JP2003014746A - 生物学的素材が固定された構造体及びその製造方法 - Google Patents
生物学的素材が固定された構造体及びその製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 安価かつ大量製造が可能な、生物学的素材が
固定化された構造体、並びにその製造方法を提供するこ
と。 【解決手段】 渦巻き状に固定した紐状担体と、該紐状
担体上に生物学的素材が固定された複数の部位とを有す
る構造体。
固定化された構造体、並びにその製造方法を提供するこ
と。 【解決手段】 渦巻き状に固定した紐状担体と、該紐状
担体上に生物学的素材が固定された複数の部位とを有す
る構造体。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、遺伝子の発現、変
異、多型等の解析やプロテオミクス解析などに非常に有
用である、ＤＮＡやタンパク質等の生物学的素材（特に
は、特異的結合パートナー）を固定化した構造体、並び
にその製造方法に関する。
異、多型等の解析やプロテオミクス解析などに非常に有
用である、ＤＮＡやタンパク質等の生物学的素材（特に
は、特異的結合パートナー）を固定化した構造体、並び
にその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、多彩な生物の遺伝子機能を効率的
に解析するための技術開発が急速に進んでいる。例え
ば、ＤＮＡもしくはＤＮＡ断片の塩基配列の解析のため
には、ＤＮＡチップとよばれる、多数のＤＮＡ断片ある
いは合成オリゴヌクレオチドなどのヌクレオチド誘導体
を固相基板の表面に固定した検出用具が用いられてい
る。このような固相基板の表面に結合固定されたヌクレ
オチド誘導体などのＤＮＡもしくはその断片、あるいは
合成オリゴヌクレオチドのような検出用分子はプローブ
分子とも呼ばれる。代表的なＤＮＡチップは、スライド
ガラス等の固相担体に多数のプローブ分子を整列固定さ
せたマイクロアレイである。このＤＮＡチップの製造、
そしてその使用に関するＤＮＡチップ関連技術は、ＤＮ
Ａ以外の生体分子の検出にも利用可能であると考えら
れ、従って、創薬研究、疾病の診断や予防法の開発等に
新しい手段を提供するものとして期待されている。
に解析するための技術開発が急速に進んでいる。例え
ば、ＤＮＡもしくはＤＮＡ断片の塩基配列の解析のため
には、ＤＮＡチップとよばれる、多数のＤＮＡ断片ある
いは合成オリゴヌクレオチドなどのヌクレオチド誘導体
を固相基板の表面に固定した検出用具が用いられてい
る。このような固相基板の表面に結合固定されたヌクレ
オチド誘導体などのＤＮＡもしくはその断片、あるいは
合成オリゴヌクレオチドのような検出用分子はプローブ
分子とも呼ばれる。代表的なＤＮＡチップは、スライド
ガラス等の固相担体に多数のプローブ分子を整列固定さ
せたマイクロアレイである。このＤＮＡチップの製造、
そしてその使用に関するＤＮＡチップ関連技術は、ＤＮ
Ａ以外の生体分子の検出にも利用可能であると考えら
れ、従って、創薬研究、疾病の診断や予防法の開発等に
新しい手段を提供するものとして期待されている。
【０００３】ＤＮＡチップ関連技術が具体化してきたの
は、ＤＮＡの塩基配列をオリゴヌクレオチドとのハイブ
リダイゼーションによって決定する方法が考案されたこ
とに始まる。この方法は、ゲル電気泳動を用いる塩基配
列決定法の限界を克服できる方法ではあったが、当初は
実用化には至らなかった。
は、ＤＮＡの塩基配列をオリゴヌクレオチドとのハイブ
リダイゼーションによって決定する方法が考案されたこ
とに始まる。この方法は、ゲル電気泳動を用いる塩基配
列決定法の限界を克服できる方法ではあったが、当初は
実用化には至らなかった。
【０００４】その後、上記のような構成のＤＮＡチップ
と、その作製技術が開発され、遺伝子の発現、変異、多
型等を短時間で効率よく調べることが可能となった。す
なわち、作製されたＤＮＡチップ上のＤＮＡ断片もしく
はオリゴヌクレオチドに相補性を示すＤＮＡ断片試料
（標的ＤＮＡ断片ともいわれる）は、一般的には、ＤＮ
Ａチップ上のＤＮＡ断片もしくはオリゴヌクレオチド
と、標識したＤＮＡ断片試料とのハイブリダイゼーショ
ンを利用して検出される。
と、その作製技術が開発され、遺伝子の発現、変異、多
型等を短時間で効率よく調べることが可能となった。す
なわち、作製されたＤＮＡチップ上のＤＮＡ断片もしく
はオリゴヌクレオチドに相補性を示すＤＮＡ断片試料
（標的ＤＮＡ断片ともいわれる）は、一般的には、ＤＮ
Ａチップ上のＤＮＡ断片もしくはオリゴヌクレオチド
と、標識したＤＮＡ断片試料とのハイブリダイゼーショ
ンを利用して検出される。
【０００５】ＤＮＡチップの作製方法としては、固相担
体表面で直接オリゴヌクレオチドを合成する方法（「オ
ン・チップ法」という。）と、予め調製用意したＤＮＡ
断片あるいはオリゴヌクレオチドを固相担体表面に結合
固定する方法 [Science 270,467-470(1995)]とが知られ
ている。前者のオン・チップ法としては、光照射で選択
的に除去される保護基の使用と、半導体製造に利用され
るフォトリソグラフィー技術および固相合成技術とを組
み合わせ、所定の微少なマトリックス領域でのオリゴヌ
クレオチドの選択的な合成を行なう方法（「マスキング
技術」という）が代表的である。この方法は高価な製造
装置と多段の製造プロセスにより、チップ当たりの大き
なコストダウンが困難とされる。また、後者の方法も特
別なスポット装置が必要であること、精度良くスポット
できない事、大量生産が困難であること等、多くの問題
点があった。
体表面で直接オリゴヌクレオチドを合成する方法（「オ
ン・チップ法」という。）と、予め調製用意したＤＮＡ
断片あるいはオリゴヌクレオチドを固相担体表面に結合
固定する方法 [Science 270,467-470(1995)]とが知られ
ている。前者のオン・チップ法としては、光照射で選択
的に除去される保護基の使用と、半導体製造に利用され
るフォトリソグラフィー技術および固相合成技術とを組
み合わせ、所定の微少なマトリックス領域でのオリゴヌ
クレオチドの選択的な合成を行なう方法（「マスキング
技術」という）が代表的である。この方法は高価な製造
装置と多段の製造プロセスにより、チップ当たりの大き
なコストダウンが困難とされる。また、後者の方法も特
別なスポット装置が必要であること、精度良くスポット
できない事、大量生産が困難であること等、多くの問題
点があった。
【０００６】上記の問題点を改善するための手段の一例
として、特開２０００−２４５４６０号公報には、中空
繊維の中にＤＮＡを固定化しておき、この中空繊維の何
本を束ね、集積体とした後、カッテングして薄片体を作
製する方法が記載されている。
として、特開２０００−２４５４６０号公報には、中空
繊維の中にＤＮＡを固定化しておき、この中空繊維の何
本を束ね、集積体とした後、カッテングして薄片体を作
製する方法が記載されている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、安価かつ大
量製造が可能な、生物学的素材が固定化された構造体、
並びにその製造方法を提供すること解決すべき課題とす
る。
量製造が可能な、生物学的素材が固定化された構造体、
並びにその製造方法を提供すること解決すべき課題とす
る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するために鋭意検討した結果、シート材料上にオリ
ゴヌクレオチドを線状にドットし、接着剤を塗布後、該
シートを巻いて円筒状とし、この円筒状物質を薄片とし
