JP2003137810A - Ｃｄ−２／ｌｆａ−３相互作用の阻害剤を用いる抗原提示細胞による皮膚障害の予防または治療の方法 - Google Patents
Ｃｄ−２／ｌｆａ−３相互作用の阻害剤を用いる抗原提示細胞による皮膚障害の予防または治療の方法Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 人間を含む哺乳動物における真皮および表皮
におけるＴ細胞活性の増加および異常な抗原提示により
特徴付けられる皮膚の状態を治療するための方法の提
供。 【解決手段】ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を使
用する。皮膚症状は乾癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚
炎、真菌性ポリープ等の皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギ
ー性および刺激性接触皮膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮
性壊疽、白斑、眼球瘢痕性疱瘡および蕁麻疹が含まれ
る。
におけるＴ細胞活性の増加および異常な抗原提示により
特徴付けられる皮膚の状態を治療するための方法の提
供。 【解決手段】ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を使
用する。皮膚症状は乾癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚
炎、真菌性ポリープ等の皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギ
ー性および刺激性接触皮膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮
性壊疽、白斑、眼球瘢痕性疱瘡および蕁麻疹が含まれ
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は人間を含む哺乳動物
における真皮および表皮内のＴ細胞活性の増加および異
常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の状態の治療に
おいてＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を用いる方
法に関する。なお、このような状態として、乾癬、ＵＶ
障害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の皮膚Ｔ細
胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔
蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕状疱瘡お
よび蕁麻疹などが挙げられる。
における真皮および表皮内のＴ細胞活性の増加および異
常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の状態の治療に
おいてＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を用いる方
法に関する。なお、このような状態として、乾癬、ＵＶ
障害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の皮膚Ｔ細
胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔
蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕状疱瘡お
よび蕁麻疹などが挙げられる。
【０００２】
【発明の背景】真皮および表皮内のＴ細胞活性の増加お
よび異常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の障害が
数多くある。このような炎症プロセスの進展に関係する
病態生理学的機構はまだよく理解されていない。しかし
ながら、皮膚の炎症性の応答の発生において皮膚細胞が
重要な関わりをもっていることが明らかになってきてい
る（Ｋｕｐｐｅｒ、「皮膚組織における免疫および炎症
プロセス」（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８６，ｐ
ｐ．１７８３−８９（１９９０）））。
よび異常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の障害が
数多くある。このような炎症プロセスの進展に関係する
病態生理学的機構はまだよく理解されていない。しかし
ながら、皮膚の炎症性の応答の発生において皮膚細胞が
重要な関わりをもっていることが明らかになってきてい
る（Ｋｕｐｐｅｒ、「皮膚組織における免疫および炎症
プロセス」（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８６，ｐ
ｐ．１７８３−８９（１９９０）））。
【０００３】正常な成人の表皮には１−２％のランゲル
ハンス細胞と９８％のケラチン細胞が含まれている。こ
のケラチン細胞とその他の非造血的に派生する細胞が皮
膚内に存在すると、免疫性血流停止や種々の細胞分裂を
引き起こしてＴ細胞の移動や付着分子の発現に影響を及
ぼす。
ハンス細胞と９８％のケラチン細胞が含まれている。こ
のケラチン細胞とその他の非造血的に派生する細胞が皮
膚内に存在すると、免疫性血流停止や種々の細胞分裂を
引き起こしてＴ細胞の移動や付着分子の発現に影響を及
ぼす。
【０００４】抗原提示細胞として、ランゲルハンス細胞
は当該細胞表面上において高濃度のクラスＩＩ（Ｃｌａ
ｓｓ ＩＩ）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）を発現す
る。該ＭＨＣクラスＩＩ分子はエンドサイトーシスされ
た抗原から派生するペプチドを結合し、主にヘルパーＴ
リンパ球により認識される。Ｔ細胞上のＴ細胞受容体は
抗原を当該ＭＨＣによりコードされた細胞表面分子に結
合したペプチドフラグメントとして認識する（Ｓｐｒｉ
ｎｇｅｒ、「免疫システムの付着受容体」（Ｎａｔｕｒ
ｅ，３４６，ｐｐ．４２５−２７（１９９０）））。
は当該細胞表面上において高濃度のクラスＩＩ（Ｃｌａ
ｓｓ ＩＩ）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）を発現す
る。該ＭＨＣクラスＩＩ分子はエンドサイトーシスされ
た抗原から派生するペプチドを結合し、主にヘルパーＴ
リンパ球により認識される。Ｔ細胞上のＴ細胞受容体は
抗原を当該ＭＨＣによりコードされた細胞表面分子に結
合したペプチドフラグメントとして認識する（Ｓｐｒｉ
ｎｇｅｒ、「免疫システムの付着受容体」（Ｎａｔｕｒ
ｅ，３４６，ｐｐ．４２５−２７（１９９０）））。
【０００５】このようなＴ細胞受容体／ＭＨＣ相互作用
に加えて、ランゲルハンス細胞やＴ細胞の表面上で発現
される分子間の相互作用が数多くある。これらの表面分
子はしばしば付着分子と呼ばれ、細胞付着、抗原認識、
Ｔ細胞活性化における相互刺激的伝達およびＴ細胞細胞
毒性のエフェクタの刺激を含む多くの機能に関係する
（「特性における付着分子および炎症性の病気の治療」
（Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ，３３６，ｐｐ．１３５１−５
２（１９９０）））。また、このような細胞付着は免疫
応答の発生におけるＴ細胞増殖の活性化に関与すると思
われる（Ｈｕｇｈｅｓ他、「Ｔ細胞機能のレギュレータ
としての内皮細胞」（Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１１
７，ｐｐ．８５−１０２（１９９０）））。
に加えて、ランゲルハンス細胞やＴ細胞の表面上で発現
される分子間の相互作用が数多くある。これらの表面分
子はしばしば付着分子と呼ばれ、細胞付着、抗原認識、
Ｔ細胞活性化における相互刺激的伝達およびＴ細胞細胞
毒性のエフェクタの刺激を含む多くの機能に関係する
（「特性における付着分子および炎症性の病気の治療」
（Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ，３３６，ｐｐ．１３５１−５
２（１９９０）））。また、このような細胞付着は免疫
応答の発生におけるＴ細胞増殖の活性化に関与すると思
われる（Ｈｕｇｈｅｓ他、「Ｔ細胞機能のレギュレータ
としての内皮細胞」（Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１１
７，ｐｐ．８５−１０２（１９９０）））。
【０００６】また、真皮および表皮におけるＴ細胞活性
および異常な抗原の提示によって種々の皮膚の病状が特
徴付けられている（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚における免疫
調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕ
ｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａ
ｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９，ｐｐ．６９−
８０，ａｔ ｐｐ．７３，７４，７６（１９９
０）））。例えば、接触アレルギー性皮膚炎において
は、皮膚内Ｔ細胞の活性化が観られる。また、アトピー
性皮膚炎の患者から得た皮膚には増加したランゲルハン
ス細胞が含まれていることが知られている（Ｃｏｏｐｅ
ｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ
Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａ
ｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９，ａｔ ｐ．７４（１９９０）））。さら
に、乾癬症の皮膚には、ランゲルハンス細胞と非ランゲ
ルハンス細胞のクラスＩＩＭＨＣ担持抗原提示細胞の両
方から成る抗原提示細胞の増加が観られる（Ｃｏｏｐｅ
ｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ
Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａ
ｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９，ｐｐ．６９−８０，ａｔ ｐ．７５（１９
９０）））。
および異常な抗原の提示によって種々の皮膚の病状が特
徴付けられている（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚における免疫
調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕ
ｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａ
ｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９，ｐｐ．６９−
８０，ａｔ ｐｐ．７３，７４，７６（１９９
０）））。例えば、接触アレルギー性皮膚炎において
は、皮膚内Ｔ細胞の活性化が観られる。また、アトピー
性皮膚炎の患者から得た皮膚には増加したランゲルハン
ス細胞が含まれていることが知られている（Ｃｏｏｐｅ
ｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ
Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａ
ｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９，ａｔ ｐ．７４（１９９０）））。さら
に、乾癬症の皮膚には、ランゲルハンス細胞と非ランゲ
ルハンス細胞のクラスＩＩＭＨＣ担持抗原提示細胞の両
方から成る抗原提示細胞の増加が観られる（Ｃｏｏｐｅ
ｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ
Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａ
ｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９，ｐｐ．６９−８０，ａｔ ｐ．７５（１９
９０）））。
【０００７】紫外線暴露した皮膚はランゲルハンス細胞
の全体的な減少と非ランゲルハンス細胞の抗体提示細胞
集団の表皮内への移動によって特徴付けられ、自己のＴ
細胞を活性化して増殖する（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚にお
ける免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｌｙｍｐｈｏｍ
ａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄ
ｓ．ｖａｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９，ａｔ
ｐｐ．７５−７６（１９９０）））。例えば、人間の
皮膚において、ＵＶ Ｂの最小の紅斑線量を４回照射後
に、ランゲルハンス細胞（構成抗原提示細胞集団）が約
３日間不活性になる（Ｃｏｏｐｅｒ他、「人間の表皮細
胞アロ抗原提示についての紫外線放射の影響：ランゲル
ハンス細胞依存型機能の初期的低下の後、表皮アロ抗原
提示を高めるＴ６−ＤＲ＋細胞が現れる」（Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．，１３４，ｐｐ．１２９−３７（１９８
５）））。この種のＵＶによる損傷を受けた皮膚におい
ては、ＣＤ１ａＤＲ＋ マクロファージ集団（抗原提示
細胞の集団）が全体の表皮細胞集団の０％（正常な皮
膚）から約２−１０％に増加して、Ｔ細胞の増殖を誘発
してアロ抗体にするべく作用する（Ｃｏｏｐｅｒ他、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（同上）、Ｂａａｄｓｇａａｒｄ
他、「インビボで紫外線暴露した人間の表皮細胞はＣＤ
４＋ ＣＤ４５ＲＡ＋サプレッサー−インデュサーＴ細
胞を含むＴサプレッサー細胞経路を活性化する」（Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４５，ｐｐ．２８４５−６１（１
９９０）））。
の全体的な減少と非ランゲルハンス細胞の抗体提示細胞
集団の表皮内への移動によって特徴付けられ、自己のＴ
細胞を活性化して増殖する（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚にお
ける免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｌｙｍｐｈｏｍ
ａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄ
ｓ．ｖａｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９，ａｔ
ｐｐ．７５−７６（１９９０）））。例えば、人間の
皮膚において、ＵＶ Ｂの最小の紅斑線量を４回照射後
に、ランゲルハンス細胞（構成抗原提示細胞集団）が約
３日間不活性になる（Ｃｏｏｐｅｒ他、「人間の表皮細
胞アロ抗原提示についての紫外線放射の影響：ランゲル
ハンス細胞依存型機能の初期的低下の後、表皮アロ抗原
提示を高めるＴ６−ＤＲ＋細胞が現れる」（Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．，１３４，ｐｐ．１２９−３７（１９８
５）））。この種のＵＶによる損傷を受けた皮膚におい
ては、ＣＤ１ａＤＲ＋ マクロファージ集団（抗原提示
細胞の集団）が全体の表皮細胞集団の０％（正常な皮
膚）から約２−１０％に増加して、Ｔ細胞の増殖を誘発
してアロ抗体にするべく作用する（Ｃｏｏｐｅｒ他、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（同上）、Ｂａａｄｓｇａａｒｄ
他、「インビボで紫外線暴露した人間の表皮細胞はＣＤ
４＋ ＣＤ４５ＲＡ＋サプレッサー−インデュサーＴ細
胞を含むＴサプレッサー細胞経路を活性化する」（Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４５，ｐｐ．２８４５−６１（１
９９０）））。
【０００８】また、皮膚のＴ細胞リンパ球は真皮および
表皮におけるＴ細胞の悪性クローナル集団の拡張によっ
て特徴付けられる。この場合、障害のある表皮細胞は増
加したＣＤ１＋ ＤＲ＋抗原提示細胞を含む（Ｃｏｏｐ
ｅｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ
Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍ
ａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９，ａｔ ｐｐ．７６−７７（１９９
０）））。
表皮におけるＴ細胞の悪性クローナル集団の拡張によっ
て特徴付けられる。この場合、障害のある表皮細胞は増
加したＣＤ１＋ ＤＲ＋抗原提示細胞を含む（Ｃｏｏｐ
ｅｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ
Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍ
ａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ Ｖｏｌｔｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９，ａｔ ｐｐ．７６−７７（１９９
０）））。
【０００９】上述の皮膚の状態に対して、現在知られて
いる治療法は十分ではない。例えば、乾癬、苔蘚、蕁麻
疹、アトピー性皮膚炎、ＵＶ障害、膿皮性壊疽、白斑、
眼球瘢痕状疱瘡、円形脱毛症、アレルギー性および刺激
性接触皮膚炎および皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療において
は、ステロイドやシクロスポリンＡが一般に使用されて
いる。加えて、これらの皮膚障害のいくつかについて
は、レチノイド、ＰＵＶＡ、ナイトロジェンマスター
ド、インターフェロン、化学療法、メトトレキセート、
ＵＶ光、抗生物質および抗ヒスタミン薬等による種々の
療法がある（参照：Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ、（Ｄｅｒ
ｍａｔｏｌｏｇｙ ｉｎ ＧｅｎｅｒａｌＭｅｄｉｃｉ
ｎｅ，３ｒｄ Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ（１９
８７）））。
いる治療法は十分ではない。例えば、乾癬、苔蘚、蕁麻
疹、アトピー性皮膚炎、ＵＶ障害、膿皮性壊疽、白斑、
眼球瘢痕状疱瘡、円形脱毛症、アレルギー性および刺激
性接触皮膚炎および皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療において
は、ステロイドやシクロスポリンＡが一般に使用されて
いる。加えて、これらの皮膚障害のいくつかについて
は、レチノイド、ＰＵＶＡ、ナイトロジェンマスター
ド、インターフェロン、化学療法、メトトレキセート、
ＵＶ光、抗生物質および抗ヒスタミン薬等による種々の
療法がある（参照：Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ、（Ｄｅｒ
ｍａｔｏｌｏｇｙ ｉｎ ＧｅｎｅｒａｌＭｅｄｉｃｉ
ｎｅ，３ｒｄ Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ（１９
８７）））。
【００１０】また、これらの療法についての副作用も知
られている。例えば、シクロスポリンＡの場合の最も一
般的に見られる欠陥は免疫抑制による毒性および腎臓毒
や神経毒が挙げられる。ステロイドもクッシング症候群
の誘発を含む副作用が知られている。さらに、上述の他
の治療法のいくつかにおける副作用として、皮膚癌、骨
髄毒および体質性毒性、靭帯の石灰化、肝臓線維症およ
び他の疾患が挙げられる。
られている。例えば、シクロスポリンＡの場合の最も一
般的に見られる欠陥は免疫抑制による毒性および腎臓毒
や神経毒が挙げられる。ステロイドもクッシング症候群
の誘発を含む副作用が知られている。さらに、上述の他
の治療法のいくつかにおける副作用として、皮膚癌、骨
髄毒および体質性毒性、靭帯の石灰化、肝臓線維症およ
び他の疾患が挙げられる。
【００１１】Ｔ細胞は標的細胞や抗原提示細胞と相互作
用して免疫応答における主要な役割を担っている。例え
ば、Ｔ細胞媒介による標的細胞の消滅は、まず、細胞溶
解Ｔ細胞（エフェクター細胞）が標的細胞に付着するこ
とから始まる、多段階のプロセスから成っている。ま
た、ヘルパーＴ細胞は抗原提示細胞への付着によって当
該免疫応答の開始を補助する。
用して免疫応答における主要な役割を担っている。例え
ば、Ｔ細胞媒介による標的細胞の消滅は、まず、細胞溶
解Ｔ細胞（エフェクター細胞）が標的細胞に付着するこ
とから始まる、多段階のプロセスから成っている。ま
た、ヘルパーＴ細胞は抗原提示細胞への付着によって当
該免疫応答の開始を補助する。
【００１２】これらのＴ細胞の標的細胞および抗原提示
細胞との相互作用は、当該Ｔ細胞の表面上の多くの特異
的抗原受容体の一による標的細胞や抗原提示細胞の表面
上の抗原の認識に高度に特異的でありかつこれに依存し
ている。
細胞との相互作用は、当該Ｔ細胞の表面上の多くの特異
的抗原受容体の一による標的細胞や抗原提示細胞の表面
上の抗原の認識に高度に特異的でありかつこれに依存し
ている。
【００１３】また、該Ｔ細胞の他の細胞との受容体−抗
原相互作用も、例えば、抗原−受容体複合体ＣＤ３およ
びＣＤ４、ＬＦＡ−１、ＣＤ８およびＣＤ２等の補助付
着分子を含む種々のＴ細胞表面蛋白質によって容易化さ
れる。さらに、当該相互作用は、上記の標的細胞や抗原
提示細胞の表面上で発現される、ＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ
−１およびＭＨＣ等の補助付着分子によっても容易化さ
れる。例えば、ＬＦＡ−１およびそのカウンター受容体
ＩＣＡＭ−１またはＩＣＡＭ−２並びにＣＤ２およびそ
のカウンター受容体ＬＦＡ−３は細胞付着やＴ細胞活性
