JP2003526777A - ＡＧＵＳ・ＰａｐスミアにおけるＭＮ／ＣＡ９タンパク質の発現を用いた診断法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 異型または正常な細胞上に発現されたＭＮ／ＣＡ９抗原の分布を観察すること、および（ａ）ＭＮ／ＣＡ９抗原が異型細胞上に観察される時は重大な病変を、（ｂ）ＭＮ／ＣＡ９抗原が異型細胞には不存在であるが正常な頚管内細胞上には存在している時は低い悪性度分類の病変を、（ｃ）ＭＮ／ＣＡ９抗原が異型細胞および異常な頚管内細胞の双方に存在しない時は良性状態であると、診断することによる、ＡＧＵＳ診断されたＰａｐスミア細胞から癌性または前癌性の子宮頚管の病変の存在を測定すること。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （関連出願に関するクロス・リファレンス） 本出願は、１９９９年８月５日提出の仮特許出願第６０／１４７，５５６号の
利益を要求する。

【０００２】 （発明の背景） 子宮頚癌は、婦人において最も通常の悪性腫瘍の１つであり、世界的にも発生
率および死亡率の両方において乳癌に次ぐのみである（ＮＩＨコンセンサス・ス
テートメント（１）Cervical Cancer（子宮頚癌）. 1996. 14 : 1 - 18）。一般
に先進国、および特に米国では、Ｐａｐスミアスクリーニングプログラムを広範
囲に受け入れた結果、子宮頚癌の発生率および死亡率における劇的な減少がもた
らされた。しかしながら、米国で行なわれた最近の調査はなお、年間に推定１５
，７００人の婦人が浸潤性子宮頚癌と診断され、かつ推定４，９００人の婦人が
子宮頚癌で死亡していることを示した（ ＮＩＨコンセンサス・ステートメント
（１）Cervical Cancer. 1996. 14 : 1 - 18）。さらに、腺癌の発生率は過去２
０年間に３倍となっており（McGonigle KF, およびBerek JS. Early stage squa
mous cell and adenocarcinoma of the cervix（初期の扁平上皮細胞と子宮頚部
の腺癌）. Curr. Opin. Obstet. Gynecol., 1992. 4 : 109 - 119）、また現在
では、診断された全子宮頚癌の２５％までに相当する（Miller BE, Flax SD, Ar
heart K, Photopulos G. The presentation of adenocarcinoma of the uterin
e cervix（子宮頚部の腺癌の提示）. Cancer 1993、72 : 1281 - 1285；およびC
rum CP, Cibas ES, Lee KR. ： Glandular precursors, adenocarinomas, and t
heir mimics（腺性前駆体、腺癌、およびそれらの擬態物）. Pathology of ear
ly cervical neolpasia（初期子宮頚部新生物の病理学）. ニューヨーク：チャ
ーチル・リビング ストン（Churchill Living stone）、1997. 177 -240）。

【０００３】 子宮頚癌の相対的に高い発生率には多くの因子が関係づけられれてきたが、偽
陰性に関する固有に高い割合が、現在のスクリーニングシステムにおける極めて
重要な関心事の１つであるように見える。この誤診は、一部には技術上の問題に
帰せられるが、しかし規則や規定によっては容易に改善されない人的な因子に主
として基づくものでもあり得る（Kos LG. Cervical (Pap) smear. New directio
ns（子宮頚部（Pap）スミア、新たな方向）. Cancer (Phial.), 71 (別冊）; 19
93. 1406 - 1412）。

【０００４】 近年、新規な子宮頚部細胞サンプリング装置（例えば、サイトブラシ）の使用
が、子宮頚管を含む腺および偏平新生物の両方の検出を改善した。しかしながら
、増大された頚管内細胞収穫量は、多くの新たな良性のパターン、および有意に
重なり合う性質を有する新生物の頚管内細胞診断学も産み出してきた。これらの
パターンは、ルーチンな日常的実践では細胞学者になじみがない。この不確かさ
が、頚管内腺性異形成に関する細胞学的診断の増加に反映されてきた。

【０００５】 ＡＩＳおよび腺癌のＰａｐスミア診断法に関する形態学的基準は、充分記述さ
れてきた(Ayer B, Pacey F, Greenberg M, Bousfield L. The cytologic diagno
sis of adenocarcinoma in situ of the cervix uteri and related lesions（
子宮頚部の上皮内腺癌および関連病巣の細胞学的診断）. I. Adenocarcinoma in
situ. Acta Cytol., 1987. 31 : 397 - 411； およびPacey NF. Glandular
neoplasms of the uterine cervix（子宮頚部の腺性新生物）、Bibbo M編、Comp
rehensive Cytopathology（包括的細胞病理学）. WBサンダーズ（Saunders)、フ
ィラデルフィア、1991. 243 - 255）。しかしながら、後にＡＩＳおよび／また
は浸潤性子宮頚管内腺癌を有することが見出された婦人からのＰａｐスミアでは
、４０％までの偽陰性率が報告されている（Crumら、1997,177 - 240；およびKi
m HS, Underwood D, Frable WJ. Adenocarcinoma in the cervicovaginal Papa
nicolaou smear: analysis of a 12-year experience（頚膣パパニコラウスミア
における腺癌；１２年間の体験分析）. Diagn. Cytopathol., 1991. 7 : 119 -
124）。ＡＩＳ／ＣＡに関する、より初期の診断ミスは、Ｐａｐスミアにおける
頚管内腺細胞の存在が少数であること、および／または技術的なアーチファクト
に帰せられた。しかしながら、研究は、ヒトにおける誤診が重要な役割を果たす
かもしれないことも示してきた。このことは、形成異常の腺細胞に関する、剥脱
性の子宮内膜細胞および／または反応性の頚管内細胞としての不正確な診断を含
む（Kosら、1993；およびLee KR, Manna EA, St. John T. Atypical endocervi
cal glandular cells：accuracy of cytologic diagnosis（異常な頚管内腺細胞
：細胞学的診断の正確さ）. Diagn. Cytopathol. 1995. 13 : 202 - 208）。

【０００６】 この情況を明らかにする試みの中で、ベセスダ・システム委員会（the Bethes
da System committee）は、１９８８年、異型腺細胞に関する細胞学的基準を確
立し、患者の類別を促進するよう、サブクラス化スキームを有する新規な診断的
用語を提案した。反応性の変化は越えるが浸潤性の腺癌には達しない頚管内腺性
異常は、重大性が未確定の異型腺細胞(atypical glandular cells of undetermi
ned significance)(AGUS)として報告されることが推奨された（National Cancer
Institute Workshop（国立癌研究所ワークショップ）. The revised Bethesda
System for reporting cervical/vaginal cytologic diagnosis : report of th
e 1991 Bethesda Workshop（子宮頚／膣部細胞学的診断報告のための改訂された
ベセスダシステム：1991年ベセスダワークショップの報告書）. JAMA, 1992. 26
7 : 1892；およびKurman RJ, Solomon D. The Bethesda System for Reporting
Cervical/Vaginal Cytologic Diagnoses（子宮頚／膣部細胞学的診断報告のた
めのベセスダシステム）. ニューヨーク：スプリンジャー-ベアレグ（Springer-
Verlag）、1994. 64- 76）。毎年、１２５万人もの米国の婦人が、ＡＧＵＳの診
断を受けている（Raab SS, Geisinger KR, Silverman JF, Thomas PA, Stanley
MW. Interobserber variability of a Papanicolaou smear diagnosis of atyp
ical glandular cells of undetermined significance（重大性未確定の異常腺
細胞パパニコラウスミア診断に関する観察者間の変動性）. Am. J. Clin. Patho
l., 1998. 110 : 653 - 659）。しかしながら、このサブクラス化の結果が臨床
的に有効であるか、なお証明されるべきである。

【０００７】 良性および腫瘍性病変の幅広い形態学的スペクトルが、ＡＧＵＳのカテゴリー
に含まれる。これらは異型性頚管内修復、子宮内膜症、微小腺の過形成、卵管化
生、腺性関与の偏平上皮内病変（ＳＩＬ）、および腺性形成異常、および腺癌を
含む（Lee KR. Atypical glandular cells in cervical smears from women who
have undergone cone biopsy. A potential diagnostic pitfall（円錐切除診
を受けた婦人からの子宮頚部スミアにおける異型腺細胞。可能性のある診断上の
落し穴）. Acta. Cytol., 1993. 37 : 705 - 709；Pacey F, Ayer B, Greenberg
M. The cytologic diagnosis of adenocarcinoma in situ of the cervix uter
i and related lesions（子宮頚部の上皮内腺癌および関連病巣の細胞学的診断
）. III. Pitfalls in diagnosis（診断の落し穴）. Acta. Cytol., 1988. 32
: 325 - 330; Yahr U, Lee KR. Cytologic findings in microglandular hyperp
lasia of the cervix（子宮頚部の微小腺過形成における細胞学的所見）. Diagn
. Cytopathol. 1991. 7 : 248 - 251；Novotny DB, Maygarden SJ, Johnson DE,
Frable WJ. Tubal metaplasia（卵管化生）. A frquent potential pitfall in
the cytologic diagnosis of endocervical glandular dysplasia on cervical
smears（子宮頚部スミアにおける頚管内腺性形成異常の細胞学的診断に頻発す
る落し穴）. Acta. Cytol., 1992. 36 : 1 - 10；Paceyら、1991；およびKos L
G. Diagnostic cytology and its histopathologic bases（診断用細胞学および
その病理組織学的基礎）. 第１巻、第４版、フィラデルフィア；ＪＢリッピンコ
ット（Lippincott）: 1992. 387 : 452 - 454）。

