JP2003518371A - インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト関連分子およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト関連（ＩＬ−１ｒａ−Ｒ）ポリペプチドおよびこれをコードする核酸分子を提供する。本発明はまた、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生するための、選択的結合因子、ベクター、宿主細胞、および方法を提供する。本発明はさらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに関連する疾患、障害、および状態の、診断、処置、改善、および／または予防のための、薬学的組成物および方法を提供する。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸分子を含むトランスジェニック非ヒト動物がまた、本発明に含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新規インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト関連（ＩＬ−
１ｒａ−Ｒ）ポリペプチドおよびこれをコードする核酸分子に関する。本発明は
また、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生するための、選択的結合因子、ベク
ター、宿主細胞および方法に関する。本発明はさらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドと関連する疾患、障害、および状態の、診断、処置、改善、および／また
は予防のための薬学的組成物および方法に関する。

【０００２】 （発明の背景） 核酸分子の同定、クローニング、発現、および操作における技術進歩ならびに
ヒトゲノムの解読は、新規治療因子の発見を大きく加速した。現在、高速核酸配
列決定技術は、前例のない速度で配列情報を作製し得、そしてコンピュータ分析
と結合されて、ゲノムの一部および全体への重複配列の集合ならびにポリペプチ
ドコード領域の同定を可能にする。既知アミノ酸配列のデータベース編集物に対
する推定アミノ酸配列の比較は、以前に同定された配列および／または構造の目
印に対して相同性の程度を決定することを可能にする。核酸分子のポリペプチド
コード領域のクローニングおよび発現は、構造分析および機能分析のためのポリ
ペプチド産物を提供する。核酸分子およびコードされるポリペプチドの操作は、
治療剤としての使用に関して生成物に対して有利な特性を与え得る。

【０００３】 過去１０年間にわたるゲノム研究における有意な技術進歩にも関わらず、ヒト
ゲノムに基づく新規治療剤の開発に対する可能性は、未だ広く理解されていない
。潜在的に有利なポリペプチド治療剤をコードする多くの遺伝子またはこれらが
コードするポリペプチド（これらは、治療分子に対して「標的」としてはたらき
得る）は、未だ同定されていない。

【０００４】 従って、診断的な利点または治療的な利点を有する、新規ポリペプチドおよび
これらをコードする核酸分子を同定することが、本発明の目的である。

【０００５】 これまでに発見された最も強力な炎症性サイトカインのうちの１つは、インタ
ーロイキン−１（ＩＬ−１）である。ＩＬ−１は、多くの疾患および医学状態に
関与すると考えられている。ＩＬ−１は、マクロファージ／単球系統の細胞によ
って（排他的にではないが）産生され、そして２つの形態：ＩＬ−１アルファ（
ＩＬ−１α）およびＩＬ−１ベータ（ＩＬ−１β）で産生され得る。インターロ
イキン−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）は、インターロイキン−
１の天然のインヒビターとして作用するヒトタンパク質である。

【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、新規ＩＬ−１ｒａ−Ｒの核酸分子およびコードされるポリペプチド
に関する。

【０００７】 本発明は、単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：）１、配列番号３、配列番号５、また
は配列番号３５のいずれかに示されるヌクレオチド配列； （ｂ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサートのヌクレオチ
ド配列； （ｃ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
に示されるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列； （ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかの相補体に、中程度または高度にストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列；および （ｅ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供
する。

【０００８】 本発明はまた、単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
に示されるポリペプチドに少なくとも約７０％同一であるポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配
列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示される
ポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれ
かに示されるヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡ
インサートのヌクレオチド配列、または（ａ）の、対立遺伝子改変体またはスプ
ライス改変体をコードするヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチドフラグメントをコードす
る、配列番号１、配列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれかの
ヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサート、
（ａ）または（ｂ）の領域であって、ここで、上記ポリペプチドフラグメントは
、配列番号２、配列番号４、配列番号６、もしくは配列番号３６のいずれかに示
されるコードされたポリペプチドの活性を有するか、または抗原性である、領域
； （ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、配列番号１、配
列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれかのヌクレオチド配列、
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサート、または（ａ）〜（ｃ
）いずれかの領域； （ｅ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）〜（ｄ）のい
ずれかの相補体にハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；ならびに （ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供
する。

【０００９】 本発明はさらに、単離された核酸分子であって、以下； （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配
列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示される
ポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配列番号
２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペ
プチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配列番号
２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペ
プチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｄ）Ｃ末端短縮および／またはＮ末端短縮を有する配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配
列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示される
ポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短縮、およびＮ末
端短縮からなる群より選択される少なくとも１つの改変を有する配列番号２、配
列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチ
ドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに
示されるポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む（ａ）〜（ｅ）の
いずれかのヌクレオチド配列； （ｇ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）〜（ｆ）のい
ずれかの相補体にハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；ならびに （ｈ）（ａ）〜（ｅ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供
する。

【００１０】 本発明は、単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
に示されるアミノ酸配列；および （ｂ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサートによってコー
ドされるアミノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドを提供
する。

【００１１】 本発明はまた、単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
のオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）に対するアミノ酸配列； （ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
のアミノ酸配列に少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列であって、ここで
、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号
３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基を含む配列番号２、配列番号４、配列番
号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列のフラグメントで
あって、ここで、上記フラグメントは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、
または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有するか、また
は抗原性である、フラグメント；ならびに （ｄ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、もしくは配列番号３６のいずれ
かに示されるアミノ酸配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡイン
サートによってコードされるアミノ酸配列、（ａ）、または（ｂ）の、対立遺伝
子改変体またはスプライス改変体のアミノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドを提供
する。

【００１２】 本発明はさらに、単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって
、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または
配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列
； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって、ここ
で、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番
号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって、ここ
で、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番
号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｄ）Ｃ末端短縮および／またはＮ末端短縮を有する配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって
、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または
配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列
；ならびに （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短縮、およびＮ末
端短縮からなる群より選択される少なくとも１つの改変を有する配列番号２、配
列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列
であって、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６
、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミ
ノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドを提供
する。

【００１３】 本発明はなおさらに、単離されたポリペプチドであって、以下： ２位のアルギニン；３位のアラニン、リジン、またはアルギニン；７位のセリン
；８位のリジン；９位のアラニン、システイン、リジン、トレオニン、またはセ
リン；１０位のシステインまたはフェニルアラニン；１３位のアルギニンまたは
トリプトファン；１５位のセリン；１８位のアルギニン；１９位のセリンまたは
トレオニン；２１位のトレオニン；２３位のセリン；３４位のアルギニン；３７
位のチロシン、セリン、またはアルギニン；３８位のリジン、アルギニン、トレ
オニン、またはセリン；４１位のトレオニン；４３位のセリン、フェニルアラニ
ン、またはアラニン；４４位のアラニン；４８位のセリンまたはリジン；５２位
のアラニン、トレオニン、またはフェニルアラニン；５３位のセリン；５４位の
セリン；５８位のアラニンまたはチロシン；６５位のリジン；６６位のフェニル
アラニン；６７位のチロシン；６９位のセリン、チロシン、またはフェニルアラ
ニン；７３位のリジンまたはセリン；７８位のトレオニンまたはアルギニン；９
０位のセリンまたはアラニン；９１位のアラニン；９６位のセリン；９７位のリ
ジンまたはアルギニン；９８位のリジンまたはセリン；１００位のアラニン；１
０２位のチロシン；１０４位のアルギニンまたはアラニン；１０５位のリジン；
１０６位のトレオニン；１０８位のアルギニン；１０９位のリジン、トレオニン
、またはトリプトファン；１１０位のトレオニンまたはセリン；１１１位のセリ
ン；１１４位のセリン；１１６位のセリン；１１７位のフェニルアラニン、シス
テイン、またはチロシン；１２１位のチロシン；１２３位のセリンまたはアラニ
ン；１２６位のシステイン、セリン、またはトレオニン；１３６位のセリン；１
３８位のフェニルアラニンまたはアルギニン；１４１位のトレオニン、アルギニ
ン、またはアラニン；１４２位のリジンまたはチロシン；１４３位のトリプトフ
ァンまたはトレオニン；１４５位のアラニン；１４７位のトレオニンまたはセリ
ン；１５１位のシステイン；および１５２位のセリン、システイン、またはフェ
ニルアラニンからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を有する
配列番号１または配列番号３のいずれかに示されるアミノ酸配列を含む単離され
たポリペプチドであって、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号
４、または配列番号６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、単離
されたポリペプチドを提供する。

【００１４】 本発明はなおさらに、単離されたポリペプチドであって、以下： ２１位のアルギニン；２２位のアラニン、リジン、またはアルギニン；２６位の
セリン；２７位のリジン；２８位のアラニン、システイン、リジン、トレオニン
、またはセリン；２９位のシステインまたはフェニルアラニン；３２位のアルギ
ニンまたはトリプトファン；３４位のセリン；３７位のアルギニン；３８位のセ
リンまたはトレオニン；４０位のトレオニン；４２位のセリン；５３位のアルギ
ニン；５６位のチロシン、セリン、またはアルギニン；５７位のリジン、アルギ
ニン、トレオニン、またはセリン；６０位のトレオニン；６２位のセリン、フェ
ニルアラニン、またはアラニン；６３位のアラニン；６７位のセリンまたはリジ
ン；７１位のアラニン、トレオニン、またはフェニルアラニン；７２位のセリン
；７３位のセリン；７７位のアラニンまたはチロシン；８４位のリジン；８５位
のフェニルアラニン；８６位のチロシン；８８位のセリン、チロシン、またはフ
ェニルアラニン；９２位のリジンまたはセリン；９７位のトレオニンまたはアル
ギニン；１０９位のセリンまたはアラニン；１１０位のアラニン；１１５位のセ
リン；１１６位のリジンまたはアルギニン；１１７位のリジンまたはセリン；１
１９位のアラニン；１２１位のチロシン；１２３位のアルギニンまたはアラニン
；１２４位のリジン；１２５位のトレオニン；１２７位のアルギニン；１２８位
のリジン、トレオニン、またはトリプトファン；１２９位のトレオニンまたはセ
リン；１３０位のセリン；１３３位のセリン；１３５位のセリン；１３６位のフ
ェニルアラニン、システイン、またはチロシン；１４０位のチロシン；１４２位
のセリンまたはアラニン；１４５位のシステイン、セリン、またはトレオニン；
１５５位のセリン；１５７位のフェニルアラニンまたはアルギニン；１６０位の
トレオニン、アルギニン、またはアラニン；１６１位のリジンまたはチロシン；
１６２位のトリプトファンまたはトレオニン；１６４位のアラニン；１６６位の
トレオニンまたはセリン；１７０位のシステイン；および１７１位のセリン、シ
ステイン、またはフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも１つの
アミノ酸置換を有する配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリ
ペプチドであって、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、また
は配列番号６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、単離されたポ
リペプチドを提供する。

【００１５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒアミノ酸配列を含む融合ポリペプチドがまた、提供される。

【００１６】 本発明はまた、本明細書中に示されるような単離された核酸分子を含む発現ベ
クター、本明細書中に示されるような組換え核酸分子を含む組換え宿主細胞、お
よびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生する方法を提供し、この方法は、この
宿主細胞を培養する工程、必要に応じてそのように産生されたポリペプチドを単
離する工程を包含する。

【００１７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸分子を含むトランスジェニッ
ク非ヒト動物がまた、本発明に含まれる。ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子は、ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの増加した
レベル（これは、増加した循環レベルを含み得る）を可能にする様式で、動物中
に導入される。あるいは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子は、内因性ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドの発現を阻害する様式で動物に導入される（すなわち、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド遺伝子ノックアウトを保有するトランスジェニック動物を
作製する）。トランスジェニック非ヒト動物は、好ましくは哺乳動物であり、よ
り好ましくはげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）である。

【００１８】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの誘導体がまた、提供される。

【００１９】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに特異的に結合し得る選択的結合因子
（例えば、抗体およびペプチド）が、さらに提供される。このような抗体および
ペプチドは、アゴニストのものであってもアンタゴニストのものであってもよい
。

【００２０】 本発明のヌクレオチド、ポリペプチド、もしくは選択的結合因子ならびに１つ
以上の薬学的に受容可能な処方剤を含む薬学的組成物がまた、本発明によって含
まれる。薬学的組成物は、治療有効量の本発明のヌクレオチドまたはポリペプチ
ドを提供するために使用される。本発明はまた、このポリペプチド、核酸分子、
および選択的結合因子を使用する方法に関する。

【００２１】 本発明のＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドおよびＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子は、
疾患および障害（本明細書中に列挙されるものを含む）を処置、予防、改善、お
よび／または検出するための使用され得る。

【００２２】 本発明はまた、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに結合する試験分子を同定する
ために、試験分子をアッセイする方法を提供する。この方法は、ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドを試験分子と接触させて、この試験分子のこのポリペプチドに対
する結合の程度を決定する工程を包含する。この方法はさらに、このような試験
分子が、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストであ
るか否かを決定する工程を包含する。本発明はさらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドの発現またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの活性に対する分子の影響を
試験する方法を提供する。

【００２３】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を調整する方法およびＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドのレベル（すなわち、増加したレベルまたは減少したレベル）を調
節する方法がまた、本発明によって含まれる。１つの方法は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドをコードする核酸分子を動物に投与する工程を包含する。別の方法
において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を調整または調節するエレメン
トを含む核酸分子が、投与され得る。これらの方法の例としては、本明細書中に
さらに記載されるように、遺伝子治療、細胞治療、およびアンチセンス治療が挙
げられる。

【００２４】 本発明の別の局面において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、そのレセプタ
ー（「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター」）を同定するために使用され
得る。種々の形態の「発現クローニング」は、タンパク質リガンドに対するレセ
プターをクローン化するために広範囲に使用されている。例えば、Ｓｉｍｏｎｓ
ｅｎおよびＬｏｄｉｓｈ、１９９４、Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃ
ｉ．１５：４３７−４１ならびにＴａｒｔａｇｌｉａら、１９９５、Ｃｅｌｌ
８３：１２６３−７１を参照のこと。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター
の単離は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル伝達経路の新規アゴニストお
よびアンタゴニストの同定または開発に有用である。このようなアゴニストおよ
びアンタゴニストとしては、可溶性ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター、
抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター−選択的結合因子（例えば、抗体ま
たはその誘導体）、小分子、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられ
、これらのうちのいずれかは、１つ以上の疾患または障害（本明細書中に開示さ
れるものを含む）の処置に有用であり得る。

【００２５】 （発明の詳細な説明） 本明細書中で使用される節の表題は、組織的な目的のみのためであり、そして
記載される内容を限定するようには解釈されるべきではない。本願において列挙
される全ての参考文献は、明確に本明細書中に参考として援用される。

【００２６】 （定義） 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子」または「ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子」あるい
は「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリヌクレオチド」とは、配列番号１、配列番号３、配列
番号５、または配列番号３５のいずれかに示されるヌクレオチド配列、配列番号
２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３にお
けるＤＮＡインサートのヌクレオチド配列、および本明細書中で定義される核酸
分子を含むか、またはこれらからなる核酸分子をいう。

【００２７】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド対立遺伝子改変体」とは、生物体または
生物体の集団の染色体の所定の遺伝子座を占める遺伝子の、天然に存在する可能
ないくつかの交替形態のうちの１つをいう。

【００２８】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライス改変体」とは、配列番号２、
配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドアミノ酸配列のＲＮＡ転写物中のイントロン配列の代替プロ
セシングによって生成される、核酸分子（通常はＲＮＡ）をいう。

【００２９】 用語「単離された核酸分子」とは、（１）総核酸が供給源細胞から単離される
場合に、これが天然で一緒に見出されるタンパク質、脂質、炭水化物、または他
の物質のうち少なくとも約５０パーセントから分離された本発明の核酸分子、（
２）「単離された核酸分子」が天然で連結しているポリヌクレオチドの全てまた
は一部に連結していない本発明の核酸分子、（３）天然では連結しないポリヌク
レオチドに作動可能に連結した本発明の核酸分子、または（４）より大きなポリ
ヌクレオチド配列の一部として天然には存在しない、本発明の核酸分子をいう。
好ましくは、本発明の単離された核酸分子は、任意の他の混入核酸分子、または
天然の環境において見出される他の混入物（これらは、ポリペプチド産生におけ
る使用、または治療的使用、診断的使用、予防的使用、または研究的使用に干渉
する）を実質的に含まない。

【００３０】 用語「核酸配列」または「核酸分子」は、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列をいう。こ
の用語は、ＤＮＡおよびＲＮＡの公知の塩基アナログのいずれかから形成される
分子を含み、例えば、以下であるがこれらに限定されない：４−アセチルシトシ
ン、８−ヒドロキシ−Ｎ６−メチルアデノシン、アジリジニル−シトシン、プソ
イドイソシトシン（ｐｓｅｕｄｏｉｓｏｃｙｔｏｓｉｎｅ）、５−（カルボキシ
ヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、
５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチル
アミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ６−イソ−ペンテニル
アデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１−メチルグア
ニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、
２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−メチル
アデニン、７−メチルグアニン、５−エチルアミノメチルウラシル、５−メトキ
シアミノ−メチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン、５’
−メトキシカルボニル−メチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチ
オ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル
、ウラシル−５−オキシ酢酸、オキシブトキソシン、プソイドウラシル、キュー
オシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル
、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチ
ルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、プソイドウラシル、キューオシン、２
−チオシトシン、および２，６−ジアミノプリン。

【００３１】 用語「ベクター」は、宿主細胞にコード情報を移すために使用される任意の分
子（例えば、核酸、プラスミド、またはウイルス）をいうように使用される。

【００３２】 用語「発現ベクター」は、宿主細胞の形質転換に適切であり、そして挿入され
た異種核酸配列の発現を、指向および／または制御する核酸配列を含むベクター
をいう。発現としては、転写、翻訳、およびＲＮＡスプライシング（イントロン
が存在する場合）のようなプロセスが挙げられるがこれらに限定されない。

【００３３】 用語「作動可能に連結された」は、本明細書中で、隣接配列の配置をいうよう
に使用され、ここで、このように記載される隣接配列は、その通常の機能を行う
ように構成または構築される。従って、コード配列に作動可能に連結した隣接配
列は、このコード配列の複製、転写および／または翻訳を行うことが可能であり
得る。例えば、コード配列は、このプロモーターがコード配列の転写を指向し得
る場合に、プロモーターに作動可能に連結される。隣接配列は、これが正確に機
能する限り、コード配列と連続する必要はない。したがって、例えば、介在性非
翻訳の、転写された配列は、プロモーター配列とコード配列との間に存在し得、
そしてこのプロモーター配列は、依然としてこのコード配列に「作動可能に連結
」されているとみなされ得る。

【００３４】 用語「宿主細胞」は、核酸配列で形質転換されたか、または形質転換され得、
次いで目的の選択された遺伝子を発現し得る細胞をいうように使用される。この
用語には、選択された遺伝子が存在する限り、子孫が形態学または遺伝子構造に
おいて本来の親と同一であろうとなかろうと、親細胞の子孫を含む。

【００３５】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド」とは、配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチド、お
よび関連するポリペプチドをいう。関連ポリペプチドとしては、ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドフラグメント、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドオルソログ、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体、およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体
が挙げられ、これらは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号
３６のいずれかに示されるポリペプチドの少なくとも１つの活性を保有する。Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、本明細書中で定義される成熟ポリペプチドであ
り得、そしてこれらが調製される方法に依存して、アミノ末端メチオニン残基を
有しても有さなくてもよい。

【００３６】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメント」とは、配列番号２、配列
番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの
、アミノ末端（リーダー配列を有するかまたは有さない）での短縮化および／ま
たはカルボキシ末端での短縮化を含むポリペプチドをいう。用語「ＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドフラグメント」はまた、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドオルソ
ログ、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド改変体のアミノ末端および／またはカルボキシ末端短縮化、あるいはＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド対立遺伝子改変体またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
スプライス改変体によってコードされるポリペプチドのアミノ末端および／また
はカルボキシ末端短縮化をいう。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメントは
、選択的ＲＮＡスプライシング、またはインビボプロテアーゼ活性から生じ得る
。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの膜結合形態もまた、本発明によって意図され
る。好ましい実施形態において、短縮化および／または欠失は、約１０アミノ酸
、または約２０アミノ酸、または約５０アミノ酸、または約７５アミノ酸、また
は約１００アミノ酸、または約１００より多くのアミノ酸を含む。このように生
成されるポリペプチドフラグメントは、約２５個連続したアミノ酸、または約５
０アミノ酸、または約７５アミノ酸、または約１００アミノ酸、または約１２５
アミノ酸を含む。このようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメントは、必
要に応じて、アミノ末端メチオニン残基を含み得る。このようなフラグメントは
、例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対する抗体を生成するために使用さ
れ得ることが理解される。

【００３７】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドオルソログ」は、配列番号２、配列番号
４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドアミノ酸配列に対応する、別の種由来のポリペプチドをいう。例えば
、マウスおよびヒトのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、互いにオルソログであ
るとみなされる。

【００３８】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変」は、配列番号２、配列番号４、配
列番号６、または配列番号３６（リーダー配列を有するかまたは有さない）のい
ずれかに示されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドアミノ酸配列と比較して、１つ
以上のアミノ酸配列の置換、欠失（例えば、内部欠失および／またはＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドフラグメント）、および／または付加（例えば、内部付加お
よび／またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ融合ポリペプチド）を有するアミノ酸配列を含む
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをいう。改変体は、天然に存在する（例えば、Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチド対立遺伝子改変体、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
オルソログ、およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライス改変体）か、また
は、人工的に構築され得る。このようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体は
、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号３５のいずれかに示さ
れるＤＮＡ配列から変化するＤＮＡ配列を有する、対応する核酸分子から調製さ
れ得る。好ましい実施形態において、この改変体は、１〜３、または１〜５、ま
たは１〜１０、または１〜１５、または１〜２０、または１〜２５、または１〜
５０、または１〜７５、または１〜１００、または１００より多くのアミノ酸の
置換、挿入、付加、および／または欠失を有し、ここで、この置換は、保存的、
または非保存的、あるいはその任意の組み合わせであり得る。

【００３９】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体」は、配列番号２、配列番号４、
配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチド、本明細書
中で定義されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメント、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドオルソログ、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体をいい、
これらは、化学的に改変されている。用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導
体」はまた、本明細書中で定義されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド対立遺伝子
改変体またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライス改変体によってコードさ
れるポリペプチドをいい、これは化学的に改変されている。

【００４０】 用語「成熟ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド」は、リーダー配列を欠失したＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドをいう。成熟ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドはまた、
他の改変（例えば、アミノ末端（リーダー配列を有するかまたは有さない）およ
び／またはカルボキシ末端のタンパク質分解性プロセシング、より大きな前駆体
からのより小さなポリペプチドの切断、Ｎ連結および／またはＯ連結グリコシル
化など）を含み得る。

【００４１】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒ融合ポリペプチド」は、配列番号２、配列番号４、配
列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチド、本明細書中
で定義されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメント、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドオルソログ、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体、またはＩＬ−１
ｒａ−Ｒ誘導体のアミノ末端またはカルボキシ末端での、１つ以上のアミノ酸の
融合（例えば、異種タンパク質またはペプチド）をいう。用語「ＩＬ−１ｒａ−
Ｒ融合ポリペプチド」はまた、本明細書中で定義されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチド対立遺伝子改変体またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライス改変体
によってコードされるポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端での、
１つ以上のアミノ酸の融合をいう。

【００４２】 用語「生物学的に活性なＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド」とは、配列番号２、
配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかのアミノ酸配列を含む
ポリペプチドの、少なくとも１つの活性特徴を有するＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドをいう。さらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、免疫原としての活性を
有し得る；すなわち、このＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、抗体が惹起され得
る少なくとも１つのエピトープを含む。

【００４３】 用語「単離されたポリペプチド」とは、（１）供給源細胞から単離される場合
に、天然で一緒に見出されるポリペプチド、脂質、炭水化物、または他の物質の
少なくとも約５０％から単離された本発明のポリペプチド、（２）「単離された
ポリペプチド」が天然で連結するポリペプチドの全てまたは一部に連結しない（
共有結合的または非共有結合的相互作用によって）、本発明のポリペプチド、（
３）天然には連結しないポリペプチドに作動可能に連結（共有結合的または非共
有結合的相互作用によって）する、本発明のポリペプチド、または（４）天然に
は存在しない本発明のポリペプチドをいう。好ましくは、この単離されたポリペ
プチドは、任意の他の混入ポリペプチドまたは天然の環境において見出される他
の混入物（これは、その治療的使用、診断的使用、予防的使用、または研究的使
用に干渉する）を実質的に含まない。

【００４４】 用語「同一性」とは、当該分野で公知のように、配列の比較によって決定され
る、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関係をい
う。当該分野において、「同一性」はまた、場合に応じて、２つ以上のヌクレオ
チドまたは２つ以上のアミノ酸配列間の一致によって決定されるように、核酸分
子またはポリペプチド間の配列関連性の程度を意味する。「同一性」は、２つ以
上の配列のうち小さなものと、特定の数理的モデルまたはコンピュータプログラ
ム（すなわち、「アルゴリズム」）によって焦点をあてられたギャップ整列（存
在する場合）との間の一致の同一パーセントを評価する。

【００４５】 用語「相同性」は、概念に関するが、「同一性」とは対照的に、「相同性」は
、同一的一致および保存的置換の一致の両方を含む関連性の基準をいう。２つの
ポリペプチド配列が、例えば１０／２０個同一のアミノ酸を有し、そして残りが
全て非保存的置換である場合、パーセント同一性および相同性は、どちらも５０
％である。同じ例において、保存的置換であるさらに５つの位置が存在する場合
、パーセント同一性は５０％のままであるが、パーセント相同性は７５％（１５
／２０）である。したがって、保存的置換が存在する場合、２つのポリペプチド
間のパーセント相同性は、これらの２つのポリペプチド間のパーセント同一性よ
りも高い。

【００４６】 用語「天然に存在する」または「ネイティブの」は、核酸分子、ポリペプチド
、宿主細胞などのような生物学的材料と関連して使用される場合、天然において
見出され、そしてヒトによって操作されていない材料をいう。同様に、「天然に
存在しない」または「ネイティブではない」は、本明細書中で使用される場合、
天然で見出されないか、またはヒトによって構造的に改変もしくは合成された材
料をいう。

【００４７】 用語「有効量」および「治療有効量」は、各々、本明細書中に示されるＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドの１つ以上の生物学的活性の観察可能なレベルを支持す
るために使用されるＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドまたはＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸
分子の量をいう。

【００４８】 用語「薬学的に受容可能なキャリア」または「生理学的に受容可能なキャリア
」は、本明細書中で使用される場合、薬学的組成物としてのＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチド、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ選択的結合因
子の送達の達成または増強に適切な１つ以上の処方材料をいう。

【００４９】 用語「抗原」とは、選択的結合因子（例えば、抗体）により結合され得、そし
てさらに動物において使用されて、その抗原のエピトープに結合し得る抗体を産
生じ得る分子または分子の一部をいう。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得
る。

【００５０】 用語「選択的結合因子」とは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに特異性を有す
る分子（単数または複数）をいう。本明細書中で使用される場合、用語「特異的
」および「特異性」とは、選択的結合因子の、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドに結合し、かつ非ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに結合しない能力をいう。し
かし、選択的結合因子がまた、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配
列番号３６のいずれかに記載されるようなポリペプチドのオルソログ（すなわち
、その種間変形（例えば、マウスＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドおよびラットＩ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチド））に結合し得ることが、理解される。

【００５１】 用語「形質導入」とは、通常はファージによる１つの細菌から別の細菌への遺
伝子の伝達をいう。「形質導入」はまた、レトロウイルスによる真核生物細胞配
列の獲得および伝達をいう。

【００５２】 用語「トランスフェクション」は、細胞による異種または外因性ＤＮＡの取り
込みをいうために使用され、そして細胞は、外因性ＤＮＡが細胞膜内に導入され
た場合には「トランスフェクトされ」ている。多数のトランスフェクション技術
は、当該分野で周知であり、そして本明細書中に開示される。例えば、Ｇｒａｈ
ａｍら，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，１９
８９）；Ｄａｖｉｓら，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８６）；ａｎｄ Ｃｈｕら，１９
８１，Ｇｅｎｅ １３：１９７を参照のこと。このような技術を使用して、１つ
以上の外因性ＤＮＡ部分を適切な宿主細胞に導入し得る。

【００５３】 本明細書中で使用される場合、用語「形質転換」とは、細胞の遺伝的特徴にお
ける変化をいい、そして細胞は、新しいＤＮＡを含有するように改変された場合
に形質転換されている。例えば、細胞は、それがそのネイティブな状態から遺伝
的に改変される場合に形質転換される。トランスフェクションまたは形質導入に
続いて、ＤＮＡの形質転換は、物理的に細胞の染色体に組み込むことにより細胞
のＤＮＡと組換わり得るか、複製されることなしにエピソームエレメントとして
一時的に維持され得るか、またはプラスミドとして独立的に複製し得る。ＤＮＡ
が細胞分裂と共に複製される場合に、細胞は、安定に形質転換されたとみなされ
る。

【００５４】 （核酸分子および／またはポリペプチドの関連性） 関連した核酸分子が、配列番号１、配列番号３、配列番号５または配列番号３
５のいずれかの核酸分子の対立遺伝子改変体またはスプライス改変体を包含する
こと、および上記のヌクレオチド配列のいずれかに相補的である配列を包含する
ことが理解される。関連した核酸分子はまた、配列番号２、配列番号４、配列番
号６または配列番号３６のいずれかにおけるポリペプチドと比較して１以上のア
ミノ酸残基の置換、改変、付加および／または欠失を含むかまたは本質的にこれ
からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を包含する。このような関
連したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、例えば、１以上のＮ結合型もしくはＯ
結合型のグリコシル化部位の付加および／もしくは欠失、または１以上のシステ
イン残基の付加および／もしくは欠失を含み得る。

【００５５】 関連した核酸分子はまた、配列番号２、配列番号４、配列番号６または配列番
号３６のいずれかのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの少なくとも約２５個連続し
たアミノ酸、または少なくとも約５０個のアミノ酸、または少なくとも約７５個
のアミノ酸、または少なくとも約１００個のアミノ酸、または少なくとも約１２
５個のアミノ酸、または１２５個より多くのアミノ酸残基のポリペプチドをコー
ドする、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子のフラグメントを包含する。

【００５６】 さらに、関連したＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子はまた、本明細書中で定義したと
おりの中程度または高度にストリンジェントな条件下で、配列番号１、配列番号
３、配列番号５もしくは配列番号３５のいずれかのＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子ま
たはポリペプチドをコードする分子の十分に相補的な配列とハイブリダイズする
ヌクレオチド配列を含む分子を包含し、このポリペプチドは、配列番号２、配列
番号４、配列番号６もしくは配列番号３６、または本明細書中に定義したとおり
の核酸フラグメント、または本明細書中に定義したとおりのポリペプチドをコー
ドする核酸フラグメントのいずれかに示されるアミノ酸配列を含む。ハイブリダ
イゼーションプローブは、本明細書中に提供されるＩＬ−１ｒａ−Ｒ配列を用い
てｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリーまたは合成ＤＮＡライブラリーを関連し
た配列についてスクリーニングして調製され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドのＤＮＡ配列および／またはアミノ酸配列のうちの、既知配列に対して顕著な
同一性を示す領域は、本明細書中に記載されるとおりの配列アラインメントアル
ゴリズムを用いて容易に決定され、そしてこれらの領域を用いて、スクリーニン
グのためのプローブを設計し得る。

【００５７】 用語「高度にストリンジェントな条件」とは、配列が非常に相補的であるＤＮ
Ａ鎖のハイブリダイゼーションを許容し、かつ顕著に不一致のＤＮＡのハイブリ
ダイゼーションを排除するように設計された条件をいう。ハイブリダイゼーショ
ンのストリンジェンシーは、温度、イオン強度および変性剤（例えば、ホルムア
ミド）の濃度によって主に決定される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄につ
いての「高度にストリンジェントな条件」の例は、６５〜６８℃での０．０１５
Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウムまたは４２℃での０．０
１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウムおよび５０％ホルム
アミドである。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
（第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１
９８９）；Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｓ
ａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ第４章（ＩＲＬ Ｐｒ
ｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を参照のこと。

【００５８】 よりストリンジェントな条件（例えば、より高い温度、より低いイオン強度、
より高いホルムアミドまたは他の変性剤）もまた用いられ得るが、ハイブリダイ
ゼーションの速度が影響される。他の薬剤は、非特異的および／またはバックグ
ラウンドのハイブリダイゼーションを減少させる目的のために、ハイブリダイゼ
ーションおよび洗浄の緩衝液中に含まれ得る。例は、０．１％ウシ血清アルブミ
ン、０．１％ポリビニルピロリドン、０．１％ピロリン酸ナトリウム、０．１％
ドデシル硫酸ナトリウム、ＮａＤｏｄＳＯ_４、（ＳＤＳ）、ｆｉｃｏｌｌ、デン
ハルト溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（または別の非相補的ＤＮＡ）およびデ
キストラン硫酸であるが、他の適切な薬剤もまた用いられ得る。これらの添加剤
の濃度および種類は、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに実質
的に影響を与えることなく変更され得る。ハイブリダイゼーション実験は通常、
ｐＨ６．８〜７．４で実施される；しかし、代表的なイオン強度の条件では、ハ
イブリダイゼーションの速度は、ｐＨからほぼ独立する。Ａｎｄｅｒｓｏｎら，
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｓａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃ
ａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ第４章（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を参照
のこと。

【００５９】 ＤＮＡ二重鎖の安定性に影響を与える因子としては、塩基組成、長さおよび塩
基対の不一致程度が挙げられる。ハイブリダイゼーション条件は、これらの変動
要因を適応させ、そして異なる配列関連性のＤＮＡがハイブリッドを形成するの
を可能にするために当業者によって調整され得る。完全に一致したＤＮＡ二重鎖
の融解温度は、以下の方程式によって評価され得る： Ｔ_ｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ
）−６００／Ｎ−０．７２（％ホルムアミド） ここで、Ｎは、形成される二重鎖の長さであり、［Ｎａ＋］は、ハイブリダイゼ
ーション溶液または洗浄溶液中でのナトリウムイオンのモル濃度であり、％Ｇ＋
Ｃは、ハイブリッド中での（グアニン＋シトシン）塩基の百分率である。不完全
に一致したハイブリッドについては、融解温度は、１％の不一致毎に約１℃下げ
られる。

【００６０】 用語「中程度にストリンジェントな条件」とは、「高度にストリンジェントな
条件」下で生じ得るよりも高い程度の塩基対不一致を有するＤＮＡ二重鎖が形成
され得る条件をいう。代表的な「中程度にストリンジェントな条件」の例は、５
０〜６５℃での０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウ
ムまたは３７〜５０℃での０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン
酸ナトリウムおよび２０％ホルムアミドである。例示として、０．０１５Ｍナト
リウムイオン中での５０℃という「中程度にストリンジェントな条件」は、約２
１％の不一致を可能にする。

【００６１】 「高度にストリンジェントな条件」と「中程度にストリンジェントな条件」と
の間に絶対的な区別が存在しないことが当業者によって認識される。例えば、０
．０１５Ｍナトリウムイオン（ホルムアミドなし）では、完全に一致した長さの
ＤＮＡの融解温度は、約７１℃である。６５℃で（同じイオン強度で）の洗浄を
用いると、このことは、約６％の不一致を可能にする。より遠く関連した配列を
捕獲するために、当業者は、単純に、温度を低くし得るかまたはイオン強度を高
くし得る。

【００６２】 約２０ｎｔまでのオリゴヌクレオチドプローブについての１Ｍ ＮａＣｌ^＊中
での融解温度の良好な評価は、以下によって与えられる： Ｔｍ＝Ａ−Ｔ塩基対あたり２℃ ＋ Ｇ−Ｃ塩基対あたり４℃^＊ ６×塩クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのナトリウムイオン濃度は、１Ｍで
ある。Ｓｕｇｇｓら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｕｓｉｎ
ｇ Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｇｅｎｅｓ ６８３（ＢｒｏｗｎおよびＦｏｘ編，１９
８１）を参照のこと。

【００６３】 オリゴヌクレオチドについての高度ストリンジェンシー洗浄条件は通常、６×
ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中でのそのオリゴヌクレオチドのＴｍよりも０℃〜５
℃低い温度においてである。

【００６４】 別の実施形態では、関連した核酸分子は、配列番号１、配列番号３、配列番号
５もしくは配列番号３５のいずれかに示されるとおりのヌクレオチド配列に対し
て少なくとも約７０パーセント同一であるヌクレオチド配列を含むかもしくはこ
れからなるか、または配列番号２、配列番号４、配列番号６もしくは配列番号３
６のいずれかに示すとおりのポリペプチドに対して少なくとも約７０パーセント
同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むかもしくは本質的
にこれからなる。好ましい実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号１、配
列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれかに示されるとおりのヌ
クレオチド配列に対して約７５パーセント、もしくは約８０パーセント、もしく
は約８５パーセント、もしくは約９０パーセント、もしくは約９５、９６、９７
、９８、もしくは９９パーセント同一であるか、またはヌクレオチド配列は、配
列番号２、配列番号４、配列番号６もしくは配列番号３６のいずれかに示される
とおりのポリペプチド配列に対して約７５パーセント、もしくは約８０パーセン
ト、もしくは約８５パーセント、もしくは約９０パーセント、もしくは約９５、
９６、９７、９８、もしくは９９パーセント同一であるポリペプチドをコードす
る。関連した核酸分子は、配列番号２、配列番号４、配列番号６または配列番号
３６のいずれかに示されるポリペプチドの少なくとも１つの活性を保有するポリ
ペプチドをコードする。

【００６５】 核酸配列における相違は、配列番号２、配列番号４、配列番号６または配列番
号３６のいずれかのアミノ酸配列と比較して、アミノ酸配列の保存的および／ま
たは非保存的改変をもたらし得る。

【００６６】 配列番号２、配列番号４、配列番号６または配列番号３６のいずれかのアミノ
酸配列に対する保存的改変（およびコードするヌクレオチドに対する、対応する
改変）は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能的特徴および化学的特徴と類似
の機能的特徴および化学的特徴を有するポリペプチドを生じる。対照的に、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能的特徴および／または化学的特徴における実質
的な改変は、以下を維持することに対するその影響が顕著に異なる、配列番号２
、配列番号４、配列番号６または配列番号３６のいずれかのアミノ酸配列におけ
る置換を選択することによって達成され得る：（ａ）例えば、シートもしくはヘ
リックスコンホメーションのような、置換領域における分子骨格の構造、（ｂ）
標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ。

【００６７】 例えば、「保存的アミノ酸置換」は、その位置でのアミノ酸残基の極性にも電
荷にもほとんどまたは全く影響がないような、標準的残基によるネイティブなア
ミノ酸残基の置換を含み得る。さらに、ポリペプチド中の任意のネイティブな残
基はまた、「アラニンスキャニング変異誘発」について以前に記載されたように
、アラニンによって置換され得る。

【００６８】 保存的アミノ酸置換はまた、生物学的系における合成によるよりむしろ、化学
的なペプチド合成によって代表的に組み込まれる、天然には存在しないアミノ酸
残基を含む。これらとしては、ペプチド模倣物、およびアミノ酸部分の他の逆転
形態または反転形態が挙げられる。

【００６９】 天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて、複数のクラスに分割され
得る： １）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ； ２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ； ３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ； ４）塩基性：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ； ５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および ６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【００７０】 例えば、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーの、別のク
ラス由来のメンバーに対する交換を包含し得る。このような置換された残基は、
非ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相同なヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドの領域またはこの分子の非相同領域に導入され得る。

【００７１】 このような変化を行う際に、アミノ酸のヒドロパシー指数が考慮され得る。各
アミノ酸は、その疎水性および電荷特性に基づいて、ヒドロパシー指数を割り当
てられている。ヒドロパシー指数は、以下である：イソロイシン（＋４．５）；
バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；
システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１
．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）
；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）
；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５
）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．
９）；およびアルギニン（−４．５）。

【００７２】 タンパク質に対する相互作用的な生物学的機能を確認する際の、ヒドロパシー
アミノ酸指数の重要性は、当該分野において一般的に理解されている（Ｋｙｔｅ
ら、１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−３１）。特定のアミノ
酸が類似のヒドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸の代わりに使用
され得、そして依然として類似の生物学的活性を維持し得ることが、公知である
。ヒドロパシー指数に基づいて変化を起こす際に、ヒドロパシー指数が±２以内
であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内であるものが特に好ましく、そして
±０．５以内であるものが、なおより特に好ましい。

【００７３】 類似のアミノ酸の置換が親水性に基づいて効果的になされ得る（特に、これに
よって作製された生物学的機能的に等価なタンパク質またはペプチドが、この場
合においてと同様に、免疫学的実施形態における使用に関して考慮される場合）
こともまた、当該分野において理解されている。タンパク質の最も大きな局所的
平均親水性は、その隣接するアミノ酸の親水性によって支配される場合に、その
免疫原性および抗原性、すなわち、そのタンパク質の生物学的特性に相関する。

【００７４】 以下の親水性の値が、これらのアミノ酸残基に割り当てられた：アルギニン（
＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミ
ン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グル
タミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−
０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（
−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．
８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（
−２．５）；およびトリプトファン（−３．４）。類似の親水性の値に基づいて
変化を行う際に、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±ｌ以
内であるものが特に好ましく、そして±０．５以内であるものが、なおより特に
好ましい。一次アミノ酸配列から、エピトープをまた、親水性に基づいて同定し
得る。これらの領域はまた、「エピトープコア領域」と呼ばれる。

【００７５】 所望のアミノ酸置換（保存的であれ非保存的であれ）は、当業者によって、こ
のような置換が所望される時点で決定され得る。例えば、アミノ酸置換を使用し
て、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの重要な残基を同定し得るか、または本明細
書中に記載されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの親和性を増加もしくは減少さ
せ得る。例示的なアミノ酸置換は、表Ｉに記載される。

【００７６】

【表１】 当業者は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいず
れかに記載のポリペプチドの適切な改変体を、周知の技術を使用して、決定し得
る。生物学的活性を破壊することなく変化され得る分子の適切な領域を同定する
ために、当業者は、活性のために重要であるとは考えられない領域を標的化し得
る。例えば、同じ種由来かまたは他の種由来の、類似の活性を有する類似のポリ
ペプチドが既知である場合には、当業者は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのア
ミノ酸配列を、このような類似のポリペプチドと比較し得る。このような比較を
用いて、類似のポリペプチド間で保存される分子の残基および部分を同定し得る
。このような類似のポリペプチドに対して保存されていない、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
分子の領域における変化が、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生物学的活性およ
び／または構造にさほど不利に影響を与えるようではないことが、理解される。
当業者にはまた、比較的保存された領域においてさえ、化学的に類似のアミノ酸
を、活性を維持ながら天然に存在する残基と置換し得ることが公知である（保存
的アミノ酸残基置換）。従って、生物学的活性または構造のために重要であり得
る領域でさえ、生物学的活性を破壊することなく、またはポリペプチド構造に不
利に影響を与えることなく、保存的アミノ酸置換に供され得る。

【００７７】 さらに、当業者は、活性または構造のために重要である、類似のポリペプチド
における残基を同定する、構造−機能研究を再調査し得る。このような比較の観
点において、類似のポリペプチドにおける活性または構造のために重要なアミノ
酸残基に対応するＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドにおける、アミノ酸残基の重要
性を予測し得る。当業者は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのこのような予測さ
れた重要なアミノ酸残基に対する化学的に類似のアミノ酸置換を、選択し得る。

【００７８】 当業者はまた、類似のポリペプチドにおける三次元構造に関して、三次元構造
およびアミノ酸配列を分析し得る。このような情報の観点において、当業者は、
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸残基のアライメントを、その三次元構
造に関して予測し得る。当業者は、そのタンパク質の表面に存在すると予測され
るアミノ酸残基に対する急激な変化を起こさないように、選択し得る。なぜなら
、このような残基は、他の分子との重要な相互作用に関与し得るからである。さ
らに、当業者は、単一のアミノ酸置換を各アミノ酸残基に含む、試験改変体を生
成し得る。これらの改変体は、当業者に公知の活性アッセイを使用して、スクリ
ーニングされ得る。このような改変体は、適切な改変体に関する情報を集めるた
めに使用され得る。例えば、特定のアミノ酸残基に対する変化が破壊を生じるか
、所望でなく減少するか、または所望でない活性であることを発見した場合には
、このような変化を有する改変体は、回避される。換言すれば、このような慣用
的な実験から集めた情報に基づいて、当業者は、さらなる置換が、単独でかまた
は他の変異と組み合わせてかのいずれかで回避されるべきであるアミノ酸を、容
易に決定し得る。

【００７９】 多数の科学刊行物が、二次構造の推定に充てられてきた。Ｍｏｕｌｔ，１９９
６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：４２２−２７；Ｃｈｏｕ
ら、１９７４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３：２２２−４５；Ｃｈｏｕら、
１９７４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １１３：２１１−２２；Ｃｈｏｕら、１
９７８，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．４７：４５−４８；Ｃｈｏｕら、１９７８，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．４７：２５１−２７６；およびＣｈｏｕら、１９７９，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．
２６：３６７−８４を参照のこと。さらに、コンピュータプログラムが、二次構
造の推定を補助するために、現在利用可能である。二次構造を推定する１つの方
法は、相同性モデリングに基づく。例えば、３０％より大きな配列同一性または
４０％より大きな類似性を有する２つのポリペプチドまたはタンパク質は、しば
しば、類似の構造トポロジーを有する。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ）
の近年の成長は、二次構造（ポリペプチドまたはタンパク質の構造における可能
な折り畳みの数を含む）の増強された推定性を提供してきた。Ｈｏｌｍら、１９
９９，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２７：２４４−４７を参照のこと
。所定のポリペプチドまたはタンパク質において制限された数の折り畳みが存在
すること、および一旦、重要な数の構造が解析されると、構造推定は劇的により
正確となることが、示唆されてきた（Ｂｒｅｎｎｅｒら、１９９７，Ｃｕｒｒ．
Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．７：３６９−７６）。

【００８０】 二次構造を推定するさらなる方法は、「スレッディング（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ
）」（Ｊｏｎｅｓ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．
７：３７７−８７；Ｓｉｐｐｌら、１９９６，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ４：１５−
１９）、「プロフィール分析」（Ｂｏｗｉｅら、１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２
５３：１６４−７０；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら、１９９０，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌ．１８３：１４６−５９；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら、１９８７，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：４３５５−５８）、および「進
化学的連鎖」（Ｈｏｌｍら、前出、およびＢｒｅｎｎｅｒら、前出を参照のこと
）を包含する。

【００８１】 好ましいＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体としては、グリコシル化部位の
数および／または型が配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３
６のいずれかに記載のアミノ酸配列と比較して変化している、グリコシル化改変
体が挙げられる。１つの実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変
体は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに
記載のアミノ酸配列より多いかまたはより少ない数のＮ連結グリコシル化部位を
含む。Ｎ連結グリコシル化部位は、配列Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−
Ｔｈｒによって特徴付けられ、ここで、Ｘと印されるアミノ酸残基は、プロリン
以外の任意のアミノ酸残基であり得る。この配列を作製するためのアミノ酸残基
の置換は、Ｎ連結炭水化物鎖の付加のための潜在的な新たな部位を提供する。あ
るいは、この配列を排除する置換は、存在するＮ連結炭水化物鎖を除去する。１
つ以上のＮ連結グリコシル化部位（代表的に、天然に存在するグリコシル化部位
）が排除され、そして１つ以上の新たなＮ連結部位が作製される、Ｎ連結炭水化
物鎖の再配列もまた、提供される。さらなる好ましいＩＬ−１ｒａ−Ｒ改変体と
しては、１つ以上のシステイン残基が、配列番号２、配列番号４、配列番号６、
または配列番号３６のいずれかに記載のアミノ酸配列と比較して欠失しているか
、または別のアミノ酸（例えば、セリン）で置換されている、システイン改変体
が挙げられる。システイン改変体は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが、例えば
不溶性の封入体の単離の後に、生物学的に活性な配置にリフォールディングされ
なければならない場合に、有用である。システイン改変体は、一般に、ネイティ
ブタンパク質より少ないシステイン残基を有し、そして代表的には同数のシステ
イン残基を有し、対合していないシステインから生じる相互作用を最小にする。

【００８２】 別の実施形態において、関連する核酸分子は、少なくとも１つのアミノ酸挿入
を有し、そしてポリペプチドが配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配
列番号３６のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有するする、配列番号２、
配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに記載のポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列を含むか、またはこの配列からなるか、あるいは
少なくとも１つのアミノ酸欠失を有し、ここでポリペプチドが配列番号２、配列
番号４、配列番号６、またた配列番号３６のいずれかに記載のポリペプチドの活
性を有する、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいず
れかに記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むか、またはこの
配列からなる。関連する核酸分子はまた、ポリペプチドがカルボキシル末端およ
び／またはアミノ末端の短縮を有し、そしてさらにここで、このポリペプチドが
、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに記載
のポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または
配列番号３６のいずれかに記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を
含むか、またはこの配列からなる。関連する核酸分子はまた、アミノ酸置換、ア
ミノ酸挿入、アミノ酸欠失、カルボキシる末端短縮、およびアミノ末端短縮から
なる群より選択される少なくとも１つの改変を含み、そしてここで、ポリペプチ
ドが配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに記
載のポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号４、配列番号６、また
は配列番号３６のいずれかに記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
を含むか、またはこの配列からなる。

【００８３】 さらに、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６、あるい
は他のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプ
チドは、同種ポリペプチドに融合してホモダイマーを形成し得るか、あるいは異
種ポリペプチドに融合してヘテロダイマーを形成し得る。異種のペプチドおよび
ポリペプチドとしては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：ＩＬ−１
ｒａ−Ｒ融合ポリペプチドの検出および／または単離を可能にするエピトープ；
膜貫通レセプタータンパク質またはその部分（例えば、細胞外ドメインまたは膜
貫通ドメインおよび細胞内ドメイン）；膜貫通レセプタータンパク質に結合する
、リガンドまたはその部分；触媒的に活性である、酵素またはその部分；オリゴ
マー化を促進するポリペプチドまたはペプチド（例えば、ロイシンジッパードメ
イン）；安定性を増加させるポリペプチドまたはペプチド（例えば、免疫グロブ
リン定常領域）；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番
号３６のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは別のＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドとは異なる治療活性を有するポリペプチド。

【００８４】 融合は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれ
かに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは他のＩＬ１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドの、アミノ末端またはカルボキシル末端のいずれかにおいて、なされ得
る。融合は、リンカーもアダプター分子も用いずに直接であっても、リンカーも
しくはアダプター分子を介してであってもよい。リンカーまたはアダプター分子
は、１つ以上のアミノ酸残基であり得、代表的に、約２０〜約５０アミノ酸残基
である。リンカーまたはアダプター分子はまた、ＤＮＡ制限エンドヌクレアーゼ
またはプロテアーゼに対する切断部位を有して設計されて、融合した部分の分離
を可能にし得る。一旦構築されると、誘導ポリペプチドは、本明細書中に記載の
方法に従って誘導体化され得ることが、理解される。

【００８５】 本発明のさらなる実施形態において、配列番号２、配列番号４、配列番号６、
または配列番号３６のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは他
のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の１つ以上のドメイ
ンに融合する。抗体は、以下の２つの機能的に独立した部分を含む；抗原を結合
する「Ｆａｂ」として公知の可変ドメイン、ならびに相補的活性化および食作用
細胞による攻撃のようなエフェクター機能に関与する、「Ｆｃ」として公知の定
常ドメイン。Ｆｃは、長い血清半減期を有し、一方でＦａｂは、短寿命である。
Ｃａｐｏｎら、１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５２５−３１。治療タンパク
質と一緒に構築される場合には、Ｆｃドメインは、より長い半減期を提供し得る
か、またはＦｃレセプター結合、プロテインＡ結合、補体結合、および恐らく、
胎盤移入さえものような機能を組み込み得る。同書。表ＩＩは、当該分野におい
て公知の特定のＦｃ融合物の使用を要約する。

【００８６】

【表２】 一例において、ヒトＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域は、
当業者に公知の方法を使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ末端ま
たはカルボキシル末端のいずれかにおいて、融合し得る。別の例において、ヒト
ＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドフラグメント（例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの推定細胞外部
分）のアミノ末端またはカルボキシル末端のいずれかにおいて、融合し得る。

【００８７】 得られるＩＬ−１ｒａ−Ｒ融合ポリペプチドは、プロテインＡアフィニティー
カラムの使用によって、精製され得る。Ｆｃ領域に融合したペプチドおよびタン
パク質は、融合していない対応物より実質的に長いインビボでの半減期を示すこ
とが見出された。また、Ｆｃ領域への融合は、融合ポリペプチドの二量化／多量
体化を可能にする。Ｆｃ領域は、天然に存在するＦｃ領域であり得るか、または
治療品質、循環時間、もしくは減少した凝集のような特定の品質を改善するよう
変更され得る。

【００８８】 関連する核酸分子およびポリペプチドの同一性および類似性は、公知の方法に
よって容易に計算され得る。このような方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ
ａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａ．Ｍ．Ｌｅｓｋ編、Ｏｘｆｏｒ
ｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ １９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎ
ｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｄ．
Ｗ．Ｓｍｉｔｈ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９３）；Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ（Ｐａｒｔ １，
Ａ．Ｍ．ＧｒｉｆｆｉｎおよびＨ．Ｇ．Ｇｒｉｆｆｉｎ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒ
ｅｓｓ １９９４）；Ｇ．ｖｏｎ Ｈｅｉｎｌｅ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ １９８７）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ（
Ｍ．ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＪ．Ｄｅｖｅｒｅｕｘ編、Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ
Ｐｒｅｓｓ １９９１）；ならびにＣａｒｉｌｌｏら、１９８８，ＳＩＡＭ Ｊ
．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３に記載されるものが挙げられる
が、これらに限定されない。

【００８９】 同一性および／または類似性を決定するための好ましい方法は、試験される配
列間での最大の適合を与えるために、設計される。同一性および類似性を決定す
るための方法は、公共に利用可能なコンピュータプログラムにおいて記載されて
いる。２つの配列間の同一性および類似性を決定するための、好ましいコンピュ
ータプログラム方法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ（ＧＡＰ（Ｄｅｖｅ
ｒｅｕｘら、１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：３８７；
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏ
ｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴ
Ｎ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．２１５：４０３−１０）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｂ
ＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の供給源（
Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ（ＮＣＢ ＮＬＭ ＮＩＨ，Ｂ
ｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、前出）から公共に利
用可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた、同一
性を決定するために使用され得る。

【００９０】 ２つのアミノ酸配列を整列させるための特定のアライメントスキームは、これ
ら２つの配列の短い領域のみの適合を生じ得、そしてこの小さな整列領域は、２
つの全長配列間に有意な関連がない場合でさえも、非常に高い配列同一性を有し
得る。従って、好ましい実施形態において、選択された整列方法（ＧＡＰプログ
ラム）は、特許請求されるポリペプチドの少なくとも５０の連続するアミノ酸に
わたる整列を生じる。

【００９１】 例えば、コンピュータアルゴリズムＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄ
ｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、配列同一性の百分率が決定されるべき２つのポリ
ペプチドが、それらのそれぞれのアミノ酸の最適な適合（アルゴリズムによって
決定される「適合したスパン」）のために、整列される。ギャップオープニング
ペナルティー（ｇａｐ ｏｐｅｎｉｎｇ ｐｅｎａｌｔｙ）（これは、平均対角
の３倍として計算される：「平均対角」とは、使用される比較行列（ｃｏｍｐａ
ｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ）の対角の平均である；「対角」とは、特定の比較行
列によって各完全なアミノ酸適合に対して割り当てられたスコアまたは数である
）およびギャップエクステンションペナルティー（ｇａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ
ｐｅｎａｌｔｙ）（これは通常、キャップオープニングペナルティーの０．１
倍である）、ならびにＰＡＭ ２５０またはＢＬＯＳＵＭ ６２のような比較行
列が、このアルゴリズムと組み合わせて使用される。標準的な比較行列もまた、
このアルゴリズムによって使用される（Ｄａｙｈｏｆｆら、５ Ａｔｌａｓ ｏ
ｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（補遺３ １９７８）（ＰＡＭ２５０比較行列）；Ｈｅｎｉｋｏｆｆら、１９９２，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１０９１５−１９（ＢＬＯ
ＳＵＭ ６２比較行列）を参照のこと）。

【００９２】 ポリペプチド配列比較のための好ましいパラメータは、以下を含む： Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０
，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−５３； Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ ６２（Ｈｅｎｉｋｏｆ
ｆら、前出）； Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ：１２ Ｇａｐ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｅｎａｌｔｙ：４ Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｏｆ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ：０ このＧＡＰプログラムは、上記パラメータを用いて有用である。上記パラメータ
は、ＧＡＰアルゴリズムを用いるポリペプチド比較（末端ギャップに対してはペ
ナルティーがないこととともに）のためのデフォルトパラメータである。

【００９３】 核酸分子配列比較のための好ましいパラメータは、以下を含む： Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，前出； Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ：ｍａｔｃｈｅｓ＝＋１０，ｍｉｓｍａ
ｔｃｈ＝０ Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ：５０ Ｇａｐ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｅｎａｌｔｙ：３ このＧＡＰプログラムはまた、上記パラメータを用いて有用である。上記パラメ
ータは、核酸分子比較のためのデフォルトパラメータである。

【００９４】 Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅ
ｒｓｉｏｎ ９，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，１９９７に記載されるものを含む、他の
例示的なａｌｇｏｒｉｔｈｍ、ｇａｐ ｏｐｅｎｉｎｇ ｐｅｎａｌｔｙ、ｇａ
ｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｐｅｎａｌｔｙ、ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉ
ｘ、およびｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｏｆ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙが使用され得る。
なされるべき特定の選択は、当業者に明らかであり、そしてなされるべき特定の
比較（例えば、ＤＮＡ対ＤＮＡ、タンパク質対タンパク質、タンパク質対ＤＮＡ
）；ならびにさらに、その比較が所定の対の配列間（この場合には、ＧＡＰまた
はＢｅｓｔＦｉｔが一般的に好ましい）であるか、１つの配列と大きなデータベ
ースの配列との間（この場合には、ＦＡＳＴＡまたはＢＬＡＳＴＡが好ましい）
であるかに依存する。

【００９５】 （核酸分子） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードす
る核酸分子は、種々の様式（化学合成、ｃＤＮＡもしくはゲノムのライブラリー
のスクリーニング、発現ライブラリースクリーニング、および／またはｃＤＮＡ
のＰＣＲ増幅が挙げられるが、これらに限定されない）で容易に得られ得る。

【００９６】 本明細書中において使用される組換えＤＮＡ法は、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ
ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒ
ｅｓｓ，１９８９）および／またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｇｒｅｅｎ Ｐ
ｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．およびＷｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ １９９４
）に記載されている。本発明は、本明細書中に記載され得ような核酸分子、およ
びこのような分子を得るための方法を提供する。

【００９７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子が１つの種
から同定された場合には、この遺伝子の全てまたは一部を、同じ種由来のオーソ
ログまたは関連する遺伝子を同定するためのプローブとして使用し得る。このプ
ローブまたはプライマーを使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを発現する
と考えられる種々の組織供給源由来のｃＤＮＡをスクリーニングし得る。さらに
、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号３５のいずれかに記載
されるような配列を有する核酸分子の部分または全てを使用して、ゲノムライブ
ラリーをスクリーニングし、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコ
ードする遺伝子を同定および単離し得る。代表的に、中程度または高いストリン
ジェンシーの条件が、スクリーニングのために使用されて、このスクリーニング
から得られる誤った陽性の数を最小にする。

【００９８】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子もまた、
発現されたタンパク質の特性に基づいて陽性クローンの検出を使用する発現クロ
ーニングによって、同定され得る。代表的に、核酸ライブラリーは、抗体または
他の結合パートナー（例えば、レセプターまたはリガンド）を、宿主細胞表面に
おいて発現および提示されたクローンタンパク質に結合させることによって、ス
クリーニングされる。抗体または結合パートナーは、所望のクローンを発現する
細胞を同定するために、検出可能な標識で改変される。

【００９９】 以下に記載される説明に従って実施される組換え発現技術に従って、これらの
ポリヌクレオチドを産生し得、そしてコードされたポリペプチドを発現し得る。
例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸配列を
適切なベクターに挿入することによって、当業者は、多量の所望のヌクレオチド
配列を容易に生成し得る。次いで、これらの配列を使用して、検出プローブまた
は増幅プライマーを生成し得る。あるいは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのア
ミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを、発現ベクターに挿入し得る。発現
ベクターを適切な宿主に導入することによって、コードされたＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドが、多量に生成され得る。

【０１００】 適切な核酸配列を得るための別の方法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で
ある。この方法において、ｃＤＮＡは、酵素逆転写酵素を使用して、ｐｏｌｙ（
Ａ）＋ＲＮＡまたは全ＲＮＡから調製される。次いで、２つのプライマー（代表
的には、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡの
２つの別個の領域に対して相補的である）が、Ｔａｑポリメラーゼのようなポリ
メラーゼとともにこのｃＤＮＡに付加され、そしてこのポリメラーゼが、このｃ
ＤＮＡのこれら２つのプライマー間の領域を増幅する。

【０１０１】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子を調製す
る別の手段は、Ｅｎｇｅｌｓら、１９８９，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．
Ｅｄ．２８：７１６−３４によって記載されるもののような、当業者に周知の方
法を使用する、化学合成である。これらの方法としては、とりわけ、核酸合成の
ためのリン酸トリエステル、ホスホルアミダイト、およびＨ−ホスホネート方法
が挙げられる。このような化学合成のために好ましい方法は、標準的なホスホル
アミダイト化学を使用する、ポリマーにより支持される合成である。代表的に、
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードするＤＮＡは、数百ヌク
レオチド長である。約１００ヌクレオチドより長い核酸は、これらの方法を使用
して、いくつかのフラグメントとして合成され得る。次いで、これらのフラグメ
ントが一緒に連結されて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の全長ヌクレオチド配列を形
成し得る。通常、このポリペプチドのアミノ末端をコードするＤＮＡフラグメン
トは、ＡＴＧを有し、これは、メチオニン残基をコードする。このメチオニンは
、宿主細胞において産生されたポリペプチドがその細胞から分泌されるよう設計
されるか否かに依存して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの成熟形態で存在して
もそうでなくてもよい。当業者に公知の他の方法が、同様に使用され得る。

【０１０２】 特定の実施形態において、核酸改変体は、所定の宿主細胞におけるＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドの最適な発現のために変更されたコドンを含む。特定のコド
ン変更は、発現のために選択される宿主細胞およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドに依存する。このような「コドン最適化」は、種々の方法によって（例えば、
所定の宿主細胞において高度に発現される遺伝子における使用に好ましいコドン
を選択することによって）実施され得る。高度に発現された細菌遺伝子のコドン
優先性のための「Ｅｃｏ＿ｈｉｇｈ．Ｃｏｄ」のようなコドン度数表を組み込む
コンピュータアルゴリズムが使用され得、そしてＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ
Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０（Ｇｅｎｅｔｉ
ｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって提供さ
れる。他の有用なコドン度数表としては、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ＿ｈｉｇｈ．ｃｏ
ｄ」、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ＿ｌｏｗ．ｃｏｄ」、「Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ＿ｈｉ
ｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｈｕｍａｎ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｍａｉｚｅ＿ｈｉｇｈ
．ｃｏｄ」、および「Ｙｅａｓｔ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ．」が挙げられる。

【０１０３】 いくつかの場合において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体をコードする
核酸分子を調製することが所望であり得る。改変体をコードする核酸分子は、プ
ライマーが所望の点変異を有する部位特異的変異誘発、ＰＣＲ増幅、または他の
適切な方法を使用して生成し得る（変異誘発技術の記載に関しては、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋら、前出、およびＡｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと）。Ｅｎｇｅｌｓ
ら、前出によって記載される方法を使用する化学合成もまた、このような改変体
を調製するために使用され得る。当業者に公知の他の方法が、同様に使用され得
る。

【０１０４】 （ベクターおよび宿主細胞） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子を、標準
的な連結技術を使用して適切な発現ベクターに挿入する。ベクターは、代表的に
、使用される特定の宿主細胞において機能的であるように選択される（すなわち
、ベクターは、遺伝子の増幅および／または遺伝子の発現が生じるように、宿主
細胞機構と適合性である）。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコ
ードする核酸分子は、原核生物宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫（バキュロウイル
ス系）宿主細胞および／または真核生物宿主細胞において増幅／発現され得る。
宿主細胞の選択は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが翻訳後修飾（例えば、グリ
コシル化および／またはホスホリル化）されるか否かに一部依存する。そうであ
る場合、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞、または哺乳動物宿主細胞が好ましい。発
現ベクターの総説について、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，ｖｏｌ．１８５（Ｄ．Ｖ．Ｇ
ｏｅｄｄｅｌ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９０）を参照のこ
と。

【０１０５】 代表的に、任意の宿主細胞に使用される発現ベクターは、プラスミド維持のた
めならびに外来性ヌクレオチド配列のクローニングおよび発現のために配列を含
む。このような配列（集合的に、「隣接配列」と呼ばれる）は、特定の実施形態
において、代表的に、以下のヌクレオチド配列の１つ以上を含む：プロモーター
、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナーおよびアクセ
プタースプライス部位を含む完全なイントロン配列、ポリペプチド分泌のための
リーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発
現されるポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、な
らびに選択マーカーエレメント。これらの配列のそれぞれが、以下に議論される
。

【０１０６】 必要に応じて、ベクターは、「タグ」コード配列（すなわち、ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドコード配列の５’末端または３’末端に配置されるオリゴヌクレ
オチド分子）を含み得；オリゴヌクレオチド配列は、ｐｏｌｙＨｉｓ（例えば、
ｈｅｘａＨｉｓ）、別の「タグ」（例えば、ＦＬＡＧ、ＨＡ（赤血球凝集素イン
フルエンザウイルス））または市販の抗体が存在するｍｙｃをコードする。この
タグは、代表的には、ポリペプチドの発現の際にポリペプチドに融合され、宿主
細胞からの、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアフィニティー精製のための手段
として役立ち得る。アフィニティー精製は、例えば、アフィニティーマトリクス
としてタグに対して抗体を使用するカラムクロマトグラフィーによって達成され
得る。必要に応じて、タグは、続いて、切断のために特定のペプチダーゼを使用
するような種々の手段によって、精製されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドから
除去される。

【０１０７】 隣接配列は、同種（すなわち、宿主細胞と同じ種および／または系統由来）で
あり得るか、異種（すなわち、宿主細胞種または系統以外の種由来）であり得る
か、ハイブリッド（すなわち、１つより多くの供給源由来の隣接配列の組み合わ
せ）であり得るか、または合成であり得るか、あるいは隣接配列は、ＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチド発現を調節するために正常に機能するネイティブな配列であ
り得る。このように、隣接配列の供給源は、任意の原核生物または真核生物、任
意の脊椎生物または無脊椎生物、あるいは任意の植物であり得、但し、隣接配列
は、宿主細胞の機構において機能的であり、そして宿主細胞の機構によって活性
化され得る。

【０１０８】 本発明のベクターに有用な隣接配列は、当該分野において周知である任意のい
くつかの方法によって得られ得る。代表的には、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子隣接配
列以外の、本明細書中で有用な隣接配列は、マッピングおよび／または制限エン
ドヌクレアーゼ消化によって以前に同定されており、従って、適切な制限エンド
ヌクレアーゼを使用して、適切な組織供給源から単離され得る。いくつかの場合
において、隣接配列の全長ヌクレオチド配列は公知であり得る。ここで、隣接配
列は、核酸合成またはクローニングのために本明細書中で記載される方法を使用
して合成され得る。

【０１０９】 隣接配列の全てまたは一部のみが公知である場合、ＰＣＲを使用して、そして
／あるいは適切なオリゴヌクレオチドならびに／または同じもしくは別の種由来
の隣接配列フラグメントを用いてゲノムライブラリーをスクリーニングすること
によって得られ得る。隣接配列が公知でない場合、隣接配列を含むＤＮＡのフラ
グメントは、例えば、コード配列または別の遺伝子を含み得る大きな片のＤＮＡ
から単離され得る。単離は、適切なＤＮＡフラグメントを生成するための制限エ
ンドヌクレアーゼ消化、続くアガロースゲル精製を使用する単離、Ｑｉａｇｅｎ
（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）、また
は当業者に公知の他の方法によって達成され得る。この目的を達成するための適
切な酵素の選択は、当業者に容易に明かである。

【０１１０】 複製起点は、代表的に、市販から購入された原核生物発現ベクターの一部であ
り、この起点は、宿主細胞においてベクターの増幅に役立つ。特定のコピー数に
対するベクターの増幅は、いくつかの場合において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドの最適な発現に重要であり得る。選択されたベクターが複製起点部位を含ま
ない場合、公知の配列に基づいて化学的に合成され得、そしてベクターに連結さ
れ得る。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌ
ａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）からの複製起点は、大部分のグラム陰性細菌に
適切であり、そして種々の起点（例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイル
ス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、またはＨＰＶまたはＢＰＶのようなパピ
ローマウイルス）は、哺乳動物細胞におけるベクターのクローニングのために有
用である。一般的に、複製起点の成分は、哺乳動物発現ベクター（例えば、ＳＶ
４０起点は、ただそれが初期プロモーターを含むので、しばしば、使用される）
。

