JP2002541120A

JP2002541120A - 血液細胞の増殖阻害用及び自動免疫疾患の治療用カスパーゼ阻害剤

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Publication number: JP2002541120A
Application number: JP2000609099A
Authority: JP
Inventors: バッド・ラルフ・シィー; チョップ・ユルグ; 孝夫 ▲かた▼岡
Original assignee: アポテーク・リサーチ・アンド・デベロップメント・リミテッド
Priority date: 1999-04-06
Filing date: 2000-04-05
Publication date: 2002-12-03
Also published as: AU4543400A; DE19915465A1; WO2000059536A1; DE50003730D1; US20020086832A1; EP1169056B1; ATE249837T1; EP1169056A1; CA2365825A1; ES2209871T3; US20040209813A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、末梢血液リンパ球の増殖を阻害するカスパーゼ阻害剤の使用方法に関し、これは末梢血液リンパ球の過増殖に起因する疾患又は障害の治療に特に適する。更に、本発明は免疫系を抑制するためのカスパーゼ阻害剤の使用方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、細胞内シグナル形質導入で重要な作用を有するシステインアスパルタートプロテアーゼ（カスパーゼ）阻害剤を細胞の増殖を阻害するために使用する方法に関する。本発明はまた病因学的にリンパ球の過増殖に基づく疾患、障害又は病理学的状態を治療するために１種以上の上記阻害剤を使用する方法及びリンパ球免疫応答を抑制するために１種以上の上記阻害剤を使用する方法に関する。

【０００２】文献から、カスパーゼ（システインアスパルタートプロテアーゼ）が特定のアポトーシス刺激シグナルの細胞内シグナル形質導入にかなり重要であることが知られている。この際アポトーシスは生理学的に精巧に調節された、目標の定まった細胞死であり、この細胞死をたとえばリガンドをレセプターに結合させることによって、たとえばＴＮＦ結合又はＣＤ９５（Ｆａｓ）結合によって、特定の増殖因子を取り除くことによって、細胞外マトリックスからの分離によって、放射線、スタウロスポリンをイオン化することによって又はグルコルチコイドによってさえも誘発することができる。さらに、文献から特に細胞外ｓＦａｓＬによって、すなわちＦａｓレセプターの可溶性リガンドによって誘発されたＦａｓレセプター（ＣＤ９５）のオリゴマー化の後、蛋白分解反応カスケードが引き金となって、最終的に細胞アポトーシスという結果に終わることは公知である。この場合、それぞれ次のカスパーゼは、カスケード中の一連のカスパーゼに対応して蛋白分解性切断によって活性化される。このアポトーシスシグナル形質導入における中心的作用は、蛋白分解性カスケードの出発点でいわゆるカスパーゼ−８を受け入れ、このカスパーゼ−８はＤＩＳＣ複合体に属し、リンカー蛋白ＦＡＤＤを介してＦａｓレセプターに連結する。ＤＩＳＣ複合体中で、酵素的にまだ不活性であるプロカスパーゼ−８は２個の連続反応段階に分けられ、それによってヘテロテトラマーとしてＤＩＳＣ複合体から引き離された活性なカスパーゼ−８が生じる。この活性なカスパーゼ−８は現在、たとえば一連のカスケードでまだ末端で作用するカスパーゼ、すなわちカスパーゼ−３又はカスパーゼ−７を活性化することができる。

【０００３】アポトーシス性シグナル形質導入経路を遮断する種々のカスパーゼ阻害剤があることも記載されている。この際、非生物学的に生じるカスパーゼ阻害剤は生物的、たとえばウイルス性カスパーゼ阻害剤と区別されねばならない。

【０００４】現在まで文献には、カスパーゼがアポトーシス性シグナル形質導入に関連して重要となるとしか示めされていなかった。したがってカスパーゼ阻害剤── ──これらが天然に又は非天然に由来するにしても───は、またアポトーシスの阻害で作用する機能をもっているにすぎなかった。これに反して、従来の技術文献に細胞内物質代謝でのカスパーゼ阻害剤のその他の機能的性質及び同時にカスパーゼ阻害剤を用いるその他の可能性は開示されていない。

【０００５】本発明は、個々のカスパーゼに関する他の機能的細胞生理学的活性を見出すこと及び同時に病理学的観点の考慮下でカスパーゼ阻害剤の使用に関する新規可能性を決定することを目的とするものである。

