TWI283683B

TWI283683B - Interleukin-1 receptor antagonist-related polypeptide, nucleic acid molecules encoding the same and uses thereof

Info

Publication number: TWI283683B
Application number: TW089126233A
Authority: TW
Inventors: Christian M Saris; Jennifer Giles; Sharon X Mu; Michael Brian Bass; Roger Craveiro
Original assignee: Amgen Inc Amgen Inc.
Priority date: 1999-12-10
Filing date: 2000-12-08
Publication date: 2007-07-11
Also published as: JP2003518371A; AR026768A1; AU1945001A; AU779534B2; JP3842647B2; MXPA02005775A; EP1246844A1

Description

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 —-----B7__ 五、發明說明（1 ) 發明領域本發明係有關新穎間白素-1受體拮抗劑相關（IL· Ira-R) 多肽及編碼彼之核酸分子。本發明也相關於選擇性結合劑、載體、宿主細胞及產生IL- Ira-R多肽的方法。本發明更有關與IL-lra-R多肽相關之疾病、失調及狀沉的診斷、治療、改善及/或預防的醫藥組合物及方法。發明背景在核酸分子的鑑別、選殖、表現和處置（manipulation)上及人類基因組破譯上的技術進步已大大地促進了新的治療學上的發現。快速核酸排序技術現在可以前所未有的速度產生序列資訊’並配合電腦分析，使交疊序列可組成部分或全部基因組，单可鑑別多肽密碼區。一預測的胺基酸序列與一已知的胺基酸序列資料庫集的比較可定出相對於先前鑑別的序列及/或結構標諸之同系性程度。核酸分子内多肤密碼區的選殖及表現爲結構及功能分析提供一種多肽產。對核紅分子及其所編碼多肤的處置可使用作治療劑的產品具較佳屬性。儘管在過去十年中在基因組的研究上有明顯的技術進步，但基於人類基因組的新型治療法的發展潛力大部分仍未實現。許多編碼具潛在效益的多肽治療劑或編碼可作治療性分子的”目標"的多肽之基因至今仍未被鏗別出。相應地 ’本發明一項目的即在於鑑別新穎多肽，及編碼彼的核酸分子，彼等具診斷或治療上的效益。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ----------φ—si, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . · ·_ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 ------B7____ 五、發明說明（2 ) 至今所發現的最強力炎性細胞介素之一爲間白素-1 (IL -1)。IL-1據認爲與許多疾病及醫學狀況有關。其是由（但不是只由）巨噬細胞/單核細胞系細胞產生，且可以產生兩種形式：IL-1從（IL-1以）及IL-1卢（IL-1 /?)。間白素：[受體拮抗劑（IL- Ira)爲一種人類蛋白質，可作爲間白素-1的天然抑制劑。發明概述本發明係有關新穎IL-Ira-R核酸分子及其所編碼多肽。本發明提出一種經分離核酸分子，其包括選自下列所成組合中之核甞酸序列： (a) SEQ ID NO : 1，SEQ ID NO : 3，SEQ ID NO : 5，或 SEQ ID NO: 35中任一者所列之核苷酸序列； (b) ATCC Deposit No ; PTA-1423 中的 DNA 嵌體之核苷酸序列； (c) 編碼 SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO ·· 4，SEQ ID NO : 6 或SEQ ID NO : 36中任一者所列多肽的核甞酸序列； (d) 與（a)-(c)中任一者的補體在中等或高度嚴緊條件下雜交之核甞酸序列；及 (e) 對（a)-(c)中任一者互補之核苷酸序列。本發明也提出一種經分離核酸分子，其包括選自下列所成組合中之核苷酸序列： (a) —種編碼一多肽的核苷酸序列，該多肽至少與下列多肽具 7 0 〇/〇的同一率：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36，其中該编碼多肽具下列多肽所本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 五經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 發明說明（3 ) 具活性：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或 SEQ ID NO ： 36 ; (b) —種編碼具下面所列核甞酸序列的對偶基因變體或接合變體之核甞酸序列：SEQ ID NO : 1，SEQ ID NO : 3，SEQ ID NO : 5或SEQ ID NO : 35，ATCC Deposit No. PTA-1423 中脱氧核糖核酸DNA嵌體之核甞酸序列，或（a); (c) 編碼具至少25個胺基酸殘基的多肽片段之下列任一者所含核甞酸序列的一區：SEQ ID NO : 1，SEQ ID NO : 3， SEQ ID NO : 5，或SEQ ID NO : 35，ATCC Deposit No. PTA-1423 中的 DNA嵌體，（a) ，或（b) ，其中該多肽片段具有如下列任一者所列編碼多肽所具活性：SEQ ID NO ·· 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO ·· 36，或具有抗原性；

(d) 包含至少約1 6個核甞酸的片段之下列任一者所含核甞酸序列的一區·· SEQ ID NO : 1，SEQ ID NO : 3，SEQ ID NO ·· 5，或SEQ ID NO : 35，ATCC Deposit No. PTA-1423 中的 DNA 嵌體，（a)，或（c)，; (e) 可與（a)-(d)中任一者的補體在中等或高度嚴緊條件下雜交之核甞酸序列；及 (f) 對（a)_(d)任一者互補之核甞酸序列。本發明也提出一種包括選自下列所成組合中之核苷酸序列的經分離核酸分子，：

(a) —種編碼一多肽的核甞酸序列，該多肽爲下面所列者 :SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或 SEQ ID 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 _B7___五、發明說明（4 ) NO : 36，且有至少一個保守性胺基酸取代，其中該編碼多肽具下列任一多肽所具活性：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 36 ; (b ) —種編碼一多肤的核誓酸序列，該多肤如下面所列： SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6 或SEQ ID NO :36，且有至少一個胺基酸嵌入，其中該編碼多肽具下列任一多肽所具活性：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 36 ; (c ) 一種編碼一多肤的核菩酸序列，該多肤如下面所列： SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6 或SEQ ID NO :36，且有至少一個胺基酸刪除，其中該編碼多肽具下列任一多肽所具活性：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 36 ; (d) —種編碼一多肽的核苷酸序列，該多肽如下面所列： SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6 或SEQ ID NO ·· 36，且有一 C及/或N端截端（truncation)，其中該編碼多肽具下列任一多肽所具活性：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 36 ; (e) —種編碼一多肽的核甞酸序列，該多肽如下面所列： SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6 或SEQ ID NO :36，且有至少一選自下列所成組合中之改質：胺基酸取代，胺基酸嵌入，胺基酸刪除，C-端截端及N-端截端，其中該編碼多肽具下列任一多肽所具活性：SEQ ID NO : 2， SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 3 6 ; (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) *v ‘i· 訂：本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 _______^ 五、發明說明（5 ) (f) 包含至少約16個核菩酸的（a)_(e)任一者之核甞酸序列； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (g) 可與（a)-(f)中任一者的補體在中等或高度嚴緊條件下雜交之核甞酸序列；及 (h) 對（a)-(e)任一者互補之核:¾:酸序列。本發明提出一種包括選自下列所成組合中的胺基酸序列之經分離多肽： (a) 胺基酸序列’其爲下列任一者所列者：seq id NO : 2 ，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO ·· 36 ;及 (b) ATCC Deposit No· PTA-1423中的DNA嵌體所編碼之胺基酸序列。本發明提出一種包括選自下列所成組合中的胺基酸序列之經分離多肽： (a) SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36中任一者的直系物之胺基酸序列；峰 (b) 與 SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36中之任一胺基酸序列有至少7 〇〇/〇同一率的胺基酸序列，其中該多肽具下列任一多肽的活性：SEQ ID NO : 2 ，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36 ; 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 (c) SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6 或 SEQ ID NO : 36中任一者所列胺基酸序列之片段，其包含至少25 個胺基酸殘基，其中該片段具下列任一多肽的活性：SEQ ID NO ·· 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36 ，或具有抗原性；及本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 A7 B7 五、發明說明（6) (d)SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36中任一所列胺基酸序列，ATCC Deposit No. ΡΤΑ· 1423中的DNA嵌體所編碼之胺基酸序列，（a)，或（b)之對偶基因變體或接合變體。本發明提出一種包括選自下列所成組合中的胺基酸序列之經分離多肽·· (a) 如下列任一者所列之胺基酸序列：SEQ ID NO : 2， SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36，且其有至少一個保守性胺基酸取代，其中該多肽具下列任一多肽所具活性：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO ·· 4，SEQ ID NO : 6，或 SEQ ID NO : 36 ; (b) 如下列任一者所列之胺基酸序列·· SEQ ID NO : 2， SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36，且其有至少一胺基酸嵌入，其中該多肽具下列任一多肽所具活性： SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO ： 36 ; (c) 如下列任一者所列之胺基酸序列：SEQ ID NO : 2， SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36，且其有至少一胺基酸刪除，其中該多肽具下列任一多肽所具活性： SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO ： 36 ;

(d) 如下面所列之胺基酸序列：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36，且其具一 C 及 / 或 N端截端，其中該多肽具下列任一多肽所具活性：SEQ ID -9 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂： 1283683 A7 _______B7___ 五、發明說明（7 ) NO · 2，SEQ ID NO ·· 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 36 :及 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (e)如下列任一者所列之胺基酸序列：SEq m N〇 : 2， SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6或SEQ ID NO : 36，且其有至

少一種改質，該改質係選自下列所成組合中者：胺基酸取代’胺基酸嵌入，胺基酸刪除，C-端截端及N-端截端，其中該多肽具下列任一多肽所具活性：SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 36。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明也提出包含下列胺基酸序列之經分離多肽：SEQ ID NO : 1或SEQ ID NO : 3中所列，且其具至少一選自下列所成組合中之胺基酸取代：位置2之精胺酸；位置3之丙胺酸、離胺酸或精胺酸；位置7之絲胺酸；位置8之離胺酸；位置9之丙胺酸、半胱胺酸、離胺酸、蘇胺酸或絲胺酸；位置之半胱胺酸或苯丙胺酸；位置13之精胺酸或色胺酸；位置1 5之絲胺酸；位置1 8之精胺酸；位置丨9之絲胺酸或蘇胺酸；位置21之蘇胺酸；位置23之絲胺酸；位置34之精胺酸；位置37之酪胺酸、絲胺酸或精胺酸；位置38之離胺酸、精胺酸、蘇胺酸或絲胺酸；位置41之蘇胺酸；位置43之絲胺酸、苯丙胺酸或丙胺酸；位置44之丙胺酸；位置48之絲胺酸或離胺酸；位置5 2之丙胺酸、蘇胺酸或苯丙胺酸；位置5 3之絲胺酸；位置5 4之絲胺酸；位置5 8之丙胺酸或酪胺酸；位置65之離胺酸；位置66之苯丙胺酸；位置67之路月ir ’位置6 9之絲胺酸、酷胺酸或苯丙胺酸；位置7 3之離胺酸或絲胺酸；位置78之蘇胺酸或精胺酸；位置9〇之絲胺 10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 五、發明說明（8 )

酸或丙胺酸；位置9 1之丙胺酸；位置9 6之絲胺酸；位置9 7 之離胺酸或精胺酸；位置98之離胺酸或絲胺酸；位置1〇〇之丙胺酸，·位置102之酪胺酸；位置1〇4之精胺酸或丙胺酸；位置105之離胺酸；位置1〇6之蘇胺酸；位置1〇8之精胺酸；位置109之離胺酸、蘇胺酸或色胺酸；位置u〇之蘇胺酸或絲胺酸；位置111之絲胺酸；位置114之絲胺酸；位置116之絲胺酸；位置117之苯丙胺酸、半胱胺酸或酪胺酸；位置 121之赂胺酸；位置123之絲胺酸或丙胺酸；位置之半胱胺酸、絲胺酸或蘇胺酸；位置136之絲胺酸；位置138之苯丙胺故或精胺酸；位置141之蘇胺酸、精胺酸或丙胺酸；位置142之離胺酸或酪胺酸；位置143之色胺酸或蘇胺酸；位置145之丙胺酸；位置147之蘇胺酸或絲胺酸；位置151之半胱胺酸；及位置152之絲胺酸、半胱胺酸或苯丙胺酸；其中 ▲多肽具下面所列任一多肽之活性：SEQ id NO : 2、SEQ ID NO : 4、或SEQ ID NO : 6。本發明也提出包含胺基酸序列之經分離多肽，該胺基酸序列如SEQ ID NO : 5中所列，且具有至少一選自下列所成組合中之胺基酸取代：位置21之精胺酸；位置22之丙胺酸、離胺酸或精胺酸；位置26之絲胺酸；位置27之離胺酸；位置28之丙胺酸、半胱胺酸、離胺酸、蘇胺酸或絲胺酸；位置29之半胱胺酸或苯丙胺酸；位置32之精胺酸或色胺酸 ;位置3 4之絲胺酸；位置37之精胺酸；位置38之絲胺酸或蘇胺酸；位置40之蘇胺酸；位置ο之絲胺酸；位置53之精胺酸；位置56之路胺酸、絲胺酸或精胺酸；位置57之離胺 —^-------春^^ (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) — — — — — — — — 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -11 - 1283683

五、發明說明（9 ) 經濟部智慧財產局消費合作社印製鉍、精胺酸、蘇胺酸或絲胺酸；位置6〇之蘇胺酸；位置62 之絲胺酸、苯丙胺酸或丙胺酸；位置63之丙胺酸；位置67 之絲胺酸或離胺酸；位置71之丙胺酸、蘇胺酸或苯丙胺酸 ’位置7 2之絲胺酸；位置7 3之絲胺酸；位置7 7之丙胺酸或路胺酸；位置84之離胺酸；位置85之苯丙胺酸；位置86之絡胺酸；位置88之絲胺酸、路胺酸或苯丙胺酸；位置92之離胺酸或絲胺酸；位置97之蘇胺酸或精胺酸；位置109之絲胺酸或丙胺酸；位置110之丙胺酸；位置115之絲胺酸；位置116之離胺酸或精胺酸；位置ι17之離胺酸或絲胺酸；位置119之丙胺酸；位置121之酪胺酸；位置123之精胺酸或丙胺酸；位置124之離胺酸；位置125之蘇胺酸；位置127之精胺酸；位置128之離胺酸、蘇胺酸或色胺酸；位置129之蘇胺酸或絲胺酸；位置130之絲胺酸；位置133之絲胺酸；位置135之絲胺酸；位置136之苯丙胺酸、半胱胺酸或赂胺酸 ;位置140之酪胺酸；位置142之絲胺酸或丙胺酸；位置145 之半胱胺酸、絲胺酸或蘇胺酸；位置155之絲胺酸；位置 157之苯丙胺酸或精胺酸；位置16〇之蘇胺酸、精胺酸或丙胺酸；位置161之離胺酸或酪胺酸；位置162之色胺酸或蘇胺酸；位置164之丙胺酸；位置166之蘇胺酸或絲胺酸；位置170之半胱胺酸；及位置171之絲胺酸、半胱胺酸或苯丙胺酸；其中該多肽具下面所列任一多肽之活性：SEQ ID NO :2、SEQ ID NO ·· 4、或SEQ ID NO : 6。本發明也提出包括IL-lra-R胺基酸序列的融合多肽。 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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五、發明說明（1G) 本發明也提出包括如本文所述之經分離核酸分子的表現載體，包含如本文所述重組體核酸分子的重組體宿主細胞，及產生IL-lra-R多肽的方法，包括培育宿主細胞及視情況分離所產生之多肽。本發明也包括一種轉殖基因型非人類動物，該動物包含一種編碼IL-lra-R多肽之核酸分子。將IL_lraR核酸分子導入動物體内的方式爲可促成1乙-1以4多肽的表現及增加的水平，該途徑可包括增加循環水平。另外，將IL_lra_R 核酸分子導入動物體内，其方式爲可防止内源IL_lra_R# 肽的表現（即，產生擁有IL-lra-R多肽基因失效的轉殖基因型動物）。該轉殖基因型非人類動物較佳者爲哺乳動物，如大鼠或小鼠。本發明也提出本發明IL-lra-R多肽的衍生物。此外，也提出選擇性結合劑，如抗體及能特異地結合本發明IL- Ira-R多肽的肽。此類抗體及肽可？蕞E動性或拮抗性者。口几經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 包含本發明核苷酸、多肽或選擇性結合劑及一或多種藥學上可接受調配劑的醫藥組合物也包括在本發明内。該醫藥組合物是用於提供治療有效量的本發明核甞酸或多肽。本發明也有關多肽、核酸分子及選擇性結合劑的使用方法。本發明IL -1 ra- R多肽及核酸分子可用以治療、預防、改善及/或偵檢疾病及失調，包括本文所述者。本發明也提出檢定試驗分子的方法以鑑別出可結合工^ lra-R多肽的試驗分子。該方法包括使一IL_lra-R多肤^與一 -13·

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五、發明說明（11 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 試驗分子接觸，以測定試驗分子與多肽的結合程度。該方法也包括測定此類試驗分子是否爲IL “ra_R多肽的激動劑或拮抗劑。本發明也提出一種測試方法，用以試驗分子對 IL- lra_R多肽的表現或IL- lra-R多肽所具活性之影響。調節IL-lra-R多肽表現及調制（即增加或降低）IL_ira_R 多肽水平的方法也包括在本發明中。一種方法係包括給動物服用編碼IL - Ira- R多肽的核酸分子。於另一方法中，可以給用包括著可調節或調制IL-lra_R多肽表現的成分之核酸分子。此類方法的例子包括基因療法、細胞療法及反義療法，這將在下文中詳述。在本發明另一方面，IL-ira-R多肽可用於識別其受體 ("IL-lra-R多肽受體”）。各種形式的，，表現選殖"已廣泛地用於選殖蛋白質配位體受體。參閱，如sim〇nsen and L〇dish， 1994, Trends Pharmacol· Sci· 15:437-41 及Tartaglia et al. 1995,

Cell 83:1263-71。IL-lra-R多肽受體的分離對於鑑別或開發新的IL _ 1 ra- R多肽化號通道的激動劑或拮抗劑很有用。此類激動劑及拮抗劑包括可溶的IL-lra-R多肽受體，抗-IL-Ira- R多肽受體選擇性結合劑（如抗體及其衍生物），小分子，及反義低聚核甞酸，以上任一物質可用於治療一種或多種疾病或失調，包括本文所述者。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製圖式之簡略説明圖1A-1B闡示人類IL-lra-R基因的核'^崎序列（SEQ ID NO : 1)及所推演出人類IL-lra-R多肽的胺基酸序列（SEq ID NO ： 2); -14 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（12) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖2A-2B闡示人類IL-lra_R基因變體的核苷酸序列（SEQ ID NO : 3)及所推演出之該變體所編碼的人類IL - lra-R多肽的胺基酸序列（SEQ ID NO : 4); 圖3闡示人類IL-lra-R接合變體（SEQ ID NO : 5)的核甞酸序列及所推演出之該變體編碼的人類IL - lra-R多肽的胺基酸序列（SEQIDNO : 6); 圖 4A-4B 闡示人類 IL-1 “（IL-1—從；SEQ ID NO : 7)、人類 IL-10(IL-1 —; SEQ ID NO : 8)，人類 IL-1 受體拮抗劑（11^-1 RA ; SEQ ID NO : 9)，人類IL-1 d (IL-1—d ; SEQ ID NO : 10)，人類 IL-lra-R 多肽（IL-lra-R ; SEQ ID NO : 2)，人類 Tango_77(Tango-77 ; SEQ ID NO : 11)，人類 Zilla4 (Zilla4 ; SEQ ID NO : 12)，人類 IL-1 C (IL-1_C ; SEQ ID NO ·· 13)，人類IL-1 受體拮抗劑 0 (IL_1 RA —/? ; SEQ ID NO : 14)，人類 SPOIL II (SPOIL _II ; SEQ ID NO : 15)，人類 IL-1 ε (IL-1 一 ε ; SEQ ID NO : 16)，及人類 IL-1 7； (IL-1—77 ; SEQ ID NO : 17)的胺基酸序列併列；圖5圖概略地闡示IL-1 r a基因族的系統發生關係；圖6圖闡示人類IL-lra-R多肽（Mature CS329)、人類IL-li:a-R多肽的序列變體（Mature CS329變體蛋白質）及人類 IL-lra-R多肽的接合變體（Omega 329蛋白質）之間的關係；經濟部智慧財產局員工消費合作社印製圖7闡示鼠科IL-lra-R基因的核甞酸序列（SEQ ID NO : 35)，及所推演出之鼠科IL-lra_R多肽（SEQ ID NO : 36)的胺基酸序列； -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（13) 圖 8 闡示人類IL-lra-R 多肽（huIL-lra-R ; SEQ ID NO : 2) 及鼠科IL- lra-R 多肽（muIL-lra-R ; SEQ ID NO : 36)的胺基酸序列排列；圖9 A-9I闡示鼠科IL-lra_R基因（SEQ ID NO : 37)的基因組核苷酸序列。也標出表現序列（exons) 1 - 4之編碼部分的位置（下劃線)〇圖10A-10C闡示用Northern點潰分析法偵檢鼠科（圖10A) 及人類（圖 10B-10C)IL-lra-R mRNA的表現；圖11A-11B闡示用抗-IL-lra-R抗體進行Western點潰分析法的結果；圖1 2闡示脾及骨髓細胞的FACS分析結果，該等細胞是從受致命照射的小鼠體内取得，該小鼠曾受過鼠科骨髓細胞移植，而該骨髓細胞係經包含IL_lra_R基因的反轉錄病毒載體所轉導。淋巴部位内細胞所占百分比所顯示的細胞是根據使用標示細胞表面標誌物所進行的標準FACS分析而得的細胞。圖13A-13B闡示脾及骨髓細胞的群落檢定結果，該細胞是從受致命照射的小鼠體内取得，該小鼠曾受過鼠科骨髓細胞移植，而該細胞係經包含IL - Ira- R基因的反轉錄病毒載體所轉導。由經轉導及對照小鼠體内所得骨髓及脾細胞係在標準群落檢定條件下培育，並在第14天計數群落；圖1 4闡示對應於用間白素IL-1 2在脾細胞内的處理的r 干擾素產生，該脾細胞是從受致命照射的小鼠體内取得，該小鼠曾受過鼠科骨髓細胞移植，而該細胞係經包含I L- -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 五、發明說明（14) lra-R基因的反轉錄病毒載體所轉導。從在間白姐^ 毫微克/毫升）存在中生長48小時的培養液（2χι〇6細胞/洞/ 毫升）取出經調理培養基樣品，並以㈣A來定量出跡厂圖15閣示對應於肌_12訊_18在脾細胞内的處理^ 干擾素產生，該脾細胞是從受致命照射的小鼠體内取得，孩小鼠曾受過鼠科骨髓細胞移植，而該細胞係經包含il_ lra-R基因的反轉錄病毒載體所轉導。從在毫微克 /¾升）及IL-18(l〇愛微克/毫升）存在中生長48小時的培養液（2Χ ΙΟ6細胞/洞/毫升）取出經調理培養基樣品，並以 ELISA來定量出IFN-厂。發明之詳細説明本文之章節標題只用於組織框架目的，而不應認爲是限制所述主題事宜。本申請案中所引之所有參考資料皆明確地併於本文作爲參考。定義術浯丨’IL -1 ra-R基因"或’丨il - ira-R核酸分子"或lra· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 R 聚核苷酸•’是指包括 SEQ ID NO : 1、SEQ ID NO : 3、SEQ ID NO : 5、或SEQ ID NO : 3 5任一者所列核甞酸序列或由彼等所構成之核苷酸序列、一编碼SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO :4、SEQIDNO : 6或SEQIDNO : 36任一者所列多肽之核荅酸序列、一在ATCC Deposit No. PTA-1423中的DNA嵌體之核苷酸序列，及本文中所界定之核酸分子。 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 -----------五、發明說明（15 ) 術語"IL-lra-R多肽對偶基因變體"是指多個可能自然發生的存在於一有機體或有機體群所具染色體上—特定基因座上的基因變體形式之一者。 ^ 術語’’IL-lra-R多肽接合變體"是指一核酸分子，通常 RNA，其係經由如下列任一者：SEQ m N〇 : 2瓜 N…4、SEQ ID N0 : 6、或SEQ ID N〇 :⑹斤列 iL_ira R 多肽胺基酸序列的核糖核酸RNA轉錄本内的介入子（intr〇n)交替處理所產生者。術語”經分離核酸分子"是指本發明核酸分子，（丨）其係經在核版由源細胞中分離時自然存在的至少占總量$ 〇 %左右的蛋白質、脂質、醣類或其他物質中分離出來者，（2)不與全部或部分該”經分離核酸分子"自然相連的聚核苷酸相連 ’（3 )可與非自然相連之聚核嘗酸可操作地連結，或（* )於自然界中不存在爲更大型聚核:y：酸序列的部分。較佳者，本發明經分離核酸分子中實質地不含任何其他雜核酸分子或可在經分離核酸分子自然環境中存在且會影響其在多肽產生或治療、診斷、預防及研究上的用途之其他雜質。術語"核酸序列"或"核酸分子"是指DNA或RNA序列。該術語包括由任一已知DNA及RNA驗類似物所形成的分子，如但不限於4-乙醯基胞嘧啶、8-羥基-N6 -甲基腺苷、氮丙啶胞嘧啶、假異胞嘧啶、5-(羧基羥基甲基）脲嘧啶、5-氟脲嘧啶、5·溴脲嘧啶、5-羧基甲基胺基甲基-2-硫脲嘧啶、 5-羧基-甲基胺基甲基脲嘧啶、二氫脲嘧啶、肌苷、N6-異 -戊烯基腺嘌呤、1-甲基腺嘌呤、1-甲基假脲喊淀、1-甲基 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) - 訂： .鬃· 16 1283683 五、發明說明（鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基-鳥嘌呤、2_甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、％甲基胞嘧啶、N6_甲基腺嘌呤、7_甲基鳥嘌呤、5 -甲基胺基甲基脲嘧啶、5•甲氧基胺基-甲基-2-硫脲嘧啶、卢·〇_甘露糖基奎核芬 (queosine)、5、甲氧羰基-甲基脲嘧啶、5_甲氧基脲嘧啶、 2-甲基硫代-N6-異戊烯基腺嘌呤、脲嘧啶_5_羥基乙酸甲基酯、脲嘧啶-5-羥基乙酸、羥基丁氧嘧啶（〇xybut〇x〇sine) 、假脲嘧啶、奎核苷、2-硫胞嘧啶、5_甲基_2_硫脲嘧啶、 2-硫脲嘧啶、4_硫脲嘧啶、5_甲基脲嘧啶、脲嘧啶_5一羥基乙酸甲酯、脲嘧啶-5-羥基乙酸、假脲嘧啶、奎核苷、 2-硫胞喊淀、及2,6 -二胺基嗓吟。術語”載體"（vector)是用來指用於向宿主細胞傳遞編碼資訊的任何分子（如核酸、質體或病毒）。術語"表現載體"指一種載體，其適於轉形宿主細胞並含有可導引及/或控制所嵌入之異源核酸序列的表現之核酸序列。该表現包括，但不限於，各種程序如轉錄、轉譯及當介入子存在時的核糖核酸RNA接合。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製術m可操作地聯結"在本文中是用於指’側接序列的排列，其中所述側接序列係經構型或組裝成使其可發揮正常功能。例如，可操作地聯結於編碼序列的側接序列能促成編碼序列的複製、轉錄及/或轉譯。例如，編碼序列可操作地聯結於一啓動子（promot〇r)，該啓動子可導引該編碼序列的轉錄。一側接序列無需與編碼序列相鄰接，只要期能正確作用即可。因此，例如，介入型未轉譯但已轉錄的序列可 -19- ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） 1283683 A7

五、發明說明（1?) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製存在於啓動子序列與編碼序列之間，且該啓動序列仍可視” 可操作地聯結”於編碼序列上。術語"宿主細胞"是用於指業經核酸序列轉形，或可經轉形’然後表現出一所選標的基因之細胞。該術語包括親代細胞的子代，無論該子代在形態上或在基因組成上與原親代是否完全一致，只要所選定的基因存在即可。術語” IL · Ira- R多肽•’是指包含下列任一胺基酸序列的多肽：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ 11)>70:36及相關多肽。相關多肽包括1[-1^-11多肽片段， IL- lra_R多肽直系物、il_ lra-R多肽變體、及iL-lra-R多肽衍生物、彼等具下列任一多肽所具至少一活性：SEQ NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或 SEQ ID NO : 3 6 。IL- Ira-R多肽可爲成熟多肽，如本文所定義者，也可含或不含一胺基終端甲硫胺酸殘基，視其製備方法而定。術語"IL-lra-R多肽片段"指包含一在胺基端截端（具或不具前導序列），及/或在多肽的羧基端具截端的多肽，該多肽如下面所列任一者：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36。術語"IL-Ira-R多肽片段，•也指IL· lra-R多肽直系物、IL - lra-R多肽衍生物、或IL - Ira-R多肽變體之胺基端及/或羧基端截端，或IL_lra-R多肽對偶基因變體或IL-Ira-R多肽接合變體所編碼之多肽在胺基端及/或叛基端的截端。IL- lra-R多肽片段可由替代型RNA 接合或由活體内（in vivo)蛋白酶活性而得。本發明也涵蓋到經膜結合的IL- lra-R多肽。在較佳實施例中，截端及/或 -20 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ♦?· · 1283683 Α7 Β7 五、發明說明（18) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 刪除包含10個左右的胺基酸、或20個左右的胺基酸、或50 個左右的胺基酸、或75個左右的胺基酸、或100個左右的胺基酸、或超過100個的胺基酸。所得多肽片段將包含相接的 25個左右胺基酸、或50個左右的胺基酸、或75個左右的胺基酸、或100個左右的胺基酸、或125個左右的胺基酸。此類IL-lra-R多肽片段可選擇性地包含一胺基端甲硫胺酸殘基。要了解者此類片段可用於如，產生對抗-IL-lra-R多肽的抗體。術語n IL - Ira- R多肽直系物••指來自另一物種，對應於下面所列任一 IL - Ira- R多肽胺基酸序列的多肽：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 3 6。例如，小鼠及人類IL-lra-R多肽就被認爲是彼此的直系物。

術語"IL-lra-R多肽變體"指與下面所列任一 il-ira-R多肽胺基酸序列：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 :6、或SEQ ID NO : 36(無論具不具前導序列）比較時，包含具一或多個胺基酸序列取代、刪除（如内刪除及/或IL_lra· R多肽片段）、及/或添加（如内添加及/或j L _ lra_ R融合多肽 )的胺基酸序列。變體可爲自然存在（如IL-lra_R#肽對偶基因變體、IL-lra-R多肽直系物、&IL-lra^多肽接合變體）或人工建構。此類IL_lra-R多肽變體可由相應的核酸分子來製備，該核酸分子所具之脱氧核糖核酸序列根據下面所列任一序列而變化：SEQ ID N〇 : !、SEQ出n〇 3 1〇1^〇:5、或犯(5101^0:35。在較佳的實施例中，變體由 1至3，或由！至5，或由iho，或由！至15，或由 -21 - 本紙張尺度適財_家標準（CNS;A4規格⑵。χ撕公爱)— 1283683 A7

五、發明說明（19 ) ，或由1至25，或由1至50，或由1至75，或由1至1〇〇, 或多於100個胺基酸取代、嵌入、增加及/或刪除，其中取代可爲保守，或非保守，或其任一組合。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

術語n IL_ lra-R多肽衍生物"指下面所列任一多肽：seq ID NO ·· 2、SEQ ID NO ·· 4、SEQ ID NO ·· 6、或SEQ ID NO ·· 36、IL-lra-R多肽片段、IL· lra-R多肽直系物、或IL- lra-R 多肽變體，如本文所定義者，等經化學改質者。術語"IL_ lra-R多肽衍生物"也指經化學改質的il - lra-R多肽對偶基因變體或IL- lra-R多肽接合變體所編碼之多肽，如本文所定義者。術語·•成熟IL-lra-R多肽”指缺乏前導序列之il-lra-R多肽。一成熟的IL-lra-R多肽也可包括其他的改質，如胺基端（具或不具前導序列）及/或羧基端的蛋白水解處理，較小多肽從較大多肽的分裂，N-連接及/或〇-連接的糖基化，及類似者。術語"IL - Ira- R融合多肽"指在下面所列任一多肽的胺基經濟部智慧財產局員工消費合作社印製或羰基端：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36、IL-lra-R多肽片段、IL-lra-R多肽直系物、或IL-lra-R多肽變體，或IL-lra-R街生物，如本文所定義者’發生的一或多個胺基酸的融合（如異源蛋白質或肽）。術語"IL - Ira-R融合多肽M也指IL- Ira-R多肽對偶基因變體或IL-lra-R多肽接合變體，如本文所定義者，所編碼之多肽在胺基或羰基端上的一或多個胺基酸的融合。 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（20 術語"生物活性IL- lra-R多肽"指具至少一種包含下面所列任一胺基酸序列之多肽所具特徵活性的IL- lra-R多肤： SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ id NO ·· 36。此外，IL-lra-R多肽可作爲具活性的免疫原；即 IL-lra-R多肽含至少一可培育出抗體的抗原決定部位，術語"經分離多肽"指本發明多肽，其（1 )已經從在由源細胞中分離時自然存在的至少占總量5 〇 %左右的蛋白質、脂質、醣類或其他物質中分離出來，（2)不與所有或部分的該 ”經分離多肽"在自然狀態下相連之多肽（經由共價或非共價交互作用）相連，（3)可操作地（經由共價或非共價交互作用 )連接到一與其在自然狀態下不相連的多肽上，或（4)不在自然界存在。較佳者，經分離多肽中實質地不含在其自然環境中存在，會影響其治療、診斷、預防及研究上的用途之其他雜多肽或其他雜質。術語”同一率••如本技藝中爲人所知者，指兩或多種多肽分子或兩或多種核酸分子序列之間經由比對序列所定出的關係，如。在技藝中，，’同一率•，也意指核酸分子或多肽之間的序列相關程度，依各例而定，可由兩或多種核嘗酸或兩或多個胺基酸序列鏈的配對所確定。”同一率”係用由一種特殊的數學模式或電腦程式（即算法（algorithms))所得間隙調整（若存在的話）法計量兩個或多個序列中較小序列的完全配對百分比。術語"相似性"爲一相關概念，但與"同一性"相異者，，•相似性"指包括完全配對及保守取代配對的_種相關性計量。 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）一 ----------- ί請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

1283683 五、發明說明（21) 若兩個多肽序列具，如，1 0 / 2 0完全相同的胺基酸，剩餘均爲非保守取代’那麼同一性及相似性的百分比均爲5 〇 % 。若，在同一例子中，在另外五個位置上爲保守取代，那麼同一性的百分比仍爲5 0 %，但相似性的百分比爲 7 5 % ( 1 5 /2 0 )。因此，在存在保守取代的情況下，兩個多肽之間的相似性百分比將高於兩個多肽間的同一性百分比。術語”自然存在"或"自然物"，當與生物學物質如核酸分子、多肽、宿主細胞及相似物聯繫起來時，指自然界存在而非爲人造的物質。同理，本文所用"非自然存在"或”非自然物”指自然界不存在的物質，或已爲人在結構上改質或爲人工合成者。術語"有效量"及"治療有效量"均指可支援本文所述IL-lra-R多肽所具一或多種物質活性的可觀察水平之iL_ira_R 多肽或IL-lra-R核酸分子用量。術語”藥學上可接受之載體"或”生理學上可接受之载體·，，如本文中所用者，指一或多個製劑物質，其適於完成或增強作爲醫藥組合物的IL-lra_R多肽、IL-lra-R核酸分子、或IL-lra-R選擇性結合劑的輸送。術語"抗原"指一分子或一分子的部分，其可經由選擇性結合劑如抗體，連接，也可在動物體内應用，以產生能結合於該抗原的抗原決定部位上之抗體。一抗原可具一或多個抗原決定部位。術語”選擇性結合劑"指對IL· lra-R多肽具特異性的一分子或多分子。如本文所用者，術語”特異地”及”特異性••指 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂：臧· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五經濟部智慧財產局員工消費合作社印製發明說明（22) 選擇性結合劑結合人類IL- lra-R多肽，而不結合人類非-IL-lra-R多肽的能力。但，要了解者，選擇性結合劑也可結合下面所列任一多肽的直系物：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，即，彼等的種間版本’如小鼠及大鼠的IL 1 ra- R多肤。術語”轉導"用以指基因由一細菌轉移至另一細菌，通常經由一嗤菌體實現。"轉導π也指經由反轉錄病毒進行的眞核生物細胞序列之獲得及轉移。術語”轉染"用以指細胞攝取異質或外源DNA，且當外源 DNA被導入細胞膜内部時，該細胞即被”轉染·’。許多轉染技術皆爲技藝中爲人所熟知者及在本文中闡述者。參閱，如 Graham et al·，1973，Virology 52:456; Sambrook et al·， Molecular Cloning，A Laboratory Manual ( Cold Spring Harbor Laboratories，1989); Davis et al.，Basic Methods in Molecular Biology (Elsevier，1986); and Chu et al.，1981，Gene 13:197 〇此類技術可用以導入一或多個外源DNA部分體進入適當的宿主細胞。術語π轉形"如本文中所用者，指細胞基因特性的改變，且當一細胞被改變以含有一新的DNA時，其就被轉形。如，當一細胞由其自然狀態下被改變基因，其即經轉形。於轉染或轉導後，轉形DNA可經由物理性整體化到細胞的染色體内與細胞的DNA重組，可暫時保持爲基因附體 (episomal element)，而不會被複製，或可作爲質體而獨立地 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 . 1283683 A7 B7 五、發明說明（23) 複製。一細胞當其DNA隨細胞的分裂而被複製時，即可認爲己被穩定地轉形。核酸分子及/戒多肽的相關性要了解者相關的核酸分子包括下面所列任一核酸分子的對偶基因或接合變體：SEQ ID NO : 1、SEQ ID NO : 3、SEQ ID NO : 5、或SEQ ID NO : 35，並包括對上述任一核甞酸序列互補之序列。相關核酸分子也包括編碼多肽的核荅酸序列，與下面所列任一多肽比較：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，該多肽包含或主要由一或多個胺基酸殘基的取代、改質、添加及/或刪除構成。此類相關IL-lra-R多肽可包含，如，一或多個N連接或〇連接糖基化部位上的添加及/或刪除，或一或多個半胱胺酸殘基上的添加及/或刪除。相關核酸分子也包括編碼一多肽IL-lra-R核酸分子片段，該多肽具有下面所列任一 IL-lra-R多肽：SEQ ID NO : 2、 SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36的胺基酸殘基中之至少25個左右相接之胺基酸、或50個左右胺基酸、或75個左右胺基酸、或100個左右胺基酸、或125個左右胺基酸、或多於125個胺基酸。此外，相關IL-lra-R核酸分子也包括那些包含下述核菩酸序列的分子，該序列在如本文所定義者之中等或高度嚴緊條件下可與下面所列任一 IL · Ira- R核酸分子之完全互補序列雜交：SEQ ID NO : 1、SEQ ID NO : 3、SEQ ID NO : 5、或SEQ ID NO : 35，或與編碼一多肽的分子之完全互補序列 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂： 4 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

