JP2003505045A - ヒト腫瘍壊死因子レセプターｔｒ１３およびｔｒ１４ - Google Patents

ヒト腫瘍壊死因子レセプターｔｒ１３およびｔｒ１４

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JP2003505045A
JP2003505045A JP2001511491A JP2001511491A JP2003505045A JP 2003505045 A JP2003505045 A JP 2003505045A JP 2001511491 A JP2001511491 A JP 2001511491A JP 2001511491 A JP2001511491 A JP 2001511491A JP 2003505045 A JP2003505045 A JP 2003505045A
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JP
Japan
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seq
polypeptide
nucleotide sequence
amino acid
receptor
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JP2001511491A
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スティーブン エム． ルーベン，
ジアン ニ，
ポール イー． ヤング，
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Human Genome Sciences Inc
Original Assignee
Human Genome Sciences Inc
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、２つの新規なタンパク質（ＴＲ１３およびＴＲ１４）に関し、これらは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプタースーパーファミリーのメンバーである。詳細には、ヒトＴＲ１３およびＴＲ１４タンパク質をコードする、単離された核酸分子が提供される。ＴＲ１３およびＴＲ１４ポリぺプチドもまた提供され、ベクター、宿主細胞、ならびにＴＲ１３およびＴＲ１４ポリぺプチドを産生するための組換え方法も同様に提供される。本発明はさらに、ＴＲ１３およびＴＲ１４のアゴニストおよびアンタゴニストを同定するためのスクリーニング方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の背景） （発明の分野） 本発明は、腫瘍壊死因子ファミリーのレセプターの２つの新規なメンバーに関
連する。より詳細には、新規ヒト腫瘍壊死因子レセプターであるＴＲ１３および
ＴＲ１４をコードする単離された核酸分子が提供される。ＴＲ１３ポリペプチド
およびＴＲ１４ポリペプチドもまた提供され、ベクター、宿主細胞、およびこれ
らを作製するための組換え方法が同様に提供される。本発明はさらに、ＴＲ１３
および／またはＴＲ１４の活性のアゴニストおよびアンタゴニストを同定するた
めのスクリーニング方法に関する。
【０００２】 （関連技術） 多くの生物学的作用（例えば、特定の刺激および天然の生物学的プロセスに対
する応答）は、サイトカインのような因子により制御される。多くのサイトカイ
ンは、レセプターと係合し、そして細胞内応答を生じることによりレセプターを
介して作用する。
【０００３】 例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αおよび腫瘍壊死因子βは、多数の生物学的
プロセス（ショックおよび炎症性疾患の感染および誘発に対する防御を含む）を
制御するためのＴＮＦレセプターを介して作用するサイトカインである。ＴＮＦ
分子は「ＴＮＦリガンド」スーパーファミリーに属し、そしてこれらのレセプタ
ーまたは対のリガンド（「ＴＮＦレセプター」スーパーファミリー）と共に作用
する。現在までに、ＴＮＦリガンドスーパーファミリーの９種のメンバーが同定
されており、そしてＴＮＦレセプタースーパーファミリーの１０種のメンバーが
特徴付けられている。
【０００４】 リガンドの中には、ＴＮＦ−α、リンホトキシン−α（ＴＮＦ−βとしてまた
公知であるＬＴ−α）、ＬＴ−β（複合体ヘテロトリマーＬＴ−２−β中に見出
される）、ＦａｓＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、Ｏ
Ｘ４０Ｌ、および神経成長因子（ＮＧＦ）が含まれる。ＴＮＦレセプターのスー
パーファミリーは、ｐ５５ＴＮＦレセプター、ｐ７５ＴＮＦレセプター、ＴＮＦ
レセプター関連タンパク質、ＦＡＳ抗原またはＡＰＯ−１、ＣＤ４０、ＣＤ２７
、ＣＤ３０、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、低親和性ｐ７５、およびＮＧＦレセプター
（Ａ．Ｍｅａｇｅｒ，，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ２２：２９１−２９５（１９
９４））を含む。
【０００５】 ＴＮＦリガンドスーパーファミリーの多くのメンバーは、活性化Ｔ細胞により
発現される。これは、これらのメンバーが細胞個体発生および機能の根底にある
他の細胞型とのＴ細胞の相互作用に必要であることを意味する（Ａ．Ｍｅａｇｅ
ｒ，前出）。
【０００６】 ＴＮＦレセプターファミリーのいくつかのメンバーの不可欠な機能についての
かなりの洞察が、これらのタンパク質の発現をなくす変異体の同定および作製に
より得られている。例えば、ＦＡＳ抗原およびそのリガンド中の天然に存在する
変異は、リンパ球増殖疾患を生じ（Ｒ．Ｗａｔａｎａｂｅ−Ｆｕｋｕｎａｇａら
、Ｎａｔｕｒｅ ３５６：３１４（１９９２））、これはおそらく、プログラム
された細胞死の失敗を反映する。ＣＤ４０リガンドの変異は、血漿中の高レベル
の免疫グロブリンＭおよび低レベルの免疫グロブリンＧにより特徴付けされるＸ
連鎖免疫不全状態を生じる。これは、不完全なＴ細胞依存性Ｂ細胞活性化を示す
（Ｒ．Ｃ．Ａｌｌｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：９９０（１９９３））。低
親和性神経成長因子レセプターの標的化された変異は、末梢構造の不完全な知覚
神経支配（ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ）により特徴付けられた障害を生じる（Ｋ．Ｆ
．Ｌｅｅら、Ｃｅｌｌ ６９：７３７（１９９２））。
【０００７】 ＴＮＦ−αおよびＬＴ−αは、２つのＴＮＦレセプター（５５ｋｄおよび７５
ｋｄのＴＮＦレセプター）へ結合し得る。それらのレセプターを通して作用する
ＴＮＦ−αおよびＬＴ−αにより誘発される多くの生物学的効果は、移植された
腫瘍の出血性壊死、細胞傷害性、エンドトキシンショックにおける役割、炎症、
免疫調節、増殖および抗ウイルス応答、ならびに電離放射線の有害な効果に対す
る防御を含む。ＴＮＦ−αおよびＬＴ−αは、エンドトキシンショック、大脳マ
ラリア、腫瘍、自己免疫疾患、ＡＩＤＳ、および移植片宿主拒絶を含む広範囲な
疾患の病因に関与する（Ｂ．ＢｅｕｔｌｅｒおよびＣ．Ｖｏｎ．Ｈｕｆｆｅｌ，
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：６６７−６６８（１９９４））。ｐ５５レセプター中
の変異は、微生物感染に対して増加された感受性を生じる。
【０００８】 さらに、ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＦａｓのＣ末端付近の約８０アミノ酸ド
メインが、プログラムされた細胞死についてのシグナルを伝える原因である「デ
スドメイン（ｄｅａｔｈ ｄｏｍａｉｎ）」として報告された（Ｔａｒｔａｇｌ
ｉａら、Ｃｅｌｌ ７４：８４５（１９９３））。
【０００９】 アポトーシス、すなわちプログラムされた細胞死は、多細胞生物の正常な発達
およびホメオスタシスに不可欠である生理学的プロセスである（Ｈ．Ｓｔｅｌｌ
ｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６７，１４４５−１４４９（１９９５））。アポトー
シスの撹乱は、ガン、神経変性障害、および後天性免疫不全症候群を含むいくつ
かのヒト疾患の病因に寄与する（Ｃ．Ｂ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２６７，１４５６−１４６２（１９９５））。最近、多くの注目が、２つの細胞
表面のデスレセプター（ｄｅａｔｈ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（Ｆａｓ／ＡＰＯ−１
およびＴＮＦＲ−１）のシグナル伝達および生物学的機能に集中している（Ｊ．
Ｌ．Ｃｌｅｖｅｌａｎｄら，Ｃｅｌｌ ８１：４７９−４８２（１９９５）；Ａ
．Ｆｒａｓｅｒら、Ｃｅｌｌ ８５：７８１−７８４（１９９６）；Ｓ．Ｎａｇ
ａｔａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６７：１４４９−５６（１９９５））。両方は、
とりわけ、ＴＮＦＲ−２、低親和性ＮＧＦＲ、ＣＤ４０、およびＣＤ３０もまた
含むＴＮＦレセプターファミリーのメンバーである（Ｃ．Ａ．Ｓｍｉｔｈら、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２４８：１０１９−２３（１９９０）；Ｍ．Ｔｅｗａｒｉら、Ｍ
ｏｄｕｌａｒ Ｔｅｘｔｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ；Ｍ．Ｐｕｒｔｏｎ，Ｈｅｌｄｉｎ，Ｃａｒｌ編（Ｃｈａｐｍａｎ
ａｎｄ Ｈａｌｌ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９９５）。ファミリーのメンバーはこれ
らの細胞外ドメイン中のシステインリッチ反復の存在により定義されるが、Ｆａ
ｓ／ＡＰＯ−１およびＴＮＦＲ−１はまた、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ自殺遺伝子ｒ
ｅａｐｅｒ（Ｐ．Ｇｏｌｓｔｅｉｎら，Ｃｅｌｌ ８１：１８５−６（１９９５
）；Ｋ．Ｗｈｉｔｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４；６７７−８３（１９９４））
の遠縁にあたる、細胞内相同性の領域である、適切に命名された「デスドメイン
」を共有する。この共有されたデスドメインは、両レセプターが、最近まで未同
定のままであった関連するセットのシグナル伝達分子と相互作用することを示唆
する。Ｆａｓ／ＡＰＯ−１の活性化は、デスドメインを含むアダプター分子ＦＡ
ＤＤ／ＭＯＲＴ１（Ａ．Ｍ．Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎら，Ｃｅｌｌ ８１：５０５
−５１２（１９９５）；Ｍ．Ｐ．Ｂｏｌｄｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
７０：７７９５−８（１９９５）；Ｆ．Ｃ．Ｋｉｓｃｈｋｅｌら、ＥＭＢＯ １
４：５５７９−５５８８（１９９５））を補充し、これは次いで、プロアポトー
シスプロテアーゼのＩＣＥ／ＣＥＤ−３ファミリーのメンバーであるＦＬＩＣＥ
／ＭＡＣＨ１へ結合し、そしておそらくこれを活性化する（Ｍ．Ｍｕｚｉｏら、
Ｃｅｌｌ ８５：８１７−８２７（１９９６）；Ｍ．Ｐ．Ｂｏｌｄｉｎら，Ｃｅ
ｌｌ ８５：８０３−８１５（１９９６））。Ｆａｓ／ＡＰＯ−１の中心的役割
は細胞死を誘発することであるが、ＴＮＦＲ−１は、多数の多様な生物学的活性
（その多くは、ＮＦ−ｋＢを活性化する能力に由来する）の信号を送り得る（Ｌ
．Ａ．Ｔａｒｔａｇｌｉａら，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １３：１５１−１
５３（１９９２））。従って、ＴＮＦＲ−１は、多価アダプター分子ＴＲＡＤＤ
（これは、ＦＡＤＤと同様にまた、デスドメインを含む）を補充する（Ｈ．Ｈｓ
ｕら、Ｃｅｌｌ ８１：４９５−５０４（１９９５）；Ｈ．Ｈｓｕら、Ｃｅｌｌ ８４：２９９−３０８（１９９６））。ＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、およびＲＩＰ
を含む多くのシグナル伝達分子との会合を通して、ＴＲＡＤＤは、アポトーシス
およびＮＦ−ｋＢ活性化の両方へ信号を送り得る（Ｈ．Ｈｓｕら、Ｃｅｌｌ ８
４：２９９−３０８（１９９６）；Ｈ．Ｈｓｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４，３８
７−３９６（１９９６））。
【００１０】 近年、新たなアポトーシス誘導性ＴＮＦリガンドが発見されている。Ｓ．Ｒ．
Ｗｉｌｅｙら（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：６７３−６８２（１９９５））は、この
新しい分子を「ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド」すなわち「ＴＲＡＩＬ
］と命名した。Ｒ．Ｍ．Ｐｉｔｔｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１２
６８７−１２６９０（１９９６）は、この分子を「Ａｐｏ−２リガンド」すなわ
ち「Ａｐｏ−２Ｌ」と命名した。この分子はまた、同時係属中の米国仮特許出願
番号６０／０１３４０５においてもまた開示されている。便宜上、この分子を、
本明細書中でＴＲＡＩＬという。
【００１１】 ＦＡＳリガンド（この転写物は、刺激されたＴ細胞に大部分は拘束されるよう
である）とは異なり、有意なレベルのＴＲＡＩＬが、多くのヒト組織（例えば、
脾臓、肺、前立腺、胸腺、卵巣、小腸、結腸、末梢血リンパ球、胎盤、腎臓）に
おいて検出され、そしていくつかの細胞株によって構成的に転写される。ＴＲＡ
ＩＬはＦａｓリガンドから独立して作用することが示されている（Ｓ．Ｒ．Ｗｉ
ｌｅｙら、前出）。ＴＲＡＩＬはＦａｓ／Ａｐｏ−１Ｌによる死シグナル伝達と
同様の時間枠内で、迅速にアポトーシスを活性化するが、ＴＮＦ誘導性アポトー
シスよりも非常に早いこともまた示されている。Ｓ．Ａ．Ｍａｒｓｔｅｒｓら、
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：７５０−７５２（１９９６）。ＴＲＡＩ
ＬがＴＮＦＲ−１、Ｆａｓ、または近年同定されたＤＲ３へ結合できないことは
、ＴＲＡＩＬが、独特のレセプターと相互作用し得ることを示唆する。
【００１２】 今までの研究によりＴＲＡＩＬについてのいくつかの固有のＴＮＦレセプター
が存在することが示唆されている。同時係属中の米国仮特許出願番号６０／０３
５，７２２には、ＴＲＡＩＬについての１つの新規のデスドメイン含有レセプタ
ーであるＤＲ４が開示された。Ｐａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：１１１−１
１３（１９９７年４月）を参照のこと。同時係属中の米国仮特許出願番号６０／
０４０，８４６には、新規のデスドメイン含有レセプター（ＤＲ５（ＴＲ７））
が開示された。このレセプターは、現在、ＴＲＡＩＬに結合することが示されて
いる。同時係属中の米国仮特許出願番号６０／０３５，４９６には、別のレセプ
ター（ＴＲ５）が開示された。このレセプターもまた、現在、ＴＲＡＩＬに結合
することが示されているが、ＴＲ５は、アポトーシスを拮抗する非シグナル伝達
囮（ｄｅｃｏｙ）レセプターであることが示されている。
【００１３】 ＴＮＦファミリーリガンドおよびＴＮＦファミリーレセプターの効果は変化に
富んでおり、そして哺乳動物系の生物学的プロセスにおいて正常および異常の両
方の多数の機能に影響する。それゆえ、正常および疾患状態の両方において生物
学的活性に影響するようなレセプターおよびリガンドの同定および特徴づけのた
めの明確な必要性が存在する。特に、ＴＲＡＩＬに結合するさらなる新規なレセ
プターを単離および特徴付ける必要性が存在する。
【００１４】 （発明の要旨） 本発明は、配列番号２（図１Ａ〜Ｃ）に示されるアミノ酸配列、配列番号４０
（図７Ａ〜Ｄ）に示されるアミノ酸配列、または１９９９年７月１３日にアメリ
カンタイプカルチャーコレクション（「ＡＴＣＣ」）受託番号ＰＴＡ−３４９（
ＨＷＬＨＭ７０）として寄託されたｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ
酸配列、および／あるいは１９９９年８月１２日にアメリカンタイプカルチャー
コレクション（「ＡＴＣＣ」）受託番号ＰＴＡ−５０７（ＨＷＬＨＮ８３）とし
て寄託されたｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ１
３レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子を提供
する。ＡＴＣＣは、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、
Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９にある。ＴＲ１３
レセプターのポリヌクレオチドおよびポリペプチドについての種々の使用方法（
本明細書中に記載の診断的使用および治療的使用が挙げられるがこれらに限定さ
れない）は、その全ての改変体およびフラグメント（例えば、図１Ａ〜Ｃ、図７
Ａ〜Ｄ、配列番号１、配列番号２、配列番号３９、配列番号４０において本明細
書中で開示および記載され、そして／または寄託されたｃＤＮＡクローンＨＷＬ
ＨＭ７０およびＨＷＬＨＮ８３のうち１つまたは両方に含まれるか、またはこれ
らによってコードされる、ＴＲ１３レセプターのフラグメント）と同等に適用さ
れることが、当業者に明らかである。
【００１５】 本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を含む組換えベクター、およびこ
の組換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞
の作製方法、および組換え技術によるＴＲ１３ポリペプチド（例えば、図１Ａ〜
Ｃおよび／または図７Ａ〜Ｄに示されるＴＲ１３ポリペプチド配列、あるいはそ
れらのフラグメント）の産生のための使用方法に関する。
【００１６】 本発明はさらに、本明細書中に記載のポリヌクレオチド（例えば、配列番号１
および／または配列番号３９に示されるポリヌクレオチド配列、あるいはそれら
のフラグメント）によってコードされるアミノ酸配列を有する、単離されたＴＲ
１３ポリペプチド（例えば、図１Ａ〜Ｃおよび／または図７Ａ〜Ｄに示されるＴ
Ｒ１３ポリペプチド配列、あるいはそれらのフラグメント）を提供する。
【００１７】 本発明はまた、ＴＲ１３ポリヌクレオチドおよび／またはＴＲ１３タンパク質
（例えば、図１Ａ〜Ｃおよび／または図７Ａ〜Ｄに示されるＴＲ１３タンパク質
、あるいはそれらフラグメント）のレベルを検出するための定量アッセイおよび
診断アッセイのような診断アッセイを提供する。従って、例えば、正常なコント
ロール組織サンプルと比較した、ＴＲ１３またはその可溶化形態の過剰発現を検
出するための本発明に従う診断アッセイは、腫瘍の存在を検出するために使用さ
れ得る。
【００１８】 本発明は、配列番号６１（図１０Ａ〜Ｈ）に示されるアミノ酸配列、および／
または１９９９年７月１３日にアメリカンタイプカルチャーコレクション（「Ａ
ＴＣＣ」）受託番号ＰＴＡ−３４８（ＨＭＳＨＫ４７）として寄託されたｃＤＮ
Ａクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ１４レセプターをコー
ドするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。配列番号６１お
よび図１０Ａ〜Ｈの配列はＴＲ１４レセプタータンパク質の好ましい実施形態で
あるが、本発明は、配列番号５に示されるアミノ酸配列（図４Ａ〜Ｄ）を有する
ＴＲ１４ レセプターをコードするポリヌクレオチドを含む、代替的な単離され
た核酸分子の実施形態を提供する。配列番号６１のアミノ酸残基Ｔ−７８〜Ｍ−
２３１の配列は、配列番号５のアミノ酸残基Ｔ−７３〜Ｍ−２２６の配列と同一
である。ＴＲ１３レセプターポリヌクレオチドおよびＴＲ１３レセプターポリペ
プチドについての種々の使用方法（本明細書中に記載される診断的使用および治
療的使用が挙げられるがこれらに限定されない）は、その全ての改変体およびフ
ラグメント（例えば、図１０Ａ〜Ｈおよび配列番号６０および６１、あるいは、
図４Ａ〜Ｄおよび配列番号４、配列番号５に開示され、そして記載され、ならび
に／あるいは寄託されたｃＤＮＡクローン（ＨＭＳＨＫ４７）に含まれるか、ま
たはこれによってコードされるＴＲ１４レセプターのフラグメント）と同等に適
用されることが、当業者に明らかである。
【００１９】 本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を含む組換えベクター、およびこ
の組換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞
を作製する方法ならびに組換え技術によってＴＲ１４ポリペプチドを産生するた
めのその使用方法に関する。
【００２０】 本発明は、本明細書中に記載のポリヌクレオチド（例えば、配列番号６０、ま
たは配列番号４に示されるポリヌクレオチド配列、あるいはそれらのフラグメン
ト）によってコードされるアミノ酸配列を有する、単離されたＴＲ１４ポリペプ
チド（例えば、図１０Ａ〜Ｈ、または図４Ａ〜Ｄに示されるＴＲ１４ポリペプチ
ド配列、あるいはそれらのフラグメント）をさらに提供する。
【００２１】 本発明はまた、ＴＲ１４ポリヌクレオチドおよび／またはＴＲ１４タンパク質
（例えば、図１０Ａ〜Ｈまたは図４Ａ〜Ｄに開示されるＴＲ１４ポリペプチド配
列、あるいはそれらのフラグメント）のレベルを検出するための定量アッセイお
よび診断アッセイのような診断アッセイを提供する。従って、例えば、正常なコ
ントロール組織サンプルと比較した、ＴＲ１４またはその可溶化形態の過剰発現
を検出するための本発明に従う診断アッセイは、腫瘍の存在を検出するために使
用され得る。
【００２２】 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーリガンドは、細胞増殖、細胞傷害性、抗ウ
イルス活性、免疫調節活性、造血およびいくつかの遺伝子の転写調節を含む多数
の細胞性応答を誘導する、最も多面的なサイトカインの一種であることが公知で
ある。ＴＮＦファミリーリガンドに対する細胞性応答は、正常な生理学的応答の
みでなく、増加したアポトーシスまたはアポトーシスの阻害に関連する疾患を含
む。アポトーシス（プログラムされた細胞死）は、免疫系の末梢Ｔリンパ球の欠
失に関与する生理学的機構であり、そしてアポトーシス調節不全は、多数の異な
る病原性プロセスを導き得る。増加した細胞生存、無制御の細胞増殖またはアポ
トーシスの阻害に関連する疾患としては、癌、自己免疫障害、ウイルス感染、炎
症、対宿主性移植片病、急性移植片拒絶および慢性移植片拒絶が挙げられる。増
加したアポトーシスと関連する疾患としては、ＡＩＤＳ、神経変性障害、脊髄形
成異常症候群、虚血性損傷、毒素誘導性肝疾患、敗血症性ショック、悪液質およ
び食欲不振が挙げられる。
【００２３】 従って、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導されるＴＲ１３媒
介シグナル伝達および／またはＴＲ１３媒介アポトーシスを阻害する方法をさら
に提供し、これは、ＴＲ１３ポリペプチド（すなわち、図１Ａ〜Ｃおよび／また
は図７Ａ〜Ｄに示されるＴＲ１３ポリペプチド、あるいはそれらのフラグメント
）を発現する細胞に、ＴＲ１３媒介アポトーシスを減少させ得、そして／または
ＴＲ１３媒介シグナル伝達を減少させ得るＴＲ１３アンタゴニストの有効量を投
与する工程を包含する。好ましくは、ＴＲ１３媒介シグナル伝達は、増加したア
ポトーシスが示される疾患を処置するために減少される。
【００２４】 従って、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導されるＴＲ１３媒
介シグナル伝達および／またはＴＲ１３媒介アポトーシスを促進する方法をさら
に提供し、これはＴＲ１３ポリペプチド（例えば、図１Ａ〜Ｃおよび／または図
７Ａ〜Ｄに示されるＴＲ１３ポリペプチド、あるいはそれらのフラグメント）を
発現する細胞に、ＴＲ１３媒介アポトーシスを増加させ得、そして／またはＴＲ
１３媒介シグナル伝達を増加させ得るＴＲ１３アゴニストの有効量を投与する工
程を含む。好ましくは、ＴＲ１３媒介シグナル伝達は、減少したアポトーシスが
示される疾患を処置するために増加される。
【００２５】 従って、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導されるＴＲ１４媒
介シグナル伝達および／またはＴＲ１４媒介アポトーシスを阻害するための方法
をさらに提供し、この方法は、ＴＲ１４ポリペプチドを発現する細胞に、ＴＲ１
４媒介アポトーシスを減少させ得、そして／またはＴＲ１４媒介シグナル伝達を
減少させ得るＴＲ１４アンタゴニストの有効量を投与することを含む。好ましく
は、ＴＲ１４媒介シグナル伝達は、増加したアポトーシスが示される疾患を処置
するために減少される。
【００２６】 従って、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導されるＴＲ１４媒
介シグナル伝達および／またはＴＲ１４媒介アポトーシスを促進するための方法
をさらに提供し、この方法はＴＲ１４ポリペプチドを発現する細胞に、ＴＲ１４
媒介アポトーシスを増加させ得、そして／またはＴＲ１４媒介シグナル伝達を増
加させ得るＴＲ１４アゴニストの有効量を投与することを含む。好ましくは、Ｔ
Ｒ１４媒介シグナル伝達は、減少したアポトーシスが示される疾患を処置するた
めに増加される。
【００２７】 さらなる局面において、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンド（例えば、ＡＰ
ＲＩＬおよびニュートロキン（Ｎｅｕｔｒｏｋｉｎｅ）−α（国際出願公開番号
ＷＯ ９８／１８９２１））によって誘導されるＴＲ１３媒介シグナル伝達を増
大するための方法に関し、この方法は、ＴＲ１３ポリペプチド（例えば、図１Ａ
〜Ｃおよび／または図７Ａ〜Ｄに示されるポリペプチド、あるいはそれらのフラ
グメント）を発現する細胞に、ＴＲ１３媒介活性を増加させ得るアゴニストの有
効量を投与することを含む。好ましくは、ＴＲ１３媒介活性は、減少したアポト
ーシスが示される疾患を処置するために減少される。
【００２８】 本発明の任意の候補「アゴニスト」または候補「アンタゴニスト」が、ＴＲ１
３媒介シグナル伝達を増大し得るかまたは阻害し得るかは、当該分野で公知のＴ
ＮＦ−ファミリーリガンド／レセプター細胞応答アッセイ（以下に、より詳細に
記載されるものを含む）を用いて決定され得る。従って、さらなる局面において
、候補アゴニストまたは候補アンタゴニストがＴＲ１３ ＴＮＦファミリーリガ
ンドに対する細胞応答を増大させ得るかまたは阻害し得るかを決定するためのス
クリーニング方法が提供される。この方法は、ＴＲ１３ポリペプチド（例えば、
図１Ａ〜Ｃおよび／または図７Ａ〜Ｄに示されるポリペプチド、あるいはそれら
のフラグメント）を発現する細胞を候補化合物およびＴＮＦファミリーリガンド
（例えば、ニュートロカイン−αまたはＡＰＲＩＬ）と接触させる工程、細胞応
答をアッセイする工程、ならびにその細胞応答を標準的な細胞応答と比較する工
程を包含し、その標準は、候補化合物の非存在下でリガンドとの接触がなされた
場合にアッセイされ、それによって、標準を上回る細胞応答の増加は、その候補
化合物がリガンド／レセプターシグナル伝達経路のアゴニストであることを示し
、そして標準と比較して減少した細胞応答は、その候補化合物がリガンド／レセ
プターシグナル伝達経路のアンタゴニストであることを示す。本発明によって、
ＴＲ１３ポリペプチド（例えば、図１Ａ〜Ｃおよび／または図７Ａ〜Ｄに示され
るポリペプチド、あるいはそれらフラグメント）を発現する細胞を、内因性また
は外因性のいずれかで投与されたＴＮＦファミリーリガンドと接触させ得る。
【００２９】 さらなる局面において、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導さ
れるアポトーシスＴＲ１４媒介シグナル伝達を増大させるための方法に関し、こ
れは、ＴＲ１４ポリペプチド（例えば、図１０Ａ〜Ｈまたは図４Ａ〜Ｄに示され
るポリペプチド、あるいはそれらのフラグメント）を発現する細胞に、ＴＲ１４
媒介活性を増加させ得るアゴニストの有効量を投与することを含む。好ましくは
、ＴＲ１４媒介活性は、減少したアポトーシスが示される疾患を処置するために
減少される。
【００３０】 特定の好ましい実施形態において、ＴＲ１４ポリヌクレオチドおよびＴＲ１４
ポリペプチド、ならびにＴＲ１４レセプターをアゴナイズする抗体（上記の抗体
の節で記載されるような）は、上皮細胞の増殖および／または発達を刺激して、
この節に記載される疾患および障害を改善させる。ＴＮＦファミリーのタンパク
質のメンバーは、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を介してシグナル伝達することが
公知である。ＮＦ−κＢは、広範な特定の薬剤によって活性化されて、細胞の活
性化および分化を刺激する転写因子である。本発明のＴＲ１４レセプターは、Ｎ
Ｆ−κＢ経路を介してシグナル伝達して、細胞の増殖および発達を活性化すると
考えられている。従って、本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチドおよびＴＲ１４ポ
リペプチド、ならびにＴＲ１４をアゴナイズする抗体およびペプチドは、本発明
に従って、ＮＦ−κＢ媒介上皮細胞増殖（外胚葉性形成異常が挙げられるがこれ
らに限定されない）を刺激するために使用され得る。
【００３１】 本発明の任意の候補「アゴニスト」または候補「アンタゴニスト」が、ＴＲ１
４媒介シグナル伝達を増大させ得るかまたは阻害し得るかは、当該分野で公知の
ＴＲ１４ ＴＮＦファミリーリガンド／レセプター細胞応答アッセイ（以下に、
より詳細に記載されるものを含む）を用いて決定され得る。従って、さらなる局
面において、候補アゴニストまたは候補アンタゴニストがＴＮＦファミリーリガ
ンドに対する細胞応答を増大させ得るかまたは阻害し得るかを決定するためのス
クリーニング方法が提供される。この方法は、ＴＲ１４ポリペプチドを発現する
細胞を候補化合物およびＴＮＦファミリーリガンドと接触させる工程、細胞応答
をアッセイする工程、ならびにその細胞応答を標準的な細胞応答と比較する工程
を包含し、その標準は、候補化合物の非存在下でリガンドとの接触がなされた場
合にアッセイされ、それによって、標準を上回る細胞応答の増加は、その候補化
合物がリガンド／レセプターシグナル伝達経路のアゴニストであることを示し、
そして標準と比較して減少した細胞応答は、その候補化合物がリガンド／レセプ
ターシグナル伝達経路のアンタゴニストであることを示す。本発明によって、Ｔ
Ｒ１４ポリペプチド（例えば、図１０Ａ〜Ｈまたは図４Ａ〜Ｄに示されるポリペ
プチド）を発現する細胞を、内因性または外因性のいずれかで投与されたＴＮＦ
ファミリーリガンドと接触させ得る。
【００３２】 （好ましい実施形態の詳細な説明） 本発明は、図１Ａ〜Ｃ（配列番号２）および／もしくは図７Ａ〜Ｄ（配列番号
４０）に示されるアミノ酸配列ならびに／またはそれらのフラグメントもしくは
改変体を有するＴＲ１３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、単
離された核酸分子を提供する。本発明のＴＲ１３ポリペプチドは、ヒトＯＸ４０
ホモログ（図２Ａ〜Ｃ）および腫瘍壊死因子レセプターＩＩホモログ（図８Ａ〜
Ｂ）と配列相同性を共有する。図１Ａ〜Ｃ（配列番号１）に示されるヌクレオチ
ド配列は、ｃＤＮＡクローン（ＨＷＬＨＭ７０）を配列決定することによって得
られ、このクローンは、１９９９年７月１３日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、そして受託番号ＰＴＡ−３
４９が付与された。図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）に示すヌクレオチド配列が、ｃ
ＤＮＡクローン（ＨＷＬＨＮ８３）を配列決定することによって部分的に得られ
た。このｃＤＮＡクローン（ＨＷＬＨＮ８３）は、１９９９年８月１２日にＡｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、
そして受託番号ＰＴＡ−５０７が付与された。この寄託されたクローンは、Ｓａ
ｌＩおよびＮｏｔＩ制限エンドヌクレアーゼ切断部位を用いて、ｐＳｐｏｒｔ１
クローン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）
に挿入されている。
【００３３】 本発明は、クローニングされたｃＤＮＡを配列決定することによって決定され
た図１０Ａ〜Ｈ（配列番号５１）またはその代わりに４Ａ〜Ｄ（配列番号５）に
示されるアミノ酸配列を有するＴＲ１４ポリペプチドおよび／またはそれらのフ
ラグメントもしくは改変体をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸
分子を提供する。本発明のＴＲ１４ポリペプチドは、腫瘍壊死因子レセプター（
図５Ａ〜Ｂ）と配列相同性を共有する。図１０Ａ〜Ｈ（配列番号６０）に示され
るヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡクローン（ＨＭＳＨＫ４７）を配列決定するこ
とによって得られた。このクローンは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔ
ｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに１９９９年７月１３日に寄託され、そして受託
番号ＰＴＡ−３４８が与えられた。この寄託されたクローンは、ＥｃｏＲＩ制限
エンドヌクレアーゼ切断部位を用いて、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔクローン（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に挿入されてい
る。配列番号６０はＴＲ１４についての好適な配列であるが、代替のＴＲ１４関
連配列を図４Ａ〜Ｄ（配列番号４）に示す。
【００３４】 （核酸分子） 他に示されない限り、本明細書中でＤＮＡ分子を配列決定することによって決
定されたすべてのヌクレオチド配列は、自動化ＤＮＡ配列決定機（例えば、Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．からのＭｏｄｅｌ ３７００およ
びＭｏｄｅｌ ３７３）を用いて決定され、そして本明細書中で決定されるＤＮ
Ａ分子によってコードされるポリペプチドのすべてのアミノ酸配列は、上記のよ
うに決定されるＤＮＡ配列の翻訳によって推定された。従って、この自動化アプ
ローチによって決定された任意のＤＮＡ配列について当該分野において公知のよ
うに、本明細書中で決定される任意のヌクレオチド配列はいくつかの誤りを含み
得る。自動化によって決定されるヌクレオチド配列は、配列決定されたＤＮＡ分
子の実際のヌクレオチド配列に対して、代表的には少なくとも約９０％同一、よ
り代表的には少なくとも約９５％から少なくとも約９９．９％同一である。実際
の配列は、当該分野において周知の手動ＤＮＡ配列決定方法を含む他のアプロー
チによってより正確に決定され得る。当該分野においてまた公知のように、実際
の配列と比較した、決定されたヌクレオチド配列における単一の挿入または欠失
は、ヌクレオチド配列の翻訳におけるフレームシフトを引き起こし、その結果、
決定されたヌクレオチド配列によってコードされる推定アミノ酸配列は、このよ
うな挿入または欠失の点にて始まる配列決定されたＤＮＡ分子によって実際にコ
ードされるアミノ酸配列とは完全に異なる。
【００３５】 本明細書中で提供される情報（例えば、配列番号１および／または配列番号３
９に示される核酸配列）を用いて、ＴＲ１３ポリペプチドをコードする本発明の
核酸分子は、出発物質としてｍＲＮＡを用いてｃＤＮＡをクローニングするため
の手順のような、標準的なクローニング手順およびスクリーニング手順を用いて
得られ得る。本発明の例示として、配列番号１に記載される核酸分子は、活性化
された単球由来のｃＤＮＡライブラリーにおいて発見された。さらに、本発明の
例示として、配列番号３９に記載される核酸分子は、正常なヒト結腸由来のｃＤ
ＮＡライブラリーにおいて発見された。本発明のＴ１３ポリヌクレオチドはまた
、以下の組織由来のｃＤＮＡライブラリーにおいて同定されている：膵臓腫瘍、
子宮内膜腫瘍、成体小腸、結腸癌、乳癌細胞株、休止しているＴ細胞、扁桃、直
腸、Ｔ細胞ヘルパー、松果体、アポトーシス性Ｔ細胞、精巣上体（ｅｐｉｄｉｄ
ｙｍｕｓ）、大網、前立腺ＢＰＨ、破骨細胞腫、子宮内膜間質細胞、間質細胞、
黒質、活性化Ｔ細胞、扁桃および精巣組織。
【００３６】 配列番号１の決定されたＴＲ１３ヌクレオチド配列は、約８２ｋＤａの推定分
子量を有する、約７５０アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーデ
ィングフレームを含む。推定されたＴＲ１３レセプターのアミノ酸配列は、配列
番号２のアミノ酸残基約１〜残基約７５０に示される。ＴＮＦレセプターファミ
リーの公知のメンバーの中で、このＴＲ１３ポリペプチドは、ヒトＯＸ４０と最
も高い程度の相同性を共有し（図２Ａ〜Ｃを参照のこと）、複数のシステインリ
ッチドメインにわたり有意な配列相同性を含む。
【００３７】 配列番号３９の決定されたＴＲ１３ヌクレオチド配列は、配列番号４０の、約
１〜約４１のアミノ酸を含む推定シグナル、約４２〜約９０６のアミノ酸を含む
推定細胞外ドメイン、約９０７〜約９３１のアミノ酸を含む膜貫通ドメインおよ
び約９３２〜１００１のアミノ酸を含む細胞内ドメインを有し、かつ約１１０ｋ
Ｄａの推定分子量を有する、約１００１アミノ酸残基のタンパク質をコードする
オープンリーディングフレームを含む。推定されたＴＲ１３レセプターのアミノ
酸配列は、配列番号４０のアミノ酸残基約１〜残基約１００１に示される。ＴＮ
Ｆレセプターファミリーの公知のメンバーの中で、このＴＲ１３ポリペプチドは
、腫瘍壊死因子レセプターＩＩホモログと最も高い程度の相同性を共有し（図８
Ａ〜Ｂを参照のこと）、複数のシステインリッチドメインにわたり有意な配列相
同性を含む。
【００３８】 本明細書中で提供される情報（例えば、好ましくは、配列番号６０またはその
代わりに配列番号４に示される核酸配列）を用いて、ＴＲ１４ポリペプチドをコ
ードする本発明の核酸分子は、出発物質としてｍＲＮＡを用いてｃＤＮＡをクロ
ーニングするための手順のような、標準的なクローニング手順またはスクリーニ
ング手順を用いて得られ得る。本発明の例示として、寄託されたクローンＨＭＳ
ＨＫ４７に含まれる（配列番号６０に記載される）核酸分子は、結腸由来のｃＤ
ＮＡライブラリーにおいて発見された。本発明の遺伝子はまた、以下の組織由来
のｃＤＮＡライブラリーにおいて同定されている：活性化Ｔ細胞、子宮内膜腫瘍
、胸腺および１２週齢の初期段階のヒト組織。
【００３９】 配列番号６０のＴＲ１４ ｃＤＮＡの決定されたヌクレオチド配列は、配列番
号６１の、約１〜約１３８のアミノ酸を含む推定細胞外ドメイン、約１３９〜約
１５５のアミノ酸を含む膜貫通ドメイン、および約１５６〜約２３１のアミノ酸
を含む細胞内ドメインを有し、かつ約２５ｋＤａの推定分子量を有する、約２３
１アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含む
。
【００４０】 配列番号４のＴＲ１４ヌクレオチド配列は、配列番号４の、約１〜約１３３の
アミノ酸を含む推定細胞外ドメイン、約１３４〜約１５０（配列番号６１の約１
３９〜約１５５のアミノ酸）のアミノ酸を含む膜貫通ドメイン、および約１５１
〜約２２６（配列番号６１の約１５６〜約２３１のアミノ酸）のアミノ酸を含む
細胞内ドメインを有し、かつ約２４．５ｋＤａの推定分子量を有する、約２２６
アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含む。
ＴＮＦレセプターファミリーの公知のメンバーの中で、配列番号５のＴＲ１４ポ
リペプチドは、腫瘍壊死因子レセプターと最も高い程度の相同性を共有する（図
５Ａ〜Ｂを参照のこと）。
【００４１】 示されるように、本発明はまた、本発明のＴＲ１３ポリペプチドおよび／また
はＴＲ１４ポリペプチドの成熟形態を包含する。シグナル仮説に従って、哺乳動
物細胞によって分泌されるタンパク質は、シグナルまたは分泌リーダー配列を有
し、これらの配列は、一旦、粗面小胞体を横切って成長しつつあるタンパク質鎖
の輸送が開始されると、成熟タンパク質から切断される。ほとんどの哺乳動物細
胞および昆虫細胞もなお、同じ特異性で分泌タンパク質を切断する。しかし、い
くつかの場合、分泌タンパク質の切断は、完全には均一ではなく、これによって
タンパク質について２つ以上の成熟種が生じる。さらに、分泌タンパク質の切断
の特異性が完全なタンパク質の一次構造によって究極的に決定される、すなわち
、切断の特異性はポリペプチドのアミノ酸配列に固有であることが長い間知られ
ている。
【００４２】 従って、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９（ＨＷＬＨＭ７０）とし
て同定されたｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列、および／ま
たは図１Ａ〜Ｃ（配列番号２）に示されるアミノ酸配列を有する成熟形態のＴＲ
１３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を提供する。例えば、ＡＴＣＣ
受託番号ＰＴＡ−３４９（ＨＷＬＨＭ７０）として同定されたｃＤＮＡクローン
によってコードされるアミノ酸配列を有する成熟形態のＴＲ１３ポリペプチドは
、寄託されたベクターに含まれるこのクローンのヒトＤＮＡ配列によってコード
される完全なオープンリーディングフレームの哺乳動物細胞（例えば、以下に記
載するようなＣＯＳ細胞）中での発現によって産生される、成熟形態のＴＲ１３
レセプターを意味する。本明細書中に示されるように、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ
−３４９（ＨＷＬＨＭ７０）に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる
アミノ酸配列を有する成熟形態のＴＲ１３ポリペプチドは、コンピューター分析
に基づく推定の切断部位の正確性に依存して、配列番号２（約１から約７５０ま
でのアミノ酸）に示される推定の成熟ＴＲ１３タンパク質とは異なっていてもよ
いし、異なっていなくてもよい。このヌクレオチド配列によってコードされるポ
リペプチドもまた、本発明によって包含される。
【００４３】 従って、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７（ＨＷＬＨＮ８３）とし
て同定されたｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列、および／ま
たは図７Ａ〜Ｄ（配列番号４０）に示されるアミノ酸配列を有する成熟形態のＴ
Ｒ１３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を提供する。例えば、ＡＴＣ
Ｃ受託番号ＰＴＡ−５０７（ＨＷＬＨＮ８３）として同定されたｃＤＮＡクロー
ンによってコードされるアミノ酸配列を有する成熟形態のＴＲ１３ポリペプチド
は、寄託されたベクターに含まれるこのクローンのヒトＤＮＡ配列によってコー
ドされる完全なオープンリーディングフレームの哺乳動物細胞（例えば、以下に
記載するようなＣＯＳ細胞）中での発現によって産生される、成熟形態のＴＲ１
３レセプターを意味する。本明細書中に示されるように、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴ
Ａ−５０７（ＨＷＬＨＮ８３）に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされ
るアミノ酸配列を有する成熟形態のＴＲ１３ポリペプチドは、コンピューター分
析に基づく推定の切断部位の正確性に依存して、配列番号４０（約４２から約１
００１までのアミノ酸）に示される推定の成熟ＴＲ１３タンパク質とは異なって
いてもよいし、異なっていなくてもよい。これらのヌクレオチド配列によってコ
ードされるポリペプチドもまた、本発明によって包含される。
【００４４】 タンパク質が分泌リーダーならびにこのリーダー配列のための切断点を有する
か否かを予測する方法が利用可能である。例えば、ＭｃＧｅｏｃｈ（Ｖｉｒｕｓ
Ｒｅｓ．３：２７１−２８６（１９８５））およびｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ（Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０（１９８６））
の方法が使用される。これらの各方法についての既知の哺乳動物分泌タンパク質
の切断点を予測することの正確さは、７５〜８０％の範囲である。ｖｏｎ Ｈｅ
ｉｎｊｅ、前出。しかし、２つの方法は、所定のタンパク質の同じ予測される切
断点を常に生じるわけではない。
【００４５】 本発明の場合において、本発明のＴＲ１３ポリペプチドの推定アミノ酸配列は
、コンピュータープログラム（「ＰＳＯＲＴ」）によって分析された（Ｋ．Ｎａ
ｋａｉおよびＭ．Ｋａｎｅｈｉｓａ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４：８９７−９１１
（１９９２）を参照のこと）。ＰＳＯＲＴは、アミノ酸配列に基づくタンパク質
の細胞内局在化を予測するための熟練したシステムである。局在化のこのコンピ
ューターによる予測の一部として、ＭｃＧｅｏｃｈおよびｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ
の方法が組み込まれている。その後、完全なアミノ酸配列が、ｖｏｎ Ｈｅｉｎ
ｊｅの（−１，−３）規則の簡単な形態を適用される視覚的検査によってさらに
分析された。ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、前出。従って、ＴＲ１３タンパク質は、配
列番号２の約残基１〜約残基７５０および／または配列番号４０の約残基１〜約
残基１００１からなることが予測される。配列番号４０に開示される成熟形態の
ポリペプチド配列は、約残基４２〜約残基１００１からなると予想される。
【００４６】 当業者が理解するように、配列決定エラーの可能性、ならびに異なる既知のタ
ンパク質におけるリーダーについての切断部位の可変性に起因して、寄託された
ｃＤＮＡクローンによってコードされる推定の全長ＴＲ１３ポリペプチドは、約
１００１アミノ酸を含むが、約７００〜約１２００アミノ酸の範囲内のどこかで
あり得る。本明細書中に記載されたドメインは、コンピューター分析によって予
測され、従って、種々の機能的ドメインを同定するために使用された分析の判断
基準に依存して、ＴＲ１３の、例えば、細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、シス
テインリッチドメイン、および膜貫通ドメインの正確な「アドレス」がわずかに
異なり得ることがさらに理解される（例えば、このアドレスは、約１〜約２０残
基、よりありそうなのは約１〜約５残基で「シフト」し得る）。例えば、図１Ａ
〜Ｃ（配列番号２）および／または図７Ａ〜Ｄ（配列番号４０）におけるＴＲ１
３システインリッチドメインの正確な位置は、モチーフを規定するために使用さ
れる判断基準に依存してわずかに変化し得る（例えば、このアドレスは、約１〜
約２０残基、よりありそうなのは約１〜約５残基で「シフト」し得る）。いずれ
にせよ、以下にさらに議論するように、本発明はさらに、全長ＴＲ１３のＮ末端
および／またはＣ末端から種々の残基が欠失されたポリペプチドを提供し、これ
には、ＴＲ１３ポリペプチドの細胞外ドメインの可溶性形態を構成する、本明細
書中に記載される細胞外ドメインのＮ末端から、１つ以上のアミノ酸を欠くポリ
ペプチドを含む。
【００４７】 当業者が理解するように、配列決定エラーの可能性に起因して、寄託されたｃ
ＤＮＡクローンによってコードされる好ましい推定の全長ＴＲ１４ポリペプチド
は、配列番号６１に示される通りの約２３１アミノ酸を含むが、１７５〜２７５
アミノ酸の範囲内のどこかであり得る。代替の実施形態では、推定の全長ＴＲ１
４ポリペプチドは、約２２６アミノ酸を含むが、１７５〜２７５アミノ酸の範囲
内のどこかであり得るが、約４５〜約２００アミノ酸の範囲内のどこかであり得
る。本明細書中に記載されたドメインは、コンピューター分析によって予測され
、従って、種々の機能的ドメインを同定するために使用された分析の判断基準に
依存して、ＴＲ１４の、例えば、細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、システイン
リッチドメイン、および膜貫通ドメインの正確な「アドレス」がわずかに異なり
得ることがさらに理解される（例えば、このアドレスは、約１〜約２０残基、よ
りありそうなのは約１〜約５残基で「シフト」し得る）。例えば、図１０Ａ〜Ｈ
（配列番号６１）またはその代わりに、図４Ａ〜Ｄ（配列番号５）におけるＴＲ
１４の細胞外ドメインおよび／またはシステインリッチドメインの正確な位置は
、ドメインを規定するために使用される判断基準に依存してわずかに変化し得る
（例えば、このアドレスは、約１〜約２０残基、よりありそうなのは約１〜約５
残基で「シフト」し得る）。さらに、ＴＲ１４のポリペプチド配列が図１０Ａ〜
Ｈまたはその代わりに図４Ａ〜Ｄに示す配列よりも長い場合、当業者は、この配
列が、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインまたは細胞内ドメインの最終的な位置に
影響を与え得ることを理解する。いずれにせよ、以下にさらに議論するように、
本発明はさらに、全長ＴＲ１４のＮ末端および／またはＣ末端から種々の残基が
欠失されたポリペプチドを提供し、これには、ＴＲ１４ポリペプチドの細胞外ド
メインの可溶性形態を構成する、本明細書中に記載される細胞外ドメインのＮ末
端から、１つ以上のアミノ酸を欠くポリペプチドを含む。
【００４８】 示されるように、本発明の核酸分子は、ＲＮＡの形態（例えば、ｍＲＮＡ）で
もまたはＤＮＡの形態（例えば、クローニングにより得られるか、もしくは合成
的に生成された、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを含む）であってもよい。このＤ
ＮＡは、二本鎖であってもまたは一本鎖であってもよい。一本鎖ＤＮＡは、コー
ド鎖（センス鎖としてもまた公知である）であってもよいし、または非コード鎖
（アンチセンス鎖としても呼ばれる）であってもよい。
【００４９】 「単離された」核酸分子とは、その天然の環境から取り出された核酸分子、Ｄ
ＮＡ、またはＲＮＡを意図する。例えば、ベクターに含まれる組換えＤＮＡ分子
は、本発明の目的のためには単離されたと考えられる。単離されたＤＮＡ分子の
さらなる例は、異種宿主細胞中で維持される組換えＤＮＡ分子、または溶液中の
（部分的にまたは実質に）精製されたＤＮＡ分子を含む。単離されたＲＮＡ分子
は、インビボまたはインビトロにおける本発明のＤＮＡ分子のＲＮＡ転写産物を
含む。本発明に従う単離された核酸分子はさらに、合成的に産生されたような分
子を含む。しかし、混合されたクローンライブラリー（例えば、ゲノムライブラ
リーまたはｃＤＮＡライブラリー）のメンバーであり、かつライブラリーの他の
クローンから単離されていないクローン中に含まれた核酸分子（例えば、ライブ
ラリーの他のメンバーを伴わないクローンを含む均質な溶液の形態で）、または
細胞もしくは細胞溶解物から単離または取り出された染色体（例えば、核型にお
ける場合「染色体展開物」）は、本発明の目的に関して「単離されて」いない。
【００５０】 本発明の単離された核酸分子は例えば、以下を包含する：図１Ａ〜Ｃ（配列番
号１）、図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）に示される、および／もしくは寄託された
ｃＤＮＡクローン（例えば、ＨＷＬＨＭ７０およびＨＷＬＨＮ８３）に含まれる
、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むかまたはその代わりにこれか
らなる、ＤＮＡ分子；図１Ａ〜Ｃ（配列番号１）および／もしくは図７Ａ〜Ｄ（
配列番号３９）に示される、および／または寄託されたｃＤＮＡクローン（例え
ば、ＨＷＬＨＭ７０およびＨＷＬＨＮ８３）に含まれる、成熟ＴＲ１３タンパク
質についてのコード配列を含むかまたはその代わりにこれからなる、ＤＮＡ分子
；図１Ａ〜Ｃおよび／もしくは図７Ａ〜Ｄに開示され、そして／または寄託され
たｃＤＮＡクローンによってコードされる全長ＴＲ１３タンパク質についてのコ
ード配列のフラグメントを含むかまたはその代わりにこれからなる、ＤＮＡ分子
；ならびに上記の配列とは実質的に異なるが、遺伝暗号の縮重に起因して、なお
もＴＲ１３ポリペプチド（これらのフラグメントまたは改変体を含む）をコード
する配列を含むかまたはその代わりにこれからなるＤＮＡ分子。もちろん、遺伝
暗号は当該分野で周知である。従って、このような縮重改変体を作製することは
当業者には慣用的である。
【００５１】 本発明の単離された核酸分子は例えば、以下を包含する：好ましくは図１０Ａ
〜Ｈ（配列番号６０）またはその代わりに図４Ａ〜Ｄ（配列番号４）に示される
、および／もしくは寄託されたｃＤＮＡクローン（ＨＭＳＨＫ４７）に含まれる
、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むかまたはその代わりにこれか
らなる、ＤＮＡ分子；好ましくは図１０Ａ〜Ｈ（配列番号６１のアミノ酸１〜１
６４）またはその代わりに図７Ａ〜Ｄ（配列番号４）に示される、および／また
は寄託されたｃＤＮＡクローン（ＨＭＳＨＫ４７）に含まれる、成熟ＴＲ１４タ
ンパク質についてのコード配列を含むかまたはその代わりにこれからなる、ＤＮ
Ａ分子；好ましくは図１０Ａ〜Ｈまたはその代わりに図４Ａ〜Ｄに開示され、そ
して／または寄託されたｃＤＮＡクローン（ＨＭＳＨＫ４７）によってコードさ
れる全長ＴＲ１４タンパク質についてのコード配列のフラグメントを含むかまた
はその代わりにこれからなる、ＤＮＡ分子；ならびに上記の配列とは実質的に異
なるが、遺伝暗号の縮重に起因して、なおもＴＲ１４ポリペプチド（これらのフ
ラグメントまたは改変体を含む）をコードする配列を含むＤＮＡ分子。もちろん
、遺伝暗号は当該分野で周知である。従って、このような縮重改変体を作製する
ことは当業者には慣用的である。
【００５２】 別の局面では、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９（ＨＷＬＨＭ７０
）に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ
１３ポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。さらなる実施形
態では、図１Ａ〜Ｃに開示される、および／またはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３
４９に含まれるｃＤＮＡによってコードされる、成熟形態のＴＲ１３ポリペプチ
ドをコードする核酸分子が提供される。さらなる実施形態では、図１Ａ〜Ｃに開
示される、および／または寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされるが
、しかし、Ｎ末端メチオニンを欠く、全長ＴＲ１３ポリペプチドをコードする核
酸分子が提供される。さらなる実施形態では、コードする核酸分子が提供される
。本発明はさらに、配列番号１に示されるヌクレオチド配列もしくは上記の寄託
されたｃＤＮＡクローンに含まれるＴＲ１３ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を有
する単離された核酸分子、または上記の配列のうちの１つに相補的な配列を有す
る核酸分子を提供する。このような単離された分子（特に、ＤＮＡ分子）は、例
えば、染色体を用いたインサイチュハイブリダイゼーションによる遺伝子マッピ
ングのための、および例えば、ノーザンブロット分析によるヒト組織におけるＴ
Ｒ１３遺伝子の発現を検出するためのプローブとして有用である。
【００５３】 別の局面では、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７（ＨＷＬＨＮ８３
）に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ
１３ポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。さらなる実施形
態では、図７Ａ〜Ｄに開示される、および／またはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５
０７に含まれるｃＤＮＡによってコードされる、成熟形態のＴＲ１３ポリペプチ
ドをコードする核酸分子が提供される。さらなる実施形態では、図７Ａ〜Ｄに開
示される、および／または寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされるが
、しかし、Ｎ末端メチオニンを欠く、全長ＴＲ１３ポリペプチドをコードする核
酸分子が提供される。本発明はさらに、配列番号３９に示されるヌクレオチド配
列もしくは上記の寄託されたｃＤＮＡクローンに含まれるＴＲ１３ ｃＤＮＡの
ヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子、または上記の配列のうちの１つ
に相補的な配列を有する核酸分子を提供する。このような単離された分子（特に
、ＤＮＡ分子）は、例えば、染色体を用いたインサイチュハイブリダイゼーショ
ンによる遺伝子マッピングのための、および例えば、ノーザンブロット分析によ
るヒト組織におけるＴＲ１３遺伝子の発現を検出するためのプローブとして有用
である。
【００５４】 別の局面では、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４８（ＨＭＳＨＫ４７
）に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ
１４ポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。さらなる実施形
態では、図１０Ａ〜Ｈまたはその代わりに図４Ａ〜Ｄに開示される、および／ま
たは寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされるが、しかし、Ｎ末端メチ
オニンを欠く、全長ＴＲ１４ポリペプチドをコードする核酸分子が提供される。
本発明はさらに、好ましくは配列番号６０またはその代わりに配列番号４に示さ
れるヌクレオチド配列もしくは上記の寄託されたｃＤＮＡクローンに含まれるＴ
Ｒ１４ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子、または上記
の配列のうちの１つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する。このような単
離された分子（特に、ＤＮＡ分子）は、例えば、染色体を用いたインサイチュハ
イブリダイゼーションによる遺伝子マッピングのための、および例えば、ノーザ
ンブロット分析によるヒト組織におけるＴＲ１４遺伝子の発現を検出するための
プローブとして有用である。
【００５５】 さらに、本発明は、以下の関連するｃＤＮＡクローンから決定された、配列番
号１の大部分に関連したヌクレオチド配列を有する核酸分子を提供する：ＨＥＴ
ＡＱ１２Ｒ（配列番号８）、ＨＥＴＡＫ８２Ｒ（配列番号９）、ＨＥＴＢＨ１８
Ｒ（配列番号１０）、ＨＥＰＡＢ２６Ｒ（配列番号１１）、ＨＥＴＡＮ３８Ｒ（
配列番号１２）、ＨＰＷＤＤ３０Ｒ（配列番号１３）、ＨＥＴＡＴ０５Ｒ（配列
番号１４）、ＨＥＴＤＱ３９Ｒ（配列番号１５）、ＨＥＴＥＭ８４Ｒ（配列番号
１６）およびＨＳＩＤＶ４２Ｒ（配列番号１７）。
【００５６】 さらに、本発明は、以下の関連するｃＤＮＡクローンから決定された、配列番
号３９の大部分に関連したヌクレオチド配列を有する核酸分子を提供する：ＨＥ
ＴＡＱ１２Ｒ（配列番号４８）、ＨＥＴＡＫ８２Ｒ（配列番号４９）、ＨＥＴＢ
Ｍ７１Ｒ（配列番号５０）、ＨＥＴＢＨ１８Ｒ（配列番号５１）、ＨＥＰＡＢ２
６Ｒ（配列番号５２）、ＨＥＴＡＮ３８Ｒ（配列番号５３）、ＨＰＷＤＤ３０Ｒ
（配列番号５４）、ＨＥＴＡＴ０５Ｒ（配列番号５５）、ＨＥＴＤＱ３９Ｒ（配
列番号５６）、ＨＰＷＢＬ９３Ｒ（配列番号５７）、ＨＥＴＥＭ８４Ｒ（配列番
号５８）およびＨＳＩＤＶ４２Ｒ（配列番号５９）。
【００５７】 さらに、本発明は、以下の関連するｃＤＮＡクローンから決定された、配列番
号６０および４の大部分に関連したヌクレオチド配列を有する核酸分子を提供す
る：ＨＳＡＢＤ５０Ｒ（配列番号１８）、ＨＴＸＭＸ５３Ｒ（配列番号１９）、
ＨＥ２ＯＲ７４Ｒ（配列番号２０）、ＨＭＳＨＫ４７Ｒ（配列番号２１）および
ＨＭＳＨＫ５９Ｒ（配列番号２２）。
【００５８】 本発明はさらに、本明細書中に記載される単離されたＴＲ１３核酸分子のフラ
グメントに関する。寄託されたｃＤＮＡクローン（例えば、ＨＷＬＨＮ８３およ
び／もしくはＨＷＬＨＭ７０）のヌクレオチド配列または図１Ａ〜Ｃ（配列番号
１）および／もしくは図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）に示されるヌクレオチド配列
を有する単離されたＤＮＡ分子のフラグメント、またはそれらに対する相補鎖に
よって、少なくとも約１５ｎｔ長、そしてより好ましくは少なくとも約２０ｎｔ
長または少なくとも２５ｎｔ長、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ長
または少なくとも３５ｎｔ長、なおさらに好ましくは少なくとも約４０ｎｔ長、
または少なくとも約５０ｎｔ長のＤＮＡフラグメントが意図される。これらのフ
ラグメントは、例えば、本明細書中で議論されるように、診断用プローブおよび
プライマーとして有用である。当然、５０〜１５００ｎｔ長のより大きなフラグ
メントのように、寄託されたｃＤＮＡのヌクレオチド配列または配列番号１およ
び／もしくは配列番号３９に示されるヌクレオチド配列の、すべてではないにし
ても大部分に対応するフラグメントもまた、本発明に従って有用である。少なく
とも２０ｎｔ長のフラグメントによって、例えば、寄託されたｃＤＮＡクローン
のヌクレオチド配列または図１Ａ〜Ｃ（配列番号１）および／もしくは図７Ａ〜
Ｄ（配列番号３９）に示されるヌクレオチド配列からの２０以上の連続する塩基
を含むフラグメントが意図される。この文脈において、「約（およそ）」は、特
に記載されるサイズの、あるいはいずれかの末端または両方の末端において、数
個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ、より大きいかまたはより
小さいかであり得る、ヌクレオチドを含む。
【００５９】 本発明はさらに、本明細書中に記載される単離されたＴＲ１４核酸分子のフラ
グメントに関する。寄託されたｃＤＮＡクローン（ＨＭＳＨＫ４７）のヌクレオ
チド配列または好ましくは図１０Ａ〜Ｈ（配列番号６０）もしくはその代わりに
図４Ａ〜Ｄ（配列番号４）に示されるヌクレオチド配列を有する単離されたＤＮ
Ａ分子のフラグメント、またはそれらに対する相補鎖によって、少なくとも約１
５ｎｔ長、そしてより好ましくは少なくとも約２０ｎｔ長または少なくとも２５
ｎｔ長、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ長または少なくとも３５ｎ
ｔ長、なおさらに好ましくは少なくとも約４０ｎｔ長、または少なくとも約５０
ｎｔ長のＤＮＡフラグメントが意図される。これらのフラグメントは、例えば、
本明細書中で議論されるように、診断用プローブおよびプライマーとして有用で
ある。当然、５０〜１５００ｎｔ長のより大きなフラグメントもまた、寄託され
たｃＤＮＡのヌクレオチド配列または好ましくは図１０Ａ〜Ｈ（配列番号６０）
もしくはその代わりに図４Ａ〜Ｄ（配列番号４）に示されるヌクレオチド配列の
、すべてではないにしても大部分に対応するフラグメントもまた、本発明に従っ
て有用である。少なくとも２０ｎｔ長のフラグメントによって、例えば、寄託さ
れたｃＤＮＡのヌクレオチド配列または好ましくは配列番号６０もしくはその代
わりに配列番号４に示されるヌクレオチド配列からの２０以上の連続する塩基を
含むフラグメントが意図される。この文脈において、「約（およそ）」は、特に
記載されるサイズの、あるいはいずれかの末端または両方の末端において、数個
（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ、より大きいかまたはより小
さいかであり得る、ヌクレオチドを含む。
【００６０】 本発明のＴＲ１３ポリヌクレオチドフラグメントの代表的な例としては、例え
ば、図１Ａ〜Ｃ（配列番号１）に示されるポリヌクレオチド配列の以下の配列、
またはそれらの配列に相補的な鎖、または寄託されたクローン（ＨＷＬＨＭ７０
）に含まれるｃＤＮＡを含むか、またはその代わりに、それらの配列からなる、
フラグメントが挙げられる：約ヌクレオチド１〜約５０、約５１〜約１０８、約
１０９〜約１５９、約１６０〜約２１０、約２１１〜約２６１、約２６２〜約２
７３、約２７４〜約３２４、約３２５〜約３７５、約３７６〜約４２６、約４２
７〜約４７７、約４７８〜約５２８、約５２９〜約５７９、約５８０〜約６３０
、約６３１〜約６８１、約６８２〜約７３２、約７３３〜約７４４、約７４５〜
約７９８、約７９９〜約８４９、約８５０〜約９００、約９０１〜約９５１、約
９５２〜約１００２、約１００３〜約１０５３、約１０５４〜約１１０４、約１
１０５〜約１１５５、約１１５６〜約１１６４、約１１６５〜約１１９７、約１
１９８〜約１２４８、約１２４９〜約１２６６、約１２６７〜約１３１７、約１
３１８〜約１３６８、約１３６９〜約１４１９、約１４２０〜約１４７０、約１
４７１〜約１５２１、約１５２２〜約１５７２、約１５７３〜約１６２３、約１
６２４〜約１６７４、約１６７５〜約１７２５、約１７２６〜約１７７６、約１
７７７〜約１８２７、約１８２８〜約１８７８、約１８７９〜約１９２９、約１
９３０〜約１９８０、約１９８１〜約２０３１、約２０３２〜約２０８２、約２
０８３〜約２１３３、約２１３４〜約２１８４、約２１８５〜約２２３５、約２
２３６〜約２２８６、約２２８７〜約２３３７、約２３３８〜約２３８８、約２
３８９〜約２４８９、約２４９０〜約２５４０、約２４５１〜約２５０１、約２
５０２〜約２５５４。本発明のポリヌクレオチドフラグメントの他の代表的な例
としては、例えば、図１Ａ〜Ｃ（配列番号１）に示されるポリヌクレオチド配列
の以下の配列、またはそれらの配列に相補的な鎖を含むか、またはその代わりに
、それらの配列からなる、フラグメントが挙げられる：約ヌクレオチド１〜約３
６２、約７０５〜約８３０、約３１〜約２２８０、約３４３〜４１４、約４１５
〜約４５９、約４６０〜約５４０、３４３〜約５４０、約７８１〜約８０４、約
８０５〜約８３０、約７８１〜約８２２、約１０２１〜約１２６０、約１７６８
〜約１８１２、約１８１３〜約１８６６、約１７６８〜約１８６６、約３１〜約
５４０、約６６０〜約９８４、約１０５７〜約１４７０、約１６７２〜約１８０
６および／または約１９２４〜約２２５６。この文脈において、「約（およそ）
」は、特に記載されるサイズの、いずれかの末端または両方の末端において、数
個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ、より大きいかまたはより
小さいかであり得る、ヌクレオチドを含む。これらのポリヌクレオチドフラグメ
ントの任意の１、２、３、４、５またはそれより多くにハイブリダイズするポリ
ヌクレオチドもまた本発明によって包含される。さらに、これらのポリヌクレオ
チドおよび／またはポリヌクレオチドフラグメントによってコードされるポリペ
プチドもまた本発明によって包含される。
【００６１】 本発明のＴＲ１３ポリヌクレオチドフラグメントのさらなる代表的な例として
は、例えば、図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）に示されるポリヌクレオチド配列の以
下の配列、またはそれらの配列に相補的な鎖、または寄託されたクローン（ＨＷ
ＬＨＮ８３）に含まれるｃＤＮＡを含むか、またはその代わりに、それらの配列
からなる、フラグメントが挙げられる：約ヌクレオチド１〜約５０、約５１〜約
１０８、約１０９〜約１５９、約１６０〜約２１０、約２１１〜約２６１、約２
６２〜約２７３、約２７４〜約３２４、約３２５〜約３７５、約３７６〜約４２
６、約４２７〜約４７７、約４７８〜約５２８、約５２９〜約５７９、約５８０
〜約６３０、約６３１〜約６８１、約６８２〜約７３２、約７３３〜約７４４、
約７４５〜約７９８、約７９９〜約８４９、約８５０〜約９００、約９０１〜約
９５１、約９５２〜約１００２、約１００３〜約１０５３、約１０５４〜約１１
０４、約１１０５〜約１１５５、約１１５６〜約１１６４、約１１６５〜約１１
９７、約１１９８〜約１２４８、約１２４９〜約１２６６、約１２６７〜約１３
１７、約１３１８〜約１３６８、約１３６９〜約１４１９、約１４２０〜約１４
７０、約１４７１〜約１５２１、約１５２２〜約１５７２、約１５７３〜約１６
２３、約１６２４〜約１６７４、約１６７５〜約１７２５、約１７２６〜約１７
７６、約１７７７〜約１８２７、約１８２８〜約１８７８、約１８７９〜約１９
２９、約１９３０〜約１９８０、約１９８１〜約２０３１、約２０３２〜約２０
８２、約２０８３〜約２１３３、約２１３４〜約２１８４、約２１８５〜約２２
３５、約２２３６〜約２２８６、約２２８７〜約２３３７、約２３３８〜約２３
８８、約２３８９〜約２４８９、約２４９０〜約２５４０、約２４５１〜約２５
０１、約２５０２〜約２５５４、約２６００〜約２６５０、約２６５１〜約２７
００、約２７０１〜約２７５０、約２７５１〜約２８００、約２８０１〜約２８
５０、約２８５１〜約２９００、約２９０１〜約２９５０、約２９５１〜約３０
００、約３００１〜約３０５０、約３０５１〜約３１００、約３１０１〜約３１
５０、約３１５１〜約３２００、約３２０１〜約３２５０、約３２５１〜約３３
００および約３３０１〜約３３３４。本発明のポリヌクレオチドフラグメントの
他の代表的な例としては、例えば、図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）に示されるポリ
ヌクレオチド配列の以下の配列、またはそれらの配列に相補的な鎖を含むか、ま
たはその代わりに、それらの配列からなる、フラグメントが挙げられる：約ヌク
レオチド１〜約４２、約１８１〜約２７７５、約９８４〜約１１４２、約１４８
５〜約１６１０、約２３６１〜約２７１８、約６１〜約３０６０、約５８〜約３
０６０、約５８〜約１８３、約５８〜約２７７５、約２７７６〜約２８５０、約
２８５１〜約３０６０、約８６８〜約１３２０、約８６８〜約９１５、約９２５
〜約９５７、約９６０〜約１０１７、約１０４２〜約１１４０、約１２６７〜約
１３２０、約８７０〜約１３２０、約１８１０〜約１８４２、約２０３８〜約２
０７９、約２１８５〜約２２８９、約２９９５〜約３０５４、約１９０〜約２３
７、約４１８〜約４６２、約５８〜約８４３、約８４７〜約１３２６、約１３６
６〜約２４２４、約１８１２〜約１８４２、約２７７６〜約２８５０、約２４２
８〜約３０６０、約２８５１〜約３０６０および／または約４９０〜約５３７。
この文脈において、「約（およそ）」は、特に記載されるサイズの、いずれかの
末端または両方の末端において、数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオ
チドだけ、より大きいかまたはより小さいかであり得る、ヌクレオチドを含む。
これらのポリヌクレオチドフラグメントの任意の１、２、３、４、５またはそれ
より多くにハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた本発明によって包含され
る。さらに、これらのポリヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチドフラグ
メントによってコードされるポリペプチドもまた本発明によって包含される。さ
らに、このポリヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチドフラグメントによ
ってコードされるポリペプチドもまた本発明によって包含される。
【００６２】 好ましくは、本発明のポリヌクレオチドフラグメントは、ＴＲ１３の機能的活
性を実証するポリペプチドをコードする。ＴＲ１３の「機能的活性」を実証する
ポリペプチドによって、全長（完全）ＴＲ１３タンパク質に関連する１つ以上の
公知の機能的活性を示し得るポリペプチドを意味する。このような機能的活性と
しては、生物学的活性（例えば、細胞増殖活性）、抗原性（抗ＴＲ１３抗体に結
合する能力（またはこの結合についてＴＲ１３ポリペプチドと競合する能力））
、免疫原性（ＴＲ１３ポリペプチドに結合する抗体を生成する能力）、本発明の
ＴＲ１３ポリペプチドと多量体を形成する能力、ならびにＴＲ１３ポリペプチド
に対するレセプターまたはリガンドに結合する能力が挙げられるが、これらに限
定されない。
【００６３】 抗ＴＲ１３抗体と結合するか、または抗ＴＲ１３抗体との結合に関して全長Ｔ
Ｒ１３ポリペプチドと競合する能力をアッセイする、１つの実施形態において、
当該分野において公知の種々の免疫アッセイが使用され得る。このようなアッセ
イとしては、放射免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「
サンドイッチ」免疫アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、ゲル拡散沈降
反応、免疫拡散アッセイ、インサイチュ免疫アッセイ（例えば、コロイド状金、
酵素または放射性同位体標識を用いる）、ウェスタンブロット、沈降反応、凝集
アッセイ（例えば、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、補体結合アッセイ
、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイ、および免疫電気泳動アッセイなど
のような技術を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系が挙げられるが、
これらに限定されない。１つの実施形態では、抗体結合が、一次抗体上の標識を
検出することによって検出される。別の実施形態では、この一次抗体は、この一
次抗体に対する二次抗体または試薬の結合を検出することによって検出される。
さらなる実施形態では、この二次抗体が標識される。多くの手段が、免疫アッセ
イにおける結合の検出について当該分野で公知であり、そして本発明の範囲内で
ある。
【００６４】 別の実施形態では、ＴＲ１３リガンドが同定される場合、または本発明のポリ
ペプチドフラグメント、改変体、または誘導体が多量体化する能力が評価される
場合、結合が、例えば、還元および非還元ゲルクロマトグラフィー、タンパク質
アフィニティークロマトグラフィー、ならびにアフィニティーブロッティングの
ような当該分野で周知の手段によって、アッセイされ得る。一般には、Ｐｈｉｚ
ｉｃｋｙ、Ｅ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：９４−１２３（１９９
５）を参照のこと。別の実施形態では、その基質へのＴＲ１３結合の生理学的相
関（シグナル伝達）がアッセイされ得る。
【００６５】 さらに、本明細書中に記載されるアッセイ（例えば、実施例５および１６〜２
１を参照のこと）および当該分野で公知の他のアッセイは、ＴＲ１３ポリペプチ
ドならびにそのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログが、特定の生物
学的活性を誘発する能力（例えば、インビトロまたはインビボで、ＴＲＡＩＬ誘
導アポトーシスを阻害する活性、Ｂ細胞増殖を調節（例えば、阻害）する活性（
例えば、実施例３３を参照のこと）、他の細胞の増殖を調節する活性、および／
または造血を阻害する活性）を測定するために慣用的に適用され得る。例えば、
当該分野で公知の技術（例えば、チミジン取り込みについてアッセイする）は、
本発明の組成物の造血細胞の増殖を調節する（例えば、アポトーシスを阻害する
）および／または調節する（例えば、阻害する）能力についてアッセイするため
に、適用または慣用的に改変され得る。さらに、本明細書中に記載されるアッセ
イ（例えば、実施例１５および実施例３３を参照のこと）および当該分野で公知
の他のアッセイは、本発明の組成物のＢ細胞増殖を阻害または刺激する能力につ
いてアッセイするために、適用または慣用的に改変され得る。
【００６６】 本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチドフラグメントの代表例としては、例えば、
図１０Ａ〜Ｈ（配列番号６０）に示されるポリヌクレオチド配列のヌクレオチド
約１〜約５０、約５１〜約１０８、約１０９〜約１５９、約１６０〜約２１０、
約２１１〜約２６１、約２６２〜約２７３、約２７４〜約３２４、約３２５〜約
３７５、約３７６〜約４２６、約４２７〜約４７７、約４７８〜約５２８、約５
２９〜約５７９、約５８０〜約６３０、約６３１〜約６８１、約６８２〜約７３
２、約７３３〜約７４４、約７４５〜約７９８、約７９９〜約８４９、約８５０
〜約９００、約９０１〜約９５１、約９５２〜約１００２、約１００３〜約１０
５３、約１０５４〜約１１０４、約１１０５〜約１１５５、約１１５６〜約１１
６４、約１１６５〜約１１９７、約１１９８〜約１２４８、約１２４９〜約１２
６６、約１２６７〜約１３１７、約１３１８〜約１３６８、約１３６９〜約１４
１９、約１４２０〜約１４７０、約１４７１〜約１５２１、約１５２２〜約１５
７２、約１５７３〜約１６２３、約１６２４〜約１６７４、約１６７５〜約１７
２５、約１７２６〜約１７７６、約１７７７〜約１８２７、約１８２８〜約１８
７８、約１８７９〜約１９２９、約１９３０〜約１９８０、約１９８１〜約２０
３１、約２０３２〜約２０８２、約２０８３〜約２１３３、約２１３４〜約２１
８４、約２１８５〜約２２３５、約２２３６〜約２２８６、約２２８７〜約２３
３７、約２３３８〜約２３８８、約２３８９〜約２４８９、約２４９０〜約２５
４０、約２４５１〜約２５０１、約２５０２〜約２５５２、約２５５３〜約２６
０３、約２６０４〜約２６５４、約２６５５〜約２７０５、約２７０６〜約２７
５６、約２８０６〜約２８５６、約２８５７〜約２９０７、約２９０８〜約２９
５８、約２９５９〜約３００９、約３０１０〜約３０６０、約３０６１〜約３１
１１、および／もしくは約３１１２〜約３１５２の配列を含むフラグメント、ま
たはこれらの配列からなるフラグメント、またはこれらの相補鎖、あるいは寄託
されたクローン（ＨＭＳＨＫ４７）に含まれるｃＤＮＡが挙げられる。本発明の
ポリヌクレオチドフラグメントの他の代表例としては、例えば、図１０Ａ〜Ｈ（
配列番号６０）に示されるポリヌクレオチド配列のヌクレオチド約１〜約１４５
１、約１７６１〜約２２５１、約８９〜約７６６、約８９〜約４８７、約４８８
〜約５３８、約５３９〜約７６６、約９２〜約１６０、約２１２〜約２４３、約
２８１〜約３１３、約３１４〜約３４３、約２８１〜約３４３、約３２５〜約４
３３、および／もしくは５５０〜約７６６の配列を含むフラグメント、またはこ
れらの配列からなるフラグメント、あるいはこれらの相補鎖が挙げられる。この
文脈において「約（およそ）」は、いずれかの末端または両方の末端において特
に記載された範囲（これより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチド
だけ大きいかまたは小さな範囲）を含む。１、２、３、４、５個以上のこれらの
ポリヌクレオチドフラグメントのいずれかにハイブリダイズするポリヌクレオチ
ドはまた、本発明によって包含される。さらに、これらのポリヌクレオチドおよ
び／またはポリヌクレオチドフラグメントによってコードされるポリペプチドは
また、本発明によって包含される。
【００６７】 本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチドフラグメントの代替の代表例としては、例
えば、図４Ａ〜Ｄ（配列番号４）に示されるポリヌクレオチド配列のヌクレオチ
ド約１〜約５０、約５１〜約１０８、約１０９〜約１５９、約１６０〜約２１０
、約２１１〜約２６１、約２６２〜約２７３、約２７４〜約３２４、約３２５〜
約３７５、約３７６〜約４２６、約４２７〜約４７７、約４７８〜約５２８、約
５２９〜約５７９、約５８０〜約６３０、約６３１〜約６８１、約６８２〜約７
３２、約７３３〜約７４４、約７４５〜約７９８、約７９９〜約８４９、約８５
０〜約９００、約９０１〜約９５１、約９５２〜約１００２、約１００３〜約１
０５３、約１０５４〜約１１０４、約１１０５〜約１１５５、約１１５６〜約１
１６４、約１１６５〜約１１９７、約１１９８〜約１２４８、約１２４９〜約１
２６６、約１２６７〜約１３１７、約１３１８〜約１３６８、約１３６９〜約１
４１９、約１４２０〜約１４７０、約１４７１〜約１５２１、約１５２２〜約１
５７２、約１５７３〜約１６２３、約１６２４〜約１６７４、約１６７５〜約１
７２５、約１７２６〜約１７７６、約１７７７〜約１８２７、約１８２８〜約１
８７８、約１８７９〜約１９２９、約１９３０〜約１９８０、約１９８１〜約２
０３１、約２０３２〜約２０８２、約２０８３〜約２１３３、約２１３４〜約２
１８４、約２１８５〜約２２３５、約２２３６〜約２２８６、約２２８７〜約２
３３７、約２３３８〜約２３８８、約２３８９〜約２４８９、約２４９０〜約２
５４０、約２４５１〜約２５０１、約２５０２〜約２５５２、約２５５３〜約２
６０３、約２６０４〜約２６５４、約２６５５〜約２７０５、約２７０６〜約２
７５６、約２８０６〜約２８５６、約２８５７〜約２９０７、約２９０８〜約２
９５８、約２９５９〜約３００９、約３０１０〜約３０６０、約３０６１〜約３
１１１、約３１１２〜約３１６２、約３１６３〜約３２１３、約３２１４〜約３
２６４、約３２６５〜約３３１５、約３３１６〜約３３６６、約３３６７〜約３
４１７、約３４１８〜約３４６８、約３４６９〜約３５１９、約３５２０〜約３
５６６、約３５６７〜約３５９９、約３６００〜約３６４９、約３６５０〜約３
６９９、約３７００〜約３７４９、約３７５０〜約３７９９、および／もしくは
約３８００〜約３８６１の配列を含むフラグメント、またはこれらの配列からな
るフラグメント、またはこれらの相補鎖、あるいは寄託されたクローン（ＨＭＳ
ＨＫ４７）に含まれるｃＤＮＡが挙げられる。本発明のポリヌクレオチドフラグ
メントの他の代表例としては、例えば、図４Ａ〜Ｄ（配列番号４）に示されるポ
リヌクレオチド配列のヌクレオチド約１〜約１４５１、約１７６１〜約２２５１
、約３１３３〜約３８６１、約８９〜約７６６、約８９〜約４８７、約４８８〜
約５３８、約５３９〜約７６６、約９２〜約１６０、約２１２〜約２４３、約２
８１〜約３１３、約３１４〜約３４３、約２８１〜約３４３、約３２５〜約４３
３、および／もしくは５５０〜約７６６の配列を含むフラグメント、またはこれ
らの配列からなるフラグメント、あるいはこれらの相補鎖が挙げられる。この文
脈において「約（およそ）」は、いずれかの末端または両方の末端において特に
記載された範囲（これより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだ
け大きいかまたは小さな範囲）を含む。１、２、３、４、５個以上のこれらのポ
リヌクレオチドフラグメントのいずれかにハイブリダイズするポリヌクレオチド
はまた、本発明によって包含される。さらに、これらのポリヌクレオチドおよび
／またはポリヌクレオチドフラグメントによってコードされるポリペプチドはま
た、本発明によって包含される。
【００６８】 好ましくは、本発明のポリヌクレオチドフラグメントは、ＴＲ１４の機能的活
性を示すポリペプチドをコードする。ＴＲ１４の「機能的活性」を示すポリペプ
チドは、全長（完全）ＴＲ１４タンパク質と関連した１つ以上の公知の機能的活
性を示し得るポリペプチドを意味する。このような機能的活性としては、生物学
的活性、抗原性（抗ＴＲ１４抗体に結合する（または結合に関して、ＴＲ１４ポ
リペプチドと競合する）能力）、免疫原性（ＴＲ１４ポリペプチドに結合する抗
体を生成する能力）、本発明のＴＲ１４ポリペプチドとマルチマーを形成する能
力、およびＴＲ１４ポリペプチドについてのレセプターまたはリガンドに結合す
る能力が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】 抗ＴＲ１４抗体への結合について全長ＴＲ１４ポリペプチドと結合または競合
する能力についてアッセイする１つの実施形態においては、当該分野で公知の種
々のイムノアッセイが用いられ得る。このようなアッセイとしては、ラジオイム
ノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ
、イムノラジオメトリックアッセイ、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、イ
ンサイチュイムノアッセイ（例えば、コロイド状金標識、酵素標識または放射性
同位体標識を用いる）、ウェスタンブロット、沈降反応、凝集アッセイ（例えば
、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセ
イ、プロテインＡアッセイ、ならびに免疫電気泳動アッセイなどのような技術を
用いる、競合アッセイ系および非競合アッセイ系が挙げられるが、これらに限定
されない。１つの実施形態において、抗体結合が、一次抗体上の標識を検出する
ことによって検出される。別の実施形態において、この一次抗体は、この一次抗
体への二次抗体または試薬の結合を検出することによって検出される。さらなる
実施形態において、この二次抗体は標識される。多くの手段が、イムノアッセイ
における結合の検出について当該分野で公知であり、そして本発明の範囲内であ
る。
【００７０】 別の実施形態において、ＴＲ１４リガンドが同定される場合、または本発明の
ポリペプチドフラグメント、改変体もしくは誘導体がマルチマー化する能力が評
価される場合、結合が、例えば、還元および非還元ゲルクロマトグラフィー、タ
ンパク質アフィニティークロマトグラフィー、およびアフィニティーブロッティ
ングのような当該分野で周知の手段によって、アッセイされ得る。一般的には、
Ｐｈｉｚｉｃｋｙら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：９４〜１２３（１９
９５）を参照のこと。別の実施形態において、ＴＲ１４のその基質への結合の生
理学的相関（シグナル伝達）がアッセイされ得る。
【００７１】 さらに、本明細書中に記載されるアッセイ（例えば、実施例５および１５〜２
１および３３を参照のこと）および当該分野で公知の他のアッセイは、ＴＲ１４
ポリペプチドならびにそのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログが、
特定の生物学的活性（例えば、ＴＲＡＩＬ誘導アポトーシスを阻害すること、Ｂ
細胞増殖を調節（例えば、阻害）すること（例えば、実施例３３を参照のこと）
、および／またはインビトロまたはインビボで造血を阻害すること）を惹起する
能力を測定するために慣用的に利用され得る。例えば、当該分野で公知の技術（
例えば、チミジン取り込みについてのアッセイのような）は、本発明の組成物の
造血細胞の増殖を調節（例えば、アポトーシスを阻害）または調節（例えば、阻
害）する能力についてアッセイするために利用され得るかまたは慣用的に改変さ
れ得る。さらに、本明細書中に記載のアッセイ（例えば、実施例１５および実施
例３３を参照のこと）および当該分野で公知の他のアッセイは、本発明の組成物
のＢ細胞増殖を阻害または抑制する能力についてアッセイするために利用され得
るかまたは慣用的に改変され得る。
【００７２】 他の方法は当業者に公知であり、かつ本発明の範囲内である。
【００７３】 本発明の好ましい核酸フラグメントは、以下の群から選択されるメンバーをコ
ードする核酸分子を含む：１つ、２つ、３つ、または４つ全てのＴＲ１３システ
インリッチドメイン（図１Ａ〜Ｃにおける約１０５〜約１７０、約２５１〜約２
６４、約３３１〜約４１０および約５８０〜約６１０のアミノ酸残基（配列番号
１におけるアミノ酸約１０５〜約１７０、約２５１〜約２６５、約３３１〜約４
１０および約５８０〜約６１０）のいずれかの組み合わせを含むポリペプチド、
あるいはこれらの組み合わせからなるポリペプチド。上記で議論したように、こ
れらのドメインの位置は、コンピューター分析によって予測されたので、当業者
は、これらのドメインを構成するアミノ酸残基が、各々のドメインについて特に
記載された範囲であり得るか、または各々のドメインを規定するのに用いられた
基準に依存して、わずかに（例えば、いずれかの末端あるいは両方の末端におい
て、およそ１、２、３、４、５、１０、または１５残基だけ）変動し得ることを
認識する。
【００７４】 本発明のさらなる好ましい核酸フラグメントは、以下の群から選択されるメン
バーをコードする核酸分子を含む：ＴＲ１３レセプター細胞外ドメイン（図７Ａ
〜Ｄにおけるアミノ酸１〜９０６）を含むか、またはこのドメインからなるポリ
ペプチド；成熟ＴＲ１３レセプター細胞外ドメイン（図７Ａ〜Ｄにおけるアミノ
酸４２〜９０６）を含むか、またはこのドメインからなるポリペプチド；図７Ａ
〜Ｄにおいて開示されたＴＲ１３システインリッチドメイン（例えば、図７Ａ〜
Ｄにおける約２７１〜約４２１、約２７１〜約２８６、約２９０〜約３００、約
３０１〜約３２０、約３２９〜約３６１、約４０４〜約４２１、および約５８５
〜約５９５のアミノ酸残基（配列番号３９ならびに配列番号４０における約２７
１〜約４２１、約２７１〜約２８６、約２９０〜約３００、約３０１〜約３２０
、約３２９〜約３６１、約４０４〜約４２１、および約５８５〜約５９５のアミ
ノ酸残基）を含むか、またはこのドメインからなるポリペプチド；ＴＲ１３膜貫
通ドメイン（図７Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸９０７〜９３１）を含むか、またはこ
のドメインからなるポリペプチド；およびＴＲ１３細胞内ドメイン（図７Ａ〜Ｄ
におけるアミノ酸９３２〜１００１）を含むか、またはこのドメインからなるポ
リペプチド。上記のように、これらのドメインの位置がコンピューター分析によ
って予想されたので、当業者は、これらのドメインを構成するアミノ酸残基が、
各々のドメインについて特に記載された範囲であり得るか、または各々のドメイ
ンを規定するのに用いられた基準に依存して、わずかに（例えば、いずれかの末
端あるいは両方の末端において、およそ１、２、３、４、５、１０、または１５
残基だけ）変動し得ることを認識する。
【００７５】 図１Ａ〜Ｃにおいて開示されるＴＲ１３のシステインリッチモチーフがＴＲ１
３とそのリガンドとの間の相互作用に重要であると考えられる。従って、本発明
の特定の実施形態は、配列番号５の約１０５〜約１７０、約２５１〜約２６５、
約３３１〜約４１０、および約５８０〜約６１０アミノ酸残基（図４Ａ〜Ｄの約
１０５〜約１７０、約２５１〜約２６５、約３３１〜約４１０、約５８０〜約６
１０アミノ酸残基に対応する）のアミノ酸配列を含むか、またはこれらのアミノ
酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。特定の実
施形態において、本発明のＴＲ１３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
は、ＴＲ１３の２つ、３つ、または４つ全てのシステインリッチモチーフのいず
れかの組み合わせをコードするポリヌクレオチド配列を含むか、またはこれらの
配列からなる。この文脈において「約（およそ）」は、いずれかの末端または両
方の末端において特に記載された範囲（これより数個（５、４、３、２、または
１）のヌクレオチドだけ大きいかまたは小さな範囲）を含む。これらのポリヌク
レオチドによってコードされるポリペプチドはまた、本発明によって包含される
。
【００７６】 さらに本発明の特定の実施形態は、配列番号４０の約２７１〜約４２１、約２
７１〜約２８６、約２９０〜約３００、約３０１〜約３２０、約３２９〜約３６
１、約４０４〜約４２１、および約５８５〜約５９５アミノ酸残基（図７Ａ〜Ｄ
の約２７１〜約４２１、約２７１〜約２８６、約２９０〜約３００、約３０１〜
約３２０、約３２９〜約３６１、約４０４〜約４２１、および約５８５〜約５９
５アミノ酸残基に対応する）のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。特定の実施形態において、
本発明のＴＲ１３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、図７Ａ〜Ｄに
開示されるＴＲ１３の２つ、３つ、または４つ全てのシステインリッチモチーフ
のいずれかの組み合わせをコードするポリヌクレオチド配列を含むか、またはこ
れらの配列からなる。この文脈において「約（およそ）」は、いずれかの末端ま
たは両方の末端において特に記載された範囲（これより数個（５、４、３、２、
または１）のヌクレオチドだけ大きいかまたは小さな範囲）を含む。これらのポ
リヌクレオチドによってコードされるポリペプチドはまた、本発明によって包含
される。
【００７７】 メチオニンは、天然では切断されることが公知であるので、本発明の好ましい
核酸フラグメントは、アミノ末端のメチオニンをコードするヌクレオチドを欠失
する全長ＴＲ１３ポリペプチド（例えば、配列番号１におけるヌクレオチド３４
〜７５０）をコードする。そしてこのような配列は、ＴＲ１３発現ベクターを遺
伝学的に操作する際に有用であり得る。このような核酸によってコードされるポ
リペプチドはまた、本発明によって考慮される。
【００７８】 メチオニンは、天然では切断されることが公知であるので、本発明の好ましい
核酸フラグメントは、アミノ末端のメチオニンをコードするヌクレオチドを欠失
する全長ＴＲ１３ポリペプチド（例えば、図７Ａ〜Ｄおよび配列番号３９におけ
るヌクレオチド６１〜１００１）をコードする。そしてこのような配列は、ＴＲ
１３発現ベクターを遺伝学的に操作する際に有用であり得る。このような核酸に
よってコードされるポリペプチドはまた、本発明によって考慮される。
【００７９】 本発明の好ましい核酸フラグメントはさらに、ＴＲ１３レセプタータンパク質
のエピトープ保有部分をコードする核酸分子を含む。特に、本発明のこのような
核酸フラグメントは、以下をコードする核酸分子を含む：図１Ａ〜Ｃにおけるア
ミノ酸残基約１〜約１７０（配列番号２におけるアミノ酸約１〜約１７０に対応
する）を含むか、またはこの残基からなるポリペプチド；図１Ａ〜Ｃにおけるア
ミノ酸残基約２１０〜約３１８（配列番号２におけるアミノ酸残基約２１０〜約
３１８に対応する）を含むか、またはこの残基からなるポリペプチド；図１Ａ〜
Ｃにおけるアミノ酸残基約３４３〜約４８０（配列番号２におけるアミノ酸約３
４３〜約４８０に対応する）を含むか、またはこの残基からなるポリペプチド；
図１Ａ〜Ｃにおけるアミノ酸残基約５４８〜約５９２（配列番号２におけるアミ
ノ酸約５４８〜約５９２に対応する）を含むか、またはこの残基からなるポリペ
プチド；ならびに図１Ａ〜Ｃにおけるアミノ酸残基約６３２〜約７４２（配列番
号２におけるアミノ酸約６３２〜約７４２に対応する）を含むか、またはこの残
基からなるポリペプチド。本発明者は、上記のポリペプチドフラグメントがＴＲ
１３タンパク質の抗原性領域であることを決定した。ＴＲ１３タンパク質の他の
このようなエピトープ保有部分を決定するための方法は、以下に詳細に記載され
る。
【００８０】 本発明の好ましい核酸フラグメントはさらに、ＴＲ１３レセプタータンパク質
の抗原フラグメントをコードする核酸分子を含む。特に、本発明のこのような核
酸フラグメントは、以下をコードする核酸分子を含む：Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌ
ｆ抗原性指標を用いて推定されたＴＲ１３タンパク質の高い抗原性領域（図３お
よび表Ｉを参照のこと）に対応する配列番号２（図１Ａ〜Ｃ）のアミノ酸残基約
Ｍ１〜約Ａ９、約Ｋ１２〜約Ｌ２０、約Ｎ４７〜約Ｔ５５、約Ｈ５８〜約Ｓ６６
、約Ｄ６３〜約Ｓ７１、約Ｐ７７〜約Ｆ８５、約Ａ９０〜約Ｑ９８、約Ｆ１３６
〜約Ｑ１４４、約Ｓ１５２〜約Ｃ１６０、約Ｒ１５９〜約Ａ１６７、約Ａ２１１
〜約Ｍ２１９、約Ｍ２３５〜約Ｖ２４３、約Ｖ２６６〜約Ｖ２７４、約Ｗ２７７
〜約Ｓ２８５、約Ｉ２９０〜約Ｆ２９８、約Ａ３１０〜約Ｖ３１８、約Ｅ３４３
〜約Ｃ３５１、約Ｉ３６０〜約Ｈ３６８、約Ｇ３９１〜約Ｉ３９９、約Ｆ４０９
〜約Ｔ４１７、約Ｓ４３６〜約Ｙ４４４、約Ｃ４５３〜約Ｓ４６１、約Ｉ４７２
〜約Ｓ４８０、約Ｙ５４８〜約Ｓ５５６、約Ｃ５５７〜約Ｉ５６５、約Ｖ５６７
〜約Ｖ５７５、約Ｔ５８４〜約Ｇ５９２、約Ｒ６３２〜約Ｇ６４０、約Ｗ６８０
〜約Ｙ６８８、約Ｑ６８４〜約Ｋ６９２、約Ｔ６９８〜約Ａ７０６、約Ｓ７２６
〜約Ｓ７３４、および約Ｓ７３４〜約Ｌ７４２を含むか、またはこれらのアミノ
酸残基からなるポリペプチド。これらの高い抗原性フラグメントは、図１Ａ〜Ｃ
および配列番号２において例示されたアミノ酸残基に対応した。この文脈におい
て「約（およそ）」は、いずれかの末端または両方の末端において特に記載され
た範囲（これより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ大きい
かまたは小さな範囲）を含む。ＴＲ１３タンパク質の他のこのような抗原性フラ
グメントを決定するための方法は、以下に詳細に記載される。
【００８１】 本発明のさらなる好ましい核酸フラグメントはさらに、以下をコードする核酸
フラグメントを含む：図７Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約１〜約２６２（配列番
号４０におけるアミノ酸約１〜約２６２と対応する）を含むか、またはこのアミ
ノ酸残基からなるポリペプチド；図７Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約２６４〜約
４２３（配列番号４０におけるアミノ酸約２６４〜約４２３と対応する）を含む
か、またはこのアミノ酸残基からなるポリペプチド；図７Ａ〜Ｄにおけるアミノ
酸残基約４３７〜約７８９（配列番号４０におけるアミノ酸約４３７〜約７８９
と対応する）を含むか、またはこのアミノ酸残基からなるポリペプチド；ならび
に図７Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約７９１〜約１００１（配列番号４０におけ
るアミノ酸約７９１〜約１００１と対応する）を含むか、またはこのアミノ酸残
基からなるポリペプチド。本発明者は、上記のポリペプチドフラグメントがＴＲ
１３タンパク質の抗原性領域であることを決定した。ＴＲ１３タンパク質の他の
このようなエピトープ保有部分を決定する方法は、以下に詳細に記載される。
【００８２】 ＴＲ１３レセプタータンパク質の抗原性フラグメントをコードする本発明のさ
らなる好ましい核酸フラグメントは、以下をコードする核酸を含む：Ｊａｍｅｓ
ｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指標を用いて推定されたＴＲ１３タンパク質の高い抗原性
領域（図９および表ＩＩＩを参照のこと）に対応する配列番号４０（図７Ａ〜Ｄ
）のアミノ酸残基約Ｍ１〜約Ｈ９、約Ｖ１４〜約Ｉ２２、約Ｈ４７〜約Ｈ５５、
約Ｃ６１〜約Ｒ６９、約Ｌ８２〜約Ｅ９０、約Ｄ１０２〜約Ｐ１１０、約Ｋ１０
９〜約Ｓ１１７、約Ｆ１２４〜約Ｈ１３２、約Ｍ１４１〜約Ｅ１４９、約Ｓ１４
６〜約Ｃ１５４、約Ｓ１５７〜約Ｗ１６５、約Ｆ１６８〜約Ｔ１７６、約Ｎ１８
２〜約Ｎ１９０、約Ｑ２０７〜約Ａ２１５、約Ｐ２１３〜約Ｍ２２１、約Ｍ２２
１〜約Ｅ２２９、約Ｖ２３３〜約Ｖ２４１、約Ｔ２５３〜約Ｖ２６１、約Ｔ２８
２〜約Ｓ２９０、約Ｎ２９８〜約Ｔ３０６、約Ｃ３０８〜約Ｙ３１６、約Ｋ３１
５〜約Ｓ３２３、約Ｐ３２８〜約Ｆ３３６、約Ａ３４１〜約Ｑ３４９、約Ｆ３８
７〜約Ｑ３９５、約Ｓ４０３〜約Ｃ４１１、約Ｔ４０９〜約Ｐ４１７、約Ｆ４４
３〜約Ｎ４５１、約Ｗ４５１〜約Ｙ４５９、約Ａ４６２〜約Ｍ４７０、約Ｇ４７
８〜約Ｍ４８６、約Ａ４８７〜約Ａ４９５、約Ｖ５１７〜約Ｖ５２５、約Ｔ５２
７〜約Ｑ５３５、約Ｉ５４１〜約Ｆ５４９、約Ａ５６１〜約Ｖ５６９、約Ｅ５９
４〜約Ｃ６０２、約Ｉ６１１〜約Ｈ６１９、約Ｇ６４３〜約Ｉ６５０、約Ｐ６８
６〜約Ｋ６９４、約Ｃ７０４〜約Ｓ７１２、約Ｒ７２２〜約Ｉ７３０、約Ｅ７２
７〜約Ｔ７３５、約Ｐ７４６〜約Ｇ７５４、約Ｄ７７６〜約Ｌ７８４、約Ｙ７９
９〜約Ｓ８０７、約Ｃ８０８〜約Ｉ８１６、約Ｖ８１８〜約Ｖ８２６、約Ｔ８３
５〜約Ｇ８４３、約Ｒ８８３〜約Ｇ８９１、約Ｋ９３２〜約Ｋ９４０、約Ｑ９３
５〜約Ｋ９４３、約Ｔ９４９〜約Ａ９５７、約Ｓ９７７〜約Ｓ９８５、約Ｓ９８
１〜約Ｐ９８９、および約Ｎ９８６〜約Ｌ９９４を含むか、またはこれらのアミ
ノ酸残基からなるポリペプチド。これらの高い抗原性フラグメントは、図７Ａ〜
Ｄおよび配列番号４０において例示されたアミノ酸残基に対応した。この文脈に
おいて「約（およそ）」は、いずれかの末端または両方の末端において特に記載
された範囲（これより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ大
きいかまたは小さな範囲）を含む。ＴＲ１３タンパク質の他のこのような抗原性
フラグメントを決定するための方法は、以下に詳細に記載される。
【００８３】 さらに、図１０Ａ〜Ｈ、または図４Ａ〜Ｄにおいて開示されるＴＲ１４の細胞
外システインリッチモチーフが、ＴＲ１４とそのリガンドとの間の相互作用に重
要であると考えられる。従って、本発明の特定の実施形態は、好ましくは、図１
０Ａ〜Ｂならびに配列番号６１のアミノ酸Ｃｙｓ−３１〜Ｃｙｓ−１０４、ある
いは配列番号１０Ａならびに配列番号６１のアミノ酸残基約７０〜約９０（図４
Ａ〜Ｄまたは配列番号５のアミノ酸残基約６５〜約８５に対応する）のアミノ酸
配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドをコードする核酸分子に関す
る。この文脈において「約（およそ）」は、いずれかの末端または両方の末端に
おいて特に記載された範囲（これより数個（５、４、３、２、または１）のヌク
レオチドだけ大きいかまたは小さな範囲）を含む。これらのポリヌクレオチドに
よってコードされるポリペプチドはまた、本発明によって包含される。
【００８４】 本発明の好ましい核酸フラグメントは、以下の群から選択されるメンバーをコ
ードする核酸分子を含む：ＴＲ１４レセプター細胞外ドメイン（好ましくは、図
１０Ａ〜Ｈにおけるアミノ酸残基約１〜約１３８、または図４Ａ〜Ｄにおけるア
ミノ酸残基約１〜約１３３）を含むか、またはこのドメインからなるポリペプチ
ド；ＴＲ１４システインリッチドメイン（好ましくは、図１０Ａ〜Ｈのアミノ酸
残基約３１〜約１０４、または図１０Ａにおけるアミノ酸残基約７０〜約９０あ
るいは図４Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約６５〜約８５）を含むか、またはこの
ドメインからなるポリペプチド；ＴＲ１４膜貫通ドメイン（好ましくは、図１０
Ａ〜Ｈにおけるアミノ酸残基約１３９〜約１５５、または図４Ａ〜Ｄにおけるア
ミノ酸残基約１３４〜約１５０）を含むか、またはこのドメインからなるポリペ
プチド；ならびにＴＲ１４細胞内ドメイン（好ましくは、図１０Ａ〜Ｈにおける
アミノ酸残基約１５６〜２３１、または図４Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約１５
１〜２２６）を含むか、またはこのドメインからなるポリペプチド。これらのド
メインの位置がコンピューター分析によって予想されたので、当業者は、これら
のドメインを構成するアミノ酸残基が、各々のドメインについて特に記載された
範囲であり得るか、または各々のドメインを規定するのに用いられた基準に依存
して、わずかに（例えば、いずれかの末端あるいは両方の末端において、およそ
１、２、３、４、５、１０、または１５残基だけ）変動し得ることを認識する。
【００８５】 メチオニンは、天然では切断されることが公知であるので、本発明の好ましい
核酸フラグメントは、アミノ末端のメチオニンをコードするヌクレオチドを欠失
する全長ＴＲ１４ポリペプチド（例えば、図１０Ａ〜Ｈもしくは配列番号６０の
ヌクレオチド７０〜７５９、または配列番号４におけるヌクレオチド１０２〜７
６５）をコードする。そしてこのような配列は、ＴＲ１４発現ベクターを遺伝学
的に操作する際に有用であり得る。このような核酸によってコードされるポリペ
プチドはまた、本発明によって考慮される。
【００８６】 本発明の好ましい核酸フラグメントはさらに、ＴＲ１４レセプタータンパク質
のエピトープ保有部分をコードする核酸分子を含む。特に、本発明の好ましいエ
ピトープ保有ポリペプチドは、残基：Ａｓｐ−２〜Ａｓｐ−１０、Ｔｈｒ−１７
〜Ａｓｐ−３８、Ｐｒｏ−４５〜Ｓｅｒ−５２、Ｐｒｏ−８８〜Ａｒｇ−９５、
Ｔｈｒ−１０８〜Ｇｌｕ−１１５、Ｔｈｒ−１３１〜Ｇｌｕ−１３６、Ｐｈｅ−
１６６〜Ｇｌｙ−１７４、Ａｌａ−１８０〜Ａｌａ−２００、およびＧｌｎ−２
２４〜Ｍｅｔ−２３１として、配列番号６１において示される１個、２個、３個
、４個、５個、６個、または６個全てのＴＲ１４タンパク質の免疫原性エピトー
プを含むか、またはこれらの免疫原性エピトープからなる。これらのポリペプチ
ドのフラグメントおよび／または改変体（例えば、本明細書中に記載されるよう
なフラグメントおよび／または改変体のような）は、本発明によって包含される
。これらのポリペプチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）をコード
するポリヌクレオチドはまた、これらのポリペプチドを結合する抗体のように本
発明によって包含される。
【００８７】 あるいは、本発明のこのような核酸フラグメントは、以下をコードする核酸分
子を含む：図４Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約２〜約２４（配列番号５における
アミノ酸約２〜約２４に対応する）を含むか、またはこのアミノ酸残基からなる
ポリペプチド；図４Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約４２〜約５２（配列番号５に
おけるアミノ酸約４２〜約５２に対応する）を含むか、またはこのアミノ酸残基
からなるポリペプチド；図４Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約８０〜約１１５（配
列番号５におけるアミノ酸約８０〜約１１５および配列番号６１のアミノ酸約８
５〜約１２０に対応する）を含むか、またはこのアミノ酸残基からなるポリペプ
チド；ならびに図４Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基約１５５〜約２２６（配列番号
５におけるアミノ酸約１５５〜約２２６および配列番号６１のアミノ酸約１６０
〜約２３１に対応する）を含むか、またはこのアミノ酸残基からなるポリペプチ
ド。本発明者は、上記のポリペプチドフラグメントがＴＲ１４タンパク質の抗原
性領域であることを決定した。ＴＲ１４タンパク質の他のこのようなエピトープ
保有部分を決定するための方法は、以下に詳細に記載される。
【００８８】 本発明の別の核酸フラグメントはさらに、ＴＲ１４レセプタータンパク質の抗
原性フラグメントをコードする核酸分子を含む。特に、本発明のこのような核酸
フラグメントは、以下をコードする核酸分子を含む：Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ
抗原性指標を用いて推定されたＴＲ１４タンパク質の高い抗原性領域（図１１お
よび表ＩＶを参照のこと）に対応する配列番号５（図４Ａ〜Ｄ）のアミノ酸残基
約Ｔ３〜約Ｓ１１、約Ｖ１６〜約Ｒ２４、約Ｑ４４〜約Ｍ５２、約Ｆ８５〜約Ｇ
９３（配列番号６１の約Ｆ９０〜約Ｇ９８）、約Ｔ１０３〜約Ｖ１１１（配列番
号６１の約Ｔ１０８〜約Ｖ１１６）、約Ｆ１６１〜約Ｇ１６９（配列番号６１の
約Ｆ１６５〜約Ｇ１７４）、約Ｖ１８７〜約Ａ１９５（配列番号６１の約Ｖ１９
２〜約Ａ２００）、約Ｐ２１８〜約Ｍ２２６（配列番号６１の約Ｐ２２３〜約Ｍ
２３１）。これらの高い抗原性フラグメントは、図４Ａ〜Ｄおよび配列番号５（
または上記のように図１０Ａ〜Ｈおよび配列番号６１）に示されるアミノ酸残基
に対応する。この文脈において「約（およそ）」は、いずれかの末端または両方
の末端において特に記載された範囲（これより数個（５、４、３、２、または１
）のヌクレオチドだけ大きいかまたは小さな範囲）を含む。ＴＲ１４タンパク質
の他のこのような抗原性フラグメントを決定する方法は、以下に詳細に記載され
る。
【００８９】 図３に示されるデータはまた、表Ｉにおいて、表形式で示される。表Ｉにおけ
る欄は、見出し「Ｒｅｓ」、「Ｐｏｓｉｔｉｏｎ」およびローマ数字Ｉ〜ＸＩＶ
で標識されている。この欄の見出しは、図３および表Ｉ中に示されるアミノ酸配
列の以下の特徴をいう：「Ｒｅｓ」：配列番号２および図１Ａ〜Ｃのアミノ酸残
基；「Ｐｏｓｉｔｉｏｎ」：配列番号２および図１Ａ〜Ｃ中の対応する残基の位
置；Ｉ：α、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＩＩ：α、領域−Ｃｈｏｕ
−Ｆａｓｍａｎ；ＩＩＩ：β、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＩＶ：β
、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；Ｖ：ターン、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂ
ｓｏｎ；ＶＩ：ターン、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；ＶＩＩ：コイル、領域
−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩＩＩ：親水性プロット−Ｋｙｔｅ−Ｄｏ
ｏｌｉｔｔｌｅ；ＩＸ：疎水性プロット−Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓ；Ｘ：α、両親
媒性領域−Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩ：β、両親媒性領域−Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ
；ＸＩＩ：可撓性領域−Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚ；ＸＩＩＩ：抗原性指標
−Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ；およびＸＩＶ：表面確率プロット−Ｅｍｉｎｉ。
【００９０】 図９に示されるデータはまた、表ＩＩＩにおいて、表形式で示される。表ＩＩ
Ｉにおける欄は、見出し「Ｒｅｓ」、「Ｐｏｓｉｔｉｏｎ」およびローマ数字Ｉ
〜ＸＩＶで標識されている。この欄の見出しは、図９および表ＩＩＩ中に示され
るアミノ酸配列の以下の特徴をいう：「Ｒｅｓ」：配列番号４０および図７Ａ〜
Ｄのアミノ酸残基；「Ｐｏｓｉｔｉｏｎ」：配列番号４０および図７Ａ〜Ｄ中の
対応する残基の位置；Ｉ：α、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＩＩ：α
、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；ＩＩＩ：β、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂ
ｓｏｎ；ＩＶ：β、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；Ｖ：ターン、領域−Ｇａｒ
ｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩ：ターン、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；ＶＩ
Ｉ：コイル、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩＩＩ：親水性プロット
−Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ；ＩＸ：疎水性プロット−Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄ
ｓ；Ｘ：α、両親媒性領域−Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩ：β、両親媒性領域−Ｅ
ｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩＩ：可撓性領域−Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚ；ＸＩ
ＩＩ：抗原性指標−Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ；およびＸＩＶ：表面確率プロッ
ト−Ｅｍｉｎｉ。
【００９１】 さらなる実施形態において、本発明の核酸分子は、ＴＲ１３の機能的な特質を
含むかまたはこの特質からなるポリペプチドをコードする。この点において、本
発明の好ましい実施形態は、ＴＲ１３のα−へリックス領域およびα−へリック
ス形成領域（「α−領域」）、β−シート領域およびβ−シート形成領域（「β
−領域」）、ターン領域およびターン形成領域（「ターン−領域」）、コイル領
域およびコイル形成領域（「コイル−領域」）、親水性領域、疎水性領域、α両
親媒性領域、β両親媒性領域、可撓性領域、表面形成領域、ならびに高い抗原性
指標領域を含むフラグメントを含む。
【００９２】 上記のように、図９および／または表ＩＩＩに示されるＴＲ１３（配列番号４
０）の構造的または機能的特質を表すデータは、デフォルトパラメーターにセッ
トされたＤＮＡ*ＳＴＡＲの種々のモジュールおよびアルゴリズムを用いて作製
された。好ましい実施形態において、表ＩＩＩの欄ＶＩＩＩ、ＩＸ、ＸＩＩＩ、
およびＸＩＶに提示されるデータは、抗原性について高い程度の可能性を示すＴ
Ｒ１３の領域を決定するために使用され得る。高い抗原性の領域は、抗原認識が
免疫応答の開始のプロセスにおいて生じ得る環境中のポリペプチドの表面に曝露
されるようなポリペプチドの領域を提示する値を選択することによって、欄ＶＩ
ＩＩ、ＩＸ、ＸＩＩＩ、および／またはＸＩＶにおいて提示されるデータから決
定される。
【００９３】 これらの点において特定の好ましい領域は図３に示されるが、この領域は、表
Ｉに示されるように、図３に提示されるデータの表の表示を用いることによって
提示または同定され得る。図３を作製するために使用されるＤＮＡ*ＳＴＡＲコ
ンピューターアルゴリズム（もともとのデフォルトパラメーターでセットされる
）は、表の形式において図３でデータを提示するために使用された（表Ｉを参照
のこと）。図３におけるデータの表の形式は、好ましい領域の特定の境界を容易
に決定するために使用され得る。
【００９４】 これらの点において特定の好ましい領域は図９に示されるが、この領域は、表
ＩＩＩに示されるように、図９に提示されるデータの表の表示を用いることによ
って提示または同定され得る。図９を作製するために使用されるＤＮＡ*ＳＴＡ
Ｒコンピューターアルゴリズム（もともとのデフォルトパラメーターでセットさ
れる）は、表の形式において図９でデータを提示するために使用された（表ＩＩ
Ｉを参照のこと）。図９におけるデータの表の形式は、好ましい領域の特定の境
界を容易に決定するために使用され得る。
【００９５】 図３、および表Ｉに示される上記の好ましい領域は、図１に示されるアミノ酸
配列の分析によって同定される上記のタイプの領域を含むが、これらに限定され
ない。図３および表Ｉにおいて示されるように、このような好ましい領域として
は、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα−領域、β−領域、ターン領域、および
コイル領域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα−領域、β−領域、およびターン領域
、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域およびＨｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓの疎
水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのα−両親媒性領域およびβ−両親媒性領域、Ｋ
ａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可撓性領域、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆの高度な
抗原性指標の領域、ならびにＥｍｉｎｉの表面形成領域が挙げられる。
【００９６】 図９、および表ＩＩＩに示される上記の好ましい領域は、図９に示されるアミ
ノ酸配列の分析によって同定される上記のタイプの領域を含むが、これらに限定
されない。図９および表ＩＩＩにおいて示されるように、このような好ましい領
域としては、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα−領域、β−領域、ターン領域
、およびコイル領域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα−領域、β−領域、およびタ
ーン領域、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域およびＨｏｐｐ−Ｗｏｏ
ｄｓの疎水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのα−両親媒性領域およびβ−両親媒性
領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可撓性領域、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ
の高度な抗原性指標の領域、ならびにＥｍｉｎｉの表面形成領域が挙げられる。
【００９７】 図１１に示されるデータはまた、表ＩＶにおいて、表形式で示される。表ＩＶ
における欄は、見出し「Ｒｅｓ」、「Ｐｏｓ」およびローマ数字Ｉ〜ＸＩＶで標
識されている。この欄の見出しは、図１０Ａ〜Ｈおよび１１中に示されるアミノ
酸配列の以下の特徴をいう：「Ｒｅｓ」：配列番号６１および図１０Ａ〜Ｈのア
ミノ酸残基；「Ｐｏｓ」：配列番号６１および図１０Ａ〜Ｈ中の対応する残基の
位置；Ｉ：α、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＩＩ：α、領域−Ｃｈｏ
ｕ−Ｆａｓｍａｎ；ＩＩＩ：β、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＩＶ：
β、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；Ｖ：ターン、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏ
ｂｓｏｎ；ＶＩ：ターン、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；ＶＩＩ：コイル、領
域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩＩＩ：親水性プロット−Ｋｙｔｅ−Ｄ
ｏｏｌｉｔｔｌｅ；ＩＸ：疎水性プロット−Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓ；Ｘ：α、両
親媒性領域−Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩ：β、両親媒性領域−Ｅｉｓｅｎｂｅｒ
ｇ；ＸＩＩ：可撓性領域−Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚ；ＸＩＩＩ：抗原性指
標−Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ；およびＸＩＶ：表面確率プロット−Ｅｍｉｎｉ
。
【００９８】 図６に示されるデータはまた、表ＩＩにおいて、表形式で示される。上記のよ
うに、表ＩＩにおける欄は、見出し「Ｒｅｓ」、「Ｐｏｓｉｔｉｏｎ」およびロ
ーマ数字Ｉ〜ＸＩＶで標識されている。この欄の見出しは、図６および表ＩＩ中
に示されるアミノ酸配列の以下の特徴をいう：「Ｒｅｓ」：配列番号５および図
４Ａ〜Ｄのアミノ酸残基；「Ｐｏｓｉｔｉｏｎ」：配列番号５および図４Ａ〜Ｄ
中の対応する残基の位置；Ｉ：α、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＩＩ
：α、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；ＩＩＩ：β、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒ
ｏｂｓｏｎ；ＩＶ：β、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；Ｖ：ターン、領域−Ｇ
ａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩ：ターン、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；
ＶＩＩ：コイル、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩＩＩ：親水性プロ
ット−Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ；ＩＸ：疎水性プロット−Ｈｏｐｐ−Ｗｏ
ｏｄｓ；Ｘ：α、両親媒性領域−Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩ：β、両親媒性領域
−Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩＩ：可撓性領域−Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚ；
ＸＩＩＩ：抗原性指標−Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ；およびＸＩＶ：表面確率プ
ロット−Ｅｍｉｎｉ。
【００９９】 さらなる実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、ＴＲ１４の機能的
な特質をコードする。この点において、本発明の好ましい実施形態は、ＴＲ１４
のα−へリックス領域およびα−へリックス形成領域（「α−領域」）、β−シ
ート領域およびβ−シート形成領域（「β−領域」）、ターン領域およびターン
形成領域（「ターン−領域」）、コイル領域およびコイル形成領域（「コイル−
領域」）、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親媒性領域、可撓性
領域、表面形成領域、ならびに高い抗原性指標領域を含むフラグメントを含む。
これらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドもまた、本発明に
よって含まれる。
【０１００】 上記のように、図３および／または表Ｉに示されるＴＲ１３（配列番号２）の
構造的または機能的特質を表すデータは、デフォルトパラメーターにセットされ
たＤＮＡ*ＳＴＡＲの種々のモジュールおよびアルゴリズムを用いて作製された
。好ましい実施形態において、表Ｉの欄ＶＩＩＩ、ＩＸ、ＸＩＩＩ、およびＸＩ
Ｖに提示されるデータは、抗原性について高い程度の可能性を示すＴＲ１３の領
域を決定するために使用され得る。高い抗原性の領域は、抗原認識が免疫応答の
開始のプロセスにおいて生じ得る環境中のポリペプチドの表面に曝露されるよう
なポリペプチドの領域を提示する値を選択することによって、欄ＶＩＩＩ、ＩＸ
、ＸＩＩＩ、および／またはＸＩＶにおいて提示されるデータから決定される。
【０１０１】 上記のように、ＴＲ１４（配列番号６１（図１１および／または表ＩＶにおい
て示されるような）；または配列番号５（図６および／または表ＩＩに示される
ような））の構造的または機能的特質を表すデータは、デフォルトパラメーター
にセットされたＤＮＡ*ＳＴＡＲの種々のモジュールおよびアルゴリズムを用い
て作製された。好ましい実施形態において、表ＩＩの欄ＶＩＩＩ、ＩＸ、ＸＩＩ
Ｉ、およびＸＩＶに提示されるデータは、抗原性について高い程度の可能性を示
すＴＲ１４の領域を決定するために使用され得る。高い抗原性の領域は、抗原認
識が免疫応答の開始のプロセスにおいて生じ得る環境中のポリペプチドの表面に
曝露されるようなポリペプチドの領域を提示する値を選択することによって、欄
ＶＩＩＩ、ＩＸ、ＸＩＩＩ、および／またはＸＩＶにおいて提示されるデータか
ら決定される。
【０１０２】 これらの点において特定の好ましい領域は図６に示されるが、この領域は、表
ＩＩに示されるように、図６に提示されるデータの表の表示を用いることによっ
て提示または同定され得る。図６を作製するために使用されるＤＮＡ*ＳＴＡＲ
コンピューターアルゴリズム（もともとのデフォルトパラメーターでセットされ
る）は、表の形式において図６でデータを提示するために使用された（表ＩＩを
参照のこと）。図６におけるデータの表の形式は、好ましい領域の特定の境界を
容易に決定するために使用され得る。
【０１０３】 これらの点において特定のさらにより好ましい領域は図１１に示されるが、こ
の領域は、表ＩＶに示されるように、図１１に提示されるデータの表の表示を用
いることによって提示または同定され得る。図１１を作製するために使用される
ＤＮＡ*ＳＴＡＲコンピューターアルゴリズム（もともとのデフォルトパラメー
ターでセットされる）は、表の形式において図１１でデータを提示するために使
用された（表ＩＶを参照のこと）。図１１におけるデータの表の形式は、好まし
い領域の特定の境界を容易に決定するために使用され得る。
【０１０４】 図１１、および表ＩＶに示される上記の好ましい領域は、図１０Ａ〜Ｈに示さ
れるアミノ酸配列の分析によって同定される上記のタイプの領域を含むが、これ
らに限定されない。図１１および表ＩＶにおいて示されるように、このような好
ましい領域としては、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα−領域、β−領域、タ
ーン領域、およびコイル領域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα−領域、β−領域、
およびターン領域、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域およびＨｏｐｐ
−Ｗｏｏｄｓの疎水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのα−両親媒性領域およびβ−
両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可撓性領域、Ｊａｍｅｓｏｎ−
Ｗｏｌｆの高度な抗原性指標の領域、ならびにＥｍｉｎｉの表面形成領域が挙げ
られる。
【０１０５】 図６、および表ＩＩに示される上記の好ましい領域は、図４Ａ〜Ｄに示される
アミノ酸配列の分析によって同定される上記のタイプの領域を含むが、これらに
限定されない。図６および表ＩＩにおいて示されるように、このような好ましい
領域としては、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα−領域、β−領域、ターン領
域、およびコイル領域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα−領域、β−領域、および
ターン領域、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域およびＨｏｐｐ−Ｗｏ
ｏｄｓの疎水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのα−両親媒性領域およびβ−両親媒
性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可撓性領域、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌ
ｆの高度な抗原性指標の領域、ならびにＥｍｉｎｉの表面形成領域が挙げられる
。
【０１０６】
【表１】
【０１０７】
【表２】
【０１０８】
【表３】
【０１０９】
【表４】 別の局面において、本発明は、上記の本発明のＴＲ１３核酸分子中のポリヌク
レオチドの一部にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリ
ダイズするポリヌクレオチド（例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９に含ま
れるｃＤＮＡクローン（ＨＷＬＨＭ７０）、図１Ａ〜Ｃに開示される核酸配列ま
たはそれらの相補鎖、およびそれらのフラグメント（例えば、本明細書中に記載
されるような））を含む、単離された核酸分子を提供する。
【０１１０】 「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホルムアミ
ド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５
０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキ
ストラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２
℃で一晩のインキュベーション、続いて０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にてフィル
ターを洗浄することを意図する。
【０１１１】 別の局面において、本発明は、上記の本発明の分子にストリンジェントなハイ
ブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド（例えば、Ａ
ＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７に含まれるＴＲ１３ ｃＤＮＡクローン（ＨＷＬ
ＨＭ８３）、図７Ａ〜Ｄに開示される核酸配列またはそれらに対応する相補鎖、
およびそれらのフラグメント（例えば、本明細書中に記載されるような））を含
む、単離された核酸分子を提供する。
【０１１２】 ポリヌクレオチドの「部分（一部）」とハイブリダイズするポリヌクレオチド
とは、少なくとも参照ポリヌクレオチドの約１５ヌクレオチド（ｎｔ）、および
より好ましくは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０
ｎｔ、およびさらにより好ましくは約３０〜７０ｎｔとハイブリダイズするポリ
ヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか）が意図される。これらは、上記
またはさらに詳細に以下に議論されるような診断プローブまたはプライマーとし
て有用である。この文脈において、「約（およそ）」とは、特に列挙されたサイ
ズ（いずれかの末端または両方の末端において、いくつか（５、４、３、２また
は１）のヌクレオチドだけ大きいかまたは小さいサイズ）を含む。
【０１１３】 例えば、「少なくとも２０ヌクレオチド長」のポリヌクレオチドの部分は、参
照ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列（例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５
０７として寄託されたｃＤＮＡ、または配列番号３９に示されるようなヌクレオ
チド配列もしくはそれらに対応する相補鎖、またはそれらのフラグメント）由来
の２０個以上連続するヌクレオチドを意図する。
【０１１４】 例えば、「少なくとも２０ヌクレオチド長」のポリヌクレオチドの部分は、参
照ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列（例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３
４９として寄託されたｃＤＮＡ、または配列番号１に示されるようなヌクレオチ
ド配列もしくはそれらに対応する相補鎖、またはそれらのフラグメント）由来の
２０個以上連続するヌクレオチドを意図する。
【０１１５】 もちろん、ポリＡ配列（例えば、配列番号１または配列番号３９に示されるＴ
Ｒ１３ ｃＤＮＡの３’末端ポリ（Ａ）領域（ｔｒａｃｔ））のみに、またはＴ
（もしくはＵ）残基の相補的ストレッチにのみに、ハイブリダイズするポリヌク
レオチドは、本発明の核酸の一部にハイブリダイズさせるために用いられる本発
明のポリヌクレオチドに含まれない。なぜなら、このようなポリヌクレオチドは
、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体を含む任意の核酸分子（例えば、オリ
ゴｄＴをプライマーとして使用して作製された、事実上任意の二本鎖ｃＤＮＡク
ローン）にハイブリダイズするからである。
【０１１６】 別の局面において、本発明は、上記の本発明のＴＲ１４核酸分子中のポリヌク
レオチドの一部にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリ
ダイズするポリヌクレオチド（例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４８に含ま
れるｃＤＮＡクローン（ＨＭＳＨＫ４７）、好ましくは図１０Ａ〜Ｈもしくは図
４Ａ〜Ｄに開示される核酸配列またはそれらに対応する相補鎖、およびそれらの
フラグメント（例えば、本明細書中に記載されるような））を含む、単離された
核酸分子を提供する。
【０１１７】 例えば、「少なくとも２０ヌクレオチド長」のポリヌクレオチドの部分は、参
照ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列（例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３
４８として寄託されたｃＤＮＡ、または好ましくは配列番号６０もしくは配列番
号４に示されるようなヌクレオチド配列もしくはそれらに対応する相補鎖、また
はそれらのフラグメント）由来の２０個以上連続するヌクレオチドを意図する。
【０１１８】 もちろん、ポリＡ配列（例えば、好ましくは、配列番号６０もしくは配列番号
４に示されるＴＲ１４ ｃＤＮＡの３’末端ポリ（Ａ）領域（ｔｒａｃｔ））の
みに、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的ストレッチにのみに、ハイブリダイ
ズするポリヌクレオチドは、本発明の核酸の一部にハイブリダイズさせるために
用いられる本発明のポリヌクレオチドに含まれない。なぜなら、このようなポリ
ヌクレオチドは、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体を含む任意の核酸分子
（例えば、オリゴｄＴをプライマーとして使用して作製された、事実上任意の二
本鎖ｃＤＮＡクローン）にハイブリダイズするからである。
【０１１９】 特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、１０００００ｋｂ、
５００００ｋｂ、１００００ｋｂ、１０００ｋｂ、５００ｋｂ、４００ｋｂ、３
５０ｋｂ、３００ｋｂ、２５０ｋｂ、２００ｋｂ、１７５ｋｂ、１５０ｋｂ、１
２５ｋｂ、１００ｋｂ、７５ｋｂ、５０ｋｂ、４０ｋｂ、３０ｋｂ、２５ｋｂ、
２０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂ、７．５ｋｂ、または５ｋｂ未満の長さである。
【０１２０】 さらなる実施形態において、本発明の核酸は、ＴＲ１３コード配列の少なくと
も１５個、少なくとも３０個、少なくとも５０個、少なくとも１００個、または
少なくとも２５０個、少なくとも５００個、または少なくとも１０００個連続し
たヌクレオチドを含むが、図１Ａ−１Ｃ（配列番号１）または図７Ａ−７Ｄ（配
列番号３９）に示される５’または３’コードヌクレオチドに隣接する、１００
０ｋｂ、５００ｋｂ、２５０ｋｂ、２００ｋｂ、１５０ｋｂ、１００ｋｂ、７５
ｋｂ、５０ｋｂ、３０ｋｂ、２５ｋｂ、２０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂ、または
５ｋｂ以下のゲノムＤＮＡからなる。さらなる実施形態において、本発明の核酸
は、ＴＲ１３コード配列の少なくとも１５個、少なくとも３０個、少なくとも５
０個、少なくとも１００個、または少なくとも２５０個、少なくとも５００個、
または少なくとも１０００個の連続したヌクレオチドを含むが、任意のＴＲ１３
イントロンの全てまたは部分を含まない。別の実施形態において、ＴＲ１３コー
ド配列を含む核酸は、ゲノム隣接遺伝子（すなわち、ゲノムにおけるＴＲ１３遺
伝子に対して５’側または３’側）のコード配列を含まない。他の実施形態にお
いて、本発明のポリヌクレオチドは、１０００個、５００個、２５０個、１００
個、５０個、２５個、２０個、１５個、１０個、５個、４個、３個、２個、また
は１個より多くのゲノム隣接遺伝子のコード配列を含まない。
【０１２１】 さらに、本発明の核酸は、ＴＲ１４コード配列の少なくとも１５個、少なくと
も３０個、少なくとも５０個、少なくとも１００個、または少なくとも２５０個
、少なくとも５００個、または少なくとも１０００個連続したヌクレオチドを含
むが、好ましくは図１０Ａ−Ｈ（配列番号６０）または図４Ａ−Ｄ（配列番号４
）に示される５’または３’コードヌクレオチドに隣接する、１０００ｋｂ、５
００ｋｂ、２５０ｋｂ、２００ｋｂ、１５０ｋｂ、１００ｋｂ、７５ｋｂ、５０
ｋｂ、３０ｋｂ、２５ｋｂ、２０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂ、または５ｋｂ以下
のゲノムＤＮＡからなる。さらなる実施形態において、本発明の核酸は、ＴＲ１
４コード配列の少なくとも１５個、少なくとも３０個、少なくとも５０個、少な
くとも１００個、または少なくとも２５０個、少なくとも５００個、または少な
くとも１０００個の連続したヌクレオチドを含むが、任意のＴＲ１４イントロン
の全てまたは部分を含まない。別の実施形態において、ＴＲ１４コード配列を含
む核酸は、ゲノム隣接遺伝子（すなわち、ゲノムにおけるＴＲ１４遺伝子に対し
て５’側または３’側）のコード配列を含まない。他の実施形態において、本発
明のポリヌクレオチドは、１０００個、５００個、２５０個、１００個、５０個
、２５個、２０個、１５個、１０個、５個、４個、３個、２個、または１個より
多くのゲノム隣接遺伝子のコード配列を含まない。
【０１２２】 示されるように、ＴＲ１３ポリペプチドをコードする本発明の核酸分子は、以
下を含み得るが、これらに限定されない：単独で成熟ポリペプチドをコードする
配列；この成熟ポリペプチドのコード配列およびさらなる配列（例えば、プレタ
ンパク質配列またはプロタンパク質配列またはプレプロタンパク質配列のような
、リーダー配列もしくは分泌配列をコードする配列）；さらなる非コード配列を
伴う、上記のさらなるコード配列を含むかまたは含まない、この成熟ポリペプチ
ドのコード配列（さらなる非コード配列は、例えば、イントロンおよび非コード
５’配列および３’配列（例えば、スプライシングおよびポリアデニル化シグナ
ルを含む、転写、ｍＲＮＡプロセシングにおいて役割（例えば、リボソーム結合
およびｍＲＮＡの安定性）を担う、転写される非翻訳配列を含むが、これらに限
定されない））；さらなる機能性を提供するようなさらなるアミノ酸をコードす
るさらなるコード配列。従って、例えば、このポリペプチドは、融合されたポリ
ペプチドの精製を容易にするペプチドのような、マーカー配列と融合され得る。
本発明のこの局面の特定の好ましい実施形態において、マーカー配列は、例えば
、ｐＱＥベクター（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．）中に提供されるタグのような、ヘ
キサヒスチジンペプチドである。中でも、これらの多くは市販されている。例え
ば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８
２１−８２４（１９８９）において記載されるように、ヘキサヒスチジンは、融
合タンパク質の簡便な精製を提供する。「ＨＡ」タグは、インフルエンザ赤血球
凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する、精製のために有用な別のペプチ
ドであり、それは、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７〜７７８（１９８
４）によって記載されている。以下で考察されるように、他のそのような融合タ
ンパク質は、Ｎ末端またはＣ末端にてＦｃに融合されたＴＲ１３レセプターを含
む。
【０１２３】 示されるように、ＴＲ１４ポリペプチドをコードする本発明の核酸分子は、以
下を含み得るが、これらに限定されない：単独で成熟ポリペプチドをコードする
配列；この成熟ポリペプチドのコード配列およびさらなる配列（例えば、プレタ
ンパク質配列またはプロタンパク質配列またはプレプロタンパク質配列のような
、リーダー配列もしくは分泌配列をコードする配列）；さらなる非コード配列を
伴う、上記のさらなるコード配列を含むかまたは含まない、この成熟ポリペプチ
ドのコード配列（さらなる非コード配列は、例えば、イントロンおよび非コード
５’配列および３’配列（例えば、スプライシングおよびポリアデニル化シグナ
ルを含む、転写、ｍＲＮＡプロセシングにおいて役割（例えば、リボソーム結合
およびｍＲＮＡの安定性）を担う、転写される非翻訳配列を含むが、これらに限
定されない））；さらなる機能性を提供するようなさらなるアミノ酸をコードす
るさらなるコード配列。従って、例えば、このポリペプチドは、融合されたポリ
ペプチドの精製を容易にするペプチドのような、マーカー配列と融合され得る。
本発明のこの局面の特定の好ましい実施形態において、マーカー配列は、例えば
、ｐＱＥベクター（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．）中に提供されるタグのような、ヘ
キサヒスチジンペプチドである。中でも、これらの多くは市販されている。例え
ば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８
２１−８２４（１９８９）において記載されるように、ヘキサヒスチジンは、融
合タンパク質の簡便な精製を提供する。「ＨＡ」タグは、インフルエンザ赤血球
凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する、精製のために有用な別のペプチ
ドであり、それは、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７〜７７８（１９８
４）によって記載されている。以下で考察されるように、他のそのような融合タ
ンパク質は、Ｎ末端またはＣ末端にてＦｃに融合されたＴＲ１４レセプターを含
む。
【０１２４】 本発明はさらに、ＴＲ１３レセプターの一部、アナログまたは誘導体をコード
する、本発明の核酸分子の改変体に関する。改変体は、天然に存在し得る（例え
ば、天然の対立遺伝子改変体）。「対立遺伝子改変体」により、生物の染色体上
の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態の１つが意味される
（Ｇｅｎｅ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。天然に存在しない改変体は、当該分野で公知
の変異誘発技術を用いて生成され得る。
【０１２５】 このような改変体としては、ヌクレオチド置換、欠失、または付加により生成
される改変体が挙げられる。この置換、欠失または付加は、１つ以上のヌクレオ
チドを含み得る。改変体は、コード領域、非コード領域、またはその両方におい
て改変され得る。コード領域における改変は、保存的アミノ酸または非保存的ア
ミノ酸の置換、欠失または付加を生成し得る。これらの中で特に好ましいのは、
サイレントな置換、付加および欠失である。これらは、ＴＲ１３レセプターまた
はその一部分の特性および活性を改変しない。また、この点において特に好まし
いのは、保存的置換である。
【０１２６】 本発明はさらに、ＴＲ１４レセプターの一部、アナログまたは誘導体をコード
する、本発明の核酸分子の改変体に関する。改変体は、天然に存在し得る（例え
ば、天然の対立遺伝子改変体）。「対立遺伝子改変体」により、生物の染色体上
の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態の１つが意味される
（Ｇｅｎｅ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。天然に存在しない改変体は、当該分野で公知
の変異誘発技術を用いて生成され得る。
【０１２７】 このような改変体としては、ヌクレオチド置換、欠失、または付加により生成
される改変体が挙げられる。この置換、欠失または付加は、１つ以上のヌクレオ
チドを含み得る。改変体は、コード領域、非コード領域、またはその両方におい
て改変され得る。コード領域における改変は、保存的アミノ酸または非保存的ア
ミノ酸の置換、欠失または付加を生成し得る。これらの中で特に好ましいのは、
サイレントな置換、付加および欠失である。これらは、ＴＲ１４レセプターまた
はその一部分の特性および活性を改変しない。また、この点において特に好まし
いのは、保存的置換である。
【０１２８】 本発明のさらなる実施形態は、以下のヌクレオチド配列に対して、少なくとも
９０％同一、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％
または９９％同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含むか、また
はこれらからなる単離された核酸分子を含む：（ａ）配列番号２におけるアミノ
酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号２
におけるアミノ酸配列を有するが、アミノ末端メチオニンを欠く（配列番号２の
アミノ酸位置２〜７５０）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｃ）
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９に含まれるｃＤＮＡクローン（ＨＷＬＨＭ７０
）によってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９に含まれるｃＤＮＡクロー
ン（ＨＷＬＨＭ７０）によってコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ１３
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）図１Ａ−Ｃに開示されるＴ
Ｒ１３システインリッチドメインの１個、２個、３個または全４個（配列番号２
のアミノ酸１０５〜１７０、アミノ酸２５１〜２６５、アミノ酸３３１〜４１０
、および／またはアミノ酸５８０〜６１０）の任意の組合せをコードするヌクレ
オチド配列；（ｆ）配列番号２の約１０５〜約１７０の位置にアミノ酸配列を有
するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｇ）配列番号２の約２５１
〜約２６５の位置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチ
ド配列；（ｈ）配列番号２の約３３１〜約４１０の位置にアミノ酸配列を有する
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｉ）配列番号２の約５８０〜約
６１０の位置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配
列；および（ｊ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（
ｇ）、（ｈ）、または（ｉ）におけるヌクレオチド配列のいずれかに対して相補
的なヌクレオチド配列。この文脈において、「約（およそ）」とは、特に列挙さ
れたサイズ（いずれかの末端または両方の末端において、いくつか（５、４、３
、２または１）のヌクレオチドだけ大きいかまたは小さいサイズ）を含む。
【０１２９】 本発明のさらなる実施形態は、以下のヌクレオチド配列に対して、少なくとも
９０％同一、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％
または９９％同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含むか、また
はこれらからなる単離された核酸分子を含む：（ａ）配列番号４０におけるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号
４０におけるアミノ酸配列を有するが、アミノ末端メチオニンを欠く（配列番号
４０のアミノ酸位置２〜１００１）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
；（ｃ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７に含まれるｃＤＮＡクローン（ＨＷＬ
ＨＮ８３）によってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７に含まれるｃＤＮ
Ａクローン（ＨＷＬＨＮ８３）によってコードされるアミノ酸配列を有する成熟
ＴＲ１３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）ＴＲ１３レセプタ
ー成熟細胞外ドメイン（配列番号４０の約４２〜約９０６のアミノ酸位置）をコ
ードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＴＲ１３レセプター膜貫通ドメイン（配列番
号４０の約１３４〜約１５０のアミノ酸位置）をコードするヌクレオチド配列；
（ｇ）ＴＲ１３レセプター細胞内ドメイン（配列番号４０の９３２〜約１００１
のアミノ酸位置）をコードするヌクレオチド配列；（ｈ）膜貫通ドメインの全て
または一部が失欠した、ＴＲ１３レセプター細胞外ドメインおよび細胞内ドメイ
ン（配列番号４０の約４２〜約９６および９３２〜約１００１のアミノ酸位置）
をコードするヌクレオチド配列；（ｉ）配列番号４０の約２７１〜約４２１の位
置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｊ）
配列番号４０の約２７１〜約２８６の位置にアミノ酸配列を有するポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列；（ｋ）配列番号４０の約２９０〜約３００の位
置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｌ）
配列番号４０の約３０１〜約３２０の位置にアミノ酸配列を有するポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列；（ｍ）配列番号４０の約３２９〜約３６１の位
置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｎ）
配列番号４０の約４０４〜約４２１の位置にアミノ酸配列を有するポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列；（ｏ）配列番号４０の約５８５〜約５９５の位
置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｐ）
図７Ａ−Ｄに示されるようなＴＲ１３保存ドメインの任意の１個をコードするヌ
クレオチド配列；（ｑ）配列番号４０の約６６１〜約６７４の位置にアミノ酸配
列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｒ）配列番号４０の
約７１０〜約７４４の位置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列；（ｓ）配列番号４０の約９８０〜約９９１の位置にアミノ酸配
列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｔ）配列番号４０の
約４５〜約６０の位置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列；（ｕ）配列番号４０の約１２１〜約１３５の位置にアミノ酸配列を
有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｖ）配列番号４０の約１
４５〜約１６０の位置にアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列；および（ｗ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（
ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（
ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、または（ｖ）におけ
るヌクレオチド配列のいずれかに対して相補的なヌクレオチド配列。この文脈に
おいて、「約（およそ）」とは、特に列挙されたサイズ（いずれかの末端または
両方の末端において、いくつか（５、４、３、２または１）のヌクレオチドだけ
大きいかまたは小さいサイズ）を含む。
【０１３０】 ＴＲ１３ポリペプチドをコードする参照ヌクレオチド配列に、例えば、少なく
とも９５％「同一」なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドとは、そのポ
リヌクレオチド配列が、ＴＲ１３ポリペプチドをコードする参照ヌクレオチド配
列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでのミスマッチを含み得ることを除いて
、そのポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、参照配列に対して同一であるこ
とを意図する。換言すれば、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％同
一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、その参照配列の
ヌクレオチドの５％までが、欠失され得るかまたは別のヌクレオチドで置換され
得、あるいは、その参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの数のヌクレオチド
が、その参照配列に挿入され得る。参照配列のこれらのミスマッチは、参照ヌク
レオチド配列の５’もしくは３’末端位置において、またはこれらの末端位置の
間の任意の位置で、参照配列中のヌクレオチド間で個々に、もしくは参照配列内
の１個以上連続した群の状態のいずれかで散在して生じ得る。参照（照会（ｑｕ
ｅｒｙ））配列は、本明細書中に記載されるように、図１Ａ〜Ｃ（配列番号１）
もしくは図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）に示されるようなヌクレオチド配列あるい
は任意のＴＲ１３ポリペプチドフラグメント（例えば、本明細書に記載されるよ
うなＴＲ１３のＮ末端および／またはＣ末端欠失のいずれかのアミノ酸配列をコ
ードするポリヌクレオチド）、改変体、誘導体またはアナログをコードする全Ｔ
Ｒ１３であり得る。
【０１３１】 実際問題として、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、例えば、配列番号１
もしくは配列番号３９に示されるヌクレオチド配列、または寄託されたｃＤＮＡ
クローン（ＨＷＬＨＭ７０もしくはＨＷＬＨＮ８３）のヌクレオチド配列に対し
て、少なくとも９０％同一、９５％同一、９６％同一、９７％同一、９８％同一
