【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法およびその卵並びに分泌型ＩｇＡ抗体の製造方法に係り、特に人間や動物や鳥や魚等の脊椎動物（以下、「脊椎動物」という）の免疫機能を向上させる免疫賦活機能を保有する生成物を雌性の鳥類に給餌して得られる分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法およびその卵並びに分泌型ＩｇＡ抗体の製造方法に関する。
【０００２】
本発明において、豆類とは、大豆等の豆科の穀類やこれらの粕、加工製品等を意味する。
【０００３】
【従来の技術と発明が解決しようとする課題】
一般に、現代人は病原性大腸菌やサルモネラ菌などの細菌感染やさらにはインフルエンザウイルスなどウイルス感染に弱くなったといわれている。このような感染症の原因となる病原性微生物としては、ウイルス（ＨＩＶ（ヒト免疫不全症ウイルス）、インフルエンザウイルス、ロタウイルス等）、細菌（肺炎球菌、病原性大腸菌、サルモネラ菌、コレラ菌、ピロリ菌、淋菌等）、腸管寄生虫（原虫、蠕虫等）が挙げられる。
【０００４】
また、養鶏産業において対応策がない深刻な感染症としては、コクシジウム症とサルモネラ菌の汚染といわれている。
【０００５】
本発明者は、国際公開公報ＷＯ００／４５８３０号において、すでに豆類を麹菌で発酵させた後、加水し、酵素分解させることによりイソフラボンアグリコンを含有するものとして得られた生成物や、その酵素分解を行わせながらイソフラボンアグリコンを含有するとともに乳酸菌を培養させた培養物やその培養した乳酸菌等により、腸管粘膜免疫系を賦活する働きを有する免疫賦活素材を提案するとともに、哺乳類や鳥類等の脊椎動物に免疫賦活素材を経口投与することで腸管粘膜免疫系を賦活させることを確認している。この免疫賦活素材を利用した免疫系の賦活は、当該免疫賦活素材を脊椎動物に対して経口的に投与すると、腸管内において抗体であるＩｇＡの分泌が亢進し、非常にユニークなシステムによって病原性微生物の感染をバリアすることにより実現されている。
【０００６】
その後、本発明者は前記免疫賦活素材による感染防御機能が母親の母乳から乳児に移行することに着目した。すなわち、前記免疫賦活素材を妊娠にいたるまでに母親に経口投与することにより、出産した母親の腸管組織でＩｇＡを多く生産させ、さらにこのＩｇＡが乳腺に存在する分泌成分（ＳＣ）がＪ鎖を結合した多量体になったＩｇＡと結合した分泌型ＩｇＡ（ｓＩｇＡ）を多く分泌させることが可能になる。母乳中においてこのｓＩｇＡ分泌を多く分泌させる利点は、このｓＩｇＡが感染防御機能を有しているからである。この感染防御機能としては病原性微生物の粘膜上皮への付着・定着の阻止、病原性細菌由来毒素の中和、ウイルスの中和、抗原凝集活性、ムチンとの結合による病原性微生物の排泄作用、分泌液中物質（例：ラクトフェリン）との共同による抗菌作用などがあるといわれている（西川伸一・本庶佑（編）（１９９９）：免疫と血液の科学、岩波書店、１６９頁）。すなわち、乳児は母乳を摂取することでｓＩｇＡの感染防御機能の恩恵を受けることができる。さらに、母親の腸管粘膜免疫系を賦活させることにより、母乳中のｓＩｇＡ分泌量が高まるだけではなく、その母親が病原性微生物に感染すると、特定の抗原認識性を示す抗体（特異的抗体）として母乳中にはｓＩｇＡが分泌されるので、母乳を介して乳児は特異的抗体を得ることが期待できるので、母乳を摂取した子供は病原性微生物の侵入を受けても、すでに母親からの母乳を介してこの病原性微生物に対する特異的抗体を効果的に獲得しているので、感染せずに済む。
【０００７】
このような病原性微生物に対しての感染防御機能を持ったｓＩｇＡを利用することは現代人にとって望まれる所であった。具体的には、病原性微生物に対する感染を腸管、鼻腔、咽喉、気管支、扁桃、泌尿生殖器等においてｓＩｇＡを用いて予防・阻止することが要望されていた。
【０００８】
しかしながら、哺乳類を使ってｓＩｇＡを入手することは、母乳が得られる時期が出産後に限られることもあり、大量にｓＩｇＡを得ることは非常に困難であり、効率面で問題であった。
【０００９】
本発明はこれらの点に鑑みてなされたものであり、優れた効力を発揮する分泌型ＩｇＡ抗体の大量利用を可能とするために分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法およびその卵並びに分泌型ＩｇＡ抗体の製造方法を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、鋭意研究し、同じような感染防御機能を有する鳥類、とりわけ産卵鶏を利用すれば、大量飼育が容易であり、産卵鶏は常時産卵することができるので、卵白中に分泌されて含有されるｓＩｇＡを簡単にかつ多量に利用することができることを発見して本発明を完成させた。
【００１１】
本発明を完成させた理由をさらに説明すると、鳥類の血液中には、哺乳類と同様にＩｇＧ、ＩｇＭおよびＩｇＡの３種類の抗体が存在することが知られている。そして、これらの３種類の抗体は、鳥類の卵においては、卵白中にはＩｇＭおよびＩｇＡが含有され、卵黄中にはＩｇＧのみが含有される性質を有している。このうち卵黄中に含有されているＩｇＧは、鳥類の身体内に既に入っている血液中等の病原性微生物に対して抗原認識性を示す抗体（特異的抗体）として働いて死滅させる等の免疫機能を有するものである。また、卵白中のＩｇＡは、例えば鳥類の腸管の粘膜にｓＩｇＡとして分泌されて、腸の内壁面おいて、未だ鳥類の身体内に入り込んでいない病原性微生物に対して抗原認識性を示す抗体（特異的抗体）として働いて、病原性菌が腸壁を通して身体内に侵入することを防止する免疫機能を有しているが、卵白中にあるＩｇＭは孵化後はほとんど血管内に分布し、血管外組織への拡散は少ないといわれている。
【００１２】
一方、八田らは、特開平４−１０３５３９号公報において、卵黄中のＩｇＧ抗体に着目し、その特異的抗体を産卵鶏が産生する卵黄から得て、特異的抗体を含有する白色化卵黄及び特異的抗体含有組成物を得ることを提案している。この卵黄中のＩｇＧは哺乳類のＩｇＧに相等する抗体であり、前記したように血管および血管外へ拡散し、広く組織中に分布し、体内おいて免疫力を発揮するものである。
【００１３】
しかしながら、八田らは、卵黄中のＩｇＧについては言及しているものの、卵白中に含有されるＩｇＡについてや、ＩｇＡの分泌量を高める前記免疫賦活素材については全く言及していない。この卵黄中のＩｇＧには、本発明の対象である卵白中のｓＩｇＡのように、気道、腸管、唾液腺などの上皮細胞の基底膜面から内腔面へ粘液とともに分泌し、体外から侵入してくる病原性微生物を体内に侵入する前に粘膜層でバリアするという働きはない。すなわち、卵黄中のＩｇＧに比べて卵白中のｓＩｇＡはヒナの腸管などの粘膜層に分泌・移行し、腸管免疫機能を発揮して、体外から侵入しようとする病原性微生物に対するヒナの初期感染防御に重要な役割を果している。そのことに本発明者は着目し、本発明を完成させるに到ったものである。
【００１４】
ここで、請求項１に記載の本発明の分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法は、豆類に麹菌を接種して製麹し、この製麹処理による生成物に加水することにより当該生成物中の蛋白質およびまたは糖質を加水分解することにより製した免疫賦活機能を保有する生成物を雌性の鳥類に給餌し、予めその鳥類の腸管粘膜免疫系を賦活させ、その後この鳥類を飼育中に病原性微生物に対する抗原認識性を持つ分泌型ＩｇＡ抗体を体内に産生させ、その後この鳥類から卵を産卵させることにより分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵を得ることを特徴とする。
【００１５】
また、請求項２に記載の本発明の分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法は、豆類に麹菌を接種して製麹し、この製麹処理による生成物に加水することにより当該生成物中の蛋白質およびまたは糖質を加水分解するとともに、前記製麹処理による生成物中に含まれている乳酸菌およびまたは前記製麹処理による生成物に添加された乳酸菌が、前記加水分解の際に増殖促進させられることにより製した免疫賦活機能を保有する生成物を雌性の鳥類に給餌し、予めその鳥類の腸管粘膜免疫系を賦活させ、その後この鳥類を飼育中に病原性微生物に対する抗原認識性を持つ分泌型ＩｇＡ抗体を体内に産生させ、その後この鳥類から卵を産卵させることにより分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵を得ることを特徴とする。
【００１６】
また、請求項３に記載の本発明の分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法は、請求項１または請求項２において、免疫賦活機能を保有する生成物が、免疫賦活機能を保有するイソフラボンアグリコンであるダイゼインを含むことを特徴とする。
【００１７】
