JP2004051866A - 水・畜産物含有有効成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法 - Google Patents
水・畜産物含有有効成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法 Download PDFInfo
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Abstract
【課題】複雑な工程を経ないで、水・畜産物に含まれる脂溶性成分等の有効成分をＣＤ包接物として簡便に製造する方法を提供すると共に、当該ＣＤ包接物を利用した製品を開発すること。
【解決手段】脂溶性成分を含有する水・畜産物植物とデンプン及び脂質可溶性溶媒の混合物にサイクロデキストリン合成酵素を加えて処理することを特徴とする脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法並びに当該包接物を利用した食品、化粧品又は医薬品。
【選択図】 なし
【解決手段】脂溶性成分を含有する水・畜産物植物とデンプン及び脂質可溶性溶媒の混合物にサイクロデキストリン合成酵素を加えて処理することを特徴とする脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法並びに当該包接物を利用した食品、化粧品又は医薬品。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、水・畜産物、すなわち水産物と畜産物含有有効成分のサイクロデキストリン（以下、ＣＤと称することがある。）包接物の製造方法に関し、詳しくは水・畜産物とデンプンを原材料として利用し、水・畜産物に含まれる有効成分のＣＤ包接物を効率よく製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より水・畜産物に含まれる各種の有効成分は、生体調節機能に有効であることが良く知られており、これら成分は食品、化粧品、医薬品等に広く用いられている。
例えば、さば、いか、ウナギ等の水産物には、ＥＰＡ、ＤＨＡ、不飽和脂肪酸が多く含まれている。水産物に含まれている不飽和脂肪酸は、油状として利用されている。
しかし、これら有効成分は脂溶性であるため、例えば食品に使用した場合、水分含有率が多い食品中では、安定性に欠ける性質があり、いずれもその使用形態に制約を受けているのが実状である。
【０００３】
上記課題を解消する方法として、特開２０００−３１３８９７号公報には、γ−ＣＤにより包接したω−３ポリ不飽和脂肪酸含有アシルグリセロールの安定化方法が提案されている。
また、特開平６−３２８８３号公報には、クロロフィル、ステロイド、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、その他の分子量の大きい疎水性物質の包接に利用可能な大環状ＣＤの製造法が提案されている。
【０００４】
しかし、現在のＣＤの生産方法は、特に米デンプンの糊化温度が６５℃と他のデンプンに比べ高いため、（ａ） デンプンに水を加えて６５℃以上で加熱して糊化させる、（ｂ） 冷却する、（ｃ） 酵素を加えて適温で反応させる、（ｄ） 乾燥する、の４工程が必要となる。
さらに、脂溶性ビタミンや不飽和脂肪酸などを粉末化するためには、（１） 有機溶媒による脂溶性ビタミンや不飽和脂肪酸の抽出、（２） ＣＤ溶液と脂溶性ビタミンや不飽和脂肪酸を攪拌する、（３） 乾燥する、の３工程が必要である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
このように、上記の従来技術によれば、水・畜産物有効成分のＣＤ包接物を製造するためには、複雑な工程を経なければならない。
そこで、本発明の目的は、水・畜産物とデンプンの混合物にサイクロデキストリン合成酵素（以下、ＣＧＴａｓｅと称することがある。）を反応させるという簡便な工程での水・畜産物有効成分のＣＤ包接物を製造する方法を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するために、本発明者らは鋭意検討した結果、目的とする水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接物は、図１に示すように、水・畜産物とデンプン （デンプンとしては糊化デンプンが望ましい。）を原料としてエタノール等の脂質可溶性溶媒存在下でデンプンをＣＧＴａｓｅと反応させることによりＣＤを製造し、同時にエタノールで抽出した水・畜産物含有有効成分をＣＤで包接することによって、水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接物を製造できることを見出した。かかる知見に基づいて本発明に到達した。
【０００７】
請求項１記載の本発明は、脂溶性成分を含有する水・畜産物、デンプン及び脂質可溶性溶媒の混合物にサイクロデキストリン合成酵素を加えて処理することを特徴とする脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項２記載の本発明は、水・畜産物が、魚介類、牛又は豚である請求項１記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項３記載の本発明は、水・畜産物が、粉末、粒状もしくは懸濁物である請求項１又は２に記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項４記載の本発明は、脂質可溶性溶媒の濃度が、５〜３０％（容量）である請求項１〜３のいずれかに記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項５記載の本発明は、サイクロデキストリン合成酵素が、耐熱性のものであり、デンプン１ｇ当たり０．１〜１０ＴＨＵ用いる請求項１〜４のいずれかに記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
【０００８】
請求項６記載の本発明は、筋子、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするビタミンＥ類のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項７記載の本発明は、イカの内臓、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするＤＨＡのサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項８記載の本発明は、さば、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするＥＰＡ及びＤＨＡのサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項９記載の本発明は、豚肉又は牛肉、馬鈴薯デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とする不飽和脂肪酸のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項１０記載の本発明は、請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた抗酸化作用を有する脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物である。
