JP2002538109A - 空胞型（ｈ＋）−ａｔｐアーゼ抑制化合物、組成物、およびそれらの使用 - Google Patents

空胞型（ｈ＋）−ａｔｐアーゼ抑制化合物、組成物、およびそれらの使用

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物、その組成物、および空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制により治療可能な状態の治療あるいは予防のためのそれらの使用方法を提供する。本発明の組成物は、本発明の化合物および担体を含む。本発明の方法は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量の本発明の化合物を投与することを含む。本発明の化合物あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、あるいはプロドラッグは、式（Ｉ）［式中、Ｒ1およびＲ2は、Ｈ、飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、飽和または不飽和アルキル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであり；芳香環は、未置換であるかあるいは置換されており；Ｚは、ＯＲ1とメタ位の関係にある芳香環の炭素で始まり、ラクトンのアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子と共に、一体として５−１７員環を形成する、０から１０原子の鎖を有する連続的なリンカーである］を有する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （技術分野） 本発明は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制ラクトン、組成物、およびそれ
らの使用方法に関する。
【０００２】 （発明の背景） 空胞（あるいは空胞型、あるいはＶ−タイプ）（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼは、“
真核細胞の万能プロトンポンプ”と呼ばれてきた(Finbour and Harrison、Bioch
em. J.、324、697-712 (1997))。空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼは、人体の多く
の組織および細胞に存在する。細胞内の空胞（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性は、特
定の器官に存在し、そしてそれらの内部の酸性度を維持する役割を果たす。この
維持は、膜および器官のタンパク質の分離；プロインスリン転換；神経伝達物質
の取り込み；細胞の減成プロセス；および、受容体サイクルなどといった、様々
な生理学的な機能にとって必須である。Mellman et al.、Ann. Rev. Biochem.、
55、663-699 (1986); Forgac、Physiological Rev.、69、765-796 (1989); Stev
ens and Forgac、Annu. Rev. Cell. Dev. Biol.、13、779-808 (1997); Nelson
、TIPS、12、71-75 (1991)を参照されたい。
【０００３】 空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性は特定の原形質膜にも存在する。重要な例
は、腎臓介在細胞の原形質膜、溶骨細胞および精子細胞中の空胞型（Ｈ＋）−Ａ
ＴＰアーゼ活性を含む。Stone and Xie、Kindney Int.、33、767-774 (1988); V
aananen et al、J. Cell、Biol.、111、1305-1311、(1990); Blair et al.、Sci
ence、245、855-857、(1987); Wang and Gluck、J. Biol. Chem.、265、21957-2
1965 (1990); Hall and Chambers、Inflamm. Res.、45、1-9 (1996); Hall and
Schaueblin、Bone and Mineral、27、159-166 (1994); David and Baron、Exp.
Opin. Invest. Drugs、4、725-740 (1995); Wassarman、Science、235、553-560
(1987); Nelson、TIPS、12、71-75 (1991)を参照されたい。
【０００４】 多くの生理学的な機能の維持における空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性の重
要性のために、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼを抑制する化合物は、様々な異な
る状況における有用な薬学上の応用を有するであろう。Nelsonによる総説、TIPS
、12、71-74 (1991)、Keeling et al.、Ann. New York Acad. Sci.、834、600-6
08 (1997)、およびそれらの引用文献を参照されたい。例えば、一定の空胞型（
Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤は、一つまたはそれ以上の病状あるいは生理学的な
機能に対して有用性を有し得、それらにおいては、器官内の、酸性化、神経伝達
物質の集積、受容体代謝、リソソームの貯蔵等といった、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴ
Ｐアーゼ媒介プロセスを抑制することが望ましい。Mellman et al.、Ann. Rev.
Biochem.、55、663-699 (1986); Forgac、Physiological Rev.、69、765-796 (1
989); Stevens and Forgac、Annu. Rev. Cell. Dev. Biol.、13、779-808 (1997
); Nelson、TIPS、12、71-75 (1991)を参照されたい。同様に、一定の空胞型（
Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物は、一つまたは複数の病状あるいは生理学的な
機能に対して有用であり、それらにおいては、尿の酸性化、骨吸収、あるいは受
精に要する先体酸分泌といった原形質膜空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ媒介プロ
セスを修飾することが望ましい。Stone and Xie、Kidney Int.、33、767-774 (1
988); Vaananen et al、J. Cell. Biol.、111、1305-1311 (1990); Blair et al
.、Science、245、855-857 (1987); Wang and Gluck、J. Biol. Chem.、265、21
957-21965 (1990); Hall and Chambers、Inflamm. Res.、45、1-9 (1996); Hall
and Schaueblin、Bone and Mineral、27、159-166 (1994); David and Baron、
Exp. Opin. Invest. Drugs、4、725-740 (1995); Wassarman、Science、235、55
3-560 (1987); Nelson、TIPS、12、71-75、(1991)を参照されたい。
【０００５】 空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼを抑制する化合物は、癌治療の補助薬としての
重要な有用性も有するであろう。例えば、細胞の増殖、血管形成、腫瘍細胞浸潤
、転移、および耐薬性に関するプロセスにおける空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ
の関わりを示す書証がある(例えば、Akifusa et. al.、Exp. Cell Res.、238、8
2-89 (1998); Altan et al.、J. Exp. Med.、187、1583-1598 (1998); Gerard e
t al.、J. Exp. Biol.、201、21-31 (1998); Ishii et al.、J. Antibiot.、48
、12-20 (1995); Moriyama et al.、J. Biochem.、115、213-218 (1994); Ohkum
a et al.、In Vitro Cell Devel. Biol.、29A、862-866 (1993); Perona et al.
、Nature、334、438-440 (1988); Montcourrier et al.、J. Cell sci.、107、2
381-2391 (1994); Montcourrier et al.、Clin. Exp. Metastatis、15、382-392
(1997); Martinez-Zaguilan et al.、Ann. NY Acad. Sci.、671、478-480 (199
2); Martinez-Zaguilan et al.、Am. J. Physiol.、265、C1015-C1029 (1993);
Martinez-Zaguilan et al.、J. Cell. Physiol.、176、196-205 (1998); Nishih
ara et al.、Biochem. Biophys. Res. Commun.、212、255-262 (1995); Manabe
et al.、J. Cell Physiol.、157、445-452 (1993); Kinoshita et al.、FEBS Le
tt.、337、221-225 (1994); Kinoshita et al.、FEBS Lett.、398、61-66 (1996
); Ohta et al.、Brit. J. Cancer、73、1511-1517 (1996); Ohta et al.、J. P
athol.、185、324-330 (1998); Marquardt et al.、J. Natl. Cancer Inst.、83
、1098-1102 (1991); and Banderra et al.、Int. J. Oncol.、12、711-715 (19
98)を参照されたい)。それ故、これらの現象を抑制する化合物は、癌の化学療法
の有用な補助薬になろう。
【０００６】 薬化学の研究が直面した多くの試みの中でも、新たな空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰ
アーゼ−抑制剤を同定する試みは、医学的治療への適応可能性をもたらす。新た
な空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ−抑制剤の同定に向けた純粋な合成によるアプ
ローチは、典型的に不首尾に終わっており、一部は、研究室合成における固有の
技術的および人的限界によるものであった。生物学的代謝産物は、新規な構造的
に異なる化合物の広範な原料を供給し、それらの幾つかは生物学的活性を示した
が、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制による治療の機会に利用できる薬剤は
これまでほとんどなかった。例えば、コンカナマイシンは、これまでに報告され
た、少数の強力な空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制剤の一つである。しかし
、それらは構造的に複雑で、しかも、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤を合
成し得る単純で、合成上実用的な良いテンプレートを供給しない。
【０００７】 それ故、新たな空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤、医薬組成物、およびそ
れらの化合物を使用する方法が未だ必要とされている。本発明はそのような化合
物、組成物、および方法を提供する。本発明のこれらおよび他の利点は、本発明
のさらなる特徴とともに、本明細書に提示する発明の説明から明らかになろう。
【０００８】 （発明の要旨） 本発明は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制により治療可能な状態の予防
または治療の方法を提供する。本発明の方法は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ
を抑制する有効量の少なくとも一つの次式の化合物；
【０００９】
【化１３】
【００１０】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれはＨ、直鎖また
は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6はＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル
、あるいはアリールである）であり；Ｒ3はＨ、直鎖または分枝の飽和または不
飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであり；
Ｒ1−Ｒ3およびＲ6において定義される飽和アルキル、不飽和アルキル、および
アリールは、未置換であるかあるいは置換されており；式（Ｉ）の芳香環は未置
換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル
、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置
換されており；Ｚは、ＯＲ1とメタ位の関係にある式（Ｉ）の芳香環の炭素で始
まり、ラクトンのアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリ
ンカーＺの両端に共有結合する）と共に、一体として５−１７員環を形成する、
０から１２原子（ヘテロ原子を含む）の鎖を有する連続的なリンカーである］あ
るいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、あるいはプロドラッグを投与す
ることを含む。本発明に従って使用する化合物は、単独で、あるいは、治療上有
効な量の、本発明の化合物以外の、少なくとも一つの付加的な空胞型（Ｈ＋）−
ＡＴＰアーゼ抑制剤と組み合わせて投与され得る。
【００１１】 （発明の詳細な説明） 本発明の化合物によって共有される主要構成成分は、図２において強調される
（点線で囲まれた領域）。驚くべきことに、そして予想外にも、図２において強
調された主要構成成分を有する化合物は空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制活性
を有するものであることが見出された。図２で表される主要構成成分は、構造的
に異なるが合成的に利用可能な非常に多くの空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制
剤を製造するために用いられ得る実用的なテンプレートを供給する。
【００１２】 したがって、本発明は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物、それらの
組成物、および一つまたはそれ以上のこのような化合物あるいは組成物、好まし
くは図２において強調される主要構成成分を含む化合物あるいは組成物を用いて
空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼを抑制する方法を提供する。本発明の空胞型（Ｈ
＋）−ＡＴＰアーゼを抑制する方法は、様々な治療上および非治療上の応用、例
えば、診断キットのコントロール、バイオアッセイ等として利用され得る。しか
し好ましくは、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制によって治療し得る状態（
例えば異常状態あるいは病気）の治療あるいは予防に適用される。それ故、好ま
しい実施態様においては、本発明は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制によ
って治療可能な状態あるいは病気の治療または予防の方法であって、空胞型（Ｈ
＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量の、図２で強調される構成部分を含む化合物を投
与することを含む方法を提供する。さらに好ましくは、本発明の空胞型（Ｈ＋）
−ＡＴＰアーゼの抑制によって治療可能な状態の治療または予防の方法は、空胞
型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量の、少なくとも一つの次式で表される化合
物：
【００１３】
【化１４】
【００１４】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれはＨ、直鎖また
は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6はＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル
あるいはアリールである）であり；Ｒ3はＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽
和アルキル、アリール、オキシム、オキシムメチルエーテルであり；Ｒ1−Ｒ3お
よびＲ6中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキルおよびアリールは、未置
換であっても、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシ
ル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で
置換されていてもよく；式（Ｉ）中の芳香環は未置換であるか、あるいはハロゲ
ン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノか
らなる群から選ばれた置換基で置換され；Ｚは、ＯＲ1とメタ位の関係にある式
（Ｉ）の芳香環の炭素で始まり、ラクトンのアルキル酸素に直接結合する炭素で
終わる５原子（両炭素はリンカーＺの両端に共有結合する）と共に、一体として
５−１７員環を形成する、０から１２原子（ヘテロ原子を含む）の鎖を有する連
続的なリンカーである］あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、ある
いはプロドラッグを投与することを含む。本発明の化合物は単独で、あるいは、
治療上有効量の、本発明の化合物以外の少なくとも一つの付加的な化合物と組み
合わせて投与され得る。
【００１５】 本発明の化合物は、当業者によって、天然原料からの単離により；周知のかつ
容易に利用可能な化学反応、試薬、および手順を用いた化学合成；半合成により
；等によって得ることができる。
【００１６】 １つの実施態様において、本発明は空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制によ
り治療可能な状態を治療または予防する方法を提供し、その方法は、空胞型（Ｈ
＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、ここ
で、Ｚは、一体として１２−１７員環を形成する７−１２の原子（ヘテロ原子を
含む）の鎖を有する隣接リンカーである。それらの化合物の例は、次式の化合物
：
【００１７】
【化１５】
【００１８】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれはＨ、直鎖または
分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるい
はＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6はＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキルあ
るいはアリールであり得る）であり；Ｒ3はＨ、直鎖または分枝の飽和または不
飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであり；
Ｒ4はＨ、アルキル、あるいはＲ7ＣＨ2−（式中、Ｒ7はＲ6Ｏ−、Ｒ6ＣＯ2−、
あるいはＲ6ＳＯ3−である）であり；Ｒ5、Ｒ5’およびＲ5”は同一あるいは異
なっており、それぞれはＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル、アリ
ール、グリコシド、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−であり；Ｒ1−
Ｒ3、Ｒ5、Ｒ5’、Ｒ5’’およびＲ6中で定義される飽和アルキル、不飽和アル
キルおよびアリール、およびＲ4中で定義されるアルキルは、未置換であるか、
あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、
あるいはシアノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されてい
る；式（Ｉ）の芳香環は、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ
、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれ
た少なくとも一つの置換基で置換されている］；医薬上許容されるそれらの塩、
エステル、およびプロドラッグを含む。
【００１９】 “飽和アルキル”の語は、直鎖または分枝鎖であって、他で明示しない限り、
約１から約２０の炭素原子、好ましくは約１から約１０の炭素原子、さらに好ま
しくは約１から約８の炭素原子、そして最も好ましくは約１から約６の炭素原子
を有する飽和アルキルを意味する。飽和アルキルの例には、メチル、エチル、プ
ロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−
ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル、オクチル、ドデカニル等が挙げられ
る。飽和アルキル置換基は未置換であっても、あるいは、例えば、ハロゲン、ニ
トロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる
群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されていてもよい。
【００２０】 “不飽和アルキル”の語は、本明細書中で定義された、飽和アルキル（直鎖ま
たは分枝鎖）であって、その一つまたはそれ以上の炭素−炭素単結合が、例えば
二重結合あるいは三重結合といった多重結合に置き換わった飽和アルキルを意味
する。それ故、不飽和アルキルには、アルケニルおよびアルキニル置換基、なら
びに二重結合および三重結合を組み合わせて有する置換基が挙げられる。“アル
ケニル”の語は、一つまたはそれ以上の二重結合を有する直鎖または分枝鎖アル
ケニルを意味する。他で明示しない限り、アルケニルは、約２から約２０の炭素
原子、好ましくは約２から約１０の炭素原子、さらに好ましくは約２から約８の
炭素原子、そして最も好ましくは約２から約６の炭素原子を有し得る。アルケニ
ルの例には、ビニル、アリル、１，４−ブタジエニル、イソプロペニル等が挙げ
られる。“アルキニル”の語は、一つまたはそれ以上の三重結合を有する直鎖ま
たは分枝鎖アルキニル基（ｒａｄｉｃａｌ）を意味する。他で明示しない限り、
アルキニルは、約２から約２０の炭素原子、好ましくは約２から約１０の炭素原
子、さらに好ましくは約２から約８の炭素原子、そして最も好ましくは約２から
約６の炭素原子を有し得る。アルキニルの例には、エチニル、プロピニル（プロ
パルギル）、ブチニル等が挙げられる。不飽和アルキル置換基は未置換であって