1283683 第089126233號專利申請案中文說明書替換頁(92年11月） A7 _B7 五、發明説明（24 ) 雜交，該多肽包含下面所列任一胺基權序列：3五卩10>10 ·· 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，或與如本文中所定義者之核酸片段之完全互補序列雜交，或與編碼如本文所定義者之多肽的核酸部分之完全互補序列雜交。可使用本文所提供之I L - Ira- R序列來針對相關序列篩選cDNA、基因組或合成DNA庫以製備雜交探針（probe)。展現出對已知序列顯著同一性的DNA及/或IL - Ira- R多肽的胺基酸序列區可經由使用如本文中所詳述的序列排比運算法則事先確定並用這些區域來設計篩選用的探針。術語’’高度嚴緊條件”指設計用以進行序列為高度互補的 DNA股雜交，並排除明顯誤配的DNA雜交之條件。雜交的嚴緊度原則上是由溫度、離子強度及變性劑如甲醯胺的濃度來決定的。雜交及清洗的”高度嚴緊條件”的例子為6 5 -68 °C下0.015 Μ的氣化鈉，0.0015 Μ檸檬酸鈉或42 °C下0.015 Μ氯化鈉、0.0015 Μ檸檬酸鈉，及50%的甲醯胺。參閱 Sambrook, Frits ch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(2nd ed.,Cold Spring Harbor Laboratory, 1989) ; Anderson et al.，Nucleic Acid Hybridisation: A Practical Approach Ch. 4 ( IRL Press Limited ) 0 更為嚴緊條件（如更高的溫度、更低的離子強度、更高的甲醯胺，或其他變性劑）也可使用，但雜交速率將受影響。其他的試劑也可包括在雜交及清洗緩衝液中用以降低非特異性及/或背景雜交。例子為0.1%的牛血清白蛋白，0.1 % 的聚乙晞基吡咯酮，0.1 %焦磷酸鈉，0.1 %十二烷基硫酸 27- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1283683 25 五、發明說明（鈉’ NaDodS〇4(SDS) ’聚薦糖，Denhardt’s溶液，超聲波降解鮭魚精子DNA(或其他非互補DNA)，及聚葡糖硫酸酯，但其他適當試劑也可使用。這些添加劑的濃度及種類可改變而不會實質地影響雜交條件的嚴緊度。雜交試驗通常在 pH値6.8-7.4進行；但在典型的離子強度條件下，雜交速率幾乎與 pH値無關。參閲 Anderson et al·，Nucleic Acid

Hybridisation: A Practical Approach Ch· 4 ( IRL Press Limited )。影響DNA雙螺旋穩定性的因素包括驗基組成、長度、及驗基對誤配程度。雜交條件可由一名諳於此技者調整，以適應這些變數，並使不同序列相關度的DNA可形成雜交物。一完美配對DN雙螺旋的融化溫度可依以下公式來估算： Tm (°C )=81.5 + 16.6 ( log[Na+] )+0.41(%G+C)-600/N-0.72 ( % 甲醯胺）其中N爲所得雙螺旋的長度，[Na+]爲鈉離子在雜交或清洗落液中的莫耳濃度，％G + C爲（鳥嘌呤+胞嘧啶）鹼基在雜交物中所占的百分比。對不完美配對的雜交物來説，每1〇/〇誤配下融化溫度約降低1 °C。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製術語"中等嚴緊條件"指可能形成具有比在"高度嚴緊條件 "下可能發生者較大的鹼基對誤配程度之DNA雙螺旋的條件。典型"中等嚴緊條件"的例子爲5〇-65 t下〇〇i5 M氣化鈉、0.0015 Μ檸檬酸鈉，或37-5〇t下，〇〇15 μ氣化鈉、 0.0015 Μ檸檬酸鈉，和20%的甲醯胺。例如，5〇Ό，〇〇15 Μ鈉離子的”中等嚴緊條件，，可促成約2丨％的誤配。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐 -28· 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（26) 諳於此技者皆了解在”高度嚴緊條件”與”中等嚴緊條件” 間無絕對區別。例如，〇·〇15 Μ鈉離子（無甲醯胺）中，完全配對長DNA的融化溫度約爲71°C。在65°C (相同離子濃度）下清洗，將會出現約6 %的誤配。爲了獲取更多的即時相關序列，諳於此技者可單純地降低溫度或增加離子濃度。在1 Μ氣化鈉*中，長達約2 0核苷酸的低聚核甞酸探針的融化溫度之良好估算如下：

Tm = 2°C per Α-Τ 鹼基對+4°CperG-C鹼基對 *在6X擰檬酸鈉鹽（SSC)中的鈉離子濃度爲1 Μ。參閲Suggs et al., Developmental Biology Using Purified Genes 683 (Brown and Fox，eds·，1981 ) o 低聚核苷酸的高度嚴緊清洗條件通常爲比低聚核苷酸在 6XSSC，0.1%SDS 的 Tm 低 0-5°C 之溫度。在另一具體實例中，相關核酸分子包含或由具有與下面所列任一核甞酸序列70%同一率的核甞酸序列組成：SEQ ID NO : 1、SEQ ID NO : 3、SEQ ID NO : 5、或SEQ ID NO ·· 35，或包含或主要由與編碼下面所列任一多肽的核甞酸序列有7 0 %同一率的核苷酸序列組成：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36。在一較佳的實施例中，該核甞酸序列與下面所列任一核甞酸序列具 7 5 %左右、或8 0 %左右、或8 5 %左右、或9 0 %左右、或 9 5 %、9 6 %、9 7 %、9 8 % 或 9 9 % 左右的同一率：S EQ ID NO : 1、SEQ ID NO ·· 3、SEQ ID NO : 5、或SEQ ID NO : 35，或該核苷酸序列所編碼的多肽與下面所列任一多肽序列具 -29 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . 1283683 Α7 Β7 五、發明說明（27) 7 5 %左右、或8 0 %左右、或8 5 %左右、或9 0 %左右、或 9 5 0/〇、9 6 %、9 7 %、9 8 % 或 9 9 % 左右的同一率：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36。相關核酸分子所編碼的多肽至少具一項下面所列多肽之活性：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36。核酸序列的區別可能導致胺基酸序列相對於下面所列任一胺基酸序列：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO :6、或SEQ ID NO : 36的保守及/或非保守改變。對下面所列任一胺基酸序列進行的保守改變·· SEQ ID NO :2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 3 6(及對編碼核甞酸的相應改變）將產生一與IL -1 r a - R多肽功能及化學特性相似的多肽。相反地，對IL-lra-R多肽的功能及/ 或化學特性所進行的實質改變可經由對下面所列任一胺基酸序列内之選擇取代來完成：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，這些取代在維持下列的效果上有顯著地區別：（a)在取代區域内分子主幹的結構，如，爲片狀或螺旋狀構象（conformation)，（ b )分子在目標部位的電荷或疏水性，或（c)支鏈的大小。例如，”保守型胺基酸取代”可涉及一非自然殘基取代一自然胺基酸殘基，使得在該部位的胺基酸殘基所具極性或電荷受很小或沒有影響。相外，多肽中任一自然殘基也可被丙胺酸所取代，如先前對"丙胺酸掃描突變π所述者。 -30 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

1283683 五、發明說明（28 ) 保守型胺基酸取代也包㈣自然存在的胺基酸殘基，該殘基通常是經由化學肽合成而非經由生物系統内的合成而掺入。每些包括擬肽，及其它胺基酸部分體的逆轉或轉化形式。自然存在的殘基可基於普通支鏈屬性予以分類： 1 )疏水類·正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、lie ; 2 )中性親水類：Cys、Ser、Thr ; 3 )酸性類：Asp、Glu ; 4 )鹼性類·· Asn、Gin、His、Lys、Arg ; 5 )影響鏈取向的殘基類：Gly、Pro ;及 6 )芳香類：Trp、Tyr、Phe。如’非保守取代可涉及這些類中的一員與另一類中的一員之間的叉換。這些取代殘基可導入與非人類J L - lra_ R多肽同源的人類IL-lra-R多肽的區域内，或導入該分子的非同源區内。在進行此類變化中，需考慮到胺基酸的疏水指數。每個胺基酸基於其疏水性及電荷特性，均被賦予一疏水指數。疏水指數為：異白胺酸（ + 4.5);纈胺酸（ + 4.2);白胺酸 ( + 3.8);苯丙胺酸（ + 2.8);半胱胺酸/胱胺酸（ + 2.5);甲硫胺酸（+1.9);丙胺酸（+1.8);甘胺酸（-0.4);蘇胺酸 (-0.7);絲胺酸（-〇·8);色胺酸（-0.9);酪胺酸（-1.3);脯胺酸（-1.6);組胺酸（-3.2);榖胺酸鹽（-3.5);穀胺醯胺（_ 3·5);天冬胺酸鹽（·3·5);天冬胺醯胺（-3.5);離胺酸（-3.9);及精胺酸（-4.5)。 31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I ^1 ϋ n ϋ 1 一：0, _ ϋ ϋ ϋ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·裝 ·!·— 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 ---- B7____ 五、發明說明（29 ) 疏水性胺基酸指數在賦予蛋白質相互作用生物功能上的重要性在本技藝中係為人所知者（Kyte et al·，1982，J. Mol. Biol. 157:105-3 1 )。已知者某些胺基酸可取代其他具類似疏水才曰數或值的胺基酸’而仍能保有相似的生物活性。在進行基於疏水指數的變化時，胺基酸取代的疏水指數在士 2之間為較佳，± 1之間為特別較佳者，而± 〇 · 5之間為甚至更為較佳者。技藝中也知曉者，相似胺基酸的取代可有效地基於疏水性來實現，特別者當所得生物功能等效性蛋白質或肽將用於免疫實施例中時，如本例中所述者。蛋白質最大局部平均親水性，如由其相近胺基酸的親水性所控制者，與其免疫原性及抗原性相關’即，與該蛋白質之生物屬性相關。下列疏水性值係經賦予彼等胺基酸殘基：精胺酸（+ 3 · 〇 ) ;離胺酸（ + 3.0);天冬胺酸鹽（ + 3〇:tl);榖胺酸鹽 (+ 3.0士1);絲胺酸（ + 0·3);天冬胺醯胺（ + 〇·2);穀胺醯胺 ( + 〇·2);甘胺酸（〇);蘇胺酸（-〇·4);脯胺酸（_〇·5±1);丙胺酸（-0.5);組胺酸（-0.5);半胱胺酸（-1〇);甲硫胺酸 (·1 · 3 );纈胺酸（-1 · 5 );白胺酸（_ 1 · 8);異白胺酸卜j · 8 ); 酪胺酸（-2.3);苯丙胺酸（-2.5);及色胺酸（·3.4)。在基於相近親水性值進行改變時，親水性值在±2之間的胺基酸取代為較佳者，在±1之間為特別較佳者，而在±〇·5之間者為甚至更為較佳者。也可基於親水性而從原胺基酸序列中鑑別抗原決定部位。這些區也稱為"抗原決定部位核心區"。 32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

-n n I 1283683 A7 B7 五、發明說明（3G) 合意的胺基酸取代（無論保守型或非保守型）可由諳於此技者於需要彼等取代時予以決定。例如，胺基酸取代可用以鑑別IL-lra-R多肽的重要殘基，或用以增加或降低本文所述IL-lra-R多肽的親和性。表1中列出了胺基酸取代範例。

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製胺基酸取代原始殘基 | 取代範例較佳取代 Ala Val, Leu, He Val _ Arg Lys, Gin, Asn Lys Asn Gin Gin Asp Glu Glu Cys Ser，Ala Ser Gin Asn Asn Glu Asp Asp Gly Pro, Ala Ala His Asn, Gin, Lys, Arg Arg lie Leu, Val, Met, Ala, Phe, Norleucine Leu Leu Norleucine, lie, lie Val, Met, Ala, Phe Lys Arg, 1,4 Diamino-butyric Acid, Gin, Asn Arg Met Leu, Phe, lie Leu Phe Leu, Val, lie, Ala, Tyr Leu -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·- 1283683 A7 B7 五、發明說明（ 31

閱讀背之注諳於此技者可使用熟知技術來確定下面所列任一多肤的

變體：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、SEQ ID NO : 36。爲了鑑別分子内可發生變化而不會破壞生物活性的適當區域，諳於此技者可以針對活性不重要的區域作爲目標。例如，當已知有來自同種或異種具相似活性的相似多肽時’請於此技者可將IL -1 ra- R多肤的胺基酸序列及筆等相似多肽進行比較。在此種比較之下，可鏗別出該分子内在相似多肽中保守的殘基及部分。要了解者IL-lra-R 分子區域内相對於此類相似多肽爲非保守的變化，對IL_ Ira· R多肤的生物活性及/或結構較不可能有不利影響。諳於此技者也知道，即使在相對保守性區域内，也可用化學相似的胺基酸來取代自然存在的殘基，同時保持活性（保守型胺基酸殘基取代）。因此，即使對生物活性或結構十分重要的區域，也會發生保守型胺基酸取代，而不會破壞其生物活性或對多肽結構造成不利影響。 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱）項再填寫本頁經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（32) 此外，諳於此技者可重新審視在對活性或結構起重要作用的相似多肽中鐘別殘基的研究。基於此種比較，可預測在IL-lra-R多肽所含對應於相似多肽中對活性或結構具重要性的胺基酸殘基之胺基酸殘基的重要性。諳於此技者會爲IL- lra_R乡肽所含經該預測之重要胺基酸殘基選擇化學上相似的胺基酸取代。諳於此技者也可相對於相似多肽中的結構來分析三維結構及胺基酸序列。基於這類資訊，諳於此技者可針對其三維結構來預測IL-lra-R多肽所含胺基酸殘基的排列。諳於此技者可選擇不對預測在蛋白質表面的胺基酸殘基進行重大變化，因爲這些殘基可能參與和其他分子的重要交互作用。而且，諳於此技者可產生在每胺基酸殘基中有單個胺基酸取代的試驗變體。該等變體可經由使用諳於此技者所熟知的活性檢定來篩選。這些變體可用以收集與適當變體有關的資訊。例如，若發現一特定胺基酸殘基的變化會導致經破壞、不理想地降低或成爲不適當的活性，有此類變化的變體應避免使用。換句話説，基於此類常規實驗收集的資訊，諳於此技者可輕易地確定出在單獨或與其它突變配合時應避免進一步取代之胺基酸。許多科學出版物已致力於預測二級結構。參閱Moult， 1996, Curr. Opin· Biotechnol. 7:422-27; Chou et al·，1974, Biochemistry 13:222-45; Chou et al·，1974，Biochemistry 113:211-22; Chou et al., 1978, Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol· 47:45-48; Chou et al·，1978，Ann· Rev. Biochem· 47:251- -35- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 1283683 A7 B7 五、發明說明（33) 276; and Chou et al·，1979, Biophys· J. 26:367-84 〇此外，現在也有電腦程式可幫助預測二級結構。一預測二級結構的方法是基於同系成型（homology modeling)。例如，兩個具超過3 0 %序列同一率、或超過4 0 %相似率的多肽或蛋白質通常具有相似的結構拓樸學。最近，蛋白質結構資料庫 (PDB)的成長已增加了對二級結構的預測性，包括多肽或蛋白質結構内的可能摺疊數。參閱Holm et al·，1999, Nucleic Acids Res· 27:244-47。這表明在一所給多肽或蛋白質内具有限數目的摺疊，且一旦解決了關鍵數的結構，對結構預測的準確度將大幅增加（Brenner et al·，1997，Curr. Opin· Struct· Biol. 7:369-76卜預測二級結構的其他方法包括"線法"（threading) ”（Jones， 1997, Curr. Opin. Struct. Biol. 7:377-87; Sippl et al.5 1996, Structure 4:15-19)，·’ 圖像分析法"（profile analysis)(Bowie et al·，1991，Science，253:164-70; Gribskov et al·，1990，Methods Enzymol. 183:146-59; Gribskov et al., 1987, Proc. Nat. Acad. Sci· U.S·A· 84:4355_58)，及”進化聯繫法"（evolutionary linkage)(參閱 Holm et al·，Supra, and Brenner et al·，supra) 〇較佳的IL-lra-R多肽變體包括糖基化變體，其中與下面所列任一胺基酸序列相比：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4 、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，糖基化部位的數量及/ 或類型皆已變更。在一實施例中，IL-lra-R多肽變體包含比下面所列任一胺基酸序列：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36更多或更少的N-連接 -36 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂：峰經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 _ B7 五、發明說明（34) 糖基化部位。一N-連接糖基化部位的特徵在於下列序列： Asn-X-Ser或Asn-X-Thr，其中標爲X的胺基酸殘基可爲脯胺酸以外的任一胺基酸殘基。產生該序列的胺基酸殘基取代爲添加一 N _連接醣支鏈提出一新的可能部位。另外，消除該序列的取代將消除一已存在的N-連接醣支鏈。此外也提出一 N_連接醣鏈的重新排列，其中一或多個n-連接糖基化邵位（通常爲自然存在者）被消除，且產生了一或多個新的N-連接部位。其他較佳IL-lra_R變體包括半胱胺酸變體 ’其中與下面所列任一胺基酸序列比較：SEQ id NO : 2、 SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 3 6，一或多個半胱胺酸殘基被刪除或由另一胺基酸（如絲胺酸）取代。當IL-lra-R多肽需再摺疊爲生物活性構造時，如在不可溶包藏體的分離之後，半胱胺酸變體即十分有用。半胱胺酸變體一般具比自然蛋白質少的半胱胺酸殘基，且通常具偶數以使未配對的半胱胺酸所致反應變得最少。在另一實施例中，相關核酸分子包含或由編碼下面所列任一多肽的核甞酸序列所組成：SEQIDN〇:2、SEQidn〇丄4心(^奶：6、或卿10]^0:36，其具至少一胺基酸嵌入’且其中該多肽具下面所列任一多肽的活性：犯卩出 NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，或包含或由編碼下面所列任一多肽的核甞酸序列所組成：

SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEq ID NO : 36，其具至少一胺基酸刪除，且其中該多肽具下面所列任一多肽的活性：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEq -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑽x 297公髮;- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 0 · 4 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 發明說明（35) ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36。相關核酸分子也包含或由編碼下面所列任一多肽的核甞酸序列所組成：SEQ ID NO : 2 、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，其中該多肽具一羧基及/或胺基-端截端，且其中該多肽具下面所列任一多肽的活性：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36。相關核酸分子也包含或由編碼下面所列任一多肽的核苷酸序列所組成：SEQ ID NO : 2 、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 3 6，具至少一選自包括下列的組合中之改變：胺基酸取代、胺基酸嵌入、胺基酸刪除、羧端截端及胺基端截端，且其中該多肽具下面所列任一多肽的活性：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36。

此外，包含下面所列任一胺基酸序列的多肽：SEQ ID NO :2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，或其他IL-lra-R多肽，可融合到一同源多肽以產生同二聚體 (homodimer)，或融合入異源多肽以產生異二聚體 (heterodimer)。異源肽及多肽包括，但不限於：可偵檢及/ 或分離IL - Ira- R融合多肽的抗原決定部位；透膜受體蛋白質或其部分，如細胞外功能部位或透膜及細胞内功能部位 ;配位元體或其部分，其可結合到透膜受體蛋白質；酵素或其部分，其具催化活性；一多肽或肽，其可促進低聚反應，如白胺酸拉鏈功能部位；一多肽或肽，其可增加穩定性，如免疫球蛋白恒定區；及一多肽，其具有與包含下面所列任一胺基酸序列不同的治療活性：SEQ ID NO : 2、SEQ -38 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂·· 1283683 A7 B7 五、發明說明（36) ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36，或其他IL-lra_ R多肤。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 融合可在包含下面所列任一胺基酸序列：SEQ ID NO : 2 、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 3 6 的多肽，或其他IL-lira-R多肽之胺基端或羧基端上發生。融合可在無連結質分子或應接質分子下直接發生，或可經由連結質分子或應接質分子發生。連結質分子或應接質分子可爲一或多個胺基酸殘基，典型地爲20個左右至50個左右的胺基酸殘基。一連結質分子或應接質分子也可設計成有一 DNA限制核酸内切酶或蛋白酶切斷部位，使得融合部分可以分離出。要了解者一旦構成後，可根據本文所述方法衍生得融合多肽。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在本發明另一實施例中，係將包含下面所列任一胺基酸序列：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或 SEQ ID NO : 36的多肽，或其他IL-lra_R多肽與人類IgG的 F c區内一或多個功能部位融合。包含兩個功能上獨立的部分，一可結合抗原的已知爲"Fab”的可變功能部位，及一已知爲"Fc"的恒定區，之抗體涉及諸如補體活化及噬菌細胞侵襲的效應子功能。F c具一長血清半生期，而Fab具短半生期。Capon et al·，1989，Nature 337 : 525-31。當與一治療性蛋白質一起構成時，Fc功能部位可提供較長的半生期，或摻入諸如Fc受體結合、蛋白質A結合、補體固定及甚至胎盤轉移等功能。Id.表II總結技藝中已知的某些Fc融合之用途。 -39 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經濟部智慧財產局員工消 f 合作社印製 A7 B7 五、發明說明（37) 表IL F c與治療性蛋白質的融合 Fc形式融合夥伴治療應用參考資料 IgGl CD30-L 的 N-端淋巴肉牙腫病；淋巴瘤整形術；T細胞白血病美國專利第5,480,981號鼠Fc r 2a IL-10 抗炎藥；移植注射 Zheng et al.，1995, J. Immunol 154:5590-600 IgGl TNF受體膿毒性休克 Fisher et al.，1996, N. Engl. J. Med 334:1697-1702; Van Zee et al.，1996， J. Immunol. 156: 2221-30 IgG， IgA， IgM，或 IgE( 不包括第一功能部位） TNF受體炎症、自體免疫失調美國專利第5,808,029號 IgGl CD4受體愛滋病 Capon et al.，1989， Nature 337:525-31 IgGl, IgG3 IL_2之N-端抗癌、抗病毒 Harvill et al·，1995， Inununotech. 1:95-105 IgGl OPG之C-端度 W097/23614 IgGl leptin 之N-端減肥藥 PCT/US 97/23183,filed December 11, 1997 人類Ig C厂1 CTLA-4 自體免疫失調 -40- Linsley, 1991, J. Exp. Med” 174:561-69 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) 請先閱讀背之注意事項再填寫本頁經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 ___B7____ 五、發明說明（38 ) 在一實施例中，人類IgG鉸鏈、CH2及CH3區可使用諳於此技者所知方法融合到IL - Ira- R多肽之胺基端或羧基端。在另一實施例中，人類IgG鉸鏈、CH2及CH3區可融合于IL-lra-R多肽片段之胺基端或羧基端（如IL - lra-R多肽之預測細胞外部分）。所得IL_lra-R融合多肽可經由使用蛋白質A親和管柱來純化。經發現融合入F c區的肽及蛋白質在活體内展現比非融合的參照物長得多的半生期。同時，在F c區的融合使得融合多肽的二聚作用/多聚作用得以發生。F c區可為自然存在的Fc區，或經過改變以提升特定品質，如治療品質、循環時間、或降低的凝集。相關核酸分子及多肽的同一性及相似性可經由已知方法輕易地算出。這些方法包括，但不限於在Computational Molecular Biology (A.M. Lesk, ed., Oxford University Press 1988) ； Biocomputing: Informatics and Genome Projects (D. W. Smith, ed., Academic Press 1993); Computer Analysis of Sequence Data (Part 15 A. M. Griffin and H. G. Griffin, eds.5 Humana Press 1994); G. von Heinle, Sequence Analysis in Molecular Biology (Academic Press 1987); Sequence Analysis Primer (M. Gribskov and J. Devereux, eds., M. Stockton Press 1991); and Carillo et al·，1988，SIAM J· Applied Math·， 48:1073中所述者。測定同一率及/或相似率的較佳方法係經設計成賦予受測序列之間最大的配對。測定同一率及相似率的方法皆為如 41 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 __B7_ 五、發明說明（39 ) 公開之電腦程式所述者。測定兩序列之間的同一率及相似率較佳的電腦程式方法包括，但不限於，GCG套裝程式，其中包括 GAP(Devereux et al·，1984，Nucleic Acids Res· 12:387; Genetics Computer Group，University of Wisconsin, Madison，WI)，BLASTP、BLASTN及FASTA(Altschul et al·， 1990, J· Mol. Biol· 215:403-10)。BLASTX 程式可公開地由國家生物技術資訊中心處（NCBI)及其它渠道得到（Altschul et al., BLAST Manual ( NCB NLM NIH 5 Bethesda, MD ); Altschul et al·，1990，supra )。熟知的 Smith Waterman運算法則也可用以測定同一性。排列兩胺基酸序列所用的某些排列程序可導致兩個序列只有一小部分區域的配對，該小排列區可具非常高的同一率，雖則兩個全長序列沒有明顯關係。相應地，在一較佳實例中，所選之排列方法（GAP程式）將導致一跨越至少5 0 個所聲明多肽所含相接胺基酸的排列。例如，使用電腦運算法則GAP(Genetics Computer Group， University of Wisconsin，Madison，WI)，兩個要測定百分序列同一率的多肽係經排列以達到其各自胺基酸之最佳配對（π 配對跨幅n (matched span)，如運算法則所定者）。間隙開口誤差（其係經計算為3 X平均對角線值；”平均對角線值"為所用比較矩陣之對角線值的平均值；”對角線值•’為對經特定比較矩陣所得每一完美胺基酸配對所指定的值或數）及間隙延伸誤差（通常為0.1X間隙開口誤差），以及諸如PAM 250或BLOSUM 62的比較矩陣，均與運算法則配合使用。運 42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（40) 算法則也使用到一標準比較矩陣（參閲Dayhoff et al·，5 Atlas of Protein Sequence and Structure (Supp. 3 1978)(PAM 250 comparison matrix); Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci USA 89:10915_19 (BLOSUM 62 comparison matrix)) 0 多肽序列比較的較佳參數包括下列：運算法貝1J : Needleman and Wunsch，1970，J· Mol. Biol， 48:443-53; 比較矩陣·· BLOSUM 62( Henikoff et al·，supra); 間隙誤差：12 間隙長度誤差：4 相似性低限値：0 GAP程式可與上述參數一起使用。使用GAP運算法則時，前述參數爲多肽比較的缺省參數（以及沒有端間隙的誤差）。核酸分子序列比較的較佳參數包括以下：運算法則：Needleman and Wunsch，supra ; 比較矩陣：配對=+ 1 0，誤配=0 間隙誤差：5 0 · 間隙長度誤差：3 GAP程式可與上述參數一起使用。前述參數爲核酸分子比較時的缺省參數。其他範例運算法則中，也使用間隙開口誤差、間隙延伸誤差、比較矩陣及相似率低限値，包括在Program Manual， Wisconsin Package，Version 9，September，1997 中所列者。對諳於此技者來説，對特定選項的選擇是顯然的，且取決於 -43- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（41) 所做的特定比較，如01<[八對DNA、蛋白質對蛋白質、蛋白質對DNA ;此外，無論該比較是介於所給序列對中（於此例中GAP或BestFit—般爲較佳者）或是介於一序列與一大的序列資料庫之間（於此例中FASTA或BLASTA爲較佳）。核酸分子編碼包含IL Ira- R多肽所具胺基酸序列的多肽之核酸分子可經由多種方法輕易地獲得，其包括但不限於，化學合成、cDNA或基因組庫篩選、表現庫篩選、及/或cDNA的 PCR擴增作用。本文所用重組DNA方法一般爲下面所列者：Sambrook e t al·，Molecular Cloning: A Laboratory Manual ( Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989 )及 / 或 Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds., Green Publishers Inc. and Wiley and Sons 1994)。本發明提出如本文所述核酸分子及獲得此類分子所用方法。當編碼IL_lra-R多肽所具胺基酸序列之基因由一物種中鑑別出來時，該基因的全部或部分可用作探針以從同種中鑑別直系物或相關基因。探針或引子（primer)可用以從各種據信會表現IL-lra-R多肽的組織源中篩選cDNA庫。此外，具下面所列任一序列：SEQ ID NO : 1、SEQ ID NO : 3、SEQ ID NO : 5、或SEQ ID NO : 35，的核酸分子的部分或全部可用以篩選基因組庫以鑑別及分離編碼IL_ lra-R多肽所具胺基酸序列的基因。通常，使用中等或高度嚴緊的條件來篩選，以使篩選所得假陽性物的數目降爲最小。 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（42) 編碼IL - Ira- R多肽所具胺基酸序列的核酸分子也可經由表現選殖來鐘別，其中係使用基於被表現蛋白質所具屬性之陽性殖株之偵檢。典型地，核酸庫是經由將抗體或其他結合夥伴（如受體或配位體）結合至表現出且展示於宿主細胞表面上的選殖蛋白質來篩選的。抗體或連接夥伴係經用一可檢測標記改質以鑑別可表現所需選殖物之細胞。可採用根據下列描述所進行的重組體表現技術以產生彼等聚核嘗酸及表現所編碼的多肽。例如，經由嵌入編碼IL _ lra-R多肽所具胺基酸序列的核酸序列於一適當載體上，諳於此技者可輕易地產生大量所需的核苷酸序列。然後可用該序列產生檢測探針或擴增引子。替代地，可將編碼iL-lra-R多肽所具胺基酸序列的聚核甞酸插置於一表現載體内。經由將該表現載體導至適當的宿主内，即可大量產生所編碼的IL - lra-R多肤。獲得適當核酸序列的另一方法爲聚合酶鏈反應（PCR)。在這種方法中，cDNA是經由使用酵素逆轉錄酶由聚（a) + rna 或全RNA來製備。然後將兩引子，典型者爲對編碼IL_ lra_ R多肽所具胺基酸序列的DNA所含兩個分離區呈互補者，和聚合酶如Taq聚合酶一起加到cDna中，且該聚合酶及擴增在兩個引子間的cDNA區。製備編碼IL - Ira· R多肽所具胺基酸序列的核酸分子之另一種方法爲化學合成，其係使用諳於此技者所熟知的方法，如下所述者 Engels et al·，1989, Angew. Chem· Inti· Ed. 28:716-34。彼等方法包括特別是，用於核酸合成之磷酸三 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ••裝：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -45·

