した最初の報告である。
【０００７】
ＭＭＰ−１は、ＲＣＣを含む種々の腫瘍により高レベルで発現されている（Ｓｔｅｐｈａｎｉｅ， Ｃ． ａｎｄ Ｇｒａｅｍｅ， Ｉ．Ｍ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８９：３００−３０８，１９９９．）。またＭＭＰ−１は、細胞外マトリックスを分解することができるタンパク分解酵素であり、腫瘍の浸潤および転移のポテンシャルを強めていると考えられる。これまでに蓄積された証拠から、乳がん、大腸がん、脳腫瘍、肺がん、前立腺がん（Ｍａｒｉｅ−Ａｎｎｉｃｋ， Ｆ．， Ｒｉｃｈａｒｄ， Ｒ．Ｄ．， ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄ，Ｂ． Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７７： ４６５−４８０，１９９９．）、食道がん（Ｓｔｅｐｈａｎｉｅ， Ｃ．ａｎｄ Ｇｒａｅｍｅ， Ｉ．Ｍ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８９：３００−３０８， １９９９．）および直腸がん（Ｈｅｗｉｔｔ， Ｒ．Ｅ．， Ｌｅａｃｈ， Ｉ．Ｅ．， Ｐｏｗｅ， Ｄ．Ｇ．， Ｃｌａｒｋ， Ｉ．Ｍ．， Ｃａｗｓｔｏｎｅ， Ｔ．Ｅ．， ａｎｄ Ｔｕｒｎｅｒ， Ｄ．Ｒ．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＴＩＭＰ） ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｔｕｍｏｒｓ． Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．４９： ６６６−６７２，１９９１．）における予後の悪さと、ＭＭＰ ｍＲＮＡあるいはＭＭＰ−１発現との密接な相関が示唆されている。腫瘍のセルラインを用いて、Ｒｕｔｔｅｒらにより、−１６０７ ｂｐ の位置に２Ｇホモザイゴートを含むＭＭＰ−１プロモーターは、１Ｇプロモーターよりも高い転写活性を有していることが示された（Ｒｕｔｔｅｒ， Ｊ． Ｌ．， Ｍｉｔｃｈｅｌｌ， Ｔ． Ｉ．， Ｂｕｔｔｉｃｅ， Ｇ．， Ｍｅｙｅｒｓ， Ｊ．， Ｇｕｓｅｌｌａ， Ｊ． Ｆ．， Ｏｚｅｌｉｕｓ， Ｌ．Ｊ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ． Ｅ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｃｒｅａｔｅｓ ａｎ Ｅｔｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ａｎｄ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５８： ５３２１−５３２５， １９９８．）。最近、これらのデータは、他のデータによって臨床的にも確認されており、１Ｇアリルを有する患者に比較して、２Ｇアリルを有する患者においてがん組織における有意に高レベルなＭＭＰ−１発現が観察されている（Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．）。この証拠から、ＭＭＰ−１プロモーター領域における特定アリルのポリモルフィズムが、特定の形質に対すると同様に、腫瘍への感受性に対しても強いインパクトを有するという仮説が立てられた。そして、これがＲＣＣにおける患者の予後に影響することが示された。
【０００８】
本発明において、患者と対照群との間の年齢調整とは無関係に、ＲＣＣと２Ｇ／２Ｇ遺伝子型との有意な相関が見られた。この結果は、健康な対照群における、ＭＭＰ−１プロモーターの１Ｇ／２Ｇポリモルフィズムの遺伝子型分布が、年齢によって影響されないことを示している。ＭＭＰ−１ポリモルフィズムと多くのがんとの相関（Ｚｈｕ， Ｙ．， Ｓｐｉｔｚ， Ｍ． Ｒ．， Ｌｅｉ， Ｌ．， Ｍｉｌｌｓ， Ｇ， Ｂ．， ａｎｄ Ｗｕ， Ｘ．Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：７８２５−７８２９， ２００１；Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｙ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｉｓｈｉｏｋａ， Ｓ．， Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， Ａ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ．， Ｔｏｋｉｎｏ， Ｔ．， ａｎｄ Ｋｕｄｏ， Ｒ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊｐｎ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ９１：６１２−６１５， ２０００．； Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．；Ｙｅ， Ｓ．， Ｄｈｉｌｌｏｎ， Ｓ．， Ｔｕｒｎｅｒ， Ｓ． Ｊ．， Ｂａｔｅｍａｎ， Ａ． Ｃ．， Ｔｈｅａｋｅｒ， Ｊ． Ｍ．， Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ， Ｒ． Ｍ．， Ｄａｙ， Ｉ．， ａｎｄ Ｈｏｗｅｌｌ， Ｗ． Ｍ． Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ １ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：１２９６−１２９８， ２００１； Ｇｈｉｌａｒｄｉ， Ｇ．， Ｂｉｏｎｄｉ， Ｍ． Ｌ．， Ｍａｎｇｏｎｉ， Ｊ．， Ｌｅｖｉｔｉ， Ｓ．， ＤｅＭｏｎｔｉ， Ｍ．， Ｇｕａｇｎｅｌｌｉｎｉ， Ｅ．， ａｎｄ Ｓｃｏｒｚａ， Ｒ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ １Ｇ／２Ｇ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ７：２３４４−２３４６， ２００１）が示唆されているので、２Ｇ／２Ｇ遺伝子型の頻度は、がんによる死亡率が加齢とともに増加するため、減少すると推測することも可能である。しかしながら、がんの発生率（日本においては約０．０１％／年）があまりにも低い値である（Ｍａｒｕｍｏ，Ｋ．，Ｓａｔｏｍｉ，Ｙ．，Ｍｉｙａｏ，Ｎ．，Ｈａｓｅｇａｗａ，Ｍ．，Ｔｏｍｉｔａ，Ｙ．，Ｉｇａｒａｓｈｉ，Ｔ．，Ｏｎｉｓｈｉ，Ｔ．，Ｎａｋａｚａｗａ，Ｈ．，Ｆｕｋｕｄａ，Ｍ．，Ｏｚｏｎｏ，Ｓ．，Ｔｅｒａｃｈｉ，Ｔ．，Ｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｎａｋａｍｏｔｏ，Ｔ．，Ｋａｗａｍｕｒａ， Ｊ．Ｔｈｅ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ａ ｎａｔｉｏｎ−ｗｉｄｅ ｓｕｒｖｅｙ ｉｎ Ｊａｐａｎ ｉｎ １９９７． Ｉｎｔ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．８（７）：３５９−６５，２００１．）ため、全ポピュレーションにおける遺伝子型分布に影響しないと考えられる。
【０００９】