請求項１１記載の本発明は、請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物を含有する食品である。
請求項１２記載の本発明は、請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物を含有する化粧品又は医薬品である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の対象とされる水・畜産物中に含まれる有効成分と当該成分を含む水・畜産物について示すと、ビタミンＥ類（ウナギ、アンコウ、卵、筋子、たらこ、あゆ等）、ビタミンＡ類（牛レバー、豚レバー、鶏レバー、卵、牛乳、ウナギ、銀鱈、ホタルイカ、鱧、穴子、鰯、あゆ、ウニ等）、ビタミンＤ（サンマ、鰹、鰯、鮭、カレイ、鯖、卵、牛乳等）、飽和又は不飽和脂肪酸（牛、豚、馬、羊、鶏、鯨、卵、牛乳、鮭、鯖、サンマ、鱈、ウナギ等）、ＤＨＡ（マグロ、ブリ、鯖、サンマ、イカ、鰹、カレイ、ヒラメ、鱈、鰯、鰺、ウナギ、穴子、ニジマス等）、ＥＰＡ（アンコウ、サンマ、ブリ、鰺、鰹、カレイ、ヒラメ、鱈、鰯、マグロ、鯖、鯛、ハマチ、ウナギ、筋子等）などを挙げることができる。
なお、水・畜産物以外の動物に由来する脂溶性成分に対しても本発明を適用することができる。その他、動物に由来する水溶性成分、例えば色素、ビタミンＢ類、ビタミンＣなどについても本発明によりＣＤ包接物を得ることができる。
これら水・畜産物は、その有効成分を溶媒によって効率よく抽出させるため、粉末、粒状もしくは懸濁物の形態で用いることが好ましい。
本発明においては、上記水・畜産物の他にデンプンを原料として用いるが、デンプンの起源は問わず各種のものを任意に使用できるが、糊化デンプンが好ましい。
【００１０】
水・畜産物含有有効成分を抽出するための溶媒としては、当該有効成分を抽出することができる全ての溶媒が利用可能であるが、特に脂質可溶性溶媒が適当であり、エタノール、メタノール、アセトン、エーテル、ヘキサン等を好適に使用することができる。
抽出溶媒としてエタノールを用いる場合を例として説明すると、エタノールの濃度は５〜３０％（容量）、好ましくは２０〜２５％（容量）のものを用いる。
【００１１】
ＣＧＴａｓｅは、デンプンと反応してＣＤを合成する作用を有する。この酵素は主に微生物に由来するが、その起源は特に限定されない。市販されているＣＧＴａｓｅの他、ＣＧＴａｓｅ生産微生物の培養物等を粗酵素として使用することができる。なお、糊化デンプンと反応させることを考慮すると、酵素は耐熱性のものが好ましい。
本発明においては、ＣＧＴａｓｅ以外の酵素、例えば４−α−グルカノトランスフェラーゼ（Ｄ酵素、不均化酵素、デキストリングリコシルトランスフェラーゼ、トランス−α−グリコシラーゼ、デキストリントランスグリコシラーゼ）等の環状糖を生成する酵素のいずれも使用することができる。
【００１２】
次に、本発明による脂溶性成分のＣＤ包接物の製造方法について説明する。水畜産物、デンプンと脂質可溶性溶媒の混合物にＣＧＴａｓｅを加えて処理すると、デンプンとＣＧＴａｓｅの反応によってＣＤが生成し、さらにエタノール等の脂質可溶性溶媒によって抽出された水畜産物含有有効成分である脂溶性成分は当該ＣＤで包接される。
このように、本発明によれば、従来のような複雑な工程を必要としないで、簡便な方法で水畜産物含有有効成分のＣＤ包接物を製造することができる。
【００１３】
本発明に用いる水・畜産物は、有効成分として脂溶性成分（ビタミンＡ、Ｅ、Ｋ等の脂溶性ビタミン類、飽和及び／又は不飽和脂肪酸、ＤＨＡ、ＥＰＡ、補酵素Ｑ−１０等）を含むものであればよく、上記した魚介類等の水産物や牛、豚、馬、羊等の畜産物等を挙げることができる。所望により、動物由来の脂溶性成分自体（例えばα−トコフェロール等のビタミンＥ類）を原料として用いることもできる。
【００１４】
また、ＣＧＴａｓｅ等の酵素の使用量は、デンプン１ｇ当たり０．１〜１０ＴＨＵ（チルデン・ハドソン単位）が適当であるが、経済性等を考慮すると０．５〜１ＴＨＵが好適である。
【００１５】
水・畜産物、デンプンと脂質可溶性溶媒の混合物にＣＧＴａｓｅを加えて行う反応条件は、通常の酵素を用いる場合は、４０〜５５℃、耐熱性酵素を用いる場合は、５０〜７０℃（好ましくは６５℃）で１２〜４８時間、好ましくは２４時間程振盪しながら反応させる。この反応により、水・畜産物中の有効成分である脂溶性成分は抽出され、さらにデンプンと酵素の反応により生成したＣＤに包接される。
反応終了後、懸濁液を３０００〜５０００回転／分、好ましくは３５００回転／分で１〜３０分間、好ましくは５〜１０分間遠心分離等の固−液分離操作を行って上澄み液を得る。これを、脂溶性成分のＣＤ包接物として用いることができる。
しかし、乾燥物を得たい場合は、上澄み液をスプレイドライヤー等で１５０〜２５０℃の温度で乾燥することにより、脂溶性成分のＣＤ包接物の乾燥粉末を得ることができる。
【００１６】
本発明によって得られる脂溶性成分のＣＤ包接物は水溶性であるため、利用できる範囲が広く、例えば食品、化粧品、医薬品等の分野において利用することができる。なお、食品、化粧品、医薬品等に色素や香料等の揮発性物質が含まれている場合、これらもＣＤに包接され、安定化することも期待できる。
【００１７】
【実施例】
以下に、本発明を実施例により詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
米デンプン５ｇ、筋子１０ｇと高温耐性のＣＧＴａｓｅ（当該酵素生産菌を培養して調製）をデンプン１ｇ当たり１ＴＨＵ加えたものに、所定濃度のエタノール溶液を加えて全量を１００ｍｌとし、これを６５℃で２４時間振盪しながら反応させた。
反応終了後、懸濁液を３５００回転／分で１０分間遠心分離して約８０ｍｌの上澄み液を得た。これを、噴霧時の温度２００℃のスプレードライヤーで乾燥させ、筋子含有有効成分のＣＤ包接物の乾燥粉末約２ｇを得た。この乾燥粉末は、水溶性であった。
【００１８】
この反応によって生成したＣＤ量を、以下の方法により、エタノールの濃度を基準として測定した。結果を第１表に示す。表から明らかなように、エタノール濃度が高くなるにしたがってＣＤ量は減少しており、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤは生成されない。
なお、ＣＤの測定は以下の方法により行った。筋子含有有効成分のＣＤ包接物０．１ｇを１ｍｌの蒸留水で溶かし、測定試料とする。ＣＤ組成は、ＨＰＬＣで測定した。測定条件は、カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ ５ＮＨ２ （φ４ｍｍ ×２５０ｍｍ 、和光純薬社製） 、移動層：水／アセトニトリル＝４０／６０、流速：０．８ｍｌ／分、カラム温度：２５℃、検出器：ＲＩＤ−６ＡＶ（島津製作所製）、ポンプ：ＬＣ６Ａ （島津製作所製）である。
【００１９】
【表１】
第１表
【００２０】