【０１１１】 転写終結配列は、代表的にポリペプチドコード領域の末端の３’側に配置され
、そして転写を終結させるのに役立つ。通常、原核生物細胞における転写終結配
列は、Ｇ−Ｃリッチフラグメント、続いてポリ−Ｔ配列である。この配列はライ
ブラリーから容易にクローン化され得るか、またはベクターの一部として市販で
購入され、これは、本明細書中上記のような核酸合成のための方法を使用して容
易に合成され得る。

【０１１２】 選択マーカー遺伝子エレメントは、選択培養培地において増殖される宿主細胞
の生存および増殖に必要なタンパク質をコードする。代表的な選択マーカー遺伝
子は、（ａ）原核生物細胞に対して、抗生物質または他の毒素（例えば、アンピ
シリン、テトラサイクリン、またはカナマイシン）に対する耐性を与えるか；細
胞の栄養要求性の欠損を補うか；あるいは複合培地から入手可能でない重要な栄
養素を供給するタンパク質をコードする。好ましい選択マーカーは、カナマイシ
ン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、およびテトラサイクリン耐性遺伝子で
ある。ネオマイシン耐性遺伝子もまた、原核生物宿主細胞および真核生物宿主細
胞における選択のために使用され得る。

【０１１３】 他の選択遺伝子は、発現される遺伝子を増幅するために使用され得る。増幅は
、増殖に重要なタンパク質の産生により大きく要求される遺伝子が、組換え細胞
の連続的な生成の染色体内でタンデムに反復されるプロセスである。哺乳動物細
胞に対する適切な選択マーカーの例としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨ
ＦＲ）およびチミジンキナーゼが挙げられる。哺乳動物細胞形質転換体は、選択
圧下に置かれ、ここで、形質転換体のみが、ベクターに存在する選択遺伝子によ
って生存するように独特に適合される。選択圧は、培地中の選択因子の濃度が連
続的に変化し、それによって選択遺伝子とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコー
ドするＤＮＡとの両方の増幅を導く条件下で、形質転換された細胞を培養するこ
とによって課される。結果として、増加した量のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
が、増幅されたＤＮＡから合成される。

【０１１４】 リボソーム結合部位は、通常、ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、そしてＳｈ
ｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ配列（原核性物）またはＫｏｚａｋ配列（真核生物）
によって特徴付けられる。このエレメントは、代表的に、発現されるＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドのプロモーターの３’側およびコード配列の５’側に配置さ
れる。Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ配列は、可変であるが、代表的には、ポリ
プリン（すなわち、高いＡ−Ｇ含有量）である。多くのＳｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａ
ｒｎｏ配列は、同定されており、それぞれが、本明細書中に記載の方法を使用し
て、原核生物ベクターを使用して容易に合成され得る。

【０１１５】 リーダー配列、またはシグナル配列は、宿主細胞からＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドを指向させるために使用され得る。代表的には、シグナル配列をコードす
るヌクレオチド配列は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子のコード領域に位置するか、
または直接ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域の５’側に位置する。多く
のシグナル配列が同定されており、選択された宿主細胞において機能性であるシ
グナル配列の任意が、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子と組み合わせて使用され得る。
従って、シグナル配列は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子に対して同種（天然）また
は異種であり得る。さらに、シグナル配列は、本明細書中に記載される方法を使
用して化学的に合成され得る。大部分において、シグナルペプチドの存在によっ
て宿主細胞からのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの分泌は、分泌されたＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドからのシグナルペプチドの除去を生じる。シグナル配列は
、ベクターの成分であり得るか、またはベクターに挿入されたＩＬ−１ｒａ−Ｒ
核酸分子の一部であり得る。

【０１１６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域に結合されたネイティブなＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル配列をコードするヌクレオチド配列またはＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域に結合された異種シグナル配列をコードする
ヌクレオチド配列のいずれかの使用が本発明の範囲内である。選択された異種シ
グナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセスされる（すなわち、シグナ
ルペプチダーゼによって切断される）ものであるべきである。ネイティブなＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル配列を認識せず、プロセスしない原核生物宿
主細胞について、シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリ
ナーゼ、または熱安定エンテロトキシンＩＩリーダーのグループから選択される
原核生物シグナル配列によって置換される。酵母分泌について、ネイティブなＩ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル配列は、酵母インベルターゼ、α因子、ま
たは酸ホスファターゼリーダーによって置換され得る。哺乳動物細胞発現におい
て、ネイティブなシグナル配列が満足であるが、他の哺乳動物シグナル配列が適
切であり得る。

【０１１７】 グリコシル化が真核生物宿主細胞発現系において望ましい、いくつかの場合に
おいて、グリコシル化または収量を改善するために種々のシグナルペプチド（ｐ
ｒｅｓｅｑｕｅｎｃｅ）が操作され得る。例えば、特定のシグナルペプチドのペ
プチダーゼ切断部位を変更し得るかまたはプロ配列（ｐｒｏ−ｓｅｑｕｅｎｃｅ
）を加え得、これはまた、グリコシル化に影響し得る。最後のタンパク質産物は
、１位に（成熟タンパク質の最初のアミノ酸に対して）、発現に付随して１つ以
上のさらなるアミノ酸を有し得、これは、完全に除去されないかもしれない。例
えば、最終のタンパク質産物は、アミノ末端に結合される、ペプチダーゼ切断部
位において見出される１つまたは２つのアミノ酸残基を有し得る。あるいは、い
くつかの酵素切断部位は、酵素が成熟ポリペプチド内のこのような領域で切断さ
れる場合、所望のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの少し短縮した形態を生じ得る
。

【０１１８】 多くの場合において、核酸分子の転写は、ベクター内の１つ以上のイントロン
の存在によって増加する；これは、ポリペプチドが真核生物宿主細胞（特に、哺
乳動物宿主細胞）において産生される場合、特に当てはまる。使用されるイント
ロンは、特に使用される遺伝子が全長ゲノム配列またはそのフラグメントである
場合、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子内に天然に存在し得る。イントロンが遺伝子内に
天然に存在しない（大部分のｃＤＮＡについて）場合、イントロンは、別の供給
源から得られ得る。隣接配列およびＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子に関してイントロン
の位置は、イントロンが効果的に転写されなければならないので、一般的に重要
である。従って、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｃＤＮＡ分子が転写される場合、イントロ
ンの好ましい位置は、転写開始部位の３’側で、ｐｏｌｙ−Ａ転写終止配列の５
’側である。好ましくは、イントロンは、コード配列を妨害しないように、ｃＤ
ＮＡの１つの側面または他の側面（すなわち、５’側または３’側）に配置され
る。任意の供給源（ウイルス、原核生物および真核生物（植物または動物）を含
む）由来のイントロンを使用して本発明を実行し得るが、但し、このイントロン
は、挿入される宿主細胞に適合性である。合成イントロンもまたここに含まれる
。必要に応じて、１つより多くのイントロンがベクター内で使用され得る。

【０１１９】 本発明の発現ベクターおよびクローニングベクターは、代表的には、宿主生物
によって認識され、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする分子に作動可能
に連結されたプロモーターを含む。プロモーターは、構造遺伝子の転写を制御す
る構造遺伝子（一般的に、約１００〜１０００ｂｐ）の開始コドンに対して上流
（すなわち、５’側）に配置される非転写配列である。プロモーターは、通常、
２つのクラス（誘導プロモーターおよび構成プロモーター）の１つにグループ化
される。誘導プロモーターは、培養条件におけるいくらかの変化（例えば、栄養
の存在または非存在、あるいは温度の変化）に応答してそれらの制御下で、ＤＮ
Ａからの転写の増加したレベルを開始する。他方、構成プロモーターは、連続的
な遺伝子産物の産生を開始する；すなわち、遺伝子発現に対して遺伝子をほとん
ど制御しないかまたは制御しない。多数のプロモーター（種々の潜在的な宿主細
胞によって認識される）が周知である。適切なプロモーターは、供給源のＤＮＡ
からプロモーターを制限酵素消化によって取り出し、そして所望のプロモーター
配列をベクターに挿入することによって、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコー
ドするＤＮＡに作動可能に連結される。ネイティブなＩＬ−１ｒａ−Ｒプロモー
ター配列は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子の増幅および／または発現に指向させる
ために使用され得る。しかし、ネイティブなプロモーターと比較して大きい転写
および発現タンパク質のより高い産生が可能であり、そして使用のために選択さ
れた宿主細胞系と適合性である場合、異種プロモーターが好ましい。

【０１２０】 原核性物宿主との使用に適切なプロモーターとしては、β−ラクタマーゼおよ
びラクトースプロモーター系；アルカリホスファターゼ；トリプトファン（ｔｒ
ｐ）プロモーター系；およびハイブリッドプロモーター（例えば、ｔａｃプロモ
ーター）が挙げられる。他の公知の細菌プロモーターもまた、適切である。これ
らの配列は、公開されており、その結果、当業者は、任意の有用な制限部位を供
給するのに必要とされるリンカーまたはアダプターを使用して、所望のＤＮＡに
それらの配列を連結し得る。

【０１２１】 酵母宿主との使用に適切なプロモーターはまた、当該分野において周知である
。酵母エンハンサーは、酵母プロモーターとの使用に有利に使用される。哺乳動
物宿主細胞との使用に適切なプロモーターは周知であり、限定しないが、ポリオ
ーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ
２）、ウシパピローマウイルス、鳥類肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レ
トロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよび最も好ましいシミアンウイルス４０（Ｓ
Ｖ４０）のようなウイルスのゲノムから得られるプロモーターが挙げられる。他
の適切な哺乳動物プロモーターとしては、異種哺乳動物プロモーター（例えば、
熱ショックプロモーターおよびアクチンプロモーター）が挙げられる。

【０１２２】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子発現を制御する際に関心があり得るさらなるプロモー
ターとしては、限定しないが、以下が挙げられる：ＳＶ４０初期プロモータ領域
（Ｂｅｒｎｏｉｓｔ ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａｔｕｒｅ ２９
０：３０４−１０）；ＣＭＶプロモーター；ラウス肉腫ウイルスの３’側の長い
終末反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，１９８０
，Ｃｅｌｌ ２２ ：７８７−９７）；ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター
（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４４−４５）；メタロチオネイン遺伝子の調節配
列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９
−４２）；β−ラクタマーゼプロモーターのような原核生物発現ベクター（Ｖｉ
ｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７５：３７２７−３１）；またはｔａｃプロモ
ーター（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０：２１−２５）。組織特異性を示し、そしてト
ランスジェニック動物において利用されている以下の動物転写制御領域もまた関
心がある：膵臓腺房細胞において活性なエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉ
ｆｔ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６３９−４６；Ｏｒｎｉｔｚ
ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ
．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９−４０９（１９８６）；ＭａｃＤｏｎａ
ｌｄ，１９８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５−５１５）；膵臓β細胞に
おいて活性なインシュリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３１５：１１５−２２）；リンパ球において活性な免疫グロブリン遺伝
子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８
：６４７−５８；Ａｄａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１
８：５３３−３８；Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：１４３６−４４）；精巣、乳房、リンパ球、および肥
満細胞において活性なマウス哺乳動物腫瘍ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒ ｅｔ
ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４５：４８５−９５）；肝臓において活性なア
ルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅ
ｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８−７６）；肝臓において活性なα−フェト
プロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｏ
ｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：１６３９−４８；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．
，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：５３−５８）；肝臓において活性なα１
−抗トリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇｅ
ｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−７１）；骨髄性細胞において活性な
β−グロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３１５：３３８−４０；Ｋｏｌｌｉａｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃ
ｅｌｌ ４６：８９−９４）；脳の稀突起神経膠細胞において活性なミエリンベ
ースのタンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄ ｅｔ ａｌ．，１９８７
，Ｃｅｌｌ ４８：７０３−１２）；骨格筋において活性なミオシン軽鎖−２遺
伝子制御領域（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３−８６）；
ならびに視床下部において活性なゴナドトロピン放出ホルモン遺伝子制御領域（
Ｍａｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：１３７２−７
８）。

【０１２３】 エンハンサー配列は、より高等な真核生物によって本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写を増加するように、ベクターに挿入され
得る。エンハンサーは、転写を増加させるためにプロモーターに作用する、通常
約１０〜３００ｂｐの長さのＤＮＡのシスに作用するエレメントである。エンハ
ンサーは、相対的な方向および位置に独立する。これらは、転写ユニットに対し
て５’側および３’側に見出された。哺乳動物遺伝子から入手可能ないくつかの
エンハンサー配列が公知である（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン
、α−フェトプロテインおよびインシュリン）。しかし、代表的には、ウイルス
由来のエンハンサーが、使用される。ＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイ
ルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、およびアデノウ
イルスエンハンサーは、真核生物プロモーターの活性化について例示的に増強す
るエレメントである。エンハンサーは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子に対して５’
位または３’位でベクターにスプライシングされ得るが、代表的には、プロモー
ターから５’位側に配置される。

【０１２４】 本発明の発現ベクターは、市販のベクターのような開始ベクターから構築され
得る。このようなベクターは、全ての所望な隣接配列を含んでも良いし、含まな
くても良い。本明細書中に記載される隣接配列の１つ以上がすでにベクター内に
ない場合、これらは、個々に得られ得、ベクターに連結され得る。隣接配列のそ
れぞれを得るために使用される方法は、当業者に周知である。

【０１２５】 本発明を実行するために好ましいベクターは、細菌宿主細胞、昆虫宿主細胞、
および哺乳動物宿主細胞と適合性のベクターである。このようなベクターとして
は、特に、ｐＣＲＩＩ、ｐＣＲ３、およびｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ｐＢＳＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ
Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）、ｐＥＴ１５（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）
、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ
Ｊ）、ｐＥＧＦＰ−Ｎ２（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）、ｐ
ＥＴＬ（ＢｌｕｅＢａｃＩＩ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＤＳＲ−ａｌｐｈａ
（ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９０／１４３６３）ならびにｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌ
（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）が挙げられる。

【０１２６】 さらなる適切なベクターとしては、限定しないが、コスミド、プラスミド、ま
たは改変ウイルスが挙げられるが、これらのベクター系は、選択された宿主細胞
と適合性でなければならないことが理解される。このようなベクターとしては、
限定しないが、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（登録商標）プラスミド誘導体（高コピー
数ＣｏｌＥｌ−ベースのファージミド、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ ＣＡ）、Ｔａｑ増幅ＰＣＲ産物をクロー
ニングするために設計されたＰＣＲクローニングプラスミド（例えば、ＴＯＰＯ ^ＴＭ ＴＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ（登録商標）Ｋｉｔ、ＰＣＲ２．１（登録商標）プ
ラスミド誘導体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ならびに
バキュロウイルス発現系のような哺乳動物ベクター、酵母ベクターまたはウイル
スベクター（ｐＢａｃＰＡＫプラスミド誘導体、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ
Ａｌｔｏ、ＣＡ）が挙げられる。

【０１２７】 ベクターが構築され、そしてＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸
分子がベクターの適切な部位に挿入された後に、完全なベクターが増幅発現およ
び／またはポリペプチド発現に適切な宿主細胞に挿入され得る。ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドに対する発現ベクターの選択された宿主細胞への形質転換は、ト
ランスフェクション、感染、塩化カルシウム、エレクトロポレーション、マイク
ロインジェクション、リポフェクチン、ＤＥＡＥ−デキストラン法、または他の
公知の技術のような方法を含む周知の方法によって達成され得る。選択される方
法は、一部、使用される宿主細胞の種類の機能である。これらの方法および他の
適切な方法は、当業者に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記に記載
される。

【０１２８】 宿主細胞は、原核生物宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核生物宿主
細胞（例えば、酵母細胞、昆虫細胞、または脊椎動物細胞）であり得る。宿主細
胞は、適切な条件下で培養される場合、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを合成し
、これは、続いて、培養培地から（宿主細胞がそのポリペプチドを培地に分泌す
る場合）収集され得るか、直接そのポリペプチドを産生する宿主細胞から収集さ
れる（そのポリペプチドが分泌されない場合）。適切な宿主細胞の選択は、所望
の発現レベル、活性（例えば、グリコシル化またはホスホリル化）に望ましいか
または必要なポリペプチド修飾、および生物学的に活性な分子に折り畳まれる容
易さなどの種々の因子に依存する。

【０１２９】 多くの適切な宿主細胞が当該分野において公知であり、多くが、Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｎ
ａｓｓａｓ，ＶＡから入手可能である。例としては、限定しないが、チャイニー
ズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＨＯ ＤＨＦＲ（−）細胞（Ｕｒｌａｕｂ
ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ．Ａ
．９７：４２１６−２０）、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３または２９３Ｔ細胞
、あるいは３Ｔ３細胞のような哺乳動物細胞が挙げられる。適切な哺乳動物宿主
細胞の選択および形質転換、培養、増幅、スクリーニング、産物生成、および精
製のための方法が当該分野において公知である。他の適切な哺乳動物細胞株は、
サルＣＯＳ−１およびＣＯＳ−７細胞株、およびＣＶ−１細胞株である。さらな
る例示的な哺乳動物宿主細胞としては、霊長動物細胞株およびゲッ歯類動物細胞
株（形質転換細胞株を含む）が挙げられる。正常な二倍体細胞、初代組織のイン
ビトロ培養物から誘導される細胞菌株、ならびに初代外植片もまた適切である。
候補細胞は、選択遺伝子を遺伝子型的に欠き得るか、または優先的に作用する選
択遺伝子を含み得る。他の適切な哺乳動物細胞株としては、限定しないが、マウ
ス神経芽細胞腫Ｎ２Ａ細胞、ＨｅＬａ、マウスＬ−９２９細胞、Ｓｗｉｓｓから
誘導された３Ｔ３株、Ｂａｌｂ−ｃまたはＮＩＨマウス、ＢＨＫまたはＨａｋハ
ムスター細胞株が挙げられる。これらの細胞株のそれぞれは、タンパク質発現の
当業者によって公知であり入手可能である。

【０１３０】 同様に、細菌細胞が、本発明に適切な宿主細胞として有用である。例えば、Ｅ
．ｃｏｌｉ（例えば、ＨＢ１０１、ＤＨ５α、ＤＨ１０、およびＭＣ１０６１）
の種々の菌株は、生物工学の分野において宿主細胞として周知である。Ｂ．ｓｕ
ｂｔｉｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．，他のＢａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．などの種々の菌株がまた本方法に
おいて使用され得る。

【０１３１】 当業者に公知の酵母細胞の多くの菌株はまた、本発明のポリペプチドの発現の
ため宿主細胞として入手可能である。好ましい酵母細胞としては、例えば、Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｉｖｉｓａｅおよびＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏ
ｒｉｓが挙げられる。

【０１３２】 さらに、望ましい場合、昆虫細胞系が、本発明の方法において利用され得る。
このような系は、例えば、Ｋｉｔｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ，１４：８１０−１７；Ｌｕｃｋｌｏｗ，１９９３，Ｃｕｒｒ．
Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：５６４−７２；およびＬｕｃｋｌｏｗ
ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６７：４５６６−７９に記載され
る。好ましい昆虫細胞は、Ｓｆ−９およびＨｉ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であ
る。

【０１３３】 グリコシル化ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを発現するためにトランスジェニ
ック動物もまた使用し得る。例えば、トランスジェニック乳産生動物（例えば、
雌ウシまたはヤギ）を使用し、本発明のグルコシル化ポリペプチドを動物の乳に
得ることができる。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生するために植物もまた
使用し得るが、しかし、一般的に、植物において生じるグリコシル化は、哺乳動
物細胞において産生されるものとは異なり、ヒト治療に適切ではないグリコシル
化産物を生じ得る。

【０１３４】 （ポリペプチド産生） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現ベクターを含む宿主細胞は、当業者に周知
の標準的な培地を使用して培養され得る。この培地は、通常、細胞の増殖および
生存に必要な全ての栄養分を含む。Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を培養するための適切な培
地としては、例えば、Ｌｕｒｉａ Ｂｒｏｔｈ（ＬＢ）および／またはＴｅｒｒ
ｉｆｉｃ Ｂｒｏｔｈ（ＴＢ）が挙げられる。真核生物細胞を培養するための適
切な培地としては、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉ
ｔｕｔｅ ｍｅｄｉｕｍ １６４０（ＲＰＭＩ １６４０）、Ｍｉｎｉｍａｌ
Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）および／またはＤｕｌｂｅｃｃｏ
’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）が挙げられ、
これらの全ては、培養される特定の細胞株に必要な血清および／または増殖因子
を補充され得る。昆虫細胞についての適切な培地は、必要に応じて、イーストレ
ート（ｙｅａｔｏｌａｔｅ）、ラクトアルブミン加水分解産物、および／または
胎仔ウシ血清を補充したグレース培地である。

【０１３５】 代表的に、トランスフェクトされた細胞または形質転換された細胞の選択的な
増殖に有用な構成物質または他の化合物が、培地に補充物質として加えられる。
使用される化合物は、宿主細胞が形質転換されるプラスミドに存在する選択マー
カーエレメントによって検出可能である。例えば、選択マーカーエレメントがカ
ナマイシン耐性である場合、培養倍地に加えられる化合物は、カナマイシンであ
る。選択的増殖のための他の化合物としては、アンピシリン、テトラサイクリン
、およびネオマイシンが挙げられる。

【０１３６】 宿主細胞によって産生されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの量は、当該分野
において公知の標準的な方法を使用して評価され得る。このような方法としては
、限定しないが、ウェスタンブロット分析、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動、非変性ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分離、
免疫沈降、および／またはＤＮＡ結合ゲル移動アッセイのような活性アッセイが
挙げられる。

【０１３７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが宿主細胞から分泌されるように設計される場
合、ポリペプチドの大部分は、細胞培養培地中で見出され得る。しかし、ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドが宿主細胞から分泌されない場合、細胞質および／また
は核（真核宿主細胞について）に、あるいは、細胞質ゾル（グラム陽性細菌宿主
細胞について）に存在する。

【０１３８】 宿主細胞細胞質および／または核（真核生物宿主細胞について）に位置するか
または細胞質ゾル（細菌宿主細胞について）に位置するＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドについて、細胞内物質（グラム陽性細菌についての封入体を含む）は、当
業者に公知の任意の標準的な技術を使用して宿主細胞から抽出され得る。例えば
、宿主細胞は、フレンチプレス、均質化、および／または超音波処理、続く遠心
分離によって、ペリプラズム／細胞質の含有量を放出するように溶解され得る。

【０１３９】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが細胞質ゾル内に封入体を形成した場合、この
封入体は、しばしば、内部および／または外部細胞膜に結合され得、従って、主
に、遠心分離後にペレット材料において見出される。次いで、ペレット材料は、
ｐＨ極限値で処理され得るか、あるいはジチオトレイトールのような還元剤の存
在下アルカリ性のｐＨで、またはトリスカルボキシエチルホスフィンの存在下酸
性のｐＨで、界面活性剤、グアニジン、グアニジン誘導体、尿素、または尿素誘
導体のようなカオトロピック剤で処理して、封入体を放出させ、分断させ、そし
て溶解させ得る。次いで、溶解されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ゲル電
気泳動、免疫沈降などを使用して分析され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
を単離することが望ましい場合、単離は、本明細書中およびＭａｒｓｔｏｎ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９０，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８２：２６４−７５に記載され
る方法のような標準的な方法を使用して達成され得る。

【０１４０】 いくつかの場合、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、単離の際、生物学的に活
性でなくても良い。「再折り畳みする」、つまり、ポリペプチドをその三次構造
に変換し、ジスルフィド連結を生成するための種々の方法を使用して、生物学的
活性を回複し得る。このような方法は、溶解されたポリペプチドをあるｐＨ（通
常７より上）および特定の濃度のカオトロピック剤（ｃｈａｏｔｒｏｐｅ）の存
在に曝露する工程を包含する。カオトロピック剤の選択は、封入体溶解に使用さ
れる選択肢に非常に類似するが、通常、カオトロピック剤は低い濃度で使用され
、溶解に使用されるカオトロピック剤と必ずしも同一ではない。多くの場合、再
折り畳み／酸化溶液はまた、還元剤、または特定の比の還元剤およびその酸化形
態を含んで、特定の酸化還元電位を生成し、タンパク質のシステイン架橋の形成
を生じるジスルフィドシャフリングを可能にする。通常使用される酸化還元対の
いくつかとしては、システイン／シスタミン、グルタチオン（ＧＳＨ）／ジチオ
ビスＧＳＨ、塩化銅（ＩＩ）、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）／ジチアンＤＴＴ
、および２，２−メルカプトエタノール（ｂＭＥ）／ジチオ−ｂ（ＭＥ）が挙げ
られる。多くの場合において、共溶媒が使用され得るか、または再折り畳みの効
率を増加するのに必要であり得、この目的のために使用されるより一般的な試薬
としては、グリセロール、種々の分子量のポリエチレングリコール、アルギニン
などが挙げられる。

【０１４１】 封入体がＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現において有意な程度まで形成さ
れない場合、ポリペプチドは、主に、細胞ホモジネートの遠心分離後に上清中に
見出される。ポリペプチドは、さらに、本明細書中に記載されるような方法を使
用して上清から単離され得る。

【０１４２】 溶液からのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの精製は、種々の技術を使用して達
成され得る。ポリペプチドが、ヘキサヒスチジン（ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ド／ｈｅｘａＨｉｓ）のようなタグまたは他の小さなペプチド（例えば、ＦＬＡ
Ｇ（Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）または
ｍｙｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））をそのカルボキシ
末端またはアミノ末端のいずれかにおいて含むように合成された場合、カラムマ
トリクスがタグについて高い親和性を有するアフィニティーカラムに溶液を通す
ことによって一工程で精製され得る。

【０１４３】 例えば、ポリヒスチジンは、ニッケルに対して大きな親和性および特異性を有
して結合する。従って、ニッケルのアフィニティーカラム（例えば、Ｑｉａｇｅ
ｎ（登録商標）ニッケルカラム）は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド／ｐｏｌｙ
Ｈｉｓの精製のために使用され得る。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ § １０．１１．８（Ａｕ
ｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉ
ｎｃ． ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ １９９３）を参照のこと。

【０１４４】 さらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを
特異的に認識し得、そして結合し得るモノクローナル抗体の使用によって精製さ
れ得る。

【０１４５】 精製のための他の適切な手段はとしては、限定しないが、アフィニティークロ
マトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィ
ー、モレキュラーシーブクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、電気泳動（ネイティブ
な電気泳動を含む）、続くゲル溶出、および分取用等電集束法（「Ｉｓｏｐｒｉ
ｍｅ」ｍａｃｈｉｎｅ／ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，Ｈｏｅｆｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）が挙げられる。いくつかの場合にお
いて、２つ以上の精製技術を、増加した純度を達成するために組み合わせられ得
る。

【０１４６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドはまた、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．
，１９６３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９；Ｈｏｕｇｈｔｅｎ
ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８２：５１３２；およびＳｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ Ｐ
ｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏ．１９８４）に記載されるような当該分野で公知の技術を使用する、
化学合成法（例えば、固相ペプチド合成）によって調製され得る。このようなポ
リペプチドは、アミノ末端にメチオニンを有するかまたは有さないで合成され得
る。化学的に合成されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、これらに記載される
方法を使用して酸化され得て、ジスルフィド結合を形成し得る。化学的に合成さ
れたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、組換え的に産生されるかまたは天然の供
給源から精製される対応するＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに匹敵する生物学的
活性を有すると期待され、従って、組換えまたは天然のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドと相互交換可能に使用され得る。

【０１４７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを得る別の手段は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドが天然に見出される供給源の組織および／または流体のような生物学的サン
プルからの精製による。このような精製は、本明細書中に記載されるようなタン
パク質精製のための方法を使用して行われ得る。精製の間、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドの存在が、例えば、組換え的に産生されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドまたはそのペプチドフラグメントに対して調製される抗体を使用してモニタ
ーされ得る。

【０１４８】 核酸およびポリペプチドを産生するための多くのさらなる方法は、当該分野に
おいて公知であり、この方法は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対して特異性
を有するポリペプチドを産生するために使用され得る。例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ
ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．９４：１２２９７−３０３を参照のこと。これは、ｍＲＮＡとそのコードさ
れるペプチドとの間の融合タンパク質の産生を記載する。Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９
９９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｚ．ｂｏｌ ３：２６８−７３もまた参照の
こと。さらに、米国特許第５，８２４，４６９号は、特定の生物学的機能を実行
し得るオリゴヌクレオチドを得るための方法を記載する。この手順は、異種プー
ルのオリゴヌクレオチドを生成する工程を包含し、それぞれが、５’無作為化配
列、中心予備選択配列、および３’ランダム化配列を有する。得られる異種プー
ルは、所望の生物学的活性を示さない細胞の集団に導入される。次いで、細胞の
亜集団を、所定の生物学的機能を示すものについてスクリーニングする。その亜
集団から、所望の生物学的機能を実行し得るオリゴヌクレオチドが単離される。

【０１４９】 米国特許第５，７６３，１９２号；同第５，８１４，４７６号；同第５，７２
３，３２３号；および同第５，８１７，４８３号は、ペプチドまたはポリペプチ
ドを産生するためのプロセスを記載する。これは、確率論的遺伝子またはそのフ
ラグメントを産生し、次いで、確率論的遺伝子によってコードされた１以上のタ
ンパク質を産生する宿主細胞にこれらの遺伝子を導入することによって達成され
る。次いで、この宿主は、所望の活性を有するペプチドまたはポリペプチドを産
生する、これらのクローンを同定するためにスクリーニングされる。

【０１５０】 ペプチドまたはポリペプチドの産生するための別の方法は、Ａｔｈｅｒｓｙｓ
，Ｉｎｃ．によって出願されたＰＣＴ／ＵＳ９８／２００９４（ＷＯ９９／１５
６５０）（「Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」（ＲＡＧＥ−ＧＤ）と
して知られている）に記載されており、このプロセスは、インサイチュ組換え方
法によって、内因性遺伝子の発現または遺伝子の過剰発現の活性化を含む。例え
ば、内因性遺伝子の発現は、非相同性組換えまたは異常な組換えによって、遺伝
子の発現を活性化し得る標的細胞中に、調節配列を組み込むことによって、活性
化または増加される。この標的ＤＮＡは、まず、放射線に供せられ、そして遺伝
子プロモーターに挿入される。このプロモーターは、遺伝子の前方に最終的に配
置され、遺伝子の転写を開始する。これは、所望のペプチドまたはポリペプチド
の発現より生じる。

【０１５１】 これらの方法は、包括的なＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現ライブラリーを
作製するために使用され得、これは、続いて、種々のアッセイ（例えば、生化学
的アッセイ、細胞アセイおよび全生物アッセイ（例えば、植物、マウスなど））
において、ハイスループット表現型スクリーニングのために使用され得る。

【０１５２】 （合成） 本明細書中に記載される核酸およびポリペプチド分子は、組換えおよび他の手
段によって産生され得ることは、当業者によって理解される。

【０１５３】 （選択的結合アッセイ） 用語「選択的結合因子」は、１以上のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対して
特異性を有する分子を言及する。適切な選択的結合因子としては、抗体およびそ
の誘導体、ポリペプチド、ならびに小分子が挙げられるが、これらに限定されな
い。適切な選択的結合因子は、当該分野で公知の方法を使用して調製され得る。
本発明の例示的なＩＬ−１ＲＡ−Ｒポリペプチド選択的結合因子は、ＩＬ−１Ｒ
Ａ−Ｒポリペプチドの特定の部分を結合し得、これにより、ポリペプチドのＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターへの結合を阻害する。

【０１５４】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと結合する抗体および抗体フラグメントのよう
な選択的結合因子は、本発明の範囲内である。この抗体は、単一特異的なポリク
ローナルを含むポリクローナル；モノクローナル（ＭＡｂ）；組換え；キメラ；
ヒト化（例えば、ＣＤＲ移植化）；ヒト；単鎖；および／または二特異的；なら
びにフラグメント；改変体；またはそれらの誘導体であり得る。抗体フラグメン
トとしては、ＩＬ−１ＲＡ−Ｒポリペプチド上のエピトープに結合する抗体のこ
れらの一部を含む。このようなフラグメントの例としては、全長抗体の酵素学的
切断によって産生されたＦａｂおよびＦ（ａｂ’）フラグメントが挙げられる。
他の結合フラグメントとしては、組換えＤＮＡ技術（例えば、抗体可変領域をコ
ードする核酸配列を含む、組換えプラスミドの発現）によって産生されたフラグ
メントが挙げられる。

【０１５５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに特異的なポリクローナル抗体は、一般に、Ｉ
Ｌ−１ＲＡ−Ｒポリペプチドおよびアジュバンドの複数回の皮下注射または腹腔
内注射によって動物（例えば、ウサギまたはマウス）において産生される。ＩＬ
−１ＲＡ−Ｒポリペプチドをキャリアタンパク質に結合させることは、有用であ
り得、このタンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、血清、アルブミ
ン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシンインヒビターのように、免
疫化される種において免疫原性である。また、ミョウバンのような凝集剤は、免
疫応答を増強させるために使用される。免疫化後、この動物は採血され、そして
血清を、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗体タイターについてアッセイする。

【０１５６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、培地中の連
続的細胞株によって抗体分子を産生するために提供される、任意の方法を使用し
て産生される。モノクローナル抗体を調製するために適切な方法の例は、Ｋｏｈ
ｌｅｒら、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−９７のハイブリドーマ法
、およびヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ、１９８４、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１３３：３００１；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌ
ｉｃａｔｉｏｎｓ ５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９
８７））が挙げられる。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと反応する、モノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株がまた、本発明によって提供される。

【０１５７】 本発明のモノクローナル抗体は、治療剤として使用するために、改変され得る
。１実施形態は、「キメラ」抗体であり、この重鎖（Ｈ）および／または軽鎖（
Ｌ）の一部が、特定の種から誘導されるか、または特定の抗体のクラスもしくは
サブクラスの属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同性である
一方で、この鎖の残りは、別の種から誘導されるか、または特定の抗体のクラス
もしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同
性である。抗体のフラグメントが所望の生物学的活性を示す限り、これらの抗体
のフラグメントも含まれる。Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１−５５の米国特許第４，８１６，５６７
号を参照のこと。

【０１５８】 別の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、「ヒト化」抗体であ
る。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該分野で周知である。米国特許第
５，５８５，０８９号および５，６９３，７６２号を参照のこと。一般に、ヒト
化した抗体は、非ヒトである供給源から導入された１以上のアミノ酸残基有する
。ヒト化は、例えば、当該分野（Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ３２１
：５２２−２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３
２３−２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３
４−３６）で記載される方法を使用して、鋸状相補的決定領域（ＣＤＲ）の少な
くとも一部をヒトの抗体の対応する領域と置換することによって、実施される。

【０１５９】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと結合するヒト抗体がまた、本発明によって包
含される。内因性の免疫グロブリンの産物の非存在下で、ヒト抗体のレパートリ
ーを産生し得る、トランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して、この
ような抗体は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗原（すなわち、少なくとも６個
の連続アミノ酸を有する）を用いて免疫化することによって産生され、必要に応
じて、キャリアに結合される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，１９９３，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．９０：２５５１−５５；Ｊａｋｏｂｏｖ
ｉｔｓら，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍ
ａｎｎら，１９９３，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３を参照のこと。
１つの方法において、このようなトランスジェニック動物は、本明細書中の重鎖
および軽鎖免疫グロブリンをコードする内因性遺伝子座を無能にし、そしてヒト
の重鎖および軽鎖タンパク質をそのゲノムに挿入することによって産生される。
次いで、部分的に改変された動物（この動物は、改変体の完全相補体未満を有す
る）は、所望の免疫系の改変体の全てを得るためにクロスブレッドされる。免疫
原が投与される場合、これらのトランスジェニック動物が、ヒト（例えば、マウ
スではない）アミノ酸配列（このアミノ酸配列は、これらの抗原に対して免疫特
異性である改変領域を含む）を有する抗体を産生する。例えば、ＰＣＴ出願番号
ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８およびＰＣＴ／ＵＳ９３／０６９２６を参照のこ
と。さらなる方法は、米国特許第５，５４５，８０７、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／
ＵＳ９１／２４５およびＰＣＴ／ＧＢ８９／０１２０７、ならびに欧州特許第５
４６０７３Ｂ１および５４６０７３Ａ１に記載される。ヒト抗体はまた、宿主細
胞中の組換えＤＮＡの発現または本明細書中に記載されるようなハイブリドーマ
細胞中での発現によって産生され得る。

【０１６０】 代替の実施形態において、ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリ
から産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．
２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５
８１）。これらにより、糸状のバクテリオファージの表面上の抗体レパートリー
のディスプレイを介した模倣免疫選択、および選択した抗原への結合によるファ
ージの続く選択を処理する。１つのこのような技術は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／
ＵＳ９８／１７３６４に記載されており、これには、このようなアプローチを使
用して、ＭＰＬ−およびｍｓｋ−レポーターについて、高い親和性および機能的
なアンタゴニスト抗体の単離が記載される。

【０１６１】 キメラ、ＣＤＲ移植化抗体、およびヒト化抗体は、代表的に組換え方法によっ
て産生される。抗体をコードする核酸は、宿主細胞中に導入され、そして本明細
書中に記載される物質および手順を使用して発現される。好ましい実施形態にお
いて、この抗体は、哺乳動物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）中で処理される。
モノクローナル（例えば、ヒト）抗体は、本明細書中に記載されるように、宿主
細胞中での組換えＤＮＡの発現またはハイブリドーマ細胞中での発現によって産
生され得る。

【０１６２】 本発明の抗−ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの検出
および定量のために、任意の公知のアッセイ方法（例えば、競合結合アッセイ、
直接的および間接的サンドイッチアッセイ、および免疫沈降アッセイ）において
使用され得る（Ｓｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４７−１５８（ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７））。この抗体は、使用されるアッセイ方法に対して
、適切である親和性でＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと結合する。

【０１６３】 診断適用のために、特定の実施形態において、抗−ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体は、
検出可能な部分で標識され得る。この検出可能な部分は、直接的または間接的の
いずれかで、検出可能なシグナルを産生し得る任意の部分であり得る。例えば、
検出可能な部分は、放射性同位体（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^{１ ２５} Ｉ、^９９Ｔｃ、１^１１Ｉｎ、または^６７Ｇａ）；蛍光化合物または化学的蛍
光化合物（フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、もしくはルシフェ
リン）、または酵素（アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、もしく
はホースラディシュペルオキシダーゼ）であり得る（Ｂａｙｅｒら，１９９０，
Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．１８４：１３８−６３）。

【０１６４】 競合結合アッセイは、標識した標準（例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
、またはその免疫学的に活性な部分）の能力に依存し、限定された量の抗−ＩＬ
−１ｒａ−Ｒ抗体との結合に関して、試験サンプル検体（ＩＬ−１ｒａ−Ｒペプ
チド）と競合する。試験サンプル中のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの量は、抗
体と結合する標準の量と反比例する。結合する標準の量を決定するのを容易にす
るために、この抗体は、競合前または後に、代表的に免疫化され、この抗体と結
合する標準および検体は、結合しないままの標準および検体から好都合に分離さ
れ得る。

【０１６５】 サンドイッチアッセイは、２つの抗体の使用に代表的に関連し、各々は、決定
および／または定量されるべきタンパク質の異なる免疫部分またはエピトープに
結合し得る。サンドイッチアッセイにおいて、この試験サンプル検体は、固体支
持体上に免疫化される第１抗体によって代表的に結合され、その後、第２抗体が
、この検体に結合され、可溶の３部の複合体を形成する。例えば、米国特許第４
，３７６，１１０を参照のこと。第２抗体自体は、検出可能な部分で標識される
か（直接的なサンドイッチアッセイ）、または検出可能な部分で標識される抗−
免疫グロブリン抗体を使用して測定され得る。例えば、サンドイッチアセイの１
つの型は、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）（この場合、検出可
能な部分は、酵素である）である。

【０１６６】 抗−ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体を含む、選択的結合因子はまた、インビボイメージ
ングのために有用である。検出可能な部分で標識した抗体は、動物に、好ましく
は、血流に投与され得、宿主中で標識した抗体の存在および位置がアッセイされ
る。この抗体は、核磁気共鳴、放射線学、または当該分野で公知の他の検出手段
のいずれかによって、動物中で検出可能である任意の部分で標識され得る。

【０１６７】 抗体を含む、本発明の選択的結合因子は、治療剤として使用され得る。これら
の治療剤は、一般に、アゴニストまたはアンタゴニストであり、これらは、少な
くとも１つのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生物学的活性を、それぞれ増強ま
たは減少させるかのいずれかである。１実施形態中で、本発明のアンタゴニスト
抗体は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに特異的に結合し得、そしてインビボま
たはインビトロでＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能活性を阻害または排除し
得る、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと特異的に結合し得る抗体またはその結合
フラグメントである。好ましい実施形態において、選択的結合因子（例えば、ア
ンタゴニスト抗体）は、少なくとも約５０％、および好ましくは、少なくとも約
８０％によって、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能活性を阻害する。別の実
施形態において、選択的結合アッセイは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パ
ートナー（リガンドまたはレセプター）と相互作用し得る抗−ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドであり、これにより、インビトロまたはインビボにおいてＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド活性を阻害または排除する。アゴニストおよびアンタゴニ
スト抗体−ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗体を含む、選択的結合因子は、当該
分野で周知であるスクリーニングアッセイによって同定される。

【０１６８】 本発明はまた、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ選択的結合因子（例えば、抗体）を含むキッ
トおよび生物学的サンプル中でＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレベルを検出する
ために有用である他の薬剤に関する。このような薬剤はまた、血清を遮断する検
出可能な標識、ポジティブおよびネガティブコントロールサンプル、および検出
薬剤を含み得る。

【０１６９】 （マイクロアレイ） ＤＮＡマイクロアレイ技術は、本発明に従って利用され得る。ＤＮＡマイクロ
アレイは、固体支持体（例えば、ガラス）上に配置された核酸の小型高密度アレ
イである。このアレイ内の各細胞またはエレメントは、相補的核酸配列（ｍＲＮ
Ａ）とハイブリダイゼーションするための標識として作用する、単一の核酸種の
複数のコピーを含む。ＤＮＡマイクロアレイ技術を使用する発現プロフィールに
おいて、ｍＲＮＡは、細胞または組織から抽出され、次いで、酵素標識されたｃ
ＤＮＡを蛍光標識されたｃＤＮＡに変換される。この材料は、マイクロアレイに
ハイブリダイズされ、そして未結合のｃＤＮＡは、洗浄により除去される。次い
で、このアレイ上に示された個々の遺伝子の発現は、各々核酸分子を標的するた
めに特異的に結合される、標識されたｃＤＮＡの量を定量することによって視覚
化される。この方法において、数千の遺伝子の発現が、生物学的材料の単一サン
プルから、ハイスループットの並行様式で定量され得る。

【０１７０】 このハイスループット発現プロフィールは、本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子に
関連して広範の適用を有し、これには、以下が挙げられるが、これに限定されな
い：治療のための標的として、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ疾患関連遺伝子の同定および確
認；関連するＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子およびそのインヒビターの分子毒性；臨床試
験のための代替標識の集団および産生の階層化；およびハイスループットスクリ
ーニングにおいて、選択化合物の同定を援助することによって、関連するＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド小分子薬物発見を増強すること。

【０１７１】 （化学的誘導体） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの化学的に改変された誘導体は、この開示が、
本明細書中に記載された場合、当業者によって調製され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチド誘導体は、このポリペプチドに天然で結合した分子の型または位置
のいずれかで、異なる様式で改変される。誘導体は、１以上の天然で結合した化
学的な基の除去によって形成される分子を含み得る。配列番号２、配列番号４、
配列番号６、もしくは配列番号３６、または他のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドは、１以上のポリマーの共有結合
によって改変され得る。例えば、選択されたポリマーは、代表的に水溶性であり
、その結果、結合するタンパク質は、水環境（例えば、生理学的な環境）下で沈
殿しない。ポリマーの混合物が、適切なポリマーの範囲内に含まれる。好ましく
は、目的産物の調製の治療学的使用のために、このポリマーは、薬学的に受容可
能である。

【０１７２】 このポリマーの各々は、任意の分子量を有し得、そして分枝または非分枝であ
り得る。このポリマーの各々は、代表的に、約２ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
の平均分子量を有する（この用語「約（およそ）」は、水溶性ポリマーの調製の
際に、上記の分子量より多い、いくらか少ない重量を有することを示す）。各ポ
リマーの平均分子量は、好ましくは、約５ｋＤａと約５０ｋＤａの間、より好ま
しくは、約１２ｋＤａと約４０ｋＤａとの間、そして最も好ましくは、約２０ｋ
Ｄａと約３５Ｄａとの間である。

【０１７３】 適切な水溶性ポリマーまたはその混合物としては、以下が挙げられるが、これ
らに限定されない：Ｎ−連結またはＯ−連結炭水化物、糖、リン酸、ポリエチレ
ン、グリコール（ＰＥＧ）（これは、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_１０）、アルコキシ−、
またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールを含む、タンパク質を誘導する
ために使用されたＰＥＧの形態を含む）、モノメトキシ−ポリエチレングリコー
ル、デキストラン（例えば、低分子量（例えば、約６ｋＤのデキストラン））、
セルロース、または他の炭水化物ベースのポリマー、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリ
ジン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロ
ピレンオキシ／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（
例えば、グリセロール）、およびビニルアルコール。共有結合したＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドマルチマーを調製するために使用され得る、二官能性架橋分子
もまた、本発明に含まれる。

【０１７４】 一般に、化学的誘導は、活性化したポリマー分子とタンパク質を反応させるた
めに使用される任意の適切な条件下で、実施され得る。ポリペプチドの化学的誘
導体を調製するための方法は、以下の工程を包含する：（ａ）配列番号２、配列
番号４、配列番号６、もしくは配列番号３６、または他のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドのいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドが、１以上のポリマー分
子に結合する条件下で、活性化したポリマー分子（例えば、ポリマー分子の反応
性エステルまたはアルデヒド誘導体）とポリペプチドを反応させる工程、ならび
に（ｂ）反応生成物を得る工程。最適の反応条件は、既知のパラメータおよび所
望の結果に基づいて決定される。例えば、ポリマー分子のタンパク質に対する比
が大きくなるほど、結合したポリマー分子の割合も大きくなる。１実施形態にお
いて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体は、アミノ末端の単一ポリマー分子
部分を有する。例えば、米国特許第５，２３４，７８４号を参照のこと。

【０１７５】 ポリペプチドのペギル化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）は、当該分野で公知の任意
のペギル化反応を使用して特異的に実施され得る。このような反応は、例えば、
以下の参考文献に記載されている：Ｆｒａｎｃｉｓら，１９９２，Ｆｏｃｕｓ
ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ３：４−１０；欧州特許第０１５４３１
６号および０４０１３８４号；ならびに米国特許第４，１７９，３３７号。例え
ば、ペギル化は、本明細書中に記載されるように、反応性ポリエチレングリコー
ル分子（または、類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキ
ル化反応を介して実施され得る。アシル化反応のために、選択されたポリマーは
、単一の反応性エステル基を有する。還元的アルキル化について、選択されたポ
リマーは、単一の反応性アルデヒド基を有する。例えば、反応性アルデヒド、ポ
リエチレングリコールプロピオンアルデヒドであり、これは、水溶性、またはモ
ノＣ_１−Ｃ_１０アルコキシもしくはそのアリールオキシ誘導体である（米国特許
第５，２５２，７１４号を参照のこと）。

【０１７６】 別の実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ビオチンに化学的
に連結され得る。次いで、このビオチン／ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド分子は
、アビジンに結合され得、その結果、４価のアビジン／ビオチン／ＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチド分子が得られる。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドはまた、ジニ
トロフェノール（ＤＮＰ）またはチリニトロフェノール（ＴＮＰ）に共有結合さ
れ得、そして得られた結合体は、抗−ＤＮＰまたは抗−ＴＮＰ−ＩｇＭと共に沈
殿し、１０価の十量体の結合体を形成する。

【０１７７】 一般に、本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体の投与によって、緩和
または調節され得る条件は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドについて本明細書中
に記載されたものを含む。しかし、本明細書中に開示されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチド誘導体は、非誘導体化分子と比較した場合、さらなる活性、増強また
は減少した生物学的活性、または他の特性（例えば、増加または減少した半減期
）を有し得る。

【０１７８】 （遺伝子操作した非ヒト動物） マウス、ラット、または他のげっ歯類；ウサギ、ヤギ、ヒツジ、または他の家
畜のような非ヒト動物が、さらに本発明の範囲内に含まれ、ここで、天然のＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子は分裂（すなわち「ノックアウト
」）され、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現レベルは、有意に減少するか、
または完全に破壊される。このような動物は、米国特許第５，５５７，０３２号
に記載されるような技術および方法を使用して調製され得る。

【０１７９】 本発明は、マウス、ラット、または他のげっ歯類；ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ま
たは他の家畜のような非ヒト動物をさらに含み、この動物のＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺
伝子の天然の形態または非相同性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子のいずれかが、動物に
よって過剰発現され、これによって、「トランスジェニック」動物を作製する。
このようなトランスジェニック動物は、米国特許第５，４８９，７４３号および
ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／２８１２２号に記載されるような周知の方法を使用し
て調製され得る。

【０１８０】 本発明は、非ヒト動物をさらに含み、ここで、本発明の１以上のＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドのプロモーターは、（例えば、相同的な組換え方法を使用する
ことによって）活性化されるか、または活性化されず、１以上のＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドの発現のレベルを改変する。

【０１８１】 これらの非ヒト動物は、薬物候補物スクリーニングのために使用され得る。こ
のようなスクリーニングにおいて、動物での薬物候補物の影響が測定され得る。
例えば、薬物候補物は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の発現を減少または増加させ得
る。特定の実施形態において、産生されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの量は
、動物を薬物候補物に曝露した後に測定され得る。さらに、特定の実施形態にお
いて、動物での薬物候補物の実際の影響を検出し得る。例えば、特定の遺伝子の
過剰発現により、疾患状態または病理学的状態を生じるか、または関連する。こ
のような場合において、遺伝子の発現を減少させるための薬物候補物の能力また
は病理学的状態を防止または阻害するための能力を試験し得る。別の例において
、ポリペプチドのフラグメントのような、特定の代謝産物の産生により、疾患状
態または病理学的状態を生じるか、または関連する。このような場合において、
このような代謝産物の産生を減少させるための薬物候補物の能力または病理学的
状態を防止または阻害するための能力を試験し得る。

【０１８２】 （ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性の他の修飾因子についてのアッセイ） いくつかの状態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの活性の修飾因子で
ある分子（例えば、アゴニストまたはアンタゴニスト）を同定することが所望さ
れ得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを調節する天然または合成分子は、本明
細書中に記載されるように、１以上のスクリーニングアッセイを使用して同定さ
れ得る。このような分子は、インビボ様式またはインビトロ様式のいずれかで、
注射、または経口送達、移植デバイスなどによって投与され得る。

【０１８３】 「試験分子」とは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの活性を調節する（すなわ
ち、増加または減少させる）ための能力について評価する分子を言う。最も一般
的に、試験分子は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと直接的に相互作用する。し
かし、試験分子はまた、例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子発現に影響を与えるこ
とによって、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー（例えば、レ
セプターまたはリガンド）に結合することによって、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド活性を直接的に調節し得る。１実施形態において、試験分子は、少なくとも
約１０^−６Ｍ、好ましくは、約１０^−８Ｍ、より好ましくは、約１０^−９Ｍ、そ
してさらにより好ましくは約１０^−１０Ｍの親和性定数（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃ
ｏｎｓｔａｎｔ）でＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと結合する。

【０１８４】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用する化合物を同定するための方法は
、本発明によって包含される。特定の実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドは、試験分子とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドとの相互作用が可能な条
件下で、試験分子と共にインキュベートされ、そして相互作用の範囲が測定され
る。試験分子は、実質的に精製された形態または粗製の混合物中でスクリーニン
グされ得る。

【０１８５】 特定の実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドアゴニストまたはア
ンタゴニストは、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、または小分子量の分
子であり得、これは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用して、その活性
を調節する。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を調節する分子は、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸と相補的であるか、またはＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドの発現を指向または制御する核酸配列に対して相補的である核
酸分子、および発現のアンチセンス制御因子として作用する核酸分子を含む。

【０１８６】 一旦、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用する場合に、試験化合物が、
同定されると、この分子は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性を増加または減
少させる能力についてさらに評価され得る。試験分子とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドとの相互作用の測定は、いくつかの形態で実施され得、これには、細胞ベ
ースの結合アッセイ、膜結合アッセイ、液相アッセイ、および免疫アッセイが挙
げられる。一般に、試験分子は、特定の期間、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと
共にインキュベートされ、そしてＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性が、生物学
的活性を測定するために１以上のアッセイによって決定される。

【０１８７】 試験分子とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドとの相互作用はまた、免疫アッセイ
において、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を使用して直接的にアッセ
イされ得る。あるいは、本明細書中に記載されるようなエピトープタグを含むＩ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの改変形態は、溶液および免疫アッセイ中で使用さ
れ得る。

【０１８８】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが、結合パートナー（例えば、レセプターまた
はリガンド）との相互作用を介して、生物学的活性を示す場合において、種々の
インビトロアッセイが、対応する結合パートナー（選択的結合因子、レセプター
、またはリガンド）へのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの結合を測定するために
使用され得る。これらのアッセイは、結合パートナーに対するＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドの結合の速度および／または速度を増加または減少させるために、
試験分子をスクリーニングするために使用され得る。１アッセイにおいて、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、マイクロタイタープレートのウェル中で免疫化さ
れる。次いで、放射標識したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー（例
えば、ヨウ素化したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー）および試験
化合物は、このウェルに、一時に一方を（いずれかの順序で）または同時に添加
され得る。インキュベーション後に、この壁を洗浄し、そしてシンチレーション
計数器を使用して、放射活性を計数し、結合パートナーがＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドに結合する範囲を決定する。代表的に、分子は、濃度範囲にわたって試
験され、そして試験アッセイの１以上を欠く一連のコントロールウェルは、結果
の評価の正確性のために使用され得る。この方法の代わりは、タンパク質の「位
置」を逆にする工程を逆にする工程（すなわち、マイクロタイタープレートウェ
ルに対してＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーを免疫化し、試験分子
および放射標識したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをインキュベートし、そして
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合の範囲を決定する工程）を包含する。例えば
、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ、第１８章（Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ
Ｉｎｃ．ならびにＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ１９９５）を参照のこと。

【０１８９】 放射性標識に対する代替として、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドまたはその結
合パートナーは、ビオチンと結合体化され得、そしてビオチン化されたタンパク
質の存在が、次いで、酵素（例えば、わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）または
アルカリホスファターゼ（ＡＰ））（これらは、比色定量的に検出される）に結
合したストレプトアビジンを使用して検出され得るか、またはストレプトアビジ
ンの蛍光タグ化によって検出され得る。ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドまたはＩ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー（これらは、ビオチンに結合されて
いる）に対する抗体はまた、ＡＰまたはＨＲＰに連結した酵素連結ストレプトア
ビジンとの複合体のインキュベーションに続いて、検出の目的のために使用され
得る。

【０１９０】 ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドまたはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パー
トナーは、アガロースビーズ、アクリルビーズ、または他の型のこのような不活
性な固体相基材への付着によって固定化され得る。基材−タンパク質複合体は、
相補タンパク質および試験化合物を含む溶液内に配置され得る。インキュベーシ
ョン後、これらのビーズは、遠心分離によって沈澱され得、そしてＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドとその結合パートナーとの間の結合の量が、本明細書中に記載
の方法を使用して評価され得る。あるいは、基材−タンパク質複合体は、カラム
を通過する、試験分子および相補タンパク質を用いてカラム内に固定化され得る
。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドトその結合パートナーとの間の複合体の形成が
、次いで、本明細書中に記載の技術（例えば、放射性標識または抗体結合）のい
ずれかを使用して評価され得る。

【０１９１】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合タンパク質とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ド結合パートナーとの間の複合体の形成を増加または減少させる試験分子を同定
するために有用な別のインビトロアッセイは、表面プラズモン共鳴検出器システ
ム（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃ
ａｔａｗａｙ，ＮＪ））である。ＢＩＡｃｏｒｅシステムは、製造業者によって
特定されるように利用される。このアッセイは、本質的に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドまたはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーのいずれかの、
デキストランでコートされたセンサーチップ（これは、検出器に存在する）への
共有結合を含む。次いで、この試験化合物および他の相補タンパク質が、同時に
かまたは連続的にかのいずれかで、センサーチップを含むチャンバーに注入され
得る。結合する相補タンパク質の量は、センサーチップのデキストランコート側
面に物理的に関係する分子の質量の変化に基づいて評価され得、この分子の質量
の変化は、検出器システムによって測定される。

【０１９２】 いくつかの場合において、２つ以上の試験化合物を一緒に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドとＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーとの間の複合体の
形成を増加または減少させるそれらの能力について評価することが所望され得る
。これらの場合において、本明細書中に記載のアッセイは、第一の試験化合物と
同時にか、またはそれに続いてのいずれかで、このようなさらなる試験化合物を
添加することによって容易に改変され得る。このアッセイにおける工程の残りは
、本明細書中に記載される。

【０１９３】 インビトロアッセイ（例えば、本明細書中に記載されるもの）は、ＩＬ−１ｒ
ａ−ＲポリペプチドとＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーとの間の複
合体の形成に対する効果について、多数の化合物をスクリーニングするために、
有利に使用され得る。これらのアッセイは、ファージディスプレイ、合成ペプチ
ド、および化学合成ライブラリーにおいて生成された化合物をスクリーニングす
るために、自動化され得る。

【０１９４】 ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドとＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナ
ーとの間の複合体の形成を増加または減少される化合物はまた、ＩＬ−１ｒａ−
ＲポリペプチドまたはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーＦのいずれ
かを発現する細胞および細胞系列を使用して、細胞培養物においてスクリーニン
グされ得る。細胞および細胞系列は、任意の哺乳動物から得られ得るが、好まし
くは、ヒト、または他の霊長類、イヌ類またはげっ歯類の供給源由来である。Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー
を発現する細胞への、その表面での結合は、試験化合物の存在または非存在下で
評価され、そして結合の程度が、例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パ
ートナーに対するビオチン化抗体を使用するフローサイトメトリーによって決定
され得る。細胞培養アッセイは、本明細書中に記載されるタンパク質結合アッセ
イにおいて、陽性であるとスコア付けされる化合物をさらに特徴付けするために
有利に使用され得る。

【０１９５】 細胞培養物はまた、薬物候補の影響をスクリーニングするために使用され得る
。例えば、薬物候補は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の発現を減少または増加させ得
る。特定の実施形態において、生成されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドまたは
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメントの量は、細胞培養物の薬物候補への
曝露の後に測定され得る。特定の実施形態において、細胞培養物への薬物候補の
実質的な影響が検出され得る。例えば、特定の遺伝子の過剰発現は、細胞培養物
への特定の影響を有し得る。このような場合に、遺伝子の発現を増加または減少
させる薬物候補の能力、または細胞培養物に対する特定の影響を予防または阻害
するその能力が試験され得る。他の例において、特定の代謝産物（例えば、ポリ
ペプチドのフラグメントなど）の生成が、疾患または病的状態を生じ得るか、ま
たはそれらと関連し得る。このような場合、細胞培養物におけるこのような代謝
産物の生成を減少する薬物候補の能力が試験され得る。

【０１９６】 （内部移行タンパク質） ｔａｔタンパク質配列（ＨＩＶ由来）が、タンパク質を細胞内に内部移行させ
るために、使用され得る。例えば、Ｆａｌｗｅｌｌら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：６６４−６８を参照のこと。例
えば、ＨＩＶ ｔａｔタンパク質の１１アミノ酸の配列（Ｙ−Ｇ−Ｒ−Ｋ−Ｋ−
Ｒ−Ｒ−Ｑ−Ｒ−Ｒ−Ｒ；配列番号１８）（「タンパク質形質導入ドメイン」、
またはＴＡＴ ＰＤＴを称される）は、細胞の細胞質膜および核膜を横切る送達
を媒介するとして記載されている。Ｓｃｈｗａｒｚｅら，１９９９，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２８５：１５６９−７２；およびＮａｇａｈａｒａら，１９９８，Ｎａｔ
．Ｍｅｄ．４：１４４９−５２を参照のこと。これらの手順において、ＦＩＴＣ
構築物（ＦＩＴＣ標識Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｙ−Ｇ−Ｒ−Ｋ−Ｋ−Ｒ−Ｒ−Ｑ−Ｒ−
Ｒ−Ｒ；配列番号１９）（これは、腹腔内投与に続いて組織を貫通する）が調製
され、そしてこのような構築物の細胞への結合が、蛍光細胞分析分離（ＦＡＣＳ
）分析によって検出される。ｔａｔ−β−ｇａｌ融合タンパク質で処置された細
胞は、β−ｇａｌ活性を示す。注入に続いて、このような構築物の発現が、多く
の組織（肝臓、腎臓、肺、心臓および脳組織）において検出され得る。このよう
な構築物は、細胞に入るためにある程度の変性を受け、そしてそれ自体、細胞内
への移入に続いて、再折り畳みを必要とし得ると考えられる。

【０１９７】 従って、ｔａｔタンパク質配列は、所望のポリペプチドを細胞に内部移入させ
るために使用され得ることが理解される。例えば、ｔａｔタンパク質配列を使用
して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒアンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−ｌｒａ−Ｒ選択的結
合因子、低分子、可溶性レセプター、またはアンチセンスオリゴヌクレオチド）
は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子の活性を阻害するために、細胞内投与され得る。本明
細書中で使用される場合、用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子」は、本明細書中に記載
されるような、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
の両方をいう。所望ならば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒタンパク質自体はまた、これらの
手順を使用して、細胞に内部投与され得る。Ｓｔｒａｕｓ，１９９９，Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２８５：１４６６−６７をまた参照のこと。

【０１９８】 （ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを使用する細胞供給源の同定） 本発明の特定の実施形態に従って、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと関連する
特定の細胞型の供給源を決定することを可能することが有用であり得る。例えば
、適切な治療を選択する際の補助として疾患または病的状態の起源を決定するこ
とが有用であり得る。特定に実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
をコードする核酸は、プローブとして使用されて、このようなプローブを用いて
細胞の核酸をスクリーニングすることによって、本明細書中に記載の細胞を同定
し得る。他の実施形態において、抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗体を使用し
て、細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの存在について試験し得、従っ
て、このような細胞が本明細書中に記載される型の細胞か否かを決定し得る。

【０１９９】 （ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド組成物および投与） 治療組成物は、本発明の範囲内である。このようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド薬学的組成物は、治療有効量のＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドまたはＩＬ−
１ｒａ−Ｒ核酸分子を、投与の様式と適合するように選択された薬学的にまたは
生理学的に受容可能な処方薬剤との混合物中に、含み得る。薬学的組成物は、治
療有効量の１以上のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド選択的結合因子を、投与の様
式と適合するように選択された薬学的にまたは生理学的に受容可能な処方薬剤と
の混合物中に、含み得る。

【０２００】 受容可能な処方物材料は、好ましくは、使用される投薬量および濃度で、レシ
ピエントに対して非毒性である。

【０２０１】 薬学的組成物は、例えば、ｐＨ、浸透圧、粘度、清澄性、色、等張性、におい
、無菌性、安定性、解離または放出の速度、吸着、または組成物の浸透を改変、
維持または保存するための処方物材料を含み得る。適切な処方物材料としては、
以下が挙げられるが、これらに限定されない：アミノ酸（例えば、グリシン、グ
ルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン）、抗菌剤、抗酸化剤（例
えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウム（ｓｏ
ｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ−ｓｕｌｆｉｔｅ））、緩衝液（例えば、ホウ酸塩
、炭酸水素塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、または他の有機酸）
、バルキング剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）、キレート化剤（エチ
レンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、複合体化剤（例えば、カフェイン、ポリビ
ニルピロリドン、β−シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル−β−シ
クロデキストリン）、フィラー、単糖類、二糖類、および他の炭水化物（例えば
、グルコース、マンノースまたはデキストリン）、タンパク質（例えば、血清ア
ルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）、着色剤、味付け剤および希釈剤
、乳化剤、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）、低分子量ポリペ
プチド、塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）、保存剤（例えば、塩化ベンザ
ルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メ
チルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸
化水素）、溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、またはポリエチ
レングリコール）、糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）
、懸濁剤、表面活性剤または湿潤剤（例えば、プルオニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ
）；ＰＥＧ；ソルビタンエステル；ポリソルビテート（例えば、ｐｏｌｙｓｏｒ
ｂａｔｅ ２０またはｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０）；トリトン；トロメタミ
ン；レシチン；コレステロールまたはチロキサポール（ｔｙｌｏｘａｐａｌ））
、安定性増強剤（例えば、スクロースまたはソルビトール）、張度増強剤（例え
ば、ハロゲン化アルカリ金属（好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム）
、またはマンニトール、ソルビトール）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および
／または薬学的なアジュバント。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，編，Ｍａ
ｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９０を参照のこと。

【０２０２】 最適な薬学的組成物は、当業者によって、例えば、意図される投与経路、送達
形式、および所望の投薬量に依存して決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出を参照のこと。
このような組成物は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子の、物理的な状態、安定性、インビ
ボ放出の速度、およびインビボクリアランスの速度に影響し得る。

【０２０３】 薬学的組成物における主要なビヒクルまたはキャリアは、本来水性または非水
性のいずれかであり得る。例えば、注入のための適切なビヒクルまたはキャリア
は、水、生理学的な生理食塩水溶液、または人工脳脊髄液であり、おそらく非経
口投与のための組成物において一般的なタンパク質の材料で補充されている。中
性の緩衝化生理食塩水または血清アルブミンと混合された生理食塩水は、さらな
る例示的なビヒクルである。他の例示的な薬学的組成物は、約ｐＨ７．０−８．
５のＴｒｉｓ緩衝液または約ｐＨ４．０−５．５の酢酸塩緩衝液を含み、これは
さらに、ソルビトールまたは適切な置換物を含み得る。本発明の１つの実施形態
において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド組成物は、所望の程度の純度を有する
選択された組成物を、任意の処方薬剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出）と混合することによって、凍結乾
燥ケークまたは水溶液の形態で、保存のために調製され得る。さらに、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド産物は、スクロースのような適切な賦形剤を使用して凍結
乾燥物として処方され得る。

【０２０４】 このＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの薬学的組成物は、非経口送達のために選
択され得る。あるいは、これらの組成物は、吸入または消化管を介する送達（例
えば、経口的に）のために、選択され得る。このような薬学的に受容可能な組成
物の調製は、当該分野の技術内にある。

【０２０５】 処方成分が、投与の部位に受容可能な濃度で存在する。例えば、緩衝液は、生
理学的ｐＨまたは多少より低いｐＨ（典型的に、約５〜約８のｐＨ範囲内）にこ
の組成物を維持するために使用される。

【０２０６】 非経口投与が意図される場合、本発明における使用のための治療組成物は、薬
学的に受容可能なビヒクルに所望のＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子を含む発熱物質を含ま
ない非経口的に受容可能な水溶液の形態であり得る。非経口注入のために特に適
切なビヒクルは、滅菌蒸留水であり、ここで、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子が、滅菌で
、等張溶液として処方され、適切に保存される。なお別の調製は、所望の分子と
、薬剤（例えば、注入可能なミクロスフィア、生体侵食（ｂｉｏ−ｅｒｏｄｉｂ
ｌｅ）薬剤、ポリマー化合物（ポリ乳酸またはポリグリコール酸）、ビーズまた
はリポソーム）との処方物に関係し、これは、次いで蓄積注射を介して送達され
得る産物の制御されたまたは持続された放出を提供する。ヒアルロン酸がまた、
使用され得、そしてこれは、循環において、維持された持続時間を促進する効果
を有し得る。所望の分子の導入のための他の適切な手段は、移植可能な薬物送達
デバイスを含む。

【０２０７】 １つの実施形態において、薬学的組成物は、吸入のために処方され得る。例え
ば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、吸入のための乾燥粉末として処方され得
る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドまたは核酸分子の吸入溶液はまた、エアロゾ
ル送達のための噴霧体と共に処方され得る。なお別の実施形態において、溶液は
、噴霧され得る。肺投与が、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／２００６９にさらに記載
され、これは化学的に改変されたタンパク質の肺送達を記載する。

【０２０８】 特定の処方物が、経口投与され得ることがまた意図される。本発明の１つの実
施形態において、このよう様式で投与されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが、
固体投薬形態（例えば、錠剤またはカプセル）の調合において慣用的に使用され
るキャリアを伴うか、または伴わず処方され得る。例えば、カプセルは、バイオ
アベイラビリティーが最大化され、そして前全身分解が最小化される場合、胃腸
管内での点で処方物の活性部分を放出するように設計され得る。さらなる薬剤が
、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの吸収を容易にするために含まれうる。希釈剤
、味付け剤、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤、およびバ
インダーがまた、使用され得る。

【０２０９】 別の薬学的組成物は、錠剤の製造に適切な非毒性賦形剤との混合物中に、有効
量のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを含み得る。錠剤を滅菌水または別の適切な
ビヒクルに溶解することによって、溶液が、単位用量形態で調製され得る。適切
な賦形剤は以下を含むが、これらに限定されない：不活性な希釈剤（炭酸カルシ
ウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウム、ラクトース、あるいはリン酸
カルシウム）；または結合剤（例えば、デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム
）；あるいは潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸または
タルク）。