ＭＭＰ−１は、ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌと同様に、がん細胞により産生されることが知られており（Ｔｈｒａｓｈ−Ｂｉｎｇｈａｍ ＣＡ， Ｓａｌａｚａｒ Ｈ， Ｆｒｅｅｄ ＪＪ， Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ＲＥ， Ｔａｒｔｏｆ ＫＤ． Ｇｅｎｏｍｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ５５：６１８９−６１９５， １９９５．）、従って、ＭＭＰ−１遺伝子の２Ｇアリルが、染色体１１ｑ２２−２３上にｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ（ＬＯＨ）が発生する時に選択的に残されるという仮説（Ｎｏｌｌ，Ｗ．Ｗ．，Ｂｅｌｌｏｎｉ，Ｄ．Ｒ．，Ｒｕｔｔｅｒ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｔｏｒｍ，Ｃ．Ａ．，Ｓｃｈｎｅｄ，Ａ．Ｒ．，Ｔｉｔｕｓ− Ｅｒｎｓｔｏｆｆ，Ｍ．Ｓ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ，Ｃ．Ｅ． Ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １１ｑ２２−２３ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ． Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８（２）：６９１−６９７，２００１．）を証明することが重要である。本発明者らは、１Ｇ／２Ｇ遺伝子型を有するＲＣＣ組織のがん領域からの１個のＤＮＡ試料におけるＬＯＨを調べたが、ＭＭＰ−１ローカスには、いかなるＬＯＨも存在しないことを示した。このデータは、非乳頭状ＲＣＣでは染色体１１ｑ上に高頻度のＬＯＨを示さないとする、以前のＬＯＨ研究（Ｂｒｉｎｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ． Ｅ．， Ｒｕｔｔｅｒ， Ｊ． Ｌ．， ａｎｄ Ｂｅｎｂｏｗ， Ｕ． Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ． Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６：４８２３−４８３０， ２０００．）の結果と一致していた。
【００１０】
最近の研究および本発明の結果から、ＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムは、通常はいくつかのがんと関連しており、ポピュレーションの違いによっては影響されないと考えられる。
【００１１】
【発明の実施の形態】
発明の実施の形態を、実施例にもとづき図面を参照して説明するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００１２】
【実施例】
病理学的に非乳頭状ＲＣＣと確認された患者１１９名（男性８５名、女性３４名）、年齢と性別を調整した健康なボランティア１０５名（対照群Ａ）、性別はマッチングしているが年齢はミスマッチングしている健康なボランティア２２０名（対照群Ｂ）を、本実施例用に登録した。患者群と対照群の平均年齢は、それぞれ６１．４才（範囲 ３２−８４才）、５６．４才（範囲 ３４−９９才）および４７．９才（範囲 ２３−９９才）であった（表１）。山口大学施設倫理委員会（Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．３３）により承認された文書によるインフォームドコンセントを、全ての患者から得た。
【００１３】
【表１】
【００１４】
ゲノムＤＮＡは、血液（患者群より６１試料、対照群は全員）または新鮮凍結正常腎臓（患者群より６１試料）のいずれかから得た。これらの試料は手術時に急速凍結し、使用するまで−８０℃で保存した。ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ＬＯＨ ａｎａｌｙｓｉｓ （Ｎｏｌｌ，Ｗ．Ｗ．，Ｂｅｌｌｏｎｉ，Ｄ．Ｒ．，Ｒｕｔｔｅｒ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｔｏｒｍ，Ｃ．Ａ．，Ｓｃｈｎｅｄ，Ａ．Ｒ．，Ｔｉｔｕｓ−Ｅｒｎｓｔｏｆｆ，Ｍ．Ｓ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ．Ｅ． Ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏ−ｚｙｇｏｓｉｔｙ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １１ｑ２２−２３ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎ ｔｈｅ Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ． Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８（２）：６９１−６９７，２００１．）用として、２１腫瘍組織試料からＤＮＡを抽出した。ＤＮＡｚｏｌ （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ， Ｏｈｉｏ）および ＧｅｎＴＬＥ（ＴＡＫＡＲＡ， Ｋｙｏｔｏ， Ｊａｐａｎ）は、正常組織および全血からのＤＮＡ抽出に用いた。組織病理学的知見に基づいて、全ての患者においてＲＣＣと診断された。健康な対照群は、山口大学附属病院における検査により、外見上の異常が見出されなかったボランティアにより構成されている。被験者はすべて、遺伝学的にネイティブな日本人であった。
【００１５】
ＰＣＲ用のプライマーは、順方向は５’‐ＣＡＧＴＧＧＣＡＡＧＴＧＴＴＣＴＴＴＧＧ‐３’、逆方向は５’‐ＣＴＣＣＣＡＣＣＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＴＡ‐３’であった。２０ｎｇ のゲノムＤＮＡ、０．５μｌの各プライマー（１０ｍＭ）、１μｌの８ｍＭ ｄＮＴＰ混合液、１μｌの１０×バッファー ［ １００ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ （ｐＨ ８．３） ， ５００ ｍＭ ＫＣｌ ， １５ ｍＭ ＭｇＣｌ２ ， ０．０１％ （ｗ／ｖ） ｇｅｌａｔｉｎ ］、５．９５μｌの滅菌脱イオン水および ５Ｕ／μｌ のＡｍｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ （ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥＲ， Ｂｒａｎｃｈｂｕｒｇ， ＮＪ） を含む１０μｌ溶液中で、ＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲ反応の条件は以下の通り：９５℃で１０分、９４℃１分−５５℃１分―９４℃１０分−７２℃１０分の反応を３０サイクル、最後に７２℃で１０分。ＰＣＲ産物をＥｘｏＳＡＰ−ＩＴ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｊａｐａｎ）と３７℃で２０分間混合し、次に２種類の加水分解酵素ＥｘｏｎｕｃｌｅａｓｅＩと Ｓｈｒｉｍｐ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅで８０℃、２０分間反応させて未反応のｄＮＴＰ、一本鎖プライマーおよび外来の一本鎖ＤＮＡを分解させた。ＤＮＡシークエンシング反応は、ＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｒｅａｄｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ， Ｊａｐａｎ）を用いて行った。Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｒｅｍｏｖａｌ Ｋｉｔ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で精製した後、ＤＮＡ配列をＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ｍｏｄｅｌ ３７７ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で検出した（Ｓｍｉｔｈ， Ｌ． Ｍ．， Ｓａｎｄｅｒｓ， Ｊ． Ｚ．， Ｋａｉｓｅｒ， Ｒ． Ｊ．， Ｈｕｇｈｅｓ， Ｐ．， Ｄｏｄｄ， Ｃ．， Ｃｏｎｎｅｌｌ， Ｃ ．Ｒ．， Ｈｅｉｎｅｒ， Ｃ．， Ｋｅｎｔ， Ｓ． Ｂ． Ｈ．， ａｎｄ Ｈｏｏｄ， Ｌ． Ｅ． Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｎａｔｕｒｅ．３２１： ６７４−６７９， １９８６．）。
【００１６】