次に、筋子含有有効成分のＣＤ包接物にはトコフェロール等のビタミンＥ類が含まれていることが分かったので、これらを次の方法で測定した。筋子含有有効成分のＣＤ包接物１ｇに１００％エタノール溶液１０ｍｌ、１％塩化ナトリウム溶液２０ｍｌ、６０％水酸化カリウム溶液１０ｍｌ、３％ピロガロール溶液１００ｍｌを加え、７０℃の恒温水槽中で３０分間振盪して試料をケン化した。ケン化した試料に酢酸エチル／ヘキサン（１／９）溶液１００ｍｌを加えて５分間振盪、抽出した後、遠心分離（３０００回転／分、５分間）して上澄みを回収した。この操作を２回繰り返した。
エバポレータ（４０℃、１００回転／分）で溶媒を留去した後、試料をヘキサン３ｍｌで溶解してＨＰＬＣ分析試料とした。ＨＰＬＣ分析条件は、カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ ５ＳＩＬ （φ４ｍｍ ×２５０ｍｍ 、和光純薬社製） 、移動層：ヘキサン／ジイソプロピルエーテル＝９／１、流速：１ｍｌ／分、カラム温度：３０℃、ＵＶ検出波長（２９５ｎｍ）、ＵＶ検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所製）、ＨＰＬＣポンプ：ＬＣ６Ａ（島津製作所製）である。エタノールの濃度別に測定した結果を第２表に示す。
【００２１】
【表２】
第２表
表中、ビタミンＥ類の含有量の単位はμｇ／ｇである。
【００２２】
第２表から明らかなように、トコフェロールの含有量は、エタノール濃度が高くなるにしたがい増加する傾向にあることが分かる。
第１表の結果と併せて考えると、本発明のＣＤ包接物の製造方法においては、エタノール濃度を適切な範囲に調整することが重要であり、５〜３０％が好適であることが明らかとなった。
【００２３】
また、得られたＣＤ包接物について、抗酸化能を安定なラジカルであるジフェニルピクリルヒドラジル（以下、ＤＤＰＨと称することがある。）を消去する能力により求めた。すなわち、筋子含有有効成分のＣＤ包接物１ｇを８０％エタノール溶液８ｍｌで振盪抽出（試験管ミキサーで１分間振盪）した後、含浸分離（３０００回転／分、５分間）して上澄みを回収しする操作を２回繰り返した。上澄みを集め、全容を２５ｍｌとし抽出試料とした。この試料２ｍｌに蒸留水１．２ｍｌと５０％エタノール溶液０．８ｍｌを加え、この測定用試料（０〜３００μｌ）を２００μＭ ＤＤＰＨ３００μｌと反応させ、５２０ｎｍの吸光度を測定し、試料無添加の吸光度を１００％として試料のＤＤＰＨ消去能を算出した。
また、対象として従来より抗酸化剤として用いられているビタミンＣ、２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール（以下、ＢＨＴと称することがある。）及びｔ−ブチルヒドロキシアニソール（以下、ＢＨＡと称することがある。）についても、同様に抗酸化能について測定した。図２は、ＤＤＰＨを２５％消去するのに必要な抗酸化剤の量（ｍｇ）を示したものである。
【００２４】
図２から分かるように、ＣＤ包接物はＢＨＴと同程度の抗酸化能を有している。また、ＤＤＰＨを２５％消去するのに必要な量は、製造時に添加するエタノールの濃度が高くなるほど少なくなることが明らかとなった。
【００２５】
実施例２
米デンプン５ｇ、イカの内臓の乾燥粉末５ｇと耐熱性ＣＧＴａｓｅ（バチルス属ＫＦ９−１０菌産生酵素）を用いた以外は、実施例１と同様にＣＤ包接物の生成を行った。この反応によって生成したＣＤ量は、実施例１と同様に測定した。また、イカの内臓含有有効成分のＣＤ包接物にはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が含まれていることが分かったので、次の方法で測定した。イカの内臓含有有効成分のＣＤ包接物１ｇを蒸留水５ｍｌに溶かし、１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液（メタノール：クロロホルム＝１：２混液）を加えて３０分間振とうしてＤＨＡを抽出した。Ｆｏｌｃｈ液、蒸留水懸濁液を３５００回転／分で１０分間遠心分離して約１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液層を得た。０．５ｍｌのＦｏｌｃｈ液層に３フッ化ホウ素メタノール錯体メタノール溶液１ｍｌを加えねじ付き試験管で密封して８０℃で７時間加熱した。加熱後放冷し、５ｍｌの蒸留水と１ｍｌのヘキサンを加えて１分間試験管ミキサーで振とうした。懸濁液を２０００回転／分で５分間遠心分離して上澄みのヘキサン層をガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）の試料とした。ＧＬＣ分析条件は、カラム：Ｓｈｉｎｃｈｒｏｍ Ｅ７１ ５％ Ｓｈｉｍａｌｉｔｅ ８０−１００ （φ３．２ｍｍ ×３．１ｍ、島津社製） 、キャリアガス：窒素ガス、流速：４０ｍｌ／分、カラム温度：２３０℃、気化室温度：２６０℃、検出器温度：２６０℃、検出器：ＦＩＤ、ＧＬＣ：ＧＣ１４Ａ（島津製作所製）である。エタノールの濃度別に測定した結果を第３表及び第４表に示す。
【００２６】
【表３】
第３表
【００２７】
【表４】
第４表
表中、ＤＨＡの含有量の単位はｍｇ／ｇである。
【００２８】
第３表に示すように、エタノール濃度が高くなるにしたがって、ＣＤ含有量が減少することが明らかとなった。特に、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤが生成されないため、エタノールの濃度を適正な範囲に調整して用いることが重要であることが分かった。
また、第４表に示すように、得られたＣＤ包接物に包接されているイカの内蔵分はＤＨＡであった。ＤＨＡは、エタノール濃度が高くなるにつれて、包接される含有量が増加した。
以上のことから、本発明のＣＤ包接物の製造方法においては、エタノール濃度を適切な範囲に調整することが重要であり、エタノール濃度を５〜３０％とすべきであることが明らかとなった。
また、溶解試験の結果、ＤＨＡのＣＤ包接物は水溶性を示した。
【００２９】
実施例３
米デンプン５ｇ、さばの乾燥粉末５ｇと耐熱性ＣＧＴａｓｅ（バチルス属ＫＦ９−１０菌産生酵素）を用いた以外は、実施例１と同様にＣＤ包接物の生成を行った。この反応によって生成したＣＤ量は、実施例１と同様に測定した。また、さば含有有効成分のＣＤ包接物にはＤＨＡとエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）が含まれていることが分かったので、次の方法で測定した。さば含有有効成分のＣＤ包接物１ｇを蒸留水５ｍｌに溶かし、１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液（メタノール：クロロホルム＝１：２混液）を加えて３０分間振とうしてＤＨＡを抽出した。Ｆｏｌｃｈ液、蒸留水懸濁液を３５００回転／分で１０分間遠心分離して約１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液層を得た。
【００３０】