も、例えば、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキ
ル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されて
いてもよい。
【００２１】 他で明示しない限り、不飽和アルキルは、本明細書で定義されるように、約２
から約２０の炭素原子、好ましくは約２から約１０の炭素原子、さらに好ましく
は約２から約８の炭素原子、そして最も好ましくは約２から約６の炭素原子を有
し得る。不飽和アルキル置換基は未置換であっても、例えば、ハロゲン、ニトロ
、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群か
ら選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されていてもよい。
【００２２】 “アリール”の語は、当該技術分野において共通に理解されるように、芳香族
炭素環基（ｒａｄｉｃａｌ）を意味し、そして、例えば、フェニルおよびナフチ
ル環といった、単環式および多環式芳香族を含む。好ましくは、アリールは、一
つまたはそれ以上の六員環を有し、例えば、フェニル、ナフチル、およびビフェ
ニルが挙げられる。アリール置換基は未置換であっても、例えば、ハロゲン、ニ
トロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる
群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されていてもよい。
【００２３】 “グリコシド”の語は、例えばグルコース、ガラクトース、アミノ糖（例えば
、Ｄ−グルコサミンおよびＮ−アセチル−β−グルコサミン）等、糖の加水分解
物をもたらす置換基を意味する。
【００２４】 式（ＩＡ）および式（ＩＢ）の化合物は、それらの例は米国特許出願第６０／
１２２，９５３号に開示され、それぞれ慣用名サリシリハラミドおよびロバタミ
ドと命名されている。式（ＩＡ）あるいは式（ＩＢ）の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰ
アーゼ抑制化合物の例には、次式の化合物が挙げられる：
【００２５】
【化１６】
【００２６】 サリシリハラミドＡの構造および絶対的な立体化学構造は図４に記載されてい
る。
【００２７】 式（ＩＣ）−（ＩＥ）の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物の例には、
次式の化合物が挙げられる：
【００２８】
【化１７】
【００２９】 ＣＪ−１２，９５０およびＣＪ−１２，３５７として称された化合物は、Dekk
er et al.、J. Antibiotics、51、14-20 (1998)に記載されている。オキシミジ
ン１および２はKim et al.、J. Org. Chem.、64、153-155 (1999)に記載されて
いる。
【００３０】 式（ＩＦ）の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物の例には、次式の化合
物が挙げられる：
【００３１】
【化１８】
【００３２】 アピクラレンＡおよびＢは、Kunze et al.、J. Antibiotics、51、1075-1080
(1998)に記載されている。
【００３３】 別の実施態様において、本発明は、空胞−型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制に
より治療し得る状態の治療または予防の方法を提供し、この方法は、空胞型（Ｈ
＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量の少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ 1 −Ｒ3およびＲ6は、本明細書で定義された通りであり、Ｚは、ＯＲ1とメタ位の
関係にある式（Ｉ）の芳香環の炭素で始まり、ラクトンのアルキル酸素に直接結
合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカーＺの両端に共有結合する）と共に
、一体として５−１１員環を形成する、０から６原子（ヘテロ原子を含む）の鎖
を有する連続的なリンカーである］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エ
ステル、あるいはプロドラッグを投与することを含む。
【００３４】 Ｚが０から６原子の鎖を有する隣接リンカーであるとき、本発明において好ま
しく使用される化合物は、次式からなる群から選ばれる：
【００３５】
【化１９】
【００３６】 ［式中、Ｒ1−Ｒ3は本明細書で定義された通りであり；Ａは共有結合であるか、
あるいは、未置換あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、ア
シル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた一つまたはそれ以上の置
換基で置換された、Ｃ1−Ｃ6の直鎖の飽和または不飽和アルキルリンカーであり
；Ｘは共有結合であるか、あるいは、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニト
ロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群
から選ばれた一つまたはそれ以上の置換基で置換された、Ｃ1−Ｃ5の直鎖の飽和
または不飽和アルキルリンカーであり；ＷはＯ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（
Ｏ）nあるいはＮ−Ｒ4（Ｒ4はＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル
、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は本明細
書で定義された通りである）である）であり、ｎは０−２の整数である］あるい
は医薬上許容されるそれらの塩、エステル、あるいはプロドラッグを含む。
【００３７】 式（ＩＧ）あるいは（ＩＨ）の化合物は例えば、次式の化合物：
【００３８】
【化２０】
【００３９】 ［式中、Ｒ1−Ｒ3は本明細書で定義された通りである］医薬上許容されるそれら
の塩、エステル、およびプロドラッグを含む。
【００４０】 上で示されたように、本発明の化合物は全て、図２において強調される主要構
成成分を共有する。本発明の化合物は、広範囲の環サイズ、置換パターン、およ
び構造的なバリエーション等にわたって、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制活
性を有すると期待される。実際、ロバタミドＡ−ＦおよびサリシリハラミドＡお
よびＢといった化合物は、図２において強調される主要構成成分を含み、そして
、所定の範囲の環サイズにわたり（例えば、１２−１５員環にわたり）そして、
所定の範囲の構造的なバリエーションにわたり（例えば、サリシリハラミドＡか
らロバタミドＡに至るリンカーＺの構造的なバリエーションにわたり）空胞型（
Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制活性能力を維持する化合物の例証である。
【００４１】 本発明の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物および組成物は、生物学的
現象（例えば、細胞内器官の器官内酸性化；尿の酸性化；骨吸収；受精；血管形
成；細胞浸潤（例えば、腫瘍細胞浸潤）；転移；および腫瘍細胞における薬剤耐
性の増大、が挙げられるが、これらに限定されない）を調節するために医学的に
使用され得る。それ故、本発明の化合物は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑
制により制御し得る疾患の治療に有用である。それらの疾患には、例えば、骨粗
しょう症（例えば、Keeling et al.、Ann. New York Acad. Sci.、834、600-608
(1997)を参照されたい）、アルツハイマー病、緑内障、および尿の異常酸性化
（例えば、Nelson、TIPS、12、71-75 (1991)を参照されたい）が挙げられる。さ
らに、本発明の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤は、酸が促進する細胞浸透
機構を利用する疾患の治療あるいは予防に用いられ得る。例えば、本発明の化合
物は、細菌（例えば、バクロ細菌およびレトロ細菌）の侵入、あるいはタンパク
毒素（例えば、ジフテリア毒素）の細胞内への侵入、を抑制するために用いられ
得る（例えば、Mellman et al.、Ann. Rev. Biochem.、55、663-699 (1986)を参
照されたい）。本発明の化合物は、動物（例えば人間）の受精を抑制するため（
例えば、Wassarman、Science、235、553-560 (1987)を参照されたい）、あるい
は腫瘍細胞の浸潤あるいは転移を抑制するため、あるいは薬剤耐性を強める癌細
胞の能力を抑制することにより癌の薬剤への感受性を高めて、それにより癌の化
学療法を容易に、および／または可能にするため（例えば、Marquardt and Cent
er、J. Natl. Cancer Inst.、83、1098-1102 (1991)を参照されたい)にも、用い
られ得る。
【００４２】 本発明の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物は、組成物（例えば医薬組
成物）に含まれ得る。組成物は、一つまたはそれ以上の本発明の化合物と好適な
医薬上許容される担体とを組み合わせることにより製造され得、そして好適な製
剤に処方され得る。好適な製剤は、例えば、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏
、溶液、座薬、注射、吸入剤、およびエアロゾル、といった固体製剤、半固体、
液体または気体状、およびそれぞれの投与経路のための当該分野で公知の他の形
態の製剤を含む。医薬上の投与形態では、本発明の化合物は、単独で、あるいは
、本明細書中で述べたような他の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物を含
む、他の医薬上活性な化合物と組み合わせて、適切な集合体で使用され得る。
【００４３】 いかなる好適な担体も利用することができる。好適な担体には、医薬上あるい
は生理学上許容される担体を含む。以下の方法および担体は、単なる例示であっ
て、制限ではない。経口製剤の場合には、本発明の化合物は、単独で、あるいは
治療上有効量の少なくとも一つの他の化合物と組み合わせて投与され得る。本発
明で用いられる組成物は、さらに、本発明の化合物以外の、少なくとも一つの付
加的な化合物、例えば、付加的な空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤（例えば
、コンカナマイシンあるいはバフィロマイシン）あるいは抗癌剤でさえも含み得
る。所望の場合には、錠剤、粉末、顆粒、カプセル等を製造するための適切な賦
形剤とともに活性な成分を組み入れることができる。
【００４４】 好適な賦形剤には、例えば、ラクトース、マンニトール、コーンスターチある
いはポテトスターチといった、通常の賦形剤が挙げられる。好適な賦形剤には、
バインダー（例えば、結晶セルロース、セルロース誘導体、アカシア、コーンス
ターチ、あるいはゼラチン）；崩壊剤（例えば、コーンスターチ、ポテトスター
チあるいはカルボキシメチルセルロースナトリウム）が；ステアリン酸タルクあ
るいはマグネシウム等の潤滑剤とともに挙げられ得る。所望の場合には、例えば
、希釈剤、薬剤緩衝剤、薬剤湿潤剤、防腐剤、および／または香料等といった他
の賦形剤が組成物に含まれ得る。
【００４５】 本発明に従って使用される化合物は、水あるいは植物油、合成脂肪酸グリセリ
ド、高級脂肪酸エステル、あるいはプロピレングリコールといった非水溶媒中で
（所望の場合には、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、および防腐剤
といった通常の賦形剤とともに）、溶解液、懸濁液、エマルジョンとなって注射
用製剤に形成され得る。本発明の化合物は、吸入によって投与するためのエアロ
ゾル製剤に作製され得る。そういったエアロゾル製剤は、ジクロロジフロオロメ
タン、プロパン、窒素等といった許容される推進剤に圧入され得る。
【００４６】 本発明の化合物は、乳化基材あるいは水溶性基材といった様々な基材と混合さ
れて座薬に形成され得る。座薬製剤は直腸投与され得、そしてココアバター、カ
ーボワックス、ポリエチレングリコールといったビヒクル（それらは体温で溶け
るが、室温では固体である）を含み得る。
【００４７】 シロップ、エリキシル剤、および懸濁液といった、経口あるいは直腸投与のた
めの単位剤型が提供され得、ここで、各形態（例えば、ティースプーン用、テー
ブルスプーン用、錠剤、あるいは座薬）は、本発明の化合物を含む組成物を規定
量で含む。同様に、注射、あるいは静脈内投与のための単位剤型は無菌水、通常
の食塩水、あるいは他の医薬上許容される担体中の溶液としての組成物を構成し
得る。
【００４８】 本明細書で用いられる“単位剤型”の語は、人間および動物にとって一回投与
に適した物理的に分かれた単位であって、各単位は、規定量の少なくとも一つの
本発明の化合物を含んでいる（単独、あるいは所望の場合には、他の治療薬剤と
ともに）。単位剤型は、当該分野で公知の方法、例えば、医薬上許容される担体
とともに、望ましい効果をもたらすのに十分な活性成分の量を計算することによ
って決定され得る。本発明に従って使用される単位剤型の特定は、達するべき特
定の効果および各ホストにおける化合物に関連する特定の薬力学に依存する。
【００４９】 医薬上許容される担体（例えば、ビヒクル、補助剤、賦形剤、あるいは希釈剤
）は当業者にとって利用可能であり、そして市販により入手可能である。当業者
は、用いられる組成物の正確な処方のための相応の投与方法を容易に決定し得る
。治療される状態の性質あるいは重篤性を検討するために、投与におけるいかな
る必要な調整も、熟練した専門家によって、容易になされ得る。投与における調
整は、例えば、個々の患者の総合的な身体的健康、性別、年齢、病歴等といった
他の要因に基づいてもなされ得る。
【００５０】 一実施態様においては、本発明の方法は、治療上有効量の少なくとも本発明の
化合物を、本発明の化合物以外の治療上有効量の少なくとも一つの付加的な化合
物と組み合わせて共投与することを含む。例えば、本発明の化合物は、付加的な
空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤（例えば、コンカナマイシン、あるいはバ
フィロマイシン）とともに、あるいは抗癌剤（例えば、癌細胞の抗癌剤への耐性
の増大の抑制のために）とともに共投与され得る。
【００５１】 本発明の化合物は、例えば、経口投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与等
を含む、任意の適した経路で投与され得る。例えば、一つまたはそれ以上の本発
明の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤（あるいはその組成物）は、静脈注射
あるいは注入に適した溶液、錠剤、カプセル等、あるいは他の適した組成物ある
いは本明細書中で記載された製剤として投与され得る。
【００５２】 空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの“抑制に有効な量”は、個々の患者における
活性化合物の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの“抑制に有効なレベル”を達成す
るのに必要な投与量である。空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制に有効な量は、
例えば、望ましい医学的治療を達成するために、本発明の化合物の空胞型（Ｈ＋
）−ＡＴＰアーゼ抑制の実質的な血中レベル、組織レベル、および／または細胞
内レベルが有効なレベルに達するために個々の患者に投与するのに必要な量によ
って規定され得る。
【００５３】 有効レベルが投与の好ましい終点として用いられるとき、実際の用量およびス
ケジュールは、例えば、薬物動態学における個体間での差異、薬剤の分布、代謝
等によって変わり得る。有効レベルも、一つまたはそれ以上の本発明の化合物が
他の治療薬剤、例えば、一つまたはそれ以上の付加的な空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰ
アーゼ抑制剤、抗癌化合物、あるいはそれらの組合せ、と組み合わせて用いられ
るときには、変わり得る。さらに、有効レベルは治療を望む疾患によって変わり
得る。例えば、骨粗しょう症の治療にとっての有効レベルは、異常な尿酸性化の
治療、あるいは受精の抑制に要する有効レベルとは異なり得る。
【００５４】 いくつかの本発明の化合物、例えば、特定の１２から１５員環の化学種は、強
力な抗腫瘍活性を有することが知られている(例えば、McKee et al.、J. Org. C
hem.、63、7805-7810 (1998)、and International Publication No. WO 99/0513
6を参照されたい)。本発明に従って使用される化合物が抗癌活性を有する場合に
は、有効血中レベルは、抗癌活性に基づく有効血中レベルのアナロジーによって
決まり得る。有効レベルは、例えば、スクリーニングアッセイにおいて抑制腫瘍
細胞の増殖を抑制するのに有効なレベル（例えば、本明細書の実施例４から、１
０-11−１０-7Ｍ）として選択され得る。同様に、有効レベルは、例えば、抗癌
活性を臨床的に予想するアッセイにおいて、人間の癌の成長を有効に抑制する治
療薬剤の濃度に相当する、患者の血液あるいは組織レベルに基づいて決定され得
る。さらに、有効レベルは、例えば、ある患者の血液における癌のマーカーが癌
を抑制する特定の化合物により抑制された濃度に基づいて決定され得る。あるい
は、有効レベルは、例えば、患者の癌の成長を減速あるいは停止させるのに、患
者の癌を退行あるいは消滅させるのに、患者に特定の癌の自覚症状をなくさせる
のに、あるいは癌患者の感覚を改善するのに有効な濃度に基づいて決定され得る
。抗癌に有効なレベルは、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制が血液、組織、お
よび／または細胞内の望みの医学的治療を達成するのに有効なレベルに達するの
に臨床的に必要なレベルを見積もり（例えば、補外法によって）、あるいは決定
するためにさえ用いられ得る。空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を有効に抑制
するのに臨床上必要な治療上の有効量の決定は、本明細書中で議論したように、
有効レベルに影響を与え得る他の変数を考慮することが必要とされることが理解
されるであろう。定まった有効量が投与の好ましい終点として用いられるときに
は、薬物投与のための実際の用量および投与スケジュールは、例えば、薬物動態
学の個人間の差異、薬の分布、代謝、他の薬と組み合わせて用いられるか否か、
あるいは本明細書中で述べた有効レベルに影響を与える他の要因、を含む要因に
依存して、個々の患者により異なり得る。
【００５５】 当業者は、個々の患者において望ましい有効レベルを達成するため、ふさわし
い用量、スケジュール、あるいは特定の製剤の投与方法を容易に決定し得る。当
業者はまた、本発明の化合物の有効レベルの相応の指示薬を容易に決定し、そし
て使用し得る。例えば、有効レベルは、直接分析（例えば、分析化学）によって
、あるいは適切な患者サンプル（例えば、血液および／または組織）の間接分析
（例えば、臨床的化学指示薬で）によって、決定され得る。有効レベルはまた、
例えば、尿の酸性度、骨密度の変化、眼圧の低下、といった直接的あるいは間接
的な観察により、あるいは癌患者における腫瘍の成長の縮小あるいは抑制によっ
て（例えば、問題の化合物が抗癌活性を有する場合）決定され得る。当該技術分
野においては、それらを必要とする患者への活性化合物の投与において使用され
るプロトコルを記載する、多くの参照文献がある。例えば、患者への抗癌剤の投
与において使用されるプロトコルは、J.B. Collinsによる“Cancer Chemotherap
y: Principles and Practice” ed.、Chabner and Collins、J.B. Lippincott、
1990（特にchapter 2）に記載されている。
【００５６】 本発明の方法は、本発明の化合物とともに、例えば、他の空胞型（Ｈ＋）−Ａ
ＴＰアーゼ抑制剤（例えば、コンカナマイシンおよび／またはバフィロマイシン
）といった他の化合物の投与で、より効果的になされ得る。本発明の化合物はま
た、抗癌剤とともに投与され得、その場合には、望ましい有効レベルは、抗癌剤
への癌の耐性の増大能力を抑制するのに必要なレベルである。適した抗癌化合物
には、例えば、米国で販売が認められている、および将来において認められるで
あろう全ての公知の抗癌化合物が挙げられ、それらへの薬剤耐性は、空胞型（Ｈ
＋）−ＡＴＰアーゼの抑制により制御され得る。
【００５７】 本発明の化合物の唯一の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制活性は、当該技術
分野において公知の任意の適した方法（例えば、アッセイ方法）を用いることに
より決定され得る。空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制活性の測定のためにふさ
わしいアッセイ方法は、例えば、Chanet al.、Anal. Biochem.、157、375-380 (
1986)に記載されている。
【００５８】 あるいは、本発明の化合物の独特の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制活性は
、米国国立癌研究所（ＮＣＩ）の６０細胞株、ヒトの腫瘍、疾患指向性のスクリ
ーニングを用いて決定され得、そしてそれらは正確に化学化合物の抗癌活性を予
測できる。重要なことに、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングは、抗癌活性のみな
らず、他のタイプの生物学的活性を予測するのに用いられ得る強力なツールでも
ある。とりわけ、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングは、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰ
アーゼ抑制活性を正確に予想するのに使用され得る（米国特許出願第６０／１２
２，９５３号を参照されたい）。ＮＣＩ６０細胞株ヒト腫瘍スクリーニング、お
よび本明細書中に開示された化合物に関する抗癌活性の決定におけるその応用は
、国際特許出願第ＷＯ９９／０５１３６号に記載されている。
【００５９】 生物学的活性の予想は、公知の活性を有する化合物によって生じるＮＣＩスク
リーニングにおける活性パターンとの相関に基づく。相関において比較された化
合物は、ＮＣＩスクリーニングにおける相関にとって適した活性パターンを表示
するために、特に抗癌活性能力を有する必要はない。興味深いことに、化合物は
、ＮＣＩスクリーニングにおいて相関するためには、構造的に類似する必要はな
い。かりに、二つの構造的に非類似な化合物が、ＮＣＩスクリーニングにおいて
互いに強く相関したとしても、それらは、癌への用途以外を含む任意の用途にお
いて事実上同様の生物学的活性を有すると正確に予想され得る。ＮＣＩ６０細胞
株スクリーニングの適切な総説は、Boyd、In: Current Therapy in Oncology (N
iederhuber、ed.)、Philadelphia: B.C. Decker、Inc.、1993、pp. 11-22; Boyd
and Paull、Drug Dev. Res.、34、91-109 (1995); Grever and Chabner、In: C
ancer Principles and Practice of Oncology、5th Ed. (DeVita et al.、eds.)