統計解析は、以下の手法を用いて行った。患者群および健常対照群におけるＭＭＰ−１プロモーターの遺伝子頻度は、Ｈａｒｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ （χ２ ＜ ３．８４， Ｐ ＜ ０．０５）と一致していた。患者群と健常対照群との間の遺伝子型の違いは、χ２ ｔｅｓｔを適用した。臨床病理学的パラメーターと遺伝子型との相関は正確検定により評価した。オッズ比と９５％信頼区間は、相対危険率を評価するために用いた。全ての統計解析はＳｔａｔＶｉｅｗ （ｖｅｒｓｉｏｎ ５； ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．， ＮＣ）を用い、Ｐ ＜ ０．０５を統計学的有意差ありとみなした。すべての非乳頭状ＲＣＣ患者は、ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ−ｎｏｄｅ−ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ （ＴＮＭ） ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ によりステージを分類した。腫瘍は、ＷＨＯ基準に従って、病理学的に分類した。
【００１７】
ＭＭＰ−１プロモーターの−１６０７の位置におけるＧの挿入（２Ｇアリル）またはＧの欠失（１Ｇアリル）を、ＲＣＣ患者および対照群において決定した。表２は、すべてのケースにおける遺伝子型分布を示している。もっとも高いＭＭＰ−１転写レベルを有する２Ｇ／２Ｇ遺伝子型の頻度を、１Ｇ／１Ｇおよび１Ｇ／２Ｇ遺伝子型の頻度と比較した。ＲＣＣ患者１１９例中の７２例（６０．５％）が２Ｇ／２Ｇ遺伝子型を示したのに対し、年齢および性別調整対照群（グループＡ）においては１０５例中の３９例（３７．１％）だけが２Ｇ／２Ｇ遺伝子型を示した（表２）。
【００１８】
【表２】
【００１９】
対照群と比較して、ＲＣＣにおいては有意に高い頻度で２Ｇ／２Ｇ遺伝子型が見出された（Ｐ＝０．０００５ ； ＯＲ ， ２．５９２ ； ９５％ＣＩ ， １．５１６−４．４３３）。２Ｇアリル頻度は、２つの対照群間では統計学的な差を示さなかった（Ｐ＝０．５４６０）。性別調整群（グループＢ）と比較した時、ＲＣＣ患者において２Ｇ／２Ｇ遺伝子型は、再び有意に高かった（Ｐ＝０．０００６ ； ＯＲ ， ２．２１３ ； ９５％ＣＩ ， １．３９５−３．５０９）。
【００２０】
ＭＭＰ−１遺伝子型ポリモルフィズムと臨床上の背景との関係はと言えば、性、等級およびステージのようないくつかの形質と遺伝子型との間には、統計学的に有意な相関はなかった（表３）。染色体１１ｑ２２−２３上のＬＯＨは、ＭＭＰ−１プロモーターにおける挿入ポリモルフィズムの保持と相関しているという仮説（Ｎｏｌｌ，Ｗ．Ｗ．，Ｂｅｌｌｏｎｉ，Ｄ．Ｒ．，Ｒｕｔｔｅｒ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｔｏｒｍ，Ｃ．Ａ．，Ｓｃｈｎｅｄ，Ａ．Ｒ．，Ｔｉｔｕｓ−Ｅｒｎｓｔｏｆｆ， Ｍ．Ｓ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ，Ｃ．Ｅ． Ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １１ｑ２２−２３ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ． Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８（２）：６９１−６９７，２００１．）を研究するために、１Ｇ／２Ｇ遺伝子型（ｎ＝２１）を有する腫瘍ＤＮＡのＰＣＲ産物を直接シークエンシングにより分析した。その結果、この遺伝子座にはいかなるＬＯＨも存在しなかった。
【００２１】
【表３】
【００２２】
【発明の効果】
ＭＭＰ−１は腫瘍細胞の浸潤や転移と相関しており、転写のレベルに影響するＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムと相関している。本発明は、腎細胞がんの発症リスクとこのポリモルフィズムとの相関を明らかにし、日本人における腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法を確立することができた。
【発明の属する技術分野】
非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するＭＭＰ−１プロモーターのＳＮＰを用いた、腎細胞がんまたは非乳頭状腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
Ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ により大腸がん患者集団と正常対照群とを比較解析することにより、大腸がんの原因遺伝子の ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＮＰ）の内から、モンゴロイド特に日本人を対象とした、大腸がんの発症、浸潤、転移のし易さを判定できる検査方法の確立に寄与し得るＳＮＰとして、ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１（ＭＭＰ−１）遺伝子と ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３（ＭＭＰ−３）遺伝子のＳＮＰが適していることが知られている。ＭＭＰ−１およびＭＭＰ−３遺伝子のＳＮＰ解析結果からは、発症前診断に利用することにより、日本人における大腸発がんのリスクを推定することが可能となっている（特願２００２−４００４９）。腎細胞がん（ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ； ＲＣＣ）は、泌尿器の悪性腫瘍の原因としては３番目に多く、また成人の悪性腫瘍の約２％を占めている（非特許文献１）。超音波、ＣＴおよびＭＲＩのような非侵襲イメージング法が広く用いられるようになって、偶然にＲＣＣという診断が下されるケースが、着実に増加している（非特許文献２）。これらスクリーニング用の検出ツールの改良にもかかわらず、生命を脅かすＲＣＣ（局所浸潤性腫瘍または転移性腫瘍）の比率は、減少してはいない（非特許文献３）。ＲＣＣ患者の約２５％は、プレゼンテーションの時点で転移性の疾患を有しているが、転移性の傷害の治療はほとんど成功しないか、あるいはリスク患者における遠方への転移の予防もできない状態である（非特許文献４）。がんのステージＩからＩＶのそれぞれにおける５年生存率は、９１％、７４％、６７％および３２％であることが報告されている（非特許文献２）。ＩＮＦαの間歇的な筋肉内注射は、ＩＬ−２併用の有無にかかわらず、転移性ＲＣＣ治療のゴールドスタンダードであり、患者の約２０％が、この治療法の恩恵を受けているに過ぎない（特許文献５−非特許文献９）。この事実が、遺伝子診断を含めた新規なスクリーニングシステムが、ＲＣＣ早期発見のために必須であることを示している。
【０００３】
【非特許文献１】Ｇｒｅｅｎｌｅｅ，Ｒ．Ｔ．，Ｍｕｒｒａｙ，Ｔ．，Ｂｏｌｄｅｎ，Ｓ．，Ｗｉｎｇｏ，Ｐ．Ａ Ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ， ２０００．ＣＡ． Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ． ５０： ７， ２０００．
【非特許文献２】Ａｌｌａｎ， Ｊ．Ｐ．， Ａｍｎｏｎ， Ｚ．， Ａｒｉｅ， Ｓ．Ｂ．Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｉｎｇｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊ．Ｕｒｏｌ． １６６：１６１１−１６２３，２００１．