０．５ｍｌのＦｏｌｃｈ液層に３フッ化ホウ素メタノール錯体メタノール溶液１ｍｌを加え、ねじ付き試験管で密封して８０℃で７時間加熱した。加熱後、放冷し、５ｍｌの蒸留水と１ｍｌのヘキサンを加えて１分間試験管ミキサーで振とうした。懸濁液を２０００回転／分で５分間遠心分離して上澄みのヘキサン層をガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）の試料とした。
ＧＬＣ分析条件は、カラム： Ｓｈｉｎｃｈｒｏｍ Ｅ７１ ５％ Ｓｈｉｍａｌｉｔｅ ８０−１００ （φ３．２ｍｍ ×３．１ｍ、島津社製） 、キャリアガス：窒素ガス、流速：４０ｍｌ／分、カラム温度：２３０℃、気化室温度：２６０℃、検出器温度：２６０℃、検出器：ＦＩＤ、ＧＬＣ：ＧＣ１４Ａ（島津製作所製）である。エタノールの濃度別に測定した結果を第５表及び第６表に示す。
【００３１】
【表５】
第５表
【００３２】
第５表に示すとおり、エタノール濃度が高くなるにつれて、生成されるＣＤ含有量が減少することが明らかとなった。すなわち、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤが生成されないため、エタノールの濃度を適正な範囲に調整することが重要であることが示された。
【００３３】
【表６】
第６表
表中、ＥＰＡとＤＨＡの含有量の単位はｍｇ／ｇである。
【００３４】
第６表に示すように、ＥＰＡとＤＨＡのＣＤ包接物は、エタノール濃度が高くなるにつれて、包接される含有量が増加した。
以上のことから、本発明のＣＤ包接物の製造方法においては、エタノール濃度を適切な範囲に調整することが重要であり、具体的なエタノール濃度は５〜３０％とすべきことが明らかとなった。
【００３５】
実施例４
馬鈴薯デンプン５ｇ、豚肉の乾燥粉末５ｇ及び耐熱性ＣＧＴａｓｅ（バチルス属ＫＦ９−１０菌産生酵素）を用いたこと以外は、実施例１と同様にＣＤ包接物の生成を行った。この反応によって生成したＣＤ量は、実施例１と同様に測定した。また、豚肉含有有効成分のＣＤ包接物にはオレイン酸やリノール酸等の不飽和脂肪酸が含まれていることが分かったので、次の方法で測定した。
豚肉含有有効成分のＣＤ包接物１ｇを蒸留水５ｍｌに溶かし、１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液（メタノール：クロロホルム＝１：２混液）を加えて３０分間振とうして不飽和脂肪酸を抽出した。Ｆｏｌｃｈ液、蒸留水懸濁液を３５００回転／分で１０分間遠心分離して約１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液層を得た。
【００３６】
０．５ｍｌのＦｏｌｃｈ液層に３フッ化ホウ素メタノール錯体メタノール溶液１ｍｌを加え、ねじ付き試験管で密封して８０℃で７時間加熱した。加熱後、放冷し、５ｍｌの蒸留水と１ｍｌのヘキサンを加えて１分間試験管ミキサーで振とうした。懸濁液を２０００回転／分で５分間遠心分離して上澄みのヘキサン層をガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）の試料とした。
ＧＬＣ分析条件は、カラム：Ｓｈｉｎｃｈｒｏｍ Ｅ７１ ５％ Ｓｈｉｍａｌｉｔｅ ８０−１００ （φ３．２ｍｍ ×３．１ｍ、島津社製） 、キャリアガス：窒素ガス、流速：４０ｍｌ／分、カラム温度：２３０℃、気化室温度：２６０℃、検出器温度：２６０℃、検出器：ＦＩＤ、ＧＬＣ：ＧＣ１４Ａ（島津製作所製）である。エタノールの濃度別に測定した結果を第７表と第８表に示す。
【００３７】
【表７】
第７表
【００３８】
【表８】
第８表
表中、オレイン酸とリノール酸の含有量の単位はｍｇ／ｇである。
【００３９】
第７表に示すように、エタノール濃度が高くなるにつれて、生成されるＣＤ含量が減少することが明らかとなった。すなわち、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤが生成されない。それ故、目的とするＣＤ包接物を効果的に得るためには、エタノールの濃度を適正な範囲に調整することが重要である。
また、第８表に示すように、豚肉含有有効成分のＣＤ包接物には、オレイン酸やリノール酸等の不飽和脂肪酸が含まれており、これらの含有量はエタノール濃度が高くなるにしたがって増加した。
【００４０】
実施例５
馬鈴薯デンプン５ｇ、牛肉の乾燥粉末５ｇ及び耐熱性ＣＧＴａｓｅ（バチルス属ＫＦ９−１０菌産生酵素）を用いたこと以外は、実施例１と同様にＣＤ包接物の生成を行った。この反応によって生成したＣＤ量は、実施例１と同様に測定した。また、牛肉含有有効成分のＣＤ包接物にはオレイン酸とリノール酸等の不飽和脂肪酸が含まれていることが分かったので、実施例４に記載した方法と同様にして測定した。エタノールの濃度別に測定した結果を第９表と第１０表に示す。
【００４１】
【表９】
第９表
【００４２】
【表１０】
第１０表
表中、オレイン酸とリノール酸の含有量の単位はｍｇ／ｇである。
【００４３】
第９表に示すように、エタノール濃度が高くなるにつれて、生成されるＣＤ含量が減少することが明らかとなった。すなわち、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤが生成されない。それ故、目的とするＣＤ包接物を効果的に得るためには、エタノールの濃度を適正な範囲に調整することが重要である。
また、第１０表に示すように、牛肉含有有効成分のＣＤ包接物には、オレイン酸やリノール酸等の不飽和脂肪酸が含まれており、これらの含有量はエタノール濃度が高くなるにしたがって増加した。
【００４４】
【発明の効果】
本発明によれば、原料のデンプンとＣＧＴａｓｅの反応によって生成したＣＤが、脂質可溶性溶媒によって抽出された水・畜産物含有有効成分である脂溶性成分を包接したＣＤ包接物を簡便、かつ効率よく製造することが可能である。しかも、有効成分として抽出される脂溶性成分はＣＤに包接されることで水溶性を示す。
そのため、得られた水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接物は、食品、化粧品、医薬品等幅広い水溶性製品に容易に添加し、利用することが可能となった。
【００４５】
さらに、本発明の水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接体は、ＣＤを含有しているため、このものを添加した食品、化粧品、医薬品に含まれる色素や香料等揮発性物質が包接され、これら物質を安定化させることも期待される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接体の製造工程の１態様を示す。
【図２】筋子由来脂溶性ビタミンの水溶性粉末の抗酸化能を示す。
【符号の説明】横軸の０〜３０％の数値はエタノール濃度を、記号は市販抗酸化剤を示し、ＢＨＴは２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール、ＢＨＡはｔ−ブチルヒドロキシアニソール、Ｖ．Ｃ．はビタミンＣを示す。
【発明の属する技術分野】
本発明は、水・畜産物、すなわち水産物と畜産物含有有効成分のサイクロデキストリン（以下、ＣＤと称することがある。）包接物の製造方法に関し、詳しくは水・畜産物とデンプンを原材料として利用し、水・畜産物に含まれる有効成分のＣＤ包接物を効率よく製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より水・畜産物に含まれる各種の有効成分は、生体調節機能に有効であることが良く知られており、これら成分は食品、化粧品、医薬品等に広く用いられている。