【０００８】 幾つかの研究室では、頚管内異型性と診断された症例におけるフォローアップ
が行なわれている。その結果は、ＡＧＵＳ症例の約４０％が高い悪性度分類のＳ
ＩＬ，上皮内腺癌 （ＡＩＳ）、または癌を表しており、相対的に６０％が良性
かまたは重要性のない病変を表わすことを示している。驚くべき範囲（１５〜５
８％）の患者が、ＡＧＵＳのＰａｐスミア診断を受けた後のフォローアップ・バ
イオプシーにおいて、重大な病変（ＨＳＩＬ、ＡＩＳ／ＣＡ）を有していた。さ
らに、重大な病変のうちごく小部分が腺性腫瘍（ＡＩＳ／ＣＡ）であった。従っ
て、ＡＧＵＳ診断法は、多くのＡＧＵＳ病変が全く腺性ではないので、不適切な
名称のように思われる（Wilbur DC, Mulford DM, Sickel JZ, Atkinson KM. Th
e problem of endocervical atypia : new cytologic presentations of normal
endocervical cells（頚管内異型性の問題点：正常な頚管内細胞に関する新規
な細胞学的提示）. Mod. Pathol., 1994. 38 : 808； Goff BA, Atanasoff P, B
rown E, Muntz HG, Bell DA, Rice LW. Endocervical glandular atypia in Pa
panicolaou smears（パパニコラウスミアにおける頚管内腺性異型性）. Obset.
Gynecol., 1992. 79 : 101 - 104；Leeら、1995 ; Nasu I, Meurer W, Fu YS.
Endocervical glandular atypia and adenocarcinoma : A correlation of cyt
ology and histology（頚管内腺性異型性と腺癌：細胞学と組織学との相関関係
）., Int. J. Gynecol. Pathol., 1993. 12 : 208 - 218 ; Taylor R, Guerrie
re J, Nash JD, Henry MR, O'Conner DM. Atypical cervical cytology : Colp
oscopic follow-up using The Bethesda System（異型子宮頚部細胞学：ベセス
ダシステムを用いたコルコスコピーによるフォローアップ）, J. Reprod. Med.,
1993. 38 : 443 - 447 ; Kennedy AW, Salmieri SS, Wirth SL, Biscotti CV,
Tuason LJ, Travarca MJ. Results of the clinical evaluation of atypical
glandular cells of undetermined significance(AGUS) detected on cervical
cytology screening（子宮頚部細胞学的スクリーニングにおいて検出された重
大性未確定の異常腺細胞（AGUS）に関する臨床評価の結果. Gynecol. Oncol., 1
996. 63 : 14 - 18 ; およびBose S, Kannan V, Kline TS. Abnormal endocerv
ical cells. Really abnormal ? Really endocervical ? （異常頚管内細胞。
真に異常か？真に頚管内性か？） Am. J. Clin. Pathol., 1994. 101 : 708 - 7
13 ）。

【０００９】 反応性の変化および偏平上皮性新形成から腫瘍性腺細胞を分離することを目指
した、子宮頚部の腺性病変の診断の助けとなる細胞学的基準を定義するための、
多くの試みがあった。しかもなお、細胞病理学者の間では、当初はＡＧＵＳと診
断された病変を再分類するのに、および良性のＡＧＵＳ病変から臨床上重大なも
のを分離するのに、僅かな一致があるだけである（Raabら、1998 ; Novotny ら
、1992； Nasuら、1993 ; Raab SS, Isacson C, Layfield LJ, Lenel, JC, Sl
agel, DD, Thomas PA. Atypical glandular cells of undetermined significa
nce: cytologic criteria to separate clinically significant from benign l
esions（重大性未確定の異型腺細胞：臨床的重要物を良性病変から分離するため
の細胞学的基準）. Am. J. Clin. Pathol., 1995. 104 : 574 - 582 ; Raab S
S, Snider TE, Potts SA, McDaniel HL, Robinson RA, Nelson DL, Sigman JD,
Thomas PA. Atypical glandular cells of undetermined significance. Diagn
ositc accuracy and interobserver variability using select cytologic crit
eria（重大性未確定の異型腺細胞。選ばれた細胞学的基準を用いた診断的精度お
よび観察者間の変動性）. Am. J. Clin. Pathol., 1997. 107 : 299 - 307 ;
および DiTomasso JP, Ramzy I, Mody DR, Glandular lesions of the cervix
. : Validity of cytologic criteria used to differntiate reactive changes
, glandular intraepithelial lesions and adenocarcinoma（子宮頚部の腺性病
変：反応性の変化、腺性上皮内病変、および腺癌を区別するのに用いられる細胞
学的基準の妥当性）.Acta. Cytol., 1996. 40 : 1127 - 1135）。

【００１０】 この診断上の不確かさは、経費−利益の観点、および患者に不必要な侵襲性の
手技を施こさないようにとの願望の両方から、臨床上の対処法決定に特有のジレ
ンマをもたらせた。従って、反応性−修復性の変化(reactive-reparative chang
es)により異型である腺細胞を、形成異常および癌により異型である細胞から分
離することができるＡＧＵＳ診断するための、有用な識別物が必要である。

【００１１】 最近、ＭＮ／ＣＡ９と名付けられた新規な抗原が記述されている。それは、子
宮頚部腺癌細胞系、ヒーラ（HeLa）において発見された膜貫糖タンパク質である
（Zavada J, Zavadova Z, Pastorekova S, Ciampor F, Pastorek J, Zelnik V.
Expression of MaTu-MN protein in human tumor cultures and in clinical s
pecimens（ヒト腫瘍培養物および臨床標本におけるMa Tu-MNタンパク質の発現）
. Int. J. Cancer 1993. 54 : 268 - 274）。ＭＮ／ＣＡ９産物をコードする遺
伝子は稀である−炭酸脱水酵素ドメインとして今日までに同定されている唯一の
相同機能性ドメインである。新生物形成の進行におけるＭＮ／ＣＡ９の役割を支
持する証拠は、ヒト細胞のハイブリッドにおける腫瘍原性の表現形との関連性、
およびＭＮｃＤＮＡを用いたトランスフェクションに続くマウス３Ｔ３細胞の腫
瘍性形質転換との関連性を含む （Zavadaら、１９９３； およびPastorek J,
Pastorekova S, Callebaut I, Morrion JP, Zelnik V, Opavsky R, Zatovicova
M, Liao S, Portelle D, Stanbridge EJ, Zavada J, Burny A, Kettmann R. Cl
oning and chracterization of MN, a human tumor-assosiated protein with a
domain homologous to carbonic anhydrase and a putative helix-loop-helix
DNA binding segment（MNのクローニングおよび特徴付け、炭酸脱水酵素に相同
性のあるドメインを有するヒト腫瘍関連タンパク質、および推定されるヘリック
ス−ループ−ヘリックスＤＮＡ結合セグメント）. Oncogene 1994. 9 : 2877 -
2888）。臨床標本に関する予備的なスクリーニングは、ＭＮ／ＣＡ９タンパク
質が非常に少数の正常組織に限定されるが、しかし子宮頚部新生物を含む特定の
悪性腫瘍では、有意なレベルの発現が認められた（Pastorekら、1994）。

【００１２】 数百の良性および新形成性の子宮頚部検体の研究は、ＭＮ／ＣＡ９がＡＩＳの
全ての症例と、子宮頚部偏平上皮新形成の９０％以上で発現されることを示して
いる。高レベルのＭＮ／ＣＡ９タンパク質の発現は、形成異常の組織に隣接した
領域における、見かけ上正常な頚管内細胞において頻繁に観察されるが、正常な
子宮頚部はＭＮ／ＣＡ９タンパク質を発現しない。さらに、３０５例のＰａｐス
ミアの研究も、Ｐａｐスミア中の剥奪性細胞に見られるＭＮ／ＣＡ９発現が、子
宮頚部の対応する組織切片におけるＭＮ／ＣＡ９発現を発生反復することを示し
ている。実質的には、ＡＩＳに由来する全ての異型腺細胞および腺癌は高レベル
のＭＮ抗原を発現するが、良性の子宮頚部から得られた頚管内細胞は陰性であっ
た（Liao SY, Brewer C, Zavada J, Pastorek J, Pastorekova S, Marietta A,
Berman ML, DiSaia PJ, Stanbridge EJ. Identification of the MN antigen a
s a diagnostic biomarker of cervical intraepithelial squamous and glandu
lar neolpasia and cervical carcinomas（子宮頚部扁平上皮性および腺性新生
物および子宮頚癌に関する診断用バイオマーカーとしてのＭＮ抗原の同定）. A
m. J. Pathol., 1994. 145 : 598 - 609 ; （Liao SY, Stanbridge EJ. Expres
sion of the MN antigen in cervical Papanicolaou smears is an early diagn
ostic biomarker of cervical dysplasia（子宮頚部パパニコラウスミアにおけ
るＭＮ抗原の発現は、子宮頚部異形成の初期の診断用バイオマーカーである）.
Canc. Epid. Biom. Prev., 1996. 5 : 549 - 557）。

【００１３】 これらの結果は、ＭＮ／ＣＡ９抗原の発現がＡＩＳおよび腺癌を示すし得るこ
とを示しているが、高い悪性度分類および低い悪性度分類の病変と、良性の状態
との間の信頼できる区別を可能にしてはいない。かかる区別を可能にすることは
、有意義な臨床診断にとって重要である。偽陰性によって引き起こされる致命的
な損害と、偽陽性によって引き起こされる苦痛および費用は、より信頼し得る臨
床的方法を要求する。

【００１４】 （発明の概要） 本発明は、現在のルーチンな慣用されているＰａｐスミアスクリーニングより
も、さらに正確なＡＧＵＳ診断法に対する要求を満たすものである。本発明は、
ＡＧＵＳ診断されたＰａｐスミア標本上の異型および／または正常な細胞上のＭ
Ｎ／ＣＡ９抗原の分布に関する新しい洞察を提供し、またＭＮ／ＣＡ９抗原に対
し、最終的には癌性または前癌状態に関する強力な診断用バイオマーカーとして
役立つことを可能にさせる臨床的ロードマップとして役立つ。

【００１５】 具体的には、本発明は、ベセスダシステムの用語法の下に重大性未確定の異型
腺細胞（ＡＧＵＳ）として細胞学的に診断されているＰａｐスミア細胞から、癌
性または前癌性の子宮頚部病変の存在を測定するための、信頼できる包括的な方
法を初めて提供する。ＡＧＵＳと診断されたＰａｐスミア細胞は、ＭＮ／ＣＡ９
抗原の発現を検出する、免疫組織化学またはin situ細胞ハイブリダイゼーショ
ンなどの方法に供される。ＡＧＵＳと診断されたＰａｐスミアは、代表的には容
易に確認できる形成異常を欠くが、異型および正常な頚管内細胞は含んでいる。
重大な又は低い悪性度分類の病変の存在を診断するために用いられるのは、異型
または正常細胞上に観察されるＭＮ／ＣＡ９抗原の分布である。より詳細には、
腺癌、浸潤癌（ＣＡ）、または高い悪性度分類の扁平上皮内病変(high grade sq
uamous intraepithelial lesions)（ＨＳＩＬ）を含む重大な病変は、ＭＮ／Ｃ
Ａ９抗原が異型細胞上に観察される時に診断される。低い悪性度分類の扁平上皮
内病変（ＬＳＩＬ）または異型性を含む低度の病変は、ＭＮ／ＣＡ９抗原が異型
細胞には存在しないが、正常な頚管内細胞上には存在する時に診断される。良性
の状態は、ＭＮ／ＣＡ９が異型および正常な頚管内細胞に存在しない時に診断さ
れる。

