ES2930809T3

ES2930809T3 - Vacunas contra el cáncer cerebral basadas en el péptido receptor de interleucina-13 alfa 2

Info

Publication number: ES2930809T3
Application number: ES18211075T
Authority: ES
Inventors: Hideho Okada
Original assignee: University of Pittsburgh
Current assignee: University of Pittsburgh
Priority date: 2010-08-24
Filing date: 2011-08-23
Publication date: 2022-12-22
Anticipated expiration: 2031-08-23
Also published as: JP7793167B2; JP2017014221A; JP6511021B2; EP2608799A2; JP2013536240A; EP3511013A1; EP2608799A4; US10874730B2; CA3066981A1; WO2012027379A2; US20130295046A1; CA2809362A1; JP6931240B2; CA2809362C; AU2011293522A1; MX2013002207A; ES2722799T3; JP2023175764A; WO2012027379A3; US20150258185A1

Abstract

En el presente documento se proporcionan vacunas contra el cáncer de cerebro basadas en el péptido α2 del receptor de interleucina-13 y métodos para tratar y vacunar contra el cáncer de cerebro que comprenden administrar a los pacientes que las necesitan vacunas contra el cáncer de cerebro basadas en el péptido α2 del receptor de interleucina-13. También se proporcionan aquí regímenes que comprenden péptidos del receptor α2 de la interleucina-13 y al menos un péptido y/o inmunoestimulante adicional. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Vacunas contra el cáncer cerebral basadas en el péptido receptor de interleucina-13 a2

1. INTRODUCCIÓN

Se proporcionan en el presente documento vacunas contra el cáncer de cerebro con base en el péptido a2 del receptor de interleucina-13 y métodos para tratar y vacunar contra el cáncer cerebral que comprenden la administración a los pacientes que lo necesitan de vacunas contra el cáncer de cerebro con base en el péptido a2 del receptor de interleucina-13 También se proporcionan en el presente documento regímenes de vacunas que comprenden péptidos del receptor a2 de la interleucina-13 y al menos un péptido y/o inmunoestimulante adicional.

2. ANTECEDENTES

Los tumores cerebrales son particularmente difíciles de tratar con métodos convencionales tales como cirugía, radioterapia o quimioterapia. Factores tales como los patrones de crecimiento invasivo y la barrera hematoencefálica hacen que el tratamiento de los gliomas malignos sea más problemático que el de otros tumores. La falta de opciones de tratamiento eficaces para los pacientes ha llevado al desarrollo de terapias alternativas, tales como la inmunoterapia.

La inmunoterapia es un nuevo enfoque prometedor en el tratamiento de los gliomas malignos. La eficacia de las inmunizaciones periféricas con células de glioma autólogas o células dendríticas (DC) pulsadas con péptidos sintéticos para epítopos de células T específicos de antígenos tumorales se ha demostrado en modelos preclínicos de ratón (Okada et al., 2001; Okada et al., 1998). Las vacunas con base en epítopos de células T específicas son probablemente más seguras que las vacunas con base en células de glioma enteras debido a la ausencia de respuestas autoinmunes teóricas contra los componentes normales del cerebro. Estos enfoques de antígenos específicos también pueden ser más eficaces que los enfoques de antígenos tumorales a granel, ya que la presentación de epítopos inmunogénicos de células T y la estimulación de precursores de células T específicos de antígenos pueden tener lugar de manera más eficiente con el uso de antígenos-péptidos específicos que con antígenos tumorales a granel.

La identificación de los inmunoepítopos de las células T en los antígenos asociados al glioma humano es necesaria para el desarrollo de dichas vacunas contra los gliomas humanos. Se han identificado pocos inmunoepítopos de linfocitos T citotóxicos (CTL) para los gliomas malignos humanos. Sin embargo, recientemente se ha identificado un epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringido por HLA (antígeno leucocitario humano) A2 derivado del receptor (R) a2 de la interleucina (IL) 13 (Okano et al., 2002). Se sabe que la IL-13Ra2 se expresa en la mayoría de los gliomas malignos humanos, pero no en los tejidos normales (Debinski et al., 2000), por lo que el epítopo identificado (IL-13Ra2345-353) es un componente atractivo de las vacunas con base en péptidos para los gliomas. Al generar líneas CTL únicas mediante la estimulación de células CD8+ con el péptido IL-13Ra2345-353, se demostró que las células de glioma positivas para IL-13Ra2 y HLA-A2 se les generaba lisis eficazmente de forma específica para el antígeno. Sin embargo, sigue sin estar clara la eficacia de estas vacunas con base en péptidos para inducir los CTL específicos y si los péptidos-análogos pueden utilizarse para una expansión y activación óptimas de los CTL restringidos por HLA-A2 específicos de IL-13Ra2.

Se ha demostrado que ciertas sustituciones de aminoácidos en péptidos identificados tales como epítopos de CTL podrían aumentar en gran medida la afinidad de unión de dichos péptidos al complejo HLA (antígeno leucocitario humano) y, por tanto, aumentarían la inmunogenicidad del péptido (Bownds et al., 2001; Chen et al., 2000). La mejora de la inmunogenicidad de IL-13Ra2345-353, y de otros epítopos de este tipo, podría conducir al desarrollo de potentes vacunas con base en péptidos específicos para el tumor, lo que supondría una mejora significativa en el actual régimen de tratamiento de los gliomas malignos. Sin embargo, sigue siendo necesario un epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringido por el polipéptido HLA-A2 mejorado.

Como se ha comentado anteriormente, se han identificado pocos inmunoepítopos de linfocitos T citotóxicos (CTL) para los gliomas malignos humanos. Sin embargo, dada la marcada heterogeneidad antigénica de los gliomas, la inmunoterapia con un único epítopo de células T específico del tumor podría simplemente promover la estabilización transitoria de la enfermedad, antes de la progresión de las variantes de pérdida de antígeno. EphA2 es un miembro de la familia Eph de receptores de tirosina quinasa, compuesta por dos clases principales (EphA2 y EphB), que se distinguen por sus especificidades para los ligandos (efrina-A y efrina-B, respectivamente). EphA2 está frecuentemente sobreexpresada y a menudo funcionalmente desregulada en cánceres avanzados, tales como las lesiones metastásicas (Kinch et al., 2003). Debido a la naturaleza agresiva e invasiva de los gliomas malignos, EphA2 podría expresarse en esta entidad tumoral y ser un posible objetivo para las vacunas contra el glioma. Se han identificado y caracterizado inmunoepítopos de células T en EphA2 como objetivos potenciales y marcadores sustitutos para otras formas de inmunoterapia del cáncer (Alves et al., 2003, y Tatsumi et al., 2003). La identificación de epítopos CTL adicionales es un paso necesario en el desarrollo de vacunas con base en multiepitópos para el glioma, lo que supondría una mejora significativa en el régimen actual de tratamiento de los gliomas malignos.

El documento WO 2008/039969 A2 divulga vacunas para su uso en el tratamiento del cáncer neural, que comprenden células presentadoras de antígenos tales como células dendríticas cargadas con IL-13Ra2 y otros antígenos, incluyendo el adyuvante de Freund.

El documento WO 2005/012350 A2 divulga epítopos de células T EphA2, incluyendo el adyuvante de Freund para provocar una respuesta inmunitaria en el tratamiento del cáncer.

El documento w O 2005/067460 A2 divulga vacunas EphA2.

El documento EP 2172211 A1 divulga péptidos que incluyen survivina y el adyuvante Montanide como vacunas para el tratamiento de glioblastomas.

El documento EP 2228 072 A1que es una solicitud anterior, divulga vacunas contra el cáncer que comprenden la proteína del tumor de Wilms 1, así como el adyuvante Montanide.

El documento US 2006/084609 A1 divulga vacunas que comprenden la proteína tumor de Wilms 1 cargada en células dendríticas, que presentan los péptidos sintéticos, así como un adyuvante.

El documento EP 1835027 A1 divulga el péptido YKL-40 presentado por las células presentadoras de antígenos, así como el adyuvante Montanide como vacuna para los tumores cerebrales.

El documento WO 2005/028505 A2 divulga un epítopo GP100 presentado por células presentadoras de antígenos, así como adyuvantes para conferir inmunidad contra el cáncer.

3. SUMARIO

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un péptido IL-13Ra2, un péptido EphA2, un péptido survivin y un péptido WT1. En una realización preferida de la invención, (a) el péptido IL-13Ra2 comprende una cualquiera de las SEQ ID NOs:1-4, el péptido EphA2 comprende SEQ ID NO:6, el péptido survivin comprende SEQ ID NO:7, y el péptido WT1 comprende SEQ ID NO:8; (b) uno o más de los péptidos se cargan en células dendríticas; y/o (c) la composición farmacéutica comprende además un adyuvante, en el que el adyuvante es preferentemente Montanide ISA-51.

La invención también se refiere a un conjunto que comprende (i) una primera composición farmacéutica de acuerdo con la invención, que comprende además un adyuvante; y (ii) una segunda composición farmacéutica que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria, para su uso en el tratamiento, la prevención o el manejo del cáncer cerebral en un sujeto que necesita el mismo.

Las realizaciones preferidas de la invención, así como las realizaciones no inventivas de las composiciones farmacéuticas, se proporcionan en la siguiente descripción.

En un aspecto, se proporciona en el presente documento un péptido derivado de IL-13Ra2, que sirve como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringidos por HLA-A2. El péptido IL-13Ra2 puede comprender, consistir o consistir esencialmente en una variante mutante de sustitución de WLPFGFILI (SEQ ID NO:1), en la que al menos uno de los residuos de aminoácidos puede ser sustituido por un aminoácido distinto del residuo indicado. Además, el péptido IL-13Ra2 puede comprender, consistir o consistir esencialmente en cualquiera de las siguientes secuencias: WLPFGFILV (SEQ ID NO:2), ALPFGFILV (SEQ ID NO:3), o ELPFGFILV (SEQ ID NO:4).

También se proporciona en el presente documento un uso de cualquiera de los péptidos IL-13Ra2 anteriores como vacuna para el glioma. Además, la divulgación proporciona un método de vacunación de un paciente contra el glioma, donde el péptido se introduce en un paciente bajo condiciones suficientes para que el paciente desarrolle una respuesta CTL. Además, se proporciona en el presente documento un uso de un péptido EphA2 que tiene la secuencia TLADFDPRV (SEQ ID NO:6) o una composición que comprende dicho péptido y un portador fisiológicamente aceptable, como una vacuna para el glioma. También se proporciona en el presente documento un método de vacunación de un paciente contra el glioma, en el que un péptido EphA2 que tiene la secuencia TLADFDPRV (SEQ ID NO:6) o una composición que comprende dicho péptido y un portador fisiológicamente aceptable, se introduce en un paciente bajo condiciones suficientes para que el paciente desarrolle una respuesta CTL.

En otro aspecto, se presentan en el presente documento vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 que comprenden un péptido IL-13Ra2 y uno, dos, tres o más péptidos adicionales asociados al cáncer cerebral. En ciertas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento se administran simultáneamente con uno o más epítopos de células T auxiliares y/o uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria. De acuerdo con dichas realizaciones, uno o más epítopos de células T colaboradoras y/o uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria pueden administrarse como parte de la vacuna (por ejemplo, en solución con el péptido IL-13Ra2 y uno, dos, tres o más péptidos adicionales asociados al cáncer cerebral) o por separado de la vacuna (es decir, los epítopos de células T colaboradoras y/o los modificadores de la respuesta inmunitaria pueden administrarse como una formulación que no forma parte de la formulación de la vacuna). En algunas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento se administran como vacunas libres de células. En otra realización, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra con un adyuvante. En una realización preferida, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra en combinación con péptidos adicionales. En otra realización, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra con un agente inmunomodulador. -En otra realización, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra como una emulsión en Montanide ISA 51, como componente de un régimen que incluye inyecciones con un agente inmunoestimulador. En una realización preferida, el agente inmunoestimulador es el poli ICLC. En otras realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento se administran como vacunas de células dendríticas.

En una realización, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende un péptido IL-13Ra2, un péptido EphA2, un péptido YKL-40 y un péptido GP100. En una realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a una cualquiera de las SEQ ID NO: 1-4, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, el péptido YKL-40 correspondiente a la SEQ ID NO:10, y el péptido GP100 correspondiente a la SEQ ID NO:11. En otra realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a la SEQ ID NO:3, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, el péptido YKL-40 correspondiente a la SEQ ID NO:10, y el péptido GPloO correspondiente a la SEQ ID NO: 11. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más epítopos de células T auxiliares. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares, en el que el epítopo de células T auxiliares es el péptido PADRE. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna libre de células. En otras realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna de células dendríticas.

De acuerdo con la invención, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende un péptido IL-13Ra2, un péptido EphA2, un péptido survivin y un péptido WT1. En una realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-l3Ra2 comprende el péptido IL-l3Ra2 correspondiente a una cualquiera de las SEQ ID NO: 1-4, el péptido EphA2 correspondiente a la s Eq ID NO:6, el péptido survivin correspondiente a la SEQ ID NO:7, y el péptido WT1 correspondiente a la SEQ ID NO:8. En otra realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a la SEQ ID NO:3, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, el péptido survivin correspondiente a la SEQ ID NO:7, y el péptido WT1 correspondiente a la SEQ ID NO:8. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más epítopos de células T auxiliares. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares, en el que el epítopo de células T auxiliares es el toxoide tetánico. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria es poli-ICLC. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria es Montanide ISA-51. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna libre de células. En otras realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna de células dendríticas.

En otra realización, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende un péptido IL-13Ra2, un péptido EphA2 y un péptido survivin. En una realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a una cualquiera de las SEQ ID NOs:1-4, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, y el péptido survivin correspondiente a la SEQ ID NO:7. En otra realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a la SEQ ID NO:3, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, y el péptido survivin correspondiente a la SEQ ID NO:7. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más epítopos de células T auxiliares. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares, en el que el epítopo de células T auxiliares es el toxoide tetánico. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria es poli-ICLC. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria es Montanide ISA-51. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna libre de células. En otras realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna de células dendríticas.

4. DEFINICIONES

Tal como se utiliza en el presente documento, los términos "de manera aproximada" o "aproximadamente" cuando se utilizan junto con un número se refieren a cualquier número dentro del 1, 5 o 10 % del número referido.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "agente" se refiere a cualquier molécula, compuesto y/o sustancia que puede utilizarse en o en combinación convacunas contra el cáncer de cerebro con base en el péptido a2 del receptor de la interleucina-13 descritas en el presente documento. El término agente incluye, sin limitación, proteínas, inmunoglobulinas (por ejemplo, Igs multiespecíficas, Igs de cadena única, fragmentos de Ig, anticuerpos policlonales y sus fragmentos, anticuerpos monoclonales y sus fragmentos), péptidos (por ejemplo, receptores peptídicos, selectinas), proteínas de unión, biológicos, agentes quimioespecíficos, agentes quimiotóxicos, agentes antiangiogénicos y fármacos de moléculas pequeñas.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "identidad de secuencia de aminoácidos" se refiere al grado de identidad o similitud entre un par de secuencias de aminoácidos alineadas, normalmente expresado como un porcentaje. Tal y como se utilizan en el presente documento, los términos "porcentaje de identidad", "porcentaje idéntico", "% de identidad" y "% idéntico" con respecto a la secuencia de aminoácidos se refieren al porcentaje de residuos de aminoácidos en una secuencia candidata que son idénticos ( es decir, los residuos de aminoácidos en una posición determinada en la alineación son el mismo residuo) al residuo de aminoácidos correspondiente en el péptido después de alinear las secuencias e introducir huecos, si es necesario, para lograr el máximo porcentaje de homología de secuencia. Tal y como se utilizan en el presente documento, los términos "porcentaje de similitud" y "% de similitud" con respecto a la secuencia de aminoácidos se refieren al porcentaje de residuos de aminoácidos en una secuencia candidata que son similares (es decir, la sustitución de aminoácidos en una posición determinada en la alineación es una sustitución conservadora, como se explica más adelante), al residuo de aminoácidos correspondiente en el péptido después de alinear las secuencias e introducir huecos, si es necesario, para lograr el máximo porcentaje de homología de secuencia. La homología de secuencias, incluyendo los porcentajes de identidad y similitud de secuencias, se determinan mediante técnicas de alineación de secuencias bien conocidas en la técnica, incluyendo los algoritmos informáticos diseñados para este fin, utilizando los parámetros por defecto de dichos algoritmos informáticos o los paquetes de software que los contienen.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "sustitución conservadora" se refiere a la sustitución de un aminoácido de una clase por otro aminoácido de la misma clase. En determinadas realizaciones, una sustitución conservadora no altera la estructura o la función, o ambas, de un péptido. Las clases de aminoácidos para efectos de la sustitución conservadora incluyen los hidrófobos (Met, Ala, Val, Leu, Ile), los hidrofílicos neutros (Cys, Ser, Thr), los ácidos (Asp, Glu), los básicos (Asn, Gln, His, Lys, Arg), los perturbadores de la conformación (Gly, Pro) y los aromáticos (Trp, Tyr, Phe).

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "péptido" se refiere a un polímero de aminoácidos unidos por enlaces de amida como es conocido por los expertos en la técnica. Un péptido puede ser un polímero de 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 o más aminoácidos unidos por enlaces covalentes de amida. En algunas realizaciones, el péptido es un polímero de 6 a 8, 8 a 10, 10 a 15, 10 a 20, 10 a 25, 10 a 30, 10 a 40, 10 a 50 o 25 a 25 aminoácidos unidos por enlaces amídicos covalentes. En ciertas realizaciones, el péptido es un polímero de 50 a 65, 50 a 75, 50 a 85, 50 a 95, 50 a 100, 75 a 100 aminoácidos unidos por enlaces amídicos covalentes. Tal y como se utiliza en el presente documento, el término puede referirse a una única cadena peptídica unida por enlaces amídicos covalentes. El término también puede referirse a múltiples cadenas peptídicas asociadas por interacciones no covalentes, tales como contactos iónicos, enlaces de hidrógeno, contactos de Van der Waals y contactos hidrófobos. Los expertos en la técnica reconocerán que el término incluye péptidos que han sido modificados, por ejemplo, mediante un procesamiento postraduccional, tal como la escisión del péptido señal, la formación de enlaces disulfuro, la glicosilación (por ejemplo, la glicosilación ligada al N), la escisión de la proteasa y la modificación de los lípidos (por ejemplo, la S-palmitoilación).

Tal y como se utiliza en el presente documento, los términos "purificado" y "aislado" cuando se utilizan en el contexto de un péptido que se obtiene de una fuente natural, por ejemplo, células, se refiere a un péptido que está sustancialmente libre de materiales contaminantes de la fuente natural, por ejemplo, partículas del suelo, minerales, productos químicos del medio ambiente, y/o materiales celulares de la fuente natural, tales como por ejemplo, aunque no exclusivamente, restos celulares, materiales de la pared celular, membranas, orgánulos, la mayor parte de los ácidos nucleicos, carbohidratos, proteínas y/o lípidos presentes en las células. Así, un péptido aislado incluye preparaciones de un polipéptido que tiene menos de aproximadamente 30 %, 20 %, 10 %, 5 %, 2 % o 1 % (en peso seco) de materiales celulares y/o materiales contaminantes. Tal y como se utilizan en el presente documento, los términos "purificado" y "aislado", cuando se emplean en el contexto de un péptido sintetizado químicamente, se refieren a un péptido que está sustancialmente libre de precursores químicos u otras sustancias químicas que intervienen en la síntesis del polipéptido.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "ácido nucleico" pretende incluir moléculas de ADN (por ejemplo, ADNc o ADN genómico) y moléculas de ARN (por ejemplo, ARNm) y análogos del ADN o ARN generados mediante análogos de nucleótidos. El ácido nucleico puede ser monocatenario o bicatenario.

Tal y como se utiliza en el presente documento, la frase "vacuna profiláctica" se refiere a una vacuna descrita en el presente documento que se utiliza con el fin de prevenir el cáncer.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "régimen profiláctico eficaz" se refiere a un régimen eficaz para la dosificación, el momento, la frecuencia y la duración de la administración de una o más terapias para la prevención del cáncer cerebral o de un síntoma del mismo.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "vacuna terapéutica" se refiere a una vacuna descrita en el presente documento que se utiliza con el fin de tratar y/o gestionar el cáncer cerebral.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "régimen terapéuticamente eficaz" se refiere a un régimen para la dosificación, el momento, la frecuencia y la duración de la administración de una o más terapias para el tratamiento y/o manejo del cáncer cerebral o un síntoma del mismo.

Tal y como se utiliza en el presente documento, los términos "sujeto" o "paciente" se utilizan indistintamente para referirse a un animal (por ejemplo, aves, reptiles y mamíferos). En una realización específica, el sujeto es un pájaro. En otra realización, el sujeto es un mamífero que incluye a un no-primate (por ejemplo, un camello, un burro, una cebra, una vaca, un cerdo, un caballo, una cabra, una oveja, un gato, un perro, una rata y un ratón) y un primate (por ejemplo, un mono, un chimpancé y un humano). En ciertas realizaciones, un sujeto es un animal no humano. En algunas realizaciones, el sujeto es un animal de granja o una mascota. En otra realización, el sujeto es un humano. En otra realización, el sujeto es un bebé humano. En otra realización, el sujeto es un niño pequeño. En otra realización, el sujeto es un niño humano. En otra realización, el sujeto es un adulto humano. En otra realización, el sujeto es un humano de edad avanzada.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "bebé humano" se refiere a un ser humano de entre un recién nacido y un año de edad.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "niño pequeño humano" se refiere a un ser humano de 1 a 3 años de edad.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "niño humano" se refiere a un ser humano de 1 año a 18 años de edad.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "adulto humano" se refiere a un ser humano de 18 años o más.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "humano anciano" se refiere a un humano de 65 años o más.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "cáncer cerebral" se refiere a un tumor localizado dentro del cráneo o en el canal espinal central. El cáncer cerebral se refiere tanto a los tumores primarios (es decir, los que se originan en la esfera intracraneal o en el canal espinal central) como a los tumores secundarios (es decir, los que invaden la esfera intracraneal o el canal espinal central después de originarse en tumores localizados principalmente en otros órganos).

Tal y como se utilizan en el presente documento, los términos "terapias" y "terapia" pueden referirse a cualquier protocolo, método, composición, formulación y/o agente que pueda utilizarse en la prevención o el tratamiento del cáncer cerebral o de una enfermedad o síntoma asociado al mismo. En ciertas realizaciones, los términos "terapias" y "terapia" se refieren a la terapia biológica, a la terapia de apoyo y/o a otras terapias útiles para el tratamiento o la prevención del cáncer cerebral o de una enfermedad o síntoma asociado a él, conocidos por un experto en la técnica.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad de una terapia que es suficiente para dar lugar a la prevención del desarrollo, la recurrencia o la aparición del cáncer cerebral y/o uno o más síntomas del mismo, para potenciar o mejorar los efectos profilácticos de otra terapia, reducir la gravedad, la duración del cáncer cerebral, mejorar uno o más síntomas del cáncer cerebral, prevenir el avance del cáncer cerebral, causar la regresión del cáncer cerebral, y/o potenciar o mejorar los efectos terapéuticos de otra terapia.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "en combinación" en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto se refiere al uso de más de una terapia (por ejemplo, profiláctica y/o terapéutica). El uso del término "en combinación" no restringe el orden en que las terapias (por ejemplo, una primera y una segunda terapia) se administran a un sujeto. Una terapia puede administrarse antes de (por ejemplo, 1 minuto, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas antes), de forma concomitante o posterior (por ejemplo 1 minuto, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas después) la administración de una segunda terapia a un sujeto que ha tenido, tiene o es susceptible de padecer cáncer cerebral. Las terapias se administran a un sujeto en una secuencia y en un intervalo de tiempo tal que las terapias pueden actuar conjuntamente. En una realización particular, las terapias se administran a un sujeto en una secuencia y dentro de un intervalo de tiempo tal que proporcionan un beneficio mayor que si se administraran de otra manera. Cualquier terapia adicional puede administrarse en cualquier orden con la otra terapia adicional.

Tal y como se utilizan en el presente documento, los términos "gestionar", "manejar" y "gestión" en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto se refieren a los efectos beneficiosos que un sujeto obtiene de una terapia (por ejemplo, una vacuna profiláctica o terapéutica) o de una combinación de terapias, sin que ello suponga la curación del cáncer cerebral. En ciertas realizaciones, se administra a un sujeto una o más terapias (por ejemplo, una o más vacunas profilácticas o terapéuticas) para "gestionar" el cáncer cerebral y así evitar la progresión o el empeoramiento de la enfermedad.

Tal y como se utilizan en el presente documento, los términos "prevenir", "que previene" y "prevención" en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto se refieren a la prevención o inhibición de la reaparición, aparición y/o desarrollo del cáncer cerebral o de un síntoma del mismo en un sujeto como resultado de la administración de una terapia (por ejemplo, un agente profiláctico o terapéutico), o una combinación de terapias (por ejemplo, una combinación de agentes profilácticos o terapéuticos).

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "simultáneamente" significa que está suficientemente cerca en el tiempo para producir un efecto combinado (es decir, simultáneamente puede ser simultáneamente, o puede ser dos o más eventos que ocurren dentro de un período de tiempo antes o después de cada uno). Cuando se administran con otros agentes, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento pueden administrarse simultáneamente con el otro agente activo. En algunas realizaciones, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionada en el presente documento y uno o más agentes (por ejemplo, un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria) se administran a un sujeto simultáneamente, en el que la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 administrada en el presente documento y uno o más agentes están en la misma composición. En otras realizaciones, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionada en el presente documento y uno o más agentes (por ejemplo, un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria) se administran a un sujeto simultáneamente, en el que la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 administrada en el presente documento y uno o más agentes no están en la misma composición. En una realización, el agente que se administra simultáneamente con la vacuna con base en el péptido ILI3Ra2 se administra como una inyección separada. En ciertas realizaciones, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionada en el presente documento y uno o más agentes (por ejemplo, un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria) se administran a un sujeto de forma simultánea, en la que la administración simultánea está separada por al menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 10 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 1 semana o 2 semanas.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "péptido asociado al cáncer cerebral" se refiere a un péptido que se encuentra asociado a uno o más cánceres cerebrales y que sirve como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringido por HLA-A2. En algunas realizaciones, un péptido asociado al cáncer cerebral es un péptido asociado al glioma, es decir, el cáncer cerebral al que se asocia el péptido es el glioma. En una realización preferida, el péptido asociado al cáncer cerebral es expresado por células de glioma. Los péptidos ejemplares asociados al cáncer cerebral incluyen, sin limitación, péptidos IL-13Ra2, péptidos EphA2, péptidos YKL-40, péptidos GP100, péptidos survivin y péptidos WT1.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "péptido IL-13Ra2" se refiere a un péptido derivado de la proteína IL-13Ra2 y que sirve como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringido por HLA-A2. En una realización específica, la proteína IL-13Ra2 de la que se deriva un péptido IL-13Ra2 es la proteína IL-13Ra2 humana. En otra realización específica, un péptido IL-l3Ra2 comprende una cualquiera de las SEQ ID NOs:1-4. En algunas realizaciones, un péptido de lL-13Ra2 comprende una, dos, tres o más mutaciones de aminoácidos (por ejemplo, adiciones, sustituciones o supresiones) en relación con el péptido de IL-13Ra2 tal como existe en la forma nativa (por ejemplo, de tipo silvestre) de la proteína IL-13Ra2.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "péptido EphA2" se refiere a un péptido derivado de la proteína EphA2 y que sirve como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringido por HLA-A2. En una realización específica, la proteína EphA2 de la que se deriva un péptido EphA2 es la proteína EphA2 humana. En otra realización específica, un péptido EphA2 comprende SEQ ID n O:6. En algunas realizaciones, un péptido EphA2 comprende una, dos, tres o más mutaciones de aminoácidos (por ejemplo, adiciones, sustituciones o supresiones) en relación con el péptido EphA2 tal como existe en la forma nativa (por ejemplo, de tipo silvestre) de la proteína EphA2.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "péptido YKL-40" se refiere a un péptido derivado de la proteína YKL-40 y que sirve como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringido por HLA-A2. En una realización específica, la proteína YKL-40 de la que se deriva un péptido YKL-40 es la proteína YKL-40 humana. En otra realización específica, un péptido YKL-40 comprende SEQ ID NO: 10. En algunas realizaciones, un péptido YKL-40 comprende una, dos, tres o más mutaciones de aminoácidos (por ejemplo, adiciones, sustituciones o supresiones) en relación con el péptido YKL-40 tal como existe en la forma nativa (por ejemplo, de tipo silvestre) de la proteína YKL-40.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "péptido GP100" se refiere a un péptido derivado de la proteína GP100 y que sirve como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringido por HLA-A2. En una realización específica, la proteína GP100 de la que se deriva un péptido GP100 es la proteína GP100 humana. En otra realización específica, un péptido GP100 comprende SEQ ID NO:11. En algunas realizaciones, un péptido GP100 comprende una, dos, tres o más mutaciones de aminoácidos (por ejemplo, adiciones, sustituciones o supresiones) en relación con el péptido GP100 tal como existe en la forma nativa (por ejemplo, de tipo silvestre) de la proteína GP100.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "péptido de survivina" se refiere a un péptido derivado de la proteína survivina y que sirve como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringido por HLA-A2. En una realización específica, la proteína survivina de la que se deriva un péptido de survivina es la proteína survivina humana. En otra realización específica, un péptido de survivina comprende SEQ ID NO:7. En algunas realizaciones, un péptido de survivina comprende una, dos, tres o más mutaciones de aminoácidos (por ejemplo, adiciones, sustituciones o supresiones) en relación con el péptido de survivina tal como existe en la forma nativa (por ejemplo, de tipo silvestre) de la proteína survivina.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "péptido WT1" se refiere a un péptido derivado de la proteína WT1 y que sirve como epítopo de linfocitos T citotóxicos (^cT^l) restringido por HLA-A2. En una realización específica, la proteína WT1 de la que se deriva un péptido WT1 es la proteína WT1 humana. En otra realización específica, un péptido WT1 comprende SEQ ID NO:8. En algunas realizaciones, un péptido WT1 comprende una, dos, tres o más mutaciones de aminoácidos (por ejemplo, adiciones, sustituciones o supresiones) en relación con el péptido WT1 tal como existe en la forma nativa (por ejemplo, de tipo silvestre) de la proteína WT1.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "vacuna libre de células" se refiere a una vacuna que comprende un péptido de lL-13Ra2, en la que el péptido de IL-13Ra2 no está cargado en una célula (por ejemplo, una célula dendrítica) en la vacuna (por ejemplo, el péptido derivado de IL-13Ra2 está en solución). En una realización preferida, los péptidos se emulsionan en adyuvante. En otra realización preferida, el adyuvante es Montanide ISA 51.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "vacuna de células dendríticas" se refiere a una vacuna que comprende un péptido IL-13Ra2, en la que el péptido IL-13Ra2 se carga en las células dendríticas de la vacuna.

5. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Fig. 1 presenta gráficamente los datos que demuestran que la IL-13Ra2-V9 y la IL-13Ra2-A 1V9 indujeron una mayor magnitud de reactividad CTL que la IL-13Ra2^345-353nativa o la IL-13Ra2-E 1V9 contra las células T2 cargadas con varias concentraciones de IL-13Ra2^345-353nativa. Células T CD8+ de un paciente con glioma HLA-A2+ fueron estimuladas con DCs cargadas con IL-13Ra2^345-353nativa (-), IL-13Ra2-V9 (o), IL-13Ra2-A1V9 (A), IL-13Ra2-E1V9 (X), péptido de la gripe M158-66 (▼), o sin péptido (□) durante 10 días. A continuación, se comprobó la actividad lítica de las células T2 cargadas con las concentraciones indicadas de IL-13Ra2^345-353o sin péptido mediante un ensayo de liberación de ⁵¹Cr durante 4 horas. La relación E/T era de 12,5. P<0,01 para la IL-13Ra2-V9 frente a la nativa, así como para la IL-13Ra2-A 1V9 frente a la nativa a 0,1 y 1 nM mediante la prueba t de Student de dos colas. Estos datos demuestran los resultados de uno de los tres experimentos separados con resultados similares.

La Fig. 2 presenta gráficamente los datos que demuestran que la línea CTL inducida por el péptido V9 (círculos abiertos) tenía una mayor actividad lítica contra las células T2 cargadas con diversas concentraciones del péptido IL-13Ra2^345-353de tipo silvestre. Las líneas CTL inducidas por cada uno de los 3 análogos agonistas (V9 (círculos abiertos), A1V9 (triángulos); E1V9 (X)) o el péptido de tipo silvestre (círculos cerrados) se examinaron para ver las actividades CTL contra concentraciones más bajas del péptido objetivo IL-13Ra2^345-353con células T2 cargadas con diversas concentraciones (1-100 nM) de IL-13Ra2^345-353mediante un ensayo de liberación de ⁵¹Cr en 4 horas (relación E/T=50).

La Fig.3 presenta gráficamente los datos que demuestran que los péptidos modificados indujeron una mayor magnitud de reactividad CTL que la IL-13Ra2345-353 nativa contra líneas celulares de glioma humano. Las células CD8+ derivadas de un paciente con glioma HLA-A2+ fueron estimuladas con IL-13Ra2^345-353nativa (-), IL-13Ra2-V9 (o), IL-13Ra2-A1V9 (A), o IL-13Ra2-E1V9 (X). El día 10, se comprobó la capacidad lítica de las células contra las células de glioma humano SNB19 (a ) y U-251 (B) (ambas son IL-13Ra+/HLA-A2+) mediante el ensayo de liberación de⁵¹Cr en 4 horas. Frente a las células de glioma SNB19, p<0,05 en todas las relaciones E/T para la IL-13Ra2-V9 frente a la IL-13Ra2^345-353nativa, así como para la IL-13Ra2-A1V9 frente a la IL-13Ra2^345-353nativa mediante pruebas t de Student de dos colas. Frente a las células de glioma U251, p<0,05 en la relación E/T de 10 y 40 para la IL-13Ra2-V9 frente a la IL-13Ra2345-353 nativa, así como para la IL-13Ra2-A1V9 frente a la IL-13Ra2345-353 nativa mediante pruebas t de Student de dos colas. La IL-13Ra2-E1V9 no mejoró la reactividad de los CTL en un nivel estadísticamente significativo en comparación con los nativos. Los datos presentados representan uno de los tres experimentos con diferentes donantes con resultados similares.

La Fig. 4 presenta gráficamente los datos que demuestran que la adición de células T2 "frías" pulsadas con IL-13Ra2^{345 -353}inhibió las actividades CTL indicando la especificidad de antígeno de las líneas CTL. Las líneas CTL inducidas con cada péptido (control (A); Gripe (B); IL-13Ra2^345-353(C); IL-13Ra2^345-9v(D)) se incubaron durante 4 h con líneas celulares de glioma humano SNB19 marcadas con ⁵¹Cren las relaciones E:T indicadas para evaluar la capacidad lítica específica (•). Para el ensayo de inhibición del objetivo en frío, se incubaron células SNB19 diana marcadas con ⁵¹Cr(1*10³células/pocillo) y células T2 en frío (1*10⁴células/pocillo) pulsadas con (A) o sin (o) péptido IL-13Ra2^345-353con los CTL.

