JP2003501628A

JP2003501628A - 抗原特異的免疫応答のインビトロ検出のための試験システム

Info

Publication number: JP2003501628A
Application number: JP2001500861A
Authority: JP
Inventors: ヨホムス，イングリト; ニーラント，ヨン
Original assignee: メディジーン・アクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 1999-06-01
Filing date: 2000-05-31
Publication date: 2003-01-14
Also published as: WO2000073790A1; AU5218800A; EP1183533A1; CA2375191A1; DE19925234A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、インビトロで、抗原特異的免疫応答、特に、免疫系のエフェクター細胞、特にＢ細胞、ＮＫ細胞、好適にはＴ細胞、より好適には細胞障害性Ｔ細胞またはヘルパーＴ細胞からの細胞性免疫応答を検出するための、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、ならびに少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰとインキュベートされた抗原を提示している少なくとも一つの標的細胞、特にＢ細胞、マクロファージ、前樹状細胞、樹状細胞、胚細胞および／または線維芽細胞を含んでいる試験システムに関している。本発明はまた、診断および治療におけるそれらの使用にも関している。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメ
ア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少な
くとも一つのＣＶＬＰ、および少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つ
の安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰお
よび／または少なくとも一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つ
の抗原提示標的細胞、特にＢ細胞、マクロファージ、前樹状細胞、樹状細胞、胚
細胞および／または線維芽細胞を含む、抗原特異的免疫応答、特に免疫系のエフ
ェクター細胞、特にＢ細胞、ＮＫ細胞、好適にはＴ細胞、特に好適な様式では細
胞障害性Ｔ細胞またはＴヘルパー細胞の細胞性免疫応答のインビトロ検出のため
の試験システム、および診断および治療におけるそれらの使用に関している。

【０００２】乳頭腫ウイルス、いぼウイルスとも称される、は約８０００塩基対のゲノムサ
イズを持ち、約５５ｎｍの直径の二十面体キャプシドを持っている二本鎖ＤＮＡ
ウイルスである。これまで１００以上の異なったヒト乳頭腫ウイルス型が知られ
ており、その内のいくつか、例えば、ＨＰＶ−１６、ＨＰＶ−１８、ＨＰＶ−３
１、ＨＰＶ−３３、ＨＰＶ−３９、ＨＰＶ−４５、ＨＰＶ−５２およびＨＰＶ−
５８は悪性腫瘍を起こすことができ、一方他のもの、例えば、ＨＰＶ−６、ＨＰ
Ｖ−１１およびＨＰＶ−４２は良性腫瘍を起こすことができる。

【０００３】乳頭腫ウイルスのゲノムは三つの領域に副分割できる：第一の領域はウイルス
の転写および複製のための制御要素を含んでいる非コード化領域である。第二の
領域（Ｅ（早期）領域と称される）は、異なった蛋白質コード化セグメントＥ１
−Ｅ７を含んでおり、例えば、そのうちのＥ６蛋白質およびＥ７蛋白質は上皮細
胞形質転換に関与しており、およびＥ１蛋白質はＤＮＡコピー数を調節する。Ｅ
６およびＥ７領域中の遺伝子は原癌遺伝子と称されるものであり、悪性に変質し
た細胞中でも発現される。第三の領域（Ｌ（後期）領域とも称される）は、ウイ
ルスキャプシドの構造成分をコード化している二つの蛋白質コード化セグメント
Ｌ１およびＬ２を含んでいる。Ｌ１蛋白質の９０％以上がウイルスキャプシドに
存在しており、Ｌ１：Ｌ２の比は一般には３０：１である。本発明の意味の範囲
において、用語Ｌ１蛋白質は主乳頭腫ウイルスキャプシド蛋白質を示していると
理解されたい（ＢａｋｅｒＴ．ｅｔａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ
．６０，１４４５）。

【０００４】なかんずく、ＨＰＶ−６およびＨＰＶ−１１は性器いぼを起こす原因であり、
一方、ＨＰＶ−１６、ＨＰＶ−１８、ＨＰＶ−３１、ＨＰＶ−３３、ＨＰＶ−３
９、ＨＰＶ−４５、ＨＰＶ−５２およびＨＰＶ−５８のようないくつかの乳頭腫
ウイルスは肛門性器管の悪性腫瘍に関係している。５０％を超える場合で、ＨＰ
Ｖ−１６が子宮頚癌（子宮頚の癌腫）につながっている。ＨＰＶ−１６は子宮頚
部新生物形成の危険因子である。免疫系は本疾患の進行に重要な働きを果たして
いる。従って、細胞性免疫応答、特に、抗原特異的Ｔリンパ球は防御機構に重要
であると推定されている。非常に悪性な子宮頚上皮内新生物（ＣＩＮＩＩ／Ｉ
ＩＩ）および子宮頚腫瘍において、Ｅ７遺伝子が感染上皮のすべての層で構成的
に発現されていることも観察されている。このため、特にＥ７蛋白質が可能性の
ある腫瘍抗原として、および活性化Ｔ細胞の標的分子として考えられている（例
えば、ＷＯ９３／２０８４４を参照されたい）。しかしながら、患者においてＥ
７により誘導される細胞性免疫応答は、疾患の進行に影響するには十分に強くな
いようである。適したワクチンで免疫応答を増加させるのは可能であろう。

【０００５】Ｌ１遺伝子の発現、またはＬ１遺伝子およびＬ２遺伝子の同時発現はキャプソ
メア、安定キャプソメア、キャプシドまたはウイルス様粒子（ＶＬＰはウイルス
様粒子を表している）の形成を導くことができることが示されている（例えば、
ＷＯ９３／０２１８４、ＷＯ９４／２０１３７およびＷＯ９４／０５７９２を参
照されたい）。キャプソメアは五つのＬ１蛋白質から成るオリゴマーコンフィギ
ュレーションであると理解されている。キャプソメアは基本構造単位であり、そ
れからウイルスキャプシドが構築される。安定キャプソメアは、キャプシドへ組
み立てることが不可能であるキャプソメアであると理解されている。キャプシド
は乳頭腫ウイルスのエンベロープであると理解されており、例えば、そのエンベ
ロープは７２キャプソメアから成っている（ＢａｋｅｒＴ．ｅｔａｌ．（１
９９１）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．６０，１４４５）。ＶＬＰは形態的に無傷のウ
イルスに似ており、その抗原性を持つキャプシドであると理解されている。種々
の動物系において、中和抗体の形成により特徴付けられる体液性抗体を誘導する
ためにＶＬＰを使用することが可能である。しかしながら、除去されるべきウイ
ルス感染細胞には抗体よりもむしろウイルス特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）
応答が必要とされるようであるので、ウイルス感染がすでに起こっている場合は
、Ｌ１蛋白質および／またはＬ２蛋白質に対するウイルス中和抗体の形成は臨床
的にはほとんど意味を持たない。さらに、ＶＬＰが細胞障害性Ｔ細胞応答を誘導
できたとしても、それは単にキャプシド蛋白質Ｌ１および／またはＬ２に対する
ものであり、乳頭腫ウイルス関連腫瘍の制御には適していないようである。

【０００６】キャプシド蛋白質Ｌ１および潜在的腫瘍抗原Ｅ７間で形成された融合蛋白質か
ら成る粒子（ＷＯ９６／１１２７２およびＭｕｌｌｅｒ、Ｍ．ｅｔａｌ．（１
９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２３４，９３）である、キメラ乳頭腫ウイルス様粒
子（ＣＶＬＰ、キメラウイルス様粒子を表している）と称されるものが開発され
ている。ＣＶＬＰはＥ７蛋白質に対するわずかな体液性免疫応答のみしか誘導し
なかった（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｍ．ｅｔａｌ．（１９９７），前記文献）。しかし
ながら、試験されたＣＶＬＰのいくつかが実際にマウスにおいて所望のＥ７特異
的細胞障害性Ｔ細胞応答を誘導した（Ｐｅｎｇｅｔａｌ．（１９９８）Ｖｉ
ｒｏｌｏｇｙ２４０，１４７−５７も参照されたい）。さらに、ＨＰＶ関連疾
患に関連して存在する中和抗体が、投与されたＬ１蛋白質への患者の免疫応答を
制限しているようである（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｍ．ｅｔａｌ．（１９９７），前記
文献）。しかしながら、ＭＨＣクラスＩ分子により腫瘍細胞によって提示される
Ｅ７蛋白質はＣＴＬの標的分子であるようであるので、ＣＶＬＰはワクチンの開
発のために未だ興味を持たれている。

【０００７】ＰｅｎｇＳ．ｅｔａｌ．（１９９８；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４０，１４７
）はウシ乳頭腫ウイルス（ＢＰＶ）からのＣ末端切断Ｌ１およびＨＰＶ−１６
Ｅ７_49-57から成るＣＶＬＰを記載しており、そのＣＶＬＰはＣ５７Ｂ１／６マ
ウスへの接種後にＥ７特異的細胞障害性Ｔ細胞を誘導し、Ｅ７−発現腫瘍の発生
からこれらのマウスを保護する。ＧｒｅｅｎｓｔｏｎｅＨ．Ｌ．ｅｔａｌ．
（１９９８；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５，１８００
−５）はＨＰＬ−１６Ｌ１および完全長ＨＰＬ−１６蛋白質に融合されたＬ２
から成るＣＶＬＰを記載しており、そのＣＶＬＰはＣ５７Ｂ１／６マウスの免疫
後に、上皮Ｅ７−発現腫瘍の発生からこれらのマウスを保護するが、細胞性免疫
応答は特に有効でないようであり、細胞障害性Ｔ細胞は示されていない。

【０００８】テタノールのような標準ワクチンに対する免疫応答は抗体により仲介され、そ
れはその結果血清学的に検出可能であるがゆえに、ヒトにも標準化可能である、
そのような治療的ワクチンの場合に得られる細胞性免疫応答のための試験システ
ムの開発が必要であった。

【０００９】従来存在している系は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（結果としてリンパ球、
マクロファージおよび樹状細胞を含んでいる）が生物体から単離され、培養され
および抗原の特定の形とインキュベートされるという原理に基づいている。抗原
は抗原提示細胞（Ｂリンパ球、マクロファージまたは樹状細胞）により取り上げ
られ、細胞内部で加工され、表面上に組織適合抗原（主要組織適合抗原複合体、
ＭＨＣ）としてＴ細胞に提示される。これに関連して、二つの経路が存在する：ＭＨＣＩ分子として提示されるペプチドはＣＤ８−陽性Ｔ細胞により認識さ
れ、それはこの刺激の結果として、活性化細胞障害性Ｔ細胞へ分化でき、および
／または抗原提示細胞を溶解する；ＭＨＣＩＩ分子として提示されるペプチドはＣＤ４−陽性Ｔ細胞により認識
され、それはこの刺激の結果として、活性化Ｔヘルパー細胞へ分化できる。

【００１０】Ｂ細胞はその抗原レセプター（ＩｇＭまたはＩｇＤ）によりその表面に抗原を
結合する。ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞は二つのレセプターを持っている：そ
の一つは抗原提示細胞の表面上の糖を認識し、他方はＭＨＣＩ分子を認識する
。ＮＫ細胞は糖を認識後、および同時にＭＨＣＩ分子が存在しないと刺激され
る。