【００１６】 本発明の好ましい形態では、ＭＮ／ＣＡ９抗原が異型細胞上に観察される時は
いつでも、重大な病変の存在のみならずその性質も診断される。１つの態様では
、ＭＮ／ＣＡ９抗原が異型細胞上に、円柱状または蜂巣状の形状で検出される時
、上皮内腺癌(adenocarcinoma in situ)（ＡＩＳ）および侵潤性腺癌を含む腺癌
の存在が診断される。もう１つの態様では、ＭＮ／ＣＡ９抗原が異型細胞上に、
隙間のないクラスターとして検出される時、ＨＳＩＬの存在が診断される。

【００１７】 従って、本発明の方法は、Ｐａｐスミア標本用のＡＧＵＳ診断に関連した不確
実性および偽陰性の問題を克服する。さらに、該方法は、異型Ｐａｐスミア中で
、重大な病変、低い悪性度分類の病変、または良性の状態に関連するものを識別
する。

【００１８】 （発明の詳細な説明） 本発明の方法は、重大性未確定の異型腺細胞を観察する際に、細胞学的検査
、例えば、Ｐａｐスミアによって得られた診断を確認するための、ＭＮ／ＣＡ９
抗原の発現のレベルおよび分布を検査することを包含する。陽性の結果は、臨床
上の状態発現がない場合でも、形成異常の初期のマーカーとして役立つ。

【００１９】Ｉ．Ｐａｐスミアの獲得 いかなる細胞診断法においても第１のステップは、精査のための好適なＰａｐ
スミア細胞を得ることである。慣用されているＰａｐスミアテストでは、細胞学
者は、子宮頚部の整列物から幾らかの細胞を擦過すること、該細胞をスライドグ
ラス上に塗抹すること、およびパパニコラウ染料を用いて染色することにより得
られた、剥脱性の細胞標本を検査する。細胞学者は、悪性の状態の存在を示す異
常に見える細胞の存在について、染色されたスミアを調べる。「悪性の状態」と
いう用語は、上皮内腺癌（ＡＩＳ）、浸潤性腺癌（ＣＡ）、新生物、悪性または
腫瘍細胞などを含む形成異常の存在を指す。

【００２０】 本発明の方法では、悪性の状態を潜伏させ得る又は得ない患者から、剥脱性(e
xfoliative)細胞標本が得られる。標本は、綿棒、へら、またはサイトブラシと
いった子宮頚部サンプリング器具を、子宮頚部または膣粘膜の部分に沿って細胞
標本を得るように回転することによって得られ得る。好適な標本は、扁平上皮(s
quamous)および／または腺(glandular)細胞を有する頚管内細胞を含むであろう
。

【００２１】 剥脱性の細胞標本は、一般に、スライド上に塗抹され、スライド表面上に標本
の薄層を供給する。しかしながら、細胞の異常性に関する手動的観察、または細
胞学的材料に関する自動化された分析は、標本スライド上の「単層」の細胞を調
製することにより、最適化され得る。「単層」とは、主として単一細胞および細
胞の小さいクラスターからなる、均一に分布した細胞材料の実質的に２次元的な
層として定義される。剥脱された細胞を解離する、および標本スライド上に「単
層」の細胞を生成するように解離された細胞を用いる先の方法は、超音波振盪、
ローターによるせん断、シリンジング、強制ろ過、遠心分離、沈降、およびフィ
ルター転移を含む。かかる技術の実例は、 Hutchinson, M.L.ら、Anatomic Path
ology、96巻3号、300- 305頁（1991）によって記述された、自動化ＴｈｉｎＰｒ
ｅｐ（登録商標）システム（サイティック・コーポレイション（Cytyc Corporat
ion）、マールボロウ、マサチューセッツ州）、および米国特許第５，３４６，
８３１号に記載されたサイトリッチ（CytoRich）プロセスシステム（ホフマン−
ラ・ロシュ社（Hoffman-La Roche Inc.）、ナトリー、ニュージャージー州）を
含む。

【００２２】 二重スミアが得られる時は、１つのスミアは慣用されているパパニコラウ法に
従って染色され、もう一方のスミアはＭＮ／ＣＡ９抗原の発現を検出するために
使用され得る。或いは、細胞学的検査の後、Ｐａｐ染料を除去するよう慣用され
ているＰａｐスミア標本は脱染色され、次いで、例えば免疫組織化学技術を用い
て、ＭＮ／ＣＡ９抗原の発現を検出するよう再染色され得る。

【００２３】II．細胞学的Ｄｘ：ザ・ベセスダ・システム（ＴＢＳ） ＴＢＳ分類システムは、Ｐａｐスミア細胞に関する予備的な細胞学的診断に用
いられる。１９８８年の臨床検査室改良法は、Ｐａｐスミアのスクリーニング結
果を報告するための同一基準のシステムを指令した。この法令に従って開発され
たシステムは、ザ・ベセスダ・システム（ＴＢＳ）として知られており、１９９
１年以来、初期の分類システムに代わり効力を発している。用語を最も広く解釈
することを除き、この２つのシステムを互いに関連づけるための正確な方法は、
ない。

【００２４】 ザ・ベセスダ・システムはまず、試料の適切性、例えば、頚管内細胞が存在す
るかどうかを報告し、さらに異常な結果に関する記述的な用語を使用する。この
システムは、Ｐａｐスミア上で検出される、真菌、細菌、原虫、またはウイルス
の感染による任意の良性の細胞性変化を記載してもよい。さらに、結果は、Ｐａ
ｐスミアが、炎症、萎縮性膣炎、放射線照射、または子宮内避妊具（ＩＵＤ）に
関連する反応性の細胞変化を検出したかどうか報告し得る。

【００２５】 良性の細胞変化に対応しない異型細胞または細胞クラスターを含むＰａｐスミ
アには、上皮細胞異常という記述的診断が与えられる。上皮細胞異常という記述
的診断は、さらに扁平上皮または腺細胞の異常として類別される。

【００２６】 扁平上皮細胞異常に関する記述的診断は：（１）重大性未確定の異型扁平上皮
細胞（ＡＳＣＵＳ）；（２）低い悪性度分類の扁平上皮内病変（ＬＳＩＬ）；（
３）高い悪性度分類の扁平上皮内病変（ＨＳＩＬ）を含み得る。ＡＳＣＵＳは、
扁平上皮内病変（ＳＩＬ）に関する基準には合致しない異常を示すが、にもかか
わらず注目するに足るものでもない。このＡＳＣＵＳカテゴリーは更に、Favor
Reactive Process（支持反応性プロセス）、Changes Associated with Atrophy
（萎縮関連性変化）、またはFavor Neoplasia（支持新形成）によって評価され
得る。 ＬＳＩＬは、軽度の形成異常を含み、またヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ
）を示唆する変化を含み得る。ＨＳＩＬは、中程度から重度の形成異常、上皮内
癌(carcinoma in situ)、および扁平上皮細胞癌を含む。

【００２７】 腺細胞異常に関する記述的診断は：（１）閉経後の婦人では細胞学的に良性で
ある、腺性子宮内膜細胞；（２）重大性未確定の異型腺細胞（ＡＧＵＳ）；およ
び（３）頚管内、子宮内膜、子宮外、または他の腺癌などの非浸潤性または悪性
新生物を含み得る。ＡＧＵＳカテゴリーは、Favor Reactive Process（支持反応
性プロセス）、Favor Neoplastic Process（支持新形成性プロセス）、およびNo
t Otherwise Specified（NOS）（他には特定されない）によって更に評価され得
る。

【００２８】III．検出手順 ベセスダシステム用語法の下に重大性未確定な異型腺細胞（ＡＧＵＳ）として
細胞学的に診断されてきたＰａｐスミア細胞は、ＭＮ／ＣＡ９抗原の発現が検出
される手順に供される。

【００２９】 Ａ． ＭＮ／ＣＡ９抗原 「ＭＮ／ＣＡ９抗原」という用語は、本明細書中では、ＭＮ／ＣＡ９遺伝子また
はそのフラグメントによりコードされたタンパク質および／またはポリペプチド
を意味するものとして定義される。「ポリペプチド」は、ペプチド結合により共
有結合性に結合されたアミノ酸の鎖であり、本明細書中では、５０個以下のアミ
ノ酸から成るとみなされる。「タンパク質」は本明細書中では、５０個以上のア
ミノ酸から成るポリペプチドであると定義される。ＭＮ／ＣＡ９遺伝子は、約４
８ｋＤａのＭＮ／ＣＡ９タンパク質をコードする。ＭＮ／ＣＡ９タンパク質は膜
貫糖タンパク質であり、ヒーラ細胞および幾つかのヒト癌の、細胞表面上および
核内に局在し得る。ＭＮ／ＣＡ９タンパク質はヒーラ細胞中では、５４および５
８ｋＤａの双子タンパク質として発現され、それらはジスルフィド結合されたオ
リゴマーを形成し得る。ＭＮ／ＣＡ９タンパク質の遺伝子は、配列番号１のヌク
レオチド配列を含んでおり、それは、本明細書中に参考として援用される米国特
許第５，３８７，６７６号に記載されているように、配列番号２のアミノ酸配列
をコードする。

【００３０】 新形成性細胞によりインビボで産生されるタンパク質またはポリペプチドが、
細胞培養中の腫瘍細胞によって産生されるものから、配列において変化され得る
ことは、理解し得る。従って、ＭＮ／ＣＡ９抗原は、ＭＮ／ＣＡ９アレレによっ
てコードされたタンパク質および／またはポリペプチドを含み、それらはアミノ
酸の置換、伸長、欠失、切断、およびそれらの組合せを制限することなく含む変
化したアミノ酸配列を有しており、それらは本発明の範囲内に入る。

【００３１】 タンパク質が、インビボでタンパク質分解または分解性プロセスのような翻訳
後の修飾を受けることもまた認識されており、従って、切断されたＭＮ／ＣＡ９
ポリペプチドか、または例えば、グリコシル化、リン酸化、アデニル化、または
ミリストイル化された残基の有無により、有意に修飾されたＭＮ／ＣＡ９タンパ
ク質もまた臨床標本中に見出され得る。従って、「ＭＮ／ＣＡ９抗原」という用
語は、本明細書中では、抗ＭＮ／ＣＡ９抗体に対して探知可能に結合する抗原決
定基または免疫反応性エピトープなどの、ＭＮ／ＣＡ９タンパク質および／また
はポリペプチドを特徴付けている部分を保持している、修飾されたＭＮ／ＣＡ９
タンパク質および／またはポリペプチドを含むものとして用いられる。