La Fig. 5 presenta gráficamente los datos que demuestran que la adición del anticuerpo anti-HLA-A2 inhibió las actividades de los CTL, indicando el reconocimiento restringido por HLA-A2 de las líneas de CTL. Las líneas CTL inducidas con cada péptido (control (A); Gripe (B); IL-13Ra2^345-353(C); IL-13Ra2^345-9v(D)) se incubaron durante 4 h con la línea celular de glioma humano SNB19 marcada con ⁵¹Cr en las relaciones E:T indicadas para evaluar la capacidad lítica específica (•). Se añadió un anticuerpo anti-HLA-A2 (W6/32; 10 |jg/ml) para bloquear la función de reconocimiento mediada por HLA-A2 de las células T (o).

La Fig.6 presenta gráficamente los datos que demuestran que los péptidos modificados indujeron una mayor magnitud de reactividad CTL que la IL-13Ra2345-353 nativa contra el EL4-HHD cargado con la IL-13Ra2345-353 nativa. Las SPC obtenidas de ratones HHD que habían sido inmunizados con MART-127-35 de control (-), IL-13Ra2345-353 nativa (o), IL-13Ra2-V9 (A) o IL-13Ra2-A1V9 (X) se sometieron a pruebas para determinar su actividad lítica específica contra las células EL4-HHD pulsadas con la IL-13Ra2345-353 nativa mediante ensayos estándar de liberación de 51Cr durante 4 horas.

La Fig.7 presenta gráficamente los datos que demuestran que los péptidos modificados indujeron una mayor magnitud de reactividad CTL que la IL-13Ra2345-353 nativa contra EL4-HHD-IL-13Ra2. Las SPC obtenidas de ratones HHD que habían sido inmunizados con MART-I^27-35de control (A), IL-13Ra2^345-353nativa (B), IL-13Ra2-V9 (C), o IL-13Ra2-A1V9 (D) se probaron para su actividad lítica específica contra EL4-HHD-IL-13Ra2 (o) o EL4-HHD de control (-) mediante ensayos estándar de liberación de 51Cr durante 4 horas.

La Fig. 8 muestra la expresión de la proteína EphA2 en el glioblastoma multiforme (GBM) y el astrocitoma anaplásico (AA). Secciones embebidas en parafina de especímenes quirúrgicos obtenidos de pacientes con GBM (A-C) o AA (D) fueron desparafinadas y teñidas con el anticuerpo policlonal anti-EphA2 (C-20: Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, Calif.), o IgG de conejo de control (ventana de la esquina superior derecha para cada muestra). Se observó una tinción relativamente densa en los endotelios y las células tumorales que rodean el vaso (D). Nueve de los catorce casos de GBM y seis de los nueve de AA examinados fueron positivos para EphA2 (no se muestra). Aumento original; * 20.

La Fig. 9 presenta gráficamente los datos que demuestran que las células CD8+ estimuladas con EphA2^s83-891provocaron respuestas CTL contra células de glioma humano que expresaban la proteína HLA-A2 y EphA2. Las células T CD8+ de un paciente con glioma HLA-A2+ se estimularon con DCs cargadas con EphA2^883-89idurante 10 días. A continuación, se comprobó la actividad lítica de estas células T contra las células de glioma humano SNB19 (HLA-A2+, EphA2+) (▲), U251 (HLA-A2+, EphA2+) (■) y A172 (HLA-A2-, EphA2+) (▼) mediante un ensayo de liberación de 51Cr durante 4 horas.

La Fig. 10: Los niveles de producción de IL-12 se correlacionaron positivamente con TTP. P=0,0255 con base en la regresión de Cox seguida de la prueba de la razón de verosimilitud. Los círculos cerrados indican los pacientes que ya han progresado, mientras que los rombos cerrados representan los pacientes que no han recurrido hasta la fecha.

La Fig. 11: Respuestas de las células T a IL-13Ra2 (A), PADRE (B), EphA2 (C), YKL-40 (D) o gp100 (E) evaluadas por IFN-y ELISPOT. Evolución temporal de los ensayos de IFN-y ESLIPOT para todos los pacientes evaluados con gráficos de caja (cajas = percentiles 25 a 75; líneas verticales = mínimo a máximo). Los números en la porción inferior de cada punto de tiempo en el panel para YKL-40 (D) son el número de pacientes evaluables en el momento indicado. Estas cifras también se refieren a los demás GAA y PADRE.

La Fig. 12: Las respuestas de las células T a la IL-13Ra2 (■), PADRE (*), EphA2 (A), YKL-40 (^), o gp100 (•) evaluados mediante análisis de IFN-y ESLIPOT para el paciente 10.

La Fig. 13: El paciente 6 mostró respuestas duraderas del tetrámero, que se analizaron hasta 33 semanas (células del tetrámero IL-13Ra2 (■); células del tetrámero EphA2 (A); células del tetrámero gp100 (•)) (C). Se muestran ejemplos de gráficos de puntos para respuestas positivas de tetrámero contra el epítopo de IL-13Ra2 (A-B).

La Fig. 14: Inducción de respuestas de citoquinas y quimioquinas de tipo 1. Los gráficos de líneas representan la expresión génica relativa emparejada de IFNa1 (A), CXCL10 (B), CCL5 (C), IL-12a (D), TLR3 (E) o CCL22 (F) por RT-PCR un día antes de la 1' vacunación en comparación con 24 horas después de la 1' vacuna para

los casos número 10 (■), 11 (|), 16 (A), 19 (□) o 22 ( ^ ) . Los ejes Y indican las concentraciones de citoquinas/quimioquinas en pg/ml. Los números en los paneles de cada una de las secciones (A)-(F) indican los valores p con base en la prueba t de student emparejada utilizando las medias del valor AACT de cada paciente.

La Fig. 15: Inducción de respuestas de citoquinas y quimioquinas de tipo 1. Los gráficos de líneas representan la expresión génica relativa emparejada de IFNa1 (A), CXCL10 (B), IFNy (C), TLR3 (D) por RT-PCR un día antes de la primera vacunación en comparación con 9 semanas después de la 1^'vacuna para los casos número 9 (•), 10 (■), 12 (sin símbolo), 16 (A), 18 (o), 19 (□) o 20 (A). Los ejes Y indican las concentraciones de citoquinas/quimioquinas en pg/ml. Los números de los paneles de cada uno de los apartados (A)-(D) indican los valores p con base en la prueba t de student emparejada utilizando las medias del valor de AAC^tde cada paciente.

La Fig. 16: Los análisis Luminex se realizaron en las muestras de suero anteriores a la primera y posteriores a la cuarta vacuna. Los ejes Y indican las concentraciones de citoquinas/quimioquinas en pg/ml. Los números en los paneles de cada uno de los (A)-(E) indican los valores p con base en la prueba t de estudiantes emparejados utilizando las medias de las concentraciones.

La Fig. 17: El paciente 1 demostró un aumento del tamaño de la lesión con Gd tras dos vacunas de refuerzo y fue sometido a una resección quirúrgica de la lesión. La hibridación in situ detectó ARNm para CXCL10 (manchas oscuras) en el tejido postvacuna (B) pero no en el tumor inicialmente resecado (prevacuna) (A). Control, (C). Ninguno de los otros dos tejidos anteriores a la vacuna demostró mensajes positivos de CXCL10. La barra de escala equivale a 100 pm. Se realizó una tinción de hematoxilina y eosina para el fondo.

La Fig. 18: Pacientes con respuesta clínica. El paciente 20 demostró una respuesta radiológica completa del tumor con realce de Gd en la IRM en las semanas 17 y 33 (se muestran tres cortes consecutivos para la semana 0 (A-C), la semana 17 (D-F) y la semana 33 (G-I)). Después de dos vacunas de refuerzo, el paciente 1 demostró un aumento de la lesión realzada por Gd. El tejido resecado no reveló ninguna evidencia de tumor mitóticamente activo (J), pero sí una notable infiltración de macrófagos CD68+ (K) y células T CD8+ (L). Aumentos originales * 20 para J-L.

La Fig. 19: Diagrama de flujo del ensayo. Véase el apartado 7.7 para conocer los detalles del tratamiento. La segunda fase de vacunas de refuerzo podía comenzar en cualquier momento después de la semana 37 y administrarse cada 3 meses hasta 3 años después de la primera vacuna, a menos que los pacientes demostraran un EA importante o la progresión de la enfermedad. Las vacunas aDC1 se administraron mediante ultrasonidos en los ganglios linfáticos inguinales (derecho e izquierdo para la primera y segunda vacunas, respectivamente) y en los ganglios linfáticos axilares (derecho e izquierdo para la tercera y cuarta vacunas, respectivamente). El lugar se rotó en el mismo orden para las vacunas de refuerzo con el fin de minimizar los efectos potenciales del traumatismo inducido por la inyección en el microambiente de los ganglios linfáticos al repetir las inyecciones en períodos cortos de tiempo.

La Fig.20: Tiempo hasta la progresión (A) y supervivencia general (B) para GBM (■) y AG La mediana del TTP es de 4 y 13 meses para GBM y AG, respectivamente.

La Fig. 21: Las vacunas peptídicas con base en IFA inducen actividades CTL superiores a las vacunas con base en DC combinadas con inyecciones intramusculares (i.m.) de poli-ICLC. Los ratones C57BL/6 recibieron dos inyecciones (en los días 0 y 7) de 1) péptido subcutáneo (s.c.) de ovoalbúmina257-264 emulsionado en IFA (IFA-OVA) más inyección i.m. simultánea de poli-ICLC (50 pg/inyección); 2) s.c. IFA-OVA más solución salina i.m.; 3) DC derivadas de la médula ósea cargadas con el péptido ovoalbúmina^257-264(DC-OVA) más poli-ICLC i.m.; o 4) DC-OVA más solución salina i.m. Otros grupos de control incluyeron ratones que recibieron IFA o DC solos sin el péptido OVA. Las vacunas IFA-OVA combinadas con poli-ICLC demostraron el mayor nivel de CTL específicos de OVA in vivo. El uso de péptidos GAA propios no mutados emulsionados en IFA con poli-ICLC mejoró la supervivencia de los ratones sin inducir autoinmunidad. Estos datos demuestran que las vacunas poli-ICLC asistidas por IFA-péptidos representan una estrategia de vacunación eficaz y segura.

6. DESCRIPCIÓN DETALLADA

Se proporcionan en el presente documento vacunas con base en péptidos del receptor de interleucina-13 a2 (IL-13Ra2) que comprenden un péptido IL-13Ra2. Las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento comprenden un péptido IL-13Ra2 y al menos un péptido adicional asociado al cáncer cerebral.

En un aspecto, se presentan en el presente documento vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 que comprenden un péptido IL-13Ra2 y uno, dos, tres o más péptidos adicionales asociados al cáncer cerebral. En ciertas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento se administran simultáneamente con uno o más epítopos de células T auxiliares y/o uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria. De acuerdo con dichas realizaciones, uno o más epítopos de células T colaboradoras y/o uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria pueden administrarse como parte de la vacuna (por ejemplo, en solución con el péptido IL-13Ra2 y uno, dos, tres o más péptidos adicionales asociados al cáncer cerebral) o por separado de la vacuna (es decir, los epítopos de células T colaboradoras y/o los modificadores de la respuesta inmunitaria pueden administrarse como una formulación que no forma parte de la formulación de la vacuna). En algunas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento se administran como vacunas libres de células. En otras realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento se administran como vacunas de células dendríticas.

En una realización, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende un péptido IL-13Ra2, un péptido EphA2, un péptido YKL-40 y un péptido GP100. En una realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a una cualquiera de las SEQ ID NO: 1-4, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, el péptido YKL-40 correspondiente a la SEQ ID NO:10, y el péptido GP100 correspondiente a la SEQ ID NO:11. En otra realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a la SEQ ID NO:3, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, el péptido YKL-40 correspondiente a la SEQ ID NO:10, y el péptido GP100 correspondiente a la SEQ ID NO: 11. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más epítopos de células T auxiliares. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares, en el que el epítopo de células T auxiliares es el péptido PADRE. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna libre de células. En otras realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna de células dendríticas.

De acuerdo con la invención, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende un péptido IL-13Ra2, un péptido EphA2, un péptido survivin y un péptido WT1. En una realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a una cualquiera de las SEQ ID NO: 1-4, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, el péptido survivin correspondiente a la SEQ ID NO:7, y el péptido WT1 correspondiente a la SEQ ID NO:8. En otra realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 comprende el péptido IL-13Ra2 correspondiente a la SEQ ID NO:3, el péptido EphA2 correspondiente a la SEQ ID NO:6, el péptido survivin correspondiente a la SEQ ID NO:7, y el péptido WT1 correspondiente a la SEQ ID NO:8. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más epítopos de células T auxiliares. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares, en el que el epítopo de células T auxiliares es el toxoide tetánico. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con uno o más modificadores de la respuesta inmunitaria. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria es poli-ICLC. En una realización específica, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria es Montanide ISA-51. En algunas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna libre de células. En otras realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna de células dendríticas.

6.1 PÉPTIDOS

6.1.1 Péptido IL-13Ra2

IL-13Ra2, una glicoproteína de membrana que se une como componente de un heterodímero a la citoquina Th2, IL-13, que induce a los monocitos y macrófagos a producir TGFp (véase, por ejemplo, Fichtner-Feigl et al., Nat. Med., 12: 99-106, 2006).

Las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 de acuerdo con la invención comprenden un péptido IL-13Ra2. Cualquier péptido de IL-13Ra2 capaz de servir como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringidos por HLA-A2 puede utilizarse en una vacuna descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el péptido IL-13Ra2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una cualquiera de las SEQ ID NOs:1-4. En una realización específica, el péptido IL-13Ra2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende la SEQ ID NO:3.

En algunas realizaciones, el péptido IL-13Ra2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una versión mutada de SEQ ID NO: 1, donde la versión mutada de SEQ ID NO: 1 comprende al menos 1, al menos 2 o al menos 3 subsituaciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones conservadoras), adiciones o supresiones.

En algunas realizaciones, el péptido IL-13Ra2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de identidad con la SEQ ID NO: 1. En otras realizaciones, el péptido IL-13Ra2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50% a 60%, 50% a 70%, 60% a 70%, 70% a 80%, 70% a 90%, o 80% a 90% de identidad con la SEQ ID NO:1. En algunas realizaciones, el péptido IL-13Ra2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de similitud con la SEQ ID NO: 1. En otras realizaciones, el péptido IL-13Ra2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de similitud con la SEQ ID NO:1

6.1.2 Péptido EphA2

EphA2 es un receptor de tirosina quinasa que participa en la formación de la notocorda a través de la interacción con ephrinAI. (véase, por ejemplo, Naruse-Nakajima et al., Mech. Dev., 102: 95-105, 2001).

De acuerdo con la invención, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento comprenden un péptido EphA2. Cualquier péptido EphA2 capaz de servir como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringidos por HLA-A2 puede utilizarse en una vacuna descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el péptido EphA2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende la SEQ ID NO:6. En otras realizaciones, el péptido EphA2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento es un péptido EphA2 descrito en la Patente Estadounidense No. 7,297,337.

[En algunas realizaciones, el péptido EphA2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una versión mutada de la SEQ ID NO:6, en la que la versión mutada de la SEQ ID NO:6 comprende al menos 1, al menos 2 o al menos 3 sustituciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones conservadoras), adiciones o supresiones.

En algunas realizaciones, el péptido EphA2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de identidad con la SEQ ID n O:6. En otras realizaciones, el péptido EphA2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de identidad con la SEQ ID NO:6. En algunas realizaciones, el péptido EphA2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de similitud con la SEQ ID NO:6. En otras realizaciones, el péptido EphA2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de similitud con la SEQ ID NO:6.

6.1.3 Péptido de survivina

La survivina es una proteína inhibidora de la apoptosis que se sobreexpresa en la mayoría de los cánceres humanos, y la inhibición de su función da lugar a un aumento de la apoptosis (véase, por ejemplo, Blanc-Brude et al., Nat. Med., 8: 987-994, 2002).

De acuerdo con la invención, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento comprenden un péptido de survivina. Cualquier péptido de survivina capaz de servir como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringidos por HLA-A2 puede utilizarse en una vacuna descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el péptido de survivina utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende la SEQ ID NO:7. En una realización específica, el péptido IL-13Ra2 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende la SEQ ID NO:7. En otras realizaciones, el péptido de survivina utilizado en una vacuna descrita en el presente documento es un péptido de survivina descrito en La publicación de la Solicitud de EE. UU. No.

2009/0041732 o por Ciesielski et al., Cancer Immunol. Immunother, 59:1211-1221, 2010.

En algunas realizaciones, el péptido de survivina utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una versión mutada de la SEQ ID NO:7, en la que la versión mutada de la SEQ ID NO:7 comprende al menos 1, al menos 2 o al menos 3 subsituaciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones conservadoras), adiciones o supresiones.

En algunas realizaciones, el péptido de survivina utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de identidad con la SEQ ID NO:7. En otras realizaciones, el péptido de survivina utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de identidad con la SEQ ID NO:7. En algunas realizaciones, el péptido de survivina utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de similitud con la SEQ ID NO:7. En otras realizaciones, el péptido de survivina utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de similitud con la SEQ ID NO:7.

6.1.4 Péptido WT1

WT1, es un factor de transcripción, que se expresa durante el desarrollo renal y regula el desarrollo de los túbulos mesonéfricos caudales (véase, por ejemplo, Sainio, Development, 124: 1293-1299, 1997).

De acuerdo con la invención, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento comprenden un péptido WT1. Cualquier péptido WT1 capaz de servir como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringidos por HLA-A2 puede utilizarse en una vacuna descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el péptido WT1 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende la SEQ ID NO:8.

En algunas realizaciones, el péptido WT1 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una versión mutada de la SEQ ID NO:8, en la que la versión mutada de la SEQ ID NO:8 comprende al menos 1, al menos 2 o al menos 3 sustituciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones conservadoras), adiciones o supresiones.

En algunas realizaciones, el péptido WT1 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de identidad con la SEQ ID NO:8. En otras realizaciones, el péptido WT1 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de identidad con la SEQ ID NO:8. En algunas realizaciones, el péptido WT1 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de similitud con la SEQ ID ⁿO:8. En otras realizaciones, el péptido WT1 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de similitud con la SEQ ID NO:8.

6.1.5 Péptido GP100

El antígeno humano asociado al melanoma, GP100, es un antígeno de diferenciación de los melanocitos que se expresa en las células nucleadas de los mamíferos. (véase, por ejemplo, Koch et al., FEBS Lett., 179: 294-298, 1985.

En algunas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento comprenden un péptido GP100. Cualquier péptido GP100 capaz de servir como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringidos por HLA-A2 puede utilizarse en una vacuna descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el péptido GP100 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende la SEQ ID NO:11.

En algunas realizaciones, el péptido GP100 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una versión mutada de la SEQ ID NO: 11, donde la versión mutada de la SEQ ID NO:11 comprende al menos 1, al menos 2, o al menos 3 subsituaciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones conservadoras), adiciones o supresiones.

En algunas realizaciones, el péptido GP100 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de identidad con la SEQ ID NO:11. En otras realizaciones, el péptido GP100 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de identidad con la SEQ ID NO:11. En algunas realizaciones, el péptido GP100 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de similitud con la SEQ ID NO:11. En otras realizaciones, el péptido GP100 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de similitud con la SEQ ID NO:11.

6.1.6 Péptido YKL-40

Se sabe que YKL-40, una glicoproteína secretada, está implicada en la degradación de la matriz extracelular y/o en la angiogénesis, tal como en la fibrosis hepática, la artritis reumatoide y la osteoartritis grave, (véase, por ejemplo, Bigg et al., (2006), J Biol Chem. 281,21082-95 ).

En algunas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento comprenden un péptido YKL-40. Cualquier péptido YKL-40 capaz de servir como epítopo de linfocitos T citotóxicos (CTL) restringidos por HLA-A2 puede utilizarse en una vacuna descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el péptido YKL-40 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende la SEQ ID NO:10.

En algunas realizaciones, el péptido YKL-40 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una versión mutada de la SEQ ID NO:10, en la que la versión mutada de la SEQ ID NO: 10 comprende al menos 1, al menos 2 o al menos 3 subsituaciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones conservadoras), adiciones o supresiones.

En algunas realizaciones, el péptido YKL-40 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de identidad con la SEQ ID NO: 10. En otras realizaciones, el péptido YKL-40 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de identidad con la SEQ ID NO:10. En algunas realizaciones, el péptido YKL-40 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de similitud con la SEQ ID NO:10. En otras realizaciones, el péptido YKL-40 utilizado en una vacuna descrita en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 50 % a 60 %, 50 % a 70 %, 60 % a 70 %, 70 % a 80 %, 70 % a 90 %, o 80 % a 90 % de similitud con la SEQ ID NO:10.

6.2 MODIFICADORES DE LA RESPUESTA INMUNITARIA

En algunas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento se administran simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria. Los modificadores de la respuesta inmunitaria incluyen agentes capaces de modificar la respuesta inmunitaria de un sujeto. En algunas realizaciones, un modificador de la respuesta inmunitaria polariza la respuesta inmunitaria de un sujeto hacia una respuesta Th1. En otras realizaciones, un modificador de la respuesta inmunitaria polariza la respuesta inmunitaria de un sujeto hacia una respuesta Th2. En una realización preferida, la respuesta inmunitaria modificada se une a un receptor tipo Toll, también conocido como TLR, tal como TLR3. Los modificadores de la respuesta inmunitaria ejemplares que pueden administrarse simultáneamente con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 que se proporcionan en el presente documento incluyen, sin limitación, poli-ICLC, imiquimod (Aldara®; Beselna®) y MIS-416 (Innate Therapeutics).

6.2.1 Poli-ICLC

El ácido polinosínico-policidílico estabilizado con polilisina y carboximetilcelulosa (poli-ICLC) es un ácido nucleico sintético, y funciona como ligando del receptor tipo Toll-3 (TLR3). El Poli-ICLC también se conoce como Hiltonol.

6.3 ADYUVANTES

En algunas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento se administran simultáneamente con un adyuvante. En algunas realizaciones, el término "adyuvante" se refiere a un agente que cuando se administra simultáneamente con o en la misma composición que la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento aumenta, acelera, prolonga, mejora y/o potencia la respuesta inmunitaria a la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2. En algunas realizaciones, el adyuvante genera una respuesta inmunitaria a la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y no produce una alergia u otra reacción adversa. Los adyuvantes pueden potenciar una respuesta inmunitaria mediante varios mecanismos, incluyendo, por ejemplo, el reclutamiento de linfocitos, la estimulación de células B y/o T, la estimulación de células dendríticas y la estimulación de macrófagos.

Ejemplos específicos de adyuvantes incluyen, pero no se limitan a, Montanide ISA-51, Montanide ISA 50V, Montanide, iSa 206, Montanide IMS 1312, VaxImmune® (CpG7909; Coley Pharmaceuticals), sales de aluminio (alumbre) (tal como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio y sulfato de aluminio), 3 Monofosforil lípido A desacilado en O (MPL) (véase GB 2220211), MF59 (Novartis), AS03 (GlaxoSmithKline), AS04 (GlaxoSmithKline), polisorbato 80 (Tween 80; ICL Americas, Inc.), compuestos de imidazopiridina (véase la Solicitud Internacional No PCT/US2007/064857publicada como Publicación Internacional No. WO2007/109812), compuestos de imidazoquinoxalina (véase la Solicitud Internacional No. PCT/US2007/064858publicada como Publicación Internacional No. WO2007/109813) y saponinas, tales como QS21 (véase Kensil et al., en Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995) Pat. de EE. UU. No. 5,057,540). En algunas realizaciones, el adyuvante es el adyuvante de Freund (completo o incompleto). Otros adyuvantes son las emulsiones de aceite en agua (tal como el escualeno o el aceite de cacahuete), opcionalmente en combinación con estimulantes inmunitarios, tales como el lípido monofosforilo A (véase Stoute et al., N. Engl. J. Med. 336, 86-91 (1997)). Otro adyuvante es CpG (Bioworld Today, 15 de noviembre de 1998). Dichos adyuvantes pueden utilizarse con o sin otros agentes inmunoestimulantes específicos tales como MPL o 3-DMP, QS21, aminoácidos poliméricos o monoméricos tales como ácido poliglutámico o polilisina, u otros agentes inmunopotenciadores. Debe entenderse que diferentes formulaciones de vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 pueden comprender diferentes adyuvantes o pueden comprender el mismo adyuvante.

6.4 EPÍTOPOS DE CÉLULAS T AUXILIARES

En algunas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento se administran simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares. Los epítopos de células T auxiliares incluyen agentes capaces de inducir una respuesta de células T auxiliares por parte del sistema inmunitario. Las células T auxiliares son células T CD4+. En algunas realizaciones, los epítopos de las células T auxiliares son presentados por moléculas MHC de clase II, y pueden ser reconocidos por el receptor de células T (TCR) de las células T auxiliares (células T CD4+), activando así las células T CD4+, haciendo que proliferen, secreten citoquinas tales como IL2, y activen las células presentadoras de antígenos profesionales. A través de diversos mecanismos, los linfocitos T auxiliares activados también estimulan a los linfocitos T asesinos (también conocidos como linfocitos T CD8+), prolongando y aumentando así la respuesta de los linfocitos T CD8+. Algunos ejemplos de epítopos de células T auxiliares que pueden administrarse simultáneamente con las vacunas con base en péptidos IL-13Ra2 proporcionadas en el presente documento incluyen, sin limitación, PADRE, HBVcore128-140 y toxoide tetánico.

6.4.1 Péptido PADRE

PADRE es un epítopo no natural optimizado tanto para la unión del HLA-DR como para la estimulación del receptor de células T (véase, por ejemplo, Alexander et al, Immunity, 1:751-761, 1994).

6.4.2 Toxoide tetánico

Se sabe que un epítopo Th bien caracterizado (SEQ ID NO:9) de la proteína del toxoide tetánico (TT), al que la gran mayoría de la población ha sido sensibilizada, actúa como epítopo de células T auxiliares.

6.4.2.1 Núcleo HBV ^128-140

Se sabe que un epítopo Th bien caracterizado (SEQ ID NO:5) de la proteína del HBV actúa como epítopo de células T auxiliares.

6.5 PRODUCCIÓN Y PURIFICACIÓN DE PÉPTIDOS

Los péptidos descritos en el presente documento pueden producirse por cualquier método conocido en la técnica para la síntesis de péptidos, en particular, por síntesis química o por técnicas de expresión recombinante. Los métodos proporcionados en el presente documento abarcan, a menos que se indique lo contrario, técnicas convencionales de biología molecular, microbiología, análisis genético, ADN recombinante, química orgánica, bioquímica, PCR, síntesis y modificación de oligonucleótidos, hibridación de ácidos nucleicos y campos relacionados dentro de la habilidad de la técnica. Estas técnicas se describen en las referencias citadas en el presente documento y se explican ampliamente en la literatura. Véase, por ejemplo Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 y actualizaciones anuales) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 y actualizaciones anuales) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press.

6.5.1.1 Producción sintética de péptidos

Los péptidos descritos en el presente documento pueden prepararse utilizando una solución convencional por pasos o síntesis en fase sólida (véase, por ejemplo, Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, Williams et al., Eds., 1997, CRC Press, Boca Raton Fla.y las referencias allí citadas Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, Atherton & Sheppard, Eds., 1989, iRl Press, Oxford, Engly, y las referencias allí citadas ).

Alternativamente, los péptidos descritos en el presente documento pueden prepararse mediante condensación de segmentos, como se describe, por ejemplo, en Liu et al., 1996, Tetrahedron Lett. 37(7):933-936 Baca, et al., 1995, J. Am. Chem. Soc. 117:1881-1887 Tam et al., 1995, Int. J. Peptide Protein Res. 45:209-216 Schnolzer y Kent, 1992, Science 256:221-225 Liu y Tam, 1994, J. Am. Chem. Soc. 116(10):4149-4153 Liu y Tam, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6584-6588 Yamashiro y Li, 1988, Int. J. Peptide Protein Res. 31:322-334. Otros métodos útiles para sintetizar los péptidos descritos en el presente documento se describen en Nakagawa et al., 1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-7092.

La formación de enlaces disulfuro, si se desea, se realiza generalmente en presencia de agentes oxidantes suaves. Se pueden utilizar agentes oxidantes químicos o simplemente exponer los compuestos al oxígeno atmosférico para efectuar estos enlaces. Se conocen diversos métodos en la técnica, incluyendo los descritos, por ejemplo, por Tam et al., 1979, Synthesis 955-957 Stewart et al., 1984, Solid Phase Peptide Synthesis, 2d Ed., Pierce Chemical Company Rockford, Ill. Ahmed et al., 1975, J. Biol. Chem. 250:8477-8482y Pennington et al., 1991 Peptides 1990 164-166, Giralt y Andreu, Eds., ESCOM Leiden, Países Bajos. Otra alternativa es la descrita por Kamber et al., 1980, Helv. Chim. Acta 63:899-915. Un método realizado en soportes sólidos es el descrito por Albericio, 1985, Int. J. Peptide Protein Res.

26:92-97.

6.5.1.2 Expresión recombinante de péptidos

La expresión recombinante de un péptido requiere la construcción de un vector de expresión que contenga un polinucleótido que codifique el péptido. Una vez que se ha obtenido un polinucleótido que codifica un péptido, el vector para la producción del péptido puede producirse mediante tecnología de ADN recombinante utilizando técnicas bien conocidas en la técnica. Por lo tanto, en el presente documento se describen métodos para preparar un péptido mediante la expresión de un polinucleótido que contiene una secuencia de nucleótidos que codifica el péptido. Para construir vectores de expresión que contengan secuencias codificadoras de péptidos y señales de control transcripcional y traslacional adecuadas, pueden utilizarse métodos bien conocidos por los expertos en la técnica. Estos métodos incluyen, por ejemplo, técnicas de ADN recombinante in vitro, técnicas sintéticas y recombinación genética in vivo. Por lo tanto, se proporcionan en el presente documento vectores de expresión replicables que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido unido de forma operable a un promotor.

Un vector de expresión comprende un ácido nucleico que codifica un péptido en una forma adecuada para la expresión del ácido nucleico en una célula huésped. En determinadas realizaciones, la célula huésped es una célula huésped aislada. En una realización específica, un vector de expresión incluye una o más secuencias reguladoras, seleccionadas en función de las células huésped que se van a utilizar para la expresión, que está operablemente unida al ácido nucleico que se va a expresar. Dentro de un vector de expresión, "operativamente ligado" significa que un ácido nucleico de interés está ligado a las secuencias reguladoras de manera que permite la expresión del ácido nucleico(por ejemplo, en un sistema de transcripción/traducción in vitro o en una célula huésped cuando el vector se introduce en la célula huésped). Las secuencias reguladoras incluyen promotores, potenciadores y otros elementos de control de la expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación). Las secuencias reguladoras incluyen las que dirigen la expresión constitutiva de un ácido nucleico en muchos tipos de células huésped, las que dirigen la expresión del ácido nucleico sólo en determinadas células huésped (por ejemplo, secuencias reguladoras específicas de tejido) y las que dirigen la expresión del ácido nucleico tras la estimulación con un agente concreto (por ejemplo, secuencias reguladoras inducibles). Los expertos en la técnica apreciarán que el diseño del vector de expresión puede depender de factores tales como la elección de la célula huésped que se va a transformar, el nivel de expresión de la proteína deseado, etc. El término "célula huésped" pretende incluir una célula particular transformada o transfectada con un ácido nucleico y la progenie o progenie potencial de dicha célula. La progenie de una célula de este tipo puede no ser idéntica a la célula madre transformada o transfectada con el ácido nucleico debido a mutaciones o influencias ambientales que pueden ocurrir en las generaciones sucesivas o a la integración del ácido nucleico en el genoma de la célula huésped. En determinadas realizaciones, se aísla la célula huésped.

Un vector de expresión puede introducirse en las células huésped mediante técnicas convencionales de transformación o transfección. Estas técnicas incluyen, pero no se limitan a, la coprecipitación de fosfato de calcio o cloruro de calcio, la transfección mediada por DEAE-dextrano, la lipofección y la electroporación. Pueden encontrarse métodos adecuados para transformar o transfectar células huésped en Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning - A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Press, Nueva York y otros manuales de laboratorio. En ciertas realizaciones, una célula huésped se transfecta transitoriamente con un vector de expresión que contiene un ácido nucleico que codifica un péptido. En otras realizaciones, una célula huésped se transfecta de forma estable con un vector de expresión que contiene un ácido nucleico que codifica un péptido. Así, se proporcionan en el presente documento células huésped que contienen un polinucleótido que codifica un péptido descrito en el presente documento o generado de acuerdo con los métodos proporcionados en el presente documento.

Se pueden utilizar diversos sistemas de vectores de expresión del huésped para expresar un péptido. Dichos sistemas de expresión del huésped representan vehículos mediante los cuales las secuencias codificantes de interés pueden ser producidas y posteriormente purificadas, pero también representan células que pueden, cuando se transforman o transfectan con las secuencias codificantes de nucleótidos apropiadas, expresar un péptido in situ. Estos incluyen, pero no se limitan a microorganismos tales como bacterias(por ejemplo, E. coli y B. subtilis) transformadas con ADN de bacteriófago recombinante, ADN de plásmido o vectores de expresión de ADN de cósmidos que contienen secuencias de codificación de péptidos; levadura (por ejemplo, Saccharomyces Pichia) transformada con vectores de expresión de levaduras recombinantes que contienen secuencias codificantes de péptidos; sistemas celulares de insectos infectados con vectores de expresión de virus recombinantes(por ejemplo, baculovirus) que contienen secuencias codificantes de péptidos; sistemas celulares vegetales infectados con vectores de expresión de virus recombinantes (por ejemplo, virus del mosaico de la coliflor, CaMV; virus del mosaico del tabaco, TMV) o transformados con vectores de expresión de plásmidos recombinantes (por ejemplo, el plásmido Ti) que contienen secuencias de codificación de péptidos; o sistemas de células de mamíferos (por ejemplo, COS, CHO, BHK, 293, NS0 y 3T3) que albergan constructos de expresión recombinante que contienen promotores derivados del genoma de células de mamíferos (por ejemplo, el promotor de la metalotioneína) o de virus de mamíferos (por ejemplo, el promotor tardío del adenovirus; el promotor del virus vaccinia 7.5K). Preferiblemente, se utilizan células bacterianas, tales como Escherichia coli, y más preferiblemente, células eucariotas para la expresión de un péptido. Por ejemplo, las células de mamífero, tales como las células de ovario de hámster chino (CHO), junto con un vector tal como el elemento promotor del gen temprano intermedio mayor del citomegalovirus humano es un sistema de expresión eficaz para los péptidos (Foecking et al., 1986, Gene 45:101y Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2). En una realización específica, la expresión de las secuencias de nucleótidos que codifican los péptidos descritos en el presente documento o generados de acuerdo con los métodos proporcionados en el presente documento está regulada por un promotor constitutivo, un promotor inducible o un promotor específico de tejido.