、Philadelphia: Lippincott-Raven、1977、pp. 385-394; Paull et al.、In: C
ancer Chemotherapeutic Agents (Foye、ed.)、Washington、D.C.: American Ch
emical Society Books、1995、pp. 9-45; and Weinstein et al.、Science、275
、343-349 (1997)を参照されたい。
【００６０】 ＮＣＩ６０細胞株ヒト腫瘍スクリーンは、化合物が選択的に人間の様々な癌を
殺すあるいは成長を抑制する能力を測定する。一般に、ＮＣＩスクリーニングで
は、本発明の化合物は特定の型のヒトの固有腫瘍（例えば、非小細胞肺癌、腎癌
、およびメラノーマ）に対する強力な活性、およびそれらの耐性株を示す。これ
らの観察によって、および他の腫瘍細胞応答プロファイルの詳しい分析から、本
発明の化合物は、独特で特徴的な生物活性プロファイルを有することが示され得
る。
【００６１】 ＮＣＩ６０細胞株ヒト腫瘍の主要なスクリーニングは、化合物の天然原料を同
定する方法も提供する。ＮＣＩスクリーニングは、幾つかの国際的に設立された
高名な域外の（非ＮＣＩ）支援およびレビューグループ（NCI Division of Canc
er Treatment's Board of Scientific Counselors、Ad Hoc Expert Review-Comm
ittee thereof、the National Cancer Advisory Board、および the President'
s Cancer Panel (Boyd、In: AntiCancer Drug Development Guide: Preclinical
Screening、Clinical Trials、and Approval (Teicher、B.A.、ed.)、Totowa、
NJ: Humana Press、Inc.、pp. 23-42、1997を参照されたい)を含む）の指揮、詳
細な調査、および監督のもとに、１９８５−１９９０年に設計され提供された。
ＮＣＩスクリーニング発展の起動力は、世界中で商業的に入手し得る抗癌薬のほ
とんどが、ヒトの癌のほとんどの形態に対し本質的には非活性であるか、あるい
は一時的にのみ有効であるという国際的な認識であった。総説が、例えば、Boyd
、In: Cancer: Principles and Practice of Oncology Updates (DeVita、V.T.
、Jr.、et al.、eds)、Philadelphia: Lippincott、1989、pp. 11-22; and Boyd
、In: Current Therapy in Oncology (Niederhuber、J.E.、ed.)、Philadelphia
: BC Decker、1993、pp. 11-22に開示されている。このＮＣＩスクリーニングは
１９９０年以降のみ使用可能であったが、既に人間の癌患者における重要な新し
い抗癌薬の発見、開発、および臨床使用のきっかけとなっていた。例えば、Wein
stein et al.、Science、275、343-349 (1997); Grever and Chabner、In: Canc
er: Principles and Practice of Oncology、5th Ed. (DeVita、V.T.、et al.、
eds.)、Philadelphia: Lippincott-Raven、1977、pp. 385-394; and Sausville
、In: AntiCancer Drug Development Guide: Preclinical Screening、Clinical
Trials、and Approval (Teicher、B.A.、ed.)、Totowa、NJ: Humana Press、In
c.、1997、pp. 217-226を参照されたい。
【００６２】 ＮＣＩスクリーニングは、各細胞株に対し成長抑制あるいは細胞毒性規定の相
対的な度合いを決定するために、規定された濃度範囲にわたって化合物が試験さ
れる、６０の異なるヒトの腫瘍細胞株のパネルからなる。スクリーニングの設計
と操作は、被験化合物に対し、スクリーニングを構成する各々の細胞株に対する
絶対および相対感受性の両方が十分に再現可能であるようなものであるので、細
胞の特徴的な応答プロファイル、あるいは“フィンガープリント”が生成する。
ＮＣＩスクリーニングにおいて活性のある化合物は、６０細胞株パネルからなる
様々な細胞株に対し、著しく特異な腫瘍成長抑制および／または細胞毒性効果を
示す。最大と最小の感受性のライン間の示差的な応答の度合いは、通常、比較的
小さい（例えば、２−１０倍）か、あるいは時には３−４桁の大きさである。さ
らに、細胞株は、所定の化合物への応答において広範に異なりうるか、あるいは
、平均よりずっと大きいかまたは小さい感受性を示す比較的少ない株だけを有し
ており、比較的均一であり得る。細胞株パネルの応答における差異の大きさまた
は不均一の程度に関わらず、本明細書に含まれる有用な情報にとって重要なこと
は、応答“フィンガープリント”の再現可能性である。
【００６３】 スクリーニングアッセイの詳細な開示は、例えば、Monks et al.、J. Natl. C
ancer Inst.、83、757-766 (1991); Skehan et al.、J. Natl. Cancer Inst.、8
2、1107-1112 (1990); and Boyd and Paull、Drug Dev. Res.、34、484-488 (19
95)にて出版されている。同定、原料、誘導、形態学的および免疫細胞化学的性
質、およびＮＣＩ６０細胞株パネルを構成する細胞株の維持方法は、例えば、Bo
yd、In: Cancer: Principles and Practice of Oncology Updates (DeVita、V.T
.、Jr.、et al.、eds)、Philadelphia: Lippincott、1989、pp. 1-12; Monks et
al.、J. Natl. Cancer Inst.、83、757-766 (1991); Stinson et al.、AntiCan
cer Res.、12、1034-1035 (1992); and Boyd and Paull、Drug. Dev. Res.、34
、91-109 (1995)などに詳細に記載されてきた。
【００６４】 スクリーニングアッセイにおいて、各薬剤はパネル中の各細胞株に対し、広い
濃度領域で試験される。全てのラインは第０日目に、一連の標準９６ウェルマイ
クロタイタープレート上に接種され、続いて、被験化合物なしで２４時間培養さ
れた。接種密度は個々の細胞株およびその成長特性による。使用される接種密度
は、Monks et al.、J. Natl. Cancer Inst.、83、757-766 (1991); and Boyd an
d Paull、Drug Dev. Res.、34、91-109 (1995)に記載されている。被験化合物は
、５つの１０倍希釈物で評価される。被験化合物とともに４８時間培養した後、
細胞は、Skehan et al.、J. Natl. Cancer Inst.、82、1107-1112 (1990); Monk
s et al.、J. Natl. Cancer Inst.、83、757-766 (1991); and Rubinstein et a
l.、J. Natl. Cancer Inst.、82、1113-1118 (1990)に記載の、スルホローダミ
ンＢ処理によってアッセイされる。光学密度は自動プレート読取機で測定され、
その後、コンピュータ化されたデータの収集、処理、記憶、および表示および分
析のアベイラビリティーが測定される。
【００６５】 化合物のそれぞれの成功した試験は、６０の用量応答カーブを生成し、そのカ
ーブはＮＣＩスクリーニングデータレポートに、腫瘍型サブパネルを構成する一
連の組成物としてプリントされる。品質管理基準に不合格の個々の細胞株のデー
タ、あるいはうまく試験できなかった欠陥を有する細胞株は、その後の分析から
除去されそしてスクリーニングレポートから削除される。
【００６６】 “パーセンテージグロース”（ＰＧ）の語、および＋５０、０および−５０応
答参照線の意味、計算された応答パラメーター、ＧＩ50、ＴＧＩ、およびＬＣ50 、“平均グラフ”およびＣＯＭＰＡＲＥパターン認識アルゴリズムの構築および
使用を、以下に短く要約する。５０％成長抑制パラメーター（ＧＩ50）は、１０
０ｘ（Ｔ−Ｔo）／（Ｃ−Ｔo）＝５０＝ＰＧである場合の被験薬の濃度である。
４８時間被薬後の試験ウェルの光学密度はＴ；時間０での光学密度はＴ0；そし
てコントロール光学密度はＣである。ＰＧは、Ｔ／Ｃ様の＋１００から−１００
をとりうるパラメーターである。ＧＩ50が効果の成長抑制レベルとして考えられ
得るとき、ＴＧＩは効果の“トータル成長抑制”あるいは細胞活動抑止レベルを
示す。ＴＧＩは、１００ｘ（Ｔ−Ｔo）／（Ｃ−Ｔ）＝０＝ＰＧである場合の薬
物の濃度である。ＬＣ50は致死濃度、“正味の細胞致死”、あるいは細胞毒性パ
ラメーターである。それは、１００ｘ（Ｔ−Ｔo）／Ｔo＝−５０＝ＰＧである場
合の濃度である。制御光学密度はＬＣ50の計算には用いられない。“パーセンテ
ージグロース”（ＰＧ）の語、および＋５０、０および−５０応答参照線の意味
、計算された応答パラメーター、ＧＩ50、ＴＧＩ、およびＬＣ50、“平均グラフ
”およびＣＯＭＰＡＲＥパターン認識アルゴリズムの構築および使用の詳細な説
明については、Boyd et al.、In: Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Co
ncepts for Drug Discovery and Development (Valeriote、F.A.、et al.、eds.
)、Amsterdam: Kluwer Academic Publishers、1992、pp. 11-34; Monks et al.
