JP3894236B2 - Copper ion measuring method and reagent composition thereof - Google Patents
Copper ion measuring method and reagent composition thereof Download PDFInfo
- Publication number
- JP3894236B2 JP3894236B2 JP00480096A JP480096A JP3894236B2 JP 3894236 B2 JP3894236 B2 JP 3894236B2 JP 00480096 A JP00480096 A JP 00480096A JP 480096 A JP480096 A JP 480096A JP 3894236 B2 JP3894236 B2 JP 3894236B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- measuring
- copper ions
- oxidase
- phenylethylamine
- histamine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、液体中の銅イオンの測定方法およびそのための試薬組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
銅イオンは、ヒト生体中において金属酵素の重要な構成成分として存在しており、銅イオンの増減は、これら金属酵素の活性の増減に密接に関わっている。したがって、ヒト体液中の銅イオンの測定は、金属酵素の増減に関わる疾病の診断において臨床意義が高い。血清中の銅イオンの測定方法としては、Landers-Zak 法（光電比色法）あるいは原子吸光分析法があるが、前者は試料の前処理が煩雑なこと、あるいは発色させるバソクプロインが銅以外の金属イオンにも作用することなど、操作性、特異性に問題がある。後者は銅イオンの特異性は高いものの特別な機器を必要とし、また大量な試料を処理するには不適であることに問題がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
このように液体中の銅イオンの測定方法において、特別の装置を必要とせず、短時間で正確に銅イオンを測定することが、従来の測定方法では困難であった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記問題点を解消するために、汎用の吸光度分析機器にて短時間で正確に体液中の銅イオンを測定する方法を検討した結果、銅イオンを補欠因子とするフェニルエチルアミンオキシダーゼまたはヒスタミンオキシダーゼを使用することによって、体液中の銅イオンを測定できることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は液体中の銅イオンに、銅を補欠因子および／または活性化因子とする酵素および該酵素の基質（銅イオンを除く）を作用させ、液体中の銅イオンによる該酵素活性の変化を測定することにより、液体中の銅イオン濃度を測定することを特徴とする銅イオン測定方法である。
【０００６】
また、本発明は銅イオンを補欠因子および／または活性化因子とする酵素、該酵素の基質（銅イオンを除く）、該酵素の反応生成物を測定する試薬を含有することを特徴とする銅イオン測定用試薬組成物である。
【０００７】
【発明の実施態様】
本発明において液体とは体液、例えば血液、尿、髄液、血漿などに限られず、他の液体、例えば天然水、海水、廃液、研究用試料など、各種金属の銅塩など含む液体を包含する。
本発明において使用する銅を補欠因子および／または活性化因子とする酵素としては、フェニルエチルオキシダーゼまたはヒスタミンオキシダーゼなどが例示され、これらの酵素はコファクターとして、３−（２，４，５−トリヒドロキシフェニル）−Ｌ−アラニン（ｔｏｐａ）を有する酵素群である。好ましくはフェニルエチルアミンオキシダーゼまたはヒスタミンオキシダーゼである。
本発明において補欠因子とは、酵素の発現に必要不可欠な物質のことである。
本発明において活性化因子とは、酵素の活性を増大する効果を有する物質のことである。
【０００８】
本発明に用いるフェニルエチルアミンオキシダーゼは、その起源は特に限定されるものではないが、好適には、アースロバクター・グロビフォルミス（Arthrobacter globiformis）由来のものが用いられる。