【非特許文献３】Ｈｏｃｋ， Ｌ．Ｍ．， Ｌｙｎｃｈ， Ｊ．， ａｎｄ Ｂａｌａｊｉ， Ｋ．Ｃ． Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ａｌｌ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｓｔ ２ ｄｅｃａｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ： ａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ， ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｎｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｇｒａｍ ｄａｔａ． Ｊ．Ｕｒｏｌ， １６７：５７−６０，２００２．
【非特許文献４】Ｒｉｔｃｈｉｅ， Ａ．Ｗ．， Ｃｈｉｓｈｏｌｍ， Ｇ．Ｄ． Ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ．１０： ３９０−４００， １９８３．
【非特許文献５】Ｋｉｒｋｗｏｏｄ， Ｊ．Ｍ．， Ｈａｒｒｉｓ， Ｊ．Ｅ．， Ｖｅｒａ， Ｒ．， Ｓａｎｄｌｅｒ， Ｓ．， Ｆｉｓｃｈｅｒ， Ｄ．Ｓ．， Ｋｈａｎｄｅｋａｒ， Ｊ．， Ｅｒｎｓｔｏｆｆ， Ｍ．Ｓ．， Ｇｏｒｄｏｎ， Ｌ．， Ｌｕｔｅｓ， Ｒ．， Ｂｏｎｏｍｉ， Ｐ．， Ｌｙｔｔｏｎ， Ｂ．， Ｃｏｂｌｅｉｇｈ， Ｍ．， Ｔａｙｌｏｒ，Ｓ．Ｊ． Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｓｔｕｄｙｏｆ ｌｏｗ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅα−ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ： Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｔｒｉａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４５： ８６３−８７１，１９８５．
【非特許文献６】Ｆｉｇｌｉｎ， Ｒ．Ａ．， Ａｂｉ−Ａａｄ， Ａ．Ｓ．， Ｂｅｌｌｄｅｒｒｕｎ， Ａ．， ｄｅＫｅｒｎｉｏｎ， Ｊ．Ｂ． Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ， １８：１０２−１０７，１９９１．
【非特許文献７】Ｆｏｓｓａ， Ｓ．Ｄ．， Ｋｒａｍａｒ， Ａ．， Ｄｒｏｚ， Ｊ．Ｐ．， Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ． Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ． ３０：１３１０−１３１４，１９９４．
【非特許文献８】Ｃａｎｏｂｂｉｏ， Ｌ．， Ｒｕｂａｇｏｔｔｉ， Ａ．， Ｍｉｇｌｉｅｔｔａ， Ｌ．， Ｃａｎｎａｔａ， Ｄ．， Ｃｕｒｏｔｔｏ， Ａ．， Ａｍｏｒｏｓｏ， Ｄ．， Ｂｏｃｃａｄｏ， Ｆ． Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．１２１： ７５３−７５６，１９９５．
【非特許文献９】Ｇｒａｔａｍａ， Ｊ．Ｗ．， Ｓｃｈｍｉｔｚ， Ｐ．Ｉ．， Ｇｏｅｙ， Ｓ．Ｈ．， Ｌａｍｅｒｓ， Ｃ．Ｈ．， Ｓｔｏｔｅｒ， Ｇ．， Ｂｏｌｈｕｉｓ， Ｒ．Ｌ． Ｍｏｄｕｌａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ−ｃｅｌｌ ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ （ＩＬ−２， ＩＦＮ ａｌｐｈａ ａｎｄ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ＩＬ−２−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）． Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．６５： １５２−１５６，１９９６．
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
ＭＭＰ−１は腫瘍細胞の浸潤や転移と相関しており、転写のレベルに影響するＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムと相関している。本発明は、腎細胞がんの発症リスクとこのポリモルフィズムとの相関を明らかにし、腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法を確立することが課題である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
腫瘍の浸潤と転移のプロセスは、腫瘍細胞の周囲の細胞外マトリックス（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ； ＥＣＭ）や結合組織の分解または切断を必要とする（Ｈａｒｔ，Ｉ． Ｒ． ａｎｄ Ｓａｉｎｉ， Ａ． Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｌａｎｃｅｔ， ３３９：１４５３−１４５７，１９９２．；Ｋｏｈｎ， Ｅ． Ｃ． ａｎｄ Ｌｉｏｔｔａ， Ｌ． Ａ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ： ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５５： １８５６−１８６２， １９９５．）。ＭＭＰは、一般的に、ＥＣＭや基底膜コンポーメントを分解することができる（Ｃｈａｍｂｅｒｓ， Ａ．Ｆ．， ａｎｄ Ｍａｔｒｉｓｉａｎ， Ｌ．Ｍ． Ｃｈａｎｇｉｎｇ ｖｉｅｗｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． （Ｂｅｔｈｅｓｄａ）， ８９： １２６０−１２７０，１９９７）。染色体１１ｑ２２に位置するＭＭＰ−１遺伝子は、種々の腫瘍細胞で発現されているとともに、正常細胞（ ｓｔｒｏｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ， ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ， ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ， ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ）において最も広く発現している（Ｚｈｕ， Ｙ．， Ｓｐｉｔｚ， Ｍ． Ｒ．， Ｌｅｉ， Ｌ．， Ｍｉｌｌｓ， Ｇ， Ｂ．， ａｎｄ Ｗｕ， Ｘ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：７８２５−７８２９，２００１；Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｙ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｉｓｈｉｏｋａ， Ｓ．， Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， Ａ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ．， Ｔｏｋｉｎｏ， Ｔ．， ａｎｄ Ｋｕｄｏ， Ｒ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊｐｎ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ９１：６１２−６１５， ２０００．；Ｓｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ， Ｗ． Ｇ．，Ｌｉｏｔｔａ， Ｌ． Ａ．， ａｎｄ Ｋｌｅｉｎｅｒ， Ｄ． Ｅ． Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ６： ｒｏｌｅ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． ＦＡＳＥＢ Ｊ．， ７：１４３４−１４４１， １９９３；Ｂｒｉｎｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ． Ｅ．， Ｒｕｔｔｅｒ， Ｊ． Ｌ．， ａｎｄ Ｂｅｎｂｏｗ， Ｕ． Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ． Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６：４８２３−４８３０， ２０００．）。Ｍｕｒｒａｙ らは、結腸直腸がんや食道がんの予後の悪さとＭＭＰ−１の発現との相関を示した（Ｍｕｒｒａｙ， Ｇ． Ｉ．， Ｄｕｎｃａｎ， Ｍ． Ｅ．， Ｏｎｅｉｌ， Ｐ．， Ｍｅｌｖｉｎ， Ｗ． Ｔ． ａｎｄ Ｆｏｒｔｈｅｒｇｉｌｌ， Ｊ． Ｅ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ． Ｎａｔ． Ｍｅｄ．， ２：４６１−４６２， １９９６．；Ｍｕｒｒａｙ， Ｇ． Ｉ．， Ｄｕｎｃａｎ， Ｍ． Ｅ．， Ｏｎｅｉｌ， Ｐ．， Ｍｃｋａｙ， Ｊ． Ａ．， Ｍｅｌｖｉｎ， Ｗ． Ｔ． ａｎｄ Ｆｏｒｔｈｅｒｇｉｌｌ， Ｊ． Ｅ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｏｅｓｏｐｈａｇｉａｌ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ． １８５：２５６−２６１， １９９８．）。
【０００６】
最近の文献は、ＭＭＰ−１プロモーター領域の −１６０７ ｂｐ におけるグアニン挿入ポリモルフィズム（２Ｇアリル）によって、Ｅｔｓ転写因子の結合サイトにおけるコア認識配列である５’‐ＧＧＡ‐３’配列（Ｒｕｔｔｅｒ， Ｊ． Ｌ．， Ｍｉｔｃｈｅｌｌ， Ｔ． Ｉ．， Ｂｕｔｔｉｃｅ， Ｇ．， Ｍｅｙｅｒｓ， Ｊ．， Ｇｕｓｅｌｌａ， Ｊ． Ｆ．， Ｏｚｅｌｉｕｓ， Ｌ．Ｊ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ． Ｅ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｃｒｅａｔｅｓ ａｎ Ｅｔｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ａｎｄ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５８： ５３２１−５３２５， １９９８．）が生ずることを報告している（Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．；Ｇｒａｖｅｓ， Ｂ．Ｊ． Ｉｎｎｅｒ ｗｏｒｋｉｎｇｓ ｏｆ ａ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｐａｒｔｎｅｒｓｈｉｐ． Ｓｃｉｅｎｃｅ （Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ）， ２７９： １０００−１００１． １９９８；Ｂｕｔｔｉｃｅ， Ｇ．， Ｄｕｔｅｒｑｕｅ−Ｃｏｑｕｉｌｌａｕｄ， Ｍ．， Ｂａｓｕｙａｕｘ， Ｊ．Ｐ．， Ｃａｒｒｅｒｅ， Ｓ．， Ｋｕｒｋｉｎｅｎ， Ｍ．， ａｎｄ Ｓｔｅｈｅｌｉｎ， Ｄ．Ｅｒｇ， ａｎ Ｅｔｓ−ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ １（ＭＭＰ−１） ａｎｄ ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ１ （ＭＭＰ３） ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｐｈｙｓｉｃａｌｌｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅＦｏｓ／Ｊｕｎ ｃｏｍｐｌｅｘ． Ｏｎｃｏｇｅｎｅ， １３：２２９７−２３０６， １９９６；．Ｂａｓｕｙａｕｘ， Ｊ． Ｐ．， Ｆｅｒｒｅｉｒａ， Ｅ．， Ｓｔｅｈｅｌｉｎ， Ｄ．， ａｎｄ Ｂｕｔｔｉｃｅ， Ｇ． Ｔｈｅ Ｅｔｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｔｅｒａｃｔ ｗｉｔｈ ｅａｃｈ ｏｔｈｅｒ ａｎｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃ−Ｆｏｓ／ｃ−Ｊｕｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｖｉａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ ａ ＤＮＡ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｄ −ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２： ２６１８８−２６１９５， １９９７；Ｙｅ， Ｓ．， Ｄｈｉｌｌｏｎ， Ｓ．， Ｔｕｒｎｅｒ， Ｓ． Ｊ．， Ｂａｔｅｍａｎ， Ａ． Ｃ．， Ｔｈｅａｋｅｒ， Ｊ． Ｍ．， Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ， Ｒ． Ｍ．， Ｄａｙ， Ｉ．， ａｎｄ Ｈｏｗｅｌｌ， Ｗ． Ｍ． Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ １ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：１２９６−１２９８， ２００１）。これまでに蓄積された証拠から、プロモーター領域の２Ｇホモザイガス ポリモルフィズムは、１Ｇホモザイゴート（Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．）よりも高い転写活性を有しており、悪性黒色腫（Ｙｅ， Ｓ．， Ｄｈｉｌｌｏｎ， Ｓ．， Ｔｕｒｎｅｒ， Ｓ． Ｊ．， Ｂａｔｅｍａｎ， Ａ． Ｃ．， Ｔｈｅａｋｅｒ， Ｊ． Ｍ．， Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ， Ｒ． Ｍ．， Ｄａｙ， Ｉ．， ａｎｄ Ｈｏｗｅｌｌ， Ｗ． Ｍ． Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ １ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：１２９６−１２９８， ２００１）と同様に、卵巣がん（Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．）、子宮内膜がん（Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｙ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｉｓｈｉｏｋａ， Ｓ．， Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， Ａ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ．， Ｔｏｋｉｎｏ， Ｔ．， ａｎｄ Ｋｕｄｏ， Ｒ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊｐｎ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，９１：６１２−６１５， ２０００．）、大腸がん（Ｇｈｉｌａｒｄｉ， Ｇ．， Ｂｉｏｎｄｉ， Ｍ． Ｌ．， Ｍａｎｇｏｎｉ， Ｊ．， Ｌｅｖｉｔｉ， Ｓ．， ＤｅＭｏｎｔｉ， Ｍ．， Ｇｕａｇｎｅｌｌｉｎｉ， Ｅ．， ａｎｄ Ｓｃｏｒｚａ， Ｒ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ １Ｇ／２Ｇ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ７：２３４４−２３４６， ２００１）および肺がん（Ｚｈｕ， Ｙ．， Ｓｐｉｔｚ， Ｍ． Ｒ．， Ｌｅｉ， Ｌ．， Ｍｉｌｌｓ， Ｇ， Ｂ．， ａｎｄ Ｗｕ， Ｘ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：７８２５−７８２９， ２００１）を含むいくつかのヒト腫瘍の悪性化と相関している。本発明は、ＭＭＰ−１プロモーターポリモルフィズムが、日本人におけるＲＣＣの感受性と有意に相関していることを示した。現時点においては、非乳頭状ＲＣＣの感受性におけるＭＭＰ−１プロモーター ポリモルフィズムの明確な影響を示した最初の報告である。