また、請求項４に記載の本発明の分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法は、請求項３のダイゼインが、豆類として大豆胚芽を用いて生成された前記免疫賦活機能を保有する生成物であり、組成の７０％以上がダイゼインからなるものとしてイソフラボンアグリコンに含有されていることを特徴とする。
【００１８】
また、請求項５に記載の本発明の分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法は、豆類として大豆粕を用いたことを特徴とする。
【００１９】
また、請求項６記載の本発明の卵は、請求項１から請求項５のいずれか１項によって製造された分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有していることを特徴とする。
【００２０】
また、請求項７に記載の本発明の分泌型ＩｇＡ抗体の製造方法は、請求項６によって製造された特異的な分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有している卵から分泌型ＩｇＡ抗体を取り出して得ることを特徴とする。
【００２１】
前記乳酸菌としては、エンテロコッカス・フエシウムおよびエンテロコツカス・フェカリスの少なくとも１種からなるエンテロコツカス属を用いるとよい。
【００２２】
このように構成されている本発明によれば、まず免疫賦活機能を保有する生成物を雌性の鳥類に経口投与し、その鳥類の腸管粘膜免疫系を賦活させる。
【００２３】
この免疫賦活機能を保有する生成物においては、原料である豆類が製麹処理されるとともに加水分解処理されてイソフラボンアグリコンを含有するものとなり、また、更にイソフラボンアグリコンを含有するとともに加水分解処理と同時に乳酸菌が多量に増殖されたものとなり、生成物内に生成されたイソフラボンアグリコンが容易に血管内に吸収され、マクロフアージに作用して免疫性を向上させたり、多量に増殖された乳酸菌により免疫賦活機能が発揮されることにより非常に優れた免疫賦活機能が発揮されることが期待できるのである。イソフラボンアグリコンの免疫賦活に対する効果に関してはＲ． Ｚｈａｎｇら（ Ｒ． Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．：“Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｅ Ｆｅｄ Ｈｉｇｈ Ｄｏｓｅｓ ｏｆ Ｓｏｙ Ｄａｉｄｚｅｉｎ”， Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ， ２９（１）， ２４−２８，（１９９７））は、ダイゼインには用量依存的に免疫賦活する機能があり、高用量で免疫賦活することを報告している。さらにＷ．Ｗａｎｇら（Ｗ． Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．：“Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓｏｙ Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ”， Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ， ２９（１）， ２９−３４， （１９９７））は、ダイゼインに比べてゲニステインは免疫賦活はせず、むしろ抑制的であるとの報告があった。これらはイソフラボンアグリコンのダイゼインの免疫賦活が期待できるという報告であったが、ダイゼインが腸管粘膜免疫系であるＩｇＡを誘導したり、その機能を利用する報告ではなかった。
【００２４】
そこで、このダイゼインを多く含有している免疫賦活機能を保有する生成物においては、免疫賦活機能を保有するために、鳥類を含む脊椎動物の消化器官から体内に吸収されると、免疫賦活機能を発揮することにより、当該脊椎動物の免疫性を向上させて、健康の維持、促進、病気の予防等を良好に行なわせることができる。特に、多量に含有されているイソフラボンアグリコンであるダイゼインと乳酸菌とが共に保有している免疫賦活機能により優れた免疫賦活機能が発揮されることとなる。
【００２５】
次いで、この鳥類を飼育中に意図的あるいは意図をせずに病原性微生物を感染させることで抗原認識性を示す特異的な分泌型ＩｇＡ抗体を作らせる。その後に、この鳥類から特異的な分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵を得ることができる。従って、この卵を食することで病原性微生物の感染を予防することが可能となる。
【００２６】
このことは哺乳類が母乳を介して抗体を子孫に伝えることとほぼ同じシステムである。更に説明すれば、雌性の鳥類が体内に形成した抗体を、その子孫である卵に内在させることにより伝えることになる。
【００２７】
このようなことから鳥類においても、例えば、産卵鶏に予め発明品を経口投与することにより腸管粘膜免疫系を賦活させて病原性微生物に対する感染防御機能を持たせるとともに、その親鶏に病原性微生物を感染させることにより生ませた卵は特異的抗体を持った、しかも、分泌型ＩｇＡ抗体の抗体量の高い卵白を得ることができる。これにより免疫賦活機能を保有する生成物を親鶏に投与することにより繁殖を目的にした卵から生れたヒナは感染に対して強い免疫力を持つことになる。とりわけ養鶏産業において対応策がない深刻な感染症はコクシジウム症とサルモネラ菌の汚染といわれているが、これらの病原性微生物は腸管を介して体内に侵入するので、免疫賦活機能を保有する生成物を投与し、腸管粘膜免疫系を賦活させることで感染予防できることを確認している。本発明は免疫賦活機能を保有する生成物を産卵鶏に投与し、腸管粘膜免疫系を賦活させ、さらにはコクシジウム症の原因となる原虫や毒素を産生するサルモネラ菌に対する特異的な抗体であるｓＩｇＡ抗体を有する卵を得ることである。この予めｓＩｇＡ抗体を摂取することにより、コクシジウム症やサルモネラ菌による食中毒症を確実に予防することが可能となる。
【００２８】
また、繁殖を目的にせず人間等の脊椎動物が食するなどを目的にして大量生産した卵の場合においては、経口投与で腸管粘膜免疫を高める効果をもたらすことができる。この場合、卵白をそのままかあるいは凍結乾燥（ＦＤ）して利用することが可能である。
【００２９】
さらには卵白からｓＩｇＡ抗体を、例えば抽出・精製して濃度を高めること等によって取り出すこともできる。これらの濃縮品であるｓＩｇＡ抗体は、人間以外に他の哺乳動物や魚類などの感染による疾患予防に利用することもできる。
【００３０】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施形態を図１について説明する。
【００３１】
図１は本発明により豆類に属する大豆胚芽若しくは大豆粕から免疫賦活機能を保有する生成物を製造する製造方法の実施形態を示している。
【００３２】
この図１に示す工程に沿って、本発明の免疫賦活機能を保有する生成物を製造する場合を説明する。
【００３３】
本実施形態においては、本発明者が特許第３０１４１４５号において既に提案している生成物であって、「原料となる大豆等の豆類に対して麹菌を用いて製麹処理を施すとともにその生成物に対して加水分解処理を施して、イソフラボンアグリコンを多量に含有する生成物やフイチン酸が完全に分解除去された生成物」において、原料である大豆胚芽のイソフラボン配糖体をイソフラボンアグリコンにさせた生成物を用いることができる。すなわち、大豆胚芽には大豆粕の２０倍以上のイソフラボン配糖体が含有されているので、本発明者等が提案している特開２０００−２８１６７３号公報に示す生成方法に従って、溶媒を用いて抽出濃縮したものを用いることもできる。例えば、イソフラボンアグリコンが２０重量％以上の濃縮物とした生成物などを利用することができる。
【００３４】
図１の工程に沿って説明すると、先ず大豆胚芽を蒸煮する。この蒸煮を施すことにより、麹菌の増殖が容易となる。また、この大豆胚芽の蒸煮は製造目的等に応じてバッチ式や連続式で行うと良い。
【００３５】
そして、この蒸煮が終了した大豆胚芽を一旦冷却して、大豆胚芽中の水分量を麹菌が増殖可能な量（例えば、３７重量％）とさせる。
【００３６】
このようにして水分量を整えられた大豆胚芽に対して、本発明方法が以下のようにして行なわれる。
【００３７】
