JP2004113129A

JP2004113129A - Liquid for specifying site producing lactic acid on periphery of tooth, and method for using the same

Info

Publication number: JP2004113129A
Application number: JP2002281397A
Authority: JP
Inventors: Yuko Matsumoto; 松本　優子
Original assignee: GC Corp; GC Dental Industiral Corp
Current assignee: GC Corp
Priority date: 2002-09-26
Filing date: 2002-09-26
Publication date: 2004-04-15

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a liquid specifying the site producing lactic acid on the periphery of a tooth by directly detecting the site on the periphery of the tooth without using the amount of dental plaque; and to provide a method. <P>SOLUTION: The liquid for specifying the site producing the lactic acid on the periphery of the tooth consists of (A) 2-500 U/mL lactic acid dehydrogenase, (B) 0.00001-0.1 wt.% reduced nicotinamide adenine dinucleotide, (C) 0.0001-0.1 wt.% electron transfer agent, (D) 0.0001-1 wt.% tetrazonium salt exhibiting color when being reduced, and (E) the balance of water, or consists of (F) 0.5-300 U/mL lactic acid oxidase, (G) 1-300 U/mL peroxidase, (H) 0.00001-0.1 wt.% color former and (H) the balance of the water. The method for using the liquid comprises washing the mouth by holding the liquid in the oral cavity or coating the aqueous solution on the periphery of the tooth by using a brush or a cotton bud to specify the site producing the lactic acid on the periphery of the tooth. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、特定の成分から成る水溶液を患者の歯の周面に直接適用して乳酸がある部位を目視可能にするための液及びその液を使用して歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
齲蝕は歯という人体で最も硬い組織が口腔内に常在する齲蝕原生菌によって破壊される特異な細菌感染症であり、齲蝕原生菌がスクロースなどの糖を代謝し、そのとき産生された乳酸によって歯面のｐＨが低下して脱灰することによって齲蝕が発生する。
【０００３】
齲蝕は多くの人々の罹る疾患である。歯の周面に乳酸を多く放置しておくと将来齲蝕発生の可能性が非常に高い。そのためエリスロシンなどの染色剤を含んだ試薬を歯の周面に適用して歯垢を簡単に検知する方法（例えば、特許文献１参照。）によって歯垢が存在する位置を乳酸が多く存在する位置とする簡易な方法が従来採用されてきた。しかし、歯の表面の歯垢がそのまま乳酸の多い箇所であるわけではないことから歯垢の場所だけを特定したのでは齲蝕を完全に予防することはできなかった。また、同じ歯垢でも乳酸の多い箇所と少ない箇所が存在するが、従来の歯垢染色液ではその区別をすることができないため、乳酸の少ない歯垢が乳酸の多い歯垢より多い場合などには実際には有害な歯垢部分には注意が向けられ難いという問題があった。
【０００４】
そこで歯の周面で乳酸を産生している部位を特定することが重要なのであるが、乳酸を検出する手段としては、送液される試料中の乳酸を電気的に測定する装置（例えば、特許文献２〜４参照。）、採取した血液中の乳酸を電気的に測定する装置（例えば、特許文献５参照。）、採取した尿中の乳酸を電気的に測定する方法（例えば、特許文献６参照。）、採取した試料中の乳酸を電気化学的に測定するセンサ（例えば、特許文献７参照。）等が開示されている。
【０００５】
しかしながらこれらの装置や方法はいずれも採取してきた試料中の乳酸を測定する装置や方法に関するものであり、しかも電気的に乳酸を測定するものであるために口腔内に適用することができないため、歯の周面で乳酸を産生している部位を特定することができないものであった。
【０００６】
【特許文献１】
特許第２５７９７７７号公報
【特許文献２】
特開平６−１８４７８号公報
【特許文献３】
特開平６−１３３７９５号公報
【特許文献４】
特開平６−１６９７９８号公報
【特許文献５】
特開平１１−２４２０１１号公報
【特許文献６】
特開平５−３７９８号公報
【特許文献７】
特開平７−９２１３８号公報
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明は、歯垢の多少ではなく、また歯の周面から試料を採取することなく、口腔内において歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する液及び方法を提供することを課題とする。
【０００８】
【問題を解決するための手段】
本発明者は前記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、乳酸の検査方法として一般的な酵素を用いた方法に着目し、特定の検知用液を直接歯の周面に適用すれば前記課題を解決できることを究明して本発明を完成したのである。
【０００９】
即ち本発明は、
Ａ）乳酸デヒドロゲナーゼ：２〜５００Ｕ／ｍＬ、
Ｂ）還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド：０．００００１〜０．１重量％、
Ｃ）電子移動剤：０．０００１〜０．１重量％、
Ｄ）還元されて呈色を示すテトラゾリウム塩：０．０００１〜１重量％、
Ｅ）水：残部
から成ることを特徴とする歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する液（以下、第一の液と言う）と、
Ｆ）乳酸オキシダーゼ：０．５〜３００Ｕ／ｍＬ、
Ｇ）ペルオキシダーゼ：１〜３００Ｕ／ｍＬ、
Ｈ）発色体：０．００００１〜０．１重量％、
Ｅ）水：残部
から成ることを特徴とする歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する液（以下、第二の液と言う）と、
これらの水溶液を歯の周面に適用し、第一の液の場合はテトラゾリウム塩の還元呈色により、第二の液の場合は発色体の酸化呈色により歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する方法である。
【００１０】