【０００７】
ＭＭＰ−１は、ＲＣＣを含む種々の腫瘍により高レベルで発現されている（Ｓｔｅｐｈａｎｉｅ， Ｃ． ａｎｄ Ｇｒａｅｍｅ， Ｉ．Ｍ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８９：３００−３０８，１９９９．）。またＭＭＰ−１は、細胞外マトリックスを分解することができるタンパク分解酵素であり、腫瘍の浸潤および転移のポテンシャルを強めていると考えられる。これまでに蓄積された証拠から、乳がん、大腸がん、脳腫瘍、肺がん、前立腺がん（Ｍａｒｉｅ−Ａｎｎｉｃｋ， Ｆ．， Ｒｉｃｈａｒｄ， Ｒ．Ｄ．， ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄ，Ｂ． Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７７： ４６５−４８０，１９９９．）、食道がん（Ｓｔｅｐｈａｎｉｅ， Ｃ．ａｎｄ Ｇｒａｅｍｅ， Ｉ．Ｍ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８９：３００−３０８， １９９９．）および直腸がん（Ｈｅｗｉｔｔ， Ｒ．Ｅ．， Ｌｅａｃｈ， Ｉ．Ｅ．， Ｐｏｗｅ， Ｄ．Ｇ．， Ｃｌａｒｋ， Ｉ．Ｍ．， Ｃａｗｓｔｏｎｅ， Ｔ．Ｅ．， ａｎｄ Ｔｕｒｎｅｒ， Ｄ．Ｒ．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＴＩＭＰ） ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｔｕｍｏｒｓ． Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．４９： ６６６−６７２，１９９１．）における予後の悪さと、ＭＭＰ ｍＲＮＡあるいはＭＭＰ−１発現との密接な相関が示唆されている。腫瘍のセルラインを用いて、Ｒｕｔｔｅｒらにより、−１６０７ ｂｐ の位置に２Ｇホモザイゴートを含むＭＭＰ−１プロモーターは、１Ｇプロモーターよりも高い転写活性を有していることが示された（Ｒｕｔｔｅｒ， Ｊ． Ｌ．， Ｍｉｔｃｈｅｌｌ， Ｔ． Ｉ．， Ｂｕｔｔｉｃｅ， Ｇ．， Ｍｅｙｅｒｓ， Ｊ．， Ｇｕｓｅｌｌａ， Ｊ． Ｆ．， Ｏｚｅｌｉｕｓ， Ｌ．Ｊ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ． Ｅ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｃｒｅａｔｅｓ ａｎ Ｅｔｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ａｎｄ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５８： ５３２１−５３２５， １９９８．）。最近、これらのデータは、他のデータによって臨床的にも確認されており、１Ｇアリルを有する患者に比較して、２Ｇアリルを有する患者においてがん組織における有意に高レベルなＭＭＰ−１発現が観察されている（Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．）。この証拠から、ＭＭＰ−１プロモーター領域における特定アリルのポリモルフィズムが、特定の形質に対すると同様に、腫瘍への感受性に対しても強いインパクトを有するという仮説が立てられた。そして、これがＲＣＣにおける患者の予後に影響することが示された。
【０００８】
本発明において、患者と対照群との間の年齢調整とは無関係に、ＲＣＣと２Ｇ／２Ｇ遺伝子型との有意な相関が見られた。この結果は、健康な対照群における、ＭＭＰ−１プロモーターの１Ｇ／２Ｇポリモルフィズムの遺伝子型分布が、年齢によって影響されないことを示している。ＭＭＰ−１ポリモルフィズムと多くのがんとの相関（Ｚｈｕ， Ｙ．， Ｓｐｉｔｚ， Ｍ． Ｒ．， Ｌｅｉ， Ｌ．， Ｍｉｌｌｓ， Ｇ， Ｂ．， ａｎｄ Ｗｕ， Ｘ．Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：７８２５−７８２９， ２００１；Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｙ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｉｓｈｉｏｋａ， Ｓ．， Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， Ａ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ．， Ｔｏｋｉｎｏ， Ｔ．， ａｎｄ Ｋｕｄｏ， Ｒ． Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊｐｎ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ９１：６１２−６１５， ２０００．； Ｋａｎａｍｏｒｉ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ， Ｍ．， Ｍｉｎａｇｕｃｈｉ， Ｔ．， Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｋ．， Ｓａｇａｅ， Ｓ．， Ｋｕｄｏ， Ｒ．， Ｔｅｒａｋａｗａ， Ｎ．， ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｙ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５９： ４２２５−４２２７， １９９９．；Ｙｅ， Ｓ．， Ｄｈｉｌｌｏｎ， Ｓ．， Ｔｕｒｎｅｒ， Ｓ． Ｊ．， Ｂａｔｅｍａｎ， Ａ． Ｃ．， Ｔｈｅａｋｅｒ， Ｊ． Ｍ．， Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ， Ｒ． Ｍ．， Ｄａｙ， Ｉ．， ａｎｄ Ｈｏｗｅｌｌ， Ｗ． Ｍ． Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ １ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６１：１２９６−１２９８， ２００１； Ｇｈｉｌａｒｄｉ， Ｇ．， Ｂｉｏｎｄｉ， Ｍ． Ｌ．， Ｍａｎｇｏｎｉ， Ｊ．， Ｌｅｖｉｔｉ， Ｓ．， ＤｅＭｏｎｔｉ， Ｍ．， Ｇｕａｇｎｅｌｌｉｎｉ， Ｅ．， ａｎｄ Ｓｃｏｒｚａ， Ｒ． Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ １Ｇ／２Ｇ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ７：２３４４−２３４６， ２００１）が示唆されているので、２Ｇ／２Ｇ遺伝子型の頻度は、がんによる死亡率が加齢とともに増加するため、減少すると推測することも可能である。しかしながら、がんの発生率（日本においては約０．０１％／年）があまりにも低い値である（Ｍａｒｕｍｏ，Ｋ．，Ｓａｔｏｍｉ，Ｙ．，Ｍｉｙａｏ，Ｎ．，Ｈａｓｅｇａｗａ，Ｍ．，Ｔｏｍｉｔａ，Ｙ．，Ｉｇａｒａｓｈｉ，Ｔ．，Ｏｎｉｓｈｉ，Ｔ．，Ｎａｋａｚａｗａ，Ｈ．，Ｆｕｋｕｄａ，Ｍ．，Ｏｚｏｎｏ，Ｓ．，Ｔｅｒａｃｈｉ，Ｔ．，Ｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｎａｋａｍｏｔｏ，Ｔ．，Ｋａｗａｍｕｒａ， Ｊ．Ｔｈｅ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ａ ｎａｔｉｏｎ−ｗｉｄｅ ｓｕｒｖｅｙ ｉｎ Ｊａｐａｎ ｉｎ １９９７． Ｉｎｔ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．８（７）：３５９−６５，２００１．）ため、全ポピュレーションにおける遺伝子型分布に影響しないと考えられる。
【０００９】