即ち、蒸煮が終了した大豆胚芽を殺菌し、冷却した後、大豆胚芽と麹菌との配合割合を、例えば大豆胚芽を４００ｋｇに対して麹菌胞子を８×１０７個／ｇに調整した種麹（精白米にて調整）を２００ｇを混合した。更に、製麹のスタート時には３２℃に冷却した後、品温が４０℃になるまで通風しないで４０℃になった時点で通風しながら、温度上昇を抑えた。スタートから約１７時間後の最初の撹拌（盛工程）を行った。大豆胚芽の熱を冷まし、撹拌後品温が３５℃前後になるように通風しながら、温度をコントロールをした。次いで約８時間後に２回目の撹拌（仲工程）を行い、熱を冷ました。再び品温を通風で３５℃前後にコントロールし、更に約１６時間後に３回目の撹拌（仕舞工程）を前回同様に行った。その後は品温が約３８℃になるように通風しながら、温度コントロールし、スタートから４８時間後に製麹を終了させた。この時点で麹菌の持つ色々な酵素の活性が高まっているが、特にイソフラボン配糖体をイソフラボンアグリコンにする酵素であるβ−グルコシダーゼが充分に高められていることが必要である。製麹終了後、水分含量が５０％になるように撹拌しながら、水分調整を行い、品温が約５０℃になるように加温後、４８時間以上麹菌の酵素で大豆胚芽中のイソフラボン化合物の大部分がアグリコン体になるまで加水分解した。表１の通り本発明による処理により大豆胚芽のイソフラボン化合物はアグリコン体のダイゼインが主体となるように多量に得られた。
【００３８】
この製麹に用いる麹菌としては、古くからの日本独特の発酵食品やテンペに用いられている麹菌であり、食品として安全なアスペルギルス・ウサミ、アスペルギルス・カワチ、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・サイトイ、アスペルギルス・オリゼー、アスペルギルス・ニガー等アスペルギルス属およびリゾープス属等からなる麹菌を用いるとよい。表１の場合には、β‐グルコシダーゼの産生能の高いアスペルギルス・アワモリを用いた。
【００３９】
この発酵時間については、使用する麹菌の種類に応じて、少なくとも２４時間以上であり、大豆胚芽中のイソフラボン化合物の配糖体を十分に分解させるに十分な発酵時間とするとよい。
【００４０】
この加水分解については、使用する麹菌の種類に応じて、大豆胚芽中のイソフラボン化合物の配糖体を十分に低減させるには、麹菌の持つイソフラボン配糖体分解酵素であるβ−グルコシダーゼの働きを高めるために十分な加水分解時間ならびに加水分解温度にするとよい。
【００４１】
このようにすれば、発酵の初期において有機酸を生成して大豆胚芽中の雑菌の増殖を抑制し、２次汚染の心配がないとともに大豆胚芽を原料とした生成物を大量生産することができる。また、この方法によれば、加水量を多くし、懸濁液状態にしなくともイソフラボン化合物の配糖体を十分に低減させる処理を施すことができる。
【００４２】
続いて、本実施形態においては加水分解によって得られた生成物を、さらに特開２０００−２８１６７３号公報に示す方法に従って、（１）親水性有機溶媒を用いて溶媒抽出し、（２）抽出して得た親水性有機溶液に疎水性有機溶媒を用いて液液分離し、（３）液液分離して得た親水性有機溶液に疎水性有機溶媒を用いて液液分離し、そして（４）必要に応じて、液液分離して得た疎水性有機溶液を濃縮乾燥することにより、表１のようなイソフラボンアグリコンが３０重量％以上の濃縮物を得た。この場合のイソフラボンアグリコンとしては、ダイゼインが約７０重量％含有されている。
【００４３】
【表１】
【００４４】
このようにして製造された本実施形態の免疫賦活機能を保有する生成物は、製麹処理とその後の加水分解処理により大豆胚芽中の蛋白質および／または糖質が十分に分解されてイソフラボンアグリコンを多量に含む生成物とされている。このイソフラボンアグリコンのうち多量に含有されているダイゼインが免疫賦活機能を有していて、脊椎動物の腸壁から容易に血液内に吸収され、早期に免疫賦活機能を発揮するようになる。
【００４５】
次ぎに、豆類として大豆粕を用いた場合を説明する。
【００４６】
図１の工程に沿って説明すると、まず、大豆粕を蒸煮する。この蒸煮を施すことにより、蒸煮を行なわない場合に比較して麹菌の増殖が容易となる。また、この大豆粕の蒸煮は製造目的等に応じて蒸煮とその後の製麹処理とを別個に行なうバッチ式や、蒸煮とその後の製麹処理とを連続して行なうことのできる製麹装置によって連続式で行うと良い。
【００４７】
そして、この蒸煮が終了した大豆粕を一旦冷却して、大豆粕中の水分量を麹菌が増殖可能な量（例えば、約３６重量％）とさせる。
【００４８】
このようにして水分量を整えられた大豆粕に対して、本発明に免疫賦活機能を保有する生成物が以下のようにして製造される。
【００４９】
即ち、蒸煮が終了した大豆粕単体を冷却して麹菌が死滅しない温度以下の４０℃以下になった時に、麹菌からなる種麹を所定重量比だけ接種し、両者が均一となるまで混合する。
【００５０】
その後、接種した種麹の増殖作用により混合物の温度を上げるために混合物を製麹装置内で品温を一旦低下させて約３２℃程度にコントロールしながら放置すると大豆粕が麹菌によって発酵させられて、即ち製麹処理が進行して約３８℃程度まで昇温するとともに、増殖する麹菌の菌糸の成長に伴って生成物が締まって固まって来る。その後、製麹が進行して製麹装置内において固まって来る生成物を回転撹拌してほぐすとともに、通気を行って内部に均一に空気を供給し、品温を約３３〜３５℃程度まで下げるようにコントロールし、更に通気を継続しながら製麹処理を進行させる。
【００５１】
これにより麹菌が死滅することを確実に防止して、麹菌の増殖を十分に行わせることができる。その後、製麹装置内の生成物の固まり具合に応じて必要回数の回転撹絆を施すとともに、通気を継続する。
【００５２】
この製麹に用いる麹菌としては、古くからの日本独特の発酵食品やテンペに用いられている麹菌であり、食品として安全なアスペルギルス・ウサミ、アスペルギルス・カワチ、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・サイトイ、アスペルギルス・オリゼー、アスペルギルス・ニガー等のアスペルギルス属およびリゾープス属の麹菌を用いるとよい。
【００５３】
この発酵時間については、使用する麹菌の種類に応じて、少なくとも２４時間以上であり、麹菌が十分に増殖して大豆粕中の蛋白質および／または糖質を所定量分解させるに十分な発酵時間とするとよい。
【００５４】
本実施形態においては、製麹処理による生成物に対して蛋白質およびまたは糖質の加水分解を更に行なうものである。ここで糖質とは少糖類等の糖類や澱粉等を含むものである。製麹後の加水分解も基質をフレーク状態に保持したまま行なわれる。
【００５５】
すなわち、本実施形態においては、製麹終了後の生成物に、例えば５０重量％の水分量となるように加水してから３０〜５５℃に加温し、保温しながら所定時間保持して製麹処理による生成物内の蛋白質およびまたは糖質の加水分解が施される。
【００５６】
また、本実施形態においては前記加水分解を、乳酸菌の菌数が１０８ｃｆｕ／ｇ以上になるまでの必要な時間を保持する条件を満たすようにしても生成物が製造されている。本実施形態においては、この乳酸菌は製麹処理による生成物中に天然に含まれている乳酸菌である。このように豆類として大豆粕を用いた本実施形態においては、プロパイオテックスが利用されることとなり、乳酸菌と麹菌とは原料である豆類からの生成物よりなる同一の基質上に共存共栄して一緒に活発に増殖される。
【００５７】
本実施形態において、麹菌として味噌用麹菌のアスペルギルス・オリゼーを用いて本発明の製造方法に従って製造された発酵大豆粕から乳酸菌を分離し、表２に示す試験項目の試験を行なって乳酸菌の同定を行なった。
【００５８】
【表２】
【００５９】
表２の性状から分離した乳酸菌は、エンテロコツカス属 （Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）のエンテロコツカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍ）であると同定された。この乳酸菌は腸球菌といわれる消化管内常在菌であることを確認した。
【００６０】
本実施形態における前記発酵時間および加水分解時間ならびに加水分解温度を、豆類の種類、状態、特性、分量、麹菌の種類、状態、特性、分量、乳酸菌の種舞、状態、特性、分量、生成物である免疫賦活素材の種類、特性等に応じて調整するとよい。
【００６１】
このようにして製造された本実施形態の免疫賦活機能を保有する生成物は、生成物の基質内に非常に多数増殖されている乳酸菌、特にエンテロコッカス属中でもエンテロコツカス・フェシウムが優れた免疫賦活機能を保有しているために、その菌が製産する免疫賦活剤が人や家畜や魚類等の脊椎動物の消化器官から体内に吸収されると、免疫拭活機能を発揮することにより、当該生物の免疫性を向上させて、健康の維持、促進、病気の予防等を良好に行なわせることができる。
【００６２】
次に、図１の鎖線に示す部分により豆類として大豆粕を用いた場合の本発明の免疫賦活機能を保有する生成物の他の製造方法を説明する。
【００６３】
本実施形態においては、製麹処理によって生成された生成物に対して、加水分解工程において麹菌と乳酸菌とを共存共生させて増殖促進させるようにしたものである。
【００６４】
従って、製麹処理が終了するまでは前記実施形態と同一の工程で行なわれる。そして、加水分解の際に乳酸菌を製麹処理による生成物に添加するか、およびまたは原料となる豆類に含有されていた自然由来の乳酸菌をもって、乳酸菌を生成物中に入れる。
【００６５】
この乳酸菌としては、エンテロコッカス属特にエンテロコツカス・フエシウムとするとよい。