て切り出すことにより、オリゴヌクレオチドを固定化し
た薄片体を得ることに成功した。さらに、本発明者ら
は、上記薄片体を用いてオリゴヌクレオチドの検出を試
みた結果、固定化したオリゴヌクレオチドに対して相補
的な配列を有するＤＮＡを効率良く検出できることを実
証した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したもの
である。
解決するために鋭意検討した結果、シート材料上にオリ
ゴヌクレオチドを線状にドットし、接着剤を塗布後、該
シートを巻いて円筒状とし、この円筒状物質を薄片とし
て切り出すことにより、オリゴヌクレオチドを固定化し
た薄片体を得ることに成功した。さらに、本発明者ら
は、上記薄片体を用いてオリゴヌクレオチドの検出を試
みた結果、固定化したオリゴヌクレオチドに対して相補
的な配列を有するＤＮＡを効率良く検出できることを実
証した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したもの
である。
【０００９】即ち、本発明によれば、渦巻き状に固定し
た紐状担体と、該紐状担体上に生物学的素材が固定され
た複数の部位とを有する構造体が提供される。好ましく
は、紐状担体は、シート状担体を切断することにより得
られたものであり、さらに好ましくは、紐状担体は、シ
ート状担体を巻き取ることにより形成される棒状物を、
巻き取られたシート状担体の端面が渦巻き状に現れるよ
うに切断することにより得られたものである。
た紐状担体と、該紐状担体上に生物学的素材が固定され
た複数の部位とを有する構造体が提供される。好ましく
は、紐状担体は、シート状担体を切断することにより得
られたものであり、さらに好ましくは、紐状担体は、シ
ート状担体を巻き取ることにより形成される棒状物を、
巻き取られたシート状担体の端面が渦巻き状に現れるよ
うに切断することにより得られたものである。
【００１０】特に好ましくは、本発明の構造体は、生物
学的素材からなる複数の線をシート状担体に固定化した
シート状担体を、前記線の向きと巻き取りにより形成さ
れる棒状物の中心線方向とが同一方向になるように巻き
取り、得られた棒状物を、巻き取られたシート状担体の
端面が渦巻き状に現れるように切断することにより得ら
れるものである。
学的素材からなる複数の線をシート状担体に固定化した
シート状担体を、前記線の向きと巻き取りにより形成さ
れる棒状物の中心線方向とが同一方向になるように巻き
取り、得られた棒状物を、巻き取られたシート状担体の
端面が渦巻き状に現れるように切断することにより得ら
れるものである。
【００１１】好ましくは、生物学的素材からなる複数の
線は、１０μｍ〜１ｃｍの間隔でシート状担体に固定化
される。好ましくは、本発明の構造体の厚さは１μｍか
ら５,０００μｍの範囲内である。
線は、１０μｍ〜１ｃｍの間隔でシート状担体に固定化
される。好ましくは、本発明の構造体の厚さは１μｍか
ら５,０００μｍの範囲内である。
【００１２】好ましくは、生物学的素材は、特異的結合
パートナーの構成員である。好ましくは、特異的結合パ
ートナーは、抗体もしくは抗体フラグメント／リガン
ド、抗体もしくは抗体フラグメント／抗原、抗体もしく
は抗体フラグメント／ハプテン、又はレセプター／リガ
ンドである。
パートナーの構成員である。好ましくは、特異的結合パ
ートナーは、抗体もしくは抗体フラグメント／リガン
ド、抗体もしくは抗体フラグメント／抗原、抗体もしく
は抗体フラグメント／ハプテン、又はレセプター／リガ
ンドである。
【００１３】好ましくは、特異的結合パートナーがアビ
ジン類／ビオチン類である。好ましくは、アビジン類
は、アビジン、ストレプトアビジンまたはビオチンと安
定な複合体を形成しうるこれらの改変体である。好まし
くは、ビオチン類は、ビチオン、ビオシチン、デスチオ
ビオチン、オキシビオチンまたはアビジンと安定な複合
体を形成しうるこれらの誘導体である。
ジン類／ビオチン類である。好ましくは、アビジン類
は、アビジン、ストレプトアビジンまたはビオチンと安
定な複合体を形成しうるこれらの改変体である。好まし
くは、ビオチン類は、ビチオン、ビオシチン、デスチオ
ビオチン、オキシビオチンまたはアビジンと安定な複合
体を形成しうるこれらの誘導体である。
【００１４】好ましくは、特異的結合パートナーは、核
酸／核酸、または核酸／核酸結合物質である。好ましく
は、核酸は、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド又
はペプチド核酸である。
酸／核酸、または核酸／核酸結合物質である。好ましく
は、核酸は、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド又
はペプチド核酸である。
【００１５】好ましくは、核酸結合物質は２本鎖ＤＮＡ
認識物質である。好ましくは、２本鎖ＤＮＡ認識物質
は、２本鎖ＤＮＡ認識抗体、ＤＮＡ転写因子、Ｚｎフィ
ンガーモチーフ若しくはリングフィンガーモチーフを有
するタンパク質、又はペプチド核酸である。
認識物質である。好ましくは、２本鎖ＤＮＡ認識物質
は、２本鎖ＤＮＡ認識抗体、ＤＮＡ転写因子、Ｚｎフィ
ンガーモチーフ若しくはリングフィンガーモチーフを有
するタンパク質、又はペプチド核酸である。
【００１６】本発明の別の側面によれば、上記した構造
体を有することを特徴とする、分析素子及び分析チップ
が提供される。本発明のさらに別の側面によれば、
（１）生物学的素材からなる複数の線をシート状担体に
固定化したシート状担体を、前記線の向きと巻き取りに
より形成される棒状物の中心線方向とが同一方向になる
ように巻き取る工程；及び（２）上記工程（１）で得ら
れた棒状物を、巻き取られたシート状担体の端面が渦巻
き状に現れるように切断する工程；を含む、生物学的素
材固定化構造体の製造方法が提供される。
体を有することを特徴とする、分析素子及び分析チップ
が提供される。本発明のさらに別の側面によれば、
（１）生物学的素材からなる複数の線をシート状担体に
固定化したシート状担体を、前記線の向きと巻き取りに
より形成される棒状物の中心線方向とが同一方向になる
ように巻き取る工程；及び（２）上記工程（１）で得ら
れた棒状物を、巻き取られたシート状担体の端面が渦巻
き状に現れるように切断する工程；を含む、生物学的素
材固定化構造体の製造方法が提供される。
【００１７】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て詳細に説明する。本発明の構造体は、渦巻き状に固定
した紐状担体と、該紐状担体上に生物学的素材が固定さ
れた複数の部位とを有するものである。渦巻き状に固定
した紐状担体は、好ましくは、シート状担体を切断する
ことにより得られたものであり、より具体的には、シー
ト状担体を巻き取ることにより形成される棒状物を、巻
き取られたシート状担体の端面が渦巻き状に現れるよう
に切断することにより得られたものである。
て詳細に説明する。本発明の構造体は、渦巻き状に固定
した紐状担体と、該紐状担体上に生物学的素材が固定さ
れた複数の部位とを有するものである。渦巻き状に固定
した紐状担体は、好ましくは、シート状担体を切断する
ことにより得られたものであり、より具体的には、シー
ト状担体を巻き取ることにより形成される棒状物を、巻
き取られたシート状担体の端面が渦巻き状に現れるよう
に切断することにより得られたものである。
【００１８】本発明の構造体は、例えば、生物学的素材
からなる複数の線をシート状担体に固定化したシート状
担体を、前記線の向きと巻き取りにより形成される棒状
物の中心線方向とが同一方向になるように巻き取り、得