、または９９％同一であるか否かは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎ
ｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｕｎｉｘ（登
録商標）用バージョン８、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）のような公知のコンピュー
タープログラムを使用して従来通りに決定され得る。Ｂｅｓｔｆｉｔは、２つの
配列間で相同性の最も高いセグメントを見出すために、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔ
ｅｒｍａｎ（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃ
ｓ ２：４８２−４８９、１９８１）の局所的相同性アルゴリズムを使用する。
特定の配列が本発明に従う参照配列に対して、例えば、９５％同一であるか否か
を決定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列整列プログラムを使用
する場合、当然のことながら、同一性のパーセンテージが参照ヌクレオチド配列
の全長にわたって計算され、そして参照配列内のヌクレオチドの総数の５％まで
の相同性におけるギャップが許容されるようにパラメーターを設定する。
【０１３２】 本発明のさらなる実施形態は、以下のヌクレオチド配列に対して、少なくとも
９０％同一、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％
または９９％同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む単離され
た核酸分子を含む：（ａ）配列番号６１におけるアミノ酸配列を有するポリペプ
チドをコードするヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号６１におけるアミノ酸配列
を有するが、アミノ末端メチオニンを欠く（配列番号６１のアミノ酸位置２〜２
３１）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｃ）ＡＴＣＣ受託番号Ｈ
ＭＳＨＫ４７に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列を
有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｄ）配列番号５における
アミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）配列
番号５におけるアミノ酸配列を有するが、アミノ末端メチオニンを欠く（配列番
号５のアミノ酸位置２〜２２６）ポリペプチドをコードするヌクレオチ配列；（
ｆ）ＴＲ１４レセプター細胞外ドメイン（好ましくは、好ましくは、配列番号６
１の約１〜約１３８のアミノ酸位置、あるいは配列番号５の約１〜約１３３のア
ミノ酸位置）をコードするヌクレオチド配列；（ｇ）ＴＲ１４システインリッチ
ドメイン（好ましくは、配列番号６１の約７０〜約９０のアミノ酸位置、あるい
は配列番号５の約６５〜約８５のアミノ酸位置）をコードするヌクレオチド配列
；（ｈ）ＴＲ１４レセプター膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号６１の約１
３９〜約１５５のアミノ酸位置、あるいは配列番号５の約１３４〜約１５０のア
ミノ酸位置）をコードするヌクレオチド配列；（ｉ）ＴＲ１４レセプター細胞内
ドメイン（好ましくは、配列番号６１の約１５６〜約２３１のアミノ酸位置、あ
るいは配列番号５の約１５１〜約２２６のアミノ酸位置）をコードするヌクレオ
チド配列；（ｊ）膜貫通ドメインの全てまたは一部が失欠した、ＴＲ１４レセプ
ター細胞外ドメインおよび細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号６１の約１〜
約１３８および１５６〜約２３１のアミノ酸位置、あるいは配列番号５の約１〜
約１３３および１５１〜約２２６のアミノ酸位置）をコードするヌクレオチド配
列；ならびに（ｋ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、
（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）または（ｋ）におけるヌクレオチド配列のいず
れかに対して相補的なヌクレオチド配列。この文脈において、「約（およそ）」
とは、特に列挙されたサイズ（いずれかの末端または両方の末端において、いく
つか（５、４、３、２または１）のヌクレオチドだけ大きいかまたは小さいサイ
ズ）を含む。
【０１３３】 ＴＲ１４ポリペプチドをコードする参照ヌクレオチド配列に、例えば、少なく
とも９５％「同一」なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドとは、そのポ
リヌクレオチド配列が、ＴＲ１４ポリペプチドをコードする参照ヌクレオチド配
列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでのミスマッチを含み得ることを除いて
、そのポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、参照配列に対して同一であるこ
とを意図する。換言すれば、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％同
一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、その参照配列の
ヌクレオチドの５％までが、欠失され得るかまたは別のヌクレオチドで置換され
得、あるいは、その参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの数のヌクレオチド
が、その参照配列に挿入され得る。参照配列のこれらのミスマッチは、参照ヌク
レオチド配列の５’もしくは３’末端位置において、またはこれらの末端位置の
間の任意の位置で、参照配列中のヌクレオチド間で個々に、もしくは参照配列内
の１個以上連続した群の状態のいずれかで散在して生じ得る。参照（照会（ｑｕ
ｅｒｙ））配列は、本明細書中に記載されるように、好ましくは図１０Ａ〜Ｈ（
配列番号６０）もしくは図４Ａ〜Ｄ（配列番号４）に示されるようなヌクレオチ
ド配列あるいは任意のＴＲ１４ポリペプチドフラグメント（例えば、本明細書に
記載されるようなＴＲ１４のＮ末端および／またはＣ末端欠失のいずれかのアミ
ノ酸配列をコードするポリヌクレオチド）、改変体、誘導体またはアナログをコ
ードする全ＴＲ１４であり得る。
【０１３４】 実際問題として、任意の特定のヌクレオチド配列が、例えば、好ましくは配列
番号６０もしくは配列番号４に示されるヌクレオチド配列、または寄託されたｃ
ＤＮＡクローンのヌクレオチド配列に対して、少なくとも９０％同一、９５％同
一、９６％同一、９７％同一、９８％同一、または９９％同一であるか否かは、
Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｕｎｉｘ（登録商標）用バージョン８、Ｇｅｎｅｔ
ｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）のような公知のコンピュータープログラムを使用して従来通りに
決定され得る。Ｂｅｓｔｆｉｔは、２つの配列間で相同性の最も高いセグメント
を見出すために、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２−４８９、１９８１）
の局所的相同性アルゴリズムを使用する。特定の配列が本発明に従う参照配列に
対して、例えば、９５％同一であるか否かを決定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔま
たは任意の他の配列整列プログラムを使用する場合、当然のことながら、同一性
のパーセンテージが参照ヌクレオチド配列の全長にわたって計算され、そして参
照配列内のヌクレオチドの総数の５％までの相同性におけるギャップが許容され
るようにパラメーターを設定する。
【０１３５】 特定の実施形態では、参照（照会）配列（本発明の配列）と対象配列との間の
同一性（全体的な配列整列ともいわれる）は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａ
ｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づ
くＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定される。同一性パーセ
ントを算定するためにＤＮＡ配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好まし
いパラメーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉ
ｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、
Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ
Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌ
ｔｙ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列
の長さ（いずれかより短い方）である。この実施形態に従って、同一性パーセン
トを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが対象配列の５’および３’の短
縮を考慮しないという事実を考慮するために、対象配列が、５’または３’欠失
のために（内部欠失が理由ではなく）、照会配列より短い場合、手動の補正が結
果に対してなされる。照会配列に対して、５’末端または３’末端で短縮化され
た対象配列について、同一性パーセントは、照会配列の総塩基のパーセントとし
て、一致／整列されない対象配列の５’および３’である照会配列の塩基の数を
計算することによって補正される。ヌクレオチドが一致／整列されるか否かの決
定は、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパーセン
トが、特定のパラメーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定
された同一性パーセントから差し引かれ、最終的な同一性パーセントのスコアに
到達する。この補正されたスコアが、本実施形態の目的に使用されるものである
。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示される場合、照会配列と一致／整列されいていな
い、対象配列の５’および３’塩基の外側の塩基のみが、同一性パーセントのス
コアを手動で調整する目的で算定される。例えば、９０塩基の対象配列は、同一
性パーセントを決定するために１００塩基の照会配列に整列される。欠失は、対
象配列の５’末端で生じ、従って、ＦＡＳＴＤＢ整列は、５’末端の最初の１０
塩基で一致／整列を示さない。１０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致して
いない５’および３’末端での塩基の数／照会配列の塩基の総数）を表し、その
ため１０％は、ＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定される同一性パーセントの
スコアから差し引かれる。残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同
一性パーセントは９０％である。別の例では、９０塩基の対象配列が、１００塩
基の照会配列と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、照
会と一致／整列しない対象配列の５’または３’の塩基は存在しない。この場合
、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再
び、照会配列と一致／整列しない対象配列の５’および３’の塩基のみが手動で
補正される。他の手動の補正は、本実施形態の目的のためにはなされない。
【０１３６】 本願は、例えば、配列番号１もしくは配列番号３９に示される核酸配列、また
はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９もしくはＰＴＡ−５０７として寄託されたｃ
ＤＮＡの核酸配列に対して、それらがＴＲ１３レセプター活性を有するポリペプ
チドをコードするか否かに関わらず、少なくとも９０％同一、９５％同一、９６
％同一、９７％同一、９８％同一、または９９％同一であるポリヌクレオチド配
列を含む核酸分子に関する。なぜならば、特定の核酸分子が、ＴＲ１３レセプタ
ー機能活性を有するポリペプチドをコードしない場合ですら、当業者はこの核酸
分子を使用する方法（例えば、ハイブリダイゼーションプローブまたはポリメラ
ーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとして）をなお知っているからである。ＴＲ
１３レセプター活性を有するポリペプチドをコードしない本発明の核酸分子の使
用としては、特に、（１）ｃＤＮＡライブラリー中のＴＲ１３レセプター遺伝子
またはその対立遺伝子改変体を単離すること；（２）Ｖｅｒｍａら（Ｈｕｍａｎ
Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎ
ｉｑｕｅｓ、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８８））に記載さ
れるような、ＴＲ１３レセプター遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、
分裂中期染色体スプレッド（ｓｐｒｅａｄ）に対するインサイチュハイブリダイ
ゼーション（例えば、「ＦＩＳＨ」）；および（３）特定の組織におけるＴＲ１
３レセプターのｍＲＮＡ発現を検出するためのノーザンブロット分析が挙げられ
る。
【０１３７】 しかし、例えば、配列番号１もしくは配列番号３９に示される核酸配列、また
はＰＴＡ−３４９もしくはＰＴＡ−５０７として寄託されたｃＤＮＡクローンの
核酸配列に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または
９９％同一な配列を有する核酸分子が好ましい。これらは、事実、ＴＲ１３レセ
プターの機能的活性を有するポリペプチドをコードする。「ＴＲ１３レセプター
の機能的活性を有するポリペプチド」によって、特定の生物学的アッセイにおい
て測定されるように、本発明のＴＲ１３レセプター（全長タンパク質または好ま
しくは成熟タンパク質）の活性と類似する活性（しかし、同一である必要はない
）を示すポリペプチドが意図される。
【０１３８】 もちろん、遺伝コードの縮重に起因して、当業者は、例えば、寄託されたｃＤ
ＮＡの核酸配列、クローンの核酸配列１もしくは配列番号３９に示される核酸配
列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な配
列を有する多くの核酸分子が「ＴＲ１３レセプターの機能的活性」を有するポリ
ペプチドをコードすることを直ちに認識する。事実、これらのヌクレオチド配列
の縮重改変体は全て、同じポリペプチドをコードするので、これは、上記の比較
アッセイを行うことなく、なお当業者に明らかである。縮重改変体ではないこの
ような核酸分子については、妥当な数がまたＴＲ１３レセプター機能活性を有す
るポリペプチドをコードすることは当該分野でさらに認識される。これは、当業
者が、タンパク質機能をあまり有意にもたらすようではないまたはもたらさない
ようであるかのいずれかであるアミノ酸置換（例えば、１つの脂肪族アミノ酸を
第２の脂肪族アミノ酸と置換すること）を十分認識しているためである。
【０１３９】 例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置換の作製方法に関するガイダンス
は、Ｊ．Ｕ．Ｂｏｗｉｅら、「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｅｓｓａｇ
ｅ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ〜Ａｍｉ
ｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３
０６−１３１０（１９９０）に提供される。ここで、著者らは、タンパク質がア
ミノ酸置換に驚くほど許容性であることを示す。
【０１４０】 本願は、例えば、好ましくは配列番号６０もしくは配列番号４に示される核酸
配列、またはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４８として寄託されたｃＤＮＡの核酸
配列、およびさらに好ましくは、これらの配列のペプチドコード領域に対して、
それらがＴＲ１４レセプター活性を有するポリペプチドをコードするか否かに関
わらず、少なくとも９０％同一、９５％同一、９６％同一、９７％同一、９８％
同一、または９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子に関する。なぜ
ならば、特定の核酸分子が、ＴＲ１４レセプター機能活性を有するポリペプチド
をコードしない場合ですら、当業者はこの核酸分子を使用する方法（例えば、ハ
イブリダイゼーションプローブまたはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマ
ーとして）をなお知っているからである。ＴＲ１４レセプター活性を有するポリ
ペプチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、特に、（１）ｃＤＮ
Ａライブラリー中のＴＲ１４レセプター遺伝子またはその対立遺伝子改変体を単
離すること；（２）Ｖｅｒｍａら（Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｐｅｒｇａｍｏｎ
Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８８））に記載されるような、ＴＲ１４レセプター
遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、分裂中期染色体スプレッド（ｓｐ
ｒｅａｄ）に対するインサイチュハイブリダイゼーション（例えば、「ＦＩＳＨ
」）；および（３）特定の組織におけるＴＲ１４レセプターのｍＲＮＡ発現を検
出するためのノーザンブロット分析が挙げられる。
【０１４１】 しかし、例えば、好ましくは配列番号６０もしくは配列番号４に示される核酸
配列、または寄託されたｃＤＮＡクローンの核酸配列に対して、そしてさらに好
ましくはこれらの配列のポリペプチドコード領域に対して、少なくとも９０％、
９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な配列を有する核酸分子が好
ましい。これらは、事実、ＴＲ１４レセプターの機能的活性を有するポリペプチ
ドをコードする。「ＴＲ１４レセプターの機能的活性を有するポリペプチド」に
よって、例えば、特定の生物学的アッセイにおいて測定されるように、本発明の
ＴＲ１４レセプター（全長タンパク質または好ましくは成熟タンパク質）の活性
と類似する活性（しかし、同一である必要はない）を示すポリペプチドが意図さ
れる。
【０１４２】 もちろん、遺伝コードの縮重に起因して、当業者は、例えば、寄託されたｃＤ
ＮＡの核酸配列または好ましくは核酸配列６０もしくは配列番号４に示される核
酸配列に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９
９％同一な配列を有する多くの核酸分子が「ＴＲ１４レセプターの機能的活性」
を有するポリペプチドをコードすることを直ちに認識する。事実、これらのヌク
レオチド配列の縮重改変体は全て、同じポリペプチドをコードするので、これは
、上記の比較アッセイを行うことなく、なお当業者に明らかである。縮重改変体
ではないこのような核酸分子については、妥当な数がまたＴＲ１４レセプター機
能活性を有するポリペプチドをコードすることは当該分野でさらに認識される。
これは、当業者が、タンパク質機能をあまり有意にもたらすようではないまたは
もたらさないようであるかのいずれかであるアミノ酸置換（例えば、１つの脂肪
族アミノ酸を第２の脂肪族アミノ酸と置換すること）を十分認識しているためで
ある。
【０１４３】 （ポリヌクレオチドアッセイ） 本発明はまた、相補的なポリヌクレオチドを検出するためのＴＲ１３ポリヌク
レオチド（例えば、診断試薬として）の使用に関する。機能不全と関連するＴＲ
１３の変異形態の検出は、ＴＲ１３またはその可溶性形態の発現の低下、過剰発
現、または発現の変更から生じる、疾患（例えば、腫瘍または自己免疫疾患など
）または疾患に対する感受性の診断を加え得るか、または定義し得る診断ツール
を提供する。
【０１４４】 ＴＲ１３遺伝子に変異を保有する個体は、種々の技術により、ＤＮＡレベルで
検出され得る。診断のための核酸は、患者の細胞（例えば、血液、尿、唾液、組
織生検および剖検材料に由来する）から得られ得る。ゲノムＤＮＡは、検出のた
めに直接使用され得るか、または分析の前に、ＰＣＲを用いることにより酵素的
に増幅され得る（Ｓａｉｋｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３２４：１６３−１６６（１９
８６））。ＲＮＡまたはｃＤＮＡはまた同じ目的のために使用され得る。例とし
て、ＴＲ１３をコードする核酸に相補的なＰＣＲプライマーを使用して、ＴＲ１
３の発現および変異を同定および分析し得る。例えば、欠失および挿入は、正常
な遺伝子型と比較した際に、増幅産物のサイズの変化により検出され得る。点変
異は、放射性標識されたＴＲ１３ ＲＮＡまたは代替的に、放射性標識されたＴ
Ｒ１３アンチセンスＤＮＡ配列に対して、増幅されたＤＮＡがハイブリダイズす
ることにより同定され得る。完全に一致した配列は、ＲＮａｓｅ Ａ消化または
融解点の差異により一致しなかった二重鎖から区別され得る。
【０１４５】 本発明はまた、相補的なポリヌクレオチドを検出するためのＴＲ１４ポリヌク
レオチド（例えば、診断試薬として）の使用に関する。機能不全と関連するＴＲ
１４の変異形態の検出は、ＴＲ１４またはその可溶性形態の発現の低下、過剰発
現、または発現の変更から生じる、疾患（例えば、腫瘍または自己免疫疾患など
）または疾患に対する感受性の診断を加え得るか、または定義し得る診断ツール
を提供する。
【０１４６】 ＴＲ１４遺伝子に変異を保有する個体は、種々の技術により、ＤＮＡレベルで
検出され得る。診断のための核酸は、患者の細胞（例えば、血液、尿、唾液、組
織生検および剖検材料に由来する）から得られ得る。ゲノムＤＮＡは、検出のた
めに直接使用され得るか、または分析の前に、ＰＣＲを用いることにより酵素的
に増幅され得る（Ｓａｉｋｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３２４：１６３−１６６（１９
８６））。ＲＮＡまたはｃＤＮＡはまた同じ目的のために使用され得る。例とし
て、ＴＲ１４をコードする核酸に相補的なＰＣＲプライマーを使用して、ＴＲ１
４の発現および変異を同定および分析し得る。例えば、欠失および挿入は、正常
な遺伝子型と比較した際に、増幅産物のサイズの変化により検出され得る。点変
異は、放射性標識されたＴＲ１４ ＲＮＡまたは代替的に、放射性標識されたＴ
Ｒ１４アンチセンスＤＮＡ配列に対して、増幅されたＤＮＡがハイブリダイズす
ることにより同定され得る。完全に一致した配列は、ＲＮａｓｅ Ａ消化または
融解点の差異により一致しなかった二重鎖から区別され得る。
【０１４７】 参照遺伝子と変異を有する遺伝子との間の配列の差異もまた、直接的なＤＮＡ
配列決定によって示され得る。さらに、クローニングされたＤＮＡセグメントは
、特定のＤＮＡセグメントを検出するプローブとして用いられ得る。このような
方法の感度は、ＰＣＲまたは別の増幅方法の適切な使用によっておおいに増強さ
れ得る。例えば、配列決定プライマーは、改変ＰＣＲによって作製された、二本
鎖ＰＣＲ産物または一本鎖鋳型分子を用いて使用される。配列の決定は、放射性
標識ヌクレオチドを用いる従来の手順によってか、または蛍光タグを用いる自動
配列決定手順によって行われる。
【０１４８】 ＤＮＡ配列の差異に基づく遺伝子試験は、変性剤を含むか、または含まないゲ
ルにおけるＤＮＡフラグメントの電気泳動移動度における変化の検出により達成
され得る。小さな配列の欠失および挿入は、高い分解能のゲル電気泳動により可
視化され得る。異なる配列のＤＮＡフラグメントは、異なるＤＮＡフラグメント
の移動度が、それらの特異的な融解温度または部分融解温度により異なる位置で
ゲルにおいて遅延される変性ホルムアミド勾配ゲルにおいて区別され得る（例え
ば、Ｍｙｅｒｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３０：１２４２（１９８５）を参照のこ
と）。
【０１４９】 特定の位置での配列変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッセイ（例えば、ＲＮａ
ｓｅおよびＳ１保護、または化学切断方法）により明らかにされ得る（例えば、
Ｃｏｔｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：４３
９７−４４０１（１９８５））。
【０１５０】 従って、特定のＤＮＡ配列の検出は、例えば、ハイブリダイゼーション、ＲＮ
ａｓｅ保護、化学切断、直接ＤＮＡ配列決定または制限酵素の使用（例えば、制
限フラグメント長多型（「ＲＦＬＰ」））、およびゲノムＤＮＡのサザンブロッ
ティングのような方法により達成され得る。
【０１５１】 より従来のゲル電気泳動およびＤＮＡ配列決定に加えて、変異もまた、インサ
イチュ分析により検出され得る。
【０１５２】 （ベクターおよび宿主細胞） 本発明はまた、本発明の単離されたＤＮＡ分子を含むベクター、本発明の組換
えベクターおよび／または核酸で遺伝子操作された宿主細胞、および組換え技術
によるＴＲ１３ポリペプチドまたはそのフラグメントの産生に関する。
【０１５３】 本発明はまた、本発明の単離されたＤＮＡ分子を含むベクター、本発明の組換
えベクターおよび／または核酸で遺伝子操作された宿主細胞、および組換え技術
によるＴＲ１４ポリペプチドまたはそのフラグメントの産生に関する。
【０１５４】 宿主細胞は、核酸分子を組み込み、そして本発明のポリペプチドを発現するよ
うに遺伝子操作され得る。ポリヌクレオチドは、単独でか、または他のポリヌク
レオチドと共に導入され得る。このような他のポリヌクレオチドは、独立して導
入されても、同時に導入されても、本発明のポリヌクレオチドに連結されて導入
されてもよい。
【０１５５】 本発明に従って、ベクターは例えば、クローンベクター、一本鎖または二本鎖
ファージベクター、一本鎖または二本鎖のＲＮＡウイルスベクターまたはＤＮＡ
ウイルスベクターであり得る。このようなベクターは、ＤＮＡおよびＲＮＡを細
胞へ導入するための周知の技術により、ポリヌクレオチド（好ましくは、ＤＮＡ
）として細胞に導入され得る。ウイルスベクターは複製能を有するかまたは複製
欠損であり得る。後者の場合、ウイルスの増殖は一般的に、補完的宿主細胞にお
いてのみ生じる。
【０１５６】 特定の局面において、ベクターの中で好ましいのは、本発明のポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドの発現のためのベクターである。一般的に、このようなベ
クターは、発現されるポリヌクレオチドに作動可能に連結され、宿主における発
現に対して有効である、シス作用性調節領域を含む。適切なトランス作用性因子
は、宿主への導入において、宿主により供給されるか、補完的ベクターにより供
給されるか、またはベクター自身により供給されるかのいずれかである。
【０１５７】 ポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために選択マーカーを含むベクター
に連結され得る。一般に、クローンベクターは、リン酸カルシウム沈澱物のよう
な沈澱物、または荷電脂質との複合体において導入される。ベクターがウイルス
である場合、このベクターは、適切なパッケージング細胞株を使用してインビト
ロでパッケージングされ得、次いで宿主細胞に形質導入され得る。
【０１５８】 ＤＮＡ挿入物は、適切なプロモーター（いくつか挙げると、例えば、ファージ
λＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター
、およびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーターおよびＳＶ４０後期プ
ロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲのプロモーター）に作動可能に連結
されなければならない。他の適切なプロモーターは当業者に公知である。核酸構
築物はさらに、転写開始、転写終結のための部位、および転写領域において、翻
訳のためのリボソーム結合部位を含む。この構築物によって発現される成熟転写
物のコード部分は、好ましくは、始めに翻訳開始コドン、および翻訳されるべき
ポリペプチドの末端に適切に位置される終結コドン（ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡ
Ｇ）を含む。
【０１５９】 示されるように、発現ベクターは、好ましくは少なくとも１つの選択マーカー
を含む。このようなマーカーは、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクター
ゼ、またはネオマイシン耐性遺伝子、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他の細菌にお
いて培養するためのテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子を含む。適
切な宿主の代表的な例は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ細胞）；真菌細
胞（例えば、酵母細胞）；昆虫細胞（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌｉａ Ｓ２お
よびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞）；動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、Ｃ
ＯＳ細胞、およびＢｏｗｅｓ黒色腫細胞）；ならびに植物細胞を含むが、これら
に限定されない。上記の宿主細胞のための適切な培養培地および条件は、当該分
野で公知である。
【０１６０】 細菌における使用のために好ましいベクターの中には、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６
０およびｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎから入手可能）；ｐＢＳベクター、Ｐｈａｇ
ｅｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ
１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６ＡおよびｐＳｐｏｒｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎ
ｅから入手可能）；およびｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−
３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）を含む。好
ましい真核生物ベクターの中には、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４
、ｐＸＴ１およびｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳ
ＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能
）がある。他の適切なベクターは、当業者に容易に明らかである。
【０１６１】 本発明はまた、本明細書中に記述される上記のベクター構築物を含む宿主細胞
に関し、そしてさらに、当該分野で公知の技術を使用して、１以上の異種制御領
域（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）に作動可能に連結され
ている、本発明のヌクレオチド配列を含む宿主細胞を包含する。宿主細胞は、哺
乳動物細胞（例えば、ヒト由来の細胞）のような高等真核生物細胞、または酵母
細胞のような下等真核生物細胞であり得るか、あるいは宿主細胞は、細菌細胞の
ような原核生物細胞であり得る。挿入された遺伝子配列の発現を調節するか、ま
たは所望される特定の様式で遺伝子産物を改変および処理する宿主株が、選択さ
れ得る。特定のプロモーターからの発現は、特定のインデューサーの存在下で増
強され得；従って、遺伝子操作されたポリペプチドの発現が、制御され得る。さ
らに、異なる宿主細胞は、タンパク質の翻訳および翻訳後のプロセシングおよび
改変（例えば、リン酸化、切断）の特徴および特異的機構を有する。適切な細胞
株は、発現される外来タンパク質の所望の改変およびプロセシングを保障するよ
うに選択され得る。
【０１６２】 宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によっ
てもたらされ得る。このような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９８６）のような多く
の標準的研究室マニュアルに記載される。
【０１６３】 本明細書において議論されるベクター構築物を含む宿主細胞を含むことに加え
て、本発明はまた、脊椎動物起源（特に、哺乳動物起源）の初代（ｐｒｉｍａｒ
ｙ）宿主細胞、２代目（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）宿主細胞、および不死化宿主細胞
を含む。これらの宿主細胞は、内因性の遺伝物質（例えば、ＴＲ１３コード配列
）を欠失または置換するように操作されており、そして／または本発明のＴＲ１
３ポリヌクレオチドと作動可能に連結された遺伝物質（例えば、異種ポリヌクレ
オチド配列）を含むように操作され、そして内因性のＴＲ１３ポリヌクレオチド
を活性化、変更、および／または増幅する。例えば、当該分野で公知の技術は、
相同組換えを介して、異種制御領域（例えば、プロモーターおよび／またはエン
ハンサー）ならびに内因性ＴＲ１３ポリヌクレオチド配列を作動可能に連結する
ために使用され得る（例えば、１９９７年６月２４日に発行された米国特許第５
，６４１，６７０号；１９９６年９月２６日に公開された国際公開第ＷＯ ９６
／２９４１１号；１９９４年８月４日に公開された国際公開番号ＷＯ９４／１２
６５０；Ｋｏｌｌｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
６：８９３２−８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒ
ｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９）を参照のこと。これらの開示の各々は
、それら全体において参考として援用される）。
【０１６４】 本明細書において議論されるベクター構築物を含む宿主細胞を含むことに加え
て、本発明はまた、脊椎動物起源（特に、哺乳動物起源）の初代（ｐｒｉｍａｒ
ｙ）宿主細胞、２代目（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）宿主細胞、および不死化宿主細胞
を含む。これらの宿主細胞は、内因性の遺伝物質（例えば、ＴＲ１４コード配列
）を欠失または置換するように操作されており、そして／または本発明のＴＲ１
４ポリヌクレオチドと作動可能に連結された遺伝物質（例えば、異種ポリヌクレ
オチド配列）を含むように操作され、そして内因性のＴＲ１４ポリヌクレオチド
を活性化、変更、および／または増幅する。例えば、当該分野で公知の技術は、
相同組換えを介して、異種制御領域（例えば、プロモーターおよび／またはエン
ハンサー）ならびに内因性ＴＲ１４ポリヌクレオチド配列を作動可能に連結する
ために使用され得る（例えば、１９９７年６月２４日に発行された米国特許第５
，６４１，６７０号；１９９６年９月２６日に公開された国際公開第ＷＯ ９６
／２９４１１号；１９９４年８月４日に公開された国際公開第ＷＯ ９４／１２
６５０号；Ｋｏｌｌｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８６：８９３２−８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕ
ｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９）を参照のこと。これらの開示の各々
は、それら全体において参考として援用される）。
【０１６５】 本発明のＴＲ１３ポリペプチドは、改変された形態（例えば、融合タンパク質
（（異なるタンパク質の）異種タンパク質配列へのペプチド結合を介して連結さ
れたポリペプチドを含む））で発現され得、そして分泌シグナルのみならず、さ
らなる異種機能領域をも含み得る。あるいは、このような融合タンパク質は、例
えば、ペプチド合成装置を使用することにより、タンパク質合成技術によって作
製され得る。従って、さらなるアミノ酸（特に、荷電アミノ酸）の領域が、精製
の間または引き続く取り扱いおよび保存の間の宿主細胞における安定性および持
続性を改善するために、ポリペプチドのＮ末端に付加され得る。また、ペプチド
部分が、精製を容易にするためにポリペプチドに付加され得る。このような領域
は、ポリペプチドの最終的な精製の前に除去され得る。特に、分泌または排出を
生じさせるため、安定性を改善するため、および精製を容易にするためにポリペ
プチドにペプチド部分を付加することは、当該分野でよく知られておりかつ慣用
的な技術である。例えば、１つの実施形態において、本発明のＴＲ１３ポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドは、グラム陰性細菌においてこのようなポリ
ペプチドの発現および精製の効率を増加するためにｐｅｌＢペクチン酸リアーゼ
シグナル配列に融合され得る。米国特許第５，５７６，１９５号および同第５，
８４６，８１８号を参照のこと、これらの内容は、本明細書中でその全体が参考
として援用される。
【０１６６】 本発明のＴＲ１４ポリペプチドは、改変された形態（例えば、融合タンパク質
（（異なるタンパク質の）異種タンパク質配列へのペプチド結合を介して連結さ
れたポリペプチドを含む））で発現され得、そして分泌シグナルのみならず、さ
らなる異種機能領域をも含み得る。あるいは、このような融合タンパク質は、例
えば、ペプチド合成装置を使用することにより、タンパク質合成技術によって作
製され得る。従って、さらなるアミノ酸（特に、荷電アミノ酸）の領域が、精製
の間または引き続く取り扱いおよび保存の間の宿主細胞における安定性および持
続性を改善するために、ポリペプチドのＮ末端に付加され得る。また、ペプチド
部分が、精製を容易にするためにポリペプチドに付加され得る。このような領域
は、ポリペプチドの最終的な精製の前に除去され得る。特に、分泌または排出を
生じさせるため、安定性を改善するため、および精製を容易にするためにポリペ
プチドにペプチド部分を付加することは、当該分野でよく知られておりかつ慣用
的な技術である。例えば、１つの実施形態において、本発明のＴＲ１４ポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドは、グラム陰性細菌においてこのようなポリ
ペプチドの発現および精製の効率を増加するためにｐｅｌＢペクチン酸リアーゼ
シグナル配列に融合され得る。米国特許第５，５７６，１９５号および同第５，
８４６，８１８号を参照のこと、これらの内容は、本明細書中でその全体が参考
として援用される。
【０１６７】 好ましい融合タンパク質は、タンパク質の可溶化に有用な免疫グロブリン由来
の異種領域を含む。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４ ５３３（カナダ国対応出願
２０４５８６９）は、別のヒトタンパク質またはその一部とともに免疫グロブリ
ン分子の定常領域の種々の部分を含む、融合タンパク質を開示する。多くの場合
、融合タンパク質中のＦｃ部分は、治療および診断における使用に十分に有利で
あり、従って、例えば改善された薬物動態学的特性を生じる（ＥＰＡ ０２３２ ２６２）。一方、いくつかの使用について、融合タンパク質が、記載される有
利な様式で発現、検出、および精製された後に、Ｆｃ部分が欠失され得ることが
望ましい。これは、Ｆｃ部分が、治療および診断における使用の障害であると判
明する場合（例えば、融合タンパク質が免疫のための抗原として使用されるべき
場合）である。薬物探索において、例えばｈＩＬ−５レセプターのようなヒトタ
ンパク質が、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するためのハイスループットス
クリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分と融合されている。Ｄ．Ｂｅｎｎ
ｅｔｔら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏ
ｎ ８：５２−５８（１９９５）およびＫ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７０：１６：９４５
９−９４７１（１９９５）を参照のこと。
【０１６８】 本発明のポリペプチドは、天然に精製された産物、化学的合成手順の産物、な
らびに原核生物宿主または真核生物宿主（例えば、細菌細胞、酵母細胞、高等植
物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を含む）から組換え技術によって産生さ
れた産物を含む。組換え産生手順において使用される宿主に依存して、本発明の
ポリペプチドは、グリコシル化されてもまたはグリコシル化されていなくてもよ
い。さらに、本発明のポリペプチドはまた、いくつかの場合において、宿主媒介
プロセスの結果として、最初の修飾されたメチオニン残基を含み得る。
【０１６９】 さらに、本発明のＴＲ１３ポリペプチドは、当該分野で公知の技術を用いて化
学合成され得る（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆ
ｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．（１９８３）およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅ
ｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３１０：１０５−１１１（１９８４）を参照のこと）。例
えば、本発明のＴＲ１３ポリペプチドフラグメントは、ペプチド合成機の使用に
より合成され得る。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化学的アミノ
酸アナログが、置換または付加としてＴＲ１３ポリペプチド配列に導入され得る
。非古典的アミノ酸としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：通常
のアミノ酸のＤ異性体、２，４−ジアミノ酪酸、ａ−アミノイソ酪酸、４−アミ
ノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、ｇ−Ａｂｕ、ｅ−Ａｈｘ、６−アミノヘキサ
ン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノ
ルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモ
シトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニ
ルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ｂ−アラニン、フルオロアミノ酸、デザ
イナー（ｄｅｓｉｇｎｅｒ）アミノ酸（例えば、ｂ−メチルアミノ酸）、Ｃａ−
メチルアミノ酸、Ｎａ−メチルアミノ酸、および一般のアミノ酸アナログ。さら
に、アミノ酸は、Ｄ（右旋性）またはＬ（左旋性）であり得る。
【０１７０】 さらに、本発明のＴＲ１４ポリペプチドは、当該分野で公知の技術を用いて化
学合成され得る（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆ
ｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．（１９８３）およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅ
ｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３１０：１０５−１１１（１９８４）を参照のこと）。例
えば、本発明のＴＲ１４ポリペプチドフラグメントは、ペプチド合成機の使用に
より合成され得る。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化学的アミノ
酸アナログが、置換または付加としてＴＲ１４ポリペプチド配列に導入され得る
。非古典的アミノ酸としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：通常
のアミノ酸のＤ異性体、２，４−ジアミノ酪酸、ａ−アミノイソ酪酸、４−アミ
ノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、ｇ−Ａｂｕ、ｅ−Ａｈｘ、６−アミノヘキサ
ン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノ
ルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモ
シトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニ
ルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ｂ−アラニン、フルオロアミノ酸、デザ
イナー（ｄｅｓｉｇｎｅｒ）アミノ酸（例えば、ｂ−メチルアミノ酸）、Ｃａ−
メチルアミノ酸、Ｎａ−メチルアミノ酸、および一般のアミノ酸アナログ。さら
に、アミノ酸は、Ｄ（右旋性）またはＬ（左旋性）であり得る。
【０１７１】 本発明はさらに、翻訳の間または翻訳後に、例えば、グリコシル化、アセチル
化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク
質分解切断、抗体分子または他の細胞性リガンドへの結合などによって示差的に
改変されたＴＲ１３ポリペプチド（タンパク質）を含む。多数の化学的改変のう
ちのいずれをも、以下を含むがこれらに限定されない公知の技術によって実施さ
れ得る：ブロモシアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテア
ーゼ、ＮａＢＨ4による特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、酸化、還
元、ツニカマイシンの存在下での代謝合成；など。
【０１７２】 本発明はさらに、翻訳の間または翻訳後に、例えば、グリコシル化、アセチル
化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク
質分解切断、抗体分子または他の細胞性リガンドへの結合などによって示差的に
改変されたＴＲ１４ポリペプチド（タンパク質）を含む。多数の化学的改変のう
ちのいずれをも、以下を含むがこれらに限定されない公知の技術によって実施さ
れ得る：ブロモシアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテア
ーゼ、ＮａＢＨ4による特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、酸化、還
元、ツニカマイシンの存在下での代謝合成；など。
【０１７３】 本発明によって含まれるさらなる翻訳後修飾としては、例えば、以下などが挙
げられる：Ｎ結合型もしくはＯ結合型の糖鎖（Ｎ末端またはＣ末端のプロセシン
グ）、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ結合型もしくはＯ結合型の糖鎖の化
学修飾、および原核生物宿主細胞発現の結果としてのＮ末端メチオニン残基の付
加もしくは欠失。これらのポリペプチドはまた、検出可能な標識（例えば、酵素
標識、蛍光標識、同位体標識または親和性標識）を用いて改変して、このタンパ
ク質の検出および単離を可能にし得る。
【０１７４】 本発明によってまた、さらなる利点（例えば、このポリペプチドの溶解度、安
定性および循環時間の増加、または免疫原性の減少）を提供し得る、ＴＲ１３ポ
リペプチド（タンパク質）の化学修飾誘導体が提供される（米国特許第４，１７
９，３３７号を参照のこと）。誘導体化のための化学部分は、水溶性ポリマー（
例えば、ポリエチレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコール
コポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコー
ルなど）から選択され得る。これらのポリペプチドは、この分子内のランダムな
位置またはこの分子内の所定の位置で改変され得、そして１、２、３以上の結合
した化学部分を含み得る。
【０１７５】 本発明によってまた、さらなる利点（例えば、このポリペプチドの溶解度、安
定性および循環時間の増加、または免疫原性の減少）を提供し得る、ＴＲ１４ポ
リペプチドの化学修飾誘導体が提供される（米国特許第４，１７９，３３７号を
参照のこと）。誘導体化のための化学部分は、水溶性ポリマー（例えば、ポリエ
チレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カ
ルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなど）から選
択され得る。これらのポリペプチドは、この分子内のランダムな位置またはこの
分子内の所定の位置で改変され得、そして１、２、３以上の結合した化学部分を
含み得る。
【０１７６】 このポリマーは、任意の分子量のポリマーであり得、そして分枝状であっても
非分枝状であってもよい。ポリエチレングリコールに関しては、好ましい分子量
は、取り扱いおよび製造の容易さのために、約１ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
（用語「約（およそ）」は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつか
の分子は示した分子量よりも重く、いくつかは示した分子量よりも軽いことを示
す）である。所望の治療プロフィール（例えば、所望される持続放出の時間、（
存在する場合には）生物学的活性に対する効果、取り扱いの容易さ、抗原性の程
度または抗原性の欠如、および治療タンパク質またはアナログに対するポリエチ
レングリコールの他の公知の効果）に依存して、他のサイズが用いられ得る。こ
のポリマーは、任意の分子量のポリマーであり得、そして分枝状であっても非分
枝状であってもよい。ポリエチレングリコールに関しては、好ましい分子量は、
取り扱いおよび製造の容易さのために、約１ｋＤａと約１００ｋＤａとの間（用
語「約（およそ）」は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつかの分
子は示した分子量よりも重く、いくつかは示した分子量よりも軽いことを示す）
である。所望の治療プロフィール（例えば、所望される持続放出の時間、（存在
する場合には）生物学的活性に対する効果、取り扱いの容易さ、抗原性の程度ま
たは抗原性の欠如、および治療タンパク質またはアナログに対するポリエチレン
グリコールの他の公知の効果）に依存して、他のサイズが用いられ得る。例えば
、ポリエチレングリコールは、約２００、５００、１０００、１５００、２００
０、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００
、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、
９５００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，
０００、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５
００、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，００
０、１７，５００、１８，０００、１８、５００、１９，０００、１９，５００
、２０，０００、２５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、
５０，０００、５５，０００、６０，０００、６５，０００、７０，０００、７
５，０００、８０，０００、８５，０００、９０，０００、９５，０００、また
は１００，０００ｋＤａの平均分子量を有し得る。
【０１７７】 上記のように、ポリエチレングリコールは、分枝構造を有し得る。分枝ポリエ
チレングリコールは、例えば、米国特許第５，６４３，５７５号；Ｍｏｒｐｕｒ
ｇｏら、Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５６：５９−７２
（１９９６）；Ｖｏｒｏｂｊｅｖら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅｓ １８：２７４５−２７５０（１９９９）；およびＣａｌｉｃｅｔｉら
、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：６３８−６４６（１９９９）（これら
の各々の開示が、本明細書中で参考として援用される）において記載される。
【０１７８】 ポリエチレングリコール分子（または他の化学的部分）は、このタンパク質の
機能的ドメインまたは抗原性ドメインに対する効果を考慮してポリペプチド（タ
ンパク質）に結合されるべきである。当業者に利用可能な多数の結合方法が存在
する（例えば、本明細書中に参考として援用される、ＥＰ ０ ４０１ ３８４
（Ｇ−ＣＳＦへのＰＥＧの結合）、Ｍａｌｉｋら，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２
０：１０２８−１０３５（１９９２）（塩化トレシル（ｔｒｅｓｙｌ ｃｈｌｏ
ｒｉｄｅ）を用いたＧＭ−ＣＳＦのペグ化を報告する）もまた参照のこと）。例
えば、ポリエチレングリコールは、反応性基（例えば、遊離のアミノ基またはカ
ルボキシル基）を介してアミノ酸残基により共有結合され得る。反応性基は、活
性化ポリエチレングリコール分子が結合し得る基である。遊離のアミノ基を有す
るアミノ酸残基としては、リジン残基およびＮ末端アミノ酸残基が挙げられ得；
遊離のカルボキシル基を有するアミノ酸残基としては、アスパラギン酸残基、グ
ルタミン酸残基およびＣ末端アミノ酸残基が挙げられ得る。スルフヒドリル基も
また、ポリエチレングリコール分子を結合するための反応性基として用いられ得
る。治療目的のために好ましいのは、アミノ基での結合、例えば、Ｎ末端または
リジン基での結合である。
【０１７９】 上記で示唆されるように、ポリエチレングリコールは、任意の多くのアミノ酸
残基への連結を介して、タンパク質に結合され得る。例えば、ポリエチレングリ
コールは、リジン残基、ヒスチジン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残
基、またはシステイン残基への共有結合を介して、タンパク質に連結され得る。
１つ以上の反応化学が使用されて、タンパク質の特定のアミノ酸残基（例えば、
リジン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステイン）また
はタンパク質の１より多い型のアミノ酸残基（例えば、リジン、ヒスチジン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸、システインおよびそれらの組み合わせ）にポリエ
チレングリコールを結合させ得る。
【０１８０】 Ｎ末端で化学修飾されたポリペプチド（タンパク質）が特に所望され得る。ポ
リエチレングリコールを本発明の組成物の例示として用いて、種々のポリエチレ
ングリコール分子（分子量、分枝などによって）から、反応混合物中でのタンパ
ク質（または、ポリペプチド）分子に対するポリエチレングリコール分子の比、
行われるペグ化反応の型、および選択されたＮ末端ペグ化タンパク質の獲得方法
が選択され得る。Ｎ末端ペグ化調製物の獲得方法（すなわち、必要な場合、この
部分を他のモノペグ化部分から分離すること）は、ペグ化タンパク質分子の集団
からの、Ｎ末端ペグ化物質の精製により行われ得る。Ｎ末端修飾で化学修飾され
た選り抜きのタンパク質は、特定のタンパク質における誘導体化に利用可能な異
なる型の第１級アミノ基（リジン対Ｎ末端）の示差的反応性を利用する、還元的
アルキル化によって達成され得る。適切な反応条件下では、カルボニル基含有ポ
リマーを用いた、Ｎ末端でのタンパク質の実質的に選択的な誘導体化が達成され
る。
【０１８１】 上記で示されたように、本発明のタンパク質のペグ化は、多数の手段によって
達成され得る。例えば、ポリエチレングリコールは、直接的または介在リンカー
によってのいずれかで、タンパク質に結合され得る。タンパク質にポリエチレン
グリコールを結合させるための無リンカー（ｌｉｎｋｅｒｌｅｓｓ）系は、Ｄｅ
ｌｇａｄｏら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓ
ｙｓ．９：２４９−３０４（１９９２）；Ｆｒａｎｃｉｓら、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ
．ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌ．６８：１−１８（１９９８）；米国特許第４，００２
，５３１号；米国特許第５，３４９，０５２号；ＷＯ９５／０６０５８；および
ＷＯ９８／３２４６６（これらの各々の開示は、本明細書中で参考として援用さ
れる）に記載される。
【０１８２】 介在するリンカーを伴わずに、タンパク質のアミノ酸残基に直接的にポリエチ
レングリコールを結合させる１つの系は、トレシル化（ｔｒｅｓｙｌａｔｅｄ）
ＭＰＥＧ（これは、塩化トレシル（ｔｒｅｓｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）（ＣｌＳＯ 2 ＣＨ2ＣＦ3）を使用して、モノメトキシ（ｍｏｎｍｅｔｈｏｘｙ）ポリエチレ
ングリコール（ＭＰＥＧ）を改変することによって生成される）を使用する。ト
レシル化ＭＰＥＧとのタンパク質の反応に際して、ポリエチレングリコールは、
タンパク質のアミン基に直接結合される。従って、本発明は、本発明のタンパク
質と２，２，２−トリフルオロエタン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｅｏｔｈａｎｅ）スル
ホニル基を有するポリエチレングリコール分子とを反応させることによって生成
される、タンパク質−ポリエチレングリコール結合体を含む。
【０１８３】 ポリエチレングリコールはまた、多くの異なる介在リンカーを使用して、タン
パク質に結合され得る。例えば、米国特許第５，６１２，４６０号（この開示全
体が、本明細書中で参考として援用される）は、タンパク質にポリエチレングリ
コールを接続するためのウレタンリンカーを開示する。ポリエチレングリコール
がリンカーによってタンパク質に結合された、タンパク質−ポリエチレングリコ
ール結合体はまた、ＭＰＥＧ−スクシンイミジルスクシネート（ｓｕｃｃｉｎｉ
ｍｉｄｙｌｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、１，１'−カルボニルジイミダゾールで活性
化されたＭＰＥＧ、ＭＰＥＧ−２，４，５−トリクロロフェニルカルボネート（
ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｐｅｎｙｌｃａｒｂｏｎａｔｅ）、ＭＰＥＧ−ｐ−ニトロフ
ェノールカルボネート、および種々のＭＰＥＧ−スクシネート誘導体のような化
合物とのタンパク質の反応によって生成され得る。タンパク質にポリエチレング
リコールを結合させるためのさらなる多くのポリエチレングリコール誘導体およ
び反応化学が、ＷＯ９８／３２４６６（この開示全体が、本明細書中で参考とし
て援用される）に記載される。本明細書中に示される反応化学を使用して生成さ
れるペグ化タンパク質産物は、本発明の範囲内に含まれる。
【０１８４】 本発明の各タンパク質に結合されたポリエチレングリコール部分の数（すなわ
ち、置換の程度）もまた、変動し得る。例えば、本発明のペグ化タンパク質は、
平均して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２
０またはそれより多いポリエチレングリコール分子を連結し得る。同様に、平均
の置換の程度は、タンパク質１分子あたり１〜３、２〜４、３〜５、４〜６、５
〜７、６〜８、７〜９、８〜１０、９〜１１、１０〜１２、１１〜１３、１２〜
１４、１３〜１５、１４〜１６、１５〜１７、１６〜１８、１７〜１９、または
１８〜２０ポリエチレングリコール部分のような範囲内である。置換の程度を決
定する方法は、例えば、Ｄｅｌｇａｄｏら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄ
ｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓ．９：２４９−３０４（１９９２）において考
察される。
【０１８５】 上記のように、本発明のＴＲ１３およびＴＲ１４ポリペプチド（タンパク質）
は、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスまたは当該分野で周知の化学的
改変技術のいずれかによって、改変され得る。同じ型の改変が、所定のＴＲ１３
またはＴＲ１４ポリペプチドにおけるいくつかの部位で同じ程度に存在してもよ
いしまたは種々の程度存在してもよいことが理解される。例えば、ＴＲ１３また
はＴＲ１４ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分枝状であり得、そして
分枝してかまたは分枝せずに、環状でもあり得る。環状ＴＲ１３またはＴＲ１４
ポリペプチド、分枝ＴＲ１３またはＴＲ１４ポリペプチド、分枝環状ＴＲ１３ま
たはＴＲ１４ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセスから生じ得るし、または合
成方法によって作製され得る。改変としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−
リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチ
ドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホ
スファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共
有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成
、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、γ−カルボキシル
化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化
、ミリストイル化、酸化、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、タンパク質分解プ
ロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、タンパ
ク質へのアミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介付加（例えば、アルギニル化）、
およびユビキチン化が挙げられる。（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴ
ＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，第２版，Ｔ．Ｅ
．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡ
ＬＥＮＴ ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｂ．Ｃ．Ｊｏ
ｈｎｓｏｎ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１−１２頁
（１９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら，Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８２：６２６
−６４６（１９９０）；Ｒａｔｔａｎら，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６
６３：４８−６２（１９９２）を参照のこと）。
【０１８６】 上記のように、本発明のＴＲ１４ポリペプチド（タンパク質）は、翻訳後プロ
セシングのような天然のプロセスまたは当該分野で周知の化学的改変技術のいず
れかによって、改変され得る。同じ型の改変が、所定のＴＲ１４ポリペプチドに
おけるいくつかの部位で同じ程度に存在してもよいしまたは種々の程度存在して
もよいことが理解される。例えば、ＴＲ１４ポリペプチドは、ユビキチン化の結
果として分枝状であり得、そして分枝してかまたは分枝せずに、環状でもあり得
る。環状ＴＲ１４ポリペプチド、分枝ＴＲ１４ポリペプチド、分枝環状ＴＲ１４
ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセスから生じ得るし、または合成方法によっ
て作製され得る。改変としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、
アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌク
レオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジル
イノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋
、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システイン
の形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシ
ル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイ
ル化、酸化、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、タンパク質分解プロセシング、
リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、タンパク質へのアミ
ノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介付加（例えば、アルギニル化）、およびユビキ
チン化が挙げられる。（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮ
Ｄ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，第２版，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇ
ｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ（１９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ Ｍ
ＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ編
，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１−１２頁（１９８３）
；Ｓｅｉｆｔｅｒら，Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８２：６２６−６４６（１
９９０）；Ｒａｔｔａｎら，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６６３：４８−
６２（１９９２）を参照のこと）。
【０１８７】 本発明のＴＲ１３ポリペプチド（タンパク質）は、硫酸アンモニウム沈殿また
はエタノール沈澱、酸抽出、アニオン交換クロマトグラフィーまたはカチオン交
換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用
クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイ
トクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーが挙げられるが、こ
れらに限定されない標準的な方法によって、化学合成および組換え細胞培養物か
ら回収および精製され得る。最も好ましくは、精製のために、高速液体クロマト
グラフィー（「ＨＰＬＣ」）が使用される。タンパク質を再折り畳みさせるため
の周知の技術は、ポリペプチドが単離および／または精製の間に変性される場合
に、活性な立体配座を再生させるために行われ得る。
【０１８８】 本発明のＴＲ１４ポリペプチド（タンパク質）は、硫酸アンモニウム沈殿また
はエタノール沈澱、酸抽出、アニオン交換クロマトグラフィーまたはカチオン交
換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用
クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイ
トクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーが挙げられるが、こ
れらに限定されない標準的な方法によって、化学合成および組換え細胞培養物か
ら回収および精製され得る。最も好ましくは、精製のために、高速液体クロマト
グラフィー（「ＨＰＬＣ」）が使用される。タンパク質を再折り畳みさせるため
の周知の技術は、ポリペプチドが単離または精製の間に変性される場合に、活性
な立体配座を再生させるために行われ得る。
【０１８９】 本発明のＴＲ１３ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにそのアゴニ
ストまたはアンタゴニストは、種々の適用について、特にＴＲ１３の化学的およ
び生物学的特性を利用する適用について、本発明に従って使用され得る。これら
のうちでもとりわけ、例えば、腫瘍の処置；寄生生物、細菌およびウイルスに対
する耐性；Ｔ細胞、内皮細胞および造血細胞の増殖を調節（誘導）すること；再
狭窄、対宿主性移植片病を処置すること；抗ウイルス応答を調節すること；そし
てアゴニストによるＴＲ１３の刺激の後に特定の自己免疫疾患を予防することに
おける適用である。さらなる適用は、診断ならびに細胞、組織および生物の障害
の処置に関する。本発明のこれらの局面は、以下にさらに議論される。
【０１９０】 本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにそのアゴニ
ストまたはアンタゴニストは、種々の適用について、特にＴＲ１４の化学的およ
び生物学的特性を利用する適用について、本発明に従って使用され得る。これら
のうちでもとりわけ、例えば、腫瘍の処置；寄生生物、細菌およびウイルスに対
する耐性；Ｔ細胞、内皮細胞および造血細胞の増殖を調節（誘導）すること；再
狭窄、対宿主性移植片病を処置すること；抗ウイルス応答を調節すること；そし
てアゴニストによるＴＲ１４の刺激の後に特定の自己免疫疾患を予防することに
おける適用である。さらなる適用は、診断ならびに細胞、組織および生物の障害
の処置に関する。本発明のこれらの局面は、以下にさらに議論される。
【０１９１】 （トランスジェニックおよび「ノックアウト」） 本発明のＴＲ１３ポリペプチド（タンパク質）はまた、トランスジェニック動
物中で発現され得る。任意の種の動物（マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、
モルモット、ブタ、ミクロピッグ（ｍｉｃｒｏ−ｐｉｇ）、ヤギ、ヒツジ、ウシ
、および非ヒト霊長類（例えば、ヒヒ、サル、およびチンパンジー）を含むがこ
れらに限定されない）が、トランスジェニック動物を作製するために使用され得
る。特定の実施形態において、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野の
公知の技術が、遺伝子治療プロトコルの一部として、ヒトにおいて本発明のポリ
ペプチドを発現するために使用される。
【０１９２】 本発明のＴＲ１４ポリペプチド（タンパク質）はまた、トランスジェニック動
物中で発現され得る。任意の種の動物（マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、
モルモット、ブタ、ミクロピッグ（ｍｉｃｒｏ−ｐｉｇ）、ヤギ、ヒツジ、ウシ
、および非ヒト霊長類（例えば、ヒヒ、サル、およびチンパンジー）を含むがこ
れらに限定されない）が、トランスジェニック動物を作製するために使用され得
る。特定の実施形態において、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野の
公知の技術が、遺伝子治療プロトコルの一部として、ヒトにおいて本発明のポリ
ペプチドを発現するために使用される。
【０１９３】 当該分野で公知の任意の技術が、導入遺伝子（すなわち、本発明の核酸）を動
物に導入して、トランスジェニック動物の創始（ｆｏｕｎｄｅｒ）系統を産生す
るために使用され得る。このような技術には、以下が含まれるがこれらに限定さ
れない：前核マイクロインジェクション（Ｐａｔｅｒｓｏｎら、Ａｐｐｌ．Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４０：６９１−６９８（１９９４）；
Ｃａｒｖｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）１１：１２６３−１２７
０（１９９３）；Ｗｒｉｇｈｔら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：８
３０−８３４（１９９１）；およびＨｏｐｐｅら、米国特許第４，８７３，１９
１号（１９８９））；生殖系列へのレトロウイルス媒介遺伝子移入（Ｖａｎ ｄ
ｅｒ Ｐｕｔｔｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２
：６１４８−６１５２（１９８５））、胚盤胞または胚；胚性幹細胞への遺伝子
ターゲッティング（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ５６：３１３−３２１（１
９８９））；細胞または胚のエレクトロポレーション（Ｌｏ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ
．Ｂｉｏｌ．３：１８０３−１８１４（１９８３））；遺伝子銃を用いる本発明
のポリヌクレオチドの導入（例えば、Ｕｌｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：
１７４５（１９９３）を参照のこと）；胚性多能性幹細胞に核酸構築物を導入す
ることおよび胚盤胞にこの幹細胞を移入しなおすこと；ならびに精子媒介遺伝子
移入（Ｌａｖｉｔｒａｎｏら、Ｃｅｌｌ ５７：７１７−７２３（１９８９））
など。このような技術の概説としては、Ｇｏｒｄｏｎ、「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
Ａｎｉｍａｌｓ」、Ｉｎｔｌ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１１５：１７１−２２９
（１９８９）（これは、本明細書中でその全体が参考として援用される）を参照
のこと。さらに、本段落に引用される各文献の内容は、本明細書中にその全体が
参考として援用される。米国特許第５，４６４，７６４号（Ｃａｐｅｃｃｈｉら
、Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ａｎｄ Ｖｅｃｔｏｒｓ）；米国特許第５，６３１，１５３号（Ｃａｐｅｃｃ
ｈｉら、Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｎｏｎ−Ｈｕｍａｎ Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｃｏ
ｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｍｏｄｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｓｅｌｅｃ
ｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｋｉｎｇ
Ｓａｍｅ）；米国特許第４，７３６，８６６号（Ｌｅｄｅｒら、Ｔｒａｎｓｇｅ
ｎｉｃ Ｎｏｎ−Ｈｕｍａｎ Ａｎｉｍａｌｓ）；および米国特許第４，８７３
，１９１号（Ｗａｇｎｅｒら、Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｚｙｇｏｔｅｓ）；（これらの各々は、この全体が参考として本明細書
中によって援用される）。
【０１９４】 当該分野において公知である任意の技術が、本発明のポリヌクレオチドを含む
トランスジェニッククローンを産生するために使用され得る（例えば、静止期に
誘導される、培養胚細胞、培養胎児細胞、または培養成体細胞由来の核の、除核
した卵母細胞への核移入）（Ｃａｍｐｅｌｌら、Ｎａｔｕｒｅ ３８０：６４−
６６（１９９６）；Ｗｉｌｍｕｔら、Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３（
１９９７）（これらの各々は、本明細書中に参考としてその全体が援用される）
）。
【０１９５】 本発明は、動物の細胞の全ての中に導入遺伝子を有するトランスジェニック動
物、ならびに、動物の細胞の全ての中ではないが、いくつかの細胞中に導入遺伝
子を有する動物（すなわち、モザイク動物またはキメラ動物）を提供する。この
導入遺伝子は、単一の導入遺伝子として、またはコンカテマー（例えば、頭−頭
タンデムまたは頭−尾タンデム）のような複数のコピーとして組み込まれ得る。
この導入遺伝子はまた、例えば、Ｌａｓｋｏら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２３２−６２３６（１９９２））の教示に従って、
特定の細胞型中に選択的に導入され得、そして特定の細胞型中で活性化され得る
。このような細胞型特異的な活性化に必要とされる調節配列は、目的の特定の細
胞型に依存し、そして当業者に明らかである。ポリヌクレオチド導入遺伝子が、
内因性遺伝子の染色体部位に組み込まれることが所望される場合、遺伝子ターゲ
ッティングが好ましい。手短には、このような技術が利用される場合、内因性遺
伝子に相同ないくつかのヌクレオチド配列を含むベクターが、染色体配列との相
同組換えを介する、内因性遺伝子のヌクレオチド配列への組み込み、および内因
性遺伝子のヌクレオチド配列の機能の破壊の目的のために設計される。この導入
遺伝子はまた、特定の細胞型に選択的に導入され得、このようにして、例えば、
Ｇｕら（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６５：１０３−１０６（１９９４））の教示に従っ
て、その細胞型においてのみ内因性遺伝子を不活性化する。このような細胞型特
異的不活性化のために必要とされる調節配列は、目的の特定の細胞型に依存し、
そして当業者に明白である。本段落に引用される各文献の内容は、本明細書中に
その全体が参考として援用される。
【０１９６】 一旦トランスジェニック動物が作製されると、組換え遺伝子の発現は標準的な
技術を利用してアッセイされ得る。最初のスクリーニングは、導入遺伝子の組み
込みが起こったことを確認するために動物組織を分析するためのサザンブロット
分析またはＰＣＲ技術によって達成され得る。トランスジェニック動物の組織に
おける導入遺伝子のｍＲＮＡ発現のレベルはまた、その動物から得られた組織サ
ンプルのノーザンブロット分析、インサイチュハイブリダイゼーション分析、な
らびに逆転写酵素ＰＣＲ（ｒｔ−ＰＣＲ）を含むが，これらに限定されない技術
を用いて評価され得る。トランスジェニック遺伝子発現組織のサンプルはまた、
導入遺伝子産物に特異的な抗体を使用して、免疫細胞化学的にまたは免疫組織化
学的に評価され得る。
【０１９７】 一旦創始動物（ｆｏｕｎｄｅｒ ａｎｉｍａｌ）が産生されると、この動物は
交配されるか、同系交配されるか、異系交配されるか、または交雑されて、特定
の動物の群体を生成し得る。このような交配のストラテジーの例は、以下を含む
がこれらに限定されない：分離系統を確立するための、１より多い組み込み部位
を有する創始動物の異系交配；各々の導入遺伝子の相加的な発現の効果に起因す
る、高レベルで導入遺伝子を発現する複合トランスジェニック体（ｃｏｍｐｏｕ
ｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）を作製するための分離系統の同系交配；発現を増
大させ、かつＤＮＡ分析による動物のスクリーニングの必要性を排除するために
、ヘテロ接合性トランスジェニック動物を交配して、所定の組み込み部位につい
てホモ接合性の動物を産生すること；別個のホモ接合性系統を交配して、複合ヘ
テロ接合性またはホモ接合性系統を生成すること；および、繁殖して、目的の実
験モデルについて適切である別個のバックグラウンド上に導入遺伝子を配置する
こと。
【０１９８】 本発明のトランスジェニック動物および「ノックアウト」動物は、以下を含む
が、それらに限定されない用途を有する：ＴＲ１３ポリペプチドの生物学的機能
を作り出す上で有用な動物モデル系、異常なＴＲ１３発現に関連する状態および
／または障害を研究すること、ならびに、このような状態および／または障害を
改善する際に有効な化合物についてスクリーニングすること。
【０１９９】 本発明のトランスジェニック動物および「ノックアウト」動物は、以下を含む
が、それらに限定されない用途を有する：ＴＲ１４ポリペプチドの生物学的機能
を作り出す上で有用な動物モデル系、異常なＴＲ１４発現に関連する状態および
／または障害を研究すること、ならびに、このような状態および／または障害を
改善する際に有効な化合物についてスクリーニングすること。
【０２００】 本発明のさらなる実施形態において、本発明のタンパク質を発現するために遺
伝子操作される細胞、あるいは本発明のタンパク質を発現しないように遺伝子操
作された細胞（例えば、ノックアウト）は、インビボで患者に投与される。この
ような細胞は、患者（すなわち、ヒトを含む動物）またはＭＨＣ適合性ドナーか
ら入手され得、そして線維芽細胞、骨髄細胞、血球（例えば、リンパ球）、脂肪
細胞、筋細胞、内皮細胞などを含み得るが、それらに限定されない。この細胞を
、組換えＤＮＡ技術を使用してインビトロで遺伝子操作して、例えば、形質導入
（ウイルスベクター、および好ましくは細胞ゲノム中に導入遺伝子を組み込むベ
クターを使用する）、またはトランスフェクション手順（クローン、コスミド、
ＹＡＣ、裸のＤＮＡ、エレクトロポレーション、リポソームなどの使用を含むが
、これらに限定されない）によって、細胞中に本発明のポリペプチドのコード配
列を導入するか、あるいは本発明のポリペプチドに関連するコード配列および／
または内因性の調節配列を破壊する。本発明のポリペプチドのコード配列を、強
力な構成的プロモーターもしくは誘導性プロモーターまたはプロモーター／エン
ハンサーの制御下に配置し、本発明のポリペプチドの発現および好ましくは分泌
を達成し得る。本発明のポリペプチドを発現、および好ましくは分泌する操作さ
れた細胞を、患者に全身的（例えば、循環中、または腹腔内）に導入し得る。あ
るいは、この細胞をマトリックスに組み込み得、そして身体に移植し得る（例え
ば、遺伝子操作した線維芽細胞を皮膚移植片の一部として移植し得る；遺伝子操
作した内皮細胞をリンパ移植片または脈管移植片の一部として移植し得る）（例
えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４９号；およびＭｕｌｌ
ｉｇａｎおよびＷｉｌｓｏｎ、米国特許第５，４６０，９５９号を参照のこと。
これらの各々は、本明細書中でその全体が参考として援用される）。
【０２０１】 投与される細胞が非自己または非ＭＨＣ適合性細胞である場合、それらを、こ
の導入細胞に対する宿主免疫応答の発生を阻止する周知の技術を使用して投与し
得る。例えば、この細胞をカプセル型形態で導入し得、この形態は、構成成分の
近接した細胞外環境との交換を可能としながら、宿主免疫系に導入細胞を認識さ
せない。
【０２０２】 （ＴＲ１３ポリペプチド） 本発明のＴＲ１３タンパク質（ポリペプチド）は、モノマーまたはマルチマー
（すなわち、ダイマー、トリマー、テトラマ−、およびより高次のマルチマー）
であり得る。従って、本発明は、本発明のＴＲ１３タンパク質（ポリペプチド）
のモノマーおよびマルチマー、これらの調製、およびこれらを含む組成物（好ま
しくは、薬学的組成物）に関する。特定の実施形態において、本発明のポリペプ
チドは、モノマー、ダイマー、トリマー、またはテトラマ−である。さらなる実
施形態において、本発明のマルチマーは、少なくともダイマー、少なくともトリ
マー、または少なくともテトラマ−である。
【０２０３】 本発明によって包含されるマルチマーは、ホモマーまたはヘテロマーであり得
る。本明細書中で使用される場合、用語ＴＲ１３ホモマーは、本発明のＴＲ１３
タンパク質（本明細書中で記載されるような、ＴＲ１３のフラグメント、改変体
、および融合タンパク質を含む）のみを含むマルチマーをいう。これらのホモマ
ーは、同一または異なるポリペプチド配列を有するＴＲ１３タンパク質を含み得
る。特定の実施形態において、本発明のホモマーは、同一のポリペプチド配列を
有するＴＲ１３タンパク質のみを含むマルチマーである。別の特定の実施形態に
おいて、本発明のホモマーは、異なるポリペプチド配列を有するＴＲ１３タンパ
ク質を含むマルチマーである。特定の実施形態において、本発明のマルチマーは
、ホモダイマー（例えば、同一または異なるポリペプチド配列を有するＴＲ１３
タンパク質を含む）であるか、またはホモトリマー（例えば、同一または異なる
ポリペプチド配列を有するＴＲ１３タンパク質を含む）である。さらなる実施形
態において、本発明のホモマーのマルチマーは、少なくともホモダイマー、少な
くともホモトリマー、または少なくともホモテトラマ−である。
【０２０４】 本明細書中で使用される場合、用語ＴＲ１３へテロマーは、本発明のＴＲ１３
タンパク質に加えて、異種タンパク質（すなわち、ＴＲ１３遺伝子によってコー
ドされるポリペプチド配列に対応しないポリペプチド配列のみを含むタンパク質
）を含むマルチマーをいう。特定の実施形態において、本発明のマルチマーは、
ヘテロダイマー、ヘテロトリマー、またはヘテロテトラマ−である。さらなる実
施形態において、本発明のヘテロマーのマルチマーは、少なくともヘテロダイマ
ー、少なくともヘテロトリマー、または少なくともヘテロテトラマ−である。
【０２０５】 本発明のマルチマーは、疎水結合、親水結合、イオン結合、および／または共
有結合の結果であり得、そして／あるいは、例えば、リポソーム形成によって間
接的に結合され得る。従って、１つの実施形態において、例えば、ホモダイマー
またはホモトリマーのような本発明のマルチマーは、本発明のタンパク質が溶液
中において互いに接触した場合に形成される。別の実施形態において、例えば、
ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマ−のような本発明のヘテロマルチマーは、
本発明のタンパク質が溶液中において本発明のポリペプチドに対する抗体（本発
明の融合タンパク質における異種ポリペプチド配列に対する抗体を含む）に接触
した場合に形成される。他の実施形態において、本発明のマルチマーは、本発明
のＴＲ１３タンパク質との共有結合、および／または本発明のＴＲ１３タンパク
質間の共有結合によって形成される。このような共有結合は、タンパク質のポリ
ペプチド配列（例えば、配列番号２または配列番号４０に引用されるポリペプチ
ド配列、またはＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４９またはＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ
−５０７で寄託されるｃＤＮＡによってコードされるポリペプチド）に含まれる
１つ以上のアミノ酸残基を含み得る。１つの例において、この共有結合は、ネイ
ティブ（すなわち、天然に存在する）ポリペプチドと相互作用するタンパク質の
ポリペプチド配列内に位置する、システイン残基間で架橋する。別の例において
、この共有結合は、化学操作または組換え操作の結果である。あるいは、このよ
うな共有結合は、ＴＲ１３融合タンパク質中の異種ポリペプチド配列中に含まれ
る、１つ以上のアミノ酸残基を含み得る。１つの例において、共有結合は、本発
明の融合タンパク質中に含まれる異種配列間である（例えば、米国特許第５，４
７８，９２５号を参照のこと）。特定の例において、この共有結合は、（本明細
書中に記載されるような）本発明のＴＲ１３−Ｆｃ融合タンパク質中に含まれる
異種配列間である。別の特定の例において、本発明の融合タンパク質の共有結合
は、例えば、オステオプロテゲリン（ｏｓｅｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）のよ
うな共有結合したマルチマーを形成し得る別のＴＮＦファミリーリガンド／レセ
プターのメンバー由来の異種ポリペプチド配列の間にある（例えば、国際公開番
号ＷＯ９８／４９３０５を参照のこと。この内容は、本明細書中にその全体が参
考として援用される）。別の実施形態において、本発明の２つ以上のＴＲ１３ポ
リペプチドは、合成リンカー（例えば、ペプチドリンカー、炭水化物リンカーま
たは可溶性ポリマーリンカー）を通して結合される。例としては、米国特許第５
，０７３，６２７号（本明細書中に参考として援用される）に記載されるペプチ
ドリンカーが挙げられる。ペプチドリンカーによって分けられる複数のＴＲ１３
ポリペプチドを含むタンパク質は、従来の組換えＤＮＡ技術を用いて産生され得
る。
【０２０６】 本発明のマルチマーＴＲ１３ポリペプチドを調製するための別の方法は、ロイ
シンジッパーまたはイソロイシンポリペプチド配列に融合されたＴＲ１３ポリペ
プチドの使用を含む。ロイシンジッパードメインおよびイソロイシンジッパード
メインは、それらが見出されるタンパク質のマルチマー化を促進するポリペプチ
ドである。ロイシンジッパーは、本来、いくつかのＤＮＡ結合タンパク質で同定
され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１７５９（１９８８
））、そして、種々の異なるタンパク質中で見出されている。既知のロイシンジ
ッパーの中には、ダイマー化またはトリマー化する天然に存在するペプチドおよ
びその誘導体がある。可溶性マルチマーＴＲ１３タンパク質を産生するのに適し
たロイシンジッパードメインの例は、ＰＣＴ出願ＷＯ９４／１０３０８（本明細
書中に参考として援用される）に記載されるものである。溶液中でダイマー化ま
たはトリマー化するペプチドに融合された可溶性ＴＲ１３ポリペプチドを含む組
換え融合タンパク質は、適切な宿主細胞中で発現され、そして生じる可溶性マル
チマーＴＲ１３は、当該分野で公知の技術を用いて培養上清から回収される。
【０２０７】 ＴＮＦファミリータンパク質の特定のメンバーは、トリマー形態で存在すると
考えられている（ＢｅｕｔｌｅｒおよびＨｕｆｆｅｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４
：６６７，１９９４；Ｂａｎｎｅｒら，Ｃｅｌｌ ７３：４３１，１９９３）。
従って、トリマーＴＲ１３は、増強された生物学的活性に関する利点を提供し得
る。好ましいロイシンジッパー部分は、優先的にトリマーを形成する部分である
。１つの例は、Ｈｏｐｐｅら（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３４４：１９１，（
１９９４））および米国特許出願番号０８／４４６，９２２（本明細書中に参考
として援用される）に記載されるような、肺のサーファクタントタンパク質Ｄ（
ＳＰＤ）由来のロイシンジッパーである。天然に存在するトリマータンパク質由
来の他のペプチドが、トリマーＴＲ１３の調製に利用され得る。
【０２０８】 さらに好ましい実施形態において、本発明のＴＲ１３ポリヌクレオチドは、「
ＦＬＡＧ」ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに融合される。従って、
ＴＲ１３−ＦＬＡＧ融合タンパク質は、本発明に含まれる。ＦＬＡＧ抗原性ポリ
ペプチドは、アミノ末端またはカルボキシ末端の、いずれかまたは両方で、本発
明のＴＲ１３ポリペプチドに融合され得る。好ましい実施形態において、ＴＲ１
３−ＦＬＡＧ融合タンパク質は、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ−５ａ発現ベクターまたは
ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ−１発現ベクター（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，
ＵＳＡから入手可能）から発現される。Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，Ｓ．ら，Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：８２２２−２９（１９８９）；Ｔｈｏｍｓｅｎ，Ｄ．
Ｒ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６５９−６３
（１９８４）；およびＫｏｚａｋ，Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ ３０８：２４１（１９
８４）（これらの各々は、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
さらなる好ましい実施形態において、ＴＲ１３−ＦＬＡＧ融合タンパク質は、抗
ＦＬＡＧモノクローナル抗体（これもまた、Ｓｉｇｍａから入手可能）によって
検出可能である。
【０２０９】 別の例において、本発明のタンパク質は、本発明のＦｌａｇ（登録商標）−Ｔ
Ｒ１３融合タンパク質に含まれるＦｌａｇ（登録商標）ポリペプチド配列間の相
互作用によって結合される。さらなる実施形態において、本発明の結合したタン
パク質は、本発明のＦｌａｇ（登録商標）−ＴＲ１３融合タンパク質中に含まれ
る異種ポリペプチド配列と抗Ｆｌａｇ（登録商標）抗体との間の相互作用によっ
て結合される。
【０２１０】 本発明のマルチマーは当該分野で公知の化学技術を用いて作製され得る。例え
ば、本発明のマルチマーに含まれることが所望されるタンパク質は、リンカー分
子および当該分野で公知のリンカー分子の長さの最適化技術（例えば、米国特許
第５，４７８，９２５号（これは、本明細書中にその全体が参考として援用され
る）を参照のこと）を用いて、化学的に架橋され得る。さらに、本発明のマルチ
マーは、当該分野で公知の技術を用いて作製され得、このマルチマー中に含まれ
ることが所望されるタンパク質のポリペプチド配列内に位置するシステイン残基
間に、１つ以上の分子間架橋を形成する（例えば、米国特許第５，４７８，９２
５号（これは、本明細書中にその全体が参考として援用される）を参照のこと）
。さらに、本発明のタンパク質は、このタンパク質のＣ末端またはＮ末端のポリ
ペプチド配列に、システインまたはビオチンを付加することによって日常的に改
変され得、そして、当該分野で公知の技術が、１つ以上のこれらの改変タンパク
質を含むマルチマーを作製するために適用され得る（例えば、米国特許第５，４
７８，９２５（これは、本明細書中にその全体が参考として援用される）を参照
のこと）。さらに、当該分野で公知の技術が、本発明のマルチマー中に含まれる
ことが所望されるタンパク質化合物を含むリポソームを作製するために適用され
得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは、本明細書中にその全
体が参考として援用される）を参照のこと）。
【０２１１】 あるいは、本発明のマルチマーは、当該分野で公知の遺伝子操作技術を用いて
作製され得る。１つの実施形態において、本発明のマルチマーに含まれるタンパ
ク質は、本明細書中に記載されるかまたは当該分野で公知の融合タンパク質技術
（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは、本明細書中にその全体が
参考として援用される）を参照のこと）を用いて、組換え産生される。特定の実
施形態において、本発明のホモダイマーをコードするポリヌクレオチドは、本発
明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列をリンカーペプチドをコー
ドする配列に連結し、次いでさらに、本来から逆の方向にＣ末端からＮ末端でこ
のポリペプチドの翻訳産物をコードする合成ポリヌクレオチド（リーダー配列を
欠く）に連結することによって作製される（例えば、米国特許第５，４７８，９
２５号（これは、本明細書中にその全体が参考として援用される）を参照のこと
）。別の実施形態において、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公
知の組換え技術が、膜貫通ドメインを含みかつ膜再構成技術によってリポソーム
に組込まれ得る、本発明の組換えポリペプチドを作製するために適用される（例
えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは、本明細書中にその全体が参考
として援用される）を参照のこと）。
【０２１２】 本発明のポリペプチド（タンパク質）は、好ましくは単離形態で提供される。
「単離されたポリペプチド」とは、そのネイティブな環境から取り除かれたポリ
ペプチドを意図する。従って、組換え宿主細胞内に産生および／または含まれる
ポリペプチドは、本発明の目的のために単離されると考えられる。部分的にかま
たは実質的に、組換え宿主細胞から精製されたポリペプチドがまた、「単離され
たポリペプチド」として意図される。例えば、ＴＲ１３ポリペプチドの組換え産
生されたバージョンは、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｇｅｎｅ ６７：３
１−４０（１９８８）に記載されるような１工程方法によって実質的に精製され
得る。
【０２１３】 従って、１つの実施形態において、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４
９またはＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５０７で寄託されるｃＤＮＡによってコード
されるアミノ酸配列、または配列番号２もしくは配列番号４０中のアミノ酸配列
を有する単離されたＴＲ１３ポリペプチド、あるいは上記のポリペプチドの一部
を含むペプチドまたはポリペプチドを提供する。
【０２１４】 本発明のポリペプチドフラグメントは、配列番号２に含まれるアミノ酸配列、
ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４９として寄託されるクローン中に含まれるｃＤＮ
Ａまたはこの寄託クローン中に含まれるヌクレオチド配列に（例えば、ストリン
ジェントなハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズする核酸によって
コードされるアミノ酸配列、あるいは図１Ａ〜Ｃ（配列番号１）もしくはこれに
対する相補鎖またはこれらのポリヌクレオチドフラグメント（例えば、本明細書
中に開示されるような）に示されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらから
なる、ポリペプチドを含む。タンパク質フラグメントは、「自律構造（ｆｒｅｅ
−ｓｔａｎｄｉｎｇ）」であるか、またはフラグメントが部分もしくは領域（最
も好ましくは１つの連続した領域として）を形成するより長いポリペプチド内に
含まれ得る。本発明のポリペプチドフラグメントの代表的な例としては、例えば
、およそ以下のアミノ酸残基：配列番号２の１〜５０、５１〜１００、１０１〜
１５０、１５１〜２００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、
３５１〜４００、４０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜
６００、６０１〜６５０、６５１〜７００、および／または７０１〜７５０を含
むか、あるいはこれらからなるフラグメントを含む。さらに、ポリぺプチドフラ
グメントは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９
０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１７５または２００ア
ミノ酸長であり得る。この文脈における、「およそ」とは、いずれかの末端もし
くは両末端において、特に列挙された範囲のいくつか（５、４、３、２もしくは
１）のアミノ酸だけ大きいか、もしくは小さい範囲を含む。これらのポリぺプチ
ドフラグメントをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。 本発明のポリペプチドフラグメントは、配列番号４０に含まれるアミノ酸配列、
ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５０７として寄託されるクローン中に含まれるｃＤＮ
Ａまたはこの寄託クローン中に含まれるヌクレオチド配列に（例えば、ストリン
ジェントなハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズする核酸によって
コードされるアミノ酸配列、あるいは図７Ａ〜Ｄ（配列番号４０）もしくはこれ
に対する相補鎖またはこれらのポリヌクレオチドフラグメント（例えば、本明細
書中に開示されるような）に示されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらか
らなる、ポリペプチドを含む。タンパク質フラグメントは、「自律構造」である
か、またはフラグメントが部分もしくは領域を（最も好ましくは１つの連続した
領域として）形成するより長いポリペプチド内に含まれ得る。本発明のポリペプ
チドフラグメントの代表的な例としては、例えば、およそ以下のアミノ酸残基：
配列番号２の１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０
１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４０１〜４５
０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６０１〜６５０、６５
１〜７００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８０１〜８５０、８５１〜９０
０、９０１〜９５０、および／または９５１〜１００１を含むか、あるいはこれ
らからなるフラグメントが挙げられる。さらに、ポリぺプチドフラグメントは、
少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、
１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１７５、２００、２５０、３００、
３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、
８００、８５０、９００、９５０、または１００１アミノ酸長であり得る。この
文脈における、「およそ」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に
列挙された範囲のいくつか（５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸だけ大きい
か、もしくは小さい範囲を含む。これらのポリぺプチドフラグメントをコードす
るポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。 本発明のポリペプチドフラグメントは、およそ以下のアミノ酸残基：配列番号２
の以下：
【０２１５】
【化１】 を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドが挙げられる。この文脈におけ
る、「およそ」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙された
範囲のいくつか（５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸だけ大きいか、もしく
は小さい範囲を含む。これらのポリぺプチドフラグメントをコードするポリヌク
レオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２１６】 本発明のポリペプチドフラグメントは、およそ以下のアミノ酸残基：配列番号
４０の以下：
【０２１７】
【化２】 を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドが挙げられる。この文脈におけ
る、「およそ」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙された
範囲のいくつか（５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸だけ大きいか、もしく
は小さい範囲を含む。
【０２１８】 さらなる実施形態において、本発明のポリペプチドフラグメントは、図１Ａ〜
Ｃに開示されるＴＲ１３ポリペプチドの１つ以上のドメインを含むか、あるいは
これらからなる。本発明の好ましいポリペプチドフラグメントは、以下の群から
選択されるメンバーを含む：（ａ）図１Ａ〜Ｃに開示されるＴＲ１３システイン
リッチドメイン（配列番号２のおよそ１０５〜およそ１７０、およそ２５１〜お
よそ２６５、およそ３３１〜およそ４１０、およびおよそ５８０〜およそ６１０
のアミノ酸残基を構成することが推定される）の、１、２、３、または４つ全て
のうちの任意の組み合わせを含むか、あるいはこれらの任意の組み合わせからな
るポリペプチド；（ｂ）図１Ａ〜Ｃに開示されるＴＲ１３レセプタータンパク質
のエピトープ保有部分（例えば、配列番号２のおよそ１〜およそ１７０、または
およそ２１０〜およそ３１８、またはおよそ３４３〜およそ４８０、またはおよ
そ５４８〜およそ５９２、またはおよそ６３２〜およそ７４２のアミノ酸残基を
構成すると推定されるエピトープ保有部分）の、１、２、３、または４つ以上を
含むか、あるいはこれらからなるポリペプチド；（ｃ）ポリペプチド（ａ）〜（
ｃ）のいずれかの組み合わせ。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドもまた、本発明に含まれる。この文脈における、「およそ」とは、いずれか
の末端もしくは両末端において、特に列挙された範囲のいくつか（５、４、３、
２もしくは１）のアミノ酸だけ大きいか、もしくは小さい範囲を含む。これらの
ポリぺプチドフラグメントをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含ま
れる。
【０２１９】 さらなる実施形態において、本発明のポリペプチドフラグメントは、図７Ａ〜
Ｄに開示されるＴＲ１３ポリペプチドの１つ以上のドメインを含むか、あるいは
これらからなる。本発明の好ましいポリペプチドフラグメントは、以下からなる
群から選択されるメンバーを含む：（ａ）配列番号４０のアミノ酸１〜およそ４
１を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチド；（ｂ）配列番号４０のアミ
ノ酸４２〜およそ９０６を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチド；（ｃ
）配列番号４０のアミノ酸９０７〜およそ９３１を含むか、あるいはこれらから
なるポリペプチド；（ｄ）配列番号４０のアミノ酸９３２〜およそ１００１を含
むか、あるいはこれらからなるポリペプチド；（ｅ）図７Ａ〜Ｄに開示されるＴ
Ｒ１３システインリッチドメイン（配列番号４０のおよそ２７１〜およそ４２１
、２７１〜およそ２８６、およそ２９０〜およそ３００、およそ３０１〜およそ
３２０、およそ３２９〜およそ３６１、およそ４０４〜およそ４２１、およそ５
８５〜およそ５９５のアミノ酸残基を構成すると推定される）の、１、２、３、
または４つ以上の任意の組み合わせを含むか、あるいはこれらの任意の組み合わ
せからなるポリペプチド；（ｆ）図７Ａ〜Ｄに開示されるＴＲ１３レセプタータ
ンパク質のエピトープ保有部分（例えば、配列番号４０のおよそ１〜およそ２６
２、またはおよそ２６４〜およそ４２３、またはおよそ４３７〜およそ７８９、
またはおよそ７９１〜およそ１００１のアミノ酸残基を構成すると推定されるエ
ピトープ保有部分）の、１、２、３、または４つ以上を含むか、あるいはこれら
からなるポリペプチド；ならびに（ｇ）ポリペプチド（ａ）〜（ｆ）のいずれか
の組み合わせ。この文脈における、「およそ」とは、いずれかの末端もしくは両
末端において、特に列挙された範囲のいくつか（５、４、３、２もしくは１）の
アミノ酸だけ大きいか、もしくは小さい範囲を含む。これらのポリぺプチドをコ
ードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２２０】 上記のように、ＴＲ１３の細胞外システインリッチモチーフは、ＴＲ１３とそ
のリガントとの間の相互作用に重要であると考えられている。従って、好ましい
実施形態において、本発明のポリペプチドフラグメントは、図１Ａ〜Ｃに開示さ
れるアミノ酸配列（配列番号２）のおよそ１０５〜およそ１７０、およそ２５１
〜およそ２６５、およそ３３１〜およそ４１０、および／またはおよそ５８０〜
およそ６１０のアミノ酸残基を含むか、あるいはこれらからなる。特定の実施形
態において、本発明のポリペプチドは、図１Ａ〜Ｃに開示される、１、２、３ま
たは４つ全ての細胞外システインリッチモチーフの任意の組み合わせを含むか、
あるいはこれらの任意の組み合わせからなる。この文脈における、「およそ」と
は、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙された範囲のいくつか（
５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸だけ大きいか、もしくは小さい範囲を含
む。これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含ま
れる。
【０２２１】 上記のように、ＴＲ１３の細胞外システインリッチモチーフは、ＴＲ１３とそ
のリガントとの間の相互作用に重要であると考えられている。従って、好ましい
実施形態において、本発明のポリペプチドフラグメントは、図７Ａ〜Ｄに開示さ
れるアミノ酸配列（配列番号４０）のおよそ２７１〜およそ４２１、またはおよ
そ２７１〜およそ２８６、またはおよそ２９０〜およそ３００、またはおよそ３
０１〜およそ３２０、またはおよそ３２９〜およそ３６１、またはおよそ４０４
〜およそ４２１、またはおよそ５８５〜およそ５９５のアミノ酸残基を含むか、
あるいはこれらからなる。特定の実施形態において、本発明のポリペプチドは、
図７Ａ〜Ｄに開示される、細胞外システインリッチモチーフの１、２、３または
４つ以上の任意の組み合わせを含むか、あるいはこれらの任意の組み合わせから
なる。この文脈における、「およそ」とは、いずれかの末端もしくは両末端にお
いて、特に列挙された範囲のいくつか（５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸
だけ大きいか、もしくは小さい範囲を含む。これらのポリぺプチドをコードする
ポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２２２】 本発明の特に好ましいフラグメントの中には、ＴＲ１３（配列番号２または配
列番号４０）の構造特質または機能特質によって特徴付けられるフラグメントが
ある。そのようなフラグメントは、完全（すなわち、全長）ＴＲ１３（配列番号
２または配列番号４０）の、αヘリックスおよびαヘリックス形成領域（「α領
域」）、βシートおよびβシート形成領域（「β領域」）、ターンおよびターン
形成領域（「ターン領域」）、コイルまたはコイル形成領域（「コイル領域」）
、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親媒性領域、表面形成領域、
および高抗原性指標領域（すなわち、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデ
フォルトパラメーターを用いて同定された場合に、１．５以上の抗原性指標を有
する、４つ以上の連続したアミノ酸を含む）を含むアミノ酸残基を含む。特定の
好ましい領域は、図３（表Ｉ）および図９（表ＩＩＩ）に示される領域であり、
そして、それぞれ図１Ａ〜Ｃ（配列番号２）または図７Ａ〜Ｄ（配列番号４０）
に示されるアミノ酸配列の分析によって同定された上記の型の領域を含むが、こ
れらに限定されない。このような好ましい領域としては、以下が挙げられる；Ｇ
ａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎの推定α領域、β領域、ターン領域、およびコイル
領域；Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎの推定α領域、β領域、およびターン領域；Ｋｙ
ｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの推定親水性領域およびＨｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓの推定
疎水性領域；Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのαおよびβ両親媒性領域；Ｅｍｉｎｉ表面形
成領域；ならびにＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆの高抗原性指標領域（これらのコン
ピュータープログラムのデフォルトパラメーターを用いて推定した場合）。これ
らのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。 上記のように、タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、タンパ
ク質の１つ以上の生物学的機能の改変または欠失をもたらす場合でさえ、他の機
能的活性（例えば、生物学的活性、多量体化する能力、ＴＲ１３リガンドに結合
する能力）は、まだ保持される。例えば、短縮化ＴＲ１３ムテインが、ポリペプ
チドの完全形態または成熟形態を認識する抗体を誘導および／またはこの抗体に
結合する能力は、完全または成熟ポリペプチドの決して大多数ではない残基が、
Ｎ末端から除去される場合、一般に保持される。完全ポリペプチドのＮ末端残基
を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫性活性を保持するか否かは、本明細
書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の方法により容易に決
定され得る。多数のＮ末端アミノ酸残基が欠失したＴＲ１３ムテインは、いくつ
かの生物学的活性または免疫原性活性を保持し得ないようである。実際、わずか
６のＴＲ１３アミノ酸残基からなるペプチドは、頻繁に、免疫応答を惹起し得る
。
【０２２３】 従って、本発明はさらに、図１Ａ〜Ｃに示されるＴＲ１３アミノ酸配列のアミ
ノ酸末端から、７４５位に存在するアスパラギン酸残基までで１つ以上の残基が
欠失されたポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドを提供する。特に、本発明は、図１Ａ〜Ｃの残基ｎ1−７５０のアミノ
酸配列（ここで、ｎ1は、図１Ａ〜Ｃ（これは、配列番号２として示される配列
と同一である）におけるアミノ酸残基の位置に対応する２〜７４５の整数である
）を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを提供する。特定の実施形態に
おいて、本発明は、図１Ａ〜Ｃの残基ｎ1−７５０のアミノ酸配列（ここで、ｎ1 は、図１Ａ〜Ｃにおけるアミノ酸残基の位置に対応する２〜６１０の整数である
）を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを提供する。これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドもまた、含まれる。
【０２２４】 １つの実施形態では、本発明のＴＲ１３ポリペプチドのＮ末端欠失は、一般式
ｎ2−７５０により記載され得る（ここで、ｎ2は、図１Ａ−Ｃ（配列番号２）に
同定されるのアミノ酸残基の位置に対応する、２〜７４５の数である）。配列番
号２に示される本発明のＴＲ１３ポリペプチドのＮ末端欠失は、以下の残基のア
ミノ酸配列を含むか、またあるいは以下の残基のアミノ酸配列から構成されるポ
リペプチドを含む：配列番号２のＤ−２〜Ｒ−７５０；Ｑ−３〜Ｒ−７５０；Ｓ
−４〜Ｒ−７５０；Ｔ−５〜Ｒ−７５０；Ｑ−６〜Ｒ−７５０；Ａ−７〜Ｒ−７
５０；Ｃ−８〜Ｒ−７５０；Ａ−９〜Ｒ−７５０；Ｇ−１０〜Ｒ−７５０；Ｅ−
１１〜Ｒ−７５０；Ｋ−１２〜Ｒ−７５０；Ｈ−１３〜Ｒ−７５０；Ｃ−１４〜
Ｒ−７５０；Ｈ−１５〜Ｒ−７５０；Ｎ−１６〜Ｒ−７５０；Ｒ−１７〜Ｒ−７
５０；Ｇ−１８〜Ｒ−７５０；Ｇ−１９〜Ｒ−７５０；Ｌ−２０〜Ｒ−７５０；
Ｈ−２１〜Ｒ−７５０；Ｆ−２２〜Ｒ−７５０；Ｒ−２３〜Ｒ−７５０；Ｍ−２
４〜Ｒ−７５０；Ｌ−２５〜Ｒ−７５０；Ｐ−２６〜Ｒ−７５０；Ｌ−２７〜Ｒ
−７５０；Ｑ−２８〜Ｒ−７５０；Ｔ−２９〜Ｒ−７５０；Ｗ−３０〜Ｒ−７５
０；Ｈ−３１〜Ｒ−７５０；Ｖ−３２〜Ｒ−７５０；Ｃ−３３〜Ｒ−７５０；Ｒ
−３４〜Ｒ−７５０；Ｑ−３５〜Ｒ−７５０；Ａ−３６〜Ｒ−７５０；Ｇ−３７
〜Ｒ−７５０；Ｌ−３８〜Ｒ−７５０；Ｌ−３９〜Ｒ−７５０；Ｆ−４０〜Ｒ−
７５０；Ｌ−４１〜Ｒ−７５０；Ｑ−４２〜Ｒ−７５０；Ｔ−４３〜Ｒ−７５０
；Ｌ−４４〜Ｒ−７５０；Ｐ−４５〜Ｒ−７５０；Ｓ−４６〜Ｒ−７５０；Ｎ−
４７〜Ｒ−７５０；Ｓ−４８〜Ｒ−７５０；Ｙ−４９〜Ｒ−７５０；Ｓ−５０〜
Ｒ−７５０；Ｎ−５１〜Ｒ−７５０；Ｋ−５２〜Ｒ−７５０；Ｇ−５３〜Ｒ−７
５０；Ｅ−５４〜Ｒ−７５０；Ｔ−５５〜Ｒ−７５０；Ｓ−５６〜Ｒ−７５０；
Ｃ−５７〜Ｒ−７５０；Ｈ−５８〜Ｒ−７５０；Ｑ−５９〜Ｒ−７５０；Ｃ−６
０〜Ｒ−７５０；Ｄ−６１〜Ｒ−７５０；Ｐ−６２〜Ｒ−７５０；Ｄ−６３〜Ｒ
−７５０；Ｋ−６４〜Ｒ−７５０；Ｙ−６５〜Ｒ−７５０；Ｓ−６６〜Ｒ−７５
０；Ｅ−６７〜Ｒ−７５０；Ｋ−６８〜Ｒ−７５０；Ｇ−６９〜Ｒ−７５０；Ｓ
−７０〜Ｒ−７５０；Ｓ−７１〜Ｒ−７５０；Ｓ−７２〜Ｒ−７５０；Ｃ−７３
〜Ｒ−７５０；Ｎ−７４〜Ｒ−７５０；Ｖ−７５〜Ｒ−７５０；Ｒ−７６〜Ｒ−
７５０；Ｐ−７７〜Ｒ−７５０；Ａ−７８〜Ｒ−７５０；Ｃ−７９〜Ｒ−７５０
；Ｔ−８０〜Ｒ−７５０；Ｄ−８１〜Ｒ−７５０；Ｋ−８２〜Ｒ−７５０；Ｄ−
８３〜Ｒ−７５０；Ｙ−８４〜Ｒ−７５０；Ｆ−８５〜Ｒ−７５０；Ｙ−８６〜
Ｒ−７５０；Ｔ−８７〜Ｒ−７５０；Ｈ−８８〜Ｒ−７５０；Ｔ−８９〜Ｒ−７
５０；Ａ−９０〜Ｒ−７５０；Ｃ−９１〜Ｒ−７５０；Ｄ−９２〜Ｒ−７５０；
Ａ−９３〜Ｒ−７５０；Ｎ−９４〜Ｒ−７５０；Ｇ−９５〜Ｒ−７５０；Ｅ−９
６〜Ｒ−７５０；Ｔ−９７〜Ｒ−７５０；Ｑ−９８〜Ｒ−７５０；Ｌ−９９〜Ｒ
−７５０；Ｍ−１００〜Ｒ−７５０；Ｙ−１０１〜Ｒ−７５０；Ｋ−１０２〜Ｒ
−７５０；Ｗ−１０３〜Ｒ−７５０；Ａ−１０４〜Ｒ−７５０；Ｋ−１０５〜Ｒ
−７５０；Ｐ−１０６〜Ｒ−７５０；Ｋ−１０７〜Ｒ−７５０；Ｉ−１０８〜Ｒ
−７５０；Ｃ−１０９〜Ｒ−７５０；Ｓ−１１０〜Ｒ−７５０；Ｅ−１１１〜Ｒ
−７５０；Ｄ−１１２〜Ｒ−７５０；Ｌ−１１３〜Ｒ−７５０；Ｅ−１１４〜Ｒ
−７５０；Ｇ−１１５〜Ｒ−７５０；Ａ−１１６〜Ｒ−７５０；Ｖ−１１７〜Ｒ
−７５０；Ｋ−１１８〜Ｒ−７５０；Ｌ−１１９〜Ｒ−７５０；Ｐ−１２０〜Ｒ
−７５０；Ａ−１２１〜Ｒ−７５０；Ｓ−１２２〜Ｒ−７５０；Ｇ−１２３〜Ｒ
−７５０；Ｖ−１２４〜Ｒ−７５０；Ｋ−１２５〜Ｒ−７５０；Ｔ−１２６〜Ｒ
−７５０；Ｈ−１２７〜Ｒ−７５０；Ｃ−１２８〜Ｒ−７５０；Ｐ−１２９〜Ｒ
−７５０；Ｐ−１３０〜Ｒ−７５０；Ｃ−１３１〜Ｒ−７５０；Ｎ−１３２〜Ｒ
−７５０；Ｐ−１３３〜Ｒ−７５０；Ｇ−１３４〜Ｒ−７５０；Ｆ−１３５〜Ｒ
−７５０；Ｆ−１３６〜Ｒ−７５０；Ｋ−１３７〜Ｒ−７５０；Ｔ−１３８〜Ｒ
−７５０；Ｎ−１３９〜Ｒ−７５０；Ｎ−１４０〜Ｒ−７５０；Ｓ−１４１〜Ｒ
−７５０；Ｔ−１４２〜Ｒ−７５０；Ｃ−１４３〜Ｒ−７５０；Ｑ−１４４〜Ｒ
−７５０；Ｐ−１４５〜Ｒ−７５０；Ｃ−１４６〜Ｒ−７５０；Ｐ−１４７〜Ｒ
−７５０；Ｙ−１４８〜Ｒ−７５０；Ｇ−１４９〜Ｒ−７５０；Ｓ−１５０〜Ｒ
−７５０；Ｙ−１５１〜Ｒ−７５０；Ｓ−１５２〜Ｒ−７５０；Ｎ−１５３〜Ｒ
−７５０；Ｇ−１５４〜Ｒ−７５０；Ｓ−１５５〜Ｒ−７５０；Ｄ−１５６〜Ｒ
−７５０；Ｃ−１５７〜Ｒ−７５０；Ｔ−１５８〜Ｒ−７５０；Ｒ−１５９〜Ｒ
−７５０；Ｃ−１６０〜Ｒ−７５０；Ｐ−１６１〜Ｒ−７５０；Ａ−１６２〜Ｒ
−７５０；Ｇ−１６３〜Ｒ−７５０；Ｔ−１６４〜Ｒ−７５０；Ｅ−１６５〜Ｒ
−７５０；Ｐ−１６６〜Ｒ−７５０；Ａ−１６７〜Ｒ−７５０；Ｖ−１６８〜Ｒ
−７５０；Ｇ−１６９〜Ｒ−７５０；Ｆ−１７０〜Ｒ−７５０；Ｅ−１７１〜Ｒ
−７５０；Ｙ−１７２〜Ｒ−７５０；Ｋ−１７３〜Ｒ−７５０；Ｗ−１７４〜Ｒ
−７５０；Ｗ−１７５〜Ｒ−７５０；Ｎ−１７６〜Ｒ−７５０；Ｔ−１７７〜Ｒ
−７５０；Ｌ−１７８〜Ｒ−７５０；Ｐ−１７９〜Ｒ−７５０；Ｔ−１８０〜Ｒ
−７５０；Ｎ−１８１〜Ｒ−７５０；Ｍ−１８２〜Ｒ−７５０；Ｅ−１８３〜Ｒ
−７５０；Ｔ−１８４〜Ｒ−７５０；Ｔ−１８５〜Ｒ−７５０；Ｖ−１８６〜Ｒ
−７５０；Ｌ−１８７〜Ｒ−７５０；Ｓ−１８８〜Ｒ−７５０；Ｇ−１８９〜Ｒ
−７５０；Ｉ−１９０〜Ｒ−７５０；Ｎ−１９１〜Ｒ−７５０；Ｆ−１９２〜Ｒ
−７５０；Ｅ−１９３〜Ｒ−７５０；Ｙ−１９４〜Ｒ−７５０；Ｋ−１９５〜Ｒ
−７５０；Ｇ−１９６〜Ｒ−７５０；Ｍ−１９７〜Ｒ−７５０；Ｔ−１９８〜Ｒ
−７５０；Ｇ−１９９〜Ｒ−７５０；Ｗ−２００〜Ｒ−７５０；Ｅ−２０１〜Ｒ
−７５０；Ｖ−２０２〜Ｒ−７５０；Ａ−２０３〜Ｒ−７５０；Ｇ−２０４〜Ｒ
−７５０；Ｄ−２０５〜Ｒ−７５０；Ｈ−２０６〜Ｒ−７５０；Ｉ−２０７〜Ｒ
−７５０；Ｙ−２０８〜Ｒ−７５０；Ｔ−２０９〜Ｒ−７５０；Ａ−２１０〜Ｒ
−７５０；Ａ−２１１〜Ｒ−７５０；Ｇ−２１２〜Ｒ−７５０；Ａ−２１３〜Ｒ
−７５０；Ｓ−２１４〜Ｒ−７５０；Ｄ−２１５〜Ｒ−７５０；Ｎ−２１６〜Ｒ
−７５０；Ｄ−２１７〜Ｒ−７５０；Ｆ−２１８〜Ｒ−７５０；Ｍ−２１９〜Ｒ
−７５０；Ｉ−２２０〜Ｒ−７５０；Ｌ−２２１〜Ｒ−７５０；Ｔ−２２２〜Ｒ
−７５０；Ｌ−２２３〜Ｒ−７５０；Ｖ−２２４〜Ｒ−７５０；Ｖ−２２５〜Ｒ
−７５０；Ｐ−２２６〜Ｒ−７５０；Ｇ−２２７〜Ｒ−７５０；Ｆ−２２８〜Ｒ
−７５０；Ｒ−２２９〜Ｒ−７５０；Ｐ−２３０〜Ｒ−７５０；Ｐ−２３１〜Ｒ
−７５０；Ｑ−２３２〜Ｒ−７５０；Ｓ−２３３〜Ｒ−７５０；Ｖ−２３４〜Ｒ
−７５０；Ｍ−２３５〜Ｒ−７５０；Ａ−２３６〜Ｒ−７５０；Ｄ−２３７〜Ｒ
−７５０；Ｔ−２３８〜Ｒ−７５０；Ｅ−２３９〜Ｒ−７５０；Ｎ−２４０〜Ｒ
−７５０；Ｋ−２４１〜Ｒ−７５０；Ｅ−２４２〜Ｒ−７５０；Ｖ−２４３〜Ｒ
−７５０；Ａ−２４４〜Ｒ−７５０；Ｒ−２４５〜Ｒ−７５０；Ｉ−２４６〜Ｒ
−７５０；Ｔ−２４７〜Ｒ−７５０；Ｆ−２４８〜Ｒ−７５０；Ｖ−２４９〜Ｒ
−７５０；Ｆ−２５０〜Ｒ−７５０；Ｅ−２５１〜Ｒ−７５０；Ｔ−２５２〜Ｒ
−７５０；Ｌ−２５３〜Ｒ−７５０；Ｃ−２５４〜Ｒ−７５０；Ｓ−２５５〜Ｒ
−７５０；Ｖ−２５６〜Ｒ−７５０；Ｎ−２５７〜Ｒ−７５０；Ｃ−２５８〜Ｒ
−７５０；Ｅ−２５９〜Ｒ−７５０；Ｌ−２６０〜Ｒ−７５０；Ｙ−２６１〜Ｒ
−７５０；Ｆ−２６２〜Ｒ−７５０；Ｍ−２６３〜Ｒ−７５０；Ｖ−２６４〜Ｒ
−７５０；Ｇ−２６５〜Ｒ−７５０；Ｖ−２６６〜Ｒ−７５０；Ｎ−２６７〜Ｒ
−７５０；Ｓ−２６８〜Ｒ−７５０；Ｒ−２６９〜Ｒ−７５０；Ｔ−２７０〜Ｒ
−７５０；Ｎ−２７１〜Ｒ−７５０；Ｔ−２７２〜Ｒ−７５０；Ｐ−２７３〜Ｒ
−７５０；Ｖ−２７４〜Ｒ−７５０；Ｅ−２７５〜Ｒ−７５０；Ｔ−２７６〜Ｒ
−７５０；Ｗ−２７７〜Ｒ−７５０；Ｋ−２７８〜Ｒ−７５０；Ｇ−２７９〜Ｒ
−７５０；Ｓ−２８０〜Ｒ−７５０；Ｋ−２８１〜Ｒ−７５０；Ｇ−２８２〜Ｒ
−７５０；Ｋ−２８３〜Ｒ−７５０；Ｑ−２８４〜Ｒ−７５０；Ｓ−２８５〜Ｒ
−７５０；Ｙ−２８６〜Ｒ−７５０；Ｔ−２８７〜Ｒ−７５０；Ｙ−２８８〜Ｒ
−７５０；Ｉ−２８９〜Ｒ−７５０；Ｉ−２９０〜Ｒ−７５０；Ｅ−２９１〜Ｒ
−７５０；Ｅ−２９２〜Ｒ−７５０；Ｎ−２９３〜Ｒ−７５０；Ｔ−２９４〜Ｒ
−７５０；Ｔ−２９５〜Ｒ−７５０；Ｔ−２９６〜Ｒ−７５０；Ｓ−２９７〜Ｒ
−７５０；Ｆ−２９８〜Ｒ−７５０；Ｔ−２９９〜Ｒ−７５０；Ｗ−３００〜Ｒ
−７５０；Ａ−３０１〜Ｒ−７５０；Ｆ−３０２〜Ｒ−７５０；Ｑ−３０３〜Ｒ
−７５０；Ｒ−３０４〜Ｒ−７５０；Ｔ−３０５〜Ｒ−７５０；Ｔ−３０６〜Ｒ
−７５０；Ｆ−３０７〜Ｒ−７５０；Ｈ−３０８〜Ｒ−７５０；Ｅ−３０９〜Ｒ
−７５０；Ａ−３１０〜Ｒ−７５０；Ｓ−３１１〜Ｒ−７５０；Ｒ−３１２〜Ｒ
−７５０；Ｋ−３１３〜Ｒ−７５０；Ｙ−３１４〜Ｒ−７５０；Ｔ−３１５〜Ｒ
−７５０；Ｎ−３１６〜Ｒ−７５０；Ｄ−３１７〜Ｒ−７５０；Ｖ−３１８〜Ｒ
−７５０；Ａ−３１９〜Ｒ−７５０；Ｋ−３２０〜Ｒ−７５０；Ｉ−３２１〜Ｒ
−７５０；Ｙ−３２２〜Ｒ−７５０；Ｓ−３２３〜Ｒ−７５０；Ｉ−３２４〜Ｒ
−７５０；Ｎ−３２５〜Ｒ−７５０；Ｖ−３２６〜Ｒ−７５０；Ｔ−３２７〜Ｒ
−７５０；Ｎ−３２８〜Ｒ−７５０；Ｖ−３２９〜Ｒ−７５０；Ｍ−３３０〜Ｒ
−７５０；Ｎ−３３１〜Ｒ−７５０；Ｇ−３３２〜Ｒ−７５０；Ｖ−３３３〜Ｒ
−７５０；Ａ−３３４〜Ｒ−７５０；Ｓ−３３５〜Ｒ−７５０；Ｙ−３３６〜Ｒ
−７５０；Ｃ−３３７〜Ｒ−７５０；Ｒ−３３８〜Ｒ−７５０；Ｐ−３３９〜Ｒ
−７５０；Ｃ−３４０〜Ｒ−７５０；Ａ−３４１〜Ｒ−７５０；Ｌ−３４２〜Ｒ
−７５０；Ｅ−３４３〜Ｒ−７５０；Ａ−３４４〜Ｒ−７５０；Ｓ−３４５〜Ｒ
−７５０；Ｄ−３４６〜Ｒ−７５０；Ｖ−３４７〜Ｒ−７５０；Ｇ−３４８〜Ｒ
−７５０；Ｓ−３４９〜Ｒ−７５０；Ｓ−３５０〜Ｒ−７５０；Ｃ−３５１〜Ｒ
−７５０；Ｔ−３５２〜Ｒ−７５０；Ｓ−３５３〜Ｒ−７５０；Ｃ−３５４〜Ｒ
−７５０；Ｐ−３５５〜Ｒ−７５０；Ａ−３５６〜Ｒ−７５０；Ｇ−３５７〜Ｒ
−７５０；Ｙ−３５８〜Ｒ−７５０；Ｙ−３５９〜Ｒ−７５０；Ｉ−３６０〜Ｒ
−７５０；Ｄ−３６１〜Ｒ−７５０；Ｒ−３６２〜Ｒ−７５０；Ｄ−３６３〜Ｒ
−７５０；Ｓ−３６４〜Ｒ−７５０；Ｇ−３６５〜Ｒ−７５０；Ｔ−３６６〜Ｒ
−７５０；Ｃ−３６７〜Ｒ−７５０；Ｈ−３６８〜Ｒ−７５０；Ｓ−３６９〜Ｒ
−７５０；Ｃ−３７０〜Ｒ−７５０；Ｐ−３７１〜Ｒ−７５０；Ｐ−３７２〜Ｒ
−７５０；Ｎ−３７３〜Ｒ−７５０；Ｔ−３７４〜Ｒ−７５０；Ｉ−３７５〜Ｒ
−７５０；Ｌ−３７６〜Ｒ−７５０；Ｋ−３７７〜Ｒ−７５０；Ａ−３７８〜Ｒ
−７５０；Ｈ−３７９〜Ｒ−７５０；Ｑ−３８０〜Ｒ−７５０；Ｐ−３８１〜Ｒ
−７５０；Ｙ−３８２〜Ｒ−７５０；Ｇ−３８３〜Ｒ−７５０；Ｖ−３８４〜Ｒ
−７５０；Ｑ−３８５〜Ｒ−７５０；Ａ−３８６〜Ｒ−７５０；Ｃ−３８７〜Ｒ
−７５０；Ｖ−３８８〜Ｒ−７５０；Ｐ−３８９〜Ｒ−７５０；Ｃ−３９０〜Ｒ
−７５０；Ｇ−３９１〜Ｒ−７５０；Ｐ−３９２〜Ｒ−７５０；Ｇ−３９３〜Ｒ
−７５０；Ｔ−３９４〜Ｒ−７５０；Ｋ−３９５〜Ｒ−７５０；Ｎ−３９６〜Ｒ
−７５０；Ｎ−３９７〜Ｒ−７５０；Ｋ−３９８〜Ｒ−７５０；Ｉ−３９９〜Ｒ
−７５０；Ｈ−４００〜Ｒ−７５０；Ｓ−４０１〜Ｒ−７５０；Ｌ−４０２〜Ｒ
−７５０；Ｃ−４０３〜Ｒ−７５０；Ｙ−４０４〜Ｒ−７５０；Ｎ−４０５〜Ｒ
−７５０；Ｄ−４０６〜Ｒ−７５０；Ｃ−４０７〜Ｒ−７５０；Ｔ−４０８〜Ｒ
−７５０；Ｆ−４０９〜Ｒ−７５０；Ｓ−４１０〜Ｒ−７５０；Ｒ−４１１〜Ｒ
−７５０；Ｎ−４１２〜Ｒ−７５０；Ｔ−４１３〜Ｒ−７５０；Ｐ−４１４〜Ｒ
−７５０；Ｔ−４１５〜Ｒ−７５０；Ｒ−４１６〜Ｒ−７５０；Ｔ−４１７〜Ｒ
−７５０；Ｆ−４１８〜Ｒ−７５０；Ｎ−４１９〜Ｒ−７５０；Ｙ−４２０〜Ｒ
−７５０；Ｎ−４２１〜Ｒ−７５０；Ｆ−４２２〜Ｒ−７５０；Ｓ−４２３〜Ｒ
−７５０；Ａ−４２４〜Ｒ−７５０；Ｌ−４２５〜Ｒ−７５０；Ａ−４２６〜Ｒ
−７５０；Ｎ−４２７〜Ｒ−７５０；Ｔ−４２８〜Ｒ−７５０；Ｖ−４２９〜Ｒ
−７５０；Ｔ−４３０〜Ｒ−７５０；Ｌ−４３１〜Ｒ−７５０；Ａ−４３２〜Ｒ
−７５０；Ｇ−４３３〜Ｒ−７５０；Ｇ−４３４〜Ｒ−７５０；Ｐ−４３５〜Ｒ
−７５０；Ｓ−４３６〜Ｒ−７５０；Ｆ−４３７〜Ｒ−７５０；Ｔ−４３８〜Ｒ
−７５０；Ｓ−４３９〜Ｒ−７５０；Ｋ−４４０〜Ｒ−７５０；Ｇ−４４１〜Ｒ
−７５０；Ｌ−４４２〜Ｒ−７５０；Ｋ−４４３〜Ｒ−７５０；Ｙ−４４４〜Ｒ
−７５０；Ｆ−４４５〜Ｒ−７５０；Ｈ−４４６〜Ｒ−７５０；Ｈ−４４７〜Ｒ
−７５０；Ｆ−４４８〜Ｒ−７５０；Ｔ−４４９〜Ｒ−７５０；Ｌ−４５０〜Ｒ
−７５０；Ｓ−４５１〜Ｒ−７５０；Ｌ−４５２〜Ｒ−７５０；Ｃ−４５３〜Ｒ
−７５０；Ｇ−４５４〜Ｒ−７５０；Ｎ−４５５〜Ｒ−７５０；Ｑ−４５６〜Ｒ
−７５０；Ｇ−４５７〜Ｒ−７５０；Ｒ−４５８〜Ｒ−７５０；Ｋ−４５９〜Ｒ
−７５０；Ｍ−４６０〜Ｒ−７５０；Ｓ−４６１〜Ｒ−７５０；Ｖ−４６２〜Ｒ
−７５０；Ｃ−４６３〜Ｒ−７５０；Ｔ−４６４〜Ｒ−７５０；Ｄ−４６５〜Ｒ
−７５０；Ｎ−４６６〜Ｒ−７５０；Ｖ−４６７〜Ｒ−７５０；Ｔ−４６８〜Ｒ
−７５０；Ｄ−４６９〜Ｒ−７５０；Ｌ−４７０〜Ｒ−７５０；Ｒ−４７１〜Ｒ
−７５０；Ｉ−４７２〜Ｒ−７５０；Ｐ−４７３〜Ｒ−７５０；Ｅ−４７４〜Ｒ
−７５０；Ｇ−４７５〜Ｒ−７５０；Ｅ−４７６〜Ｒ−７５０；Ｓ−４７７〜Ｒ
−７５０；Ｇ−４７８〜Ｒ−７５０；Ｆ−４７９〜Ｒ−７５０；Ｓ−４８０〜Ｒ
−７５０；Ｋ−４８１〜Ｒ−７５０；Ｓ−４８２〜Ｒ−７５０；Ｉ−４８３〜Ｒ
−７５０；Ｔ−４８４〜Ｒ−７５０；Ａ−４８５〜Ｒ−７５０；Ｙ−４８６〜Ｒ
−７５０；Ｖ−４８７〜Ｒ−７５０；Ｃ−４８８〜Ｒ−７５０；Ｑ−４８９〜Ｒ
−７５０；Ａ−４９０〜Ｒ−７５０；Ｖ−４９１〜Ｒ−７５０；Ｉ−４９２〜Ｒ
−７５０；Ｉ−４９３〜Ｒ−７５０；Ｐ−４９４〜Ｒ−７５０；Ｐ−４９５〜Ｒ
−７５０；Ｅ−４９６〜Ｒ−７５０；Ｖ−４９７〜Ｒ−７５０；Ｔ−４９８〜Ｒ
−７５０；Ｇ−４９９〜Ｒ−７５０；Ｙ−５００〜Ｒ−７５０；Ｋ−５０１〜Ｒ
−７５０；Ａ−５０２〜Ｒ−７５０；Ｇ−５０３〜Ｒ−７５０；Ｖ−５０４〜Ｒ
−７５０；Ｓ−５０５〜Ｒ−７５０；Ｓ−５０６〜Ｒ−７５０；Ｑ−５０７〜Ｒ
−７５０；Ｐ−５０８〜Ｒ−７５０；Ｖ−５０９〜Ｒ−７５０；Ｓ−５１０〜Ｒ
−７５０；Ｌ−５１１〜Ｒ−７５０；Ａ−５１２〜Ｒ−７５０；Ｄ−５１３〜Ｒ
−７５０；Ｒ−５１４〜Ｒ−７５０；Ｌ−５１５〜Ｒ−７５０；Ｉ−５１６〜Ｒ
−７５０；Ｇ−５１７〜Ｒ−７５０；Ｖ−５１８〜Ｒ−７５０；Ｔ−５１９〜Ｒ
−７５０；Ｔ−５２０〜Ｒ−７５０；Ｄ−５２１〜Ｒ−７５０；Ｍ−５２２〜Ｒ
−７５０；Ｔ−５２３〜Ｒ−７５０；Ｌ−５２４〜Ｒ−７５０；Ｄ−５２５〜Ｒ
−７５０；Ｇ−５２６〜Ｒ−７５０；Ｉ−５２７〜Ｒ−７５０；Ｔ−５２８〜Ｒ
−７５０；Ｓ−５２９〜Ｒ−７５０；Ｐ−５３０〜Ｒ−７５０；Ａ−５３１〜Ｒ
−７５０；Ｅ−５３２〜Ｒ−７５０；Ｌ−５３３〜Ｒ−７５０；Ｆ−５３４〜Ｒ
−７５０；Ｈ−５３５〜Ｒ−７５０；Ｌ−５３６〜Ｒ−７５０；Ｅ−５３７〜Ｒ
−７５０；Ｓ−５３８〜Ｒ−７５０；Ｌ−５３９〜Ｒ−７５０；Ｇ−５４０〜Ｒ
−７５０；Ｉ−５４１〜Ｒ−７５０；Ｐ−５４２〜Ｒ−７５０；Ｄ−５４３〜Ｒ
−７５０；Ｖ−５４４〜Ｒ−７５０；Ｉ−５４５〜Ｒ−７５０；Ｆ−５４６〜Ｒ
−７５０；Ｆ−５４７〜Ｒ−７５０；Ｙ−５４８〜Ｒ−７５０；Ｒ−５４９〜Ｒ
−７５０；Ｓ−５５０〜Ｒ−７５０；Ｎ−５５１〜Ｒ−７５０；Ｄ−５５２〜Ｒ
−７５０；Ｖ−５５３〜Ｒ−７５０；Ｔ−５５４〜Ｒ−７５０；Ｑ−５５５〜Ｒ
−７５０；Ｓ−５５６〜Ｒ−７５０；Ｃ−５５７〜Ｒ−７５０；Ｓ−５５８〜Ｒ
−７５０；Ｓ−５５９〜Ｒ−７５０；Ｇ−５６０〜Ｒ−７５０；Ｒ−５６１〜Ｒ
−７５０；Ｓ−５６２〜Ｒ−７５０；Ｔ−５６３〜Ｒ−７５０；Ｔ−５６４〜Ｒ
−７５０；Ｉ−５６５〜Ｒ−７５０；Ｒ−５６６〜Ｒ−７５０；Ｖ−５６７〜Ｒ
−７５０；Ｒ−５６８〜Ｒ−７５０；Ｃ−５６９〜Ｒ−７５０；Ｓ−５７０〜Ｒ
−７５０；Ｐ−５７１〜Ｒ−７５０；Ｑ−５７２〜Ｒ−７５０；Ｋ−５７３〜Ｒ
−７５０；Ｔ−５７４〜Ｒ−７５０；Ｖ−５７５〜Ｒ−７５０；Ｐ−５７６〜Ｒ
−７５０；Ｇ−５７７〜Ｒ−７５０；Ｓ−５７８〜Ｒ−７５０；Ｌ−５７９〜Ｒ
−７５０；Ｌ−５８０〜Ｒ−７５０；Ｌ−５８１〜Ｒ−７５０；Ｐ−５８２〜Ｒ
−７５０；Ｇ−５８３〜Ｒ−７５０；Ｔ−５８４〜Ｒ−７５０；Ｃ−５８５〜Ｒ
−７５０；Ｓ−５８６〜Ｒ−７５０；Ｄ−５８７〜Ｒ−７５０；Ｇ−５８８〜Ｒ
−７５０；Ｔ−５８９〜Ｒ−７５０；Ｃ−５９０〜Ｒ−７５０；Ｄ−５９１〜Ｒ
−７５０；Ｇ−５９２〜Ｒ−７５０；Ｃ−５９３〜Ｒ−７５０；Ｎ−５９４〜Ｒ
−７５０；Ｆ−５９５〜Ｒ−７５０；Ｈ−５９６〜Ｒ−７５０；Ｆ−５９７〜Ｒ
−７５０；Ｌ−５９８〜Ｒ−７５０；Ｗ−５９９〜Ｒ−７５０；Ｅ−６００〜Ｒ
−７５０；Ｓ−６０１〜Ｒ−７５０；Ａ−６０２〜Ｒ−７５０；Ａ−６０３〜Ｒ
−７５０；Ａ−６０４〜Ｒ−７５０；Ｃ−６０５〜Ｒ−７５０；Ｐ−６０６〜Ｒ
−７５０；Ｌ−６０７〜Ｒ−７５０；Ｃ−６０８〜Ｒ−７５０；Ｓ−６０９〜Ｒ
−７５０；Ｖ−６１０〜Ｒ−７５０；Ａ−６１１〜Ｒ−７５０；Ｄ−６１２〜Ｒ
−７５０；Ｙ−６１３〜Ｒ−７５０；Ｈ−６１４〜Ｒ−７５０；Ａ−６１５〜Ｒ
−７５０；Ｉ−６１６〜Ｒ−７５０；Ｖ−６１７〜Ｒ−７５０；Ｓ−６１８〜Ｒ
−７５０；Ｓ−６１９〜Ｒ−７５０；Ｃ−６２０〜Ｒ−７５０；Ｖ−６２１〜Ｒ
−７５０；Ａ−６２２〜Ｒ−７５０；Ｇ−６２３〜Ｒ−７５０；Ｉ−６２４〜Ｒ
−７５０；Ｑ−６２５〜Ｒ−７５０；Ｋ−６２６〜Ｒ−７５０；Ｔ−６２７〜Ｒ
−７５０；Ｔ−６２８〜Ｒ−７５０；Ｙ−６２９〜Ｒ−７５０；Ｖ−６３０〜Ｒ
−７５０；Ｗ−６３１〜Ｒ−７５０；Ｒ−６３２〜Ｒ−７５０；Ｅ−６３３〜Ｒ
−７５０；Ｐ−６３４〜Ｒ−７５０；Ｋ−６３５〜Ｒ−７５０；Ｌ−６３６〜Ｒ
−７５０；Ｃ−６３７〜Ｒ−７５０；Ｓ−６３８〜Ｒ−７５０；Ｇ−６３９〜Ｒ
−７５０；Ｇ−６４０〜Ｒ−７５０；Ｉ−６４１〜Ｒ−７５０；Ｓ−６４２〜Ｒ
−７５０；Ｌ−６４３〜Ｒ−７５０；Ｐ−６４４〜Ｒ−７５０；Ｅ−６４５〜Ｒ
−７５０；Ｑ−６４６〜Ｒ−７５０；Ｒ−６４７〜Ｒ−７５０；Ｖ−６４８〜Ｒ
−７５０；Ｔ−６４９〜Ｒ−７５０；Ｉ−６５０〜Ｒ−７５０；Ｃ−６５１〜Ｒ
−７５０；Ｋ−６５２〜Ｒ−７５０；Ｔ−６５３〜Ｒ−７５０；Ｉ−６５４〜Ｒ
−７５０；Ｄ−６５５〜Ｒ−７５０；Ｆ−６５６〜Ｒ−７５０；Ｗ−６５７〜Ｒ
−７５０；Ｌ−６５８〜Ｒ−７５０；Ｋ−６５９〜Ｒ−７５０；Ｖ−６６０〜Ｒ
−７５０；Ｇ−６６１〜Ｒ−７５０；Ｉ−６６２〜Ｒ−７５０；Ｓ−６６３〜Ｒ
−７５０；Ａ−６６４〜Ｒ−７５０；Ｇ−６６５〜Ｒ−７５０；Ｔ−６６６〜Ｒ
−７５０；Ｃ−６６７〜Ｒ−７５０；Ｔ−６６８〜Ｒ−７５０；Ａ−６６９〜Ｒ
−７５０；Ｉ−６７０〜Ｒ−７５０；Ｌ−６７１〜Ｒ−７５０；Ｌ−６７２〜Ｒ
−７５０；Ｔ−６７３〜Ｒ−７５０；Ｖ−６７４〜Ｒ−７５０；Ｌ−６７５〜Ｒ
−７５０；Ｔ−６７６〜Ｒ−７５０；Ｃ−６７７〜Ｒ−７５０；Ｙ−６７８〜Ｒ
−７５０；Ｆ−６７９〜Ｒ−７５０；Ｗ−６８０〜Ｒ−７５０；Ｋ−６８１〜Ｒ
−７５０；Ｋ−６８２〜Ｒ−７５０；Ｎ−６８３〜Ｒ−７５０；Ｑ−６８４〜Ｒ
−７５０；Ｋ−６８５〜Ｒ−７５０；Ｌ−６８６〜Ｒ−７５０；Ｅ−６８７〜Ｒ
−７５０；Ｙ−６８８〜Ｒ−７５０；Ｋ−６８９〜Ｒ−７５０；Ｙ−６９０〜Ｒ
−７５０；Ｓ−６９１〜Ｒ−７５０；Ｋ−６９２〜Ｒ−７５０；Ｌ−６９３〜Ｒ
−７５０；Ｖ−６９４〜Ｒ−７５０；Ｍ−６９５〜Ｒ−７５０；Ｎ−６９６〜Ｒ
−７５０；Ａ−６９７〜Ｒ−７５０；Ｔ−６９８〜Ｒ−７５０；Ｌ−６９９〜Ｒ
−７５０；Ｋ−７００〜Ｒ−７５０；Ｄ−７０１〜Ｒ−７５０；Ｃ−７０２〜Ｒ
−７５０；Ｄ−７０３〜Ｒ−７５０；Ｌ−７０４〜Ｒ−７５０；Ｐ−７０５〜Ｒ
−７５０；Ａ−７０６〜Ｒ−７５０；Ａ−７０７〜Ｒ−７５０；Ｄ−７０８〜Ｒ
−７５０；Ｓ−７０９〜Ｒ−７５０；Ｃ−７１０〜Ｒ−７５０；Ａ−７１１〜Ｒ
−７５０；Ｉ−７１２〜Ｒ−７５０；Ｍ−７１３〜Ｒ−７５０；Ｅ−７１４〜Ｒ
−７５０；Ｇ−７１５〜Ｒ−７５０；Ｅ−７１６〜Ｒ−７５０；Ｄ−７１７〜Ｒ
−７５０；Ｖ−７１８〜Ｒ−７５０；Ｅ−７１９〜Ｒ−７５０；Ｄ−７２０〜Ｒ
−７５０；Ｄ−７２１〜Ｒ−７５０；Ｌ−７２２〜Ｒ−７５０；Ｉ−７２３〜Ｒ
−７５０；Ｆ−７２４〜Ｒ−７５０；Ｔ−７２５〜Ｒ−７５０；Ｓ−７２６〜Ｒ
−７５０；Ｋ−７２７〜Ｒ−７５０；Ｎ−７２８〜Ｒ−７５０；Ｈ−７２９〜Ｒ
−７５０；Ｓ−７３０〜Ｒ−７５０；Ｌ−７３１〜Ｒ−７５０；Ｇ−７３２〜Ｒ
−７５０；Ｒ−７３３〜Ｒ−７５０；Ｓ−７３４〜Ｒ−７５０；Ｎ−７３５〜Ｒ
−７５０；Ｈ−７３６〜Ｒ−７５０；Ｌ−７３７〜Ｒ−７５０；Ｐ−７３８〜Ｒ
−７５０；Ｐ−７３９〜Ｒ−７５０；Ｒ−７４０〜Ｒ−７５０；Ｇ−７４１〜Ｒ
−７５０；Ｌ−７４２〜Ｒ−７５０；Ｌ−７４３〜Ｒ−７５０；Ｍ−７４４〜Ｒ
−７５０；Ｄ−７４５〜Ｒ−７５０。これらのポリぺプチドをコードするポリヌ
クレオチドもまた本発明により包含される。
【０２２５】 従って、本発明は、さらに、図７Ａ−Ｄに示されるＴＲ１３アミノ酸配列のア
ミノ酸末端から、９９６位のアスパラギン酸残基までで１つ以上の残基が欠失さ
れたポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドを提供する。詳細には、本発明は、図７Ａ−Ｄの残基ｎ1−１００１のアミノ
酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを提供する（ここで、ｎ1
は、図７Ａ−Ｃのアミノ酸残基の位置に対応する、２〜９０６の範囲の整数であ
る（図７Ａ−Ｄのアミノ酸残基は配列番号４０に示される配列と同一である））
。特定の実施形態において、本発明は、図７Ａ〜Ｄの残基ｎ1−９０６のアミノ
酸を含むか、またあるいは図７Ａ〜Ｄの残基ｎ1−９９６のアミノ酸からなるポ
リぺプチドを提供する（ここでｎ1は、図７Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基の位置
に対応する４２〜５９５の整数である）。これらのポリぺプチドをコードするポ
リヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２２６】 別の実施形態では、ＴＲ１３ポリペプチドのＮ末端欠失は、一般式ｎ2−１０
０１により記載され得る（ここで、ｎ2は、図７Ａ−Ｄ（配列番号４０）に同定
されるのアミノ酸残基の位置に対応する、２〜９９６の数である）。配列番号４
０に示される本発明のＴＲ１３ポリペプチドのＮ末端欠失は、以下の残基のアミ
ノ酸配列を含むか、またあるいは以下の残基のアミノ酸配列からなるポリペプチ
ドを含む：配列番号４０のＡ−２〜Ｒ−１００１；Ｅ−３〜Ｒ−１００１；Ｐ−
４〜Ｒ−１００１；Ｇ−５〜Ｒ−１００１；Ｈ−６〜Ｒ−１００１；Ｓ−７〜Ｒ
−１００１；Ｈ−８〜Ｒ−１００１；Ｈ−９〜Ｒ−１００１；Ｌ−１０〜Ｒ−１
００１；Ｓ−１１〜Ｒ−１００１；Ａ−１２〜Ｒ−１００１；Ｒ−１３〜Ｒ−１
００１；Ｖ−１４〜Ｒ−１００１；Ｒ−１５〜Ｒ−１００１；Ｇ−１６〜Ｒ−１
００１；Ｒ−１７〜Ｒ−１００１；Ｔ−１８〜Ｒ−１００１；Ｅ−１９〜Ｒ−１
００１；Ｒ−２０〜Ｒ−１００１；Ｒ−２１〜Ｒ−１００１；Ｉ−２２〜Ｒ−１
００１；Ｐ−２３〜Ｒ−１００１；Ｒ−２４〜Ｒ−１００１；Ｌ−２５〜Ｒ−１
００１；Ｗ−２６〜Ｒ−１００１；Ｒ−２７〜Ｒ−１００１；Ｌ−２８〜Ｒ−１
００１；Ｌ−２９〜Ｒ−１００１；Ｌ−３０〜Ｒ−１００１；Ｗ−３１〜Ｒ−１
００１；Ａ−３２〜Ｒ−１００１；Ｇ−３３〜Ｒ−１００１；Ｔ−３４〜Ｒ−１
００１；Ａ−３５〜Ｒ−１００１；Ｆ−３６〜Ｒ−１００１；Ｑ−３７〜Ｒ−１
００１；Ｖ−３８〜Ｒ−１００１；Ｔ−３９〜Ｒ−１００１；Ｑ−４０〜Ｒ−１
００１；Ｇ−４１〜Ｒ−１００１；Ｔ−４２〜Ｒ−１００１；Ｇ−４３〜Ｒ−１
００１；Ｐ−４４〜Ｒ−１００１；Ｅ−４５〜Ｒ−１００１；Ｌ−４６〜Ｒ−１
００１；Ｈ−４７〜Ｒ−１００１；Ａ−４８〜Ｒ−１００１；Ｃ−４９〜Ｒ−１
００１；Ｋ−５０〜Ｒ−１００１；Ｅ−５１〜Ｒ−１００１；Ｓ−５２〜Ｒ−１
００１；Ｅ−５３〜Ｒ−１００１；Ｙ−５４〜Ｒ−１００１；Ｈ−５５〜Ｒ−１
００１；Ｙ−５６〜Ｒ−１００１；Ｅ−５７〜Ｒ−１００１；Ｙ−５８〜Ｒ−１
００１；Ｔ−５９〜Ｒ−１００１；Ａ−６０〜Ｒ−１００１；Ｃ−６１〜Ｒ−１
００１；Ｄ−６２〜Ｒ−１００１；Ｓ−６３〜Ｒ−１００１；Ｔ−６４〜Ｒ−１
００１；Ｇ−６５〜Ｒ−１００１；Ｓ−６６〜Ｒ−１００１；Ｒ−６７〜Ｒ−１
００１；Ｗ−６８〜Ｒ−１００１；Ｒ−６９〜Ｒ−１００１；Ｖ−７０〜Ｒ−１
００１；Ａ−７１〜Ｒ−１００１；Ｖ−７２〜Ｒ−１００１；Ｐ−７３〜Ｒ−１
００１；Ｈ−７４〜Ｒ−１００１；Ｔ−７５〜Ｒ−１００１；Ｐ−７６〜Ｒ−１
００１；Ｇ−７７〜Ｒ−１００１；Ｌ−７８〜Ｒ−１００１；Ｃ−７９〜Ｒ−１
００１；Ｔ−８０〜Ｒ−１００１；Ｓ−８１〜Ｒ−１００１；Ｌ−８２〜Ｒ−１
００１；Ｐ−８３〜Ｒ−１００１；Ｄ−８４〜Ｒ−１００１；Ｐ−８５〜Ｒ−１
００１；Ｖ−８６〜Ｒ−１００１；Ｋ−８７〜Ｒ−１００１；Ｇ−８８〜Ｒ−１
００１；Ｔ−８９〜Ｒ−１００１；Ｅ−９０〜Ｒ−１００１；Ｃ−９１〜Ｒ−１
００１；Ｓ−９２〜Ｒ−１００１；Ｆ−９３〜Ｒ−１００１；Ｓ−９４〜Ｒ−１
００１；Ｃ−９５〜Ｒ−１００１；Ｎ−９６〜Ｒ−１００１；Ａ−９７〜Ｒ−１
００１；Ｇ−９８〜Ｒ−１００１；Ｅ−９９〜Ｒ−１００１；Ｆ−１００〜Ｒ−
１００１；Ｌ−１０１〜Ｒ−１００１；Ｄ−１０２〜Ｒ−１００１；Ｍ−１０３
〜Ｒ−１００１；Ｋ−１０４〜Ｒ−１００１；Ｄ−１０５〜Ｒ−１００１；Ｑ−
１０６〜Ｒ−１００１；Ｓ−１０７〜Ｒ−１００１；Ｃ−１０８〜Ｒ−１００１
；Ｋ−１０９〜Ｒ−１００１；Ｐ−１１０〜Ｒ−１００１；Ｃ−１１１〜Ｒ−１
００１；Ａ−１１２〜Ｒ−１００１；Ｅ−１１３〜Ｒ−１００１；Ｇ−１１４〜
Ｒ−１００１；Ｒ−１１５〜Ｒ−１００１；Ｙ−１１６〜Ｒ−１００１；Ｓ−１
１７〜Ｒ−１００１；Ｌ−１１８〜Ｒ−１００１；Ｇ−１１９〜Ｒ−１００１；
Ｔ−１２０〜Ｒ−１００１；Ｇ−１２１〜Ｒ−１００１；Ｉ−１２２〜Ｒ−１０
０１；Ｒ−１２３〜Ｒ−１００１；Ｆ−１２４〜Ｒ−１００１；Ｄ−１２５〜Ｒ
−１００１；Ｅ−１２６〜Ｒ−１００１；Ｗ−１２７〜Ｒ−１００１；Ｄ−１２
８〜Ｒ−１００１；Ｅ−１２９〜Ｒ−１００１；Ｌ−１３０〜Ｒ−１００１；Ｐ
−１３１〜Ｒ−１００１；Ｈ−１３２〜Ｒ−１００１；Ｇ−１３３〜Ｒ−１００
１；Ｆ−１３４〜Ｒ−１００１；Ａ−１３５〜Ｒ−１００１；Ｓ−１３６〜Ｒ−
１００１；Ｌ−１３７〜Ｒ−１００１；Ｓ−１３８〜Ｒ−１００１；Ａ−１３９
〜Ｒ−１００１；Ｎ−１４０〜Ｒ−１００１；Ｍ−１４１〜Ｒ−１００１；Ｅ−
１４２〜Ｒ−１００１；Ｌ−１４３〜Ｒ−１００１；Ｄ−１４４〜Ｒ−１００１
；Ｄ−１４５〜Ｒ−１００１；Ｓ−１４６〜Ｒ−１００１；Ａ−１４７〜Ｒ−１
００１；Ａ−１４８〜Ｒ−１００１；Ｅ−１４９〜Ｒ−１００１；Ｓ−１５０〜
Ｒ−１００１；Ｔ−１５１〜Ｒ−１００１；Ｇ−１５２〜Ｒ−１００１；Ｎ−１
５３〜Ｒ−１００１；Ｃ−１５４〜Ｒ−１００１；Ｔ−１５５〜Ｒ−１００１；
Ｓ−１５６〜Ｒ−１００１；Ｓ−１５７〜Ｒ−１００１；Ｋ−１５８〜Ｒ−１０
０１；Ｗ−１５９〜Ｒ−１００１；Ｖ−１６０〜Ｒ−１００１；Ｐ−１６１〜Ｒ
−１００１；Ｒ−１６２〜Ｒ−１００１；Ｇ−１６３〜Ｒ−１００１；Ｄ−１６
４〜Ｒ−１００１；Ｙ−１６５〜Ｒ−１００１；Ｉ−１６６〜Ｒ−１００１；Ａ
−１６７〜Ｒ−１００１；Ｆ−１６８〜Ｒ−１００１；Ｎ−１６９〜Ｒ−１００
１；Ｔ−１７０〜Ｒ−１００１；Ｄ−１７１〜Ｒ−１００１；Ｅ−１７２〜Ｒ−
１００１；Ｃ−１７３〜Ｒ−１００１；Ｔ−１７４〜Ｒ−１００１；Ａ−１７５
〜Ｒ−１００１；Ｔ−１７６〜Ｒ−１００１；Ｌ−１７７〜Ｒ−１００１；Ｍ−
１７８〜Ｒ−１００１；Ｙ−１７９〜Ｒ−１００１；Ａ−１８０〜Ｒ−１００１
；Ｖ−１８１〜Ｒ−１００１；Ｎ−１８２〜Ｒ−１００１；Ｌ−１８３〜Ｒ−１
００１；Ｋ−１８４〜Ｒ−１００１；Ｑ−１８５〜Ｒ−１００１；Ｓ−１８６〜
Ｒ−１００１；Ｇ−１８７〜Ｒ−１００１；Ｔ−１８８〜Ｒ−１００１；Ｖ−１
８９〜Ｒ−１００１；Ｎ−１９０〜Ｒ−１００１；Ｆ−１９１〜Ｒ−１００１；
Ｅ−１９２〜Ｒ−１００１；Ｙ−１９３〜Ｒ−１００１；Ｙ−１９４〜Ｒ−１０
０１；Ｙ−１９５〜Ｒ−１００１；Ｐ−１９６〜Ｒ−１００１；Ｄ−１９７〜Ｒ
−１００１；Ｓ−１９８〜Ｒ−１００１；Ｓ−１９９〜Ｒ−１００１；Ｉ−２０
０〜Ｒ−１００１；Ｉ−２０１〜Ｒ−１００１；Ｆ−２０２〜Ｒ−１００１；Ｅ
−２０３〜Ｒ−１００１；Ｆ−２０４〜Ｒ−１００１；Ｆ−２０５〜Ｒ−１００
１；Ｖ−２０６〜Ｒ−１００１；Ｑ−２０７〜Ｒ−１００１；Ｎ−２０８〜Ｒ−
１００１；Ｄ−２０９〜Ｒ−１００１；Ｑ−２１０〜Ｒ−１００１；Ｃ−２１１
〜Ｒ−１００１；Ｑ−２１２〜Ｒ−１００１；Ｐ−２１３〜Ｒ−１００１；Ｎ−
２１４〜Ｒ−１００１；Ａ−２１５〜Ｒ−１００１；Ｄ−２１６〜Ｒ−１００１
；Ｄ−２１７〜Ｒ−１００１；Ｓ−２１８〜Ｒ−１００１；Ｒ−２１９〜Ｒ−１
００１；Ｗ−２２０〜Ｒ−１００１；Ｍ−２２１〜Ｒ−１００１；Ｋ−２２２〜
Ｒ−１００１；Ｔ−２２３〜Ｒ−１００１；Ｔ−２２４〜Ｒ−１００１；Ｅ−２
２５〜Ｒ−１００１；Ｋ−２２６〜Ｒ−１００１；Ｇ−２２７〜Ｒ−１００１；
Ｗ−２２８〜Ｒ−１００１；Ｅ−２２９〜Ｒ−１００１；Ｆ−２３０〜Ｒ−１０
０１；Ｈ−２３１〜Ｒ−１００１；Ｓ−２３２〜Ｒ−１００１；Ｖ−２３３〜Ｒ
−１００１；Ｅ−２３４〜Ｒ−１００１；Ｌ−２３５〜Ｒ−１００１；Ｎ−２３
６〜Ｒ−１００１；Ｒ−２３７〜Ｒ−１００１；Ｇ−２３８〜Ｒ−１００１；Ｎ
−２３９〜Ｒ−１００１；Ｎ−２４０〜Ｒ−１００１；Ｖ−２４１〜Ｒ−１００
１；Ｌ−２４２〜Ｒ−１００１；Ｙ−２４３〜Ｒ−１００１；Ｗ−２４４〜Ｒ−
１００１；Ｒ−２４５〜Ｒ−１００１；Ｔ−２４６〜Ｒ−１００１；Ｔ−２４７
〜Ｒ−１００１；Ａ−２４８〜Ｒ−１００１；Ｆ−２４９〜Ｒ−１００１；Ｓ−
２５０〜Ｒ−１００１；Ｖ−２５１〜Ｒ−１００１；Ｗ−２５２〜Ｒ−１００１
；Ｔ−２５３〜Ｒ−１００１；Ｋ−２５４〜Ｒ−１００１；Ｖ−２５５〜Ｒ−１
００１；Ｐ−２５６〜Ｒ−１００１；Ｋ−２５７〜Ｒ−１００１；Ｐ−２５８〜
Ｒ−１００１；Ｖ−２５９〜Ｒ−１００１；Ｌ−２６０〜Ｒ−１００１；Ｖ−２
６１〜Ｒ−１００１；Ｒ−２６２〜Ｒ−１００１；Ｎ−２６３〜Ｒ−１００１；
Ｉ−２６４〜Ｒ−１００１；Ａ−２６５〜Ｒ−１００１；Ｉ−２６６〜Ｒ−１０
０１；Ｔ−２６７〜Ｒ−１００１；Ｇ−２６８〜Ｒ−１００１；Ｖ−２６９〜Ｒ
−１００１；Ａ−２７０〜Ｒ−１００１；Ｙ−２７１〜Ｒ−１００１；Ｔ−２７
２〜Ｒ−１００１；Ｓ−２７３〜Ｒ−１００１；Ｅ−２７４〜Ｒ−１００１；Ｃ
−２７５〜Ｒ−１００１；Ｆ−２７６〜Ｒ−１００１；Ｐ−２７７〜Ｒ−１００
１；Ｃ−２７８〜Ｒ−１００１；Ｋ−２７９〜Ｒ−１００１；Ｐ−２８０〜Ｒ−
１００１；Ｇ−２８１〜Ｒ−１００１；Ｔ−２８２〜Ｒ−１００１；Ｙ−２８３
〜Ｒ−１００１；Ａ−２８４〜Ｒ−１００１；Ｄ−２８５〜Ｒ−１００１；Ｋ−
２８６〜Ｒ−１００１；Ｑ−２８７〜Ｒ−１００１；Ｇ−２８８〜Ｒ−１００１
；Ｓ−２８９〜Ｒ−１００１；Ｓ−２９０〜Ｒ−１００１；Ｆ−２９１〜Ｒ−１
００１；Ｃ−２９２〜Ｒ−１００１；Ｋ−２９３〜Ｒ−１００１；Ｌ−２９４〜
Ｒ−１００１；Ｃ−２９５〜Ｒ−１００１；Ｐ−２９６〜Ｒ−１００１；Ａ−２
９７〜Ｒ−１００１；Ｎ−２９８〜Ｒ−１００１；Ｓ−２９９〜Ｒ−１００１；
Ｙ−３００〜Ｒ−１００１；Ｓ−３０１〜Ｒ−１００１；Ｎ−３０２〜Ｒ−１０
０１；Ｋ−３０３〜Ｒ−１００１；Ｇ−３０４〜Ｒ−１００１；Ｅ−３０５〜Ｒ
−１００１；Ｔ−３０６〜Ｒ−１００１；Ｓ−３０７〜Ｒ−１００１；Ｃ−３０
８〜Ｒ−１００１；Ｈ−３０９〜Ｒ−１００１；Ｑ−３１０〜Ｒ−１００１；Ｃ
−３１１〜Ｒ−１００１；Ｄ−３１２〜Ｒ−１００１；Ｐ−３１３〜Ｒ−１００
１；Ｄ−３１４〜Ｒ−１００１；Ｋ−３１５〜Ｒ−１００１；Ｙ−３１６〜Ｒ−
１００１；Ｓ−３１７〜Ｒ−１００１；Ｅ−３１８〜Ｒ−１００１；Ｋ−３１９
〜Ｒ−１００１；Ｇ−３２０〜Ｒ−１００１；Ｓ−３２１〜Ｒ−１００１；Ｓ−
３２２〜Ｒ−１００１；Ｓ−３２３〜Ｒ−１００１；Ｃ−３２４〜Ｒ−１００１
；Ｎ−３２５〜Ｒ−１００１；Ｖ−３２６〜Ｒ−１００１；Ｒ−３２７〜Ｒ−１
００１；Ｐ−３２８〜Ｒ−１００１；Ａ−３２９〜Ｒ−１００１；Ｃ−３３０〜
Ｒ−１００１；Ｔ−３３１〜Ｒ−１００１；Ｄ−３３２〜Ｒ−１００１；Ｋ−３
３３〜Ｒ−１００１；Ｄ−３３４〜Ｒ−１００１；Ｙ−３３５〜Ｒ−１００１；
Ｆ−３３６〜Ｒ−１００１；Ｙ−３３７〜Ｒ−１００１；Ｔ−３３８〜Ｒ−１０
０１；Ｈ−３３９〜Ｒ−１００１；Ｔ−３４０〜Ｒ−１００１；Ａ−３４１〜Ｒ
−１００１；Ｃ−３４２〜Ｒ−１００１；Ｄ−３４３〜Ｒ−１００１；Ａ−３４
４〜Ｒ−１００１；Ｎ−３４５〜Ｒ−１００１；Ｇ−３４６〜Ｒ−１００１；Ｅ
−３４７〜Ｒ−１００１；Ｔ−３４８〜Ｒ−１００１；Ｑ−３４９〜Ｒ−１００
１；Ｌ−３５０〜Ｒ−１００１；Ｍ−３５１〜Ｒ−１００１；Ｙ−３５２〜Ｒ−
１００１；Ｋ−３５３〜Ｒ−１００１；Ｗ−３５４〜Ｒ−１００１；Ａ−３５５
〜Ｒ−１００１；Ｋ−３５６〜Ｒ−１００１；Ｐ−３５７〜Ｒ−１００１；Ｋ−
３５８〜Ｒ−１００１；Ｉ−３５９〜Ｒ−１００１；Ｃ−３６０〜Ｒ−１００１
；Ｓ−３６１〜Ｒ−１００１；Ｅ−３６２〜Ｒ−１００１；Ｄ−３６３〜Ｒ−１
００１；Ｌ−３６４〜Ｒ−１００１；Ｅ−３６５〜Ｒ−１００１；Ｇ−３６６〜
Ｒ−１００１；Ａ−３６７〜Ｒ−１００１；Ｖ−３６８〜Ｒ−１００１；Ｋ−３
６９〜Ｒ−１００１；Ｌ−３７０〜Ｒ−１００１；Ｐ−３７１〜Ｒ−１００１；
Ａ−３７２〜Ｒ−１００１；Ｓ−３７３〜Ｒ−１００１；Ｇ−３７４〜Ｒ−１０
０１；Ｖ−３７５〜Ｒ−１００１；Ｋ−３７６〜Ｒ−１００１；Ｔ−３７７〜Ｒ
−１００１；Ｈ−３７８〜Ｒ−１００１；Ｃ−３７９〜Ｒ−１００１；Ｐ−３８
０〜Ｒ−１００１；Ｐ−３８１〜Ｒ−１００１；Ｃ−３８２〜Ｒ−１００１；Ｎ
−３８３〜Ｒ−１００１；Ｐ−３８４〜Ｒ−１００１；Ｇ−３８５〜Ｒ−１００
１；Ｆ−３８６〜Ｒ−１００１；Ｆ−３８７〜Ｒ−１００１；Ｋ−３８８〜Ｒ−
１００１；Ｔ−３８９〜Ｒ−１００１；Ｎ−３９０〜Ｒ−１００１；Ｎ−３９１
〜Ｒ−１００１；Ｓ−３９２〜Ｒ−１００１；Ｔ−３９３〜Ｒ−１００１；Ｃ−
３９４〜Ｒ−１００１；Ｑ−３９５〜Ｒ−１００１；Ｐ−３９６〜Ｒ−１００１
；Ｃ−３９７〜Ｒ−１００１；Ｐ−３９８〜Ｒ−１００１；Ｙ−３９９〜Ｒ−１
００１；Ｇ−４００〜Ｒ−１００１；Ｓ−４０１〜Ｒ−１００１；Ｙ−４０２〜
Ｒ−１００１；Ｓ−４０３〜Ｒ−１００１；Ｎ−４０４〜Ｒ−１００１；Ｇ−４
０５〜Ｒ−１００１；Ｓ−４０６〜Ｒ−１００１；Ｄ−４０７〜Ｒ−１００１；
Ｃ−４０８〜Ｒ−１００１；Ｔ−４０９〜Ｒ−１００１；Ｒ−４１０〜Ｒ−１０
０１；Ｃ−４１１〜Ｒ−１００１；Ｐ−４１２〜Ｒ−１００１；Ａ−４１３〜Ｒ
−１００１；Ｇ−４１４〜Ｒ−１００１；Ｔ−４１５〜Ｒ−１００１；Ｅ−４１
６〜Ｒ−１００１；Ｐ−４１７〜Ｒ−１００１；Ａ−４１８〜Ｒ−１００１；Ｖ
−４１９〜Ｒ−１００１；Ｇ−４２０〜Ｒ−１００１；Ｆ−４２１〜Ｒ−１００
１；Ｅ−４２２〜Ｒ−１００１；Ｙ−４２３〜Ｒ−１００１；Ｋ−４２４〜Ｒ−
１００１；Ｗ−４２５〜Ｒ−１００１；Ｗ−４２６〜Ｒ−１００１；Ｎ−４２７
〜Ｒ−１００１；Ｔ−４２８〜Ｒ−１００１；Ｌ−４２９〜Ｒ−１００１；Ｐ−
４３０〜Ｒ−１００１；Ｔ−４３１〜Ｒ−１００１；Ｎ−４３２〜Ｒ−１００１
；Ｍ−４３３〜Ｒ−１００１；Ｅ−４３４〜Ｒ−１００１；Ｔ−４３５〜Ｒ−１
００１；Ｔ−４３６〜Ｒ−１００１；Ｖ−４３７〜Ｒ−１００１；Ｌ−４３８〜
Ｒ−１００１；Ｓ−４３９〜Ｒ−１００１；Ｇ−４４０〜Ｒ−１００１；Ｉ−４
４１〜Ｒ−１００１；Ｎ−４４２〜Ｒ−１００１；Ｆ−４４３〜Ｒ−１００１；
Ｅ−４４４〜Ｒ−１００１；Ｙ−４４５〜Ｒ−１００１；Ｋ−４４６〜Ｒ−１０
０１；Ｇ−４４７〜Ｒ−１００１；Ｍ−４４８〜Ｒ−１００１；Ｔ−４４９〜Ｒ
−１００１；Ｇ−４５０〜Ｒ−１００１；Ｗ−４５１〜Ｒ−１００１；Ｅ−４５
２〜Ｒ−１００１；Ｖ−４５３〜Ｒ−１００１；Ａ−４５４〜Ｒ−１００１；Ｇ
−４５５〜Ｒ−１００１；Ｄ−４５６〜Ｒ−１００１；Ｈ−４５７〜Ｒ−１００
１；Ｉ−４５８〜Ｒ−１００１；Ｙ−４５９〜Ｒ−１００１；Ｔ−４６０〜Ｒ−
１００１；Ａ−４６１〜Ｒ−１００１；Ａ−４６２〜Ｒ−１００１；Ｇ−４６３
〜Ｒ−１００１；Ａ−４６４〜Ｒ−１００１；Ｓ−４６５〜Ｒ−１００１；Ｄ−
４６６〜Ｒ−１００１；Ｎ−４６７〜Ｒ−１００１；Ｄ−４６８〜Ｒ−１００１
；Ｆ−４６９〜Ｒ−１００１；Ｍ−４７０〜Ｒ−１００１；Ｉ−４７１〜Ｒ−１
００１；Ｌ−４７２〜Ｒ−１００１；Ｔ−４７３〜Ｒ−１００１；Ｌ−４７４〜
Ｒ−１００１；Ｖ−４７５〜Ｒ−１００１；Ｖ−４７６〜Ｒ−１００１；Ｐ−４
７７〜Ｒ−１００１；Ｇ−４７８〜Ｒ−１００１；Ｆ−４７９〜Ｒ−１００１；
Ｒ−４８０〜Ｒ−１００１；Ｐ−４８１〜Ｒ−１００１；Ｐ−４８２〜Ｒ−１０
０１；Ｑ−４８３〜Ｒ−１００１；Ｓ−４８４〜Ｒ−１００１；Ｖ−４８５〜Ｒ
−１００１；Ｍ−４８６〜Ｒ−１００１；Ａ−４８７〜Ｒ−１００１；Ｄ−４８
８〜Ｒ−１００１；Ｔ−４８９〜Ｒ−１００１；Ｅ−４９０〜Ｒ−１００１；Ｎ
−４９１〜Ｒ−１００１；Ｋ−４９２〜Ｒ−１００１；Ｅ−４９３〜Ｒ−１００
１；Ｖ−４９４〜Ｒ−１００１；Ａ−４９５〜Ｒ−１００１；Ｒ−４９６〜Ｒ−
１００１；Ｉ−４９７〜Ｒ−１００１；Ｔ−４９８〜Ｒ−１００１；Ｆ−４９９
〜Ｒ−１００１；Ｖ−５００〜Ｒ−１００１；Ｆ−５０１〜Ｒ−１００１；Ｅ−
５０２〜Ｒ−１００１；Ｔ−５０３〜Ｒ−１００１；Ｌ−５０４〜Ｒ−１００１
；Ｃ−５０５〜Ｒ−１００１；Ｓ−５０６〜Ｒ−１００１；Ｖ−５０７〜Ｒ−１
００１；Ｎ−５０８〜Ｒ−１００１；Ｃ−５０９〜Ｒ−１００１；Ｅ−５１０〜
Ｒ−１００１；Ｌ−５１１〜Ｒ−１００１；Ｙ−５１２〜Ｒ−１００１；Ｆ−５
１３〜Ｒ−１００１；Ｍ−５１４〜Ｒ−１００１；Ｖ−５１５〜Ｒ−１００１；
Ｇ−５１６〜Ｒ−１００１；Ｖ−５１７〜Ｒ−１００１；Ｎ−５１８〜Ｒ−１０
０１；Ｓ−５１９〜Ｒ−１００１；Ｒ−５２０〜Ｒ−１００１；Ｔ−５２１〜Ｒ
−１００１；Ｎ−５２２〜Ｒ−１００１；Ｔ−５２３〜Ｒ−１００１；Ｐ−５２
４〜Ｒ−１００１；Ｖ−５２５〜Ｒ−１００１；Ｅ−５２６〜Ｒ−１００１；Ｔ
−５２７〜Ｒ−１００１；Ｗ−５２８〜Ｒ−１００１；Ｋ−５２９〜Ｒ−１００
１；Ｇ−５３０〜Ｒ−１００１；Ｓ−５３１〜Ｒ−１００１；Ｋ−５３２〜Ｒ−
１００１；Ｇ−５３３〜Ｒ−１００１；Ｋ−５３４〜Ｒ−１００１；Ｑ−５３５
〜Ｒ−１００１；Ｓ−５３６〜Ｒ−１００１；Ｙ−５３７〜Ｒ−１００１；Ｔ−
５３８〜Ｒ−１００１；Ｙ−５３９〜Ｒ−１００１；Ｉ−５４０〜Ｒ−１００１
；Ｉ−５４１〜Ｒ−１００１；Ｅ−５４２〜Ｒ−１００１；Ｅ−５４３〜Ｒ−１
００１；Ｎ−５４４〜Ｒ−１００１；Ｔ−５４５〜Ｒ−１００１；Ｔ−５４６〜
Ｒ−１００１；Ｔ−５４７〜Ｒ−１００１；Ｓ−５４８〜Ｒ−１００１；Ｆ−５
４９〜Ｒ−１００１；Ｔ−５５０〜Ｒ−１００１；Ｗ−５５１〜Ｒ−１００１；
Ａ−５５２〜Ｒ−１００１；Ｆ−５５３〜Ｒ−１００１；Ｑ−５５４〜Ｒ−１０
０１；Ｒ−５５５〜Ｒ−１００１；Ｔ−５５６〜Ｒ−１００１；Ｔ−５５７〜Ｒ
−１００１；Ｆ−５５８〜Ｒ−１００１；Ｈ−５５９〜Ｒ−１００１；Ｅ−５６
０〜Ｒ−１００１；Ａ−５６１〜Ｒ−１００１；Ｓ−５６２〜Ｒ−１００１；Ｒ
−５６３〜Ｒ−１００１；Ｋ−５６４〜Ｒ−１００１；Ｙ−５６５〜Ｒ−１００