【００６６】
このようにして乳酸菌を製麹処理による生成物中に入れて加水分解工程を開始させると、加水分解工程中に製麹処理において増殖した麹菌と乳酸菌とが同一基質である前記生成物に共存共生し、乳酸菌は生成物から栄養の付与を受けて増殖を促進させられて、生成物に麹菌と乳酸菌とが一緒に培養された状態となる。特に、製麹処理により生成物中にはビタミンＢ類が生成され、乳酸菌にとっても吸収しやすい栄養価の高い成分が生成されるために、これらを栄養源として乳酸菌の増殖が促進される。更に、本実施形態の生成物内には、麹菌の酵素で種々の成分が加水分解されたものは、大豆粕を消化酵素で分解したものに相当し、消化物と未消化物とが分離している状態である。麹菌の酵素で加水分解された分解物（消化物）は人や家畜等の脊椎動物が摂取すると直ちに吸収されるが、未分解物は吸収されずに腸内で常在している有用な乳酸菌の栄養源となり、脊椎動物にとって有用な短鎖脂肪酸の生成を増加させることになる。
【００６７】
しかも、前記生成物は乳酸菌が活発に増殖できる培地であるから、増殖したその乳酸菌が家畜の腸内で前記生成物に含有される酵素未分解物を栄養源として常在できるものである。そして、最終的には麹菌と有用微生物とが同一基質である生成物に培養されているプロパイオテックスを利用した乳酸菌の増殖促進機能を保有する豆類を原料とした免疫賦活機能を保有する生成物が生成される。
【００６８】
豆類として大豆粕を用いた本実施例において、前記のようにして麹菌としてアスペルギルス・オリゼーを用いて本発明によって生成した免疫賦活機能を保有する生成物となる発酵大豆粕はイソフラボン化合物が良好に分解されたものとなる。即ち、未処理大豆粕においては、グリコシドであるダイジンおよびゲニスチンがアグリコンであるダイゼインおよびゲニスティンに比較して極めて多いのに、本発明によって生成された発酵大豆粕においては、グリコシドであるダイジンおよびゲニスチンが分解されて極めて少なくなり、分解によって生成されたアグリコンであるダイゼインおよびゲニスティンが極めて多くなる。
【００６９】
即ち、無処理の大豆粕に対して品温が３５℃になるように通風しながら、調節し、４８時間の製麹を施し、水分含量が約５０％となるように加水し、４５℃で２４時間以上に亘って麹菌の酵素で大豆の成分や麹菌の成分を加水分解を施してなる大豆粕中のイソフラボン化合物の含有量は表３の通りとなり、イソフラボン化合物のアグリコン体であるダイゼインやゲニスティンが多量に得られることが分かるが、この場合のイソフラボンアグリコン量は原料に大豆胚芽を用いた場合に比べて低い。前記の通り大豆粕を原料にして麹菌であるアスペルギルス・オリゼーにより発酵させた生成物については、乳酸菌の増殖促進作用があるので、乳酸菌による免疫賦活機能素材となる。
【００７０】
【表３】
【００７１】
このように本実施の形態によれば、大豆を原料とした生成物、すなわち、麹菌を使って効率的に製造した免疫賦活機能を有した素材を用いることができる。
【００７２】
従って、大豆胚芽を原料とし、麹菌としてアスペルギルス・アワモリを用いて発酵させて生成される免疫賦活機能を有しているダイゼインを組成分の７０％以上とするイソフラボンアグリコンと、大豆粕を原料とし、麹菌としてアスペルギルス・オリゼーを用いて発酵させた生成物を加水分解する際に増殖促進される乳酸菌によって、効果的な免疫賦活機能を発揮する生成物を得ることができる。
【００７３】
１） 次に、本発明の分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法について説明する。
【００７４】
まず、前記の各実施の形態のようにして製造された免疫賦活機能を保有する生成物を雌性の鳥類にとしての産卵鶏に経口投与し、その産卵鶏の腸管粘膜免疫系を賦活させる。
【００７５】
この免疫賦活機能を保有する生成物においては、１）豆類としてイソフラボンアグリコンが多量に含有されている大豆胚芽を用いた場合には、製麹処理と加水分解処理を施すことにより、免疫賦活機能を有しているダイゼインを組成分の７０％以上とするイソフラボンアグリコンにより免疫賦活機能が発揮され、２）豆類として大豆粕を用いた場合には、製麹処理と加水分解処理を施すとともに乳酸菌を加水分解の際に増殖促進させることにより、乳酸菌により免疫賦活機能が発揮されることとなる。
【００７６】
次に、この産卵鶏を所定期間飼育した後に、意図的あるいは意図をせずに病原性微生物を感染させることにより抗原認識性を示す特異的な分泌型ＩｇＡ抗体を作らせた。本実施形態においては、病原性微生物としてのコクシジウム症の原因となる原虫（例えば、アイメリア テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ））のオーシストや毒素を産生するサルモネラ菌（例えば、サルモネラ ティフィムリアム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）やサルモネラ エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ））をホルマリン等で不活性化させたものを経口的に投与させて、これらに対する特異的な抗体を作らせることができた。
【００７７】
感染後所定期間経過した後に、この産卵鶏が産卵し卵の卵白中の成分を検査したところ、特異的なｓＩｇＡ抗体が卵白中に含有されていた。
【００７８】
２） ヒナの健康度
前記のように免疫賦活機能を保有する生成物を親鶏に投与することにより繁殖を目的にした卵から生れたヒナは感染に対して強い免疫力を持っていることが判明した。
【００７９】
これにより、とりわけ養鶏産業において対応策がない深刻な感染症はコクシジウム症とサルモネラ菌の汚染に対しても、本発明の免疫賦活機能を保有する生成物を投与し、親鳥である産卵鶏の腸管粘膜免疫系を賦活させることで感染を予防させ、更にコクシジウム症の原因となる原虫や毒素を産生するサルモネラ菌に対する特異的抗体であるｓＩｇＡ抗体を有する卵を得ることでができた。
【００８０】
３） 抗体量の高い卵白を摂取する効能
前記のようにして産卵された卵、特に卵白部分をヒナや産卵鶏に給餌することにより、予めｓＩｇＡ抗体を摂取することによってコクシジウム症やサルモネラ菌による食中毒症を確実に予防させて、病原性微生物の感染を予防することができることがわかった。
【００８１】
４） ｓＩｇＡ抗体の製造方法
前記のようにして得られた卵白から公知の抽出・生成方法により、ｓＩｇＡ抗体を抽出・精製して濃度を高めることによってｓＩｇＡ抗体を製造した。これによりｓＩｇＡ抗体を安価に大量生産することができた。
【００８２】
このようにして製造されたｓＩｇＡ抗体を繁殖を目的にしない人間等の脊椎動物に経口投与すると、腸管粘膜免疫を高める効果をもたらすことができた。
【００８３】
なお、この場合、卵白をそのままかあるいは凍結乾燥（ＦＤ）して利用することもできる。
【００８４】
なお、本発明は前記実施の形態に限定されるものではなく、必要に応じて変更することができる。
【００８５】
【発明の効果】
本発明の分泌型ＩｇＡ抗体を卵白に含有させた卵の製造方法およびその卵並びに分泌型ＩｇＡ抗体の製造方法はこのように構成され作用するものであるから、優れた効力を発揮する分泌型ＩｇＡ抗体の大量利用を可能とすることができる。
【００８６】
具体的には、分泌型ＩｇＡ抗体の抗体量の高い卵白を有する卵を安価に、かつ、用意に得ることができるとともに、ワクチン等としても利用可能な分泌型ＩｇＡ抗体を単独で生成することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明により豆類の１種である大豆胚芽から免疫賦活機能を保有する生成物を製造する製造方法の１実施形態を示す工程図[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for producing an egg containing a secretory IgA antibody in egg white and a method for producing the egg and the secretory IgA antibody, and particularly to vertebrates such as humans, animals, birds and fish (hereinafter referred to as “vertebrates”). A method for producing an egg containing an egg white containing a secretory IgA antibody obtained by feeding a female bird with a product having an immunostimulatory function for improving an immune function, and the egg and secretory IgA antibody. It relates to a manufacturing method.