られた棒状物を、巻き取られたシート状担体の端面が渦
巻き状に現れるように切断することにより作製すること
ができる。即ち、本発明の構造体は、シート状担体を巻
き取る工程と、これにより形成された棒状物を切断する
工程とにより作製することができる。これらの工程の模
式図を図１に示す。
からなる複数の線をシート状担体に固定化したシート状
担体を、前記線の向きと巻き取りにより形成される棒状
物の中心線方向とが同一方向になるように巻き取り、得
られた棒状物を、巻き取られたシート状担体の端面が渦
巻き状に現れるように切断することにより作製すること
ができる。即ち、本発明の構造体は、シート状担体を巻
き取る工程と、これにより形成された棒状物を切断する
工程とにより作製することができる。これらの工程の模
式図を図１に示す。
【００１９】図１において、上段の（Ａ）は、生物学的
素材からなる複数の線を固定化したシート状担体を示
す。
素材からなる複数の線を固定化したシート状担体を示
す。
【００２０】シート状担体を構成するシート物質として
は、特異的結合パートナーの一員相互間の結合形成に悪
影響を及ぼさないもので、巻き取り可能な柔らかい形状
を有するものが好ましい。また、その表面が凹凸を有す
る平面性の低い基板も用いることができる。シート状担
体の材質の具体例としては、ポリエチレンテレフタレー
ト、ポリブチレンテレフタレート、酸セルロース、ビス
フェノールＡのポリカーボネート、ポリスチレン、ポリ
メチルメタクリレート、ナイロン６、ナイロン６６、ポ
リエチレンテレフタレート、ポリ乳酸、ポリグリコール
酸等のポリエステル系、ポリアクリロニトリル等のアク
リル系、ポリエチレンやポリプロピレン等のポリオレフ
ィン系、ポリビニルアルコール系、ポリ塩化ビニリデン
系、塩化ビニル系、ポリウレタン系、フェノール系、ポ
リフッ化ビニリデンやポリテトラフルオロエチレン等か
らなるフッ素、ポリアルキレンパラオキシベンゾエート
系、ジアセテート、トリアセテート、キチン、キトサン
等を原料としたセルロース系誘導体系、プロミックスと
呼称される蛋白質系、ビスコース法や銅−アンモニア
法、あるいは有機溶剤法により得られるセルロース系
（レーヨン、キュプラ、ポリノジック等）、亜麻、苧
麻、黄麻などが挙げられる。
は、特異的結合パートナーの一員相互間の結合形成に悪
影響を及ぼさないもので、巻き取り可能な柔らかい形状
を有するものが好ましい。また、その表面が凹凸を有す
る平面性の低い基板も用いることができる。シート状担
体の材質の具体例としては、ポリエチレンテレフタレー
ト、ポリブチレンテレフタレート、酸セルロース、ビス
フェノールＡのポリカーボネート、ポリスチレン、ポリ
メチルメタクリレート、ナイロン６、ナイロン６６、ポ
リエチレンテレフタレート、ポリ乳酸、ポリグリコール
酸等のポリエステル系、ポリアクリロニトリル等のアク
リル系、ポリエチレンやポリプロピレン等のポリオレフ
ィン系、ポリビニルアルコール系、ポリ塩化ビニリデン
系、塩化ビニル系、ポリウレタン系、フェノール系、ポ
リフッ化ビニリデンやポリテトラフルオロエチレン等か
らなるフッ素、ポリアルキレンパラオキシベンゾエート
系、ジアセテート、トリアセテート、キチン、キトサン
等を原料としたセルロース系誘導体系、プロミックスと
呼称される蛋白質系、ビスコース法や銅−アンモニア
法、あるいは有機溶剤法により得られるセルロース系
（レーヨン、キュプラ、ポリノジック等）、亜麻、苧
麻、黄麻などが挙げられる。
【００２１】また、電気化学的な分析方法に用いる電極
基板、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサ用基
板、電荷結合素子（ＣＣＤ）などの各種の基板をシート
状にしても良い。代表的な例としては、金、銀を薄膜に
したシート状材料を用いることができる。さらにこれら
のシート物質は単独で利用することができるが、シート
状物質に、生物学的素材が結合し易い様な試薬をコート
して使用することもできる。生物学的素材がマイナスの
電荷（例えばＤＮＡ、もしくはその誘導体）を持ってい
る時には、試薬として、アミン系物質（プラス電荷）を
コートすれば良い。また、生物学的素材と共有結合する
官能基を予めシート物質にコートすることもできる。こ
のような官能基の種類のしては、サクシイミド、マレイ
イミド、酸無水物、カルボジイミド、メルカプト、ビニ
ルスルホン等が挙げられるが、これに限定するものでは
ない。ＤＮＡ、タンパク、ハプテン等の生物学的素材を
固相担体に固定化することが可能な任意の手法を利用す
ることができる。
基板、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサ用基
板、電荷結合素子（ＣＣＤ）などの各種の基板をシート
状にしても良い。代表的な例としては、金、銀を薄膜に
したシート状材料を用いることができる。さらにこれら
のシート物質は単独で利用することができるが、シート
状物質に、生物学的素材が結合し易い様な試薬をコート
して使用することもできる。生物学的素材がマイナスの
電荷（例えばＤＮＡ、もしくはその誘導体）を持ってい
る時には、試薬として、アミン系物質（プラス電荷）を
コートすれば良い。また、生物学的素材と共有結合する
官能基を予めシート物質にコートすることもできる。こ
のような官能基の種類のしては、サクシイミド、マレイ
イミド、酸無水物、カルボジイミド、メルカプト、ビニ
ルスルホン等が挙げられるが、これに限定するものでは
ない。ＤＮＡ、タンパク、ハプテン等の生物学的素材を
固相担体に固定化することが可能な任意の手法を利用す
ることができる。
【００２２】シート物質に生物学的素材を線状に形成す
る方法としては、スリット塗布、スポット法、インクジ
ェット法などが挙げられる。
る方法としては、スリット塗布、スポット法、インクジ
ェット法などが挙げられる。
【００２３】生物学的素材がタンパク質の場合には、ス
ポッター装置を用いることもできるが、ピンヘッドの性
状によってはタンパク質の活性を低下させる可能性もあ
る。その場合は、インクジェット装置などを用いること
が好ましい。ライン形成後のタンパク質の乾燥及び変性
を防ぐために、ヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体
の場合と同様に高沸点の物質を添加してもよい。
ポッター装置を用いることもできるが、ピンヘッドの性
状によってはタンパク質の活性を低下させる可能性もあ
る。その場合は、インクジェット装置などを用いること
が好ましい。ライン形成後のタンパク質の乾燥及び変性
を防ぐために、ヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体
の場合と同様に高沸点の物質を添加してもよい。
【００２４】線の幅は検出する機器の解像度に合わせて
設定することができ、特に限定されないが、マイクロア
レイの場合には、１００μｍあれば十分である。線の間
隔は生物学的素材の種類が多い場合、間隔を狭くするこ
とでより小さい薄片を作成することができる。線の間隔
は特に限定されないが、一般的には１０μｍ〜１ｃｍで
ある。
設定することができ、特に限定されないが、マイクロア
レイの場合には、１００μｍあれば十分である。線の間
隔は生物学的素材の種類が多い場合、間隔を狭くするこ
とでより小さい薄片を作成することができる。線の間隔
は特に限定されないが、一般的には１０μｍ〜１ｃｍで
ある。
【００２５】本発明においては、上記した生物学的素材
からなる複数の線を固定化したシート状担体を巻き取る
ことにより、棒状物を形成する。図１の中段の（Ｂ）
は、このようにして形成された棒状物を示す。棒状物を