En los sistemas bacterianos, pueden seleccionarse ventajosamente varios vectores de expresión en función del uso previsto para el péptido que se expresa. Por ejemplo, cuando se va a producir una gran cantidad de péptido, para la generación de composiciones farmacéuticas de un péptido, pueden ser deseables vectores que dirijan la expresión de altos niveles de productos de proteínas de fusión que se purifiquen fácilmente. Dichos vectores incluyen, pero no se limitan a, el vector de expresión de E. coli pUR278 (Ruther et al., 1983, EMBO 12:1791), en el que la secuencia codificadora del péptido puede ligarse individualmente en el vector en marco con la región codificadora de lac Z, de modo que se produce una proteína de fusión; los vectores pIN (Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509); los vectores pGEX también pueden utilizarse para expresar polipéptidos extraños como proteínas de fusión con la glutatión 5-transferasa (GST). En general, estas proteínas de fusión son solubles y pueden purificarse fácilmente a partir de células lisadas por adsorción y unión a perlas de agarosa de matriz de glutatión, seguidas de una elución en presencia de glutatión libre. Los vectores pGEX están diseñados para incluir sitios de escisión de la trombina o de la proteasa del factor Xa, de modo que el producto genético objetivo clonado pueda liberarse de la fracción GST.

En un sistema de insectos, el virus de la poliedrosis nuclear de Autographa califomica (AcNPV) se utiliza como vector para expresar genes extraños. El virus crece en las células de Spodoptera frugiperda. La secuencia codificadora del péptido puede clonarse individualmente en regiones no esenciales (por ejemplo, el gen de la poliedrina) del virus y colocarse bajo el control de un promotor del AcNPV (por ejemplo, el promotor de la poliedrina).

En las células huésped de mamíferos, se pueden utilizar varios sistemas de expresión con base en virus. En los casos en los que se utiliza un adenovirus como vector de expresión, la secuencia codificadora del péptido de interés puede ligarse a un complejo de control de transcripción/traducción del adenovirus, por ejemplo, el promotor tardío y la secuencia líder tripartita. Este gen quimérico puede entonces insertarse en el genoma del adenovirus mediante recombinación in vitro o in vivo. La inserción en una región no esencial del genoma viral (por ejemplo, la región El o E3) dará lugar a un virus recombinante que es viable y capaz de expresar el péptido en los huéspedes infectados (por ejemplo, véase Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359). También pueden ser necesarias señales de iniciación específicas para la traducción eficiente de las secuencias codificadoras de péptidos insertadas. Estas señales incluyen el codón de iniciación ATG y las secuencias adyacentes. Además, el codón de iniciación debe estar en fase con el marco de lectura de la secuencia codificante deseada para garantizar la traducción de todo el inserto. Estas señales exógenas de control de la traducción y los codones de iniciación pueden tener diversos orígenes, tanto naturales como sintéticos. La eficiencia de la expresión puede mejorarse mediante la inclusión de elementos potenciadores de la transcripción adecuados, terminadores de la transcripción, etc. (véase, por ejemplo, Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544).

Además, puede elegirse una cepa celular huésped que module la expresión de las secuencias insertadas, o que modifique y procese el producto génico de la forma específica deseada. Estas modificaciones (por ejemplo, la glicosilación) y el procesamiento (por ejemplo, la escisión) de los productos proteicos pueden ser importantes para la función del péptido. Las diferentes células huésped tienen mecanismos característicos y específicos para el procesamiento y la modificación postraduccional de las proteínas y los productos génicos. Se pueden elegir las líneas celulares o los sistemas anfitriones adecuados para garantizar la modificación y el procesamiento correctos de la proteína extraña expresada. Para ello, pueden utilizarse células huésped eucariotas que posean la maquinaria celular para el procesamiento adecuado del transcrito primario, la glicosilación y la fosforilación del producto génico. Dichas células huésped de mamíferos incluyen, pero no se limitan a, las células CHO, VERY, BHK, Hela, COS, Vero, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, H^tB2, BT2O y T47D, NS0 (una línea celular de mieloma murino que no produce endógenamente ninguna cadena de inmunoglobulina), CRL7O3O y HsS78Bst.

Para la producción a largo plazo y de alto rendimiento de péptidos recombinantes, se prefiere la expresión estable. Por ejemplo, se pueden crear líneas celulares que expresen de forma estable la molécula peptídica. En lugar de utilizar vectores de expresión que contengan orígenes virales de replicación, las células huésped pueden transformarse con ADN controlado por elementos de control de expresión apropiados (por ejemplo, promotor, potenciador, secuencias, terminadores de transcripción, sitios de poliadenilación, etc.), y un marcador seleccionable. Tras la introducción del ADN extraño, se puede dejar que las células manipuladas crezcan durante 1 o 2 días en un medio enriquecido, y luego se cambian a un medio selectivo. El marcador seleccionable en el plásmido recombinante confiere resistencia a la selección y permite a las células integrar de forma estable el plásmido en sus cromosomas y crecer hasta formar focos que, a su vez, pueden clonarse y expandirse en líneas celulares. Este método puede utilizarse ventajosamente para diseñar líneas celulares que expresen el péptido. Dichas líneas celulares de ingeniería pueden ser particularmente útiles en el cribado y evaluación de composiciones que interactúan directa o indirectamente con el péptido. Los métodos comúnmente conocidos en la técnica de la tecnología del ADN recombinante pueden aplicarse rutinariamente para seleccionar el clon recombinante deseado, y tales métodos se describen, por ejemplo, en Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993) Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); y en Capítulos 12 y 13, Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994) Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1.

Los niveles de expresión de un péptido pueden aumentarse mediante la amplificación del vector (para una revisión, véase Bebbington y Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, Nueva York, 1987)). Cuando un marcador del sistema vectorial que expresa el péptido se puede amplificar, el aumento del nivel de inhibidor presente en el cultivo de la célula huésped aumentará el número de copias del gen marcador. Dado que la región amplificada está asociada al péptido, la producción de éste también aumentará (Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257).

Como alternativa a la expresión recombinante de un péptido utilizando una célula huésped, un vector de expresión que contiene un ácido nucleico que codifica un péptido puede transcribirse y traducirse in vitro utilizando, por ejemplo, secuencias reguladoras del promotor T7 y la polimerasa T7. En una realización específica, puede utilizarse un sistema de transcripción/traducción acoplado, tal como Promega TNT®, o un lisado celular o un extracto celular que comprenda los componentes necesarios para la transcripción y la traducción para producir un péptido.

En consecuencia, se proporcionan en el presente documento métodos para producir un péptido. En una realización, el método comprende el cultivo de una célula huésped que contiene un ácido nucleico que codifica el péptido en un medio adecuado de manera que se produzca el péptido. En algunas realizaciones, el método comprende además el aislamiento del péptido del medio o de la célula huésped.

En ciertas realizaciones, las plantas (por ejemplo, plantas del género Nicotiana) pueden ser diseñadas para expresar un péptido descrito en el presente documento. En determinadas realizaciones, las plantas se diseñan para expresar un péptido descrito en el presente documento mediante un procedimiento de agroinfiltración utilizando métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los ácidos nucleicos que codifican un gen de interés, por ejemplo, un gen que codifica un péptido descrito en el presente documento, se introducen en una cepa de Agrobacterium. Posteriormente, la cepa se hace crecer en un cultivo líquido y las bacterias resultantes se lavan y se suspenden en una solución tampón. A continuación, las plantas se exponen (por ejemplo, mediante inyección o inmersión) al Agrobacterium que comprende los ácidos nucleicos que codifican un péptido descrito en el presente documento, de forma que el Agrobacterium transforma el gen de interés en una porción de las células de la planta. El péptido es entonces expresado transitoriamente por la planta y puede ser aislado utilizando métodos conocidos en la técnica y descritos en el presente documento. (Para ejemplos concretos, véase Shoji et al., 2008, Vaccine, 26(23):2930-2934y D'Aoust et al., 2008, J. Plant Biotechnology, 6(9):930-940). En una realización específica, la planta es una planta de tabaco (es decir, Nicotiana tabacum). En otra realización específica, la planta es un pariente de la planta del tabaco (por ejemplo, Nicotiana benthamiana).

En otras realizaciones, las algas (por ejemplo, Chlamydomonas reinhardtii) pueden ser diseñadas para expresar un péptido descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, Rasala et al., 2010, Plant Biotechnology Journal (Publicado en línea el 7 de marzo de 2010)).

6.5.1.3 Purificación de péptidos

Los péptidos descritos en el presente documento y generados utilizando los enfoques descritos en el presente documento pueden ser purificados por cualquier método conocido en la técnica para la purificación de un péptido, por ejemplo, por cromatografía (por ejemplo, intercambio iónico, afinidad, particularmente por afinidad por el antígeno específico después de la Proteína A, y cromatografía de columna de tamaño), centrifugación, solubilidad diferencial, o por cualquier otra técnica estándar para la purificación de proteínas. Además, los péptidos pueden fusionarse con secuencias peptídicas heterólogas descritas en el presente documento o conocidas de otro modo en la técnica para facilitar la purificación. Las condiciones reales utilizadas para purificar un péptido concreto dependerán, en parte, de la estrategia de síntesis (por ejemplo, producción sintética frente a producción recombinante) y de factores tales como la carga neta, la hidrofobicidad y/o la hidrofilia del péptido, y serán evidentes para quienes tengan conocimientos en la técnica.

6.6 COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y VÍAS DE ADMINISTRACIÓN

Se proporcionan en el presente documento composiciones farmacéuticas que comprenden. En algunas realizaciones, una composición proporcionada en el presente documento comprende una vacuna contra el cáncer cerebral con base en el péptido del receptor a2 de interleucina 13. En otras realizaciones, una composición proporcionada en el presente documento comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria. En otras realizaciones, una composición proporcionada en el presente documento comprende un modificador de la respuesta inmunitaria. Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento son adecuadas para la administración veterinaria y/o humana.

Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante, y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) pueden estar en cualquier forma que permita administrar la composición a un sujeto, siendo dicho sujeto preferentemente un animal, incluyendo, pero sin limitarse a un humano, mamífero o animal no humano, como una vaca, caballo, oveja, cerdo, ave, gato, perro, ratón, rata, conejo, cobaya, etc., y es más preferentemente un mamífero, y más preferentemente un humano.

En realizaciones específicas, las composiciones proporcionadas en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) están en forma de líquido (por ejemplo, un elixir, jarabe, solución, emulsión o suspensión). Las rutas típicas de administración de las composiciones líquidas proporcionadas en el presente documento pueden incluir, sin limitación, parenteral, intradérmica, intratumoral, intracerebral e intratecal. La administración parenteral incluye, sin limitación, técnicas de administración subcutánea, intranodal, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal e intrapleural. En una realización específica, las composiciones se administran por vía parenteral. En una composición para la administración por inyección, puede incluirse uno o más de un tensioactivo, un conservante, un agente humectante, un agente dispersante, un agente de suspensión, un tampón, un estabilizador y un agente isotónico. En una realización específica, puede utilizarse una bomba para administrar las vacunas (véase, por ejemplo, Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 1987, 14, 201 Buchwald et al., Surgery 1980, 88: 507; Saudek et al., N. Engl. J. Med. 1989, 321: 574). En una realización específica, la bomba puede ser, pero no se limita a, una bomba similar a la insulina.

Los materiales utilizados en la preparación de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) pueden ser no tóxicos en las cantidades utilizadas. Puede ser evidente para los expertos en la técnica que las dosificaciones óptimas de los ingredientes activos en la composición farmacéutica dependerá de una variedad de factores. Los factores relevantes incluyen, sin limitación, el tipo de sujeto (por ejemplo, humano), la salud general del sujeto, el tipo de cáncer cerebral del que el sujeto necesita tratamiento, el uso de la composición como parte de un régimen de múltiples fármacos, la forma particular de la vacuna que se administra, la manera de administración y la composición empleada.

Las composiciones líquidas de la invención, ya sean soluciones, suspensiones u otra forma similar, también pueden incluir uno o más de los siguientes diluyentes estériles tales como agua para inyección, solución salina, preferentemente fisiológica, solución de Ringer, cloruro sódico isotónico, aceites fijos tales como mono o diglicéridos sintéticos que pueden servir como disolvente o medio de suspensión, polietilenglicoles, glicerina, ciclodextrina, propilenglicol, u otros disolventes; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o el metilparabeno; antioxidantes como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como ácido etilendiaminotetraacético; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos; y agentes para el ajuste de la tonicidad tal como cloruro de sodio o dextrosa. Una composición parenteral puede estar encerrada en una ampolla, una jeringa desechable o un vial de dosis múltiple de vidrio, plástico u otro material. La composición inyectable es preferentemente estéril.

Las composiciones proporcionadas en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) pueden comprender un portador o vehículo farmacéuticamente aceptable. Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "farmacéuticamente aceptable" significa que está aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal o que aparece en la U.S. Pharmacopeia o en otras farmacopeas generalmente reconocidas para su uso en animales, y más concretamente en humanos. El término "portador" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el que se administra la composición farmacéutica. Las soluciones salinas y las soluciones acuosas de dextrosa y glicerol también pueden emplearse como soportes líquidos, especialmente para soluciones inyectables. Entre los excipientes adecuados se encuentran almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares. En "Remington's Pharmaceutical Sciences", de E.W., se describen ejemplos de soportes farmacéuticos adecuados. Martin. La formulación debe adaptarse al modo de administración.

En una realización, las composiciones proporcionadas en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) se formulan de acuerdo con procedimientos rutinarios tal como una composición farmacéutica adaptada para la administración parenteral a animales, particularmente a seres humanos. Por lo general, los ingredientes de las composiciones se suministran por separado o mezclados en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como un polvo seco liofilizado o un concentrado sin agua en un recipiente hermético tal como una ampolla o una bolsita que indica la cantidad de agente activo. Cuando una composición descrita en el presente documento se administra por inyección, se puede proporcionar una ampolla de agua estéril para inyección o solución salina para que los ingredientes se puedan mezclar antes de la administración, si es necesario.

Las composiciones proporcionadas en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) descritas en el presente documento pueden comprender un agente activo adicional seleccionado entre los que incluyen, pero sin limitarse a, un agente profiláctico adicional, un agente terapéutico adicional, un agente antiemético, un factor estimulante de colonias hematopoyéticas, una terapia adyuvante, un agente con base en anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, un antidepresivo y un agente analgésico.

Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) pueden prepararse utilizando una metodología bien conocida en la técnica farmacéutica. Por ejemplo, una composición destinada a ser administrada por inyección puede prepararse combinando los péptidos de una vacuna descrita en el presente documento con agua y/u otros componentes líquidos para formar una solución. Se puede añadir un tensioactivo para facilitar la formación de una solución o suspensión homogénea.

Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden incluirse en un envase, paquete o dispensador junto con las instrucciones de administración.

6.7 USOS PROFILÁCTICOS Y TERAPÉUTICOS

En un aspecto, se proporcionan en el presente documento métodos para prevenir, tratar y/o manejar el cáncer cerebral en un sujeto que lo necesita, administrando una cantidad eficaz de una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento.

En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para prevenir, tratar y/o gestionar el cáncer cerebral en un paciente (por ejemplo, un paciente humano), comprendiendo el método administrar al paciente un régimen profilácticamente eficaz o un régimen terapéuticamente eficaz, comprendiendo el régimen administrar al paciente una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, en el que el paciente ha sido diagnosticado con cáncer cerebral.

En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para prevenir, tratar y/o gestionar el cáncer cerebral en un paciente (por ejemplo, un paciente humano), comprendiendo el método administrar al paciente un régimen profilácticamente eficaz o un régimen terapéuticamente eficaz, comprendiendo el régimen administrar al paciente una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, en el que el paciente ha recaído del cáncer cerebral.

En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para prevenir, tratar y/o manejar el cáncer cerebral en un paciente (por ejemplo, un paciente humano), comprendiendo el método administrar al paciente un régimen profilácticamente eficaz o un régimen terapéuticamente eficaz, comprendiendo el régimen administrar al paciente una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrito en el presente documento o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, en el que el paciente ha fracasado o está fracasando en la terapia del cáncer cerebral que no comprende una vacuna descrita en el presente documento.

En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para prevenir, tratar y/o gestionar el cáncer cerebral en un paciente (por ejemplo, un paciente humano), comprendiendo el método administrar al paciente un régimen profilácticamente eficaz o un régimen terapéuticamente eficaz, comprendiendo el régimen administrar al paciente una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, en el que el paciente está en remisión del cáncer cerebral.

En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para prevenir, tratar y/o gestionar el cáncer cerebral en un paciente (por ejemplo, un paciente humano), comprendiendo el método administrar al paciente un régimen profilácticamente eficaz o un régimen terapéuticamente eficaz, comprendiendo el régimen administrar al paciente una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, en el que el paciente es refractario a la terapia del cáncer cerebral que no comprende una vacuna descrita en el presente documento. En una realización de este aspecto, el paciente ha recibido o está recibiendo una terapia contra el cáncer cerebral que no comprende una vacuna descrita en el presente documento. En otra realización de este aspecto, el paciente no ha recibido previamente una terapia contra el cáncer cerebral que no comprenda una vacuna descrita en el presente documento para la prevención, el tratamiento y/o el manejo del cáncer cerebral.

En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para prevenir, tratar y/o gestionar el cáncer cerebral en un paciente (por ejemplo, un paciente humano), comprendiendo el método administrar al paciente un régimen profilácticamente eficaz o un régimen terapéuticamente eficaz, comprendiendo el régimen administrar al paciente una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, en la que el paciente ha recibido otra terapia contra el cáncer cerebral. En algunas realizaciones, la terapia previa contra el cáncer cerebral es, por ejemplo, quimioterapia, radioterapia, terapia quirúrgica, terapia de moléculas pequeñas, terapia biológica, terapia de anticuerpos, terapia hormonal, inmunoterapia, terapia antiangiogénica o cualquier combinación de las mismas. En algunas realizaciones, la terapia anterior ha fracasado en el paciente. En algunas realizaciones, el régimen terapéuticamente eficaz que comprende la administración de una vacunación con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra al paciente inmediatamente después de que éste se haya sometido a la terapia anterior. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, el resultado de la terapia previa puede ser desconocido antes de que se administre al paciente la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2. En una realización, la quimioterapia previa es la temolozimida. En la modalidad, la terapia previa es la radioterapia. En otra realización, la terapia previa es una combinación de temozolomida y radioterapia. En una realización preferida, la combinación de temozolomida y radiación se administra utilizando el régimen de Stupp. En otra realización, la terapia previa es la cirugía. En algunas realizaciones, el paciente se somete a una intervención quirúrgica antes de iniciar la terapia combinada. En algunas realizaciones, el paciente se somete a cirugía antes del tratamiento con temozolomida. En algunas realizaciones, el paciente se somete a una cirugía antes de iniciar la radioterapia. En cada una de estas realizaciones que describen el uso de la terapia combinada, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 puede administrarse antes, durante o después del tratamiento del paciente con la terapia que se está combinando.

En algunas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento se administran como monoterapia para la prevención, el tratamiento y/o el manejo del cáncer cerebral. En otras realizaciones, se proporcionan en el presente documento métodos que comprenden la administración a un sujeto que lo necesita de una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento y uno o más agentes distintos de la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento que se utilizan actualmente, se han utilizado, se sabe que son útiles o pueden ser útiles en la prevención, el tratamiento y/o el manejo del cáncer cerebral o uno o más síntomas del mismo. Los agentes de las terapias combinadas pueden administrarse de forma secuencial o concurrente. En ciertas realizaciones, las terapias combinadas mejoran el efecto profiláctico o terapéutico de una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento que funciona junto con la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento para tener un efecto aditivo o sinérgico. En algunas realizaciones, las terapias combinadas se administran antes, durante o después de la administración de las composiciones descritas en el presente documento.

En otro aspecto, se proporcionan en el presente documento métodos para inducir una respuesta inmunitaria en un sujeto con cáncer cerebral que comprende la administración de una cantidad eficaz de una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, la respuesta inmunitaria inducida en un sujeto por una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento es eficaz para prevenir, tratar y/o gestionar el cáncer cerebral en el sujeto. En algunas realizaciones, la respuesta inmunitaria inducida en un sujeto por una vacuna con base en el péptido lL-13Ra2 descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento es eficaz para reducir los síntomas del cáncer cerebral en el sujeto.

El médico puede diagnosticar al paciente utilizando cualquiera de los métodos convencionales de detección de cáncer cerebral, incluyendo, pero sin limitarse a, el examen neurológico; los métodos de imagen (por ejemplo, la tomografía computarizada (TC), la resonancia magnética (IRM), el ultrasonido, las imágenes de rayos X y la tomografía por emisión de positrones (PET)); y la biopsia (por ejemplo, la biopsia esterotáctica).

6.7.1 DOSIFICACIÓN Y FRECUENCIA DE ADMINISTRACIÓN

La cantidad de una composición descrita en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante, y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) que será eficaz en el tratamiento, la prevención, y/o el manejo del cáncer cerebral puede depender del estado del cáncer cerebral, del paciente al que se va a administrar las composiciones, de la vía de administración, y/o del tipo de cáncer cerebral. Estas dosis pueden determinarse mediante técnicas clínicas estándar y pueden decidirse según el criterio del profesional.

Por ejemplo, las dosis efectivas pueden variar dependiendo de los medios de administración, el lugar de destino, el estado fisiológico del paciente (incluyendo la edad, el peso corporal, la salud), si el paciente es humano o animal, otros medicamentos administrados y si el tratamiento es profiláctico o terapéutico. Por lo general, el paciente es un humano, pero también pueden tratarse mamíferos no humanos, incluyendo los transgénicos. Las dosis de tratamiento se titulan de forma óptima para optimizar la seguridad y la eficacia.

En ciertas realizaciones, se emplea un ensayo in vitro para ayudar a identificar los intervalos óptimos de dosificación. Las dosis efectivas pueden extrapolarse a partir de curvas dosis-respuesta derivadas de sistemas de ensayo in vitro o de modelos animales.

En ciertas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna libre de células, en la que la vacuna libre de células comprende un péptido IL-13Ra2 y uno, dos, tres o más péptidos adicionales asociados al cáncer cerebral. En algunas realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células comprenden aproximadamente 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 550, 600, 650, 700, 750 u 800 |jg de cada péptido asociado al cáncer cerebral por dosis. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células comprenden aproximadamente 25 a 50, 25 a 75, 25 a 100, 50 a 100, 50 a 150, 50 a 200, 100 a 150, 100 a 200, 100 a 250, 100 a 300, 150 a 200, 150 a 250, 150 a 300, 200 a 250, 250 a 300, 250 a 350, 250 a 400, 300 a 350, 300 a 400, 300 a 450, 300 a 500, 350 a 400, 350 a 450, 400 a 500, 400 a 600, 500 a 600, 500 a 700, 600 a 700, 600 a 800, o 700 a 800 jg de cada péptido asociado al cáncer cerebral por dosis. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células comprenden aproximadamente 5 jg a 100 mg, 15 jg a 50 mg, 15 jg a 25 mg, 15 jg a 10 mg, 15 jg a 5 mg, 15 jg a 1 mg, 15 jg a 100 jg , 15 jg a 75 jg , 5 jg a 50 jg , 10 jg a 50 jg , 15 jg a 45 jg , 20 jg a 40 jg , o 25 a 35 jg de cada péptido asociado al cáncer cerebral por kilogramo del paciente.

En ciertas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares. En algunas realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con aproximadamente 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 550 o 600 jg de un epítopo de células T auxiliares. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con aproximadamente 25 a 50, 25 a 75, 25 a 100, 50 a 100, 50 a 150, 50 a 200, 100 a 150, 100 a 200, 100 a 250, 100 a 300, 150 a 200, 150 a 250, 150 a 300, 200 a 250, 250 a 300, 250 a 350, 250 a 400, 300 a 350, 300 a 400, 300 a 450, 300 a 500, 350 a 400, 350 a 450, 400 a 500, 400 a 600, o 500 a 600 |jg de un epítopo de células T auxiliares.

En ciertas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria. En algunas realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con aproximadamente 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700 o 1800 jg de un modificador de la respuesta inmunitaria. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con aproximadamente 100 a 300, 200 a 400, 400 a 800, 600 a 800, 800 a 1000, 800 a 1200, 1000 a 1200, 1000 a 1400, 1200 a 1400, 1200 a 1600, 1400 a 1600, 1400 a 1800, o 1600 a 1800 jg de un modificador de la respuesta inmunitaria. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con aproximadamente 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 o 60 jg de un modificador de la respuesta inmunitaria por kilogramo del paciente. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con aproximadamente 1 a 5, 1 a 10, 5 a 10, 5 a 15, 10 a 15, 10 a 20, 15 a 20, 15 a 25, 15 a 30, 20 a 25, 20 a 30, 20 a 35, 25 a 30, 25 a 35, 25 a 40, 30 a 35, 30 a 40, 35 a 40, 35 a 45, 40 a 45, 40 a 50, 45 a 50, 50 a 55, o 50 a 60 jg de un modificador de la respuesta inmunitaria por kilogramo del paciente.

En ciertas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administran simultáneamente con un adyuvante. En algunas realizaciones, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se mezcla 0,5 a 1, 1 a 0,5, 1 a 1, 1 a 2, 1 a 3, 2 a 1, o 3 a 1 con un adyuvante.

En ciertas realizaciones, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 es una vacuna con base en células dendríticas, en la que la vacuna con base en células dendríticas comprende células dendríticas cargadas con un péptido IL-13Ra2 y células dendríticas cargadas con uno, dos, tres o más péptidos adicionales asociados al cáncer cerebral. En algunas realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas comprenden aproximadamente 103, 5 * 103, 104, 5 * 104, 105, 5 * 105, 106, 5 * 106, 107, 3 * 107, 5 * 107, 7 * 107, 108, 5 * 108, 1 * 109, 5 * 109, 1 * 1010, 5 * 1010, 1 * 1011, 5 * 1011 o 1012 células dendríticas cargadas con péptidos asociados al cáncer cerebral por dosis. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas comprenden aproximadamente103to 104, 103to 105, 104to 105, 104 to 106, 105to 106, 105to 107, 106to 107, 106 to 108, 107 to 108, 107 to 109, 108 to 109, 109 to 1010, 1010to 1011, o 1011 a 1012 células dendríticas cargadas con péptidos asociados al cáncer cerebral por dosis.

En ciertas realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares. En algunas realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con aproximadamente 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 550 o 600 jg de un epítopo de células T auxiliares. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con aproximadamente 25 a 50, 25 a 75, 25 a 100, 50 a 100, 50 a 150, 50 a 200, 100 a 150, 100 a 200, 100 a 250, 100 a 300, 150 a 200, 150 a 250, 150 a 300, 200 a 250, 250 a 300, 250 a 350, 250 a 400, 300 a 350, 300 a 400, 300 a 450, 300 a 500, 350 a 400, 350 a 450, 400 a 500, 400 a 600, o 500 a 600 jg de un epítopo de células T auxiliares.

En ciertas realizaciones, las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria. En algunas realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con aproximadamente 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700 o 1800 jg de un modificador de la respuesta inmunitaria. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con aproximadamente 100 a 300, 200 a 400, 400 a 800, 600 a 800, 800 a 1000, 800 a 1200, 1000 a 1200, 1000 a 1400, 1200 a 1400, 1200 a 1600, 1400 a 1600, 1400 a 1800, o 1600 a 1800 jg de un modificador de la respuesta inmunitaria. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con aproximadamente 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 o 60 jg de un modificador de la respuesta inmunitaria por kilogramo del paciente. En otras realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con aproximadamente 1 a 5, 1 a 10, 5 a 10, 5 a 15, 10 a 15, 10 a 20, 15 a 20, 15 a 25, 15 a 30, 20 a 25, 20 a 30, 20 a 35, 25 a 30, 25 a 35, 25 a 40, 30 a 35, 30 a 40, 35 a 40, 35 a 45, 40 a 45, 40 a 50, 45 a 50, 50 a 55, o 50 a 60 jg de un modificador de la respuesta inmunitaria por kilogramo del paciente.

En ciertas realizaciones, las vacunas ejemplares con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administran simultáneamente con un adyuvante. En algunas realizaciones, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se mezcla 0,5 a 1, 1 a 0,5, 1 a 1, 1 a 2, 1 a 3, 2 a 1, o 3 a 1 con un adyuvante.

En ciertas realizaciones, una composición descrita en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) se administra a un sujeto una vez como dosis única. En algunas realizaciones, una composición descrita en el presente documento (por ejemplo, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2, una composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 y un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria, o una composición que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria) se administra en múltiples dosis (por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más de 10 dosis), donde las dosis pueden estar separadas por al menos 1 día, 2 días, 3 días, 4, días 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 15 días, o 30 días. En realizaciones específicas, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 se administra por vía intranodal o subcutánea y el modificador de la respuesta inmunitaria se administra por vía intramuscular.

En algunas realizaciones, cuando una composición descrita en el presente documento comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células, la composición puede administrarse en el transcurso de 21 semanas, con administraciones que se producen en las semanas 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 y 21. En ciertas realizaciones, la composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administra simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria. En una realización específica, una composición descrita en el presente documento que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administra en el transcurso de 21 semanas, con administraciones que tienen lugar en las semanas 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 y 21, y la composición se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria se administra el día de cada administración de la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células y el día 4 después de cada administración de la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células. En otra realización específica, una composición descrita en el presente documento que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administra en el transcurso de 21 semanas, con administraciones que tienen lugar en las semanas 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 y 21, y la composición se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria se administra el día de cada administración de la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células. En realizaciones específicas, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administra por vía subcutánea y el modificador de la respuesta inmunitaria se administra por vía intramuscular.

En algunas realizaciones, cuando una composición descrita en el presente documento comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas, la composición puede administrarse en el transcurso de 6 semanas, con administraciones en las semanas 0, 2, 4 y 6. En ciertas realizaciones, la composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administra simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria. En una realización específica, una composición descrita en el presente documento que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administra en el transcurso de 6 semanas, con administraciones que se producen en las semanas 0, 2, 4 y 6, y la composición se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria se administra dos veces por semana comenzando en el primer día de administración de la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas. En realizaciones específicas, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administra por vía intranodal y el modificador de la respuesta inmunitaria se administra por vía intramuscular.

En algunas realizaciones, cuando una composición descrita en el presente documento comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas, la composición puede administrarse en el transcurso de 26 semanas, con administraciones en las semanas 0, 2, 4, 6, 10, 14, 18, 22 y 26. En ciertas realizaciones, la composición que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 libre de células se administra simultáneamente con un epítopo de células T auxiliares, un adyuvante y/o un modificador de la respuesta inmunitaria. En una realización específica, una composición descrita en el presente documento que comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administra en el transcurso de 26 semanas, con administraciones que se producen en las semanas 0, 2, 4, 6, 10, 14, 18, 22 y 26, y la composición se administra simultáneamente con un modificador de la respuesta inmunitaria, en el que el modificador de la respuesta inmunitaria se administra dos veces por semana comenzando en el primer día de administración de la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas. En realizaciones específicas, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 con base en células dendríticas se administra por vía intranodal y el modificador de la respuesta inmunitaria se administra por vía intramuscular.

6.7.2 CÁNCERES CEREBRALES

La vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento puede utilizarse en la prevención, el tratamiento y/o la gestión del cáncer cerebral. Cualquier tipo de cáncer cerebral puede ser tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento. Los cánceres cerebrales ejemplares incluyen, pero no se limitan a, gliomas (incluyendo astrocitoma (por ejemplo, astrocitoma pilocítico, astrocitoma difuso y astrocitoma anaplásico), glioblastoma, oligodendroglioma, glioma de tronco cerebral, glioma de no tronco cerebral, ependimoma y tumores mixtos que comprenden más de un tipo de célula glial), schwannoma acústico, craneofaringioma, meningioma, meduloblastoma, linfoma primario del sistema nervioso central y tumores de la pineal (por ejemplo, tumores astrocíticos pineales y tumores del parénquima pineal) y de las glándulas pituitarias. Los gliomas incluyen además los gliomas malignos recurrentes, los astrocitomas de alto riesgo de grado II de la OMS, los oligo-astrocitomas, los gliomas de grado II de la OMS recurrentes, los gliomas malignos o intrínsecos del tronco cerebral recién diagnosticados, los gliomas de tronco no cerebral resecados de forma incompleta y los gliomas de bajo grado no resecables recurrentes. Otros tipos de cáncer cerebral que pueden tratarse con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento incluyen astrocitoma/oligodendroglioma supratentorial infiltrativo de bajo grado en adultos, astrocitoma supratentorial infiltrativo de bajo grado en adultos, astrocitoma/oligodendroglioma supratentorial infiltrativo de bajo grado en adultos, astrocitoma/oligodendroglioma supratentorial infiltrativo de bajo grado en adultos (excluyendo astrocitoma pilocítico), oligodendroglioma supratentorial infiltrante de bajo grado en adultos (excluyendo astrocitoma pilocítico), ependimoma intracraneal adulto, ependimoma intracraneal adulto (excluyendo subependimoma y mixopapilar), ependimoma anaplásico intracraneal adulto, glioma anaplásico, glioblastoma anaplásico, astrocitoma pilocítico, subependimoma, mixopapilar, 1 a 3 lesiones metastásicas limitadas (intraparenquimatosas), más de 3 lesiones metastásicas (intraparenquimatosas), metástasis leptomeníngeas (meningitis neoplásica), linfoma primario del SNC, tumores espinales metastásicos o meningiomas.

En una realización, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es un glioma. En una realización específica, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es un glioma maligno recurrente. En otra realización específica, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es un glioma recurrente de grado II de la OMS. En otra realización específica, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es un glioma de tronco cerebral maligno o intrínseco recién diagnosticado. En otra realización específica, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es un glioma de tronco no cerebral resecado de forma incompleta. En otra realización específica, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es un glioma de bajo grado no resecable recurrente. En una realización, el paciente es un adulto con glioma maligno recurrente, glioblastoma recurrente, astrocitoma anaplásico, oligodendroglioma anaplásico u oligoastrocitoma mixto anaplásico. En otra realización específica, el paciente es un adulto con un glioma de bajo grado de alto riesgo recién diagnosticado. En otra realización específica, el paciente es un adulto con astrocitoma de bajo grado de alto riesgo recién diagnosticado. En otra realización específica, el paciente es un adulto con oligoastrocitoma de bajo grado de alto riesgo recién diagnosticado. En otra realización específica, el paciente es un adulto con astrocitoma de bajo grado recurrente de alto riesgo. En otra realización específica, el paciente es un adulto con oligoastrocitoma de bajo grado recurrente de alto riesgo. En otra realización específica, el paciente es un adulto con oligodendroglioma de bajo grado recurrente de alto riesgo. En otra realización específica, el paciente es un niño con un glioma maligno recién diagnosticado. En otra realización específica, el paciente es un niño con glioma intrínseco de tronco cerebral. En otra realización específica, el paciente es un niño con un glioma de alto grado no cerebral resecado de forma incompleta. En otra realización específica, el paciente es un niño con glioma de bajo grado no resecable recurrente. En otra realización específica, el paciente es un niño con un glioma pontino intrínseco difuso recién diagnosticado. En otra realización específica, el paciente es un niño con cualquier glioma de alto grado que afecte al tronco cerebral y sea tratado con RT o sin quimioterapia durante RT. En otra realización específica, el paciente es un niño con un glioma de alto grado no cerebral recién diagnosticado y tratado con RT con quimioterapia. En otra realización específica, el paciente es un niño con un glioma de alto grado no cerebral recién diagnosticado y tratado con RT sin quimioterapia. En otra realización específica, el paciente es un niño con glioma de alto grado no cerebral recurrente que ha reaparecido después del tratamiento.