そしてこのような歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する液を構成する要素として、第一の液においては、Ｃ）電子移動剤が、メルドラブルー、１−メトキシフェナジンメトスルファート、フェナジンメトスルファート、フェナジンエトサルフェート、ローズインデュリン　２Ｇ、チオニン、クレシルブルーから選ばれる少なくとも１種であることが、またＤ）還元されて呈色を示すテトラゾリウム塩が、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム１ナトリウム塩、３−３’−（１，１’−ビフェニル−４，４’−ジイル）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド）、３，３’−［３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−４，４’−ジイル］−ビス［２−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリムクロライド］、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、３，３’−［３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−４，４’−ジイル］−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイドから選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。
【００１１】
また第二の液においては、Ｈ）発色体が、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ヘキサ（３−スルホプロピル）−４，４’，４’’−トリアミノトリフェニルメタン・ヘキサナトリウム塩、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウム・フルオロスルフォネート、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン・ナトリウム塩、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン・２塩酸／２水和物、３，３’−ジアミノベンジジン・４塩酸、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）トリジン・２ナトリウム塩、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）トリジン・２ナトリウム塩／４水和物、４−（５，６−ジメトキシ−２−ベンゾチアゾリル）フタリルヒドラジド、２−（５−ブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−［Ｎ−ｎ−プロピル−Ｎ−（３−スルホプロピル）アミノ］フェノール・２ナトリウム塩・２水和物、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸から選ばれる少なくとも１種であるか、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）アニリン・ナトリウム塩、Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−（３−スルホプロピル）アニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３−メチルアニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリン・ナトリウム塩・２水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メトキシアニリン・ナトリウム塩・２水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３−メトキシアニリン・ナトリウム塩・１水和物から選ばれる１種又は２種以上の混合物と４−アミノアンチピリンとの混合物であることが好ましい。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明に係る歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する第一の液は、乳酸デヒドロゲナーゼを用いたものである。即ち、乳酸に乳酸デヒドロゲナーゼを作用させ乳酸をピルビン酸に、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）をニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）とし、このニコチンアミドアデニンジヌクレオチドに電子移動体を介してテトラゾリウム塩をホルマザンへ還元させ呈色する反応を利用したものである。
【００１３】
このような第一の液で使用するＡ）成分である乳酸デヒドロゲナーゼは、乳酸が存在するとピルビン酸に還元する機能を持つ。この乳酸デヒドロゲナーゼは、ニワトリ心臓由来，ブタ心臓由来，ウサギ筋肉由来などの酵素が市販されている脱水素酵素であり、従来からの乳酸検出方法に用いられている酵素が使用可能である。
【００１４】
このＡ）成分は第一の液中に２〜５００Ｕ／ｍＬ含まれている必要があり、２Ｕ／ｍＬ未満では十分な反応を得ることができず、５００Ｕ／ｍＬを超えて配合しても一般的には歯の周面にはその量に対応する乳酸が存在しないため効果が得られない。
【００１５】
第一の液に使用するＢ）成分である還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）は、乳酸がピルビン酸に還元される反応と後述する特定のテトラゾリウム塩の還元反応の媒体となる物質である。乳酸がピルビン酸に還元される際の電子供給によりニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）へと変化し後述するＤ）成分である還元されて呈色するテトラゾリウム塩を還元して発色させるのである。前記Ａ）成分と同様にＢ）成分である還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドも従来からの乳酸検出方法に用いられている物質が使用可能である。
【００１６】
このＢ）成分は第一の液中に０．００００１〜０．１重量％含まれている必要があり、０．００００１重量％未満では十分な反応を得ることができず、０．１重量％を超えて配合しても対応する乳酸の量又は後述するＤ）成分である還元されて呈色するテトラゾリウム塩の量に対応しないため十分な効果が得られない。
【００１７】
第一の液に使用するＣ）成分である電子移動剤は、Ｂ）成分である還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドと後述するＤ）成分である還元されて呈色するテトラゾリウム塩間において電子を移動させる作用を持ち、Ｄ）成分である還元されて呈色するテトラゾリウム塩を還元してホルマザンとすることにより呈色させる作用を持つ。このＣ）成分である電子移動剤としては、同様の効果を得るものであれば特に限定されないが、反応の正確さから、メルドラブルー、１−メトキシフェナジンメトスルファート、フェナジンメトスルファート、フェナジンエトサルフェート、ローズインデュリン　２Ｇ、チオニン、クレシルブルーから選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。
【００１８】
このＣ）成分は第一の液中に０．０００１〜０．１重量％含まれている必要があり、０．０００１重量％未満では十分な反応を得ることができず、０．１重量％を超えて配合しても対応する後述するＤ）成分である還元されて呈色するテトラゾリウム塩の量に対応しないため十分な効果が得られない。