【００３２】 Ｂ． 免疫組織化学 本発明の１つの態様では、ＭＮ／ＣＡ９抗原は、ＭＮ／ＣＡ９タンパク質／ポ
リペプチドと特異的に結合し得る結合性部分と反応し得、それにより結合性部分
／ＭＮ／ＣＡ９抗原複合体を生成する。代表的には、標本は、ＭＮ／ＣＡ９抗原
に特異的な抗体と、該抗体が抗原性部位に結合する条件下で接触される。接触後
、抗体／抗原複合体の有無が測定される。

【００３３】 結合性部分は、代表的には、抗体／ＭＮ／ＣＡ９抗原複合体を形成し得る抗体
、即ち、抗ＭＮ／ＣＡ９抗体である。本明細書中で用いられるように、「抗体」
という用語は、結合性タンパク質、例えば免疫グロブリン、またはＭＮ／ＣＡ９
抗原に関する好適な結合親和性および特異性を有する、免疫グロブリン可変領域
様結合性ドメインを含む、他のタンパク質を意味するものと理解される。ポリク
ローナル抗体またはモノクローナル抗体を産生する方法は、当分野で周知である
。抗体は、ヒト、マウス、またはそれらの組合せを含む哺乳類の源に由来し得る
。抗体は、好ましくはＩｇＧであるが、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡなどであり得る
。さらに、好適な結合性ドメインを有する他の有用な抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ
´）₂、Ｆｖなどのような抗体フラグメントを含む。抗体フラグメントは、慣用
されている技術、例えば、パパインまたはペプシンを用いた、抗体のペプチダー
ゼ消化によって調製され得る。

【００３４】 或いは、抗体フラグメントは、好ましくは、超可変部を含む軽鎖および／また
は重鎖（Ｖ_HおよびＶ_L）の可変領域から、さらになお好ましくは、Ｖ_HおよびＶ_L 領域から遺伝子的に工作され得る。従って、１つ以上の抗原と結合し得る「ハイ
ブリッド」抗体、定常−可変領域キメラ、異なる起源からの重鎖および軽鎖を有
する「複合体」免疫グロブリン、および改善された特異性と他の特性とを有する
「改変された」抗体は、本発明で使用するために組換え技術によって調製され得
る。

【００３５】 モノクローナル抗体が、好ましい。代表的な抗ＭＮ／ＣＡ９抗体、モノクロー
ナル抗体M７５を産生するマウスハイブリドーマは、米国特許第５，３８７，６
７６号（本明細書中に参考として援用されている）に開示されるように、１９９
２年９月１７日、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション[ＡＴＣＣ、
メリーランド州、ロックビル（米国）] に、ＡＴＣＣ番号ＨＢ１１１２８の下に
寄託された。

【００３６】 抗体と標本との接触は、一般に、水性緩衝システム中で行なわれる。標本と抗
体との接触時間の後、スライドは水性緩衝化溶液を用いて、未反応の抗体を除去
するよう洗浄される。次に、抗原に対する抗体の結合が、標識化システムの使用
によって検出される。

【００３７】 抗原／抗体（免疫）複合体の存在を測定するために、検出可能なシグナルを産
生する手段が検定システムに取り入れられる。例えば、直接標識法では、検定に
用いられる１次抗体、例えば抗ＭＮ／ＣＡ９抗体を、検出可能なシグナルを産生
し得る標識に複合体化し得る。標識は、フルオレセイン、ローダミン、Ｃｙ５な
どのような蛍光色素を含む発色団か；またはアルカリ性ホスファターゼ、西洋ワ
サビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどのような酵素であり得る。
或いは、１次抗体は、第２の結合性部分と特異的に結合するリガンドに複合体化
し得、ここで、リガンドはＤＮＰなどのハプテンか、またはビオチンを含み得る
。間接標識法もまた用いられ得、そこでは、洗浄されたスライドを、１次抗体ま
たは１次抗体に複合体化されたリガンドに特異的に結合する第２の結合性部分と
接触させ得る。例えば、マウスの源に由来するモノクローナル抗体が１次抗体で
ある場合、標識された抗マウス免疫グロブリンが２次抗体として用いられ得る。
或いは、アビジンを含む分子または抗ビオチン抗体が、特異的に結合してビオチ
ンに複合体化された１次または２次抗体とともに複合体を形成し得る。

【００３８】 さらに、１次または２次の結合性部分、またはそれらのリガンドは、酵素性、
蛍光性、放射性、リン光性、または着色粒子標識などの、検出可能な標識に結合
され得る。標識された複合体は、例えば顕微鏡検査により、または画像検出器の
援助を得て検出され得る。

【００３９】 C． 増幅およびin situハイブリダイゼーション 本発明のもう１つの態様では、ＭＮ／ＣＡ９発現は、ＭＮ／ＣＡ９タンパク質
／ポリペプチドをコードする標的ＲＮＡ分子を選択的に検出するための、in sit
u細胞ハイブリダイゼーションを用いて測定され得る。標的ｍＲＮＡ分子は、例
えば、プライマーおよび、ＭＮ／ＣＡ９タンパク質／ポリペプチドをコードする
ｍＲＮＡ分子の少なくとも一部分か、またはその相補的な配列と、特異的にハイ
ブリダイズし得るハイブリダイゼーションプローブを用いて、増幅および検出さ
れ得る。好ましくは、プライマーおよび／またはハイブリダイゼーションプロー
ブは、配列番号１の部分に実質的に相補的か、または同一であるオリゴヌクレオ
チドである。最も好ましくは、プローブは、配列番号１に相補的な配列と、穏や
かから緊縮性までのハイブリダイゼーション条件下に、ハイブリダイズし得る。

【００４０】IV．ＭＮ／ＣＡ９抗原およびＤｘの分布 本方法の次の工程は、ＡＧＵＳであると細胞学的に診断されたＰａｐスミアの
異型および／または正常細胞上に発現されたＭＮ／ＣＡ９抗原の分布を観察する
ことである。形態学的に正常な予備(reservoir)および円柱状細胞は、転移性の
扁平上皮細胞を含めて、我々が正常な頚管内細胞（ＥＣ）と定義する細胞ポピュ
レーションを構成する。正常な扁平上皮細胞、頚管内予備細胞、または円柱状細
胞から形態学的に逸脱したいかなる細胞クラスターも、異型細胞クラスターとみ
なされる。異型細胞の核は、一般に、正常なＥＣ細胞よりも３〜５倍大きく、増
大された核／細胞質比を有する有意な過染色症を示す。異型細胞は、異型扁平上
皮の化生、異型の予備細胞増殖、および頚管内腺性異型に由来し得る。

【００４１】 ＭＮ／ＣＡ９抗原発現の分布は、１つ以上の一般的なパターンに入り得る。陰
性のＭＮ／ＣＡ９発現パターンは、標識が全く観察されないか、または２個以下
の正常な頚管内細胞が検出可能に標識される場合に存在する。他方、陽性のＭＮ
／ＣＡ９発現パターンは、検出可能な標識がどの異型細胞クラスターにも、ある
いは２以上の正常な頚管内細胞クラスターにおいて観察される場合に存在する。
散在性の染色パターンは、異型細胞／細胞クラスターの大部分か、または各々の
スミアにおいて１００以上の正常な頚管内細胞／細胞クラスターが、強いＭＮ／
ＣＡ９発現を示している場合である。さらに、単離された頚管内細胞クラスター
および／または異型細胞のみが陽性である場合には、焦点性の染色パターンが観
察される。

【００４２】 本発明の方法は、先にＡＧＵＳと診断されたＰａｐスミア細胞中の偽陰性の結
果のレベルを低下させる。子宮頚癌の前駆体は形成異常であり、当分野では子宮
頚部上皮内新生物（ＣＩＮ）または扁平上皮内病変（ＳＩＬ）としても周知であ
る。推定上は腺起源の異型細胞が観察される場合、細胞はＡＧＵＳと診断され、
細胞学者はそれを形成異常であるとは考えない。本発明の方法では、重大な又は
重篤な癌性または前癌性の病変は、ＡＧＵＳと診断されたＰａｐスミア標本の異
型細胞上のＭＮ／ＣＡ９抗原の検出と関連付けられるので、偽陰性の結果が回避
される。重大な病変は、腺癌、浸潤癌（ＣＡ）、および高い悪性度分類のＳＩＬ
（ＨＳＩＬ）を含み得る。異型細胞上のＭＮ／ＣＡ９抗原の発現は、時折、低い
悪性度分類のＳＩＬ（ＬＳＩＬ）と関連付けられるが、この「偽陽性」の結果は
、ＨＳＩＬに進行するであろう病変を前もって警告し得る。

【００４３】 本発明の好ましい態様は、代表的には異型細胞上に見い出される２つの特定の
ＭＮ／ＣＡ９抗原染色パターンを含み、それらは常に、重大または重篤な病変を
有する患者から得られたＰａｐスミアを、子宮頚癌またはその前駆体と関連する
ものとして診断する。

【００４４】 本発明の１つの好ましい態様では、Ｐａｐスミア細胞は、本明細書では焦点性
に円柱状かまたは蜂巣状の構造として記述される、ＭＮ／ＣＡ９発現のパターン
を示す。蜂巣状パターンの実例は、図２（パネル１）、図６（パネルF）、およ
び図７（パネルF）に見出され得る。散在性パターンでの異型細胞およびクラス
ター上の蜂巣状構造は、腺癌（ＡＩＳ）または浸潤性腺癌を有する患者から得ら
れるＰａｐスミアの特徴である。

【００４５】 本発明のもう１つの好ましい態様では、Ｐａｐスミア細胞は、密なクラスター
中に配置された異型細胞上のＭＮ／ＣＡ９発現のパターンを示す（参考のため、
図２、パネルＢ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、およびＨ；図５、パネルＥおよびＦ；図６、パネ
ルＥ；および図７、パネルＥを参照のこと）。密なクラスター中の異型細胞の染
色パターンは、散在性または焦点性であり得る（例えば、図２、パネルFおよびG
を参照のこと）、通常は、高い悪性度分類のＳＩＬ（ＨＳＩＬ）を有する患者か
らのＰａｐスミア細胞の特徴である。