また、本発明に用いるヒスタミンオキシダーゼは、その起源は特に限定されるものではないが、好適には、アースロバクター・グロビフォルミス（Arthrobacter globiformis）由来のものが用いられる。
本発明において、銅を補欠因子および／または活性化因子とする酵素の基質とは銅イオンを含まない。
フェニルエチルアミンオキシダーゼの基質としては、フェニルエチルアミンおよびその塩、例えば塩酸塩、チラミン、トリプタミン、プトレッシンまたはベンジルアミンなどが例示される。
ヒスタミンオキシダーゼの基質としては、ヒスタミンなどが例示される。
【０００９】
本発明において使用する上記酵素の反応により生じる過酸化水素またはアンモニアを測定試薬としては、従来公知のものが使用できる。
過酸化水素測定試薬としては、４−アミノアンチピリンなどのカップラーとフェノールまたはアニリンおよびそれらの誘導体などの色原体およびペルオキシダーゼを含有する試薬、メタノールとカタラーゼおよび生成するホルムアルデヒドを測定する試薬などが例示される。
該試薬に使用するカップラーとしては４−アミノアンチピリン、３−メチル−２−ベンゾチアゾリンヒドラシゾン等が使用される。また色原体としてはフェノール、２−クロロフェノール、４−クロロフェノール、２，４−ジクロロフェノールなどのフェノール類、アニリン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルイジン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−アニシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’−アセチルエチレンジアミン、Ｎ−エチル−Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−アニシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’−サクシニルエチレンジアミン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）などのアニリン類が用いられる。
【００１０】
本発明の銅イオン測定用試薬組成物は、銅イオンを補欠因子および／または活性化因子とする酵素、該酵素の基質（銅イオンを除く）および必要により該酵素の反応生成物を測定する試薬を含有する。
試薬組成物中の銅イオンを補欠因子および／または活性化因子とする酵素、例えばフェニルエチルアミンオキシダーゼまたはヒスタミンオキシダーゼなどの添加量は、特に限定されるものではないが、好適には５〜１００ｕ／ｌである。該酵素の基質濃度は銅イオンの測定に支障をきたさない限り、限定されるものではない。
【００１１】
本発明の試薬組成物のｐＨは、酵素反応を阻害しない範囲であれば、特に限定されるものではないが、好適には緩衝液によりｐＨ５〜１０に保たれているのが好ましい。また緩衝液の種類は、銅イオンを含有しないものであれば、いかなるものでもよい。たとえば、GOOD'S緩衝液、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液などが挙げられる。
【００１２】
本発明の試薬組成物には必要により、界面活性剤、防腐剤、安定化剤などを使用してもよい。界面活性剤としては、非イオン界面活性剤（例えばポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル）、陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤など、特に限定されるものではなく、約0.01〜0.5%で用いることができる。防腐剤としてはアジ化ナトリウム、抗生物質が用いられる。安定化剤としては、安定化効果を示すものであれば、特に限定されないが、グルコース、マンニトール、トレハロース、グリセロール等の糖類またはアミノ酸類、アルブミンなどが用いられる。
【００１３】
本発明の一実施態様はフェニルエチルアミンオキシダーゼ、フェニルエチルアミン塩酸塩、ペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリンおよび発色剤を含有する銅イオン測定用試薬組成物である。
また、別な実施態様はヒスタミンオキシダーゼ、ヒスタミン、ペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリンおよび発色剤を含有する銅イオン測定用試薬組成物である。