[0002]
In the present invention, legumes refer to legume cereals such as soybeans, lees thereof, processed products, and the like.
[0003]
[Prior Art and Problems to be Solved by the Invention]
In general, it is said that modern people have become vulnerable to bacterial infections such as pathogenic Escherichia coli and Salmonella, and also to viral infections such as influenza virus. Examples of pathogenic microorganisms that cause such infectious diseases include viruses (HIV (human immunodeficiency virus), influenza virus, rotavirus, etc.), bacteria (pneumococci, pathogenic Escherichia coli, salmonella, cholera, pylori). , Gonorrhoeae, etc.) and intestinal parasites (protozoa, helminths, etc.).
[0004]
Serious infectious diseases in the poultry industry that have no countermeasures are said to be coccidiosis and Salmonella contamination.
[0005]
In WO 00/45830, the present inventors have disclosed that a product obtained as a product containing isoflavone aglycone by already fermenting beans with koji mold and then hydrolyzing and enzymatically decomposing the same, We propose an immunostimulatory material that has the function of activating the intestinal mucosal immune system by using a culture obtained by culturing lactic acid bacteria and culturing lactic acid bacteria while containing isoflavone aglycone while performing vertebrates such as mammals and birds. It has been confirmed that oral administration of immunostimulatory material activates the intestinal mucosal immune system. Activation of the immune system using this immunostimulatory material is based on the fact that when the immunostimulatory material is orally administered to a vertebrate, the secretion of IgA, an antibody, is enhanced in the intestinal tract and the pathogenicity is enhanced by a very unique system. This is achieved by barriers to microbial infection.
[0006]
Then, the present inventor paid attention to the fact that the function of protecting the infection by the immunostimulatory material was transferred from mother's milk to infants. That is, by orally administering the immunostimulatory material to the mother before pregnancy, a large amount of IgA is produced in the intestinal tract tissue of the mother who gave birth, and the secretory component (SC) in which the IgA is present in the mammary gland forms the J chain. It becomes possible to secrete a large amount of secretory IgA (sIgA) bound to the bound multimeric IgA. The advantage of secreting a large amount of sIgA in breast milk is that sIgA has a protective function against infection. The protective function of this infection is to prevent the adhesion and colonization of pathogenic microorganisms to the mucosal epithelium, neutralize toxins derived from pathogenic bacteria, neutralize viruses, antigen aggregation activity, excretion of pathogenic microorganisms by binding to mucin, It is said that it has an antibacterial action in cooperation with a substance in secretion fluid (eg, lactoferrin) (Shinichi Nishikawa, Honjosuke (ed.) (1999): Immunology and Blood Science, Iwanami Shoten, p. 169). That is, infants can benefit from the sIgA infection defense function by ingesting breast milk. Furthermore, by activating the mother's intestinal mucosal immune system, not only is the amount of sIgA secreted in breast milk increased, but when the mother is infected with a pathogenic microorganism, the antibody (specific antibody) exhibits specific antigen recognition. Since sIgA is secreted into breast milk, infants can expect to obtain specific antibodies through breast milk. Thus, since the specific antibody against the pathogenic microorganism has been effectively obtained, infection can be avoided.
[0007]
Utilization of sIgA having a function of preventing infection against such pathogenic microorganisms has been desired by modern people. Specifically, there has been a demand for prevention and prevention of infection with pathogenic microorganisms in the intestinal tract, nasal cavity, throat, bronchi, tonsils, genitourinary tract, etc. using sIgA.
[0008]
However, obtaining sIgA using mammals has a problem in terms of efficiency because it is very difficult to obtain sIgA in large quantities because the time when breast milk can be obtained is limited after childbirth.
[0009]
The present invention has been made in view of these points, and a method for producing an egg in which a secretory IgA antibody is contained in egg white to enable large-scale use of a secretory IgA antibody exhibiting excellent efficacy, and a method thereof. An object of the present invention is to provide a method for producing eggs and secretory IgA antibodies.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have conducted intensive studies, and if birds having the same infection protective function, particularly laying hens, are used, large-scale breeding is easy and laying hens can always lay eggs, so they are secreted into egg white. The present inventors have found that sIgA contained in a high concentration can be used easily and in large amounts, and completed the present invention.
[0011]
To further explain the reason why the present invention has been completed, it is known that three kinds of antibodies of IgG, IgM and IgA exist in the blood of birds as in mammals. These three types of antibodies have a property that egg white contains IgM and IgA and egg yolk contains only IgG in bird eggs. Among them, IgG contained in egg yolk functions as an antibody (specific antibody) showing antigen recognizing property to pathogenic microorganisms such as blood already contained in the body of birds and kills them. It has. In addition, IgA in egg white is secreted as sIgA, for example, into the mucous membrane of the intestinal tract of birds and, on the inner wall of the intestine, an antibody that shows antigen recognition for a pathogenic microorganism that has not yet entered the body of birds ( It acts as a specific antibody) to prevent pathogenic bacteria from invading the body through the intestinal wall, but IgM in egg white is almost completely distributed in blood vessels after hatching. It is said that the spread to external organizations is small.
[0012]
On the other hand, Hatta et al., In Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 4-103538, focused on IgG antibody in egg yolk, obtained a specific antibody from egg yolk produced by laying hens, It is proposed to obtain a target antibody containing composition. The IgG in the yolk is an antibody equivalent to mammalian IgG, and as described above, diffuses into blood vessels and outside blood vessels, is widely distributed in tissues, and exerts immunity in the body.
[0013]
However, while mentioning IgG in egg yolk, Hatta et al. Do not mention IgA contained in egg white or the immunostimulatory material that increases the secretion amount of IgA at all. The IgG in the yolk is secreted together with mucus from the basement membrane surface of the epithelial cells such as the respiratory tract, intestinal tract and salivary gland to the luminal surface, like sIgA in the egg white which is the object of the present invention, and invades from outside the body. It does not act as a barrier in the mucosal layer before the invading pathogenic microorganisms enter the body. That is, sIgA in egg white is secreted and translocated to the mucous layer such as the intestinal tract of chick, and exerts intestinal immune function to protect the chick against initial infection against pathogenic microorganisms that try to enter from outside the body, as compared with IgG in egg yolk. Plays an important role. The present inventor pays attention to this, and has completed the present invention.