【００１１】抗原による刺激により達成される免疫細胞の活性化は、例えば、インターフェ
ロンγおよびインターロイキン３（ＩＬ３）のようなサイトカインの合成により
検出できる。対応するサイトカインはこれらの試験システムにおいて細胞内に蓄
積され、例えば、蛍光体結合抗体として検出できる（ＫｅｒｎＦ．ｅｔａｌ
．（１９９８）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．４，９７５−８）。最後に、特定の抗原により
活性化できた免疫細胞の比率はＦＡＣＳ（蛍光−活性化細胞選別機）で決定でき
る。分泌されたサイトカインはまた、例えば、ＥＬＩＳＡで検出できる。免疫細
胞の活性化を検出するための他の可能な方法はＥＬＩＳＰＯＴ、増殖試験および ⁵¹ Ｃｒ放出試験である。

【００１２】Ｋａｓｔ，Ｗ．Ｍ．ｅｔａｌ．（１９８９；Ｃｅｌｌ，１７，６０３−１４
）、Ｒｏｃｋ，Ｋ．Ｌ．ｅｔａｌ．（１９９２；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９，８９１８−２２）およびＣｅｒｕｎｄｏｌｏ，Ｖ
．ｅｔａｌ．（１９９０；Ｎａｔｕｒｅ，３４５，４４９−５２）の系におい
て、単一の、決められたペプチド（８ｍｅｒ、９ｍｅｒまたは１０ｍｅｒ）が抗
原として使用された。ペプチドは細胞表面上に発現され、哺乳類間で、生物体−
生物体で非常に変化するＭＨＣクラスＩ分子により結合される。このことは、順
に、一つの生物体でＴ細胞応答を検出するために非常によく研究されたペプチド
は同じ種の別の生物体には使用できないことを意味している（なぜなら、この後
者の生物体は対応するＭＨＣＩハプロタイプを持っていない）；しかしながら
、例えば、異なったペプチドが各々の患者の場合にＴ細胞を刺激するために使用
されなければならないので、この実験法は実際問題としてヒトの場合には応用で
きない。さらに、細胞障害性Ｔ細胞を構成できる蛋白質断片またはペプチドはほ
とんどの抗原の場合に知られていない。

【００１３】もし、Ａｌｌｅｎ，Ｐ．Ｍ．ａｎｄＵｎａｎｕｅ，Ｅ．Ｒ．（１９８４；Ｉ
ｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，１６８，１８２−８）に記載されているように、Ｐ
ＢＭＣを刺激するために比較的多量のペプチドまたは蛋白質が使用されるならば
、これらの抗原は細胞質内へ取り込まれ、またはエンドソームにより、処理され
る。形成されたペプチドはＭＨＣＩＩ分子に結合し、細胞表面上のＣＤ４−陽
性細胞へ提示される。そのような系はそれゆえにＴヘルパー細胞の活性化を検出
するには限定され、例えば、細胞性免疫応答を誘導することに基づいている治療
的ワクチンを評価するためには使用できない、または排他的に使用できない。

【００１４】それ故、ペプチドまたは蛋白質はＭＨＣ−制限的であるかまたはＴヘルパー細
胞を活性化できるのみであるというジレンマが存在する。これらの欠点はＴａｒｐｅｙ，Ｉ．ｅｔａｌ．（１９９４；Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，８１，２２２−７）およびＮｉｍａｋｏ，Ｍ．ｅｔａｌ．（１９７
７；ＣａｎｃｅｒＲｅｓ５７，４８５５−６１）のシステムにより回避され
、そこで彼らは抗原輸送体として組換えワクシニアウイルスまたはアデノウイル
スを使用した。感染によって、与えられたウイルスは、そのゲノムの一部として
、適した抗原のための情報を細胞内へ導入する。続いて、ウイルス蛋白質および
抗原が細胞内で発現される。ウイルス抗原は次に特異的抗原と同じ様式で正確に
加工され、ＭＨＣＩ分子経由でＴ細胞へ提示される。その結果、前に述べた系
とは対照的に、特異的抗原の取り込みはこれらの系においてはＭＨＶ−非依存的
であり、異なった生物体の細胞は、たとえ各々の場合で提示される抗原の一部が
ハプロタイプ−ハプロタイプ間で異なっていても、特異的抗原の一部をＴ細胞へ
提示できる。

【００１５】ワクシニアウイルスおよびアデノウイルス系は、そのような細胞のウイルス感
染はウイルス遺伝子発現およびウイルス複製が付随するという欠点を持っている
。抗原提示細胞に対するこの追加の影響は、特異的抗原に限定されている細胞障
害性Ｔ細胞応答を定量的に測定することを著しくより困難にしている。第二点は
、組換え体ワクシニアウイルスおよび／またはアデノウイルスの取り扱いにはド
イツ生物安全性レベルＳ２（Ｓｉｃｈｅｒｈｅｉｔｓｓｔｕｆｅ２）が必要と
されるので、これらのシステムを実行するのは困難でおよび費用がかかる。

【００１６】本発明の目的は、それゆえ細胞性免疫応答のための試験システムを開発するこ
とでありここで、細胞障害性Ｔ細胞、特に、例えば、またＴヘルパー細胞、Ｂ細胞また
はＮＫ（ナチュラルキラー）細胞が試験でき、それと関連して免疫細胞を区別す
ることが可能であろう；ここで、細胞内への抗原の取り込みはＭＨＣ分子非依存性である；ここで、ウイルス蛋白質発現およびウイルス複製が付随するウイルス感染はな
い；標準化できる。

【００１７】この目的は、驚くべきことに、ＰＢＭＣと例えば、ＣＶＬＰのインキュベーシ
ョンは、インビトロ実験で、細胞障害性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞またはＢ細胞の
ような免疫細胞の抗原特異的免疫応答、特に細胞障害性免疫応答を導くことを示
すことが可能であるので達成された。このため、従来の検出法および本発明間の
基本的相違は、刺激または再刺激のために使用される抗原の性質である。

【００１８】このことに加え、驚くべきことに、インビトロでの前樹状細胞へのＣＶＬＰの
結合は、すでにそれ自身、免疫応答がインビボで活性化されたことをしめしてい
る。本発明の文脈において、前樹状細胞とは、ＣＶ１６を強く発現するが、一方
、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩ分子、およびまたＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ４
０は比較的弱くしか発現しない、樹状細胞前駆体であると理解されている。対照
的に、樹状細胞はＣＤ１６をわずかしか発現しないが、一方、ＭＨＣクラスＩお
よびＩＩ分子、およびまたＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ４０を強く発現する（
Ｗｏｏｄｈｅａｄｅｔａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ９４（４
）：５５２−９）。ＣＤ１６−陽性細胞とは、特異的抗体を使用することにより
、例えば、ＦＡＣＳｃａｎ実験でＣＤ１６を発現することを示すことができる細
胞を指している。

【００１９】現在、インビボで細胞性免疫応答を誘導できるＣＶＬＰがインビトロで前樹
状細胞（例えば、ＪＡＷＳＩＩ細胞）へ結合できることが示された。別のバッ
チからのＣＶＬＰ（細胞性免疫応答を誘導できなかったが、それでも体液性免疫
応答は誘導できた、理由は不明である）は前樹状細胞へ同様に結合できなかった
。しかしながら、対照的に、これらのＣＶＬＰはＴリンパ球細胞株に属する細胞
へ非常によく結合できた。それゆえ、前樹状細胞へのＣＶＬＰの結合は細胞性免
疫応答の誘導における律速段階であることが結論できる。

【００２０】この現象の可能な説明は、ＣＶＬＰはレセプターとして働き、ＣＤ１６経由で
細胞内への道を造っていることである。ＣＤ１６は前樹状細胞上で強く発現され
るが、樹状細胞上にはほとんどまたは全く発現されない。実際、樹状細胞はＣＶ
ＬＰをほとんど結合しない（データは示されていない）。

【００２１】観察された細胞障害性免疫応答は、ＣＶＬＰの外因性蛋白質が、ＭＨＣクラス
Ｉ分子により、ＣＤ８−陽性細胞へ実際に提示されていることが前提条件である
。これには、ＣＶＬＰとのインキュベーション後にＭＨＣＩ分子の細胞内充填
が起こることを仮定しなければならない。しかしながら、例えば、Ａｌｌｅｎ
Ｐ．Ｍ．およびＵｎａｎｕｅＥ．Ｒ．（前記文献）により使用された実験方法
は、外因性蛋白質は通常クラスＩＩＭＨＣ分子によりＣＤ４−陽性細胞に提示
され、ＭＨＣＩ系へ入ってはいかないことを教えている。ＣＶＬＰの外因性蛋
白質のこの驚くべきおよび基本的に異なった挙動は、その微粒子構造および細胞
内へのレセプター仲介取り込みの結果として、ＣＶＬＰは細胞へ“偽感染する”
能力を持っているという事実により説明可能であろう。この場合、ＣＶＬＰの微
粒子構造は細胞質中での分解および加工によってのみ消滅し、そのため、外因性
蛋白質の状況とは対照的に、主として（しかし排他的ではない）抗原断片へ接近
できるＭＨＣＩ分子はこれらの断片を結合し、細胞表面へ輸送し、ＣＤ８−陽
性細胞へ提示する。これと平行して、細胞内ＭＨＣＩＩ分子もまた抗原断片で
充填され、ＭＨＣＩＩ分子（ＭＨＣＩ分子と同様に）はペプチドをＣＤ−４
陽性細胞へ提示する。その結果として、ＭＨＣＩおよびＭＨＣＩＩ分子の両
方が抗原提示細胞中、ＣＶＬＰとのインキュベーションの結果としてＣＶＬＰペ
プチドで“充填”される（“ＣＶＬＰ−充填細胞”）。本発明の意味において、
提示とは、ペプチドまたは蛋白質断片がＭＨＣ分子に結合し（この結合は、例え
ば、小胞体中または細胞外空間で起こることができる）、およびこのＭＨＣ分子
−ペプチド複合体が、免疫細胞に特異的に認識されるように細胞膜の細胞外側に
結合される場合を意味していると理解される。

【００２２】その結合されたペプチドと一緒にＭＨＣ分子が、Ｔ細胞レセプター（各々の場
合に特異的である）経由で関連する特異的Ｔ細胞により認識された後、細胞障害
性Ｔ細胞またはＴヘルパー細胞が増殖する。少なくとも一つのキャプソメア、少
なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一
つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／または少なくと
も一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つの
キャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ
とインキュベートされた細胞で連続的に刺激された場合、これらの細胞集団はイ
ンターフェロンγまたはインターロイキン４（ＩＬ４）を産生し、系中で、それ
らは細胞質に蓄積される。ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｏｆＩｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ（６．２から６．２４章（１９９９），ＣｏｌｉｇａｎＪ．Ｅ
．，ＫｒｕｉｓｂｅｅｋＡ．Ｍ．，ＭａｒｇｕｌｉｅｓＤ．Ｈ．，Ｓｈｅ
ｖａｃｋＥ．Ｍ．およびＳｔｒｏｂｅｒＷ．編，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆
Ｓｏｎｓ）に記載されているように、例えば、細胞内インターフェロンγが特
異的に活性化されたＴ細胞を検出するために使用できる。

【００２３】このことは、誘導された免疫応答に関し、キャプソメア、安定キャプソメア、
キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰは驚くべきことに、それらはウイル
ス蛋白質の発現および／またはウイルス複製を誘導しないけれども、ウイルス様
（蛋白質様ではなく）に挙動すること意味している。