さらに別な実施態様は、フェニルアミンオキシダーゼまたはヒスタミンオキシダーゼおよびこれらの基質、例えばフェニルエチルアミンおよびその塩、チラミン、トリプタミン、プトレッシンまたはベンジルアミンなど、またはヒスタミンなど、α−ケトグルタル酸、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈおよびグルタミン酸脱水素酵素を含有する銅イオン測定用試薬組成物である。
【００１４】
本発明の銅イオン測定方法では、液体中の銅イオンに、銅を補欠因子および／または活性化因子とする酵素および該酵素の基質（銅イオンを除く）を作用させ、液体中の銅イオンによる該酵素活性の変化を測定することにより、液体中の銅イオン濃度を測定する。
本発明の上記酵素活性を測定する方法としては、該酵素の作用により生成する過酸化水素あるいは消費される酸素または生成するアンモニアをそれぞれ公知の方法で測定する。
生成する過酸化水素を測定する場合は、一般的に４−アミノアンチピリンなどのカップラーとフェノールまたはアニリンおよびそれらの誘導体などの色原体をペルオキシダーゼ存在下反応させ、生成する色素の増加を吸光度を測定する方法あるいはメタノールとカタラーゼを作用させ生成するホルムアルデヒドを化学的または酵素を用いて比色定量する方法などが用いられる。
消費する酸素を測定する場合は、酸素電極を利用する。
【００１５】
また、アンモニアを測定する場合は、α−ケトグルタル酸、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈおよびグルタミン酸脱水素酵素を使用し消費されるＮＡＤ（Ｐ）Ｈ量を測定する方法が用いられる。
【００１６】
本発明の測定方法の一例は、試料中の銅イオンに銅イオンによって活性が変化する酵素を用いて、該酵素の反応がもたらす吸光度変化量を求め、予め標準液を用いた検量線から、目的とする成分の量を測定する方法である。
【００１７】
【実施例】
以下、本発明を実施例により説明するが、これらによって、本発明は限定されるものではない。なお、実施例中の略号は以下のものを示す。
ＨＥＰＥＳ：Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸
【００１８】
実施例１ 銅イオン濃度の測定
下記試薬１および２を調製した。
上記サンプル６μＬに試薬１を２４０μＬ添加し、３７℃で５分間加温後、試薬２を１２０μＬ添加し、第２試薬添加１分後と５分後に精製水を対照に５４６ｎｍの吸光度を測定し、１分間あたりの吸光度変化量を求めた。得られた吸光度変化量をもとに、予め標準液を用いて作成した検量線から銅イオン濃度を求めた。吸光度変化量より銅イオン濃度を求める計算式は、以下の通りである。
【００２０】
△ＡＢＳ／ｍｉｎ＝（Ａ５−Ａ１）／４
Ａ５：第２試薬添加５分後の吸光度
Ａ１：第２試薬添加１分後の吸光度
銅イオン濃度＝（Ｓ−ＢＬ）／（ＳＴＤ−ＢＬ）×１００
Ｓ：試料の△ＡＢＳ／ｍｉｎ
ＢＬ：精製水の△ＡＢＳ／ｍｉｎ
ＳＴＤ：標準液の△ＡＢＳ／ｍｉｎ
１００：標準液の銅イオン濃度（μＭ）
その結果を表１に示す。表中の数字の単位はμＭである。
【００２１】
【表１】
表１から試料中の銅イオン濃度に比例して測定値の増加が認められた。
【００２３】
実施例２ 血清中の銅イオン濃度の測定
サンプルの前処理操作
血清試料０．４ｍＬに２．５Ｍ塩酸グアニジン水溶液を０．２ｍｌ添加後、３７℃で５分間インキュベートした。インキュベート後、０．９Ｍ ＴＣＡ（トリクロロ酢酸？）溶液を０．２ｍｌ添加し、攪拌後、遠心分離を行った。
上清を測定用試料とし、実施例１と同様に測定を行った（ｎ＝５）。
その結果を表２に示す。表中の数値の単位はμＭである。
【００２４】
【表２】
【００２５】
実施例３ 他イオンの影響の検討
下記金属塩の水溶液および精製水を試料として使用した（各水溶液濃度は５０μＭ）。
ＣｕＳＯ4 、ＭｇＣｌ2 、ＡｌＣｌ3 、ＭｎＣｌ2 、ＣｏＣｌ2 、ＺｎＣｌ2 、ＢａＣｌ2 、精製水
試料中の銅イオンの測定は、実施例１と同様にして行った。その結果を表３に示す。
【００２６】
【表３】
表３から明らかなように、本発明の酵素では他のイオンの影響はほとんどなく、銅イオンに対して特異性が高いことが確認された。
【００２８】
【発明の効果】
本発明によれば、銅イオンを補欠因子または活性化因子とする酵素を用いることによって、特別な装置を必要とせず、正確性に優れた銅イオンの測定が可能となる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for measuring copper ions in a liquid and a reagent composition therefor.