形成するための巻き取りは、シート状担体に固定化した
線の向きと、棒状物の中心線方向とが同一方向になるよ
うに巻き取る。ここで言う中心線とは、棒状物（円柱
物）の渦巻きの中心を貫通する線を意味し、図１におい
て中心線として示す方向の線である。
からなる複数の線を固定化したシート状担体を巻き取る
ことにより、棒状物を形成する。図１の中段の（Ｂ）
は、このようにして形成された棒状物を示す。棒状物を
形成するための巻き取りは、シート状担体に固定化した
線の向きと、棒状物の中心線方向とが同一方向になるよ
うに巻き取る。ここで言う中心線とは、棒状物（円柱
物）の渦巻きの中心を貫通する線を意味し、図１におい
て中心線として示す方向の線である。
【００２６】巻き取る前処理として、表面に接着材を利
用すると、後に薄片にする際に再現性が良い。
用すると、後に薄片にする際に再現性が良い。
【００２７】本発明においては、上記のようにシート状
担体を巻き取ることにより形成される棒状物を、巻き取
られたシート状担体の端面が渦巻き状に現れるように切
断することにより、生物学的素材が固定された複数の部
位を有する、渦巻き状に固定した紐状担体（本明細書
中、薄片体とも称する）を作製することができる。図１
では、（Ｂ）の棒状物を切断して、（Ｃ）の薄片体を作
製できることを示す。このように形成された薄片体は、
渦巻き状に固定した紐状担体と、該紐状担体上に生物学
的素材が固定された複数の部位とを有する。
担体を巻き取ることにより形成される棒状物を、巻き取
られたシート状担体の端面が渦巻き状に現れるように切
断することにより、生物学的素材が固定された複数の部
位を有する、渦巻き状に固定した紐状担体（本明細書
中、薄片体とも称する）を作製することができる。図１
では、（Ｂ）の棒状物を切断して、（Ｃ）の薄片体を作
製できることを示す。このように形成された薄片体は、
渦巻き状に固定した紐状担体と、該紐状担体上に生物学
的素材が固定された複数の部位とを有する。
【００２８】薄片体を作製する方法は、例えば、ダイヤ
モンドワイヤー切断機（ムサシノ電子社）、ミクロトー
ムを用いて薄片体を切り出す方法等が挙げられる。薄片
体の厚みは任意に調整することができるが、通常１〜
５,０００μｍ、好ましくは１０〜２,０００μｍであ
る。
モンドワイヤー切断機（ムサシノ電子社）、ミクロトー
ムを用いて薄片体を切り出す方法等が挙げられる。薄片
体の厚みは任意に調整することができるが、通常１〜
５,０００μｍ、好ましくは１０〜２,０００μｍであ
る。
【００２９】本発明で用いる生物学的素材の種類は特に
限定されず任意の物質を使用できるが、他の物質と親和
性を有する物質が好ましく、特には、特異的結合パート
ナーの構成員であることが好ましい。
限定されず任意の物質を使用できるが、他の物質と親和
性を有する物質が好ましく、特には、特異的結合パート
ナーの構成員であることが好ましい。
【００３０】生物学的な特異的結合を形成することがで
きる特異的結合パートナーの種類は特に限定されるもの
でないが、抗体もしくは抗体フラグメント／リガンド、
抗体もしくは抗体フラグメント／抗原、抗体もしくは抗
体フラグメント／ハプテンなどの抗原決定基をもつも
の、レセプター／リガンド、アビジン類／ビオチン類、
核酸／核酸、核酸／核酸結合タンパク質等の組み合わせ
が挙げられる。
きる特異的結合パートナーの種類は特に限定されるもの
でないが、抗体もしくは抗体フラグメント／リガンド、
抗体もしくは抗体フラグメント／抗原、抗体もしくは抗
体フラグメント／ハプテンなどの抗原決定基をもつも
の、レセプター／リガンド、アビジン類／ビオチン類、
核酸／核酸、核酸／核酸結合タンパク質等の組み合わせ
が挙げられる。
【００３１】本発明に従って作製される生物学的素材が
固定化された構造体をＤＮＡチップとして使用する場合
には、一定の結合強度を有するため、その後のハイブリ
ダイゼーション操作に精度よく反復使用できるものであ
る。
固定化された構造体をＤＮＡチップとして使用する場合
には、一定の結合強度を有するため、その後のハイブリ
ダイゼーション操作に精度よく反復使用できるものであ
る。
【００３２】ビオチン類としては、ビオチン、ビオシチ
ン、デスチオビオチン、オキシビオチンまたはアビジン
と安定な複合体を形成しうるこれらの誘導体が挙げられ
る。このような安定な複合体を形成しうるとは、ビオチ
ン−アビジン複合体の解離定数（１０-15Ｍ）に近似す
る解離定数を有する複合体を形成することができること
を意味する。一方、アビジン類としては、アビジン、ス
トレプトアビジンまたはビオチンと安定な複合体を形成
しうるこれらの改変体が挙げられる。ここにいう、「安
定な複合体」の意味も、上記、ビオチン類について定義
したのと同義である。また改変体とは、天然由来のアビ
ジンまたはストレプトアビジンの修飾体もしくは断片、
あるいはそれらの組換え体を意味する。
ン、デスチオビオチン、オキシビオチンまたはアビジン
と安定な複合体を形成しうるこれらの誘導体が挙げられ
る。このような安定な複合体を形成しうるとは、ビオチ
ン−アビジン複合体の解離定数（１０-15Ｍ）に近似す
る解離定数を有する複合体を形成することができること
を意味する。一方、アビジン類としては、アビジン、ス
トレプトアビジンまたはビオチンと安定な複合体を形成
しうるこれらの改変体が挙げられる。ここにいう、「安
定な複合体」の意味も、上記、ビオチン類について定義
したのと同義である。また改変体とは、天然由来のアビ
ジンまたはストレプトアビジンの修飾体もしくは断片、
あるいはそれらの組換え体を意味する。
【００３３】核酸としては特に限定されるものではない
が、ヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体が挙げられ
る。代表例としては、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレ
オチド、そしてペプチド核酸を挙げることができる。こ
れらのヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体として
は、天然起源のもの（ＤＮＡ、ＤＮＡ断片、ＲＮＡ、あ
るいはＲＮＡ断片など）であってもよく、あるいは合成
化合物であってもよい。また、ヌクレオチド誘導体もし
くはその類縁体としては、その糖単位部分に架橋基を有
するＬＮＡと呼ばれる化合物（J. Am. Chem. Soc. 199
8, 120, 13252-13253に記載）などの各種の類縁化合物
が含まれる。
が、ヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体が挙げられ
る。代表例としては、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレ
オチド、そしてペプチド核酸を挙げることができる。こ
れらのヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体として
は、天然起源のもの（ＤＮＡ、ＤＮＡ断片、ＲＮＡ、あ
るいはＲＮＡ断片など）であってもよく、あるいは合成
化合物であってもよい。また、ヌクレオチド誘導体もし
くはその類縁体としては、その糖単位部分に架橋基を有
するＬＮＡと呼ばれる化合物（J. Am. Chem. Soc. 199
8, 120, 13252-13253に記載）などの各種の類縁化合物
が含まれる。
【００３４】核酸結合物質として特に限定されるもので
はないが、二本鎖ＤＮＡ認識物質が挙げられる。二本鎖
ＤＮＡ認識物質としては、二本鎖ＤＮＡを認識し、特異
的に結合する物質を示す。二本鎖ＤＮＡ認識物質の具体
例としては、ＤＮＡ転写因子、ミスマッチ修復タンパク