【０００６】本発明の課題は本発明によれば請求項１、５、７及び８によって解決される。

【０００７】請求項１によれば、カスパーゼ阻害剤は末梢血液リンパ球（ＰＢＬ）の増殖を阻害することにも使用することができる。この可能な使用は、カスパーゼが外因性アポトーシス性シグナルの伝達に関与するばかりか、対応する外因性刺激によるＰＢＬの増殖も受け継ぐことができるという知見に基づく。これは、２つの刺激シグナルがＰＢＬ増殖を必要するという事実によって説明することができる。従来公知の、Ｔ−細胞レセプターＣＤ３複合体での刺激性結合反応の他に、別の共刺激シグナルもなければならない。この共刺激は、カスパーゼの活性化によって引き続きの細胞内シグナル形質導入と同時にＦａｓに細胞外ＦａｓＬを結合させることである。したがって細胞外ＦａｓＬは、たとえばＴ −細胞レセプター（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体でＴ−細胞の刺激と共に共刺激的に作用する。

【０００８】したがってカスパーゼは１対の作用、すなわち一方でアポトーシス性シグナル形質導入のカスパーゼメンバーとして、そして他方で本発明によればＰＢＬに対する共刺激外因性シグナルの細胞内要素として作用する。したがってカスパーゼの阻害は本発明によればＰＢＬの増殖の阻害を生じる。これによってカスパーゼがリンパ球の、この場合は特にＰＢＬの増殖の阻害剤として作用するのである。したがって本発明のよればカスパーゼ阻害剤は、Ｂ−リンパ球及び特にＴ−リンパ球の増殖を特に冠状血管系で循環するリンパ球と共に阻害することができる。

【０００９】増殖を阻害するために使用されるカスパーゼ阻害剤は、１種以上のカスパーゼの可逆的又は非可逆的阻害によってその阻害性を発揮することができる。細胞内シグナル伝達はこのようにして遮断される。

【００１０】カスパーゼ−８の作用を阻害するカスパーゼ阻害剤は特に本発明の対象である。カスパーゼ−８阻害は、たとえばプロカスパーゼ−８のプロドメインの切断を妨げる物質が原因となって生じさせることができる。この方法では、別のシグナル形質導入を許可する活性カスパーゼ−８分画の発生は全く起こり得ない。さらに蛋白分解的に切断され、それ故に活性カスパーゼ−８分画の酵素活性を遮断するようなカスパーゼ阻害剤の使用が考えられる。これはたとえばカスパーゼ−８の活性中心への結合によって可能である。

【００１１】請求項５の対象によれば、本発明はカスパーゼ阻害剤が疾患、障害又は病理学的状態を治療するために又はＰＢＬの過増殖に起因するような疾患、障害又は病理学的状態を治療することに使用することができる薬剤の製造に適用するために使用することができるという知見に基づいている。本発明によれば１種以上のカスパーゼの活性化を生じるＦａｓＬ／ＦａｓＲによる共刺激はＰＢＬの増殖に必要であるので、カスパーゼ阻害剤の助けによってＰＢＬの病理学的増殖を阻止することができる。したがってカスパーゼ阻害剤の使用はリンパ系の腫瘍疾患を患う患者に必要であると考えられる。カスパーゼ阻害剤の使用は、腫瘍疾患がＴ−又はＢ−リンパ球の過増殖に基づくならば特に有利である。

【００１２】このことに関連して、この種の疾患の治療用薬剤を製造するために１種以上のカスパーゼ阻害剤が使用される。

【００１３】カスパーゼ阻害剤もまたＢ−リンパ球又はＴ−リンパ球によるかに関係なく過剰の免疫応答を抑制することを示す。特にこの場合免疫防御が身体自体の構造に対して向けられる疾患、障害又は病理学的状態を治療することカスパーゼ阻害剤を使用することに注目すべきである。したがって自動免疫疾患を克服するためにカスパーゼ阻害剤を使用するのが好ましい。

【００１４】ここに１種以上のカスパーゼ阻害剤を次の疾患、障害又は病理学的状態を治療するために使用するか又は次の疾患、障害又は病理学的状態を治療する薬剤を製造するために１種以上のカスパーゼ阻害剤を使用する例を列挙する。上記疾患、障害又は病理学的状態は自動免疫疾患：慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、真性糖尿病又は多発性硬化症と呼ばれる。