【０２１０】 さらなるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの薬学的組成物は、当業者に明らかで
あり、持続または制御送達処方物中にＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを含む処方
物を含む。種々の他の持続または制御送達手段（例えば、リポソームキャリア、
生体侵食マイクロスフィアあるいは多孔性ビーズおよび蓄積注射）を処方するた
めの技術はまた、当業者に公知である。例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９
（これは、薬学的組成物の送達のための多孔性ポリマー性ミクロ粒子の制御放出
を記載する）を参照のこと。

【０２１１】 徐放性調製物のさらなる例としては、成形された物品の形態（例えば、フィル
ム、またはマイクロカプセル）の半透過性ポリマーマトリックスを含む。徐放性
マトリックスとしては、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第
３，７７３，９１９号および欧州特許第０５８４８１号）、Ｌ−グルタミン酸と
γエチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら，１９８３，Ｂｉ
ｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５６）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メ
タクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．
Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７およびＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅ
ｃｈ．１２：９８−１０５）、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒら，前
出）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許第１３３９８８号）
。徐放性組成物はまた、リポソームを含み得、これは、当該分野で公知のいくつ
かの方法のいずれかによって調製され得る。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら，１９
８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８−９２
；および欧州特許第０３６６７６号、同第０８８０４６号、および同第１４３９
４９号を参照のこと。

【０２１２】 インビボ投与のために使用されるＩＬ−１ｒａ−Ｒの薬学的組成物は、代表的
に滅菌でなければならない。このことは、滅菌濾過膜を介する濾過によって達成
され得る。組成物が、凍結乾燥される場合、この方法を使用する滅菌は、凍結乾
燥および再構成の前に、またはそれに続いてのいずれかで実施され得る。非経口
投与のための組成物は、凍結乾燥された形態または溶液で保存され得る。さらに
、非経口組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器（例えば、静脈内
溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアル）
内に配置される。

【０２１３】 一旦、薬学的組成物が処方されると、それは、滅菌バイアル中に溶液、懸濁液
、ゲル、エマルジョン、固体、または脱水和粉末または凍結乾燥粉末として保存
され得る。このような処方物は、すぐに使用できる形態または投与の前に再構成
を必要とする形態（凍結乾燥された形態）のいずれかで保存され得る。

【０２１４】 特定の実施形態において、本発明は、単一用量投与単位を生成するためのキッ
トに関する。このキットは、各々、乾燥タンパク質を有する第一の容器および水
性処方物を有する第二の容器の両方を含み得る。また、本発明の範囲内には、単
一および多チャンバーの予め充填されたシリンジ（例えば、液体シリンジおよび
分散シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含むキットが含まれる。

【０２１５】 治療的に使用されるＩＬ−１ｒａ−Ｒの薬学的組成物の有効量は、例えば、治
療の内容および目的に依存する。当業者は、処置のための適切な投薬レベルが、
従って、送達される分子、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子が使用されている指標、投与の
経路、および患者のサイズ（体重、体表面、または器官の大きさ）および状態（
年齢および一般的な健康）に、部分的に依存して変化することを理解する。従っ
て、臨床家は、最適な治療効果を得るために、投薬量を力価決定し（ｔｉｔｅｒ
）、投与経路を改変し得る。代表的な投薬量は、上記の因子に依存して、約０．
１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ以上までの範囲であり得る。他の実施形態に
おいて、投薬量は、０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまで；または１μｇ
／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまで；または５μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇま
での範囲であり得る。

【０２１６】 投薬の頻度は、使用される処方物中でのＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子の薬物動態学の
パラメーターに依存する。典型的に、臨床家は、所望の効果を達成する投薬量に
達するまで組成物を投与する。組成物は、従って、組成物は、経時的な単一用量
として、２以上の用量（これは、同量の所望の分子を含んでも、含まなくてもよ
い）として、あるいは移植デバイスまたはカテーテルを介する連続的な注入とし
て、投与され得る。適切な投薬量のさらなる改良は、当業者によって慣用的にな
され、そしてそれらによって慣用的に実施される課題の範囲内である。適切な投
薬量は、適切な用量−応答データの使用を介して確認され得る。

【０２１７】 薬学的組成物の投与の経路は、以下のような公知の方法と一致する：経口的に
；静脈内、腹腔内、脳内（実質内の）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内
、または病巣内の経路による注入を介して；徐放性系によって；または移植デバ
イスによって。所望される場合、これらの組成物は、ボーラス注射によって投与
され得るか、または注入によって連続的に投与され得るか、または移植デバイス
によって投与され得る。

【０２１８】 あるいはまたはさらに、組成物は、その上に所望の分子が吸収されるかまたは
カプセル化される膜、スポンジ、または他の適切な材料の移植を介して局所的に
投与され得る。移植デバイスが使用される場合、このデバイスは、任意の適切な
組織または器官に移植され得、そして所望の分子の送達は、拡散、時限放出ボー
ラスまたは連続的な投与を介し得る。

【０２１９】 いくつかの場合において、エキソビボ様式において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドの薬学的組成物を使用することが所望され得る。このような例において、
患者から除去された細胞、組織、または器官は、これらの細胞、組織、または器
官が引き続いて患者に移植して戻された後にＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに曝
露される。

【０２２０】 他の場合において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、本明細書中に記載され
る方法を使用して、遺伝的に操作されて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを発現
および分泌する特定の細胞を移植することによって送達され得る。このような細
胞は、動物またはヒト細胞であり得、そして自己、異種、または外因性の細胞で
あり得る。必要に応じて、細胞は、不死化され得る。免疫学的応答の機会を減少
するために、細胞は、周囲の組織の浸潤を回避するために、カプセル化され得る
。カプセル化材料は、典型的に、生体適合性の半浸透性ポリマー性包囲物または
膜であり、これらは、タンパク質産物の放出を可能にするが、患者の免疫系また
は周囲の組織からの他の有害な因子によって細胞の破壊を防止する。

【０２２１】 本明細書中において議論されるように、単離された細胞集団（例えば、幹細胞
、リンパ球、赤血球、軟骨細胞、ニューロンなど）を１つ以上のＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドで処理することが、望ましくあり得る。このことは、細胞膜に対
して透過性の形態である場合には、単離された細胞をこのポリペプチドに直接曝
露することによって達成され得る。

【０２２２】 本発明のさらなる実施形態は、治療ポリペプチドのインビトロ産生と、遺伝子
治療または細胞治療による治療ポリペプチドの産生および送達との両方のための
、細胞および方法（例えば、相同組換えおよび／または他の組換え産生方法）に
関する。相同組換えおよび他の組換えの方法を使用して、通常は転写に対してサ
イレントなＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子（すなわち、過少発現される遺伝子）を含む
細胞を改変し得、これによって、治療有効量のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを
発現する細胞を産生し得る。

【０２２３】 相同組換えは、もともとは、遺伝子を標的化して転写活性な遺伝子における変
異を誘導するか、または修正するために開発された技術である。Ｋｕｃｈｅｒｌ
ａｐａｔｉ，１９８９，Ｐｒｏｇ．ｉｎ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．＆ Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６：３０１。基本的な技術が、特定の変異を哺乳動物ゲノム
の特定の領域に導入するため（Ｔｈｏｍａｓら、１９８６，Ｃｅｌｌ ４４：４
１９−２８；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ，１９８７，Ｃｅｌｌ ５１
：５０３−１２；Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら、１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：８５８３−８７）、または欠損遺伝子にお
ける特定の変異を修正するため（Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら、１９８７，Ｎａｔｕ
ｒｅ ３３０：５７６−７８）の方法として、開発された。例示的な相同組換え
技術は、米国特許第５，２７２，０７１号；欧州特許第９１９３０５１号および
同第５０５５００号；ＰＣＴ／ＵＳ９０／０７６４２、ならびにＰＣＴ公開番号
ＷＯ ９１／０９９５５）に記載されている。

【０２２４】 相同組換えによって、ゲノムに挿入されるべきＤＮＡ配列は、それを標的ＤＮ
Ａに付着させることによって、目的の遺伝子の特定の領域に指向され得る。この
標的ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡの領域に相補的（相同）であるヌクレオチド配列で
ある。ゲノムの特定の領域に対して相補的な標的ＤＮＡの小さな断片は、ＤＮＡ
複製プロセスの間に、親鎖と接触される。これは、細胞に挿入されてハイブリダ
イズしたＤＮＡの一般的な特性であり、そして従って、共有される相同領域を介
して、内因性ＤＮＡの他の断片と組み換わる。この相補鎖が、変異または異なる
配列またはさらなるヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに付着される場合に
は、これはまた、この組換えの結果として新たに合成された鎖に組み込まれる。
プルーフリーディング機能の結果として、ＤＮＡの新たな配列がテンプレートと
して働くことが可能である。従って、移入されたＤＮＡは、ゲノムに組み込まれ
る。

【０２２５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用し得るかまたはその発現を制御し得
るＤＮＡの領域（例えば、隣接配列）が、標的ＤＮＡのこれらの断片に付着する
。例えば、プロモーター／エンハンサーエレメント、サプレッサ、または外因性
転写調節エレメントが、意図される宿主細胞のゲノムに、所望のＩＬ−１ｒａ−
ＲポリペプチドをコードするＤＮＡの近位に、このＤＮＡの転写に影響を与える
に十分な配向で、挿入される。制御エレメントは、この宿主細胞ゲノムに存在す
るＤＮＡの部分を制御する。従って、所望のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発
現は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子自体をコードするＤＮＡのトランスフェクション
によってではなく、むしろ、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の転写のための認識可能な
シグナルを有する内因性遺伝子配列を提供するＤＮＡ調節セグメントと結合した
標的ＤＮＡ（目的の内因性遺伝子と相同の領域を含む）の使用によって、達成さ
れ得る。

【０２２６】 例示的な方法において、細胞における所望の標的遺伝子（すなわち、所望の内
因性細胞遺伝子）の発現は、予め選択された部位における細胞ゲノムへの相同組
換えを介して、少なくとも調節配列、エキソン、およびスプライスドナー部位を
含むＤＮＡの導入によって、変更される。これらの構成成分は、新たな転写ユニ
ットの産生を実際に生じるような様式で、染色体（ゲノム）ＤＮＡに導入される
（ここで、ＤＮＡ構築物に存在する調節配列、エキソン、およびスプライスドナ
ー部位は、内因性遺伝子に作動可能に連結する）。染色体ＤＮＡへのこれらの構
成成分の導入の結果として、所望の内因性遺伝子の発現が変化する。

【０２２７】 本明細書中で記載されるように、変化された遺伝子発現は、通常は得られたま
まの細胞においてサイレントな（発現されていない）遺伝子の活性化（または発
現させる）、ならびに得られたままの細胞において生理学的に有意なレベルでは
発現されない遺伝子の発現の増加を包含する。この実施形態はさらに、調節また
は誘導のパターンを変化させる工程を包含し、その結果、これは、得られたまま
の細胞において生じる調節または誘導のパターンとは異なり、そして得られたま
まの細胞において発現される遺伝子の発現を減少（排除を含む）させる。

【０２２８】 細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの
産生を増加するかまたはこれを引き起こすために相同定組換えが使用され得る１
つの方法は、最初に、相同性組換えを使用して、部位特異的組換え系由来の組換
え配列（例えば、Ｃｒｅ／ｌｏｘＰ、ＦＬＰ／ＦＲＴ）（Ｓａｕｅｒ，１９９４
，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５：５２１−２；Ｓａｕｅｒ
，１９９３，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２２５：８９０−９００）を
、細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域の上流（すなわち、５
’）に配置する工程を包含する。ゲノムＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領
域のすぐ上流に配置された領域に対して相同性の組換え部位を含むプラスミドは
、適切なリコンビナーゼ酵素と共に、改変された細胞株に導入される。このリコ
ンビナーゼによって、プラスミドは、このプラスミドの組換え部位を介して、こ
の細胞株のゲノムＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域のすぐ上流に位置す
る組換え部位に組込み得る（ＢａｕｂｏｎｉｓおよびＳａｕｅｒ、１９９３，Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２１：２０２５−２９；Ｏ’Ｇａｒｍａｎ
ら、１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１−５５）。転写を増加させる
ことが知られている任意の側方配列（例えば、エンハンサー／プロモーター、イ
ントロン、翻訳エンハンサー）は、このプラスミド中に適切に配置される場合、
細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からの新たなまたは増加したＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチド産生を生じる新たなまたは改変された転写単位を作製するよう
な様式で一体化する。

【０２２９】 部位特異的組換え配列が細胞の内在性ゲノムＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコ
ード領域のすぐ上流に配置された細胞株を使用するさらなる方法は、細胞株のゲ
ノムの他の位置に第２の組換え部位を導入するために相同性組換えを使用するこ
とである。適切な組換え酵素は、次いで、二組換え部位細胞株に導入され、組換
え減少（欠失、転化、および転移）を生じ（Ｓａｕｅｒ，１９９４，Ｃｕｒｒ．
Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５：５２１−２７；Ｓａｕｅｒ，１９９３
，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｘｙｍｏｌ．，２２５：８９０−９００）、これは、細
胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からの新規なまたは増加したＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチド産生を生じる新しいかまたは改変された転写ユニットを作製する
。

【０２３０】 細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの
発現を増加するため、または引き起こすためのさらなるアプローチは、細胞の内
在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からの新たなまたは増加したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドの産生を生じる様式で、遺伝子（単数または複数）（例えば、転写因子
）の発現を増加するかまたは引き起こし、そして／または遺伝子（単数または複
数）（例えば、転写リプレッサ）の発現を減少する工程を包含する。この方法は
、天然に存在しないポリペプチド（例えば、転写因子ドメインに融合した部位特
異的ＤＮＡ結合ドメインを含むポリペプチド）を、細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−
Ｒ遺伝子からの新たなまたは増加したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの産生が起
こるように、細胞に導入する工程を包含する。

【０２３１】 本発明はさらに、標的遺伝子の発現を変化させる方法において有用なＤＮＡ構
築物に関する。特定の実施形態において、代表的なＤＮＡ構築物は、以下を含む
：（ａ）１つ以上の標的配列、（ｂ）制御配列、（ｃ）エキソン、および（ｄ）
不対スプライスドナー部位。ＤＮＡ構築物中の標的配列は、エレメント（ａ）〜
（ｄ）の細胞中の標的遺伝子への組込みを指向し、その結果、これらのエレメン
ト（ｂ）〜（ｄ）は、内在性標的遺伝子の配列に作動可能に連結される。別の実
施形態において、ＤＮＡ構築物は、以下を含む：（ａ）１つ以上の標的配列、（
ｂ）制御配列、（ｃ）エキソン、（ｄ）スプライスドナー部位、（ｅ）イントロ
ン、および（ｆ）スプライスアクセプター部位。ここで、標的配列は、エレメン
ト（ａ）〜（ｆ）の組込みを指向し、その結果、これらのエレメント（ｂ）〜（
ｆ）は、内在性遺伝子に作動可能に連結される。標的配列は、相同性組換えが生
じる細胞染色体ＤＮＡの予め選択された部位に対して相同性である。この構築物
において、エキソンは、一般的に、制御配列の３’であり、そしてスプライスド
ナー部位は、このエキソンの３’である。

【０２３２】 特定の遺伝子の配列（例えば、本明細書中で記載されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドの核酸配列）が公知である場合、遺伝子の選択された領域に対して相補
的なＤＮＡの部分は、合成されるか、またはそうでなければ、例えば、目的の領
域に結合している特定の認識部位におけるネイティブのＤＮＡの適切な制限等に
よって得られ得る。この部分は、細胞に挿入された際に、標的配列として働き、
そしてそのゲノム内の相同性領域にハイブリダイズする。このハイブリダイゼー
ションが、ＤＮＡ複製の間に生じる場合、このＤＮＡの部分、およびそれに結合
した任意のさらなる配列は、Ｏｋａｚａｋｉフラグメントとして作用し、そして
ＤＮＡの新たに合成された娘鎖に組み込まれる。従って、本発明は、ＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドをコードするヌクレオチドを含み、このヌクレオチドは、標
的配列として使用され得る。

【０２３３】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド細胞治療（例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドを産生する細胞の移植）もまた企図される。この実施形態は、生物学的に活
性な形態のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを合成および分泌し得る細胞を移植す
る工程を包含する。このようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド産生細胞は、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドの天然産物である細胞であり得るか、または組換え細
胞であって、そのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生する能力が、所望のポリ
ペプチドをコードする遺伝子またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を増大
する遺伝子で形質転換することによって増大された、組換え細胞であり得る。こ
のような改変は、遺伝子を送達し、その発現および分泌を促進するために適切な
ベクターによって達成され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを投与されてい
る患者における強力な免疫学的反応を最小化するために、異種のポリペプチドの
投与と共に生じる場合、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生する天然の細胞が
、ヒト起源であり、そしてヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生することが
好ましい。同様に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生する組換え細胞が、ヒ
トＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子を含む発現ベクターで形質
転換されることが好ましい。

【０２３４】 移植細胞は、周辺組織の浸透を回避するようにカプセル化され得る。ヒトまた
は非ヒト動物細胞は、生体適合性の半透性ポリマー封入物または膜（これは、Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの放出を可能にするが、患者の免疫系または周辺組
織からの他の有害な因子による細胞の崩壊を防止する）の形態で患者に移植され
得る。あるいは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをエキソビボで産生するように
形質転換された患者自身の細胞が、このようなカプセル化なしで、患者に直接移
植され得る。

【０２３５】 生きた細胞をカプセル化するための技術は当該分野で公知であり、そしてカプ
セル化された細胞の調製およびそれらの患者への移植は、慣用的に達成され得る
。例えば、Ｂａｅｔｇｅら（ＰＣＴ公開ＷＯ９５／０５４５２およびＰＣＴ／Ｕ
Ｓ９４／０９２９９）は、生物学的に活性な分子の効果的な送達のために遺伝子
操作された細胞を含む膜カプセルを記載する。このカプセルは、生体適合性であ
り、そして容易に取り出し可能である。このカプセルは、哺乳動物宿主に移植さ
れた際に、インビボで下方制御に供されないプロモーターに作動可能に連結され
た生物学的に活性な分子をコードするＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子でトラ
ンスフェクトされた細胞をカプセル化する。このデバイスは、生きた細胞由来の
分子のレシピエント内の特定の部位への送達を提供する。さらに、米国特許第４
，８９２，５３８号；同第５，０１１，４７２号；および同第５，１０６，６２
７号を参照のこと。生きた細胞をカプセル化するためのシステムは、ＰＣＴ公開
ＷＯ９１／１０４２５（Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら）に記載される。ＰＣＴ公開を９
１／／１０４７０（Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら）；Ｗｉｎｎら、１９９１，Ｅｘｐｅ
ｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．１１３：３２２−２９；Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら、１９９１，
Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．１１１：２６９−７５；およびＴｒｅｓｃｏら、１
９９２，ＡＳＡＩＯ ３８：１７−２３もまた参照のこと。

【０２３６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのインビボおよびインビトロの遺伝子治療送達
もまた想定される。遺伝子治療技術の一例は、構成的または誘発性プロモーター
に作動可能に連結され得るＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするＩＬ−１
ｒａ−Ｒ遺伝子（ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡおよび／または合成ＤＮＡのいずれか
）を使用して、「遺伝子治療ＤＮＡ構築物」を形成することである。このプロモ
ーターは、内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子に対してホモ接合性またはヘテロ接合
性であるが、ただし、これは、構築物が挿入される細胞または組織型において活
性である。遺伝子治療ＤＮＡ構築物の他の成分は、必要に応じて、部位特異的組
込みのために設計されるＤＮＡ分子（例えば、相同性組換えのために有用な内在
性配列）、組織特異的プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサー、親細胞
を越える選択的優性を提供し得るＤＮＡ分子、形質転換された細胞を同定するた
めの標識として有用なＤＮＡ分子、ネガティブ選択系、細胞特異的結合因子（例
えば、細胞標的化について）。細胞特異的内部移行、ベクターからの発現を増大
する転写因子、およびベクターの産生を可能にする因子を含む。

【０２３７】 遺伝子治療ＤＮＡ構築物は、次いで、ウイルスベクターまたは非ウイルスベク
ターを使用して細胞に導入され得る（エキソビボまたはインビボノいずれか）。
遺伝子治療ＤＮＡ構築物を導入するための１つの方法は、本明細書中に記載され
るようなウイルスベクターの使用による。特定のベクター（例えば、レトロウイ
ルスベクター）は、ＤＮＡ構築物を細胞の染色体ＤＮＡに送達し、そしてこの遺
伝子は、染色体ＤＮＡに組み込まれ得る。他のベクターは、エピソームとして機
能し、そして遺伝子治療ＤＮＡ構築物は、細胞質に残る。

【０２３８】 さらに他の実施形態において、制御エレメントが、標的細胞におけるＩＬ−１
ｒａ−Ｒ遺伝子の制御された発現のために含められ得る。このようなエレメント
は、適切なエフェクターに応答して刺激される。このようにして、治療的ポリペ
プチドは、所望の場合に発現され得る。１つの従来の制御手段は、低分子結合ド
メインおよび生物学的プロセスを開始し得るドメインを含むキメラタンパク質（
例えば、ＤＮＡ結合タンパク質または転写活性タンパク質）を二量化する低分子
二量化剤またはラパログ（ｒａｐａｌｏｇ）の使用を包含する（ＰＣＴ公開ＷＯ
９６／４１８６５、ＷＯ９７／３１８９８およびＷＯ９７／３１８９９を参照の
こと）。タンパク質の二量化は、導入遺伝子の転写を開始するために使用され得
る。

【０２３９】 代替の調節技術は、目的の遺伝子から発現されたタンパク質を、凝集体または
クラスターとして細胞の内側に貯蔵する方法を使用する。目的の遺伝子は、内在
性小網における凝集タンパク質の保持を生じる、条件的凝集ドメインを含む融合
タンパク質として発現される。貯蔵されたタンパク質は安定であり、そして細胞
の内側で不活性である。しかし、このタンパク質は、条件的凝集ドメインを除去
する薬物（例えば、低分子リガンド）を投与することによって放出され得、それ
により、凝集体またはクラスターを破壊し、その結果、このタンパク質は細胞か
ら分泌され得る。Ａｒｉｄｏｒら、２０００，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：８１６
−１７およびＲｉｖｅｒａら、２０００，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：８２６−３
０を参照のこと。

【０２４０】 他の適切な制御手段または遺伝子スイッチとしては、本明細書中で記載される
系が挙げられるが、これらに限定されない。Ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ（ＲＵ４
８６）は、プロゲステロンアンタゴニストとして使用される。改変されたプロゲ
ステロンレセプターリガンド結合ドメインのプロゲステロンアンタゴニストへの
結合は、２つの転写因子のダイマーを形成することによって、転写を活性化し、
次いで、核に至り、ＤＮＡに結合する。このリガンド結合ドメインは、天然のリ
ガンドに結合するレセプターの能力を排除するように改変される。改変されたス
テロイドホルモンレセプター系はさらに、米国特許第５，３６４，７９１号、な
らびにＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０９１１およびＷＯ９７／１０３３７に記載され
る。

【０２４１】 さらに別の制御系は、エクジソンレセプター（細胞質レセプター）に結合し、
そしてこれを活性化するエクジソン（ショウジョウバエステロイドホルモン）を
使用する。次いで、このレセプターは核に転移し、特定のＤＮＡ応答エレメント
（エクジソン応答性遺伝子由来のプロモーター）に結合する。エクジソンレセプ
ターは、トランス活性化ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、およびリガンド結合ド
メインを含み、転写を開始する。エクジソン系はさらに、米国特許第５，５１４
，５７８、およびＰＣＴ公開ＷＯ９７／３８１１７、ＷＯ９６／３７６０９、お
よびＷＯ９３／０３１６２に記載される。

【０２４２】 別の制御手段は、陽性テトラシクリン制御可能トランス活性化因子を使用する
。この系は、転写を活性化するポリペプチドに連結された変異したｔｅｔレプレ
ッサタンパク質ＤＮＡ結合ドメイン（逆テトラサイクリン制御トランス活性化因
子タンパク質を生じた変異したｔｅｔＲ−４アミノ酸の変化、すなわち、これは
、テトラサイクリンの存在下でｔｅｔオペレーターに結合する）を含む。このよ
うな系は、米国特許第５，４６４，７５８号、同第５，６５０，２９８号、およ
び同第５，６５４，１６８号に記載される。

【０２４３】 さらなる発現制御系および核酸構築物は、米国特許第５，７４１，６７９号お
よび同第５，８３４，１８６号（Ｉｎｎｏｖｉｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
Ｉｎｃ．）に記載される。

【０２４４】 インビボ遺伝子治療は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子を
、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子の局所注射によって、または適切なウイルスもしく
は非ウイルス送達ベクターによって、細胞に導入することにより達成され得る。
Ｈｅｆｔｉ，１９９４，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２５：１４１８−３５。例
えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸分子は、標的細胞への送
達のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに含まれ得る（例えば、Ｊｏ
ｈｎｓｏｎ，ＰＣＴ公開ＷＯ９５／３４６７０；ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／
０７１７８を参照のこと。組換えＡＡＶゲノムは、典型的に、機能的プロモータ
ーに作動可能に連結したＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするＤＮＡ配列
およびポリアデニル化配列に隣接するＡＡＶ逆末端反復を含む。

【０２４５】 代替の適切なウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、
単純ヘルペスウイルス、レンチウイルス、肝炎ウイルス、パルボウイルス、パポ
バウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、コロナウイルス、ラブドウ
イルス、パラミクソウイルス、および乳頭腫ウイルスベクターが挙げられる。米
国特許第５，６７２，３４４号は、組換え神経栄養性ＨＳＶ−１ベクターを含む
インビボウイルス媒介遺伝子転移系を記載する。米国特許第５，３９９，３４６
号は、治療タンパク質をコードするＤＮＡセグメントを挿入するためにインビト
ロで処置されたヒト細胞の送達によって、治療タンパク質を患者に提供するため
のプロセスの例を提供する。遺伝子治療技術の実施のためのさらなる方法および
材料は、米国特許第５，６３１，２３６号（アデノウイルスベクターを含む）、
同第５，６７２，５１０号（レトロウイルスベクターを含む）、同第５，６３５
，３９９号（サイトカインを発現するレトロウイルスベクターを含む）に記載さ
れる。

【０２４６】 非ウイルス送達法としては、リポローム媒介送達、裸のＤＮＡ送達（直接注射
）、レセプター媒介送達（リガンド−ＤＮＡ複合体）、エレクトロポレーション
、リン酸カルシウム沈降、および微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃）
が挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子治療材料および方法はまた、誘
導性プロモーター、組織特異的エンハンサー−プロモーター、部位特異的組込み
のために設計されたＤＮＡ配列、親細胞を越える選択的優性を提供し得るＤＮＡ
配列、形質転換された細胞を同定するための標識、ネガティブな選択系および発
現制御系（安全性の指標）、細胞特異的結合因子（細胞ターゲッティングのため
）、細胞特異的内部移行因子、およびベクターならびにベクター製造の方法によ
る発現を増大する転写因子を含み得る。遺伝子治療技術の実施のためのこのよう
なさらなる方法および材料は、米国特許第４，９７０，１５４号（エレクトロポ
レーション技術を含む）、同第５，６７９，５５９号（遺伝子送達のためのリポ
タンパク質含有系を記載する）、同第５，６７６，９５４号（リポロームキャリ
アを含む）、同第５，５９３，８７５号（リン酸カルシウムトランスフェクショ
ンのための方法を記載する）、および同第４，９４５，０５０同第（生物学的に
活性な粒子がある速度で細胞に噴霧され、それによりこの粒子がこの細胞の表面
に浸透し、そしてこの細胞の内側に組み込まれるプロセスを記載する）、および
ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０９５８（各リガンドを含む）に記載される。

【０２４７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子治療または細胞治療はさらに、同じか異なる細胞（単
数または複数）における１つ以上のさらなるポリペプチドの送達を含み得ること
もまた企図される。このような細胞は、患者に別々に導入され得るか、この細胞
は、単一の移植可能デバイス（例えば、上記のカプセル化膜）に含められ得るか
、あるいはこの細胞は、ウイルスベクターによって別々に改変され得る。

【０２４８】 遺伝子治療による細胞における内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を
増加する手段は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドプロモーターに１つ以上のエン
ハンサーエレメントを挿入することであり、ここでエンハンサーエレメントは、
ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の転写活性を増加させるように働き得る。使用されるエ
ンハンサーエレメントは、遺伝子を活性化することを所望する組織に基づいて選
択される−エンハンサーエレメントは、組織が選択されるという点で、プロモー
ター活性化を与えることが知られている。例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドをコードする遺伝子がＴ細胞において「オンに変わる」場合、ｌｃｋプロモー
ターエンハンサーエレメントが使用され得る。従って、付加される転写エレメン
トの機能的部分は、標準的なクローニング技術を使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドプロモーターを含むＤＮＡのフラグメントに挿入され得る（そして必
要に応じて、ベクターおよび／または５’および／または３’隣接配列に挿入さ
れる）。「相同性組換え構築物」として公知のこの構築物は、次いで、エキソビ
ボまたはインビボノいずれかで、所望の細胞に導入され得る。

【０２４９】 遺伝子治療はまた、内在性プロモーターのヌクレオチド配列を改変することに
よって、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現を増加するために使用され得る。こ
のような改変は、典型的に、相同性組換え方法によって達成される。例えば、不
活性化のために選択されたＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の全てまたは一部を含むＤＮ
Ａ分子は、転写を調節するプロモーターの断片を除去および／または置換するよ
うに操作され得る。例えば、プロモーターの転写活性化因子のＴＡＴＡボックス
および／または結合部位は、標準的な分子生物学的技術を使用して欠失され得；
このような欠失は、プロモーター活性を阻害し得、それにより対応するＩＬ−１
ｒａ−Ｒ遺伝子の転写を阻止し得る。プロモーターにおけるＴＡＴＡボックスま
たは転写活性化因子結合部位の欠失は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドプロモー
ター（調節されるＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子と同じかまたは関連の種由来）のすべ
てまたは関連の部分を含むＤＮＡ構築物を生成することによって達成され得、こ
こで、１つ以上のＴＡＴＡボックスおよび／または転写活性化因子結合部位のヌ
クレオチドは、１つ以上のヌクレオチドの置換、欠失、および／または挿入によ
って変異される。結果として、ＴＡＴＡボックスおよび／または活性化因子結合
部位は、活性を減少するか、または化安全に不活性にされる。この構築物（これ
はまた、典型的に、改変されたプロモーターセグメントに隣接したネイティブの
（内在性）５’および３’ＤＮＡ配列に対応する少なくとも約５００塩基のＤＮ
Ａを含む）は、直接または本明細書中に記載されるようなウイルスベクターを介
してのいずれかで、適切な細胞に（エキソビボまたはインビボノいずれかで）導
入され得る。典型的に、細胞のゲノムＤＮＡへのこの構築物の組込みは、相同性
組換えによってであり、ここで、このプロモーター構築物の５’および３’ＤＮ
Ａ配列は、内在性染色体ＤＮＡへのハイブリダイゼーションによって、改変プロ
モーター領域に一体化するのを助け得る。

【０２５０】 （治療的用途） ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにそれらのアゴニストおよ
びアンタゴニストは、多数の疾患、障害または状態（本明細書中で引用されるモ
ノを含む）を処置、診断、回復または予防するために使用され得る。

【０２５１】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドアゴニストおよびアンタゴニストは、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド活性を調節し、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの成熟形態
の少なくとも１つの活性を増加または減少するものを含む。アゴニストまたはア
ンタゴニストは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用し、それによりその
活性を調節する補因子（例えば、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質または
低分子量分子）であり得る。強力なポリペプチドアゴニストまたはアンタゴニス
トは、タンパク質の細胞外ドメインの一部または全てを含むＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドの可溶性または膜結合形態のいずれかと反応する抗体を含む。ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド発現を調節する分子は、典型的に、発現のアンチセンス
制御因子として働き得るＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸を含む
。

【０２５２】 例えば、本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニ
ストおよびアンタゴニストは、免疫系不全を含む、疾患、障害または状態を処置
、診断、回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては
、以下が挙げられるが、これらに限定されない：リウマチ様動脈炎、乾癬性関節
炎、炎症性関節炎、変形性関節症、炎症性関節疾患、自己免疫疾患（自己免疫脈
管炎を含む）、多発性硬化症、狼瘡、糖尿病（例えば、インスリン糖尿病）、炎
症性腸疾患、移植拒絶、移植片対宿主疾患、および骨折、捻挫、軟骨損傷、外傷
、整形手術、感染または他の疾患プロセスから生じる炎症状態。免疫系の不全に
よって影響を受ける他の疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５３】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、感染を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復
または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：らい病、ウイルス感染（例えば、肝炎または
ＨＩＶ）、細菌感染（例えば、ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ関連疾患、ｃｌｏｓｔｒ
ｉｕｍ関連下痢を含む）、肺結核、急性熱性疾患、熱、肝臓の急性期反応、敗血
症または敗血症ショック。感染を含む他の疾患は、本発明の範囲内に包含される
。

【０２５４】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、体重障害を含む疾患、障害または状態を処置、診断、
回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：肥満、食欲不振、悪液質（ＡＩＤＳ誘発
性悪液質を含む）、筋障害（例えば、敗血症における筋肉タンパク質代謝）、お
よび低血糖症。体重障害を含む他の疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５５】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、神経機能不全を含む疾患、障害または状態を処置、診
断、回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以
下が挙げられるが、これらに限定されない：アルツハイマー病、パーキンソン病
、神経毒性（例えば、ＨＩＶによって誘発されるような）、ＡＬＳ、脳損傷、ス
トレス、うつ病、痛覚および他の疼痛（癌関連疼痛を含む）、痛覚過敏、癲癇、
学習障害および記憶障害、睡眠障害、ならびに末梢神経障害および中枢神経障害
。他の神経学的障害は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５６】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、肺を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復ま
たは予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げら
れるが、これらに限定されない：急性もしくは慢性肺損傷（間質性肺疾患を含む
）、急性呼吸疾患症候群、肺高血圧症、気腫、嚢胞性線維症、肺性線維症、およ
び喘息。肺の他の疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５７】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、皮膚を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復
または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：乾癬、湿疹および創傷治癒。他の皮膚の疾患
は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５８】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、腎臓を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復
または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：急性および慢性糸球体腎炎。他の腎臓の疾患
は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５９】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、骨を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復ま
たは予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げら
れるが、これらに限定されない：骨粗鬆症、変形性関節症、骨形成不全症、パジ
ェット病、歯周疾患、一時性顎関節疾患、および高カルシウム血症。他の骨の疾
患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２６０】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、血管系を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回
復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙
げられるが、これらに限定されない：出血または発作、出血性ショック、虚血（
心臓虚血および大脳虚血、例えば、外傷、癲癇、出血または発作の結果としての
脳損傷（これらの各々は、神経変性を生じる）を含む）、アテローム性動脈硬化
症、うっ血性心不全、再狭窄、再灌流障害、および新脈管形成。他の血管系の疾
患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２６１】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、腫瘍細胞を含む疾患、障害または状態を処置、診断、
回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：リンパ腫、骨肉腫、慢性および急性骨髄
性白血病（ＣＭＬおよびＡＭＬ）、および他の白血病、多発性骨髄腫、肺癌、乳
癌、腫瘍転移、および放射線治療の副作用。他の腫瘍細胞を含む疾患は、本発明
の範囲内に包含される。

【０２６２】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、生殖器系を含む疾患、障害または状態を処置、診断、
回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：不妊症、流産、早期分娩および早期産、
ならびに子宮内膜症。他の生殖器系を含む疾患は、本発明の範囲内に包含される
。

【０２６３】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、眼を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復ま
たは予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げら
れるが、これらに限定されない：炎症性眼疾患（例えば、角膜移植に関連し得る
）、網膜変性、失明、黄斑変性、緑内障、ブドウ膜炎、および網膜．ニューロパ
シー。他の眼の疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２６４】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、疾患（例えば、急性膵炎、慢性疲労症候群、線維素血
症、および川崎病（ＭＬＮＳ））を処置するために使用され得る。

【０２６５】 ＩＬ−１インヒビターは、ＩＬ−１に対する細胞性レセプターの活性化を特異
的に防止し得る任意のタンパク質を含み、これは、任意の数の機構から生じ得る
。このような機構は、ＩＬ−１産生のダウンレギュレーション、遊離ＩＬ−１の
結合、ＩＬ−１のそのレセプターへの結合の妨害、ＩＬ−１レセプター複合体（
すなわち、ＩＬ−１レセプター付属タンパク質とのＩＬ−１レセプターの結合）
の形成の妨害、およびＩＬ−１のそのレセプターへの結合後のシグナル伝達の妨
害を含む。このようなインターロイキン−１インヒビターとしては、以下が挙げ
られる：本明細書中に記載されるような、ＩＬ−１ｒａ−Ｒのようなインターロ
イキン−１レセプター抗体（例えば、欧州特許第６２３６７４号）、可溶性ＩＬ
−１レセプターのようなＩＬ−１結合タンパク質（例えば、米国特許第５，４９
２，８８８号、同第５，４８８，０３２号、同第５，４６４，９３７号、同第５
，３１９，０７１号、および同第５，１８０，８１２）、抗ＩＬ−１モノクロー
ナル抗体（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９５／０１９９７、ＷＯ９４／０２６２７、
ＷＯ９０／０６３７１；米国特許第４，９３５，３４３号；および欧州特許第３
６４７７８号、同第２６７６１１号および同第２２００６３号）、ＩＬ−１レセ
プター付属タンパク質およびそれらに対する抗体（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６
／２３０６７）；インターロイキン−１β変換酵素（ＩＣＥ）またはカスパーゼ
Ｉのインヒビター（これを使用して、ＩＬ−１β産生および分泌を阻害し得る）
、インターロイキン−１βプロテアーゼインヒビター、ならびにＩＬ−１のイン
ビボ合成または細胞外放出を遮断する他の化合物およびタンパク質。

【０２６６】 例示的なＩＬ−１インヒビターは、以下において開示される：米国特許第５，
７４７，４４４号、同第５，３５９，０３２号、同第５，６０８，０３５号、同
第５，８４３，９０５号、同第５，３５９，０３２号、同第５，８６６，５７６
号、同第５，８６９，６６０号、同第５，８６９，３１５号、同第５，８７２，
０９５号、同第５，９５５，４８０号；ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２１９５７、ＷＯ
９６／０９３２３、ＷＯ９１／１７１８４、ＷＯ９６／４０９０７、ＷＯ９８／
３２７３３、ＷＯ９８／４２３２５、ＷＯ９８／４４９４０、ＷＯ９８／４７８
９２、ＷＯ９８／５６３７７、ＷＯ９９／０３８３７、ＷＯ９９／０６４２６、
ＷＯ９９／０６０４２、ＷＯ９１／１７２４９、ＷＯ９８／３２７３３、ＷＯ９
８／１７６６１、ＷＯ９７／０８１７４、ＷＯ９５／３４３２６、ＷＯ９９／３
６４２６、およびＷＯ９９／３６４１５；欧州特許第５３４９７８号および同第
８９４７９５；および仏国特許出願ＦＲ ２７６２５１４。

【０２６７】 インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）は、インタ
ーロイキン−１の天然のインヒビターとして作用するヒトタンパク質である。好
ましいレセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａならびにその改変体および誘導
体を含む）、ならびに、その作成方法および使用方法は、米国特許第５，０７５
，２２２号；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０８２８５、ＷＯ９１／１７１８４、ＷＯ９
２／１６２２１、ＷＯ９３／２１９４６、ＷＯ９４／０６４５７、ＷＯ９４／２
１２７５、ＷＯ９４／２１２３５、ＷＯ９４／２０５１７、ＷＯ９６／２２７９
３、ＷＯ９７／２８８２８、ａｎｄＷＯ９９／３６５４１；豪国特許第ＡＵ ９
１７３６３６号；仏国特許第ＦＲ ２７０６７７２号；および独国特許第ＤＥ
４２１９６２６号に記載される。このようなタンパク質には、グリコシル化ＩＬ
−１レセプターアンタゴニストおよび非グリコシル化ＩＬ−１レセプターアンタ
ゴニストが含まれる。

【０２６８】 具体的には、Ｉｌ−１ｒａおよびその改変体の３つの代表的な形態が、５，０
７５，２２２特許に開示されかつ記載される。これらのうち１つ目は、「ＩＬ−
１ｉ」と呼ばれ、Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．６）中の約５２ｍＭ ＮａＣｌにて
ＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣカラムから溶出して、適切な４．８の等電点を有する、Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥにおける２２〜２３ｋＤの分子として特徴付けされる。２番目（
ＩＬ−１ｒａβ）は、４８ｍＭ ＮａＣｌでＭｏｎｏＱカラムから溶出して、２
２〜２３ｋＤのタンパク質として特徴付けられる。ＩＬ−１ｒａαおよびＩＬ−
１ｒａβの両方がグリコシル化される。３番目（ＩＬ−１ｒａχ）は、４８ｍＭ ＮａＣｌでＭｏｎｏＱカラムから溶出して、２０ｋＤのタンパク質として特徴
付けられる。米国特許第５，０７５，２２２号はまた、これらのインヒビターの
コードの原因である遺伝子を単離するための方法、この遺伝子を適切なベクター
および細胞型でクローン化するための方法、ならびにこの遺伝子を発現させてこ
れらのインヒビターを産生するための方法を開示する。

【０２６９】 当業者は、欠失、挿入および置換の多くの組合せ（本明細書中では個々にまた
は集約的に「改変体（単数または複数）」）が、ＩＬ−１ｒａ−Ｒのアミノ酸配
列内で成され得、但し、得られる分子は、生物学的に活性である（例えば、本明
細書中に記載されるような疾患および障害の１つ以上に影響を及ぼす能力を有す
る）ことを、当業者は認識する。

【０２７０】 本発明により検討されるように、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、他の治療
のアジュバントとして、そしてまた処置される兆候に適切な薬学的組成物と共に
投与され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド、および１つ以上の更なる治療ま
たは薬学的処方のうちのいずれかが、別々にか、続けてか、または同時に投与さ
れ得る。

【０２７１】 特定の実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される疾患および障害
の処置または予防のための１つ以上のＴＮＦインヒビターのいずれかと組合わせ
た（前処置、処置後、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に
関する。

【０２７２】 このようなＴＮＦインヒビターとしては、ＴＮＦのインビボ合成または細胞外
放出を遮断する化合物およびタンパク質が挙げられる。特定の実施形態において
、本発明は、以下のＴＮＦインヒビターの１つ以上のいずれかと組合わせた（前
処置、処置後、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関する
：ＴＮＦ結合タンパク質（本明細書中で定義されるような、可溶性ＴＮＦレセプ
ターＩ型および可溶性ＴＮＦレセプターＩＩ型（「ｓＴＮＦ」）、抗ＴＮＦ抗体
、顆粒球コロニー刺激因子、サリドマイド、ＢＮ ５０７３０、ｔｅｎｉｄａｐ
、Ｅ ５５３１、ｔｉａｐａｆａｎｔ ＰＣＡ ４２４８、ｎｉｍｅｓｕｌｉｄ
ｅ、ｐａｎａｖｉｒ、ｒｏｌｉｐｒａｍ、ＲＰ ７３４０１、ペプチドＴ、ＭＤ
Ｌ ２０１，４４９Ａ、（ｌＲ，３Ｓ）−Ｃｉｓ−１−［９−（２，６−ジアミ
ノ）プリニル］−３−ヒドロキシ−４−シクロペンタン塩酸塩、（ｌＲ，３Ｒ）
−ｔｒａｎｓ−１−（９−（２、６−ジアミノ）プリン］−３−アセトキシシク
ロペンタン塩酸塩、（１Ｒ，３Ｒ）−ｔｒａｎｓ−１−［９−アデニル）−３−
アジドシクロペンタン塩酸および（１Ｒ，３Ｒ）−ｔｒａｎｓ−１−（６−ヒド
ロキシ−プリン−９−イル）−３−アジドシクロ−ペンタン。ＴＮＦ結合タンパ
ク質は、当該分野で開示される（米国特許第５，１３６，０２１号；欧州特許第
３０８３７８号、同第４２２３３９号、同第３９３４３８号、同第３９８３２７
号、同第４１２４８６号、同第４１８０１４号、同第４３３９００号、同第４６
４５３３号、同第５１２５２８号、同第５２６９０５号、同第５６８９２８号、
同第４１７５６３号；ＰＣＴ公開ＷＯ９０／１３５７５、ＷＯ９１／０３５５３
、ＷＯ９２／０１００２、ＷＯ９２／１３０９５、ＷＯ９２／１６２２１、ＷＯ
９３／０７８６３、ＷＯ９３／２１９４６、ＷＯ９３／１９７７７、ＷＯ９４／
０６４７６、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９７／１２２４４；英国特許第ＧＢ
２２１８１０１号および同第２２４６５６９号；ならびに日本国特許出願１２７
，８００／１９９１）。

【０２７３】 例えば、欧州特許第３９３４３８号および同第４２２３３９号は、可溶性ＴＮ
ＦレセプターＩ型（「ｓＴＮＦＲ−Ｉ」または「３０ｋＤ ＴＮＦインヒビター
」としても公知）および可溶性ＴＮＦレセプターＩＩ型（「ｓＴＮＦＲ−ＩＩ」
または「４０ｋＤ ＴＮＦインヒビター」としても公知）（集約的に「ｓＴＮＦ
Ｒ」と称する）ならびにその成熟形態（例えば、フラグメント、機能的誘導体、
および改変体）のアミノ酸配列および核酸配列を教示する。欧州特許第３９３４
３８号および同第４２２３３９号はまた、インヒビターのコードの原因である遺
伝子を単離するための方法、適切なベクターおよび細胞型でこの遺伝子をクロー
ニングするための方法、およびこの遺伝子を発現させてインヒビターを産生する
ための方法を開示する。さらに、ＴＮＦＲ−ＩおよびｓＴＮＦＲ−ＩＩの多原子
価形態（すなわち、１つ以上の活性部部を含む分子）もまた開示された。１つの
実施形態において、多原子価形態は、少なくとも１つのＴＮＦインヒビターおよ
び別の部分を、任意の臨床的に受容可能なリンカー（例えば、ポリエチレングリ
コール）と化学的にカップリングすることにより（ＰＣＴ公開ＷＯ９２／１６２
２１およびＷＯ９５／３４３２６）、ペプチドリンカーにより（（Ｎｅｖｅら、
１９９６、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、８：３６５−７０）、ビオチンへの化学的カップ
リングおよび次いでアビジンへの結合（ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０３５５３）によ
り、そして最後に、キメラ抗体分を組合わせることにより（米国特許第５，１１
６，９６４号；ＰＣＴ公開ＷＯ８９／０９６２２およびＷＯ９１／１６４３７；
ならびに欧州特許第３１５０６２号）構築され得る。

【０２７４】 抗ＴＮＦ抗体としては、以下が挙げられる：ＭＡＫ １９５Ｆ Ｆａｂ抗体（
Ｈｏｌｌｅｒら、１９９３、 Ｉｓｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐ
ｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒ
ａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １４７）、ＣＤＰ ５７１抗−ＴＮＦモノクロ
ーナル抗体（Ｒａｎｋｉｎら、１９９５、Ｂｒ． Ｊ． Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．
、３４：３３４−４２）、ＢＡＹ Ｘ １３５１マウス抗腫瘍壊死因子モノクロ
ーナル抗体（Ｋｉｅｆｔら、１９９５，７ｔｈ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｎｇｒ
ｅｓｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆ
ｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ９）；ＣｅｎＴＮＦ ｃＡ２抗ＴＮＦモノ
クローナル抗体（Ｅｌｌｉｏｔｔ ら、１９９４、Ｌａｎｃｅｔ、３４４：１１
２５−２７；Ｅｌｌｉｏｔｔら、１９９４、Ｌａｎｃｅｔ、３４４： １１０５
−１０）。

【０２７５】 特定の実施形態において、本発明は、分泌または可溶性のヒトｆａｓ抗原また
はその組換えバージョン（ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２０２０６；Ｍｏｕｎｔｚら、
１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：４８２９−３７；および欧州特許第
５１０６９１号）と組合わせた（前処置、処置後、または同時処置）ＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドの使用に関する。ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２０２０６は、分泌
ヒトｆａｓ抗原（ネイティブおよび組換え、Ｉｇ融合タンパク質を含む）、可溶
性組換えヒトｆａｓ抗原のコードの原因である遺伝子を単離するための方法、適
切なベクターおよび細胞型でこの遺伝子をクローン化するための方法、およびこ
の遺伝子を発現させてインヒビターを産生するための方法を開示する。欧州特許
第５１０６９１号は、ヒトｆａｓ抗原をコードする核酸を開示し、可溶性ｆａｓ
抗原、上記の核酸を発現するためのベクター、およびこのベクターでトランスフ
ェクトされた形質転換体を含む。非経口的に投与される場合、分泌または可溶性
のｆａｓ抗原融合タンパク質の用量は、それぞれ一般的に、約１μｇ／ｋｇ〜約
１００μｇ／ｋｇである。

【０２７６】 本明細書中に列挙される疾患および障害（リウマチ性疾患のような急性および
慢性の炎症を含む）の現在の処置は、一般的に、疼痛および炎症の制御のための
第１の系統の薬物の使用を包含し；これらの薬物は、非ステロイド系抗炎症薬（
ＮＳＡＩＤ）として分類される。二次的な処置は、コルチコステロイド（遅い作
用性の抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）、または疾患改善（ＤＭ）薬を含む。以下の
化合物に関する情報は、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎ
ｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ （第１６版、１９９２）およびＰｈａｒｍ
ａｐｒｏｊｅｃｔｓ （ＰＪＢ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｌｔｄ）に見出
され得る。

【０２７７】 特定の実施形態において、本発明は、本明細書中に列挙される疾患および障害
（リウマチ性疾患のような急性および慢性の炎症および移植片対宿主病を含む）
の処置のためのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関する。ＮＳＡＩＤは、
少なくとも部分的に、プロスタグランジン合成の阻害に対して、その抗炎症性作
用を担う（ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（第７版、１９８５
））。ＮＳＡＩＤは、以下の９つのグループに特徴付けられ得る：（１）サリチ
ル酸誘導体、（２）プロピオン酸誘導体、（３）酢酸誘導体、（４）フェナム酸
誘導体、（５）カルボン酸誘導体、（６）酪酸誘導体、（７）オキシカム類、（
８）ピラゾール類、および（９）ピラゾロン類。

【０２７８】 別の特定の実施形態にいおいて、本発明は、１つ以上のサリチル酸誘導体、そ
のプロドラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩と組合わせた（前処置、
処置後、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関する。この
ようなサリチル酸誘導体、そのプロドラッグエステル、および薬学的に受容可能
な塩は、以下を含む：アセトアミノサロール（ａｃｅｔａｍｉｎｏｓａｌｏｌ）
、アロキシプリン（ａｌｏｘｉｐｒｉｎ）、アスピリン、ベノリレート（ｂｅｎ
ｏｒｙｌａｔｅ）、ブロモサリゲニン、アセチルサリチル酸カルシウム、コリン
マグネシウムトリサリチレート、サリチル酸マグネシウム、コリンサリチレート
、ジフルシナル（ｄｉｆｌｕｓｉｎａｌ）、エテルサレート（ｅｔｅｒｓａｌａ
ｔｅ）、フェンドサル（ｆｅｎｄｏｓａｌ）、ゲンチシン酸、サリチル酸グリコ
ール、イミダゾールサリチレート、リシンアセチルサリチレート、メサラミン、
モルホリンサリチレート、１−ナフチルサリチレート、オルサラジン、パーサル
ミド（ｐａｒｓａｌｍｉｄｅ）、アセチルサリチル酸フェニル、サリチル酸フェ
ニル、サルアセタミド（ｓａｌａｃｅｔａｍｉｄｅ）、サリチルアミド Ｏ−酢
酸、サルサレート、サリチル酸ナトリウムおよびスルファサラジン。同様の鎮痛
特性および抗炎症特性を有する構造的に関連したサリチル酸誘導体はまた、この
グループに包含されることが意図される。

【０２７９】 さらなる特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のプロピオン酸誘導体
、プロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合
わせた（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
の使用に関する。プロピオン酸誘導体、プロドラッグエステル、およびその薬学
的に受容可能な塩は、以下を含む：アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、
ブクロクス酸、カルプロフェン、デキシンドプロフェン（ｄｅｘｉｎｄｏｐｒｏ
ｆｅｎ）、フェノプロフェン、フルノキサプロフェン、フルプロフェン、フルル
ビプロフェン、フルクロプロフェン、イブプロフェン、イブプロフェンアルミニ
ウム、イブプロキサム、インドプロフェン、イソプロフェン、ケトプロフェン、
ロキソプロフェン（ｌｏｘｏｐｒｏｆｅｎ）、ミロプロフェン、ナプロキセン、
ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピケトプロフェン、ピメプロフェン
、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸、ピリドキシプロフェン（
ｐｙｒｉｄｏｘｉｐｒｏｆｅｎ）、スプロフェン、チアプロフェン酸およびチオ
キサプロフェン。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連
したプロピオン酸誘導体はまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８０】 なお別の特定の実施形態において、本発明は、１つ以上の酢酸誘導体、プロド
ラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（
処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に
関する。酢酸誘導体、プロドラッグエステル、およびその薬学的に受容可能な塩
は、以下を含む：アセメタシン、アルクロフェナック、アンフェナク、ブフェキ
サマック、シンメタシン、クロピラク、デルメタシン（ｄｅｌｍｅｔａｃｉｎ）
、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク、フェルビ
ナク、フェンクロフェナク、フェンクロラク、フェンクロジン酸、フェンチアザ
ク、フロフェナク、グルカメタシン、イブフェナック、インドメタシン、イソフ
ェゾラク、イソキセパック、ロナゾラク、メチアジン酸（ｍｅｔｉａｚｉｎｉｃ
ａｃｉｄ）、オキサメタシン、オキシピナック（ｏｘｐｉｎａｃ）、ピメタシ
ン、プログルメタシン、スリンダク、タルメタシン、チアラミド、チオピナク、
トルメチン、トルメチンナトリウム、ジドメタシンおよびゾメピラク。類似した
鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連した酢酸誘導体はまた、こ
の群に含まれることが意図される。

【０２８１】 別の特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のフェナム酸誘導体、プロ
ドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた
（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用
に関する。フェナム酸誘導体、プロドラッグエステル、およびその薬学的に受容
可能な塩は、以下を含む：エンフェナム酸、エトフェナマート、フルフェナム酸
、イソニキシン、メクロフェナム酸、メクロフェナメートナトリウム、メドフェ
ナム酸（ｍｅｄｏｆｅｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）、メフェナム酸、ニフルム酸、タ
ルニフルマート、テロフェナマート、トルフェナム酸およびウフェナマート。類
似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したフェナム酸誘導
体はまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８２】 さらなる特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のカルボン酸誘導体、
プロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わ
せた（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの
使用に関する。以下を含むカルボン酸誘導体、プロドラッグエステル、およびそ
の薬学的に受容可能な塩が使用され得る：クリダナク、ジフルニサル、フルフェ
ニサール、イノリジン（ｉｎｏｒｉｄｉｎｅ）、ケトロラク酸およびチノリジン
。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したカルボン酸
誘導体はまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８３】 なお特定の実施形態において、本発明は、１つ以上の酪酸誘導体、プロドラッ
グエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（処置
前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関す
る。酪酸誘導体、プロドラッグエステル、およびその薬学的に受容可能な塩は、
以下を含む：ブマジソン、ブチブフェンおよびキセンブシン。類似した鎮痛性特
性および抗炎症性特性を有する構造的に関連した酪酸誘導体はまた、この群に含
まれることが意図される。

【０２８４】 別の特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のオキシカン、プロドラッ
グエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（処置
前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関す
る。オキシカム、プロドラッグエステル、およびその薬学的に受容可能な塩は、
以下を含む：ドロキシカム、エノリカム、イソキシカム、ピロキシカム、スドキ
シカム、テノキシカムおよび４−ヒドロキシ−１，２−ベンゾチアジン１，１−
ジオキシド４−（Ｎ−フェニル）−カルボキサミド。類似した鎮痛性特性および
抗炎症性特性を有する構造的に関連したオキシカムはまた、この群に含まれるこ
とが意図される。

【０２８５】 なお別の特異的な実施形態において、本発明は、１つ以上のピラゾール、プロ
ドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた
（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用
に関する。以下を含むピラゾール、プロドラッグエステル、およびその薬学的に
受容可能な塩が使用され得る：ジフェナミゾールおよびエピリゾール。類似した
鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したピラゾールはまた、こ
の群に含まれることが意図される。

【０２８６】 さらなる特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のピラゾロン、プロド
ラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（
処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に
関する。ピラゾロン、プロドラッグエステル、およびその薬学的に受容可能な塩
は、以下を含む：アパゾン、アザプロパゾン、ベンズピペリロン、フェプラゾン
、モフェブタゾン、モラゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピペ
ブゾン、プロピルフェナゾン、ラミフェナゾン、スキシブゾンおよびチアゾリノ
ブタゾン。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したピ
ラゾロンはまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８７】 別の特定の実施形態において、本発明は、以下のＮＳＡＩＤの１つ以上のいず
れかと組み合わせた（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドの使用に関する：ε−アセトアミドカプロン酸、Ｓ−アデノシルメ
チオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン、アニトラザフェ
ン、アントラフェニン、ベンダザック、ベンダザックリジネート（ｂｅｎｄａｚ
ａｃ ｌｙｓｉｎａｔｅ）、ベンジダミン、ベプロジン（ｂｅｐｒｏｚｉｎ）、
ブロペラモール、ブコローム、ブフェゾラク、シプロカゾン、クロキシマート、
ダジダミン、デボキサメト、デトミジン、ジフェンピラミド、ジフェンピラミド
、ジフィサラミン（ｄｉｆｉｓａｌａｍｉｎｅ）、ジタゾール、エモルファゾン
、ファネチゾールメシレート、フェンフルミゾール、フロクタフェニン、フルミ
ゾール、フルニキシン、フルプロカゾン、フォピルトリン（ｆｏｐｉｒｔｏｌｉ
ｎｅ）、フォスフォサル、グアイメサール、グアイアゾレン（ｇｕａｉａｚｏｌ
ｅｎｅ）、イソニキシン（ｉｓｏｎｉｘｉｒｎ）、レフェタミンＨＣｌ、レフル
ノミド、ロフェミゾール、ロチファゾール、リジンクロニキシネート（ｌｙｓｉ
ｎ ｃｌｏｎｉｘｉｎａｔｅ）、メセクラゾン、ナブメトン、ニクチンドール、
ニメスリド、オルゴテイン、オルパノキシン、オキサセプロール、オキサパドー
ル、パラニリン（ｐａｒａｎｙｌｉｎｅ）、ぺリソキサール、クエン酸ぺリソキ
サール、ピフォキシム、ピプロキセン（ｐｉｐｒｏｘｅｎ）、ピラゾラク、ピル
フェニドン、プロカゾン、プロキサゾール、チエラビンＢ（ｔｈｉｅｌａｖｉｎ
Ｂ）、チフラミゾール、チメガジン、トレクチン、トルパドール、トリプトア
ミド（ｔｒｙｐｔａｍｉｄ）および４８０１５６Ｓ、ＡＡ８６１、ＡＤ１５９０
、ＡＦＰ８０２、ＡＦＰ８６０、ＡＩ７７Ｂ、ＡＰ５０４、ＡＵ８００１、ＢＰ
ＰＣ、ＢＷ５４０Ｃ、ＣＨＩＮＯＩＮ １２７、ＣＮ１００、ＥＢ３８２、ＥＬ
５０８、Ｆ１０４４、ＦＫ−５０６、ＧＶ３６５８、ＩＴＦ１８２、ＫＣＮＴＥ
Ｉ６０９０、ＫＭＥ４、ＬＡ２８５１、ＭＲ７１４、ＭＲ８９７、ＭＹ３０９、
ＯＮ０３１４４、ＰＲ８２３、ＰＶ１０２、ＰＶ１０８、Ｒ８３０、ＲＳ２１３
１、ＳＣＲ１５２、ＳＨ４４０、ＳＩＲ１３３、ＳＰＡＳ５１０、ＳＱ２７２３
９、ＳＴ２８１、ＳＹ６００１、ＴＡ６０、ＴＡＩ−９０１（４−ベンゾイル−
１−インタンカルボン酸）、ＴＶＸ２７０６、Ｕ６０２５７、ＵＲ２３０１およ
びＷＹ４１７７０のような会社コード番号によって登録されるようなＮＳＡＩＤ
。ＮＳＡＩＤに対して類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に
関連したＮＳＡＩＤはまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８８】 さらに別の特定の実施形態において、本発明は、リウマチ性疾患、対宿主性移
植片病、および多発性硬化症のような急性および慢性炎症を含む、本明細書中に
列挙される疾患および障害の処置のための、１つ以上の副腎皮質ステロイド、プ
ロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせ
た（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使
用に関する。副腎皮質ステロイド、プロドラッグエステル、およびその薬学的に
受容可能な塩は、以下に由来するヒドロコルチゾンおよび化合物を含む：２１−
アセトキシプレグネノロン、アルクロメラゾン、アルゲストン、アムシノニド、
ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ベタメタゾンバレレート、ブデソニド、クロロ
プレドニゾロン、クロベタゾール、クロベタゾールプロピオネート、クロベタゾ
ン、クロベタゾンブチレート、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコス
テロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコン、デソニド、デスオキシメ
ラゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドネー
ト、エノキソロン、フルアザコート、フルクロロニド、フルメタゾン、フルメタ
ゾンピバレート、フルシノロンアセトニド、フルニソリド、フルオシノニド、フ
ルオシノロンアセトニド、フルコーチンブチル、フルオコルトロン、フルオコル
トロンヘキサノエート、ジフルコルトロンバレレート、フルオロメタロン、フル
ペロロンブチレート、フルプレドニデンアセテート、フルプレドニゾロン、フル
ランデノリド、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ハロプレドンア
セテート、ヒドロコルタメート、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンアセテー
ト、ヒドロコルチゾンブチレート、ヒドロコルチゾンホスフェート、ヒドロコル
チゾン２１−ナトリウムサクシネート、ヒドロコルチゾンテブテート、マジプレ
ドン、メドリゾン、メプレドニゾンメチルプレドニソロン、モメタゾンフロエー
ト、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２１
−ジエドリアミノアセテート、プレドニゾロンナトリウムホスフェート、プレド
ニゾロンナトリウムサクシネート、プレドニゾロンナトリウム２１−ｍ−スルホ
ベンゾネート、プレドニゾロン２１−ステアログリコレート、プレドニゾロンブ
チレート、トリメチルアセテート、プレドニゾロン２１−トリメチルアセテート
、プレドニゾン、プレドニバル、プレドニリデン、プレドニリデン２１−ジエチ
ルアミノアセテート、チキソコートル、トリアムシノロン、トリアムシノロンア
セトニド、トリアムシノロンベネトニド、およびトリアムシノロンヘキサアセト
ニドのようなヒドロコルチゾン。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有す
る構造的に関連した副腎皮質コルチコイドはまた、この群に含まれることが意図
される。

【０２８９】 別の特定の実施形態において、本発明は、リウマチ性疾患、対宿主性移植片病
、および多発性硬化症のような急性および慢性炎症を含む、本明細書中に列挙さ
れる疾患および障害の処置のための、１つ以上の遅効性の抗リウマチ性薬物（Ｓ
ＡＡＲＤ）または疾患改変抗リウマチ性薬物（ＤＭＡＲＤＳ）、プロドラッグエ
ステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（処置前、
処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関する。
ＳＡＡＲＤまたはＤＭＡＲＤ、プロドラッグエステル、およびその薬学的に受容
可能な塩は、以下を含む：アロキュプレイドナトリウム、オーラノフィン、アウ
ロチオグルコース、アウロチオグリカニド、アザチオプリン、ブレキナール（ｂ
ｒｅｑｕｉｎａｒ）ナトリウム、ブシラミン、カルシウム３−アウロチオ−２−
プロパノール−１−スルホネート、クロラムブシル、クロロキン、クロブザリッ
ト、キュプロキソリン、シクロホスホアミド、シクロスポリン、ダプソン、１５
−デオキシスペルグアリン、ジアセレイン、グルコサミン、金塩（例えば、シク
ロキン金塩、金ナトリウムチオマレート、金ナトリウムチオスルフェート）、ヒ
ドロキシクロロキン、ヒドロキシクロロキンスルフェート、ヒドロキシ尿素、ケ
ブゾン、レバミゾール、ロベンザリット、メリチン、６−メルカプトプリン、メ
トトレキセート、ミゾリビン、ミコフェノレートモフェチル（ｍｏｆｅｔｉｌ）
、ミオラル、ナイトロジェン・マスタード、Ｄ−ペニシルアミン、ピリジノール
、イミダゾール（例えば、ＳＫＮＦ８６００２およびＳＢ２０３５８０）、ラパ
マイシン、チオール、サイモポエチン、およびビンクリスチン。類似した鎮痛性
特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したＳＡＡＲＤまたはＤＭＡＲＤ
はまた、この群に含まれることが意図される。

【０２９０】 別の特定の実施形態において、本発明は、急性および慢性炎症を含む、本明細
書中に列挙される疾患および障害の処置のための、１つ以上のＣＯＸ２インヒビ
ター、プロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組
み合わせた（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドの使用に関する。ＣＯＸ２インヒビター、プロドラッグエステル、およびそ
の薬学的に受容可能な塩の例としては、例えば、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘ
ｉｂ）が挙げられる。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に
関連したＣＯＸ２はまた、この群に含まれることが意図される。

【０２９１】 さらに別の特定の実施形態において、本発明は、急性および慢性炎症を含む、
本明細書中に記載される疾患および障害の処置のための、１つ以上の抗菌剤、プ
ロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせ
た（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使
用に関する。抗菌剤としては、例えば、ペニシリン、セファロスポリンおよび他
のβ−ラクタム、アミノ配糖体、アゾール、キロノン類、マクロライド、リファ
マイシン、テトラサイクリン、スルホンアミド、リンコサミド（ｌｉｎｃｏｓａ
ｍｉｄｅ）およびポリミキシンの広範なクラスが挙げられる。ペニシリンは、以
下を含むがこれらに限定されない：ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリン、
ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フロクサシリ
ン、アンピシリン、アンピシリン／スルバクタム、アモキシリン、アモキシリン
／クラブラン酸、ヘタシリン、シクラシリン（ｃｙｃｌａｃｉｌｌｉｎ）、バカ
ンピシリン、カルベニシリン、カルベニシリンインダニル（ｃａｒｂｅｎｉｃｉ
ｌｌｉｎ ｉｎｄａｎｙｌ）、チカルシリン、チカルシリン／クラブラン酸、ア
ズロシリン、メズロシリン、ピペラシリン（ｐｅｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ）、およ
びメシリナム。セファロスポリンおよび他のβ−ラクタムとしては、以下を含む
がこれらに限定されない：セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セフ
ラジン、セファゾリン、セファドロキシル、セファクロール、セファマンドール
、セフォテタン、セフォキシチン、セルロキシム（ｃｅｒｕｒｏｘｉｍｅ）、セ
フォニシド、セフォラジン（ｃｅｆｏｒａｄｉｎｅ）、セフィキシム、セフォタ
キシム、モキサラクタム、セフチゾキシム、セトリアキソン（ｃｅｔｒｉａｘｏ
ｎｅ）、セフォペラゾン（ｃｅｐｈｏｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフタジジム、イミ
ペネムおよびアズトレオナム。アミノ配糖体としては、以下を含むがこれらに限
定されない：ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アミカシ
ン、ネチルマイシン、カナマイシンおよびネオマイシン。アゾールとしては、フ
ルコナゾールを含むがこれに限定されない。キノロン類としては、ナリジクス酸
、ノルフロキサシン、エノキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、ス
パルフロキサシンおよびテマフロキサシンを含むがこれらに限定されない。マク
ロライドとしては、エリスロマイシン（ｅｒｙｔｈｏｍｙｃｉｎ）、スピラマイ
シンおよびアジスロマイシンを含むがこれらに限定されない。リファマイシンと
しては、リファンピンを含むがこれに限定されない。テトラサイクリンとしては
、スピサイクリン（ｓｐｉｃｙｃｌｉｎｅ）、クロルテトラサイクリン、クロモ
サイクリン、デメクロサイクリン、デオキシサイクリン（ｄｅｏｘｙｃｙｃｌｉ
ｎｅ） 、グアメサイクリン（ｇｕａｍｅｃｙｃｌｉｎｅ）、リメサイクリン、メクロサ
イクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ぺニメ
ピロサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、セ
ノサイクリン（ｓｅｎｏｃｉｃｌｉｎ）およびテトラサイクリンを含むがこれら
に限定されない。スルホンアミドとしては、スルホニルアミド、スルファメトキ
シサゾール、スルファセタミド、スルファジアジン、スルフィソキサゾールおよ
びｃｏ−トリモキサゾール（トリメトプリム／スルファメトキシサゾール）を含
むがこれらに限定されない。リンコサミドとしては、クリンダマイシンおよびリ
ンコマイシンを含むがこれらに限定されない。ポリミキシン（ポリペプチド）と
しては、ポリミキシンＢおよびコリスチンを含むがこれらに限定されない。