[0014]
Here, the method for producing an egg containing the secretory IgA antibody of the present invention in egg white according to claim 1 comprises inoculating beans with koji mold to make koji, and adding water to a product obtained by the koji making treatment. Feeds a female bird with a product having an immunostimulatory function produced by hydrolyzing the protein and / or carbohydrate in the product, and activates the intestinal mucosal immune system of the bird in advance, and thereafter the bird During the breeding, a secretory IgA antibody having an antigen recognizing property against a pathogenic microorganism is produced in the body, and then eggs are laid from the birds to obtain an egg containing the secretory IgA antibody in egg white. I do.
[0015]
Further, the method for producing an egg in which the secretory IgA antibody of the present invention is contained in egg white according to claim 2 comprises injecting koji fungi into beans and making koji, and adding water to a product obtained by the koji making treatment. Along with hydrolyzing proteins and / or carbohydrates in the product, lactic acid bacteria contained in the product by the koji making process and / or lactic acid bacteria added to the product by the koji making process are subjected to the hydrolysis. A product having an immunostimulatory function produced by being promoted during growth is fed to a female bird, and the intestinal mucosal immune system of the bird is activated in advance, and then the bird is raised against an antigen against pathogenic microorganisms during breeding. A secretory IgA antibody having a recognizing property is produced in the body, and then eggs are laid from the birds to obtain an egg containing the secretory IgA antibody in egg white.
[0016]
Further, in the method for producing an egg in which the secretory IgA antibody of the present invention is contained in egg white according to claim 3, the product having an immunostimulatory function according to claim 1 or 2 has an immunostimulatory function. It is characterized by containing daidzein which is an isoflavone aglycone.
[0017]
Further, in the method for producing an egg containing the secretory IgA antibody of the present invention in egg white according to claim 4, the daidzein according to claim 3 has the immunostimulatory function generated using soybean germ as beans. Characterized in that 70% or more of the composition is contained in isoflavone aglycone as being composed of daidzein.
[0018]
The method for producing an egg containing the secretory IgA antibody of the present invention in egg white according to claim 5 is characterized by using soybean meal as beans.
[0019]
The egg of the present invention described in claim 6 is characterized in that the egg white contains the secretory IgA antibody produced according to any one of claims 1 to 5.
[0020]
In the method for producing a secretory IgA antibody of the present invention according to claim 7, the secretory IgA antibody is extracted from an egg containing the specific secretory IgA antibody produced in claim 6 in egg white. It is characterized by obtaining.
[0021]
As the lactic acid bacterium, a genus Enterococcus consisting of at least one of Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis may be used.
[0022]
According to the present invention configured as described above, first, a product having an immunostimulatory function is orally administered to a female bird to activate the intestinal mucosal immune system of the bird.
[0023]
In the product having the immunostimulatory function, beans as a raw material are subjected to koji-making treatment and hydrolysis treatment to contain isoflavone aglycone, and further contain isoflavone aglycone and simultaneously with the hydrolysis treatment. Lactic acid bacteria are grown in large quantities, and the isoflavone aglycone produced in the product is easily absorbed into blood vessels and acts on macrophages to improve immunity, or immunostimulatory function by large quantities of lactic acid bacteria grown in Thus, it can be expected that a very excellent immunostimulatory function will be exerted by the expression. Regarding the effect of isoflavone aglycone on immunostimulation, see Zhang et al. (R. Zhang et al .: "Enhancement of Immune Function in Mice Fed High Dose of Soy Daidzein", Nutrition and Cancer, pp. 29-29, 1991; Has a function of stimulating immunostimulation, and reports that it can immunize at high doses. Furthermore, W. Wang et al. (W. Wang et al .: "Individual and Combinatory Effects of Soy Isoflavones on the In Vitro Potionation, 29, D.C. It has been reported that genistein does not immunostimulate, but rather suppresses. These reports reported that immunostimulation of isoflavone aglycone daidzein could be expected, but did not report that daidzein induces IgA, which is an intestinal mucosal immune system, or utilizes its function.
[0024]
Therefore, in a product having an immunostimulatory function that contains a large amount of daidzein, the immunostimulatory function is maintained when absorbed into the body from the digestive organs of vertebrates including birds in order to maintain the immunostimulatory function. By exerting it, immunity of the vertebrate can be improved, and health maintenance and promotion, disease prevention, and the like can be favorably performed. In particular, an excellent immunostimulatory function is exhibited by an immunostimulatory function possessed by both daidzein, which is an isoflavone aglycone contained in large amounts, and lactic acid bacteria.
[0025]
Next, the birds are intentionally or unintentionally infected with pathogenic microorganisms during breeding to produce specific secretory IgA antibodies showing antigen recognition. Thereafter, eggs containing specific secretory IgA antibodies in egg white can be obtained from the birds. Therefore, by eating this egg, it becomes possible to prevent infection by pathogenic microorganisms.
[0026]
This is similar to the way mammals transmit antibodies to their offspring via breast milk. More specifically, the antibodies formed in the body by female birds are transmitted by being endogenous to their offspring eggs.
[0027]
For this reason, in birds, for example, the oral administration of the present invention to laying hens in advance activates the intestinal mucosal immune system to provide a protective function against pathogenic microorganisms, and also provides the parent chicken with pathogenic microorganisms. Eggs bred by infecting E. coli have specific antibodies, and can obtain egg white having a high amount of secretory IgA antibodies. As a result, chicks born from eggs intended for breeding by administering a product having an immunostimulatory function to a parent chicken will have a strong immunity against infection. Serious infectious diseases, especially in the poultry farming industry, are said to be coccidiosis and contamination by Salmonella. It has been confirmed that infection can be prevented by administering and activating the intestinal mucosal immune system. The present invention administers a product having an immunostimulatory function to a laying hen, activates the intestinal mucosal immune system, and furthermore, a sIgA antibody which is a specific antibody against Salmonella which produces protozoa and toxins that cause coccidiosis. Is to obtain an egg having By ingesting the sIgA antibody in advance, it is possible to reliably prevent coccidiosis and food poisoning caused by Salmonella.
[0028]
In addition, in the case of eggs that are mass-produced for the purpose of feeding by vertebrates such as humans without the purpose of reproduction, oral administration can have an effect of enhancing intestinal mucosal immunity. In this case, the egg white can be used as it is or by freeze-drying (FD).
[0029]
Furthermore, the sIgA antibody can be extracted from the egg white by, for example, increasing the concentration by extraction and purification. These concentrated sIgA antibodies can also be used to prevent diseases caused by infections of other mammals and fish besides humans.
[0030]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Hereinafter, an embodiment of the present invention will be described with reference to FIG.
[0031]
FIG. 1 shows an embodiment of a production method for producing a product having an immunostimulatory function from soybean germ or soybean meal belonging to legumes according to the present invention.
[0032]
A case of producing the product having an immunostimulatory function of the present invention will be described along the steps shown in FIG.
[0033]
In the present embodiment, a product already proposed by the present inventor in Japanese Patent No. 3014145, which is obtained by subjecting beans such as soybeans as a raw material to a koji making process using a koji mold and the product Is hydrolyzed to a product containing a large amount of isoflavone aglycone or a product in which phytic acid is completely decomposed and removed. The product can be used. That is, since soybean germ contains isoflavone glycosides at least 20 times that of soybean meal, a solvent is used in accordance with the production method proposed by the present inventors in JP-A-2000-281873. Extracted and concentrated ones can also be used. For example, it is possible to use a product in which isoflavone aglycone is a concentrate of 20% by weight or more.
[0034]
Describing along the process of FIG. 1, first, soybean germ is steamed. By performing this steaming, the growth of koji mold becomes easy. Further, the soybean germ may be steamed in a batch system or a continuous system depending on the purpose of production.
[0035]
Then, the steamed soybean germ is once cooled so that the water content in the soybean germ is an amount (for example, 37% by weight) at which the koji mold can grow.
[0036]
The method of the present invention is performed on the soybean germ whose water content has been adjusted as described above, as follows.