例えば、さば、いか、ウナギ等の水産物には、ＥＰＡ、ＤＨＡ、不飽和脂肪酸が多く含まれている。水産物に含まれている不飽和脂肪酸は、油状として利用されている。
しかし、これら有効成分は脂溶性であるため、例えば食品に使用した場合、水分含有率が多い食品中では、安定性に欠ける性質があり、いずれもその使用形態に制約を受けているのが実状である。
【０００３】
上記課題を解消する方法として、特開２０００−３１３８９７号公報には、γ−ＣＤにより包接したω−３ポリ不飽和脂肪酸含有アシルグリセロールの安定化方法が提案されている。
また、特開平６−３２８８３号公報には、クロロフィル、ステロイド、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、その他の分子量の大きい疎水性物質の包接に利用可能な大環状ＣＤの製造法が提案されている。
【０００４】
しかし、現在のＣＤの生産方法は、特に米デンプンの糊化温度が６５℃と他のデンプンに比べ高いため、（ａ） デンプンに水を加えて６５℃以上で加熱して糊化させる、（ｂ） 冷却する、（ｃ） 酵素を加えて適温で反応させる、（ｄ） 乾燥する、の４工程が必要となる。
さらに、脂溶性ビタミンや不飽和脂肪酸などを粉末化するためには、（１） 有機溶媒による脂溶性ビタミンや不飽和脂肪酸の抽出、（２） ＣＤ溶液と脂溶性ビタミンや不飽和脂肪酸を攪拌する、（３） 乾燥する、の３工程が必要である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
このように、上記の従来技術によれば、水・畜産物有効成分のＣＤ包接物を製造するためには、複雑な工程を経なければならない。
そこで、本発明の目的は、水・畜産物とデンプンの混合物にサイクロデキストリン合成酵素（以下、ＣＧＴａｓｅと称することがある。）を反応させるという簡便な工程での水・畜産物有効成分のＣＤ包接物を製造する方法を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するために、本発明者らは鋭意検討した結果、目的とする水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接物は、図１に示すように、水・畜産物とデンプン （デンプンとしては糊化デンプンが望ましい。）を原料としてエタノール等の脂質可溶性溶媒存在下でデンプンをＣＧＴａｓｅと反応させることによりＣＤを製造し、同時にエタノールで抽出した水・畜産物含有有効成分をＣＤで包接することによって、水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接物を製造できることを見出した。かかる知見に基づいて本発明に到達した。
【０００７】
請求項１記載の本発明は、脂溶性成分を含有する水・畜産物、デンプン及び脂質可溶性溶媒の混合物にサイクロデキストリン合成酵素を加えて処理することを特徴とする脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項２記載の本発明は、水・畜産物が、魚介類、牛又は豚である請求項１記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項３記載の本発明は、水・畜産物が、粉末、粒状もしくは懸濁物である請求項１又は２に記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項４記載の本発明は、脂質可溶性溶媒の濃度が、５〜３０％（容量）である請求項１〜３のいずれかに記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項５記載の本発明は、サイクロデキストリン合成酵素が、耐熱性のものであり、デンプン１ｇ当たり０．１〜１０ＴＨＵ用いる請求項１〜４のいずれかに記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
【０００８】
請求項６記載の本発明は、筋子、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするビタミンＥ類のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項７記載の本発明は、イカの内臓、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするＤＨＡのサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項８記載の本発明は、さば、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするＥＰＡ及びＤＨＡのサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項９記載の本発明は、豚肉又は牛肉、馬鈴薯デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とする不飽和脂肪酸のサイクロデキストリン包接物の製造方法である。
請求項１０記載の本発明は、請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた抗酸化作用を有する脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物である。
請求項１１記載の本発明は、請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物を含有する食品である。
請求項１２記載の本発明は、請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物を含有する化粧品又は医薬品である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の対象とされる水・畜産物中に含まれる有効成分と当該成分を含む水・畜産物について示すと、ビタミンＥ類（ウナギ、アンコウ、卵、筋子、たらこ、あゆ等）、ビタミンＡ類（牛レバー、豚レバー、鶏レバー、卵、牛乳、ウナギ、銀鱈、ホタルイカ、鱧、穴子、鰯、あゆ、ウニ等）、ビタミンＤ（サンマ、鰹、鰯、鮭、カレイ、鯖、卵、牛乳等）、飽和又は不飽和脂肪酸（牛、豚、馬、羊、鶏、鯨、卵、牛乳、鮭、鯖、サンマ、鱈、ウナギ等）、ＤＨＡ（マグロ、ブリ、鯖、サンマ、イカ、鰹、カレイ、ヒラメ、鱈、鰯、鰺、ウナギ、穴子、ニジマス等）、ＥＰＡ（アンコウ、サンマ、ブリ、鰺、鰹、カレイ、ヒラメ、鱈、鰯、マグロ、鯖、鯛、ハマチ、ウナギ、筋子等）などを挙げることができる。
なお、水・畜産物以外の動物に由来する脂溶性成分に対しても本発明を適用することができる。その他、動物に由来する水溶性成分、例えば色素、ビタミンＢ類、ビタミンＣなどについても本発明によりＣＤ包接物を得ることができる。
これら水・畜産物は、その有効成分を溶媒によって効率よく抽出させるため、粉末、粒状もしくは懸濁物の形態で用いることが好ましい。