質、二本鎖ＤＮＡ認識抗体、又はペプチド核酸などを挙
げることができる。二本鎖認識物質としては、Ｚｎフィ
ンガーモチーフまたはリングフィンガーモチーフを持つ
ものが挙げられる。
はないが、二本鎖ＤＮＡ認識物質が挙げられる。二本鎖
ＤＮＡ認識物質としては、二本鎖ＤＮＡを認識し、特異
的に結合する物質を示す。二本鎖ＤＮＡ認識物質の具体
例としては、ＤＮＡ転写因子、ミスマッチ修復タンパク
質、二本鎖ＤＮＡ認識抗体、又はペプチド核酸などを挙
げることができる。二本鎖認識物質としては、Ｚｎフィ
ンガーモチーフまたはリングフィンガーモチーフを持つ
ものが挙げられる。
【００３５】ＤＮＡ転写因子は、遺伝子上のプロモータ
ー領域に結合して、ＤＮＡからｍＲＮＡへの転写を制御
する物質である（田村隆明著：転写因子（羊土社 １９
９５年））。従って、転写因子は特定の配列の２本鎖Ｄ
ＮＡに特異的に結合することが知られている。
ー領域に結合して、ＤＮＡからｍＲＮＡへの転写を制御
する物質である（田村隆明著：転写因子（羊土社 １９
９５年））。従って、転写因子は特定の配列の２本鎖Ｄ
ＮＡに特異的に結合することが知られている。
【００３６】多数ある転写因子のうち、Ｚｉｎｃ Ｆｉ
ｎｇｅｒ ＰｒｏｔｅｉｎつまりＺｉｎｃ Ｆｉｎｇｅ
ｒやＲｉｎｇ Ｆｉｎｇｅｒモチーフをもつ転写因子群
は、真核生物における出現率は非常に高く、ゲノム中の
１％はこれをコードしているらしい。Ｐａｂｏ等はＺｉ
ｎｃ Ｆｉｇｅｒモチーフの３次構造を解析、ＤＮＡと
結合するメカニズムの解明した（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５
２， ８０９（１９９１））。さらに、Ｃｈｏｏ等は、
遺伝子組換法により、特定の配列に結合する自然界には
ないＺｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ群を作製
することに成功している（Ｎａｔｕｒｅ ３７２，６４
２［１９９４］，ＰＮＡＳ９１，１１１６３（１９９
４））。さらに、Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのグループはＰｈａｇｅ Ｄｉｓｐ
ｌａｙにより新規なＺｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎ群の作製に成功している（ＰＮＡＳ９５，２８１
２，［１９９８］：９６，２７５８（１９９９））。こ
のように、Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎに
代表されるＤＮＡ転写因子群は、本来２本鎖ＤＮＡと結
合する性質をもっており、かつ近年の研究によれば、任
意のＤＮＡ配列を認識する組換体の作製も可能となって
きている。このような、タンパク質を固定化することに
より、２本鎖ＤＮＡを効率良く支持体上に捕捉すること
が可能である。その他、核酸結合物質としては、ヘリッ
クス・ループ・ヘリックスタンパク質やＥｔｓドメイン
を持つものも挙げられる。
ｎｇｅｒ ＰｒｏｔｅｉｎつまりＺｉｎｃ Ｆｉｎｇｅ
ｒやＲｉｎｇ Ｆｉｎｇｅｒモチーフをもつ転写因子群
は、真核生物における出現率は非常に高く、ゲノム中の
１％はこれをコードしているらしい。Ｐａｂｏ等はＺｉ
ｎｃ Ｆｉｇｅｒモチーフの３次構造を解析、ＤＮＡと
結合するメカニズムの解明した（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５
２， ８０９（１９９１））。さらに、Ｃｈｏｏ等は、
遺伝子組換法により、特定の配列に結合する自然界には
ないＺｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ群を作製
することに成功している（Ｎａｔｕｒｅ ３７２，６４
２［１９９４］，ＰＮＡＳ９１，１１１６３（１９９
４））。さらに、Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのグループはＰｈａｇｅ Ｄｉｓｐ
ｌａｙにより新規なＺｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎ群の作製に成功している（ＰＮＡＳ９５，２８１
２，［１９９８］：９６，２７５８（１９９９））。こ
のように、Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎに
代表されるＤＮＡ転写因子群は、本来２本鎖ＤＮＡと結
合する性質をもっており、かつ近年の研究によれば、任
意のＤＮＡ配列を認識する組換体の作製も可能となって
きている。このような、タンパク質を固定化することに
より、２本鎖ＤＮＡを効率良く支持体上に捕捉すること
が可能である。その他、核酸結合物質としては、ヘリッ
クス・ループ・ヘリックスタンパク質やＥｔｓドメイン
を持つものも挙げられる。
【００３７】本発明による生物学的素材（例えば、ヌク
レオチド誘導体もしくはその類縁体など）が固定された
構造体は、分析素子又は分析チップとして、遺伝子発現
のモニタリング、塩基配列の決定、変異解析、多型解析
等において利用することができる。核酸を固定化した場
合の検出原理は、後述する標識した試料核酸断片とのハ
イブリダイゼーションである。
レオチド誘導体もしくはその類縁体など）が固定された
構造体は、分析素子又は分析チップとして、遺伝子発現
のモニタリング、塩基配列の決定、変異解析、多型解析
等において利用することができる。核酸を固定化した場
合の検出原理は、後述する標識した試料核酸断片とのハ
イブリダイゼーションである。
【００３８】標識方法としては、ＲＩ法と非ＲＩ法（蛍
光法、ビオチン法、化学発光法等）とが知られている
が、本発明では蛍光法を用いることが好ましい。蛍光標
識に利用される蛍光物質としては、核酸の塩基部分と結
合できるものであれば何れも用いることができるが、シ
アニン色素（例えば、市販のＣｙ ＤｙｅTMシリーズの
Ｃｙ３、Ｃｙ５等）、ローダミン６Ｇ試薬、Ｎ−アセト
キシ−Ｎ2−アセチルアミノフルオレン（ＡＡＦ）ある
いはＡＡＩＦ（ＡＡＦのヨウ素誘導体）を使用すること
ができる。
光法、ビオチン法、化学発光法等）とが知られている
が、本発明では蛍光法を用いることが好ましい。蛍光標
識に利用される蛍光物質としては、核酸の塩基部分と結
合できるものであれば何れも用いることができるが、シ
アニン色素（例えば、市販のＣｙ ＤｙｅTMシリーズの
Ｃｙ３、Ｃｙ５等）、ローダミン６Ｇ試薬、Ｎ−アセト
キシ−Ｎ2−アセチルアミノフルオレン（ＡＡＦ）ある
いはＡＡＩＦ（ＡＡＦのヨウ素誘導体）を使用すること
ができる。
【００３９】試料核酸断片としては、通常、その配列や
機能が未知であるＤＮＡ断片試料あるいはＲＮＡ断片試
料などの核酸断片試料が用いられる。
機能が未知であるＤＮＡ断片試料あるいはＲＮＡ断片試
料などの核酸断片試料が用いられる。
【００４０】核酸断片試料は、遺伝子発現を調べる目的
では、真核生物の細胞や組織サンプルから単離すること
が好ましい。試料がゲノムならば、赤血球を除く任意の
組織サンプルから単離することが好ましい。赤血球を除
く任意の組織は、抹消血液リンパ球、皮膚、毛髪、精液
等であることが好ましい。試料がｍＲＮＡならば、ｍＲ
ＮＡが発現される組織サンプルから抽出することが好ま
しい。ｍＲＮＡは、逆転写反応により標識ｄＮＴＰ
（「ｄＮＴＰ」は、塩基がアデニン（Ａ）、シトシン
（Ｃ）、グアニン（Ｇ）もしくはチミン（Ｔ）であるデ
オキシリボヌクレオチドを意味する。）を取り込ませて
標識ｃＤＮＡとすることが好ましい。ｄＮＴＰとして
は、化学的な安定性のため、ｄＣＴＰを用いることが好