【００１９】
第一の液に使用するＤ）成分である還元されて呈色を示すテトラゾリウム塩は、テトラゾリウム塩の中で還元されて呈色を示すものであり、例えば、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム１ナトリウム塩、３−３’−（１，１’−ビフェニル−４，４’−ジイル）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド）、３，３’−［３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−４，４’−ジイル］−ビス［２−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリムクロライド］、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、３，３’−［３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−４，４’−ジイル］−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイドを挙げることができる。これらのテトラゾリウム塩は１種のみ使用しても、２種以上の混合物として使用してもよい。
【００２０】
このＤ）成分は第一の液中に０．０００１〜１重量％含まれている必要があり、０．０００１重量％未満では十分な反応を得ることができず、１重量％を超えて配合しても対応する乳酸の量又は前述したＢ）成分である還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの量に対応しないため十分な効果が得られない。
【００２１】
本発明に係る歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する第二の液は、乳酸オキシターゼとぺルオキシターゼを用いる液である。これは乳酸に乳酸オキシダーゼを作用させるとピルビン酸と過酸化水素を生成させ、ペルオキシダーゼ存在下で過酸化水素が発色体を酸化させ呈色させることにより乳酸を検出するものである。
【００２２】
第二の液に使用するＦ）乳酸オキシターゼは、乳酸からピルビン酸と過酸化水素を生成させる働きを持つ酵素である。この乳酸オキシターゼは、第二の液中に０．５〜３００Ｕ／ｍＬ配合されている必要があり、０．５Ｕ／ｍＬ未満であると効果がなく、３００Ｕ／ｍＬを超えて配合しても一般的には歯の周面にはその量に対応する乳酸が存在しないため効果が得られない。
【００２３】
第二の液に使用するＧ）ペルオキシターゼは、後述するＨ）成分である発色体を酸化させて発色させる作用を持つ酵素である。この酵素は過酸化水素に作用して発色体を酸化して呈色させる働きを持つ酵素である。このＧ）成分は、第二の液中に１〜３００Ｕ／ｍＬ配合されている必要があり、１Ｕ／ｍＬ未満であると効果がなく、３００Ｕ／ｍＬを超えて配合しても過酸化水素の量が対応しないため十分な効果を得ることができない。
【００２４】
第二の液に使用するＨ）発色体は、乳酸にＦ）成分である乳酸オキシダーゼを作用させることにより生成される過酸化水素によりＧ）成分であるペルオキシターゼの存在下で酸化され発色する物質である。具体的には、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ヘキサ（３−スルホプロピル）−４，４’，４’’−トリアミノトリフェニルメタン・ヘキサナトリウム塩、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウム・フルオロスルフォネート、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン・ナトリウム塩、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン・２塩酸／２水和物、３，３’−ジアミノベンジジン・４塩酸、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）トリジン・２ナトリウム塩、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）トリジン・２ナトリウム塩／４水和物、４−（５，６−ジメトキシ−２−ベンゾチアゾリル）フタリルヒドラジド、２−（５−ブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−［Ｎ−ｎ−プロピル−Ｎ−（３−スルホプロピル）アミノ］フェノール・２ナトリウム塩・２水和物、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸から選ばれる１種又は２種以上の混合物を挙げることができる。
【００２５】
またこのＨ）成分である発色体は、前述の発色体に代えて、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）アニリン・ナトリウム塩、Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−（３−スルホプロピル）アニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３−メチルアニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリン・ナトリウム塩・２水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン・ナトリウム塩・１水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メトキシアニリン・ナトリウム塩・２水和物、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３−メトキシアニリン・ナトリウム塩・１水和物から選ばれる１種又は２種以上の混合物と４−アミノアンチピリンとの混合物であってもよい。
【００２６】
このようなＨ）成分である発色体は、第二の液中に０．００００１〜０．１重量％含まれている必要があり、０．００００１重量％未満では十分な反応を得ることができず、０．１重量％を超えて配合しても対応する過酸化水素の量が対応しないため十分な効果が得られない。
【００２７】
本発明に係る歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する液は、酵素反応の最適値がｐＨ７付近であるために必要に応じて緩衝作用を与えることが好ましい。緩衝作用を得る方法としては、一般的なリン酸緩衝液やトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液などを利用することができる。
【００２８】
本発明に係る歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する方法は、前述の第一の液又は第二の液を歯の周面に適用し、テトラゾリウム塩の還元呈色又は発色体の酸化呈色により歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する方法である。
【００２９】
本発明の歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する液を用いる方法は、歯の周面への適用として水溶液を口腔に含ませて洗口で適用しても、水溶液を筆や綿棒などを用いて歯の周面に塗布してもよい。
【００３０】
【実施例】
以下に実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００３１】
表１に示す組成の第一の液と、表２に示す組成の第二の液及び従来の歯垢染色液（比較例１）を調製した。
【００３２】
【表１】