本発明においては、上記水・畜産物の他にデンプンを原料として用いるが、デンプンの起源は問わず各種のものを任意に使用できるが、糊化デンプンが好ましい。
【００１０】
水・畜産物含有有効成分を抽出するための溶媒としては、当該有効成分を抽出することができる全ての溶媒が利用可能であるが、特に脂質可溶性溶媒が適当であり、エタノール、メタノール、アセトン、エーテル、ヘキサン等を好適に使用することができる。
抽出溶媒としてエタノールを用いる場合を例として説明すると、エタノールの濃度は５〜３０％（容量）、好ましくは２０〜２５％（容量）のものを用いる。
【００１１】
ＣＧＴａｓｅは、デンプンと反応してＣＤを合成する作用を有する。この酵素は主に微生物に由来するが、その起源は特に限定されない。市販されているＣＧＴａｓｅの他、ＣＧＴａｓｅ生産微生物の培養物等を粗酵素として使用することができる。なお、糊化デンプンと反応させることを考慮すると、酵素は耐熱性のものが好ましい。
本発明においては、ＣＧＴａｓｅ以外の酵素、例えば４−α−グルカノトランスフェラーゼ（Ｄ酵素、不均化酵素、デキストリングリコシルトランスフェラーゼ、トランス−α−グリコシラーゼ、デキストリントランスグリコシラーゼ）等の環状糖を生成する酵素のいずれも使用することができる。
【００１２】
次に、本発明による脂溶性成分のＣＤ包接物の製造方法について説明する。水畜産物、デンプンと脂質可溶性溶媒の混合物にＣＧＴａｓｅを加えて処理すると、デンプンとＣＧＴａｓｅの反応によってＣＤが生成し、さらにエタノール等の脂質可溶性溶媒によって抽出された水畜産物含有有効成分である脂溶性成分は当該ＣＤで包接される。
このように、本発明によれば、従来のような複雑な工程を必要としないで、簡便な方法で水畜産物含有有効成分のＣＤ包接物を製造することができる。
【００１３】
本発明に用いる水・畜産物は、有効成分として脂溶性成分（ビタミンＡ、Ｅ、Ｋ等の脂溶性ビタミン類、飽和及び／又は不飽和脂肪酸、ＤＨＡ、ＥＰＡ、補酵素Ｑ−１０等）を含むものであればよく、上記した魚介類等の水産物や牛、豚、馬、羊等の畜産物等を挙げることができる。所望により、動物由来の脂溶性成分自体（例えばα−トコフェロール等のビタミンＥ類）を原料として用いることもできる。
【００１４】
また、ＣＧＴａｓｅ等の酵素の使用量は、デンプン１ｇ当たり０．１〜１０ＴＨＵ（チルデン・ハドソン単位）が適当であるが、経済性等を考慮すると０．５〜１ＴＨＵが好適である。
【００１５】
水・畜産物、デンプンと脂質可溶性溶媒の混合物にＣＧＴａｓｅを加えて行う反応条件は、通常の酵素を用いる場合は、４０〜５５℃、耐熱性酵素を用いる場合は、５０〜７０℃（好ましくは６５℃）で１２〜４８時間、好ましくは２４時間程振盪しながら反応させる。この反応により、水・畜産物中の有効成分である脂溶性成分は抽出され、さらにデンプンと酵素の反応により生成したＣＤに包接される。
反応終了後、懸濁液を３０００〜５０００回転／分、好ましくは３５００回転／分で１〜３０分間、好ましくは５〜１０分間遠心分離等の固−液分離操作を行って上澄み液を得る。これを、脂溶性成分のＣＤ包接物として用いることができる。
しかし、乾燥物を得たい場合は、上澄み液をスプレイドライヤー等で１５０〜２５０℃の温度で乾燥することにより、脂溶性成分のＣＤ包接物の乾燥粉末を得ることができる。
【００１６】
本発明によって得られる脂溶性成分のＣＤ包接物は水溶性であるため、利用できる範囲が広く、例えば食品、化粧品、医薬品等の分野において利用することができる。なお、食品、化粧品、医薬品等に色素や香料等の揮発性物質が含まれている場合、これらもＣＤに包接され、安定化することも期待できる。
【００１７】
【実施例】
以下に、本発明を実施例により詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
米デンプン５ｇ、筋子１０ｇと高温耐性のＣＧＴａｓｅ（当該酵素生産菌を培養して調製）をデンプン１ｇ当たり１ＴＨＵ加えたものに、所定濃度のエタノール溶液を加えて全量を１００ｍｌとし、これを６５℃で２４時間振盪しながら反応させた。
反応終了後、懸濁液を３５００回転／分で１０分間遠心分離して約８０ｍｌの上澄み液を得た。これを、噴霧時の温度２００℃のスプレードライヤーで乾燥させ、筋子含有有効成分のＣＤ包接物の乾燥粉末約２ｇを得た。この乾燥粉末は、水溶性であった。
【００１８】
この反応によって生成したＣＤ量を、以下の方法により、エタノールの濃度を基準として測定した。結果を第１表に示す。表から明らかなように、エタノール濃度が高くなるにしたがってＣＤ量は減少しており、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤは生成されない。
なお、ＣＤの測定は以下の方法により行った。筋子含有有効成分のＣＤ包接物０．１ｇを１ｍｌの蒸留水で溶かし、測定試料とする。ＣＤ組成は、ＨＰＬＣで測定した。測定条件は、カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ ５ＮＨ２ （φ４ｍｍ ×２５０ｍｍ 、和光純薬社製） 、移動層：水／アセトニトリル＝４０／６０、流速：０．８ｍｌ／分、カラム温度：２５℃、検出器：ＲＩＤ−６ＡＶ（島津製作所製）、ポンプ：ＬＣ６Ａ （島津製作所製）である。
【００１９】
【表１】
第１表
次に、筋子含有有効成分のＣＤ包接物にはトコフェロール等のビタミンＥ類が含まれていることが分かったので、これらを次の方法で測定した。筋子含有有効成分のＣＤ包接物１ｇに１００％エタノール溶液１０ｍｌ、１％塩化ナトリウム溶液２０ｍｌ、６０％水酸化カリウム溶液１０ｍｌ、３％ピロガロール溶液１００ｍｌを加え、７０℃の恒温水槽中で３０分間振盪して試料をケン化した。ケン化した試料に酢酸エチル／ヘキサン（１／９）溶液１００ｍｌを加えて５分間振盪、抽出した後、遠心分離（３０００回転／分、５分間）して上澄みを回収した。この操作を２回繰り返した。
エバポレータ（４０℃、１００回転／分）で溶媒を留去した後、試料をヘキサン３ｍｌで溶解してＨＰＬＣ分析試料とした。ＨＰＬＣ分析条件は、カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ ５ＳＩＬ （φ４ｍｍ ×２５０ｍｍ 、和光純薬社製） 、移動層：ヘキサン／ジイソプロピルエーテル＝９／１、流速：１ｍｌ／分、カラム温度：３０℃、ＵＶ検出波長（２９５ｎｍ）、ＵＶ検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所製）、ＨＰＬＣポンプ：ＬＣ６Ａ（島津製作所製）である。エタノールの濃度別に測定した結果を第２表に示す。
【００２１】
【表２】
第２表
【００２２】
第２表から明らかなように、トコフェロールの含有量は、エタノール濃度が高くなるにしたがい増加する傾向にあることが分かる。
第１表の結果と併せて考えると、本発明のＣＤ包接物の製造方法においては、エタノール濃度を適切な範囲に調整することが重要であり、５〜３０％が好適であることが明らかとなった。
【００２３】