ましい。一回のハイブリダイゼーションに必要なｍＲＮ
Ａ量は、点着する液量や標識方法によって異なるが、数
μｇ以下である。なお、ヌクレオチド誘導体もしくはそ
の類縁体固定固相担体上のＤＮＡ断片がオリゴＤＮＡで
ある場合には、核酸断片試料は低分子化しておくことが
望ましい。原核生物の細胞では、ｍＲＮＡの選択的な抽
出が困難なため、全ＲＮＡを標識することが好ましい。
では、真核生物の細胞や組織サンプルから単離すること
が好ましい。試料がゲノムならば、赤血球を除く任意の
組織サンプルから単離することが好ましい。赤血球を除
く任意の組織は、抹消血液リンパ球、皮膚、毛髪、精液
等であることが好ましい。試料がｍＲＮＡならば、ｍＲ
ＮＡが発現される組織サンプルから抽出することが好ま
しい。ｍＲＮＡは、逆転写反応により標識ｄＮＴＰ
（「ｄＮＴＰ」は、塩基がアデニン（Ａ）、シトシン
（Ｃ）、グアニン（Ｇ）もしくはチミン（Ｔ）であるデ
オキシリボヌクレオチドを意味する。）を取り込ませて
標識ｃＤＮＡとすることが好ましい。ｄＮＴＰとして
は、化学的な安定性のため、ｄＣＴＰを用いることが好
ましい。一回のハイブリダイゼーションに必要なｍＲＮ
Ａ量は、点着する液量や標識方法によって異なるが、数
μｇ以下である。なお、ヌクレオチド誘導体もしくはそ
の類縁体固定固相担体上のＤＮＡ断片がオリゴＤＮＡで
ある場合には、核酸断片試料は低分子化しておくことが
望ましい。原核生物の細胞では、ｍＲＮＡの選択的な抽
出が困難なため、全ＲＮＡを標識することが好ましい。
【００４１】核酸断片試料は、遺伝子の変異や多型を調
べる目的では、標識プライマーもしくは標識ｄＮＴＰを
含む反応系において標的領域のＰＣＲを行なって得るこ
とが好ましい。
べる目的では、標識プライマーもしくは標識ｄＮＴＰを
含む反応系において標的領域のＰＣＲを行なって得るこ
とが好ましい。
【００４２】ハイブリダイゼーションは、９６穴もしく
は３８４穴プラスチックプレートに分注しておいた、標
識した核酸断片試料が溶解あるいは分散してなる水性液
を、本発明のヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体を
固定した固相担体上に点着することによって実施するこ
とができる。点着の量は、１乃至１００ｎＬの範囲にあ
ることが好ましい。ハイブリダイゼーションは、室温乃
至７０℃の温度範囲で、そして６乃至２０時間の範囲で
実施することが好ましい。ハイブリダイゼーションの終
了後、界面活性剤と緩衝液との混合溶液を用いて洗浄を
行い、未反応の核酸断片試料を除去することが好まし
い。界面活性剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム（Ｓ
ＤＳ）を用いることが好ましい。緩衝液としては、クエ
ン酸緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、トリス緩衝
液、グッド緩衝液等を用いることができるが、クエン酸
緩衝液を用いることが特に好ましい。
は３８４穴プラスチックプレートに分注しておいた、標
識した核酸断片試料が溶解あるいは分散してなる水性液
を、本発明のヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体を
固定した固相担体上に点着することによって実施するこ
とができる。点着の量は、１乃至１００ｎＬの範囲にあ
ることが好ましい。ハイブリダイゼーションは、室温乃
至７０℃の温度範囲で、そして６乃至２０時間の範囲で
実施することが好ましい。ハイブリダイゼーションの終
了後、界面活性剤と緩衝液との混合溶液を用いて洗浄を
行い、未反応の核酸断片試料を除去することが好まし
い。界面活性剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム（Ｓ
ＤＳ）を用いることが好ましい。緩衝液としては、クエ
ン酸緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、トリス緩衝
液、グッド緩衝液等を用いることができるが、クエン酸
緩衝液を用いることが特に好ましい。
【００４３】ヌクレオチド誘導体もしくはその類縁体を
固定した固相担体を用いるハイブリダイゼーションの特
徴は、標識した核酸断片試料の使用量を非常に少なくで
きることである。そのため、固相担体に固定するヌクレ
オチド誘導体もしくはその類縁体の鎖長や標識した核酸
断片試料の種類により、ハイブリダイゼーションの最適
条件を設定する必要がある。遺伝子発現の解析には、低
発現の遺伝子も十分に検出できるように、長時間のハイ
ブリダイゼーションを行うことが好ましい。一塩基変異
の検出には、短時間のハイブリダイゼーションを行うこ
とが好ましい。また、互いに異なる蛍光物質によって標
識した核酸断片試料を二種類用意し、これらを同時にハ
イブリダイゼーションに用いることにより、同一のＤＮ
Ａ断片固定固相担体上で発現量の比較や定量ができる特
徴もある。以下の実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明は実施例によって限定されるものでは
ない。
固定した固相担体を用いるハイブリダイゼーションの特
徴は、標識した核酸断片試料の使用量を非常に少なくで
きることである。そのため、固相担体に固定するヌクレ
オチド誘導体もしくはその類縁体の鎖長や標識した核酸
断片試料の種類により、ハイブリダイゼーションの最適
条件を設定する必要がある。遺伝子発現の解析には、低
発現の遺伝子も十分に検出できるように、長時間のハイ
ブリダイゼーションを行うことが好ましい。一塩基変異
の検出には、短時間のハイブリダイゼーションを行うこ
とが好ましい。また、互いに異なる蛍光物質によって標
識した核酸断片試料を二種類用意し、これらを同時にハ
イブリダイゼーションに用いることにより、同一のＤＮ
Ａ断片固定固相担体上で発現量の比較や定量ができる特
徴もある。以下の実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明は実施例によって限定されるものでは
ない。
【００４４】
【実施例】１．薄片フィルムの作成
ナイロンメンブレン（アマシャムファルマシア製ハイボ
ンドＮプラス）（１５ｃｍ×１５ｃｍ）にＢＩＯ ＤＯ
Ｔ社製で下記の配列を有する２種類のオリゴヌクレオチ
ド（各々１０-5Ｍの溶液）を交互に４０のラインをライ
ン間隔１ｍｍでドットした。 ：３’−ＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＧＧＧＧＡＧＧＡ
ＴＣＴＧＡＣＡＣＴＴＣＡＡＧＧＴＣＴＡＧ−５’（配
列番号１） ：３’−ＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＧＧＧＧＡＧＧＡ
ＴＣＴＧＡＣＡＣＴＴＧＡＡＧＧＴＣＴＡＧ−５’（配
列番号２）
ンドＮプラス）（１５ｃｍ×１５ｃｍ）にＢＩＯ ＤＯ
Ｔ社製で下記の配列を有する２種類のオリゴヌクレオチ
ド（各々１０-5Ｍの溶液）を交互に４０のラインをライ
ン間隔１ｍｍでドットした。 ：３’−ＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＧＧＧＧＡＧＧＡ
ＴＣＴＧＡＣＡＣＴＴＣＡＡＧＧＴＣＴＡＧ−５’（配
列番号１） ：３’−ＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＧＧＧＧＡＧＧＡ
ＴＣＴＧＡＣＡＣＴＴＧＡＡＧＧＴＣＴＡＧ−５’（配
列番号２）
【００４５】ポリウレタン樹脂接着剤を薄く塗布して、
直径２ｍｍのテフロン(登録商標）棒を芯にして、オリ