、J. Natl. Cancer Inst.、83、757-766 (1991); and Boyd and Paull、Drug De
v. Res.、34、91-109 (1995)を参照されたい。
【００６７】 平均グラフは正および負の値のプロットにより形成されたパターンであって、
“デルタ”と称され、ＮＣＩインビトロスクリーンの各細胞株に対して試験され
た化合物から得られるＧＩ50、ＴＧＩ、あるいはＬＣ50濃度の組から生成されて
いる。デルタは、３ステップにより、ＧＩ50、ＴＧＩ、あるいはＬＣ50データか
ら得られる。例えば、所定の化合物に対して試験が成功した各細胞株についての
ＧＩ50値は、そのｌｏｇ10 ＧＩ50値に変換される。平均パネルｌｏｇ10 ＧＩ 50 値は、各ｌｏｇ10 ＧＩ50値を平均して得られる。次いで、各ｌｏｇ10 ＧＩ 50 値は、パネル平均から減じられて、対応するデルタが算出される。
【００６８】 平均グラフの構築のために、デルタは、算出された平均パネルＧＩ50を表す垂
直線に対し平行にプロットされる。負のデルタは平均参照線の右にプロットされ
、そして計算された平均よりも変動しやすい細胞株を比例的に表す。逆に、正の
デルタは、所定の薬剤に対してより変動の小さい細胞株を表すよう、参照線の左
にプロットされる。それ故、例えば、ＧＩ50平均グラフにおいて、垂直の参照線
の右に３ユニット突出しているバーは、この細胞株のＧＩ50濃度が、パネル平均
ＧＩ50濃度より１０００倍小さいことを示す。ＴＧＩおよびＬＣ50平均グラフは
同様に作成され、解釈される。
【００６９】 三つの付加的な数字が３つのそれぞれの平均グラフの基線にプリントされる。
これらの数字はＭＧ−ＭＩＤ、Ｄｅｌｔａ（個々の細胞株についての“デルタ”
と混同されてはならない）、およびＲａｎｇｅである。ＭＧ−ＭＩＤは、計算さ
れた平均パネルＧＩ50、ＴＧＩ、あるいはＬＣ50である。Ｄｅｌｔａは、ｌｏｇ 10 の単位の数であり、パネルの最も変動が大きい株のデルタは対応するＭＧ−Ｍ
ＩＤとは異なる。同様に、Ｒａｎｇｅはｌｏｇ10の単位の数であり、パネルの最
も変動が大きい株のデルタは最も変動が小さい株のデルタとは異なる。
【００７０】 ＣＯＭＰＡＲＥは、ＮＣＩスクリーニングによって生成したデータの評価およ
び利用において用いられる、コンピュータ化されたパターン認識アルゴリズムで
ある。要するに、ＣＯＭＰＡＲＥは、同一あるいは異なる化合物から得られた平
均グラフプロファイルの同様性、あるいはその欠如を決定し表示する方法である
。スクリーニングの開発中にこのようなツールを構築する初期の起動力は、標準
化およびスクリ−ニングの信頼性および時間に対する再現性を確立しモニターす
る必要性であった。これは、細胞株の同じパネルに対し繰り返しスクリーニング
したときに同じか非常に似たプロファイルを生成すると期待される標準化合物の
標準試験によって達成された。
【００７１】 ＮＣＩスクリーニングは繰り返してキャリブレーションされる。スクリーニン
グの標準化の過程において、ＮＣＩは標準化合物として、非常に多くの前臨床お
よび／または臨床的な抗癌特性および作用の機構についての情報が入手可能な約
１７０の薬剤を選んだ。これらの化合物は、市販の抗癌剤、開発中の抗癌剤、お
よび別の癌関連の試験システムにおける活性に基づいて、前臨床的開発がなされ
ているか、あるいはなされていた他の抗癌剤を含んだ。これらプロトタイプ“標
準薬剤”の繰り返しの周期的なスクリーニング（それらの結果の累積編集は“標
準薬剤データベース”を形成する）は、依然としてスクリーニングのキャリブレ
ーションおよび標準化についての基礎である。
【００７２】 重要なことに、ＮＣＩの標準薬剤データベースは、多くの有用な新たな薬剤の
応用の発見の手がかりも提供する。例えば、選択された標準薬剤の特徴的な応答
プロファイル“フィンガープリント”は、任意の他の入手可能な平均グラフデー
タベースを、それらに含まれた密接にマッチしたプロファイルがあるか否かを確
かめるために精査するための“種”として用いられ得る。同様に、任意の入手可
能な平均グラフデータベースから選ばれたプロファイルは、“標準薬剤データベ
ース”を、密接にマッチした標準薬剤プロファイルがあるか否かを決定するため
に精査するために用いられ得る。そういった研究に用いられる付加的なデータベ
ースは、所望のように構築あるいは定義され得、そして、比較的小さく（例えば
、単一の化合物、あるいは選ばれた同種の一連の化合物からなる）、あるいは非
常に大きい（例えば、今までにＮＣＩスクリーニングで試験された純粋な化合物
、混合物、画分物、および抽出物の全てのデータベース）可能性がある。
【００７３】 ＣＯＭＰＡＲＥを用いた初期のＮＣＩの研究は、平均グラフパターンにマッチ
する化合物は関連する化学構造をしばしば有することを示した。しかし、この現
象のより詳細な試験により、ある種の非関連の構造の化合物が平均グラフパター
ンのマッチングを有し、そして、作用の同一あるいは関連した生化学的機構を共
有することが明らかになった。例えば、Boyd、In: Current Therapy in Oncolog
y (Niederhuber、J.E.、ed.)、Philadelphia: BC Decker、1993、pp. 11-22; an
d Paull et al.、In: Cancer Therapeutic Agents、Washington、D.C.: Am. Che
m. Soc. Books、pp. 9-45 (1995); およびそれらの参照文献を参照されたい。
【００７４】 ＣＯＭＰＡＲＥ分析は、ＧＩ50、ＴＧＩ、あるいはＬＣ50のいずれかから計算
される平均グラフデルタを用いて行われ得る。選択された特定の平均グラフプロ
ファイルあるいは“種”が、所定のデータベースを精査するために用いられると
きには、各細胞株についての適切なデルタ値は、特定のデータベースセットに入
っている全ての平均グラフの同じ細胞株に対応するデルタ値と比較される。もし
、いずれかのデルタ値がいずれかの細胞株を失う（例えば、試験の不合格あるい
は品質管理削除のせいで）ならば、そのときは、その細胞株はその特定の種／平
均グラフとデータベース／平均グラフとのペアについての計算から完全に除外さ
れる。それ故、特定されたデータベースにおける各平均グラフにとって、デルタ
値のペアのセット（最大値６０）が得られる。商業的に入手し得るＳＡＳ統計プ
ログラムが、各デルタ値ペアのセットのためのピアソンプロダクトモーメント補
正係数（０．０−１．０）の計算のために用いられる。特定されたデータベース
における全ての化合物の平均グラフは、種平均グラフに対する類似性についてラ
ンク付けされ得る。ＮＣＩの“標準薬剤データベース”ならびにＣＯＭＰＡＲＥ
を含む様々なＮＣＩスクリーニングデータディスプレイおよび分析ツールへの公
的アクセスは、インターネット（ｈｔｔｐ：／／ｄｔｐ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏ
ｖ／）により世界中の研究者にとって利用可能である。
【００７５】 ＣＯＭＰＡＲＥの通常の応用により、標準薬剤データベースから選択されたプ
ロトタイプ種化合物を用いて、ＮＣＩは今までのデータから生じた全ての歴史的
なスクリーニングデータベースの調査を維持してきた。このようにして、公知の
または公知と推定される作用の機構を有する標準薬剤にマッチするスクリーニン
グフィンガープリントを有する化合物が同定され得る。ＮＣＩは、作用機構が以
前は知られていなかった化合物のデータベース分類を、目的とする多くの既知の
機構分類に関連させそして次第に確定することを可能ならしめてきた。例えば、
新たなメンバーが、チューブリン相互作用性抗有糸多重度物質、代謝拮抗物質、
アルキル化剤、トポイソメラーゼ抑制剤、ＤＮＡバインダー等の総合的な機構の
カテゴリーに分類されてきた。この種のデータベース予想から生じるこれらおよ
び多くの他の例が、例えば、Paull et al.、Cancer Res.、52、3892-3900 (1992
)、およびその参照文献; and Paull et al.、In: Cancer Chemotherapeutic Age
nts、Washington、D.C.: Am. Chem. Soc. Books、1995、pp. 9-45、およびその
参照文献において、出版されてきた。
【００７６】 ＮＣＩの継続した薬剤のスクリーニングの取り組みの一部として、コンカナマ
イシンＡ（図１２Ａ−１２Ｃ）およびバフィロマイシンＡ1の特徴的なスクリー
ニング“フィンガープリント”がＮＣＩスクリーニングにおいて決定された。コ
ンカナマイシンおよびバフィロマイシンの“フィンガープリント”の間には高い
相関があった。
【００７７】 きわめて驚くべきことに、出願人が分析した幾万もの平均グラフ“フィンガー
プリント”の中でも特に、本発明の特定の１２および１５員環化合物の特徴的な
スクリーニング“フィンガープリント”がコンカナマイシンＡ（これまでに知ら
れた最も強力な空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤）とほとんど完全に相関す
ることが見出されてきた。本発明の特定の１２および１５員環化合物に対する相
関は非常に正確であるので、偶然の一致という可能性は実質的には除かれている
。それゆえ、本発明の化合物であって、ＮＣＩスクリーニングにおけるその平均
グラフフィンガープリントがコンカナマイシンＡのそれと相関する化合物は、空
胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制剤であると結論される。事実、特定の空胞型
（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼのバイオアッセイにより、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニ
ングにおけるフィンガープリントがコンカナマイシンＡのそれと相関する本発明
の化合物は、強力な空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制活性を有することがさら
に確認されてきた。それ故、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングは、任意の選択さ
れた本発明の化合物が、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制剤であることを証
明するのに用いられ得る。
【００７８】 ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにより生成した、平均グラフ“フィンガープ
リント”が互いに高く相関する化合物は、たとえ化合物が構造的に非常に異なっ
ているとしても、共通の分子ターゲットあるいは生物学的作用機構を共有すると
期待され得る。例えば、約０．８から０．９あるいはそれ以上のＣＯＭＰＡＲＥ
相関係数によって、高い相関が確立され得る。Boyd、In: Current Therapy in O
ncology (Niederhuber、J.E.、ed) Philadelphia: B.C. Decker、1993、pp. 11-
22; Boyd and Paull、Drug Dev. Res.、34、91-109、1995; Paull et al.、In:
Cancer Therapeutic Agents、Washington、D.C.: Am. Chem. Soc. Books、1995
、pp. 9-45を参照されたい。それ故、コンカナマイシン、バフィロマイシン、サ
リシリハラミドおよびロバタミドは、例えば、それら相互のＮＣＩ６０細胞株ス
クリーニング相関係数が高く、全て、同一の分子ターゲット、空胞型（Ｈ＋）−
ＡＴＰアーゼを共有することが示され得る。この性質の詳細な記載は実施例５で
与えられる。
【００７９】 当業者は、細胞内器官の別の種類あるいは位置、原形質膜の別の種類あるいは
位置、あるいは細胞組織の別の種類あるいは位置において、全ての空胞型（Ｈ＋
）−ＡＴＰアーゼ抑制剤が同様に空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を抑制する
わけではないことを理解するであろう。いいかえると、ある所定の空胞型（Ｈ＋
）−抑制化合物は、細胞内器官、原形質膜、細胞あるいは組織の一つまたはそれ
以上の種類あるいは位置において、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を優先的
に抑制し得る。それ故、熟練した専門家は、所望する治療上の使用のために特定
の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物を典型的に選択するであろう。化合
物の選択は、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼが化合物によって優先的に抑制され
る、細胞内器官あるいは原形質膜の特定の種類あるいは位置に基づいてなされ得
る。実際、一つまたはそれ以上の種類の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの優先的
な抑制に基づいた特定の応用のためにこの化合物が選択され得ることを示す、文
献における明らかな先例がある。例えば、Gagliardi et al.、J. Med. Chem.、4
1、1568-1573、(1998)は、ヒトの腎皮質の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性に
比べ、ヒトの溶骨細胞空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を選択的に抑制する化
合物を同定した；それ故、そういった化合物は、骨粗しょう症の治療において特
に有用であることが期待される。
【００８０】 哺乳動物の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性の抑制剤の薬学上の有用性に加
え、薬学上の有用性はまた、非哺乳動物の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性の
抑制によっても得られうる。例えば、既知の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制
剤であるバフィロマイシンＡ1およびコンカナマイシンＡは、真菌および哺乳動
物の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を強力に抑制し、そしてそれらの化合物
は強い抗真菌活性を有する。Bowman et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、85
、7972-7976 (1988); Droese et al.、Biochemistry、32、3902-3906 (1993); D
roese and Altendorf、J. Exp. Biol.、200、1-8 (1997)を参照されたい。注目
すべきことに、本発明のある種の化合物は、哺乳動物（非哺乳動物に対し）の空
胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼを選択的に抑制することが見出されてきており、こ
のことは、これらの化合物がいかなる既知の抑制剤とも異なる機構によって、酵
素を抑制することを示す。
【００８１】 腫瘍細胞の増殖、および引き続くそれらの浸潤および転移において、空胞型（
Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼが重要な役割をはたすという証拠もある。Montcourrier e
t al.、J. Cell Sci.、107、2381-2391 (1994); Martinez-Zaguilan et al.、Am
. J. Physiol.、265、C1015-C1-29 (1993); Martinez-Zaguilan et al.、J. Cel
l Physiol.、176、196-205 (1998); Nishihara et al.、Biochem. Biophys. Res
. Commun.、212、255-262 (1995); Manabe、et al.、J. Cell Physiol.、157、4
45-452 (1993)を参照されたい。さらに、細胞内器官の酸性化は、通常の抗癌剤
の除去および細胞流出に寄与し得る。Marquardt and Center、J. Natl. Cancer
Inst.、83、1098-1102 (1991); Benderra et al.、Intl. J. Oncol.、12、711-7
15 (1998); Mariyama et al.、J. Biochem.、115、213-218 (1994)を参照された
い。それ故、本発明の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物は、腫瘍細胞の
増殖、およびそれに続くそれらの浸潤および転移の抑制に用いられ得る。さらに
、本発明の化合物は、通常の抗癌剤に対する腫瘍細胞の薬剤耐性の抑制のために
用いられ得る。
【００８２】 本発明に従って用いられる特定の化合物あるいは組成物は、空胞型（Ｈ＋）−
ＡＴＰアーゼ抑制の所望される種類あるいは部位、および／または、当業者にと
って周知の他の薬理学上、中毒学上、医薬上の、あるいは他の適切な検討に基づ
いて選択され得る。本発明の化合物および組成物の抑制活性の、様々な組織、細
胞、器官および他の製剤における、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性に対する
特定のバイオアッセイ、定量および比較のための常套の方法は文献に詳細に記載