【０２９２】 ＩＬ−１ＲＡ−Ｆポリペプチド機能のアゴニストまたはアンタゴニストは、処
置される状態に適切であるように、１つ以上のサイトカイン、増殖因子、抗生物
質、抗炎症剤および／または化学療法剤と組み合わせて（同時にかまたは引き続
き）使用され得る。

【０２９３】 望ましくないレベルの１つ以上のＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａ、またはＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドによって引き起こされるかまたは媒介される他の疾患は、本
発明の範囲内に含まれる。望ましくないレベルとしては、過度のレベルのＩＬ−
１、ＩＬ−１ｒａ、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド、および正常以下のレ
ベルのＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａ、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが挙げら
れる。

【０２９４】 （ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド） 本発明の核酸分子（それ自体は生物学的に活性なポリペプチドをコードしない
核酸分子を含む）を使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子および関連遺伝子の染色
体上の位置をマッピングし得る。マッピングは、当該分野で公知の技術（例えば
、ＰＣＲ増幅およびインサイチュハイブリダイゼーション）により行われ得る。

【０２９５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子（それ自体は生物学的に活性なポリペプチドをコー
ドしない核酸分子を含む）は、哺乳動物組織または体液サンプル中のＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒ核酸分子の存在について、定性的または定量的のいずれかで試験するため
の、診断アッセイにおけるハイブリダイゼーションプローブとして有用であり得
る。

【０２９６】 他の方法はまた、１つ以上のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの活性を阻害する
ことが所望される場合に使用され得る。このような阻害は、発現制御配列（三重
らせん形成）またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡに相補的でありかつ発現制御配
列（三重らせん形成）またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡにハイブリダイズする
核酸分子によりもたらされ得る。例えば、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ分子
（これらは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の少なくとも一部に相補的である配列を有
する）は、細胞中に導入され得る。アンチセンスプローブは、本明細書中に開示
されるＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の配列を使用して、利用可能な技術により設計さ
れ得る。代表的には、このようなアンチセンス分子の各々は、選択された各ＩＬ
−１ｒａ−Ｒ遺伝子の開始部位（５’末端）に相補的である。このアンチセンス
分子が次いで、対応するＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡにハイブリダイズする場合
、このｍＲＮＡの翻訳は、防止されるかまたは低減される。アンチセンスインヒ
ビターは、細胞または生物におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの減少または
不在に関連する情報を提供する。

【０２９７】 あるいは、遺伝子治療を使用して、１つ以上のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
の優性ネガティブインヒビターを作製し得る。この状況において、各選択された
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡは、調
製され得、そして本明細書中に記載されるウイルスまたは非ウイルスの方法のい
ずれかを使用して患者の細胞中に導入され得る。このような変異体の各々は、代
表的にはその生物学的役割において内因性ポリペプチドと競合するように設計さ
れる。

【０２９８】 さらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（生物学的に活性でも活性でなくても
）免疫原として使用され得、すなわち、これらのポリペプチドは、それに対して
抗体が誘発され得る少なくとも１つのエピトープを含有する。ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドに結合する選択的結合因子（本明細書中に記載されるように）は、
インビボおよびインビトロでの診断目的のために使用され得、これらの目的とし
ては、体液サンプルまたは細胞サンプル中のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの存
在を検出するための標識された形態での使用を含むが、これに限定されない。こ
れらの抗体をまた使用して、本明細書中に列挙される疾患および障害を含む多数
の疾患および障害を、予防、処置、または診断し得る。これらの抗体は、ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドの少なくとも１つの活性特徴を低減するかまたは遮断す
るように、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに結合し得るか、またはポリペプチド
に結合してＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの少なくとも１つの活性特徴を増加し
得る（ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの薬物動態を増加させることによるものを
含む）。

【０２９９】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、発現クローニングストラテジーを
使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターをクローン化するために使
用され得る。放射性標識（^１２５ヨウ素）されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
またはアフィニティ／活性−タグ化ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（例えば、Ｆ
ｃ融合またはアルカリホスファターゼ融合）を、結合アッセイにおいて使用して
、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターを発現する細胞型または細胞株また
は組織を同定し得る。このような細胞または組織から単離されたＲＮＡは、ｃＤ
ＮＡに変換され得、哺乳動物発現ベクターにクローン化され、そして哺乳動物細
胞（例えば、ＣＯＳまたは２９３細胞）にトランスフェクトされて発現ライブラ
リーを生成する。放射性標識されるかまたはタグ化されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドは、次いで、アフィニティリガンドとして使用されて、このライブラリ
ーから、その表面上にＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターを発現する細胞
のサブセットを同定および単離し得る。ＤＮＡは、次いでこれらの細胞から単離
され得、そして哺乳動物細胞にトランスフェクトされて二次発現ライブラリー（
ここで、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターを発現する細胞の画分は、元
のライブラリーよりも何倍も高い）を作製し得る。この富化プロセスは、ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターを含有する単一の組換えクローンが単離され
るまで繰り返し反復され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターの単離
は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル伝達経路の新規なアゴニストおよび
アンタゴニストを同定または開発するために有用である。このようなアゴニスト
およびアンタゴニストとしては、可溶性ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプタ
ー、抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター抗体、低分子またはアンチセン
スオリゴヌクレオチドが含まれ、そしてこれらは、本明細書中に記載される疾患
または障害の１つ以上を、処置、予防、または診断するために使用され得る。

【０３００】 ヒトＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするｃＤＮＡの寄託（受託番号Ｐ
ＴＡ−１４２３を有する）を、アメリカン タイプ カルチャー コレクション
（ＡＴＣＣ）（バージニア ２０１１０−２２０９、マナサス、ユニバーシティ ブールバード １０８０１）にて２０００年２月２９日に行った。

【０３０１】 以下の実施例は、例示目的のみのために意図され、本発明の範囲をどちらにし
ても限定するとは解釈されるべきではない。

【０３０２】 （実施例１：ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド遺伝子のクローニング） 概して、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）に記載されるような材料および方法を、
ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子をクローン化および分析
するために使用した。

【０３０３】 ヒトＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするｃＤＮＡ配列を単離するため
に、専有データベース（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）の検
索を、クローンｓｈｏｓ１−００００３−ｄ１を問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列
として使用して行った。この様式で同定された４２３ｂｐの配列は、アミノ酸レ
ベルで問い合わせ配列に対して４１％同一性を共有することが見出された。この
配列内の最も高い相同性の領域を使用して、ｃＤＮＡ供給源の同定およびｃＤＮ
Ａクローンの生成のために、種々のＰＣＲストラテジーを使用して、遺伝子特異
的オリゴヌクレオチドを設計した。

【０３０４】 多数のｃＤＮＡライブラリーを、２５μｌの全反応容積で、１０ｎｇのｃｄＮ
ＡテンプレートＤＮＡ、１０ｐｍｏｌのアンプリマー（ａｍｐｌｉｍｅｒ）：２
３４９−９８（５’−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｃ−
Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｇ−３’；配列番号２０）および２３４
９−９９（５’−Ｔ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−
Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−３’；配列番号２１）、ならびにＲｅａ
ｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐ
ｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ
Ｊ）を含有する増幅反応で分析した。反応を、９５℃にて５分間を１サイクル；
９５℃にて１５秒間、６３℃にて１５秒間、そして７２℃にて１分間を３０サイ
クル；および７２℃にて１０分間を１サイクルにて行った。予測されたサイズ（
１５３ｂｐ）のＰＣＲ産物を、多数のｃＤＮＡライブラリー（ヒト胎児頭皮（オ
リゴ−ｄＴでプライムした（ｐｒｉｍｅｄ）もの）およびヒト胎盤（オリゴ−ｄ
Ｔでプライムしたものおよびランダムにプライムしたもの）を含む）において同
定した。

【０３０５】 胎児頭皮よび胎盤のｃＤＮＡライブラリーを、以下のようにして調製した。全
ＲＮＡを、ヒト胎児頭皮から、およびヒト胎盤から標準的なＲＮＡ抽出手順を使
用して抽出し、そしてポリ−Ａ^＋ＲＮＡを、標準的な手順を使用してこの全ＲＮ
Ａから選択した。ランダムにプライムされたかオリゴ−ｄＴでプライムされたｃ
ＤＮＡを、このポリ−Ａ＋ＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成およびプラスミドクローニ
ングキット用のＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｉ
ｂｃｏ−ＢＲＬ）を使用して、製造者の示唆したプロトコルに従って合成した。
得られたｃＤＮＡを、適切な制限酵素を用いて消化し、次いでｐＳＰＯＲＴ−１
、または他の適切なクローニングベクターにライゲーションする。ライゲーショ
ン産物を、標準的な技術を使用してＥ．ｃｏｌｉに形質転換し、そして細菌性形
質転換体を、アンピシリン、テトラサイクリン、カナマイシン、またはクロラム
フェニコールのいずれかを含有する培養プレートで選択した。ｃＤＮＡライブラ
リーは、これらの形質転換体の全てまたはサブセットから構成された。

【０３０６】 ５’ＲＡＣＥ反応および３’ＲＡＣＥ反応の両方を、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドについての全長ｃＤＮＡ配列を作成するために行った。ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドについてのｃＤＮＡ配列の５’末端に対応するｃＤＮＡ配列を単離
するために、５’ＲＡＣＥを、１０ｎｇのオリゴプライムされたヒト胎児頭皮ｃ
ＤＮＡライブラリーをｐＳＰＯＲＴ１ならびにプライマー１５７２−３６（５’
−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ Ｇ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ｇ
−Ａ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−３’；配列番号２２）および２３４９−９９を使用して
行った。反応を、９４℃にて１分間を１サイクル；９４℃にて５秒間そして７２
℃にて５分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、７０℃にて１０秒間そして７２
℃にて３分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、６８度にて１０秒間、そして７
２℃にて３分間を２５サイクル；ならびに７２℃にて７分間を１サイクルで行っ
た。入れ子式（ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲを、５’ＲＡＣＥ増幅産物の一部およびプ
ライマー２３２８−９１（５’−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｇ
−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号２３）お
よび２３５１−４７（５’−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｔ
−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−ＧＣ−３’；配列番号２４）を使用して行った。入
れ子式ＰＣＲを、９４にて１分間を１サイクル；９４℃にて５秒間および７２℃
にて５分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、７０℃にて１０秒間、そして７２
℃にて３分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、６８℃にて１０秒間、そして７
２℃にて３分間を２５サイクル；ならびに７２℃にて７分間を１サイクルで行っ
た。

【０３０７】 ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドについてのｃＤＮＡ配列の３’末端に対応する
ｃＤＮＡ配列を単離するために、３’ＲＡＣＥを、１０ｎｇのオリゴ−ｄＴでプ
ライムされたヒト胎児頭皮ｃＤＮＡライブラリーを使用してｐＳＰＯＲＴＩなら
びにプライマー２３５１−４８（５’−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−
Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−３’；配列番号２５）およ
び２３２９−９３（５’−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号２６）で行った。反応を
９４℃にて１分間を１サイクル；９４℃にて５秒間および７２℃にて５分間を５
サイクル；９４℃にて５秒間、７０℃にて１０秒間、および７２℃にて３分間を
５サイクル；９４℃にて５秒間、７０℃にて１０秒間、および７２℃にて３分間
を２５サイクル；ならびに７２℃にて７分間を１サイクルで行った。入れ子式Ｐ
ＣＲを、３’ＲＡＣＥ増幅産物の一部およびプライマー２３６３−０４（５’−
Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ
Ｇ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号２７）および２３２９−９４（５’−Ｔ−Ｇ−Ｇ−
Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−
３’；配列番号２８）を使用して行った。入れ子式ＰＣＲを、９５℃にて１分間
を１サイクル；９５℃にて３０秒間および６９℃にて１分間を３０サイクル；な
らびに６８℃にて７分間を１サイクルで行った。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
についての全長ｃＤＮＡ配列を、５’ＲＡＣＥクローンおよび３’ＲＡＣＥクロ
ーンの得られた収集物からアセンブルした。

【０３０８】 ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドについてのｃＤＮＡ配列の５’部分を、ヒト胎
盤Ｍａｒａｔｈｏｎ^ＴＭ ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）由来のｃ
ＤＮＡ配列を独立して単離することにより確認した。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドについてのｃＤＮＡ配列の５’末端に対応するｃＤＮＡ配列を単離するため
に、５’ＲＡＣＥを、１ｎｇのヒト胎盤ｃＤＮＡならびにプライマーＡＰ−１（
５’−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号２９；Ｃｌｏｎｔ
ｅｃｈ）および２３５３−８７（５’−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ａ−
Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−ＴＧ−３’；配列番号３０）を
使用して行った。反応を、９４℃にて２分間を１サイクル；９４℃にて５秒間お
よび７２℃にて１．５分間を５サイクル；９４℃にて５秒間および７０℃にて１
．５分間を５サイクル９４℃にて５秒間および６８℃にて１．５分間を２５サイ
クル；および８６℃にて７分間を１サイクルで行った。入れ子式ＰＣＲを、５’
ＲＡＣＥ増幅産物の一部ならびにプライマーＡＰ−１および２３４９−５２（５
’−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｃ−
Ｃ−Ａ−３’；配列番号３１）を使用して行った。入れ子式ＰＣＲを、９４℃に
て２分間を１サイクル；９４℃にて１０秒間および６８℃にて１．５分間を３０
サイクル；および６９℃にて７分間を１サイクルで行った。

【０３０９】 ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドについての推定ｃＤＮＡ配列の配列分析は
、この遺伝子が、１５２個のアミノ酸をコードする４５６ｂｐのオープンリーデ
ィングフレーム（図１Ａ〜１Ｂ）を含むことを示した。ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドの配列改変体もまた同定された。この改変体の配列分析は、この改変
体についての遺伝子もまた、１５２個のアミノ酸をコードする４５６ｂｐのオー
プンリーディングフレーム（図２Ａ〜２Ｂ）を含むことを示唆した。この改変体
のヌクレオチド配列は、２つのヌクレオチド位置においてヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ
遺伝子と異なる。

【０３１０】 図４Ａ〜４Ｂは、以下のアミノ酸配列アラインメントを図示する：ヒトＩＬ−
１α（ＩＬ−１ ａｌｐｈａ；配列番号７）、ヒトＩＬ−１β（ＩＬ−１ ｂｅ
ｔａ；配列番号８）、ヒトＩＬ−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ；
配列番号９）、ヒトＩＬ−１δ（ＩＬ１ ｄｅｌｔａ；配列番号１０）、ヒトＩ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列番号２）、ヒトＴａｎｇ
ｏ−７７（Ｔａｎｇｏ−７７；配列番号１１）、ヒトＺｉｌｌａ４（Ｚｉｌｌａ
４；配列番号１２）、ヒトＩＬ−１ζ（ＩＬ−１ ｚｅｔａ；配列番号１３）、
ヒトＩＬ−１レセプターアンタゴニストβ（ＩＬ−１ＲＡ β；配列番号１４）
、ヒトＳＰＯＩＬ ＩＩ（Ｓｐｏｉｌ ＩＩ；配列番号１５）、ヒトＩＬ−１ε
（ＩＬ−１ ｅｐｓｉｌｏｎ；配列番号１６）、およびヒトＩＬ−ｌ１η（ＩＬ
１ ｅｔａ；配列番号１７）。図５は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子ファミリーの系
統発生的関係を模式的に図示する。

【０３１１】 （実施例２：ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド遺伝子スプライシングバリア
ント（改変体）のクローニング） 概して、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライシング改変体（バリアン
ト）をコードする遺伝子をクローニングおよび分析するためには、Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋら（前出）に記載の材料および方法を用いた。

【０３１２】 ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのスプライシング改変体をコードする全長
ｃＤＮＡを、以下のように調製したヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーから単離した
。標準的ＲＮＡ抽出手順を用いて、総ＲＮＡをヒト胎盤から抽出し、そして標準
的手順を用いてこの総ＲＮＡからポリ−Ａ＋ＲＮＡを選択した。製造業者の示唆
したプロトコールに従って、ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｌａｓ
ｍｉｄ Ｃｌｏｎｉｎｇキット（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）のためのＳｕｐｅｒｓｃ
ｒｉｐｔ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｓｙｓｔｅｍを用いて、このポリ−Ａ^＋ＲＮＡから
、オリゴ−ｄＴプライムしたｃＤＮＡを、合成した。得られたｃＤＮＡをＮｏｔ
Ｉで消化し、次いで０．８％アガロースゲル上での電気泳動によって分画した。
０．８〜１．６ｋｂのフラグメントを単離し、精製し、次いでｐＳＰＯＲＴ−１
に連結した。連結（ライゲーション）産物を、標準的技術を用いてＥ．ｃｏｌｉ
中に形質転換し、そして細菌形質転換体を、アンピシリン含有培養プレート上で
選択した。得られた形質転換体をプールして、ｃＤＮＡライブラリーを生成し、
そしてプログラムＤＮＡを、このｃＤＮＡライブラリーの１２のプール（それぞ
れが約８０，０００コロニーを含有する）から調製した。

【０３１３】 １０ｎｇのテンプレートＤＮＡ、アンプライマー２３４９〜９８および２３４
９〜９９（各、０．４μＭの濃度）、ならびにＲｅａｄｙ−ｔｏ−Ｇｏ（すぐ使
用できる）ＰＣＲビーズを含有する増幅反応物（総反応容積２５μｌ）中で、各
ｃＤＮＡライブラリープールを、分析した。９４℃５分を１サイクル；９４℃３
０秒、６５℃３０秒、および７２℃１分を３０サイクル；ならびに７２℃１０分
を１サイクルで、反応を実施した。ｃＤＮＡライブラリープールをまた、１０ｎ
ｇのテンプレートＤＮＡ、アンプライマー２３４９〜５１（５’−Ａ−Ａ−Ｇ−
Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−
Ｔ−Ｃ−Ｔ−３’；配列番号３２）および２３４９〜５２（各、０．４μＭの濃
度）、ならびにＲｅａｄｙ−ｔｏ−Ｇｏ（すぐ使用できる）ＰＣＲビーズを含有
する増幅反応物（総反応容積２５μｌ）中で、分析した。９４℃５分を１サイク
ル；９４℃３０秒、６５℃３０秒、および７２℃１分を３０サイクル；ならびに
７２℃１０分を１サイクルで、反応を実施した。次いで、これらの反応で得られ
たＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分析した。

【０３１４】 これらのプール由来のプラスミドＤＮＡは、期待されるサイズを有するＰＣＲ
産物を生成した。そして、これらの各々の陽性プール由来の３×１０^５クローン
を、アンプライマー２３４９−９８および２３４９−９９を用いるＰＣＲによっ
てスクリーニングした。ＰＣＲによって生成したＰＣＲ産物（ｚｈｖｔ−０００
３２９）の１つを、^３２Ｐ−ｄＣＴＰで標識し、プローブとして用いて、陽性の
ｃＤＮＡライブラリーのプールを再スクリーニングした。細菌コロニーを、（１
５０ｍｍプレートあたり、約５０，０００で）プレートし、次いで、ニトロセル
ロースフィルター上に吊り上げた。ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂハイブリダイゼーショ
ン溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中で６８℃３０分間、フィルターをプレハイブリダ
イズし、次いで、標識プローブを添加した同じ溶液中で、６８℃一晩ハイブリダ
イズした。ハイブリダイゼーション後、このフィルターを、２×ＳＳＣおよび０
．０５％ＳＤＳ中で、室温で１０分間２回洗浄し、次いで０．１×ＳＳＣおよび
０．１％ＳＤＳ中で、６８℃で３０分間２回洗浄した。次いで、強化スクリーン
を有するオートラジオグラフィーに−８０℃で２時間フィルターを曝した。ｃＤ
ＮＡライブラリープールの１つから、約１．２ｋｂのインサートを含有する陽性
クローン（ＲＤＳ＃１９９９１８５０３）を、同定した。別のｃＤＮＡライブラ
リープールから、約０．８ｋｂのサイズのインサートを含有する第二の陽性クロ
ーン（ＲＤＳ＃１９９９１８５０１）を、同定した。これらのクローンの各々か
らプラスミドＤＮＡを調製し、そして配列を分析した。

【０３１５】 これらのクローンの１つについて予想されるｃＤＮＡ配列の配列分析によって
、このｃＤＮＡが、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（実施例１を参照）の改
変体をコードすることが示された。この改変体をコードする遺伝子は、１７１ア
ミノ酸のタンパク質をコードする５１３ｂｐのオープンリーディングフレームを
含む（図３）。

【０３１６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＣ０１６７２４，コンテ
ィグ．フラグメント７６６４９−９６３４２）を含有するヒトゲノムの配列分析
により、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の最初のエキソン（実施例１を参照）が、Ｉｌ
−１オメガ（Ｏｍｅｇａ）（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｚ３０００５０）の最後の
エキソンの４．１ｋｂ下流に存在するが示された。ゲノム中のこれらの２つの遺
伝子の密接な近似により、本ポリペプチドは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子、または
その改変体（実施例１を参照）の第二のエキソン上のＩＬ−１オメガ（Ｏｍｅｇ
ａ）の最初の２つのエキソンのスプライシング（または融合）から生じ得ること
が示唆される。従って、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの改変体は、ＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒスプライシング改変体、融合タンパク質、などであり得る。ＩＬ−１Ｏｍ
ｅｇａにおける第二エキソンおよびＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子（またはその改変体
）の第二エキソンの並列（ｊｕｘｔａｐｏｓｉｔｉｏｎ）は、シグナルペプチド
として機能するらしい、Ｎ末端を有するタンパク質をコードする配列を生じる。
図６は、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（成熟（Ｍａｔｕｒｅ）ＣＳ３２９
）と、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの配列改変体（成熟ＣＳ３２９改変体
タンパク質）と、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのスプライシング改変体（
オメガ（Ｏｍｅｇａ）３２９タンパク質）との間の関係を図示する。

【０３１７】 （実施例３：マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド遺伝子のクローニング） 概して、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子をクローニ
ングおよび分析するためには、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）に記載の材料および
方法を用いた。

【０３１８】 マウスＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするｃＤＮＡを単離するために
、７日齢マウス胚ｃＤＮＡライブラリーテンプレートテンプレート、ならびにア
ンプライマー２５５７−９５（５’−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−３’；
配列番号３３）および２５５７〜９６（５’−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｇ
−３’；配列番号３４）、ならびに標準的技術を用いて、ＰＣＲを実施した。

【０３１９】 マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの推定ｃＤＮＡ配列の配列分析によって
、この遺伝子が、１５２アミノ酸のタンパク質をコードする４５６ｂｐのオープ
ンリーディングフレームを含むことが示された（図７）。図８は、ヒトＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド（ｈｕＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列番号２）およびマウスＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ｍｕＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列番号３６）のアミノ酸
配列アラインメントを例示する。図９Ａ〜９Ｉは、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝
子（配列番号３７）のゲノムヌクレオチド配列を例示する。エキソン１〜４のコ
ード部分の位置を示す（下線）。

【０３２０】 （実施例４：ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡ発現） ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡの発現を、１０ｎｇのｃＤＮＡライブラリーテン
プレートＤＮＡ、１０ｐｍｏｌのアンプライマー２３４９〜９８および２３４９
〜９９、ならびにＲｅａｄｙ−ｔｏ−Ｇｏ（すぐ使用できる）ＰＣＲビーズを含
有する増幅反応物（総反応容積２５μｌ）中でのＰＣＲによって検討した。９５
℃５分を１サイクル；９５℃１５秒、６３℃１５秒、および７２℃１分を３０サ
イクル；ならびに７２℃１０分を１サイクルで、反応を実施した。ヒト胎児頭皮
、ヒト胎児眼、ヒト膀胱、およびヒト胎盤を含む、多数のｃＤＮＡライブラリー
中から、予期されたサイズ（１５３ｂｐ）のＰＣＲ産物を、同定した。ＩＬ−１
ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡ発現をまた、アンプライマー２３４９〜５１および２３４９
−５２、ならびにＴｉｔａｎシステム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）を用いるＲＴ−
ＰＣＲによって、胎児眼および胎児脾臓中で検出した。５５℃３０分を１サイク
ル；９４℃１５秒、６４℃１５秒、および６８℃５０秒（１サイクルについて２
秒ずつ増加）を３０サイクル；ならびに６８℃７分を１サイクルで、これらの反
応を実施した。

【０３２１】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡの発現を、ヒトおよびマウスのＲＮＡブロット（
Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いたノーザンブロット分析によって試験した。ブロット
をまず、Ｐｒｅ−Ｈｙｂ溶液（Ａｍｅｒｓｈａｍ）中で６５℃で３０分間、プレ
ハイブリダイズし、次いで、ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするｃＤＮ
Ａ配列のヌクレオチド１〜４７４に対応する、２５ｎｇの^３２Ｐ標識プローブを
含有する同じ溶液中で、６５℃一晩プローブした。このプローブを、Ｒｅｄｉ
Ｐｒｉｍｅ ＩＩキット（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて標識した。ハイブリダ
イゼーション後、ブロットを、６×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で、１時間２
回、２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で１時間２回、２×ＳＳＣおよび０．１
％ＳＤＳ中で、１時間２回、０．２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で３０分間
２回洗浄し、次いで２×ＳＳＣ中でリンスした。ホスホルイメージャー（ｐｈｏ
ｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ）中のノーザンブロットの一晩の曝露後、約１．６ｋｂ
の転写物を、マウスの骨格筋中で検出し（図１０Ａ）、そして約２．９ｋｂの転
写物を、ヒトの膵臓および末梢血白血球中で検出した（図１０Ｂおよび１０Ｃ）
。同じプローブを用いたドットブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）の分析において、
ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡをマウス骨格筋、顎下腺、および精巣上体中で検出
した。

【０３２２】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡの発現を、インサイチュハイブリダイゼーション
によって局在化した。正常胚および成体マウス組織のパネルを４％パラホルムア
ミド中で固定し、パラフィンに包埋し、そして５μｍに切片化した。切片化した
組織を、０．２Ｍ ＨＣｌ中で透過化処理し、プロテイナーゼＫで消化し、そし
てトリエタノールアミンおよび無水酢酸でアセチル化した。切片を、ハイブリダ
イゼーション溶液（３００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ
８．０，５ｍＭ ＥＤＴＡ、１×デンハート溶液、０．２％ ＳＤＳ、１０ｍＭ ＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌ ｔＲＮＡ、２５μｇ／ｍｌ ポリＡ，２５μｇ
／ｍｌ ポリＣおよび５０％ホルムアミド）中で１時間６０℃でプレハイブリダ
イズし、次いで、１０％デキストランおよび２×１０^４ｃｐｍ／μｌの^３３Ｐ−
標識アンチセンスリボプローブ（ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子に相補的）を含有
する同じ溶液中で６０℃で一晩ハイブリダイズする。標準的技術を用いて、ヒト
ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｃＤＮＡを含有するクローンのインビトロ転写によって、こ
のリボプローブを得る。

【０３２３】 ハイブリダイゼーション後、切片を、ハイブリダイゼーション溶液中でリンス
し、ＲＮａｓｅＡで処理してハイブリダイズしていないプローブを消化し、次い
で０．１×ＳＳＣ中で５５℃で３０分間洗浄する。次いで、切片をＮＴＢ−２エ
マルジョン（Ｋｏｄａｋ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に浸し、４℃に３週間曝
し、発色させ、そしてヘマトキシリンおよびエオシンで対比染色する。組織形態
学およびハイブリダイゼーションシグナルを、脳（矢状断面１つおよび冠状断面
２つ）、胃腸管（食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、近位結腸、および遠位結腸
）、下垂体、肝臓、肺、心臓、脾臓、胸腺、リンパ節、腎臓、副腎、膀胱、膵臓
、唾液腺、雄性および雌性生殖器（雌性の卵巣、卵管、および子宮；ならびに雄
性の精巣上体、前立腺、精嚢および輸精管）、ＢＡＴおよびＷＡＴ（皮下、腎臓
周囲）、骨（大腿）、皮膚、乳房、および骨格筋についての暗野かつ標準のイル
ミネーションによって同時に分析する。

【０３２４】 （実施例５：ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生成） （Ａ．細菌におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現） ＰＣＲを用いて、ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするテンプレートＤ
ＮＡ配列を増幅する。このＰＣＲには、この配列の５’および３’末端に対応す
るプライマーを用いる。増幅したＤＮＡ産物を改変して、発現ベクター内への挿
入を可能にするために制限酵素部位を含むようにし得る。ＰＣＲ産物をゲル精製
し、そして標準的組み換えＤＮＡ方法論を用いて発現ベクター中に挿入する。ｌ
ｕｘプロモーターおよびカナマイシン耐性をコードする遺伝子を含むｐＡＭＧ２
１（ＡＴＣＣ番号９８１１３）のような代表的ベクターを、挿入したＤＮＡの方
向性クローニングのために、ＢａｍＨＩおよびＮｄｅＩを用いて消化する。連結
した混合物を、エレクトロポレーションによってＥ．ｃｏｌｉ宿主株中に形質転
換し、そして形質転換体をカナマイシン耐性について選択する。選択したコロニ
ー由来のプラスミドＤＮＡを、単離し、そしてＤＮＡ配列決定に供してインサー
ト（挿入物）の存在を確認する。

【０３２５】 形質転換した宿主細胞を、導入前に、３０μｇ／ｍＬカナマイシンを含有する
２×ＹＴ培地中で３０℃でインキュベートする。最終濃度３０ｎｇ／ｍＬへのＮ
−（３−オキソヘキサノイル）−ｄｌ−ホモセリンラクトンの添加、それに続く
３０℃かまたは３７℃での６時間のインキュベーションによって、遺伝子発現を
誘導する。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を、培養物、細菌ペレットの再
懸濁および溶解物の遠心分離、ならびに、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳
動による宿主細胞タンパク質の分析によって評価する。

【０３２６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを含有する封入体を、以下の通り精製する。細
菌細胞を遠心分離によってペレット化し、そして水中に再懸濁する。この細胞懸
濁液を超音波処理によって溶解し、そして１９５，０００×ｇでの５〜１０分間
の遠心分離によってペレット化する。この上清を廃棄し、そしてペレットを洗浄
してホモジナイザーに移す。このペレットを、均一に懸濁されるまで、５ｍＬの
Ｐｅｒｃｏｌｌ溶液（７５％液体Ｐｅｒｃｏｌｌおよび０．１５Ｍ ＮａＣｌ）
中にホモジナイズし、次いで希釈して２１，６００×ｇで３０分間遠心分離する
。封入体を含む勾配画分を回収してプールする。単離した封入体をＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥによって分析する。

【０３２７】 Ｅ．ｃｏｌｉが産生したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに相当する、ＳＤＳポ
リアクリルアミドゲル上の単一のバンドを、ゲルから切り出し、そしてＮ末端ア
ミノ酸配列を、本質的にＭａｔｓｕｄａｉｒａら、１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２６２：１０〜３５に記載のように決定する。

【０３２８】 （Ｂ．哺乳動物細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現） ＰＣＲを用いて、ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするテンプレートＤ
ＮＡ配列を増幅する。このＰＣＲには、この配列の５’および３’末端に対応す
るプライマーを用いる。増幅したＤＮＡ産物を改変して、発現ベクター内への挿
入を可能にするために制限酵素部位を含むようにし得る。ＰＣＲ産物をゲル精製
し、そして標準的組み換えＤＮＡ方法論を用いて発現ベクター中に挿入する。Ｅ
ｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス複製起点を含む代表的な発現ベクターであるｐ
ＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を、２９３−ＥＢ
ＮＡ−１細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現のために用い得る。
増幅およびゲル精製したＰＣＲ産物を、ｐＣＥＰ４ベクターに連結し、そしてリ
ポフェクチンによって２９３−ＥＢＮＡ細胞中に導入する。トランスフェクトし
た細胞を、１００μｇ／ｍＬのハイグロマイシン中で選択し、そして得られた薬
物耐性培養物をコンフルエンスになるまで増殖する。次いで、この細胞を無血清
培地中で７２時間培養する。馴化培地を取り出し、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ド発現をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析する。

【０３２９】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現は、銀染色によって検出できる。あるいは
、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを、ペプチドタグに対する抗体を用いてウエス
タンブロット分析によって検出可能である、エピトープタグ（例えば、ＩｇＧ定
常ドメインまたはＦＬＡＧエピトープ）を有する融合タンパク質として生成する
。 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルから切
り出し得る、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ融合タンパク質を、エピトープタグに対す
るアフィニティークロマトグラフィーによって精製し、そして本明細書に記載の
ようなＮ末端アミノ酸配列分析に供する。

【０３３０】 （Ｃ．哺乳動物細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現および精製
） リポフェクチンまたはリン酸カルシウムプロトコールのいずれかを用いて、２
９３ ＥＢＮＡ細胞またはＣＨＯ細胞中に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現
構築物を導入する。

【０３３１】 生成されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対する機能的研究を行うため、ハ
イグロマイシン選択２９３ ＥＢＮＡクローニングのプールから大量の馴化培地
を生成する。この細胞を５００ｃｍ Ｎｕｎｃ Ｔｒｉｐｌｅ Ｆｌａｓｋｓ中
で、８０％コンフルエンスになるまで培養し、その後、培地を回収する１週間前
に無血清培地に切り換える。馴化培地を回収し、そして精製まで−２０℃に凍結
する。

【０３３２】 馴化培地を下記のとおり、アフィニティークロマトグラフィーによって精製す
る。この培地を解凍し、次いで０．２μｍフィルターに通す。プロテインＧカラ
ムをＰＢＳでｐＨ７．０に平衡化し、次いで濾過した培地をロードした。このカ
ラムをＡ_２８０の吸収がベースラインに達するまでＰＢＳで洗浄する。０．１Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＨＣｌを用いてｐＨ７．２でＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
を、カラムから溶出し、直ちに１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを用いてｐＨ８．５で中
和する。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを含有する画分をプールし、ＰＢＳ中で
透析し、そして−７０℃で貯蔵した。

【０３３３】 ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド−Ｆｃ融合ポリペプチドの第Ｘａ因子切断
について、アフィニティークロマトグラフィー精製したタンパク質を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ_２中でｐＨ８．
０で透析する。制限プロテアーゼ第Ｘａ因子を、透析したタンパク質に１／１０
０（ｗ／ｗ）で添加し、そしてこのサンプルを室温で一晩消化する。

【０３３４】 （実施例６：抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗体の生成） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対する抗体を、生物学的合成または化学的合
成によって生成した、精製タンパク質またはＩＬ−１ｒａ−Ｒペプチドを用いて
免疫することによって獲得し得る。抗体を生成するための適切な手順は、Ｈｕｄ
ｓｏｎおよびＢａｙ、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第二版、Ｂ
ｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｉｌｉｃａｔｉｏｎ）に記載
の手順を含む。

【０３３５】 抗体生成のための１つの手順において、動物（代表的には、マウスまたはウサ
ギ）に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗原（例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド）を注
射し、そして、ハイブリドーマ産生のため、ＥＬＩＳＡによって決定した十分な
血清力価を有する動物を、選択する。免疫した動物の脾臓を回収し、そして単一
細胞懸濁液として調製し、これから脾臓細胞を回収する。脾臓細胞をマウスミエ
ローマ細胞（例えば、Ｓｐ２／０−Ａｇ１４細胞）に融合し、ＤＭＥＭ（２００
Ｕ／ｍＬペニシリン、２００μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン、および４ｍＭ
グルタミン含有）中でまずインキュベートし、次いで、ＨＡＴ選択培地（ヒポキ
サンチン、アミノプテリンおよびチミジン）中でインキュベートする。選択後、
組織培養上清を各融合ウェルから取り出し、そしてＥＬＩＳＡによって、抗ＩＬ
−１ｒａ−Ｒ抗体産生について試験する。

【０３３６】 抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒを得るため、別の手順をまた、使用し得る。この手順は例
えば、ヒト抗体の生成のためのヒトＩｇ遺伝子座を保有するトランスジェニック
マウスの免疫、および合成抗体ライブラリー（例えば、抗体可変ドメインの変異
誘発によって生成されるライブラリーなど）のスクリーニングである。

【０３３７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対する抗体は、Ｅ．ｃｏｌｉ中で生成され、
そして単離された全長ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを用いてＮｅｗ Ｚｅａｌ
ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ ｒａｂｂｉｔを免疫することによって得られた。粗ポリク
ローナル免疫血清を回収し、そして組み換えＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（図
１１Ａ〜１１Ｂ、レーン１、４、および７）、組み換えＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチド改変体（図１１Ａ〜１１Ｂ、レーン２、５、および８）、および組み換え
ＩＬ−１ｒａ（図１１Ａ〜１１Ｂ；レーン３、６、および９）を用いる免疫沈澱
分析に用いた。１０ｎｇ（図１１Ａ、レーン４〜６）もしくは０．６μｇ（図１
１Ｂ、レーン７〜９）のいずれかの組み換えポリペプチドを、１８％Ｔｒｉｓ−
グリシンゲル上に直接ロードすること、またはゲル上にサンプルをロードする前
に、０．２μｌの粗抗血清（図１１Ａ、レーン１〜３）を用いて１μｇの組み換
えポリペプチドを免疫沈降することによって、ゲルを調製した。ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ分離後、ゲルをＰＶＤＦ膜上にブロットし、そして粗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ血清の
１：１０００希釈を用い、続いて、ＨＲＰ結合体化プロテインＡおよびＥＣＬ検
出によって発色させた。図１１Ｂに示すゲルを、ブロッティング後、Ｇｅｌｃｏ
ｄｅ Ｂｌｕｅ（Ｐｉｅｒｃｅ）で染色した。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに
対する抗体は、膜固定ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドおよびＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチド改変体の両方を検出するが、ＩＬ−１ｒａは検出しないことが示され
た。溶液中で、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ド改変体よりも効率的に認識された。

【０３３８】 （実施例７：トランスジェニックマウスにおけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドの発現） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生物学的活性を評価するため、肝臓特異的Ａ
ｐｏＥプロモーターの制御下で、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド／Ｆｃ融合タン
パク質をコードする構築物を調製する。この構築物の送達により、ＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドの機能に関する情報である、病理的変化を生じることが期待さ
れる。同様に、βアクチンプロモーターの制御下で、全長ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドを含む構築物を調製する。この構築物の送達により、偏在性発現を生じ
ることが期待される。

【０３３９】 これらの構築物を生成するために、ＰＣＲを用いて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドをコードするテンプレートＤＮＡ配列を増幅する。このＰＣＲには、所望
の配列の５’および３’末端に対応するプライマーを用いる。そしてこの配列は
、発現ベクター内への増幅産物の挿入を可能にするために制限酵素部位を組み込
む。増幅後、ＰＣＲ産物をゲル精製し、適切な制限酵素で消化し、そして標準的
組み換えＤＮＡ技術を用いて発現ベクター中に連結する。例えば、増幅したＩＬ
−１ｒａＲポリペプチド配列を、Ｇｒａｈａｍら、１９９７、Ｎａｔｕｒｅ Ｇ
ｅｎｅｔｉｃｓ，１７：２７２〜７４およびＲａｙら，１９９１ Ｇｅｎｅｓ
Ｄｅｖ．５：２２６５〜７３に記載のように、ヒトβアクチンプロモーターの制
御下で発現ベクター中にクローニングし得る。

【０３４０】 連結（ライゲーション）後、反応混合物を用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主株をエレ
クトロポレーションによって形質転換し、そして形質転換体を、薬物耐性で選択
する。選択したコロニー由来のプラスミドＤＮＡを単離して、ＤＮＡ配列決定に
供し、適切なインサートの存在および変異が存在しないことを確認する。ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド発現ベクターを、２回のＣｓＣｌ密度勾配遠心分離を通
じて精製し、適切な制限酵素で切断し、そして、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
導入遺伝子を含有する直線フラグメントを、ゲル電気泳動によって精製する。精
製したフラグメントを、５ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）および０．２ｍＭ Ｅ
ＤＴＡ中で、２ｍｇ／ｍＬの濃度で、再懸濁する。

【０３４１】 ＢＤＦ１×ＢＤＦ１交配マウス由来の単一細胞胚を、記載（ＰＣＴ公開番号Ｗ
Ｏ９７／２３６１４）のように注射する。胚を、ＣＯ_２インキュベーター中で一
晩培養し、そして１５〜２０の２細胞胚を偽妊娠ＣＤ１雌性マウスの卵管に移す
。マイクロインジェクションした胚の着床から得た子孫を、以下のように、ゲノ
ムＤＮＡサンプル中に取り込んだ導入遺伝子のＰＣＲ増幅でスクリーニングする
。耳切片を２０ｍＬの耳緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．０，１０ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．５％ ＳＤＳ、および５００ｍｇ／ｍＬ プロテイナーゼＫ）中
で、５５℃で一晩消化する。次いで、このサンプルを２００ｍＬのＴＥで希釈し
、そして２ｍＬの耳サンプルを、適切なプライマーを用いるＰＣＲ反応中で用い
る。

【０３４２】 ８週齢で、トランスジェニック創始動物およびコントロール動物を、剖検およ
び病理分析のため、屠殺する。脾臓の一部を取り出し、そしてＴｏｔａｌ ＲＮ
Ａ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、脾臓から、総細
胞ＲＮＡを単離し、そして導入遺伝子発現を、ＲＴ−ＰＣＲによって決定する。
脾臓から回収したＲＮＡを、以下のように、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ^ＴＭＰｒｅ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を用いてｃ
ＤＮＡに変換する。適切なプライマー（発現ベクター配列に位置し、そしてＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチド導入遺伝子の３’である）を用いて、導入遺伝子転写
物からｃＤＮＡ合成をプライムする。トランスジェニック創始動物およびコント
ロール由来の１０ｍｇの総脾臓ＲＮＡを、１ｍＭのプライマーとともに、１０分
間７０℃でインキュベートし、そして氷上に置く。次いで、反応物に、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．３、５０ｍＭ ＫＣｌ、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２ 、１０ｍＭの各ｄＮＴＰ、０．１ｍＭ ＤＴＴ、および２００ＵのＳｕｐｅｒＳ
ｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素を補充する。４２℃で５０分間のインキュベーション
後、７２℃で１５分間加熱することによって反応を停止し、２ＵのＲＮａｓｅ
Ｈを用いて２０分間３７℃で消化する。次いで、サンプルをＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドに特異的なプライマーを用いるＰＣＲによって増幅する。

【０３４３】 （実施例８：トランスジェニックマウスにおけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドの生物学的活性） 安楽死の前に、トランスジェニック動物を計量し、イソフルオロラン（ｉｓｏ
ｆｌｕｏｒａｎｅ）によって麻酔し、そして心臓穿刺によって採血する。サンプ
ルを、血液学および血清化学分析に供する。Ｘ線撮影を、最終的な放血後に行う
。肉眼での解剖の際に、主な内臓器官を、重量分析に供する。

【０３４４】 肉眼での解剖後、組織（すなわち、肝臓、脾臓、膵臓、胃、胃腸管全体、腎臓
、生殖器官、皮膚および乳腺、骨、脳、心臓、肺、胸腺、気管、食道、甲状腺、
副腎、膀胱、リンパ節および骨格筋）を取出し、そして１０％緩衝化Ｚｎ−ホル
マリン中で組織学的検査のために固定する。固定後、組織をパラフィンブロック
中で処理し、そして３ｍｍの切片を得る。全ての切片を、ヘマトキシリンおよび
エオシンで染色し、次いで組織学的分析に供する。

【０３４５】 トランスジェニックマウスおよびコントロールマウスの両方の脾臓、リンパ節
およびパイアー斑を、以下の通りにＢ細胞特異的抗体およびＴ細胞特異的抗体に
ついての免疫組織学的分析に供する。ホルマリンで固定したパラフィン包埋切片
を脱パラフィン処理し、そして脱イオン水中で水和する。切片を３％過酸化水素
でクエンチし、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂｌｏｃｋ（Ｌｉｐｓｈａｗ，Ｐｉｔｔｓｂｕ
ｒｇｈ，ＰＡ）でブロックし、そしてラットモノクローナル抗マウスＢ２２０お
よびＣＤ３（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）中でインキュベ
ートする。抗体結合を、色素原（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）としてＤＡＢ（ＢｉｏＴ
ｅｋ，Ｓａｎｔａ Ｂａｒｂａｒａ，ＣＡ）を用いて、ビオチン化ウサギ抗ラッ
ト免疫グロブリンおよびペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン（Ｂｉｏ
Ｇｅｎｅｘ，Ｓａｎ Ｒａｍｏｎ，ＣＡ）によって検出する。切片を、ヘマトキ
シリンで対比染色する。

【０３４６】 剖検後、トランスジェニック動物およびコントロールの同腹仔由来の脾臓およ
び胸腺のＭＬＮおよび切片を取出す。シリンジの平らな末端を用いて１００ｍｍ
ナイロン性細胞ストレーナー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋ
ｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）の底に対してこの組織を穏やかに粉砕することによ
って単細胞懸濁物を調製する。細胞を２回洗浄し、計数し、次いで各組織由来の
約１×１０^６細胞を、２０μＬ容量において０．５μｇ ＣＤ１６／３２（Ｆｃ
γＩＩＩ／ＩＩ）Ｆｃブロックで１０分間インキュベートする。次いで、サンプ
ルを、ＦＩＴＣまたはＰＥに結合体化した、ＣＤ９０．２（Ｔｈｙ−１．２）、
ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）、ＣＤ１１ｂ（Ｍａｃ−１）、Ｇｒ−１、ＣＤ４または
ＣＤ８に対するモノクローナル抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）の０．５μｇ抗体を有する、１００μＬ容量のＰＢＳ（Ｃａ^＋および
Ｍｇ^＋を欠く）、０．１％ウシ血清アルブミンおよび０．０１％アジ化ナトリウ
ム中で２〜８℃で３０分間染色する。抗体結合後、細胞を洗浄し、次いでＦＡＣ
Ｓｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）でのフローサイトメトリーによ
って分析する。

【０３４７】 （実施例９：ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能化） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが、ＩＬ−１、ＩＬ−１８または他のサイトカ
インに対する細胞応答に影響を与えるか否かを評価するために、以下の実験を行
った。最初に、マウスの骨髄細胞を、以前に記載されたとおりのレトロウイルス
感染（Ｙａｎら，１９９９，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２７：１４０９−１７）
によってＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子で形質導入した。次いで、形質導入された骨髄
を用いて、致死的に照射されたレシピエントマウスに移植した。造血が回復した
ら、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ形質導入マウスおよびコントロールマウス（すなわち、空
のレトロウイルスベクターで形質導入したマウス）由来の骨髄および脾臓細胞を
、一連の分析（ＦＡＣＳ分析（図１２）、コロニーアッセイ（図１３Ａ〜１３Ｂ
）およびＩＬ−１２（図１４）またはＩＬ−１２＋ＩＬ−１８（図１５）のいず
れかに応じたγ−インターフェロン産生を含む）に供した。

【０３４８】 このデータは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の発現が、脾臓中の造血前駆体の特定
のサブセット（最も顕著にはＧ−ＣＳＦはＧＭ−ＣＦＣを誘導した；ＳＣＦ／Ｅ
ｐｏはＢＦＵ−Ｅ／ＣＦＵ−Ｍｉｘを誘導した；そしてＣＳＦ−１はＭ−ＣＦＣ
を誘導した）および骨髄中の造血前駆体の特定のサブセット（ＩＬ−３およびＧ
−ＣＳＦはＧＭ−ＣＦＣを誘導した；ＳＣＦ／ＥｐｏはＢＦＵ−Ｅ／ＣＦＵ−Ｍ
ｉｘを誘導し、そしてＩＬ−３／ＥｐｏはＧＭ−ＣＦＣ／ＣＦＵ−Ｍｉｘを誘導
した）の相対量および／またはサイトカイン応答に影響を与えることを示唆する
。

【０３４９】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現はまた、脾細胞上でのＣＤ４およびＮＫ
１．１の表面発現の減少と、ならびに脾細胞がＩＬ−１２単独またはＩＬ−１２
＋ＩＬ−１８に応じてγ−インターフェロンを産生する能力の減少と相関する。

【０３５０】 本発明を好ましい実施形態に関して記載してきたが、改変および修飾が当業者
に思い浮かぶことが理解される。それゆえ、添付の特許請求の範囲が、本願発明
の範囲内に入る全てのこのような均等な改変物を包含することが意図される。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１Ａ〜１Ｂは、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子のヌクレオチド配列（配列番号
１）、およびヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの推定のアミノ酸配列（配列番
号２）を示す。

【図２】 図２Ａ〜２Ｂは、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子改変体のヌクレオチド配列（配
列番号３）、およびこの改変体によりコードされるヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドの推定のアミノ酸配列（配列番号４）を示す。

【図３】 図３は、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒスプライス改変体のヌクレオチド配列（配列番
号５）、およびこのスプライス改変体によりコードされるヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドの推定のアミノ酸配列（配列番号６）を示す。

【図４】 図４Ａ〜４Ｂは、ヒトＩＬ−１α（ＩＬ−１＿ａｌｐｈａ；配列番号７）、ヒ
トＩＬ−１β（ＩＬ−１＿ｂｅｔａ；配列番号８）、ヒトＩＬ−１レセプターア
ンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ；配列番号９）、ヒトＩＬ−δ（ＩＬ−１＿ｄｅｌ
ｔａ；配列番号１０）、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
；配列番号２）、ヒトＴａｎｇｏ−７７（Ｔａｎｇｏ−７７；配列番号１１）、
ヒトＺｉｌｌａ４（Ｚｉｌｌａ４；配列番号１２）、ヒトＩＬ−１ζ（ＩＬ−１
＿ｚｅｔａ；配列番号１３）、ヒトＩＬ−１レセプターアンタゴニストβ（ＩＬ
−１ＲＡ＿ｂｅｔａ；配列番号１４）、ヒトＳＰＯＩＬ ＩＩ（ｓｐｏｉｌ＿Ｉ
Ｉ；配列番号１５）、ヒトＩＬ−１ε（ＩＬ−１＿ｅｐｓｉｌｏｎ；配列番号１
６）、およびヒトＩＬ−１η（ＩＬ−１＿ｅｔａ；配列番号１７）のアミノ酸ア
ライメントを示す。

【図５】 図５は、ＩＬ−ｒａ遺伝子ファミリーの系統学的相関を図で示す。

【図６】 図６は、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（Ｍａｔｕｒｅ ＣＳ３２９）と
、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの配列改変体（Ｍａｔｕｒｅ ＣＳ３２９
改変体タンパク質）と、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのスプライス改変体
（Ｏｍｅｇａ ３２９タンパク質）との間の相関を図で示す。

【図７】 図７は、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子のヌクレオチド配列（配列番号３５）
およびマウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの推定アミノ酸配列（配列番号３６
）を示す。

【図８】 図８は、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ｈｕＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列番
号２）と、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ｍｕＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列
番号３６）とのアミノ酸配列アライメントを示す。

【図９】 図９Ａ−９Ｉは、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子（配列番号３７）についての
ゲノムヌクレオチド配列を示す。エキソン１−４のコードタンパク質の位置を示
す（下線）。

【図１０】 図１０Ａ−１０Ｃは、ノーザンブロットにより検出される、マウス（図１０Ａ
）およびヒト（図１０Ｂ−１０Ｃ）のＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡ発現を示す。

【図１１】 図１１Ａ〜１１Ｂは、抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体を用いるウェスタンブロット分
析の結果を示す。

【図１２】 図１２は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウイルスベクターを用いて処
理したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから回収し
た脾細胞および骨髄細胞のＦＡＣＳ分析の結果を示す。リンパの画分中の細胞の
割合を、示された細胞表面マーカーを用いる標準的ＦＡＣＳ分析に供した細胞に
ついて示す。

【図１３Ａ】 図１３Ａは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウィルスベクターを用いて
処理したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから回収
した脾細胞および骨髄細胞で行われたコロニーアッセイの結果を示す。形質導入
マウスおよびコントロールマウス由来の骨髄細胞および脾細胞を、標準的コロニ
ーアッセイ条件下で培養し、そしてコロニーを１４日目に計数した。

【図１３Ｂ】 図１３Ｂは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウィルスベクターを用いて
処理したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから回収
した脾細胞および骨髄細胞で行われたコロニーアッセイの結果を示す。形質導入
マウスおよびコントロールマウス由来の骨髄細胞および脾細胞を、標準的コロニ
ーアッセイ条件下で培養し、そしてコロニーを１４日目に計数した。

【図１４】 図１４は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウィルスベクターを用いて処
理したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから回収し
た脾細胞におけるＩＬ−１２処置に対するγ−インターフェロンの産生を示す。
馴化培地のサンプルを、ＩＬ−１２（１ｎｇ／ｍｌ）の存在下で４８時間増殖さ
せた培地（２×１０^６細胞／ウェル／ｍｌ）から取り出し、そしてＩＦＮ−γを
ＥＬＩＳＡにより定量した。

【図１５】 図１５は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウィルスベクターを用いて処
理したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから回収し
た脾細胞におけるＩＬ−１２およびＩＬ−１８処置に対するγ−インターフェロ
ンの産生を示す。馴化培地のサンプルを、ＩＬ−１２（１ｎｇ／ｍｌ）およびＩ
Ｌ−１８（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で４８時間増殖させた培地（２×１０^６細
胞／ウェル／ｍｌ）から取り出し、そしてＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡにより定量し
た。

【手続補正書】

【提出日】平成１４年６月２５日（２００２．６．２５）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項１８】 単離されたポリペプチドであって、以下： ２位のアルギニン；３位のアラニン、リジン、またはアルギニン；７位のセリン
；８位のリジン；９位のアラニン、システイン、リジン、トレオニン、またはセ
リン；１０位のシステインまたはフェニルアラニン；１３位のアルギニンまたは
トリプトファン；１５位のセリン；１８位のアルギニン；１９位のセリンまたは
トレオニン；２１位のトレオニン；２３位のセリン；３４位のアルギニン；３７
位のチロシン、セリン、またはアルギニン；３８位のリジン、アルギニン、トレ
オニン、またはセリン；４１位のトレオニン；４３位のセリン、フェニルアラニ
ン、またはアラニン；４４位のアラニン；４８位のセリンまたはリジン；５２位
のアラニン、トレオニン、またはフェニルアラニン；５３位のセリン；５４位の
セリン；５８位のアラニンまたはチロシン；６５位のリジン；６６位のフェニル
アラニン；６７位のチロシン；６９位のセリン、チロシン、またはフェニルアラ
ニン；７３位のリジンまたはセリン；７８位のトレオニンまたはアルギニン；９
０位のセリンまたはアラニン；９１位のアラニン；９６位のセリン；９７位のリ
ジンまたはアルギニン；９８位のリジンまたはセリン；１００位のアラニン；１
０２位のチロシン；１０４位のアルギニンまたはアラニン；１０５位のリジン；
１０６位のトレオニン；１０８位のアルギニン；１０９位のリジン、トレオニン
、またはトリプトファン；１１０位のトレオニンまたはセリン；１１１位のセリ
ン；１１４位のセリン；１１６位のセリン；１１７位のフェニルアラニン、シス
テイン、またはチロシン；１２１位のチロシン；１２３位のセリンまたはアラニ
ン；１２６位のシステイン、セリン、またはトレオニン；１３６位のセリン；１
３８位のフェニルアラニンまたはアルギニン；１４１位のトレオニン、アルギニ
ン、またはアラニン；１４２位のリジンまたはチロシン；１４３位のトリプトフ
ァンまたはトレオニン；１４５位のアラニン；１４７位のトレオニンまたはセリ
ン；１５１位のシステイン；および１５２位のセリン、システイン、またはフェ
ニルアラニンからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を有する
配列番号１または配列番号３のいずれかに示されるアミノ酸配列を含む単離され
たポリペプチドであって、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４
、または配列番号６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、 単離されたポリペプチド。

【請求項１９】単離されたポリペプチドであって、以下： ２１位のアルギニン；２２位のアラニン、リジン、またはアルギニン；２６位の
セリン；２７位のリジン；２８位のアラニン、システイン、リジン、トレオニン
、またはセリン；２９位のシステインまたはフェニルアラニン；３２位のアルギ
ニンまたはトリプトファン；３４位のセリン；３７位のアルギニン；３８位のセ
リンまたはトレオニン；４０位のトレオニン；４２位のセリン；５３位のアルギ
ニン；５６位のチロシン、セリン、またはアルギニン；５７位のリジン、アルギ
ニン、トレオニン、またはセリン；６０位のトレオニン；６２位のセリン、フェ
ニルアラニン、またはアラニン；６３位のアラニン；６７位のセリンまたはリジ
ン；７１位のアラニン、トレオニン、またはフェニルアラニン；７２位のセリン
；７３位のセリン；７７位のアラニンまたはチロシン；８４位のリジン；８５位
のフェニルアラニン；８６位のチロシン；８８位のセリン、チロシン、またはフ
ェニルアラニン；９２位のリジンまたはセリン；９７位のトレオニンまたはアル
ギニン；１０９位のセリンまたはアラニン；１１０位のアラニン；１１５位のセ
リン；１１６位のリジンまたはアルギニン；１１７位のリジンまたはセリン；１
１９位のアラニン；１２１位のチロシン；１２３位のアルギニンまたはアラニン
；１２４位のリジン；１２５位のトレオニン；１２７位のアルギニン；１２８位
のリジン、トレオニン、またはトリプトファン；１２９位のトレオニンまたはセ
リン；１３０位のセリン；１３３位のセリン；１３５位のセリン；１３６位のフ
ェニルアラニン、システイン、またはチロシン；１４０位のチロシン；１４２位
のセリンまたはアラニン；１４５位のシステイン、セリン、またはトレオニン；
１５５位のセリン；１５７位のフェニルアラニンまたはアルギニン；１６０位の
トレオニン、アルギニン、またはアラニン；１６１位のリジンまたはチロシン；
１６２位のトリプトファンまたはトレオニン；１６４位のアラニン；１６６位の
トレオニンまたはセリン；１７０位のシステイン；および１７１位のセリン、シ
ステイン、またはフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも１つの
アミノ酸置換を有する配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリ
ペプチドであって、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、また
は配列番号６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、 単離されたポリペプチド。

【請求項２０】 請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項１８、また
は請求項１９のいずれかに記載のポリペプチドに特異的に結合する、選択的結合
因子またはそのフラグメント。

【請求項２１】 配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３
６のいずれかに示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはそのフラグメン
トに特異的に結合する、請求項２０に記載の選択的結合因子またはそのフラグメ
ント。

【請求項２２】 抗体またはそのフラグメントである、請求項２０に記載の
選択的結合因子。

【請求項２３】 ヒト化抗体である、請求項２０に記載の選択的結合因子。

【請求項２４】 ヒト抗体またはそのフラグメントである、請求項２０に記
載の選択的結合因子。

【請求項２５】 ポリクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求
項２０に記載の選択的結合因子。

【請求項２６】 モノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求
項２０に記載の選択的結合因子。

【請求項２７】 キメラ抗体またはそのフラグメントである、請求項２０に
記載の選択的結合因子。

【請求項２８】 ＣＤＲ移植抗体またはそのフラグメントである、請求項２ ０ に記載の選択的結合因子。

【請求項２９】 抗イディオタイプ抗体またはそのフラグメントである、請
求項２０に記載の選択的結合因子。

【請求項３０】 可変領域フラグメントである、請求項２０記載の選択的結
合因子。

【請求項３１】 前記可変領域フラグメントがＦａｂフラグメントまたはＦ ａｂ’フラグメントである、請求項３０に記載の選択的結合因子。

【請求項３２】 配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３
６のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異性を有する少なくとも
１つの相補性決定領域を含む、選択的結合因子またはそのフラグメント。

【請求項３３】 検出可能標識に結合される、請求項２０に記載の選択的結
合因子。

【請求項３４】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生物学的活性を拮抗する
、請求項２０に記載の選択的結合因子。

【請求項３５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド関連の疾患、状態、または
障害を、処置、予防、または改善するための薬学的組成物であって、有効量の請
求項２０に記載の選択的結合因子を含有する、薬学的組成物。

【請求項３６】 配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３
６のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドで動物を免疫することによって
産生される、選択的結合因子。

【請求項３７】 請求項１、請求項２、または請求項３のいずれかに記載の
ポリペプチドを結合し得る選択的結合因子を産生する、ハイブリドーマ。

【請求項３８】 請求項２０に記載の抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体またはフラグ
メントを用いて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの量を検出または定量する方法
。

【請求項３９】 請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項１８、また
は請求項１９のいずれかのポリペプチド、および薬学的に受容可能な処方剤を含
む、組成物。

【請求項４０】 前記薬学的に受容可能な処方剤が、キャリア、アジュバン
ト、溶解剤、安定剤、または抗酸化剤である、請求項３９に記載の組成物。

【請求項４１】 請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項１８、また
は請求項１９のいずれかのポリペプチドの誘導体を含む、ポリペプチド。

【請求項４２】 水溶性ポリマーを用いて共有結合的に改変された、請求項 ４１ に記載のポリペプチド。

【請求項４３】 請求項４２に記載のポリペプチドであって、ここで、前記
水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコ
ール、デキストラン、セルロース、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレ
ングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／
エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、およびポリビニ
ルアルコールからなる群より選択される、ポリペプチド。

【請求項４４】 請求項１、請求項２または請求項３のいずれかの核酸分子
および薬学的に受容可能な処方剤を含む、組成物。

【請求項４５】 前記核酸分子が、ウイルスベクター中に含まれる、請求項 ４４ に記載の組成物。

【請求項４６】 請求項１、請求項２または請求項３のいずれかの核酸分子
を含む、ウイルスベクター。

【請求項４７】 異種アミノ酸配列に融合された、請求項１３、請求項１４
、請求項１５、請求項１８、または請求項１９のいずれかのポリペプチドを含む
、融合ポリペプチド。

【請求項４８】 前記異種アミノ酸配列が、ＩｇＧ定常ドメインまたはその
フラグメントである、請求項４７に記載の融合ポリペプチド。

【請求項４９】 医学状態を、処置、予防、または改善するための薬学的組 成物 であって、請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項１８、もしくは請
求項１９のいずれかのポリペプチド、または請求項１、請求項２、もしくは請求
項３のいずれかの核酸によってコードされるポリペプチドを含有する、薬学的組 成物 。

【請求項５０】 被験体における病的状態または病的状態に対する感受性に 関して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを検出するキットであって、該キットは 、以下： （ａ）サンプル中の、請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項１８、も しくは請求項１９のいずれかのポリペプチド、または請求項１、請求項２、もし くは請求項３のいずれかの核酸によってコードされるポリペプチドに結合するＩ Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチド選択的結合因子；および （ｂ）使用方法を示す指示書、 を備える、キット。

【請求項５１】 デバイスであって、以下： （ａ）移植に適した膜；および （ｂ）該膜内にカプセル化された細胞であって、該細胞は、請求項１３、請求
項１４、請求項１５、請求項１８、もしくは請求項１９のいずれかのタンパク質
を分泌する、細胞； を備え、 該膜は、該タンパク質に対して透過性であり、そして該細胞に有害な物質に対
して不透過性である、デバイス。

【請求項５２】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに結合する化合物を同定す
る方法であって、以下： （ａ）請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項１８、もしくは請求項１ ９ のいずれかのポリペプチドを、化合物と接触させる工程；および （ｂ）該化合物に対する該ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの結合の程度を決定
する工程、 を包含する、方法。

【請求項５３】 前記化合物に結合した場合に、前記ポリペプチドの活性を
決定する工程をさらに包含する、請求項５２に記載の方法。

【請求項５４】 動物においてポリペプチドのレベルを調節する薬学的組成 物 であって、請求項１、請求項２、または請求項３のいずれかの核酸分子を含有 する、薬学的組成物。

【請求項５５】 請求項１、請求項２、または請求項３のいずれかの核酸分
子を含む、トランスジェニック非ヒト哺乳動物。

【請求項５６】 化合物がＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性またはＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド産生を阻害するか否かを決定するためのプロセスであっ
て、請求項５５に記載のトランスジェニック哺乳動物を該化合物に曝露する工程
、および該哺乳動物におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性またはＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド産生を測定する工程を包含する、プロセス。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】発明の詳細な説明

【補正方法】変更

【補正の内容】

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新規インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト関連（ＩＬ−
１ｒａ−Ｒ）ポリペプチドおよびこれをコードする核酸分子に関する。本発明は
また、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生するための、選択的結合因子、ベク
ター、宿主細胞および方法に関する。本発明はさらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドと関連する疾患、障害、および状態の、診断、処置、改善、および／また
は予防のための薬学的組成物および方法に関する。

【０００２】 （発明の背景） 核酸分子の同定、クローニング、発現、および操作における技術進歩ならびに
ヒトゲノムの解読は、新規治療因子の発見を大きく加速した。現在、高速核酸配
列決定技術は、前例のない速度で配列情報を作製し得、そしてコンピュータ分析
と結合されて、ゲノムの一部および全体への重複配列の集合ならびにポリペプチ
ドコード領域の同定を可能にする。既知アミノ酸配列のデータベース編集物に対
する推定アミノ酸配列の比較は、以前に同定された配列および／または構造の目
印に対して相同性の程度を決定することを可能にする。核酸分子のポリペプチド
コード領域のクローニングおよび発現は、構造分析および機能分析のためのポリ
ペプチド産物を提供する。核酸分子およびコードされるポリペプチドの操作は、
治療剤としての使用に関して生成物に対して有利な特性を与え得る。

【０００３】 過去１０年間にわたるゲノム研究における有意な技術進歩にも関わらず、ヒト
ゲノムに基づく新規治療剤の開発に対する可能性は、未だ広く理解されていない
。潜在的に有利なポリペプチド治療剤をコードする多くの遺伝子またはこれらが
コードするポリペプチド（これらは、治療分子に対して「標的」としてはたらき
得る）は、未だ同定されていない。

【０００４】 従って、診断的な利点または治療的な利点を有する、新規ポリペプチドおよび
これらをコードする核酸分子を同定することが、本発明の目的である。

【０００５】 これまでに発見された最も強力な炎症性サイトカインのうちの１つは、インタ
ーロイキン−１（ＩＬ−１）である。ＩＬ−１は、多くの疾患および医学状態に
関与すると考えられている。ＩＬ−１は、マクロファージ／単球系統の細胞によ
って（排他的にではないが）産生され、そして２つの形態：ＩＬ−１アルファ（
ＩＬ−１α）およびＩＬ−１ベータ（ＩＬ−１β）で産生され得る。インターロ
イキン−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）は、インターロイキン−
１の天然のインヒビターとして作用するヒトタンパク質である。

【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、新規ＩＬ−１ｒａ−Ｒの核酸分子およびコードされるポリペプチド
に関する。

【０００７】 本発明は、単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：）１、配列番号３、配列番号５、また
は配列番号３５のいずれかに示されるヌクレオチド配列； （ｂ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサートのヌクレオチ
ド配列； （ｃ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
に示されるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列； （ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかの相補体に、中程度または高度にストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列；および （ｅ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供
する。

【０００８】 本発明はまた、単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
に示されるポリペプチドに少なくとも約７０％同一であるポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配
列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示される
ポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれ
かに示されるヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡ
インサートのヌクレオチド配列、または（ａ）の、対立遺伝子改変体またはスプ
ライス改変体をコードするヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチドフラグメントをコードす
る、配列番号１、配列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれかの
ヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサート、
（ａ）または（ｂ）の領域であって、ここで、上記ポリペプチドフラグメントは
、配列番号２、配列番号４、配列番号６、もしくは配列番号３６のいずれかに示
されるコードされたポリペプチドの活性を有するか、または抗原性である、領域
； （ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、配列番号１、配
列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれかのヌクレオチド配列、
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサート、または（ａ）〜（ｃ
）いずれかの領域； （ｅ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）〜（ｄ）のい
ずれかの相補体にハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；ならびに （ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供
する。

【０００９】 本発明はさらに、単離された核酸分子であって、以下； （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配
列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示される
ポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配列番号
２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペ
プチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配列番号
２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペ
プチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｄ）Ｃ末端短縮および／またはＮ末端短縮を有する配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチドは、配
列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示される
ポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短縮、およびＮ末
端短縮からなる群より選択される少なくとも１つの改変を有する配列番号２、配
列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列であって、ここで、上記コードされたポリペプチ
ドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに
示されるポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む（ａ）〜（ｅ）の
いずれかのヌクレオチド配列； （ｇ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）〜（ｆ）のい
ずれかの相補体にハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；ならびに （ｈ）（ａ）〜（ｅ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供
する。

【００１０】 本発明は、単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
に示されるアミノ酸配列；および （ｂ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサートによってコー
ドされるアミノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドを提供
する。

【００１１】 本発明はまた、単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
のオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）に対するアミノ酸配列； （ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
のアミノ酸配列に少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列であって、ここで
、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号
３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基を含む配列番号２、配列番号４、配列番
号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列のフラグメントで
あって、ここで、上記フラグメントは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、
または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有するか、また
は抗原性である、フラグメント；ならびに （ｄ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、もしくは配列番号３６のいずれ
かに示されるアミノ酸配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡイン
サートによってコードされるアミノ酸配列、（ａ）、または（ｂ）の、対立遺伝
子改変体またはスプライス改変体のアミノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドを提供
する。

【００１２】 本発明はさらに、単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって
、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または
配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列
； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって、ここ
で、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番
号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって、ここ
で、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番
号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｄ）Ｃ末端短縮および／またはＮ末端短縮を有する配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって
、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または
配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列
；ならびに （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短縮、およびＮ末
端短縮からなる群より選択される少なくとも１つの改変を有する配列番号２、配
列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列
であって、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６
、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミ
ノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドを提供
する。