【００２４】その結果、それらの偽感染能力のため、これらの化合物は遊離のペプチド／蛋
白質を使用する方法の利点と組換えウイルスの利点を併せ持っている。ウイルス
に類似して、キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよび／ま
たはＣＶＬＰは粒子として細胞質内へ入ることができ、その結果ＭＨＣ制限的で
はない。しかしながら、ウイルス系と対照的に、特異的抗原の放出および／また
は発現、およびＭＨＣＩ分子の充填には遺伝子発現は必要とされない。ＣＤ４
−陽性細胞かまたはＣＤ８−陽性細胞を主として刺激する、遊離ペプチドまたは
蛋白質を使用する実験構成とは対照的に、キャプソメア、安定キャプソメア、キ
ャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰはＣＤ４−陽性およびＣＤ８−陽性Ｔ
細胞の両方を同じ程度に活性化する。最後に、その安全基準に関し、キャプソメ
ア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰはＳ１に類
別され、そのことはウイルス系に関して必要とされるＳ２安全基準の場合よりも
、工業的実行がより安価で、および少ない技術的投入で多くの場所で実現できる
ことを意味している。

【００２５】本発明は、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメ
ア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少な
くとも一つのＣＶＬＰ、ならびに少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一
つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰ
および／または少なくとも一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一
つの抗原提示標的細胞、特にＢ細胞、マクロファージ、前樹状細胞、樹状細胞、
胚細胞および／または線維芽細胞を含む、抗原特異的免疫応答、特に免疫系のエ
フェクター細胞、特にＢ細胞、ＮＫ細胞、好適にはＴ細胞、特に好適な様式では
細胞障害性Ｔ細胞またはＴヘルパー細胞の細胞性免疫応答のインビトロ検出のた
めの試験システム、および診断および治療におけるそれらの使用に関している。

【００２６】本発明はさらに、一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、
少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくと
も一つのＣＶＬＰ、ならびに少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの
安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよ
び／または少なくとも一つのＣＶＬＰで処理された少なくとも一つの前樹状細胞
および／または一つのＣＤ１６−陽性細胞を含む抗原特異的免疫応答のインビト
ロ検出のための試験システムに関しており、該細胞への安定キャプソメア、キャ
プシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰの結合が測定される。

【００２７】好適な態様において、エフェクター細胞は哺乳類細胞、特にヒトまたはマウス
細胞である。試験システムで使用されるキャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、Ｖ
ＬＰおよび／またはＣＶＬＰは、少なくとも一つのキャプソメア、安定キャプソ
メア、キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰが一つまたはそれ以上の乳頭
腫ウイルスからの少なくとも一つのＬ１蛋白質、または少なくとも一つの乳頭腫
ウイルスＬ２蛋白質、特にヒト、ウシおよび／またはワタオウサギ乳頭腫ウイル
スからのＬ１蛋白質またはＬ１およびＬ２蛋白質を含んでいる。好適な態様にお
いて、キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣ
ＶＬＰが一つまたはそれ以上の乳頭腫ウイルスからのＬ１蛋白質部分およびＬ１
と異種である蛋白質部分から成る少なくとも一つのＬ１融合蛋白質を含んでいる
。

【００２８】使用されるＬ１蛋白質は天然に存在するＬ１蛋白質でもよいし、または一つま
たはそれ以上の欠失を含んでいてもよく、それは例えば、Ｃ末端、Ｎ末端および
／または内部、および／または一つまたはそれ以上の突然変異であろう。好適な
態様において、少なくとも約３５までのアミノ酸、好適には少なくとも約２５か
ら約３５まで、特に少なくとも約３２から約３４までのアミノ酸がＬ１蛋白質の
Ｃ末端から欠失されている。

【００２９】Ｌ１と異質である蛋白質部分は天然に存在するＬ１蛋白質でもよいし、または
一つまたはそれ以上の欠失を含むこともでき、それは例えば、Ｃ末端、Ｎ末端お
よび／または内部、および／またはいくつかの突然変異であろう。特別の態様に
おいて、Ｌ１と異質である蛋白質は細菌またはウイルス起源であり、例えば、Ｈ
ＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＣＭＶ、好適には乳頭腫ウイルス、特にはヒト乳頭
腫ウイルス、例えば（しかし排他的ではない）、Ｅ６またはＥ７から誘導できる
。好適な態様において、Ｅ７蛋白質のＣ末端から少なくとも約５５アミノ酸、好
適には少なくとも約５から約５５まで、特に少なくとも約３８から約５５までの
アミノ酸が欠失されている。さらにこれらの蛋白質は、甲状腺炎、実験的自己免
疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）、卵巣炎または関節リューマチのような特定の自己免疫疾
患に関係しているサイログロブリン、ミエリンまたは透明帯糖蛋白質３（ＺＰ₃
）のような自己免疫抗原から誘導できる。別の好適な態様において、Ｌ１と異質
である蛋白質は、ＭＡＲＴのようなメラノーマ抗原、Ｈｅｒ２ｎｅｕ（ｃ−ｅ
ｒｂＢ２）、ＢＤＲＡ−１またはＣＡ１２５のような卵巣癌腫抗原、ＣＡ１２５
のような結腸癌腫抗原、Ｈｅｒ２ｎｅｕ（ｃ−ｅｒｂＢ２）、ＢＤＲＡ−１お
よびＢＤＲＡ−２のような乳癌腫抗原から誘導される。これに関連し、この抗原
部分は蛋白質の単一ドメインまたはエピトープを含むことができる（しかし、含
んでいなければならないわけではない）。Ｌ１蛋白質と異質である蛋白質部分は
結合された形で、好適には融合された形で存在している。

【００３０】本発明はさらに、キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよ
び／またはＣＶＬＰとインビトロインキュベーション後、該キャプソメア、安定
キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰからの蛋白質および
／または蛋白質断片を含んでいる、および好適にはＭＨＣＩおよびＭＨＣＩ
Ｉ複合体として提示する細胞を含んでいる。

【００３１】本発明に従った細胞は、一つまたはそれ以上の乳頭腫ウイルスから誘導された
少なくとも一つのＬ１蛋白質または少なくとも一つのＬ１蛋白質、および少なく
とも一つの乳頭腫ウイルスＬ２蛋白質を含んでいるキャプソメア、安定キャプソ
メア、キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰから誘導された蛋白質、蛋白
質断片および／またはペプチドを含む（特に、これらを提示する）。好適な態様
において、本発明に従った細胞は、一つまたはそれ以上の乳頭腫ウイルスから誘
導されたＬ１蛋白質部分およびＬ１蛋白質と異種である蛋白質部分から成る少な
くとも一つのＬ１融合蛋白質を含んでいる、キャプソメア、安定キャプソメア、
キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰから誘導された蛋白質、蛋白質断片
および／またはペプチドを含む（特に、これらを提示する）。使用されるＬ１蛋
白質は天然に存在するＬ１蛋白質でもよいし、または一つまたはそれ以上の欠失
を含んでいてもよく、それは例えば、Ｃ末端、Ｎ末端および／または内部、およ
び／または一つまたはそれ以上の突然変異であろう。好適な態様において、少な
くとも約３５までのアミノ酸、好適には少なくとも約２５から約３５まで、特に
少なくとも約３２から約３４までのアミノ酸がＬ１蛋白質のＣ末端から欠失され
ている。

【００３２】Ｌ１と異質である蛋白質部分は天然に存在するＬ１蛋白質でもよいし、または
一つまたはそれ以上の欠失を含むこともでき、それは例えば、Ｃ末端、Ｎ末端お
よび／または内部、および／またはいくつかの突然変異であろう。特別の態様に
おいて、Ｌ１と異質である蛋白質は細菌またはウイルス起源であり、例えば、Ｈ
ＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＣＭＶ、好適には乳頭腫ウイルス、特にはヒト乳頭
腫ウイルス、例えば（しかし排他的ではない）、Ｅ６またはＥ７から誘導できる
。好適な態様において、Ｅ７蛋白質のＣ末端から少なくとも約５５アミノ酸、好
適には少なくとも約５から約５５まで、特に少なくとも約３８から約５５までの
アミノ酸が欠失されている。さらにこれらの蛋白質は、甲状腺炎、実験的自己免
疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）、卵巣炎または関節リューマチのような特定の自己免疫疾
患に関係しているサイログロブリン、ミエリンまたは透明帯糖蛋白質３（ＺＰ₃
）のような自己免疫抗原から誘導できる。別の好適な態様において、Ｌ１と異質
である蛋白質は、ＭＡＲＴのようなメラノーマ抗原、Ｈｅｒ２ｎｅｕ（ｃ−ｅ
ｒｂＢ２）、ＢＤＲＡ−１またはＣＡ１２５のような卵巣癌腫抗原、ＣＡ１２５
のような結腸癌腫抗原、Ｈｅｒ２ｎｅｕ（ｃ−ｅｒｂＢ２）、ＢＤＲＡ−１お
よびＢＤＲＡ−２のような乳癌腫抗原から誘導される。これに関連し、この抗原
部分は蛋白質の単一ドメインまたはエピトープを含むことができる（しかし、含
んでいなければならないわけではない）。抗原部分はＬ１蛋白質に結合、好適に
は融合されている。

【００３３】すべての好適な態様において、細胞は抗原提示細胞、特にＢ細胞、マクロファ
ージ、前樹状細胞、樹状細胞、胚細胞または線維芽細胞である。本発明の主題の別の部分は、標的細胞を製造するための方法であり、その方法
は、標的細胞をインビトロで少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの
安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよ
び／または少なくとも一つのＣＶＬＰとインキュベートすることを基礎にしてい
る。

【００３４】本発明の主題の別の部分は試験システムを製作するための方法であり、そこで
は少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なく
とも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つ
のＣＶＬＰが組換え的に製造され、および標的細胞は一つのキャプソメア、安定
キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰとインキュベートす
ることにより製造され、およびエフェクター細胞は免疫細胞株および／または培
養初代免疫細胞、好適にはマウスまたはヒト免疫細胞および／または培養初代免
疫細胞である。好適な態様において、キャプソメア、安定キャプソメア、キャプ
シド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰの構成物である組換え的に製造された蛋白
質は大腸菌のような細菌、Ｓ．セレビジエ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のような酵
母、特にスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅ
ｒｄａ）細胞またはトリコプルシア・ニ（ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉ）細
胞のような昆虫細胞、ＣＯＳ細胞またはヒーラー細胞のような哺乳類細胞中で発
現される。

【００３５】本発明の主題の別の部分は試験システムを製作するための方法であり、そこで
は少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なく
とも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つ
のＣＶＬＰが組換え的に製造され、前樹状細胞および／またはＣＤ１６−陽性細
胞とインキュベートされる。

【００３６】本発明の主題の別の部分は、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つ
の安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰお
よび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの細胞
（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なく
とも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰ
とインキュベートされた少なくとも一つの細胞）により、免疫系エフェクター細
胞活性化のインビトロ検出のための方法であり、この方法は以下の工程を含んで
いる：ａ）本発明の試験システムは第一の工程で使用される。好適な態様において、
免疫細胞（エフェクター細胞）、例えば、ＰＢＭＣ、Ｔ細胞株または培養初代Ｔ
細胞を抗原と、好適には少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定
キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／
または少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの細胞（少な
くとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一
つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰとイン
キュベートされた少なくとも一つの細胞）と少なくとも約５時間、特別には約１
７時間インキュベートする。別の好適な態様において、ＰＢＭＣ、Ｔ細胞株また
は培養初代Ｔ細胞は抗原と、好適には少なくとも一つのキャプソメア、少なくと
も一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶ
ＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つ
の細胞（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、
少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣ
ＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの細胞）と少なくとも約５時間の
みインキュベートされる。この短い時間の間に、抗原により活性化される細胞は
、同一の抗原または類似の抗原により以前にすでに刺激されている細胞のみであ
る。