[0002]
[Prior art]
Copper ions are present as an important component of metalloenzymes in the human body, and the increase / decrease in copper ions is closely related to the increase / decrease in the activity of these metalenzymes. Therefore, the measurement of copper ions in human body fluid is highly clinically significant in the diagnosis of diseases related to the increase or decrease of metalloenzymes. The method for measuring copper ions in serum includes the Landers-Zak method (photometric colorimetric method) or atomic absorption spectrometry, but the former involves complicated sample pretreatment, or the color of the bathocuproine used to develop a metal other than copper. There are problems in operability and specificity, such as acting on ions. Although the latter has high specificity of copper ions, it requires special equipment and is unsuitable for processing a large amount of samples.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
As described above, in the method for measuring copper ions in a liquid, it is difficult to measure copper ions accurately in a short time without requiring a special device.
[0004]
[Means for Solving the Problems]
In order to solve the above problems, the present inventors have studied a method for accurately measuring copper ions in body fluids in a short time with a general-purpose absorbance analyzer, and as a result, phenylethylamine having copper ions as a prosthetic factor. By using oxidase or histamine oxidase, it was found that copper ions in body fluid can be measured, and the present invention has been completed.
[0005]
That is, in the present invention, an enzyme having copper as a prosthetic factor and / or activator and a substrate of the enzyme (excluding copper ions) are allowed to act on copper ions in a liquid, and the enzyme activity by the copper ions in the liquid is controlled. It is a copper ion measuring method characterized by measuring a copper ion concentration in a liquid by measuring a change.
[0006]
The present invention also includes an enzyme containing copper ions as a prosthetic factor and / or activator, a substrate for the enzyme (excluding copper ions), and a reagent for measuring a reaction product of the enzyme. It is a reagent composition for ion measurement.
[0007]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the present invention, the liquid is not limited to body fluids such as blood, urine, cerebrospinal fluid, and plasma, but includes other liquids such as natural water, seawater, waste liquid, and liquids containing various metal copper salts such as research samples. .
Examples of the enzyme using copper as a prosthetic factor and / or activator used in the present invention include phenylethyl oxidase or histamine oxidase, and these enzymes include 3- (2,4,5-trimethyl) as a cofactor. It is an enzyme group having (hydroxyphenyl) -L-alanine (topa). Preferred is phenylethylamine oxidase or histamine oxidase.
In the present invention, a prosthetic factor is a substance essential for the expression of an enzyme.
In the present invention, an activator is a substance having an effect of increasing the activity of an enzyme.
[0008]
The origin of the phenylethylamine oxidase used in the present invention is not particularly limited, but preferably, the one derived from Arthrobacter globiformis is used.
Further, the origin of the histamine oxidase used in the present invention is not particularly limited, but those derived from Arthrobacter globiformis are preferably used.
In the present invention, the substrate of an enzyme that uses copper as a prosthetic factor and / or activator does not contain copper ions.
Examples of the substrate for phenylethylamine oxidase include phenylethylamine and salts thereof such as hydrochloride, tyramine, tryptamine, putrescine or benzylamine.
Examples of the substrate for histamine oxidase include histamine.
[0009]
As the measuring reagent, hydrogen peroxide or ammonia generated by the reaction of the enzyme used in the present invention, a conventionally known reagent can be used.
Examples of the hydrogen peroxide measuring reagent include couplers such as 4-aminoantipyrine and chromogens such as phenol or aniline and their derivatives and reagents containing peroxidase, reagents for measuring methanol and catalase, and formaldehyde produced. The
As the coupler used for the reagent, 4-aminoantipyrine, 3-methyl-2-benzothiazoline hydracisone and the like are used. The chromogens include phenols such as phenol, 2-chlorophenol, 4-chlorophenol and 2,4-dichlorophenol, aniline, N, N-dimethylaniline, N, N-diethylaniline, N, N-diethyl. -M-toluidine, N, N-dimethyl-m-anisidine, N-ethyl-N- (3-methylphenyl) -N'-acetylethylenediamine, N-ethyl-N- (β-hydroxyethyl) -m-toluidine N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -m-toluidine, N-ethyl-N-sulfopropyl-m-toluidine, N-ethyl-N-sulfopropyl-3,5-dimethoxyaniline N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline, N- (2-hydroxy-3 Sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline, N-ethyl-N-sulfopropyl-m-anisidine, N-ethyl-N- (3-methylphenyl) -N'-succinylethylenediamine, N-ethyl-N- ( Anilines such as 2-hydroxy-3-sulfopropyl) -m-anisidine and N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -m-toluidine (TOOS) are used.