ゴヌクレオチドが固定化されたナイロンメンブレンを巻
いた。得られた棒状物質を、ミクロトームを用いて２０
０μｍの厚さに切り出すことにより、核酸固定化ゲル保
持フィルム積層体断面を有する薄片を得た。
直径２ｍｍのテフロン(登録商標）棒を芯にして、オリ
ゴヌクレオチドが固定化されたナイロンメンブレンを巻
いた。得られた棒状物質を、ミクロトームを用いて２０
０μｍの厚さに切り出すことにより、核酸固定化ゲル保
持フィルム積層体断面を有する薄片を得た。
【００４６】２． 相補的な標的オリゴヌクレオチド試
料の検出 ５’末端にＣｙ５が結合した２２ｍｅｒのオリゴヌクレ
オチド試料（ＣＴＡＧＴＣＴＧＴＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧ
ＡＴＣ）（配列番号３）をハイブリダイゼーション用溶
液（４×ＳＳＣおよび１０重量％のＳＤＳの混合溶液）
（２００μＬ）に分散させたものと、上記（１）で得た
薄片フィルムとを試験管に入れ密封して、２０時間イン
キュベートした。次いで、このものを０．１重量％ＳＤ
Ｓと２×ＳＳＣとの混合溶液、０．１重量％ＳＤＳと
０．２×ＳＳＣとの混合溶液、および０．２×ＳＳＣ水
溶液で順次洗浄した後、室温で乾燥した。スライドガラ
ス表面の蛍光強度を蛍光スキャニング装置で測定したと
ころ、パ−フェクトマッチが１０７８、ミスマッチが１
９５であった。
料の検出 ５’末端にＣｙ５が結合した２２ｍｅｒのオリゴヌクレ
オチド試料（ＣＴＡＧＴＣＴＧＴＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧ
ＡＴＣ）（配列番号３）をハイブリダイゼーション用溶
液（４×ＳＳＣおよび１０重量％のＳＤＳの混合溶液）
（２００μＬ）に分散させたものと、上記（１）で得た
薄片フィルムとを試験管に入れ密封して、２０時間イン
キュベートした。次いで、このものを０．１重量％ＳＤ
Ｓと２×ＳＳＣとの混合溶液、０．１重量％ＳＤＳと
０．２×ＳＳＣとの混合溶液、および０．２×ＳＳＣ水
溶液で順次洗浄した後、室温で乾燥した。スライドガラ
ス表面の蛍光強度を蛍光スキャニング装置で測定したと
ころ、パ−フェクトマッチが１０７８、ミスマッチが１
９５であった。
【００４７】以上の結果から、本発明によるオリゴヌク
レオチド固定薄片フィルム担体を用いることによって、
オリゴヌクレオチドと相補性を有する標的ＤＮＡ断片試
料のような標的オリゴヌクレオチド試料を効率良く検出
できることが分かる。
レオチド固定薄片フィルム担体を用いることによって、
オリゴヌクレオチドと相補性を有する標的ＤＮＡ断片試
料のような標的オリゴヌクレオチド試料を効率良く検出
できることが分かる。
【００４８】
【発明の効果】本発明により、安価かつ大量製造が可能
な、生物学的素材が固定化された構造体、並びにその製
造方法を提供することが可能になった。本発明の構造体
を用いることにより、オリゴヌクレオチドと相補性を有
する標的オリゴヌクレオチドを効率良く検出することが
できる。
な、生物学的素材が固定化された構造体、並びにその製
造方法を提供することが可能になった。本発明の構造体
を用いることにより、オリゴヌクレオチドと相補性を有
する標的オリゴヌクレオチドを効率良く検出することが
できる。
【００４９】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> Fuji Photo Film Co.Ltd.,
<120> A structural body on which biological materials was immobilized an
d a process for the preparation thereof
<130> A11245MA
<160> 3
【００５０】
<210> 1
<211> 40
<212> DNA
<213> Artificial DNA
<400> 1
tcctccatgt ccggggagga tctgacactt caaggtctag 40
【００５１】
<210> 2
<211> 40
<212> DNA
<213> Artificial DNA
<400> 2
tcctccatgt ccggggagga tctgacactt gaaggtctag 40
【００５２】
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial DNA
<400> 3
ctagtctgtg aagttccaga tc 22
【図１】図１は、本発明による生物学的素材固定化構造
体の製造方法の工程を示す模式図である。
体の製造方法の工程を示す模式図である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 37/00 １０２ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＦ
Ｆターム(参考） 2G042 AA01 BD19 CA10 CB03 DA10
FB05
4B024 AA11 CA01 CA09 CA11 HA11
4B029 AA21 AA23 BB20 CC11
Claims (17)
- 【請求項１】 渦巻き状に固定した紐状担体と、該紐状
担体上に生物学的素材が固定された複数の部位とを有す
る構造体。 - 【請求項２】 紐状担体が、シート状担体を切断するこ
とにより得られたものである、請求項１に記載の構造
体。 - 【請求項３】 紐状担体が、シート状担体を巻き取るこ
とにより形成される棒状物を、巻き取られたシート状担
体の端面が渦巻き状に現れるように切断することにより
得られたものである、請求項１又は２に記載の構造体。 - 【請求項４】 生物学的素材からなる複数の線をシート
状担体に固定化したシート状担体を、前記線の向きと巻
き取りにより形成される棒状物の中心線方向とが同一方
向になるように巻き取り、得られた棒状物を、巻き取ら
れたシート状担体の端面が渦巻き状に現れるように切断
することにより得られる、請求項１から３の何れかに記
載の構造体。 - 【請求項５】 生物学的素材からなる複数の線を、１
０μｍ〜１ｃｍの間隔でシート状担体に固定化すること
を特徴とする、請求項４に記載の構造体。 - 【請求項６】 厚さが１μｍから５,０００μｍの範囲
内である、請求項１から５の何れかに記載の構造体。 - 【請求項７】 生物学的素材が、特異的結合パートナー
の構成員である、請求項１から６に記載の記載の構造
体。 - 【請求項８】 特異的結合パートナーが、抗体もしくは
抗体フラグメント／リガンド、抗体もしくは抗体フラグ
メント／抗原、抗体もしくは抗体フラグメント／ハプテ
ン、又はレセプター／リガンドである、請求項７に記載
の構造体。 - 【請求項９】 特異的結合パートナーがアビジン類／ビ
オチン類である請求項７に記載の構造体。 - 【請求項１０】 アビジン類が、アビジン、ストレプト
アビジンまたはビオチンと安定な複合体を形成しうるこ
れらの改変体である、請求項９に記載の構造体。 - 【請求項１１】 ビオチン類が、ビチオン、ビオシチ
ン、デスチオビオチン、オキシビオチンまたはアビジン
と安定な複合体を形成しうるこれらの誘導体である、請
求項９に記載の構造体。 - 【請求項１２】 特異的結合パートナーが、核酸／核
酸、または核酸／核酸結合物質である、請求項７に記載
の構造体。 - 【請求項１３】 核酸が、オリゴヌクレオチド、ポリヌ
クレオチド又はペプチド核酸である、請求項１２に記載
の構造体。 - 【請求項１４】 核酸結合物質が２本鎖ＤＮＡ認識物質
である、請求項１２に記載の構造体。 - 【請求項１５】 ２本鎖ＤＮＡ認識物質が、２本鎖ＤＮ