１；Ｔ−５６６〜Ｒ−１００１；Ｎ−５６７〜Ｒ−１００１；Ｄ−５６８〜Ｒ−
１００１；Ｖ−５６９〜Ｒ−１００１；Ａ−５７０〜Ｒ−１００１；Ｋ−５７１
〜Ｒ−１００１；Ｉ−５７２〜Ｒ−１００１；Ｙ−５７３〜Ｒ−１００１；Ｓ−
５７４〜Ｒ−１００１；Ｉ−５７５〜Ｒ−１００１；Ｎ−５７６〜Ｒ−１００１
；Ｖ−５７７〜Ｒ−１００１；Ｔ−５７８〜Ｒ−１００１；Ｎ−５７９〜Ｒ−１
００１；Ｖ−５８０〜Ｒ−１００１；Ｍ−５８１〜Ｒ−１００１；Ｎ−５８２〜
Ｒ−１００１；Ｇ−５８３〜Ｒ−１００１；Ｖ−５８４〜Ｒ−１００１；Ａ−５
８５〜Ｒ−１００１；Ｓ−５８６〜Ｒ−１００１；Ｙ−５８７〜Ｒ−１００１；
Ｃ−５８８〜Ｒ−１００１；Ｒ−５８９〜Ｒ−１００１；Ｐ−５９０〜Ｒ−１０
０１；Ｃ−５９１〜Ｒ−１００１；Ａ−５９２〜Ｒ−１００１；Ｌ−５９３〜Ｒ
−１００１；Ｅ−５９４〜Ｒ−１００１；Ａ−５９５〜Ｒ−１００１；Ｓ−５９
６〜Ｒ−１００１；Ｄ−５９７〜Ｒ−１００１；Ｖ−５９８〜Ｒ−１００１；Ｇ
−５９９〜Ｒ−１００１；Ｓ−６００〜Ｒ−１００１；Ｓ−６０１〜Ｒ−１００
１；Ｃ−６０２〜Ｒ−１００１；Ｔ−６０３〜Ｒ−１００１；Ｓ−６０４〜Ｒ−
１００１；Ｃ−６０５〜Ｒ−１００１；Ｐ−６０６〜Ｒ−１００１；Ａ−６０７
〜Ｒ−１００１；Ｇ−６０８〜Ｒ−１００１；Ｙ−６０９〜Ｒ−１００１；Ｙ−
６１０〜Ｒ−１００１；Ｉ−６１１〜Ｒ−１００１；Ｄ−６１２〜Ｒ−１００１
；Ｒ−６１３〜Ｒ−１００１；Ｄ−６１４〜Ｒ−１００１；Ｓ−６１５〜Ｒ−１
００１；Ｇ−６１６〜Ｒ−１００１；Ｔ−６１７〜Ｒ−１００１；Ｃ−６１８〜
Ｒ−１００１；Ｈ−６１９〜Ｒ−１００１；Ｓ−６２０〜Ｒ−１００１；Ｃ−６
２１〜Ｒ−１００１；Ｐ−６２２〜Ｒ−１００１；Ｐ−６２３〜Ｒ−１００１；
Ｎ−６２４〜Ｒ−１００１；Ｔ−６２５〜Ｒ−１００１；Ｉ−６２６〜Ｒ−１０
０１；Ｌ−６２７〜Ｒ−１００１；Ｋ−６２８〜Ｒ−１００１；Ａ−６２９〜Ｒ
−１００１；Ｈ−６３０〜Ｒ−１００１；Ｑ−６３１〜Ｒ−１００１；Ｐ−６３
２〜Ｒ−１００１；Ｙ−６３３〜Ｒ−１００１；Ｇ−６３４〜Ｒ−１００１；Ｖ
−６３５〜Ｒ−１００１；Ｑ−６３６〜Ｒ−１００１；Ａ−６３７〜Ｒ−１００
１；Ｃ−６３８〜Ｒ−１００１；Ｖ−６３９〜Ｒ−１００１；Ｐ−６４０〜Ｒ−
１００１；Ｃ−６４１〜Ｒ−１００１；Ｇ−６４２〜Ｒ−１００１；Ｐ−６４３
〜Ｒ−１００１；Ｇ−６４４〜Ｒ−１００１；Ｔ−６４５〜Ｒ−１００１；Ｋ−
６４６〜Ｒ−１００１；Ｎ−６４７〜Ｒ−１００１；Ｎ−６４８〜Ｒ−１００１
；Ｋ−６４９〜Ｒ−１００１；Ｉ−６５０〜Ｒ−１００１；Ｈ−６５１〜Ｒ−１
００１；Ｓ−６５２〜Ｒ−１００１；Ｌ−６５３〜Ｒ−１００１；Ｃ−６５４〜
Ｒ−１００１；Ｙ−６５５〜Ｒ−１００１；Ｎ−６５６〜Ｒ−１００１；Ｄ−６
５７〜Ｒ−１００１；Ｃ−６５８〜Ｒ−１００１；Ｔ−６５９〜Ｒ−１００１；
Ｆ−６６０〜Ｒ−１００１；Ｓ−６６１〜Ｒ−１００１；Ｒ−６６２〜Ｒ−１０
０１；Ｎ−６６３〜Ｒ−１００１；Ｔ−６６４〜Ｒ−１００１；Ｐ−６６５〜Ｒ
−１００１；Ｔ−６６６〜Ｒ−１００１；Ｒ−６６７〜Ｒ−１００１；Ｔ−６６
８〜Ｒ−１００１；Ｆ−６６９〜Ｒ−１００１；Ｎ−６７０〜Ｒ−１００１；Ｙ
−６７１〜Ｒ−１００１；Ｎ−６７２〜Ｒ−１００１；Ｆ−６７３〜Ｒ−１００
１；Ｓ−６７４〜Ｒ−１００１；Ａ−６７５〜Ｒ−１００１；Ｌ−６７６〜Ｒ−
１００１；Ａ−６７７〜Ｒ−１００１；Ｎ−６７８〜Ｒ−１００１；Ｔ−６７９
〜Ｒ−１００１；Ｖ−６８０〜Ｒ−１００１；Ｔ−６８１〜Ｒ−１００１；Ｌ−
６８２〜Ｒ−１００１；Ａ−６８３〜Ｒ−１００１；Ｇ−６８４〜Ｒ−１００１
；Ｇ−６８５〜Ｒ−１００１；Ｐ−６８６〜Ｒ−１００１；Ｓ−６８７〜Ｒ−１
００１；Ｆ−６８８〜Ｒ−１００１；Ｔ−６８９〜Ｒ−１００１；Ｓ−６９０〜
Ｒ−１００１；Ｋ−６９１〜Ｒ−１００１；Ｇ−６９２〜Ｒ−１００１；Ｌ−６
９３〜Ｒ−１００１；Ｋ−６９４〜Ｒ−１００１；Ｙ−６９５〜Ｒ−１００１；
Ｆ−６９６〜Ｒ−１００１；Ｈ−６９７〜Ｒ−１００１；Ｈ−６９８〜Ｒ−１０
０１；Ｆ−６９９〜Ｒ−１００１；Ｔ−７００〜Ｒ−１００１；Ｌ−７０１〜Ｒ
−１００１；Ｓ−７０２〜Ｒ−１００１；Ｌ−７０３〜Ｒ−１００１；Ｃ−７０
４〜Ｒ−１００１；Ｇ−７０５〜Ｒ−１００１；Ｎ−７０６〜Ｒ−１００１；Ｑ
−７０７〜Ｒ−１００１；Ｇ−７０８〜Ｒ−１００１；Ｒ−７０９〜Ｒ−１００
１；Ｋ−７１０〜Ｒ−１００１；Ｍ−７１１〜Ｒ−１００１；Ｓ−７１２〜Ｒ−
１００１；Ｖ−７１３〜Ｒ−１００１；Ｃ−７１４〜Ｒ−１００１；Ｔ−７１５
〜Ｒ−１００１；Ｄ−７１６〜Ｒ−１００１；Ｎ−７１７〜Ｒ−１００１；Ｖ−
７１８〜Ｒ−１００１；Ｔ−７１９〜Ｒ−１００１；Ｄ−７２０〜Ｒ−１００１
；Ｌ−７２１〜Ｒ−１００１；Ｒ−７２２〜Ｒ−１００１；Ｉ−７２３〜Ｒ−１
００１；Ｐ−７２４〜Ｒ−１００１；Ｅ−７２５〜Ｒ−１００１；Ｇ−７２６〜
Ｒ−１００１；Ｅ−７２７〜Ｒ−１００１；Ｓ−７２８〜Ｒ−１００１；Ｇ−７
２９〜Ｒ−１００１；Ｆ−７３０〜Ｒ−１００１；Ｓ−７３１〜Ｒ−１００１；
Ｋ−７３２〜Ｒ−１００１；Ｓ−７３３〜Ｒ−１００１；Ｉ−７３４〜Ｒ−１０
０１；Ｔ−７３５〜Ｒ−１００１；Ａ−７３６〜Ｒ−１００１；Ｙ−７３７〜Ｒ
−１００１；Ｖ−７３８〜Ｒ−１００１；Ｃ−７３９〜Ｒ−１００１；Ｑ−７４
０〜Ｒ−１００１；Ａ−７４１〜Ｒ−１００１；Ｖ−７４２〜Ｒ−１００１；Ｉ
−７４３〜Ｒ−１００１；Ｉ−７４４〜Ｒ−１００１；Ｐ−７４５〜Ｒ−１００
１；Ｐ−７４６〜Ｒ−１００１；Ｅ−７４７〜Ｒ−１００１；Ｖ−７４８〜Ｒ−
１００１；Ｔ−７４９〜Ｒ−１００１；Ｇ−７５０〜Ｒ−１００１；Ｙ−７５１
〜Ｒ−１００１；Ｋ−７５２〜Ｒ−１００１；Ａ−７５３〜Ｒ−１００１；Ｇ−
７５４〜Ｒ−１００１；Ｖ−７５５〜Ｒ−１００１；Ｓ−７５６〜Ｒ−１００１
；Ｓ−７５７〜Ｒ−１００１；Ｑ−７５８〜Ｒ−１００１；Ｐ−７５９〜Ｒ−１
００１；Ｖ−７６０〜Ｒ−１００１；Ｓ−７６１〜Ｒ−１００１；Ｌ−７６２〜
Ｒ−１００１；Ａ−７６３〜Ｒ−１００１；Ｄ−７６４〜Ｒ−１００１；Ｒ−７
６５〜Ｒ−１００１；Ｌ−７６６〜Ｒ−１００１；Ｉ−７６７〜Ｒ−１００１；
Ｇ−７６８〜Ｒ−１００１；Ｖ−７６９〜Ｒ−１００１；Ｔ−７７０〜Ｒ−１０
０１；Ｔ−７７１〜Ｒ−１００１；Ｄ−７７２〜Ｒ−１００１；Ｍ−７７３〜Ｒ
−１００１；Ｔ−７７４〜Ｒ−１００１；Ｌ−７７５〜Ｒ−１００１；Ｄ−７７
６〜Ｒ−１００１；Ｇ−７７７〜Ｒ−１００１；Ｉ−７７８〜Ｒ−１００１；Ｔ
−７７９〜Ｒ−１００１；Ｓ−７８０〜Ｒ−１００１；Ｐ−７８１〜Ｒ−１００
１；Ａ−７８２〜Ｒ−１００１；Ｅ−７８３〜Ｒ−１００１；Ｌ−７８４〜Ｒ−
１００１；Ｆ−７８５〜Ｒ−１００１；Ｈ−７８６〜Ｒ−１００１；Ｌ−７８７
〜Ｒ−１００１；Ｅ−７８８〜Ｒ−１００１；Ｓ−７８９〜Ｒ−１００１；Ｌ−
７９０〜Ｒ−１００１；Ｇ−７９１〜Ｒ−１００１；Ｉ−７９２〜Ｒ−１００１
；Ｐ−７９３〜Ｒ−１００１；Ｄ−７９４〜Ｒ−１００１；Ｖ−７９５〜Ｒ−１
００１；Ｉ−７９６〜Ｒ−１００１；Ｆ−７９７〜Ｒ−１００１；Ｆ−７９８〜
Ｒ−１００１；Ｙ−７９９〜Ｒ−１００１；Ｒ−８００〜Ｒ−１００１；Ｓ−８
０１〜Ｒ−１００１；Ｎ−８０２〜Ｒ−１００１；Ｄ−８０３〜Ｒ−１００１；
Ｖ−８０４〜Ｒ−１００１；Ｔ−８０５〜Ｒ−１００１；Ｑ−８０６〜Ｒ−１０
０１；Ｓ−８０７〜Ｒ−１００１；Ｃ−８０８〜Ｒ−１００１；Ｓ−８０９〜Ｒ
−１００１；Ｓ−８１０〜Ｒ−１００１；Ｇ−８１１〜Ｒ−１００１；Ｒ−８１
２〜Ｒ−１００１；Ｓ−８１３〜Ｒ−１００１；Ｔ−８１４〜Ｒ−１００１；Ｔ
−８１５〜Ｒ−１００１；Ｉ−８１６〜Ｒ−１００１；Ｒ−８１７〜Ｒ−１００
１；Ｖ−８１８〜Ｒ−１００１；Ｒ−８１９〜Ｒ−１００１；Ｃ−８２０〜Ｒ−
１００１；Ｓ−８２１〜Ｒ−１００１；Ｐ−８２２〜Ｒ−１００１；Ｑ−８２３
〜Ｒ−１００１；Ｋ−８２４〜Ｒ−１００１；Ｔ−８２５〜Ｒ−１００１；Ｖ−
８２６〜Ｒ−１００１；Ｐ−８２７〜Ｒ−１００１；Ｇ−８２８〜Ｒ−１００１
；Ｓ−８２９〜Ｒ−１００１；Ｌ−８３０〜Ｒ−１００１；Ｌ−８３１〜Ｒ−１
００１；Ｌ−８３２〜Ｒ−１００１；Ｐ−８３３〜Ｒ−１００１；Ｇ−８３４〜
Ｒ−１００１；Ｔ−８３５〜Ｒ−１００１；Ｃ−８３６〜Ｒ−１００１；Ｓ−８
３７〜Ｒ−１００１；Ｄ−８３８〜Ｒ−１００１；Ｇ−８３９〜Ｒ−１００１；
Ｔ−８４０〜Ｒ−１００１；Ｃ−８４１〜Ｒ−１００１；Ｄ−８４２〜Ｒ−１０
０１；Ｇ−８４３〜Ｒ−１００１；Ｃ−８４４〜Ｒ−１００１；Ｎ−８４５〜Ｒ
−１００１；Ｆ−８４６〜Ｒ−１００１；Ｈ−８４７〜Ｒ−１００１；Ｆ−８４
８〜Ｒ−１００１；Ｌ−８４９〜Ｒ−１００１；Ｗ−８５０〜Ｒ−１００１；Ｅ
−８５１〜Ｒ−１００１；Ｓ−８５２〜Ｒ−１００１；Ａ−８５３〜Ｒ−１００
１；Ａ−８５４〜Ｒ−１００１；Ａ−８５５〜Ｒ−１００１；Ｃ−８５６〜Ｒ−
１００１；Ｐ−８５７〜Ｒ−１００１；Ｌ−８５８〜Ｒ−１００１；Ｃ−８５９
〜Ｒ−１００１；Ｓ−８６０〜Ｒ−１００１；Ｖ−８６１〜Ｒ−１００１；Ａ−
８６２〜Ｒ−１００１；Ｄ−８６３〜Ｒ−１００１；Ｙ−８６４〜Ｒ−１００１
；Ｈ−８６５〜Ｒ−１００１；Ａ−８６６〜Ｒ−１００１；Ｉ−８６７〜Ｒ−１
００１；Ｖ−８６８〜Ｒ−１００１；Ｓ−８６９〜Ｒ−１００１；Ｓ−８７０〜
Ｒ−１００１；Ｃ−８７１〜Ｒ−１００１；Ｖ−８７２〜Ｒ−１００１；Ａ−８
７３〜Ｒ−１００１；Ｇ−８７４〜Ｒ−１００１；Ｉ−８７５〜Ｒ−１００１；
Ｑ−８７６〜Ｒ−１００１；Ｋ−８７７〜Ｒ−１００１；Ｔ−８７８〜Ｒ−１０
０１；Ｔ−８７９〜Ｒ−１００１；Ｙ−８８０〜Ｒ−１００１；Ｖ−８８１〜Ｒ
−１００１；Ｗ−８８２〜Ｒ−１００１；Ｒ−８８３〜Ｒ−１００１；Ｅ−８８
４〜Ｒ−１００１；Ｐ−８８５〜Ｒ−１００１；Ｋ−８８６〜Ｒ−１００１；Ｌ
−８８７〜Ｒ−１００１；Ｃ−８８８〜Ｒ−１００１；Ｓ−８８９〜Ｒ−１００
１；Ｇ−８９０〜Ｒ−１００１；Ｇ−８９１〜Ｒ−１００１；Ｉ−８９２〜Ｒ−
１００１；Ｓ−８９３〜Ｒ−１００１；Ｌ−８９４〜Ｒ−１００１；Ｐ−８９５
〜Ｒ−１００１；Ｅ−８９６〜Ｒ−１００１；Ｑ−８９７〜Ｒ−１００１；Ｒ−
８９８〜Ｒ−１００１；Ｖ−８９９〜Ｒ−１００１；Ｔ−９００〜Ｒ−１００１
；Ｉ−９０１〜Ｒ−１００１；Ｃ−９０２〜Ｒ−１００１；Ｋ−９０３〜Ｒ−１
００１；Ｔ−９０４〜Ｒ−１００１；Ｉ−９０５〜Ｒ−１００１；Ｄ−９０６〜
Ｒ−１００１；Ｆ−９０７〜Ｒ−１００１；Ｗ−９０８〜Ｒ−１００１；Ｌ−９
０９〜Ｒ−１００１；Ｋ−９１０〜Ｒ−１００１；Ｖ−９１１〜Ｒ−１００１；
Ｇ−９１２〜Ｒ−１００１；Ｉ−９１３〜Ｒ−１００１；Ｓ−９１４〜Ｒ−１０
０１；Ａ−９１５〜Ｒ−１００１；Ｇ−９１６〜Ｒ−１００１；Ｔ−９１７〜Ｒ
−１００１；Ｃ−９１８〜Ｒ−１００１；Ｔ−９１９〜Ｒ−１００１；Ａ−９２
０〜Ｒ−１００１；Ｉ−９２１〜Ｒ−１００１；Ｌ−９２２〜Ｒ−１００１；Ｌ
−９２３〜Ｒ−１００１；Ｔ−９２４〜Ｒ−１００１；Ｖ−９２５〜Ｒ−１００
１；Ｌ−９２６〜Ｒ−１００１；Ｔ−９２７〜Ｒ−１００１；Ｃ−９２８〜Ｒ−
１００１；Ｙ−９２９〜Ｒ−１００１；Ｆ−９３０〜Ｒ−１００１；Ｗ−９３１
〜Ｒ−１００１；Ｋ−９３２〜Ｒ−１００１；Ｋ−９３３〜Ｒ−１００１；Ｎ−
９３４〜Ｒ−１００１；Ｑ−９３５〜Ｒ−１００１；Ｋ−９３６〜Ｒ−１００１
；Ｌ−９３７〜Ｒ−１００１；Ｅ−９３８〜Ｒ−１００１；Ｙ−９３９〜Ｒ−１
００１；Ｋ−９４０〜Ｒ−１００１；Ｙ−９４１〜Ｒ−１００１；Ｓ−９４２〜
Ｒ−１００１；Ｋ−９４３〜Ｒ−１００１；Ｌ−９４４〜Ｒ−１００１；Ｖ−９
４５〜Ｒ−１００１；Ｍ−９４６〜Ｒ−１００１；Ｎ−９４７〜Ｒ−１００１；
Ａ−９４８〜Ｒ−１００１；Ｔ−９４９〜Ｒ−１００１；Ｌ−９５０〜Ｒ−１０
０１；Ｋ−９５１〜Ｒ−１００１；Ｄ−９５２〜Ｒ−１００１；Ｃ−９５３〜Ｒ
−１００１；Ｄ−９５４〜Ｒ−１００１；Ｌ−９５５〜Ｒ−１００１；Ｐ−９５
６〜Ｒ−１００１；Ａ−９５７〜Ｒ−１００１；Ａ−９５８〜Ｒ−１００１；Ｄ
−９５９〜Ｒ−１００１；Ｓ−９６０〜Ｒ−１００１；Ｃ−９６１〜Ｒ−１００
１；Ａ−９６２〜Ｒ−１００１；Ｉ−９６３〜Ｒ−１００１；Ｍ−９６４〜Ｒ−
１００１；Ｅ−９６５〜Ｒ−１００１；Ｇ−９６６〜Ｒ−１００１；Ｅ−９６７
〜Ｒ−１００１；Ｄ−９６８〜Ｒ−１００１；Ｖ−９６９〜Ｒ−１００１；Ｅ−
９７０〜Ｒ−１００１；Ｄ−９７１〜Ｒ−１００１；Ｄ−９７２〜Ｒ−１００１
；Ｌ−９７３〜Ｒ−１００１；Ｉ−９７４〜Ｒ−１００１；Ｆ−９７５〜Ｒ−１
００１；Ｔ−９７６〜Ｒ−１００１；Ｓ−９７７〜Ｒ−１００１；Ｋ−９７８〜
Ｒ−１００１；Ｎ−９７９〜Ｒ−１００１；Ｈ−９８０〜Ｒ−１００１；Ｓ−９
８１〜Ｒ−１００１；Ｌ−９８２〜Ｒ−１００１；Ｇ−９８３〜Ｒ−１００１；
Ｒ−９８４〜Ｒ−１００１；Ｓ−９８５〜Ｒ−１００１；Ｎ−９８６〜Ｒ−１０
０１；Ｈ−９８７〜Ｒ−１００１；Ｌ−９８８〜Ｒ−１００１；Ｐ−９８９〜Ｒ
−１００１；Ｐ−９９０〜Ｒ−１００１；Ｒ−９９１〜Ｒ−１００１；Ｇ−９９
２〜Ｒ−１００１；Ｌ−９９３〜Ｒ−１００１；Ｌ−９９４〜Ｒ−１００１；Ｍ
−９９５〜Ｒ−１００１；Ｄ−９９６〜Ｒ−１００１。これらのポリぺプチドを
コードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２２７】 また上述のように、タンパク質のＣ末端由来の１つ以上のアミノ酸の欠失が、
タンパク質の１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じる場合でさえ、他
の機能的活性（例えば、生物学的活性、多量体を形成する能力、ならびにＴＲ１
３リガンドに結合する能力）は、まだ保持される。例えば、短縮化ＴＲ１３ムテ
インの、ポリペプチドの完全形態または成熟形態を認識する抗体を誘導および／
または結合する能力は、完全ポリぺプチドまたは成熟ポリぺプチドの決して大多
数ではない残基が、Ｃ末端から除去される場合、一般に保持される。完全なポリ
ペプチドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドがそのような免疫学的活性を保
持し得るか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知
の他の方法により容易に決定され得る。多数のＣ末端アミノ酸残基が欠失された
ＴＲ１３ムテインは、いくつかの生物学的活性または免疫学的活性を保持し得る
ことが予想される。実際、６残基低度のＴＲ１３アミノ酸残基からなるペプチド
は、頻繁に、免疫応答を惹起し得る。
【０２２８】 従って、本発明は、さらに、図１Ａ−Ｃ（配列番号２）に示されるＴＲ１３ポ
リぺプチドアミノ酸配列のカルボキシ末端から、６位に存在するグルタミン残基
までで１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、およびこのようなポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、図１Ａ−Ｃ
の残基１−ｍ1のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを
提供する（ここで、ｍ1は、図１Ａ−Ｃのアミノ酸残基の位置に対応する、６〜
７４９の整数である）。
【０２２９】 さらに、本発明は、以下の残基のアミノ酸配列を含むか、またはそれらから構
成される、ＴＲ１３ポリペプチドを提供する：配列番号２のＱ−６〜Ｃ−７４９
；Ｑ−６〜Ｑ−７４８；Ｑ−６〜Ｔ−７４７；Ｑ−６〜Ｌ−７４６；Ｑ−６〜Ｄ
−７４５；Ｑ−６〜Ｍ−７４４；Ｑ−６〜Ｌ−７４３；Ｑ−６〜Ｌ−７４２；Ｑ
−６〜Ｇ−７４１；Ｑ−６〜Ｒ−７４０；Ｑ−６〜Ｐ−７３９；Ｑ−６〜Ｐ−７
３８；Ｑ−６〜Ｌ−７３７；Ｑ−６〜Ｈ−７３６；Ｑ−６〜Ｎ−７３５；Ｑ−６
〜Ｓ−７３４；Ｑ−６〜Ｒ−７３３；Ｑ−６〜Ｇ−７３２；Ｑ−６〜Ｌ−７３１
；Ｑ−６〜Ｓ−７３０；Ｑ−６〜Ｈ−７２９；Ｑ−６〜Ｎ−７２８；Ｑ−６〜Ｋ
−７２７；Ｑ−６〜Ｓ−７２６；Ｑ−６〜Ｔ−７２５；Ｑ−６〜Ｆ−７２４；Ｑ
−６〜Ｉ−７２３；Ｑ−６〜Ｌ−７２２；Ｑ−６〜Ｄ−７２１；Ｑ−６〜Ｄ−７
２０；Ｑ−６〜Ｅ−７１９；Ｑ−６〜Ｖ−７１８；Ｑ−６〜Ｄ−７１７；Ｑ−６
〜Ｅ−７１６；Ｑ−６〜Ｇ−７１５；Ｑ−６〜Ｅ−７１４；Ｑ−６〜Ｍ−７１３
；Ｑ−６〜Ｉ−７１２；Ｑ−６〜Ａ−７１１；Ｑ−６〜Ｃ−７１０；Ｑ−６〜Ｓ
−７０９；Ｑ−６〜Ｄ−７０８；Ｑ−６〜Ａ−７０７；Ｑ−６〜Ａ−７０６；Ｑ
−６〜Ｐ−７０５；Ｑ−６〜Ｌ−７０４；Ｑ−６〜Ｄ−７０３；Ｑ−６〜Ｃ−７
０２；Ｑ−６〜Ｄ−７０１；Ｑ−６〜Ｋ−７００；Ｑ−６〜Ｌ−６９９；Ｑ−６
〜Ｔ−６９８；Ｑ−６〜Ａ−６９７；Ｑ−６〜Ｎ−６９６；Ｑ−６〜Ｍ−６９５
；Ｑ−６〜Ｖ−６９４；Ｑ−６〜Ｌ−６９３；Ｑ−６〜Ｋ−６９２；Ｑ−６〜Ｓ
−６９１；Ｑ−６〜Ｙ−６９０；Ｑ−６〜Ｋ−６８９；Ｑ−６〜Ｙ−６８８；Ｑ
−６〜Ｅ−６８７；Ｑ−６〜Ｌ−６８６；Ｑ−６〜Ｋ−６８５；Ｑ−６〜Ｑ−６
８４；Ｑ−６〜Ｎ−６８３；Ｑ−６〜Ｋ−６８２；Ｑ−６〜Ｋ−６８１；Ｑ−６
〜Ｗ−６８０；Ｑ−６〜Ｆ−６７９；Ｑ−６〜Ｙ−６７８；Ｑ−６〜Ｃ−６７７
；Ｑ−６〜Ｔ−６７６；Ｑ−６〜Ｌ−６７５；Ｑ−６〜Ｖ−６７４；Ｑ−６〜Ｔ
−６７３；Ｑ−６〜Ｌ−６７２；Ｑ−６〜Ｌ−６７１；Ｑ−６〜Ｉ−６７０；Ｑ
−６〜Ａ−６６９；Ｑ−６〜Ｔ−６６８；Ｑ−６〜Ｃ−６６７；Ｑ−６〜Ｔ−６
６６；Ｑ−６〜Ｇ−６６５；Ｑ−６〜Ａ−６６４；Ｑ−６〜Ｓ−６６３；Ｑ−６
〜Ｉ−６６２；Ｑ−６〜Ｇ−６６１；Ｑ−６〜Ｖ−６６０；Ｑ−６〜Ｋ−６５９
；Ｑ−６〜Ｌ−６５８；Ｑ−６〜Ｗ−６５７；Ｑ−６〜Ｆ−６５６；Ｑ−６〜Ｄ
−６５５；Ｑ−６〜Ｉ−６５４；Ｑ−６〜Ｔ−６５３；Ｑ−６〜Ｋ−６５２；Ｑ
−６〜Ｃ−６５１；Ｑ−６〜Ｉ−６５０；Ｑ−６〜Ｔ−６４９；Ｑ−６〜Ｖ−６
４８；Ｑ−６〜Ｒ−６４７；Ｑ−６〜Ｑ−６４６；Ｑ−６〜Ｅ−６４５；Ｑ−６
〜Ｐ−６４４；Ｑ−６〜Ｌ−６４３；Ｑ−６〜Ｓ−６４２；Ｑ−６〜Ｉ−６４１
；Ｑ−６〜Ｇ−６４０；Ｑ−６〜Ｇ−６３９；Ｑ−６〜Ｓ−６３８；Ｑ−６〜Ｃ
−６３７；Ｑ−６〜Ｌ−６３６；Ｑ−６〜Ｋ−６３５；Ｑ−６〜Ｐ−６３４；Ｑ
−６〜Ｅ−６３３；Ｑ−６〜Ｒ−６３２；Ｑ−６〜Ｗ−６３１；Ｑ−６〜Ｖ−６
３０；Ｑ−６〜Ｙ−６２９；Ｑ−６〜Ｔ−６２８；Ｑ−６〜Ｔ−６２７；Ｑ−６
〜Ｋ−６２６；Ｑ−６〜Ｑ−６２５；Ｑ−６〜Ｉ−６２４；Ｑ−６〜Ｇ−６２３
；Ｑ−６〜Ａ−６２２；Ｑ−６〜Ｖ−６２１；Ｑ−６〜Ｃ−６２０；Ｑ−６〜Ｓ
−６１９；Ｑ−６〜Ｓ−６１８；Ｑ−６〜Ｖ−６１７；Ｑ−６〜Ｉ−６１６；Ｑ
−６〜Ａ−６１５；Ｑ−６〜Ｈ−６１４；Ｑ−６〜Ｙ−６１３；Ｑ−６〜Ｄ−６
１２；Ｑ−６〜Ａ−６１１；Ｑ−６〜Ｖ−６１０；Ｑ−６〜Ｓ−６０９；Ｑ−６
〜Ｃ−６０８；Ｑ−６〜Ｌ−６０７；Ｑ−６〜Ｐ−６０６；Ｑ−６〜Ｃ−６０５
；Ｑ−６〜Ａ−６０４；Ｑ−６〜Ａ−６０３；Ｑ−６〜Ａ−６０２；Ｑ−６〜Ｓ
−６０１；Ｑ−６〜Ｅ−６００；Ｑ−６〜Ｗ−５９９；Ｑ−６〜Ｌ−５９８；Ｑ
−６〜Ｆ−５９７；Ｑ−６〜Ｈ−５９６；Ｑ−６〜Ｆ−５９５；Ｑ−６〜Ｎ−５
９４；Ｑ−６〜Ｃ−５９３；Ｑ−６〜Ｇ−５９２；Ｑ−６〜Ｄ−５９１；Ｑ−６
〜Ｃ−５９０；Ｑ−６〜Ｔ−５８９；Ｑ−６〜Ｇ−５８８；Ｑ−６〜Ｄ−５８７
；Ｑ−６〜Ｓ−５８６；Ｑ−６〜Ｃ−５８５；Ｑ−６〜Ｔ−５８４；Ｑ−６〜Ｇ
−５８３；Ｑ−６〜Ｐ−５８２；Ｑ−６〜Ｌ−５８１；Ｑ−６〜Ｌ−５８０；Ｑ
−６〜Ｌ−５７９；Ｑ−６〜Ｓ−５７８；Ｑ−６〜Ｇ−５７７；Ｑ−６〜Ｐ−５
７６；Ｑ−６〜Ｖ−５７５；Ｑ−６〜Ｔ−５７４；Ｑ−６〜Ｋ−５７３；Ｑ−６
〜Ｑ−５７２；Ｑ−６〜Ｐ−５７１；Ｑ−６〜Ｓ−５７０；Ｑ−６〜Ｃ−５６９
；Ｑ−６〜Ｒ−５６８；Ｑ−６〜Ｖ−５６７；Ｑ−６〜Ｒ−５６６；Ｑ−６〜Ｉ
−５６５；Ｑ−６〜Ｔ−５６４；Ｑ−６〜Ｔ−５６３；Ｑ−６〜Ｓ−５６２；Ｑ
−６〜Ｒ−５６１；Ｑ−６〜Ｇ−５６０；Ｑ−６〜Ｓ−５５９；Ｑ−６〜Ｓ−５
５８；Ｑ−６〜Ｃ−５５７；Ｑ−６〜Ｓ−５５６；Ｑ−６〜Ｑ−５５５；Ｑ−６
〜Ｔ−５５４；Ｑ−６〜Ｖ−５５３；Ｑ−６〜Ｄ−５５２；Ｑ−６〜Ｎ−５５１
；Ｑ−６〜Ｓ−５５０；Ｑ−６〜Ｒ−５４９；Ｑ−６〜Ｙ−５４８；Ｑ−６〜Ｆ
−５４７；Ｑ−６〜Ｆ−５４６；Ｑ−６〜Ｉ−５４５；Ｑ−６〜Ｖ−５４４；Ｑ
−６〜Ｄ−５４３；Ｑ−６〜Ｐ−５４２；Ｑ−６〜Ｉ−５４１；Ｑ−６〜Ｇ−５
４０；Ｑ−６〜Ｌ−５３９；Ｑ−６〜Ｓ−５３８；Ｑ−６〜Ｅ−５３７；Ｑ−６
〜Ｌ−５３６；Ｑ−６〜Ｈ−５３５；Ｑ−６〜Ｆ−５３４；Ｑ−６〜Ｌ−５３３
；Ｑ−６〜Ｅ−５３２；Ｑ−６〜Ａ−５３１；Ｑ−６〜Ｐ−５３０；Ｑ−６〜Ｓ
−５２９；Ｑ−６〜Ｔ−５２８；Ｑ−６〜Ｉ−５２７；Ｑ−６〜Ｇ−５２６；Ｑ
−６〜Ｄ−５２５；Ｑ−６〜Ｌ−５２４；Ｑ−６〜Ｔ−５２３；Ｑ−６〜Ｍ−５
２２；Ｑ−６〜Ｄ−５２１；Ｑ−６〜Ｔ−５２０；Ｑ−６〜Ｔ−５１９；Ｑ−６
〜Ｖ−５１８；Ｑ−６〜Ｇ−５１７；Ｑ−６〜Ｉ−５１６；Ｑ−６〜Ｌ−５１５
；Ｑ−６〜Ｒ−５１４；Ｑ−６〜Ｄ−５１３；Ｑ−６〜Ａ−５１２；Ｑ−６〜Ｌ
−５１１；Ｑ−６〜Ｓ−５１０；Ｑ−６〜Ｖ−５０９；Ｑ−６〜Ｐ−５０８；Ｑ
−６〜Ｑ−５０７；Ｑ−６〜Ｓ−５０６；Ｑ−６〜Ｓ−５０５；Ｑ−６〜Ｖ−５
０４；Ｑ−６〜Ｇ−５０３；Ｑ−６〜Ａ−５０２；Ｑ−６〜Ｋ−５０１；Ｑ−６
〜Ｙ−５００；Ｑ−６〜Ｇ−４９９；Ｑ−６〜Ｔ−４９８；Ｑ−６〜Ｖ−４９７
；Ｑ−６〜Ｅ−４９６；Ｑ−６〜Ｐ−４９５；Ｑ−６〜Ｐ−４９４；Ｑ−６〜Ｉ
−４９３；Ｑ−６〜Ｉ−４９２；Ｑ−６〜Ｖ−４９１；Ｑ−６〜Ａ−４９０；Ｑ
−６〜Ｑ−４８９；Ｑ−６〜Ｃ−４８８；Ｑ−６〜Ｖ−４８７；Ｑ−６〜Ｙ−４
８６；Ｑ−６〜Ａ−４８５；Ｑ−６〜Ｔ−４８４；Ｑ−６〜Ｉ−４８３；Ｑ−６
〜Ｓ−４８２；Ｑ−６〜Ｋ−４８１；Ｑ−６〜Ｓ−４８０；Ｑ−６〜Ｆ−４７９
；Ｑ−６〜Ｇ−４７８；Ｑ−６〜Ｓ−４７７；Ｑ−６〜Ｅ−４７６；Ｑ−６〜Ｇ
−４７５；Ｑ−６〜Ｅ−４７４；Ｑ−６〜Ｐ−４７３；Ｑ−６〜Ｉ−４７２；Ｑ
−６〜Ｒ−４７１；Ｑ−６〜Ｌ−４７０；Ｑ−６〜Ｄ−４６９；Ｑ−６〜Ｔ−４
６８；Ｑ−６〜Ｖ−４６７；Ｑ−６〜Ｎ−４６６；Ｑ−６〜Ｄ−４６５；Ｑ−６
〜Ｔ−４６４；Ｑ−６〜Ｃ−４６３；Ｑ−６〜Ｖ−４６２；Ｑ−６〜Ｓ−４６１
；Ｑ−６〜Ｍ−４６０；Ｑ−６〜Ｋ−４５９；Ｑ−６〜Ｒ−４５８；Ｑ−６〜Ｇ
−４５７；Ｑ−６〜Ｑ−４５６；Ｑ−６〜Ｎ−４５５；Ｑ−６〜Ｇ−４５４；Ｑ
−６〜Ｃ−４５３；Ｑ−６〜Ｌ−４５２；Ｑ−６〜Ｓ−４５１；Ｑ−６〜Ｌ−４
５０；Ｑ−６〜Ｔ−４４９；Ｑ−６〜Ｆ−４４８；Ｑ−６〜Ｈ−４４７；Ｑ−６
〜Ｈ−４４６；Ｑ−６〜Ｆ−４４５；Ｑ−６〜Ｙ−４４４；Ｑ−６〜Ｋ−４４３
；Ｑ−６〜Ｌ−４４２；Ｑ−６〜Ｇ−４４１；Ｑ−６〜Ｋ−４４０；Ｑ−６〜Ｓ
−４３９；Ｑ−６〜Ｔ−４３８；Ｑ−６〜Ｆ−４３７；Ｑ−６〜Ｓ−４３６；Ｑ
−６〜Ｐ−４３５；Ｑ−６〜Ｇ−４３４；Ｑ−６〜Ｇ−４３３；Ｑ−６〜Ａ−４
３２；Ｑ−６〜Ｌ−４３１；Ｑ−６〜Ｔ−４３０；Ｑ−６〜Ｖ−４２９；Ｑ−６
〜Ｔ−４２８；Ｑ−６〜Ｎ−４２７；Ｑ−６〜Ａ−４２６；Ｑ−６〜Ｌ−４２５
；Ｑ−６〜Ａ−４２４；Ｑ−６〜Ｓ−４２３；Ｑ−６〜Ｆ−４２２；Ｑ−６〜Ｎ
−４２１；Ｑ−６〜Ｙ−４２０；Ｑ−６〜Ｎ−４１９；Ｑ−６〜Ｆ−４１８；Ｑ
−６〜Ｔ−４１７；Ｑ−６〜Ｒ−４１６；Ｑ−６〜Ｔ−４１５；Ｑ−６〜Ｐ−４
１４；Ｑ−６〜Ｔ−４１３；Ｑ−６〜Ｎ−４１２；Ｑ−６〜Ｒ−４１１；Ｑ−６
〜Ｓ−４１０；Ｑ−６〜Ｆ−４０９；Ｑ−６〜Ｔ−４０８；Ｑ−６〜Ｃ−４０７
；Ｑ−６〜Ｄ−４０６；Ｑ−６〜Ｎ−４０５；Ｑ−６〜Ｙ−４０４；Ｑ−６〜Ｃ
−４０３；Ｑ−６〜Ｌ−４０２；Ｑ−６〜Ｓ−４０１；Ｑ−６〜Ｈ−４００；Ｑ
−６〜Ｉ−３９９；Ｑ−６〜Ｋ−３９８；Ｑ−６〜Ｎ−３９７；Ｑ−６〜Ｎ−３
９６；Ｑ−６〜Ｋ−３９５；Ｑ−６〜Ｔ−３９４；Ｑ−６〜Ｇ−３９３；Ｑ−６
〜Ｐ−３９２；Ｑ−６〜Ｇ−３９１；Ｑ−６〜Ｃ−３９０；Ｑ−６〜Ｐ−３８９
；Ｑ−６〜Ｖ−３８８；Ｑ−６〜Ｃ−３８７；Ｑ−６〜Ａ−３８６；Ｑ−６〜Ｑ
−３８５；Ｑ−６〜Ｖ−３８４；Ｑ−６〜Ｇ−３８３；Ｑ−６〜Ｙ−３８２；Ｑ
−６〜Ｐ−３８１；Ｑ−６〜Ｑ−３８０；Ｑ−６〜Ｈ−３７９；Ｑ−６〜Ａ−３
７８；Ｑ−６〜Ｋ−３７７；Ｑ−６〜Ｌ−３７６；Ｑ−６〜Ｉ−３７５；Ｑ−６
〜Ｔ−３７４；Ｑ−６〜Ｎ−３７３；Ｑ−６〜Ｐ−３７２；Ｑ−６〜Ｐ−３７１
；Ｑ−６〜Ｃ−３７０；Ｑ−６〜Ｓ−３６９；Ｑ−６〜Ｈ−３６８；Ｑ−６〜Ｃ
−３６７；Ｑ−６〜Ｔ−３６６；Ｑ−６〜Ｇ−３６５；Ｑ−６〜Ｓ−３６４；Ｑ
−６〜Ｄ−３６３；Ｑ−６〜Ｒ−３６２；Ｑ−６〜Ｄ−３６１；Ｑ−６〜Ｉ−３
６０；Ｑ−６〜Ｙ−３５９；Ｑ−６〜Ｙ−３５８；Ｑ−６〜Ｇ−３５７；Ｑ−６
〜Ａ−３５６；Ｑ−６〜Ｐ−３５５；Ｑ−６〜Ｃ−３５４；Ｑ−６〜Ｓ−３５３
；Ｑ−６〜Ｔ−３５２；Ｑ−６〜Ｃ−３５１；Ｑ−６〜Ｓ−３５０；Ｑ−６〜Ｓ
−３４９；Ｑ−６〜Ｇ−３４８；Ｑ−６〜Ｖ−３４７；Ｑ−６〜Ｄ−３４６；Ｑ
−６〜Ｓ−３４５；Ｑ−６〜Ａ−３４４；Ｑ−６〜Ｅ−３４３；Ｑ−６〜Ｌ−３
４２；Ｑ−６〜Ａ−３４１；Ｑ−６〜Ｃ−３４０；Ｑ−６〜Ｐ−３３９；Ｑ−６
〜Ｒ−３３８；Ｑ−６〜Ｃ−３３７；Ｑ−６〜Ｙ−３３６；Ｑ−６〜Ｓ−３３５
；Ｑ−６〜Ａ−３３４；Ｑ−６〜Ｖ−３３３；Ｑ−６〜Ｇ−３３２；Ｑ−６〜Ｎ
−３３１；Ｑ−６〜Ｍ−３３０；Ｑ−６〜Ｖ−３２９；Ｑ−６〜Ｎ−３２８；Ｑ
−６〜Ｔ−３２７；Ｑ−６〜Ｖ−３２６；Ｑ−６〜Ｎ−３２５；Ｑ−６〜Ｉ−３
２４；Ｑ−６〜Ｓ−３２３；Ｑ−６〜Ｙ−３２２；Ｑ−６〜Ｉ−３２１；Ｑ−６
〜Ｋ−３２０；Ｑ−６〜Ａ−３１９；Ｑ−６〜Ｖ−３１８；Ｑ−６〜Ｄ−３１７
；Ｑ−６〜Ｎ−３１６；Ｑ−６〜Ｔ−３１５；Ｑ−６〜Ｙ−３１４；Ｑ−６〜Ｋ
−３１３；Ｑ−６〜Ｒ−３１２；Ｑ−６〜Ｓ−３１１；Ｑ−６〜Ａ−３１０；Ｑ
−６〜Ｅ−３０９；Ｑ−６〜Ｈ−３０８；Ｑ−６〜Ｆ−３０７；Ｑ−６〜Ｔ−３
０６；Ｑ−６〜Ｔ−３０５；Ｑ−６〜Ｒ−３０４；Ｑ−６〜Ｑ−３０３；Ｑ−６
〜Ｆ−３０２；Ｑ−６〜Ａ−３０１；Ｑ−６〜Ｗ−３００；Ｑ−６〜Ｔ−２９９
；Ｑ−６〜Ｆ−２９８；Ｑ−６〜Ｓ−２９７；Ｑ−６〜Ｔ−２９６；Ｑ−６〜Ｔ
−２９５；Ｑ−６〜Ｔ−２９４；Ｑ−６〜Ｎ−２９３；Ｑ−６〜Ｅ−２９２；Ｑ
−６〜Ｅ−２９１；Ｑ−６〜Ｉ−２９０；Ｑ−６〜Ｉ−２８９；Ｑ−６〜Ｙ−２
８８；Ｑ−６〜Ｔ−２８７；Ｑ−６〜Ｙ−２８６；Ｑ−６〜Ｓ−２８５；Ｑ−６
〜Ｑ−２８４；Ｑ−６〜Ｋ−２８３；Ｑ−６〜Ｇ−２８２；Ｑ−６〜Ｋ−２８１
；Ｑ−６〜Ｓ−２８０；Ｑ−６〜Ｇ−２７９；Ｑ−６〜Ｋ−２７８；Ｑ−６〜Ｗ
−２７７；Ｑ−６〜Ｔ−２７６；Ｑ−６〜Ｅ−２７５；Ｑ−６〜Ｖ−２７４；Ｑ
−６〜Ｐ−２７３；Ｑ−６〜Ｔ−２７２；Ｑ−６〜Ｎ−２７１；Ｑ−６〜Ｔ−２
７０；Ｑ−６〜Ｒ−２６９；Ｑ−６〜Ｓ−２６８；Ｑ−６〜Ｎ−２６７；Ｑ−６
〜Ｖ−２６６；Ｑ−６〜Ｇ−２６５；Ｑ−６〜Ｖ−２６４；Ｑ−６〜Ｍ−２６３
；Ｑ−６〜Ｆ−２６２；Ｑ−６〜Ｙ−２６１；Ｑ−６〜Ｌ−２６０；Ｑ−６〜Ｅ
−２５９；Ｑ−６〜Ｃ−２５８；Ｑ−６〜Ｎ−２５７；Ｑ−６〜Ｖ−２５６；Ｑ
−６〜Ｓ−２５５；Ｑ−６〜Ｃ−２５４；Ｑ−６〜Ｌ−２５３；Ｑ−６〜Ｔ−２
５２；Ｑ−６〜Ｅ−２５１；Ｑ−６〜Ｆ−２５０；Ｑ−６〜Ｖ−２４９；Ｑ−６
〜Ｆ−２４８；Ｑ−６〜Ｔ−２４７；Ｑ−６〜Ｉ−２４６；Ｑ−６〜Ｒ−２４５
；Ｑ−６〜Ａ−２４４；Ｑ−６〜Ｖ−２４３；Ｑ−６〜Ｅ−２４２；Ｑ−６〜Ｋ
−２４１；Ｑ−６〜Ｎ−２４０；Ｑ−６〜Ｅ−２３９；Ｑ−６〜Ｔ−２３８；Ｑ
−６〜Ｄ−２３７；Ｑ−６〜Ａ−２３６；Ｑ−６〜Ｍ−２３５；Ｑ−６〜Ｖ−２
３４；Ｑ−６〜Ｓ−２３３；Ｑ−６〜Ｑ−２３２；Ｑ−６〜Ｐ−２３１；Ｑ−６
〜Ｐ−２３０；Ｑ−６〜Ｒ−２２９；Ｑ−６〜Ｆ−２２８；Ｑ−６〜Ｇ−２２７
；Ｑ−６〜Ｐ−２２６；Ｑ−６〜Ｖ−２２５；Ｑ−６〜Ｖ−２２４；Ｑ−６〜Ｌ
−２２３；Ｑ−６〜Ｔ−２２２；Ｑ−６〜Ｌ−２２１；Ｑ−６〜Ｉ−２２０；Ｑ
−６〜Ｍ−２１９；Ｑ−６〜Ｆ−２１８；Ｑ−６〜Ｄ−２１７；Ｑ−６〜Ｎ−２
１６；Ｑ−６〜Ｄ−２１５；Ｑ−６〜Ｓ−２１４；Ｑ−６〜Ａ−２１３；Ｑ−６
〜Ｇ−２１２；Ｑ−６〜Ａ−２１１；Ｑ−６〜Ａ−２１０；Ｑ−６〜Ｔ−２０９
；Ｑ−６〜Ｙ−２０８；Ｑ−６〜Ｉ−２０７；Ｑ−６〜Ｈ−２０６；Ｑ−６〜Ｄ
−２０５；Ｑ−６〜Ｇ−２０４；Ｑ−６〜Ａ−２０３；Ｑ−６〜Ｖ−２０２；Ｑ
−６〜Ｅ−２０１；Ｑ−６〜Ｗ−２００；Ｑ−６〜Ｇ−１９９；Ｑ−６〜Ｔ−１
９８；Ｑ−６〜Ｍ−１９７；Ｑ−６〜Ｇ−１９６；Ｑ−６〜Ｋ−１９５；Ｑ−６
〜Ｙ−１９４；Ｑ−６〜Ｅ−１９３；Ｑ−６〜Ｆ−１９２；Ｑ−６〜Ｎ−１９１
；Ｑ−６〜Ｉ−１９０；Ｑ−６〜Ｇ−１８９；Ｑ−６〜Ｓ−１８８；Ｑ−６〜Ｌ
−１８７；Ｑ−６〜Ｖ−１８６；Ｑ−６〜Ｔ−１８５；Ｑ−６〜Ｔ−１８４；Ｑ
−６〜Ｅ−１８３；Ｑ−６〜Ｍ−１８２；Ｑ−６〜Ｎ−１８１；Ｑ−６〜Ｔ−１
８０；Ｑ−６〜Ｐ−１７９；Ｑ−６〜Ｌ−１７８；Ｑ−６〜Ｔ−１７７；Ｑ−６
〜Ｎ−１７６；Ｑ−６〜Ｗ−１７５；Ｑ−６〜Ｗ−１７４；Ｑ−６〜Ｋ−１７３
；Ｑ−６〜Ｙ−１７２；Ｑ−６〜Ｅ−１７１；Ｑ−６〜Ｆ−１７０；Ｑ−６〜Ｇ
−１６９；Ｑ−６〜Ｖ−１６８；Ｑ−６〜Ａ−１６７；Ｑ−６〜Ｐ−１６６；Ｑ
−６〜Ｅ−１６５；Ｑ−６〜Ｔ−１６４；Ｑ−６〜Ｇ−１６３；Ｑ−６〜Ａ−１
６２；Ｑ−６〜Ｐ−１６１；Ｑ−６〜Ｃ−１６０；Ｑ−６〜Ｒ−１５９；Ｑ−６
〜Ｔ−１５８；Ｑ−６〜Ｃ−１５７；Ｑ−６〜Ｄ−１５６；Ｑ−６〜Ｓ−１５５
；Ｑ−６〜Ｇ−１５４；Ｑ−６〜Ｎ−１５３；Ｑ−６〜Ｓ−１５２；Ｑ−６〜Ｙ
−１５１；Ｑ−６〜Ｓ−１５０；Ｑ−６〜Ｇ−１４９；Ｑ−６〜Ｙ−１４８；Ｑ
−６〜Ｐ−１４７；Ｑ−６〜Ｃ−１４６；Ｑ−６〜Ｐ−１４５；Ｑ−６〜Ｑ−１
４４；Ｑ−６〜Ｃ−１４３；Ｑ−６〜Ｔ−１４２；Ｑ−６〜Ｓ−１４１；Ｑ−６
〜Ｎ−１４０；Ｑ−６〜Ｎ−１３９；Ｑ−６〜Ｔ−１３８；Ｑ−６〜Ｋ−１３７
；Ｑ−６〜Ｆ−１３６；Ｑ−６〜Ｆ−１３５；Ｑ−６〜Ｇ−１３４；Ｑ−６〜Ｐ
−１３３；Ｑ−６〜Ｎ−１３２；Ｑ−６〜Ｃ−１３１；Ｑ−６〜Ｐ−１３０；Ｑ
−６〜Ｐ−１２９；Ｑ−６〜Ｃ−１２８；Ｑ−６〜Ｈ−１２７；Ｑ−６〜Ｔ−１
２６；Ｑ−６〜Ｋ−１２５；Ｑ−６〜Ｖ−１２４；Ｑ−６〜Ｇ−１２３；Ｑ−６
〜Ｓ−１２２；Ｑ−６〜Ａ−１２１；Ｑ−６〜Ｐ−１２０；Ｑ−６〜Ｌ−１１９
；Ｑ−６〜Ｋ−１１８；Ｑ−６〜Ｖ−１１７；Ｑ−６〜Ａ−１１６；Ｑ−６〜Ｇ
−１１５；Ｑ−６〜Ｅ−１１４；Ｑ−６〜Ｌ−１１３；Ｑ−６〜Ｄ−１１２；Ｑ
−６〜Ｅ−１１１；Ｑ−６〜Ｓ−１１０；Ｑ−６〜Ｃ−１０９；Ｑ−６〜Ｉ−１
０８；Ｑ−６〜Ｋ−１０７；Ｑ−６〜Ｐ−１０６；Ｑ−６〜Ｋ−１０５；Ｑ−６
〜Ａ−１０４；Ｑ−６〜Ｗ−１０３；Ｑ−６〜Ｋ−１０２；Ｑ−６〜Ｙ−１０１
；Ｑ−６〜Ｍ−１００；Ｑ−６〜Ｌ−９９；Ｑ−６〜Ｑ−９８；Ｑ−６〜Ｔ−９
７；Ｑ−６〜Ｅ−９６；Ｑ−６〜Ｇ−９５；Ｑ−６〜Ｎ−９４；Ｑ−６〜Ａ−９
３；Ｑ−６〜Ｄ−９２；Ｑ−６〜Ｃ−９１；Ｑ−６〜Ａ−９０；Ｑ−６〜Ｔ−８
９；Ｑ−６〜Ｈ−８８；Ｑ−６〜Ｔ−８７；Ｑ−６〜Ｙ−８６；Ｑ−６〜Ｆ−８
５；Ｑ−６〜Ｙ−８４；Ｑ−６〜Ｄ−８３；Ｑ−６〜Ｋ−８２；Ｑ−６〜Ｄ−８
１；Ｑ−６〜Ｔ−８０；Ｑ−６〜Ｃ−７９；Ｑ−６〜Ａ−７８；Ｑ−６〜Ｐ−７
７；Ｑ−６〜Ｒ−７６；Ｑ−６〜Ｖ−７５；Ｑ−６〜Ｎ−７４；Ｑ−６〜Ｃ−７
３；Ｑ−６〜Ｓ−７２；Ｑ−６〜Ｓ−７１；Ｑ−６〜Ｓ−７０；Ｑ−６〜Ｇ−６
９；Ｑ−６〜Ｋ−６８；Ｑ−６〜Ｅ−６７；Ｑ−６〜Ｓ−６６；Ｑ−６〜Ｙ−６
５；Ｑ−６〜Ｋ−６４；Ｑ−６〜Ｄ−６３；Ｑ−６〜Ｐ−６２；Ｑ−６〜Ｄ−６
１；Ｑ−６〜Ｃ−６０；Ｑ−６〜Ｑ−５９；Ｑ−６〜Ｈ−５８；Ｑ−６〜Ｃ−５
７；Ｑ−６〜Ｓ−５６；Ｑ−６〜Ｔ−５５；Ｑ−６〜Ｅ−５４；Ｑ−６〜Ｇ−５
３；Ｑ−６〜Ｋ−５２；Ｑ−６〜Ｎ−５１；Ｑ−６〜Ｓ−５０；Ｑ−６〜Ｙ−４
９；Ｑ−６〜Ｓ−４８；Ｑ−６〜Ｎ−４７；Ｑ−６〜Ｓ−４６；Ｑ−６〜Ｐ−４
５；Ｑ−６〜Ｌ−４４；Ｑ−６〜Ｔ−４３；Ｑ−６〜Ｑ−４２；Ｑ−６〜Ｌ−４
１；Ｑ−６〜Ｆ−４０；Ｑ−６〜Ｌ−３９；Ｑ−６〜Ｌ−３８；Ｑ−６〜Ｇ−３
７；Ｑ−６〜Ａ−３６；Ｑ−６〜Ｑ−３５；Ｑ−６〜Ｒ−３４；Ｑ−６〜Ｃ−３
３；Ｑ−６〜Ｖ−３２；Ｑ−６〜Ｈ−３１；Ｑ−６〜Ｗ−３０；Ｑ−６〜Ｔ−２
９；Ｑ−６〜Ｑ−２８；Ｑ−６〜Ｌ−２７；Ｑ−６〜Ｐ−２６；Ｑ−６〜Ｌ−２
５；Ｑ−６〜Ｍ−２４；Ｑ−６〜Ｒ−２３；Ｑ−６〜Ｆ−２２；Ｑ−６〜Ｈ−２
１；Ｑ−６〜Ｌ−２０；Ｑ−６〜Ｇ−１９；Ｑ−６〜Ｇ−１８；Ｑ−６〜Ｒ−１
７；Ｑ−６〜Ｎ−１６；Ｑ−６〜Ｈ−１５；Ｑ−６〜Ｃ−１４；Ｑ−６〜Ｈ−１
３；Ｑ−６〜Ｋ−１２。これらのポリぺプチドをコードするポリぺプチドもまた
本発明に含まれる。
【０２３０】 本発明は、さらに、図７Ａ−Ｄ（配列番号４０）に示されるＴＲ１３ポリぺプ
チドのアミノ酸配列のカルボキシ末端から、６位に存在するヒスチジン残基まで
で１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、およびこのようなポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、図７Ａ−Ｄの残
基１−ｍ1のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを提供
する（ここで、ｍ1は、図７Ａ−Ｄのアミノ酸残基の位置に対応する、６〜１０
０１の整数である）。
【０２３１】 さらに、本発明は、以下の残基のアミノ酸配列を含むか、またはこれらから構
成される、ＴＲ１３ポリペプチドを提供する：配列番号４０のＨ−６〜Ｃ−１０
００；Ｈ−６〜Ｑ−９９９；Ｈ−６〜Ｔ−９９８；Ｈ−６〜Ｌ−９９７；Ｈ−６
〜Ｄ−９９６；Ｈ−６〜Ｍ−９９５；Ｈ−６〜Ｌ−９９４；Ｈ−６〜Ｌ−９９３
；Ｈ−６〜Ｇ−９９２；Ｈ−６〜Ｒ−９９１；Ｈ−６〜Ｐ−９９０；Ｈ−６〜Ｐ
−９８９；Ｈ−６〜Ｌ−９８８；Ｈ−６〜Ｈ−９８７；Ｈ−６〜Ｎ−９８６；Ｈ
−６〜Ｓ−９８５；Ｈ−６〜Ｒ−９８４；Ｈ−６〜Ｇ−９８３；Ｈ−６〜Ｌ−９
８２；Ｈ−６〜Ｓ−９８１；Ｈ−６〜Ｈ−９８０；Ｈ−６〜Ｎ−９７９；Ｈ−６
〜Ｋ−９７８；Ｈ−６〜Ｓ−９７７；Ｈ−６〜Ｔ−９７６；Ｈ−６〜Ｆ−９７５
；Ｈ−６〜Ｉ−９７４；Ｈ−６〜Ｌ−９７３；Ｈ−６〜Ｄ−９７２；Ｈ−６〜Ｄ
−９７１；Ｈ−６〜Ｅ−９７０；Ｈ−６〜Ｖ−９６９；Ｈ−６〜Ｄ−９６８；Ｈ
−６〜Ｅ−９６７；Ｈ−６〜Ｇ−９６６；Ｈ−６〜Ｅ−９６５；Ｈ−６〜Ｍ−９
６４；Ｈ−６〜Ｉ−９６３；Ｈ−６〜Ａ−９６２；Ｈ−６〜Ｃ−９６１；Ｈ−６
〜Ｓ−９６０；Ｈ−６〜Ｄ−９５９；Ｈ−６〜Ａ−９５８；Ｈ−６〜Ａ−９５７
；Ｈ−６〜Ｐ−９５６；Ｈ−６〜Ｌ−９５５；Ｈ−６〜Ｄ−９５４；Ｈ−６〜Ｃ
−９５３；Ｈ−６〜Ｄ−９５２；Ｈ−６〜Ｋ−９５１；Ｈ−６〜Ｌ−９５０；Ｈ
−６〜Ｔ−９４９；Ｈ−６〜Ａ−９４８；Ｈ−６〜Ｎ−９４７；Ｈ−６〜Ｍ−９
４６；Ｈ−６〜Ｖ−９４５；Ｈ−６〜Ｌ−９４４；Ｈ−６〜Ｋ−９４３；Ｈ−６
〜Ｓ−９４２；Ｈ−６〜Ｙ−９４１；Ｈ−６〜Ｋ−９４０；Ｈ−６〜Ｙ−９３９
；Ｈ−６〜Ｅ−９３８；Ｈ−６〜Ｌ−９３７；Ｈ−６〜Ｋ−９３６；Ｈ−６〜Ｑ
−９３５；Ｈ−６〜Ｎ−９３４；Ｈ−６〜Ｋ−９３３；Ｈ−６〜Ｋ−９３２；Ｈ
−６〜Ｗ−９３１；Ｈ−６〜Ｆ−９３０；Ｈ−６〜Ｙ−９２９；Ｈ−６〜Ｃ−９
２８；Ｈ−６〜Ｔ−９２７；Ｈ−６〜Ｌ−９２６；Ｈ−６〜Ｖ−９２５；Ｈ−６
〜Ｔ−９２４；Ｈ−６〜Ｌ−９２３；Ｈ−６〜Ｌ−９２２；Ｈ−６〜Ｉ−９２１
；Ｈ−６〜Ａ−９２０；Ｈ−６〜Ｔ−９１９；Ｈ−６〜Ｃ−９１８；Ｈ−６〜Ｔ
−９１７；Ｈ−６〜Ｇ−９１６；Ｈ−６〜Ａ−９１５；Ｈ−６〜Ｓ−９１４；Ｈ
−６〜Ｉ−９１３；Ｈ−６〜Ｇ−９１２；Ｈ−６〜Ｖ−９１１；Ｈ−６〜Ｋ−９
１０；Ｈ−６〜Ｌ−９０９；Ｈ−６〜Ｗ−９０８；Ｈ−６〜Ｆ−９０７；Ｈ−６
〜Ｄ−９０６；Ｈ−６〜Ｉ−９０５；Ｈ−６〜Ｔ−９０４；Ｈ−６〜Ｋ−９０３
；Ｈ−６〜Ｃ−９０２；Ｈ−６〜Ｉ−９０１；Ｈ−６〜Ｔ−９００；Ｈ−６〜Ｖ
−８９９；Ｈ−６〜Ｒ−８９８；Ｈ−６〜Ｑ−８９７；Ｈ−６〜Ｅ−８９６；Ｈ
−６〜Ｐ−８９５；Ｈ−６〜Ｌ−８９４；Ｈ−６〜Ｓ−８９３；Ｈ−６〜Ｉ−８
９２；Ｈ−６〜Ｇ−８９１；Ｈ−６〜Ｇ−８９０；Ｈ−６〜Ｓ−８８９；Ｈ−６
〜Ｃ−８８８；Ｈ−６〜Ｌ−８８７；Ｈ−６〜Ｋ−８８６；Ｈ−６〜Ｐ−８８５
；Ｈ−６〜Ｅ−８８４；Ｈ−６〜Ｒ−８８３；Ｈ−６〜Ｗ−８８２；Ｈ−６〜Ｖ
−８８１；Ｈ−６〜Ｙ−８８０；Ｈ−６〜Ｔ−８７９；Ｈ−６〜Ｔ−８７８；Ｈ
−６〜Ｋ−８７７；Ｈ−６〜Ｑ−８７６；Ｈ−６〜Ｉ−８７５；Ｈ−６〜Ｇ−８
７４；Ｈ−６〜Ａ−８７３；Ｈ−６〜Ｖ−８７２；Ｈ−６〜Ｃ−８７１；Ｈ−６
〜Ｓ−８７０；Ｈ−６〜Ｓ−８６９；Ｈ−６〜Ｖ−８６８；Ｈ−６〜Ｉ−８６７
；Ｈ−６〜Ａ−８６６；Ｈ−６〜Ｈ−８６５；Ｈ−６〜Ｙ−８６４；Ｈ−６〜Ｄ
−８６３；Ｈ−６〜Ａ−８６２；Ｈ−６〜Ｖ−８６１；Ｈ−６〜Ｓ−８６０；Ｈ
−６〜Ｃ−８５９；Ｈ−６〜Ｌ−８５８；Ｈ−６〜Ｐ−８５７；Ｈ−６〜Ｃ−８
５６；Ｈ−６〜Ａ−８５５；Ｈ−６〜Ａ−８５４；Ｈ−６〜Ａ−８５３；Ｈ−６
〜Ｓ−８５２；Ｈ−６〜Ｅ−８５１；Ｈ−６〜Ｗ−８５０；Ｈ−６〜Ｌ−８４９
；Ｈ−６〜Ｆ−８４８；Ｈ−６〜Ｈ−８４７；Ｈ−６〜Ｆ−８４６；Ｈ−６〜Ｎ
−８４５；Ｈ−６〜Ｃ−８４４；Ｈ−６〜Ｇ−８４３；Ｈ−６〜Ｄ−８４２；Ｈ
−６〜Ｃ−８４１；Ｈ−６〜Ｔ−８４０；Ｈ−６〜Ｇ−８３９；Ｈ−６〜Ｄ−８
３８；Ｈ−６〜Ｓ−８３７；Ｈ−６〜Ｃ−８３６；Ｈ−６〜Ｔ−８３５；Ｈ−６
〜Ｇ−８３４；Ｈ−６〜Ｐ−８３３；Ｈ−６〜Ｌ−８３２；Ｈ−６〜Ｌ−８３１
；Ｈ−６〜Ｌ−８３０；Ｈ−６〜Ｓ−８２９；Ｈ−６〜Ｇ−８２８；Ｈ−６〜Ｐ
−８２７；Ｈ−６〜Ｖ−８２６；Ｈ−６〜Ｔ−８２５；Ｈ−６〜Ｋ−８２４；Ｈ
−６〜Ｑ−８２３；Ｈ−６〜Ｐ−８２２；Ｈ−６〜Ｓ−８２１；Ｈ−６〜Ｃ−８
２０；Ｈ−６〜Ｒ−８１９；Ｈ−６〜Ｖ−８１８；Ｈ−６〜Ｒ−８１７；Ｈ−６
〜Ｉ−８１６；Ｈ−６〜Ｔ−８１５；Ｈ−６〜Ｔ−８１４；Ｈ−６〜Ｓ−８１３
；Ｈ−６〜Ｒ−８１２；Ｈ−６〜Ｇ−８１１；Ｈ−６〜Ｓ−８１０；Ｈ−６〜Ｓ
−８０９；Ｈ−６〜Ｃ−８０８；Ｈ−６〜Ｓ−８０７；Ｈ−６〜Ｑ−８０６；Ｈ
−６〜Ｔ−８０５；Ｈ−６〜Ｖ−８０４；Ｈ−６〜Ｄ−８０３；Ｈ−６〜Ｎ−８
０２；Ｈ−６〜Ｓ−８０１；Ｈ−６〜Ｒ−８００；Ｈ−６〜Ｙ−７９９；Ｈ−６
〜Ｆ−７９８；Ｈ−６〜Ｆ−７９７；Ｈ−６〜Ｉ−７９６；Ｈ−６〜Ｖ−７９５
；Ｈ−６〜Ｄ−７９４；Ｈ−６〜Ｐ−７９３；Ｈ−６〜Ｉ−７９２；Ｈ−６〜Ｇ
−７９１；Ｈ−６〜Ｌ−７９０；Ｈ−６〜Ｓ−７８９；Ｈ−６〜Ｅ−７８８；Ｈ
−６〜Ｌ−７８７；Ｈ−６〜Ｈ−７８６；Ｈ−６〜Ｆ−７８５；Ｈ−６〜Ｌ−７
８４；Ｈ−６〜Ｅ−７８３；Ｈ−６〜Ａ−７８２；Ｈ−６〜Ｐ−７８１；Ｈ−６
〜Ｓ−７８０；Ｈ−６〜Ｔ−７７９；Ｈ−６〜Ｉ−７７８；Ｈ−６〜Ｇ−７７７
；Ｈ−６〜Ｄ−７７６；Ｈ−６〜Ｌ−７７５；Ｈ−６〜Ｔ−７７４；Ｈ−６〜Ｍ
−７７３；Ｈ−６〜Ｄ−７７２；Ｈ−６〜Ｔ−７７１；Ｈ−６〜Ｔ−７７０；Ｈ
−６〜Ｖ−７６９；Ｈ−６〜Ｇ−７６８；Ｈ−６〜Ｉ−７６７；Ｈ−６〜Ｌ−７
６６；Ｈ−６〜Ｒ−７６５；Ｈ−６〜Ｄ−７６４；Ｈ−６〜Ａ−７６３；Ｈ−６
〜Ｌ−７６２；Ｈ−６〜Ｓ−７６１；Ｈ−６〜Ｖ−７６０；Ｈ−６〜Ｐ−７５９
；Ｈ−６〜Ｑ−７５８；Ｈ−６〜Ｓ−７５７；Ｈ−６〜Ｓ−７５６；Ｈ−６〜Ｖ
−７５５；Ｈ−６〜Ｇ−７５４；Ｈ−６〜Ａ−７５３；Ｈ−６〜Ｋ−７５２；Ｈ
−６〜Ｙ−７５１；Ｈ−６〜Ｇ−７５０；Ｈ−６〜Ｔ−７４９；Ｈ−６〜Ｖ−７
４８；Ｈ−６〜Ｅ−７４７；Ｈ−６〜Ｐ−７４６；Ｈ−６〜Ｐ−７４５；Ｈ−６
〜Ｉ−７４４；Ｈ−６〜Ｉ−７４３；Ｈ−６〜Ｖ−７４２；Ｈ−６〜Ａ−７４１
；Ｈ−６〜Ｑ−７４０；Ｈ−６〜Ｃ−７３９；Ｈ−６〜Ｖ−７３８；Ｈ−６〜Ｙ
−７３７；Ｈ−６〜Ａ−７３６；Ｈ−６〜Ｔ−７３５；Ｈ−６〜Ｉ−７３４；Ｈ
−６〜Ｓ−７３３；Ｈ−６〜Ｋ−７３２；Ｈ−６〜Ｓ−７３１；Ｈ−６〜Ｆ−７
３０；Ｈ−６〜Ｇ−７２９；Ｈ−６〜Ｓ−７２８；Ｈ−６〜Ｅ−７２７；Ｈ−６
〜Ｇ−７２６；Ｈ−６〜Ｅ−７２５；Ｈ−６〜Ｐ−７２４；Ｈ−６〜Ｉ−７２３
；Ｈ−６〜Ｒ−７２２；Ｈ−６〜Ｌ−７２１；Ｈ−６〜Ｄ−７２０；Ｈ−６〜Ｔ
−７１９；Ｈ−６〜Ｖ−７１８；Ｈ−６〜Ｎ−７１７；Ｈ−６〜Ｄ−７１６；Ｈ
−６〜Ｔ−７１５；Ｈ−６〜Ｃ−７１４；Ｈ−６〜Ｖ−７１３；Ｈ−６〜Ｓ−７
１２；Ｈ−６〜Ｍ−７１１；Ｈ−６〜Ｋ−７１０；Ｈ−６〜Ｒ−７０９；Ｈ−６
〜Ｇ−７０８；Ｈ−６〜Ｑ−７０７；Ｈ−６〜Ｎ−７０６；Ｈ−６〜Ｇ−７０５
；Ｈ−６〜Ｃ−７０４；Ｈ−６〜Ｌ−７０３；Ｈ−６〜Ｓ−７０２；Ｈ−６〜Ｌ
−７０１；Ｈ−６〜Ｔ−７００；Ｈ−６〜Ｆ−６９９；Ｈ−６〜Ｈ−６９８；Ｈ
−６〜Ｈ−６９７；Ｈ−６〜Ｆ−６９６；Ｈ−６〜Ｙ−６９５；Ｈ−６〜Ｋ−６
９４；Ｈ−６〜Ｌ−６９３；Ｈ−６〜Ｇ−６９２；Ｈ−６〜Ｋ−６９１；Ｈ−６
〜Ｓ−６９０；Ｈ−６〜Ｔ−６８９；Ｈ−６〜Ｆ−６８８；Ｈ−６〜Ｓ−６８７
；Ｈ−６〜Ｐ−６８６；Ｈ−６〜Ｇ−６８５；Ｈ−６〜Ｇ−６８４；Ｈ−６〜Ａ
−６８３；Ｈ−６〜Ｌ−６８２；Ｈ−６〜Ｔ−６８１；Ｈ−６〜Ｖ−６８０；Ｈ
−６〜Ｔ−６７９；Ｈ−６〜Ｎ−６７８；Ｈ−６〜Ａ−６７７；Ｈ−６〜Ｌ−６
７６；Ｈ−６〜Ａ−６７５；Ｈ−６〜Ｓ−６７４；Ｈ−６〜Ｆ−６７３；Ｈ−６
〜Ｎ−６７２；Ｈ−６〜Ｙ−６７１；Ｈ−６〜Ｎ−６７０；Ｈ−６〜Ｆ−６６９
；Ｈ−６〜Ｔ−６６８；Ｈ−６〜Ｒ−６６７；Ｈ−６〜Ｔ−６６６；Ｈ−６〜Ｐ
−６６５；Ｈ−６〜Ｔ−６６４；Ｈ−６〜Ｎ−６６３；Ｈ−６〜Ｒ−６６２；Ｈ
−６〜Ｓ−６６１；Ｈ−６〜Ｆ−６６０；Ｈ−６〜Ｔ−６５９；Ｈ−６〜Ｃ−６
５８；Ｈ−６〜Ｄ−６５７；Ｈ−６〜Ｎ−６５６；Ｈ−６〜Ｙ−６５５；Ｈ−６
〜Ｃ−６５４；Ｈ−６〜Ｌ−６５３；Ｈ−６〜Ｓ−６５２；Ｈ−６〜Ｈ−６５１
；Ｈ−６〜Ｉ−６５０；Ｈ−６〜Ｋ−６４９；Ｈ−６〜Ｎ−６４８；Ｈ−６〜Ｎ
−６４７；Ｈ−６〜Ｋ−６４６；Ｈ−６〜Ｔ−６４５；Ｈ−６〜Ｇ−６４４；Ｈ
−６〜Ｐ−６４３；Ｈ−６〜Ｇ−６４２；Ｈ−６〜Ｃ−６４１；Ｈ−６〜Ｐ−６
４０；Ｈ−６〜Ｖ−６３９；Ｈ−６〜Ｃ−６３８；Ｈ−６〜Ａ−６３７；Ｈ−６
〜Ｑ−６３６；Ｈ−６〜Ｖ−６３５；Ｈ−６〜Ｇ−６３４；Ｈ−６〜Ｙ−６３３
；Ｈ−６〜Ｐ−６３２；Ｈ−６〜Ｑ−６３１；Ｈ−６〜Ｈ−６３０；Ｈ−６〜Ａ
−６２９；Ｈ−６〜Ｋ−６２８；Ｈ−６〜Ｌ−６２７；Ｈ−６〜Ｉ−６２６；Ｈ
−６〜Ｔ−６２５；Ｈ−６〜Ｎ−６２４；Ｈ−６〜Ｐ−６２３；Ｈ−６〜Ｐ−６
２２；Ｈ−６〜Ｃ−６２１；Ｈ−６〜Ｓ−６２０；Ｈ−６〜Ｈ−６１９；Ｈ−６
〜Ｃ−６１８；Ｈ−６〜Ｔ−６１７；Ｈ−６〜Ｇ−６１６；Ｈ−６〜Ｓ−６１５
；Ｈ−６〜Ｄ−６１４；Ｈ−６〜Ｒ−６１３；Ｈ−６〜Ｄ−６１２；Ｈ−６〜Ｉ
−６１１；Ｈ−６〜Ｙ−６１０；Ｈ−６〜Ｙ−６０９；Ｈ−６〜Ｇ−６０８；Ｈ
−６〜Ａ−６０７；Ｈ−６〜Ｐ−６０６；Ｈ−６〜Ｃ−６０５；Ｈ−６〜Ｓ−６
０４；Ｈ−６〜Ｔ−６０３；Ｈ−６〜Ｃ−６０２；Ｈ−６〜Ｓ−６０１；Ｈ−６
〜Ｓ−６００；Ｈ−６〜Ｇ−５９９；Ｈ−６〜Ｖ−５９８；Ｈ−６〜Ｄ−５９７
；Ｈ−６〜Ｓ−５９６；Ｈ−６〜Ａ−５９５；Ｈ−６〜Ｅ−５９４；Ｈ−６〜Ｌ
−５９３；Ｈ−６〜Ａ−５９２；Ｈ−６〜Ｃ−５９１；Ｈ−６〜Ｐ−５９０；Ｈ
−６〜Ｒ−５８９；Ｈ−６〜Ｃ−５８８；Ｈ−６〜Ｙ−５８７；Ｈ−６〜Ｓ−５
８６；Ｈ−６〜Ａ−５８５；Ｈ−６〜Ｖ−５８４；Ｈ−６〜Ｇ−５８３；Ｈ−６
〜Ｎ−５８２；Ｈ−６〜Ｍ−５８１；Ｈ−６〜Ｖ−５８０；Ｈ−６〜Ｎ−５７９
；Ｈ−６〜Ｔ−５７８；Ｈ−６〜Ｖ−５７７；Ｈ−６〜Ｎ−５７６；Ｈ−６〜Ｉ
−５７５；Ｈ−６〜Ｓ−５７４；Ｈ−６〜Ｙ−５７３；Ｈ−６〜Ｉ−５７２；Ｈ
−６〜Ｋ−５７１；Ｈ−６〜Ａ−５７０；Ｈ−６〜Ｖ−５６９；Ｈ−６〜Ｄ−５
６８；Ｈ−６〜Ｎ−５６７；Ｈ−６〜Ｔ−５６６；Ｈ−６〜Ｙ−５６５；Ｈ−６
〜Ｋ−５６４；Ｈ−６〜Ｒ−５６３；Ｈ−６〜Ｓ−５６２；Ｈ−６〜Ａ−５６１
；Ｈ−６〜Ｅ−５６０；Ｈ−６〜Ｈ−５５９；Ｈ−６〜Ｆ−５５８；Ｈ−６〜Ｔ
−５５７；Ｈ−６〜Ｔ−５５６；Ｈ−６〜Ｒ−５５５；Ｈ−６〜Ｑ−５５４；Ｈ
−６〜Ｆ−５５３；Ｈ−６〜Ａ−５５２；Ｈ−６〜Ｗ−５５１；Ｈ−６〜Ｔ−５
５０；Ｈ−６〜Ｆ−５４９；Ｈ−６〜Ｓ−５４８；Ｈ−６〜Ｔ−５４７；Ｈ−６
〜Ｔ−５４６；Ｈ−６〜Ｔ−５４５；Ｈ−６〜Ｎ−５４４；Ｈ−６〜Ｅ−５４３
；Ｈ−６〜Ｅ−５４２；Ｈ−６〜Ｉ−５４１；Ｈ−６〜Ｉ−５４０；Ｈ−６〜Ｙ
−５３９；Ｈ−６〜Ｔ−５３８；Ｈ−６〜Ｙ−５３７；Ｈ−６〜Ｓ−５３６；Ｈ
−６〜Ｑ−５３５；Ｈ−６〜Ｋ−５３４；Ｈ−６〜Ｇ−５３３；Ｈ−６〜Ｋ−５
３２；Ｈ−６〜Ｓ−５３１；Ｈ−６〜Ｇ−５３０；Ｈ−６〜Ｋ−５２９；Ｈ−６
〜Ｗ−５２８；Ｈ−６〜Ｔ−５２７；Ｈ−６〜Ｅ−５２６；Ｈ−６〜Ｖ−５２５
；Ｈ−６〜Ｐ−５２４；Ｈ−６〜Ｔ−５２３；Ｈ−６〜Ｎ−５２２；Ｈ−６〜Ｔ
−５２１；Ｈ−６〜Ｒ−５２０；Ｈ−６〜Ｓ−５１９；Ｈ−６〜Ｎ−５１８；Ｈ
−６〜Ｖ−５１７；Ｈ−６〜Ｇ−５１６；Ｈ−６〜Ｖ−５１５；Ｈ−６〜Ｍ−５
１４；Ｈ−６〜Ｆ−５１３；Ｈ−６〜Ｙ−５１２；Ｈ−６〜Ｌ−５１１；Ｈ−６
〜Ｅ−５１０；Ｈ−６〜Ｃ−５０９；Ｈ−６〜Ｎ−５０８；Ｈ−６〜Ｖ−５０７
；Ｈ−６〜Ｓ−５０６；Ｈ−６〜Ｃ−５０５；Ｈ−６〜Ｌ−５０４；Ｈ−６〜Ｔ
−５０３；Ｈ−６〜Ｅ−５０２；Ｈ−６〜Ｆ−５０１；Ｈ−６〜Ｖ−５００；Ｈ
−６〜Ｆ−４９９；Ｈ−６〜Ｔ−４９８；Ｈ−６〜Ｉ−４９７；Ｈ−６〜Ｒ−４
９６；Ｈ−６〜Ａ−４９５；Ｈ−６〜Ｖ−４９４；Ｈ−６〜Ｅ−４９３；Ｈ−６
〜Ｋ−４９２；Ｈ−６〜Ｎ−４９１；Ｈ−６〜Ｅ−４９０；Ｈ−６〜Ｔ−４８９
；Ｈ−６〜Ｄ−４８８；Ｈ−６〜Ａ−４８７；Ｈ−６〜Ｍ−４８６；Ｈ−６〜Ｖ
−４８５；Ｈ−６〜Ｓ−４８４；Ｈ−６〜Ｑ−４８３；Ｈ−６〜Ｐ−４８２；Ｈ
−６〜Ｐ−４８１；Ｈ−６〜Ｒ−４８０；Ｈ−６〜Ｆ−４７９；Ｈ−６〜Ｇ−４
７８；Ｈ−６〜Ｐ−４７７；Ｈ−６〜Ｖ−４７６；Ｈ−６〜Ｖ−４７５；Ｈ−６
〜Ｌ−４７４；Ｈ−６〜Ｔ−４７３；Ｈ−６〜Ｌ−４７２；Ｈ−６〜Ｉ−４７１
；Ｈ−６〜Ｍ−４７０；Ｈ−６〜Ｆ−４６９；Ｈ−６〜Ｄ−４６８；Ｈ−６〜Ｎ
−４６７；Ｈ−６〜Ｄ−４６６；Ｈ−６〜Ｓ−４６５；Ｈ−６〜Ａ−４６４；Ｈ
−６〜Ｇ−４６３；Ｈ−６〜Ａ−４６２；Ｈ−６〜Ａ−４６１；Ｈ−６〜Ｔ−４
６０；Ｈ−６〜Ｙ−４５９；Ｈ−６〜Ｉ−４５８；Ｈ−６〜Ｈ−４５７；Ｈ−６
〜Ｄ−４５６；Ｈ−６〜Ｇ−４５５；Ｈ−６〜Ａ−４５４；Ｈ−６〜Ｖ−４５３
；Ｈ−６〜Ｅ−４５２；Ｈ−６〜Ｗ−４５１；Ｈ−６〜Ｇ−４５０；Ｈ−６〜Ｔ
−４４９；Ｈ−６〜Ｍ−４４８；Ｈ−６〜Ｇ−４４７；Ｈ−６〜Ｋ−４４６；Ｈ
−６〜Ｙ−４４５；Ｈ−６〜Ｅ−４４４；Ｈ−６〜Ｆ−４４３；Ｈ−６〜Ｎ−４
４２；Ｈ−６〜Ｉ−４４１；Ｈ−６〜Ｇ−４４０；Ｈ−６〜Ｓ−４３９；Ｈ−６
〜Ｌ−４３８；Ｈ−６〜Ｖ−４３７；Ｈ−６〜Ｔ−４３６；Ｈ−６〜Ｔ−４３５
；Ｈ−６〜Ｅ−４３４；Ｈ−６〜Ｍ−４３３；Ｈ−６〜Ｎ−４３２；Ｈ−６〜Ｔ
−４３１；Ｈ−６〜Ｐ−４３０；Ｈ−６〜Ｌ−４２９；Ｈ−６〜Ｔ−４２８；Ｈ
−６〜Ｎ−４２７；Ｈ−６〜Ｗ−４２６；Ｈ−６〜Ｗ−４２５；Ｈ−６〜Ｋ−４
２４；Ｈ−６〜Ｙ−４２３；Ｈ−６〜Ｅ−４２２；Ｈ−６〜Ｆ−４２１；Ｈ−６
〜Ｇ−４２０；Ｈ−６〜Ｖ−４１９；Ｈ−６〜Ａ−４１８；Ｈ−６〜Ｐ−４１７
；Ｈ−６〜Ｅ−４１６；Ｈ−６〜Ｔ−４１５；Ｈ−６〜Ｇ−４１４；Ｈ−６〜Ａ
−４１３；Ｈ−６〜Ｐ−４１２；Ｈ−６〜Ｃ−４１１；Ｈ−６〜Ｒ−４１０；Ｈ
−６〜Ｔ−４０９；Ｈ−６〜Ｃ−４０８；Ｈ−６〜Ｄ−４０７；Ｈ−６〜Ｓ−４
０６；Ｈ−６〜Ｇ−４０５；Ｈ−６〜Ｎ−４０４；Ｈ−６〜Ｓ−４０３；Ｈ−６
〜Ｙ−４０２；Ｈ−６〜Ｓ−４０１；Ｈ−６〜Ｇ−４００；Ｈ−６〜Ｙ−３９９
；Ｈ−６〜Ｐ−３９８；Ｈ−６〜Ｃ−３９７；Ｈ−６〜Ｐ−３９６；Ｈ−６〜Ｑ
−３９５；Ｈ−６〜Ｃ−３９４；Ｈ−６〜Ｔ−３９３；Ｈ−６〜Ｓ−３９２；Ｈ
−６〜Ｎ−３９１；Ｈ−６〜Ｎ−３９０；Ｈ−６〜Ｔ−３８９；Ｈ−６〜Ｋ−３
８８；Ｈ−６〜Ｆ−３８７；Ｈ−６〜Ｆ−３８６；Ｈ−６〜Ｇ−３８５；Ｈ−６
〜Ｐ−３８４；Ｈ−６〜Ｎ−３８３；Ｈ−６〜Ｃ−３８２；Ｈ−６〜Ｐ−３８１
；Ｈ−６〜Ｐ−３８０；Ｈ−６〜Ｃ−３７９；Ｈ−６〜Ｈ−３７８；Ｈ−６〜Ｔ
−３７７；Ｈ−６〜Ｋ−３７６；Ｈ−６〜Ｖ−３７５；Ｈ−６〜Ｇ−３７４；Ｈ
−６〜Ｓ−３７３；Ｈ−６〜Ａ−３７２；Ｈ−６〜Ｐ−３７１；Ｈ−６〜Ｌ−３
７０；Ｈ−６〜Ｋ−３６９；Ｈ−６〜Ｖ−３６８；Ｈ−６〜Ａ−３６７；Ｈ−６
〜Ｇ−３６６；Ｈ−６〜Ｅ−３６５；Ｈ−６〜Ｌ−３６４；Ｈ−６〜Ｄ−３６３
；Ｈ−６〜Ｅ−３６２；Ｈ−６〜Ｓ−３６１；Ｈ−６〜Ｃ−３６０；Ｈ−６〜Ｉ
−３５９；Ｈ−６〜Ｋ−３５８；Ｈ−６〜Ｐ−３５７；Ｈ−６〜Ｋ−３５６；Ｈ
−６〜Ａ−３５５；Ｈ−６〜Ｗ−３５４；Ｈ−６〜Ｋ−３５３；Ｈ−６〜Ｙ−３
５２；Ｈ−６〜Ｍ−３５１；Ｈ−６〜Ｌ−３５０；Ｈ−６〜Ｑ−３４９；Ｈ−６
〜Ｔ−３４８；Ｈ−６〜Ｅ−３４７；Ｈ−６〜Ｇ−３４６；Ｈ−６〜Ｎ−３４５
；Ｈ−６〜Ａ−３４４；Ｈ−６〜Ｄ−３４３；Ｈ−６〜Ｃ−３４２；Ｈ−６〜Ａ
−３４１；Ｈ−６〜Ｔ−３４０；Ｈ−６〜Ｈ−３３９；Ｈ−６〜Ｔ−３３８；Ｈ
−６〜Ｙ−３３７；Ｈ−６〜Ｆ−３３６；Ｈ−６〜Ｙ−３３５；Ｈ−６〜Ｄ−３
３４；Ｈ−６〜Ｋ−３３３；Ｈ−６〜Ｄ−３３２；Ｈ−６〜Ｔ−３３１；Ｈ−６
〜Ｃ−３３０；Ｈ−６〜Ａ−３２９；Ｈ−６〜Ｐ−３２８；Ｈ−６〜Ｒ−３２７
；Ｈ−６〜Ｖ−３２６；Ｈ−６〜Ｎ−３２５；Ｈ−６〜Ｃ−３２４；Ｈ−６〜Ｓ
−３２３；Ｈ−６〜Ｓ−３２２；Ｈ−６〜Ｓ−３２１；Ｈ−６〜Ｇ−３２０；Ｈ
−６〜Ｋ−３１９；Ｈ−６〜Ｅ−３１８；Ｈ−６〜Ｓ−３１７；Ｈ−６〜Ｙ−３
１６；Ｈ−６〜Ｋ−３１５；Ｈ−６〜Ｄ−３１４；Ｈ−６〜Ｐ−３１３；Ｈ−６
〜Ｄ−３１２；Ｈ−６〜Ｃ−３１１；Ｈ−６〜Ｑ−３１０；Ｈ−６〜Ｈ−３０９
；Ｈ−６〜Ｃ−３０８；Ｈ−６〜Ｓ−３０７；Ｈ−６〜Ｔ−３０６；Ｈ−６〜Ｅ
−３０５；Ｈ−６〜Ｇ−３０４；Ｈ−６〜Ｋ−３０３；Ｈ−６〜Ｎ−３０２；Ｈ
−６〜Ｓ−３０１；Ｈ−６〜Ｙ−３００；Ｈ−６〜Ｓ−２９９；Ｈ−６〜Ｎ−２
９８；Ｈ−６〜Ａ−２９７；Ｈ−６〜Ｐ−２９６；Ｈ−６〜Ｃ−２９５；Ｈ−６
〜Ｌ−２９４；Ｈ−６〜Ｋ−２９３；Ｈ−６〜Ｃ−２９２；Ｈ−６〜Ｆ−２９１
；Ｈ−６〜Ｓ−２９０；Ｈ−６〜Ｓ−２８９；Ｈ−６〜Ｇ−２８８；Ｈ−６〜Ｑ
−２８７；Ｈ−６〜Ｋ−２８６；Ｈ−６〜Ｄ−２８５；Ｈ−６〜Ａ−２８４；Ｈ
−６〜Ｙ−２８３；Ｈ−６〜Ｔ−２８２；Ｈ−６〜Ｇ−２８１；Ｈ−６〜Ｐ−２
８０；Ｈ−６〜Ｋ−２７９；Ｈ−６〜Ｃ−２７８；Ｈ−６〜Ｐ−２７７；Ｈ−６
〜Ｆ−２７６；Ｈ−６〜Ｃ−２７５；Ｈ−６〜Ｅ−２７４；Ｈ−６〜Ｓ−２７３
；Ｈ−６〜Ｔ−２７２；Ｈ−６〜Ｙ−２７１；Ｈ−６〜Ａ−２７０；Ｈ−６〜Ｖ
−２６９；Ｈ−６〜Ｇ−２６８；Ｈ−６〜Ｔ−２６７；Ｈ−６〜Ｉ−２６６；Ｈ
−６〜Ａ−２６５；Ｈ−６〜Ｉ−２６４；Ｈ−６〜Ｎ−２６３；Ｈ−６〜Ｒ−２
６２；Ｈ−６〜Ｖ−２６１；Ｈ−６〜Ｌ−２６０；Ｈ−６〜Ｖ−２５９；Ｈ−６
〜Ｐ−２５８；Ｈ−６〜Ｋ−２５７；Ｈ−６〜Ｐ−２５６；Ｈ−６〜Ｖ−２５５
；Ｈ−６〜Ｋ−２５４；Ｈ−６〜Ｔ−２５３；Ｈ−６〜Ｗ−２５２；Ｈ−６〜Ｖ
−２５１；Ｈ−６〜Ｓ−２５０；Ｈ−６〜Ｆ−２４９；Ｈ−６〜Ａ−２４８；Ｈ
−６〜Ｔ−２４７；Ｈ−６〜Ｔ−２４６；Ｈ−６〜Ｒ−２４５；Ｈ−６〜Ｗ−２
４４；Ｈ−６〜Ｙ−２４３；Ｈ−６〜Ｌ−２４２；Ｈ−６〜Ｖ−２４１；Ｈ−６
〜Ｎ−２４０；Ｈ−６〜Ｎ−２３９；Ｈ−６〜Ｇ−２３８；Ｈ−６〜Ｒ−２３７
；Ｈ−６〜Ｎ−２３６；Ｈ−６〜Ｌ−２３５；Ｈ−６〜Ｅ−２３４；Ｈ−６〜Ｖ
−２３３；Ｈ−６〜Ｓ−２３２；Ｈ−６〜Ｈ−２３１；Ｈ−６〜Ｆ−２３０；Ｈ
−６〜Ｅ−２２９；Ｈ−６〜Ｗ−２２８；Ｈ−６〜Ｇ−２２７；Ｈ−６〜Ｋ−２
２６；Ｈ−６〜Ｅ−２２５；Ｈ−６〜Ｔ−２２４；Ｈ−６〜Ｔ−２２３；Ｈ−６
〜Ｋ−２２２；Ｈ−６〜Ｍ−２２１；Ｈ−６〜Ｗ−２２０；Ｈ−６〜Ｒ−２１９
；Ｈ−６〜Ｓ−２１８；Ｈ−６〜Ｄ−２１７；Ｈ−６〜Ｄ−２１６；Ｈ−６〜Ａ
−２１５；Ｈ−６〜Ｎ−２１４；Ｈ−６〜Ｐ−２１３；Ｈ−６〜Ｑ−２１２；Ｈ
−６〜Ｃ−２１１；Ｈ−６〜Ｑ−２１０；Ｈ−６〜Ｄ−２０９；Ｈ−６〜Ｎ−２
０８；Ｈ−６〜Ｑ−２０７；Ｈ−６〜Ｖ−２０６；Ｈ−６〜Ｆ−２０５；Ｈ−６
〜Ｆ−２０４；Ｈ−６〜Ｅ−２０３；Ｈ−６〜Ｆ−２０２；Ｈ−６〜Ｉ−２０１
；Ｈ−６〜Ｉ−２００；Ｈ−６〜Ｓ−１９９；Ｈ−６〜Ｓ−１９８；Ｈ−６〜Ｄ
−１９７；Ｈ−６〜Ｐ−１９６；Ｈ−６〜Ｙ−１９５；Ｈ−６〜Ｙ−１９４；Ｈ
−６〜Ｙ−１９３；Ｈ−６〜Ｅ−１９２；Ｈ−６〜Ｆ−１９１；Ｈ−６〜Ｎ−１
９０；Ｈ−６〜Ｖ−１８９；Ｈ−６〜Ｔ−１８８；Ｈ−６〜Ｇ−１８７；Ｈ−６
〜Ｓ−１８６；Ｈ−６〜Ｑ−１８５；Ｈ−６〜Ｋ−１８４；Ｈ−６〜Ｌ−１８３
；Ｈ−６〜Ｎ−１８２；Ｈ−６〜Ｖ−１８１；Ｈ−６〜Ａ−１８０；Ｈ−６〜Ｙ
−１７９；Ｈ−６〜Ｍ−１７８；Ｈ−６〜Ｌ−１７７；Ｈ−６〜Ｔ−１７６；Ｈ
−６〜Ａ−１７５；Ｈ−６〜Ｔ−１７４；Ｈ−６〜Ｃ−１７３；Ｈ−６〜Ｅ−１
７２；Ｈ−６〜Ｄ−１７１；Ｈ−６〜Ｔ−１７０；Ｈ−６〜Ｎ−１６９；Ｈ−６
〜Ｆ−１６８；Ｈ−６〜Ａ−１６７；Ｈ−６〜Ｉ−１６６；Ｈ−６〜Ｙ−１６５
；Ｈ−６〜Ｄ−１６４；Ｈ−６〜Ｇ−１６３；Ｈ−６〜Ｒ−１６２；Ｈ−６〜Ｐ
−１６１；Ｈ−６〜Ｖ−１６０；Ｈ−６〜Ｗ−１５９；Ｈ−６〜Ｋ−１５８；Ｈ
−６〜Ｓ−１５７；Ｈ−６〜Ｓ−１５６；Ｈ−６〜Ｔ−１５５；Ｈ−６〜Ｃ−１
５４；Ｈ−６〜Ｎ−１５３；Ｈ−６〜Ｇ−１５２；Ｈ−６〜Ｔ−１５１；Ｈ−６
〜Ｓ−１５０；Ｈ−６〜Ｅ−１４９；Ｈ−６〜Ａ−１４８；Ｈ−６〜Ａ−１４７
；Ｈ−６〜Ｓ−１４６；Ｈ−６〜Ｄ−１４５；Ｈ−６〜Ｄ−１４４；Ｈ−６〜Ｌ
−１４３；Ｈ−６〜Ｅ−１４２；Ｈ−６〜Ｍ−１４１；Ｈ−６〜Ｎ−１４０；Ｈ
−６〜Ａ−１３９；Ｈ−６〜Ｓ−１３８；Ｈ−６〜Ｌ−１３７；Ｈ−６〜Ｓ−１
３６；Ｈ−６〜Ａ−１３５；Ｈ−６〜Ｆ−１３４；Ｈ−６〜Ｇ−１３３；Ｈ−６
〜Ｈ−１３２；Ｈ−６〜Ｐ−１３１；Ｈ−６〜Ｌ−１３０；Ｈ−６〜Ｅ−１２９
；Ｈ−６〜Ｄ−１２８；Ｈ−６〜Ｗ−１２７；Ｈ−６〜Ｅ−１２６；Ｈ−６〜Ｄ
−１２５；Ｈ−６〜Ｆ−１２４；Ｈ−６〜Ｒ−１２３；Ｈ−６〜Ｉ−１２２；Ｈ
−６〜Ｇ−１２１；Ｈ−６〜Ｔ−１２０；Ｈ−６〜Ｇ−１１９；Ｈ−６〜Ｌ−１
１８；Ｈ−６〜Ｓ−１１７；Ｈ−６〜Ｙ−１１６；Ｈ−６〜Ｒ−１１５；Ｈ−６
〜Ｇ−１１４；Ｈ−６〜Ｅ−１１３；Ｈ−６〜Ａ−１１２；Ｈ−６〜Ｃ−１１１
；Ｈ−６〜Ｐ−１１０；Ｈ−６〜Ｋ−１０９；Ｈ−６〜Ｃ−１０８；Ｈ−６〜Ｓ
−１０７；Ｈ−６〜Ｑ−１０６；Ｈ−６〜Ｄ−１０５；Ｈ−６〜Ｋ−１０４；Ｈ
−６〜Ｍ−１０３；Ｈ−６〜Ｄ−１０２；Ｈ−６〜Ｌ−１０１；Ｈ−６〜Ｆ−１
００；Ｈ−６〜Ｅ−９９；Ｈ−６〜Ｇ−９８；Ｈ−６〜Ａ−９７；Ｈ−６〜Ｎ−
９６；Ｈ−６〜Ｃ−９５；Ｈ−６〜Ｓ−９４；Ｈ−６〜Ｆ−９３；Ｈ−６〜Ｓ−
９２；Ｈ−６〜Ｃ−９１；Ｈ−６〜Ｅ−９０；Ｈ−６〜Ｔ−８９；Ｈ−６〜Ｇ−
８８；Ｈ−６〜Ｋ−８７；Ｈ−６〜Ｖ−８６；Ｈ−６〜Ｐ−８５；Ｈ−６〜Ｄ−
８４；Ｈ−６〜Ｐ−８３；Ｈ−６〜Ｌ−８２；Ｈ−６〜Ｓ−８１；Ｈ−６〜Ｔ−
８０；Ｈ−６〜Ｃ−７９；Ｈ−６〜Ｌ−７８；Ｈ−６〜Ｇ−７７；Ｈ−６〜Ｐ−
７６；Ｈ−６〜Ｔ−７５；Ｈ−６〜Ｈ−７４；Ｈ−６〜Ｐ−７３；Ｈ−６〜Ｖ−
７２；Ｈ−６〜Ａ−７１；Ｈ−６〜Ｖ−７０；Ｈ−６〜Ｒ−６９；Ｈ−６〜Ｗ−
６８；Ｈ−６〜Ｒ−６７；Ｈ−６〜Ｓ−６６；Ｈ−６〜Ｇ−６５；Ｈ−６〜Ｔ−
６４；Ｈ−６〜Ｓ−６３；Ｈ−６〜Ｄ−６２；Ｈ−６〜Ｃ−６１；Ｈ−６〜Ａ−
６０；Ｈ−６〜Ｔ−５９；Ｈ−６〜Ｙ−５８；Ｈ−６〜Ｅ−５７；Ｈ−６〜Ｙ−
５６；Ｈ−６〜Ｈ−５５；Ｈ−６〜Ｙ−５４；Ｈ−６〜Ｅ−５３；Ｈ−６〜Ｓ−
５２；Ｈ−６〜Ｅ−５１；Ｈ−６〜Ｋ−５０；Ｈ−６〜Ｃ−４９；Ｈ−６〜Ａ−
４８；Ｈ−６〜Ｈ−４７；Ｈ−６〜Ｌ−４６；Ｈ−６〜Ｅ−４５；Ｈ−６〜Ｐ−
４４；Ｈ−６〜Ｇ−４３；Ｈ−６〜Ｔ−４２；Ｈ−６〜Ｇ−４１；Ｈ−６〜Ｑ−
４０；Ｈ−６〜Ｔ−３９；Ｈ−６〜Ｖ−３８；Ｈ−６〜Ｑ−３７；Ｈ−６〜Ｆ−
３６；Ｈ−６〜Ａ−３５；Ｈ−６〜Ｔ−３４；Ｈ−６〜Ｇ−３３；Ｈ−６〜Ａ−
３２；Ｈ−６〜Ｗ−３１；Ｈ−６〜Ｌ−３０；Ｈ−６〜Ｌ−２９；Ｈ−６〜Ｌ−
２８；Ｈ−６〜Ｒ−２７；Ｈ−６〜Ｗ−２６；Ｈ−６〜Ｌ−２５；Ｈ−６〜Ｒ−
２４；Ｈ−６〜Ｐ−２３；Ｈ−６〜Ｉ−２２；Ｈ−６〜Ｒ−２１；Ｈ−６〜Ｒ−
２０；Ｈ−６〜Ｅ−１９；Ｈ−６〜Ｔ−１８；Ｈ−６〜Ｒ−１７；Ｈ−６〜Ｇ−
１６；Ｈ−６〜Ｒ−１５；Ｈ−６〜Ｖ−１４；Ｈ−６〜Ｒ−１３；Ｈ−６〜Ａ−
１２。これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明に含ま
れる。
【０２３２】 別の実施形態では、図７Ａ〜７Ｄに示されるアミノ酸配列を有する推定成熟Ｔ
Ｒ１３タンパク質の推定細胞外ドメインのＮ末端欠失は、一般式ｎ2−９０６に
より記載され得る（ここで、ｎ2は、図７Ａ−Ｄ（配列番号４０）に同定される
アミノ酸残基の位置に対応する、２〜９００の数である）。配列番号４０に示さ
れる本発明のＴＲ１３ポリペプチドのＮ末端欠失は、以下の残基のアミノ酸配列
を含むか、またあるいは以下の残基のアミノ酸配列から構成されるポリペプチド
を含む：配列番号４０のＴ−４２〜Ｄ−９０６；Ｇ−４３〜Ｄ−９０６；Ｐ−４
４〜Ｄ−９０６；Ｅ−４５〜Ｄ−９０６；Ｌ−４６〜Ｄ−９０６；Ｈ−４７〜Ｄ
−９０６；Ａ−４８〜Ｄ−９０６；Ｃ−４９〜Ｄ−９０６；Ｋ−５０〜Ｄ−９０
６；Ｅ−５１〜Ｄ−９０６；Ｓ−５２〜Ｄ−９０６；Ｅ−５３〜Ｄ−９０６；Ｙ
−５４〜Ｄ−９０６；Ｈ−５５〜Ｄ−９０６；Ｙ−５６〜Ｄ−９０６；Ｅ−５７
〜Ｄ−９０６；Ｙ−５８〜Ｄ−９０６；Ｔ−５９〜Ｄ−９０６；Ａ−６０〜Ｄ−
９０６；Ｃ−６１〜Ｄ−９０６；Ｄ−６２〜Ｄ−９０６；Ｓ−６３〜Ｄ−９０６
；Ｔ−６４〜Ｄ−９０６；Ｇ−６５〜Ｄ−９０６；Ｓ−６６〜Ｄ−９０６；Ｒ−
６７〜Ｄ−９０６；Ｗ−６８〜Ｄ−９０６；Ｒ−６９〜Ｄ−９０６；Ｖ−７０〜
Ｄ−９０６；Ａ−７１〜Ｄ−９０６；Ｖ−７２〜Ｄ−９０６；Ｐ−７３〜Ｄ−９
０６；Ｈ−７４〜Ｄ−９０６；Ｔ−７５〜Ｄ−９０６；Ｐ−７６〜Ｄ−９０６；
Ｇ−７７〜Ｄ−９０６；Ｌ−７８〜Ｄ−９０６；Ｃ−７９〜Ｄ−９０６；Ｔ−８
０〜Ｄ−９０６；Ｓ−８１〜Ｄ−９０６；Ｌ−８２〜Ｄ−９０６；Ｐ−８３〜Ｄ
−９０６；Ｄ−８４〜Ｄ−９０６；Ｐ−８５〜Ｄ−９０６；Ｖ−８６〜Ｄ−９０
６；Ｋ−８７〜Ｄ−９０６；Ｇ−８８〜Ｄ−９０６；Ｔ−８９〜Ｄ−９０６；Ｅ
−９０〜Ｄ−９０６；Ｃ−９１〜Ｄ−９０６；Ｓ−９２〜Ｄ−９０６；Ｆ−９３
〜Ｄ−９０６；Ｓ−９４〜Ｄ−９０６；Ｃ−９５〜Ｄ−９０６；Ｎ−９６〜Ｄ−
９０６；Ａ−９７〜Ｄ−９０６；Ｇ−９８〜Ｄ−９０６；Ｅ−９９〜Ｄ−９０６
；Ｆ−１００〜Ｄ−９０６；Ｌ−１０１〜Ｄ−９０６；Ｄ−１０２〜Ｄ−９０６
；Ｍ−１０３〜Ｄ−９０６；Ｋ−１０４〜Ｄ−９０６；Ｄ−１０５〜Ｄ−９０６
；Ｑ−１０６〜Ｄ−９０６；Ｓ−１０７〜Ｄ−９０６；Ｃ−１０８〜Ｄ−９０６
；Ｋ−１０９〜Ｄ−９０６；Ｐ−１１０〜Ｄ−９０６；Ｃ−１１１〜Ｄ−９０６
；Ａ−１１２〜Ｄ−９０６；Ｅ−１１３〜Ｄ−９０６；Ｇ−１１４〜Ｄ−９０６
；Ｒ−１１５〜Ｄ−９０６；Ｙ−１１６〜Ｄ−９０６；Ｓ−１１７〜Ｄ−９０６
；Ｌ−１１８〜Ｄ−９０６；Ｇ−１１９〜Ｄ−９０６；Ｔ−１２０〜Ｄ−９０６
；Ｇ−１２１〜Ｄ−９０６；Ｉ−１２２〜Ｄ−９０６；Ｒ−１２３〜Ｄ−９０６
；Ｆ−１２４〜Ｄ−９０６；Ｄ−１２５〜Ｄ−９０６；Ｅ−１２６〜Ｄ−９０６
；Ｗ−１２７〜Ｄ−９０６；Ｄ−１２８〜Ｄ−９０６；Ｅ−１２９〜Ｄ−９０６
；Ｌ−１３０〜Ｄ−９０６；Ｐ−１３１〜Ｄ−９０６；Ｈ−１３２〜Ｄ−９０６
；Ｇ−１３３〜Ｄ−９０６；Ｆ−１３４〜Ｄ−９０６；Ａ−１３５〜Ｄ−９０６
；Ｓ−１３６〜Ｄ−９０６；Ｌ−１３７〜Ｄ−９０６；Ｓ−１３８〜Ｄ−９０６
；Ａ−１３９〜Ｄ−９０６；Ｎ−１４０〜Ｄ−９０６；Ｍ−１４１〜Ｄ−９０６
；Ｅ−１４２〜Ｄ−９０６；Ｌ−１４３〜Ｄ−９０６；Ｄ−１４４〜Ｄ−９０６
；Ｄ−１４５〜Ｄ−９０６；Ｓ−１４６〜Ｄ−９０６；Ａ−１４７〜Ｄ−９０６
；Ａ−１４８〜Ｄ−９０６；Ｅ−１４９〜Ｄ−９０６；Ｓ−１５０〜Ｄ−９０６
；Ｔ−１５１〜Ｄ−９０６；Ｇ−１５２〜Ｄ−９０６；Ｎ−１５３〜Ｄ−９０６
；Ｃ−１５４〜Ｄ−９０６；Ｔ−１５５〜Ｄ−９０６；Ｓ−１５６〜Ｄ−９０６
；Ｓ−１５７〜Ｄ−９０６；Ｋ−１５８〜Ｄ−９０６；Ｗ−１５９〜Ｄ−９０６
；Ｖ−１６０〜Ｄ−９０６；Ｐ−１６１〜Ｄ−９０６；Ｒ−１６２〜Ｄ−９０６
；Ｇ−１６３〜Ｄ−９０６；Ｄ−１６４〜Ｄ−９０６；Ｙ−１６５〜Ｄ−９０６
；Ｉ−１６６〜Ｄ−９０６；Ａ−１６７〜Ｄ−９０６；Ｆ−１６８〜Ｄ−９０６
；Ｎ−１６９〜Ｄ−９０６；Ｔ−１７０〜Ｄ−９０６；Ｄ−１７１〜Ｄ−９０６
；Ｅ−１７２〜Ｄ−９０６；Ｃ−１７３〜Ｄ−９０６；Ｔ−１７４〜Ｄ−９０６
；Ａ−１７５〜Ｄ−９０６；Ｔ−１７６〜Ｄ−９０６；Ｌ−１７７〜Ｄ−９０６
；Ｍ−１７８〜Ｄ−９０６；Ｙ−１７９〜Ｄ−９０６；Ａ−１８０〜Ｄ−９０６
；Ｖ−１８１〜Ｄ−９０６；Ｎ−１８２〜Ｄ−９０６；Ｌ−１８３〜Ｄ−９０６
；Ｋ−１８４〜Ｄ−９０６；Ｑ−１８５〜Ｄ−９０６；Ｓ−１８６〜Ｄ−９０６
；Ｇ−１８７〜Ｄ−９０６；Ｔ−１８８〜Ｄ−９０６；Ｖ−１８９〜Ｄ−９０６
；Ｎ−１９０〜Ｄ−９０６；Ｆ−１９１〜Ｄ−９０６；Ｅ−１９２〜Ｄ−９０６
；Ｙ−１９３〜Ｄ−９０６；Ｙ−１９４〜Ｄ−９０６；Ｙ−１９５〜Ｄ−９０６
；Ｐ−１９６〜Ｄ−９０６；Ｄ−１９７〜Ｄ−９０６；Ｓ−１９８〜Ｄ−９０６
；Ｓ−１９９〜Ｄ−９０６；Ｉ−２００〜Ｄ−９０６；Ｉ−２０１〜Ｄ−９０６
；Ｆ−２０２〜Ｄ−９０６；Ｅ−２０３〜Ｄ−９０６；Ｆ−２０４〜Ｄ−９０６
；Ｆ−２０５〜Ｄ−９０６；Ｖ−２０６〜Ｄ−９０６；Ｑ−２０７〜Ｄ−９０６
；Ｎ−２０８〜Ｄ−９０６；Ｄ−２０９〜Ｄ−９０６；Ｑ−２１０〜Ｄ−９０６
；Ｃ−２１１〜Ｄ−９０６；Ｑ−２１２〜Ｄ−９０６；Ｐ−２１３〜Ｄ−９０６
；Ｎ−２１４〜Ｄ−９０６；Ａ−２１５〜Ｄ−９０６；Ｄ−２１６〜Ｄ−９０６
；Ｄ−２１７〜Ｄ−９０６；Ｓ−２１８〜Ｄ−９０６；Ｒ−２１９〜Ｄ−９０６
；Ｗ−２２０〜Ｄ−９０６；Ｍ−２２１〜Ｄ−９０６；Ｋ−２２２〜Ｄ−９０６
；Ｔ−２２３〜Ｄ−９０６；Ｔ−２２４〜Ｄ−９０６；Ｅ−２２５〜Ｄ−９０６
；Ｋ−２２６〜Ｄ−９０６；Ｇ−２２７〜Ｄ−９０６；Ｗ−２２８〜Ｄ−９０６
；Ｅ−２２９〜Ｄ−９０６；Ｆ−２３０〜Ｄ−９０６；Ｈ−２３１〜Ｄ−９０６
；Ｓ−２３２〜Ｄ−９０６；Ｖ−２３３〜Ｄ−９０６；Ｅ−２３４〜Ｄ−９０６
；Ｌ−２３５〜Ｄ−９０６；Ｎ−２３６〜Ｄ−９０６；Ｒ−２３７〜Ｄ−９０６
；Ｇ−２３８〜Ｄ−９０６；Ｎ−２３９〜Ｄ−９０６；Ｎ−２４０〜Ｄ−９０６
；Ｖ−２４１〜Ｄ−９０６；Ｌ−２４２〜Ｄ−９０６；Ｙ−２４３〜Ｄ−９０６
；Ｗ−２４４〜Ｄ−９０６；Ｒ−２４５〜Ｄ−９０６；Ｔ−２４６〜Ｄ−９０６
；Ｔ−２４７〜Ｄ−９０６；Ａ−２４８〜Ｄ−９０６；Ｆ−２４９〜Ｄ−９０６
；Ｓ−２５０〜Ｄ−９０６；Ｖ−２５１〜Ｄ−９０６；Ｗ−２５２〜Ｄ−９０６
；Ｔ−２５３〜Ｄ−９０６；Ｋ−２５４〜Ｄ−９０６；Ｖ−２５５〜Ｄ−９０６
；Ｐ−２５６〜Ｄ−９０６；Ｋ−２５７〜Ｄ−９０６；Ｐ−２５８〜Ｄ−９０６
；Ｖ−２５９〜Ｄ−９０６；Ｌ−２６０〜Ｄ−９０６；Ｖ−２６１〜Ｄ−９０６
；Ｒ−２６２〜Ｄ−９０６；Ｎ−２６３〜Ｄ−９０６；Ｉ−２６４〜Ｄ−９０６
；Ａ−２６５〜Ｄ−９０６；Ｉ−２６６〜Ｄ−９０６；Ｔ−２６７〜Ｄ−９０６
；Ｇ−２６８〜Ｄ−９０６；Ｖ−２６９〜Ｄ−９０６；Ａ−２７０〜Ｄ−９０６
；Ｙ−２７１〜Ｄ−９０６；Ｔ−２７２〜Ｄ−９０６；Ｓ−２７３〜Ｄ−９０６
；Ｅ−２７４〜Ｄ−９０６；Ｃ−２７５〜Ｄ−９０６；Ｆ−２７６〜Ｄ−９０６
；Ｐ−２７７〜Ｄ−９０６；Ｃ−２７８〜Ｄ−９０６；Ｋ−２７９〜Ｄ−９０６
；Ｐ−２８０〜Ｄ−９０６；Ｇ−２８１〜Ｄ−９０６；Ｔ−２８２〜Ｄ−９０６
；Ｙ−２８３〜Ｄ−９０６；Ａ−２８４〜Ｄ−９０６；Ｄ−２８５〜Ｄ−９０６
；Ｋ−２８６〜Ｄ−９０６；Ｑ−２８７〜Ｄ−９０６；Ｇ−２８８〜Ｄ−９０６
；Ｓ−２８９〜Ｄ−９０６；Ｓ−２９０〜Ｄ−９０６；Ｆ−２９１〜Ｄ−９０６
；Ｃ−２９２〜Ｄ−９０６；Ｋ−２９３〜Ｄ−９０６；Ｌ−２９４〜Ｄ−９０６
；Ｃ−２９５〜Ｄ−９０６；Ｐ−２９６〜Ｄ−９０６；Ａ−２９７〜Ｄ−９０６
；Ｎ−２９８〜Ｄ−９０６；Ｓ−２９９〜Ｄ−９０６；Ｙ−３００〜Ｄ−９０６
；Ｓ−３０１〜Ｄ−９０６；Ｎ−３０２〜Ｄ−９０６；Ｋ−３０３〜Ｄ−９０６
；Ｇ−３０４〜Ｄ−９０６；Ｅ−３０５〜Ｄ−９０６；Ｔ−３０６〜Ｄ−９０６
；Ｓ−３０７〜Ｄ−９０６；Ｃ−３０８〜Ｄ−９０６；Ｈ−３０９〜Ｄ−９０６
；Ｑ−３１０〜Ｄ−９０６；Ｃ−３１１〜Ｄ−９０６；Ｄ−３１２〜Ｄ−９０６
；Ｐ−３１３〜Ｄ−９０６；Ｄ−３１４〜Ｄ−９０６；Ｋ−３１５〜Ｄ−９０６
；Ｙ−３１６〜Ｄ−９０６；Ｓ−３１７〜Ｄ−９０６；Ｅ−３１８〜Ｄ−９０６
；Ｋ−３１９〜Ｄ−９０６；Ｇ−３２０〜Ｄ−９０６；Ｓ−３２１〜Ｄ−９０６
；Ｓ−３２２〜Ｄ−９０６；Ｓ−３２３〜Ｄ−９０６；Ｃ−３２４〜Ｄ−９０６
；Ｎ−３２５〜Ｄ−９０６；Ｖ−３２６〜Ｄ−９０６；Ｒ−３２７〜Ｄ−９０６
；Ｐ−３２８〜Ｄ−９０６；Ａ−３２９〜Ｄ−９０６；Ｃ−３３０〜Ｄ−９０６
；Ｔ−３３１〜Ｄ−９０６；Ｄ−３３２〜Ｄ−９０６；Ｋ−３３３〜Ｄ−９０６
；Ｄ−３３４〜Ｄ−９０６；Ｙ−３３５〜Ｄ−９０６；Ｆ−３３６〜Ｄ−９０６
；Ｙ−３３７〜Ｄ−９０６；Ｔ−３３８〜Ｄ−９０６；Ｈ−３３９〜Ｄ−９０６
；Ｔ−３４０〜Ｄ−９０６；Ａ−３４１〜Ｄ−９０６；Ｃ−３４２〜Ｄ−９０６
；Ｄ−３４３〜Ｄ−９０６；Ａ−３４４〜Ｄ−９０６；Ｎ−３４５〜Ｄ−９０６
；Ｇ−３４６〜Ｄ−９０６；Ｅ−３４７〜Ｄ−９０６；Ｔ−３４８〜Ｄ−９０６
；Ｑ−３４９〜Ｄ−９０６；Ｌ−３５０〜Ｄ−９０６；Ｍ−３５１〜Ｄ−９０６
；Ｙ−３５２〜Ｄ−９０６；Ｋ−３５３〜Ｄ−９０６；Ｗ−３５４〜Ｄ−９０６
；Ａ−３５５〜Ｄ−９０６；Ｋ−３５６〜Ｄ−９０６；Ｐ−３５７〜Ｄ−９０６
；Ｋ−３５８〜Ｄ−９０６；Ｉ−３５９〜Ｄ−９０６；Ｃ−３６０〜Ｄ−９０６
；Ｓ−３６１〜Ｄ−９０６；Ｅ−３６２〜Ｄ−９０６；Ｄ−３６３〜Ｄ−９０６
；Ｌ−３６４〜Ｄ−９０６；Ｅ−３６５〜Ｄ−９０６；Ｇ−３６６〜Ｄ−９０６
；Ａ−３６７〜Ｄ−９０６；Ｖ−３６８〜Ｄ−９０６；Ｋ−３６９〜Ｄ−９０６
；Ｌ−３７０〜Ｄ−９０６；Ｐ−３７１〜Ｄ−９０６；Ａ−３７２〜Ｄ−９０６
；Ｓ−３７３〜Ｄ−９０６；Ｇ−３７４〜Ｄ−９０６；Ｖ−３７５〜Ｄ−９０６
；Ｋ−３７６〜Ｄ−９０６；Ｔ−３７７〜Ｄ−９０６；Ｈ−３７８〜Ｄ−９０６
；Ｃ−３７９〜Ｄ−９０６；Ｐ−３８０〜Ｄ−９０６；Ｐ−３８１〜Ｄ−９０６
；Ｃ−３８２〜Ｄ−９０６；Ｎ−３８３〜Ｄ−９０６；Ｐ−３８４〜Ｄ−９０６
；Ｇ−３８５〜Ｄ−９０６；Ｆ−３８６〜Ｄ−９０６；Ｆ−３８７〜Ｄ−９０６
；Ｋ−３８８〜Ｄ−９０６；Ｔ−３８９〜Ｄ−９０６；Ｎ−３９０〜Ｄ−９０６
；Ｎ−３９１〜Ｄ−９０６；Ｓ−３９２〜Ｄ−９０６；Ｔ−３９３〜Ｄ−９０６
；Ｃ−３９４〜Ｄ−９０６；Ｑ−３９５〜Ｄ−９０６；Ｐ−３９６〜Ｄ−９０６
；Ｃ−３９７〜Ｄ−９０６；Ｐ−３９８〜Ｄ−９０６；Ｙ−３９９〜Ｄ−９０６
；Ｇ−４００〜Ｄ−９０６；Ｓ−４０１〜Ｄ−９０６；Ｙ−４０２〜Ｄ−９０６
；Ｓ−４０３〜Ｄ−９０６；Ｎ−４０４〜Ｄ−９０６；Ｇ−４０５〜Ｄ−９０６
；Ｓ−４０６〜Ｄ−９０６；Ｄ−４０７〜Ｄ−９０６；Ｃ−４０８〜Ｄ−９０６
；Ｔ−４０９〜Ｄ−９０６；Ｒ−４１０〜Ｄ−９０６；Ｃ−４１１〜Ｄ−９０６
；Ｐ−４１２〜Ｄ−９０６；Ａ−４１３〜Ｄ−９０６；Ｇ−４１４〜Ｄ−９０６
；Ｔ−４１５〜Ｄ−９０６；Ｅ−４１６〜Ｄ−９０６；Ｐ−４１７〜Ｄ−９０６
；Ａ−４１８〜Ｄ−９０６；Ｖ−４１９〜Ｄ−９０６；Ｇ−４２０〜Ｄ−９０６
；Ｆ−４２１〜Ｄ−９０６；Ｅ−４２２〜Ｄ−９０６；Ｙ−４２３〜Ｄ−９０６
；Ｋ−４２４〜Ｄ−９０６；Ｗ−４２５〜Ｄ−９０６；Ｗ−４２６〜Ｄ−９０６
；Ｎ−４２７〜Ｄ−９０６；Ｔ−４２８〜Ｄ−９０６；Ｌ−４２９〜Ｄ−９０６
；Ｐ−４３０〜Ｄ−９０６；Ｔ−４３１〜Ｄ−９０６；Ｎ−４３２〜Ｄ−９０６
；Ｍ−４３３〜Ｄ−９０６；Ｅ−４３４〜Ｄ−９０６；Ｔ−４３５〜Ｄ−９０６
；Ｔ−４３６〜Ｄ−９０６；Ｖ−４３７〜Ｄ−９０６；Ｌ−４３８〜Ｄ−９０６
；Ｓ−４３９〜Ｄ−９０６；Ｇ−４４０〜Ｄ−９０６；Ｉ−４４１〜Ｄ−９０６
；Ｎ−４４２〜Ｄ−９０６；Ｆ−４４３〜Ｄ−９０６；Ｅ−４４４〜Ｄ−９０６
；Ｙ−４４５〜Ｄ−９０６；Ｋ−４４６〜Ｄ−９０６；Ｇ−４４７〜Ｄ−９０６
；Ｍ−４４８〜Ｄ−９０６；Ｔ−４４９〜Ｄ−９０６；Ｇ−４５０〜Ｄ−９０６
；Ｗ−４５１〜Ｄ−９０６；Ｅ−４５２〜Ｄ−９０６；Ｖ−４５３〜Ｄ−９０６
；Ａ−４５４〜Ｄ−９０６；Ｇ−４５５〜Ｄ−９０６；Ｄ−４５６〜Ｄ−９０６
；Ｈ−４５７〜Ｄ−９０６；Ｉ−４５８〜Ｄ−９０６；Ｙ−４５９〜Ｄ−９０６
；Ｔ−４６０〜Ｄ−９０６；Ａ−４６１〜Ｄ−９０６；Ａ−４６２〜Ｄ−９０６
；Ｇ−４６３〜Ｄ−９０６；Ａ−４６４〜Ｄ−９０６；Ｓ−４６５〜Ｄ−９０６
；Ｄ−４６６〜Ｄ−９０６；Ｎ−４６７〜Ｄ−９０６；Ｄ−４６８〜Ｄ−９０６
；Ｆ−４６９〜Ｄ−９０６；Ｍ−４７０〜Ｄ−９０６；Ｉ−４７１〜Ｄ−９０６
；Ｌ−４７２〜Ｄ−９０６；Ｔ−４７３〜Ｄ−９０６；Ｌ−４７４〜Ｄ−９０６
；Ｖ−４７５〜Ｄ−９０６；Ｖ−４７６〜Ｄ−９０６；Ｐ−４７７〜Ｄ−９０６
；Ｇ−４７８〜Ｄ−９０６；Ｆ−４７９〜Ｄ−９０６；Ｒ−４８０〜Ｄ−９０６
；Ｐ−４８１〜Ｄ−９０６；Ｐ−４８２〜Ｄ−９０６；Ｑ−４８３〜Ｄ−９０６
；Ｓ−４８４〜Ｄ−９０６；Ｖ−４８５〜Ｄ−９０６；Ｍ−４８６〜Ｄ−９０６
；Ａ−４８７〜Ｄ−９０６；Ｄ−４８８〜Ｄ−９０６；Ｔ−４８９〜Ｄ−９０６
；Ｅ−４９０〜Ｄ−９０６；Ｎ−４９１〜Ｄ−９０６；Ｋ−４９２〜Ｄ−９０６
；Ｅ−４９３〜Ｄ−９０６；Ｖ−４９４〜Ｄ−９０６；Ａ−４９５〜Ｄ−９０６
；Ｒ−４９６〜Ｄ−９０６；Ｉ−４９７〜Ｄ−９０６；Ｔ−４９８〜Ｄ−９０６
；Ｆ−４９９〜Ｄ−９０６；Ｖ−５００〜Ｄ−９０６；Ｆ−５０１〜Ｄ−９０６
；Ｅ−５０２〜Ｄ−９０６；Ｔ−５０３〜Ｄ−９０６；Ｌ−５０４〜Ｄ−９０６
；Ｃ−５０５〜Ｄ−９０６；Ｓ−５０６〜Ｄ−９０６；Ｖ−５０７〜Ｄ−９０６
；Ｎ−５０８〜Ｄ−９０６；Ｃ−５０９〜Ｄ−９０６；Ｅ−５１０〜Ｄ−９０６
；Ｌ−５１１〜Ｄ−９０６；Ｙ−５１２〜Ｄ−９０６；Ｆ−５１３〜Ｄ−９０６
；Ｍ−５１４〜Ｄ−９０６；Ｖ−５１５〜Ｄ−９０６；Ｇ−５１６〜Ｄ−９０６
；Ｖ−５１７〜Ｄ−９０６；Ｎ−５１８〜Ｄ−９０６；Ｓ−５１９〜Ｄ−９０６
；Ｒ−５２０〜Ｄ−９０６；Ｔ−５２１〜Ｄ−９０６；Ｎ−５２２〜Ｄ−９０６
；Ｔ−５２３〜Ｄ−９０６；Ｐ−５２４〜Ｄ−９０６；Ｖ−５２５〜Ｄ−９０６
；Ｅ−５２６〜Ｄ−９０６；Ｔ−５２７〜Ｄ−９０６；Ｗ−５２８〜Ｄ−９０６
；Ｋ−５２９〜Ｄ−９０６；Ｇ−５３０〜Ｄ−９０６；Ｓ−５３１〜Ｄ−９０６
；Ｋ−５３２〜Ｄ−９０６；Ｇ−５３３〜Ｄ−９０６；Ｋ−５３４〜Ｄ−９０６
；Ｑ−５３５〜Ｄ−９０６；Ｓ−５３６〜Ｄ−９０６；Ｙ−５３７〜Ｄ−９０６
；Ｔ−５３８〜Ｄ−９０６；Ｙ−５３９〜Ｄ−９０６；Ｉ−５４０〜Ｄ−９０６
；Ｉ−５４１〜Ｄ−９０６；Ｅ−５４２〜Ｄ−９０６；Ｅ−５４３〜Ｄ−９０６
；Ｎ−５４４〜Ｄ−９０６；Ｔ−５４５〜Ｄ−９０６；Ｔ−５４６〜Ｄ−９０６
；Ｔ−５４７〜Ｄ−９０６；Ｓ−５４８〜Ｄ−９０６；Ｆ−５４９〜Ｄ−９０６
；Ｔ−５５０〜Ｄ−９０６；Ｗ−５５１〜Ｄ−９０６；Ａ−５５２〜Ｄ−９０６
；Ｆ−５５３〜Ｄ−９０６；Ｑ−５５４〜Ｄ−９０６；Ｒ−５５５〜Ｄ−９０６
；Ｔ−５５６〜Ｄ−９０６；Ｔ−５５７〜Ｄ−９０６；Ｆ−５５８〜Ｄ−９０６
；Ｈ−５５９〜Ｄ−９０６；Ｅ−５６０〜Ｄ−９０６；Ａ−５６１〜Ｄ−９０６
；Ｓ−５６２〜Ｄ−９０６；Ｒ−５６３〜Ｄ−９０６；Ｋ−５６４〜Ｄ−９０６
；Ｙ−５６５〜Ｄ−９０６；Ｔ−５６６〜Ｄ−９０６；Ｎ−５６７〜Ｄ−９０６
；Ｄ−５６８〜Ｄ−９０６；Ｖ−５６９〜Ｄ−９０６；Ａ−５７０〜Ｄ−９０６
；Ｋ−５７１〜Ｄ−９０６；Ｉ−５７２〜Ｄ−９０６；Ｙ−５７３〜Ｄ−９０６
；Ｓ−５７４〜Ｄ−９０６；Ｉ−５７５〜Ｄ−９０６；Ｎ−５７６〜Ｄ−９０６
；Ｖ−５７７〜Ｄ−９０６；Ｔ−５７８〜Ｄ−９０６；Ｎ−５７９〜Ｄ−９０６
；Ｖ−５８０〜Ｄ−９０６；Ｍ−５８１〜Ｄ−９０６；Ｎ−５８２〜Ｄ−９０６
；Ｇ−５８３〜Ｄ−９０６；Ｖ−５８４〜Ｄ−９０６；Ａ−５８５〜Ｄ−９０６
；Ｓ−５８６〜Ｄ−９０６；Ｙ−５８７〜Ｄ−９０６；Ｃ−５８８〜Ｄ−９０６
；Ｒ−５８９〜Ｄ−９０６；Ｐ−５９０〜Ｄ−９０６；Ｃ−５９１〜Ｄ−９０６
；Ａ−５９２〜Ｄ−９０６；Ｌ−５９３〜Ｄ−９０６；Ｅ−５９４〜Ｄ−９０６
；Ａ−５９５〜Ｄ−９０６；Ｓ−５９６〜Ｄ−９０６；Ｄ−５９７〜Ｄ−９０６
；Ｖ−５９８〜Ｄ−９０６；Ｇ−５９９〜Ｄ−９０６；Ｓ−６００〜Ｄ−９０６
；Ｓ−６０１〜Ｄ−９０６；Ｃ−６０２〜Ｄ−９０６；Ｔ−６０３〜Ｄ−９０６
；Ｓ−６０４〜Ｄ−９０６；Ｃ−６０５〜Ｄ−９０６；Ｐ−６０６〜Ｄ−９０６
；Ａ−６０７〜Ｄ−９０６；Ｇ−６０８〜Ｄ−９０６；Ｙ−６０９〜Ｄ−９０６
；Ｙ−６１０〜Ｄ−９０６；Ｉ−６１１〜Ｄ−９０６；Ｄ−６１２〜Ｄ−９０６
；Ｒ−６１３〜Ｄ−９０６；Ｄ−６１４〜Ｄ−９０６；Ｓ−６１５〜Ｄ−９０６
；Ｇ−６１６〜Ｄ−９０６；Ｔ−６１７〜Ｄ−９０６；Ｃ−６１８〜Ｄ−９０６
；Ｈ−６１９〜Ｄ−９０６；Ｓ−６２０〜Ｄ−９０６；Ｃ−６２１〜Ｄ−９０６
；Ｐ−６２２〜Ｄ−９０６；Ｐ−６２３〜Ｄ−９０６；Ｎ−６２４〜Ｄ−９０６
；Ｔ−６２５〜Ｄ−９０６；Ｉ−６２６〜Ｄ−９０６；Ｌ−６２７〜Ｄ−９０６
；Ｋ−６２８〜Ｄ−９０６；Ａ−６２９〜Ｄ−９０６；Ｈ−６３０〜Ｄ−９０６
；Ｑ−６３１〜Ｄ−９０６；Ｐ−６３２〜Ｄ−９０６；Ｙ−６３３〜Ｄ−９０６
；Ｇ−６３４〜Ｄ−９０６；Ｖ−６３５〜Ｄ−９０６；Ｑ−６３６〜Ｄ−９０６
；Ａ−６３７〜Ｄ−９０６；Ｃ−６３８〜Ｄ−９０６；Ｖ−６３９〜Ｄ−９０６
；Ｐ−６４０〜Ｄ−９０６；Ｃ−６４１〜Ｄ−９０６；Ｇ−６４２〜Ｄ−９０６
；Ｐ−６４３〜Ｄ−９０６；Ｇ−６４４〜Ｄ−９０６；Ｔ−６４５〜Ｄ−９０６
；Ｋ−６４６〜Ｄ−９０６；Ｎ−６４７〜Ｄ−９０６；Ｎ−６４８〜Ｄ−９０６
；Ｋ−６４９〜Ｄ−９０６；Ｉ−６５０〜Ｄ−９０６；Ｈ−６５１〜Ｄ−９０６
；Ｓ−６５２〜Ｄ−９０６；Ｌ−６５３〜Ｄ−９０６；Ｃ−６５４〜Ｄ−９０６
；Ｙ−６５５〜Ｄ−９０６；Ｎ−６５６〜Ｄ−９０６；Ｄ−６５７〜Ｄ−９０６
；Ｃ−６５８〜Ｄ−９０６；Ｔ−６５９〜Ｄ−９０６；Ｆ−６６０〜Ｄ−９０６
；Ｓ−６６１〜Ｄ−９０６；Ｒ−６６２〜Ｄ−９０６；Ｎ−６６３〜Ｄ−９０６
；Ｔ−６６４〜Ｄ−９０６；Ｐ−６６５〜Ｄ−９０６；Ｔ−６６６〜Ｄ−９０６
；Ｒ−６６７〜Ｄ−９０６；Ｔ−６６８〜Ｄ−９０６；Ｆ−６６９〜Ｄ−９０６
；Ｎ−６７０〜Ｄ−９０６；Ｙ−６７１〜Ｄ−９０６；Ｎ−６７２〜Ｄ−９０６
；Ｆ−６７３〜Ｄ−９０６；Ｓ−６７４〜Ｄ−９０６；Ａ−６７５〜Ｄ−９０６
；Ｌ−６７６〜Ｄ−９０６；Ａ−６７７〜Ｄ−９０６；Ｎ−６７８〜Ｄ−９０６
；Ｔ−６７９〜Ｄ−９０６；Ｖ−６８０〜Ｄ−９０６；Ｔ−６８１〜Ｄ−９０６
；Ｌ−６８２〜Ｄ−９０６；Ａ−６８３〜Ｄ−９０６；Ｇ−６８４〜Ｄ−９０６
；Ｇ−６８５〜Ｄ−９０６；Ｐ−６８６〜Ｄ−９０６；Ｓ−６８７〜Ｄ−９０６
；Ｆ−６８８〜Ｄ−９０６；Ｔ−６８９〜Ｄ−９０６；Ｓ−６９０〜Ｄ−９０６
；Ｋ−６９１〜Ｄ−９０６；Ｇ−６９２〜Ｄ−９０６；Ｌ−６９３〜Ｄ−９０６
；Ｋ−６９４〜Ｄ−９０６；Ｙ−６９５〜Ｄ−９０６；Ｆ−６９６〜Ｄ−９０６
；Ｈ−６９７〜Ｄ−９０６；Ｈ−６９８〜Ｄ−９０６；Ｆ−６９９〜Ｄ−９０６
；Ｔ−７００〜Ｄ−９０６；Ｌ−７０１〜Ｄ−９０６；Ｓ−７０２〜Ｄ−９０６
；Ｌ−７０３〜Ｄ−９０６；Ｃ−７０４〜Ｄ−９０６；Ｇ−７０５〜Ｄ−９０６
；Ｎ−７０６〜Ｄ−９０６；Ｑ−７０７〜Ｄ−９０６；Ｇ−７０８〜Ｄ−９０６
；Ｒ−７０９〜Ｄ−９０６；Ｋ−７１０〜Ｄ−９０６；Ｍ−７１１〜Ｄ−９０６
；Ｓ−７１２〜Ｄ−９０６；Ｖ−７１３〜Ｄ−９０６；Ｃ−７１４〜Ｄ−９０６
；Ｔ−７１５〜Ｄ−９０６；Ｄ−７１６〜Ｄ−９０６；Ｎ−７１７〜Ｄ−９０６
；Ｖ−７１８〜Ｄ−９０６；Ｔ−７１９〜Ｄ−９０６；Ｄ−７２０〜Ｄ−９０６
；Ｌ−７２１〜Ｄ−９０６；Ｒ−７２２〜Ｄ−９０６；Ｉ−７２３〜Ｄ−９０６
；Ｐ−７２４〜Ｄ−９０６；Ｅ−７２５〜Ｄ−９０６；Ｇ−７２６〜Ｄ−９０６
；Ｅ−７２７〜Ｄ−９０６；Ｓ−７２８〜Ｄ−９０６；Ｇ−７２９〜Ｄ−９０６
；Ｆ−７３０〜Ｄ−９０６；Ｓ−７３１〜Ｄ−９０６；Ｋ−７３２〜Ｄ−９０６
；Ｓ−７３３〜Ｄ−９０６；Ｉ−７３４〜Ｄ−９０６；Ｔ−７３５〜Ｄ−９０６
；Ａ−７３６〜Ｄ−９０６；Ｙ−７３７〜Ｄ−９０６；Ｖ−７３８〜Ｄ−９０６
；Ｃ−７３９〜Ｄ−９０６；Ｑ−７４０〜Ｄ−９０６；Ａ−７４１〜Ｄ−９０６
；Ｖ−７４２〜Ｄ−９０６；Ｉ−７４３〜Ｄ−９０６；Ｉ−７４４〜Ｄ−９０６
；Ｐ−７４５〜Ｄ−９０６；Ｐ−７４６〜Ｄ−９０６；Ｅ−７４７〜Ｄ−９０６
；Ｖ−７４８〜Ｄ−９０６；Ｔ−７４９〜Ｄ−９０６；Ｇ−７５０〜Ｄ−９０６
；Ｙ−７５１〜Ｄ−９０６；Ｋ−７５２〜Ｄ−９０６；Ａ−７５３〜Ｄ−９０６
；Ｇ−７５４〜Ｄ−９０６；Ｖ−７５５〜Ｄ−９０６；Ｓ−７５６〜Ｄ−９０６
；Ｓ−７５７〜Ｄ−９０６；Ｑ−７５８〜Ｄ−９０６；Ｐ−７５９〜Ｄ−９０６
；Ｖ−７６０〜Ｄ−９０６；Ｓ−７６１〜Ｄ−９０６；Ｌ−７６２〜Ｄ−９０６
；Ａ−７６３〜Ｄ−９０６；Ｄ−７６４〜Ｄ−９０６；Ｒ−７６５〜Ｄ−９０６
；Ｌ−７６６〜Ｄ−９０６；Ｉ−７６７〜Ｄ−９０６；Ｇ−７６８〜Ｄ−９０６
；Ｖ−７６９〜Ｄ−９０６；Ｔ−７７０〜Ｄ−９０６；Ｔ−７７１〜Ｄ−９０６
；Ｄ−７７２〜Ｄ−９０６；Ｍ−７７３〜Ｄ−９０６；Ｔ−７７４〜Ｄ−９０６
；Ｌ−７７５〜Ｄ−９０６；Ｄ−７７６〜Ｄ−９０６；Ｇ−７７７〜Ｄ−９０６
；Ｉ−７７８〜Ｄ−９０６；Ｔ−７７９〜Ｄ−９０６；Ｓ−７８０〜Ｄ−９０６
；Ｐ−７８１〜Ｄ−９０６；Ａ−７８２〜Ｄ−９０６；Ｅ−７８３〜Ｄ−９０６
；Ｌ−７８４〜Ｄ−９０６；Ｆ−７８５〜Ｄ−９０６；Ｈ−７８６〜Ｄ−９０６
；Ｌ−７８７〜Ｄ−９０６；Ｅ−７８８〜Ｄ−９０６；Ｓ−７８９〜Ｄ−９０６
；Ｌ−７９０〜Ｄ−９０６；Ｇ−７９１〜Ｄ−９０６；Ｉ−７９２〜Ｄ−９０６
；Ｐ−７９３〜Ｄ−９０６；Ｄ−７９４〜Ｄ−９０６；Ｖ−７９５〜Ｄ−９０６
；Ｉ−７９６〜Ｄ−９０６；Ｆ−７９７〜Ｄ−９０６；Ｆ−７９８〜Ｄ−９０６
；Ｙ−７９９〜Ｄ−９０６；Ｒ−８００〜Ｄ−９０６；Ｓ−８０１〜Ｄ−９０６
；Ｎ−８０２〜Ｄ−９０６；Ｄ−８０３〜Ｄ−９０６；Ｖ−８０４〜Ｄ−９０６
；Ｔ−８０５〜Ｄ−９０６；Ｑ−８０６〜Ｄ−９０６；Ｓ−８０７〜Ｄ−９０６
；Ｃ−８０８〜Ｄ−９０６；Ｓ−８０９〜Ｄ−９０６；Ｓ−８１０〜Ｄ−９０６
；Ｇ−８１１〜Ｄ−９０６；Ｒ−８１２〜Ｄ−９０６；Ｓ−８１３〜Ｄ−９０６
；Ｔ−８１４〜Ｄ−９０６；Ｔ−８１５〜Ｄ−９０６；Ｉ−８１６〜Ｄ−９０６
；Ｒ−８１７〜Ｄ−９０６；Ｖ−８１８〜Ｄ−９０６；Ｒ−８１９〜Ｄ−９０６
；Ｃ−８２０〜Ｄ−９０６；Ｓ−８２１〜Ｄ−９０６；Ｐ−８２２〜Ｄ−９０６
；Ｑ−８２３〜Ｄ−９０６；Ｋ−８２４〜Ｄ−９０６；Ｔ−８２５〜Ｄ−９０６
；Ｖ−８２６〜Ｄ−９０６；Ｐ−８２７〜Ｄ−９０６；Ｇ−８２８〜Ｄ−９０６
；Ｓ−８２９〜Ｄ−９０６；Ｌ−８３０〜Ｄ−９０６；Ｌ−８３１〜Ｄ−９０６
；Ｌ−８３２〜Ｄ−９０６；Ｐ−８３３〜Ｄ−９０６；Ｇ−８３４〜Ｄ−９０６
；Ｔ−８３５〜Ｄ−９０６；Ｃ−８３６〜Ｄ−９０６；Ｓ−８３７〜Ｄ−９０６
；Ｄ−８３８〜Ｄ−９０６；Ｇ−８３９〜Ｄ−９０６；Ｔ−８４０〜Ｄ−９０６
；Ｃ−８４１〜Ｄ−９０６；Ｄ−８４２〜Ｄ−９０６；Ｇ−８４３〜Ｄ−９０６
；Ｃ−８４４〜Ｄ−９０６；Ｎ−８４５〜Ｄ−９０６；Ｆ−８４６〜Ｄ−９０６
；Ｈ−８４７〜Ｄ−９０６；Ｆ−８４８〜Ｄ−９０６；Ｌ−８４９〜Ｄ−９０６
；Ｗ−８５０〜Ｄ−９０６；Ｅ−８５１〜Ｄ−９０６；Ｓ−８５２〜Ｄ−９０６
；Ａ−８５３〜Ｄ−９０６；Ａ−８５４〜Ｄ−９０６；Ａ−８５５〜Ｄ−９０６
；Ｃ−８５６〜Ｄ−９０６；Ｐ−８５７〜Ｄ−９０６；Ｌ−８５８〜Ｄ−９０６
；Ｃ−８５９〜Ｄ−９０６；Ｓ−８６０〜Ｄ−９０６；Ｖ−８６１〜Ｄ−９０６
；Ａ−８６２〜Ｄ−９０６；Ｄ−８６３〜Ｄ−９０６；Ｙ−８６４〜Ｄ−９０６
；Ｈ−８６５〜Ｄ−９０６；Ａ−８６６〜Ｄ−９０６；Ｉ−８６７〜Ｄ−９０６
；Ｖ−８６８〜Ｄ−９０６；Ｓ−８６９〜Ｄ−９０６；Ｓ−８７０〜Ｄ−９０６
；Ｃ−８７１〜Ｄ−９０６；Ｖ−８７２〜Ｄ−９０６；Ａ−８７３〜Ｄ−９０６
；Ｇ−８７４〜Ｄ−９０６；Ｉ−８７５〜Ｄ−９０６；Ｑ−８７６〜Ｄ−９０６
；Ｋ−８７７〜Ｄ−９０６；Ｔ−８７８〜Ｄ−９０６；Ｔ−８７９〜Ｄ−９０６
；Ｙ−８８０〜Ｄ−９０６；Ｖ−８８１〜Ｄ−９０６；Ｗ−８８２〜Ｄ−９０６
；Ｒ−８８３〜Ｄ−９０６；Ｅ−８８４〜Ｄ−９０６；Ｐ−８８５〜Ｄ−９０６
；Ｋ−８８６〜Ｄ−９０６；Ｌ−８８７〜Ｄ−９０６；Ｃ−８８８〜Ｄ−９０６
；Ｓ−８８９〜Ｄ−９０６；Ｇ−８９０〜Ｄ−９０６；Ｇ−８９１〜Ｄ−９０６
；Ｉ−８９２〜Ｄ−９０６；Ｓ−８９３〜Ｄ−９０６；Ｌ−８９４〜Ｄ−９０６
；Ｐ−８９５〜Ｄ−９０６；Ｅ−８９６〜Ｄ−９０６；Ｑ−８９７〜Ｄ−９０６
；Ｒ−８９８〜Ｄ−９０６；Ｖ−８９９〜Ｄ−９０６；およびＴ−９００〜Ｄ−
９０６。これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明に含
まれる。
【０２３３】 本発明はさらに、推定成熟ＴＲ１３タンパク質（図７Ａ〜Ｄ（配列番号４０）
に示されるアミノ酸配列を有する）の推定細胞外ドメインのカルボキシ末端から
、４８位のアラニン残基までで１つ以上の残基が欠失されたポリぺプチド、およ
びこのようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には
、本発明は、図７Ａ〜Ｄの残基４２−ｍ1のアミノ酸配列を含むか、またあるい
は図７Ａ〜Ｄの残基４２−ｍ1のアミノ酸配列からなるポリぺプチドを提供し、
ここでｍ１は、図７Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸残基の位置に対応する４８〜９０６
の整数である。
【０２３４】 従って、本発明は、以下の残基のアミノ酸配列を含むか、またあるいは以下の
残基のアミノ酸からなるＴＲ１３ポリぺプチドを提供する：配列番号４０のＴ−
４２〜Ｄ−９０６；Ｔ−４２〜Ｉ−９０５；Ｔ−４２〜Ｔ−９０４；Ｔ−４２〜
Ｋ−９０３；Ｔ−４２〜Ｃ−９０２；Ｔ−４２〜Ｉ−９０１；Ｔ−４２〜Ｔ−９
００；Ｔ−４２〜Ｖ−８９９；Ｔ−４２〜Ｒ−８９８；Ｔ−４２〜Ｑ−８９７；
Ｔ−４２〜Ｅ−８９６；Ｔ−４２〜Ｐ−８９５；Ｔ−４２〜Ｌ−８９４；Ｔ−４
２〜Ｓ−８９３；Ｔ−４２〜Ｉ−８９２；Ｔ−４２〜Ｇ−８９１；Ｔ−４２〜Ｇ
−８９０；Ｔ−４２〜Ｓ−８８９；Ｔ−４２〜Ｃ−８８８；Ｔ−４２〜Ｌ−８８
７；Ｔ−４２〜Ｋ−８８６；Ｔ−４２〜Ｐ−８８５；Ｔ−４２〜Ｅ−８８４；Ｔ
−４２〜Ｒ−８８３；Ｔ−４２〜Ｗ−８８２；Ｔ−４２〜Ｖ−８８１；Ｔ−４２
〜Ｙ−８８０；Ｔ−４２〜Ｔ−８７９；Ｔ−４２〜Ｔ−８７８；Ｔ−４２〜Ｋ−
８７７；Ｔ−４２〜Ｑ−８７６；Ｔ−４２〜Ｉ−８７５；Ｔ−４２〜Ｇ−８７４
；Ｔ−４２〜Ａ−８７３；Ｔ−４２〜Ｖ−８７２；Ｔ−４２〜Ｃ−８７１；Ｔ−
４２〜Ｓ−８７０；Ｔ−４２〜Ｓ−８６９；Ｔ−４２〜Ｖ−８６８；Ｔ−４２〜
Ｉ−８６７；Ｔ−４２〜Ａ−８６６；Ｔ−４２〜Ｈ−８６５；Ｔ−４２〜Ｙ−８
６４；Ｔ−４２〜Ｄ−８６３；Ｔ−４２〜Ａ−８６２；Ｔ−４２〜Ｖ−８６１；
Ｔ−４２〜Ｓ−８６０；Ｔ−４２〜Ｃ−８５９；Ｔ−４２〜Ｌ−８５８；Ｔ−４
２〜Ｐ−８５７；Ｔ−４２〜Ｃ−８５６；Ｔ−４２〜Ａ−８５５；Ｔ−４２〜Ａ
−８５４；Ｔ−４２〜Ａ−８５３；Ｔ−４２〜Ｓ−８５２；Ｔ−４２〜Ｅ−８５
１；Ｔ−４２〜Ｗ−８５０；Ｔ−４２〜Ｌ−８４９；Ｔ−４２〜Ｆ−８４８；Ｔ
−４２〜Ｈ−８４７；Ｔ−４２〜Ｆ−８４６；Ｔ−４２〜Ｎ−８４５；Ｔ−４２
〜Ｃ−８４４；Ｔ−４２〜Ｇ−８４３；Ｔ−４２〜Ｄ−８４２；Ｔ−４２〜Ｃ−
８４１；Ｔ−４２〜Ｔ−８４０；Ｔ−４２〜Ｇ−８３９；Ｔ−４２〜Ｄ−８３８
；Ｔ−４２〜Ｓ−８３７；Ｔ−４２〜Ｃ−８３６；Ｔ−４２〜Ｔ−８３５；Ｔ−
４２〜Ｇ−８３４；Ｔ−４２〜Ｐ−８３３；Ｔ−４２〜Ｌ−８３２；Ｔ−４２〜
Ｌ−８３１；Ｔ−４２〜Ｌ−８３０；Ｔ−４２〜Ｓ−８２９；Ｔ−４２〜Ｇ−８
２８；Ｔ−４２〜Ｐ−８２７；Ｔ−４２〜Ｖ−８２６；Ｔ−４２〜Ｔ−８２５；
Ｔ−４２〜Ｋ−８２４；Ｔ−４２〜Ｑ−８２３；Ｔ−４２〜Ｐ−８２２；Ｔ−４
２〜Ｓ−８２１；Ｔ−４２〜Ｃ−８２０；Ｔ−４２〜Ｒ−８１９；Ｔ−４２〜Ｖ
−８１８；Ｔ−４２〜Ｒ−８１７；Ｔ−４２〜Ｉ−８１６；Ｔ−４２〜Ｔ−８１
５；Ｔ−４２〜Ｔ−８１４；Ｔ−４２〜Ｓ−８１３；Ｔ−４２〜Ｒ−８１２；Ｔ
−４２〜Ｇ−８１１；Ｔ−４２〜Ｓ−８１０；Ｔ−４２〜Ｓ−８０９；Ｔ−４２
〜Ｃ−８０８；Ｔ−４２〜Ｓ−８０７；Ｔ−４２〜Ｑ−８０６；Ｔ−４２〜Ｔ−
８０５；Ｔ−４２〜Ｖ−８０４；Ｔ−４２〜Ｄ−８０３；Ｔ−４２〜Ｎ−８０２
；Ｔ−４２〜Ｓ−８０１；Ｔ−４２〜Ｒ−８００；Ｔ−４２〜Ｙ−７９９；Ｔ−
４２〜Ｆ−７９８；Ｔ−４２〜Ｆ−７９７；Ｔ−４２〜Ｉ−７９６；Ｔ−４２〜
Ｖ−７９５；Ｔ−４２〜Ｄ−７９４；Ｔ−４２〜Ｐ−７９３；Ｔ−４２〜Ｉ−７
９２；Ｔ−４２〜Ｇ−７９１；Ｔ−４２〜Ｌ−７９０；Ｔ−４２〜Ｓ−７８９；
Ｔ−４２〜Ｅ−７８８；Ｔ−４２〜Ｌ−７８７；Ｔ−４２〜Ｈ−７８６；Ｔ−４
２〜Ｆ−７８５；Ｔ−４２〜Ｌ−７８４；Ｔ−４２〜Ｅ−７８３；Ｔ−４２〜Ａ
−７８２；Ｔ−４２〜Ｐ−７８１；Ｔ−４２〜Ｓ−７８０；Ｔ−４２〜Ｔ−７７
９；Ｔ−４２〜Ｉ−７７８；Ｔ−４２〜Ｇ−７７７；Ｔ−４２〜Ｄ−７７６；Ｔ
−４２〜Ｌ−７７５；Ｔ−４２〜Ｔ−７７４；Ｔ−４２〜Ｍ−７７３；Ｔ−４２
〜Ｄ−７７２；Ｔ−４２〜Ｔ−７７１；Ｔ−４２〜Ｔ−７７０；Ｔ−４２〜Ｖ−
７６９；Ｔ−４２〜Ｇ−７６８；Ｔ−４２〜Ｉ−７６７；Ｔ−４２〜Ｌ−７６６
；Ｔ−４２〜Ｒ−７６５；Ｔ−４２〜Ｄ−７６４；Ｔ−４２〜Ａ−７６３；Ｔ−
４２〜Ｌ−７６２；Ｔ−４２〜Ｓ−７６１；Ｔ−４２〜Ｖ−７６０；Ｔ−４２〜
Ｐ−７５９；Ｔ−４２〜Ｑ−７５８；Ｔ−４２〜Ｓ−７５７；Ｔ−４２〜Ｓ−７
５６；Ｔ−４２〜Ｖ−７５５；Ｔ−４２〜Ｇ−７５４；Ｔ−４２〜Ａ−７５３；
Ｔ−４２〜Ｋ−７５２；Ｔ−４２〜Ｙ−７５１；Ｔ−４２〜Ｇ−７５０；Ｔ−４
２〜Ｔ−７４９；Ｔ−４２〜Ｖ−７４８；Ｔ−４２〜Ｅ−７４７；Ｔ−４２〜Ｐ
−７４６；Ｔ−４２〜Ｐ−７４５；Ｔ−４２〜Ｉ−７４４；Ｔ−４２〜Ｉ−７４
３；Ｔ−４２〜Ｖ−７４２；Ｔ−４２〜Ａ−７４１；Ｔ−４２〜Ｑ−７４０；Ｔ
−４２〜Ｃ−７３９；Ｔ−４２〜Ｖ−７３８；Ｔ−４２〜Ｙ−７３７；Ｔ−４２
〜Ａ−７３６；Ｔ−４２〜Ｔ−７３５；Ｔ−４２〜Ｉ−７３４；Ｔ−４２〜Ｓ−
７３３；Ｔ−４２〜Ｋ−７３２；Ｔ−４２〜Ｓ−７３１；Ｔ−４２〜Ｆ−７３０
；Ｔ−４２〜Ｇ−７２９；Ｔ−４２〜Ｓ−７２８；Ｔ−４２〜Ｅ−７２７；Ｔ−
４２〜Ｇ−７２６；Ｔ−４２〜Ｅ−７２５；Ｔ−４２〜Ｐ−７２４；Ｔ−４２〜
Ｉ−７２３；Ｔ−４２〜Ｒ−７２２；Ｔ−４２〜Ｌ−７２１；Ｔ−４２〜Ｄ−７
２０；Ｔ−４２〜Ｔ−７１９；Ｔ−４２〜Ｖ−７１８；Ｔ−４２〜Ｎ−７１７；
Ｔ−４２〜Ｄ−７１６；Ｔ−４２〜Ｔ−７１５；Ｔ−４２〜Ｃ−７１４；Ｔ−４
２〜Ｖ−７１３；Ｔ−４２〜Ｓ−７１２；Ｔ−４２〜Ｍ−７１１；Ｔ−４２〜Ｋ
−７１０；Ｔ−４２〜Ｒ−７０９；Ｔ−４２〜Ｇ−７０８；Ｔ−４２〜Ｑ−７０
７；Ｔ−４２〜Ｎ−７０６；Ｔ−４２〜Ｇ−７０５；Ｔ−４２〜Ｃ−７０４；Ｔ
−４２〜Ｌ−７０３；Ｔ−４２〜Ｓ−７０２；Ｔ−４２〜Ｌ−７０１；Ｔ−４２
〜Ｔ−７００；Ｔ−４２〜Ｆ−６９９；Ｔ−４２〜Ｔ−４２９８；Ｔ−４２〜Ｔ
−４２９７；Ｔ−４２〜Ｆ−６９６；Ｔ−４２〜Ｙ−６９５；Ｔ−４２〜Ｋ−６
９４；Ｔ−４２〜Ｌ−６９３；Ｔ−４２〜Ｇ−６９２；Ｔ−４２〜Ｋ−６９１；
Ｔ−４２〜Ｓ−６９０；Ｔ−４２〜Ｔ−６８９；Ｔ−４２〜Ｆ−６８８；Ｔ−４
２〜Ｓ−６８７；Ｔ−４２〜Ｐ−６８６；Ｔ−４２〜Ｇ−６８５；Ｔ−４２〜Ｇ
−６８４；Ｔ−４２〜Ａ−６８３；Ｔ−４２〜Ｌ−６８２；Ｔ−４２〜Ｔ−６８
１；Ｔ−４２〜Ｖ−６８０；Ｔ−４２〜Ｔ−６７９；Ｔ−４２〜Ｎ−６７８；Ｔ
−４２〜Ａ−６７７；Ｔ−４２〜Ｌ−６７６；Ｔ−４２〜Ａ−６７５；Ｔ−４２
〜Ｓ−６７４；Ｔ−４２〜Ｆ−６７３；Ｔ−４２〜Ｎ−６７２；Ｔ−４２〜Ｙ−
６７１；Ｔ−４２〜Ｎ−６７０；Ｔ−４２〜Ｆ−６６９；Ｔ−４２〜Ｔ−６６８
；Ｔ−４２〜Ｒ−６６７；Ｔ−４２〜Ｔ−６６６；Ｔ−４２〜Ｐ−６６５；Ｔ−
４２〜Ｔ−６６４；Ｔ−４２〜Ｎ−６６３；Ｔ−４２〜Ｒ−６６２；Ｔ−４２〜
Ｓ−６６１；Ｔ−４２〜Ｆ−６６０；Ｔ−４２〜Ｔ−６５９；Ｔ−４２〜Ｃ−６
５８；Ｔ−４２〜Ｄ−６５７；Ｔ−４２〜Ｎ−６５６；Ｔ−４２〜Ｙ−６５５；
Ｔ−４２〜Ｃ−６５４；Ｔ−４２〜Ｌ−６５３；Ｔ−４２〜Ｓ−６５２；Ｔ−４
２〜Ｔ−４２５１；Ｔ−４２〜Ｉ−６５０；Ｔ−４２〜Ｋ−６４９；Ｔ−４２〜
Ｎ−６４８；Ｔ−４２〜Ｎ−６４７；Ｔ−４２〜Ｋ−６４６；Ｔ−４２〜Ｔ−６
４５；Ｔ−４２〜Ｇ−６４４；Ｔ−４２〜Ｐ−６４３；Ｔ−４２〜Ｇ−６４２；
Ｔ−４２〜Ｃ−６４１；Ｔ−４２〜Ｐ−６４０；Ｔ−４２〜Ｖ−６３９；Ｔ−４
２〜Ｃ−６３８；Ｔ−４２〜Ａ−６３７；Ｔ−４２〜Ｑ−６３６；Ｔ−４２〜Ｖ
−６３５；Ｔ−４２〜Ｇ−６３４；Ｔ−４２〜Ｙ−６３３；Ｔ−４２〜Ｐ−６３
２；Ｔ−４２〜Ｑ−６３１；Ｔ−４２〜Ｔ−４２３０；Ｔ−４２〜Ａ−６２９；
Ｔ−４２〜Ｋ−６２８；Ｔ−４２〜Ｌ−６２７；Ｔ−４２〜Ｉ−６２６；Ｔ−４
２〜Ｔ−６２５；Ｔ−４２〜Ｎ−６２４；Ｔ−４２〜Ｐ−６２３；Ｔ−４２〜Ｐ
−６２２；Ｔ−４２〜Ｃ−６２１；Ｔ−４２〜Ｓ−６２０；Ｔ−４２〜Ｔ−４２
１９；Ｔ−４２〜Ｃ−６１８；Ｔ−４２〜Ｔ−６１７；Ｔ−４２〜Ｇ−６１６；
Ｔ−４２〜Ｓ−６１５；Ｔ−４２〜Ｄ−６１４；Ｔ−４２〜Ｒ−６１３；Ｔ−４
２〜Ｄ−６１２；Ｔ−４２〜Ｉ−６１１；Ｔ−４２〜Ｙ−６１０；Ｔ−４２〜Ｙ
−６０９；Ｔ−４２〜Ｇ−６０８；Ｔ−４２〜Ａ−６０７；Ｔ−４２〜Ｐ−６０
６；Ｔ−４２〜Ｃ−６０５；Ｔ−４２〜Ｓ−６０４；Ｔ−４２〜Ｔ−６０３；Ｔ
−４２〜Ｃ−６０２；Ｔ−４２〜Ｓ−６０１；Ｔ−４２〜Ｓ−６００；Ｔ−４２
〜Ｇ−５９９；Ｔ−４２〜Ｖ−５９８；Ｔ−４２〜Ｄ−５９７；Ｔ−４２〜Ｓ−
５９６；Ｔ−４２〜Ａ−５９５；Ｔ−４２〜Ｅ−５９４；Ｔ−４２〜Ｌ−５９３
；Ｔ−４２〜Ａ−５９２；Ｔ−４２〜Ｃ−５９１；Ｔ−４２〜Ｐ−５９０；Ｔ−
４２〜Ｒ−５８９；Ｔ−４２〜Ｃ−５８８；Ｔ−４２〜Ｙ−５８７；Ｔ−４２〜
Ｓ−５８６；Ｔ−４２〜Ａ−５８５；Ｔ−４２〜Ｖ−５８４；Ｔ−４２〜Ｇ−５
８３；Ｔ−４２〜Ｎ−５８２；Ｔ−４２〜Ｍ−５８１；Ｔ−４２〜Ｖ−５８０；
Ｔ−４２〜Ｎ−５７９；Ｔ−４２〜Ｔ−５７８；Ｔ−４２〜Ｖ−５７７；Ｔ−４
２〜Ｎ−５７６；Ｔ−４２〜Ｉ−５７５；Ｔ−４２〜Ｓ−５７４；Ｔ−４２〜Ｙ
−５７３；Ｔ−４２〜Ｉ−５７２；Ｔ−４２〜Ｋ−５７１；Ｔ−４２〜Ａ−５７
０；Ｔ−４２〜Ｖ−５６９；Ｔ−４２〜Ｄ−５６８；Ｔ−４２〜Ｎ−５６７；Ｔ
−４２〜Ｔ−５６６；Ｔ−４２〜Ｙ−５６５；Ｔ−４２〜Ｋ−５６４；Ｔ−４２
〜Ｒ−５６３；Ｔ−４２〜Ｓ−５６２；Ｔ−４２〜Ａ−５６１；Ｔ−４２〜Ｅ−
５６０；Ｔ−４２〜Ｈ−５５９；Ｔ−４２〜Ｆ−５５８；Ｔ−４２〜Ｔ−５５７
；Ｔ−４２〜Ｔ−５５６；Ｔ−４２〜Ｒ−５５５；Ｔ−４２〜Ｑ−５５４；Ｔ−
４２〜Ｆ−５５３；Ｔ−４２〜Ａ−５５２；Ｔ−４２〜Ｗ−５５１；Ｔ−４２〜
Ｔ−５５０；Ｔ−４２〜Ｆ−５４９；Ｔ−４２〜Ｓ−５４８；Ｔ−４２〜Ｔ−５
４７；Ｔ−４２〜Ｔ−５４６；Ｔ−４２〜Ｔ−５４５；Ｔ−４２〜Ｎ−５４４；
Ｔ−４２〜Ｅ−５４３；Ｔ−４２〜Ｅ−５４２；Ｔ−４２〜Ｉ−５４１；Ｔ−４
２〜Ｉ−５４０；Ｔ−４２〜Ｙ−５３９；Ｔ−４２〜Ｔ−５３８；Ｔ−４２〜Ｙ
−５３７；Ｔ−４２〜Ｓ−５３６；Ｔ−４２〜Ｑ−５３５；Ｔ−４２〜Ｋ−５３
４；Ｔ−４２〜Ｇ−５３３；Ｔ−４２〜Ｋ−５３２；Ｔ−４２〜Ｓ−５３１；Ｔ
−４２〜Ｇ−５３０；Ｔ−４２〜Ｋ−５２９；Ｔ−４２〜Ｗ−５２８；Ｔ−４２
〜Ｔ−５２７；Ｔ−４２〜Ｅ−５２６；Ｔ−４２〜Ｖ−５２５；Ｔ−４２〜Ｐ−
５２４；Ｔ−４２〜Ｔ−５２３；Ｔ−４２〜Ｎ−５２２；Ｔ−４２〜Ｔ−５２１
；Ｔ−４２〜Ｒ−５２０；Ｔ−４２〜Ｓ−５１９；Ｔ−４２〜Ｎ−５１８；Ｔ−
４２〜Ｖ−５１７；Ｔ−４２〜Ｇ−５１６；Ｔ−４２〜Ｖ−５１５；Ｔ−４２〜
Ｍ−５１４；Ｔ−４２〜Ｆ−５１３；Ｔ−４２〜Ｙ−５１２；Ｔ−４２〜Ｌ−５
１１；Ｔ−４２〜Ｅ−５１０；Ｔ−４２〜Ｃ−５０９；Ｔ−４２〜Ｎ−５０８；
Ｔ−４２〜Ｖ−５０７；Ｔ−４２〜Ｓ−５０６；Ｔ−４２〜Ｃ−５０５；Ｔ−４
２〜Ｌ−５０４；Ｔ−４２〜Ｔ−５０３；Ｔ−４２〜Ｅ−５０２；Ｔ−４２〜Ｆ
−５０１；Ｔ−４２〜Ｖ−５００；Ｔ−４２〜Ｆ−４９９；Ｔ−４２〜Ｔ−４９
８；Ｔ−４２〜Ｉ−４９７；Ｔ−４２〜Ｒ−４９６；Ｔ−４２〜Ａ−４９５；Ｔ
−４２〜Ｖ−４９４；Ｔ−４２〜Ｅ−４９３；Ｔ−４２〜Ｋ−４９２；Ｔ−４２
〜Ｎ−４９１；Ｔ−４２〜Ｅ−４９０；Ｔ−４２〜Ｔ−４８９；Ｔ−４２〜Ｄ−
４８８；Ｔ−４２〜Ａ−４８７；Ｔ−４２〜Ｍ−４８６；Ｔ−４２〜Ｖ−４８５
；Ｔ−４２〜Ｓ−４８４；Ｔ−４２〜Ｑ−４８３；Ｔ−４２〜Ｐ−４８２；Ｔ−
４２〜Ｐ−４８１；Ｔ−４２〜Ｒ−４８０；Ｔ−４２〜Ｆ−４７９；Ｔ−４２〜
Ｇ−４７８；Ｔ−４２〜Ｐ−４７７；Ｔ−４２〜Ｖ−４７６；Ｔ−４２〜Ｖ−４
７５；Ｔ−４２〜Ｌ−４７４；Ｔ−４２〜Ｔ−４７３；Ｔ−４２〜Ｌ−４７２；
Ｔ−４２〜Ｉ−４７１；Ｔ−４２〜Ｍ−４７０；Ｔ−４２〜Ｆ−４６９；Ｔ−４
２〜Ｄ−４６８；Ｔ−４２〜Ｎ−４６７；Ｔ−４２〜Ｄ−４６６；Ｔ−４２〜Ｓ
−４６５；Ｔ−４２〜Ａ−４６４；Ｔ−４２〜Ｇ−４６３；Ｔ−４２〜Ａ−４６
２；Ｔ−４２〜Ａ−４６１；Ｔ−４２〜Ｔ−４６０；Ｔ−４２〜Ｙ−４５９；Ｔ
−４２〜Ｉ−４５８；Ｔ−４２〜Ｈ−４５７；Ｔ−４２〜Ｄ−４５６；Ｔ−４２
〜Ｇ−４５５；Ｔ−４２〜Ａ−４５４；Ｔ−４２〜Ｖ−４５３；Ｔ−４２〜Ｅ−
４５２；Ｔ−４２〜Ｗ−４５１；Ｔ−４２〜Ｇ−４５０；Ｔ−４２〜Ｔ−４４９
；Ｔ−４２〜Ｍ−４４８；Ｔ−４２〜Ｇ−４４７；Ｔ−４２〜Ｋ−４４６；Ｔ−
４２〜Ｙ−４４５；Ｔ−４２〜Ｅ−４４４；Ｔ−４２〜Ｆ−４４３；Ｔ−４２〜
Ｎ−４４２；Ｔ−４２〜Ｉ−４４１；Ｔ−４２〜Ｇ−４４０；Ｔ−４２〜Ｓ−４
３９；Ｔ−４２〜Ｌ−４３８；Ｔ−４２〜Ｖ−４３７；Ｔ−４２〜Ｔ−４３６；
Ｔ−４２〜Ｔ−４３５；Ｔ−４２〜Ｅ−４３４；Ｔ−４２〜Ｍ−４３３；Ｔ−４
２〜Ｎ−４３２；Ｔ−４２〜Ｔ−４３１；Ｔ−４２〜Ｐ−４３０；Ｔ−４２〜Ｌ
−４２９；Ｔ−４２〜Ｔ−４２８；Ｔ−４２〜Ｎ−４２７；Ｔ−４２〜Ｗ−４２
６；Ｔ−４２〜Ｗ−４２５；Ｔ−４２〜Ｋ−４２４；Ｔ−４２〜Ｙ−４２３；Ｔ
−４２〜Ｅ−４２２；Ｔ−４２〜Ｆ−４２１；Ｔ−４２〜Ｇ−４２０；Ｔ−４２
〜Ｖ−４１９；Ｔ−４２〜Ａ−４１８；Ｔ−４２〜Ｐ−４１７；Ｔ−４２〜Ｅ−
４１６；Ｔ−４２〜Ｔ−４１５；Ｔ−４２〜Ｇ−４１４；Ｔ−４２〜Ａ−４１３
；Ｔ−４２〜Ｐ−４１２；Ｔ−４２〜Ｃ−４１１；Ｔ−４２〜Ｒ−４１０；Ｔ−
４２〜Ｔ−４０９；Ｔ−４２〜Ｃ−４０８；Ｔ−４２〜Ｄ−４０７；Ｔ−４２〜
Ｓ−４０６；Ｔ−４２〜Ｇ−４０５；Ｔ−４２〜Ｎ−４０４；Ｔ−４２〜Ｓ−４
０３；Ｔ−４２〜Ｙ−４０２；Ｔ−４２〜Ｓ−４０１；Ｔ−４２〜Ｇ−４００；
Ｔ−４２〜Ｙ−３９９；Ｔ−４２〜Ｐ−３９８；Ｔ−４２〜Ｃ−３９７；Ｔ−４
２〜Ｐ−３９６；Ｔ−４２〜Ｑ−３９５；Ｔ−４２〜Ｃ−３９４；Ｔ−４２〜Ｔ
−３９３；Ｔ−４２〜Ｓ−３９２；Ｔ−４２〜Ｎ−３９１；Ｔ−４２〜Ｎ−３９
０；Ｔ−４２〜Ｔ−３８９；Ｔ−４２〜Ｋ−３８８；Ｔ−４２〜Ｆ−３８７；Ｔ
−４２〜Ｆ−３８６；Ｔ−４２〜Ｇ−３８５；Ｔ−４２〜Ｐ−３８４；Ｔ−４２
〜Ｎ−３８３；Ｔ−４２〜Ｃ−３８２；Ｔ−４２〜Ｐ−３８１；Ｔ−４２〜Ｐ−
３８０；Ｔ−４２〜Ｃ−３７９；Ｔ−４２〜Ｈ−３７８；Ｔ−４２〜Ｔ−３７７
；Ｔ−４２〜Ｋ−３７６；Ｔ−４２〜Ｖ−３７５；Ｔ−４２〜Ｇ−３７４；Ｔ−
４２〜Ｓ−３７３；Ｔ−４２〜Ａ−３７２；Ｔ−４２〜Ｐ−３７１；Ｔ−４２〜
Ｌ−３７０；Ｔ−４２〜Ｋ−３６９；Ｔ−４２〜Ｖ−３６８；Ｔ−４２〜Ａ−３
６７；Ｔ−４２〜Ｇ−３６６；Ｔ−４２〜Ｅ−３６５；Ｔ−４２〜Ｌ−３６４；
Ｔ−４２〜Ｄ−３６３；Ｔ−４２〜Ｅ−３６２；Ｔ−４２〜Ｓ−３６１；Ｔ−４
２〜Ｃ−３６０；Ｔ−４２〜Ｉ−３５９；Ｔ−４２〜Ｋ−３５８；Ｔ−４２〜Ｐ
−３５７；Ｔ−４２〜Ｋ−３５６；Ｔ−４２〜Ａ−３５５；Ｔ−４２〜Ｗ−３５
４；Ｔ−４２〜Ｋ−３５３；Ｔ−４２〜Ｙ−３５２；Ｔ−４２〜Ｍ−３５１；Ｔ
−４２〜Ｌ−３５０；Ｔ−４２〜Ｑ−３４９；Ｔ−４２〜Ｔ−３４８；Ｔ−４２
〜Ｅ−３４７；Ｔ−４２〜Ｇ−３４６；Ｔ−４２〜Ｎ−３４５；Ｔ−４２〜Ａ−
３４４；Ｔ−４２〜Ｄ−３４３；Ｔ−４２〜Ｃ−３４２；Ｔ−４２〜Ａ−３４１
；Ｔ−４２〜Ｔ−３４０；Ｔ−４２〜Ｈ−３３９；Ｔ−４２〜Ｔ−３３８；Ｔ−
４２〜Ｙ−３３７；Ｔ−４２〜Ｆ−３３６；Ｔ−４２〜Ｙ−３３５；Ｔ−４２〜
Ｄ−３３４；Ｔ−４２〜Ｋ−３３３；Ｔ−４２〜Ｄ−３３２；Ｔ−４２〜Ｔ−３
３１；Ｔ−４２〜Ｃ−３３０；Ｔ−４２〜Ａ−３２９；Ｔ−４２〜Ｐ−３２８；
Ｔ−４２〜Ｒ−３２７；Ｔ−４２〜Ｖ−３２６；Ｔ−４２〜Ｎ−３２５；Ｔ−４
２〜Ｃ−３２４；Ｔ−４２〜Ｓ−３２３；Ｔ−４２〜Ｓ−３２２；Ｔ−４２〜Ｓ
−３２１；Ｔ−４２〜Ｇ−３２０；Ｔ−４２〜Ｋ−３１９；Ｔ−４２〜Ｅ−３１
８；Ｔ−４２〜Ｓ−３１７；Ｔ−４２〜Ｙ−３１６；Ｔ−４２〜Ｋ−３１５；Ｔ
−４２〜Ｄ−３１４；Ｔ−４２〜Ｐ−３１３；Ｔ−４２〜Ｄ−３１２；Ｔ−４２
〜Ｃ−３１１；Ｔ−４２〜Ｑ−３１０；Ｔ−４２〜Ｈ−３０９；Ｔ−４２〜Ｃ−
３０８；Ｔ−４２〜Ｓ−３０７；Ｔ−４２〜Ｔ−３０６；Ｔ−４２〜Ｅ−３０５
；Ｔ−４２〜Ｇ−３０４；Ｔ−４２〜Ｋ−３０３；Ｔ−４２〜Ｎ−３０２；Ｔ−
４２〜Ｓ−３０１；Ｔ−４２〜Ｙ−３００；Ｔ−４２〜Ｓ−２９９；Ｔ−４２〜
Ｎ−２９８；Ｔ−４２〜Ａ−２９７；Ｔ−４２〜Ｐ−２９６；Ｔ−４２〜Ｃ−２
９５；Ｔ−４２〜Ｌ−２９４；Ｔ−４２〜Ｋ−２９３；Ｔ−４２〜Ｃ−２９２；
Ｔ−４２〜Ｆ−２９１；Ｔ−４２〜Ｓ−２９０；Ｔ−４２〜Ｓ−２８９；Ｔ−４
２〜Ｇ−２８８；Ｔ−４２〜Ｑ−２８７；Ｔ−４２〜Ｋ−２８６；Ｔ−４２〜Ｄ
−２８５；Ｔ−４２〜Ａ−２８４；Ｔ−４２〜Ｙ−２８３；Ｔ−４２〜Ｔ−２８
２；Ｔ−４２〜Ｇ−２８１；Ｔ−４２〜Ｐ−２８０；Ｔ−４２〜Ｋ−２７９；Ｔ
−４２〜Ｃ−２７８；Ｔ−４２〜Ｐ−２７７；Ｔ−４２〜Ｆ−２７６；Ｔ−４２
〜Ｃ−２７５；Ｔ−４２〜Ｅ−２７４；Ｔ−４２〜Ｓ−２７３；Ｔ−４２〜Ｔ−
２７２；Ｔ−４２〜Ｙ−２７１；Ｔ−４２〜Ａ−２７０；Ｔ−４２〜Ｖ−２６９
；Ｔ−４２〜Ｇ−２６８；Ｔ−４２〜Ｔ−２６７；Ｔ−４２〜Ｉ−２６６；Ｔ−
４２〜Ａ−２６５；Ｔ−４２〜Ｉ−２６４；Ｔ−４２〜Ｎ−２６３；Ｔ−４２〜
Ｒ−２６２；Ｔ−４２〜Ｖ−２６１；Ｔ−４２〜Ｌ−２６０；Ｔ−４２〜Ｖ−２
５９；Ｔ−４２〜Ｐ−２５８；Ｔ−４２〜Ｋ−２５７；Ｔ−４２〜Ｐ−２５６；
Ｔ−４２〜Ｖ−２５５；Ｔ−４２〜Ｋ−２５４；Ｔ−４２〜Ｔ−２５３；Ｔ−４
２〜Ｗ−２５２；Ｔ−４２〜Ｖ−２５１；Ｔ−４２〜Ｓ−２５０；Ｔ−４２〜Ｆ
−２４９；Ｔ−４２〜Ａ−２４８；Ｔ−４２〜Ｔ−２４７；Ｔ−４２〜Ｔ−２４
６；Ｔ−４２〜Ｒ−２４５；Ｔ−４２〜Ｗ−２４４；Ｔ−４２〜Ｙ−２４３；Ｔ
−４２〜Ｌ−２４２；Ｔ−４２〜Ｖ−２４１；Ｔ−４２〜Ｎ−２４０；Ｔ−４２
〜Ｎ−２３９；Ｔ−４２〜Ｇ−２３８；Ｔ−４２〜Ｒ−２３７；Ｔ−４２〜Ｎ−
２３６；Ｔ−４２〜Ｌ−２３５；Ｔ−４２〜Ｅ−２３４；Ｔ−４２〜Ｖ−２３３
；Ｔ−４２〜Ｓ−２３２；Ｔ−４２〜Ｈ−２３１；Ｔ−４２〜Ｆ−２３０；Ｔ−
４２〜Ｅ−２２９；Ｔ−４２〜Ｗ−２２８；Ｔ−４２〜Ｇ−２２７；Ｔ−４２〜
Ｋ−２２６；Ｔ−４２〜Ｅ−２２５；Ｔ−４２〜Ｔ−２２４；Ｔ−４２〜Ｔ−２
２３；Ｔ−４２〜Ｋ−２２２；Ｔ−４２〜Ｍ−２２１；Ｔ−４２〜Ｗ−２２０；
Ｔ−４２〜Ｒ−２１９；Ｔ−４２〜Ｓ−２１８；Ｔ−４２〜Ｄ−２１７；Ｔ−４
２〜Ｄ−２１６；Ｔ−４２〜Ａ−２１５；Ｔ−４２〜Ｎ−２１４；Ｔ−４２〜Ｐ
−２１３；Ｔ−４２〜Ｑ−２１２；Ｔ−４２〜Ｃ−２１１；Ｔ−４２〜Ｑ−２１
０；Ｔ−４２〜Ｄ−２０９；Ｔ−４２〜Ｎ−２０８；Ｔ−４２〜Ｑ−２０７；Ｔ
−４２〜Ｖ−２０６；Ｔ−４２〜Ｆ−２０５；Ｔ−４２〜Ｆ−２０４；Ｔ−４２
〜Ｅ−２０３；Ｔ−４２〜Ｆ−２０２；Ｔ−４２〜Ｉ−２０１；Ｔ−４２〜Ｉ−
２００；Ｔ−４２〜Ｓ−１９９；Ｔ−４２〜Ｓ−１９８；Ｔ−４２〜Ｄ−１９７
；Ｔ−４２〜Ｐ−１９６；Ｔ−４２〜Ｙ−１９５；Ｔ−４２〜Ｙ−１９４；Ｔ−
４２〜Ｙ−１９３；Ｔ−４２〜Ｅ−１９２；Ｔ−４２〜Ｆ−１９１；Ｔ−４２〜
Ｎ−１９０；Ｔ−４２〜Ｖ−１８９；Ｔ−４２〜Ｔ−１８８；Ｔ−４２〜Ｇ−１
８７；Ｔ−４２〜Ｓ−１８６；Ｔ−４２〜Ｑ−１８５；Ｔ−４２〜Ｋ−１８４；
Ｔ−４２〜Ｌ−１８３；Ｔ−４２〜Ｎ−１８２；Ｔ−４２〜Ｖ−１８１；Ｔ−４
２〜Ａ−１８０；Ｔ−４２〜Ｙ−１７９；Ｔ−４２〜Ｍ−１７８；Ｔ−４２〜Ｌ
−１７７；Ｔ−４２〜Ｔ−１７６；Ｔ−４２〜Ａ−１７５；Ｔ−４２〜Ｔ−１７
４；Ｔ−４２〜Ｃ−１７３；Ｔ−４２〜Ｅ−１７２；Ｔ−４２〜Ｄ−１７１；Ｔ
−４２〜Ｔ−１７０；Ｔ−４２〜Ｎ−１６９；Ｔ−４２〜Ｆ−１６８；Ｔ−４２
〜Ａ−１６７；Ｔ−４２〜Ｉ−１６６；Ｔ−４２〜Ｙ−１６５；Ｔ−４２〜Ｄ−
１６４；Ｔ−４２〜Ｇ−１６３；Ｔ−４２〜Ｒ−１６２；Ｔ−４２〜Ｐ−１６１
；Ｔ−４２〜Ｖ−１６０；Ｔ−４２〜Ｗ−１５９；Ｔ−４２〜Ｋ−１５８；Ｔ−
４２〜Ｓ−１５７；Ｔ−４２〜Ｓ−１５６；Ｔ−４２〜Ｔ−１５５；Ｔ−４２〜
Ｃ−１５４；Ｔ−４２〜Ｎ−１５３；Ｔ−４２〜Ｇ−１５２；Ｔ−４２〜Ｔ−１
５１；Ｔ−４２〜Ｓ−１５０；Ｔ−４２〜Ｅ−１４９；Ｔ−４２〜Ａ−１４８；
Ｔ−４２〜Ａ−１４７；Ｔ−４２〜Ｓ−１４６；Ｔ−４２〜Ｄ−１４５；Ｔ−４
２〜Ｄ−１４４；Ｔ−４２〜Ｌ−１４３；Ｔ−４２〜Ｅ−１４２；Ｔ−４２〜Ｍ
−１４１；Ｔ−４２〜Ｎ−１４０；Ｔ−４２〜Ａ−１３９；Ｔ−４２〜Ｓ−１３
８；Ｔ−４２〜Ｌ−１３７；Ｔ−４２〜Ｓ−１３６；Ｔ−４２〜Ａ−１３５；Ｔ
−４２〜Ｆ−１３４；Ｔ−４２〜Ｇ−１３３；Ｔ−４２〜Ｈ−１３２；Ｔ−４２
〜Ｐ−１３１；Ｔ−４２〜Ｌ−１３０；Ｔ−４２〜Ｅ−１２９；Ｔ−４２〜Ｄ−
１２８；Ｔ−４２〜Ｗ−１２７；Ｔ−４２〜Ｅ−１２６；Ｔ−４２〜Ｄ−１２５
；Ｔ−４２〜Ｆ−１２４；Ｔ−４２〜Ｒ−１２３；Ｔ−４２〜Ｉ−１２２；Ｔ−
４２〜Ｇ−１２１；Ｔ−４２〜Ｔ−１２０；Ｔ−４２〜Ｇ−１１９；Ｔ−４２〜
Ｌ−１１８；Ｔ−４２〜Ｓ−１１７；Ｔ−４２〜Ｙ−１１６；Ｔ−４２〜Ｒ−１
１５；Ｔ−４２〜Ｇ−１１４；Ｔ−４２〜Ｅ−１１３；Ｔ−４２〜Ａ−１１２；
Ｔ−４２〜Ｃ−１１１；Ｔ−４２〜Ｐ−１１０；Ｔ−４２〜Ｋ−１０９；Ｔ−４
２〜Ｃ−１０８；Ｔ−４２〜Ｓ−１０７；Ｔ−４２〜Ｑ−１０６；Ｔ−４２〜Ｄ
−１０５；Ｔ−４２〜Ｋ−１０４；Ｔ−４２〜Ｍ−１０３；Ｔ−４２〜Ｄ−１０
２；Ｔ−４２〜Ｌ−１０１；Ｔ−４２〜Ｆ−１００；Ｔ−４２〜Ｅ−９９；Ｔ−
４２〜Ｇ−９８；Ｔ−４２〜Ａ−９７；Ｔ−４２〜Ｎ−９６；Ｔ−４２〜Ｃ−９
５；Ｔ−４２〜Ｓ−９４；Ｔ−４２〜Ｆ−９３；Ｔ−４２〜Ｓ−９２；Ｔ−４２
〜Ｃ−９１；Ｔ−４２〜Ｅ−９０；Ｔ−４２〜Ｔ−８９；Ｔ−４２〜Ｇ−８８；
Ｔ−４２〜Ｋ−８７；Ｔ−４２〜Ｖ−８６；Ｔ−４２〜Ｐ−８５；Ｔ−４２〜Ｄ
−８４；Ｔ−４２〜Ｐ−８３；Ｔ−４２〜Ｌ−８２；Ｔ−４２〜Ｓ−８１；Ｔ−
４２〜Ｔ−８０；Ｔ−４２〜Ｃ−７９；Ｔ−４２〜Ｌ−７８；Ｔ−４２〜Ｇ−７
７；Ｔ−４２〜Ｐ−７６；Ｔ−４２〜Ｔ−７５；Ｔ−４２〜Ｈ−７４；Ｔ−４２
〜Ｐ−７３；Ｔ−４２〜Ｖ−７２；Ｔ−４２〜Ａ−７１；Ｔ−４２〜Ｖ−７０；
Ｔ−４２〜Ｒ−６９；Ｔ−４２〜Ｗ−６８；Ｔ−４２〜Ｒ−６７；Ｔ−４２〜Ｓ
−６６；Ｔ−４２〜Ｇ−６５；Ｔ−４２〜Ｔ−６４；Ｔ−４２〜Ｓ−６３；Ｔ−
４２〜Ｄ−６２；Ｔ−４２〜Ｃ−６１；Ｔ−４２〜Ａ−６０；Ｔ−４２〜Ｔ−５
９；Ｔ−４２〜Ｙ−５８；Ｔ−４２〜Ｅ−５７；Ｔ−４２〜Ｙ−５６；Ｔ−４２
〜Ｈ−５５；Ｔ−４２〜Ｙ−５４；Ｔ−４２〜Ｅ−５３；Ｔ−４２〜Ｓ−５２；
Ｔ−４２〜Ｅ−５１；Ｔ−４２〜Ｋ−５０；Ｔ−４２〜Ｃ−４９；およびＴ−４
２〜Ａ−４８。これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発
明に含まれる。
【０２３５】 本発明はまた、図１Ａ−Ｃ（すなわち、配列番号２）の残基ｎ1−ｍ2および／
またはｎ2−ｍ1を有するように一般に記載され得る（ここで、ｎ1、ｎ2およびｍ 1 は、上記のような整数である）、アミノ末端およびカルボキシル末端の両方か
ら欠失した１つ以上のアミノ酸を有するポリペプチドを提供する。従って、任意
の上記に列挙したＮ末端欠失またはＣ末端欠失は、Ｎ末端およびＣ末端欠失ＴＲ
１３ポリペプチドを生成するために組み合わされ得る。
【０２３６】 本発明はまた、図７Ａ−Ｄ（配列番号４０）の残基ｎ1−ｍ2および／またはｎ 2 −ｍ1を有するように一般に記載され得る（ここで、ｎ1、ｎ2およびｍ1は、上
記のような整数である）、アミノ末端およびカルボキシル末端の両方から欠失し
た１つ以上のアミノ酸を有するポリペプチドを提供する。従って、任意の上記に
列挙したＮ末端欠失またはＣ末端欠失は、Ｎ末端およびＣ末端欠失ＴＲ１３ポリ
ペプチドを生成するために組み合わされ得る。
【０２３７】 ＴＲ１３ポリペプチドのいくつかのアミノ酸配列は、そのタンパク質の構造ま
たは機能に対して有意な効果を有さないで変化され得ることが当該分野で認識さ
れる。配列におけるこのような差が考慮される場合、活性を決定するタンパク質
の重要な領域が存在することを記憶しておくべきである。従って、本発明は、さ
らに、本明細書中で議論されるポリペプチド部分のような、実質的なＴＲ１３機
能活性を示すかまたはＴＲ１３ポリペプチドの領域を含む、ＴＲ１３ポリペプチ
ドの改変体を含む。このような変異体は、欠失、挿入、逆位、反復および型置換
を含む。上記のように、アミノ酸変化が表現型的にサイレントであるようなもの
に関するガイダンスは、Ｊ．Ｕ．Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３
０６−１３１０（１９９０）に見出され得る。
【０２３８】 従って、配列番号２または配列番号４０、あるいはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−
３４９またはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７として寄託されたｃＤＮＡにより
コードされるポリヌクレオチドのフラグメント、誘導体もしくはアナログは、（
ｉ）アミノ酸残基の少なくとも１つ以上が保存アミノ酸残基もしくは非保存アミ
ノ酸残基（好ましくは、保存アミノ酸残基、そしてより好ましくは、少なくとも
１つであるが１０未満の保存されたアミノ酸残基）で置換されたものであっても
よく、そしてこのような置換されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによりコード
されたものであっても、もしくはそうでなくてもよく、または（ｉｉ）アミノ酸
残基の１つ以上が置換基を含むものであってもよく、または（ｉｉｉ）成熟ポリ
ペプチドが、ポリペプチドの半減期を延長する化合物のような別の化合物（例え
ば、ポリエチレングリコール）と融合されたものでもよく、または（ｉｖ）さら
なるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチドまたはリーダー配列もし
くは分泌配列、または成熟ポリペプチドもしくはプロタンパク質配列の精製に使
用される配列）が成熟ポリペプチドと融合されたものでもよい。このようなフラ
グメント、誘導体およびアナログは、本明細書における教示から当業者の範囲内
であるとみなされる。
【０２３９】 格別興味深いことは、荷電したアミノ酸の、別の荷電したアミノ酸との置換お
よび中性または負に荷電したアミノ酸との置換である。後者は、タンパク質にお
いて低下した正電荷を生じて、ＴＲ１３ポリペプチドの特性を改善する。凝集の
阻止は、非常に所望される。タンパク質の凝集は、薬学的処方物を調製する場合
、活性を減じるのみでなく、問題でもあり得る。なぜなら、凝集物は免疫原性で
あり得るからである（Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．２：３３１〜３４０（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３
６：８３８〜８４５（１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈ
ｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０
７〜３７７（１９９３））。
【０２４０】 アミノ酸の置換はまた、細胞表面レセプターへの結合の選択性を変化し得る。
Ｏｓｔａｄｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３６１：２６６〜２６８（１９９３）は、ＴＮ
Ｆ−αの、２つの公知の型のＴＮＦレセプターの１つの型のみへの選択的結合を
生じる、特定の変異を記載している。従って、本発明のＴＲ１３ポリペプチドは
、天然の変異かまたはヒトの操作のいずれかによる、１つ以上のアミノ酸置換、
欠失または付加を含み得る。
【０２４１】 示されるように、変化は、好ましくは、わずかな性質の変化、例えば、タンパ
ク質のフォールディングまたは活性に有意に影響しない保存的アミノ酸置換であ
る（表Ｖを参照のこと）。
【０２４２】
【表５】 特定の実施形態において、図１Ａ〜Ｃまたは図７Ａ〜Ｄのアミノ酸配列および
／または本明細書中に記載の任意のポリペプチドフラグメント（例えば、１以上
のシステインリッチドメイン、成熟細胞外ドメインなど）における置換、付加ま
たは欠失の数は、７５、７０、６０、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１
５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、あるいは３０〜２０、２０〜
１５、２０〜１０、１５〜１０、１０〜１、５〜１０、１〜５、１〜３または１
〜２である。
【０２４３】 機能に必須である本発明のＴＲ１３ポリペプチド中のアミノ酸は、部位特異的
変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発のような、当該分野で公知の方法
によって同定され得る（ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））。後者の手順は、分子中の全て
の残基で単一のアラニン変異を導入する。次いで、得られた変異体分子は、生物
学的活性、例えば、レセプター結合またはインビトロ増殖活性について試験され
る。リガンド−レセプター結合のために重要な部位もまた、結晶化、核磁気共鳴
、または光親和性標識のような構造解析によって決定され得る（Ｓｍｉｔｈら、
Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ Ｖｏ
ｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９９２））。
【０２４４】 ＴＲ１３ポリペプチドの特徴を改善または改変するために、タンパク質工学を
使用し得る。当業者に公知の組換えＤＮＡ技術は、新規な変異体タンパク質ある
いは単一または複数のアミノ酸の置換、欠失、付加を含むムテイン、または融合
タンパク質を作製するために用いられ得る。このような改変されたポリペプチド
は、例えば、増強された活性または増加した安定性を示し得る。さらに、これら
は、高収量で精製され得、そして少なくとも特定の精製条件および保存条件下で
対応する天然のポリペプチドよりも良好な溶解度を示し得る。
【０２４５】 天然に存在しない改変体は、当該分野で公知の変異誘発技術を用いて生成され
得る。これらの技術としては、オリゴヌクレオチド媒介変異誘発、アラニンスキ
ャニング、ＰＣＲ変異誘発、部位特異的変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｎ
ｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：４３３１（１９８６）；およびＺｏｌｌｅ
ｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７（１９８２）を参照のこ
と）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓら、Ｇｅｎｅ ３４：３１５（１
９８５）を参照のこと）、制限選択変異誘発（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｓｅｌ
ｅｃｔｉｏｎ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（例えば、Ｗｅｌｌｓら、Ｐｈｉｌｏ
ｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ ＳｅｒＡ ３１７：４１５（１９
８６）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４６】 従って、本発明はまた、選択された宿主細胞において、発現、スケールアップ
などにより適したＴＲ１３ポリペプチドを生成するために、１以上のアミノ酸残
基が欠失、付加または置換された、ＴＲ１３の誘導体およびアナログを含む。例
えば、システイン残基は、ジスルフィド架橋を除去するために欠失され得るか、
または別のアミノ酸残基で置換され得；Ｎ結合型グリコシル化部位は、例えば、
Ｎ結合部位を高グリコシル化する（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅ）ことが
公知である酵母宿主から、より容易に回収および精製される均質な産物の発現を
達成するために、改変または除去され得る。この目的のために、本発明のＴＲ１
３ポリペプチドの任意の１以上のグリコシル化認識配列上の第１または第３のア
ミノ酸位置の一方あるいは両方での種々のアミノ酸置換、および／または任意の
１以上のこのような認識配列の第２位でのアミノ酸欠失は、その改変トリペプチ
ド配列でのＴＲ１３のグリコシル化を妨げる（例えば、Ｍｉｙａｊｉｍｏら、Ｅ
ＭＢＯ Ｊ ５（６）：１１９３−１１９７を参照のこと）。さらに、本発明の
ポリペプチドの１以上のアミノ酸残基（例えば、アルギニン残基およびリジン残
基）は、欠失されるかまたは別の残基と置換されて、プロテアーゼ（例えば、フ
リン（ｆｕｒｉｎ）またはケクシン（ｋｅｘｉｎ）のような）による所望しない
プロセシングを排除し得る。
【０２４７】 本発明のポリペプチドは、以下を含む：リーダーを含むＡＴＣＣ受託番号ＰＴ
Ａ−３４９として寄託されたｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドを含むか
、またはこれらからなる、ポリペプチド；リーダーを含まないその寄託されたｃ
ＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドを含むか、またはこれらからなる、
ポリペプチド（すなわち、成熟タンパク質）；配列番号２のアミノ酸およそ１〜
およそ７５０を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド；配列番号２のア
ミノ酸およそ２〜およそ７５０を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド
；配列番号２のアミノ酸およそ１〜およそ３３１を含むか、またはこれらからな
る、ポリペプチド；図１Ａ〜Ｃに開示される任意の４つのシステインリッチドメ
イン（配列番号２のアミノ酸およそ１０５〜およそ１７０、２５１〜および２６
５、およそ３３１〜およそ４１０、およびおよそ５８０〜およそ６１０を構成す
ることが予測される）の１以上を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド
；ならびに上記のポリペプチド（例えば、その寄託されたｃＤＮＡクローンによ
ってコードされるポリペプチド、図１Ａ〜Ｃ（配列番号２）のポリペプチドおよ
び本明細書中に開示されるようなポリペプチドのポリペプチドフラグメント）に
対して少なくとも８０％同一、より好ましくは、少なくとも９０％または９５％
同一、なおより好ましくは、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同
一である、ポリペプチド。そして、本発明のポリペプチドは、少なくとも３０ア
ミノ酸、そしてより好ましくは、少なくとも５０アミノ酸を有する、このような
ポリペプチドの一部もまた含む。この文脈において、「およそ」とは、いずれか
の端または両端において、いくつかの（５、４、３、２または１）アミノ酸より
大きいかまたはより小さい、特に列挙される範囲を含む。これらのポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２４８】 本発明のポリペプチドは、以下を含む：リーダーを含むＡＴＣＣ受託番号ＰＴ
Ａ−５０７として寄託されたｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドを含むか
、またはこれらからなる、ポリペプチド；リーダーを含まないその寄託されたｃ
ＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドを含むか、またはこれらからなる、
ポリペプチド（すなわち、成熟タンパク質）；配列番号４０のアミノ酸およそ１
〜およそ１００１を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド；配列番号４
０のアミノ酸およそ２〜およそ１００１を含むか、またはこれらからなる、ポリ
ペプチド；配列番号４０のアミノ酸およそ１〜およそ９０６を含むか、またはこ
れらからなる、ポリペプチド；配列番号４０のアミノ酸およそ４２〜およそ１０
０１を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド；配列番号４０のアミノ酸
およそ４２〜およそ９０６を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド；配
列番号４０のアミノ酸およそ９０７〜およそ９３１を含むか、またはこれらから
なる、ポリペプチド；配列番号４０のアミノ酸およそ９３２〜およそ１００１を
含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド；図７Ａ〜Ｄに開示される任意の
７つのシステインリッチドメイン（配列番号４０のアミノ酸およそ２７１〜およ
そ４２１、２７１〜および２８６、およそ２９０〜およそ３００、およそ３０１
〜およそ３２０、およそ３２９〜およそ３６１、およそ４０４〜およそ４２１、
およびおよそ５８５〜およそ５９５を構成することが予測される）のいずれかを
含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド；ならびに上記のポリペプチド（
例えば、その寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされるポリペプチド、
図７Ａ〜Ｄ（配列番号４０）のポリペプチドおよび本明細書中に開示されるよう
なポリペプチドのポリペプチドフラグメント）に対して少なくとも８０％同一、
より好ましくは、少なくとも９０％または９５％同一、なおより好ましくは、少
なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一である、ポリペプチド。そし
て、本発明のポリペプチドは、少なくとも３０アミノ酸、そしてより好ましくは
、少なくとも５０アミノ酸を有する、このようなポリペプチドの一部もまた含む
。この文脈において、「およそ」とは、いずれかの端または両端において、いく
つかの（５、４、３、２または１）アミノ酸より大きいかまたはより小さい、特
に列挙される範囲を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
もまた、本発明に含まれる。
【０２４９】 ＴＲ１３ポリペプチドの参照アミノ酸配列に、例えば、少なくとも９５％「同
一」なアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる、ポリペプチド（タンパク
質）により、そのポリペプチドのアミノ酸配列が、ＴＲ１３ポリペプチドの参照
アミノ酸配列の各１００アミノ酸あたり５つまでのアミノ酸変化を含み得ること
を除いて、その参照配列に同一であることが意図される。換言すると、参照アミ
ノ酸配列に少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るた
めに、参照配列のアミノ酸残基の５％までが、欠失または、別のアミノ酸で置換
され得るか、または参照配列の総アミノ酸残基の５％までの数のアミノ酸が、そ
の参照配列に挿入され得る。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列のア
ミノ末端位置またはカルボキシ末端位置、あるいはこれらの末端位置間のどこか
で生じ得、参照配列の残基間で個々にかまたは参照配列内で１個以上連続する群
としてかのいずれかで間に散在する。
【０２５０】 実際的な問題として、任意の特定のポリペプチドが、例えば、配列番号２また
は配列番号４０に示されるアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４
９またはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７として寄託されたｃＤＮＡクローンに
よりコードされるアミノ酸配列に、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％
、９８％または９９％同一であるか否かは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓ
ｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒ
ｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ（登録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕ
ｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７
５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）のよう
な公知のコンピュータープログラムを使用して従来のように決定され得る。特定
の配列が、本発明に従う参照配列に、例えば９５％同一か否かを決定するために
、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アライメントプログラムを使用する場合
、もちろん、参照アミノ酸配列の全長に渡って同一性の百分率が算出されるよう
に、そして参照配列中のアミノ酸残基の合計の数の５％までの相同性のギャップ
が許容されるように、パラメーターが設定される。
【０２５１】 特定の実施形態において、参照（問い合わせ）配列（本発明の配列）と対象配
列との間の同一性（全体的配列整列もいわれる）は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍ
ｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズム
に基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定され得る。ＦＡ
ＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｐ
ＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏ
ｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ
Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ
＝配列の長さ、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔ
ｙ＝０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象アミノ酸配列の長さ
（どちらかより短い方）である。この実施形態に従うと、対象配列がＮ末端欠失
またはＣ末端欠失により（内部の欠失のためではなく）問い合わせ配列よりも短
い場合、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する場合
に対象配列のＮ末端短縮およびＣ末端短縮を考慮しないという事実を考慮して、
手動の補正が結果に対してなされる。問い合わせ配列に対する、Ｎ末端およびＣ
末端で短縮されている対象配列について、同一性パーセントは、問い合わせ配列
の総塩基のパーセントとして、対応する対象残基と一致／整列しない、対象配列
のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配列の残基の数を計算することによって
補正される。残基が一致／整列されているか否かの決定は、ＦＡＳＴＤＢ配列整
列の結果によって決定される。次いで、このパーセントは、同一性パーセントか
ら差し引かれ、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって特定のパラメーターを使
用して計算され、最終的な同一性パーセントのスコアに到達する。この最終的な
同一性パーセントのスコアが、この実施形態の目的で使用されるものである。問
い合わせ配列と一致／整列していない対象配列のＮ末端およびＣ末端側の残基の
みが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的のために考慮される。す
なわち、問い合わせ残基は、対象配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側
にのみ位置する。例えば、９０アミノ酸残基の対象配列を、同一性パーセントを
決定するために１００残基の問い合わせ配列と整列する。この欠失は、対象配列
のＮ末端で生じ、そしてそれゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の１０残
基の一致／整列を示さない。この１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致し
ていないＮ末端およびＣ末端での残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）を
表し、その結果ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算される同一性パーセントの
スコアから１０％が差し引かれる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最終
的な同一性パーセントは９０％である。別の例において、９０残基の対象配列を
、１００残基の問い合わせ配列と比較する。この場合、欠失は、内部欠失であり
、そのため問い合わせ配列と一致／整列しない対象配列のＮ末端またはＣ末端の
残基は存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセン
トは、手動で補正されない。再び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示されるように、
問い合わせ配列と一致／整列しない対象配列のＮ末端およびＣ末端の外の残基位
置のみが、手動で補正される。他の手動の補正は、この実施形態の目的のために
はなされない。
【０２５２】 本願はまた、本明細書中の図１Ａ〜Ｃまたは図７Ａ〜Ｄに示されるポリペプチ
ド配列についてｎ1−ｍ1および／またはｎ2−ｍ1として示されるＴＲ１３ポリペ
プチド配列に、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９
％同一なポリペプチドを含むか、またはこれらからなる、タンパク質に関する。
好ましい実施形態では、本願は、本明細書中に列挙される特定のＴＲ１３のＮ末
端欠失型および／またはＣ末端欠失型のアミノ酸配列を有するポリペプチドに、
少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なポリペ
プチドを含むか、またはこれらからなる、タンパク質に関する。さらなる好まし
い実施形態は、これらのポリペプチド配列を含む融合タンパク質に関する。これ
らのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２５３】 別の局面において、本発明は、本発明のポリペプチドのエピトープ保有部分を
含むペプチドまたはポリペプチドを提供する。このポリペプチド部分のエピトー
プは、本明細書中に記載されるポリペプチドの免疫原性または抗原性エピトープ
である。「免疫原性エピトープ」は、タンパク質全体が免疫原である場合、抗体
応答を誘発するタンパク質の一部分として定義される。他方で、抗体が結合し得
るタンパク質の領域は、「抗原性エピトープ」として定義される。タンパク質の
免疫原性エピトープの数は、抗原性エピトープの数未満である。例えば、Ｇｅｙ
ｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８−
４００２（１９８３）を参照のこと。
【０２５４】 抗原性エピトープ（すなわち、抗体が結合し得る、タンパク質分子の領域を含
む）を保有するペプチドもしくはポリペプチドの選択については、タンパク質配
列の部分を模倣する比較的短い合成ペプチドが、部分的に模倣したタンパク質と
反応する抗血清を慣用的に誘発し得るということが当該分野において周知である
。例えば、Ｊ．Ｇ．Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ
ｒｅａｃｔ ｗｉｔｈ ｐｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｓｉｔｅ ｏｎ ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６０−６６６（１９８３）を参照
のこと。タンパク質反応性抗血清を誘発し得るペプチドは、しばしは、タンパク
質の一次配列において表わされ、１セットの単純な化学的ルールによって特徴付
けられ得、そしてインタクトなタンパク質の免疫優性領域（すなわち、免疫原性
エピトープ）またはアミノ末端もしくはカルボキル末端のいずれに対しても限定
されない。 本発明の抗原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、そ
れゆえ本発明のポリペプチドと特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含
む）を惹起するのに有用である。例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７
６７−７７８（１９８４）の７７７を参照のこと。
【０２５５】 本発明の抗原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、好ましくは、
本発明のポリペプチドのアミノ酸配列内に含まれる、少なくとも７個、より好ま
しくは少なくとも９個、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少
なくとも４０、少なくとも５０および最も好ましくはおよそ５５〜およそ１００
個のアミノ酸の配列を含む。。この文脈において、「およそ」とは、いずれかの
端または両端において、いくつかの（５、４、３、２または１）アミノ酸より大
きいかまたはより小さい、特に列挙される範囲を含む。
【０２５６】 ＴＲ１３レセプター特異的抗体を生成するために使用され得る推定抗原性ポリ
ペプチドの非限定的な例としては、以下が挙げられる：図１Ａ〜Ｃのおよそ１〜
およそ１７０のアミノ酸残基（配列番号２のおよそアミノ酸１〜およそ１７０に
対応する）を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド；図１Ａ〜Ｃのおよ
そ２１０〜およそ３１８のアミノ酸残基（配列番号２のおよそアミノ酸２１０〜
およそ３１８に対応する）を含むポリペプチド；図１Ａ〜Ｃのおよそ３４３〜お
よそ４８０のアミノ酸残基（配列番号２のおよそアミノ酸３４３〜およそ４８０
に対応する）を含むポリペプチド；図１Ａ〜Ｃのおよそ５４８〜およそ５９２の
アミノ酸残基（配列番号２のおよそアミノ酸５４８〜およそ５９２に対応する）
を含むポリペプチド；および図１Ａ〜Ｃのおよそ６３２〜およそ７４２のアミノ
酸残基（配列番号２のおよそアミノ酸６３２〜およそ７４２に対応する）を含む
ポリペプチド。上記に示されるように、本発明者らは、上記ポリペプチドフラグ
メントが、ＴＲ１３レセプタータンパク質の抗原性領域であることを決定した。
この文脈において、「およそ」とは、いずれかの端または両端において、いくつ
かの（５、４、３、２または１）アミノ酸より大きいかまたはより小さい、特に
列挙される範囲を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも
また、本発明に含まれる。
【０２５７】 ＴＲ１３レセプター特異的抗体を生成するために使用され得る推定抗原性ポリ
ペプチドのさらなる非限定的な例としては、以下が挙げられる：Ｊａｍｅｓｏｎ
−Ｗｏｌｆ抗原性指数を使用して予測された、ＴＲ１３タンパク質の高い抗原性
領域に対応される、配列番号２（図１Ａ〜Ｃ）のおよそＭ１〜およそＡ９、およ
そＫ１２〜およそＬ２０、およそＮ４７〜およそＴ５５、およそＨ５８〜およそ
Ｓ６６、およそＤ６３〜およそＳ７１、およそＰ７７〜およそＦ８５、およそＡ
９０〜およそＱ９８、およそＦ１３６〜およそＱ１４４、およそＳ１５２〜およ
そＣ１６０、およそＲ１５９〜およそＡ１６７、およそＡ２１１〜およそＭ２１
９、およそＭ２３５〜およそＶ２４３、およそＶ２６６〜およそＶ２７４、およ
そＷ２７７〜およそＳ２８５、およそＩ２９０〜およそＦ２９８、およそＡ３１
０〜およそＶ３１８、およそＥ３４３〜およそＣ３５１、およそＩ３６０〜およ
そＨ３６８、およそＧ３９１〜およそＩ３９９、およそＦ４０９〜およそＴ４１
７、およそＳ４３６〜およそＹ４４４、およそＣ４５３〜およそＳ４６１、およ
そＩ４７２〜およそＳ４８０、およそＹ５４８〜およそＳ５５６、およそＣ５５
７〜およそＩ５６５、およそＶ５６７〜およそＶ５７５、およそＴ５８４〜およ
そＧ５９２、およそＲ６３２〜およそＧ６４０、およそＷ６８０〜およそＹ６８
８、およそＱ６８４〜およそＫ６９２、およそＴ６９８〜およそＡ７０６、およ
そＳ７２６〜およそＳ７３４、およびおよそＳ７３４〜およそＬ７４２のアミノ
酸残基を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド（図３および表Ｉを参照
のこと）。これらの高い抗原性フラグメントは、図１Ａ〜Ｃおよび配列番号２に
例示されるアミノ酸残基に対応する。上記に示されるように、本発明者らは、上
記ポリペプチドフラグメントが、ＴＲ１３レセプタータンパク質の抗原性領域で
あることを決定した。この文脈において、「およそ」とは、いずれかの端または
両端において、いくつかの（５、４、３、２または１）アミノ酸より大きいかま
たはより小さい、特に列挙される範囲を含む。これらのポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２５８】 ＴＲ１３特異的抗体を生成するために使用され得る推定抗原性ポリペプチドの
非限定的な例としては、以下が挙げられる：図７Ａ〜Ｄのおよそ１〜およそ２６
２のアミノ酸残基（配列番号４０のおよそアミノ酸１〜およそ２６２に対応する
）を含むか、またはこれらからなる、ポリペプチド；図７Ａ〜Ｄのおよそ２６４
〜およそ４２３のアミノ酸残基（配列番号４０のおよそアミノ酸２６４〜およそ
４２３に対応する）を含むポリペプチド；図７Ａ〜Ｄのおよそ４３７〜およそ７
８９のアミノ酸残基（配列番号４０のおよそアミノ酸７９１〜およそ１００１に
対応する）を含むポリペプチド；および図７Ａ〜Ｄのおよそ５４８〜およそ５９
２のアミノ酸残基（配列番号４０のおよそアミノ酸７９１〜およそ１００１に対
応する）を含むポリペプチド。上記に示されるように、本発明者らは、上記ポリ
ペプチドフラグメントが、ＴＲ１３レセプタータンパク質の抗原性領域であるこ
とを決定した。この文脈において、「およそ」とは、いずれかの端または両端に
おいて、いくつかの（５、４、３、２または１）アミノ酸より大きいかまたはよ
り小さい、特に列挙される範囲を含む。これらのポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２５９】 ＴＲ１３レセプター特異的抗体を生成するために使用され得る推定抗原性ポリ
ペプチドのさらなる非限定的な例としては、以下が挙げられる：Ｊａｍｅｓｏｎ
−Ｗｏｌｆ抗原性指数を使用して予測された、ＴＲ１３タンパク質の高い抗原性
領域に対応される、配列番号４０（図７Ａ〜Ｄ）のおよそＭ１〜およそＨ９、お
よそＶ１４〜およそＩ２２、およそＨ４７〜およそＨ５５、およそＣ６１〜およ
そＲ６９、およそＬ８２〜およそＥ９０、およそＤ１０２〜およそＰ１１０、お
よそＫ１０９〜およそＳ１１７、およそＦ１２４〜およそＨ１３２、およそＭ１
４１〜およそＥ１４９、およそＳ１４６〜およそＣ１５４、およそＳ１５７〜お
よそＷ１６５、およそＦ１６８〜およそＴ１７６、およそＮ１８２〜およそＮ１
９０、およそＱ２０７〜およそＡ２１５、およそＰ２１３〜およそＭ２２１、お
よそＭ２２１〜およそＥ２２９、およそＶ２３３〜およそＶ２４１、およそＴ２
５３〜およそＶ２６１、およそＴ２８２〜およそＳ２９０、およそＮ２９８〜お
よそＴ３０６、およそＣ３０８〜およそＹ３１６、およそＫ３１５〜およそＳ３
２３、およそＰ３２８〜およそＦ３３６、およそＡ３４１〜およそＱ３４９、お
よそＦ３８７〜およそＱ３９５、およそＳ４０３〜およそＣ４１１、およそＴ４
０９〜およそＰ４１７、およそＦ４４３〜およそＮ４５１、およそＷ４５１〜お
よそＹ４５９、およそＡ４６２〜およそＭ４７０、およそＧ４７８〜およそＭ４
８６、およそＡ４８７〜およそＡ４９５、およそＶ５１７〜およそＶ５２５、お
よそＴ５２７〜およそＱ５３５、およそＩ５４１〜およそＦ５４９、およそＡ５
６１〜およそＶ５６９、およそＥ５９４〜およそＣ６０２、およそＩ６１１〜お
よそＨ６１９、およそＧ６４３〜およそＩ６５０、およそＰ６８６〜およそＫ６
９４、およそＣ７０４〜およそＳ７１２、およそＲ７２２〜およそＩ７３０、お
よそＥ７２７〜およそＴ７３５、およそＰ７４６〜およそＧ７５４、およそＤ７
７６〜およそＬ７８４、およそＹ７９９〜およそＳ８０７、およそＣ８０８〜お
よそＩ８１６、およそＶ８１８〜およそＶ８２６、およそＴ８３５〜およそＧ８
４３、およそＲ８８３〜およそＧ８９１、およそＫ９３２〜およそＫ９４０、お
よそＱ９３５〜およそＫ９４３、およそＴ９４９〜およそＡ９５７、およそＳ９
７７〜およそＳ９８５、およそＳ９８１〜およそＰ９８９、およびおよそＮ９８
６〜およそＬ９９４のアミノ酸残基を含むか、またはこれらからなる、ポリペプ
チド（図９および表ＩＩＩを参照のこと）。これらの高い抗原性フラグメントは
、図７Ａ〜Ｄおよび配列番号４０に例示されるアミノ酸残基に対応する。上記に
示されるように、本発明者らは、上記ポリペプチドフラグメントが、ＴＲ１３レ
セプタータンパク質の抗原性領域であることを決定した。この文脈において、「
およそ」とは、いずれかの端または両端において、いくつかの（５、４、３、２
または１）アミノ酸より大きいかまたはより小さい、特に列挙される範囲を含む
。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれ
る。
【０２６０】 本発明のエピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、任意の従来の手段に
よって産生され得る。Ｒ．Ａ．Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、「Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｔｈ
ｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｓｙｓｔｈｅｓ
ｉｓ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｓｐｅｃｉ
ｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｉ
ｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄｓ」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１
−５１３５（１９８５）。この「Ｓｉｍｕｌｔａｎｉｏｕｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ
Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＳＭＰＳ）」プロセスは、Ｈｏｕｇｈ
ｔｅｎらに対する米国特許第４，６３１，２１１号（１９８６）にさらに記載さ
れる。
【０２６１】 当業者に理解されるように、本明細書中に記載される、本発明のＴＲ１３レセ
プターポリペプチドおよびそのエピトープ保有フラグメント（例えば、配列番号
２のアミノ酸残基１０５〜およそ１７０、およそ２５１〜およそ２６５、およそ
３３１〜およそ４１０、および／またはおよそ５８０〜およそ６１０のような、
細胞外ドメインの一部に対応する）は、異種ポリペプチド配列に組み合わされ得
、例えば、本発明のポリペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ
、ＩｇＭ）の定常ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、それ
らの任意の組み合わせ（ドメイン全体およびそれらの部分を含む））と融合され
得、キメラポリペプチドを生じる。これらの融合タンパク質は、精製を容易にし
得、そしてインビボにおいて半減期を増加させ得る。これは、ヒトＣＤ４ポリペ
プチドの最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽
鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質について示されている
（例えば、ＥＰ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３
３１：８４〜８６（１９８８））。ＩｇＧ部分に起因してジスルフィド架橋二量
体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、単量体ＴＲ１３タンパク質または
タンパク質フラグメント単独よりも、他の分子の結合および中和においてより効
果的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０
：３９５８〜３９６４（１９９５））。この文脈において、「およそ」とは、い
ずれかの端または両端において、いくつかの（５、４、３、２または１）アミノ
酸より大きいかまたはより小さい、特に列挙される範囲を含む。
【０２６２】 当業者に理解されるように、本明細書中に記載される、本発明のＴＲ１３レセ
プターポリペプチドおよびそのエピトープ保有フラグメント（例えば、配列番号
４０のアミノ酸残基１〜およそ２６２、およそ２６４〜およそ４２３、およそ４
３７〜およそ７８９、およそ２７１〜およそ４２１および／またはおよそ５８５
〜およそ５９９のような、細胞外ドメインの一部に対応する）は、異種ポリペプ
チド配列に組み合わされ得、例えば、本発明のポリペプチドは、免疫グロブリン
（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ
１、ＣＨ２、ＣＨ３、それらの任意の組み合わせ（ドメイン全体およびそれらの
部分を含む））と融合され得、キメラポリペプチドを生じる。これらの融合タン
パク質は、精製を容易にし得、そしてインビボにおいて半減期を増加させ得る。
これは、ヒトＣＤ４ポリペプチドの最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫
グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパ
ク質について示されている（例えば、ＥＰ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋ
ｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４〜８６（１９８８））。ＩｇＧ部分に起因
してジスルフィド架橋二量体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、単量体
ＴＲ１３タンパク質またはタンパク質フラグメント単独よりも、他の分子の結合
および中和においてより効果的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８〜３９６４（１９９５））。この文脈にお
いて、「およそ」とは、いずれかの端または両端において、いくつかの（５、４
、３、２または１）アミノ酸より大きいかまたはより小さい、特に列挙される範
囲を含む。
【０２６３】 本発明の好ましいＴＲ１３Ｆｃ融合体としては、配列番号２のアミノ酸残基１
〜７５０、１０〜７５０、２０〜７５０、３０〜７５０、４０〜７５０、１〜７
４０、１〜７３０、１〜７２０、１〜７１０、１０〜７４０、１０〜７３０およ
び／または１０〜７２０を含むか、またはこれらからなる、構築物が挙げられる
が、これらに限定されない。これらのＴＲ１３融合体をコードするポリヌクレオ
チドもまた、本発明に含まれる。
【０２６４】 本発明のさらなる好ましいＴＲ１３Ｆｃ融合体としては、配列番号２のアミノ
酸残基１〜９０６、４２〜９０６、２７１〜４２１、５８５〜５９５、１〜１０
０１、１０〜１００１、２０〜１００１、３０〜１００１、４２〜１００１、４
２〜９０６、１〜９９０、１〜９８０、１〜９７０、１〜９６０、１０〜９９０
、１０〜９８０および／または１０〜９７０を含むか、またはこれらからなる、
構築物が挙げられるが、これらに限定されない。これらのＴＲ１３融合体をコー
ドするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２６５】 本発明のポリペプチドは、本発明のポリペプチドを結合する抗体を生成するた
めの供給源として、および等業者に周知の方法を使用するＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
または分子ふるいゲル濾過カラム上の分子量マーカーとしての用途が挙げられる
が、これらに限定されない用途を有する。
【０２６６】 （ＴＲ１４ポリペプチド） 本発明のＴＲ１４タンパク質（ポリペプチド）は、モノマーまたはマルチマー
（すなわち、ダイマー、トリマー、テトラマーおよびより高度のマルチマー）で
あり得る。従って、本発明は、モノマーおよびマルチマーの本発明のＴＲ１４タ
ンパク質、それらの調製ならびにそれらを含む組成物（好ましくは、薬学的組成
物）に関する。特定の実施形態では、本発明のポリペプチドは、モノマー、ダイ
マー、トリマーまたはテトラマーである。さらなる実施形態では、本発明のマル
チマーは、少なくともダイマー、少なくともトリマー、または少なくともテトラ
マーである。
【０２６７】 本発明によって含まれるマルチマーは、ホモマーまたはヘテロマーであり得る
。本明細書中で用いられる場合、用語ＴＲ１４ホモマーは、本発明のＴＲ１４タ
ンパク質（本明細書中に記載されるＴＲ１４フラグメント、改変体および融合タ
ンパク質を含む）のみを含むマルチマーをいう。これらのホモマーは、同一また
は異なるポリぺプチド配列を有するＴＲ１４タンパク質を含み得る。特定の実施
形態では、本発明のホモマーは、同一のポリぺプチド配列を有するＴＲ１４タン
パク質のみを含むマルチマーである。別の特定の実施形態では、本発明のホモマ
ーは、異なるポリぺプチド配列を有するＴＲ１４タンパク質を含むマルチマーで
ある。特定の実施形態では、本発明のマルチマーは、ホモダイマー（例えば、同
一または異なるポリぺプチド配列を有するＴＲ１４タンパク質を含む）あるいは
ホモトリマー（例えば、同一または異なるポリぺプチド配列を有するＴＲ１４タ
ンパク質を含む）である。さらなる実施形態では、本発明のホモマー性マルチマ
ーは、少なくともホモダイマー、少なくともホモトリマーまたは少なくともホモ
テトラマーである。
【０２６８】 本明細書中で用いられる場合、用語ＴＲ１４ヘテロマーとは、本発明のＴＲ１
４タンパク質に加えて異種タンパク質（すなわち、ＴＲ１４遺伝子によりコード
されるペプチド配列に対応しないポリぺプチド配列のみを含むタンパク質）を含
むマルチマーをいう。特定の実施形態では、本発明のマルチマーは、ヘテロダイ
マー、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーである。さらなる実施形態では、
本発明のヘテロマー性マルチマーは、少なくともヘテロダイマー、少なくともヘ
テロトリマーまたは少なくともヘテロテトラマーである。
【０２６９】 本発明のマルチマーは、疎水性、親水性、イオン性および／もしくは共有結合
的な結合の結果であり得、そして／または例えば、リポソーム形成によって間接
連結され得る。従って、１つの実施形態では、本発明のマルチマー（例えば、ホ
モダイマーまたはホモトリマーなど）は、本発明のタンパク質が溶液中で互いに
接触する場合に形成される。別の実施形態では、本発明のへテロマルチマー（例
えば、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーなど）は、本発明のタンパク質が
、溶液中で本発明のポリペプチドに対する抗体（本発明の融合タンパク質におけ
る異種ポリペプチド配列に対する抗体を含む）と接触した場合に形成される。他
の実施形態では、本発明のマルチマーは、本発明のＴＲ１４タンパク質との、お
よび／または本発明のＴＲ１４タンパク質間での共有結合によって形成される。
このような共有結合は、タンパク質のポリぺプチド配列（例えば、好ましくは配
列番号６１あるいは配列番号５に引用されるポリペプチド配列、または寄託され
たｃＤＮＡクローンによってコードされるポリペプチド）に含まれる１以上のア
ミノ酸残基を含み得る。１例では、この共有結合は、ネイティブ（すなわち、天
然に存在する）ポリペプチドにおいて相互作用するタンパク質のポリペプチド配
列内に存在するシステイン残基間での架橋である。別の例では、この共有結合は
、化学的操作または組換え操作の結果である。あるいは、このような共有結合は
、ＴＲ１４融合タンパク質中の異種ポリペプチド配列において含まれる１以上の
アミノ酸残基を含み得る。１例では、共有結合は、本発明の融合タンパク質に含
まれる異種配列間にある（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこ
と）。特定の例では、この共有結合は、（本明細書中に記載されるような）本発
明のＴＲ１４−Ｆｃ融合タンパク質に含まれる異種配列間にある。別の特定の例
では、本発明の融合タンパク質の共有結合は、共有結合したマルチマーを形成し
得る別のＴＮＦファミリーリガンド／レセプターメンバー（例えば、オステオプ
ロテゲリン（ｏｓｅｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）など）由来の異種ポリペプチ
ド配列間にある（例えば、国際公開番号ＷＯ ９８／４９３０５号（この内容は
その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。別の実施形態
では、２以上の本発明のＴＲ１４ポリペプチドは、合成リンカー（例えば、ペプ
チドリンカー、糖質リンカー、または可溶性ポリマーリンカー）を通して連結さ
れる。例としては、米国特許第５，０７３，６２７号（本明細書中に参考として
援用される）に記載されるペプチドリンカーが挙げられる。ペプチドリンカーに
よって隔てられた複数のＴＲ１４ポリペプチドを含むタンパク質は、従来の組換
えＤＮＡ技術を用いて生成され得る。
【０２７０】 本発明のマルチマーＴＲ１４ポリペプチドを調製するための別の方法は、ロイ
シンジッパーポリペプチド配列またはイソロイシンジッパーポリペプチド配列に
融合されたＴＲ１４ポリペプチドの使用を含む。ロイシンジッパードメインおよ
びイソロイシンジッパードメインは、そのドメインが見出されるタンパク質のマ
ルチマー形成を促進するポリペプチドである。ロイシンジッパーは元々、いくつ
かのＤＮＡ結合タンパク質において同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２４０：１７５９、（１９８８））、そしてそれ以来種々の異なるタ
ンパク質において見出されている。とりわけ公知のロイシンジッパーは、ダイマ
ー形成またはトリマー形成をする、天然に存在するペプチドおよびその誘導体で
ある。可溶性マルチマーＴＲ１４タンパク質を生成するために適切なロイシンジ
ッパードメインの例は、本明細書中に参考として援用されるＰＣＴ出願ＷＯ ９
４／１０３０８に記載されるロイシンジッパードメインである。溶液中でダイマ
ー形成またはトリマー形成をするペプチドに融合された可溶性ＴＲ１４ポリペプ
チドを含む組換え融合タンパク質は、適切な宿主細胞中で発現され、そして得ら
れる可溶性マルチマーＴＲ１４は、当該分野で公知の技術を用いて培養上清から
回収される。
【０２７１】 タンパク質のＴＮＦファミリーの特定のメンバーは、トリマー形態で存在する
と考えられる（ＢｅｕｔｌｅｒおよびＨｕｆｆｅｌ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：
６６７，１９９４；Ｂａｎｎｅｒら、Ｃｅｌｌ ７３：４３１，１９９３）。従
って、トリマーＴＲ１４は、増強された生物学的活性という利点を提供し得る。
好ましいロイシンジッパー部分は、トリマーを優先的に形成する部分である。１
例は、本明細書中に参考として援用されるＨｏｐｐｅら（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅ
ｒｓ ３４４：１９１，（１９９４））および米国特許出願第０８／４４６，９
２２号に記載されるような、肺サーファクタントプロテインＤ（ＳＰＤ）に由来
するロイシンジッパーである。天然に存在するトリマータンパク質由来の他のペ
プチドは、トリマーＴＲ１４の調製において用いられ得る。
【０２７２】 さらに好ましい実施形態では、本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチドは、「ＦＬ
ＡＧ」ポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドに融合される。従って、ＴＲ
１４−ＦＬＡＧ融合タンパク質は、本発明に含まれる。ＦＬＡＧ抗原性ポリぺプ
チドは、本発明のＴＲ１４ポリぺプチドに、アミノ末端またはカルボキシ末端の
いずれかまたは両方において、融合され得る。好ましい実施形態において、ＴＲ
１４融合タンパク質は、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ−５ａ発現ベクターまたはｐＦＬＡ
Ｇ−ＣＭＶ−１発現ベクター（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡか
ら入手可能）から発現される。Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２６４：８２２２−２９（１９８９）；Ｔｈｏｍｓｅｎ，Ｄ．Ｒ．ら、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６５９−６３（１９８
４）；およびＫｏｚａｋ，Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ ３０８：２４１（１９８４）（
これらの各々は、本明細書中でその全体が参考として援用される）を参照のこと
。さらに好ましい実施形態では、ＴＲ１４融合タンパク質は、抗−ＦＬＡＧモノ
クローナル抗体（これもまたＳｉｇｍａから入手可能）によって検出可能である
。
【０２７３】 別の例において、本発明のタンパク質は、本発明のＦＬＡＧ（登録商標）−Ｔ
Ｒ１４融合タンパク質に含まれるＦＬＡＧ（登録商標）ポリペプチド配列の間の
相互作用により会合される。さらなる実施形態では、本発明の会合タンパク質は
、本発明のＦＬＡＧ（登録商標）−ＴＲ１４融合タンパク質に含まれる異種ポリ
ペプチド配列と、抗ＦＬＡＧ（登録商標）抗体との間の相互作用により会合され
る。
【０２７４】 本発明のマルチマーは、当該分野で公知の化学技術を使用して生成され得る。
例えば、本発明のマルチマーに含まれることが所望されるタンパク質は、当該分
野で公知のリンカー分子およびリンカー分子長最適化技術を使用して、化学的に
架橋され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは本明細書中で
参考として援用される）を参照のこと）さらに、本発明のマルチマーは、当該分
野で公知の技術を使用して生成されて、マルチマー中に含まれることが所望され
るタンパク質のポリぺプチド配列内に位置するシステイン残基間に、１つ以上の
分子間架橋を形成し得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは、
本明細書中にその全体が参考として援用される）を参照のこと）。さらに、本発
明のタンパク質は、このタンパク質のポリぺプチド配列のＣ末端またはＮ末端へ
のシステインまたはビオチンの付加により慣用的に改変され得、当該分野で公知
の技術が、１つ以上のこれらの改変されたタンパク質を含むマルチマーを生成す
るために適用され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これはその
全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。さらに、当該分野
で公知技術は、本発明のマルチマーに含まれることを所望されるタンパク質成分
を含むリポソームを生成するために適用され得る（例えば、米国特許第５，４７
８，９２５号（これはその全体が本明細書中で参考として援用される）を参照の
こと）。
【０２７５】 あるいは、本発明のマルチマーは、当該分野で公知の遺伝子操作技術を用いて
生成され得る。１つの実施形態では、本発明のマルチマーに含まれるタンパク質
は、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の融合タンパク質技術
を用いて組換え生成される（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用さ
れる、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。特定の実施形態では、
本発明のホモダイマーをコードするポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチド
をコードするポリヌクレオチド配列を、リンカーポリペプチドをコードする配列
に連結し、次いでさらに元々のＣ末端からＮ末端の方向とは逆方向でポリペプチ
ドの翻訳産物をコードする合成ポリヌクレオチド（リーダー配列を欠く）に連結