化において関係があると考えられている。また、ＬＦＡ
−１／ＩＣＡＭおよびＣＤ２／ＬＦＡ−３の相互作用は
互いに独立していることも知られている。
原相互作用も、例えば、抗原−受容体複合体ＣＤ３およ
びＣＤ４、ＬＦＡ−１、ＣＤ８およびＣＤ２等の補助付
着分子を含む種々のＴ細胞表面蛋白質によって容易化さ
れる。さらに、当該相互作用は、上記の標的細胞や抗原
提示細胞の表面上で発現される、ＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ
−１およびＭＨＣ等の補助付着分子によっても容易化さ
れる。例えば、ＬＦＡ−１およびそのカウンター受容体
ＩＣＡＭ−１またはＩＣＡＭ−２並びにＣＤ２およびそ
のカウンター受容体ＬＦＡ−３は細胞付着やＴ細胞活性
化において関係があると考えられている。また、ＬＦＡ
−１／ＩＣＡＭおよびＣＤ２／ＬＦＡ−３の相互作用は
互いに独立していることも知られている。
【００１４】さらに、Ｔ細胞を休止する際に存在する他
の多くの分子もまた当該Ｔ細胞の付着に関与していると
考えられている。このような物質としては、Ｅ２（ＭＩ
Ｃ２）、ＶＬＡ−４（ＣＤ４９ｄ）、ＣＤ４４（Ｈｅｒ
ｍｅｓ，Ｐｇｐ−１，ＥＣＭＲＩＩＩ）およびＨ１９
（Ｎ４）が挙げられる（参照：Ｍａｋｇｏｂａ他、「Ｃ
Ｄ２−ＬＦＡ−３およびＬＦＡ−１−ＩＣＡＭ経路：Ｔ
細胞認識への関連性」（Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，
１０，ｐｐ．４１７−２２（１９８９）））。
の多くの分子もまた当該Ｔ細胞の付着に関与していると
考えられている。このような物質としては、Ｅ２（ＭＩ
Ｃ２）、ＶＬＡ−４（ＣＤ４９ｄ）、ＣＤ４４（Ｈｅｒ
ｍｅｓ，Ｐｇｐ−１，ＥＣＭＲＩＩＩ）およびＨ１９
（Ｎ４）が挙げられる（参照：Ｍａｋｇｏｂａ他、「Ｃ
Ｄ２−ＬＦＡ−３およびＬＦＡ−１−ＩＣＡＭ経路：Ｔ
細胞認識への関連性」（Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，
１０，ｐｐ．４１７−２２（１９８９）））。
【００１５】Ｔ細胞を活性化する一方法として、抗原特
異性のＴ細胞受容体をマクロファージ等の抗原提示細胞
の表面上のペプチドーＭＨＣ複合体に結合する方法があ
る。Ｔ細胞が活性化すると、２種類の機能的Ｔ細胞、す
なわち、抗体生成性Ｂリンパ球の増殖および熟成を促進
するヘルパー細胞と、標的細胞を溶解するキラー細胞の
増殖と分化が刺激される（Ｂｉｅｒｅｒ他、「ＬＦＡ−
３に対するモノクローナル抗体であるＣＤ２リガンドは
主要組織適合複合体蛋白質を特異的に固定化する」（Ｅ
ｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９，ｐｐ．６６１−６５
（１９８９））、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、「免疫システムの
付着受容体」（Ｎａｔｕｒｅ，３４６，ｐｐ．４２５−
３４（１９９０）））。
異性のＴ細胞受容体をマクロファージ等の抗原提示細胞
の表面上のペプチドーＭＨＣ複合体に結合する方法があ
る。Ｔ細胞が活性化すると、２種類の機能的Ｔ細胞、す
なわち、抗体生成性Ｂリンパ球の増殖および熟成を促進
するヘルパー細胞と、標的細胞を溶解するキラー細胞の
増殖と分化が刺激される（Ｂｉｅｒｅｒ他、「ＬＦＡ−
３に対するモノクローナル抗体であるＣＤ２リガンドは
主要組織適合複合体蛋白質を特異的に固定化する」（Ｅ
ｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９，ｐｐ．６６１−６５
（１９８９））、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、「免疫システムの
付着受容体」（Ｎａｔｕｒｅ，３４６，ｐｐ．４２５−
３４（１９９０）））。
【００１６】Ｔ細胞の活性化については、ＣＤ２とＬＦ
Ａ−３の相互作用はまだよく理解されていないが、最近
の研究では、Ｔ細胞の標的細胞や抗原提示細胞への付着
の媒介において、当該ＣＤ２（Ｔ細胞付着分子）とＬＦ
Ａ−３（標的細胞や抗原提示細胞付着分子）との間には
特異的な相互作用があると示唆されている。このような
細胞間付着はＴ細胞の機能的応答の開始において考えら
れていたことである（Ｄｕｓｔｉｎ他、「精製リンパ球
機能を伴う抗原３はＣＤ２に結合し、Ｔリンパ球の付着
を媒介する」（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６５，ｐｐ．
６７７−９２（１９８７））、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、
「リンパ球機能を伴うＬＦＡ−１、ＣＤ２およびＬＦＡ
−３分子：免疫システムの細胞付着受容体」（Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，ｐｐ．２２３−５２
（１９８７）））。
Ａ−３の相互作用はまだよく理解されていないが、最近
の研究では、Ｔ細胞の標的細胞や抗原提示細胞への付着
の媒介において、当該ＣＤ２（Ｔ細胞付着分子）とＬＦ
Ａ−３（標的細胞や抗原提示細胞付着分子）との間には
特異的な相互作用があると示唆されている。このような
細胞間付着はＴ細胞の機能的応答の開始において考えら
れていたことである（Ｄｕｓｔｉｎ他、「精製リンパ球
機能を伴う抗原３はＣＤ２に結合し、Ｔリンパ球の付着
を媒介する」（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６５，ｐｐ．
６７７−９２（１９８７））、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、
「リンパ球機能を伴うＬＦＡ−１、ＣＤ２およびＬＦＡ
−３分子：免疫システムの細胞付着受容体」（Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，ｐｐ．２２３−５２
（１９８７）））。
【００１７】人間の赤血球を含む広範な細胞の表面上に
見い出されるＬＦＡ−３はＴ細胞の種々の相互作用にお
けるその役割をさらに明らかにするために多大な研究が
おこなわれてきた（参照例：Ｋｒｅｎｓｙ他、「ＬＦＡ
−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３の機能的意義、分布
および構造：ＣＴＬ標的相互作用を伴う細胞表面抗原」
（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１（２），ｐｐ．６１１
−１６（１９８３）、Ｓｈａｗ他、「人間の細胞障害性
Ｔ細胞クローンにより用いられる２種の抗原非依存型付
着経路」（Ｎａｔｕｒｅ，３２３，ｐｐ．２６２−６４
（１９８６）））。これまでに、ＬＦＡ−３の天然の形
態が２種類同定されている。その内の一つの形態（「ト
ランスメンブランＬＦＡ−３」）はトランスメンブラン
疎水性ドメインにより細胞膜内に連結する。このＬＦＡ
−３の形態をコードするｃＤＮＡはクローン化されシー
ケンス化されている（参照例：Ｗａｌｌｎｅｒ他、「リ
ンパ球機能を伴う抗原−３（ＬＦＡ−３）の主構造」
（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６６，ｐｐ．９２３−３２
（１９８７）））。また、当該ＬＦＡ−３の他の形態は
糖脂質を含むフォスファチジルイノシトール（「Ｐ
Ｉ」）に対する共有連結を介して細胞膜に結合する。こ
の後者の形態は「ＰＩ連結ＬＦＡ−３」として示され、
当該ＬＦＡ−３の形態をコードするｃＤＮＡもまたクロ
ーン化されシーケンス化されている（Ｗａｌｌｎｅｒ
他、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９０／０２１８１）。
見い出されるＬＦＡ−３はＴ細胞の種々の相互作用にお
けるその役割をさらに明らかにするために多大な研究が
おこなわれてきた（参照例：Ｋｒｅｎｓｙ他、「ＬＦＡ
−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３の機能的意義、分布
および構造：ＣＴＬ標的相互作用を伴う細胞表面抗原」
（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１（２），ｐｐ．６１１
−１６（１９８３）、Ｓｈａｗ他、「人間の細胞障害性
Ｔ細胞クローンにより用いられる２種の抗原非依存型付
着経路」（Ｎａｔｕｒｅ，３２３，ｐｐ．２６２−６４
（１９８６）））。これまでに、ＬＦＡ−３の天然の形
態が２種類同定されている。その内の一つの形態（「ト
ランスメンブランＬＦＡ−３」）はトランスメンブラン
疎水性ドメインにより細胞膜内に連結する。このＬＦＡ
−３の形態をコードするｃＤＮＡはクローン化されシー
ケンス化されている（参照例：Ｗａｌｌｎｅｒ他、「リ
ンパ球機能を伴う抗原−３（ＬＦＡ−３）の主構造」
（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６６，ｐｐ．９２３−３２
（１９８７）））。また、当該ＬＦＡ−３の他の形態は
糖脂質を含むフォスファチジルイノシトール（「Ｐ
Ｉ」）に対する共有連結を介して細胞膜に結合する。こ
の後者の形態は「ＰＩ連結ＬＦＡ−３」として示され、
当該ＬＦＡ−３の形態をコードするｃＤＮＡもまたクロ
ーン化されシーケンス化されている（Ｗａｌｌｎｅｒ
他、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９０／０２１８１）。
【００１８】人間のＣＤ２（Ｔ１１）分子は９５％以上
のリンパ球および実質的にすべての末梢Ｔリンパ球上に
発現される５０ｋＤ表面糖蛋白質である。特異的なモノ
クローナル抗体を用いる生化学的分析によって、該ＣＤ
２がＴリネージ特異性を有しており、数種の異なるクリ
コシル化形態において該細胞表面上に存在することが示
されている（Ｈｏｗａｒｄ他、「Ｅ−ロゼット形成を阻
止するモノクローナル抗体により定義された人間のＴリ
ンパ球弁別標識」（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２６，ｐ
ｐ．２１１７−２２（１９８１）、Ｂｒｏｗｎ他、（Ｌ
ｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ III，ｅｄ．Ｍｃｍ
ｉｃｈａｅｌ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１１０−１２（１９８７）、Ｓａｙ
ｒｅ他、「Ｔ１１ｃＤＮＡの分子クローニングおよび発
現は人間のＴリンパ球上の受容体類似構造を提示する」
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８
４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）））。
のリンパ球および実質的にすべての末梢Ｔリンパ球上に
発現される５０ｋＤ表面糖蛋白質である。特異的なモノ
クローナル抗体を用いる生化学的分析によって、該ＣＤ
２がＴリネージ特異性を有しており、数種の異なるクリ
コシル化形態において該細胞表面上に存在することが示
されている（Ｈｏｗａｒｄ他、「Ｅ−ロゼット形成を阻
止するモノクローナル抗体により定義された人間のＴリ
ンパ球弁別標識」（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２６，ｐ
ｐ．２１１７−２２（１９８１）、Ｂｒｏｗｎ他、（Ｌ
ｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ III，ｅｄ．Ｍｃｍ
ｉｃｈａｅｌ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１１０−１２（１９８７）、Ｓａｙ
ｒｅ他、「Ｔ１１ｃＤＮＡの分子クローニングおよび発
現は人間のＴリンパ球上の受容体類似構造を提示する」
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８
４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）））。
【００１９】人間のＣＤ２遺伝子の配列は既に報告され
ている（ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆｏ、「高速免疫選択
手法によるＣＤ２抗原、Ｔ細胞赤血球受容体、の分子ク
ローニング」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．３３６５−６９（１９８
７）、Ｓａｙｒｅ他、「Ｔ１１ｃＤＮＡの分子クローニ
ングおよび発現は人間のＴリンパ球上の受容体類似構造
を提示する」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８
７）））。ＣＤ２ｃＤＮＡのクローンにより、２４個の
アミノ酸残基から成る開裂信号ペプチド、１８５個の残
基から成る細胞外セグメント、２５個の残基から成るト
ランスメンブランドメインおよび１１７個の残基から成
る細胞質領域が予見されている（Ｓａｙｒｅ他、（同
上）、Ｓｅｗｅｌｌ他、「人間のＴ−リンパ球表面ＣＤ
２（Ｔ１１）抗原の分子クローニング」（Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８３，ｐｐ．８７
１８−２２（１９８６））、ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆ
ｏ、（同上）、Ｃｌａｙｔｏｎ他、（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．，１７，ｐｐ．１３６７−７０（１９８
７）））。
ている（ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆｏ、「高速免疫選択
手法によるＣＤ２抗原、Ｔ細胞赤血球受容体、の分子ク
ローニング」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．３３６５−６９（１９８
７）、Ｓａｙｒｅ他、「Ｔ１１ｃＤＮＡの分子クローニ
ングおよび発現は人間のＴリンパ球上の受容体類似構造
を提示する」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８
７）））。ＣＤ２ｃＤＮＡのクローンにより、２４個の
アミノ酸残基から成る開裂信号ペプチド、１８５個の残
基から成る細胞外セグメント、２５個の残基から成るト
ランスメンブランドメインおよび１１７個の残基から成
る細胞質領域が予見されている（Ｓａｙｒｅ他、（同
上）、Ｓｅｗｅｌｌ他、「人間のＴ−リンパ球表面ＣＤ
２（Ｔ１１）抗原の分子クローニング」（Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８３，ｐｐ．８７
１８−２２（１９８６））、ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆ
ｏ、（同上）、Ｃｌａｙｔｏｎ他、（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．，１７，ｐｐ．１３６７−７０（１９８
７）））。
【００２０】また、ＬＦＡ−３結合ドメインを有する可
溶性ＣＤ２ポリペプチドが報告されている（ＰＣＴ特許
公報ＷＯ９０／０８１８７）。
溶性ＣＤ２ポリペプチドが報告されている（ＰＣＴ特許
公報ＷＯ９０／０８１８７）。
【００２１】ＴＳ２／１８、Ｔ１１１、Ｔ１１２、Ｔ１
１３等のＣＤ２に対するモノクローナル抗体およびＴＳ
２／９等のＬＦＡ−３に対するモノクローナル抗体もま
た報告されている（参照例：Ｈｕｇｈｅｓ他、「Ｔ−細
胞機能のレギュレータとしての内皮細胞」（Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ，１１７，ｐｐ．８５−１０２
（１９９０））、Ｍｅｕｅｒ、「Ｔ−細胞活性化の別経
路：５０ｋｄＴ１１羊赤血球受容体蛋白質に対する機能
的役割」（Ｃｅｌｌ，３６，ｐｐ．８９７−９０６（１
９８４）））。
１３等のＣＤ２に対するモノクローナル抗体およびＴＳ
２／９等のＬＦＡ−３に対するモノクローナル抗体もま
た報告されている（参照例：Ｈｕｇｈｅｓ他、「Ｔ−細
胞機能のレギュレータとしての内皮細胞」（Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ，１１７，ｐｐ．８５−１０２
（１９９０））、Ｍｅｕｅｒ、「Ｔ−細胞活性化の別経
路：５０ｋｄＴ１１羊赤血球受容体蛋白質に対する機能
的役割」（Ｃｅｌｌ，３６，ｐｐ．８９７−９０６（１
９８４）））。
【００２２】現在、増加したＴ細胞活性および異常な抗
原提示を示す皮膚の状態を防止しかつ治療するための改
善された方法が依然として要望されている。
原提示を示す皮膚の状態を防止しかつ治療するための改
善された方法が依然として要望されている。
【００２３】
【発明の概要】本発明は上述の問題の大部分を概ね解消
する。すなわち、本発明は、哺乳動物における真皮およ
び表皮内の増加したＴ細胞活性および異常な抗原提示に
より特徴付けられる皮膚の状態を防止または治療するた
めの方法を提供し、この結果、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互
作用の阻害剤が哺乳動物に投与される。而して、本発明
の方法は、従前の治療法に比して、免疫抑制を低減し、
毒性の少ないより特異的な治療を提供する等の多くの理
由により、上記の皮膚障害に対して優れた治療法であ
る。
する。すなわち、本発明は、哺乳動物における真皮およ
び表皮内の増加したＴ細胞活性および異常な抗原提示に
より特徴付けられる皮膚の状態を防止または治療するた
めの方法を提供し、この結果、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互
作用の阻害剤が哺乳動物に投与される。而して、本発明
の方法は、従前の治療法に比して、免疫抑制を低減し、
毒性の少ないより特異的な治療を提供する等の多くの理
由により、上記の皮膚障害に対して優れた治療法であ
る。
【００２４】好ましくは、本発明の方法は乾癬、ＵＶ障
害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の皮膚Ｔ細胞
リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔
蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕状疱瘡お
よび蕁麻疹等の皮膚障害の治療または予防に使用され、
とりわけ、乾癬またはＵＶ障害に対して用いられるのが
好ましい。
害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の皮膚Ｔ細胞
リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔
蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕状疱瘡お
よび蕁麻疹等の皮膚障害の治療または予防に使用され、
とりわけ、乾癬またはＵＶ障害に対して用いられるのが
好ましい。
【００２５】本発明の方法において使用可能な阻害剤と
しては、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害するいかな
る分子でもよい。好ましくは、該阻害剤は抗ＬＦＡ−３
抗体の同族体、抗ＣＤ２抗体の同族体、可溶性ＬＦＡ−
３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、ＣＤ２ま
たはＬＦＡ−３擬態物質およびこれらの派生体から成る
群から選ばれる。
しては、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害するいかな
る分子でもよい。好ましくは、該阻害剤は抗ＬＦＡ−３
抗体の同族体、抗ＣＤ２抗体の同族体、可溶性ＬＦＡ−
３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、ＣＤ２ま
たはＬＦＡ−３擬態物質およびこれらの派生体から成る
群から選ばれる。
【００２６】
【発明の実施の形態】「ＣＤ２」とは、天然のＬＦＡ−
３ポリペプチドに結合するＣＤ２ポリペプチドを意味
し、（ａ）天然の哺乳類のＣＤ２ＤＮＡ配列（例：ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：５）、（ｂ）天然のＣＤ２ＤＮＡ配列
に縮重するＤＮＡ配列、または（ｃ）Ｔｍ以下の約２０
℃ないし２７℃で１Ｍ塩化ナトリウムに匹敵する条件下
で上記ＤＮＡ配列の一に対合するＤＮＡ配列によりコー
ドされるものである。
３ポリペプチドに結合するＣＤ２ポリペプチドを意味
し、（ａ）天然の哺乳類のＣＤ２ＤＮＡ配列（例：ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：５）、（ｂ）天然のＣＤ２ＤＮＡ配列
に縮重するＤＮＡ配列、または（ｃ）Ｔｍ以下の約２０
℃ないし２７℃で１Ｍ塩化ナトリウムに匹敵する条件下
で上記ＤＮＡ配列の一に対合するＤＮＡ配列によりコー
ドされるものである。
【００２７】「ＬＦＡ−３」とは、天然のＣＤ２ポリペ
プチドに結合するＬＦＡ−３ポリペプチドを意味し、
（ａ）天然の哺乳類のＬＦＡ−３ＤＮＡ配列（例：ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、
（ｂ）天然のＬＦＡ−３ＤＮＡ配列に縮重するＤＮＡ配
列、または（ｃ）Ｔｍ以下の約２０℃ないし２７℃で１
Ｍ塩化ナトリウムに匹敵する条件下で上記ＤＮＡ配列の
一に対合するＤＮＡ配列によりコードされるものであ
る。
プチドに結合するＬＦＡ−３ポリペプチドを意味し、
（ａ）天然の哺乳類のＬＦＡ−３ＤＮＡ配列（例：ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、
（ｂ）天然のＬＦＡ−３ＤＮＡ配列に縮重するＤＮＡ配
列、または（ｃ）Ｔｍ以下の約２０℃ないし２７℃で１
Ｍ塩化ナトリウムに匹敵する条件下で上記ＤＮＡ配列の
一に対合するＤＮＡ配列によりコードされるものであ
る。
【００２８】「可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド」または
「可溶性ＣＤ２ポリペプチド」とは、細胞膜内にそれ自
体で連結不可能なＬＦＡ−３またはＣＤ２ポリペプチド
である。このような可溶性ポリペプチドとしては、当該
ポリペプチドを連結するための膜連結ドメインの領域を