[0037]
That is, after the steamed soybean germ is sterilized and cooled, the mixture ratio of the soybean germ and the koji mold, for example, 400 kg of the soybean germ, 8 × 10 7 200 g of seed koji (adjusted with polished rice) adjusted to pieces / g was mixed. Further, at the start of koji making, after cooling to 32 ° C., the temperature rise was suppressed while ventilating at 40 ° C. without ventilating until the product temperature reached 40 ° C. About 17 hours after the start, the first stirring (filling step) was performed. The heat of the soybean germ was cooled, and after stirring, the temperature was controlled while ventilating so that the product temperature was around 35 ° C. Then, about 8 hours later, the second stirring (intermediate process) was performed to cool down the heat. The product temperature was again controlled to about 35 ° C. by ventilation, and a third stirring (finish process) was performed in the same manner as the previous time after about 16 hours. Thereafter, the temperature was controlled while ventilating to a product temperature of about 38 ° C., and the koji making was terminated 48 hours after the start. At this time, the activities of various enzymes possessed by Aspergillus are increasing. In particular, it is necessary that β-glucosidase, which is an enzyme that converts isoflavone glycosides into isoflavone aglycone, is sufficiently increased. After completion of the koji-making, the water content is adjusted with stirring so that the water content becomes 50%, and the product is heated to a temperature of about 50 ° C., and the enzyme of the koji mold isoflavone compound in the soybean germ for 48 hours or more Were hydrolyzed until the aglycone form was obtained. As shown in Table 1, the isoflavone compound of the soybean germ was obtained in a large amount by the treatment according to the present invention so that the aglycone daidzein was mainly used.
[0038]
The koji mold used in the koji-making is a koji mold used for fermented foods and tempe peculiar to Japan since ancient times. Aspergillus spp. And Aspergillus spp. Such as Aspergillus niger and Rhizopus spp. In the case of Table 1, Aspergillus awamori having a high ability to produce β-glucosidase was used.
[0039]
The fermentation time is at least 24 hours or more depending on the type of koji mold used, and may be a fermentation time sufficient to sufficiently decompose the glycoside of the isoflavone compound in the soybean germ.
[0040]
Regarding this hydrolysis, in order to sufficiently reduce the glycosides of the isoflavone compound in the soybean germ, depending on the type of koji mold used, the action of β-glucosidase, an isoflavone glycoside-degrading enzyme possessed by koji mold, is considered. A sufficient hydrolysis time and hydrolysis temperature may be used to increase the temperature.
[0041]
In this way, an organic acid is generated in the early stage of fermentation to suppress the growth of various bacteria in the soybean germ, and there is no fear of secondary contamination, and the product using the soybean germ as a raw material can be mass-produced. . Further, according to this method, it is possible to perform a treatment for sufficiently reducing the glycoside of the isoflavone compound without increasing the amount of water and forming the suspension.
[0042]
Subsequently, in the present embodiment, the product obtained by hydrolysis is further subjected to (1) solvent extraction using a hydrophilic organic solvent and (2) extraction according to the method described in JP-A-2000-281673. (3) Liquid-liquid separation of the hydrophilic organic solution obtained by using a hydrophobic organic solvent, liquid-liquid separation of the hydrophilic organic solution obtained by liquid-liquid separation using a hydrophobic organic solvent, and (4) ) If necessary, the hydrophobic organic solution obtained by liquid-liquid separation was concentrated and dried to obtain a concentrate containing 30% by weight or more of isoflavone aglycone as shown in Table 1. In this case, the isoflavone aglycone contains about 70% by weight of daidzein.
[0043]
[Table 1]
[0044]
The thus-produced product having an immunostimulatory function of the present embodiment is characterized in that the protein and / or carbohydrate in the soybean germ is sufficiently decomposed by the koji-making treatment and the subsequent hydrolysis treatment to produce isoflavone aglycone. It is considered to be a product containing a large amount. Daidzein, which is contained in a large amount in this isoflavone aglycone, has an immunostimulatory function, is easily absorbed into the blood from the intestinal wall of vertebrates, and exerts the immunostimulatory function early.
[0045]
Next, the case where soybean meal is used as beans is described.
[0046]
Describing along the process of FIG. 1, first, soybean meal is steamed. By performing the steaming, the growth of the koji mold becomes easier as compared with the case where the steaming is not performed. In addition, the steaming of this soybean meal is performed by a batch type in which steaming and subsequent koji making are performed separately according to the production purpose, or by a koji making apparatus capable of continuously performing steaming and subsequent koji making. It is better to use a continuous method.
[0047]
Then, the steamed soybean meal is once cooled, and the water content in the soybean meal is adjusted to an amount at which the koji mold can grow (for example, about 36% by weight).
[0048]
With respect to the soybean meal whose water content has been adjusted in this way, a product having an immunostimulatory function in the present invention is produced as follows.
[0049]
That is, when the steamed soybean meal alone is cooled to 40 ° C. or lower, which is below the temperature at which the koji mold does not die, seed koji consisting of the koji mold is inoculated in a predetermined weight ratio and mixed until both are uniform.
[0050]
Then, in order to increase the temperature of the mixture by the inoculation of the seed koji, the temperature of the mixture is temporarily lowered in the koji making apparatus, and the mixture is allowed to stand at about 32 ° C., soybean cake is fermented by the koji mold. In other words, as the koji-making process proceeds and the temperature rises to about 38 ° C., the product tightens and solidifies as the hyphae of the growing koji mold grow. Thereafter, the koji-making proceeds and the product solidified in the koji-making apparatus is rotated and agitated and loosened, and air is also supplied to supply air uniformly therein to lower the product temperature to about 33 to 35 ° C. Control, and the koji-making process is advanced while continuing ventilation.
[0051]
As a result, it is possible to reliably prevent the koji mold from being killed, and to allow the koji mold to grow sufficiently. Thereafter, rotation and stirring are performed a required number of times according to the degree of agglomeration of the product in the koji-making apparatus, and ventilation is continued.
[0052]
The koji mold used in the koji-making is a koji mold used for fermented foods and tempe peculiar to Japan since ancient times. Aspergillus spp. And Rhizopus spp. Koji molds such as Oryzae and Aspergillus niger may be used.
[0053]
The fermentation time is at least 24 hours or more, depending on the type of koji mold used. The fermentation time is sufficient for the koji mold to grow sufficiently to decompose a predetermined amount of protein and / or sugar in soybean meal. Good to do.
[0054]
In the present embodiment, a protein and / or a carbohydrate is further hydrolyzed on a product obtained by the koji making process. Here, the saccharide includes saccharides such as oligosaccharides, starch and the like. The hydrolysis after the koji making is also performed while the substrate is kept in a flake state.
[0055]
That is, in the present embodiment, the product after completion of koji making is, for example, added with water so as to have a water content of, for example, 50% by weight, and then heated to 30 to 55 ° C. Hydrolysis of protein and / or carbohydrate in the product by the koji treatment is performed.
[0056]
In the present embodiment, the hydrolysis is carried out when the number of lactic acid bacteria is 10 8 The product is manufactured even when the condition for maintaining the necessary time until it becomes cfu / g or more is satisfied. In the present embodiment, this lactic acid bacterium is a lactic acid bacterium naturally contained in the product of the koji-making process. Thus, in the present embodiment using soybean meal as beans, propyotex will be used, and lactic acid bacteria and koji mold coexist and co-prosper on the same substrate consisting of products from beans as raw materials. Actively propagated together.
[0057]
In the present embodiment, lactic acid bacteria were separated from the fermented soybean meal produced according to the production method of the present invention using Aspergillus oryzae, a koji mold for miso, as the koji mold, and the test items shown in Table 2 were tested to identify the lactic acid bacteria. Done.
[0058]
[Table 2]
[0059]
The lactic acid bacteria isolated from the properties shown in Table 2 were identified as Enterococcus faecium of the genus Enterococcus. This lactic acid bacterium was confirmed to be a resident bacterium in the digestive tract called enterococci.
[0060]
The fermentation time and hydrolysis time and hydrolysis temperature in the present embodiment, the type of beans, state, characteristics, amount, type of koji mold, state, characteristics, amount, species of lactic acid bacteria, state, characteristics, amount, product It may be adjusted according to the type, characteristics, etc. of the immunostimulating material.