【００４６】 本発明の更にもう１つの態様では、低い悪性度分類の病変が、より重篤な病変
から区別され得る。かかる低い悪性度分類の病変は、もう１つの染色パターンに
関連づけられ、そこでは、ＭＮ／ＣＡ９抗原は異型細胞上に検出されないが、正
常な細胞に限定される。ＭＮ／ＣＡ９抗原の存在を正常なＥＣ細胞上にのみ検出
する染色法は、低い悪性度分類のＳＩＬ（ＬＳＩＬ）および異型を含む、より重
篤でない低い悪性度分類の病変を有する患者から得られたＰａｐスミアを診断す
る。

【００４７】 最後に、本発明の好ましい形態は、先に記載されたＭＮ／ＣＡ９発現の任意の
パターンの不存在が、一般に良性状態と相関関係する１工程を含む。結果として
、正常および異型細胞がいずれもＭＮ／ＣＡ９抗原に関する染色を示さない陰性
の染色パターンは、良性状態であると診断する。

【００４８】 本発明は、子宮頚癌およびその前駆体に関連した重大で低い悪性度分類の病変
の存在を診断するための、改善された方法を提供する。該方法は、重大性未確定
の異型腺細胞（ＡＧＵＳ）と先に類別された、Ｐａｐスミア標本における不確実
性および／または偽陰性の結果の問題を克服する。Ｐａｐスミア標本には、容易
に確認できる形成異常が不存在であっても、該方法は、子宮頚部における重大な
癌性または前癌性の病変から、より重篤でない病変を識別することができる。さ
らに、ＭＮ／ＣＡ９発現の不存在は、良性状態に関する信頼できる指標である。

【００４９】 本発明は、特定の好ましいその形態についてかなり詳細に述べてきたが、他の
形態が可能である。例えば、本発明のスクリーニング検定法は、自動化され得、
それによって多数の標本を同時にスクリーニングするのを促進する。従って、添
付の請求項の精神および範囲は、本明細書に記載された好ましい形態に関する記
載に制限されない。

【００５０】 （実施例） ＳＩＬを有してもいなくても、ＡＧＵＳであるとの個々の細胞学的診断を有す
る全部で２４５個のＰａｐスミアが調べられた。バイオプシー材料に関する対応
する組織学的検査は、それぞれの症例で行なわれた。我々は、異型および新形成
性子宮頚部組織が診断された全ての症例で、ＭＮ／ＣＡ９免疫反応性が見られる
ことを発見した。対照的に、ＡＧＵＳの細胞学的診断を有する正常な子宮頚部の
Ｐａｐスミアは、ＭＮ／ＣＡ９陰性であった。重要なこととして、ＡＩＳおよび
浸潤性腺癌の全症例において、高レベルのＭＮ／ＣＡ９タンパク質発現が見られ
た。

【００５１】 表１は、頚管内異型と診断された症例において、本研究を、幾つかの他の研究
室により為されたフォローアップ研究と比較している。集積された結果は、表１
に示されるように、ＡＧＵＳ症例の約４０％が高い悪性度分類のＳＩＬ、上皮内
腺癌（ＡＩＳ）または癌を表し、また相対的に６０％が良性または重大でない病
変を表わすこと示している。

【００５２】

【表１】

【００５３】材料および方法 組織標本：１９９４年７月〜１９９８年９月の間に、南部カリフォルニア、オ
レンジ郡における民間の細胞学研究所によって検査された１８５，４１４例のＰ
ａｐスミアから、ＳＩＬを有する又は有しないＡＧＵＳ（発生率：０．３％）と
いう細胞学的診断を有する５５７人の患者からの個々のＰａｐスミアを回収した
。フォローアップの組織学的確認は、２５１例のＰａｐスミアにおいて同定され
た（フォローアップ率：４３％）。これらのうち６例は、頚管内掻爬（n＝３）
、子宮内膜掻爬のみ（n＝２）、および空気乾燥されたスミア（n＝１）において
不充分な材料であるため除外された。従って、本研究に含められた全Ｐａｐスミ
アの総数は２４５であった。本研究に含まれた患者の年齢の中央値は、３９歳（
範囲は２０〜８１歳）であった。全てのＰａｐスミアは、サイトブラシおよび木
製へらによって収集された。子宮頚部の組織切片の源は、コルポスコピー向けの
子宮頚管バイオプシー、頚管内掻爬、子宮頚部円錐切除、または子宮摘出術から
であった。

【００５４】 細胞学：Ｐａｐスミアは、６名の細胞技術者によりスクリーニングされ、３名
の協会認定細胞病理学者を含む８名の病理学者によって精査された。ＴＢＳ類別
法が、この研究において用いられ、ＡＧＵＳという細胞学的診断はさらに、ＡＧ
ＵＳ−支持反応性(AGUS-favor reactive)、ＡＧＵＳ−支持新形成性(AGUS-favor
neoplastic)、および他には特定されないＡＧＵＳ(AGUS-not otherwise specif
ied)（ＡＧＵＳ−ＮＯＳ）に類別される。Ｐａｐスミアは、診断的ストリンジェ
ンシーについて精査されなかった；従って、この結果は、民間の実施情況におけ
る実際の細胞学的スクリーニングと一致している。細胞学的および組織学的デー
タが相互に関連付けられた。ＭＮ／ＣＡ９の免疫反応性は、盲検様式で判断され
、続いて、結果は、組織学データと相互に関連付けられた。当初の組織学的診断
とＭＮ／ＣＡ９免疫反応性との間に不一致がある場合にのみ、ＭＮ／ＣＡ９の免
疫染色の結果に関する知識を用いて、組織学的切片が精査された。

【００５５】 免疫組織化学的研究：ＭＮ／ＣＡ９タンパク質を検出するために用いられたマ
ウスモノクローナル抗体は、先に記載されている（Pastorekら、1994）。抗体は
、ホルマリン固定され、パラフィン包埋された切片、およびデータ集積されたＰ
ａｐスミア中の抗原を認識する（Liaoら、1994；およびLiaoら、1996）。組織切
片および脱色されたＰａｐスミアを、抗ＭＮ／ＣＡ９Ｍａｂ（ＭＮ７５）を用い
ての免疫組織化学的染色は、先に記載されたペルオキシダーゼ技術を用いて行な
われた（Hsu SM, Raine L, Fanger H. Use of avidin-biotin peroxidase comp
lex (ABC) in immunoperoxidase techniques : a comparison between ABC and
unlabeled antibody (PAP) procedures（免疫ペルオキシダーゼ技術におけるア
ビジン−ビオチン・ペルオキシダーゼ複合体(ABC)の使用：ABCと未標識抗体（PA
P）との比較. J. Histochem. Cytochem., 1981. 29 : 577 - 580）。既知の陽性
および陰性の組織標本が、各々のランに含められた。手短にいえば、スミアを１
％酸アルコールを用いて脱色し、蒸留水でリンスした。パラフィン包埋された組
織の５ミクロン切片を、脱パラフィンした。内在性ペルオキシダーゼは、スライ
ドを、メタノール中の３．０％過酸化水素溶液中にて１０分間インキュベートす
ることによりブロックした。スライドは次いで、好適なブロッキング血清（ＰＢ
Ｓ中の５％の正常ウマ血清）とともにインキュベートし、続いて、腹水由来の精
製された１次抗体ＭＮ７５（０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中の１：１０，０００
希釈物）とともに６０分間インキュベートした。次に、２次の、ビオチニル化さ
れたウマの抗マウス免疫グロブリンG抗体（ＰＢＳ中の１：２００希釈物）が３
０分間にわたり添加され、アビジン−ビオチン・ペルオキシダーゼ複合体（ＡＢ
Ｃエリート（Elite)）とともに３０分間インキュベートした（ベクター・ラボラ
トリーズ、バーリンゲイム（Burlingame）、カリフォルニア州）。ジアミノベン
ジジンテトラヒドロクロリドを、クロマゲンとして用いた（シグマ・ケミカル社
、セントルイス、ミズーリ州、）。処理の後、切片を蒸留水で洗浄し、ヘマトキ
シリンで後染色し、パラマウント（Permount）を用いてマウントした。

【００５６】 免疫組織化学的分析：染色の特異性は、主として原形質膜上の茶色の反応生成
物の存在により定義された。染色の強度は、２スケール・システム；即ち、弱い
（＋）および強い（＋＋〜＋＋＋）を用いることにより主観的に定義した。高倍
率の拡大においてのみ検出可能な、細胞質のごく弱い染色は、特異性を欠くこと
から陰性とみなされた（Liaoら、1996）。強く又は弱く染色された全ての細胞お
よび／または細胞クラスターは、高倍率の拡大下に評価された。正常な扁平上皮
細胞、頚管内予備細胞、または円柱状細胞から形態学的に逸脱している、細胞ク
ラスター中のいかなるＭＮ／ＣＡ９免疫反応性細胞も、異型の細胞クラスターと
してみなされた。これらの異型細胞の核は、一般に、正常の頚管内細胞（ＥＣ）
よりも３〜５倍大きく、増大した核／細胞質比を有する有意な過染色性を示した
。各々のスミアにおける陽性の細胞または細胞クラスターの数は、4Xの走査倍率
下でカウントされた。散在性のＭＮ／ＣＡ９免疫反応性は、５０％以上の異型細
胞／細胞クラスターか、または各々のスミアにおける１００以上の正常の頚管内
細胞／細胞クラスターが、強い（＋＋／＋＋＋）ＭＮ／ＣＡ９免疫反応性を示す
時として定義される。スミアは、褐色の染色が、任意の異型細胞クラスターにお
いて、または２つ以上の正常な頚管内細胞クラスターにおいて同定される場合に
は陽性として、また褐色の反応が見られないか、または染色が各スミアにおいて
２以下の正常な頚管内細胞クラスターに限定される場合には陰性としてスコアさ
れた。