En otra realización, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es un astrocitoma. En una realización específica, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es un astrocitoma de alto riesgo de grado II de la OMS. En otra realización específica, el cáncer cerebral tratado con las vacunas con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento es el oligoastrocitoma.

6.7.3 POBLACIÓN DE PACIENTES

En ciertos casos, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento puede administrarse a un sujeto ingenuo, es decir, un sujeto que no tiene cáncer cerebral. En una realización, una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento se administra a un sujeto ingenuo que está en riesgo de adquirir cáncer cerebral.

En ciertas realizaciones, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un paciente al que se le ha diagnosticado cáncer cerebral. En algunas realizaciones, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un paciente con cáncer cerebral antes de que los síntomas se manifiesten o se agraven. En una realización preferida, el cáncer cerebral es un glioma.

En ciertas realizaciones, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un paciente que necesita tratamiento, prevención y/o manejo del cáncer cerebral. Dichos sujetos pueden o no haber sido tratados previamente contra el cáncer o pueden estar en remisión, recaída o haber fracasado el tratamiento. Estos pacientes también pueden tener una citogenética anormal. Las vacunas y composiciones con base en el péptido 13Ra2 descritas en el presente documento pueden utilizarse como cualquier línea de terapia contra el cáncer cerebral, por ejemplo, una primera línea, una segunda línea o una tercera línea de terapia contra el cáncer cerebral. En una realización específica, el sujeto que va a recibir o recibe una vacuna o composición farmacéutica descrita en el presente documento está recibiendo o ha recibido otras terapias contra el cáncer cerebral. En una realización alternativa, el sujeto que va a recibir o recibe una vacuna o composición farmacéutica descrita en el presente documento no ha recibido o no está recibiendo otras terapias contra el cáncer cerebral.

En una realización específica, el sujeto ha sido diagnosticado con cáncer cerebral usando técnicas conocidas por un experto en la técnica, incluyendo, pero no limitado a, el examen neurológico; métodos de formación de imágenes (por ejemplo, tomografía computarizada (CT), resonancia magnética (IRM), ultrasonido, formación de imágenes de rayos X, secuencias de inversión-recuperación de fluidos (FLAIR), formación de imágenes ponderadas en T2, y tomografía por emisión de positrones (PET)); y biopsia (por ejemplo, biopsia esterotactica). La respuesta del tumor al tratamiento puede evaluarse según los criterios de McDonald o los criterios de evaluación de la respuesta en neurooncología (RANO). El tamaño del tumor o la respuesta al tratamiento pueden evaluarse mediante diversas técnicas de imagen por resonancia magnética, incluyendo la formación de imágenes ponderadas por difusión, la formación de imágenes ponderadas por perfusión, la formación de imágenes de permeabilidad T1 con contraste dinámico, el contraste de susceptibilidad dinámico, las imágenes con tensor de difusión y la espectroscopia por resonancia magnética, las imágenes ponderadas en T2 de IRM anatómica, las imágenes ponderadas en T2 con recuperación de inversión atenuada por fluidos (FLAIR) y las imágenes ponderadas en T1 con gadolinio. Estas técnicas de formación de imágenes pueden utilizarse para evaluar la celularidad del tumor, la invasión de la sustancia blanca, la alteración metabólica, incluyendo la hipoxia y la necrosis, el volumen sanguíneo capilar neovascular o la permeabilidad. También puede utilizarse la tecnología de tomografía por emisión de positrones (PET) para obtener imágenes de la respuesta tumoral, tal como la PET con 18F-fluoromisonidazol y la PET con 3'-desoxi-3'-18F-fluorotimidina.

En una realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto que se somete o se ha sometido a radioterapia para tratar un tumor de cáncer cerebral. En una realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-l3Ra2 o la composición descrita en el presente documento se administra a un sujeto simultáneamente o después de la radioterapia para tratar un tumor de cáncer cerebral. En otra realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto antes de la radioterapia para tratar un tumor de cáncer cerebral y, en algunas realizaciones, durante y/o después de la radioterapia. En algunas realizaciones preferidas, la radioterapia es de haz externo fraccionado, radioterapia de haz externo fraccionado de campo limitado, radioterapia de todo el cerebro, radiocirugía estereotáctica o radioterapia craneoespinal

En una realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto que se somete o se ha sometido a quimioterapia para tratar un tumor de cáncer cerebral. En una realización específica, una vacuna con base en el péptido IL-l3Ra2 o la composición descrita en el presente documento se administra a un sujeto simultáneamente o después de la quimioterapia para tratar un tumor de cáncer cerebral. En otra realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto antes de la quimioterapia para tratar un tumor de cáncer cerebral y, en algunas realizaciones, durante y/o después de la quimioterapia. En algunas realizaciones preferidas, la quimioterapia es temozolomida (Temodar®), nitrosurea, regímenes con base en platino, etopósido, cisplatino, bevacizumab (Avastin®), irinotecán, ciclofosfamida, BCNU (carmustina), capecitabina, metotrexato a dosis altas, topotecán, ARA-C a dosis altas, hidroxiurea, a-inteferón, análogo de la somatostatina, quimioterapia intra-CSF (citarabina liposomal, metotrexato, citarabina, tiotepa o rituximab (Rituxan®)).

En una realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto que ha fracasado, se está sometiendo o se ha sometido a más de una estrategia terapéutica, incluyendo quimioterapia, radioterapia o cirugía para tratar un tumor de cáncer cerebral. En una realización preferida, el cáncer cerebral es un glioma. Por ejemplo, un paciente puede no haber sido sometido, o haber sido sometido, a quimioterapia y a cirugía. También es posible que un paciente haya sido sometido o esté siendo sometido tanto a radiación como a cirugía. Además, el paciente puede haber recibido o estar recibiendo quimioterapia y radioterapia.

En algunas realizaciones preferidas, las terapias combinadas a las que el paciente ha fallado, se está sometiendo o se ha sometido son resección y temozolomida (Temodar®) (150-200 mg/m2) esquema 5/28, resección y oblea de BCNU (Gliadel®), bevacizumab (Avastin®) y quimioterapia, combinación PCV (CCNU (lomustina) y procarbazina y vincristina), dosis altas de metotrexato y vincristina, procarbazina, citaribina o rituximab, quimioterapia a dosis altas con rescate de células madre, o rituximab (Rituxan®) y temozolomida (Temodar®).

En una realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto que se somete o se ha sometido a una cirugía para extirpar un tumor de cáncer cerebral. En una realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto simultáneamente o después de la cirugía para extirpar un tumor de cáncer cerebral. En otra realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto antes de la cirugía para extirpar un tumor de cáncer cerebral y, en algunas realizaciones, durante y/o después de la cirugía.

En ciertas realizaciones, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto como alternativa a otra terapia, por ejemplo, quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, cirugía, terapia de moléculas pequeñas, terapia antiangiogénica y/o terapia biológica, incluyendo la inmunoterapia, cuando la terapia ha resultado o puede resultar demasiado tóxica, es decir, produce efectos secundarios inaceptables o insoportables para el sujeto.

En una realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a sujetos que van a recibir, están recibiendo o han recibido radioterapia. Entre estos sujetos se encuentran los que han recibido quimioterapia, terapia hormonal, terapia de moléculas pequeñas, terapia antiangiogénica y/o terapia biológica, incluyendo la inmunoterapia, así como los que se han sometido a cirugía.

En otra realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a sujetos que se someterán, se están sometiendo o se han sometido a terapia hormonal y/o terapia biológica, incluyendo la inmunoterapia. Entre estos sujetos se encuentran los que han recibido quimioterapia, terapia de moléculas pequeñas, terapia antiangiogénica y/o radioterapia, así como los que han sido sometidos a cirugía.

En ciertas realizaciones, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto refractario a una o más terapias. En una realización, que un cáncer sea refractario a una terapia significa que al menos una porción significativa de las células cancerosas no son eliminadas o su división celular no es detenida. La determinación de si las células cancerosas son refractarias puede hacerse in vivo o in vitro mediante cualquier método conocido en la técnica para ensayar la eficacia de una terapia en las células cancerosas, utilizando los significados de "refractario" aceptados por la técnica en dicho contexto. En diversas realizaciones, un cáncer es refractario cuando la cantidad de células cancerosas no se ha reducido significativamente, o ha aumentado.

En algunas realizaciones, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto que está en remisión del cáncer cerebral. En una realización específica, el sujeto no tiene cáncer cerebral detectable, es decir, no hay cáncer cerebral detectable utilizando un método convencional descrito en el presente documento (por ejemplo, IRM) o conocido por un experto en la técnica.

En una realización, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con glioma. En una realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado de astrocitoma (por ejemplo, astrocitoma pilocítico, astrocitoma difuso y astrocitoma anaplásico). En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado de glioblastoma. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado de oligodendroglioma. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado de glioma de tronco cerebral. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado de ependimoma. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con un tumor mixto que comprende más de un tipo de células gliales.

En una realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con glioma maligno recurrente. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con astrocitomas de alto riesgo de grado II de la OMS. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado de oligoastrocitoma. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con glioma recurrente de grado II de la OMS. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con un glioma de tronco cerebral maligno o intrínseco recientemente diagnosticado. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con un glioma de tronco no cerebral resecado de forma incompleta. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con un glioma de bajo grado no resecable recurrente.

En una realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con schwannoma acústico. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con faringioma craneal. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con meningioma. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con meduloblastoma. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con linfoma primario del sistema nervioso central. En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con un tumor de la glándula pineal (por ejemplo, un tumor astrocítico pineal o un tumor parenquimatoso pineal). En otra realización específica, una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento se administra a un sujeto diagnosticado con un tumor de la glándula pituitaria.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o una composición descrita en el presente documento es un adulto humano. En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento es un sujeto humano de edad avanzada. En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento es un niño humano. En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento es un lactante humano. En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento es un niño pequeño humano.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento es HLA-A2 positivo según se determina, por ejemplo, mediante citometría de flujo.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene un estado de rendimiento Karnofsky (KPS) de > 60. El KPS se utiliza como variable de estratificación y selección en los ensayos aleatorios de agentes quimioterapéuticos y tiene un intervalo de 0 a 100. Los pacientes con una puntuación superior a 60 no pueden trabajar, son capaces de vivir en casa y pueden atender la mayoría de sus necesidades personales con distintos grados de asistencia. Los pacientes con una puntuación > 70 realizan una actividad normal con esfuerzo y muestran algunos signos y síntomas de la enfermedad. Los pacientes con una puntuación superior a 80 son capaces de llevar a cabo una actividad normal y sólo muestran signos o síntomas menores de la enfermedad. Los pacientes con una puntuación superior a 90 son normales, no tienen problemas de salud y no muestran signos o síntomas de la enfermedad.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene un recuento de glóbulos blancos de aproximadamente 1000/mm3, 1500/mm3, 2000/mm3, 2500/mm3, 3000/mm3, o 3500/mm3 o aproximadamente 1000/mm3 a 1500/mm3, 1000/mm3 a 2000/mm3, 1500/mm3 a 2500/mm3, 1500/mm3 a 3000/mm3, 2000/mm3 a 3500/mm3, o 2500/mm3 a 3500/mm3. En una realización específica, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene un recuento de glóbulos blancos mayor o igual a 2500/mm3.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene un recuento de linfocitos de aproximadamente 100/mm3, 200/mm3, 300/mm3, 400/mm3, 500/mm3, o 600/mm3o aproximadamente 100/mm3a 400/mm3, 200/mm3a 400/mm3, 300/mmmm3a 500/mm3, 300/mm3a 600/mm3, 400/mm3 a 500/mm3, o 400/mm3 a 600/mm3. En una realización específica, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene un recuento de linfocitos mayor o igual a 400/mm3.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento tiene un recuento de plaquetas de aproximadamente 25.000/mm3, 50.000/mm3, 75.000/mm3, 100.000/mm3 200.000/mm3, o 300.000/mm3 o aproximadamente 25.000/mm3 a 100.000/mm3, 50.000/mm3 a 100.000/mm3, 75.000/mm3 a 100.000/mm3, 100.000/mm3 a 200.000/mm3, 100.000/mm3 a 300.000/mm3, o 200.000/mm3 a 300.000/mm3. En una realización específica, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene un recuento de plaquetas mayor o igual a 100.000/mm3.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene un recuento de hemoglobina de aproximadamente 5 g/dL, 10 g/dL, 15 g/dL o 20 g/dL, o de aproximadamente 5 a 10 g/dL, 5 a 15 g/dL, 10 a 15 g/dL o 10 a 20 g/dL. En una realización específica, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene un recuento de hemoglobina mayor o igual a 10 g/dL.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene niveles de AST, ALT, GGT, LDH y fosfatasa alcalina dentro de 1, 1,5, 2, 2,5 o 3 veces el límite superior normal. En una realización específica, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene niveles de AST, ALT, GGT, LDH y fosfatasa alcalina dentro de 2,5 veces el límite superior normal.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene una bilirrubina total de aproximadamente 1 mg/dL, 1,5 mg/dL, 2 mg/dL, 2,5 mg/dL o 3 mg/dL, o de aproximadamente 1,5 a 2,5 mg/dL, 1,5 a 3 mg/dL, 2 a 2,5 mg/dL o 2 a 3 mg/dL. En una realización específica, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene una bilirrubina total mayor o igual a 2 mg/dL.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene niveles de creatinina sérica dentro de 0,5, 1, 1,5., 2, 2,5 o 3 veces el límite superior normal. En una realización específica, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene niveles de creatinina sérica dentro de 1,5 veces el límite superior normal.

En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene pruebas de coagulación PT y PTT que están dentro de 0,5, 1, 1,5., 2, 2,5 o 3 veces los límites normales. En ciertas realizaciones, un sujeto al que se le va a administrar una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento tiene pruebas de coagulación PT y PTT que están dentro de los límites normales.

En algunas realizaciones, puede ser aconsejable no administrar una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento a una o más de las siguientes poblaciones de pacientes seres humanos de edad avanzada; bebés menores de 6 meses; personas embarazadas; bebés menores de 1 año; niños menores de 2 años; niños menores de 3 años; niños menores de 4 años; niños menores de 5 años; adultos menores de 20 años; adultos menores de 25 años; adultos menores de 30 años; adultos menores de 35 años; adultos menores de 40 años; adultos menores de 45 años; adultos menores de 50 años; ancianos de más de 70 años; ancianos de más de 75 años; ancianos de más de 80 años; ancianos de más de 85 años; ancianos de más de 90 años; ancianos de más de 95 años; sujetos sometidos a quimioterapia; sujetos sometidos a radioterapia; sujetos sometidos a terapia biológica; sujetos sometidos a terapia con interferón; sujetos que reciben inyecciones de desensibilización de alergias; sujetos que toman drogas ilícitas; sujetos que reciben tratamientos con factores de crecimiento (por ejemplo, Procrit®, Aranesp®, Neulasta®); sujetos que reciben tratamientos con interleucinas (por ejemplo, Proleukin®); sujetos con enfermedad metastásica; sujetos femeninos que estén amamantando; sujetos con infección viral, bacteriana o fúngica activa; sujetos con antecedentes de presencia de enfermedad autoinmune; sujetos con VIH; sujetos en tratamiento con medicamentos en investigación que no comprendan una vacuna descrita en el presente documento; sujetos con gliomatosis cerebri, enfermedad metastásica leptomeníngea craneal o espinal; y/o sujetos sometidos a tratamiento inmunosupresor.

6.7.4 TERAPIAS COMBINADAS

En ciertas realizaciones, los métodos proporcionados en el presente documento para prevenir, tratar y/o gestionar el cáncer cerebral comprenden administrar a un paciente (por ejemplo, un paciente humano) que lo necesita un régimen profiláctico y/o terapéutico eficaz, comprendiendo el régimen administrar al paciente una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento y una o más terapias adicionales, siendo dicha terapia adicional no una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento. La vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento y la terapia adicional pueden administrarse por separado, simultáneamente o de forma secuencial. Las terapias combinadas pueden actuar de forma aditiva o sinérgica.

Las terapias combinadas pueden administrarse a un sujeto en la misma composición farmacéutica. Alternativamente, las terapias combinadas pueden administrarse simultáneamente a un sujeto en composiciones farmacéuticas separadas. Las terapias combinadas pueden administrarse a un sujeto por la misma o diferentes vías de administración.

Cualquier terapia (por ejemplo, agente terapéutico o profiláctico) que sea útil, se haya utilizado o se utilice actualmente para la prevención, el tratamiento y/o el manejo del cáncer (por ejemplo, el cáncer cerebral) puede utilizarse en combinación con una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento en los métodos descritos en el presente documento. Las terapias incluyen, pero no se limitan a, péptidos, polipéptidos, anticuerpos, conjugados, moléculas de ácido nucleico, pequeñas moléculas, agentes miméticos, fármacos sintéticos, moléculas inorgánicas y moléculas orgánicas. Ejemplos no limitantes de terapias contra el cáncer incluyen quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, cirugía, terapia de moléculas pequeñas, terapia antiangiogénica, terapia de diferenciación, terapia epigenética, radioinmunoterapia, terapia dirigida y/o terapia biológica, incluyendo inmunoterapia. En ciertas realizaciones, un régimen profiláctico y/o terapéutico eficaz de la invención comprende la administración de una combinación de terapias.

En una realización, la quimioterapia previa es temolozimida. En la modalidad, la terapia previa es la radioterapia. En otra realización, la terapia previa es una combinación de temozolomida y radioterapia. En una realización preferida, la combinación de temozolomida y radiación se administra utilizando el régimen de Stupp. En otra realización, la terapia previa es la cirugía. En algunas realizaciones, el paciente se somete a una intervención quirúrgica antes de iniciar la terapia combinada. En algunas realizaciones, el paciente se somete a cirugía antes del tratamiento con temozolomida. En algunas realizaciones, el paciente se somete a una cirugía antes de iniciar la radioterapia. En cada una de estas realizaciones que describen el uso de la terapia combinada, la vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 puede administrarse antes, durante o después del tratamiento del paciente con la terapia que se está combinando.

Los ejemplos de terapias contra el cáncer que pueden utilizarse en combinación con una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento incluyen, pero no se limitan a: acivicina; aclarubicina; clorhidrato de acodazol; acronina; adozelesina; aldesleukina; altretamina; ambomicina; acetato de ametantrona; aminoglutetimida; amsacrina; anastrozol; antraciclina; antraciclina; asparaginasa; asperlina; azacitidina (Vidaza); azetepa; azotomicina; batimastat; benzodepa; bicalutamida; clorhidrato de bisantreno; dimesilato de bisnafida; bifosfonatos (por ejemplo, pamidronato (Aredria), clondronato sódico (Bonefos), ácido zoledrónico (Zometa), alendronato (Fosamax), etidronato, ibandornato, cimadronato, risedromato y tiludromato); bizelesina; sulfato de bleomicina; brequinar sódico; bropirimina busulfán; cactinomicina; calusterona; caracemida; carbetimer; carboplatino; carmustina; clorhidrato de carubicina; carzelesina; cedefingol; clorambucilo; cirolemicina; cisplatino; cladribina; mesilato de crisnatol; ciclofosfamida; citarabina (Ara-C); dacarbazina; dactinomicina; clorhidrato de daunorubicina; decitabina (Dacogen); agentes de desmetilación, dexormaplatina; dezaguanina; mesilato de dezaguanina; diaziquona; docetaxel; doxorubicina; clorhidrato de doxorubicina; droloxifeno; citrato de droloxifeno; propionato de dromostanolona; duazomicina; edatrexato; clorhidrato de eflomitina; inhibidores de EphA2; elsamitrucina; enloplatino; enpromato; epipropidina; clorhidrato de epirubicina; erbulozol; clorhidrato de esorubicina; estramustina; fosfato sódico de estramustina; etanidazol; etopósido; fosfato de etopósido; etoprina; clorhidrato de fadrozol; fazarabina; fenretinida; floxuridina; fosfato de fludarabina; fluorouracilo; flurocitabina; fosquidona; fostriecina sódica; gemcitabina; inhibidores de la histona deacetilasa (HDAC) clorhidrato de gemcitabina; hidroxiurea; clorhidrato de idarubicina; ifosfamida; ilmofosina; mesilato de imatinib (Gleevec, Glivec); interleucina II (incluyendo interleucina II recombinante, o rIL2), interferón alfa-2a; interferón alfa-2b; interferón alfa-nl ; interferón alfa-n3; interferón beta-I a; interferón gamma-I b; iproplatino; clorhidrato de irinotecán; acetato de lanreotida; lenalidomida (Revlimid); letrozol; acetato de leuprolida; clorhidrato de liarozole; lometrexol sódico; lomustina; clorhidrato de losoxantrona; masoprocol; maytansina; clorhidrato de mecloretamina; anticuerpos anti-CD2 (por ejemplo, siplizumab (MedImmune Inc.; Publicación Internacional No WO 02/098370)); acetato de megestrol; acetato de melengestrol; melfalán; menogaril; mercaptopurina; metotrexato; metotrexato sódico; metoprina; meturedepa; mitindomida; mitocarcina; mitocromina mitogillina; mitomalcina; mitomicina; mitosper; mitotano; clorhidrato de mitoxantrona; ácido micofenólico; nocodazol; nogalamicina; ormaplatino; oxaliplatino; oxisuran; paclitaxel; pegaspargas; peliomicina; pentamustina; sulfato de peplomicina; perfosfamida; pipobromán; piposulfán; clorhidrato de piroxantrona; plicamicina; plomestano; porfimer sódico; porfiromicina; prednimustina; clorhidrato de procarbazina; puromicina; clorhidrato de puromicina; pirazofurina; riboprina; rogletimida; safingol; clorhidrato de safingol; semustina; simtrazeno; esparfosato sódico; esparsomicina; clorhidrato de espirogermanio; espiromustina; espiroplatino; estreptonigrina; estreptozocina; sulofenur; talisomicina; tecogalan sódico; tegafur; clorhidrato de teloxantrona; temoporfina; teniposida; teroxirona; testolactona; tiamiprina; tioguanina; tiotepa; tiazofurina; tirapazamina; citrato de toremifeno; acetato de trestolona; fosfato de triciribina; trimetrexato; glucuronato de trimetrexato; triptorelina; clorhidrato de tubulozol; mostaza de uracilo; uredepa; vapreotida; verteporfina; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vindesina; sulfato de vindesina; sulfato de vinepidina; sulfato de vinglicinato; sulfato de vinleurosina; tartrato de vinorelbina; sulfato de vinrosidina; sulfato de vinzolidina; vorozol; zeniplatino; zinostatina; clorhidrato de zorubicina.

Otros ejemplos de terapias contra el cáncer que pueden utilizarse en combinación con una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento incluyen, pero no se limitan a: 20-epi-1,25 dihidroxivitamina D3; 5-etiluracilo; abiraterona; aclarubicina; acilfulvena; adecypenol; adozelesina; aldesleukina; antagonistas de ALL-TK; altretamina; ambamustina; amidox; amifostina; ácido aminolevulínico; amrubicina; amsacrina; anagrelida; anastrozol; andrografolida; inhibidores de la angiogénesis; antagonista D; antagonista G; antarelix; antiproteína morfogenética dorsalizante-1; antiandrógeno, carcinoma prostático; antiestrógeno; antineoplastón; oligonucleótidos en antisentido; glicinato de afidicolina; moduladores del gen de la apoptosis; reguladores de la apoptosis; ácido apurínico; ara-CDP-DL-PTBA; arginina desaminasa; asulacrina; atamestano; atrimustina; axinastatina 1 axinastatina 2; axinastatina 3; azasetrón; azatoxina; azatirosina; derivados de la bacatina III; balanol; batimastat; antagonistas del BCR/ABL; benzoclorinas; benzoilstaurosporina; derivados de la beta lactama; beta-aletina; betaclamicina B; ácido betulínico; inhibidor del bFGF; bicalutamida; bisantreno; bisaziridinilspermina; bisnafida; bistrateno A; bizelesina; breflato; bropirimina; budotitán; butionina sulfoximina; calcipotriol; calfostina C; derivados de la camptotecina; canarypox IL-2; capecitabina; carboxamida-amino-triazol; carboxiamidotriazol; CaRest M3; CARN 700; inhibidor derivado del cartílago; carzelesina; inhibidores de la caseína quinasa (ICOS); castanospermina; cecropina B; cetrorelix; clorlns; cloroquinoxalina sulfonamida; cicaprost; cis-porfirina; cladribina; análogos del clomifeno; clotrimazol; colismicina A; colismicina B; combretastatina A4; análogo de la combretastatina; conagenina; crambescidina 816; crisnatol; criptoficina 8; derivados de la criptoficina A; curacina A; ciclopentantraquinonas; cicloplatam; cipemycin; ocfosfato de citarabina; factor citolítico; citostatina; dacliximab; decitabine; dehydrodidemnin B; deslorelin; dexamethasone; dexifosfamide; dexrazoxane; dexverapamilo; diaziquone; didemnin B; didox; dietilnorspermina; dihidro-5-azacitidina; dihidrotaxol, dioxamicina; difenil espiromustina; docetaxel; docosanol; dolasetrón; doxifluridina; droloxifeno; dronabinol; duocarmicina SA; ebselen; ecomustina; edelfosina; edrecolomab; eflornitina; elemeno; emitefur; epirubicina; epristerida; análogo de la estramustina; agonistas de los estrógenos; antagonistas de los estrógenos; etanidazol; fosfato de etopósido; exemestano; fadrozol; fazarabina; fenretinida; filgrastim; finasterida; flavopiridol; flezelastina; fluasterona; fludarabina; clorhidrato de fluorodaunorunicina; forfenimex; formestano; fostriecina; fotemustina; texafirina de gadolinio; nitrato de galio; galocitabina; ganirelix; inhibidores de la gelatinasa; gemcitabina; inhibidores del glutatión; inhibidores de la HMG CoA reductasa (por ejemplo, atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lescol, lupitor, lovastatina, rosuvastatina y simvastatina); hepsulfam; heregulina; bisacetamida de hexametileno; hipericina; ácido ibandrónico; idarubicina; idoxifeno; idramantona; ilmofosina; ilomastat; imidazoacridonas; imiquimod; péptidos inmunoestimulantes; inhibidor del receptor del factor de crecimiento similar a la insulina-1; agonistas del interferón; interferones; interleucinas; iobenguano; iododoxorrubicina; ipomeanol, 4- iroplact; irsogladina; isobengazol; isohomohalicondrina B; itasetrón; jasplakinolida; kahalalida F; lamelarina-N triacetato; lanreotida; leinamicina; lenograstim; lentinan sulfato leptolstatina; letrozol; factor inhibidor de la leucemia; interferón alfa leucocitario; leuprolida+estrógeno+progesterona; leuprorelina; levamisol; LFA-3TIP (Biogen, Cambridge, MA; Publicación Internacional No. WO 93/0686 y Patente de EE. UU. No. 6.162.432); liarozo; análogo de poliamina lineal; péptido disacárido lipofílico; compuestos de platino lipofílicos; lissoclinamida 7; lobaplatin; lombricina; lometrexol; lonidamina; losoxantrona; lovastatin; loxoribina; lurtotecan; texafirina de lutecio; lisofilina; péptidos líticos maitansina; mannostatina A; marimastat; masoprocol; maspin; inhibidores de la matrilisina; inhibidores de la metaloproteinasa de la matriz; menogaril; merbarona; meterelina; metioninasa; metoclopramida; inhibidor de la MIF; mifepristona; miltefosina; mirimostim; ARN de doble cadena no coincidente; mitoguazona; mitolactol; análogos de la mitomicina; mitonafida; mitotoxina factor de crecimiento de fibroblastos-saporina; mitoxantrona; mofaroteno; molgramostim; anticuerpo monoclonal, gonadotrofina coriónica humana; monofosforil-lípido A+pared celular de miobacterias; mopidamol; inhibidor del gen de la resistencia a múltiples fármacos; terapia con base en el supresor tumoral múltiple 1; agente anticanceroso de mostaza; micaperóxido B; extracto de pared celular de micobacterias; miriaporona; N-acetildinalina; benzamidas N-sustituidas; nafarelina; nagrestip; naloxona+pentazocina; napavina; nafterpina; nartograstim; nedaplatina; nemorubicina; ácido neridrónico; endopeptidasa neutra; nilutamida; nisamicina; moduladores del óxido nítrico; antioxidante nitroxido; nitrulina; O6-bencilguanina; octreotida; okicenona; oligonucleótidos; onapristona; ondansetrón; oracina; inductor oral de citoquinas; ormaplatino; osaterona; oxaliplatino; oxaunomicina; paclitaxel; análogos del paclitaxel; derivados del paclitaxel; palauamina; palmitoilrhizoxina; ácido pamidrónico; panaxitriol; panomifeno; parabactina; pazeliptina; pegaspargasa; peldesina; pentosan polisulfato sódico; pentostatina; pentrozol; perflubron; perfosfamida; alcohol perilico; fenazinomicina; fenilacetato; inhibidores de la fosfatasa; picibanil; clorhidrato de pilocarpina; pirarubicina; piritrexim; placetina A; placetina B; inhibidor del activador del plasminógeno; complejo de platino; compuestos de platino; complejo de platino-triamina; porfímero sódico; porfiromicina; prednisona; bisacridona de propilo; prostaglandina ^j2; inhibidores del proteasoma; modulador inmunitario basado en la proteína A; inhibidor de la proteína quinasa C; inhibidores de la proteína quinasa C, microalgal; inhibidores de la proteína tirosina fosfatasa; inhibidores de la purina nucleósido fosforilasa; purpurinas; pirazoloacridina; conjugado de polioxietileno de la hemoglobina piridoxilada; antagonistas del raf; raltitrexed; ramosetrón; inhibidores de la ras farnesil proteína transferasa; inhibidores de la ras; inhibidor de la ras-GAP; reteliptina desmetilada; renio Re 186 etidronato; ribozimas; retinamida RII; rogletimida; rohitukina; romurtida; roquinimex; rubiginona B1; ruboxilo; safingol; saintopina; SarCNU; sarcofitol A; sargramostim; miméticos de Sdi 1; semustina; inhibidor derivado de la senescencia 1; oligonucleótidos de sentido; inhibidores de la transducción de señales; moduladores de la transducción de señales; proteína de unión a antígeno de cadena única; sizofiran; sobuzoxane; borocaptato de sodio; fenilacetato de sodio; solverol; proteína de unión a la somatomedina; sonermin; ácido esparfósico; espicamicina D; espiromustina; esplenopentina; espongistatina 1; escualamina; inhibidor de las células madre; inhibidores de la división de las células madre; estipiamida; inhibidores de la estromelisina; sulfinosina; antagonista del péptido intestinal superactivo; suradista; suramina; swainsonina; glicosaminoglicanos sintéticos; tallimustina; 5-fluorouracilo; leucovorina; metoduro de tamoxifeno; tauromustina; tazaroteno; tecogalan sódico; tegafur; telurapirilio; inhibidores de la telomerasa; temoporfina; temozolomida; teniposida; tetraclorodecaóxido; tetrazomina; taliblastina; tiocoralina; trombopoyetina; mimético de la trombopoyetina; timalfasina; agonista del receptor de la timopoyetina; timotrinan; hormona estimulante de la tiroides; estaño etiopurpurina; tirapazamina; bicloruro de titanoceno; topsentina; toremifeno; factor de células madre totipotentes; inhibidores de la traducción; tretinoína; triacetiluridina; triciribina; trimetrexato; triptorelina; tropisetrón; turosterida; inhibidores de la tirosina quinasa; trifostinas; inhibidores de la UBC; ubenimex; factor inhibidor del crecimiento derivado del seno urogenital; antagonistas de los receptores de la uroquinasa; vapreotida; variolina B; sistema de vectores, terapia génica eritrocitaria; talidomida; velaresol; veramina; verdinas; verteporfina; vinorelbina; vinxaltina; VTTAXIN™ (véase Pub. de Patenete de EE.UU. No US 2002/0168360 A1, de fecha 14 de noviembre de 2002titulado "Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin avp3 Antagonists in Combination With Other Prophylactic or Therapeutic Agents"); vorozol; zanoterona; zeniplatino; zilascorb; y zinostatina stimalamer.

En algunas realizaciones, las terapias utilizadas en combinación con una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento es un agente inmunomodulador. Ejemplos no limitantes de agentes inmunomoduladores que pueden usarse en combinación con una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento incluyen agentes proteínicos tales como citoquinas, miméticos peptídicos y anticuerpos (por ejemplo, humanos, humanizados, quiméricos, monoclonales, policlonales, Fvs, ScFvs, fragmentos Fab o F(ab)2 o fragmentos de unión a epítopos), moléculas de ácido nucleico(por ejemplo, moléculas de ácido nucleico antisentido y triples hélices), pequeñas moléculas, compuestos orgánicos y compuestos inorgánicos. En particular, los agentes inmunomoduladores incluyen, pero no se limitan a, metotrexato, leflunomida, ciclofosfamida, citoxan, Immuran, ciclosporina A, minociclina, azatioprina, antibióticos (por ejemplo, FK506 (tacrolimus)), metilprednisolona (MP), corticosteroides, esteroides, micofenolato mofetilo, rapamicina (sirolimus), mizoribina, deoxispergualina, brequinar, malonitriloaminas (por ejemplo, leflunamida), moduladores de los receptores de células T, moduladores de los receptores de citoquinas y moduladores de los mastocitos. Otros ejemplos de agentes inmunomoduladores pueden encontrarse, por ejemplo, en Publicación de EE. UU. No. 2005/0002934 A1 en los párrafos 259-275. En una realización, el agente inmunomodulador es un agente quimioterapéutico. En una realización alternativa, el agente inmunomodulador es un agente inmunomodulador distinto de un agente quimioterapéutico. En algunas realizaciones, las terapiasutilizadas de acuerdo con la invención no son un agente inmunomodulador.