【００３３】
【表２】

【００３４】
実施例１、２，３，６，７においては、第一の液又は第二の液を筆を用いて歯の周面に塗布した結果、隣接面や歯頸部が赤く発色した。また実施例４，５，８においては、第一の液又は第二の液を口腔内に含ませて洗口した処、同様に隣接面や歯頸部が赤く発色した。比較例１では歯垢及び歯肉などが赤く染まった。
【００３５】
各実施例で発色した箇所及び発色の少ない箇所の歯垢内のミュータンス連鎖球菌の数を測定した処、赤く染まった歯垢約１ｍｇ中のミュータンス連鎖球菌の数は平均２．１×１０^５ＣＦＵで、殆ど染まらなかった歯垢約１ｍｇ中のミュータンス連鎖球菌の数は平均７．３×１０^３ＣＦＵであった。
【００３６】
【発明の効果】
以上に詳述した如く、比較例である従来の歯垢染色液では歯の周面全体が染まってしまうため歯の周面で乳酸を産生している部位を特定することができず、その結果実際にミュータンス連鎖球菌が多く存在している箇所を特定することができないのに対し、本発明に係る歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する液及びその液を使用して歯の周面で乳酸を産生している部位を特定する方法は、歯垢の多少ではなく歯の周面に存在する乳酸を直接検知して歯の周面で乳酸を産生している部位を特定することが可能であり、従って歯科医療に貢献するところの非常に大なるものである。[0001]
[Industrial applications]
The present invention provides a solution for directly applying an aqueous solution comprising a specific component to the peripheral surface of a patient's tooth to make the site where lactic acid is present visible, and producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth using the liquid. The method relates to a method of specifying a part that is located.
[0002]
[Prior art]
Caries is a specific bacterial infection in which the hardest tissue in the human body, the tooth, is destroyed by proto-caries probiotic resident in the oral cavity, and proto-caries proteome metabolizes sugars such as sucrose, and the lactic acid produced at that time The pH of the tooth surface decreases and demineralization causes dental caries.
[0003]
Caries is a disease that affects many people. If a large amount of lactic acid is left on the tooth periphery, the possibility of dental caries is very high in the future. Therefore, a plaque-existing position is determined by applying a reagent containing a staining agent such as erythrosine to the peripheral surface of the tooth to easily detect plaque (for example, see Patent Document 1). Has been conventionally adopted. However, since the plaque on the tooth surface is not a lactic acid-rich portion as it is, identification of only the plaque location did not completely prevent dental caries. In the same plaque, there are places with a lot of lactic acid and places with a little lactic acid.However, since conventional plaque staining solution cannot distinguish between them, in cases where plaque with less lactic acid is more than plaque with more lactic acid In fact, there was a problem that it was difficult to pay attention to the harmful plaque part.
[0004]
Therefore, it is important to identify the site that produces lactic acid on the peripheral surface of the tooth. As a means for detecting lactic acid, a device that electrically measures lactic acid in a sample to be sent (for example, see Patent References 2 to 4), a device for electrically measuring lactic acid in collected blood (for example, see Patent Document 5), and a method for electrically measuring lactic acid in collected urine (for example, Patent Document 6) And a sensor for electrochemically measuring lactic acid in a collected sample (for example, see Patent Document 7).
[0005]
However, all of these devices and methods relate to devices and methods for measuring lactic acid in a sample collected, and cannot be applied to the oral cavity because they are for electrically measuring lactic acid. It was not possible to identify the site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth.
[0006]
[Patent Document 1]
Japanese Patent No. 2579777 [Patent Document 2]
JP-A-6-18478 [Patent Document 3]
Japanese Patent Application Laid-Open No. 6-133975 [Patent Document 4]
JP-A-6-169798 [Patent Document 5]
JP-A-11-24201 [Patent Document 6]
JP-A-5-3798 [Patent Document 7]
JP-A-7-92138
[Problems to be solved by the invention]
Accordingly, the present invention provides a liquid and a method for specifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of a tooth in the oral cavity without collecting a sample from the peripheral surface of the tooth, without any amount of plaque. As an issue.
[0008]
[Means to solve the problem]
The present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, focused on a method using a general enzyme as a method for testing lactic acid, and applying a specific detection liquid directly to the peripheral surface of the tooth, The inventors of the present invention have sought to solve the problem and completed the present invention.
[0009]
That is, the present invention
A) Lactate dehydrogenase: 2-500 U / mL,
B) reduced nicotinamide adenine dinucleotide: 0.00001 to 0.1% by weight;
C) Electron transfer agent: 0.0001 to 0.1% by weight,
D) Tetrazolium salt which shows a color when reduced: 0.0001 to 1% by weight,
E) water: a liquid (hereinafter, referred to as a first liquid) for identifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth, which is characterized by being composed of a residue.
F) Lactate oxidase: 0.5-300 U / mL,
G) Peroxidase: 1 to 300 U / mL,
H) Color former: 0.00001 to 0.1% by weight,
E) water: a liquid (hereinafter, referred to as a second liquid) for identifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth, which is characterized by being composed of the remainder;
These aqueous solutions are applied to the peripheral surface of the tooth, and lactic acid is produced on the peripheral surface of the tooth by the reduction coloring of the tetrazolium salt in the case of the first liquid and by the oxidative coloring of the chromogen in the case of the second liquid. This is a method of identifying the part that is in the process.
[0010]
And as an element constituting the liquid for specifying the site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth, in the first liquid, C) the electron transfer agent is Meldora Blue, 1-methoxyphenazine metsulfate. At least one selected from fate, phenazine methosulfate, phenazine ethosulfate, rose indulin 2G, thionin, and cresyl blue; and D) a tetrazolium salt that exhibits a color when reduced is 2- (4- Iodophenyl) -3- (2,4-dinitrophenyl) -5- (2,4-disulfophenyl) -2H-tetrazolium monosodium salt, 3-3 ′-(1,1′-biphenyl-4,4 '-Diyl) -bis (2,5-diphenyl-2H-tetrazolium chloride), 3,3'-[3,3'-dimethoxy- (1,1'-biphenyl) -4,4'-diyl] -bis [2- (4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H-tetrazorim chloride], 2- (4-iodophenyl) -3- (4-nitrophenyl)- 5-phenyl-2H-tetrazolium chloride, 3,3 '-[3,3'-dimethoxy- (1,1'-biphenyl) -4,4'-diyl] -bis (2,5-diphenyl-2H-tetrazolium It is preferably at least one selected from chloride and 3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide.