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（43) 酯法，磷醯胺酸酯法及H-膦酸酯法。此類化學合成之較佳方法爲使用標準磷醯胺酸酯化學的聚合物支撑合成。通常编碼IL-lra-R多肽所具胺基酸序列的DNA在長度上爲幾百個核苷酸。大於約100個核苷酸的核酸可使用彼等方法合成爲數個片段。然後可將該等片段連接在一起以產生完全長度的IL-lra-R基因核苷酸序列。編碼多肽胺基端的DNA片段一般具一 ATG，其係編碼甲硫胺酸殘基。該甲硫胺酸可能存在或不存在於成熟形式的IL-lra-R多肽中，取決於產生於宿主細胞内之該多肽是否經設計爲從細胞中分泌出來。也可使用諳於此技者所知其他方法。在某些應用中，核酸變體包含經變更以在一給定的宿主細胞内獲得IL-lra-R多肽之最佳表現之密碼子。特定的密碼子變更將取決於爲表現所選之IL-lra-R多肽及宿主細胞。此類”密碼子最佳化"可經由許多方法來實現，如，經由選擇出可較佳地使用在給定宿主細胞内高度表現基因的密碼子之方法。可以使用且由University of Wisconsin Package Version 9.0(Genetics Computer Group，Madison，WI)所提供經加入密碼子頻率表如用於經高度表現細菌基因的密碼子偏好性的” Eco_high· Cod"之電腦運算法則。其他有用之密碼子頻率表包括"Celegans_high.cod，" "Celegans_low.cod，丨· "Drosophila一high.cod，" ” Human_high.cod，n "Maize一high.cod，’’ 及"Yeast_high.codM 0 在某些例子中，可能需要製備編碼IL-lra-R多肽變體之核酸分子。編碼變體之核酸分子可使用部位指向突變、 -46· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（44 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) PCR擴增或其他適當方法來產生，其中引子具所需點突變（參閲 Sambrook et al·，supra，and Ausubel et al·，supra，有關突變發生技術的描述）。使用如Engels et al·，supra所述方法的化學合成也可用於製備此類變體。諳於此技者所知的其他方法也可使用。載體及宿主細胞編碼IL_lra-R多肽所具胺基酸序列的核酸分子可經使用標準連接技術而嵌入至一適當的表現載體中。該載體典型地係經選擇在所用特定宿主細胞内發揮功能者（即該載體能與宿主細胞機制相容使得基因的擴增及/或基因表現得以發生）。一編碼IL-lra-R多肽所具胺基酸序列的核酸分子可在原核生物、酵母、昆蟲（桿狀病毒（baculovirus)系統）及/或眞核生物宿主細胞内擴增/表現。宿主細胞的選擇部分取決於IL-lra-R多肽是否要經後-轉譯改質（如，糖基化及/或磷酸化）。若是這樣的話，酵母、昆蟲或哺乳動物宿主細胞皆爲較佳的。表現載體的評述可參閲Meth. Enz. vol. 185(D. V. Goeddel, ed., Academic Press 1990) 〇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製典型地，在任何宿主細胞内所用表現載體要包含質體維護及外源核甞酸序列選殖及表現所用的序列。此類序列在特定實施例中統稱爲”側接序列"，且通常包括一或多個的下列核替酸序列：啓動子、一或多個增強子序列、一複製源、一轉錄終止序列、一含供體和受體接合部位的完全介入子序列、編碼多肽分泌所用領導序列的序列、核糖體結合邵位、多腺芬化序列、嵌入編碼要表現多肤的核酸所用 • 47- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（45 的^連接子區，及可選擇之標誌成分。下面將討論每一這類序列。、視需要地，載體可含有一"標記"（tag卜編碼序列，即一位於IL-lra-R多肽密碼序列的5,或3,端的低聚核苷酸分子 :該低據核苷酸序列編碼聚組胺酸（如六聚組胺酸），或另一 •’標記”如FLAG，HA(血細胞凝集素流感病毒）、或瓜八，其抗體可在商業上購得。這一標記通常在多肽表現中融合到多肽，且可作爲由宿主細胞中親和性純化出IL_ira_R多肽的工具。親和性純化的完成可用，如，針對標記的抗體作爲親和性基質的管柱層析法。视需要地，標記可於隨後由純化過的IL _ 1 r a - R多肽中使用多種手段例如某些用於斷裂的肽酶予以去除。側接序列可爲同源（即來自與宿主細胞相同的種及/或系）、異源（即來自與宿主細胞的種或系不同的種）、雜交（即來自一種以上的來源之側接序列組合）、或合成物，或該侧接序列可爲自然序列，其通常係用來調節IL-lra_R多肽表現。如此，侧接序列源可爲任一原核或眞核生物、任一脊椎或非脊椎生物、或任一植物，只要該側接序列能在宿主細胞機制内發揮功能並可被啓動即可。在本發明載體内有用的側接序列可經由技藝中熟知的多種方法之任一者來得到。通常，可用於本發明側接序列（除 IL- Ira-R基因侧接序列外）均先經用基因定圖位（㈤叩扣叫）及/或限制核酸内切酶消化予以鑑別，且因此可使用適當的限制核酸内切酶從合適的組織源中分離出。在某些例子中 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) --------訂----- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -48- 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ___B7____ 五、發明說明（46 ) ，側接序列的完全核甞酸序列係已知者。此時，侧接序列可使用本文所述核酸合成法或選痕法來合成。當側接序列的全部或只有部分爲已知時，其獲得方法可爲使用PCR及/或經由使用適當的低聚核替酸及/或來自同一或其他物種的側接序列片段來篩選基因組庫。當側接序列爲未知時，可從含有，如，密碼序列或甚至是另一基因或基因群的一較大DNA片段中分離出含側接序列的DNA片段。分離的實現可先經由限制核酸内切酶消化，以產生合適的DNA片段，然後使用瓊脂糖凝膠純化、Qiageil®管柱層析法（Chatsworth，CA)或其他諳於此技者所知的方法來分離。實現這一目地所用適當酶的選擇對通曉本技藝者係顯然可知者。一複製源通常爲可購得之原核生物表現載體的部分，及該來源有助於在宿主細胞内的載體擴增。載體擴增到某一複本數在某些例子中，對IL-lra-R多肽的最佳表現可能具有重要性。若所選載體不含複製部位的源，可基於已知序列予以化學合成後連接到載體内。例如，質體pBR322(New England Biolabs，Bevedy，ΜΑ)的複製源即適用於大多數的革蘭氏陰性細菌，且有多種源（如SV40，多瘤病毒、腺病毒、口腔泡病毒（VS V)或乳頭’狀瘤病毒如HP V或BP V)對在哺乳動物細胞内選殖載體來説很有用。通常，複製成分的來源對哺乳動物表現載體來説是不必要的（如，SV4〇源經常被使用，只是因爲其含有早期啓動子）。本紙張尺度適用中關家標準（CNS)A4規格⑵G χ 297公爱 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂---------AWI -49- 1283683 A7 -----—— 五、發明說明（47 ) -- 轉錄終止序列通常位於多肽密碼區的3,端且用於終止轉錄。-般説m細胞的轉錄終止序列爲富含g_c的片段，後接著聚τ序列。雖然該序列可輕易地從庫中選殖或甚至於從甲面上講得以作爲載體的部分，其也可使用如本文所述核酸合成法輕易地合成。一可選標誌基因元素係編碼對在選擇性培養基中生長的宿主細胞的存活及生長所必需的蛋白質。通常選擇標妹基因所編碼的蛋白質爲（a)使原核宿主細胞對於抗生素或其他毒素，如氨比西林、四環素或卡那徽素產生抵抗性；（…補充細胞的營養缺陷；或（c)提供複合培養基中無法得到的關鍵營養。較佳的可選標誌爲卡那徽素抵抗基因、氨比西林抵抗基因及四環素抵抗基因。新黴素抵抗基因也可用於原核及眞核宿主細胞中的選擇。其他選擇基因也可經使用來擴增需表現的基因。擴增作用是一種方法，其中對生長具關鍵性的蛋白質之產生有較大需求性的基因係在連續幾代的重組體細胞的染色體中級聯地復製。哺乳動物細胞的適當可選標誌之例子包括二氫葉酸還原酶（DHFR)及胸甞激酶。可將哺乳動物細胞轉形株置於選擇壓力下，其中唯有轉形株可藉由載體中所含選擇基因獨特地適應存活。選擇壓力是經由在培養基中的選擇劑濃度依序改變的條件下培養轉形細胞而施加的，因此導致選擇基因及編碼IL-lra-R多肽的DNA兩者之擴增。結果，經由擴增後的DNA合成增加量的IL-lra-R多肽。 -50- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五經濟部智慧財產局員工消費合作社印製發明說明（48) (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 核糖體結合部位通常對mRNA的轉譯起始是必需的，且其特性是由Shine-Dalgarno序列（原核生物）或Kozak序列（眞核生物）來確定的。該元素典型地是位於啓動子的31部位及需表現之IL-lra_R多肽的密碼序列之5'部位。Shine_Dalgarno 序列會改變，但通常爲聚嗓呤（即含大量的A-G)。許多 Shine- Dalgarno序列已被饈定出，彼等每一者都可用本文所述方法予以合成並用於原核生物載體中。一領導序列或信號序列可用以將IL_lra-R多肽導引出宿主細胞。通常編碼信號序列之核苷酸序列是位於IL- Ira·R 核酸分子的密碼區内，或直接位於IL - Ira-R多肽密碼區的 5 ·端。許多信號序列已被鑑定出，且在所選宿主細胞内發揮功能的彼等之任何一者都可搭配IL- lra-R核酸分子使用。因此，一信號序列可爲IL - Ira- R核酸分子的同源（自然存在）或異源者。此外，信號序列可使用本文所述方法予以化學合成。在大多數的例子中，經由信號肽的存在從宿主細胞中分泌IL - lra-R多肽將導致信號肽從所分泌的il- lra-R 多肽中去除。信號序列可爲載體的一成分，或其可爲嵌入載體内的IL-Ira-R核酸分子的一部分。本發明適用之範圍包括使用編碼連接到IL -1 ra- R多肽密碼區的自然IL -1 ra- R多肽信號序列之核:y：酸序列，或使用編碼連接到IL _ 1 ra- R多肽密碼區的異源I l -1 ra_ r多肽信號序列之核苷酸序列。選定之異源信號序列需能被宿主細胞所辨識並加工，即被信號肽酶所斷裂。對不能辨識並處理自然IL -1 ra- R多肽信號序列的原核宿主細胞來説，該信號 -51 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（49 ) 序列需被選定之原核信號序列取代，如由以下選出者：鹼性磷故g旨酶、青黴素酶或熱穩定性腸毒素Η前導體。對酵母的分泌來説，自然IL_ Ira·R多肽信號序列可爲酵母轉化酶、α因子或酸性磷酸酶諸前導體所取代。在哺乳類動物細胞表現上，自然信號序列即可合乎所用，雖則其他哺乳類動物信號序列也可適用。在某些例子中，如在眞核宿主細胞表現系統中需進行糖基化作用時，可控制各種前體序列（presequences)以増加糖基化或產量。例如，可改變一特定信號肽的肽酶斷裂部位，或添加前體序列，其也可影響糖基化。最終蛋白質產物在邵位1處（相應於成熟蛋白質的第一胺基酸）可具一或多個額外的表現出之胺基酸，其可能沒被完全去除。例如，最終蛋白質產物可具一或兩個在肽酶斷裂部位處的胺基酸殘基’連接於胺基端。另外，若酵素切於成熟多肽内此類酵素斷裂部位時，使用某些此類部位的使用可能導致所需iL-lra-R多肽的輕微截端形式。在許多例子中，核酸分子的轉錄隨著載體内一或多個介入子的存在而增加；當多肽產生於眞核宿主細胞，特別是哺乳動物宿主細胞内時更是如此。所用介入子可自然存在於IL-lra-R基因，特別是當所用基因係全長基因組序列或其片段時。當介入子不是自然存在於基因内時（如大多數的 cDNA)，介入子可得自其他來源。介入子相對於側接序列及IL -1 ra- R基因的位置一般係重要者，因爲介入子需轉錄成爲有效者之故。因此，當IL- lra-R cDNA分子經轉綠時 -52 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 -----——_ B7___ 五、發明說明（5〇 ) 一" — ，介入子的較佳位置爲轉錄起始部位的3,，和聚A轉錄終結序列的5’。較佳者，介入子或介入子組係定位於的一邊或另一邊（即5’或3，），這樣它不會打斷密碼序列。來自任-來源的任-介入子可，包括病毒、原核及眞核(植物或動物）生物，都可用以實施本發明，只要其與其將嵌入之宿主細胞相容即可。本發明也包括合成型介入子。視情況地，可於載體内使用一種以上的介入子。本發明表現及選殖載體通常包含一啓動子，該啓動子可爲宿主有機體所辨識，可操作地聯結於編碼iL - lra_ R多肽的分子上。啓動子爲非轉錄序列，位於結構基因之起始密碼子的上游（即5’）（一般在約1〇〇至10001){)之内），該起始密碼子控制該結構基因的轉錄。啓動子按傳統分爲兩類：謗導型啓動子及組成型啓動子。謗導型啓動子相應於培養環境的某種變化，如一營養物的存在與否，或溫度的變化，而起始其控制下的自DNA之更高轉錄水平。另一方面，組成型啓動子引發持續的基因產物的產生；即對基因的表現具很小或沒有控制。能爲多種潛在宿主細胞所辨識的大多數啓動子已爲人所熟知。經由限制酶消化從來源DNA上去除啓動子及所需啓動子序列嵌入載體中即可將一適當的啓動子可操作地聯結於編碼IL-lra-R多肽的DNA上。自然IL-lra-R啓動子序列可用以導引IL-lra-R核酸分子的擴增及/ 或表現。不過，較佳的爲一異源啓動子，只要其與自然啓動子相比，可促成需表現之蛋白質更多的轉錄及更高的產量，且只要其與選用的宿主細胞系統相容即可。 -53- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） -n I 1 ·1^· ϋ ϋ ϋ ϋ n I I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·裝 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（51) 適用於原核宿主的啓動子包括内醯胺酶及乳糖的？僞囵t統；鹼性磷酸酯；色胺酸（trp)啓動子系統；及雜交啓動子如tac啓動子。其他已知的細菌啓動子也適用。彼等的序列都已公開發表，因此，使諳於此技者可經由使用聯結質或應接質來使彼等連接於所需DNA序列上，以使需要提供任核有用的限制部位。適於和酵母宿主一起使用的啓動子也爲技藝中熟知者。酵母增強子與酵母啓動子一起使用是有利的。適於和哺乳動物宿主細胞一起使用的啓動子也熟知，包括但不限於，由下列病毒基因組所得宿主：如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒（如腺病毒2 )、牛乳頭狀瘤毒、鳥肉瘤病毒、巨細胞病毒、反轉錄病毒、乙型肝炎病毒及最佳者猿病毒40(SV40) 。其他適用的哺乳動物啓動子包括異源哺乳動物啓動子如熱休克（heat- shock)啓動子及肌動蛋白啓動子。有利於控制IL-lra-R基因表現的額外啓動子包括，但不限於：猿病毒40早期啓動子區（Bernoist and Chambon，1981， Nature 290:304-10) ; CMV啓動子；包含於魯斯氏肉瘤病毒的3·長端重複體中的啓動子（Yamamoto，et al.，1980，Cell 22:787-97);皰疹胸苷激酶啓動子（Wagner etal·，1981，Proc· Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78:1444-45);金屬硫因 (metallothionine)基因調節序列（Brinster et al·，1982，Nature 296:39-42);原核生物表現載體如0 _内醯胺酶啓動子 (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 75:3727_31);或 tac啓動子（DeBoer et al ·，1983，Proc. Natl· -54- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 訂---- % 1283683 A7

五、發明說明（52 )

Acad. Sci. U.S.A·，80:21-25)。下列動物轉錄控制區也有用，該區展示出組織特異性，且已用於轉殖基因型動物：彈性蛋白酶I基因控制區，其在膦腺泡細胞中具活性（Swift et al.， 1984，Cell 38:639-46; Ornitz et al·，1986，Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409(1986); MacDonald，1987, Hepatology 7:425-515);胰島基因控制區，其在胰細胞中具活性（Hanahan，1985, Nature 315:115-22);免疫球蛋白基因控制區，其在淋巴細胞内具活性（Grosschedl et al·，1984, Cell 38:647-58; Adames et al., 1985, Nature 318:533-38; Alexander et al·，1987, Mol. Cell· Biol·，7:1436-44);鼠乳房瘤病毒控制區，其在睾丸、乳房、淋巴及肥大細胞中具活性（Leder et al·，1986, Cell 45:485-95);白蛋白基因控制區，其在肝臟中具活性（Pinkert et al·，1987，Genes and Devel. 1:268-76);沈胎-蛋白質基因控制區，其在肝臟内具活性 (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol., 5:1639-48; Hammer et al·，1987，Science 235:53-58);江1-抗胰蛋白酶基因控制區，其在肝臟中具活性（1^180丫61&1.，1987，〇01^8&11(1〇6¥61· 1:161-71) ; yS -球蛋白基因控制區，其在骨髓細胞中具活性 (Mogram et al., 1985, Nature 315:338-40; Kollias et al., 1986, Cell 46:89-94);髓磷酯鹼性蛋白質基因控制區，其在腦部少樹突細胞中具活性（Readhead et al·，1987，Cell 48:703 - 1 2) ;肌凝蛋白輕鏈-2基因控制區，其在骨骼肌肉中具活性 (Sani，1985, Nature 314:283-8 6);及促性腺釋放激素基因控 -55- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ••裝 % 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（53) 制區，其在視丘下部具活性（Mason et al·，1986，Science 234:1372-78)。 (請先閱讀背面之注音3事項再填寫本頁) 一增強子序列可嵌入至載體中而經由更高級眞核細胞來增加本發明編碼IL-lra-R多肽的DNA之轉錄。增強子爲 DNA的順式作用元素，長度通常爲約l〇-300bp，其作用於啓動子上以增加轉錄。增強子於定向及定位上相對地獨立。彼等係位於轉錄單元的5’及3·。由哺乳動物基因處可得到的數種增強子序列已爲人所知（如球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α -胎-蛋白質及胰島素）。但通常使用由病毒所得增強子。猿病毒40增強子、巨細胞病毒早期啓動子增強子、多瘤病毒增強子及腺病毒增強子爲啓動眞核啓動子的增強性元素範例。雖然增強子可接合於載體中的5 ·或y部位中至IL-lra-R核酸分子上，其通常位於啓動子的51部位。本發明表現載體可由起始載體如可購得之載體來構成。此類載體可或可能不包含所有的所需側接序列。當本文所述一或多個側接序列不存在於該載體中時，彼等可分別獲得並連接於載體上。獲得每個側接序列的方法對諳於此技者來説是十分熟悉的。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製用於實施本發明較佳載體爲可細菌、昆蟲及哺乳動物宿主細胞相容的載體。此類載體包括，特別是，pCRII，pCR3, 及pcDNA3.1(Invitrogen，San Diego，CA)，pBSII (Stratagene，La Jolla，CA)，pETl5 (Novagen，Madison，WI)，pGEX(Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)，pEGFP_N2(Clontech，Palo Alto, CA) -56 · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（54) > pETL (BlueBacII, Invitrogen) > pDSR-alpha (PCT Pub. No. WO 90/14363)及pFastBacDual (Gibco-BRL，Grand Island，NY) 0 此外，適當的載體包括，但不限於，粘接質體（cosmids) ，質體、或經改質病毒，但要了解者載體系統必須與選定之宿主細胞相容。此類載體包括，但不限於質體如 Bluescript®質體衍生物（高複本數以ColEl·爲基的噬菌質體 (phagemid)，Stratagene選殖系統，La Jolla CA)、爲選殖Taq 擴增PCR產物的PCR選殖質體（如TOPOTM ΤΑ Cloning® Kit ，PCR2.1® 質體衍生物，Invitrogen，Carlsbad，CA)，及哺乳動物、酵母或病毒載體如桿狀病毒（baculovirus)表現系統 (pBacPAK質體衍生物，Clontech，Palo Alto, CA)。構成載體’且將編碼IL -1 ra_ R多肤的核酸分子嵌入至載體的適當部位後，可將完成的載體嵌入至一適當的宿主細胞中，以進行擴增及多肽表現。IL-lra-R多肽表現載體轉形到所選宿主細胞内的過程可經由熟知方法來完成，包括轉染、感染、氯化鈣、電穿孔、微注射、脂染、' DEAE-葡聚糖方法或其他已知技術。所選方法部分與所用的宿主細胞類別相關。彼等方法及其它適當方法皆爲諳於此技者所熟知，如 Sambrook et al·，supra所列者。宿主細胞可爲原核生物宿主細胞（如大腸桿菌）或眞核生物宿主細胞（如酵母、昆蟲或脊椎動物細胞）。宿主細胞當在適當環境中培養時，可合成IL_lra-R多肽，該多肽隨後可從培養基中收集（若宿主細胞分泌其到培養基内的話）或直接由產生其的宿主細胞獲得（若沒有分泌的話）。對適當 -57- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 1283683 A7 B7 五、發明說明（55) (請先閱讀背面之注音2事項再填寫本頁) 宿主細胞的選擇取決於各種因素，如所需的表現水平，對活性（如糖基化或磷酸化）合宜或必需的多肽改質，以及摺疊成生物活性分子的容易性。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製有許多適當的宿主細胞係技藝所知者，且許多可由 American Type Culture Collection(ATCC)，Manassas，VA處獲得。例子包括，但不限於哺乳動物細胞，如中國大頻鼠卵巢細胞（CHO)，CHO DHFR(-)細胞（111^1^6(&1.，1980，？1*〇(：· Natl· Acad· Sci. U.S.A. 97:4216-20)，人類胚胎腎（HEK) 293 或293T細胞，或3T3細胞。對適當哺乳動物宿主細胞及轉形方法、培養、擴增、篩選、產物的產生及純化等的選擇技藝所知者。其他適當的哺乳動物細胞系爲猴COS- 1及COS-7細胞系，及CV- 1細胞系。更多的哺乳動物宿主細胞的範例包括靈長類動物細胞系及齧齒動物細胞系，包括經轉形細胞系。正常的雙倍染色體細胞、由原組織、原移植體試管中培養物所得細胞系也是適當的。候選細胞在選擇基因中可能爲基因型缺陷者，或可包含一顯性作用選擇基因。其他適當的哺乳動物細胞系包括但不限於，小鼠成神經細胞瘤N2A細胞，HeLa，小鼠L 929細胞、由Swiss，Balb-c或 NIH小鼠、BHK或HaK大頰鼠細胞系所得3T3系。每個此類細胞系都爲熟悉蛋白質表現技藝的人士所知，並可得到者。同樣可適用爲本發明宿主細胞的有細菌細胞。例如，大腸样菌的各種株系（如HB101、DH5a、DH10及MC1061)在生物技術領域是熟知的宿主細胞。枯草芽胞样菌（B · subtilis) ，假單胞菌屬（Pseudomonas spp.)，其他桿菌屬（Bacillus -58- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（56) spp.)，鏈黴菌屬（Streptomyces spp·)等的各種株系也可使用於此方法中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 諳於此技者所知的許多酵母細胞株系也可用作本發明多肽表現的宿主細胞。較佳的酵母包括如釀酒酵母 (Saccharomyces cerivisae)及巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris) 〇此外，需要時，昆蟲細胞系統也可用於本發明方法中。此類系統如下列中所述者··如Kitts et al.，1993， Biotechniques, 14:810-17; Lucklow, 1993， Curr. Opin. Biotechnol. 4:564-72; and Lucklow et al., 1993，J· Virol·， 67:4566-79。較佳的昆蟲細胞爲 Sf-9 及 Hi5(Invitrogen)。可能也會使用轉殖基因型動物來表現糖基化的IL- lra-R . 多肽。例如，可使用轉殖基因型產奶動物（如母牛或山羊），且在動物奶中得到本發明糖基化多肽。也可使用植物來產生IL_lra-R多肽，但一般説來，發生於植物體内的糖基化與在哺乳動物細胞内產生的不相同，且可能導致不適於人類治療用途的糖基化產物。多肽的產生經濟部智慧財產局員工消費合作社印製包含IL-lra-R多肽表現載體的宿主細胞可用技藝中熟知的標準培養基來培養。該等培養基通常包含細胞生長及存活所必需的所有營養物。適於培養大腸桿菌細胞的培養基包括如 Luria Broth (LB)及/或Terrific Broth (TB)。適於培養眞核生物細胞的培養基包括Roswell Park Memorial Institute培養基 1640 (RPMI 1640)，Minimal Essential Medium (MEM)及/ 或Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM)，彼等均可用 •59- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 !283683

，養特定細胞系所必需的血清及/或生長因子來補充。適於比蟲培養的培養基爲（Jrace’s培養基，必要的話可補充酵母酯（yeast〇late)、乳白蛋白水解產物及/或胎牛血清。通常，將有利於經轉染或轉形細胞的選擇性成長的抗生素或其他化合物作爲補體加至培養基中。所用化合物係決疋於存在於將宿主細胞轉形的質體中所含可選擇標誌元素例如，‘可選擇標諸元素爲那徽素藥抗性時，加入培養基的化合物即爲那徽素。其他用於選擇性成長的化合物包括氨比西林、四環素及新黴素。宿主細胞所產生的IL-Ira-R多肽的量可使用本技藝中已知標準方法來測量。此類方法包括，但不限於，Western點 >貝分析法、SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法、非變性凝膠電泳、高性能液相層析法（HPLC)分離、免疫沈澱、及/或活性檢定，如DNA結合凝膠轉移檢定。若IL - Ira- R多肽是設計以由宿主細胞分泌，則大部分多肽的可在宿主培養基内找到。但若IL-ira-R多肽不會由宿主細胞分泌，其將存在於細胞質及/或核中（對眞核宿主細胞而& )或在胞液中（對革蘭氏陰性細菌宿主細胞而言）。對存在於宿主細胞細胞質及/或核（對眞核宿主細胞而言）或在胞液中（對革蘭氏陰性細菌宿主細胞而言）的IL - Ira- R 多肽來説，細胞間物質（包括革蘭氏陰性細菌的内含體）可由宿主細胞中經由使用諳於此技者所知的技術來提取。例如，可用法蘭西壓榨器、勻化、及/或超聲波降解使宿主細胞細胞溶解後離心，以釋放圍膜/細胞質的内容。 -60- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁}

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制取 A7 B7 五、發明說明（58) 若IL-lra-R多肽在胞液内形成内含體，内含體經常會結合於内及/或外細胞膜，因此離心後主要存在於沉丸物質内。然後可用pH極値或用促溶劑如清潔劑、胍、胍衍生物、尿素、或尿素衍生物在還原劑如二硫蘇糖醇存在中於鹼性 pH値下，或用三羧基乙基磷化氫在酸性pH値下處理沉丸物質，以釋放、打散及溶解該等内含體。溶解後的IL-lra-R多肽可使用凝膠電泳法、免疫沈澱或類似法來分析。若需要分離IL-lra-R多肽，可使用本文及Marston et al·，1990, Meth· Enz·，182:264-75所述標準方法來分離。在某些例子中，IL-lra-R多肽分離後不具生物活性。各種”重折π或轉化多肽至其三級結構及產生二硫鍵聯的方法可用以恢復生物活性。此類方法包括曝露已溶出多肽至通常高於7的pH値中，及在特定濃度的促溶劑之存在中。促溶劑的選擇與對内含體溶解的選擇極爲相似，但通常促溶劑所用的濃度較低且不必與溶解所用促溶劑一樣。在大多數例子中，重折/氧化溶液也包含有還原劑或還原劑加上特定比率的其氧化形式以產生一特定的氧化還原電位，使二硫鍵聯重組發生而形成蛋白質的半胱胺酸橋聯。某些常用的氧化還原偶合包括半胱胺酸/胱胺、谷胱甘肽（Gsh)/二硫雙谷胱甘肽、氣化銅、二硫蘇糖醇（DTT)/二硫嘍烷DTT ，及2-2-銃基乙醇（bME)/二硫-b(ME)。在許多例子中，可用或可能需要共溶劑以增加重折的效率，爲此而用的較常見試劑包括甘油、各種分子量的聚乙二醇、精胺酸及類似物0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（59) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 若在IL-lra-R多肽表現時内含體不能形成至明顯程度，則該多肽主要存在於細胞勻漿離心後的上澄液中。多肽可用如本文中所述方法進一步由上澄液中分離出。由溶液中純化IL-lra-R多肽可使用各種技術來實現。若多肽係經合成使得其在其羧基-或胺基·端上包含一標記如六聚組胺酸（IL -1 ra-R多肽/hexaHis)或其他如FLAG(Eastman Kodak Co·，New Haven，CT)或myc ( Invitrogen，Carlsbad，CA) 等小肽的標記，則可經由將溶液通過一管柱基質對該標記具很高的親和性之親和性管柱而以一步程序來純化。例如，聚組胺酸可用很強的親和性及特異性結合鎳。因此，鎳親和性管柱（如Qiagen®鎳管柱）可用來純化IL - Ira- R 多肽 / 聚組胺酸。參閱如 Current Protocols in Molecular Biology § 10.11.8 ( Ausubel et al., eds., Green Publishers Inc. and Wiley and Sons 1993 ) 〇此外，IL-lra-R多肽可經由使用能特異地辨識並結合IL-lra-R多肽的單株抗體來純化。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其他適用的純化程序包括，但不限於，親和性層析術層析術、免疫親和層析術、離子交換層析術、分子篩層析術、HPLC、電泳（包括自然凝膠電泳），接著凝膠洗提，及製備型等電子聚焦（"Isoprime"機器/技術，Hoefer Scientific， San Francisco，CA)。在某些例子中，兩個或多個純化技術可综合使用以達至更高的純度。 IL-lra-R多肽也可經由用技藝中已知的技術以化學合成方法來製備（如固相肽合成），如下列資料所列：Merrifield -62- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（6Q) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) et al·，1963，J· Am. Chem. Soc· 85:2149; Houghten et al·，1985, Proc Natl Acad· Sci. USA 82:5132;及Stewart and Young，Solid Phase Peptide Synthesis (Pierce Chemical Co. 1984) o 此類多肽可或可不合成爲在胺基端上有甲硫胺酸者。化學合成IL-Ira- R多肽可用如彼等參考資料所列方法氧化產生二硫化橋聯。化學合成IL-lira-R多肽可望具與重組產生或由自然源中純化而得之相應IL- lra-R多肽相比的生物活性，因此可與重組體或自然IL-lra-R多肽互換地使用〇另一獲得IL-lra-R多肽的方法是經由從生物樣品中純化而得，如從IL_ lra-R多肽自然存在於其中的來源組織及/或體液。此類純化可經由如本文所述蛋白質純化方法來進行。純化過程中對IL-lra-R多肽存在可經由，如使用經製備的抗重組產生之IL-lra-R多肽或其肽片段的抗體來監控。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製產生核酸及多肽的許多其他方法係技藝所知者，且彼等方法可用以產生具IL-lra_R多肽特異性的多肽。參閲，如 Roberts et al., 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:12297-303，其中述及mRNA及其編碼肽之間的融合蛋白質之產生〇也參閲 Roberts，1999，Curr. Opin· Chem· Biol· 3:268-73。此外，美國專利第5,824,469號述及獲得可執行特定生物功能的低聚核荅酸的方法。該方法包括產生一低聚核荅酸的不均一池（pool)，每個低聚核苷酸具一 5 ’隨機序列、一中央預選序列、及一 3 ·隨機序列。所得不均一池可經導入一不展示所需生物功能的細胞群中。然後篩選細胞亞群，以得 -63- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（61) 可展示預定生物功能的亞群。由彼等亞群中分離出能執行所需生物功能的低聚核苷酸。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 美國專利第 5,763，192 ; 5,814,476 ; 5,723,323 ;及5,817,483 號述及產生肽或多肽的過程。其係經由產生隨機基因或其片段，然後將彼等基因導入能產生一或多種該隨機基因編碼的蛋白質之宿主細胞中。隨後篩選該宿主細胞以鑑別出能產生具所需活性的肽或多肽的比等選殖株。另一產生肽或多肽的方法如Athersys，Inc.提出申請的 PCT/US98/20094 (WO99/15650)中所述。如所稱的，，用於基因發現之基因表現的隨機活化n (RAGE- GD)，該方法包括以就地（in situ)重組方法活化内源基因表現或基因過度表現。例如，内源基因的表現是經由將一調節序列整合到可經由非同源或不正規重組來啓動基因表現的標的細胞而啓動或增加。目標DNA首先置於輻射中，而後嵌入一基因啓動子。該啓動子最終在基因前定位一斷裂，引發基因的轉錄。此導致所需肽或多肽表現。要了解者彼等方法也可用以產生全面的IL-lra-R多肽表現庫，該庫可隨即用於各種檢定的高通量顯型篩選，如生化檢定、細胞檢定及整個有機體檢定（如植物、鼠等）。合成經濟部智慧財產局員工消費合作社印製諳於此技者皆了解本文所述核酸及多肽分子可經由重組體及其它手段來產生。選擇結合劑 -64- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 ------------- Β7___ 五、發明說明（62 ) #心選擇結合劑”指對一或多種IL]ra-R多肤具特異性 /的刀予。適用的選擇結合劑包括，但不限於，如抗體及其何生物、多肽及小分子。適用的選擇結合劑可使用本技藝中：知的方法來製備。-本發明iL-lra-R多肽選擇結合劑的範例可結合IL_lra-R多月太的某一部分，藉此抑制該多肽與IL-lra-R多肽受體的結合。選擇〜口劑如可結合JL- ira-R多肽的抗體及抗體片段係在本發明範疇中者。抗體可為多株型，包括單特異性多株型；單株型（MAbs);重組體型；嵌合體型；人類化型，如 CDR-移植；人類型；單鏈型；及/或雙特異性型；以及彼等的片段；變體；及衍生物。抗體片段包括抗體結合於IL· lra-R多肽上抗原決定部位的片段。此類片段的例子包括由全長抗體經酶分裂產生的Fab及F(ab，）片段❶其他結合性片 ^又包括由重組DNA技術所產生者，如經由將包含編碼抗體變體區之核酸序列的重組體質體予以表現。針對IL -1 ra- R多肤的多株抗體一般係用如多重皮下或腹膜内IL-1 ra-R多肽及佐劑的注射而在動物體内（如兔或鼠）產生。有用者為將IL-lra-R多肽拼合到一在要免疫的物種體内為免疫原之載體蛋白質，如鎖眼帽貝血藍蛋白、血清、白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑。此外，凝集劑如礬可用以增強免疫反應。免疫後，將該動物放血並檢定血清的抗-1L -1 ra- R抗體濃度。針對IL- lra-R多肽之單株抗體是使用任一可用來經由在培養基中以連續細胞系產生抗體分子的方法來產生。適用 65- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------訂---------1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ··裝經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 __ B7_ 五、發明說明（63 ) 來製備單株抗體的方法例子包括K〇hler et a!·，i975, Nature 256:495-97的融合瘤方法，及人類B -細胞融合瘤方法 (Kozbor，1984，J. Immunol· 133:3001; Brodeur et al·， Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63 (Marcel Dekker，Inc.，1987)。本發明也提供可產生對 IL - Ira- R多肽具反應性之單株抗體的融合瘤細胞系。本發明單株抗體可經改質以用為治療劑。一具體實例為π 嵌合”抗體，其中重鏈（Η)及/或輕鏈（L)的一部分係與一特定物種衍生而得或屬於一特定的抗體類或亞類之抗體内的相應序列完全相同或同源者，同時該鏈的剩餘物係與由其他種衍生而得或屬於另一抗體類或亞類之抗體内的相應序列完全相同或同源者。也包括彼等抗體的片段，條件是其展示所需的生物活性。參閱美國專利第4,816,567號； Morrison et al·，1985，Proc· Natl· Acad. Sci. 81:6851-55 〇在另一實例中，本發明單株抗體為n人類化n抗體。使非人類抗體人類化的方法係技藝熟知者。參閱美國專利第 5,585,089及5,693,762號。一般說來，一人類化抗體具一或多個由一非人類源導入其中的胺基酸殘基。人類化可使用，例如技藝中所述方法來進行（Jones et al·，1986，Nature 321:522-25; Riechmann et al., 1998, Nature 332:323-27; Verhoeyen et al·，1988，Science 239:1534-36)，其係經由在人類抗體相應的區内取代以至少一部分的齧齒動物互補決定區（CDR) 〇本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -----------Φ------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---- ## 1283683 A7 _B7 _ 五、發明說明（64 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明也包括結合IL-lra-R多肽的人類抗體。使用能在缺乏内源免疫球蛋白產生的情況下產生人類抗體的全部功能之轉殖基因型動物（如小鼠），該抗體可經由用1L - Ira-R 多肽抗原（即，具至少6個相接的胺基酸），視情況拼合到載體，進行免疫化而產生。參閲如Jakobovits et al·，1993, Proc· Natl· Acad· Sci. 90:2551-55; Jakobovits et al·，1993，Nature 362:255-58; Bruggermann et al., 1993, Year in Immuno. 7:33) 0 在一方法中，此類轉殖基因型動物的產生是經由使其中的内源編碼重及輕免疫球蛋白鏈之基因座無能化，並將編碼人類重及輕鏈蛋白質的基因座换入其基因組内。然後使具少於該改變之完全補充的部分改變動物互交以獲得具所有所需免疫系統改變的動物。再給用一免疫原時，彼等轉殖基因型動物會產生具人類（而非如鼠類）胺基酸序列的抗體，包括對彼等抗原具免疫特異性的可變區。參閲PCT Αρρ· Nos· PCT/US96/05928 及PCT/US93/06926。其他的方法載於美國專利第 5,545,807號，PCT App. Nos. PCT/US91/245 and PCT/GB89/01207，及歐洲專利第 546073B1 及 546073A1 號。人類抗體也可由重組DNA在宿主細胞内的表現或如本文所述在融合瘤細胞内的表現來產生。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

在另一實例中，人類抗體也可由噬菌體展示庫產生 (Hoogenboom et al., 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., 1991，J· Mol· Biol· 222:581)。彼等方法係模擬透過在絲狀噬菌體表面上展示抗體全部功能進行免疫選擇，隨後經由其對所選抗原的結合來選擇噬菌體。一種此類技術爲如PCT -67- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱）. 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（65)

App. No. PCT/US98 /17364中所述者，該資料述及使用這種做法來分離MPL-及msk-受體之高親和性及功能性激動抗體。嵌合體的、CDR移植及人類化等抗體典型地是經由重組體的方法來產生的。將編碼抗體的核酸導入宿主細胞中，並使用本文所述物質及方法來表現。在一較佳實例中，抗體是在哺乳動物宿主細胞内產生，如CHO細胞。單株（如人類）抗體也可經由重組體DNA在宿主細胞内表現或在如本文所述融合瘤細胞中表現而產生。本發明抗-1L - Ira- R抗體可用於任一已知檢定方法，如競爭性結合檢定、直接及間接夾層檢定、及免疫沈澱反應檢 S(Sola，MonoclonalAntibodies:AManualofTechniquesl47-158 (CRC Press，Inc· 1987))之中來偵檢及定量IL-lra-R 多肽。該抗體可用適於所用檢定方法的親和性結合IL-Ira-R 多肽。對於診斷用途，在某些實例中，抗-IL-lra-R抗體可用可偵檢部分體來標誌。該可偵檢部分體可爲任一能直接或間接產生可檢測信號的部分體。例如，可偵檢部分體可爲放射性同位素，如 3H、14C、32P、35S、125I、99Tc、ulIn、或67Ga ;一榮光或化學發光性化合物，如勞光素異硫氰酸醋、若丹明或蟲螢光素；或依酵素，如鹼性磷酸酶、半乳糖甞酶或辣根過氧化酶（Bayer，et al·，1990，Meth· Εηζ· 184:138-63) 〇競爭結合檢定有賴於經標誌標準品（如一 IL- Ira-R多肽或其免疫反應部分）與受測樣品分析物（IL- lra-R多肽）對有限 -68- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（66 ) 量抗-IL-lra_R抗體競爭結合的能力。IL-lra_R多肽在受測樣品中的量與結合到抗體的標準品之量成反比。爲了便於測定經結合的標準品之量，抗體通常在競爭之前或之後予以不溶解化，使得與抗體結合之標準品及分析物可方便地從不結合的標準品及分析物分離出。夾層檢定典型地包括使用兩種抗體，每種抗體可結合至受偵檢及/或定量的蛋白質所含不同的免疫原部分或抗原決定部位。在夾層檢定中，受測樣品分析物通常與固定化於固體載體上的第一抗體結合，且隨後第二抗體結合於分析物上，因此形成一不可溶的三部份式複合物。參閲如美國專利第4,376,110號。第二抗體自身可用一可偵檢部分體來標諸（直接夾層檢定）或可使用經可偵檢部分體標諸過的抗免疫球蛋白抗體來測量（間接夾層檢定）。例如，一種夾層檢定爲酶聯結免疫吸附檢定（ELISA)，在該例中，可偵檢部分體爲酵素。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 選擇結合劑，包括抗-IL-lra-R抗體，也可用於活體内造像（in vivo imaging)中。可將經用可偵檢部分體來標誌過的抗體給動物服用，較佳者係進入血流中，並檢定該經標誌抗體在宿主體内的存在與位置。該抗體可用能在動物體内偵檢出，不論是用核磁共振，放射學，或技藝中已知的其他偵檢手段，偵檢出之任何部分體予以標誌。本發明選擇結合劑，包括抗體，可用爲治療劑。彼等治療劑一般爲激動劑或拮抗劑，其中彼等分別增強或降低

Ira-R多肤的至少一種生物、壬地太 *" /徑生物活性。在一實例中，本發明拮抗 -69- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7