十分に有していないか、あるいは、当該膜連結ドメイン
が非機能的となるように改質されているＣＤ２およびＬ
ＦＡ−３ポリペプチドが挙げられる。さらに、ここで言
う可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドには完全長または部分
切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）した（例：内部欠失）ＰＩ
連結ＬＦＡ−３等が含まれる。
「可溶性ＣＤ２ポリペプチド」とは、細胞膜内にそれ自
体で連結不可能なＬＦＡ−３またはＣＤ２ポリペプチド
である。このような可溶性ポリペプチドとしては、当該
ポリペプチドを連結するための膜連結ドメインの領域を
十分に有していないか、あるいは、当該膜連結ドメイン
が非機能的となるように改質されているＣＤ２およびＬ
ＦＡ−３ポリペプチドが挙げられる。さらに、ここで言
う可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドには完全長または部分
切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）した（例：内部欠失）ＰＩ
連結ＬＦＡ−３等が含まれる。
【００２９】「抗体同族体」とは、１種以上の抗原に結
合可能な免疫グロブリンＬ鎖、免疫グロブリンＨ鎖およ
びこれらの抗原結合性フラグメントから選択される１種
以上のポリペプチドから成る蛋白質である。なお、２種
以上のポリペプチドから成る抗体同族体の構成ポリペプ
チドは必要に応じてジスルフィド結合していてもよく、
また、共有的に架橋していてもよい。而して、当該抗体
同族体にはＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ
（およびこれらのサブタイプ）の完全な免疫グロブリン
が含まれ、当該免疫グロブリンのＬ鎖はκまたはλタイ
プでよい。さらに、該抗体同族体には、例えば、Ｆａｂ
フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２
フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメント、Ｈ鎖モノマーま
たはダイマー、Ｌ鎖モノマーまたはダイマー、１種のＨ
鎖および１種のＬ鎖から成るダイマー等の抗原結合特異
性を保有する完全な免疫グロブリンの部分も含まれる。
合可能な免疫グロブリンＬ鎖、免疫グロブリンＨ鎖およ
びこれらの抗原結合性フラグメントから選択される１種
以上のポリペプチドから成る蛋白質である。なお、２種
以上のポリペプチドから成る抗体同族体の構成ポリペプ
チドは必要に応じてジスルフィド結合していてもよく、
また、共有的に架橋していてもよい。而して、当該抗体
同族体にはＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ
（およびこれらのサブタイプ）の完全な免疫グロブリン
が含まれ、当該免疫グロブリンのＬ鎖はκまたはλタイ
プでよい。さらに、該抗体同族体には、例えば、Ｆａｂ
フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２
フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメント、Ｈ鎖モノマーま
たはダイマー、Ｌ鎖モノマーまたはダイマー、１種のＨ
鎖および１種のＬ鎖から成るダイマー等の抗原結合特異
性を保有する完全な免疫グロブリンの部分も含まれる。
【００３０】「人間化した組換え抗体同族体」とは、組
換えＤＮＡ技法により生成された抗体同族体であり、抗
原結合に要さない人間の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖
のアミノ酸の全部または一部が対応する人間以外の哺乳
動物の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖のアミノ酸に置き
換えられている。
換えＤＮＡ技法により生成された抗体同族体であり、抗
原結合に要さない人間の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖
のアミノ酸の全部または一部が対応する人間以外の哺乳
動物の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖のアミノ酸に置き
換えられている。
【００３１】「キメラ組換え抗体同族体」とは、組換え
ＤＮＡ技法により生成された抗体同族体であり、免疫グ
ロブリンＬ鎖、Ｈ鎖またはその両方のヒンジ領域および
不変領域の全部または一部が別の免疫グロブリンＬ鎖ま
たはＨ鎖の対応する領域に置き換えられている。
ＤＮＡ技法により生成された抗体同族体であり、免疫グ
ロブリンＬ鎖、Ｈ鎖またはその両方のヒンジ領域および
不変領域の全部または一部が別の免疫グロブリンＬ鎖ま
たはＨ鎖の対応する領域に置き換えられている。
【００３２】皮膚の状態
本発明の方法は、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤
を投与することによって、真皮および表皮において増加
したＴ細胞活性と異常な抗原提示により特徴付けられる
皮膚の状態を人間を含む哺乳類動物を対象に防止または
治療するのに有用である。このような病状としては、乾
癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の
皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮
膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕
状疱瘡および蕁麻疹等が含まれる。なお、膿皮性壊疽お
よび蕁麻疹等の皮膚障害の治療および予防が本発明の範
囲に含まれることは明らかに理解されると考える。すな
わち、これら後者の皮膚障害はシクロスポリンＡ感応性
の皮膚病であるため、Ｔ細胞の活性化に関与するもので
ある。ただし、本発明の方法は乾癬およびＵＶ障害の予
防または治療に使用されるのがより好ましい。また、本
発明の方法はいかなる哺乳動物体にも実施可能である
が、人間を対象に使用するのがより好ましい。
を投与することによって、真皮および表皮において増加
したＴ細胞活性と異常な抗原提示により特徴付けられる
皮膚の状態を人間を含む哺乳類動物を対象に防止または
治療するのに有用である。このような病状としては、乾
癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の
皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮
膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕
状疱瘡および蕁麻疹等が含まれる。なお、膿皮性壊疽お
よび蕁麻疹等の皮膚障害の治療および予防が本発明の範
囲に含まれることは明らかに理解されると考える。すな
わち、これら後者の皮膚障害はシクロスポリンＡ感応性
の皮膚病であるため、Ｔ細胞の活性化に関与するもので
ある。ただし、本発明の方法は乾癬およびＵＶ障害の予
防または治療に使用されるのがより好ましい。また、本
発明の方法はいかなる哺乳動物体にも実施可能である
が、人間を対象に使用するのがより好ましい。
【００３３】本発明者は、理論的に限定するものではな
いが、本発明の方法にしたがって使用するＣＤ２／ＬＦ
Ａ−３相互作用の阻害剤がＴ細胞と抗原提示細胞との間
の相互作用を阻害し、とりわけ、当該Ｔ細胞の増殖およ
び活性化を阻害するので、上記皮膚障害の予防および治
療に有効であると考えている。また、本発明者はこの種
の病気の逆の作用がこのようなＴ細胞の増殖や活性化に
よるものと考えている。さらに、本発明者は本発明の方
法が、すべての抗原提示に対する抗原特異性相互作用の
阻害、Ｔ細胞を減少させることなく当該細胞の活性化を
阻害すること、一般的な免疫抑制作用がなんら関与しな
いこと、さらに、寛容性の誘因の可能性等を含む多くの
理由により、これらの病気に対して従前実施されていた
治療法に比して優れていると考える。
いが、本発明の方法にしたがって使用するＣＤ２／ＬＦ
Ａ−３相互作用の阻害剤がＴ細胞と抗原提示細胞との間
の相互作用を阻害し、とりわけ、当該Ｔ細胞の増殖およ
び活性化を阻害するので、上記皮膚障害の予防および治
療に有効であると考えている。また、本発明者はこの種
の病気の逆の作用がこのようなＴ細胞の増殖や活性化に
よるものと考えている。さらに、本発明者は本発明の方
法が、すべての抗原提示に対する抗原特異性相互作用の
阻害、Ｔ細胞を減少させることなく当該細胞の活性化を
阻害すること、一般的な免疫抑制作用がなんら関与しな
いこと、さらに、寛容性の誘因の可能性等を含む多くの
理由により、これらの病気に対して従前実施されていた
治療法に比して優れていると考える。
【００３４】特に、本発明者は本発明の方法の使用が多
形核白血球またはマクロファージ媒介のエフェクター機
構上になんら影響を及ぼすことなく当該病変の初期段階
において実際にＴ細胞に対してより特異的に作用すると
考える。したがって、患者に対する影響をステロイドあ
るいはその他の一般的な免疫抑制剤を使用する場合に比
べてより低減することができる。それゆえ、本発明によ
り提供されるＴ細胞活性化を阻害する方法は上記の皮膚
障害に対して有効な予防法かつ治療法である。
形核白血球またはマクロファージ媒介のエフェクター機
構上になんら影響を及ぼすことなく当該病変の初期段階
において実際にＴ細胞に対してより特異的に作用すると
考える。したがって、患者に対する影響をステロイドあ
るいはその他の一般的な免疫抑制剤を使用する場合に比
べてより低減することができる。それゆえ、本発明によ
り提供されるＴ細胞活性化を阻害する方法は上記の皮膚
障害に対して有効な予防法かつ治療法である。
【００３５】ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤
ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤は本発明の方法に
おいて有用である。このような阻害剤としては、抗ＬＦ
Ａ−３抗体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体、可溶性ＬＦＡ
−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、ＬＦＡ
−３およびＣＤ２擬態物質およびこれらの派生体が挙げ
られる。これらの阻害剤の中で、可溶性ＬＦＡ−３ポリ
ペプチドおよび抗ＬＦＡ−３抗体同族体がより好まし
い。
おいて有用である。このような阻害剤としては、抗ＬＦ
Ａ−３抗体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体、可溶性ＬＦＡ
−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、ＬＦＡ
−３およびＣＤ２擬態物質およびこれらの派生体が挙げ
られる。これらの阻害剤の中で、可溶性ＬＦＡ−３ポリ
ペプチドおよび抗ＬＦＡ−３抗体同族体がより好まし
い。
【００３６】さらに、当該特定の可溶性ＣＤ２ポリペプ
チド、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、抗ＬＦＡ−３抗
体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体、または、ＬＦＡ−３お
よびＣＤ２擬態物質等の本発明の方法における有用性は
これらのＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害能力をアッ
セイすることにより容易に決定することができる。例え
ば、該能力のアッセイは、当該阻害剤におけるＬＦＡ−
３およびＣＤ２を担持する細胞上でのこれら物質間の相
互作用を阻害する能力の目視評価（拡大処理下）を可能
にする単純な細胞結合アッセイを用いて行うことができ
る。この場合、ジュルカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞がＣ
Ｄ２＋基質として好ましく、羊の赤血球細胞または人間
のＪＹ細胞がＬＦＡ−３＋基質として好ましい。また、
本発明において有用なこれらの可溶性ポリペプチド、抗
体同族体および擬態物質の結合特性は、該抗体同族体、
ポリペプチドまたは物質を放射性ラベリング（例：３５
Ｓまたは１２５Ｉ）した後、これらラベル処理したポリ
ペプチド、擬態物質または抗体同族体を適当にＣＤ２＋
またはＬＦＡ−３＋細胞と接触させる等の幾つかの既知
の方法によりアッセイすることができる。また、該結合
特性は適当な酵素的にラベル化した二次抗体を用いても
アッセイすることができる。また、Ｓｅｅｄ他（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，ｐ
ｐ．３３６５−６９（１９８７））において記載される
ようなロゼット形成競合アッセイも使用することができ
る。
チド、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、抗ＬＦＡ−３抗
体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体、または、ＬＦＡ−３お
よびＣＤ２擬態物質等の本発明の方法における有用性は
これらのＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害能力をアッ
セイすることにより容易に決定することができる。例え
ば、該能力のアッセイは、当該阻害剤におけるＬＦＡ−
３およびＣＤ２を担持する細胞上でのこれら物質間の相
互作用を阻害する能力の目視評価（拡大処理下）を可能
にする単純な細胞結合アッセイを用いて行うことができ
る。この場合、ジュルカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞がＣ
Ｄ２＋基質として好ましく、羊の赤血球細胞または人間
のＪＹ細胞がＬＦＡ−３＋基質として好ましい。また、
本発明において有用なこれらの可溶性ポリペプチド、抗
体同族体および擬態物質の結合特性は、該抗体同族体、
ポリペプチドまたは物質を放射性ラベリング（例：３５
Ｓまたは１２５Ｉ）した後、これらラベル処理したポリ
ペプチド、擬態物質または抗体同族体を適当にＣＤ２＋
またはＬＦＡ−３＋細胞と接触させる等の幾つかの既知
の方法によりアッセイすることができる。また、該結合
特性は適当な酵素的にラベル化した二次抗体を用いても
アッセイすることができる。また、Ｓｅｅｄ他（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，ｐ
ｐ．３３６５−６９（１９８７））において記載される
ようなロゼット形成競合アッセイも使用することができ
る。
【００３７】Ａ．抗ＬＦＡ−３および抗ＣＤ２抗体同族
体 多くの種類の抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体同族体が
本発明の方法において有用である。これらには、モノク
ローナル抗体、組換え抗体、キメラ組換え抗体、人間化
組換え抗体並びにこれらの抗体結合性部位が含まれる。
体 多くの種類の抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体同族体が
本発明の方法において有用である。これらには、モノク
ローナル抗体、組換え抗体、キメラ組換え抗体、人間化
組換え抗体並びにこれらの抗体結合性部位が含まれる。
【００３８】これらの抗ＬＦＡ−３抗体同族体の中で
は、モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体を用いることが好
ましい。さらに、受入番号ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９３
（１Ｅ６）、ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９４（ＨＣ−１Ｂ
１１）、ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９５（７Ａ６）および
ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９６（８Ｂ８）を有するハイブ
リドーマの群から選択されるハイブリドーマにより生成
されるモノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体、あるいは、Ｔ
Ｓ２／９として知られるモノクローナル抗体を用いるの
がより好ましい（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、
「人間Ｔ−リンパ球媒介の細胞溶解を伴う３種類の異な
る抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３」
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７
９，ｐｐ．７４８９−９３（１９８２）））。さらに、
該モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体が上記受入番号ＡＴ
ＣＣ ＨＢ １０６９５（７Ａ６）およびＡＴＣＣ Ｈ
Ｂ １０６９３（１Ｅ６）を有するハイブリドーマの群
から選択されたハイブリドーマにより生成されることが
最も好ましい。
は、モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体を用いることが好
ましい。さらに、受入番号ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９３
（１Ｅ６）、ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９４（ＨＣ−１Ｂ
１１）、ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９５（７Ａ６）および
ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９６（８Ｂ８）を有するハイブ
リドーマの群から選択されるハイブリドーマにより生成
されるモノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体、あるいは、Ｔ
Ｓ２／９として知られるモノクローナル抗体を用いるの
がより好ましい（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、
「人間Ｔ−リンパ球媒介の細胞溶解を伴う３種類の異な
る抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３」
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７
９，ｐｐ．７４８９−９３（１９８２）））。さらに、
該モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体が上記受入番号ＡＴ
ＣＣ ＨＢ １０６９５（７Ａ６）およびＡＴＣＣ Ｈ
Ｂ １０６９３（１Ｅ６）を有するハイブリドーマの群
から選択されたハイブリドーマにより生成されることが
最も好ましい。
【００３９】また、上述の抗ＣＤ２抗体同族体の中で
は、ＴＳ２／１８を含むＴ１１１エピトープ抗体として
知られる抗ＣＤ２モノクローナル抗体等のモノクローナ
ル抗ＣＤ２抗体を用いることが好ましい。（Ｓａｎｃｈ
ｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、「人間Ｔ−リンパ球媒介の細胞
溶解を伴う３種類の異なる抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−
２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐｐ．７４８９−９３（１
９８２））） これらのモノクローナル抗体を生成する技法は周知であ
る。簡単にいえば、特定の不死細胞系（骨髄腫細胞が典
型的）を任意の抗原から成る標品（ｐｒｅｐａｒａｔｉ
ｏｎ）により免疫化した哺乳類から得たリンパ球（脾臓
細胞が典型的）に融合し、次いで、生じたハイブリドー
マ細胞の培養上澄み液を当該抗原に対する抗体について
スクリーニングする（参照：Ｋｏｈｌｅｒ他、「所定の
特異性を有する抗体を分泌する融合細胞の連続的培養」
（Ｎａｔｕｒｅ，２５６，ｐｐ．４９５−９７（１９７
５）））。なお、本発明の目的において有用な免疫原と
しては、ＣＤ２またはＬＦＡ−３担持細胞並びにＬＦＡ
−３、ＣＤ２またはこれらのカウンター受容体結合性フ
ラグメント（例：ＬＦＡ−３に結合するＣＤ２フラグメ
ントまたはＣＤ２に結合するＬＦＡ−３フラグメント）
を含む無細胞標品などが挙げられる。
は、ＴＳ２／１８を含むＴ１１１エピトープ抗体として
知られる抗ＣＤ２モノクローナル抗体等のモノクローナ
ル抗ＣＤ２抗体を用いることが好ましい。（Ｓａｎｃｈ
ｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、「人間Ｔ−リンパ球媒介の細胞
溶解を伴う３種類の異なる抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−
２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐｐ．７４８９−９３（１
９８２））） これらのモノクローナル抗体を生成する技法は周知であ
る。簡単にいえば、特定の不死細胞系（骨髄腫細胞が典
型的）を任意の抗原から成る標品（ｐｒｅｐａｒａｔｉ
ｏｎ）により免疫化した哺乳類から得たリンパ球（脾臓
細胞が典型的）に融合し、次いで、生じたハイブリドー
マ細胞の培養上澄み液を当該抗原に対する抗体について
スクリーニングする（参照：Ｋｏｈｌｅｒ他、「所定の
特異性を有する抗体を分泌する融合細胞の連続的培養」
（Ｎａｔｕｒｅ，２５６，ｐｐ．４９５−９７（１９７
５）））。なお、本発明の目的において有用な免疫原と
しては、ＣＤ２またはＬＦＡ−３担持細胞並びにＬＦＡ
−３、ＣＤ２またはこれらのカウンター受容体結合性フ
ラグメント（例：ＬＦＡ−３に結合するＣＤ２フラグメ
ントまたはＣＤ２に結合するＬＦＡ−３フラグメント）
を含む無細胞標品などが挙げられる。
【００４０】また、上記の免疫化は標準的な手法を用い
ることにより行える。なお、当該免疫化の様式およびそ
の単位投与量は対象となる哺乳動物の種、免疫状態、体
重等に依存する。一般に、免疫化された哺乳動物は採血
されて、適当なスクリーニングアッセイにより、特定の