Ａ認識抗体、ＤＮＡ転写因子、Ｚｎフィンガーモチーフ
若しくはリングフィンガーモチーフを有するタンパク
質、又はペプチド核酸である、請求項１４に記載の構造
体。 - 【請求項１６】 請求項１から１５の何れかに記載の構
造体を有することを特徴とする、分析素子及び分析チッ
プ。 - 【請求項１７】 （１）生物学的素材からなる複数の線
をシート状担体に固定化したシート状担体を、前記線の
向きと巻き取りにより形成される棒状物の中心線方向と
が同一方向になるように巻き取る工程；及び（２）上記
工程（１）で得られた棒状物を、巻き取られたシート状
担体の端面が渦巻き状に現れるように切断する工程；を
含む、生物学的素材固定化構造体の製造方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001194786A JP2003014746A (ja) | 2001-06-27 | 2001-06-27 | 生物学的素材が固定された構造体及びその製造方法 |
| EP02013995A EP1271149A3 (en) | 2001-06-27 | 2002-06-26 | Structure with immobilized biological material and method for manufacturing the same |
| US10/180,331 US20040086950A1 (en) | 2001-06-27 | 2002-06-27 | Structure in which biological material is fixed and method for manufacturing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001194786A JP2003014746A (ja) | 2001-06-27 | 2001-06-27 | 生物学的素材が固定された構造体及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003014746A true JP2003014746A (ja) | 2003-01-15 |
Family
ID=19032865
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001194786A Pending JP2003014746A (ja) | 2001-06-27 | 2001-06-27 | 生物学的素材が固定された構造体及びその製造方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040086950A1 (ja) |
| EP (1) | EP1271149A3 (ja) |
| JP (1) | JP2003014746A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005103724A1 (ja) * | 2004-04-20 | 2005-11-03 | Universal Bio Research Co., Ltd. | 試料集積用カセット、スポッティング装置および試料集積化装置 |
| JP2010256306A (ja) * | 2009-04-28 | 2010-11-11 | Japan Science & Technology Agency | オリゴヌクレオチドの固定方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5320814A (en) * | 1991-01-25 | 1994-06-14 | Trustees Of Tufts College | Fiber optic array sensors, apparatus, and methods for concurrently visualizing and chemically detecting multiple analytes of interest in a fluid sample |
| AU3568897A (en) * | 1996-06-07 | 1998-01-05 | Eos Biotechnology, Inc. | Immobilised linear oligonucleotide arrays |
| US6037186A (en) * | 1997-07-16 | 2000-03-14 | Stimpson; Don | Parallel production of high density arrays |
| JP3445501B2 (ja) * | 1998-09-04 | 2003-09-08 | 日立ソフトウエアエンジニアリング株式会社 | シート状部材積層体及びシート状プローブ保持体の製造方法 |
| US6203989B1 (en) * | 1998-09-30 | 2001-03-20 | Affymetrix, Inc. | Methods and compositions for amplifying detectable signals in specific binding assays |
| US6713309B1 (en) * | 1999-07-30 | 2004-03-30 | Large Scale Proteomics Corporation | Microarrays and their manufacture |
-
2001
- 2001-06-27 JP JP2001194786A patent/JP2003014746A/ja active Pending
-
2002
- 2002-06-26 EP EP02013995A patent/EP1271149A3/en not_active Withdrawn
- 2002-06-27 US US10/180,331 patent/US20040086950A1/en not_active Abandoned
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| WO2005103724A1 (ja) * | 2004-04-20 | 2005-11-03 | Universal Bio Research Co., Ltd. | 試料集積用カセット、スポッティング装置および試料集積化装置 |
| JP4699993B2 (ja) * | 2004-04-20 | 2011-06-15 | ユニバーサル・バイオ・リサーチ株式会社 | 試料集積用カセット、スポッティング装置および試料集積化装置 |
| US8168142B2 (en) | 2004-04-20 | 2012-05-01 | Universal Bio Research Co., Ltd. | Cassette for stacking specimen, spotting device, and specimen stacking device |
| JP2010256306A (ja) * | 2009-04-28 | 2010-11-11 | Japan Science & Technology Agency | オリゴヌクレオチドの固定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20040086950A1 (en) | 2004-05-06 |
| EP1271149A2 (en) | 2003-01-02 |
| EP1271149A3 (en) | 2003-12-17 |
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