五、發明說明（67 ) 劑抗體爲可特異地結合IL - Ira- r多肽且可在活體内或試管内抑制或消除IL]ra-R多肽所具功能活性之抗體或其結合性片段。在較佳實例中，該選擇結合劑，如拮抗劑抗體，可抑制IL-lra-R多肽至少50%，較佳者至少80%的功能活性。在另一實例中，選擇結合劑可爲能與几心⑻尺多肽結合性夥伴（配位體或受體）交互作用，由此在活體内或試管中抑制或消除IL - lra-R多肽活性之抗- IL - lra-R多肽抗體。選擇結合劑，包括激動劑及拮抗劑抗_IL_lra_R多肽抗體，可經由本技藝中熟知的篩選檢定來鑑別。本發明也有關一種套劑，其包#IL-lra-R選擇結合劑（如抗體）及用以檢測在生物樣品中的IL-lra-R多肽水平之其它試劑。此類試劑可包括可檢測標誌、阻斷血清、陽性及陰性對照樣品，及偵檢試劑。微矩陣（Microarray) 要了解者可根據本發明來使用DNA微矩陣技術。DNA微矩陣爲置於固體載體如玻璃上的核酸之微縮、高密度矩陣。矩陣中每個細胞或元素包含有單一核酸物種的多個複本 ’彼等是作爲與互補核酸序列（如mRNA)進行雜交的目標。使用DNA微矩陣技術進行表現輪廓化中，首先從細胞或組織樣品中提取出mRNA，然後再經由酶轉化爲螢光標之 cDNA。將該物質與微矩陣雜交，並清洗去除未結合的 cDNA。然後可經由定量標誌與每個目標核酸分子特異地結合的cDNA之量來觀察在矩陣上個別基因的表現。依此法， -70- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ~---~~--^---- 五、發明說明（68 ) 數千個基因的表現可從單一生物物質樣品以高通量併行方式定量。這種高通量表現輪廓化對於本發明IL- lra-R分子有很廣的應用’包括但不限於：作爲治療劑的標的之IL_lra-R疾病相關基因的鑑定及確認；相關IL-lra-R分子及其抑制劑的分子毒物學；臨床試驗所用取代標誌物群及代的層化；及在高通量篩選中幫助選擇性化合物的鑑定來增加相關IL-ha-R多肽小分子藥物的發現。化學衍生物

於本文所述揭示之下，IL-lra-R多肽之化學改質衍生物可由讀於此技者來製備。IL_ lra-R多肽衍生物的改質方式爲自然連接於多肽上的分子之種類或位置均不一樣。衍生物可包括由刪除一或多個自然連接化學基所形成的分子。包含下面所列任一胺基酸序列的多肽：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36或其他 IL-Ira- R多肤’都可經由一或多個聚合物的共價連接來改質。例如，所選聚合物通常爲水溶性者使得其所連接的蛋白質不會在水環境，如生理環境中沈澱。適用聚合物範疇包括聚合物混合物。較佳者，對於終端產物製劑的治療用途而言 ’該聚合物在藥學上係可接受者。每聚合物可有任一分子量，且可或可不具支鏈。每聚合物所具平均分子量通常在約2 kDa至約1〇〇 kDa(術語"約，，表示在製備水溶性聚合物時，某些分子比所説的分子量較重 ’某些則較輕）。每聚合物的平均分子量較佳的爲介於約5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（69) kDa至約50 kDa，更佳者介於約12 kDa至約40 kDa，且最佳的爲介於約2 0 kDa至約3 5 kDa之間。適用的水溶性聚合物或其混合物包括，但不限於，N -聯結或0 -聯結的醣類、糖、嶙酸酯、聚乙二醇（pEG)(包括用於衍生蛋白質的PEG形式，包括單-(Ci-CM)，烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇），單曱氧基聚乙二醇、葡聚糖（如約6 kD 的低分子量葡聚糖）、纖維素、或其他基於醣類的聚合物、聚（N -乙烯基吡咯烷酮）聚乙二醇、丙二醇同元聚合物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇（如甘油）及聚乙烯醇。本發明也包括雙官能交聯分子，其可用以製備共價連接IL _ 1 ra- R多肤多體物（multimers)。一般説來，化學衍生可在任一適用於使蛋白質與經活化聚合物分子反應的條件下進行。製備多肽化學衍生物的方法一般包含以下步驟：（a)使多肽與經活化聚合物分子（如反應性醋或聚合物分子的衍生物）反應，反應條件爲使包含下面所列任一胺基酸序列的多肽：SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 6、或SEQ ID NO : 36、或其他IL-lra-R多肽與一或多個聚合物分子相連接，及（b)獲得反應產物。最適反應條件將基於已知的參數及所需結果來決定。例如，聚合物分子與蛋白質的比例越大，所連接的聚合物分子的百分比就越高。在一實例中，IL-lra-R多肽衍生物可在胺基端具一單一聚合物分子部分體。參閱如美國專利第 5,234,784號。 -72- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） _ ϋ ϋ ϋ 1-· -1 一一0JI I ϋ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 p-----B7____一五、發明說明（70 ) 多肽的聚乙二醇化可經由使用技藝中已知的任一聚乙二醇化反應特定地進行。此類反應爲如下列資料中所述者： Francis et al·，1992, Focus on Growth Factors 3:4-10 ;歐洲專利第0154316及0401384號；及美國專利第4，179,337號。例如，聚乙二醇化可經由與一如本文所述反應性聚乙二醇分子（或一類似的反應性水可溶聚合物）的醯化反應或烷化反應來進行。醯化反應中，所選聚合物需具單一反應性酯基。對於還原型烷化反應，一選定聚合物需具單一反應性醛基。反應性醛爲，例如聚乙二醇丙醛，其具有水安定性，或其單Ci-。⑺烷氧基或芳氧基衍生物（參閲美國專利第 5,252,714 號）。在另一實例中，可將IL-lra-R多肽化學偶合至生物素上。然後可將生物素/IL- lra-R多肽分子結合於抗生物素蛋白上’導致產生四價抗生物素蛋白/生物素/IL-lra-R多肽分子。IL_ lra-R多肽也可共價偶合於二硝基酚（DNP)或三硝基紛（TNP)上，並抗-DNP-或抗-TNP-IgM沈澱所得拼合物而形成10價的十體型拼合物。一般説來，可經由給用本發明IL-lra-R多肽衍生物來改善或調制的狀況包括本文中爲IL-lra-R多肽所述者。但本文所揭示IL - Ira- R多肽衍生物與未衍化分子相比，可具其他的活性，增加或降低的生物活性，或其他特徵，如增^ 或減短的半生期。 1因工程所得韭人類動物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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1283683 A7 — 丨 __ ___ 五、發明說明（71 ) 本發明範疇内也包括非人類動物，如小鼠、大鼠、或其他齧齒類動物；兔、山羊、綿羊或其他家畜，其中編碼自然IL-lra-R多肽的基因已被"分裂··（即"打斷"），使得IL· lra-R多肽表現水平大幅降低或完全廢除。此類動物可使用如美國專利第5,557,032號所述技術和方法來製備。本發明也包括非人類動物如小鼠、大鼠、或其他齧齒類動物；兔、山羊、綿羊或其他家畜，其中該動物IL-lra_R 基因的自然形式或異種的IL-ira-R基因會被該動物過度表現，因此產生了一 "轉殖基因型"動物。此類轉殖基因型動物可使用已知方法來製備，如美國專利第5,489,743號及pcT Pub. No· W0 94/28122中所述者。本發明也包括非人類動物，其中一或多個本發明iL_lra_ R多肽的啓動子係經活化或抑活化（如經由使用同源重組方法）而變更一或多種自然IL- lra-R多肽的表現水平。彼等非人類動物可用以候選藥物的篩選。在此類篩選中 ’可測量候選藥物對動物的影響。例如，候選藥物可能降低或增加IL-lra-R基因的表現。在某些實例中，所產生的 IL-lra-R多肽的量可在使動物曝露於候選藥物中後測量。此外，在某些實例中，可偵檢候選藥物對動物的實際影響。例如，特定基因的過度表現會導致、或伴隨著，一種疾病或病理情況。在此類例子中，可測試候選藥物降低基因表現的能力，或其預防或抑制病理情況的能力。在另一實施例中，特定的代謝產物如多肽片段的產生會導致，或伴隨著，一種疾病或病理情況。在此類例子中，可檢測候選 -74- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) tT---------絶經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 72 五、發明說明（藥物降低此類代謝產物產生的能力或其預防或抑制病理情況的能力。楚jL-lra-R多肽活性的其他誰|制劑之烚宏在某些情況下，需要鑑別爲調制劑的分子，如IL_ lra_R 多肽活性的激動劑或拮抗劑。可調制IL- lra-R多肽的自然或合成分子可使用一或多種筛選檢定來辨識，如本文所述者。此類分子可經由注射、或口服、移植設備或類似者在丨惫生物體外或活體内給用。訂 "受測分子”指接受進行調制（即增加或降低）IL-lra_R多肽活性能力評估的分子。最普遍的是，受測分子將直接與 IL- lra-R多肽反應。但，也考慮到受測分子也可間接調制 IL-lra_Rf肽活性，如經由影響IL-lra-R基因表現，或經由結合於一IL-lra-R多肽結合夥伴上（即受體或配位體）。在一實例中，受測分子係結合於IL-lra_R多肽，其親和常數爲至少約10 ，較佳者1〇_8M左右，更佳者左右，且最佳者10-1()M左右。鑑別可與IL-lra-R多肽交互作用的化合物所用方法也包括於本發明中。在某些實例中，lra-R多肽係與受測分子一起溫置，其條件爲使受測分子能與IL_lra-R多肽交互作用，並測量交互作用程度。受測分子可經篩選成實質純化的形式或爲粗混合物的形式。在特定實施例中，IL- lra-R多肽激動劑或拮抗劑可？陶j 白質、肽、醣類、酯、或可與IL-ira-R多肽交互作用以控制其活性的小分子量分子。調節IL- lra_R多肽表現的分子本紙張尺度適財關家^ϋΑ4規格⑽χ撕公爱 -75· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 〜^ ----B7_— 五、發明說明（73 ) 包括核酸，其係與編碼IL-lra-R多肽的核酸呈互補，或與引導或控制IL-lra-R多肽表現的核酸序列呈互補並作爲表現的反義調節劑。一旦受測分子經鑑定爲可與IL-lra-R多肽交互作用者，可進一步評估該分子增加或降低IL-lra-R多肽活性的能力。受測分子與IL_ lra_R多肽交互作用的測量可以多種格式進行，包括基於細胞的結合檢定、膜結合檢定、溶液相檢定、及免疫測定。一般説來，受測分子係與IL_lra-R多肽一起溫置所指定的一段時間，並用一或多種測量生物活性的檢定來測定IL_lra_R多肽活性。受測分子與IL- Ira-R多肽的交互作用也可在免疫測定中使用多株型或單株抗體來直接檢定。另外，包含如本文所述抗原決定部位標記的IL- lra-R多肽改質形式可用於溶液及免疫測定中。在IL - lra-R多肽透過與結合夥伴（如受體或配位體）交互作用展現其生物活性時，可使用各種試管内檢定來測量IL_ lra-R多肽對相應結合夥伴（如選擇性結合劑、受體或配位體）結合。彼等檢定可用以篩選受測分子增加或降低結合 IL-lra-R多肽至其連接夥伴的速率及/或程度的能力。在一檢定中，IL-lra-R多肽係經固定化於一微滴板的洞中。隨後可將經放射性同位素標誌wIL_lra-R多肽結合夥伴（如碘化IL- lra-R多肽結合夥伴）及受測分子一次一種地（以任一順序）或以同時方式加到洞中。溫置後，清洗諸洞，並使用閃爍計數器來計算放射性，測定結合夥伴結合於匕-丨以—化 -76 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑵〇 X 297公髮) ----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ----------B7__________ 五、發明說明（74 ) 多肽上的程度。通常，分子需經在某一範園的濃度内測試，且使用一系列缺少一種或多種測試檢定成分的對照洞，以求結果評估的準確性。這種方法的一替代方式包括逆反蛋白質的"位置"，即將IL-lra-R多肽結合夥伴固定化於微滴板的洞，將受測分子與放射性同位素標誌IL-lra_R多肽一起溫置，並測定IL- Ira-R多肽結合的程度。參閲如， Current Protocols in Molecular Biology, chap. 18 (Ausubel et al·，eds·，Green Publishers Inc. and Wiley and Sons 1995)。作爲放射性同位素標記法的一替代者，可將IL - 1γ& R多肽或其結合夥伴拼合到生物素，隨後使用聯結於酵素如辣根過氧化酶（HRP)或鹼性磷酸酶（AP)上的鏈抗生素蛋白經由比色法來偵檢生物素化蛋白質的存在可，或經由鏈抗生物素蛋白的螢光標記來檢測。針對IL -1 ra- R多肽或il-1 r a-R多肽結合夥伴且經搏合到生物素的抗體也可用於在將該復合物與經酶聯結AP-或HRP-聯結鏈抗生物素蛋白溫置之後之偵檢目的。 IL· lra-R多肽或IL_ lra-R多肽結合夥伴也可經由接著於壤脂糖珠、壓克力珠或其他類型的此類惰性固相基材予以固定化。基材-蛋白質複合物可置於包含互補蛋白質及受測成分的溶液中。溫置後，經由離心來沈澱彼等珠，並使用本文所述方法來估算IL - Ira- R多肽與其結合夥伴之間的結合量。另外，可將基材-蛋白質複合物固定化於一管柱後，將受測分子及互補蛋白質通過該管柱。隨後可使用本文所 -77- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -I I I I I I I I I I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1283683

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（75) 述任一技術（如放射性同位素標記或抗體結合）來估算IL-lra-R多肽與其結合夥伴之間的複合物形成。可用來鐘定可增加或降低IL-lra-R多肽結合性蛋白質與 IL · 1 ra- R多肽結合夥伴之間的複合物形成之受測分子的另一試管内檢定爲表面質粒基因組共振偵檢器系統，如BIA核心檢定系統（Pharmacia，Piscataway，NJ)。BIA核心系統的使用疋由生產商所特定。此檢定基本上包括IL-lra-R多肽或 IL-lra-R多肽結合夥伴對於一位於偵檢器内的經葡聚糖塗覆感測器晶片的共價結合。隨後可將受測成分及其它補充蛋白質同時或依序地注射到含該感測器晶片的室内。結合的補充蛋白質量可基於與感測器晶片之經葡聚糖塗覆側面物理相關的分子質量變化來估算，該分子質量的變化是經由偵檢器系統來測量。在某些例子中，可能需要一起評估兩種或多種受測成分增加或降低IL- lra-R多肽與IL - lra_R多肽結合夥伴間形成複合物的能力。在彼等例子中，如本文所述檢定可輕易地經由與第一受測成分同時，或緊跟其後加入此類額外受測成分的步驟予以修改。檢定的剩餘步驟則如本文所述者。如本文所述之試管内檢定可以有利地針對其對lra_R 多肽與IL -1 ra- R多肽結合夥伴之間形成複合物的影響篩選大數目的化合物。該檢定可經自動化來篩選經由嗟菌體展示、合成肽及化學合成庫產生的化合物。可增加或降低IL - lra-R多肽與IL-lra-R多肽結合夥伴之間的複合物形成之化合物也可在細胞培養中篩選，其中係 •78- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） J --------^— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ____B7 _ 五、發明說明（76 ) 使用可表現IL- lra-R多肽或IL- lra-R多肽結合夥伴的細胞及細胞系。該細胞及細胞系可得自任一哺乳動物，但較佳者為來自人類或其他靈長類動物、犬科或齧齒類源者。IL-Ira· R多肽對能表現IL - Ira- R多肽結合夥伴的細胞表面之結合係在受測分子的存在或不存在係評估，且其結合程度可由如使用針對IL- lra-R多肽結合夥伴的生物素化抗體進行流動血細胞計數法來測定。細胞培養檢定可以有利地用來進一步評估經本文所述蛋白質結合檢定中評定為陽性的化合物。細胞培養也可用以篩選候選藥物的影響。例如，候選藥物可能降低或增加IL - Ira- R基因的表現。在某些實例中，所產生的IL- lra-R多肽或IL- lra-R多肽片段之量可在曝露細胞培養於候選藥物後測量得到。在某些實例中，可偵檢候選藥物對細胞培養的實際影響。例如，特定基因的過度表現可能對細胞培養具特定影響。在此類例子中，可測試候選藥物增加或降低基因表現的能力，或其預防或抑制對細胞培養的特定影響之能力。在其他實施例中，特定代謝？牧咻P多肽片段的產生可導致或伴隨著一種疾病或病理情況。在此類例子中，可測試候選藥物降低可測試候選藥物在細胞培養中降低此類代謝產物的產生之能力。内部化蛋白7y tat蛋白質序列（來自HIV)可用以將蛋白質内部化到一細胞

内。參閱如Falwell et al·，1994, Proc· Natl. Acad. Sci· U.S.A 91:664-68。例如HIV tat蛋白質（稱為”蛋白質轉導功能部位，， 79- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------^--------- 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（77) 或TAT PDT)中之11個胺基酸序列（丫_〇^-11-11-(5-R-R-R ; SEQ ID NO : 18)即經描述爲媒介透過細胞質膜及細胞核膜的輸送。參閲Schwarze et al·，1999，Science 285:1569-72; and Nagahara et al., 1998, Nat. Med. 4:1449-52 ° 在彼等程序中，製備了 FITC-構成物（FITC-標誌0-0-0-0_ Y-G-R-K-K-R-R-Q-R-R-R ; SEQ ID NO : 19)，其在腹膜内給藥後可穿透組織，此類構成物對細胞的結合是由螢光-活化細胞分類（FACS)分析來檢測的。用tat- - gal融合蛋白質處理過的細胞展現出々-gal活性。注射後，此類構成物的表現可在許多組織内偵檢到，包括肝臟、腎臟、肺、心臟、及腦組織。相信彼等構成物經歷了某種程度的展開以進入細胞，因此進入細胞後可能需要一重摺。要了解者tat蛋白質序列可用以將一所需多肽内部化進入一細胞。例如，使用tat蛋白質序列，可將一 iL-lra_R拮抗劑（如一抗-IL-lra-R選擇結合劑、小分子、可溶受體或反義低聚核甞酸）可經細胞内給用以抑制IL- lra-R分子的活性。如本文所用者，術語"IL-lra-R分子，，指的是如本文所定義者之IL-lra_R核酸分子及IL_lra_R多肽。需要時，il· ha-R蛋白質自身也可使用彼等程序經由内部給用到一細胞内。參閱 Straus，1999, Science 285:1466-67 〇多肽的細胞源鑑別根據本發明某些實例，能測定與IL_lra-R多肽有關的某一細胞種類係有用者。例如，可用以確定—疾病或病理情況的起源以幫助選擇適當療法。在某些實例中，編碼il_ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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Ira- R多肽的核酸可用作探針經由用此探針來篩選該細胞的核阪以鑑別出本文所述細胞。在另一實例中，可使用抗-IL- lra-R多肽抗體來測試il- lra-R多肽在細胞内的存在，並由此確定此類細胞是否爲本文所述的類別。 IL -1 r a - R多肽組合物及服用治療組合物也在本發明範圍之内。此類IL_lra_R多肽醫藥組合物可包含治療有效量IL-lra-R多肽或iL-ira-R核酸分子，與針對與服用方式的適合性而選出的藥學或生理學上可接受的調配劑之混合物。醫藥組合物可包含治療有效量的一或多種IL_lra-R多肽選擇結合劑，及與針對與服用方式的適合性而選出的藥學或生理學上可接受的調配劑之混合物。可接受調配物質較佳者在所用劑量及濃度下對接受者無毒者。醫藥組合物可包含調配物質來改變、保持或保存如該組合物的pH値、莫耳滲透度、粘度、澄清度、顏色、等張度、氣味、無菌狀態、穩定性、溶解或釋放速率、吸附性、或穿透性。適用的配劑物質包括但不限於，胺基酸（如甘胺 &1、榖胺酿胺、天冬胺酿胺、精胺酸、或離胺酸）、殺微生物劑、抗氧化劑（如抗壞血酸、亞硫酸納或亞硫酸氫鈉）、緩衝劑（如硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris_HCl、擰檬酸鹽、鱗酸鹽、或其他有機酸）、擴大劑（如甘露醇或甘胺酸）、鉗合劑 (如EDTA)、錯合劑（如咖啡因、聚乙烯基吡咯烷酮、卢·環糊精或羥丙基-点-環糊精）、填充劑、單醣、雙醣及其它醣本紙張尺度適时關家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公髮） --------1--------- c請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -81 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 '— -------B7_______ 五、發明說明（79 ) 類（如葡萄糖、甘露糖、或糊精）、蛋白質（如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白）、著色、著味及稀釋劑、乳化劑、親水性聚合物（如聚乙稀基吡咯烷酮）、低分子量多肽、鹽形成性抗衡離子（如鈉）、防腐鮮劑（如芊烷銨氯、苯甲酸、水楊酸、山梨酸、或過氧化氫）、溶劑（如甘油、丙二醇、^ 聚乙二醇）、糖醇（如甘露醇或山梨醇）、懸浮劑、界面活性劑或濕潤劑（如Pluronics ; PEG ;脫水山梨醇酯；聚山梨酸酿如聚山梨酸酯2 0或聚山梨酸酯8 〇 ; triton ;胺基丁三醇· 卵磷酯；膽固醇或tyloxapal)、穩定促進劑（如蔗糖或山梨醇 )、張性增強劑（如鹼金屬函化物·較佳者氯化鈉或氯化鉀-或甘露醇山梨醇）、釋放媒液、稀釋劑、賦形劑及/或醫藥佐

劑。參閱Remington’s Pharmaceutical Sciences (18th Ed·，A R

Gennaro, ed·，Mack Publishing Company 1990)。取佳的醫藥組合物可由熟悉此技者來決定，取決於例如所要的服藥途徑、輸送方式及所需劑量。參閱Remingt〇n,s

Pharmaceutical Sciences，Supra。此類組合物可影響 il_ lra- R分子的物理狀態、穩定性、活體内釋放速度及活體内的廓清速度。醫藥組合物中的原始媒液或載體本質上可為水性或非水性。例如，適於注射的媒液或載體可為水、生理食鹽水溶液或人造腦脊髓液，可由其他非經腸服用組合物中常見物質來補充。經中性緩衝食鹽水或混合血清白蛋白的食鹽水也可其他的範例媒液。其他範例醫藥組合物包括P Η值約為 7 · 0 - 8 · 5的Tris緩衝液，或ρ Η值約為4 · 0 - 5 · 5的乙酸鹽緩衝 82- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（80) 劑，彼等也可進一步包括山梨醇或適當的取代物。在本發明一實例中，IL- Ira-R多肽組合物可經由將具所需純度的選定組合物與選擇性調配劑混合（Remingtoi^s Pharmaceutical Sciences, supra)成冷凍乾燥餅或水溶液形式製備成以供保存。此外，IL-lra-R多肽產物可使用適當的賦形劑如蔗糖來配製成冷凍乾燥物。 IL· lra-R多肽醫藥組合物可經選用以進行非經腸輸送。另外，該組合物可經選擇以進行吸入或經由消化道輸送，如口服。此類藥學可接受組合物的製備係技藝中已知技術。配製成分係以對服用點可接受的濃度存在著。例如用緩衝劑將組合物維持在生物pH或稍低的pH値，典型者介於約5至約8的pH範圍内者。當考慮非經腸服用時，本發明所用治療組合物可爲無熱原、腸道可接受的水溶液形式，其包含在藥學可接受媒液内之所需IL_ Ira-R分子。一種特別適於非經腸注射的媒液爲無菌蒸餾水，其中IL - Ira- R分子係經調配爲無菌、等張溶液並適當保存。但另一種製備將包括將所需分子與一藥劑的配製，如可注射型微球體、生物易蝕性顆粒、聚合物型化合物（如聚乳酸或聚乙醇酸）、珠或微脂粒，彼等物質可提供給產物的經控制或持續性釋放，隨後可經由辟積、主射來輸送。也可使用透明質酸，其可具增加循環中持續存在期的效果。導入所需分子的其他適用方法包括可移植藥物輸送裝置。 -83 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（81 ) 在一實例中，醫藥組合物可經配製成以用於吸入者。例如，可將IL_lra-R多肽配製爲用於吸入的乾粉。IL-lra-R 多肽或核酸分子吸入溶液也可經用氣霧劑基質配製以氣霧輸送。在另一實例中，可將溶液喷霧。肺部服用在PCT Pub· No. WO 94/2〇069中有進一步的描述，其中述及化學改質蛋白質的肺部輸送。也考慮到某些配劑可口服。在本發明一實例中，可用此形式服用的IL-lra-R多肽可與或不與載體一起配製，該載體通常用以組成固體片劑如藥片及膠囊。例如，膠囊可設計當生物藥效率最高，而前系統降解最小時，在腸胃道點上釋放該配劑的活性部分。也可包括其他的劑以方便IL· Ira- R多肽的吸收。也將用到稀釋劑、著味劑、低熔點蠟、植物油、潤滑劑、懸浮劑、藥片分解劑及結合劑。另一種醫藥組合物包括有效量的IL-lra-R多肽與適於錠劑製造的無毒賦形劑之混合物。經由溶解該錠劑於無菌水或其他適當的媒液中，可以製備單位劑量形式的溶液。適當的賦形劑包括但不限於，惰性稀釋劑如碳酸鈣、碳酸鈉或碳酸氫鈉、乳糖、或磷酸鈣；或粘合劑，如澱粉、凝膠、或阿膠；或潤滑劑如硬酯酸鎂、硬酯酸或滑石。其他的IL-lra-R多肽醫藥組合物皆爲諳於此技者所顯知者，包括含有IL-lra-R多肽的持續.或控制_釋放調配物的調配物。調配各種其他持續_或控制_釋放工具的技術，如微脂粒載體、生物易蝕性微粒或多孔珠粒及貯積注射也皆 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 _B7 _ 五、發明說明（82 ) 為諳於此技者所知者。參閱如PCT/US93/00829，其述及多孔型聚合物微粒對醫藥組合物輸送中之控制釋放。持續釋放型製劑的其他實施例包括成形物件形式的半透性聚合物基質，如薄膜或微膠囊。持續釋放基質可包括聚酯、水凝膠、聚乳交酯（美國專利第3,773,919號及歐洲專利第058481號），L-榖胺酸和7乙基-L_穀胺酸酯的共聚物 (Sidman et al·，1983，Biopolymers，22:547-56)，聚（2-經基乙基甲基丙晞酸酉旨）（Langer et al·，1981，J· Biomed· Mater. Res. 15:167-277 and Langer，1982，Chem. Tech. 12:98-105)，乙烯-乙酸乙烯酯（Langer et al·，supra)或聚-D (-) - 3 - #呈基丁酸（歐洲專利第133988號）。持續釋放型組合物也可包括微脂粒，其可由本技藝中已知的多種方法之任一來製備。參閱如 Eppstein et al·，1985，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688-92 ;及歐洲專利第036676、088046及143949號。用於活體内服用的IL- lra-R醫藥組合物通常需為無菌者。這可經由經無菌過濾膜的過濾來完成。在將該組合物冷凍乾燥的情況中，使用此法的滅菌可於冷凍乾燥和重調之前或之後進行。非經腸服用的組合物可以冷凍乾燥形式或於溶液中貯存。此外，非經腸組合物一般可置於具無菌入口的容器内，例如一靜脈内溶液袋或具可由皮下注射針穿透的塞子之管瓶。一旦調配成醫藥組合物，其可以溶液、懸浮液、凝膠、乳液、固體或脫水或凍乾粉的形式存於無菌小瓶内。此類 85- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ----------B7 _ 五、發明說明（83 ) " " 1 调配物可以便用形式或服用前需重調的形式（如冷來貯存。、在一特定實例中，本發明係有關用於產生單劑量服用單位的套劑。彼等套劑各包含内裝乾燥蛋白質的第一容器及内裝水性調配物的第二容器。包含單一及多室預先填充注射(如液體注射筒及散注射器）的套劑也在本發明範圍之内之内。治療所用IL-lra_R醫藥組合物的有效量將取決於，如，治療環境及目的。諳於此技者皆了解用於治療的適當劑量水平的改變，部分係取決於所輸送的分子、使用lL_ira_R 分子的適用症、服用途徑、及病人的體形（體重、身體表面及器百大小）及狀況（年齡及健康狀況）。相應地，臨床醫生可決定劑量並改變服用途徑以得到最佳的治療效果。典型劑量係介於約0 · 1微克/公斤至約1 〇〇毫克/公斤或更高者，取決於上述各因素。在其他實例中，劑量可介於約〇〗微克 /公斤至約100亳克/公斤；或約1微克/公斤至約1〇〇毫克/公斤；或約5微克/公斤至約1〇〇毫克/公斤。服藥頻率取決於IL - lra-R分子在所用配劑中的藥物動力學參數。通常，臨床醫生將控制組合物，直到其達到所需療效的劑量。因此該組合物的控制可以單一劑量，一段時間内的二或更多劑量（其可含或可不含相同量的所需分子） ’或經由移植設備或導管進行連續注入。適當劑量的進一步修正係熟悉此技者所例常地進行且爲彼等的例行性工作 -86 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

五、發明說明（84) !283683 範圍内者。適當的劑量可經由使用適當的劑量-反應數據來確定。醫藥組合物的服用途徑係根據已知方法爲之，如口服；經由靜脈内、腹膜内、腦内（主質内）、腦室内、肌内、眼内、動脈内、門靜脈或損傷間注射途徑；持續釋放系統；或移植裝置。需要時，組合物可經由大丸藥注射或持續注入或移植設備來給用。替代者或外加者，組合物的局部服用可經由將已將所需分子吸收或包囊的膜、海綿或其他適當物質予以移植來實現。當使用一移植裝置時，該裝置可移植入任一適當的組織或器官中，且所需分子的輸送可經由擴散、限時釋放型大丸藥或持續服用來實現。在某些例子中，需要以活體外方式來使用IL-lra_R多肽醫藥組合物。在此類例子中，係將從病人身上取出的細胞、組織或器官曝露於IL-lra-R多肽醫藥組合物中，然後將該細胞、組織或器官移植回病人體内。在其他例子中’ IL -1 ra- R多肽可經由移植某些種細胞來輸送，該等細胞係經使用如本文所述方法遺傳工程處理過以表現及分泌IL-lra-R多肽。此類細胞或爲動物或人類細胞，可爲自體同源、異種的、或異基因的。視需要者，該細胞可爲不死者。爲了降低免疫反應的機會，可將該細胞包囊’以避免周圍組織的滲入。包膠物質通常爲生物相容、半透性聚合物圍物或膜，其可使蛋白質產物釋放，但防 -87- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁>

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（85) 止該細胞被病人的免疫系統或來自周園組織其他有害因素所破壞。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 如本文所討論者，可能有需要用一或多種1L-lra-R#肽來處理經分離的細胞群（如幹細胞、淋巴細胞、紅血球、軟骨細胞、神經元或類似者）。其可經由將該分離細胞直接曝露於多肽，其中其係呈可透過該細胞膜的形式。本發明其他實例係有關治療性多肽的試管内產生及基因療法或細胞療法中治療性多肽的產生及釋放兩者所用的細胞與方法（如同源重組及/或其他重組體產生方法）。同源或其他重組方法可用以改變含有正常轉錄不活動性IL 1 ra- R 基因、或表現不夠型基因的細胞，並由此產生能表現出治療有效量的IL-1 ra-R多肽細胞。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製同源重組技術最早是發展來導引基因以謗導或改矯正在轉錄活性基因中的突變。Kucherlapati，1989, Prog· In Nucl. Acid Res. & Mol. Biol. 36:301。該基礎技術經發展爲向哺乳動物基因組特定區域内導入特定突變的方法（Thomas et a1·， 1986, Cell 44:419-28; Thomas and Capecchi, 1987, Cell 51:503-12; Doetschman et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:8583-87)，或矯正陷基因内的特定突變的方法 (Doetschman et al·，1987，Nature 330:576_78)。同源重組技術的範例如美國專利第5,272,071號；歐洲專利第9193051及 505500號；PCT/US90/07642，及PCT Pub No. WO 91/09955。經由同源重組，可將要嵌到基因組内的DNA序列經由將其接著至目標DNA上而導引到標的基因的特定區域。目標 -88- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1283683 A7 B7 五、發明說明（86) 導向性DNA爲一核甞酸序列，其與基因組DNA的區爲互補（同源）關係。與基因組特定區互補的小段目標導向性DNA在 DNA複製過程中與親代股接觸。嵌入細胞内的dnA所具一般屬性爲經由共用同源區域而與其他内源DNA段雜交，及因此重組。右该互補股連接於含有突變或不同序列或額外核甞酸的低聚核苷酸上，其也會因重組結果而摻加至新合成股中。校讀功能的結果，可用該新的DNA序列作爲模板。因此，該經轉移DNA及經摻加至基因組中。接著於彼等目標導向性DNA段上者爲可與IL- lra-R多肽交互作用或控制其表現之DNA區域，如侧接序列。例如，將啓動子/增強子元素、抑制基因或外源轉錄調節元素嵌入至目標宿主細胞的基因組中，其鄰近性及定向性足以影響編碼所需IL-lra-R多肽的DNA之轉綠。控制元素係控制存在於宿主細胞基因組内的DNA部分。因此，所需Il - Ira- R 多肽表現可能不是由編碼IL- lra-R基因自身的DNA轉染來實現，而是經由將目標導向性DNA(含有與標的内源基因同源性之區）與可爲内源基因序列提供IL-lra-R基因轉錄可辨識信號的DNA調節性節段配合使用來達成的。在一範例方法中，細胞内所需經目標導向基因（即所需内源細胞基因）的表現係經由導入包含至少一調節序列、一表現序列及一接合供體部位的DNA而進行同源重組到細胞基因組的預選部位予以改變。彼等成分可經導入至染色體（基因組）DN A ’其方式爲使其在事實上導致產生新的轉錄單元 (其中存在於DNA構成物内的調節序列、表現序列及接合供 -89 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·1111111. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 -----------B7___ 五、發明說明（87 ) 體部位皆為可操作地聯結於内源基因上）^導入彼等成分至染色體組DNA内的結果，使所需内源基因的表現被改變。如本文所述’已變更的基因表現包括活化（或引起被表現）正常上在所得細胞内為不活動（未表現）的基因，以及增加在所得細胞内未表現至生理意義水平的基因之表現。此實例也包括改變調節或謗導的型態使得其與所得細胞内發生的調節或謗導不同，並降低（包括消除）在所得細胞内表現的基因之表現。可用以增加或導致IL-lra-R多肽從細胞内源11_11^尺基因中產生的一種同源重組方法包括，首先使用同源重組以從部位特異性重組系統（如Cre/loxP，FLP/FRT)(Sauer，1994,

Curr· Opin· Biotechnol” 5:521-27; Sauer，1993，Methods

Enzymol·，225:890-900)中設置重組序列至細胞内源基因組 IL- lra-R多肽密碼區的上游（即5，）。將含有與置於基因組 IL · 1 ra- R多肤後、碼區上游處的部位同源之重組部位的質體用適當的重組酶一起導入至改變後的細胞系中。該重組酶举致質體經由質體的重組部位整合到細胞系中正好位於基因組IL- lra-R多肽密碼區上游的重組部位内（Baub〇nis and

Sauer，1993, Nucleic Acids Res· 21:2025-29; OOorman et al·， 1991，Science 25:1351-55 )。已知的任一可增加轉錄的側接序列（如增強子/啟動子、介入子、轉譯增強子），若在該質體内合適位置時，會以可產生一種可導致由細胞内源IL-lra-R基因的IL- lra-R多肽重新產生或增加產量之新的或經改變的轉錄單元。 90- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) • / ϋ ----訂---------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683