することによって生成される（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用
される、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。別の実施形態では、
本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の組換え技術を適用して、
膜貫通ドメインを含み、そして膜再構成技術によってリポソームに取り込まれ得
る、本発明の組換えポリペプチドを生成する（例えば、本明細書中にその全体が
参考として援用される、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。
【０２７６】 本発明のポリペプチド（タンパク質）は、好ましくは、単離形態で提供される
。「単離されたポリペプチド」によって、そのネイティブな環境から取り出され
たポリペプチドが意図される。従って、組換え宿主細胞中で産生され、そして／
またはその中に含まれるポリペプチドは、本発明の目的のために単離されたとみ
なされる。組換え宿主細胞から部分的または実質的に精製されたポリペプチドも
また、「単離されたポリペプチド」として意図される。例えば、ＴＲ１４ポリペ
プチドの組換え産生されたバージョンが、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ Ｇ
ｅｎｅ ６７：３１〜４０（１９８８）に記載される１工程の方法によって実質
的に精製され得る。
【０２７７】 従って、１つの実施形態では、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８と
して寄託されたｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列、または好ましくは配
列番号６１、あるいは配列番号５で示されるアミノ酸配列を有する単離されたＴ
Ｒ１４ポリペプチド、あるいは上記のポリペプチドの一部を含むポリペプチドを
提供する。
【０２７８】 本発明のポリペプチドは、好ましくは、単離形態で提供される。「単離された
ポリペプチド」によって、そのネイティブな環境から取り出されたポリペプチド
が意図される。従って、組換え宿主細胞中で産生され、そして／またはその中に
含まれるポリペプチドは、本発明の目的のために単離されたとみなされる。組換
え宿主細胞から部分的または実質的に精製されたポリペプチドもまた、「単離さ
れたポリペプチド」として意図される。例えば、ＴＲ１４ポリペプチドの組換え
産生されたバージョンが、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ Ｇｅｎｅ ６７：
３１〜４０（１９８８）に記載される１工程の方法によって実質的に精製され得
る。
【０２７９】 本発明のポリぺプチドフラグメントは、以下を含むか、またあるいは以下から
なる、ポリぺプチドを含む：好ましくは配列番号６１、あるいは配列番号５に含
まれるアミノ酸配列、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８として寄託されたクロー
ンに含まれるｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列、あるいは寄託されたク
ローンに含まれるヌクレオチド配列に（例えば、ストリンジェントなハイブリダ
イゼーション条件下で）ハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配
列か、または図１０Ａ−Ｈ（配列番号６１）に示されるアミノ酸配列、または図
４Ａ−Ｄ（配列番号４）に示されるアミノ酸配列か、またはそれらの相補鎖、ま
たはそれらのポリヌクレオチドフラグメント（例えば、本明細書中に開示される
）。タンパク質フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ−ｓｔａｎｄｉｎｇ）」
であり得るか、あるいはより大きなポリぺプチド内（そのフラグメントが、部分
または領域を、最も好ましくは単一の連続した領域として形成する）に含まれ得
る。本発明のポリペプチドフラグメントの好ましい代表的な例としては、例えば
、以下を含むかあるいは以下からなる、フラグメントが挙げられる：配列番号６
１のアミノ酸残基およそ１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２
００、２０１〜２３１。本発明のポリペプチドフラグメントのそれほど好ましく
ない代表的な例としては、例えば、以下を含むかあるいは以下からなる、フラグ
メントが挙げられる：配列番号５のアミノ酸残基およそ１〜５０、５１〜１００
、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２２６、および配列番号６１の対
応するアミノ酸残基（配列番号６１のアミノ酸残基Ｔ−７８〜Ｍ−２３１の配列
が、配列番号５のアミノ酸残基Ｔ−７３〜Ｍ−２２６の配列と同一である場合）
。さらに、ポリぺプチドフラグメントは、少なくとも１０、２０、３０、４０、
５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１
５０、１７５または２００アミノ酸長であり得る。この文脈における、「約（お
よそ）」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙された値のい
くつか（５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸だけ大きいか、もしくは小さい
値を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明
に含まれる。
【０２８０】 本発明のポリペプチドフラグメントとしては、以下を含むかあるいは以下から
なる、ポリペプチドが挙げられる：配列番号２のアミノ酸残基およそ１７８〜お
よそ１８０、１１８〜およそ１２１、１７８〜およそ１８１、１９３〜およそ１
９６、９〜およそ１４、および／または６５〜およそ８５。この文脈における、
「約（およそ）」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙され
た値のいくつか（５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸だけ大きいか、もしく
は小さい値を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた
、本発明に含まれる。
【０２８１】 特定の実施形態において、本発明のポリぺプチドフラグメントは、以下を含む
か、またあるいは以下からなる：配列番号６１に示されるアミノ酸残基およそ：
１〜およそ１３８、１３９〜およそ１５５、および／または１５６〜およそ２３
１；あるいは、配列番号５に示されるアミノ酸残基およそ１〜およそ１３３、１
３４〜およそ１５０、および／または１５１〜およそ２２６。この文脈における
、「約（およそ）」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙さ
れた値のいくつか（５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸だけ大きいか、もし
くは小さい値を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはま
た、本発明に含まれる。
【０２８２】 さらなる実施形態において、本発明のポリペプチドフラグメントは、１つ以上
のＴＲ１４ドメインを含むか、あるいは１つ以上のＴＲ１４ドメインからなる。
本発明の好ましいポリペプチドフラグメントは、以下の群より選択されたメンバ
ーを含む：（ａ）ＴＲ１４細胞外ドメイン（好ましくは、図１０Ａ−Ｈおよび配
列番号６１のアミノ酸残基およそ１〜およそ１３８、あるいは配列番号５および
図４Ａ−Ｄのアミノ酸残基およそ１〜およそ１３３，または配列番号５のアミノ
酸残基およそ１〜１３３を構成すると予想される）を含むかあるいはこのドメイ
ンよりなる、ポリペプチド；（ｂ）ＴＲ１４システインリッチドメイン（好まし
くは、配列番号６１のアミノ酸残基Ｃｙｓ−３１〜Ｃｙｓ−１０４、あるいは図
４Ａ−Ｄのアミノ酸残基およそ６５〜およそ８８、または配列番号５のアミノ酸
残基およそ６５〜およそ８５を構成すると予想される）を含むかあるいはこのド
メインよりなる、ポリペプチド；（ｃ）ＴＲ１４膜貫通ドメイン（図１０Ａ−Ｈ
および配列番号６１のアミノ酸残基およそ１３９〜およそ１５５、または図４Ａ
−Ｄおよび配列番号５のアミノ酸残基およそ１３４〜およそ１５０を構成すると
予想される）を含むかあるいはこのドメインよりなる、ポリペプチド；（ｄ）Ｔ
Ｒ１４細胞内ドメイン（図１０Ａ−Ｈおよび配列番号６１のアミノ酸残基およそ
１５５〜およそ２３１、または図４Ａ−Ｄおよび配列番号５のアミノ酸残基およ
そ１５１〜およそ２２６を構成すると予想される）を含むかあるいはこのドメイ
ンよりなる、ポリペプチド；（ｅ）ＴＲ１４ポリペプチドの１、２、３、４以上
のエピトープ保有部位（好ましくは、配列番号６１のＡｓｐ−２〜Ａｓｐ−１０
、Ｔｈｒ−１７〜Ａｓｐ−３８、Ｐｒｏ−４５〜Ｓｅｒ−５２、Ｐｒｏ−８８〜
Ａｒｇ−９５、Ｔｈｒ−１０８〜Ｇｌｕ−１１５、Ｔｈｒ−１３１〜Ｇｌｕ−１
３６、Ｐｈｅ−１６６〜Ｇｌｙ−１７４、Ａｌａ−１８０〜Ａｌａ−２００、ａ
ｎｄＧｌｎ−２２４〜Ｍｅｔ−２３１、あるいは配列番号５の対応するアミノ酸
配列（配列番号６１のアミノ酸配列Ｔ−７８〜Ｍ−２３１の配列が、配列番号５
のアミノ酸残基Ｔ−７３〜Ｍ−２２６の配列と同一である場合）を構成すると予
想される）を含むかあるいはこのポリペプチドよりなる、ポリペプチド。さらな
るエピトープ保有ＴＲ１４ポリペプチドは、以下を含むかあるいは以下からなる
：配列番号５のアミノ酸残基およそ２〜およそ２４、４２〜およそ５２、８０〜
およそ１１５、および１５５〜およそ２２６（または、配列番号６１の対応する
アミノ酸配列（配列番号６１のアミノ酸配列Ｔ−７８〜Ｍ−２３１の配列が、配
列番号５のアミノ酸残基Ｔ−７３〜Ｍ−２２６の配列と同一である場合））；お
よび（ｆ）ポリペプチド（ａ）〜（ｅ）の任意の組み合わせ。この文脈における
、「約（およそ）」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙さ
れた値のいくつか（５、４、３、２もしくは１）のアミノ酸だけ大きいか、もし
くは小さい値を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはま
た、本発明に含まれる。
【０２８３】 上記で議論されるように、ＴＲ１４の細胞外システインリッチモチーフが、Ｔ
Ｒ１４とそのリガンドとの間の相互作用のために重要であると考えられる。従っ
て、好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドフラグメントは、配列番
号６１のアミノ酸残基３１〜１０４、または配列番号５の６５〜８５、を含むか
、あるいはそれらからなる。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドはまた、本発明に含まれる。
【０２８４】 とりわけ、特に好ましい本発明のフラグメントは、ＴＲ１４（好ましくは、配
列番号６１、あるいは配列番号５）の構造的特性もしくは機能的特性により特徴
付けられるフラグメントである。そのようなフラグメントは、完全（すなわち、
全長）ＴＲ１４（このましくは配列番号６１、あるいは配列番号５）のα−へリ
ックスおよびα−へリックス形成領域（「α領域」）、β−シートおよびβ−シ
ート形成領域（「β領域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域」）
、コイルおよびコイル形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、
α両親媒性領域、β両親媒性領域、表面形成領域、および高抗原性指標領域（す
なわち、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメータを使用し
て同定されるように、１．５以上の抗原性指標を有するアミノ酸残基を構成する
ポリペプチドの領域）を含むアミノ酸残基を含む。特定の好ましい領域は、図６
および表ＩＩに記載される領域であり、そして、図１０Ａ−Ｈ（配列番号６１）
、あるいは図４Ａ−Ｄ（配列番号５）に示されるアミノ酸配列の分析によって同
定される上述の型の領域を含むが、それらに限定されず、そのような好ましい領
域としては、これらのコンピュータプログラムのデフォルトパラメーターを使用
して推定されるような、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ推定α領域、β領域、タ
ーン領域、およびコイル領域；Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ推定α領域、β領域、お
よびターン領域；Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ推定親水性領域およびＨｏｐｐ
−Ｗｏｏｄｓ推定疎水性領域；Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇα両親媒性領域およびβ両親
媒性領域；Ｅｍｉｎｉ表面形成領域ならびにＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ高抗原性
指標領域が挙げられる。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは
また、本発明により含まれる。
【０２８５】 上述のように、タンパク質のＮ末端由来の１つ以上のアミノ酸の欠失が、タン
パク質の１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じる場合でさえ、他の機
能的活性（例えば、生物学的活性、多量体化する能力、ＴＲ１４リガンドに結合
する能力）は、まだ保持される。例えば、短縮化ＴＲ１４ムテインのポリペプチ
ドの完全形態または成熟形態を認識する、抗体を誘導および／または結合する能
力は、完全タンパク質または成熟タンパク質の決して大多数ではない残基が、Ｎ
末端から除去される場合、一般に保持される。完全なポリペプチドのＮ末端残基
を欠く特定のポリペプチドが免疫学的活性を保持し得るか否かは、本明細書中に
記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の方法により容易に決定され
得る。多数の欠失したＮ末端アミノ酸残基を有するＴＲ１４ムテインは、いくつ
かの生物学的活性または免疫学的活性を保持することが予想される。実際、６と
同じくらい少ないＴＲ１４アミノ酸残基からなるペプチドは、頻繁に、免疫応答
を惹起し得る。
【０２８６】 従って、本発明は、さらに、好ましくは図１０Ａ−Ｈ（配列番号６１）、ある
いは図４Ａ−Ｄ（配列番号５）に示されるＴＲ１４アミノ酸配列のアミノ酸末端
から、配列番号６１の３２１位（または配列番号５の２２６位）に存在するメチ
オニン残基までを欠失した１つ以上の残基を有するポリペプチド、およびこのよ
うなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。ＴＲ１４について
特に好ましい実施形態において、本発明は、図１０Ａ−Ｈの残基ｎ1−２３１の
アミノ酸配列を含むかあるいはこれらからなるポリペプチドを提供する（ここで
、ｎ1は、図１０Ａ−Ｈのアミノ酸残基の位置に対応する、１〜２３１の範囲の
整数である）。代替の実施形態において、本発明は、図４Ａ−Ｄの残基ｎ1−２
２６のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらからなるポリペプチドを提供する（
ここで、ｎ1は、図４Ａ−Ｄのアミノ酸残基の位置に対応する、１〜２２６の範
囲の整数である）。
【０２８７】 特定の実施形態において、本発明のＴＲ１４ポリペプチドのＮ末端欠失は、一
般式ｎ2−２３１により記載され得る（ここで、ｎ2は、図１０Ａ−Ｈに同定され
るのアミノ酸残基の位置に対応する、２〜２２６の数である）。配列番号６１と
して示される本発明のＴＲ１４ポリペプチドのＮ末端欠失は、以下の残基のアミ
ノ酸配列を含むかあるいはそれらからなるポリペプチドを含む：配列番号６１の
Ｄ−２〜Ｍ−２３１；Ｃ−３〜Ｍ−２３１；Ｑ−４〜Ｍ−２３１；Ｅ−５〜Ｍ−
２３１；Ｎ−６〜Ｍ−２３１；Ｅ−７〜Ｍ−２３１；Ｙ−８〜Ｍ−２３１；Ｗ−
９〜Ｍ−２３１；Ｄ−１０〜Ｍ−２３１；Ｑ−１１〜Ｍ−２３１；Ｗ−１２〜Ｍ
−２３１；Ｇ−１３〜Ｍ−２３１；Ｒ−１４〜Ｍ−２３１；Ｃ−１５〜Ｍ−２３
１；Ｖ−１６〜Ｍ−２３１；Ｔ−１７〜Ｍ−２３１；Ｃ−１８〜Ｍ−２３１；Ｑ
−１９〜Ｍ−２３１；Ｒ−２０〜Ｍ−２３１；Ｃ−２１〜Ｍ−２３１；Ｇ−２２
〜Ｍ−２３１；Ｐ−２３〜Ｍ−２３１；Ｇ−２４〜Ｍ−２３１；Ｑ−２５〜Ｍ−
２３１；Ｅ−２６〜Ｍ−２３１；Ｌ−２７〜Ｍ−２３１；Ｓ−２８〜Ｍ−２３１
；Ｋ−２９〜Ｍ−２３１；Ｄ−３０〜Ｍ−２３１；Ｃ−３１〜Ｍ−２３１；Ｇ−
３２〜Ｍ−２３１；Ｙ−３３〜Ｍ−２３１；Ｇ−３４〜Ｍ−２３１；Ｅ−３５〜
Ｍ−２３１；Ｇ−３６〜Ｍ−２３１；Ｇ−３７〜Ｍ−２３１；Ｄ−３８〜Ｍ−２
３１；Ａ−３９〜Ｍ−２３１；Ｙ−４０〜Ｍ−２３１；Ｗ−４１〜Ｍ−２３１；
Ｈ−４２〜Ｍ−２３１；Ｓ−４３〜Ｍ−２３１；Ｌ−４４〜Ｍ−２３１；Ｐ−４
５〜Ｍ−２３１；Ｓ−４６〜Ｍ−２３１；Ｓ−４７〜Ｍ−２３１；Ｑ−４８〜Ｍ
−２３１；Ｙ−４９〜Ｍ−２３１；Ｋ−５０〜Ｍ−２３１；Ｓ−５１〜Ｍ−２３
１；Ｓ−５２〜Ｍ−２３１；Ｗ−５３〜Ｍ−２３１；Ｇ−５４〜Ｍ−２３１；Ｈ
−５５〜Ｍ−２３１；Ｈ−５６〜Ｍ−２３１；Ｋ−５７〜Ｍ−２３１；Ｃ−５８
〜Ｍ−２３１；Ｑ−５９〜Ｍ−２３１；Ｓ−６０〜Ｍ−２３１；Ｃ−６１〜Ｍ−
２３１；Ｉ−６２〜Ｍ−２３１；Ｔ−６３〜Ｍ−２３１；Ｃ−６４〜Ｍ−２３１
；Ａ−６５〜Ｍ−２３１；Ｖ−６６〜Ｍ−２３１；Ｉ−６７〜Ｍ−２３１；Ｎ−
６８〜Ｍ−２３１；Ｒ−６９〜Ｍ−２３１；Ｖ−７０〜Ｍ−２３１；Ｑ−７１〜
Ｍ−２３１；Ｋ−７２〜Ｍ−２３１；Ｖ−７３〜Ｍ−２３１；Ｎ−７４〜Ｍ−２
３１；Ｃ−７５〜Ｍ−２３１；Ｔ−７６〜Ｍ−２３１；Ｐ−７７〜Ｍ−２３１；
Ｔ−７８〜Ｍ−２３１；Ｓ−７９〜Ｍ−２３１；Ｎ−８０〜Ｍ−２３１；Ａ−８
１〜Ｍ−２３１；Ｖ−８２〜Ｍ−２３１；Ｃ−８３〜Ｍ−２３１；Ｇ−８４〜Ｍ
−２３１；Ｄ−８５〜Ｍ−２３１；Ｃ−８６〜Ｍ−２３１；Ｌ−８７〜Ｍ−２３
１；Ｐ−８８〜Ｍ−２３１；Ｒ−８９〜Ｍ−２３１；Ｆ−９０〜Ｍ−２３１；Ｙ
−９１〜Ｍ−２３１；Ｒ−９２〜Ｍ−２３１；Ｋ−９３〜Ｍ−２３１；Ｔ−９４
〜Ｍ−２３１；Ｒ−９５〜Ｍ−２３１；Ｉ−９６〜Ｍ−２３１；Ｇ−９７〜Ｍ−
２３１；Ｇ−９８〜Ｍ−２３１；Ｌ−９９〜Ｍ−２３１；Ｑ−１００〜Ｍ−２３
１；Ｄ−１０１〜Ｍ−２３１；Ｑ−１０２〜Ｍ−２３１；Ｅ−１０３〜Ｍ−２３
１；Ｃ−１０４〜Ｍ−２３１；Ｉ−１０５〜Ｍ−２３１；Ｐ−１０６〜Ｍ−２３
１；Ｃ−１０７〜Ｍ−２３１；Ｔ−１０８〜Ｍ−２３１；Ｋ−１０９〜Ｍ−２３
１；Ｑ−１１０〜Ｍ−２３１；Ｔ−１１１〜Ｍ−２３１；Ｐ−１１２〜Ｍ−２３
１；Ｔ−１１３〜Ｍ−２３１；Ｓ−１１４〜Ｍ−２３１；Ｅ−１１５〜Ｍ−２３
１；Ｖ−１１６〜Ｍ−２３１；Ｑ−１１７〜Ｍ−２３１；Ｃ−１１８〜Ｍ−２３
１；Ａ−１１９〜Ｍ−２３１；Ｆ−１２０〜Ｍ−２３１；Ｑ−１２１〜Ｍ−２３
１；Ｌ−１２２〜Ｍ−２３１；Ｓ−１２３〜Ｍ−２３１；Ｌ−１２４〜Ｍ−２３
１；Ｖ−１２５〜Ｍ−２３１；Ｅ−１２６〜Ｍ−２３１；Ａ−１２７〜Ｍ−２３
１；Ｄ−１２８〜Ｍ−２３１；Ａ−１２９〜Ｍ−２３１；Ｐ−１３０〜Ｍ−２３
１；Ｔ−１３１〜Ｍ−２３１；Ｖ−１３２〜Ｍ−２３１；Ｐ−１３３〜Ｍ−２３
１；Ｐ−１３４〜Ｍ−２３１；Ｑ−１３５〜Ｍ−２３１；Ｅ−１３６〜Ｍ−２３
１；Ａ−１３７〜Ｍ−２３１；Ｔ−１３８〜Ｍ−２３１；Ｌ−１３９〜Ｍ−２３
１；Ｖ−１４０〜Ｍ−２３１；Ａ−１４１〜Ｍ−２３１；Ｌ−１４２〜Ｍ−２３
１；Ｖ−１４３〜Ｍ−２３１；Ｓ−１４４〜Ｍ−２３１；Ｓ−１４５〜Ｍ−２３
１；Ｌ−１４６〜Ｍ−２３１；Ｌ−１４７〜Ｍ−２３１；Ｖ−１４８〜Ｍ−２３
１；Ｖ−１４９〜Ｍ−２３１；Ｆ−１５０〜Ｍ−２３１；Ｔ−１５１〜Ｍ−２３
１；Ｌ−１５２〜Ｍ−２３１；Ａ−１５３〜Ｍ−２３１；Ｆ−１５４〜Ｍ−２３
１；Ｌ−１５５〜Ｍ−２３１；Ｇ−１５６〜Ｍ−２３１；Ｌ−１５７〜Ｍ−２３
１；Ｆ−１５８〜Ｍ−２３１；Ｆ−１５９〜Ｍ−２３１；Ｌ−１６０〜Ｍ−２３
１；Ｙ−１６１〜Ｍ−２３１；Ｃ−１６２〜Ｍ−２３１；Ｋ−１６３〜Ｍ−２３
１；Ｑ−１６４〜Ｍ−２３１；Ｆ−１６５〜Ｍ−２３１；Ｆ−１６６〜Ｍ−２３
１；Ｎ−１６７〜Ｍ−２３１；Ｒ−１６８〜Ｍ−２３１；Ｈ−１６９〜Ｍ−２３
１；Ｃ−１７０〜Ｍ−２３１；Ｑ−１７１〜Ｍ−２３１；Ｒ−１７２〜Ｍ−２３
１；Ｇ−１７３〜Ｍ−２３１；Ｇ−１７４〜Ｍ−２３１；Ｌ−１７５〜Ｍ−２３
１；Ｌ−１７６〜Ｍ−２３１；Ｑ−１７７〜Ｍ−２３１；Ｆ−１７８〜Ｍ−２３
１；Ｅ−１７９〜Ｍ−２３１；Ａ−１８０〜Ｍ−２３１；Ｄ−１８１〜Ｍ−２３
１；Ｋ−１８２〜Ｍ−２３１；Ｔ−１８３〜Ｍ−２３１；Ａ−１８４〜Ｍ−２３
１；Ｋ−１８５〜Ｍ−２３１；Ｅ−１８６〜Ｍ−２３１；Ｅ−１８７〜Ｍ−２３
１；Ｓ−１８８〜Ｍ−２３１；Ｌ−１８９〜Ｍ−２３１；Ｆ−１９０〜Ｍ−２３
１；Ｐ−１９１〜Ｍ−２３１；Ｖ−１９２〜Ｍ−２３１；Ｐ−１９３〜Ｍ−２３
１；Ｐ−１９４〜Ｍ−２３１；Ｓ−１９５〜Ｍ−２３１；Ｋ−１９６〜Ｍ−２３
１；Ｅ−１９７〜Ｍ−２３１；Ｔ−１９８〜Ｍ−２３１；Ｓ−１９９〜Ｍ−２３
１；Ａ−２００〜Ｍ−２３１；Ｅ−２０１〜Ｍ−２３１；Ｓ−２０２〜Ｍ−２３
１；Ｑ−２０３〜Ｍ−２３１；Ｖ−２０４〜Ｍ−２３１；Ｓ−２０５〜Ｍ−２３
１；Ｗ−２０６〜Ｍ−２３１；Ａ−２０７〜Ｍ−２３１；Ｐ−２０８〜Ｍ−２３
１；Ｇ−２０９〜Ｍ−２３１；Ｓ−２１０〜Ｍ−２３１；Ｌ−２１１〜Ｍ−２３
１；Ａ−２１２〜Ｍ−２３１；Ｑ−２１３〜Ｍ−２３１；Ｌ−２１４〜Ｍ−２３
１；Ｆ−２１５〜Ｍ−２３１；Ｓ−２１６〜Ｍ−２３１；Ｌ−２１７〜Ｍ−２３
１；Ｄ−２１８〜Ｍ−２３１；Ｓ−２１９〜Ｍ−２３１；Ｖ−２２０〜Ｍ−２３
１；Ｐ−２２１〜Ｍ−２３１；Ｉ−２２２〜Ｍ−２３１；Ｐ−２２３〜Ｍ−２３
１；Ｑ−２２４〜Ｍ−２３１；Ｑ−２２５〜Ｍ−２３１およびＱ−２２６〜Ｍ−
２３１。
【０２８８】 さらなる実施形態において、本発明のＴＲ１４ポリペプチドのＮ末端欠失は、
一般式ｎ2−２２６により記載され得る（ここで、ｎ2は、図４Ａ−Ｄ（配列番号
５）に同定されるのアミノ酸残基の位置に対応する、２〜２２１の数である）。
配列番号５として示される本発明のＴＲ１４ポリペプチドのＮ末端欠失は、以下
の残基のアミノ酸配列を含むかあるいはそれらからなるポリペプチドを含む：配
列番号５のＳ−２〜Ｍ−２２６；Ｔ−３〜Ｍ−２２６；Ｇ−４〜Ｍ−２２６；Ｔ
−５〜Ｍ−２２６；Ｎ−６〜Ｍ−２２６；Ｇ−７〜Ｍ−２２６；Ｄ−８〜Ｍ−２
２６；Ｇ−９〜Ｍ−２２６；Ｖ−１０〜Ｍ−２２６；Ｓ−１１〜Ｍ−２２６；Ｐ
−１２〜Ｍ−２２６；Ａ−１３〜Ｍ−２２６；Ｎ−１４〜Ｍ−２２６；Ｇ−１５
〜Ｍ−２２６；Ｖ−１６〜Ｍ−２２６；Ｖ−１７〜Ｍ−２２６；Ｌ−１８〜Ｍ−
２２６；Ｄ−１９〜Ｍ−２２６；Ｒ−２０〜Ｍ−２２６；Ｓ−２１〜Ｍ−２２６
；Ｙ−２２〜Ｍ−２２６；Ｐ−２３〜Ｍ−２２６；Ｒ−２４〜Ｍ−２２６；Ｉ−
２５〜Ｍ−２２６；Ｖ−２６〜Ｍ−２２６；Ｖ−２７〜Ｍ−２２６；Ｍ−２８〜
Ｍ−２２６；Ｅ−２９〜Ｍ−２２６；Ｒ−３０〜Ｍ−２２６；Ｖ−３１〜Ｍ−２
２６；Ｅ−３２〜Ｍ−２２６；Ｍ−３３〜Ｍ−２２６；Ｐ−３４〜Ｍ−２２６；
Ｔ−３５〜Ｍ−２２６；Ａ−３６〜Ｍ−２２６；Ｑ−３７〜Ｍ−２２６；Ｐ−３
８〜Ｍ−２２６；Ａ−３９〜Ｍ−２２６；Ｌ−４０〜Ｍ−２２６；Ｌ−４１〜Ｍ
−２２６；Ａ−４２〜Ｍ−２２６；Ｖ−４３〜Ｍ−２２６；Ｑ−４４〜Ｍ−２２
６；Ｋ−４５〜Ｍ−２２６；Ｑ−４６〜Ｍ−２２６；Ｌ−４７〜Ｍ−２２６；Ｇ
−４８〜Ｍ−２２６；Ｐ−４９〜Ｍ−２２６；Ｐ−５０〜Ｍ−２２６；Ｑ−５１
〜Ｍ−２２６；Ｍ−５２〜Ｍ−２２６；Ｃ−５３〜Ｍ−２２６；Ｒ−５４〜Ｍ−
２２６；Ｖ−５５〜Ｍ−２２６；Ａ−５６〜Ｍ−２２６；Ｃ−５７〜Ｍ−２２６
；Ｔ−５８〜Ｍ−２２６；Ｃ−５９〜Ｍ−２２６；Ａ−６０〜Ｍ−２２６；Ｖ−
６１〜Ｍ−２２６；Ｉ−６２〜Ｍ−２２６；Ｎ−６３〜Ｍ−２２６；Ｒ−６４〜
Ｍ−２２６；Ｖ−６５〜Ｍ−２２６；Ｑ−６６〜Ｍ−２２６；Ｋ−６７〜Ｍ−２
２６；Ｖ−６８〜Ｍ−２２６；Ｎ−６９〜Ｍ−２２６；Ｃ−７０〜Ｍ−２２６；
Ｔ−７１〜Ｍ−２２６；Ｐ−７２〜Ｍ−２２６；Ｔ−７３〜Ｍ−２２６；Ｓ−７
４〜Ｍ−２２６；Ｎ−７５〜Ｍ−２２６；Ａ−７６〜Ｍ−２２６；Ｖ−７７〜Ｍ
−２２６；Ｃ−７８〜Ｍ−２２６；Ｇ−７９〜Ｍ−２２６；Ｄ−８０〜Ｍ−２２
６；Ｃ−８１〜Ｍ−２２６；Ｌ−８２〜Ｍ−２２６；Ｐ−８３〜Ｍ−２２６；Ｒ
−８４〜Ｍ−２２６；Ｆ−８５〜Ｍ−２２６；Ｙ−８６〜Ｍ−２２６；Ｒ−８７
〜Ｍ−２２６；Ｋ−８８〜Ｍ−２２６；Ｔ−８９〜Ｍ−２２６；Ｒ−９０〜Ｍ−
２２６；Ｉ−９１〜Ｍ−２２６；Ｇ−９２〜Ｍ−２２６；Ｇ−９３〜Ｍ−２２６
；Ｌ−９４〜Ｍ−２２６；Ｑ−９５〜Ｍ−２２６；Ｄ−９６〜Ｍ−２２６；Ｑ−
９７〜Ｍ−２２６；Ｅ−９８〜Ｍ−２２６；Ｃ−９９〜Ｍ−２２６；Ｉ−１００
〜Ｍ−２２６；Ｐ−１０１〜Ｍ−２２６；Ｃ−１０２〜Ｍ−２２６；Ｔ−１０３
〜Ｍ−２２６；Ｋ−１０４〜Ｍ−２２６；Ｑ−１０５〜Ｍ−２２６；Ｔ−１０６
〜Ｍ−２２６；Ｐ−１０７〜Ｍ−２２６；Ｔ−１０８〜Ｍ−２２６；Ｓ−１０９
〜Ｍ−２２６；Ｅ−１１０〜Ｍ−２２６；Ｖ−１１１〜Ｍ−２２６；Ｑ−１１２
〜Ｍ−２２６；Ｃ−１１３〜Ｍ−２２６；Ａ−１１４〜Ｍ−２２６；Ｆ−１１５
〜Ｍ−２２６；Ｑ−１１６〜Ｍ−２２６；Ｌ−１１７〜Ｍ−２２６；Ｓ−１１８
〜Ｍ−２２６；Ｌ−１１９〜Ｍ−２２６；Ｖ−１２０〜Ｍ−２２６；Ｅ−１２１
〜Ｍ−２２６；Ａ−１２２〜Ｍ−２２６；Ｄ−１２３〜Ｍ−２２６；Ａ−１２４
〜Ｍ−２２６；Ｐ−１２５〜Ｍ−２２６；Ｔ−１２６〜Ｍ−２２６；Ｖ−１２７
〜Ｍ−２２６；Ｐ−１２８〜Ｍ−２２６；Ｐ−１２９〜Ｍ−２２６；Ｑ−１３０
〜Ｍ−２２６；Ｅ−１３１〜Ｍ−２２６；Ａ−１３２〜Ｍ−２２６；Ｔ−１３３
〜Ｍ−２２６；Ｌ−１３４〜Ｍ−２２６；Ｖ−１３５〜Ｍ−２２６；Ａ−１３６
〜Ｍ−２２６；Ｌ−１３７〜Ｍ−２２６；Ｖ−１３８〜Ｍ−２２６；Ｓ−１３９
〜Ｍ−２２６；Ｓ−１４０〜Ｍ−２２６；Ｌ−１４１〜Ｍ−２２６；Ｌ−１４２
〜Ｍ−２２６；Ｖ−１４３〜Ｍ−２２６；Ｖ−１４４〜Ｍ−２２６；Ｆ−１４５
〜Ｍ−２２６；Ｔ−１４６〜Ｍ−２２６；Ｌ−１４７〜Ｍ−２２６；Ａ−１４８
〜Ｍ−２２６；Ｆ−１４９〜Ｍ−２２６；Ｌ−１５０〜Ｍ−２２６；Ｇ−１５１
〜Ｍ−２２６；Ｌ−１５２〜Ｍ−２２６；Ｆ−１５３〜Ｍ−２２６；Ｆ−１５４
〜Ｍ−２２６；Ｌ−１５５〜Ｍ−２２６；Ｙ−１５６〜Ｍ−２２６；Ｃ−１５７
〜Ｍ−２２６；Ｋ−１５８〜Ｍ−２２６；Ｑ−１５９〜Ｍ−２２６；Ｆ−１６０
〜Ｍ−２２６；Ｆ−１６１〜Ｍ−２２６；Ｎ−１６２〜Ｍ−２２６；Ｒ−１６３
〜Ｍ−２２６；Ｈ−１６４〜Ｍ−２２６；Ｃ−１６５〜Ｍ−２２６；Ｑ−１６６
〜Ｍ−２２６；Ｒ−１６７〜Ｍ−２２６；Ｇ−１６８〜Ｍ−２２６；Ｇ−１６９
〜Ｍ−２２６；Ｌ−１７０〜Ｍ−２２６；Ｌ−１７１〜Ｍ−２２６；Ｑ−１７２
〜Ｍ−２２６；Ｆ−１７３〜Ｍ−２２６；Ｅ−１７４〜Ｍ−２２６；Ａ−１７５
〜Ｍ−２２６；Ｄ−１７６〜Ｍ−２２６；Ｋ−１７７〜Ｍ−２２６；Ｔ−１７８
〜Ｍ−２２６；Ａ−１７９〜Ｍ−２２６；Ｋ−１８０〜Ｍ−２２６；Ｅ−１８１
〜Ｍ−２２６；Ｅ−１８２〜Ｍ−２２６；Ｓ−１８３〜Ｍ−２２６；Ｌ−１８４
〜Ｍ−２２６；Ｆ−１８５〜Ｍ−２２６；Ｐ−１８６〜Ｍ−２２６；Ｖ−１８７
〜Ｍ−２２６；Ｐ−１８８〜Ｍ−２２６；Ｐ−１８９〜Ｍ−２２６；Ｓ−１９０
〜Ｍ−２２６；Ｋ−１９１〜Ｍ−２２６；Ｅ−１９２〜Ｍ−２２６；Ｔ−１９３
〜Ｍ−２２６；Ｓ−１９４〜Ｍ−２２６；Ａ−１９５〜Ｍ−２２６；Ｅ−１９６
〜Ｍ−２２６；Ｓ−１９７〜Ｍ−２２６；Ｑ−１９８〜Ｍ−２２６；Ｖ−１９９
〜Ｍ−２２６；Ｓ−２００〜Ｍ−２２６；Ｗ−２０１〜Ｍ−２２６；Ａ−２０２
〜Ｍ−２２６；Ｐ−２０３〜Ｍ−２２６；Ｇ−２０４〜Ｍ−２２６；Ｓ−２０５
〜Ｍ−２２６；Ｌ−２０６〜Ｍ−２２６；Ａ−２０７〜Ｍ−２２６；Ｑ−２０８
〜Ｍ−２２６；Ｌ−２０９〜Ｍ−２２６；Ｆ−２１０〜Ｍ−２２６；Ｓ−２１１
〜Ｍ−２２６；Ｌ−２１２〜Ｍ−２２６；Ｄ−２１３〜Ｍ−２２６；Ｓ−２１４
〜Ｍ−２２６；Ｖ−２１５〜Ｍ−２２６；Ｐ−２１６〜Ｍ−２２６；Ｉ−２１７
〜Ｍ−２２６；Ｐ−２１８〜Ｍ−２２６；Ｑ−２１９〜Ｍ−２２６；Ｑ−２２０
〜Ｍ−２２６；Ｑ−２２１〜Ｍ−２２６。これらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。
【０２８９】 別の実施形態において、ＴＲ１４ポリペプチドの細胞外ドメインのＮ末端欠失
は、一般式ｎ2−１３３により記載され得る（ここで、ｎ2は、図４Ａ−Ｄに同定
されるのアミノ酸残基の位置に対応する、１〜１２８の数である）。配列番号７
として示される本発明のＴＲ１４ポリペプチドの細胞外ドメインのＮ末端欠失は
、以下の残基のアミノ酸配列を含むかあるいはそれらからなるポリペプチドを含
む：配列番号７のＳ−２〜Ｔ−１３３；Ｔ−３〜Ｔ−１３３；Ｇ−４〜Ｔ−１３
３；Ｔ−５〜Ｔ−１３３；Ｎ−６〜Ｔ−１３３；Ｇ−７〜Ｔ−１３３；Ｄ−８〜
Ｔ−１３３；Ｇ−９〜Ｔ−１３３；Ｖ−１０〜Ｔ−１３３；Ｓ−１１〜Ｔ−１３
３；Ｐ−１２〜Ｔ−１３３；Ａ−１３〜Ｔ−１３３；Ｎ−１４〜Ｔ−１３３；Ｇ
−１５〜Ｔ−１３３；Ｖ−１６〜Ｔ−１３３；Ｖ−１７〜Ｔ−１３３；Ｌ−１８
〜Ｔ−１３３；Ｄ−１９〜Ｔ−１３３；Ｒ−２０〜Ｔ−１３３；Ｓ−２１〜Ｔ−
１３３；Ｙ−２２〜Ｔ−１３３；Ｐ−２３〜Ｔ−１３３；Ｒ−２４〜Ｔ−１３３
；Ｉ−２５〜Ｔ−１３３；Ｖ−２６〜Ｔ−１３３；Ｖ−２７〜Ｔ−１３３；Ｍ−
２８〜Ｔ−１３３；Ｅ−２９〜Ｔ−１３３；Ｒ−３０〜Ｔ−１３３；Ｖ−３１〜
Ｔ−１３３；Ｅ−３２〜Ｔ−１３３；Ｍ−３３〜Ｔ−１３３；Ｐ−３４〜Ｔ−１
３３；Ｔ−３５〜Ｔ−１３３；Ａ−３６〜Ｔ−１３３；Ｑ−３７〜Ｔ−１３３；
Ｐ−３８〜Ｔ−１３３；Ａ−３９〜Ｔ−１３３；Ｌ−４０〜Ｔ−１３３；Ｌ−４
１〜Ｔ−１３３；Ａ−４２〜Ｔ−１３３；Ｖ−４３〜Ｔ−１３３；Ｑ−４４〜Ｔ
−１３３；Ｋ−４５〜Ｔ−１３３；Ｑ−４６〜Ｔ−１３３；Ｌ−４７〜Ｔ−１３
３；Ｇ−４８〜Ｔ−１３３；Ｐ−４９〜Ｔ−１３３；Ｐ−５０〜Ｔ−１３３；Ｑ
−５１〜Ｔ−１３３；Ｍ−５２〜Ｔ−１３３；Ｃ−５３〜Ｔ−１３３；Ｒ−５４
〜Ｔ−１３３；Ｖ−５５〜Ｔ−１３３；Ａ−５６〜Ｔ−１３３；Ｃ−５７〜Ｔ−
１３３；Ｔ−５８〜Ｔ−１３３；Ｃ−５９〜Ｔ−１３３；Ａ−６０〜Ｔ−１３３
；Ｖ−６１〜Ｔ−１３３；Ｉ−６２〜Ｔ−１３３；Ｎ−６３〜Ｔ−１３３；Ｒ−
６４〜Ｔ−１３３；Ｖ−６５〜Ｔ−１３３；Ｑ−６６〜Ｔ−１３３；Ｋ−６７〜
Ｔ−１３３；Ｖ−６８〜Ｔ−１３３；Ｎ−６９〜Ｔ−１３３；Ｃ−７０〜Ｔ−１
３３；Ｔ−７１〜Ｔ−１３３；Ｐ−７２〜Ｔ−１３３；Ｔ−７３〜Ｔ−１３３；
Ｓ−７４〜Ｔ−１３３；Ｎ−７５〜Ｔ−１３３；Ａ−７６〜Ｔ−１３３；Ｖ−７
７〜Ｔ−１３３；Ｃ−７８〜Ｔ−１３３；Ｇ−７９〜Ｔ−１３３；Ｄ−８０〜Ｔ
−１３３；Ｃ−８１〜Ｔ−１３３；Ｌ−８２〜Ｔ−１３３；Ｐ−８３〜Ｔ−１３
３；Ｒ−８４〜Ｔ−１３３；Ｆ−８５〜Ｔ−１３３；Ｙ−８６〜Ｔ−１３３；Ｒ
−８７〜Ｔ−１３３；Ｋ−８８〜Ｔ−１３３；Ｔ−８９〜Ｔ−１３３；Ｒ−９０
〜Ｔ−１３３；Ｉ−９１〜Ｔ−１３３；Ｇ−９２〜Ｔ−１３３；Ｇ−９３〜Ｔ−
１３３；Ｌ−９４〜Ｔ−１３３；Ｑ−９５〜Ｔ−１３３；Ｄ−９６〜Ｔ−１３３
；Ｑ−９７〜Ｔ−１３３；Ｅ−９８〜Ｔ−１３３；Ｃ−９９〜Ｔ−１３３；Ｉ−
１００〜Ｔ−１３３；Ｐ−１０１〜Ｔ−１３３；Ｃ−１０２〜Ｔ−１３３；Ｔ−
１０３〜Ｔ−１３３；Ｋ−１０４〜Ｔ−１３３；Ｑ−１０５〜Ｔ−１３３；Ｔ−
１０６〜Ｔ−１３３；Ｐ−１０７〜Ｔ−１３３；Ｔ−１０８〜Ｔ−１３３；Ｓ−
１０９〜Ｔ−１３３；Ｅ−１１０〜Ｔ−１３３；Ｖ−１１１〜Ｔ−１３３；Ｑ−
１１２〜Ｔ−１３３；Ｃ−１１３〜Ｔ−１３３；Ａ−１１４〜Ｔ−１３３；Ｆ−
１１５〜Ｔ−１３３；Ｑ−１１６〜Ｔ−１３３；Ｌ−１１７〜Ｔ−１３３；Ｓ−
１１８〜Ｔ−１３３；Ｌ−１１９〜Ｔ−１３３；Ｖ−１２０〜Ｔ−１３３；Ｅ−
１２１〜Ｔ−１３３；Ａ−１２２〜Ｔ−１３３；Ｄ−１２３〜Ｔ−１３３；Ａ−
１２４〜Ｔ−１３３；Ｐ−１２５〜Ｔ−１３３；Ｔ−１２６〜Ｔ−１３３；Ｖ−
１２７〜Ｔ−１３３；Ｐ−１２８〜Ｔ−１３３（または、配列番号６１の対応す
るアミノ酸配列（配列番号６１のアミノ酸配列Ｔ−７８〜Ｔ−１３３の配列が、
配列番号７のアミノ酸残基Ｔ−７３〜Ｔ−１３３の配列と同一である場合））。
これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた本発明に含まれる。
【０２９０】 上述のように、タンパク質のＮ末端由来の１つ以上のアミノ酸の欠失が、タン
パク質の１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じる場合でさえ、他の機
能的活性（例えば、生物学的活性、多量体化する能力、ＴＲ１４リガンドに結合
する能力）は、まだ保持される。例えば、短縮化ＴＲ１４ムテインのポリペプチ
ドの完全形態または成熟形態を認識する、抗体を誘導および／または結合する能
力は、完全タンパク質または成熟タンパク質の決して大多数ではない残基が、Ｎ
末端から除去される場合、一般に保持される。完全なポリペプチドのＮ末端残基
を欠く特定のポリペプチドが免疫学的活性を保持し得るか否かは、本明細書中に
記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の方法により容易に決定され
得る。多数の欠失したＣ末端アミノ酸残基を有するＴＲ１４ムテインは、いくつ
かの生物学的活性または免疫学的活性を保持することが予想される。実際、６と
同じくらい少ないＴＲ１４アミノ酸残基からなるペプチドは、頻繁に、免疫応答
を惹起し得る。
【０２９１】 従って、本発明は、さらに、図１０Ａ−Ｈ（配列番号６１）に示されるＴＲ１
４ポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ酸末端から、７位に存在するグルタ
ミン酸残基までを欠失した１つ以上の残基を有するポリペプチド、およびこのよ
うなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。特に、本発明は、
図１０Ａ−Ｈの残基１−ｍ1のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらからなるポ
リペプチドを提供する（ここで、ｍ1は、図１０Ａ−Ｈ（これは配列番号６１と
して示される配列と同一である）のアミノ酸残基の位置に対応する、７〜２３１
の範囲の整数である）。
【０２９２】 さらに、本発明は、以下のアミノ酸残基を含むかあるいはこれらからなるポリ
ペプチドを提供する：配列番号６１のＭ−１〜Ｅ−２３０；Ｍ−１〜Ｐ−２２９
；Ｍ−１〜Ｇ−２２８；Ｍ−１〜Ｑ−２２７；Ｍ−１〜Ｑ−２２６；Ｍ−１〜Ｑ
−２２５；Ｍ−１〜Ｑ−２２４；Ｍ−１〜Ｐ−２２３；Ｍ−１〜Ｉ−２２２；Ｍ
−１〜Ｐ−２２１；Ｍ−１〜Ｖ−２２０；Ｍ−１〜Ｓ−２１９；Ｍ−１〜Ｄ−２
１８；Ｍ−１〜Ｌ−２１７；Ｍ−１〜Ｓ−２１６；Ｍ−１〜Ｆ−２１５；Ｍ−１
〜Ｌ−２１４；Ｍ−１〜Ｑ−２１３；Ｍ−１〜Ａ−２１２；Ｍ−１〜Ｌ−２１１
；Ｍ−１〜Ｓ−２１０；Ｍ−１〜Ｇ−２０９；Ｍ−１〜Ｐ−２０８；Ｍ−１〜Ａ
−２０７；Ｍ−１〜Ｗ−２０６；Ｍ−１〜Ｓ−２０５；Ｍ−１〜Ｖ−２０４；Ｍ
−１〜Ｑ−２０３；Ｍ−１〜Ｓ−２０２；Ｍ−１〜Ｅ−２０１；Ｍ−１〜Ａ−２
００；Ｍ−１〜Ｓ−１９９；Ｍ−１〜Ｔ−１９８；Ｍ−１〜Ｅ−１９７；Ｍ−１
〜Ｋ−１９６；Ｍ−１〜Ｓ−１９５；Ｍ−１〜Ｐ−１９４；Ｍ−１〜Ｐ−１９３
；Ｍ−１〜Ｖ−１９２；Ｍ−１〜Ｐ−１９１；Ｍ−１〜Ｆ−１９０；Ｍ−１〜Ｌ
−１８９；Ｍ−１〜Ｓ−１８８；Ｍ−１〜Ｅ−１８７；Ｍ−１〜Ｅ−１８６；Ｍ
−１〜Ｋ−１８５；Ｍ−１〜Ａ−１８４；Ｍ−１〜Ｔ−１８３；Ｍ−１〜Ｋ−１
８２；Ｍ−１〜Ｄ−１８１；Ｍ−１〜Ａ−１８０；Ｍ−１〜Ｅ−１７９；Ｍ−１
〜Ｆ−１７８；Ｍ−１〜Ｑ−１７７；Ｍ−１〜Ｌ−１７６；Ｍ−１〜Ｌ−１７５
；Ｍ−１〜Ｇ−１７４；Ｍ−１〜Ｇ−１７３；Ｍ−１〜Ｒ−１７２；Ｍ−１〜Ｑ
−１７１；Ｍ−１〜Ｃ−１７０；Ｍ−１〜Ｈ−１６９；Ｍ−１〜Ｒ−１６８；Ｍ
−１〜Ｎ−１６７；Ｍ−１〜Ｆ−１６６；Ｍ−１〜Ｆ−１６５；Ｍ−１〜Ｑ−１
６４；Ｍ−１〜Ｋ−１６３；Ｍ−１〜Ｃ−１６２；Ｍ−１〜Ｙ−１６１；Ｍ−１
〜Ｌ−１６０；Ｍ−１〜Ｆ−１５９；Ｍ−１〜Ｆ−１５８；Ｍ−１〜Ｌ−１５７
；Ｍ−１〜Ｇ−１５６；Ｍ−１〜Ｌ−１５５；Ｍ−１〜Ｆ−１５４；Ｍ−１〜Ａ
−１５３；Ｍ−１〜Ｌ−１５２；Ｍ−１〜Ｔ−１５１；Ｍ−１〜Ｆ−１５０；Ｍ
−１〜Ｖ−１４９；Ｍ−１〜Ｖ−１４８；Ｍ−１〜Ｌ−１４７；Ｍ−１〜Ｌ−１
４６；Ｍ−１〜Ｓ−１４５；Ｍ−１〜Ｓ−１４４；Ｍ−１〜Ｖ−１４３；Ｍ−１
〜Ｌ−１４２；Ｍ−１〜Ａ−１４１；Ｍ−１〜Ｖ−１４０；Ｍ−１〜Ｌ−１３９
；Ｍ−１〜Ｔ−１３８；Ｍ−１〜Ａ−１３７；Ｍ−１〜Ｅ−１３６；Ｍ−１〜Ｑ
−１３５；Ｍ−１〜Ｐ−１３４；Ｍ−１〜Ｐ−１３３；Ｍ−１〜Ｖ−１３２；Ｍ
−１〜Ｔ−１３１；Ｍ−１〜Ｐ−１３０；Ｍ−１〜Ａ−１２９；Ｍ−１〜Ｄ−１
２８；Ｍ−１〜Ａ−１２７；Ｍ−１〜Ｅ−１２６；Ｍ−１〜Ｖ−１２５；Ｍ−１
〜Ｌ−１２４；Ｍ−１〜Ｓ−１２３；Ｍ−１〜Ｌ−１２２；Ｍ−１〜Ｑ−１２１
；Ｍ−１〜Ｆ−１２０；Ｍ−１〜Ａ−１１９；Ｍ−１〜Ｃ−１１８；Ｍ−１〜Ｑ
−１１７；Ｍ−１〜Ｖ−１１６；Ｍ−１〜Ｅ−１１５；Ｍ−１〜Ｓ−１１４；Ｍ
−１〜Ｔ−１１３；Ｍ−１〜Ｐ−１１２；Ｍ−１〜Ｔ−１１１；Ｍ−１〜Ｑ−１
１０；Ｍ−１〜Ｋ−１０９；Ｍ−１〜Ｔ−１０８；Ｍ−１〜Ｃ−１０７；Ｍ−１
〜Ｐ−１０６；Ｍ−１〜Ｉ−１０５；Ｍ−１〜Ｃ−１０４；Ｍ−１〜Ｅ−１０３
；Ｍ−１〜Ｑ−１０２；Ｍ−１〜Ｄ−１０１；Ｍ−１〜Ｑ−１００；Ｍ−１〜Ｌ
−９９；Ｍ−１〜Ｇ−９８；Ｍ−１〜Ｇ−９７；Ｍ−１〜Ｉ−９６；Ｍ−１〜Ｒ
−９５；Ｍ−１〜Ｔ−９４；Ｍ−１〜Ｋ−９３；Ｍ−１〜Ｒ−９２；Ｍ−１〜Ｙ
−９１；Ｍ−１〜Ｆ−９０；Ｍ−１〜Ｒ−８９；Ｍ−１〜Ｐ−８８；Ｍ−１〜Ｌ
−８７；Ｍ−１〜Ｃ−８６；Ｍ−１〜Ｄ−８５；Ｍ−１〜Ｇ−８４；Ｍ−１〜Ｃ
−８３；Ｍ−１〜Ｖ−８２；Ｍ−１〜Ａ−８１；Ｍ−１〜Ｎ−８０；Ｍ−１〜Ｓ
−７９；Ｍ−１〜Ｔ−７８；Ｍ−１〜Ｐ−７７；Ｍ−１〜Ｔ−７６；Ｍ−１〜Ｃ
−７５；Ｍ−１〜Ｎ−７４；Ｍ−１〜Ｖ−７３；Ｍ−１〜Ｋ−７２；Ｍ−１〜Ｑ
−７１；Ｍ−１〜Ｖ−７０；Ｍ−１〜Ｒ−６９；Ｍ−１〜Ｎ−６８；Ｍ−１〜Ｉ
−６７；Ｍ−１〜Ｖ−６６；Ｍ−１〜Ａ−６５；Ｍ−１〜Ｃ−６４；Ｍ−１〜Ｔ
−６３；Ｍ−１〜Ｉ−６２；Ｍ−１〜Ｃ−６１；Ｍ−１〜Ｓ−６０；Ｍ−１〜Ｑ
−５９；Ｍ−１〜Ｃ−５８；Ｍ−１〜Ｋ−５７；Ｍ−１〜Ｈ−５６；Ｍ−１〜Ｈ
−５５；Ｍ−１〜Ｇ−５４；Ｍ−１〜Ｗ−５３；Ｍ−１〜Ｓ−５２；Ｍ−１〜Ｓ
−５１；Ｍ−１〜Ｋ−５０；Ｍ−１〜Ｙ−４９；Ｍ−１〜Ｑ−４８；Ｍ−１〜Ｓ
−４７；Ｍ−１〜Ｓ−４６；Ｍ−１〜Ｐ−４５；Ｍ−１〜Ｌ−４４；Ｍ−１〜Ｓ
−４３；Ｍ−１〜Ｈ−４２；Ｍ−１〜Ｗ−４１；Ｍ−１〜Ｙ−４０；Ｍ−１〜Ａ
−３９；Ｍ−１〜Ｄ−３８；Ｍ−１〜Ｇ−３７；Ｍ−１〜Ｇ−３６；Ｍ−１〜Ｅ
−３５；Ｍ−１〜Ｇ−３４；Ｍ−１〜Ｙ−３３；Ｍ−１〜Ｇ−３２；Ｍ−１〜Ｃ
−３１；Ｍ−１〜Ｄ−３０；Ｍ−１〜Ｋ−２９；Ｍ−１〜Ｓ−２８；Ｍ−１〜Ｌ
−２７；Ｍ−１〜Ｅ−２６；Ｍ−１〜Ｑ−２５；Ｍ−１〜Ｇ−２４；Ｍ−１〜Ｐ
−２３；Ｍ−１〜Ｇ−２２；Ｍ−１〜Ｃ−２１；Ｍ−１〜Ｒ−２０；Ｍ−１〜Ｑ
−１９；Ｍ−１〜Ｃ−１８；Ｍ−１〜Ｔ−１７；Ｍ−１〜Ｖ−１６；Ｍ−１〜Ｃ
−１５；Ｍ−１〜Ｒ−１４；Ｍ−１〜Ｇ−１３；Ｍ−１〜Ｗ−１２；Ｍ−１〜Ｑ
−１１；Ｍ−１〜Ｄ−１０；Ｍ−１〜Ｗ−９；Ｍ−１〜Ｙ−８およびＭ−１〜Ｅ
−７。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた本発明に含ま
れる。
【０２９３】 あるいは、本発明は、さらに、図４Ａ−Ｄ（配列番号５）に示されるＴＲ１４
ポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ酸末端から、６位に存在するアスパラ
ギン残基までを欠失した１つ以上の残基を有するポリペプチド、およびこのよう
なポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。特に、本発明は、図
４Ａ−Ｄの残基１−ｍ1のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらからなるポリペ
プチドを提供する（ここで、ｍ1は、図４Ａ−Ｄ（これは配列番号５として示さ
れる配列と同一である）のアミノ酸残基の位置に対応する、６〜２２６の範囲の
整数である）。
【０２９４】 さらに、本発明は、以下のアミノ酸残基を含むかあるいはこれらからなるポリ
ペプチドを提供する：配列番号５のＭ−１〜Ｅ−２２５；Ｍ−１〜Ｐ−２２４；
Ｍ−１〜Ｇ−２２３；Ｍ−１〜Ｑ−２２２；Ｍ−１〜Ｑ−２２１；Ｍ−１〜Ｑ−
２２０；Ｍ−１〜Ｑ−２１９；Ｍ−１〜Ｐ−２１８；Ｍ−１〜Ｉ−２１７；Ｍ−
１〜Ｐ−２１６；Ｍ−１〜Ｖ−２１５；Ｍ−１〜Ｓ−２１４；Ｍ−１〜Ｄ−２１
３；Ｍ−１〜Ｌ−２１２；Ｍ−１〜Ｓ−２１１；Ｍ−１〜Ｆ−２１０；Ｍ−１〜
Ｌ−２０９；Ｍ−１〜Ｑ−２０８；Ｍ−１〜Ａ−２０７；Ｍ−１〜Ｌ−２０６；
Ｍ−１〜Ｓ−２０５；Ｍ−１〜Ｇ−２０４；Ｍ−１〜Ｐ−２０３；Ｍ−１〜Ａ−
２０２；Ｍ−１〜Ｗ−２０１；Ｍ−１〜Ｓ−２００；Ｍ−１〜Ｖ−１９９；Ｍ−
１〜Ｑ−１９８；Ｍ−１〜Ｓ−１９７；Ｍ−１〜Ｅ−１９６；Ｍ−１〜Ａ−１９
５；Ｍ−１〜Ｓ−１９４；Ｍ−１〜Ｔ−１９３；Ｍ−１〜Ｅ−１９２；Ｍ−１〜
Ｋ−１９１；Ｍ−１〜Ｓ−１９０；Ｍ−１〜Ｐ−１８９；Ｍ−１〜Ｐ−１８８；
Ｍ−１〜Ｖ−１８７；Ｍ−１〜Ｐ−１８６；Ｍ−１〜Ｆ−１８５；Ｍ−１〜Ｌ−
１８４；Ｍ−１〜Ｓ−１８３；Ｍ−１〜Ｅ−１８２；Ｍ−１〜Ｅ−１８１；Ｍ−
１〜Ｋ−１８０；Ｍ−１〜Ａ−１７９；Ｍ−１〜Ｔ−１７８；Ｍ−１〜Ｋ−１７
７；Ｍ−１〜Ｄ−１７６；Ｍ−１〜Ａ−１７５；Ｍ−１〜Ｅ−１７４；Ｍ−１〜
Ｆ−１７３；Ｍ−１〜Ｑ−１７２；Ｍ−１〜Ｌ−１７１；Ｍ−１〜Ｌ−１７０；
Ｍ−１〜Ｇ−１６９；Ｍ−１〜Ｇ−１６８；Ｍ−１〜Ｒ−１６７；Ｍ−１〜Ｑ−
１６６；Ｍ−１〜Ｃ−１６５；Ｍ−１〜Ｈ−１６４；Ｍ−１〜Ｒ−１６３；Ｍ−
１〜Ｎ−１６２；Ｍ−１〜Ｆ−１６１；Ｍ−１〜Ｆ−１６０；Ｍ−１〜Ｑ−１５
９；Ｍ−１〜Ｋ−１５８；Ｍ−１〜Ｃ−１５７；Ｍ−１〜Ｙ−１５６；Ｍ−１〜
Ｌ−１５５；Ｍ−１〜Ｆ−１５４；Ｍ−１〜Ｆ−１５３；Ｍ−１〜Ｌ−１５２；
Ｍ−１〜Ｇ−１５１；Ｍ−１〜Ｌ−１５０；Ｍ−１〜Ｆ−１４９；Ｍ−１〜Ａ−
１４８；Ｍ−１〜Ｌ−１４７；Ｍ−１〜Ｔ−１４６；Ｍ−１〜Ｆ−１４５；Ｍ−
１〜Ｖ−１４４；Ｍ−１〜Ｖ−１４３；Ｍ−１〜Ｌ−１４２；Ｍ−１〜Ｌ−１４
１；Ｍ−１〜Ｓ−１４０；Ｍ−１〜Ｓ−１３９；Ｍ−１〜Ｖ−１３８；Ｍ−１〜
Ｌ−１３７；Ｍ−１〜Ａ−１３６；Ｍ−１〜Ｖ−１３５；Ｍ−１〜Ｌ−１３４；
Ｍ−１〜Ｔ−１３３；Ｍ−１〜Ａ−１３２；Ｍ−１〜Ｅ−１３１；Ｍ−１〜Ｑ−
１３０；Ｍ−１〜Ｐ−１２９；Ｍ−１〜Ｐ−１２８；Ｍ−１〜Ｖ−１２７；Ｍ−
１〜Ｔ−１２６；Ｍ−１〜Ｐ−１２５；Ｍ−１〜Ａ−１２４；Ｍ−１〜Ｄ−１２
３；Ｍ−１〜Ａ−１２２；Ｍ−１〜Ｅ−１２１；Ｍ−１〜Ｖ−１２０；Ｍ−１〜
Ｌ−１１９；Ｍ−１〜Ｓ−１１８；Ｍ−１〜Ｌ−１１７；Ｍ−１〜Ｑ−１１６；
Ｍ−１〜Ｆ−１１５；Ｍ−１〜Ａ−１１４；Ｍ−１〜Ｃ−１１３；Ｍ−１〜Ｑ−
１１２；Ｍ−１〜Ｖ−１１１；Ｍ−１〜Ｅ−１１０；Ｍ−１〜Ｓ−１０９；Ｍ−
１〜Ｔ−１０８；Ｍ−１〜Ｐ−１０７；Ｍ−１〜Ｔ−１０６；Ｍ−１〜Ｑ−１０
５；Ｍ−１〜Ｋ−１０４；Ｍ−１〜Ｔ−１０３；Ｍ−１〜Ｃ−１０２；Ｍ−１〜
Ｐ−１０１；Ｍ−１〜Ｉ−１００；Ｍ−１〜Ｃ−９９；Ｍ−１〜Ｅ−９８；Ｍ−
１〜Ｑ−９７；Ｍ−１〜Ｄ−９６；Ｍ−１〜Ｑ−９５；Ｍ−１〜Ｌ−９４；Ｍ−
１〜Ｇ−９３；Ｍ−１〜Ｇ−９２；Ｍ−１〜Ｉ−９１；Ｍ−１〜Ｒ−９０；Ｍ−
１〜Ｔ−８９；Ｍ−１〜Ｋ−８８；Ｍ−１〜Ｒ−８７；Ｍ−１〜Ｙ−８６；Ｍ−
１〜Ｆ−８５；Ｍ−１〜Ｒ−８４；Ｍ−１〜Ｐ−８３；Ｍ−１〜Ｌ−８２；Ｍ−
１〜Ｃ−８１；Ｍ−１〜Ｄ−８０；Ｍ−１〜Ｇ−７９；Ｍ−１〜Ｃ−７８；Ｍ−
１〜Ｖ−７７；Ｍ−１〜Ａ−７６；Ｍ−１〜Ｎ−７５；Ｍ−１〜Ｓ−７４；Ｍ−
１〜Ｔ−７３；Ｍ−１〜Ｐ−７２；Ｍ−１〜Ｔ−７１；Ｍ−１〜Ｃ−７０；Ｍ−
１〜Ｎ−６９；Ｍ−１〜Ｖ−６８；Ｍ−１〜Ｋ−６７；Ｍ−１〜Ｑ−６６；Ｍ−
１〜Ｖ−６５；Ｍ−１〜Ｒ−６４；Ｍ−１〜Ｎ−６３；Ｍ−１〜Ｉ−６２；Ｍ−
１〜Ｖ−６１；Ｍ−１〜Ａ−６０；Ｍ−１〜Ｃ−５９；Ｍ−１〜Ｔ−５８；Ｍ−
１〜Ｃ−５７；Ｍ−１〜Ａ−５６；Ｍ−１〜Ｖ−５５；Ｍ−１〜Ｒ−５４；Ｍ−
１〜Ｃ−５３；Ｍ−１〜Ｍ−５２；Ｍ−１〜Ｑ−５１；Ｍ−１〜Ｐ−５０；Ｍ−
１〜Ｐ−４９；Ｍ−１〜Ｇ−４８；Ｍ−１〜Ｌ−４７；Ｍ−１〜Ｑ−４６；Ｍ−
１〜Ｋ−４５；Ｍ−１〜Ｑ−４４；Ｍ−１〜Ｖ−４３；Ｍ−１〜Ａ−４２；Ｍ−
１〜Ｌ−４１；Ｍ−１〜Ｌ−４０；Ｍ−１〜Ａ−３９；Ｍ−１〜Ｐ−３８；Ｍ−
１〜Ｑ−３７；Ｍ−１〜Ａ−３６；Ｍ−１〜Ｔ−３５；Ｍ−１〜Ｐ−３４；Ｍ−
１〜Ｍ−３３；Ｍ−１〜Ｅ−３２；Ｍ−１〜Ｖ−３１；Ｍ−１〜Ｒ−３０；Ｍ−
１〜Ｅ−２９；Ｍ−１〜Ｍ−２８；Ｍ−１〜Ｖ−２７；Ｍ−１〜Ｖ−２６；Ｍ−
１〜Ｉ−２５；Ｍ−１〜Ｒ−２４；Ｍ−１〜Ｐ−２３；Ｍ−１〜Ｙ−２２；Ｍ−
１〜Ｓ−２１；Ｍ−１〜Ｒ−２０；Ｍ−１〜Ｄ−１９；Ｍ−１〜Ｌ−１８；Ｍ−
１〜Ｖ−１７；Ｍ−１〜Ｖ−１６；Ｍ−１〜Ｇ−１５；Ｍ−１〜Ｎ−１４；Ｍ−
１〜Ａ−１３；Ｍ−１〜Ｐ−１２；Ｍ−１〜Ｓ−１１；Ｍ−１〜Ｖ−１０；Ｍ−
１〜Ｇ−９；Ｍ−１〜Ｄ−８；Ｍ−１〜Ｇ−７；Ｍ−１〜Ｎ−６。これらのポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた本発明に含まれる。
【０２９５】 上述のように、タンパク質のＣ末端由来の１つ以上のアミノ酸の欠失が、タン
パク質の１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じる場合でさえ、他の機
能的活性（例えば、生物学的活性、多量体化する能力、ＴＲ１４リガンドに結合
する能力）は、まだ保持される。例えば、短縮化ＴＲ１４ムテインのポリペプチ
ドの完全形態または成熟形態を認識する、抗体を誘導および／または結合する能
力は、完全タンパク質または成熟タンパク質の決して大多数ではない残基が、Ｃ
末端から除去される場合、一般に保持される。完全なポリペプチドのＮ末端残基
を欠く特定のポリペプチドが免疫学的活性を保持し得るか否かは、本明細書中に
記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の方法により容易に決定され
得る。多数の欠失したＣ末端アミノ酸残基を有するＴＲ１４ムテインは、いくつ
かの生物学的活性または免疫学的活性を保持することが予想される。実際、６と
同じくらい少ないＴＲ１４アミノ酸残基からなるペプチドは、頻繁に、免疫応答
を惹起し得る。
【０２９６】 従って、本発明は、さらに、図４Ａ−Ｄ（配列番号５）に示されるＴＲ１４ポ
リペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ酸末端を欠失した１つ以上の残基を有す
るポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
を提供する。特に、本発明は、図４Ａ−Ｄの残基１３３−ｍ1のアミノ酸配列を
含むかあるいはこれらからなるポリペプチドを提供する（ここで、ｍ1は、図４
Ａ−Ｄ（これは配列番号５として示される配列と同一である）のアミノ酸残基の
位置に対応する、６〜１３２の範囲の整数である）。
【０２９７】 さらに、本発明は、以下の残基のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらからな
るＴＲ１４ポリペプチドを提供する：配列番号７のＭ−１〜Ａ−１３２；Ｍ−１
〜Ｅ−１３１；Ｍ−１〜Ｑ−１３０；Ｍ−１〜Ｐ−１２９；Ｍ−１〜Ｐ−１２８
；Ｍ−１〜Ｖ−１２７；Ｍ−１〜Ｔ−１２６；Ｍ−１〜Ｐ−１２５；Ｍ−１〜Ａ
−１２４；Ｍ−１〜Ｄ−１２３；Ｍ−１〜Ａ−１２２；Ｍ−１〜Ｅ−１２１；Ｍ
−１〜Ｖ−１２０；Ｍ−１〜Ｌ−１１９；Ｍ−１〜Ｓ−１１８；Ｍ−１〜Ｌ−１
１７；Ｍ−１〜Ｑ−１１６；Ｍ−１〜Ｆ−１１５；Ｍ−１〜Ａ−１１４；Ｍ−１
〜Ｃ−１１３；Ｍ−１〜Ｑ−１１２；Ｍ−１〜Ｖ−１１１；Ｍ−１〜Ｅ−１１０
；Ｍ−１〜Ｓ−１０９；Ｍ−１〜Ｔ−１０８；Ｍ−１〜Ｐ−１０７；Ｍ−１〜Ｔ
−１０６；Ｍ−１〜Ｑ−１０５；Ｍ−１〜Ｋ−１０４；Ｍ−１〜Ｔ−１０３；Ｍ
−１〜Ｃ−１０２；Ｍ−１〜Ｐ−１０１；Ｍ−１〜Ｉ−１００；Ｍ−１〜Ｃ−９
９；Ｍ−１〜Ｅ−９８；Ｍ−１〜Ｑ−９７；Ｍ−１〜Ｄ−９６；Ｍ−１〜Ｑ−９
５；Ｍ−１〜Ｌ−９４；Ｍ−１〜Ｇ−９３；Ｍ−１〜Ｇ−９２；Ｍ−１〜Ｉ−９
１；Ｍ−１〜Ｒ−９０；Ｍ−１〜Ｔ−８９；Ｍ−１〜Ｋ−８８；Ｍ−１〜Ｒ−８
７；Ｍ−１〜Ｙ−８６；Ｍ−１〜Ｆ−８５；Ｍ−１〜Ｒ−８４；Ｍ−１〜Ｐ−８
３；Ｍ−１〜Ｌ−８２；Ｍ−１〜Ｃ−８１；Ｍ−１〜Ｄ−８０；Ｍ−１〜Ｇ−７
９；Ｍ−１〜Ｃ−７８；Ｍ−１〜Ｖ−７７；Ｍ−１〜Ａ−７６；Ｍ−１〜Ｎ−７
５；Ｍ−１〜Ｓ−７４；Ｍ−１〜Ｔ−７３；Ｍ−１〜Ｐ−７２；Ｍ−１〜Ｔ−７
１；Ｍ−１〜Ｃ−７０；Ｍ−１〜Ｎ−６９；Ｍ−１〜Ｖ−６８；Ｍ−１〜Ｋ−６
７；Ｍ−１〜Ｑ−６６；Ｍ−１〜Ｖ−６５；Ｍ−１〜Ｒ−６４；Ｍ−１〜Ｎ−６
３；Ｍ−１〜Ｉ−６２；Ｍ−１〜Ｖ−６１；Ｍ−１〜Ａ−６０；Ｍ−１〜Ｃ−５
９；Ｍ−１〜Ｔ−５８；Ｍ−１〜Ｃ−５７；Ｍ−１〜Ａ−５６；Ｍ−１〜Ｖ−５
５；Ｍ−１〜Ｒ−５４；Ｍ−１〜Ｃ−５３；Ｍ−１〜Ｍ−５２；Ｍ−１〜Ｑ−５
１；Ｍ−１〜Ｐ−５０；Ｍ−１〜Ｐ−４９；Ｍ−１〜Ｇ−４８；Ｍ−１〜Ｌ−４
７；Ｍ−１〜Ｑ−４６；Ｍ−１〜Ｋ−４５；Ｍ−１〜Ｑ−４４；Ｍ−１〜Ｖ−４
３；Ｍ−１〜Ａ−４２；Ｍ−１〜Ｌ−４１；Ｍ−１〜Ｌ−４０；Ｍ−１〜Ａ−３
９；Ｍ−１〜Ｐ−３８；Ｍ−１〜Ｑ−３７；Ｍ−１〜Ａ−３６；Ｍ−１〜Ｔ−３
５；Ｍ−１〜Ｐ−３４；Ｍ−１〜Ｍ−３３；Ｍ−１〜Ｅ−３２；Ｍ−１〜Ｖ−３
１；Ｍ−１〜Ｒ−３０；Ｍ−１〜Ｅ−２９；Ｍ−１〜Ｍ−２８；Ｍ−１〜Ｖ−２
７；Ｍ−１〜Ｖ−２６；Ｍ−１〜Ｉ−２５；Ｍ−１〜Ｒ−２４；Ｍ−１〜Ｐ−２
３；Ｍ−１〜Ｙ−２２；Ｍ−１〜Ｓ−２１；Ｍ−１〜Ｒ−２０；Ｍ−１〜Ｄ−１
９；Ｍ−１〜Ｌ−１８；Ｍ−１〜Ｖ−１７；Ｍ−１〜Ｖ−１６；Ｍ−１〜Ｇ−１
５；Ｍ−１〜Ｎ−１４；Ｍ−１〜Ａ−１３；Ｍ−１〜Ｐ−１２；Ｍ−１〜Ｓ−１
１；Ｍ−１〜Ｖ−１０；Ｍ−１〜Ｇ−９；Ｍ−１〜Ｄ−８；Ｍ−１〜Ｇ−７；Ｍ
−１〜Ｎ−６。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた本発
明に含まれる。
【０２９８】 本発明はまた、残基ｎ1−ｍ1、ｎ2−ｍ1、ｎ1−ｍ2および／またはｎ2−ｍ2を
有するように一般に記載され得る（ここで、ｎ1、ｎ2、ｍ1およびｍ2は、上記の
ような整数である）、アミノ末端およびカルボキシル末端の両方から欠失した１
つ以上のアミノ酸を有するポリペプチドを提供する。従って、任意の上記に列挙
したＮ末端またはＣ末端欠失は、Ｎ末端欠失およびＣ末端欠失ＴＲ１４ポリペプ
チドを生成するために組合され得る。
【０２９９】 ＴＲ１４ポリペプチドのいくつかのアミノ酸配列は、タンパク質の構造または
機能に対して有意な効果を有さないで変化され得ることが当該分野で認識される
。配列におけるこのような差が考慮される場合、活性を決定するタンパク質の重
要な領域が存在することを記憶しておくべきである。従って、本発明は、さらに
、実質的なＴＲ１４レセプター活性を示すか、または本明細書中で議論されるタ
ンパク質部分のようなＴＲ１４ポリペプチドの領域を含むＴＲ１４レセプターの
改変体を含む。このような変異体は、欠失、挿入、逆位、反復、および型置換を
含む。上記のように、アミノ酸変化が表現型的にサイレントであるようなものに
関する手引きは、Ｊ．Ｕ．Ｂｏｗｉｅ，ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６
−１３１０（１９９０））に見出され得る。
【０３００】 従って、好ましくは配列番号６１、あるいは配列番号５に示されるか、または
ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８として寄託されたｃＤＮＡによりコードされる
ポリヌクレオチドのフラグメント、誘導体もしくはアナログは、（ｉ）アミノ酸
残基の少なくとも１つ以上が保存アミノ酸残基もしくは非保存アミノ酸残基（好
ましくは保存アミノ酸残基、そしてより好ましくは、少なくとも１つ、しかし１
０未満の保存されたアミノ酸残基）で置換されたものであっても良いし、そして
このような置換されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによりコードされたもので
あっても、もしくはそうでなくてもよく、または（ｉｉ）アミノ酸残基の１つ以
上が置換基を含むものであってもよく、または（ｉｉｉ）成熟ポリペプチドが、
ポリペプチドの半減期を延長する化合物のような別の化合物（例えば、ポリエチ
レングリコール）と融合されたものでもよく、または（ｉｖ）さらなるアミノ酸
が成熟ポリペプチド（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチドまたはリーダー配
列もしくは分泌配列、または成熟ポリペプチドもしくはプロタンパク質配列の精
製に使用される配列）と融合されたものでもよい。このようなフラグメント、誘
導体およびアナログは、本明細書における教示から当業者の範囲内であるとみな
される。
【０３０１】 特に興味深いのは、荷電したアミノ酸と別の荷電したアミノ酸との置換、およ
び中性または負に荷電したアミノ酸との置換である。後者は、ＴＲ１４ポリペプ
チドの特徴を改善するために、低減した正電荷を有するタンパク質を生じる。凝
集の防止は大いに所望される。タンパク質の凝集は、活性の喪失を生じるだけで
なく、免疫原性であり得るため、薬学的処方物を調製する場合に問題となり得る
。（Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１−３
４０（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−８４
５（１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒｐｅｕｔｉｃ
Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（１９９
３））。
【０３０２】 アミノ酸の置換はまた、細胞表面レセプターへの結合選択性を変化させ得る。
Ｏｓｔａｄｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３６１：２６６−２６８（１９９３）は、２つ
のＴＮＦレセプターの既知の型の１つに対するＴＮＦ−αの選択的結合を生じる
特定の変異を記載する。従って、本発明のＴＲ１４レセプターは、天然変異また
は人為操作のどちらかに由来する１つ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を
含み得る。
【０３０３】 示されるように、タンパク質の折り畳みまたは活性に実質上影響しない保存的
なアミノ酸置換などの変化は、好ましくはあまり重要でない物質である（表４を
参照のこと）。
【０３０４】 特定の実施形態では、図１０Ａ−Ｈのアミノ酸配列（配列番号６１）および／
または本明細書中に記載される任意のポリペプチドフラグメントにおける置換、
付加または欠失の数（例えば、システインリッチドメイン、細胞外ドメイン、ま
たは、細胞内ドメイン）は、７５、７０、６０、５０、４０、３５、３０、２５
、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１または３０〜２０、
２０〜１５、２０〜１０、１５〜１０、１０〜１、５〜１０、１〜５、１〜３ま
たは１〜２である。
【０３０５】 さらなる実施形態では、図４Ａ−Ｄのアミノ酸配列（配列番号５）および／ま
たは本明細書中に記載される任意のポリペプチドフラグメントにおける置換、付
加または欠失の数（例えば、システインリッチドメイン、細胞外ドメイン、また
は、細胞内ドメイン）は、７５、７０、６０、５０、４０、３５、３０、２５、
２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１または３０〜２０、２
０〜１５、２０〜１０、１５〜１０、１０〜１、５〜１０、１〜５、１〜３また
は１〜２である。
【０３０６】 本発明のＴＲ１４ポリペプチドの機能に重要なアミノ酸は、部位指向変異誘発
またはアラニン走査変異生成などの当該分野で公知の方法（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａ
ｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８９
））によって同定され得る。後者の手順は、分子の全ての残基に単一のアラニン
変異を導入する。次いで、生じる変異体分子は、レセプター結合活性またはイン
ビボ増殖活性などの生物学的活性について試験される。リガンド−レセプター結
合について重要な部位はまた、結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識などの構
造分析（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９
９２）およびｄｅ Ｖｏｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９
９２））によって決定され得る。
【０３０７】 ＴＲ１４ポリペプチドの特徴を改善または変化させるために、タンパク質工学
が利用され得る。当業者に公知の組換えＤＮＡ技術が、新規の変異体タンパク質
または、「単一または多数のアミノ酸置換を含むムテイン」、欠失タンパク質、
付加タンパク質または融合タンパク質を作製するために使用され得る。そのよう
な改変ポリペプチドは、例えば、増強した活性または増加した安定性を示し得る
。さらに、それらは、高収率で純化され得、そして、少なくとも特定の精製およ
び貯蔵条件下で、対応する天然ポリペプチドよりもより優れた可溶性を示し得る
。
【０３０８】 天然に存在しない改変体は、当業者に公知の変異生成技術を使用して産生され
得、その技術としては、オリゴヌクレオチド媒介変異生成、アラニン走査、ＰＣ
Ｒ変異生成、部位指向変異生成（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
Ｒｅｓ．１３：４３３１（１９８６）；およびＺｏｌｌｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７（１９８２）を参照のこと）、カセット変異
誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓら、Ｇｅｎｅ ３４：３１５（１９８５）を参照のこ
と）、制限選択変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓら、Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．
Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ ＳｅｒＡ ３１７：４１５（１９８６）を参照のこ
と）が挙げられるが、それらに制限されない。
【０３０９】 従って、本発明はまた、選択された宿主細胞における発現、スケールアップな
どにより適したＴＲ１４ポリペプチドを産生するために、１以上のアミノ酸残基
が欠失し、付加され、または置換されるＴＲ１４誘導体およびＴＲ１４アナログ
を含む。例えば、システイン残基は、欠失され得るか、または、ジスルフィド架
橋を除去するために別のアミノ酸残基と置換され得る；Ｎ連結グリコシル化部位
は、例えば、高度にグリコシル化されたＮ連結部位に公知である酵母宿主からよ
り簡単に回収および精製される同質な産物の発現を達成するために、変化され得
るかまたは除去され得る。この目的に対して、本発明のＴＲ１４ポリペプチドに
おける任意の１つ以上のグリコシル化認識配列上の１番目または３番目のアミノ
酸位置の１つまたは両方での種々のアミノ酸置換、および／または任意の１つ以
上のそのような認識配列の２番目の位置でのアミノ酸欠失は、改変されたトリペ
プチド配列でのＴＲ１４のグリコシル化を妨げる（例えば、Ｍｉｙａｊｉｍｏら
、ＥＭＢＯ Ｊ ５（６）１１９３−１１９７を参照のこと）。さらに、本発明
のポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基（例えば、アルギニンおよびリジン残
基）は、例えば、フューリンまたはケキシンなどのプロテアーゼによる所望でな
いプロセシングを除去するために、欠失され得るか、または、別の残基で置換さ
れ得る。
【０３１０】 本発明のポリペプチドとしては、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８として寄託
されるｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドを含むか、あるいは、それか
らなるポリペプチド；配列番号６１の１から約２３１のアミノ酸または配列番号
５の１から約２２６のアミノ酸を含むか、あるいはそれからなるポリペプチド；
配列番号６１の２から約２３１のアミノ酸または配列番号５の２から約２２６の
アミノ酸を含むか、あるいはそれからなるポリペプチド；配列番号６１の１から
約１３８由来のアミノ酸または配列番号５の１から約１３３のアミノ酸を含むか
、あるいはそれからなるポリペプチド；ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８として
寄託されるｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドの細胞外ドメインを含む
か、あるいは、それからなるポリペプチド；ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８と
して寄託されるｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドのシステインリッチ
ドメインを含むか、あるいは、それからなるポリペプチド、または配列番号６１
の約３１から約１０４のアミノ酸で示される、または配列番号５の約６５から約
８５のアミノ酸で示される、ポリペプチド；ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８と
して寄託されるｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドの膜貫通領域を含む
か、あるいは、それからなるポリペプチド（配列番号６１の約１３９から約１５
５のアミノ酸または配列番号５の１３４から約１５０のアミノ酸を構成すると推
定される）；細胞内ドメインを含むか、あるいは、それからなるポリペプチド（
配列番号６１の約１５５から約２３１のアミノ酸または配列番号５の１５１から
約２２６のアミノ酸を構成すると推定される）；欠失した膜貫通ドメインの全て
または一部を有する細胞外および細胞内ドメインを含むか、あるいは、それから
なるポリペプチド；ならびに、上記記載のポリペプチドに対して少なくとも８０
％同一な、さらに好ましくは少なくとも９０％または９５％同一な、なおさらに
好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一なポリペプチ
ドが挙げられる（例えば、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８におけるｃＤＮＡに
よってコードされるポリペプチド、図１０Ａ−Ｈのポリペプチド（配列番号６１
）；または図４Ａ−Ｄのポリペプチド（配列番号５）またはそのポリペプチドフ
ラグメント（例えば、本明細書中に開示されるポリペプチドフラグメント））、
そしてまた、少なくとも３０アミノ酸およびさらに好ましくは少なくとも５０ア
ミノ酸を有するポリペプチドの一部を含む。この文脈では、「約」は、どちらか
の末端かまたは両方の末端で、いくつか（５、４、３、２、または１）のアミノ
酸だけより大きいまたはより小さい特に記載された範囲を含む。これらのポリヌ
クレオチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって含まれる。
【０３１１】 ＴＲ１４ポリペプチドの参照アミノ酸配列に対して少なくとも、例えば、９５
％「同一な」アミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチド（タンパ
ク質）によって、そのポリペプチド配列は、ＴＲ１４ポリペプチドの参照アミノ
酸のそれぞれ１００アミノ酸について５アミノ酸までの変化を含み得ることを除
いて、ポリペプチドのアミノ酸配列は、その参照配列に同一であることが意図さ
れる。言い換えれば、参照アミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一なアミノ
酸配列を有するポリペプチドを獲得するために、参照配列における５％までのア
ミノ酸残基が、欠失され得るか、もしくは、別のアミノ酸と置換され得、または
、参照配列における総アミノ酸残基の５％までの多くのアミノ酸が、参照配列に
挿入され得る。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列のアミノ末端また
はカルボキシ末端地点、または、これらの末端地点の間のどこでも起こり得、参
照配列の残基間で個別にまたは参照配列中の１つ以上の近接する群で散在する。
【０３１２】 実際的な問題として、任意の特定のポリペプチドが、例えば、配列番号５に示
されるアミノ酸配列に対して、またはＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８として寄
託されるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０
％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、Ｂｅ
ｓｔｆｉｔ ｐｒｏｇｒａｍ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａ
ｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ（登録商
標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ
ｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａ
ｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）などの公知のコンピュータープログラムを慣例
的に使用して決定され得る。本発明に従って、特定の配列が、参照配列に対して
、例えば、９５％同一か否かを決定するためのＢｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の
配列アライメントプログラムを使用する場合、パラメーターは、同一性の割合が
、参照アミノ酸配列の全長にわたって計算されるように、そして、参照配列にお
けるアミノ酸残基の総数の５％までの相同性のギャップが許可されるように、パ
ラメーターが設定される。
【０３１３】 特定の実施形態において、参照（照会）配列（本発明の配列）と対象配列との
間の同一性（またグローバル配列アライメントともいわれる）は、Ｂｒｕｔｌａ
ｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））の
アルゴリズムに基づいたＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定
される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸アライメントにおいて使用される好ましいパラメ
ーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ
Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍ
ｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝
１、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｅｎｇｔｈ、Ｇａｐ Ｐｅ
ｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ
Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列の長さ（どちらかより短い方）
である。この実施形態に従って、対象配列が、内部欠失のためでなく、Ｎ末端ま
たはＣ末端欠失に起因して、照会配列より短い場合、グローバルパーセント同一
性を計算するときに、ＦＡＳＴＤＢプログラムは、対象配列のＮ末端およびＣ末
端の欠如を考慮しないという事実を考慮して、結果に対して手動の訂正が行われ
る。照会配列と比較して、Ｎ末端およびＣ末端が欠如した対象配列（それは、対
応する対象残基と一致／アライメントしない）について、パーセント同一性は、
照会配列の総塩基の割合として対象配列のＮ末端およびＣ末端である照会配列の
残基の数を計算することによって、訂正される。残基が、一致／アライメントす
るか否かを決定することは、ＦＡＳＴＤＢ配列アライメントの結果によって決定
される。次いで、この割合は、パーセント同一性より差引かれ、特定のパラメー
ターを使用する上記ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算され、最終的なパーセ
ント同一性スコアへ到達する。この最終的なパーセント同一性スコアは、この実
施形態の目的として使用されるスコアである。対象配列のＮ末端およびＣ末端に
対する残基（それは、照会配列と一致／アライメントしない）のみが、パーセン
ト同一性スコアを手動で調節する目的で考慮される。すなわち、照会残基のみが
、対象配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側に位置する。例えば、９０
アミノ酸残基対象配列は、パーセント同一性を決定するために、１００残基照会
配列とアライメントされる。欠失は、対象配列のＮ末端で発生し、従って、ＦＡ
ＳＴＤＢアライメントは、Ｎ末端の最初の１０残基の一致／アライメントを示さ
ない。その１０の対を成さない残基は、その配列の１０％（Ｎ末端およびＣ末端
の一致しない残基の数／照会配列の総残基数）を示し、そして、１０％が、ＦＡ
ＳＴＤＢプログラムによって計算されるパーセント同一性スコアから差引かれる
。残りの９０％の残基が完全に一致する場合、最終的なパーセント同一性は９０
％である。別の実施形態では、９０残基対象配列は、１００残基照会配列と比較
される。このとき、欠失は、内部欠失であり、それで、照会配列と一致／アライ
メントしない対象配列のＮ末端またはＣ末端の残基は存在しない。この場合、Ｆ
ＡＳＴＤＢによって計算されるパーセント同一性は、手動で訂正されない。もう
一度、ＦＡＳＴＤＢアライメントに示されるように、対象配列（それは、照会配
列と一致／アライメントしない）のＮ末端およびＣ末端の外側に位置する残基の
みが、手動で訂正される。他の手動の訂正は、この実施形態の目的について行な
われない。
【０３１４】 本願はまた、本明細書中に記載されるｎ1−ｍ1、ｎ2−ｍ1、ｎ1−ｍ2、および
／またはｎ2−ｍ2として示されたＴＲ１４ポリペプチド配列に対して少なくとも
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なポリペプチドを含
むタンパク質に指向される。好ましい実施形態では、その適用は、本明細書中に
記載される特定のＴＲ１４のＮ末端およびＣ末端欠失のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドに対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％同一なポリペプチド配列を含むか、あるいは、それからなるタンパク質
に指向される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本
発明によって含まれる。
【０３１５】 特定の好ましい実施形態において、本発明のＴＲ１４タンパク質は、上記に記
載される融合タンパク質を含み、ここで、前記ＴＲ１４ポリペプチドは、本明細
書中で、ｎ1−ｍ1、および／またはｎ2−ｍ1として記載されるポリペプチドであ
る。好ましい実施形態では、その適用は、本明細書中に記載される特定のＮ末端
およびＣ末端欠失のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列に
対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一
な核酸分子に指向される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
はまた、本発明によって含まれる。
【０３１６】 別の局面では、本発明は、本発明のポリペプチドのエピトープを有する部分を
含むＴＲ１４ポリペプチドを提供する。このポリペプチドのエピトープ部分は、
本明細書中に記載されるポリペプチドの免疫原性または抗原性エピトープである
。「免疫原性エピトープ」は、全タンパク質が免疫原である場合、抗体反応を誘
導するタンパク質の一部として定義される。他方、抗体が結合し得るタンパク質
分子の領域は、「抗原性エピトープ」として定義される。タンパク質の免疫原性
エピトープの数は、一般的に、抗原性エピトープの数より少ない。例えば、Ｇｅ
ｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８
−４００２（１９８３）を参照のこと。
【０３１７】 抗原性エピトープを有するペプチドまたはポリペプチド（抗体が結合し得るタ
ンパク質分子の領域を含む）の選択に関して、タンパク質配列の一部を擬似する
比較的短い合成ペプチドは、部分的擬似タンパク質と反応する抗血清を慣用的に
誘導し得ることが、当該分野で周知である。例えば、Ｊ．Ｇ．Ｓｕｔｃｌｉｆｆ
ら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｔｈａｔ Ｒｅａｃｔ Ｗｉｔｈ Ｐｒｅｄｅｔ
ｅｒｍｉｎｅｄ Ｓｉｔｅｓ ｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
１９：６６０−６６６（１９８３）を参照のこと。しばしばタンパク質一次配列
で示されるタンパク質反応性血清を誘導可能なペプチドは、簡単な化学ルールの
セットによって特徴付けられ得、そして、インタクトなタンパク質の免疫優性な
領域（すなわち免疫原性エピトープ）またはアミノ末端もしくはカルボシル末端
のいずれにも限定されない。
【０３１８】 本発明の抗原性エピトープを有するペプチドおよびポリペプチドは、従って、
本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を
産生するのに有用である。例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７−
７７８（１９８４）の７７７頁を参照のこと。本発明の抗原性エピトープ保有ペ
プチドおよびポリペプチドは、本発明のポリペプチドのアミノ酸配列内に含まれ
た、好ましくは少なくとも７、さらに好ましくは９、少なくとも２０、少なくと
も２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０および最も好ましく
は少なくとも約５５と約１００との間のアミノ酸を含む。この文脈では、「約」
は、どちらかの末端かまたは両方の末端で、いくつか（５、４、３、２、または
１）のアミノ酸だけより大きいまたはより小さい特に述べられた範囲を含む。
【０３１９】 ＴＲ１４特異的抗体を産生するために使用され得る推定抗原性ポリペプチドの
非制限的な例としては、配列番号６１の約：Ａｓｐ２〜Ａｓｐ１０、Ｔｈｒ１７
〜Ａｓｐ３８、Ｐｒｏ４５〜Ｓｅｒ５２、Ｐｒｏ８８〜Ａｒｇ９５、Ｔｈｒ１０
８〜Ｇｌｕ１１５、Ｔｈｒ１３１〜Ｇｌｕ１３６、Ｐｈｅ１６６〜Ｇｌｙ１７４
、Ａｌａ１８０〜Ａｌａ２００、およびＧｌｎ２２４〜Ｍｅｔ２３１を含むポリ
ペプチドが挙げられる。これらのフラグメントおよび／または改変体（例えば、
本明細書中に記載されるフラグメントおよび／または改変体など）は、本発明に
よって含まれる。これらのポリペプチド（フラグメントおよび／または改変体を
含む）をコードするポリヌクレオチドはまた、これらのポリペプチドに結合する
抗体のように、本発明によって含まれる。
【０３２０】 ＴＲ１４特異的抗体を産生するために使用され得る推定される抗原性ポリペプ
チドのさらなる非制限的な例は、以下を含む：図４Ａ−Ｄにおける約２〜約２４
のアミノ酸残基を含むか、あるいはそれからなるポリペプチド（配列番号５のア
ミノ酸約２から約２４に対応する）；図４Ａ−Ｄにおける約４２〜約５２のアミ
ノ酸残基を含むポリペプチド（配列番号５のアミノ酸約４２から約５２に対応す
る）；図４Ａ−Ｄにおける約８０〜約１１５のアミノ酸残基を含むポリペプチド
（配列番号５のアミノ酸約８０から約１１５に対応する）；および図４Ａ−Ｄに
おける約１１５〜約２２６のアミノ酸残基を含むポリペプチド（配列番号５のア
ミノ酸約１５５から約２２６に対応する）；そして、配列番号６１のアミノ酸残
基Ｔ７８からＭ２３１の配列は、配列番号５のアミノ酸残基Ｔ７３からＭ２２６
の配列と同一であるので、対応する配列番号６１のアミノ酸配列を含む。上記に
示されるように、発明者は、上記ポリペプチドフラグメントが、ＴＲ１４レセプ
タータンパク質の抗原性領域であることを決定した。この文脈では、「約」は、
どちらかの末端かまたは両方の末端で、いくつか（５、４、３、２、または１）
のアミノ酸だけより大きいまたはより小さい特に述べられた範囲を含む。これら
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって含まれる
。
【０３２１】 ＴＲ１４特異的抗体を産生するために使用され得る推定される抗原性ペプチド
のさらなる非制限的な例は、以下を含む：配列番号５の約Ｔ３から約Ｓ１１、約
Ｖ１６から約Ｒ２４、約Ｑ４４から約Ｍ５２、約Ｆ８５から約Ｇ９３、約Ｔ１０
３から約Ｖ１１１、約Ｆ１６１から約Ｇ１６９、約Ｖ１８７から約Ａ１９５、約
Ｐ２１８から約Ｍ２２６のアミノ酸残基を含むか、あるいは、それからなるポリ
ペプチド（図４Ａ−Ｄ、配列番号６１のアミノ酸残基Ｔ７８からＭ２３１の配列
は、配列番号５のアミノ酸残基Ｔ７３からＭ２２６の配列と同一であるので、対
応する配列番号６１のアミノ酸配列を含む）（それは、ＴＲ１４タンパク質の高
度に抗原性の領域に対応し、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指標を使用して推
定された（図６および表ＩＩを参照のこと））。これらの高度に抗原性なフラグ
メントは、図４Ａ−Ｄおよび配列番号５に例示されるアミノ酸残基に対応する。
この文脈では、「約」は、どちらかの末端かまたは両方の末端で、いくつか（５
、４、３、２、または１）のアミノ酸だけより大きいまたはより小さい特に述べ
られた範囲を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた
、本発明によって含まれる。
【０３２２】 本発明のエピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、任意の従来の方法で
産生される。Ｒ．Ａ．Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，「Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｔｈｏｄ ｆ
ｏｒ ｔｈｅ Ｒａｐｉｄ Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏ
ｆ Ｌａｒｇｅ Ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｐｅｓｉｆｉｃ
ｉｔｙ ｏｆ Ａｎｔｉｇｅｎ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ
ａｔ ｔｈｅ Ｌｅｖｅｌ ｏｆ Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉ
ｄ」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３
５（１９８５）。この「Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＳＭＰＳ）」プロセスは、Ｈｏｕｇｈｔｅｎら
（１９８６）の米国特許４，６３１，２１１号にさらに記載される。
【０３２３】 当業者は、本明細書中に記載される本発明のＴＲ１４レセプターポリペプチド
およびそのペプチド保有フラグメント（例えば、配列番号５の約１から約１４９
、約２から約２４、約４２から約５２、約８０から約１１５、および／または約
１５５から約２２６のアミノ酸残基などの細胞外ドメインに対応する）は、異質
なポリペプチド配列と組み合わせられ得、例えば、本発明のポリペプチドは、免
疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ドメインまたはその一
部（ドメイン全体およびその一部の両方を含むＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および
その任意の組み合わせ）と融合し得、キメラポリペプチドを生じる。これらの融
合タンパク質は精製を容易とし、そして、インビボでの増加した半減期を示す。
このことは、例えば、キメラタンパク質が、ヒトＣＤ４ポリペプチドの最初の２
つのドメインおよび哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々
のドメインからなることを示してきた（ＥＰＡ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃ
ｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−８６（１９８８））。ＩｇＧ部分に起
因するジスルフィド結合二量体構造を有する融合タンパク質はまた、単量体ＴＲ
１４タンパク質またはタンパク質フラグメント単独以外の他の分子を結合および
中和する際に、より効率的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．２７０：３９５８−３９６４（１９９５））。この文脈では、「約
」は、どちらかの末端かまたは両方の末端で、いくつか（５、４、３、２、また
は１）のアミノ酸だけより大きいまたはより小さい特に述べられた範囲を含む。
【０３２４】 本発明の好ましいＴＲ１４Ｆｃ融合体は：配列番号６１の１〜１３８、５０〜
１３８、７０〜９０、１〜２３１、１０〜２３１、２０〜２３１、３０〜２３１
、４０〜２３１、１〜２２１、１〜２１１、１〜２０１、１〜１９１、１０〜２
２１、１０〜２０１、および／または１０〜１９１のアミノ酸残基を含む、ある
いは、それからなる構築物を含むがそれに限定されない。これらのＴＲ１４融合
をコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって含まれる。
【０３２５】 本発明のさらなるＴＲ１４Ｆｃ融合体は：配列番号５の１〜１３３、５０〜１
３３、６５〜８５、１〜２２６、１０〜２２６、２０〜２２６、３０〜２２６、
４０〜２２６、１〜２１６、１〜２０６、１〜１９６、１〜１８６、１０〜２１
６、１０〜２０６、および／または１０〜１９６のアミノ酸残基を含む、あるい
は、それからなる構築物を含むがそれに限定されない。これらのＴＲ１４融合を
コードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって含まれる。
【０３２６】 本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法を使用して、本発明のポリペプ
チドに結合する抗体を産生するための供給源としての、および、ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅゲルまたは分子ふるいゲルろ過カラム上の分子量マーカーとしての、使用を含
むがそれに限定されない。
【０３２７】 （診断アッセイ） 本発明の化合物は、哺乳動物、好ましくはヒトにおける種々の免疫系関連障害
の診断または処置について有用である。そのような障害としては、腫瘍（例えば
、Ｔ細胞、Ｂ細胞および単球白血病およびリンパ腫瘍）および腫瘍転移、細菌、
ウイルスおよび他の寄生生物による感染、免疫欠損、炎症性疾患、リンパ節症、
自己免疫疾患、および対宿主性移植片疾患が挙げられるが、それらに限定されな
い。
【０３２８】 ＴＲ１３およびＴＲ１４は、免疫細胞および免疫組織で発現される。いくつか
の免疫系関連障害については、「標準的」ＴＲ１３および／またはＴＲ１４遺伝
子発現レベル（すなわち、免疫系障害を有さない個体由来の免疫系組織または体
液におけるＴＲ１３および／またはＴＲ１４発現レベル）に対して、実質的に変
化した（増加したまたは減少した）レベルのＴＲ１３および／またはＴＲ１４遺
伝子発現が、そのような障害を有する個体から採取された免疫系組織または他の
細胞または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液または髄液）において検出され
得る。従って、本発明は、免疫系疾患の診断間に有用な診断方法を提供し、それ
は、個体由来の免疫系組織または他の細胞または体液におけるＴＲ１３および／
またはＴＲ１４ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを測定する工程、
ならびに、測定された遺伝子発現レベルを標準的ＴＲ１３および／またはＴＲ１
４遺伝子発現レベルとそれぞれ比較する工程を包含し、従って、標準と比較した
遺伝子発現レベルの増加および減少が、免疫系疾患または正常な活性化、増殖、
分化、および／または死を示す。
【０３２９】 特に、癌（例えば、免疫系の細胞または組織の癌）を有する哺乳動物における
特定の組織は、対応する「標準」レベルに比較される場合、正常または変化した
ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドおよびＴＲ１３および／またはＴ
Ｒ１４ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの有意に増加したまたは減少したレベ
ルを発現する。さらに、癌を有さない同一種の哺乳動物由来の血清と比較する場
合、そのような癌を有する哺乳動物由来の特定の体液（例えば、血清、血漿、尿
、または髄液）または細胞または組織において、ＴＲ１３および／またはＴＲ１
４ポリペプチドの増加したまたは減少したレベルが検出され得ると考えられてい
る。
【０３３０】 例えば、本発明のポリヌクレオチド（例えば、ＴＲ１３および／またはＴＲ１
４ｍＲＮＡの全部または一部に対して相補的なポリヌクレオチド配列）および本
発明のポリペプチドに対して指向した抗体（および抗体フラグメント）は、それ
らの細胞表面で、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４を発現するＴ細胞系統および
／またはＢ細胞系統（例えば、Ｂ細胞白血病細胞）の細胞の濃度を定量および定
性するために使用され得る。これらの抗体は、ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１
４遺伝子発現のレベルの異常、またはＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４の構造
および／または時間的、組織、細胞性、または亜細胞性位置の異常を検出する際
、診断的適用をさらに有する。これらの診断アッセイは、例えば、血液サンプル
、生検組織または検死組織などで、インビボまたはインビトロで、実施され得る
。
【０３３１】 例えば、本明細書中に開示されるように、ＴＲ１３またはＴＲ１４は、Ｔ細胞
で発現される。従って、本発明のポリヌクレオチド（例えば、ＴＲ１３および／
またはＴＲ１４ｍＲＮＡの全部または一部に対して相補的なポリヌクレオチド配
列）および本発明のポリペプチドに対して指向した抗体（および抗体フラグメン
ト）は、それらの細胞表面で、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４を発現するＴ細
胞系統の細胞（例えば、Ｔ細胞白血病細胞）の濃度を定量および定性するために
使用され得る。これらのポリペプチドおよび抗体は、ＴＲ１３もしくはＴＲ１４
遺伝子発現のレベルの異常、またはＴＲ１３もしくはＴＲ１４の構造および／ま
たは時間的、組織、細胞性、または亜細胞性位置の異常を検出する際、診断的適
用をさらに有する。これらの診断アッセイは、例えば、血液サンプル、生検組織
または検死組織などで、インビボまたはインビトロで、実施され得る。
【０３３２】 従って、本発明は、免疫系障害（この系の癌を含む）および／または細胞増殖
障害（例えば、癌（本明細書中で開示される癌のような）の診断間に有用な診断
方法を提供し、それは、個体由来の免疫系組織または他の細胞または体液におけ
るＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベ
ルを測定する工程、ならびに、測定された遺伝子発現レベルを標準的ＴＲ１３お
よび／またはＴＲ１４遺伝子発現レベルとそれぞれ比較する工程を包含し、従っ
て、標準と比較した遺伝子発現レベルの増加および減少が、免疫系疾患または正
常な活性化、増殖、分化、および／または死を示す。
【０３３３】 免疫系における疾患の診断（腫瘍の診断を含む）および／または細胞増殖疾患
の診断は、すでに従来の方法に従って行なわれている場合、本発明は、予後指標
として有用であり、従って、増加したまたは減少したＴＲ１３および／またはＴ
Ｒ１４遺伝子発現を示す患者は、標準レベルにより近いレベルで遺伝子を発現す
る患者に比較してより悪い臨床結果を経験する。
【０３３４】 「ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レ
ベルをアッセイする」によって、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチド
のレベル、またはＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドをコードするｍ
ＲＮＡレベルを、第一の生物学的サンプルで、直接的（例えば、絶対タンパク質
レベルまたはｍＲＮＡレベルの決定または評価によって）または相対的（例えば
、第二の生物学的サンプルのＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドレベ
ルまたはｍＲＮＡレベルに対する比較によって）に、定性または定量的に決定ま
たは評価することを意図する。好ましくは、第一の生物学的サンプル中のＴＲ１
３および／またはＴＲ１４ポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベルは、測定ま
たは評価され、標準ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドレベルまたは
ｍＲＮＡレベルと比較され、この標準は、障害を有さない個体から得た第二の生
物学的サンプルから得られるか、または免疫系の障害を有さない個体集団からの
レベルを平均して決定される。当該分野で理解されるように、一旦標準ＴＲ１３
および／またはＴＲ１４ポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベルが判明すると
、比較のための標準として繰り返し使用され得る。
【０３３５】 「生物学的サンプル」によって、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４レセプター
タンパク質（その部分を含む）またはｍＲＮＡを含有する、個体、細胞株、組織
培養物、またはその他の供給源から得られた、任意の生物学的サンプルが意図さ
れる。示されるように、生物学的サンプルは、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４
ポリペプチドの遊離細胞外ドメインを含有する体液（血清、血漿、尿、滑液、お
よび髄液のような）、免疫系組織、およびＴＲ１３および／またはＴＲ１４レセ
プターの完全または遊離細胞外ドメインを発現することが見出れているその他の
組織供給源を包含する。哺乳動物から組織生検および体液を得る方法は、当該分
野で周知である。生物学的サンプルが、ｍＲＮＡを含む場合、組織生検が好まし
い供給源である。
【０３３６】 総細胞ＲＮＡは、例えば、ＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃｈｉ，Ａｎ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２：１５６−１５９（１９８７）に記載される単一
工程のグアジニウム−チオシアネート−フェノール−クロロホルム法のような任
意の適切な技術を使用して、生物学的サンプルから単離され得る。次いで、ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのレベルは、適
切な方法を使用してアッセイされる。これらとしては、ノーザンブロット分析、
Ｓ１ヌクレアーゼマッピング、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ポリメラーゼ
連鎖反応と組み合わせた逆転写（ＲＴ−ＰＣＲ）、およびリガーゼ連鎖反応と組
み合わせた逆転写（ＲＴ−ＬＣＲ）が挙げられる。
【０３３７】 本発明はまた、細胞および組織における、正常および異常レベルの決定を含む
ＴＲ１３ポリペプチドまたはその可溶性形態のレベルを検出するための定量およ
び診断アッセイなどの診断アッセイに関する。従って、例えば、正常なコントロ
ール組織サンプルと比較して、ＴＲ１３またはその可溶性形態の過剰発現を検出
するための発明に従う診断アッセイは、例えば、腫瘍の存在を検出するために使
用され得る。宿主由来の生物学的サンプル中で、本発明のＴＲ１３ポリペプチド
またはその可溶性形態のようなタンパク質のレベルを決定するために使用され得
るアッセイ技術は、当業者に周知である。そのようなアッセイ方法としては、放
射性免疫アッセイ、競合結合アッセイ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳ
Ａアッセイが挙げられる。抗体ベースの技術は、生物学的サンプルにおけるＴＲ
１３ポリペプチドレベルをアッセイするために好ましい。例えば、組織における
ＴＲ１３ポリペプチド発現は、伝統的な免疫組織的方法を使用して研究され得る
（Ｍ．Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５
（１９８５）；Ｍ．Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３
０８７−３０９６（１９８７））。ＴＲ１３遺伝子発現を検出するために有用な
他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およ
び放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）のような免疫アッセイが挙げられる。
【０３３８】 本発明はまた、細胞および組織における、正常および異常レベルの決定を含む
ＴＲ１４ポリペプチドまたはその可溶性形態のレベルを検出するための定量およ
び診断アッセイなどの診断アッセイに関する。従って、例えば、正常なコントロ
ール組織サンプルと比較して、ＴＲ１４またはその可溶性形態の過剰発現を検出
するための発明に従う診断アッセイは、例えば、腫瘍の存在を検出するために使
用され得る。宿主由来の生物学的サンプル中で、本発明のＴＲ１４ポリペプチド
またはその可溶性形態のようなタンパク質のレベルを決定するために使用され得
るアッセイ技術は、当業者に周知である。そのようなアッセイ方法としては、放
射性免疫アッセイ、競合結合アッセイ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳ
Ａアッセイが挙げられる。抗体ベースの技術は、生物学的サンプルにおけるＴＲ
１４ポリペプチドレベルをアッセイするために好ましい。例えば、組織における
ＴＲ１４ポリペプチド発現は、伝統的な免疫組織的方法を使用して研究され得る
（Ｍ．Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５
（１９８５）；Ｍ．Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３
０８７−３０９６（１９８７））。ＴＲ１４遺伝子発現を検出するために有用な
他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およ
び放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）のような免疫アッセイが挙げられる。
【０３３９】 適切な抗体アッセイ標識は、当該分野において公知であり、そして酵素標識（
例えば、グルコースオキシダーゼ）、および放射性同位体（例えば、ヨウ素（13 1 Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、121Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ
）、インジウム（115mＩｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ、111Ｉｎ）、およびテクネチウ
ム（99Ｔｃ、99mＴｃ）、タリウム（201Ｔｉ）、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、
パラジウム（103Ｐｄ）、モリブデン（99Ｍｏ）、キセノン（133Ｘｅ）、フッ素
（18Ｆ）、153Ｓｍ，177Ｌｕ、159Ｇｄ、149Ｐｍ、140Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈｏ
、90Ｙ、47Ｓｃ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ、105Ｒｈ、97Ｒｕ）；発光標識（
例えば、ルミノール）；ならびに蛍光標識（例えば、フルオレセインおよびロー
ダミン）、ならびにビオチンが挙げられる。
【０３４０】 分析される組織または細胞型としては、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４遺伝
子を発現することが公知であるか、または疑われている細胞または組織（例えば
、Ｔ細胞系統など）、または、ＴＲ１３リガンドおよび／またはＴＲ１４リガン
ド遺伝子を発現することが公知であるか、または疑われている細胞または組織（
例えば、単球系統および脾臓の細胞など）が、一般的に挙げられる。本明細書中
で使用されるタンパク質単離方法は、例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（Ｈ
ａｒｌｏｗ，Ｅ．およびＬａｎｅ，Ｄ．，１９８８，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に記載される方法であり得、その全体が参考として
本明細書中に援用される。単離された細胞は、細胞培養由来または患者由来であ
り得る。培養物より得られた細胞の分析は、細胞ベースの遺伝子治療技術の一部
として、あるいは、ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４遺伝子またはＴＲ１３リ
ガンドおよび／もしくはＴＲ１４リガンド遺伝子の発現に対する化合物の影響を
試験するために、使用され得る細胞の評価における必要な工程であり得る。
【０３４１】 例えば、抗体または抗体のフラグメント（本明細書中に記載されるような抗体
）は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４遺伝子産物または保存された改変体また
はそのペプチドフラグメントの存在を定量または定性的に検出するために使用さ
れ得る。このことは、例えば、光学顕微鏡検出、フローサイトメトリー検出、ま
たは蛍光定量的検出と組み合わせた蛍光標識抗体を使用する免疫蛍光技術によっ
て達成され得る。
【０３４２】 本発明の抗体（またはそのフラグメント）またはＴＲ１３および／もしくはＴ
Ｒ１４ポリペプチドまたはＴＲ１３リガンドおよび／もしくはＴＲ１４リガンド
ポリペプチドは、さらに、免疫蛍光、免疫電子顕微鏡または非免疫学的アッセイ
におけるように組織学的に、ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４遺伝子産物また
は保存的改変体またはそのポリペプチドフラグメントのインサイチュ検出のため
に、あるいは、ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４リガンドに結合するＴＲ１３
および／もしくはＴＲ１４についてのインサイチュ検出のために、それぞれ使用
され得る。インサイチュ検出は、患者から組織学的試料を取り出し、そして、本
発明の標識抗体（ＴＲ１３ポリペプチドまたはＴＲ１４ポリペプチド）に適用す
ることによって達成され得る。その抗体（もしくはフラグメント）またはＴＲ１
３および／もしくはＴＲ１４ポリペプチドは、好ましくは、標識抗体（もしくは
フラグメント）を生物学的サンプルに重層することによって適用される。そのよ
うな手順の使用を介して、ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４遺伝子産物、また
は保存的改変体またはペプチドフラグメント、またはＴＲ１３および／もしくは
ＴＲ１４ポリペプチド結合の存在だけでなく、調査組織中のその分配を決定する
ことが可能である。本発明を使用して、当業者は、任意の広範な種々の組織学的
方法（染色手順のような）が、そのようなインサイチュ検出を達成するために改
変され得る。
【０３４３】 ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４遺伝子産物または保存的改変体またはその
ペプチドフラグメントについての免疫アッセイおよび非免疫アッセイは、代表的
には、ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４遺伝子産物または保存的改変体または
そのペプチドフラグメントの検出可能な標識抗体の存在下で、生物学的液体、組
織抽出物、新しく採取した細胞、または細胞培養でインキュベートされた細胞の
溶解液のようなサンプルをインキュベートする工程、ならびに、当該分野で周知
の多数の技術のいずれかによって結合抗体を検出する工程、を包含する。
【０３４４】 ＴＲ１３リガンドおよび／もしくはＴＲ１４リガンド遺伝子産物または保存的
改変体またはそのペプチドフラグメントについての免疫アッセイおよび非免疫ア
ッセイは、代表的には、ＴＲ１３リガンドおよび／もしくはＴＲ１４リガンド遺
伝子産物または保存的改変体またはそのペプチドフラグメントを同定可能である
検出可能または標識可能なＴＲ１３の存在下で、生物学的液体、組織抽出物、新
しく採取した細胞、または細胞培養でインキュベートされた細胞の溶解液のよう
なサンプルをインキュベートする工程、ならびに、当該分野で周知の多数の技術
のいずれかによって結合したＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４ポリペプチドを
検出する工程、を包含する。
【０３４５】 生物学的サンプルは、細胞、細胞粒子または可溶性タンパク質を固定可能なニ
トロセルロースなどの固相支持体またはキャリア、または他の固体支持体上に接
触され得、そして固定され得る。次いで、その支持体は、適切な緩衝液で洗浄さ
れ得、検出可能に標識された抗ＴＲ１３および／もしくは抗ＴＲ１４抗体または
検出可能なＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４ポリペプチドでの処理が続き得る
。次いで、その固体支持体は、緩衝液で２回で洗浄され得、結合していない抗体
またはポリペプチドが除去される。必要に応じて、その抗体は、続いて標識され
得る。次いで、固体支持体上の結合標識の量が、従来の手法によって検出され得
る。
【０３４６】 「固相支持体またはキャリア」は、抗原または抗体に結合し得る任意の支持体
を意図する。周知の支持体またはキャリアとしては、ガラス、ポリスチレン、ポ
リプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然およ
び改変セルロース、ポリアクリルアミド、斑レイ岩、および磁鉄鉱が挙げられる
。そのキャリアの性質は、本発明の目的のために、ある程度可溶性かまたは不溶
性のどちらかであり得る。その固体物質は、結合分子が抗原または抗体に結合可
能な限り、事実上任意の可能な構造的立体配置を有し得る。従って、その支持体
の立体配置は、ビーズのように球状であり得、試験管チューブの表面の内側のよ
うに円柱状であり得、ロッドの外側表面であり得る。あるいは、その表面は、紙
、試験片などのように平らであり得る。好ましい支持体としては、ポリスチレン
ビーズが挙げられる。当業者は、結合する抗体または抗原について、他の多数の
適切なキャリアを知るか、または慣用的な実験の使用によって同一であることを
確認し得る。
【０３４７】 生物学的サンプルにおけるＴＲ１３またはＴＲ１４のタンパク質レベルをアッ
セイすることは、当該分野で公知の任意の方法を使用して起こり得る。
【０３４８】 所定のロットの抗ＴＲ１３および／もしくは抗ＴＲ１４抗体またはＴＲ１３お
よび／もしくはＴＲ１４ポリペプチドの結合活性は、周知の方法に従って決定さ
れ得る。当業者は、慣用的に実験を行なうことによって、それぞれの決定につい
て、操作的および最適なアッセイ条件を決定し得る。
【０３４９】 個体から得られた生物学的サンプルでのＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４ポ
リペプチドレベルまたはポリヌクレオチドレベルをアッセイすることに加えて、
ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドまたはポリヌクレオチドがまた、
画像化によってインビボで検出され得る。例えば、本発明の１つの実施形態にお
いて、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドは、単球白血病またはリン
パ腫を画像化するために使用され得る。別の実施形態では、本発明のＴＲ１３お
よび／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド（例えば、ＴＲ１３および／またはＴＲ
１４ｍＲＮＡの全部または一部に対して相補的なポリヌクレオチド）は、Ｔ細胞
白血病またはリンパ腫を画像化するために使用される。
【０３５０】 ＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチドのインビボ画像化
のための抗体標識またはマーカーとしては、Ｘ線撮影、ＮＭＲ、ＭＲＩ、ＣＡＴ
−スキャンまたはＥＳＲによって検出される抗体標識またはマーカーが挙げられ
る。Ｘ線撮影のための適切な標識としては、例えば、バリウムまたはセシウムの
ようなラジオアイソトープが挙げられ、それらは、検出可能な放射線を放射する
が、被験体に対して過度に有害ではない。ＮＭＲおよびＥＳＲのための適切なマ
ーカーとしては、ジュウテリウムのような検出可能な特徴的なスピンを有するマ
ーカーが挙げられ、それらは、関連するハイブリドーマのための養分の標識によ
って抗体に取り込まれ得る。インビボ画像化が使用され、ヒトにおける診断のた
めに増加したレベルのＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチ
ドを検出する場合、ヒト抗体または「ヒト化」キメラモノクローナル抗体を使用
することが好ましくあり得る。このような抗体は、本明細書中に記載されるかま
たはさもなければ当該分野で公知の他の技術を使用して産生され得る。例えば、
キメラ抗体を産生するための方法は、当該分野で公知である。総説については、
Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら，
ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｃａｂｉｌｌｙら，米
国特許出願４，８１６，５６７；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら，ＥＰ １７１４９６；
Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，ＥＰ １７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，ＷＯ ８６
０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら，ＷＯ ８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅ
ら，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，Ｎａ
ｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）を参照のこと。
【０３５１】 さらに、その存在が検出され得る任意のＴＲ１３ポリペプチドおよび／または
ＴＲ１４ポリペプチドが投与され得る。例えば、放射線不透過性化合物または他
の適切な化合物で標識されたＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリ
ペプチドは、標識された抗体について上記で議論されたように、投与され得、そ
してインビボで視覚化され得る。さらに、このようなＴＲ１３および／またはＴ
Ｒ１４ポリペプチドは、インビトロ診断手順のために利用され得る。
【０３５２】 適切な検出可能な画像化部分（例えば、ラジオアイソトープ（例えば、131Ｉ
，112Ｉｎ，99mＴｃ）、放射線不透過性物質、または核磁気共鳴によって検出可
能な物質）で標識されているＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリ
ペプチド特異的抗体または抗体フラグメントが、哺乳動物に導入され（例えば、
非経口的に、皮下に、または腹腔内に）、免疫系障害および／または細胞増殖障
害について試験される。被験体のサイズおよび使用される画像化システムが、診
断画像を産生するために必要とされる画像化部分の量を決定することが当該分野
で理解される。ヒト被験体についてのラジオアイソトープ部分の場合、注射され
る放射活性の量は、通常、約５〜２０ミリキューリーの99mＴｃの範囲である。
次いで、標識された抗体または抗体フラグメントは、ＴＲ１３タンパク質および
／またはＴＲ１４タンパク質を含む細胞の位置で優先的に蓄積される。インビボ
腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋ
ｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａ
ｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（１３章、Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎ
ｇ：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎ
ｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ，編，Ｍａｓｓ
ｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２））に記載される。
【０３５３】 抗体について、抗ＴＲ１３抗体および／または抗ＴＲ１４抗体が、検出可能に
標識され得る、１つの方法は、抗ＴＲ１３抗体および／または抗ＴＲ１４抗体を
酵素に結合し、そして酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）において、その結合された
産物を使用することによる（Ｖｏｌｌｅｒ，Ａ．，「Ｔｈｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ｌ
ｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）」，１９
７８，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｈｏｒｉｚｏｎｓ ２：１−７，Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ Ｐｕｂｌｉｃ
ａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）；Ｖｏｌｌｅｒら，Ｊ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｐａｔｈｏｌ．３１：５０７−５２０（１９７８）；Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｅ
．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３：４８２−５２３（１９８１）；Ｍａｇｇ
ｉｏ，Ｅ．（編），１９８０，Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＣＲＣ
Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，；Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｅ．ら，（
編），１９８１，Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，Ｋｇａｋｕ Ｓｈｏ
ｉｎ，Ｔｏｋｙｏ）。抗体に結合された酵素は、例えば、分光光度的手段、蛍光
定量的手段または視覚化手段によって、検出され得る化学部分を産生するような
様式で、適切な基質、好ましくは色素基質と反応する。検出可能に抗体を標識す
るために使用され得る酵素としては、以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、δ−５−ステロイド
イソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロホスフェート、
デヒドロゲナーゼ、トリオースホスフェートイソメラーゼ、西洋ワサビペルオキ
シダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダー
ゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グル
コース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチル
コリンステラーゼ。さらに、検出は、酵素についての色素基質を使用する比色法
によって達成され得る。検出はまた、同様に調製された標準と比較した基質の酵
素学的な反応の程度の視覚の比較によって、達成され得る。
【０３５４】 検出はまた、種々の他のイムノアッセイのいずれかを使用して達成され得る。
例えば、抗体または抗体フラグメントを放射活性標識することによって、ラジオ
イムノアッセイ（ＲＩＡ）の使用を通じてＴＲ１３および／またはＴＲ１４を検
出することが可能である（例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｂ．，Ｐｒｉｎｃｉｐ
ｌｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｔｒａ
ｉｎｉｎｇ Ｃｏｕｒｓｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｔｅ
ｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｔｈｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｍａｒｃｈ
，１９８６，（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。放射活性
アイソトープとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない手段により
検出され得る：γ計数器、シンチレーション計数器、またはオートラジオグラフ
ィー。
【０３５５】 蛍光化合物で抗体を標識することもまた、可能である。蛍光標識抗体が、適切
な波の光に曝露される場合、次いで、その存在は蛍光に起因して検出され得る。
最も共通して使用される蛍光標識化合物は、蛍光イソチオシアナート、ローダミ
ン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン（ａｌｌｏｐｈｙ
ｃｏｃｙａｎｉｎ）、ｏ−フタルデヒド（ｏｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）、およ
びフルオレサミンである。
【０３５６】 抗体はまた、152Ｅｕのような蛍光放出金属、または他のランタニド系列を使
用して、検出可能に標識され得る。これらの金属は、ジエチレントリアミンペン
タ酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キ
レート基を使用して、抗体に付着され得る。
【０３５７】 抗体はまた、それを、化学発光化合物にカップリングすることによって検出可
能に標識され得る。次いで、化学発光タグ化抗体の存在は、化学反応の過程の間
に生じる発光の存在を検出することによって、決定され得る。特に有用な化学発
光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、熱性（ｔｈｅｒｏｍａｔｉ
ｃ）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびシュウ酸
エステルである。
【０３５８】 同様に、生物発光化合物は、本発明の抗体を標識するために使用され得る。生
物発光は、触媒タンパク質が、化学蛍光反応の効率を増加する生物学的な系に見
出される化学発光の型である。生物発光タンパク質の存在は、蛍光の存在を検出
することによって決定され得る。標識の目的の重要な生物発光化合物は、ルシフ
ェリン、ルシフェラーゼおよびエクオリンである。 （ＴＲ１３結合ペプチドおよびＴＲ１４結合ペプチドおよび他の分子） 本発明はまた、ＴＲ１３またはＴＲ１４に結合するポリペプチドおよび非ポリ
ペプチドを同定するためのスクリーニング方法を含み、そしてＴＲ１３またはＴ
Ｒ１４結合分子はそれによって同定される。これらの結合分子は、例えば、ＴＲ
１３またはＴＲ１４レセプタータンパク質のアゴニストおよびアンタゴニストと
して有用である。このようなアゴニストおよびアンタゴニストは、以下で詳細に
記載される治療実施形態において、本発明に従って使用され得る。
【０３５９】 この方法は、以下の工程を包含する： ａ．ＴＲ１３タンパク質またはＴＲ１４タンパク質、あるいはＴＲ１３様タン
パク質またはＴＲ１４様タンパク質を、複数の分子と接触させる工程；および ｂ．ＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、まはＴＲ１３様タンパ
ク質もしくはＴＲ１４様タンパク質と結合する分子を同定する工程。
【０３６０】 ＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク
質もしくはＴＲ１４様タンパク質を、複数の分子と接触させる工程は、多くの方
法で影響され得る。例えば、ＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、
またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質を、固体支持体上に
固定化すること、および、固定化されたＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タ
ンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質と複数の
分子の溶液を接触させることを意図し得る。このような手順は、固定されたＴＲ
１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もし
くはＴＲ１４様タンパク質を含む、親和性マトリックスを用いるアフィニティー
クロマトグラフィープロセスに類似している。次いで、ＴＲ１３タンパク質もし
くはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タン
パク質についての選択的な親和性を有する分子は、親和性選択によって精製され
得る。固体支持体の性質、固体支持体へのＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４
タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質の付着
についてのプロセス、溶媒、および親和性単離または選択の条件は、ほとんどが
従来的であり、そして当業者に周知である。
【０３６１】 あるいはまた、複数のポリペプチドを、個別のポリペプチドのサブセットを含
む実質的に別の画分に分離し得る。例えば、ポリペプチドの分離について、ゲル
電気泳動、カラムクロマトグラフィーなどの当業者に公知の方法によって複数の
ポリペプチドを分離し得る。個別のポリペプチドはまた、形質転換された宿主細
胞によって、発現されるような様式でか、またはその外表面付近に（例えば、組
換え期に）産生され得る。次いで、個々の単離は、ＴＲ１３タンパク質もしくは
ＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク
質によって、必要に応じて発現のために必要とされるインデューサの存在下で「
プローブビングされ」、ＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、また
はＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質と、個々のクローンとの
間で任意の選択的親和性相互作用が起こるかどうか決定される。各画分が、個別
のポリペプチドを含みながらＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、
またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質をむ前に、ポリペプ
チドは、さらなる便宜のために、固体支持体に最初に移され得る。このような固
体支持体は、例えば、ニトロセルロースまたはナイロンで作られるフィルター膜
の単なる一片であり得る。この様式において、ポジティブなクローンは、発現ラ
イブラリーの形質転換された宿主細胞の収集から同定され得る。それらの宿主細
胞は、ＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１３様タン
パク質もしくはＴＲ１４様タンパク質に対する、選択的親和性を有するポリペプ
チドをコードするＤＮＡ構築物を保有し得る。さらに、ＴＲ１３タンパク質もし
くはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タン
パク質に対する選択的親和性を有するポリペプチドのアミノ酸配列は、従来手段
を使用して直接に決定され得るか、またはポリペプチドをコードするＤＮＡのコ
ード配列は、より都合よく頻繁に決定され得る。次いで、一次配列は、対応する
ＤＮＡ配列から推定され得る。アミノ酸配列が、ポリペプチド自体から決定され
る場合、ミクロ配列決定技術が使用され得る。この配列決定技術は、質量分析を
含み得る。
【０３６２】 特定の状況において、選択的親和性相互作用の存在を決定するか、または検出
することを試みる前に、任意の非結合のＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タ
ンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質を洗浄す
ること、あるいはＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ
１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質の混合物および複数のポリペプ
チド由来の非結合のポリペプチドを洗浄することが望ましくあり得る。このよう
な洗浄工程は、ＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１
３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質、または複数のポリペプチドが固
体支持体に結合された場合に、特に望ましくあり得る。
【０３６３】 この方法に従って提供される複数の分子は、ＴＲ１３またはＴＲ１４への特異
的に結合する分子についてスクリーニングされ得る、送達ライブラリー（例えば
、ランダムまたはコンビナトリアルペプチドまたは非ペプチドライブラリー）の
目的で提供され得る。使用され得る多くのライブラリー（例えば、化学合成ライ
ブラリー、組換え（例えば、ファージディスプレイライブラリー）、およびイン
ビトロ翻訳ベースのライブラリー））が、当該分野で公知である。化学的合成ラ
イブラリーの例は、Ｆｏｄｏｒら，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７
−７７３；Ｈｏｕｇｈｔｅｎら，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８４−８６
；Ｌａｍら，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２−８４；Ｍｅｄｙｎｓｋｉ
，１９９４，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：７０９−７１０；Ｇａｌｌ
ｏｐら，１９９４，Ｊ．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７（９）
：１２３３−１２５１；Ｏｈｌｍｅｙｅｒら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１０９２２−１０９２６；Ｅｒｂら，１９９
４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２−１１
４２６；Ｈｏｕｇｈｔｅｎら，１９９２，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：
４１２；Ｊａｙａｗｉｃｋｒｅｍｅら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１６１４−１６１８；Ｓａｌｍｏｎら，１９９３，
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１１７０８−１１７１
２；ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９３／２０２４２；ならびにＢｒｅｎｎｅｒおよびＬ
ｅｒｎｅｒ，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９
：５３８１−５３８３に記載される。
【０３６４】 ファージディスプレイライブラリーの例は、ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ，１
９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０；Ｄｅｖｌｉｎら，１９９０
，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：４０４−４０６；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ，Ｒ．Ｂ．，
ら，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７１１−７１８）；Ｌｅｎｓｔ
ｒａ，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１５２：１４９−１５７；Ｋ
ａｙら，１９９３，Ｇｅｎｅ １２８：５９−６５；ならびにＰＣＴ公開番号Ｗ
Ｏ ９４／１８３１８（１９９４年８月１８日）に記載される。
【０３６５】 インビトロ翻訳ベースのライブラリーとしては、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９１／
０５０５８（１９９１年４月１８日）；およびＭａｔｔｈｅａｋｉｓら，１９９
４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９０２２−９０２
６に記載されるライブラリーが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３６６】 非ペプチドライブラリーの例としては、ベンゾジアゼピンライブラリー（例え
ば、Ｂｕｎｉｎら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：４７０８−４７１２を参照のこと）が、使用に適用され得る。ペプチド
ライブラリー（Ｓｉｍｏｎら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８９：９３６７−９３７１）が使用に適用され得る。ペプチド中の
アミド基が、ペルメチル化（ｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）され、化学的に変換
されたコンビナトリアルライブラリーを産生する、使用され得るライブラリーの
別の例は、Ｏｓｔｒｅｓｈら（１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ９１：１１１３８−１１１４２）によって記載される。
【０３６７】 本発明において有用な種々の非ペプチドライブラリーは、多い。例えば、Ｅｃ
ｋｅｒおよびＣｒｏｏｋｅ，１９９５，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３：
３５１−３６０は、種々のライブラリーのベースを形成する化学種として、ベン
ジアゼピン、ヒダントイン、ピペラジンジオン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅｄｉｏｎ
ｅｓ）、ビフェニル、糖アナログ、βメルカプトケトン、アリール酢酸（ａｒｙ
ｌａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄｓ）、アクリピペリジン（ａｃｙｌｐｉｐｅｒｉｄｉ
ｎｅｓ）、ベンゾピラン、クバン、キサンチン、アミニミド（ａｍｉｎｉｍｉｄ
ｅｓ）およびオキサゾロンを列挙する。
【０３６８】 非ペプチドライブラリーは、以下の２つの型に広く分類され得る：修飾（ｄｅ
ｃｏｒａｔｅｄ）モノマーおよびオリゴマー。修飾モノマーライブラリーは、比
較的単純な骨格構造を使用し、この構造上に種々の官能基が加えられる。しばし
ば骨格は、既知の有用な薬理学的活性を有する分子である。例えば、骨格は、ベ
ンゾジアゼピン構造であり得る。
【０３６９】 非ペプチドオリゴマーライブラリーは、モノマーの順番に依存して新しい形状
を作成するような様式で構築される、多数のモノマーを使用する。使用されたモ
ノマーユニットとしては、カルバメート、ピロリノン（ｐｙｒｒｏｌｉｎｏｎｅ
ｓ）およびモルフォリノ（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｓ）が挙げられる。側鎖が、α
炭素ではなくαアミノ基に付着されたペプチド、ペプチド様オリゴマーは、非ペ
プチドオリゴマーライブラリーの別のバージョンの基礎を形成する。第１の非ペ
プチドオリゴマーライブラリーは、１つの型のモノマー使用し、従って、反復バ
ックボーンを含んだ。最近のライブラリーは、１つより多くのモノマーを使用し
、ライブラリーに柔軟性を与えた。
【０３７０】 ライブラリーのスクリーニングは、広範な共通して公知の種々の方法のいずれ
かによって達成され得る。例えば、ペプチドライブラリーのスクリーニングを開
示する、以下の参考文献を参照のこと：ＰａｒｍｌｅｙおよびＳｍｉｔｈ，１９
８９，Ａｄｖ．Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５１：２１５−２１８；Ｓｃｏ
ｔｔおよびＳｍｉｔｈ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０；
Ｆｏｗｌｋｅｓら，１９９２；ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４２２−４
２７；Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８９：５３９３−５３９７；Ｙｕら，１９９４，Ｃｅｌｌ ７６：
９３３−９４５；Ｓｔａｕｄｔら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：５７７
−５８０；Ｂｏｃｋら，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ ３５５：５６４−５６６；Ｔ
ｕｅｒｋら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９
：６９８８−６９９２；Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎら，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ ３５
５：８５０−８５２；米国特許第５，０９６，８１５号，米国特許第５，２２３
，４０９号，および米国特許第５，１９８，３４６号（すべてはＬａｄｎｅｒら
に対する），；ＲｅｂａｒおよびＰａｂｏ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３
：６７１−６７３；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ ９４／１８３１８。
【０３７１】 特定の実施形態において、ＴＲ１３またはＴＲ１４に結合する分子を同定する
ためのスクリーニングは、ライブラリーメンバーを、固相上に固定されたＴＲ１
３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしく
はＴＲ１４様タンパク質と接触させ、そしてＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１
４タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タンパク質に結
合する、これらのライブラリーメンバーを収集することによって行われ得る。こ
のようなスクリーニング方法の例は、ＰａｒｍｌｅｙおよびＳｍｉｔｈ，１９８
８，Ｇｅｎｅ ７３：３０５−３１８；Ｆｏｗｌｋｅｓら，１９９２，ＢｉｏＴ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４２２−４２７；ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９４／１８
３１８；および本明細書中に列挙された参考文献において例として記載される、
「パニング」技術と称される。
【０３７２】 別の実施形態において、酵母における相互作用するタンパク質を選択するため
のツーハイブリッド系（ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６；Ｃｈｉｅｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：９５７８−９５８２）は、ＴＲ１３タンパク質も
しくはＴＲ１４タンパク質、またはＴＲ１３様タンパク質もしくはＴＲ１４様タ
ンパク質に特異的に結合する分子を同定するために使用され得る。
【０３７３】 ＴＲ１３結合分子またはＴＲ１４結合分子がポリペプチドである場合、このポ
リペプチドは、任意のペプチドライブラリー（ランダムペプチドライブラリー、
コンビナトリアルペプチドライブラリー、または偏った（ｂｉａｓｅｄ）ペプチ
ドライブラリーを含む）から、簡便に選択され得る。用語「偏った」は、本明細
書中で使用され、この場合のペプチドにおいて、生じる分子の収集の多様性を支
配する１以上のパラメーターを制限するようなライブラリーを産生する方法を意
味する。
【０３７４】 従って、本当にランダムなペプチドライブラリーはペプチドの収集を産生し、
ここでペプチドの所定の位置で特定のアミノ酸を見出す可能性は、すべての２０
アミノ酸について同じである。しかし、偏りは、例えば、リジンが５アミノ酸毎
に生じること、または１０ペプチドのライブラリーの４位、８位および９位が、
アルギニンのみを含むことを固定すことを特定化することによって、ライブラリ
ーに導入され得る。明らかに、多くの型の偏りが意図され得、そして本発明は、
任意の特定の偏りに制限されない。さらに、本発明は、ファージディスプレイペ
プチドライブラリーおよびＤＮＡ挿入物を有するλファージベクターを含むＤＮ
Ａ構築物を使用するライブラリーのような特定の型のペプチドライブラリーを意
図する。
【０３７５】 上記のように、ＴＲ１３結合分子またはＴＲ１４結合分子がポリペプチドであ
る場合、このポリペプチドは、約６から約６０より少ないアミノ酸残基、好まし
くは約６〜約１０アミノ酸残基、そして最も好ましくは約６〜約２２アミノ酸を
有し得る。別の実施形態において、ＴＲ１３またはＴＲ１４結合ポリペプチドは
、１５〜１００アミノ酸、または２０〜５０アミノ酸の範囲有する。
【０３７６】 選択されたＴＲ１３またはＴＲ１４結合ポリペプチドは、化学合成または組換
え発現によって得られ得る。
【０３７７】 （エピトープ） 本発明は、以下を含むか、またはそれらからなるポリペプチドを含む：上で詳
細に議論されたか、または上で定義されたストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下またはより低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件
下で、上で詳細に議論されたＴＲ１３コード配列およびＴＲ１４コード配列の配
列の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＴＲ１
３およびＴＲ１４ポリペプチドのエピトープ。本発明はさらに、ポリペプチド配
列のエピトープをコードするポリヌクレオチド配列、本発明のエピトープをコー
ドするポリヌクレオチド配列の相補鎖のポリヌクレオチド配列、および上で定義
されたストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリ
ンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で、相補鎖にハイブリダイズする
ポリヌクレオチド配列を含む。
【０３７８】 本明細書中で使用される用語「エピトープ」とは、動物、好ましくは哺乳動物
、そして最も好ましくはヒトにおいて、抗原性活性または免疫原性活性を有する
ポリペプチドの部分をいう。好ましい実施形態において、本発明は、このポリペ
プチドをコードするエピトープならびにポリヌクレオチドを含むポリペプチドを
含む。本明細書で使用される場合、「免疫原性エピトープ」は、動物において抗
体応答を誘発するタンパク質の一部分として定義され、このような応答は、当該
分野で公知の任意の方法（例えば、以下に記載された抗体作製の方法）によって
測定される。（例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８−４００２（１９８３）を参照のこと）。本明細書
中で使用される場合、用語「抗原性エピトープ」とは、当該分野で周知の任意の
方法（例えば、本明細書中に記載されたイムノアッセイ）によって測定されるよ
うに、抗体がその抗原に免疫特異的に結合し得るタンパク質の一部として定義さ
れる。免疫特異的な結合は、非特異的な結合を除外するが、必ずしも他の抗原と
の交差反応性を除外する必要はない。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性を
必要とはしない。
【０３７９】 エピトープとして機能するフラグメントは、任意の従来の手段により作製され
得る。（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５（１９８５）（米国特許第４，６３１，２１
１号にさらに記載される）を参照のこと）。
【０３８０】 本発明において、抗原性エピトープは、好ましくは、少なくとも４アミノ酸、
少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸、少なくとも７アミノ酸の配列を
含み、より好ましくは、少なくとも８アミノ酸、少なくとも９アミノ酸、少なく
とも１０アミノ酸、少なくとも１５アミノ酸、少なくとも２０アミノ酸、少なく
とも２５アミノ酸の配列を含み、そして最も好ましくは約１５アミノ酸と約３０
アミノ酸との間の配列を含む。免疫原性または抗原性エピトープを含有する好ま
しいポリペプチドは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、
４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１
００アミノ酸残基の長さである。抗原性エピトープは、例えば、このエピトープ
に特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起するために有用で
ある。抗原性エピトープは、イムノアッセイにおいて、標的分子として使用され
得る。（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら，Ｃｅｌｌ ３７：７６７−７７８（１９８４
）；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６０−６６６（１９８
３）を参照のこと）。
【０３８１】 同様に、当該分野で周知の方法に従って、免疫原性エピトープを使用して、例
えば、抗体を誘導し得る。（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏ
ｎら，前出；Ｃｈｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：
２３４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。１つ以上の免疫原性エピトー
プを含むポリペプチドは、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）とともに
動物系（例えば、ウサギまたはマウス）に抗体応答を誘発するために提示され得
るか、このポリペプチドが十分に長い場合（少なくとも約２５アミノ酸）、この
ポリペプチドは、キャリアなしで動物系に提示され得る。しかし、８〜１０程度
の少ないアミノ酸を含む免疫原性エピトープは、少なくとも変性ポリペプチド中
の直鎖状エピトープ（例えば、ウェスタンブロッティングにおいて）に結合し得
る抗体を惹起するには十分であることが示されている。
【０３８２】 本発明のエピトープ保有ポリペプチドは、当該分野で周知の方法に従って抗体
を誘導するために使用され得る。これらの周知の方法としては、インビボ免疫、
インビトロ免疫、およびファージディスプレイ法が挙げられるが、それらに限定
されない。例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら，前出；Ｗｉｌｓｏｎら，前出；およ
びＢｉｔｔｌｅら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２３４７−２３５４（１９
８５）を参照のこと。インビボ免疫を使用する場合、動物を遊離ペプチドを用い
て免疫し得る；しかし、抗ペプチド抗体力価は、高分子キャリア（例えば、キー
ホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）または破傷風トキソイド）にペプチド
を結合させることによりブーストされ得る。例えば、システイン残基を含むペプ
チドは、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢ
Ｓ）のようなリンカーを用いてキャリアに結合され得る。その一方、他のペプチ
ドは、より一般的な結合剤（例えば、グルタルアルデヒド）を用いてキャリアに
結合され得る。ウサギ、ラット、およびマウスのような動物は、遊離のペプチド
またはキャリア結合ペプチドのいずれかを用いて、例えば、エマルジョン（約１
００μｇのペプチドまたはキャリアタンパク質およびフロイントアジュバント、
あるいは免疫応答を刺激するための当該分野で公知の他のアジュバントを含む）
の腹腔内注射および／または皮内注射により免疫される。いくつかのブースター
注射が、抗ペプチド抗体の有用な力価を提供するために（例えば、約２週間の間
隔で）必要とされ得る。この力価は、例えば、固体表面に吸着した遊離のペプチ
ドを用いるＥＬＩＳＡアッセイにより検出され得る。免疫した動物由来の血清中
の抗ペプチド抗体の力価は、例えば、当該分野で周知の方法に従う固体支持体上
のペプチドの吸着および選択された抗体の溶出による、抗ペプチド抗体の選択に
より上昇し得る。
【０３８３】 当業者に理解されるように、そして上記で考察されるように、免疫原性エピト
ープまたは抗原性エピトープを含む本発明のポリペプチドは、他のポリペプチド
配列に融合され得る。例えば、本発明のポリペプチドは、免疫グロブリン（Ｉｇ
Ａ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ１、Ｃ
Ｈ２、ＣＨ３、それらの任意の組み合わせ、およびそれらの部分）と融合し得、
これがキメラポリペプチドを生じる。これらの融合タンパク質は、精製を容易に
し得、そしてインビボにおいて半減期を増加させ得る。これは、ヒトＣＤ４ポリ
ペプチドの最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または
軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質について示された。
例えば、ＥＰ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３
１：８４〜８６（１９８８）を参照のこと。ＩｇＧ部分ジスルフィト結合に起因
してジスルフィド架橋二量体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、単量体
ポリペプチドまたはそれらのフラグメント単独よりも、他の分子の結合および中
和においてより効果的であり得る。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８〜３９６４（１９９５）を参照のこと。上
記のエピトープをコードする核酸はまた、エピトープタグ（例えば、血球凝集素
（「ＨＡ」）タグまたはフラッグタグ（ｆｌａｇ ｔａｇ））として目的の遺伝
子と組み換えられ、発現されたポリペプチドの検出および精製を補助し得る。例
えば、Ｊａｎｋｎｅｃｈｔらによって記載された系は、ヒト細胞株において発現
される非変性融合タンパク質の前精製を可能にする（Ｊａｎｋｎｅｃｈｔら、１
９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８９７２−８
９７）。この系において、目的の遺伝子は、遺伝子のオープンリーディングフレ
ームが、６つのヒスチジン残基からなるアミノ末端タグと翻訳的に融合されるよ
うに、ワクシニア組換えプラスミド中でサブクローンされる。このタグは、融合
タンパク質に対するマトリクス結合ドメインとして働く。組換えワクシニアウイ
ルスに感染した細胞由来の抽出物は、Ｎｉ2+ニトリロ三酢酸酸性アガロースカラ
ムに充填され、そしてヒスチジンタグ化したタンパク質は、イミダゾール含有緩
衝液を用いて選択的に溶出され得る。
【０３８４】 本発明のさらなる融合タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッ
フリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（総
称して「ＤＮＡシャッフリング」といわれる）の技術を通じて生成され得る。Ｄ
ＮＡシャッフリングは、本発明のポリペプチドの活性を調節するために用いられ
得、このような方法は、変化した活性を有するポリペプチド、ならびにこのポリ
ペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを生成するために用いられ得る。一
般には、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５
，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号および同第５，８３７，４５８
号、ならびにＰａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ．８：７２４−３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ
．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５−７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎ
ｚｏおよびＢｌａｓｃｏ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８−
１３（１９９８）（これらの特許および刊行物の各々の全体が参考として本明細
書中に援用される）を参照のこと。１つの実施形態において、配列番号１または
６０に対応するポリヌクレオチドの改変およびこれらのポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチドの改変は、ＤＮＡシャッフリングにより達成され得る
。ＤＮＡシャッフリングは、このポリヌクレオチド配列中にバリエーションを生
成するための、相同組換えまたは部位特異的組換えによる、２つ以上のＤＮＡセ
グメントのアセンブリを含む。別の実施形態において、本発明のポリヌクレオチ
ドまたはコードされるポリペプチドは、組換え前に、誤りがちの（ｅｒｒｏｒ−
ｐｒｏｎｅ）ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法により、ランダ
ムな変異誘発に供されることによって改変され得る。別の実施形態において、本
発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つ以上の成分、モチーフ
、断片（ｓｅｃｔｉｏｎ）、部分、ドメイン、フラグメントなどは、１つ以上の
異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、断片（ｓｅｃｔｉｏｎ）、部分、ドメイ
ン、フラグメントなどと組み換えられ得る。（これらの特許および刊行物の各々
は、参考として本明細書により援用される）。１実施形態において、ＴＲ１３ポ
リペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリヌクレオチドおよび対応するポリペプチ
ドの改変は、ＤＮＡシャッフリングによって達成され得る。ＤＮＡシャッフリン
グは、相同組換えまたは部位特異的組換えによる、２以上のＤＮＡセグメントの
所望のＴＲ１３および／またはＴＲ１４分子への構築を含む。別の実施形態にお
いて、ＴＲ１３ポリヌクレオチドおよび／またはＴＲ１４ポリヌクレオチドおよ
び対応するポリペプチドは、組換え前に、誤りがちのＰＣＲ、ランダムヌクレオ
チド挿入または他の方法により、ランダムな変異誘発に供されることによって改
変され得る。別の実施形態において、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の１つ以
上の成分、モチーフ、断片、部分、ドメイン、フラグメントなどは、１つ以上の
異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、断片、部分、ドメイン、フラグメントな
どと組み換えられ得る。好ましい実施形態において、異種分子は、ＴＮＦ−α、
ＴＮＦ−β、リンホトキシン−α、リンホトキシン−β、ＦＡＳリガンドおよび
ＡＰＲＩＬのレセプターである。さらに好ましい実施形態において、異種分子は
、ＴＮＦファミリーの任意のメンバーである。
【０３８５】 （抗体） 本発明はさらに、本発明のポリペプチド、好ましくはエピトープに免疫特異的
に結合する（特異的抗体−抗原結合をアッセイするための当該分野で周知のイム
ノアッセイにより決定されるような）抗体およびＴ−細胞抗原レセプター（ＴＣ
Ｒ）に関する。本発明の抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗
体、多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆ
ａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによっ
て産生されたフラグメント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明
の抗体に対する抗Ｉｄ抗体が挙げられる）、および任意の上記の抗体のエピトー
プ結合フラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で使用
される場合、用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子
の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位
を含む分子）をいう。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任
意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、
クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩ
ｇＡ２）またはサブクラスの分子であり得る。
【０３８６】 最も好ましくは、抗体は、本発明のヒト抗原結合抗体フラグメントであり、そ
してＦａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単
鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）およびＶＬドメインまたはＶＨドメ
インのいずれかを含むフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。単
鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を、単独であるいは以下：
ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインの全体また
は部分との組み合わせで含み得る。ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイ
ンおよびＣＨ３ドメインと可変領域の任意の組み合わせをもまた含む抗原結合フ
ラグメントもまた、本発明に含まれる。本発明の抗体は、鳥類および哺乳動物を
含む任意の動物起源由来であり得る。好ましくは、この抗体は、ヒト、ネズミ、
ロバ、ウサギ（ｓｈｉｐ ｒａｂｂｉｔ）、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、
またはニワトリである。本明細書中で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免
疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、そしてヒト免疫グロブリンラ
イブラリーから、または１つ以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニ
ックでかつ内因性免疫グロブリンを発現しない動物（以下および、例えば、Ｋｕ
ｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されるよ
うな）から単離された抗体を含む。
【０３８７】 本発明の抗体は、一重特異的、二重特異的、三重特異的またはより多価の多重
特異的であり得る。多重特異的な抗体は、本発明のポリペプチドの異なるエピト