されている（例えば、Bowman et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、85、7972-
7976 (1988); Gagliardi et al.、J. Med. Chem.、41、1883-1893 (1998); Gagl
iardi et al.、J. Med. Chem.、41、1568-1573 (1998);およびそれらの参考文献
を参照されたい）。
【００８３】 本発明の化合物は、構造的に独特である。そのうえ、本発明の特定の化合物の
ＧＩ50およびＴＧＩの平均グラフスクリーニングプロファイルのＣＯＭＰＡＲＥ
分析は、互いに関して高度の共通性を密接に示す（例えば、少なくとも０．６−
０．８、あるいはそれ以上のＧＩ50およびＴＧＩのＣＯＭＰＡＲＥピアソン相関
係数）が、いかなる既知標準薬剤ともそういった相関を示さない。同様に、本発
明の化合物を含むことが示され得る天然有機体の抽出物は、本発明の化合物と同
様に高いＧＩ50およびＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥピアソン相関（例えば、典型的に
は０．６−０．７あるいはそれ以上）を有するＧＩ50およびＴＧＩの平均グラフ
スクリーニングフィンガープリントを典型的に与える。このことは、当業者が、
それらの製造上の原料有機体およびその抽出物を容易に同定することを可能なら
しめており、それらから、当業者は本発明の化合物あるいはそれらの前駆体を容
易に得ることおよび使用することができる。本発明の化合物の同定および／また
は特徴付けは、特定の特徴的なＮＭＲシグナルの存在によってさらに容易になる
。そういった特徴的なＮＭＲシグナルは、それらの天然有機体からの粗抽出物お
よび部分的に精製された画分、あるいはこれらの化合物を含む合成または半合成
反応生成物を含む、化合物の混合物の同定および選択をさらに確実にし得る。こ
れを以下にさらに記述する。
【００８４】 図１は、水素原子（Ｈ1−Ｈ10）として描写されていて、本発明の好ましい化
合物によって共有されている１０のプロトンの構造的な位置を示している。本発
明の化合物のプロトンＮＭＲ分光法（５００ＭＨｚ）は、これら１０のプロトン
が、一緒になって本発明の化合物に非常に特徴的な化学シフト値を有する共鳴を
もたらすことを示す。これらの特徴的なＮＭＲピーク（それらは、特定の化合物
に依存して多重度が異なり得る）は、以下の化学シフト値の範囲に強く集中して
いる集まる（ＣＤ3ＯＤ中で残留メタノールを標準として記録したとき）：H1, 6
.60-6.70; H2, 7.10-7.20; H3, 6.65-6.75; H4, 5.30-5.70; H5, 6, 2.30-2.60;
H7, 5.00-5.45; H8, 6.70-6.90; H9, 5.60-6.30; H10, 6.40-7.20。例えば、代
表的な本発明の化合物、サリシリハラミドＡおよびＢ、およびロバタミドＡおよ
びＢ、のＨ1−Ｈ10（ＣＤ3ＯＤ中）の1Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）化学シフト
および共鳴の多重度は、下記の表１に記載されている。
【００８５】
【表１】
【００８６】 表１に記載の本発明の化合物の少なくとも六つの特徴的な共鳴（具体的には、
Ｈ1−Ｈ3およびＨ8−Ｈ10で表した）は、それらを含む天然有機物の粗製の抽出
物において容易に区別される。それ故、抽出物が、特徴的な平均グラフスクリー
ニングプロファイルを示し、そして、前記の特徴的なＨ1−Ｈ3およびＨ8−Ｈ10
の共鳴を有するプロトンＮＭＲスペクトルを示すときには、本発明の化合物は、
天然有機体の抽出物からさらに同定され得る。特徴的な平均グラフスクリーニン
グプロファイルを有する抽出物は、例えば、本発明の典型的な純粋な化合物のス
クリーニングプロファイルに対応する０．６−０．７より大きいか同等のＧＩ50 および／またはＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥ相関を示すものを含む。このような抽出
物がひとたび選ばれれば、当該技術分野における専門家は、本明細書で与えられ
た記載に従って、本発明の化合物を得ることができる。一つのこのようなアプロ
ーチは実施例１に例示される。
【００８７】 本発明の特定の１２−１５員環の化合物は、海綿動物および被嚢動物の溶媒抽
出物を含む天然原料から、例えば、Ｈａｌｉｃｌｏｎａ属由来の海綿動物および
Ａｐｌｉｄｉｕｍ属由来の被嚢動物種の水あるいは有機溶媒抽出物から容易に得
ることができる。Ｈａｌｉｃｌｏｎａ海綿動物あるいはＡｐｌｉｄｉｕｍ被嚢動
物の抽出物は、任意の適した溶媒、例えば有機溶媒、水、およびそれらの混合物
から調製され得る。新鮮な海綿動物あるいは被嚢動物が用いられ得るが、もっと
一般的にはそれらは回収後直ちに冷凍され、そして直ちに用いられるか、あるい
は抽出が行われる前に凍結乾燥される。本発明の化合物を得るための原料として
海綿動物が用いられるときは、Ｈａｌｉｃｌｏｎａ属由来であるのが好ましいが
、さらに好ましくはＨａｌｉｃｌｏｎａ種由来であり、そして最も好ましくはウ
ェスタンオーストラリアのＲｏｔｔｎｅｓｔ島付近で採られるＨａｌｉｃｌｏｎ
ａ種である（実施例１を参照されたい）。
【００８８】 本発明の化合物を得るための原料として被嚢動物が用いられるときは、Ａｐｌ
ｉｄｉｕｍ属由来であるのが好ましい。さらに好ましくは、被嚢動物はＡｐｌｉ
ｄｉｕｍ種であり、さらにより好ましくはＡｐｌｉｄｉｕｍ ｌｏｂａｔｕｍで
、最も好ましくはＨｉｌｌａｒｙ Ｂｏａｔ Ｈａｒｂｏｒの真西のオーストラ
リアの南西海岸で採られたＡｐｌｉｄｉｕｍ ｌｏｂａｔｕｍである（実施例１
を参照されたい）。本発明の化合物を含むＨａｌｉｃｌｏｎａおよびＡｐｌｉｄ
ｉｕｍ種の特定の抽出物は、ＮＣＩ６０細胞ヒト腫瘍スクリーニングにおいてそ
れらが生成する抗癌スクリーニングプロファイルに基づいて同定され選択され得
る。本発明の化合物を含むこのような抽出物はまた、本発明の化合物（実施例１
をまた参照されたい）に共有される主要構成成分（図２）に特徴的な主要なプロ
トンＮＭＲシグナル（表１）に基づいても同定および選択され得る。
【００８９】 前記の選択された抽出物から本発明の化合物を単離および精製するために、種
々の方法が用いられ得る。単離および精製の各工程において、前記の特徴的な抗
癌スクリーニングプロファイルあるいは適切なバイオアッセイ、ならびに前記の
特徴的なプロトンＮＭＲシグナルは、部分的に精製されたおよび精製された化合
物ならびに中間体画分について得ることができ、所望の本発明の化合物の単離が
確実になる。
【００９０】 天然材料から本発明の特定の化合物を得る好ましい方法は、以下の工程を含む
： （ａ）一つまたはそれ以上の本発明の化合物あるいはそれらの前駆体を含む新
鮮なあるいは冷凍した海綿動物あるいは被嚢動物（あるいは他の適した天然原料
）のサンプルを得る工程、 （ｂ）当該化合物あるいは前駆体を溶解する水または有機溶媒を用いて、当該
サンプルから当該化合物あるいはそれらの前駆体を抽出し、水あるいは有機溶媒
の抽出物を形成する工程、 （ｃ）必要に応じて、当該抽出物をエタノールを用いて処理し、高分子量タン
パク質および硫酸化多糖を沈殿させ除去する工程、 （ｄ）当該抽出物を非極性有機溶媒と水性溶媒との間で分配して、所望の化合
物あるいはそれらの前駆体を含む、分配された水性、非極性あるいは極性有機抽
出物を得る工程、 （ｅ）当該分配された抽出物を、例えば、吸着、分画、あるいはサイズ排除マ
トリクスによるクロマトグラフィーにかけて、画分を形成する工程、および （ｆ）本発明の化合物あるいはそれらの前駆体を含む画分から、それらを単離
する工程。
【００９１】 工程（ｂ）において、溶媒は、適切な非極性有機溶媒および適切な極性有機溶
媒の混合物を含み得る。適切な非極性有機溶媒には、例えば、ＣＨ2Ｃｌ2、ＣＨ
Ｃｌ3、トルエン、およびヘキサンが挙げられる。適切な極性有機溶媒には、例
えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、イソプロピルアルコール、およびアセトンが挙げら
れる。工程（ｄ）において、適切な有機非極性溶媒には、ＣＨ2Ｃｌ2、ヘキサン
、ＣＣｌ4、ＣＨＣｌ3、ＭｅＯｔＢｕ、および酢酸エチルが挙げられる；そして
典型的な水性溶媒は、水およびアルコールの混合物である。分配工程において用
いられ得る溶媒混合物の非限定的な例には：（１）ＣＨ2Ｃｌ2対１９：１Ｈ2Ｏ
−ＭｅＯＨ、（２）ヘキサン対９：１ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ、（３）ＣＣｌ4対８：２
ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ、（４）ＣＨ2Ｃｌ2対７：３ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ、および（５）Ｅ
ｔＯＡｃ対Ｈ2Ｏが挙げられる。工程（ｄ）において、好ましいクロマトグラフ
ィーは、カラムクロマトグラフィーである。カラムクロマトグラフィーが用いら
れるとき、好ましいクロマトグラフィーマトリックスは吸着型、分配型、サイズ
排除型、あるいはそれらの適した組合せである。溶媒およびマトリックスは、単
離される化合物が特に酸に安定でないときは、過度に酸性でないことが好ましい
。ＳｅｐｈａｄｅｘTMＬＨ−２０は、本発明の特定の型の化合物の単離にとって
特に好ましいマトリックスであり、前述の三つのマトリックスタイプの全てを併
せ持ち、そして、穏やかな処理および良好な復元性によって特徴付けられている
。単離工程（ｆ）は、例えば、溶媒の単純な蒸発あるいは再結晶のいずれかによ
って行われ得る。
【００９２】 一つのアプローチにおいては、冷凍Ｈａｌｉｃｌｏｎａ種海綿動物の選択され
たサンプルを、ドライアイスを用いて粉砕する。ドライアイスを昇華させ、蒸留
水を加え、そして解凍された材料を３℃にて３時間攪拌し、そして遠心分離する
。残渣を、凍結乾燥させ、ＣＨ2Ｃｌ2−ＭｅＯＨ（１：１ｖ／ｖ）の混合物を用
いて室温（例えば、２０−２５°Ｃ）にて一晩で抽出する。溶媒を抜き取り、残
渣をＭｅＯＨですすぐ。あわせた有機抽出物を蒸発乾固させる。粗製の有機抽出
物をＤｉｏｌ−６０カラムの数バッチの真空液体クロマトグラフィー（連続的に
ヘキサン、ＣＨ2Ｃｌ2−ＭｅＯＨ、ＥｔＯＡｃ、アセトン、およびＭｅＯＨで溶
出する）にかける。ＥｔＯＡｃの画分を、ＣＨ2Ｃｌ2−ＭｅＯＨ（１：１）のＳ
ｅｐｈａｄｅｘTMＬＨ−２０のカラムに通し、本発明の化合物に特徴的な生物活
性プロファイルおよびＮＭＲシグナルを持つ画分を得る。第２のＳｅｐｈａｄｅ
ｘTMＬＨ−２０カラムを、ヘキサン−トルエン−ＭｅＯＨ（３：２：２）で溶出
し、実質的に精製された本発明の化合物を得る。サリシリハラミドＡ（図３Ａ）
およびそのΔ17−シス−異性体（サリシリハラミドＢ）（図３Ｃ）は、Ｃ−１８
逆相ＨＰＬＣ（７０％から１００％の直線勾配のＭｅＯＨを用いる）により純粋
な形態に単離される。本発明の代表的な化合物の単離のより詳細な例示は、実施
例１に与えられる。
【００９３】 単離された化合物の構造の明確な証拠は、予備的な分光分析（例えば、高分解
能ＮＭＲおよび質量スペクトル分析、赤外およびＵＶ分光法）を含む方法、分光
学的および物理化学的性質の関連する文献の先例との比較、およびＸ線結晶学的
分析による方法の組合せによって得ることができる。これらは、本明細書の実施
例２でさらに例示される。
【００９４】
【実施例】
以下の実施例は、本発明をさらに例示するが、もちろん、いかなる方法でもそ
の範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【００９５】 （実施例１） 本実施例は、海綿動物および被嚢動物から、本発明の特定の化合物を得るため
の手順を例示する。
【００９６】 本実施例における検討のために、ＮＣＩ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ
Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、Ｍａｒｙｌａｎｄから選ばれた
Ｈａｌｉｃｌｏｎａ ｓｐ．海綿動物の特定の抽出物は、サリシリハラミドＡあ
るいはロバタミドＡと高い相関（０．７より大きいかあるいは同等のＴＧＩ−Ｃ
ＯＭＰＡＲＥピアソン相関係数）を持つ、ＮＣＩ６０−細胞スクリーニング平均
グラフ（ＴＧＩ）フィンガープリントを示した。抽出物はまた、ＣＤ3ＯＤ中で
残留メタノールを標準として、化学シフト値(および多重度)６．６５（ｄ）、７
．１２（ｔ）、６．７２（ｄ）、６．８０（ｄ）、５．６８（ｄ）、および６．
８７（ｄｔ）のプロトンＮＭＲ（５００ＭＨｚ）共鳴も示した。選択された抽出
物は、Ｐ．Ｍｕｒｐｈｙによって、サウスウェスタンオーストラリア、Ｒｏｔｔ
ｎｅｓｔ島から０．７海里離れて１５メートルの深さで、１９８９年３月に採取
されたＨａｌｉｃｌｏｎａ ｓｐ．海綿動物由来であった。海綿動物は、報告に
よれば、無定形の葉を有する緑色の塊として発見され岩石の多いオーバーハング
の下側で成長しておりこれは、Ｊａｍｅｓ Ｃｏｏｋ大学のＰ．Ｊａｎｅ Ｆｒ
ｏｍｏｎｔによって同定された。この特定の海綿動物採集の証明標本（シリアル
ナンバーＱ６６Ｃ２６７０と記載されている）は、Ｓｍｉｔｈｓｏｎｉａｎ Ｉ
ｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ａｎｄ Ｓｏｒｔｉｎｇ Ｃｅｎｔ
ｅｒ、Ｓｕｉｔｌａｎｄ、ＭＤ．に寄託されている。
【００９７】 サリシリハラミドＡおよびＢを以下のように単離した。約４５０ｇの冷凍湿潤
重量の海綿動物をドライアイスを用いて粉砕した。ドライアイスを昇華させ、蒸
留水を加え、解凍された材料を３℃にて３時間攪拌し、次いで遠心分離した。残
渣を凍結乾燥し、ＣＨ2Ｃｌ2−ＭｅＯＨ（１：１ｖ／ｖ）の混合物から室温にて
一晩で抽出した。溶媒をろ過によって除去し、残渣をＭｅＯＨですすいだ。合わ
せた有機抽出物を蒸発させて約３．５ｇの粗製の抽出物を得た。
【００９８】 活性成分を単離するための初期の試みにより、重水素化クロロホルムの存在下
で、粗製の抽出物およびそれらのクロマトグラフィー画分から生物活性が失われ
ていることが明らかになった。例えば、部分的に精製した画分のＣＤＣｌ3溶液
を一晩貯蔵することにより、抗癌スクリーニングにおいて不活性なタール状の不
溶残渣を形成する結果に終わった。それ故、単離におけるその後の全ての試みで
は、クロロホルムの使用あるいはＣＤＣｌ3へのサンプルの曝露を避けた。そう
すると、分解あるいは生物活性の喪失に関するさらなる問題は起こらなかった。
そのうえ、利用されるその他の通常の有機溶媒中、水中あるいは生物学的媒体中
のいずれにおいても、純粋な単離化合物の不安定さを示す兆候はなかった。
【００９９】 選択された粗製抽出物からの、サリシリハラミドの典型的な単離および精製は
、以下の如くである。抽出物のアリコート（３３０ｍｇ）を、２．１ｇのジオー
ル結合相上にコーティングし、引き続き１００ｍｌのヘキサン、ＣＨ2Ｃｌ2、Ｅ
ｔＯＡｃ、アセトン、およびＭｅＯＨでバッチ溶出した。細胞毒性のＣＨ2Ｃｌ2 およびＥｔＯＡｃの溶出物を合わせて（１０７ｍｇ）、そしてヘキサン−トルエ
ン−ＭｅＯＨ（３：２：２ｖ／ｖ、１．５ｘ４５ｃｍカラム）を用いて、Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘTMＬＨ−２０を通過させ、４つの画分を得た。その２番目（８．４ｍ
ｇ）がサリシリハラミドＡに対応するＮＭＲシグナルを示した。ワイドポアＣ−
１８（ＲａｉｎｉｎTM１ｘ２５ｃｍ）上のＨＰＬＣ（７０％から１００％の直線
勾配のＭｅＯＨを用いる）に２０分かけて、５．５ｍｇの純粋なサリシリハラミ
ドＡ（保持時間１３分）および少量の（約０．５ｍｇ）サリシリハラミドＢ(保
持時間１４．５分)を得た。
【０１００】 サリシリハラミドＡについての物理化学的および分光分析学的データは以下の
通りであった：無定形固体； [α]D -35° (c = 0.7、MeOH); λmax (MeOH) 280
nm (ε =34,000); νmax (film) 3288、2964、1697、1651、1606、1588、1520
、1464、1293、1268、1247、1214、1123、1068、972、869、735 cm-1;1Ｈおよび 13 Ｃ ＮＭＲについては、実施例２、表２(下記)を参照されたい; EIMS m/z 439
[M+] (43)、421 (1)、410 (5)、409 (2)、392 (2)、330 (7)、315 (8)、313 (3
)、312 (3)、296 (10)、288 (12)、278 (4)、231 (12)、191 (40)、149 (17)、1
25 (18)、124 (6)、109 (100)、108 (19)、107 (16)、96 (63)、91 (10)、83 (3
1)、82 (50)、81 (87)、79 (35)、56 (27)、55 (24)、43 (14)、18 (19); HREIM
S m/z 439.2354 (M+、calcd for C26H33NO5、439.2350)。
【０１０１】 サリシリハラミドＢについての物理化学的および分光学的データは以下の通り
であった：無定形固体； [α]D -73° (c = 0.3、MeOH); λmax (MeOH) 280 nm
(ε=38,000); νmax (film) 3356、2964、2923、1690、1651、1588、1503、1463
、1294、1246、1212、1121、1032、972 cm-1; 1H NMR (C6D6) δ 0.77 (3H、t、
7.3)、0.83 (3H、d、6.8)、1.22 (dd、15.2、8.8)、1.32 (br s)、1.50 (br q、
6.8)、1.73 (br m)、1.74 (dd、15.2、10.5)、1.89 (ddd、15.2、7.8、7.4)、1.