ＭＭＰ−１は、ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌと同様に、がん細胞により産生されることが知られており（Ｔｈｒａｓｈ−Ｂｉｎｇｈａｍ ＣＡ， Ｓａｌａｚａｒ Ｈ， Ｆｒｅｅｄ ＪＪ， Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ＲＥ， Ｔａｒｔｏｆ ＫＤ． Ｇｅｎｏｍｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ５５：６１８９−６１９５， １９９５．）、従って、ＭＭＰ−１遺伝子の２Ｇアリルが、染色体１１ｑ２２−２３上にｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ（ＬＯＨ）が発生する時に選択的に残されるという仮説（Ｎｏｌｌ，Ｗ．Ｗ．，Ｂｅｌｌｏｎｉ，Ｄ．Ｒ．，Ｒｕｔｔｅｒ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｔｏｒｍ，Ｃ．Ａ．，Ｓｃｈｎｅｄ，Ａ．Ｒ．，Ｔｉｔｕｓ− Ｅｒｎｓｔｏｆｆ，Ｍ．Ｓ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ，Ｃ．Ｅ． Ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １１ｑ２２−２３ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ． Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８（２）：６９１−６９７，２００１．）を証明することが重要である。本発明者らは、１Ｇ／２Ｇ遺伝子型を有するＲＣＣ組織のがん領域からの１個のＤＮＡ試料におけるＬＯＨを調べたが、ＭＭＰ−１ローカスには、いかなるＬＯＨも存在しないことを示した。このデータは、非乳頭状ＲＣＣでは染色体１１ｑ上に高頻度のＬＯＨを示さないとする、以前のＬＯＨ研究（Ｂｒｉｎｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ． Ｅ．， Ｒｕｔｔｅｒ， Ｊ． Ｌ．， ａｎｄ Ｂｅｎｂｏｗ， Ｕ． Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ． Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６：４８２３−４８３０， ２０００．）の結果と一致していた。
【００１０】
最近の研究および本発明の結果から、ＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムは、通常はいくつかのがんと関連しており、ポピュレーションの違いによっては影響されないと考えられる。
【００１１】
【発明の実施の形態】
発明の実施の形態を、実施例にもとづき図面を参照して説明するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００１２】
【実施例】
病理学的に非乳頭状ＲＣＣと確認された患者１１９名（男性８５名、女性３４名）、年齢と性別を調整した健康なボランティア１０５名（対照群Ａ）、性別はマッチングしているが年齢はミスマッチングしている健康なボランティア２２０名（対照群Ｂ）を、本実施例用に登録した。患者群と対照群の平均年齢は、それぞれ６１．４才（範囲 ３２−８４才）、５６．４才（範囲 ３４−９９才）および４７．９才（範囲 ２３−９９才）であった（表１）。山口大学施設倫理委員会（Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．３３）により承認された文書によるインフォームドコンセントを、全ての患者から得た。
【００１３】
【表１】
ゲノムＤＮＡは、血液（患者群より６１試料、対照群は全員）または新鮮凍結正常腎臓（患者群より６１試料）のいずれかから得た。これらの試料は手術時に急速凍結し、使用するまで−８０℃で保存した。ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ＬＯＨ ａｎａｌｙｓｉｓ （Ｎｏｌｌ，Ｗ．Ｗ．，Ｂｅｌｌｏｎｉ，Ｄ．Ｒ．，Ｒｕｔｔｅｒ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｔｏｒｍ，Ｃ．Ａ．，Ｓｃｈｎｅｄ，Ａ．Ｒ．，Ｔｉｔｕｓ−Ｅｒｎｓｔｏｆｆ，Ｍ．Ｓ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ， Ｃ．Ｅ． Ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏ−ｚｙｇｏｓｉｔｙ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １１ｑ２２−２３ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎ ｔｈｅ Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ． Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８（２）：６９１−６９７，２００１．）用として、２１腫瘍組織試料からＤＮＡを抽出した。ＤＮＡｚｏｌ （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ， Ｏｈｉｏ）および ＧｅｎＴＬＥ（ＴＡＫＡＲＡ， Ｋｙｏｔｏ， Ｊａｐａｎ）は、正常組織および全血からのＤＮＡ抽出に用いた。組織病理学的知見に基づいて、全ての患者においてＲＣＣと診断された。健康な対照群は、山口大学附属病院における検査により、外見上の異常が見出されなかったボランティアにより構成されている。被験者はすべて、遺伝学的にネイティブな日本人であった。
【００１５】
ＰＣＲ用のプライマーは、順方向は５’‐ＣＡＧＴＧＧＣＡＡＧＴＧＴＴＣＴＴＴＧＧ‐３’、逆方向は５’‐ＣＴＣＣＣＡＣＣＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＴＡ‐３’であった。２０ｎｇ のゲノムＤＮＡ、０．５μｌの各プライマー（１０ｍＭ）、１μｌの８ｍＭ ｄＮＴＰ混合液、１μｌの１０×バッファー ［ １００ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ （ｐＨ ８．３） ， ５００ ｍＭ ＫＣｌ ， １５ ｍＭ ＭｇＣｌ２ ， ０．０１％ （ｗ／ｖ） ｇｅｌａｔｉｎ ］、５．９５μｌの滅菌脱イオン水および ５Ｕ／μｌ のＡｍｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ （ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥＲ， Ｂｒａｎｃｈｂｕｒｇ， ＮＪ） を含む１０μｌ溶液中で、ＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲ反応の条件は以下の通り：９５℃で１０分、９４℃１分−５５℃１分―９４℃１０分−７２℃１０分の反応を３０サイクル、最後に７２℃で１０分。ＰＣＲ産物をＥｘｏＳＡＰ−ＩＴ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｊａｐａｎ）と３７℃で２０分間混合し、次に２種類の加水分解酵素ＥｘｏｎｕｃｌｅａｓｅＩと Ｓｈｒｉｍｐ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅで８０℃、２０分間反応させて未反応のｄＮＴＰ、一本鎖プライマーおよび外来の一本鎖ＤＮＡを分解させた。ＤＮＡシークエンシング反応は、ＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｒｅａｄｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ， Ｊａｐａｎ）を用いて行った。Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｒｅｍｏｖａｌ Ｋｉｔ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で精製した後、ＤＮＡ配列をＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ｍｏｄｅｌ ３７７ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で検出した（Ｓｍｉｔｈ， Ｌ． Ｍ．， Ｓａｎｄｅｒｓ， Ｊ． Ｚ．， Ｋａｉｓｅｒ， Ｒ． Ｊ．， Ｈｕｇｈｅｓ， Ｐ．， Ｄｏｄｄ， Ｃ．， Ｃｏｎｎｅｌｌ， Ｃ ．Ｒ．， Ｈｅｉｎｅｒ， Ｃ．， Ｋｅｎｔ， Ｓ． Ｂ． Ｈ．， ａｎｄ Ｈｏｏｄ， Ｌ． Ｅ． Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｎａｔｕｒｅ．３２１： ６７４−６７９， １９８６．）。