【００１５】更に、１種のカスパーゼ阻害剤の使用又は数種のカスパーゼ阻害剤の組み合わせ使用は免疫系の基本的抑制を望む場合に有利である。この際カスパーゼ阻害剤は末梢血管リンパ球（ＰＢＬ）によって支持された免疫応答を抑制するのに特に適する。広範囲の免疫抑制は特に同種異系細胞、異種組織又は異種臓器の移植後に示される。異種細胞、異種組織又は異種臓器への移植患者の拒絶反応は、予期される重い副作用もなく、カスパーゼ阻害剤の使用によって又は薬剤の製造にこれを使用することによって阻止することができる。

【００１６】カスパーゼ阻害剤は天然に生じる物質であってよく、そしてカスパーゼ阻害剤として生理学的作用をすでに有していてもよい。しかしながらカスパーゼ阻害剤はたとえば有機化学分子構造又は短い非天然ペプチドであってもよい。一般に、カスパーゼを阻害する非生物学的に生じる物質又は分子それぞれが好ましい。

【００１７】この際、阻害剤としてカスパーゼを遮断するオリゴペプチド又はポリペプタイドが好ましい。３〜１５個のアミノ酸鎖長を有するオリゴペプチドが特に適当であり、３〜６個のアミノ酸鎖長を有するオリゴペプチドが特に好ましい。

【００１８】したがってこの場合テトラペプチドが特に有利である。オリゴペプチドはカスパーゼ阻害剤の作用も有していてよい天然に生じる蛋白質の部分配列であってよい。

【００１９】たとえば細菌性蛋白質ＣｒｍＡの部分配列を使用することができる。ペプチドベース上のこうようなカスパーゼ阻害剤を、アミノ酸側鎖の反応性基で、たとえばアミノ基又はカルボキシ基で、又はペプチドのそれぞれのＮ−又はＣ− 末端で化学的に修飾することができる。このようにしてたとえばペプチドベースの阻害剤の安定性を増加させることができるか又は細胞膜への阻害剤の通過を容易にすることができる。

【００２０】オリゴペプチド又はポリペプチドのＣ−末端での好ましい修飾として次のものが挙げられる：アルデヒド誘導体化、フルオロメチルケトン基又はアシルオキシメチルケトン基の導入。

【００２１】アミノ酸配列ＶＡＤ、ＩＥＴＤ又はＹＶＡＤ（一文字暗号) を有するペプチドはカスパーゼ阻害剤としての使用に特に極めて好ましい。しかしながら場合により化学的に修飾されたペプチドＶＡＤ、ＩＥＴＤ又はＹＶＡＤは本発明による使用にも適する。増殖を阻害するために使用されるカスパーゼ阻害剤としてはＩＥＴＤ−ｆｍｋ、ｚＶＡＤ−ｆｍｋ又はＹＶＡＤ−ｆｍｋがとくに好ましい。すなわちこれらはそれぞれＣ−末端でフルオロメチルケトン基によって修飾されたペプチドである。

【００２２】細胞増殖の阻害剤としての使用に非天然の分子構造と共に、本発明はこれらの生物学的に生じる物質、特にペプチド又は蛋白質も包含する。これらは生理学的に有効なカスパーゼ阻害剤として証明されている。これらはウィルス、細菌又は真核細胞に由来する物質であることができる。細菌性蛋白ＣｒｍＡが好ましい例として挙げられる。

【００２３】症状範囲に応じて、カスパーゼ阻害剤又は２種以上のカスパーゼ阻害剤の組み合わせは全身又は局所適用で使用することができる。全身適用の場合、経口、静脈内、腹腔内又は筋肉内投与形態を考慮することができる。

【００２４】場合により上記疾患又は障害の治療用薬剤の製造にカスパーゼ阻害剤を使用するにはアジュバントが必要である。特定のガレヌス調合物はそれぞれの症状範囲及び所望の投与形態に依存する。