【００５７】 （実施例１） 組織学：各症例からの子宮頚部の組織切片を精査し、良性、異型、子宮頚管上
皮内新形成（ＣＩＮ）、またはＡＩＳ／癌（ＡＩＳ／ＣＡ）と解釈した。腺性異
型／新形成、およびＣＩＮの診断に用いられた基準は、CrumおよびKurmanによっ
て定義されたものである（Crum CP, Cibas ES, Lee KR. Criteria for grading
squamous intraepithelial lesions（扁平上皮内病変の悪性度分類のための基
準）. Pathology of Eary Cervical Neoplasia（初期の子宮頚管新形成の病理学
）、ニューヨーク チャーチヒル リビングストン、1997. 47 - 91；およびKur
man RJ, Norris HJ, Wilkinson E. Tumors of the cervix, vagina, and vulva
（子宮頚部、膣、および外陰部の腫瘍）. Atlas of Tumor Pathology（腫瘍病
理学図表集） 第３シリーズ、分冊4 , Armed Forces Institute of Pathology,
1992. 37 - 139）。）代表的な例を、図１に示す。良性のカテゴリーは、炎症を
有する又は有しない正常な子宮頚部（パネルＡ）を含んだ。異型の診断は、異型
扁平上皮化生／異型予備細胞増殖、および頚管内腺性異型（パネルＢおよびC）
を含んだ。ＣＩＮの診断用に２スケール・システム、即ち、低い悪性度分類（コ
ンジローマ／ＣＩＮ I）（パネルＤ）および高い悪性度分類（ＣＩＮ IIおよ
びＣＩＮ III）（パネルＥ）を用いた。ＡＩＳの例を、パネルＦに示す。

【００５８】 細胞学と組織学の間の相関関係：ＡＧＵＳ Ｐａｐスミアに関する種々のカテ
ゴリーと、子宮頚管標本の組織学的診断との間の比較分析を、表２に略述する。

【００５９】

【表２】

【００６０】 調べた２４５症例のうち、２９例（１２％）のＰａｐスミアがＡＧＵＳ−支
持反応性であり、１５７例（６４％）がＡＧＵＳ−ＮＯＳであり、５９例（２４
％）がＡＧＵＳ−支持新形成性と診断された。ＳＩＬの共存的細胞学的診断は、
１例のＡＧＵＳ−支持反応性、２０例のＡＧＵＳ−ＮＯＳ、および８例のＡＧＵ
Ｓ−支持新形成性のＰａｐスミアで見い出された。

【００６１】 バイオプシー・フォローアップは、３４例（１４％）の子宮頚部が明白な異常
を有していないことを示した。対応するＰａｐスミアは、ＡＧＵＳ−支持反応性
と診断された１３標本、ＡＧＵＳ ＮＯＳとしての２０、およびＡＧＵＳ−支持
新形成性と診断された１標本であった。

【００６２】 子宮頚部標本の１２例（５％）が、異型という組織学的診断を受けた。細胞学
的診断は、３例のＡＧＵＳ−支持反応性、８例のＡＧＵＳ−ＮＯＳ、および１例
のＡＧＵＳ−支持新形成性であった。

【００６３】 組織学的診断の重要な部分は、ＬＳＩＬ（７６症例）またはＨＳＩＬ（９５症
例）であった。ＬＳＩＬ診断の場合には、対応する細胞学的診断は：１０例のＡ
ＧＵＳ−支持反応性、５７例のＡＧＵＳ−ＮＯＳ、および９例のＡＧＵＳ−支持
新形成性であった。細胞学的診断に関する同様の幅広い分布が、ＨＳＩＬコホー
トに見られた。ここでは、１例のＡＧＵＳ−支持反応性、６７例のＡＧＵＳ−Ｎ
ＯＳ、および２７例のＡＧＵＳ−支持新形成性であった。

【００６４】 最も重篤な病変カテゴリーである、ＡＩＳ／ＣＡには、２８症例（１１％）が
あり、そのうち３例は子宮内膜腺癌であった。対応する細胞学的診断は；２例の
ＡＧＵＳ−支持反応性、５例のＡＧＵＳ−ＮＯＳ、および２１例のＡＧＵＳ−支
持新形成性であった。

【００６５】 従って、発明者らの研究は、ＡＧＵＳ Ｐａｐスミアの５０％が、フォローア
ップ・バイオプシーにおいて重大な病変（ＨＳＩＬおよびＡＩＳ／ＣＡ）を有す
ることを示した。ＡＧＵＳ−支持新形成性Ｐａｐスミアの大半（８１％）が、Ｈ
ＳＩＬまたはＡＩＳ／ＣＡであると組織学的に確認されたけれども、ＡＧＵＳ−
ＮＯＳＰａｐスミアの４６％が、子宮頚部で重大な病変を見られたに過ぎなかっ
た。従って、これらの診断は明らかに、臨床医が直面している苦境を反映してい
る。ＡＧＵＳ−ＮＯＳという診断は、ＡＧＵＳの細胞学的診断カテゴリーの最も
容易で最も頻繁に用いられるものでありで、臨床上の結果を予言するのに非常に
有用ということではなかった。

【００６６】 ＰａｐスミアにおけるＭＮ／ＣＡ９免疫反応性：正常なＰａｐスミアでは、剥
脱性の頚管内細胞／細胞クラスターと、下部子宮部分に由来する子宮内膜細胞と
は、首尾一貫してＭＮ／ＣＡ９陰性である（データは示さず）。ＡＧＵＳ Ｐａ
ｐスミアでは、我々は、細胞学的形態学／免疫反応性の組合せに関する比較的複
雑なパターンを見い出した。これらは図２に例示されており、この研究における
解釈を成功させる骨組みとして役立つ。ＴＢＳ類別において記述された、異型腺
細胞に関する細胞学的基準を、この解釈において用いた（国立癌研究所ワークシ
ョップ。The revised Bethesda System for reporting cervical/vaginal cytol
ogic diagnosis : report of the 1991 Bethesda Workshop（子宮頚部／膣細胞
学的診断報告のための改訂されたベセスダシステム：1991年ベセスダワークショ
ップの報告）. JAMA, 1992. 267 : 1892；およびKurmanら、1994））。パネルＡ
は、何らＭＮ／ＣＡ９免疫反応性を示さないＡＧＵＳ Ｐａｐスミアを示す。陽
性の免疫染色が見られるスミアでは、２つの広いカテゴリーがある：正常なＥＤ
を有するか又は有しない異型細胞が陽性である場合のもの、および正常なＥＣの
みが染色される場合のもの（パネルＢ〜Ｄ）。陽性の免疫染色を示すスミアでは
、染色の強度の変異に遭遇する。パネルＢは、強い陽性（矢印）である異型細胞
のクラスターと、弱い陽性（矢頭）である正常なＥＣのクラスターを例示してい
る。免疫染色のパターンも変化し得る。パネルＦは、焦点性の染色の例を示して
おり、パネルＧは、散在性の免疫反応性の例を示している。異型細胞が染色され
たこれらのＰａｐスミアには、形態学的変異がある。染色された異型細胞の幾つ
かは、密なクラスター内に配置されており（パネルH）、そこでは、他のスミア
中に焦点性の円柱状または蜂巣状の構造が観察された（パネルl）。

【００６７】 ＭＮ／ＣＡ９免疫染色と組織学的診断との相関関係：先に述べた免疫染色パタ
ーンの分布と、それらの組織学的診断との相関関係を図３に例示する。異型から
ＡＩＳ／ＣＡに及ぶ組織学的診断を有する全ての標本が、ＭＮ／ＣＡ９発現に関
して陽性であることは一目瞭然である。反対に、良性の子宮頚部に関する全ての
症例は、ＭＮ／ＣＡ９陰性Ｐａｐスミアを有した。

【００６８】 組織学的に診断された形成異常の程度と、対応するＰａｐスミアにおけるＭＮ
／ＣＡ９陽性細胞の形態学との間には、興味深い相関関係があった。ＡＩＳ／Ｃ
ＡまたはＨＳＩＬという組織学的診断を有する標本は、全ての症例において、対
応するＰａｐスミア中の異型細胞±正常ＥＣの免疫染色を示した。さらに、ＡＩ
Ｓ／ＣＡの症例では、免疫反応性の異型細胞は常に、散在性の染色パターンを有
する焦点性の円柱状または蜂巣状の特徴を示した。反対に、ＨＳＩＬの場合には
、ＭＮ／ＣＡ９陽性異型細胞は、通常、密なクラスター内に配置されており（参
考のため、図２、パネルＢ、Ｃ、H、およびＩを参照のこと）、症例の一部分の
み（２８％）が散在的な免疫染色パターンを示した。ＬＳＩＬという診断の症例
では、１４／７６が同様のパターンを示したのに対し、残りは正常なＥＣのみの
染色を示した（参考のため、図２、パネルＤを参照のこと）。異型の組織学的診
断を有する症例の数は小さいが（n＝１２）、それらの全ては正常なＥＣのみの
免疫染色を示した。最後に、良性症例の全てが、ＭＮ／ＣＡ９陰性であった。

【００６９】 これらのデータから直ちに明らかであるのは、異型細胞がＭＮ／ＣＡ９を示す
非常に多数の症例では、重大な病変（ＨＳＩＬおよびＡＩＳ／ＣＡ）の存在が示
されることである。低い悪性度分類の病変に関しては、画像はより不鮮明である
。ＬＳＩＬ症例の一部（１４／７６）が実際に異型細胞の免疫染色を示している
のに対し、残りは抗原を発現する正常なＥＣのみである。この後者の特徴も、異
型の全ての症例（n＝１２）で見られる。従って、これらの基準から、これら後
者の２つのカテゴリーの組織学的診断を、ＭＮ／ＣＡ９免疫反応性に基づいて、
自信を持って識別することは不可能である。

【００７０】 統計学的分析：免疫陽性スミアを、真の診断的分析に供した（Dunn G. Everit
t B. Clinical problems and statistical solutions（臨床上の問題および統
計学的解明）. Clinical Biostatistics（臨床生物統計学）、ニューヨーク
ホルステド・プレス 1995 ; 1 - 32）。この分析では、免疫染色された異型細胞
と、対応するバイオプシーにおける重大な病変との相関関係は、陽性予測値を有
すると考えられる。同様に、免疫染色された正常ＥＣのみと、重大な病変との相
関関係は、陰性予測値を有すると考えられる。その分析を、表３に示す。明らか
に、感度、特異性、および陽性の予測値が優れている。

【００７１】

【表３】

【００７２】 （実施例２） ＡＧＵＳ診断のカテゴリーとそれらの免疫染色パターン：上記のデータから、
ＡＧＵＳの一般的な診断を受けている関連するＰａｐスミア中の異型細胞のＭＮ
／ＣＡ９免疫染色に基づいて、高い悪性度分類の病変が予測されることは明らか
である。図４は、ＡＧＵＳ診断（即ち、ＡＧＵＳ−支持反応性、ＡＧＵＳ−ＮＯ
Ｓ、およびＡＧＵＳ−支持新形成性）が、各々のＭＮ／ＣＡ９免疫染色パターン
と比較された場合に、どれほど予言的であったかを示している。