【００１３】 本発明はなおさらに、単離されたポリペプチドであって、以下： ２位のアルギニン；３位のアラニン、リジン、またはアルギニン；７位のセリン
；８位のリジン；９位のアラニン、システイン、リジン、トレオニン、またはセ
リン；１０位のシステインまたはフェニルアラニン；１３位のアルギニンまたは
トリプトファン；１５位のセリン；１８位のアルギニン；１９位のセリンまたは
トレオニン；２１位のトレオニン；２３位のセリン；３４位のアルギニン；３７
位のチロシン、セリン、またはアルギニン；３８位のリジン、アルギニン、トレ
オニン、またはセリン；４１位のトレオニン；４３位のセリン、フェニルアラニ
ン、またはアラニン；４４位のアラニン；４８位のセリンまたはリジン；５２位
のアラニン、トレオニン、またはフェニルアラニン；５３位のセリン；５４位の
セリン；５８位のアラニンまたはチロシン；６５位のリジン；６６位のフェニル
アラニン；６７位のチロシン；６９位のセリン、チロシン、またはフェニルアラ
ニン；７３位のリジンまたはセリン；７８位のトレオニンまたはアルギニン；９
０位のセリンまたはアラニン；９１位のアラニン；９６位のセリン；９７位のリ
ジンまたはアルギニン；９８位のリジンまたはセリン；１００位のアラニン；１
０２位のチロシン；１０４位のアルギニンまたはアラニン；１０５位のリジン；
１０６位のトレオニン；１０８位のアルギニン；１０９位のリジン、トレオニン
、またはトリプトファン；１１０位のトレオニンまたはセリン；１１１位のセリ
ン；１１４位のセリン；１１６位のセリン；１１７位のフェニルアラニン、シス
テイン、またはチロシン；１２１位のチロシン；１２３位のセリンまたはアラニ
ン；１２６位のシステイン、セリン、またはトレオニン；１３６位のセリン；１
３８位のフェニルアラニンまたはアルギニン；１４１位のトレオニン、アルギニ
ン、またはアラニン；１４２位のリジンまたはチロシン；１４３位のトリプトフ
ァンまたはトレオニン；１４５位のアラニン；１４７位のトレオニンまたはセリ
ン；１５１位のシステイン；および１５２位のセリン、システイン、またはフェ
ニルアラニンからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を有する
配列番号１または配列番号３のいずれかに示されるアミノ酸配列を含む単離され
たポリペプチドであって、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号
４、または配列番号６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、単離
されたポリペプチドを提供する。

【００１４】 本発明はなおさらに、単離されたポリペプチドであって、以下： ２１位のアルギニン；２２位のアラニン、リジン、またはアルギニン；２６位の
セリン；２７位のリジン；２８位のアラニン、システイン、リジン、トレオニン
、またはセリン；２９位のシステインまたはフェニルアラニン；３２位のアルギ
ニンまたはトリプトファン；３４位のセリン；３７位のアルギニン；３８位のセ
リンまたはトレオニン；４０位のトレオニン；４２位のセリン；５３位のアルギ
ニン；５６位のチロシン、セリン、またはアルギニン；５７位のリジン、アルギ
ニン、トレオニン、またはセリン；６０位のトレオニン；６２位のセリン、フェ
ニルアラニン、またはアラニン；６３位のアラニン；６７位のセリンまたはリジ
ン；７１位のアラニン、トレオニン、またはフェニルアラニン；７２位のセリン
；７３位のセリン；７７位のアラニンまたはチロシン；８４位のリジン；８５位
のフェニルアラニン；８６位のチロシン；８８位のセリン、チロシン、またはフ
ェニルアラニン；９２位のリジンまたはセリン；９７位のトレオニンまたはアル
ギニン；１０９位のセリンまたはアラニン；１１０位のアラニン；１１５位のセ
リン；１１６位のリジンまたはアルギニン；１１７位のリジンまたはセリン；１
１９位のアラニン；１２１位のチロシン；１２３位のアルギニンまたはアラニン
；１２４位のリジン；１２５位のトレオニン；１２７位のアルギニン；１２８位
のリジン、トレオニン、またはトリプトファン；１２９位のトレオニンまたはセ
リン；１３０位のセリン；１３３位のセリン；１３５位のセリン；１３６位のフ
ェニルアラニン、システイン、またはチロシン；１４０位のチロシン；１４２位
のセリンまたはアラニン；１４５位のシステイン、セリン、またはトレオニン；
１５５位のセリン；１５７位のフェニルアラニンまたはアルギニン；１６０位の
トレオニン、アルギニン、またはアラニン；１６１位のリジンまたはチロシン；
１６２位のトリプトファンまたはトレオニン；１６４位のアラニン；１６６位の
トレオニンまたはセリン；１７０位のシステイン；および１７１位のセリン、シ
ステイン、またはフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも１つの
アミノ酸置換を有する配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリ
ペプチドであって、ここで、上記ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、ま
たは配列番号６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、単離された
ポリペプチドを提供する。

【００１５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒアミノ酸配列を含む融合ポリペプチドがまた、提供される。

【００１６】 本発明はまた、本明細書中に示されるような単離された核酸分子を含む発現ベ
クター、本明細書中に示されるような組換え核酸分子を含む組換え宿主細胞、お
よびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生する方法を提供し、この方法は、この
宿主細胞を培養する工程、必要に応じてそのように産生されたポリペプチドを単
離する工程を包含する。

【００１７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸分子を含むトランスジェニッ
ク非ヒト動物がまた、本発明に含まれる。ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子は、ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの増加した
レベル（これは、増加した循環レベルを含み得る）を可能にする様式で、動物中
に導入される。あるいは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子は、内因性ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドの発現を阻害する様式で動物に導入される（すなわち、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド遺伝子ノックアウトを保有するトランスジェニック動物を
作製する）。トランスジェニック非ヒト動物は、好ましくは哺乳動物であり、よ
り好ましくはげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）である。

【００１８】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの誘導体がまた、提供される。

【００１９】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに特異的に結合し得る選択的結合因子
（例えば、抗体およびペプチド）が、さらに提供される。このような抗体および
ペプチドは、アゴニストのものであってもアンタゴニストのものであってもよい
。

【００２０】 本発明のヌクレオチド、ポリペプチド、もしくは選択的結合因子ならびに１つ
以上の薬学的に受容可能な処方剤を含む薬学的組成物がまた、本発明によって含
まれる。薬学的組成物は、治療有効量の本発明のヌクレオチドまたはポリペプチ
ドを提供するために使用される。本発明はまた、このポリペプチド、核酸分子、
および選択的結合因子を使用する方法に関する。

【００２１】 本発明のＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドおよびＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子は、
疾患および障害（本明細書中に列挙されるものを含む）を処置、予防、改善、お
よび／または検出するための使用され得る。

【００２２】 本発明はまた、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに結合する試験分子を同定する
ために、試験分子をアッセイする方法を提供する。この方法は、ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドを試験分子と接触させて、この試験分子のこのポリペプチドに対
する結合の程度を決定する工程を包含する。この方法はさらに、このような試験
分子が、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストであ
るか否かを決定する工程を包含する。本発明はさらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドの発現またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの活性に対する分子の影響を
試験する方法を提供する。

【００２３】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を調整する方法およびＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドのレベルを調節する（すなわち、レベルを増加するか、またはレベ ルを減少する） 方法がまた、本発明によって含まれる。１つの方法は、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸分子を動物に投与する工程を包含する。
別の方法において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を調整または調節する
エレメントを含む核酸分子が、投与され得る。これらの方法の例としては、本明
細書中にさらに記載されるように、遺伝子治療、細胞治療、およびアンチセンス
治療が挙げられる。

【００２４】 本発明の別の局面において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、そのレセプタ
ー（「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター」）を同定するために使用され
得る。種々の形態の「発現クローニング」は、タンパク質リガンドに対するレセ
プターをクローン化するために広範囲に使用されている。例えば、Ｓｉｍｏｎｓ
ｅｎおよびＬｏｄｉｓｈ、１９９４、Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃ
ｉ．１５：４３７−４１ならびにＴａｒｔａｇｌｉａら、１９９５、Ｃｅｌｌ
８３：１２６３−７１を参照のこと。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター
の単離は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル伝達経路の新規アゴニストお
よびアンタゴニストの同定または開発に有用である。このようなアゴニストおよ
びアンタゴニストとしては、可溶性ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター、
抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター−選択的結合因子（例えば、抗体お よび その誘導体）、小分子、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられ
、これらのうちのいずれかは、１つ以上の疾患または障害（本明細書中に開示さ
れるものを含む）の処置に有用であり得る。

【００２５】 （発明の詳細な説明） 本明細書中で使用される節の表題は、構成の目的のみのためであり、そして記
載される内容を限定するようには解釈されるべきではない。本願において引用さ
れる全ての参考文献は、明確に本明細書中に参考として援用される。

【００２６】 （定義） 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子」または「ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子」あるい
は「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリヌクレオチド」とは、配列番号１、配列番号３、配列
番号５、または配列番号３５のいずれかに示されるヌクレオチド配列、配列番号
２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３にお
けるＤＮＡインサートのヌクレオチド配列、および本明細書中で定義される核酸
分子を含むか、またはこれらからなる核酸分子をいう。

【００２７】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド対立遺伝子改変体」とは、生物体または
生物体の集団の染色体の所定の遺伝子座を占める遺伝子の、天然に存在する可能
ないくつかの代替的な形態のうちの１つをいう。

【００２８】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライス改変体」とは、配列番号２、
配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドアミノ酸配列のＲＮＡ転写物中のイントロン配列の選択的プ
ロセシングによって生成される、核酸分子（通常はＲＮＡ）をいう。

【００２９】 用語「単離された核酸分子」とは、（１）総核酸が供給源細胞から単離される
場合に、これが天然で一緒に見出されるタンパク質、脂質、炭水化物、または他
の物質のうち少なくとも約５０パーセントから分離された本発明の核酸分子か、
（２）「単離された核酸分子」が天然で連結しているポリヌクレオチドの全てま
たは一部に連結していない本発明の核酸分子か、（３）天然では連結しないポリ
ヌクレオチドに作動可能に連結した本発明の核酸分子か、あるいは（４）より大
きなポリヌクレオチド配列の一部として天然には存在しない、本発明の核酸分子
をいう。好ましくは、本発明の単離された核酸分子は、任意の他の混入核酸分子
、または天然の環境において見出される他の混入物（これらは、ポリペプチド産
生における使用、または治療的使用、診断的使用、予防的使用、または研究的使
用を妨げる）を実質的に含まない。

【００３０】 用語「核酸配列」または「核酸分子」は、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列をいう。こ
の用語は、ＤＮＡおよびＲＮＡの公知の塩基アナログのいずれかから形成される
分子を含み、例えば、以下であるがこれらに限定されない：４−アセチルシトシ
ン、８−ヒドロキシ−Ｎ６−メチルアデノシン、アジリジニル−シトシン、プソ
イドイソシトシン（ｐｓｅｕｄｏｉｓｏｃｙｔｏｓｉｎｅ）、５−（カルボキシ
ヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、
５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチル
アミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ６−イソ−ペンテニル
アデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１−メチルグア
ニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、
２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−メチル
アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキ
シアミノ−メチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン、５’
−メトキシカルボニル−メチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチ
オ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル
、ウラシル−５−オキシ酢酸、オキシブトキソシン、プソイドウラシル、キュー
オシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル
、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチ
ルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、プソイドウラシル、キューオシン、２
−チオシトシン、および２，６−ジアミノプリン。

【００３１】 用語「ベクター」は、宿主細胞にコード情報を移すために使用される任意の分
子（例えば、核酸、プラスミド、またはウイルス）をいうように使用される。

【００３２】 用語「発現ベクター」は、宿主細胞の形質転換に適切であり、そして挿入され
た異種核酸配列の発現を、指向および／または制御する核酸配列を含むベクター
をいう。発現としては、転写、翻訳、およびＲＮＡスプライシング（イントロン
が存在する場合）のようなプロセスが挙げられるがこれらに限定されない。

【００３３】 用語「作動可能に連結された」は、本明細書中で、隣接配列の配置をいうよう
に使用され、ここで、このように記載される隣接配列は、その通常の機能を行う
ように配置またはアセンブルされる。従って、コード配列に作動可能に連結した
隣接配列は、このコード配列の複製、転写および／または翻訳を行うことが可能
であり得る。例えば、コード配列は、このプロモーターがコード配列の転写を指
向し得る場合に、プロモーターに作動可能に連結されている。隣接配列は、これ
が正確に機能する限り、コード配列と連続する必要はない。したがって、例えば
、介在する、翻訳されないが、なお転写される配列が、プロモーター配列とコー
ド配列との間に存在し得、そしてこのプロモーター配列は、依然としてこのコー
ド配列に「作動可能に連結」されているとみなされ得る。

【００３４】 用語「宿主細胞」は、核酸配列で形質転換されたか、または形質転換され得、
次いで目的の選択された遺伝子を発現し得る細胞をいうように使用される。この
用語には、選択された遺伝子が存在する限り、子孫が形態学または遺伝子構造に
おいて本来の親と同一であろうとなかろうと、親細胞の子孫を含む。

【００３５】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド」とは、配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチド、お
よび関連するポリペプチドをいう。関連ポリペプチドとしては、ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドフラグメント、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドオルソログ、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体、およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体
が挙げられ、これらは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号
３６のいずれかに示されるポリペプチドの少なくとも１つの活性を保有する。Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、本明細書中で定義される成熟ポリペプチドであ
り得、そしてこれらが調製される方法に依存して、アミノ末端メチオニン残基を
有しても有さなくてもよい。

【００３６】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメント」とは、配列番号２、配列
番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの
、アミノ末端（リーダー配列を有するかまたは有さない）での短縮化および／ま
たはカルボキシ末端での短縮化を含むポリペプチドをいう。用語「ＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドフラグメント」はまた、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドオルソ
ログ、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド改変体のアミノ末端および／またはカルボキシ末端短縮化、あるいはＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド対立遺伝子改変体またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
スプライス改変体によってコードされるポリペプチドのアミノ末端および／また
はカルボキシ末端短縮化をいう。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメントは
、選択的ＲＮＡスプライシング、またはインビボプロテアーゼ活性から生じ得る
。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの膜結合形態もまた、本発明によって意図され
る。好ましい実施形態において、短縮化および／または欠失は、約１０アミノ酸
、または約２０アミノ酸、または約５０アミノ酸、または約７５アミノ酸、また
は約１００アミノ酸、または約１００より多くのアミノ酸を含む。このように生
成されるポリペプチドフラグメントは、約２５個連続したアミノ酸、または約５
０アミノ酸、または約７５アミノ酸、または約１００アミノ酸、または約１２５
アミノ酸を含む。このようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメントは、必
要に応じて、アミノ末端メチオニン残基を含み得る。このようなフラグメントは
、例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対する抗体を生成するために使用さ
れ得ることが理解される。

【００３７】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドオルソログ」は、配列番号２、配列番号
４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドアミノ酸配列に対応する、別の種由来のポリペプチドをいう。例えば
、マウスおよびヒトのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、互いにオルソログであ
るとみなされる。

【００３８】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変」は、配列番号２、配列番号４、配
列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドアミノ酸配列（リーダー配列を有するかまたは有さない）と比較して、１つ
以上のアミノ酸配列の置換、欠失（例えば、内部欠失および／またはＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドフラグメント）、および／または付加（例えば、内部付加お
よび／またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ融合ポリペプチド）を有するアミノ酸配列を含む
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをいう。改変体は、天然に存在する（例えば、Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチド対立遺伝子改変体、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
オルソログ、およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライス改変体）か、また
は、人工的に構築され得る。このようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体は
、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号３５のいずれかに示さ
れるＤＮＡ配列から変化するＤＮＡ配列を有する、対応する核酸分子から調製さ
れ得る。好ましい実施形態において、この改変体は、１〜３、または１〜５、ま
たは１〜１０、または１〜１５、または１〜２０、または１〜２５、または１〜
５０、または１〜７５、または１〜１００、または１００より多くのアミノ酸の
置換、挿入、付加、および／または欠失を有し、ここで、この置換は、保存的、
または非保存的、あるいはその任意の組み合わせであり得る。

【００３９】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体」は、本明細書中で定義されるよ うな、 配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに
示されるポリペプチド、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメント、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドオルソログ、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体
をいい、これらは、化学的に改変されている。用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド誘導体」はまた、本明細書中で定義されるようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド対立遺伝子改変体またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライス改変体に
よってコードされるポリペプチドをいい、これは化学的に改変されている。

【００４０】 用語「成熟ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド」は、リーダー配列を欠失したＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドをいう。成熟ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドはまた、
他の改変（例えば、アミノ末端（リーダー配列を有するかまたは有さない）およ
び／またはカルボキシ末端のタンパク質分解性プロセシング、より大きな前駆体
からのより小さなポリペプチドの切断、Ｎ連結および／またはＯ連結グリコシル
化など）を含み得る。

【００４１】 用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒ融合ポリペプチド」は、本明細書中で定義されるよう な、 配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示
されるポリペプチド、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメント、ＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドオルソログ、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体、または
ＩＬ−１ｒａ−Ｒ誘導体のアミノ末端またはカルボキシ末端での、１つ以上のア
ミノ酸の融合（例えば、異種タンパク質またはペプチド）をいう。用語「ＩＬ−
１ｒａ−Ｒ融合ポリペプチド」はまた、本明細書中で定義されるようなＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド対立遺伝子改変体またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドス
プライス改変体によってコードされるポリペプチドのアミノ末端またはカルボキ
シル末端での、１つ以上のアミノ酸の融合をいう。

【００４２】 用語「生物学的に活性なＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド」とは、配列番号２、
配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかのアミノ酸配列を含む
ポリペプチドの、少なくとも１つの活性特徴を有するＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドをいう。さらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、免疫原としての活性を
有し得る；すなわち、このＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、抗体が惹起され得
る少なくとも１つのエピトープを含む。

【００４３】 用語「単離されたポリペプチド」とは、（１）供給源細胞から単離される場合
に、天然で一緒に見出されるポリペプチド、脂質、炭水化物、または他の物質の
少なくとも約５０％から分離された本発明のポリペプチド、（２）「単離された
ポリペプチド」が天然で連結するポリペプチドの全てまたは一部に（共有結合的
または非共有結合的相互作用によって）連結しない、本発明のポリペプチド、（
３）天然には連結しないポリペプチドに作動可能に（共有結合的または非共有結
合的相互作用によって）連結する、本発明のポリペプチド、または（４）天然に
は存在しない本発明のポリペプチドをいう。好ましくは、この単離されたポリペ
プチドは、任意の他の混入ポリペプチドまたは天然の環境において見出される他
の混入物（これは、その治療的使用、診断的使用、予防的使用、または研究的使
用に干渉する）を実質的に含まない。

【００４４】 用語「同一性」とは、当該分野で公知のように、配列の比較によって決定され
る、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関係をい
う。当該分野において、「同一性」はまた、場合に応じて、２つ以上のヌクレオ
チドまたは２つ以上のアミノ酸配列文字列の間の一致によって決定されるように
、核酸分子の間またはポリペプチドの間の配列関連性の程度を意味する。「同一
性」は、２つ以上の配列のうち小さなものと、特定の数理的モデルまたはコンピ
ュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって焦点をあてられたギ
ャップ整列（存在する場合）との間の一致の同一パーセントを評価する。

【００４５】 用語「類似性」は、概念に関するが、「同一性」とは対照的に、「類似性」は
、同一的一致および保存的置換の一致の両方を含む関連性の基準をいう。２つの
ポリペプチド配列が、例えば１０／２０個同一のアミノ酸を有し、そして残りが
全て非保存的置換である場合、同一性パーセントおよび類似性は、どちらも５０
％である。同じ例において、保存的置換であるさらに５つの位置が存在する場合
、同一性パーセントは５０％のままであるが、類似性パーセントは７５％（１５
／２０）である。したがって、保存的置換が存在する場合、２つのポリペプチド
間の類似性パーセントは、これらの２つのポリペプチド間の同一性パーセントよ
りも高い。

【００４６】 用語「天然に存在する」または「ネイティブの」は、核酸分子、ポリペプチド
、宿主細胞などのような生物学的材料と関連して使用される場合、天然において
見出され、そしてヒトによって操作されていない材料をいう。同様に、「天然に
存在しない」または「ネイティブではない」は、本明細書中で使用される場合、
天然で見出されないか、またはヒトによって構造的に改変もしくは合成された材
料をいう。

【００４７】 用語「有効量」および「治療有効量」は、各々、本明細書中に示されるＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドの１つ以上の生物学的活性の観察可能なレベルを支持す
るために使用されるＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドまたはＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸
分子の量をいう。

【００４８】 用語「薬学的に受容可能なキャリア」または「生理学的に受容可能なキャリア
」は、本明細書中で使用される場合、薬学的組成物としてのＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチド、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ選択的結合因
子の送達の達成または増強に適切な１つ以上の処方材料をいう。

【００４９】 用語「抗原」とは、選択的結合因子（例えば、抗体）により結合され得、そし
てさらに動物において使用されて、その抗原のエピトープに結合し得る抗体を産
生じ得る分子または分子の一部をいう。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得
る。

【００５０】 用語「選択的結合因子」とは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに特異性を有す
る分子（単数または複数）をいう。本明細書中で使用される場合、用語「特異的
」および「特異性」とは、選択的結合因子が、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドに結合し、かつ非ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに結合しない能力をいう
。しかし、選択的結合因子がまた、配列番号２、配列番号４、配列番号６、また
は配列番号３６のいずれかに記載されるようなポリペプチドのオルソログ（すな
わち、その種間変形（例えば、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドおよびラッ
トＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド））に結合し得ることが、理解される。

【００５１】 用語「形質導入」を用いて、通常はファージによる１つの細菌から別の細菌へ
の遺伝子の伝達をいう。「形質導入」はまた、レトロウイルスによる真核生物細
胞配列の獲得および伝達をいう。

【００５２】 用語「トランスフェクション」は、細胞による異種または外因性ＤＮＡの取り
込みをいうために使用され、そして細胞は、外因性ＤＮＡが細胞膜内に導入され
た場合には「トランスフェクトされ」ている。多数のトランスフェクション技術 が 、当該分野で周知であり、そして本明細書中に開示される。例えば、Ｇｒａｈ
ａｍら，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，１９
８９）；Ｄａｖｉｓら，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８６）；ａｎｄ Ｃｈｕら，１９
８１，Ｇｅｎｅ １３：１９７を参照のこと。このような技術を使用して、１つ
以上の外因性ＤＮＡ部分を適切な宿主細胞に導入し得る。

【００５３】 本明細書中で使用される場合、用語「形質転換」とは、細胞の遺伝的特徴にお
ける変化をいい、そして細胞は、新しいＤＮＡを含有するように改変された場合
に形質転換されている。例えば、細胞は、それがそのネイティブな状態から遺伝
的に改変される場合に形質転換される。トランスフェクションまたは形質導入に
続いて、ＤＮＡの形質転換は、物理的に細胞の染色体に組み込むことにより細胞
のＤＮＡと組換わり得るか、複製されることなしにエピソームエレメントとして
一時的に維持され得るか、またはプラスミドとして独立的に複製され得る。ＤＮ
Ａが細胞分裂と共に複製される場合に、細胞は、安定に形質転換されたとみなさ
れる。

【００５４】 （核酸分子および／またはポリペプチドの関連性） 関連した核酸分子が、配列番号１、配列番号３、配列番号５または配列番号３
５のいずれかの核酸分子の対立遺伝子改変体またはスプライス改変体を包含する
こと、および上記のヌクレオチド配列のいずれかに相補的である配列を包含する
ことが理解される。関連した核酸分子はまた、配列番号２、配列番号４、配列番
号６または配列番号３６のいずれかにおけるポリペプチドと比較して１以上のア
ミノ酸残基の置換、改変、付加および／または欠失を含むかまたは本質的にこれ
からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を包含する。このような関
連したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、例えば、１以上のＮ結合型もしくはＯ
結合型のグリコシル化部位の付加および／もしくは欠失、または１以上のシステ
イン残基の付加および／もしくは欠失を含み得る。

【００５５】 関連した核酸分子はまた、配列番号２、配列番号４、配列番号６または配列番
号３６のいずれかのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの少なくとも約２５個連続し
たアミノ酸、または少なくとも約５０個のアミノ酸、または少なくとも約７５個
のアミノ酸、または少なくとも約１００個のアミノ酸、または少なくとも約１２
５個のアミノ酸、または１２５個より多くのアミノ酸残基のポリペプチドをコー
ドする、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子のフラグメントを包含する。

【００５６】 さらに、関連したＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子はまた、本明細書中で定義したと
おりの中程度または高度にストリンジェントな条件下で、配列番号１、配列番号
３、配列番号５もしくは配列番号３５のいずれかのＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子ま
たはポリペプチドをコードする分子の十分に相補的な配列とハイブリダイズする
ヌクレオチド配列を含む分子を包含し、このポリペプチドは、配列番号２、配列
番号４、配列番号６もしくは配列番号３６、または本明細書中に定義したとおり
の核酸フラグメント、または本明細書中に定義したとおりのポリペプチドをコー
ドする核酸フラグメントのいずれかに示されるアミノ酸配列を含む。ハイブリダ
イゼーションプローブは、本明細書中に提供されるＩＬ−１ｒａ−Ｒ配列を用い
てｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリーまたは合成ＤＮＡライブラリーを関連し
た配列についてスクリーニングして調製され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドのＤＮＡ配列および／またはアミノ酸配列のうちの、既知配列に対して顕著な
同一性を示す領域は、本明細書中に記載されるとおりの配列アラインメントアル
ゴリズムを用いて容易に決定され、そしてこれらの領域を用いて、スクリーニン
グのためのプローブを設計し得る。

【００５７】 用語「高度にストリンジェントな条件」とは、配列が非常に相補的であるＤＮ
Ａ鎖のハイブリダイゼーションを許容し、かつ顕著に不一致のＤＮＡのハイブリ
ダイゼーションを排除するように設計された条件をいう。ハイブリダイゼーショ
ンのストリンジェンシーは、温度、イオン強度および変性剤（例えば、ホルムア
ミド）の濃度によって主に決定される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄につ
いての「高度にストリンジェントな条件」の例は、６５〜６８℃での０．０１５
Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウムまたは４２℃での０．０
１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウムおよび５０％ホルム
アミドである。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
（第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１
９８９）；Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｓ
ａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ第４章（ＩＲＬ Ｐｒ
ｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を参照のこと。

【００５８】 よりストリンジェントな条件（例えば、より高い温度、より低いイオン強度、
より高いホルムアミドまたは他の変性剤）もまた用いられ得るが、ハイブリダイ
ゼーションの速度が影響される。他の薬剤は、非特異的および／またはバックグ
ラウンドのハイブリダイゼーションを減少させる目的のために、ハイブリダイゼ
ーションおよび洗浄の緩衝液中に含まれ得る。例は、０．１％ウシ血清アルブミ
ン、０．１％ポリビニルピロリドン、０．１％ピロリン酸ナトリウム、０．１％
ドデシル硫酸ナトリウム、ＮａＤｏｄＳＯ_４、（ＳＤＳ）、ｆｉｃｏｌｌ、デン
ハルト溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（または別の非相補的ＤＮＡ）および硫 酸デキストラン であるが、他の適切な薬剤もまた用いられ得る。これらの添加剤
の濃度および種類は、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに実質
的に影響を与えることなく変更され得る。ハイブリダイゼーション実験は通常、
ｐＨ６．８〜７．４で実施される；しかし、代表的なイオン強度の条件では、ハ
イブリダイゼーションの速度は、ｐＨからほぼ独立する。Ａｎｄｅｒｓｏｎら，
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｓａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃ
ａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ第４章（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を参照
のこと。

【００５９】 ＤＮＡ二重鎖の安定性に影響を与える因子としては、塩基組成、長さおよび塩
基対の不一致程度が挙げられる。ハイブリダイゼーション条件は、これらの変動
要因を適応させ、そして異なる配列関連性のＤＮＡがハイブリッドを形成するの
を可能にするために当業者によって調整され得る。完全に一致したＤＮＡ二重鎖
の融解温度は、以下の方程式によって評価され得る： Ｔ_ｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ［Ｎａ＋］）＋０．４１（Ｇ＋Ｃ％ ）−６００／Ｎ−０．７２（％ホルムアミド） ここで、Ｎは、形成される二重鎖の長さであり、［Ｎａ＋］は、ハイブリダイゼ
ーション溶液または洗浄溶液中でのナトリウムイオンのモル濃度であり、Ｇ＋Ｃ ％ は、ハイブリッド中での（グアニン＋シトシン）塩基の百分率である。不完全
に一致したハイブリッドについては、融解温度は、１％の不一致毎に約１℃下げ
られる。

【００６０】 用語「中程度にストリンジェントな条件」とは、「高度にストリンジェントな
条件」下で生じ得るよりも高い程度の塩基対不一致を有するＤＮＡ二重鎖が形成
され得る条件をいう。代表的な「中程度にストリンジェントな条件」の例は、５
０〜６５℃での０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウ
ムまたは３７〜５０℃での０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン
酸ナトリウムおよび２０％ホルムアミドである。例示として、０．０１５Ｍナト
リウムイオン中での５０℃という「中程度にストリンジェントな条件」は、約２
１％の不一致を可能にする。

【００６１】 「高度にストリンジェントな条件」と「中程度にストリンジェントな条件」と
の間に絶対的な区別が存在しないことが当業者によって認識される。例えば、０
．０１５Ｍナトリウムイオン（ホルムアミドなし）では、完全に一致した長さの
ＤＮＡの融解温度は、約７１℃である。６５℃で（同じイオン強度で）の洗浄を
用いると、約６％の不一致が可能になる。より関連性の遠い配列を捕獲するため
に、当業者は、単純に、温度を低くし得るかまたはイオン強度を高くし得る。

【００６２】 約２０ｎｔまでのオリゴヌクレオチドプローブについての１Ｍ ＮａＣｌ^＊中
での融解温度の良好な評価は、以下によって与えられる： Ｔｍ＝Ａ−Ｔ塩基対あたり２℃ ＋ Ｇ−Ｃ塩基対あたり４℃^＊ ６×塩クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのナトリウムイオン濃度は、１Ｍで
ある。Ｓｕｇｇｓら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｕｓｉｎ
ｇ Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｇｅｎｅｓ ６８３（ＢｒｏｗｎおよびＦｏｘ編，１９
８１）を参照のこと。

【００６３】 オリゴヌクレオチドについての高度ストリンジェンシー洗浄条件は通常、６×
ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中でのそのオリゴヌクレオチドのＴｍよりも０℃〜５
℃低い温度においてである。

【００６４】 別の実施形態では、関連した核酸分子は、配列番号１、配列番号３、配列番号
５もしくは配列番号３５のいずれかに示されるとおりのヌクレオチド配列に対し
て少なくとも約７０パーセント同一であるヌクレオチド配列を含むかもしくはこ
れからなるか、または配列番号２、配列番号４、配列番号６もしくは配列番号３
６のいずれかに示すとおりのポリペプチドに対して少なくとも約７０パーセント
同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むかもしくは本質的
にこれからなる。好ましい実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号１、配
列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれかに示されるとおりのヌ
クレオチド配列に対して約７５パーセント、もしくは約８０パーセント、もしく
は約８５パーセント、もしくは約９０パーセント、もしくは約９５、９６、９７
、９８、もしくは９９パーセント同一であるか、またはヌクレオチド配列は、配
列番号２、配列番号４、配列番号６もしくは配列番号３６のいずれかに示される
とおりのポリペプチド配列に対して約７５パーセント、もしくは約８０パーセン
ト、もしくは約８５パーセント、もしくは約９０パーセント、もしくは約９５、
９６、９７、９８、もしくは９９パーセント同一であるポリペプチドをコードす
る。関連した核酸分子は、配列番号２、配列番号４、配列番号６または配列番号
３６のいずれかに示されるポリペプチドの少なくとも１つの活性を保有するポリ
ペプチドをコードする。

【００６５】 核酸配列における相違は、配列番号２、配列番号４、配列番号６または配列番
号３６のいずれかのアミノ酸配列と比較して、アミノ酸配列の保存的改変および
／または非保存的改変をもたらし得る。

【００６６】 配列番号２、配列番号４、配列番号６または配列番号３６のいずれかのアミノ
酸配列に対する保存的改変（およびコードするヌクレオチドに対する、対応する
改変）は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能的特徴および化学的特徴と類似
の機能的特徴および化学的特徴を有するポリペプチドを生じる。対照的に、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能的特徴および／または化学的特徴における実質
的な改変は、以下を維持することに対するその影響が顕著に異なる、配列番号２
、配列番号４、配列番号６または配列番号３６のいずれかのアミノ酸配列におけ
る置換を選択することによって達成され得る：（ａ）例えば、シートコンホメー ション もしくはヘリックスコンホメーションのような、置換領域における分子骨
格の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の
かさ。

【００６７】 例えば、「保存的アミノ酸置換」は、その位置でのアミノ酸残基の極性にも電
荷にもほとんど影響がないかまたは全く影響がないような、非ネイティブ残基に
よるネイティブなアミノ酸残基の置換を含み得る。さらに、ポリペプチド中の任
意のネイティブな残基はまた、「アラニンスキャニング変異誘発」について以前
に記載されたように、アラニンによって置換され得る。

【００６８】 保存的アミノ酸置換はまた、生物学的系における合成によるよりむしろ、化学
的なペプチド合成によって代表的に組み込まれる、天然には存在しないアミノ酸
残基を含む。これらとしては、ペプチド模倣物、およびアミノ酸部分の他の逆転
形態または反転形態が挙げられる。

【００６９】 天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて、複数のクラスに分割され
得る： １）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ； ２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ； ３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ； ４）塩基性：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ； ５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および ６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【００７０】 例えば、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーの、別のク
ラス由来のメンバーに対する交換を包含し得る。このような置換された残基は、
非ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相同なヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドの領域またはこの分子の非相同領域に導入され得る。

【００７１】 このような変化を行う際に、アミノ酸のヒドロパシー指数が考慮され得る。各
アミノ酸は、その疎水性特性および電荷特性に基づいて、ヒドロパシー指数を割
り当てられている。ヒドロパシー指数は、以下である：イソロイシン（＋４．５
）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８
）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（
＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．
８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．
６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３
．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−
３．９）；およびアルギニン（−４．５）。

【００７２】 タンパク質に対する相互作用的な生物学的機能を確認する際の、ヒドロパシー
アミノ酸指数の重要性は、当該分野において一般的に理解されている（Ｋｙｔｅ
ら、１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−３１）。特定のアミノ
酸が、類似のヒドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸に代えて置換 され得、そして依然として類似の生物学的活性を維持し得ることが、公知である
。ヒドロパシー指数に基づいて変化を起こす際に、ヒドロパシー指数が±２以内
であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内であるものが特に好ましく、そして
±０．５以内であるものが、なおより特に好ましい。

【００７３】 類似のアミノ酸の置換が親水性に基づいて効果的になされ得る（特に、これに
よって作製された生物学的機能的に等価なタンパク質またはペプチドが、この場
合においてと同様に、免疫学的実施形態における使用に関して考慮される場合）
こともまた、当該分野において理解されている。タンパク質の最も大きな局所的
平均親水性は、その隣接するアミノ酸の親水性によって支配される場合に、その
免疫原性および抗原性、すなわち、そのタンパク質の生物学的特性に相関する。

【００７４】 以下の親水性の値が、これらのアミノ酸残基に割り当てられた：アルギニン（
＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミ
ン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グル
タミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−
０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（
−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．
８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（
−２．５）；およびトリプトファン（−３．４）。類似の親水性の値に基づいて
変化を行う際に、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±ｌ以
内であるものが特に好ましく、そして±０．５以内であるものが、なおより特に
好ましい。一次アミノ酸配列から、エピトープをまた、親水性に基づいて同定し
得る。これらの領域はまた、「エピトープコア領域」と呼ばれる。

【００７５】 所望のアミノ酸置換（保存的であれ非保存的であれ）は、当業者によって、こ
のような置換が所望される時点で決定され得る。例えば、アミノ酸置換を使用し
て、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの重要な残基を同定し得るか、または本明細
書中に記載されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの親和性を増加もしくは減少さ
せ得る。例示的なアミノ酸置換は、表Ｉに記載される。

【００７６】

【表１】 当業者は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいず
れかに記載のポリペプチドの適切な改変体を、周知の技術を使用して、決定し得
る。生物学的活性を破壊することなく変化され得る分子の適切な領域を同定する
ために、当業者は、活性のために重要であるとは考えられない領域を標的化し得
る。例えば、同じ種由来かまたは他の種由来の、類似の活性を有する類似のポリ
ペプチドが既知である場合には、当業者は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのア
ミノ酸配列を、このような類似のポリペプチドと比較し得る。このような比較を
用いて、類似のポリペプチド間で保存される分子の残基および部分を同定し得る
。このような類似のポリペプチドに対して保存されていない、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
分子の領域における変化が、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生物学的活性およ
び／または構造にさほど不利に影響を与えるようではないことが、理解される。
当業者にはまた、比較的保存された領域においてさえ、化学的に類似のアミノ酸
を、活性を維持しながら天然に存在する残基に代わって置換し得ることが公知で
ある（保存的アミノ酸残基置換）。従って、生物学的活性または構造のために重
要であり得る領域でさえ、生物学的活性を破壊することなく、またはポリペプチ
ド構造に不利に影響を与えることなく、保存的アミノ酸置換に供され得る。

【００７７】 さらに、当業者は、活性または構造のために重要である、類似のポリペプチド
における残基を同定する、構造−機能研究を再調査し得る。このような比較の観
点において、類似のポリペプチドにおける活性または構造のために重要なアミノ
酸残基に対応するＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドにおける、アミノ酸残基の重要
性を予測し得る。当業者は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのこのような予測さ
れた重要なアミノ酸残基に代わる化学的に類似のアミノ酸置換を、選択し得る。

【００７８】 当業者はまた、類似のポリペプチドにおける三次元構造およびその構造に関連 する アミノ酸配列を分析し得る。このような情報の観点において、当業者は、Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸残基のアライメントを、その三次元構造
に関して予測し得る。当業者は、そのタンパク質の表面上に存在すると予測され
るアミノ酸残基に対する急激な変化を起こさないように、選択し得る。なぜなら
、このような残基は、他の分子との重要な相互作用に関与し得るからである。さ
らに、当業者は、単一のアミノ酸置換を各アミノ酸残基に含む、試験改変体を生
成し得る。これらの改変体は、当業者に公知の活性アッセイを使用して、スクリ
ーニングされ得る。このような改変体は、適切な改変体に関する情報を集めるた
めに使用され得る。例えば、特定のアミノ酸残基に対する変化が、破壊された活 性 、望ましくなく減少した活性、または適切でない活性を生じたことを発見した
場合には、このような変化を有する改変体は、回避される。換言すれば、このよ
うな慣用的な実験から集めた情報に基づいて、当業者は、さらなる置換が、単独
でかまたは他の変異と組み合わせてかのいずれかで回避されるべきであるアミノ
酸を、容易に決定し得る。

【００７９】 多数の科学刊行物が、二次構造の推定に充てられてきた。Ｍｏｕｌｔ，１９９
６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：４２２−２７；Ｃｈｏｕ
ら、１９７４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３：２２２−４５；Ｃｈｏｕら、
１９７４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １１３：２１１−２２；Ｃｈｏｕら、１
９７８，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．４７：４５−４８；Ｃｈｏｕら、１９７８，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．４７：２５１−２７６；およびＣｈｏｕら、１９７９，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．
２６：３６７−８４を参照のこと。さらに、コンピュータプログラムが、二次構
造の推定を補助するために、現在利用可能である。二次構造を推定する１つの方
法は、相同性モデリングに基づく。例えば、３０％より大きな配列同一性または
４０％より大きな類似性を有する、２つのポリペプチドまたはタンパク質は、し
ばしば、類似の構造トポロジーを有する。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ
）の近年の成長は、二次構造（ポリペプチドまたはタンパク質の構造における可
能な折り畳みの数を含む）の増強された予測性を提供してきた。Ｈｏｌｍら、１
９９９，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２７：２４４−４７を参照のこ
と。所定のポリペプチドまたはタンパク質において制限された数の折り畳みが存
在すること、および一旦、臨界数の構造が解明されると、構造推定は劇的により
正確となることが、示唆されてきた（Ｂｒｅｎｎｅｒら、１９９７，Ｃｕｒｒ．
Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．７：３６９−７６）。

【００８０】 二次構造を推定するさらなる方法としては、「スレッディング（ｔｈｒｅａｄ
ｉｎｇ）」（Ｊｏｎｅｓ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉ
ｏｌ．７：３７７−８７；Ｓｉｐｐｌら、１９９６，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ４：
１５−１９）、「プロフィール分析」（Ｂｏｗｉｅら、１９９１，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，２５３：１６４−７０；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら、１９９０，Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：１４６−５９；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら、１９８７，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：４３５５−５８）、およ
び「進化学的連鎖」（Ｈｏｌｍら、前出、およびＢｒｅｎｎｅｒら、前出を参照
のこと）が挙げられる。

【００８１】 好ましいＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体としては、グリコシル化部位の
数および／または型が、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号
３６のいずれかに記載のアミノ酸配列と比較して変化している、グリコシル化改
変体が挙げられる。１つの実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改
変体は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
に記載のアミノ酸配列より多いかまたはより少ない数のＮ結合型グリコシル化部
位を含む。Ｎ結合型グリコシル化部位は、配列Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ
−Ｘ−Ｔｈｒによって特徴付けられ、ここで、Ｘと印されるアミノ酸残基は、プ
ロリン以外の任意のアミノ酸残基であり得る。この配列を作製するためのアミノ
酸残基の置換は、Ｎ結合型糖鎖の付加のための潜在的な新たな部位を提供する。
あるいは、この配列を排除する置換は、存在するＮ結合型糖鎖を除去する。１つ
以上のＮ連結グリコシル化部位（代表的に、天然に存在するグリコシル化部位）
が排除され、そして１つ以上の新たなＮ結合部位が作製される、Ｎ結合型糖鎖の
再配列もまた、提供される。さらなる好ましいＩＬ−１ｒａ−Ｒ改変体としては
、１つ以上のシステイン残基が、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または
配列番号３６のいずれかに記載のアミノ酸配列と比較して欠失しているか、また
は別のアミノ酸（例えば、セリン）で置換されている、システイン改変体が挙げ
られる。システイン改変体は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが、例えば不溶性
の封入体の単離の後に、生物学的に活性な立体構造へとリフォールディングされ
なければならない場合に、有用である。システイン改変体は、一般に、ネイティ
ブタンパク質より少ないシステイン残基を有し、そして代表的には同数のシステ
イン残基を有し、対合していないシステインから生じる相互作用を最小にする。

【００８２】 別の実施形態において、関連する核酸分子は、少なくとも１つのアミノ酸挿入
を有しかつポリペプチドが配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番
号３６のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有する、配列番号２、配列番号
４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに記載のポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列を含むかもしくはこの配列からなるか、あるいは少なくと
も１つのアミノ酸欠失を有しかつポリペプチドが配列番号２、配列番号４、配列
番号６、または配列番号３６のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有する、
配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに記載の
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むかもしくはこの配列からなる
。関連する核酸分子はまた、ポリペプチドがカルボキシル末端および／またはア
ミノ末端の短縮を有しかつさらにこのポリペプチドが、配列番号２、配列番号４
、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有
する、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに
記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を、含むかまたはこの配列か
らなる。関連する核酸分子はまた、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失
、カルボキシル末端短縮、およびアミノ末端短縮からなる群より選択される少な
くとも１つの改変を含み、そしてここで、ポリペプチドが配列番号２、配列番号
４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに記載のポリペプチドの活性を
有する、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を、含むかまたはこの配列
からなる。

【００８３】 さらに、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれ
かのアミノ酸配列を含むポリペプチドあるいは他のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ ド は、同種ポリペプチドに融合してホモダイマーを形成し得るか、あるいは異種
ポリペプチドに融合してヘテロダイマーを形成し得る。異種のペプチドおよびポ
リペプチドとしては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：ＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒ融合ポリペプチドの検出および／または単離を可能にするエピトープ；膜
貫通レセプタータンパク質またはその部分（例えば、細胞外ドメインまたは膜貫
通ドメインおよび細胞内ドメイン）；膜貫通レセプタータンパク質に結合する、
リガンドまたはその部分；触媒的に活性である、酵素またはその部分；オリゴマ
ー化を促進するポリペプチドまたはペプチド（例えば、ロイシンジッパードメイ
ン）；安定性を増加させるポリペプチドまたはペプチド（例えば、免疫グロブリ
ン定常領域）；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号
３６のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドあるいは別のＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドとは異なる治療活性を有する、ポリペプチド。

【００８４】 融合は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれ
かに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは他のＩＬ１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドの、アミノ末端またはカルボキシル末端のいずれかにおいて、なされ得
る。融合は、リンカーもアダプター分子も用いずに直接であっても、リンカーも
しくはアダプター分子を介してであってもよい。リンカーまたはアダプター分子
は、１つ以上のアミノ酸残基であり得、代表的に、約２０〜約５０アミノ酸残基
である。ＤＮＡ制限エンドヌクレアーゼまたはプロテアーゼに対する切断部位を
有するリンカーまたはアダプター分子がまた、設計されて、融合した部分の分離
を可能にし得る。一旦構築されると、誘合ポリペプチドは、本明細書中に記載の
方法に従って誘導体化され得ることが、理解される。

【００８５】 本発明のさらなる実施形態において、配列番号２、配列番号４、配列番号６、
または配列番号３６のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは他
のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の１つ以上のドメイ
ンに融合する。抗体は、以下の２つの機能的に独立した部分を含む；抗原を結合
する「Ｆａｂ」として公知の可変ドメイン、ならびに相補的活性化および食作用
細胞による攻撃のようなエフェクター機能に関与する、「Ｆｃ」として公知の定
常ドメイン。Ｆｃは、長い血清半減期を有し、一方でＦａｂは、短寿命である。
Ｃａｐｏｎら、１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５２５−３１。治療タンパク
質と一緒に構築される場合には、Ｆｃドメインは、より長い半減期を提供し得る
か、またはＦｃレセプター結合、プロテインＡ結合、補体結合、および恐らく、
胎盤移入のような機能を組み込み得る。同書。表ＩＩは、当該分野において公知
の特定のＦｃ融合物の使用を要約する。

【００８６】

【表２】 一例において、ヒトＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域は、
当業者に公知の方法を使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ末端ま
たはカルボキシル末端のいずれかにおいて、融合し得る。別の例において、ヒト
ＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドフラグメント（例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの推定細胞外部
分）のアミノ末端またはカルボキシル末端のいずれかにおいて、融合し得る。

【００８７】 得られるＩＬ−１ｒａ−Ｒ融合ポリペプチドは、プロテインＡアフィニティー
カラムの使用によって、精製され得る。Ｆｃ領域に融合したペプチドおよびタン
パク質は、融合していない対応物より実質的に長いインビボでの半減期を示すこ
とが見出された。また、Ｆｃ領域への融合は、融合ポリペプチドの二量化／多量
体化を可能にする。Ｆｃ領域は、天然に存在するＦｃ領域であり得るか、または
治療品質、循環時間、もしくは減少した凝集のような特定の品質を改善するよう
変更され得る。

【００８８】 関連する核酸分子およびポリペプチドの同一性および類似性は、公知の方法に
よって容易に計算され得る。このような方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ
ａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａ．Ｍ．Ｌｅｓｋ編、Ｏｘｆｏｒ
ｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ １９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎ
ｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｄ．
Ｗ．Ｓｍｉｔｈ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９３）；Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ（Ｐａｒｔ １，
Ａ．Ｍ．ＧｒｉｆｆｉｎおよびＨ．Ｇ．Ｇｒｉｆｆｉｎ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒ
ｅｓｓ １９９４）；Ｇ．ｖｏｎ Ｈｅｉｎｌｅ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ １９８７）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ（
Ｍ．ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＪ．Ｄｅｖｅｒｅｕｘ編、Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ
Ｐｒｅｓｓ １９９１）；ならびにＣａｒｉｌｌｏら、１９８８，ＳＩＡＭ Ｊ
．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３に記載されるものが挙げられる
が、これらに限定されない。

【００８９】 同一性および／または類似性を決定するための好ましい方法は、試験される配
列間での最大の適合を与えるために、設計される。同一性および類似性を決定す
るための方法は、公共に利用可能なコンピュータプログラムにおいて記載されて
いる。２つの配列間の同一性および類似性を決定するための、好ましいコンピュ
ータプログラム方法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ（ＧＡＰ（Ｄｅｖｅ
ｒｅｕｘら、１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：３８７；
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏ
ｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴ
Ｎ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．２１５：４０３−１０）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｂ
ＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の供給源（
Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ（ＮＣＢ ＮＬＭ ＮＩＨ，Ｂ
ｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、前出）から公共に利
用可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた、同一
性を決定するために使用され得る。

【００９０】 ２つのアミノ酸配列を整列させるための特定のアライメントスキームは、これ
ら２つの配列の短い領域のみの適合を生じ得、そしてこの小さな整列領域は、２
つの全長配列間に有意な関連がない場合でさえも、非常に高い配列同一性を有し
得る。従って、好ましい実施形態において、選択された整列方法（ＧＡＰプログ
ラム）は、特許請求されるポリペプチドの少なくとも５０の連続するアミノ酸に
わたる整列を生じる。

【００９１】 例えば、コンピュータアルゴリズムＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄ
ｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、配列同一性の百分率が決定されるべき２つのポリ
ペプチドが、それらのそれぞれのアミノ酸の最適な適合（アルゴリズムによって
決定される「適合したスパン」）のために、整列される。ギャップオープニング
ペナルティー（ｇａｐ ｏｐｅｎｉｎｇ ｐｅｎａｌｔｙ）（これは、平均対角
の３倍として計算される：「平均対角」とは、使用される比較行列（ｃｏｍｐａ
ｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ）の対角の平均である；「対角」とは、特定の比較行
列によって各完全なアミノ酸適合に対して割り当てられたスコアまたは数である
）およびギャップエクステンションペナルティー（ｇａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ
ｐｅｎａｌｔｙ）（これは通常、キャップオープニングペナルティーの０．１
倍である）、ならびにＰＡＭ ２５０またはＢＬＯＳＵＭ ６２のような比較行
列が、このアルゴリズムと組み合わせて使用される。標準的な比較行列もまた、
このアルゴリズムによって使用される（Ｄａｙｈｏｆｆら、５ Ａｔｌａｓ ｏ
ｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（補遺３ １９７８）（ＰＡＭ２５０比較行列）；Ｈｅｎｉｋｏｆｆら、１９９２，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１０９１５−１９（ＢＬＯ
ＳＵＭ ６２比較行列）を参照のこと）。

【００９２】 ポリペプチド配列比較のための好ましいパラメータは、以下を含む： Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０
，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−５３； Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ ６２（Ｈｅｎｉｋｏｆ
ｆら、前出）； Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ：１２ Ｇａｐ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｅｎａｌｔｙ：４ Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｏｆ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ：０ このＧＡＰプログラムは、上記パラメータを用いて有用である。上記パラメータ
は、ＧＡＰアルゴリズムを用いるポリペプチド比較（末端ギャップに対してはペ
ナルティーがないこととともに）のためのデフォルトパラメータである。

【００９３】 核酸分子配列比較のための好ましいパラメータは、以下を含む： Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，前出； Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ：ｍａｔｃｈｅｓ＝＋１０，ｍｉｓｍａ
ｔｃｈ＝０ Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ：５０ Ｇａｐ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｅｎａｌｔｙ：３ このＧＡＰプログラムはまた、上記パラメータを用いて有用である。上記パラメ
ータは、核酸分子比較のためのデフォルトパラメータである。

【００９４】 Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅ
ｒｓｉｏｎ ９，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，１９９７に記載されるものを含む、他の
例示的なａｌｇｏｒｉｔｈｍ、ｇａｐ ｏｐｅｎｉｎｇ ｐｅｎａｌｔｙ、ｇａ
ｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｐｅｎａｌｔｙ、ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉ
ｘ、およびｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｏｆ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙが使用され得る。
なされるべき特定の選択は、当業者に明らかであり、そしてなされるべき特定の
比較（例えば、ＤＮＡ対ＤＮＡ、タンパク質対タンパク質、タンパク質対ＤＮＡ
）；ならびにさらに、その比較が所定の対の配列間（この場合には、ＧＡＰまた
はＢｅｓｔＦｉｔが一般的に好ましい）であるか、１つの配列と大きなデータベ
ースの配列との間（この場合には、ＦＡＳＴＡまたはＢＬＡＳＴＡが好ましい）
であるかに依存する。

【００９５】 （核酸分子） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードす
る核酸分子は、種々の様式（化学合成、ｃＤＮＡもしくはゲノムのライブラリー
のスクリーニング、発現ライブラリースクリーニング、および／またはｃＤＮＡ
のＰＣＲ増幅が挙げられるが、これらに限定されない）で容易に得られ得る。

【００９６】 本明細書中において使用される組換えＤＮＡ法は、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ
ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒ
ｅｓｓ，１９８９）および／またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｇｒｅｅｎ Ｐ
ｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．およびＷｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ １９９４
）に記載されている。本発明は、本明細書中に記載され得るような核酸分子、お
よびこのような分子を得るための方法を提供する。

【００９７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子が１つの種
から同定された場合には、この遺伝子の全てまたは一部を、同じ種由来のオーソ
ログまたは関連する遺伝子を同定するためのプローブとして使用し得る。このプ
ローブまたはプライマーを使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを発現する
と考えられる種々の組織供給源由来のｃＤＮＡをスクリーニングし得る。さらに
、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号３５のいずれかに記載
されるような配列を有する核酸分子の部分または全てを使用して、ゲノムライブ
ラリーをスクリーニングし、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコ
ードする遺伝子を同定および単離し得る。代表的に、中程度または高いストリン
ジェンシーの条件が、スクリーニングのために使用されて、このスクリーニング
から得られる誤った陽性の数を最小にする。

【００９８】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子もまた、
発現されたタンパク質の特性に基づいて陽性クローンの検出を使用する発現クロ
ーニングによって、同定され得る。代表的に、核酸ライブラリーは、抗体または
他の結合パートナー（例えば、レセプターまたはリガンド）を、宿主細胞表面に
おいて発現および提示されたクローンタンパク質に結合させることによって、ス
クリーニングされる。抗体または結合パートナーは、所望のクローンを発現する
細胞を同定するために、検出可能な標識で改変される。

【００９９】 以下に記載される説明に従って実施される組換え発現技術に従って、これらの
ポリヌクレオチドを産生し得、そしてコードされたポリペプチドを発現し得る。
例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸配列を
適切なベクターに挿入することによって、当業者は、多量の所望のヌクレオチド
配列を容易に生成し得る。次いで、これらの配列を使用して、検出プローブまた
は増幅プライマーを生成し得る。あるいは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのア
ミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを、発現ベクターに挿入し得る。発現
ベクターを適切な宿主に導入することによって、コードされたＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドが、多量に産生され得る。

【０１００】 適切な核酸配列を得るための別の方法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で
ある。この方法において、ｃＤＮＡは、酵素逆転写酵素を使用して、ｐｏｌｙ（
Ａ）＋ＲＮＡまたは全ＲＮＡから調製される。次いで、２つのプライマー（代表
的には、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡの
２つの別個の領域に対して相補的である）が、Ｔａｑポリメラーゼのようなポリ
メラーゼとともにこのｃＤＮＡに付加され、そしてこのポリメラーゼが、このｃ
ＤＮＡのこれら２つのプライマー間の領域を増幅する。

【０１０１】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子を調製す
る別の手段は、Ｅｎｇｅｌｓら、１９８９，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．
Ｅｄ．２８：７１６−３４によって記載されるもののような、当業者に周知の方
法を使用する、化学合成である。これらの方法としては、とりわけ、核酸合成の
ためのリン酸トリエステル、ホスホルアミダイト、およびＨ−ホスホネート方法
が挙げられる。このような化学合成のために好ましい方法は、標準的なホスホル
アミダイト化学を使用する、ポリマーにより支持される合成である。代表的に、
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードするＤＮＡは、数百ヌク
レオチド長である。約１００ヌクレオチドより長い核酸は、これらの方法を使用
して、いくつかのフラグメントとして合成され得る。次いで、これらのフラグメ
ントが一緒に連結されて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の全長ヌクレオチド配列を形
成し得る。通常、このポリペプチドのアミノ末端をコードするＤＮＡフラグメン
トは、ＡＴＧを有し、これは、メチオニン残基をコードする。このメチオニンは
、宿主細胞において産生されたポリペプチドがその細胞から分泌されるよう設計
されるか否かに依存して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの成熟形態で存在して
もそうでなくてもよい。当業者に公知の他の方法が、同様に使用され得る。

【０１０２】 特定の実施形態において、核酸改変体は、所定の宿主細胞におけるＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドの最適な発現のために変更されたコドンを含む。特定のコド
ン変更は、発現のために選択される宿主細胞およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドに依存する。このような「コドン最適化」は、種々の方法によって（例えば、
所定の宿主細胞において高度に発現される遺伝子における使用に好ましいコドン
を選択することによって）実施され得る。高度に発現された細菌遺伝子のコドン
優先性のための「Ｅｃｏ＿ｈｉｇｈ．Ｃｏｄ」のようなコドン度数表を組み込む
コンピュータアルゴリズムが使用され得、そしてＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ
Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０（Ｇｅｎｅｔｉ
ｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって提供さ
れる。他の有用なコドン度数表としては、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ＿ｈｉｇｈ．ｃｏ
ｄ」、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ＿ｌｏｗ．ｃｏｄ」、「Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ＿ｈｉ
ｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｈｕｍａｎ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｍａｉｚｅ＿ｈｉｇｈ
．ｃｏｄ」、および「Ｙｅａｓｔ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ．」が挙げられる。

【０１０３】 いくつかの場合において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド改変体をコードする
核酸分子を調製することが所望であり得る。改変体をコードする核酸分子は、プ
ライマーが所望の点変異を有する部位特異的変異誘発、ＰＣＲ増幅、または他の
適切な方法を使用して生成し得る（変異誘発技術の記載に関しては、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋら、前出、およびＡｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと）。Ｅｎｇｅｌｓ
ら、前出によって記載される方法を使用する化学合成もまた、このような改変体
を調製するために使用され得る。当業者に公知の他の方法が、同様に使用され得
る。

【０１０４】 （ベクターおよび宿主細胞） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子を、標準
的な連結技術を使用して適切な発現ベクターに挿入する。ベクターは、代表的に
、使用される特定の宿主細胞において機能的であるように選択される（すなわち
、ベクターは、遺伝子の増幅および／または遺伝子の発現が生じるように、宿主
細胞機構と適合性である）。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアミノ酸配列をコ
ードする核酸分子は、原核生物宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫（バキュロウイル
ス系）宿主細胞および／または真核生物宿主細胞において増幅／発現され得る。
宿主細胞の選択は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが翻訳後修飾（例えば、グリ
コシル化および／またはホスホリル化）されるか否かに一部依存する。そうであ
る場合、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞、または哺乳動物宿主細胞が好ましい。発
現ベクターの総説について、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，ｖｏｌ．１８５（Ｄ．Ｖ．Ｇ
ｏｅｄｄｅｌ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９０）を参照のこ
と。

【０１０５】 代表的に、任意の宿主細胞に使用される発現ベクターは、プラスミド維持のた
めならびに外来性ヌクレオチド配列のクローニングおよび発現のための配列を含
む。このような配列（集合的に、「隣接配列」と呼ばれる）は、特定の実施形態
において、代表的に、以下のヌクレオチド配列の１つ以上を含む：プロモーター
、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナーおよびアクセ
プタースプライス部位を含む完全なイントロン配列、ポリペプチド分泌のための
リーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発
現されるポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、な
らびに選択マーカーエレメント。これらの配列のそれぞれが、以下に議論される
。

【０１０６】 必要に応じて、ベクターは、「タグ」コード配列（すなわち、ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドコード配列の５’末端または３’末端に配置されるオリゴヌクレ
オチド分子）を含み得；オリゴヌクレオチド配列は、ｐｏｌｙＨｉｓ（例えば、
ｈｅｘａＨｉｓ）、または別の「タグ」（例えば、ＦＬＡＧ、ＨＡ（赤血球凝集
素インフルエンザウイルス）またはｍｙｃ（これらには、市販の抗体が存在する ）） をコードする。このタグは、代表的には、ポリペプチドの発現の際にポリペ
プチドに融合され、宿主細胞からの、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのアフィニ
ティー精製のための手段として役立ち得る。アフィニティー精製は、例えば、ア
フィニティーマトリクスとしてタグに対する抗体を使用するカラムクロマトグラ
フィーによって達成され得る。必要に応じて、タグは、続いて、切断のために特
定のペプチダーゼを使用するような種々の手段によって、精製されたＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドから除去され得る。

【０１０７】 隣接配列は、同種（すなわち、宿主細胞と同じ種および／または系統由来）で
あり得るか、異種（すなわち、宿主細胞種または宿主細胞系統以外の種由来）で
あり得るか、ハイブリッド（すなわち、１つより多くの供給源由来の隣接配列の
組み合わせ）であり得るか、または合成であり得るか、あるいは隣接配列は、Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現を調節するために正常に機能するネイティブな
配列であり得る。このように、隣接配列の供給源は、任意の原核生物または真核
生物、任意の脊椎生物または無脊椎生物、あるいは任意の植物であり得、但し、
隣接配列は、宿主細胞の機構において機能的であり、そして宿主細胞の機構によ
って活性化され得る。

【０１０８】 本発明のベクターに有用な隣接配列は、当該分野において周知である任意のい
くつかの方法によって得られ得る。代表的には、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子隣接配
列以外の、本明細書中で有用な隣接配列は、マッピングおよび／または制限エン
ドヌクレアーゼ消化によって以前に同定されており、従って、適切な制限エンド
ヌクレアーゼを使用して、適切な組織供給源から単離され得る。いくつかの場合
において、隣接配列の全長ヌクレオチド配列は公知であり得る。ここで、隣接配
列は、核酸合成またはクローニングのために本明細書中で記載される方法を使用
して合成され得る。

【０１０９】 隣接配列の全てまたは一部のみが公知である場合、ＰＣＲを使用して、そして
／あるいは適切なオリゴヌクレオチドならびに／または同じもしくは別の種由来
の隣接配列フラグメントを用いてゲノムライブラリーをスクリーニングすること
によって、隣接配列は得られ得る。隣接配列が公知でない場合、隣接配列を含む
ＤＮＡのフラグメントは、例えば、コード配列または別の遺伝子を含み得る大き なＤ ＮＡ断片から単離され得る。単離は、適切なＤＮＡフラグメントを生成する
ための制限エンドヌクレアーゼ消化、続くアガロースゲル精製を使用する単離、
Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、
ＣＡ）、または当業者に公知の他の方法によって達成され得る。この目的を達成
するための適切な酵素の選択は、当業者に容易に明かである。

【０１１０】 複製起点は、代表的に、市販から購入された原核生物発現ベクターの一部であ
り、この起点は、宿主細胞においてベクターの増幅に役立つ。特定のコピー数へ の ベクターの増幅は、いくつかの場合において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
の最適な発現に重要であり得る。選択されたベクターが複製起点部位を含まない
場合、公知の配列に基づいて化学的に合成され得、そしてベクターに連結され得
る。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ
ｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）からの複製起点は、大部分のグラム陰性細菌に適切
であり、そして種々の起点（例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、
水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、またはＨＰＶもしくはＢＰＶのようなパピロ
ーマウイルス）は、哺乳動物細胞におけるクローニングベクターのために有用で
ある。一般的に、複製起点の成分は、哺乳動物発現ベクターに必要とされない（
例えば、ＳＶ４０起点は、ただそれが初期プロモーターを含むので、しばしば、
使用される）。

【０１１１】 転写終結配列は、代表的にポリペプチドコード領域の末端の３’側に配置され
、そして転写を終結させるのに役立つ。通常、原核生物細胞における転写終結配
列は、Ｇ−Ｃリッチフラグメント、続いてポリ−Ｔ配列である。この配列はライ
ブラリーから容易にクローン化され得るか、またはベクターの一部として市販で
購入されるが、これはまた、本明細書中上記のような核酸合成のための方法を使
用して容易に合成され得る。

【０１１２】 選択マーカー遺伝子エレメントは、選択培養培地において増殖される宿主細胞
の生存および増殖に必要なタンパク質をコードする。代表的な選択マーカー遺伝
子は、（ａ）原核生物宿主細胞に対して、抗生物質または他の毒素（例えば、ア
ンピシリン、テトラサイクリン、またはカナマイシン）に対する耐性を与えるか
；（ｂ）細胞の栄養要求性の欠損を補うか；あるいは（ｃ）複合培地から入手可
能でない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。好ましい選択マーカ
ーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、およびテトラサイク
リン耐性遺伝子である。ネオマイシン耐性遺伝子もまた、原核生物宿主細胞およ
び真核生物宿主細胞における選択のために使用され得る。

【０１１３】 他の選択遺伝子は、発現される遺伝子を増幅するために使用され得る。増幅は
、増殖に重要なタンパク質の産生により大きく要求される遺伝子が、組換え細胞
の染色体の連続的な生成の内にタンデムに反復されるプロセスである。哺乳動物
細胞に対する適切な選択マーカーの例としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（Ｄ
ＨＦＲ）およびチミジンキナーゼが挙げられる。哺乳動物細胞形質転換体は、選
択圧下に置かれ、ここで、形質転換体のみが、ベクターに存在する選択遺伝子に
よって生存するように独特に適合される。選択圧は、培地中の選択因子の濃度が
連続的に変化し、それによって選択遺伝子とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコ
ードするＤＮＡとの両方の増幅を導く条件下で、形質転換された細胞を培養する
ことによって課される。結果として、増加した量のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドが、増幅されたＤＮＡから合成される。

【０１１４】 リボソーム結合部位は、通常、ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、そしてシャ イン・ダルガルノ 配列（原核性物）またはコザック配列（真核生物）によって特
徴付けられる。このエレメントは、代表的に、発現されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドのプロモーターの３’側およびコード配列の５’側に配置される。シャ イン・ダルガルノ 配列は、可変であるが、代表的には、ポリプリン（すなわち、
高いＡ−Ｇ含有量）である。多くのシャイン・ダルガルノ配列は、同定されてお
り、それぞれが、本明細書中に記載の方法を使用して、原核生物ベクターに使用
して容易に合成され得る。

【０１１５】 リーダー配列、またはシグナル配列は、宿主細胞からＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドを指向させるために使用され得る。代表的には、シグナル配列をコードす
るヌクレオチド配列は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子のコード領域に位置するか、
または直接ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域の５’末端に位置する。多
くのシグナル配列が同定されており、選択された宿主細胞において機能性である 任意の シグナル配列が、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子と組み合わせて使用され得る
。従って、シグナル配列は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子に対して同種（天然）ま
たは異種であり得る。さらに、シグナル配列は、本明細書中に記載される方法を
使用して化学的に合成され得る。大部分において、シグナルペプチドの存在を介 した 宿主細胞からのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの分泌は、分泌されたＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドからのシグナルペプチドの除去を生じる。シグナル配列
は、ベクターの成分であり得るか、またはベクターに挿入されたＩＬ−１ｒａ−
Ｒ核酸分子の一部であり得る。

【０１１６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域に結合されたネイティブなＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル配列をコードするヌクレオチド配列またはＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域に結合された異種シグナル配列をコードする
ヌクレオチド配列のいずれかの使用が本発明の範囲内に含まれる。選択された異
種シグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセスされる（すなわち、シ
グナルペプチダーゼによって切断される）ものであるべきである。ネイティブな
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル配列を認識せず、プロセスしない原核生
物宿主細胞について、シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニ
シリナーゼ、または熱安定エンテロトキシンＩＩリーダーのグループから選択さ
れる原核生物シグナル配列によって置換される。酵母分泌について、ネイティブ
なＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル配列は、酵母インベルターゼ、α因子
、または酸ホスファターゼリーダーによって置換され得る。哺乳動物細胞発現に
おいて、ネイティブなシグナル配列が十分であるが、他の哺乳動物シグナル配列
が適切であり得る。

【０１１７】 グリコシル化が真核生物宿主細胞発現系において望ましいようないくつかの場
合において、グリコシル化または収量を改善するために種々のプレ配列（ｐｒｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ）が操作され得る。例えば、特定のシグナルペプチドのペプチ
ダーゼ切断部位を変更し得るかまたはプロ配列（ｐｒｏ−ｓｅｑｕｅｎｃｅ）（ これはまた、グリコシル化に影響し得る）を加え得る。最後のタンパク質産物は
、１位に（成熟タンパク質の最初のアミノ酸に対して）、発現に付随して１つ以
上のさらなるアミノ酸を有し得、これは、完全に除去されないかもしれない。例
えば、最終のタンパク質産物は、アミノ末端に結合される、ペプチダーゼ切断部
位において見出される１つまたは２つのアミノ酸残基を有し得る。あるいは、い
くつかの酵素切断部位の使用は、酵素が成熟ポリペプチド内のこのような領域を 切断する場合、所望のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの少し短縮した形態を生じ
得る。