抗体について各血液サンプルから血清がアッセイされ
る。例えば、有用な抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体が
ジュルカット細胞の羊赤血球細胞ロゼット形成を阻止す
る免疫血清の能力を調べることにより同定でき、このこ
とはこれらの細胞のそれぞれの表面上にＬＦＡ−３およ
びＣＤ２が存在することに起因する。而して、上記のハ
イブリドーマ細胞の生成に用いるリンパ球は、一般に、
当該スクリーニングアッセイにより所望の抗体の存在が
既に確認済みの血清を有する免疫化した哺乳動物から単
離される。
ることにより行える。なお、当該免疫化の様式およびそ
の単位投与量は対象となる哺乳動物の種、免疫状態、体
重等に依存する。一般に、免疫化された哺乳動物は採血
されて、適当なスクリーニングアッセイにより、特定の
抗体について各血液サンプルから血清がアッセイされ
る。例えば、有用な抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体が
ジュルカット細胞の羊赤血球細胞ロゼット形成を阻止す
る免疫血清の能力を調べることにより同定でき、このこ
とはこれらの細胞のそれぞれの表面上にＬＦＡ−３およ
びＣＤ２が存在することに起因する。而して、上記のハ
イブリドーマ細胞の生成に用いるリンパ球は、一般に、
当該スクリーニングアッセイにより所望の抗体の存在が
既に確認済みの血清を有する免疫化した哺乳動物から単
離される。
【００４１】一般に、不死細胞系列（例：骨髄腫細胞系
列）はリンパ球と同一の哺乳類種から派生する。この場
合、好ましい不死細胞系列は、ヒポキサンチン、アミノ
プテリンおよびチミジンを含む培養地（「ＨＡＴ培
地」）に対して感応性を示すマウスの骨髄腫細胞であ
る。
列）はリンパ球と同一の哺乳類種から派生する。この場
合、好ましい不死細胞系列は、ヒポキサンチン、アミノ
プテリンおよびチミジンを含む培養地（「ＨＡＴ培
地」）に対して感応性を示すマウスの骨髄腫細胞であ
る。
【００４２】該ＨＡＴ感応性マウス骨髄腫細胞は一般に
ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）３３５０を用い
てマウスの脾臓細胞に融合する。その後、当該融合によ
り生じたハイブリドーマ細胞はＨＡＴ培地を用いて選択
され、未融合および未生成の融合骨髄腫細胞が消滅除去
される（未融合の脾臓細胞は形質転換しないために数日
後に死滅する）。その後、所望の抗体を生成するハイブ
リドーマが、当該ハイブリドーマの培養上澄み液におけ
る、例えば、カウンタ受容体への結合性やジュルカット
細胞の羊赤血球細胞への付着能力についてスクリーニン
グすることにより検出される。さらに、限界希釈による
ハイブリドーマ培養のサブクローニングがモノクローナ
ル性を確保するために一般に行われる。
ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）３３５０を用い
てマウスの脾臓細胞に融合する。その後、当該融合によ
り生じたハイブリドーマ細胞はＨＡＴ培地を用いて選択
され、未融合および未生成の融合骨髄腫細胞が消滅除去
される（未融合の脾臓細胞は形質転換しないために数日
後に死滅する）。その後、所望の抗体を生成するハイブ
リドーマが、当該ハイブリドーマの培養上澄み液におけ
る、例えば、カウンタ受容体への結合性やジュルカット
細胞の羊赤血球細胞への付着能力についてスクリーニン
グすることにより検出される。さらに、限界希釈による
ハイブリドーマ培養のサブクローニングがモノクローナ
ル性を確保するために一般に行われる。
【００４３】さらに、抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２モノ
クローナル抗体を生成するために、上記スクリーニング
において陽性と判定されたハイブリドーマが、当該ハイ
ブリドーマ細胞が所定の栄養培養液中にモノクローナル
抗体を分泌する条件下においてこれに要する十分な時間
で培養される。なお、このようなハイブリドーマ細胞に
適する組織培養技法や培地は周知である。また、必要に
応じて、該条件付ハイブリドーマ培養の上澄み液を収集
して、周知の方法によって所望の抗体をさらに精製する
ことが可能である。
クローナル抗体を生成するために、上記スクリーニング
において陽性と判定されたハイブリドーマが、当該ハイ
ブリドーマ細胞が所定の栄養培養液中にモノクローナル
抗体を分泌する条件下においてこれに要する十分な時間
で培養される。なお、このようなハイブリドーマ細胞に
適する組織培養技法や培地は周知である。また、必要に
応じて、該条件付ハイブリドーマ培養の上澄み液を収集
して、周知の方法によって所望の抗体をさらに精製する
ことが可能である。
【００４４】また、当該所望の抗体は上記ハイブリドー
マをプリスタン注入した（ｐｒｉｓｔａｎｅ−ｐｒｉｍ
ｅｄ）マウスの腹膜腔内に注射することによっても生成
できる。この結果、該ハイブリドーマ細胞は当該腹膜腔
内において増殖して上述の抗体を分泌し、該分泌液は腹
水として蓄積する。したがって、この腹水液を注射器に
より該腹膜腔内から取り出すことにより、目的の抗体を
得ることができる。
マをプリスタン注入した（ｐｒｉｓｔａｎｅ−ｐｒｉｍ
ｅｄ）マウスの腹膜腔内に注射することによっても生成
できる。この結果、該ハイブリドーマ細胞は当該腹膜腔
内において増殖して上述の抗体を分泌し、該分泌液は腹
水として蓄積する。したがって、この腹水液を注射器に
より該腹膜腔内から取り出すことにより、目的の抗体を
得ることができる。
【００４５】さらに、本発明において有用な抗ＣＤ２お
よび抗ＬＦＡ−３抗体同族体は所望の抗体の免疫グロブ
リンＬ鎖およびＨ鎖をコードするＤＮＡにより形質転換
した宿主細胞によって生成した組換え抗体でもよい。こ
の組換え抗体は既知の遺伝工学的技法により生成できる
（参照例：米国特許第４８１６３９７号、同文献は本明
細書の参考文献である）。
よび抗ＬＦＡ−３抗体同族体は所望の抗体の免疫グロブ
リンＬ鎖およびＨ鎖をコードするＤＮＡにより形質転換
した宿主細胞によって生成した組換え抗体でもよい。こ
の組換え抗体は既知の遺伝工学的技法により生成できる
（参照例：米国特許第４８１６３９７号、同文献は本明
細書の参考文献である）。
【００４６】例えば、該組換え抗体は、本発明において
有用な抗体同族体を生成するハイブリドーマ細胞から得
た所望の抗体の免疫グロブリンＬ鎖およびＨ鎖をコード
するクローニングｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡによって
生成することができる。その後、これらのポリペプチド
をコードするｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡは発現ベクタ
ー内に挿入されて、両方の遺伝子がそれらの転写および
翻訳発現制御配列に効果的に連結する。さらに、該発現
ベクターおよび発現制御配列が使用した発現宿主細胞に
適合するように選択される。なお、一般には、当該両方
の遺伝子は同一の発現ベクターに挿入されている。
有用な抗体同族体を生成するハイブリドーマ細胞から得
た所望の抗体の免疫グロブリンＬ鎖およびＨ鎖をコード
するクローニングｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡによって
生成することができる。その後、これらのポリペプチド
をコードするｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡは発現ベクタ
ー内に挿入されて、両方の遺伝子がそれらの転写および
翻訳発現制御配列に効果的に連結する。さらに、該発現
ベクターおよび発現制御配列が使用した発現宿主細胞に
適合するように選択される。なお、一般には、当該両方
の遺伝子は同一の発現ベクターに挿入されている。
【００４７】この場合、真核または原核宿主細胞を用い
ることができる。ただし、真核細胞は原核細胞に比して
組み合わせが容易であり、また、適当に折りたたまれか
つ免疫学的に活性な抗体を分泌しやすいという理由か
ら、真核宿主細胞における発現の方が好ましい。しかし
ながら、不適当な折りたたみにより不活性となったいか
なる抗体も周知の方法で再生することが可能である（Ｋ
ｉｍおよびＢａｌｄｗｉｎ、「小蛋白質の折りたたみ反
応における特異的中間体および蛋白質の折りたたみの機
構」（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５１，ｐ
ｐ．４５９−８９（１９８２）））。なお、該宿主細胞
は、本発明による抗体同族体でもあるＬ鎖ダイマーやＨ
鎖ダイマー等の完全な抗体の部分を生成することも可能
である。
ることができる。ただし、真核細胞は原核細胞に比して
組み合わせが容易であり、また、適当に折りたたまれか
つ免疫学的に活性な抗体を分泌しやすいという理由か
ら、真核宿主細胞における発現の方が好ましい。しかし
ながら、不適当な折りたたみにより不活性となったいか
なる抗体も周知の方法で再生することが可能である（Ｋ
ｉｍおよびＢａｌｄｗｉｎ、「小蛋白質の折りたたみ反
応における特異的中間体および蛋白質の折りたたみの機
構」（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５１，ｐ
ｐ．４５９−８９（１９８２）））。なお、該宿主細胞
は、本発明による抗体同族体でもあるＬ鎖ダイマーやＨ
鎖ダイマー等の完全な抗体の部分を生成することも可能
である。
【００４８】上述の手法の変形もまた本発明において有
用であることが理解されると考える。例えば、特定の抗
体同族体のＬ鎖またはＨ鎖（両方ではない）をコードす
るＤＮＡを用いて宿主細胞を形質転換することが望まし
い場合が考えられる。また、組換えＤＮＡ技法により、
ＣＤ２またはＬＦＡ−３カウンタ受容体結合のために必
要でないＬ鎖およびＨ鎖のいずれかまたは両方をコード
するＤＮＡの全部または一部を除去するようにすること
もできる。すなわち、このように部分的に削除したＤＮ
Ａ分子から発現される分子もまた本発明の方法において
有用である。加えて、１個のＨ鎖と１個のＬ鎖が抗ＣＤ
２または抗ＬＦＡ−３抗体同族体であり、他の１個のＨ
鎖および１個のＬ鎖がＣＤ２またはＬＦＡ−３以外の抗
原、若しくは、ＣＤ２またはＬＦＡ−３の他のエピトー
プに対して特異的であるような二官能性の抗体を生成す
ることもできる。
用であることが理解されると考える。例えば、特定の抗
体同族体のＬ鎖またはＨ鎖（両方ではない）をコードす
るＤＮＡを用いて宿主細胞を形質転換することが望まし
い場合が考えられる。また、組換えＤＮＡ技法により、
ＣＤ２またはＬＦＡ−３カウンタ受容体結合のために必
要でないＬ鎖およびＨ鎖のいずれかまたは両方をコード
するＤＮＡの全部または一部を除去するようにすること
もできる。すなわち、このように部分的に削除したＤＮ
Ａ分子から発現される分子もまた本発明の方法において
有用である。加えて、１個のＨ鎖と１個のＬ鎖が抗ＣＤ
２または抗ＬＦＡ−３抗体同族体であり、他の１個のＨ
鎖および１個のＬ鎖がＣＤ２またはＬＦＡ−３以外の抗
原、若しくは、ＣＤ２またはＬＦＡ−３の他のエピトー
プに対して特異的であるような二官能性の抗体を生成す
ることもできる。
【００４９】キメラ組換え抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２
抗体同族体は宿主細胞を所望の免疫グロブリンＬ鎖およ
びＨ鎖をコードするＤＮＡから成る適当な発現ベクター
により形質転換することによって生成することができ、
この場合、当該Ｈ鎖および／またはＬ鎖のヒンジ領域お
よび不変領域をコードするＤＮＡの全部または一部が異
なる種の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖の対応領域から
得たＤＮＡで既に置き換えられている。このとき、元の
組換え抗体が人間のものでなく、また、上記の阻害剤が
人間に投与される場合、対応する人間の配列の置き換え
が好ましい。例示的なキメラ組換え抗体としては、マウ
スの可変領域と人間のヒンジ領域および不変領域を有し
ているものが挙げられる（参照：米国特許第４８１６３
９７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ他、「キメラ人間抗体分子：
人間の不変領域ドメインを伴うマウス抗体結合性ドメイ
ン」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８１，ｐｐ．６８５１−５５（１９８４）））。
抗体同族体は宿主細胞を所望の免疫グロブリンＬ鎖およ
びＨ鎖をコードするＤＮＡから成る適当な発現ベクター
により形質転換することによって生成することができ、
この場合、当該Ｈ鎖および／またはＬ鎖のヒンジ領域お
よび不変領域をコードするＤＮＡの全部または一部が異
なる種の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖の対応領域から
得たＤＮＡで既に置き換えられている。このとき、元の
組換え抗体が人間のものでなく、また、上記の阻害剤が
人間に投与される場合、対応する人間の配列の置き換え
が好ましい。例示的なキメラ組換え抗体としては、マウ
スの可変領域と人間のヒンジ領域および不変領域を有し
ているものが挙げられる（参照：米国特許第４８１６３
９７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ他、「キメラ人間抗体分子：
人間の不変領域ドメインを伴うマウス抗体結合性ドメイ
ン」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８１，ｐｐ．６８５１−５５（１９８４）））。
【００５０】また、人間化した組換え抗ＬＦＡ−３また
は抗ＣＤ２抗体は所望の人間でない免疫グロブリンＬ鎖
およびＨ鎖をコードするＤＮＡから成る適当な発現ベク
ターにより宿主細胞を形質転換することによって生成す
ることができる。この際、抗原結合に関与しないアミノ
酸をコードするＤＮＡの全部または一部が所望の人間の
免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖の対応領域から得たＤＮ
Ａで置き換えられている（参照例：Ｊｏｎｅ他、「人間
の抗体における相補性決定領域とマウスの領域との置き
換え」（Ｎａｔｕｒｅ，３２１，ｐｐ．５２２−２５
（１９８６）））。
は抗ＣＤ２抗体は所望の人間でない免疫グロブリンＬ鎖
およびＨ鎖をコードするＤＮＡから成る適当な発現ベク
ターにより宿主細胞を形質転換することによって生成す
ることができる。この際、抗原結合に関与しないアミノ
酸をコードするＤＮＡの全部または一部が所望の人間の
免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖の対応領域から得たＤＮ
Ａで置き換えられている（参照例：Ｊｏｎｅ他、「人間
の抗体における相補性決定領域とマウスの領域との置き
換え」（Ｎａｔｕｒｅ，３２１，ｐｐ．５２２−２５
（１９８６）））。
【００５１】完全な抗体でない抗ＣＤ２および抗ＬＦＡ
−３抗体同族体もまた本発明において有用である。この
ような同族体は上述の抗体同族体のいずれかから誘導す
ることができる。例えば、抗体結合性フラグメント並び
に上述の抗体から誘導できる完全長モノマー、ダイマー
またはトリマーポリペプチドはそれ自体で有用である。
この種の有用な抗体同族体としては、Ｆａｂフラグメン
ト、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメン
ト、Ｆ（ｖ）フラグメント、Ｈ鎖モノマーまたはダイマ
ー、Ｌ鎖モノマーまたはダイマー、１個のＨ鎖および１
個のＬ鎖から成るダイマー等が含まれる。抗ＬＦＡ−３
Ｈ鎖は好ましい抗ＬＦＡ−３抗体フラグメントである。
−３抗体同族体もまた本発明において有用である。この
ような同族体は上述の抗体同族体のいずれかから誘導す
ることができる。例えば、抗体結合性フラグメント並び
に上述の抗体から誘導できる完全長モノマー、ダイマー
またはトリマーポリペプチドはそれ自体で有用である。
この種の有用な抗体同族体としては、Ｆａｂフラグメン
ト、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメン
ト、Ｆ（ｖ）フラグメント、Ｈ鎖モノマーまたはダイマ
ー、Ｌ鎖モノマーまたはダイマー、１個のＨ鎖および１
個のＬ鎖から成るダイマー等が含まれる。抗ＬＦＡ−３
Ｈ鎖は好ましい抗ＬＦＡ−３抗体フラグメントである。
【００５２】該抗体フラグメントはまた、例えば、ペプ
シンまたはパパイン（ｐａｐａｉｎ）等のプロテアーゼ
を用いる完全な抗体の開裂や、当該開裂生成物を必要に
応じて還元剤で処理する等の化学的方法によって生成す
ることもできる。また、有用なフラグメントを宿主細胞
の部分切除したＨおよび／またはＬ鎖遺伝子による形質
転換によって生成することも可能である。また、Ｈ鎖お
よびＬ鎖モノマーは、完全な抗体をジチオトレイトール
（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）等の還元剤で処理し
た後、生成して当該鎖状体を分離することにより生成で
きる。さらに、該Ｈ鎖およびＬ鎖モノマーは所望のＨ鎖
またはＬ鎖（両方ではない）のいずれか一方をコードす
るＤＮＡを用いて形質転換した宿主細胞によっても生成
することができる（参照例：Ｗａｒｄ他、「大腸菌から
分泌される単一免疫グロブリン可変領域の範囲における
結合活性」（Ｎａｔｕｒｅ，３４１，ｐｐ．５４４−４
６（１９８９））、Ｓａｓｔｒｙ他、「モノクローナル
接触抗体の発生のための大腸菌における免疫学的領域の
クローニング：Ｈ鎖可変領域特異性ｃＤＮＡライブラリ
の構造」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ，８６，ｐｐ．５７２８−３２（１９８９）））。
シンまたはパパイン（ｐａｐａｉｎ）等のプロテアーゼ
を用いる完全な抗体の開裂や、当該開裂生成物を必要に
応じて還元剤で処理する等の化学的方法によって生成す
ることもできる。また、有用なフラグメントを宿主細胞
の部分切除したＨおよび／またはＬ鎖遺伝子による形質
転換によって生成することも可能である。また、Ｈ鎖お
よびＬ鎖モノマーは、完全な抗体をジチオトレイトール
（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）等の還元剤で処理し
た後、生成して当該鎖状体を分離することにより生成で
きる。さらに、該Ｈ鎖およびＬ鎖モノマーは所望のＨ鎖
またはＬ鎖（両方ではない）のいずれか一方をコードす
るＤＮＡを用いて形質転換した宿主細胞によっても生成
することができる（参照例：Ｗａｒｄ他、「大腸菌から
分泌される単一免疫グロブリン可変領域の範囲における
結合活性」（Ｎａｔｕｒｅ，３４１，ｐｐ．５４４−４
６（１９８９））、Ｓａｓｔｒｙ他、「モノクローナル
接触抗体の発生のための大腸菌における免疫学的領域の
クローニング：Ｈ鎖可変領域特異性ｃＤＮＡライブラリ
の構造」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ，８６，ｐｐ．５７２８−３２（１９８９）））。
【００５３】Ｂ．可溶性ＣＤ２およびＬＦＡ−３ポリペ
プチド ＬＦＡ−３およびＣＤ２の相互作用を阻害する可溶性Ｌ
ＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチド
は本発明の方法において有用である。これらのうち、可
溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドの方が好ましい。
プチド ＬＦＡ−３およびＣＤ２の相互作用を阻害する可溶性Ｌ
ＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチド
は本発明の方法において有用である。これらのうち、可
溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドの方が好ましい。
【００５４】可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドはＬＦＡ−
３のトランスメンブラン形態、特に、細胞外ドメイン
（例：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のＡＡ１−ＡＡ１８７）
から誘導することができる。このようなポリペプチドは
米国特許第４９５６２８１号および同時係属の米国特許
出願０７／６６７９７１号（本出願と譲渡人を共通にす
る）に記載されており、これらは本明細書の参考文献で
ある。好ましい可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドはＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２のＡＡ１−ＡＡ９２、ＳＥＱＩＤ Ｎ
Ｏ：２のＡＡ１−ＡＡ８０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の
ＡＡ５０−ＡＡ６５およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のＡ
Ａ２０−ＡＡ８０から成るポリペプチドを含む。また、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２をコードするＤＮＡ配列（すな
わち、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）から成るベクターはア
メリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏ
ｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に受入番号７５１０７
で寄託されている。
３のトランスメンブラン形態、特に、細胞外ドメイン
（例：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のＡＡ１−ＡＡ１８７）
から誘導することができる。このようなポリペプチドは
米国特許第４９５６２８１号および同時係属の米国特許
出願０７／６６７９７１号（本出願と譲渡人を共通にす
る）に記載されており、これらは本明細書の参考文献で
ある。好ましい可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドはＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２のＡＡ１−ＡＡ９２、ＳＥＱＩＤ Ｎ
Ｏ：２のＡＡ１−ＡＡ８０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の