【００７３】 ＡＧＵＳ−支持反応性：全部で２９症例が、このカテゴリーに診断された。細
胞学的診断と一致して、フォローアップ・バイオプシーは、４５％（n＝１３）
が良性であった。これらの全ては、ＭＮ／ＣＡ９陰性であった。異型のうち３例
と、ＬＳＩＬの１０例は診断された。これらの全ては、正常なＥＣのみの免疫染
色を示した。また、１例のＨＳＩＬおよび２例のＡＩＳがあった。全てはＭＮ／
ＣＡ９陽性であり、異型細胞の染色をともなっていた。重要なこととして、重大
な病変が見られた少数の症例が、異型細胞のＭＮ／ＣＡ９免疫染色によって予測
された。

【００７４】 Ｐａｐ染色および免疫染色の例を、図５に示す。パネルＡ、Ｂ、およびＣの異
型細胞クラスターの全ては、最少の細胞の重なり、および中程度の過染色性とと
もに、核の多型性を示す。パネルＢでは、異型細胞は繊毛のある化生細胞（矢印
）に結合している。しかしながら、繊毛のある細胞クラスターを含め（パネルＥ
およびＦ）、細胞のＭＮ／ＣＡ９免疫染色があった場合、高い悪性度分類の病変
（ＨＳＩＬ）が子宮頚部に見い出された。反対に、免疫染色が見られなかった場
合には、形成異常の組織は全く同定されなかった（パネルＤ）。

【００７５】 ＡＧＵＳ−ＮＯＳ（他には特定されない）：これは、ＡＧＵＳ診断の最大のカ
テゴリーであった（n＝１５７）。組織学的診断は、明らかに、この領域に伴う
臨床上の問題を示している。完全な範囲の良性、低い悪性度分類および高い悪性
度分類の病変が、各々のカテゴリーに有意な数を有するて見い出された（表２）
。再度、全ての高い悪性度分類の病変は、Ｐａｐスミアにおける異型細胞のＭＮ
／ＣＡ９免疫染色を示した。ＬＳＩＬの症例では、僅かに１４／７６がこのパタ
ーンを示したにすぎない：異型に関する組織学的診断の症例において見られたよ
うに、正常なＥＣの免疫染色のみが残りの部分において見られた。従って、重大
な病変（ＨＳＩＬおよびＡＩＳ）が存在する症例では、ＭＮ／ＣＡ９の陽性に基
づき容易に診断された。重要なこととして、それらは、このＡＧＵＳ−ＮＯＳの
カテゴリーで全体の４６％を表していた。

【００７６】 Ｐａｐ染色および免疫染色の例を、図６に示す。パネルＡ、Ｂ、およびＣにお
ける全ての異型細胞は、細胞の重なり、中程度の核多型性、およびわずかに増大
した核／細胞質比を示している。再び、ＨＳＩＬ（パネルＥ）およびＡＩＳ（パ
ネルF）は、異型細胞が陽性に染色された症例においてのみ組織学的に同定され
た。ＭＮ／ＣＡ９免疫染色性が全く検出されなかった症例では、形成異常病変は
観察されなかった（パネルＤ）。

【００７７】 ＡＧＵＳ−支持新形成性：このカテゴリーにおける組織学的診断の殆どは、重
大な病変（ＨＳＩＬ、ＡＩＳ／ＣＡ）の存在を確証した。表２において例証され
たように、２７例の（４６％）のＨＳＩＬ、および２１例の（３６％）のＡＩＳ
／ＣＡがあった。全てが、異型細胞のＭＮ／ＣＡ９免疫染色性を示した。ＬＳＩ
Ｌおよび異型と診断された症例（各々n＝９およびn＝１）は、正常なＥＣのみ陽
性の染色を示した。今一度、ＭＮ／ＣＡ９免疫染色パターンは、重大な病変を正
確に予言した。

【００７８】 Ｐａｐ染色と免疫染色の例を、図７に示す。パネルＡ、Ｂ、およびＣにおける
全ての異型細胞クラスターが、細胞の重なり、著しい核多型性、過染色性、およ
び増大した核／細胞質比を示している。ＨＳＩＬおよびＡＩＳは、Ｐａｐスミア
のものに対応する子宮頚部において観察され、そこでは、ＭＮ／ＣＡ９免疫染色
は、異型細胞クラスターにおいて見られた（パネルＥおよびＦ）。良性の組織学
は、ＭＮ／ＣＡ９陰性のＰａｐスミアにおいて見られた（パネルＤ）。

【００７９】 考察 本発明で、我々は、異型細胞のＭＮ／ＣＡ９免疫染色性±ＡＧＵＳ Ｐａｐス
ミアにおける正常なＥＣと、ＨＳＩＬかまたはＡＩＳ／ＣＡであるかにかかわら
ず、子宮頚部における重大な病変の存在との間の明確な関連について明らかにし
た（図３）。同様に、我々は、ＭＮ／ＣＡ９免疫染色性の欠如と、子宮頚部に病
変がないこととの間の明確な関係を明らかにした。しかしながら、ＭＮ／ＣＡ９
免疫染色パターンは、ＬＳＩＬと異型との間を識別しない。異型の全ての症例お
よびＬＳＩＬの８２％（n＝６２）の症例で、正常なＥＣのみの免疫染色が観察
された。ＬＳＩＬの残りの症例は、異型±正常なＥＣの染色性を示した。ＬＳＩ
Ｌの症例のこの少なさ（n＝１４）は、偽陽性の小さなパーセントを表わす（異
型細胞の染色が、子宮頚部における重大な病変の存在を診断するものであるとい
う意味で）か、またはこれらの病変はＨＳＩＬへ進行しているであろうというこ
との予後的な指標であるかもしれない。さらに、ＡＩＳ症例に見られる免疫染色
パターンは、常に散在性で、かつ染色された細胞クラスターは円柱状または蜂巣
状の構造を示す。このことは、細胞が密なクラスター内に配置され、それらがほ
とんどの症例において焦点性の免疫染色パターンを示すＨＳＩＬの症例と対照的
である。従って、染色された細胞クラスターの形態における差と、それらの免疫
染色パターンに基づき、ＡＧＵＳ Ｐａｐスミア診断でＡＩＳおよびＨＳＩＬの
間の識別が可能である。このことは、明確かつ重要な臨床的含意を有する。 細胞学的診断を補佐するものとしての本発明の診断法の価値は、ＡＧＵＳスミ
アが３つのサブカテゴリー、ＡＧＵＳ−支持反応性、ＡＧＵＳ−ＮＯＳ、および
ＡＧＵＳ−支持新形成性（図４）に分類される場合に特に明らかである。予期さ
れたように、ＡＧＵＳ−支持新形成性という診断の殆どは、重大な病変の存在と
相関していた。これらの全ても、異型細胞のＭＮ／ＣＡ９免疫染色を示した。Ｌ
ＳＩＬおよび異型の症例（全部でn＝１２）は、正常なＥＣのみの陽性染色を示
した。ＡＧＵＳ−ＮＯＳのカテゴリーは、フォローアップ・バイオプシーで最も
範囲の広い病変を示した。再び、異型細胞のＭＮ／ＣＡ９免疫染色性は、重大な
病変が見つけられた症例の全てを予言した。少数（n＝１４）の「偽陽性」が、
ここで見つけられており、それらは、異型細胞がＭＮ／ＣＡ９陽性であるＬＳＩ
Ｌの症例である。この「偽陽性」染色パターンは、ＡＧＵＳ ＮＯＳカテゴリー
でのみ見つかっていることは興味深く、先に考察したように、進行するべく運命
づけられている病変を予後判定し得る。ＡＧＵＳ−支持反応性のカテゴリーでは
、相対的に少ない（n＝３）ものが、重大な病変を有していた。全てが、ＭＮ／
ＣＡ９免疫染色パターンにより正確に診断され、偽陽性は認められなかった。

【００８０】 これらのデータは、本発明に関連しては、異型細胞におけるＭＮ／ＣＡ９抗原
の発現が、ＡＧＵＳ診断で使用される優れたバイオマーカーであること、および
どのＡＧＵＳ診断が重大な病変を生じ易いか決定するのを補佐するものとしての
大きな利点を有して、臨床医に使用され得ることを明示する。このことは、ＡＧ
ＵＳ診断の約４０％のみが重大な病変に対応して関連づけられることが示された
ので、明確な費用−効果の可能性を有する（表１を参照）。

【００８１】 本発明は、特定の好ましい形態に関してかなり詳細に記載してきたが、他の形
態も可能である。従って、添付の請求項の精神および範囲は、本明細書中に記載
された好ましい形態の記述に制限されるべきではない。

【図面の簡単な説明】 本発明のこれら及び他の特徴、側面、および利益は、以下の記述、添付の請求
項、および添付の図面を参照して更に理解される。

【図１】 異型、前新形成、および新形成性病変を診断するための基準を例示するための
、扁平上皮および腺性の変化のスペクトルを示している：パネルＡは、正常な子
宮頚部であり、整然とした扁平上皮および腺性上皮を示しており、パネルBは、
異型扁平上皮の化生（左）および予備細胞の増殖（右）の例であり、パネルCは
、上皮の層状構造を有する腺性異型の例であり、パネルＤおよびＥは、各々ＬＳ
ＩＬおよびＨＳＩＬを例示しており、パネルFは、ＡＩＳの例である（倍率：Ａ
１００x、B〜F ２００x）。

【図２】 ＡＧＵＳ ＰａｐスミアにおけるＭＮ／ＣＡ９免疫反応性に関する染色パター
ンを示す。パネルＡは、何ら免疫染色性を示さないスミアであり；パネルＢは、
異型細胞（矢印）および正常ＥＣ（矢頭）の両方における陽性の免疫染色を示し
ており、パネルＣは、ＭＮ／ＣＡ９陽性の異型細胞のみを示しており、パネルＤ
は、正常なＥＣのみの免疫反応性の例であり、パネルＥには対応するＰａｐ染色
とともに、さらに免疫反応性のパターンは焦点性（パネルF）または散在性（パ
ネルG）であり得、免疫染色された細胞の形態は密なクラスター（パネルH）また
は蜂巣状構造（パネルＩ）であり得る。（倍率：Ａ、Ｆ、およびＧ １００x；
ＨおよびＩ ２００x；Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ、４００x）

【図３】 ＡＧＵＳ ＰａｐスミアのＭＮ／ＣＡ９免疫染色の分布と、それらの組織学的
診断との相関関係を示す。

【図４】 ＡＧＵＳ ＰａｐスミアのＭＮ／ＣＡ９免疫染色の分布を、３つのカテゴリー
：支持反応性、他には特定されない（ＮＯＳ）、および新形成性支持で示し、ま
たそれらの組織学的診断との相関関係を示す。