[0010]
The reagent composition for measuring copper ions of the present invention comprises an enzyme that uses copper ions as a prosthetic factor and / or activator, a substrate for the enzyme (excluding copper ions), and, if necessary, a reaction product of the enzyme. Containing.
The addition amount of an enzyme that uses copper ions in the reagent composition as a prosthetic factor and / or activator, such as phenylethylamine oxidase or histamine oxidase, is not particularly limited, but is preferably 5 to 100 u / l. It is. The substrate concentration of the enzyme is not limited as long as it does not hinder the measurement of copper ions.
[0011]
The pH of the reagent composition of the present invention is not particularly limited as long as it does not inhibit the enzyme reaction, but is preferably kept at pH 5 to 10 with a buffer solution. The buffer solution may be of any type as long as it does not contain copper ions. Examples include GOOD'S buffer, Tris buffer, phosphate buffer, and acetate buffer.
[0012]
In the reagent composition of the present invention, a surfactant, preservative, stabilizer and the like may be used as necessary. The surfactant is not particularly limited, such as a nonionic surfactant (for example, polyoxyethylene octylphenyl ether), a cationic surfactant, an anionic surfactant, and the like, and should be used at about 0.01 to 0.5%. Can do. As a preservative, sodium azide and antibiotics are used. The stabilizer is not particularly limited as long as it exhibits a stabilizing effect, and sugars such as glucose, mannitol, trehalose, and glycerol, amino acids, albumin, and the like are used.
[0013]
One embodiment of the present invention is a reagent composition for measuring copper ions comprising phenylethylamine oxidase, phenylethylamine hydrochloride, peroxidase, 4-aminoantipyrine and a color former.
Another embodiment is a reagent composition for measuring copper ions containing histamine oxidase, histamine, peroxidase, 4-aminoantipyrine and a color former.
Yet another embodiment is phenylamine oxidase or histamine oxidase and their substrates, such as phenylethylamine and its salts, tyramine, tryptamine, putrescine or benzylamine, or histamine, such as α-ketoglutarate, NAD (P) H and It is a reagent composition for copper ion measurement containing glutamate dehydrogenase.
[0014]
In the method for measuring copper ions of the present invention, an enzyme using copper as a prosthetic factor and / or an activator and a substrate of the enzyme (excluding copper ions) are allowed to act on the copper ions in the liquid, and the copper ions in the liquid are used. By measuring the change in the enzyme activity, the copper ion concentration in the liquid is measured.
As a method for measuring the enzyme activity of the present invention, hydrogen peroxide produced by the action of the enzyme, oxygen consumed or ammonia produced is measured by a known method.
When measuring the amount of hydrogen peroxide produced, a coupler such as 4-aminoantipyrine is generally reacted with a chromogen such as phenol or aniline or a derivative thereof in the presence of peroxidase, and the increase in the amount of dye produced is measured by absorbance. Or a method for colorimetric determination of formaldehyde produced by the reaction of methanol and catalase, either chemically or using an enzyme.
When measuring the consumed oxygen, an oxygen electrode is used.
[0015]
Moreover, when measuring ammonia, the method of measuring the amount of NAD (P) H consumed using (alpha) -ketoglutarate, NAD (P) H, and glutamate dehydrogenase is used.
[0016]
An example of the measuring method of the present invention is to determine the amount of change in absorbance caused by the reaction of the enzyme using an enzyme whose activity is changed by copper ion in the copper ion in the sample, and from the calibration curve using a standard solution in advance This is a method for measuring the amount of the component.
[0017]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention, this invention is not limited by these. In addition, the symbol in an Example shows the following.
HEPES: N-2-hydroxyethylpiperazine-N′-2-ethanesulfonic acid
Example 1 Measurement of copper ion concentration Reagents 1 and 2 below were prepared.