[0011]
In the second liquid, H) the color former is N, N, N ′, N ′, N ″, N ″ -hexa (3-sulfopropyl) -4,4 ′, 4 ″ -triol. Aminotriphenylmethane hexasodium salt, 10-methyl-9- (phenoxycarbonyl) acridinium fluorosulfonate, 3,3 ′, 5,5′-tetramethylbenzidine, N- (3-sulfopropyl) -3 , 3 ', 5,5'-Tetramethylbenzidine sodium salt, 3,3', 5,5'-Tetramethylbenzidine dihydrochloride / dihydrate, 3,3'-diaminobenzidine / 4 hydrochloric acid, N N, N'-bis (2-hydroxy-3-sulfopropyl) trizine disodium salt, N, N'-bis (2-hydroxy-3-sulfopropyl) trizine disodium salt / 4-hydrate, 4- (5,6-dimethoxy-2-benzothia Lyl) phthalylhydrazide, 2- (5-bromo-2-pyridylazo) -5- [Nn-propyl-N- (3-sulfopropyl) amino] phenol disodium salt dihydrate, 3- At least one selected from (4-hydroxyphenyl) propionic acid, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) aniline sodium salt, N- (3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline Sodium salt monohydrate, N- (3-sulfopropyl) aniline sodium salt monohydrate, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline sodium salt1 water Japanese N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) 3-methylaniline sodium salt dihydrate, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt, N-ethyl-N- (3-sulfo Propyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt monohydrate, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethylaniline sodium salt monohydrate, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3-methoxyaniline sodium salt dihydrate, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methoxyaniline sodium salt -It is preferable that it is a mixture of one or a mixture of two or more selected from monohydrates and 4-aminoantipyrine.
[0012]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The first liquid for specifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth according to the present invention uses lactate dehydrogenase. That is, lactate dehydrogenase is caused to act on lactic acid, lactic acid is converted to pyruvate, reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NAD ⁺ ) is converted to nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), and the nicotinamide adenine dinucleotide is transferred to the nicotinamide adenine dinucleotide via an electron transfer member. It utilizes a reaction of reducing the color of a tetrazolium salt to formazan to form a color.
[0013]
Lactate dehydrogenase which is the component A) used in such a first liquid has a function of reducing to pyruvate when lactic acid is present. This lactate dehydrogenase is a dehydrogenase whose enzyme derived from chicken heart, pig heart, rabbit muscle and the like is commercially available, and an enzyme used in a conventional method for detecting lactic acid can be used.
[0014]
The component (A) needs to be contained in the first liquid at 2 to 500 U / mL, and if it is less than 2 U / mL, a sufficient reaction cannot be obtained. In general, no effect is obtained because there is no lactic acid corresponding to the amount on the peripheral surface of the tooth.
[0015]
The reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NAD ⁺ ), which is the component B) used in the first liquid, is a substance that serves as a medium for the reaction of reducing lactic acid to pyruvate and the reduction reaction of a specific tetrazolium salt described below. is there. Lactic acid is converted into nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) by electron supply when reduced to pyruvic acid, and a reduced color developing tetrazolium salt, which is a component D) described below, is reduced to develop color. Similar to the component A), the reduced nicotinamide adenine dinucleotide as the component B) can be a substance used in a conventional method for detecting lactic acid.
[0016]
The component B) must be contained in the first liquid in an amount of 0.00001 to 0.1% by weight. If the amount is less than 0.00001% by weight, a sufficient reaction cannot be obtained. If the amount exceeds the above range, no sufficient effect can be obtained because the amount does not correspond to the amount of the corresponding lactic acid or the amount of the reduced tetrazolium salt which is the component D) described later.
[0017]
The electron transfer agent as component C) used in the first liquid transfers electrons between the reduced nicotinamide adenine dinucleotide as component B) and the reduced and colored tetrazolium salt as component D) described later. It has the effect of reducing the color of the tetrazolium salt, which is the component D), which is reduced to form formazan. The electron transfer agent as the component (C) is not particularly limited as long as the same effect can be obtained. However, from the accuracy of the reaction, Meldora Blue, 1-methoxyphenazine methosulfate, phenazine methosulfate, phenazine It is preferably at least one selected from ethosulfate, rose indulin 2G, thionine, and cresyl blue.
[0018]
The component C) must be contained in the first liquid in an amount of 0.0001 to 0.1% by weight. If the amount is less than 0.0001% by weight, a sufficient reaction cannot be obtained. When the amount exceeds the above range, a sufficient effect cannot be obtained because the amount does not correspond to the amount of the reduced tetrazolium salt, which is the corresponding component D) described later.
[0019]