ープに対して特異的であり得るか、または本発明のポリペプチドおよび異種エピ
トープ（例えば、異種ポリペプチドまたは固体支持体物質）の両方に特異的であ
り得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；
ＷＯ ９１／００３６０；ＷＯ ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；
同第４，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２
０号；同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１４８：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
【０３８８】 本発明の抗体は、抗体により認識されるかまたは特異的に結合される本発明の
ポリペプチドのエピトープまたは部分によって記載され得るかまたは特定化され
得る。このエピトープまたはポリペプチド部分は、本明細書中に記載されるよう
に、例えば、Ｎ末端およびＣ末端位置により、連続するアミノ酸残基のサイズに
より、または表および図に列挙されるように特定化され得る。本発明の任意のエ
ピトープまたはポリペプチドを特異的に結合する抗体はまた排除され得る。従っ
て、本発明は、本発明のポリペプチドを特異的に結合し、そしてこのポリペプチ
ドの排除を可能にする抗体を含む。
【０３８９】 本発明の抗体はまた、その交差反応性によって記載され得るか、または特定化
され得る。本発明のポリペプチドの任意の他のアナログ、オルソログ（ｏｒｔｈ
ｏｌｏｇ）またはホモログを結合しない抗体が、含まれる。本発明のポリペプチ
ドに対して少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくと
も８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくと
も６０％、少なくとも５５％および少なくとも５０％の同一性（当該分野で公知
の方法および本明細書において記載された方法を用いて計算される場合）を有す
るポリペプチドを結合する抗体もまた、本発明に含まれる。本発明のポリペプチ
ドに９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未
満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、おおよび５０％未満（当該分野で公
知の方法および本明細書中に記載の方法を使用して計算された場合）の同一性を
有する、結合しない抗体はまた、本発明に含まれる。さらに本発明には、（本明
細書中に記載されるような）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
で本発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコー
ドされるポリペプチドを結合する抗体が含まれる。本発明の抗体はまた、本発明
のポリペプチドに対するその結合親和性によって記載または特定され得る。好ま
しい結合親和性としては、５×１０-2Ｍ、１０-2Ｍ、５×１０-3Ｍ、１０-3Ｍ、
５×１０-4Ｍ、１０-4Ｍ、５×１０-5Ｍ、１０-5Ｍ、５×１０-6Ｍ、１０-6Ｍ、
５×１０-7Ｍ、１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-9Ｍ、
５×１０-10Ｍ、１０-10Ｍ、５×１０-11Ｍ、１０-11Ｍ、５×１０-12Ｍ、１０- 12 Ｍ、５×１０-13Ｍ、１０-13Ｍ、５×１０-14Ｍ、１０-14Ｍ、５×１０-15Ｍ
、および１０-15Ｍ未満の解離定数すなわちＫdを有する結合親和性が挙げられる
。
【０３９０】 本発明はまた、競合的な結合を決定するための当該分野で公知の任意の方法（
例えば、本明細書中に記載されるイムノアッセイ）によって決定されるような、
本発明のエピトープに対する抗体の結合を競合的に阻害する抗体を提供する。好
ましい実施形態において、抗体は、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少な
くとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％、エピトープに対す
る結合を競合的に阻害する。
【０３９１】 本発明の抗体は、本発明のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストと
して作用し得る。例えば、本発明は、レセプター／リガンドと本発明のポリペプ
チドとの相互作用を部分的または完全にのいずれかで破壊する抗体を含む。本発
明は、レセプター特異的抗体およびリガンド特異的抗体の両方を特徴とする。本
発明はまた、リガンド結合を妨げないがレセプターの活性化を妨げるレセプター
特異的抗体を特徴とする。レセプターの活性化（すなわち、シグナル伝達）は、
本明細書中に記載される技術、またはさもなくば当該分野で公知の技術によって
決定され得る。例えば、レセプターの活性化は、（例えば、上記されたような）
免疫沈降、続いてウエスタンブロット分析によって、レセプターのリン酸化（例
えば、チロシンまたはセリン／スレオニン）あるいはその基質を検出することに
よって決定され得る。特定の実施形態において、抗体の非存在下の活性の少なく
とも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または
少なくとも５０％リガンド活性またはレセプター活性を阻害する抗体を提供する
。 本発明はまた、リガンド結合およびレセプター活性化の両方を妨げるレセプター
特異的抗体、ならびにレセプター−リガンド複合体を認識し、そして、好ましく
は、結合していないレセプターまたは結合していないリガンドを特異的に認識し
ない抗体を特徴とする。同様に、本発明には、リガンドに結合し、そしてリガン
ドのレセプターへの結合を妨げる中和抗体、ならびにリガンドに結合し、それに
よってレセプター活性化を妨げるが、リガンドがレセプターに結合することは妨
げない抗体が含まれる。さらに本発明に含まれるのは、レセプターを活性化する
抗体である。これらの抗体は、レセプターアゴニストとして作用し得、すなわち
、リガンド媒介のレセプター活性化の生物学的活性のすべてまたはサブセット（
ｓｕｂｓｅｔ）のいずれかを増強または活性化し得る。この抗体は、本明細書中
に開示される本発明のペプチドの特定の生物学的活性を含む生物学的活性に対す
るアゴニスト、アンタゴニストまたはインバース（ｉｎｖｅｒｓｅ）アゴニスト
として特定化され得る。上記の抗体アゴニストは、当該分野で公知の方法を用い
て作製され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８
１１，０９７号；Ｄｅｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ９２（６）：１９８１−１９８８（
１９９８）；Ｃｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６８−３
６７８（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）：１
７８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ：５８（１５
）：３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６
０（７）：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃ
ｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；
Ｌｉａｕｔａｒｄら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９（４）：２３３−２４１（１９９７
）；Ｃａｒｌｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５
−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら、Ｎｅｕｒｏｎ １４（４）：７
５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ６（９）：
１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８
（１）：１４−２０（１９９６）（上記の文献はすべて、その全体が本明細書に
おいて参考として援用される）を参照のこと。
【０３９２】 本発明の抗体は、例えば、インビトロおよびインビボの両方における診断方法
および治療方法を含めて、本発明のポリペプチドを精製、検出および標的化する
のために使用され得るが、これに限定されない。例えば、この抗体は、生物学的
サンプルにおいて本発明のポリペプチドのレベルを定性的および定量的に測定す
るためのイムノアッセイにおいて用途を有する。例えば、Ｈａｒｌｏｗら，Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，第２版，１９
８８）（その全体が参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０３９３】 以下により詳細が議論されるように、本発明の抗体は、単独で、または他の組
成物との組み合わせのいずれかで用いられ得る。この抗体は、さらに、Ｎ末端も
しくはＣ末端で異種ポリペプチドに組換え的に融合され得るか、またはポリペプ
チドもしくは他の組成物に化学的に結合（共有結合および非共有結合を含む）さ
れ得る。例えば、本発明の抗体は、検出アッセイにおける標識として有用な分子
およびエフェクター分子（例えば、異種ポリペプチド、薬物、放射性核種または
毒素）に組換え的に融合または結合され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０
８４９５；ＷＯ９１／１４４３８；ＷＯ８９／１２６２４；米国特許第５，３１
４，９９５号；および欧州特許第３９６，３８７号を参照のこと。
【０３９４】 本発明の抗体は、改変された（すなわち、共有結合性付着（ｃｏｖａｌｅｎｔ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）が、抗体が抗イディオタイプ応答を産生するのを妨げ
ないような、抗体に対する任意の型の分子の共有結合性付着による）誘導体を含
む。例えば、制限されないが、抗体誘導体には、例えば、グリコシル化、アセチ
ル化、ぺグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｙｌａｔｉｏ
ｎ）、アミド化、既知の保護基／ブロック基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）
による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質
への連結などによって改変された抗体が挙げられる。多数の任意の化学的改変が
、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成など
を含むが、これらに制限されない公知の技術によって実行され得る。さらに、誘
導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
【０３９５】 本発明の抗体は、当該分野で公知の任意の適切な方法によって産生され得る。
目的の抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で周知の種々の手順によっ
て産生され得る。例えば、本発明のポリペプチドが種々の宿主動物（ウサギ、マ
ウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）に投与されて、抗原に対して
特異的なポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導し得る。種々のアジュバン
トが、宿主種に依存して、免疫学的応答を増加させるために使用され得、そして
フロイント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル（
ｍｉｎｅｒａｌ ｇｅｌ）、リゾレシチンのような界面活性物質、プルロニック
（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、
キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カ
ルメット−ゲラン杆菌）およびｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ
のような潜在的に有用なヒトアジュバントを含むが、これらに限定されない。こ
のようなアジュバントはまた、当該分野で周知である。
【０３９６】 モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレ
イ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該分野で公知の広範な種々
の技術を用いて調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該分野で公知
の以下に挙げられるハイブリドーマ技術を使用して産生され得、そして例えば、
Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒ
ｅｓｓ，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６
３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９８１）（上記の参考文献は、その
全体が参考として援用される）に教示される。本明細書中で使用される場合、用
語「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術を介して生成された抗体に
限定されない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物、原核生物、
またはファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体をいい、そしてそ
の生成される方法に由来する抗体ではない。
【０３９７】 ハイブリドーマ技術を用いて特異的抗体を産生およびスクリーニングする方法
は、当該分野で慣用的かつ周知であり、そして以下の実施例５に詳細に議論され
る。簡略には、マウスは、本発明のポリペプチドまたはそのようなペプチドを発
現する細胞を用いて免疫され得る。一旦免疫応用が検出される（例えば、抗原に
特異的な抗体がマウスの血清中に検出される）と、マウスの脾臓を収集しそして
脾細胞を単離する。次に、その脾細胞を周知技術によって任意の適切な骨髄腫細
胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞）に融合させる
。ハイブリドーマを限界希釈によって選択およびクローン化する。次に、ハイブ
リドーマクローンは、本発明のポリペプチドに結合し得る抗体を分泌する細胞に
ついて、当該分野で公知の方法によってアッセイされる。一般的に高いレベルの
抗体を含む腹水（ａｓｃｉｔｅｓ ｆｌｕｉｄ）が、陽性ハイブリドーマクロー
ンを用いてマウスを免疫させることによって、産生され得る。
【０３９８】 従って、本発明は、モノクローナル抗体および本発明の抗体を分泌するハイブ
リドーマ細胞を培養する工程を包含する方法によって産生される抗体を、生成す
る方法を提供し、ここで、好ましくは、このハイブリドーマは、骨髄腫細胞と本
発明の抗原で免疫したマウスから単離された脾細胞とを融合させ、次いで本発明
のポリペプチドと結合し得る抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて、
融合物から生じるハイブリドーマをスクリーニングすることによって生成される
。
【０３９９】 特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術によって生成さ
れ得る。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、（Ｆａ
ｂフラグメントを生成するために）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）２フラグメン
トを産生するために）ペプシンのような酵素を使用して、免疫グロブリン分子の
タンパク質分解切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、可
変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。
【０４００】 例えば、本発明の抗体はまた、当該分野で公知の種々のファージディスプレイ
方法を用いて産生され得る。ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメ
インは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表
面に提示される。特定の実施形態において、そのようなファージは、レパートリ
ーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から
発現される抗原結合ドメインを提示するために利用され得る。目的の抗原に結合
する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて選択または同定され
得る（例えば、標識した抗体あるいは固体表面またはビーズに結合または捕捉さ
れた抗原を使用する）。これらの方法において用いられるファージは、代表的に
は、ファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質またはファージ遺伝子ＶＩＩＩタンパク質
のいずれかに組換え的に融合されたＦａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化され
たＦｖの抗体ドメインを有するファージから発現されたｆｄおよびＭ１３結合ド
メインを含む糸状ファージ（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｐｈａｇｅ）である。本
発明の抗体を作製するために用いられ得るファージディスプレイ方法の例として
は、以下に開示される方法が挙げられる：Ｂｒｉｎｋｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓら、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔ
ｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８
（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ １８７ ９−１８（１９９７）；Ｂ
ｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１
−２８０（１９９４）；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ
公開ＷＯ ９０／０２８０９；ＷＯ ９１／１０７３７；ＷＯ ９２／０１０４
７；ＷＯ ９２／１８６１９；ＷＯ ９３／１１２３６；ＷＯ ９５／１５９８
２；ＷＯ ９５／２０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第
５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号
；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０
４７号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１
６，６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５
，７３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号（これらの各々は、本明細
書中でその全体が参考として援用される）。
【０４０１】 上記参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体をコ
ードする領域は、ヒト抗体を含む抗体の全体または任意の他の所望の抗原結合フ
ラグメントを生成するために単離されそして用いられ得、そして例えば、以下に
詳細が記載されるように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌
を含む任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およ
びＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に産生するための技術はまた、以下に
開示されるような当該分野で公知の方法を用いて使用され得る：ＰＣＴ公開ＷＯ ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２
（６）：８６４−８６９（１９９２）；およびＳａｗａｉら、ＡＪＲＩ ３４：
２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１
０４１−１０４３（１９９８）（これらの参考文献は、その全体が参考として援
用される）。
【０４０２】 単鎖のＦｖｓおよび抗体を産生するために用いられ得る技術の例としては、米
国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８（１９
９１）；Ｓｈｕら、ＰＮＡＳ ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；および
Ｓｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に
記載される技術が挙げられる。ヒトにおける抗体のインビボにおける使用および
インビトロ検出アッセイを含むいくつかの用途のために、キメラ抗体、ヒト化抗
体またはヒト抗体の使用が好ましくあり得る。キメラ抗体とは、抗体の異なる部
分が、異なる動物種に由来する分子（例えば、マウスモノクローナル抗体由来の
可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体）である。キメラ抗体
を産生するための方法は、当該分野において公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓ
ｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら、（１９８９）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２；米国特許第５，
８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６３９７号
を参照のこと（これらはそれらの全体が、参考として本明細書中に援用される）
。ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒ
ト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望される抗原に結合
する非ヒト種抗体由来の抗体分子である。しばしば、ヒトフレームワーク領域内
のフレームワーク残基（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｓｉｄｕｅ）は、抗原結合を
変化させるため（好ましくは改善させるために）ＣＤＲドナー抗体由来の対応残
基と置換される。これらフレームワークの置換は、当該分野で周知の方法によっ
て同定され、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣ
ＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位置に
おける異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較による。（例えば、
Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）（これらはそれらの全体が参考として本
明細書中に援用される）を参照のこと）。抗体は、以下を含む当該分野で公知の
種々の技術を用いてヒト化され得る：例えば、ＣＤＲ−移植（欧州特許第２３９
，４００号；ＰＣＴ公開ＷＯ ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３
９号；同第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリ
ング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎ
ｇ）（欧州特許第５９２，１０６号；同第５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ、Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８（
１９９１）； Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ ９
１：９６９−９７３（１９９４））、およびチェーンシャッフリング（ｃｈａｉ
ｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）。
【０４０３】 完全なヒト抗体は、ヒト患者の治療的処置に対して特に所望される。ヒト抗体
は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いた上記のファー
ジディスプレイ法を含む当該分野で公知の種々の方法により作製され得る。米国
特許第４，４４４，８８７号、および同第４，７１６，１１１号；ならびにＰＣ
Ｔ公開ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８
９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７
３５、およびＷＯ ９１／１０７４１；（これらの各々はその全体が参考として
本明細書中に援用される）もまた参照のこと。
【０４０４】 ヒト抗体はまた、機能的内因性免疫グロブリンの発現は出来ないが、ヒト免疫
グロブリン遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを用いて産生され得る
。例えば、ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子およびヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子
の複合体は、無作為にまたは相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入され得
る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｒｅｇｉｏｎ）は、ヒト重鎖遺伝子およびヒト軽鎖遺伝子に加えて、マウスの
胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖免疫グロブリン遺伝子およびマウス軽鎖
免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン座の導入と別々
にまたは同時に非機能的にされ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失は、内
因性抗体の産生を妨げる。改変された胚性幹細胞を増殖させ、そしてキメラマウ
スを産生するために胚盤胞中に微量注入する。次いで、キメラマウスを、ヒト抗
体を発現するホモ接合性の子孫を産生するために繁殖させる。トランスジェニッ
クマウスを、選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全体または部分
）を用いて通常の様式で免疫する。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来の
ハイブリドーマ技術を用いて免疫したトランスジェニックマウスから得られ得る
。トランスジェニックマウスに保持されたヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ
細胞分化の間に再編成し、そしてその後、クラススイッチングおよび体細胞変異
を受ける。従って、そのような技術の使用によって、治療的に有用なＩｇＧ抗体
、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体の産生が可能である。ヒト抗体を産
生するためのこの技術の概要については、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、
（１９９５、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３）を参照のこ
と。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術のならび
にそのような抗体を産生するためのプロトコールの詳細な議論については、例え
ば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３
７３５；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５
，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；
同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；および同第５，９３９
，５９８号を参照のこと（これらはその全体が本明細書中に参考として援用され
る）。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＧ
ｅｎｐｈａｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のような企業は、上記の技術に類似
した技術を用いて選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに従事し得る
。
【０４０５】 選択されたエピトープを認識するヒト抗体を、「ガイドされた（ｇｕｉｄｅｄ
）選択」といわれる技術を用いて完全に産生し得る。このアプローチにおいて、
選択された非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）は、同じエピトー
プを完全に認識するヒト抗体の選択を導くために使用される。（Ｊｅｓｐｅｒｓ
ら、Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：８９９−９０３（１９８８））。
【０４０６】 さらに、本発明のポリペプチドに対する抗体は、次いで当業者に周知の技術を
用いて本発明のポリペプチドを「模倣する」抗イディオタイプ抗体を産生するた
めに順々に利用され得る。（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎおよびＢｏｎａ、ＦＡ
ＳＥＢ Ｊ．７（５）：４３７−４４４；（１９８９）およびＮｉｓｓｉｎｏｆ
ｆ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８（１９９１）を参
照のこと。）例えば、本発明のポリペプチドに結合し、そして本発明のポリペプ
チドの多量体化（ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）および／またはリガンドに
対する本発明のポリペプチドの結合を競合的に阻害する抗体が、ポリペプチドの
多量体化ドメインおよび／または結合ドメインを「模倣する」抗イディオタイプ
を産生するために使用され得、そして結果としてポリペプチドおよび／またはそ
のリガンドに結合し、そして中和する。このような抗イディオタイプまたはその
ような抗イディオタイプのＦａｂフラグメントの中和は、ポリペプチドリガンド
を中和するための治療的レジメンに使用され得る。例えば、そのような抗イディ
オタイプ抗体は、本発明のポリペプチドに結合するためおよび／またはそのリガ
ンド／レセプターに結合するために使用され、そしてそれによってその生物学的
活性がブロックされ得る。
【０４０７】 （抗体をコードするポリヌクレオチド） 本発明はさらに、本発明の抗体およびそのフラグメントをコードするヌクレオ
チド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、ストリンジェント
な、または低いストリジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で（例えば、
上記に定義されるような）抗体（好ましくは、本発明のポリペプチドと特異的に
結合する、好ましくは、本発明のＴＲ１３ポリペプチドまたはＴＲ１４ポリペプ
チドに結合する抗体）をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリ
ヌクレオチドを含む。
【０４０８】 ポリヌクレオチドが、当該分野で公知の任意の方法によって得られ得、そして
ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定される。例えば、抗体のヌクレオチ
ド配列が知られている場合、抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合
成されたオリゴヌクレオチドから集合させられ得（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒら
、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９４）に記載されるように
）、これは、簡単にいうと、以下の工程を包含する：抗体をコードする配列の部
分を含む重複するオリゴヌクレオチドの合成、これらのオリゴヌクレオチドのア
ニーリングおよび連結、次いでＰＣＲによる連結されたオリゴヌクレオチドの増
幅。
【０４０９】 あるいは、抗体をコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源からの核酸か
ら作製され得る。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手不可能だが
、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、
適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または抗体を発現する任意
の組織もしくは細胞（例えば、本発明の抗体の発現のために選択されたハイブリ
ドーマ細胞）から作製されたｃＤＮＡライブラリー、またはそれから単離された
核酸（好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ））を、例えば、抗体をコードするｃＤＮＡラ
イブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定するために、配列の３’末端もしくは
５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって
、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するク
ローニングによって得られ得る。ＰＣＲによって作製された増幅された核酸は、
次いで、当該分野で周知の任意の方法を用いて、複製可能なクローニングベクタ
ーにクローニングされ得る。
【０４１０】 一旦、その抗体のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列が決定される
と、抗体のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で周
知の方法（例えば、組換えＤＮＡ技術、部位指向性変異誘発、ＰＣＲなど（例え
ば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，
ＮＹおよびＡｕｓｕｂｅｌら編、１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏ
ｎｓ，ＮＹ（これらは両方がその全体において本明細書に参考として援用される
）に記載の技術を参照のこと。））を用いて操作され、例えば、アミノ酸の置換
、欠失、および／または挿入を生成するように異なるアミノ酸配列を有する抗体
を作製し得る。
【０４１１】 特定の実施形態において、重鎖および／または軽鎖の可変ドメインのアミノ酸
配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列の同定のために、当該分野において周
知の方法によって（例えば、配列超可変性の領域を決定するために、他の重鎖、
および軽鎖の可変領域を既知のアミノ酸配列と比較することによって）調べられ
得る。慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて、１つ以上のＣＤＲが、前述のように
フレームワーク領域内に（例えば、非ヒト抗体をヒト化するために、ヒトフレー
ムワーク領域中に）挿入され得る。このフレームワーク領域は天然に存在する領
域、またはコンセンサスフレームワーク領域、および好ましくはヒトフレームワ
ーク領域であり得る（例えば、列挙したヒトフレームワーク領域については、Ｃ
ｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９（１９９８）
を参照のこと）。好ましくは、フレームワーク領域およびＣＤＲの組み合わせに
よって作製されたポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドに特異的に結合す
る抗体をコードする。好ましくは、上記に議論されるように、１つ以上のアミノ
酸置換は、フレームワーク領域内で作製され得、そして好ましくは、そのアミノ
酸置換は、抗体のその抗原への結合を改善する。さらに、このような方法は、１
つ以上の鎖内のジスルフィド結合が欠如した抗体分子を作製するように、鎖内ジ
スルフィド結合に関与する１つ以上の可変領域のシステイン残基のアミノ酸置換
または欠失を作製するために使用され得る。ポリヌクレオチドへの他の変更は、
本発明によって、および当該分野の技術において包含される。
【０４１２】 さらに、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物学的
活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と共にスプライシングすることによる、「キメ
ラ抗体」を生産するために発達した技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅ
ｒら（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら（１
９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２−４５４）が使用され得る。上記のよう
に、キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種から誘導される分子であり、この
ような分子は、マウスｍＡｂおよびヒト免疫グロブリンの定常領域から由来の可
変領域を有する（例えば、ヒト化抗体）。
【０４１３】 あるいは、単鎖抗体の産生のために記載された技術（米国特許第４，６９４，
７７８号；Ｂｉｒｄ（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２；Ｈｕ
ｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５
：５８７９−５８８３；およびＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：
５４４−５４）が、単鎖抗体の産生に適応され得る。単鎖抗体は、Ｆｖ領域の重
鎖フラグメントおよび軽鎖フラグメントがアミノ酸架橋を介して連結されれるこ
とによって形成され、単鎖ポリペプチドを生じる。Ｅ．ｃｏｌｉにおける機能性
Ｆｖフラグメントのアセンブリのための技術もまた、使用され得る（Ｓｋｅｒｒ
ａら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８−１０４１）。
【０４１４】 （抗体を産生する方法） 本発明の抗体は、抗体を合成するための当該分野で公知の任意の方法によって
、特に、化学合成によって、または、好ましくは、組換え体発現技術によって産
生され得る。
【０４１５】 本発明の抗体、またはそのフラグメント、誘導体もしくはアナログ（例えば、
本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖）の組換え体発現は、抗体をコードするポリヌ
クレオチドを含有する発現ベクターの構築を必要とする。一旦、本発明の抗体分
子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、あるいはそれらの部分（好ましくは、重鎖ま
たは軽鎖の可変ドメインを含有する）をコードするポリヌクレオチドが得られる
と、抗体分子の産生のためのベクターは、当該分野で周知の技術を用いる組換え
ＤＮＡ技術によって産生され得る。従って、ヌクレオチド配列をコードする抗体
を含有するポリヌクレオチドの発現によってタンパク質を調製するための方法は
、本明細書に記載される。当業者に周知の方法は、抗体をコードする配列ならび
に適切な転写制御シグナルおよび翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターの構
築のために使用され得る。これらの方法には、例えば、インビトロの組換えＤＮ
Ａ技術、合成技術、およびインビボの遺伝子組換えが挙げられる。従って、本発
明は、プロモーターに作動可能に連結した、本発明の抗体分子、あるいはその重
鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインをコードするヌクレオ
チド配列を含む複製可能なベクターを提供する。このようなベクターは、抗体分
子の定常領域（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ８６／０５８０７；ＰＣＴ公開ＷＯ８９
／０１０３６；および米国特許第５，１２２，４６４号を参照のこと）をコード
するヌクレオチド配列ならびに重鎖または軽鎖の全体の発現のためにこのような
ベクターにクローニングされ得る抗体の可変ドメインを含み得る。
【０４１６】 この発現ベクターは、従来技術によって宿主細胞へと移入され、そしてこのト
ランスフェクトされた細胞は、次いで、本発明の抗体を産生するために、従来技
術によって培養される。従って、本発明は、異種プロモーターに作動可能に連結
した、本発明の抗体、あるいはその重鎖もしくは軽鎖をコードするポリヌクレオ
チドを含む宿主細胞を含む。二本鎖抗体の発現についての好ましい実施形態にお
いて、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、以下に詳述されるように
、免疫グロブリン分子の全体の発現のために宿主細胞において同時発現され得る
。
【０４１７】 種々の宿主発現ベクター系は、本発明の抗体分子を発現させるために利用され
得る。このような宿主発現系は、目的のコード配列が産生されそして続いて精製
され得るビヒクルを表わすが、また、適切なヌクレオチドをコードする配列で形
質転換またはトランスフェクトされる場合に、インサイチュで本発明の抗体分子
を発現し得る細胞を表わす。これらには、抗体をコードする配列を含む組換えバ
クテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡの発現ベクタ
ーを用いて形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．サブチリス（ｓｕ
ｂｔｉｌｉｓ））のような微生物；抗体をコードする配列を含む組換え酵母発現
ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃ
ｈｉａ）；抗体をコードする配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、
バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例え
ば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭ
Ｖ）に感染した植物細胞系または抗体をコードする配列を含む組換えプラスミド
発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるい
は哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモ
ーター）または哺乳動物のウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイル
ス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え
発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９
３、３Ｔ３細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのような細菌細胞、そしてより好ましくは、特に、
組換え抗体分子全体の発現のために真核生物細胞が、組換え抗体分子の発現のた
めに使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要最初期遺伝子プ
ロモーターエレメントのようなベクターと組み合わされた、チャイニーズハムス
ターの卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞が、抗体のための効果的な発現
系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら（１９８６）Ｇｅｎｅ ４５：１０１；Ｃｏｃｋ
ｅｔｔら（１９９０）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２）。
【０４１８】 細菌系において、多くの発現ベクターが、抗体分子の発現を意図する使用に依
存して有利に選択され得る。例えば、多量のこのようなタンパク質が産生される
場合、抗体分子の薬学組成物の作製のために、容易に精製される融合タンパク質
産物の高レベルの発現を指向するベクターが所望され得る。このようなベクター
には、抗体をコードする配列がｌａｃＺをコードする領域と共にベクターにイン
フレームで個別に連結され得、その結果、融合タンパク質が産生されるＥ．ｃｏ
ｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら（１９８３）ＥＭＢＯ Ｊ．２
：１７９１）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ（１９８５）Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９；Ｖａｎ Ｈｅｅ
ｋｅ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３
−５５０９）などが挙げられるが、これらに限定されない。ｐＧＥＸベクターも
また、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質とし
て、外因性ポリペプチドを発現させるために使用され得る。一般に、このような
融合タンパク質は可溶性であり、そして溶解した細胞から、マトリックスグルタ
チオン−アガロースビーズへの吸着および結合、それに続く遊離グルタチオン存
在化での溶出によって容易に精製され得る。このｐＧＥＸベクターは、トロンビ
ンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計され、その結果、この
クローニングされた標的遺伝子産物は、ＧＳＴ部分から解放され得る。
【０４１９】 昆虫系において、オートグラファカリフォルニカ核多核体病ウイルス（Ａｕｔ
ｏｇｒａｐｈａ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒ
ｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ）（ＡｃＮＰＶ）は、外因性遺伝子を発現させるためのベ
クターとして使用される。このウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉ
ｐｅｒｄａ細胞中で増殖する。この抗体をコードする配列は、ウイルスの非必須
領域（例えば、ポリヘドリン（ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ）遺伝子）に個々にクロー
ン化され得、そしてＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモータ
ー）の制御下に配置され得る。
【０４２０】 哺乳動物の宿主細胞において、多くのウイルスに基づいた発現系が利用され得
る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、抗体をコードする目
的の配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体（例えば、後期プロモーター
および３部からなるリーダー配列）に連結され得る。次いで、このキメラ遺伝子
は、インビトロまたはインビボの組換えによって、アデノウイルスゲノム中に挿
入され得る。ウイルスのゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）へ
の挿入は、感染した宿主において生存し、かつ抗体分子を発現し得る組換えウイ
ルスを生じる。（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３５５−３５９を参照のこと）。特定
の開始シグナルもまた、挿入された抗体をコードする配列の効率的な翻訳のため
に必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接する配列
を含む。さらに、この開始コドンは、挿入物全体の翻訳を保証するように、所望
のコード配列のリーディングフレームと同調でなければならない。これらの外因
性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方の種々の起源の
外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンであり得る。発現の効率は、適切な転
写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含めることによって増強
され得る（Ｂｉｔｔｎｅｒら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ．１５３：５１−５４４を参照のこと）。
【０４２１】 さらに、挿入された配列の発現を調節するか、または遺伝子産物を所望の特定
の様式に改変およびプロセスする宿主細胞株が、選択され得る。タンパク質産物
のこのような改変（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断
）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク
質産物および遺伝子産物の翻訳後プロセシングおよび改変について特徴的かつ特
有の機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現した外因性タンパク質の
正確な改変およびプロセシングを保証するように選択され得る。この目的のため
に、一次転写物の適切なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化、およびリン
酸化のための細胞の機構を有する真核生物の宿主細胞が使用され得る。このよう
な哺乳動物の宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、Ｍ
ＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、および、特に、乳癌細胞株（例えば、ＢＴ
４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄなど）、ならびに正
常な乳腺細胞株（例えば、ＣＲＬ７０３０およびＨｓ５７８Ｂｓｔなど）が挙げ
られるが、これらに限定されない。
【０４２２】 組換えタンパク質の長期の高収率の産生のために、安定した発現が好ましい。
例えば、抗体分子を安定して発現する細胞株が操作され得る。ウイルスの複製起
点を含む発現ベクターの使用よりも、むしろ宿主細胞は、適切な発現制御エレメ
ント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリ
アデニル化部位など）、および選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転
換され得る。外因性ＤＮＡの導入に続いて、操作された細胞は、濃縮された培地
中で１〜２日間増殖され得、次いで選択培地に切り換えられる。組換えプラスミ
ド中の選択マーカーは、選択への耐性を与え、そして細胞がプラスミドをそれら
の染色体に安定に組み込むことを可能とし、そして増殖し、次いで細胞株にクロ
ーニングおよび増殖され得る病巣を形成する。この方法は、抗体分子を発現する
細胞株を操作するために有利に使用され得る。このような操作された細胞株は、
抗体分子と直接的または間接的に相互作用する化合物のスクリーニングおよび評
価において特に有用であり得る。
【０４２３】 多くの選択系が使用され得、それらには、それぞれｔｋ−細胞、ｈｇｐｒｔ−
細胞、またはａｐｒｔ−細胞において使用され得る、単純ヘルペスウイルスチミ
ジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら（１９７７）Ｃｅｌｌ １１：２２３）、ヒポキ
サンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａお
よびＳｚｙｂａｌｓｋｉ（１９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ４８：２０２）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌ
ｏｗｙら、Ｃｅｌｌ ２２：８１７（１９８０））遺伝子が挙げられるが、これ
らに限定されない。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子の選択の基礎とし
て使用され得る：メトトレキサートに対する耐性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅ
ｒら（１９８０）Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７；Ｏ’Ｈ
ａｒｅら（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：
１５２７）；ミコフェノール酸への耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎおよ
びＢｅｒｇ（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８
：２０７２）；アミノグリコシドＧ−４１８への耐性を与えるｎｅｏ（Ｃｌｉｎ
ｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ（１９９
１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３
）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９
６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２；
ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；１９９３年５月，ＴＩＢ ＴＥＣＨ １
１（５）：１５５−２１５）；ならびにハイグロマイシンに対するの耐性を与え
るｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅら（１９８４）Ｇｅｎｅ ３０：１４７）。当
該分野で一般に公知である組換えＤＮＡ技術の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）
（１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ
（１９９０）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ
；ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉら（編）（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓ
ｏｎｓ，ＮＹの１２および１３章；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら（１９
８１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１に記載され、これらはその全体が本明
細書において参考として援用される。
【０４２４】 抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加され得る（総説について
は、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ
ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉ
ｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，第３巻
（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照のこと
）。抗体を発現するベクター系においてマーカーが増幅できる場合、宿主細胞の
培養液中に存在するインヒビターのレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピーの
数を増加する。この増幅された領域が抗体遺伝子と結合しているために、この抗
体の産生もまた、増加する（Ｃｒｏｕｓｅら（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂ
ｉｏｌ．３：２５７）。
【０４２５】 その宿主細胞は、本発明の２つの発現ベクター（重鎖由来のポリペプチドをコ
ードする第１のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベク
ター）で同時トランスフェクトされ得る。この２つのベクターは、重鎖および軽
鎖のポリペプチドの等しい発現を可能とする同一の選択マーカーを含み得る。あ
るいは、重鎖および軽鎖のポリペプチドの両方をコードする単一のベクターが使
用され得る。このような状況において、この軽鎖は、過剰の有毒な遊離重鎖を避
けるために、重鎖の前に配置されるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ（１９８６
）Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２；Ｋｏｈｌｅｒ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７）。重鎖および軽鎖のコード配列
は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。
【０４２６】 一旦、本発明の抗体分子が、組換え発現によって産生されると、この抗体分子
は、免疫グロブリン分子の精製についての当該分野で公知の任意の方法によって
（例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフ
ィニティー（特にプロテインＡの後の特異的抗原へのアフィニティーによる）ク
ロマトグラフィー、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、
差示的溶解度によって、またはタンパク質の精製についての他の任意の標準的な
技術によって）精製され得る。
【０４２７】 （抗体結合体） 本発明は、融合タンパク質を作製するために、本発明のポリペプチド（または
それらの一部、好ましくは、ポリペプチドの少なくとも１０、２０もしくは５０
個のアミノ酸）と組換え的に融合したか、あるいは化学的に結合（共有結合およ
び非共有結合の両方を含む）した抗体を含む。この融合は、必ずしも直接的であ
る必要はないが、リンカー配列を介して起こり得る。この抗体は、本発明のポリ
ペプチド（またはそれらの一部、好ましくは、ポリペプチドの少なくとも１０、
２０もしくは５０個のアミノ酸）以外の抗原に特異的であり得る。例えば、抗体
は、本発明のポリペプチドを、インビトロまたはインビボのいずれかで、特定の
細胞表面レセプターに特異的な抗体に融合させるかまたは結合させることによっ
て、本発明のポリペプチドを特定の細胞型に標的化するために使用され得る。本
発明のポリペプチドに融合されたかまたは結合された抗体はまた、当該分野で公
知の方法を使用してインビトロイムノアッセイおよび精製方法にて使用され得る
。例えば、Ｈａｒｂｏｒら、前出およびＰＣＴ公開ＷＯ ９３／２１２３２；Ｅ
Ｐ ４３９，０９５；Ｎａｒａｍｕｒａら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３９：
９１−９９（１９９４）；米国特許第５，４７４，９８１号；Ｇｉｌｌｉｅｓら
、ＰＮＡＳ ８９：１４２８−１４３２（１９９２）；Ｆｅｌｌら、Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１４６：２４４６−２４５２（１９９１）（これらは、それらの全体
において参考として援用される）を参照のこと。
【０４２８】 本発明はさらに、可変領域以外の抗体のドメインに融合されたかまたは結合さ
れた本発明のポリペプチドを含む組成物を含む。例えば、本発明のポリペプチド
は、抗体のＦｃ領域、またはその一部に融合または結合され得る。本発明のポリ
ペプチドに融合された抗体部分は、定常領域、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、Ｃ
Ｈ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、またはそれらのドメイン全体もしくは部
分の任意の組合せを含み得る。このポリペプチドはまた、上記の抗体部分に融合
または結合し、マルチマーを形成し得る。例えば、本発明のポリペプチドと融合
したＦｃ部分は、Ｆｃ部分間のジスルフィド結合を介して二量体を形成し得る。
より高次なマルチマー形態は、このポリペプチドをＩｇＡおよびＩｇＭの部分に
融合することにより作製され得る。本発明のポリペプチドを抗体部分に融合また
は結合するための方法は、当該分野において公知である。例えば、米国特許第５
，３３６，６０３号；同第５，６２２，９２９号；同第５，３５９，０４６号；
同第５，３４９，０５３号；同第５，４４７，８５１号；同第５，１１２，９４
６号；ＥＰ ３０７，４３４；ＥＰ ３６７，１６６；ＰＣＴ公開ＷＯ ９６／
０４３８８；ＷＯ ９１／０６５７０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１）
；Ｚｈｅｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００（１９９５
）；およびＶｉｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９；
１１３３７−１１３４１（１９９２）（上記の参考文献は、それらの全体が参考
として援用される）を参照のこと。
【０４２９】 上記で議論されたように、本発明のポリペプチドは、上記の抗体部分と融合ま
たは結合され得、このポリペプチドのインビボの半減期を増加するか、または当
該分野で公知の方法を使用するイムノアッセイにおいて使用される。さらに、本
発明のポリペプチドは、精製を容易にするために、上記の抗体部分に融合または
結合され得る。１つの報告された実施例は、ヒトＣＤ４ポリペプチドの第１の２
つのドメインおよび哺乳動物免疫グロブリンの重鎖もしくは軽鎖の定常領域の種
々のドメインからなるキメラタンパク質を記載する。（ＥＰ ３９４，８２７；
Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−８６（１９８８））。
ジスルフィド連結した二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有する抗体に融合また
は結合した本発明のポリペプチドはまた、単量体分泌タンパク質またはタンパク
質フラグメント単独よりも、他の分子との結合および中和においてより効率的で
あり得る。（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：３９
５８−３９６４（１９９５））。多くの場合において、融合タンパク質のＦｃ部
分は、治療および診断において有利であり、従って、例えば、改良された薬物動
態学的な特性を生じ得る。（ＥＰ Ａ ２３２，２６２）。あるいは、融合タン
パク質が発現、検出、および精製された後のＦｃ部分の欠損が、好ましい。例え
ば、この融合タンパク質が免疫化のための抗原として使用される場合、このＦｃ
部分は、治療および診断を妨げ得る。薬物の開発において、例えば、ヒトタンパ
ク質（例えばｈＩＬ−５）は、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するためのハ
イスループットスクリーニングアッセイの目的のために、Ｆｃタンパク質と融合
された。（Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ
ｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと）。
【０４３０】 さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、その精製を容易にするペプ
チドのような、マーカー配列に融合され得る。好ましい実施形態において、マー
カーアミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、ｐＱＥベ
クター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａ
ｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）であり、これら
の多くのマーカーアミノ酸配列は、市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８
９）に記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の都合の良い
精製を提供する。精製のために有用な別のペプチドタグは、インフルエンザ赤血
球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら
、Ｃｅｌｌ３７：７６７（１９８４））、および「ｆｌａｇ」タグを含むが、こ
れに限定されない。
【０４３１】 本発明は、診断剤または治療剤に結合体化される、抗体またはそのフラグメン
トをさらに含む。抗体は、例えば、臨床上の試験手順（例えば、所定の処置レジ
メン（ｒｅｇｉｍｅｎ）の効力を決定するため）の一部として、腫瘍の発生また
は進行をモニターするために、診断的に使用され得る。検出は、抗体を検出可能
な物質と連結させることによって容易にされ得る。検出可能な物質の例としては
、種々の酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、
種々の陽電子放射断層撮影を使用する陽電子放射金属、および非放射性常磁性金
属イオン、が挙げられる。例えば、本発明に従う診断薬としての使用のための抗
体に結合体化され得る金属イオンに関しては、米国特許第４，７４１，９００号
を参照のこと。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカ
リホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ
が挙げられ；適切な補欠分子団複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオ
チンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光物質の例としては、ウン
ベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミ
ン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィ
コエリトリンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；生物
発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げ
られ；そして、適切な放射性物質の例としては、ヨウ素（131Ｉ、125Ｉ、123Ｉ
、121Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（11 5m Ｉｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ、111Ｉｎ）、およびテクネチウム（99Ｔｃ、99mＴ
ｃ）、タリウム（201Ｔｉ）、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、パラジウム（103Ｐ
ｄ）、モリブデン（99Ｍｏ）、キセノン（133Ｘｅ）、フッ素（18Ｆ）、153Ｓｍ
，177Ｌｕ、159Ｇｄ、149Ｐｍ、140Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈｏ、90Ｙ、47Ｓｃ、18 6 Ｒｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ、105Ｒｈ、97Ｒｕが挙げられる。
【０４３２】 さらに、抗体またはそのフラグメントは、治療用部分（例えば細胞毒（例えば
細胞増殖抑制性もしくは細胞殺傷性の薬剤））、治療剤または放射性金属イオン
に結合体化され得る。細胞毒または細胞毒性薬剤は、細胞に対して有害な任意の
薬剤を含む。例としては、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｏｌ）、サイトカ
ラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エト
ポシド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチ
ン、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジ
ヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄ
ｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デ
ヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リド
カイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそのアナログま
たはホモログ、が挙げられる。治療剤は、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサ
ート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウ
ラシルデカルバジン（５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ
）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロ
ラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣ
ＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルフ
ァン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならび
にｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラ
サイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソル
ビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、
ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙ
ｃｉｎ）（ＡＭＣ））、ならびに抗有糸分裂剤（例えばビンクリスチンおよびビ
ンブラスチン）、を含むが、それらに限定されない。
【０４３３】 本発明の結合体は、所定の生物学的応答を改変するために使用され得、治療剤
または薬物部分は、古典的な化学的治療剤に限定されると解釈されない。例えば
、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリぺプチドであ
り得る。このようなタンパク質としては、例えば、毒素（例えばアブリン、リシ
ンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素）；タンパク質（例えば、
腫瘍壊死因子、ａ−インターフェロン、β−インターフェロン、神経発育因子、
血小板由来増殖因子、組織プラスミノゲンアクチベーター、血栓症薬もしくは抗
脈管形成薬（例えば、アンジオスタチンもしくはエンドスタチン）；または生物
学的応答改変剤（例えばリンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）
、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６
」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コ
ロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または他の増殖因子など）、が挙げられ得
る。
【０４３４】 抗体はまた、固体支持体に付着させられ得、この固体支持体は、標的抗原の免
疫アッセイまたは精製に特に有用である。このような固体支持体としては、ガラ
ス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニ
ルまたはポリプロピレン、が挙げられるがそれらに限定されない。
【０４３５】 このような治療部分を抗体に結合体化する技術は周知であり、例えば、Ａｒｎ
ｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎ
ｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、２４３−５６頁（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌ
ｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、６２３−５３頁（Ｍａ
ｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏ
ｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５−５０６頁（１
９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒ
ｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ
Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ
ａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、３
０３−１６頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、およびＴｈｏｒｐ
ｅら、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒ
ｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ
ｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８（１９８２）を参照のこと
。
【０４３６】 あるいは、抗体は、第二の抗体に結合され、米国特許第４，６７６，９８０号
（これは、その全体が本明細書に参考として援用される）におけるＳｅｇａｌに
よる記載のような抗体異種結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成し
得る。
【０４３７】 単独、あるいは細胞傷害性因子および／またはサイトカインと組み合わせて投
与される、抗体に結合する治療部分を有するかまたは有さない抗体が、治療薬と
して使用され得る。
【０４３８】 （抗体結合についてのアッセイ） 本発明の抗体は、当該分野において公知の任意の方法により、免疫特異的結合
についてアッセイされ得る。用いられ得る免疫アッセイとしては、いくつかのも
のについてだけ名称を挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、
ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免
疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセ
イ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、プロテイン
Ａ免疫アッセイのような技術を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系が
挙げられるが、これらに限定されない。このようなアッセイは慣用的であり、そ
して当該分野において周知である（例えば、その全体が本明細書中に参考として
援用される、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。例示的な免疫ア
ッセイが、以下に簡潔に記載される（が、これらは限定を目的とすることを意図
しない）。
【０４３９】 免疫沈降プロトコルは、一般に、タンパク質ホスファターゼインヒビターおよ
び／またはプロテアーゼインヒビター（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチ
ニン、バナジン酸ナトリウム）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（１％ ＮＰ−４０ま
たはＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１％ デオキシコール酸ナトリウム、０．１％ ＳＤＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．２
）、１％ Ｔｒａｓｙｌｏｌ）のような溶解緩衝液中で、細胞の集団を溶解する
工程、目的の抗体を細胞溶解物に添加する工程、一定時間（例えば、１〜４時間
）４℃でインキュベートする工程、プロテインＡセファロースビーズおよび／ま
たはプロテインＧセファロースビーズを細胞溶解物に添加する工程、約１時間以
上４℃でインキュベートする工程、溶解緩衝液中でビーズを洗浄する工程、およ
びＳＤＳ／サンプル緩衝液中でビーズを再懸濁する工程を包含する。目的の抗体
が特定の抗原を免疫沈降する能力は、例えば、ウエスタンブロット分析により、
アッセイされ得る。当業者は、抗体の抗原への結合を増加するように、そしてバ
ックグラウンドを減少させるように改変され得るパラメータ（例えば、セファロ
ースビーズを用いて細胞溶解物を事前にきれいにする工程）に関して、認識し得
る。免疫沈降プロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂ
ｅｌら編，１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ
．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．１６．１を参照のこと。
【０４４０】 ウエスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製する工程、ポ
リアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に応じた８％〜２０％ ＳＤＳ−
ＰＡＧＥ）中でのそのタンパク質サンプルの電気泳動、そのタンパク質サンプル
をそのポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、ＰＶＤＦまたはナイロン
のような膜に転写する工程、ブロッキング溶液（例えば、３％ ＢＳＡまたは脱
脂粉乳を有するＰＢＳ）中でその膜をブロックする工程、洗浄緩衝液（例えば、
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ ２０）中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中
で希釈された一次抗体（目的の抗体）を用いてその膜をブロックする工程、洗浄
緩衝液中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈された酵素基質
（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）あるい
は放射性分子（例えば、32Ｐまたは125Ｉ）に結合体化された二次抗体（一次抗
体を認識する、例えば、抗ヒト抗体）を用いて、その膜をブロックする工程、洗
浄緩衝液中でその膜を洗浄する工程、ならびにその抗原の存在を検出する工程を
包含する。当業者は、検出されるシグナルを増加させるように、そしてバックグ
ラウンドノイズを減少させるように改変され得るパラメータに関して、認識し得
る。ウエスタンブロットプロトコルに関するさらなる考察については、例えば、
Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎ
ｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．８．１を参照のこと。
【０４４１】 ＥＬＩＳＡは、抗原を調製する工程、９６ウェルマイクロタイタープレートの
ウェルをその抗原でコーティングする工程、酵素基質（例えば、西洋ワサビペル
オキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物に結合
体化された目的の抗体をそのウェルに添加し、そして一定時間インキュベートす
る工程、およびその抗原の存在を検出する工程を包含する。ＥＬＩＳＡにおいて
、目的の抗体は、検出可能な化合物に結合している必要はない；その代わり、検
出可能な化合物に結合体化された第二の抗体（目的の抗体を認識する）が、ウェ
ルに添加され得る。さらに、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、抗体が
ウェルにコーティングされ得る。この場合、検出可能な化合物に結合体化された
第二の抗体が、コーティングされたウェルへの目的の抗原の添加に続いて、添加
され得る。当業者は、検出されるシグナルを増加させるように改変され得るパラ
メータ、および当該分野において公知のＥＬＩＳＡの他のバリエーションに関し
て、認識し得る。ＥＬＩＳＡに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓ
ｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉ
ｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１１．２．１を参照のこと。
【０４４２】 抗原に対する抗体の結合親和性および抗体−抗原相互作用のオフレート（ｏｆ
ｆ−ｒａｔｅ）が、競合結合アッセイにより決定され得る。競合結合アッセイの
一つの例は、ラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、漸増量の
非標識抗原の存在下での、目的の抗体との標識された抗原（例えば、3Ｈまたは1 25 Ｉ）のインキュベーション、および標識抗原に結合体化された抗体の検出を含
む。特定の抗原に対する目的の抗体の親和性、および結合オフレートは、スキャ
ッチャードプロット分析によるデータから決定され得る。第二の抗体との競合は
また、ラジオイムノアッセイを用いて決定され得る。この場合、抗原は、漸増量
の非標識の第二の抗体の存在下で、標識化合物（例えば、3Ｈまたは125Ｉ）に結
合した目的の抗体とともにインキュベートされる。
【０４４３】 （治療用途） 本発明はさらに、抗体を基礎とした治療に関し、この治療は、本発明の抗体を
、１つ以上の開示された障害を処置するために、動物、好ましくは哺乳動物、そ
して最も好ましくはヒトの患者に投与する工程を含む。本発明の治療化合物とし
ては、本発明の抗体（本明細書中に記載するような、それらのフラグメント、ア
ナログおよび誘導体を含む）ならびに本発明の抗体をコードする核酸（本明細書
中に記載するような、それらのフラグメント、アナログおよび誘導体を含む）が
挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗体は、本発明のポリペプチド
の異常な発現および／または活性に関連した疾患および障害（免疫障害を含むが
これらに限定されない）を処置、阻害または予防するために使用され得る。本発
明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾患および障害の
処置および/または予防としては、このような疾患および障害に関連する症状を
緩和することが挙げられるがこれらに限定されない。本発明の抗体は、当該分野
で公知であるかまたは本明細書中に記載される薬学的に受容可能な組成物中に提
供され得る。ＴＲ１４レセプターをアゴナイズする抗体は、以下：上皮細胞増殖
、歯の発達、粘膜層の増殖、および上皮表面（毛包、汗腺、基底細胞および真皮
を含む）の増殖、に関連する生物学的活性を緩和または処置するために用いられ
得る。従って、ＴＲ１４アゴニスト性抗体は、上皮に関連する疾患および/また
は障害（例えば、無汗性外胚葉性形成異常、発汗性外胚葉異形成症、汗腺障害、
静脈潰瘍、乾癬、紅色汗疹、創傷治癒、上皮起源の癌、男性型禿頭症、および/
または以下の「上皮細胞増殖および創傷治癒」において記載されるものなど）の
処置において用いられ得る。
【０４４４】 本発明の抗体が治療的に使用され得る方法の１つの要約は、身体内で局所的に
または全身的に、あるいは（例えば、補体（ＣＤＣ）により、またはエフェクタ
ー細胞（ＡＤＣＣ）により媒介されるような）抗体の直接的細胞傷害性により、
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを結合させることを含む。これら
のアプローチのいくつかは、より詳細に以下に記載される。本明細書中で提供さ
れる教示を与えられれば、当業者は、過度の実験なしに、診断上の目的、モニタ
リングの目的あるいは治療上の目的のために、本発明の抗体を使用する方法がわ
かる。
【０４４５】 本発明の抗体は、例えば、抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活
性を増加させるために役立つ、他のモノクローナル抗体またはキメラ抗体、ある
いはリンホカインまたは造血増殖因子（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３およびＩＬ
−７など）と組み合わせて有利に利用され得る。
【０４４６】 本発明の抗体は、単独で、または他の型の処置（例えば、放射線療法、化学療
法、ホルモン治療、免疫治療および抗腫瘍剤）との組み合わせで投与され得る。
一般的に、（抗体の場合には）患者の種と同じ種である種起源または種反応性の
生成物の投与が好ましい。従って、好ましい実施形態においては、ヒトの抗体、
フラグメント誘導体、アナログ、または核酸が、治療または予防のために、ヒト
の患者に投与される。
【０４４７】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（そのフラグメントを含む）に
関するイムノアッセイ、およびそれらに関連した障害の治療の両方のために、本
発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対する、高親和性および／または
強力な、インビボでの阻害抗体および／または中和抗体、そのフラグメントもし
くはその領域を使用することが好ましい。このような抗体、フラグメント、また
は領域は、好ましくは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（そのフ
ラグメントを含む）に対して親和性を有する。好ましい結合親和性としては、５
×１０-6Ｍ、１０-6Ｍ、５×１０-7Ｍ、１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５
×１０-9Ｍ、１０-9Ｍ、５×１０-10Ｍ、１０-10Ｍ、５×１０-11Ｍ、１０-11Ｍ
、５×１０-12Ｍ、１０-12Ｍ、５×１０-13Ｍ、１０-13Ｍ、５×１０-14Ｍ、１
０-14Ｍ、５×１０-15Ｍ、および１０-15Ｍより小さい解離定数すなわちＫｄを
有する結合親和性が挙げられる。
【０４４８】 （遺伝子治療） 特定の実施形態において、抗体またはその機能的誘導体をコードする配列を含
む核酸は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾
患または障害を処置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与され
る。遺伝子治療とは、発現したか、または発現可能な核酸の、被験体への投与に
より行われる治療をいう。本発明のこの実施形態において、核酸は、それらのコ
ードされたタンパク質を産生し、そのタンパク質は治療効果を媒介する。
【０４４９】 当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法は、本発明に従って使用
され得る。例示的な方法が以下に記載される。
【０４５０】 遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，Ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５（１９９３）；Ｗｕおよ
びＷｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓ
ｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３
−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−
９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照のこと。使用され得
る、組換えＤＮＡ技術分野において一般的に公知である方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ
ら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；お
よびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載される。
【０４５１】 好ましい局面において、化合物は抗体をコードする核酸配列を含有し、上記核
酸配列は、適切な宿主において、抗体、またはそのフラグメントもしくはキメラ
タンパク質、あるいはその重鎖もしくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部であ
る。特に、このような核酸配列は、抗体コード領域に作動可能に連結したプロモ
ーターを有し、上記プロモーターは誘導性であるかまたは構成性であり、そして
必要に応じて組織特異的である。別の特定の実施形態においては、抗体をコード
する配列および任意の他の所望の配列がゲノム中の所望の部位での相同組換えを
促進する領域に隣接した核酸分子が使用され、従って抗体をコードする核酸の染
色体内の発現を提供する（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；
Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９））。
特定の実施形態において、発現した抗体分子は単鎖抗体であるか；あるいはこの
核酸配列は、この抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする配列またはそのフラ
グメントを含む。
【０４５２】 核酸の患者への送達は、直接的（この場合、患者は核酸または核酸保有ベクタ
ーに直接的に曝される）か、または間接的（この場合、細胞は最初にインビトロ
で核酸で形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得る。これ
らの２つのアプローチは、インビボ遺伝子治療として、またはエキソビボ遺伝子
治療としてそれぞれ公知である。
【０４５３】 特定の実施形態において、核酸配列はインビボで直接的に投与され、そこで核
酸配列は発現されて、コードされた生成物を産生する。これは、当該分野で公知
の多数の方法（例えば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部分として構築し
、そしてそれを細胞内になるように投与することにより（例えば、欠損性または
弱毒化したレトロウイルスまたは他のウイルスベクター（米国特許第４，９８０
，２８６号を参照のこと）を用いた感染により）、あるいは、裸のＤＮＡの直接
注射により、あるいは、微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌ
ｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、あるいは脂質または細胞表面のレセ
プターまたはトランスフェクト剤でコーティングすることにより、あるいは、リ
ポソーム、微粒子、またはマイクロカプセル中へのカプセル化により、あるいは
、それらを核に入ることが公知であるペプチドと結合させて投与することにより
、レセプター媒介のエンドサイトーシスを受けるリガンドと結合させて投与する
ことにより（例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４
２９−４４３２（１９８７）を参照のこと）（レセプターを特異的に発現する細
胞の型を標的にするために用いられ得る）などのいずれかにより達成され得る。
別の実施形態において、核酸−リガンド複合体が形成され得、ここで、リガンド
はエンドソームを破壊するフソジェニック（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ウイルス性ペ
プチドを含み、核酸がリソソーム分解を回避するようにする。さらに別の実施形
態において、核酸は、特異的なレセプターを標的とすることにより、細胞特異的
な取り込みおよび発現についてインビボで標的とされ得る（例えば、ＰＣＴ公開
第ＷＯ９２／０６１８０号（１９９２年４月１６日付け、Ｗｕら）；同第ＷＯ９
２／２２６３５号（１９９２年１２月２３日付、Ｗｉｌｓｏｎら）；同第ＷＯ９
２／２０３１６号（１９９２年１１月２６日付、Ｆｉｎｄｉｅｓら）；同第ＷＯ
９３／１４１８８号（１９９３年７月２２日付、Ｃｌａｒｋら）、同第ＷＯ９３
／２０２２１号（１９９３年１０月１４日付け、Ｙｏｕｎｇ）を参照のこと）。
あるいは、核酸は、細胞内部に導入され得、そして相同組換えにより、発現のた
めに宿主細胞ＤＮＡ中に組み込まれ得る（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ
，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５
（１９８９）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（
１９８９））。
【０４５４】 具体的な実施形態において、本発明の抗体をコードする核酸配列を含むウイル
スベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが用いられ得る（Ｍ
ｉｌｌｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９（１９９３
）を参照のこと）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルス性ゲノムのパ
ッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの組込みのために必要でないレトロウイル
ス配列を欠失しなければならない。遺伝子治療において使用される抗体をコード
する核酸配列は、一つ以上のベクター中にクローン化され、これは、患者内への
遺伝子の送達を容易にする。レトロウイルスベクターに関するさらなる詳細は、
Ｂｏｅｓｅｎら，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１−３０２（１９９４）（こ
れは、幹細胞を化学療法に対してより耐性にするために、ｍｄｒＩ遺伝子を造血
性幹細胞に送達するための、レトロウイルスベクターの使用を記載する）に見出
され得る。遺伝子治療におけるレトロウイルスベクターの使用を説明する他の参
考文献は、以下である。：Ｃｌｏｗｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３
：６４４−６５１（１９９４）；Ｋｉｅｍら，Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７−１
４７３（１９９４）；ＳａｌｍｏｎｓおよびＧｕｎｚｂｅｒｇ，Ｈｕｍａｎ Ｇ
ｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２９−１４１（１９９３）；ならびにＧｒｏｓ
ｓｍａｎおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３：１１０−１１４（１９９３）。
【０４５５】 アデノウイルスは、遺伝子治療において使用され得る他のウイルスベクターで
ある。アデノウイルスは、特に、気道上皮へ遺伝子を送達するための魅力的なビ
ヒクルである。アデノウイルスは、自然に気道上皮に感染し、そこで軽い疾患を
起こす。アデノウイルスベースの送達系の他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮
細胞、および筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞を感染することができ
るという利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：４９９−５０３（１９９３）は、アデノウイルスベースの遺伝子治療の概
説を示す。Ｂｏｕｔら，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：３−１０
（１９９４）は、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を移すためのアデノウイルスベ
クターの使用を示した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の例は、
Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４（１９９１）
；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５（１９９２）；Ｍａ
ｓｔｒａｎｇｅｌｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５−２３４（
１９９３）；ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号；およびＷａｎｇら，Ｇｅｎ
ｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５−７８３（１９９５）に見出され得る。好まし
い実施形態において、アデノウイルスベクターが使用される。
【０４５６】 アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はまた、遺伝子治療における使用が提案されて
きた（Ｗａｌｓｈら，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：
２８９−３００（１９９３）；米国特許第５，４３６，１４６号）。
【０４５７】 遺伝子治療への別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクショ
ン、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、またはウイルス感染のような
方法により、組織培養中の細胞へ遺伝子を移入する工程を包含する。通常、移入
の方法は、選択可能なマーカーの細胞への移入を含む。次いで、細胞は、移入さ
れた遺伝子を取り込みそして発現する細胞を単離するために選沢下に置かれる。
次いで、それらの細胞は患者に送達される。
【０４５８】 この実施形態においては、得られた組換え細胞のインビボ投与の前に、核酸が
細胞に導入される。このような導入は、当該分野において公知の任意の方法によ
り実施され得、それらの方法としては以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクショ
ン、核酸配列を含むウイルスベクターまたはバクテリオファージベクターでの感
染、細胞融合、染色体媒介の遺伝子移入、マイクロセル媒介の遺伝子移入、スフ
ェロプラスト融合など。外来遺伝子の細胞への導入については、当該分野におい
て多数の技術が公知であり（例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ，Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９−６１８（１９９３）；Ｃｏｈｅｎら，Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４（１９９３）；Ｃｌｉｎｅ，
Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９−９２（１９８５）を参照のこと）、そ
してレシピエント細胞の必要な発生的および生理学的機能が破壊されないならば
、本発明に従って使用され得る。この技術は、細胞への核酸の安定した移入を提
供するべきであり、その結果、この核酸は、細胞により発現可能であり、好まし
くは、その細胞の子孫により遺伝性でかつ発現可能である。
【０４５９】 得られた組換え細胞は、当該分野において公知の様々な方法により、患者へ送
達され得る。組換え血球（例えば、造血幹細胞または造血前駆細胞）は、好まし
くは、静脈内に投与される。使用が考えられる細胞の量は、所望の効果、患者の
状態などに依存し、当業者により決定され得る。
【０４６０】 遺伝子治療の目的のために核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の入手可能
な細胞型を包含し、以下を含むがそれらに限定されない：上皮細胞、内皮細胞、
ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単
球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球のような血球；様々な幹
細胞または前駆細胞、特に、造血幹細胞または造血前駆細胞（例えば、骨髄、臍
帯血、末梢血、胎児の肝臓などから得られるような細胞）。
【０４６１】 好ましい実施形態において、遺伝子治療に使用される細胞は、患者に対して自
己である。
【０４６２】 遺伝子治療において組換え細胞が使用される実施形態において、抗体をコード
する核酸配列は、細胞またはそれらの子孫により核酸配列が発現可能であるよう
に細胞に導入され、そして次いで組み換え細胞は、治療的効果のためにインビボ
で投与される。具体的な実施形態において、幹細胞または前駆細胞が用いられる
。インビトロで単離され得、そしてインビトロで維持され得る任意の幹細胞およ
び／または前駆細胞は、本発明のこの実施形態に従って潜在的に使用され得る（
例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０８５９８号：ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅ
ｒｓｏｎ，Ｃｅｌｌ ７１：９７３−９８５（１９９２）；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ
，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１Ａ：２２９（１９８０）；ならびにＰｉｔ
ｔｅｌｋｏｗおよびＳｃｏｔｔ，Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７
７１（１９８６）を参照のこと）。
【０４６３】 具体的な実施形態において、遺伝子治療の目的で導入される核酸は、コード領
域に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含有し、その結果、核酸の発現
は、適切な転写誘導因子の存在または不在を制御することにより制御可能である
。
【０４６４】 （治療活性または予防活性の証明） 本発明の化合物または薬学的組成物は、好ましくは、ヒトでの使用の前にイン
ビトロで、そして次いでインビボで、所望の治療活性または予防活性について試
験される。例えば、化合物または薬学的組成物の、治療有用性または予防有用性
を証明するためのインビトロアッセイとしては、細胞株または患者組織サンプル
に対する化合物の効果が挙げられる。細胞株および／または組織サンプルに対す
る化合物または組成物の効果は、当業者に公知である技術（ロゼット形成アッセ
イおよび細胞溶解アッセイが挙げられるがこれらに限定されない）を利用して決
定され得る。本発明に従って、特定の化合物の投与が示されるか否かを決定する
ために用いられ得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイ
が挙げられ、このアッセイでは、患者組織サンプルを培養して増殖させ、そして
化合物に曝すか、そうでなければ化合物を投与し、そして、組織サンプルに対す
るそのような化合物の効果を観察する。
【０４６５】 （治療的／予防的な投与および組成物） 本発明は、被験体への有効量の本発明の化合物または薬学的組成物、好ましく
は本発明の抗体の投与による処置、阻害および予防の方法を提供する。好ましい
局面において、化合物は実質的に精製される（例えば、その効果を制限するかま
たは望ましくない副作用を生じる物質は実質的にない）。被験体は好ましくは、
ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げられるがそれらに限
定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動物であり、そして最も好ましく
はヒトである。
【０４６６】 化合物が核酸または免疫グロブリンを含む場合に使用され得る処方および投与
方法は、上記に記載され；さらなる適切な処方および投与経路は、本明細書中で
以下に記載されたものの中から選択され得る。
【０４６７】 様々な送達系が公知であり、そして本発明の化合物を投与するために用いられ
得る（例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、この化合物の発現が可
能な組換え細胞中でのカプセル化、レセプター媒介エンドサイトーシス（例えば
、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１
９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核
酸の構築など）。導入方法としては、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔
内、硬膜外、および経口経路が挙げられるがそれらに限定されない。化合物また
は組成物は、任意の好都合な経路により（例えば、注入またはボーラス注射によ
り、上皮または粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を通
しての吸収により）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与
され得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の薬学的化
合物または組成物を、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射を包含し
；脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバのようなリザーバに取り付けら
れた脳室内カテーテルにより容易にされ得る）により中枢神経系に導入すること
が望まれ得る。例えば、吸入器または噴霧器の使用、およびエアゾール化剤を用
いた処方により、肺投与もまた使用され得る。
【０４６８】 具体的な実施形態において、本発明の薬学的化合物または組成物を、処置の必
要な領域に局所的に投与することが望まれ得る；これは、制限する目的ではない
が、例えば、手術中の局部注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯との組み
合わせて）により、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプ
ラント（このインプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のよ
うな膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または膠様材料である）により達
成され得る。好ましくは、抗体を含む本発明のタンパク質を投与する際、タンパ
ク質が吸収されない材料を使用するために注意が払われなければならない。
【０４６９】 別の実施形態において、化合物または組成物は、小胞、特に、リポソーム中へ
送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（
１９９０）；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌ
ｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，３５３〜３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，
同書３１７〜３２７頁を参照のこと；広く同書を参照のこと）。
【０４７０】 さらに別の実施形態において、化合物または組成物は、徐放系中で送達され得
る。１つの実施形態において、ポンプが用いられ得る（Ｌａｎｇｅｒ，（前出）
；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２
０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７（１９
８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８
９）を参照のこと）。別の実施形態において、高分子材料が用いられ得る（Ｍｅ
ｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌ
ｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ
Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ
ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編），Ｗｉ
ｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，Ｊ
．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６
１（１９８３）を参照のこと；Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０（
１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１（１９８９
）；Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９）もま
た参照のこと）。さらに別の実施形態において、徐放系は、治療標的、即ち、脳
の近くに置かれ得、従って、全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏ
ｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，（前出），第２巻，１１５〜１３８頁（１９８４）を
参照のこと）。
【０４７１】 他の徐放系は、Ｌａｎｇｅｒにより総説において議論される（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））。
【０４７２】 本発明の化合物がタンパク質をコードする核酸である、具体的な実施形態にお
いて、その核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構成し、そして
それが細胞内になるように投与することにより（例えば、レトロウイルスベクタ
ーの使用により（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、または直接
注射により、または微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓ
ｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、または脂質もしくは細胞表面レセプター
もしくはトランスフェクト剤でコーティングすることにより、または核に入るこ
とが公知であるホメオボックス様ペプチドと結合させて投与すること（例えば、
Ｊｏｌｉｏｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８
６４−１８６８（１９９１）を参照のこと）などにより、そのコードされたタン
パク質の発現を促進するようにインビボで投与され得る。あるいは、核酸は、細
胞内に導入され得、そして、発現のために相同組換えにより宿主細胞ＤＮＡ内に
組み込まれ得る。
【０４７３】 本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療有効量の
化合物、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。具体的な実施形態において
、用語「薬学的に受容可能な」とは、動物における、そしてさらに特にヒトにお
ける使用のために、連邦規制当局もしくは米国政府により認められたか、または
米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されたことを意味する。
用語「キャリア」とは、治療剤がともに投与される、希釈剤、アジュバンド、賦
形剤、またはビヒクルをいう。このような薬学的なキャリアは、水および油（石
油起源、動物起源、植物起源、または合成起源の油（例えば、ピーナッツ油、大
豆油、鉱油、ゴマ油など）を含む）のような滅菌した液体であり得る。水は、薬
学的組成物が静脈内に投与される場合に、好ましいキャリアである。生理食塩水
溶液、ならびにデキストロースおよびグリセロールの水溶液はまた、特に注射可
能な溶液のために、液体キャリアとして使用され得る。適切な薬学的賦形剤とし
ては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ
、フラワー、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン
酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレ
ン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物はまた、所望される
ならば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの
組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性処方物
などの形態を取り得る。この組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドのよ
うなキャリアとともに、坐剤として処方され得る。経口処方物は、薬学的等級の
マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン
ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準キャリアを含み得
る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される
。このような組成物は、治療有効量の化合物を、好ましくは精製された形態で、
適切な量のキャリアとともに含んで、患者への適切な投与のための形態を提供す
る。処方物は、投与形態に適するべきである。
【０４７４】 好ましい実施形態において、組成物は、慣用手順に従って、ヒトへの静脈内投
与のために採用された薬学的組成物として、処方される。代表的には、静脈内投
与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要な場合、組成物は
また、可溶化剤および注射の部位での痛みを緩和するリグノカインのような局部
麻酔を含み得る。一般的には、成分は、別々にかまたは単一投薬形態で一緒に混
合してのどちらかで、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたは小袋（ｓａｃ
ｈｅｔｔｅ）のような気密容器中の凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物とし
て供給される。組成物が注入により投与されるべき場合には、組成物は、滅菌し
た薬学的等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルに分配され得る。組成物が
注射により投与される場合、成分が投与の前に混合され得るように、注射用滅菌
水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【０４７５】 本発明の化合物は、中性のまたは塩の形態として処方され得る。薬学的に受容
可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもの
のようなアニオンとともに形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモ
ニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、
２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するもののよ
うなカチオンとともに形成される塩が挙げられる。
【０４７６】 この処置（本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性と関連する
疾患または障害の抑制および予防）において効果的である本発明の化合物の量は
、標準的な臨床技術により決定され得る。さらに、インビトロアッセイを、必要
に応じて使用して、最適な投薬量の範囲を同定するのを助け得る。処方において
使用されるべき正確な用量はまた、投与の経路、および疾患または障害の重篤さ
に依存し、そして開業医の判断および各患者の状況に従って決定されるべきであ
る。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量反応曲線
から外插され得る。
【０４７７】 抗体に関して、患者に投与される投薬量は、代表的に、患者の体重１ｋｇあた
り０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。好ましくは、患者に投与される投薬量は、患
者の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇと２０ｍｇとの間であり、より好ましくは、患
者の体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリ
ペプチドへの免疫応答に起因して、他種由来の抗体よりもヒト体内で長い半減期
を有する。従って、ヒト抗体の低い投薬量および頻度の低い投与は、しばしば可
能である。さらに、本発明の抗体の投与の投薬量および頻度は、改変（例えば、
脂溶化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）のような）による抗体の取り込みおよび組織浸
透（例えば、脳への）を増強することにより減少され得る。
【０４７８】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の一つ以上の成分で満たされている一つ
以上の容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。薬学的製品または生
物学的製品の製造、使用または販売を規制している政府機関により規定される形
式における通告は、このような容器に、必要に応じて伴ない得る。この通告は、
ヒトの投与のための製造、使用または販売のこの機関による認可を反映する。
【０４７９】 （診断および画像化） 目的のポリペプチドに特異的に結合する標識化抗体、ならびにその誘導体およ
びそのアナログは、診断目的のために使用されて、本発明のポリペプチドの異常
な発現および／または活性に関連する疾患および／または障害を検出、診断また
はモニターし得る。本発明は、目的のポリペプチドの異常な発現の検出について
提供し、これは、（ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用し
て、個体の細胞または体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、
および（ｂ）この遺伝子発現レベルと標準的な遺伝子発現のレベルを比較する工
程、を包含し、これによって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイさ
れたポリペプチド遺伝子発現レベルの増加または減少が、異常な発現を示す。
【０４８０】 本発明は、障害を診断するための診断アッセイを提供し、このアッセイは、（
ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用して、個体の細胞また
は体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、および（ｂ）この遺
伝子発現レベルと標準的な遺伝子発現のレベルを比較する工程、を包含し、これ
によって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイされたポリペプチド遺
伝子発現レベルの増加または減少が、特定の障害を示す。癌に関して、個体由来
の生検組織における比較的高い量の転写物の存在は、疾患の発生のための素因を
示し得るか、または実際の臨床症状の出現前に疾患を検出するための手段を提供
し得る。この型のより決定的な診断は、保健専門家に予防手段を使用させること
、または早期の積極的な処置を可能にし得、これにより、癌の発生またはさらな
る進行を予防する。
【０４８１】 本発明の抗体を使用して、当業者に公知の古典的な免疫組織学的方法を使用し
て生物学的サンプル中のタンパク質レベルをアッセイし得る（例えば、Ｊａｌｋ
ａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８
５）；Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７
−３０９６（１９８７）を参照のこと）。タンパク質遺伝子発現を検出するため
に有用な、抗体に基づく他の方法としては、イムノアッセイ（例えば、酵素結合
イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定法（ＲＩＡ））が挙
げられる。適切な抗体アッセイ標識は、当該分野において公知であり、そして酵
素標識（例えば、グルコースオキシダーゼ）；放射性同位体（例えば、ヨウ素（ 131 Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、121Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3
Ｈ）、インジウム（115mＩｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ、111Ｉｎ）、およびテクネチ
ウム（99Ｔｃ、99mＴｃ）、タリウム（201Ｔｉ）、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）
、パラジウム（103Ｐｄ）、モリブデン（99Ｍｏ）、キセノン（133Ｘｅ）、フッ
素（18Ｆ）、135Ｓｍ、177Ｌｕ、159Ｇｄ、149Ｐｍ、140Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈ
ｏ、90Ｙ、47Ｓｃ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ、105Ｒｈ、97Ｒｕ）；発光標識
（例えば、ルミノール）；ならびに蛍光標識（例えば、フルオレセインおよびロ
ーダミン）、ならびにビオチンが挙げられる。
【０４８２】 本発明の１つの局面は、動物（好ましくは哺乳動物であり、そして最も好まし
くはヒト）における目的のポリペプチドの異常な発現に関連する、疾患または障
害の検出および診断である。１つの実施形態において、診断は、以下：（ａ）被
験体に、目的のポリペプチドに特異的に結合する、有効量の標識分子を投与（例
えば、非経口、皮下、または腹腔内）する工程；（ｂ）この投与に続いて、この
ポリペプチドが発現する被験体の部位において、標識分子が優先的に濃縮するこ
と（および結合していない標識分子がバックグラウンドレベルまで除去されるこ
と）を可能とする時間間隔を待つ工程；（ｃ）バックグラウンドレベルを決定す
る工程；および（ｄ）被験体において標識分子を検出する工程であって、その結
果、バックグラウンドレベルより上の標識分子の検出が、この被験体が目的のポ
リペプチドの異常な発現に関連する特定の疾患または障害を有することを示す、
工程を包含する。バックグラウンドレベルは、検出した標識分子の量を、特定の
系に関して先に決定した標準値と比較することを含む、種々の方法によって、決
定され得る。
【０４８３】 被験体の大きさおよび使用される画像化システムは、診断画像を作成するため
に必要とされる画像化部分の品質を決定することが、当該分野において理解され
る。放射性同位体部分の場合には、ヒト被験体に対して、注入される放射能の量
は、通常、99ｍＴｃの約５〜２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識され
た抗体または抗体フラグメントは、優先的に、特定のタンパク質を含む細胞の位
置に蓄積する。インビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍ
ｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏ
ｒ Ｉｍａｇｉｎｇの第１３章：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔ
ｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、Ｓ．Ｗ．ＢｕｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒ
ｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２））
に記載される。
【０４８４】 いくつかの変化（使用される標識の型および投与の様式を含む）に依存して、
標識分子が優先的に被験体のある部位において濃縮されることを可能にし、かつ
結合していない標識分子がバックグラウンドレベルまで排除されるための、投与
に続く時間間隔は、６〜４８時間または６〜２４時間または６〜１２時間である
。別の実施形態において、投与に続く時間間隔は、５〜２０日間または５〜１０
日間である。
【０４８５】 １つの実施形態において、疾患または障害のモニタリングは、その疾患または
疾患を診断するための方法を、例えば、最初の診断の１ヵ月後、最初の診断の６
ヶ月後、最初の診断の１年後などに、繰り返すことによって、実施される。
【０４８６】 標識分子の存在は、インビボ走査についての分野において公知の方法を使用し
て、患者において検出され得る。これらの方法は、使用される標識の型に依存す
る。当業者は、特定の標識を検出するための適切な方法を決定し得る。本発明の
診断方法において使用され得る方法およびデバイスとしては、コンピュータ連動
断層撮影（ＣＴ）、陽電子（ｐｏｓｉｔｉｏｎ）放射撮像断層（ＰＥＴ）のよう
な全身走査、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）、および超音波検査が挙げられるが、こ
れらに限定されない。
【０４８７】 特定の実施形態において、分子は放射性同位体で標識され、そして放射応答性
の外科用器具を使用して、患者において検出される（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、米国
特許第５，４４１，０５０号）。別の実施形態において、分子は蛍光化合物で標
識され、そして蛍光応答性の走査機器を使用して、患者において検出される。別
の実施形態において、分子は陽電子放射材料で標識され、そして陽電子放射断層
撮像法を使用して、患者において検出される。なお別の実施形態において、分子
は常磁性標識で標識され、そして磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）を使用して患者にお
いて検出される。
【０４８８】 （キット） 本発明は、上記の方法において使用され得るキットを提供する。１つの実施形
態において、キットは、１つ以上の容器において、本発明の抗体、好ましくは精
製した抗体を備える。特定の実施形態において、本発明のキットは、エピトープ
を含む実質的に単離されたポリペプチドを備える。このエピトープは、キット中
に含まれる抗体と特異的に免疫反応する。好ましくは、本発明のキットは、目的
のポリペプチドと反応しないコントロール抗体をさらに備える。別の特定の実施
形態において、本発明のキットは、目的のポリペプチドへの抗体の結合を検出す
るための手段を備える（例えば、この抗体は、検出可能な基質（例えば、蛍光化
合物、酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物）に結合体化され得るか、ま
たは一次抗体を認識する二次抗体が、検出可能な基質と結合体化され得る）。
【０４８９】 本発明の別の特定の局面において、キットは、増殖性および／または癌性のポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドに対して特異的な抗体を含む血清のスクリー
ニングに使用するための診断キットである。このようなキットは、目的のポリペ
プチドと反応しないコントロール抗体を備え得る。このようなキットは、エピト
ープを含む実質的に単離されたポリペプチド抗原を備え得る。このエピトープは
、少なくとも１つの抗ポリペプチド抗原抗体と特異的に免疫反応する。さらに、
このようなキットは、抗原に対する上記の抗体の結合を検出するための手段を備
える（例えば、抗体は、蛍光化合物（例えば、フローサイトメトリーにより検出
され得るフルオレセインまはたローダミン）と結合体化され得る）。特定の実施
形態において、キットは、組換え的に産生されたポリペプチド抗原または化学的
に合成されたポリペプチド抗原を備え得る。キットのポリペプチド抗原はまた、
固体支持体に付着され得る。
【０４９０】 より特定の実施形態において、上記のキットの検出手段は、上記のポリペプチ
ド抗原が付着する固体支持体を備える。このようなキットはまた、非付着レポー
ター標識化抗ヒト抗体を備え得る。この実施形態において、ポリペプチド抗原へ
の抗体の結合は、上記のレポーター標識化抗体の結合によって検出され得る。
【０４９１】 さらなる実施形態では、本発明は、本発明のポリペプチドの抗原を含有する血
清をスクリーニングする際に使用するための診断用キットを含む。この診断用キ
ットは、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド抗原と特異的に免疫反応性である
実質的に単離された抗体、およびこの抗体に対するポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチド抗原の結合を検出する手段を含む。１つの実施形態では、この抗体は、
固体支持体に付着される。特定の実施形態では、この抗体は、モノクローナル抗
体であり得る。キットの検出手段は、第二の標識化されたモノクローナル抗体を
含み得る。あるいは、またはさらに、この検出手段は、標識化された競合抗原を
含み得る。
【０４９２】 １つの診断形態において、試験血清は、本発明の方法により得られる表面結合
抗原を有する固相試薬と反応される。試薬への特異的抗原抗体の結合および洗浄
による非結合血清成分の除去後、この試薬は、固体支持体上の結合された抗抗原
抗体の量に比例してレポーターを試薬に結合するように、レポーター標識抗ヒト
抗体と反応される。試薬は、再度、非結合標識抗体を除去するために洗浄され、
そして、試薬と会合したレポーターの量が決定される。代表的には、このレポー
ターは、適切な比蛍光（ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ）基質、発光基質または比色
基質（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）の存在下で固相をインキュベート
することにより検出される酵素である。
【０４９３】 上記アッセイにおける固体表面試薬は、固体支持材料（例えば、ポリマー性ビ
ーズ、ディップスティック、９６ウェルプレート、またはフィルター材料）にタ
ンパク質材料を付着するための公知の技術によって調製される。これらの付着方
法は、一般に、支持体へのタンパク質の非特異的吸着、または固体支持体上の化
学反応基（例えば、活性型カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアルデヒド
基）へのタンパク質（代表的には、遊離アミン基を介する）の共有結合を包含す
る。あるいは、ストレプトアビジンコーティングプレートは、ビオチン化抗原と
併用して使用され得る。
【０４９４】 従って、本発明は、本診断方法を実施するためのアッセイ系またはキットを提
供する。このキットは、一般に、表面結合された組換え抗原を有する支持体、お
よび表面結合抗抗原抗体を検出するためのレポーター標識抗ヒト抗体を含む。
【０４９５】 （治療） 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーリガンドが、細胞傷害性、抗ウイルス活性
、免疫調節活性、および数種の遺伝子の転写制御を含む、多数の細胞応答を誘導
する、最も多面的なサイトカインに属することは、公知である（Ｄ．Ｖ．Ｇｏｅ
ｄｄｅｌら、「Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒｓ：Ｇｅｎｅ Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ」、
Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５１：５９７−６０９（１９８６）、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ；Ｂ．Ｂｅｕｔｌｅｒ ａｎｄ Ａ．Ｃｅｒａ
ｍｉ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７：５０５−５１８（１９８８）
；Ｌ．Ｊ．Ｏｌｄ、Ｓｃｉ．Ａｍ．２５８：５９−７５（１９８８）；Ｗ．Ｆｉ
ｅｒｓ、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２８５：１９９−２２４（１９９１））。ＴＮＦ
−ファミリーリガンドは、ＴＮＦ−ファミリーレセプターと結合することによっ
て、このような種々の細胞応答を誘導する。
【０４９６】 （ＴＲ１４の上皮障害関連治療実施形態） 本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストは、１以上の生物学的活性を試験するためのアッセイに
おいて使用され得る。これらの本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド
、またはアゴニストもしくはアンタゴニストが、特定のアッセイにおいて活性を
示す場合、これらの分子は、その生物学的活性に関連する疾患に関与し得るよう
である。従って、これらのポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにアゴ
ニストまたはアンタゴニストは、関連する障害を処置するために使用され得る。
【０４９７】 ＴＲ１４ポリヌクレオチドおよび翻訳産物は、上皮細胞増殖、歯の発達、粘膜
層の成長、および上皮表面（毛包、汗腺、基底細胞、および真皮を含む）の成長
に関連する生物学的活性に関与すると考えられる。従って、本発明の組成物（本
発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体、ならびにそれらのフラグメ
ントおよび改変体を含む）は、異常なＴＲ１４活性に関連する疾患および／また
は障害の診断、検出および／または処置において使用され得る。好ましい実施形
態においては、本発明の組成物（ＴＲ１４ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよ
びＴＲ１４アゴニスト（本発明のペプチドおよび抗体を含む）ならびにそれらの
フラグメントおよび改変体を含む）は、上皮に関連する疾患および／または障害
（例えば、無汗性外胚葉性形成異常、発汗性外胚葉性形成異常、汗腺障害、静脈
潰瘍、乾癬、紅色汗疹疾患、創傷治癒、上皮起始の癌、男性型禿頭症、および／
または以下の「上皮細胞増殖および創傷治癒」のもとで記載されるような疾患お
よび／または障害）の診断、検出および／または処置において使用され得る。従
って、本発明のポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、上皮の疾患および／
または障害ならびに上皮細胞増殖疾患および／または障害を含むがこれらに限定
されない活性に関連する疾患および／または障害の診断、検出および／または処
置において有用である。
【０４９８】 より一般的には、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗
体は、以下の系に関連する疾患および／または障害の診断、検出および／または
処置のために有用であり得る。
【０４９９】 （上皮細胞増殖および創傷治癒） 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明のポリヌクレオチドまたは翻訳産
物、およびアゴニストまたはアンタゴニストを、治療目的のため、例えば、創傷
治癒の目的のために上皮細胞増殖および基底ケラチノサイトを刺激するため、な
らびに毛包産生および皮膚創傷の治癒を刺激するために、利用するためのプロセ
スが提供される。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニ
ストもしくはアンタゴニストは、以下を含む創傷治癒を刺激することにおいて臨
床的に有用であり得る：外科的創傷、切除の創傷、深い創傷（真皮および表皮の
損傷を含む）、眼組織の創傷、歯の組織の創傷、口腔の創傷、糖尿病性潰瘍、皮
膚の潰瘍、肘の潰瘍、動脈性の潰瘍、静脈うっ滞潰瘍、熱への曝露または化学物
質による熱傷、および他の異常な創傷治癒状態（例えば、尿毒症、栄養失調、ビ
タミン欠乏、ならびにステロイド、放射能療法および抗腫瘍性薬物および代謝拮
抗物質を用いる全身性処置に関連する合併症）。本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチド、およびアゴニストもしくはアンタゴニストは、皮膚の欠失後の
皮膚の回復を促進するために使用され得る。
【０５００】 特定の、好ましい実施形態においては、ＴＲ１４ポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチド、ならびにＴＲ１４レセプターをアゴナイズする抗体（上記の抗体の節
で記載したような）は、上皮細胞増殖および／または発達を刺激して、この節に
記載される疾患および障害を寛解させる。タンパク質のＴＮＦファミリーのメン
バーは、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を介してシグナル伝達することが知られて
いる。ＮＦ−κＢは、広範な特定の薬剤によって活性化されて細胞活性化および
分化を刺激する転写因子である。本発明のＴＲ１４レセプターは、ＮＦ−κＢ経
路を介してシグナル伝達して細胞の増殖および発達を活性化すると考えられる。
従って、本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにＴＲ
１４をアゴナイズする抗体およびペプチドを本発明に従って使用して、ＮＦ−κ
Ｂ媒介上皮細胞増殖を刺激し、それによって上記の上皮障害を処置し得る。
【０５０１】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストまたはアン
タゴニストはまた、肝細胞増殖、および肺、乳房、膵臓、胃、小腸（ｓｍａｌｌ
ｉｎｔｅｓｔｉｎｇ）、および大腸における上皮細胞増殖における変化を生じ
ると考えられる。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニ
ストまたはアンタゴニストは、上皮細胞（例えば、皮脂細胞（ｓｅｂｏｃｙｔｅ
）、毛包、肝実質細胞、肺胞上皮細胞ＩＩ型（ｔｙｐｅ ＩＩ ｐｎｅｕｍｏｃ
ｙｔｅ）、ムチン産生杯細胞、および他の上皮細胞、ならびに皮膚、肺、肝臓、
および胃腸管内に含まれるそれらの先祖）の増殖を促進し得る。本発明のポリヌ
クレオチドまたはポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニストは、内皮細胞
、ケラチノサイト、および基底ケラチノサイトの増殖を促進し得る。
【０５０２】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストまたはアン
タゴニストは、創傷床（ｗｏｕｎｄ ｂｅｄ）への皮膚移植片の付着を増大する
ため、および創傷床からの再上皮形成を刺激するために使用され得る。以下は、
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニス
トが創傷床への付着を増大するために使用され得る、移植片の型である：自家移
植片、人工皮膚、同種移植片（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）、自己植皮片、自己表皮移
植片（ａｕｔｏｅｐｄｅｒｍｉｃ ｇｒａｆｔ）、無血管性（ａｖａｃｕｌａｒ
）移植片、ブレア−ブラウン移植片、骨移植片、胚胎組織移植片、真皮移植片、
遅延移植片、皮膚移植片、表皮移植片、筋膜移植片、全層皮膚移植片、異種移植
片（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、異種移植片（ｘｅｎｏｇｒａｆ
ｔ）、同種移植片（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、増殖性移植片、層板
状の移植片、網状移植片、粘膜移植片、オリエ−ティールシュ移植片、大網移植
片（ｏｍｅｎｐａｌ ｇｒａｆｔ）、パッチの移植片、茎状移植片、全層移植片
（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｇｒａｆｔ）、分層植皮片、分層皮膚移植片。本発
明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストまたはアンタゴニ
ストは、皮膚の強度を助長するため、および高齢の皮膚の外見を改善するために
使用され得る。
【０５０３】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストまたはアン
タゴニストはまた、照射、化学療法処置またはウイルス感染から生じる腸の毒性
の副作用を低減するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチド、およびアゴニストまたはアンタゴニストは、小腸粘膜上で細胞保護的
な効果を有し得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴ
ニストまたはアンタゴニストはまた、化学療法およびウイルス感染から生じる粘
膜炎（ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ）（口粘膜）の治癒を刺激し得る。
【０５０４】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストまたはアン
タゴニストは、熱傷を含む、完全なおよび部分的な厚さの皮膚欠損における皮膚
の十分な再生（すなわち、毛包、汗腺、および皮脂腺の再増殖）、乾癬のような
他の皮膚欠損の処置においてさらに使用され得る。本発明のポリヌクレオチドま
たはポリペプチド、およびアゴニストまたはアンタゴニストは、表皮水疱症、こ
れらの損傷の再上皮形成を促進することによる頻繁な開放性かつ疼痛性の水疱を
生じる内在的な真皮への表皮の接着における欠損を処置するために使用され得る
。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストまたはアン
タゴニストはまた、胃潰瘍および十二指腸潰瘍を処置し、そして粘膜の内層の瘢
痕形成ならびにより迅速な腺の粘膜および十二指腸の粘膜の内層の再生による治
癒を助けるために使用され得る。炎症性腸疾患（例えば、クーロン病および潰瘍
性大腸結腸炎）は、それぞれ、小腸または大腸の粘膜表面の崩壊を生じる疾患で
ある。従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニス
トまたはアンタゴニストは、粘膜表面の再表面化（ｒｅｓｕｌｆａｃｉｎｇ）を
促進して、より迅速な治癒を助けるため、および炎症性腸疾患の進行を予防する
ために、使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、アゴニ
ストまたはアンタゴニストを用いる処置は、胃腸管全体の粘膜の産生に対して有
意な効果を有することが予測され、そして腸粘膜を、摂取されたかまたは外科手
術後の有害な物質から保護するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチド
またはポリペプチド、およびアゴニストまたはアンタゴニストは、過小発現に関
連する疾患を処置するために使用され得る。
【０５０５】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストま
たはアンタゴニストは、種々の病的状態に起因する肺への損傷を予防および治癒
するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およ
びアゴニストまたはアンタゴニストは、急性または慢性の肺損傷を予防または処
置するために、増殖および分化を刺激し得、そして肺胞および気管支（ｂｒｏｃ
ｈｉｏｌａｒ）上皮の修復を促進し得る。例えば、気管支上皮および肺胞（ａｖ
ｅｏｌｉ）の壊死を生じる、気腫（これは、肺胞の進行性の損失を生じる）およ
び吸入損傷（すなわち、煙の吸入および熱傷から生じる）は、本発明のポリヌク
レオチドまたはポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニストを使用して効果
的に処置され得る。また、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およ
びアゴニストまたはアンタゴニストは、肺胞上皮細胞ＩＩ型の増殖および分化を
刺激するために使用され得、これは、未熟な乳児における硝子膜疾患（例えば、
乳児呼吸窮迫症候群および気管支肺異形成症）のような疾患を処置または予防す
ることを助け得る。
【０５０６】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストまたはアン
タゴニストは、肝実質細胞の増殖および分化を刺激し得、そして従って、肝臓疾
患および病状（例えば、肝硬変により生じる劇症肝不全、肝炎ウイルスおよび毒
性物質（すなわち、アセトアミノフェン、四塩化炭素（ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒ
ａｈｏｌｏｒｉｄｅ）、および他の当該分野で公知の肝臓毒素）により生じる肝
臓損傷）を緩和または処置するために使用され得る。
【０５０７】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストま
たはアンタゴニストは、真性糖尿病の発症を処置または予防するために使用され
得る。新たにＩ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病と診断された患者において、いくつ
かの島細胞機能が残っている場合、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、およびアゴニストまたはアンタゴニストは、その疾患の持続性の発現を緩和
、遅延または予防するように、その島機能を維持するために使用され得る。また
、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、およびアゴニストまたはアン
タゴニストは、島細胞機能を改善または促進するための島細胞移植における補助
として使用され得る。
【０５０８】 （さらなる治療実施形態） 本発明のＴＲ１３核酸、ポリペプチド（タンパク質）、アゴニストおよび／ま
たはアンタゴニストは、不完全なＴＲ１３または欠乏したレベルのＴＲ１３によ
って（直接的または間接的に）媒介される任意の疾患または障害に罹患した患者
（例えば、哺乳動物、好ましくはヒト）に投与され得る。あるいは、遺伝子治療
アプローチは、このような疾患または障害を処置するために適用され得る。本発
明の１つの実施形態においては、ＴＲ１３ポリヌクレオチド配列は、ムテインＴ
Ｒ１３遺伝子（欠損遺伝子を含む）を検出するために使用される。ムテイン遺伝
子は、当業者に公知の技術を用いるインビトロ診断アッセイにおいて、および本
明細書中で開示されるＴＲ１３ヌクレオチド配列を、この遺伝子において欠損を
有している疑いのある患者由来のＴＲ１３遺伝子の配列と比較することによって
同定され得る。欠損遺伝子は、当業者に公知の技術を用いて正常なＴＲ１３コー
ド遺伝子で置換され得る。
【０５０９】 別の実施形態においては、本発明のＴＲ１３ポリペプチド、核酸、アゴニスト
および／またはアンタゴニストは、種々の細胞型でのＴＲ１３／ＴＲ１３リガン
ド相互作用を阻害することから生じる表現型効果を研究するための研究道具とし
て使用される。ＴＲ１３ポリペプチドおよびアンタゴニスト（例えば、ＴＲ１３
に対するモノクロナール抗体）はまた、ＴＲ１３またはＴＲ１３リガンドまたは
それらの相互作用を検出するためのインビトロアッセイにおいて使用され得る。
【０５１０】 本発明のＴＲ１４核酸、ポリペプチド（タンパク質）、アゴニストおよび／ま
たはアンタゴニストは、不完全なＴＲ１４または欠乏したレベルのＴＲ１４によ
って（直接的または間接的に）媒介される任意の疾患または障害に罹患した患者
（例えば、哺乳動物、好ましくはヒト）に投与され得る。あるいは、遺伝子治療
アプローチは、このような疾患または障害を処置するために適用され得る。本発
明の１つの実施形態においては、ＴＲ１４ポリヌクレオチド配列は、ムテインＴ
Ｒ１４遺伝子（欠損遺伝子を含む）を検出するために使用される。ムテイン遺伝
子は、当業者に公知の技術を用いるインビトロ診断アッセイにおいて、および本
明細書中で開示されるＴＲ１４ヌクレオチド配列を、この遺伝子において欠損を
有している疑いのある患者由来のＴＲ１４遺伝子の配列と比較することによって
同定され得る。欠損遺伝子は、当業者に公知の技術を用いて正常なＴＲ１４コー
ド遺伝子で置換され得る。
【０５１１】 別の実施形態においては、本発明のＴＲ１４ポリペプチド、核酸、アゴニスト
および／またはアンタゴニストは、種々の細胞型でのＴＲ１４／ＴＲ１４リガン
ド相互作用を阻害することから生じる表現型効果を研究するための研究道具とし
て使用される。ＴＲ１４ポリペプチドおよびアンタゴニスト（例えば、ＴＲ１４
に対するモノクロナール抗体）はまた、ＴＲ１４またはＴＲ１４リガンドまたは
それらの相互作用を検出するためのインビトロアッセイにおいて使用され得る。
【０５１２】 ＴＲ１３ポリペプチドを発現し、かつＴＲ１３リガンドに対する有効な細胞応
答を有すると考えられる細胞としては、脾臓腫、子宮内膜腫、成体小腸、大腸癌
、乳癌細胞株、休止Ｔ細胞、扁桃体、直腸、Ｔ細胞ヘルパー、松果体、アポトー
シスＴ細胞、精巣上体、大網、前立腺ＢＰＨ、骨巨細胞腫、子宮内膜間質細胞、
間質細胞、黒質、活性化Ｔ細胞、扁桃、および精巣組織が挙げられる。「ＴＮＦ
ファミリーリガンドに対する細胞応答」により、ＴＮＦファミリーリガンド（例
えば、本明細書中に記載されるＴＮＦリガンドのような）により誘導される、細
胞、細胞株、組織、組織培養物または患者に対する、任意の遺伝子型、表現型、
および／または形態型の変化が意図される。示されるように、このような細胞応
答は、ＴＮＦファミリーのリガンドに対する正常な生理学的応答だけでなく、増
加したアポトーシスまたはアポトーシスの阻害に関連する疾患をも含む。アポト
ーシスをプログラムされた細胞死は、免疫系の末梢Ｔリンパ球の欠失に関与する
生理学的メカニズムであり、その調節不全は、多くの異なる病原性のプロセスを
導き得る（Ｊ．Ｃ．Ａｍｅｉｓｅｎ、ＡＩＤＳ ８：１１９７−１２１３（１９
９４）；Ｐ．Ｈ．Ｋｒａｍｍｅｒら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６
：２７９−２８９（１９９４））。
【０５１３】 ＴＲ１４ポリペプチドを発現し、かつＴＲ１４リガンドに対する有効な細胞応
答を有すると考えられる細胞としては、活性化Ｔ細胞、子宮内膜、胸腺、および
１２週初期ヒト組織が挙げられる。「ＴＮＦファミリーリガンドに対する細胞応
答」により、ＴＮＦファミリーリガンド（例えば、本明細書中に記載されるＴＮ
Ｆリガンドのような）により誘導される、細胞、細胞株、組織、組織培養物また
は患者に対する、任意の遺伝子型、表現型、および／または形態型の変化が意図
される。示されるように、このような細胞応答は、ＴＮＦファミリーのリガンド