240 μL of Reagent 1 is added to 6 μL of the above sample, heated at 37 ° C. for 5 minutes, 120 μL of Reagent 2 is added, and 1 minute and 5 minutes after the addition of the second reagent, the absorbance at 546 nm is measured using purified water as a control, The amount of change in absorbance per minute was determined. Based on the obtained change in absorbance, the copper ion concentration was determined from a calibration curve prepared in advance using a standard solution. The calculation formula for obtaining the copper ion concentration from the amount of change in absorbance is as follows.
[0020]
ΔABS / min = (A5-A1) / 4
A5: Absorbance 5 minutes after addition of second reagent A1: Absorbance copper ion concentration 1 minute after addition of second reagent = (S-BL) / (STD-BL) × 100
S: ΔABS / min of sample
BL: ΔABS / min of purified water
STD: ΔABS / min of standard solution
100: Copper ion concentration of standard solution (μM)
The results are shown in Table 1. The unit of the numbers in the table is μM.
[0021]
[Table 1]
From Table 1, an increase in the measured value was recognized in proportion to the copper ion concentration in the sample.
[0023]
Example 2 Measurement of Serum Copper Ion Concentration Sample Pretreatment Operation 0.2 mL of 2.5 M guanidine hydrochloride aqueous solution was added to 0.4 mL of a serum sample and incubated at 37 ° C. for 5 minutes. After the incubation, 0.2 ml of 0.9M TCA (trichloroacetic acid?) Solution was added, and the mixture was stirred and centrifuged.
The supernatant was used as a measurement sample, and measurement was performed in the same manner as in Example 1 (n = 5).
The results are shown in Table 2. The unit of numerical values in the table is μM.
[0024]
[Table 2]
[0025]
Example 3 Examination of Influence of Other Ions The following metal salt aqueous solution and purified water were used as samples (the concentration of each aqueous solution was 50 μM).
CuSO 4 , MgCl 2 , AlCl 3 , MnCl 2 , CoCl 2 , ZnCl 2 , BaCl 2 , and copper ions in the purified water sample were measured in the same manner as in Example 1. The results are shown in Table 3.
[0026]
[Table 3]
As is clear from Table 3, it was confirmed that the enzyme of the present invention has little influence from other ions and has high specificity for copper ions.
[0028]
【The invention's effect】
According to the present invention, by using an enzyme having copper ions as a prosthetic factor or activator, it is possible to measure copper ions with excellent accuracy without requiring a special device.
Claims (4)
（１）５〜１００ｕ／ｌのフェニルエチルアミンオキシダーゼ、ならびに、フェニルエチルアミンまたはその塩酸塩、チラミン、トリプタミン、プトレッシンおよびベンジルアミンからなる群より選ばれる基質、(1) 5 to 100 u / l phenylethylamine oxidase, and a substrate selected from the group consisting of phenylethylamine or a hydrochloride thereof, tyramine, tryptamine, putrescine and benzylamine,
もしくは、Or
（２）５〜１００ｕ／ｌのヒスタミンオキシダーゼ、および、ヒスタミン(2) 5 to 100 u / l histamine oxidase and histamine
を作用させ、Act
生成する過酸化水素にペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリンおよび発色剤を作用させ、吸光度変化を測定することにより、液体中の銅イオン濃度を測定することを特徴とする銅イオン測定方法。A method for measuring copper ions, characterized by measuring a copper ion concentration in a liquid by allowing peroxidase, 4-aminoantipyrine and a color former to act on hydrogen peroxide to be produced, and measuring a change in absorbance.
（１）５〜１００ｕ／ｌのフェニルエチルアミンオキシダーゼ、ならびに、フェニルエチルアミンまたはその塩酸塩、チラミン、トリプタミン、プトレッシンおよびベンジルアミンからなる群より選ばれる基質、(1) 5 to 100 u / l phenylethylamine oxidase, and a substrate selected from the group consisting of phenylethylamine or a hydrochloride thereof, tyramine, tryptamine, putrescine and benzylamine,
もしくは、Or
（２）５〜１００ｕ／ｌのヒスタミンオキシダーゼ、および、ヒスタミン(2) 5 to 100 u / l histamine oxidase and histamine
を作用させ、Act
生成するアンモニアにα−ケトグルタル酸、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈおよびグルタミン酸脱水素酵素を作用させ、ＮＡＤ（Ｐ）変化量を測定することにより、液体中の銅イオン濃度を測定することを特徴とする銅イオン測定方法。A copper characterized in that the concentration of copper ions in a liquid is measured by allowing α-ketoglutarate, NAD (P) H and glutamate dehydrogenase to act on the ammonia to be produced, and measuring the amount of NAD (P) change. Ion measurement method.