【００３７】ｂ）エフェクター細胞の可能な活性化は第二の工程で決定される。例えば、刺
激されたＴ細胞は、Ｔ細胞によるサイトカインの産生または分泌、Ｔ細胞上の表
面分子の発現、標的細胞の溶解または細胞の増殖のような種々の方法により検出
できる。これに適した方法の例はサイトカインアッセイである（Ｃｕｒｒｅｎｔ
ＰｒｏｔｏｃｏｌｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９９）の６．２から
６．２４章、前記参照）。ＥＬＩＳＰＯＴ（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌ
ｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙの６．１９章、前記参照）、⁵¹Ｃｒ放出試験（
ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙの３．１１
章、前記参照）または増殖の検出（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙの３．１２章、前記参照）である。用いられた方法に依
存して、これに関連し、細胞障害性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、Ｂ細胞およびＮＫ
細胞およびその他の細胞のような免疫細胞を区別することも可能である。

【００３８】本方法の別の態様において、以下の追加の工程ａ’）が工程ａ）の前に挿入さ
れる：ａ’）試験システムの少なくとも一つのエフェクター細胞が、少なくとも一つ
のキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプ
シド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰ、および／または少なく
とも一つの標的細胞（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キ
ャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／ま
たは一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの標的細胞）と、少
なくとも約８週間、特には約３週間共培養し、その後に工程ａ）が行われる。エ
フェクター細胞のこの前活性化により、続いての工程ａ）において、少なくとも
一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキ
ャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰ、および／または少
なくとも一つの標的細胞（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安
定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび
／または一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの標的細胞）の
添加によりエフェクター細胞が再刺激される。共培養とは同一の増殖培地および
同一の組織培養容器中で、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安
定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび
／またはＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの標的細胞（少なくとも一つ
のキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプ
シド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰとインキュベート
された少なくとも一つの標的細胞）存在下での少なくとも一つのエフェクター細
胞の増殖であると理解される。

【００３９】本発明に従った方法の好適な態様において、試験システムの一つの成分、即ち
、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なく
とも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つ
のＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの細胞（少なくとも一つのキャプソ
メア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少な
くとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰとインキュベート
された少なくとも一つの細胞）は基準として使用され、一方、試験システムの第
二の成分、即ちエフェクター細胞は実際の試験成分である。二つの成分の反応に
より観察されるエフェクター細胞の活性化は、例えば、工業的規模製造過程から
の、キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶ
ＬＰ、および／または少なくとも一つの細胞（少なくとも一つのキャプソメア、
少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも
一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも
一つの細胞）の活性化効果と比較される。この態様は、少なくとも一つのキャプ
ソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少
なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／また
は少なくとも一つの細胞（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安
定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび
／または一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの細胞）を含む
予防的および／または治療的ワクチンバッチの品質管理を可能にする。

【００４０】本発明に従った試験システムを利用する別の好適な方法は、蛋白質の一部に基
づいたワクチン開発のために特に有効なエピトープの選択である。例えば、もし
、免疫細胞の刺激を仲介するために蛋白質から、または病原体（融合部分として
）から誘導された、異なったＣＶＬＰ（各々の場合に短いペプチドを含んでいる
）の能力を別々のアッセイで調べる場合、特に有効なペプチドを同定するために
各々のＣＶＬＰに対する免疫応答を定量的に比較することが可能である。これら
のペプチドは新規ワクチンを製造するために混合できる。蛋白質はこれと類似し
た様式で試験できる。本発明の主題の別の部分は、従って免疫応答、特に細胞性
免疫応答を誘導するエピトープ、ペプチドまたは蛋白質断片を同定するための方
法である。

【００４１】本発明の主題の別の部分は、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つ
の安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰお
よび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの細胞
（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なく
とも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰ
とインキュベートされた少なくとも一つの細胞）による免疫系のエフェクター細
胞活性化のインビトロ検出のための方法であり、該方法は以下の工程を含んでい
る：Ｉ）第一の工程において、ＰＢＭＣ、例えば、特にＴ細胞は供与体の血液から
、特に、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、
少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰ
、および／または少なくとも一つの標的細胞（少なくとも一つのキャプソメア、
少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも
一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも
一つの標的細胞）がすでに接種されている供与体の血液から得られ、および得ら
れているエフェクター細胞を培養するか、または脾臓細胞がマウスから、特に、
少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくと
も一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰ、および
／または少なくとも一つの標的細胞（少なくとも一つのキャプソメア、少なくと
も一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶ
ＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの標
的細胞）がすでに接種されているマウスから単離された。

【００４２】ＩＩ）第二の工程において、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つ
の安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰお
よび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの細胞
（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なく
とも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰ
とインキュベートされた少なくとも一つの細胞）が、例えば、単離されたおよび
／または培養された細胞に少なくとも約５時間、特別には約１７時間加えられる
。別の好適な態様において、インキュベーションは少なくとも約５時間行われる
。この短い時間の間に、抗原により活性化される細胞は、同一の抗原または類似
の抗原により以前にすでに刺激されている細胞のみである。

【００４３】ＩＩＩ）エフェクター細胞の可能な活性化は第二の工程で決定される。例えば
、刺激されたＴ細胞は、Ｔ細胞によるサイトカインの産生または分泌、Ｔ細胞上
の表面分子の発現、標的細胞の溶解または細胞増殖の検出のような種々の方法に
より［欠文］できる。これに適した方法の例はサイトカインアッセイである（Ｃ
ｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９９）
の６．２から６．２４章、前記参照）。ＥＬＩＳＰＯＴ（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒ
ｏｔｏｃｏｌｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙの６．１９章、前記参照）、⁵¹Ｃ
ｒ放出試験（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙの３．１１章、前記参照）または増殖の検出（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃ
ｏｌｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙの３．１２章、前記参照）である。用いら
れた方法に依存して、これに関連し、細胞障害性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、Ｂ細
胞およびＮＫ細胞およびその他の細胞のような免疫細胞を区別することも可能で
ある。

【００４４】本方法の別の態様において、以下の追加の工程Ｉ’）が工程Ｉ）の後に挿入さ
れる：Ｉ’）単離された細胞は、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの
安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよ
び／またはＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの標的細胞（少なくとも一
つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャ
プシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰとインキュベー
トされた少なくとも一つの標的細胞）と少なくとも約８週間、特別には少なくと
も約３週間、共培養され、その後工程ＩＩ）を続ける。エフェクター細胞のこの
前活性化により、続いての工程ＩＩ）において、少なくとも一つのキャプソメア
、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくと
も一つのＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの標的
細胞（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少
なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶ
ＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの標的細胞）の添加によりエフェク
ター細胞が再刺激される。

【００４５】この型の実行は再刺激と称される。しかしながら、これに関連して、第一の刺
激は、Ｉ）の項で記載されているように、例えば、ワクチン接種、感染または腫
瘍により、または自己免疫疾患に関して供与体において起こすことができる。し
かしながら第一の刺激は、特異的反応性細胞クローンまたは集団を得るために、
Ｉ’）の項で説明したようにインビトロで実施できる。

【００４６】特別の態様において、本発明に従った方法は、病原体に関する生物体の免疫状
態を試験するために使用できる。例えば、もしＰＢＭＣが生物体から単離され、
融合部分としてまたはその一部に病原体特異的抗原を含んでいる、少なくとも一
つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャ
プシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰ、および／または少な
くとも一つの標的細胞（少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定
キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／
または一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの標的細胞）で再
刺激すると、細胞障害性Ｔ細胞、反応性Ｔヘルパー細胞または反応性Ｂ細胞のよ
うな特定の抗原に対して反応性である免疫細胞を見つけることにより、以前の感
染を検出することが可能である。さらに別の態様において、反応性細胞を定量す
ることにより、定量的に決定することができ、例えば、ブースターワクチン接種
の必要性を分析することが可能である。

【００４７】別の態様において、比較的長い時間前に行われたワクチン接種後の、患者のワ
クチン接種の成功、および／または現在の免疫状態を確認することも可能である
。これに関連し、モニタリングは少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一
つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰ
および／またはＣＶＬＰ、および／または少なくとも一つの標的細胞（少なくと
も一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つの
キャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つのＣＶＬＰとインキュ
ベートされた少なくとも一つの標的細胞）による予防的および／または治療的ワ
クチン接種のみに制限されるわけではなく、等しく通常のワクチンにもよく適し
ている。

【００４８】本試験法による特異的反応性Ｔ細胞の検出は検出が困難である感染の診断に使
用できる。例えば、もしＣＶＬＰが既知ではあるか検出が困難である病原体から
の抗原または抗原の一部から構築されるとすると、これらの抗原に対するＴ細胞
応答は存在する感染についての情報を提供できる。

【００４９】本発明に従った方法の別の態様において、もし、特定の感染性疾患に免疫性で
ある、免疫できないまたは困難ではあるがわずかに免疫される、患者群のＨＬＡ
ハプロタイプが対応する病原体の抗原に関するそのＴ細胞反応性に相関していれ
ば、病原体に対する免疫性を仲介するハプロタイプを同定することが可能である
。

【００５０】もし特定の自己免疫疾患の原因となる抗原が既知であれば、この自己免疫抗原
または一部を含む、キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよ
び／またはＣＶＬＰ、および／または標的細胞（少なくとも一つのキャプソメア
、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、および／
または一つのＣＶＬＰとインキュベートされた標的細胞）を製造することが可能
である。これらは、例えば、関連する自己免疫抗原で単離されたＰＢＭＣの刺激
後に患者のＴ細胞応答をインビトロで測定することにより、各々の自己免疫疾患
を診断するために使用できる。

【００５１】本発明に従った方法の別の態様は、異なった特異的腫瘍抗原と考えられる腫瘍
型を区別することである。もし、異なった腫瘍抗原を発現する、腫瘍の異なった
型（なかんずく、お互いに異なった型）が知られており、および、他方で、各々
の腫瘍抗原の一つにより特異的に再刺激できる、異なったＴ細胞集団が入手可能
であるならば、反応性Ｔ細胞の再刺激を検出することにより、患者の腫瘍を分類
することが可能である。そのような分類は、例えば、患者自信の腫瘍細胞に対す
る細胞障害性Ｔ細胞集団をこの様式で発生させるために、関連腫瘍抗原を接種す
ることにより、患者自身のＴ細胞を特異的に刺激するために使用できるであろう
。

【００５２】本発明に従った方法は、本試験システムを使用した場合に速い処置速度および
高い再現性で、例えば、製造中のワクチンバッチの品質調節、新規抗原性エピト
ープの同定、患者のハプロタイプの同定、自己免疫疾患の区別、または腫瘍型の
区別に対して適している。このため、本発明の主題の別の部分は、少なくとも一
つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャ
プシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰによ
る、あるいは少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメ
ア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または一つ
のＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの細胞によるエフェクター細
胞の活性化が高スループット系において実施される方法である。高スループット
系において、例えば、免疫応答、特にＴ細胞応答に関して上記の化合物に加えて
大規模にペプチドまたは蛋白質を調べることも可能である。

【００５３】本発明の主題の別の部分は、免疫応答を誘導または検出するための、少なくと
も一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つの
キャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ
、あるいは少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア
、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なく
とも一つのＣＶＬＰ、および免疫系のエフェクター細胞、特にＢ細胞、ＮＫ細胞
、好適にはＴ細胞、特に好適な様式では細胞障害性Ｔ細胞またはＴヘルパー細胞
とインキュベートされた少なくとも一つの抗原提示標的細胞、特にＢ細胞、マク
ロファージ、樹状細胞、胚細胞または線維芽細胞の使用である。

【００５４】本発明の主題の別の部分は、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つ
の安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰお
よび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、あるいは少なくとも一つのキャプソメ
ア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なく
とも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、免疫系のエフェク
ター細胞、特にＢ細胞、ＮＫ細胞、好適にはＴ細胞、特に好適な様式では細胞障
害性Ｔ細胞またはＴヘルパー細胞とインキュベートされた少なくとも一つの抗原
提示標的細胞、特にＢ細胞、マクロファージ、樹状細胞、胚細胞または線維芽細
胞、および、適切な場合、医薬として受容可能な担体物質を含む診断薬である。

【００５５】当業者には既知である担体物質の例は、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレ
ン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然または修飾セル
ロース、ポリアクリルアミド、アガロース、水酸化アルミニウムおよびマグニタ
イドである。

【００５６】本発明に従った診断薬は溶液中に、固形マトリックスに結合されておよび／ま
たは添加された補助剤を含んで存在できる。診断薬は種々の方法で投与できる。当業者には既知である投与形の例は、例え
ば、経口、鼻孔内、静脈内、筋肉内および／または局所投与による、非経口、局
所および／または全身投与である。投与の好適な形は、例えば、特定の乳頭腫ウ
イルス感染によりとられた天然の感染経路により影響される。投与量は、年齢、
体重および患者の健康の一般的状態および乳頭腫ウイルス感染の型に依存する。
診断薬はカプセル、液剤、懸濁剤、エリキシル剤（経口投与のため）または滅菌
溶液剤および／または懸濁剤（非経口または鼻孔内投与のため）の形で投与でき
る。例えば、塩溶液またはリン酸緩衝化塩溶液が不活性で免疫学的に受容可能な
担体物質として使用できる。

【００５７】図および下記の実施例は本発明を明らかにすることが意図されており、本発明
を制限するものではない。実施例１．出発物質の説明：ＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 ＣＶＬＰはドイツ特許出願ＤＥ１９８１
２９４１．６（ＭｕｌｌｅｒＭ．等（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２３４
，９３−１１１も参照されたい）に記載されているように製造された。

【００５８】ＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-60 ＣＶＬＰはＭｕｌｌｅｒＭ．ｅｔａｌ．
（１９９７；上記参照）に記載されているように製造された。Ｌ１ＶＬＰはＭｕｌｌｅｒＭ．ｅｔａｌ．（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇ
ｙ２３４，９３−１１１、に記載されているように製造された。

【００５９】Ｃ５７Ｂ１／６マウスはＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）から入手した。Ｂ６細胞はＣ５７Ｂ１／６マウスから誘導された胚幹細胞を意味している。

【００６０】Ｃ３細胞はＨＰＶ１６およびｒａｓ−形質転換Ｂ６胚細胞を意味している（Ｆ
ｅｌｔｋａｍｐＭ．Ｃ．ｅｔａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．２３，２２４２−９を参照されたい）。

【００６１】ＲＭＡ細胞はＣ５７ＢＬ１６マウスの胸腺腫から誘導された（Ｌｊｕｎｇｇｒ
ｅｎＨ．Ｇ．＆ＫａｒｒｅＫ．（１９８５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６２
，１７４５−５９を参照されたい）。

【００６２】ＲＭＡ−Ｅ７細胞ＲＭＡから誘導されたが、安定なトランスフェクションの結
果としてＨＰＶ６Ｅ７蛋白質を構成的に発現する。Ｂ１６Ｆ１０細胞はＡＴＣＣＣＲＬ−６４７５で入手可能な細胞株を意味し
ている。

【００６３】ＰＢＭＣは末梢血単核細胞を意味しており、例えば、ＲｕｄｏｌｆＭ．Ｐ．
ｅｔａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３８０，３３５−４０に記載さ
れている方法により調製できる。

【００６４】ＭＶＡ−Ｌ１Δ_Cは感染細胞中でＨＰＶ１６Ｌ１Δ_Cを発現する、組換えマウ
スワクシニアウイルスを意味している。ＩＬ−２は組換えサイトカインを意味している（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎ
ｓｏｎ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。

【００６５】２５／Ｃ α−ＨＰＶ１６Ｌ１はＬ１に対して方向付けられたマウスモノクロ
ーナル抗体を意味している。 α−ｈｕＣＤ２８はヒトＣＤ２８の細胞外部分（ＡＴＣＣＣＲＬ−８００
１）に対して方向付けられたマウスモノクローナル抗体を意味している。

【００６６】 α−ＣＤ３／ＰＥはヒトＣＤ３の細胞外領域（ε）に対して方向付けられたマ
ウスモノクローナル抗体を意味しており、フィコエリスリン蛍光標識を含んでい
る（Ｍｅｄａｃ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。

【００６７】 α−ＣＤ４／ＣｙｃｈｒｏｍｅはＣＤ４の細胞外領域に対して方向付けられた
マウスモノクローナル抗体を意味しており、Ｃｙｃｈｒｏｍｅ蛍光標識を含んで
いる（ＤＡＫＯ；Ｇｌｏｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋ）。

【００６８】 α−ＣＤ４／ＴｒｉｃｏｌｏｒはＣＤ４の細胞外領域に対して方向付けられた
ラットモノクローナル抗体を意味しており、Ｔｒｉｃｏｌｏｒ蛍光標識を含んで
いる（Ｍｅｄａｃ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。

【００６９】 α−ｍｕｓインターフェロンγ−ＦＩＴＣはｍｕｓインターフェロンγに
対して方向付けられたラットモノクローナル抗体を意味しており、ＦＩＴＣ蛍光
標識を含んでいる（Ｍｅｄａｃ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。

【００７０】Ｅ−７ペプチドはヒト乳頭腫ウイルスタイプ１６のアミノ酸４９〜５７を意味
している、配列：ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（ＦｅｌｔｋａｍｐＭ．Ｃ．ｅｔａｌ
．（１９９３）上記参照）。

【００７１】Ｐ−１２ペプチドＨＰＶ１６Ｌ１蛋白質のアミノ酸１６５〜１７３を意味し
ている、配列：ＡＧＶＤＮＲＥＣＩ（Ｇｅｎｂａｎｋ５５５９．．７１５４参
照）。このペプチドをマウス細胞障害性Ｔ細胞エピトープとして同定することが
可能であった。（ＤＥ１９９２５２３５．１−４１を参照されたい）。

【００７２】ＡＭペプチドはインフルエンザ核蛋白質のアミノ酸３６６〜３７４を意味して
いる、配列：ＡＳＮＥＮＭＥＴＭ（ＴｏｗｎｓｅｎｄＡ．Ｒ．ｅｔａｌ．（
１９８６）Ｃｅｌｌ４４，９５９−６８を参照されたい）。

【００７３】ＨＰＶ１６Ｌ１９３−１０１とはＨＰＶ１６Ｌ１蛋白質のアミノ酸９３〜
１０１を意味している、配列：ＧＬＱＹＲＶＦＲＩ。フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）はＳｉｇｍａ（Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇ
ｅｒｍａｎｙ）から入手した。

【００７４】ゴルジプラグはＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）か
ら入手した。細胞は各々の場合、３７℃および５％ＣＯ₂にて、１０％ウシ胎児血清、カナ
マイシンおよびアンピシリンを含むＲＰＭＩ培地（ＧｉｂｃｏＢＲＬ，Ｅｇｇ
ｅｎｓｔｅｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中で培養した。

【００７５】ＪＡＷＳＩＩ細胞は前樹状細胞である（ＵＳ５，６４８，２１９を参照さ
れたい）。モネンシンはＳｉｇｍａ（Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入
手した。

【００７６】ＭＨＣＩＡ^b抗体はＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒ
ｍａｎｙ）から入手した。ＦＩＴＣ−結合抗マウス抗体はＳｉｇｍａ（Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒ
ｍａｎｙ）から入手した。

【００７７】ＦＩＴＣ−結合２５／Ｃ α−ＨＰＶ１６Ｌ１抗体はＬ１に対して方向付けら
れたマウスモノクローナル抗体を意味しており、それ自身ＦＩＴＣへ結合してい
る。ＦＩＴＣはＳｉｇｍａ（Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入
手した。

【００７８】 α−マウスＣＤ８／ＰＥ抗体はＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ
，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。 α−マウスインターフェロンγ−ＦＩＴＣ抗体はＣａｌｔａｇ（Ｈａｍｂｕｒ
ｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。

【００７９】 α−マウスα−ＣＤ４／Ｃｙｃｈｒｏｍｅ抗体はＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｈｅ
ｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。Ｚｅｆａ膜とは４５μｍの円筒付属フィルターを意味しており、Ｚｅｆａ（Ｍ
ｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。

【００８０】ＦＡＣＳｃａｎカリバーまたはＦＣＡＳは“蛍光活性化細胞選別機”を意味し
ている。この装置はＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ（Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅ
ｒｍａｎｙ）から入手した。

【００８１】ＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェァーはＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ（Ｈ
ａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。２．マウスＣＤ８−陽性Ｔ細胞の調製ａ）ＶＬＰによるマウスの免疫化：２匹のＣ５７Ｂ１／６マウスを１０μｇのＬ１ＶＬＰで免疫した。６週間後
、脾臓細胞が単離された。ｂ）抗原提示細胞（標的細胞）の調製：Ｂ６細胞をインターフェロンγと２．５日インキュベートした後、抗原提示細
胞を調製するためにＭＶＡ−Ｌ１Δ_Cウイルス（ＭＯＩ＝５）で一夜感染させ、
および１６時間培養した。続いての工程において、感染Ｂ６細胞を照射し、それ
によりさらに増殖するのを防止した。ｃ）単離された脾臓細胞の再刺激：脾臓細胞は各々の場合、脾臓細胞中のＴ細胞のための刺激細胞として機能する
Ｌ１Δ_C−発現Ｂ６細胞と一緒に５日間培養された。

【００８２】３．抗原提示細胞によるＴ細胞の再刺激２ｘ１０⁴のマウス抗原提示細胞（Ｃ３またはＢ１６Ｆ１０）を３７℃で一夜
、異なった濃度のＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 ＣＶＬＰとインキュベートし
た。その後。特異的ＨＰＶ１６Ｌ１ペプチドに特異的である２ｘ１０⁵のマウ
スＣＤ８−陽性Ｔ細胞（実施例２参照）を加え、混合物は１０ＩＵのＩＬ２／ｍ
ｌ存在下、３７℃で５時間培養した。細胞は１μＬのゴルジプラグ存在下、３７
℃でさらに培養した。続いて細胞を固定し、浸透可能にし、α−マウスＣＤ３／
ＰＥ、α−マウスＣＤ４／Ｔｒｉｃｏｌｏｒおよびα−マウスインターフェロン
γ−ＦＩＴＣで染色し、洗浄した。細胞の標識化はＦＡＣＳｃａｎカリバー（Ｂ
ｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で調べ、
得られた測定結果はＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェァー（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃ
ｋｉｎｓｏｎ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して分析した。１０¹
以上のインターフェロンγシグナルを与えた細胞が刺激された細胞として定義さ
れた。Ｔ細胞は１０²以上のＣＤ３シグナルを与えていると定義された。結果：図１はＣＶＬＰの量が増加するにつれて抗原提示細胞により再刺激された
Ｔ細胞のパーセントもまた増加したことを示している。ここで使用されたＴ細胞
はＭＨＣＩ−提示ペプチドと限定的に相互作用するので、この実験は、ＣＶＬ
Ｐは抗原提示細胞の偽感染を引き起こさなければならないことを示している。こ
の様式によってのみ、Ｌ１ペプチド特異的Ｔ細胞により細胞表面で認識されるた
めに、ＭＨＣＩ分子がＣＶＬＰペプチドで充填されていることが可能であった
という事実を説明することが可能である。

【００８３】４．ウイルス中和抗体による偽感染の阻害マウスＣ３標的細胞を６つの異なったＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 ＣＶＬ
Ｐ調製物またはＰ１２ペプチドと３７℃で一夜インキュベートした、各々の場合
ａ）抗体なしｂ）２５／Ｃ αＨＰＶ１６Ｌ１抗体（１０μｇ／ｍｌ）と。

【００８４】この抗体はＨＰＶＬ１蛋白質へ結合することにより、ＨＰＶウイルス（または
ウイルス様粒子）の抗原提示細胞感染を防止することが知られている。ＨＰＶ１
６Ｌ１ペプチド特異的マウスＴ細胞を次に加え、混合物は６時間インキュベート
した（ＣＶＬＰ２−６はゴルジプラグ存在下でインキュベートした）。細胞によ
るインターフェロンγ産生が分析された（前の実施例参照）。抗原とインキュベ
ートされているＣ３細胞が陰性対照として働いた（図２参照）。結果：ウイルスＨＰＶ感染の場合のように、ＣＶＬＰはウイルス中和抗体により
抗原提示細胞内への挿入を妨げられた。しかしながら、抗体の添加は個々のペプ
チドの取り込みには何の影響も与えなかった。

【００８５】５．ＨＰＶ１６Ｌ１Ｅ７ＣＶＬＰによるヒトＰＢＭＣの刺激ＰＢＭＣ（４ｘ１０⁶）を異なった濃度のＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 Ｃ
ＶＬＰおよびまた１０ＩＵのＩＬ２／ｍｌおよび０．５μｇの抗ヒトＣＤ２８／
ｍｌを含んでいる１００μＬの培地中、３７℃で一夜インキュベートした。次の
日、１μｌのゴルジプラグを加えた。細胞は３７℃でさらに５時間インキュベー
トした。細胞を固定し、浸透可能にし、抗ヒトＣＤ３／ＰＥで染色し、抗ヒトＣ
Ｄ４／および抗ヒトインターフェロンγ／ＦＩＴＣで着色した。細胞の標識はＢ
ｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＦＡＣＳｃａｎカリバーで調べ、測定結果は
Ｃｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェァーで分析した（前の実施例参照）。結果：ＣＶＬＰの濃度が増加するにつれ、細胞質にインターフェロンγを蓄積し
たＴ細胞の比率が直線的に増加した（図３ＡおよびＢ参照）。この増加は結果と
してＴ細胞がＣＶＬＰにより刺激されたことを明らかにしている。

【００８６】６．異なった抗原によるＣＶＬＰ−刺激ＰＢＭＣの再刺激週毎に１μｇのＣＶＬＰ／ｍｌおよび１０⁵の抗原提示ＰＢＭＣを加え、ヒト
ＰＢＭＣ（４ｘ１０⁵）をＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 ＣＶＬＰで、３７℃
にて３週間刺激し、採取した。細胞は次に、１００μｌの培地中３７℃にて、１
０ＩＵのＩＬ２／ｍｌおよび０．５μｇの抗ヒトＣＤ２８／ｍｌ存在下、１０μ
ｇの以下の異なった抗原／ｍｌで再刺激したａ）Ｅ７ペプチドｂ）ＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 ＣＶＬＰｃ）インフルエンザペプチドｄ）フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）。１時間後、細胞を固定し、浸透可能にし、抗ヒトＣＤ３／ＰＥ、α−ヒトＣＤ４
／Ｃｙｃｈｒｏｍｅおよびα−ヒトインターフェロンγ／ＦＩＴＣで染色した。
細胞の標識はＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＦＡＣＳｃａｎカリバーで調
べ、測定結果はＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェァーで分析した（前の実施例参照
）。結果：Ｅ７ペプチドまたはインフルエンザペプチドによる再刺激と比較してＣＶ
ＬＰにより３倍以上のＴ細胞が再刺激された（図４参照）。予期されるように、
非特異的刺激剤としてのフィトヘマグルチニンはほとんどのＴ細胞を刺激した。
従って、ＣＶＬＰによる３週間インキュベーションの結果として、いくつかのヒ
トＰＢＭＣがＣＶＬＰにより特別に再刺激可能になった。

【００８７】７．異なった抗原提示細胞によるＣＶＬＰ−刺激Ｔ細胞の再刺激週毎に１μｇのＣＶＬＰ／ｍｌおよび１０⁵の照射ＰＢＭＣを加え、ヒトＰＢ
ＭＣ（４ｘ１０⁵）をＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 ＣＶＬＰで、３７℃にて
８週間刺激し、採取した。続いて、１００μｌの培地中３７℃にて、１０ＩＵの
ＩＬ２／ｍｌおよび０．５μｇの抗ヒトＣＤ２８／ｍｌ存在下、１０μｇの以下
の異なった抗原／ｍｌで再刺激した：ａ）ＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 ＣＶＬＰインキュベートＰＢＭＣで一夜、
ｂ）ＨＰＶ１６Ｌ１９３−１０１ペプチドインキュベートＰＢＭＣで一夜。
１時間後、１μｌのゴルジプラグを加えた。細胞は３７℃でさらに５時間インキ
ュベートした。その後細胞を固定し、浸透可能にし、抗ヒトＣＤ３／ＰＥ、α−
ヒトＣＤ４／Ｃｙｃｈｒｏｍｅおよびα−ヒトインターフェロンγ／ＦＩＴＣで
染色した。細胞の標識はＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＦＡＣＳｃａｎカ
リバーで調べ、測定結果はＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェァーで分析した（前の
実施例参照）。結果：図５は、両方のＣＶＬＰ−インキュベートＰＢＭＣはＣＶＬＰ−刺激Ｔ細
胞の再刺激を引き起こしたが、対照ペプチドでインキュベートされたＰＢＭＣは
このことを引き起こさないことを示している。従って、特異的に再刺激可能であ
るＴ細胞が、ＣＶＬＰによるヒトＴ細胞の８週間のインキュベーションの結果と
して形成された。さらに、このことから、ヒト抗原提示細胞はＣＶＬＰにより偽
感染され、それゆえにＣＶＬＰ−特異的Ｔ細胞により認識されたことが結論でき
る。

【００８８】８．Ｅ７−特異的細胞障害性Ｔ細胞によるＣＶＬＰ−インキュベート細胞の溶解ＲＭＡ細胞を⁵¹Ｃｒ存在下、ＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-60 ＣＶＬＰまたはＬ１−ＶＬＰと３７℃で１時間インキュベートした。

【００８９】ＲＭＡ−Ｅ７細胞は同様に⁵¹Ｃｒ存在下、抗原添加なしで３７℃で１時間イン
キュベートした。続いて、Ｅ７特異的細胞障害性Ｔ細胞（Ｃ５７ＢＬ／６マウス
（Ｈ２^b））（実施例２参照）を、標的細胞（ＲＭＡ細胞）に対して種々の比で
添加した。標的細胞の溶解に付随する⁵¹Ｃｒの放出が、βカウンターで測定され
、完全に溶解した細胞へ関係付けられた。

【００９０】図６ａＡは、ＣＶＬＰ−インキュベート細胞およびＥ７を発現する細胞がＴ細
胞により有効に溶解されているが、抗原なしでインキュベートされたＲＭＡ細胞
は溶解されていないことを示している。

【００９１】図６Ｂは、ＣＶＬＰと対照的に、ＲＭＡ細胞とＬ１−ＶＬＰとインキュベート
すると、細胞の効果的な溶解が生じないことを示している。結果：従って、Ｅ７は、抗原提示ＲＭＡ細胞の溶解を導く、細胞障害性Ｔ細胞株
の特異的刺激の原因である。これに関連し、Ｅ７が安定な発現により細胞内で発
生されたか、または偽感染により細胞内へＣＶＬＰにより導入されたか否かは重
要ではない。

【００９２】９．前樹状細胞の活性化一方で、３ｘ１０⁵ＪＡＷＳＩＩ細胞がＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 Ｃ
ＶＬＰの量を増加させて２日間インキュベートした。細胞は、最初に１μｇのＭ
ＨＣＩＡ^b抗体／ｍｌと、次に１μｇのＦＩＴＣ−結合抗マウス抗体／ｍｌと
インキュベートすることにより、ＭＨＣクラスＩＩ分子を発現しているか否かを
見るために試験した。最後に、細胞の染色はＦＡＣＳｃａｎカリバーで調べ、測
定結果はＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェァーを使用して分析した。

【００９３】他方で、ＪＡＷＳＩＩ細胞を前のようにＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ７_1-55 Ｃ
ＶＬＰの量を増加させて３時間のみインキュベートした。これらの細胞はそれら
がＣＶＬＰを結合したか否かを見るために試験された。このためには、細胞を最
初にＦＩＴＣ−結合２５／Ｃ α−ＨＰＶＣ１６Ｌ１抗体で染色した。細胞の染
色はＦＡＣＳｃａｎカリバーで調べ、測定結果はＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェ
ァーを使用して分析した。

【００９４】細胞へのＣＶＬＰの結合は、ＪＡＷＳＩＩ細胞がインキュベートされたＣＶ
ＬＰの濃度の増加とともに増加し、および細胞はＭＨＣクラスＩＩ分子を発現す
るように活性化された。

【００９５】さらに、ＪＡＷＳＩＩ細胞を前に記載したように、ＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C*Ｅ
７_1-55 ＣＶＬＰおよび／またはマウス血清を含んでいる種々の混合物とインキ
ュベートした。以下のものがこれに関連して加えられた：８０または１０μｇのＣＶＬＰ、溶液からＣＶＬＰを効率よく除去するが、不純物のほとんどはフィルターを通
ることを可能にすることが知られているＺｅｆａ膜を通して濾過された８０また
は１０μｇのＣＶＬＰを含んでいる溶液（枯渇混合物）、前記ＣＶＬＰで免疫したマウスから得られたマウス血清の１／２０希釈液の１
０μｌ、および１０μｌの前記マウス血清と５分間、前インキュベートされている１０μｇの
ＣＶＬＰ。

【００９６】細胞は、最初に１μｇのＭＨＣＩＡ^b抗体／ｍｌと、次に１μｇのＦＩＴＣ
−結合抗マウス抗体／ｍｌとインキュベートすることにより、ＭＨＣクラスＩＩ
分子を発現しているか否かを見るために、上のように試験した。最後に、細胞の
染色はＦＡＣＳｃａｎカリバーで調べ、測定結果はＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウ
ェァーを使用して分析した。

【００９７】図８は、混合物中のＣＶＬＰの枯渇およびＣＶＬＰ−特異的マウス血清での前
インキュベーションの両方がＭＨＣクラスＩＩ発現の活性化を妨げたことを示し
ており、この観察された活性化はＣＶＬＰにより特異的に惹起され、ＣＶＬＰ調
製試料中の潜在的夾雑物によるものではないことを意味している。

【００９８】１０．インビボにおけるＴ細胞活性化のための試験細胞株としての前樹状細胞各々場合において、３ｘ１０⁵のＲＭＡ細胞またはＪＡＷＳＩＩ細胞を、実
施例９で説明したように、異なった調製試料から得られたＨＰＶ１６Ｌ１Δ_C* Ｅ７_1-55 ＣＶＬＰの濃度を増加させて、３時間インキュベートした。細胞は再
び、それらが結合ＣＶＬＰを持っているか否かを見るために試験された。このた
めには、細胞を１μｇのＦＩＴＣ−結合２５／Ｃ α−ＨＰＶＣ１６Ｌ１抗体／
ｍｌで染色し、細胞の染色はＦＡＣＳｃａｎカリバーで調べ、測定結果はＣｅｌ
ｌｑｕｅｓｔソフトウェァーを使用して分析した。

【００９９】図９は、ＣＶＬＰのバッチ１−３はＲＭＡ細胞に結合することができるが、同
一濃度でバッチ３結合は幾分弱いことを示している。一方、バッチ１および３の
ＣＶＬＰのみがＪＡＷＳＩＩ細胞に結合し、バッチ２中のＣＶＬＰは明瞭な増
加を示さず、１００μｇのＣＶＬＰ／ｍｌの最高濃度でさえも５０％結合を達成
しなかった。従って、細胞へのＣＶＬＰの結合はＣＶＬＰ調製試料および細胞型
で変化した。

【０１００】ＣＶＬＰ結合の観察された変化性が、インビボでの細胞障害性Ｔ細胞応答を誘
導する能力と相関しているか否かを試験するため、以下の実験が実施された：各々の場合において、Ｃ５７ＢＬ６マウスにバッチ１から３までの１０または
１μｇのＣＶＬＰが接種された。２週間後、マウスに２回目の同一注射で追加免
疫を行ったさらに２週間後、動物を殺し、脾臓および血清が得られた。血清のす
べてがＣＶＬＰに対する抗体を含んでいた（データは示されていない）。Ｔ細胞
が脾臓から単離され、ナイロンウールを通して精製された（ＣｕｒｒｅｎｔＰ
ｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｒｙ、前記参照，ページ７．７．２
から７．７．３）。

【０１０１】Ｔ細胞は１０μｇのマウス細胞障害性Ｐ１２ペプチド／ｍｌで５日間刺激した
。続いて、Ｔ細胞は１００μｌの培地中３７℃にて、１０ＩＵのＩＬ２／ｍｌ存
在下、さらに１０μｇのＰ１２ペプチドで再刺激した。緩衝液で免疫したマウス
から得られたＴ細胞が陰性対照として用いられた。１時間後、１μｌのモネンシ
ン（３００μＭ）を加えた。細胞は３７℃でさらに５時間インキュベートした。
次に細胞を固定し、浸透可能にし、各々の場合に１μｇ／ｍｌのα−マウスＣＤ
４／Ｃｙｃｈｒｏｍｅおよびα−マウスＣＤ８／ＰＥおよびα−マウスインター
フェロンγ／ＦＩＴＣ抗体で染色した。細胞の標識はＦＡＣＳｃａｎカリバーで
調べ、および測定結果はＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェァーを使用して分析した
。

【０１０２】図１０は、バッチ２からのＣＶＬＰを接種されているマウスは、Ｐ１２ペプチ
ドに反応性である細胞障害性Ｔ細胞を発生しなかったが、一方、数匹のマウスへ
バッチ１および３からのＣＶＬＰの接種は反応性Ｔ細胞を誘導できた。これらの
インビボデータから得られた洞察、即ち、バッチ２中のＣＶＬＰは細胞障害性Ｔ
細胞発生に適していないことは、ＪＡＷＳＩＩ細胞を使用したＣＶＬＰ−結合
研究から得られたインビトロデータからすでに明らかであったが、一方、ＲＭＡ
細胞はそのような予測を可能にしなかった。従って、ＪＡＷＳＩＩ細胞のよう
な前樹状細胞はインビボでのＣＶＬＰによるＴ細胞の活性化を予測するために特
に適している。

【０１０３】

【配列表】

SEQUENCE LISTING <110> MediGene Aktiengesellschaft <120> Test system for the in-vitro detection of an antigen-specific i mmune response, a process for producing it, and its use as a dia gnostic agent <150> DE 199 25 234.3 <151> 06-01-1999 <160> 4 <170> Microsoft Word 97 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Human papilloma virus type 16 <400> 1 Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 9 1 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Human papilloma virus type 16 <400> 2 Ala Gly Val Asp Asn Arg Glu Cys Ile 9 1 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Influenza virus type A <400> 3 Ala Ser Asn Glu Asn Met Glu Thr Met 9 1 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Human papilloma virus type 16 <400> 4 Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile 9 1

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は量を増加させたＣＶＬＰで前もってインキュベートされて
いる二つのマウス抗原提示細胞株（Ｃ３およびＢ１６Ｆ１０）によるマウスＨＰ
Ｖ１６Ｌ１−特異的Ｔ細胞の再刺激のグラフ的分析を示している。ＣＶＬＰの濃
度の増加が刺激されたＴ細胞のパーセントに対してプロットされており、それは
インターフェロンγ産生により検出された。

【図２】図２は、ウイルス−中和抗体不在下および存在下、異なったＣＶ
ＬＰ調製試料で前もってインキュベートされているマウスＣ３細胞によるマウス
ＨＰＶ１６Ｌ１ペプチド−特異的Ｔ細胞の再刺激のグラフ的分析を示している。

【図３】図３Ａは異なった濃度のＣＶＬＰ（０−１０μｇ／ｍｌ）でのヒ
トＰＢＭＣ刺激後の、５つのＦＡＣＳｃａｎ実験の分析を示しており、ここでヒ
トインターフェロンγに対して陽性である細胞は上向きに示されている。図３Ｂは図３Ａのグラフ分析であり、ＣＶＬＰの濃度は刺激された細胞のパー
セントに対してプロットされている。刺激された細胞はヒトインターフェロンγ
の検出により決定された。

【図４】図４はＰＢＭＣを前もってＣＶＬＰで刺激した後の、異なった抗
原によるヒトＰＢＭＣの再刺激のグラフ分析を示している。

【図５】図５は、Ｔ細胞を前もってＣＶＬＰで刺激した後の、種々の抗原
提示細胞によるヒトＴ細胞の再刺激に続く、３つのＦＡＣＳｃａｎ実験の分析を
示している。Ｔ細胞に特異的であるＣＤ３の含量が各々の場合で左から右へプロ
ットされており、一方、活性化細胞に特異的であるヒトインターフェロンγの含
量が下から上へとプロットされている。

【図６】図６ＡはＥ７−特異的細胞障害性細胞株による種々のマウス抗原
提示ＲＭＡ細胞の特異的溶解のグラフ分析を示している。この実験は正常ＲＭＡ
、Ｅ７を発現するＲＭＡ細胞、または前もってＬ１Ｅ７_1-60−ＣＶＬＰとインキ
ュベートされているＲＭＡが使用された。標的細胞に対するエフェクター細胞の
比が特異的に溶解した細胞のパーセントに対してプロットされている。図６ＢはＥ７−特異的細胞障害性Ｔ細胞株による、種々のマウス抗原提示ＲＭ
Ａ細胞の特異的溶解のグラフ的分析を示している。この実験はＬ１Ｅ７_1-60−Ｃ
ＶＬＰまたはＥ７部分を持たないＬ１−ＶＬＰで前もってインキュベートされて
いるＲＭＡ細胞が使用された。

【図７】ＣＶＬＰ量を増加させて（左から右にプロットされている）、Ｊ
ＡＷＳＩＩ細胞とインキュベーションした後のＦＡＣＳｃａｎ実験の分析を示
している。一方、ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現は、細胞表面上のＭＨＣクラスＩ
Ｉ分子の検出するための特異的抗体を用いて測定された。これらの値は左側のＹ
軸上の相対的蛍光単位としてプロットされている。他方、細胞に対するＣＶＬＰ
の結合は細胞表面上のＨＰＶ１６Ｌ１エピトープを検出するためのＬ１−特異的
抗体を使用することにより測定された。これらの値は、５％＋／−１％結合細胞
と決定されている、ＣＶＬＰを持たない陰性対照と比較した％結合細胞として示
されている。

【図８】図８はＪＡＷＳＩＩ細胞と示された量のＣＶＬＰおよび／また
はＣＶＬＰ−接種マウスからの血清をインキュベートした後のＦＡＣＳｃａｎ実
験の分析を示している。“Ｄｅｐｌ”はＪＡＷＳＩＩ細胞へ加える前における
、インキュベーション混合物からのＣＶＬＰの枯渇を意味している。ＣＶＬＰ＋
血清混合物において、ＣＶＬＰはＪＡＷＳＩＩ細胞へ加える前に血清と前もっ
てインキュベートされている。ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現は、細胞表面上のＭ
ＨＣクラスＩＩ分子を検出する特異的抗体を使用することにより測定された。値
はＹ軸上の相対的蛍光単位としてプロットされている。

【図９】図９はＲＭＡ細胞（左図）またはＪＡＷＳＩＩ細胞（右図）と
ＣＶＬＰ量を増加させて（左から右）インキュベーションした後の、ＦＡＣＳｃ
ａｎ実験の分析を示している。細胞へのＣＶＬＰの結合は、細胞表面上のＨＰＶ
１６Ｌ１エピトープを検出するためのＬ１−特異的抗体を使用することにより
測定された。値は、５％＋／−結合細胞と定義された、ＣＶＬＰを持たない陰性
対照と比較した％結合細胞として示されている。

【図１０】図１０は異なったバッチからのＣＶＬＰの異なった量で接種さ
れている異なったマウスからのＴ細胞で実施されたＦＡＣＳｃａｎ実験の分析を
示している。Ｔ細胞は既知の細胞障害性ＨＰＶ１６Ｌ１エピトープで刺激され
、その後、実施例に記載した条件下、同一のペプチドで再刺激した；ＣＤ８−陽
性およびインターフェロンγ−陽性細胞の相対比を決定するため、ＦＡＣＳ実験
においては特異的抗体が使用された。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】抗原特異的免疫応答、特に細胞性免疫応答のインビトロ検出
のための試験システムであって、ａ）少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少
なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも
一つのＣＶＬＰ、ならびに少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安
定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび
／または少なくとも一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの抗
原提示標的細胞、特にＢ細胞、マクロファージ、前樹状細胞、樹状細胞、胚細胞
および／または線維芽細胞と、ｂ）免疫系のエフェクター細胞、特にＢ細胞、ＮＫ細胞、好適にはＴ細胞、特
に好適な様式では細胞障害性Ｔ細胞またはＴヘルパー細胞とを含む試験システム。
【請求項２】抗原特異的免疫応答、特に細胞性免疫応答のインビトロ検出
のための試験システムであって、該試験システムは少なくともａ）一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一
つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶ
ＬＰ、ならびに少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソ
メア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少
なくとも一つのＣＶＬＰとインキュベートされた少なくとも一つの前樹状細胞お
よび／または一つのＣＤ１６−陽性細胞と、ｂ）前樹状細胞および／またはＣＤ１６−陽性細胞への安定キャプソメア、キ
ャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰの結合が測定されることとを含む。
【請求項３】細胞が哺乳類細胞、特にヒトまたはマウス細胞であることで
特徴付けられる請求項１または２に記載の試験システム。
【請求項４】キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよ
び／またはＣＶＬＰが一つまたはそれ以上の乳頭腫ウイルスからの少なくとも一
つのＬ１蛋白質、または少なくとも一つのＬ１蛋白質および少なくとも一つの乳
頭腫ウイルスＬ２蛋白質、特にヒト、ウシおよび／またはワタオウサギ乳頭腫ウ
イルスからのＬ１蛋白質またはＬ１およびＬ２蛋白質を含んでいることで特徴付
けられる請求項１〜３のいずれかに記載の試験システム。
【請求項５】キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシドおよび／また
はＣＶＬＰが一つまたはそれ以上の乳頭腫ウイルスからのＬ１蛋白質部分および
Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分から成る少なくとも一つのＬ１融合蛋白質を
含んでいることで特徴付けられる請求項４に記載の試験システム。
【請求項６】Ｌ１蛋白質部分が天然に存在するＬ１蛋白質であることで特
徴付けられる請求項４または５に記載の試験システム。
【請求項７】Ｌ１蛋白質部分が欠失および／または突然変異されているこ
とで特徴付けられる請求項４または５に記載の試験システム。
【請求項８】Ｌ１蛋白質部分のＣ末端から少なくとも約３５までのアミノ
酸、好適には少なくとも約２５から約３５まで、特に少なくとも約３２から約３
４までのアミノ酸が欠失されていることで特徴付けられる請求項７に記載の試験
システム。
【請求項９】Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分が天然に存在する蛋白質
であることで特徴付けられる請求項４〜８のいずれかに記載の試験システム。
【請求項１０】Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分が欠失および／または
突然変異されていることで特徴付けられる請求項４〜８のいずれかに記載の試験
システム。
【請求項１１】Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分が細菌またはウイルス
蛋白質、好適には乳頭腫ウイルス蛋白質から誘導される、特にヒト乳頭腫ウイル
スから誘導されることで特徴付けられる請求項９または１０に記載の試験システ
ム。
【請求項１２】乳頭腫ウイルス蛋白質がＥ蛋白質、特にＥ６またはＥ７蛋
白質であることで特徴付けられる請求項１１に記載の試験システム。
【請求項１３】Ｅ７蛋白質のＣ末端から少なくとも約５５アミノ酸、好適
には少なくとも約５から約５５まで、特に少なくとも約３８から約５５までのア
ミノ酸が欠失されていることで特徴付けられる請求項１２に記載の試験システム
。
【請求項１４】Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分が自己免疫抗原、特に
サイログロブリン、ミエリンまたは透明帯糖蛋白質３（ＺＰ３）、または腫瘍抗
原、特にメラノーマ、卵巣癌または乳癌抗原から誘導されることで特徴付けられ
る請求項９または１０に記載の試験システム。
【請求項１５】キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰお
よび／またはＣＶＬＰとインビトロでインキュベーション後、該キャプソメア、
安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰからの蛋白質お
よび／または蛋白質断片を含んでいる、および好適には提示することを特徴とす
る細胞。
【請求項１６】キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰお
よび／またはＣＶＬＰが一つまたはそれ以上の乳頭腫ウイルスから誘導された少
なくとも一つのＬ１蛋白質、または少なくとも一つのＬ１蛋白質、および少なく
とも一つの乳頭腫ウイルスＬ２蛋白質を含んでいることを特徴とする請求項１５
に記載の細胞。
【請求項１７】キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、および／
またはＣＶＬＰが、一つまたはそれ以上の乳頭腫ウイルスから誘導されたＬ１蛋
白質部分およびＬ１蛋白質と異種である蛋白質部分から成る少なくとも一つのＬ
１融合蛋白質を含んでいることで特徴付けられる請求項１６または１７に記載の
細胞。
【請求項１８】Ｌ１蛋白質部分が天然に存在するＬ１蛋白質であることで
特徴付けられる請求項１６または１７に記載の細胞。
【請求項１９】Ｌ１蛋白質部分が欠失および／または突然変異されている
ことで特徴付けられる請求項１６または１７に記載の細胞。
【請求項２０】Ｌ１蛋白質部分のＣ末端から少なくとも約３５までのアミ
ノ酸、好適には少なくとも約２５から約３５まで、特に少なくとも約３２から約
３４までのアミノ酸が欠失されていることで特徴付けられる請求項１９に記載の
細胞。
【請求項２１】Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分が天然に存在する蛋白
質であることで特徴付けられる請求項１６〜２０のいずれかに記載の細胞。
【請求項２２】Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分が欠失および／または
突然変異されている蛋白質であることで特徴付けられる請求項１６〜２０のいず
れかに記載の細胞。
【請求項２３】Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分が、細菌またはウイル
ス蛋白質、好適には乳頭腫ウイルス蛋白質から誘導される、特にヒト乳頭腫ウイ
ルスから誘導されることで特徴付けられる請求項２１または２２に記載の細胞。
【請求項２４】乳頭腫ウイルス蛋白質がＥ蛋白質、特にＥ６またはＥ７蛋
白質であることで特徴付けられる請求項２３に記載の細胞。
【請求項２５】Ｅ７蛋白質のＣ末端から少なくとも約５５アミノ酸、好適
には少なくとも約５から約５５まで、特に少なくとも約３８から約５５までのア
ミノ酸が欠失されていることで特徴付けられる請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】Ｌ１蛋白質と異種である蛋白質部分が自己免疫抗原、特に
サイログロブリン、ミエリンまたはＺＰ３、または腫瘍抗原、特にメラノーマ、
卵巣癌または乳癌抗原から誘導されることで特徴付けられる請求項２１または２
２に記載の細胞。
【請求項２７】細胞が抗原提示細胞、特にＢ細胞、マクロファージ、前樹
状細胞、樹状細胞、胚細胞または線維芽細胞であることで特徴付けられる請求項
１５〜２６のいずれかに記載の細胞。
【請求項２８】標的細胞が、インビトロで少なくとも一つのキャプソメア
、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくと
も一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰとインキュベートされ
ることで特徴付けられる請求項１５〜２７のいずれかに記載の標的細胞を製造す
る方法。
【請求項２９】少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キ
ャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／ま
たは少なくとも一つのＣＶＬＰが組換え的に製造され、および前樹状細胞および
／またはＣＤ１６−陽性細胞とインキュベートされることで特徴付けられる請求
項１〜１４のいずれかに記載の試験システムを製作するための方法。
【請求項３０】少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キ
ャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／ま
たは少なくとも一つのＣＶＬＰが組換え的に製造され、および標的細胞が請求項
２８に従って製造され、およびそこでエフェクター細胞は免疫細胞株および／ま
たは培養初代免疫細胞、好適にはマウスまたはヒト免疫細胞および／または培養
初代免疫細胞であることで特徴付けられる請求項１〜１４のいずれかに記載の試
験システムを製作するための方法。
【請求項３１】キャプソメア、安定キャプソメア、キャプシド、ＶＬＰお
よび／またはＣＶＬＰが、大腸菌のような細菌、Ｓ．セレビジエ（ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ）のような酵母、特にスポドプテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅ
ｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞またはトリコプルシアニ（ｔｒｉｃｈｏｐ
ｌｕｓｉａｎｉ）細胞のような昆虫細胞、ＣＯＳ細胞またはヒーラー細胞のよ
うな哺乳類細胞中で製造されることで特徴付けられる請求項１〜１４のいずれか
に記載の試験システムを製作するための方法。
【請求項３２】以下の工程から成る、少なくとも一つのキャプソメア、少
なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一
つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／または請求項１
４〜２６のいずれかに記載の少なくとも一つの細胞による、免疫系エフェクター
細胞活性化のインビトロ検出のための方法であって：ａ）請求項１〜１４のいずれかに記載の試験システムを使用し；ｂ）エフェクター細胞の可能な活性化を決定する各工程を含む方法。
【請求項３３】前記工程ａ）に先だって以下の追加の工程ａ’）を含むこ
とで特徴付けられる請求項３２に記載の方法：ａ’）請求項１または３に記載の試験システムのエフェクター細胞と少なくと
も一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つの
キャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰ、請求項１〜１４
のいずれかに記載の少なくとも一つの試験システムの標的細胞、および／または
請求項１４〜２６のいずれかに記載の少なくとも一つの細胞を少なくとも約８週
間、特に少なくとも約３週間共培養し、その後工程ａ）が続く方法。
【請求項３４】少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キ
ャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／ま
たは少なくとも一つのＣＶＬＰおよび一つの樹状細胞および／または請求項１５
〜２７のいずれかに記載の一つのＣＤ１６−陽性細胞による、免疫系エフェクタ
ー細胞活性化のインビトロ検出のための方法：ａ）請求項１〜１４のいずれかに記載の試験システムを使用し；ｂ）樹状細胞および／またはＣＤ１６−陽性細胞への安定キャプソメア、キャ
プシド、ＶＬＰおよび／またはＣＶＬＰの結合を決定する各工程を含む方法。
【請求項３５】少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キ
ャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／ま
たは少なくとも一つのＣＶＬＰまたは請求項１４〜２６のいずれかに記載の少な
くとも一つの細胞を含む、予防的および／または治療的ワクチンバッチの品質を
管理するために使用されることを特徴とする請求項３２〜３４のいずれかに記載
の方法。
【請求項３６】免疫応答、特に細胞性免疫応答を誘導するエピトープ、ペ
プチドまたは蛋白質断片を同定するために使用されることを特徴とする請求項３
２〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キ
ャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／ま
たは少なくとも一つのＣＶＬＰ、および／または請求項１５〜２７のいずれかに
記載の少なくとも一つの細胞による、免疫系エフェクター細胞活性化のインビト
ロ検出のための方法であって：Ｉ）免疫系のエフェクター細胞を含む試料を入手および調製し、および続いて
これらの細胞を培養し、ＩＩ）少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、
少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくと
も一つのＣＶＬＰ、および／または請求項１５〜２７のいずれかに記載の少なく
とも一つの細胞を加え、ＩＩＩ）エフェクター細胞の可能な活性化を決定する各工程を含む方法。
【請求項３８】工程Ｉ）の後に、以下の追加の工程Ｉ’）を含むことを特
徴とする請求項３７に記載の方法：Ｉ’）エフェクター細胞と、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つ
の安定キャプソメア、少なくとも一つのキャプシド、少なくとも一つのＶＬＰお
よび／またはＣＶＬＰ、および／または請求項１５〜２７のいずれかに記載の少
なくとも一つの細胞を少なくとも約８週間、特に少なくとも約３週間共培養し、
その後工程ＩＩ）を続ける前記方法。
【請求項３９】病原体、特に検出することが困難である病原体に関して、
生物体の免疫状態をモニターするために使用されることを特徴とする請求項３７
または３８に記載の方法。
【請求項４０】ワクチン接種をモニターするために使用されることを特徴
とする請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４１】特定の病原体に対する免疫性を媒介するＨＬＡハプロタイ
プを同定するために使用されることを特徴とする請求項３７または３８に記載の
方法。
【請求項４２】異なった特定の自己免疫抗原に関する自己免疫疾患を区別
および断定するために使用されることを特徴とする請求項３７または３８に記載
の方法。
【請求項４３】異なった特定の腫瘍抗原に関する腫瘍型を区別するために
使用されることを特徴とする請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４４】高スループット系において、エフェクター細胞が少なくと
も一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定キャプソメア、少なくとも一つの
キャプシド、少なくとも一つのＶＬＰおよび／または少なくとも一つのＣＶＬＰ
により活性化されることを特徴とする請求項３２〜４３のいずれかに記載の方法
。
【請求項４５】免疫応答を誘導または検出するための、請求項１〜１４の
いずれかに記載の少なくとも一つの試験システムおよび／または請求項１５〜２
６のいずれかに記載の一つの細胞の使用。
【請求項４６】請求項１〜１４のいずれかに記載の少なくとも一つの試験
システムおよび／または請求項１５〜２６のいずれかに記載の一つの細胞、およ
び適切な場合、薬学的に受容可能な担体物質を含む診断薬。
【請求項４７】請求項１〜１４のいずれかに記載の少なくとも一つの試験
システムおよび／または請求項１５〜２６のいずれかに記載の一つの細胞が溶液
中に存在し、固体マトリックスへ結合されているおよび／または加えられた補助
剤を含んでいることを特徴とする請求項４３に記載の診断薬。