ＡＡ５０−ＡＡ６５およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のＡ
Ａ２０−ＡＡ８０から成るポリペプチドを含む。また、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２をコードするＤＮＡ配列（すな
わち、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）から成るベクターはア
メリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏ
ｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に受入番号７５１０７
で寄託されている。
【００５５】また、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドはＰ
ＣＴ特許出願ＷＯ９０／０２１８１に記載されているよ
うなＬＦＡ−３のＰＩ連結形態から誘導することもでき
る。このＰＩ連結ＬＦＡ−３をコードするＤＮＡ配列
（すなわちＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）から成るベクター
はアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋ
ｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に受入番号６８７８８で寄託されて
いる。なお、該ＬＦＡ−３のＰＩ連結形態とＬＦＡ−３
のトランスメンブラン形態が全細胞外ドメインを通して
同一のアミノ酸配列を有することは当然理解されると考
える。したがって、好ましいＰＩ連結ＬＦＡ−３ポリペ
プチドは上記ＬＦＡ−３のトランスメンブラン形態の場
合と同一である。
ＣＴ特許出願ＷＯ９０／０２１８１に記載されているよ
うなＬＦＡ−３のＰＩ連結形態から誘導することもでき
る。このＰＩ連結ＬＦＡ−３をコードするＤＮＡ配列
（すなわちＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）から成るベクター
はアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋ
ｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に受入番号６８７８８で寄託されて
いる。なお、該ＬＦＡ−３のＰＩ連結形態とＬＦＡ−３
のトランスメンブラン形態が全細胞外ドメインを通して
同一のアミノ酸配列を有することは当然理解されると考
える。したがって、好ましいＰＩ連結ＬＦＡ−３ポリペ
プチドは上記ＬＦＡ−３のトランスメンブラン形態の場
合と同一である。
【００５６】可溶性ＣＤ２ポリペプチドは完全長ＣＤ
２、特に、細胞外ドメイン（例：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６のＡＡ１−ＡＡ１８５）から誘導できる。また、この
ようなポリペプチドは当該ＣＤ２の完全長ドメインの全
部または一部から構成できる。例示的な可溶性ＣＤ２ポ
リペプチドが参考文献ＰＣＴ ＷＯ９０／０８１８７に
記載されている。 本発明において有用な可溶性ポリペ
プチドの生成は当業界において知られる種々の方法によ
って行うことができる。例えば、該ポリペプチドは完全
なトランスメンブランＬＦＡ−３またはＣＤ２分子、あ
るいは、完全なＰＩ連結ＬＦＡ−３分子から、エクソペ
プチダーゼと組み合わせた特異的なエンドペプチダーゼ
を用いる蛋白質分解、エドマン分解またはこれらの両方
によって誘導することができる。一方、完全なＬＦＡ−
３分子または完全なＣＤ２分子は従来法によりその天然
供給源から精製できる。また、該完全なＬＦＡ−３また
はＣＤ２はｃＤＮＡを用いる既知の組換えＤＮＡ技法に
より生成することもできる（参照例：Ｗａｌｌｎｅｒ他
の米国特許第４９５６２８１号、ＡｒｕｆｆｏおよびＳ
ｅｅｄ：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８
４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）、Ｓａｙｒｅ
他：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４，
ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）。
２、特に、細胞外ドメイン（例：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６のＡＡ１−ＡＡ１８５）から誘導できる。また、この
ようなポリペプチドは当該ＣＤ２の完全長ドメインの全
部または一部から構成できる。例示的な可溶性ＣＤ２ポ
リペプチドが参考文献ＰＣＴ ＷＯ９０／０８１８７に
記載されている。 本発明において有用な可溶性ポリペ
プチドの生成は当業界において知られる種々の方法によ
って行うことができる。例えば、該ポリペプチドは完全
なトランスメンブランＬＦＡ−３またはＣＤ２分子、あ
るいは、完全なＰＩ連結ＬＦＡ−３分子から、エクソペ
プチダーゼと組み合わせた特異的なエンドペプチダーゼ
を用いる蛋白質分解、エドマン分解またはこれらの両方
によって誘導することができる。一方、完全なＬＦＡ−
３分子または完全なＣＤ２分子は従来法によりその天然
供給源から精製できる。また、該完全なＬＦＡ−３また
はＣＤ２はｃＤＮＡを用いる既知の組換えＤＮＡ技法に
より生成することもできる（参照例：Ｗａｌｌｎｅｒ他
の米国特許第４９５６２８１号、ＡｒｕｆｆｏおよびＳ
ｅｅｄ：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８
４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）、Ｓａｙｒｅ
他：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４，
ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）。
【００５７】好ましくは、本発明に有用な可溶性ポリペ
プチドを直接的に生成して、完全なＬＦＡ−３分子や完
全なＣＤ２分子を出発原料とする必要性を省く。このこ
とは、従来の化学的合成技法や、所望のペプチドをコー
ドするＤＮＡ配列のみを形質転換した宿主内に発現する
周知の組換えＤＮＡ技法によって行うことができる。例
えば、所望の可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドや可溶性Ｃ
Ｄ２ポリペプチドをコードする遺伝子はオリゴヌクレオ
チドシンセサイザーを用いる化学的手段により合成する
ことができる。すなわち、このようなオリゴヌクレオチ
ドは所望の可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドや可溶性ＣＤ
２ポリペプチドのアミノ酸配列に基づいて設計される。
また、該所望のペプチドに対応する特異的なＤＮＡ配列
のコード化は、特異的な制限エンドヌクレアーゼフラグ
メントの単離や当該特異的領域のＰＣＲ合成によって完
全長のＤＮＡ配列から誘導することもできる。
プチドを直接的に生成して、完全なＬＦＡ−３分子や完
全なＣＤ２分子を出発原料とする必要性を省く。このこ
とは、従来の化学的合成技法や、所望のペプチドをコー
ドするＤＮＡ配列のみを形質転換した宿主内に発現する
周知の組換えＤＮＡ技法によって行うことができる。例
えば、所望の可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドや可溶性Ｃ
Ｄ２ポリペプチドをコードする遺伝子はオリゴヌクレオ
チドシンセサイザーを用いる化学的手段により合成する
ことができる。すなわち、このようなオリゴヌクレオチ
ドは所望の可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドや可溶性ＣＤ
２ポリペプチドのアミノ酸配列に基づいて設計される。
また、該所望のペプチドに対応する特異的なＤＮＡ配列
のコード化は、特異的な制限エンドヌクレアーゼフラグ
メントの単離や当該特異的領域のＰＣＲ合成によって完
全長のＤＮＡ配列から誘導することもできる。
【００５８】本発明において有用な可溶性ＬＦＡ−３ポ
リペプチドや可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコードする遺
伝子の合成には標準的な手法が適用できる。例えば、完
全なアミノ酸配列を逆翻訳した（ｂａｃｋ−ｔｒａｎｓ
ｌａｔｅｄ）遺伝子を構成するために用いることができ
る。また、本発明において有用な可溶性ＬＦＡ−３ポリ
ペプチドや可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコーディングす
るヌクレオチド配列を含むＤＮＡオリゴマーは単一ステ
ップで合成することができる。さらに、当該所望のポリ
ペプチドの部分をコーディングするいくつかの短いオリ
ゴヌクレオチドを合成して連結することも可能である。
好ましくは、本発明において有用な可溶性ＬＦＡ−３ポ
リペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドをいくつか
の分離したオリゴヌクレオチドとして合成し、その後、
連結する。このような個々のオリゴヌクレオチドは一般
に５’または３’方向の補足的な組合せ部分に対応する
延出部（ｏｖｅｒｈａｎｇｓ）を含んでいる。
リペプチドや可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコードする遺
伝子の合成には標準的な手法が適用できる。例えば、完
全なアミノ酸配列を逆翻訳した（ｂａｃｋ−ｔｒａｎｓ
ｌａｔｅｄ）遺伝子を構成するために用いることができ
る。また、本発明において有用な可溶性ＬＦＡ−３ポリ
ペプチドや可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコーディングす
るヌクレオチド配列を含むＤＮＡオリゴマーは単一ステ
ップで合成することができる。さらに、当該所望のポリ
ペプチドの部分をコーディングするいくつかの短いオリ
ゴヌクレオチドを合成して連結することも可能である。
好ましくは、本発明において有用な可溶性ＬＦＡ−３ポ
リペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドをいくつか
の分離したオリゴヌクレオチドとして合成し、その後、
連結する。このような個々のオリゴヌクレオチドは一般
に５’または３’方向の補足的な組合せ部分に対応する
延出部（ｏｖｅｒｈａｎｇｓ）を含んでいる。
【００５９】このようにして組み合わされた所望の遺伝
子は、制限エンドヌクレアーゼにより認識される配列
（クローニングまたは発現ベクターへの直接的組合せに
対応する特異的制限部位を含む）、使用の宿主発現シス
テムを考慮した上での好ましいコドン、および、転写さ
れる際に安定で効果的に翻訳されるｍＲＮＡを生成する
配列によって特徴付けられる。適切な組合せについては
ヌクレオチド配列決定、制限マッピング、および、適当
な宿主における生物学的に活性なポリペプチドの発現に
より確認できる。
子は、制限エンドヌクレアーゼにより認識される配列
（クローニングまたは発現ベクターへの直接的組合せに
対応する特異的制限部位を含む）、使用の宿主発現シス
テムを考慮した上での好ましいコドン、および、転写さ
れる際に安定で効果的に翻訳されるｍＲＮＡを生成する
配列によって特徴付けられる。適切な組合せについては
ヌクレオチド配列決定、制限マッピング、および、適当
な宿主における生物学的に活性なポリペプチドの発現に
より確認できる。
【００６０】なお、上述の特異的なＤＮＡ配列によりコ
ードされる可溶性ＬＦＡ−３およびＣＤ２ポリペプチド
は、遺伝子コードの縮退により、他の多くのヌクレオチ
ド配列から成るＤＮＡ分子によってもコードすることが
可能であることは当業者において明らかである。これら
の縮退配列はまた本発明において有用なポリペプチドを
コード化する。
ードされる可溶性ＬＦＡ−３およびＣＤ２ポリペプチド
は、遺伝子コードの縮退により、他の多くのヌクレオチ
ド配列から成るＤＮＡ分子によってもコードすることが
可能であることは当業者において明らかである。これら
の縮退配列はまた本発明において有用なポリペプチドを
コード化する。
【００６１】上記のＤＮＡ配列は単細胞宿主において発
現可能である。当業界において周知の如く、宿主内にお
いて形質転換した遺伝子の高い発現レベルを得るために
は、当該遺伝子は該選択された発現宿主において機能的
な転写および翻訳発現制御配列に有効に連結される必要
がある。好ましくは、該発現制御配列および関係する遺
伝子は、さらにバクテリア選択マーカーおよび複製開始
点から成る発現ベクターに含まれる。もしも該発現宿主
が真核細胞であれば、当該発現ベクターは当該発現宿主
において有用であるさらに付加的な発現マーカーから構
成されていなければならない。
現可能である。当業界において周知の如く、宿主内にお
いて形質転換した遺伝子の高い発現レベルを得るために
は、当該遺伝子は該選択された発現宿主において機能的
な転写および翻訳発現制御配列に有効に連結される必要
がある。好ましくは、該発現制御配列および関係する遺
伝子は、さらにバクテリア選択マーカーおよび複製開始
点から成る発現ベクターに含まれる。もしも該発現宿主
が真核細胞であれば、当該発現ベクターは当該発現宿主
において有用であるさらに付加的な発現マーカーから構
成されていなければならない。
【００６２】上記の所望の可溶性ポリペプチドをコード
するＤＮＡ配列はシグナル配列をコードしてもしなくて
もよい。ただし、上記の発現宿主が原核細胞である場合
は、当該ＤＮＡ配列はシグナル配列をコードしない方が
一般的に好ましい。逆に、該発現宿主が真核細胞である
場合は、シグナル配列がコードされる方が一般的に好ま
しい。
するＤＮＡ配列はシグナル配列をコードしてもしなくて
もよい。ただし、上記の発現宿主が原核細胞である場合
は、当該ＤＮＡ配列はシグナル配列をコードしない方が
一般的に好ましい。逆に、該発現宿主が真核細胞である
場合は、シグナル配列がコードされる方が一般的に好ま
しい。
【００６３】また、アミノ末端メチオニンは上記の発現
生成物上に存在していてもいなくてもよい。ただし、該
末端メチオニンが発現宿主によって開裂していない場合
は、必要に応じて、これを標準的な技法により化学的に
除去することができる。
生成物上に存在していてもいなくてもよい。ただし、該
末端メチオニンが発現宿主によって開裂していない場合
は、必要に応じて、これを標準的な技法により化学的に
除去することができる。
【００６４】また、種々の発現宿主／ベクターの組み合
わせが使用できる。真核宿主細胞に対して有用な発現ベ
クターとしては、例えば、ＳＶ４０、ウシ乳頭腫ウィル
ス、アデノウィルスおよびサイトメガロウィルスから得
られる発現制御配列から成るベクターがある。また、細
菌の宿主細胞に対して有用な発現ベクターとしては、ｃ
ｏｌ Ｅ１含む大腸菌のプラスミド、ｐＣＲ１、ｐＢＲ
３２２およびこれらの派生体等のような既知の細菌のプ
ラスミド、さらに、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、例えば、
ファージλの多種派生体、例えば、ＮＭ９８９、および
Ｍ１３および線状一本鎖ＤＮＡファージ等の他のＤＮＡ
ファージ等のより広い宿主範囲を有するプラスミドが挙
げられる。また、酵母細胞に対して有用な発現ベクター
としては、２μプラスミドおよびその派生体が挙げられ
る。さらに、昆虫細胞に有用なベクターとしてはｐＶＬ
９４１がある。
わせが使用できる。真核宿主細胞に対して有用な発現ベ
クターとしては、例えば、ＳＶ４０、ウシ乳頭腫ウィル
ス、アデノウィルスおよびサイトメガロウィルスから得
られる発現制御配列から成るベクターがある。また、細
菌の宿主細胞に対して有用な発現ベクターとしては、ｃ
ｏｌ Ｅ１含む大腸菌のプラスミド、ｐＣＲ１、ｐＢＲ
３２２およびこれらの派生体等のような既知の細菌のプ
ラスミド、さらに、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、例えば、
ファージλの多種派生体、例えば、ＮＭ９８９、および
Ｍ１３および線状一本鎖ＤＮＡファージ等の他のＤＮＡ
ファージ等のより広い宿主範囲を有するプラスミドが挙
げられる。また、酵母細胞に対して有用な発現ベクター
としては、２μプラスミドおよびその派生体が挙げられ
る。さらに、昆虫細胞に有用なベクターとしてはｐＶＬ
９４１がある。
【００６５】加えて、広範な発現制御配列のいずれもが
これらのベクターにおいて使用することができる。この
ような有用な発現制御配列には、上述の発現ベクターの
構造遺伝子を伴う発現制御配列を含まれる。例えば、当
該有効発現制御配列としては、ＳＶ４０またはアデノウ
ィルスの初期および後期プロモーター、ラクトース（ｌ
ａｃ）システム、トリプロファン（ｔｒｐ）システム、
ＴＡＣまたはＴＲＣシステム、ファージλの主要オペレ
ーターおよびプロモーター領域、ｆｄコート蛋白質の制
御領域、３−ホスフォグリセレートキナーゼまたは他の
解糖酵素に対するプロモーター、酸ホスファターゼ、
例、Ｐｈｏ５のプロモーター、酵母α接合システムおよ
び真核または原核細胞の遺伝子発現を制御することで知
られる他の配列のプロモーター、およびこれらの種々の
組み合わせが挙げられる。
これらのベクターにおいて使用することができる。この
ような有用な発現制御配列には、上述の発現ベクターの
構造遺伝子を伴う発現制御配列を含まれる。例えば、当
該有効発現制御配列としては、ＳＶ４０またはアデノウ
ィルスの初期および後期プロモーター、ラクトース（ｌ
ａｃ）システム、トリプロファン（ｔｒｐ）システム、
ＴＡＣまたはＴＲＣシステム、ファージλの主要オペレ
ーターおよびプロモーター領域、ｆｄコート蛋白質の制
御領域、３−ホスフォグリセレートキナーゼまたは他の
解糖酵素に対するプロモーター、酸ホスファターゼ、
例、Ｐｈｏ５のプロモーター、酵母α接合システムおよ
び真核または原核細胞の遺伝子発現を制御することで知
られる他の配列のプロモーター、およびこれらの種々の
組み合わせが挙げられる。
【００６６】また、広範な単細胞宿主細胞が有用であ
る。これらの宿主細胞としては、大腸菌株、プソイドモ
ナス属、バチルス属、ストレプトミセス属、真菌類、酵
母、スポドプテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ
ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（ＳＦ９）等の昆虫細胞、Ｃ
ＨＯおよびマウス細胞等の動物細胞、ＣＯＳ１、ＣＯＳ
７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０およびＢＭＴ１０等のアフリ
カミドリザル（Ａｆｒｉｃａｎ ｇｒｅｅｎ ｍｏｎｋ
ｅｙ）細胞、人間の細胞、並びに、組織培養における植
物細胞等が挙げられる。なお、動物細胞の発現において
は、本発明者はＣＨＯ細胞およびＣＨＯ７細胞が好まし
いと考える。
る。これらの宿主細胞としては、大腸菌株、プソイドモ
ナス属、バチルス属、ストレプトミセス属、真菌類、酵
母、スポドプテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ
ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（ＳＦ９）等の昆虫細胞、Ｃ
ＨＯおよびマウス細胞等の動物細胞、ＣＯＳ１、ＣＯＳ
７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０およびＢＭＴ１０等のアフリ
カミドリザル（Ａｆｒｉｃａｎ ｇｒｅｅｎ ｍｏｎｋ
ｅｙ）細胞、人間の細胞、並びに、組織培養における植
物細胞等が挙げられる。なお、動物細胞の発現において
は、本発明者はＣＨＯ細胞およびＣＨＯ７細胞が好まし
いと考える。
【００６７】ただし、ここに記載するＤＮＡを発現する
上で、これらすべてのベクターおよび発現制御配列が一
様に機能するとは限らないことは勿論のことである。ま
た、すべての宿主細胞の当該同一発現システムにおける
機能も同様である。しかしながら、当業者においては、
過度の実験を要することなく、これらのベクター、発現
制御配列および宿主細胞からの選定を行うことが可能で
ある。例えば、ベクターの選択においては、該ベクター
が宿主細胞内で複製されるため、当該宿主細胞が考慮さ
れる必要がある。また、該ベクターのコピー番号、当該
コピー番号を制御する能力、および、抗体マーカー等、
当該ベクターによりコードされる他の任意の蛋白質の発
現も考慮する必要がある。
上で、これらすべてのベクターおよび発現制御配列が一
様に機能するとは限らないことは勿論のことである。ま
た、すべての宿主細胞の当該同一発現システムにおける
機能も同様である。しかしながら、当業者においては、
過度の実験を要することなく、これらのベクター、発現
制御配列および宿主細胞からの選定を行うことが可能で
ある。例えば、ベクターの選択においては、該ベクター
が宿主細胞内で複製されるため、当該宿主細胞が考慮さ
れる必要がある。また、該ベクターのコピー番号、当該
コピー番号を制御する能力、および、抗体マーカー等、
当該ベクターによりコードされる他の任意の蛋白質の発
現も考慮する必要がある。
【００６８】また、発現制御配列を選択する場合には、
種々の因子を考慮する必要がある。例えば、該因子とし
ては、配列の相対的強度、制御の可能性、上記ＤＮＡ配
列特に潜在的二次構造との適合性が挙げられる。また、
単細胞宿主は、選択されたベクターとの適合性、該ＤＮ
Ａ配列によりコード化した生成物の毒性、分泌特性、可
溶性ポリペプチドを正確に折りたたむ能力、発酵または
培養の必要性、および、当該ＤＮＡ配列によりコード化
した生成物の精製の容易さを考慮した上で選択する必要
がある。
種々の因子を考慮する必要がある。例えば、該因子とし
ては、配列の相対的強度、制御の可能性、上記ＤＮＡ配
列特に潜在的二次構造との適合性が挙げられる。また、
単細胞宿主は、選択されたベクターとの適合性、該ＤＮ
Ａ配列によりコード化した生成物の毒性、分泌特性、可
溶性ポリペプチドを正確に折りたたむ能力、発酵または
培養の必要性、および、当該ＤＮＡ配列によりコード化
した生成物の精製の容易さを考慮した上で選択する必要
がある。
【００６９】なお、これらのパラメータの範囲内におい
て、当業者においては、発酵や例えばＣＨＯ細胞やＣＯ
Ｓ７細胞等の大規模な動物細胞の培養において必要なＤ