【００２５】本発明を図面にしたがって詳細に説明する：図１はヒトＴ−細胞への種々のカスパーゼ阻害剤の影響を示す。このために、Ｔ−細胞を種々のカスパーゼ阻害剤の存在下に可溶性抗ＣＤ３抗体１０μｇ／ｍｌで刺激する。阻害剤、ＩＥＴＤ−ｆｍｋ及びｚＶＡＤ−ｆｍｋ（カスパーゼ−８阻害剤）、ＹＶＡＤ−ｆｍｋ（カスパーゼ−１阻害剤）を使用し、同様にそれぞれの場合に同等の濃度でコントロールのためにＤＭＳＯを使用する。刺激されたＴ−細胞の増殖（ｃｍｐ、［³Ｈ］チミジン導入によって測定される）をカスパーゼ阻害剤の濃度の増加作用としてプロットして、示す。特に２５μＭ以上の濃度で２個のカスパーゼ−８阻害剤ＩＥＴＤ−ｆｍｋ及びｚＶＡＤ−ｆｍｋが細胞増殖に明瞭な阻害効果を示す。

【００２６】図２は、Ｔ−リンパ球の増殖に対するＦａｓ−Ｆｃ又はＩｇＧの添加の結果として生じる効果を示す。この際、Ｔ−リンパ球は固定化抗ＣＤ３抗体（０．５μｇ／ｍｌ）を用いて活性化される。Ｆａｓ−Ｆｃの薬用量依存添加は３日経過した後に測定された細胞の数（この際ｃｐｍによって測定）を明らかに減少させるのに対して、ＩｇＧの添加は細胞増殖に何ら影響しない。したがって図２の結果は、増殖に必要である共刺激シグナル、すなわちＦａｓＬ／Ｆａｓ結合を固定化ＦａｓＬ阻害剤Ｆａｓ−Ｆｃが遮断することを仮定するモデルと一致する。

【００２７】図３は３つのカスパーゼ阻害剤、すなわちＹＶＡＤ−ｆｍｋ、ｚＶＡＤ−ｆｍｋ及びＩＥＴＤ−ｆｍｋの特異的増殖効果を示す。このために、ＰＢＬをそれぞれ上記カスパーゼ阻害剤と共に培養し、ついで可溶性抗ＣＤ３抗体及び架橋したｓＦａｓＬ３μｍ／ｍｌで刺激する（５０ｎｇ／ｍｌ）。架橋したｓＦａｓＬはオリゴマー化されたｓＦａｓＬを示す。ｓＦａｓＬはＦＬＡＧ配列を支持して、十文字にネットワークする抗ＦＬＡＧ抗体に結合させる。このことがオリゴマー化を導く。図１で証明された事項と同様に、カスパーゼ−８阻害剤は抗ＣＤ３抗体及びＦａｓＬとの組み合わせ刺激でさえ最も有効なＴ−細胞増殖阻害剤であることが証明される。

【００２８】図４は棒グラフを用いてＩＬ−２発現とカスパーゼ阻害剤の使用の相互関係を明らかにする。一方で、抗ＣＤ３抗体及びＦａｓＬとの組み合わせ刺激が、抗ＣＤ３抗体単独で実施された活性化に比べて（ここではコントロールとして記載する）顕著に増加したＩＬ−２産生を示すことを観察することができる。

【００２９】他方、抗ＣＤ３抗体を用いてカスパーゼ−８阻害剤ＩＥＴＤ−ｆｍｋ及びｚＶＡＤ−ｆｍｋは、ここでもまたＩＬ−２産生の抑制に関して特に有効であることを証明する。図４に示された知見は、上記カスパーゼ阻害剤（５０μＭ）の存在下か又はその不在下に固定化抗ＣＤ３抗体（３μｇ／ｍｌ）及びＦａｓＬ（５０ｎｇ／ｍｌ）を用いて１０⁶ＰＢＬ／ｍｌを培養した実験に基づく。上澄みを２４時間後に除去し、そのＩＬ−２濃度に関してＣＴＬＬバイオアッセイを用いて調べた。