The tetrazolium salt which is reduced and exhibits a color, which is the component D) used in the first liquid, is reduced in the tetrazolium salt and exhibits a color. For example, 2- (4-iodophenyl)- 3- (2,4-dinitrophenyl) -5- (2,4-disulfophenyl) -2H-tetrazolium monosodium salt, 3-3 ′-(1,1′-biphenyl-4,4′-diyl) -Bis (2,5-diphenyl-2H-tetrazolium chloride), 3,3 '-[3,3'-dimethoxy- (1,1'-biphenyl) -4,4'-diyl] -bis [2- ( 4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H-tetrazorim chloride], 2- (4-iodophenyl) -3- (4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H-tetrazolium chloride, 3,3'- [3,3′-dimethoxy- 1,1′-biphenyl) -4,4′-diyl] -bis (2,5-diphenyl-2H-tetrazolium chloride, 3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H These tetrazolium salts may be used alone or as a mixture of two or more.
[0020]
The component D) must be contained in the first liquid in an amount of 0.0001 to 1% by weight. If the amount is less than 0.0001% by weight, a sufficient reaction cannot be obtained. However, since it does not correspond to the amount of the corresponding lactic acid or the amount of the reduced nicotinamide adenine dinucleotide as the component B), a sufficient effect cannot be obtained.
[0021]
The second liquid for specifying the site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth according to the present invention is a liquid using lactate oxidase and peroxidase. In this method, when lactate oxidase is allowed to act on lactic acid, pyruvate and hydrogen peroxide are generated, and in the presence of peroxidase, hydrogen peroxide oxidizes a color-developed body to form a color, thereby detecting lactic acid.
[0022]
F) lactate oxidase used in the second liquid is an enzyme having a function of producing pyruvic acid and hydrogen peroxide from lactic acid. This lactate oxidase must be blended in the second liquid at 0.5 to 300 U / mL, and if it is less than 0.5 U / mL, it has no effect. In general, no effect is obtained because there is no lactic acid corresponding to the amount on the peripheral surface of the tooth.
[0023]
G) peroxidase used in the second liquid is an enzyme having an action of oxidizing a color former, which is a component H) described later, to develop a color. This enzyme is an enzyme that acts on hydrogen peroxide to oxidize a chromogenic body to develop color. The component G) must be contained in the second liquid in an amount of 1 to 300 U / mL. If the amount is less than 1 U / mL, there is no effect. Since the amounts do not correspond, a sufficient effect cannot be obtained.
[0024]
The H) color former used in the second liquid is a substance that is oxidized in the presence of peroxidase as a component G) by hydrogen peroxide generated by allowing lactate oxidase as a component F) to act on lactic acid and develops a color. is there. Specifically, N, N, N ′, N ′, N ″, N ″ -hexa (3-sulfopropyl) -4,4 ′, 4 ″ -triaminotriphenylmethane hexasodium salt, 10-methyl-9- (phenoxycarbonyl) acridinium fluorosulfonate, 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine, N- (3-sulfopropyl) -3,3', 5,5'- Tetramethylbenzidine sodium salt, 3,3 ′, 5,5′-tetramethylbenzidine dihydrochloride / dihydrate, 3,3′-diaminobenzidine / 4 hydrochloric acid, N, N′-bis (2-hydroxy -3-sulfopropyl) trizine disodium salt, N, N'-bis (2-hydroxy-3-sulfopropyl) trizine disodium salt / 4 hydrate, 4- (5,6-dimethoxy-2- Benzothiazolyl) phthalyl hydrazide 2- (5-bromo-2-pyridylazo) -5- [NN-propyl-N- (3-sulfopropyl) amino] phenol disodium salt dihydrate, 3- (4-hydroxyphenyl) One or a mixture of two or more selected from propionic acid can be mentioned.
[0025]
The color former as the component H) is, instead of the aforementioned color former, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) aniline sodium salt, N- (3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxy Aniline sodium salt monohydrate, N- (3-sulfopropyl) aniline sodium salt monohydrate, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline sodium salt.1 Hydrate, N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3-methylaniline sodium Salt dihydrate, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3 5-dimethoxyaniline sodium salt monohydrate, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethylaniline sodium salt monohydrate, N-ethyl-N -(2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3-methoxyaniline sodium salt dihydrate, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methoxyaniline sodium salt monohydrate And a mixture of one or two or more selected from the group consisting of 4-aminoantipyrine.
[0026]
The color former as the component (H) needs to be contained in the second liquid in an amount of 0.00001 to 0.1% by weight. If the amount is less than 0.00001% by weight, a sufficient reaction can be obtained. However, even if the content exceeds 0.1% by weight, a sufficient effect cannot be obtained because the corresponding amount of hydrogen peroxide does not correspond.
[0027]
It is preferable that the liquid for specifying the site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth according to the present invention has a buffering action as necessary because the optimum value of the enzyme reaction is around pH 7. As a method for obtaining a buffering action, a general phosphate buffer or a tris (hydroxymethyl) aminomethane buffer can be used.
[0028]
The method for identifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of a tooth according to the present invention comprises applying the first liquid or the second liquid to the peripheral surface of the tooth, and reducing or coloring the tetrazolium salt. It is a method of identifying the site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth by oxidative coloring of the body.
[0029]
The method of the present invention using a liquid for identifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of a tooth can be applied to a tooth surface by applying an aqueous solution to a mouth and applying the aqueous solution to a mouthwash. It may be applied to the peripheral surfaces of the teeth using a cotton swab or the like.
[0030]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
[0031]
A first liquid having a composition shown in Table 1, a second liquid having a composition shown in Table 2, and a conventional plaque staining liquid (Comparative Example 1) were prepared.
[0032]
[Table 1]