に対する正常な生理学的応答だけでなく、これらの生理学的応答の調節不全（例
えば、増加したアポトーシスまたはアポトーシスの阻害に関連する疾患のような
）をも含む。アポトーシスをプログラムされた細胞死は、免疫系の末梢Ｔリンパ
球の欠失に関与する生理学的メカニズムであり、その調節不全は、多くの異なる
病原性のプロセスを導き得る（Ｊ．Ｃ．Ａｍｅｉｓｅｎ、ＡＩＤＳ ８：１１９
７−１２１３（１９９４）；Ｐ．Ｈ．Ｋｒａｍｍｅｒら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２７９−２８９（１９９４））。
【０５１４】 増加した細胞生存またはアポトーシスの阻害に関連し、本発明のＴＲ１３ポリ
ヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアゴニストまたはアンタゴニスト
によって処置または予防され得る疾患としては、以下が挙げられるが、これらに
限定されない：癌（例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異を伴う癌、およびホル
モン依存性腫瘍（大腸癌、心臓腫瘍、膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、神経膠芽
細胞腫、肺癌、腸癌、精巣癌、胃癌、神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫、
内皮腫、骨芽細胞腫、骨巨細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳癌、前立腺癌、
カポジ肉腫および卵巣癌が挙げられるが、これらに限定されない））；自己免疫
障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬
変、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）病、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテ
マトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎および慢性関節リウマチ）；ウイルス感染
（例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイルスおよびアデノウイルス）；炎症
；対宿主性移植片病；急性移植片拒絶および慢性移植片拒絶。好ましい実施形態
において、本発明のＴＲ１３核酸、ポリぺプチド、アゴニストおよび／またはア
ンタゴニストは、特に上記に列挙されるか、または以下の段落に列挙される癌の
、増殖、進行および／または転移を阻害するために使用される。
【０５１５】 増加した細胞生存に関連し、本発明のＴＲ１３ポリヌクレオチド、ポリペプチ
ド、アゴニストおよび／またはアンタゴニストによって処置または予防され得る
さらなる疾患または状態としては、以下のような悪性腫瘍および関連する障害の
進行、および／または転移が挙げられるが、これらに限定されない：白血病（急
性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性白血
病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血病を含
む））、および慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性
リンパ球性白血病）を含む）、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン
病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクロ大グロブ
リン血症、Ｈ鎖病、および充実性腫瘍（肉腫および癌腫（例えば、線維肉腫、粘
液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リン
パ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、
横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞
癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管
支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィル
ムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、
星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞
腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神
経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫）を含むが、これらに限定されない）。好まし
い実施形態においては、ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、アゴニストおよび／また
はアンタゴニストは、上記に列挙される疾患および障害を処置するために使用さ
れる。
【０５１６】 さらなる実施形態においては、ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、アゴニストおよ
び／またはアンタゴニストは、脾臓腫、子宮内膜種、大腸癌、乳癌、前立腺ＢＰ
Ｈおよび／または骨肉腫を処置するために使用される。
【０５１７】 従って、好ましい実施形態においては、本発明のＴＲ１３ポリヌクレオチドも
しくはポリペプチドおよびそれらのアゴニストまたはアンタゴニストは、自己免
疫疾患を処置または予防するため、ならびに／あるいは癌の増殖、進行、および
／または転移を阻害するために使用され、このような癌としては以下が挙げられ
るが、これらに限定されない：本明細書中に記載された癌（例えば、膵臓癌、子
宮内膜癌、大腸癌、乳癌、骨肉腫（ｏｓｔｅｏｃａｒｃｏｍａ）、ならびにリン
パ球性白血病（例えば、ＭＬＬおよび慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含む）
および濾胞性リンパ腫）。別の実施形態においては、本発明のＴＲ１３ポリヌク
レオチドもしくはポリペプチドおよび／またはそのアゴニストもしくはアンタゴ
ニストを使用して、癌細胞または癌組織（例えば、Ｔ細胞系関連癌およびＢ細胞
系関連癌（例えば、ＣＬＬおよびＭＬＬ）、リンパ球性白血病、またはリンパ腫
）を活性化、分化または増殖させ、そしてそれによって細胞を、癌治療（例えば
、化学療法または放射線療法）に対してより脆弱にする。
【０５１８】 増加したアポトーシスに関連し、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドな
らびに／あるいはアゴニストまたはアンタゴニストによって処置または予防され
得る疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＡＩＤＳ；神
経変性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症
、色素性網膜炎、小脳変性；および脳腫瘍または事前の関連する疾患）；自己免
疫障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝
硬変、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）病、クローン病、多発性筋炎、全身性エリ
テマトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎および慢性関節リウマチ）；脊髄形成異
常症候群（例えば、再生不良性貧血）、対宿主性移植片病、虚血性傷害（例えば
、心筋梗塞、発作および再灌流障害により引き起こされる虚血性傷害）、肝臓傷
害（例えば、肝炎関連肝臓傷害、虚血／再灌流傷害、胆汁不全（ｃｈｏｌｅｓｔ
ｏｓｉｓ）（胆管傷害）および肝臓癌）；毒素誘導肝臓疾患（例えば、アルコー
ルにより引き起こされるような）、敗血症性ショック、悪液質および食欲不振。
好ましい実施形態においては、ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、アゴニストおよび
／またはアンタゴニストを使用して、上記に列挙される疾患および障害を処置す
る。
【０５１９】 増加した細胞生存またはアポトーシスの阻害に関連し、本発明のＴＲ１４ポリ
ヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアゴニストまたはアンタゴニスト
によって処置または予防され得る疾患としては、以下が挙げられるが、これらに
限定されない：癌（例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異を伴う癌、およびホル
モン依存性腫瘍（大腸癌、心臓腫瘍、膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、神経膠芽
細胞腫、肺癌、腸癌、精巣癌、胃癌、神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫、
内皮腫、骨芽細胞腫、骨巨細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳癌、前立腺癌、
カポジ肉腫および卵巣癌が挙げられるが、これらに限定されない））；自己免疫
障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬
変、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）病、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテ
マトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎および慢性関節リウマチ）；ウイルス感染
（例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイルスおよびアデノウイルス）；炎症
；対宿主性移植片病；急性移植片拒絶および慢性移植片拒絶。好ましい実施形態
において、本発明のＴＲ１４核酸、ポリぺプチド、アゴニストおよび／またはア
ンタゴニストは、特に上記に列挙されるか、または以下の段落に列挙される癌の
、増殖、進行および／または転移を阻害するために使用される。
【０５２０】 増加した細胞生存に関連し、本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチド、ポリペプチ
ド、および／またはアゴニストまたはアンタゴニストによって処置または予防さ
れ得るさらなる疾患または状態としては、以下のような悪性腫瘍および関連する
障害の進行、および／または転移が挙げられるが、これらに限定されない：白血
病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球
性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血
病を含む））、および慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病およ
び慢性リンパ球性白血病）を含む）、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホ
ジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクロ大
グロブリン血症、Ｈ鎖病、および充実性腫瘍（肉腫および癌腫（例えば、線維肉
腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫
、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋
肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基
底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌
、気管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、
ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経
膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管
芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色
腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫を含むが、これらに限定されない）。好
ましい実施形態においては、ＴＲ１４核酸、ポリペプチド、アゴニストおよび／
またはアンタゴニストを使用して、上記に列挙される疾患および障害を処置する
。
【０５２１】 従って、好ましい実施形態においては、本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチドも
しくはポリペプチドおよびそれらのアゴニストまたはアンタゴニストは、自己免
疫疾患を処置または予防するため、ならびに／あるいは癌の増殖、進行、および
／または転移を阻害するために使用され、このような癌としては以下が挙げられ
るが、これらに限定されない：本明細書中に開示された癌（例えば、リンパ球性
白血病（例えば、ＭＬＬおよび慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含む）および
濾胞性リンパ腫）。別の実施形態においては、本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチ
ドもしくはポリペプチドおよび／またはそのアゴニストもしくはアンタゴニスト
を使用して、癌細胞または癌組織（例えば、Ｔ細胞系関連癌、Ｂ細胞系関連癌（
例えば、ＣＬＬおよびＭＬＬ）、リンパ球性白血病、またはリンパ腫）を活性化
、分化または増殖させ、そしてそれによって細胞を、癌治療（例えば、化学療法
または放射線療法）に対してより脆弱にする。
【０５２２】 増加したアポトーシスに関連し、本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチド、ポリペ
プチドならびに／あるいはアゴニストまたはアンタゴニストによって処置または
予防され得る疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＡＩ
ＤＳ；神経変性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側
索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性；および脳腫瘍または事前の関連する疾患）
；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、
胆汁性肝硬変、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）病、クローン病、多発性筋炎、全
身性エリテマトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎および慢性関節リウマチ）；脊
髄形成異常症候群（例えば、再生不良性貧血）、対宿主性移植片病、虚血性傷害
（例えば、心筋梗塞、発作および再灌流障害により引き起こされる虚血性傷害）
、肝臓傷害（例えば、肝炎関連肝臓傷害、虚血／再灌流傷害、胆汁不全（ｃｈｏ
ｌｅｓｔｏｓｉｓ）（胆管傷害）および肝臓癌）；毒素誘導肝臓疾患（例えば、
アルコールにより引き起こされるような）、敗血症性ショック、悪液質および食
欲不振）。好ましい実施形態においては、ＴＲ１４核酸、ポリペプチド、アゴニ
ストおよび／またはアンタゴニストを使用して、上記に列挙される疾患および障
害を処置する。
【０５２３】 ＨＩＶに関連する多くの病理（ＨＩＶ誘導腎症およびＨＩＶ脳炎を含む）は、
アポトーシスによって媒介される。従って、さらなる好ましい実施形態において
は、本発明のＴＲ１３核酸、ポリペプチド、ならびに／あるいはＴＲ１３アゴニ
ストまたはアンタゴニストは、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳに関連する病理を処置す
るために使用される。
【０５２４】 ＨＩＶに関連する多くの病理（ＨＩＶ誘導腎症およびＨＩＶ脳炎を含む）は、
アポトーシスによって媒介される。従って、さらなる好ましい実施形態において
は、本発明のＴＲ１４核酸、ポリペプチド、ならびに／あるいはＴＲ１４アゴニ
ストまたはアンタゴニストは、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳに関連する病理を処置す
るために使用される。
【０５２５】 本発明の別の実施形態は、ＨＩＶ感染患者におけるＴ細胞のＴＮＦファミリー
メンバー媒介細胞死を減少させるためのＴＲ１３の使用に関する。ＡＩＤＳを規
定する免疫不全の状態は、ＣＤ４+Ｔリンパ球の数および機能の減少の二次的な
ものである。最近の報告は、ＣＤ４+Ｔ細胞の１日の損失は、３．５×１０7細胞
と２×１０9細胞との間であると見積もる（Ｗｅｉら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：
１１７〜１２２（１９９５））。ＨＩＶ感染の状況におけるＣＤ４+Ｔ細胞欠乏
の１つの原因は、ＨＩＶ誘導アポトーシスであると考えられている（例えば、Ｍ
ｅｙａａｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：２１７〜２１９、１９９２；Ｇｒｏ
ｕｘら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：３３１，１９９２；およびＯｙａｉｚ
ｕら、Ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ
ＨＩＶ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ＡｎｄｒｉｅｕおよびＬｕ（編）Ｐｌｅｎｕｍ
Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５，１０１〜１１４頁を参照のこと）。
実際に、ＨＩＶ誘導性アポトーシス細胞死は、インビトロで実証されただけでは
なく、より重要なことに、感染した個体においてもまた実証された（Ｊ．Ｃ．Ａ
ｍｅｉｓｅｎ、ＡＩＤＳ ８：１１９７−１２１３（１９９４）；Ｆｉｎｋｅｌ
，Ｔ．Ｈ．およびＮ．Ｋ．Ｂａｎｄａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
６：６０５−６１５（１９９５）；Ｃ．Ａ．Ｍｕｒｏ−Ｃａｃｈｏら、Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１５４：５５５５−５５６６（１９９５））。さらに、アポトーシ
スおよびＣＤ４+Ｔリンパ球の枯渇は、ＡＩＤＳの異なる動物モデルに密接に相
関し（Ｔ．Ｂｒｕｎｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：４４１−４４４（１９９
５）；Ｍ．Ｌ．Ｇｏｕｇｅｏｎら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉ
ｒｕｓｅｓ ９：５５３−５６３（１９９３））、そしてアポトーシスは、ウイ
ルス複製がＡＩＤＳを生じない動物モデルにおいては観察されない（同書）。さ
らなるデータは、ＨＩＶに感染した個体由来の感染していないＴリンパ球である
が、プライムされるか活性化されたＴリンパ球が、ＴＮＦファミリーのリガンド
ＦａｓＬと遭遇した後にアポトーシスを受けることを示す。ＨＩＶ感染後に死を
生じる単球細胞株を使用して、Ｕ９３７細胞のＨＩＶでの感染が、ＦａｓＬの新
規の発現を生じ、そしてＦａｓＬが、ＨＩＶ誘導性アポトーシスを媒介すること
が実証された（Ａ．Ｄ．Ｂａｄｌｅｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：１９９−２０
６（１９９６））。さらに、ＴＮＦファミリーのリガンドは、感染されていない
マクロファージにおいて検出可能であり、そしてその発現は、ＨＩＶ感染の後に
上方制御され、感染されていないＣＤ４ Ｔリンパ球の選択的殺傷を生じた（同
書）。従って、本発明によって、ＨＩＶ+個体を処置するための方法が提供され
る。この方法は、本発明のＴＲ１３ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび／ま
たはＴＲ１３アゴニストまたはアンタゴニストを投与して、ＣＤ４+Ｔリンパ球
の選択的な死滅を減少させる工程を包含する。投与の様式および投薬量は、以下
に詳細に考察される。
【０５２６】 活性化ヒトＴ細胞は、ＣＤ３／Ｔ細胞レセプター複合体（活性化誘導性細胞死
（ＡＩＣＤ）と呼ばれるプロセス）を通じる誘発の際に、プログラム細胞死（ア
ポトーシス）を受けることを誘導される。ＨＩＶに感染した無症候の個体から単
離されたＣＤ４+Ｔ細胞のＡＩＣＤが報告された（Ｇｒｏｕｘら、前出）。従っ
て、ＡＩＣＤは、ＣＤ４+Ｔ細胞の枯渇およびＨＩＶに感染した個体におけるＡ
ＩＤＳへの進行に役割を果たし得る。従って、本発明は、ＨＩＶ患者における腫
瘍壊死因子ファミリーメンバー媒介性Ｔ細胞死を阻害する方法であって、患者に
、本発明のＴＲ１３ポリペプチド（好ましくは、可溶性ＴＲ１３ポリペプチド）
を投与する工程を包含する方法を提供する。一つの実施形態において、ＴＲ１３
での処置を開始する場合、患者は無症候である。所望であれば、処置の前に、末
梢血Ｔ細胞は、ＨＩＶ患者から抽出され得、そして当該分野において公知の手順
による腫瘍壊死因子ファミリーメンバー媒介性細胞死に対する感受性を試験され
得る。一つの実施形態において、患者の血液または血漿は、エキソビボでＴＲ１
３と接触される。ＴＲ１３は、当該分野で公知の手順によって、適切なクロマト
グラフィーマトリックスに結合され得る。患者の血液または血漿は、患者に戻さ
れる前に、マトリックスに結合したＴＲ１３を含むクロマトグラフィーカラムを
通って流れる。固定されたＴＲ１３がＴＲＡＩＬまたは別のＴＮＦファミリーメ
ンバーに結合する場合には、患者の血液からＴＲＡＩＬおよび／または他のＴＮ
Ｆファミリーメンバータンパク質が除去される。
【０５２７】 さらなる実施形態においては、本発明のＴＲ１３ポリペプチド、ポリヌクレオ
チド、および／またはアゴニストまたはアンタゴニストは、Ｔ細胞アポトーシス
のインヒビターと組み合わせて投与される。例えば、ＴＲＡＩＬ媒介アポトーシ
スおよびＦａｓ媒介アポトーシスはまた、ＨＩＶ個体におけるＴ細胞の損失に関
係してきた（例えば、Ｋａｔｓｉｋｉｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：２０
２９〜２０３６（１９９５）を参照のこと）。従って、Ｆａｓリガンド媒介およ
び／またはＴＲＡＩＬ媒介Ｔ細胞死の両方に対して感受性の患者は、ＴＲＡＩＬ
／ＴＲＡＩＬレセプター相互作用をブロックする薬剤および／またはＦａｓリガ
ンド／Ｆａｓ相互作用をブロックする薬剤を用いて処置され得る。Ｆａｓに対す
るＦａｓリガンドの結合をブロックするための適切な薬剤としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：可溶性Ｆａｓポリペプチド；可溶性Ｆａｓポ
リペプチドの多量体形態（例えば、ｓＦａｓ／Ｆｃの二量体）；アポトーシスを
生じる生物学的シグナルを伝達することなく、Ｆａｓに結合する抗Ｆａｓ抗体；
ＦａｓへのＦａｓリガンドの結合をブロックする抗Ｆａｓリガンド抗体；および
Ｆａｓを結合するが、アポトーシスを生じる生物学的シグナルを伝達しないＦａ
ｓリガンドのムテイン。好ましくは、この方法に従って使用される抗体は、モノ
クロナール抗体である。Ｆａｓリガンド／Ｆａｓ相互作用をブロックする（抗Ｆ
ａｓモノクロナール抗体をブロックすることを含む）ための適切な薬剤の例は、
国際出願公開ＷＯ９５／１０５４０（本明細書中に参考として援用される）に記
載される。
【０５２８】 ＴＲＡＩＬのＴＲＡＩＬレセプターへの結合、またはＦＡＳリガンドのＦＡＳ
への結合をブロックし、本発明の核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニスト
またはアンタゴニストを用いて投与され得る適切な薬剤としては、可溶性ＴＲＡ
ＩＬレセプターポリペプチド（例えば、ＯＰＧ、ＤＲ４の可溶性形態（国際出願
公開番号ＷＯ ９８／３２８５６）；ＴＲ５（国際出願公開番号ＷＯ ９８／３
０６９３）；およびＤＲ５（国際出願公開番号ＷＯ ９８／４１６２９）；可溶
性ＴＲＡＩＬレセプターポリペプチドの多量体形態；ならびにアポトーシスを生
じる生物学的シグナルを伝達せずにＴＲＡＩＬレセプターを結合するＴＲＡＩＬ
レセプター抗体、１つ以上のＴＲＡＩＬレセプターへのＴＲＡＩＬの結合をブロ
ックする抗ＴＲＡＩＬ抗体、およびＴＲＡＩＬレセプターを結合するが、アポト
ーシスを生じる生物学的シグナルを伝達しないＴＲＡＩＬのムテインが挙げられ
るが、これらに限定されない。好ましくは、この方法に従って使用される抗体は
、モノクローナル抗体である。
【０５２９】 本発明の別の実施形態は、ＨＩＶ感染患者におけるＴ細胞のＴＮＦファミリー
メンバー媒介細胞死を減少させるためのＴＲ１４の使用に関する。ＡＩＤＳを規
定する免疫不全の状態は、ＣＤ４+Ｔリンパ球の数および機能の減少の二次的な
ものである。最近の報告は、ＣＤ４+Ｔ細胞の１日の損失は、３．５×１０7細胞
と２×１０9細胞との間であると見積もる（Ｗｅｉら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：
１１７〜１２２（１９９５））。ＨＩＶ感染の状況におけるＣＤ４+Ｔ細胞欠乏
の１つの原因は、ＨＩＶ誘導アポトーシスであると考えられている（例えば、Ｍ
ｅｙａａｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：２１７〜２１９、１９９２；Ｇｒｏ
ｕｘら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：３３１，１９９２；およびＯｙａｉｚ
ｕら、Ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ
ＨＩＶ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ＡｎｄｒｉｅｕおよびＬｕ（編）Ｐｌｅｎｕｍ
Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５，１０１〜１１４頁を参照のこと）。
実際に、ＨＩＶ誘導性アポトーシス細胞死は、インビトロで実証されただけでは
なく、より重要なことに、感染した個体においてもまた実証された（Ｊ．Ｃ．Ａ
ｍｅｉｓｅｎ、ＡＩＤＳ ８：１１９７−１２１３（１９９４）；Ｆｉｎｋｅｌ
，Ｔ．Ｈ．およびＮ．Ｋ．Ｂａｎｄａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
６：６０５−６１５（１９９５）；Ｃ．Ａ．Ｍｕｒｏ−Ｃａｃｈｏら、Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１５４：５５５５−５５６６（１９９５））。さらに、アポトーシ
スおよびＣＤ４+Ｔリンパ球の枯渇は、ＡＩＤＳの異なる動物モデルに密接に相
関し（Ｔ．Ｂｒｕｎｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：４４１−４４４（１９９
５）；Ｍ．Ｌ．Ｇｏｕｇｅｏｎら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉ
ｒｕｓｅｓ ９：５５３−５６３（１９９３））、そしてアポトーシスは、ウイ
ルス複製がＡＩＤＳを生じない動物モデルにおいては観察されない（同書）。さ
らなるデータは、ＨＩＶに感染した個体由来の感染していないＴリンパ球である
が、プライムされるか活性化されたＴリンパ球が、ＴＮＦファミリーのリガンド
ＦａｓＬと遭遇した後にアポトーシスを受けることを示す。ＨＩＶ感染後に死を
生じる単球細胞株を使用して、Ｕ９３７細胞のＨＩＶでの感染が、ＦａｓＬの新
規の発現を生じ、そしてＦａｓＬが、ＨＩＶ誘導性アポトーシスを媒介すること
が実証された（Ａ．Ｄ．Ｂａｄｌｅｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：１９９−２０
６（１９９６））。さらに、ＴＮＦファミリーのリガンドは、感染されていない
マクロファージにおいて検出可能であり、そしてその発現は、ＨＩＶ感染の後に
上方制御され、感染されていないＣＤ４ Ｔリンパ球の選択的殺傷を生じた（同
書）。従って、本発明によって、ＨＩＶ+個体を処置するための方法が提供され
る。この方法は、本発明のＴＲ１４ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび／ま
たはＴＲ１４アゴニストまたはアンタゴニストを投与して、ＣＤ４+Ｔリンパ球
の選択的な死滅を減少させる工程を包含する。投与の様式および投薬量は、以下
に詳細に考察される。
【０５３０】 活性化ヒトＴ細胞は、ＣＤ３／Ｔ細胞レセプター複合体（活性化誘導性細胞死
（ＡＩＣＤ）と呼ばれるプロセス）を通じる誘発の際に、プログラム細胞死（ア
ポトーシス）を受けることを誘導される。ＨＩＶに感染した無症候の個体から単
離されたＣＤ４+Ｔ細胞のＡＩＣＤが報告された（Ｇｒｏｕｘら、前出）。従っ
て、ＡＩＣＤは、ＣＤ４+Ｔ細胞の枯渇およびＨＩＶに感染した個体におけるＡ
ＩＤＳへの進行に役割を果たし得る。従って、本発明は、ＨＩＶ患者における腫
瘍壊死因子ファミリーメンバー媒介性Ｔ細胞死を阻害する方法であって、患者に
、本発明のＴＲ１４ポリペプチド（好ましくは、可溶性ＴＲ１４ポリペプチド）
を投与する工程を包含する方法を提供する。一つの実施形態において、ＴＲ１４
での処置を開始する場合、患者は無症候である。所望であれば、処置の前に、末
梢血Ｔ細胞は、ＨＩＶ患者から抽出され得、そして当該分野において公知の手順
によるＴＮＦファミリーメンバー媒介性細胞死に対する感受性を試験され得る。
一つの実施形態において、患者の血液または血漿は、エキソビボでＴＲ１４と接
触される。ＴＲ１４は、当該分野で公知の手順によって、適切なクロマトグラフ
ィーマトリックスに結合され得る。患者の血液または血漿は、患者に戻される前
に、マトリックスに結合したＴＲ１４を含むクロマトグラフィーカラムを通って
流れる。固定されたＴＲ１４がＴＲＡＩＬまたは別のＴＮＦファミリーメンバー
に結合する場合には、患者の血液からＴＲＡＩＬおよび／または他のＴＮＦファ
ミリーメンバータンパク質が除去される。
【０５３１】 さらなる実施形態においては、本発明のＴＲ１４ポリペプチド、ポリヌクレオ
チド、および／またはアゴニストまたはアンタゴニストは、Ｔ細胞アポトーシス
のインヒビターと組み合わせて投与される。例えば、ＴＲＡＩＬ媒介アポトーシ
スおよびＦａｓ媒介アポトーシスはまた、ＨＩＶ個体におけるＴ細胞の損失に関
係してきた（例えば、Ｋａｔｓｉｋｉｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：２０
２９〜２０３６（１９９５）を参照のこと）。従って、Ｆａｓリガンド媒介およ
び／またはＴＲＡＩＬ媒介Ｔ細胞死の両方に対して感受性の患者は、ＴＲＡＩＬ
／ＴＲＡＩＬレセプター相互作用をブロックする薬剤および／またはＦａｓリガ
ンド／Ｆａｓ相互作用をブロックする薬剤を用いて処置され得る。Ｆａｓに対す
るＦａｓリガンドの結合をブロックするための適切な薬剤としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：可溶性Ｆａｓポリペプチド；可溶性Ｆａｓポ
リペプチドの多量体形態（例えば、ｓＦａｓ／Ｆｃの二量体）；アポトーシスを
生じる生物学的シグナルを伝達することなく、Ｆａｓに結合する抗Ｆａｓ抗体；
ＦａｓへのＦａｓリガンドの結合をブロックする抗Ｆａｓリガンド抗体；および
Ｆａｓを結合するが、アポトーシスを生じる生物学的シグナルを伝達しないＦａ
ｓリガンドのムテイン。好ましくは、この方法に従って使用される抗体は、モノ
クロナール抗体である。Ｆａｓリガンド／Ｆａｓ相互作用をブロックする（抗Ｆ
ａｓモノクロナール抗体をブロックすることを含む）ための適切な薬剤の例は、
国際出願公開ＷＯ９５／１０５４０（本明細書中に参考として援用される）に記
載される。
【０５３２】 ＴＲＡＩＬのＴＲＡＩＬレセプターへの結合、またはＦＡＳリガンドのＦＡＳ
への結合をブロックし、本発明の核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニスト
またはアンタゴニストを用いて投与され得る適切な薬剤としては、可溶性ＴＲＡ
ＩＬレセプターポリペプチド（例えば、ＯＰＧ、ＤＲ４の可溶性形態（国際出願
公開番号ＷＯ ９８／３２８５６）；ＴＲ５（国際出願公開番号ＷＯ ９８／３
０６９３）；およびＤＲ５（国際出願公開番号ＷＯ ９８／４１６２９）；可溶
性ＴＲＡＩＬレセプターポリペプチドの多量体形態；ならびにアポトーシスを生
じる生物学的シグナルを伝達せずにＴＲＡＩＬレセプターを結合するＴＲＡＩＬ
レセプター抗体、１つ以上のＴＲＡＩＬレセプターへのＴＲＡＩＬの結合をブロ
ックする抗ＴＲＡＩＬ抗体、およびＴＲＡＩＬレセプターを結合するが、アポト
ーシスを生じる生物学的シグナルを伝達しないＴＲＡＩＬのムテインが挙げられ
るが、これらに限定されない。好ましくは、この方法に従って使用される抗体は
、モノクローナル抗体である。
【０５３３】 本発明のＴＲ１３ポリペプチド、核酸、および／またはアゴニストまたはアン
タゴニストは、四肢虚血のような末梢性動脈疾患を含む、心臓血管障害を処置す
るために使用され得る。
【０５３４】 本発明のＴＲ１４ポリペプチド、核酸、および／またはアゴニストまたはアン
タゴニストは、四肢虚血のような末梢性動脈疾患を含む、心臓血管障害を処置す
るために使用され得る。
【０５３５】 心臓血管障害としては、動動脈瘻（ａｒｔｅｒｉｏ−ａｒｔｅｒｉａｌ ｆｉ
ｓｔｕｌａ）、動静脈瘻、大脳動静脈先天異常、先天性心欠陥（ｃｏｎｇｅｎｉ
ｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｅｆｅｃｔｓ）、肺動脈弁閉鎖症、およびシミター症候
群のような心臓血管異常が挙げられる。先天性心欠陥としては、大動脈縮窄、三
房心、冠状脈管奇形（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｖｅｓｓｅｌ ａｎｏｍａｌｉｅｓ）
、交差心、右胸心、開存性動脈管（ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒｉ
ｏｓｕｓ）、エブスタイン奇形、アイゼンメンガー複合体、左心室発育不全症候
群、左胸心、ファロー四徴症、大血管転位症、両大血管右室起始症、三尖弁閉鎖
症、動脈管遺残、および心中隔欠損症（ｈｅａｒｔ ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃ
ｔｓ）（例えば、大動脈肺動脈中隔欠損症（ａｏｒｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓ
ｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ）、心内膜床欠損症、リュタンバッシェ症候群、ファ
ロー三徴症、心室心中隔欠損症（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｈｅａｒｔ ｓｅｐ
ｔａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ））、および小血管の凝塊によって特徴付けられる状態
が挙げられる。
【０５３６】 心臓血管障害としてはまた、不整脈、カルチノイド心臓病、高心拍出量（ｈｉ
ｇｈ ｃａｒｄｉａｃ ｏｕｔｐｕｔ）、低心拍出量（ｌｏｗ ｃａｒｄｉａｃ
ｏｕｔｐｕｔ）、心タンポナーデ、心内膜炎（細菌性を含む）、心臓動脈瘤、
心停止、うっ血性心不全、うっ血性心筋症、発作性呼吸困難、心臓水腫、心肥大
、うっ血性心筋症、左心室肥大、右心室肥大、梗塞後心破裂（ｐｏｓｔ−ｉｎｆ
ａｒｃｔｉｏｎ ｈｅａｒｔ ｒｕｐｔｕｒｅ）、心室中隔破裂、心臓弁疾患、
心筋疾患、心筋虚血、心内膜液浸出、心外膜炎（梗塞性および結核性を含む）、
気心膜症、心膜切開後症候群、右心疾患、リウマチ性心疾患、心室機能不全、充
血、心臓血管妊娠合併症（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ
ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、シミター症候群、心血管梅毒、および心血管
結核（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のような心
臓病が挙げられる。
【０５３７】 不整脈としては、以下が挙げられる：洞不整脈、心房細動、心房粗動、徐脈、
期外収縮、アダムズ−ストークス症候群、脚ブロック、洞ブロック、長ＱＴ症候
群、副収縮、ローン−ギャノング−レヴァイン症候群、マハイム型早期興奮症候
群、ウォルフ−パーキンソン−ホワイト症候群、洞不全症候群、頻拍、および心
室細動。頻拍としては、以下が挙げられる：発作頻拍、上室頻拍、加速性心室固
有調律、房室結節性再入頻拍、異所性心房頻拍、異所性接合部頻拍、洞房結節性
再入頻拍、洞頻拍、Ｔｏｒｓａｄｅｓ ｄｅ Ｐｏｉｎｔｅｓおよび心室頻拍。
【０５３８】 心臓弁疾患としては、以下が挙げられる：大動脈弁不全、大動脈弁狭窄、雑音
（ｈｅａｒ ｍｕｒｍｕｒｓ）、大動脈弁脱出、僧帽弁脱出、三尖弁脱出、僧帽
弁不全、僧帽弁狭窄、肺動脈弁閉鎖、肺動脈弁不全、肺動脈弁狭窄、三尖弁閉鎖
、三尖弁不全、および三尖弁狭窄。
【０５３９】 心筋疾患としては、以下が挙げられる：アルコール性心筋症、うっ血性心筋症
、肥大型心筋症、弁下部大動脈狭搾症、弁下部肺動脈狭搾症、拘束型心筋症、シ
ャーガス心筋症、心内膜線維弾性症、心内膜心筋線維症、キーンズ症候群、心筋
再灌流障害、および心筋炎。
【０５４０】 心筋性虚血としては、狭心症、冠動脈瘤、冠動脈硬化、冠動脈血栓症、冠動脈
血管痙攣、心筋梗塞、および心筋気絶（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｓｔｕｎｎｉｎ
ｇ）のような冠動脈疾患が挙げられる。
【０５４１】 心臓血管疾患としてはまた、動脈瘤、血管形成異常、血管腫症、細菌性血管腫
症状、ヒッペル−リンダラ疾患（Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ Ｄｉｓｅａｓｅ
）、クリペル−トルノネー−ウェーバー症候群、スタージ−ウェーバー症候群、
血管運動神経性水腫、大動脈疾患、高安動脈炎、大動脈炎、ルリーシュ症候群、
動脈閉塞疾患、動脈炎、動脈内膜炎（ｅｎａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、結節性多発性
動脈炎、脳血管障害、糖尿病性血管障害、糖尿病性網膜症、塞栓症、血栓症、先
端紅痛症、痔、肝静脈閉塞障害、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管障害、静脈炎
、肺静脈閉塞疾患、レーノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、網膜静脈閉塞、シミター症
候群、上大静脈症候群、毛細血管拡張症、毛細血管拡張性運動失調（ａｔａｃｉ
ａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、遺伝性出血性毛細管拡張症、精索静脈瘤
、拡張蛇行静脈、静脈瘤性潰瘍、脈管炎、血栓性微小血管障害（例えば、血栓性
血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）および溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ））、ならび
に静脈機能不全のような血管疾患が挙げられる。
【０５４２】 動脈瘤としては、解離性動脈瘤、偽動脈瘤、感染した動脈瘤、破裂した動脈瘤
、大動脈性動脈瘤、大脳性動脈瘤、冠動脈瘤、心動脈瘤、および腸骨性動脈瘤が
挙げられる。
【０５４３】 動脈閉塞疾患としては、動脈硬化症、間欠性跛行、頸動脈狭窄症、線維筋性形
成異常、腸間膜性血管閉塞、モヤモヤ病、腎動脈閉塞、網膜動脈閉塞、および閉
塞性血栓性血管炎が挙げられる。
【０５４４】 脳血管障害としては、頸動脈疾患、脳のアミロイド血管症、大脳動脈瘤、大脳
無酸素症、大脳動脈硬化、大脳動静脈先天異常、大脳動脈疾患、大脳の閉塞症お
よび血栓症、頸動脈血栓症、洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、大脳出血、硬膜
上血腫、硬膜下血腫、クモ膜下出血（ｓｕｂａｒａｘｈｎｏｉｄ ｈｅｍｏｒｒ
ｈａｇｅ）、大脳梗塞、大脳虚血（一過性を含む）、鎖骨下動脈盗血症候群、室
周白軟化症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃｉａ）、
血管性頭痛、群発性頭痛、片頭痛、および椎骨基部（ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉ
ｌａｒ）機能不全が挙げられる。
【０５４５】 塞栓症としては、空気塞栓症、羊水塞栓症、コレステロール塞栓症、爪先チア
ノーゼ症候群、脂肪塞栓症、肺動脈塞栓症、および血栓塞栓症が挙げられる。血
栓症としては、冠状動脈血栓症、肝静脈血栓症、網膜静脈閉塞、頸動脈血栓症、
洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、および血栓性静脈炎が挙げられる。
【０５４６】 虚血としては、大脳虚血、虚血性大腸炎、区画症候群、前区画症候群、心筋虚
血、再灌流傷害、および末梢四肢虚血が挙げられる。脈管炎としては、大動脈炎
、動脈炎、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）症候群、チャーグ−ストラウス症候群
、皮膚粘膜リンパ節症候群、閉塞性血栓性血管炎、過敏性血管炎、シェーンライ
ン紫斑病（Ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎ−Ｈｅｎｏｃｈ ｐｕｒｐｕｒａ）、アレルギ
ー性皮膚血管炎およびヴェーゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０５４７】 新脈管形成の内因性刺激因子と阻害因子と間の天然に存在するバランスは、阻
害の影響が優勢であるバランスである。Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄら、Ｃｅｌｌ ５
６：３４５〜３５５（１９８９）。通常の生理学的条件下で新生脈管形成が生じ
るまれな例（例えば、創傷治癒、器官再生、胚発生、および雌性生殖プロセス）
において、新脈管形成は、厳密に調節され、そして空間的および時間的に区切ら
れる。病理学的新脈管形成の条件（例えば、固形腫瘍増殖を特徴とする条件）下
で、これらの調節制御は失敗する。調節されない新脈管形成は、病理学的になり
、そして多くの腫瘍性疾患および非腫瘍性疾患の進行を維持する。多数の重篤な
疾患が、異常な新生脈管形成により支配される。このような疾患は、固形腫瘍増
殖、および転移、関節炎、いくつかの型の眼の障害、および乾癬を含む。例えば
、Ｍｏｓｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．９：６３０〜６３４（１９９１）；Ｆｏｌｋ
ｍａｎら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３３：１７５７〜１７６３（１９９５
）；Ａｕｅｒｂａｃｈら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．２９：４０１〜４
１１（１９８５）；Ｆｏｌｋｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ＫｌｅｉｎおよびＷｅｉｎｈｏｕｓｅ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１７５〜２０３頁（１９８５）；Ｐａｔｚ、
Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．９４：７１５〜７４３（１９８２）；ならびに
Ｆｏｌｋｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２１：７１９〜７２５（１９８３）によ
る概説を参照のこと。多数の病理学的状態において、新脈管形成のプロセスは、
その疾患の状態に寄与する。例えば、固形腫瘍の増殖が新脈管形成に依存するこ
とを示唆する、かなりの数のデータが蓄積されている。ＦｏｌｋｍａｎおよびＫ
ｌａｇｓｂｒｕｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：４４２〜４４７（１９８７）。
【０５４８】 本発明は、本発明のＴＲ１３核酸および／またはポリペプチド（ＴＲ１３アゴ
ニストおよび／またはアンタゴニストを含む）の投与による、新生脈管形成に関
係する疾患または障害の処置を提供する。本発明の核酸およびポリペプチドで処
置され得る悪性状態および転移状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定
されない：本明細書中に記載されるかさもなければ当該分野で公知の、悪性疾患
、固形腫瘍、および癌（このような障害の概説については、Ｆｉｓｈｍａｎら、
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌ
ａｄｅｌｐｈｉａ（１９８５）を参照のこと）。
【０５４９】 本発明は、本発明のＴＲ１４核酸および／またはポリペプチド（ＴＲ１４アゴ
ニストおよび／またはアンタゴニストを含む）の投与による、新生脈管形成に関
係する疾患または障害の処置を提供する。本発明の核酸およびポリペプチドで処
置され得る悪性状態および転移状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定
されない：本明細書中に記載されるかさもなければ当該分野で公知の、悪性疾患
、固形腫瘍、および癌（このような障害の概説については、Ｆｉｓｈｍａｎら、
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌ
ａｄｅｌｐｈｉａ（１９８５）を参照のこと）。
【０５５０】 さらに、本発明のＴＲ１３核酸およびポリペプチド（ＴＲ１３アゴニストおよ
びＴＲ１３アンタゴニストを含む）で処置され得る新生脈管形成に関係する眼の
障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：血管新生緑内障、糖
尿病性網膜症、網膜芽細胞腫、水晶体後線維増殖症、ブドウ膜炎、未熟児網膜症
、黄斑変性、角膜移植片新生血管形成、ならびに脈絡膜または虹彩の新生脈管形
成に関係する、他の眼の炎症疾患、眼の腫瘍および疾患。例えば、Ｗａｌｔｍａ
ｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌ．８５：７０４〜７１０（１９７８）およびＧ
ａｒｔｎｅｒら、Ｓｕｒｖ．Ｏｐｈｔｈａｌ．２２：２９１〜３１２（１９７８
）による概説を参照のこと。
【０５５１】 さらに、本発明のＴＲ１３核酸およびポリペプチド（ＴＲ１３アゴニストおよ
びＴＲ１３アンタゴニストを含む）で処置され得る障害としては、以下が挙げら
れるがこれらに限定されない：血管腫、関節炎、乾癬、血管線維腫、アテローム
硬化性斑、創傷治癒の遅延、肉芽形成、血友病性関節、過形成性瘢痕、偽関節骨
折、オースラー−ウェーバー症候群、化膿性肉芽腫、強皮症、トラコーマ、およ
び血管癒着。
【０５５２】 さらに、本発明のＴＲ１４核酸およびポリペプチド（ＴＲ１４アゴニストおよ
びＴＲ１４アンタゴニストを含む）で処置され得る新生脈管形成に関係する眼の
障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：血管新生緑内障、糖
尿病性網膜症、網膜芽細胞腫、水晶体後線維増殖症、ブドウ膜炎、未熟児網膜症
、黄斑変性、角膜移植片新生血管形成、ならびに脈絡膜または虹彩の新生脈管形
成に関係する、他の眼の炎症疾患、眼の腫瘍および疾患。例えば、Ｗａｌｔｍａ
ｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌ．８５：７０４〜７１０（１９７８）およびＧ
ａｒｔｎｅｒら、Ｓｕｒｖ．Ｏｐｈｔｈａｌ．２２：２９１〜３１２（１９７８
）による概説を参照のこと。
【０５５３】 さらに、本発明のＴＲ１４核酸およびポリペプチド（ＴＲ１４アゴニストおよ
びＴＲ１４アンタゴニストを含む）で処置され得る障害としては、以下が挙げら
れるがこれらに限定されない：血管腫、関節炎、乾癬、血管線維腫、アテローム
硬化性斑、創傷治癒の遅延、肉芽形成、血友病性関節、過形成性瘢痕、偽関節骨
折、オースラー−ウェーバー症候群、化膿性肉芽腫、強皮症、トラコーマ、およ
び血管癒着。
【０５５４】 本発明のＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／または
アゴニストおよび／またはアンタゴニストは、造血細胞の増殖および分化を阻害
するために使用され得、従って、化学療法の間、化学療法剤から骨髄幹細胞を防
御するために使用され得る。この抗増殖効果は、化学療法剤のより高い用量の投
与を可能にし得、従って、より効果的な化学療法処置を可能にし得る。
【０５５５】 本発明のＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／または
アゴニストおよび／またはアンタゴニストはまた、未熟な造血前駆細胞、例えば
顆粒球、マクロファージまたは単核細胞（例えば、ＣＤ３４＋、ｋｉｔ＋）の分
化を一時的に防ぐことによって、それらを拡大するために用いられ得る。これら
の骨髄細胞は、インビトロで培養され得る。このように、ＴＲ１３は、骨髄移植
および／または遺伝子治療の目的でインビトロにおいて造血幹細胞のモジュレー
タとして有用であり得る。幹細胞は、まれであり、遺伝子療法のために遺伝子を
導入するに最も有用であるので、ＴＲ１３は、幹細胞の富化された集団を単離す
るために使用され得る。分裂している細胞を迅速に殺傷する５−Ｆｕのような細
胞毒の存在下で、細胞を培養することによって、幹細胞は富化され得る。一方、
幹細胞は、ＴＲ１３によって保護される。これらの幹細胞は、骨髄移植患者に戻
され得るかまたは次に遺伝子治療のための所望の遺伝子のトランスフェクション
のために用いられ得る。さらに、ＴＲ１３は、動物の骨髄から末梢血液への幹細
胞の放出を生じる動物に注射され得る。これらの幹細胞は、遺伝子治療のための
自家骨髄移植または操作の目的で単離され得る。患者が化学療法または放射線療
法の処置を終えた後、単離された幹細胞は患者に戻され得る。
【０５５６】 本発明のＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストおよび／また
はアンタゴニストはまた、未熟な造血前駆細胞、例えば顆粒球、マクロファージ
または単核細胞（例えば、ＣＤ３４＋、ｋｉｔ＋）の分化を一時的に防ぐことに
よって、それらを拡大するために用いられ得る。これらの骨髄細胞は、インビト
ロで培養され得る。このように、ＴＲ１４は、骨髄移植および／または遺伝子治
療の目的でインビトロにおいて造血幹細胞のモジュレータとして有用であり得る
。幹細胞は、まれであり、遺伝子療法のために遺伝子を導入するに最も有用であ
るので、ＴＲ１４は、幹細胞の富化された集団を単離するために使用され得る。
分裂している細胞を迅速に殺傷する５−Ｆｕのような細胞毒の存在下で、細胞を
培養することによって、幹細胞は富化され得る。一方、幹細胞は、ＴＲ１４によ
って保護される。これらの幹細胞は、骨髄移植患者に戻され得るかまたは次に遺
伝子治療のための所望の遺伝子のトランスフェクションのために用いられ得る。
さらに、ＴＲ１４は、動物の骨髄から末梢血液への幹細胞の放出を生じる動物に
注射され得る。これらの幹細胞は、遺伝子治療のための自家骨髄移植または操作
の目的で単離され得る。患者が化学療法または放射線療法の処置を終えた後、単
離された幹細胞は患者に戻され得る。
【０５５７】 特定の実施形態において、本発明のＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポ
リペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストおよび／またはアンタゴニ
ストは、血球濃度の増加の必要のある個体における血球濃度を増加するために（
すなわち、造血治療において）使用され得る。本発明の組成物を投与することに
より回復され得る状態には、好中球減少症、貧血および血小板減少症が挙げられ
るが、これらに限定されない。
【０５５８】 特定の実施形態において、本発明のＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸およ
び／またはポリペプチド（ならびに／あるいはそれらのアゴニストまたはアンタ
ゴニスト）は、エチスロポイエチン治療において使用され、この治療は、血液の
酸素運搬能力の補充に関する。本発明の核酸および／またはポリペプチド（なら
びに／あるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニスト）は、例えば以下のよ
うな、一般に輸血を必要とする患者における疾患または状態を処置または予防す
るために使用され得る：外傷犠牲者、手術患者、透析患者および様々な血液成分
障害疾患（例えば、血友病、嚢胞性線維症、妊娠、月経障害、未熟児の早期貧血
、脊髄損傷、加齢、様々な腫瘍性疾患状態など）を有する患者。血液の酸素運搬
能力の補充を必要とし、本発明の範囲内である患者の状態の例には、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：低いまたは不完全な赤血球産生により特徴付
けられる血液障害の処置、慢性腎不全に関連する貧血、網状赤血球応答の刺激、
鉄動態効果（例えば、血漿鉄交換効果および骨髄移行時間効果）の発生、赤血球
の質量変化、ヘモグロビンＣ合成の刺激、および脊椎動物における増加したレベ
ルのヘマクリット。本発明はまた、個体（例えば、低酸素環境の状態に遭遇して
いる個体）の酸素運搬能力を増強するための処置を提供する。
【０５５９】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニス
トまたはアンタゴニストはまた、例えば、化学療法後に成熟白血球を骨髄から放
出する（すなわち、幹細胞流動）ために、種々の造血前駆細胞の活性化および分
化を調節することによって、造血を調節するために使用され得る。ＴＲ１３およ
び／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストまたはアンタ
ゴニストはまた、敗血症を処置するために使用され得る。
【０５６０】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニス
トまたはアンタゴニストはまた、Ｔ細胞媒介自己免疫疾患およびリンパ性白血病
（例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられる）の処置のために、ＩＬ
−２生合成を阻害することによって、Ｔ細胞増殖を阻害するために使用され得る
。
【０５６１】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニス
トまたはアンタゴニストはまた、破片クリーニングと結合組織促進炎症細胞との
両方の補充によって、創傷治癒を刺激するために使用され得る。この同じ様式で
、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニス
トまたはアンタゴニストはまた、他の線維症障害（肝硬変症、変形性関節症およ
び肺線維症が挙げられる）を処置するために使用され得る。
【０５６２】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニス
トまたはアンタゴニストはまた、殺菌性白血球の誘引および活性化によって抵抗
性の慢性感染および急性感染（例えば、筋細菌性感染）に対する宿主防御を増強
するために使用され得る。
【０５６３】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニス
トまたはアンタゴニストはまた、組織に侵入する寄生虫の幼生（住血吸虫症、旋
毛虫症および回虫症におけるように）を殺す独特の機能を有する好酸球の存在を
増加させる。
【０５６４】 本発明のＴＲ１３核酸、ポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニス
トおよび／またはアンタゴニストは、骨髄性白血病の処置において使用され得る
。
【０５６５】 ＴＲ１３ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、あるいはＴＲ１３のアゴニス
トは、感染因子の処置において使用され得る。例えば、免疫応答を増強すること
によって、感染性疾患は処置され得る。免疫応答は、現存の免疫応答を増強する
ことによってか、または新しい免疫応答を開始することによってのいずれかで増
強され得る。あるいは、ＴＲ１３ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、あるい
はＴＲ１３のアゴニストまたはアンタゴニストはまた、免疫応答を誘発する必要
なく、感染因子を直接阻害し得る。
【０５６６】 ＴＲ１４ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、あるいはＴＲ１４のアゴニス
トは、感染因子の処置において使用され得る。例えば、免疫応答を増強すること
によって、感染性疾患は処置され得る。免疫応答は、現存の免疫応答を増強する
ことによってか、または新しい免疫応答を開始することによってのいずれかで増
強され得る。あるいは、ＴＲ１４ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、あるい
はＴＲ１４のアゴニストまたはアンタゴニストはまた、免疫応答を誘発する必要
なく、感染因子を直接阻害し得る。
【０５６７】 ウイルスは、ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、および／またはアゴニストまたは
アンタゴニストにより処置され得る疾患または症状を引き起こし得る感染因子の
一例である。ウイルスの例としては、以下のＤＮＡおよびＲＮＡのウイルスおよ
びウイルス科が挙げられるがこれらに限定されない：アルボウイルス、アデノウ
イルス科、アレナウイルス科、アルテリウイルス、ビルナウイルス科、ブンヤウ
イルス科、カルシウイルス科、サルコウイルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）
、コロナウイルス科、デング熱、ＥＢＶ、ＨＩＶ、フラビウイルス科、ヘパドナ
ウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例えば、サイトメガロウイルス、単
純ヘルペス、ヘルペス帯状疱疹）、モノネガウイルス（Ｍｏｎｏｎｅｇａｖｉｒ
ｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、麻疹ウイルス、ラブドウイルス科）、
オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、およ
びパラインフルエンザ）、パピローマウイルス、パポバウイルス科、パルボウイ
ルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイルス科（例えば、痘瘡またはワクシ
ニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイルス）、レトロウイルス科（ＨＴＬ
Ｖ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、およびトガウイルス科（例えば、
ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイルスは、以下を含むがこれらに限定
されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：関節炎、細気管支炎（ｂｒｏ
ｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、呼吸性シンシチウムウイルス、脳炎、眼性感染症（
例えば、結膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、
慢性活動性、デルタ）、日本脳炎Ｂ型、アルゼンチン出血熱、チクングニア、リ
フトバレー熱、黄熱病、髄膜炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バ
ーキットリンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性耳下腺炎、パラインフルエンザ
、狂犬病、感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、皮膚病（例えば、カポージ
、いぼ）、およびウイルス血症。ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、および／または
ＴＲ１３のアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、任意のこれらの症状ま
たは疾患が処置または検出され得る。特定の実施形態において、ＴＲ１３核酸、
ポリペプチド、および／またはアゴニストまたはアンタゴニストは、以下の処置
に使用される：髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ、および／または肝炎（例えば、Ｂ型
肝炎）。さらなる具体的な実施形態において、ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、お
よび／またはアゴニストまたはアンタゴニストは、１以上の他の市販の肝炎ワク
チンに非応答性の患者を処置するために使用される。さらに具体的な実施形態に
おいて、ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、および／またはアゴニストまたはアンタ
ゴニストは、ＡＩＤＳを処置するために使用される。
【０５６８】 同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつＴＲ１３核酸またはポリペプチ
ド、および／またはＴＲ１３のアゴニストまたはアンタゴニストによって処置さ
れ得る細菌性因子あるいは真菌性因子は、以下のグラム陰性およびグラム陽性細
菌および細菌科ならびに真菌を含むがこれらに限定されない：Ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒ
ｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（例えば、Ａ
ｎｔｈｒａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、Ｂ
ｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ（例えば
、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ、Ｃ
ａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｏ
ｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓｅ
ｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉお
よびＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａ
ｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（例えば
、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａ
ｔｙｐｈｉ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔ
ｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏｓｉｓ、Ｌｅｐｔ
ｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｔａｌｅｓ、Ｍ
ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｏｎｏ
ｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｍｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇ
ｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感染症（例えば、Ａｃｔｉｎｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ（例えば、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ
インフルエンザＢ型）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、
Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉ
ｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ、Ｍｅｎｉｎ
ｇｉｏｃｏｃｃａｌ、ＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌならびにＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃａｌ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＢ
群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）。これらの細菌または真菌の科は、以下を含む
がこれらに限定されない疾患または症状を引き起こし得る：菌血症、心内膜炎、
眼感染症（結膜炎、結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見感染症（例えば、ＡＩ
ＤＳに関連した感染症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染症、ライター病、気道
感染症（例えば、百日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム病、ネコ引っ掻き病、
赤痢、パラチフス熱、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎（例えば、髄膜炎
Ａ型およびＢ型）、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ライ病、パラ結核、結核、
狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマチ熱、猩紅熱、性感染病
、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓｅｓ））、
毒血症、尿路感染症、創傷感染症。ＴＲ１３核酸もしくはポリペプチド、および
／またはＴＲ１３のアゴニストまたはアンタゴニストを用いて、任意のこれらの
症状もしくは疾患を処置または検出し得る。具体的な実施形態において、ＴＲ１
３核酸、ポリペプチド、および／またはそれらのアゴニストまたはアンタゴニス
トは、以下を処置するために使用される：破傷風、ジフテリア、ボツリスム、お
よび／またはＢ型髄膜炎。
【０５６９】 さらに、ＴＲ１３核酸またはポリペプチド、および／あるいはＴＲ１３のアゴ
ニストまたはアンタゴニストにより処置され得る疾患または症状を引き起こす寄
生生物性因子としては以下のファミリーまたはクラスが挙げられるがこれらに限
定されない：アメーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリプトスポリジウム
症、二核アメーバ症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交疫、外部寄生生物
性、ジアルジア鞭毛虫症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレリア症、トキソプ
ラスマ症、トリパノソーマ症、およびトリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ）
症、ならびに胞子虫症（Ｓｐｏｒｏｚｏａｎ）（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ
ｖｉｒａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ、Ｐｌａｓｍｏ
ｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅおよびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ）。これ
らの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引
き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例えば、赤痢、ジア
ルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ関連）
、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ症。ＴＲ１３核酸もしくはポリ
ペプチド、および／またはＴＲ１３のアゴニストもしくはアンタゴニストを用い
て、任意のこれらの症状または疾患を処置または検出し得る。特定の実施形態に
おいて、ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、および／またはそれらのアゴニストもし
くはアンタゴニストは、マラリアを処置するために使用される。さらに、ＴＲ１
３核酸またはポリペプチド、および／あるいはＴＲ１３のアゴニストまたはアン
タゴニストにより処置され得る疾患または症状を引き起こす寄生生物性因子とし
ては以下のファミリーまたはクラスが挙げられるがこれらに限定されない：アメ
ーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリプトスポリジウム症、二核アメーバ
症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交疫、外部寄生生物性、ジアルジア鞭
毛虫症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレリア症、トキソプラスマ症、トリパ
ノソーマ症、およびトリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ）症、ならびに胞子
虫症（Ｓｐｏｒｏｚｏａｎ）（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｒａｘ、Ｐ
ｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌ
ａｒｉａｅおよびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ）。これらの寄生生物は、
以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：疥
癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）
、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠
合併症、およびトキソプラスマ症。ＴＲ１３核酸もしくはポリペプチド、および
／またはＴＲ１３のアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、任意のこれら
の症状または疾患を処置または検出し得る。特定の実施形態において、ＴＲ１３
核酸、ポリペプチド、および／またはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニス
トは、マラリアを処置するために使用される。
【０５７０】 ウイルスは、ＴＲ１４核酸またはポリペプチド、および／あるいはＴＲ１４の
アゴニストまたはアンタゴニストにより処置され得る疾患または症状を引き起こ
し得る感染因子の一例である。ウイルスの例としては、以下のＤＮＡおよびＲＮ
Ａのウイルスおよびウイルス科が挙げられるがこれらに限定されない：アルボウ
イルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリウイルス、ビルナウイ
ルス科、ブンヤウイルス科、カルシウイルス科、サルコウイルス科（Ｃｉｒｃｏ
ｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、デング熱、ＥＢＶ、ＨＩＶ、フラビウイ
ルス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例えば、サイトメ
ガロウイルス、単純ヘルペス、ヘルペス帯状疱疹）、モノネガウイルス（Ｍｏｎ
ｏｎｅｇａｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、麻疹ウイルス、ラブ
ドウイルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザＡ、インフ
ルエンザＢ、およびパラインフルエンザ）、パピローマウイルス、パポバウイル
ス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイルス科（例えば、
痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイルス）、レトロウ
イルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、およびトガウイ
ルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイルスは、以下を含
むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：関節炎、細
気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、呼吸性シンシチウムウイルス、脳
炎、眼性感染症（例えば、結膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、肝炎（Ａ型、Ｂ
型、Ｃ型、Ｅ型、慢性活動性、デルタ）、日本脳炎Ｂ型、アルゼンチン出血熱、
チングニア、リフトバレー熱、黄熱病、髄膜炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤ
Ｓ）、肺炎、バーキットリンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性耳下腺炎、パラ
インフルエンザ、狂犬病、感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、皮膚病（例
えば、カポージ、いぼ）、およびウイルス血症。ＴＲ１４核酸もしくはポリペプ
チド、および／またはＴＲ１４のアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、
任意のこれらの症状または疾患が処置または検出され得る。特定の実施形態にお
いて、ＴＲ１４核酸、ポリペプチド、および／またはアゴニストもしくはアンタ
ゴニストは、以下の処置に使用される：髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ、および／ま
たは肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）。さらなる具体的な実施形態において、ＴＲ１４
核酸、ポリペプチド、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、１
以上の他の市販の肝炎ワクチンに非応答性の患者を処置するために使用される。
さらに具体的な実施形態において、ＴＲ１４核酸、ポリペプチド、および／また
はアゴニストもしくはアンタゴニストは、ＡＩＤＳを処置するために使用される
。
【０５７１】 同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつＴＲ１４核酸またはポリペプチ
ド、および／あるいはＴＲ１４のアゴニストまたはアンタゴニストによって処置
され得る細菌性因子あるいは真菌性因子は、以下のグラム陰性およびグラム陽性
細菌および細菌科ならびに真菌を含むがこれらに限定されない：Ａｃｔｉｎｏｍ
ｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏ
ｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（例えば、
Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、
Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ（例え
ば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ、
Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄ
ｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓ
ｅｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、腸毒性Ｅ．ｃｏｌｉおよび腸出血性Ｅ．ｃｏｌｉ
）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌｍ
ｏｎｅｌｌａ（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、およびＳａｌｍｏ
ｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、
Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌ
ｌｏｓｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａ
ｓｍａｔａｌｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ
ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂ
ａｃｔｅｒ、Ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｍｅｉｓｓｅ
ｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感染症（
例えば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ（例えば、Ｈ
ｅａｍｏｐｈｉｌｕｓインフルエンザＢ型）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅ
ａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃａｌ、Ｍｅｎｉｎｇｉｏｃｏｃｃａｌ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌならびに
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅおよびＢ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）。これらの細菌または真
菌の科は、以下を含むがこれらに限定されない疾患または症状を引き起こし得る
：菌血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見
感染症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染
症、ライター病、気道感染症（例えば、百日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム
病、ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄
膜炎（例えば、髄膜炎Ａ型およびＢ型）、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ライ
病、パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマチ
熱、猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔｏ
ｃｙｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。ＴＲ１４核酸もしくは
ポリペプチド、および／またはＴＲ１４のアゴニストもしくはアンタゴニストを
用いて、任意のこれらの症状もしくは疾患を処置または検出し得る。具体的な実
施形態において、ＴＲ１４核酸、ポリペプチド、および／またはそれらのアゴニ
ストもしくはアンタゴニストは、以下を処置するために使用される：破傷風、ジ
フテリア、ボツリヌス中毒、および／またはＢ型髄膜炎。
【０５７２】 さらに、ＴＲ１４核酸またはポリペプチド、および／あるいはＴＲ１４のアゴ
ニストまたはアンタゴニストにより処置され得る疾患または症状を引き起こす寄
生生物性因子としては以下のファミリーまたはクラスが挙げられるがこれらに限
定されない：アメーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリプトスポリジウム
症、二核アメーバ症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交疫、外部寄生生物
性、ジアルジア鞭毛虫症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレリア症、トキソプ
ラスマ症、トリパノソーマ症、およびトリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ）
症、ならびに胞子虫症（Ｓｐｏｒｏｚｏａｎ）（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ
ｖｉｒａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ、Ｐｌａｓｍｏ
ｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅおよびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ）。これ
らの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引
き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例えば、赤痢、ジア
ルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ関連）
、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ症。ＴＲ１４核酸もしくはポリ
ペプチド、および／またはＴＲ１４のアゴニストもしくはアンタゴニストを用い
て、任意のこれらの症状または疾患を処置または検出し得る。特定の実施形態に
おいて、ＴＲ１４核酸、ポリペプチド、および／またはそれらのアゴニストもし
くはアンタゴニストは、マラリアを処置するために使用される。さらに、ＴＲ１
４核酸またはポリペプチド、および／あるいはＴＲ１４のアゴニストまたはアン
タゴニストにより処置され得る疾患または症状を引き起こす寄生生物性因子とし
ては以下のファミリーまたはクラスが挙げられるがこれらに限定されない：アメ
ーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリプトスポリジウム症、二核アメーバ
症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交疫、外部寄生生物性、ジアルジア鞭
毛虫症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレリア症、トキソプラスマ症、トリパ
ノソーマ症、およびトリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ）症、ならびに胞子
虫症（Ｓｐｏｒｏｚｏａｎ）（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｒａｘ、Ｐ
ｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌ
ａｒｉａｅおよびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ）。これらの寄生生物は、
以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：疥
癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）
、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠
合併症、およびトキソプラスマ症。ＴＲ１４核酸もしくはポリペプチド、および
／またはＴＲ１４のアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、任意のこれら
の症状または疾患を処置または検出し得る。特定の実施形態において、ＴＲ１４
核酸、ポリペプチド、および／またはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニス
トは、マラリアを処置するために使用される。
【０５７３】 ＴＲ１３核酸またはポリペプチド、および／あるいはＴＲ１３のアゴニストま
たはアンタゴニストにより処置され得るさらなる状態、疾患または症状は、骨髄
炎である。
【０５７４】 ＴＲ１４核酸またはポリペプチド、および／あるいはＴＲ１４のアゴニストま
たはアンタゴニストにより処置され得るさらなる状態、疾患または症状は、骨髄
炎である。
【０５７５】 好ましくは、ＴＲ１３核酸、ポリペプチド、および／あるいはＴＲ１３のアゴ
ニストまたはアンタゴニストは、患者に有効量のＴＲ１３ポリペプチドを投与す
るか、または患者から細胞を取り出して、ＴＲ１３核酸をこの細胞に供給し、そ
して操作した細胞を患者に戻す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであ
り得る。さらに、本明細書中でさらに議論されるように、ＴＲ１３ポリペプチド
または核酸はワクチン中のアジュバントとして用いられて、感染性疾患に対する
免疫応答を惹起し得る。
【０５７６】 好ましくは、ＴＲ１４核酸、ポリペプチド、および／あるいはＴＲ１４のアゴ
ニストまたはアンタゴニストは、患者に有効量のＴＲ１４ポリペプチドを投与す
るか、または患者から細胞を取り出して、ＴＲ１４核酸をこの細胞に供給し、そ
して操作した細胞を患者に戻す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであ
り得る。さらに、本明細書中でさらに議論されるように、ＴＲ１４ポリペプチド
または核酸はワクチン中のアジュバントとして用いられて、感染性疾患に対する
免疫応答を惹起し得る。
【０５７７】 本発明のさらなる好ましい実施形態には、以下の用途におけるＴＲ１３および
／またはＴＲ１４のポリペプチドおよび機能性アゴニストまたは機能的アンタゴ
ニストの使用が挙げられるが、これらに限定されない： 増加した量の１つ以上の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ
）を産生するための免疫系をブーストするための、より高い親和性抗体の産生（
例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ）を誘導するための、そして／ま
たは免疫応答を増加させるための、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハ
ムスター、モルモット、ブタ、ミニブタ（ｍｉｃｒｏ−ｐｉｇ）、ニワトリ、ラ
クダ、ヤギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ヒト以外の霊長類、およびヒト
（最も好ましくはヒト）への投与。
【０５７８】 機能性内因性抗体分子を産生し得ないか、または別の損なわれた内因性免疫系
を有し得るが、別の動物由来の再構築されたかまたは部分的に再構築された免疫
系によりヒト免疫グロブリン分子を産生し得る動物（上記に列挙した動物、およ
びトランストランスジェニック動物が挙げられるが、これらに限定されない）へ
の投与（例えば、公開ＰＣＴ出願番号ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ／９６３４０
９６、ＷＯ／９６３３７３５およびＷＯ／９１１０７４１を参照のこと）。
【０５７９】 特異的抗原に対する免疫応答性を増強するワクチンアジュバント。特定の実施
形態において、このワクチンアジュバントは、本明細書中に記載されるＴＲ１３
および／またはＴＲ１４のポリペプチドである。別の特定の実施形態において、
このワクチンアジュバントは、本明細書中に記載されるＴＲ１３および／または
ＴＲ１４の核酸である（すなわち、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸は、
遺伝子ワクチンアジュバントである）。本明細書中で議論されるように、ＴＲ１
３および／またはＴＲ１４の核酸は、当該分野で公知の技術を用いて投与され得
、これらの技術としては、リポソーム送達、組換えベクター送達、裸のＤＮＡの
注射、および遺伝子銃送達（ｇｅｎｅ ｇｕｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）が挙げられ
るが、これらに限定されない。
【０５８０】 腫瘍特異的免疫応答を増強するためのアジュバント。
【０５８１】 抗ウイルス免疫応答を増強するためのアジュバント：本発明の組成物をアジュ
バントとして使用して増強され得る抗ウイルス免疫応答としては、本明細書中に
開示されるか、さもなければ当該分野で公知である、ウイルスおよびウイルス関
連性の疾患または症状が挙げられる。特定の実施形態において、本発明の組成物
は、以下からなる群より選択される、ウイルス、疾患または症状に対する免疫応
答を増強するためのアジュバントとして使用される：ＡＩＤＳ、髄膜炎、デング
熱、ＥＢＶ、および肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）。別の特定の実施形態において、
本発明の組成物は、以下からなる群より選択される、ウイルス、疾患または症状
に対するに免疫応答を増強するためのアジュバントとして使用される：ＨＩＶ／
ＡＩＤＳ、ＲＳウイルス、デング熱（Ｄｅｎｇｕｅ）、ロタウイルス、日本脳炎
Ｂ型、インフルエンザＡ型およびＢ型（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ａｎｄ Ｂ）
、パラインフルエンザ（Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、麻疹（Ｍｅａｓｌｅｓ
）、サイトメガロウイルス、狂犬病（Ｒａｂｉｅｓ）、フニン（Ｊｕｎｉｎ）、
チクングニヤ（Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ）、リフトバレー熱、単純ヘルペス（Ｈ
ｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ）、および黄熱病。別の特定の実施形態において、
本発明の組成物は、ＨＩＶ ｇｐ１２０抗原に対する免疫応答を増強するための
アジュバントとして使用される。
【０５８２】 抗菌性または抗真菌性免疫応答を増強するためのアジュバント：本発明の組成
物をアジュバントとして使用して増強され得る抗菌性または抗真菌性の免疫応答
としては、本明細書中に開示されるか、さもなければ当該分野で公知である、細
菌または真菌、および細菌または真菌関連性の疾患または症状が挙げられる。特
定の実施形態において、本発明の組成物は、以下からなる群より選択される、細
菌または真菌、疾患または症状に対する免疫応答を増強するためのアジュバント
として使用される：破傷風、ジフテリア（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、ボツリヌス
中毒、およびＢ型髄膜炎。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、以
下からなる群より選択される、細菌または真菌、疾患または症状に対する免疫応
答を増強するためのアジュバントとして使用される：Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅ
ｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｍｅｉｓｓｅｒｉａ
ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉ
ａｅ、Ｂ群連鎖球菌、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、腸毒性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ、腸出血性Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆ
ｅｒｉ、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ（マラリア）。
【０５８３】 抗寄生生物性免疫応答を増強するためのアジュバント。本発明の組成物をアジ
ュバントとして使用して増強され得る抗寄生生物性の免疫応答としては、本明細
書中に開示されるか、さもなければ当該分野で公知である、寄生生物および寄生
生物関連性の疾患または症状が挙げられる。特定の実施形態において、本発明の
組成物は、寄生生物に対する免疫応答を増強するためのアジュバントとして使用
される。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕ
ｍ（マラリア）に対する免疫応答を増強するためのアジュバントとして使用され
る。
【０５８４】 病因に対するＢ細胞応答性の刺激薬として。
【０５８５】 個体が免疫抑制治療を受ける前に、その個体の免疫状態を上昇させる薬剤とし
て。
【０５８６】 より高い親和性抗体を誘導するための薬剤として。
【０５８７】 血清免疫グロブリン濃度を高めるための薬剤として。
【０５８８】 免疫無防備状態の個体の回復を促進するための薬剤として。
【０５８９】 老齢の集団において免疫応答性をブーストするための薬剤として。
【０５９０】 骨髄移植および／または他の移植（例えば、同種または異種器官移植）の前、
間または後の免疫系エンハンサーとして。移植に関して、本発明の組成物は、移
植の前、同時および／または後に投与され得る。特定の実施形態において、本発
明の組成物は、移植の後、Ｔ細胞集団の回復の開始の後に投与される。別の特定
の実施形態において、本発明の組成物は、まず、移植の後、かつＢ細胞集団の完
全な回復の前ではなく、Ｔ細胞集団の回復の開始の前に投与される。
【０５９１】 Ｂ細胞免疫不全個体における免疫応答性をブーストするための薬剤として。本
発明のＴＲ１３ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニ
ストを投与することによって改善または処置され得るＢ細胞免疫不全としては、
以下が挙げられ得るがこれらに限定されない：ＳＣＩＤ、先天性無ガンマグロブ
リン血症、分類不能型免疫不全、ヴィスコット−オールドリッチ症候群、高Ｉｇ
Ｍを伴うＸ連鎖免疫不全、および重症複合型免疫不全。
【０５９２】 Ｂ細胞免疫不全個体における免疫応答性をブーストするための薬剤として。本
発明のＴＲ１４ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニ
ストを投与することによって改善または処置され得るＢ細胞免疫不全としては、
以下が挙げられ得るがこれらに限定されない：ＳＣＩＤ、先天性無ガンマグロブ
リン血症、分類不能型免疫不全、ヴィスコット−オールドリッチ症候群、高Ｉｇ
Ｍを伴うＸ連鎖免疫不全、および重症複合型免疫不全。
【０５９３】 Ｂ細胞機能の後天性喪失を有する個体における免疫応答性をブーストするため
の薬剤として。本発明のＴＲ１３ポリペプチドもしくは核酸、またはそれらのア
ゴニストを投与することにより改善または処置され得る、Ｂ細胞機能の後天性喪
失となる状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＨＩＶ感染
、ＡＩＤＳ、骨髄移植、およびＢ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）。
【０５９４】 一時的免疫欠損を有する個体における免疫応答性をブーストするための薬剤と
して。本発明のＴＲ１３ポリペプチドもしくは核酸、またはそれらのアゴニスト
を投与することにより改善または処置され得る、一時的免疫不全となる状態とし
ては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ウイルス感染（例えば、イン
フルエンザ）からの回復、栄養失調に関連した状態、伝染性単核球症からの回復
、またはストレスに関連した状態、麻疹からの回復、輸血からの回復、手術から
の回復。
【０５９５】 Ｂ細胞機能の後天性喪失を有する個体における免疫応答性をブーストするため
の薬剤として。本発明のＴＲ１４ポリペプチドもしくは核酸、またはそれらのア
ゴニストを投与することにより改善または処置され得る、Ｂ細胞機能の後天性喪
失となる状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＨＩＶ感染
、ＡＩＤＳ、骨髄移植、およびＢ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）。
【０５９６】 一時的免疫欠損を有する個体における免疫応答性をブーストするための薬剤と
して。本発明のＴＲ１４ポリペプチドもしくは核酸、またはそれらのアゴニスト
を投与することにより改善または処置され得る、一時的免疫不全となる状態とし
ては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ウイルス感染（例えば、イン
フルエンザ）からの回復、栄養失調に関連した状態、伝染性単核球症からの回復
、またはストレスに関連した状態、麻疹からの回復、輸血からの回復、手術から
の回復。
【０５９７】 単核細胞、樹状細胞、および／またはＢ細胞による抗原提示の調節因子として
。一実施形態において、ＴＲ１３（可溶性形態、膜結合形態または膜貫通形態）
は、インビトロまたはインビボにおいて、抗原提示を増強するかまたは抗原提示
を拮抗する。さらに、関連の実施形態において、抗原提示の増強または拮抗は、
抗腫瘍処置として、または免疫系を調節するために有用であり得る。
【０５９８】 単核細胞、樹状細胞、および／またはＢ細胞による抗原提示の調節因子として
。一実施形態において、ＴＲ１４（可溶性形態、膜結合形態または膜貫通形態）
は、インビトロまたはインビボにおいて、抗原提示を増強するかまたは抗原提示
を拮抗する。さらに、関連の実施形態において、抗原提示の増強または拮抗は、
抗腫瘍処置として、または免疫系を調節するために有用であり得る。
【０５９９】 個体の免疫系を、ＴＨ１細胞応答とは対照的に、体液性応答（すなわち、ＴＨ
２）の発達に指向するための薬剤として。
【０６００】 腫瘍増殖を誘発し、そしてその腫瘍を抗腫瘍剤に対してより感受性にするため
の手段として。例えば、多発性骨髄腫は、緩徐に分裂する疾患であり、従って、
実質的に全ての抗腫瘍レジメに対して不応性である。これらの細胞がより迅速に
増殖される場合、これらの感受性特性は変化するようである。
【０６０１】 例えば、ＡＩＤＳ、慢性リンパ球障害および／または分類不能型免疫不全のよ
うな病理におけるＢ細胞産生の刺激薬として。
【０６０２】 手術後、外傷または遺伝子欠陥のリンパ球様組織の生成および／または再生の
ための治療として。
【０６０３】 ＳＣＩＤ患者において観察されるような、免疫不全を生じる遺伝的に遺伝した
障害のための遺伝子ベースの治療として。
【０６０４】 ＴＲ１３媒介応答を阻害または増強する抗体の生成のための抗原として。
【０６０５】 ＴＲ１４媒介応答を阻害または増強する抗体の生成のための抗原として。
【０６０６】 リーシュマニア症のような単核細胞をもたらす寄生生物性疾患に対して防御す
るための単核細胞／マクロファージを活性化する手段として。
【０６０７】 Ｔ細胞を活性化する手段として。
【０６０８】 移植前の骨髄サンプルの前処置として。このような処置は、Ｂ細胞提示を増強
し、従って回復を促進する。
【０６０９】 ＲＴ１３によって誘発される分泌サイトカインを調節する手段として。
【０６１０】 ＲＴ１４によって誘発される分泌サイトカインを調節する手段として。
【０６１１】 本発明のＴＲ１３ポリペプチドまたは核酸、および／あるいはアゴニストまた
はアンタゴニストは、インビトロまたはインビボにおけるＩｇＥ濃度を調節する
ために使用され得る。
【０６１２】 本発明のＴＲ１４ポリペプチドまたは核酸、および／あるいはアゴニストまた
はアンタゴニストは、インビトロまたはインビボにおけるＩｇＥ濃度を調節する
ために使用され得る。
【０６１３】 さらに、本発明のＴＲ１３ポリペプチドまたは核酸、またはそれらのアゴニス
トもしくはアンタゴニストは、ＩｇＥ媒介性アレルギー反応を処置または予防す
るために使用され得る。このようなアレルギー反応としては、ぜん息、鼻炎、お
よび湿疹が挙げられるが、これらに限定されない。
【０６１４】 さらに、本発明のＴＲ１４ポリペプチドまたは核酸、またはそれらのアゴニス
トもしくはアンタゴニストは、ＩｇＥ媒介性アレルギー反応を処置または予防す
るために使用され得る。このようなアレルギー反応としては、ぜん息、鼻炎、お
よび湿疹が挙げられるが、これらに限定されない。
【０６１５】 上記のすべての適用は、獣医学に適用され得る。
【０６１６】 ＴＲ１３のアンタゴニストは、結合抗体および／または阻害抗体、アンチセン
ス核酸、リボザイム、または可溶性形態のＴＲ１３レセプターを含む。ＴＲ１３
のアンタゴニストまたはアゴニストは、上記のリガンドならびに以下のような臨
床適用または実用的適用を見出されたリガンドの多くの活性を逆転させることが
予想される： ＴＲ１４のアンタゴニストは、結合抗体および／または阻害抗体、アンチセン
ス核酸、リボザイム、または可溶性形態のＴＲ１４レセプターを含む。ＴＲ１４
のアンタゴニストまたはアゴニストは、上記のリガンドならびに以下のような臨
床適用または実用的適用を見出されたリガンドの多くの活性を逆転させることが
予想される： 種々の局面の外来因子または自己に対する免疫応答をブロックする手段。例と
しては、自己免疫障害（例えば、狼瘡）、および関節炎、ならびに皮膚アレルギ
ーに対する免疫応答性、炎症、腸疾患、傷害および病原体が挙げられる。
【０６１７】 種々の局面の外来因子または自己に対する免疫応答をブロックする手段。例と
しては、自己免疫障害（例えば、狼瘡）、および関節炎、ならびに皮膚アレルギ
ーに対する免疫応答性、炎症、腸疾患、傷害および病原体が挙げられる。
【０６１８】 自己免疫疾患（例えば、特発性血小板減少性紫斑病、全身性エリテマトーデス
（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｗｒｙｔｈｒａｍａｔｏｓｕｓ）およびＭＳ
）と関連したＢ細胞増殖およびＩｇ分泌を予防するための治療。
【０６１９】 対宿主性移植片病または移植拒絶のインヒビター。
【０６２０】 Ｂ細胞悪性疾患（例えば、ＡＬＬ、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、慢性リ
ンパ球性白血病、プラズマ細胞腫、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、および
ＥＢＶ形質転換病）のための治療。
【０６２１】 非定量有意性の単一クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ヴァル
デンストレーム病、関連特発性単一クローン性高ガンマグロブリン血症、および
プラズマ細胞腫などの疾患において明らかな、慢性高ガンマグロブリン血症のた
めの治療。
【０６２２】 ラージＢ細胞リンパ腫の細胞増殖を減少させるための治療。
【０６２３】 慢性骨髄性白血病に関連するＢ細胞およびＩｇの関与を減少させるための手段
。
【０６２４】 免疫抑制剤。
【０６２５】 本発明のＴＲ１３ポリペプチドもしくは核酸、および／またはアンタゴニスト
もしくはアゴニストを使用して、インビトロまたはインビボにおけるＩｇＥ濃度
を調節し得る。
【０６２６】 本発明のＴＲ１４ポリペプチドもしくは核酸、および／またはアンタゴニスト
もしくはアゴニストを使用して、インビトロまたはインビボにおけるＩｇＥ濃度
を調節し得る。
【０６２７】 別の実施形態においては、本発明のＴＲ１３ポリペプチドもしくは核酸、およ
び／またはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニストの投与を使用して、Ｉｇ
Ｅ媒介性アレルギー反応（喘息、鼻炎、および湿疹が挙げられるが、これらに限
定されない）を処置または予防し得る。
【０６２８】 別の実施形態においては、本発明のＴＲ１４ポリペプチドもしくは核酸、およ
び／またはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニストの投与を使用して、Ｉｇ
Ｅ媒介性アレルギー反応（喘息、鼻炎、および湿疹が挙げられるが、これらに限
定されない）を処置または予防し得る。
【０６２９】 上記に列挙した適用は、広範な種々の宿主における使用を有する。このような
宿主としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ヒト、ネズミ、ウ
サギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、マウス、ラット、ハムスター、ブタ、
ミニブタ（ｍｉｃｒｏ−ｐｉｇ）、ニワトリ、ヤギ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ
、非ヒト霊長類、およびヒト。特定の実施形態においては、宿主は、マウス、ウ
サギ、ヤギ、モルモット、ニワトリ、ラット、ハムスター、ブタ、ヒツジ、イヌ
またはネコである。好ましい実施形態においては、宿主は哺乳動物である。最も
好ましい実施形態においては、宿主はヒトである。
【０６３０】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプチドならびに／またはアゴ
ニストおよびアンタゴニストは、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、本明細
書中で記載されるような）と共に、組成物中で使用され得る。
【０６３１】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプチドならびに／またはアゴ
ニストもしくはアンタゴニストは、特定の自己免疫および慢性炎症および感染性
疾患においてマクロファージおよびそれらの前駆体、ならびに好中球、好塩基球
、Ｂリンパ球およびいくつかのＴ細胞サブセット（例えば、活性化およびＣＤ８
細胞傷害性Ｔ細胞）およびナチュラルキラー細胞の、例えば、ＴＲ１６走化性お
よび活性化を阻害するために用いられ得る。自己免疫疾患の例としては、多発性
硬化症およびインスリン依存性糖尿病が挙げられる。ＴＲ１３および／またはＴ
Ｒ１４の核酸、ポリペプチドならびに／またはアゴニストもしくはアンタゴニス
トはまた、単核性貪食細胞の漸増および活性化を予防することにより、感染性疾
患を処置するために用いられ得、これらの感染性疾患としては、以下が挙げられ
る：珪肺症、サルコイドーシス、突発性肺線維症。それらはまた、好酸球の生成
および移動を防止することにより、突発性好酸球増多症候群を処置するために使
用され得る。内毒素ショックもまた、本発明のＴＲ１６ポリペプチドのアンタゴ
ニストによりマクロファージの移動およびそれらの生成を防止することにより処
置され得る。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプチドおよび／ま
たはアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、ケモカイン誘導性マスト細胞お
よび好中球の脱顆粒およびヒスタミンの放出を阻害することにより、ヒスタミン
媒介性アレルギー反応および免疫学的障害（遅延相アレルギー反応（ｌａｔｅ
ｐｈａｓｅ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ）、慢性蕁麻疹およびアトピ
ー性皮膚炎を含む）を処置するために用いられ得る。ＩｇＥ媒介性アレルギー反
応（例えば、アレルギー性の喘息、鼻炎および湿疹）もまた処置され得る。ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストも
しくはアンタゴニストはまた、創傷領域への単核細胞の誘引を防止することによ
り、慢性炎症および急性炎症を処置するために用いられ得る。それらはまた、正
常な肺のマクロファージ集団を調節するために用いられ得る。なぜなら、慢性炎
症および急性炎症の肺疾患は、肺における単核貪食細胞の壊死巣分離と関連する
からである。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプチドおよび／ま
たはアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、患者の関節における滑液への単
核細胞の誘引を防止することにより、慢性関節リウマチを処置するために用いら
れ得る。単核細胞の流入（ｉｎｆｌｕｘ）および活性化は、変形性関節症（ｄｅ
ｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）および炎症性関節症の両方の
病理において重要な役割を果たす。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポ
リペプチドおよび／またはアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、ＩＬ−１
およびＴＮＦに主に帰する有害なカスケードを妨害するために用いられ得る。Ｉ
Ｌ−１およびＴＮＦは、他の炎症性サイトカインの生合成を妨げる。このように
して、アンタゴニストは、炎症を防止するために用いられ得る。ＴＲ１３および
／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストもしくはアン
タゴニストはまた、ＴＲ１６により誘導されるプロスタグランジン非依存性熱を
阻害するために用いられ得る。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペ
プチドおよび／またはアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、骨髄不全（例
えば、再生不良性貧血および骨髄形成異常症候群）の症例を処置するために用い
られ得る。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプチドおよび／また
はアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、肺における好酸球の蓄積を防止す
ることにより、喘息およびアレルギーを処置するために用いられ得る。ＴＲ１３
および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストもしく
はアンタゴニストはまた、喘息の肺の顕著な特徴である上皮下基底膜線維症を処
置するために用いられ得る。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸、ポリペプ
チドおよび／またはアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、リンパ腫（例え
ば、本明細書中に提供されるリンパ腫の広範なリストのうちの１つ以上（限定さ
れない））を処置するために用いられ得る。
【０６３２】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４に対する抗体は、ＴＲ１３および／またはＴ
Ｒ１４に結合し、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の活性を阻害して、傷害後の
肺への好中球の浸潤を防止することにより、ＡＲＤＳを処置するために用いられ
得る。本発明のアゴニストおよびアンタゴニストは、薬学的に受容可能なキャリ
ア（例えば、本明細書中以下で記載される）とともに組成物中で用いられ得る。
【０６３３】 同種移植片拒絶では、レシピエント動物の免疫系は、ほとんどの場合、免疫系
は周囲抗原によってのみ感作されるので、応答するように前もって感作されてい
ない。同種の他のメンバーからの組織は、例えば、ウイルスおよび細菌が提示さ
れるのと同じようには、提示されていない。同種移植片拒絶の場合、免疫抑制養
生法は、免疫系がエフェクター期に到達することを阻むように設計される。しか
し、異種移植片拒絶の免疫プロフィールは、同種移植片拒絶よりも疾患再発によ
り類似し得る。疾患再発の場合、免疫系は、天然の島細胞の破壊によって示され
るように、すでに活性化されている。従って、疾患再発では、免疫系はすでにエ
フェクター期にある。活性化され、エフェクター細胞へ分化されたリンパ球は、
ＴＲ１３ポリペプチドを発現するので、本発明のアンタゴニストは、同種移植片
および異種移植片の両方に対する免疫応答を抑制し得、そのことによって、アポ
トーシスを増強する化合物に感受性である。従って、本発明はさらに、免疫学的
寛容組織を作製するための方法を提供する。
【０６３４】 同種移植片拒絶では、レシピエント動物の免疫系は、ほとんどの場合、免疫系
は周囲抗原によってのみ感作されるので、応答するように前もって感作されてい
ない。同種の他のメンバーからの組織は、例えば、ウイルスおよび細菌が提示さ
れるのと同じようには、提示されていない。同種移植片拒絶の場合、免疫抑制養
生法は、免疫系がエフェクター期に到達することを阻むように設計される。しか
し、異種移植片拒絶の免疫プロフィールは、同種移植片拒絶よりも疾患再発によ
り類似し得る。疾患再発の場合、免疫系は、天然の島細胞の破壊によって示され
るように、すでに活性化されている。従って、疾患再発では、免疫系はすでにエ
フェクター期にある。活性化され、エフェクター細胞へ分化されたリンパ球は、
ＴＲ１４ポリペプチドを発現するので、本発明のアンタゴニストは、同種移植片
および異種移植片の両方に対する免疫応答を抑制し得、そのことによって、アポ
トーシスを増強する化合物に感受性である。従って、本発明はさらに、免疫学的
寛容組織を作製するための方法を提供する。
【０６３５】 本発明のＴＲ１３の核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストもしくはア
ンタゴニストは、炎症疾患（例えば炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、変形性関
節症、乾癬、および敗血症）の処置おいてさらに使用され得る。
【０６３６】 本発明のＴＲ１４の核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストもしくはア
ンタゴニストは、炎症疾患（例えば炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、変形性関
節症、乾癬、および敗血症）の処置おいてさらに使用され得る。
【０６３７】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸および／もしくはポリペプチドならび
に／またはそれらのアゴニストおよび／もしくはアンタゴニストは、広範囲の疾
患および／または状態の診断および処置または予防において有用である。このよ
うな疾患および状態としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：癌
（例えば、免疫細胞間連癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、濾胞性リンパ腫、ｐ５３
の変異または変化に関連する癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、結腸直
腸癌、肺の非小細胞癌、肺の小細胞癌、胃癌など）、リンパ増殖性障害（例えば
、リンパ節症）、微生物（例えば、ウイルス、細菌など）感染（例えば、ＨＩＶ
−１感染、ＨＩＶ−２感染、ヘルペスウイルス感染（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、
ＣＭＶ、ＶＺＶ、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、ＥＢＶを含むが、これらに限定され
ない）、アデノウイルス感染、ポックスウイルス感染、ヒトパピローマウイルス
感染、肝炎ウイルス感染（例えば、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶなど）、ヘリコバク
ターピロリ感染、侵襲性ブドウ球菌感染など）、寄生生物感染、腎炎、骨疾患（
例えば、骨粗鬆症）、アテローム性動脈硬化症、疼痛、心臓血管障害（例えば、
新生血管形成、低脈管形成または減少した循環（例えば、虚血性疾患（例えば、
心筋梗塞、発作など））、ＡＩＤＳ、アレルギー、炎症、神経変性疾患（例えば
、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜症、小
脳変性など）、移植片拒絶（急性および慢性）、対宿主性移植片病、骨髄形成異
常による疾患（例えば、再生不良性貧血など）、リウマチにおける関節組織破壊
、肝疾患（例えば、急性肝炎および慢性肝炎、肝傷害ならびに肝硬変）、自己免
疫疾患（例えば、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、
免疫複合体性糸球体腎炎、自己免疫性糖尿病、自己免疫性血小板減少性紫斑病、
グレーヴス病、橋本甲状腺炎など）、心筋症（例えば、拡張型心筋症）、糖尿病
、糖尿病合併症（例えば、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症）
、インフルエンザ、喘息、乾癬、糸球体腎炎、敗血症性ショック、ならびに潰瘍
性大腸炎。
【０６３８】 本発明のＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸および／もしくはポリペプチ
ドならびに／またはそれらのアゴニストおよび／もしくはアンタゴニストは、新
脈管形成の促進、造血の調節および創傷治癒（例えば、傷、火傷、および骨折）
において有用である。
【０６３９】 本発明のＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸および／もしくはポリペプチ
ドならびに／またはそれらのアゴニストおよび／もしくはアンタゴニストはまた
、特定の抗原、抗ウイルス性免疫応答に対する免疫応答性を増強するためのアジ
ュバントとして有用である。
【０６４０】 より一般的には、本発明のＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸および／も
しくはポリペプチドならびに／またはそれらのアゴニストおよび／もしくはアン
タゴニストは、免疫応答の調節（すなわち、増強および減少）において有用であ
る。例えば、本発明の核酸および／またはポリペプチドは、手術、外傷、放射線
療法、化学療法、および移植の準備または手術、外傷、放射線療法、化学療法、
および移植からの回復において有用であり得るか、あるいは高齢者および免疫無
防備状態の個体における免疫応答および／または免疫回復をブーストするために
使用され得る。あるいは、本発明のＴＲ１３および／またはＴＲ１４の核酸およ
び／もしくはポリペプチドならびに／またはそれらのアゴニストおよび／もしく
はアンタゴニストは、例えば、自己免疫障害の処置または予防における、免疫抑
制剤として有用である。特定の実施形態においては、本発明の核酸および／また
はポリペプチドは、慢性炎症、アレルギーまたは自己免疫状態（例えば、本明細
書中に記載されるか、そうでなければ、当該分野において公知の自己免疫状態）
を処置または予防するために使用され得る。
【０６４１】 １つの局面において、本発明は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドによって誘発さ
れるアポトーシスおよび／またはＴＲ１３媒介シグナル伝達を増大する方法に関
する。この方法は、ＴＲ１３ポリペプチドを発現する細胞に、アポトーシスおよ
び／またはＴＲ１３媒介性シグナル伝達を増加し得る有効量のＴＲ１３リガンド
、アナログまたはアゴニストを投与する工程を包含する。好ましくは、ＴＲ１３
媒介性シグナル伝達は、疾患を処置するために増加され、ここで減少されたアポ
トーシスまたは減少されたサイトカインおよび接着分子の発現が示される。アゴ
ニストとしては、可溶性形態のＴＲ１３およびＴＲ１３ポリペプチドに対するモ
ノクローナル抗体が挙げられ得る。
【０６４２】 さらなる局面において、本発明は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドによって誘発
されるアポトーシスおよび／またはＴＲ１３媒介性シグナル伝達を阻害する方法
に関する。この方法は、ＴＲ１３ポリペプチドを発現する細胞に、アポトーシス
および／またはＴＲ１３媒介性シグナル伝達を減少し得る有効量のアンタゴニス
トを投与する工程を包含する。好ましくは、ＴＲ１３媒介性シグナル伝達は、疾
患を処置するために減少され、ここで減少されたアポトーシスまたはＮＦｋＢの
発現が示される。アンタゴニストとしては、可溶性形態のＴＲ１３およびＴＲ１
３ポリペプチドに対するモノクローナル抗体が挙げられ得る。
【０６４３】 １つの局面において、本発明は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドによって誘発さ
れるアポトーシスおよび／またはＴＲ１４媒介シグナル伝達を増大する方法に関
する。この方法は、ＴＲ１４ポリペプチドを発現する細胞に、アポトーシスおよ
び／またはＴＲ１４媒介性シグナル伝達を増加し得る有効量のＴＲ１４リガンド
、アナログまたはアゴニストを投与する工程を包含する。好ましくは、ＴＲ１４
媒介性シグナル伝達は、疾患を処置するために増加され、ここで減少されたアポ
トーシスまたは減少されたサイトカインおよび接着分子の発現が示される。アゴ
ニストとしては、可溶性形態のＴＲ１４およびＴＲ１４ポリペプチドに対するモ
ノクローナル抗体が挙げられ得る。
【０６４４】 さらなる局面において、本発明は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドによって誘発
されるアポトーシスおよび／またはＴＲ１４媒介性シグナル伝達を阻害する方法
に関する。この方法は、ＴＲ１４ポリペプチドを発現する細胞に、アポトーシス
および／またはＴＲ１４媒介性シグナル伝達を減少し得る有効量のアンタゴニス
トを投与する工程を包含する。好ましくは、ＴＲ１４媒介性シグナル伝達は、疾
患を処置するために減少され、ここで減少されたアポトーシスまたはＮＦｋＢの
発現が示される。アンタゴニストとしては、可溶性形態のＴＲ１４およびＴＲ１
３ポリペプチドに対するモノクローナル抗体が挙げられ得る。
【０６４５】 「アゴニスト」によって、アポトーシスを増強または強化し得る天然に存在す
る化合物および合成の化合物が意図される。「アンタゴニスト」によって、アポ
トーシスを阻害し得る天然に存在する化合物および合成の化合物が意図される。
本発明の任意の候補「アゴニスト」または「アンタゴニスト」がアポトーシスを
阻害し得るかまたは増強し得るかは、当該分野で公知のＴＮＦ−ファミリーリガ
ンド／レセプター細胞応答アッセイ（以下により詳細に記載されるものを含む）
を用いて決定され得る。
【０６４６】 １つのこのようなスクリーニング手順は、トランスフェクトされて本発明のレ
セプターを発現するメラニン保有細胞の使用を包含する。このようなスクリーニ
ング技術は、１９９２年２月６日に公開された、国際出願公開番号ＷＯ９２／０
１８１０に記載される。このようなアッセイは、例えば、本発明のレセプターポ
リペプチドの活性化を阻害（または増強）する化合物についてスクリーニングす
るために使用され得る。このアッセイは、レセプターをコードするメラニン保有
細胞をＴＮＦファミリーリガンドおよび候補アンタゴニスト（またはアゴニスト
）の両方と接触させることによる。リガンドによって生成されるシグナルの阻害
および増強は、その化合物が、リガンド／レセプターシグナル伝達経路のアンタ
ゴニストまたはアゴニストであることを示す。
【０６４７】 他のスクリーニング技術には、レセプター活性化によって引き起こされる細胞
外ｐＨ変化を測定する系においてレセプターを発現する細胞（例えば、トランス
フェクトしたＣＨＯ細胞）の使用が含まれる。例えば、化合物は、本発明のレセ
プターポリペプチドを発現する細胞と接触され得、そしてセカンドメッセンジャ
ー応答（例えば、シグナル伝達またはｐＨ変化）が測定され得、潜在的な化合物
がレセプターを活性化するかまたは阻害するかを決定し有る。
【０６４８】 別のこのようなスクリーニング技術は、そのレセプターをコードするＲＮＡを
Ｘｅｎｏｐｕｓ卵母細胞に導入して、そのレセプターを一過性に発現する工程を
包含する。次いで、そのレセプター卵母細胞は、レセプターリガンドと接触され
得、そして化合物がスクリーニングされ得、続いてレセプターの活性化を阻害す
ると考えられている化合物についてのスクリーニングの場合、カルシウムシグナ
ルの阻害または活性化の検出が行われ得る。
【０６４９】 当該分野で周知の別のスクリーニング技術には、構築物を細胞中で発現するこ
とが含まれ、ここでそのレセプターは、ホスホリパーゼＣまたはＤに連結されて
いる。例示的な細胞には、内皮細胞、平滑筋細胞、胚腎臓細胞なとが含まれる。
このスクリーニングは、本明細書中上記のように、ホスホリパーゼシグナルから
、レセプターの活性化またはレセプターの活性化の阻害の検出によって達成され
得る。
【０６５０】 別の方法は、その表面上にレセプターを有する細胞に対する標識されたリガン
ドの結合の阻害を決定することによって、本発明のアンタゴニストのレセプター
ポリペプチドの活性化を阻害する化合物をスクリーニングする工程を包含する。
このような方法は、レセプターをコードするＤＮＡで真核生物細胞をトランスフ
ェクトして、その結果その細胞がその表面でそのレセプターを発現する工程、お
よび標識した形態の既知のリガンドの存在下で細胞を化合物と接触させる工程を
包含する。そのリガンドは、例えば、放射能によって標識され得る。レセプター
に結合した標識されたリガンドの量は、例えば、レセプターの放射能を測定する
ことによって測定される。その化合物が、レセプターに結合する標識されたリガ
ンドの減少によって決定されるようにレセプターに結合する場合、そのレセプタ
ーに対する標識されたリガンドの結合は阻害される。
【０６５１】 本発明のアゴニストおよびアンタゴニストについてのさらなるスクリーニング
アッセイは、Ｌ．Ａ．ＴａｒｔａｇｌｉａおよびＤ．Ｖ．Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（７）：４３０４−４３０７（１９９２）に記載さ
れる。
【０６５２】 従って、さらなる局面において、候補アゴニストまたはアンタゴニストがＴＮ
Ｆファミリーリガンドに対する細胞応答を増強し得るかまたは阻害し得るかを決
定するためのスクリーニング方法が提供される。この方法は、ＴＲ１３ポリペプ
チドを発現する細胞を候補化合物およびＴＮＦファミリーリガンドと接触させる
工程、細胞応答をアッセイする工程、ならびにその細胞応答を標準的な細胞応答
と比較する工程を包含し、その標準は、候補化合物の非存在下でリガンドとの接
触がなされた場合にアッセイされ、それによって、標準を上回る細胞応答の増加
は、その候補化合物がリガンド／レセプターシグナル伝達経路のアゴニストであ
ることを示し、そして標準と比較して減少した細胞応答は、その候補化合物がリ
ガンド／レセプターシグナル伝達経路のアンタゴニストであることを示す。「細
胞応答をアッセイする」によって、候補化合物および／またはＴＮＦファミリー
リガンドに対する細胞応答を定性的または定量的に測定すること（例えば、Ｔ細
胞増殖のまたはトリチウム化されたチミジン標識の増加または減少を決定または
見積もること）が意図される。本発明によって、ＴＲ１３ポリペプチドを発現す
る細胞は、内因性または外因性のいずれかで与えられたＴＮＦファミリーリガン
ドと接触され得る。
【０６５３】 従って、さらなる局面において、候補アゴニストまたはアンタゴニストがＴＮ
Ｆファミリーリガンドに対する細胞応答を増強し得るかまたは阻害し得るかを決
定するためのスクリーニング方法が提供される。この方法は、ＴＲ１４ポリペプ
チドを発現する細胞を候補化合物およびＴＮＦファミリーリガンドと接触させる
工程、細胞応答をアッセイする工程、ならびにその細胞応答を標準的な細胞応答
と比較する工程を包含し、その標準は、候補化合物の非存在下でリガンドとの接
触がなされた場合にアッセイされ、それによって、標準を上回る細胞応答の増加
は、その候補化合物がリガンド／レセプターシグナル伝達経路のアゴニストであ
ることを示し、そして標準と比較して減少した細胞応答は、その候補化合物がリ
ガンド／レセプターシグナル伝達経路のアンタゴニストであることを示す。「細
胞応答をアッセイする」によって、候補化合物および／またはＴＮＦファミリー
リガンドに対する細胞応答を定性的または定量的に測定すること（例えば、Ｔ細
胞増殖のまたはトリチウム化されたチミジン標識の増加または減少を決定または
見積もること）が意図される。本発明によって、ＴＲ１４ポリペプチドを発現す
る細胞は、内因性または外因性のいずれかで与えられたＴＮＦファミリーリガン
ドと接触され得る。
【０６５４】 本発明に従うアゴニストには、天然に存在する化合物および合成化合物（例え
ば、ＴＮＦファミリーリガンドペプチドフラグメント、トランスホーミング増殖
因子、神経伝達物質（例えば、グルタミン酸、ドパミン、Ｎ−メチル−Ｄ−アス
パラギン酸）、腫瘍サプレッサー（ｐ５３）、細胞溶解性Ｔ細胞、および代謝拮
抗物質）が含まれる。好ましいアゴニストには、化学療法剤（例えば、シスプラ
チン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、シトシンアラビノシド、ナイトロジェ
ンマスタード、メトトレキサート、およびビンクリスチン）が含まれる。他のア
ゴニストには、エタノールおよびアミロイドペプチドが含まれる（Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２６７：１４５７−１４５８（１９９５））。さらに好ましいアゴニストに
は、ＴＲ１３ポリペプチドまたはそのフラグメントに対して惹起されたポリクロ
ーナル抗体およびモノクローナル抗体が含まれる。ＴＮＦファミリーレセプター
に対して惹起されたこのようなアゴニスト抗体は、Ｌ．Ａ．Ｔａｒｔａｇｌｉａ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：９２９２−９２９
６（１９９１）；ならびにＬ．Ａ．ＴａｒｔａｇｌｉａおよびＤ．Ｖ．Ｇｏｅｄ
ｄｅｌ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：４３０４−４３０７（１９９２）に
開示される。国際出願公開番号ＷＯ ９４／０９１３７もまた参照のこと。
【０６５５】 本発明に従うアゴニストには、天然に存在する化合物および合成化合物（例え
ば、ＴＮＦファミリーリガンドペプチドフラグメント、トランスホーミング増殖
因子、神経伝達物質（例えば、グルタミン酸、ドパミン、Ｎ−メチル−Ｄ−アス
パラギン酸）、腫瘍サプレッサー（ｐ５３）、細胞溶解性Ｔ細胞、および代謝拮
抗物質）が含まれる。好ましいアゴニストには、化学療法剤（例えば、シスプラ
チン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、シトシンアラビノシド、ナイトロジェ
ンマスタード、メトトレキサート、およびビンクリスチン）が含まれる。他のア
ゴニストには、エタノールおよびアミロイドペプチドが含まれる（Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２６７：１４５７−１４５８（１９９５））。さらに好ましいアゴニストに
は、ＴＲ１４ポリペプチドまたはそのフラグメント、ならびにＴＲ１４ポリペプ
チドまたはそのフラグメントに対して惹起されたポリクローナル抗体およびモノ
クローナル抗体が含まれる。ＴＮＦファミリーレセプターに対して惹起されたこ
のようなアゴニスト抗体は、Ｔａｒｔａｇｌｉａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：９２９２−９２９６（１９９１）；ならびにＴａ
ｒｔａｇｌｉａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（７）：４３０４−４３０
７（１９９２）に開示される。国際出願公開番号ＷＯ ９４／０９１３７もまた
参照のこと。
【０６５６】 本発明に従うアンタゴニストには、天然に存在する化合物および合成化合物（
例えば、ＣＤ４０リガンド、天然アミノ酸、亜鉛、エストロゲン、アンドロゲン
、ウイルス遺伝子（例えば、アデノウイルス ＥｌＢ、バキュロウイルスｐ３５
およびＩＡＰ、牛痘ウイルスｃｒｍＡ、エプスタイン−バーウイルスＢＨＲＦ１
、ＬＭＰ−１、アフリカ豚コレラウイルスＬＭＷ５−ＨＬ、およびヘルペスウイ
ルスｙｌ３４．５）、カルパインインヒビター、システインプロテアーゼインヒ
ビター、および腫瘍プロモーター（例えば、ＰＭＡ、フェノバルビタール、およ
び＿−ヘキサクロロシクロヘキサン））が含まれる。
【０６５７】 他の潜在的なアゴニストとしては、アンチセンス分子が挙げられる。アンチセ
ンス技術は、アンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通して、または三重ヘリック
ス形成を通して、遺伝子発現を制御するために使用され得る。アンチセンス技術
は、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）
；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）において議論される。三重ヘ
リックス形成は、例えば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１
：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３
００（１９９１）において議論される。この方法は、ポリヌクレオチドの相補的
ＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づく。
【０６５８】 特定の実施形態において、本発明に従うアンタゴニストは、ＴＲ１３（配列番
号１）および／または配列番号３９に含まれる配列もしくはその相補鎖、ならび
に／あるいは寄託されたクローンＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４９および／また
はＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５０７に含まれるヌクレオチド配列に対応する核酸
である。１つの実施形態において、アンチセンス配列は、生物によって内部で生
成され、別の実施形態において、アンチセンス配列は、別々に投与される（例え
ば、Ｏｋａｎｏ，Ｈ．ら、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）およ
びＯｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）を参照のこと）。アンチセン
ス技術は、アンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通して、または三重ヘリックス
形成を通して、遺伝子発現を制御するために使用され得る。アンチセンス技術は
、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；
Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉ
ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）において議論される。三重ヘリ
ックス形成は、例えば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：
４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３０
０（１９９１）において議論される。この方法は、ポリヌクレオチドの相補的Ｄ
ＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づく。
【０６５９】 特定の実施形態において、本発明に従うアンタゴニストは、ＴＲ１４に含まれ
る配列（好ましくは、配列番号６０もしくは配列番号４）もしくはその相補鎖、
ならびに／あるいは寄託されたクローンＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３４８に含ま
れるヌクレオチド配列に対応する核酸である。１つの実施形態において、アンチ
センス配列は、生物によって内部で生成され、別の実施形態において、アンチセ
ンス配列は、別々に投与される（例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｈ．ら、Ｎｅｕｒｏｃｈ
ｅｍ．５６：５６０（１９９１）およびＯｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉ
ｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１
９８８）を参照のこと）。アンチセンス技術は、アンチセンスＤＮＡもしくはＲ
ＮＡを通して、または三重ヘリックス形成を通して、遺伝子発現を制御するため
に使用され得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃ
ｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄ
ｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９
８８）において議論される。三重ヘリックス形成は、例えば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏ
ｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎ
ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３００（１９９１）において議論される。この
方法は、ポリヌクレオチドの相補的ＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づく。
【０６６０】 例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’コー
ド部分は、約１０〜４０塩基対長のアンチセンスＲＮＡポリヌクレオチドを設計
するために使用され得る。ＤＮＡポリヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の
領域に相補的なように設計され、それによってレセプターの転写および産生を妨
害する。アンチセンスＲＮＡポリヌクレオチドは、インビボでｍＲＮＡにハイブ
リダイズし、そしてレセプターポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳をブロック
する。本明細書中に記載されるポリヌクレオチドはまた、細胞に送達され得、そ
れによってアンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡは、インビボで発現され、レセプタ
ーの産生を阻害し得る。
【０６６１】 １つの実施形態において、本発明のＴＲ１３アンチセンス核酸は、外因性配列
からの転写によって細胞内で産生される。例えば、ベクターまたはその部分は、
転写されて、本発明のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を産生する。このようなベク
ターは、ＴＲ１３アンチセンス核酸をコードする配列を含む。このようなベクタ
ーは、所望のアンチセンスＲＮＡを産生するために転写され得る限りにおいて、
エピソームのままであり得るか、または染色体に組み込まれ得る。このようなベ
クターは、当該分野で標準的な組換えＤＮＡ技術方法によって構築され得る。ベ
クターは、脊椎動物細胞中での複製および発現のために使用される、プラスミド
、ウイルス、または当該分野において公知の他のものであり得る。ＴＲ１３をコ
ードする配列またはそのフラグメントの発現は、当該分野において公知の任意の
プロモーターによって、脊椎動物（好ましくは、ヒト）の細胞において作用する
ためであり得る。このようなプロモーターは、誘導性または構成的であり得る。
このようなプロモーターには、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｒｎｏｉｓ
ｔおよびＣｈａｍｂｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ ２９：３０４−３１０（１９８１））
、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏ
ｔｏら、Ｃｅｌｌ ２２：７８７−７９７（１９８０））、ヘルペスチミジンプ
ロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ
．Ａ．７８：１４４１−１４４５（１９８１））、メタロチオネイン遺伝子の調
節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９−４２（１９８２）
）などが含まれるがこれらに限定されない。
【０６６２】 メッセージの５’末端に相補的なオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＵＧ開始コ
ドンまでのおよびＡＵＧ開始コドンを含む５’非翻訳配列）は、翻訳を阻害する
際に最も効率的に働くはずである。しかし、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的
な配列は、同様にｍＲＮＡの翻訳を阻害する際に有効であることが示されてきた
。一般的には、Ｗａｇｎｅｒ，Ｒ．、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３−３３５（
１９９４）を参照のこと。従って、図１Ａ〜Ｃまたは図７Ａ〜Ｄに示されるＴＲ
１３の５’非翻訳、非コード領域または３’ 非翻訳、非コード領域のいずれか
に相補的なオリゴヌクレオチドは、内因性ＴＲ１３ ｍＲＮＡの翻訳を阻害する
ためのアンチセンスアプローチにおいて使用され得る。ｍＲＮＡの５’非翻訳領
域に相補的なオリゴヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの相補物を含むべきであ
る。ＴＲ１３コード領域配列に相補的なアンチセンスヌクレオチドが用いられる
が、非翻訳領域に相補的なアンチセンスヌクレオチドが最も好ましい。
【０６６３】 ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、より効率
的でない翻訳のインヒビターであるが、本発明に従って使用され得る。ＴＲ１３ ｍＲＮＡの５’、３’、またはコード領域にハイブリダイズするように設計さ
れたかどうかに関わらず、アンチセンス核酸は、少なくとも６ヌクレオチド長で
あるべきであり、そして好ましくは、６〜約５０ヌクレオチド長の範囲のオリゴ
ヌクレオチドである。特定の局面において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも
約１０ヌクレオチド、少なくとも約１７ヌクレオチド、少なくとも約２５ヌクレ
オチド、または少なくとも約５０ヌクレオチドである。
【０６６４】 本発明のアンチセンス核酸は、ＴＲ１３遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一
部に相補的な配列を含む。しかし、完全な相補性は、好ましいものの、必要なわ
けではない。「ＲＮＡの少なくとも一部に相同な」配列とは、本明細書中で引用
される場合、ＲＮＡにハイブリダイズし得るのに十分な相補性を有して、安定な
二重鎖を形成する配列を意味する。二本鎖ＴＲ１３アンチセンス核酸の場合、従
って、二重鎖ＤＮＡの一本鎖が試験され得るか、または三重鎖形成がアッセイさ
れ得る。ハイブリダイズする能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の長
さの両方に依存する。一般的に、ハイブリダイズする核酸が長いほど、それが含
み得、そしてなお安定な二重鎖（または場合によっては三重鎖）を形成するＴＲ
１３ ＲＮＡとの塩基のミスマッチがより多くなる。当業者は、ハイブリダイズ
した複合体の融点を決定するための標準的な手段の使用によってミスマッチの許
容できる程度を確認し得る。
【０６６５】 １つの実施形態において、本発明のＴＲ１４アンチセンス核酸は、外因性配列
からの転写によって細胞内で産生される。例えば、ベクターまたはその部分は、
転写されて、本発明のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を産生する。このようなベク
ターは、ＴＲ１４アンチセンス核酸をコードする配列を含む。このようなベクタ
ーは、所望のアンチセンスＲＮＡを産生するために転写され得る限りにおいて、
エピソームのままであり得るか、または染色体に組み込まれ得る。このようなベ
クターは、当該分野で標準的な組換えＤＮＡ技術方法によって構築され得る。ベ
クターは、脊椎動物細胞中での複製および発現のために使用される、プラスミド
、ウイルス、または当該分野において公知の他のものであり得る。ＴＲ１４をコ
ードする配列またはそのフラグメントの発現は、当該分野において公知の任意の
プロモーターによって、脊椎動物（好ましくは、ヒト）の細胞において作用する
ためであり得る。このようなプロモーターは、誘導性または構成的であり得る。
このようなプロモーターには、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｒｎｏｉｓ
ｔおよびＣｈａｍｂｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ ２９：３０４−３１０（１９８１））
、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏ
ｔｏら、Ｃｅｌｌ ２２：７８７−７９７（１９８０））、ヘルペスチミジンプ
ロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ
．Ａ．７８：１４４１−１４４５（１９８１））、メタロチオネイン遺伝子の調
節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９−４２（１９８２）
）などが含まれるがこれらに限定されない。
【０６６６】 本発明のアンチセンス核酸は、ＴＲ１４遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一
部に相補的な配列を含む。しかし、完全な相補性は、好ましいものの、必要なわ
けではない。「ＲＮＡの少なくとも一部に相同な」配列とは、本明細書中で引用
される場合、ＲＮＡにハイブリダイズし得るのに十分な相補性を有して、安定な
二重鎖を形成する配列を意味する。二本鎖ＴＲ１４アンチセンス核酸の場合、従
って、二重鎖ＤＮＡの一本鎖が試験され得るか、または三重鎖形成がアッセイさ
れ得る。ハイブリダイズする能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の長
さの両方に依存する。一般的に、ハイブリダイズする核酸が長いほど、それが含
み得、そしてなお安定な二重鎖（または場合によっては三重鎖）を形成するＴＲ
１４ ＲＮＡとの塩基のミスマッチがより多くなる。当業者は、ハイブリダイズ
した複合体の融点を決定するための標準的な手段の使用によってミスマッチの許
容できる程度を確認し得る。
【０６６７】 メッセージの５’末端に相補的なオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＵＧ開始コ
ドンまでのおよびＡＵＧ開始コドンを含む５’非翻訳配列）は、翻訳を阻害する
際に最も効率的に働くはずである。しかし、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的
な配列は、同様にｍＲＮＡの翻訳を阻害する際に有効であることが示されてきた
。一般的には、Ｗａｇｎｅｒ，Ｒ．、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３−３３５（
１９９４）を参照のこと。従って、図４Ａ〜Ｄに示されるＴＲ１４の５’非翻訳
、非コード領域または３’ 非翻訳、非コード領域のいずれかに相補的なオリゴ
ヌクレオチドは、内因性ＴＲ１４ ｍＲＮＡの翻訳を阻害するためのアンチセン
スアプローチにおいて使用され得る。ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的なオリ
ゴヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの相補物を含むべきである。ＴＲ１４コー
ド領域配列に相補的なアンチセンスヌクレオチドが用いられるが、非翻訳領域に
相補的なアンチセンスヌクレオチドが最も好ましい。
【０６６８】 ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、より効率
的でない翻訳のインヒビターであるが、本発明に従って使用され得る。ＴＲ１４ ｍＲＮＡの５’、３’、またはコード領域にハイブリダイズするように設計さ
れたかどうかに関わらず、アンチセンス核酸は、少なくとも６ヌクレオチド長で
あるべきであり、そして好ましくは、６〜約５０ヌクレオチド長の範囲のオリゴ
ヌクレオチドである。特定の局面において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも
約１０ヌクレオチド、少なくとも約１７ヌクレオチド、少なくとも約２５ヌクレ
オチド、または少なくとも約５０ヌクレオチドである。
【０６６９】 本発明の核酸は、一本鎖または二本鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡまたはそのキメ
ラ混合物または誘導体または修飾バージョンであり得る。オリゴヌクレオチドは
、塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格で修飾されて、例えば、分子の安定性、
ハイブリダイゼーションなどを改善し得る。オリゴヌクレオチドは、ペプチドの
ような他の付加された基（例えば、インビボで宿主細胞レセプターを標的化する
ために）または細胞膜を横切る輸送を容易にするための薬剤（例えば、Ｌｅｔｓ
ｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６
５５３−６５５６（１９８９）；Ｌｅｍａｉｔｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４．６４８−６５２（１９８７）；ＰＣＴ公開
番号ＷＯ８８／０９８１０（１９８８年１２月１５日公開）を参照のこと）、ま
たは血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４（１９８８年４
月２５日公開）を参照のこと）、ハイブリダイゼーションによって誘発される切
断剤（例えば、Ｋｒｏｌら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：９５８−９７６
（１９８８）を参照のこと）または挿入（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ）薬剤（
例えば、Ｚｏｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９（１９８８）を参照
のこと）を含み得る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例
えば、ペプチド、ハイブリダイゼーションによって誘発される架橋剤、輸送剤、
ハイブリダイゼーションによって誘発される切断剤など）と結合体化され得る。
【０６７０】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下を含む群から選択されるがこれらに
限定されない、少なくとも１つの修飾塩基部分を含み得る：５−フルオロウラシ
ル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサ
ンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチ
ル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カ
ルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシ
ルキューオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニ
ン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２
−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン
、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノ
メチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン、５−メトキシカ
ルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソ
ペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗ
ｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシ
ン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５
−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−
オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ
−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミ
ノプリン。
【０６７１】 アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、アラビノース、２−フルオロアラビ
ノース、キシルロース、およびヘキソースから選択されるがこれらに限定されな