【００３０】図５は、カスパーゼ−８阻害剤、この場合例としてｚＶＡＤ−ｆｍｋを用いてＴ−細胞増殖の阻害をＩＬ−２を添加することによって阻止することができることを示す。これは、カスパーゼ−８の活性がＴ−細胞のＩＬ−２産生に重要であることを意味する。図５が基礎とする実験において、ｚＶＡＤ−ｆｍｋ（５０μＭ）の存在下か又はその不在下に及び抗ＣＤ３抗体ｚＶＡＤ−ｆｍｋ及び組換え体ヒトＩＬ−２５００Ｕ／ｍｌの存在下に可溶性抗ＣＤ３抗体１０μｇ／ｍｌを用いてＰＢＬを活性化する。本発明によればｚＶＡＤ−ｆｍｋの添加は観察時点でコントロールに比べて明らかな細胞数の減少効果を示すが、細胞増殖はＩＬ−２の添加で劇的に増加する。

【００３１】図６は、いわゆるウエスタンブロットを示す。ヒトＴ- 細胞を可溶性抗ＣＤ３抗体単独（３μｇ／ｍｌ）で刺激しない（コントロール）か又は抗ＣＤ３抗体及びｓＦａｓＬ（５０ｎｇ／ｍｌ）────これは上述したようにそのフラッグ配列（flag sequence)を介して架橋されている─────を用いて培養する。細胞溶菌液をプロカスパーゼ−８の又はプロカスパーゼ−８の切断生成物の発現に関して図６に示した時間にしたがって調べる。この場合黒の矢印はウエスタンブロットで酵素的に不活性なプロカスパーゼ−８の位置を示す。一方白の矢印は酵素的に活性な、蛋白分解的に切断された２６ｋＤＡフラグメントを示す。図６は活性カスパーゼ−８の最高濃度が培養開始４時間後に細胞溶菌液中に観察されることを明らかに示す。この際、抗ＣＤ３抗体及びＦａｓＬによる組み合わせ細胞刺激されたテスト法は、抗ＣＤ３抗体のみで引き起こされたＴ−細胞刺激に比べて著しく増加された活性カスパーゼ−８分画を示す。別の実験法で（図６、ウエスタンブロット、右）、Ｔ−細胞を６時間、すなわちカスパーゼ−８阻害剤ＩＥＴＤ−ｆｍｋの存在下に抗ＣＤ３抗体及びＦａｓＬの組み合わせで刺激する。カスパーゼ−８阻害剤の作用のために、刺激の間カスパーゼ−８の切断は遮断され、２６ｋＤａ分画はこの場合ウエスタンブロットで検出することができない。

【００３２】本発明を次の実施例によって詳細に説明する。

【００３３】実施例１細胞増殖の阻害剤としてのカスパーゼ阻害剤の活性を証明するために、ヒト末梢血液リンパ球へのその影響を調べる。

【００３４】このために上記リンパ球をＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ遠心分離によって調製する。ついで細胞（ウエル（ｗｅｌｌ）あたり５×１０⁴細胞）を種々のカスパーゼ阻害剤の存在下に９６個のウエルプレート上で培養するか又はコントロールのためにこれの不在下に培養する。カスパーゼ阻害剤の濃度は２５〜１００μＭの範囲内で変化する。最後に細胞を、抗フラッグ配列抗体（１μｇ／ｍｌ）含有又は上記配列抗体不含抗ＣＤ３抗体（ＴＲ６６）によって又は抗ＣＤ３抗体と可溶性組換え体ＦａｓＬとの組み合わせ刺激によって刺激する。

【００３５】細胞増殖を４日間の培養期間の最後の１８時間で測定する。細胞増殖の測定尺度は、増殖細胞への［³Ｈ］チミジン導入である。

【００３６】使用されるカスパーゼ阻害剤（ＹＶＡＤ−ｆｍｋ、ｚＶＡＤ−ｆｍｋ及びＩＥＴＤ−ｆｍｋ）はBachem and Enzyme System Products がらの生成物である。組換え体ＦａｓＬはＡｌｅｘｉｓに由来する。

【００３７】ＩＥＴＤ−ｆｍｋ及びｚＶＡＤ−ｆｍｋの場合、使用されるカスパーゼ阻害剤は抗ＣＤ３によって引き起こされた刺激の完全な阻害を生じる。カスパーゼ阻害剤ＺＶＡＤ−ＦＭＫは、細胞増殖の部分阻害を検出させる（図１）。