[0033]
[Table 2]

[0034]
In Examples 1, 2, 3, 6, and 7, the first liquid or the second liquid was applied to the peripheral surface of the tooth using a brush, and as a result, the adjacent surface and the cervical region were colored red. Further, in Examples 4, 5, and 8, when the first liquid or the second liquid was contained in the oral cavity and the mouth was washed, the adjacent surface and the cervical region were similarly colored red. In Comparative Example 1, plaque and gums were stained red.
[0035]
When the number of mutans streptococci in the plaque at the site where color was developed and at the site where color development was low in each Example was measured, the number of mutans streptococci in about 1 mg of red plaque stained was 2.1 × 10 on average. ^{At 5} CFU, the number of Streptococcus mutans in about 1 mg of plaque, which was almost unstained, averaged 7.3 × 10 ³ CFU.
[0036]
【The invention's effect】
As described in detail above, the conventional plaque staining solution as a comparative example stains the entire peripheral surface of the tooth, so that it is not possible to specify a site that produces lactic acid on the peripheral surface of the tooth, and as a result, While it is not possible to specify the location where a lot of mutans streptococci are actually present, using the liquid for specifying the site producing lactic acid on the peripheral surface of the tooth according to the present invention and using the liquid. The method of identifying the site that produces lactic acid on the peripheral surface of the tooth is to detect the site that produces lactic acid on the peripheral surface of the tooth by directly detecting the lactic acid present on the peripheral surface of the tooth instead of the amount of plaque. It is very large that can be identified and thus contributes to dental care.