En algunas realizaciones, las terapias utilizadas en combinación con una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento es un agente antiangiogénico. Ejemplos no limitantes de agentes antiangiogénicos que pueden utilizarse en combinación con una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento incluyen proteínas, polipéptidos, péptidos, conjugados, anticuerpos (por ejemplo, humanos, humanizados, quiméricos, monoclonales, policlonales, Fvs, ScFvs, fragmentos Fab, fragmentos F(ab)2 y fragmentos de unión a antígeno de los mismos) tales como anticuerpos que se unen específicamente al TNF-a, moléculas de ácido nucleico (por ejemplo, moléculas antisentido o triples hélices), moléculas orgánicas, moléculas inorgánicas y pequeñas moléculas que reducen o inhiben la angiogénesis. Otros ejemplos de agentes antiangiogénicos pueden encontrarse, por ejemplo, en Publicación de EE. UU. No. 2005/0002934 A1 en los párrafos 277-282. En una realización preferida, la terapia antiangiogénica es bevacizumab (Avastin®). En otras realizaciones, las terapias utilizadas de acuerdo con la invención no es un agente antiangiogénico.

En algunas realizaciones, las terapias utilizadas en combinación con una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento son un agente antiinflamatorio. Ejemplos no limitantes de agentes antiinflamatorios que pueden utilizarse en combinación con una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento incluyen cualquier agente antiinflamatorio, incluyendo agentes útiles en terapias para trastornos inflamatorios, bien conocidos por un experto en la técnica. Entre los ejemplos no limitantes de agentes antiinflamatorios se encuentran antiinflamatorios no esteroideos (AINE), antiinflamatorios esteroideos, anticolinérgicos (por ejemplo, sulfato de atropina, metilnitrato de atropina y bromuro de ipratropio (ATROVENT™)), agonistas beta2 (por ejemplo, abuterol (VENTOLIN™ y PROVENTIL™), bitolterol (TORNALATE™), levalbuterol (XOPONEX™), metaproterenol (ALUPENT™), pirbuterol (MAXAIR™), terbutlaína (BRETHAIRE™ y BRETHINE™), albuterol (PROVENTIL™, REPETABS™ y VOLMAX™), formoterol (FORADIL AEROLIZER™) y salmeterol (SEREVENT™ y SEREVENT DISKUS™)), y metilxantinas(e.g., teofilina (UNIPHYL™, THEO-DUR™, SLO-BID™, y TEHO-42™)). Algunos ejemplos de AINE son, pero no se limitan a, aspirina, ibuprofeno, celecoxib (CELEBREX™), diclofenaco (VOLTAREN™), etodolac (LODINE™), fenoprofeno (NALFON™), indometacina (INDOCIN™), ketoralac (TORADOL™), oxaprozina (DAYPRO™), nabumentona (RELAFEN™), sulindac (CLINORIL™), tolmentina (TOLECTIN™), rofecoxib (VIOXX™), naproxeno (ALEVE™, NAPROSYN™), ketoprofeno (ACTRON™) y nabumetona (RELAFEN™). Estos AINE funcionan inhibiendo una enzima ciclooxigenasa (por ejemplo, la COX-1 y/o la COX-2). Entre los ejemplos de antiinflamatorios esteroideos se encuentran, pero no se limitan a, glucocorticoides, dexametasona (DECADRON™), corticosteroides (por ejemplo, metilprednisolona (MEDROL™)), cortisona, hidrocortisona, prednisona (PREDNISONE™ y DELTASONE™), prednisolona (PRELONE™ y PEDIAPRED™), triamcinolona, azulfidina e inhibidores de los eicosanoides (por ejemplo, prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos). Otros ejemplos de agentes antiinflamatorios pueden encontrarse, por ejemplo, en Publicación de EE. UU. No.

005/0002934 A1 en los párrafos 290-294. En otras realizaciones, las terapias utilizadas de acuerdo con la invención no son un agente antiinflamatorio.

En ciertas realizaciones, la(s) terapia(s) utilizada(s) en combinación con una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 o la composición descrita en el presente documento es un agente alquilante, una nitrosourea, un antimetabolito y una antraciclina, un inhibidor de la topoisomerasa II o un inhibidor mitótico. Los agentes alquilantes incluyen, pero no se limitan a, busulfán, cisplatino, carboplatino, colormbucil, ciclofosfamida, ifosfamida, decarbazina, mecloretamina, melfalán y temozolomida. Las nitrosoureas incluyen, pero no se limitan a, carmustina (BCNU) y lomustina (CCNU). Los antimetabolitos incluyen, pero no se limitan a, 5-fluorouracilo, capecitabina, metotrexato, gemcitabina, citarabina y fludarabina. Las antraciclinas incluyen, pero no se limitan a, daunorubicina, doxorubicina, epirubicina, idarubicina y mitoxantrona. Los inhibidores de la topoisomerasa II incluyen, pero no se limitan a, topotecán, irinotecán, etopisida (VP-16) y tenipósido. Los inhibidores mitóticos incluyen, pero no se limitan a, taxanos (paclitaxel, docetaxel) y alcaloides de la vinca (vinblastina, vincristina y vinorelbina).

Las terapias contra el cáncer actualmente disponibles y sus dosificaciones, vías de administración y uso recomendado son conocidas en la técnica y han sido descritas en literatura como la Physician's Desk Reference (60a ed., 2006). De acuerdo con la presente invención, las dosificaciones y la frecuencia de administración de los agentes quimioterapéuticos se describen a continuación.

6.7.5 ENSAYOS BIOLÓGICOS

Las vacunas y composiciones con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento pueden probarse para su capacidad de tratar, prevenir o controlar el cáncer cerebral.

6.7.5.1 Ensayos in vivo

Las vacunas y composiciones con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento pueden probarse en sistemas de modelos animales adecuados antes de su uso en humanos. Tales sistemas de modelos animales incluyen, pero no se limitan a, ratas, ratones, pollos, vacas, monos, cerdos, perros, conejos, etc. Puede utilizarse cualquier sistema animal conocido en la técnica. Varios aspectos del procedimiento pueden variar; dichos aspectos incluyen, pero no se limitan a, el régimen temporal de administración de los componentes de la vacuna, si dichos componentes de la vacuna se administran por separado o como una mezcla, y la frecuencia de administración de los componentes de la vacuna.

Los modelos animales para el cáncer pueden utilizarse para evaluar la eficacia de una vacuna o composición con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento o una terapia combinada descrita en el presente documento. Los ejemplos de modelos animales para el cáncer cerebral incluyen, pero no se limitan a, estudios de xenoinjertos utilizando líneas celulares de cáncer cerebral que expresan IL-13Ra2, o células tumorales humanas primarias que expresan IL-13Ra2. En estos modelos, se inmuniza a los ratones para inducir una respuesta de células T específicas de IL-13Ra2, que luego se evalúa por su capacidad para inhibir el crecimiento del tumor. En una realización, el xenoinjerto tumoral se forma antes de la inmunización para probar la capacidad de la respuesta de células T específicas de IL-13Ra2 para inhibir el crecimiento del tumor preexistente. En otra realización, la respuesta de las células T específicas de lL-13Ra2 se induce antes de la inyección de las células tumorales, para evaluar la capacidad de la respuesta inmunitaria de prevenir la formación de un tumor.

6.7.5.2 Ensayos de citotoxicidad

La toxicidad y/o eficacia de las vacunas y composiciones con base en el péptido IL-13Ra2 descritas en el presente documento pueden determinarse mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales de experimentación, por ejemplo, para determinar LD⁵⁰(la dosis letal para el 50 % de la población) y ED⁵⁰(la dosis terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La relación de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la relación LD⁵⁰/ED⁵⁰. Se prefieren los regímenes terapéuticos que presentan grandes índices terapéuticos. Aunque se pueden utilizar regímenes terapéuticos que presenten efectos secundarios tóxicos, se debe tener cuidado de diseñar un sistema de administración que dirija dichos agentes al lugar del tejido afectado para minimizar el daño potencial a las células no infectadas y, por tanto, reducir los efectos secundarios.

6.8 ARTÍCULOS DE FABRICACIÓN

También se incluye en el presente documento un producto farmacéutico acabado, envasado y etiquetado. Este artículo de fabricación incluye la forma de dosificación unitaria apropiada en un recipiente o contenedor apropiado, tal como un vial de vidrio u otro contenedor que esté sellado herméticamente. El producto farmacéutico puede contener, por ejemplo, los componentes de una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descritos en el presente documento en una forma de dosificación unitaria.

En una realización específica, la forma de dosificación unitaria es adecuada para la administración parenteral, intravenosa, intramuscular, intranasal o subcutánea. Por lo tanto, en el presente documento se incluyen soluciones, preferentemente estériles, adecuadas para cada vía de administración.

Como con cualquier producto farmacéutico, el material de envasado y el recipiente están diseñados para proteger la estabilidad del producto durante el almacenamiento y el envío. Además, los productos suministrados en el presente documento incluyen instrucciones para su uso u otro material informativo que aconseja al médico, al técnico o al paciente sobre cómo prevenir o tratar adecuadamente el cáncer cerebral en cuestión. En otras palabras, el artículo de fabricación incluye medios de instrucción que indican o sugieren un régimen de dosificación que incluye, pero no se limita a, las dosis reales, los procedimientos de control y otra información.

Específicamente, se proporciona en el presente documento un artículo de fabricación que comprende material de envasado, tal como una caja, una botella, un tubo, un vial, un contenedor, un pulverizador, un insuflador, una bolsa intravenosa^.v.), sobre y similares; y al menos una forma de dosificación unitaria de una vacuna o composición farmacéutica descrita en el presente documento contenida dentro de dicho material de envasado, en el que dicha vacuna o composición farmacéutica descrita en el presente documento comprende una vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrito en el presente documento, y en el que dicho material de envasado incluye medios de instrucción que indican que dicha vacuna con base en el péptido IL-13Ra2 descrita en el presente documento puede utilizarse para prevenir, gestionar y/o tratar el cáncer cerebral o uno o más síntomas del mismo mediante la administración de dosis específicas y el uso de regímenes de dosificación específicos como se describe en el presente documento.

7. EJEMPLOS

Los siguientes ejemplos ilustran aún más la invención, pero, por supuesto, no deben interpretarse como una limitación de su alcance.

7.1 EJEMPLO 1

Este ejemplo demuestra la identificación de péptidos modificados para la IL-13Ra2345-353 que mejoran la inducción de la respuesta CTL contra la IL-13Ra2345"353 nativa.

Se sintetizaron tres péptidos modificados como se indica en la Tabla 1. La capacidad de unión de estos péptidos modificados se evaluó utilizando una línea celular T2 transfectada con HLA-A2. Se incubaron alícuotas de células T2 con péptidos modificados o IL-13Ra2345-353 a 1 nM durante la noche, y luego se examinaron los niveles de expresión superficial de HLA-A2 en las células T2 mediante citometría de flujo. Dado que la unión estable de HLA-A2 con los epítopos peptídicos estabiliza aún más la expresión de superficie de HLA-A2 (Francini et al., 2002; Alves et al., 2003), los niveles de expresión cuantitativa de HLA-A2, que se indica mediante la intensidad de fluorescencia media (MFI) en la Tabla 1, se correlacionan con la afinidad de unión de los epítopos peptídicos que se coincuban con las células T2. Los péptidos modificados V9 y A1V9 poseen una mayor afinidad de unión a HLA-A2 que la IL-13Ra2345-353 nativa (Tabla 1), lo que sugiere la posibilidad de que estos péptidos modificados sean más inmunogénicos que la IL-13Ra2345-353.

TABLA 1

7.2 EJEMPLO 2

Este ejemplo demuestra que CTL inducido por el análogo agonista V9 reconoció el péptido IL-13Ra2345-353 presentado en HLA-A*0201 más eficientemente que los CTL inducidos por el péptido de tipo silvestre.

Las células dendríticas (DC) derivadas de HLA-A*0201+ de pacientes con glioma fueron pulsadas con V9, A1V9, E1V9, una gripe de control (Gripe), o el péptido de tipo silvestre (10 pg/ml), y se utilizaron para estimular células T CD8+ autólogas. En el día 7, los cultivos de células respondedoras individuales se volvieron a estimular una vez con las DC autólogas cargadas con el péptido correspondiente utilizado en la estimulación primaria. La actividad CTL específica de las líneas de células T inducidas se probó primero con células T2 cargadas con la IL-13Ra2345-353 de tipo silvestre, o sin péptido en el día 10.

Como se muestra en la FIG. 1, las células T que habían sido estimuladas con el tipo silvestre (IL-13R) o con análogos agonistas (V9, A1V9 y E1V9) generaron lisis eficazmente de las células objetivo T2 pulsadas con 100 ng/ml de IL-13Ra2345-353 de tipo silvestre; mientras que sólo se observó una lisis de bajo fondo en ausencia del péptido en las células T2. Las células T que habían sido estimuladas con el péptido de control de la gripe o sin péptido (control) no demostraron ninguna actividad lítica por encima de los niveles de fondo. Estos resultados demostraron que las líneas CTL inducidas con el tipo silvestre o con análogos agonistas reconocieron y generaron lisis de las células que presentaban el epítopo IL-13Ra2345-353 de tipo silvestre específicamente. En particular, el péptido V9 indujo un nivel significativamente mayor de respuesta CTL específica al antígeno en comparación con el tipo silvestre IL-13Ra2345-353 en cada relación efector/destino (E/T) (p=0,018, 0,020 y 0,011 en una relación E/T de 50, 25 y 12,5, respectivamente). El mismo conjunto de experimentos se repitió con al menos tres pacientes individuales con glioma HLA-A2+, y el péptido V9 demostró sistemáticamente mayores actividades CTL que el IL-13Ra2345-353 nativo en los cuatro donantes analizados (datos no mostrados).

Posteriormente, se examinó la sensibilidad de las líneas CTL inducidas por análogos agonistas o el péptido de tipo silvestre con células T2 cargadas con diversas concentraciones (1-100 nM) del péptido IL-13Ra2345-353 mediante un ensayo de liberación de 51Cr en 4 horas (FIG. 2). Todas las líneas CTL demostraron actividades líticas dependientes de la dosis de péptido contra las células T2 cargadas de péptido. La línea CTL inducida por el agonista análogo V9 demostró una mayor actividad CTL que la IL-13Ra2345-353 de tipo silvestre en todas las concentraciones de péptidos examinadas (P=0,029, 0,039 y 0,018 a 1, 10 y 100 nM, respectivamente). Cabe destacar que el valor promedio del porcentaje de lisis alcanzado por el CTL inducido por V9 con 1 nM de IL-13Ra2345-353 fue mayor que el demostrado con el CTL inducido por el péptido de tipo silvestre con 100 nM de péptido, aunque esto no demostró una significancia estadística debido a una gran variación estándar. Estos resultados indican que el péptido V9 es más eficiente que el péptido de tipo silvestre en la inducción de CTL que son capaces de reconocer bajas concentraciones del péptido IL-13Ra2345-353 de tipo silvestre. Esta capacidad es importante porque las células tumorales humanas expresan bajos niveles de epítopos CTL objetivo en sus moléculas HLA (Bakker et al., 1995; Lupetti et al., 1998).

7.3 EJEMPLO 3

Este ejemplo demuestra que los CTL inducidos por los péptidos modificados generaron lisis de las células de glioma HLA-A2+ que expresan IL-13Ra2 con mayor eficacia que los CTL inducidos por el péptido nativo.

Se examinó la capacidad de los péptidos modificados, tal como IL-13Ra2-V9, para mejorar la actividad CTL contra las células de glioma humano HLA-A2+ que expresaban y presentaban endógenamente epítopos derivados de IL-13Ra2. Las líneas celulares de glioma humano U251 y SNB19 expresan HLA-A2 e IL-13Ra2, mientras que la línea celular de glioma humano A172 expresa IL-13Ra2, pero no HLA-A2 (Okano et al., 2002). Por lo tanto, se utilizaron U251 y SNB19 como células de glioma objetivo relevantes, mientras que A172 sirvió como línea de control negativo para demostrar la restricción de la respuesta por HLA-A2.

La capacidad lítica de las líneas CTL inducidas por el péptido contra estas células de glioma se examinó mediante ensayos de liberación de 51Cr durante 4 horas. Como se ilustra en la FIG. 3, las líneas celulares U-251 y SNB19 fueron altamente susceptibles a la actividad citotóxica de todas las líneas CTL que habían sido inducidas con IL-13Ra2345-353 o cada uno de sus péptidos modificados. Las células A172, por el contrario, no se les generó lisis más allá del nivel de fondo (<10 %) por ninguna de las líneas CTL probadas, lo que sugiere que las líneas CTL inducidas por IL-13Ra2345-³⁵³o por el péptido modificado generaron lisis de las células de glioma SNB19 y U-251 de forma restringida a HLA-A2 (datos no mostrados). Las células T estimuladas con un epítopo del antígeno asociado al melanoma Mart-^127-35y las células T sin estimulación del péptido sólo mostraron un nivel de fondo (<10 %) de lisis en todas las relaciones efector/objetivo (E/T) probadas (datos no mostrados). En este paciente en particular, tanto IL-13Ra2-V9 como -A1V9 indujeron mayores niveles de lisis de SNB19 y U-251 en cada relación E/T en comparación con el péptido nativo IL-13Ra2345-353.

Para determinar la especificidad de la actividad lítica, se realizaron experimentos de competencia de objetivo en frío mediante la adición de células T2 no radiomarcadas (en frío) pulsadas con el péptido IL-13Ra2345-353 en el ensayo de liberación de 51 Cr durante 4 horas (FIG. 4). Las actividades líticas de las células de glioma anti-SNB19 por parte de las líneas CTL inducidas por la IL-13Ra2345-353 nativa o la IL-13Ra2-V9 fueron casi completamente inhibidas por la adición de las células T2 frías pulsadas con IL-13Ra2345-353. Sin embargo, las actividades de los CTL no fueron inhibidas por la adición de células T2 frías sin péptidos, demostrando que la capacidad lítica de los CTL era específica para el epítopo IL-13Ra2345-353.

Además, se utilizó un anticuerpo anti-HLA-A2 (W6/32) para bloquear la señalización mediada por HLA-A2 en la reactividad de los CTL. Como se ilustra en la FIG. 5, la adición de este anticuerpo inhibió la lisis mediada por el CTL, confirmando que la reactividad del CTL anti-glioma inducida por estos péptidos estaba restringida por HLA-A2.

7.4 EJEMPLO 4

Este ejemplo demuestra la vacunación de ratones transgénicos HLA-A2 (HHD) con epítopos CTL derivados de IL-13Ra2.

Para examinar si la inmunización con IL-13Ra2345-353 y/o sus péptidos modificados puede provocar respuestas CTL in vivo, y también para examinar si las respuestas CTL inducidas pueden mediar respuestas terapéuticas antitumorales contra los tumores cerebrales que expresan IL-13Ra2345-353, los ratones HHD se obtuvieron del Dr. Francois A. Lemonnier (Instituto Pasteur, París). Los ratones HHD son Dbxp2 microglobulina (p2M) nulos, y transgénicos para HLA-A2.1-p2 microglobulina de cadena simple modificada (gen HHD) (Pascolo et al., 1997). Los experimentos in vivo mostraron que los ratones HHD presentan respuestas restringidas por HLA-A2 a proteínas multiepitópicas tal como el virus de la gripe intacto (Pascolo et al., 1997) y nuevos antígenos asociados al cáncer,tales como EphA2 (Alves et al., 2003), HER-2/neu y hTERT (Scardino et al., 2002), MAGE (Graff-Dubois et al., 2002) y un nuevo BA46 asociado al carcinoma de mama (Carmon et al., 2002). Por lo tanto, estos ratones son una herramienta útil para la identificación y caracterización de potenciales epítopos CTL restringidos por HLA-A2 derivados del tumor.

Para crear una línea celular tumoral singénica de ratón HHD que exprese IL-13Ra2, se obtuvieron células de linfoma EL4 transfectadas con el gen HHD (EL4-HHD). Se han generado células EL4-HHD a partir de EL4 mediante la agotamiento de D^bxp2M y la inserción de la cadena única HLA-A2.1-p2M modificada (Pascolo et al., 1997), lo que permite el trasplante singénico en ratones HHD. Las células EL4-HHD se transfectaron de forma estable con un plásmido de expresión que codifica IL-13Ra2. La línea celular (EL4-HHD-IL-13Ra2) expresó la proteína IL-13Ra2 y formó tumores tanto en el espacio subcutáneo (s.c.) como en el intracraneal (i.c.) tras las inyecciones a ratones HHD singénicos.

7.5 EJEMPLO 5

Este ejemplo demuestra que la inmunización in vivo de ratones HHD con los péptidos modificados indujo mayores magnitudes de respuestas CTL que el péptido nativo contra las células objetivo que expresan IL-13Ra2^345-353.

Los ratones HHD recibieron (en los días 7 y 14) inyecciones s.c. inyecciones de 100 |jg del péptido IL-13Ra2-V9, -A1V9, IL-13Ra2^{345 -353}, o MART-1^27-35emulsionado en adyuvante de Freund incompleto (IFA) en presencia de 140 jg del epítopo HBVcore-^i28-140(TPPAYRPPNAPIL) restringido por I-Ab (SEQ ID NO:5), que estimula una respuesta de células T auxiliares CD4+, promoviendo así la estimulación de los CTL CD8+. Los animales de control recibieron una IFA que contenía sólo el péptido auxiliar del HBV. Once días después de la última inmunización, se sacrificaron los animales y se estimularon in vitro 5*106 células del bazo (SPC) con el mismo péptido que se utilizó para la estimulación in vivo (10 jM ). En el día 6 de cultivo, se comprobó la citotoxicidad específica de las poblaciones masivas contra las células EL4-HHD que expresaban IL-13Ra2 o EL4-HHD pulsadas con IL-13 Ra2^345-353.

EL4-HHD-IL-13Ra2 y EL4-HHD se marcaron con 100 jC i de ⁵¹Cr durante 60 minutos, y se colocaron en placas de 96 pocillos con fondo en V (3*103 células/pocillo). Las EL4-HHD marcadas fueron pulsadas con IL-13Ra2^345-353(1 jM ) a 37°C durante 2 h. Las células objetivo de control fueron pulsadas sin péptidos. A continuación, se añadieron las SPC estimuladas como células efectoras y se incubaron a 37°C durante 4 h. Se recogieron cien j l de sobrenadante y se midió la radiactividad en un contador gamma.

La FIG. 6 demuestra que las respuestas CTL inducidas por los péptidos modificados fueron capaces de generar lisis de células T2 cargadas con IL-13Ra2^345-353nativo. No se les generó lisis a las células EL4-HHD de control no pulsadas por los CTL más allá de los niveles de fondo (mostrados en la FIG. 7). Además, la inmunización con IL-13Ra2-V9 mostró una tendencia hacia niveles más altos de reactividad CTL contra las células EL4-HHD pulsadas con el péptido nativo IL-13Ra2^345-353que otros péptidos examinados, aunque la diferencia no fue estadísticamente significativa debido a la variación dentro de las muestras triplicadas. Estos datos apoyan el conjunto anterior de datos con células T humanas derivadas de pacientes HLA-A2+, en el que los péptidos modificados indujeron niveles más altos de respuesta CTL anti-IL-13Ra^2345-353que el péptido nativo.

La capacidad de los mismos CTL derivados de ratones HHD utilizados en la FIG. 6 para generar lisis de las células EL4-HHD-IL-13Ra2 con el fin de evaluar la capacidad de los CTL para reconocer el péptido IL-13Ra2^345-353que es procesado naturalmente por las células que expresan endógenamente IL-13Ra2. La FIG. 7 ilustra que la inmunización con la IL-13Ra2^345-353, IL-13Ra2-V9 o -A1V9 indujo una actividad CTL específica contra las células EL4-HHD-IL-13Ra2. Las actividades de los CTL eran específicas del antígeno porque no se generó lisis de los EL4-HHD de control lisados más allá del nivel de fondo. Los péptidos modificados IL-13Ra2-V9 y -A1V9 indujeron una mayor magnitud de actividades CTL en comparación con la IL-13Ra2^345-353nativa contra las células EL4-HHD-IL-13Ra (p<0,05 en todas las relaciones efector/objetivo). Actualmente se está evaluando el efecto antitumoral in vivo de las vacunaciones con los péptidos IL-13Ra2^345-353o IL-13Ra2 modificados en ratones HHD portadores de tumores EL4-HHD-IL-13Ra2.

7.6 EJEMPLO 6

Este ejemplo demuestra que EphA2 tiene epítopos CTL restringidos por HLA-A2 disponibles.

EphA2 es un atractivo antígeno asociado a tumores y un objetivo para las vacunas contra tumores, ya que se han identificado previamente 5 epítopos de células T HLA-A2 y 3 DR4 (Tatsumi et al., 2003). Como se muestra en la FIG.

8, 9 de 14 casos de glioblastoma multiforme (GBM) humano y 6 de 9 casos de astrocitoma anaplásico (AA) expresan altos niveles de EphA2. Además, se ha inducido la reactividad CTL antiglioma en células CD8+ obtenidas de pacientes con glioma HLA-A2+ mediante la estimulación con el epítopo EphA2883-891 (FIG. 9). Esta respuesta fue específica para el epítopo EphA2^a83-891porque el ensayo paralelo utilizando células T2 cargadas con EphA2^a83-891demostró una respuesta específica al péptido en comparación con el objetivo T2 sin carga de control (no mostrado). Estos datos sugieren fuertemente que EphA2^e83-891puede servir como epítopo CTL.

7.7 EJEMPLO 7

Este Ejemplo describe un ensayo de fase I/II realizado para evaluar la seguridad e inmunogenicidad de una novedosa vacunación con células dendríticas polarizadas tipo a-1 (aDC1) cargadas con péptidos sintéticos para epítopos de antígenos asociados al glioma (GAA) y la administración de poli-ICLC en pacientes con antígeno leucocitario humano (HLA)-A2+ con gliomas malignos recurrentes. Los GAA de estos péptidos son EphA2, receptor de interleucina-13 (IL-13R) a2, YKL-40 y gp100.

7.7.1 PACIENTES Y MÉTODOS

7.7.1.1 Pacientes

Los pacientes con glioma maligno recurrente se inscribieron con el consentimiento informado y las aprobaciones de la junta de revisión institucional (IRB) y la US Food and Drug Administraron (FDA) (BB-IND#12415). Las características clínicas de los pacientes se resumen en las Tablas 2 y 3A. Los criterios de inscripción incluían: diagnóstico histológico de glioblastoma multiforme (GBM) o glioma anaplásico (AG), incluyendo el astrocitoma anaplásico (AA), el oligodendroglioma anaplásico (AO) o el oligoastrocitoma anaplásico (AOA); hasta 2 recidivas previas; > 18 años; estado de rendimiento de Karnofsky > 60; función hepática y renal adecuada y HLA-A2+. Se permitieron dosis mínimas de corticosteroides (dexametasona hasta 4 mg/día). Se inscribieron 22 pacientes que recibieron al menos una vacuna. Diecinueve de 22 pacientes completaron las 4 inmunizaciones iniciales programadas; tres pacientes (los pacientes 4, 11 y 13) fueron retirados del protocolo debido a la progresión temprana del tumor. Nueve pacientes completaron 5 vacunaciones de refuerzo adicionales. Los datos inmunológicos y de seguridad se presentan en los pacientes que recibieron al menos 4 vacunas (n = 19), y al menos una vacuna (n = 22), respectivamente.

TABLA 2: r rí i m r fi líni l i n r i i n



TABLA 3B

7.7.1.2 Diseño de ensayos clínicos

Este estudio fue diseñado para evaluar la toxicidad y la inducción de respuestas inmunológicas y clínicas preliminares de las vacunaciones con aDC1 cargado con GAA y la administración de poli-ICLC (Hiltonol®, Oncovir, Inc.). El primer curso de vacunas consistió en 4 administraciones intranodales (i.n.) guiadas por ultrasonido de 1 o 3 * 107 aDC1/inyecciones cada 2 semanas (Figura 19) rotando cada uno de los grupos de ganglios linfáticos inguinales y axilares para minimizar los efectos potenciales del trauma inducido por la inyección en el microambiente de los ganglios linfáticos repitiendo las inyecciones en períodos cortos. Los primeros 10 pacientes evaluables recibieron 1 *107 aDC1/inyección (Nivel de Dosis 1), y luego 9 recibieron 3 * 1o7 aDC1/inyección (Nivel de Dosis 2). Todos los pacientes recibieron inyecciones intramusculares (i.m.) con poli-ICLC (20 pg/kg) dos veces por semana durante 8 semanas, comenzando el día 1. Los pacientes que mostraron una enfermedad estable o una regresión de la enfermedad sin eventos adversos (AE) importantes después de la 4' vacunación fueron elegibles para recibir vacunas adicionales. A partir de la Semana 13, estos pacientes fueron tratados con la misma dosis de vacunas adicionales cada 4 semanas hasta un máximo de 5 inyecciones de vacuna y poli-ICLC i.m. a partir del día de la primera vacuna adicional y dos veces por semana (1' fase de refuerzo). A los pacientes que no demostraron AE mayores o progresión tumoral después de la1' fase de refuerzo se les ofreció la misma dosis de vacunas adicionales (cada 3 meses) y poli-ICLC (cada semana) hasta tres años desde la primera vacunación (2' fase de refuerzo).

7.7.1.3 Evaluación de la toxicidad y reglas de parada

El ensayo fue monitorizado continuamente para los AE relacionados con el tratamiento utilizando los National Cancer Institute Common Toxicity Criteria versión 3.0. Se consideraron toxicidades limitantes de la dosis (DLT) las que se consideraron posibles, probables o definitivas asociadas al tratamiento: > Hipersensibilidad de grado 2; > Toxicidad no hematológica/metabólica de grado 3; > Toxicidad hematológica (excepto linfopenia) o metabólica de grado 3 que no haya remitido tras 4 semanas de cese temporal del poli-ICLC. Se aplicaron reglas de interrupción, de modo que se consideró que un nivel de dosis era excesivamente tóxico, lo que justificaba que se detuviera la acumulación, si en algún momento la tasa observada de DLT era > 33 % y se habían observado al menos 2 DLT.

7.7.1.4 Péptidos

Los péptidos con restricción HLA-A2 utilizados en estos estudios fueron: ALPFGFILV (SEQ ID NO:3; IL-13Ra2^345-353:iA9v); TLADFDPRV (SEQ ID NO:6; EphA2^883-89i); IMDQVPFSV (SEQ ID NO:11; GP100^209-217:M2); y SIMTYDFHGA (SEQ ID NO:10; YKL-⁴O^201-210). También se cargaron aDC1 con un epítopo pan-DR (PADRE), que es un epítopo no natural optimizado para la respuesta de las células T auxiliares (véase, por ejemplo, Alexander et al, Immunity, 1:751-761, 1994). Los péptidos se sintetizaron mediante la síntesis automatizada de péptidos en fase sólida. Los péptidos se sometieron a múltiples estudios de garantía de calidad, incluyendo pureza, esterilidad, identidad, potencia, pirogenicidad y estabilidad.

7.7.1.5 Preparación de la vacuna

Para el cultivo de DC, se obtuvieron monocitos del producto de la leucaféresis y se purificaron mediante el sistema ElutraTM. Los monocitos se cultivaron en medio de cultivo sin antibióticos CellGenix complementado con 1000 U/mL de GM-CSF y 1000 U/mL de IL-4 en cartuchos estériles, utilizando el sistema Aastrom Replicell. Los (i)DC inmaduros se cosecharon el día 6 y se criopreservaron. Antes de cada vacunación, se descongelaron alícuotas de iDCs congeladas, se maduraron y polarizaron con IL-1p de grado clínico (10 ng/ml), TNF-a (10 ng/ml), IFN-a (3000 U/ml), IFN-y (1000 U/mI) y poli-I:C (20 jg/m I) a 37°C en 5%de CO²durante 48 horas y se cargaron con péptidos GAA (10 |jg/ml) durante 4-6 horas. Dos horas antes de la recolección, se añadió el péptido PADRE a los cultivos. Los criterios para la liberación de aDC1 incluían: Esterilidad por tinción de Gram y cultivo bacteriológico; Mycoplasma negativo; endotoxina < 5,0 U.E./kg de peso corporal; expresión superior al 70 % tanto de CD86 como de HLA-DR en aDC1.

7.7.1.6 Recogida de PBMC

Se extrajo sangre periférica (50-60 ml) en cada visita para la vacuna (antes de la vacuna) así como en las Semanas 0, 9 y 33. Las PBMC aisladas con ficol se criopreservaron en dimetilsulfóxido al 10 %/90 % de FBS.

7.7.1.7 Ensayos ELISPOT

Los ensayos de manchas inmunoenzimáticas (ELISPOT) se realizaron como se ha descrito anteriormente (véase, por ejemplo, Kirkwood et al, Clin.Cancer Res., 15:1443-1451,2009) con ligeras modificaciones. Brevemente, se evaluaron simultáneamente muestras de PBMC por lotes tras la estimulación in vitro con PBMC autólogas e irradiadas cargadas con IL-13Ra345-353 de tipo silvestre, EphA2^883-891, GP^{10 0 209-217}e YKL^{- 40 202-211}durante una semana. Una respuesta ELISPOT positiva se definió como un aumento de 2 veces en las células T formadoras de manchas con respecto al nivel prevacunal y al menos 10 manchas/20.000 células durante al menos dos puntos temporales consecutivos postvacunales contra cualquier antígeno.

7.7.1.8 Ensayos de tetrámeros

Se produjeron HLA-A conjugado con ficoeritrina (PE)*0201/ALPFGFILV (SEQ ID NO:3) (IL-13Ra2-tetrámero), HLA-A*0201/IMDQVPFSV (SEQ ID NO:11) (gp100-tetrámero) y HLA-A*0201/TLADFDPRV (SEQ ID NO:6) (tetrámero EphA2) por la instalación de tetrámeros del National Institute of Allergy and Infectious Disease dentro del Emory University Vaccine Center (Atlanta, GA) utilizando el péptido sintetizado por la University of Pittsburgh Peptide Production Facility. El anti CD8 humano conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) se obtuvo de BD Biosciences. Se definió una respuesta positiva en un único punto temporal para un péptido como el (0,1+B)% de todas las células CD8+ positivas mediante el ensayo de tetrámeros (véase, por ejemplo, Weber t al, J Immunother, 31:215-23, 2008y Celis, Cancer, 110:203-14, 2007), donde B es el porcentaje positivo al inicio, que fue inferior al 0,01 % en todos los casos. Se consideró que un paciente había respondido si tenía 2 respuestas consecutivas de un solo punto de tiempo para cualquier péptido.

7.7.1.9 Ensayos de citoquinas y quimioquinas

Las muestras de ARN total se obtuvieron de PBMC utilizando el sistema PAXgene Blood RNA (PreAnalytix, Suiza). La RT-PCR se realizó por triplicado, y los valores se estandarizaron con respecto a GAPDH y se calculó la expresión relativa de los ARNm mediante el método AAC^t(véase, por ejemplo, Livak y Schmittgen, Methods, 25:402-8, 2001). El ensayo con base en Luminex se realizó en muestras de suero como se ha descrito anteriormente (véase, por ejemplo, Zczepanski et al, Cancer Res., 69:3105-3113, 2009). Las placas multiplex previamente probadas (Invitrogen) incluían curvas estándar y estándares de citoquinas (R&D Systems). La hibridación in situ con una sonda de ARNc radiomarcada para CXCL10 se realizó como se describe (véase, por ejemplo, Fallert y Reinhart, J Virol Methods, 99:23-32, 2002), con tiempos de exposición autorradiográfica de 14 días.