また、得られたＣＤ包接物について、抗酸化能を安定なラジカルであるジフェニルピクリルヒドラジル（以下、ＤＤＰＨと称することがある。）を消去する能力により求めた。すなわち、筋子含有有効成分のＣＤ包接物１ｇを８０％エタノール溶液８ｍｌで振盪抽出（試験管ミキサーで１分間振盪）した後、含浸分離（３０００回転／分、５分間）して上澄みを回収しする操作を２回繰り返した。上澄みを集め、全容を２５ｍｌとし抽出試料とした。この試料２ｍｌに蒸留水１．２ｍｌと５０％エタノール溶液０．８ｍｌを加え、この測定用試料（０〜３００μｌ）を２００μＭ ＤＤＰＨ３００μｌと反応させ、５２０ｎｍの吸光度を測定し、試料無添加の吸光度を１００％として試料のＤＤＰＨ消去能を算出した。
また、対象として従来より抗酸化剤として用いられているビタミンＣ、２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール（以下、ＢＨＴと称することがある。）及びｔ−ブチルヒドロキシアニソール（以下、ＢＨＡと称することがある。）についても、同様に抗酸化能について測定した。図２は、ＤＤＰＨを２５％消去するのに必要な抗酸化剤の量（ｍｇ）を示したものである。
【００２４】
図２から分かるように、ＣＤ包接物はＢＨＴと同程度の抗酸化能を有している。また、ＤＤＰＨを２５％消去するのに必要な量は、製造時に添加するエタノールの濃度が高くなるほど少なくなることが明らかとなった。
【００２５】
実施例２
米デンプン５ｇ、イカの内臓の乾燥粉末５ｇと耐熱性ＣＧＴａｓｅ（バチルス属ＫＦ９−１０菌産生酵素）を用いた以外は、実施例１と同様にＣＤ包接物の生成を行った。この反応によって生成したＣＤ量は、実施例１と同様に測定した。また、イカの内臓含有有効成分のＣＤ包接物にはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が含まれていることが分かったので、次の方法で測定した。イカの内臓含有有効成分のＣＤ包接物１ｇを蒸留水５ｍｌに溶かし、１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液（メタノール：クロロホルム＝１：２混液）を加えて３０分間振とうしてＤＨＡを抽出した。Ｆｏｌｃｈ液、蒸留水懸濁液を３５００回転／分で１０分間遠心分離して約１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液層を得た。０．５ｍｌのＦｏｌｃｈ液層に３フッ化ホウ素メタノール錯体メタノール溶液１ｍｌを加えねじ付き試験管で密封して８０℃で７時間加熱した。加熱後放冷し、５ｍｌの蒸留水と１ｍｌのヘキサンを加えて１分間試験管ミキサーで振とうした。懸濁液を２０００回転／分で５分間遠心分離して上澄みのヘキサン層をガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）の試料とした。ＧＬＣ分析条件は、カラム：Ｓｈｉｎｃｈｒｏｍ Ｅ７１ ５％ Ｓｈｉｍａｌｉｔｅ ８０−１００ （φ３．２ｍｍ ×３．１ｍ、島津社製） 、キャリアガス：窒素ガス、流速：４０ｍｌ／分、カラム温度：２３０℃、気化室温度：２６０℃、検出器温度：２６０℃、検出器：ＦＩＤ、ＧＬＣ：ＧＣ１４Ａ（島津製作所製）である。エタノールの濃度別に測定した結果を第３表及び第４表に示す。
【００２６】
【表３】
第３表
【表４】
第４表
【００２８】
第３表に示すように、エタノール濃度が高くなるにしたがって、ＣＤ含有量が減少することが明らかとなった。特に、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤが生成されないため、エタノールの濃度を適正な範囲に調整して用いることが重要であることが分かった。
また、第４表に示すように、得られたＣＤ包接物に包接されているイカの内蔵分はＤＨＡであった。ＤＨＡは、エタノール濃度が高くなるにつれて、包接される含有量が増加した。
以上のことから、本発明のＣＤ包接物の製造方法においては、エタノール濃度を適切な範囲に調整することが重要であり、エタノール濃度を５〜３０％とすべきであることが明らかとなった。
また、溶解試験の結果、ＤＨＡのＣＤ包接物は水溶性を示した。
【００２９】
実施例３
米デンプン５ｇ、さばの乾燥粉末５ｇと耐熱性ＣＧＴａｓｅ（バチルス属ＫＦ９−１０菌産生酵素）を用いた以外は、実施例１と同様にＣＤ包接物の生成を行った。この反応によって生成したＣＤ量は、実施例１と同様に測定した。また、さば含有有効成分のＣＤ包接物にはＤＨＡとエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）が含まれていることが分かったので、次の方法で測定した。さば含有有効成分のＣＤ包接物１ｇを蒸留水５ｍｌに溶かし、１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液（メタノール：クロロホルム＝１：２混液）を加えて３０分間振とうしてＤＨＡを抽出した。Ｆｏｌｃｈ液、蒸留水懸濁液を３５００回転／分で１０分間遠心分離して約１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液層を得た。
【００３０】
０．５ｍｌのＦｏｌｃｈ液層に３フッ化ホウ素メタノール錯体メタノール溶液１ｍｌを加え、ねじ付き試験管で密封して８０℃で７時間加熱した。加熱後、放冷し、５ｍｌの蒸留水と１ｍｌのヘキサンを加えて１分間試験管ミキサーで振とうした。懸濁液を２０００回転／分で５分間遠心分離して上澄みのヘキサン層をガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）の試料とした。
ＧＬＣ分析条件は、カラム： Ｓｈｉｎｃｈｒｏｍ Ｅ７１ ５％ Ｓｈｉｍａｌｉｔｅ ８０−１００ （φ３．２ｍｍ ×３．１ｍ、島津社製） 、キャリアガス：窒素ガス、流速：４０ｍｌ／分、カラム温度：２３０℃、気化室温度：２６０℃、検出器温度：２６０℃、検出器：ＦＩＤ、ＧＬＣ：ＧＣ１４Ａ（島津製作所製）である。エタノールの濃度別に測定した結果を第５表及び第６表に示す。
【００３１】
【表５】
第５表
第５表に示すとおり、エタノール濃度が高くなるにつれて、生成されるＣＤ含有量が減少することが明らかとなった。すなわち、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤが生成されないため、エタノールの濃度を適正な範囲に調整することが重要であることが示された。
【００３３】
【表６】
第６表
【００３４】
第６表に示すように、ＥＰＡとＤＨＡのＣＤ包接物は、エタノール濃度が高くなるにつれて、包接される含有量が増加した。
以上のことから、本発明のＣＤ包接物の製造方法においては、エタノール濃度を適切な範囲に調整することが重要であり、具体的なエタノール濃度は５〜３０％とすべきことが明らかとなった。
【００３５】
実施例４
馬鈴薯デンプン５ｇ、豚肉の乾燥粉末５ｇ及び耐熱性ＣＧＴａｓｅ（バチルス属ＫＦ９−１０菌産生酵素）を用いたこと以外は、実施例１と同様にＣＤ包接物の生成を行った。この反応によって生成したＣＤ量は、実施例１と同様に測定した。また、豚肉含有有効成分のＣＤ包接物にはオレイン酸やリノール酸等の不飽和脂肪酸が含まれていることが分かったので、次の方法で測定した。
豚肉含有有効成分のＣＤ包接物１ｇを蒸留水５ｍｌに溶かし、１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液（メタノール：クロロホルム＝１：２混液）を加えて３０分間振とうして不飽和脂肪酸を抽出した。Ｆｏｌｃｈ液、蒸留水懸濁液を３５００回転／分で１０分間遠心分離して約１０ｍｌのＦｏｌｃｈ液層を得た。