Claims

A) Lactate dehydrogenase: 2-500 U / mL,
B) reduced nicotinamide adenine dinucleotide: 0.00001 to 0.1% by weight;
C) Electron transfer agent: 0.0001 to 0.1% by weight,
D) Tetrazolium salt which shows a color when reduced: 0.0001 to 1% by weight,
E) Water: a liquid for identifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of a tooth, which is characterized by being composed of the remainder.

C) The electron transfer agent according to claim 1, wherein the electron transfer agent is at least one selected from meldra blue, 1-methoxyphenazine methosulfate, phenazine methosulfate, phenazine ethosulfate, rose indulin 2G, thionin, and cresyl blue. A liquid that identifies the site that produces lactic acid on the circumference of the teeth.

D) The tetrazolium salt which is colored when reduced is 2- (4-iodophenyl) -3- (2,4-dinitrophenyl) -5- (2,4-disulfophenyl) -2H-tetrazolium monosodium Salt, 3-3 ′-(1,1′-biphenyl-4,4′-diyl) -bis (2,5-diphenyl-2H-tetrazolium chloride), 3,3 ′-[3,3′-dimethoxy- (1,1′-biphenyl) -4,4′-diyl] -bis [2- (4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H-tetrazorim chloride], 2- (4-iodophenyl) -3 -(4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H-tetrazolium chloride, 3,3 '-[3,3'-dimethoxy- (1,1'-biphenyl) -4,4'-diyl] -bis (2 , 5-Diphenyl-2H- The tooth surface according to claim 1 or 2, wherein at least one selected from trazolium chloride and 3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide. A liquid that identifies the site that produces lactic acid.

F) Lactate oxidase: 0.5-300 U / mL,
G) Peroxidase: 1 to 300 U / mL,
H) Color former: 0.00001 to 0.1% by weight,
E) Water: a liquid for identifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of a tooth, which is characterized by being composed of the remainder.

H) The color forming body is N, N, N ′, N ′, N ″, N ″ -hexa (3-sulfopropyl) -4,4 ′, 4 ″ -triaminotriphenylmethane hexasodium salt 10,10-methyl-9- (phenoxycarbonyl) acridinium fluorosulfonate, 3,3 ′, 5,5′-tetramethylbenzidine, N- (3-sulfopropyl) -3,3 ′, 5,5 ′ -Tetramethylbenzidine sodium salt, 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine dihydrochloride / 2-hydrate, 3,3'-diaminobenzidine / 4 hydrochloric acid, N, N'-bis (2- Hydroxy-3-sulfopropyl) trizine disodium salt, N, N'-bis (2-hydroxy-3-sulfopropyl) trizine disodium salt / 4-hydrate, 4- (5,6-dimethoxy-2 -Benzothia Lyl) phthalylhydrazide, 2- (5-bromo-2-pyridylazo) -5- [Nn-propyl-N- (3-sulfopropyl) amino] phenol disodium salt dihydrate, 3- The liquid for identifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of a tooth according to claim 4, which is at least one selected from (4-hydroxyphenyl) propionic acid.

H) The color former is N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) aniline sodium salt, N- (3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt monohydrate, N- ( 3-sulfopropyl) aniline sodium salt monohydrate, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline sodium salt monohydrate, N- (2-hydroxy-3- Sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3-methylaniline sodium salt dihydrate, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt Hydrate, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethylaniline sodium salt monohydrate, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) Propyl) -3-methoxyaniline sodium salt dihydrate, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methoxyaniline sodium salt monohydrate or one or more selected from them The liquid for specifying a site producing lactic acid on the peripheral surface of a tooth according to claim 4, which is a mixture of a mixture of (1) and 4-aminoantipyrine.

A) lactate dehydrogenase: 2-500 U / mL, B) reduced nicotinamide adenine dinucleotide: 0.00001-0.1% by weight, C) electron transfer agent: 0.0001-0.1 %) D) Tetrazolium salt which shows a color when reduced: 0.0001 to 1% by weight E) Water: An aqueous solution consisting of the remainder is applied, and lactic acid is produced on the peripheral surface of the tooth by reduction coloring of the tetrazolium salt How to identify the part that is doing.

F) lactate oxidase: 0.5-300 U / mL, G) peroxidase: 1-300 U / mL, H) color former: 0.00001-0.1% by weight, E) water: from the rest A method of applying an aqueous solution comprising the oxidized color of a chromogenic body to identify a site producing lactic acid on the peripheral surface of a tooth.