7.7.1.10 Vigilancia de la respuesta radiológica

El tamaño del tumor se evaluó en las Semanas 9, 17, 25 y 33, y cada 3 meses a partir de entonces, utilizando escáneres de IRM con realce de contraste. La respuesta se evaluó según los criterios de McDonald mediante imágenes ponderadas en T1 con gadolinio (Gd), área de prolongación de la señal en imágenes ponderadas en T2, o una combinación de ambas, con base en el aspecto de la IRM previa al tratamiento

7.7.1.11 Otros criterios de valoración clínicos

La supervivencia general se definió por el intervalo desde la entrada en el estudio hasta la fecha de la muerte. Se utilizaron las IRM para evaluar el tiempo de progresión (TTP).

7.7.2 RESULTADOS

7.7.2.1 Resumen de las toxicidades clínicas

Los EA relacionados con el tratamiento se enumeran para los 22 pacientes en la Tabla 4. No hubo toxicidades de grado 3 o 4, ni muertes en el estudio, ni DLT en ninguna dosis hasta la 1ra fase de refuerzo. No se encontraron incidencias de autoinmunidad. Los perfiles de toxicidad fueron comparables en todos los niveles de dosis. Las reacciones de grado 1 o 2 en el lugar de la inyección fueron las más frecuentes (82 %). Los síntomas gripales de grado 1, incluyendo fatiga (73 %), mialgia (32 %), fiebre (23 %), escalofríos/rigores (18 %) y dolor de cabeza (32 %), fueron frecuentes y se limitaron generalmente a las 24 horas posteriores a cada vacuna. Se registró linfopenia de grado 2 en un paciente (5%).

TABLA 4

continuación

7.7.2.2 Producción de IL-12 por aDC1

Como se muestra en las Tablas 3A-3B, los niveles de producción de IL-12 p70 inducidos por CD40L por aDC1 variaron sustancialmente entre los pacientes, y se correlacionaron positivamente con TTP (p=0,0255; Figura 10) pero no con la respuesta de IFN-y ELISPOT, la edad de los pacientes o los tipos de tumor.

7.7.2.3 Inducción de respuestas inmunitarias específicas de los epítopos contra los GAA

Los 19 pacientes que completaron el curso inicial de 4 vacunas tenían PBMCs disponibles para la monitorización inmunológica. No se obtuvieron suficientes PBMC de los pacientes 17, 21 y 22 para realizar tanto los ensayos ELISPOT como los tetrámeros; y se priorizaron los ensayos ELISPOT funcionales. Las 4 primeras vacunas programadas indujeron una reactividad inmunitaria a al menos uno de los GAAs objetivo de la vacuna en 6 de 10 y 5 de 9 en los niveles de dosis 1 y 2, respectivamente, ya sea mediante ensayos de IFN-^yELISPOT o tetrámero (Tablas 3A-3B). En los pacientes 6, 7, 8, 16, 19, 20 y 22, algunas lecturas alcanzaron los criterios de respuesta positiva tras las vacunas de refuerzo (indicadas con § en la Tabla 3B). En resumen, 11 de los 19 (58%) pacientes evaluables mostraron una respuesta positiva después de las 4 vacunas iniciales, y 3 de los 19 (pacientes 8, 19 y 20; 16%) mostraron una respuesta positiva sólo después de las vacunas de refuerzo.

Las tasas de respuesta positiva (ya sea por tetrámero o ELISPOT) no mostraron diferencias significativas entre las dos dosis de aDC1 según la prueba exacta de Fisher. Además, las magnitudes de la respuesta ELISPOT, con base en la suma de los puntos positivos de la semana 3 a la 9, fueron comparables en los dos niveles de dosis de aDC1 (prueba de Wilcoxon). Por lo tanto, el curso temporal de las respuestas de IFN-^yELISPOT se presenta combinando los resultados de ambos niveles de dosis (Figura 11). El epítopo gp100 demostró la mayor magnitud de respuesta entre los péptidos GAA ensayados (p=0,0001, 0,0003 y 0,0005 frente a los péptidos derivados de IL-13Ra2, EphA2 y YKL-40, respectivamente, mediante la prueba de Wilcoxon). Para los demás epítopos, las vacunas de refuerzo parecen mejorar la inducción de respuestas específicas. Se observó un descenso temporal de las respuestas en la Semana 13, lo que puede reflejar que algunos pacientes que demostraron respuestas positivas en la Semana 9 no participaron en la fase de refuerzo debido a la progresión del tumor (pacientes 2, 9, 18 y 21) o a la linfopenia (paciente 10), lo que dio lugar a una reducción general de la respuesta cuando se agrupan los datos de todos los pacientes. El paciente 10 demostró la mayor magnitud de respuestas IFN-y ELISPOT contra epítopos derivados de IL-13Ra2 y gp100, así como PADRE (Figura 12), pero los análisis de tetrámero en este paciente no produjeron respuestas (Tabla 3A). El paciente 6, que demuestra una enfermedad estable durante más de 30 meses, desarrolló respuestas duraderas y de alto nivel en los ensayos de tetrámero (Figura 13) y ELISPOT.

7.7.2.4 Inducción de respuestas de citoquinas y quimioquinas de Tipo 1

Los análisis de RT-PCR de PBMC (Figura 14 y 15) revelaron una regulación al alza de la expresión de ARNm para varias citocinas y quimiocinas de tipo 1, específicamente IFN-a1, CXCL10 y TLR3, tanto en la fase posterior a la 1a vacuna como en la posterior a la 4a vacuna. Se encontró que IFN-^y estaba regulado al alza después de la 4' vacuna, pero no después de la 1', lo que sugiere que la regulación al alza del IFN-y puede estar asociada a la inducción de una respuesta inmunitaria adaptativa, más que innata. Los niveles de CCL22, que se sabe que atrae a las células T reguladoras (véase, por ejemplo, Muthuswamy et al., Cancer Res. 68:5972-5978, 2008), y ^cCL5 disminuyeron en los análisis por pares de las muestras posteriores a la primera vacuna. Los niveles de Perforina, Granzima B, COX-2 y Foxp3 no cambiaron significativamente.

Se evaluó un panel de citocinas y quimiocinas a nivel de proteínas en muestras de suero disponibles antes y después de la vacuna de 5 pacientes (Figura 16). Entre ellos, IFN-a, CXCL10, IL-15, MCP-1 y MIP-1p aumentaron significativamente en los sueros post-vacuna. IL-17 estaba por debajo de los intervalos detectables tanto en RT-PCR como en los análisis de suero.

Además, tres de los cinco tumores disponibles resecados debido a la progresión radiográfica post-vacuna expresaron ARNm para CXCL10, que es una quimiocina crítica para el tráfico efectivo de células T CD8+ a los sitios de los tumores cerebrales (véase, por ejemplo, Nishimura et al., Cancer Res 66:4478-4487, 2006y Fujita et al., Cancer Res 69:1587-1595, 2009) (la Figura 17 muestra un caso representativo). Estos datos sugieren que el régimen actual induce respuestas inmunitarias sistémicas y polifuncionales en pacientes generalmente inmunodeprimidos con glioma maligno.

7.7.2.5 Datos de inmunohistoquímica

Los datos inmunohistoquímicos de 7 casos GAA se resumen en la Tabla 5. Estos datos sugieren que la expresión de gp100 puede ser muy baja en los gliomas primarios de alto grado. Para la inmunohistoquímica, se utilizaron los siguientes anticuerpos policlonales (Ab) y los correspondientes Ab secundarios: anti-humano(h)IL-13Ra2 (IgG de cabra; R&D Systems); anti-humano EphA2 (H-77) (IgG de conejo; Santa Cruz Biotechnology); anti-humano YKL-40 (IgG de conejo; Quidel) y anti-humano gp100 (IgG de cabra; Santa Cruz Biotechnology).

TABLA 5

7.7.2.6 Resultados clínicos

Dos pacientes (Paciente 1 y 20) experimentaron regresiones clínicas objetivas del tumor (tasa de respuesta = 9%). Ambos pacientes no respondieron a la prueba ELISPOT, pero sí al tetrámero. El paciente 20 con GBM recurrente demostró una respuesta completa con base en la desaparición de la masa realzada por Gd en la semana 17 post vacuna en comparación con la IRM de línea bas, que fue duradera y continua durante al menos 13 meses desde el inicio del tratamiento (Figura 18A-I). El paciente 1 con GBM recurrente mostró una respuesta parcial en la semana 9. Tras dos vacunas de refuerzo, la lesión realzada por Gd aumentó de tamaño. La biopsia de la lesión, sin embargo, reveló una intensa infiltración de células T CD8+ y macrófagos CD68+ y ninguna evidencia de tumor mitóticamente activo (Figura 18J-L). Entonces, este paciente recibió una vacuna adicional antes de la reaparición a los 7 meses de la vacuna inicial. Nueve pacientes (41%; 4 y 5 con GBM y AG, respectivamente) estuvieron libres de progresión durante al menos 12 meses. Cinco pacientes permanecieron libres de progresión (Tabla 3A) y continuaron recibiendo vacunas de refuerzo. La mediana del TTP es de 4 y 13 meses para el GBM y el AG, respectivamente (Figura 20).

7.7.3 CONCLUSIÓN

El estudio descrito en este Ejemplo evaluó vacunas con base en aDC1 cargadas con nuevos péptidos derivados de GAA, en combinación con poli-ICLC. Los resultados demuestran la seguridad e inmunogenicidad, así como la eficacia preliminar del enfoque.

7.8 EJEMPLO 8

Este ejemplo describe un estudio de la seguridad y eficacia de un régimen terapéutico para adultos con gliomas recurrentes de grado II de la OMS que comprende la vacunación con antígenos-péptidos de glioma restringidos por HLA-A2 en combinación con poli-ICLC.

7.8.1. JUSTIFICACIÓN

Este Ejemplo describe un régimen de vacunación que está diseñado para inducir eficazmente respuestas de células T antitumorales en pacientes con glioma recurrente de grado II de la OMS. El régimen combina inyecciones subcutáneas de antígenos asociados al glioma (GAA) derivados de linfocitos T citotóxicos (CTL) con la administración simultánea por vía intramuscular (i.m.) de poli-ICLC.

Los adultos con glioma supratentorial de bajo grado (LGG) tienen un riesgo significativo (24 %) de progresión tumoral 2 años después del tratamiento con cirugía o cirugía seguida de radioterapia (RT). El estudio descrito en este Ejemplo tiene un potencial inmunoprofiláctico e inmunoterapéutico para reducir el riesgo de recidiva tumoral, lo que puede traducirse en una mejora de la supervivencia. Desde el punto de vista terapéutico, el enfoque de la inmunoterapia puede suprimir la expansión de las células tumorales de bajo grado II de crecimiento indolente. De forma profiláctica, el enfoque puede prevenir la transformación anaplásica, que se produce en aproximadamente la mitad de los LGG recurrentes. La tasa de crecimiento más lenta de los LGG (en contraste con los gliomas malignos) debería permitir un tiempo suficiente para repetir múltiples inmunizaciones, lo que podría llevar a la inducción de altos niveles de inmunidad específica contra los GAA. Además, se ha demostrado que el poli-ICLC potencia los efectos de la vacuna en modelos preclínicos de tumores cerebrales (véase, por ejemplo, Zhu et al., J.Transl.Med., 5: 10, 2007), y ser seguro en pacientes con glioma maligno (véase, por ejemplo, Salazar et al., Neurosurgery, 38: 1096-1103, 1996). Por lo tanto, nuestra hipótesis es que esta forma de vacuna en combinación con el tratamiento de poli-ICLC inducirá una potente respuesta inmunitaria contra el glioma, y será segura.

7.8.2 OBJETIVOS

Este ejemplo describe un estudio de vacunas en adultos con glioma recurrente de grado II de la OMS. Los objetivos de este Ejemplo incluyen la recopilación de datos inmunológicos y de seguridad que pueden ser utilizados en estudios adicionales. Los pacientes del estudio descrito en este Ejemplo pueden ser seguidos durante un mínimo de 2 años, de modo que se puedan determinar de forma exploratoria las tasas reales de supervivencia general (OS) a los 2 años y de supervivencia libre de progresión (PFS) a los 6 meses y a los 2 años.

7.8.2.1 Inducción de la respuesta de las células T específicas de GAA

La tasa de respuesta y la magnitud de la respuesta inmunitaria en las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) postvacunas contra los péptidos GAA en respuesta a esta forma de vacuna pueden determinarse mediante ensayos de inmuno-manchas ligadas a la enzima IFN-y (ELISPOT) y tetrámero.

7.8.2.2 Seguridad

Se puede evaluar la incidencia y la gravedad de los eventos adversos asociados con el régimen de la vacuna, con una regla de detención temprana con base en la frecuencia de la Toxicidad Limitante del Régimen (RLT).

7.8.2.3 Respuesta clínica

La respuesta radiológica puede determinarse utilizando los criterios de respuesta estándar de la OMS. La supervivencia libre de progresión (PFS) a los 6 meses y a los 2 años puede evaluarse de forma exploratoria, con base en escaneos formación de imágenes de resonancia magnética (IRM) seriados.

7.8.2.4 Tejidos tumorales para correlación biológica

En el caso de los pacientes que desarrollan una progresión, se puede fomentar la biopsia/resección. Siempre que se disponga de tejidos tumorales postvacunales, se puede analizar el estado de expresión de GAA y la infiltración de células T específicas de GAA.

7.8.3 SELECCIÓN DE PACIENTES

7.8.3.1 Criterios de elegibilidad

Criterios patológicos - Los pacientes tienen astrocitoma supratentorial recurrente de grado II de la OMS, oligoastrocitoma u oligodendroglioma que está confirmado histológicamente por la biopsia o resección anterior, o en el momento de la reoperación (se permite la reoperación antes de la entrada en el estudio actual; sin embargo, el Decadron postoperatorio debe estar fuera durante al menos 4 semanas antes de la administración de la primera vacuna). Los pacientes de este estudio deben haber recibido previamente radioterapia de haz externo y/o quimioterapia. Con respecto a la terapia previa, los pacientes de este estudio deben haber recibido tratamiento para no más de 2 recaídas previas. La recaída se define como la progresión tras la terapia inicial (es decir, radiación /-quimio si se utilizó como terapia inicial). Por lo tanto, la intención es que los pacientes de este estudio hayan recibido 3 terapias previas (terapia inicial y tratamiento para 2 recaídas). Si el paciente fue sometido a una resección quirúrgica por enfermedad recidivante, y no se instituyó ninguna terapia anticancerosa hasta 12 semanas, y el paciente se somete a otra resección quirúrgica, esto se considera como 1 recaída.

Los pacientes de este estudio deben ser HLA-A2 positivos según la citometría de flujo.

Los pacientes de este estudio deben haberse recuperado de los efectos tóxicos de la terapia anterior: 4 semanas desde cualquier agente en investigación, 4 semanas desde la terapia citotóxica previa y/o al menos dos semanas desde la vincristina, 4 semanas desde las nitrosoureas, 3 semanas desde la administración de procarbazina, y 1 semana para agentes no citotóxicos, por ejemplo, interferón, tamoxifeno, talidomida, ácido cis-retinoico, etc. (el radiosensibilizador no cuenta). Con respecto a la radioterapia (RT) previa, deben pasar al menos 6 meses desde la finalización de la RT (o radiocirugía).

Los pacientes de este estudio deben tener más de 18 años.

Los pacientes de este estudio deben tener un estado de rendimiento de Karnofsky de > 60 (Apéndice I).

Las pacientes de este estudio en edad fértil deben tener pHCG sérica negativa documentada.

Los pacientes de este estudio deben estar libres de infecciones sistémicas. Los pacientes con infecciones activas (requieran o no terapia antibiótica) pueden ser elegibles después de la resolución completa de la infección. Los pacientes con terapia antibiótica deben dejar de tomar antibióticos durante al menos 7 días antes de comenzar el tratamiento.

Los pacientes de este estudio deben tener una función orgánica adecuada, medida por un recuento de glóbulos blancos > 2500/mm3; linfocitos > 400/mm3; plaquetas > 100.000/mm3, hemoglobina > 10,0 g/dL, AST, ALT, GGT, LDH, fosfatasa alcalina dentro de 2,5 x límite superior normal, y bilirrubina total < 2,0 mg/dL, y creatinina sérica dentro de 1,5 X límite superior normal. Los pacientes de este estudio deben tener pruebas de coagulación y la PT y la PTT deben estar dentro de los límites normales.

7.8.3.2 Criterios de exclusión

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si tienen presencia de gliomatosis cerebri, enfermedad metastásica leptomeníngea craneal o espinal.

Incluso si el diagnóstico inicial era un glioma de grado II de la OMS, si el diagnóstico patológico de la enfermedad recurrente demuestra la transformación a gliomas de grado superior (es decir, grado III o IV de la OMS), los pacientes deben ser excluidos de este estudio.

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si están sometidos a un tratamiento o medicación concurrente que incluya: radioterapia; quimioterapia; interferón (por ejemplo, Intron-A®); inyecciones de desensibilización a la alergia; factores de crecimiento (por ejemplo, Procrit®, Aranesp®, Neulasta®); interleucinas (por ejemplo, Proleukin®); y/o cualquier medicación terapéutica en investigación.

Los pacientes de este estudio no deben haber tenido trastornos autoinmunes previos que requieran una terapia citotóxica o inmunosupresora, ni trastornos autoinmunes con afectación visceral. También deben excluirse los pacientes de este estudio con un trastorno autoinmune activo que requiera estas terapias. La artritis leve que requiere medicamentos AINE no debe ser excluyente.

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si han utilizado inmunosupresores en las cuatro semanas anteriores a la entrada en el estudio o si prevén el uso de agentes inmunosupresores. La dexametasona, u otros medicamentos corticosteroides, si se utilizan en el periodo peri-operatorio y/o durante la radioterapia, deben ser reducidos por los pacientes y suspendidos al menos cuatro semanas antes de la administración de la primera vacuna del estudio. Los corticosteroides tópicos y los esteroides inhalados (por ejemplo: Advair®, Flovent®, Azmacort®) deberían ser aceptables.

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si tienen otro diagnóstico de cáncer, excepto que los siguientes diagnósticos pueden ser permitidos: cáncer de células escamosas de la piel sin metástasis conocida; cáncer de células basales de la piel sin metástasis conocida; carcinoma in situ de la mama (DCIS o LCIS); carcinoma in situ del cuello uterino; y/o cualquier cáncer sin metástasis a distancia que haya sido tratado con éxito, sin evidencia de recurrencia o metástasis durante más de 5 años.

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si tienen una adicción conocida al alcohol o a las drogas ilícitas. Dado que no se espera que los pacientes con inmunodeficiencia respondan a esta terapia, los pacientes seropositivos deben ser excluidos del estudio.

7.8.4 Vacuna peptídica

7.8.4.1 Péptidos

Los siguientes péptidos pueden incluirse en la formulación de la vacuna: IL-13Ra2345-3531A9V (ALPFGFILV; SEQ ID NO:3); EphA2^883-891(TLADFDPRV; SEQ ID NO:6); Survivin^96-104:M2 (LMLGEFLKL; SEQ ID NO:7); W T W m Y (YMFPNAPYL; SEQ ID NO:8); y Tetanus Toxoid (TetA830) (AQYIKANSKFIGITEL; SEQ ID NO:9).

Todos los péptidos pueden ser sintetizados y los péptidos sintéticos pueden ser purificados por HPLC. La identidad de los péptidos sintéticos puede confirmarse verificando su masa y sus secuencias de aminoácidos por espectrometría de masas. Cada lote de péptidos puede ser evaluado según lo exigido por la FDA en cuanto a identidad, pureza, esterilidad y pirogenicidad.

Los péptidos pueden ser amparados bajo condiciones GMP y guardados a -70 °C. La estabilidad de los péptidos liofilizados puede comprobarse anualmente mediante espectroscopia de masas.

7.8.4.2 Otros agentes

La montanida ISA-51 (SEPPIC Inc., Fairfield, NJ) puede utilizarse como agente adicional en las vacunas peptídicas.

7.8.4.3 Dosificación y preparación

Una solución acuosa (500 j l ) que contiene cada uno de los cuatro péptidos GAA restringidos por HLA-A2 (300 jg/péptido) y el péptido tetánico (Peptide-tet; 200 jg ) puede mezclarse 1/1 con Montanide ISA-51 para formar una emulsión de agua en aceite (es decir, el volumen total/inyección es de 1 ml).

7.8.4.4 Administración

Los pacientes de este estudio pueden ser vacunados por vía subcutánea en la parte superior del brazo derecho o izquierdo con ganglios axilares de drenaje intactos. En caso de que los pacientes no posean ganglios linfáticos axilares intactos como ganglios de drenaje, las vacunas pueden administrarse en la parte superior del muslo del mismo lado con ganglios linfáticos inguinales intactos.

La vacuna puede administrarse en las semanas 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 y 21.

7.8.5 Poli-ICLC

El Poli-ICLC puede ser preparado y envasado en las instalaciones GMP de Bioserv, Corporation (San Diego, California). El Poli-ICLC puede suministrarse en viales que contienen 1cc de solución translúcida con una concentración de 2 mg por cc. El Poli-ICLC es estable a temperatura ambiente durante varios días, pero puede almacenarse refrigerado a aproximadamente 4,44 °C.

7.8.5.1 Dosificación y administración

El Poli-ICLC puede administrarse por vía intramuscular en dosis de 20 jg/kg y hasta 1640 jg/inyección, con dos inyecciones en los días 0 y 4 después de cada vacunación.

El primer curso de administración de poli-ICLC (20 jg/kg i.m. y hasta 1640 jg/inyección) puede administrarse el día de la primera vacuna GAA/TT y el día 4 después de la vacuna. Para cada una de las siguientes vacunaciones repetidas (en las semanas 3, 6, 9, 12, 15, 18 y 21), se puede administrar poli-ICLC (20 jg/kg i.m. y hasta 1640 jg/inyección) el día de la vacuna y el día 4 después de la vacuna.

Con respecto a los sitios de inyección, como se espera que el poli-ICLC mejore el proceso de presentación de antígenos en los ganglios linfáticos de drenaje, el poli-ICLC debe ser administrado i.m. dentro de la proximidad del sitio de inyección de péptidos anterior (por ejemplo, a menos de 3 cm del centro de los sitios de inyección de péptidos anteriores).

El Poli-ICLC debe administrarse por vía intramuscular (i.m.) utilizando una técnica estéril, tal y como se suministra en el vial, y en la cantidad prescrita para el peso del paciente (hasta 1640 jg/inyección). Los signos vitales pueden ser monitorizados antes y durante al menos 20 minutos después del primer tratamiento.

7.8.6 Plan de tratamiento

El estudio descrito en este Ejemplo puede emplear dos cohortes de pacientes para evaluar la inmunogenicidad, la seguridad y la eficacia clínica de la vacuna de péptidos GAA/TT y poli-ICLC en pacientes HLA-A2+ con gliomas recurrentes de grado II de la OMS. Dado que la vacuna peptídica se secuestra localmente y la respuesta inmunitaria se produce principalmente a nivel local y en los ganglios linfáticos de drenaje, no debería ser necesario aumentar la dosis de la vacuna proporcionalmente al tamaño (por peso o superficie corporal) del receptor, como podría hacerse con un fármaco cuyo efecto está relacionado con su distribución en el líquido corporal. En cuanto a la dosis de poli-ICLC, puede emplearse una dosis fija (20 pg/kg/inyección y hasta 1640 pg/inyección), que ha demostrado ser segura e inducir respuestas biológicas en pacientes con glioma maligno (véase, por ejemplo, Salazar et al., Neurocirugía, 38: 1096-1103, 1996).

7.8.6.1 Calendario

Los pacientes pueden ser tratados con inyecciones subcutáneas de vacunas GAA/TT en las semanas 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 y 21. Se puede administrar poli-ICLC i.m. (20 pg/kg i.m. y hasta 1640 pg) el día de, y el día 4 después de cada vacuna (por ejemplo, si la vacuna se administra el jueves, se puede administrar poli-ICLC el día de la vacuna y el lunes siguiente). Cada vacuna puede administrarse dentro de las 2 horas anteriores o posteriores a la administración i.m. de poli-ICLC.

Los pacientes pueden ser evaluados para cualquier posible evento adverso, toxicidad limitante del régimen (RLT) así como respuestas clínicas/radiológicas por medio de visitas clínicas y escaneo de IRM. Los escaneos de IRM pueden realizarse en las semanas 0, 12 y 24. Si la gammagrafía de la semana 12 demuestra una progresión tumoral inequívoca, el paciente puede ser retirado.

Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) obtenidas antes de la vacuna inicial pueden utilizarse como muestra basal. Si los pacientes demuestran alguna respuesta positiva en los dos ensayos inmunológicos (ELISPOT o Tetramer sin RLT o progresión tumoral, a estos pacientes se les pueden ofrecer vacunas adicionales de GAA/TT (véase, por ejemplo, la sección 7.8.6.2) comenzando en cualquier momento entre la semana 34-40, y cada 3 meses a partir de entonces hasta que los pacientes demuestren progresión tumoral, pérdida de la respuesta inmunitaria o RLT.

7.8.6.2 Terapia adicional

En las semanas 0 (línea base), 12, 15, 18, 21 y 24, las PBMC de los pacientes pueden ser evaluadas para detectar la presencia de respuestas de células T específicas de GAA contra los péptidos GAA. Si se observa una respuesta de este tipo para cualquiera de los péptidos GAA, el paciente puede someterse a vacunaciones adicionales con los GAA que demostraron la respuesta persistente, así como a 3l poli-ICLC, comenzando en cualquier momento entre la semana 34-40, y cada 12 semanas a partir de entonces hasta 2 años después de la vacunación inicial. Pueden obtenerse muestras adicionales de PBMC cada 12 semanas (en las mismas visitas de administración de la vacuna) para el seguimiento inmunológico. Las vacunas adicionales pueden ser canceladas en cualquiera de las siguientes condiciones: 1) progresión del tumor; 2) RLT; o 3) respuesta inmunológica negativa en dos momentos consecutivos.

7.8.6.3 Modificación de la dosis

7.8.6.3.1 Modificación de la dosis para el poli-ICLC

En el caso de cualquier síntoma similar a la gripe de grado 2 o mayor, incluyendo fiebre y fatiga, el poli-ICLC puede suspenderse hasta que los síntomas vuelvan a ser de grado 0. Si se producen síntomas gripales de grado 2 o superior el día de la vacunación, y si los síntomas no vuelven a ser de grado 0 el día 4 después de la vacunación, se puede omitir la siguiente administración de poli-ICLC el día 4 después de la vacunación. Si el paciente está libre de síntomas en el día 4 (Grado 0), se puede reanudar el policlínico al 50 % de la dosis original. Si se producen síntomas gripales de grado 2 o superior tras la administración de poli-ICLC en el día 4 después de una vacunación, en el siguiente ciclo de vacunación, se pueden administrar dos administraciones de poli-ICLC (en el día 0 y 4 después de las vacunas) al 50 % de la dosis original. Se puede administrar un tratamiento previo con acetaminofén de 650-1000 mg o con cualquier AINE. Si se tolera bien la dosis adicional, se puede reinstaurar posteriormente la dosis original.

En el caso de una elevación de las enzimas hepáticas >4 veces la línea base, o cualquier otro efecto secundario intolerable imprevisto de grado 2 o mayor, el poli-ICLC puede ser suspendido hasta que esa toxicidad se haya reducido a grado 1 o menos. A continuación, se puede volver a administrar Poli-ICLC a la mitad de la dosis original, y el paciente puede ser observado de cerca. Si no se puede reiniciar el poli-ICLC en el siguiente ciclo de vacunas, el paciente puede ser retirado para la RLT.

Para los pacientes que demostraron un grado 3 o menor de linfopenia al entrar en el estudio (nuestro criterio de elegibilidad requiere 400 células/pl), la aparición o la presencia continuada de linfopenia de grado 3 durante el estudio no obliga a interrumpir el poli-ICLC. Sin embargo, el poli-ICLC puede suspenderse en caso de linfopenia de grado 4. Además, si se sospecha fuertemente de la atribución de poli-ICLC, incluso para la linfopenia de grado 3, se pueden suspender las administraciones de poli-ICLC. En estos casos, se puede permitir la readministración a la mitad de la dosis original cuando los recuentos absolutos de linfocitos vuelvan a ser de al menos 400/pl.

Los pacientes pueden permanecer con la dosis original para las toxicidades de grado 1. Sin embargo, la dosis puede reducirse al 50 % en caso de toxicidad hematológica o no hematológica de grado 2 (excepto en caso de fiebre y fatiga transitoria, como se ha indicado anteriormente en esta sección). Si en el nivel de dosis del 50 % no hay toxicidad durante un mínimo de 2 semanas, la dosis puede ser escalada de nuevo a la dosis inicial. Las toxicidades subsiguientes, si se producen, pueden requerir una reducción de la dosis al 50 %, y no se pueden permitir más escaladas. Si la toxicidad reaparece con la dosis reducida, el paciente puede dejar el tratamiento.

7.8.6.3.2 Retraso en la dosificación de las vacunas peptídicas

En circunstancias en las que se suspende la administración de poli-ICLC, si el evento no es atribuible a la vacuna de péptidos/ISA-51, las administraciones de la vacuna pueden no ser suspendidas. Si el evento es atribuible tanto al poli-ICLC como a las vacunas peptídicas, ambas pueden ser suspendidas. Si se considera que un acontecimiento adverso se debe únicamente a las vacunas de péptidos/ISA-51, pero no al poli-ICLC, se pueden suspender las administraciones de la vacuna y del poli-ICLC. En circunstancias en las que la evaluación de un acontecimiento adverso es limitada, tal como por ejemplo por una enfermedad intercurrente, o cuando se requieren estudios de laboratorio para evaluar otras causas de toxicidad, el programa de vacunación puede interrumpirse durante un máximo de 4 semanas. El retraso en la administración de una vacuna de hasta 4 semanas no se considerará una violación del protocolo si se debe a un acontecimiento adverso, independientemente de su atribución. Si una o más vacunas se retrasan 4 semanas debido a un acontecimiento adverso, independientemente de la atribución, el tratamiento debe interrumpirse.

Los pacientes pueden ser observados por la toxicidad limitante del régimen (RLT) a lo largo del estudio. Los siguientes se consideran RLT si se consideran posibles, probables o definitivamente asociados con el tratamiento.

En caso de que se produzcan, los pacientes individuales pueden ser retirados del estudio y no se pueden administrar más inyecciones.

> Grado 2 o más de broncoespasmo o uticaria generalizada (hipersensibilidad).

> Reacción alérgica de grado 2 o superior, tal como eritrodermia exfoliativa, anafilaxia o colapso vascular. > Grado 2 o más de enfermedad autoinmune (por ejemplo, hipotiroidismo, encefalitis autoinmune).

Cualquier toxicidad > Grado 3 posible, probable o definitivamente relacionada con la vacuna, con especial atención a los siguientes eventos.

> Grado 3 de reacción en el lugar de la inyección debido a la administración de péptido-vacuna o poli-ICLC. > Grado 3 de toxicidad hematológica o hepática.

> Grado 3 de neurotoxicidad: signos y síntomas que pueden indicar una progresión tumoral o una respuesta inmunitaria inflamatoria (es decir, una pseudoprogresión tumoral) que requiere una biopsia o resección con hallazgos patológicos de infiltración inflamatoria/linfocítica.

> Grado 3 de náuseas y vómitos sin suficiente profilaxis antiemética no se consideran RLT.

Retrasos en la dosificación > 4 semanas para las vacunas poli-ICLC o peptídicas.

La terapia puede interrumpirse por las siguientes razones: (i) Toxicidad limitante del régimen - como se ha definido anteriormente; (ii) Progresión de la enfermedad - al menos un aumento del 20 % en la suma del diámetro más largo de la lesión objetivo o la aparición de realce de contraste en un tumor que anteriormente no presentaba realce. Sin embargo, si se sospecha que el pseudotumor ha progresado, se puede poner al paciente en tratamiento con dexametasona, hasta 4 mg/día, y se le vuelve a hacer la prueba 4-8 semanas después. Si necesitan más de 4 mg/día de dexametasona, o si la repetición del estudio de formación de imágenes sigue cumpliendo los criterios de progresión de la enfermedad, el paciente puede ser retirado del estudio y se puede interrumpir el tratamiento posterior. Sin embargo, si su dosis de esteroides es < 4mg/día y si su repetición de imágenes no cumple los criterios de progresión de la enfermedad, entonces el paciente puede continuar en el estudio y recibir el tratamiento del estudio según lo prescrito en el mismo. Cualquier caso de sospecha de progresión tumoral o pseudotumoral debe ser revisado para determinar si el sujeto debe permanecer en el estudio. (iii) Enfermedad intercurrente que impida la administración ulterior de la vacuna o la administración de poli-ICLC. (iv) Embarazo: Las pacientes embarazadas seguirán siendo objeto de seguimiento mientras dure el embarazo.

7.8.6.4 Duración del tratamiento

En ausencia de retrasos en el tratamiento debido a eventos adversos, el tratamiento puede continuar durante 21 semanas (8 vacunas) o hasta que se aplique uno de los siguientes criterios: Toxicidad limitante del régimen (RLT); progresión de la enfermedad; y/o enfermedad intercurrente que impida seguir administrando el tratamiento.

7.8.6.5 Tratamiento concomitante

7.8.6.5.1 Aceptable

Para la fiebre, se puede utilizar acetaminofén (325 mg en tabletas, 1 o 2 p.o. cada 4 horas). El tratamiento previo de los pacientes con acetaminofén puede ser instituido según lo justifiquen los efectos secundarios del poli-ICLC. Las fiebres que duran más de 8 horas después del tratamiento pueden ser evaluadas en términos de infección potencial.

Para el dolor local leve, se pueden planificar opiáceos orales (oxicodona, 5 -10 mg p.o. cada 3-4 horas). El dolor que es de grado más que leve-moderado puede ser investigado para otras fuentes que no sean la terapia, y manejado en consecuencia.

La dexametasona (o medicamentos corticoesteroides similares) no debe utilizarse durante al menos 4 semanas antes del inicio de la terapia de la vacuna/poli-ICLC (Semana 0). La dexametasona (hasta 4 mg/día) puede utilizarse en caso de progresión del pseudotumor, y reducirse o suspenderse lo antes posible.

Los medicamentos anticonvulsivos deben usarse según lo indicado.

Si es necesario, se pueden administrar antieméticos.

Otros medicamentos aceptables pueden ser: Corticosteroides tópicos; antiinflamatorios no esteroideos; antihistamínicos (por ejemplo, Claritin®, Allegra®); medicamentos crónicos, excepto los enumerados en la sección 7.8.6.5.2; vacunas contra la gripe (deben administrarse al menos dos semanas antes del inicio de las vacunas del estudio o al menos dos semanas después de la 8va (última) vacuna); y/o medicamentos corticosteroideos administrados por vía parenteral o por inhalación (por ejemplo: Advair®, Flovent®, Azmacort®).