95 (2H、quintet、7.3)、2.05 (ddd、14.7、6.8、6.4)、2.08 (br m)、3.25 (br
d、16.5)、3.27 (br d、8.8)、3.56 (dd、16.5、4.9)、4.52 (dt、10.2、8.8、
8.8)、5.08 (ddd、15.6、7.3、6.4)、5.17 (very br m)、5.20 (very br m)、5.
48 (d、11.2)、5.62 (dt、10.7、7.8、7.3)、6.45 (dd、8.3、3.9)、6.62 (dd、
11.2、10.8)、6.95 (m)、7.29 (t、10.3)、7.66 (br d、10.2)、7.93 (t、10.8)
、11.58 (br s); 13C NMR (C6D6) δ 13.8、14.0、20.8、31.5、36.2、38.0、38
.4、39.4、70.9、76.1、103.3、117.2、119.5、123.7、124.9、125.4、126.8、1
32.8、134.6、137.4、141.9、163.0、172.0 (四重線の炭素のうち３つは観測さ
れなかった); HREIMS m/z 439.2351 (M+、calcd for C26H33NO5、439.2350)。
【０１０２】 本実施例における調査のために、ＮＣＩ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ
Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、から選択さ
れたＡｐｌｉｄｉｕｍ ｌｏｂａｔｕｍの抽出物は、サリシリハラミドＡあるい
はロバタミドＡと高く相関（ＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥピアソン相関係数が０．７
より大きいか同等）を有するＮＣＩ６０−細胞スクリーニング平均グラフ（ＴＧ
Ｉ）フィンガープリントを示す。抽出物はまた、ＣＤ3ＯＤ中で記録され残留メ
タノールを標準として、化学シフト値(および多重度) 6.63(d)、7.14(t)、6.68(
d)、6.82(d)、6.04(d)、および 6.45(dd)のプロトンＮＭＲ（５００ＭＨｚ）共
鳴も示した。選択された抽出物は、Ｐ．Ｍｕｒｐｈｙによって、Ｈｉｌｌａｒｙ
Ｂｏａｔ Ｈａｒｂｏｒの真西のオーストラリアの南西海岸で６メートルの深
さで採集されたＡｐｌｉｄｉｕｍ ｌｏｂａｔｕｍ由来であった。分類はＱｕｅ
ｅｎｓｌａｎｄ ＭｕｓｅｕｍのＰａｔｒｉｃｉａ Ｋｏｔｔによりなされた。
この特定の被嚢動物収集の証明標本（シリアルナンバーＱ６６Ｃ２７８０と記載
されている）は、Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍａｒｉ
ｎｅ Ｓｃｉｅｎｃｅおよびｔｈｅ Ｓｍｉｔｈｓｏｎｉａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕ
ｔｅの両方に寄託されている。ロバタミドＡおよびＢは次のように単離した。
【０１０３】 Ａ．ｌｏｂａｔｕｍ（湿潤重量６４２ｇ）を採集後直ちに、抽出まで冷凍した
。水抽出物（１３．８ｇ）をまず、以下のように、ＥｔＯＨを用いて沈澱処理を
施し、高分子量タンパク質および硫酸化多糖を以下のように除去した。抽出物を
、５ｇのアリコートに分割し、それらの各々を水（４０ｍｌ）に溶解し、続いて
ＥｔＯＨ（４０ｍｌ）を添加した。溶液を、一晩、−２０°Ｃにて静置し、その
後、遠心分離によって沈殿をペレット化し、そして上澄みをデカンテーションし
そして合わせた。合わせた沈殿をＨ2Ｏ−ＥｔＯＨ（１：１、４０ｍｌ）で洗浄
し、再び遠心分離によりペレット化した。洗液をデカントし、合わせた上澄みに
添加した。ＥｔＯＨをロータリーエバポレーションにより合わせた上澄みから除
去し、残ったＨ2Ｏを凍結乾燥により除去した。凍結乾燥した上澄みを、ＥｔＯ
ＡｃとＨ2Ｏに分配し、前述の特徴的なＮＣＩ６０細胞株スクリーニングプロフ
ァイルおよびプロトンＮＭＲ化学シフトの両方により決定されるように、目的の
化合物中で濃縮された細胞毒性のＥｔＯＨに可溶な物質を得た。このＥｔＯＡｃ
に可溶な物質を、続いてゲル浸透（ＳｅｐｈａｄｅｘTMＬＨ−２０、１：１ Ｍ
ｅＯＨ−ＭｅＣＮ）、続いてＶＬＣ（アミノ結合相、ＣＨ2Ｃｌ2−ＭｅＯＨ勾配
１００−９０％ＣＨ2Ｃｌ2）、ＳａｎｋｉＣＰＣ（５：７：４ ＣＨＣｌ3−Ｍ
ｅＯＨ−Ｈ2Ｏ、アセンドモード、１．７ｍｌ／ｍｉｎ）、および最後にＨＰＬ
Ｃ（Ｃ18、３：７ ＭｅＣＮ−Ｈ2Ｏ）を用いるクロマトグラフにかけて、ロバ
タミドＡ（湿潤重量１．１ｍｇ、８．０ｘ１０-3％）およびロバタミドＢ（湿潤
重量１．４ｍｇ、０．０１％）を得た。
【０１０４】 ロバタミドＡについて得られた物理化学的および分光学的データは以下の通り
であった：[α]D-7.9° (c 0.24、MeOH); UV (MeOH) λmax 273 nm (logε 4.22
); IR (film) νmax 3590-3128 (br)、2974、2933、1739、1656、1523、1461、1
451、1374、1266、1215、1169、1113、1042 cm-1; HRFABMS (noba) MH+ m/z 513
.2257 for C27H33N2O8 Δ+2.0 mmu; FABMS (magic bullet) m/z 535 (M + Na+、
8%) 513 (MH+、16)、495 (15)、460 (20)、289 (65)、239 (22)、176 (30)、154
(100)、138 (100)、105 (83)。
【０１０５】 ＦＡＢ質量スペクトルは、ＪＥＯＬTMＳＸ１０２スペクトロメーターで、１０
ｋＶキセノン銃を用いてサンプルをｍａｇｉｃ ｂｕｌｌｅｔマトリックス（５
：１ ＤＴＴ−ＤＴＥ）から脱離させて得た。スペクトルは正および負のイオン
化条件下で実行した。フラグメンテーションは、親イオンとフラグメンテーショ
ンイオンのＢ／Ｅリンクしたスキャンによって行った。必要に応じて、ヘリウム
コリジョンガスを用いて、第一フリー領域においてこのフラグメンテーションを
活性化した。交換スペクトルを化学イオン化（ＣＩ）条件下で、ダイレクトエク
スポージャープローブを用いて、Ｆｉｎｎｉｇａｎ ４５００スペクトロメータ
ーで測定した。交換は、試薬ガスとしてのＮＤ3をＮＨ3由来のガスとともに用い
て得られたスペクトルの比較によって決定された。構造的に重要なフラグメント
のＨＲＦＡＢＭＳデータは、以下の通りであった： II: 495.2115 for C27H31N 2 O7、calcd 495.2131; 3 交換可能プロトン; III: 239.1021 for C11H15N2O4、c
alcd 239.1032; ２つの交換可能プロトン; V: 112.0402 for C5H6NO2、calcd 11
2.0399; VI:CI中のみ観測された;３つの交換可能プロトン; VII: 257.1129 for
C16H17O3、calcd 257.1137;２つの交換可能プロトン; VIII: 291.1231 for C16H 19 O5、calcd 291.1231; IX: 273.1118 for C16H17O4、calcd 273.1127; X: 219.
0650 for C12H11O4、calcd 219.0657。
【０１０６】 ロバタミドＢについて得られた物理化学的および分光学的データは以下の通り
であった：[α]D-15° (c 0.03、MeOH); UV (MeOH) λmax 288 nm (log ε 4.55
); IR (film) νmax 3580-3118 (br)、3056、2974、2933、1733、1651、1605、1
584、1528、1467、1451、1267、1221、1175、1113、1046 cm-1; HRFABMS (magic
bullet) MH+ m/z 513.2244 for C27H33N2O8 D +0.7 mmu; FABMS (glyc) m/z 51
3 (MH+、10%)、495 (10)、461 (8)、279 (55)、239 (23)、177 (25)、153 (100)
、135 (100)。
【０１０７】 （実施例２） 本実施例は、本発明の特定の化合物の構造解析を記述する。
【０１０８】 実施例１において得られ、分光分析学的に特徴付けされたようなサリシリハラ
ミドＡは、ＨＲＥＩＭＳによりＣ26Ｈ33ＮＯ5であると確認された分子式をもつ
無定形固体である。13ＣおよびＤＥＰＴ ＮＭＲスペクトル（表２）は、２６の
独特の共鳴を示した：５つの四重線、１４のメチン、５つのメチレン、および２
つのメチル炭素。化学シフト値はさらに、２つのエステルあるいはアミドカルボ
ニル、１４のオレフィン性あるいは芳香族炭素、および二つの酸素化メチンを特
徴付けした。３つの交換可能なプロトンはプロトン数を充足した。ＩＲスペクト
ルは、ＯＨおよび／またはＮＨ（３２８８ｃｍ-1）基を確認し、そしてアミド（
１６５１ｃｍ-1）および分子内水素結合した共役エステル（１６９７ｃｍ-1）の
両方の存在を示唆した。Ｃ6Ｄ6およびＣＤ3ＯＤにおけるサリシリハラミドＡに
ついての13Ｃ（１２５ＭＨｚ）および1Ｈ（５００ＭＨｚ）ＮＭＲデータを以下
の表２に例示する。
【０１０９】
【表２】
【０１１０】 サリシリハラミドＡのＣＤＣｌ3への感受性により、全てのＮＭＲ分光実験は
、Ｃ6Ｄ6あるいはＣＤ3ＯＤ中で行った。第一の溶媒中では、はっきりしなかっ
た、あるいは解析できなかったシグナルは、第二溶媒中では容易に認識可能であ
った。結果として、1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、およびＨＭＢＣ ＮＭＲデ
ータは、両方の溶媒中で収集した。サリシリハラミドＡのＣ6Ｄ6中での1Ｈ−1Ｈ
ＣＯＳＹスペクトルにより、以下のような相関が明らかになった (H/H): 4/6
、5/6、8a/8b、8a/9、8a/10、8a/11b、8b/9、9/10、10/11a、10/llb、11a/11b、
11a/12、11b/12、12/13、12/26、13/14a、13/14b、14a/14b、14a/15、14b/15、1
5/16a、15/16b、16a/16b、16a/17、16a/18、16b/17、16b/18、17/18、18/NH、20
/21、20/22、20/23、21/22、21/23、22/23、22/24、23/24、24/25。ＨＭＱＣ（
表２）およびＣＯＳＹスペクトルデータの組合せから、図５Ａ−５Ｃに示した部
分構造が得られた。
【０１１１】 セグメントＣ（図４Ｃ）中のエナミド官能基は、隣接オレフィン性およびアミ
ドのＮ−Ｈプロトンの間の１０．８Ｈｚカップリングを通じて同定された；後者
は可変化学シフト値によって特徴付けされた。２６個の炭素全ては図４Ａ、４Ｂ
、４Ｃにそれぞれ対応する部分構造Ａ、Ｂ、およびＣに帰属された。ＨＭＢＣス
ペクトル（表２）において、ヘキサジエン部分構造Ｂ（図４Ｂ）の二つのビニル
水素［Ｃ6Ｄ6中でのδが５．１７（Ｈ−２０）および６．６２（Ｈ−２１）；Ｃ
Ｄ3ＯＤ中でのδが５．６８および６．８７］と、部分構造Ｃ（図４Ｃ）のアミ
ドカルボニル（δは、Ｃ6Ｄ6中では１６２．９そして、ＣＤ3ＯＤ中では１６５
．９）との間のカップリングにより、このアミドカルボニル炭素を介したＢのＣ
への結合が確認された。このことは、Ｃ6Ｄ6中における、アミドプロトンとカル
ボニルの間のＨＭＢＣ相関、および質量スペクトルにおけるベースピーク（ｍ／
ｚ１０９、Ｃ7Ｈ9Ｏ）によって確認された。エステルカルボニルが共役しかつ分
子内で水素結合（１６９７ｃｍ-1）しているというＩＲスペクトルの証拠は、フ
ェノールのＯＨ（δ１１．４６、Ｃ6Ｄ6）の低磁場（ｌｏｗ−ｆｉｅｌｄ）の化
学シフトによって支持された。このことは、エステルカルボニルが部分構造Ａ（
図４Ａ）のフェノールのＯＨに対してオルト配位していることを示した。従って
、残りの空いている芳香族の位置は、部分Ｃ（図４Ｃ）のアリル炭素で占められ
るべきであり、サリシリハラミドＡの構造を与えた。
【０１１２】 芳香族の置換のパターンの確認を、８．３Ｈｚカップリングに最適化されたＨ
ＭＢＣ相関によって行った。ＣＤ3ＯＤ中で、フェノールの炭素およびアミドカ
ルボニルの炭素は、三つの芳香族プロトン全ておよび六つの芳香族炭素全てと同
様に解析された。そのうえ、後者は、溶媒の共鳴により不明確になることもなか
った。ＣＤ3ＯＤ中で、δが７．１２（Ｈ−５）の芳香族プロトンは、δが１５
７．１（Ｃ−３）の酸素を有するフェノールの炭素および１４０．７（Ｃ−７）
の第４の芳香性炭素の両方に対する相関を示した。1Ｈ ＮＭＲスペクトルにお
いて、このδが７．１２のプロトンは３重線（Ｊ＝７．３Ｈｚ）であるので、こ
れが相関する二つの第４の芳香性炭素は、これに対してメタ位であった。δが６
．６５（Ｈ−６）の芳香性水素は、二つの異なる芳香性炭素、δが１１５．３（
Ｃ−４）のメチンおよびδが１２３．０（Ｃ−２）の第４の炭素に対して相関を
示した。さらに、δが６．６５のプロトンは、δが３８．８（Ｃ−８）における
側鎖脂肪族炭素と相関し、必然的にこの側鎖の配置は、δが６．６５の水素に対
しオルト位であった。オルト置換基を配慮し、その化学シフトを考慮するために
、このδが６．６５の水素は、フェノールのＯＨに対してパラ位であるべきであ
った。この帰属の確認は、側鎖のベンジルのプロトン（Ｈ−８、δ３．５６）な
らびにδが１４０．７（Ｃ−７）の第４の芳香性炭素およびδが６．６５の水素
を有するδが１２２．５（Ｃ−６）の芳香性炭素の両方との間に観測された相関
であった。エステルカルボニルが結合するための唯一残った芳香族の部位は、サ
リシリハラミドＡの構造に示される通り、フェノールのＯＨ（δが１２３．０）
に対してオルト位であった。付加的なＨＭＢＣ相関を表２に示す。
【０１１３】 サリシリハラミドＡの相対的な立体化学は、1Ｈ−1Ｈカップリング定数とｎＯ
ｅスペクトルの違いとの組合せから推定される。図５は、重要なｎＯｅの相互作
用を記述する；最も注目すべきは、エステルメチン（Ｈ−１５）を有するアルコ
ールメチン（Ｈ−１３）、メチルが結合しているメチン（Ｈ−１２）、およびオ
レフィン性水素（Ｈ−１０）の相互作用であった。４つのこれらのプロトンは全
て、分子の同一面にあるはずであり、図３に描写される相対的な立体化学を導く
。エステルメチン（Ｈ−１５）とＨ−１４ａの二面角は、これら二つのビシナル
な水素の間に結合が観察されなかったので、約９０度であるはずである。それら
のカップリング定数（１０．３Ｈｚ）およびそれらの間に測定可能なｎＯｅがな
いことと適合するためには、Ｈ−１５とＨ−１４ｂの間の二面角はほぼ１８０度
でなければならない。同様に、Ｈ−１４ｂおよびアルコールメチン（Ｈ−１３）
は、測定可能なカップリングを示さず、そのことは、その二面角が約９０度であ
ることを示している。一方、Ｈ−１４ａとＨ−１３の間の大きな二面角は、定量
可能なカップリング（８．８Ｈｚ）と適合する必要がある。逆に、Ｈ−１３は、
３．５ＨｚのＪ値および、Ｈ−１２について実質的なｎＯｅを示し、このことは
これら二つのプロトン間の二面角が約６０度であることを示唆している。分子モ
デルの研究、上述のｎＯｅの束縛をもった最小エネルギー構造をつくる研究は、
実際の実験値の１−１．５Ｈｚ以内に適合する予想されたＪ値をもたらした。図
６は、コンピュータで生成されたサリシリハラミドＡのこのようなモデルのうち
の一つを示す。熱力学的モデリング計算は、Macromodel v3.0 [Mohamadi et al.