【００３８】抗ＣＤ３抗体及びＦａｓＬによるヒト末梢血液リンパ球の組み合わせ刺激は使用されたカスパーゼ阻害剤の活性に関して同様な結果を生じる（図３）。

【００３９】実施例２Ｔリンパ球の分画におけるカスパーゼ阻害剤による増殖の阻害を第二実験システムで測定する。

【００４０】このためにＴリンパ球（１０⁶／ｍｌ）を架橋したＦａｓＬ（５０ｎｇ／ｍｌ）含有又は上記ＦａｓＬ不含固定化抗ＣＤ３抗体（３μｇ／ｍｌ）で刺激する。カスパーゼ阻害剤含有又はカスパーゼ阻害剤不含（コントロールとしてＩ）のこれらの調製物の上澄みを刺激期間後の除去し、それぞれのＩＬ−２濃度をＣＴＴＬバイオアッセイを用いて測定する。上澄み中のＩＬ−２濃度はＴ− 細胞増殖に影響を与える。

【００４１】この結果は、カスパーゼ阻害剤、特にｚＶＡＤ−ｆｍｋ及びＩＥＴＤ−ｆｍｋの存在がＴ−細胞増殖を遮断することを示す。これらのテスト調製物において、弱いＩＬ−２活性のみが観察される（図４）。カスパーゼ阻害剤不含の２つの調製物は、抗ＣＤ３抗体で又はＦａｓＬとの組み合わせで刺激後に予想されうるＩＬ−２産生の評価に関する尺度として使用される（図４、それぞれ棒グラフ左及び右）。

【００４２】これらの調製物中のカスパーゼ阻害剤での増殖抑制は外因性組換え体ＩＬ− ２の添加によって再度阻止される。コントロール調製物に比べてはるかに増加した［³Ｈ］チミジン導入がこの場合測定することができる（図５）。

【００４３】実施例３この例において、不活性なヒトＴリンパ球を種々の条件で培養する：（ｉ）刺激のないコントロール、（ｉｉ）可溶性抗ＣＤ３抗体（３μｇ／ｍｌ）のみで刺激又は（ｉｉｉ）抗ＣＤ３抗体とｓＦａｓＬとの組み合わせ刺激（５０μ ｇ／ｍｌ、ＦＬＡＧ／配列“架橋”によって架橋した）。

【００４４】０、２、４、６及び２２時間後、細胞を種々の調製物から取り出し、溶菌する。細胞溶菌液をそれらのカスパーゼ−８活性に関してウエスタンブロット法を用いて調べる（それぞれプロカスパーゼ−８，５５ｋＤａ分画、又は蛋白分解で切断された活性カスパーゼ−８，２６ｋＤａ分画）。

【００４５】活性２６ｋＤａ分画のバンドは、抗ＣＤ３抗体での刺激後しか現れないか又はｓＦａｓＬでの刺激後より激しく現れる。５５ｋＤａ分画から蛋白分解によって産生される活性２６ｋＤａカスパーゼ−８分画は刺激の開始４時間後にその最も高い組み合わせが観察される（図６）。

【００４６】別のテスト法で不活性Ｔリンパ球を抗ＣＤＳ抗体及び架橋したｓＦａｓＬ（上記）でカスパーゼ阻害剤ＩＥＴＤ−ｆｍｋ（５０μＭ）の存在下に刺激し、刺激の開始６時間後に溶菌する。カスパーゼ阻害剤不含テスト法とは対照的に、ウエスタンブロット適用はなんら２６ｋＤａバンドを検出しない（図６、右側）。これは、カスパーゼ−８の蛋白分解切断がｓＦａｓＬで共刺激した場合ＩＥＴＤ−ｆｍｋによっても有効に遮断されることを証明する。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はヒトＴ−細胞への種々のカスパーゼ阻害剤の影響を示す。