7.8.6.5.2 Inaceptable

Los medicamentos inaceptables pueden incluir la terapia con interferón (por ejemplo, Intron-A®); la quimioterapia; las inyecciones de desensibilización de alergias; los factores de crecimiento (por ejemplo, Procrit®, Aranesp®, Neulasta®); las interleucinas (por ejemplo, Proleukin®); otros medicamentos en investigación; y/o las drogas ilícitas.

7.8.7 ESTUDIOS CORRELATIVOS/ESPECIALES

7.8.7.1 Control inmunológico

7.8.7.1.1 Ensayos de inmunoabsorción enzimática (ELISPOT)

Las frecuencias de los precursores de linfocitos T que responden a los antígenos asociados al glioma (GAA) en las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) antes y después de la administración de la vacuna con base en el péptido GAA pueden medirse mediante un ensayo ELISPOT. Las respuestas biológicas medidas por ELISPOT pueden hacerse en el mismo punto de tiempo al menos para un paciente individual para evitar la variabilidad entre ensayos. La vacunación exitosa estimula poblaciones clonales de células T que son capaces de secretar citoquinas de forma específica al antígeno y restringida al CMH. El ensayo ELISPOT puede utilizarse para evaluar las respuestas inmunitarias específicas de ^gA^ade las poblaciones de células T CD8+, así como de las células T CD4+ que reaccionan contra el péptido TT auxiliar. La producción de IFN-y puede entonces evaluarse para valorar la respuesta de las células T de tipo 1.

Se puede considerar que un sujeto ha respondido, si en cualquiera de los dos puntos temporales consecutivos post vacuna contra el mismo antígeno[s] (Semanas 12, 15, 18, 21 y 24), el número de manchas es el doble que, en la línea base, y hay al menos 10 manchas/20.000 células, y si el número de las manchas post-vacuna es al menos tres veces la desviación estándar del valor pre-vacuna. La respuesta puede ser a cualquier antígeno.

7.8.7.1.2 Análisis de tetrámeros de células T reactivas a GAA en PBMC de pacientes

Los análisis de tetrámeros permiten evaluar la presencia de células T CD8+ específicas de GAA en la sangre periférica con una gran sensibilidad sin necesidad de reestimular las células in vitro. Se espera, con base en los datos anteriores disponibles de pacientes con glioma maligno, que se pueda observar un aumento significativo (un logaritmo o más) en la frecuencia de células T CD8+ que responden al péptido en algunos, pero no todos, los pacientes inmunizados con vacunas con base en antígenos tumorales. De manera exploratoria, estas PBMCs también pueden ser evaluadas para la expresión de superficie de un receptor de integrina antígeno muy tardío (VLA)-4, que ha sido implicado para conferir guiado de células T a los tumores del SNC (véase, por ejemplo, Zhu et al., J.Transl.Med., 5: 10, 2007) y los receptores de quimioquinas (por ejemplo, CXCR3 y CCR5). Los procedimientos para el análisis del tetrámero están bien establecidos.

Los ensayos de tetrámeros pueden realizarse al inicio y en 5 puntos de tiempo después de las vacunaciones (Semanas 12, 15, 18, 21 y 24). Se puede definir una respuesta positiva en un solo punto temporal para un péptido como (1 B)% de todas las células CD8+ positivas por el ensayo de tetrámero, donde B es el porcentaje positivo al inicio, que suele ser inferior al 0,1 %. De forma análoga a la definición de respuesta ELISPOT, se puede considerar que un paciente ha respondido si tiene dos respuestas consecutivas de un solo punto de tiempo para cualquier péptido.

7.8.7.1.3 Análisis de citometría de flujo de subconjuntos de linfocitos

Pueden evaluarse los números de células T CD4+ y CD8+, así como de células reguladoras T CD4+/Foxp3+ en puntos temporales seriados pre y post-vacunas.

7.8.7.1.4 Análisis de autoinmunidad en sueros

Los sueros almacenados pueden ser evaluados para detectar la presencia de autoanticuerpos.

7.8.7.2 Evaluación de los tejidos tumorales primarios y recurrentes

La expresión de GAA en los tejidos tumorales disponibles de los pacientes puede ser evaluada (ya sea antes de la vacuna o después de la progresión post-vacuna; o ambos) por inmunohistoquímica (IHC) y reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR).

Si los tumores reaparecen después de las vacunaciones, puede ser crítico evaluar cómo los tumores escapan a los efectos de las vacunas. Para ello, pueden evaluarse las siguientes cuestiones específicas en la medida en que la disponibilidad de los tejidos lo permita: (i) Pérdida de antígeno: IHC y RT-PCR pueden utilizarse para evaluar si los tumores recurrentes expresan los GAAs, el HLA-A2 y los componentes de la maquinaria de procesamiento de antígenos, tal como el transportador asociado al procesamiento de antígenos; (ii) aumento de la regulación de las moléculas antiapoptóticas: aunque la Survivina puede ser el objetivo, otras moléculas antiapoptóticas pueden estar reguladas, por ejemplo, cFLIP (proteína inhibidora de la enzima convertidora de IL-1p similar al dominio de muerte asociado a Fas); y (iii) infiltración de células inmunitarias: una de las razones por las que los tumores pueden escapar a una respuesta inmunitaria inducida por la vacuna es porque las células T reactivas no se infiltran en el tumor. Para examinar esto, siempre que se disponga de tejidos tumorales recién resecados (no fijados ni congelados), se pueden aislar los linfocitos infiltrantes del tumor (TIL) y caracterizar su número, fenotipo y especificidad de antígeno utilizando tetrámeros HLA-A2 para cada uno de los GAA. Utilizando la citometría de flujo multicolor, la función y la viabilidad de los TlLs tetrámero+ pueden determinarse mediante la tinción para perforina/IFN-Y y Annexin-V, respectivamente. Los tejidos de control pueden incluir tumores anteriores a la vacuna (si están disponibles) y tumores recurrentes de pacientes que no participan en el estudio. Estos estudios pueden permitir evaluar si las células T inducidas por la vacuna se dirigen eficazmente al lugar del tumor cerebral y mantienen su función y viabilidad.

7.8.8 PARÁMETROS DEL ESTUDIO

Este estudio puede realizarse de forma ambulatoria, con pacientes programados para ser evaluados en las semanas 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 y 24. Después de este periodo, si los pacientes no reciben vacunas adicionales, los pacientes pueden salir del estudio, y se les puede hacer un seguimiento clínico cada 2-4 meses a partir de entonces, como se suele hacer con los pacientes con el mismo tipo de tumor. Si los pacientes tienen tumores que progresan, pueden ofrecerse otras terapias, tales como la quimioterapia o la resección. Si los pacientes reciben vacunas adicionales, dichas vacunas adicionales pueden administrarse cada 12 semanas, y puede realizarse un seguimiento clínico, inmunológico y radiológico (IRM) en cada visita (q12 semanas) hasta que los pacientes se retiren. Los sujetos con una respuesta completa pueden ser tratados de nuevo con dos vacunas adicionales, con intervalos de 12 semanas, y luego ser seguidos. Las vacunaciones pueden interrumpirse en el caso de pacientes con enfermedad progresiva o toxicidad inaceptable en cualquier momento durante las vacunaciones programadas.

7.8.8.1 Pretratamiento (datos de cribado y de referencia)

Los siguientes procedimientos pueden llevarse a cabo antes de proceder al tratamiento: consentimiento informado antes de iniciar el cribado; tipificación del HLA (evaluación citométrica de flujo para la positividad del HLA-A2); documentación del diagnóstico (patológico); historial completo y examen físico (con signos vitales y peso), incluyendo exámenes neurológicos y estado de rendimiento; se deben designar los sitios de vacunación con la confirmación de los ganglios linfáticos de drenaje intactos; se debe registrar la información demográfica; se deben evaluar el CBC y las plaquetas con diferencial; se debe evaluar el PT/PTT; se debe evaluar la química, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina; se deben evaluar la GGT, el fósforo y el magnesio; debe tomarse sangre para ensayos in vitro; se deben realizar la HGBA1C para pacientes con diabetes mellitus; se deben realizar un ECG y un ecocardiograma para los pacientes con síntomas cardíacos, antecedentes o enfermedad actual; se debe realizar un análisis de orina; se debe realizar una IRM del cerebro para evaluar el estado basal de la enfermedad; y/o se debe realizar una prueba de embarazo de beta-HCG en suero a las mujeres en edad fértil.

7.8.8.2 Evaluación durante el tratamiento

Los siguientes procedimientos pueden llevarse a cabo a medida que avanza el tratamiento. Preadministración (Semanas 0,3,6,9,12,15,18 y 21 antes de la administración de la vacuna el día de la vacunación): historia y examen físico, incluyendo signos vitales, peso, estado de rendimiento de Karnofsky y función neurológica; se debe tomar sangre para ensayos in vitro; se debe evaluar la química, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina (Excepto en la Semana 0); se deben evaluar los niveles de DEA si está clínicamente indicado; se deben examinar los pacientes en busca de eventos adversos de las dosis anteriores, para incluir la evaluación neurológica y el examen de la piel (sitios de inyección); y/o se debe realizar una IRM (sólo en la Semana 12 entre estas visitas de inyección de la vacuna).

Después de la administración de la vacuna, todos los pacientes deben ser observados de cerca para detectar eventos adversos durante al menos 20 minutos después de cada administración de la vacuna de péptidos GAA. El mismo día, el poli-ICLC (i.m. 20 mg/kg) puede administrarse dentro de las 2 horas anteriores o posteriores a la vacuna, y controlarse al menos 20 minutos después de la inyección de poli-ICLC.

7.8.8.3 Evaluación de la semana 24 (después de las 8 vacunas)

Después de completar el ciclo de vacunación, se pueden realizar los siguientes procedimientos historial y examen físico, incluyendo signos vitales, peso, estado de rendimiento de Karnofsky y función neurológica; debe tomarse sangre para ensayos in vitro (excepto para la Semana 3, 6 y 9); se deben evaluar el hemograma y las plaquetas con diferencial (excepto para la semana 0); se debe evaluar la química, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina (excepto en la Semana 0); se deben evaluar los niveles de AED si está clínicamente indicado; los pacientes deben ser examinados para detectar eventos adversos de dosis anteriores, para incluir la evaluación neurológica y el examen de la piel (sitios de inyección); y/o debe realizarse una IRM.

7.8.8.4 Evaluación con vacunas adicionales (casos con vacunas adicionales)

Antes de la administración con vacunas adicionales, se pueden realizar los siguientes procedimientos: historial y examen físico, incluyendo los signos vitales, el peso, el estado de rendimiento de Karnofsky y la función neurológica; debe tomarse sangre para ensayos in vitro (excepto para la Semana 3, 6 y 9); se deben evaluar el hemograma y las plaquetas con diferencial (excepto para la Semana 0); se debe evaluar la química, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina (excepto en la Semana 0); se deben evaluar los niveles de AED si está clínicamente indicado; los pacientes deben ser examinados para detectar eventos adversos de dosis anteriores, para incluir la evaluación neurológica y el examen de la piel (sitios de inyección); y/o debe realizarse una IRM.

Después de la administración con vacunas adicionales, todos los pacientes deben ser observados de cerca para detectar eventos adversos durante al menos 20 minutos después de cada vacunación. Las vacunas adicionales pueden ser canceladas en cualquiera de las siguientes condiciones: 1) progresión del tumor; 2) RLT; o 3) respuesta inmunológica negativa en dos momentos consecutivos tras el inicio de las vacunas adicionales.

7.8.9 MEDICIÓN DEL EFECTO

7.8.9.1 Objetivos

7.8.9.1.1 Inmunogenicidad

La tasa de respuesta y la magnitud de las respuestas de las células T CD8+ contra los péptidos GAA en las PBMC postvacunas pueden evaluarse utilizando IFN-y- ELISPOT, y el análisis de tetrámeros por citometría de flujo como ensayo secundario.

Los ensayos ELISPOT indican el estado funcional de las células T específicas de antígeno como expresión de citoquinas. Los análisis de citometría de flujo que utilizan tetrámeros permiten una estimación relativamente precisa de la frecuencia de las células T que se unen al antígeno sin una manipulación importante in vitro de las PBMC derivadas del paciente, así como los análisis de fenotipo, tal como la expresión del receptor de referencia (integrinas) en las células T específicas del antígeno.

Los ensayos biológicos para medir la respuesta en sangre periférica pueden llevarse a cabo en el mismo punto de tiempo para evitar la variabilidad entre ensayos.

Utilizando la citometría de flujo, también puede evaluarse el número de subconjuntos de linfocitos, tal como las células T CD4+ y las células T reguladoras CD4+/Foxp3+. Además, en los pacientes que se someten a una citorreducción quirúrgica del tumor que progresa, si el tejido tumoral está disponible, la infiltración de los CTL específicos de antígeno puede evaluarse mediante citometría de flujo de los linfocitos que infiltran el tumor con tetrámeros MHC específicos del epítopo.

7.8.9.1.2 Seguridad

Se puede determinar la seguridad de la administración de los de los cuatro péptidos del epítopo del antígeno asociado al glioma (GAA) restringido por HLA-A2 junto con un epítopo de células T auxiliares derivado del toxoide tetánico (TT) restringido por el MHC de clase II y poli-ICLC i.m. en pacientes con gliomas de grado II recurrentes.

Los criterios de valoración pueden incluir la incidencia y la gravedad de los acontecimientos adversos, utilizando criterios estándar, así como un seguimiento clínico estrecho como el que se realizaría normalmente en este grupo de pacientes tras las vacunaciones. El régimen puede considerarse inaceptablemente tóxico si >33 % de los pacientes de una cohorte determinada desarrollan RLT.

7.8.9.1.3 Respuesta y supervivencia libre de progresión

La recurrencia del tumor puede ser evaluada mínimamente en las semanas 12 y 24, y cada 3 meses a partir de entonces, utilizando escaneos de IRM con realce de contraste. Dado que los gliomas de bajo grado son tumores infiltrantes que normalmente no realzan con la administración de contraste, para la evaluación de la respuesta y la supervivencia libre de progresión, el tumor (es decir, la lesión objetivo) puede medirse a partir de las imágenes de IRM T2 o FLAIR. En caso de que haya una lesión que aumente en la línea base, se puede discutir cuidadosamente si la información patológica como tumor de grado II de la OMS representa realmente el estado del tumor. Si el tumor que realza se sigue considerando de grado II, el tamaño de la lesión que realza puede utilizarse para la evaluación. Además, como se indica más adelante, la aparición de un realce en un tumor que antes no lo tenía se considera enfermedad progresiva (PD).

(A) Respuesta (de acuerdo con los criterios RECIST)

Respuesta completa (CR): Desaparición de todas las lesiones objetivo.

Respuesta parcial (PR): Al menos una disminución del 30% en la suma del diámetro más largo (LD) de las lesiones objetivo, tomando como referencia la suma del LD de referencia.

Enfermedad progresiva (PD): Al menos un aumento del 20% en la suma de los LD de las lesiones objetivo, tomando como referencia la menor suma de LD registrada desde el inicio del tratamiento o la aparición de un realce de contraste en un tumor que anteriormente no presentaba realce. Debido a la posibilidad de que se produzca una pseudoprogresión tumoral, los pacientes pueden ser sometidos a dosis bajas de esteroides y se les vuelve a hacer una prueba de imagen antes de declarar que tienen PD.

Enfermedad estable (SD): Ni una contracción suficiente para calificar como PR ni un aumento suficiente para calificar como PD, tomando como referencia la suma más pequeña de LD desde el inicio del tratamiento.

(B) Supervivencia general (OS) y supervivencia sin progresión (PFS)

PFS se define como la duración del tiempo desde el inicio del tratamiento hasta el momento de la progresión o la muerte. Todos los pacientes pueden ser seguidos durante un mínimo de 2 años, de modo que se pueda determinar su OS y PFS reales a los 2 años.

7.8.9.1.4 Análisis de los tejidos tumorales tras las vacunaciones

Es posible que no se disponga de tejidos tumorales de todos los pacientes del estudio. Sin embargo, los siguientes aspectos pueden ser evaluados de manera exploratoria en todos los tejidos tumorales disponibles obtenidos antes y/o después de las vacunas: (i) Pérdida de antígenos; (ii) aumento de la regulación de moléculas antiapoptóticas; y (iii) infiltración de células inmunitarias.

7.8.10 CONSIDERACIONES ESTADÍSTICAS

7.8.10.1 Evaluación de las respuestas inmunológicas

La evaluación de la respuesta inmunitaria puede emplear tanto ensayos de IFN-^yELISPOT como de tetrámeros. Un respondedor puede definirse como un paciente que ha respondido en los ensayos de IFN-y ELISPOT o tetrámero. Se puede considerar que una cohorte merece una investigación más profunda si hay al menos 4 respuestas en los 9 sujetos. Este criterio tiene la propiedad de que si la tasa de respuesta verdadera es < 17 %, hay < 5 % de probabilidad de observar 4 o más respuestas, y que si la tasa de respuesta verdadera es >66 %, hay <5 % de probabilidad de observar 3 o menos respuestas.

7.8.10.2 Documentación y evaluación de la seguridad

Los criterios de terminología común del NCI para los eventos adversos (AE) (CTCAE 3.0) pueden ser utilizados para evaluar la toxicidad; la toxicidad puede ser considerada como un evento adverso que está posible, probable o definitivamente relacionado con el tratamiento. El grado máximo de toxicidad para cada categoría de interés puede registrarse para cada paciente y los resultados resumidos pueden tabularse por categoría y grado.

Para la seguridad, se puede considerar que el régimen es excesivamente tóxico si, en cualquier momento, la tasa observada de toxicidad limitante del régimen (RLT) > 33 % y se han observado al menos 2 RLT.

El diseño del estudio tiene las siguientes propiedades: si la tasa verdadera de RLT es > 45 %, hay al menos 90 % de probabilidad de que la acumulación se detenga; si la tasa verdadera de RLT es <9 %, hay 90 % de probabilidad de que la acumulación no se detenga, y que el régimen pueda considerarse seguro.

7.8.10.3 Evaluación de los criterios de valoración clínicos

Todos los pacientes pueden ser seguidos durante un mínimo de 2 años, de modo que su supervivencia general (OS) real a 2 años, la supervivencia libre de progresión (SLP) y las tasas de respuesta pueden ser tabuladas como criterios de valoración exploratorios. PSF se define como el intervalo de tiempo desde el inicio de la terapia hasta la progresión, con base en escaneos seriados de IRM. Si se considera oportuno, los análisis exploratorios pueden investigar la relación de la respuesta inmunitaria con la respuesta de formación de imágenes y OS/PFS (mediante la prueba exacta de Fisher y la prueba de rango logarítmico, respectivamente).

7.8.10.4 Datos demográficos

Se pueden proporcionar estadísticas descriptivas de referencia sobre todos los pacientes evaluables para las variables demográficas (edad, sexo, raza/etnia), el estado de rendimiento de Karnofsky, el estadio de la enfermedad y el estado en el momento de la inscripción (enfermedad estable, enfermedad progresiva), y/o los regímenes de tratamiento utilizados previamente.

7.9 EJEMPLO 9

Este ejemplo describe un estudio para evaluar los efectos de las vacunaciones con antígenos-péptidos de glioma restringidos por HLA-A2 en combinación con la administración de poli-ICLC para pacientes con astrocitomas y oligoastrocitomas de alto riesgo de grado II de la OMS.

7.9.1. JUSTIFICACIÓN

Este Ejemplo describe un estudio de un régimen de vacunación que está diseñado para inducir eficientemente respuestas de células T antitumorales en pacientes con astrocitoma y oligoastrocitoma de grado II de la OMS de "alto riesgo"; es decir, pacientes con una probabilidad >50 % de progresión 5 años después de la cirugía sola o de la cirugía más radioterapia postoperatoria. El régimen descrito en el estudio proporcionado en este Ejemplo combina inyecciones subcutáneas de antígenos asociados a gliomas (GAA) derivados de linfocitos T citotóxicos (CTL) con la administración intramuscular (i.m.) simultánea de poli-ICLC.

Los adultos con LGG supratentorial tienen un riesgo significativo (24 %) de progresión tumoral 2 años después del tratamiento con cirugía o cirugía seguida de RT. Para los subconjuntos desfavorables de estos pacientes, el riesgo de progresión a dos años es del 40-50 %. El estudio descrito en este Ejemplo tiene un potencial inmunoprofiláctico e inmunoterapéutico para reducir el riesgo de recidiva tumoral, lo que puede traducirse en una mejora de la supervivencia. Desde el punto de vista terapéutico, el enfoque de la inmunoterapia puede suprimir la expansión de las células tumorales de bajo grado II de crecimiento indolente. De forma profiláctica, el enfoque puede prevenir la transformación anaplásica, que se produce en aproximadamente la mitad de los LGG recurrentes. La tasa de crecimiento más lenta de los LGG (en contraste con los gliomas malignos) debería permitir un tiempo suficiente para repetir múltiples inmunizaciones, lo que podría llevar a la inducción de altos niveles de inmunidad específica contra los GAA. Además, se ha demostrado que el poli-ICLC potencia los efectos de la vacuna en modelos preclínicos de tumores cerebrales (véase, por ejemplo, Zhu et al., J.Transl.Med., 5: 10, 2007), y ser seguro en pacientes con glioma maligno (véase, por ejemplo, Salazar et al., Neurosurgery, 38: 1096-1103, 1996). Por lo tanto, nuestra hipótesis es que esta forma de vacuna en combinación con el tratamiento de poli-ICLC inducirá una potente respuesta inmunitaria contra el glioma, y será segura.

7.9.2 OBJETIVOS

Este Ejemplo describe un estudio de vacunas en adultos con astrocitoma u oligoastrocitoma de grado II de la OMS. Los objetivos de este Ejemplo incluyen la recopilación de datos inmunológicos y de seguridad que pueden ser utilizados en estudios adicionales. Los pacientes del estudio descrito en este Ejemplo pueden ser seguidos durante un mínimo de 2 años, de modo que se puedan determinar de forma exploratoria las tasas reales de supervivencia general (OS) a los 2 años y de supervivencia libre de progresión (PFS) a los 6 meses y a los 2 años.

7.9.2.1 Inducción de la respuesta de las células T específicas de GAA

7.9.2.2 Seguridad

7.9.2.3 Respuesta clínica

La respuesta radiológica puede determinarse utilizando los criterios de respuesta estándar de la OMS. La supervivencia libre de progresión (SLP) a los 2 años puede evaluarse de forma exploratoria, con base en escaneos de formación de imágenes de resonancia magnética (IRM) seriados.

7.9.2.4 Tejidos tumorales para correlación biológica

7.9.2.5 Influencia de RT en la inducción de la respuesta inmunitaria específica de GAA

La tasa y la magnitud de las respuestas inmunitarias específicas de GAA en las dos cohortes pueden compararse utilizando ensayos de IFN-y-ELISPOT y ensayos de tetrámero.

7.9.3 SELECCIÓN DE PACIENTES

7.9.3.1 Criterios de elegibilidad

Criterios patológicos - Los pacientes deben tener un diagnóstico patológico documentado de un astrocitoma u oligoastrocitoma supratentorial de grado II de la OMS.

Deben analizarse dos cohortes de pacientes, con base en si los pacientes han recibido una RT previa. Cohorte 1: Los pacientes deben haber sido operados o sometidos a una biopsia únicamente (sin radiación o quimioterapia postoperatoria) y tener un escaneo de IRM de línea base (en las 4 semanas siguientes a la primera vacuna) que muestre una enfermedad estable o una regresión (sin progresión desde la cirugía/biopsia inicial). Cohorte 2: Los pacientes deben haber sido sometidos a cirugía o biopsia y a radioterapia (RT) (incluyendo radioterapia de haz externo fraccionado y/o radiocirugía estereotáctica), que se haya completado > 6 meses antes de la inscripción, y tener un escaneo IRM de línea base dentro de las 4 semanas anteriores a la primera vacuna= que muestre una enfermedad estable o regresión.

Los pacientes de este estudio deben tener (i) edad > 40 años con resección de cualquier extensión;(ii) edad de 18 a 39 años con resección incompleta (IRM postoperatoria que muestre > 1 cm de enfermedad residual, con base en la dimensión máxima de la anomalía T2 o FLAIR residual desde el borde de la cavidad quirúrgica, ya sea lateral, anteroposterior o superoinferior) o (iii) edad de 18-39 años con GTR definida por el neurocirujano, pero el tamaño del tumor es > 4 cm (el diámetro máximo del tumor preoperatorio, con base en las imágenes de IRM T2 o FLAIR axiales y/o coronales). Todos los pacientes deben tener > 18 años.

7.9.3.2 Criterios de exclusión

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si se han sometido a quimioterapia previa o a una terapia antiglioma de cualquier tipo que no sea la radioterapia.

7.9.4 Vacuna peptídica

7.9.4.1 Péptidos

Los siguientes péptidos pueden incluirse en la formulación de la vacuna: IL-13Ra2345-3531A9V (ALPFGFILV; SEQ ID NO:3); EphA2883-891 (TLADFDPRV; SEQ ID NO:6); Surviving6-104:M2 (LMLGEFLKL; SEQ ID NO:7); W T W - ^ Y I (YMFPNAPYL; SEQ ID NO:8); y Tetanus Toxoid (TetA830) (AQYIKANSKFIGITEL; SEQ ID NO:9).

7.9.4.2 Otros agentes

7.9.4.3 Dosificación y preparación

7.9.4.4 Administración

La vacuna puede administrarse en las semanas 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 y 21.

7.9.5 Poli-ICLC

7.9.5.1 Dosificación y administración

7.9.6 Plan de tratamiento

El estudio descrito en este Ejemplo puede emplear dos cohortes de pacientes para evaluar la inmunogenicidad, la seguridad y la eficacia clínica de la vacuna de péptidos GAA/TT y poli-ICLC en pacientes HLA-A2+ con astrocitoma u oligo-astrocitoma de grado II de la OMS con factores de mal pronóstico. Dado que la vacuna peptídica se secuestra localmente y la respuesta inmunitaria se produce principalmente a nivel local y en los ganglios linfáticos de drenaje, no debería ser necesario aumentar la dosis de la vacuna proporcionalmente al tamaño (por peso o superficie corporal) del receptor, como podría hacerse con un fármaco cuyo efecto está relacionado con su distribución en el líquido corporal. En cuanto a la dosis de poli-ICLC, puede emplearse una dosis fija (20 pg/kg/inyección y hasta 1640 pg/inyección), que ha demostrado ser segura e inducir respuestas biológicas en pacientes con glioma maligno (véase, por ejemplo, Salazar et al., Neurocirugía, 38: 1096-1103, 1996).

7.9.6.1 Calendario

Los pacientes elegibles en la cohorte 1 deben haber sido sometidos a cirugía o biopsia sola (sin radiación o quimioterapia postoperatoria) y tener un escaneo de IRM de línea base (dentro de las 4 semanas de la 1ra vacuna) que muestre enfermedad estable o regresión (sin progresión desde la cirugía/biopsia inicial); los pacientes de la cohorte 2 deben haber completado la RT > 6 meses antes de la inscripción, y tener un escaneo de IRM de línea base (dentro de las 4 semanas anteriores a la 1ra vacuna) que muestre enfermedad estable o regresión. Todos los pacientes deben haber suspendido la dexametasona o un corticoide similar al menos 4 semanas antes de la primera vacuna.

Los pacientes pueden ser evaluados para cualquier posible evento adverso, RLT, así como respuestas clínicas/radiológicas por medio de visitas clínicas y escaneo de IRM.

La PBMC obtenida antes de la vacuna inicial puede ser utilizada como muestra de línea base. Si los pacientes demuestran alguna respuesta positiva en los dos ensayos inmunológicos (ELISPOT o Tetramer sin RLT o progresión tumoral, a estos pacientes se les pueden ofrecer vacunas adicionales de GAA/TT (véase, por ejemplo, la sección 7.9.6.2) comenzando en cualquier momento entre la semana 34-40, y cada 3 meses a partir de entonces hasta que los pacientes demuestren progresión tumoral, pérdida de la respuesta inmunitaria o RLT.

7.9.6.2 Terapia adicional

7.9.6.3 Modificación de la dosis

7.9.6.3.1 Modificación de la dosis para el poli-ICLC

Los pacientes pueden permanecer con la dosis original de poli-ICLC para la toxicidad hematológica de grado 1 o 2, o la toxicidad no hematológica de grado 1. Si en el nivel de dosis del 50 % no hay toxicidad durante un mínimo de 2 semanas, la dosis puede ser escalada de nuevo a la dosis inicial a discreción del investigador. Las toxicidades subsiguientes, si se producen, pueden requerir una reducción de la dosis al 50 %, y no se pueden permitir más escaladas. Si la toxicidad reaparece con la dosis reducida, el paciente puede dejar el tratamiento.

7.9.6.3.2 Retraso en la dosificación de las vacunas peptídicas

> Grado 2 o más de broncoespasmo o uticaria generalizada (hipersensibilidad).

7.9.6.4 Duración del tratamiento

7.9.6.5 Tratamiento concomitante

7.9.6.5.1 Aceptable

Para la fiebre, se puede utilizar acetaminofén (325 mg en tabletas, 1 o 2 p.o. cada 4 horas). El tratamiento previo de los pacientes con acetaminofén puede ser instituido según lo justifiquen los efectos secundarios del poli-ICLC. Las fiebres que duran más de 8 horas después del tratamiento pueden ser evaluadas en términos de infección potencial. Para el dolor local leve, se pueden planificar opiáceos orales (oxicodona, 5 -10 mg p.o. cada 3-4 horas). El dolor que es de grado más que leve-moderado puede ser investigado para otras fuentes que no sean la terapia, y manejado en consecuencia.

Los medicamentos anticonvulsivos deben usarse según lo indicado.

Si es necesario, se pueden administrar antieméticos.

7.9.6.5.2 Inaceptable

7.9.7 ESTUDIOS CORRELATIVOS/ESPECIALES

7.9.7.1 Control inmunológico

7.9.7.1.1 Ensayos ELISPOT

Las frecuencias de los precursores de linfocitos T que responden a los antígenos asociados al glioma (GAA) en las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) antes y después de la administración de la vacuna con base en el péptido GAA pueden medirse mediante un ensayo ELISPOT. Las respuestas biológicas medidas por ELISPOT pueden hacerse en el mismo punto de tiempo al menos para un paciente individual para evitar la variabilidad entre ensayos. La vacunación exitosa estimula poblaciones clonales de células T que son capaces de secretar citoquinas de forma específica al antígeno y restringida al CMH. El ensayo ELISPOT puede utilizarse para evaluar las respuestas inmunitarias específicas de g Aa de las poblaciones de células T CD8+, así como de las células T CD4+ que reaccionan contra el péptido TT auxiliar. La producción de IFN-y puede entonces evaluarse para valorar la respuesta de las células T de tipo 1.

7.9.7.1.2 Análisis de tetrámeros de células T reactivas a GAA en PBMC de pacientes

7.9.7.1.3 Análisis por citometría de flujo de los subconjuntos de linfocitos

7.9.7.1.4 Análisis de autoinmunidad en sueros

7.9.7.2 Evaluación de los tejidos tumorales primarios y recurrentes

7.9.8 PARÁMETROS DEL ESTUDIO

7.9.8.1 Pretratamiento (datos de cribado y de referencia)

Los siguientes procedimientos pueden llevarse a cabo antes de proceder al tratamiento: consentimiento informado antes de iniciar el cribado; tipificación del HLA (evaluación citométrica de flujo para la positividad del HLA-A2); documentación del diagnóstico (patológico); historial completo y examen físico (con signos vitales y peso), incluyendo exámenes neurológicos y estado de rendimiento; se deben designar los sitios de vacunación con la confirmación de los ganglios linfáticos de drenaje intactos; se debe registrar la información demográfica; se deben evaluar el CBC y las plaquetas con diferencial; se debe evaluar el PT/PTT; se debe evaluar la química, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina; se deben evaluar la GGT, el fósforo y el magnesio; debe tomarse sangre para ensayos in vitro; se deben realizar la HGBA1C para pacientes con diabetes mellitus; se deben realizar un ECG y un ecocardiograma para los pacientes con síntomas cardíacos, antecedentes o enfermedad actual; se debe realizar un análisis de orina; se debe realizar una IRM del cerebro para evaluar el estado de línea base de la enfermedad; y/o se debe realizar una prueba de embarazo de beta-HCG en suero a las mujeres en edad fértil.

7.9.8.2 Evaluación durante el tratamiento

7.9.8.3 Evaluación de la semana 24 (después de las 8 vacunas)

7.9.8.4 Evaluación con vacunas adicionales (casos con vacunas adicionales)

7.9.9 MEDICIÓN DEL EFECTO

7.9.9.1 Objetivos

7.9.9.1.1 Inmunogenicidad

7.9.9.1.2 Seguridad

Se puede determinar la seguridad de la administración de los cuatro epítopos del antígeno asociado al glioma (GAA) restringidos por el HLA-A2 junto con un epítopo de células T auxiliares derivado del toxoide tetánico (TT) restringido por el MHC de clase II y el poli-ICLC i.m. en pacientes con astrocitoma y oligoastrocitoma de grado II.

7.9.9.1.3 Respuesta y supervivencia libre de progresión

(A) Respuesta (de acuerdo con los criterios RECIST)

Respuesta completa (CR): Desaparición de todas las lesiones objetivo.

(B) Supervivencia general (OS) y supervivencia sin progresión (PFS)

7.9.9.1.4 Análisis de los tejidos tumorales tras las vacunaciones

7.9.10 CONSIDERACIONES ESTADÍSTICAS

7.9.10.1 Evaluación de las respuestas inmunológicas

7.9.10.2 Documentación y evaluación de la seguridad

El diseño del estudio tiene las siguientes propiedades: si la tasa verdadera de RLT es > 45 %, hay al menos 90 % de probabilidad de que la acumulación se detenga; si la tasa verdadera de RLT es < 9 %, hay 90 % de probabilidad de que la acumulación no se detenga, y que el régimen pueda considerarse seguro.

7.9.10.3 Evaluación de los criterios de valoración clínicos

Todos los pacientes pueden ser seguidos durante un mínimo de 2 años, de modo que su supervivencia general (OS) real a 2 años, la supervivencia libre de progresión (SLP) y las tasas de respuesta pueden ser tabuladas como criterios de valoración exploratorios. PSF se define como el intervalo de tiempo desde el diagnóstico patológico de astrocitoma u oligoastrocitoma de grado II de la OMS de un paciente hasta la progresión, con base en los escaneos de IRM seriadas. Si se considera oportuno, los análisis exploratorios pueden investigar la relación de la respuesta inmunitaria con la respuesta de formación de imágenes y o S/PFS (mediante la prueba exacta de Fisher y la prueba de rango logarítmico, respectivamente).