五、發明說明（88) 另一種使用已將邵位特異性重組序列置於細胞内源基因組IL Ira-R多肤密碼區上游的細胞系之方法爲使用同源重組將第二重組部位導到細胞系基因組的其他處。隨後可將適當的重組酶導到雙-重組-部位細胞系中，引發重組事件（刪除、逆轉及轉位）（Sauer，1994，Curr· Opin· Biotechnol·， 5:521-27; Sauer，1993, Methods Enzymol·，225:890-900)以產生一種新的或經改質轉錄單元而導致由細胞内源IL · Ira-R基因的IL-lra-R多肽重新產生或增加產量。增加或導致由細胞内源IL-lra-R基因的IL-Ira-R多肽表現的另一方法包括增加或促成單基因或多基因的表現（如轉錄因子），及/或降低單或多基因的表現（如轉錄壓制劑 (repressor))，其方式爲導致由細胞内源iL-ira-R基因的il-lra_R多肽的重新產生或增加產量。該方法包括將非自然存在的多肽（如含經融合到轉錄因子功能部位内的部位特異性 DNA結合功能部位的多肽）導至細胞内而促使細胞内源il_ lra-R基因的IL- lra-R多肽重新產生或增加產量。本發明也有關可用於變更目標基因表現方法中的DNA構成物。在某些實例中，範例DNA構成物包含：（a) —或多種目標導向性序列，（b) —調節序列，（c) 一表現序列，及（d) 一未配對接合供體部位。DNA構成物中的目標導向性序列可導引成分（a)-(d)整合入細胞内的目標基因中使得成分 (b)_(d)可操作地聯結於内源目標基因序列上。在另一實例中，DNA構成物包含：（a) —或多種目標導向性序列，（b) 一調節序列，（c) 一表現序列，（d)—接合供體部位，（e) — -91 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 κι _________Β7 ------------ — 五、發明說明（89 ) 介入子，及（f)一接合受體部位，其中目標導向性序列導弓丨成分（a)-(f)的整合，使得元素（b)-(f)可操作地聯結於内源基因上。該目標導向性序列與細胞染色體組DNA之預選部位爲同源因而使同源重組得以發生。於該構成物中，表現序列一般係在調節序列的3 W立置，而接合供體部位係在調節序列的3 ’位置。若已知一特定基因的序列，如本文中之IL · Ira-R多肽的核酸序列，則可合成，或以其他方法獲得與所選基因區互補的DNA片段，如經由對自然DNA在界定標的區之特定辨識部位上的適當限制來獲得。該片段是作爲嵌入細胞的目標導向性序列，且將與其在基因組内的同源區雜交。若雜交發生在DNA複製過程中，則該DNA片段及連接其上的任一額外序列都可作爲岡崎片段（Okazaki fragment)且會結合新合成的DNA子代股之内。因此本發明包括編多肽的核苷酸，該核苷酸可用作目標導向性序列。本發明也涵蓋IL-lra-R多肽細胞療法，如產多肽的細胞之移植。該具體實例包括移植能合成及分泌生物活性形式的IL-lra-R多肽之細胞。此類iL-lra-R多肽產生性細胞可爲IL-lra-R多肽的自然產生者，或爲產生il-lra-R多肽的能力經由用編碼所需IL-Ira-R多肽的基因或用可增強IL- lra-R多肽表現的基因予以轉形而得到增強之重組細胞。此類改質可利用適於輸送基因並促進其表現及分泌的載體來完成。爲了使服用IL-lra-R多肽的病人體内如同服用異物種多肽所發生的潛在免疫反應最小化，較佳者 -92- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 __B7 五、發明說明（90 ) 為產生IL- lra-R多肽的自然細胞系源自人類，並產生人類 IL- lra-R多肽。同理，較佳者為產生IL- lra-R多肽的重組細胞係用含有編碼人類IL - 1 ra- R多肤的基因之表現載體予以轉形。移植細胞可包入膠囊中，以避免周圍組織的滲入。可將人類或非人類動物細胞置於可使IL - Ira- R多肽釋放，但可防止被病人免疫系統或其他來自周圍組織的有害因子所破壞的生物相容、半透性聚合物包圍物或膜中而移植到病人體内。另外，病人自身的細胞在經轉形以於生物體外產生 IL -1 ra- R多肽者’可無需包入膠囊内而直接移植到病人體内。使活體細胞包入膠囊中的技術係技藝中所知者，且包囊細胞的製備及其在病人體内的移植可例行地完成。例如， Baetge et al., ( PCT Pub. No. WO 95/05452 and PCT/US94/09299) 述及含經基因工程處理的細胞以有效輸送生物活性分子的膜膠囊。該膠囊係生物可相容且可容易地取回者。該膠囊係包膠經重組DNA分子轉染的細胞，該DNA分子含有經可操作地聯結於啟動子的編碼生物活性分子之DNA序列，且該啟動子於移植入哺乳動物宿主後不會在活體内被向下調節。該裝置可提供由活體細胞至受體内的特定部位之分子輸送。此外，參閱美國專利第4,892,538 ; 5,011，472 ;及 5，106,627號。一包膠活細胞所用系統為如pCT pub. ν〇· WO91/10425( Aebischer et al·)中所述者。也可參閱 pcT Pub. No. WO 91/10470 (Aebischer et al. ); Winn et al., 1991, Exper. 93- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ------訂---- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 _B7 五、發明說明（91 )

Neurol. 113:322-29; Aebischer et al., 1991, Exper. Neurol. 111:269-75; and Tresco et al·，1992, ASAIO 38:17-23。也擬出IL-Ira-R多肽的活體内和試管内基因療法輸送。基因療法技術的一例子爲使用編碼IL -1 ra- R多肤的IL -1 ra-R基因（基因組DNA、cDNA及/或合成DNA)，其係經可操作地聯結於一組成型或謗導型啓動子以形成一 ”基因療法DNA 構成物π。該啓動子可爲同源IL-lra-R基因的同源或異源物，只要該啓動子在嵌入該構成物的細胞或組織類別中具有活性即可。基因療法DNA構成物的其他成分可視需要包括爲下列所設計的DNA分子：部位特異性整合（如對同源重組有用的内源序列）、組織特異性啓動子、增強子或不活動子 (silencer)、能提供較親代細胞具選擇性優勢的DNA分子、能用作標記來鑑別轉形細胞的DNA分子、陰性選擇系統、細胞特異性結合劑（如用於細胞目標導向者）、細胞特異性内部化因子、增強載體表現的轉錄因子、及能促成載體產生的因子。基因療法DNA構成物隨後可用病毒或非病毒的載體導至細胞内（生物體外或活體内）。導入該基因療法DNA構成物的一種手段爲利用病毒載體，如本文所述。某些載體如反轉錄病毒載體可輸送DNA構成物入細胞的染色體組DNA内，且可使該基因整合到染色體組DNA内。其他載體可發揮基因附體的功能，且該基因療法DNA構成物係保留在細胞質中。 -94- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 五、發明說明（92) 在其他實例中，爲了控制目標細胞内的IL-lra-R基因之表現也可包括凋節元素。此類成分轉而對適當效應子產生反應。依此方式，治療性多肽可在需要時表現。一傳統的 I二制方法包括使用小分子二體物或叫s來使嵌合蛋白質二聚化，該嵌合蛋白質含一小分子_結合性功能部位及一可引發生物程序的功能部位，如DNA_結和性蛋白質或轉錄啓動蛋白質（參閲 PCT Pub. Nos. W0 96/41865, W0 97/31898, and WO 97/31899)。蛋白質的二聚作用可用以引發轉殖基因的轉錄。另一調節技術是使用在細胞内以凝集體或簇團形式的形式貯存自標的基因表現出的蛋白質之方法。標的基因係經表現爲融合蛋白質，其包括一條件聚集功能部位，其可導致經聚集的蛋白質在内質網膜内保存下來。貯存的蛋白質在細胞内穩定並無活性。不過，該蛋白質可經由服用可去除該條件聚集功能部位的藥物（如小分子配位體）來釋放且由此特異地打開聚集物或簇團使得蛋白質可由細胞中分泌出來0 參閲 Aridor et al·，2000，Science 287:816-17 and Rivera et al., 2000, Science 287:826-30 〇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其他適用的控制方法或基因開關包括但不限於，本文所述系統。米非司酮（Mifepristone)(RU486)係經用爲黃體嗣括抗劑。經改質黃體嗣受體配位體-結合功能部位對黃體酮拮抗劑的結合可促成經由形成兩個轉錄因子的二聚體其隨後轉入細胞核中以結合DNA而啓動轉錄。配位體結合功能部位經改質以消除受體結合自然配位體的能力。改質過的類 -95- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（93) 固醇激素受體系統在美國專利第5,364,791號及PCT Pub. Nos· WO 96/40911 and WO 97/10337中有進一步描述。另一控制系統使用蜕化素（一種果蠅類固醇染色體），其可結合並啓動蛻化素受體（細胞質型受體）。該受體隨後移位至細胞核以結合特定DNA反應元素（來自蜕化素-反應基因的啓動子）。±兑化素受體包括一轉活化（transactivation)農部位、DNA結合功能部位、及配位體結合功能部位以引發轉錄。該蜕化素系統在美國專利第5,514,578號及PCT Pub. Nos· WO 97/38117, WO 96/37609,與 WO 93/03162中有進一步描述。另一種控制方法係使用陽性四環素-可控轉活化子。該系統包括一經突變tet壓制蛋白質DNA_結合功能部位（突變型 tet R-4胺基酸變化，其導致逆向四環素調節轉活化蛋白質，即其可在四環素存在下結合於一tet操縱基因），該結合功能部位係聯結於一啓動轉錄的多肽上。此類系統有如美國專利第 5,464,758、5,650,298及5,654，168號中所述者。其他的表現控制系統及核酸構成物爲如給Innovir Laboratories Inc·的美國專利第 5,741，679及5,834，186 號中所述者。活體内基因療法可經由局部注射IL -1 ra- R核酸分子或經由其他適當的病毒或非病毒輸送載體將編碼IL-lra-R多肽的基因導入細胞内而完成。Hefti，1994，Neurobiology 25:1418_ 3 5。例如，可將編碼IL -1 ra- R多肽的核酸分子包含於一腺相關病毒（AAV)載體中用以輸送至目標細胞中（參 -96- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -裝--------訂---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1283683 五、發明說明（9 ) 閲如 Johnson，PCT Pub. No· W0 95/34670; PCT App· No. PCT/US95/07178)。重組AAV基因組典型地包含側接在編碼 IL-lra_R多肽的DNA序列之經AAV轉化末端重複本，其中該多肽可操作地聯結於功能啓動子及聚腺荅酸序列上。其他適當的病毒載體包括，但不限於，反轉錄病毒、腺病毒、單純皰疹病毒、豆狀病毒、肝炎病毒、微小病毒、乳多空病毒、痘病毒、α病毒、冠狀病毒、棒狀病毒、副枯病毒、乳頭狀瘤病毒等之載體。美國專利第5,672,344號述及包括重組親神經性HSV- 1受體的活體内病毒·媒介基因轉移系統。美國專利第5,399,346號提出一種方法，其經由將經在活體内處理嵌入一編碼治療性蛋白質的Dna片段之人類細胞之輸送爲病人提供治療性蛋白質。進行基因治療技術所用的其他方法及物質爲如美國專利第5,631，236號（包括腺病毒載體）、5,672,510(包括反轉錄病毒載體）、 5,635,399(包括可表現細胞介素的反轉錄病毒載體）中所述經濟部智慧財產局員工消費合作社印製非病毒釋放方法包括但不限於，微脂粒媒介轉移、裸 DNA釋放（直接注射）、受體媒介轉移（配位體DNA複合物）、電穿孔、磷酸鈣沈澱、及微顆粒轟擊（如基因槍）。基因療法物貧及方法也可包括可謗導型啓動子、組織特異性增強子-啓動子、爲部位特異性整合所設計的DNA序列、可提供比親代細胞具選擇性優勢的DNA序列、鑑別經轉形細胞的標記、陰性選擇系統及表現控制系統（安全措施）、細胞特異性結合劑（對細胞目標而言）、細胞特異性内部化因子 -97- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G χ 297公爱） 1283683 A7

五、發明說明（95 ) 、及經由載體促進表現的轉錄因子，以及載體製造方法。此類進行基因療法技術的其他方法及物質皆載於美國專利第4,970，154(包括電穿孔技術）、5,679,559(述及用於基因輸送的含脂蛋白質系統）、5,676,954(包括微脂粒載體）、 5,593,875 (述及磷酸鈣轉染方法）及4,945,050(述及一種方法，其中生物活性粒子在細胞内推動的速度使該等粒子可以穿透細胞表面，並摻到細胞内）等號及PCT Pub No. WO96/40958(包括核配位體）等之中。也考慮到IL- Ira· R基因療法或細胞療法可進一步包括將一或多種額外多肤輸送到相同或不同細胞内。此類細胞可分別導入病人體内，或該等細胞可包含於單一可移植裝置中，如上述之包膠膜，或該細胞可分別經由病毒載體的方式來改質。一種經由基因療法增加細胞内内源IL - 1 ra- R多肽表現的方法是將一或多種增強子元素嵌至IL- lra-R多肽啓動子中 ’其中該等增強子元素可增加IL - Ira· R基因的轉錄活性。所用增強子元素可基於需要活化的基因所在之組織來選擇-選擇已知可在該組織内活化啓動子的增強子元素。例如，若编碼IL _ Ira- R多肽的基因要在T細胞内"打開·，，可使用 lck啓動子增強子元素。此處，要加入的轉錄成分所具功能部分可使用標準選殖技術嵌到含IL-lra-R多肽啓動子的 DNA片段中（且視需要地嵌到載體及/或5,及/或3,側接序列中）。該構成物，已知爲”同源重組構成物”隨後可在生物體外或活體内導至所需細胞内。 -98- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ^裝 ^--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製· 1283683

基因療法也可用以經由改變内源啓動子所具核苷酸序列來降低IL-lra-R多肽表現。此類改變通常經由同源重組法來實現。例如，爲抑活化而選擇的含全部或部分IL-ira_R 基因啓動子的DNA分子，可經處理以去除及/或置換調節轉錄的啓動子片段。例如，TATA盒及/或啓動子轉錄活化子的結合部位可經由使用標準分子生物技術來刪除；此類刪除可抑制啓動子活性，由此阻遏相應況^仏尺基因的轉錄。TATA盒或啓動子内的轉錄活化子結合部位的刪除可經由產生DNA構成物來實現，該構成物包含所有或相關部分的 IL-lra-R多肽啓動子（來自與需調基因相同或相關的物種），其中一或多種TATA盒及/或轉錄啓動結合部位核芬故經由取代、刪除及/或嵌入一或多種核苷酸而進行突變。結果’ TATA盒及/或活化子結合部位及降低活性或變爲完全無活性。該構成物通常也包含至少約5〇〇個DNA鹼基 ’其相應於鄰近經改變的啓動子節段之自然（内源）5 •及3’ DNA序列’且該構成物可直接地或經由如本文所述病毒載體導到適當的細胞内（生物體外或生物體内）。通常，該構成物到細胞基因組DNA内的整合是經由同源重組，其中啓動子構成物内的5·及：T DNA序列可經由雜交而幫助將改變過的啓動子區整合到内源染色體DNA之内。治療用途 IL- Ira-R核酸分子、多肽、及其激動劑及拮抗劑可用以治療、診斷、緩解、或預防多種疾病、失調、或狀況，包括本文所引者。 -99- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）裝— (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1283683

IL- lra-R多肽激動劑及拮抗劑包括可調節iL_ lra_R多肤活性，及增加或降低成熟形式IL-lra_R多肽的至少一種活性。激動劑或拮抗劑可爲輔因子，如蛋白質、肽、酷類、脂、或小分子量分子，其可與IL-ira_R多肽交互作用，由此調節其活性。潛在的多肽激動劑或拮抗劑包括抗體，該抗體可與可溶或經膜結合形式的IL-lra-R#肽反應，該多肤構成邵分或全部所述蛋白質的細胞外功能部位。可調節 IL- lra-R多肽表現的分子典型地包括編碼IL— lra_R多肽的核酸，可作爲反義表現調節劑。例如，本發明酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑可用以治療、診斷、緩解、或預防包括免疫系統功能障礙的疾病、失調、或狀況。此類疾病的例子包括但不限於 ’風/愚性關節炎、牛皮癖性關節炎、炎性關節炎、骨關節炎、炎性關節疾病、自體免疫疾病（包括自體免疫血管炎）、複發性硬化症、狼瘡、糖脲病（如胰島素糖脲病）、炎性腸疾病、移植拮抗、移植物對宿主疾病、及由損傷、扭傷、軟骨損傷、創傷、整形外科手術、感染及其它疾病過程引發的炎性狀況。免疫系統功能障礙所影響的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL-lra-R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括感染的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，麻瘋病、病毒感染（如肝炎或HIV病毒）、細菌感染（如梭菌相關疾病，包括梭菌相關痢疾）、肺結核、急性熱病、發燒、肝臟急性期反應、 -100 -

-------知，— C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -n n n n t^· 本紙張尺度適时國國家標準（CNS)A4規格（21() x 297 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 --—------ 五、發明說明（98 ) 敗血病或敗血性休克。包括感染的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL-lra-R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括體重失調的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，肥胖症、厭食、惡質病（包括愛滋病謗導的惡質病）、肌病（如肌肉蛋白質代謝’如在膿血症中者）及低血糖症。包括體重失調的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL-lra-R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括神經功能障礙的疾病、失凋或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，阿茲海默爾氏症、帕金森症、神經中毒（如由mv謗導之中毒）、肌萎縮性侧索硬化、大腦損傷、壓力過大、憂修症、疼痛感覺 (n〇ciception)及其它疼痛（包括與癌症相關的疼痛）、痛覺過敏、癲癇症、學習能力損傷及記憶失調、睡眠紊亂及週邊及中樞神經疾病。包括神經功能障礙的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL-lra-R核酸分子、多肤及激動劑及括抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括肺部的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，急性或慢性肺損傷（包括間隙肺疾病）、急性呼吸道疾病徵候群、肺過度緊張、肺氣腔、囊狀纖維症、肺纖維症及哮喘。包括肺部的其他疾病也在本發明範圍之内。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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1283683 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制农五、發明說明（99) 本發明IL -1 ra- R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括皮膚的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，牛皮癬、濕參、及傷口痊愈。包括皮膚的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL -1 ra· R核酸分子、多肤及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括腎臟的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，急性及慢性血管球性腎炎。包括腎臟的其他疾病也在本發明範園之内。本發明IL-1 ra-R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括骨的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，骨質疏鬆症、骨贅、骨產生缺陷（imperfecta)、佩吉特氏病（paget，s disease)、牙周病、暫時性的顎關節疾病、及高鈣血症。包括骨的其他疾病也在本發明範園之内。本發明IL-lra-R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括血管系統的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，溶血或中風、出血性休克、局部缺血（包括心臟缺血及腦部缺血，如創傷、癲癇、流血或中風引起之缺血，分別會導致神經變性）、動脈粥樣硬化、充血性心衰竭、再狹窄、再注輸損傷及血管形成（angiogenesis)。包括血管系統的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL - Ira- R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括腫瘤細胞的疾病、失 -102- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁)

裝 ·. 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（1GC)) 調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，淋巴瘤、骨惡性肉瘤、慢性及急性骨髓白血病（CML及AML)及其它白血病、複發性骨髓瘤、肺癌、乳癌、腫瘤轉移、或輻射治療的副作用。包括腫瘤的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL-lra-R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括生殖系統的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，不育、流產、早產和分娩、及子宮内膜異位。包括生殖系統的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL-lra-R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用以治療、診斷、緩解、或預防包括眼的疾病、失調或狀況。此類疾病的例子包括但不限於，眼睛發炎（如可相關於角膜移植）、視網膜退化、眼盲、斑點退化、青光眼、葡萄膜炎、及視網膜神經病。包括眼科的其他疾病也在本發明範圍之内。本發明IL-lra-R核酸分子、多肽及激動劑及拮抗劑也可用於治療疾病如急性胰炎、慢性疲勞徵候群、纖維肌痛及川崎氏病（MLNS)。 IL 1抑制劑包括可特定地預防可由任一數目的機制 :IL]細胞受體活化之任一蛋白質。此類機制包括向下調 -1產生、結合自由、干擾IL-1對其受體的結合、受體複合物（即受體與受體輔助蛋白質調刹合）的形成、及干擾在結合於其受體後K·1信號產生的 …。此類間白素-1抑制劑包括：間自素-1受體拮抗劑如 (CMS)A4 規格（210 X 297 公髮） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂. -103 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 A7 B7 五、發明說明（1G1) IL-lra-R，如本文所述者，抗-IL-1受體單株抗體（如歐洲專利第623674號）、11^1-結合蛋白質如可溶性11^-1受體（如美國專利第 5,492,888、5,488,032、5,464,937、5,319,071、及 5，180,812 號）、抗-IL-1 單株抗體（如 PCT Pub· Nos· W0 95/01997，WO 94/02627，WO 90/06371 ;美國專利第 4,935,343號；及歐洲專利第 364778、267611及 220063號）、 IL-1受體輔助蛋白質及其抗體（如PCT Pub· No· WO 96/23067);間白素-1/?轉化酵素（ICE)或胱冬肽酶I的抑制劑，其可用以抑制IL-1々的產生及分泌、間白素-1卢蛋白酶抑制劑、及可阻礙IL - 1在活體内的合成或在細胞外的釋放之其它化合物及蛋白質。範例IL -1抑制劑揭示於下列資料中：美國專利第 5,747,444、5,359,032、5,608,035、5,843,905、5,359,032、 5,866,576、5,869,660、5,869,315、5,872,095、5,955,480號； PCT Pub. Nos. WO 98/21957 > WO 96/09323 > WO 91/17184 > WO 96/40907、WO 98/32733、WO 98/42325、WO 98/44940、 WO 98/47892、WO 98/56377、WO 99/03837、WO 99/06426、 WO 99/06042、WO 91/17249、WO 98/32733、WO 98/17661、 WO 97/08174、WO 95/34326、WO 99/36426及WO 99/36415 ; 歐洲專利第534978和894795號；及法國專利申請 FR 2762514〇間白素-1受體拮抗劑（IL- Ira)爲人類蛋白質，其可做爲間白素-1的自然抑制劑。較佳的受體拮抗劑（包括IL-Ira及其變體和衍生物），以及其產生及使用方法爲下面所列者： -104- 本紙張尽度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . 1283683 A7 B7 五、發明說明（102) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 美國專利第 5,075,222號；PCT Pub. Nos. WO 91/08285、WO 91/17184、WO 92/16221、WO 93/21946、WO 94/06457、WO 94/21275、WO 94/21235、WO 94/20517、WO 96/22793、WO 97/28828、WO 99/36541 ;澳大利亞專利 AU 9173636 ;法國專利FR 2706772 ;及德國專利DE 4219626。此類蛋白質包括糖基化及非糖基化IL-1受體拮抗劑。特別是，IL-1受體拮抗劑及其變體的三種範例形式在 5,075,222專利中有揭示與説明。其中第一種稱爲”L-li"，其特徵爲在SDS-PAGE上之22-23 KD分子，等電點約爲4 · 8，由MonoQ FPLC管柱以約52 mM氣化鈉/Tris緩衝劑，pH 7·6 洗提出來。第二種，IL-lrayS，的特徵爲22-23 KD蛋白質，由MonoQ管柱以約48 mM氣化鈉洗提出。IL-lra以及IL-lra/?均爲經糖基化者。第三種，IL-lrax，其特徵爲20 kD蛋白質，由MonoQ管柱以約48 mM氣化鈉洗提出，爲非糖基化者。美國專利第5,075,222號也揭示出分離出编碼抑制劑的基因、在適當載體及細胞種類中選殖該基因、以及表現該基因以產生抑制劑的方法。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製諳於此技者會發現冊i除、嵌入及取代的許多組合（在本文中個別或集體地稱爲"變體"）可以在IL- lra-R胺基酸序列中完成，只要所得分子具有生物活性即可（如擁有影響本文所引一或多種疾病或失調的能力。）如本發明所涵蓋者，IL-lra-R多肽可作爲其他治療的佐劑服用，也可與其他適於治療該症狀的醫藥組合物一起服 -105- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1283683 A7 B7 五、發明說明（103) 用。IL-lra-R多肽及一或多種其它療法或藥學調配劑之任一可分別、依序或同時服用。在一特定實例中’本發明係有關IL -1 ra- R多肤與一或多種TNF抑制劑組合（治療前、治療後或與治療同步）以治療或預防本文所引之疾病及失調之用途。經.濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 此類TNF抑制劑包括可阻遏TNF活體内合成或細胞外釋放的化合物及蛋白質。在一特定實例中，本發明係有關IL-Ira- R多肤與一或多種下列TNF抑制劑組合（治療前、治療後或與治療同步）之用途：TNF結合蛋白質（可溶性TNF受體類型·Ι及可溶性TNF受體類型-II(”sTNFRs”），如本文所定義者）、抗-TNF抗體、粒細胞群落刺激因子、thalidomide、 BN 50730、替尼達普（tenidap)、E 5531、tiapafant PCA 4 2 4 8 、尼美舒利（nimesulide) 、panavir、咯利普蘭 (rolipram)、RP 73401、肽 T、MDL 201，449A、（1尺，38)-順-1-[9-(2,6-二胺基嘌呤基）]-3-羥基-4-環戊缔鹽酸鹽、 (1R，3R)-反-l-[9-(2,6-二胺基）嘌呤]-3·乙醯氧基環戊烷、（1R，3R)-反-1-(9-腺嘌呤基）-3-疊氮基環戊烷鹽酸鹽及 (1R，3R) -反-1_(6 -經基-嗓吟-9 -基）-3 -疊氮基環-戊燒。 TNF結合性蛋白質揭示於下列技藝中（美國專利第5，136,021 號；歐洲專利第 308378、422339、393438、398327、412486 、418014 、 433900 、 464533 、 512528 、 526905 、 568928 、 417563 號；PCT Pub· Nos· WO90/13575、WO 91/03553、WO 92/01002、WO 92/13095、WO 92/16221、WO 93/07863、WO 93/21946、WO 93/19777、WO 94/06476、PCT App. No. -106- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（1C)4) PCT/US97/12244 ;英國專利 GB 2218101 及2246569 ;及日本專利申請 JP 127,800/1991)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 例如，歐洲專利第393438及422339號敎導可溶性TNF受體類型1(也稱爲"sTNFR-In或30 kDa TNF抑制劑"）及可溶性 TNF受體類型11(也稱爲"sTNFR-II"或"40 kDa TNF抑制劑 π )，總稱爲” sTNFRs"，以及其改質形式（如片段、功能衍生物及變體）的胺基酸及核酸序列。歐洲專利第393438及 422339號也揭示負貴編碼抑制劑的基因、在適用載體及細胞種類中選殖基因及表現基因以產生抑制劑的方法。此外，也揭示sTNFR-1及sTNFR- II的多價形式（即含一種以上活性部分體的分子）。在一實例中，多價形式可經由化學偶合至少一 TNF抑制劑且另一部分偶合任一臨床可接受聯結劑，如聚乙二醇（PCT Pub. Nos. WO 92/16221 and WO 95/34326)，經由一肽聯結劑（Neve et al·，1996，Cytokine， 8365-70)，經由化學偶合於生物素上，隨後結合於抗生物素蛋白（PCT Pub.No. W0 91/03553 )，及最後，經由結合嵌合抗體分子（美國專利第5，116,964號；PCT Pub· Nos. W0 89/09622 和WO 91/16437 ;及歐洲專利第 315062號）。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製抗-TNF抗體包括 MAK 195F Fab 抗體（Holler et al·，1993, 1st International Symposium on Cytokines in Bone Marrow Transplantation 147)，CDP 571 抗-TNF 單株抗體（Rankin et al·，1995, Br. J. Rheumatol·，34:334-42)，BAY X 1351 鼠科抗腫瘤壞死因子單株抗體（Kieft et al·，1995，7th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases 9)； -107- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經·濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（1G5)

CenTNF cA2 抗-TNF 單株抗體（Elliott et al·，1994, Lancet， 344:1125-27; Elliott et al.，1994, Lancet，344:1105-10)。在一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與分泌或可溶之人類fas抗原或其重組版（PCT Pub· No. W0 96/20206;Mountz et al·，1995，J. Immunol·，155:4829-37 ;及歐洲專利第510691號）之組合使用。PCT Pub. No· WO 96/20206 揭示分泌型人類fas抗原（自然的及重組的，包括Ig融合蛋白質）、分離負貴編碼可溶重組人類fas抗原的基因之方法、在適用載體及細胞種類中選殖該基因的方法，及表現該基因以產生抑制劑的方法。歐洲專利第510691號敎導編碼人類 fas抗原，包括可溶fas抗原的核酸、表現該等核酸所用的載體、及經該載體轉染的轉形株。當非經腸服用時，分泌或可溶fas抗原融合蛋白質的劑量一般爲約1微克/公斤至約1〇〇微克/公斤。現行對本文所引疾病及失調，包括急性及慢性炎症如風濕病，的治療通常包括使用第一線藥來控制疼痛及發炎；彼等藥經分類爲非類固醇、抗炎藥（NSAIDs)。第二線治療包括皮質類固醇、慢作用抗風濕藥（SAARDs)，或疾病改變 (DM)藥。關於下列化合物的資訊可於The Merck Manual 〇 f Diagnosis and Therapy (16th ed· 1992)及Pharmaprojects ( PJB Publications Ltd)中找到 ° 在一特定實例中，本發明係有關IL-lr*a-R多肽及一或多種NSAIDs中之任一者治療本文所引疾病及失調，包括急性及慢性炎症如風濕病及移植對宿主疾病之用途。NSAIDs的 •108- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂·· 1283683 A7 B7 五、發明說明（1()6) 抗炎作用，至少部分，係源自對前列腺素合成的抑制 (Goodman and Gilman ， The Pharmacological Basis of Therapeutics(7th ed. 1985))°NSAIDs可依特性分爲爲九組： (1)水楊酸衍生物、（2)丙酸衍生物、（3)乙酸衍生物、（4) 滅酸（fenamic acid)衍生物、（5)叛酸衍生物、（6) 丁酸衍生物、（7)oxicams、（8)p比咬、及（9)说咬酮。在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種水揚酸衍生物、其前體藥物酯或藥學可接受鹽組合（治療前、治療後或與治療同步）之用途。此類水楊酸衍生物、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括：乙醯胺基水揚酸苯酯、阿洛西普林（aloxiprin)、阿斯匹林、撲炎痛（benorylate)、溴水楊醇、乙酿基水楊酸#5、膽驗三水揚酸鎂、水楊酸鍰、膽驗水楊酸、diflusinal、etersalate、芬多沙（fendosal)、龍膽酸、乙二醇水揚酸酯、咪唑水楊酸酯、離胺酸醋酸水揚酸酯、美沙拉嗪、嗎琳水楊酸醋、1 -茶基水揚酸酯、奥沙拉嗪（olsalazine)、parsalmide、苯基醋酸水楊酸g旨、苯基水揚酸酯、乙醯水楊醯胺、水楊醯胺0 -乙酸、salsalate、水楊酸鈉及柳氮磺吡啶。具相似止痛消炎屬性的結構相關水揚酸衍生物也屬於此組。在另一特定實例中，本發明係有.關IL-lra-R多肽與一或多種丙酸衍生物、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途。該丙酸衍生物、其前體藥物S旨及藥學可接受鹽包括：阿明洛芬（aimin〇pr〇fen)、苯惡洛芬(benoxaprofen) 、bucloxic acid 、carprofen 、 -109- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) ¾裝訂：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（1Q7) (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) dexindoprofen、非語洛芬（fenoprofen)、flunoxaprofen、 fluprofen、氟比洛芬（flurbiprofen)、furcloprofen、布洛芬 (ibuprofen)、布洛芬铭、ibuproxam、indoprofen、isoprofen 、酮丙酸（ketoprofen)、環氧溶芬（loxoprofen)、miroprofen 、荅斐階i(naproxen)、蕃普生納、奥沙普嗪（oxaprozin)、 piketoprofen、pimeprofen、p比丙芬（pirprofen)、泊來布洛芬 (pranoprofen) 、protizinic acid、pyridoxiprofen、舒洛芬 (suprofen)、苯塞丙酸（tiaprofenic acid)、和 tioxaprofen o 具相似止痛消炎屬性的結構相關丙酸衍生物也屬於此組。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在另一特定實例中，本發明係有關IL_lra-R多肽與一或多種乙酸衍生物、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途。該乙酸衍生物、其前體藥物醋及藥學可接受鹽包括：醋炎痛（acemetacin)、晞氯苯乙酸（alclofenac)、amfenac、丁苯乙月亏（bufexamac)、 cinmetacin、clopirac、delmetacin、環氟拉口秦却（diclofenac potassium)、環氟拉喚鈉、_ 咯酸（etodolac)、felbinac、二氯苯氧苯乙酸（fenclofenac)、fenclorac、fenclozic acid、雙苯塞酸（fentiazac)、furofenac、glucametacin、對異丁基苯乙酸、消炎痛（indomethacin)、isofezolac、isoxepac、lonazolac 、metiazinic acid、oxametacin、oxpinac、pimetacin、 proglumetacin、蘇靈大（sulindac)、talmetacin、tiaramide、 tiopinac、甲苯酿吨酸（tolmetin)、甲苯酿p比酸納、 zidometacin、和zomepirac。具相似止痛消炎屬性的結構相關乙酸衍生物也屬於此組。 -110- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 , , 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 發明說明（1C)8) 在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種滅酸衍生物、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途。該滅酸衍生物、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括·· enfenamic acid、依託芬那醋 (etofenamic acid)、氟芬那酸（flufenamic acid)、isonixin、 meclofenamid acid、meclofenamate sodium、medofenamic acid、甲滅酸（mefenamic acid)、niflumic acid、talniflumate 、terofenamate、tolfenamic acid、和 ufenamate。具相令乂止痛消炎屬性的結構相關fenamic酸衍生物也屬於此組。在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種羧酸衍生物、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途。該羧酸衍生物、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括：氣環茚酸（clidanac)、二氟苯水楊酸（diflunisal) 、flufenisal、inoridine、_ p各酸 (ketorolac)、和tinoridine。具相似止痛消炎屬性的結構相關叛酸衍生物也屬於此組。在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種丁酸衍生物、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途。該丁酸衍生物、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括：丁丙二苯肼（bumadizon)、 butibufen、聯苯丁酮酸（fenbufen)和xenbucin。具相似止痛消炎屬性的結構相關丁酸衍生物也屬於此組。在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種oxicams、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前 -111- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1283683 Α7 Β7 五、發明說明（1Q9) (請先閱讀背面之注咅3事項再填寫本頁) 、治療後或與治療同步）用途。該oxicams、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括：德羅喜康（droxicam)、enolicam、異喜康（isoxicam)、炎痛喜康（piroxicam)、sudoxicam、替諾喜康（tenoxicam)和4 -裡基_1，2_苯並井1，1-二氧化物4-(N-苯基）·羧醯胺。具相似止痛消炎屬性的結構相關 oxicams也屬於此組0 在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種吡唑、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途。該吡唑、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括：difenamizole、和甲p密淀咬（epirizole)。具相似止痛消炎屬性的結構相關吡唑也屬於此組。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種吡唑酮、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途。該吡唑酮、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括：炎爽痛（apazone)、阿紮丙_ (azapropazone)、benzpiperylon、戊烯保泰松（feprazone)、布他酮（mefebutazone) 、 morazone 、經基保泰松 (oxyphenbutazone)、苯基丁氮酮（phenylbutazone)、 pipebuzone、丙基非那酮（propylphenazone)、異丙基胺基比林（ramifenazone)、suxibuzone 及 thiazolinobutazone 〇具與 p比唑酮相似止痛消炎屬性的結構相關吡唑酮也屬於此組。在另一特定實例中，本發明係有關IL- lra-R多肽與下列一或多種組合（治療前、治療後或與治療同步）的用途： NSAIDs ： ε -乙醯胺基癸酸、S -腺苷基甲硫胺酸、3 -胺基· -112- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（110) 4 _ 經基丁酸、amixetrine、anitrazafen、antrafenine、苯 Θ丨酸 (bendazac)、苯〃5| 酸離胺酸酯、炎痛靜（benzydamine)、 beprozin、broperamole、布可龍（bucolome)、bufezolac、 ciproquazone、cloximate、dazidamine、deboxamet、detomidine 、difenpiramide、difenpyramide、difisalamine、雙苯峻醇 (ditazol)、emorfazone、fanetizole 甲續酸鹽、fenflumizole、氟 4氨苯醋（floctafenine)、flumizole、氟胺煙酸（flunixin)、甲叉茂（fluproquazone)、fopirtoline、fosfosal、guaimesal、 guaiazolene、isonixirn、利非他明（lefetamine)HCl、來氟米特（leflunomide)、lofemizole、lotifazole、lysin clonixinate 、meseclazone、審丁美酮（nabumetone)、nictindole、尼美舒利（nimesulide)、orgotein、orpanoxin、oxaceprol、oxapadol 、paranyline、perisoxal、perisoxal 擰檬酸鹽、pifoxime、 piproxen、pirazolac、pirfenidone、proquazone、proxazole、 thielavin B、 tiflamizole、timegadine、甲苯酿 p比洛乙酸 (tolectin)、tolpadol、tryptamid及下列公司碼數所指者： 480156S、AA861、AD1590、AFP802、AFP860、AI77B、 AP504、AU8001、BPPC、BW540C、CHINOIN 127、CN100、 EB382、EL508、F1044、FK-506、GV3658、ITF182、 KCNTEI6090、KME4、LA2851、MR714、MR897、MY309、 0N03144、PR823、PV102、PV108、R830、RS2131、SCR152 、SH440、SIR133、SPAS510、SQ27239、ST281、SY6001、 TA60、TAI-901(4-苯甲醯-1-二氧化茚羧酸）、TVX2706、 -113- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（111) U60257、UR2301及WY41770。具有與NSAIDs相似止痛消炎屬性的結構相關NSAIDs也屬於此組。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在另一特定實例中，本發明係有關IL- lra-R多肽與一或多種皮質類固醇、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途，以治療本文所引之疾病及失調，包括急性及慢性炎症，如風濕病、移植對宿主疾病及複發性硬化症。皮質類固醇、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括氫化可的松及由氫化可的松衍生的化合物，如 21-乙酿氧基孕甾缔 _ 醇、alclomerasone、algestone、 amcinonide、氯地米松、倍他米松、戊酸倍他米松、布地莕德（budesonide)、氣潑尼松、氣氟美松、丙酸氯氟美松、氣氟美松嗣、丁酸氣氟美松酮、clocortolone、cloprednol、皮甾酮、可的松、cortivazol、deflazacon、desonide、 desoximerasone、地塞米松、雙醋二氟松（diflorasone)、二氟米松（diflucortolone)、醋丁二氟龍（difluprednate)、甘草次酸、氟惡米松、flucloronide、氟甲松、新戊酸氟甲松、 flucinolone acetonide、9-去氟膚輕鬆（flunisolide)、氟新諾龍酉旨（fluocinonide)、fluorocinolone acetonide、fluocortin丁基、氟考龍（fluocortolone)、己酸氟考龍、戊酸二氟米松、氣甲龍、醋酸fluperolone、醋酸fluprednidene、氟強的松龍、 flurandenolide、formocortal、氣氟松、halometasone、醋酸 halopredone、氫可的松、氳化可的松、醋酸氫化可的松、丁酸氫化可的松、磷酸氫化可的松、氫化可的松2 1 -琥珀酸鈉、氫化可的松tebutate、mazipredone、甲經孕酮、 -114- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（112) meprednisone、甲基強的松龍、糠酸 mometasone、 paramethasone、prednicarbate、氫化波尼松、氫化波尼松 21-diedryaminoacetate、氳化波尼松磷酸鈉、氫化波尼松琥珀酸鈉、氫化波尼松21-m-磺安息香酸鈉、氫化波尼松21-硬脂乙醇酸鈉、氫化波尼松tebutat、氫化波尼松21-三甲基醋酸醋、強的松、prednival、prednylidene、prednylidene 21-二乙基氨醋酸酯、tixocortol、氟羥氫化潑尼松、氟羥氫化潑尼松丙_化物、氟經复化潑尼松benetonide及氣經氫化潑尼松己酮化物。具相似止痛消炎屬性的結構相關皮質類固醇也屬於此組。在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種慢作用抗風濕藥（SAARDs)或疾病改變抗風濕藥 (DMARDS)、其前體藥物酉旨或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途，以治療本文所引之疾病及失調，包括急性及慢性炎症，如風濕病、移植對宿主疾病及複發性硬化症。SAARDs或DMARDS、其前體藥物酯及藥學可接受鹽包括：別銅硫脲鈉、auranofin、金硫代葡萄糖、金硫代多糖代物、咪咬硫嗓呤、brequinar sodium、 bucillamine、3_金硫代_2_丙醇-1-磺酸鈣、苯丁酸氮芥、氣4、clobuzarit、cuproxoline、環磷酿胺、環孢子菌素、氨苯石風（dapsone)、15 -脱氧精液蛋白、diacerein、葡萄糖胺、金鹽（如環喳金鹽、硫代蘋果酸鈉金、硫代硫酸金鈉），羥氯喳、羥氣喹硫酸鹽、羥基脲、酮保泰松、左咪唑、 lobenzarit、蜂毒素、6_巯基嘌呤、甲氨蝶呤、mizoribine、 -115- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 1283683 A7 B7 五、發明說明（113) mycophenolate mofetil、金硫乙酸#5、氮齐末、D-青黴胺、吡啶酚咪唑如SKNF86002及SB203580、雷帕黴素、硫醇、胸腺產生素及長春新鹼。具相似止痛消炎屬性的結構相關 SAARDs或DMARDS也屬於此組。在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種C0X2抑制劑、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途，以治療本文所引之疾病及失調，包括急性及慢性炎症。C0X2抑制劑、其前體藥物酯及藥學可接受鹽的例子包括如celecoxib。具相似止痛消炎屬性的結構相關C0X2也屬於此組。在另一特定實例中，本發明係有關IL-lra-R多肽與一或多種抗微生物劑、其前體藥物酯或藥學可接受鹽的組合（治療前、治療後或與治療同步）用途，以治療本文所引之疾病及失調，包括急性及慢性炎症。抗微生物劑包括如廣闊的青黴素，頭孢菌素及其它卢-内醯胺等類、胺基糖苷類、唑類、喹諾酮、大環内酯物、利福黴素、四環素、磺胺藥物、lincosamides及多粘菌素。青黴素包括但不限於青黴素G 、青黴素V、二甲氧苯青黴素、乙氧奈胺青黴素、苯甲異噁唑青黴素、氣灑西林、二氣青黴素、氟氣青黴素、氨比西林、氨比西林/sulbactam、阿摩西林、阿摩西林 /clavulanate、縮酮氨下青黴素、氨環已青黴素、氨下青黴素甲戊酯、羧苄青黴素、羧苄青黴素茚滿基、羧嘧吩青黴素、致p塞吩青黴素/ clavulanate、阿洛西林、梅茲洛西林、 peperacillin、及氮卓脒青黴素。頭孢菌素及其它卢-内酿胺 -116- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（114) 包括但不限於先鋒黴素、頭孢吡硫、頭孢氨苄、環已烯胺頭孢菌素、頭孢黴素V、頭孢羥氨下、氯氨下頭孢菌素、頭孢裎峻、頭孢雙硫也甲氧、頭抱甲氧黴素、ceruroxime、鹽沼、ceforadine、cefixime、氨中塞B頭孢菌素、經叛氧醯胺菌素、去曱塞月亏頭孢菌素、cetriaxone、cephoperazone、頭孢塞甲幾Μ、imipenem及aztreonam。胺基糖嘗類包括但不限於鏈黴素、慶大黴素、托普黴素、氨丁卡黴素、乙基西梭黴素、卡那徽素及新黴素峻包括但不限制於fluconazole。 4諾酮包括但不限制於蕃淀酸、氟孤酸、enoxacin、捲鬚黴素、p此淀幾黴素、sparfloxacin及temafloxacin。大環内醋包括但不限於紅黴素（erythomycin)、螺旋黴素及azithromycin 。利福黴素包括但不限制於利福平。四環素包括但不限制於spicycline、氣四環素、羥甲金黴素、去甲金黴素、脱氧土黴素、胍孤四環素、賴氨> 甲四環素、meclocycline、甲婦土黴素、二甲胺四環素、土黴素、青黴素v鉀呱四環素、 pipacycline、吡甲四環素、脱甲脱氧四環素、senociclin及四環素。磺胺藥物包括但不限制於磺胺、磺胺甲基異崎唑、乙醯磺胺、磺胺嘧啶、磺胺異嘧唑及共三異哼唑（甲氧苄氨喊症/續胺甲基異吟吐）。lincosamides包括但不限制於氣林可黴素及林肯黴素。多粘菌素（多肽）包括但不限制於多粘菌素B及黏菌素。 IL- lra-R多肽功能的激動劑或拮抗劑可（同時或依序）與一或多種細胞介素、生長因子、抗生素、抗炎藥、及/或化學治療劑組合使用，只要對於需治療的狀況恰當即可。 -117- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂·· 1283683 經濟部替慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（115) 其他由一或多種IL_1、IL-lra或IL-lra-R多肽之不當水平所引發或媒介的疾病也在本發明範圍之内。不當水平包括過量水平的IL-1、IL-lra或IL-lra-R多肽及低於正常水平的 IL-1、IL-lra 或 IL-lra_R 多肽。 IL-lra-R核酸及多肽的用途本發明核酸分子（包括自身沒有編碼生物活性多肽者）可用以標出IL-lra-R基因及相關基因在染色體上的圖位。標圖可經由本技藝中已知技術來實現，如PCr擴增及原位雜交。 IL-lra-R核酸分子（包括自身沒有編碼生物活性多肽者）可用爲雜交探針，該探針而用於診斷檢定以，於定性上或疋量上’測定IL -1 ra- R核酸分子在哺乳動物組織或體液樣品中的存在。當需要抑制一或多種IL - Ira- R多肽活性時，也可使用其他方法。此類抑制可經由對表現控制序列（三螺旋形成）或 IL-lra-R mRNA爲互補及可雜交的核酸分子來實現。例如，反義DNA或RNA分子，其具與至少IL-lra-R基因部分爲互補，可導入至細胞。反有意義探針可經由已有技術來設計，使用本文所透露之IL-lra-R基因序列。通常每個此類反有意義分子與每個選定IL-lra-R基因起始部位（5,端）互補。當反有意義分子隨後與相應的IL _ Ira- R信使核糖核酸雜父時’該信使核糖核酸的轉譯被預防或降低了。反有意義抑制劑提出與在細胞或有機體内IL-lra-R多肽的降低或不存在相關的資訊。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -118-