【０１１８】 多くの場合において、核酸分子の転写は、ベクター内の１つ以上のイントロン
の存在によって増加する；これは、ポリペプチドが真核生物宿主細胞（特に、哺
乳動物宿主細胞）において産生される場合、特に当てはまる。使用されるイント
ロンは、特に使用される遺伝子が全長ゲノム配列またはそのフラグメントである
場合、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子内に天然に存在し得る。イントロンが遺伝子内に
天然に存在しない（大部分のｃＤＮＡについて）場合、イントロンは、別の供給
源から得られ得る。隣接配列およびＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子に関してイントロン
の位置は、イントロンが効果的に転写されなければならないので、一般的に重要
である。従って、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｃＤＮＡ分子が転写される場合、イントロ
ンの好ましい位置は、転写開始部位の３’側およびポリ−Ａ転写終止配列の５’
側である。好ましくは、イントロンは、コード配列を妨害しないように、ｃＤＮ
Ａの１つの側または他の側（すなわち、５’側または３’側）に配置される。任
意の供給源（ウイルス、原核生物および真核生物（植物または動物）を含む）由
来の任意のイントロンを使用して本発明を実行し得るが、但し、このイントロン
は、挿入される宿主細胞に適合性である。合成イントロンもまた本明細書中に含
まれる。必要に応じて、１つより多くのイントロンがベクター内で使用され得る
。

【０１１９】 本発明の発現ベクターおよびクローニングベクターは、代表的には、宿主生物
によって認識され、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする分子に作動可能
に連結されたプロモーターを含む。プロモーターは、構造遺伝子の転写を制御す
る構造遺伝子（一般的に、約１００〜１０００ｂｐ）の開始コドンに対して上流
（すなわち、５’側）に配置される非転写配列である。プロモーターは、通常、
２つのクラス（誘導プロモーターおよび構成プロモーター）の１つにグループ化
される。誘導プロモーターは、培養条件におけるいくらかの変化（例えば、栄養
の存在または非存在、あるいは温度の変化）に応答してそれらの制御下で、ＤＮ
Ａからの増加したレベルの転写を開始する。他方、構成プロモーターは、連続的
な遺伝子産物の産生を開始する；すなわち、遺伝子発現に対して遺伝子をほとん
ど制御しないかまたは制御しない。多数のプロモーター（種々の潜在的な宿主細
胞によって認識される）が周知である。適切なプロモーターは、供給源のＤＮＡ
からプロモーターを制限酵素消化によって取り出し、そして所望のプロモーター
配列をベクターに挿入することによって、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコー
ドするＤＮＡに作動可能に連結される。ネイティブなＩＬ−１ｒａ−Ｒプロモー
ター配列は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子の増幅および／または発現に指向させる
ために使用され得る。しかし、ネイティブなプロモーターと比較して大きい転写
および発現タンパク質のより高い産生が可能であり、そして使用のために選択さ
れた宿主細胞系と適合性である場合、異種プロモーターが好ましい。

【０１２０】 原核生物宿主との使用に適切なプロモーターとしては、β−ラクタマーゼおよ
びラクトースプロモーター系；アルカリホスファターゼ；トリプトファン（ｔｒ
ｐ）プロモーター系；およびハイブリッドプロモーター（例えば、ｔａｃプロモ
ーター）が挙げられる。他の公知の細菌プロモーターもまた、適切である。これ
らの配列は、公開されており、その結果、当業者は、任意の有用な制限部位を供
給するのに必要とされるリンカーまたはアダプターを使用して、所望のＤＮＡに
それらの配列を連結し得る。

【０１２１】 酵母宿主との使用に適切なプロモーターはまた、当該分野において周知である
。酵母エンハンサーは、酵母プロモーターと共に有利に使用される。哺乳動物宿
主細胞との使用に適切なプロモーターは周知であり、限定しないが、ポリオーマ
ウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ２）
、ウシパピローマウイルス、鳥類肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロ
ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよび最も好ましいシミアンウイルス４０（ＳＶ４
０）のようなウイルスのゲノムから得られるプロモーターが挙げられる。他の適
切な哺乳動物プロモーターとしては、異種哺乳動物プロモーター（例えば、熱シ
ョックプロモーターおよびアクチンプロモーター）が挙げられる。

【０１２２】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子発現を制御する際に関心があり得るさらなるプロモー
ターとしては、限定しないが、以下が挙げられる：ＳＶ４０初期プロモータ領域
（Ｂｅｒｎｏｉｓｔ ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａｔｕｒｅ ２９
０：３０４−１０）；ＣＭＶプロモーター；ラウス肉腫ウイルスの３’側の長い 末端 反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，１９８０
，Ｃｅｌｌ ２２ ：７８７−９７）；ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター
（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４４−４５）；メタロチオネイン遺伝子の調節配
列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９
−４２）；β−ラクタマーゼプロモーターのような原核生物発現ベクター（Ｖｉ
ｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７５：３７２７−３１）；またはｔａｃプロモ
ーター（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０：２１−２５）。組織特異性を示し、そしてト
ランスジェニック動物において利用されている以下の動物転写制御領域もまた関
心がある：膵臓腺房細胞において活性なエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉ
ｆｔ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６３９−４６；Ｏｒｎｉｔｚ
ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ
．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９−４０９（１９８６）；ＭａｃＤｏｎａ
ｌｄ，１９８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５−５１５）；膵臓β細胞に
おいて活性なインシュリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３１５：１１５−２２）；リンパ球において活性な免疫グロブリン遺伝
子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８
：６４７−５８；Ａｄａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１
８：５３３−３８；Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：１４３６−４４）；精巣、乳房、リンパ球、および肥
満細胞において活性なマウス乳腺癌ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ
．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４５：４８５−９５）；肝臓において活性なアルブミ
ン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａ
ｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８−７６）；肝臓において活性なα−フェトプロテ
イン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：１６３９−４８；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９
８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：５３−５８）；肝臓において活性なα１−抗ト
リプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅｓ
ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−７１）；骨髄性細胞において活性なβ−グ
ロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１５：３３８−４０；Ｋｏｌｌｉａｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４６：８９−９４）；脳の稀突起神経膠細胞において活性なミエリン塩基性タ
ンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｃｅｌ
ｌ ４８：７０３−１２）；骨格筋において活性なミオシン軽鎖−２遺伝子制御
領域（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３−８６）；ならびに
視床下部において活性なゴナドトロピン放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏ
ｎ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：１３７２−７８）。

【０１２３】 エンハンサー配列は、より高等な真核生物によって本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写を増加するように、ベクターに挿入され
得る。エンハンサーは、転写を増加させるためにプロモーターに作用する、通常
約１０〜３００ｂｐの長さのＤＮＡのシスに作用するエレメントである。エンハ
ンサーは、相対的な方向非依存性および位置非依存性である。これらは、転写ユ
ニットに対して５’側および３’側に見出された。哺乳動物遺伝子から入手可能
ないくつかのエンハンサー配列が公知である（例えば、グロビン、エラスターゼ
、アルブミン、α−フェトプロテインおよびインシュリン）。しかし、代表的に
は、ウイルス由来のエンハンサーが、使用される。ＳＶ４０エンハンサー、サイ
トメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、お
よびアデノウイルスエンハンサーは、真核生物プロモーターの活性化について例
示的に増強するエレメントである。エンハンサーは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子
に対して５’位または３’位でベクターにスプライシングされ得るが、代表的に
は、プロモーターから５’位側に配置される。

【０１２４】 本発明の発現ベクターは、市販のベクターのような開始ベクターから構築され
得る。このようなベクターは、全ての所望な隣接配列を含んでも良いし、含まな
くても良い。本明細書中に記載される隣接配列の１つ以上がすでにベクター内に
ない場合、これらは、個々に得られ得、ベクターに連結され得る。隣接配列のそ
れぞれを得るために使用される方法は、当業者に周知である。

【０１２５】 本発明を実行するために好ましいベクターは、細菌宿主細胞、昆虫宿主細胞、
および哺乳動物宿主細胞と適合性のベクターである。このようなベクターとして
は、特に、ｐＣＲＩＩ、ｐＣＲ３、およびｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ｐＢＳＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ
Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）、ｐＥＴ１５（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）
、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ
Ｊ）、ｐＥＧＦＰ−Ｎ２（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）、ｐ
ＥＴＬ（ＢｌｕｅＢａｃＩＩ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＤＳＲ−ａｌｐｈａ
（ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９０／１４３６３）ならびにｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌ
（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）が挙げられる。

【０１２６】 さらなる適切なベクターとしては、限定しないが、コスミド、プラスミド、ま
たは改変ウイルスが挙げられるが、これらのベクター系は、選択された宿主細胞
と適合性でなければならないことが理解される。このようなベクターとしては、
限定しないが、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（登録商標）プラスミド誘導体（高コピー
数ＣｏｌＥｌ−ベースのファージミド、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ ＣＡ）、Ｔａｑ増幅ＰＣＲ産物をクロー
ニングするために設計されたＰＣＲクローニングプラスミド（例えば、ＴＯＰＯ ^ＴＭ ＴＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ（登録商標）Ｋｉｔ、ＰＣＲ２．１（登録商標）プ
ラスミド誘導体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ならびに
バキュロウイルス発現系のような哺乳動物ベクター、酵母ベクターまたはウイル
スベクター（ｐＢａｃＰＡＫプラスミド誘導体、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ
Ａｌｔｏ、ＣＡ）のようなプラスミドが挙げられる。

【０１２７】 ベクターが構築され、そしてＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸
分子がベクターの適切な部位に挿入された後に、完全なベクターが増幅発現およ
び／またはポリペプチド発現に適切な宿主細胞に挿入され得る。ＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドに対する発現ベクターの選択された宿主細胞への形質転換は、ト
ランスフェクション、感染、塩化カルシウム、エレクトロポレーション、マイク
ロインジェクション、リポフェクチン、ＤＥＡＥ−デキストラン法、または他の
公知の技術のような方法を含む周知の方法によって達成され得る。選択される方
法は、一部、使用される宿主細胞の種類の機能である。これらの方法および他の
適切な方法は、当業者に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記に記載
される。

【０１２８】 宿主細胞は、原核生物宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核生物宿主
細胞（例えば、酵母細胞、昆虫細胞、または脊椎動物細胞）であり得る。宿主細
胞は、適切な条件下で培養される場合、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを合成し
、これは、続いて、培養培地から（宿主細胞がそのポリペプチドを培地に分泌す
る場合）収集され得るか、直接そのポリペプチドを産生する宿主細胞から収集さ
れる（そのポリペプチドが分泌されない場合）。適切な宿主細胞の選択は、所望
の発現レベル、活性（例えば、グリコシル化またはホスホリル化）に望ましいか
または必要なポリペプチド修飾、および生物学的に活性な分子に折り畳まれる容
易さなどの種々の因子に依存する。

【０１２９】 多くの適切な宿主細胞が当該分野において公知であり、多くが、Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｎ
ａｓｓａｓ，ＶＡから入手可能である。例としては、限定しないが、チャイニー
ズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＨＯ ＤＨＦＲ（−）細胞（Ｕｒｌａｕｂ
ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ．Ａ
．９７：４２１６−２０）、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３または２９３Ｔ細胞
、あるいは３Ｔ３細胞のような哺乳動物細胞が挙げられる。適切な哺乳動物宿主
細胞の選択および形質転換、培養、増幅、スクリーニング、産物生成、および精
製のための方法が当該分野において公知である。他の適切な哺乳動物細胞株は、
サルＣＯＳ−１およびＣＯＳ−７細胞株、およびＣＶ−１細胞株である。さらな
る例示的な哺乳動物宿主細胞としては、霊長動物細胞株およびゲッ歯類動物細胞
株（形質転換細胞株を含む）が挙げられる。正常な二倍体細胞、初代組織のイン
ビトロ培養物から誘導される細胞菌株、ならびに初代外植片もまた適切である。
候補細胞は、選択遺伝子を遺伝子型的に欠き得るか、または優先的に作用する選
択遺伝子を含み得る。他の適切な哺乳動物細胞株としては、限定しないが、マウ
ス神経芽細胞腫Ｎ２Ａ細胞、ＨｅＬａ、マウスＬ−９２９細胞、Ｓｗｉｓｓから
誘導された３Ｔ３株、Ｂａｌｂ−ｃまたはＮＩＨマウス、ＢＨＫまたはＨａｋハ
ムスター細胞株が挙げられる。これらの細胞株のそれぞれは、タンパク質発現の
当業者によって公知であり入手可能である。

【０１３０】 同様に、細菌細胞が、本発明に適切な宿主細胞として有用である。例えば、Ｅ
．ｃｏｌｉ（例えば、ＨＢ１０１、ＤＨ５α、ＤＨ１０、およびＭＣ１０６１）
の種々の菌株は、生物工学の分野において宿主細胞として周知である。Ｂ．ｓｕ
ｂｔｉｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．，他のＢａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．などの種々の菌株がまた本方法に
おいて使用され得る。

【０１３１】 当業者に公知の酵母細胞の多くの菌株はまた、本発明のポリペプチドの発現の
ため宿主細胞として入手可能である。好ましい酵母細胞としては、例えば、Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｉｖｉｓａｅおよびＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏ
ｒｉｓが挙げられる。

【０１３２】 さらに、望ましい場合、昆虫細胞系が、本発明の方法において利用され得る。
このような系は、例えば、Ｋｉｔｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ，１４：８１０−１７；Ｌｕｃｋｌｏｗ，１９９３，Ｃｕｒｒ．
Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：５６４−７２；およびＬｕｃｋｌｏｗ
ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６７：４５６６−７９に記載され
る。好ましい昆虫細胞は、Ｓｆ−９およびＨｉ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であ
る。

【０１３３】 グリコシル化ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを発現するためにトランスジェニ
ック動物もまた使用し得る。例えば、トランスジェニック乳産生動物（例えば、
雌ウシまたはヤギ）を使用し、本発明のグルコシル化ポリペプチドを動物の乳に
得ることができる。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生するために植物もまた
使用し得るが、しかし、一般的に、植物において生じるグリコシル化は、哺乳動
物細胞において産生されるものとは異なり、ヒト治療用途に適切ではないグリコ
シル化産物を生じ得る。

【０１３４】 （ポリペプチド産生） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現ベクターを含む宿主細胞は、当業者に周知
の標準的な培地を使用して培養され得る。この培地は、通常、細胞の増殖および
生存に必要な全ての栄養分を含む。Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を培養するための適切な培
地としては、例えば、Ｌｕｒｉａ Ｂｒｏｔｈ（ＬＢ）および／またはＴｅｒｒ
ｉｆｉｃ Ｂｒｏｔｈ（ＴＢ）が挙げられる。真核生物細胞を培養するための適
切な培地としては、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉ
ｔｕｔｅ ｍｅｄｉｕｍ １６４０（ＲＰＭＩ １６４０）、Ｍｉｎｉｍａｌ
Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）および／またはＤｕｌｂｅｃｃｏ
’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）が挙げられ、
これらの全ては、培養される特定の細胞株に必要な血清および／または増殖因子
を補充され得る。昆虫細胞についての適切な培地は、必要に応じて、イーストレ
ート（ｙｅａｔｏｌａｔｅ）、ラクトアルブミン加水分解産物、および／または
胎仔ウシ血清を補充したグレース培地である。

【０１３５】 代表的に、トランスフェクトされた細胞または形質転換された細胞の選択的な
増殖に有用な構成物質または他の化合物が、培地に補充物質として加えられる。
使用される化合物は、宿主細胞が形質転換されるプラスミドに存在する選択マー
カーエレメントによって検出可能である。例えば、選択マーカーエレメントがカ
ナマイシン耐性である場合、培養倍地に加えられる化合物は、カナマイシンであ
る。選択的増殖のための他の化合物としては、アンピシリン、テトラサイクリン
、およびネオマイシンが挙げられる。

【０１３６】 宿主細胞によって産生されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの量は、当該分野
において公知の標準的な方法を使用して評価され得る。このような方法としては
、限定しないが、ウェスタンブロット分析、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動、非変性ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分離、
免疫沈降、および／またはＤＮＡ結合ゲル移動アッセイのような活性アッセイが
挙げられる。

【０１３７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが宿主細胞から分泌されるように設計される場
合、ポリペプチドの大部分は、細胞培養培地中で見出され得る。しかし、ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドが宿主細胞から分泌されない場合、細胞質および／また
は核（真核宿主細胞について）に、あるいは、細胞質ゾル（グラム陰性細菌宿主
細胞について）に存在する。

【０１３８】 宿主細胞細胞質および／または核（真核生物宿主細胞について）に位置するか
または細胞質ゾル（細菌宿主細胞について）に位置するＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドについて、細胞内物質（グラム陰性細菌についての封入体を含む）は、当
業者に公知の任意の標準的な技術を使用して宿主細胞から抽出され得る。例えば
、宿主細胞は、フレンチプレス、均質化、および／または超音波処理、続く遠心
分離によって、ペリプラズム／細胞質の含有量を放出するように溶解され得る。

【０１３９】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが細胞質ゾル内に封入体を形成した場合、この
封入体は、しばしば、内部および／または外部細胞膜に結合され得、従って、主
に、遠心分離後にペレット材料において見出される。次いで、ペレット材料は、
ｐＨ極限値で処理され得るか、あるいはジチオトレイトールのような還元剤の存
在下アルカリ性のｐＨで、またはトリスカルボキシエチルホスフィンの存在下酸
性のｐＨで、界面活性剤、グアニジン、グアニジン誘導体、尿素、または尿素誘
導体のようなカオトロピック剤で処理して、封入体を放出させ、分断させ、そし
て溶解させ得る。次いで、溶解されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ゲル電
気泳動、免疫沈降などを使用して分析され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
を単離することが望ましい場合、単離は、本明細書中およびＭａｒｓｔｏｎ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９０，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８２：２６４−７５に記載され
る方法のような標準的な方法を使用して達成され得る。

【０１４０】 いくつかの場合、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、単離の際、生物学的に活
性でなくても良い。「再折り畳みする」、つまり、ポリペプチドをその三次構造
に変換し、ジスルフィド連結を生成するための種々の方法を使用して、生物学的
活性を回複し得る。このような方法は、溶解されたポリペプチドをあるｐＨ（通
常７より上）および特定の濃度のカオトロピック剤（ｃｈａｏｔｒｏｐｅ）の存
在に曝露する工程を包含する。カオトロピック剤の選択は、封入体溶解に使用さ
れる選択肢に非常に類似するが、通常、カオトロピック剤は低い濃度で使用され
、溶解に使用されるカオトロピック剤と必ずしも同一ではない。多くの場合、再
折り畳み／酸化溶液はまた、還元剤、または特定の比の還元剤およびその酸化形
態を含んで、特定の酸化還元電位を生成し、タンパク質のシステイン架橋の形成
を生じるジスルフィドシャフリングを可能にする。通常使用される酸化還元対の
いくつかとしては、システイン／シスタミン、グルタチオン（ＧＳＨ）／ジチオ
ビスＧＳＨ、塩化銅（ＩＩ）、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）／ジチアンＤＴＴ
、および２，２−メルカプトエタノール（ｂＭＥ）／ジチオ−ｂ（ＭＥ）が挙げ
られる。多くの場合において、共溶媒が使用され得るか、または再折り畳みの効
率を増加するのに必要であり得、この目的のために使用されるより一般的な試薬
としては、グリセロール、種々の分子量のポリエチレングリコール、アルギニン
などが挙げられる。

【０１４１】 封入体がＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現において有意な程度まで形成さ
れない場合、ポリペプチドは、主に、細胞ホモジネートの遠心分離後に上清中に
見出される。ポリペプチドは、さらに、本明細書中に記載されるような方法を使
用して上清から単離され得る。

【０１４２】 溶液からのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの精製は、種々の技術を使用して達
成され得る。ポリペプチドが、ヘキサヒスチジン（ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ド／ｈｅｘａＨｉｓ）のようなタグまたは他の小さなペプチド（例えば、ＦＬＡ
Ｇ（Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）または
ｍｙｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））をそのカルボキシ ル 末端またはアミノ末端のいずれかにおいて含むように合成された場合、カラム
マトリクスがタグについて高い親和性を有するアフィニティーカラムに溶液を通
すことによって一工程で精製され得る。

【０１４３】 例えば、ポリヒスチジンは、ニッケルに対して大きな親和性および特異性を有
して結合する。従って、ニッケルのアフィニティーカラム（例えば、Ｑｉａｇｅ
ｎ（登録商標）ニッケルカラム）は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド／ｐｏｌｙ
Ｈｉｓの精製のために使用され得る。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ § １０．１１．８（Ａｕ
ｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉ
ｎｃ． ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ １９９３）を参照のこと。

【０１４４】 さらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを
特異的に認識し得、そして結合し得るモノクローナル抗体の使用によって精製さ
れ得る。

【０１４５】 精製のための他の適切な手段はとしては、限定しないが、アフィニティークロ
マトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィ
ー、モレキュラーシーブクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、電気泳動（ネイティブ
な電気泳動を含む）、続くゲル溶出、および分取用等電集束法（「Ｉｓｏｐｒｉ
ｍｅ」ｍａｃｈｉｎｅ／ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，Ｈｏｅｆｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）が挙げられる。いくつかの場合にお
いて、２つ以上の精製技術を、増加した純度を達成するために組み合わせられ得
る。

【０１４６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドはまた、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．
，１９６３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９；Ｈｏｕｇｈｔｅｎ
ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８２：５１３２；およびＳｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ Ｐ
ｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏ．１９８４）に記載されるような当該分野で公知の技術を使用する、
化学合成法（例えば、固相ペプチド合成）によって調製され得る。このようなポ
リペプチドは、アミノ末端にメチオニンを有するかまたは有さないで合成され得
る。化学的に合成されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、これらの参考文献に
記載される方法を使用して酸化され得て、ジスルフィド結合を形成し得る。化学
的に合成されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、組換え的に産生されるかまた
は天然の供給源から精製される対応するＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに匹敵す
る生物学的活性を有すると期待され、従って、組換えまたは天然のＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドと相互交換可能に使用され得る。

【０１４７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを得る別の手段は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドが天然に見出される供給源の組織および／または流体のような生物学的サン
プルからの精製による。このような精製は、本明細書中に記載されるようなタン
パク質精製のための方法を使用して行われ得る。精製の間、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドの存在が、例えば、組換え的に産生されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドまたはそのペプチドフラグメントに対して調製される抗体を使用してモニタ
ーされ得る。

【０１４８】 核酸およびポリペプチドを産生するための多くのさらなる方法は、当該分野に
おいて公知であり、この方法は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対して特異性
を有するポリペプチドを産生するために使用され得る。例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ
ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．９４：１２２９７−３０３を参照のこと。これは、ｍＲＮＡとそのコードさ
れるペプチドとの間の融合タンパク質の産生を記載する。Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９
９９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｚ．ｂｏｌ ３：２６８−７３もまた参照の
こと。さらに、米国特許第５，８２４，４６９号は、特定の生物学的機能を実行
し得るオリゴヌクレオチドを得るための方法を記載する。この手順は、異種プー
ルのオリゴヌクレオチドを生成する工程を包含し、それぞれが、５’ランダム化
配列、中心予備選択配列、および３’ランダム化配列を有する。得られる異種プ
ールは、所望の生物学的機能を示さない細胞の集団に導入される。次いで、細胞
の亜集団を、所定の生物学的機能を示すものについてスクリーニングする。その
亜集団から、所望の生物学的機能を実行し得るオリゴヌクレオチドが単離される
。

【０１４９】 米国特許第５，７６３，１９２号；同第５，８１４，４７６号；同第５，７２
３，３２３号；および同第５，８１７，４８３号は、ペプチドまたはポリペプチ
ドを産生するためのプロセスを記載する。これは、確率論的遺伝子またはそのフ
ラグメントを産生し、次いで、確率論的遺伝子によってコードされた１以上のタ
ンパク質を産生する宿主細胞にこれらの遺伝子を導入することによって達成され
る。次いで、この宿主は、所望の活性を有するペプチドまたはポリペプチドを産
生する、これらのクローンを同定するためにスクリーニングされる。

【０１５０】 ペプチドまたはポリペプチドの産生するための別の方法は、Ａｔｈｅｒｓｙｓ
，Ｉｎｃ．によって出願されたＰＣＴ／ＵＳ９８／２００９４（ＷＯ９９／１５
６５０）（「Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」（ＲＡＧＥ−ＧＤ）と
して知られている）に記載されており、このプロセスは、インサイチュ組換え方
法によって、内因性遺伝子の発現または遺伝子の過剰発現の活性化を含む。例え
ば、内因性遺伝子の発現は、非相同性組換えまたは異常な組換えによって、遺伝
子の発現を活性化し得る標的細胞中に、調節配列を組み込むことによって、活性
化または増加される。この標的ＤＮＡは、まず、放射線に供せられ、そして遺伝
子プロモーターが挿入される。このプロモーターは、遺伝子の前方の分岐点に最
終的に配置され、遺伝子の転写を開始する。これは、所望のペプチドまたはポリ
ペプチドの発現より生じる。

【０１５１】 これらの方法はまた、包括的なＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現ライブラリ
ーを作製するために使用され得、これは、続いて、種々のアッセイ（例えば、生
化学的アッセイ、細胞アッセイおよび全生物アッセイ（例えば、植物、マウスな
ど））において、高スループット表現型スクリーニングのために使用され得るこ とが理解される 。

【０１５２】 （合成） 本明細書中に記載される核酸およびポリペプチド分子が、組換えおよび他の手
段によって産生され得ることは、当業者によって理解される。

【０１５３】 （選択的結合因子） 用語「選択的結合因子」は、１以上のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対して
特異性を有する分子を言及する。適切な選択的結合因子としては、抗体およびそ
の誘導体、ポリペプチド、ならびに小分子が挙げられるが、これらに限定されな
い。適切な選択的結合因子は、当該分野で公知の方法を使用して調製され得る。
本発明の例示的なＩＬ−１ＲＡ−Ｒポリペプチド選択的結合因子は、ＩＬ−１Ｒ
Ａ−Ｒポリペプチドの特定の部分を結合し得、これにより、ポリペプチドのＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターへの結合を阻害する。

【０１５４】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと結合する抗体および抗体フラグメントのよう
な選択的結合因子は、本発明の範囲内である。この抗体は、単一特異的なポリク
ローナルを含むポリクローナル；モノクローナル（ＭＡｂ）；組換え；キメラ；
ヒト化（例えば、ＣＤＲ移植化）；ヒト；単鎖；および／または二重特異的；な
らびにそれらのフラグメント；改変体；または誘導体であり得る。抗体フラグメ
ントとしては、ＩＬ−１ＲＡ−Ｒポリペプチド上のエピトープに結合する抗体の 一 部を含む。このようなフラグメントの例としては、全長抗体の酵素学的切断に
よって産生されたＦａｂおよびＦ（ａｂ’）フラグメントが挙げられる。他の結
合フラグメントとしては、組換えＤＮＡ技術（例えば、抗体可変領域をコードす
る核酸配列を含む、組換えプラスミドの発現）によって産生されたフラグメント
が挙げられる。

【０１５５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対するポリクローナル抗体は、一般に、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドおよびアジュバンドの複数回の皮下注射または腹腔内
注射によって動物（例えば、ウサギまたはマウス）において産生される。ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドをキャリアタンパク質に結合させることは、有用であり
得、このタンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、血清、アルブミン
、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシンインヒビターのように、免疫
化される種において免疫原性である。また、ミョウバンのような凝集剤は、免疫
応答を増強させるために使用される。免疫化後、この動物は採血され、そして血
清を、抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体力価についてアッセイする。

【０１５６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対するモノクローナル抗体は、培地中の連続
的細胞株によって抗体分子を産生するために提供される、任意の方法を使用して
産生される。モノクローナル抗体を調製するために適切な方法の例は、Ｋｏｈｌ
ｅｒら、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−９７のハイブリドーマ法、
およびヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ、１９８４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１３３：３００１；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉ
ｃａｔｉｏｎｓ ５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９８
７））が挙げられる。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと反応する、モノクローナ
ル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株がまた、本発明によって提供される。

【０１５７】 本発明のモノクローナル抗体は、治療剤として使用するために、改変され得る
。１実施形態は、「キメラ」抗体であり、この重鎖（Ｈ）および／または軽鎖（
Ｌ）の一部が、特定の種から誘導されるか、または別の抗体のクラスもしくはサ
ブクラスの属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同性である一
方で、この鎖の残りは、別の種から誘導されるか、または特定の抗体のクラスも
しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同性
である。抗体のフラグメントが所望の生物学的活性を示す限り、これらの抗体の
フラグメントも含まれる。米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ
ら、１９８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１−５５ を 参照のこと。

【０１５８】 別の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、「ヒト化」抗体であ
る。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該分野で周知である。米国特許第
５，５８５，０８９号および５，６９３，７６２号を参照のこと。一般に、ヒト
化した抗体は、非ヒトである供給源から導入された１以上のアミノ酸残基有する
。ヒト化は、例えば、当該分野（Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ３２１
：５２２−２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３
２３−２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３
４−３６）で記載される方法を使用して、げっ歯類相補的決定領域（ＣＤＲ）の
少なくとも一部をヒトの抗体の対応する領域と置換することによって、実施され 得 る。

【０１５９】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと結合するヒト抗体がまた、本発明によって包
含される。内因性の免疫グロブリンの産物の非存在下で、ヒト抗体のレパートリ
ーを産生し得る、トランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して、この
ような抗体は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗原（すなわち、少なくとも６連 続するアミノ酸を有する）を用いて免疫化することによって産生され、必要に応
じて、キャリアに結合される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，１９９３，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．９０：２５５１−５５；Ｊａｋｏｂｏｖ
ｉｔｓら，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍ
ａｎｎら，１９９３，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３を参照のこと。
１つの方法において、このようなトランスジェニック動物は、本明細書中の重鎖
および軽鎖免疫グロブリンをコードする内因性遺伝子座を無能にし、そしてヒト
の重鎖および軽鎖タンパク質をコードする遺伝子座をそのゲノムに挿入すること
によって産生される。次いで、部分的に改変された動物（この動物は、完全に相 補性ではない 改変を有する）は、所望の免疫系の改変の全てを有する動物を得る
ために交雑される。免疫原が投与される場合、これらのトランスジェニック動物
が、ヒト（例えば、マウスではない）アミノ酸配列（このアミノ酸配列は、これ
らの抗原に対して免疫特異性である可変領域を含む）を有する抗体を産生する。
例えば、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８およびＰＣＴ／ＵＳ９３
／０６９２６を参照のこと。さらなる方法は、米国特許第５，５４５，８０７、
ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９１／２４５およびＰＣＴ／ＧＢ８９／０１２０７
、ならびに欧州特許第５４６０７３Ｂ１および５４６０７３Ａ１に記載される。
ヒト抗体はまた、宿主細胞中の組換えＤＮＡの発現または本明細書中に記載され
るようなハイブリドーマ細胞中での発現によって産生され得る。

【０１６０】 代替の実施形態において、ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリ
から産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ．２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：
５８１）。これらにより、糸状のバクテリオファージの表面上の抗体レパートリ
ーの提示を介した模倣免疫選択、および選択した抗原への結合によるファージの
続く選択を処理する。１つのこのような技術は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９
８／１７３６４に記載されており、これには、このようなアプローチを使用して
、ＭＰＬ−およびｍｓｋ−レポーターについて、高い親和性および機能的なアン
タゴニスト抗体の単離が記載される。

【０１６１】 キメラ抗体、ＣＤＲ移植化抗体、およびヒト化抗体は、代表的に組換え方法に
よって産生される。抗体をコードする核酸は、宿主細胞中に導入され、そして本
明細書中に記載される材料および手順を使用して発現される。好ましい実施形態
において、この抗体は、哺乳動物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）中で産生され
る。モノクローナル（例えば、ヒト）抗体は、本明細書中に記載されるように、
宿主細胞中での組換えＤＮＡの発現またはハイブリドーマ細胞中での発現によっ
て産生され得る。

【０１６２】 本発明の抗−ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの検出
および定量のために、任意の公知のアッセイ方法（例えば、競合結合アッセイ、
直接的および間接的サンドイッチアッセイ、および免疫沈降アッセイ）において
使用され得る（Ｓｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４７−１５８（ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７））。この抗体は、使用されるアッセイ方法に対して
、適切である親和性でＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと結合する。

【０１６３】 診断適用のために、特定の実施形態において、抗−ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体は、
検出可能な部分で標識され得る。この検出可能な部分は、直接的または間接的の
いずれかで、検出可能なシグナルを産生し得る任意の部分であり得る。例えば、
検出可能な部分は、放射性同位体（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^{１ ２５} Ｉ、^９９Ｔｃ、 ^{１ １１}Ｉｎ、または^６７Ｇａ）；蛍光化合物または化学的蛍
光化合物（フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、もしくはルシフェ
リン）；または酵素（アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、もしく
は西洋ワサビペルオキシダーゼ）であり得る（Ｂａｙｅｒら，１９９０，Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚ．１８４：１３８−６３）。

【０１６４】 競合結合アッセイは、標識した標準物質（例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド、またはその免疫学的に反応性な部分）の能力に依存し、限定された量の抗
−ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体との結合に関して、試験サンプル検体（ＩＬ−１ｒａ−
Ｒペプチド）と競合する。試験サンプル中のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの量
は、抗体と結合する標準物質の量と反比例する。結合する標準物質の量を決定す
るのを容易にするために、この抗体は、競合前または後に、代表的に不溶化され
、その結果この抗体と結合する標準物質および検体は、結合しないままの標準物 質 および検体から好都合に分離され得る。

【０１６５】 サンドイッチアッセイは、２つの抗体の使用を代表的にを含み、各々は、決定
および／または定量されるタンパク質の異なる免疫部分またはエピトープに結合
し得る。サンドイッチアッセイにおいて、この試験サンプル検体は、固体支持体
上に固定化される第１抗体によって代表的に結合され、その後、第２抗体が、こ
の検体に結合され、従って不溶の３部の複合体を形成する。例えば、米国特許第
４，３７６，１１０を参照のこと。第２抗体自体は、検出可能な部分で標識され
るか（直接的なサンドイッチアッセイ）、または検出可能な部分で標識される抗
−免疫グロブリン抗体を使用して測定され得る（間接的なサンドイッチアッセイ ） 。例えば、サンドイッチアセイの１つの型は、酵素結合イムノソルベント検定
法（ＥＬＩＳＡ）（この場合、検出可能な部分は、酵素である）である。

【０１６６】 抗−ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体を含む、選択的結合因子はまた、インビボイメージ
ングのために有用である。検出可能な部分で標識した抗体は、動物に、好ましく
は、血流に投与され得、宿主中で標識した抗体の存在および位置がアッセイされ
る。この抗体は、核磁気共鳴、放射線学、または当該分野で公知の他の検出手段
のいずれかによって、動物中で検出可能である任意の部分で標識され得る。

【０１６７】 抗体を含む、本発明の選択的結合因子は、治療剤として使用され得る。これら
の治療剤は、一般に、アゴニストまたはアンタゴニストであり、これらは、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を、それぞれ増強ま
たは減少させるかのいずれかである。１実施形態中で、本発明のアンタゴニスト
抗体は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに特異的に結合し得、そしてインビボま
たはインビトロでＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能活性を阻害または排除し
得る、抗体またはその結合フラグメントである。好ましい実施形態において、選
択的結合因子（例えば、アンタゴニスト抗体）は、少なくとも約５０％、および
好ましくは、少なくとも約８０％、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能活性を
阻害する。別の実施形態において、選択的結合アッセイは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチド結合パートナー（リガンドまたはレセプター）と相互作用し得る抗−
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗体であり得、これにより、インビトロまたはイ
ンビボにおいてＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性を阻害または排除する。アゴ
ニストおよびアンタゴニスト抗体−ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗体を含む、
選択的結合因子は、当該分野で周知であるスクリーニングアッセイによって同定
される。

【０１６８】 本発明はまた、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ選択的結合因子（例えば、抗体）を含むキッ
トおよび生物学的サンプル中でＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレベルを検出する
ために有用である他の試薬に関する。このような試薬は、検出可能な標識、ブロ ッキングの血清、 ポジティブおよびネガティブコントロールサンプル、および検
出試薬を含み得る。

【０１６９】 （マイクロアレイ） ＤＮＡマイクロアレイ技術は、本発明に従って利用され得ることが理解される 。ＤＮＡマイクロアレイは、固体支持体（例えば、ガラス）上に配置された核酸
の小型高密度アレイである。このアレイ内の各細胞またはエレメントは、相補的
核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）とハイブリダイゼーションするための標識として
作用する、単一の核酸種の複数のコピーを含む。ＤＮＡマイクロアレイ技術を使
用する発現プロファイリングにおいて、ｍＲＮＡは、細胞サンプルまたは組織サ ンプル からまず抽出され、次いで、酵素標識されたｃＤＮＡを蛍光標識されたｃ
ＤＮＡに変換する。この材料は、マイクロアレイにハイブリダイズされ、そして
未結合のｃＤＮＡは、洗浄により除去される。次いで、このアレイ上に示された
個々の遺伝子の発現は、各標的核酸分子に特異的に結合される、標識されたｃＤ
ＮＡの量を定量することによって視覚化される。この方法において、数千の遺伝
子の発現が、生物学的材料の単一サンプルから、高スループットの並行様式で定
量され得る。

【０１７０】 この高スループット発現プロファイリングは、本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子
に関連して広範の適用を有し、これには、以下が挙げられるが、これに限定され
ない：治療のための標的として、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ疾患関連遺伝子の同定および
確認；関連するＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子およびそのインヒビターの分子毒性；臨床
試験のための代替マーカーの集団および産生の階層化；および高スループットス
クリーニングにおいて、選択化合物の同定を援助することによって、関連するＩ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチド小分子薬物探索を増強すること。

【０１７１】 （化学的誘導体） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの化学的に改変された誘導体は、この開示が、
本明細書中に記載されると、当業者によって調製され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチド誘導体は、このポリペプチドに天然で結合した分子の型または位置の
いずれかで、異なる様式で改変される。誘導体は、１以上の天然で結合した化学
的な基の除去によって形成される分子を含み得る。配列番号２、配列番号４、配
列番号６、もしくは配列番号３６、または他のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの
いずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドは、１以上のポリマーの共有結合に
よって改変され得る。例えば、選択されたポリマーは、代表的に水溶性であり、
その結果、結合するタンパク質は、水環境（例えば、生理学的な環境）下で沈殿
しない。ポリマーの混合物が、適切なポリマーの範囲内に含まれる。好ましくは
、最終生成物の調製物の治療学的使用のために、このポリマーは、薬学的に受容
可能である。

【０１７２】 このポリマーの各々は、任意の分子量を有し得、そして分枝または非分枝であ
り得る。このポリマーの各々は、代表的に、約２ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
の平均分子量を有する（この用語「約（およそ）」は、水溶性ポリマーの調製の
際に、幾つかの分子が、上記の分子量より多い、いくらか少ない重量を有するこ
とを示す）。各ポリマーの平均分子量は、好ましくは、約５ｋＤａと約５０ｋＤ
ａの間、より好ましくは、約１２ｋＤａと約４０ｋＤａとの間、そして最も好ま
しくは、約２０ｋＤａと約３５Ｄａとの間である。

【０１７３】 適切な水溶性ポリマーまたはその混合物としては、以下が挙げられるが、これ
らに限定されない：Ｎ−連結またはＯ−連結炭水化物、糖、リン酸、ポリエチレ
ン、グリコール（ＰＥＧ）（これは、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_１０）、アルコキシ−、
またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールを含む、タンパク質を誘導する
ために使用されたＰＥＧの形態を含む）、モノメトキシ−ポリエチレングリコー
ル、デキストラン（例えば、低分子量（例えば、約６ｋＤのデキストラン））、
セルロース、または他の炭水化物ベースのポリマー、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリ
ジン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロ
ピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール
（例えば、グリセロール）、およびポリビニルアルコール。共有結合したＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドマルチマーを調製するために使用され得る、二官能性架
橋分子もまた、本発明に含まれる。

【０１７４】 一般に、化学的誘導体化は、活性化したポリマー分子とタンパク質を反応させ
るために使用される任意の適切な条件下で、実施され得る。ポリペプチドの化学
的誘導体を調製するための方法は、以下の工程を包含する：（ａ）配列番号２、
配列番号４、配列番号６、もしくは配列番号３６、または他のＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドが、１以上のポリマ
ー分子に結合する条件下で、活性化したポリマー分子（例えば、ポリマー分子の
反応性エステルまたはアルデヒド誘導体）とポリペプチドを反応させる工程、な
らびに（ｂ）反応生成物を得る工程。最適の反応条件は、既知のパラメータおよ
び所望の結果に基づいて決定される。例えば、ポリマー分子のタンパク質に対す
る比が大きくなるほど、結合したポリマー分子の割合も大きくなる。１実施形態
において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体は、アミノ末端の単一ポリマー
分子部分を有する。例えば、米国特許第５，２３４，７８４号を参照のこと。

【０１７５】 ポリペプチドのペギル化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）は、当該分野で公知の任意
のペギル化反応を使用して特異的に実施され得る。このような反応は、例えば、
以下の参考文献に記載されている：Ｆｒａｎｃｉｓら，１９９２，Ｆｏｃｕｓ
ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ３：４−１０；欧州特許第０１５４３１
６号および０４０１３８４号；ならびに米国特許第４，１７９，３３７号。例え
ば、ペギル化は、本明細書中に記載されるように、反応性ポリエチレングリコー
ル分子（または、類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキ
ル化反応を介して実施され得る。アシル化反応のために、選択されたポリマーは
、単一の反応性エステル基を有する。還元的アルキル化について、選択されたポ
リマーは、単一の反応性アルデヒド基を有する。例えば、反応性アルデヒドは、
ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドであり、これは、水安定性、また
はモノＣ_１−Ｃ_１０アルコキシもしくはそのアリールオキシ誘導体である（米国
特許第５，２５２，７１４号を参照のこと）。

【０１７６】 別の実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ビオチンに化学的
に連結され得る。次いで、このビオチン／ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド分子は
、アビジンに結合され得、その結果、４価のアビジン／ビオチン／ＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチド分子が得られる。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドはまた、ジニ
トロフェノール（ＤＮＰ）またはトリニトロフェノール（ＴＮＰ）に共有結合さ
れ得、そして得られた結合体は、抗−ＤＮＰまたは抗−ＴＮＰ−ＩｇＭと共に沈
殿し、１０価の十量体の結合体を形成する。

【０１７７】 一般に、本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド誘導体の投与によって、緩和
または調節され得る条件は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドについて本明細書中
に記載されたものを含む。しかし、本明細書中に開示されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチド誘導体は、非誘導体化分子と比較した場合、さらなる活性、増強また
は減少した生物学的活性、または他の特性（例えば、増加または減少した半減期
）を有し得る。

【０１７８】 （遺伝子操作した非ヒト動物） マウス、ラット、または他のげっ歯類；ウサギ、ヤギ、ヒツジ、または他の家
畜のような非ヒト動物が、さらに本発明の範囲内に含まれ、ここで、天然のＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子は分裂（すなわち「ノックアウト
」）され、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現レベルは、有意に減少するか、
または完全に破壊される。このような動物は、米国特許第５，５５７，０３２号
に記載されるような技術および方法を使用して調製され得る。

【０１７９】 本発明は、マウス、ラット、または他のげっ歯類；ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ま
たは他の家畜のような非ヒト動物をさらに含み、この動物のＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺
伝子の天然の形態または非相同性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子のいずれかが、動物に
よって過剰発現され、これによって、「トランスジェニック」動物を作製する。
このようなトランスジェニック動物は、米国特許第５，４８９，７４３号および
ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／２８１２２号に記載されるような周知の方法を使用し
て調製され得る。

【０１８０】 本発明は、非ヒト動物をさらに含み、ここで、本発明の１以上のＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドのプロモーターは、（例えば、相同的な組換え方法を使用する
ことによって）活性化されるか、または活性化されず、１以上のＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドの発現のレベルを改変する。

【０１８１】 これらの非ヒト動物は、薬物候補物スクリーニングのために使用され得る。こ
のようなスクリーニングにおいて、動物での薬物候補物の影響が測定され得る。
例えば、薬物候補物は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の発現を減少または増加させ得
る。特定の実施形態において、産生されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの量は
、動物を薬物候補物に曝露した後に測定され得る。さらに、特定の実施形態にお
いて、動物での薬物候補物の実際の影響を検出し得る。例えば、特定の遺伝子の
過剰発現により、疾患状態または病理学的状態を生じるか、または関連する。こ
のような場合において、遺伝子の発現を減少させるための薬物候補物の能力また
は病理学的状態を防止または阻害するための能力を試験し得る。別の例において
、ポリペプチドのフラグメントのような、特定の代謝産物の産生により、疾患状
態または病理学的状態を生じるか、または関連する。このような場合において、
このような代謝産物の産生を減少させるための薬物候補物の能力または病理学的
状態を防止または阻害するための能力を試験し得る。

【０１８２】 （ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性の他の修飾因子についてのアッセイ） いくつかの状態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの活性の修飾因子で
ある分子（例えば、アゴニストまたはアンタゴニスト）を同定することが所望さ
れ得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを調節する天然または合成分子は、本明
細書中に記載されるように、１以上のスクリーニングアッセイを使用して同定さ
れ得る。このような分子は、インビボ様式またはインビトロ様式のいずれかで、
注射、または経口送達、移植デバイスなどによって投与され得る。

【０１８３】 「試験分子」とは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの活性を調節する（すなわ
ち、増加または減少させる）ための能力について評価する分子を言う。最も一般
的に、試験分子は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと直接的に相互作用する。し
かし、試験分子はまた、例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子発現に影響を与えるこ
とによって、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー（例えば、レ
セプターまたはリガンド）に結合することによって、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド活性を直接的に調節し得る。１実施形態において、試験分子は、少なくとも
約１０^−６Ｍ、好ましくは、約１０^−８Ｍ、より好ましくは、約１０^−９Ｍ、そ
してさらにより好ましくは約１０^−１０Ｍの親和性定数（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃ
ｏｎｓｔａｎｔ）でＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと結合する。

【０１８４】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用する化合物を同定するための方法は
、本発明によって包含される。特定の実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドは、試験分子とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドとの相互作用が可能な条
件下で、試験分子と共にインキュベートされ、そして相互作用の範囲が測定され
る。試験分子は、実質的に精製された形態または粗製の混合物中でスクリーニン
グされ得る。

【０１８５】 特定の実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドアゴニストまたはア
ンタゴニストは、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、または低分子量の分
子であり得、これは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用して、その活性
を調節する。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を調節する分子は、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸と相補的であるか、またはＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドの発現を指向または制御する核酸配列に対して相補的である核
酸分子、および発現のアンチセンス制御因子として作用する核酸分子を含む。

【０１８６】 一旦、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用する場合に、試験化合物が、
同定されると、この分子は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性を増加または減
少させる能力についてさらに評価され得る。試験分子とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドとの相互作用の測定は、いくつかの形態で実施され得、これには、細胞ベ
ースの結合アッセイ、膜結合アッセイ、液相アッセイ、および免疫アッセイが挙
げられる。一般に、試験分子は、特定の期間、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと
共にインキュベートされ、そしてＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性が、生物学
的活性を測定するために１以上のアッセイによって決定される。

【０１８７】 試験分子とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドとの相互作用はまた、免疫アッセイ
において、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を使用して直接的にアッセ
イされ得る。あるいは、本明細書中に記載されるようなエピトープタグを含むＩ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの改変形態は、溶液および免疫アッセイ中で使用さ
れ得る。

【０１８８】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが、結合パートナー（例えば、レセプターまた
はリガンド）との相互作用を介して、生物学的活性を示す場合において、種々の
インビトロアッセイが、対応する結合パートナー（選択的結合因子、レセプター
、またはリガンド）へのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの結合を測定するために
使用され得る。これらのアッセイは、結合パートナーに対するＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドの結合の速度および／または速度を増加または減少させるために、
試験分子をスクリーニングするために使用され得る。１アッセイにおいて、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、マイクロタイタープレートのウェル中に固定化さ
れる。次いで、放射標識したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー（例
えば、ヨウ素化したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー）および試験
化合物は、このウェルに、一時に一方を（いずれかの順序で）または同時に添加
され得る。インキュベーション後に、この壁を洗浄し、そしてシンチレーション
計数器を使用して、放射活性を計数し、結合パートナーがＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドに結合する範囲を決定する。代表的に、分子は、濃度範囲にわたって試
験され、そして試験アッセイの１以上を欠く一連のコントロールウェルは、結果
の評価の正確性のために使用され得る。この方法の代わりは、タンパク質の「位
置」を逆にする工程を逆にする工程（すなわち、マイクロタイタープレートウェ
ルにＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーを固定化し、試験分子および
放射標識したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをインキュベートし、そしてＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド結合の範囲を決定する工程）を包含する。例えば、Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
、第１８章（Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ
．ならびにＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ１９９５）を参照のこと。

【０１８９】 放射性標識に対する代替として、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドまたはその結
合パートナーは、ビオチンと結合体化され得、そしてビオチン化されたタンパク
質の存在が、次いで、酵素（例えば、わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）または
アルカリホスファターゼ（ＡＰ））に結合したストレプトアビジンを使用して検
出され得、これらは、比色定量的に検出され得るか、またはストレプトアビジン
の蛍光タグ化によって検出され得る。ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドまたはＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー（これらは、ビオチンに結合されてい
る）に対する抗体はまた、ＡＰまたはＨＲＰに連結した酵素連結ストレプトアビ
ジンとの複合体のインキュベーションに続いて、検出の目的のために使用され得
る。

【０１９０】 ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドまたはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パー
トナーは、アガロースビーズ、アクリルビーズ、または他の型のこのような不活
性な固体相基材への付着によって固定化され得る。基材−タンパク質複合体は、
相補タンパク質および試験化合物を含む溶液内に配置され得る。インキュベーシ
ョン後、これらのビーズは、遠心分離によって沈澱され得、そしてＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドとその結合パートナーとの間の結合の量が、本明細書中に記載
の方法を使用して評価され得る。あるいは、基材−タンパク質複合体は、カラム
を通過する、試験分子および相補タンパク質を用いてカラム内に固定化され得る
。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドトその結合パートナーとの間の複合体の形成が
、次いで、本明細書中に記載の技術（例えば、放射性標識または抗体結合）のい
ずれかを使用して評価され得る。

【０１９１】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合タンパク質とＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ド結合パートナーとの間の複合体の形成を増加または減少させる試験分子を同定
するために有用な別のインビトロアッセイは、表面プラズモン共鳴検出器システ
ム（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃ
ａｔａｗａｙ，ＮＪ））である。ＢＩＡｃｏｒｅシステムは、製造業者によって
特定されるように利用される。このアッセイは、本質的に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドまたはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーのいずれかの、
デキストランでコートされたセンサーチップ（これは、検出器に存在する）への
共有結合を含む。次いで、この試験化合物および他の相補タンパク質が、同時に
かまたは連続的にかのいずれかで、センサーチップを含むチャンバーに注入され
得る。結合する相補タンパク質の量は、センサーチップのデキストランコート側
面に物理的に関係する分子の質量の変化に基づいて評価され得、この分子の質量
の変化は、検出器システムによって測定される。

【０１９２】 いくつかの場合において、２つ以上の試験化合物を一緒に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドとＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーとの間の複合体の
形成を増加または減少させるそれらの能力について評価することが所望され得る
。これらの場合において、本明細書中に記載のアッセイは、第一の試験化合物と
同時にか、またはそれに続いてのいずれかで、このようなさらなる試験化合物を
添加することによって容易に改変され得る。このアッセイにおける工程の残りは
、本明細書中に記載される。

【０１９３】 インビトロアッセイ（例えば、本明細書中に記載されるもの）は、ＩＬ−１ｒ
ａ−ＲポリペプチドとＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーとの間の複
合体の形成に対する効果について、多数の化合物をスクリーニングするために、
有利に使用され得る。これらのアッセイは、ファージディスプレイ、合成ペプチ
ド、および化学合成ライブラリーにおいて生成された化合物をスクリーニングす
るために、自動化され得る。

【０１９４】 ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドとＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナ
ーとの間の複合体の形成を増加または減少される化合物はまた、ＩＬ−１ｒａ−
ＲポリペプチドまたはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナーＦのいずれ
かを発現する細胞および細胞系列を使用して、細胞培養物においてスクリーニン
グされ得る。細胞および細胞系列は、任意の哺乳動物から得られ得るが、好まし
くは、ヒト、または他の霊長類、イヌ類またはげっ歯類の供給源由来である。Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パートナー
を発現する細胞への、その表面での結合は、試験化合物の存在または非存在下で
評価され、そして結合の程度が、例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド結合パ
ートナーに対するビオチン化抗体を使用するフローサイトメトリーによって決定
され得る。細胞培養アッセイは、本明細書中に記載されるタンパク質結合アッセ
イにおいて、陽性であるとスコア付けされる化合物をさらに特徴付けするために
有利に使用され得る。

【０１９５】 細胞培養物はまた、薬物候補の影響をスクリーニングするために使用され得る
。例えば、薬物候補は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の発現を減少または増加させ得
る。特定の実施形態において、生成されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドまたは
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドフラグメントの量は、細胞培養物の薬物候補への
曝露の後に測定され得る。特定の実施形態において、細胞培養物への薬物候補の
実質的な影響が検出され得る。例えば、特定の遺伝子の過剰発現は、細胞培養物
への特定の影響を有し得る。このような場合に、遺伝子の発現を増加または減少
させる薬物候補の能力、または細胞培養物に対する特定の影響を予防または阻害
するその能力が試験され得る。他の例において、特定の代謝産物（例えば、ポリ
ペプチドのフラグメントなど）の生成が、疾患または病的状態を生じ得るか、ま
たはそれらと関連し得る。このような場合、細胞培養物におけるこのような代謝
産物の生成を減少する薬物候補の能力が試験され得る。

【０１９６】 （内部移行タンパク質） ｔａｔタンパク質配列（ＨＩＶ由来）が、タンパク質を細胞内に内部移行させ
るために、使用され得る。例えば、Ｆａｌｗｅｌｌら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：６６４−６８を参照のこと。例
えば、ＨＩＶ ｔａｔタンパク質の１１アミノ酸の配列（Ｙ−Ｇ−Ｒ−Ｋ−Ｋ−
Ｒ−Ｒ−Ｑ−Ｒ−Ｒ−Ｒ；配列番号１８）（「タンパク質形質導入ドメイン」、
またはＴＡＴ ＰＤＴを称される）は、細胞の細胞質膜および核膜を横切る送達
を媒介するとして記載されている。Ｓｃｈｗａｒｚｅら，１９９９，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２８５：１５６９−７２；およびＮａｇａｈａｒａら，１９９８，Ｎａｔ
．Ｍｅｄ．４：１４４９−５２を参照のこと。これらの手順において、ＦＩＴＣ
構築物（ＦＩＴＣ標識Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｙ−Ｇ−Ｒ−Ｋ−Ｋ−Ｒ−Ｒ−Ｑ−Ｒ−
Ｒ−Ｒ；配列番号１９）（これは、腹腔内投与に続いて組織を貫通する）が調製
され、そしてこのような構築物の細胞への結合が、蛍光細胞分析分離（ＦＡＣＳ
）分析によって検出される。ｔａｔ−β−ｇａｌ融合タンパク質で処置された細
胞は、β−ｇａｌ活性を示す。注入に続いて、このような構築物の発現が、多く
の組織（肝臓、腎臓、肺、心臓および脳組織）において検出され得る。このよう
な構築物は、細胞に入るためにある程度の変性を受け、そしてそれ自体、細胞内
への移入に続いて、再折り畳みを必要とし得ると考えられる。

【０１９７】 従って、ｔａｔタンパク質配列は、所望のポリペプチドを細胞に内部移入させ
るために使用され得ることが理解される。例えば、ｔａｔタンパク質配列を使用
して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒアンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−ｌｒａ−Ｒ選択的結
合因子、低分子、可溶性レセプター、またはアンチセンスオリゴヌクレオチド）
は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子の活性を阻害するために、細胞内投与され得る。本明
細書中で使用される場合、用語「ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子」は、本明細書中に規定 されるような、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
の両方をいう。所望ならば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒタンパク質自体はまた、これらの
手順を使用して、細胞に内部投与され得る。Ｓｔｒａｕｓ，１９９９，Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２８５：１４６６−６７をまた参照のこと。

【０１９８】 （ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを使用する細胞供給源の同定） 本発明の特定の実施形態に従って、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと関連する
特定の細胞型の供給源を決定することを可能することが有用であり得る。例えば
、適切な治療を選択する際の補助として疾患または病的状態の起源を決定するこ
とが有用であり得る。特定に実施形態において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
をコードする核酸は、プローブとして使用されて、このようなプローブを用いて
細胞の核酸をスクリーニングすることによって、本明細書中に記載の細胞を同定
し得る。他の実施形態において、抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗体を使用し
て、細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの存在について試験し得、従っ
て、このような細胞が本明細書中に記載される型の細胞か否かを決定し得る。

【０１９９】 （ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド組成物および投与） 治療組成物は、本発明の範囲内である。このようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チド薬学的組成物は、治療有効量のＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドまたはＩＬ−
１ｒａ−Ｒ核酸分子を、投与の様式と適合するように選択された薬学的にまたは
生理学的に受容可能な処方薬剤との混合物中に、含み得る。薬学的組成物は、治
療有効量の１以上のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド選択的結合因子を、投与の様
式と適合するように選択された薬学的にまたは生理学的に受容可能な処方薬剤と
の混合物中に、含み得る。

【０２００】 受容可能な処方物材料は、好ましくは、使用される投薬量および濃度で、レシ
ピエントに対して非毒性である。

【０２０１】 薬学的組成物は、例えば、ｐＨ、浸透圧、粘度、清澄性、色、等張性、におい
、無菌性、安定性、解離または放出の速度、吸着、または組成物の浸透を改変、
維持または保存するための処方物材料を含み得る。適切な処方物材料としては、
以下が挙げられるが、これらに限定されない：アミノ酸（例えば、グリシン、グ
ルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン）、抗菌剤、抗酸化剤（例
えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウム（ｓｏ
ｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ−ｓｕｌｆｉｔｅ））、緩衝液（例えば、ホウ酸塩
、炭酸水素塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、または他の有機酸）
、バルキング剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）、キレート化剤（エチ
レンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、複合体化剤（例えば、カフェイン、ポリビ
ニルピロリドン、β−シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル−β−シ
クロデキストリン）、フィラー、単糖類、二糖類、および他の炭水化物（例えば
、グルコース、マンノースまたはデキストリン）、タンパク質（例えば、血清ア
ルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）、着色剤、味付け剤および希釈剤
、乳化剤、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）、低分子量ポリペ
プチド、塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）、保存剤（例えば、塩化ベンザ
ルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メ
チルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸
化水素）、溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、またはポリエチ
レングリコール）、糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）
、懸濁剤、表面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ
）；ＰＥＧ；ソルビタンエステル；ポリソルビテート（例えば、ｐｏｌｙｓｏｒ
ｂａｔｅ ２０またはｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０）；トリトン；トロメタミ
ン；レシチン；コレステロールまたはチロキサポール（ｔｙｌｏｘａｐａｌ））
、安定性増強剤（例えば、スクロースまたはソルビトール）、張度増強剤（例え
ば、ハロゲン化アルカリ金属（好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム）
、またはマンニトール、ソルビトール）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および
／または薬学的なアジュバント。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，編，Ｍａ
ｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９０を参照のこと。

【０２０２】 最適な薬学的組成物は、当業者によって、例えば、意図される投与経路、送達
形式、および所望の投薬量に依存して決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出を参照のこと。
このような組成物は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子の、物理的な状態、安定性、インビ
ボ放出の速度、およびインビボクリアランスの速度に影響し得る。

【０２０３】 薬学的組成物における主要なビヒクルまたはキャリアは、本来水性または非水
性のいずれかであり得る。例えば、注入のための適切なビヒクルまたはキャリア
は、水、生理学的な生理食塩水溶液、または人工脳脊髄液であり、おそらく非経
口投与のための組成物において一般的な他の材料で補充されている。中性の緩衝
化生理食塩水または血清アルブミンと混合された生理食塩水は、さらなる例示的
なビヒクルである。他の例示的な薬学的組成物は、約ｐＨ７．０−８．５のＴｒ
ｉｓ緩衝液または約ｐＨ４．０−５．５の酢酸塩緩衝液を含み、これはさらに、
ソルビトールまたは適切な置換物を含み得る。本発明の１つの実施形態において
、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド組成物は、所望の程度の純度を有する選択され
た組成物を、任意の処方薬剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出）と混合することによって、凍結乾燥ケーク
または水溶液の形態で、保存のために調製され得る。さらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチド産物は、スクロースのような適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物と
して処方され得る。

【０２０４】 このＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの薬学的組成物は、非経口送達のために選
択され得る。あるいは、これらの組成物は、吸入または消化管を介する送達（例
えば、経口的に）のために、選択され得る。このような薬学的に受容可能な組成
物の調製は、当該分野の技術内にある。

【０２０５】 処方成分が、投与の部位に受容可能な濃度で存在する。例えば、緩衝液は、生
理学的ｐＨまたは多少より低いｐＨ（典型的に、約５〜約８のｐＨ範囲内）にこ
の組成物を維持するために使用される。

【０２０６】 非経口投与が意図される場合、本発明における使用のための治療組成物は、薬
学的に受容可能なビヒクルに所望のＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子を含む、発熱物質を含
まない非経口的に受容可能な水溶液の形態であり得る。非経口注入のために特に
適切なビヒクルは、滅菌蒸留水であり、ここで、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子が、滅菌
で、等張溶液として処方され、適切に保存される。なお別の調製は、所望の分子
と、薬剤（例えば、注入可能なミクロスフィア、生体侵食（ｂｉｏ−ｅｒｏｄｉ
ｂｌｅ）薬剤、ポリマー化合物（ポリ乳酸またはポリグリコール酸）、ビーズま
たはリポソーム）との処方物に関係し、これは、次いで蓄積注射を介して送達さ
れ得る産物の制御されたまたは持続された放出を提供し得る。ヒアルロン酸がま
た、使用され得、そしてこれは、循環において、維持された持続時間を促進する
効果を有し得る。所望の分子の導入のための他の適切な手段は、移植可能な薬物
送達デバイスを含む。

【０２０７】 １つの実施形態において、薬学的組成物は、吸入のために処方され得る。例え
ば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、吸入のための乾燥粉末として処方され得
る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドまたは核酸分子の吸入溶液はまた、エアロゾ
ル送達のための噴霧体と共に処方され得る。なお別の実施形態において、溶液は
、噴霧され得る。肺投与が、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／２００６９にさらに記載
され、これは化学的に改変されたタンパク質の肺送達を記載する。

【０２０８】 特定の処方物が、経口投与され得ることがまた意図される。本発明の１つの実
施形態において、このよう様式で投与されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが、
固体投薬形態（例えば、錠剤またはカプセル）の調合において慣用的に使用され
るキャリアを伴うか、または伴わず処方され得る。例えば、カプセルは、バイオ
アベイラビリティーが最大化され、そして前全身分解が最小化される場合、胃腸
管内で処方物の活性部分を放出するように設計され得る。さらなる薬剤が、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドの吸収を容易にするために含まれ得る。希釈剤、味付
け剤、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤、およびバインダ
ーがまた、使用され得る。

【０２０９】 別の薬学的組成物は、錠剤の製造に適切な非毒性賦形剤との混合物中に、有効
量のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを含み得る。錠剤を滅菌水または別の適切な
ビヒクルに溶解することによって、溶液が、単位用量形態で調製され得る。適切
な賦形剤は以下を含むが、これらに限定されない：不活性な希釈剤（炭酸カルシ
ウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウム、ラクトース、あるいはリン酸
カルシウム）；または結合剤（例えば、デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム
）；あるいは潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸または
タルク）。

【０２１０】 さらなるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの薬学的組成物は、当業者に明らかで
あり、持続または制御送達処方物中にＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを含む処方
物を含む。種々の他の持続または制御送達手段（例えば、リポソームキャリア、
生体侵食マイクロスフィアあるいは多孔性ビーズおよび蓄積注射）を処方するた
めの技術はまた、当業者に公知である。例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９
（これは、薬学的組成物の送達のための多孔性ポリマー性ミクロ粒子の制御放出
を記載する）を参照のこと。

【０２１１】 徐放性調製物のさらなる例としては、成形された物品の形態（例えば、フィル
ム、またはマイクロカプセル）の半透過性ポリマーマトリックスを含む。徐放性
マトリックスとしては、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第
３，７７３，９１９号および欧州特許第０５８４８１号）、Ｌ−グルタミン酸と
γエチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら，１９８３，Ｂｉ
ｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５６）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メ
タクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．
Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７およびＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅ
ｃｈ．１２：９８−１０５）、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒら，前
出）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許第１３３９８８号）
。徐放性組成物はまた、リポソームを含み得、これは、当該分野で公知のいくつ
かの方法のいずれかによって調製され得る。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら，１９
８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８−９２
；および欧州特許第０３６６７６号、同第０８８０４６号、および同第１４３９
４９号を参照のこと。

【０２１２】 インビボ投与のために使用されるＩＬ−１ｒａ−Ｒの薬学的組成物は、代表的
に滅菌でなければならない。このことは、滅菌濾過膜を介する濾過によって達成
され得る。組成物が、凍結乾燥される場合、この方法を使用する滅菌は、凍結乾
燥および再構成の前に、またはそれに続いてのいずれかで実施され得る。非経口
投与のための組成物は、凍結乾燥された形態または溶液で保存され得る。さらに
、非経口組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器（例えば、静脈内
溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアル）
内に配置される。

【０２１３】 一旦、薬学的組成物が処方されると、それは、滅菌バイアル中に溶液、懸濁液
、ゲル、エマルジョン、固体、または脱水和粉末または凍結乾燥粉末として保存
され得る。このような処方物は、すぐに使用できる形態または投与の前に再構成
を必要とする形態（凍結乾燥された形態）のいずれかで保存され得る。

【０２１４】 特定の実施形態において、本発明は、単一用量投与単位を生成するためのキッ
トに関する。このキットは、各々、乾燥タンパク質を有する第一の容器および水
性処方物を有する第二の容器の両方を含み得る。また、本発明の範囲内には、単
一および多チャンバーの予め充填されたシリンジ（例えば、液体シリンジおよび
分散シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含むキットが含まれる。

【０２１５】 治療的に使用されるＩＬ−１ｒａ−Ｒの薬学的組成物の有効量は、例えば、治
療の内容および目的に依存する。当業者は、処置のための適切な投薬レベルが、
従って、送達される分子、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子が使用されている指標、投与の
経路、および患者のサイズ（体重、体表面、または器官の大きさ）および状態（
年齢および一般的な健康）に、部分的に依存して変化することを理解する。従っ
て、臨床家は、最適な治療効果を得るために、投薬量を力価決定し（ｔｉｔｅｒ
）、投与経路を改変し得る。代表的な投薬量は、上記の因子に依存して、約０．
１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ以上までの範囲であり得る。他の実施形態に
おいて、投薬量は、０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまで；または１μｇ
／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまで；または５μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇま
での範囲であり得る。

【０２１６】 投薬の頻度は、使用される処方物中でのＩＬ−１ｒａ−Ｒ分子の薬物動態学の
パラメーターに依存する。典型的に、臨床家は、所望の効果を達成する投薬量に
達するまで組成物を投与する。組成物は、従って、組成物が、経時的な単一用量
として、２以上の用量（これは、同量の所望の分子を含んでも、含まなくてもよ
い）として、あるいは移植デバイスまたはカテーテルを介する連続的な注入とし
て、投与され得る。適切な投薬量のさらなる改良は、当業者によって慣用的にな
され、そしてそれらによって慣用的に実施される課題の範囲内である。適切な投
薬量は、適切な用量−応答データの使用を介して確認され得る。

【０２１７】 薬学的組成物の投与の経路は、例えば、以下のような公知の方法と一致する：
経口的に；静脈内、腹腔内、脳内（実質内の）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内
、門脈内、または病巣内の経路による注入を介して；徐放性系によって；または
移植デバイスによって。所望される場合、これらの組成物は、ボーラス注射によ
って投与され得るか、または注入によって連続的に投与され得るか、または移植
デバイスによって投与され得る。

【０２１８】 あるいはまたはさらに、組成物は、その上に所望の分子が吸収されるかまたは
カプセル化される膜、スポンジ、または他の適切な材料の移植を介して局所的に
投与され得る。移植デバイスが使用される場合、このデバイスは、任意の適切な
組織または器官に移植され得、そして所望の分子の送達は、拡散、時限放出ボー
ラスまたは連続的な投与を介し得る。

【０２１９】 いくつかの場合において、エキソビボ様式において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドの薬学的組成物を使用することが所望され得る。このような例において、
患者から除去された細胞、組織、または器官は、これらの細胞、組織、または器
官が引き続いて患者に移植して戻された後にＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの薬 学的組成物 に曝露される。

【０２２０】 他の場合において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、本明細書中に記載され
る方法を使用して、遺伝的に操作されて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを発現
および分泌する特定の細胞を移植することによって送達され得る。このような細
胞は、動物またはヒト細胞であり得、そして自己、異種、または外因性の細胞で
あり得る。必要に応じて、細胞は、不死化され得る。免疫学的応答の機会を減少
するために、細胞は、周囲の組織の浸潤を回避するために、カプセル化され得る
。カプセル化材料は、典型的に、生体適合性の半浸透性ポリマー性包囲物または
膜であり、これらは、タンパク質産物の放出を可能にするが、患者の免疫系また
は周囲の組織からの他の有害な因子による細胞の破壊を防止する。