ＮＡ配列を発現する種々のベクター／発現制御配列／宿
主細胞の組み合わせを選択することが可能である。
て、当業者においては、発酵や例えばＣＨＯ細胞やＣＯ
Ｓ７細胞等の大規模な動物細胞の培養において必要なＤ
ＮＡ配列を発現する種々のベクター／発現制御配列／宿
主細胞の組み合わせを選択することが可能である。
【００７０】さらに、当該可溶性ＬＦＡ−３およびＣＤ
２ポリペプチドは従来の種々の方法のいずれかを使用す
ることにより上記の発酵や細胞培養から単離し精製する
ことができる。当業者においては、これらの中で、最適
の単離および精製法を選択することが可能である。
２ポリペプチドは従来の種々の方法のいずれかを使用す
ることにより上記の発酵や細胞培養から単離し精製する
ことができる。当業者においては、これらの中で、最適
の単離および精製法を選択することが可能である。
【００７１】組換えＤＮＡ技法は２０個以上のアミノ酸
配列を有する有用な可溶性ＣＤ２ポリペプチドや可溶性
ＬＦＡ−３ポリペプチドを生成する好ましい方法である
が、約２０個以下のアミノ酸を有する短めのＣＤ２やＬ
ＦＡ−３ポリペプチドは従来の化学的な合成法により生
成する方が好ましい。なお、本発明において有用な合成
的に生成されるポリペプチドは極めて高収率であり容易
に精製できる点で有利である。
配列を有する有用な可溶性ＣＤ２ポリペプチドや可溶性
ＬＦＡ−３ポリペプチドを生成する好ましい方法である
が、約２０個以下のアミノ酸を有する短めのＣＤ２やＬ
ＦＡ−３ポリペプチドは従来の化学的な合成法により生
成する方が好ましい。なお、本発明において有用な合成
的に生成されるポリペプチドは極めて高収率であり容易
に精製できる点で有利である。
【００７２】好ましくは、このような可溶性ＣＤ２ポリ
ペプチドまたは可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドは液相ま
たは固相のポリペプチド合成法により合成され、必要に
応じて、カルボキシペプチダーゼにより（Ｃ末端アミノ
酸を除去するために）消化されるか、手動式エドマン分
解法により（Ｎ末端アミノ酸を除去するために）分解さ
れる。また、ポリペプチドの適切な折りたたみはＫｅｎ
ｔ（「ポリペプチドおよび蛋白質の化学的合成」（Ａｎ
ｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７，ｐｐ．９５７−８
９（１９８８）））において記載されるようなジスルフ
ィド架橋の形成に好適な酸化条件下で行うことができ
る。その後、このようにして生成したポリペプチドは当
業界において広く知られる分離技法、好ましくは逆相Ｈ
ＰＬＣを利用することにより、精製することができる。
なお、液相合成法の使用はチロシンのいわゆるＯ−硫酸
エステル等の成長過程のポリペプチド鎖に特定の派生ア
ミノ酸を直接付加することを可能にする点で有利であ
る。これにより、本発明において有用なポリペプチドの
任意の残基を改変するための後続の処理が不要になる。
ペプチドまたは可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドは液相ま
たは固相のポリペプチド合成法により合成され、必要に
応じて、カルボキシペプチダーゼにより（Ｃ末端アミノ
酸を除去するために）消化されるか、手動式エドマン分
解法により（Ｎ末端アミノ酸を除去するために）分解さ
れる。また、ポリペプチドの適切な折りたたみはＫｅｎ
ｔ（「ポリペプチドおよび蛋白質の化学的合成」（Ａｎ
ｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７，ｐｐ．９５７−８
９（１９８８）））において記載されるようなジスルフ
ィド架橋の形成に好適な酸化条件下で行うことができ
る。その後、このようにして生成したポリペプチドは当
業界において広く知られる分離技法、好ましくは逆相Ｈ
ＰＬＣを利用することにより、精製することができる。
なお、液相合成法の使用はチロシンのいわゆるＯ−硫酸
エステル等の成長過程のポリペプチド鎖に特定の派生ア
ミノ酸を直接付加することを可能にする点で有利であ
る。これにより、本発明において有用なポリペプチドの
任意の残基を改変するための後続の処理が不要になる。
【００７３】Ｃ．ＬＦＡ−３およびＣＤ２擬態物質
本発明の方法においては、ＬＦＡ−３およびＣＤ２擬態
物質もまた有用である。これらの物質はＣＤ２／ＬＦＡ
−３相互作用の阻害剤であり、ペプチド、半ペプチド化
合物または非ペプチド化合物のいずれでもよい。なお、
最も好ましいＣＤ２およびＬＦＡ−３擬態物質は該ＣＤ
２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害すると共に、少なくとも
抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体７Ａ６または抗ＣＤ２
モノクローナル抗体ＴＳ２／１８（上述）を阻害する。
物質もまた有用である。これらの物質はＣＤ２／ＬＦＡ
−３相互作用の阻害剤であり、ペプチド、半ペプチド化
合物または非ペプチド化合物のいずれでもよい。なお、
最も好ましいＣＤ２およびＬＦＡ−３擬態物質は該ＣＤ
２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害すると共に、少なくとも
抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体７Ａ６または抗ＣＤ２
モノクローナル抗体ＴＳ２／１８（上述）を阻害する。
【００７４】このような擬態物質は多種類のペプチド
（例：５−２０個のアミノ酸の長さのもの）、半ペプチ
ド化合物または非ペプチド化合物および有機化合物を合
成し、次いで、当該ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害
する能力についてスクリーニングすることにより生成す
ることができる（参照：本明細書における参考文献とし
ての、米国特許第４８３３０９２号、Ｓｃｏｔｔおよび
Ｓｍｉｔｈ、「エピトープライブラリによるペプチドリ
ガンドについてのサーチ」（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，
ｐｐ．３８６−９０（１９９０））、およびＤｅｖｌｉ
ｎ他、「ランダムペプチドライブラリ：特異的蛋白質結
合分子の供給源」（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，ｐｐ．４
０４−０７（１９９０）））。
（例：５−２０個のアミノ酸の長さのもの）、半ペプチ
ド化合物または非ペプチド化合物および有機化合物を合
成し、次いで、当該ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害
する能力についてスクリーニングすることにより生成す
ることができる（参照：本明細書における参考文献とし
ての、米国特許第４８３３０９２号、Ｓｃｏｔｔおよび
Ｓｍｉｔｈ、「エピトープライブラリによるペプチドリ
ガンドについてのサーチ」（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，
ｐｐ．３８６−９０（１９９０））、およびＤｅｖｌｉ
ｎ他、「ランダムペプチドライブラリ：特異的蛋白質結
合分子の供給源」（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，ｐｐ．４
０４−０７（１９９０）））。
【００７５】Ｄ．派生阻害剤
本発明の方法においてはＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の
派生阻害剤もまた有用である。この場合、例えば、ここ
に記載の抗体同族体、可溶性ＣＤ２およびＬＦＡ−３ポ
リペプチド、あるいは、ＣＤ２およびＬＦＡ−３擬態物
質のいずれかが、抗ＬＦＡ−３および抗ＣＤ２抗体同族
体、可溶性ＬＦＡ−３およびＣＤ２ポリペプチド、ＣＤ
２およびＬＦＡ−３擬態物質、細胞障害性物質および薬
剤から成る群から独立に選択した１種以上の物質に機能
的に連結（化学的結合、遺伝的融合等により）してい
る。
派生阻害剤もまた有用である。この場合、例えば、ここ
に記載の抗体同族体、可溶性ＣＤ２およびＬＦＡ−３ポ
リペプチド、あるいは、ＣＤ２およびＬＦＡ−３擬態物
質のいずれかが、抗ＬＦＡ−３および抗ＣＤ２抗体同族
体、可溶性ＬＦＡ−３およびＣＤ２ポリペプチド、ＣＤ
２およびＬＦＡ−３擬態物質、細胞障害性物質および薬
剤から成る群から独立に選択した１種以上の物質に機能
的に連結（化学的結合、遺伝的融合等により）してい
る。
【００７６】このような派生的阻害剤の１種は２種以上
の阻害剤（同一種または異種）を架橋することにより生
成できる。この場合の、適当な架橋剤としては、ヘテロ
二官能的な、適当なスペーサにより分離される２個の異
なる反応基を有するもの（例：ｍ−マレイミドベンゾイ
ルーＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、あるい
は、ホモ二官能性のもの（例：スベリン酸ジスクシンイ
ミジル）が挙げられる。なお、このような架橋剤はピア
スケミカル社（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から市販されて
いる。
の阻害剤（同一種または異種）を架橋することにより生
成できる。この場合の、適当な架橋剤としては、ヘテロ
二官能的な、適当なスペーサにより分離される２個の異
なる反応基を有するもの（例：ｍ−マレイミドベンゾイ
ルーＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、あるい
は、ホモ二官能性のもの（例：スベリン酸ジスクシンイ
ミジル）が挙げられる。なお、このような架橋剤はピア
スケミカル社（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から市販されて
いる。
【００７７】他の可能な架橋処理としては、ＰＩ連結Ｌ
ＦＡ−３におけるＰＩ連結信号配列やそのフラグメント
を利用する方法がある。特に、該ＰＩ連結信号配列
（例：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＡＡ１６２−ＡＡ２１
２）をコードするＤＮＡは所望のポリペプチド、好まし
くは、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドをコードするＤＮ
Ａの下流側で連結する。もしもこのような構造が適当な
真核細胞内において発現されると、該細胞は当該ＰＩ連
結信号配列を認識してＰＩを対応するポリペプチドに共
有的に連結する。その後、該ＰＩの疎水性により、当該
ポリペプチドのミセル凝集体が形成される。
ＦＡ−３におけるＰＩ連結信号配列やそのフラグメント
を利用する方法がある。特に、該ＰＩ連結信号配列
（例：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＡＡ１６２−ＡＡ２１
２）をコードするＤＮＡは所望のポリペプチド、好まし
くは、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドをコードするＤＮ
Ａの下流側で連結する。もしもこのような構造が適当な
真核細胞内において発現されると、該細胞は当該ＰＩ連
結信号配列を認識してＰＩを対応するポリペプチドに共
有的に連結する。その後、該ＰＩの疎水性により、当該
ポリペプチドのミセル凝集体が形成される。
【００７８】また、１種以上の細胞障害性細胞または薬
剤物質に連結した阻害剤も有用である。この場合の有用
な薬剤としては、ＣＤ２またはＬＦＡ−３以外の人間の
ポリペプチドに特異的な抗体同族体またはその一部分等
の生物学的に活性なペプチド、ポリペプチドおよび蛋白
質が挙げられる。さらに、当該有用な薬剤および細胞障
害性物質として、シクロスポリンＡ、プレドニソン、Ｆ
Ｋ５０６、メトトレキセート、ステロイド、レチノイ
ド、インターフェロンおよびナイトロジェンマスタード
が挙げられる。
剤物質に連結した阻害剤も有用である。この場合の有用
な薬剤としては、ＣＤ２またはＬＦＡ−３以外の人間の
ポリペプチドに特異的な抗体同族体またはその一部分等
の生物学的に活性なペプチド、ポリペプチドおよび蛋白
質が挙げられる。さらに、当該有用な薬剤および細胞障
害性物質として、シクロスポリンＡ、プレドニソン、Ｆ
Ｋ５０６、メトトレキセート、ステロイド、レチノイ
ド、インターフェロンおよびナイトロジェンマスタード
が挙げられる。
【００７９】また、薬剤により派生した好ましい阻害剤
としては、組換え的に生成したポリペプチドが挙げら
れ、この場合、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性
ＣＤ２ポリペプチドまたはペプチジルＣＤ２やペプチジ
ルＬＦＡ−３擬態物質が免疫グロブリンＨ鎖のヒンジ領
域の全部または一部および該Ｈ鎖の不変領域の全部また
は一部に融合している。なお、このような融合蛋白質を
作成するために好ましいポリペプチドは可溶性ＬＦＡ−
３ポリペプチドである。さらに、最も好ましいものは、
人間のＩｇＧ１ヒンジ領域の一部分（内鎖ジスルフィド
結合に関与すると考えられる２種のシステイン残基を含
むヒンジ領域のＣ末端の１０個のアミノ酸を含む）およ
び該ＩｇＧ１Ｈ鎖の不変ドメインにおけるＣＨ２および
ＣＨ３領域に融合したＬＦＡ−３のＡＡ１−ＡＡ９２
（例：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を含む融合蛋白質であ
る。このような融合蛋白質は血清の半減期を延長し、阻
害剤の二量化を可能にすることが期待できる。
としては、組換え的に生成したポリペプチドが挙げら
れ、この場合、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性
ＣＤ２ポリペプチドまたはペプチジルＣＤ２やペプチジ
ルＬＦＡ−３擬態物質が免疫グロブリンＨ鎖のヒンジ領
域の全部または一部および該Ｈ鎖の不変領域の全部また
は一部に融合している。なお、このような融合蛋白質を
作成するために好ましいポリペプチドは可溶性ＬＦＡ−
３ポリペプチドである。さらに、最も好ましいものは、
人間のＩｇＧ１ヒンジ領域の一部分（内鎖ジスルフィド
結合に関与すると考えられる２種のシステイン残基を含
むヒンジ領域のＣ末端の１０個のアミノ酸を含む）およ
び該ＩｇＧ１Ｈ鎖の不変ドメインにおけるＣＨ２および
ＣＨ３領域に融合したＬＦＡ−３のＡＡ１−ＡＡ９２
（例：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を含む融合蛋白質であ
る。このような融合蛋白質は血清の半減期を延長し、阻
害剤の二量化を可能にすることが期待できる。
【００８０】薬剤組成物および本発明による方法
本発明はＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の１種以上の阻害
剤またはその派生形態を哺乳動物に投与することによっ
て当該哺乳動物における上述の皮膚障害を防止あるいは
治療するための方法を提供する。
剤またはその派生形態を哺乳動物に投与することによっ
て当該哺乳動物における上述の皮膚障害を防止あるいは
治療するための方法を提供する。
【００８１】好ましくは、該阻害剤またはその派生形態
の効果量が投与される。この「効果量」とは、本書に記
載した皮膚障害の範囲または程度を低減し得る量を意味
する。
の効果量が投与される。この「効果量」とは、本書に記
載した皮膚障害の範囲または程度を低減し得る量を意味
する。
【００８２】当業者においては、当該効果量の阻害剤
が、とりわけ、投与スケジュール、単位投薬量、該阻害
剤の投与における他の治療剤との組み合わせ、患者の免
疫状態および健康状態、投与した特定阻害剤の治療およ
び予防における活性、および、血清の半減期に依存する
ことは明らかである。
が、とりわけ、投与スケジュール、単位投薬量、該阻害
剤の投与における他の治療剤との組み合わせ、患者の免
疫状態および健康状態、投与した特定阻害剤の治療およ
び予防における活性、および、血清の半減期に依存する
ことは明らかである。
【００８３】好ましくは、該阻害剤は体重１ｋｇ当たり
約０．００１ｍｇおよび約５０ｍｇの間で、より好まし
くは体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇおよび約１０ｍｇ
の間で、最も好ましくは体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ
および約４ｍｇの間で投与される。
約０．００１ｍｇおよび約５０ｍｇの間で、より好まし
くは体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇおよび約１０ｍｇ
の間で、最も好ましくは体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ
および約４ｍｇの間で投与される。
【００８４】単位投薬量は効果が現れるまで投与され
る。なお、この効果はインビトロなＴ細胞活性アッセイ
および影響を受けた皮膚領域の除去（ｃｌｅａｒｉｎ
ｇ）を含む種々の方法によって計測できる。好ましく
は、該単位投薬量の投与が１週間に１ないし３回または
１日に１ないし３回行われる。より好ましくは、当該投
与が約３日から７日の間で１日に１ないし３回または１
カ月毎に約３日および７日の間で１日に１ないし３回行
われる。なお、これよりも低いまたは高い投薬量および
他の投与スケジュールを用いることもできる。
る。なお、この効果はインビトロなＴ細胞活性アッセイ
および影響を受けた皮膚領域の除去（ｃｌｅａｒｉｎ
ｇ）を含む種々の方法によって計測できる。好ましく
は、該単位投薬量の投与が１週間に１ないし３回または
１日に１ないし３回行われる。より好ましくは、当該投
与が約３日から７日の間で１日に１ないし３回または１
カ月毎に約３日および７日の間で１日に１ないし３回行
われる。なお、これよりも低いまたは高い投薬量および
他の投与スケジュールを用いることもできる。
【００８５】さらに、当該阻害剤およびその派生形態は
薬剤として許容可能なキャリヤを含む組成物中において
投与されることが好ましい。この「薬剤として許容可能
なキャリヤ」とは、投与を受ける患者においてアレルギ
ー反応や他の不都合な作用を生じないキャリヤを意味す
る。
薬剤として許容可能なキャリヤを含む組成物中において
投与されることが好ましい。この「薬剤として許容可能
なキャリヤ」とは、投与を受ける患者においてアレルギ
ー反応や他の不都合な作用を生じないキャリヤを意味す
る。
【００８６】適当な薬剤として許容可能なキャリヤは、
例えば、水、生理食塩水、リン酸塩バッファー処理した
生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノー
ル、並びにこれらの組み合わせの１種またはそれ以上で
ある。さらに、該薬剤として許容可能なキャリヤは、湿
潤剤または乳化剤、貯蔵寿命や阻害剤の効果を向上する
ための防腐剤やバッファー等の少量の補助的物質を含ん
でいてもよい。
例えば、水、生理食塩水、リン酸塩バッファー処理した
生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノー
ル、並びにこれらの組み合わせの１種またはそれ以上で
ある。さらに、該薬剤として許容可能なキャリヤは、湿
潤剤または乳化剤、貯蔵寿命や阻害剤の効果を向上する
ための防腐剤やバッファー等の少量の補助的物質を含ん
でいてもよい。
【００８７】また、該薬剤組成物または阻害剤は他の治
療剤または予防剤と共に投与することができる。これら
の薬剤としては、例えば、シクロスポリンＡ、ステロイ
ド、レチノイド、ナイトロジェンマスタード、インター
フェロン、メトトレキセート、抗体および抗ヒスタミン
剤がある。
療剤または予防剤と共に投与することができる。これら
の薬剤としては、例えば、シクロスポリンＡ、ステロイ
ド、レチノイド、ナイトロジェンマスタード、インター
フェロン、メトトレキセート、抗体および抗ヒスタミン
剤がある。
【００８８】なお、これらの薬剤は阻害剤と共に単一の
投与形態（すなわち、同一の薬剤組成物の一部とし
て）、該阻害剤とは別でかつ同時の複数の投与形態、あ
るいは、これら二成分が別々にかつ連続的に投与される
複数の投与形態において投与できる。また、該阻害剤お
よびその他の活性薬剤を単一の複合分子の形態とするこ
とができる。なお、このような二成分の複合化は当業界
において周知の標準的な架橋技法により行うことができ
る。さらに、単一分子は組換え融合蛋白質の形態を採る
こともできる。加えて、本発明において有用な当該阻害
剤または薬剤組成物はＰＵＶＡ、化学療法およびＵＶ照
射等の他の療法との組み合わせで使用することもでき
る。このような組合せ療法は当該治療剤または予防剤の
投薬量を低減できる点で有利である。
投与形態（すなわち、同一の薬剤組成物の一部とし
て）、該阻害剤とは別でかつ同時の複数の投与形態、あ
るいは、これら二成分が別々にかつ連続的に投与される
複数の投与形態において投与できる。また、該阻害剤お
よびその他の活性薬剤を単一の複合分子の形態とするこ
とができる。なお、このような二成分の複合化は当業界
において周知の標準的な架橋技法により行うことができ
る。さらに、単一分子は組換え融合蛋白質の形態を採る
こともできる。加えて、本発明において有用な当該阻害
剤または薬剤組成物はＰＵＶＡ、化学療法およびＵＶ照
射等の他の療法との組み合わせで使用することもでき
る。このような組合せ療法は当該治療剤または予防剤の
投薬量を低減できる点で有利である。
【００８９】さらに、該阻害剤または薬剤組成物は種々
の形態を採り得る。これらは、例えば、錠剤、丸薬、粉
体、溶液、分散液または懸濁液、リポソーム、座薬など
注射可能、注入可能および局所投与可能な標品の固体、
半固体および液体の投与形態である。なお、好ましい形
態は投与の態様や治療の適用性に依存するが、注射可能
または注入可能な溶液がより好ましい。
の形態を採り得る。これらは、例えば、錠剤、丸薬、粉
体、溶液、分散液または懸濁液、リポソーム、座薬など
注射可能、注入可能および局所投与可能な標品の固体、
半固体および液体の投与形態である。なお、好ましい形
態は投与の態様や治療の適用性に依存するが、注射可能
または注入可能な溶液がより好ましい。
【００９０】さらに、当該阻害剤または薬剤組成物は静
脈内、筋肉内、皮下、関節内、包膜内、骨膜、腫瘍内、
障害部内または障害部周囲に、注入、経口、局所的投与
または吸入により投与できる。好ましくは、皮下、筋肉
内または静脈内に投与する。また、最も好ましくは、皮
下に投与する。
脈内、筋肉内、皮下、関節内、包膜内、骨膜、腫瘍内、
障害部内または障害部周囲に、注入、経口、局所的投与