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五、發明說明（116) 另外’基因療法可用來產生一或多種JL- lra_R多肽的主要爲陰性的抑制劑。在這個情況下，編碼每個選定IL _ lra_ R多肽的突變多肽的DNA可製備好，並導入至病人的細胞内，這是經由本文所述病毒或非病毒方法來實現的。每個此類突變通常設計以與内源多肽的生物作用相激動.。此外，IL-lra-R多肽無論爲生物或非活性，可用作免疫原，即多肽含至少一產生抗體的抗原決定部位。連接於IL _ Ira- R多肽（如本文所述）的選擇結合劑可用於活體内及生物體外診斷目的，包括但不限於，以標記形式使用來檢測iL-lra_ R多肽在體液或細胞樣品内的存在。該抗體也可用以預防、治療或診斷一些疾病及失調，包括本文所引。該抗體可連接於IL - lra-R多肽，以使IL - lra-R多肽至少一種活性特性最小化或受阻遏，或連接於多肽上，以增加IL · ira- R 多肽至少一種活性特性（包括增加IL-lra-R多肽之藥物代謝動力學）。本發明IL-lra-R多肽可用以選殖IL-lra-R多肽受體，所用方法爲表現選殖技術。放射性同位素標記（125破）IL - Ira-R多肽或親和性/活性標兹、IL - Ira- R多肽（如F c融合或驗性磷酸酶融合）可用以連接檢定，以辨識細胞種類或細胞系或組織，該物質表現IL-lra-R多肽受體。由此類細胞或組織中分離出的RNA可轉換爲cDNA，選殖入哺乳動物表現載體内，轉染入哺乳動物細胞（如COS或293細胞）中產生表現庫。經放射性同位素標記或經標誌的IL-lra-R多肽可隨後用作親和性配位體來由該庫中鑑別及分離出可在其表面上表 -119- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

裝經•濟部智慧財產局員工消費合作社印製經*濟部替慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（117) 現出IL-lra-R多肽受體的細胞子集（subset)。隨後可由彼等細胞分離出DNA，轉染入哺乳動物細胞中，以產生第二表現庫，其中可表現IL - Ira· R多肽受體的細胞比例較在原庫中者大許多倍。此增濃過程可不斷重復，直到含IL_lr*a-R 多肽受體的單一重組選殖係分離出來爲止。IL-lra-R多肽受體的分離可用來鑑別或開發新的IL- lra-R多肽信號通道之激動劑及拮抗劑。此類激動劑及拮抗劑包括可溶性IL -lra-R多肽受體、抗-IL-lra_R多肽受體抗體、小分子或反義低聚核苷酸、且彼等可用以治療、預防或診斷一或多種本文所述疾病或失調。編碼人類IL-lra-R多肽的cDNA的存庫，Accession No. PTA- 1423，已由 American Type Culture Collection(ATCC)， 10801 University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209 在 2000年二月29日完成。下面的實施例意欲僅爲闡明目的所用，而絕不應視爲用來限制本發明的範圍者。實施例1 :人類IL-lra-R多肽基因的選殖概括地，係使用Sambrook et al.，supra中所述物質及方法來選殖及分析編碼人類IL-lra-R多肽的基因。爲了分離編碼人類IL-lra-R多肽的cDNA序列，乃使用殖株shosl-00003-dl作爲詢問序列進行對專業資料庫的搜尋 (Amgen，Thousand Oaks, CA) 〇發現以此法鑑別出之一 423 bp序列與詢問序列在胺基酸水平上共有4 1 %的同一性。使用在該序列中有最高同一率的區經由各種PCR技術來設計 -120- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 1283683 A7 B7 五、發明說明（118) 基因特定低聚核苷酸以鑑別出cDNA源及cDNA選殖體的產生。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 用許多cDNA庫在如下述的擴增反應中分析：含1 0毫微克的cDNA庫模板DNA、1 0毫微莫耳的各擴增體2349- 9 8 ( 5 ·-C-A-C-A-C-G-C-T-T-C-A-C-C-T-T-C-T-T-T-C-C-A-G-3，； SEQ ID NO : 20)和 2349_99(5，-T-A-A-A-A-C-T-T-G-G_T-A-C-G-G_G-C-T-G-A-G-G-G-3· ; SEQID NO : 21)、及就緒的 PCR 珠粒（Amersham-Pharmacia， Piscataway，NJ) (Pharmacia，Piscataway，NJ)，總反應體積 25 微升。反應是在9 5 °C下進行5分鐘一循環；9 5 °C下1 5秒、 6 3 °C下15秒、和72 °C下1分鐘爲30循環；72 °C下10分鐘一循環。在許多cDNA庫中鑑別出預期大小（153 bp)的PCR產物，包括人類胚胎頭皮（經低聚-dT引導者（primed))及人類胎盤（經低聚-dT引導及隨機引導者）。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製胚胎頭皮及胎盤cDNA庫可依下述來製備。由人類胚胎頭皮及人類胎盤中使用標準RNA提取程序提取出總RNA，並由此總RNA使用標準程序選擇出聚-A + RNA。由該聚-A + RNA 使用 Superscript Plasmid System for cDNA 及 Plasmid Cloning kit(Gibco-BRL)根據生產商所建議的草案或其他適當的程序來合成經隨機引導或經低聚-dT引導之cDNA。用恰當的限制酶消化所得cDNA，隨後連接到pSPORT· 1或其他適當的選殖載體内。將連接產物使用標準技術轉形到大腸桿菌内，並在含氨比西林、四環素、卡那徽素或氣黴素 121 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683

五、發明說明（119) 中任一者的培養板上選擇細菌轉形體。cDNA庫包括彼等轉形體的所有或一子集。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 進行y RACE及3· RACE兩反應以產生IL-lra-R多肽之全長cDNA序列。爲了分離對應於IL-lra-R多肽cDNA序列5, 端的cDNA序列，進行5，RACE，其中在pSPORTl中使用10 毫微克的經低聚-dT引導人類胚胎頭皮cDNA庫，及引子

1572-3 6(5’-G-T-G-T-G-G-A-A-T-T-G-T-G-A-G-C-G-G-A-T-A-A-C-3· ; SEQ ID NO : 22)及 2349-99。反應係在94°C下進行1分鐘i循環；94。(：下5秒及72Ό下5分鐘5 個循環；94Ό下5秒、7(TC下10秒及72°C下3分鐘5個循環 ;9 4 Ό下5秒、6 8。(：下1 0秒及7 2 °C下3分鐘2 5個循環；及 7 2°C下7分鐘1個循環。套式pcR(Nested PCR)是使用一部分 5’ RACE擴增產物及引子zsSS-Piy'-C-T-A-T-G-A-C-C-A-T-G-A-T-T-A-C-G-C-C-A-A-G-C-S· ;SEQ ID NO : 23)&235 1 -47(5、G-C-T-G-T-A_C-T-G-G-C-T-G-C-T-G-G-G-G-C-3’ ； SEQ ID NO : 24)。套式PCR的進行是在94°C下1分鐘1個循環；94°C下5秒及72Ό下5分鐘5個循環；94X：下5秒、7(TC下10秒及72°C下3分鐘5個循環； 9 4 °C下5秒、6 8 °C下1 0秒及7 2 下3分鐘2 5個循環；7 2 Τ 經濟部替慧財產局員工消費合作社印製下7分鐘1個循環。爲了分離對應於IL-lra-R多肽之cDNA序列3’端的cDNA序列，乃進行3 · RACE，其中係在pSPORTl中使用1 0毫微克的經低聚-dT引導人類胚胎頭皮cDNA庫，及引子2351-48 (5’-C-C-T-T-C-A-G-G-C-T-T-G-A-G-G-C-T-G-C-T-G- -122- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 五、發明說明（12〇) 3’ ； SEQ ID NO ·· 25)及 2329-93 (5，-C-G-G-G-C-C-T-C· T-T-C-G-C-T-A-T-T-A-C-G-C-3· ; SEQ ID NO : 26)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 反應在94°C下進行1分鐘1個循環；94°C下5秒及72°C下5 分鐘5個循環；94t下5秒、7〇。〇下1〇秒及72。〇下3分鐘5 個循環；94 °C下5秒、68 eC下10秒及72X：下3分鐘25個循壤；及72。(：下7分鐘i個循環。套式PCr是使用3, RACE擴增產物引子 2363-04(5，-(：-(：-1^-〇-(：-1'-〇-〇-丁-1[-(：- C-T-G-T-G-T-G-G-C-3· ; SEQ ID NO : 27)及 2329- sms’-t-g-g-cng-a-a-a-g-g-g-g-g-a-t-g-t-g- C_T_G_3、SEQ ID NO : 2 8)。套式PCR的進行是在 95°c 下 1分鐘1個循環；95°C下30秒及68°C下1分鐘30個循環； 6 8 C下7分鐘1個循環。由所得5，rACe及3 , race選殖體集合組合成IL-lra-R多肽之全長cdnA序列。 IL-lra-R多肽之cDNA序列的5，部分經由從人類胎盤

MarathonTM CDNA庫（Clontech)中獨立地分離出cDNA序列來確定。爲了分離對應於IL_ira_R多肽之cDna 5,端的cDNA 序列’乃進行5’ RACE，其中使用i毫微克的人類胎盤cDNA 及引子人？-1(5，-(：-(：-八-11-(：-(：-1'-八-八-1'-八-(：-0-八-(：- T-C.A-C-T-A-T-A-G-G-G-C-3, ; SEQ ID NO ： 29 ；經濟部替慧財產局員工消費合作社印製

Clontech) & 2353-87(5、C-C-T-T-G-G-T-G-A-G-C-T- G-T-A-C-T-G-G-C-T-G-3’ ； SEQ ID NO : 30)。反應的進行是在94C下2分鐘1個循環；94°c下5秒及72t下ι·5 分鐘5個循環；94。(：下5秒、7〇。(：下1.5分鐘5個循環；94 C下5秒及6 8乇下1 · 5分鐘2 5個循環；8 6 X：下7分鐘1個循 123- 本紐尺度剌中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) 經濟部替慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7

五、發明說明（121 ) 每。套式PCR的進行係使用一部分的5, race擴增產物引子 AP - 1 & 2349-52(5，-C-C-G-G-G.C-C-A-C-A-C-A-G· G_A_A_C_C_A_3· ; SEQ ID NO : 31)。套式PCR的進行是在94 C下2分鐘1個循環；94 °C下10秒及68 Ό下1.5分鐘 3 0個循環；及68 °C下7分鐘1個循環。人類IL- lra-R多肽的預測cdNA序列之序列分析表明該基因含456 bp開放讀碼架構，編碼一含152個胺基酸的蛋白質 (圖1 A-1B)。也鑑別出人類iL_lra_R多肽的一序列變體。該變體的序列分析指出此變體的基因也含456 bp開放讀碼架構，編碼一含152個胺基酸的蛋白質（圖2A-2B)。該變體的核苷酸序列與人類IL- lra-R基因的核甞酸序列在兩個核嘗故的位置上不相同。圖4A-4B闡示出下列胺基酸序列的排列：人類乩-1 ^(IL-l—α ; SEQ ID NO : 7)、人類IL-1 (IL-1 一; SEQ ID NO ·· 8)、人類IL-1受體拮抗劑（IL-1RA ; SEQ ID NO : 9)、人類 IL-1 β (IL-1 一 i ; SEQ ID NO : 10)、人類 IL-lra-R 多肽（几-lra-R : SEQ ID NO : 2)、人類 Tango-77(Tango-77 ; SEQ ID NO : 11)、人類 Zilla4(Zilla4 : SEQ ID NO : 12)、人類 IL-U (IL_1—$ ; SEQ ID NO : 13)、人類 IL-1 受體拮抗劑/?(几· IRAj ; SEQ ID NO : 14)、人類 SPOIL II(Spoil_II ; SEQ ID NO : 15)、人類 IL-1 ε (IL-1—ε ; SEQ ID NO : 16)及人類 IL-1 77 (IL-l—7； ; SEQ ID NO ·· 17)。圖 5 以圖表闡釋IL-lra基因族的種系發生關係。實施例2 :人類IL-lra-R多肽基因接合變體的選殖 -124- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部A曰慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（122) 概擴地，係使用Sambrook et al· Supra中所述物質及方法以選殖及分析編碼人類IL-lra-R多肽接合變體的基因。編碼人類IL- lra-R多肽接合變體的全長cDNA序列可由人類胎盤cDNA庫中分離，其製備如下述。使用標準RNA提取過程由人類胎盤中提取總RNA，並使用標準程序由該總 RNA中選擇出聚-A+ RNA。經低聚-dT引導cDNA係由該聚 -A+ RNA 使用 Superscipt Plasmid System for cDNA 及 Plasmid Cloning kit(Gibco-BRL)根據生產商所建議的草案，或其他適當的過程來合成。用Not I消化所得cDNA，且隨後在〇 . 8 °/。的瓊脂糖凝膠上電泳分部分離。分離出0.8至1 · 6 kb 諸片段，純化，然後連接於pSPORT-1。使用標準技術將連接產物轉形到大腸桿菌内，並在含氨比西林的培養板上選擇出細菌轉形株。將所得轉形株合併成池（pool)，以產生 cDNA庫，並由1 2個此種cDNA庫的池（每個含約80,000個群落）製得質體DNA。對每個cDNA庫池以擴增反應進行分析，其中含1 0毫微克的模板DNA、濃度各爲0·4 μΜ的擴增體2349-9 8及2349-9 9 、及備妥的PCR珠粒，反應總量爲25微升。反應的進行是在94°C下5分鐘1個循環；94Ό下30秒、65°C下30秒及72 Ό下1分鐘3 0個循環；72 °C下1 0分鐘1個循環。cDNA庫池的分析也可在含下列物質的擴增反應中進行：1 〇毫微克模板 DNA、濃度均爲 0·4 μΜ 的擴增體 2349-5 1 (5.-A-A-G-A-G-G-C-C-A-C-A-C-G-C-T-T-C-A-C-C-T-T-C-T-3， ;SEQ ID NO : 32)及2349-52、備妥的PCR珠粒，反應總體 -125- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（123) 積爲25微升。反應是在94°C下5分鐘1個循環；94χ：Τ3〇秒、65°C下3 0秒及72。(：下1分鐘3 0個猶環；72。(：下1〇分鐘1個循環。在彼等反應中所得PCR產物隨後在瓊脂糖凝膠上分析。來自二個池的質體DNA產生具期望大小的pcR產物，並對對由每個彼等陽性池中所得3 X 1〇5選殖株用使用擴增體2349-9 8及2349-99的？0尺來篩選。將1>(^產生的？(：^產物之一（zhvt_00〇329)用32P-dCTP予以標記，並用作探針來重新篩選陽性cDNA庫池。將細菌群落平板培養（在每15〇 mm 板上約50,000個），且隨後升置於硝酸纖維素濾紙上。將諸濾紙在68Ό下，於ExpressHyb雜交溶液（Clontech)中預雜交 3 0分鐘，隨後在6 8 C下，相同溶液中於添加經標記探針下雜X整夜6雜交後’在室溫下，置於2X SSC及0.05 % SDS中清洗二次達10分鐘，然後在68°C下，在Ο.ιχ SSC及 0.1% SDS中清洗濾紙3 0分鐘二次、然後將諸濾紙在-8(^c 下曝露於強化螢幕進行自動放射顯影術2個小時。由諸 cDN A庫池之一中鑑別出含一約1 · 2 kb嵌體的陽性選殖體 (RDS#199918503)。由另一 cDNA庫池中鑑別出含一約〇 8 kb 嵌入的第二陽性選殖體（RDS#1999185〇1)。由每一.該等選殖體製備質體DNA，並分析其序列。對彼等選殖體之一的預測cDNA序列之序列分析指出cdNA 編碼一人類IL· Ira-R多肽變體（參閲實施例1)。編碼該變體的基因包含513 bp開放讀碼架構，其編碼一含171胺基酸的蛋白質（圖式3 )。 -126· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) : 經濟部昝慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（124) 含IL- lra-R基因的人類基因組序列（Genbank Accession

No· AC016724, contig· fragment 76649-96342)的序列分析指 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 出，IL - Ira- R基因（參閲實施例1 )的第一表現序列係位於 IL_1 Ω (Genbank Accession No· Z300050)的最後表現序列的下游4 · 1 kb處。這兩個基因在基因組中的極爲接近情況指出本發明多肽的產生可能是經由將IL - 1 Ω的頭兩個表現序列接合（或融合）至IL - Ira- R多肽的第二個表現序列，或其變體（參閲實施例1)之上而產生的。此IL-1 ra- R多肤變體可因此爲一 IL - lra-R接合變體、融合蛋白質或類似物。IL-1〇的第二表現序列與IL - Ira-R基因的第二表現序列（或其一變體）之並置產生一序列，其編碼一具N端且似乎作爲信號肽的蛋白質。圖6以圖表解釋了人類iL-lra-R多肽（成熟 CS329)、人類IL - Ira- R多肽序列變體（成熟CS329變體蛋白質）、及人類IL-lra-R多肽接合變體（Ω 329蛋白質）之間的關係。實施例3 :鼠科IL-lra-R多肤基因的選殖概括地，係使用Sambrook et al· Supra中所述物質及方法來 ilt殖及分析編碼鼠科IL - lra-R多肤的基因。爲了分離編碼鼠科IL - 1 ra- R多肤的cDNA序列，使用一 η 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製天鼠胚胎cDNA庫模板及擴增體2557-9 5 (5，-A-A-G_C_C：_ T-T-T-T-T-C-T-T-C-T-T-T-G-C-C-T-C-A-G-T-G-3· ;SEQ ID NO : 33)和 2557-96(5'-T_G_C-C-A_T-T-T-A_ A-T-G-T-A-A-C-A-G-G-T-C-A-C-A-G-31 ； SEQ ID NO ·· 34)以標準技術進行PCR。 -127- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

1283683 第089126233號專利申請案中文說明書替換頁(92年11月）五、發明説明（125) 對鼠科I L - Ira- R多肽的預測CDNA序列之序列分析指出該基因含456 bp開放讀碼架構，其編碼含152個胺基酸的蛋白質（圖7”圖8闡示人類IL-lra-R多肽（人類IL-lra，R ; SEQ ID NO : 2)及鼠科 IL - lra-R 多肽（mulIL- lra-R ; SEQ ID NO : 36)的胺基酸序列併列。圖9A-9I闡示鼠科IL-lra-R基因的基因組核甞酸序列（SEQ ID NO : 37)。其中指示出表現序列1—4的密瑀鄯分之位置（下劃線)。實施例4 : IL-lra-R mRNA之裊現 IL-lra-R mRNA的表現係經由PCR在擴增反應中檢查，擴增反應含10毫微克的cDNA庫模板DNA，10毫微莫耳的擴增體2349-98及2349-99、及備妥PCR珠粒，總反應體積為 25微升。反應的進行為在95 °C下5分鐘1個循環；95 °C下15 秒、63°C下15秒及72°C下1分鐘3 0個循環；72°C下10分鐘 1個循環。在許多cDNA庫，包括人類胚胎頭皮、人類胚胎眼睛、人類膽囊及人類胎盤中鑑別出具期望大小（153 bp)的 PCR產物IL· lra-R mRNA表現的檢測也可在胚胎眼睛及胚胎脾中，經由RT-PCR，使用擴增體2349- 5 1及2349- 52及 T i ta η系統（Boehringer)完成。彼等反應的進行是在55°C下 30分鐘1個循環；94°C下15秒、64°C下15秒及68°C下50 秒（每個循環增加2秒）30個循環；68 °C下7分鐘1個循環。 IL-lra-R-mRNA的表現係以Northern點潰分析，使用人類和小鼠核RNA點潰（Clontech)來檢查。彼等潰點首先是在6 5 °C下在Pre-Hyb溶液（Amersham)中預雜交3〇分鐘，然後在 128- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1283683 綠濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（） 65°C下，相同的含25毫微克32P-標記探針的溶液中探查整夜，其中該探針是對應於編碼IL - Ira- R多肽之cDNA序列的 1 -474核替酸。探針是使用 Redi Prime II kit (Pharmacia)予以標記。雜交後，在6X SSC及0.1% SDS中清洗潰點1小時兩次，在2XSSC及〇· 1 % SDS中清洗1小時兩次，在〇.2X SSC及 0.1 % SDS中清洗3 0分鐘兩次，然後在2X SSC中洗清。將 Northern潰點曝露於磷成像劑中整夜後，在鼠骨骼肌中檢測到一約1.6 kb的轉錄本（圖10A)，在人類的胰及周圍白血球中檢測到一約2 · 9 kb的轉錄本（圖10B及10C)。在對使用相同探針的點式點潰（Clontech)分析中，在鼠類骨骼肌、下顎腺及附睾中檢測到IL Ira- R mRNA。 IL- lra-R mRNA的表現係經由原位雜交來定位。將一組正常的胚胎及成鼠組織固定於4%的多聚甲醛中，埋置於石蠟中，並切成5微米片。將切片組織置於0.2 M HC1中進行可透化，用蛋白酶Κ消化，及用三乙醇胺及乙酸酐加入乙醯基。將切片在6(TC下1小時，雜交溶液中（300 mM NaCl ，20 mM Tris-HCl、Ph 8·0，5 mM EDTA，IX Denhardfs溶液，0.2% SDS，10 mM DTT，0·25 毫克 / 毫升 tRNA，2 5 微克 / 毫升聚A，25微克/毫升聚C及5 0%甲醯胺）預雜交，然後在 60°C，含10%葡聚糖及2xl04cpm/微升的與人類IL-lra-R 基因互補的33-P標記反義核探針的相同溶液中雜交整夜。核探針是經由使用標準技術，在試管内轉錄含人類IL-lra-R cDNA序列的選殖體而得到的。 -129- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經'濟部批曰慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 _^B7_ 五、發明說明（127) 雜交後，在雜交溶液中清洗切片，用核糖核酸酶A處理以消化未雜交探針，然後在〇 · IX SSC 5 5 °C下清洗3 0分鐘。隨後將切片浸泡於NTB-2乳液（Kodak，Rochester，NY)中，在4 °C下曝光3個星期，顯影，再用蘇木素及曙紅複染色。經由對下列組織以暗視域及標準照明同時分析組織形態及雜交信號：腦部（一矢狀缝及兩個冠狀切片）、腸胃道（食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、最近的結腸、及結腸末梢）、垂體、肝臟、肺、心臟、脾、胸腺、淋巴結、腎、腎上腺、膀胱、胰腺、唾液腺、男性及女性生殖器官（女性卵巢、輸卵管、及子宮；及男性睾丸、附睾、前列腺、精囊、及輸精管）、BAT及WAT(皮下、周圍）、骨骼（大腿骨）、皮膚、乳房、及骨骼肌。實施例5 ·· IL-lra-R多肽的產生 A. IL-lra-R多肽在細菌内的表現經由PCR使用對應於序列5'及3'端的引子以擴增編碼IL-lra-R多肽的模板DNA序列。擴增後的DNA產物可經改質以包含限制酵素部位而促成嵌至表現載體内。將PCR產物凝膠純化後，使用標準重組DNA方法嵌至表現載體内。一範例載體，如含lux啓動子及編碼卡那徽素抵抗基因的pAMG21 (ATCC ηο·98113)，經用Bam HI及Nde I消化以用於經嵌入的 DNA之方向選殖。將連接混合物經由電穿孔轉形到大腸样 Λ 菌宿主株中，並依卡那徽素抵抗性來選擇轉形體。將由選定群落中所得質體DNA分離後，進行DNA序列分析以確定嵌體的存在。 -130- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683

五、發明說明（128) 將轉形後的宿主細胞在謗導前，先在含3〇微克/毫升卡那黴素的2xYT培養基中，在3 0 下保溫培養。基因表現的謗導是經由加入N-(3-酮基己醯基）_dl-高絲胺酸内酯至3〇微克/毫升之最終濃度，然後在30。(：下或37T下保溫培養6個小時。IL- Ira-R多肽表現是經由將培養基離心、將細菌沉丸重懸浮及溶裂，並以SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳分析宿主細胞蛋白質來評估的。含IL · 1 ra- R多肤的包涵體係經純化如下。將細菌細胞經由離心沉丸並在水中重懸浮。將細胞懸浮液經由超聲波降解而溶裂並經由以195,000 xg離心5至10分鐘予以沉丸。丟棄上澄液，清洗小球，並轉移至勻化器中。將沉丸置於5毫升Percoll溶液（7 5 %液體Percoll及0· 15 Μ氣化鋼）中勻化直到均句地懸浮，然後稀釋，並以21，600 xg離心30分鐘。收取含内涵體的梯度部分並合併。分離出的内涵體再用SDS-PAGE來分析。將對應於大腸桿菌產生之IL-lra-R多肤的SDS聚丙缔酿胺凝膠中的單一帶從凝膠切下，且基本上如Matsudaira e t al·，1987, J· Biol. Chem. 262:10-35中所述測定N-端胺基酸序列。 B · IL -1 r a _ R多肽在哺乳動物細胞中的表現經由PCR使用與該序列5 ·及3，端對應的引子擴增編碼IL Ira- R多肽的模板DNA序列。將經擴增的DNA產物改質以包含限制酵素部位，以促成嵌至表現載體中。將PCR產物凝膠純化後，使用標準重組DNA方法嵌至表現載體内。一範 -131 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（129) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 例載體，pCEP4(Invitrogen，Carlsbad，CA)，包含一 Epstein-Barr病毒複製源，可用以在293_EBNA-1細胞中表現IL-lra-R多肽。將擴增及凝膠純化後的PCR產物連接到pCEP4載體上，並經由脂染（lipofection)導至293-EBNA細胞内。將該轉染細胞置於100微克/毫升濕黴素中選擇，並將所得抗藥性培養物生長至匯合。隨後將細胞置於無血清的培養基中培養72個小時。取出處理過的基後，經由SDS-PAGE分析IL-lra-R多肽表現。 IL-lra-R多肽表現可經由銀染著來偵檢。另外，將IL-lra-R多肽產生爲一具抗原決定部位標記的融合蛋白質，如 IgG恒定區或一 FLAG抗原決定部位，其可使用針對肽標記的抗體經由Western點潰分析法來偵檢。 IL-lra-R多肽可從SDS-聚丙晞醯胺凝膠上切出，或者將 IL-lra-R融合蛋白質經由針對抗原決定部位標記的親和性層析術來純化，並施以本文所述N-端胺基酸序列分析。 C. IL-lra-R多肽在哺乳動物細胞内的表現及純化 :·· 將IL-Ira-R多肽表現構成物使用脂染或磷酸鈣草案導至 293 EBNA或CH0細胞中。經濟部昝慧財產局員工消費合作社印製爲了對所產生的IL-lra-R多肽進行功能研究，乃由一池經濕黴素選擇的293 EBNA選殖體產生大量的處理過培養基。將細胞置於500公分Nunc Triple Flasks中培養至80 %匯合率，轉到無血清培養基中培養一星期再收取培養基。將獲得之經處理培養基置於-20°C下冷凍至純化爲止。 -132- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五 . - 鳞濟部智慧財產局員工消費合作社印製發明說明（13G) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 處理過的培養基依下述經由親和性層析術進行純化。解凍培養基，然後經由0.2微米濾器。用PBS平衡蛋白質〇管柱到pH 7.0，然後裝載過濾後的培養基。用PBS清洗該管柱直到Amo的吸光度達到基線。il- lra-R多肽係用〇 1 M甘胺酸- HC1在pH 2.7時從管柱中洗提出，並立即用iM Tris_ HC1中和到pH 8.5。將含IL- lra-R多肽的液份合併，在pbs 中透析，並貯存在-7(TC。對於人類IL-lra-R多肽-Fc融合多肽之因子xa切斷，係將經親和性層析純化的蛋白質在50 mM Tris-HCl、1〇〇 mM 氣化鈉、2 mM氣化鈣在pH 8.0透析。將限制蛋白酶因子Xa 以l/100(w/w)加入至透析過的蛋白質中，並將樣品在室溫下消化整夜。實施例6 ··抗-IL-1 ra-R多肽抗體的產生針對IL - Ira- R多肽的抗體可經由用純化蛋白質或用由生物或化學合成產生的IL-lra-R多肽進行免疫化而獲得。適用於產生抗體的程序包括Hudson and Bay，Practical Immunology(2nd ed.，Blackwell Scientific Publications)中所述者。在一產生抗體的程序中，係對動物（通常爲小鼠或兔）注射IL-lra-R抗原（如IL-lra-R多肽），並選出經由ELISA確定具足夠血清濃度水平者以進行融合瘤產生。收集並製備免疫過的動物的脾並製備單細胞懸浮液以由其中收取脾細胞。將脾細胞融合入小鼠骨髓瘤細胞中（如Sp2/0-Agl4細胞），首先在DMEM中用200 U/mL青黴素、200微克/亳升的鏈黴素 •133- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683