7.9.10.4 Datos demográficos

7.10 EJEMPLO 10

Este ejemplo describe un estudio para evaluar los efectos de la vacunación con antígenos-péptidos de glioma restringidos por HLA-A2 en combinación con poli-ICLC para niños con gliomas de tronco cerebral (BSG) malignos o intrínsecos recién diagnosticados o gliomas de alto grado no cerebrales (HGG) incompletamente resecados o gliomas de bajo grado (LGG) no resecables recurrentes.

7.10.1. JUSTIFICACIÓN

Actualmente, no existen modalidades terapéuticas eficaces para los gliomas malignos pediátricos. La inmunoterapia, en particular las vacunas activas, tiene el potencial de desarrollarse como una modalidad eficaz y segura. Las vacunas que utilizan péptidos específicos de los GAA, en comparación con los antígenos enteros derivados del glioma, pueden ser más factibles porque estas vacunas pueden inducir respuestas inmunitarias específicas del glioma sin las preocupaciones teóricas de la encefalitis autoinmune. Las pruebas de estudios recientes sugieren que los gliomas pediátricos y los gliomas intrínsecos del tronco cerebral tienen un patrón similar de expresión de los antígenos asociados a los gliomas (GAA), a los que se puede dirigir la terapia con base en la vacuna. En vista del pésimo pronóstico de los niños con gliomas intrínsecos del tronco del encéfalo, gliomas malignos resecados de forma incompleta, es conveniente evaluar la actividad y la seguridad de la inmunización tras la radioterapia en estos tumores. Asimismo, los gliomas profundos de bajo grado también expresan un espectro similar de GAAs. Debido a que estas lesiones se vuelven comúnmente refractarias a la terapia convencional, con una morbilidad y mortalidad crecientes, es apropiado evaluar la eficacia potencial de la terapia vacunal en aquellos pacientes que han tenido una progresión de la enfermedad después de al menos dos regímenes de quimioterapia o terapia biológica o irradiación.

La administración de poli-ICLC junto con los péptidos GAA mejora notablemente la inducción de respuestas CTL anti-GAA y el tráfico de células T específicas de antígeno a los sitios del tumor cerebral. En el estudio descrito en este ejemplo, los pacientes pediátricos con glioma maligno recién diagnosticado o con gliomas de bajo grado refractarios al tratamiento pueden ser vacunados con múltiples epítopos CTL novedosos derivados del HLA-A2 restringidos en combinación con la administración intramuscular de poli-ICLC.

7.10.2 OBJETIVOS

Este Ejemplo describe un estudio de vacunas en niños con gliomas de tronco cerebral (BSG) malignos o intrínsecos recién diagnosticados o con gliomas de alto grado (HGG) no resecados de forma incompleta o con gliomas de bajo grado (LGG) no resecables recurrentes.

7.10.2.1 Inducción de la respuesta de las células T específicas de GAA

7.10.2.2 Seguridad

Se puede evaluar la incidencia y la gravedad de los eventos adversos asociados con el régimen de la vacuna, con una regla de detención temprana con base en la frecuencia de la Toxicidad Limitante del Régimen (RLT) en niños con gliomas malignos de tronco cerebral (BSG) recién diagnosticados, y en niños con gliomas malignos de tronco no cerebral (HGG) recién diagnosticados con resección incompleta. La incidencia y la gravedad de los acontecimientos adversos asociados al régimen de la vacuna también pueden evaluarse en pacientes con gliomas de bajo grado no resecables y refractarios al tratamiento que hayan progresado después de dos regímenes de quimioterapia o terapia biológica o de irradiación.

7.10.2.3 Respuesta clínica

7.10.2.4 Tejidos tumorales para correlación biológica

En el caso de los pacientes con tumores que no son de tronco cerebral y que desarrollan una progresión, se puede alentar la biopsia/la citorreducción del tumor. Siempre que se disponga de tejidos tumorales postvacunales, se puede analizar el estado de expresión de GAA y la infiltración de células T específicas de GAA.

7.10.3 SELECCIÓN DE PACIENTES

7.10.3.1 Criterios de elegibilidad

Criterios patológicos - Los pacientes tendrán un glioma. En algunas realizaciones, el paciente con glioma se encuentra en uno de los siguientes estratos: (i) Estrato A: Gliomas pontinos intrínsecos difusos recién diagnosticados o cualquier glioma de alto grado comprobado por biopsia que afecte al tronco encefálico; (ii) Estrato B: glioma de alto grado no tronco encefálico recién diagnosticado y resecado de forma incompleta (es decir, tumor residual definitivo visible en las imágenes); o (iii) Estrato C: Glioma de bajo grado no resecable y progresivo de cualquier subtipo que haya recidivado a pesar de dos regímenes previos de quimioterapia o terapia biológica y/o radioterapia; iv) Estrato D: Gliomas pontinos intrínsecos difusos (DlPG) recién diagnosticados O cualquier glioma de alto grado probado por biopsia* que afecte al tronco encefálico y que haya sido tratado con radioterapia con o sin quimioterapia durante la irradiación; v) Estrato E: Gliomas de alto grado no cerebrales recién diagnosticados* (HGG) tratados con radioterapia con o sin quimioterapia durante la irradiación; (vi) Estrato F: Gliomas recurrentes de alto grado no relacionados con el tronco cerebral* que han reaparecido después del tratamiento. Los pacientes deben haberse recuperado de los efectos tóxicos de la terapia anterior. Las histologías elegibles para el glioma de alto grado incluyen el glioblastoma (GBM), el astrocitoma anaplásico (AA) o el gliosarcoma. Los pacientes con cualquier componente de oligodendroglioma pueden no ser elegibles para el protocolo particular descrito en este ejemplo.

Los pacientes del estrato A y B deben haber recibido RT de campo involucrado estándar definida como radioterapia de haz externo fraccionada con dosis totales entre 5000-6000 cGy. Los pacientes de estos estratos deben ser registrados en las 4-12 semanas siguientes a la finalización de la RT.

Los pacientes de este estudio deben estar clínicamente estables y sin o con dosis bajas (no más de 0,1 mg/kg/día, máximo 4 mg/día de Dexametasona) de corticosteroides durante al menos una semana antes del registro del estudio. Los pacientes de este estudio deben tener > 3 y <21 años de edad en el momento del estudio.

Los pacientes de este estudio deben tener un estado de rendimiento > 50; (Karnofsky si > 16 años y Lansky si < 16 años).

Las pacientes femeninas de este estudio que son postmenárquicas deben tener pHCG sérica negativa documentada. Los pacientes de este estudio deben estar libres de infecciones sistémicas. Los pacientes con terapia antibiótica deben dejar de tomar antibióticos durante al menos 7 días antes de comenzar el tratamiento.

Los pacientes de este estudio deben tener una función orgánica adecuada, medida por: (i) Médula ósea: ANC > 1.000/pl; Plaquetas > 100.000/pl (independiente de la transfusión); Hemoglobina >8 g/dl (puede ser transfundida); (ii) Hepático: bilirrubina < 1,5* normal institucional para la edad; SGPT (ALT) < 3x normal institucional y albúmina > 2g/dl; (iii) Renal: Creatinina sérica con base en la edad o Aclaramiento de creatinina o FG radioisotópico > 70 ml/min/1,73 m2. Los pacientes de este estudio deben tener pruebas de coagulación y TP y TPT dentro de los límites normales para su edad.

Los pacientes de este estudio no deben tener ninguna enfermedad cardíaca, gastrointestinal, pulmonar o psiquiátrica manifiesta.

Para los pacientes del estrato C, puede ser necesaria la recuperación de los efectos de la quimioterapia previa.

7.10.3.2 Criterios de exclusión

Los pacientes del estrato A y del estrato B de este estudio deben ser excluidos si tienen presencia de enfermedad metastásica leptomeníngea.

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si tienen tumores brutos totalmente resecados, es decir, sin enfermedad residual visible definida en el escaneo de IRM en el momento del estudio.

Los pacientes del estrato A y del estrato B de este estudio deben ser excluidos si han recibido algún tipo de quimioterapia o terapia antiglioma previa que no sea radioterapia. (Los pacientes del estrato C de este estudio deben haber recibido al menos dos regímenes previos de quimioterapia o terapia biológica y/o radioterapia)

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si están sometidos a tratamientos o medicamentos concurrentes, incluyendo: radioterapia; interferón (por ejemplo, Intron-A®); inyecciones de desensibilización de alergias; esteroides inhalados (por ejemplo, Advair®, Flovent®, Azmacort®); factores de crecimiento (por ejemplo, Procrit®, Aranesp®, Neulasta®); interleucinas (por ejemplo, Proleukin®); y/o cualquier medicamento terapéutico en investigación.

Los pacientes de este estudio no deben haber tenido trastornos autoinmunes previos que requieran una terapia citotóxica o inmunosupresora, ni trastornos autoinmunes con afectación visceral. La artritis leve que requiere medicamentos AINE no debe ser excluyente.

Los pacientes de este estudio deben ser excluidos si han utilizado inmunosupresores en las cuatro semanas anteriores a la entrada en el estudio o si prevén el uso de agentes inmunosupresores. La dexametasona, u otros medicamentos corticosteroides, si se utilizan en el periodo perioperatorio y/o durante la radioterapia, deben ser reducidos por los pacientes (no más de 0.1 mg/kg/día, máximo 4 mg/día de dexametasona) durante al menos una semana antes del registro del estudio. Los corticoides tópicos deberían ser aceptables.

7.10.4 Vacuna peptídica

7.10.4.1 Péptidos

Los siguientes péptidos pueden incluirse en la formulación de la vacuna: IL-13Ra2345-353 1A9V (ALPFGFILV; SEQ ID NO:3); EphA2883-891 (TLADFDPRV; SEQ ID NO:6); Survivin96-104:M2 (LMLGEFLKL; SEQ ID NO:7); y Toxoide Tetánico (TetA830) (AQYIKANSKFIGITEL; SEQ ID NO:9).

7.10.4.2 Otros agentes

7.10.4.3 Dosificación y preparación

Una solución acuosa (400 j L) que contiene cada uno de los cuatro péptidos GAA restringidos por HLA-A2 (300 jg/péptido) y el péptido tetánico (Peptide-tet; 200 jg ) puede mezclarse 1/1 con Montanide ISA-51 para formar una emulsión de agua en aceite (es decir, el volumen total/inyección es de 800 jl).

7.10.4.4 Administración

Los pacientes de este estudio pueden ser vacunados por vía subcutánea en la parte superior del brazo o del muslo. La vacuna puede ser administrada Q3Wk comenzando 4-12 semanas después de la finalización de la RT (Wk 1).

7.10.5 Poli-ICLC

7.10.5.1 Dosificación y administración

El primer curso de administración de poli-ICLC (30 jg/kg i.m.) puede ser administrado el día de la primera vacuna GAA/TT. Para cada una de las siguientes vacunaciones repetidas (Q3W), se puede administrar poli-ICLC (30 jg/kg i.m.) el día de la vacuna.

El Poli-ICLC debe administrarse por vía intramuscular (i.m.) utilizando una técnica estéril, tal como se suministra en el vial, y en la cantidad prescrita para el peso del paciente. Los tratamientos de poli-ICLC pueden administrarse el mismo día que la vacuna. Los signos vitales pueden ser monitorizados antes y durante al menos 20 minutos después del primer tratamiento.

7.10.6 Plan de tratamiento

El estudio descrito en este Ejemplo puede emplear tres estratos para evaluar la inmunogenicidad, la seguridad y la eficacia clínica preliminar de la vacuna de péptidos GAA/TT y poli-ICLC en niños HLA-A2+ con gliomas intrínsecos de tronco cerebral (BSG) recién diagnosticados o GBM, AA o gliosarcoma probados por biopsia que afectan al tronco cerebral (Estrato A); o GBM, AA o gliosarcoma de tronco cerebral resecados de forma incompleta (estrato B); o gliomas de bajo grado progresivos recurrentes (estrato C).

7.10.6.1 Calendario

Después del diagnóstico (para el estrato A y B) o después de la progresión de la enfermedad (para el estrato C), el tratamiento de acuerdo con el estudio descrito en este Ejemplo puede ser discutido con los pacientes potencialmente elegibles. Todos los pacientes del estrato A y B pueden recibir radioterapia externa fraccionada (FEBRT). Los pacientes pueden ser evaluados para el estado HLA-A2. El cribado de elegibilidad y el escaneo de IRM de línea base y los estudios de laboratorio deben completarse en las 2 semanas siguientes a la inscripción para participar en el estudio y en las 3 semanas siguientes a la recepción de la primera vacuna. Los pacientes de los estratos A y B deben inscribirse para participar en el estudio en las 4-12 semanas siguientes a la finalización de la FEBRT. El momento de registro del estudio para estos pacientes dependerá de si la IRM posterior a la RT (normalmente realizada en la semana 4) muestra evidencia de un aumento de realce o de efecto de masa y el paciente está clínicamente sintomático/peor. Si es así, el registro del estudio se producirá cuando el paciente haya estado clínicamente estable/mejorado y con una dosis baja (0,1 mg/kg/día máximo 4 mg de decadrón) o sin esteroides x una semana.

Los pacientes pueden ser tratados con inyecciones subcutáneas de vacunas GAA/TT a partir de la semana 1 y cada 3 semanas a partir de entonces durante un máximo de 8 ciclos. Puede administrarse poli-ICLC i.m. (30|jg/kg i.m.) el mismo día que la vacuna. Cada vacuna puede ser administrada justo antes de la administración i.m. de poli-ICLC. El poli-ICLC debe administrarse por vía i.m. en las proximidades del lugar de inyección del péptido anterior (por ejemplo, a menos de 3 cm del centro de los lugares de inyección del péptido anterior).

Los pacientes pueden ser evaluados para cualquier posible evento adverso, RLT, así como respuestas clínicas/radiológicas por medio de visitas clínicas y escaneo de IRM. Se pueden realizar IRM de seguimiento cada 9 semanas a partir de la Semana 7 (Semanas 7, 16 y 25).

La PBMC obtenida antes de la vacuna inicial puede ser utilizada como muestra de línea base. En las semanas 7, 16 y 25, se pueden obtener PBMC como muestras postvacunas. Los ensayos inmunológicos pueden realizarse para todas las muestras de PBMC obtenidas de al menos un participante a la vez, de modo que se evite la variabilidad entre ensayos.

7.10.6.2 Terapia adicional de "continuación"

Después de la 8va vacunación programada, si el paciente demuestra una respuesta radiológica (es decir, una respuesta completa o parcial) o una enfermedad estable sin RLT, el paciente puede recibir vacunas peptídicas adicionales junto con poli-ICLC comenzando 6 semanas después de la 8va vacunación, y cada 6 semanas a partir de entonces hasta 2 años después de la vacunación inicial, siempre y cuando no haya progresión del tumor y no haya RLT. Pueden obtenerse muestras adicionales de PBMC en las mismas visitas de administración de vacunas para el seguimiento inmunológico. Las vacunas adicionales pueden ser canceladas en cualquiera de las siguientes condiciones: 1) progresión del tumor; 2) RLT; o 3) retirada del paciente.

7.10.6.3 Modificación de la dosis

7.10.6.3.1 Modificación de la dosis para el poli-ICLC

El pretratamiento con acetaminofén o con cualquier AINE debe darse antes de cada dosis de poli-ICLC. Para los síntomas constitucionales de grado 2 o superior que persisten durante más de 48 horas después de la inyección, la siguiente dosis de poli-ICLC debe administrarse al 67 % de la dosis original (es decir, 20 jg/kg). Si se tolera bien la dosis adicional, se puede reinstaurar posteriormente la dosis original. Si los síntomas de grado 2 o superior vuelven a aparecer a pesar de una reducción de la dosis y duran más de 48 horas, el paciente puede ser retirado para una RLT.

En el caso de una elevación de las enzimas hepáticas > 5 veces la línea base (Grado 3), o cualquier toxicidad no hematológica intolerable de grado 2 que dure > 7 días, el policlínico puede suspenderse hasta que esa toxicidad se haya reducido a Grado 1 o menos. A continuación, se puede volver a administrar Poli-ICLC a dos tercios de la dosis original (es decir, 20 jg/kg), y se puede observar de cerca al participante. Si la misma toxicidad limitante de la dosis se repite a pesar de la reducción de la dosis, el participante puede ser retirado para la RLT.

En caso de toxicidad hematológica de grado 3 o superior, la siguiente dosis debe reducirse al 67 % (es decir, 20 jg/kg) siempre que la toxicidad se haya resuelto al grado 1 o menos en el momento de la siguiente dosis. Si la toxicidad no se ha resuelto en el momento de la siguiente dosis, el paciente deja el tratamiento. Si vuelven a aparecer las mismas toxicidades hematológicas limitantes de la dosis a pesar de la reducción de la dosis, el paciente puede ser retirado del tratamiento de RLT.

7.10.6.3.2 Retraso en la dosificación de las vacunas peptídicas

En circunstancias en las que se suspende la administración de poli-ICLC, si el evento no es atribuible a la vacuna de péptidos/ISA-51, la administración de la vacuna debe continuar según el cronograma. En circunstancias en las que la evaluación de un acontecimiento adverso es limitada, tal como por ejemplo por una enfermedad intercurrente, o cuando se requieren estudios de laboratorio para evaluar otras causas de toxicidad, el programa de vacunación puede interrumpirse durante un máximo de 6 semanas. Si la administración de la vacuna se retrasa más de 6 semanas debido a un acontecimiento adverso que no sea la progresión del pseudotumor, independientemente de la atribución, el tratamiento debe interrumpirse.

> Grado 2 o más de broncoespasmo o uticaria generalizada (hipersensibilidad).

> Grado 2 o más de reacción alérgica, tal como eritrodermia exfoliativa, anafilaxia o colapso vascular. Cualquier toxicidad no hematológica > Grado 3 (excluyendo la toxicidad hepática) posible, probable o definitivamente relacionada con el régimen terapéutico, incluyendo la reacción en el lugar de la inyección > Grado 3 debida a la administración del péptido-vacuna o del poli-ICLC.

Toxicidad hematológica o hepática > Grado 3 que reaparece a pesar de una reducción del 33 % de la dosis o que no se resuelve al grado 1 o menos en el momento de la siguiente dosis.

Toxicidad no hematológica de grado 2 intolerable que dure > 7 días y que reaparezca a pesar de una reducción de la dosis del 33 % o que no se resuelva al grado 1 o menos en el momento de la siguiente dosis.

Síntomas constitucionales de grado 2 o superior que persisten > 48 horas a pesar de una reducción de la dosis.

> Grado 3 de neurotoxicidad debida a una respuesta inmunitaria inflamatoria relacionada con el régimen (es decir, progresión pseudotumoral que no responde a un ensayo de 7 días de 0,3 mg/kg de decadrón al día (máximo 12 mg/día) y/o requiere cirugía de citorreducción, si es factible.

> Grado 3 de náuseas y vómitos a pesar de una profilaxis antiemética suficiente.

Retrasos en la dosificación > 6 semanas para las vacunas poli-ICLC o peptídicas debido a la toxicidad distinta de la PTP.

La terapia puede interrumpirse por las siguientes razones: (i) Toxicidad limitante del régimen que no sea la PTP - como se ha definido anteriormente; (ii) progresión de la enfermedad - al menos un aumento del 25 % en el producto del diámetro del tumor más largo y su diámetro perpendicular en el escaneo IRM. (iii) Enfermedad intercurrente que impida la administración posterior de la vacuna o la administración de poli-ICLC durante más de 6 semanas. (iv) Embarazo: Las pacientes embarazadas seguirán siendo objeto de seguimiento mientras dure el embarazo.

7.10.6.4 Duración del tratamiento

En ausencia de retrasos en el tratamiento debido a eventos adversos, el tratamiento puede continuar durante 25 semanas (8 vacunas y la visita de seguimiento en la Semana 25) o hasta que se produzca uno de los criterios de Fuera de Tratamiento de la Sección 7.10.6.3.2.

7.10.6.5 Tratamiento concomitante

7.10.6.5.1 Aceptable

Los pacientes deben recibir una dosis de acetaminofén (15 mg/kg hasta un máximo de 1000 mg) 30-60 minutos antes de cada administración de poli-ICLC. Para la fiebre después de la inyección, se puede administrar acetaminofén (15 mg/kg hasta un máximo de 1000 mg q 4 -6 horas prn, sin exceder 4 g/día). Los pacientes con fiebre de más de 48 horas deben ser evaluados para detectar una posible infección.

Para el dolor local leve, se pueden utilizar opiáceos orales (tylenol y codeína 0,5 mg/kg p.o. cada 4 horas). El dolor que sea de grado más que leve-moderado se investigará para detectar causas no relacionadas con la terapia, y se tratará en consecuencia.

Dexametasona - no más de 0,1 mg/kg/día, máx. 4 mg/día durante al menos una semana antes del inicio de la terapia de la vacuna/poli-ICLC (Semana 0). La dosis de dexametasona puede aumentarse en caso de progresión del pseudotumor y reducirse o suspenderse lo antes posible.

Los medicamentos anticonvulsivos deben usarse según lo indicado.

Si es necesario, se pueden administrar antieméticos.

Otros medicamentos aceptables pueden ser: Corticosteroides tópicos; agentes antiinflamatorios no esteroideos; antihistamínicos (por ejemplo, Claritin®, Allegra®); medicamentos crónicos, excepto los enumerados en la sección 7.10.6.5.2; y/o vacunas contra la gripe (deben administrarse al menos dos semanas antes del inicio de las vacunas del estudio o al menos dos semanas después de la 8va (última) vacuna).

7.10.6.5.2 Inaceptable

Los medicamentos inaceptables pueden incluir terapia con interferón (por ejemplo, Intron-A®); quimioterapia; inyecciones de desensibilización de alergias; medicamentos corticosteroides administrados por vía parenteral o por inhalación (por ejemplo: Advair®, Flovent®, Azmacort®); factores de crecimiento (por ejemplo, Procrit®, Aranesp®, Neulasta®); interleucinas (por ejemplo, Proleukin®); otros medicamentos en investigación; y/o drogas ilícitas.

7.10.7 ESTUDIOS CORRELATIVOS/ESPECIALES

7.10.7.1 Control inmunológico

7.10.7.1.1 Ensayos ELISPOT

Las frecuencias de los precursores de linfocitos T que responden a los antígenos asociados al glioma (GAA) en las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) antes y después de la administración de la vacuna con base en el péptido GAA pueden medirse mediante un ensayo ELISPOT. Las respuestas biológicas medidas por ELISPOT pueden hacerse en el mismo punto de tiempo al menos para un paciente individual para evitar la variabilidad entre ensayos. La vacunación exitosa estimula poblaciones clonales de células T que son capaces de secretar citoquinas de forma específica al antígeno y restringida al CMH. El ensayo ELISPOT puede utilizarse para evaluar las respuestas inmunitarias específicas de g Aa de las poblaciones de células T CD8+, así como de las células T CD4+ que reaccionan contra el péptido TT auxiliar. La producción de IFN-^ypuede entonces evaluarse para valorar la respuesta de las células T de tipo 1.

7.10.7.1.2 Análisis de tetrámeros de células T reactivas a GAA en PBMC de pacientes

7.10.7.1.3 Análisis por citometría de flujo de los subconjuntos de linfocitos

7.10.7.2 Evaluación de los tejidos tumorales primarios y recurrentes

7.10.8 PARÁMETROS DEL ESTUDIO

Este estudio puede realizarse de forma ambulatoria, con pacientes programados para ser evaluados cada 3 semanas durante un máximo de 8 vacunaciones. Si los pacientes reciben vacunas adicionales, administradas cada 6 semanas como parte de la fase de continuación, se puede realizar un seguimiento clínico, inmunológico y radiológico (IRM) en cada visita (Q6Wk) hasta que se cumpla uno de los criterios para finalizar el tratamiento. Las vacunaciones pueden interrumpirse en el caso de pacientes con enfermedad progresiva o toxicidad inaceptable en cualquier momento durante las vacunaciones programadas.

7.10.8.1 Pretratamiento (datos de cribado y de referencia)

Los siguientes procedimientos pueden llevarse a cabo antes de proceder al tratamiento: se debe obtener el Consentimiento informado antes de iniciar el cribado; tipificación del HLA (evaluación citométrica de flujo para la positividad del HLA-A2); y documentación del diagnóstico (histológico para los primarios de no tronco cerebral (es decir, Estrato B); patológico o de imagen para los primarios de tronco cerebral); anamnesis y examen físico completos (con signos vitales y peso), incluyendo exámenes neurológicos y estado de rendimiento; se debe registrar la información demográfica de la medicación concurrente; se deben evaluar el hemograma y las plaquetas con diferencial; se deben evaluar PT/PTT; se debe evaluar el panel metabólico completo, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina; se deben evaluar la GGT, el fósforo y el magnesio; se debe tomar sangre para ensayos in vitro; se debe realizar un análisis de orina; se debe realizar una IRM del cerebro; y/o se debe administrar a las mujeres en edad fértil una prueba de embarazo de beta-HCG en suero.

7.10.8.2 Evaluación durante el tratamiento

Los siguientes procedimientos pueden llevarse a cabo a medida que avanza el tratamiento. Preadministración: historial y examen físico incluyendo signos vitales, peso, estado de rendimiento, medicación concurrente y función neurológica; se debe tomar sangre para ensayos in vitro; se debe evaluar la química, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina; se deben examinar los pacientes para detectar eventos adversos de dosis anteriores, para incluir la evaluación neurológica y el examen de la piel (sitios de inyección); y/o se debe realizar una IRM (cada 9 semanas a partir de la Semana 6; es decir, las Semanas 6, 15 y 24).

Después de la administración de la vacuna, todos los pacientes deben ser observados de cerca para detectar eventos adversos durante al menos 20 minutos después de cada administración de la vacuna de péptidos GAA. El mismo día, se administrará el poli-ICLC (i.m. 30 mg/kg) después de cada vacuna, y los pacientes serán monitorizados durante al menos 20 minutos después de la inyección de poli-ICLC.

7.10.8.3 Evaluación de la semana 24 (después de las 8 vacunas)

Después de completar el ciclo de vacunación, se pueden realizar los siguientes procedimientos historial y examen físico, incluyendo signos vitales, peso, estado de rendimiento, medicación concurrente y función neurológica; se debe tomar sangre para ensayos in vitro ; se debe evaluar el hemograma y las plaquetas con diferencial; se debe evaluar la química, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina (Excepto para la Semana 0); y/o se debe examinar a los pacientes para detectar eventos adversos de dosis anteriores, para incluir la evaluación neurológica y el examen de la piel (sitios de inyección).

7.10.8.4 Evaluación con vacunas adicionales de "continuación"

Antes de la administración con vacunas adicionales, se pueden realizar los siguientes procedimientos historia y examen físico, incluyendo signos vitales, peso, estado de desempeño, medicación concurrente y función neurológica; se debe tomar sangre para ensayos in vitro; se deben evaluar el CBC y las plaquetas con diferencial; se debe evaluar la química, incluyendo electrolitos, creatinina, nitrógeno ureico en sangre, glucosa, AST, ALT, Alk fos, bilirrubina total, LDH, calcio y albúmina (Excepto para la Semana 0); se deben examinar los pacientes para detectar eventos adversos de las dosis anteriores, para incluir la evaluación neurológica y el examen de la piel (sitios de inyección); y/o se debe realizar una IRM.

T A B L A 8 : C a le n d a r io d e e s tu d io s

7.10.9 M E D IC IO N D E L E F E C T O

7.10.9.1 O b je t iv o s

7.10.9.1.1 In m u n o g e n ic id a d

7.10.9.1.2 Seguridad

Se puede determinar la seguridad de la administración de los cuatro epítopos de antígenos asociados a gliomas (GAA) restringidos por HLA-A2, junto con un epítopo de células T auxiliares restringido por MHC de clase II (toxoide tetánico (TT)) y un poli-ICLC i.m. en pacientes con gliomas malignos de tronco cerebral y no tronco cerebral recién diagnosticados, inmediatamente después de la irradiación (estrato A y B, respectivamente) y en pacientes con glioma de bajo grado refractario al tratamiento, no resecable (estrato C).

7.10.9.1.3 Respuesta y supervivencia libre de progresión

Para la evaluación de la respuesta y la supervivencia libre de progresión, el tumor (es decir, la lesión objetivo) puede medirse a partir de imágenes de IRM T1 realzadas con gadolinio (Gd) o, para los tumores con componentes no realzantes, a partir de imágenes ponderadas en T2.

(A) Respuesta (de acuerdo con los criterios RECIST)

Respuesta completa (CR): Desaparición completa en la IRM de todo el tumor visible y del efecto de masa, con una dosis estable o decreciente de corticosteroides (o sólo con dosis suprarrenales sustitutivas), acompañada de un examen neurológico estable o que mejore, y que se mantenga durante al menos 6 semanas.

Respuesta parcial (PR): Reducción mayor o igual al 50% del tamaño del tumor por medición bidimensional con una dosis estable o decreciente de corticoesteroides, acompañada de un examen neurológico estable o que mejora, y mantenida durante al menos 6 semanas.

Enfermedad progresiva (PD): anomalías neurológicas o empeoramiento del estado neurológico que no se explican por causas no relacionadas con la progresión del tumor (por ejemplo, toxicidad por anticonvulsivos o corticosteroides, alteraciones electrolíticas, sepsis, hiperglucemia, etc.), o un aumento superior al 25% en la medición bidimensional, o el aumento de las dosis de corticosteroides necesarias para mantener el estado neurológico estable o las imágenes. Enfermedad estable (SD): El examen neurológico es al menos estable y la dosis de corticosteroides de mantenimiento no se ha incrementado, y las imágenes de IRM no cumplen los criterios de PR ni los criterios de enfermedad progresiva. Para que esta categoría sea reportada como de posible beneficio clínico, el estado de enfermedad estable debe mantenerse durante al menos 12 semanas.

Enfermedad pseudoprogresiva (Pseudo-PD). Los pacientes con pseudoprogresión, que permanecen en el estudio y finalmente experimentan SD, PR o CR pueden ser clasificados como pseudo-PD y Sd , PR o CR, respectivamente, para la determinación de la respuesta.

(B) Supervivencia general (OS) y supervivencia sin progresión (PFS)

PFS se define como la duración del tiempo desde el inicio del tratamiento hasta el momento de la progresión o la muerte. Se realizará un seguimiento de todos los pacientes para determinar OS y lPFS.

7.10.9.1.4 Análisis de los tejidos tumorales tras las vacunaciones

7.10.10 CONSIDERACIONES ESTADÍSTICAS

7.10.10.1 Evaluación de las respuestas inmunológicas

La evaluación de la respuesta inmunitaria puede emplear tanto ensayos de IFN-^yELISPOT como de tetrámeros.

Un respondedor puede definirse como un paciente que ha respondido en los ensayos de IFN-y ELISPOT o tetrámero. Cada uno de los tres estratos debe ser evaluado independientemente. Se considerará que un estrato merece ser investigado si hay al menos 5 respuestas en los 12 sujetos. Este criterio tiene la propiedad de que si la tasa de respuesta verdadera es < 18 %, hay < 5 % de probabilidad de observar 5 o más respuestas, y que si la tasa de respuesta verdadera es >68 %, hay <5 % de probabilidad de observar 4 o menos respuestas.

7.10.10.2 Documentación y evaluación de la seguridad

El diseño del estudio tiene las siguientes propiedades: si la verdadera tasa de RLT en esta población de pacientes es > 42 %, hay al menos 90 % de probabilidad de que se detenga la acumulación; si la verdadera tasa de RLT es < 8,7 %, hay un 9o % de probabilidad de que no se detenga la acumulación y de que el régimen se considere seguro.

7.10.10.3 Evaluación de los criterios de valoración clínicos

Se pueden documentar las respuestas clínicas y calcular la tasa de respuesta y sus límites de confianza del 95 %. Todos los pacientes pueden ser seguidos para evaluar la supervivencia general (OS) y la supervivencia libre de progresión (PFS). PFS se define para los estratos A y B como el intervalo de tiempo desde el diagnóstico de un paciente hasta su muerte o progresión, y para el estrato C desde el momento de la inscripción en el estudio hasta su muerte o progresión, con base en los escaneos de IRM seriadas. Si se considera oportuno, los análisis exploratorios pueden investigar la relación de la respuesta inmunitaria con la respuesta clínica y OS/PFS (mediante la prueba exacta de Fisher y la prueba de rango logarítmico, respectivamente).

7.10.10.4 Datos demográficos

Se pueden proporcionar estadísticas descriptivas de referencia sobre todos los pacientes evaluables para las variables demográficas (edad, sexo, raza/etnia), el estado de rendimiento de Kamofsky o Lansky, el estadio de la enfermedad y el estado en el momento de la inscripción (enfermedad estable, enfermedad progresiva), y los regímenes de tratamiento utilizados previamente (para el estrato C).

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende un péptido IL-13Ra2, un péptido EphA2, un péptido survivin y un péptido WT1, en la que:

(a) el péptido IL-13Ra2 comprende una cualquiera de las SEQ ID NO:1-4, el péptido EphA2 comprende la ^sE^qID N^o:6, el péptido survivin comprende la SEQ ID NO:7, y el péptido WT1 comprende la SEQ ID NO:8; preferentemente en la que:

(b) uno o más de los péptidos se cargan en células dendríticas; y/o

(c) la composición farmacéutica comprende además un adyuvante,

donde el adyuvante es preferentemente Montanide ISA-51.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición farmacéutica está libre de células.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 o 2, que comprende además un adyuvante, en la que la composición farmacéutica que comprende el péptido IL-13Ra2, el péptido EphA2, el péptido survivin y el péptido WT1 se mezcla en una relación de 1 a 1 con el adyuvante.

4. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 para su uso en el tratamiento, la prevención o el manejo del cáncer cerebral.

5. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 4, comprendiendo además un epítopo de células T auxiliares.

6. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 5, en la que el epítopo de células T auxiliares es el péptido PADRE, un péptido del toxoide tetánico o el péptido del núcleo del HBV¹²⁸-¹⁴⁰.

7. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 4, que comprende además un modificador de la respuesta inmunitaria.

8. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 7, en la que el modificador de la respuesta inmunitaria es poli-ICLC o imiquimod.

9. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 4, en la que la composición farmacéutica está formulada para la administración subcutánea o intranodal.

10. Un conjunto que comprende

(i) una primera composición farmacéutica de la reivindicación 1 o 2, que comprende además un adyuvante; y

(ii) una segunda composición farmacéutica que comprende un modificador de la respuesta inmunitaria, para su uso en el tratamiento, la prevención o el control del cáncer cerebral en un sujeto que lo necesite.

11. El conjunto para el uso de la reivindicación 10, en el que el modificador de la respuesta inmune es poli-ICLC.

12. El conjunto para el uso de la reivindicación 10 u 11, formulado para su administración en más de 10 dosis, en el que las dosis están separadas por al menos 3 días.

13. El conjunto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en el que la primera composición farmacéutica está formulada para la administración subcutánea y la segunda composición farmacéutica está formulada para la administración intramuscular.

14. El conjunto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 10-13, que comprende además bevacizumab.

15. La composición farmacéutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4-9, o el conjunto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 10-14, en el que el cáncer cerebral es un glioblastoma recurrente en pacientes adultos.