【０２２１】 本明細書中において議論されるように、単離された細胞集団（例えば、幹細胞
、リンパ球、赤血球、軟骨細胞、ニューロンなど）を１つ以上のＩＬ−１ｒａ−
Ｒポリペプチドで処理することが、望ましくあり得る。このことは、このポリペ プチドが 細胞膜に対して透過性の形態である場合には、単離された細胞をこのポ
リペプチドに直接曝露することによって達成され得る。

【０２２２】 本発明のさらなる実施形態は、治療ポリペプチドのインビトロ産生と、遺伝子
治療または細胞治療による治療ポリペプチドの産生および送達との両方のための
、細胞および方法（例えば、相同組換えおよび／または他の組換え産生方法）に
関する。相同組換えおよび他の組換えの方法を使用して、通常は転写に対してサ
イレントなＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子（すなわち、過少発現される遺伝子）を含む
細胞を改変し得、これによって、治療有効量のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを
発現する細胞を産生し得る。

【０２２３】 相同組換えは、もともとは、遺伝子を標的化して転写活性な遺伝子における変
異を誘導するか、または修正するために開発された技術である。Ｋｕｃｈｅｒｌ
ａｐａｔｉ，１９８９，Ｐｒｏｇ．ｉｎ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．＆ Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６：３０１。基本的な技術が、特定の変異を哺乳動物ゲノム
の特定の領域に導入するため（Ｔｈｏｍａｓら、１９８６，Ｃｅｌｌ ４４：４
１９−２８；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ，１９８７，Ｃｅｌｌ ５１
：５０３−１２；Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら、１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：８５８３−８７）、または欠損遺伝子にお
ける特定の変異を修正するため（Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら、１９８７，Ｎａｔｕ
ｒｅ ３３０：５７６−７８）の方法として、開発された。例示的な相同組換え
技術は、米国特許第５，２７２，０７１号；欧州特許第９１９３０５１号および
同第５０５５００号；ＰＣＴ／ＵＳ９０／０７６４２、ならびにＰＣＴ公開番号
ＷＯ ９１／０９９５５）に記載されている。

【０２２４】 相同組換えによって、ゲノムに挿入されるべきＤＮＡ配列は、このＤＮＡ配列 に 標的化ＤＮＡを結合することによって、目的の遺伝子の特定の領域に指向され
得る。この標的化ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡの領域に相補的（相同）であるヌクレ
オチド配列である。ゲノムの特定の領域に対して相補的な標的化ＤＮＡの小さな
断片は、ＤＮＡ複製プロセスの間に親鎖と接触される。これは、細胞に挿入され
て、共有される相同領域を介して内因性ＤＮＡの他の断片とハイブリダイズし、 そ して従って、その内因性ＤＮＡの他の断片と組み換わる、ＤＮＡの一般的特性 である 。この相補鎖に、変異または異なる配列あるいはさらなるヌクレオチドを
含むオリゴヌクレオチドが結合される場合には、このオリゴヌクレオチドもまた
、この組換えの結果としてその新たに合成された鎖に組み込まれる。プルーフリ
ーディング機能の結果として、ＤＮＡのこの新たな配列がテンプレートとして働
くことが可能である。従って、この移入されたＤＮＡは、ゲノムに組み込まれる
。

【０２２５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用し得るかまたはその発現を制御し得
るＤＮＡの領域（例えば、隣接配列）に、標的化ＤＮＡのこれらの断片を結合す る 。例えば、プロモーター／エンハンサーエレメント、サプレッサ、または外因
性転写調節エレメントが、意図される宿主細胞のゲノムにおいて、所望のＩＬ−
１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするＤＮＡの転写に影響を与えるに十分な近接 性および方 向で、挿入される。制御エレメントは、この宿主細胞ゲノムに存在す
るＤＮＡの一部を制御する。従って、所望のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発
現は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子自体をコードするＤＮＡのトランスフェクション
によってではなく、むしろ、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の転写のための認識可能な
シグナルを有する内因性遺伝子配列を提供するＤＮＡ調節セグメントと結合した
標的化ＤＮＡ（目的の内因性遺伝子と相同の領域を含む）の使用によって、達成
され得る。

【０２２６】 例示的な方法において、細胞における所望の標的遺伝子（すなわち、所望の内
因性細胞遺伝子）の発現は、予め選択された部位における細胞ゲノムへの相同組
換えを介して、少なくとも調節配列、エキソン、およびスプライスドナー部位を
含むＤＮＡの導入によって、変更される。これらの構成成分は、新たな転写単位 の産生を実際に生じるような様式で、染色体（ゲノム）ＤＮＡに導入される（こ
こで、ＤＮＡ構築物に存在する調節配列、エキソン、およびスプライスドナー部
位は、内因性遺伝子に作動可能に連結される）。染色体ＤＮＡへのこれらの構成
成分の導入の結果として、所望の内因性遺伝子の発現が変化する。

【０２２７】 本明細書中で記載されるように、変化された遺伝子発現は、得られたままの細
胞において通常にはサイレントな（発現されていない）遺伝子を活性化すること （または発現させること）、ならびに得られたままの細胞において生理学的に有
意なレベルでは発現されない遺伝子の発現を増加させることを包含する。この実
施形態はさらに、調節または誘導のパターンを変化させる工程を包含し、その結
果、このパターンは、得られたままの細胞において生じる調節または誘導のパタ
ーンとは異なり、そしてその得られたままの細胞において発現される遺伝子の発
現を減少（排除を含む）させる。

【０２２８】 細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの
産生を増加するかまたはこれを引き起こすために相同組換えが使用され得る、１ つの方法は、最初に、相同性組換えを使用して、部位特異的組換え系由来の組換
え配列（例えば、Ｃｒｅ／ｌｏｘＰ、ＦＬＰ／ＦＲＴ）（Ｓａｕｅｒ，１９９４
，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５：５２１−２；Ｓａｕｅｒ
，１９９３，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２２５：８９０−９００）を
、その細胞の内在性ゲノムＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域の上流（す
なわち、５’側）に配置する工程を包含する。ゲノムＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドコード領域のすぐ上流に配置されたこの部位に対して相同性の組換え部位を
含むプラスミドは、適切なリコンビナーゼ酵素と共に、その改変された細胞株に
導入される。このリコンビナーゼは、このプラスミドを、このプラスミドの組換
え部位を介して、この細胞株のゲノムＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコード領域
のすぐ上流に位置するその組換え部位に組込む（ＢａｕｂｏｎｉｓおよびＳａｕ
ｅｒ、１９９３，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２１：２０２５−２９
；Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら、１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１−５５）
。転写を増加させることが知られている任意の隣接配列（例えば、エンハンサー
／プロモーター、イントロン、翻訳エンハンサー）は、このプラスミド中に適切
に配置される場合、細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からの新たなまたは増
加したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド産生を生じる、新たなまたは改変された転
写単位を作製するような様式で組み込む。

【０２２９】 部位特異的組換え配列が細胞の内在性ゲノムＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドコ
ード領域のすぐ上流に配置された細胞株を使用するさらなる方法は、相同組換え を使用して 細胞株のゲノムの他の位置に第２の組換え部位を導入することである
。次いで、適切なリコンビナーゼ酵素が、この二組換え部位細胞株に導入され、
組換え事象（欠失、反転、および転移）を生じ（Ｓａｕｅｒ，１９９４，Ｃｕｒ
ｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５：５２１−２７；Ｓａｕｅｒ，１９
９３，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｘｙｍｏｌ．，２２５：８９０−９００）、これは
、その細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からの新規なまたは増加したＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド産生を生じる、新しいかまたは改変された転写単位を作
製する。

【０２３０】 細胞の内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの
発現を増加するため、または引き起こすためのさらなるアプローチは、細胞の内
在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子からの新たなまたは増加したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドの産生を生じる様式で、遺伝子（単数または複数）（例えば、転写因子
）の発現を増加するかまたは引き起こす工程、および／または遺伝子（単数また
は複数）（例えば、転写リプレッサー）の発現を減少する工程を包含する。この
方法は、天然に存在しないポリペプチド（例えば、転写因子ドメインに融合した
部位特異的ＤＮＡ結合ドメインを含むポリペプチド）を、その細胞の内在性ＩＬ
−１ｒａ−Ｒ遺伝子からの新たなまたは増加したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
の産生が起こるように、細胞に導入する工程を包含する。

【０２３１】 本発明はさらに、標的遺伝子の発現を変化させる方法において有用なＤＮＡ構
築物に関する。特定の実施形態において、代表的なＤＮＡ構築物は、以下を含む
：（ａ）１つ以上の標的化配列、（ｂ）調節配列、（ｃ）エキソン、および（ｄ
）不対スプライスドナー部位。ＤＮＡ構築物中の標的化配列は、細胞中の標的遺 伝子への エレメント（ａ）〜（ｄ）の組込みを指向し、その結果、これらのエレ
メント（ｂ）〜（ｄ）が、その内在性標的遺伝子の配列に作動可能に連結される
。別の実施形態において、ＤＮＡ構築物は、以下を含む：（ａ）１つ以上の標的 化 配列、（ｂ）調節配列、（ｃ）エキソン、（ｄ）スプライスドナー部位、（ｅ
）イントロン、および（ｆ）スプライスアクセプター部位。ここで、標的化配列
は、エレメント（ａ）〜（ｆ）の組込みを指向し、その結果、これらのエレメン
ト（ｂ）〜（ｆ）が、その内在性遺伝子に作動可能に連結される。この標的化配
列は、相同性組換えが生じる細胞染色体ＤＮＡの予め選択された部位に対して相
同性である。この構築物において、エキソンは、一般的に、制御配列の３’側で
あり、そしてスプライスドナー部位は、このエキソンの３’側である。

【０２３２】 特定の遺伝子の配列（例えば、本明細書中で記載されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドの核酸配列）が公知である場合、この遺伝子の選択された領域に対して
相補的なＤＮＡの断片が、合成され得るか、またはそうでなければ、例えば、目
的の領域に結合している特定の認識部位におけるそのネイティブのＤＮＡの適切
な制限処理によって得られ得る。この断片は、細胞に挿入された際に、標的化配
列として働き、そしてそのゲノム内の相同性領域にハイブリダイズする。このハ
イブリダイゼーションが、ＤＮＡ複製の間に生じる場合、このＤＮＡの断片およ
びそれに結合した任意のさらなる配列は、岡崎フラグメントとして作用し、そし
てＤＮＡの新たに合成された娘鎖に組み込まれる。従って、本発明は、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチドをコードするヌクレオチドを含み、このヌクレオチドは、
標的化配列として使用され得る。

【０２３３】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド細胞治療（例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドを産生する細胞の移植）もまた企図される。この実施形態は、生物学的に活
性な形態のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを合成および分泌し得る細胞を移植す
る工程を包含する。このようなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド産生細胞は、ＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチドの天然の産生者である細胞であり得るか、またはその
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生する能力が、所望のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドをコードする遺伝子またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を増大
する遺伝子で形質転換することによって増大された、組換え細胞であり得る。こ
のような改変は、遺伝子を送達しそしてその遺伝子の発現および分泌を促進する
ために適切なベクターによって達成され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを
投与されている患者における強力な免疫学的反応を最小化するために、外来種の
ポリペプチドの投与と共に生じ得る場合、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生
する天然の細胞が、ヒト起源であり、そしてヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
を産生することが好ましい。同様に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生する
組換え細胞が、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子を含む発
現ベクターで形質転換されることが好ましい。

【０２３４】 移植細胞は、周辺組織の浸潤を回避するようにカプセル化され得る。ヒトまた
は非ヒト動物細胞は、生体適合性の半透性ポリマー封入物または膜（これは、Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの放出を可能にするが、患者の免疫系によるかまた
は周辺組織からの他の有害な因子による細胞の崩壊を防止する）の形態で患者に
移植され得る。あるいは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをエキソビボで産生す
るように形質転換された患者自身の細胞が、このようなカプセル化なしで、患者
に直接移植され得る。

【０２３５】 生きた細胞をカプセル化するための技術は当該分野で公知であり、そしてカプ
セル化された細胞の調製およびそれらの患者への移植は、慣用的に達成され得る
。例えば、Ｂａｅｔｇｅら（ＰＣＴ公開ＷＯ９５／０５４５２およびＰＣＴ／Ｕ
Ｓ９４／０９２９９）は、生物学的に活性な分子の効果的な送達のために遺伝子
操作された細胞を含む膜カプセルを記載する。このカプセルは、生体適合性であ
り、そして容易に回収可能である。このカプセルは、生物学的に活性な分子をコ
ードするＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子でトランスフェクトされた細胞をカ
プセル化し、このＤＮＡ配列は、哺乳動物宿主に移植された際にインビボで下方 制御に供されないプロモーターに作動可能に連結されている 。このデバイスは、 レシピエント内の特定の部位への 生きた細胞由来の分子の送達を提供する。さら
に、米国特許第４，８９２，５３８号；同第５，０１１，４７２号；および同第
５，１０６，６２７号を参照のこと。生きた細胞をカプセル化するためのシステ
ムは、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１０４２５（Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら）に記載される
。ＰＣＴ公開ＷＯ９１／／１０４７０（Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら）；Ｗｉｎｎら、
１９９１，Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．１１３：３２２−２９；Ａｅｂｉｓｃｈ
ｅｒら、１９９１，Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．１１１：２６９−７５；および
Ｔｒｅｓｃｏら、１９９２，ＡＳＡＩＯ ３８：１７−２３もまた参照のこと。

【０２３６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのインビボおよびインビトロの遺伝子治療送達
もまた想定される。遺伝子治療技術の一例は、構成的または誘導性プロモーター
に作動可能に連結され得るＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするＩＬ−１
ｒａ−Ｒ遺伝子（ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡおよび／または合成ＤＮＡのいずれか
）を使用して、「遺伝子治療ＤＮＡ構築物」を形成することである。このプロモ
ーターは、内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子に対してホモ接合性またはヘテロ接合
性であり得るが、ただし、これは、構築物が挿入される細胞または組織型におい
て活性である。遺伝子治療ＤＮＡ構築物の他の成分は、必要に応じて、部位特異
的組込みのために設計されるＤＮＡ分子（例えば、相同性組換えのために有用な
内在性配列）、組織特異的プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサー、親
細胞を越える選択的優性を提供し得るＤＮＡ分子、形質転換された細胞を同定す
るための標識として有用なＤＮＡ分子、ネガティブ選択系、細胞特異的結合因子
（例えば、細胞標的化について）、細胞特異的内部移行因子、ベクターからの発
現を増大する転写因子、およびベクターの産生を可能にする因子を含み得る。

【０２３７】 遺伝子治療ＤＮＡ構築物は、次いで、ウイルスベクターまたは非ウイルスベク
ターを使用して細胞に導入され得る（エキソビボまたはインビボのいずれか）。
遺伝子治療ＤＮＡ構築物を導入するための１つの方法は、本明細書中に記載され
るようなウイルスベクターの使用による。特定のベクター（例えば、レトロウイ
ルスベクター）は、ＤＮＡ構築物を細胞の染色体ＤＮＡに送達し、そしてこの遺
伝子は、染色体ＤＮＡに組み込まれ得る。他のベクターは、エピソームとして機
能し、そして遺伝子治療ＤＮＡ構築物は、細胞質に残る。

【０２３８】 さらに他の実施形態において、調節エレメントが、標的細胞におけるＩＬ−１
ｒａ−Ｒ遺伝子の制御された発現のために含められ得る。このようなエレメント
は、適切なエフェクターに応答して刺激される。このようにして、治療的ポリペ
プチドは、所望の場合に発現され得る。１つの従来の制御手段は、低分子結合ド
メインおよび生物学的プロセスを開始し得るドメインを含むキメラタンパク質（
例えば、ＤＮＡ結合タンパク質または転写活性タンパク質）を二量化する低分子
二量化剤またはラパログ（ｒａｐａｌｏｇ）の使用を包含する（ＰＣＴ公開ＷＯ
９６／４１８６５、ＷＯ９７／３１８９８およびＷＯ９７／３１８９９を参照の
こと）。タンパク質の二量化は、導入遺伝子の転写を開始するために使用され得
る。

【０２３９】 代替の調節技術は、目的の遺伝子から発現されたタンパク質を、凝集体または
クラスターとして細胞の内側に貯蔵する方法を使用する。目的の遺伝子は、小胞 体 における凝集タンパク質の保持を生じる、条件的凝集ドメインを含む融合タン
パク質として発現される。貯蔵されたタンパク質は安定であり、そして細胞の内
側で不活性である。しかし、このタンパク質は、条件的凝集ドメインを除去する
薬物（例えば、低分子リガンド）を投与することによって放出され得、それによ
り、凝集体またはクラスターを破壊し、その結果、このタンパク質は細胞から分
泌され得る。Ａｒｉｄｏｒら、２０００，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：８１６−１
７およびＲｉｖｅｒａら、２０００，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：８２６−３０を
参照のこと。

【０２４０】 他の適切な制御手段または遺伝子スイッチとしては、本明細書中で記載される
系が挙げられるが、これらに限定されない。Ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ（ＲＵ４
８６）は、プロゲステロンアンタゴニストとして使用される。改変されたプロゲ
ステロンレセプターリガンド結合ドメインのプロゲステロンアンタゴニストへの
結合は、２つの転写因子のダイマーを形成することによって、転写を活性化し、
次いで、核に至り、ＤＮＡに結合する。このリガンド結合ドメインは、天然のリ
ガンドに結合するレセプターの能力を排除するように改変される。改変されたス
テロイドホルモンレセプター系はさらに、米国特許第５，３６４，７９１号、な
らびにＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０９１１およびＷＯ９７／１０３３７に記載され
る。

【０２４１】 さらに別の制御系は、エクジソンレセプター（細胞質レセプター）に結合し、
そしてこれを活性化するエクジソン（ショウジョウバエステロイドホルモン）を
使用する。次いで、このレセプターは核に転移し、特定のＤＮＡ応答エレメント
（エクジソン応答性遺伝子由来のプロモーター）に結合する。エクジソンレセプ
ターは、トランス活性化ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、およびリガンド結合ド
メインを含み、転写を開始する。エクジソン系はさらに、米国特許第５，５１４
，５７８、およびＰＣＴ公開ＷＯ９７／３８１１７、ＷＯ９６／３７６０９、お
よびＷＯ９３／０３１６２に記載される。

【０２４２】 別の制御手段は、陽性テトラシクリン制御可能トランス活性化因子を使用する
。この系は、転写を活性化するポリペプチドに連結された変異したｔｅｔレプレ
ッサタンパク質ＤＮＡ結合ドメイン（逆テトラサイクリン調節トランス活性化因
子タンパク質を生じた変異したｔｅｔＲ−４アミノ酸の変化、すなわち、これは
、テトラサイクリンの存在下でｔｅｔオペレーターに結合する）を含む。このよ
うな系は、米国特許第５，４６４，７５８号、同第５，６５０，２９８号、およ
び同第５，６５４，１６８号に記載される。

【０２４３】 さらなる発現制御系および核酸構築物は、米国特許第５，７４１，６７９号お
よび同第５，８３４，１８６号（Ｉｎｎｏｖｉｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
Ｉｎｃ．）に記載される。

【０２４４】 インビボ遺伝子治療は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子を
、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子の局所注射によって、またはその他の適切なウイル
スもしくは非ウイルス送達ベクターによって、細胞に導入することにより達成さ
れ得る。Ｈｅｆｔｉ，１９９４，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２５：１４１８−
３５。例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核酸分子は、標的細
胞への送達のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに含まれ得る（例え
ば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，ＰＣＴ公開ＷＯ９５／３４６７０；ＰＣＴ出願ＰＣＴ／Ｕ
Ｓ９５／０７１７８を参照のこと。組換えＡＡＶゲノムは、典型的に、機能的プ
ロモーターに作動可能に連結したＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするＤ
ＮＡ配列およびポリアデニル化配列に隣接するＡＡＶ逆末端反復を含む。

【０２４５】 代替の適切なウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、
単純ヘルペスウイルス、レンチウイルス、肝炎ウイルス、パルボウイルス、パポ
バウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、コロナウイルス、ラブドウ
イルス、パラミクソウイルス、および乳頭腫ウイルスベクターが挙げられるがこ れらに限定されない 。米国特許第５，６７２，３４４号は、組換え神経栄養性Ｈ
ＳＶ−１ベクターを含むインビボウイルス媒介遺伝子移入系を記載する。米国特
許第５，３９９，３４６号は、治療タンパク質をコードするＤＮＡセグメントを
挿入するためにインビトロで処置されたヒト細胞の送達によって、治療タンパク
質を患者に提供するためのプロセスの例を提供する。遺伝子治療技術の実施のた
めのさらなる方法および材料は、米国特許第５，６３１，２３６号（アデノウイ
ルスベクターを含む）、同第５，６７２，５１０号（レトロウイルスベクターを
含む）、同第５，６３５，３９９号（サイトカインを発現するレトロウイルスベ
クターを含む）に記載される。

【０２４６】 非ウイルス送達法としては、リポソーム媒介移入、裸のＤＮＡ送達（直接注射
）、レセプター媒介送達（リガンド−ＤＮＡ複合体）、エレクトロポレーション
、リン酸カルシウム沈降、および微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃）
が挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子治療材料および方法はまた、誘
導性プロモーター、組織特異的エンハンサー−プロモーター、部位特異的組込み
のために設計されたＤＮＡ配列、親細胞を越える選択的優性を提供し得るＤＮＡ
配列、形質転換された細胞を同定するための標識、ネガティブな選択系および発
現制御系（安全性の指標）、細胞特異的結合因子（細胞ターゲッティングのため
）、細胞特異的内部移行因子、およびベクターならびにベクター製造の方法によ
る発現を増大する転写因子を含み得る。遺伝子治療技術の実施のためのこのよう
なさらなる方法および材料は、米国特許第４，９７０，１５４号（エレクトロポ
レーション技術を含む）、同第５，６７９，５５９号（遺伝子送達のためのリポ
タンパク質含有系を記載する）、同第５，６７６，９５４号（リポソームキャリ
アを含む）、同第５，５９３，８７５号（リン酸カルシウムトランスフェクショ
ンのための方法を記載する）、および同第４，９４５，０５０同第（生物学的に
活性な粒子がある速度で細胞に噴霧され、それによりこの粒子がこの細胞の表面
に浸透し、そしてこの細胞の内側に組み込まれるプロセスを記載する）、および
ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０９５８（核リガンドを含む）に記載される。

【０２４７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子治療または細胞治療はさらに、同じか異なる細胞（単
数または複数）における１つ以上のさらなるポリペプチドの送達を含み得ること
もまた企図される。このような細胞は、患者に別々に導入され得るか、この細胞
は、単一の移植可能デバイス（例えば、上記のカプセル化膜）に含められ得るか
、あるいはこの細胞は、ウイルスベクターによって別々に改変され得る。

【０２４８】 遺伝子治療による細胞における内在性ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を
増加する手段は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドプロモーターに１つ以上のエン
ハンサーエレメントを挿入することであり、ここでエンハンサーエレメントは、
ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の転写活性を増加させるように働き得る。使用されるエ
ンハンサーエレメントは、遺伝子を活性化することを所望する組織に基づいて選
択される−エンハンサーエレメントは、組織が選択されるという点で、プロモー
ター活性化を与えることが知られている。例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドをコードする遺伝子がＴ細胞において「オンに変わる」場合、ｌｃｋプロモー
ターエンハンサーエレメントが使用され得る。従って、付加される転写エレメン
トの機能的部分は、標準的なクローニング技術を使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドプロモーターを含むＤＮＡのフラグメントに挿入され得る（そして必
要に応じて、ベクターおよび／または５’および／または３’隣接配列に挿入さ
れる）。「相同性組換え構築物」として公知のこの構築物は、次いで、エキソビ
ボまたはインビボノいずれかで、所望の細胞に導入され得る。

【０２４９】 遺伝子治療はまた、内在性プロモーターのヌクレオチド配列を改変することに
よって、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現を減少するために使用され得る。こ
のような改変は、典型的に、相同性組換え方法によって達成される。例えば、不
活性化のために選択されたＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子のプロモーターの全てまたは
一部を含むＤＮＡ分子は、転写を調節するプロモーターの断片を除去および／ま
たは置換するように操作され得る。例えば、プロモーターの転写活性化因子のＴ
ＡＴＡボックスおよび／または結合部位は、標準的な分子生物学的技術を使用し
て欠失され得；このような欠失は、プロモーター活性を阻害し得、それにより対
応するＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の転写を阻止し得る。プロモーターにおけるＴＡ
ＴＡボックスまたは転写活性化因子結合部位の欠失は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドプロモーター（調節されるＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子と同じかまたは関連の
種由来）のすべてまたは関連の部分を含むＤＮＡ構築物を生成することによって
達成され得、ここで、１つ以上のＴＡＴＡボックスおよび／または転写活性化因
子結合部位のヌクレオチドは、１つ以上のヌクレオチドの置換、欠失、および／
または挿入によって変異される。結果として、ＴＡＴＡボックスおよび／または
活性化因子結合部位は、活性を減少するか、または完全に不活性にされる。この
構築物（これはまた、典型的に、改変されたプロモーターセグメントに隣接した
ネイティブの（内在性）５’および３’ＤＮＡ配列に対応する少なくとも約５０
０塩基のＤＮＡを含む）は、直接かまたは本明細書中に記載されるようなウイル
スベクターを介してのいずれかで、適切な細胞に（エキソビボまたはインビボの いずれかで）導入され得る。典型的に、細胞のゲノムＤＮＡへのこの構築物の組
込みは、相同性組換えによってであり、ここで、このプロモーター構築物の５’
および３’ＤＮＡ配列は、内在性染色体ＤＮＡへのハイブリダイゼーションによ
って、改変プロモーター領域に一体化するのを助け得る。

【０２５０】 （治療的用途） ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにそれらのアゴニストおよ
びアンタゴニストは、多数の疾患、障害または状態（本明細書中で引用されるも の を含む）を処置、診断、回復または予防するために使用され得る。

【０２５１】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドアゴニストおよびアンタゴニストは、ＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド活性を調節し、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの成熟形態
の少なくとも１つの活性を増加または減少するそれらの分子を含む。アゴニスト
またはアンタゴニストは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドと相互作用し、それに
よりその活性を調節する補因子（例えば、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂
質または低分子量分子）であり得る。強力なポリペプチドアゴニストまたはアン
タゴニストは、タンパク質の細胞外ドメインの一部または全てを含むＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドの可溶性または膜結合形態のいずれかと反応する抗体を含む
。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現を調節する分子は、典型的に、発現のアン
チセンス制御因子として働き得るＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする核
酸を含む。

【０２５２】 例えば、本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニ
ストおよびアンタゴニストは、免疫系不全を含む、疾患、障害または状態を処置
、診断、回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては
、以下が挙げられるが、これらに限定されない：リウマチ様動脈炎、乾癬性関節
炎、炎症性関節炎、変形性関節症、炎症性関節疾患、自己免疫疾患（自己免疫脈
管炎を含む）、多発性硬化症、狼瘡、糖尿病（例えば、インスリン糖尿病）、炎
症性腸疾患、移植拒絶、移植片対宿主疾患、および骨折、捻挫、軟骨損傷、外傷
、整形手術、感染または他の疾患プロセスから生じる炎症状態。免疫系の不全に
よって影響を受ける他の疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５３】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、感染を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復
または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：らい病、ウイルス感染（例えば、肝炎または
ＨＩＶ）、細菌感染（例えば、ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ関連疾患、ｃｌｏｓｔｒ
ｉｕｍ関連下痢を含む）、肺結核、急性熱性疾患、熱、肝臓の急性期反応、敗血
症または敗血症ショック。感染を含む他の疾患は、本発明の範囲内に包含される
。

【０２５４】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、体重障害を含む疾患、障害または状態を処置、診断、
回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：肥満、食欲不振、悪液質（ＡＩＤＳ誘発
性悪液質を含む）、筋障害（例えば、敗血症における筋肉タンパク質代謝）、お
よび低血糖症。体重障害を含む他の疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５５】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、神経機能不全を含む疾患、障害または状態を処置、診
断、回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以
下が挙げられるが、これらに限定されない：アルツハイマー病、パーキンソン病
、神経毒性（例えば、ＨＩＶによって誘発されるような）、ＡＬＳ、脳損傷、ス
トレス、うつ病、痛覚および他の疼痛（癌関連疼痛を含む）、痛覚過敏、癲癇、
学習障害および記憶障害、睡眠障害、ならびに末梢神経障害および中枢神経障害
。他の神経学的障害は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５６】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、肺を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復ま
たは予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げら
れるが、これらに限定されない：急性もしくは慢性肺損傷（間質性肺疾患を含む
）、急性呼吸疾患症候群、肺高血圧症、気腫、嚢胞性線維症、肺性線維症、およ
び喘息。肺の他の疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５７】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、皮膚を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復
または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：乾癬、湿疹および創傷治癒。他の皮膚の疾患
は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５８】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、腎臓を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復
または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：急性および慢性糸球体腎炎。他の腎臓の疾患
は、本発明の範囲内に包含される。

【０２５９】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、骨を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復ま
たは予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げら
れるが、これらに限定されない：骨粗鬆症、変形性関節症、骨形成不全症、パジ
ェット病、歯周疾患、一時性顎関節疾患、および高カルシウム血症。他の骨の疾
患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２６０】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、血管系を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回
復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙
げられるが、これらに限定されない：出血または発作、出血性ショック、虚血（
心臓虚血および大脳虚血、例えば、外傷、癲癇、出血または発作の結果としての
脳損傷（これらの各々は、神経変性を生じ得る）を含む）、アテローム性動脈硬
化症、うっ血性心不全、再狭窄、再灌流障害、および新脈管形成。他の血管系の
疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２６１】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、腫瘍細胞を含む疾患、障害または状態を処置、診断、
回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：リンパ腫、骨肉腫、慢性および急性骨髄
性白血病（ＣＭＬおよびＡＭＬ）、および他の白血病、多発性骨髄腫、肺癌、乳
癌、腫瘍転移、および放射線治療の副作用。他の腫瘍細胞を含む疾患は、本発明
の範囲内に包含される。

【０２６２】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、生殖器系を含む疾患、障害または状態を処置、診断、
回復または予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：不妊症、流産、早期分娩および早期産、
ならびに子宮内膜症。他の生殖器系を含む疾患は、本発明の範囲内に包含される
。

【０２６３】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、眼を含む疾患、障害または状態を処置、診断、回復ま
たは予防するために使用され得る。このような疾患の例としては、以下が挙げら
れるが、これらに限定されない：炎症性眼疾患（例えば、角膜移植に関連し得る
）、網膜変性、失明、黄斑変性、緑内障、ブドウ膜炎、および網膜ニューロパシ
ー。他の眼の疾患は、本発明の範囲内に包含される。

【０２６４】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子、ポリペプチド、ならびにアゴニストおよ
びアンタゴニストはまた、疾患（例えば、急性膵炎、慢性疲労症候群、線維素血
症、および川崎病（ＭＬＮＳ））を処置するために使用され得る。

【０２６５】 ＩＬ−１インヒビターは、ＩＬ−１に対する細胞性レセプターの活性化を特異
的に防止し得る任意のタンパク質を含み、これは、多くの機構から生じ得る。こ
のような機構は、ＩＬ−１産生のダウンレギュレーション、遊離ＩＬ−１の結合
、ＩＬ−１のそのレセプターへの結合の妨害、ＩＬ−１レセプター複合体の形成 （すなわち、ＩＬ−１レセプター補助タンパク質とのＩＬ−１レセプターの結合 ）の 妨害、およびＩＬ−１のそのレセプターへの結合後のシグナル伝達の調節の 妨害を含む。このようなインターロイキン−１インヒビターとしては、以下が挙
げられる：本明細書中に記載されるような、ＩＬ−１ｒａ−Ｒのようなインター
ロイキン−１レセプターアンタゴニスト、抗ＩＬ−１レセプターモノクローナル 抗体（例えば、欧州特許第６２３６７４号）、可溶性ＩＬ−１レセプターのよう
なＩＬ−１結合タンパク質（例えば、米国特許第５，４９２，８８８号、同第５
，４８８，０３２号、同第５，４６４，９３７号、同第５，３１９，０７１号、
および同第５，１８０，８１２号）、抗ＩＬ−１モノクローナル抗体（例えば、
ＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／０１９９７、ＷＯ９４／０２６２７、ＷＯ９０／０６
３７１；米国特許第４，９３５，３４３号；および欧州特許第３６４７７８号、
同第２６７６１１号および同第２２００６３号）、ＩＬ−１レセプター補助タン
パク質およびそれらに対する抗体（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９６／２３０６
７）；インターロイキン−１β変換酵素（ＩＣＥ）またはカスパーゼＩのインヒ
ビター（これを使用して、ＩＬ−１βの産生および分泌を阻害し得る）、インタ
ーロイキン−１βプロテアーゼインヒビター、ならびにＩＬ−１のインビボ合成
または細胞外放出を遮断する他の化合物およびタンパク質。

【０２６６】 例示的なＩＬ−１インヒビターは、以下において開示される：米国特許第５，
７４７，４４４号、同第５，３５９，０３２号、同第５，６０８，０３５号、同
第５，８４３，９０５号、同第５，３５９，０３２号、同第５，８６６，５７６
号、同第５，８６９，６６０号、同第５，８６９，３１５号、同第５，８７２，
０９５号、同第５，９５５，４８０号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／２１９５７、
ＷＯ９６／０９３２３、ＷＯ９１／１７１８４、ＷＯ９６／４０９０７、ＷＯ９
８／３２７３３、ＷＯ９８／４２３２５、ＷＯ９８／４４９４０、ＷＯ９８／４
７８９２、ＷＯ９８／５６３７７、ＷＯ９９／０３８３７、ＷＯ９９／０６４２
６、ＷＯ９９／０６０４２、ＷＯ９１／１７２４９、ＷＯ９８／３２７３３、Ｗ
Ｏ９８／１７６６１、ＷＯ９７／０８１７４、ＷＯ９５／３４３２６、ＷＯ９９
／３６４２６、およびＷＯ９９／３６４１５；欧州特許第５３４９７８号および
同第８９４７９５；ならびに仏国特許出願ＦＲ ２７６２５１４。

【０２６７】 インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）は、インタ
ーロイキン−１の天然のインヒビターとして作用するヒトタンパク質である。好
ましいレセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａならびにその改変体および誘導
体を含む）、ならびに、その作成方法および使用方法は、米国特許第５，０７５
，２２２号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／０８２８５、ＷＯ９１／１７１８４、Ｗ
Ｏ９２／１６２２１、ＷＯ９３／２１９４６、ＷＯ９４／０６４５７、ＷＯ９４
／２１２７５、ＷＯ９４／２１２３５、ＷＯ９４／２０５１７、ＷＯ９６／２２
７９３、ＷＯ９７／２８８２８およびＷＯ９９／３６５４１；豪国特許第ＡＵ
９１７３６３６号；仏国特許第ＦＲ ２７０６７７２号；ならびに独国特許第Ｄ
Ｅ ４２１９６２６号に記載される。このようなタンパク質には、グリコシル化
ＩＬ−１レセプターアンタゴニストおよび非グリコシル化ＩＬ−１レセプターア
ンタゴニストが含まれる。

【０２６８】 具体的には、ＩＬ−１ｒａおよびその改変体の３つの代表的な形態が、５，０
７５，２２２特許に開示されかつ記載される。これらのうち１つ目は、「ＩＬ−
１ｉ」と呼ばれ、Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．６）中の約５２ｍＭ ＮａＣｌにて
ＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣカラムから溶出する、およそ４．８の等電点を有する、Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥにおける２２〜２３ｋＤの分子として特徴付けられる。２番目（
ＩＬ−１ｒａβ）は、４８ｍＭ ＮａＣｌでＭｏｎｏＱカラムから溶出する、２
２〜２３ｋＤのタンパク質として特徴付けられる。ＩＬ−１ｒａαおよびＩＬ−
１ｒａβの両方がグリコシル化される。３番目（ＩＬ−１ｒａχ）は、４８ｍＭ ＮａＣｌでＭｏｎｏＱカラムから溶出する、２０ｋＤのタンパク質として特徴
付けられ、そしてグルコシル化されていない。米国特許第５，０７５，２２２号
はまた、これらのインヒビターのコードの原因である遺伝子を単離するための方
法、この遺伝子を適切なベクターおよび細胞型でクローン化するための方法、な
らびにこの遺伝子を発現させてこれらのインヒビターを産生するための方法を開
示する。

【０２６９】 欠 失、挿入および置換の多くの組合せ（本明細書中では個々にまたは集合的に
「改変体（単数または複数）」）が、ＩＬ−１ｒａ−Ｒのアミノ酸配列内で成さ
れ得、但し、得られる分子は、生物学的に活性である（例えば、本明細書中に記
載されるような疾患および障害の１つ以上に影響を及ぼす能力を有する）ことを
、当業者は認識する。

【０２７０】 本発明により意図されるように、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、他の治療 に対する補助物 として、そしてまた処置される適応症に適切な他の薬学的組成物
と共に投与され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド、および１つ以上の更なる
治療または薬学的処方のうちのいずれかが、別々にか、続けてか、または同時に
投与され得る。

【０２７１】 特定の実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される疾患および障害
の処置または予防のための１つ以上のＴＮＦインヒビターのいずれかと組合わせ
た（前処置、処置後、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に
関する。

【０２７２】 このようなＴＮＦインヒビターとしては、ＴＮＦのインビボ合成または細胞外
放出を遮断する化合物およびタンパク質が挙げられる。特定の実施形態において
、本発明は、以下の１つ以上のＴＮＦインヒビターのいずれかと組合わせた（前
処置、処置後、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関する
：ＴＮＦ結合タンパク質（本明細書中で定義されるような、可溶性ＴＮＦレセプ
ターＩ型および可溶性ＴＮＦレセプターＩＩ型（「ｓＴＮＦＲ」）、抗ＴＮＦ抗
体、顆粒球コロニー刺激因子、サリドマイド、ＢＮ ５０７３０、テニダプ（ｔ
ｅｎｉｄａｐ）、Ｅ ５５３１、チアパファント（ｔｉａｐａｆａｎｔ）ＰＣＡ ４２４８、ニメスリド（ｎｉｍｅｓｕｌｉｄｅ）、パナビル（ｐａｎａｖｉｒ ） 、ロリプラム（ｒｏｌｉｐｒａｍ）、ＲＰ ７３４０１、ペプチドＴ、ＭＤＬ ２０１，４４９Ａ、（１Ｒ，３Ｓ）−Ｃｉｓ−１−［９−（２，６−ジアミノ プ リニル）］−３−ヒドロキシ−４−シクロペンテン塩酸塩、（１Ｒ，３Ｒ）−
ｔｒａｎｓ−１−（９−（２，６−ジアミノ）プリン］−３−アセトキシシクロ
ペンタン、（１Ｒ，３Ｒ）−ｔｒａｎｓ−１−［９−アデニル）−３−アジドシ
クロペンタン塩酸塩および（１Ｒ，３Ｒ）−ｔｒａｎｓ−１−（６−ヒドロキシ
−プリン−９−イル）−３−アジドシクロ−ペンタン。ＴＮＦ結合タンパク質は
、当該分野で開示される（米国特許第５，１３６，０２１号；欧州特許第３０８
３７８号、同第４２２３３９号、同第３９３４３８号、同第３９８３２７号、同
第４１２４８６号、同第４１８０１４号、同第４３３９００号、同第４６４５３
３号、同第５１２５２８号、同第５２６９０５号、同第５６８９２８号、同第４
１７５６３号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／１３５７５、ＷＯ９１／０３５５３、
ＷＯ９２／０１００２、ＷＯ９２／１３０９５、ＷＯ９２／１６２２１、ＷＯ９
３／０７８６３、ＷＯ９３／２１９４６、ＷＯ９３／１９７７７、ＷＯ９４／０
６４７６、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９７／１２２４４；英国特許第ＧＢ ２
２１８１０１号および同第２２４６５６９号；ならびに日本国特許出願第ＪＰ１
２７，８００／１９９１）。

【０２７３】 例えば、欧州特許第３９３４３８号および同第４２２３３９号は、可溶性ＴＮ
ＦレセプターＩ型（「ｓＴＮＦＲ−Ｉ」または「３０ｋＤａ ＴＮＦインヒビタ
ー」としても公知）および可溶性ＴＮＦレセプターＩＩ型（「ｓＴＮＦＲ−ＩＩ
」または「４０ｋＤａ ＴＮＦインヒビター」としても公知）（集合的に「ｓＴ
ＮＦＲ」と称する）ならびにその改変形態（例えば、フラグメント、機能的誘導
体、および改変体）のアミノ酸配列および核酸配列を教示する。欧州特許第３９
３４３８号および同第４２２３３９号はまた、インヒビターのコードの原因であ
る遺伝子を単離するための方法、適切なベクターおよび細胞型でこの遺伝子をク
ローニングするための方法、ならびにこの遺伝子を発現させてインヒビターを産
生するための方法を開示する。さらに、ｓＴＮＦＲ−ＩおよびｓＴＮＦＲ−ＩＩ
の多価形態（すなわち、１より多くの活性部分を含む分子）もまた開示された。
１つの実施形態において、多価形態は、少なくとも１つのＴＮＦインヒビターお
よび別の部分を、任意の臨床的に受容可能なリンカー（例えば、ポリエチレング
リコール）と化学的にカップリングすることにより（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／
１６２２１およびＷＯ９５／３４３２６）、ペプチドリンカーにより（Ｎｅｖｅ
ら、１９９６、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、８：３６５−７０）、ビオチンへの化学的カ
ップリングおよび次いでアビジンへの結合（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／０３５５
３）により、そして最後に、キメラ抗体分子を組合わせることにより（米国特許
第５，１１６，９６４号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／０９６２２およびＷＯ９１
／１６４３７；ならびに欧州特許第３１５０６２号）構築され得る。

【０２７４】 抗ＴＮＦ抗体としては、以下が挙げられる：ＭＡＫ １９５Ｆ Ｆａｂ抗体（
Ｈｏｌｌｅｒら、１９９３、１ｓｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏ
ｓｉｕｍ ｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａ
ｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １４７）、ＣＤＰ ５７１抗ＴＮＦモノクローナル
抗体（Ｒａｎｋｉｎら、１９９５、Ｂｒ． Ｊ． Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．、３４
：３３４−４２）、ＢＡＹ Ｘ １３５１マウス抗腫瘍壊死因子モノクローナル
抗体（Ｋｉｅｆｔら、１９９５，７ｔｈ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ
ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔ
ｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ９）；ＣｅｎＴＮＦ ｃＡ２抗ＴＮＦモノクロー
ナル抗体（Ｅｌｌｉｏｔｔら、１９９４、Ｌａｎｃｅｔ、３４４：１１２５−２
７；Ｅｌｌｉｏｔｔら、１９９４、Ｌａｎｃｅｔ、３４４：１１０５−１０）。

【０２７５】 特定の実施形態において、本発明は、分泌または可溶性のヒトｆａｓ抗原また
はその組換えバージョン（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９６／２０２０６；Ｍｏｕｎｔｚ
ら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：４８２９−３７；および欧州特
許第５１０６９１号）と組合わせた（前処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関する。ＰＣＴ公開番号ＷＯ９６／２０２０６
は、分泌ヒトｆａｓ抗原（ネイティブおよび組換え（Ｉｇ融合タンパク質を含む ） ）、可溶性組換えヒトｆａｓ抗原のコードの原因である遺伝子を単離するため
の方法、適切なベクターおよび細胞型でこの遺伝子をクローン化するための方法
、ならびにこの遺伝子を発現させてインヒビターを産生するための方法を開示す
る。欧州特許第５１０６９１号は、ヒトｆａｓ抗原（可溶性ｆａｓ抗原を含む） をコードする核酸、この核酸を発現するためのベクター、およびこのベクターで
トランスフェクトされた形質転換体を教示する。非経口的に投与される場合、分
泌または可溶性のｆａｓ抗原融合タンパク質の用量は、それぞれ一般的に、約１
μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇである。

【０２７６】 本明細書中に列挙される疾患および障害（リウマチ性疾患のような急性および
慢性の炎症を含む）の現在の処置は、一般的に、疼痛および炎症の制御のための
第１の系統の薬物の使用を包含し；これらの薬物は、非ステロイド系抗炎症薬（
ＮＳＡＩＤ）として分類される。二次的な処置は、コルチコステロイド（遅効性
の抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）、または疾患改善（ＤＭ）薬を含む。以下の化合
物に関する情報は、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓ
ｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ （第１６版、１９９２）およびＰｈａｒｍａｐ
ｒｏｊｅｃｔｓ（ＰＪＢ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｌｔｄ）に見出され得
る。

【０２７７】 特定の実施形態において、本発明は、本明細書中に列挙される疾患および障害
（リウマチ性疾患のような急性および慢性の炎症ならびに移植片対宿主病を含む
）の処置のためのＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドおよび１以上のＮＳＡＩＤのい ずれか の使用に関する。ＮＳＡＩＤは、その抗炎症性作用が、少なくとも部分的
に、プロスタグランジン合成の阻害による（ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ
、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐ
ｅｕｔｉｃｓ（第７版、１９８５））。ＮＳＡＩＤは、以下の少なくとも９つの
グループに特徴付けられ得る：（１）サリチル酸誘導体、（２）プロピオン酸誘
導体、（３）酢酸誘導体、（４）フェナム酸誘導体、（５）カルボン酸誘導体、
（６）酪酸誘導体、（７）オキシカム類、（８）ピラゾール類、および（９）ピ
ラゾロン類。

【０２７８】 別の特定の実施形態にいおいて、本発明は、１つ以上のサリチル酸誘導体、そ
のプロドラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩のいずれかと組合わせた
（前処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関
する。このようなサリチル酸誘導体、そのプロドラッグエステル、および薬学的
に受容可能な塩は、以下を含む：アセトアミノザロール（ａｃｅｔａｍｉｎｏｓ
ａｌｏｌ）、アロキシプリン（ａｌｏｘｉｐｒｉｎ）、アスピリン、ベノリレー
ト（ｂｅｎｏｒｙｌａｔｅ）、ブロモサリゲニン、アセチルサリチル酸カルシウ
ム、コリンマグネシウムトリサリチレート、サリチル酸マグネシウム、コリンサ
リチレート、ジフルシナル（ｄｉｆｌｕｓｉｎａｌ）、エテルサレート（ｅｔｅ
ｒｓａｌａｔｅ）、フェンドサール（ｆｅｎｄｏｓａｌ）、ゲンチジン酸、サリ
チル酸グリコール、イミダゾールサリチレート、リジンアセチルサリチレート、
メサラミン、モルホリンサリチレート、１−ナフチルサリチレート、オルサラジ
ン、パルサルミド（ｐａｒｓａｌｍｉｄｅ）、アセチルサリチル酸フェニル、サ
リチル酸フェニル、サラセタミド（ｓａｌａｃｅｔａｍｉｄｅ）、サリチルアミ
ド Ｏ−酢酸、サルサレート、サリチル酸ナトリウムおよびスルファサラジン。
同様の鎮痛特性および抗炎症特性を有する構造的に関連したサリチル酸誘導体も また、この群に包含されることが意図される。

【０２７９】 さらなる特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のプロピオン酸誘導体
、そのプロドラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合
わせた（前処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使
用に関する。プロピオン酸誘導体、そのプロドラッグエステル、および薬学的に
受容可能な塩は、以下を含む：アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブク
ロクス酸、カルプロフェン、デキスインドプロフェン（ｄｅｘｉｎｄｏｐｒｏｆ
ｅｎ）、フェノプロフェン、フルノキサプロフェン、フルプロフェン、フルルビ
プロフェン、フルクロプロフェン、イブプロフェン、イブプロフェンアルミニウ
ム、イブプロキサム、インドプロフェン、イソプロフェン、ケトプロフェン、ロ
キソプロフェン（ｌｏｘｏｐｒｏｆｅｎ）、ミロプロフェン、ナプロキセン、ナ
プロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピケトプロフェン、ピメプロフェン、
ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸、ピリドキシプロフェン（ｐ
ｙｒｉｄｏｘｉｐｒｏｆｅｎ）、スプロフェン、チアプロフェン酸およびチオキ
サプロフェン。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連し
たプロピオン酸誘導体もまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８０】 なお別の特定の実施形態において、本発明は、１つ以上の酢酸誘導体、そのプ
ロドラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（ 前 処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関す
る。酢酸誘導体、そのプロドラッグエステル、および薬学的に受容可能な塩は、
以下を含む：アセメタシン、アルクロフェナク、アムフェナク、ブフェキサマッ
ク、シンメタシン、クロピラク、デルメタシン（ｄｅｌｍｅｔａｃｉｎ）、ジク
ロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク、フェルビナク、
フェンクロフェナク、フェンクロラク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、フ
ロフェナク、グルカメタシン、イブフェナック、インドメタシン、イソフェゾラ
ク、イソキセパック、ロナゾラク、メチアジン酸（ｍｅｔｉａｚｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、オキサメタシン、オキシピナック（ｏｘｐｉｎａｃ）、ピメタシ
ン、プログルメタシン、スリンダク、タルメタシン、チアラミド、チオピナク、
トルメチン、トルメチンナトリウム、ジドメタシンおよびゾメピラク。類似した
鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連した酢酸誘導体もまた、こ
の群に含まれることが意図される。

【０２８１】 別の特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のフェナム酸誘導体、その プロドラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた
（前処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関
する。フェナム酸誘導体、そのプロドラッグエステル、および薬学的に受容可能
な塩は、以下を含む：エンフェナム酸、エトフェナマート、フルフェナム酸、イ
ソニキシン、メクロフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、メドフェナム酸
（ｍｅｄｏｆｅｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）、メフェナム酸、ニフルム酸、タルニフ
ルマート、テロフェナマート、トルフェナム酸およびウフェナマート。類似した
鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したフェナム酸誘導体もま
た、この群に含まれることが意図される。

【０２８２】 さらなる特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のカルボン酸誘導体、 その プロドラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わ
せた（前処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用
に関する。使用され得るカルボン酸誘導体、そのプロドラッグエステル、および 薬 学的に受容可能な塩は以下を含む：クリダナク、ジフルニサル、フルフェニサ
ール、イノリジン（ｉｎｏｒｉｄｉｎｅ）、ケトロラクおよびチノリジン。類似
した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したカルボン酸誘導体 も また、この群に含まれることが意図される。

【０２８３】 なお別の特定の実施形態において、本発明は、１つ以上の酪酸誘導体、そのプ
ロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせ
た（前処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に
関する。酪酸誘導体、そのプロドラッグエステル、および薬学的に受容可能な塩
は、以下を含む：ブマジソン、ブチブフェン、フェンブフェンおよびキセンブシ
ン。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連した酪酸誘導
体もまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８４】 別の特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のオキシカム、そのプロド
ラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（前処 置、後 処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関する。
オキシカム、そのプロドラッグエステル、および薬学的に受容可能な塩は、以下
を含む：ドロキシカム、エノリカム、イソキシカム、ピロキシカム、スドキシカ
ム、テノキシカムおよび４−ヒドロキシル−１，２−ベンゾチアジン１，１−ジ
オキシド４−（Ｎ−フェニル）−カルボキサミド。類似した鎮痛性特性および抗
炎症性特性を有する構造的に関連したオキシカムもまた、この群に含まれること
が意図される。

【０２８５】 なお別の特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のピラゾール、そのプ
ロドラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（ 前 処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関す
る。使用され得るピラゾール、そのプロドラッグエステル、および薬学的に受容
可能な塩は以下を含む：ジフェナミゾールおよびエピリゾール。類似した鎮痛性
特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したピラゾールもまた、この群に
含まれることが意図される。

【０２８６】 さらなる特定の実施形態において、本発明は、１つ以上のピラゾロン、そのプ
ロドラッグエステル、または薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（ 前 処置、後処置、または同時処置）ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関す
る。使用され得るピラゾロン、そのプロドラッグエステル、および薬学的に受容
可能な塩は、以下を含む：アパゾン、アザプロパゾン、ベンズピペリロン、フェ
プラゾン、モフェブタゾン、モラゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾ
ン、ピペブゾン、プロピルフェナゾン、ラミフェナゾン、スキシブゾンおよびチ
アゾリノブタゾン。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関
連したピラゾロン（ｐｙｒａｚａｌｏｎｅ）もまた、この群に含まれることが意
図される。

【０２８７】 別の特定の実施形態において、本発明は、以下のＮＳＡＩＤの１つ以上のいず
れかと組み合わせた（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドの使用に関する：ε−アセトアミドカプロン酸、Ｓ−アデノシルメ
チオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン、アニトラザフェ
ン、アントラフェニン、ベンダザック、ベンダザックリジネート（ｂｅｎｄａｚ
ａｃ ｌｙｓｉｎａｔｅ）、ベンジダミン、ベプロジン（ｂｅｐｒｏｚｉｎ）、
ブロペラモール、ブコローム、ブフェゾラク、シプロカゾン、クロキシマート、
ダジダミン、デボキサメト、デトミジン、ジフェンピラミド、ジフェンピラミド
、ジフィサラミン（ｄｉｆｉｓａｌａｍｉｎｅ）、ジタゾール、エモルファゾン
、ファネチゾールメシレート、フェンフルミゾール、フロクタフェニン、フルミ
ゾール、フルニキシン、フルプロカゾン、フォピルトリン（ｆｏｐｉｒｔｏｌｉ
ｎｅ）、フォスフォサル、グアイメサール、グアイアゾレン（ｇｕａｉａｚｏｌ
ｅｎｅ）、イソニキシン（ｉｓｏｎｉｘｉｒｎ）、レフェタミンＨＣｌ、レフル
ノミド、ロフェミゾール、ロチファゾール、リジンクロニキシネート（ｌｙｓｉ
ｎ ｃｌｏｎｉｘｉｎａｔｅ）、メセクラゾン、ナブメトン、ニクチンドール、
ニメスリド、オルゴテイン、オルパノキシン、オキサセプロール、オキサパドー
ル、パラニリン（ｐａｒａｎｙｌｉｎｅ）、ぺリソキサール、クエン酸ぺリソキ
サール、ピフォキシム、ピプロキセン（ｐｉｐｒｏｘｅｎ）、ピラゾラク、ピル
フェニドン、プロカゾン、プロキサゾール、チエラビンＢ（ｔｈｉｅｌａｖｉｎ
Ｂ）、チフラミゾール、チメガジン、トレクチン、トルパドール、トリプトア
ミド（ｔｒｙｐｔａｍｉｄ）および４８０１５６Ｓ、ＡＡ８６１、ＡＤ１５９０
、ＡＦＰ８０２、ＡＦＰ８６０、ＡＩ７７Ｂ、ＡＰ５０４、ＡＵ８００１、ＢＰ
ＰＣ、ＢＷ５４０Ｃ、ＣＨＩＮＯＩＮ １２７、ＣＮ１００、ＥＢ３８２、ＥＬ
５０８、Ｆ１０４４、ＦＫ−５０６、ＧＶ３６５８、ＩＴＦ１８２、ＫＣＮＴＥ
Ｉ６０９０、ＫＭＥ４、ＬＡ２８５１、ＭＲ７１４、ＭＲ８９７、ＭＹ３０９、
ＯＮＯ３１４４、ＰＲ８２３、ＰＶ１０２、ＰＶ１０８、Ｒ８３０、ＲＳ２１３
１、ＳＣＲ１５２、ＳＨ４４０、ＳＩＲ１３３、ＳＰＡＳ５１０、ＳＱ２７２３
９、ＳＴ２８１、ＳＹ６００１、ＴＡ６０、ＴＡＩ−９０１（４−ベンゾイル−
１−インダンカルボン酸）、ＴＶＸ２７０６、Ｕ６０２５７、ＵＲ２３０１およ
びＷＹ４１７７０のような会社コード番号によって登録されるようなＮＳＡＩＤ
。ＮＳＡＩＤに対して類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に
関連したＮＳＡＩＤはまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８８】 さらに別の特定の実施形態において、本発明は、リウマチ性疾患、対宿主性移
植片病、および多発性硬化症のような急性および慢性炎症を含む、本明細書中に
列挙される疾患および障害の処置のための、１つ以上の副腎皮質ステロイド、プ
ロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせ
た（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使
用に関する。副腎皮質ステロイド、プロドラッグエステル、およびその薬学的に
受容可能な塩は、以下に由来するヒドロコルチゾンおよび化合物を含む：２１−
アセトキシプレグネノロン、アルクロメラゾン、アルゲストン、アムシノニド、
ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ベタメタゾンバレレート、ブデソニド、クロロ
プレドニゾロン、クロベタゾール、クロベタゾールプロピオネート、クロベタゾ
ン、クロベタゾンブチレート、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコス
テロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコン、デソニド、デスオキシメ
ラゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドネー
ト、エノキソロン、フルアザコート、フルクロロニド、フルメタゾン、フルメタ
ゾンピバレート、フルシノロンアセトニド、フルニソリド、フルオシノニド、フ
ルオシノロンアセトニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオコ
ルトロンヘキサノエート、ジフルコルトロンバレレート、フルオロメトロン、フ
ルペロロンアセテート、フルプレドニデンアセテート、フルプレドニゾロン、フ
ルランデノリド、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ハロプレドン
アセテート、ヒドロコルタメート、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンアセテ
ート、ヒドロコルチゾンブチレート、ヒドロコルチゾンホスフェート、ヒドロコ
ルチゾン２１−ナトリウムスクシネート、ヒドロコルチゾンテブテート、マジプ
レドン、メドリゾン、メプレドニゾンメチルプレドニソロン、モメタゾンフロエ
ート、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２
１−ジエドリアミノアセテート、プレドニゾロンナトリウムホスフェート、プレ
ドニゾロンナトリウムスクシネート、プレドニゾロンナトリウム２１−ｍ−スル
ホベンゾエート、プレドニゾロン２１−ステアログリコレート、プレドニゾロン テブテート、 プレドニゾロン２１−トリメチルアセテート、プレドニゾン、プレ
ドニバル、プレドニリデン、プレドニリデン２１−ジエチルアミノアセテート、
チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアム
シノロンベネトニド、およびトリアムシノロンヘキサアセトニドのようなヒドロ
コルチゾン。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連した
副腎皮質コルチコイドはまた、この群に含まれることが意図される。

【０２８９】 別の特定の実施形態において、本発明は、リウマチ性疾患、対宿主性移植片病
、および多発性硬化症のような急性および慢性炎症を含む、本明細書中に列挙さ
れる疾患および障害の処置のための、１つ以上の遅効性の抗リウマチ性薬物（Ｓ
ＡＡＲＤ）または疾患改変抗リウマチ性薬物（ＤＭＡＲＤＳ）、プロドラッグエ
ステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせた（処置前、
処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用に関する。
ＳＡＡＲＤまたはＤＭＡＲＤ、プロドラッグエステル、およびその薬学的に受容
可能な塩は、以下を含む：アロキュプレイドナトリウム、オーラノフィン、アウ
ロチオグルコース、アウロチオグリカニド、アザチオプリン、ブレキナール（ｂ
ｒｅｑｕｉｎａｒ）ナトリウム、ブシラミン、カルシウム３−アウロチオ−２−
プロパノール−１−スルホネート、クロラムブシル、クロロキン、クロブザリッ
ト、キュプロキソリン、シクロホスホアミド、シクロスポリン、ダプソン、１５
−デオキシスペルグアリン、ジアセレイン、グルコサミン、金塩（例えば、シク
ロキン金塩、金ナトリウムチオマレート、金ナトリウムチオスルフェート）、ヒ
ドロキシクロロキン、ヒドロキシクロロキンスルフェート、ヒドロキシ尿素、ケ
ブゾン、レバミゾール、ロベンザリット、メリチン、６−メルカプトプリン、メ
トトレキセート、ミゾリビン、ミコフェノレートモフェチル（ｍｏｆｅｔｉｌ）
、ミオラル、ナイトロジェン・マスタード、Ｄ−ペニシルアミン、ピリジノール
、イミダゾール（例えば、ＳＫＮＦ８６００２およびＳＢ２０３５８０）、ラパ
マイシン、チオール、サイモポエチン、およびビンクリスチン。類似した鎮痛性
特性および抗炎症性特性を有する構造的に関連したＳＡＡＲＤまたはＤＭＡＲＤ
はまた、この群に含まれることが意図される。

【０２９０】 別の特定の実施形態において、本発明は、急性および慢性炎症を含む、本明細
書中に列挙される疾患および障害の処置のための、１つ以上のＣＯＸ２インヒビ
ター、プロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組
み合わせた（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドの使用に関する。ＣＯＸ２インヒビター、プロドラッグエステル、またはそ
の薬学的に受容可能な塩の例としては、例えば、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘ
ｉｂ）が挙げられる。類似した鎮痛性特性および抗炎症性特性を有する構造的に
関連したＣＯＸ２インヒビターはまた、この群に含まれることが意図される。

【０２９１】 さらに別の特定の実施形態において、本発明は、急性および慢性炎症を含む、
本明細書中に記載される疾患および障害の処置のための、１つ以上の抗菌剤、プ
ロドラッグエステル、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかと組み合わせ
た（処置前、処置後、または処置と同時）、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使
用に関する。抗菌剤としては、例えば、ペニシリン、セファロスポリンおよび他
のβ−ラクタム、アミノ配糖体、アゾール、キロノン類、マクロライド、リファ
マイシン、テトラサイクリン、スルホンアミド、リンコサミド（ｌｉｎｃｏｓａ
ｍｉｄｅ）およびポリミキシンの広範なクラスが挙げられる。ペニシリンは、以
下を含むがこれらに限定されない：ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリン、
ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フロクサシリ
ン、アンピシリン、アンピシリン／スルバクタム、アモキシリン、アモキシリン
／クラブラン酸、ヘタシリン、シクラシリン（ｃｙｃｌａｃｉｌｌｉｎ）、バカ
ンピシリン、カルベニシリン、カルベニシリンインダニル（ｃａｒｂｅｎｉｃｉ
ｌｌｉｎ ｉｎｄａｎｙｌ）、チカルシリン、チカルシリン／クラブラン酸、ア
ズロシリン、メズロシリン、ピペラシリン（ｐｅｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ）、およ
びメシリナム。セファロスポリンおよび他のβ−ラクタムとしては、以下を含む
がこれらに限定されない：セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セフ
ラジン、セファゾリン、セファドロキシル、セファクロール、セファマンドール
、セフォテタン、セフォキシチン、セルロキシム（ｃｅｒｕｒｏｘｉｍｅ）、セ
フォニシド、セフォラジン（ｃｅｆｏｒａｄｉｎｅ）、セフィキシム、セフォタ
キシム、モキサラクタム、セフチゾキシム、セトリアキソン（ｃｅｔｒｉａｘｏ
ｎｅ）、セフォペラゾン（ｃｅｐｈｏｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフタジジム、イミ
ペネムおよびアズトレオナム。アミノ配糖体としては、以下を含むがこれらに限
定されない：ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アミカシ
ン、ネチルマイシン、カナマイシンおよびネオマイシン。アゾールとしては、フ
ルコナゾールを含むがこれに限定されない。キノロン類としては、ナリジクス酸
、ノルフロキサシン、エノキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、ス
パルフロキサシンおよびテマフロキサシンを含むがこれらに限定されない。マク
ロライドとしては、エリスロマイシン（ｅｒｙｔｈｏｍｙｃｉｎ）、スピラマイ
シンおよびアジスロマイシンを含むがこれらに限定されない。リファマイシンと
しては、リファンピンを含むがこれに限定されない。テトラサイクリンとしては
、スピサイクリン（ｓｐｉｃｙｃｌｉｎｅ）、クロルテトラサイクリン、クロモ
サイクリン、デメクロサイクリン、デオキシサイクリン（ｄｅｏｘｙｃｙｃｌｉ
ｎｅ）、グアメサイクリン（ｇｕａｍｅｃｙｃｌｉｎｅ）、リメサイクリン、メ
クロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、
ぺニメピサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン
、セノサイクリン（ｓｅｎｏｃｉｃｌｉｎ）およびテトラサイクリンを含むがこ
れらに限定されない。スルホンアミドとしては、スルホニルアミド、スルファメ
トキサゾール、スルファセタミド、スルファジアジン、スルフィソキサゾールお
よびｃｏ−トリモキサゾール（トリメトプリム／スルファメトキシサゾール）を
含むがこれらに限定されない。リンコサミドとしては、クリンダマイシンおよび
リンコマイシンを含むがこれらに限定されない。ポリミキシン（ポリペプチド）
としては、ポリミキシンＢおよびコリスチンを含むがこれらに限定されない。

【０２９２】 ＩＬ−１ＲＡ−Ｆポリペプチド機能のアゴニストまたはアンタゴニストは、処
置される状態に適切であるように、１つ以上のサイトカイン、増殖因子、抗生物
質、抗炎症剤および／または化学療法剤と組み合わせて（同時にかまたは引き続
き）使用され得る。

【０２９３】 望ましくないレベルの１つ以上のＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａ、またはＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒポリペプチドによって引き起こされるかまたは媒介される他の疾患は、本
発明の範囲内に含まれる。望ましくないレベルとしては、過度のレベルのＩＬ−
１、ＩＬ−１ｒａ、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド、および正常以下のレ
ベルのＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａ、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが挙げら
れる。

【０２９４】 （ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸およびＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの使用） 本発明の核酸分子（それ自体は生物学的に活性なポリペプチドをコードしない
核酸分子を含む）を使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子および関連遺伝子の染色
体上の位置をマッピングし得る。マッピングは、当該分野で公知の技術（例えば
、ＰＣＲ増幅およびインサイチュハイブリダイゼーション）により行われ得る。

【０２９５】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ核酸分子（それ自体は生物学的に活性なポリペプチドをコー
ドしない核酸分子を含む）は、哺乳動物組織または体液サンプル中のＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒ核酸分子の存在について、定性的または定量的のいずれかで試験するため
の、診断アッセイにおけるハイブリダイゼーションプローブとして有用であり得
る。

【０２９６】 他の方法はまた、１つ以上のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの活性を阻害する
ことが所望される場合に使用され得る。このような阻害は、発現制御配列（三重
らせん形成）またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡに相補的でありかつ発現制御配
列（三重らせん形成）またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡにハイブリダイズする
核酸分子によりもたらされ得る。例えば、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ分子
（これらは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の少なくとも一部に相補的である配列を有
する）は、細胞中に導入され得る。アンチセンスプローブは、本明細書中に開示
されるＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の配列を使用して、利用可能な技術により設計さ
れ得る。代表的には、このようなアンチセンス分子の各々は、選択された各ＩＬ
−１ｒａ−Ｒ遺伝子の開始部位（５’末端）に相補的である。このアンチセンス
分子が次いで、対応するＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡにハイブリダイズする場合
、このｍＲＮＡの翻訳は、防止されるかまたは低減される。アンチセンスインヒ
ビターは、細胞または生物におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの減少または
不在に関連する情報を提供する。

【０２９７】 あるいは、遺伝子治療を使用して、１つ以上のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
の優性ネガティブインヒビターを作製し得る。この状況において、各選択された
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡは、調
製され得、そして本明細書中に記載されるウイルスまたは非ウイルスの方法のい
ずれかを使用して患者の細胞中に導入され得る。このような変異体の各々は、代
表的にはその生物学的役割において内因性ポリペプチドと競合するように設計さ
れる。

【０２９８】 さらに、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（生物学的に活性でも活性でなくても
）は、免疫原として使用され得、すなわち、これらのポリペプチドは、それに対
して抗体が誘発され得る少なくとも１つのエピトープを含有する。ＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドに結合する選択的結合因子（本明細書中に記載されるように）
は、インビボおよびインビトロでの診断目的のために使用され得、これらの目的
としては、体液サンプルまたは細胞サンプル中のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
の存在を検出するための標識された形態での使用を含むが、これに限定されない
。これらの抗体をまた使用して、本明細書中に列挙される疾患および障害を含む
多数の疾患および障害を、予防、処置、または診断し得る。これらの抗体は、Ｉ
Ｌ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの少なくとも１つの活性特徴を低減するかまたは遮
断するように、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに結合し得るか、またはポリペプ
チドに結合してＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの少なくとも１つの活性特徴を増
加し得る（ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの薬物動態を増加させることによるも
のを含む）。

【０２９９】 本発明のＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、発現クローニングストラテジーを
使用して、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターをクローン化するために使
用され得る。放射性標識（^１２５ヨウ素）されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
またはアフィニティ／活性−タグ化ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（例えば、Ｆ
ｃ融合またはアルカリホスファターゼ融合）を、結合アッセイにおいて使用して
、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターを発現する細胞型または細胞株また
は組織を同定し得る。このような細胞または組織から単離されたＲＮＡは、ｃＤ
ＮＡに変換され得、哺乳動物発現ベクターにクローン化され、そして哺乳動物細
胞（例えば、ＣＯＳまたは２９３細胞）にトランスフェクトされて発現ライブラ
リーを生成する。放射性標識されるかまたはタグ化されたＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドは、次いで、アフィニティリガンドとして使用されて、このライブラリ
ーから、その表面上にＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターを発現する細胞
のサブセットを同定および単離し得る。ＤＮＡは、次いでこれらの細胞から単離
され得、そして哺乳動物細胞にトランスフェクトされて二次発現ライブラリー（
ここで、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターを発現する細胞の画分は、元
のライブラリーよりも何倍も高い）を作製し得る。この富化プロセスは、ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターを含有する単一の組換えクローンが単離され
るまで繰り返し反復され得る。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプターの単離
は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドシグナル伝達経路の新規なアゴニストおよび
アンタゴニストを同定または開発するために有用である。このようなアゴニスト
およびアンタゴニストとしては、可溶性ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプタ
ー、抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドレセプター抗体、低分子またはアンチセン
スオリゴヌクレオチドが含まれ、そしてこれらは、本明細書中に記載される疾患
または障害の１つ以上を、処置、予防、または診断するために使用され得る。