【００１６】
統計解析は、以下の手法を用いて行った。患者群および健常対照群におけるＭＭＰ−１プロモーターの遺伝子頻度は、Ｈａｒｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ （χ２ ＜ ３．８４， Ｐ ＜ ０．０５）と一致していた。患者群と健常対照群との間の遺伝子型の違いは、χ２ ｔｅｓｔを適用した。臨床病理学的パラメーターと遺伝子型との相関は正確検定により評価した。オッズ比と９５％信頼区間は、相対危険率を評価するために用いた。全ての統計解析はＳｔａｔＶｉｅｗ （ｖｅｒｓｉｏｎ ５； ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．， ＮＣ）を用い、Ｐ ＜ ０．０５を統計学的有意差ありとみなした。すべての非乳頭状ＲＣＣ患者は、ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ−ｎｏｄｅ−ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ （ＴＮＭ） ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ によりステージを分類した。腫瘍は、ＷＨＯ基準に従って、病理学的に分類した。
【００１７】
ＭＭＰ−１プロモーターの−１６０７の位置におけるＧの挿入（２Ｇアリル）またはＧの欠失（１Ｇアリル）を、ＲＣＣ患者および対照群において決定した。表２は、すべてのケースにおける遺伝子型分布を示している。もっとも高いＭＭＰ−１転写レベルを有する２Ｇ／２Ｇ遺伝子型の頻度を、１Ｇ／１Ｇおよび１Ｇ／２Ｇ遺伝子型の頻度と比較した。ＲＣＣ患者１１９例中の７２例（６０．５％）が２Ｇ／２Ｇ遺伝子型を示したのに対し、年齢および性別調整対照群（グループＡ）においては１０５例中の３９例（３７．１％）だけが２Ｇ／２Ｇ遺伝子型を示した（表２）。
【００１８】
【表２】
対照群と比較して、ＲＣＣにおいては有意に高い頻度で２Ｇ／２Ｇ遺伝子型が見出された（Ｐ＝０．０００５ ； ＯＲ ， ２．５９２ ； ９５％ＣＩ ， １．５１６−４．４３３）。２Ｇアリル頻度は、２つの対照群間では統計学的な差を示さなかった（Ｐ＝０．５４６０）。性別調整群（グループＢ）と比較した時、ＲＣＣ患者において２Ｇ／２Ｇ遺伝子型は、再び有意に高かった（Ｐ＝０．０００６ ； ＯＲ ， ２．２１３ ； ９５％ＣＩ ， １．３９５−３．５０９）。
【００２０】
ＭＭＰ−１遺伝子型ポリモルフィズムと臨床上の背景との関係はと言えば、性、等級およびステージのようないくつかの形質と遺伝子型との間には、統計学的に有意な相関はなかった（表３）。染色体１１ｑ２２−２３上のＬＯＨは、ＭＭＰ−１プロモーターにおける挿入ポリモルフィズムの保持と相関しているという仮説（Ｎｏｌｌ，Ｗ．Ｗ．，Ｂｅｌｌｏｎｉ，Ｄ．Ｒ．，Ｒｕｔｔｅｒ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｔｏｒｍ，Ｃ．Ａ．，Ｓｃｈｎｅｄ，Ａ．Ｒ．，Ｔｉｔｕｓ−Ｅｒｎｓｔｏｆｆ， Ｍ．Ｓ．， ａｎｄ Ｂｒｉｎｃｋｅｒｈｏｆｆ，Ｃ．Ｅ． Ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １１ｑ２２−２３ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｒ． Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８（２）：６９１−６９７，２００１．）を研究するために、１Ｇ／２Ｇ遺伝子型（ｎ＝２１）を有する腫瘍ＤＮＡのＰＣＲ産物を直接シークエンシングにより分析した。その結果、この遺伝子座にはいかなるＬＯＨも存在しなかった。
【００２１】
【表３】
【発明の効果】
ＭＭＰ−１は腫瘍細胞の浸潤や転移と相関しており、転写のレベルに影響するＭＭＰ−１プロモーターのポリモルフィズムと相関している。本発明は、腎細胞がんの発症リスクとこのポリモルフィズムとの相関を明らかにし、日本人における腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法を確立することができた。
Claims (4)
- 非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するＭＭＰ−１プロモーターのＳＮＰを用いた、腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法。
- 非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するＭＭＰ−１プロモーターのＳＮＰを用いた、非乳頭状腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法。
- 日本人を対象とする、非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するＭＭＰ−１プロモーターのＳＮＰを用いた請求項１または２に記載の検査方法。
- 非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するＭＭＰ−１プロモーターのＳＮＰが ５’‐ＧＧＡ‐３’配列を有することを特徴とする、請求項１から３のいずれかに記載の検査方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002281445A JP2004113136A (ja) | 2002-09-26 | 2002-09-26 | 非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するｍｍｐ−１プロモーターのｓｎｐを用いた腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法 |
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|---|---|
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| JP2002281445A Pending JP2004113136A (ja) | 2002-09-26 | 2002-09-26 | 非乳頭状腎細胞がんの感受性と相関するｍｍｐ−１プロモーターのｓｎｐを用いた腎細胞がんの発症リスクを予測する分子レベルでの検査方法 |
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|---|---|
| JP (1) | JP2004113136A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008500034A (ja) * | 2004-05-26 | 2008-01-10 | ステンマン，ヤコブ | 小さな生物学的サンプルにおけるｍＲＮＡ発現レベルの定量及び／又は比較評価を行うための方法 |
-
2002
- 2002-09-26 JP JP2002281445A patent/JP2004113136A/ja active Pending
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| JP2008500034A (ja) * | 2004-05-26 | 2008-01-10 | ステンマン，ヤコブ | 小さな生物学的サンプルにおけるｍＲＮＡ発現レベルの定量及び／又は比較評価を行うための方法 |
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