【図５】 拡大された核のサイズ、最少化された細胞の重なり、および中程度の核の多型
（パネルＡ、Ｂ、およびＣ）などの、ＡＧＵＳ−支持反応性Ｐａｐスミアにおけ
る異型細胞クラスターの細胞学的特徴を示し、ＭＮ／ＣＡ９発現を検出するため
に脱染色され免疫染色された同一の細胞クラスターが、いかなる免疫反応性も組
織学的病変に結びつけられない例（パネルＤ）や、強い（パネルＥ）および弱い
（パネルF）免疫反応性がＨＳＩＬの組織学的診断と結びつけられる例を提供す
る：パネルＥにおいて差し示された繊毛のある細胞がＭＮ／ＣＡ９陰性であるこ
とに注意（倍率：４００x）。

【図６】 隣接する中間の細胞（矢印）の核より３倍大きい核、および増大された細胞の
重なりと核の過染色性といった、ＡＧＵＳ Ｐａｐスミアにおける異型細胞クラ
スターの細胞学的特徴（パネルＡ、Ｂ、およびＣ）を示すが、同一の標本に関す
る対応するＭＮ／ＣＡ９免疫染色は、フォローアップ・バイオプシーで陰性であ
ったものに対応するパネルＤでは陰性の免疫染色を、ＨＳＩＬという組織学的診
断に相当するパネルＥでは陽性の免疫染色を、またフォローアップ・バイオプシ
ーで腺癌と診断されたものに相当するパネルFでは特徴的な蜂巣状パターンの免
疫染色を示す（倍率：４００x）。

【図７】 ＡＧＵＳ−支持新形成性Ｐａｐスミアにおける異型細胞クラスターに関する、
有意な細胞の重なり、核の多型および過染色性といった、細胞学的特徴を示し（
パネルＡ、Ｂ、およびＣ）、対応するＭＮ／ＣＡ９免疫染色は、良性であるフォ
ローアップ・バイオプシーに対応する陰性の免疫染色の例（パネルＤ）、ＨＳＩ
Ｌという組織学的診断に対応する陽性の免疫染色の例（パネルＥ）、および染色
された細胞であって、蜂巣状および円柱状の特徴を示し（パネルF）、ＡＩＳと
診断されたフォローアップ・バイオプシーに対応する細胞を示す（倍率：４００
x）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＣＡ，ＪＰ (72)発明者 スタンブリッジ、 エリック、 ジェイ． アメリカ合衆国 92625 カリフォルニア 州 コロナ デル マル シーウォード ロード 501 Ｆターム(参考） 4B024 AA12 BA36 CA12 HA14 4B063 QA19 QQ02 QQ53 QR55 QR62 QS34

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ベセスダシステム用語法のもとに、重大性未確定異型腺細胞
   （ＡＧＵＳ）として細胞学的に診断されているＰａｐスミア細胞からの、癌性ま
   たは前癌性の子宮頚部病変の存在を測定する方法であって、前記Ｐａｐスミアが
   異型および正常の頚管内細胞を含んでおり、前記方法が： （Ａ） 前記ＡＧＵＳ診断されたＰａｐスミア細胞を、それによりＭＮ／ＣＡ９
   抗原の発現が検出される方法に供すること； （Ｂ） 細胞学的に診断された前記ＡＧＵＳＰａｐスミア細胞の異型または正常
   な細胞上に発現されたＭＮ／ＣＡ９抗原の分布を観察すること；および （Ｃ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞上に観察されており、前記重大な
   病変が腺癌、浸潤癌（ＣＡ）、または高い悪性度分類の扁平上皮内病変（ＨＳＩ
   Ｌ）を含む時、重大な病変の存在を診断すること； （Ｄ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞には存在しないが前記正常な頚管
   内細胞上には存在しており、低い悪性度分類の病変が扁平上皮内病変（ＬＳＩＬ
   ）または異型を含む時、低い悪性度分類の病変の存在を診断すること、 を包含する、方法。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の方法であって、さらに： （Ｅ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞および正常な頚管内細胞には不存
   在である時、良性状態であると診断すること、 を包含する、方法。
3. 【請求項３】 ベセスダシステム用語法のもとに、重大性未確定異型腺細胞
   （ＡＧＵＳ）として細胞学的に診断されているＰａｐスミア細胞からの、腺癌の
   存在を測定する方法であって、前記Ｐａｐスミアが異型および正常の頚管内細胞
   を含んでおり、前記方法が： （Ａ） 前記ＡＧＵＳ診断されたＰａｐスミア細胞を、それによりＭＮ／ＣＡ９
   抗原の発現が検出される方法に供すること； （Ｂ） 細胞学的に診断された前記ＡＧＵＳＰａｐスミア細胞の異型または正常
   な細胞上に発現されたＭＮ／ＣＡ９抗原の分布を観察すること；および （Ｃ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞上に蜂巣状構造にて観察される時
   、腺癌の存在を診断すること； を包含する、方法。
4. 【請求項４】 請求項２に記載の方法であって、前記腺癌が上皮内腺癌（Ａ
   ＩＳ）または浸潤性腺癌である、方法。
5. 【請求項５】 ベセスダシステム用語法のもとに、重大性未確定異型腺細胞
   （ＡＧＵＳ）として細胞学的に診断されているＰａｐスミア細胞からの、高い悪
   性度分類の扁平上皮内病変の存在を測定する方法であって、前記Ｐａｐスミアが
   異型および正常の頚管内細胞を含んでおり、前記方法が： （Ａ） 前記ＡＧＵＳ診断されたＰａｐスミア細胞を、それによりＭＮ／ＣＡ９
   抗原の発現が検出される方法に供すること； （Ｂ） 細胞学的に診断された前記ＡＧＵＳＰａｐスミア細胞の異型または正常
   な細胞上に発現されたＭＮ／ＣＡ９抗原の分布を観察すること；および （Ｃ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞上に密なクラスターにて観察され
   る時、高い悪性度分類の扁平上皮病変（ＨＳＩＬ）の存在を診断すること； を包含する、方法。
6. 【請求項６】 ベセスダシステム用語法のもとに、重大性未確定異型腺細胞
   （ＡＧＵＳ）として細胞学的に診断されているＰａｐスミア細胞からの、癌性ま
   たは前癌性の子宮頚部病変の存在を測定する方法であって、前記Ｐａｐスミアが
   異型および正常の頚管内細胞を含んでおり、前記方法が： （Ａ） 前記ＡＧＵＳ診断されたＰａｐスミア細胞を、それによりＭＮ／ＣＡ９
   抗原の発現が検出される方法に供すること； （Ｂ） 細胞学的に診断された前記ＡＧＵＳＰａｐスミア細胞の異型または正常
   な細胞上に発現されたＭＮ／ＣＡ９抗原の分布を観察すること； （Ｃ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞上に観察されており、前記重大な
   病変が腺癌、浸潤癌、または高い悪性度分類の上皮内病変を含む時、重大な病変
   の存在を診断すること； （Ｄ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞上に、蜂巣上構造にて観察される
   時、腺癌の存在を診断すること；および （Ｅ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞に密なクラスターにて観察される
   時、高い悪性度分類の扁平上皮内病変（ＨＳＩＬ）の存在を診断すること、 を包含する、方法。
7. 【請求項７】 ベセスダシステム用語法のもとに、重大性未確定異型腺細胞
   （ＡＧＵＳ）として細胞学的に診断されているＰａｐスミア細胞からの、低い悪
   性度分類の子宮頚管病変の存在を測定する方法であって、前記Ｐａｐスミアが異
   型および正常の頚管内細胞を含んでおり、前記方法が： （Ａ） 前記ＡＧＵＳ診断されたＰａｐスミア細胞を、それによりＭＮ／ＣＡ９
   抗原の発現が検出される方法に供すること； （Ｂ） 細胞学的に診断された前記ＡＧＵＳＰａｐスミア細胞の異型または正常
   な細胞上に発現されたＭＮ／ＣＡ９抗原の分布を観察すること；および （Ｃ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞には不存在であるが前記正常な頚
   管内細胞上には存在している時、低い悪性度分類の扁平上皮内病変（ＬＳＩＬ）
   または異型の存在を診断すること； を包含する、方法。
8. 【請求項８】 ベセスダシステム用語法のもとに、重大性未確定異型腺細胞（
   ＡＧＵＳ）として細胞学的に診断されているＰａｐスミア細胞からの、癌性また
   は前癌性の子宮頚部病変の有無を測定する方法であって、前記Ｐａｐスミアが異
   型および正常の頚管内細胞を含んでおり、前記方法が： （Ａ） 前記ＡＧＵＳ診断されたＰａｐスミア細胞を、それによりＭＮ／ＣＡ９
   タンパク質またはそれを特徴づける部分が検出される方法に供すること； （Ｂ） 細胞学的に診断された前記ＡＧＵＳＰａｐスミア細胞の異型または正常
   な細胞上に発現されたＭＮ／ＣＡ９抗原の分布を観察すること； （Ｃ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞上に蜂巣状構造にて観察される時
   、腺癌の存在を診断すること； （Ｄ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞上に密なクラスターにて観察され
   る時、高い悪性度分類の扁平上皮病変（ＨＳＩＬ）の存在を診断すること； （Ｅ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記異型細胞には不存在であるが前記正常な頚
   管内細胞上には存在している時、低い悪性度分類の扁平上皮内病変（ＬＳＩＬ）
   および／または異型の存在を診断すること；および （Ｆ） 前記ＭＮ／ＣＡ９抗原が前記変異細胞および正常頚管内細胞にない時、
   良性状態であると診断すること、 を包含する、方法。
9. 【請求項９】 請求項８に記載の方法であって、前記ＭＮ／ＣＡ９抗原がＭＮ
   ／ＣＡ９タンパク質の特徴づけている部分を含む、方法。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の方法であって、前記ＭＮ／ＣＡ９タンパク
    質の前記特徴づけている部分が、前記ＭＮ／ＣＡ９タンパク質の少なくとも１つ
    の免疫反応性エピトープを含む、方法。
11. 【請求項１１】 請求項８に記載の方法であって、前記発現が免疫組織化学に
    より検出される、方法。
12. 【請求項１２】 請求項８に記載の方法であって、前記発現がＭＮ／ＣＡ９タ
    ンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物の増幅および／またはハイブリダイゼーシ
    ョンにより検出される、方法。