【０３００】 ヒトＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするｃＤＮＡの寄託（受託番号Ｐ
ＴＡ−１４２３を有する）を、アメリカン タイプ カルチャー コレクション
（ＡＴＣＣ）（バージニア ２０１１０−２２０９、マナサス、ユニバーシティ ブールバード １０８０１）にて２０００年２月２９日に行った。

【０３０１】 以下の実施例は、例示目的のみのために意図され、本発明の範囲をどちらにし
ても限定するとは解釈されるべきではない。

【０３０２】 （実施例１：ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド遺伝子のクローニング） 概して、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）に記載されるような材料および方法を、
ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子をクローン化および分析
するために使用した。

【０３０３】 ヒトＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするｃＤＮＡ配列を単離するため
に、専有データベース（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）の検
索を、クローンｓｈｏｓ１−００００３−ｄ１を問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列
として使用して行った。この様式で同定された４２３ｂｐの配列は、アミノ酸レ
ベルで問い合わせ配列に対して４１％同一性を共有することが見出された。この
配列内の最も高い相同性の領域を使用して、ｃＤＮＡ供給源の同定およびｃＤＮ
Ａクローンの生成のために、種々のＰＣＲストラテジーを使用して、遺伝子特異
的オリゴヌクレオチドを設計した。

【０３０４】 多数のｃＤＮＡライブラリーを、２５μｌの全反応容積で、１０ｎｇのｃＤＮ
ＡライブラリーテンプレートＤＮＡ、それぞれ１０ｐｍｏｌのアンプライマー（
ａｍｐｌｉｍｅｒ）：２３４９−９８（５’−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｔ
−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｇ−３’；配列
番号２０）および２３４９−９９（５’−Ｔ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｇ
−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−３’；配列番号
２１）、ならびにＲｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−
Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐ
ｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を含有する増幅反応で分析した。反応を、９５℃に
て５分間を１サイクル；９５℃にて１５秒間、６３℃にて１５秒間、そして７２
℃にて１分間を３０サイクル；および７２℃にて１０分間を１サイクルにて行っ
た。予測されたサイズ（１５３ｂｐ）のＰＣＲ産物を、多数のｃＤＮＡライブラ
リー（ヒト胎児頭皮（オリゴ−ｄＴでプライムした（ｐｒｉｍｅｄ）もの）およ
びヒト胎盤（オリゴ−ｄＴでプライムしたものおよびランダムにプライムしたも
の）を含む）において同定した。

【０３０５】 胎児頭皮よび胎盤のｃＤＮＡライブラリーを、以下のようにして調製した。全
ＲＮＡを、ヒト胎児頭皮から、およびヒト胎盤から標準的なＲＮＡ抽出手順を使
用して抽出し、そしてポリ−Ａ^＋ＲＮＡを、標準的な手順を使用してこの全ＲＮ
Ａから選択した。ランダムにプライムされたかオリゴ−ｄＴでプライムされたｃ
ＤＮＡを、このポリ−Ａ^＋ ＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成およびプラスミドクローニ
ングキット用のＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｉ
ｂｃｏ−ＢＲＬ）を使用して、製造者の示唆したプロトコルまたは他の適切な手 順 に従って合成した。得られたｃＤＮＡを、適切な制限酵素を用いて消化し、次
いでｐＳＰＯＲＴ−１、または他の適切なクローニングベクターにライゲーショ
ンした。ライゲーション産物を、標準的な技術を使用してＥ．ｃｏｌｉに形質転
換し、そして細菌性形質転換体を、アンピシリン、テトラサイクリン、カナマイ
シン、またはクロラムフェニコールのいずれかを含有する培養プレートで選択し
た。ｃＤＮＡライブラリーは、これらの形質転換体の全てまたはサブセットから
構成された。

【０３０６】 ５’ＲＡＣＥ反応および３’ＲＡＣＥ反応の両方を、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドについての全長ｃＤＮＡ配列を作成するために行った。ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドについてのｃＤＮＡ配列の５’末端に対応するｃＤＮＡ配列を単離
するために、５’ＲＡＣＥを、１０ｎｇのオリゴ−ｄＴ−プライムされたヒト胎
児頭皮ｃＤＮＡライブラリーをｐＳＰＯＲＴ１ならびにプライマー１５７２−３
６（５’−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｃ
−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−３’；配列番号２２）および２３４９−９９を
使用して行った。反応を、９４℃にて１分間を１サイクル；９４℃にて５秒間そ
して７２℃にて５分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、７０℃にて１０秒間そ
して７２℃にて３分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、６８℃にて１０秒間、
そして７２℃にて３分間を２５サイクル；ならびに７２℃にて７分間を１サイク
ルで行った。入れ子式（ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲを、５’ＲＡＣＥ増幅産物の一部
およびプライマー２３２８−９１（５’−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ａ
−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号
２３）および２３５１−４７（５’−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ
−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号２４）を使用して
行った。入れ子式ＰＣＲを、９４℃にて１分間を１サイクル；９４℃にて５秒間
および７２℃にて５分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、７０℃にて１０秒間
、そして７２℃にて３分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、６８℃にて１０秒
間、そして７２℃にて３分間を２５サイクル；ならびに７２℃にて７分間を１サ
イクルで行った。

【０３０７】 ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドについてのｃＤＮＡ配列の３’末端に対応する
ｃＤＮＡ配列を単離するために、３’ＲＡＣＥを、１０ｎｇのオリゴ−ｄＴでプ
ライムされたヒト胎児頭皮ｃＤＮＡライブラリーを使用してｐＳＰＯＲＴＩなら
びにプライマー２３５１−４８（５’−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−
Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−３’；配列番号２５）およ
び２３２９−９３（５’−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号２６）を使用して行った
。反応を９４℃にて１分間を１サイクル；９４℃にて５秒間および７２℃にて５
分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、７０℃にて１０秒間、および７２℃にて
３分間を５サイクル；９４℃にて５秒間、６８℃にて１０秒間、および７２℃に
て３分間を２５サイクル；ならびに７２℃にて７分間を１サイクルで行った。入
れ子式ＰＣＲを、３’ＲＡＣＥ増幅産物の一部およびプライマー２３６３−０４
（５’−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−
Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号２７）および２３２９−９４（５’−Ｔ−
Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−
Ｔ−Ｇ−３’；配列番号２８）を使用して行った。入れ子式ＰＣＲを、９５℃に
て１分間を１サイクル；９５℃にて３０秒間および６８℃にて１分間を３０サイ
クル；ならびに６８℃にて７分間を１サイクルで行った。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドについての全長ｃＤＮＡ配列を、５’ＲＡＣＥクローンおよび３’ＲＡ
ＣＥクローンの得られた収集物からアセンブルした。

【０３０８】 ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドについてのｃＤＮＡ配列の５’部分を、ヒト胎
盤Ｍａｒａｔｈｏｎ^ＴＭ ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）由来のｃ
ＤＮＡ配列を独立して単離することにより確認した。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプ
チドについてのｃＤＮＡ配列の５’末端に対応するｃＤＮＡ配列を単離するため
に、５’ＲＡＣＥを、１ｎｇのヒト胎盤ｃＤＮＡならびにプライマーＡＰ−１（
５’−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｃ
−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−３’；配列番号２９；Ｃｌｏｎｔ
ｅｃｈ）および２３５３−８７（５’−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ａ−
Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−３’；配列番号３０）
を使用して行った。反応を、９４℃にて２分間を１サイクル；９４℃にて５秒間
および７２℃にて１．５分間を５サイクル；９４℃にて５秒間および７０℃にて
１．５分間を５サイクル；９４℃にて５秒間および６８℃にて１．５分間を２５
サイクル；および８６℃にて７分間を１サイクルで行った。入れ子式ＰＣＲを、
５’ＲＡＣＥ増幅産物の一部ならびにプライマーＡＰ−１および２３４９−５２
（５’−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ａ−
Ｃ−Ｃ−Ａ−３’；配列番号３１）を使用して行った。入れ子式ＰＣＲを、９４
℃にて２分間を１サイクル；９４℃にて１０秒間および６８℃にて１．５分間を
３０サイクル；および６８℃にて７分間を１サイクルで行った。

【０３０９】 ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドについての推定ｃＤＮＡ配列の配列分析は
、この遺伝子が、１５２個のアミノ酸のタンパク質をコードする４５６ｂｐのオ
ープンリーディングフレーム（図１Ａ〜１Ｂ）を含むことを示した。ヒトＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチドの配列改変体もまた同定された。この改変体の配列分析
は、この改変体についての遺伝子もまた、１５２個のアミノ酸のタンパク質をコ
ードする４５６ｂｐのオープンリーディングフレーム（図２Ａ〜２Ｂ）を含むこ
とを示唆した。この改変体のヌクレオチド配列は、２つのヌクレオチド位置にお
いてヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子と異なる。

【０３１０】 図４Ａ〜４Ｂは、以下のアミノ酸配列アラインメントを図示する：ヒトＩＬ−
１α（ＩＬ−１ ａｌｐｈａ；配列番号７）、ヒトＩＬ−１β（ＩＬ−１ ｂｅ
ｔａ；配列番号８）、ヒトＩＬ−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ；
配列番号９）、ヒトＩＬ−１δ（ＩＬ−１ ｄｅｌｔａ；配列番号１０）、ヒト
ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列番号２）、ヒトＴａｎ
ｇｏ−７７（Ｔａｎｇｏ−７７；配列番号１１）、ヒトＺｉｌｌａ４（Ｚｉｌｌ
ａ４；配列番号１２）、ヒトＩＬ−１ζ（ＩＬ−１ ｚｅｔａ；配列番号１３）
、ヒトＩＬ−１レセプターアンタゴニストβ（ＩＬ−１ＲＡ β；配列番号１４
）、ヒトＳＰＯＩＬ ＩＩ（Ｓｐｏｉｌ ＩＩ；配列番号１５）、ヒトＩＬ−１
ε（ＩＬ−１ ｅｐｓｉｌｏｎ；配列番号１６）、およびヒトＩＬ−ｌ１η（Ｉ
Ｌ１ ｅｔａ；配列番号１７）。図５は、ＩＬ−１ｒａ遺伝子ファミリーの系統
発生的関係を模式的に図示する。

【０３１１】 （実施例２：ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド遺伝子スプライス改変体（バ リアント） のクローニング） 概して、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドスプライス改変体（バリアント）
をコードする遺伝子をクローニングおよび分析するために、Ｓａｍｂｒｏｏｋら
（前出）に記載の材料および方法を用いた。

【０３１２】 ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのスプライス改変体をコードする全長ｃＤ
ＮＡ配列を、以下のように調製したヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーから単離した
。標準的ＲＮＡ抽出手順を用いて、総ＲＮＡをヒト胎盤から抽出し、そして標準
的手順を用いてこの総ＲＮＡからポリ−Ａ^＋ ＲＮＡを選択した。製造業者の示唆
したプロトコールに従って、ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｌａｓ
ｍｉｄ Ｃｌｏｎｉｎｇキット（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）のためのＳｕｐｅｒｓｃ
ｒｉｐｔ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｓｙｓｔｅｍを用いて、このポリ−Ａ^＋ＲＮＡから
、オリゴ−ｄＴプライムしたｃＤＮＡを、合成した。得られたｃＤＮＡをＮｏｔ
Ｉで消化し、次いで０．８％アガロースゲル上での電気泳動によって分画した。
０．８〜１．６ｋｂのフラグメントを単離し、精製し、次いでｐＳＰＯＲＴ−１
に連結した。連結（ライゲーション）産物を、標準的技術を用いてＥ．ｃｏｌｉ
中に形質転換し、そして細菌形質転換体を、アンピシリン含有培養プレート上で
選択した。得られた形質転換体をプールして、ｃＤＮＡライブラリーを作製し、
そしてプラスミドＤＮＡを、このｃＤＮＡライブラリーの１２のプール（それぞ
れが約８０，０００コロニーを含有する）から調製した。

【０３１３】 １０ｎｇのテンプレートＤＮＡ、アンプライマー２３４９〜９８および２３４
９〜９９（各、０．４μＭの濃度）、ならびにＲｅａｄｙ−ｔｏ−Ｇｏ（すぐ使
用できる）ＰＣＲビーズを含有する増幅反応物（総反応容積２５μｌ）中で、各
ｃＤＮＡライブラリープールのそれぞれを、分析した。９４℃５分を１サイクル
；９４℃３０秒、６５℃３０秒、および７２℃１分を３０サイクル；ならびに７
２℃１０分を１サイクルで、反応を実施した。ｃＤＮＡライブラリープールをま
た、１０ｎｇのテンプレートＤＮＡ、アンプライマー２３４９〜５１（５’−Ａ
−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ
−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−３’；配列番号３２）および２３４９〜５２（各、０．
４μＭの濃度）、ならびにＲｅａｄｙ−ｔｏ−Ｇｏ（すぐ使用できる）ＰＣＲビ
ーズを含有する増幅反応物（総反応容積２５μｌ）中で、分析した。９４℃５分
を１サイクル；９４℃３０秒、６５℃３０秒、および７２℃１分を３０サイクル
；ならびに７２℃１０分を１サイクルで、反応を実施した。次いで、これらの反
応で得られたＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分析した。

【０３１４】 ３つのプール由来のプラスミドＤＮＡは、期待されるサイズを有するＰＣＲ産
物を生成した。そして、これらの各々の陽性プール由来の３×１０^５クローンを
、アンプライマー２３４９−９８および２３４９−９９を用いるＰＣＲによって
スクリーニングした。ＰＣＲによって生成したＰＣＲ産物（ｚｈｖｔ−０００３
２９）の１つを、^３２Ｐ−ｄＣＴＰで標識し、プローブとして用いて、陽性のｃ
ＤＮＡライブラリーのプールを再スクリーニングした。細菌コロニーを、（１５
０ｍｍプレートあたり、約５０，０００で）プレートし、次いで、ニトロセルロ
ースフィルター上に吊り上げた。ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂハイブリダイゼーション
溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中で６８℃３０分間、フィルターをプレハイブリダイ
ズし、次いで、標識プローブを添加した同じ溶液中で、６８℃一晩ハイブリダイ
ズした。ハイブリダイゼーション後、このフィルターを、２×ＳＳＣおよび０．
０５％ＳＤＳ中で、室温で１０分間２回洗浄し、次いで０．１×ＳＳＣおよび０
．１％ＳＤＳ中で、６８℃で３０分間２回洗浄した。次いで、強化スクリーンを
有するオートラジオグラフィーに−８０℃で２時間フィルターを曝した。ｃＤＮ
Ａライブラリープールの１つから、約１．２ｋｂのインサートを含有する陽性ク
ローン（ＲＤＳ＃１９９９１８５０３）を、同定した。別のｃＤＮＡライブラリ
ープールから、約０．８ｋｂのサイズのインサートを含有する第二の陽性クロー
ン（ＲＤＳ＃１９９９１８５０１）を、同定した。これらのクローンの各々から
プラスミドＤＮＡを調製し、そして配列を分析した。

【０３１５】 これらのクローンの１つについて予想されるｃＤＮＡ配列の配列分析によって
、このｃＤＮＡが、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（実施例１を参照）の改
変体をコードすることが示された。この改変体をコードする遺伝子は、１７１ア
ミノ酸のタンパク質をコードする５１３ｂｐのオープンリーディングフレームを
含む（図３）。

【０３１６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＣ０１６７２４，コンテ
ィグ．フラグメント７６６４９−９６３４２）を含有するヒトゲノムの配列分析
により、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の最初のエキソン（実施例１を参照）が、Ｉｌ
−１オメガ（Ｏｍｅｇａ）（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｚ３０００５０）の最後の
エキソンの４．１ｋｂ下流に存在するが示された。ゲノム中のこれらの２つの遺
伝子の密接な近似により、本ポリペプチドは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子、または
その改変体（実施例１を参照）の第二のエキソン上のＩＬ−１オメガ（Ｏｍｅｇ
ａ）の最初の２つのエキソンのスプライシング（または融合）から生じ得ること
が示唆される。従って、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの改変体は、ＩＬ−１ｒ
ａ−Ｒスプライス改変体、融合タンパク質、などであり得る。ＩＬ−１Ｏｍｅｇ
ａにおける第二エキソンおよびＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子（またはその改変体）の
第二エキソンの並列（ｊｕｘｔａｐｏｓｉｔｉｏｎ）は、シグナルペプチドとし
て機能するらしい、Ｎ末端を有するタンパク質をコードする配列を生じる。図６
は、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（成熟（Ｍａｔｕｒｅ）ＣＳ３２９）と
、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの配列改変体（成熟ＣＳ３２９改変体タン
パク質）と、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのスプライス改変体（オメガ（
Ｏｍｅｇａ）３２９タンパク質）との間の関係を図示する。

【０３１７】 （実施例３：マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド遺伝子のクローニング） 概して、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドをコードする遺伝子をクローニ
ングおよび分析するために、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）に記載の材料および方
法を用いた。

【０３１８】 マウスＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするｃＤＮＡを単離するために
、７日齢マウス胚ｃＤＮＡライブラリーテンプレート、ならびにアンプライマー
２５５７−９５（５’−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｔ
−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−３’；配列番号３３
）および２５５７〜９６（５’−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ
−Ｇ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｇ−３’；配列
番号３４）、ならびに標準的技術を用いて、ＰＣＲを実施した。

【０３１９】 マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの推定ｃＤＮＡ配列の配列分析によって
、この遺伝子が、１５２アミノ酸のタンパク質をコードする４５６ｂｐのオープ
ンリーディングフレームを含むことが示された（図７）。図８は、ヒトＩＬ−１
ｒａ−Ｒポリペプチド（ｈｕＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列番号２）およびマウスＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ｍｕＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列番号３６）のアミノ酸
配列アラインメントを例示する。図９Ａ〜９Ｉは、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝
子（配列番号３７）のゲノムヌクレオチド配列を例示する。エキソン１〜４のコ
ード部分の位置を示す（下線）。

【０３２０】 （実施例４：ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡ発現） ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡの発現を、１０ｎｇのｃＤＮＡライブラリーテン
プレートＤＮＡ、１０ｐｍｏｌのアンプライマー２３４９〜９８および２３４９
〜９９、ならびにＲｅａｄｙ−ｔｏ−Ｇｏ（すぐ使用できる）ＰＣＲビーズを含
有する増幅反応物（総反応容積２５μｌ）中でのＰＣＲによって検討した。９５
℃５分を１サイクル；９５℃１５秒、６３℃１５秒、および７２℃１分を３０サ
イクル；ならびに７２℃１０分を１サイクルで、反応を実施した。ヒト胎児頭皮
、ヒト胎児眼、ヒト胆嚢、およびヒト胎盤を含む、多数のｃＤＮＡライブラリー
中から、予期されたサイズ（１５３ｂｐ）のＰＣＲ産物を、同定した。ＩＬ−１
ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡ発現をまた、アンプライマー２３４９〜５１および２３４９
−５２、ならびにＴｉｔａｎシステム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）を用いるＲＴ−
ＰＣＲによって、胎児眼および胎児脾臓中で検出した。５５℃３０分を１サイク
ル；９４℃１５秒、６４℃１５秒、および６８℃５０秒（１サイクルについて２
秒ずつ増加）を３０サイクル；ならびに６８℃７分を１サイクルで、これらの反
応を実施した。

【０３２１】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡの発現を、ヒトおよびマウスのＲＮＡブロット（
Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いたノーザンブロット分析によって試験した。ブロット
をまず、Ｐｒｅ−Ｈｙｂ溶液（Ａｍｅｒｓｈａｍ）中で６５℃で３０分間、プレ
ハイブリダイズし、次いで、ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするｃＤＮ
Ａ配列のヌクレオチド１〜４７４に対応する、２５ｎｇの^３２Ｐ標識プローブを
含有する同じ溶液中で、６５℃一晩プローブした。このプローブを、Ｒｅｄｉ
Ｐｒｉｍｅ ＩＩキット（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて標識した。ハイブリダ
イゼーション後、ブロットを、６×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で、１時間２
回、２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で１時間２回、０．２×ＳＳＣおよび０
．１％ＳＤＳ中で３０分間２回洗浄し、次いで２×ＳＳＣ中でリンスした。ホス ホ イメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）中のノーザンブロットの一晩の
曝露後、約１．６ｋｂの転写物を、マウスの骨格筋中で検出し（図１０Ａ）、そ
して約２．９ｋｂの転写物を、ヒトの膵臓および末梢血白血球中で検出した（図
１０Ｂおよび１０Ｃ）。同じプローブを用いたドットブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃ
ｈ）の分析において、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡをマウス骨格筋、顎下腺、お
よび精巣上体中で検出した。

【０３２２】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡの発現を、インサイチュハイブリダイゼーション
によって局在化した。正常胚および成体マウス組織のパネルを４％パラホルムア
ミド中で固定し、パラフィンに包埋し、そして５μｍに切片化した。切片化した
組織を、０．２Ｍ ＨＣｌ中で透過化処理し、プロテイナーゼＫで消化し、そし
てトリエタノールアミンおよび無水酢酸でアセチル化した。切片を、ハイブリダ
イゼーション溶液（３００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ
８．０，５ｍＭ ＥＤＴＡ、１×デンハート溶液、０．２％ ＳＤＳ、１０ｍＭ ＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌ ｔＲＮＡ、２５μｇ／ｍｌ ポリＡ、２５μｇ
／ｍｌ ポリＣおよび５０％ホルムアミド）中で１時間６０℃でプレハイブリダ
イズし、次いで、１０％デキストランおよび２×１０^４ｃｐｍ／μｌの^３３Ｐ−
標識アンチセンスリボプローブ（ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子に相補的）を含有
する同じ溶液中で６０℃で一晩ハイブリダイズする。標準的技術を用いて、ヒト
ＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｃＤＮＡを含有するクローンのインビトロ転写によって、こ
のリボプローブを得る。

【０３２３】 ハイブリダイゼーション後、切片を、ハイブリダイゼーション溶液中でリンス
し、ＲＮａｓｅＡで処理してハイブリダイズしていないプローブを消化し、次い
で０．１×ＳＳＣ中で５５℃で３０分間洗浄する。次いで、切片をＮＴＢ−２エ
マルジョン（Ｋｏｄａｋ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に浸し、４℃に３週間曝
し、発色させ、そしてヘマトキシリンおよびエオシンで対比染色する。組織形態
学およびハイブリダイゼーションシグナルを、脳（矢状断面１つおよび冠状断面
２つ）、胃腸管（食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、近位結腸、および遠位結腸
）、下垂体、肝臓、肺、心臓、脾臓、胸腺、リンパ節、腎臓、副腎、膀胱、膵臓
、唾液腺、雄性および雌性生殖器（雌性の卵巣、卵管、および子宮；ならびに雄
性の精巣、精巣上体、前立腺、精嚢および輸精管）、ＢＡＴおよびＷＡＴ（皮下
、腎臓周囲）、骨（大腿）、皮膚、乳房、および骨格筋についての暗野かつ標準
のイルミネーションによって同時に分析する。

【０３２４】 （実施例５：ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生成） （Ａ．細菌におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現） ＰＣＲを用いて、ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするテンプレートＤ
ＮＡ配列を増幅する。このＰＣＲには、この配列の５’および３’末端に対応す
るプライマーを用いる。増幅したＤＮＡ産物を改変して、発現ベクター内への挿
入を可能にするために制限酵素部位を含むようにし得る。ＰＣＲ産物をゲル精製
し、そして標準的組み換えＤＮＡ方法論を用いて発現ベクター中に挿入する。ｌ
ｕｘプロモーターおよびカナマイシン耐性をコードする遺伝子を含むｐＡＭＧ２
１（ＡＴＣＣ番号９８１１３）のような代表的ベクターを、挿入したＤＮＡの方
向性クローニングのために、ＢａｍＨＩおよびＮｄｅＩを用いて消化する。連結
した混合物を、エレクトロポレーションによってＥ．ｃｏｌｉ宿主株中に形質転
換し、そして形質転換体をカナマイシン耐性について選択する。選択したコロニ
ー由来のプラスミドＤＮＡを、単離し、そしてＤＮＡ配列決定に供してインサー
ト（挿入物）の存在を確認する。

【０３２５】 形質転換した宿主細胞を、導入前に、３０μｇ／ｍＬカナマイシンを含有する
２×ＹＴ培地中で３０℃でインキュベートする。最終濃度３０ｎｇ／ｍＬへのＮ
−（３−オキソヘキサノイル）−ｄｌ−ホモセリンラクトンの添加、それに続く
３０℃かまたは３７℃での６時間のインキュベーションによって、遺伝子発現を
誘導する。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現を、培養物の遠心分離、細菌ペ
レットの再懸濁および溶解、ならびに、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動
による宿主細胞タンパク質の分析によって評価する。

【０３２６】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを含有する封入体を、以下の通り精製する。細
菌細胞を遠心分離によってペレット化し、そして水中に再懸濁する。この細胞懸
濁液を超音波処理によって溶解し、そして１９５，０００×ｇでの５〜１０分間
の遠心分離によってペレット化する。この上清を廃棄し、そしてペレットを洗浄
してホモジナイザーに移す。このペレットを、均一に懸濁されるまで、５ｍＬの
Ｐｅｒｃｏｌｌ溶液（７５％液体Ｐｅｒｃｏｌｌおよび０．１５Ｍ ＮａＣｌ）
中にホモジナイズし、次いで希釈して２１，６００×ｇで３０分間遠心分離する
。封入体を含む勾配画分を回収してプールする。単離した封入体をＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥによって分析する。

【０３２７】 Ｅ．ｃｏｌｉが産生したＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに相当する、ＳＤＳポ
リアクリルアミドゲル上の単一のバンドを、ゲルから切り出し、そしてＮ末端ア
ミノ酸配列を、本質的にＭａｔｓｕｄａｉｒａら、１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２６２：１０〜３５に記載のように決定する。

【０３２８】 （Ｂ．哺乳動物細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現） ＰＣＲを用いて、ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするテンプレートＤ
ＮＡ配列を増幅する。このＰＣＲには、この配列の５’および３’末端に対応す
るプライマーを用いる。増幅したＤＮＡ産物を改変して、発現ベクター内への挿
入を可能にするために制限酵素部位を含むようにし得る。ＰＣＲ産物をゲル精製
し、そして標準的組み換えＤＮＡ方法論を用いて発現ベクター中に挿入する。Ｅ
ｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス複製起点を含む代表的な発現ベクターであるｐ
ＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を、２９３−ＥＢ
ＮＡ−１細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現のために用い得る。
増幅およびゲル精製したＰＣＲ産物を、ｐＣＥＰ４ベクターに連結し、そしてリ
ポフェクチンによって２９３−ＥＢＮＡ細胞中に導入する。トランスフェクトし
た細胞を、１００μｇ／ｍＬのハイグロマイシン中で選択し、そして得られた薬
物耐性培養物をコンフルエンスになるまで増殖する。次いで、この細胞を無血清
培地中で７２時間培養する。馴化培地を取り出し、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ド発現をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析する。

【０３２９】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現は、銀染色によって検出できる。あるいは
、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを、ペプチドタグに対する抗体を用いてウエス
タンブロット分析によって検出可能である、エピトープタグ（例えば、ＩｇＧ定
常ドメインまたはＦＬＡＧエピトープ）を有する融合タンパク質として生成する
。 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルから切
り出し得、またはＩＬ−１ｒａ−Ｒ融合タンパク質を、エピトープタグに対する
アフィニティークロマトグラフィーによって精製し、そして本明細書に記載のよ
うなＮ末端アミノ酸配列分析に供する。

【０３３０】 （Ｃ．哺乳動物細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現および精製
） リポフェクチンまたはリン酸カルシウムプロトコールのいずれかを用いて、２
９３ ＥＢＮＡ細胞またはＣＨＯ細胞中に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド発現
構築物を導入する。

【０３３１】 生成されるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対する機能的研究を行うため、ハ
イグロマイシン選択２９３ ＥＢＮＡクローニングのプールから大量の馴化培地
を生成する。この細胞を５００ｃｍ Ｎｕｎｃ Ｔｒｉｐｌｅ Ｆｌａｓｋｓ中
で、８０％コンフルエンスになるまで培養し、その後、培地を回収する１週間前
に無血清培地に切り換える。馴化培地を回収し、そして精製まで−２０℃に凍結
する。

【０３３２】 馴化培地を下記のとおり、アフィニティークロマトグラフィーによって精製す
る。この培地を解凍し、次いで０．２μｍフィルターに通す。プロテインＧカラ
ムをＰＢＳでｐＨ７．０に平衡化し、次いで濾過した培地をロードした。このカ
ラムをＡ_２８０の吸収がベースラインに達するまでＰＢＳで洗浄する。０．１Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＨＣｌを用いてｐＨ７．２でＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
を、カラムから溶出し、直ちに１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを用いてｐＨ８．５で中
和する。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを含有する画分をプールし、ＰＢＳ中で
透析し、そして−７０℃で貯蔵した。

【０３３３】 ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド−Ｆｃ融合ポリペプチドの第Ｘａ因子切断
について、アフィニティークロマトグラフィー精製したタンパク質を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ_２中でｐＨ８．
０で透析する。制限プロテアーゼ第Ｘａ因子を、透析したタンパク質に１／１０
０（ｗ／ｗ）で添加し、そしてこのサンプルを室温で一晩消化する。

【０３３４】 （実施例６：抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド抗体の生成） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対する抗体を、生物学的合成または化学的合
成によって生成した、精製タンパク質またはＩＬ−１ｒａ−Ｒペプチドを用いて
免疫することによって獲得し得る。抗体を生成するための適切な手順は、Ｈｕｄ
ｓｏｎおよびＢａｙ、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第二版、Ｂ
ｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｉｌｉｃａｔｉｏｎ）に記載
の手順を含む。

【０３３５】 抗体生成のための１つの手順において、動物（代表的には、マウスまたはウサ
ギ）に、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗原（例えば、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド）を注
射し、そして、ハイブリドーマ産生のため、ＥＬＩＳＡによって決定した十分な
血清力価レベルを有する動物を、選択する。免疫した動物の脾臓を回収し、そし
て単一細胞懸濁液として調製し、これから脾臓細胞を回収する。脾臓細胞をマウ
スミエローマ細胞（例えば、Ｓｐ２／０−Ａｇ１４細胞）に融合し、ＤＭＥＭ（
２００Ｕ／ｍＬペニシリン、２００μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン、および
４ｍＭグルタミン含有）中でまずインキュベートし、次いで、ＨＡＴ選択培地（
ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン）中でインキュベートする。選
択後、組織培養上清を各融合ウェルから取り出し、そしてＥＬＩＳＡによって、
抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体産生について試験する。

【０３３６】 抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体を得るため、別の手順をまた、使用し得る。この手順
は例えば、ヒト抗体の生成のためのヒトＩｇ遺伝子座を保有するトランスジェニ
ックマウスの免疫、および合成抗体ライブラリー（例えば、抗体可変ドメインの
変異誘発によって生成されるライブラリーなど）のスクリーニングである。

【０３３７】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対する抗体は、Ｅ．ｃｏｌｉ中で生成され、
そして単離された全長ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを用いてＮｅｗ Ｚｅａｌ
ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ ｒａｂｂｉｔを免疫することによって得られた。粗ポリク
ローナル免疫血清を回収し、そして組み換えＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（図
１１Ａ〜１１Ｂ、レーン１、４、および７）、組み換えＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチド改変体（図１１Ａ〜１１Ｂ、レーン２、５、および８）、および組み換え
ＩＬ−１ｒａ（図１１Ａ〜１１Ｂ；レーン３、６、および９）を用いる免疫沈澱
分析に用いた。１０ｎｇ（図１１Ａ、レーン４〜６）もしくは０．６μｇ（図１
１Ｂ、レーン７〜９）のいずれかの組み換えポリペプチドを、１８％Ｔｒｉｓ−
グリシンゲル上に直接ロードすること、またはゲル上にサンプルをロードする前
に、０．２μｌの粗抗血清（図１１Ａ、レーン１〜３）を用いて１μｇの組み換
えポリペプチドを免疫沈降することによって、ゲルを調製した。ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ分離後、ゲルをＰＶＤＦ膜上にブロットし、そして粗抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ血清
の１：１０００希釈を用いて発色させ、続いて、ＨＲＰ結合体化プロテインＡお
よびＥＣＬで検出した。図１１Ｂに示すゲルを、ブロッティング後、Ｇｅｌｃｏ
ｄｅ Ｂｌｕｅ（Ｐｉｅｒｃｅ）で染色した。ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに
対する抗体は、膜固定ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドおよびＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチド改変体の両方を検出するが、ＩＬ−１ｒａは検出しないことが示され
た。溶液中で、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ド改変体よりも効率的に認識された。

【０３３８】 （実施例７：トランスジェニックマウスにおけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドの発現） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生物学的活性を評価するため、肝臓特異的Ａ
ｐｏＥプロモーターの制御下で、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド／Ｆｃ融合タン
パク質をコードする構築物を調製する。この構築物の送達により、ＩＬ−１ｒａ
−Ｒポリペプチドの機能に関する情報である、病理的変化を生じることが期待さ
れる。同様に、βアクチンプロモーターの制御下で、全長ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリ
ペプチドを含む構築物を調製する。この構築物の送達により、遍在性発現を生じ
ることが期待される。

【０３３９】 これらの構築物を生成するために、ＰＣＲを用いて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドをコードするテンプレートＤＮＡ配列を増幅する。このＰＣＲには、所望
の配列の５’および３’末端に対応するプライマーを用いる。そしてこの配列は
、発現ベクター内への増幅産物の挿入を可能にするために制限酵素部位を組み込
む。増幅後、ＰＣＲ産物をゲル精製し、適切な制限酵素で消化し、そして標準的
組み換えＤＮＡ技術を用いて発現ベクター中に連結する。例えば、増幅したＩＬ
−１ｒａＲポリペプチド配列を、Ｇｒａｈａｍら、１９９７、Ｎａｔｕｒｅ Ｇ
ｅｎｅｔｉｃｓ，１７：２７２〜７４およびＲａｙら，１９９１ Ｇｅｎｅｓ
Ｄｅｖ．５：２２６５〜７３に記載のように、ヒトβアクチンプロモーターの制
御下で発現ベクター中にクローニングし得る。

【０３４０】 連結（ライゲーション）後、反応混合物を用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主株をエレ
クトロポレーションによって形質転換し、そして形質転換体を、薬物耐性で選択
する。選択したコロニー由来のプラスミドＤＮＡを単離して、ＤＮＡ配列決定に
供し、適切なインサートの存在および変異が存在しないことを確認する。ＩＬ−
１ｒａ−Ｒポリペプチド発現ベクターを、２回のＣｓＣｌ密度勾配遠心分離を通
じて精製し、適切な制限酵素で切断し、そして、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド
導入遺伝子を含有する直線フラグメントを、ゲル電気泳動によって精製する。精
製したフラグメントを、５ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）および０．２ｍＭ Ｅ
ＤＴＡ中で、２ｍｇ／ｍＬの濃度で、再懸濁する。

【０３４１】 ＢＤＦ１×ＢＤＦ１交配マウス由来の単一細胞胚を、記載（ＰＣＴ公開番号Ｗ
Ｏ９７／２３６１４）のように注射する。胚を、ＣＯ_２インキュベーター中で一
晩培養し、そして１５〜２０の２細胞胚を偽妊娠ＣＤ１雌性マウスの卵管に移す
。マイクロインジェクションした胚の着床から得た子孫を、以下のように、ゲノ
ムＤＮＡサンプル中に取り込んだ導入遺伝子のＰＣＲ増幅でスクリーニングする
。耳切片を２０ｍＬの耳緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．０，１０ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．５％ ＳＤＳ、および５００ｍｇ／ｍＬ プロテイナーゼＫ）中
で、５５℃で一晩消化する。次いで、このサンプルを２００ｍＬのＴＥで希釈し
、そして２ｍＬの耳サンプルを、適切なプライマーを用いるＰＣＲ反応中で用い
る。

【０３４２】 ８週齢で、トランスジェニック創始動物およびコントロール動物を、剖検およ
び病理分析のため、屠殺する。脾臓の一部を取り出し、そしてＴｏｔａｌ ＲＮ
Ａ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、脾臓から、総細
胞ＲＮＡを単離し、そして導入遺伝子発現を、ＲＴ−ＰＣＲによって決定する。
脾臓から回収したＲＮＡを、以下のように、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ^ＴＭＰｒｅ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を用いてｃ
ＤＮＡに変換する。適切なプライマー（発現ベクター配列に位置し、そしてＩＬ
−１ｒａ−Ｒポリペプチド導入遺伝子の３’である）を用いて、導入遺伝子転写
物からｃＤＮＡ合成をプライムする。トランスジェニック創始動物およびコント
ロール由来の１０ｍｇの総脾臓ＲＮＡを、１ｍＭのプライマーとともに、１０分
間７０℃でインキュベートし、そして氷上に置く。次いで、反応物に、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．３、５０ｍＭ ＫＣｌ、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２ 、１０ｍＭの各ｄＮＴＰ、０．１ｍＭ ＤＴＴ、および２００ＵのＳｕｐｅｒＳ
ｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素を補充する。４２℃で５０分間のインキュベーション
後、７２℃で１５分間加熱することによって反応を停止し、２ＵのＲＮａｓｅ
Ｈを用いて２０分間３７℃で消化する。次いで、サンプルをＩＬ−１ｒａ−Ｒポ
リペプチドに特異的なプライマーを用いるＰＣＲによって増幅する。

【０３４３】 （実施例８：トランスジェニックマウスにおけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチ
ドの生物学的活性） 安楽死の前に、トランスジェニック動物を計量し、イソフルオロラン（ｉｓｏ
ｆｌｕｏｒａｎｅ）によって麻酔し、そして心臓穿刺によって採血する。サンプ
ルを、血液学および血清化学分析に供する。Ｘ線撮影を、最終的な放血後に行う
。肉眼解剖の際に、主な内臓器官を、重量分析に供する。

【０３４４】 肉眼解剖後、組織（すなわち、肝臓、脾臓、膵臓、胃、胃腸管全体、腎臓、生
殖器官、皮膚および乳腺、骨、脳、心臓、肺、胸腺、気管、食道、甲状腺、副腎
、膀胱、リンパ節および骨格筋）を取出し、そして１０％緩衝化Ｚｎ−ホルマリ
ン中で組織学的検査のために固定する。固定後、組織をパラフィンブロック中で
処理し、そして３ｍｍの切片を得る。全ての切片を、ヘマトキシリンおよびエオ
シンで染色し、次いで組織学的分析に供する。

【０３４５】 トランスジェニックマウスおよびコントロールマウスの両方の脾臓、リンパ節
およびパイアー斑を、以下の通りにＢ細胞特異的抗体およびＴ細胞特異的抗体に
ついての免疫組織学的分析に供する。ホルマリンで固定したパラフィン包埋切片
を脱パラフィン処理し、そして脱イオン水中で水和する。切片を３％過酸化水素
でクエンチし、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂｌｏｃｋ（Ｌｉｐｓｈａｗ，Ｐｉｔｔｓｂｕ
ｒｇｈ，ＰＡ）でブロックし、そしてラットモノクローナル抗マウスＢ２２０お
よびＣＤ３（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）中でインキュベ
ートする。抗体結合を、色素原（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）としてＤＡＢ（ＢｉｏＴ
ｅｋ，Ｓａｎｔａ Ｂａｒｂａｒａ，ＣＡ）を用いて、ビオチン化ウサギ抗ラッ
ト免疫グロブリンおよびペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン（Ｂｉｏ
Ｇｅｎｅｘ，Ｓａｎ Ｒａｍｏｎ，ＣＡ）によって検出する。切片を、ヘマトキ
シリンで対比染色する。

【０３４６】 剖検後、トランスジェニック動物およびコントロールの同腹仔由来の脾臓およ
び胸腺のＭＬＮおよび切片を取出す。シリンジの平らな末端を用いて１００ｍｍ
ナイロン性細胞ストレーナー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋ
ｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）の底に対してこの組織を穏やかに粉砕することによ
って単細胞懸濁物を調製する。細胞を２回洗浄し、計数し、次いで各組織由来の
約１×１０^６細胞を、２０μＬ容量において０．５μｇ ＣＤ１６／３２（Ｆｃ
γＩＩＩ／ＩＩ）Ｆｃブロックで１０分間インキュベートする。次いで、サンプ
ルを、ＦＩＴＣまたはＰＥに結合体化した、ＣＤ９０．２（Ｔｈｙ−１．２）、
ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）、ＣＤ１１ｂ（Ｍａｃ−１）、Ｇｒ−１、ＣＤ４または
ＣＤ８に対するモノクローナル抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）の０．５μｇ抗体を有する、１００μＬ容量のＰＢＳ（Ｃａ^＋および
Ｍｇ^＋を欠く）、０．１％ウシ血清アルブミンおよび０．０１％アジ化ナトリウ
ム中で２〜８℃で３０分間染色する。抗体結合後、細胞を洗浄し、次いでＦＡＣ
Ｓｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）でのフローサイトメトリーによ
って分析する。

【０３４７】 （実施例９：ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの機能化） ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドが、ＩＬ−１、ＩＬ−１８または他のサイトカ
インに対する細胞応答に影響を与えるか否かを評価するために、以下の実験を行
った。最初に、マウスの骨髄細胞を、以前に記載されたとおりのレトロウイルス
感染（Ｙａｎら，１９９９，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２７：１４０９−１７）
によってＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子で形質導入した。次いで、形質導入された骨髄
を用いて、致死的に照射されたレシピエントマウスに移植した。造血が回復した
ら、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ形質導入マウスおよびコントロールマウス（すなわち、空
のレトロウイルスベクターで形質導入したマウス）由来の骨髄および脾臓細胞を
、一連の分析（ＦＡＣＳ分析（図１２）、コロニーアッセイ（図１３Ａ〜１３Ｂ
）およびＩＬ−１２（図１４）またはＩＬ−１２＋ＩＬ−１８（図１５）のいず
れかに応じたγ−インターフェロン産生を含む）に供した。

【０３４８】 このデータは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子の発現が、脾臓中の造血前駆体の特定
のサブセット（最も顕著にはＧ−ＣＳＦはＧＭ−ＣＦＣを誘導した；ＳＣＦ／Ｅ
ｐｏはＢＦＵ−Ｅ／ＣＦＵ−Ｍｉｘを誘導した；そしてＣＳＦ−１はＭ−ＣＦＣ
を誘導した）および骨髄中の造血前駆体の特定のサブセット（ＩＬ−３およびＧ
−ＣＳＦはＧＭ−ＣＦＣを誘導した；ＳＣＦ／ＥｐｏはＢＦＵ−Ｅ／ＣＦＵ−Ｍ
ｉｘを誘導し、そしてＩＬ−３／ＥｐｏはＧＭ−ＣＦＣ／ＣＦＵ−Ｍｉｘを誘導
した）の相対量および／またはサイトカイン応答に影響を与えることを示唆する
。

【０３４９】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの発現はまた、脾細胞上でのＣＤ４およびＮＫ
１．１の表面発現の減少と、ならびに脾細胞がＩＬ−１２単独またはＩＬ−１２
＋ＩＬ−１８に応じてγ−インターフェロンを産生する能力の減少と相関する。

【０３５０】 本発明を好ましい実施形態に関して記載してきたが、改変および修飾が当業者
に思い浮かぶことが理解される。それゆえ、添付の特許請求の範囲が、本願発明
の範囲内に入る全てのこのような均等な改変物を包含することが意図される。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１Ａ〜１Ｂは、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子のヌクレオチド配列（配列番号
１）、およびヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの推定のアミノ酸配列（配列番
号２）を示す。

【図２】 図２Ａ〜２Ｂは、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子改変体のヌクレオチド配列（配
列番号３）、およびこの改変体によりコードされるヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペ
プチドの推定のアミノ酸配列（配列番号４）を示す。

【図３】 図３は、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒスプライス改変体のヌクレオチド配列（配列番
号５）、およびこのスプライス改変体によりコードされるヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒ
ポリペプチドの推定のアミノ酸配列（配列番号６）を示す。

【図４】 図４Ａ〜４Ｂは、ヒトＩＬ−１α（ＩＬ−１＿ａｌｐｈａ；配列番号７）、ヒ
トＩＬ−１β（ＩＬ−１＿ｂｅｔａ；配列番号８）、ヒトＩＬ−１レセプターア
ンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ；配列番号９）、ヒトＩＬ−δ（ＩＬ−１＿ｄｅｌ
ｔａ；配列番号１０）、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ＩＬ−１ｒａ−Ｒ
；配列番号２）、ヒトＴａｎｇｏ−７７（Ｔａｎｇｏ−７７；配列番号１１）、
ヒトＺｉｌｌａ４（Ｚｉｌｌａ４；配列番号１２）、ヒトＩＬ−１ζ（ＩＬ−１
＿ｚｅｔａ；配列番号１３）、ヒトＩＬ−１レセプターアンタゴニストβ（ＩＬ
−１ＲＡ＿ｂｅｔａ；配列番号１４）、ヒトＳＰＯＩＬ ＩＩ（ｓｐｏｉｌ＿Ｉ
Ｉ；配列番号１５）、ヒトＩＬ−１ε（ＩＬ−１＿ｅｐｓｉｌｏｎ；配列番号１
６）、およびヒトＩＬ−１η（ＩＬ−１＿ｅｔａ；配列番号１７）のアミノ酸ア
ライメントを示す。

【図５】 図５は、ＩＬ−ｒａ遺伝子ファミリーの系統学的相関を図で示す。

【図６】 図６は、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（Ｍａｔｕｒｅ ＣＳ３２９）と
、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの配列改変体（Ｍａｔｕｒｅ ＣＳ３２９
改変体タンパク質）と、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドのスプライス改変体
（Ｏｍｅｇａ ３２９タンパク質）との間の相関を図で示す。

【図７】 図７は、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子のヌクレオチド配列（配列番号３５）
およびマウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの推定アミノ酸配列（配列番号３６
）を示す。

【図８】 図８は、ヒトＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ｈｕＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列番
号２）と、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド（ｍｕＩＬ−１ｒａ−Ｒ；配列
番号３６）とのアミノ酸配列アライメントを示す。

【図９】 図９Ａ−９Ｉは、マウスＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子（配列番号３７）についての
ゲノムヌクレオチド配列を示す。エキソン１−４のコード部分の位置を示す（下
線）。

【図１０】 図１０Ａ−１０Ｃは、ノーザンブロット分析により検出される、マウス（図１
０Ａ）およびヒト（図１０Ｂ−１０Ｃ）のＩＬ−１ｒａ−Ｒ ｍＲＮＡ発現を示
す。

【図１１】 図１１Ａ〜１１Ｂは、抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体を用いるウェスタンブロット分
析の結果を示す。

【図１２】 図１２は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウイルスベクターを用いて形 質導入 したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから回
収した脾細胞および骨髄細胞のＦＡＣＳ分析の結果を示す。リンパ球の画分中の
細胞の割合を、示された細胞表面マーカーを用いる標準的ＦＡＣＳ分析に供した
細胞について示す。

【図１３Ａ】 図１３Ａは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウィルスベクターを用いて 形質導入 したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから
回収した脾細胞および骨髄細胞で行われたコロニーアッセイの結果を示す。形質
導入マウスおよびコントロールマウス由来の骨髄細胞および脾細胞を、標準的コ
ロニーアッセイ条件下で培養し、そしてコロニーを１４日目に計数した。

【図１３Ｂ】 図１３Ｂは、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウィルスベクターを用いて 形質導入 したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから
回収した脾細胞および骨髄細胞で行われたコロニーアッセイの結果を示す。形質
導入マウスおよびコントロールマウス由来の骨髄細胞および脾細胞を、標準的コ
ロニーアッセイ条件下で培養し、そしてコロニーを１４日目に計数した。

【図１４】 図１４は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウィルスベクターを用いて形 質導入 したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから回
収した脾細胞におけるＩＬ−１２処置に対する応答としてのγ−インターフェロ
ンの産生を示す。馴化培地のサンプルを、ＩＬ−１２（１ｎｇ／ｍｌ）の存在下
で４８時間増殖させた培地（２×１０^６細胞／ウェル／ｍｌ）から取り出し、そ
してＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡにより定量した。

【図１５】 図１５は、ＩＬ−１ｒａ−Ｒ遺伝子を含むレトロウィルスベクターを用いて形 質導入 したマウス骨髄細胞を移植した、致死照射したレシピエントマウスから回
収した脾細胞におけるＩＬ−１２およびＩＬ−１８処置に対する応答としてのγ
−インターフェロンの産生を示す。馴化培地のサンプルを、ＩＬ−１２（１ｎｇ
／ｍｌ）およびＩＬ−１８（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で４８時間増殖させた培
地（２×１０^６細胞／ウェル／ｍｌ）から取り出し、そしてＩＦＮ−γをＥＬＩ
ＳＡにより定量した。

【手続補正４】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図６

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図６】

【手続補正５】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図１０】

【手続補正６】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１３Ａ

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図１３Ａ】

【手続補正７】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１３Ｂ

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図１３Ｂ】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 1/16 ４Ｃ０８４ Ａ６１Ｐ 1/16 3/04 ４Ｃ０８５ 3/04 3/10 ４Ｃ０８６ 3/10 11/00 ４Ｈ０４５ 11/00 17/02 17/02 17/06 17/06 19/02 19/02 25/00 25/00 29/00 29/00 １０１ １０１ 31/04 31/04 31/12 31/12 37/00 37/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 16/18 16/18 16/42 16/42 17/08 17/08 19/00 19/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/50 Ｃ１２Ｐ 21/08 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ // Ｃ１２Ｐ 21/08 5/00 Ａ Ｂ (31)優先権主張番号 ６０／１９４，５２１ (32)優先日 平成12年４月４日(2000．4．4) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／１９５，９１０ (32)優先日 平成12年４月10日(2000．4．10) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ０９／７２４，５８３ (32)優先日 平成12年11月28日(2000．11．28) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ム， シャロン エックス． アメリカ合衆国 カリフォルニア 91362， サウザンド オークス， リッカード ドライブ 2954 (72)発明者 シァ， ミン アメリカ合衆国 カリフォルニア 91320， ニューベリー パーク， カジェ ブエ ナ ヴィスタ 3946 (72)発明者 バス， マイケル ブライアン アメリカ合衆国 カリフォルニア 91360， サウザンド オークス， エヌ． マリ アン アベニュー 1743 (72)発明者 クラヴェイロ， ロジャー アメリカ合衆国 カリフォルニア 91360， サウザンド オークス， イースト ウ ィルバー ロード 384， アパートメン ト 203 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA40 BA13 BB03 BB20 CB01 CB21 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB03 FB04 FB07 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 CA12 DA02 DA03 GA13 HA11 HA17 4B063 QA18 QQ08 QQ79 QR48 QR77 4B064 AG01 AG27 CA19 CA20 CC24 CE06 CE12 DA01 DA15 4B065 AA26X AA90X AA90Y AA93X AA93Y AB01 BA05 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17 BA22 BA35 CA53 CA56 MA52 MA55 MA66 NA14 ZA011 ZA591 ZA701 ZA751 ZA891 ZA961 ZB071 ZB111 ZB151 ZB331 ZB351 ZC351 ZC781 4C085 AA38 EE06 FF24 GG01 GG08 4C086 AA01 AA02 EA16 MA52 MA55 MA66 NA14 ZA01 ZA59 ZA75 ZA89 ZA96 ZB07 ZB11 ZB15 ZB33 ZB35 ZC35 ZC78 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 BA57 CA45 DA75 EA29 EA53 FA74 GA10 GA26

Claims (56)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号３５のいずれか
   に示されるヌクレオチド配列； （ｂ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサートのヌクレオチ
   ド配列； （ｃ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
   に示されるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列； （ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかの相補体に、中程度または高度にストリンジ
   ェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列；および （ｅ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
2. 【請求項２】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
   に示されるポリペプチドに少なくとも約７０％同一であるポリペプチドをコード
   するヌクレオチド配列であって、ここで、該コードされたポリペプチドは、配列
   番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポ
   リペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれ
   かに示されるヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡ
   インサートのヌクレオチド配列、または（ａ）の、対立遺伝子改変体またはスプ
   ライス改変体をコードするヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチドフラグメントをコードす
   る、配列番号１、配列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれかの
   ヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサート、
   （ａ）または（ｂ）の領域であって、ここで、該ポリペプチドフラグメントは、
   配列番号２、配列番号４、配列番号６、もしくは配列番号３６のいずれかに示さ
   れるコードされたポリペプチドの活性を有するか、または抗原性である、領域； （ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、配列番号１、配
   列番号３、配列番号５、もしくは配列番号３５のいずれかのヌクレオチド配列、
   ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサート、または（ａ）〜（ｃ
   ）いずれかの領域； （ｅ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）〜（ｄ）のい
   ずれかの相補体にハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；ならびに （ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
3. 【請求項３】 単離された核酸分子であって、以下； （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４
   、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコード
   するヌクレオチド配列であって、ここで、該コードされたポリペプチドは、配列
   番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポ
   リペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４、配列
   番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコードするヌ
   クレオチド配列であって、ここで、該コードされたポリペプチドは、配列番号２
   、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプ
   チドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４、配列
   番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコードするヌ
   クレオチド配列であって、ここで、該コードされたポリペプチドは、配列番号２
   、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプ
   チドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｄ）Ｃ末端短縮および／またはＮ末端短縮を有する配列番号２、配列番号４
   、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドをコード
   するヌクレオチド配列であって、ここで、該コードされたポリペプチドは、配列
   番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポ
   リペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短縮、およびＮ末
   端短縮からなる群より選択される少なくとも１つの改変を有する配列番号２、配
   列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチド
   をコードするヌクレオチド配列であって、ここで、該コードされたポリペプチド
   は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示
   されるポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む（ａ）〜（ｅ）の
   いずれかのヌクレオチド配列； （ｇ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）〜（ｆ）のい
   ずれかの相補体にハイブリダイズする、ヌクレオチド配列；ならびに （ｈ）（ａ）〜（ｅ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
4. 【請求項４】 請求項１、請求項２または請求項３のいずれかに記載の核酸
   分子を含む、ベクター。
5. 【請求項５】 請求項４に記載のベクターを含む、宿主細胞。
6. 【請求項６】 真核生物細胞である、請求項５に記載の宿主細胞。
7. 【請求項７】 原核生物細胞である、請求項５に記載の宿主細胞。
8. 【請求項８】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドを産生するためのプロセスで
   あって、該ポリペプチドを発現するために適切な条件下で請求項５に記載の宿主
   細胞を培養する工程、および必要に応じて、該培養物から該ポリペプチドを単離
   する工程を包含する、プロセス。
9. 【請求項９】 請求項８に記載のプロセスによって産生される、ポリペプチ
   ド。
10. 【請求項１０】 請求項８に記載のプロセスであって、ここで、前記核酸分
    子が、ＩＬ−１ｒａ−ＲポリペプチドをコードするＤＮＡに作動可能に連結され
    た、ネイティブなＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに対するプロモーターＤＮＡ以
    外のプロモーターＤＮＡを含む、プロセス。
11. 【請求項１１】 請求項２に記載の単離された核酸分子であって、ここで、
    前記パーセント同一性は、ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＡ、
    ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔ、およびＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリ
    ズムからなる群より選択されるコンピュータープログラムを用いて決定される、
    単離された核酸分子。
12. 【請求項１２】 化合物がＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性またはＩＬ−
    １ｒａ−Ｒポリペプチド産生を阻害するか否かを決定するためのプロセスであっ
    て、請求項５、請求項６、または請求項７のいずれかに記載の細胞を該化合物に
    曝露する工程、および該細胞におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性または
    ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド産生を測定する工程を包含する、プロセス。
13. 【請求項１３】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
    に示されるアミノ酸配列；および （ｂ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡインサートによってコー
    ドされるアミノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
14. 【請求項１４】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
    のオルソログに対するアミノ酸配列； （ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
    のアミノ酸配列に少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列であって、ここで
    、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３
    ６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基を含む配列番号２、配列番号４、配列番
    号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列のフラグメントで
    あって、ここで、該フラグメントは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、ま
    たは配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有するか、または
    抗原性である、フラグメント；ならびに （ｄ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、もしくは配列番号３６のいずれ
    かに示されるアミノ酸配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１４２３中のＤＮＡイン
    サートによってコードされるアミノ酸配列、（ａ）、または（ｂ）の、対立遺伝
    子改変体またはスプライス改変体のアミノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
15. 【請求項１５】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４
    、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって
    、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配
    列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４、配列
    番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって、ここ
    で、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号
    ３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４、配列
    番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって、ここ
    で、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号
    ３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｄ）Ｃ末端短縮および／またはＮ末端短縮を有する配列番号２、配列番号４
    、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列であって
    、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配
    列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列；
    ならびに （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短縮、およびＮ末
    端短縮からなる群より選択される少なくとも１つの改変を有する配列番号２、配
    列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれかに示されるアミノ酸配列
    であって、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、
    または配列番号３６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、アミノ
    酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
16. 【請求項１６】 請求項１、請求項２、または請求項３のいずれかの核酸分
    子によってコードされる単離されたポリペプチドであって、ここで、該ポリペプ
    チドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３６のいずれか
    に示されるポリペプチドの活性を有する、単離されたポリペプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１４に記載の単離されたポリペプチドであって、こ
    こで、前記パーセント同一性は、ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳ
    ＴＡ、ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔ、およびＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎア
    ルゴリズムからなる群より選択されるコンピュータープログラムを用いて決定さ
    れる、単離されたポリペプチド。
18. 【請求項１８】 請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項５５、また
    は請求項５６のいずれかに記載のポリペプチドに特異的に結合する、選択的結合
    因子またはそのフラグメント。
19. 【請求項１９】 配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３
    ６のいずれかに示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはそのフラグメン
    トに特異的に結合する、請求項１８に記載の選択的結合因子またはそのフラグメ
    ント。
20. 【請求項２０】 抗体またはそのフラグメントである、請求項１８に記載の
    選択的結合因子。
21. 【請求項２１】 ヒト化抗体である、請求項１８に記載の選択的結合因子。
22. 【請求項２２】 ヒト抗体またはそのフラグメントである、請求項１８に記
    載の選択的結合因子。
23. 【請求項２３】 ポリクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求
    項１８に記載の選択的結合因子。
24. 【請求項２４】 モノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求
    項１８に記載の選択的結合因子。
25. 【請求項２５】 キメラ抗体またはそのフラグメントである、請求項１８に
    記載の選択的結合因子。
26. 【請求項２６】 ＣＤＲ移植抗体またはそのフラグメントである、請求項１
    ８に記載の選択的結合因子。
27. 【請求項２７】 抗イディオタイプ抗体またはそのフラグメントである、請
    求項１８に記載の選択的結合因子。
28. 【請求項２８】 可変領域フラグメントである、請求項１８記載の選択的結
    合因子。
29. 【請求項２９】 ＦａｂフラグメントまたはＦａｂ’フラグメントである、
    請求項２８に記載の可変領域フラグメント。
30. 【請求項３０】 配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３
    ６のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異性を有する少なくとも
    １つの相補性決定領域を含む、選択的結合因子またはそのフラグメント。
31. 【請求項３１】 検出可能標識に結合される、請求項１８に記載の選択的結
    合因子。
32. 【請求項３２】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの生物学的活性を拮抗する
    、請求項１８に記載の選択的結合因子。
33. 【請求項３３】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド関連の疾患、状態、または
    障害を、処置、予防、または改善するための方法であって、有効量の請求項１８
    に記載の選択的結合因子を患者に投与する工程を包含する、方法。
34. 【請求項３４】 配列番号２、配列番号４、配列番号６、または配列番号３
    ６のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドで動物を免疫することによって
    産生される、選択的結合因子。
35. 【請求項３５】 請求項１、請求項２、または請求項３のいずれかに記載の
    ポリペプチドを結合し得る選択的結合因子を産生する、ハイブリドーマ。
36. 【請求項３６】 請求項１８に記載の抗ＩＬ−１ｒａ−Ｒ抗体またはフラグ
    メントを用いて、ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの量を検出または定量する方法
    。
37. 【請求項３７】 請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項５５、また
    は請求項５６のいずれかのポリペプチド、および薬学的に受容可能な処方剤を含
    む、組成物。
38. 【請求項３８】 前記薬学的に受容可能な処方剤が、キャリア、アジュバン
    ト、溶解剤、安定剤、または抗酸化剤である、請求項３７に記載の組成物。
39. 【請求項３９】 請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項５５、また
    は請求項５６のいずれかのポリペプチドの誘導体を含む、ポリペプチド。
40. 【請求項４０】 水溶性ポリマーを用いて共有結合的に改変された、請求項
    ３９に記載のポリペプチド。
41. 【請求項４１】 請求項４０に記載のポリペプチドであって、ここで、前記
    水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコ
    ール、デキストラン、セルロース、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレ
    ングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／
    エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、およびポリビニ
    ルアルコールからなる群より選択される、ポリペプチド。
42. 【請求項４２】 請求項１、請求項２または請求項３のいずれかの核酸分子
    および薬学的に受容可能な処方剤を含む、組成物。
43. 【請求項４３】 前記核酸分子が、ウイルスベクター中に含まれる、請求項
    ４２に記載の組成物。
44. 【請求項４４】 請求項１、請求項２または請求項３のいずれかの核酸分子
    を含む、ウイルスベクター。
45. 【請求項４５】 異種アミノ酸配列に融合された、請求項１３、請求項１４
    、請求項１５、請求項５５、または請求項５６のいずれかのポリペプチドを含む
    、融合ポリペプチド。
46. 【請求項４６】 前記異種アミノ酸配列が、ＩｇＧ定常ドメインまたはその
    フラグメントである、請求項４５に記載の融合ポリペプチド。
47. 【請求項４７】 医学状態を、処置、予防、または改善するための方法であ
    って、請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項５５、もしくは請求項５６
    のいずれかのポリペプチド、または請求項１、請求項２、もしくは請求項３のい
    ずれかの核酸によってコードされるポリペプチドを患者に投与する工程を包含す
    る、方法。
48. 【請求項４８】 被験体において病的状態または病的状態に対する感受性を
    診断する方法であって、以下： （ａ）サンプル中の、請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項５５、も
    しくは請求項５６のいずれかのポリペプチド、または請求項１、請求項２、もし
    くは請求項３のいずれかの核酸によってコードされるポリペプチドの、発現の存
    在または発現量を決定する工程；および （ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または発現量に基づいて、病的状態または
    病的状態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。
49. 【請求項４９】 デバイスであって、以下： （ａ）移植に適した膜；および （ｂ）該膜内にカプセル化された細胞であって、該細胞は、請求項１３、請求
    項１４、請求項１５、請求項５５、もしくは請求項５６のいずれかのタンパク質
    を分泌する、細胞； を備え、 該膜は、該タンパク質に対して透過性であり、そして該細胞に有害な物質に対
    して不透過性である、デバイス。
50. 【請求項５０】 ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドに結合する化合物を同定す
    る方法であって、以下： （ａ）請求項１３、請求項１４、請求項１５、請求項５５、もしくは請求項５
    ６のいずれかのポリペプチドを、化合物と接触させる工程；および （ｂ）該化合物に対する該ＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチドの結合の程度を決定
    する工程、 を包含する、方法。
51. 【請求項５１】 前記化合物に結合した場合に、前記ポリペプチドの活性を
    決定する工程をさらに包含する、請求項５０に記載の方法。
52. 【請求項５２】 動物においてポリペプチドのレベルを調節する方法であっ
    て、請求項１、請求項２、または請求項３のいずれかの核酸分子を該動物に投与
    する工程を包含する、方法。
53. 【請求項５３】 請求項１、請求項２、または請求項３のいずれかの核酸分
    子を含む、トランスジェニック非ヒト哺乳動物。
54. 【請求項５４】 化合物がＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性またはＩＬ−
    １ｒａ−Ｒポリペプチド産生を阻害するか否かを決定するためのプロセスであっ
    て、請求項５３に記載のトランスジェニック哺乳動物を該化合物に曝露する工程
    、および該哺乳動物におけるＩＬ−１ｒａ−Ｒポリペプチド活性またはＩＬ−１
    ｒａ−Ｒポリペプチド産生を測定する工程を包含する、プロセス。
55. 【請求項５５】 単離されたポリペプチドであって、以下： ２位のアルギニン；３位のアラニン、リジン、またはアルギニン；７位のセリン
    ；８位のリジン；９位のアラニン、システイン、リジン、トレオニン、またはセ
    リン；１０位のシステインまたはフェニルアラニン；１３位のアルギニンまたは
    トリプトファン；１５位のセリン；１８位のアルギニン；１９位のセリンまたは
    トレオニン；２１位のトレオニン；２３位のセリン；３４位のアルギニン；３７
    位のチロシン、セリン、またはアルギニン；３８位のリジン、アルギニン、トレ
    オニン、またはセリン；４１位のトレオニン；４３位のセリン、フェニルアラニ
    ン、またはアラニン；４４位のアラニン；４８位のセリンまたはリジン；５２位
    のアラニン、トレオニン、またはフェニルアラニン；５３位のセリン；５４位の
    セリン；５８位のアラニンまたはチロシン；６５位のリジン；６６位のフェニル
    アラニン；６７位のチロシン；６９位のセリン、チロシン、またはフェニルアラ
    ニン；７３位のリジンまたはセリン；７８位のトレオニンまたはアルギニン；９
    ０位のセリンまたはアラニン；９１位のアラニン；９６位のセリン；９７位のリ
    ジンまたはアルギニン；９８位のリジンまたはセリン；１００位のアラニン；１
    ０２位のチロシン；１０４位のアルギニンまたはアラニン；１０５位のリジン；
    １０６位のトレオニン；１０８位のアルギニン；１０９位のリジン、トレオニン
    、またはトリプトファン；１１０位のトレオニンまたはセリン；１１１位のセリ
    ン；１１４位のセリン；１１６位のセリン；１１７位のフェニルアラニン、シス
    テイン、またはチロシン；１２１位のチロシン；１２３位のセリンまたはアラニ
    ン；１２６位のシステイン、セリン、またはトレオニン；１３６位のセリン；１
    ３８位のフェニルアラニンまたはアルギニン；１４１位のトレオニン、アルギニ
    ン、またはアラニン；１４２位のリジンまたはチロシン；１４３位のトリプトフ
    ァンまたはトレオニン；１４５位のアラニン；１４７位のトレオニンまたはセリ
    ン；１５１位のシステイン；および１５２位のセリン、システイン、またはフェ
    ニルアラニンからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を有する
    配列番号１または配列番号３のいずれかに示されるアミノ酸配列を含む単離され
    たポリペプチドであって、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４
    、または配列番号６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、 単離されたポリペプチド。
56. 【請求項５６】単離されたポリペプチドであって、以下： ２１位のアルギニン；２２位のアラニン、リジン、またはアルギニン；２６位の
    セリン；２７位のリジン；２８位のアラニン、システイン、リジン、トレオニン
    、またはセリン；２９位のシステインまたはフェニルアラニン；３２位のアルギ
    ニンまたはトリプトファン；３４位のセリン；３７位のアルギニン；３８位のセ
    リンまたはトレオニン；４０位のトレオニン；４２位のセリン；５３位のアルギ
    ニン；５６位のチロシン、セリン、またはアルギニン；５７位のリジン、アルギ
    ニン、トレオニン、またはセリン；６０位のトレオニン；６２位のセリン、フェ
    ニルアラニン、またはアラニン；６３位のアラニン；６７位のセリンまたはリジ
    ン；７１位のアラニン、トレオニン、またはフェニルアラニン；７２位のセリン
    ；７３位のセリン；７７位のアラニンまたはチロシン；８４位のリジン；８５位
    のフェニルアラニン；８６位のチロシン；８８位のセリン、チロシン、またはフ
    ェニルアラニン；９２位のリジンまたはセリン；９７位のトレオニンまたはアル
    ギニン；１０９位のセリンまたはアラニン；１１０位のアラニン；１１５位のセ
    リン；１１６位のリジンまたはアルギニン；１１７位のリジンまたはセリン；１
    １９位のアラニン；１２１位のチロシン；１２３位のアルギニンまたはアラニン
    ；１２４位のリジン；１２５位のトレオニン；１２７位のアルギニン；１２８位
    のリジン、トレオニン、またはトリプトファン；１２９位のトレオニンまたはセ
    リン；１３０位のセリン；１３３位のセリン；１３５位のセリン；１３６位のフ
    ェニルアラニン、システイン、またはチロシン；１４０位のチロシン；１４２位
    のセリンまたはアラニン；１４５位のシステイン、セリン、またはトレオニン；
    １５５位のセリン；１５７位のフェニルアラニンまたはアルギニン；１６０位の
    トレオニン、アルギニン、またはアラニン；１６１位のリジンまたはチロシン；
    １６２位のトリプトファンまたはトレオニン；１６４位のアラニン；１６６位の
    トレオニンまたはセリン；１７０位のシステイン；および１７１位のセリン、シ
    ステイン、またはフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも１つの
    アミノ酸置換を有する配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリ
    ペプチドであって、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、また
    は配列番号６のいずれかに示されるポリペプチドの活性を有する、 単離されたポリペプチド。