[0061]
The thus-produced product having an immunostimulatory function of the present embodiment is a lactic acid bacterium that has been grown in a very large number in the substrate of the product, especially Enterococcus faecium even among Enterococcus sp. Due to its function, when the immunostimulant produced by the bacterium is absorbed into the body from the digestive organs of vertebrates such as humans, livestock, and fish, it exerts an immune wiping function, and By improving the immunity of an organism, it is possible to favorably maintain and promote health, prevent disease, and the like.
[0062]
Next, another method for producing a product having an immunostimulatory function of the present invention when soybean meal is used as legumes will be described with reference to a portion shown by a chain line in FIG.
[0063]
In the present embodiment, koji mold and lactic acid bacteria coexist and coexist in the hydrolysis step to promote growth of the product produced by the koji making process.
[0064]
Therefore, until the koji making process is completed, the same steps as in the above embodiment are performed. Then, the lactic acid bacteria are added to the product of the koji-making process during the hydrolysis, or the lactic acid bacteria are added to the product with naturally-occurring lactic acid bacteria contained in the beans used as the raw material.
[0065]
As the lactic acid bacterium, a genus Enterococcus, in particular, Enterococcus faecium may be used.
[0066]
In this way, when the lactic acid bacteria are put into the product of the koji making process and the hydrolysis step is started, the koji mold and the lactic acid bacteria grown in the koji making process during the hydrolysis process coexist with the product having the same substrate. Then, the lactic acid bacterium is provided with nutrients from the product to promote its growth, and the product is in a state where the koji mold and the lactic acid bacterium are cultured together. In particular, vitamin B is produced in the product by the koji making process, and components having a high nutritional value that are easily absorbed by the lactic acid bacteria are produced. Therefore, the growth of the lactic acid bacteria is promoted by using these as a nutrient source. Furthermore, in the product of the present embodiment, those obtained by hydrolyzing various components with the enzymes of Aspergillus are equivalent to those obtained by decomposing soybean meal with digestive enzymes, and digested matter and undigested matter are separated. It is in the state that it is. Degraded products (digested products) hydrolyzed by the enzymes of Aspergillus are absorbed immediately by vertebrates such as humans and livestock, but undegraded products are not absorbed but useful lactic acid bacteria that are resident in the intestine. And increase the production of short-chain fatty acids that are useful to vertebrates.
[0067]
Moreover, since the product is a medium in which lactic acid bacteria can proliferate actively, the grown lactic acid bacteria can be resident in the intestine of livestock using the undegraded enzyme contained in the product as a nutrient source. Finally, a product having an immunostimulatory function from beans that have a growth promoting function of lactic acid bacteria using propionite, which is cultured on a product in which the koji mold and the useful microorganism are the same substrate, is used. Is generated.
[0068]
In this example using soybean meal as beans, the fermented soybean meal which is a product having an immunostimulatory function produced according to the present invention using Aspergillus oryzae as a koji mold as described above, isoflavone compounds are decomposed well. It was done. That is, in untreated soybean meal, the glycoside daidzin and genistin are extremely large compared to the aglycone daidzein and genistein, but in the fermented soybean meal produced according to the present invention, the glycoside daidzin and genistin are present. It is degraded to a very low level and the aglycones produced by the degradation, daidzein and genistein, are extremely high.
[0069]
That is, the untreated soybean meal is adjusted while ventilating so that the product temperature becomes 35 ° C., koji making is performed for 48 hours, and water is added so that the water content becomes about 50%. The content of isoflavone compounds in soybean meal obtained by hydrolyzing the components of soybeans and the components of koji mold with the enzyme of koji mold for 24 hours or more is as shown in Table 3, and daidzein or genistein, which are aglycones of isoflavone compounds. Is obtained in a large amount, but the amount of isoflavone aglycone in this case is lower than when soybean germ is used as a raw material. As described above, a product obtained by fermenting soybean meal with Aspergillus oryzae, which is a koji mold, has an effect of promoting the growth of lactic acid bacteria.
[0070]
[Table 3]
[0071]
As described above, according to the present embodiment, it is possible to use a product using soybean as a raw material, that is, a material having an immunostimulating function that is efficiently produced using koji mold.
[0072]
Therefore, using soybean germ as a raw material, an isoflavone aglycone containing 70% or more of daidzein having an immunostimulatory function produced by fermentation using Aspergillus awamori as a koji mold, and soybean meal as a raw material, A product exhibiting an effective immunostimulatory function can be obtained by a lactic acid bacterium which is promoted to grow when a product fermented using Aspergillus oryzae as a koji mold is hydrolyzed.
[0073]
1) Next, a method for producing an egg containing the secretory IgA antibody of the present invention in egg white will be described.
[0074]
First, the product having an immunostimulatory function produced as in each of the above embodiments is orally administered to a laying hen as a female bird to activate the intestinal mucosal immune system of the laying hen.
[0075]
In the product having this immunostimulatory function, 1) When soybean germ containing a large amount of isoflavone aglycone is used as beans, the immunostimulatory function is obtained by performing koji making and hydrolysis treatments. The isoflavone aglycone containing 70% or more of daidzein in the composition has an immunostimulatory function. 2) When soybean meal is used as beans, it is subjected to a koji-making treatment and a hydrolysis treatment while hydrolyzing lactic acid bacteria. By promoting growth during decomposition, the lactic acid bacteria exert an immunostimulatory function.
[0076]
Next, after the laying hens were bred for a predetermined period of time, specific secretory IgA antibodies showing antigen recognition were produced by infecting pathogenic microorganisms intentionally or unintentionally. In the present embodiment, Salmonella bacteria (eg, Salmonella typhimurium) and salmonella typhimurium that produce toxins and toxins of protozoa (eg, Eimeria tenella) that cause coccidiosis as pathogenic microorganisms. Rititis (Salmonella enteritidis) inactivated with formalin or the like was orally administered to produce specific antibodies against these.
[0077]
After a lapse of a predetermined period of time after the infection, the laying hen laid eggs, and the components in the egg white of the eggs were examined. As a result, the specific sIgA antibody was contained in the egg white.
[0078]
2) Chick health
It was found that chicks born from eggs intended for reproduction by administering a product having an immunostimulatory function to a parent chicken as described above have strong immunity against infection.
[0079]
Thus, especially in the poultry industry, where serious countermeasures are not taken against coccidiosis and contamination with Salmonella, the intestinal mucosa of the parent laying hens can be administered by administering the product having the immunostimulatory function of the present invention, even for coccidiosis and Salmonella contamination. By activating the immune system, infection was prevented, and eggs having the sIgA antibody, which is a specific antibody against Salmonella, which produces protozoa and toxins that cause coccidiosis, could be obtained.
[0080]
3) Efficacy of ingesting egg white with high antibody content
Eggs laid as described above, particularly egg white parts, are fed to chicks and laying hens, and by ingesting sIgA antibody in advance, coccidiosis and food poisoning caused by Salmonella are reliably prevented, and pathogenic microorganisms It turns out that infection can be prevented.
[0081]
4) Method for producing sIgA antibody
The sIgA antibody was produced by extracting and purifying the sIgA antibody from the egg white obtained as described above by a known extraction and production method to increase the concentration. This enabled mass production of the sIgA antibody at low cost.
[0082]
When the thus produced sIgA antibody was orally administered to a vertebrate such as a human not aiming to reproduce, it was possible to bring about an effect of enhancing intestinal mucosal immunity.
[0083]
In this case, the egg white can be used as it is or by freeze-drying (FD).
[0084]
Note that the present invention is not limited to the above-described embodiment, and can be changed as needed.
[0085]
【The invention's effect】
Since the method for producing an egg containing the secretory IgA antibody of the present invention in egg white and the method for producing the egg and the secretory IgA antibody are configured and operated as described above, the secretory IgA exhibiting excellent efficacy is provided. Large amounts of antibodies can be used.
[0086]
Specifically, an egg having egg white with a high amount of secretory IgA antibody can be obtained inexpensively and easily, and it is possible to produce a secretory IgA antibody that can be used alone as a vaccine or the like alone. it can.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a process chart showing one embodiment of a production method for producing a product having an immunostimulatory function from soybean germ, a kind of legumes, according to the present invention.