または吸入により投与できる。好ましくは、皮下、筋肉
内または静脈内に投与する。また、最も好ましくは、皮
下に投与する。
【００９１】本発明をさらによく理解するために以下の
実験例を説明する。なお、当該実験例は例示のためのみ
のものであり、これらによって本発明の範囲をいかなる
意味においても限定するものではない。
実験例を説明する。なお、当該実験例は例示のためのみ
のものであり、これらによって本発明の範囲をいかなる
意味においても限定するものではない。
【００９２】実験例１ 実験対象
６人の成人の患者について調査した。プロトコルについ
て国内検閲局の認可を得た後、情報公開の同意を得た。
また、すべての患者は乾癬すなわち特徴的形態および分
布の慢性丘疹状鱗苞プラークに対する主要診断基準を満
たしていた。これらの患者には局所的なコルチコステロ
イドの断続的投与を共通に行い、当該調査に入る前の２
週間これを中断した。また、乾癬症や他の皮膚障害の経
験のない健康的なボランティアの一群を正常な対照群と
した。
て国内検閲局の認可を得た後、情報公開の同意を得た。
また、すべての患者は乾癬すなわち特徴的形態および分
布の慢性丘疹状鱗苞プラークに対する主要診断基準を満
たしていた。これらの患者には局所的なコルチコステロ
イドの断続的投与を共通に行い、当該調査に入る前の２
週間これを中断した。また、乾癬症や他の皮膚障害の経
験のない健康的なボランティアの一群を正常な対照群と
した。
【００９３】表皮細胞サスペンションの標品
皮膚のバイオプシー試料を角質部を用いて正常および障
害のある皮膚の両方から得た後、５０ユニット／ｍｌの
ディスパーゼ（ｄｉｓｐａｓｅ）（Ｃｏｌｌａｂｏｒａ
ｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）
を含有するダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）のリン酸塩
生理食塩水（「ＰＢＳ」）（ＧｉｂｃｏＬａｂｓ，Ｇｒ
ａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）に浸漬した。その後、該
試料を４℃で１８時間培養し、表皮部を内皮から除去し
た。
害のある皮膚の両方から得た後、５０ユニット／ｍｌの
ディスパーゼ（ｄｉｓｐａｓｅ）（Ｃｏｌｌａｂｏｒａ
ｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）
を含有するダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）のリン酸塩
生理食塩水（「ＰＢＳ」）（ＧｉｂｃｏＬａｂｓ，Ｇｒ
ａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）に浸漬した。その後、該
試料を４℃で１８時間培養し、表皮部を内皮から除去し
た。
【００９４】これらの表皮シートを０．５％トリプシン
（Ｓｉｇｍａ ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕ
ｉｓ，ＭＯ）を含有するダルベッコＰＢＳに浸漬し、３
７℃で３０分培養した。
（Ｓｉｇｍａ ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕ
ｉｓ，ＭＯ）を含有するダルベッコＰＢＳに浸漬し、３
７℃で３０分培養した。
【００９５】このようにトリプシンで処理した表皮シー
トを０．０５％のデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓ
ｅ）（Ｓｉｇｍａ）を含むダルベッコＰＢＳ中に移して
細胞サスペンションにした。ウシ胎児血清（「ＦＢ
Ｓ」）（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を不活性
な残余トリプシンに加えた後、当該表皮細胞サスペンシ
ョンを１１２μｍナイロンフィルタ（Ｔｅｔｋｏ，Ｅｌ
ｍｓｆｏｒｄ，ＮＹ）に通した。この概ね単一細胞のサ
スペンションを１％ＦＢＳを含むダルベッコＰＢＳ中に
おいて３回洗浄した後、当該細胞を１％のペニシリンお
よびストレプトマイシン、１％グルタミン（Ｇｉｂｃ
ｏ）および１０％人間ＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ）を含有す
るＲＰＭＩ１６４０（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ ＭＡ Ｂｉ
ｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗａｋｅｒｆｉｅｌｄ，ＭＤ）か
ら成る培養液中において再懸濁した。
トを０．０５％のデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓ
ｅ）（Ｓｉｇｍａ）を含むダルベッコＰＢＳ中に移して
細胞サスペンションにした。ウシ胎児血清（「ＦＢ
Ｓ」）（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を不活性
な残余トリプシンに加えた後、当該表皮細胞サスペンシ
ョンを１１２μｍナイロンフィルタ（Ｔｅｔｋｏ，Ｅｌ
ｍｓｆｏｒｄ，ＮＹ）に通した。この概ね単一細胞のサ
スペンションを１％ＦＢＳを含むダルベッコＰＢＳ中に
おいて３回洗浄した後、当該細胞を１％のペニシリンお
よびストレプトマイシン、１％グルタミン（Ｇｉｂｃ
ｏ）および１０％人間ＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ）を含有す
るＲＰＭＩ１６４０（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ ＭＡ Ｂｉ
ｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗａｋｅｒｆｉｅｌｄ，ＭＤ）か
ら成る培養液中において再懸濁した。
【００９６】Ｔ細胞の単離および減少処理（Ｄｅｐｌｅ
ｔｉｏｎ） 末梢血液単核細胞（「ＭＮＣ」）をフィコールハイパー
ク（Ｆｉｃｏｌｌ Ｈｙｐａｑｕｅ：Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）密度勾配遠心分離を用いて当該製造者の指示するプ
ロトコルにしたがってペパリンで凝血防止した血液から
単離した。マクロファージを３７℃で１時間のプラスチ
ック付着により除去した。次いで、非付着のマクロファ
ージ減少されたＭＮＣを洗浄した後、ＣＤ８＋Ｔリンパ
球、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞およびＮＫ細
胞を、ＣＤ８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ８０１４）、ＨＬＡ−
ＤＲ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ Ｈ３５５）およびＣＤ１１
（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８０２６）に対するモノクローナ
ル抗体の存在下インキュベーションすることにより減少
させた。これらの抗体はプリスタン注入したマウスの腹
水液のＰＢＳ（１：２００）における希釈液として用い
た。
ｔｉｏｎ） 末梢血液単核細胞（「ＭＮＣ」）をフィコールハイパー
ク（Ｆｉｃｏｌｌ Ｈｙｐａｑｕｅ：Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）密度勾配遠心分離を用いて当該製造者の指示するプ
ロトコルにしたがってペパリンで凝血防止した血液から
単離した。マクロファージを３７℃で１時間のプラスチ
ック付着により除去した。次いで、非付着のマクロファ
ージ減少されたＭＮＣを洗浄した後、ＣＤ８＋Ｔリンパ
球、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞およびＮＫ細
胞を、ＣＤ８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ８０１４）、ＨＬＡ−
ＤＲ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ Ｈ３５５）およびＣＤ１１
（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８０２６）に対するモノクローナ
ル抗体の存在下インキュベーションすることにより減少
させた。これらの抗体はプリスタン注入したマウスの腹
水液のＰＢＳ（１：２００）における希釈液として用い
た。
【００９７】この抗体処理したＭＮＣを４℃で４．５ｎ
ｍの磁気粒子コートを用いて山羊の抗マウスＩｇＧの存
在下に（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ−４５０，Ｄｙｎａ
ｌ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）１細胞当たり３ビーズの
比率で培養した。次いで、抗体陽性細胞を磁石（Ａｄｖ
ａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇ
ｅ，ＭＡ）に引き付けて減少させた。この場合、当該磁
石を試験管の側方に配して懸濁液中の残存細胞のデカン
テーションを可能にした。さらに、デカンテーション処
理した細胞懸濁液を再度磁石で処理してから残存細胞を
収集した。その後、残存する抗体陽性細胞をさらに減少
するために新鮮な山羊の抗マウスＩｇＧビーズを再び収
集した細胞の懸濁液に加え、このような磁気除去処理を
繰り返した。次いで、細胞をＰＢＳ中で洗浄した後、使
用する前に、培養液において再び懸濁した。このように
して、９９％純度に濃縮したＣＤ４＋Ｔリンパ球を含有
し、固有の抗原提示活性のない標品を作成した。
ｍの磁気粒子コートを用いて山羊の抗マウスＩｇＧの存
在下に（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ−４５０，Ｄｙｎａ
ｌ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）１細胞当たり３ビーズの
比率で培養した。次いで、抗体陽性細胞を磁石（Ａｄｖ
ａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇ
ｅ，ＭＡ）に引き付けて減少させた。この場合、当該磁
石を試験管の側方に配して懸濁液中の残存細胞のデカン
テーションを可能にした。さらに、デカンテーション処
理した細胞懸濁液を再度磁石で処理してから残存細胞を
収集した。その後、残存する抗体陽性細胞をさらに減少
するために新鮮な山羊の抗マウスＩｇＧビーズを再び収
集した細胞の懸濁液に加え、このような磁気除去処理を
繰り返した。次いで、細胞をＰＢＳ中で洗浄した後、使
用する前に、培養液において再び懸濁した。このように
して、９９％純度に濃縮したＣＤ４＋Ｔリンパ球を含有
し、固有の抗原提示活性のない標品を作成した。
【００９８】自己の乾癬細胞に対するＴリンパ球の増殖
応答 １０万個のＣＤ４＋Ｔ細胞を丸底のマイクロタイターウ
ェル（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に１
０％人間ＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍ
Ｏ）を含む０．２ｍｌのＲＰＭＩ中の８万個の乾癬表皮
細胞と共に加えた。該１ウェル当たりの乾癬表皮細胞の
数は当該数によりＴ細胞の自己反応的応答が誘引できた
とするそれまでの実験結果から選択した。５％ＣＯ２／
９５％空気において３７℃で６日間インキュベーション
した後、１ウェル当たり１μＣｉの［３Ｈ］ＴｄＲ（Ｉ
ＣＮ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，
ＣＡ）を加え、１８時間後に当該細胞をＰＨＤセルハー
ベスタ上に収集した（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）。
この［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みはパッカード（Ｐａｃｋ
ａｒｄ）シンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｄｏｗｎｅｒｓ Ｇｒ
ｏｖｅｒ，ＩＬ）上で計測した。なお、当該［３Ｈ］Ｔ
ｄＲ取み込み量はＴ細胞の増殖量に相当する。
応答 １０万個のＣＤ４＋Ｔ細胞を丸底のマイクロタイターウ
ェル（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に１
０％人間ＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍ
Ｏ）を含む０．２ｍｌのＲＰＭＩ中の８万個の乾癬表皮
細胞と共に加えた。該１ウェル当たりの乾癬表皮細胞の
数は当該数によりＴ細胞の自己反応的応答が誘引できた
とするそれまでの実験結果から選択した。５％ＣＯ２／
９５％空気において３７℃で６日間インキュベーション
した後、１ウェル当たり１μＣｉの［３Ｈ］ＴｄＲ（Ｉ
ＣＮ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，
ＣＡ）を加え、１８時間後に当該細胞をＰＨＤセルハー
ベスタ上に収集した（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）。
この［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みはパッカード（Ｐａｃｋ
ａｒｄ）シンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｄｏｗｎｅｒｓ Ｇｒ
ｏｖｅｒ，ＩＬ）上で計測した。なお、当該［３Ｈ］Ｔ
ｄＲ取み込み量はＴ細胞の増殖量に相当する。
【００９９】また、該Ｔ細胞（「ＴＣ」）のみまたは表
皮細胞（「ＥＣ」）のみに対応する適当な対照の処理を
上述のプロトコルを用いて行った。この結果、これらの
アッセイにおいては［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みが全く見
られなかった。一方、乾癬表皮細胞に応じた自己Ｔ細胞
の活発な増殖が見られた（データ示さず）。
皮細胞（「ＥＣ」）のみに対応する適当な対照の処理を
上述のプロトコルを用いて行った。この結果、これらの
アッセイにおいては［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みが全く見
られなかった。一方、乾癬表皮細胞に応じた自己Ｔ細胞
の活発な増殖が見られた（データ示さず）。
【０１００】加えて、正常な皮膚に対する同種異系応答
を試験するために、上述のプロトコルを１０万個の同種
異系Ｔ細胞および８万個の正常な皮膚細胞を用いて行っ
た。この結果、これらの条件下において、当該同種異系
Ｔ細胞の活発な増殖が見られた（データ示さず）。
を試験するために、上述のプロトコルを１０万個の同種
異系Ｔ細胞および８万個の正常な皮膚細胞を用いて行っ
た。この結果、これらの条件下において、当該同種異系
Ｔ細胞の活発な増殖が見られた（データ示さず）。
【０１０１】自己Ｔリンパ球増殖を刺激する乾癬表皮細
胞の能力の 阻止 抗ＣＤ２モノクローナル抗体（ＴＳ２／１８）（Ｓａｎ
ｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、「人間Ｔリンパ球媒介の細
胞溶解を伴う３種の異なる抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−
２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐｐ．７４８９−９３（１
９８２）））、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体（７Ａ
６）（ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９５）または無関係な特
異性のイソタイプ適合型対照モノクローナル抗体（ＭＯ
ＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の［３Ｈ］ＴｄＲ取り込み効果
を、上述の如きプロトコルを用いて５０μｇ／ｍｌのそ
れぞれの抗体の存在下で計測した。
胞の能力の 阻止 抗ＣＤ２モノクローナル抗体（ＴＳ２／１８）（Ｓａｎ
ｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、「人間Ｔリンパ球媒介の細
胞溶解を伴う３種の異なる抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−
２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐｐ．７４８９−９３（１
９８２）））、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体（７Ａ
６）（ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９５）または無関係な特
異性のイソタイプ適合型対照モノクローナル抗体（ＭＯ
ＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の［３Ｈ］ＴｄＲ取り込み効果
を、上述の如きプロトコルを用いて５０μｇ／ｍｌのそ
れぞれの抗体の存在下で計測した。
【０１０２】第１図は、イソタイプ適合型対照抗体の存
在下における増殖に対比した場合の、抗ＣＤ２または抗
ＬＦＡ−３の添加による障害乾癬表皮に対応する自己Ｔ
細胞増殖の一貫した（ｎ＝４）実質的（約６０％）阻害
効果を示している。
在下における増殖に対比した場合の、抗ＣＤ２または抗
ＬＦＡ−３の添加による障害乾癬表皮に対応する自己Ｔ
細胞増殖の一貫した（ｎ＝４）実質的（約６０％）阻害
効果を示している。
【０１０３】第１図は４人の患者のみのデータを示して
いるが、これら４人の患者は、なんらの抗原も当該シス
テムに加えられていないにもかかわらず、自らの障害表
皮に対する血液ＣＤ４＋Ｔ細胞の自己反応性を示してい
る。このことは異常な結果である。すなわち、正常な固
体の同種異系血液Ｔ細胞の共通培養体および表皮細胞は
反応しないからである。このような反応は当該皮膚内に
おいて生じた自己免疫反応のインビトロモデルであると
考えられる。なお、他の二人の患者のＥＣ標品は参考に
ならなかった。すなわち、これらのＥＣ標品の一つはバ
クテリアにより汚染され、他の一つは自己反応性Ｔ細胞
応答を誘発しない抗原提示細胞を含んでいたからであ
る。
いるが、これら４人の患者は、なんらの抗原も当該シス
テムに加えられていないにもかかわらず、自らの障害表
皮に対する血液ＣＤ４＋Ｔ細胞の自己反応性を示してい
る。このことは異常な結果である。すなわち、正常な固
体の同種異系血液Ｔ細胞の共通培養体および表皮細胞は
反応しないからである。このような反応は当該皮膚内に
おいて生じた自己免疫反応のインビトロモデルであると
考えられる。なお、他の二人の患者のＥＣ標品は参考に
ならなかった。すなわち、これらのＥＣ標品の一つはバ
クテリアにより汚染され、他の一つは自己反応性Ｔ細胞
応答を誘発しない抗原提示細胞を含んでいたからであ
る。
【０１０４】また、５０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２または抗
ＬＦＡ−３抗体を上述の同種異系の正常皮膚アッセイに
加えても、同種異系Ｔ細胞の活性化を阻止することがわ
かった。ただし、この場合の阻害の程度は乾癬障害の表
皮細胞を用いた自己抗原提示細胞の活性に見られた結果
（データ示さず）に比して実質的ではなかった（約４０
％）。
ＬＦＡ−３抗体を上述の同種異系の正常皮膚アッセイに
加えても、同種異系Ｔ細胞の活性化を阻止することがわ
かった。ただし、この場合の阻害の程度は乾癬障害の表
皮細胞を用いた自己抗原提示細胞の活性に見られた結果
（データ示さず）に比して実質的ではなかった（約４０
％）。
【０１０５】また、イソタイプ適合型対照抗体（無関係
な抗原に対して特異的）の添加は乾癬障害の表皮細胞に
より誘発した自己Ｔ細胞のＴ細胞増殖（データ示さず）
の程度を実質的に変化させなかった。
な抗原に対して特異的）の添加は乾癬障害の表皮細胞に
より誘発した自己Ｔ細胞のＴ細胞増殖（データ示さず）
の程度を実質的に変化させなかった。
【０１０６】実験例２ 実験対象
本調査には１人の成人を実験対象とした。プロトコルに
ついて国内検閲局の認可を得た後、情報公開の同意を得
た。当該実験に先立って、対象体において皮膚紅斑を誘
発するに要する一組みの蛍光管（ＦＳ４０）からのＵＶ
Ｂの最小照射量を決定した。適度な日焼け（４個の最
小の紅斑を生じる量）の照射を左の臀部に対して行い、
３日後にＵＶ障害の皮膚供給源とした。また、右臀部の
未照射の皮膚を対照とした。
ついて国内検閲局の認可を得た後、情報公開の同意を得
た。当該実験に先立って、対象体において皮膚紅斑を誘
発するに要する一組みの蛍光管（ＦＳ４０）からのＵＶ
Ｂの最小照射量を決定した。適度な日焼け（４個の最
小の紅斑を生じる量）の照射を左の臀部に対して行い、
３日後にＵＶ障害の皮膚供給源とした。また、右臀部の
未照射の皮膚を対照とした。
【０１０７】表皮細胞サスペンションの標品
角質部を用いて当該正常および日焼けの皮膚から皮膚バ
イオプシー試料を得た。次いで、実験例１と実質的同一
のプロトコルを用いてこれらの試料より表皮細胞のサス
ペンションを作成した。
イオプシー試料を得た。次いで、実験例１と実質的同一
のプロトコルを用いてこれらの試料より表皮細胞のサス
ペンションを作成した。
【０１０８】Ｔ細胞の単離および減少処理
末梢血液単核細胞（「ＭＮＣ」）をフィコールハイパー
ク（Ｆｉｃｏｌｌ Ｈｙｐａｑｕｅ：Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）密度勾配遠心分離を用いて当該製造者の指示するプ
ロトコルにしたがって他の人間のペパリン凝血防止した
血液から単離した。次いで、ＣＤ４＋Ｔリンパ球を実験
例１と概ね同様に作成した。
ク（Ｆｉｃｏｌｌ Ｈｙｐａｑｕｅ：Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）密度勾配遠心分離を用いて当該製造者の指示するプ
ロトコルにしたがって他の人間のペパリン凝血防止した
血液から単離した。次いで、ＣＤ４＋Ｔリンパ球を実験
例１と概ね同様に作成した。
【０１０９】同種異系のＵＶ障害皮膚細胞に対するＴリ
ンパ球の増 殖応答 他の個体から得た１０万個のＣＤ４＋Ｔ細胞を丸底のマ