【図２】図２は、Ｔ−リンパ球の増殖に対するＦａｓ−Ｆｃ又はＩｇＧの添加の結果として生じる効果を示す。

【図３】図３は３つのカスパーゼ阻害剤、すなわちＹＶＡＤ−ｆｍｋ、ｚＶＡＤ−ｆｍｋ及びＩＥＴＤ−ｆｍｋの特異的増殖効果を示す。

【図４】図４は棒グラフを用いてＩＬ−２発現とカスパーゼ阻害剤の使用の相互関係を明らかにする。

【図５】図５は、カスパーゼ−８阻害剤、この場合例としてｚＶＡＤ−ｆｍｋを用いてＴ−細胞増殖の阻害をＩＬ−２を添加することによって阻止することができることを示す。

【図６】図６は、いわゆるウエスタンブロットを示す。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年７月２０日（２００１．７．２０）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 19/02 19/02 21/00 21/00 25/00 １０１ 25/00 １０１ 29/00 １０１ 29/00 １０１ 37/02 37/02 43/00 １０５ 43/00 １０５１１１１１１Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ▲かた▼岡孝夫東京都新宿区北新宿３−32−15 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA17 BA01 BA08 BA15 BA16 BA23 CA01 CA04 CA05 MA01 NA14 ZA022 ZA942 ZA962 ZB072 ZB152 ZC352 4C087 BC01 BC30 BC83 CA16 CA44 MA01 NA14 ZA02 ZA94 ZA96 ZB07 ZB15 ZC35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】カスパーゼ阻害剤は末梢血液リンパ球の増殖を阻害することを特徴とする、カスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項２】カスパーゼ阻害剤がＴ−リンパ球の増殖を阻害することを特徴とする、請求項１記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項３】カスパーゼ阻害剤が、１種以上のカスパーゼの可逆的又は非可逆的阻害によって細胞増殖を刺激するシグナルの形質導入を細胞内で遮断する、請求項１又は２記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項４】カスパーゼ阻害剤が、カスパーゼ−８を阻害することによって細胞増殖を刺激するシグナルの形質導入を遮断する、請求項１〜３のいずれかに記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項５】疾患、障害又は病理学的状態が末梢血液リンパ球の過剰増殖に起因することを特徴とする、上記疾患、障害又は病理学的状態の治療に１種以上のカスパーゼ阻害剤を使用する方法。
【請求項６】疾患、障害又は病理学的状態が自動免疫疾患であることを特徴とする、上記疾患、障害又は病理学的状態の治療に１種以上のカスパーゼ阻害剤を使用する、請求項５記載の方法。
【請求項７】自動免疫疾患が、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、真性糖尿病又は多発性硬化症である、請求項６記載の自動免疫疾患の治療に１種以上のカスパーゼ阻害剤を使用する方法。
【請求項８】１種以上のカスパーゼ阻害剤を免疫系を抑制するために、特にＰＢＬによる免疫応答を抑制するために使用することを特徴とする、１種以上のカスパーゼ阻害剤を使用する方法。
【請求項９】同種異系細胞−、組織−又は臓器移植後、１種以上のカスパーゼ阻害剤を免疫応答を抑制するために、特にＰＢＬによる免疫応答を抑制するために使用することを特徴とする、請求項８記載の１種以上のカスパーゼ阻害剤を使用する方法。
【請求項１０】カスパーゼ阻害剤が非生物学的に生じる分子構造を有する、請求項１〜９のいずれかに記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１１】カスパーゼ阻害剤がオリゴペプチド、特にテトラペプチド又はポリペプチドである、請求項１０記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１２】カスパーゼ阻害剤がオリゴペプチド又はポリペプチドとしてＮ−又はＣ−末端での修飾を有する、請求項１０又は１１記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１３】オリゴペプチド又はポリペプチドのＣ−末端がアルデヒド誘導体化、フルオロメチルケトン又はアシルオキシメチルケトンを有する、請求項１２記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１４】カスパーゼ阻害剤がオリゴペプチド又はポリペプチドとして配列ＶＡＤ、ＩＥＴＤ又はＹＶＡＤを含有する、請求項１０〜１３のいずれかに記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１５】カスパーゼ阻害剤がＩＥＴＤ−ｆｍｋである、請求項１３又は１４記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１６】カスパーゼ阻害剤がｚＶＡＤ−ｆｍｋである、請求項１３又は１４記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１７】カスパーゼ阻害剤がＹＶＡＤ−ｆｍｋである、請求項１３又は１４記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１８】カスパーゼ阻害剤が生物に由来する、請求項１〜９のいずれかに記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項１９】カスパーゼ阻害剤がウイルス、細菌又は真核細胞に由来する、請求項１８記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。
【請求項２０】カスパーゼ阻害剤が細菌蛋白質ＣｒｍＡ又はＣｒｍＡの生理学的に活性な部分配列である、請求項１９記載のカスパーゼ阻害剤の使用方法。