い、少なくとも１つの修飾された糖部分を含む。
【０６７２】 なお別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロチ
オエート、ホスホルアミドチオエート、ホスホルアミデート、ホスホルジアミデ
ート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステル、およびホルムアセタ
ールまたはそれらのアナログを含む群から選択されるがこれらに限定されない、
少なくとも１つの修飾されたリン酸骨格を含む。
【０６７３】 なお別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、α−アノマ
ー性オリゴヌクレオチドである。α−アノマー性オリゴヌクレオチドは、相補的
ＲＮＡと特異的二本鎖ハイブリッドを形成し、ここで、通常のβユニットとは反
対に、その鎖は互いに平行に走る（Ｇａｕｔｉｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．１５：６６２５−６６４１（１９８７））。そのオリゴヌクレオチドは
、２＿−メチルリボヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅ
ｓ．１５：６１３１−６１４８（１９８７））またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナ
ログ（Ｉｎｏｕｅら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３０（１９８７
））である。
【０６７４】 本発明の核酸は、当該分野で公知の標準的な方法によって（例えば、自動ＤＮ
Ａシンセサイザー（例えば、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓなどから市販されているようなもの）の使用によって）合成され得る
。例として、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎら（Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８））の方法によって合成さ
れ得、メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御されたポアのガラスポリ
マー支持体（Ｓａｒｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．８５：７４４８−７４５１（１９８８））などの使用によって調製され得る
。
【０６７５】 本発明に従う潜在的なアンタゴニストはまた、触媒ＲＮＡ、すなわちリボザイ
ムを含む（例えば、１９９０年１０月４日に公開された国際出願公開番号ＷＯ
９０／１１３６４；Ｓａｒｖｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１２２２−１２
２５（１９９０）を参照のこと）。部位特異的な認識配列でｍＲＮＡを切断する
リボザイムはＴＲ１３ ｍＲＮＡを破壊するために使用され得るが、ハンマーヘ
ッド型リボザイムの使用が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲ
ＮＡと相補的な塩基対を形成する隣接境域によって指示される位置においてｍＲ
ＮＡを切断する。唯一の要件は、標的ｍＲＮＡが以下の２つの塩基配列：５’−
ＵＧ−３’を有することである。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および作製
は、当該分野において周知であり、そしてＨａｓｅｌｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃ
ｈ、Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１（１９８８）においてより十分に記
載される。図１Ａ〜Ｃ（配列番号１）または図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）のＴＲ
１３のヌクレオチド配列中において、多数の潜在的なハンマーヘッド型リボザイ
ム切断部位が存在する。好ましくは、リボザイムは、切断認識部位がＴＲ１３
ｍＲＮＡの５’末端の近傍に位置するように；すなわち、効率を増大させ、そし
て非機能的なＲＮＡ転写物の細胞内蓄積を最小化するように操作される。
【０６７６】 アンチセンスアプローチにおけるのと同様に、本発明のリボザイムは、修飾さ
れたオリゴヌクレオチドから構成され得（例えば、安定性の改善、標的化などの
ために）、そしてインビボでＴＲ１３を発現する細胞に送達されるべきである。
リボザイムをコードするＤＮＡ構築物は、ＤＮＡをコードするアンチセンスの導
入についての上記と同様の様式で細胞に導入され得る。送達の好ましい方法は、
強力な構成的プロモーター（例えば、ｐｏｌＩＩＩプロモーターまたはｐｏｌＩ
Ｉプロモーター）の制御下でリボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築物を使用し
て、その結果、トランスフェクトされた細胞は、内因性のＴＲ１３メッセージを
破壊し、そして翻訳を妨害するのに十分な量のリボザイムを産生することを包含
する。このようなリボザイムは、アンチセンス分子とは違って触媒性であり、よ
り低い細胞内濃度が効率のために必要である。
【０６７７】 本発明に従う潜在的なアンタゴニストはまた、触媒ＲＮＡ、すなわちリボザイ
ムを含む（例えば、１９９０年１０月４日に公開された国際出願公開番号ＷＯ
９０／１１３６４；Ｓａｒｖｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１２２２−１２
２５（１９９０）を参照のこと）。部位特異的な認識配列でｍＲＮＡを切断する
リボザイムはＴＲ１４ ｍＲＮＡを破壊するために使用され得るが、ハンマーヘ
ッド型リボザイムの使用が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲ
ＮＡと相補的な塩基対を形成する隣接境域によって指示される位置においてｍＲ
ＮＡを切断する。唯一の要件は、標的ｍＲＮＡが以下の２つの塩基配列：５’−
ＵＧ−３’を有することである。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および作製
は、当該分野において周知であり、そしてＨａｓｅｌｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃ
ｈ、Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１（１９８８）においてより十分に記
載される。ＴＲ１４のヌクレオチド配列（好ましくは、図１０Ａ〜Ｈ（配列番号
６０）または図４Ａ〜Ｄ（配列番号４）中において、多数の潜在的なハンマーヘ
ッド型リボザイム切断部位が存在する。好ましくは、リボザイムは、切断認識部
位がＴＲ１４ ｍＲＮＡの５’末端の近傍に位置するように；すなわち、効率を
増大させ、そして非機能的なＲＮＡ転写物の細胞内蓄積を最小化するように操作
される。
【０６７８】 アンチセンスアプローチにおけるのと同様に、本発明のリボザイムは、修飾さ
れたオリゴヌクレオチドから構成され得（例えば、安定性の改善、標的化などの
ために）、そしてインビボでＴＲ１４を発現する細胞に送達されるべきである。
リボザイムをコードするＤＮＡ構築物は、ＤＮＡをコードするアンチセンスの導
入についての上記と同様の様式で細胞に導入され得る。送達の好ましい方法は、
強力な構成的プロモーター（例えば、ｐｏｌＩＩＩプロモーターまたはｐｏｌＩ
Ｉプロモーター）の制御下でリボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築物を使用し
て、その結果、トランスフェクトされた細胞は、内因性のＴＲ１４メッセージを
破壊し、そして翻訳を妨害するのに十分な量のリボザイムを産生することを包含
する。このようなリボザイムは、アンチセンス分子とは違って触媒性であり、よ
り低い細胞内濃度が効率のために必要である。
【０６７９】 内因性遺伝子発現はまた、ＴＲ１３遺伝子および／またはそのプロモーターを
、標的化された相同組換えを用いて、不活性化または「ノックアウトする」こと
によって減少され得る（例えば、Ｓｍｉｔｈｉｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３１７：
２３０−２３４（１９８５）；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ、Ｃｅｌｌ ５１：５０３−５１２（１９８７）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ５：３
１３−３２１（１９８９）（これらの各々は、その全体が参考として本明細書中
で援用される）を参照のこと）。例えば、内因性ポリヌクレオチド配列（その遺
伝子のコード領域または調節領域のいずれか）に相同なＤＮＡと隣接する、本発
明の変異体、非機能的ポリヌクレオチド（または完全に関連しないＤＮＡ配列）
が、選択マーカーおよび／またはネガティブ選択マーカーとともに、またはこれ
らの選択マーカーなしで使用され、インビボで本発明のポリペプチドを発現する
細胞をトランスフェクトし得る。別の実施形態において、当該分野において公知
の技術が使用されて、目的の遺伝子を含むがその遺伝子を発現しない、細胞中で
ノックアウトを生成する。標的化された相同組換えを介するＤＮＡ構築物の挿入
は、標的遺伝子の不活性化を生じる。このようなアプローチは、研究分野および
農業分野において特に適しており、ここでは胚性幹細胞への改変が不活性な標的
された遺伝子を有する動物子孫を生成するために使用され得る（例えば、Ｔｈｏ
ｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ １９８７ならびにＴｈｏｍｐｓｏｎ １９８９
、前出を参照のこと）。しかし、このアプローチは、組換えＤＮＡ構築物が、当
業者に明らかである適切なウイルスベクターを使用して、インビボで必要とされ
る部位に直接的に投与されるかまたは標的化されるならば、ヒトにおける使用に
慣用的に適合され得る。この段落に引用される文書のそれぞれの内容は、その全
体が参考として本明細書中で援用される。
【０６８０】 内因性遺伝子発現はまた、ＴＲ１４遺伝子および／またはそのプロモーターを
、標的化された相同組換えを用いて、不活性化または「ノックアウトする」こと
によって減少され得る（例えば、Ｓｍｉｔｈｉｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３１７：
２３０−２３４（１９８５）；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ、Ｃｅｌｌ ５１：５０３−５１２（１９８７）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ５：３
１３−３２１（１９８９）（これらの各々は、その全体が参考として本明細書中
で援用される）を参照のこと）。例えば、内因性ポリヌクレオチド配列（その遺
伝子のコード領域または調節領域のいずれか）に相同なＤＮＡと隣接する、本発
明の変異体、非機能的ポリヌクレオチド（または完全に関連しないＤＮＡ配列）
が、選択マーカーおよび／またはネガティブ選択マーカーとともに、またはこれ
らの選択マーカーなしで使用され、インビボで本発明のポリペプチドを発現する
細胞をトランスフェクトし得る。別の実施形態において、当該分野において公知
の技術が使用されて、目的の遺伝子を含むがその遺伝子を発現しない、細胞中で
ノックアウトを生成する。標的化された相同組換えを介するＤＮＡ構築物の挿入
は、標的遺伝子の不活性化を生じる。このようなアプローチは、研究分野および
農業分野において特に適しており、ここでは胚性幹細胞への改変が不活性な標的
された遺伝子を有する動物子孫を生成するために使用され得る（例えば、Ｔｈｏ
ｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ １９８７ならびにＴｈｏｍｐｓｏｎ １９８９
、前出を参照のこと）。しかし、このアプローチは、組換えＤＮＡ構築物が、当
業者に明らかである適切なウイルスベクターを使用して、インビボで必要とされ
る部位に直接的に投与されるかまたは標的化されるならば、ヒトにおける使用に
慣用的に適合され得る。この段落に引用される文書のそれぞれの内容は、その全
体が参考として本明細書中で援用される。
【０６８１】 遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、
および／またはコドンシャッフリングの技術（集合的に「ＤＮＡシャッフリング
」という）を利用して、ＴＲ１３の活性を調節し得、それによってＴＲ１３のア
ゴニストおよびアンタゴニストを効果的に生成する。一般に、米国特許第５，６
０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５．８３０，７２１号、同第
５，８３４，２５２号、および同第５，８３７，４５８号、ならびにＰａｔｔｅ
ｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４〜３３（
１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（
２）：７６〜８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２
８７：２６５〜７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏおよびＢｌａｓｃｏ
、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）３０８〜１３（１９９８）（これら
の特許および刊行物の各々は、本明細書において参考として援用される）を参照
のこと。１つの実施形態において、ＴＲ１３核酸および対応するポリペプチドの
変更は、ＤＮＡシャッフリングによって達成され得る。ＤＮＡシャッフリングは
、相同性、または部位特異的な組換えによる、２つ以上のＤＮＡセグメントの、
所望のＴＲ１３分子への構築を含む。別の実施形態において、ＴＲ１３核酸およ
び対応するポリペプチドは、組換えの前に、誤りがちな（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎ
ｅ）ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法によるランダム変異誘発
に供することによって、変更され得る。別の実施形態において、ＴＲ１３の１つ
以上の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、フラグメントなどが、１
つ以上の非相同的な分子の１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、ドメイン、
フラグメントなどと組換えられ得る。好ましい実施形態において、非相同的な分
子は、ＴＮＦＲファミリーメンバーである。特定の実施形態において、非相同的
な分子は、以下からなる群より選択される：可溶形態のＴＮＦ−α、リンホトキ
シン−α（ＬＴ−α、ＴＮＦ−βとしても知られる）、ＬＴ−β（ＬＴ−α２−
βのヘテロトリマー複合体において見出される）、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２
７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ
−γ（国際公開第ＷＯ ９６／１４３２８号）、ＴＲＡＩＬ、ＡＩＭ−ＩＩ（国
際公開番号ＷＯ９７／３４９１１）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８
（６）：１１８５−１１９０）、エンドカイン−α（国際公開番号ＷＯ９８／０
７８８０）、ニュートロカイン−α（国際公開番号ＷＯ９８／１８９２１）、Ｔ
ＷＥＡＫ、ＯＰＧ、ＯＸ４０、および神経成長因子（ＮＧＦ）、ならびに可溶性
形態のＦａｓ、可溶性形態のＣＤ３０、可溶性形態のＣＤ２７、可溶性形態のＣ
Ｄ４０および可溶性形態の４−ＩＢＢ、ＴＲ２（国際公開番号ＷＯ９６／３４０
９５）、ＤＲ３（国際公開番号ＷＯ９７／３３９０４）、ＤＲ４（国際公開番号
ＷＯ９８／３２８５６）、ＴＲ５（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９３）、ＴＲ
６（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９４）、ＴＲ７（国際公開番号ＷＯ９８／４
１６２９）、ＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際公開番号ＷＯ９８／５６８９２）、ＴＲ１
０（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９４）、３１２Ｃ２（国際公開番号ＷＯ９８
／０６８４２）、およびＴＲ１２、ならびに可溶性形態のＣＤ１５４、可溶性形
態のＣＤ７０、および可溶性形態のＣＤ１５３。さらに好ましい実施形態におい
て、異種分子は、ＴＮＦファミリーの任意のメンバーである。
【０６８２】 遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、
および／またはコドンシャッフリングの技術（集合的に「ＤＮＡシャッフリング
」という）を利用して、ＴＲ１４の活性を調節し得、それによってＴＲ１４のア
ゴニストおよびアンタゴニストを効果的に生成する。一般に、米国特許第５，６
０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５．８３０，７２１号、同第
５，８３４，２５２号、および同第５，８３７，４５８号、ならびにＰａｔｔｅ
ｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４〜３３（
１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（
２）：７６〜８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２
８７：２６５〜７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏおよびＢｌａｓｃｏ
、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）３０８〜１３（１９９８）（これら
の特許および刊行物の各々は、本明細書において参考として援用される）を参照
のこと。１つの実施形態において、ＴＲ１４核酸および対応するポリペプチドの
変更は、ＤＮＡシャッフリングによって達成され得る。ＤＮＡシャッフリングは
、相同性、または部位特異的な組換えによる、２つ以上のＤＮＡセグメントの、
所望のＴＲ１４分子への構築を含む。別の実施形態において、ＴＲ１４核酸およ
び対応するポリペプチドは、組換えの前に、誤りがちな（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎ
ｅ）ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法によるランダム変異誘発
に供することによって、変更され得る。別の実施形態において、ＴＲ１４の１つ
以上の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、フラグメントなどが、１
つ以上の非相同的な分子の１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、ドメイン、
フラグメントなどと組換えられ得る。好ましい実施形態において、非相同的な分
子は、ＴＮＦＲファミリーメンバーである。特定の実施形態において、非相同的
な分子は、以下からなる群より選択される：可溶形態のＴＮＦ−α、リンホトキ
シン−α（ＬＴ−α、ＴＮＦ−βとしても知られる）、ＬＴ−β（ＬＴ−α２−
βのヘテロトリマー複合体において見出される）、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２
７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ
−γ（国際公開第ＷＯ ９６／１４３２８号）、ＴＲＡＩＬ、ＡＩＭ−ＩＩ（国
際公開番号ＷＯ９７／３４９１１）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８
（６）：１１８５−１１９０）、エンドカイン−α（国際公開番号ＷＯ９８／０
７８８０）、ニュートロカイン−α（国際公開番号ＷＯ９８／１８９２１）、Ｔ
ＷＥＡＫ、ＯＰＧ、ＯＸ４０、および神経成長因子（ＮＧＦ）、ならびに可溶性
形態のＦａｓ、可溶性形態のＣＤ３０、可溶性形態のＣＤ２７、可溶性形態のＣ
Ｄ４０および可溶性形態の４−ＩＢＢ、ＴＲ２（国際公開番号ＷＯ９６／３４０
９５）、ＤＲ３（国際公開番号ＷＯ９７／３３９０４）、ＤＲ４（国際公開番号
ＷＯ９８／３２８５６）、ＴＲ５（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９３）、ＴＲ
６（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９４）、ＴＲ７（国際公開番号ＷＯ９８／４
１６２９）、ＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際公開番号ＷＯ９８／５６８９２）、ＴＲ１
０（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９４）、３１２Ｃ２（国際公開番号ＷＯ９８
／０６８４２）、およびＴＲ１２、ならびに可溶性形態のＣＤ１５４、可溶性形
態のＣＤ７０、および可溶性形態のＣＤ１５３。さらに好ましい実施形態におい
て、異種分子は、ＴＮＦファミリーの任意のメンバーである。
【０６８３】 他の実施形態では、本発明に従うアンタゴニストは、ＴＲ１３の可溶型（例え
ば、図に開示される全長レセプターの細胞外領域からのリガンド結合ドメイン、
および／またはシステインリッチドメインの１、２、３、もしくは４以上の任意
の組合せを含む、図１Ａ〜Ｃ（配列番号２）または図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）
に示されるＴＲ１３のフラグメント）を含む。ＴＲ１３のこのような可溶型のレ
セプター（これは、天然に存在するか、または合成であり得る）は、ＴＮＦファ
ミリーリガンドへの結合について、このレセプターの細胞表面結合形態と競合す
ることによって、ＴＲ１３媒介シグナル伝達を拮抗する。本発明のアンタゴニス
トはまた、ＴＮＦファミリーリガンドに特異的な抗体、ＴＲ１３ポリペプチドに
特異的な抗体、およびＴＲ１３融合タンパク質を含む。
【０６８４】 他の実施形態では、本発明に従うアンタゴニストは、ＴＲ１４の可溶型（例え
ば、好ましくは、全長レセプターの細胞外領域からのリガンド結合ドメイン、お
よび／またはシステインリッチドメインを含む、図１０Ａ〜Ｈ（配列番号６１）
または図４Ａ〜Ｄ（配列番号５）に示されるＴＲ１４のフラグメント）を含む。
ＴＲ１４のこのような可溶型のレセプター（これは、天然に存在するか、または
合成であり得る）は、ＴＮＦファミリーリガンドへの結合について、このレセプ
ターの細胞表面結合形態と競合することによって、ＴＲ１４媒介シグナル伝達を
拮抗する。本発明のアンタゴニストはまた、ＴＮＦファミリーリガンドに特異的
な抗体、ＴＲ１４ポリペプチドに特異的な抗体、およびＴＲ１４融合タンパク質
を含む。
【０６８５】 「ＴＮＦファミリーリガンド」とは、ＴＮＦレセプターファミリーのメンバー
と結合し得、そしてリガンド／レセプターシグナル伝達経路を誘導および／また
はブロックする、天然に存在するリガンド、組換えリガンド、および合成リガン
ドを意図する。ＴＮＦリガンドファミリーのメンバーとしては、以下が挙げられ
るが、これらに限定されない：ＴＮＦ−α、リンホトキシン−α（ＬＴ−α、Ｔ
ＮＦ−βとしても知られる）、ＬＴ−β（ＬＴ−α２−βのヘテロトリマー複合
体において見出される）、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ
４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ−γ（国際公開第ＷＯ
９６／１４３２８号）、ＴＲＡＩＬ、ＡＩＭ−ＩＩ（国際公開番号ＷＯ９７／３
４９１１）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１
９０）、エンドカイン−α（国際公開番号ＷＯ９８／０７８８０）、ニュートロ
カイン−α（国際公開番号ＷＯ９８／１８９２１）、ＴＷＥＡＫ、ＯＰＧ、ＯＸ
４０、および神経成長因子（ＮＧＦ）、ならびに可溶性形態のＦａｓ、可溶性形
態のＣＤ３０、可溶性形態のＣＤ２７、可溶性形態のＣＤ４０および可溶性形態
の４−ＩＢＢ、ＴＲ２（国際公開番号ＷＯ９６／３４０９５）、ＤＲ３（国際公
開番号ＷＯ９７／３３９０４）、ＤＲ４（国際公開番号ＷＯ９８／３２８５６）
、ＴＲ５（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９３）、ＴＲ６（国際公開番号ＷＯ９
８／３０６９４）、ＴＲ７（国際公開番号ＷＯ９８／４１６２９）、ＲＡＮＫ、
ＴＲ９（国際公開番号ＷＯ９８／５６８９２）、ＴＲ１０（国際公開番号ＷＯ９
８／３０６９４）、３１２Ｃ２（国際公開番号ＷＯ９８／０６８４２）、および
ＴＲ１２、ならびに可溶性形態のＣＤ１５４、可溶性形態のＣＤ７０、および可
溶性形態のＣＤ１５３。
【０６８６】 ＴＮＦ−αは、１型単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ−１）による感染からマウスを
防御することが示されている（Ｒｏｓｓｏｌ−Ｖｏｔｈら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒ
ｏｌ．７２：１４３−１４７（１９９１））。ＴＮＦ−αの防御効果の機構は、
未知であるが、インターフェロンもＮＫ細胞殺害もどちらも関与しないようであ
る。このファミリーの１つのメンバーは、ＨＳＶ−１の細胞への侵入を媒介する
ことが示されている（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら、Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎ
ｅｗｔ．７：１５９（１９９６））。さらに、このメンバーの細胞外ドメインに
特異的な抗体は、細胞へのＨＳＶ−１の侵入をブロックする。従って、本発明の
ＴＲ１３アンタゴニストとしては、ＴＲ１３アミノ酸配列およびウイルスの細胞
への侵入の媒介を妨害し得る、抗体の両方が挙げられる。このような配列および
抗体は、ウイルスに結合するために位置されている細胞表面と競合することか、
または細胞表面レセプターへのウイルスの結合を直接ブロックすることかのいず
れかによって機能し得る。
【０６８７】 本発明に従う抗体はまた、本発明のＴＲ１３免疫源および／または本発明の抗
原を用いる任意の種々の標準的方法によって調製され得る。示されるように、こ
のようなＴＲ１３免疫原および／または抗原としては、全長ＴＲ１３ポリペプチ
ドおよびＴＲ１３ポリペプチドフラグメント（例えば、細胞外ドメイン、図１Ａ
〜Ｃおよび／または図７Ａ〜Ｄに開示される４つのシステインリッチドメインの
いずれか１つ、リガンド結合ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む
）が挙げられる。
【０６８８】 本発明に従う、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体のアゴニストま
たはアンタゴニストは、本明細書中に開示される方法および／または当該分野で
公知の方法（例えば、ＴａｒｔａｇｌｉａおよびＧｏｅｄｄｅｌ、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２６７（７）：４３０４−４３０７（１９９２）；Ｔａｒｔａｇｌ
ｉａら、Ｃｅｌｌ ７３：２１３−２１６（１９９３）、ならびに国際出願公開
番号ＷＯ ９４／０９１３７（これらの３つの適用の各々の内容は、その全体が
参考として本明細書中に援用される）に記載される方法）に従って惹起され得、
そして好ましくは、配列番号２または配列番号４０のアミノ酸配列を有する本発
明のＴＲ１３ポリペプチドに特異的である。
【０６８９】 ＴＮＦ−αは、１型単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ−１）による感染からマウスを
防御することが示されている（Ｒｏｓｓｏｌ−Ｖｏｔｈら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒ
ｏｌ．７２：１４３−１４７（１９９１））。ＴＮＦ−αの防御効果の機構は、
未知であるが、インターフェロンもＮＫ細胞殺害もどちらも関与しないようであ
る。このファミリーの１つのメンバーは、ＨＳＶ−１の細胞への侵入を媒介する
ことが示されている（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら、Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎ
ｅｗｔ．７：１５９（１９９６））。さらに、このメンバーの細胞外ドメインに
特異的な抗体は、細胞へのＨＳＶ−１の侵入をブロックする。従って、本発明の
ＴＲ１４アンタゴニストとしては、ＴＲ１４アミノ酸配列およびウイルスの細胞
への侵入の媒介を妨害し得る、抗体の両方が挙げられる。このような配列および
抗体は、ウイルスに結合するために位置されている細胞表面と競合することか、
または細胞表面レセプターへのウイルスの結合を直接ブロックすることかのいず
れかによって機能し得る。
【０６９０】 本発明に従う抗体は、本発明のＴＲ１４免疫原および／または抗原を使用して
種々の方法のいずれかによって調製され得る。示されるように、このようなＴＲ
１４免疫原および／または抗原としては、全長ＴＲ１４ポリペプチド（リーダー
配列を含んでも含まなくてもよい）およびＴＲ１４ポリペプチドフラグメント（
例えば、細胞外ドメイン、システインが豊富なドメイン、リガンド結合ドメイン
、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメイン、またはその任意の組み合わせ）が挙
げられる。
【０６９１】 ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体のアゴニストまたはアンタゴニ
ストは、Ｔａｒｔａｇｌｉａ Ｌ．Ａ．およびＧｏｅｄｄｅｌ Ｄ．Ｖ．、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（７）：４３０４−４３０７（１９９２）；Ｔａｒ
ｔａｇｌｉａ Ｌ．Ａ．ら、Ｃｅｌｌ ７３：２１３−２１６（１９９３）、な
らびに国際出願公開番号ＷＯ ９４／０９１３７（これらの３つの出願の各々の
内容は、その全体が参考として本明細書中に援用される）に記載される方法に従
って惹起され得、そして好ましくは、配列番号６１または配列番号５のアミノ酸
配列を有する本発明のＴＲ１４ポリペプチドに特異的である。
【０６９２】 本発明に従うさらなるアゴニストは、ＴＲ１３の可溶型（すなわち、図１Ａ〜
Ｃまたは図７Ａ〜Ｄに示されるＴＲ１３ポリペプチド配列の細胞外領域からのリ
ガンド結合ドメイン、および／または１、２、３、４以上のシステインが豊富な
ドメインを含むＴＲ１３フラグメント）を含む。このような可溶型のレセプター
（これは、天然に存在するか、または合成であり得る）は、ＴＮＦファミリーリ
ガンドへの結合について細胞表面ＴＮ１３と競合することによって、ＴＮ１３媒
介シグナル伝達をアンタゴナイズする。さらに、可溶性ＴＲ１３は、ＴＮＦリガ
ンド（例えば、ＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬまたはＡＩＭ−ＩＩ）を誘導するアポプト
ーシスに結合し得かつＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬ、ＡＩＭ−ＩＩ、バインディングま
たは他のＴＮＦファミリーメンバーについてより効果的に競合し得、利用可能な
ＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬ、ＡＩＭ−ＩＩまたは他のＴＮＦファミリーメンバーを減
少し、機能的死ドメインを有するレセプターへ結合する。従って、リガンド結合
ドメインおよび／または１以上のシステインが豊富なＴＲ１３のドメインを含む
このレセプターの可溶型は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導されたアポ
トーシスを阻害し得る新規なサイトカインである。これらは、好ましくは、ダイ
マーまたはトリマーとして発現される。なぜなら、これらは、アンタゴニストの
ような可溶型レセプター（ＩｇＧＦｃ−ＴＮＦレセプターファミリー融合体）の
モノマー形態より優れていると示されるからである。他のこのようなサイトカイ
ンは当該分野で公知であり、そしてＦａｓリガンドによって誘導されるアポトー
シスを制限するように生理学的に作用するＦａｓＢ（マウスＦａｓレセプターの
可溶型）（Ｈｕｇｈｅｓ，Ｄ．Ｐ．およびＣｒｉｓｐｅ，Ｉ．Ｎ．、Ｊ．Ｅｘｐ
．Ｍｅｄ．１８２：１３９５−１４０１（１９９５））を含む。
【０６９３】 本発明に従うアンタゴニストは、ＴＲ１４の可溶型（すなわち、全長レセプタ
ーの細胞外領域からのリガンド結合ドメイン、および／または１システインが豊
富なドメインを含むＴＲ１４フラグメント）を含む。このような可溶型のレセプ
ター（これは、天然に存在するか、または合成であり得る）は、ＴＮＦファミリ
ーリガンドへの結合について細胞表面ＴＮ１４と競合することによって、ＴＮ１
４媒介シグナル伝達をアンタゴナイズする。さらに、可溶性ＴＲ１４は、ＴＮＦ
リガンド（例えば、ＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬまたはＡＩＭ−ＩＩ）を誘導するアポ
プトーシスに結合し得かつＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬ、ＡＩＭ−ＩＩ、バインディン
グまたは他のＴＮＦファミリーメンバーについてより効果的に競合し得、利用可
能なＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬ、ＡＩＭ−ＩＩまたは他のＴＮＦファミリーメンバー
を減少し、機能的死ドメインを有するレセプターへ結合する。従って、リガンド
結合ドメインおよび／または１以上のシステインが豊富なＴＲ１４のドメインを
含むこのレセプターの可溶型は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導された
アポトーシスを阻害し得る新規なサイトカインである。これらは、好ましくは、
ダイマーまたはトリマーとして発現される。なぜなら、これらは、アンタゴニス
トのような可溶型レセプター（ＩｇＧＦｃ−ＴＮＦレセプターファミリー融合体
）のモノマー形態より優れていると示されるからである。他のこのようなサイト
カインは当該分野で公知であり、そしてＦａｓリガンドによって誘導されるアポ
トーシスを制限するように生理学的に作用するＦａｓＢ（マウスＦａｓレセプタ
ーの可溶型）（Ｈｕｇｈｅｓ，Ｄ．Ｐ．およびＣｒｉｓｐｅ，Ｉ．Ｎ．、Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３９５−１４０１（１９９５））を含む。
【０６９４】 ＴＲ１３ドメインに結合するタンパク質および他の化合物もまた、本発明に従
う候補アゴニストおよびアンタゴニストである。このような結合化合物は、酵母
ツーハイブリッド系を使用して「捕捉され」得る（ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ
、Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６（１９８９））。酵母ツーハイブリッ
ド系の改変されたバージョンは、Ｒｏｇｅｒ Ｂｒｅｎｔおよび共同研究者らに
よって記載されている（Ｇｙｕｒｉ Ｃｅｌｌ ７５：７９１−８０３（１９９
３）；Ｚｅｒｖｏｓら、Ｃｅｌｌ ７２：２２３−２３２（１９９３））。好ま
しくは、酵母ツーハイブリッド系は、本発明に従って使用され、ＴＲ１４のリガ
ンド結合ドメイン、１、２、３または４つすべてのシステインが豊富なドメイン
のいずれか、または全長もしくは部分長のＴＲ１３タンパク質に結合する化合物
を捕捉する。
【０６９５】 ＴＲ１４ドメインに結合するタンパク質および他の化合物もまた、本発明に従
う候補アゴニストおよびアンタゴニストである。このような結合化合物は、酵母
ツーハイブリッド系を使用して「捕捉され」得る（ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ
、Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６（１９８９））。酵母ツーハイブリッ
ド系の改変されたバージョンは、Ｒｏｇｅｒ Ｂｒｅｎｔおよび共同研究者らに
よって記載されている（Ｇｙｕｒｉ Ｃｅｌｌ ７５：７９１−８０３（１９９
３）；Ｚｅｒｖｏｓら、Ｃｅｌｌ ７２：２２３−２３２（１９９３））。好ま
しくは、酵母ツーハイブリッド系は、本発明に従って使用され、ＴＲ１４のリガ
ンド結合ドメイン、システインが豊富なドメイン、またはＴＲ１４細胞内ドメイ
ンのいずれかに結合する化合物を捕捉する。このような化合物は、本発明の良好
な候補アゴニストおよび候補アンタゴニストである。
【０６９６】 （投与形態） 本発明のＴＲ１３核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストまたはアンタ
ゴニストは、インビトロ、エキソビボ、またはインビボで、本発明のレセプター
を発現する細胞に投与され得る。ＴＲ１３核酸、ポリペプチドおよび／またはア
ゴニストまたはアンタゴニストの「有効量」の投与とは、ＴＮＦファミリーリガ
ンドに対する細胞応答を増強または阻害するに十分な化合物の量を意図する。特
に、ＴＲ１３核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストまたはアンタゴニス
トの「有効量」の投与とは、ＴＲ１３媒介性シグナル伝達および／またはＴＲ１
３媒介性アポプトーシスを増強または阻害するに有効な量を意図する。もちろん
、アポトーシスが増強されることが望まれる場合、本発明に従うアゴニストは、
ＴＮＦファミリーリガンドと共に投与され得る。当業者は以下のことを理解する
。アゴニストまたはアンタゴニストの有効量が、経験的に決定され得、そして純
粋な形態または薬学的に受容可能な塩の形態、エステルの形態、あるいはプロド
ラッグの形態で使用され得ることを理解する。アゴニストまたはアンタゴニスト
は、１以上の薬学的に受容可能な賦形剤と組み合わされた組成物において投与さ
れ得る。
【０６９７】 本発明のＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストまたはアンタ
ゴニストは、インビトロ、エキソビボ、またはインビボで、本発明のレセプター
を発現する細胞に投与され得る。ＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはア
ゴニストまたはアンタゴニストの「有効量」の投与とは、ＴＮＦファミリーリガ
ンドに対する細胞応答を増強または阻害するに十分な化合物の量を意図する。特
に、ＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストまたはアンタゴニス
トの「有効量」の投与とは、ＴＲ１４媒介性シグナル伝達および／またはＴＲ１
４媒介性アポプトーシスを増強または阻害するに有効な量を意図する。もちろん
、アポトーシスが増強されることが望まれる場合、本発明に従うアゴニストは、
ＴＮＦファミリーリガンドと共に投与され得る。当業者は以下のことを理解する
。アゴニストまたはアンタゴニストの有効量が、経験的に決定され得、そして純
粋な形態または薬学的に受容可能な塩の形態、エステルの形態、あるいはプロド
ラッグの形態で使用され得ることを理解する。アゴニストまたはアンタゴニスト
は、１以上の薬学的に受容可能な賦形剤と組み合わされた組成物において投与さ
れ得る。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはア
ゴニストまたはアンタゴニストは、１以上の薬学的に受容可能な賦形剤と組み合
わせた組成物で投与され得る。
【０６９８】 以下のことが理解される。ヒト患者に投与される場合、本発明の化合物および
組成物の全体の日々の使用は、主治医である医師によって信頼できる医療の判断
の範囲内で決定される。任意の特別な患者に対する特定の治療有効量の用量レベ
ルは、医療分野で周知の因子に依存する。
【０６９９】 一般的提案として、１用量あたりで非経口投与されるＴＲ１３ポリペプチドの
総薬学的有効量は、患者の体重の約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範
囲であるが、上記のように、これは治療的自由裁量に供される。より好ましくは
、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくはヒト
について、ホルモンに関して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と１ｍｇ／ｋｇ／日との
間である。連続的に与えられる場合、ＴＲ１３ポリペプチドは、代表的には、約
１μｇ／ｋｇ／時間〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の用量速度で、１日あたり１〜４
回の注射、または例えば、ミニポンプを用いる連続的皮下注入のいずれかにより
投与される。静脈内バック溶液もまた用いられ得る。
【０７００】 一般的提案として、１用量あたりで非経口投与されるＴＲ１４ポリペプチドの
総薬学的有効量は、患者の体重の約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範
囲であるが、上記のように、これは治療的自由裁量に供される。より好ましくは
、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくはヒト
について、ホルモンに関して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と１ｍｇ／ｋｇ／日との
間である。連続的に与えられる場合、ＴＲ１４ポリペプチドは、代表的には、約
１μｇ／ｋｇ／時間〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の用量速度で、１日あたり１〜４
回の注射、または例えば、ミニポンプを用いる連続的皮下注入のいずれかにより
投与される。静脈内バック溶液もまた用いられ得る。
【０７０１】 投与はまた、患者に特異的な様式でアレンジされ、決定された濃度のアゴニス
トまたはアンタゴニストを血液に提供する（ＲＩＡ技術によって決定されたよう
に）。従って、患者に投与することは、調節され得、ＲＩＡによって測定される
血液レベルによってレギュラーな継続を達成する。そのオーダーは、５０〜１０
００ｎｇ／ｍｌ、好ましくは１５０〜５００ｎｇ／ｍｌである。
【０７０２】 本発明のＴＲ１３ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび／またはアゴニスト
またはアンタゴニストは、を含む薬学的組成物は、経口的、直腸内、非経口的、
槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉剤、軟膏
、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔スプレ
ーとして投与され得る。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体、
半固体または液状充填剤、希釈剤、カプセル化材料または任意の型の処方補助物
を意味する。用語「非経口的」とは本明細書中において使用される場合、静脈内
、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様
式をいう。
【０７０３】 本発明のＴＲ１４核酸、ポリペプチドおよび／またはアゴニストまたはアンタ
ゴニストを含む薬学的組成物は、経口的、直腸内、非経口的、槽内（ｉｎｔｒａ
ｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉剤、軟膏、点滴剤、または
経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔スプレーとして投与され
得る。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体、半固体または液状
充填剤、希釈剤、カプセル化材料または任意の型の処方補助物を意味する。用語
「非経口的」とは本明細書中において使用される場合、静脈内、筋肉内、腹腔内
、胸骨内、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。
【０７０４】 非経口注射のための本発明の薬学的組成物は、使用の直前に滅菌注射溶液また
は分散剤（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）への再形成のために以下を含み得る。薬学的
に受容可能な滅菌された水性または非水性溶液、分散剤、懸濁液またはエマルジ
ョン、ならびにの滅菌粉末。
【０７０５】 可溶性ＴＲ１３ポリペプチドに加えて、ＴＲ１３ポリペプチドはまた、界面活
性剤（例えば、ＣＨＡＰＳまたはＮＰ−４０）を含むことによって緩衝液に適切
に可溶化される場合に使用され得る。。
【０７０６】 可溶性ＴＲ１４ポリペプチドに加えて、膜貫通領域を含むＴＲ１４ポリペプチ
ドはまた、界面活性剤（例えば、ＣＨＡＰＳまたはＮＰ−４０）を含むことによ
って緩衝液に適切に可溶化される場合に使用され得る。
【０７０７】 本発明のＴＲ１３組成物はまた、徐放系によって適切に投与される。徐放組成
物の適切な例は、適切なポリマー物質（例えば、造形品の形態である半浸透性ポ
リマーマトリックス（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル））、適切な疎
水性物質（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）、またはイオン交換
樹脂、および乏しい可溶性誘導体（例えば、難溶性塩）を含む。
【０７０８】 本発明のＴＲ１４組成物はまた、徐放系によって適切に投与される。徐放組成
物の適切な例は、適切なポリマー物質（例えば、造形品の形態である半浸透性ポ
リマーマトリックス（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル））、適切な疎
水性物質（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）、またはイオン交換
樹脂、および乏しい可溶性誘導体（例えば、難溶性塩）を含む。
【０７０９】 徐放性マトリックスは、ポリラクチド（米国特許番号第３，７７３，９１９号
、ＥＰ５８，４８１号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートの
コポリマー（Ｓｉｄｍａｎ，Ｕ．ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−
５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｒ．Ｌ
ａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７
（１９８１）、およびＲ．Ｌａｎｇｅｒ、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１
０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、同書）
、またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ １３３，９８８）を含
む。
【０７１０】 徐放性組成物はまた、リポソームに捕捉された本発明の組成物を含む（一般に
は、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）
；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−
ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
３１７−３２７頁および３５３−３６５頁（１９８９））。ＴＲ１３ポリペプチ
ド含有リポソームは、それ自体既知の方法によって調製される：ＤＥ３，２１８
，１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳ
Ａ）８２：３６８８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４０３０−４０３４（１９８０）；Ｅ
Ｐ ５２，３２２；ＥＰ ３６，６７６；ＥＰ ８８，０４６：ＥＰ １４３，
９４９；ＥＰ １４２，６４１；日本特許出願８３−１１８００８；米国特許第
４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号；および、ＥＰ １０２，
３２４。一般的に、リポソームは、脂質含有量が約３０モル％コレステロールよ
り多い、小さな（約２００〜８００オングストローム）単ラメラ型であり、選択
される割合は、最適なＴＲ１３ポリペプチド治療について調整される。
【０７１１】 徐放性組成物はまた、リポソームに捕捉された本発明の組成物を含む（一般に
は、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）
；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−
ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
３１７−３２７頁および３５３−３６５頁（１９８９））。ＴＲ１０ポリペプチ
ド含有リポソームは、それ自体既知の方法によって調製される：ＤＥ３，２１８
，１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳ
Ａ）８２：３６８８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４０３０−４０３４（１９８０）；Ｅ
Ｐ ５２，３２２；ＥＰ ３６，６７６；ＥＰ ８８，０４６：ＥＰ １４３，
９４９；ＥＰ １４２，６４１；日本特許出願８３−１１８００８；米国特許第
４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号；および、ＥＰ １０２，
３２４。一般的に、リポソームは、脂質含有量が約３０モル％コレステロールよ
り多い、小さな（約２００〜８００オングストローム）単ラメラ型であり、選択
される割合は、最適なＴＲ１４ポリペプチド治療について調整される。
【０７１２】 なおさらなる実施形態において、本発明の組成物は、ポンプによって送達され
る（Ｌａｎｇｅｒ，前出；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍ
ｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒ
ｙ ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．
３２１：５７４（１９８９）を参照のこと）。
【０７１３】 他の制御放出（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）系は、Ｌａｎｇｅｒ
（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））による総説にお
いて議論される。
【０７１４】 本発明の組成物（例えば、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸）を単独でま
たは他の補助剤と組み合わせて投与し得る。本発明の組成物と共に投与され得る
補助剤は、ミョウバン、ミョウバンおよびデオキシコール酸（ＩｍｍｕｎｏＡｇ
）、ＭＴＰ−ＰＥ（Ｂｉｏｃｉｎｅ Ｃｏｒｐ．）、ＱＳ２１（Ｇｅｎｅｎｔｅ
ｃｈ，Ｉｎｃ．）、ＢＣＧ、およびＭＰＬを含み得るが、これに限定されない。
特定の実施形態において、本発明の組成物をミョウバンと組み合わせて投与する
。別の特定の実施形態において、本発明の組成物をＱＳ−２１と組み合わせて投
与する。本発明の組成物と共に投与され得るさらなる補助剤は、モノホスホリル
脂質免疫調節物質、ＡｄｊｕＶａｘ １００ａ、ＱＳ−１８、ＣＲＬ１００５、
アルミニウム塩、ＭＦ−５９、およびＶｉｒｏｓｏｍａｌアジュバント技術を含
むが、これらに限定されない。本発明の組成物と共に投与され得るワクチンは、
ＭＭＲ（はしか、おたふくかぜ、風疹）、ポリオ、水痘、破傷風／ジフテリア、
Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｂ型インフルエンザ菌、百日咳、肺炎、インフルエンザ、
ライム病、ロタウイルス、コレラ、黄熱病、日本脳炎、ポリオ、狂犬病、腸チフ
ス、および百日咳に対する防御へ指向されるワクチンを含むがこれらに限定され
ない。同時に（例えば、混合剤として）、別々であるが同時もしくは並行して；
または経時的にのいずれかで配合物を投与し得る。これは、組み合わせた薬剤を
治療混合剤として共に投与する提示、また組み合わせ剤を別々であるが、同時に
（例えば、別々の静脈内ラインを個々の同じ静脈ラインへ通すように）投与する
手順を含む。さらに、「組み合わせての」投与は、化合物の１つの別々の投与ま
たは、所与の第１の、続いて第２の薬剤の投与を含む。
【０７１５】 本発明の組成物（例えば、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸、ポリペプチ
ドならびに／あるいは本発明のアゴニストまたはアンタゴニスト）は、単独また
は他の治療剤と組合せて投与され得る。本発明の組成物と組み合わせて投与され
得る治療剤としては、ＴＮＦファミリーの他のメンバー、化学療法剤、抗生物質
、ステロイド系抗炎症剤および非ステロイド系抗炎症剤、従来の免疫治療剤、サ
イトカイン、ケモカインおよび／または増殖因子が挙げられるが、これらに限定
されない。付随して（例えば、混合剤として）、別々であるが同時もしくは並行
して、；または経時的にのいずれかで組み合わせ剤を投与し得る。これは、組み
合わせ剤を治療混合剤として共に投与する提示、およびまた組み合わせ剤を別々
であるが、同時に（例えば、別々の静脈内ラインを個々の同じ静脈ラインへ通す
ように）投与する手順を含む。さらに、「組み合わせの」投与は、化合物の１つ
の別々の投与または、所与の第１の、続いて第２の薬剤の投与を含む。
【０７１６】 １つの実施形態において、本発明の組成物は、ＴＮＦファミリーの他のメンバ
ーと組み合わせて投与される。本発明の組成物とともに投与され得るＴＮＦ、Ｔ
ＮＦ関連分子またはＴＮＦ様分子としては、以下が挙げられるが、それらに限定
されない：ＴＮＦ−αの可溶性形態、リンホトキシン−α（ＬＴ−α、ＴＮＦ−
βとしてもまた公知）、ＬＴ−β（複合体ヘテロトリマーＬＴ−α２−βにおい
て見出される）、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、
４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ−γ（国際出願公開番号ＷＯ９６
／１４３２８）、ＴＲＡＩＬ、ＡＩＭ−ＩＩ（国際出願公開番号ＷＯ９７／３４
９１１）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１９
０）、エンドカイン−α（国際出願公開番号ＷＯ９８／０７８８０）、ニュート
ロカインα（国際出願公開番号ＷＯ９８１８９２１）、ＯＰＧ、ＯＸ４０、およ
び神経増殖因子（ＮＧＦ）および可溶性形態のＦａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ２７、Ｃ
Ｄ４０および４−ＩＢＢ、ＴＲ２（国際出願公開番号ＷＯ９６／３４０９５）、
ＤＲ３（国際出願公開番号ＷＯ９７／３３９０４）、ＤＲ４（国際出願公開番号
ＷＯ９８／３２８５６）、ＴＲ５（国際出願公開番号ＷＯ９８／３０６９３）、
ＴＲ６（国際出願公開番号ＷＯ９８／３０６９４）、ＴＲ７（国際出願公開番号
ＷＯ９８／４１６２９）、ＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際出願公開番号ＷＯ９８／５６
８９２）、ＴＲ１０（国際出願公開番号ＷＯ９８５４２０２）、３１２Ｃ２（国
際出願公開番号ＷＯ９８／０６８４２）およびＴＲ１２、ならびに可溶性形態の
ＣＤ１５４、ＣＤ７０、およびＣＤ１５３。
【０７１７】 本発明の組成物と組み合わせて投与され得る、従来の非特異的免疫抑制剤は、
ステロイド、シクロスポリン、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミドメ
チルプレゾニドン、プレゾニドン、アザチオプリン、ＦＫ−５０６、１５−デオ
キシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、およびＴ細胞び応答
する機能を抑制することによって作用する他の免疫抑制剤が挙げられるが、これ
らに限定されない。
【０７１８】 特定の実施形態において、本発明の組成物を、抗レトロウイルス剤、ヌクレオ
シド逆転写阻害剤、非ヌクレオシド逆転写阻害剤、および／またはプロテアーゼ
阻害剤と組み合わせて投与する。本発明の組成物と組み合わせて投与され得るヌ
クレオシド逆転写阻害剤は、ＲＥＴＲＯＶＩＲTM（ジドブジン／ＡＺＴ）、ＶＩ
ＤＥＸTM（ジダノシン／ｄｄＩ）、ＨＩＶＩＤTM（ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔ
ａｂｉｎｅ／ｄｄＣ）、ＺＥＲＩＴTM（スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）／ｄ
４Ｔ）、ＥＰＩＶＩＲTM（ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）／３ＴＣ）、お
よびＣＯＭＢＩＶＩＲTM（ジドブジン／ラミブジン）を含むが、限定されない。
本発明の組成物と組み合わされて投与し得る非ヌクレオシド逆転写阻害剤は、Ｖ
ＩＲＡＭＵＮＥTM（ネビラピン（ｎｅｖｉｒａｐｉｎ））、ＲＥＳＣＲＩＰＴＯ
ＲTM（デラビルジン（ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎｅ））、およびＳＵＳＴＩＶＡTM（
エファビレンツ（ｅｆａｖｉｒｅｎｚ））を含むが、これらに限定されない。本
発明の組成物と組み合わせて投与され得るタンパク質阻害剤は、ＣＲＩＸＩＶＡ
ＮTM（インジナビル（ｉｎｄｉｎａｖｉｒ））、ＮＯＲＶＩＲTM（リトナビル（
ｒｉｔｏｎａｖｉｒ））、ＩＮＶＩＲＡＳＥTM（サキナビル（ｓａｑｕｉｎａｖ
ｉｒ）、およびＶＩＲＡＣＥＰＴTM（ネルフィナビル（ｎｅｌｆｉｎａｖｉｒ）
）を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、抗レトロウイル
ス剤、ヌクレオシド逆転写阻害剤、非ヌクレオシド逆転写阻害剤、および／また
はプロテアーゼ阻害剤は、本発明の組成物と任意に組み合わせて、使用され、Ａ
ＩＤＳを処置し得、ならびに／またはＨＩＶ感染を処置、および／もしくは防止
し得る。
【０７１９】 他の実施形態において、本発明の組成物を抗日和見性感染剤と組み合わせて投
与し得る。本発明の組成物と組み合わせて投与され得る抗日和見性剤は、ＴＲＩ
ＭＥＴＨＯＰＲＩＭ−ＳＵＬＦＡＭＥＴＨＯＸＡＺＯＬＥTM、ＤＡＰＳＯＮＥTM 、ＰＥＮＴＡＭＩＤＩＮＥTM、ＡＴＯＶＡＱＵＯＮＥTM、ＩＳＯＮＩＡＺＩＤTM 、ＲＩＦＡＭＰＩＮTM、ＰＹＲＡＺＩＮＡＭＩＤＥTM、ＥＴＨＡＭＢＵＴＯＬTM 、ＲＩＦＡＢＵＴＩＮTM、ＣＬＡＲＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮTM、ＡＺＩＴＨＲＯＭ
ＹＣＩＮTM、ＧＡＮＣＩＣＬＯＶＩＲTM、ＦＯＳＣＡＲＮＥＴTM、ＣＩＤＯＦＯ
ＶＩＲTM、ＦＬＵＣＯＮＡＺＯＬＥTM、ＩＴＲＡＣＯＮＡＺＯＬＥTM、ＫＥＴＯ
ＣＯＮＡＺＯＬＥTM、ＡＣＹＣＬＯＶＩＲTM、ＦＡＭＣＩＣＯＬＶＩＲTM、ＰＹ
ＲＩＭＥＴＨＡＭＩＮＥTM、ＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮTM、ＮＥＵＰＯＧＥＮTM（フ
ィルグラスティム／Ｇ−ＣＳＦ）、およびＬＥＵＫＩＮＥTM（サーグラモスティ
ム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ／ＧＭ−ＣＳＦ）を含むが、これらに限定されな
い。特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＴＲＩＭＥＴＨＯＰＲＩＭ−
ＳＵＬＦＡＭＥＴＨＯＸＡＺＯＬＥTM、ＤＡＰＳＯＮＥTM、ＰＥＮＴＡＭＩＤＩ
ＮＥTM、および／またはＡＴＯＶＡＱＵＯＮＥTMと任意に組み合わせて使用され
、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎感染を予防的に処置または予
防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＩＳＯＮＩＡＺＩ
ＤTM、ＲＩＦＡＭＰＩＮTM、ＰＹＲＡＺＩＮＡＭＩＤＥTM、および／またはＥＴ
ＨＡＭＢＵＴＯＬTMと任意に組み合わせて使用され、日和見性Ｍｙｃｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ菌複合感染を予防的に処置または予防し得る。別の特定
の実施形態において、本発明の組成物は、ＲＩＦＡＢＵＴＩＮTM、ＣＬＡＲＩＴ
ＨＲＯＭＹＣＩＮTM、および／またはＡＺＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮTM、と任意に組
み合わせて使用され、日和見性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌ
ｏｓｉｓ感染を予防的に処置、予防、および／または診断し得る。別の特定の実
施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＮＣＩＣＬＯＶＩＲTM、ＦＯＳＣＡＲ
ＮＥＴTM、および／またはＣＩＤＯＦＯＶＩＲTMと任意に組み合わせて使用され
、日和見性サイトメガロウイルス感染を予防的に処置または予防し得る。別の特
定の実施形態において、本発明の組成物は、ＦＬＵＣＯＮＡＺＯＬＥTM、ＩＴＲ
ＡＣＯＮＡＺＯＬＥTM、および／またはＫＥＴＯＣＯＮＡＺＯＬＥTMと任意に組
み合わせて使用され、日和見性真菌感染を予防的に処置または予防し得る。別の
特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＡＣＹＣＬＯＶＩＲTM、および／
またはＦＡＭＣＩＣＯＬＶＩＲTMと任意に組み合わせて使用され、日和見性単純
ヘルペスウイルス型Ｉ感染および／または単純ヘルペスウイルス型ＩＩ感染を予
防的に処置または予防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は
、ＰＹＲＩＭＥＴＨＡＭＩＮＥTMおよび／またはＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮTMと任意
に組み合わせて使用され、日和見性Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ感染を
予防的に処置または予防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物
は、ＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮTMおよび／またはＮＥＵＰＯＧＥＮTMと任意に組み合
わせて使用され、日和見性細菌感染を予防的に処置または予防し得る。
【０７２０】 さらなる実施形態において、本発明の組成物を、抗ウイルス剤と組み合わせて
投与する。本発明の組成物と共に投与され得る抗ウイルス剤は、アシクロビル、
リバビリン、アマンタジン、およびレマンチジン（ｒｅｍａｎｔｉｄｉｎｅ）を
含むが、これらに限定されない。
【０７２１】 さらなる実施形態において、本発明の組成物を抗生物質剤と組み合わせて投与
する。本発明の組成物と共に投与され得る抗生物質剤は、アモキシリン、アミノ
酸糖体、β−ラクタム（糖ペプチド）、β−ラクタマーゼ、クリンダマイシン、
クロラムフェニコール、セファロスポリン、シプロフロキサシン、エリトロマイ
シン、フルオロキノロン類、マクロライド系抗生物質、メトロニダゾル、ペニシ
リン類、キノロン類、リファンピン、ストレプトマイシン、スルホンアミド、テ
トラサイクリン、トリペトプリム、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、
およびバンコマイシンを含むが、これらに限定されない。
【０７２２】 本発明の組成物と組み合わせて投与され得る、従来の非特定の免疫抑制剤は、
ステロイド、シクロスポリン、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミドメ
チルプレドニゾロン、プレドニゾロン、アザチオプリン、ＦＫ−５０６、１５−
デオキシスパーグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、およびＴ細胞に
応答する機能を抑制することにより作用する他の免疫抑制剤を含むが、これらに
限定されない。
【０７２３】 本発明の組成物と共に投与され得るさらなる免疫抑制薬製剤は、ＯＲＴＨＯＣ
ＬＯＮＥTM（ＯＫＴ３）、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥTM／ＮＥＯＲＡＬTM／ＳＡＮＧ
ＤＹＡTM（シクロスポリン）、ＰＲＯＧＲＡＦTM（タクロリムス）、ＣＥＬＬＣ
ＥＰＴTM（マイコフェノレート（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ））、アザチオプ
リン、グルコルチコステロイド（ｇｌｕｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ）、お
よびＲＡＰＡＭＵＮＥTM（シロリマス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ））を含むが、これ
らに限定されない。特定の実施形態において、免疫抑制剤は、器官または骨髄移
植の拒絶を妨ぐために使用され得る。
【０７２４】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、単独でかまたは１以上の静脈
内免疫グロブリン調製物と組み合わせて投与される。本発明の組成物と組み合わ
せて投与され得る静脈内免疫グロブリン調製物としては、ＧＡＭＭＡＲTM、ＩＶ
ＥＥＧＡＭTM、ＳＡＮＤＯＧＬＯＢＵＬＩＮTM、ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ Ｓ／ＤTM およびＧＡＭＩＭＵＮＥTMが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施
形態において、本発明の治療剤は、移植治療（例えば、骨髄移植）において静脈
内免疫グロブリン調製物と組み合わせて投与される。
【０７２５】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、単独でかまたは抗炎症剤と組
み合わせて投与される。本発明の組成物とともに投与され得る抗炎症剤としては
、グルココルチコイドおよび非ステロイド抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸
誘導体、アリール酢酸誘導体、アリール酪酸誘導体、アリールカルボン酸、アリ
ールプロピオン酸誘導体、ピラゾール類、ピラゾロン類、サリチル酸誘導体、チ
アジンカルボキサミド類、ｅ−アセトアミドカプロン酸、Ｓ−アデノシルメチオ
ニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン（ａｍｉｘｅｔｒｉｎ
ｅ）、ベンダザック、ベンジダミン、ブコローム、ジフェンピラミド、ジタゾー
ル、エモルファゾン、グアイアズレン、ナブメトン、ニメスリド、オルゴテイン
、オキサセプロール、パラニリン（ｐａｒａｎｙｌｉｎｅ）、ペリソキサール、
ピフオキシム、プロカゾン、プロキサゾール、およびテニダプが挙げられるが、
これらに限定されない。
【０７２６】 別の実施形態において、本発明の組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与さ
れる。本発明の治療剤とともに投与され得る化学療法剤としては、抗生物質誘導
体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、およびダクチ
ノマイシン）；抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）；抗代謝物（例えば
、フルオロウラシル、５−ＦＵ、メトトレキサート、フロクスウリジン、インタ
ーフェロンα−２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）
、メルカプトプリン、および６−チオグアニン）；細胞傷害剤（例えば、カルム
スチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホス
ファミド、エストラムスチン、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、マイトマイ
シン、ブスルファン、シス−プラチン、および硫酸ビンクリスチン）；ホルモン
（例えば、メドロキシプロゲステロン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エ
チニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテス
トステロン、ジエチルスチルベストロールジホスフェート、クロロトリアニセン
、およびテストラクトン）；ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メファ
レン（ｍｅｐｈａｌｅｎ）、クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メ
クロレタミン（ナイトロジェンマスタード）およびチオテパ）；ステロイド類お
よび組み合わせ（例えば、ベタメタゾンリン酸ナトリウム）；ならびにその他（
例えば、ジカルバジン（ｄｉｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アスパラギナーゼ、ミトー
テン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、およびエトポシド）が挙げら
れるが、これらに限定されない。
【０７２７】 特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＣＨＯＰ（シクロフォスファミ
ド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）と組み合わせて投
与されるか、ＣＨＯＰの成分の任意の組み合わせで投与される。別の実施形態に
おいて、本発明の組成物は、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂと組み合わせて投与される。さ
らなる実施形態において、本発明の組成物は、ＲｉｔｕｘｍａｂおよびＣＨＯＰ
と共に、またはＲｉｔｕｘｍａｂおよびＣＨＯＰの成分の任意の組み合わせと共
に投与される。
【０７２８】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、サイトカインと組み合わせて
投与される。本発明の組成物とともに投与され得るサイトカインとしては、ＧＭ
−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−
４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−
１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−
１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、抗ＣＤ４０、ＣＤ４
０Ｌ、ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αが挙げられるが、これらに限定されない。１
つの実施形態において、本発明の組成物は、１つ以上のケモカインと組合せて投
与される。特定の実施形態において、本発明の組成物は、以下からなる群より選
択されるα（ＣｘＣ）ケモカイン：γ−インターフェロン誘導タンパク質−１０
（γＩＰ−１０）、インタロイキン−８（ＩＬ−８）、血小板第４因子（ＰＦ４
）、好中球活性化因子（ＮＡＰ−２）、ＧＲＯ−α、ＧＲＯ−β、ＧＲＯ−γ、
好中球活性化ペプチド（ＥＮＡ−７８）、顆粒球化学誘導タンパク質−２（ＧＣ
Ｐ−２）および間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１、すなわち前Ｂ細胞刺激因子
（ＰＢＳＦ）（ｐｒｅ−Ｂ−ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ
））；および／または以下からなる群より選択されるβ（ＣＣ）ケモカイン：Ｒ
ＡＮＴＥＳ（活性化の際にレギュレートされ、正常なＴ発現され、そして分泌さ
れる）、マクロファージ炎症タンパク質−１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファー
ジ炎症タンパク質−１β（ＭＩＰ−１β）、単球走化タンパク質−１（ＭＣＰ−
１）、単球走化タンパク質−２（ＭＣＰ−２）、単球走化タンパク質−３（ＭＣ
Ｐ−３）、単吸走化タンパク質−４（ＭＣＰ−４）、マクロファージ炎症タンパ
ク質−１γ（ＭＩＰ−１γ）、マクロファージ炎症タンパク質−３α（ＭＩＰ−
３α）、マクロファージ炎症タンパク質−３β（ＭＩＰ−３β）、マクロファー
ジ炎症タンパク質−４（ＭＩＰ−４／ＤＣ−ＣＫ−１／ＰＡＲＣ）、エオタキシ
ン（ｅｏｔａｘｉｎ）、ＥｘｏｄｕｓおよびＩ−３０９；および／またはγ（Ｃ
）ケモカイン、リンホタクチン（ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ）と組合せて投与さ
れる。
【０７２９】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、線維芽細胞増殖因子と組み合
わせて投与される。本発明の組成物とともに投与され得る線維芽細胞増殖因子と
しては、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧ
Ｆ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１０、ＦＧＦ−１１、
ＦＧＦ−１２、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−１４、およびＦＧＦ−１５が挙げられる
が、これらに限定されない。
【０７３０】 好ましい実施形態において、本発明の組成物は、幹細胞因子またはＩＬ−３と
組合せて投与される。最も好ましい実施形態において、本発明の組成物は、幹細
胞因子およびＩＬ−３と組合せて投与される。
【０７３１】 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリぺプチド（およ
び／またはそのアゴニストまたはアンタゴニスト）を他の提案されたかまたは従
来の造血治療と組合せることを包含する。従って、例えば、本発明のポリヌクレ
オチドおよび／またはポリぺプチド（および／またはそのアゴニストまたはアン
タゴニスト）は、単独で赤血球生成刺激効果を示す化合物（例えば、エリスロポ
イエチン、テストステロン、前駆細胞刺激物質、インスリン様増殖因子、プロス
タグランジン、セロトニン、環状ＡＭＰ、プロラクチン、およびトリヨードチロ
ニン（ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｚｏｎｉｎｅ））と組合され得る。本発明の組成物
の一般的に再生不良性貧血を処置するために使用される化合物（例えば、メテノ
ロン（ｍｅｔｈｅｎｏｌｅｎｅ）、スタノゾロール、およびナンドロロン）；鉄
欠乏性貧血を処置するために使用される化合物（例えば、鉄調製物）；悪性貧血
を処置するために使用される化合物（例えば、ビタミンＢ12および／または葉酸
）；および溶血性貧血を処置するために使用される化合物（例えば、副腎皮質ス
テロイド類（例えば、コルチコイド））との組合せもまた含まれる。例えば、Ｒ
ｅｓｅｇｏｔｔｉら，Ｐａｎｍｉｎｅｒｖａ Ｍｅｄｉｃａ，２３：２４３−２
４８（１９８１）；Ｋｕｒｔｚ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１４ａ：１０５−
１０８（１９８２）；ＭｃＧｏｎｉｇｌｅら，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．，２５：
４３７−４４４（１９８４）；およびＰａｖｌｏｖｉｃ−Ｋａｎｔｅｒａ，Ｅｘ
ｐｔ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，８（補遺８）２８３−２９１（１９８０）（これらの
各々の内容はその全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０７３２】 エリトロポエチンの効果を増強するか、またはエリトロポエチンと協同する化
合物はまた、本明細書においてアジュバントとして有用であり、これらとしては
、アドレナリン作用性アゴニスト、甲状腺ホルモン、アンドロゲン、肝エリトロ
ポエチン因子、エリスロトロピン（ｅｒｙｔｈｒｏｔｒｏｐｉｎ）、およびエリ
スロゲニン（ｅｒｙｔｈｒｏｇｅｎｉｎ）が挙げられるが、これらに限定されな
い。Ｄｕｎｎ，「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐ
ｏｉｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（Ｃｈｉｃｈｅｓｔ
ｅｒ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９８３）；Ｋａｌｍａｎｉ，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．
，２２：３８３−３９１（１９８２）；Ｓｈａｈｉｄｉ，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．
Ｍｅｄ．，２８９：７２−８０（１９７３）；Ｕｒａｂｅら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．，１４９：１３１４−１３２５（１９７９）；Ｂｉｌｌａｔら，Ｅｘｐｔ．
Ｈｅｍａｔｏｌ．，１０：１３３−１４０（１９８２）；Ｎａｕｇｈｔｏｎら，
Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔ，６９：１７１−１７９（１９８３）；Ｃｏｇｎｏｔｅ
ら、要約、３６４， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ７ｔｈ Ｉｎｔｌ． Ｃｏｎｇ
． ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（Ｑｕｅｂｅｃ Ｃｉｔｙ，Ｑｕｅｂｅ
ｃ，Ｊｕｌｙ １−７，１９８４）；およびＲｏｔｈｍａｎら，１９８２，Ｊ．
Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．，２０：１０５−１０８（１９８２）を参照のこと。造
血を刺激するための方法は、造血有効量の（すなわち、血球の形成をもたらす量
）の、本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリぺプチド（および／または
そのアゴニストもしくはアンタゴニスト）を含む薬学的組成物を患者に投与する
工程を包含する。本発明のポリヌクレオチドおよび／もしくはポリぺプチドなら
びに／またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストは、任意の適切な技術（非
経口、舌下、局所的、肺内および鼻腔内を含むがこれらに限定されず、これらの
技術は、本明細書中でさらに議論される）により患者に投与される。薬学的組成
物は、必要に応じて、エリトロポエチン、テストステロン、前駆細胞刺激物質、
インスリン様増殖因子、プロスタグランジン、セロトニン、環状ＡＭＰ、プロラ
クチン、トリヨードチロニン（ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｚｏｎｉｎｅ）、メテノロ
ン（ｍｅｔｈｅｎｏｌｅｎｅ）、スタノゾロール、およびナンドロロン鉄調製物
、ビタミンＢ１２、葉酸および／または副腎皮質ステロイドからなる群の１つ以
上のメンバーを含む。
【０７３３】 さらなる好ましい実施形態において、本発明の組成物を造血増殖因子と組み合
わせて投与する。本発明の組成物と共に投与され得る造血増殖因子は、ＬＥＵＫ
ＩＮＥTM（ＳＡＲＧＲＡＭＯＳＴＩＭTM）およびＮＥＵＰＯＧＥＮTM（ＦＩＬＧ
ＲＡＳＴＩＭTM）を含むが、これらに限定されない。
【０７３４】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、例えば、放射線療法のような
他の治療レジメンまたは予防レジメンと組み合わせて投与される。
【０７３５】 （染色体アッセイ） 本発明の核酸分子はまた、染色体同定に価値がある。その配列は、個々のヒト
染色体上の特定の位置に特異的に標的化され、そしてそれとハイブリダイズし得
る。本発明による、ＤＮＡの染色体へのマッピングは、疾患と関連する遺伝子と
それらの配列とを相関付ける際の重要な第１の工程である。
【０７３６】 この点における特定の好ましい実施形態において、本明細書中において開示さ
れるｃＤＮＡを使用して、ＴＲ１３レセプター遺伝子のゲノムＤＮＡをクローニ
ングする。このことは、一般に市販されている種々の周知の技術およびライブラ
リーを使用して達成され得る。次いで、ゲノムＤＮＡを、インサイチュ染色体マ
ッピングのために、この目的のための周知の技術を使用して使用される。
【０７３７】 この点における特定の好ましい実施形態において、本明細書中において開示さ
れるｃＤＮＡを使用して、ＴＲ１４レセプター遺伝子のゲノムＤＮＡをクローニ
ングする。このことは、一般に市販されている種々の周知の技術およびライブラ
リーを使用して達成され得る。次いで、ゲノムＤＮＡを、インサイチュ染色体マ
ッピングのために、この目的のための周知の技術を使用して使用される。
【０７３８】 さらに、いくつかの場合において、配列は、ｃＤＮＡ由来のＰＣＲプライマー
（好ましくは、１５〜２５ｂｐ）を調製することによって、染色体にマッピング
され得る。遺伝子の３’非翻訳領域のコンピュータ分析を使用して、ゲノムＤＮ
Ａにおける１より多くのエキソンにまたがらないプライマーを迅速に選択し、そ
れによって増幅プロセスは複雑にされる。次いで、これらのプライマーを、個々
のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために使用す
る。
【０７３９】 中期染色体スプレッドへのｃＤＮＡクローンの蛍光インサイチュハイブリダイ
ゼーション（「ＦＩＳＨ」）を使用して、１つの工程で、正確な染色体位置を提
供し得る。この技術は、５０または６０ｂｐほどの短いｃＤＮＡ由来のプローブ
とともに使用され得る。この技術の概説について、Ｖｅｒｍａら、Ｈｕｍａｎ
Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ Ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉ
ｑｕｅｓ、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）を参
照のこと。
【０７４０】 一旦、配列が正確な染色体位置にマッピングされると、染色体上のその配列の
物理的位置を、遺伝マップデータに相関付けし得る。そのようなデータは、例え
ば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ，Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ Ｉ
ｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｌｃｈ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙからオンラインで利用可能）において見られ
る。次いで、同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾患との間の関係を、
連鎖解析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）を介して同定する。
【０７４１】 次いで、罹患している個体と罹患していない個体との間の、ｃＤＮＡまたはゲ
ノム配列における差を決定することが必要である。変異が、罹患している個体の
いくらか、またはすべてにおいて観察されるが、正常な個体においては観察され
ない場合、変異は、その疾患の原因因子である可能性がある。
【０７４２】 本発明を一般的に記載してきたが、本発明は、以下の実施例を参照してより容
易に理解される。以下の実施例は、例示の目的のために提供され、限定を意図さ
れない。
【０７４３】 （実施例１：Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＴＲ１３ポリペプチド、ＴＲ１３−αポリ
ペプチド、および／またはＴＲ１４ポリペプチドの発現および精製） 細菌発現ベクターｐＱＥ６０を、本実施例において細菌発現のために使用する
。（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓ
ｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）。ｐＱＥ６０は、アンピシリン抗生物質耐性（
「Ａｍｐr」）をコードし、そして細菌複製起点（「ｏｒｉ」）、ＩＰＴＧ誘導
性プロモーター、リボソーム結合部位（「ＲＢＳ」）、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．
（上述）により販売されているニッケル−ニトリロ三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）
アフィニティー樹脂を使用するアフィニティー精製を可能にするヒスチジン残基
をコードする６コドン、および適切な単一制限酵素切断部位を含有する。これら
のエレメントは、ポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントが、そのポリペ
プチドのカルボキシル末端に共有結合で連結された６つのＨｉｓ残基（すなわち
、「６×Ｈｉｓタグ」）を有するポリペプチドを産生するように挿入され得るよ
うに配置される。しかし、本実施例において、６つのＨｉｓコドンの翻訳が妨げ
られ従ってこのポリペプチドが６×Ｈｉｓタグを有さないで産生されるように、
このポリペプチドコード配列を挿入する。
【０７４４】 疎水性リーダー配列を欠失するＴＲ１３タンパク質および／またはＴＲ１４タ
ンパク質の所望の部分をコードするＤＮＡ配列を、ＰＣＲオリゴヌクレオチドプ
ライマーを使用して、寄託されたｃＤＮＡクローンから増幅する。このプライマ
ーは、ＴＲ１３タンパク質および／またはＴＲ１４タンパク質の所望の部分のア
ミノ末端配列と、ｃＤＮＡコード配列の３’側の寄託された構築物中の配列とに
アニールする。ｐＱＥ６０ベクターにおけるクローニングを容易にするための制
限部位を含むさらなるヌクレオチドを、５’配列および３’配列にそれぞれ付加
する。
【０７４５】 ＴＲ１３ポリペプチドをクローニングするために、５’プライマーは、配列：
【０７４６】
【化３】 （配列番号２３）を有する。これは、下線を付したＮｃｏＩ制限部位、続いて、
図１Ａ〜Ｃそれぞれ中の成熟ＴＲ１３配列のアミノ末端コード配列に相補的なヌ
クレオチドを含有する。当然、当業者は、タンパク質コード配列中における、５
’プライマーが開始する地点を、完全タンパク質の所望の部分（記載された形態
より短いかまたはより長い）を増幅するために変動し得ることを理解する。
【０７４７】 ＴＲ１４ポリペプチドをクローニングするために、５’プライマーは、配列：
【０７４８】
【化４】 （配列番号２４）を有する。これは、下線を付したＮｃｏＩ制限部位、続いて、
図４Ａ〜Ｄそれぞれ中の成熟ＴＲ１４配列のアミノ末端コード配列に相補的なヌ
クレオチドを含有する。当然、当業者は、タンパク質コード配列中における、５
’プライマーが開始する地点を、完全タンパク質の所望の部分（記載された形態
より短いかまたはより長い）を増幅するために変動し得ることを理解する。
【０７４９】 ＴＲ１３ポリペプチドをクローニングするために、５’プライマーは、配列：
【０７５０】
【化５】 （配列番号４２）を有する。これは、下線を付したＮｄｅＩＩ制限部位、続いて
、図７Ａ〜Ｄそれぞれ中の成熟ＴＲ１３配列のアミノ末端コード配列に相補的な
ヌクレオチドを含有する。当然、当業者は、タンパク質コード配列中における、
５’プライマーが開始する地点を、完全タンパク質の所望の部分（記載された形
態より短いかまたはより長い）を増幅するために変動し得ることを理解する。
【０７５１】 ３’ＴＲ１３プライマーは、配列：
【０７５２】
【化６】 （配列番号２５）を有する。これは、下線を付したＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、続
いて、図１Ａ〜Ｃ中のＴＲ１３ ＤＮＡ配列中の非コード配列の３’末端に相補
的なヌクレオチドを含有する。
【０７５３】 ３’ＴＲ１４プライマーは、配列：
【０７５４】
【化７】 （配列番号２６）を有する。これは、下線を付したＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、続
いて、図４Ａ〜Ｄ中のＴＲ１４ ＤＮＡ配列中の非コード配列の３’末端に相補
的なヌクレオチドを含有する。
【０７５５】 ３’ＴＲ１３プライマーは、配列：
【０７５６】
【化８】 （配列番号４３）を有する。これは、下線を付したＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、続
いて、図７Ａ〜Ｄ中のＴＲ１３ ＤＮＡ配列中の非コード配列の３’末端に相補
的なヌクレオチドを含有する。
【０７５７】 増幅されたＴＲ１３ ＤＮＡフラグメントおよび／またはＴＲ１４ ＤＮＡフ
ラグメントならびにベクターｐＱＥ６０を、ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消
化し、そして次いで、消化されたＤＮＡを共に連結する。制限処理されたｐＱＥ
６０ベクターへのＴＲ１３タンパク質ＤＮＡおよび／またはＴＲ１４タンパク質
ＤＮＡの挿入は、ＩＰＴＧ誘導性プロモーターから下流に、かつ開始ＡＵＧとイ
ンフレームに、（その結合した終止コドンを含む）ＴＲ１３タンパク質コード領
域および／またはＴＲ１４タンパク質コード領域を配置する。この結合した終止
コドンは、挿入位置の下流の６つのヒスチジンコドン翻訳を妨げる。
【０７５８】 この連結混合物を、標準的な手順を使用して、コンピテントＥ．Ｃｏｌｉ細胞
に形質転換する。このような手順は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版；Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）に記載される。Ｅ．ｃ
ｏｌｉ Ｍ１５／ｒｅｐ４株（多コピーのクローンｐＲＥＰ４を含有する。これ
は、ｌａｃリプレッサーを発現し、そしてカナマイシン耐性（「Ｋａｎr」）を
与える）を、本明細書中に記載の例示的な実施例を実施することにおいて使用す
る。この株は、ＴＲ１３タンパク質および／またはＴＲ１４タンパク質の発現に
適した多くのうちの単なる１つであり、Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．（前出）から市
販されている。
【０７５９】 形質転換体を、アンピシリンおよびカナマイシンの存在下においてＬＢプレー
ト上で増殖するそれらの能力によって同定する。クローンＤＮＡを、耐性コロニ
ーから単離し、そしてクローン化ＤＮＡの正体を制限分析、ＰＣＲおよびＤＮＡ
配列決定によって確認する。
【０７６０】 所望の構築物を含有するクローンを、アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）およ
びカナマイシン（２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地中での液体培養に
おいて、一晩（「Ｏ／Ｎ」）増殖させる。このＯ／Ｎ培養物を、約１：１００〜
１：２５０の希釈で大培養物に接種するために使用する。その細胞を、６００ｎ
ｍでの光学密度（「ＯＤ６００」）が０．４と０．６との間になるまで増殖させ
る。次いで、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（「ＩＰＴＧ」）
を最終濃度１ｍＭに添加し、ｌａｃＩリプレッサーを不活性化することによりｌ
ａｃリプレッサー感受性プロモーターからの転写を誘導する。細胞を、続けてさ
らに３〜４時間インキュベートする。次いで、細胞を、遠心分離により採取する
。
【０７６１】 次いで、この細胞を６Ｍ塩酸グアニジン、ｐＨ８中で、４℃で３〜４時間、攪
拌する。この細胞破片を遠心分離によって除去し、そしてＴＲ１３および／また
はＴＲ１４を含む上清を、ニッケル−ニトリロ三酢酸（「ＮｉＮＴＡ」）アフィ
ニティー樹脂カラム（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ（前出）から入手可能）にロードす
る。６×Ｈｉｓタグを有するタンパク質はＮＩ−ＮＴＡ樹脂に高親和性で結合し
、そしてそれを単純なワンステップ手順で精製し得る（詳細については、Ｔｈｅ
ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔ，１９９５，ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，（
前出）を参照のこと）。簡潔には、この上清を、６Ｍ 塩酸グアニジン、ｐＨ８
中においてカラムにロードし、このカラムを、まず１０容量の６Ｍ塩酸グアニジ
ン、ｐＨ８で洗浄し、次いで１０容量の６Ｍ塩酸グアニジン ｐＨ６で洗浄し、
そして最後に６Ｍ塩酸グアニジン、ｐＨ５でＴＲ１３および／またはＴＲ１４を
溶出する。
【０７６２】 次いで、この精製タンパク質を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または５
０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ６）緩衝液＋２００ｍＭ ＮａＣｌに対して透析
することで再生する。あるいは、このタンパク質を、Ｎｉ−ＮＴＡカラムに固定
している間に首尾よく再生し得る。その推奨条件は以下の通りである：プロテア
ーゼインヒビターを含む５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０％ グリセロール、２０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．４中で６Ｍ〜１Ｍの尿素の直線的勾配を用いて
再生する。この再生は、１．５時間以上の間にわたり実行するべきである。再生
の後、このタンパク質を、２５０ｍＭ イミダゾールの添加によって溶出し得る
。イミダゾールを、ＰＢＳまたは５０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ６）緩衝液＋
２００ｍＭ ＮａＣｌに対する最終的な透析工程によって除去する。この精製さ
れたタンパク質を４℃で保存するかまたは−８０℃で凍結する。
【０７６３】 （実施例２：バキュロウイルス発現系におけるＴＲ１３ポリペプチドおよび／
またはＴＲ１４ポリペプチドのクローニングおよび発現） この例示的な実施例において、Ｓｕｍｍｅｒｓら、Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ
Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｔｅｘａｓ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂ
ｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載されるような標準的手法を
使用して、クローンシャトルベクターｐＡ２を使用して、天然に結合した分泌シ
グナル（リーダー）配列を含む完全タンパク質をコードするクローン化されたＤ
ＮＡをバキュロウイルスに挿入し、成熟ＴＲ１３タンパク質および／またはＴＲ
１４タンパク質を発現する。この発現ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａ
ｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリン
プロモーター、続いて都合の良い制限部位（例えば、ＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７
１８）を含む。シミアンウイルス４０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を
、効率的なポリアデニル化のために使用する。組換えウイルスの容易な選択のた
めに、このクローンは、同方向の弱いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御
下にある、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリ
ン遺伝子のポリアデニル化シグナルを含む。挿入された遺伝子は、クローン化さ
れたポリヌクレオチドを発現する生存可能なウイルスを生成するように、野生型
ウイルスＤＮＡとの細胞媒介性の相同組換えのためのウイルス配列と両方の側で
隣接する。
【０７６４】 他の多くのバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１
、およびｐＡｃＩＭ１）を、当業者が容易に理解するように、構築物が転写、翻
訳、分泌などのために適切に配置されたシグナル（必要とされる場合、シグナル
ペプチドおよびインフレームなＡＵＧを含む）を提供する限りにおいて、上記の
ベクターの代わりに使用し得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏｗ
ら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９（１９８９）に記載される。
【０７６５】 図１Ａ〜Ｃ（配列番号２）、図７Ａ〜Ｄ（配列番号４０）、および図４Ａ〜Ｄ
（配列番号５）それぞれにおいて示される、ＡＵＧ開始コドンおよび天然で結合
したリーダー配列を欠く、寄託されたクローン中のＴＲ１３レセプタータンパク
質および／またはＴＲ１４レセプタータンパク質をコードするｃＤＮＡ配列を、
この遺伝子の５’および３’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマ
ーを使用して増幅する。
【０７６６】 ５’ＴＲ１３プライマーは、配列：
【０７６７】
【化９】 （配列番号２７）を有し、この配列は、下線部のＢａｍＨＩ制限酵素部位、真核
生物細胞における翻訳開始のために効率的なシグナル（Ｍ．Ｋｏｚａｋ、Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７−９５０（１９８７）に記載されるような）、
それに続いて成熟タンパク質の示されたＮ末端から始まる図１Ａ〜Ｃに示される
成熟ＴＲ１３タンパク質の配列の塩基を含む。
【０７６８】 ５’ＴＲ１４プライマーは、配列：
【０７６９】
【化１０】 （配列番号２８）を有し、この配列は、下線部のＢａｍＨＩ制限酵素部位、真核
生物細胞における翻訳開始のために効率的なシグナル（Ｍ．Ｋｏｚａｋ、Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７−９５０（１９８７）に記載されるような）、
それに続いて成熟タンパク質の示されたＮ末端から始まる図４Ａ〜Ｄそれぞれに
示されるＴＲ１４ポリペプチドの配列の塩基を含む。
【０７７０】 ５’ＴＲ１３プライマーは、配列：
【０７７１】
【化１１】 （配列番号４４）を有し、この配列は、下線部のＸｂａＩ制限酵素部位、真核生
物細胞における翻訳開始のために効率的なシグナル（Ｍ．Ｋｏｚａｋ、Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７−９５０（１９８７）に記載されるような）、そ
れに続いて成熟タンパク質の示されたＮ末端から始まる図７Ａ〜Ｄそれぞれに示
されるＴＲ１３ポリペプチドの配列の塩基を含む。
【０７７２】 ＴＲ１３のための３’プライマーは、配列：
【０７７３】
【化１２】 （配列番号２９）を有し、この配列は、下線部のＡｓｐ７１８制限部位、それに
続く、図１Ａ〜Ｃの３’非コード配列に相補的なヌクレオチドを含む。
【０７７４】 ＴＲ１４のための３’プライマーは、配列：
【０７７５】
【化１３】 （配列番号３０）を有し、この配列は、下線部のＡｓｐ７１８制限部位、それに
続く、図４Ａ〜Ｄそれぞれの３’非コード配列に相補的なヌクレオチドを含む。
【０７７６】 ＴＲ１３のための３’プライマーは、配列：
【０７７７】
【化１４】 （配列番号４５）を有し、この配列は、下線部のＸｂａＩ制限部位、それに続く
、図７Ａ〜Ｄそれぞれの３’非コード配列に相補的なヌクレオチドを含む。
【０７７８】 増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ
１０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ Ｃａ．）を使用して１％アガロースゲル
から単離する。次いで、このフラグメントを、ＢａｍＨＩまたはＸｂａＩとＡｓ
ｐ７１８またはＸｂａＩとで消化し、そして１％アガロースゲル上で、再度、精
製する。このフラグメントを、「Ｆ１」と称する。
【０７７９】 このクローンを、制限酵素ＢａｍＨＩまたはＸｂａＩを用いて消化し、そして
それを必要に応じて当該分野で公知の慣用的な手順を使用して仔ウシ腸ホスファ
ターゼを使用して脱リン酸し得る。次いで、このＤＮＡを、市販のキット（「Ｇ
ｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ Ｃａ．）を
使用して１％アガロースゲルから単離する。このベクターＤＮＡを、本明細書中
で「Ｖ１」と称する。
【０７８０】 フラグメントＦ１および脱リン酸したクローンＶ１を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ
を用いて互いに連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１細胞またはＸＬ−１ Ｂｌ
ｕｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌ
ｌａ，ＣＡ）細胞のような他の適切なＥ．ｃｏｌｉ宿主を、連結混合物で形質転
換し、そして培養プレート上に拡げる。ＰＣＲ法を使用してヒトＴＲ１３核酸お
よび／またはＴＲ１４核酸を有するクローンを含む細菌を同定する。このＰＣＲ
法において、使用するプライマーの１つはこの核酸を増幅するためであり、そし
て第２のプライマーは十分にベクターの内部由来であり、その結果ＴＲ１３核酸
フラグメントおよび／またはＴＲ１４核酸フラグメントを含有する細菌コロニー
のみがＤＮＡの増幅を示す。クローン化されたフラグメントの配列を、ＤＮＡ配
列決定によって確認する。このクローンを、本明細書においてｐＢａｃＴＲ１３
および／またはｐＢａｃＴＲ１４と称する。
【０７８１】 ５μｇのクローンｐＢａｃＴＲ１３および／またはｐＢａｃＴＲ１４を、Ｆｅ
ｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１
３−７４１７ （１９８７）によって記載されたリポフェクチン法を使用して、
１．０μｇの市販の線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ，ＣＡ．）とともに同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏ
ｌｄTMウイルスＤＮＡおよび５μｇのクローンｐＢａｃＴＲ１３および／または
ｐＢａｃＴＲ１４を、５０μｌの無血清グレース培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を含む、マイクロタイタ
ープレートの滅菌したウェル中で混合する。その後、１０μｌのリポフェクチン
および９０μｌグレース培地を加え、混合し、そして室温で１５分間インキュベ
ートする。次いで、トランスフェクション混合物を、無血清グレース培地１ｍｌ
を加えた３５ｍｍ組織培養プレートに播種したＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ ＣＲ
Ｌ １７１１）に滴下して加える。このプレートを前後に揺らして新たに添加し
た溶液を混合する。次いで、このプレートを２７℃で５時間インキュベートする
。５時間後、トランスフェクション溶液をそのプレートから除去し、そして１０
％ウシ胎仔血清を補充した１ｍｌのグレース昆虫培地を添加する。このプレート
をインキュベーターに戻し、そして培養を２７℃で４日間継続する。
【０７８２】 ４日後、上清を収集し、そして上記のＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈによっ
て記載されたようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を含むア
ガロースゲルを、ｇａｌ発現クローン（青色に着色したプラークを生ずる）の容
易な同定および単離を可能にするために使用する（この型の「プラークアッセイ
」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏ
ｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤによって配布される、昆虫細胞培養およびバキュロウイル
ス学のための使用者ガイドの中の９−１０頁に見出され得る）。適切なインキュ
ベーションの後、青色に染色したプラークを、マイクロピペッター（例えば、Ｅ
ｐｐｅｎｄｏｒｆ）のチップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天を、２
００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁させ、そして組
換えバキュロウイルスを含む懸濁液を使用して、３５ｍｍディッシュに播種した
Ｓｆ９細胞を感染させる。４日後、これらの培養ディッシュの上清を採集し、次
いで４℃に貯蔵する。この組換えウイルスをＶ−ＴＲ１３および／またはＶ−Ｔ
Ｒ１４と称する。
【０７８３】 ＴＲ１３核酸および／またはＴＲ１４核酸の発現を確認するために、１０％熱
非働化ＦＢＳを補充したグレース培地中で、Ｓｆ９細胞を増殖させる。この細胞
に、感染多重度（「ＭＯＩ」）約２で、組換えバキュロウイルスＶ−ＴＲ１３お
よび／またはＶ−ＴＲ１４を感染させる。６時間後に培地を除去し、そしてメチ
オニンおよびシステインを含まないＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤから入手可能）に
置き換える。放射性標識したタンパク質を所望する場合には、４２時間後、５μ
Ｃｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの35Ｓ−システイン（Ａｍｅｒｓｈａｍ
から入手可能）を添加する。この細胞をさらに１６時間インキュベートし、次い
で遠心分離によって採集する。上清中のタンパク質ならびに細胞内タンパク質を
、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、次いでオートラジオグラフィーによって（放射性
標識した場合）分析する。精製タンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列の微量配
列決定法を使用して、成熟タンパク質のアミノ末端配列、従って、分泌シグナル
ペプチドの切断位置および長さを決定し得る。
【０７８４】 （実施例３：哺乳動物細胞におけるＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ
１４ポリペプチドのクローニングおよび発現） 代表的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介するプロモー
ターエレメント、タンパク質コード配列、および転写の終結および転写物のポリ
アデニル化に必要なシグナルを含む。さらなるエレメントとしては、エンハンサ
ー、コザック（Ｋｏｚａｋ）配列、ならびに、ＲＮＡスプライシングのためのド
ナー部位およびアクセプター部位に隣接する介在配列が挙げられる。非常に効率
的な転写は、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、レトロウイルス（例
えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩ）由来の長末端反復（ＬＴＲ）、およびサイ
トメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成し得る。しかし、
細胞内シグナル（例えば、ヒトアクチンプロモーター）もまた、使用し得る。本
発明を実施する際の使用に適切な発現ベクターとしては、例えば、ｐＳＶＬおよ
びｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶ
ｃａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６）
、およびｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）のようなベクターが挙げられ
る。使用し得る哺乳動物宿主細胞としては、ヒトのＨｅｌａ細胞、２９３細胞、
Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスのＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細
胞、Ｃｏｓ １細胞、Ｃｏｓ ７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラのＱＣ１−３細
胞、マウスのＬ細胞、およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げ
られる。
【０７８５】 あるいは、この遺伝子は、染色体に組み込まれた遺伝子を含む、安定な細胞株
中で発現し得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、またはハイグロマイシンの
ような選択マーカーを用いる同時トランスフェクションは、トランスフェクトさ
れた細胞の同定および単離を可能にする。
【０７８６】 トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードされたタンパク質を発現
するために増幅し得る。ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）マーカーは、目
的の遺伝子の数百または数千さえものコピーを有する細胞株の開発に有用である
。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕ
ｒｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅ
ｂｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１６９−１７５（
１９９２））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖
させ、そしてもっとも高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は、染
色体に組み込まれた、増幅した遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（Ｃ
ＨＯ）細胞を、タンパク質の産生のためにしばしば使用する。
【０７８７】 発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５：４３８
−４４７（１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶ
−エンハンサー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０ （１９
８５））のフラグメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ
７１８の制限酵素切断部位を有するマルチクローニングサイトは、目的の遺伝子
のクローニングを容易にする。このベクターはまた、ラットプレプロインスリン
遺伝子の３’イントロン、ポリアデニル化シグナルおよび終止シグナルを含む。
【０７８８】 （実施例３Ａ：ＣＯＳ細胞におけるＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ
１４ポリペプチドの細胞外可溶性ドメインのクローニングおよび発現） 発現クローンであるｐＴＲ１３−ＨＡおよび／またはＴＲ１４−ＨＡを、ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、発現ベクタ
ーｐｃＤＮＡＩ／ＡｍｐまたはｐｃＤＮＡＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎ
ｃ．より入手可能）にクローニングすることによって、作製する。
【０７８９】 発現ベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐは、以下を含む：（１）Ｅ．ｃｏｌｉおよ
び他の原核生物細胞中での増殖のために効果的な、Ｅ．ｃｏｌｉの複製起点；（
２）クローンを含有する原核生物細胞の選択のための、アンピシリン耐性遺伝子
；（３）真核生物細胞中での増殖のためのＳＶ４０の複製起点；（４）ｃＤＮＡ
を、ポリリンカーにおける制限部位によって都合よくＣＭＶプロモーターの発現
制御下に配置し得かつＳＶ４０イントロンおよびポリアデニル化シグナルと作動
可能に連結し得るように配置された、ＣＭＶプロモーター、ポリリンカー、ＳＶ
４０イントロンおよびポリアデニル化シグナル。
【０７９０】 ＴＲ１３前駆体および／またはＴＲ１４前駆体全体をコードするＤＮＡフラグ
メントおよびその３’末端にインフレームで融合されたＨＡタグを、ベクターの
ポリリンカー領域中にクローン化し、その結果、組換えタンパク質発現を、ＣＭ
Ｖプロモーターによって指向するようにする。このＨＡタグは、Ｗｉｌｓｏｎら
、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９８４）によって記載されたインフルエンザ赤血
球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する。標的タンパク質へのＨＡタグ
の融合は、ＨＡエピトープを認識する抗体を用いる組換えタンパク質の容易な検
出を可能にする。
【０７９１】 クローン構築のストラテジーは、以下のとおりである： 寄託されたクローンのＴＲ１３ ｃＤＮＡおよび／またはＴＲ１４ ｃＤＮＡ
を、Ｅ．ｃｏｌｉ中でのＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプ
チドの発現のための発現ベクターの構築に関して、上記に十分に記載されるよう
な都合よい制限部位を含有するプライマーを使用して増幅する。
【０７９２】 発現されたＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチドの検出
、精製および特徴付けを容易にするために、このプライマーのうちの１つは、上
記の赤血球凝集素タグ（「ＨＡタグ」）を含む。
【０７９３】 本実施例において使用されるＴＲ１３および／またはＴＲ１４のための適切な
プライマーとしては、以下が挙げられる： ５’ＴＲ１３プライマー、
【０７９４】
【化１５】 （配列番号３１）は、下線部のＢａｍＨＩ部位、ＡＴＧ開始コドンおよびその後
の５つのコドンを含む。下線のＸｂａＩ部位、終止コドン、赤血球凝集素タグ、
および（３’末端で）３’コード配列の最後の１８ヌクレオチドを含む、ＴＲ１
３のための３’プライマーは、以下の配列：
【０７９５】
【化１６】 （配列番号３２）を有する。
【０７９６】 ５’ＴＲ１４プライマー、
【０７９７】
【化１７】 （配列番号３４）は、下線部のＢａｍＨＩ部位、ＡＴＧ開始コドンおよびその後
の５つのコドンを含む。下線のＸｂａＩ部位、終止コドン、赤血球凝集素タグ、
および（３’末端で）３’コード配列の最後の１８ヌクレオチドを含む、ＴＲ１
４のための３’プライマーは、以下の配列：
【０７９８】
【化１８】 （配列番号３３）を有する。
【０７９９】 図７Ａ〜Ｄ（配列番号３９）に記載される配列の５’ＴＲ１３プライマー、
【０８００】
【化１９】 （配列番号４６）は、下線部のＢａｍＨＩ部位、ＡＴＧ開始コドンおよびその後
の５つのコドンを含む。下線のＸｂａＩ部位、終止コドン、赤血球凝集素タグ、
および（３’末端で）３’コード配列の最後の１８ヌクレオチドを含む、ＴＲの
ための３’プライマーは、以下の配列：
【０８０１】
【化２０】 （配列番号４７）を有する。
【０８０２】 ＰＣＲ増幅したＤＮＡフラグメントおよびベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐを、
ＢａｍＨＩおよびＸｂａＩを用いて消化し、次いで連結する。この連結混合物を
、Ｅ．ｃｏｌｉ ＳＵＲＥ株（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓ
ｔｅｍｓ、１１０９９ Ｎｏｒｔｈ Ｔｏｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌ
ａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ ９２０３７より入手可能）に形質転換し、そして形質転
換した培養物をアンピシリン培地プレート上にプレーティングし、次に、インキ
ュベートして、アンピシリン耐性コロニーを増殖させる。クローンＤＮＡを耐性
コロニーから単離し、そしてＴＲ１３コードフラグメントおよび／またはＴＲ１
４コードフラグメントの存在について制限分析およびゲルサイズ決定によって試
験する。
【０８０３】 組換えＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチドの発現のた
めに、上記のようにＤＥＡＥ−ＤＥＸＴＲＡＮを使用して（例えば、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）に記載されるよ
うに）、ＣＯＳ細胞を発現ベクターでトランスフェクトする。細胞を、ベクター
によるＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチドの発現のため
の条件下でインキュベートする。
【０８０４】 ＴＲ１３−ＨＡ融合タンパク質および／またはＴＲ１４−ＨＡ融合タンパク質
の発現を、放射能標識および免疫沈降によって（例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版；Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８８）に記載される方法を使
用して）検出する。この目的のために、トランスフェクションの２日後、この細
胞を35Ｓ−システインを含有する培地中で８時間インキュベーションすることに
よって標識する。この細胞および培地を収集し、そして細胞を洗浄し、そして上
記に引用されるＷｉｌｓｏｎらに記載されるように、界面活性剤含有ＲＩＰＡ緩
衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４０、０．１％ ＳＤＳ、１％ Ｎ
Ｐ−４０、０．５％ ＤＯＣ、５０ｍＭ ＴＲＩＳ、ｐＨ ７．５）を用いて溶
解する。タンパク質を細胞溶解物、および培養培地から、ＨＡ特異的モノクロー
ナル抗体を使用して沈殿する。次に、沈殿したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲ
ルおよびオートラジオグラフィーによって分析する。予想されたサイズの発現産
物が細胞溶解物中に見出される。この予想されたサイズの発現産物は、ネガティ
ブコントロール中では見られない。
【０８０５】 （実施例３Ｂ：ＣＨＯ発現系を用いるＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴ
Ｒ１４ポリペプチドのクローニングおよび発現） ベクターｐＣ４をＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチド
の発現のために使用する。クローンｐＣ４は、クローンｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（Ａ
ＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体である。このクローンは、ＳＶ４０初期プ
ロモーターの制御下のマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。これらのクローンでトラン
スフェクトされた、ジヒドロ葉酸活性を欠くチャイニーズハムスター卵巣細胞ま
たは他の細胞を、化学治療剤メトトレキサート（ＭＴＸ）を補充した選択培地（
αマイナスＭＥＭ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ
，ＭＤ）において細胞を増殖することによって選択し得る。ＭＴＸ耐性の細胞中
のＤＨＦＲ遺伝子の増幅が、十分に実証されている（例えば、Ｆ．Ｗ．Ａｌｔら
、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｊ．Ｌ
．ＨａｍｌｉｎおよびＣ．Ｍａ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃ
ｔａ．１０９７：１０７−１４３（１９９０）；Ｍ．Ｊ．Ｐａｇｅ、Ｍ．Ａ．Ｓ
ｙｄｅｎｈａｍ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１）を
参照のこと）。漸増濃度のＭＴＸ中の細胞増殖は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結果
として、標的酵素であるＤＨＦＲの過剰産生により、この薬物に対する耐性をも
たらす。第２の遺伝子が、ＤＨＦＲ遺伝子と連結している場合、その遺伝子は、
通常、同時に増幅され、そして過剰発現される。このアプローチを使用して、１
，０００コピーを超える増幅した遺伝子のコピーを保有する細胞株を開発し得る
ことは、当該分野において公知である。引き続いて、メトトレキサートが取り除
かれた場合、宿主細胞の１つ以上の染色体中に組み込まれた増幅された遺伝子を
含有する細胞株を得る。
【０８０６】 クローンｐＣ４は、目的の遺伝子の発現のために、ラウス肉腫ウイルスの長末
端反復配列（ＬＴＲ）の強力なプロモーター（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５：４３８−４４７（１９
８５年３月）およびヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の前初期遺伝子のエン
ハンサーより単離されたフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５
２１〜５３０（１９８５））を含有する。プロモーターの下流は、遺伝子の組み
込みを可能とする単一制限酵素切断部位ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７
１８である。これらのクローニング部位の後に、このクローンは、ラットプレプ
ロインシュリン遺伝子の３’イントロンおよびポリアデニル化部位を含む。他の
高効率プロモーターもまた、発現のために使用し得る（例えば、ヒトβ−アクチ
ンプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーターまたは後期プロモーター、あるいは
他のレトロウイルス（例えば、ＨＩＶおよびＨＴＬＶＩ）由来の長末端反復）。
ＣｌｏｎｔｅｃｈのＴｅｔ−Ｏｆｆ遺伝子発現系およびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現
系ならびに同様の系を使用して、哺乳動物において調節された方法でＴＲ１３ポ
リペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチドを発現し得る。ｍＲＮＡのポリ
アデニル化のために、他のシグナル（例えば、ヒト成長ホルモンまたはグロビン
遺伝子由来）もまた同様に使用し得る。
【０８０７】 染色体中に組み込まれた目的の遺伝子を保有する安定な細胞株もまた、ｇｐｔ
、Ｇ４１８またはハイグロマイシンのような選択マーカーを用いる同時トランス
フェクションの際に選択され得る。最初は、１つより多い選択マーカー（例えば
、Ｇ４１８およびメトトレキサート）を使用することが有利である。
【０８０８】 クローンｐＣ４を制限酵素ＢａｍＨＩを用いて消化し、次いで、当該分野にお
いて公知の手順によって、仔ウシ小腸ホスファターゼを使用して脱リン酸する。
次いで、このベクターを１％アガロースゲルより単離する。
【０８０９】 完全ＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチドをコードする
ＤＮＡ配列を、遺伝子の所望の部分の５’および３’配列に対応するＰＣＲオリ
ゴヌクレオチドプライマーを使用して増幅する。
【０８１０】 ＴＲ１３のための５’オリゴヌクレオチドプライマーは、配列：
【０８１１】
【化２１】 （配列番号３４）を有し、下線部のＢａｍＨＩ制限部位、コザック配列、および
ＡＵＧ開始コドンを含む。ＴＲ１３のための３’プライマーは、配列：
【０８１２】
【化２２】 （配列番号３５）を有し、下線部のＡｓｐ７１８制限部位を含む。
【０８１３】 ＴＲ１４のための５’オリゴヌクレオチドプライマーは、配列：
【０８１４】
【化２３】 （配列番号３６）を有し、下線部のＢａｍＨＩ制限部位、コザック配列、および
ＡＵＧ開始コドンを有する。ＴＲ１４のための３’プライマーは、配列：
【０８１５】
【化２４】 （配列番号３７）を有し、下線部のＡｓｐ７１８制限部位を含む。
【０８１６】 増幅したフラグメントを、ＢａｍＨＩで消化し、次いで１％アガロースゲルで
再び精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸したベクターを
Ｔ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１細胞また
はＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そして例えば、制限酵素分析を使用し
てクローンｐＣ４に挿入されたフラグメントを含む細菌を同定する。
【０８１７】 活性なＤＨＦＲ酵素を欠失するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トランス
フェクションのために使用する。５μｇの発現クローンｐＣ４を、リポフェクチ
ン法（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）を用いて、０．５μｇのクローンｐＳＶｎｅｏ
とともに同時トランスフェクトする。このクローンｐＳＶ２−ｎｅｏは優性選択
マーカー（Ｇ４１８を含む一群の抗生物質に対する耐性を与える酵素をコードす
るＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子）を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を補充
したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、この細胞をトリプシン処理し、１０
、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのＭＴＸおよび１ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補充し
たαマイナスＭＥＭにおいてハイブリドーマクローニングプレート（Ｇｒｅｉｎ
ｅｒ， Ｇｅｒｍａｎｙ）に播種した。約１０〜１４日培養後、単一のクローン
をトリプシン処理し、次いで異なる濃度のメトトレキサート（５０ｎＭ、１００
ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６ウェルペトリ皿ま
たは１０ｍｌフラスコに播種する。次いで、最高濃度のメトトレキサートで増殖
するクローンを、さらに高濃度のメトトレキサート（１μＭ、２μＭ、５μＭ、
１０μＭ、２０μＭ）を含む新たな６ウェルプレートに移す。同じ手順を、１０
０μＭ〜２００μＭの濃度で増殖するクローンを得るまで繰り返す。所望の遺伝
子産物の発現を、例えば、ウエスタンブロット分析およびＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
ってか、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
【０８１８】 （実施例４：ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のタンパク質融合物） 本発明のＴＲ１３ポリぺプチドおよび／またはＴＲ１４ポリぺプチドを、必要
に応じて、他のタンパク質に融合される。これらの融合タンパク質は、種々の適
用のために使用し得る。例えば、ＴＲ１３ポリぺプチドおよび／またはＴＲ１４
ポリぺプチドの、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およ
びマルトース結合タンパク質への融合は、精製を容易にする（ＥＰ Ａ ３９４
，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−８６（１９
８８）を参照のこと）。同様に、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−３、およびアルブミンへ
の融合は、インビボでの半減期を増大させる。ＴＲ１３ポリぺプチドおよび／ま
たはＴＲ１４ポリぺプチドに融合した核局在化シグナルは、タンパク質を特定の
細胞内位置に標的化し得る。一方、共有結合ヘテロダイマーまたはホモダイマー
は、融合タンパク質の活性を増大または減少し得る。融合タンパク質はまた、１
つより多い機能を有するキメラ分子を作製し得る。最後に、融合タンパク質は、
非融合タンパク質と比較して、融合タンパク質の可溶性および／または安定性を
増大させ得る。上記の融合タンパク質の全ての型は、当該分野で公知の技術を使
用することによってか、あるいはＩｇＧ分子へのポリぺプチドの融合を概説する
以下のプロトコルを使用するかまたは慣用的に改変することによって作製され得
る。
【０８１９】 簡単には、ＩｇＧ分子のヒトＦｃ部分を、以下に記載の配列（配列番号３８）
の５’および３’末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅し得る。これら
のプライマーはまた、好ましくは、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベ
クター）へのクローニングを容易にする都合の良い制限酵素部位を含む。
【０８２０】 例えば、ｐＣ４（受託番号第２０９６４６号）発現ベクターを使用する場合、
ヒトＦｃ部分を、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結し得る。３’ＢａｍＨＩ部
位を破壊すべきであることに注意のこと。次いで、ヒトＦｃ部分を含むベクター
を、ＢａｍＨＩで再制限処理して、ベクターを線状化し、そして実施例１に記載
するＰＣＲプロトコルによって単離されたＴＲ１３ポリヌクレオチドおよび／ま
たはＴＲ１３ポリヌクレオチドを、このＢａｍＨＩ部位に連結する。このポリヌ
クレオチドを、終止コドンなしにクローン化すること、そうでなければ、融合タ
ンパク質は産生されないことに注意すること。
【０８２１】 天然に存在するシグナル配列を分泌タンパク質を産生するために使用する場合
、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在す
るシグナル配列を使用しない場合、このベクターを、異種シグナル配列を含むよ
うに改変し得る（例えば、ＷＯ ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０８２２】 ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域：
【０８２３】
【化２５】 （実施例５：ＴＲ１３またはＴＲ１４に対する抗体の産生） （（ａ）ハイブリドーマ技術） 本発明の抗体を、種々の方法によって調製し得る。（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ，第２章を参照のこと）。このような方法の１つの例として、ＴＲ
１３またはＴＲ１４を発現する細胞を、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を
誘導するために動物に投与する。好ましい方法において、ＴＲ１３タンパク質ま
たはＴＲ１４タンパク質の調製物を調製し、そして精製して、天然の夾雑物を実
質的に含まないようにする。次いで、より大きな比活性のポリクローナル抗血清
を生成するために、このような調製物を、動物に導入する。
【０８２４】 ＴＲ１３タンパク質またはＴＲ１４タンパク質に対して特異的なモノクローナ
ル抗体は、ハイブリドーマ技術を使用して調製する（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕ
ｒｅ ２５６：４９５（１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．６：５１１（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．６：２９２（１９７６）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓ
ｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１））。一般に、動物（好ま
しくは、マウス）をＴＲ１３ポリぺプチドまたはＴＲ１４のポリぺプチドで免疫
すること、またはより好ましくは、分泌されたＴＲ１３ポリぺプチドを発現する
細胞またはＴＲ１４ポリぺプチドを発現する細胞で免疫する。このようなポリペ
プチド発現細胞を、任意の適切な組織培養培地（好ましくは、１０％ウシ胎仔血
清（約５６℃で不活化した）を補充し、そして約１０ｇ／ｌの非必須アミノ酸、
約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／ｍｌのストレプトマ
イシンを補充したＥａｒｌｅ改変イーグル培地）において培養する。
【０８２５】 このようなマウスの脾細胞を抽出し、そして適切な骨髄種細胞株と融合する。
任意の適切な骨髄種細胞株を、本発明に従って用い得る；しかし、ＡＴＣＣから
入手可能な親骨髄種細胞株（ＳＰ２Ｏ）を用いることが好ましい。融合後、得ら
れるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に維持し、次いでＷａｎ
ｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２（１９８１
））により記載されるように限界希釈によってクローニングする。次いで、この
ような選択を介して得られるハイブリドーマ細胞を、ＴＲ１３ポリぺプチドまた
はＴＲ１４ポリぺプチドに結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するために
アッセイする。
【０８２６】 あるいは、ＴＲ１３ポリぺプチドまたはＴＲ１４ポリぺプチドに結合し得るさ
らなる抗体を、抗イディオタイプ抗体を使用して２段階工程の手順において生成
し得る。このような方法は、抗体それ自体が抗原であり、それゆえ第二の抗体に
結合する抗体を得ることが可能であるという事実を使用する。この方法に従って
、タンパク質特異的抗体を使用して、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。
次いで、このような動物の脾細胞を使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。
そして、このハイブリドーマ細胞を、ＴＲ１３タンパク質またはＴＲ１４タンパ
ク質特異的抗体に結合する能力がＴＲ１３またはＴＲ１４によってブロックされ
得る抗体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングする。このような
抗体は、ＴＲ１３タンパク質またはＴＲ１４タンパク質に特異的な抗体に対する
抗イディオタイプ抗体を含み、そして動物を免疫してＴＲ１３またはＴＲ１４タ
ンパク質に特異的なさらなる抗体の形成を誘導するために使用し得る。
【０８２７】 ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、抗体を「ヒト化」する。このよう
な抗体を、上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来する
遺伝的構築物を使用することによって産生し得る。キメラ抗体およびヒト化抗体
を産生するための方法は当該分野で公知であり、下記に記載される（総説につい
ては、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏ
ｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｃａｂｉｌｌｙ
ら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、ＥＰ １７１４
９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ
８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａ
ｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら
、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）を参照のこと）。
【０８２８】 （（ｂ）ｓｃＦｖのライブラリーからのＴＲ１３またはＴＲ１４に対する抗体
フラグメントの単離） ヒトＰＢＬから単離した天然に存在するＶ遺伝子を、ＴＲ１３またはＴＲ１４
に対する反応性を含む抗体フラグメントのライブラリーに構築する。このＴＲ１
３またはＴＲ１４に対して、ドナーが曝露されていてもよいし、曝露されていな
くてもよい（例えば、米国特許第５，８８５，７９３号（その全体が参考として
本明細書中に援用される）を参照のこと）。
【０８２９】 （ライブラリーのレスキュー） ＰＣＴ公開第ＷＯ ９２／０１０４７号に記載のように、ヒトＰＢＬのＲＮＡ
からｓｃＦｖのライブラリーを構築する。抗体フラグメントを提示するファージ
をレスキューするため、ファージミドを保有する約１０９ Ｅ．ｃｏｌｉを用い
て、５０ｍｌの２×ＴＹ（１％グルコースおよび１００μｇ／ｍｌのアンピシリ
ンを含有する）（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＧＬＵ）に播種し、そして振盪しながら０
．８のＯ．Ｄ．まで増殖させる。この培養物の５ｍｌを用いて５０ｍｌの２×Ｔ
Ｙ−ＡＭＰ−ＧＬＵに播種し、２×１０８ＴＵのΔ遺伝子３ヘルパー（Ｍ１３Δ
遺伝子ＩＩＩ、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０１０４７号を参照のこと）を添加し、
そして培養物を振盪なしで３７℃で４５分間インキュベートし、次いで振盪しな
がら３７℃で４５分間インキュベートする。この培養物を１０分間４０００ｒ．
ｐ．ｍ．で遠心分離し、そしてペレットを２リットルの２×ＴＹ（１００μｇ／
ｍｌアンピシリンおよび５０μｇ／ｍｌカナマイシンを含有する）中に再懸濁し
、そして一晩増殖させる。ファージをＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０１０４７号に記
載のように調製する。
【０８３０】 Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩを以下のように調製する：Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩヘルパ
ーファージは、遺伝子ＩＩＩタンパク質をコードしない。それゆえ、抗体フラグ
メントを提示するファージ（ファージミド）は、抗原へのより大きい結合アビデ
ィティーを有する。ファージ形態形成の間、野生型遺伝子ＩＩＩタンパク質を供
給するｐＵＣ１９誘導体を保有する細胞においてヘルパーファージを増殖させる
ことにより、感染性Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩ粒子を作製する。培養物を振盪なしで
３７℃で１時間インキュベートし、次いで振盪しながら３７℃でさらに１時間イ
ンキュベートする。細胞を遠心沈殿（ＩＥＣ−Ｃｅｎｔｒａ ８，４００ｒ．ｐ
．ｍ．で１０分間）し、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２５μｇ／ｍｌ
のカナマイシンを含有する２×ＴＹブロス（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＫＡＮ）３００
ｍｌ中に再懸濁し、そして３７℃で振盪しながら一晩増殖させた。ファージ粒子
を、２回のＰＥＧ沈殿（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０）により培養培地から精
製および濃縮し、２ｍｌ ＰＢＳに再懸濁し、そして０．４５μｍのフィルター
（Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＮＭＬ；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を通過させ、約１０１３形
質導入単位／ｍｌ（アンピシリン耐性クローン）の最終濃度を得る。
【０８３１】 （ライブラリーのパニング） Ｉｍｍｕｎｏｔｕｂｅ（Ｎｕｎｃ）を、本発明のポリぺプチドの１００μｇ／
ｍｌまたは１０μｇ／ｍｌのいずれかの４ｍｌを用いてＰＢＳ中で一晩被膜する
。チューブを２％Ｍａｒｖｅｌ−ＰＢＳを用いて３７℃で２時間ブロックし、次
いでＰＢＳ中で３回洗浄する。約１０１３ＴＵのファージをそのチューブに適用
し、そして、回転盤で上下に傾けながら室温で３０分間インキュベートし、次い
でさらに１．５時間静置しておく。チューブをＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０
で１０回、そしてＰＢＳで１０回洗浄する。１ｍｌの１００ｍＭトリエチルアミ
ンを添加し、そして回転盤上で１５分間上下に回転させることによりファージを
溶出し、その後この溶液を０．５ｍｌの１．０Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．
４で直ちに中和する。次いで、溶出したファージを細菌とともに３７℃で３０分
間インキュベートすることにより、ファージを用いて、１０ｍｌの対数増殖中期
のＥ．ｃｏｌｉ ＴＧ１に感染させる。次いで、そのＥ．ｃｏｌｉを１％グルコ
ースおよび１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するＴＹＥプレート上にプレー
ティングする。次いで、得られる細菌ライブラリーを、上記のようにΔ遺伝子３
ヘルパーファージでレスキューし、引き続く回の選択のためのファージを調製す
る。次いで、このプロセスを、アフィニティー精製の全４回について反復し、３
回目および４回目にはチューブ洗浄をＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で２０
回、そしてＰＢＳで２０回に増加する。
【０８３２】 （結合剤の特徴付け） 第３回目および４回目の選択から溶出したファージを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ
ＨＢ ２１５１を感染させ、そして可溶性ｓｃＦｖをアッセイのために単一コロ
ニーから生成する（Ｍａｒｋｓら、１９９１）。５０ｍＭ炭酸水素塩、ｐＨ９．
６中の本発明のポリぺプチドの１０ｐｇ／ｍｌのいずれかで被膜したマイクロタ
イタープレートを用いてＥＬＩＳＡを行う。ＥＬＩＳＡ中の陽性クローンをＰＣ
Ｒフィンガープリンティング（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０１０４７号を
参照のこと）、次いで配列決定することによりさらに特徴付ける。
【０８３３】 （実施例６：ＴＲ１３およびＴＲ１４ ｍＲＮＡ発現の組織分布） ノーザンブロット分析を行って、とりわけＳａｍｂｒｏｏｋら（前出）によっ
て記載される方法を用いて、ヒト組織におけるＴＲ１３および／またはＴＲ１４
遺伝子発現を調べた。ＴＲ１３のヌクレオチド配列全体（配列番号１）および／
またはＴＲ１４のヌクレオチド配列全体を含むｃＤＮＡプローブ（ＨＭＳＨＫ４
７）を、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ標識システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉ
ｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を製造者の説明書に従って用いて32Ｐで標識した。標識
後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を製造者のプロトコル番号ＰＴ１２００
−１に従って用いて精製した。次いで、精製した標識ＴＲ１３プローブおよびＴ
Ｒ１４プローブを別々に用いて、種々のヒト組織を、それぞれＴＲ１３および／
またはＴＲ１４のｍＲＮＡについて調べた。
【０８３４】 種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む複数組織のノーザ
ン（ＭＴＮ）ブロットを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手し、そしてＥｘｐｒｅｓｓ
ＨｙｂTMハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を製造者のプロトコ
ル番号ＰＴ１１９０−１に従って用いて標識プローブを用いて調べた。ハイブリ
ダイゼーションおよび洗浄後、ブロットをマウントし、そして−７０℃にて一晩
フィルムに曝し、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像した。
【０８３５】 ＴＲ１３の発現が、膵臓腫瘍、子宮内膜腫瘍、成体の小腸、結腸癌、乳癌細胞
株、休止Ｔ細胞、扁桃（ａｍｙｇｄａｌａ）、直腸、Ｔ細胞ヘルパー、松果体、
アポトーシスＴ細胞、精巣上体（ｅｐｉｄｉｄｙｍｕｓ）、大網、前立腺ＢＰＨ
、骨巨細胞腫、子宮内膜間質細胞、間質細胞、黒質、活性化Ｔ細胞、扁桃（ｔｏ
ｎｓｉｌ）、および精巣組織において検出された。
【０８３６】 ＴＲ１４の発現が、活性化Ｔ細胞、子宮内膜腫瘍、胸腺および１２週齢早期段
階のヒト組織にて検出された。
【０８３７】 （種々の細胞株におけるＴＲ１３および／またはＴＲ１４のノーザンブロット
分析） （方法） （細胞） 他に記載されない限り、細胞株を、アメリカンタイプカルチャーコレクション
（ロックビル、ＭＤ）から入手する。研究された骨髄細胞株（Ｋｏｅｆｆｌｅｒ
ら、（１９８０）；Ｋｏｅｆｆｌｅｒ（１９８３）；ＨａｒｒｉｓおよびＲａｌ
ｐｈ（１９８５）；およびＴｕｃｋｅｒら、（１９８７））およびＢ細胞株（Ｊ
ｏｎａｋら、（１９２２））は、分化経路の異なる段階における細胞型を示す。
ＫＧ１ａ細胞およびＰＬＢ９８５細胞（Ｔｕｃｋｅｒら、（１９８７））を、Ｈ
．Ｐ．Ｋｏｅｆｆｌｅｒ（ＵＣＬＡ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）
から得る。ＢＪＡ−Ｂを、Ｚ．Ｊｏｎａｋ（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈ
ａｍ）から得る。ＴＦ２７４（骨芽細胞の特徴を示す間質細胞株）を、健常な雌
性ドナーの骨髄から生成する（Ｚ．ＪｏｎａｋおよびＫ．Ｂ．Ｔａｎ，非公開）
。初代頸動脈内皮細胞を、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）から入手する。そして単球を、末梢血単核細胞の示差的遠心分離およ
び組織培養皿への接着によって調製する。ＣＤ１９＋細胞、ＣＤ４＋細胞および
ＣＤ８＋細胞（＞９０％純粋）を、細胞型特異的免疫磁気ビーズ（Ｄｒｙｎａｌ
，Ｌａｋｅ Ｓｕｃｃｅｓｓ，ＮＹ）を用いて単離する。
【０８３８】 （ＲＮＡ分析） 成人組織の全ＲＮＡを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から
入手する。全ＲＮＡを、ＴｒｉＲｅａｇｅｎｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）を用いて（
対数増殖期における）細胞株および初代細胞から抽出する。５〜７．５μｇの全
ＲＮＡを、わずかに改変して記載（Ｓａｍｂｒｏｏｋら）のように、Ｗｉｄｅ
Ｍｉｎｉ−Ｓｕｂ Ｃｅｌｌ ゲルトレイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ
，ＣＡ）にはめたホルムアルデヒド含有１％アガロースゲルにおいて分画する。
このホルムアルデヒド濃度を、０．５Ｍまで減少し、そしてＲＮＡを、染色し、
その後、ローディング緩衝液に添加された１００□ｇ／ｍｌのエチジウムブロマ
イドとともに電気泳動する。連続緩衝液再循環を用いる電気泳動（６０ボルト／
９０分）後、このゲルを撮影し、そしてＲＮＡを、Ｚｅｔａ−プローブナイロン
膜（Ｂｉｏｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に２５ｍＭ ＮａＯＨを用いる真
空ブロッティングによって９０分間定量的にトランスファーする。３Ｍ ＮａＣ
ｌ含有１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５での５〜１０分間の中和の後、この
ブロットを、５０％ホルムアミド、８％硫酸デキストラン、６×ＳＳＰＥ、０．
１％ ＳＤＳおよび１００μｇ／ｍｌの剪断変性サケ精子ＤＮＡで少なくとも３
０分間、４２℃でプレハイブリダイゼーションする。32Ｐ−ｄＣＴＰでランダム
プライミング（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）によって標識
したｃＤＮＡ挿入物を、０．２５Ｍ ＮａＯＨ（１０分、３７℃）で変性し、そ
してプレハイブリダイゼーション溶液に添加する。４２℃で２４〜６５時間後、
このブロットを、高ストリンジェンシー条件下（Ｓａｍｂｒｏｏｋら）で洗浄し
、そしてＸ線フィルムに曝露する。
【０８３９】 （実施例７：ＴＲ１３および／またはＴＲ１４遺伝子における変化の決定方法
） 目的の表現型（例えば、疾患）を提示する家族全員または個々の患者からＲＮ
Ａを単離する。次いで、ｃＤＮＡをこれらのＲＮＡサンプルから当該分野で公知
のプロトコルを使用して生成する（Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと）。次いで、
このｃＤＮＡを、配列番号１、配列番号６０、および／または配列番号４におけ
る目的の領域を取り囲むプライマーを用いるＰＣＲのためのテンプレートとして
使用する。示唆されるＰＣＲ条件は、Ｓｉｄｒａｎｓｋｙ，Ｄ．ら、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２５２：７０６（１９９１）に記載の緩衝溶液を使用する、９５℃で３０
秒間；５２〜５８℃で６０〜１２０秒間；および７０℃で６０〜１２０秒間の３
５サイクルから構成される。
【０８４０】 次いで、ＰＣＲ産物を、ＳｅｑｕｉＴｈｅｒｍ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅを用い
、それらの５’末端にＴ４ポリヌクレオチドキナーゼで標識したプライマーを使
用して配列決定する。（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。Ｔ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４の選択したエキソンのイントロン−エキソン境界
もまた決定し、そしてゲノムＰＣＲ産物を分析してその結果を確認する。次いで
、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４において疑わしい変異を有するＰＣＲ産物を
クローン化し、そして配列決定し、直接配列決定の結果を確認する。
【０８４１】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のＰＣＲ産物を、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｔ．Ａおよ
びＧｒａｈａｍ，Ｍ．Ｗ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
１９：１１５６（１９９１）に記載のようにＴテールベクターにクローン化し、
Ｔ７ポリメラーゼ（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）で
配列決定する。罹患した個体を、罹患していない個体には存在しないＴＲ１３お
よび／またはＴＲ１４における変異により同定する。
【０８４２】 ゲノム再配置もまた、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４遺伝子における変化を
決定する方法として観察される。当該分野で公知の技術を使用して単離したゲノ
ムクローンを、ジゴキシゲニンデオキシ−ウリジン５’−三リン酸（Ｂｏｅｈｒ
ｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈｅｉｍ）を用いてニックトランスレーションし、そしてＪ
ｏｈｎｓｏｎ，Ｃｇ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３５：７３−
９９（１９９１）に記載のようにＦＩＳＨを行う。ＴＲ１３および／またはＴＲ
１４ゲノムの遺伝子座への特異的ハイブリダイゼーションのために、大過剰のヒ
トｃｏｔ−１ ＤＮＡを用いて標識プローブとのハイブリダイゼーションを行う
。
【０８４３】 染色体を、４，６−ジアミノ−２−フェニルインドール（ｐｈｅｎｙｌｉｄｏ
ｌｅ）およびヨウ化プロピジウムで対比染色し、ＣバンドおよびＲバンドの組み
合わせを生成する。正確なマッピングのための整列イメージを、三重バンドフィ
ルターセット（Ｃｈｒｏｍａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ
，ＶＴ）と冷却電荷結合素子カメラ（Ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ
，ＡＺ）および可変励起波長フィルターとを組み合わせて用いて得る。（Ｊｏｈ
ｎｓｏｎ，ＣＶ．ら、Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．，８：７５
（１９９１））。ＩＳｅｅ Ｇｒａｐｈｉｃａｌ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｓｙｓｔｅ
ｍを使用して、イメージ収集、分析および染色体部分長測定を行う。（Ｉｎｏｖ
ｉｓｉｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）。ＴＲ１３および
／またはＴＲ１４のゲノム領域の染色体変化（プローブによりハイブリダイズさ
れる）を、挿入、欠失および転座として同定する。これらのＴＲ１３および／ま
たはＴＲ１４変化を関連疾患の診断マーカーとして使用する。
【０８４４】 （実施例８：生物学的サンプル中のＴＲ１３核酸および／またはＴＲ１４核酸
の異常レベルを検出する方法） ＴＲ１３ポリペプチドおよび／またはＴＲ１４ポリペプチドは生物学的サンプ
ル中で検出され得、そしてＴＲ１３および／またはＴＲ１４のレベルの上昇また
は低下が検出される場合、このポリペプチドは、特定の表現型についてのマーカ
ーである。検出方法は数多くあり、そしてそれ故、当業者は以下のアッセイをそ
れらの特定の必要性に適合するように改変し得ることが理解される。
【０８４５】 例えば、抗体サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、サンプル中、好ましくは、
生物学的サンプル中のＴＲ１３および／またはＴＲ１４を検出する。マイクロタ
イタープレートのウェルを、最終濃度０．２〜１０μｇ／ｍｌにおけるＴＲ１３
および／またはＴＲ１４に対して特異的な抗体でコーティングする。この抗体は
、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであって、そして当該分野で
公知の技術を使用して産生される。ウェルに対するＴＲ１３および／またはＴＲ
１４の非特異的結合が減少するように、このウェルをブロックする。
【０８４６】 次に、コーティングしたウェルを、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４を含有す
るサンプルを用いて室温で２時間を超えてインキュベートする。好ましくは、サ
ンプルの段階希釈を使用して結果を確認すべきである。次に、プレートを脱イオ
ン水または蒸留水で３回洗浄し、結合していないＴＲ１３および／またはＴＲ１
４を除去する。
【０８４７】 次に、特異的抗体−アルカリホスファターゼ結合体５０μｌを２５〜４００ｎ
ｇの濃度で加え、そして室温で２時間インキュベートする。プレートを再び脱イ
オン水または蒸留水で３回洗浄し、結合していない結合体を除去する。
【０８４８】 次いで、４−メチルウンベリフェリルリン酸（ＭＵＰ）またはｐ−ニトロフェ
ニルリン酸（ＮＰＰ）基質溶液７５μｌを各ウェルに添加し、そして室温で１時
間インキュベートして基質と蛍光とを切断する。蛍光をマイクロタイタープレー
トリーダーにより測定する。コントロールサンプルの段階希釈からの実験結果を
使用して検量線を作成し、そしてＸ軸（対数スケール）にサンプル濃度を、そし
てＹ軸（直線スケール）に蛍光または吸光度をプロットする。次いで、このサン
プルの測定された蛍光に基づいた検量線を用いてサンプル中のＴＲ１３および／
またはＴＲ１４のポリペプチド濃度を補間する。
【０８４９】 （実施例９） （ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のレベルを減少させる方法） 本発明は、身体中のＴＲ１３および／またはＴＲ１４の生物学的活性のレベル
の減少を必要とする個体を処置するための方法に関し、この方法は、そのような
個体に、治療有効量のＴＲ１３および／またはＴＲ１４のアンタゴニストを含む
組成物を投与する工程を包含する。本発明における使用に好ましいアンタゴニス
トは、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４に特異的な抗体である。
【０８５０】 アンチセンス技術を使用して、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の産生を阻害
する。この技術は、種々の病因（例えば、癌）に起因して、ＴＲ１３および／ま
たはＴＲ１４のポリペプチド（好ましくは可溶性形態および／もしくは分泌形態
）のレベルを減少させる方法の１例である。
【０８５１】 例えば、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のポリペプチドのレベルが減少して
いる患者に、そのポリペプチドの１日用量０．１〜１００μｇ／ｋｇを連続６日
間与える。好ましくは、そのポリペプチドは、可溶性形態および／または分泌形
態である。
【０８５２】 （実施例１０：ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のレベル増加を処置する方法
） 本発明はまた、体内におけるＴＲ１３および／またはＴＲ１４の生物学的活性
のレベルを増加させる必要のある個体を処置するための方法に関し、その方法は
、治療有効量のＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４、またはそのアゴニストを含
む組成物をそのような個体に投与する工程を包含する。
【０８５３】 さらに、個体におけるＴＲ１３および／またはＴＲ１４の標準または正常発現
レベルの低下により引き起こされる状態は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４を
、好ましくは可溶および／または分泌形態で投与することにより処置され得るこ
とが理解される。従って、本発明はまた、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のポ
リペプチドのレベルの増加が必要な個体の処置方法を提供する。この方法は、こ
のような個体に、このような個体でＴＲ１３および／またはＴＲ１４の生物学的
活性レベルを増加させる量のＴＲ１３および／またはＴＲ１４を含む薬学的組成
物を投与する工程を包含する。
【０８５４】 例えば、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のレベルが異常に増加したと診断さ
れた患者に、アンチセンスポリヌクレオチドを、１日０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、
１．５ｍｇ、２．０ｍｇおよび３．０ｍｇ／ｋｇで２１日間静脈投与する。この
処置は、それが十分に寛容されていると決定された場合は、７日間の休止期間の
後、反復される。
【０８５５】 （実施例１１：遺伝子治療を使用する処置方法−エキソビボ） 遺伝子治療の１つの方法は、可溶性および／または成熟ＴＲ１３および／また
はＴＲ１４ポリペプチドを発現し得る線維芽細胞を患者に移植する。一般に、線
維芽細胞は、皮膚生検により被験体から得られる。得られた組織を組織培養培地
中に配置し、小片に分割する。組織の小塊を組織培養フラスコの湿潤表面に置き
、約１０片を各フラスコに置く。このフラスコを倒置し、しっかりと閉め、そし
て室温で一晩放置する。室温で２４時間後、フラスコを反転させ、組織塊をフラ
スコの底に固定させたままにし、そして新鮮培地（例えば、１０％ＦＢＳ、ペニ
シリンおよびストレプトマイシンを含有するＨａｍのＦ１２培地）を添加する。
次に、フラスコを３７℃で約１週間インキュベートする。
【０８５６】 この時点で、新鮮培地を添加し、次いで数日ごとに取り換える。さらに二週間
培養した後、単層の線維芽細胞が出現する。単層をトリプシン処理し、そしてさ
らに大きなフラスコにスケールアップする。
【０８５７】 Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルスの長末端反復が隣接するｐＭＶ−７（Ｋｉ
ｒｓｃｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））を
ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、仔ウシ腸ホスファターゼで処理
する。線状ベクターをアガロースゲルで分画し、そしてガラスビーズを使用して
精製する。
【０８５８】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４をコードするｃＤＮＡを、それぞれ５’およ
び３’末端のコード配列に対応するＰＣＲプライマーを使用して増幅し得る。好
ましくは、５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そして３’プライマーはＨ
ｉｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルス線状骨格
および増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを、Ｔ４ ＤＮＡ
リガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を二つのフラグメントの連結
に適切な条件下で維持する。次に、連結混合物を使用し、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１
０１を形質転換する。次に、それを、カナマイシン含有寒天上にプレーティング
し、ベクターが適切に挿入されたＴＲ１３および／またはＴＲ１４を有すること
を確認する。
【０８５９】 アンホトロピックｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、１
０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むＤｕｌｂ
ｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅｓ培地（ＤＭＥＭ）中、組織培養でコンフルエントな密
度まで増殖させる。次に、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４遺伝子を含むＭＳＶ
ベクターを培地に加え、そしてパッケージング細胞にベクターを形質導入する。
このとき、パッケージング細胞はＴＲ１３および／またはＴＲ１４核酸を含む感
染性ウイルス粒子を産生する（ここで、パッケージング細胞をプロデューサー細
胞という）。
【０８６０】 形質導入されたプロデューサー細胞に新鮮培地を添加し、次いで培地を１０ｃ
ｍプレートのコンフルエントなプロデューサー細胞から採取する。感染性ウイル
ス粒子を含む使用済み培地を、ミリポアーフィルターを通して濾過して、はがれ
たプロデューサー細胞を除去し、次いでこの培地を使用して、線維芽細胞を感染
させる。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから培地を除去し、そして
プロデューサー細胞からの培地で速やかに置き換える。この培地を除去し、そし
て新鮮培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線維芽
細胞が感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまたはｈ
ｉｓのような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用することが必
要である。一旦、線維芽細胞が効率的に感染すると、線維芽細胞を分析し、ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４タンパク質が産生されているか否かを決定する。
【０８６１】 次に、操作された線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス３マイクロキ
ャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいずれかで、宿主に移植する
。
【０８６２】 （実施例１２：遺伝子治療を使用する処置方法−インビボ） 本発明の別の局面は、障害、疾患、および状態を処置するためにインビボ遺伝
子治療方法を使用することである。この遺伝子治療法は、ＴＲ１３および／また
はＴＲ１４ポリペプチドの発現を増大または減少させるための、動物への裸の核
酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）ＴＲ１３および
／またはＴＲ１４配列の導入に関する。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリヌ
クレオチドは、プロモーター、または標的組織によるＴＲ１３および／またはＴ
Ｒ１４ポリペプチドの発現に必要な任意の他の遺伝子エレメントに、作動可能に
連結され得る。このような遺伝子治療および送達の技術および方法は、当該分野
で公知であり、例えば、ＷＯ９０／１１０９２、ＷＯ９８／１１７７９；米国特
許第５６９３６２２号、同第５７０５１５１号、同第５５８０８５９号；Ｔａｂ
ａｔａ Ｈ．ら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．３５：４７０−４７９（１９
９７）；Ｃｈａｏ Ｊ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．３５：５１７−５２
２（１９９７）；Ｗｏｌｆｆ Ｊ．Ａ．，Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ．Ｄｉｓｏｒ
ｄ．７：３１４−３１８（１９９７）、Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｂ．ら、Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．３：４０５−４１１（１９９６）；Ｔｓｕｒｕｍｉ Ｙ．ら、Ｃｉｒ
ｃｕｌａｔｉｏｎ ９４：３２８１−３２９０（１９９６）（本明細書中に参考
として援用される）を参照のこと。
【０８６３】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド構築物は、注入可能な物質
を動物の細胞に送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚、肺、肝
臓、腸など）の間隙空間への注入）によって送達され得る。ＴＲ１３および／ま
たはＴＲ１４ポリヌクレオチド構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性キ
ャリア中で送達され得る。
【０８６４】 用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡは、細胞への侵入を補助
、促進、または容易にするように作用するいかなる送達ビヒクル（ウイルス配列
、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチン、または沈澱剤などを含む
）も含まない配列をいう。しかし、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレ
オチドはまた、当業者に周知の方法によって調製され得るリポソーム処方物（例
えば、Ｆｅｌｇｎｅｒ Ｐ．Ｌ．らＡｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７２：
１２６−１３９（１９９５）およびＡｂｄａｌｌａｈ Ｂ．らＢｉｏｌ．Ｃｅｌ
ｌ ８５（１）：１−７（１９９５）で教示されたもの）中で送達され得る。
【０８６５】 この遺伝子治療方法において使用されるＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリ
ヌクレオチドベクター構築物は、好ましくは、宿主ゲノムに組み込まれず、複製
を可能にする配列も含まない構築物である。当業者に公知の任意の強力なプロモ
ーターが、ＤＮＡの発現を駆動するために用いられ得る。他の遺伝子治療技術と
は異なり、裸の核酸配列を標的細胞に導入する１つの主要な利点は、その細胞に
おけるポリヌクレオチド合成の一過性の性質である。研究によって、非複製ＤＮ
Ａ配列が細胞に導入されて、６ヶ月までの期間、所望のポリペプチドの産生を提
供し得ることが示された。
【０８６６】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（
筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨
、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、およ
び結合組織を包含する）の間隙空間に送達され得る。組織の間隙空間は、細胞間
液、器官組織の細網線維間のムコ多糖マトリクス、血管または室の壁における弾
性線維、線維性組織のコラーゲン線維、あるいは筋肉細胞を囲む結合組織内の同
じマトリクス（ｔｈａｔ ｓａｍｅ ｍａｔｒｉｘ）または骨の裂孔中の結合組
織内の同じマトリクス（ｔｈａｔ ｓａｍｅ ｍａｔｒｉｘ）を含む。これは、
同様に、循環の血漿およびリンパチャンネルのリンパ液により占められた空間で
ある。筋肉組織の間隙空間への送達は、以下に考察する理由のために好ましい。
それらは、これらの細胞を含む組織への注入によって、好都合に送達され得る。
それらは、好ましくは、分化した持続性の非分裂細胞に送達され、そしてその細
胞において発現されるが、送達および発現は、非分化細胞または完全には分化し
ていない細胞（例えば、血液の幹細胞または皮膚線維芽細胞）において達成され
得る。インビボで、筋肉細胞は、ポリヌクレオチドを取り込み、そして発現する
それらの能力において、特に適格である。
【０８６７】 裸のＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド注入のために、ＤＮＡ
またはＲＮＡの有効投薬量は、約０．０５ｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体
重の範囲にある。好ましくは、この投薬量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２
０ｍｇ／ｋｇであり、そしてより好ましくは、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍ
ｇ／ｋｇである。もちろん、当業者が認識するように、この投薬量は、注入の組
織部位に従って変化する。核酸配列の適切かつ有効な投薬量は、当業者によって
容易に決定され得、そして処置される状態および投与経路に依存し得る。好まし
い投与経路は、組織の間隙空間への非経口注入経路によってである。しかし、他
の非経口経路（例えば、特に肺もしくは気管支組織、咽喉、または鼻の粘膜への
送達のためのエアロゾル処方物の吸入）もまた用いられ得る。さらに、裸のＴＲ
１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド構築物が、血管形成術の間に、こ
の手順において用いられるカテーテルによって動脈に送達され得る。
【０８６８】 インビボで筋肉に注入されたＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチ
ドの用量応答効果を、以下のようにして決定する。ＴＲ１３および／またはＴＲ
１４ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの生成のための適切なＴＲ１３および／
またはＴＲ１４鋳型ＤＮＡを、標準的な組換えＤＮＡ方法論に従って調製する。
鋳型ＤＮＡ（これは環状または線状のいずれかであり得る）を裸のＤＮＡとして
使用するか、またはリポソームと複合体化するかのいずれかである。次いで、マ
ウスの四頭筋に、種々の量の鋳型ＤＮＡを注入する。
【０８６９】 ５〜６週齢の雌性および雄性のＢａｌｂ／Ｃマウスに、０．３ｍｌの２．５％
Ａｖｅｒｔｉｎを腹腔内注射することにより麻酔する。１．５ｃｍの切開を大腿
前部で行い、そして四頭筋を直接可視化する。ＴＲ１３および／またはＴＲ１４
鋳型ＤＮＡを、０．１ｍｌのキャリアに入れて、１ｃｃ注射器で２７ゲージ針を
通して１分間にわたって、筋肉の遠位挿入部位から約０．５ｃｍのところで膝に
、約０．２ｃｍの深さで注入する。縫合を、将来の位置決定のために注入部位の
上で行い、そしてその皮膚をステンレス鋼クリップで閉じる。
【０８７０】 適切なインキュベーション時間（例えば、７日）後、筋肉抽出物を、四頭全体
を切り出すことによって調製する。個々の四頭筋の５枚毎の１５μｍ切片を、Ｔ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４タンパク質発現について組織化学的に染色する。
ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質発現についてのタイムコースを、異
なるマウスからの四頭を異なる時間で採取すること以外は、同様な様式で行い得
る。注入後の筋肉中のＴＲ１３および／またはＴＲ１４のＤＮＡの持続性を、注
入したマウスおよびコントロールマウスからの全細胞性ＤＮＡおよびＨＩＲＴ上
清を調製した後、サザンブロット分析によって決定し得る。マウスにおける上記
実験の結果を、裸のＴＲ１３および／またはＴＲ１４ ＤＮＡを用いて、ヒトお
よび他の動物において適切な投薬量および他の処置パラメーターを外挿するため
に使用し得る。
【０８７１】 （実施例１４：内因性ＴＲ１３および／またはＴＲ１４遺伝子を使用する遺伝
子治療） 本発明に従う遺伝子治療の別の方法は、内因性ＴＲ１３および／またはＴＲ１
４配列を、例えば、米国特許第５，６４１，６７０号（１９９７年６月２４日発
行）；国際公開第ＷＯ ９６／２９４１１号（１９９６年９月２６日公開）；国
際公開第ＷＯ ９４／１２６５０号（１９９４年８月４日公開）；Ｋｏｌｌｅｒ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：８９３２〜８９３
５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒｅ，３４２：４３５〜
４３８（１９８９）に記載されるように、相同組換えを介してプロモーターに作
動可能に結合する工程を包含する。この方法は、その標的細胞中に存在するが、
その細胞中で発現されないかまたは所望されるよりも低いレベルで発現される、
遺伝子の活性化を包含する。プロモーターおよび標的配列を含むポリヌクレオチ
ド構築物を作製する。この標的配列は、プロモーターに隣接する、内因性ＴＲ１
３および／またはＴＲ１４の５’非コード配列と相同である。この標的配列は、
このＴＲ１３および／またはＴＲ１４の５’末端に十分に近く、その結果、この
プロモーターは、相同組換えの際にこの内因性配列に作動可能に連結される。こ
のプロモーターおよび標的配列を、ＰＣＲを使用して増幅し得る。好ましくは、
この増幅したプロモーターは、５’末端および３’末端上に異なる制限酵素部位
を含む。好ましくは、第１の標的配列の３’末端は、増幅したプロモーターの５
’末端と同じ制限酵素部位を含み、そして第２の標的配列の５’末端は、増幅し
たプロモーターの３’末端と同じ制限部位を含む。
【０８７２】 この増幅したプロモーターおよび増幅した標的配列を、適切な制限酵素で消化
し、続いて仔ウシ腸ホスファターゼで処理する。消化したプロモーターおよび消
化した標的配列を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下でともに加える。生じた混合
物を、これら２つのフラグメントの連結に適切な条件下で維持する。この構築物
をアガロースゲル上でサイズ分画し、次いでフェノール抽出およびエタノール沈
殿により精製する。
【０８７３】 この実施例において、このポリヌクレオチド構築物を、エレクトロポレーショ
ンを介して裸のポリヌクレオチドとして投与する。しかし、このポリヌクレオチ
ド構築物はまた、トランスフェクション促進剤（例えば、リポソーム、ウイルス
配列、ウイルス粒子、沈殿剤など）と共に投与され得る。このような送達方法は
、当該分野で公知である。
【０８７４】 一旦、細胞をトランスフェクトすると、相同組換えが起こり、この内因性ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４配列に作動可能に連結されるプロモーターを生じる
。これは、この細胞中におけるＴＲ１３および／またはＴＲ１４の発現を生じる
。発現は、免疫学的染色または当該分野で公知の他の任意の方法により、検出さ
れ得る。
【０８７５】 線維芽細胞を、皮膚生検により被験体から得る。得られた組織を、ＤＭＥＭ＋
１０％胎仔ウシ血清中に置く。対数増殖期または定常期初期の線維芽細胞を、ト
リプシン処理し、そしてプラスチックの表面から栄養培地でリンスする。細胞懸
濁液のアリコートを、計数のために取り出し、そして残りの細胞を遠心分離に供
する。上清を吸引し、そしてペレットを５ｍｌのエレクトロポレーション緩衝液
（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．３、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ
、０．７ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、６ｍＭデキストロース）に再懸濁する。この細胞
を再遠心分離し、上清を吸引し、そして細胞をアセチル化ウシ血清アルブミン１
ｍｇ／ｍｌを含むエレクトロポレーション緩衝液に再懸濁する。この最終細胞懸
濁物は、約３×１０6細胞／ｍｌを含む。エレクトロポレーションを、再懸濁直
後に実施すべきである。
【０８７６】 クローンＤＮＡを、標準的技術に従って調製する。例えば、ＴＲ１３および／
またはＴＲ１４の遺伝子座に標的化するためのクローンを構築するために、クロ
ーンｐＵＣ１８（ＭＢＩ Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ａｍｈｅｒｓｔ、ＮＹ）をＨｉ
ｎｄＩＩＩで消化する。ＣＭＶプロモーターを、５’末端にＸｂａＩ部位および
３’末端にＢａｍＨＩ部位を備えてＰＣＲにより増幅する。２つのＴＲ１３およ
び／またはＴＲ１４非コード配列をＰＣＲを介して増幅する：一方のＴＲ１３お
よび／またはＴＲ１４非コード配列（ＴＲ１３および／またはＴＲ１４フラグメ
ント１）を、５’末端にＨｉｎｄＩＩＩ部位および３’末端にＸｂａＩ部位を備
えて増幅する；他方のＴＲ１３および／またはＴＲ１４非コード配列（ＴＲ１３
および／またはＴＲ１４フラグメント２）を、５’末端にＢａｍＨＩ部位および
３’末端にＨｉｎｄＩＩＩ部位を備えて増幅する。このＣＭＶプロモーターおよ
びＴＲ１３および／またはＴＲ１４フラグメントを、適切な酵素（ＣＭＶプロモ
ーター−ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩ；ＴＲ１３および／またはＴＲ１４フラグメ
ント１−ＸｂａＩ；ＴＲ１３および／またはＴＲ１４フラグメント２−ＢａｍＨ
Ｉ）で消化し、そして共に連結する。生じた連結生成物をＨｉｎｄＩＩＩで消化
し、そしてＨｉｎｄＩＩＩで消化したｐＵＣ１８クローンと連結する。
【０８７７】 クローンＤＮＡを、０．４ｃｍの電極ギャップを備える滅菌キュベット（Ｂｉ
ｏ−Ｒａｄ）に添加する。最終ＤＮＡ濃度は、一般的に、少なくとも１２０μｇ
／ｍｌである。次いで、この細胞懸濁液の０．５ｍｌ（約１．５×１０6細胞を
含む）をこのキュベットに添加し、そしてこの細胞懸濁液およびＤＮＡ溶液を、
穏やかに混合する。エレクトロポレーションを、Ｇｅｎｅ−Ｐｕｌｓｅｒ装置（
Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて実施する。キャパシタンスおよび電圧を、それぞれ、
９６０μＦおよび２５０〜３００Ｖに設定する。電圧が増加すると、細胞の生存
が減少するが、導入されたＤＮＡをそのゲノム中に安定に組込む生存細胞の割合
は劇的に増加する。これらのパラメーターを考慮すると、パルス時間約１４〜２
０ｍＳｅｃが観察されるはずである。
【０８７８】 エレクトロポレーションした細胞を、室温で約５分間維持し、次いで、このキ
ュベットの中身を、滅菌した移動ピペットを用いて穏やかに取り出す。この細胞
を、１０ｃｍのディッシュ中の、予め温めた栄養培地（１５％仔ウシ血清を含む
ＤＭＥＭ）１０ｍｌに直接加え、そして３７℃でインキュベートする。翌日、こ
の培地を吸引し、そして１０ｍｌの新鮮な培地で置換し、そしてさらに１６〜２
４時間インキュベートする。
【０８７９】 次いで、操作された線維芽細胞を、宿主中に、単独か、またはサイトデックス
（ｃｙｔｏｄｅｘ）３マイクロキャリア（ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒ）ビーズ上
でコンフルエントになるまで増殖させた後かのいずれかで、注射する。ここで、
この線維芽細胞は、タンパク質産物を生成する。次いで、この線維芽細胞を、上
記のような患者に導入し得る。
【０８８０】 （実施例１５） （Ｂ細胞の増殖および分化の、刺激または阻害を検出するためのアッセイ） 機能的体液性免疫応答の生成は、Ｂ系列細胞とその微小環境との間の可溶性か
つ同種の両方のシグナル伝達を必要とする。シグナルは、Ｂ系列細胞がそのプロ
グラムされた発生を続けることを可能にする正の刺激か、またはその細胞がその
現在の発生経路を休止するように指示する負の刺激を付与し得る。現在まで、多
数の刺激シグナルおよび阻害シグナル（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−
６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４およびＩＬ−１５を含む）
がＢ細胞の応答性に影響することが見出されている。興味深いことに、これらの
シグナルは、単独では弱いエフェクターであるが、種々の同時刺激タンパク質と
組み合わせて、Ｂ細胞集団における活性化、増殖、分化、ホーミング、寛容、お
よび死を誘導し得る。最もよく研究されたＢ細胞同時刺激タンパク質の種類の１
つは、ＴＮＦスーパーファミリーである。このファミリーのうち、ＣＤ４０、Ｃ
Ｄ２７およびＣＤ３０は、その各々のリガンドであるＣＤ１５４、ＣＤ７０およ
びＣＤ１５３とともに、種々の免疫応答を調節することが見出されている。これ
らのＢ細胞集団およびその前駆体の増殖および分化の検出ならびに／もしくは観
察を可能にするアッセイは、種々のタンパク質が増殖および分化に関してこれら
のＢ細胞集団に対して有し得る効果を決定する際の価値ある道具である。下記に
列挙されたのは、Ｂ細胞集団およびその前駆体の分化、増殖または阻害の検出を
可能にするように設計された２つのアッセイである。
【０８８１】 （実験手順） （インビトロアッセイ）−精製したＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４のタン
パク質、またはその短縮形態を、Ｂ細胞集団およびその前駆体において活性化、
増殖、分化もしくは阻害および／もしくは死を誘導するその能力について評価す
る。精製したヒト扁桃Ｂ細胞に対するＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク
質の活性（０．１〜１０，０００ｎｇ／ｍＬの用量範囲にわたって定性的に測定
する）を、標準的Ｂリンパ球同時刺激アッセイにて評価する。このアッセイにお
いて、精製した扁桃Ｂ細胞を、プライミング剤として、ホルマリン固定したＳｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ Ｃｏｗａｎ Ｉ（ＳＡＣ）または固
定した抗ヒトＩｇＭ抗体のいずれかの存在下で培養する。トリチウムチミジン取
り込みにより測定した場合に、第２シグナル（例えば、ＩＬ−２およびＩＬ−１
５）が、ＳＡＣおよびＩｇＭ架橋と相乗作用してＢ細胞増殖を惹起する。新規な
相乗作用剤を、このアッセイを使用して容易に同定し得る。このアッセイは、Ｃ
Ｄ３陽性細胞の磁気ビーズ（ＭＡＣＳ）枯渇によって、ヒト扁桃Ｂ細胞を単離す
る工程を包含する。生じた細胞集団は、ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）の発現により評
価した場合、９５％より多くがＢ細胞である。各サンプルの種々の希釈物を９６
ウェルプレートの個々のウェルに配置し、そこに培養培地（１０％ ＦＢＳ、５
×１０-5Ｍ βＭＥ、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１０μｇ／ｍｌストレプトマ
イシン、およびＳＡＣの１０-5希釈物を含む、ＲＰＭＩ １６４０）に懸濁した
１０5個のＢ細胞を、総体積１５０μｌにて添加する。増殖または阻害を、因子
添加の７２時間後から開始して、3Ｈ−チミジン（６．７Ｃｉ／ｍＭ）を用いた
２０時間のパルス（１μＣｉ／ウェル）により定量する。陽性コントロールおよ
び陰性コントロールは、それぞれ、ＩＬ２および培地である。
【０８８２】 （インビボアッセイ）−ＢＡＬＢ／ｃマウスに、緩衝液単独、あるいは２ｍｇ
／ＫｇのＴＲ１３タンパク質もしくはＴＲ１４タンパク質またはそれらの短縮形
態を、１日２回（ｉ．ｐ．）注射する。マウスに、この処置を連続４日間与え、
その時点でマウスを屠殺し、そして種々の組織および血清を分析用に収集する。
正常な脾臓ならびにＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質で処理した脾臓
由来のヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）切片の比較により、脾細胞に対する
ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質の活性の結果（例えば、動脈周囲リ
ンパ鞘の拡散、および／または赤脾髄領域の有核細胞性の有意な増加（これは、
Ｂ細胞集団の分化および増殖の活性化を示し得る））を同定する。Ｂ細胞マーカ
ー（抗ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０））を使用する免疫組織化学研究を使用して、非細
胞に対するなんらかの生理的変化（例えば、脾組織崩壊）が、確立されたＴ細胞
領域を浸潤する大まかに規定されたＢ細胞域におけるＢ細胞提示の増加に起因す
るか否かを決定する。
【０８８３】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質で処理したマウス由来の脾臓のフ
ローサイトメトリー分析を使用して、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク
質が、コントロールマウスにて観察されたものに対して、ＴｈＢ＋，ＣＤ４５Ｒ
（Ｂ２２０）ダルＢ細胞の集団を特異的に増加させるか否かを示す。
【０８８４】 同様に、インビボでの成熟Ｂ細胞提示の増加の予測された結果は、血清Ｉｇ力
価における相対的増加である。従って、血清ＩｇＭレベルおよびＩｇＡレベルを
、緩衝液で処理したマウスと、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質で処
理したマウスとの間で比較する。
【０８８５】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質における活性を試験する。しかし、当業者は、ＴＲ１３および／もしくはＴ
Ｒ１４ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／もしくはＴ
Ｒ１４のアゴニスト、ならびに／またはＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４のア
ンタゴニストの活性を試験するために、例示された研究を容易に改変し得る。
【０８８６】 （実施例１６） （Ｔ細胞増殖アッセイ） ＣＤ３誘導増殖アッセイを、ＰＢＭＣに対して実施し、そして3Ｈ−チミジン
の取り込みにより測定する。このアッセイは、以下のように実施する。９６ウェ
ルプレートを、ＣＤ３に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ＨＩＴ３ａ、Ｐ
ｈａｒｍｉｎｇｅｎ）またはアイソタイプが一致するコントロールモノクローナ
ル抗体（Ｂ３３．１）１００μｌ／ウェルを用いて、４℃で一晩（０．０５Ｍ重
炭酸緩衝液（ｐＨ９．５）中１μｇ／ｍｌ）コーティングし、次いで、ＰＢＳで
３回洗浄する。ＰＢＭＣを、Ｆ／Ｈ勾配遠心分離によりヒト末梢血から単離し、
モノクローナル抗体でコーティングしたプレートの４連のウェルに（５×１０4
／ウェル）、種々の濃度のＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質の存在下
で１０％ ＦＣＳおよびＰ／Ｓを含むＲＰＭＩ中にて（総体積２００μｌ）添加
する。関連のタンパク質緩衝液および培地単独がコントロールである。３７℃で
４８時間の培養の後、プレートを１０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、そして上
清１００μｌを取り出し、そして増殖に対する効果が観察された場合はＩＬ−２
（または他のサイトカイン）の測定用に−２０℃で保存する。ウェルに、０．５
μＣｉの3Ｈ−チミジンを含む培地１００μｌを補充し、そして３７℃で１８〜
２４時間培養する。ウェルから収集し、そして3Ｈ−チミジンの取り込みを増殖
の尺度として使用する。抗ＣＤ３単独が増殖についての陽性コントロールである
。ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）もまた、増殖を増強するコントロールとして使用
する。Ｔ細胞の増殖を誘導しないコントロール抗体を、ＴＲ１３および／または
ＴＲ１４タンパク質の効果についての陰性コントロールとして使用する。
【０８８７】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３およびＴＲ１４タンパク質にお
ける活性を試験する。しかし、当業者は、ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４ポ
リヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４の
アゴニスト、ならびに／またはＴＲ１３および／もしくはＴＲ１４のアンタゴニ
ストの活性を試験するために、例示された研究を容易に改変し得る。
【０８８８】 （実施例１７：ＭＨＣクラスＩＩ、同時刺激分子および接着分子の発現、なら
びに単球および単球由来ヒト樹状細胞の細胞分化に対するＴＲ１３および／また
はＴＲ１４の効果） 樹状細胞を末梢血において見出される増殖前駆体の増殖により生成する：接着
性ＰＢＭＣまたは清浄化単球画分を、ＧＭ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）およびＩ
Ｌ−４（２０ｎｇ／ｍｌ）とともに７〜１０日間培養する。これらの樹状細胞は
、未熟細胞の特徴的表現型（ＣＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０およびＭＨ
ＣクラスＩＩ抗原の発現）を有する。ＴＮＦ−αのような活性化因子での処理は
、表面表現型に迅速な変化（ＭＨＣクラスＩおよびＩＩ、同時刺激分子および接
着分子の発現の増加、ＦＣγＲＩＩの下方制御、ＣＤ８３の上方制御）を生じる
。これらの変化は抗原提示能力の増加、および樹状細胞の機能的成熟と相関する
。
【０８８９】 表面抗原のＦＡＣＳ分析を以下のように実施する。細胞を、ＴＲ１３および／
またはＴＲ１４またはＬＰＳ（陽性コントロール）の種々の濃度で１〜３日間処
理し、１％ＢＳＡおよび０．０２ｍＭアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳで洗浄
し、次いで１：２０希釈の適切なＦＩＴＣ標識モノクローナル抗体またはＰＥ標
識モノクローナル抗体とともに、４℃で３０分間インキュベートする。さらなる
洗浄後、標識した細胞をＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）
でのフローサイトメトリーにより分析する。
【０８９０】 （サイトカインの産生に対する効果） 樹状細胞により生成されるサイトカイン、特にＩＬ−１２は、Ｔ細胞依存性免
疫応答の開始において重要である。ＩＬ−１２は、Ｔｈ１ヘルパーＴ細胞免疫応
答の発生に強力に影響し、そして細胞傷害性Ｔ細胞機能およびＮＫ細胞機能を誘
導する。ＥＬＩＳＡを用いて以下のようにＩＬ−１２放出を測定する。樹状細胞
（１０6／ｍｌ）を、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の種々の濃度で２４時間
処理する。ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）を、陽性コントロールとして細胞培養物
に添加する。次いで、細胞培養物からの上清を収集し、そして市販のＥＬＩＳＡ
キット（例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ））
を用いてＩＬ−１２含量について分析する。キットに提供される標準的プロトコ
ールを用いる。
【０８９１】 （ＭＨＣクラスＩＩ、同時刺激分子および接着分子の発現に対する効果） 細胞表面抗原の３つの主なファミリー：接着分子、抗原提示に関与する分子、
およびＦｃレセプターが、単球上で同定され得る。ＭＨＣクラスＩＩ抗原および
他の同時刺激分子（例えば、Ｂ７およびＩＣＡＭ−１）の発現の調節は、単球の
抗原提示能力、およびＴ細胞活性化を誘導する能力に変化を生じ得る。Ｆｃレセ
プターの発現増加は、単球細胞傷害性活性、サイトカイン放出および食菌作用の
改善と相関し得る。
【０８９２】 ＦＡＣＳ分析は、以下のような表面抗原を試験するために用いられる。単球を
、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４またはＬＰＳ（陽性コントロール）の種々の
濃度で１〜５日間処理し、１％ＢＳＡおよび０．０２ｍＭアジ化ナトリウムを含
有するＰＢＳで洗浄し、次いで１：２０希釈の適切なＦＩＴＣ標識モノクローナ
ル抗体またはＰＥ標識モノクローナル抗体とともに、４℃で３０分間インキュベ
ートする。さらなる洗浄後、標識した細胞をＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄ
ｉｃｋｉｎｓｏｎ）でのフローサイトメトリーにより分析する。
【０８９３】 （単球活性化および／または生存の増加） 単球を活性化する（あるいは、不活化する）および／または単球の生存を増加
する（あるいは、単球生存を低下させる）分子についてのアッセイは、当該分野
で公知であり、そして本発明の分子が単球のインヒビターまたはアクチベーター
として機能するか否かを決定するために慣用的に適用され得る。ＴＲ１３および
／またはＴＲ１４、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のアゴニストまたはアンタ
ゴニストは、以下に記載の３つのアッセイを用いてスクリーニングされ得る。こ
れらのアッセイのそれぞれについて、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｈｉｓｔ
ｏｐａｑｕｅ勾配（Ｓｉｇｍａ）を通した遠心分離により、単一のドナーｌｅｕ
ｋｏｐａｃｋ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，
ＭＤ）から精製する。単球を向流遠心性エルトリエーション（ｃｏｕｎｔｅｒｆ
ｌｏｗ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ）によりＰＢＭＣか
ら単離する。
【０８９４】 （１．単球生存アッセイ）ヒト末梢血単球は、血清または他の刺激の非存在下
で培養した場合、次第に生存度を失う。それらの死は、内部調節されたプロセス
（アポトーシス）から生じる。活性化因子、例えばＴＮＦαの培養への添加は、
劇的に、細胞生存を改善し、そしてＤＮＡの断片化を妨げる。プロピジウムヨー
ド（ＰＩ）染色を用いて、以下のようにアポトーシスを測定する。単球を、無血
清培地（陽性コントロール）中、１００ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−α（陰性コントロ
ール）の存在下、および試験される種々の濃度の化合物の存在下で、ポリプロピ
レンチューブ中で、４８時間培養する。細胞を、最終濃度５μｇ／ｍｌでＰＩを
含有するＰＢＳ中で２×１０6／ｍｌの濃度に懸濁し、次いでＦＡＣＳｃａｎ分
析の前に５分間室温でインキュベートする。ＰＩ取り込みは、この試験パラダイ
ムにおけるＤＮＡの断片化と相関することを示している。
【０８９５】 （２．サイトカイン放出に対する効果）単球／マクロファージの重要な機能は
、刺激後のサイトカインの放出を通した免疫系の他の細胞集団への調節活性であ
る。サイトカイン放出を測定するためのＥＬＩＳＡは、以下のように実施する。
ヒト単球を、５×１０5細胞／ｍｌの密度で、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４
の種々の濃度とともに、および同じ条件下でＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
非存在下で、インキュベートする。ＩＬ−１２の生成については、この細胞を、
ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の存在下でＩＦＮ−□（１００Ｕ／ｍｌ）で１
晩プライムする。次いで、ＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加する。馴化培地を２
４時間後に収集し、そして使用するまで凍結保存する。次いで、ＴＮＦ−α、Ｉ
Ｌ−１０、ＭＣＰ−１およびＩＬ−８の測定を市販のＥＬＩＳＡキット（例えば
、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ））を用い、キット
に提供される標準的プロトコールを適用して実施する。
【０８９６】 （３．酸化バースト（Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｂｕｒｓｔ））精製した単球を９
６ウェルプレートに２〜１×１０5細胞／ウェルでプレートする。ＴＲ１３およ
び／またはＴＲ１４の種々の濃度をウェルの総量０．２ｍｌの培養培地（ＲＰＭ
Ｉ １６４０＋１０％ＦＣＳ、グルタミンおよび抗生物質）に添加する。３日間
のインキュベーション後、このプレートを遠心分離し、そして培地をウェルから
除く。マクロファージの単層に、１ウェルあたり０．２ｍｌのフェノールレッド
溶液（１４０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、５
．５ｍＭ デキストロース、０．５６ｍＭ フェノールレッドおよび１９Ｕ／ｍ
ｌのＨＲＰＯ）を、刺激物質（２００ｎＭ ＰＭＡ）とともに添加する。このプ
レートを３７℃で２時間インキュベートし、そして１ウェルあたり２０μｌの１
Ｎ ＮａＯＨを添加して反応を停止する。吸光度を６１０ｎｍで読む。マクロフ
ァージにより生成されるＨ2Ｏ2の量を算出するため、既知のモル濃度のＨ2Ｏ2溶
液の検量線をそれぞれの実験について実施する。
【０８９７】 この実施例において記載された研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タン
パク質の活性を試験した。しかし、当業者はＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポ
リヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のア
ゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験するために、例示された研
究を容易に改変し得る。
【０８９８】 （実施例１８：血管内皮細胞の増殖に対するＴＲ１３および／またはＴＲ１４
の効果） １日目に、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、４％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ
）、１６ユニット／ｍｌ ヘパリン、および５０ユニット／ｍｌ 内皮細胞増殖
補充物（ＥＣＧＳ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，Ｉｎｃ．）を含有するＭ１９９
培地中で、３５ｍｍシャーレあたり２〜５×１０4細胞の密度で播種する。２日
目、この培地を、１０％ＦＢＳ、８ユニット／ｍｌヘパリンを含有するＭ１９９
で置換する。それぞれ、配列番号２のＴＲ１３および／または、好ましくは配列
番号６１のＴＲ１４タンパク質、もしくは配列番号５のＴＲ１４タンパク質、な
らびに陽性コントロール（例えば、ＶＥＧＦおよび塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＦ））
を種々の濃度で添加する。４日目および６日目に、培地を交換する。８日目、Ｃ
ｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒを用いて細胞数を決定する。
【０８９９】 ＨＵＶＥＣ細胞数の増加は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４が血管内皮細胞
を増殖し得ることを示す。
【０９００】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
アゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験するために、例示する研
究を容易に改変し得る。
【０９０１】 （実施例１９：血管内皮細胞の増殖に対するＴＲ１３および／またはＴＲ１４
の刺激効果） 増殖因子の分裂促進活性の評価のために、電子共役試薬ＰＭＳ（フェナジンメ
トサルフェート）を用いる、比色分析ＭＴＳ（３−（４，５−ジメチルチアゾー
ル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフ
ォフェニル）２Ｈ−テトラゾリウム）アッセイを実行した（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱ，Ｐｒｏｍｅｇａ）。細胞を０．１ｍＬの血清補充培地中で９６ウ
ェルプレートに播種し（５，０００細胞／ウェル）、そして一晩付着させる。０
．５％ＦＢＳ中、１２時間の血清飢餓後、Ｈｅｐａｒｉｎ（８Ｕ／ｍｌ）を伴う
かまたは伴わない、条件（０．５％ＦＢＳ中のｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ165またはＴ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４）をウェルに４８時間添加する。２０ｍｇのＭＴ
Ｓ／ＰＭＳ混合物（１：０．０５）を１ウェル毎に添加し、そして３７℃で１時
間インキュベートさせ、その後ＥＬＩＳＡプレートリーダーで４９０ｎｍの吸光
度を測定する。コントロールウェル（培地あり、細胞なし）のバックグラウンド
の吸光度を差し引きし、そしてそれぞれの条件について７つのウェルを並行して
実施する。Ｌｅａｋら、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３０
Ａ：５１２〜５１８（１９９４）を参照のこと。
【０９０２】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
アゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験するために、例示する研
究を容易に改変し得る。
【０９０３】 （実施例２０：ＰＤＧＦ誘導性血管平滑筋細胞増殖刺激効果の阻害） ＨＡｏＳＭＣ増殖を、例えば、ＢｒｄＵｒｄ組み込みにより測定し得る。手短
には、４チャンバスライド上で増殖するサブコンフルエントな休止期細胞を、Ｃ
ＲＰまたはＦＩＴＣ標識化ＡＴ２−３ＬＰでトランスフェクトする。次いで、こ
の細胞に１０％仔ウシ血清および６ｍｇ／ｍｌのＢｒｄＵｒｄを適用（ｐｕｌｓ
ｅ）する。２４時間後、ＢｒｄＵｒｄ染色キット（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｉｅｓ）を用いることにより免疫細胞化学を実施する。簡略には、この細胞
を、変性溶液への曝露後、ビオチン化マウス抗−ＢｒｄＵｒｄ抗体と４℃で２時
間インキュベートし、次いでストレプトアビジン−ペルオキシダーゼおよびジア
ミノベンジジンとともにインキュベートする。ヘマトキシリンでの対比染色後、
この細胞を顕微鏡試験のために標本にし、そしてＢｒｄ Ｕｒｄ−陽性細胞を計
数する。ＢｒｄＵｒｄ係数は、総細胞数に対するＢｒｄＵｒｄ−陽性細胞の割合
として計算される。さらに、個々の細胞について、明野照明および暗野ＵＶ蛍光
照明の同時使用により、ＢｒｄＵｒｄ染色（核）およびＦＩＴＣ取り込み（細胞
質）の同時検出を実行する。Ｈａｙａｓｈｉｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
６：２７１（３６）：２１９８５〜２１９９２（１９９６）を参照のこと。
【０９０４】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
アゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験するために、例示する研
究を容易に改変し得る。
【０９０５】 （実施例２１：内皮遊走（ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）の刺激） 本実施例は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４がリンパ性の内皮細胞遊走を刺
激し得る可能性を探索するために用いられる。
【０９０６】 内皮細胞遊走アッセイは、４８ウェルの微小走化性チャンバを用いて実行され
る（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｂｅ Ｉｎｃ．，Ｃａｂｉｎ Ｊｏｈｎ，ＭＤ；Ｆａｌｋ
，Ｗ．Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｒ．Ｈ．Ｊ．，およびＬｅｏｎａｒｄ，Ｅ．Ｊ．「Ａ
４８ ｗｅｌｌ ｍｉｃｒｏ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｆｏ
ｒ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ
ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｍｅｔｈｏｄｓ １９８０；３３：２３９〜２４７）。ポリビニルピロリドンを
含まないポリカーボネートフィルター（これは８μｍの孔径を備える）（Ｎｕｃ
ｌｅｏｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を室温で少なくとも６
時間０．１％ゼラチンでコーティングし、そして無菌空気のもとで乾燥させる。
０．２５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補充したＭ１９９中で試験物質を適
切な濃度に希釈し、そして２５μｌの最終希釈物を改変Ｂｏｙｄｅｎ装置の底部
チャンバに置く。サブコンフルエントな早期継代（２〜６）のＨＵＶＥＣまたは
ＢＭＥＣ培養物を洗浄し、そして細胞の脱離に必要な最少の時間トリプシン処理
する。底部チャンバと上部チャンバとの間のフィルターを配置した後、１％ＦＢ
Ｓを含有する５０μｌ Ｍ１９９中に懸濁した２．５×１０5細胞を上部コンパ
ートメントに播種する。次いでこの装置を、５％ＣＯ２と共に湿潤にしたチャン
バ中で３７℃で５時間インキュベートして細胞を遊走させた。インキュベーショ
ン期間後、このフィルターを取り出し、そして非遊走細胞を有するフィルターの
上部側をゴム性のポリスマン（ｐｏｌｉｃｅｍａｎ）でかきとる。このフィルタ
ーをメタノールで固定し、そしてＧｉｅｍｓａ溶液で染色する（Ｄｉｆｆ−Ｑｕ
ｉｃｋ，Ｂａｘｔｅｒ，ＭｃＧｒａｗ Ｐａｒｋ，ＩＬ）。遊走は、それぞれの
ウェルにおいて、３つの無作為の高出力視野（４０×）の細胞を計数することに
より定量する。そしてすべての群を４連で実行する。
【０９０７】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
アゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験するために、例示する研
究を容易に改変し得る。
【０９０８】 （実施例２２：内皮細胞による一酸化窒素産生の刺激） 血管内皮による一酸化窒素の放出は、血管内皮弛緩の介在物質であると考えら
れる。従って、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の活性は、ＴＲ１３および／ま
たはＴＲ１４に応答する内皮細胞による一酸化窒素産生を測定することによって
アッセイされ得る。
【０９０９】 一酸化窒素を、２４時間の飢餓、次いで、様々なレベルの陽性コントロール（
例えば、ＶＥＧＦ−１）ならびにＴＲ１３および／またはＴＲ１４への４時間の
曝露の後のコンフルエントな微小血管内皮細胞の９６ウェルプレート中で測定す
る。培地中の一酸化窒素を、Ｇｒｉｅｓｓ試薬の使用により決定して、硝酸還元
酵素による一酸化窒素由来の硝酸塩の還元後の亜硝酸塩の総量を測定する。一酸
化窒素放出に対するＴＲ１３および／またはＴＲ１４の効果を、ＨＵＶＥＣにお
いて試験する。
【０９１０】 簡単には、培養したＨＵＶＥＣ単層からのＮＯ放出は、ＮＯメーター（Ｉｓｏ
−ＮＯ，Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．
）に接続したＮＯ特異的なポーラログラフ電極を用いて測定する。ＮＯエレメン
トの較正を、以下の式に従って行う： ２ＫＮＯ2＋２ＫＩ＋２Ｈ2ＳＯ4６２ＮＯ＋Ｉ2＋２Ｈ2Ｏ＋Ｋ2ＳＯ4。
【０９１１】 較正検量線を、ＫＩおよびＨ2ＳＯ4を含む較正溶液中に段階的な濃度のＫＮＯ 2 （０、５、１０、２５、５０、１００、２５０、および５００ｎｍｏｌ／Ｌ）
を添加することによって得る。ＮＯに対するＩｓｏ−ＮＯ電極の特異性を、オー
センティックなＮＯ気体からのＮＯを測定することにより、事前に決定する。こ
の培養培地を取り除き、そしてＨＵＶＥＣを、Ｄｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝化生
理食塩水で２回洗浄する。次いで、細胞を、６ウェルプレート中で５ｍｌのろ過
したＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ溶液に浸し、そしてこの細胞プレートを、
３７℃に温度を維持するために、スライドウォーマー（Ｌａｂ Ｌｉｎｅ Ｉｎ
ｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）で保持する。ＮＯセンサープローブをウェルに
垂直に挿入して、異なる条件の追加の前に、電極の先端を溶液の表面の２ｍｍ下
で保持する。Ｓ−ニトロソアセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）を、陽性コントロ
ールとして用いる。放出したＮＯの量を、１×１０6内皮細胞あたりのピコモル
濃度として表す。全ての報告した値は、各群（細胞培養ウェルの数）における４
〜６回の測定値の平均である。Ｌｅａｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２１７：９６−１０５（１９９５）を参照のこと。
【０９１２】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
アゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験するために、例示する研
究を容易に改変し得る。
【０９１３】 （実施例２３：新脈管形成における索形成に対するＴＲ１３および／またはＴ
Ｒ１４の効果） 新脈管形成における別の工程は、内皮細胞の分化により特徴付けられる索（ｃ
ｏｒｄ）形成である。このバイオアッセイは、インビトロで培養した場合の微小
血管内皮細胞が毛細管様構造（中空構造）を形成する能力を測定する。
【０９１４】 ＣＡＤＭＥＣ（微小血管内皮細胞）を、増殖細胞（２継代）としてＣｅｌｌ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｉｎｃ．から購入し、Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎｓ’ＣＡＤＭＥＣ Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍ中で培養し、そして５継
代で使用する。インビトロ新脈管形成アッセイのために、４８ウェル細胞培養プ
レートのウェルをＣｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ’Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ
Ｆａｃｔｏｒ Ｍｅｄｉｕｍ（２００μｌ／ウェル）を用いて、３７℃にて３
０分間コーティングする。ＣＡＤＭＥＣを、７，５００細胞／ウェルでコーティ
ングしたウェルに播種し、Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍ中で一晩培養する。次い
で、このＧｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍを、コントロール緩衝液またはＴＲ１３お
よび／またはＴＲ１４（０．１〜１００ｎｇ／ｍｌ）を含む３００μｇのＣｅｌ
ｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ’Ｃｈｏｒｄ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕ
ｍと交換し、そしてこの細胞をさらに４８時間培養する。毛細管様索の数および
長さを、Ｂｏｅｃｋｅｌｅｒ ＶＩＡ−１７０ビデオ画像分析装置の使用を通じ
て定量する。全てのアッセイを三連で行う。
【０９１５】 市販の（Ｒ＆Ｄ）ＶＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）を、陽性コントロールとして用
いる。ｂ−エストラジオール（１ｎｇ／ｍｌ）を、陰性コントロールとして用い
る。適切な緩衝液（タンパク質なし）もまた、コントロールとして利用する。
【０９１６】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の
アゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験するために、例示する研
究を容易に改変し得る。
【０９１７】 （実施例２４：ニワトリ漿尿膜に対する脈管形成効果） ニワトリ漿尿膜（ＣＡＭ）は、新脈管形成を試験するために十分に確立した系
である。ＣＡＭにおける血管形成は、容易に可視化および定量可能である。ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４が、ＣＡＭにおける新脈管形成を刺激する能力を試
験し得る。
【０９１８】 白色レグホンニワトリ（Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ）の受精卵およびニホン
ウズラ（ｑｕａｉｌ）（Ｃｏｔｕｒｎｉｘ ｃｏｔｕｒｎｉｘ）を、３７．８℃
および湿度８０％でインキュベートする。１６日齢のニワトリの分化したＣＡＭ
および１３日齢のウズラの胚を以下の方法で研究する。
【０９１９】 発生の４日目に、ニワトリ卵の卵殻に窓を作る。この胚を正常な発生について
調べ、そしてこの卵をセロテープ（登録商標）で封着する。これらを、さらに１
３日目までインキュベートする。Ｔｈｅｒｍａｎｏｘカバーガラス（Ｎｕｎｃ，
Ｎａｐｅｒｖｉｌｌｅ，ＩＬ）を、直径約５ｍｍのディスクに切る。滅菌かつ無
塩成長因子、および試験されるべきタンパク質を蒸留水に溶解し、そして約３．
３ｍｇ／５ｍｌをディスクにピペットで移す。風乾後、逆さにしたディスクをＣ
ＡＭに適用する。３日後、標本を３％グルタルアルデヒドおよび２％ホルムアル
デヒド中に固定し、そして０．１２Ｍカコジル酸ナトリウム緩衝液でリンスする
。これらを実体顕微鏡［Ｗｉｌｄ Ｍ８］を用いて写真撮影し、上記のように半
薄層切片化および超薄層切片化のために包埋する。コントロールを、キャリアデ
ィスクのみで行う。
【０９２０】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の活性
を試験した。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改変して、ＴＲ１３およ
び／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３および
／またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験し得
る。
【０９２１】 （実施例２５：マウスにおけるマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）移植片を用い
る新脈管形成アッセイ） ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質活性を試験するための新脈管形成
のためのインビボモデルを確立するために、マウスおよびラットを、２０ｍｇの
ＢＳＡ（陰性コントロール）、１ｍｇのＴＲ１３および／またはＴＲ１４、また
は０．５ｍｇのＶＥＧＦ−１（陽性コントロール）のいずれかを含むメチルセル
ロースディスクとともに皮下に移植する。ネガティブコントロールディスクは、
ほとんど血管新生を含むべきではないが、ポジティブコントロールディスクは、
脈管形成の徴候を示すべきである。
【０９２２】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改変して、Ｔ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性
を試験し得る。
【０９２３】 （実施例２６：ウサギ下肢モデルにおける虚血のレスキュー） ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の虚血に対するインビボでの効果を研究する
ため、ウサギ後肢虚血モデルを、以前に記載される（Ｔａｋｅｓｈｉｔａ、Ｓ．
ら、Ａｍ Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ １４７：１６４９−１６６０（１９９５））よう
に１つの大腿動脈の外科的除去により作製する。大腿動脈の切除は、血栓の逆行
性伝播および外腸骨動脈の閉塞を生じる。結果として、虚血肢への血流は、内腸
骨動脈から生じる側副血管に依存する（Ｔａｋｅｓｈｉｔａ、Ｓ．ら、Ａｍ Ｊ
．Ｐａｔｈｏｌ １４７：１６４９−１６６０（１９９５））。１０日の間隔で
、ウサギの手術後の回復および内因性の側副血管の発達を可能にする。手術後１
０日目（０日目）に、ベースライン血管造影を行った後、虚血肢の内腸骨動脈を
、５００ｍｇの裸のＴＲ１３および／またはＴＲ１４発現クローンを用いて、（
Ｒｉｅｓｓｅｎ Ｒ．ら、Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４：７４９−７５８（
１９９３）；Ｌｅｃｌｅｒｃ，Ｇ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：９
３６−９４４（１９９２））に記載されるように、ヒドロゲル被覆バルーンカテ
ーテルを用いる動脈遺伝子移入技術により、トランスフェクトする。ＴＲ１３お
よび／またはＴＲ１４を処置に用いる場合、５００ｍｇのＴＲ１３および／また
はＴＲ１４タンパク質またはコントロールの単回ボーラスを、注入カテーテルを
通して１分間にわたり、虚血肢の内腸骨動脈中に送達する。３０日目に、種々の
パラメーターを、これらのウサギで測定する：（ａ）ＢＰ比−虚血肢の収縮期血
圧 対 正常肢の収縮期血圧の比；（ｂ）血流および血流貯蔵量（Ｆｌｏｗ Ｒ
ｅｓｅｒｖｅ）−停止ＦＬ：非拡張状態の間の血流、および最大ＦＬ：完全拡張
状態の間の血流（また、血管量の間接的測定）、そして血流貯蔵量は、最大ＦＬ
：停止ＦＬの比に反映される：停止ＦＬ；（ｃ）血管造影値（ａｎｇｉｏｇｒａ
ｐｈｉｃ Ｓｃｏｒｅ）−これを側副血管の血管造影により測定する。値を、か
ぶせたグリッド内の円の百分率（ウサギ大腿の総数ｍで割った横断不透明化動脈
を用いる）により決定する；（ｄ）毛細管（ｃａｐｉｌｌａｒｙ）密度−後肢か
ら得た光学顕微鏡用切片において決定した側副毛細血管の数。
【０９２４】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の活性
を試験した。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改変して、ＴＲ１３およ
び／またはＴＲ１４のポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ１３およ
び／またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性を試験し
得る。
【０９２５】 （実施例２７：ラット虚血皮膚弁モデル） 評価パラメーターは、皮膚の血流、皮膚温度、および第ＶＩＩＩ因子の免疫組
織化学または内皮アルカリホスファターゼ反応を含む。皮膚虚血の間のＴＲ１３
および／またはＴＲ１４の発現を、インサイチュハイブリダーゼーションを用い
て研究する。
【０９２６】 このモデルにおける研究を、以下の３つの部分に分ける： ａ）虚血皮膚、 ｂ）虚血皮膚創傷、 ｃ）通常の創傷。
【０９２７】 実験プロトコールは以下を含む： ａ）３×４ｃｍの単一茎全層無作為皮膚弁（ｓｉｎｇｌｅ ｐｅｄｉｃｌｅ
ｆｕｌｌ−ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｒａｎｄｏｍ ｓｋｉｎ ｆｌａｐ）（動物の
背下部におよぶ筋皮弁）を生じさせること、 ｂ）虚血皮膚（皮膚弁）に切除創傷をつくること（直径４〜６ｍｍ）、 ｃ）１ｍｇ〜１００ｍｇの種々の投薬量範囲でＴＲ１３および／またはＴＲ１
４を用いて、（創傷後の０、１、２、３、４日目に）切除創傷の局所的な処置を
すること、 ｄ）組織学的研究、免疫組織化学的研究、およびインサイチュ研究のために、
創傷後の３、５、７、１０、１４、および２１日目に創傷組織を収集すること。
【０９２８】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改変して、Ｔ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性
を試験し得る。
【０９２９】 （実施例２８：末梢動脈疾患モデル） ＴＲ１３および／またはＴＲ１４を用いる新脈管形成治療は、末梢動脈疾患の
場合、虚血周囲の血流の回復を得るための新規の治療的ストラテジーである。実
験プロトコールは以下を含む： ａ）一方の側の大腿動脈を、後肢の虚血筋肉を作製するために結紮し、他方の
側の後肢は、コントロールの役割をする、 ｂ）ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質を、２０ｍｇ〜５００ｍｇの
投薬量範囲で、一週間あたり静脈内および／または筋肉内に３回（おそらくそれ
より多く）で２〜３週間、送達する、 ｃ）この虚血筋肉組織を、大腿動脈の結紮後、１、２、および３週間目に、Ｔ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４の発現の分析ならびに組織学のために収集する。
生検もまた、他方の側の対側後肢の正常な筋肉において行う。
【０９３０】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改変して、Ｔ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４のポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、Ｔ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの活
性を試験し得る。
【０９３１】 （実施例２９：虚血性心筋疾患モデル） ＴＲ１３および／またはＴＲ１４を、側枝血管の発達を刺激し得、かつ冠状動
脈閉塞後の新しい血管を再構成し得る強力なマイトジェンとして評価する。ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４の発現の変化を、インサイチュで調査する。実験プ
ロトコールは、以下を含む： ａ）心臓を、ラットの左側開胸術を介して露出する。直ちに、左冠状動脈を、
細い縫合糸（６−０）を用いて咬合し、そして胸郭を閉じる、 ｂ）ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパク質を、２０ｍｇ〜５００ｍｇの
投薬範囲で、一週間あたり静脈内および／または筋肉内に３回（おそらくそれよ
り多く）で２〜４週間、送達する、 ｃ）手術の３０日後、この心臓を、形態測定のために取り出しそして横断切片
化し、そしてインサイチュで分析する。
【０９３２】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験した。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改変して、Ｔ
Ｒ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、ＴＲ
１３および／またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性
を試験し得る。
【０９３３】 （実施例３０：ラット角膜創傷治癒モデル） この動物モデルは、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４の、新生血管形成に対す
る効果を示す。実験プロトコールは、以下を含む： ａ）角膜の中心から支質層へと１〜１．５ｍｍの長さの切開を作ること、 ｂ）眼の外側の角に面する切開の唇縁の下にへらを挿入すること、 ｃ）ポケットを作ること（その基底は、眼の縁から（ｆｏｒｍ）１〜１．５ｍ
ｍである）、 ｄ）５０ｎｇ〜５μｇのＴＲ１３および／またはＴＲ１４を含むペレットを、
ポケット内に配置すること、 ｅ）ＴＲ１３および／またはＴＲ１４での処置をまた、２０ｍｇ〜５００ｍｇ
の範囲の投薬量範囲内で（毎日の処置を５日間）角膜創傷に局所的に適用し得る
。
【０９３４】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のポリ
ペプチドの活性を試験した。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改変して
、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、
ＴＲ１３および／またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの
活性を試験し得る。
【０９３５】 （実施例３１：糖尿病マウスおよび糖質コルチコイド損傷創傷治癒モデル） （Ａ．糖尿病ｄｂ＋／ｄｂ＋マウスモデル） ＴＲ１３および／またはＴＲ１４が治癒プロセスを促進することを実証するた
めに、創傷治癒の遺伝的糖尿病マウスモデルを、使用する。ｄｂ＋／ｄｂ＋マウ
スにおける全層（ｆｕｌｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ）創傷治癒モデルは、損傷（ｉ
ｍｐａｉｒｅｄ）創傷治癒の十分に特徴付けられた、臨床的に関連性のある、そ
して再現可能なモデルである。糖尿病性創傷の治癒は、収縮ではなく肉芽組織の
形成および再上皮形成に依存する（Ｇａｒｔｎｅｒ，Ｍ．Ｈ．ら、Ｊ．Ｓｕｒｇ
．Ｒｅｓ．５２：３８９（１９９２）；Ｇｒｅｅｎｈａｌｇｈ，Ｄ．Ｇ．ら、Ａ
ｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３６：１２３５（１９９０））。
【０９３６】 この糖尿病動物は、ＩＩ型真性糖尿病において観察される特徴的な特性の多く
を有する。ホモ接合（ｄｂ＋／ｄｂ＋）マウスは、それらの正常なヘテロ接合（
ｄｂ＋／＋ｍ）同腹仔と比較して肥満である。変異糖尿病（ｄｂ＋／ｄｂ＋）マ
ウスは、第４染色体上に単一の常染色体性の劣性変異（ｄｂ＋）を有する（Ｃｏ
ｌｅｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２８３
−２９３（１９８２））。動物は、多食症、多渇症、および多尿症を示す。変異
糖尿病マウス（ｄｂ＋／ｄｂ＋）は、上昇した血中グルコース、増加したまたは
正常なインスリンレベル、および抑制された細胞媒介性免疫を有する（Ｍａｎｄ
ｅｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２０：１３７５（１９７８）；Ｄｅｂｒａｙ−
Ｓａｃｈｓ，Ｍ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５１（１）：１−７
（１９８３）；Ｌｅｉｔｅｒら、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ Ｐａｔｈｏｌ．１１４：４６
−５５（１９８５））。末梢神経障害、心筋合併症、および微小血管損傷、基底
膜肥厚、および糸球体濾過異常が、これらの動物において記載されている（Ｎｏ
ｒｉｄｏ，Ｆ．ら、Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．８３（２）：２２１−２３２（１９
８４）；Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２９（１）：６０−６７（
１９８０）；Ｇｉａｃｏｍｅｌｌｉら、Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．４０（４）：４
６０−４７３（１９７９）；Ｃｏｌｅｍａｎ，Ｄ．Ｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３
１（補遺）：１−６（１９８２））。これらのホモ接合性糖尿病マウスは、高血
糖症を発症し、そしてこれは、ヒトＩＩ型糖尿病に類似してインスリンに対して
耐性である（Ｍａｎｄｅｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２０：１３７５−１３７
７（１９７８））。
【０９３７】 これらの動物において観察された特徴は、このモデルにおける治癒が、ヒト糖
尿病において観察される治癒に類似し得ることを示す（Ｇｒｅｅｎｈａｌｇｈら
、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ Ｐａｔｈｏｌ．１３６：１２３５−１２４６（１９９０））
。
【０９３８】 遺伝的糖尿病の雌性Ｃ５７ＢＬ／ＫｓＪ（ｄｂ＋／ｄｂ＋）マウス、およびそ
れらの非糖尿病（ｄｂ＋／＋ｍ）へテロ接合性同腹仔を、この研究に用いる（Ｊ
ａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。これらの動物を６週齢で購入し、
そしてこれらの動物は研究の開始時に８週齢である。動物を個別に飼育し、そし
て自由に食物および水を与える。全ての操作を、無菌技術を用いて行う。この実
験を、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．のＩｎｓｔｉｔ
ｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅ
ｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎ
ｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓの規則およびガイド
ラインに従って行う。
【０９３９】 創傷プロトコールを、以前に報告された方法（Ｔｓｕｂｏｉ，Ｒ．およびＲｉ
ｆｋｉｎ，Ｄ．Ｂ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：２４５−２５１（１９９０
））に従って行う。簡単には、創傷させる日に、動物を、脱イオン水に溶解した
Ａｖｅｒｔｉｎ（０．０１ｍｇ／ｍＬ）、２，２，２−トリブロモエタノールお
よび２−メチル−２−ブタノールの腹腔内注射で麻酔する。この動物の背面領域
を剃毛し、そして皮膚を７０％エタノール溶液およびヨウ素で洗浄する。手術範
囲を、創傷させる前に滅菌ガーゼで乾燥させる。次いで、８ｍｍの全層の創傷を
、Ｋｅｙｅｓ組織パンチを用いて作製する。創傷させた直後に、周囲の皮膚を、
創傷の拡大を取り除くために穏やかに伸ばす。実験の間この創傷を開放させる。
処置の適用を、創傷させた日から開始して５日間連続で、局所的に与える。処置
の前に、創傷を、滅菌生理食塩水およびガーゼスポンジを用いて穏やかに洗浄す
る。
【０９４０】 創傷を視覚的に検査し、そして手術の日およびその後２日間隔で、固定した距
離で写真撮影する。創傷閉鎖を、１〜５日目の毎日および８日目の測定により決
定する。創傷を目盛り付き（Ｃａｌｉｂｒａｔｅｄ）Ｊａｍｅｓｏｎカリパスを
用いて水平および垂直に測定する。創傷を、肉芽組織がもはや目に見えずかつ創
傷を連続した上皮が覆う場合に治癒したとみなす。
【０９４１】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４を、ビヒクル中で８日間、ＴＲ１３および／
またはＴＲ１４の異なる用量の範囲（１日あたり創傷あたり４ｍｇ〜５００ｍｇ
）を用いて投与する。ビヒクルコントロール群には、５０ｍＬのビヒクル溶液を
与えた。
【０９４２】 動物を、８日目にペントバルビタールナトリウム（３００ｍｇ／ｋｇ）の腹腔
内注射で安楽死させる。次いで、創傷および周囲の皮膚を、組織学および免疫組
織化学のために収集する。組織標本を、さらなる処理のために、生検スポンジの
間の組織カセット内で１０％中性緩衝化ホルマリン中に置く。
【０９４３】 各々１０匹の動物（５匹の糖尿病および５匹の非糖尿病コントロール）の３つ
の群：１）ビヒクルプラシーボコントロール、２）ＴＲ１３および／またはＴＲ
１４を、評価する。
【０９４４】 創傷閉鎖を、水平軸および垂直軸で面積を測定すること、そして創傷の面積の
合計を得ることにより分析する。次いで、収縮を、最初の創傷の面積（０日）と
処置後（８日）の面積との間の差異を確立することにより評価する。１日目のこ
の創傷面積は、６４ｍｍ2（皮膚パンチに対応するサイズ）である。計算を以下
の式を用いて行う： ［８日目の開放面積］−［１日目の開放面積］／［１日目の開放面積］。
【０９４５】 標本を１０％緩衝化ホルマリン中に固定し、そしてパラフィン包埋塊を、創傷
表面に対して垂直に切り出し（５ｍｍ）、そしてＲｅｉｃｈｅｒｔ−Ｊｕｎｇミ
クロトームを用いて切断する。慣用的なヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）染
色を、二等分した創傷の横断切片で行う。創傷の組織学的試験を用いて、修復し
た皮膚の治癒プロセスおよび形態的な外見を、ＴＲ１３および／またはＴＲ１４
を用いる処置によって改変したかどうかを評価する。この評価は、細胞蓄積、炎
症細胞、毛細管、線維芽細胞、再上皮形成、および表皮成熟の存在の検証を含む
（Ｇｒｅｅｎｈａｌｇｈ，Ｄ．Ｇ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３６：１２
３５（１９９０））。目盛り付きレンズマイクロメーターを盲検観察者（ｂｌｉ
ｎｄｅｄ ｏｂｓｅｒｖｅｒ）が用いる。
【０９４６】 組織切片をまた、ＡＢＣ Ｅｌｉｔｅ検出システムを使用してポリクローナル
ウサギ抗ヒトケラチン抗体で免疫組織化学的に染色する。ヒト皮膚を陽性組織コ
ントロールとして用いる一方、非免疫ＩｇＧを陰性コントロールとして用いる。
ケラチノサイト増殖を、目盛り付きレンズマイクロメーターを用いて創傷の再上
皮形成の程度を評価することによって決定する。
【０９４７】 皮膚標本における増殖細胞核抗原／サイクリン（ＰＣＮＡ）を、ＡＢＣ Ｅｌ
ｉｔｅ検出システムを用いて抗ＰＣＮＡ抗体（１：５０）を使用することにより
実証する。ヒト結腸癌は、陽性組織コントロールとして役割を果たし、そしてヒ
ト脳組織を、陰性組織コントロールとして用いる。各標本は、１次抗体の省略（
ｏｍｉｓｓｉｏｎ）および非免疫マウスＩｇＧとの置換を有する切片を含む。こ
れらの切片の順位は、０〜８のスケール（わずかな増殖を反映するより低い側の
スケール〜激しい増殖を反映するより高い側）の増殖の程度に基づく。
【０９４８】 実験データを、片側ｔ検定を用いて分析する。＜０．０５のｐ値を有意とみな
す。
【０９４９】 （Ｂ．ステロイド損傷ラットモデル） ステロイドによる創傷治癒の阻害は、種々のインビトロおよびインビボ系にお
いて十分に実証されている（Ｗａｈｌ，Ｓ．Ｍ．Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ
ｓ ａｎｄ Ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ：Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒ
ｙ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ａｃｔｉｏｎ：Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ａｓｐｅｃｔｓ．２８０−３０２（１９８９）； Ｗａｈｌ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１５：４７６−４８１（１９７５）；Ｗｅｒｂ，Ｚ．ら、Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４７：１６８４−１６９４（１９７８））。糖質コルチコ
イドは、新脈管形成を阻害すること、血管透過性（Ｅｂｅｒｔ，Ｒ．Ｈ．ら、Ａ
ｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．３７：７０１−７０５（１９５２））、線維芽細胞
増殖、およびコラーゲン合成（Ｂｅｃｋ，Ｌ．Ｓ．ら、Ｇｒｏｗｓ Ｆａｃｔｏ
ｒｓ．５：２９５−３０４（１９９１）；Ｈａｙｎｅｓ，Ｂ．Ｆ．ら、Ｊ．Ｃｌ
ｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６１：７０３−７９７（１９７８））を低下させること、
ならびに循環する単球の一過性の減少を生じること（Ｈａｙｎｅｓ，Ｂ．Ｆ．ら
、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６１：７０３−７９７（１９７８）；Ｗａｈｌ
，Ｓ．Ｍ．，「Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ａｎｄ ｗｏｕｎｄ ｈｅａ
ｌｉｎｇ」：Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ａｃｔｉｏ
ｎ：Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ，Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２８０−３０２頁（１９８９））によって
創傷治癒を遅延させる。損傷創傷治癒に対するステロイドの全身性投与は、ラッ
トにおいて十分に確立された現象である（Ｂｅｃｋ，Ｌ．Ｓ．ら、Ｇｒｏｗｔｈ
Ｆａｃｔｏｒｓ．５：２９５−３０４（１９９１）； Ｈａｙｎｅｓ，Ｂ．Ｆ
．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６１：７０３−７９７（１９７８） ；Ｗ
ａｈｌ，Ｓ．Ｍ．「Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ａｎｄ ｗｏｕｎｄ ｈ
ｅａｌｉｎｇ」：Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ａｃｔ
ｉｏｎ：Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２８０−３０２頁（１９８９）；Ｐｉ
ｅｒｃｅ，Ｇ．Ｆ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６
：２２２９−２２３３（１９８９））。
【０９５０】 ＴＲ１３および／またはＴＲ１４が治癒プロセスを促進し得ることを実証する
ために、治癒が、メチルプレドニゾロンの全身性投与により損なわれる、ラット
の全層切除皮膚創傷に対するＴＲ１３および／またはＴＲ１４の複数の局所適用
の効果を評価する。
【０９５１】 若年成体の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（体重２５０〜３００ｇ
）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）をこの実験に用
いる。この動物を、８週齢で購入する。研究の開始時は９週齢である。ラットの
治癒応答は、創傷の時点で、メチルプレドニゾロンの全身性投与（１７ｍｇ／ｋ
ｇ／ラット、筋肉内）により損なわれる。動物を個別に飼育し、そして自由に食
物と水を与える。全ての操作を、無菌技術を用いて行う。この研究を、Ｈｕｍａ
ｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ
Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ａｎｄ ｔ
ｈｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏ
ｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓの規則およびガイドラインに従って
行う。
【０９５２】 創傷プロトコルは、上記Ａ節に従う。創傷させる日に、動物をケタミン（５０
ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射で麻酔する。この
動物の背面領域を剃毛し、そして皮膚を７０％エタノールおよびヨウ素溶液で洗
浄する。手術範囲を、創傷させる前に滅菌ガーゼで乾燥させる。８ｍｍの全層創
傷をＫｅｙｅｓ組織パンチを用いて作製する。実験の継続の間、この創傷の左を
開放する。創傷させ、次いでメチルメチルプレドニゾロン投与した日から開始し
て、試験物質の適用を、７日間連続で、１日１回、局所的に与える。処置の前に
、創傷を滅菌生理食塩水およびガーゼスポンジを用いて穏やかに洗浄する。
【０９５３】 創傷を視覚的に検査し、そして創傷させた日および処置の終りに、固定した距
離で写真撮影する。創傷閉鎖を、１〜５日目の毎日および８日目の測定により決
定する。創傷を目盛り付き（ｃａｌｉｂｒａｔｅｄ）Ｊａｍｅｓｏｎノギスを用
いて水平および垂直に測定する。肉芽組織がもはや目に見えずかつ創傷を連続し
た上皮が覆う場合に、創傷を治癒したとみなす。
【０９５４】 ＴＲ１３および/またはＴＲ１４を、ビヒクル中で８日間、異なる用量の範囲
（１日あたり創傷あたり４ｍｇ〜５００ｍｇ）のＴＲ１３および/またはＴＲ１
４を用いて投与する。ビヒクルコントロール群は、５０ｍＬのビヒクル溶液を受
けた。
【０９５５】 動物を、８日目にペントバルビタールナトリウム（３００ｍｇ／ｋｇ）の腹腔
内注射で安楽死させる。次いで、創傷および周囲の皮膚を、組織学のために収集
する。組織標本を、さらなるプロセシングのために、生検スポンジの間の組織カ
セット内で１０％中性緩衝化ホルマリン中に置く。
【０９５６】 各々１０匹の動物（メチルプレドニゾロンを用いる５匹および糖質コルチコイ
ドを用いない５匹）の４つの群を評価した：１）非処置群、２）ビヒクルプラシ
ーボコントロール、および３）ＴＲ１３および/またはＴＲ１４処置群。
【０９５７】 創傷閉鎖を、垂直軸および水平軸で面積を測定すること、および創傷の面積全
体を得ることにより分析する。次いで、閉鎖を、最初の創傷の面積（０日）と処
置後（８日）の面積との間の差異を確立することにより評価する。１日目のこの
創傷面積は、６４ｍｍ2（皮膚パンチに対応するサイズ）である。計算を以下の
式を用いて行った： ［８日目の開放面積］−［１日目の開放面積］／［１日目の開放面積］ 標本を１０％緩衝化ホルマリン中に固定し、そしてパラフィン包埋塊を、創傷
表面に対して垂直に切り出し（５ｍｍ）、そしてＯｌｙｍｐｕｓミクロトームを
用いて切断する。慣用的なヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を、二等分
した創傷の断面上で行う。創傷の組織学的試験は、修復した皮膚の治癒プロセス
および形態的な外見がＴＲ１３および/またはＴＲ１４での処置によって改善さ
れたかどうかを評価することを可能にする。目盛り付きレンズマイクロメーター
を盲検観察者（ｂｌｉｎｄｅｄ ｏｂｓｅｒｖｅｒ）が用いて、創傷の隙間の距
離を決定する。
【０９５８】 実験データを、片側ｔ検定を用いて分析する。０．０５未満のｐ値を有意とみ
なす。
【０９５９】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３および/またはＴＲ１４タンパ
ク質の活性を試験する。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改変して、Ｔ
Ｒ１３および/またはＴＲ１４のポリヌクレオチド（例えば、遺伝子治療）、Ｔ
Ｒ１３および/またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの活
性を試験し得る。
【０９６０】 （実施例３２：リンパ水腫（ｌｙｍｐｈａｄｅｍａ）動物モデル） この実験アプローチの目的は、ラット後肢におけるリンパ管形成（ｌｙｍｐｈ
ａｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）およびリンパの循環系の再確立におけるＴＲ１３およ
び/またはＴＲ１４の治療的効果を試験するための、適切かつ一貫したリンパ水
腫モデルを作製することである。有効性を、罹患した肢の腫脹体積、リンパの脈
管構造、総血漿タンパク質の量の定量、および組織病理学により測定する。急性
リンパ水腫は、７〜１０日間観察される。恐らくより重要なことは、水腫の慢性
進行は、３〜４週間まで続く。
【０９６１】 手術を始める前に、血液サンプルを、タンパク質濃度分析のために採血する。
雄性ラット（体重約３５０ｇ）に、ペントバルビタールを投薬する。次いで、右
肢を膝から股関節部まで剃毛する。この剃毛した範囲を７０％ＥｔＯＨに浸した
ガーゼで拭く。血液を、血清総タンパク質試験のために採血する。周径測定およ
び体積測定を２つの測定レベル（踵の０．５ｃｍ上、足の背の中間点）に印をつ
けた後、足へと色素を注射する。右足背および左足背の両方の内皮に、０．０５
ｍｌの１％Ｅｖａｎ’ｓ Ｂｌｕｅを注射する前に行った。次いで、足への色素
の注射の後、周径測定および体積測定を行う。
【０９６２】 目印として膝関節を用いて、中肢鼡径部切開を、大腿血管の位置を確認できる
ように環状に行う。鉗子および止血鉗子を用いて、皮膚弁を切開し、そして分離
する。大腿血管の位置確認後、血管の横に沿ってかつ血管の下に走るリンパ管を
位置確認する。次いで、この範囲の主要なリンパ管を、電気的に凝固するかまた
は縫合結紮（ｓｕｔｕｒｅ ｌｉｇａｔｅ）する。
【０９６３】 顕微鏡を用いて、肢の背の筋肉（半腱様筋（ｓｅｍｉｔｅｎｄｉｎｏｓｉｓ）
および内転筋の付近）を平滑に切開する。次いで、膝窩リンパ節の位置を確認す
る。次いで、２つの近位リンパ管および２つの遠位リンパ管、ならびに膝窩節の
遠位血液供給部を縫合することにより結紮する。次いで、膝窩リンパ節および任
意の付随する脂肪組織を、結合組織を切断することによって取り除く。
【０９６４】 この手順で生じるいかなる軽度の出血をも管理するように注意すること。リン
パ管を咬合した後、皮膚弁を、液体皮膚（Ｖｅｔｂｏｎｄ）（ＡＪ Ｂｕｃｋ）
を使用することによって密封する。別々の皮膚縁を、その下の筋肉組織に、脚の
周囲に約０．５ｃｍのギャップを残しながら密封する。皮膚はまた、必要な場合
にその下の筋肉に縫合することによって係留し得る。
【０９６５】 感染を回避するために、動物を、メッシュを用いて個別に収容する（床敷きな
し）。回復した動物を、最適な水腫ピークを通して毎日チェックする。このピー
クは、代表的には５〜７日まで生じる。次いで、プラトーの水腫ピークを観察す
る。リンパ水腫の強度を評価するために、各肢上の２つの指定した場所の周径お
よび体積を、操作の前および７日間毎日測定する。リンパ水腫に対する血漿タン
パク質の効果を決定し、そしてタンパク質分析が有用な試験周界であるか否かも
また調査する。コントロール肢および水腫肢の両方の重量を、２箇所で評価する
。分析を盲検の様式（ｂｌｉｎｄ ｍａｎｎｅｒ）で行う。
【０９６６】 周径測定：肢の運動を防止するための短期気体麻酔のもとで、布巻尺を使用し
て、肢の周径を測定する。測定を、距骨および背面の足にて、２人の異なる人物
によって行い、次いで、これらの２つの読み取りを平均する。読み取りを、コン
トロールおよび水腫肢の両方から得る。
【０９６７】 体積測定：手術の日に、動物をペントバルビタールで麻酔し、そして手術の前
に試験する。毎日の体積測定のために、動物を短期ハロタン麻酔（迅速な固定化
およびすばやい回復）のもとにおき、両方の脚を剃毛し、そして耐水性マーカー
を用いて脚に等しく印をつける。脚を、最初に水に漬け、次いで各々顕著なレベ
ルまで装置に漬け、次いでＢｕｘｃｏ水腫ソフトウェア（Ｃｈｅｎ／Ｖｉｃｔｏ
ｒ）によって測定する。データを１人の人物によって記録し、一方他者は、脚を
しるしを付けた領域まで漬ける。
【０９６８】 血液−血漿タンパク質測定：手術の前に血液を取り出し、遠心分離し、そして
血清を分離し、次いで、全タンパク質およびＣａ２＋比較について結論付ける。
【０９６９】 肢重量比較：血液を取り出した後、この動物を、組織収集のために調製する。
この肢を、キリチン（ｑｕｉｌｌｉｔｉｎｅ）を用いて切断し、次いで、実験用
脚とコントロール脚の両方を、結紮して切断し、そして秤量する。２回目の秤量
を、脛踵（ｔｉｂｉｏ−ｃａｃａｎｅａｌ）関節を外し、そして足を秤量して行
う。
【０９７０】 組織学的調製：膝（膝窩）領域の後ろに位置する横筋を切り出し、そして金属
型に配置し、ｆｒｅｅｚｅＧｅｌで満たし、冷メチルブタンに漬け、標識したサ
ンプルバッグに切断するまで−８０℃にて配置する。切断の際に、筋肉を、蛍光
顕微鏡のもとで、リンパ管について観察した。他の免疫学的方法／組織学的方法
は、現在評価中である。
【０９７１】 本実施例において記載される研究は、ＴＲ１３タンパク質および/またはＴＲ
１４タンパク質の活性を試験する。しかし、当業者は、例証した研究を容易に改
変して、ＴＲ１３および/またはＴＲ１４のポリヌクレオチド（例えば、遺伝子
治療）、ＴＲ１３および/またはＴＲ１４のアゴニストおよび／またはアンタゴ
ニストの活性を試験し得る。
【０９７２】 （実施例３３） （インビトロでの同時刺激アッセイにおけるＢ細胞増殖のＴＲ１３および／ま
たはＴＲ１４阻害についてのアッセイ） この実施例は、ニュートロカインα（またはＩＬ−２）で媒介されるＢ細胞増
殖のＴＲ１３および／またはＴＲ１４ポリペプチドアンタゴニストについてアッ
セイするために、プライミング因子としてＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕ
ｒｅｕｓ Ｃｏｗａｎ １（ＳＡＣ）および２次シグナルとしてニュートロカイ
ンα（国際出願公開番号ＷＯ９８／１８９２１）またはＩＬ−２を使用した、同
時刺激アッセイを提供する。
【０９７３】 可溶性ＴＲ１３またはＴＲ１４ポリペプドを調製する（例えば、ヒトＩｇＧ１
免疫グロブリン分子のＦｃ部分に結合されるＴＲ１３またはＴＲ１４細胞外ドメ
インの一部分に対応するＴＲ１３またはＴＲ１４の可溶性形態）。ヒトＢ細胞の
増殖応答を変更するこのタンパク質の能力を、標準的な同時刺激アッセイにおい
て評価する。簡単には、ヒト扁桃腺Ｂ細胞を、ＣＤ３ポジティブ細胞の磁気ビー
ズ（ＭＡＣＳ）枯渇により精製する。生じた細胞集合は、ＣＤ１９およびＣＤ２
０染色の発現により評価されるように、通常、Ｂ細胞が９５％より大きい。ｒＨ
ｕニュートロカインα（国際出願公開番号ＷＯ９８／１８９２１）またはｒＨｕ
ＩＬ２の種々の希釈を、９６ウェルプレートの個々のウェルに配置し、これに、
培養培地（１０％ ＦＢＳ、５×１０-5Ｍ ２ＭＥ、１００Ｕ／ｍｌペニシリン
、１０μｇ／ｍｌストレプトマイシン、およびＰａｎｓｏｒｂｉｎ（Ｐａｎ）と
してもまた公知の１０-5希釈のホルマリン固定Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ Ｃｏｗａｎ Ｉ（ＳＡＣ）を含むＲＰＭＩ １６４０）中に懸濁
された１０5Ｂ細胞を１５０μｌの総体積において添加する。次いで、ＴＲ１３
またはＴＲ１４ポリペプチドを、種々の濃度で添加し、そして、このプレートを
、インキュベーター（３７℃ ５％ＣＯ2、湿度９５％）に３日間置く。増殖を
、因子添加７２時間後に開始する２０ｈパルス（１μＣｉ／ウェル）の3Ｈチミ
ジン（６．７Ｃｉ／ｍＭ）により定量化する。ポジティブコントロールおよびネ
ガティブコントロールは、それぞれ、ｒＨｕニュートロカインα（またはｒＨｕ
ＩＬ２）および培地（ＴＲ１３またはＴＲ１４ポリペプチドが非存在）を含む、
ＳＡＣに曝露されたＢ細胞である。
【０９７４】 ｒＨｕニュートロカインα（またはｒＨｕＩＬ２）媒介Ｂ細胞増殖のアンタゴ
ニストは、ポジティブコントロールと比較した場合、ＴＲ１３ポリペプチドまた
はＴＲ１４ポリペプチドを含むサンプルにおいて、低減されたレベルのＢ細胞増
殖を示す。
【０９７５】 本発明を、前述の説明および実施例に詳細に記載された以外の方法で実施し得
ることは、明らかである。本発明の多数の改変およびバリエーションが、上記の
教示を考慮して可能であり、従って、それは、添付の特許請求の範囲内にある。
【０９７６】 発明の背景、詳細な説明および実施例において引用された各文書（特許、特許
出願、学術文献、要約、実験マニュアル、書籍または他の開示を含む）の全開示
は、本明細書により参考として本明細書中に援用される。本出願は、１９９９年
７月１６日に出願された米国仮出願第６０／１４４，０８７号、１９９９年８月
１８日に出願された同第６０／１４９，４５０号、１９９９年８月２０日に出願
された同第６０／１４９，７１２；および１９９９年９月１０日に出願された同
第６０／１５３，０８９号に対して、米国特許法第１１９条（ｅ）項に基づく優
先権の利益を主張する（これらの各々が、本明細書によりその全体が参考として
援用される）。
【０９７７】 さらに、本明細書にとともにコンピューターの形態および紙形態の両方で提出
された配列表は、本明細書中にその全体が参考として援用される。
【０９７８】
【表６】 （カナダ） 出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。
【０９７９】 （ノルウェー） 出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０９８０】 （オーストラリア） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。
【０９８１】 （フィンランド） 出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。
【０９８２】 （英国） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。
【０９８３】 （デンマーク） 出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０９８４】 （スウェーデン） 出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局Temp
Tempに対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／Ｒ
Ｏ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者に
よるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するも
のとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト
（ｌｉｓｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意
の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり
得る。
【０９８５】 （オランダ） 出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０９８６】
【表７】 （カナダ） 出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。
【０９８７】 （ノルウェー） 出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０９８８】 （オーストラリア） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。
【０９８９】 （フィンランド） 出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。
【０９９０】 （英国） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。
【０９９１】 （デンマーク） 出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０９９２】 （スウェーデン） 出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０９９３】 （オランダ） 出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０９９４】
【表８】 （カナダ） 出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。
【０９９５】 （ノルウェー） 出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０９９６】 （オーストラリア） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。
【０９９７】 （フィンランド） 出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。
【０９９８】 （英国） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。
【０９９９】 （デンマーク） 出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【１０００】 （スウェーデン） 出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【１００１】 （オランダ） 出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１Ａ〜Ｃは、ＴＲ１３レセプターのヌクレオチド（配列番号１）および推定
アミノ酸配列（配列番号２）を示す。約１０５〜約１７０、約２５１〜約２６５
、約３３１〜約４１０、および約５８０〜約６１０の予測されるアミノ酸は、シ
ステインリッチドメイン（配列番号２の約１０５〜約１７０、約２５１〜約２６
５、約３３１〜約４１０、および約５８０〜約６１０のアミノ酸残基）を構成し
、そして下線のアミノ酸領域によって表される；約１３９〜約１４２、約１４０
〜約１４３、約１５３〜約１５６、約２９３〜約２９６、約３２５〜約３２８、
約４２１〜約４２４、約４６６〜約４６９、約６９６〜約６９９、および約７２
８〜約７３１のアミノ酸は、潜在的なＮ−グリコシル化部位（配列番号２の約１
３９〜約１４２、約１４０〜約１４３、約１５３〜約１５６、約２９３〜約２９
６、約３２５〜約３２８、約４２１〜約４２４、約４６６〜約４６９、約６９６
〜約６９９、および約７２８〜約７３１のアミノ酸残基）を構成し、これは太字
のアミノ酸によって表される；約３１２〜約３１５、および約４５８〜約４６１
のアミノ酸は、潜在的ｃＡＭＰリン酸化部位（配列番号２の約３１２〜約３１５
、および約４５８〜約４６１のアミノ酸残基）を構成し、そしてアミノ酸残基上
のアスタリスク（*）によって表される；約５０〜約５３、約６６〜約６９、約
８０〜約８３、約２７６〜約２７９、約３１１〜約３１４、約４３８〜約４４１
、約５５９〜約５６２、約５６４〜約５６７、約６９８〜約７０１、および約７
２５〜約７２８のアミノ酸は、潜在的なプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）リン酸
化部位（配列番号２の約５０〜約５３、約６６〜約６９、約８０〜約８３、約２
７６〜約２７９、約３１１〜約３１４、約４３８〜約４４１、約５５９〜約５６
２、約５６４〜約５６７、約６９８〜約７０１、および約７２５〜約７２８のア
ミノ酸残基）を構成し、そして斜体のアミノ酸残基によって表される；約８０〜
約８３、約８９〜約９２、約１８０〜約１８３、約１９８〜約２０１、約２１４
〜約２１７、約２７２〜約２７５、約３０６〜約３０９、約５１０〜約５１３、
約５２９〜約５３２、約５８４〜約５８７、約６０９〜約３１２、約６４２〜約
６４５、および約６９８〜約７０１のアミノ酸は、カゼインキナーゼＩＩリン酸
化部位（配列番号２の約８０〜約８３、約８９〜約９２、約１８０〜約１８３、
約１９８〜約２０１、約２１４〜約２１７、約２７２〜約２７５、約３０６〜約
３０９、約５１０〜約５１３、約５２９〜約５３２、約５８４〜約５８７、約６
０９〜約３１２、約６４２〜約６４５、および約６９８〜約７０１のアミノ酸残
基）を構成し、そして二重下線のアミノ酸によって表される；約６９〜約７４、
約１４９〜約１５４、約１５４〜約１５９、約１６３〜約１６８、約２１２〜約
２１７、約２４８〜約２５３、約３６５〜約３７０、約３８３〜約３８８、約３
９３〜約３９８、約５８８〜約５９３、約６２３〜約６２８、約６６１〜約６６
６、および約６６５〜約６７０のアミノ酸は、Ｎ−ミリストイル化部位（配列番
号２の約６９〜約７４、約１４９〜約１５４、約１５４〜約１５９、約１６３〜
約１６８、約２１２〜約２１７、約２４８〜約２５３、約３６５〜約３７０、約
３８３〜約３８８、約３９３〜約３９８、約５８８〜約５９３、約６２３〜約６
２８、約６６１〜約６６６、および約６６５〜約６７０のアミノ酸）を構成し、
そして取消線のひかれた（ｓｔｒｉｋｅｔｈｒｏｕｇｈ）アミノ酸（例えば、
【化２６】 ）によって表される；そして、約４５６〜約４５９のアミノ酸は、潜在的なアミ
ジル化部位（配列番号５の約４５６〜約４５９のアミノ酸残基）を構成し、そし
て小文字のアミノ酸によって表される。
【図２Ａ】 図２Ａは、ＴＲ１３レセプタータンパク質（配列番号２）とＯＸ４０タンパク
質（配列番号３）との間のアミノ酸配列の類似領域を示す。
【図２Ｂ】 図２Ｂは、ＴＲ１３レセプタータンパク質（配列番号２）とＯＸ４０タンパク
質（配列番号３）との間のアミノ酸配列の類似領域を示す。
【図２Ｃ】 図２Ｃは、ＴＲ１３レセプタータンパク質（配列番号２）とＯＸ４０タンパク
質（配列番号３）との間のアミノ酸配列の類似領域を示す。
【図３】 図３は、ＴＲ１３アミノ酸配列（配列番号２）の分析を示す。α領域、β領域
、ターン領域およびコイル領域；親水性領域および疎水性領域；両親媒性領域；
可撓性領域；抗原性指数および表面の確率（ｓｕｒｆａｃｅ ｐｒｏｂａｂｉｌ
ｉｔｙ）を示す。「抗原性指数−Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ」グラフにおいて、
配列番号２（図１Ａ〜Ｃ）の約Ｍ１〜約Ａ９、約Ｋ１２〜約Ｌ２０、約Ｎ４７〜
約Ｔ５５、約Ｈ５８〜約Ｓ６６、約Ｄ６３〜約Ｓ７１、約Ｐ７７〜約Ｆ８５、約
Ａ９０〜約Ｑ９８、約Ｆ１３６〜約Ｑ１４４、約Ｓ１５２〜約Ｃ１６０、約Ｒ１
５９〜約Ａ１６７、約Ａ２１１〜約Ｍ２１９、約Ｍ２３５〜約Ｖ２４３、約Ｖ２
６６〜約Ｖ２７４、約Ｗ２７７〜約Ｓ２８５、約Ｉ２９０〜約Ｆ２９８、約Ａ３
１０〜約Ｖ３１８、約Ｅ３４３〜約Ｃ３５１、約Ｉ３６０〜約Ｈ３６８、約Ｇ３
９１〜約Ｉ３９９、約Ｆ４０９〜約Ｔ４１７、約Ｓ４３６〜約Ｙ４４４、約Ｃ４
５３〜約Ｓ４６１、約Ｉ４７２〜約Ｓ４８０、約Ｙ５４８〜約Ｓ５５６、約Ｃ５
５７〜約Ｉ５６５、約Ｖ５６７〜約Ｖ５７５、約Ｔ５８４〜約Ｇ５９２、約Ｒ６
３２〜約Ｇ６４０、約Ｗ６８０〜約Ｙ６８８、約Ｑ６８４〜約Ｋ６９２、約Ｔ６
９８〜約Ａ７０６、約Ｓ７２６〜約Ｓ７３４、および約Ｓ７３４〜約Ｌ７４２の
アミノ酸残基は、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数を使用して予想されたＴ
Ｒ１３タンパク質の高度に抗原性の領域に対応する（図３および表Ｉを参照のこ
と）。これらの高度に抗原性のフラグメントは、図１Ａ〜Ｃおよび配列番号２に
示されるアミノ酸残基に対応する。
【図４】 図４Ａ〜Ｄは、ＴＲ１４レセプターのヌクレオチド（配列番号４）および推定
アミノ酸配列（配列番号５）を示す。予測された細胞外ドメインは、約１〜約１
３３のアミノ酸（配列番号５の１〜１３３のアミノ酸残基）を構成し、そして下
線のひかれたアミノ酸によって表される；約６５〜約８５のアミノ酸は、保存さ
れたシステインリッチドメイン（配列番号５の約６５〜約８５のアミノ酸残基）
を構成し、そして斜体のアミノ酸残基によって表される；約１３４〜約１５０の
アミノ酸は、予想される膜貫通ドメイン（配列番号５の約１３４〜約１５０のア
ミノ酸残基）を構成し、これは二重下線のひかれたアミノ酸残基によって表され
る；約１５１〜約２２６のアミノ酸残基は、予想される細胞内ドメイン（配列番
号５の約１５１〜約２２６のアミノ酸残基）を構成し、そして小文字のアミノ酸
残基によって表される；約１７８〜約１８０のアミノ酸は、潜在的なプロテイン
キナーゼＣ（ＰＫＣ）リン酸化部位（配列番号５の約１７８〜約１８０のアミノ
酸残基）を構成し、そしてアミノ酸残基上のアスタリスク（*）によって表され
る；約５〜約８、約１１８〜約１２１、約１７８〜約１８１、および約１９３〜
約１９６のアミノ酸は、潜在的なカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（配列番号
５の約５〜約８、約１１８〜約１２１、約１７８〜約１８１、約１９３〜約１９
６のアミノ酸残基）を構成し、そして取消線のひかれたアミノ酸残基によって表
される；そして約９〜約１４のアミノ酸は、潜在的なＮ−ミリストイル化部位（
配列番号５の約９〜約１４のアミノ酸残基）を構成し、そして太字のアミノ酸に
よって表される。
【図５Ａ】 図５Ａは、ＴＲ１４レセプタータンパク質（配列番号５）と腫瘍壊死因子レセ
プタータンパク質（配列番号６）との間のアミノ酸配列の類似領域を示す。
【図５Ｂ】 図５Ｂは、ＴＲ１４レセプタータンパク質（配列番号５）と腫瘍壊死因子レセ
プタータンパク質（配列番号６）との間のアミノ酸配列の類似領域を示す。
【図６】 図６は、ＴＲ１４アミノ酸配列（配列番号５）の分析を示す。α領域、β領域
、ターン領域およびコイル領域；親水性領域および疎水性領域；両親媒性領域；
可撓性領域；抗原性指数および表面の確率が示される。「抗原性指数−Ｊａｍｅ
ｓｏｎ−Ｗｏｌｆ」グラフにおいて、配列番号５（図４Ａ〜Ｄ）の約Ｔ３〜約Ｓ
１１、約Ｖ１６〜約Ｒ２４、約Ｑ４４〜約Ｍ５２、約Ｆ８５〜約Ｇ９３、約Ｔ１
０３〜約Ｖ１１１、約Ｆ１６１〜約Ｇ１６９、約Ｖ１８７〜約Ａ１９５、約Ｐ２
１８〜約Ｍ２２６のアミノ酸残基は、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数（図
６および表ＩＩＩを参照のこと）を使用して予想されたＴＲ１４タンパク質の高
度に抗原性の領域に対応する。これらの高度に抗原性のフラグメントは、図４Ａ
〜Ｄおよび配列番号５に示されるアミノ酸残基に対応する。
【図７】 図７Ａ〜Ｄは、全長ＴＲ１３レセプターのヌクレオチド（配列番号３９）およ
び推定アミノ酸配列（配列番号４０）を示す。予想されるシグナル配列は、約１
〜約４１のアミノ酸（配列番号４０の約１〜約４１のアミノ酸残基）を構成し、
そして点線の下線がひかれたアミノ酸によって表される；約４２〜約９０６のア
ミノ酸は、予想される細胞外ドメイン（配列番号４０の４２〜９０６のアミノ酸
残基）を構成し、そして一重下線のひかれたアミノ酸によって表される；約２７
１〜約４２１および約５８５〜約５９５のアミノ酸は、保存されたシステインリ
ッチドメイン（配列番号４０の約２７１〜約４２１および約５８５〜約５９５の
アミノ酸残基）を構成し、そして斜体のアミノ酸残基によって表される；約９０
７〜約９３１のアミノ酸は、予想される膜貫通ドメイン（配列番号４０の約９０
７〜約９３１のアミノ酸残基）を構成し、これは二重下線のひかれたアミノ酸残
基によって表される；約９３２〜約１００１のアミノ酸残基は、予想される細胞
内ドメイン（配列番号４０の約９３２〜約１００１のアミノ酸残基）を構成し、
そして小文字のアミノ酸残基によって表される；約１１〜約１３、約１８〜約２
０、１０７〜約１０９、約１５６〜約１５８、約２２４〜約２２６、約３０１〜
約３０３、約３１７〜約３１９、約３３１〜約３３３、約５２７〜約５２９、約
５６２〜約５６４、約６８９〜約６９１、約８１０〜約８１２、約８１５〜約８
１７、約９４９〜約９５１、および約９７６〜約９７８のアミノ酸は、潜在的な
プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）リン酸化部位（配列番号４０の約１１〜約１３
、約１８〜約２０、１０７〜約１０９、約１５６〜約１５８、約２２４〜約２２
６、約３０１〜約３０３、約３１７〜約３１９、約３３１〜約３３３、約５２７
〜約５２９、約５６２〜約５６４、約６８９〜約６９１、約８１０〜約８１２、
約８１５〜約８１７、約９４９〜約９５１、および約９７６〜約９７８のアミノ
酸残基）を構成し、そしてアミノ酸残基上のアスタリスク（*）によって表され
る；約４２〜約４５、約５９〜約６２、約８１〜約８４、約１４６〜約１４９、
約２８２〜約２８５、約３３１〜約３３４、約３４０〜約３４３、約４３１〜約
４３４、約４４９〜約４５２、約４６５〜約４６８、約５２３〜約５２６、約５
５７〜約５６０、約７６１〜約７６４、約７８０〜約７８３、約７８０〜約７８
３、約８３５〜約８３８、約８６０〜約８６３、約８９３〜約８９６、および約
９４９〜約９５２のアミノ酸は、潜在的なカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（
配列番号４０の約４２〜約４５、約５９〜約６２、約８１〜約８４、約１４６〜
約１４９、約２８２〜約２８５、約３３１〜約３３４、約３４０〜約３４３、約
４３１〜約４３４、約４４９〜約４５２、約４６５〜約４６８、約５２３〜約５
２６、約５５７〜約５６０、約７６１〜約７６４、約７８０〜約７８３、約７８
０〜約７８３、約８３５〜約８３８、約８６０〜約８６３、約８９３〜約８９６
、および約９４９〜約９５２のアミノ酸残基）を構成し、そして取消線のひかれ
たアミノ酸残基によって表される；約７７〜約８２、約８８〜約９３、約１５２
〜約１５７、約２６８〜約２７３、約２８８〜約２９３、約３２０〜約３２５、
約４００〜約４０５、約４１４〜約４１９、約４６３〜約４６８、約５９９〜約
６０４、約６１６〜約６２１、約６３４〜約６３９、約６４４〜約６４９、約８
３９〜約８４４、約８７４〜約８７９、約９１２〜約９１７、および約９１６〜
約９２１のアミノ酸は、潜在的なＮ−ミリストイル化部位（配列番号４０の約７
７〜約８２、約８８〜約９３、約１５２〜約１５７、約２６８〜約２７３、約２
８８〜約２９３、約３２０〜約３２５、約４００〜約４０５、約４１４〜約４１
９、約４６３〜約４６８、約５９９〜約６０４、約６１６〜約６２１、約６３４
〜約６３９、約６４４〜約６４９、約８３９〜約８４４、約８７４〜約８７９、
約９１２〜約９１７、および約９１６〜約９２１のアミノ酸残基）を構成し、そ
してアミノ酸上のプラス記号（「＋」）によって表される；約５０〜約５６、お
よび１０９〜約１１６のアミノ酸は、潜在的なチロシンリン酸化部位（配列番号
４０の約５０〜約５６、および約１０９〜約１１６のアミノ酸）を構成し、そし
て二重取消線のひかれたアミノ酸によって表される；そして、約１５３〜約１５
６、３９０〜約３９３、３９１〜約３９４、約４０４〜約４０７、約５４４〜約
５４７、約５７６〜約５７９、約６７２〜約６７５、約７１７〜約７２０、約９
４７〜約９５０、および約９７９〜約９８２のアミノ酸は、潜在的なＮ−グリコ
シル化部位（配列番号４０の約１５３〜約１５６、３９０〜約３９３、３９１〜
約３９４、約４０４〜約４０７、約５４４〜約５４７、約５７６〜約５７９、約
６７２〜約６７５、約７１７〜約７２０、約９４７〜約９５０、および約９７９
〜約９８２のアミノ酸）を構成し、これは陰をつけたアミノ酸によって表される
。
【図８】 図８Ａ〜Ｂは、全長ＴＲ１３レセプタータンパク質（配列番号４０）と腫瘍壊
死因子レセプターＩＩホモログ（ｇｂ｜ＡＡＢ９４３８２．１）（配列番号４１
）との間のアミノ酸配列の類似領域を示す。
【図９】 図９は、図７Ａ〜Ｄ（配列番号４０）に開示される全長ＴＲ１３アミノ酸配列
の分析を示す。α領域、β領域、ターン領域およびコイル領域；親水性領域およ
び疎水性領域；両親媒性領域；可撓性領域；抗原性指数および表面の確率を示す
。「抗原性指数−Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ」グラフにおいて、配列番号４０（
図７Ａ〜Ｄ）の約Ｍ１〜約Ｈ９、約Ｖ１４〜約Ｉ２２、約Ｈ４７〜約Ｈ５５、約
Ｃ６１〜約Ｒ６９、約Ｌ８２〜約Ｅ９０、約Ｄ１０２〜約Ｐ１１０、約Ｋ１０９
〜約Ｓ１１７、約Ｆ１２４〜約Ｈ１３２、約Ｍ１４１〜約Ｅ１４９、約Ｓ１４６
〜約Ｃ１５４、約Ｓ１５７〜約Ｗ１６５、約Ｆ１６８〜約Ｔ１７６、約Ｎ１８２
〜約Ｎ１９０、約Ｑ２０７〜約Ａ２１５、約Ｐ２１３〜約Ｍ２２１、約Ｍ２２１
〜約Ｅ２２９、約Ｖ２３３〜約Ｖ２４１、約Ｔ２５３〜約Ｖ２６１、約Ｔ２８２
〜約Ｓ２９０、約Ｎ２９８〜約Ｔ３０６、約Ｃ３０８〜約Ｙ３１６、約Ｋ３１５
〜約Ｓ３２３、約Ｐ３２８〜約Ｆ３３６、約Ａ３４１〜約Ｑ３４９、約Ｆ３８７
〜約Ｑ３９５、約Ｓ４０３〜約Ｃ４１１、約Ｔ４０９〜約Ｐ４１７、約Ｆ４４３
〜約Ｎ４５１、約Ｗ４５１〜約Ｙ４５９、約Ａ４６２〜約Ｍ４７０、約Ｇ４７８
〜約Ｍ４８６、約Ａ４８７〜約Ａ４９５、約Ｖ５１７〜約Ｖ５２５、約Ｔ５２７
〜約Ｑ５３５、約Ｉ５４１〜約Ｆ５４９、約Ａ５６１〜約Ｖ５６９、約Ｅ５９４
〜約Ｃ６０２、約Ｉ６１１〜約Ｈ６１９、約Ｇ６４３〜約Ｉ６５０、約Ｐ６８６
〜約Ｋ６９４、約Ｃ７０４〜約Ｓ７１２、約Ｒ７２２〜約Ｉ７３０、約Ｅ７２７
〜約Ｔ７３５、約Ｐ７４６〜約Ｇ７５４、約Ｄ７７６〜約Ｌ７８４、約Ｙ７９９
〜約Ｓ８０７、約Ｃ８０８〜約Ｉ８１６、約Ｖ８１８〜約Ｖ８２６、約Ｔ８３５
〜約Ｇ８４３、約Ｒ８８３〜約Ｇ８９１、約Ｋ９３２〜約Ｋ９４０、約Ｑ９３５
〜約Ｋ９４３、約Ｔ９４９〜約Ａ９５７、約Ｓ９７７〜約Ｓ９８５、約Ｓ９８１
〜約Ｐ９８９、および約Ｎ９８６〜約Ｌ９９４のアミノ酸残基は、Ｊａｍｅｓｏ
ｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数（図９および表ＩＩＩを参照のこと）を使用して予想さ
れたＴＲ１３タンパク質の高度に抗原性の領域に対応する。これらの高度に抗原
性のフラグメントは、図７Ａ〜Ｄおよび配列番号４０に示されるアミノ酸残基に
対応する。
【図１０】 図１０Ａ〜Ｈは、ＴＲ１４レセプターの好ましいヌクレオチド（配列番号６０
）および推定アミノ酸配列（配列番号６１）を示す。アミノ酸Ｌ−１３９〜Ｌ−
１５５の膜貫通ドメインは、下線がひかれている。
【図１１】 図１１は、図１０Ａ〜Ｈ（配列番号６１）に開示される全長ＴＲ１４アミノ酸
配列の分析を示す。α領域、β領域、ターン領域およびコイル領域；親水性領域
および疎水性領域；両親媒性領域；可撓性領域；抗原性指数および表面の確率を
示す。これらのデータは、上記の表ＩＶにおいて、表の型式でアミノ酸ごとに示
す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 1/16 1/14 3/10 1/16 7/00 3/10 7/02 7/00 7/04 7/02 7/06 7/04 9/00 7/06 9/04 9/00 9/06 9/04 9/10 9/06 １０１ 9/10 １０３ １０１ 9/12 １０３ 11/00 9/12 11/06 11/00 13/12 11/06 17/00 13/12 17/02 17/00 17/06 17/02 17/14 17/06 19/02 17/14 19/10 19/02 21/00 19/10 25/00 21/00 25/16 25/00 25/28 25/16 27/02 25/28 27/06 27/02 31/04 27/06 31/06 31/04 31/16 31/06 31/22 31/16 33/10 31/22 35/00 33/10 37/02 35/00 37/06 37/02 37/08 37/06 Ｃ０７Ｋ 14/715 37/08 16/30 Ｃ０７Ｋ 14/715 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/30 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/10 5/00 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ６０／１４９，７１２ (32)優先日 平成11年８月20日(1999．8．20) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／１５３，０８９ (32)優先日 平成11年９月10日(1999．9．10) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ， ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，Ｋ Ｒ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ルーベン， スティーブン エム． アメリカ合衆国 メリーランド 20832， オルネイ， ヘリテイジ ヒルズ ドラ イブ 18532 (72)発明者 ニ， ジアン アメリカ合衆国 メリーランド 20853， ロックビル， マナーフィールド ロー ド 5502 (72)発明者 ヤング， ポール イー． アメリカ合衆国 メリーランド 20878， ゲイザースバーグ， ベックウィズ ス トリート 122 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 DA02 EA02 EA04 GA13 HA01 HA11 4B064 AG20 CA02 CA10 CA19 CC24 CE12 DA01 DA13 4B065 AA26X AA91X AA93Y AA95X AB01 BA02 BA05 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17 BA01 BA22 CA53 DA45 MA17 MA22 MA23 MA24 MA38 MA52 MA57 MA59 MA60 MA63 MA66 ZA022 ZA162 ZA332 ZA342 ZA362 ZA382 ZA402 ZA452 ZA512 ZA542 ZA552 ZA592 ZA662 ZA672 ZA682 ZA692 ZA752 ZA812 ZA892 ZA962 ZA972 ZB052 ZB112 ZB262 ZB272 ZB332 ZB352 ZB392 ZC542 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA41 DA51 EA20 EA50 FA74 GA26

Claims (53)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 以下からなる群より選択される配列と少なくとも９５％同一
    のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子： （ａ）配列番号１におけるアミノ酸約１〜約７５０を含むポリペプチドをコー
    ドするヌクレオチド配列； （ｂ）配列番号１におけるアミノ酸約１〜約７５０を含むポリペプチドをコー
    ドするヌクレオチド配列； （ｃ）配列番号１におけるアミノ酸約１〜約７５０を含むポリペプチドをコー
    ドするヌクレオチド配列； （ｄ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列； （ｅ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ１３ポリペプチドをコードするヌクレ
    オチド配列； （ｆ）配列番号６１のアミノ酸約１〜約２３１を含むポリペプチドをコードす
    るヌクレオチド配列； （ｇ）配列番号６１のアミノ酸約２〜約２３１を含むポリペプチドをコードす
    るヌクレオチド配列； （ｈ）配列番号６１のアミノ酸約１〜約１３８を含むポリペプチドをコードす
    るヌクレオチド配列； （ｉ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４８に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列； （ｊ）配列番号５のアミノ酸１〜２２６を含むポリペプチドをコードするヌク
    レオチド配列； （ｋ）ＴＲ１４細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列； （ｌ）ＴＲ１４膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列； （ｍ）ＴＲ１４細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列； （ｎ）膜貫通ドメインのうちの全てまたは一部が欠失されている、ＴＲ１４レ
    セプター細胞外ドメインおよび細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列； （ｏ）配列番号４０のアミノ酸約１〜約１００１を含むポリペプチドをコード
    するヌクレオチド配列； （ｐ）配列番号４０のアミノ酸約２〜約１００１を含むポリペプチドをコード
    するヌクレオチド配列； （ｑ）配列番号４０のアミノ酸約４２〜約１００１を含むポリペプチドをコー
    ドするヌクレオチド配列； （ｒ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列； （ｓ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ１３ポリペプチドをコードするヌクレ
    オチド配列； （ｔ）ＴＲ１３細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列； （ｕ）ＴＲ１３膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列； （ｖ）ＴＲ１３細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列； （ｗ）膜貫通ドメインのうちの全てまたは一部が欠失されている、ＴＲ１３レ
    セプター細胞外ドメインおよび細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列；
    ならびに （ｘ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、
    （ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、
    （ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）または（ｗ）におけるヌクレオチド配
    列のいずれかと相補的なヌクレオチド配列。
  2. 【請求項２】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号１におけるヌクレオチド
    配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。
  3. 【請求項３】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号６０におけるヌクレオチ
    ド配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。
  4. 【請求項４】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号３９におけるヌクレオチ
    ド配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。
  5. 【請求項５】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号１におけるヌクレオチド
    配列を有し、該ヌクレオチド配列が配列番号２におけるアミノ酸配列を有するＴ
    Ｒ１３レセプターをコードする、請求項１に記載の核酸分子。
  6. 【請求項６】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号６０におけるヌクレオチ
    ド配列を有し、該ヌクレオチド配列が配列番号６１におけるアミノ酸配列を有す
    るＴＲ１４レセプターをコードする、請求項１に記載の核酸分子。
  7. 【請求項７】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号３９におけるヌクレオチ
    ド配列を有し、該ヌクレオチド配列が配列番号４０におけるアミノ酸配列を有す
    るＴＲ１４レセプターをコードする、請求項１に記載の核酸分子。
  8. 【請求項８】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号１におけるヌクレオチド
    配列を有し、該ヌクレオチド配列が配列番号２におけるアミノ酸配列を有する成
    熟ＴＲ１３レセプターをコードする、請求項１に記載の核酸分子。
  9. 【請求項９】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号６０におけるヌクレオチ
    ド配列を有し、該ヌクレオチド配列が配列番号６１におけるアミノ酸配列を有す
    る成熟ＴＲ１４レセプターの細胞外ドメインをコードする、請求項１に記載の核
    酸分子。
  10. 【請求項１０】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号３９におけるヌクレオ
    チド配列を有し、該ヌクレオチド配列が配列番号４０におけるアミノ酸配列を有
    する成熟ＴＲ１３レセプターをコードする、請求項１に記載の核酸分子。
  11. 【請求項１１】 前記ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４
    ９に含まれるｃＤＮＡクローンの完全ヌクレオチド配列を有する、請求項１に記
    載の核酸分子。
  12. 【請求項１２】 前記ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４
    ８に含まれるｃＤＮＡクローンの完全ヌクレオチド配列を有する、請求項１に記
    載の核酸分子。
  13. 【請求項１３】 前記ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０
    ７に含まれるｃＤＮＡクローンの完全ヌクレオチド配列を有する、請求項１に記
    載の核酸分子。
  14. 【請求項１４】 前記ポリヌクレオチドが、ＴＲ１３レセプターをコードす
    るヌクレオチド配列を有し、該ＴＲ１３レセプターは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ
    −３４９に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する
    、請求項１に記載の核酸分子。
  15. 【請求項１５】 前記ポリヌクレオチドが、ＴＲ１４レセプターをコードす
    るヌクレオチド配列を有し、該ＴＲ１４レセプターは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ
    −３４８に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する
    、請求項１に記載の核酸分子。
  16. 【請求項１６】 前記ポリヌクレオチドが、ＴＲ１３レセプターをコードす
    るヌクレオチド配列を有し、該ＴＲ１３レセプターは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ
    −５０７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する
    、請求項１に記載の核酸分子。
  17. 【請求項１７】 前記ポリヌクレオチドが、成熟ＴＲ１３レセプターをコー
    ドするヌクレオチド配列を有し、該成熟ＴＲ１３レセプターは、ＡＴＣＣ受託番
    号ＰＴＡ−３４９に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列
    を有する、請求項１に記載の核酸分子。
  18. 【請求項１８】 前記ポリヌクレオチドが、ＴＲ１４レセプターの細胞外ド
    メインをコードするヌクレオチド配列を有し、該ＴＲ１４レセプターは、ＡＴＣ
    Ｃ受託番号ＰＴＡ−３４８に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミ
    ノ酸配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。
  19. 【請求項１９】 前記ポリヌクレオチドが、成熟ＴＲ１３レセプターをコー
    ドするヌクレオチド配列を有し、該成熟ＴＲ１３レセプターは、ＡＴＣＣ受託番
    号ＰＴＡ−５０７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列
    を有する、請求項１に記載の核酸分子。
  20. 【請求項２０】 請求項１に記載の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ
    ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ
    ），（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ
    ）または（ｘ）におけるヌクレオチド配列と同一のヌクレオチド配列を有するポ
    リヌクレオチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブ
    リダイズするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子であって、 ここで該ハイブリダイズするポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基の
    みからなるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドに、ストリンジェントな
    ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズしない、核酸分子。
  21. 【請求項２１】 請求項１に記載の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ
    ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ
    ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ
    ）または（ｘ）におけるアミノ酸配列を有するＴＲ１３レセプターのエピトープ
    保有部分のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸
    分子。
  22. 【請求項２２】 請求項１に記載の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ
    ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ
    ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ
    ）または（ｘ）におけるアミノ酸配列を有するＴＲ１４レセプターのエピトープ
    保有部分のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸
    分子。
  23. 【請求項２３】 以下からなる群より選択されるＴＲ１３レセプターのエピ
    トープ保有部分をコードする、請求項２１に記載の単離された核酸分子：配列番
    号２のアミノ酸残基約２〜約１７０を含むポリペプチド；配列番号２のアミノ酸
    残基約２１０〜約３１８を含むポリペプチド；配列番号２のアミノ酸残基約３４
    ３〜約４８０を含むポリペプチド；配列番号２のアミノ酸残基約５４８〜約５９
    ２を含むポリペプチド；もしくは配列番号２のアミノ酸残基約６３２〜約７４２
    を含むポリペプチド、または配列番号４０のアミノ酸残基約１〜約２６２を含む
    ポリペプチド、もしくは配列番号４０のアミノ酸残基約２６４〜約４２３を含む
    ポリペプチド、もしくは配列番号４０のアミノ酸残基約４３７〜約７８９を含む
    ポリペプチド、もしくは配列番号４０のアミノ酸残基約７９１〜約１００１を含
    むポリペプチド。
  24. 【請求項２４】 以下からなる群より選択されるＴＲ１４レセプターのエピ
    トープ保有部分をコードする、請求項２２に記載の単離された核酸分子：配列番
    号５のアミノ酸残基約２〜約２４を含むポリペプチド；配列番号５のアミノ酸残
    基約４２〜約５２を含むポリペプチド；配列番号５のアミノ酸残基約８０〜約１
    １５を含むポリペプチド；または配列番号５のアミノ酸残基約１１５〜約２２６
    を含むポリペプチド。
  25. 【請求項２５】 ＴＲ１４レセプター細胞外ドメインをコードする、請求項
    １に記載の単離された核酸分子。
  26. 【請求項２６】 ＴＲ１４レセプター膜貫通ドメインをコードする、請求項
    １に記載の単離された核酸分子。
  27. 【請求項２７】 ＴＲ１４レセプター細胞内ドメインをコードする、請求項
    １に記載の単離された核酸分子。
  28. 【請求項２８】 ＴＲ１３レセプター細胞外ドメインをコードする、請求項
    １に記載の単離された核酸分子。
  29. 【請求項２９】 ＴＲ１３レセプター膜貫通ドメインをコードする、請求項
    １に記載の単離された核酸分子。
  30. 【請求項３０】 ＴＲ１３レセプター細胞内ドメインをコードする、請求項
    １に記載の単離された核酸分子。
  31. 【請求項３１】 以下からなる群より選択される配列と少なくとも９５％同
    一の配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子： （ａ）クローンＨＥＴＡＱ１２Ｒのヌクレオチド配列（配列番号８）； （ｂ）クローンＨＥＴＡＫ８２Ｒのヌクレオチド配列（配列番号９）； （ｃ）クローンＨＥＴＢＨ１８Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１０）； （ｄ）クローンＨＥＰＡＢ２６Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１１）； （ｅ）クローンＨＥＴＡＮ３８Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１２）； （ｆ）クローンＨＰＷＤＤ３０Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１３）； （ｇ）クローンＨＥＴＡＴ０５Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１４）； （ｈ）クローンＨＥＴＤＱ３９Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１５）； （ｉ）クローンＨＥＴＥＭ８４Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１６）； （ｊ）クローンＨＳＩＤＶ４２Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１７）；およ
    び （ｋ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（
    ｈ）、（ｉ）、または（ｊ）におけるヌクレオチド配列のいずれかと相補的なヌ
    クレオチド配列。
  32. 【請求項３２】 以下からなる群より選択される配列と少なくとも９５％同
    一の配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子： （ａ）クローンＨＳＡＢＤ５０Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１８）； （ｂ）クローンＨＴＸＭＸ５３Ｒのヌクレオチド配列（配列番号１９）； （ｃ）クローンＨＥ２ＯＲ７４Ｒのヌクレオチド配列（配列番号２０）； （ｄ）クローンＨＭＳＨＫ４７Ｒのヌクレオチド配列（配列番号２１）； （ｅ）クローンＨＭＳＨＫ５９Ｒのヌクレオチド配列（配列番号２２）；およ
    び （ｆ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、または（ｅ）におけるヌクレ
    オチド配列のいずれかと相補的なヌクレオチド配列。
  33. 【請求項３３】 以下からなる群より選択される配列と少なくとも９５％同
    一の配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子： （ａ）クローンＨＥＴＡＱ１２Ｒのヌクレオチド配列（配列番号４８）； （ｂ）クローンＨＥＴＡＫ８２Ｒのヌクレオチド配列（配列番号４９）； （ｃ）クローンＨＥＴＢＭ７１Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５０）； （ｄ）クローンＨＥＴＢＨ１８Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５１）； （ｅ）クローンＨＥＰＡＢ２６Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５２）； （ｆ）クローンＨＥＴＡＮ３８Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５３）； （ｇ）クローンＨＰＷＤＤ３０Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５４）； （ｈ）クローンＨＥＴＡＴ０５Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５５）； （ｉ）クローンＨＥＴＤＱ３９Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５６）； （ｊ）クローンＨＰＷＢＬ９３Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５７）； （ｋ）クローンＨＥＴＥＭ８４Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５８）； （ｌ）クローンＨＳＩＤＶ４２Ｒのヌクレオチド配列（配列番号５９）；およ
    び （ｍ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（
    ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）または（ｍ）におけるヌクレオチド配列
    のいずれかと相補的なヌクレオチド配列。
  34. 【請求項３４】 請求項１に記載の単離された核酸分子をベクターに挿入す
    る工程を包含する、組換えベクターを作製する方法。
  35. 【請求項３５】 請求項３４に記載の方法によって産生される、組換えベク
    ター。
  36. 【請求項３６】 請求項３５に記載の組換えベクターを宿主細胞に導入する
    工程を包含する、組換え宿主細胞を作製する方法。
  37. 【請求項３７】 請求項３６に記載の方法によって産生される、組換え宿主
    細胞。
  38. 【請求項３８】 ＴＲ１３ポリペプチドを産生する組換え方法であって、該
    方法が、該ポリペプチドが発現されるような条件下で請求項３７に記載の組換え
    宿主細胞を培養する工程、および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、方
    法。
  39. 【請求項３９】 ＴＲ１４ポリペプチドを産生する組換え方法であって、該
    方法が、該ポリペプチドが発現されるような条件下で請求項３７に記載の組換え
    宿主細胞を培養する工程、および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、方
    法。
  40. 【請求項４０】 以下からなる群より選択される配列と少なくとも９５％同
    一のアミノ酸配列を有する、単離されたＴＲ１３ポリペプチド： （ａ）配列番号２におけるアミノ酸約１〜約７５０； （ｂ）配列番号２におけるアミノ酸約２〜約７５０； （ｃ）配列番号４０におけるアミノ酸約１〜約１００１； （ｄ）配列番号４０におけるアミノ酸約２〜約１００１； （ｅ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有するＴＲ１３ポリペプチドのアミノ酸配列； （ｆ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有するＴＲ１３ポリペプチドのアミノ酸配列； （ｇ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４９に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ１３ポリペプチドのアミノ酸配列； （ｈ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５０７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ１３ポリペプチドのアミノ酸配列；な
    らびに （ｉ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、または（
    ｈ）のポリペプチドのいずれか１つのエピトープ保有部分のアミノ酸配列。
  41. 【請求項４１】 以下からなる群より選択される配列と少なくとも９５％同一の
    アミノ酸配列を有する、単離されたＴＲ１４ポリペプチド： （ａ）配列番号６１におけるアミノ酸約１〜約２３１； （ｂ）配列番号６１におけるアミノ酸約２〜約２３１； （ｃ）配列番号６１におけるアミノ酸約２〜約１３８； （ｄ）配列番号６１におけるアミノ酸約１５６〜約２３１； （ｅ）ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３４８に含まれるｃＤＮＡクローンによりコ
    ードされるアミノ酸配列を有するＴＲ１４ポリペプチドのアミノ酸配列； （ｆ）配列番号５のアミノ酸７３〜２２６； （ｇ）ＴＲ１４レセプター細胞外ドメインのアミノ酸配列； （ｈ）ＴＲ１４レセプター膜貫通ドメインのアミノ酸配列； （ｉ）ＴＲ１４レセプター細胞内ドメインのアミノ酸配列； （ｊ）膜貫通ドメインのうちのすべてまたは一部が欠失されている、ＴＲ１４
    レセプター細胞内ドメインおよび細胞外ドメインのアミノ酸配列；ならびに （ｋ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、
    （ｉ）または（ｊ）のポリペプチドのいずれか１つのエピトープ保有部分のアミ
    ノ酸配列。
  42. 【請求項４２】 ＴＲ１３レセプタータンパク質のエピトープ保有部分を含
    む単離されたポリペプチドであって、ここで、該部分が以下からなる群より選択
    される、単離されたポリペプチド：配列番号２におけるアミノ酸残基約２〜約１
    ７０を含むポリペプチド；配列番号２におけるアミノ酸残基約２１０〜約３１８
    を含むポリペプチド；配列番号２におけるアミノ酸残基約３４３〜約４８０を含
    むポリペプチド；配列番号２におけるアミノ酸残基約５４５〜約５９２を含むポ
    リペプチド；配列番号２におけるアミノ酸残基約６３２〜約７４２を含むポリペ
    プチド；配列番号４０におけるアミノ酸残基約１〜約２６２を含むポリペプチド
    ；配列番号４０におけるアミノ酸残基約２６４〜約４２３を含むポリペプチド；
    配列番号４０におけるアミノ酸残基約４３７〜約７８９を含むポリペプチド；配
    列番号４０におけるアミノ酸残基約７９１〜約１００１を含むポリペプチド。
  43. 【請求項４３】 ＴＲ１４レセプタータンパク質のエピトープ保有部分を含
    む単離されたポリペプチドであって、ここで該部分が以下からなる群より選択さ
    れる、単離されたポリペプチド：配列番号５におけるアミノ酸残基約２〜約２４
    を含むポリペプチド；配列番号５におけるアミノ酸残基約４２〜約５２を含むポ
    リペプチド；配列番号５におけるアミノ酸残基約８０〜約１１５を含むポリペプ
    チド；および配列番号５におけるアミノ酸残基約１５５〜約２２６を含むポリペ
    プチド。
  44. 【請求項４４】 請求項４０に記載のＴＲ１３レセプターポリペプチドに特
    異的に結合する、単離された抗体。
  45. 【請求項４５】 請求項４１に記載のＴＲ１４レセプターポリペプチドに特
    異的に結合する、単離された抗体。
  46. 【請求項４６】 アポトーシスの阻害に関連した疾患および障害を処置する
    方法であって、該方法は、該処置を必要とする患者に、有効量の、請求項４０に
    記載のポリペプチドまたはこのポリペプチドのアゴニストを投与する工程を包含
    する、方法。
  47. 【請求項４７】 アポトーシスの阻害に関連した疾患まおよび障害を処置す
    る方法であって、該方法は、該処置を必要とする患者に、有効量の、請求項４１
    に記載のポリペプチドまたはこのポリペプチドのアゴニストを投与する工程を包
    含する、方法。
  48. 【請求項４８】 増加したアポトーシスに関連した疾患および障害を処置す
    る方法であって、該方法は、該処置を必要とする患者に、有効量の、請求項４０
    に記載のポリペプチドのアンタゴニストを投与する工程を包含する、方法。
  49. 【請求項４９】 増加したアポトーシスに関連した疾患および障害を処置す
    る方法であって、該方法は、該処置を必要とする患者に、有効量の、請求項４１
    に記載のポリペプチドのアンタゴニストを投与する工程を包含する、方法。
  50. 【請求項５０】 炎症性の疾患および障害を処置する方法であって、該方法
    は、該処置を必要とする患者に、有効量の、請求項４０に記載のポリペプチドの
    アンタゴニストを投与する工程を包含する、方法。
  51. 【請求項５１】 炎症性の疾患および障害を処置する方法であって、該方法
    は、該処置を必要とする患者に、有効量の、請求項４１に記載のポリペプチドの
    アンタゴニストを投与する工程を包含する、方法。
  52. 【請求項５２】 上皮性障害を、処置、予防、または改善する方法であって
    、該方法は、該処置、予防、または改善を必要とする患者に、ＴＲ１４ポリヌク
    レオチド、ポリぺプチド、またはアゴニストを投与する工程を包含する、方法。
  53. 【請求項５３】 前記障害が、無汗性外胚葉形成異常症である、請求項５２
    に記載の方法。
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