、J. Computat. Chem.、11、440-467 (1990)]を用いて、ＶＡＸ６６２０コンピュー
タにより行われた。Ｄｒｅｉｄｉｎｇモデルにより構築された相対的な立体化学
を持つ平坦なマクロライド構造をもった入力モデルは、手で描かれた。距離の束
縛を順次当てはめ、エネルギー最小化は各ステップで行った。観測された顕著な
トランスアニュラーのｎＯｅに対応する束縛を当てはめた後、その束縛を除去し
、束縛なしで構造を最小化し最終モデルを作り出した。描画（図６）は、構造を
ダウンロードし、Ｃｈｅｍ３Ｄプログラムからプリントして得られたものである
。
【０１１４】 絶対的な立体化学の問題は、Ｍｏｓｈｅｒエステルの使用により検討した。Oh
tani et al.、J. Org. Chem.、56、1296-1297 (1991); Dale et al.、J. Am. Ch
em. Soc.、95、512-519 (1973); Oh et al.、J. Org. Chem.、54、4499-4503 (1
989); Leclercq et al.、Tetrahedron Lett.、50、8465-8488 (1994); and Kane
ko et al.、Tetrahedron Lett.、35、4107-4110 (1994)を参照されたい。サリシリ
ハラミドＡの（Ｒ）−および（Ｓ）−メトキシトリフルオロメチルフェニル酢酸
（ＭＴＰＡ）ジエステルの両方が作られ、1Ｈ ＮＭＲ分析に供された（表３）
。少量のトリス−ＭＴＰＡ誘導体（ジエステルイミド）をそれぞれの場合で形成
し、ＮＭＲ分析の前の分取ＴＬＣにより除去した。Ｃ6Ｄ6におけるサリシリハラ
ミドＡのＭｏｓｈｅｒエステルの分析を下記表３に記述する。
【０１１５】
【表３】
【０１１６】 ＭＴＰＡエステルの調製は、以下のように行った。セプタムで密封したバイア
ル中の１０μｌの無水ＣＨ2Ｃｌ2および１５μｌの無水ピリジン中の０．５ｍｇ
のサリシリハラミドの混合物に、１．２μｌの鏡像異性的に純粋なα−メトキシ
−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルクロライドを加えた。反応混合物を
２５°Ｃで１６時間置いて、Ｈ2ＯおよびＣＨ2Ｃｌ2を加え、ＣＨ2Ｃｌ2の層を
Ｈ2Ｏで数回洗い、そして無水Ｎａ2ＳＯ4の短いカラムに通し、Ｎ2下でエバポレ
ートして乾燥した。残渣をＭｅＯＨを用いて逆相ＴＬＣ（Ｃ１８）にかけ、ジ−
およびトリ−ＭＴＰＡ誘導体を得た。質量スペクトルデータは以下の通りであっ
た：(ジエステル)HRFABMS m/z 872.324 [(R)-誘導体]; 872.323 [(S)-誘導体] (
MH+、calcd for C46H48F6NO9、872.322); (ジエステルイミド) HRFABMS m/z 10
88.361 [(R)-誘導体]; 1088.362[(S)-誘導体] (MH+、calcd for C56H55F9NO11
、1088.362)。
【０１１７】 ＭｏｓｈｅｒエステルのＮＭＲデータの分析は以下の通りであった。Ｃ6Ｄ6中
で、（Ｒ）−誘導体のＣ−１２メチルの水素（Ｈ−２６）およびＨ−１０は、（
Ｓ）−誘導体のそれの高磁場側に現れた。同様に、Ｃ6Ｄ6中で、（Ｒ）−誘導体
のＨ−１４ａ、Ｈ−１５、およびＨ−１７は、（Ｓ）−誘導体に対し低磁場側に
現れた（それぞれ図７Ａおよび７Ｂ）。Ｍｏｓｈｅｒエステル部位としての分子
面と同一面のＨ−１７は、Ｈ−１７とエステルメチン、Ｈ−１５との間の強いｎ
Ｏｅから明らかになった。同様の結果が、ＣＤ3ＯＤ中で測定したＮＭＲスペク
トルにおいて観察された。これらのデータから、Ｃ−１３における絶対コンフィ
グレーションはＳであると特定することができた。７Ａおよび７Ｂに示す部分構
造図は、観測された化学シフトの違いを説明するＮｅｗｍａｎ投影図を記載する
。（Ｒ、Ｓ）−ジアステレオマーにおいて、Ｈ−１０およびＭｅ−２６の水素は
フェニル基からの遮蔽を受ける一方、（Ｓ、Ｓ）−ジアステレオマーにおけるＨ
−１４ａ、Ｈ−１５、およびＨ−１７がフェニル基からの遮蔽を受ける。仮にＣ
−１３が（Ｒ）−コンフィグレーションであるなら、ちょうど反対の遮蔽効果が
得られるであろう。三つのキラル中心全ての相対的な立体化学が決定されたので
、Ｃ−１３における（Ｓ）−コンフィグレーションの特定は、Ｃ−１２およびＣ
−１５における（Ｒ）−コンフィグレーションを与える。それ故、絶対的なコン
フィグレーションは、図３において、サリシリハラミドＡについて描写される通
りである。
【０１１８】 海綿動物抽出物中の付随的なサリシリハラミドＡは、その分光データがほとん
どサリシリハラミドＡと等しい微量成分である。その構造は、Ｃ6Ｄ6およびＣＤ 3 ＯＤの両方における1Ｈ、13Ｃ、および1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ ＮＭＲデータとサ
リシリハラミドＡのそれらとの注意深い比較によって決定された。プロトン−炭
素結合の順序は、サリシリハラミドＡのそれと同等であった。サリシリハラミド
Ａとその異性体、サリシリハラミドＢ、との間の唯一の重要な違いはカップリン
グ定数であり、サリシリハラミドＡについては１４．６Ｈｚであったのに対し、
Ｈ−１７およびＨ−１８については１０．２Ｈｚであった。それ故、サリシリハ
ラミドＢは、サリシリハラミドＡの１７−Ｚ異性体であった。
【０１１９】 実施例１において得られ分光分析学的に特徴付けされたようなロバタミドＡは
、ＨＲＦＡＢＭＳ（ｎｏｂａ、ｍ／ｚ ５１３．２２５７、ＭＨ+、ｃａｌｃｄ
５１３．２２３７）により決定される分子式Ｃ27Ｈ33Ｎ2Ｏ8を有した。３つの
交換可能なプロトンの存在は、イオン化試薬としてＮＤ3を用いたＣＩＭＳの重
水素置換実験によって示された。ロバタミドＡの13Ｃ ＮＭＲスペクトル（表４
）は、二つのエステルカルボニル（δ１７１．９、１７０．０）、一つのアミド
カルボニル（δ１６４．２）、１５個のｓｐ2炭素（そのうちの１４個は１つの
フェニル環および４つのオレフィンに相当した）、３つの酸素化メチン炭素（δ
７３．８、７３．３、７３．０）、３つのメチレン（δ３３．１、３５．６、３
８．９）、および３つのメチル基（δ６２．７（ＯＣＨ3）、２０．２、１９．
６）を含む、２７個の炭素全てについてのシグナルを含んだ。ロバタミドＡおよ
びロバタミドＢの1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲ データは、下記表４に記載される。
スペクトルは全て、ＣＤ3ＯＤ中、残留メタノールを標準として測定された。
【０１２０】
【表４】
【０１２１】 ＣＯＳＹ、差ｎＯｅ、ＨＭＱＣおよびＨＭＢＣを含む一連のＮＭＲ実験は、図
８において、強調された結合（図８においてＡ−Ｅと称される）により、５つの
部分構造を構築するのに用いられた。フラグメントＡ（図８）は、三つの隣接す
る芳香族のプロトン（δC１１４．４、δH６．６８、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ；δC
１３１．８、δH７．１４、ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ；δC１２０．８、δH６．６３
、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）からなっていた。フラグメントＢ（図８）は、メチレン
基（δC３３．１、δH２．９３、ｄｄ、Ｊ＝１７．１、８．３ＨｚおよびδH３
．２１、ｄ、Ｊ＝１７．１Ｈｚ）および三置換オレフィンのオレフィン性プロト
ン（δC１２５．６、δH５．１７、ｍ；δC１３９．４）からなっていた。ＨＭ
ＢＣ実験は、１重線のメチル基（δC２１．８、δH１．７９）が、１３９．４ｐ
ｐｍのオレフィン性炭素上の置換基であることを示し、これはまた５．１７ｐｐ
ｍのオレフィン性プロトンとも相関した。このオレフィンのＺ形は、メチル基（
δ１．７９）およびδが５．１７のプロトンの間で観察されたｎＯｅから決定さ
れた。フラグメントＣ（図８）は、オレフィン性プロトン間で観察された１５．
１Ｈｚのカップリングに基づいて、トランス（Ｅ）であると示されたオレフィン
（δC１３５．０、δH５．６６およびδC１３２．７、δH５．５０）にカップリ
ングした酸素化メチン（δC７３．３、δH４．７８）からなっていた。５．５０
ｐｐｍのプロトンはさらに、別の酸素化した炭素（δC７３．８、δH５．２３）
にあるプロトンにカップリングしていて、それは、続いて順に、δH１．３５（
δC２０．２）で共鳴する二重線のメチルにカップリングしていた。フラグメン
トＤ（図８）は、酸素化メチン（δC７３．０、δH５．５３）にカップリングし
たジアステレオピックなメチレン［δC３８．９、δH２．６７＆２．５９（Ｊ＝
１６．６Ｈｚ）］で始まっていた。メチンは、メチレン（δC３５．６、δH２．
４８）にカップリングしており、続いて、第二のトランスオレフィン（δC１０
９．９、δH５．３４；δC１２６．９、δH６．８２；Ｊ＝１４．２Ｈｚ）とカ
ップリングした。図８においてフラグメントＥであるとラベルされた残りのスピ
ン系は、３つのオレフィン性プロトン（δC１２６．１、δH６．０４；δC１３
５．６、δH６．４５；およびδC１４８．７、δH８．９５）からなっていた。
これらプロトンのうち二つ（Ｈ２４およびＨ２５につき、それぞれ、δH６．０
４およびδH６．４５）は、１１．７ＨｚのＪ24、25およびプロトン間で観察され
たｎＯｅに基づくシスオレフィンを形成した。１４８．７ｐｐｍの炭素の化学シ
フトおよびそのプロトンの８．９５ｐｐｍへの低磁場シフトの両方は、この炭素
が残りの窒素原子とイミン型結合で結合していることを示唆した。さらに、この
プロトンは、既にフラグメントＥの一部として同定された隣接するオレフィン以
外のいかなる炭素とも相関がなかった。１４８．７の炭素の化学シフトは、オキ
シムの存在と一致した(Gordon et al.、J. Org. Chem.、49、97-100 (1984))、
そしてそういった官能基は、分子式に要する残りの窒素および酸素原子に相当し
た。Ｈ２５−Ｈ２６のカップリング定数が１１Ｈｚに近いことに加えて、これら
二つのプロトン間で観測されたｎＯｅ相関は、オレフィンおよびオキシムがｓ−
シスの関係にあることを示唆した。これらの部分構造は、ロバタミドＡのメトキ
シル基以外の構造的な要素の全てを説明する。メトキシル置換基は、結局、その
炭素の化学シフト（δC６２．７）に基づいてＮ２７でオキシム上に位置してお
り、このことは、他のオキシムメチルエーテルとも一致し、３．９１ｐｐｍのメ
トキシルシグナルおよび８．９５ｐｐｍのプロトン（Ｈ２６）間で観察された弱
いｎＯｅにより裏付けられた。観測された、オキシムの炭素およびプロトンのｎ
Ｏｅおよび化学シフトは、オキシム二重結合のＥ（ｓｙｎ）のジオメトリーを裏
付けた(Gordon et al.、J. Org. Chem.、49、97-100 (1984); Wolkowski et al.