イクロタイターウェル（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄ
ｇｅ，ＭＡ）に当該対象体から得たＵＶ障害の表皮細胞
とともに加えて［３Ｈ］ＴｄＲの存在下でインキュベ−
ションした後、収集した。その後、該［３Ｈ］ＴｄＲの
取り込みを実験例１と概ね同様に計測した。なお、当該
実験は抗原刺激が乾癬刺激性の自己抗原ではなくアロ抗
原である点で実験例１と異なる。したがって、自己Ｔ細
胞ではなく、同種異系のＴ細胞が使用されている。
ンパ球の増 殖応答 他の個体から得た１０万個のＣＤ４＋Ｔ細胞を丸底のマ
イクロタイターウェル（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄ
ｇｅ，ＭＡ）に当該対象体から得たＵＶ障害の表皮細胞
とともに加えて［３Ｈ］ＴｄＲの存在下でインキュベ−
ションした後、収集した。その後、該［３Ｈ］ＴｄＲの
取り込みを実験例１と概ね同様に計測した。なお、当該
実験は抗原刺激が乾癬刺激性の自己抗原ではなくアロ抗
原である点で実験例１と異なる。したがって、自己Ｔ細
胞ではなく、同種異系のＴ細胞が使用されている。
【０１１０】第２図は、ＵＶ障害表皮細胞（「ＥＣ＋Ｔ
Ｃ」）を用いてインキュベ−ションした場合の同種異系
Ｔ細胞の活発な増殖の程度（［３Ｈ］ＴｄＲ取り込みに
よる計測値として）を示している。
Ｃ」）を用いてインキュベ−ションした場合の同種異系
Ｔ細胞の活発な増殖の程度（［３Ｈ］ＴｄＲ取り込みに
よる計測値として）を示している。
【０１１１】同種異系Ｔリンパ球増殖を刺激するＵＶ障
害表皮細胞 の能力の阻止 抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体（１Ｅ６）（ＡＴＣＣ
ＨＢ １０６９３）、抗ＣＤ２モノクローナル抗体
（ＴＳ２／１８）（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、
「人間Ｔリンパ球媒介の細胞溶解を伴う３種の異なる抗
原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐ
ｐ．７４８９−９３（１９８２）））または無関係な特
異性のイソタイプ適合型対照モノクローナル抗体（ＭＯ
ＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の［３Ｈ］ＴｄＲ取り込み効果
を、上述の如きプロトコルを用いて５０μｇ／ｍｌのそ
れぞれの抗体の存在下で計測した。
害表皮細胞 の能力の阻止 抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体（１Ｅ６）（ＡＴＣＣ
ＨＢ １０６９３）、抗ＣＤ２モノクローナル抗体
（ＴＳ２／１８）（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、
「人間Ｔリンパ球媒介の細胞溶解を伴う３種の異なる抗
原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐ
ｐ．７４８９−９３（１９８２）））または無関係な特
異性のイソタイプ適合型対照モノクローナル抗体（ＭＯ
ＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の［３Ｈ］ＴｄＲ取り込み効果
を、上述の如きプロトコルを用いて５０μｇ／ｍｌのそ
れぞれの抗体の存在下で計測した。
【０１１２】第２図は、当該無関係な特異性のモノクロ
ーナル抗体（ＭＯＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏ．）の存在下における［３Ｈ］ＴｄＲの取り
込みが幾分減少していることを示している。しかしなが
ら、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体１Ｅ６または抗Ｃ
Ｄ２モノクローナル抗体ＴＳ２／１８を添加すると、上
記対照抗体の存在下における増殖に比して、実質的なＴ
細胞増殖の阻害が生じた。
ーナル抗体（ＭＯＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏ．）の存在下における［３Ｈ］ＴｄＲの取り
込みが幾分減少していることを示している。しかしなが
ら、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体１Ｅ６または抗Ｃ
Ｄ２モノクローナル抗体ＴＳ２／１８を添加すると、上
記対照抗体の存在下における増殖に比して、実質的なＴ
細胞増殖の阻害が生じた。
【０１１３】寄託
本発明において有用なマウスのハイブリドーマ細胞およ
び抗ＬＦＡ−３抗体は１９９１年３月５日にブダペスト
条約に基づきアメリカンタイプカルチャーコレクション
（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）に
寄託された培養体により例示され，以下の如く同定され
る。
び抗ＬＦＡ−３抗体は１９９１年３月５日にブダペスト
条約に基づきアメリカンタイプカルチャーコレクション
（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）に
寄託された培養体により例示され，以下の如く同定され
る。
【０１１４】指定名
ＡＴＣＣ受入番号
１Ｅ６ ＨＢ １０３９３
ＨＣ−１Ｂ１１ ＨＢ １０６９４
７Ａ６ ＨＢ １０６９５
８Ｂ８ ＨＢ １０６９６
トランスメンブランＬＦＡ−３をコードするプラスミド
のキャリヤであるバクテリオファージは１９８７年５月
２８日にブダペスト条約に基づきインビトロインターナ
ショナル（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ，Ｉｎｃ．，Ｌｉｎｔｈｉｃｕｍ，Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ，ＵＳＡ）に受入番号ＩＶＩ−１０１３３で寄託され
た。その後、当該寄託は１９９１年６月２０日にアメリ
カンタイプカルチャーコレクションに移され，以下の如
く同定される。
のキャリヤであるバクテリオファージは１９８７年５月
２８日にブダペスト条約に基づきインビトロインターナ
ショナル（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ，Ｉｎｃ．，Ｌｉｎｔｈｉｃｕｍ，Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ，ＵＳＡ）に受入番号ＩＶＩ−１０１３３で寄託され
た。その後、当該寄託は１９９１年６月２０日にアメリ
カンタイプカルチャーコレクションに移され，以下の如
く同定される。
【０１１５】指定名
ＡＴＣＣ受入番号
λＨＴ１６［λｇｔ１０／ＬＦＡ−３］ ７５１０７
ＰＩ連結ＬＦＡ−３をコードするプラスミドにより形質
転換した大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は１９８８年７月２２
日にブダペスト条約に基づきインビトロインターナショ
ナル（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ，Ｉｎｃ．，Ｌｉｎｔｈｉｃｕｍ，Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ，ＵＳＡ）に受入番号ＩＶＩ−１０１８０で寄託され
た。その後、当該寄託は１９９１年６月２０日にアメリ
カンタイプカルチャーコレクションに移され，以下の如
く同定される。
転換した大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は１９８８年７月２２
日にブダペスト条約に基づきインビトロインターナショ
ナル（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ，Ｉｎｃ．，Ｌｉｎｔｈｉｃｕｍ，Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ，ＵＳＡ）に受入番号ＩＶＩ−１０１８０で寄託され
た。その後、当該寄託は１９９１年６月２０日にアメリ
カンタイプカルチャーコレクションに移され，以下の如
く同定される。
【０１１６】指定名
ＡＴＣＣ受入番号
ｐ２４ ６８７８８配列
以下は、配列リストにおいて述べた配列の概要である。
【０１１７】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１ トランスメンブランＬＦＡ−
３のＤＮＡ配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２ トランスメンブランＬＦＡ−
３のアミノ酸配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３ ＰＩ連結ＬＦＡ−３のＤＮＡ
配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４ ＰＩ連結ＬＦＡ−３のアミノ
酸配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５ ＣＤ２のＤＮＡ配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６ ＣＤ２のアミノ酸配列 上述の如く本発明の数多くの実施態様を説明したが、こ
れらの基本的実施態様は変更可能であり、したがって、
本発明の手法を利用する他の実施態様を当該変更によっ
て提供することも可能である。それゆえ、本発明の範囲
は本明細書における上記の記載とこれに添付した請求の
範囲とにおいて定めることのできるすべての変更態様お
よび変形例を含むと解されるべきである。すなわち、本
発明は、例示の目的で上述した当該特定の実施態様によ
って制限されるものではない。
３のＤＮＡ配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２ トランスメンブランＬＦＡ−
３のアミノ酸配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３ ＰＩ連結ＬＦＡ−３のＤＮＡ
配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４ ＰＩ連結ＬＦＡ−３のアミノ
酸配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５ ＣＤ２のＤＮＡ配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６ ＣＤ２のアミノ酸配列 上述の如く本発明の数多くの実施態様を説明したが、こ
れらの基本的実施態様は変更可能であり、したがって、
本発明の手法を利用する他の実施態様を当該変更によっ
て提供することも可能である。それゆえ、本発明の範囲
は本明細書における上記の記載とこれに添付した請求の
範囲とにおいて定めることのできるすべての変更態様お
よび変形例を含むと解されるべきである。すなわち、本
発明は、例示の目的で上述した当該特定の実施態様によ
って制限されるものではない。
【図１】図１は、イソタイプ適合型対照抗体の存在下に
おける増殖に対比した場合の、抗ＣＤ２または抗ＬＦＡ
−３の添加による障害乾癬表皮に対応する自己Ｔ細胞増
殖の一貫した（ｎ＝４）実質的（約６０％）阻害効果を
示している。
おける増殖に対比した場合の、抗ＣＤ２または抗ＬＦＡ
−３の添加による障害乾癬表皮に対応する自己Ｔ細胞増
殖の一貫した（ｎ＝４）実質的（約６０％）阻害効果を
示している。
【図２】図２は、当該無関係な特異性のモノクローナル
抗体（ＭＯＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．）の存在下における［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みが
幾分減少していることを示している。
抗体（ＭＯＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．）の存在下における［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みが
幾分減少していることを示している。
【シーケンスリスト】
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 17/14 Ａ６１Ｐ 17/16
17/16 27/02
27/02 35/00
35/00 Ｃ１２Ｐ 21/08
// Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 ＺＮＡ
(71)出願人 595061750
ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァー
シティ オブ ミシガン
Ｔｈｅ Ｒｅｇｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｈｉ
ｇａｎ
アメリカ合衆国 ミシガン 48109−1248
アン・アーバー イースト・ジェファー
ソン・ストリート 475
(72)発明者 バーバラ ピー． ウォルナー
アメリカ合衆国 02139 マサチューセッ
ツ州 ケインブリッジ センター ストリ
ート ７
(72)発明者 ケヴィン ディー． クーパー
アメリカ合衆国 48105 ミシガン州 ア
ン アーバー ウィンドミア ドライブ
3815
Ｆターム(参考） 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA01
4C084 AA01 AA02 BA01 BA08 CA18
DC50 MA52 MA55 MA56 MA66
NA14 ZA332 ZA892
4C085 AA14 AA16 BB11 BB41 CC23
EE01 GG02 GG03 GG04 GG08
Claims (29)
- 【請求項１】 真皮および表皮におけるＴ細胞活性の増
加および異常な抗原提示により特徴付けられる、ヒトの
皮膚症状を含む哺乳動物の皮膚症状の予防または治療の
ための医薬の製造方法であって、該方法は、該医薬にＣ
Ｄ２ポリペプチド、抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体同
族体および抗ＬＦＡ−３抗体または抗ＬＦＡ−３抗体同
族体からなる群から選択されるＣＤ２／ＬＦＡ−３相互
作用の阻害剤を包含させる行程を含み、ただし該抗体同
族体はモノクローナル抗体、組換抗体、キメラ組換抗
体、ヒト化組換抗体およびそれらの抗原結合部位からな
る群から選択される、前記方法。 - 【請求項２】 前記皮膚症状がアトピー性皮膚炎、皮膚
Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚
炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕性
疱瘡および蕁麻疹から成る群から選択されることを特徴
とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記症状が乾癬であることを特徴とする
請求項１に記載の方法。 - 【請求項４】 前記阻害剤が抗ＬＦＡ−３抗体同族体ま
たは抗ＣＤ２抗体同族体であることを特徴とする請求項
１に記載の方法。 - 【請求項５】 前記阻害剤がモノクローナル抗ＬＦＡ−
３抗体またはモノクローナル抗ＣＤ２抗体であることを
特徴とする請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 前記阻害剤が、受入番号ＡＴＣＣ ＨＢ
１０６９３（１Ｅ６）、ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９４
（ＨＣ−１Ｂ１１）、ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９５
（７Ａ６）およびＡＴＣＣ ＨＢ １０６９６（８Ｂ
８）を有するハイブリドーマの群から選択されるハイブ
リドーマにより生成されたモノクローナル抗ＬＦＡ−３
抗体、あるいは、モノクローナル抗体ＴＳ２／９である
ことを特徴とする請求項５に記載の方法。 - 【請求項７】 前記モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体が
受入番号ＡＴＣＣＨＢ １０６９５（７Ａ６）およびＡ
ＴＣＣ ＨＢ １０６９３（１Ｅ６）を有するハイブリ
ドーマの群から選択されるハイブリドーマにより生成さ
れたことを特徴とする請求項６に記載の方法。 - 【請求項８】 前記阻害剤がキメラ組換え抗ＬＦＡ−３
抗体同族体またはキメラ組換え抗ＣＤ２抗体同族体であ
ることを特徴とする請求項４に記載の方法。 - 【請求項９】 前記阻害剤がヒト化組換え抗ＬＦＡ−３
抗体同族体またはヒト化組換え抗ＣＤ２抗体同族体であ
ることを特徴とする請求項４に記載の方法。 - 【請求項１０】 前記阻害剤がＦａｂフラグメント、Ｆ
ａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ
（ｖ）フラグメントおよび抗ＬＦＡ−３抗体同族体また
は抗ＣＤ２抗体同族体の完全な免疫グロブリンＨ鎖から
選択されることを特徴とする請求項４に記載の方法。 - 【請求項１１】 前記阻害剤が可溶性ＣＤ２ポリペプチ
ドであることを特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項１２】 前記哺乳動物が人間であることを特徴
とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項１３】 前記医薬が前記阻害剤を体重１ｋｇ当
たり０．００１および５０ｍｇの間の投薬量で投与する
ための医薬であることを特徴とする請求項１に記載の方
法。 - 【請求項１４】 前記医薬が前記阻害剤を体重１ｋｇ当
たり０．０１および１０ｍｇの間の投薬量で投与するた
めの医薬であることを特徴とする請求項１３に記載の方
法。 - 【請求項１５】 前記医薬が前記阻害剤を体重１ｋｇ当
たり０．１および４ｍｇの間の投薬量で投与するための
医薬であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。 - 【請求項１６】 前記医薬が前記阻害剤を１週間に１回
ないし３回投与するための医薬であることを特徴とする
請求項１３に記載の方法。 - 【請求項１７】 前記医薬が前記阻害剤を１日に１回な
いし３回投与するための医薬であることを特徴とする請
求項１３に記載の方法。 - 【請求項１８】 前記医薬が前記阻害剤を３日および７
日の間で毎日１回ないし３回投与するための医薬である
ことを特徴とする請求項１７に記載の方法。 - 【請求項１９】 前記医薬が前記阻害剤を毎月３日およ
び７日の間で毎日１回ないし３回投与するための医薬で
あることを特徴とする請求項１８に記載の方法。 - 【請求項２０】 前記医薬が静脈内、筋肉内、皮下、関
節内、包膜内、骨膜、腫瘍部内、障害部内、障害部周
辺、経口、局所的または吸入投与用として処方されるこ
とを特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項２１】 前記医薬が筋肉内、静脈内または皮下
投与用として処方されることを特徴とする請求項２０に
記載の方法。 - 【請求項２２】 前記阻害剤が抗ＬＦＡ−３抗体同族
体、抗ＣＤ２抗体同族体、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチ
ド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、細胞障害性物質および
薬剤から成る群から独立して選択される１種以上の物質
に連結することを特徴とする請求項１に記載の方法であ
って、ただし該抗体同族体はモノクローナル抗体、組換
抗体、キメラ組換抗体、ヒト化組換抗体およびそれらの
抗原結合部位からなる群から選択される、前記方法。 - 【請求項２３】 前記症状がＵＶ障害であることを特徴
とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項２４】 ＣＤ２ポリペプチド、抗ＣＤ２抗体ま
たは抗ＣＤ２抗体同族体および抗ＬＦＡ−３抗体または
抗ＬＦＡ−３抗体同族体からなる群から選択されるＣＤ
２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を含むことを特徴とす
る、真皮および表皮におけるＴ細胞活性の増加および異
常な抗原呈示により特徴付けられる、ヒトの皮膚症状を
含む哺乳動物の皮膚症状の予防または治療のための医薬
であって、ただし該抗体同族体はモノクローナル抗体、
組換抗体、キメラ組換抗体、ヒト化組換抗体およびそれ
らの抗原結合部位からなる群から選択される、前記医
薬。 - 【請求項２５】 前記皮膚症状がアトピー性皮膚炎、皮
膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚
炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕性
疱瘡および蕁麻疹から成る群から選択されることを特徴
とする請求項２４に記載の医薬。 - 【請求項２６】 前記阻害剤が抗ＬＦＡ−３抗体同族
体、抗ＣＤ２抗体同族体および可溶性ＣＤ２ポリペプチ
ドから成る群から選択されることを特徴とする請求項２
４に記載の医薬。 - 【請求項２７】 前記阻害剤が、受入番号ＡＴＣＣ Ｈ
Ｂ １０６９３（１Ｅ６）、ＡＴＣＣ ＨＢ １０６９
４ （ＨＣ−１Ｂ１１）、ＡＴＣＣ ＨＢ１０６９５
（７Ａ６）およびＡＴＣＣ ＨＢ １０６９６（８Ｂ
８）を有するハイブリドーマの群から選択されるハイブ
リドーマにより生成されたモノクローナル抗ＬＦＡ−３
抗体、あるいは、モノクローナル抗体ＴＳ２／９である
ことを特徴とする請求項２４に記載の医薬。 - 【請求項２８】 前記哺乳動物が人間であることを特徴
とする請求項２４に記載の医薬。 - 【請求項２９】 前記阻害剤が抗ＬＦＡ−３抗体同族
体、抗ＣＤ２抗体同族体、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチ
ド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、細胞障害性物質および
薬剤から成る群から独立して選択される１種以上の物質
に連結することを特徴とする請求項２４に記載の医薬で
あって、ただし該抗体同族体はモノクローナル抗体、組
換抗体、キメラ組換抗体、ヒト化組換抗体およびそれら
の抗原結合部位からなる群から選択される、前記医薬。
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