五、發明說明（131) 硫酸鹽及4 mM榖胺醯胺中保溫培養，並於隨後在HAT選擇培養基（次黃嘌呤、氨喋呤、及胸甞）中保溫培養。選擇後，由每個融合洞中取出組織培養物上澄液，經由ELIS A測試抗-IL-lra-R抗體產生。也可以使用另一種獲得抗-1L - Ira- R抗體的程序，如將固著人類I g基因座的轉殖基因型小鼠免疫化以產生人類抗體 ’及篩選合成抗體庫，如經由抗體變異性功能部位突轉形成所產生者。 IL-lra-R多肽的抗體可經由用在大腸桿菌内產生並分離出的全長IL_ Ira-R多肽將紐西蘭白兔免疫化來獲得。收集原始多株免疫血清，並用於使用重組IL-li*a-R多肽（圖11A-11B，道1、4及7)、重組IL-lra-R多肽變體（圖11A-11B，道2、5及8)及重組IL-lra(圖11A-11B ;道3、6及9)的免疫沈殿分析中。凝膠的製備是經由將1 〇毫微克（圖11A，道 4-6)或0.6微克（圖11B，道7-9)的重組多肽直接填充道 18% Tris-甘胺酸凝膠上，或經由在將樣品裝載在凝膠上之前，用〇 · 2微升的粗製抗血清免疫沈澱1微克的重組多肽（圖 11A ’道1-3)。SDS-PAGE分離後，將凝膠點潰於PVDF膜上 ’並使用1 · 1 〇〇〇的粗製抗_ IL · 1 ra· R血清稀釋液，接著 HRP-拼合蛋白質A來顯影及ECL偵檢。將圖11B中所示凝膠在點潰後用Gelcode Blue(Pierce)染著出。IL-lra-R多肽的抗體顯示可用以债檢經膜固定的IL-lra-R多肽及IL-Ira-R多肽變體’但不能偵檢IL -1 ra。在溶液中，IL -1 ra- R多肽可較IL-lira-R多肽變體能更有效地被辨識出。 •134- 本紙張尺度適財_家標準（CNS)A4規格（210 X 297公餐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（132) 實施例7 : IL-lra-R多肽在轉殖基因型小息中的辛招 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 爲了評估IL - Ira- R多肽的生物活性，乃製備處於肝臟特定性ApoE啓動子的控制下之編碼IL- lra-R多肽/fc融合蛋白質的構成物。該構成物的輸送可望引發可傳達IL -1 ra - R 多肽功能的資訊之病理變化。相似地，製備處於点肌動蛋白控制下的含全長IL-lra-R多肽之構成物。該構成物的輸送可望導致普遍的表現。爲了產生彼等構成物，乃以PCR使用與所需序列的5，及3，端相對應且摻有限制酵素部位以使擴增產物得以嵌至表現載體内之引子來擴增編碼IL-lra-R多肽的模板DNA序列。擴增後，將PCR產物凝膠約化，用適當的限制酶消化，及使用標準重組DNA技術連接於表現載體上。例如，可將經擴增的IL - 1 ra- R多肽序列選殖到可在人類卢肌動蛋白啓動子控制下的表現載體，如Graham et al.，1997，Nature Genetics, 17:272-74 and Ray et al., 1991, Genes Dev. 5:2265-7 3中所述者。經*濟部智慧財產局員工消費合作社印製連接後，用該反應混合物經由電穿孔來轉形大腸样菌宿主株，並依抗藥性選擇轉形體。從所選群落分離出質體 DNA並施以DNA定序以確定恰當嵌體的存在及突變的不存在。將IL-lra-R多肽表現載體經由兩輪的氣化铯密度梯度離心來純化，用一適用的限制酵素切斷，並經由凝膠電泳來純化含IL- lra-R多肽轉殖基因的線性化片段。將純化後的片段重新懸浮於5 111^1[1^、？117.4及0.2 111^1£〇丁八中，濃度爲2毫克/毫升。 -135- $1^尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（133) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 由BDFlxBDFl雜交小鼠的單細胞胚胎如所述（PCT Pub· No. WO 97/23614)予以注射。將胚胎置於二氧化碳保溫培養器内培養整夜，將1 5 - 2 0個雙細胞胚胎轉移至假懷孕 C D 1母鼠的輸卵管内。由微注射胚胎植體所得後代係按下述經由基因組DNA樣品内的整合轉殖基因之PCR擴增予以篩選。將耳片段在20毫升耳緩衝液（20 mM Tris，pH 8.0，10 mM EDTA，0.5% SDS，及500毫克/毫升蛋白酶K)中，55°C 下消化整夜。然後用200毫升的TE稀釋，並用2毫升的耳樣品於使用適當引子的PCR反應中。蟫濟部替慧財產局員工消費合作社印製於8個星期大時，將轉殖基因型建立者動物及對照動物犧牲，用以驗屍及病理分析。取出部分的脾，使用Total RNA Extraction Kit(Qiagen )從該脾分離總細胞 RNA ’ 並用 RT· PCR 測定轉殖基因表現。將由脾收取出的RNA依下述使用 SuperScriptTM Preamplification System (Gibco-BRL)轉換爲 cDNA。用適當的引子-其位於表現載體序列中且於IL-lra_ R多肽轉殖基因的3*處-以引導由轉殖基因型轉錄本的cDNA 合成。將1 〇毫克得自轉殖基因型建立者及對照動物的總脾 RNA與1 mM引子在7 0 °C下保溫培養1 〇分鐘後，置於冰上。然後用 10 mM的 Tris_HCl，pH 8.3，50 mM的氣化鉀，2.5 mM 氣化鎂，各 10 mM 的 dNTP，0.1 mM DTT，及 200 U 的 Superscript II反轉錄酶來補充該反應。在4 2 °C下保溫培養 5 0分鐘後，經由在72°C下加熱15分鐘而停止該反應，並用 2U的核糖核酸酶Η在3 7°C下消化20分鐘。樣品隨後使用對 IL-lra-R多肽具特異性之引子以PCR來擴增樣品。 -136- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經'濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（134) 實施例8 : IL-lra-R多肽在轉殖基因型小鼠中的生物活性在轉殖基因型動物安樂死前，稱重，用isofluorane麻醉並用心臟穿刺來抽血。對樣品施以血液學及血清化學分析。最終放血後進行放射線照相術。總解剖後，對主要的内臟器官進行重量分析。總解剖後，取出組織（即肝臟、脾、胰、胃、整個腸胃道、腎、生殖器官、皮膚及乳腺、骨骼、腦、心臟、肺、胸腺、氣管、食道、甲狀腺、腎上腺、膀胱、淋巴結及骨骼肌），並固定於10%經緩衝Zn-福馬林中用於組織學檢驗。固定後，將組織處理入石蠟塊中，並取得多個3毫米切片。所有切片都用蘇木素及曙紅染色，並於隨後施以組織學分析。對轉殖基因型及對照小鼠兩者的脾、淋巴結及的Peyer小片都用B細胞及T細胞特異性抗體如下施以免疫組織學分析。將經福馬林固定石蠟包埋切片去除石蠟並在去離子水中水合。用3 %的過氧化氫驟止彼等切片，被Protein Block (Lipshaw，Pittsburgh，PA)封阻，並在大鼠單株抗-小鼠B220 及CD3中保溫培養（Harlan，Indianapolis, IN)。抗體結合係以生物素化兔子抗-鼠免疫球蛋白及過氧化物酶拼合鏈抗生物素蛋白（BioGenex，San Ramon，CA)，使用DAB作為色原 (chromagen) (BioTek，Santa Barbara，CA)來偵檢。將彼等切片用蘇木素進行複染色。驗屍後，由轉殖基因型及對照組同胎動物取出MLN及脾和胸腺的切片。單細胞懸浮液係經由用注射器的平端對著 137- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（135) 一 100 毫米的尼龍細胞滤網（Becton Dickinson，Franklin Lakes, NJ)的底部溫和地研磨而製備的。清洗細胞二次，計數，並隨後從每個組織中取約1 X 106的細胞用〇 · 5微克 CD16/32 (Fcr III/II)Fc塊，在20微升體積中保溫培養1〇分鐘。隨後將樣品在2-8°C，在100微升量的PBS(缺鈣離子及鎂離子）、0.1%牛血清白蛋白、及0.01%的疊氮化鋼中，與 0 · 5微克的FITC抗體或針對下列物質的p E ·拼合單株抗體一起染著 30 分鐘：CD90.2(Thy-1.2)，CD45R(B220)， CDllb(Mac-l) ’ Gr_l ’ CD4，或CD8 (PharMingen，San Diego, CA)。抗體結合後，清洗細胞，且然後在FACScan(Becton Dickinson)上經由流體血細胞計數來分析。實施例9 : IL-lra-R多肽的功能爲評估IL-lra-R多肽是否影響對IL-1、IL-18及其它細胞介素的細胞反應，乃進行下列實驗。首先，將鼠骨髓細胞經由前述（Yan et al·，1999, Exp· Hematol· 27:1409-17)反轉錄病毒感染用IL-lra-R基因轉導。隨後用經轉導骨髓來移植到經致命照射的受體鼠内。在造血恢復後，對取自經IL_ lra-R轉導及對照小鼠（即經空反轉錄病毒載體所轉導的小鼠）之骨髓及脾細胞進行一系列分析，包括FACS分析（圖 12)、群落檢定（圖13A-13B)，及對應於jl-12(圖14)或 IL_12加IL-18(圖I5)的r -干擾素的產生。數據指出IL-1 ra-R基因表現會影響造血起源所含特定子集的相對豐富性及/或細胞介素的反應，該造血起源係位於脾（最顯著者爲G-CSF謗導GM-CFC ; SCF/Epo謗導BFU- -138- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^ ^--------^-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 第089126233號專利申請案中文說明書替換頁(92年11月） A7 B7

五、發明説明（136) E/CFU-Mix ;及CSF-1 誘導Μ-CFC)和骨髓中（IL-3 及G-CSF 誘導 GM-CFC ; SCF/Epo誘導 BFU-E/CFU-Mix 和 IL-3/Epo 誘導 GM-CFC/CFU-Mix)。 IL-lra-R多肽表現也與CD4及NK1.1在脾細胞上降低的表面表現，及與脾細胞減低的對應於單獨IL-12或IL-12加 IL-18產生r干擾素的能力相關聯。雖然本發明已就較佳實例予以說明，不過應了解諳於此技者可對彼等進行各種變異及修改。因此，後附申請專利範圍意欲涵蓋落於本發明申請範圍所聲明的範圍内之所有此等同效變化。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1283683 A7 B7_ 五、發明說明（137) 序列表 <110> Saris, Christiaan Μ.

Giles, Jennifer Mu, Sharon X.

Xia, Min Bass, Michael B.

Craveiro, Roger <120> Interleukin-1 Receptor Antagonist-Related Molecules and Uses Thereof <130> 00-1213 <140> <141> <150> 60/170,191 <151〉 1999-12-10 <150> 60/188,053 <151> 2000-03-09 <150〉 60/194,521 <151> 2000-04-04 <150> 60/195,910 <151> 2000-04-10 <160> 37 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 1020 <212> _DNA <213>人類 <220> <221> CDS <222> (64)..(522) <_> 1 cagggatcag ggttccagga actcaggatc tgcagtgagg accagacacc actgattgca 60 經·濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) gga atg tgt tcc etc ccc atg gca aga tac tac ata att aaa tat gca 108

Met Cys Ser Leu Pro Met Ala Arg Tyr Tyr lie lie Lys Tyr Ala 15 10 15 gac cag aag get eta tac aca aga gat ggc cag ctg ctg gtg gga gat 156

Asp Gin Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asp Gly Gin Leu Leu Val Gly Asd 20 25 30 * ect gtt gca gac aac tgc tgt gca gag aag ate tgc aca ett cct aac 204

Pro Val Ala Asp Asn Cys Cys Ala Glu Lys lie Cys Thr Leu ?rc As.n 35 40 45 -140- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 _B7五、發明說明（138) aga ggc ttg gac cgc acc aag gtc ccc att ttc ctg ggg ate cag gga 252 Arg Gly Leu Asp Arg Thr Lys Val Pro lie Phe Leu Gly lie Gin Gly 50 55 60 ggg age cgc tgc ctg gca tgt gtg gag aca gaa gag ggg cct tcc eta 300 Gly Ser Arg Cys Leu Ala Cys Val Glu Thr Glu Glu Gly Pro Ser Leu 65 70 75 cag ctg gag gat gtg aac att gag gaa ctg tac aaa ggt ggt gaa gag 348 Gin Leu Glu Asp Val Asn lie Glu Glu Leu Tyr Lys Gly Gly Glu Glu 80 85 90 95 gcc aca cgc ttc acc ttc ttc cag age age tea ggc tcc gcc ttc agg 396 Ala Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gin Ser Ser Ser Gly Ser Ala Phe Arg 100 105 110 ett gag get get gcc tgg cct ggc tgg ttc ctg tgt ggc ccg gca gag 444 Leu Glu Ala Ala Ala Trp Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro Ala Glu 115 120 125 ccc cag cag cca gta cag etc acc aag gag agt gag ccc tea gcc cgt 492 Pro Gin Gin Pro Val Gin Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser Ala Arg 130 135 140 acc aag ttt tac ttt gaa cag age tgg tag ggagacagga aactgcgttt 542 Thr Lys Phe Tyr Phe Glu Gin Ser Trp 145 150 tagccttgtg cccccaaacc aagctcatcc tgctcagggt ctatggtagg cagaataatg 602 tcccccgaaa tatgtccaca tcctaatccc aagatctgtg catatgttac catacatgtc 662 caaagaggtt ttgcaaatgt gattatgtta aggatettga aatgaggaga caatccuggg 722 ttatccttgt gggctcagtt taatcacaag aaggaggcag gaagggagag tcagagagag 782 aatggaagat accatgcttc taattttgaa gatggagtga ggggccttga gccaacaaat 842 gcaggtgttt ttagaaggtg gaaaaqccaa gggaaeggat tctcctctag agtctccgga 902 aggaacacag ctcttgacac atggatttca gctcagtgac acccatttca gaettetgae 962 ctccacaact ataaaataat aaacttgtgt tattgtaaac ctctaaaaaa aaaaaaaa 1020 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 · 經-濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 2 <211> 152 <212> PRT <213>人類 <_> 2 Met Cys Ser Leu Pro Met Ala Arg Tyr Tyr lie lie Lys Tyr Ala Asp 1 5 10 15 Gin Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asp Gly Gin Leu Leu Val Gly Asp Pro 20 25 30 ‘ -141 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經-濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（139)

Val Ala Asp Asn Cys Cys Ala Glu Lys lie Cys Thr Leu Pro Asn Arg 35 40 45

Gly Leu Asp Arg Thr Lys Val Pro lie Phe Leu Gly lie Gin Gly Gly 50 55 60

Ser Arg Cys Leu Ala Cys Val Glu Thr Glu Glu Gly Pro Ser Leu Gin 65 70 75 80

Leu Glu Asp Val Asn lie Glu Glu Leu Tyr Lys Gly Gly Glu Glu Ala 85 90 95

Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gin Ser Ser Ser Gly Ser Ala Phe Arg Leu 100 105 110

Glu Ala Ala Ala Trp Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro Ala Glu Pro 115 120 125

Gin Gin Pro Val Gin Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser Ala Arg Thr 130 135 140

Lys Phe Tyr Phe Glu Gin Ser Trp 145 150 <210> 3 <211〉 1020 <212> DNA <213〉人類 <220> <221〉 CDS <222> (64)..(522) <400〉 3 cagggatcag ggttccagga actcaggatc tgcagtgagg accagacacc actgattgca 60 gga atg tgt tcc etc ccc atg gca aga tac tac ata att aaa tat gca 108

Asp Gin Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asp Gly Gin Leu Leu Val Gly Asp 20 25 30 cct gtt gca gac aac tgc tgt gca gag aag ate tgc ata ett cct aac 204

Pro Val Ala Asp Asn Cys Cys Ala Glu Lys lie Cys lie Leu Pro Asn 35 40 45 aga ggc ttg gcc ege acc aag gtc ccc att ttc ctg ggg ate cag gga 252

Arg Gly Leu Ala Arg Thr Lys Val Pro lie Phe Leu Gly lie Gin Gly 50 55 60 ggg age ege tgc ctg gca tgt gtg gag aca gaa gag ggg cct tcc eta 300

Gly Ser Arg Cys Leu Ala Cys Val Glu Thr Glu Glu Gly Pro Ser Leu 65 70 75 -142- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 _B7 _ 五、發明說明（14D) cag ctg gag gat gtg aac att gag gaa ctg tac aaa ggt ggt gaa gag 343

Gin Leu Glu Asp Val Asn lie Glu Glu Leu Tyr Lys Gly Gly Glu Glu 80 85 90 95 gcc aca cgc ttc acc ttc ttc cag age age tea ggc tee gee ttc agg 396

Ala Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gin Ser Ser Ser Gly Ser Ala Phe Arg 100 105 110 ett gag get get gcc tgg cct ggc tgg ttc ctg tgt ggc ccg gca gag 444

Leu Glu Ala Ala Ala Trp Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro Ala Glu 115 120 125 ccc cag cag cca gta cag etc acc aag gag agt gag ccc tea gcc cgt 492

Pro Gin Gin Pro Val Gin Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser Ala Arg 130 135 140 acc aag ttt tac ttt gaa cag age tgg tag ggagacagga aactgcgttt 542 Thr Lys Phe Tyr Phe Glu Gin Ser Trp 145 150 tagccttgtg cccccaaacc aagctcatcc tgctcagggt ctatggtagg cagaataatg 602 tcccccgaaa tatgtccaca tcctaatccc aagatctgtg catatgttac catacatgtc 662 caaagaggtt ttgcaaatgt gattatgtta aggatettga aatgaggaga caatcctggg 722 ttatccttgt gggctcagtt taatcacaag aaggaggcag gaagggagag tcagagagag 782 aatggaagat accatgcttc taattttgaa gatggagtga ggggccttga gccaacaaat 842 gcaggtgttt ttagaaggtg gaaaagccaa gggaaeggat tctcctctag agtctccgga 902 aggaacacag ctcttgacac atggatttca gctcagtgac acccatttca gaettetgae 962 ctccacaact ataaaataat aaacttgtgt tattgtaaac ctctaaaaaa aaaaaaaa 1020 <210> 4 <211〉 152 <212> PRT <213〉人類 <400〉 4

Met Cys Ser Leu Pro Met Ala Arg Tyr Tyr lie lie Lys Tyr Ala Asp 15 10 15

Gin Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asp Gly Gin Leu Leu Val Gly Asp Pro 20 25 30

Val Ala Asp Asn Cys Cys Ala Glu Lys lie Cys lie Leu Pro Asn Arg 35 40 45

Gly Leu Ala Arg Thr Lys Val Pro lie Phe Leu Gly lie Gin Gly Gly 50 55 60

Ser Arg Cys Leu Ala Cys Val Glu Thr Glu Glu Gly Pro Ser Leu Gin 65 70 75 80 -143- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（141)

Leu Glu Asp Val Asn lie Glu Glu Leu Tyr Lys Gly Gly Glu Glu Ala 85 90 95

Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gin Ser Ser Ser Gly Ser Ala Phe Arg Leu 100 105 110

Glu Ala Ala Ala Trp Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro Ala Glu Pro 115 120 125

Gin Gin Pro Val Gin Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser Ala Arg Thr 130 135 140

Lys Phe Tyr Phe Glu Gin Ser Trp 145 150 <210〉 5 <211> 744 <212〉 DNA <213〉人類 <220> <221> CDS <222> (58).. (573) <400> 5 gctcccgcca ggagaaagga acattctgag gggagtctac accctgtgga gctcaag 57 atg gtc ctg agt ggg gcg ctg tgc ttc cgt gag gac cag aca cca ctg 105

Met Val Leu Ser Gly Ala Leu Cys Phe Arg Glu Asp Gin Thr Pro Leu 15 10 15 att gca gga atg tgt tcc etc ccc atg gca aga tac tac ata att aaa 153 lie Ala Gly Met Cys Ser Leu Pro Met Ala Arg Tyr Tyr lie lie Lys 20 25 30 tat gca gac cag aag get eta tac aca aga gat ggc cag ctg ctg gtg 201

Tyr Ala Asp Gin Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asp Gly Gin Leu Leu Val 35 40 45 gga gat cct gtt gca gac aac tgc tgt gca gag aag ate tgc ata ett 249

Gly Asp Pro Val Ala Asp Asn Cys Cys Ala Glu Lys lie Cys lie Leu 50 55 60 cct aac aga ggc ttg gcc ege acc aag gtc ccc att ttc ctg ggg ate 297

Pro Asn Arg Gly Leu Ala Arg Thr Lys Val Pro lie Phe Leu Gly lie 65 70 75 80 cag gga ggg age ege tgc ctg gca tgt gtg gag aca gaa gag ggg cct 345

Gin Gly Gly Ser Arg Cys Leu Ala Cys Val Glu Thr Glu Glu Gly Pro 85 90 95 tcc eta cag ctg gag gat gtg aac att gag gaa ctg tac aaa ggt ggt 393

Ser Leu Gin Leu Glu Asp Val Asn lie Glu Glu Leu Tyr Lys Gly Gly 100 105 110 -144- •本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 _B7 五、發明說明（142 ’) gaa gag gcc aca cgc ttc acc ttc ttc cag age age tea ggc tee gee Glu Glu Ala Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gin Ser Ser Ser Gly Ser Ala 115 120 125 ttc agg ett gag get get gcc tgg cct ggc tgg ttc ctg tgt ggc ccg Phe Arg Leu Glu Ala Ala Ala Trp Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro 130 135 140 gca gag ccc cag cag cca gta cag etc acc aag gag agt gag ccc tea Ala Glu Pro Gin Gin Pro Val Gin Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser 145 150 155 160 gcc cgt acc aag ttt tac ttt gaa cag age tgg tag ggagacagga Ala Arg Thr Lys Phe Tyr Phe Glu Gin Ser Trp 165 170 441 489 537 583 aactgcgttt tagccttgtg cccccaaacc aagctcatcc tgctcagggt c'tatggtagg 643 cagaataatg tcccccgaaa tatgtccaca tcctaatccc aagatctgtg catatgttac 703 catacatgtc caaagaggtt ttgcaaatgt gattatgtta a 744 <210> 6 <211> 171 <212> PRT <213>人類 :卜丨丨一 —丨.-----%裝丨丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 6 Met Val Leu Ser Gly Ala Leu Cys Phe Arg Glu Asp Gin Thr Pro Leu 1 5 10 15 He Ala Gly Met Cys Ser Leu Pro Met Ala Arg Tyr Tyr He lie Lys 20 25 30 Tyr Ala Asp Gin Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asp Gly Gin Leu Leu Val 35 40 45 Gly Asp Pro Val Ala Asp Asn Cys Cys Ala Glu Lys lie Cys lie Leu 50 55 60 Pro Asn Arg Gly Leu Ala Arg Thr Lys Val Pro lie Phe Leu Gly He 65 70 75 80 Gin Gly Gly Ser Arg Cys Leu Ala Cys Val Glu Thr Glu Glu Gly Pro 85 90 95 Ser Leu Gin Leu Glu Asp Val Asn lie Glu Glu Leu Tyr Lys Gly Gly 100 105 110 Glu Glu Ala Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gin Ser Ser Ser Gly Ser Α1δ 115 120 125 Phe Arg Leu Glu Ala Ala Ala Trp Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro 130 135 140 Ala Glu Pro Gin Gin Pro Val Gin Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser 145- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（143 ) 145 150 155 160 Ala Arg Thr Lys Phe Tyr Phe Glu Gin Ser Trp 165 170 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) <210> 7 <211> 269 <212> PRT <213>人類 <400> 7

Met Ala Glu Val Pro Lys Leu Ala Ser Glu Met Met Ala Tyr Tyr Ser 1 5 10 15

Gly Asn Glu Asp Asp Leu Phe Phe Glu Ala Asp Gly Pro Lys Gin Met 20 25 30·

Lys Cys Ser Phe Gin Asp Leu Asp Leu Cys Pro Leu Asp Gly Gly lie 35 40 45

Gin Leu Arg lie Ser Asp His His Tyr Ser Lys Gly Phe Arg Gin Ala 50 55 60

Ala Ser Val Val Val Ala Met Asp Lys Leu Arg Lys Met Leu Val Pro 65 70 75 80

Cys Pro Gin Thr Phe Gin Glu Asn Asp Leu Ser Thr Phe Phe Pro Phe 85 90 95 lie Phe Glu Glu Glu Pro lie Phe Phe Asp Thr Trp Asp Asn Glu Ala 100 105 110

Tyr Val His Asp Ala Pro Val Arg Ser Leu Asn Cys Thr Leu Arg Asp 115 120 125

Ser Gin Gin Lys Ser Leu Val Met Ser Gly Pro Tyr Glu Leu Lys Ala 130 135 140

Leu His Leu Gin Gly Gin Asp Met Glu Gin Gin Val Val Phe Ser Met 145 150 155 160

Ser Phe Val Gin Gly Glu Glu Ser Asn Asp Lys lie Pro Val Ala Leu 165 170 175 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Gly Leu Lys Glu Lys Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Val Leu Lys Asp Asp 180 185 190

Lys Pro Thr Leu Gin Leu Glu Ser Val Asp Pro Lys Asn Tyr Pro Lys 195 200 205

Lys Lys Met Glu Lys Arg Phe Val Phe Asn Lys He Glu He Asn Asn 210 215 220

Lys Leu Glu Phe Glu Ser Ala Gin Phe Pro Asn Trp Tyr lie Ser Thr 225 230 235 240 146- — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（144)

Ser Gin Ala Glu Asn Met Pro Val Phe Leu Gly Gly Thr Lys Gly Gly ' 245 250 255

Gin Asp lie Thr Asp Phe Thr Met Gin Phe Val Ser Ser 260 265 <210> 8 <211> 153 <212> PRT , <213>人類 <400> 8

Ala Pro Val Arg Ser Leu Asn Cys Thr Leu Arg Asp Ser Gin Gin Lys 15 10 15

Ser Leu Val Met Ser Gly Pro Tyr Glu Leu Lys Ala Leu His Leu Gin 20 25 30

Gly Gin Asp Met Glu Gin Gin Val Val Phe Ser Met Ser Phe Val Gin 35 40 45

Gly Glu Glu Ser Asn Asp Lys lie Pro Val Ala Leu Gly Leu Lys Glu 50 55 60

Lys Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Val Leu Lys Asp Asp Lys Pro Thr Leu 65 70 75 80

Gin Leu Glu Ser Val Asp Pro Lys Asn Tyr Pro Lys Lys Lys Met Glu 85 90 95

Lys Arg Phe Val Phe Asn Lys lie Glu lie Asn Asn Lys Leu Glu Phe 100 105 110

Glu Ser Ala Gin Phe Pro Asn Trp Tyr lie Ser Thr Ser Gin Ala Glu 115 120 125

Asn Met Pro Val Phe Leu Gly Gly Thr Lys Gly Gly Gin Asp lie Thr 130 135 140

Asp Phe Thr Met Gin Phe Val Ser Ser 145 150 <210> 9 <211> 177 <212> PRT <213>人類 <400> 9

Met Glu lie Cys Arg Gly Leu Arg Ser His Leu lie Thr Leu Leu Leu 15 10 15

Phe Leu Phe His Ser Glu Thr lie Cys Arg Pro Ser Gly Arg Lys Ser 20 25 30

Ser Lys lie Gin Ala Phe Arg He Trp Asp Val Asn Gin Lys Thr Phe 147- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（145 ) 35 40 45

Tyr Leu Arg Asn Asn Gin Leu Val Ala Gly Tyr Leu Gin Gly Pro Asn 50 55 60

Val Asn Leu Glu Glu Lys He Asp Val Val Pro lie Glu Pro His Ala 65 70 75 80

Leu Phe Leu Gly lie His Gly Gly Lys Met Cys Leu Ser Cys Val Lys 85 90 95

Ser Gly Asp Glu Thr Arg Leu Gin Leu Glu Ala Val Asn He Thr Asp 100 105 110

Leu Ser Glu Asn Arg Lys Gin Asp Lys Arg Phe Ala Phe lie Arg Ser 115 120 125

Asp Ser Gly Pro Thr Thr Ser Phe Glu Ser Ala Ala Cys Pro Gly Trp 130 135 140

Phe Leu Cys Thr Ala Met Glu Ala Asp Gin Pro Val Ser Leu Thr Asn 145 150 155 160

Met Pro Asp Glu Gly Val Met Val Thr Lys Phe Tyr Phe Gin Glu Asp 165 170 175

Glu <210〉 10 <211> 155 <212> PRT <213〉人類 <_> 10

Met Val Leu Ser Gly Ala Leu Cys -Phe Arg Met Lys Asp Ser Ala Leu 15 10 15

Lys Val Leu Tyr Leu His Asn Asn Gin Leu Leu Ala Gly Gly Leu His 20 25 30

Ala Gly Lys Val lie Lys Gly Glu Glu lie Ser Val Val Pro Asn Arg 35 40 45

Trp Leu Asp Ala Ser Leu Ser Pro Val lie Leu Gly Val Gin Gly Gly 50 55 60

Ser Gin Cys Leu Ser Cys Gly Val Gly Gin Glu Pro Thr Leu Thr Leu 65 70 75 80

Glu Pro Val Asn lie Met Glu Leu Tyr Leu Gly Ala Lys Glu Ser Lys 85 90 95

Ser Phe Thr Phe Tyr Arg Arg Asp Met Gly Leu Thr Ser Ser Phe Glu 100 105 110 148- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

W 1283683 A7 B7 五、發明說明（146 )

Ser Ala Ala Tyr Pro Gly Trp Phe Leu Cys Thr Val Pro Glu Ala Asp 115 120 125 Gin Pro Val Arg Leu Thr Gin Leu Pro Glu Asn Gly Gly Trp Asn Ala 130 135 140 Pro lie Thr Asp Phe Tyr Phe Gin Gin Cys Asp 145 150 155 經濟部智慧財產局員工消費合作社印5衣 <210> 11 <211> 178 <212> PRT <213〉人類 <400> 11 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp· 15 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gin Cys Cys Leu Glu Asp Pro Ala Gly Ser 20 25 30 Pro Leu Glu Pro Gly Pro Ser Leu Pro Thr Met Asn Phe Val His Thr 35 40 45 Lys He Phe Phe Ala Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu 50 55 60 Lys Gly Ser Pro lie Leu Leu Gly Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu 65 70 75 80 Tyr Cys Asp Lys Asp Lys Gly Gin Ser His Pro Ser Leu Gin Leu Lys 85 90 95 Lys Glu Lys Leu Met Lys Leu Ala Ala Gin Lys Glu Ser Ala Arg Arg 100 105 110 Pro Phe lie Phe Tyr Arg Ala Gin Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu 115 120 125 Ser Ala Ala His Pro Gly Trp Phe lie Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn 130 135 140 Glu Pro Val Gly Val Thr Asp Lys Phe Glu Asn Arg Lys His lie Glu 145 150 155 160 Phe Ser Phe Gin Pro Val Cys Lys Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val 165 170 175 Ser Asp <210> 12 <211> 218 <212〉 PRT <213>人類 149- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) %裝 · 1283683 A7 B7 五、發明說明（147) <400> 12 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gin Cys Cys Leu Glu Asp Pro Ala Gly Ser 20 25 30 Pro Leu Glu Pro Gly Pro Ser Leu Pro Thr Met Asn Phe Val His Thr 35 40 45 Ser Pro Lys Val Lys Asn Leu Asn Pro Lys Lys Phe Ser lie His Asp 50 55 60 Gin Asp His Lys Val Leu Val Leu Asp Ser Gly Asn Leu lie Ala Val 65 70 75 80 Pro Asp Lys Asn Tyr lie Arg Pro Glu lie Phe Phe Ala Leu Ala Ser 85 90 95 Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro lie Leu Leu Gly 100 105 110 Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp Lys Gly Gin 115 120 125 Ser His Pro Ser Leu Gin Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met Lys Leu Ala 130 135 140 Ala Gin Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe lie Phe Tyr Arg Ala Gin 145 150 155 160 Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser Ala Ala His Pro Gly Trp Phe 165 170 175 lie Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro Val Gly Val Thr Asp Lys 180 185 190 Phe Glu Asn Arg Lys His lie Glu Phe Ser Phe Gin Pro Val Cys Lys 195 200 205 Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 210 215 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 13 <211> 192 <212> PRT <213〉人類 <400〉 13 Met Ser Gly Cys Asp Arg Arg Glu Thr Glu Thr Lys Gly Lys Asn Ser 1 5 10 15 Phe Lys Lys Arg Leu Arg Gly Pro Lys Val Lys Asn Leu Asn Pro Lys 20 25 30 150- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（148)

Lys Phe Ser lie His Asp Gin Asp His Lys Val Leu Val Leu Asp Ser 35 40 45 Gly Asn Leu lie Ala Val Pro Asp Lys Asn Tyr lie Arg Pro Glu lie 50 55 60 Phe Phe Ala Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly 65 70 75 80 Ser Pro lie Leu Leu Gly Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys 85 90 95 Asp Lys Asp Lys Gly Gin Ser His Pro Ser Leu Gin Leu Lys Lys Glu 100 105 110 Lys Leu Met Lys Leu Ala Ala Gin Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe 115 120 125 lie Phe Tyr Arg Ala Gin Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser Ala 130 135 140 Ala His Pro Gly Trp Phe lie Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro 145 150 155 160 Val Gly Val Thr Asp Lys Phe Glu Asn Arg Lys His lie Glu Phe Ser 165 170 175 Phe Gin Pro Val Cys Lys Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 180 185 190 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) %裝訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 14 <211> 169 <212> PRT _ <213> 人類—— <400> 14 Met Arg Gly Thr Pro Gly Asp Ala Asp Gly Gly Gly Arg Ala Val Tyr 15 10 15 Gin Ser Met Cys Lys Pro lie Thr Gly Thr lie Asn Asp Leu Asn Gin 20 25 30 Gin Val Trp Thr Leu Gin Gly Gin Asn Leu Val Ala Val Pro Arg Ser 35 40 45 Asp Ser Val Thr Pro Val Thr Val Ala Val lie Thr Cys Lys Tyr Pro 50 55 60 Glu Ala Leu Glu Gin Gly Arg Gly Asp Pro lie Tyr Leu Gly lie Gin 65 70 75 80 Asn Pro Glu Met Cys Leu Tyr Cys Glu Lys Val Gly Glu Gin Pro Thr 85 90 95 151 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（149)

Leu Gin Leu Lys Glu Gin Lys lie Met Asp Leu Tyr Gly Gin Pro Glu 100 105 110 Pro Val Lys Pro Phe Leu Phe Tyr Arg Ala Lys Thr Gly Arg Thr Ser 115 120 125 Thr Leu Glu Ser Val Ala Phe Pro Asp Trp Phe lie Ala Ser Ser Lys 130 135 140 Arg Asp Gin Pro lie lie Leu Thr Ser Glu Leu Gly Lys Ser Tyr Asn 145 150 155 160 Thr Ala Phe Glu Leu Asn lie Asn Asp 165 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 15 <211〉 208 <212> PRT <213>人類 <400> 15 Met Arg Gly Thr Pro Gly Asp Ala Asp Gly Gly Gly Arg Ala Val Tyr 15 10 15 Gin Ser Ser Glu Ser Asn Ala Val Gly Met Gly Leu Trp Arg Leu Arg 20 25 30 Pro Ser Ala Leu Thr Leu Ser Pro Val Glu Ala Pro Ala Phe Ser Ala 35 40 45 Pro Leu Cys Thr Leu Pro Phe Pro Pro Val Cys Lys Pro lie Thr Gly 50 55 60 Thr lie Asn Asp Leu Asn Gin Gin Val Trp Thr Leu Gin Gly Gin Asn 65 70 75 80 Leu Val Ala Val Pro Arg Ser Asp Ser Val Thr Pro Val Thr Val Ala 85 90 95 Val lie Thr Cys Lys Tyr Pro Glu Ala Leu Glu Gin Gly Arg Gly Asp 100 10b 110 Pro lie Tyr Leu Gly lie Gin Asn Pro Glu Met Cys Leu Tyr Cys Glu 115 120 125 Lys Val Gly Glu Gin Pro Thr Leu Gin Leu Lys Glu Gin Lys lie Met 130 135 140 Asp Leu Tyr Gly Gin Pro Glu Pro Val Lys Pro Phe Leu Phe Tyr Arg 145 150 155 160 Ala Lys Thr Gly Arg Thr Ser Thr Leu Glu Ser Val Ala Phe Pro Asp 165 170 175 Trp Phe lie Ala Ser Ser Lys Arg Asp Gin Pro lie lie Leu Thr Ser 152- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) : 1283683 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 .B7 五、發明說明（150) 180 185 190