もしくは、Or
（２）５〜１００ｕ／ｌのヒスタミンオキシダーゼ、および、ヒスタミンの組合せ(2) A combination of 5 to 100 u / l histamine oxidase and histamine
に、さらに、ペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリンおよび発色剤からなる測定試薬を含有することを特徴とする銅イオン測定用試薬組成物。And a reagent for measuring copper ions, further comprising a measuring reagent comprising peroxidase, 4-aminoantipyrine and a color former.
もしくは、Or
（２）５〜１００ｕ／ｌのヒスタミンオキシダーゼ、および、ヒスタミンの組合せ(2) A combination of 5 to 100 u / l histamine oxidase and histamine
に、さらに、α−ケトグルタル酸、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈおよびグルタミン酸脱水素酵素からなる測定試薬を含有することを特徴とする銅イオン測定用試薬組成物。And a reagent for measuring copper ions, further comprising a measuring reagent comprising α-ketoglutarate, NAD (P) H and glutamate dehydrogenase.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP00480096A JP3894236B2 (en) | 1996-01-16 | 1996-01-16 | Copper ion measuring method and reagent composition thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP00480096A JP3894236B2 (en) | 1996-01-16 | 1996-01-16 | Copper ion measuring method and reagent composition thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09191897A JPH09191897A (en) | 1997-07-29 |
| JP3894236B2 true JP3894236B2 (en) | 2007-03-14 |
Family
ID=11593852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP00480096A Expired - Fee Related JP3894236B2 (en) | 1996-01-16 | 1996-01-16 | Copper ion measuring method and reagent composition thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3894236B2 (en) |
-
1996
- 1996-01-16 JP JP00480096A patent/JP3894236B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09191897A (en) | 1997-07-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2610074B2 (en) | Method for measuring ions in liquid and composition therefor | |
| AU694039B2 (en) | Determination of glycated proteins | |
| EP0223977B1 (en) | Colour developing method in clinical examinations | |
| Kasidas et al. | A new enzymatic method for the determination of glycollate in urine and plasma | |
| EP0133681B1 (en) | Enzymatic urea assay | |
| US4271265A (en) | Method and reagent for the determination of glutamate-oxalacetate transaminase and glutamate-pyruvate transaminase | |
| Jung et al. | An optimized assay of human serum glutamate dehydrogenase activity | |
| JPH042240B2 (en) | ||
| JP3894236B2 (en) | Copper ion measuring method and reagent composition thereof | |
| JP2994831B2 (en) | Cholesterol assay and reagents | |
| JPS603480B2 (en) | Creatinine and creatine determination method | |
| US5919644A (en) | Method for assaying sulfate-conjugated bile acid and therefore | |
| JP3151097B2 (en) | Highly sensitive method for determination of tyramine | |
| JP4544598B2 (en) | Liquid reagent and storage method | |
| CA1206077A (en) | Sensitive enzymatic creatinine assay | |
| JPH10108696A (en) | Measurement of urea nitrogen and kit for measurement thereof | |
| JPS6342519B2 (en) | ||
| JP2003000236A (en) | Method for stabilizing esterase | |
| JP3597909B2 (en) | Method and reagent for quantitative determination of chloride ion | |
| JP3143289B2 (en) | Chlorine ion determination method | |
| JPH02100699A (en) | Measurement of organism sample | |
| AU622859C (en) | Method and composition for the determination of potassium ions in fluids | |
| JPS6219100A (en) | Measurement of bile acid | |
| JPH11165A (en) | Urease inhibitor | |
| JPH0218839B2 (en) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060119 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060317 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060706 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060901 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20061122 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20061205 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091222 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101222 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101222 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111222 Year of fee payment: 5 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |