JP2003171278A - 新規なアポトーシス誘導剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明の目的は、種々のガン細胞株に対し
て、より低濃度でアポトーシス誘導活性を示し、且つよ
り低濃度で細胞毒性を示す、新規で且つ合成しやすいア
ポトーシス誘導物質を提供することにある。 【解決手段】 本発明は、基本骨格として、下記一般式
［１］ 【化１】 で示される２環性コア構造を有する、例えば、細胞接着
制御活性をもつ天然物の一種であるハリクロリンの合成
中間体等からなる、アポトーシス誘導物質に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なアポトーシ
ス誘導剤に関する。詳しくは、細胞接着制御活性をもつ
天然物の一種であるハリクロリンの合成中間体等からな
る、新規なアポトーシス誘導剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】アポトーシスとは、生物が発生の進行や
恒常性の維持のために、自ら積極的に細胞死を誘導し
て、不要な細胞を除去する生理機構である。アポトーシ
ス過程に異常が起こると、本来死ぬべき細胞（ガン化し
た細胞、免疫担当細胞或いはウイルス感染細胞等）が生
き残り、ガン、自己免疫疾患、ウイルス性疾患等を助長
する。一方神経細胞などの生理的細胞死が亢進すると神
経変性疾患などが引き起こされる。従ってアポトーシス
を誘導する物質は、抗がん剤、自己免疫疾患治療剤、抗
ウィルス剤などとしての応用が期待される。またアポト
ーシスの抑制物質は、神経変性疾患治療薬としての応用
が期待される。最近ではアポトーシスを誘導する細胞表
面受容体Ｆａｓ抗原、アポトーシス誘導に必須のプロテ
アーゼ（カスパーゼ）、アポトーシスを阻害するガン遺
伝子ｂｃｌ−２などが明らかにされている。

【０００３】アポトーシス誘導能をもつ既知の低分子化
合物としては、例えばイリノテカン（irinotecan ：cam
ptothecin-11）等のカンプトテシン（camptothecin）誘
導体がある。即ち、ＤＮＡトポイソメラーゼ Ｉ（ＤＮ
Ａ topoisomerase Ｉ）は、ＤＮＡの複製過程で、一本
鎖ＤＮＡにニック（傷）をつけ、ねじれたＤＮＡ鎖をほ
どいた後、再結合させる活性をもつ酵素であるが、中国
原産の喜樹に含まれるカンプトテシン誘導体の一種であ
るイリノテカンは、このＤＮＡトポイソメラーゼ Ｉに
結合してＤＮＡとの複合体を安定化させることにより、
ニックの入ったＤＮＡ鎖の再結合を阻害することにより
その損傷を引き起こす。一方、ｐ５３は転写因子の一種
であり、放射線や紫外線照射、ＤＮＡの損傷などの要因
によりその分解が抑制され、細胞内に蓄積する。蓄積し
たｐ５３は以下の３つの経路によりアポトーシスを誘導
する。 １）転写活性化因子（transactivation）として、アポ
トーシス誘導因子の遺伝子群の発現を促進する。 ２）転写抑制因子（transrepression）として、アポト
ーシス抑制因子の遺伝子群の発現を抑制する。 ３）ｐ５３が直接機能分子として他のタンパク質に作用
し、アポトーシスを誘導する。 イリノテカンは、このｐ５３を介して、ＤＮＡ複製が亢
進しているガン細胞にアポトーシスを誘導するため、乳
ガンや消化器がんに対して抗ガン作用を示すが、骨髄毒
性や下痢などの副作用も強いため臨床応用に制限がある
［Cancer Chemother. Pharmacol. (1993) 32, 103-11
2］。

【０００４】また、イノスタマイシンは、放線菌Strept
omyces sp. MH816-AF15 からcytidine 5'-diphosphate
1,2-diacyl-sn-glycerol(CDP-DG)−inositol transfera
seの阻害剤として単離された抗生物質であるが、本物質
は種々のガン細胞株に対してアポトーシスを惹起する。
しかしながら、この物質はカスパーゼ３の活性化の引き
金になるミトコンドリアからのcytochrome c の放出を
誘導する。本物質に関しては、未だ前臨床段階にあり、
臨床応用のためには作用機構の解析が更に必要である
［Jpn J Antibiot. 2001 Mar;54(3):117-125；Jpn J Ca
ncerRes. 1998 Mar;89(3):315-322．］。

【０００５】更に、サイトトリエニンＡは、放線菌Stre
ptomyces sp. から単離された化合物で、急性前骨髄球
白血病細胞（HL-60）にアポトーシスを誘導する。その
作用機構としては、カスパーゼ３を介したｐ３６−myel
in basic protein kinase活性化が必要であることが示
されている。この化合物についても未だ基礎研究段階に
ある［J Antibiot (Tokyo). 1997 Apr;50(4):370-37
2.］。

【０００６】一方、海綿（Halichondria okadai Kadot
a）から単離されたアルカロイドであるハリクロリン（H
alichlorine）は、細胞間の接着に関わる分子の一種で
あるVascular cell adhesion molecule （ＶＣＡＭ−
１）のヒト血管内皮細胞における発現を阻害するという
薬理作用を有している。このＶＣＡＭ−１は、白血球な
どの血球細胞やある種のガン細胞との接着を介して、炎
症、動脈硬化又はガン細胞の転移の進行に深く関わって
いる。従って、ハリクロリンは抗炎症剤、抗動脈硬化薬
及びがん転移抑制薬の候補物質として期待されている。
しかしながら、ハリクロリンは天然には微量しか存在し
ないため、化学合成による大量調製が望まれており、様
々な有機合成法の開発が進められている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、種々
のガン細胞株に対して、より低濃度でアポトーシス誘導
活性を示し、且つより低濃度で細胞毒性を示す、新規で
且つ合成しやすいアポトーシス誘導剤を提供することに
ある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗炎症
剤、抗動脈硬化薬及びがん転移抑制薬等の候補物質とし
て期待されているハリクロリンの作用機構を解明するた
めに、生理活性を担うと予想されるコア部分構造をもつ
合成中間体の薬理活性について鋭意研究の途上、ハリク
ロリンのコア部分構造をもつ各種合成中間体の中からア
ポトーシス誘導能を持つ新規化合物を見出し本発明を完
成するに到った。

【０００９】即ち、本発明は、基本骨格として、下記一
般式［１］

【化１３】 で示される２環性コア構造を有する化合物を含んでなる
アポトーシス誘導剤に関する。

【００１０】また、本発明は、一般式［２'］

【化１４】 ［式中、Ｒ_０ ^１は、水素原子又はＣＨ_２ＯＲ^３を表し
（但し、Ｒ^３は、水素原子、アルキル基、アリール基、
アラルキル基又は置換シリル基を表す。）、Ｒ^２は、水
素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリイ
ソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
基、トリエチルシリル基、トリメチルシリル基、アルキ
ル基、アリール基又はアラルキル基を表し、ＸはＯ又は
Ｈ，Ｈを表す。］で示される化合物に関する。

【００１１】更に、本発明は、抗炎症剤、抗ガン剤、自
己免疫疾患治療剤又は抗ウィルス剤である、基本骨格と
して上記一般式［１］で示される２環性コア構造を有す
る化合物を含んでなるアポトーシス誘導剤に関する。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明のアポトーシス誘導剤に係
る、基本骨格として、上記一般式［１］で示される２環
性コア構造を有する化合物としては、例えば、細胞接着
制御活性をもつ天然物の一種であるハリクロリンの合成
中間体等が挙げられ、中でも、ハリクロリンの化学構造
式の１４位に相当する位置に水酸基又は保護された水酸
基を有する化合物が好ましく、保護された水酸基を有す
る化合物がより好ましい。

【００１３】本発明のアポトーシス誘導剤に係る、基本
骨格として、一般式［１］で示される２環性コア構造を
有する化合物としては、例えば下記一般式［２］

【化１５】 ［式中、Ｒ^１は、水素原子、ＣＨ_２ＯＲ^３又はＣＯ_２Ｒ
^３を表し（但し、Ｒ^３は、水素原子、アルキル基、アリ
ール基、アラルキル基又は置換シリル基を表す。）、Ｒ
^２は、水素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル
基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメ
チルシリル基、トリエチルシリル基、トリメチルシリル
基、アルキル基、アリール基又はアラルキル基を表し、
ＸはＯ又はＨ，Ｈを表す。］で示される化合物が挙げら
れる。

【００１４】同じく、基本骨格として、一般式［１］で
示される２環性コア構造を有する化合物としては、例え
ば下記一般式［３］

【化１６】 ［式中、Ｒ^２は、水素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニ
ルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブ
チルジメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリメチ
ルシリル基、アルキル基、アリール基又はアラルキル基
を表し、Ｒ^４は、ＣＯＯＨ、ＣＯ_２Ｒ^１４（但し、Ｒ
^１４は、アルキル基、アリール基又はアラルキル基を表
す。）又はＣＮを表す。］で示される化合物が挙げられ
る。

【００１５】同じく、基本骨格として、一般式［１］で
示される２環性コア構造を有する化合物としては、例え
ば下記一般式［４］

【化１７】 ［式中、Ｒ^２は、水素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニ
ルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブ
チルジメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリメチ
ルシリル基、アルキル基、アリール基又はアラルキル基
を表し、Ｒ^５は、ＣＨ_２ＯＨ又はＣＯ_２Ｒ^１５（但し、
Ｒ^１５は、アルキル基、アリール基又はアラルキル基を
表す。）を表し、Ｒ^６は、水素原子、アルキル基、アリ
ール基、アラルキル基又はＲ^７ＣＯ−を表す（但し、Ｒ
^７は、水素原子、アルキル基、アリール基又はアラルキ
ル基を表す。）。また、Ｒ^５とＲ^６とが一緒になって−
Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−となっていてもよい。］で示される化合
物が挙げられる。

【００１６】上記一般式［２］で示される化合物の内、
Ｒ^１が、水素原子又はＣＨ_２ＯＲ^３で表される化合物、
即ち、下記一般式［２'］

【化１８】 ［式中、Ｒ_０ ^１は、水素原子又はＣＨ_２ＯＲ^３を表し
（但し、Ｒ^３は、水素原子、アルキル基、アリール基、
アラルキル基又は置換シリル基を表す。）、Ｒ^２は、水
素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリイ
ソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
基、トリエチルシリル基、トリメチルシリル基、アルキ
ル基、アリール基又はアラルキル基を表し、ＸはＯ又は
Ｈ，Ｈを表す。］で示される化合物は新規物質である。

【００１７】上記一般式［２］、［２'］、［３］及び
［４］において、Ｒ^１及びＲ_０ ^１の定義の中のＲ^３、Ｒ
^２、Ｒ^４の定義の中のＲ^１４、Ｒ^５の定義の中の
Ｒ^１５、Ｒ ^６、Ｒ^６の定義の中のＲ^７で示されるアルキ
ル基としては、例えば、炭素数が１〜２０、好ましくは
１〜１０、より好ましくは１〜６の直鎖状、分枝状又は
環状の低級アルキル基が挙げられ、より具体的には、例
えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル
基、ブチル基、イソブチル基、第二級ブチル基、第三級
ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、シクロプロピル
基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられ
る。同じく、アリール基としては、例えば、炭素数６〜
３０、好ましくは６〜２０、より好ましくは６〜１４の
単環、多環又は縮合環式の芳香族炭化水素基が挙げら
れ、より具体的には、例えば、フェニル基、トリル基、
キシリル基、ナフチル基、メチルナフチル基、アントリ
ル基、フェナントリル基、ビフェニル基等が挙げられ
る。また、アラルキル基としては、例えば、炭素数７〜
３０、好ましくは７〜２０、より好ましくは７〜１５の
単環、多環又は縮合環式のアラルキル基が挙げられ、よ
り具体的には、例えば、ベンジル基、フェネチル基、ナ
フチルメチル基、ナフチルエチル基等が挙げられる。

【００１８】一般式［２］及び［２'］において、Ｒ^１
及びＲ_０ ^１の定義の中のＲ^３で示される置換シリル基と
しては、シリル基の水素原子の１〜３個がアルキル基、
アリール基等に置き換わったものが挙げられ、中でもト
リ置換体が好ましく、より具体的には、トリメチルシリ
ル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル
基、トリフェニルシリル基等が挙げられる。

【００１９】上記一般式［２］又は［２'］で示される
化合物の具体例としては、例えば下式［５］、［６］及
び［７］で示される化合物が挙げられる。

【化１９】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル基を表す。）

【化２０】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル基を表す。）

【化２１】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル基を表す。）

【００２０】また、上記一般式［３］で示される化合物
の具体例としては、例えば下式［８］で示される化合物
が挙げられる。

【化２２】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル基を表す。）

【００２１】更に、上記一般式［４］で示される化合物
の具体例としては、例えば下式［９］、［１０］及び
［１１］で示される化合物が挙げられる。

【化２３】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル基を表す。）

【化２４】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル基を表す。）

【化２５】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル基を表す。）

【００２２】本発明に係る化合物の中の代表的なものに
ついて、その合成法を以下に反応スキームで示す。な
お、下記反応スキーム中の略語は以下の通りである。 ＨＭＰＡ：ヘキサメチルホスホルアミド ＮＣＳ：Ｎ−クロロスクシンイミド ＤＢＵ：１,８−ジアザビシクロ［５.４.０］−７−ウ
ンデセン ＴＢＤＰＳＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルク
ロライド ４−ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン ＭｓＣｌ：メタンスルホニルクロライド ＬＤＡ：リチウム ジイソプロピルアミド ＭＣＰＢＡ：ｍ−クロロ過安息香酸

【００２３】

【化２６】

【化２７】

【化２８】

【化２９】

【００２４】その他の本発明に係る化合物の合成法に関
しては、例えば、TETRAHEDRON LETTERS 41(2000)929-93
2等の文献に記載されているので、これらの文献に記載
されている合成法に準じて所望の化合物を適宜合成すれ
ばよい。

【００２５】アポトーシス誘導剤は、他にも知られてい
るが、本発明に係る化合物群は、それ自体にアポトーシ
ス誘導活性と細胞接着制御活性の二重機能を持ちうるも
のであり、抗炎症剤、抗癌剤、自己免疫性疾患治療薬、
抗ウィルス剤等の医薬品素材として、非常に興味あるも
のである。また、本発明に係る化合物群は、これまでの
アポトーシス誘導剤とは違った骨格構造であり、合成し
易く、低濃度で効果があるなどの可能性を有している。

【００２６】本発明に係る化合物群の薬理作用の評価に
ついては、例えば下記の方法により測定を行うことが出
来る（なお、詳細については後述する実施例の記載参
照。）。 １．細胞毒性 細胞の生存を、培養細胞が示す乳酸脱水素酵素（Lactat
e dehydrogenase; ＬＤＨ）活性を定量する（ＸＴＴ
法）ことにより評価（低下しているほど死細胞が多
い）。 ２．アポトーシス誘導活性 アポトーシスで特異的に起こるクロマチン凝集を、ＤＮ
Ａ結合蛍光試薬（ヘキスト３３２５８）を用いた細胞染
色により評価 （アポトーシスを起こした細胞内ではクロマチン凝集に
伴う顆粒状の蛍光が特異的に観察される）。 ３．ＶＣＡＭ−１発現誘導阻害活性 予め合成中間体存在下でヒトアストロサイトーマ株（Ｃ
ＣＦ−ＳＴＴＧ１）を前処理しておき、その後ＴＮＦ−
αを添加した際に起こるＶＣＡＭ−１ ｍＲＮＡの発現
誘導に対する効果をＲＴ−ＰＣＲ法・ゲル電気泳動法に
より解析する。ＶＣＡＭ−１ ｍＲＮＡに特異的なｃＤ
ＮＡフラグメントの増幅を、コントロールとしてのβ−
アクチンに対する割合で評価する。

【００２７】

【実施例】以下、合成例、実施例により本発明をより具
体的に説明するが、本発明はこれら合成例、実施例によ
り何ら限定されるものではない。

【００２８】合成例１ （４ＲＳ，７ＲＳ，９ａＳＲ，
２'ＲＳ）−２'−［［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル）オキシ］メチル］−７−ヒドロキシメチル−６−
オキソ−１，２，３，６，７，８，９，９ａ−オクタヒ
ドロ−４Ｈ−キノリジン−４−スピロ−１'−シクロペ
ンタン（化合物［５］）の合成

【化３０】 窒素気流下、化合物［１５］（４７３.６ｍｇ，０.８８
７ｍｍｏｌ）のＥｔ _２Ｏ（９.５ｍＬ）溶液にＭｅＯＨ
（０.０６３ｍＬ）とＬｉＢＨ_４（３３.８ｍｇ，１５５
ｍｍｏｌ）を加え、３０分間還流した後、ＭｅＯＨをゆ
っくり滴下した。溶媒を留去した後、ＡｃＯＥｔを加
え、これを蒸留水及び飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した
後、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を留去し、得られ
た油状物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，３０
v/v％ＡｃＯＥｔ−ヘキサン）に付すと化合物［５］３
８４.４ｍｇが無色油状物として得られた（収率８６
％）。^１ Ｈ−ＮＭＲ(300MHz, CDC1_３) δ:1.03 (s, 4.5H, -Si
^ｔBu), 1.04 (s, 4.5H,-Si^ｔBu),1.11-2.20 (m，18.5
H), 2.82 (m, 0.5H, -OCH_２CH-), 3.38-3.62 (m,5H, HO
CH _２ ,-SiOCH _２ −,-NCH), 735-7.41(ｍ, 6H, ArH), 7.60
-7.68 (ｍ, 4H, ArH)。 ＩＲ(neat): 3421, 3070, 2938, 2857, 1741 cm^−１。 ＭＳ(EI): m/ｚ５０５（Ｍ^＋）。 ＨＲＭＳ(EI): m/ｚ calcd for Ｃ_３１Ｈ_４３Ｏ_３ＮＳ
ｉ：５０５.３０１２；found：５０５.２９８７。

【００２９】合成例２ （４ＲＳ，７ＲＳ，９ａＳＲ，
２'ＲＳ）−２'−［［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
リル）オキシ］メチル］−７−ヒドロキシメチル−１，
２，３，６，７，８，９，９ａ−デカヒドロキノリジン
−４−スピロ−１'−シクロペンタン（化合物［６］）
の合成

【化３1】 アルゴン気流下、化合物［５］（２９７.５ｍｇ，０.５
８８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（８ｍＬ）溶液にボラン−
ＴＨＦ錯体（１.８ｍＬ，１.７６ｍｍｏｌ）を加え室温
で４時間撹拌した。反応混合物にＭｅＯＨをゆっくり加
えしばらく撹拌した後、溶媒を留去し、得られた油状物
にＭｅＯＨを加え再びこれを留去した。この操作を３回
繰り返して得られた油状物をカラムクロマトグラフィー
（Ａｌ_２Ｏ_３，２v/v％ＡｃＯＥｔ−ヘキサン）に付す
と化合物［６］１３０.０ｍｇが無色油状物として得ら
れた（収率４５％）。^１ Ｈ−ＮＭＲ(300MHz, CDC1_３) δ:1.06 (s, 9H, -Si^ｔ
Bu), 1.18-2.17 (m, 19H), 2.26(d, 1H, J=11.2Hz), 2.
59(d, 1H, J=11.0Hz),3.47 (m, 1H, -NCH), 3.54-4.23
(m, 4H, CH_２-), 7.36-7.43(m, 6H, ArH), 7.60-7.71
(m, 4H, ArH)。ＩＲ(neat): 3419, 3070, 3047，2929,
2857, 2857cm^−１。 ＭＳ(EI): m/ｚ４９１（Ｍ^＋）。 ＨＲＭＳ(EI): m/ｚ calcd for Ｃ_３１Ｈ_４３Ｏ_２ＮＳ
ｉ：４９１.３２２０； found：４９１.３２３７。

【００３０】合成例３ （４ＲＳ，９ａＳＲ，２'Ｒ
Ｓ）−２'−［［（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリ
ル）オキシ］メチル］−６−オキソ−１，２，３，６，
７，８，９，９ａ−オクタヒドロ−４Ｈ−キノリジン−
４−スピロ−１'−シクロペンタン（化合物［７］）の
合成

【化３２】 アルゴン気流下、ジイソプロピルアミン（０.５５ｍ
Ｌ，３.９２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液
に０℃でｎ−ＢｕＬｉ（３.７４ｍｍｏｌ）のヘキサン
溶液（１.５５Ｍ，２.４ｍＬ）を加えて、同温にて１５
分間撹拌した後、ヨウ素体（１.１３ｇ，１.８７ｍｍｏ
ｌ）の無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液を−７８℃で加え
た。これを同温にて１５分間撹拌した後、飽和ＮＨ_４Ｃ
ｌ水溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を
留去して得られた油状物をカラムクロマトグラフィー
（ＳｉＯ_２，１０v/v％ＡｃＯＥｔ−ヘキサン）に付す
と化合物［７］０.８５ｇが無色油状物として得られた
（収率９６％）。^１ Ｈ−ＮＭＲ(400MHz, CDC1_３) δ:1.04 (s, 9H, -Si^ｔ
Bu), 1.90-1.24 (ｍ, 15H),2.06-2.22 (ｍ, 4H, -CH
_２ -), 3.55-3.58 (ｍ, 3H, -SiOCH_２-, -NCH, 7.33-7.4
1 (ｍ,6H, ArH), 7.66-7.68 (ｍ, 4H, ArH)。^１３ Ｃ−ＮＭＲ(75MHz, DMS0, 80℃) δ:17.1(t), 18.0
(t), 18.4 (S), 20.7(t),26.3 (q), 28.4 (t),29.5
(t), 30.2 (t), 33.1 (t), 33.8 (t), 35.0 (t), 50.6
(d), 53.0 (d), 64.6 (t), 67.2 (s), 127.2 (d),129.1
(d), 134.6 (d), 170.5 (s)。 ＩＲ(neat): 3070, 3047, 2951, 2857, 1742 cm^−１。 ＭＳ(El): m/ｚ４７５（Ｍ^＋）。 ＨＲＭＳ(El): m/ｚ calcd for Ｃ_３０Ｈ_４１Ｎ０_２Ｓ
ｉ：４７５.２９０７； found：４７５.２９２６。

【００３１】合成例４ （４ＲＳ，９ａＳＲ，２’Ｒ
Ｓ）−２’−［［（tert−ブチルジフェニルシリル）オ
キシ］メチル］−７−メトキシカルボニル−６−オキソ
−１，２，３，６，７，８，９，９ａ−オクタヒドロ−
４Ｈ−キノリジン−４−スピロ−１’−シクロペンタン
（化合物［１５］）の合成

【化３３】 （１）アセトアミド体の合成 アルゴン気流下、化合物［１０］（２.１５ｇ，４.５０
ｍｍｏｌ）の無水Ｅｔ _２Ｏ（４０ｍＬ）溶液に−７８℃
でＢＦ_３・ＯＥｔ_２（０.６３ｍＬ，５.００ｍｍｏｌ）
を加え、同温にて反応混合物を３０分間撹拌した後、Ｍ
ｅＬｉ（２２.１ｍＬ，２２.５ｍｍｏｌ）を加え更に１
時間撹拌した。反応混合物に飽和ＮＨ _４Ｃｌ水溶液を加
えＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３水
溶液と飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した後、無水ＭｇＳＯ
_４で乾燥し、溶媒を留去して得られた油状物をカラムク
ロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，３０v/v％ＡｃＯＥｔ−
ヘキサン）に付すとアセトアミド体１.１３ｇが白色固
体として得られた（収率５１％）。

【００３２】（２）ヨウ素体の合成 窒素気流下、（１）で得られたアセトアミド体（６００
ｍｇ，１.２２ｍｍｏｌ）の無水ベンゼン（２０ｍＬ）
溶液にイミダゾール（２０８ｍｇ，３.０５ｍｍｏ
ｌ），トリフェニルホスフィン（６３７ｍｇ，２４３ｍ
ｍｏｌ）及びヨウ素（６１７ｍｇ，２.４３ｍｍｏｌ）
を室温にて順次加えた。同温にて反応混合物を３０分間
撹拌した後、飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液を加え更に３０
分間撹拌し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を飽和Ｎａ
Ｃｌ水溶液で洗浄した後、無水ＭｇＳＯ _４で乾燥し、溶
媒を留去して得られた油状物をカラムクロマトグラフィ
ー（ＳｉＯ_２，１０−５０v/v％ＡｃＯＥｔ−ヘキサ
ン）に付すとヨウ素体６９９ｍｇが無色油状物として得
られた（収率９５％）。

【００３３】（３）化合物［１５］の合成 アルゴン気流下、ＬＤＡの０.５Ｍ ＴＨＦ溶液（０.６２
ｍＬ，０.３１０ｍｍｏｌ）に−７８℃で、（２）で得
られたヨウ素体（３７.６ｍｇ，０.０６２ｍｍｏｌ）の
ＴＨＦ（１ｍｌ）溶液を滴下し、混合物を同温にて３０
分間撹拌した後、クロロギ酸メチル（７.２μＬ，０.０
９３ｍｍｏｌ）を加え更に３０分間撹拌した。反応混合
物に飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液を加えＡｃＯＥｔで抽出し
た。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液と飽和ＮａＣｌ水
溶液で洗浄した後、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を留
去して得られた油状物をプレパラテイブＴＬＣ（ＳｉＯ
_２，３０v/v％ＡｃＯＥｔ−ヘキサン）に付すと化合物
［１５］２３.７ｍｇが無色油状物として得られた（収
率７１％）。

【００３４】合成例５ （４ＲＳ，９ａＳＲ，２’Ｒ
Ｓ）−７−シアノ−２’−ヒドロキシメチル−６−オキ
ソ−１，２，３，６，９，９ａ−ヘキサヒドロ−４Ｈ−
キノリジン−４−スピロ−１’−シクロペンタン（化合
物［１４］）の合成

【化３４】 窒素気流下、TETRAHEDRON LETTERS 41(2000)929-932に
記載の方法により合成した上記シリルエーテル体（１７
９ｍｇ，０.０３６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液
に、室温にてＨＦ・ピリジン（６０−７０％，３滴）を
加え、混合物を同温にて３日間撹拌した。反応混合物に
ＣＨ_２Ｃｌ_２と飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液を加え１０分間
撹拌した後、有機層を無水ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒
を留去して得られた油状物をプレパラテイブＴＬＣ（Ｓ
ｉＯ_２，ＡｃＯＥｔ）に付すと化合物［１４］５.９ｍ
ｇが無色油状物として得られた（収率６３％）。

【００３５】合成例６ （３ａＲＳ，７ＳＲ，１０ａＲ
Ｓ）−７−（２−ヒドロキシエチル）−オクタヒドロ−
５−オキサ−６ａ−アザシクロペンタ［ｄ］ナフタレン
−６−オン（化合物［１６］）の合成

【化３５】 窒素気流下、化合物［１０］（３５０ｍｇ，０.７３ｍｍ
ｏｌ）のＴＨＦ（ｌ０ｍＬ）溶液に室温にてフッ化テト
ラ−ｎ−ブチルアンモニウムの１.０Ｍ ＴＨＦ溶液
（１.１０ｍＬ，１.１０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５
０℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した後、残さに蒸
留水を加えＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を飽和ＮａＣ
ｌ水溶液で洗浄した後、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒
を留去して得られた油状物をカラムクロマトグラフィー
（ＳｉＯ_２，５０v/v％ＡｃＯＥｔ−ヘキサン）に付す
と化合物［１６］１３３ｍｇが無色油状物として得られ
た（収率７６％）。

【００３６】実施例１ 細胞毒性試験（ＸＴＴ法） ９６ウェルマイクロプレートに、１ウェル当たり５×１
０^３個／２００μｌの培地密度で播いたヒト急性単球型
白血病細胞株（ＴＨＰ−１）に、各化合物（５〜１００
μＭ）を添加して４時間処理した後、テトラゾリウム塩
ＸＴＴと電子架橋試薬を加えて更に４時間インキュベー
トした。この間にＸＴＴから生細胞により変換されて生
じる水溶性フォルマザン色素の発色度を分光光度計（Ｏ
Ｄ５５０ｎｍ／ＯＤ６９０ｎｍ）で測定することによ
り、細胞の生存率を評価した。結果を表１及び表２に示
す。

【００３７】

【表１】

【００３８】

【表２】

【００３９】表１及び表２から明らかなように、本発明
に係る化合物のうち、化合物［５］、［６］、［７］、
［８］、［９］、［１０］及び［１１］が、ヒト急性単
球型白血病細胞株（ＴＨＰ−１）に対して顕著に細胞毒
性を示した。その薬理効果は［８］＞［９］＞［１１］
＞［１０］＝［６］＞［５］＞［７］の順で高く、５０
％の細胞に対して毒性を発現させるのに必要な用量（Ｅ
Ｄ５０％）は、各々５、９、２５、３２、３２、６３及
び７３μＭであった。その他の化合物のＥＤ５０％は＞
１００μＭであった。

【００４０】実施例２ クロマチン凝集に基づくアポト
ーシス誘導試験（ヘキスト染色法） ＴＨＰ−１、ヒトがん細胞株（ＨｅＬａ）、初代培養ヒ
ト皮膚線維芽細胞株を、予め各化合物（５〜１００μ
Ｍ）で４時間処理した後、ＤＮＡ結合蛍光試薬であるヘ
キスト３３２５８（０.１μｇ／ｍｌ）で更に２時間培
養して、蛍光顕微鏡でクロマチン凝集を起こし、核内に
強い蛍光を発する細胞の割合を調べ、アポトーシスの誘
導を定性的に評価した。結果を表１、表２、図１、図２
及び図３に示す。

【００４１】表１、表２及び図１、図２から明らかなよ
うに、アポトーシスで特異的に起こるクロマチン凝集を
顕著に誘導した化合物は、［５］、［６］、［８］、
［９］、［１０］及び［１１］であり、更に５０μＭで
［７］、［１２］、［１３］、［１４］、［１５］及び
［１６］が一部の細胞に対してクロマチン凝集を誘導し
た。また、このうち化合物［８］及び［９］は、５μＭ
の濃度で付着性のヒトがん細胞株（ＨｅＬａ）に対して
顕著にクロマチン凝集を誘導したが、初代培養ヒト皮膚
線維芽細胞株に対してはほとんど惹起しなかった（図
３）。このことから、これら本発明に係る化合物は、比
較的低濃度では正常細胞よりもがん細胞に対して強いア
ポトーシス誘導能を有することが明らかになった。本発
明に係る化合物のうち、細胞毒性あるいはアポトーシス
誘導能を有する化合物は保護基（ＴＢＤＰＳ基）をもつ
ものが多く、またこれらの脱保護誘導体では薬理活性が
低下又は消失していた（表１、表２及び図１、図２）。

【００４２】実施例３ 細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１）
の遺伝子発現の解析 ヒトアストロサイトーマ株（ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１）（１
Ｘ１０^５個）を予め本発明に係る化合物（１μＭ）で４
時間処理した後、ＴＮＦ−α（２００Ｕ／ｍｌ）を更に
作用させた。４時間後に細胞から全ＲＮＡを抽出し、ま
ずオリゴｄＴを用いた逆転写反応によりｃＤＮＡを合成
した。次に細胞接着分子であるＶＣＡＭ−１、また対照
として恒常発現を示すβ−アクチンのそれぞれに対する
特異的なプライマーセットを用いたＰＣＲ法を行った。
増幅された各ＤＮＡフラグメントの相対量を、アガロー
ス電気泳動により分離後、蛍光強度を測定することによ
り、ＴＮＦ−α処理により合成が促進される（誘導され
る）ＶＣＡＭ−１の細胞内ｍＲＮＡの相対量を比較し
た。本発明に係る化合物処理によりＶＣＡＭ−１／β−
アクチン比の変動を調べ、ＶＣＡＭ−１の遺伝子発現に
及ぼす化合物の影響を評価した。結果を図４に示す。

【００４３】但し、図４において、レーン１〜６は以下
の通りである。 １：化合物未処理、ＴＮＦ−α未処理 ２：化合物未処理、ＴＮＦ−α処理（２００Ｕ／ｍｌ） ３：化合物［８］前処理（１μＭ）、ＴＮＦ−α未処理 ４：化合物［８］前処理（１μＭ）、ＴＮＦ−α処理
（２００Ｕ／ｍｌ） ５：化合物［１５］前処理（１μＭ）、ＴＮＦ−α未処
理 ６：化合物［１５］前処理（１μＭ）、ＴＮＦ−α処理
（２００Ｕ／ｍｌ）

【００４４】１）この細胞株、即ちヒトアストロサイト
ーマ株（ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１）ではもともとＶＣＡＭ−
１のｍＲＮＡが発現していることが判る。（レーン１の
上：５３１ｂｐのＶＣＡＭ−１のバンドが検出されてい
る。） ２）この細胞を化合物［８］で処理すると、ＶＣＡＭ−
１のバンド強度の若干の減少が観察された（レーン３の
上）。 ３）更に同様のＶＣＡＭ−１のバンド強度の減少が、化
合物［８］（１μＭ）で処理後、ＴＮＦ−α（２００Ｕ
／ｍｌ）を作用させた場合にも顕著に検出された（レー
ン４の上）。 ４）化合物［１５］（１μＭ）で処理した場合は、ＶＣ
ＡＭ−１のバンド強度の変動は認められなかった（レー
ン５の上）。 ５）化合物［１５］（１μＭ）で処理後、ＴＮＦ−α
（２００Ｕ／ｍｌ）を作用させた場合には、ＶＣＡＭ−
１のバンド強度のわずかな減少が観察された。 ６）β−アクチンのバンド強度については、レーン６の
下のバンド強度のわずかな減少を除き、どの条件におい
ても基本的に変動は認められなかった（レーン１，２，
３，４，５の下）。これらの結果から、少なくとも化合
物［８］（１μＭ）はＶＣＡＭ−１の発現を選択的に抑
制していることが判り、ＴＮＦ−α処理により細胞内で
促進されるＶＣＡＭ−１の発現も阻害していることが判
る。即ち、サイカインの一種であるＴＮＦ−αがヒトア
ストロサイトーマ株（ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１）に作用した
際に、細胞接着分子であるＶＣＡＭ−１遺伝子の発現が
誘導されるが、図４から明らかなように、化合物［８］
は、更に低濃度（１μＭ）で、ＶＣＡＭ−１遺伝子の発
現誘導を抑制した。

【００４５】

【発明の効果】（１）基本骨格として、上記一般式
［１］で示される２環性コア構造をもつ本発明に係る化
合物群は、それ自体に下記の二重機能（Dual function
s）をもつ可能性があり、医薬品素材として非常に興味
深い化合物である。 標的細胞に対しアポトーシス誘導活性をもつ。 標的細胞における細胞接着分子の発現抑制を介した接
着・浸潤阻害活性をもつ。 （２）本発明に係る化合物群が有する作用としては、例
えば、以下の如きものが挙げられる。 機能亢進している免疫担当細胞を、細胞死誘導により
除去するとともに、免疫担当細胞の浸潤能を抑制する。 がん細胞に対し直接アポトーシスを誘導するととも
に、がん細胞の浸潤転移能を間接的に抑制する（がん細
胞の接着相手に対する作用）。 アポトーシス誘導によりウイルス感染細胞を除去する
とともに、感染細胞の体内移行を抑制する。 （３）本発明に係る化合物群の具体的な用途としては、
例えば、上記二重作用を利用して、抗炎症剤、免疫抑制
剤、抗がん剤あるいは抗ウィルス剤としてより有効性の
高い医薬品を開発できる可能性が期待される。また仮に
化合物が二重機能を示さなくても、既知のアポトーシス
誘導機構の異なる薬物や細胞接着阻害物質との併用によ
り、疾患の治療効果を高められる可能性がある。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明に係る化合物によりＴＨＰ−１
株において誘導されるクロマチン凝集の状態を示してい
る。

【図２】図２は、図１と同様に、本発明に係る化合物に
よりＴＨＰ−１株において誘導されるクロマチン凝集の
状態を示している(図１の続き)。

【図３】図３は、本発明に係る化合物により初代培養ヒ
ト皮膚線維芽細胞株及びヒトがん細胞株（ＨｅＬａ）に
おいて誘導されるクロマチン凝集の状態を示している。

【図４】図４は、本発明に係る化合物の、細胞接着分子
（ＶＣＡＭ−１）の発現に対する影響をアガロース電気
泳動により調べた結果を示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｐ 37/02 43/00 １０５ 43/00 １０５ Ｃ０７Ｆ 7/18 Ｃ０７Ｆ 7/18 Ａ // Ｃ０７Ｄ 455/00 Ｃ０７Ｄ 455/00 498/04 498/04 １１２Ｔ Ｆターム(参考） 4C064 AA11 CC01 DD08 EE04 FF01 GG01 4C072 AA01 AA06 BB02 BB06 CC01 CC11 EE06 FF07 GG01 4C086 AA01 AA02 CB09 CB22 DA44 MA04 NA14 ZB07 ZB11 ZB21 ZB26 ZB33 4H049 VN01 VP01 VQ59 VQ60 VQ67 VR23 VR41 VU06 VU07 VU08 VW01

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 基本骨格として、下記一般式［１］ 【化１】 で示される２環性コア構造を有する化合物を含んでなる
   アポトーシス誘導剤。
2. 【請求項２】 ハリクロリンの合成中間体である請求項
   １に記載のアポトーシス誘導剤。
3. 【請求項３】 ハリクロリンの化学構造式の１４位に相
   当する位置に水酸基又は保護された水酸基を有する請求
   項１又は２に記載のアポトーシス誘導剤。
4. 【請求項４】 ハリクロリンの化学構造式の１４位に相
   当する位置に保護された水酸基を有する請求項１又は２
   に記載のアポトーシス誘導剤。
5. 【請求項５】 水酸基の保護基がｔ−ブチルジフェニル
   シリル基（ＴＢＤＰＳ基）である請求項４に記載のアポ
   トーシス誘導剤。
6. 【請求項６】 基本骨格として、一般式［１］で示され
   る２環性コア構造を有する化合物が下記一般式［２］ 【化２】 ［式中、Ｒ^１は、水素原子、ＣＨ_２ＯＲ^３又はＣＯ_２Ｒ
   ^３を表し（但し、Ｒ^３は、水素原子、アルキル基、アリ
   ール基、アラルキル基又は置換シリル基を表す。）、Ｒ
   ^２は、水素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル
   基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメ
   チルシリル基、トリエチルシリル基、トリメチルシリル
   基、アルキル基、アリール基又はアラルキル基を表し、
   ＸはＯ又はＨ，Ｈを表す。］で示される化合物である請
   求項１に記載のアポトーシス誘導剤。
7. 【請求項７】 基本骨格として、一般式［１］で示され
   る２環性コア構造を有する化合物が下記一般式［３］ 【化３】 ［式中、Ｒ^２は、水素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニ
   ルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブ
   チルジメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリメチ
   ルシリル基、アルキル基、アリール基又はアラルキル基
   を表し、Ｒ^４は、ＣＯＯＨ、ＣＯ_２Ｒ^１４（但し、Ｒ
   ^１４は、アルキル基、アリール基又はアラルキル基を表
   す。）又はＣＮを表す。］で示される化合物である請求
   項１に記載のアポトーシス誘導剤。
8. 【請求項８】 基本骨格として、一般式［１］で示され
   る２環性コア構造を有する化合物が下記一般式［４］ 【化４】 ［式中、Ｒ^２は、水素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニ
   ルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブ
   チルジメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリメチ
   ルシリル基、アルキル基、アリール基又はアラルキル基
   を表し、Ｒ^５は、ＣＨ_２ＯＨ又はＣＯ_２Ｒ^１５（但し、
   Ｒ^１５は、アルキル基、アリール基又はアラルキル基を
   表す。）を表し、Ｒ^６は、水素原子、アルキル基、アリ
   ール基、アラルキル基又はＲ^７ＣＯ−を表す（但し、Ｒ
   ^７は、水素原子、アルキル基、アリール基又はアラルキ
   ル基を表す。）。また、Ｒ^５とＲ^６とが一緒になって−
   Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−となっていてもよい。］で示される化合
   物である請求項１に記載のアポトーシス誘導剤。
9. 【請求項９】 一般式［２］で示される化合物が下式
   ［５］ 【化５】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
   リル基を表す。）で示される化合物である請求項６に記
   載のアポトーシス誘導剤。
10. 【請求項１０】 一般式［２］で示される化合物が下式
    ［６］ 【化６】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
    リル基を表す。）で示される化合物である請求項６に記
    載のアポトーシス誘導剤。
11. 【請求項１１】 一般式［２］で示される化合物が下式
    ［７］ 【化７】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
    リル基を表す。）で示される化合物である請求項６に記
    載のアポトーシス誘導剤。
12. 【請求項１２】 一般式［３］で示される化合物が下式
    ［８］ 【化８】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
    リル基を表す。）で示される化合物である請求項７に記
    載のアポトーシス誘導剤。
13. 【請求項１３】 一般式［４］で示される化合物が下式
    ［９］ 【化９】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
    リル基を表す。）で示される化合物である請求項８に記
    載のアポトーシス誘導剤。
14. 【請求項１４】 一般式［４］で示される化合物が下式
    ［１０］ 【化１０】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
    リル基を表す。）で示される化合物である請求項８に記
    載のアポトーシス誘導剤。
15. 【請求項１５】 一般式［４］で示される化合物が下式
    ［１１］ 【化１１】 （式中、ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシ
    リル基を表す。）で示される化合物である請求項８に記
    載のアポトーシス誘導剤。
16. 【請求項１６】 一般式［２'］ 【化１２】 ［式中、Ｒ_０ ^１は、水素原子又はＣＨ_２ＯＲ^３を表し
    （但し、Ｒ^３は、水素原子、アルキル基、アリール基、
    アラルキル基又は置換シリル基を表す。）、Ｒ^２は、水
    素原子、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリイ
    ソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
    基、トリエチルシリル基、トリメチルシリル基、アルキ
    ル基、アリール基又はアラルキル基を表し、ＸはＯ又は
    Ｈ，Ｈを表す。］で示される化合物。
17. 【請求項１７】 アポトーシス誘導剤が抗炎症剤である
    請求項１〜１５の何れかに記載のアポトーシス誘導剤。
18. 【請求項１８】 アポトーシス誘導剤が抗ガン剤である
    請求項１〜１５の何れかに記載のアポトーシス誘導剤。
19. 【請求項１９】 アポトーシス誘導剤が自己免疫疾患治
    療剤である請求項１〜１５の何れかに記載のアポトーシ
    ス誘導剤。
20. 【請求項２０】 アポトーシス誘導剤が抗ウィルス剤で
    ある請求項１〜１５の何れかに記載のアポトーシス誘導
    剤。