Glu Leu Gly Lys Ser Tyr Asn Thr Ala Phe Glu Leu Asn lie Asn Asp 195 200 205 <210> 16 <211> 158 <212> PRT <213〉人類 <400> 16

Met Glu Lys Ala Leu Lys lie Asp Thr Pro Gin Gin Gly Ser .lie Gin 15 10 15

Asp lie Asn His Arg Val Trp Val Leu Gin Asp Gin Thr Leu lie Ala 20 25 30

Val Pro Arg Lys Asp Arg Met Ser Pro Val Thr lie Ala Leu lie Ser 35 40 45

Cys Arg His Val Glu Thr Leu Glu Lys Asp Arg Gly Asn Pro lie Tyr 50 55 60

Leu Gly Leu Asn Gly Leu Asn Leu Cys Leu Met Cys Ala Lys Val Gly 65 70 75 80

Asp Gin Pro Thr Leu Gin Leu Lys Glu Lys Asp lie Met Asp Leu Tyr 85 90 95

Asn Gin Pro Glu Pro Val Lys Ser Phe Leu Phe Tyr His Ser Gin Ser 100 105 110

Gly Arg Asn Ser Thr Phe Glu Ser Val Ala Phe Pro Gly Trp Phe lie 115 120 125

Ala Val Ser Ser Glu Gly Gly Cys Pro Leu lie Leu Thr Gin Glu Leu 130 135 140

Gly Lys Ala Asn Thr Thr Asp Phe Gly Leu Thr Met Leu Phe 145 150 155 <210> 17 <211> 157 <212> PRT <213〉人類 <_> 17

Met Asn Pro Gin Arg Glu Ala Ala Pro Lys Ser Tyr Ala lie Arg Asp 1 5 10 15

Ser Arg Gin Met Val Trp Val Leu Ser Gly Asn Ser Leu lie Ala Ala 20 25 30 153- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（151)

Pro Leu Ser Arg Ser lie Lys Pro Val Thr Leu His Leu lie Ala Cys 35 40 45

Arg Asp Thr Glu Phe Ser Asp Lys Glu Lys Gly Asn Met Val Tyr Leu 50 55 60

Gly lie Lys Gly Lys Asp Leu Cys Leu Phe Cys Ala Glu lie Gin Gly 65 70 75 80

Lys Pro Thr Leu Gin Leu Lys Glu Lys Asn lie Met Asp Leu Tyr Val 85 90 95

Glu Lys Lys Ala Gin Lys Pro Phe Leu Phe Phe His Asn Lys Glu Gly 100 105 110

Ser Thr Ser Val Phe Gin Ser Val Ser Tyr Pro Gly Trp Phe lie Ala 115 120 125

Thr Ser Thr Thr Ser Gly Gin Pro He Phe Leu Thr Lys Glu Arg Gly 130 135 140 lie Thr Asn Asn Thr Asn Phe Tyr Leu Asp Ser Val Glu 145 150 155

<210> 18 <211> 11 <212> PRT <213>人類免疫缺乏病毒型1 <400> 18

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg 15 10 <210〉 19 <211> 15 <212> PRT 二 <213>人造序列 - <220> <223>人造序列説明：衍生自HIV tat蛋白質的内部化功能部位 <_> 19

Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg 1 5 10 15 <210〉 20 <211> 23 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223>人造序列説明： 154- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（152 ) 低聚&甞酸2349-98 <_> 20 cacacgcttc accttctttc cag 23 <210> 21 <211> 23 <212> DNA > <213> 人造—序列， <220> —......... <223〉人造序列説明：低聚核甞酸2349-99 <400> 21 taaaacttgg tacgggctga ggg 23 <210> 22 <211> 23 <212> DNA ..： <213〉人造序列― <220> .… <223〉人造序列説明：低聚核Ϋ酸1572-36 <400〉 22 gtgtggaatt gtgagcggat aac 23 <210> 23 <211〉 23 <212> DNA <213> 人造序列·· <220> — <223>人造序列説明·· 低聚核甞酸2328-91 <400> 23 ctatgaccat gattacgcca age 23 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Φ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210〉 24 <211> 20 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>，人造序列説明：低聚核甘酸2351-47 <_> 24 gctgtactgg ctgctggggc 20 155- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1283683 A7 B7 五、發明說明（153 ) <210> 25 <211> 21 <212> DNA <213〉人造序列 <220> 人造序列説明：低聚核甞酸2351-48 <_> 25 ccttcaggct tgaggctgct g <210> 26 <211〉 21 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉人造序列説明·· 低聚核甞酸2329-93 <400> 26 cgggcctctt cgctattacg c 21 21 <210〉 27 <211> 21 <212> __ <213>·ΧΐίΠ ce <220> <223>人造序列説明：低聚核甞酸2363-04 <400> 27 cctggctggt tcctgtgtgg c 21 > > > > 0 12 3 111 1 2 2 2 2 28 21 DNA 人造序列經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <223>人造序列説明·· 低聚核tf酸2329-94 <400> 28 tggcgaaagg gggatgtgct g <210> 29 <211> 27 <212> DNA <213>人造序列· 156- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 21 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7 五、發明說明（154 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <223>人造序列説明：低聚核甞酸AP-1 <400> 29 ccatcctaat acgactcact atagggc <210> 30 <211〉 22 <212> DNA <213>人造序列 <220> —— <223〉人造序列説明·· 低聚核甞酸2353-87 <_> 30 ccttggtgag ctgtactggc tg <210> 31 <211> 19 <212> DNA <213〉人造序列 <220> ~ <223〉人造序列説明：低聚核甞酸2349-52 <400> 31 ccgggccaca caggaacca <210〉 32 <211> 24 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉人造序列説明：低聚核芬酸2349-51 <400> 32 aagaggccac acgcttcacc ttct <210> 33 <211> 26 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 · 一— <223〉人造序列説明：低聚核站酸2557-95 7 2 2 2

9 IX 4 2 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . 157- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 _B7 _ 五、發明說明（155 ) <400> 33 aagccttttt cttctttgcc tcagtg 26 <210> 34 <211> 26 <212> DNA <213>人造序列 <220> —二人造序列説明：低聚核瞀酸2557-96 <400> 34 tgccatttaa tgtaacacgg tcacag 26 <210> 35 <211> 459 <212> DNA <213>小鼠 <220> <221〉 CDS <222> (1)··(459) <400> 35 atg tgc tcc ctt ccc atg gca aga tac tac ata ate aag gat gca cat 48

Met Cys Ser Leu Pro Met Ala Arg Tyr Tyr lie lie Lys Asp Ala His 15 10 15 caa aag get ttg tac aca egg aat ggc cag etc ctg ctg gga gac cct 96

Gin Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asn Gly Gin Leu Leu Leu Gly Asp Pro 20 25 30 gat tea gac aat tat agt cca gag aag gtc tgt ate ctt cct aac ega 144

Asp Ser Asp Asn Tyr Ser Pro Glu Lys Val Cys lie Leu Pro Asn Arg 35 40 45 ggc eta gac ege tec aag gtc ccc ate ttc ctg ggg atg cag gga gga 192

Gly Leu Asp Arg Ser Lys Val Pro lie Phe Leu Gly Met Gin Gly Gly 50 55 60 agt tgc tgc ctg geg tgt gta aag aca aga gag gga cct etc ctg cag 240

Ser Cys Cys Leu Ala Cys Val Lys Thr Arg Glu Gly Pro Leu Leu Gin 65 70 75 80 ctg gag gat gtg aac ate gag gac eta tac aag gga ggt gaa caa acc 288

Leu Glu Asp Val Asn lie Glu Asp Leu Tyr Lys Gly Gly Glu Gin Thr 85 90 95 acc cgt ttc acc ttt ttc cag aga age ttg gga tet gee ttc agg ctt 336

Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gin Arg Ser Leu Gly Ser Ala Phe Arg Leu 100 105 110 gag get get gee tgc cct ggc tgg ttt etc tgt ggc cca get gag ccc 394

Glu Ala Ala Ala Cys Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro Ala Glu Pro 158- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1283683 A7 B7五、發明說明（156) 115 120 125 cag cag cca gtg cag etc acc aaa gag agt gaa ccc tcc acc cat act 432 Gin Gin Pro Val Gin Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser Thr His Thr 130 135 140 gaa ttc tac ttt gag atg agt egg taa 459 Glu Phe Tyr Phe Glu Met Ser Arg 145 150 2 T'a. 6 5 R l· 3 1 p I > > > > 0 12 3 1 111 2 2 2 2 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 36 Met Cys Ser Leu Pro Met Ala Arg Tyr Tyr lie lie Lys Asp Ala His 1 5 10 15 Gin Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asn Gly Gin Leu Leu Leu Gly Asp Pro 20 25 30 Asp Ser Asp Asn Tyr Ser Pro Glu Lys Val Cys lie Leu Pro Asn Arg 35 40 45 Gly Leu Asp Arg Ser Lys Val Pro lie Phe Leu Gly Met Gin Gly Gly 50 55 60 Ser Cys Cys Leu Ala Cys Val Lys Thr Arg Glu Gly Pro Leu Leu Gin 65 70 75 80 Leu Glu Asp Val Asn lie Glu Asp Leu Tyr Lys Gly Gly Glu Gin Thr 85 90 95 Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gin Arg Ser Leu Gly Ser Ala Phe Arg Leu 100 105 110 Glu Ala Ala Ala Cys Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro Ala Glu Pro 115 120 125 Gin Gin Pro Val Gin Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser Thr His Thr 130 135 140 Glu Phe Tyr Phe Glu Met Ser Arg 145 150 <210> 37 <211> 13017 <212> DNA <213>小氱 <220> · <221> 表現序列 <222〉（8025)··(8054) 159- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 * _B7_ 五、發明說明（157 ) <220> . <221> 表現序列. <222> (9548)..(9631) <220> <221> 表現序列 <222〉（9967)··(10092) <220> <221> 表現序列 <222> (10358)..(10570) <400> 37 actagtctcc catagacaac agctgaatgt acgaggtcag aagcaaggcc tgccccagaa 60 ccattgcaag ccaggtgctg tcttgattgt agcctcataa aaaactgatg cagaattgcc 120 ccaccaacat gctccagatt cctgctccac agaaaccctg tgaactaacc atgttgcttt 180 tagattctgc agtaagttga taatctgcag taaataacat tcgatgaaag agaaacatgt 240 gtagttactt tattatgatc aaaactttat ttctccactc tttccatttt ccttctcaga 300 attgacacca gcctttcact aacccaaata gcctatttaa atgctgatca tacttctctt 360 gttaactgtt acctgttccc aaaaggtaca attccctttc gaccatagct gcatctccca 420 cctgcacacc aggatgtttc tcatatttct acctaaaaca ttggggacta caagtgaaag 480 caaaagaggg ggtccatatc agaaccccag gtatttagct gtaaaactca cttgtcaggc 540 cagcttgaca ggtttacagt ttgtagaagg accagaaaga aggtagccaa gacagaagag 600 gcaacctctg cttgtcctag aaccttcagt ccatatacat ctaagctccc cagcaccatt 660 tctaccacag acctctcaga gttcctgagg atgcagaccc caggacactg acctcagttt 720 ccaggcaggg tttctgcaca cccccttcac actgcctgac tgggagttag tctcatggtg 780 caacactact ttgggacact gtacccatcc cctcgaccta cagaaaccat tcacttttca 840 aggtcacctc ctataggaag tatttgaaaa gatgagagtc atggtcattt gctatgataa 900 tattctgtgc ttatctccct gtaaaaagtt ggcttggggt ctctggcatg catctgacct 960 taaggttgga gctgcaccaa tatgttttta agcacccggc ataatgcttc gcaaaatttc 1020 agaacatggt ttgtacagaa tgtactttcc tccactcata caaacccttg taaaagagta 1080 gtttgaatcc caactcattc ttgaaggcca ccttttgtag ggtgacagaa tttaaaaata 1140 cagaatttaa aaatacttta tcccagggaa gctcacactt ctaaatccag aatgaaagsa 1200 gaaatagaaa cacacttgtg gtggcggtgg tggtggtgat ggtggtcgtg gtcgtggtgc 1260 tggtggtggt ggtgatggtg gtggtggtgg tggtggtggt ggtcgtggtg gtgtaatgat 1320 160- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂. _»in· 1283683 A7 B7 五、發明說明（158) cacagtaaag tgaggcatca tggcctgaga gagtcaggca tcacagctat tcaagtgaaa 1380 actacctact actgatttta gagttctata attttagtag cagccacagg cctggggcct 1440 gggcctatat tttcagagag gaaatgttca cagcaggtca actgcagaca gtgaagatca 1500 gaaatgtttc ataatcaggt catcagagaa aaggcaaagg agctgatgga ctttatcctg 1560 aaaaagcaaa atccaaccca cctcatgctt aatgcattca aaggtctgcg ggcagaagaa 1620 tacattttgc tttttattat tataaattac ctggagaata tttttgtctg aattatctcc 1680 caaatattaa ccataaaaat aaaaaattcc atgtgtgctt ctcccagggg ctataaagcc 1740 cctggtctta gagttgttgg ggcaaaacct gacctttgaa gtagttactt ttgaagatgc 1800 cataccatac atttggccac ttggagagag tctaatgtca catctaaagg gttactctga I860 tgctctgttt tctcatatgc ccttggctta cagctaacta tggctccagc taaactataa 1920 agttccttgg caacagagat ggtacgctat gtgtctttga cacagcagaa taaatgctta 1980 gtgaacatta ctgattgcct gacaggacac ctcacacttt ggtactttca acagagggat 2040 gtaaacttat gaagaacaat gaagaatgaa tattggcaat aaaagcaaaa attggttaac 2100 ccaattctag ctctgaaatc atttttaggt agtgggaagt ctttttgttt tgtttattca 2160 ctttacatcc caattgctgt cctccctcca agttccccac caccaccaca gtcctttttc 2220 cctccccttc tcctctgaga gaatggagaa ccctcctgga tattccccca tcatgaaaca 2280 ttaagtctct gcagggctag acacttcccc cagtgaggcc agtcagggca gcccagctag 2340 aaaaagcata tcccacagac agacaacagc ttttgggata gccccgttcc agttgtttag 2400 gatccacatg aaggctgagc tgcacatctg ctacatatga atgaggaggc ctaggtccag 2460 cctgtgtatg ttctttggtt ggtggttcag actctgagag ccccaagggt ccaggtcagt 2520 tgactctgtt ggtcttcctg tggacaccct gtccccttcc agcccacaat ccttccccta 2580 atccttctcc ttctcacttc cataagagtg tgaggagtct ttaaaaacat gaagcatttt 2640 atctccccag ggcaacacat ggaaatgaaa gattgtgaaa agtaatttaa agaaaaagaa 2700 aaaaaaattt aacaaggaat aagaatcttg tttctctgaa aatgcttaag agtgtggaaa 2Ί60 acataaactg gattctaata gaatgcaatt ggattgtaat gaaaacctat caaagttatg 2320 aaatagcttt cactaccttg cacaaaatct cttggcatgt gtgttgttgg caaattttct 2330 tgttagttta aaaccacaac aataacaaca aaatagcaaa aattgggtct cagcctcatt 2940 cattttttct catttcttgc tctgtgatcg tctgggtctt aagctgacac ctcaccaatt 3000 cctcatcaag acctttgtgg aaatttgcaa atgtcccaaa aaggagaatt acaataagtc 3060 161 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) -A?-----

ϋ n ϋ · ϋ «I ϋ n ϋ 1 I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（159 ) agagaacgtt ctgtccaatt ctttatccct agtgatggat gagtaaagga tgtataagag 3120 atggataaat ggactgatgt acagataaat gaaggaatat gtacatggtt aggtggatag 3180 atgacttact caacagatga gtagaaggat gagaaataga tggacagctg gactgaggca 3240 tgcaaagtca actggagaac tgagtctctt gaccatgcac tgtccagggt ctcatattcc 3300 ctagagtcca gggcccatgg ctcctgtgcc atccccatgc aaatctaagg ttaatacgtt 3360 ctacagctga gtttccttac atatgtgtct cagtaagttt gtatcaacta attaaatctg 3420 aaaggagttc cttctgatct tcccaaacag agccacactc gtgatgaagt cagccctgct 3430 tcattgtggt tctctggatg catctggctt ccatcagcat aatctttcta t.tcttgatcc 3540 ttccaacctc ttcaggtctc agacagaacc ccatggagca tcaaagaggt ttgaccccag 3600 cattgtttat gtagctgcaa aaccactaat aacacagtca atgacagtag ctacagagac 3660 agcaggtcag tgtctggcct ctgtcaaggc tttatgagtg actctctccc cttcccgcaa 3720 atactcatta atctccccac ctccttatta tttggactgt gttgaagata ttatgaaatc 3780 tctgggctct tcttcccgga tctagagcca attacagatt ctgtaggttt gacccaccct 3840 gaccagacat tataaacaca gtgctggtgc cctgaagaaa acagttggag actccaggca 3900 ttagaatcca ggcaccagga actacaggtc agtggtgaca gtcggtctct ctgtgtatct 3960 cttacacaca cacacataca cacacacaac acaacataca cacacataca acacacaaca 4020 catacacata caacacatac acacacacaa cacttttctg taatgtctcc aaaattctca 4080 ggctctaggg aagaagaaat gtcttttaga gaatgcggtg tgatgttcta taagtctagg 4140 aatacttgat agaatttaat gagaagtata gattaggtca aagcaagggt actacatatt 4200 tggaaccaca gagttttgaa agtcatctca aaagaaatta tttaggccag agatgttcaa 4260 aaaatgtttt gtttgtgaca tatggaagct cccatggaga cattctgtga ttctcatcaa 4320 tagacagtag ggatgccacc aaggtgctaa cgtcttcatc accccatcat ctatcataca 4380 tccaaatggt ttctttgaaa acaatctcct tgtgaaactt aaagtagcct tgaaaatata 4440 ataatcttgt ccagcctctc atttcaatgg gaatagattg aaggcctaag gaccaaaaca 4500 aaaaacaaaa caaacaaaat aaaaacacca aaaaaaaaac ccataaaatg aatgagtagc 4560 taagttattt ttagaatcca gcctttcagt caaagcttga ttcatgcata tctigtgttct 4 620 gatcttaagg tgctgtgtct gtcagttgta tagttggata gaggtacaga tgagctatat 4 680 acatcatgct tcaagatttc aggatcttat aacttttata aagcaaataa tttgtcttaa 4740 162- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 1283683 A7 B7_ 五、發明說明（160 ) tgcacactaa taaacaatat agcaaagttt gacaggagtt cagagtactg ttagagaagt 4800 gaagggaaga attttgttat gatagtaaag gggaaaatca aattttgagt catggaatca 4860 tacatagttt gacatagaaa gaaccttggc aaccacataa tctaatgcat gagcccaaga 4920 actggcctgt gtttttaaga tctcattctc agctgttatg taactgaaca gacaagatac 4980 taagcccaag tatagtgaag ccatgtccag tgatcttaat aggagtgaca ggaatggttg 5040 gtgatgaaga ggggtggatt ttgagcagga ataccaaaag caatgctgac tgtgcccttg 5100 gagagaatta gcatgagtcc ttgagagaaa aatgagatgc tattgcacaa gcaacctagg 5160 gccagatggt gtcaagatag gtggccatcg tggactttag aaccaggcag gaatgtgatc 5220 agagatgtac tttatgtagg ttaggtttga ttcagaaacc aggagggtta gcatgtttac 5280 aatggtgact aaaaacaagc acaaggttat actttaaaga aataatctct gaaaagaagg 5340 gaggtatatt ttcagtgccg gaaagaggaa tattacaaaa gtgagaggag tagatttgag 5400 aaagagaagt ggattgtgga ggagcagatg ctcaccacgc ccttacactc acttgaactg 5460 acacccaaag atgaaggtgt gctgtggact gctgaagctc agcctgtggc tgggaagcag 5520 taaacaaaat tgctcatcac agctgtacaa gatattccat agcatataaa aataaaagtg 5580 cttaggctat tctcttacaa ctctcagcct tatgaatgac ccggaaggaa aagaactcta 5640 caatgtgcct gtgtctgttc ttacttcctc tgccacaagc aaaagagcct tgggaattgg 5700 ctcagaggga acgtcatcaa acaggctggc cttgaggctg ggctgttatt cgtctacctg 5760 ggatagagga attcgctatt cttttataat ccaagtgtgg cctggggacc agcagcatta 5820 ttaagacctg gttgcatgtt tgaaatgcag tctcagattt catcccagac ctaaagagta 5880 acactgtttt catgaggata caagattaag aaatatgcat tagagagtaa ttggctaaat 5940 gggtaaatgt catgcaagca ggaggatctg attgactccc caggacccac acagttccca 6000 tgccgtagag cacatctgta atcacagtag gcgtatgatg aaatgggagg tgaatcaaga 6060 gaatctctag cagctacggg ctggccagcc tcccatgcac agcactaaat aaggcaagga 6120 ccaatacctg aagttgtccc attaccttca catatacacc acggcatgtg tgtacttgta 6180 ctcacacata caaacaaata cacacgtgca cacatacaaa actcagagat taaggacaat 6240 tggcctgaca tatcagttcc taagcctggc tcattgcttg taacactaca agcagtatta 6300 aataaggata ggcgagagaa cagttaccga atggttcaga agtggggcca tgcctgtgac 6360 tttaaacaaa tgtttcatat ttttaaataa taacacttag attacaaaat aaatttacta 6420 caggaaaatg ttaagaacta tcaacaacca ttgactatcc tgtcggccac aaatgagtgt 6480 163- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注音3事項再填寫本頁) ---- ϋ ϋ ·1 ·ϋ^-OJ 1§ n ϋ 1· 1_§ 1 a— 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1283683 A7 B7_ 五、發明說明（161 ) tataacaagc accagccgtc cttgtccaca tgtgtgtgtg tctacacagc tatgaattta 6540 attgggataa taatgtgcac attctttacg gcctgcagtt tttacttcat gtatttgaaa 6600 tgtttgtgcc acaaatgtca tctttaagga gcatatcctt atttcctgga tttatcattc 6660 cctttcagcc gactggacat tgacagcatt tccaactttt caaccttgta aaaataacta 6720 attgaactat tttataacta agcatttggg caatcaatta cctctgcctg gaatgggggc 6780 aacaacacat gcaatcatgg gaaagccagg atgctgctgt ctgatcccta gccctggcat 6840 tcgtgcagaa cctcactctc atctgtgdcc tgatatcctt cactctcaag tcttttccca 6900 gtgactttta aaggcaacag aatcatatag ccaataatga aagctacttg gtctacagtt 6960 gtgtggcgtt ttttatagat attttcttca tttacatttc aaatgctatc ccaaaagtcc 7020 cctataccct cccccaccct gctcccctac ccactcactc ccacttcttg gccctggctt 7080 tcccccttac tggggcatat aaagtttgct agaccaaggg gcctctcttc ccaatgatgg 7140 ccaactaggc cattttctgc tacatatgca gctagagaca ccagttctgg ggttactggt 7200 tagttcatat tgttgttcta cctatggggt tgcagacccc ttcagctctt gagtactttc 7260 tctagctcct ccattgggag ccctgtgttc catcctatag atgactgtga gcatccactt 7320 ctgtatttgc caggcactgg catatgaaat agtatctgca tttggtggct gattatggga 7380 tggacccccg ggtggggcag tctctggatg gtccatcctt tcatcttagc tccaaacttt 7440 gtctctgcaa cttcttccat ggatatttta gtccctaatc tagggagaaa tgaagtatcc 7500 acaagttgat cttccttctt gattttctta tgttttagaa gttgtatctt ggatattcta 7560 ggtttctggg ctaatatcca cttatcagtg agtacatatc aagtgaattc ttttgtgatt 7620 aggttacctc actcaagatg atattctcca ctatgttcat agcagcccta tttatagtag 7680 ccagaagctg gaaagaaccc agtccctcaa cagaggaatg gatacagaaa atgtggcaca 7740 tttatgcaat ggagtaccac tcagatatta aaaacaacga atttatgaaa ttctcgggca 7800 aaaccctatc taaagaccag gaataaggaa aagatggact gcctgcctgc agctgggaga 7860 gctggggaga cctttgtgga ttctgtaata cttaggggta cggaacagct tgtggctgga 7920 taattctgag ctccagcatg tctgcccccc aaaaaacatt ctgtttttct gaaagccttt 7930 ttcttctttg cctcagtgaa gaccagacac tcccaactgc agga atg tgc tcc ctt 8036 ccc atg gca aga tac tac atgtaagtaa tcttaacgat cgctcaatca 8084 aggggcctgg agatcacatg agaagggaaa aggctgagtc aaagggacaa agctccctct 8144 164· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 B7 五、發明說明（162 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 gaggggggca gacccagtaa cttctagctg agccctacct tgcttaaaac ctgccatctg 9921 tggtcccctc actgtctgaa ttgcattctg tcttacctcc cagag aag gtc tgt ate 9978 ett cct aac ega ggc eta gac ege tee aag gtc ccc ate ttc ctg ggg 10026 atg cag gga gga agt tgc tgc ctg geg tgt gta aag aca aga gag gga 10074 cct etc ctg cag ctg gag gtgagacacc cctcctcatt gcagtcagta 10122 ctgccactgg aacatagtga catctttgaa cccacatgtc ccctctcttg tttcccatct 10182 atetetettt gcctccagct gagggactct agcctttggg gatgtacaga aagaacatgg 10242 cttcggaaaa ctcttcccta ttgagteett ctttggccaa gcctctgagg cactaagggc 10302 tgacgtccca accaaacact catttcatct cacagctgtc tccctttccc cacag gat 10360 gtg aac ate gag gac eta tac aag gga ggt gaa caa acc acc cgt ttc 10408 acc ttt ttc cag aga age ttg gga tet gee ttc agg ett gag get get 10456 gee tgc cct ggc tgg ttt etc tgt ggc cca get gag ccc cag cag cca 10504 gtg cag etc acc aaa gag agt gaa ccc tee acc cat act gaa ttc tac 10552 ttt gag atg agt egg taa agagacataa ggctggggcc tegtetagtg 10600 cccccagtct gagatettet tgctcagcat ctctggaaag cagaataagg aagataccaa 10660 agatgtttgg gtcttaatcc ccagaatctg tgaccgtgtt acattaaatg gcaaagggat 10720 tttttttttc cttcatggtc catttgggcc cattggaatc atetgaggee tcatgaggag 10730 aaggaagagg tcagagggag actggggcaa actttggtac taasagtaac aatggagaca 10840 gggaccataa gctgatgggt aacagtggtt tctagaaacc ggaaatgatg agagctctcc 10900 tgacacaggt tctggatttt tctggactga agaatggtga aataatacag ctccattatt 10960 ttaagccact gagtttgaga tcattcaatg aagctgtcat aataaaacct gtgcttcaca 11020 tacaattcaa tattggtagg caccccggtg atttcttgga aagacatcta gggattctcc 11080 tggatgctga ttccagggtc cagtggagtc cctgggttga agagatttca caacccagaa 11140 catcaggctc gactcttcta aaagtccgtc gttgcacccc ttgcctgaga gcattagcaa 11200 tttctatttc ataggaaatc tgtgtccctg cccctgctaa ageagggage ctggaccgtc 11260 ctgatttagt gaggggtgag ctgctggcac ttttttgtgt caccagtgtc ttaagcagtg 11320 atggagcaca aaagatcttt actgagaaga tggccatgaa gctctggcta gacaccaaga 11330 atatgatata ageagageta cagcacaaga tgagccaatg aggaaagcca ttcagggagg 11440 165- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 > 訂

I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283683 A7 ___B7_ 五、發明說明（163) agccacagaa atctcaaaca ctgaataatt gatcttcatc tttgtcaatc acaacagccc 8204 tctttcctgg tgacagaatg gaacaactgt aagagtggta ttgcttagtc cattttacag 8264 acccggaaac tcaacctcca cgaggttata caattttcct catgtcatgc aattacccaa 8324 aagcagagag tgggatcgga ctctctgttc tctaaactga tgtagctagt tcttagaaag 8384 ctcaaacaat cttgagtccc aaggacagca cctttatggt cacctggatt gatacctata 8444 tcaaaaaaaa aaaaaggtct cactagatag ccctggctac cctgaaactc tcactgtgta 8504 catttaggtg accacgaact cacagagatc tgccttccaa gtgctgggat taaagtatgt 8564 accaccacac ctgcatcttt gacaataact gagtggtatc taaattcttc cagtggctaa 8624 acagttaagt cccagttccc aaagtctgag aaaaatgcca ggtggtgaaa tctgtacaga 8684 cctttgttct taatgtacaa gtgagcctgc tttaaaaaca atacgcaagc tgtttttgct 8744 attgctaagt gttgcagaga cagaaaaggc tcccagaagt ggtaactttg gtccagaggt 8804 tctgttctca aactcattgt gagctctgaa agcaactgat gggcagctct gaaatcagct 8864 gggcaattag gctaataaca ggcataattt taatgtttca cacgcatgac agttcctccc 8924 cagctgccct agtacatact taccctccta ggcacgtcat tagacccata ggtataacca 8984 gtgactaatc aggccctggt ctaattctaa gttggcctcc tatataagtg ccactcagag 9044 tgtacctcat catggctgta gtgggcccag agtctaggga catagacttt tctattgtcc 9104 aatttctgat ttgtgaattt tctacaaaaa gaattttttt taattttaca aatcaaatca 9164 cagttactac atcttcagtt ccttcattaa ttagtgttac tatttaaaaa aataaaataa 9224 atcaagctca gaaacatcat ggatagggtt cattgtatct ccagggtacc tgagcttcaa 9284 agcaactcct cagacagcca tgaaaacatc ctcaattacc tcatgagaag acactattgt 9344 catttctgga gcctctgata atcctgagcc taggcagctt tgggatgaaa caatttctac 9404 ccttattgga acagtgtccc tctcctgtct ggaaacaatt caccaaaggc tccatgtggt 9464 tgtccagtaa ggtggtatgg ggacagaaat ggacaatgat ccctgagggc agtgatccat 9524 taaccttgcc ctcctatttc aga ate aag gat gca cat caa aag get ttg tac 9577 aca egg aat ggc cag etc ctg ctg gga gac cct gat tea gac aat tat 9625 agt cca ggtgatcttc cggtggtggg ggtgggggag tggaggggag ggtgtggggg 9631 gggetetett ccagaagttg cttagtgtcc atctgccaca aggeettgat tctttccttc 9741 aattgtgtct ctagagacat gagaatattg tcacagtgat aaggagaaga ggtaggggca 9801 gtttcttcct gtaaaaaatg aattccattt accctgcagt ctccatacag aaacaggcca 9861 166- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ---- ----訂---- 1283683 A7 ___B7 五、發明說明（164 ) ctaagcccag cttcccaaag ggacagctaa ccctggactc aaatgaatag gggttttcct 11500 ggcagagaac ataggtcaag cattctaggt agaatcagca attcagaaag gtgtgagaga 11560 ggcatggaga gctccaggca tgtctgggct atggtgtgtc attcttgtgg caagaatcca 11620 acgtctgtgg ttaaggagtt gctgaaaatt aaaataggaa aatgggtaga gtctaattgt 11680 gaatgacttg caaaggagtt tagcccataa gtggggagct cagaggagtc atctaaggat 11740 tgcaagcagg ggccctgtga tcattgctgg accagcctag gtgctacaga gcctaccttc 11800 agctctgcat cctcactcac atccaggtac cttcagaggt caatttctgt gctctggttc 11860 tatgggtagc ctgaccctgt ttcatcttct tgtataactt aggcacataa gcttagggac 11920 tggtagagtt tacttgagtg attggtgaat caggcagcac caaactacaa gttgttcagg 11930 gctttaccaa gggggcactg attggagaat tggaatgagg gtggttagaa tgcattcaga 12040 aaacaagggg aagaaaaatt tgattgctta aagtggaaag tcccaactta aatgttagtc 12100 « agtagtttct aattacttga gtctctaatt agaggttagt tggcagtttc tggttagtta 12160 atctaagttt cattttctta ggctatgacc attctctgag tcgcatgtta gcaatgcagt 12220 aagaactcaa gacccagaat agcctctgtt aattatttta gcaatgatca ctcatttctg 12280 ttgcctccta ttgagatctg ttcccatgga ccacccaggc acatcaggcc tcctagtacc 12340 aacataataa tgattgctgc acagacaaaa tatttttttt cagtatctgg tatttgctac 12400 atttccatta gtgctggagg gaaggctaca acgaccatga aggcatggcc cctgccttct 12460 aaggacttac aatgtaatag gagccctgac attataaagt gggtcacctt gtttcaaact 12520 gagccaaact gaggctgagg gcttagatta gtggtaggtc actttccaga catgttcagt 12580 gctaagaaaa acacattctg gggttagtta gatgttttag ttcatttgat aagaagccca 12640 atgattggac tttcaacttc tggaacccat gtggtggaag agagaaccaa cttctgacca 12700 tttgggtcat ggcacatccc ctaccatcac aagaactcac caaaataaat tagaaaaatc 12760 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -»» aagaaaaact catatcctat agacctctgg tagaattagc agaacgctgc tgtggcactt 12820 gggatttgaa actcaaaaat ggaagaagct acttgtgacc gttcaagact ccagggaggc 12880 tcctctgaca catcccacga ctcaggctta aattccttct tctccctaga aggccacgcc 12940 atcttctcaa ccaggccaca gatgctataa ttatgtaaat gtgtgggaga ggcacacttt 13000 agatcttatc cactagt 13017 167- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims

128¾¾¾6233號專利申請案中文申請專利範圍替換本(96年1月）六、申請專利範園 i. 一種經分離核酸分子，其係由選自下列核苷酸序列所組成之群所組成： (a) SEQ ID NO : 1 , SEQ ID NO : 3 ^ SEQ ID NO ：或SEQ ID NO: 35中任一者所列之核菩酸序列； (b) 編碼 SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4 , SEQ ID NO : 6或SEQ ID NCM 36中任一者所列多肽的核苷酸序列； (c) 與（a)或（b)的補體在65_68〇c下於含有〇〇15]^氯化鈉及0.001 5M檸檬酸鈉之雜交緩衝液條件下雜交之核甞酸序列，其中該經編碼多肽具下列多肽所具活性： SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 36 ;及 (d) 對（a)或（b)互補之核甞酸序列。 2 · 一種載體，其包括申請專利範圍第丨項之核酸分子。 3· 一種宿主細胞，其包括申請專利範圍第2項所述之載體。 4·如申請專利範圍第3項之宿主細胞，其為真核生物細胞。 5 ·如申請專利範圍第3項之宿主細胞，其為原核生物細胞。 6. —種產生IL-lra-R多肽之方法，其包括將申請專利範圍第3項之宿主細胞置於適當條件下培養以表現出該多肽，及視情況從該培養物分離出該多肽。 7. 一種多肽，其係經由如申請專利範圍第6項之方法產生者〇 8 ·如申請專利範圍第6項之方法，其中該核酸分子包括除了經可操作地聯結到編碼IL- lra-R多肽的DNA之天然IL_ lra-R多肽啟動子DNA以外的啟動子01^八。 68141-960110.DOC ^ ^ ^ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

A8 B8 C8 D8 1283683 六、申請專利範圍 9 · 一種經分離多肽，其係由下列任一者所列之胺基酸序列所組成· SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO : 6 或SEQ ID NO : 36。 1 0 · —種選擇性結合劑，其可特異地結合申請專利範圍第9項之多肽，其中該選擇性結合劑為一抗1]1-11^_11抗體。 1 1 ·如申請專利範圍第丨〇項之選擇性結合劑，其可特異地結合包括下列任一者：SEq ID NO : 2 , SEq ID NO: 4， SEQ ID NO : 6，或SEQ ID NO : 36所列胺基酸序列的多肽〇 1 2 ·如申請專利範圍第丨〇項之選擇性結合劑，其為一多株抗 1 3 ·如申请專利範圍第1 〇項之選擇性結合劑，其係經結合到一可侦檢標記（label)。 14.如申請專利範圍第10項之選擇性結合劑，其可拮抗iL_ 1 r a - R多肤生物活性。 1 5 ·如申請專利範圍第1 〇項之選擇性結合劑，其係經由用包括下列任一者· SEQ ID NO : 2，SEQ ID NO : 4，SEQ ID NO · 6，或SEQ ID NO : 36所列胺基酸序列的多肽將依動物免疫化所產生者。 1 6· —種偵檢或定量IL - lra-R多肽的量之方法，其包括使用申請專利範圍第10項之抗-IL_lra_R抗體。 1 7 · —種病毒載體，其包括申請專利範圍第1項之核酸分子。 1 8 · —種製備轉殖基因小鼠的方法，其包括將如申請專利範圍第1 8項之病毒載體轉移到小鼠體内。 68141-960110.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

裝訂

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