【００３６】
０．５ｍｌのＦｏｌｃｈ液層に３フッ化ホウ素メタノール錯体メタノール溶液１ｍｌを加え、ねじ付き試験管で密封して８０℃で７時間加熱した。加熱後、放冷し、５ｍｌの蒸留水と１ｍｌのヘキサンを加えて１分間試験管ミキサーで振とうした。懸濁液を２０００回転／分で５分間遠心分離して上澄みのヘキサン層をガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）の試料とした。
ＧＬＣ分析条件は、カラム：Ｓｈｉｎｃｈｒｏｍ Ｅ７１ ５％ Ｓｈｉｍａｌｉｔｅ ８０−１００ （φ３．２ｍｍ ×３．１ｍ、島津社製） 、キャリアガス：窒素ガス、流速：４０ｍｌ／分、カラム温度：２３０℃、気化室温度：２６０℃、検出器温度：２６０℃、検出器：ＦＩＤ、ＧＬＣ：ＧＣ１４Ａ（島津製作所製）である。エタノールの濃度別に測定した結果を第７表と第８表に示す。
【００３７】
【表７】
第７表
【表８】
第８表
【００３９】
第７表に示すように、エタノール濃度が高くなるにつれて、生成されるＣＤ含量が減少することが明らかとなった。すなわち、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤが生成されない。それ故、目的とするＣＤ包接物を効果的に得るためには、エタノールの濃度を適正な範囲に調整することが重要である。
また、第８表に示すように、豚肉含有有効成分のＣＤ包接物には、オレイン酸やリノール酸等の不飽和脂肪酸が含まれており、これらの含有量はエタノール濃度が高くなるにしたがって増加した。
【００４０】
実施例５
馬鈴薯デンプン５ｇ、牛肉の乾燥粉末５ｇ及び耐熱性ＣＧＴａｓｅ（バチルス属ＫＦ９−１０菌産生酵素）を用いたこと以外は、実施例１と同様にＣＤ包接物の生成を行った。この反応によって生成したＣＤ量は、実施例１と同様に測定した。また、牛肉含有有効成分のＣＤ包接物にはオレイン酸とリノール酸等の不飽和脂肪酸が含まれていることが分かったので、実施例４に記載した方法と同様にして測定した。エタノールの濃度別に測定した結果を第９表と第１０表に示す。
【００４１】
【表９】
第９表
【表１０】
第１０表
【００４３】
第９表に示すように、エタノール濃度が高くなるにつれて、生成されるＣＤ含量が減少することが明らかとなった。すなわち、エタノール濃度が３０％を超えると、ＣＤが生成されない。それ故、目的とするＣＤ包接物を効果的に得るためには、エタノールの濃度を適正な範囲に調整することが重要である。
また、第１０表に示すように、牛肉含有有効成分のＣＤ包接物には、オレイン酸やリノール酸等の不飽和脂肪酸が含まれており、これらの含有量はエタノール濃度が高くなるにしたがって増加した。
【００４４】
【発明の効果】
本発明によれば、原料のデンプンとＣＧＴａｓｅの反応によって生成したＣＤが、脂質可溶性溶媒によって抽出された水・畜産物含有有効成分である脂溶性成分を包接したＣＤ包接物を簡便、かつ効率よく製造することが可能である。しかも、有効成分として抽出される脂溶性成分はＣＤに包接されることで水溶性を示す。
そのため、得られた水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接物は、食品、化粧品、医薬品等幅広い水溶性製品に容易に添加し、利用することが可能となった。
【００４５】
さらに、本発明の水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接体は、ＣＤを含有しているため、このものを添加した食品、化粧品、医薬品に含まれる色素や香料等揮発性物質が包接され、これら物質を安定化させることも期待される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の水・畜産物含有有効成分のＣＤ包接体の製造工程の１態様を示す。
【図２】筋子由来脂溶性ビタミンの水溶性粉末の抗酸化能を示す。
【符号の説明】横軸の０〜３０％の数値はエタノール濃度を、記号は市販抗酸化剤を示し、ＢＨＴは２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール、ＢＨＡはｔ−ブチルヒドロキシアニソール、Ｖ．Ｃ．はビタミンＣを示す。
Claims (12)
- 脂溶性成分を含有する水・畜産物、デンプン及び脂質可溶性溶媒の混合物にサイクロデキストリン合成酵素を加えて処理することを特徴とする脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- 水・畜産物が、魚介類、牛又は豚である請求項１記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- 水・畜産物が、粉末、粒状もしくは懸濁物である請求項１又は２に記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- 脂質可溶性溶媒の濃度が、５〜３０％（容量）である請求項１〜３のいずれかに記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- サイクロデキストリン合成酵素が、耐熱性のものであり、デンプン１ｇ当たり０．１〜１０ＴＨＵ用いる請求項１〜４のいずれかに記載の脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- 筋子、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするビタミンＥ類のサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- イカの内臓、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするＤＨＡのサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- さば、米デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とするＥＰＡ及びＤＨＡのサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- 豚肉又は牛肉、馬鈴薯デンプン及びエタノールを混合し、これにサイクロデキストリン合成酵素を加えて５０〜６５℃で２４〜４８時間振盪しながら処理することを特徴とする不飽和脂肪酸のサイクロデキストリン包接物の製造方法。
- 請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた抗酸化作用を有する脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物。
- 請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物を含有する食品。
- 請求項１〜９のいずれかに記載の方法で得られた脂溶性成分のサイクロデキストリン包接物を含有する化粧品又は医薬品。
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