、Tetrahedron Lett.、565-568 (1972))。オキシムメチルエーテルの存在は、Ｍ
Ｓデータ（下記参照）によっても裏付けられた。
【０１２２】 フラグメントＡ（図９）のフェニル環のまわりの置換パターンは、８．３およ
び５．５Ｈｚのカップリングについて最適化されたＨＭＢＣ実験に基づいて決定
された。δ７．１４の芳香族プロトン（Ｈ５）は、二つのオルト位のプロトンに
カップリングしており、そしてδ１５６．７のフェノール炭素、およびδ１４１
．２の第２、第４の炭素の両方に相関していて、このプロトンに対し共にメタ位
であることを示唆している。δ１４１．２の炭素は、さらにＣ８のメチレンプロ
トンにも相関していて、それ故、この炭素はＣ７であると同定され、そのメチレ
ンのこの炭素への結合を要する。Ｈ６（δ６．６３）への相関は、δ１１４．４
（Ｃ４）、１２２．３（Ｃ２）および側鎖の末端の炭素（δ３３．１）から観測
され、当該側鎖はＣ６に対してオルト位になるようＣ７に位置している。このこ
とにより、Ｃ２（δ１２２．３）がδ１７０．０（Ｃ１）のエステルカルボニル
への唯一の結合点として残された。
【０１２３】 フラグメントＡおよびＢ（図８）は、δ７．１４（Ｈ５）、δ６．６３（Ｈ６
）、およびδ３．２１（Ｈ８ａ）で炭素のプロトンへのＨＭＢＣ相関に基づいて
、Ｃ７を介して結合されていた。この結合を裏付ける付加的な相関は、Ｈ６とＣ
８、Ｈ８とＣ２、およびＨ８とＣ６との間の相関であった。Ｃ１０からＨ１１お
よびＨ１２への相関は、Ｈ２９からＣ９、Ｃ１０、およびＣ１１で観測される相
関と共に、フラグメントＢとＣとの間の結合を与えた（図８）。δ１７１．９（
Ｃ１６）におけるＨ１４とエステルカルボニルの相関（これはＣ１７（δ２．５
９、２．６７）およびＨ１８のプロトンとも相関する）は、フラグメントＣとＤ
との間の結合を与えた（図８）。Ｈ１８（δ５．５８）は、さらにδ１７０．０
（Ｃ１）の第二のエステルカルボニルと相関し、これはＣ２において既にフラグ
メントＡにリンクしていた。最後に、フラグメントＤおよびＥ（図８）は、δ１
６４．２のカルボニルとＨ２１、Ｈ２４、およびＨ２５のプロトンとの間におい
て観察された相関に基づくアミド結合を介して結合していた。それ故、ＨＭＢＣ
実験はロバタミドＡの全体構造を導く最終的なデータを提供した。
【０１２４】 加えて、ロバタミドＡの構造についての重要な裏付けが、質量スペクトル分析
により提供された（実施例１の方法およびデータを参照されたい）。重水素交換
実験は、３つの交換可能なプロトンを有する構造と一致する結果を提供した。ロ
バタミドＡは断片化して幾つかの構造的に重要なイオンを与え（図９）、その配
列はフラグメントイオンのリンクスキャン分析によって決定された。正イオンモ
ードでは、水分子の脱離が重量領域を占めて、ｍ／ｚ４９５（ＩＩ）にピークを
与えた。このイオンにとって描写可能な１つ以上の構造があるが、ＩＩは一連の
フラグメンテーションおよび重水素交換データに基づいている。第二のエステル
結合の開裂により、分子の上半分の特徴的な主要なイオンがｍ／ｚ２３９（ＩＩ
Ｉ）に生じた。これはさらにフラグメント化してｍ／ｚ１２８（ＩＶ）およびｍ
／ｚ１１２（Ｖ）にイオンを生じた。この後者のフラグメント（Ｖ、ｍ／ｚ１１
２）は、オキシム上のメトキシルの位置を強く裏づけた。他のエステル結合にお
ける最初のフラグメンテーションにより、フラグメントイオンがｍ／ｚ２７５（
ＶＩ）に、次いでｍ／ｚ２５７（ＶＩＩ）に生じた。負イオンモードにおいては
、フラグメンテーションは、両エステル結合における開裂によって占められ、ｍ
／ｚ２９１（ＶＩＩＩ）、ｍ／ｚ２７３（ＩＸ）、およびｍ／ｚ２１９（Ｘ）に
おいてイオンを生じ、さらに大環式環を特徴付けた。アセチル化の際に、ロバタ
ミドＡは、ｍ／ｚ５９６のジアセテートを生じ、それは、正イオンモードにおけ
るフラグメンテーションにおいて、ロバタミドＡの構造をさらに裏付けた（ＩＩ
、ＶＩ、およびＶＩＩと比較可能なフラグメントイオンは二つのアセチル化を示
した一方、類似の構造ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶは変化を示さなかった）。
【０１２５】 ロバタミドＢはロバタミドＡの異性体であった。実際、ロバタミドＢの1Ｈ
ＮＭＲスペクトルにおける唯一の重要な違いは、Ｈ２５の７．０４ｐｐｍへの低
磁場シフト（ロバタミドＡでは６．４５ｐｐｍに対し）およびＨ２６の８．３６
ｐｐｍへの高磁場シフト（ロバタミドＡでは８．９５ｐｐｍに対し）であった。
このプロトンの高磁場シフトは、オキシム結合の周りのＺ（アンチ）ジオメトリ
ーに一致する。プロトンスペクトルにおけるこれらのシフトは、対応する炭素の
シグナルにおいて、δ１２７．５に現れているＣ２５はロバタミドＡでの１３５
．６ｐｐｍから高磁場化シフトしており、Ｃ２６は１４４．４ｐｐｍへと高磁場
シフトしている（ロバタミドＡにおけるδ１４８．７に対して）という同様の変
化を伴っていた。これらの違いは、ロバタミドＢにおいてオキシムメチルエーテ
ルのジオメトリーが、Ｚに変化したことを示した。オキシムのＯＭｅとＨ２６と
の間で、ロバタミドＡについて見られたような、ｎＯｅは観察されなかった。ロ
バタミドＢの質量スペクトルは、ロバタミドＡにおいて見られたのと実質的に同
じフラグメンテーションを示し、さらに、ロバタミドＢにおいてオキシムのジオ
メトリーのみが変わったことを裏付けた。
【０１２６】 （実施例３） 本実施例は、本発明の特定の化合物であるロバタミドＣ−Ｆの単離および構造
を例示する。
【０１２７】 ロバタミドＣ−Ｆを、Ａｐｌｉｄｉｕｍ ｌｏｂａｔｕｍから単離し、そして
その構造を、実施例１および２においてロバタミドＡおよびＢについて記載した
処理と同様の処理によって解明した。ロバタミドＣは、ＨＲＦＡＢＭＳによって
ロバタミドＡおよびＢの異性体、すなわちＣ27Ｈ32Ｎ2Ｏ8であることが示された
。後者の化合物と同様に、ＮＤ3をイオン化試薬として用いたＣＩＭＳ重水素置
換実験によって、三つの交換可能なプロトンの存在が示された。三つの化合物間
の構造上の類似性は、13Ｃおよび1Ｈ ＮＭＲスペクトル（表４−６）から明瞭
に確かめられた。ロバタミドＣの13Ｃ ＮＭＲスペクトルは、二つのエステルカ
ルボニル（δ１７１．７、１６９．９）；一つのアミドカルボニル（δ１６４．
１）；１５のｓｐ2炭素（それらのうちの１４個は、フェニル環および４つのオ
レフィンに帰属した）；三つの、酸素化メチン炭素（δ７３．７、７３．２、７
２．９）；三つのメチレン（δ３３．０、３５．５、３８．８）；および三つの
メチル基（δ６２．７（ＯＣＨ3）、２０．２、１９．５）を含む、２７の炭素
全てについてのシグナルを含んだ。
【０１２８】 標準的な一連の１次元および２次元のＮＭＲ実験（ＨＭＱＣおよびＨＭＢＣを
含む、）に基づき、ロバタミドＡについて図８に記載された５つのスピン系（Ａ
−Ｅ領域としてラベルされた）はまた、ロバタミドＣでも同定され得た。定義さ
れた５つのスピン系のうち、一つの系のみ（図８、Ｅ領域）が、ロバタミドＡお
よびＢにおいて見出されたものと異なっていた。この系は、Ｈ２４とＨ２５との
間のカップリング定数１５．１Ｈｚに基づくトランスオレフィンを含んだ。この
カップリング定数は、ロバタミドＡおよびＢの両方について、１１．７Ｈｚであ
った。ロバタミドＣについては、オキシムメチルエーテルのコンフィグレーショ
ンは、それぞれδC１４９．３と１３５．５におけるＣ２６およびＣ２５につい
ての炭素の化学シフトに基づいて、Ｅとして帰属された；加えて、Ｃ２６の一つ
の結合ＪCHは１７５Ｈｚであった。
【０１２９】 フラグメントＡおよびＢ（図８、それぞれＡおよびＢ領域）は、Ｃ７を介して
結合しており、δ７．１４（Ｈ５）およびδ３．２１（Ｈ８ａ）におけるその炭
素のプロトンへのＨＭＢＣ相関に基づいていた。この結合を支持する付加的な相
関は、Ｈ６とＣ８、およびＨ８とＣ２との間のそれであった。Ｃ１０からＨ１１
とＨ１２への相関は、Ｈ２９からＣ９、Ｃ１０およびＣ１１に観測される相関と
共に、フラグメントＢとＣ（図８、それぞれＢおよびＣ領域）の間の結合を提供
した。Ｈ１４とδ１７１．７（Ｃ１６）のエステルカルボニルとの間の相関は、
δ１７１．７（Ｃ１６）のエステルカルボニルは、Ｃ１７の両プロトン（δ２．
６０、２６８）およびＨ１８ともさらに相関しており、フラグメントＣとＤ（図
８、それぞれＣおよびＤ領域）の間の結合を提供した。Ｈ１８（δ５．６０）は
、δ１６９．９（Ｃ１）の第二のエステルカルボニル（これはＣ２においてフラ
グメントＡと既にリンクしている）ともさらに相関した。最後に、フラグメント
ＤとＥ（図８、それぞれＤおよびＥ領域）は、アミノ結合を介して結合しており
、δ１６４．１（Ｃ２３）のカルボニルとＨ２４およびＨ２５との間に観察され
た相関に基づいていた。Ｈ２１とＣ２３の間にはＨＭＢＣ実験における相関は観
察されなかった；しかし、アミド結合の存在は、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲスペク
トルの類似性により裏付けられた。それ故、ＨＭＢＣ実験は、ロバタミドＣの全
構造を導き；さらに、ロバタミドＡおよびＢについてと同様に、ロバタミドＣの
推定構造は、リンクスキャン質量スペクトル分析によって確認された。これら三
つのケース全てにおいて、同一分子式の同定および同一フラグメンテーション（
図８を参照されたい）の観察は、これら三つの構造が幾何学的異性体であること
を裏付けた。
【０１３０】 これら三つの付加的な単離化合物、ロバタミドＤ−Ｆは全て、Ｃ27Ｈ32Ｎ2Ｏ9 の分子式を有し、ロバタミドＡ−Ｃより酸素が一つ多く存在することを示した。
重水素置換ＣＩＭＳ実験により、この別の酸素は、後者の４つの化合物における
付加的なヒドロキシル基によって説明され得ることが確認された。13Ｃおよび1
Ｈ ＮＭＲデータ（それぞれ、表５および６）は、ロバタミドＤ−Ｆの構造をさ
らに明らかにした。
【０１３１】 ロバタミドＤについて、１次元および２次元のＮＭＲ実験の標準的なセットが
得られ、５つのスピン系の存在が同定された；これらのうち、４つ（図８に記載
されたＡ−ＣおよびＥ領域）は、ロバタミドＡのそれと同様である。しかし、フ
ラグメントＤ（図８のＤ領域に相当する）は、メチル基でなく、ヒドロキシメチ
レン（δC６４．２；δH３．７０、ｄｄ、Ｊ＝１２．１、７．８Ｈｚ；３．６５
、ｄｄ、Ｊ＝１２．１、３．９Ｈｚ）で終わっている。ロバタミドＤのリンクス
キャン質量スペクトル研究により、フラグメントイオンの幾つかは、ロバタミド
Ａ−Ｃのそれに対して、１６ａｍｕだけ異なっていることが示された。これらの
イオンは、ＩＩ（ｍ／ｚ５１１）、ＶＩ（ｍ／ｚ２９１）、ＶＩＩ（ｍ／ｚ２７
３）、ＶＩＩＩ（ｍ／ｚ３０７）、およびＩＸ（ｍ／ｚ２８９）を含んだ。加え
て、フラグメントＶＩＩは、ｍ／ｚ２５５にてイオンを与える水の要素を欠き、
それ故、ロバタミドＤの余分なヒドロキシル基のＣ３０の位置を確認した。炭素
およびプロトンの化学シフトおよびＪCH値は、ロバタミドＡについて報告された
値と密接に合致しており、このことは両化合物が、Δ24、25−オレフィンとオキ
シムの結合において同一のジオメトリーを有することを示した。
【０１３２】 ロバタミドＤおよびＥについて得られた1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲスペクトルの
比較は、オキシムメチルエーテル官能基のジオメトリーのみが異なることを示唆
した。ロバタミドＥにおけるオキシム炭素（Ｃ２６）の化学シフトは、ロバタミ
ドＤのそれと比較して高磁場側に現れ（それぞれ、１４４．５ｐｐｍおよび１４
８．７ｐｐｍ）、Ｃ２５についても同様であった（ロバタミドＥおよびＤにつき
、それぞれ１２７．６および１３５．９ｐｐｍ）。炭素スペクトルにおけるこれ
らの違いは、Ｈ２６についてのシグナルの類似する高磁場シフト（ロバタミドＤ
について８．９５ｐｐｍであったのに対し、ロバタミドＥについて８．３６ｐｐ
ｍであった）により比較された。加えて、ロバタミドＥのＣ２６の結合異核カッ
プリング定数は、１９０Ｈｚであった。これらのデータは、ロバタミドＢの場合
と同様に、オキシムメチルエーテルはＺジオメトリーであることを示した。ロバ
タミドＢとＥのスペクトルデータの比較は、ロバタミドＥの構造を支持し、1Ｈ
と13Ｃスペクトルの両方における化学シフトの密接な相関を示した。
【０１３３】 1Ｈおよび13Ｃスペクトルの比較および一連のＮＭＲ実験により、ロバタミド
Ｆの全構造が確認された。ロバタミドＣと同様、Ｃ２４−Ｃ２５オレフィンは、
１５．６Ｈｚのカップリング定数に基づいたＥジオメトリーを有していた。Ｈ２
５とＨ２６の間の１０Ｈｚの一致するカップリング定数およびこの二つのプロト
ン間で観察されたＮＯＥは、オレフィン−オキシム結合が、ｓ−ｃｉｓ関係にあ
ることを示した。最後に、Ｃ２６（１４９．４ｐｐｍ）およびＣ２５（１３５．
５ｐｐｍ）の炭素の化学シフトは、ロバタミドＡ、ＣおよびＤの化学シフトと密
接に対応し、そしてロバタミドＢおよびＥのＣ２５およびＣ２６シフトの低磁場
側であった。加えて、１つの結合異核カップリング定数（１７８Ｈｚ）は、オキ
シム結合においてＥジオメトリー配座を有する他のロバタミドのそれと一致した
。
【０１３４】 ロバタミドＣ−Ｆについての付加的な物理化学的および分光学的データは以下
の通りであった。ロバタミドＣ：[α]D -15.5°(c 0.113、MeOH); UV (MeOH) λ max 280 (log ε4.04) nm; IR (film) νmax 3590-3108 (br)、3067、2975、293
3、1733、1656、1616、1584、1467、1451、1354、1267、1215、1175、1113、104
2、959、790 cm-1; HRFABMS (magic bullet) MNa+ m/z 535.2065、calcd. for
C27H33N2O8 513.2255; FABMS (m-bullet) m/z 551 (MNa+、55 %)、535 (60)、49
5 (20)、257 (32)、239 (50)、193 (100)。ロバタミドＤ: [α]D -35.0° (c 0.
08、MeOH); UV (MeOH) λmax 281 (logε4.23) IR (film) νmax 3593-3123 (br
)、2924、1738、1650、1607、1529、1464、1450、1269、1218、1168、1117、104
2、964、755 cm-1; HRFABMS (m-bullet) MH+ m/z 529.2164、calcd. for C27H3 3 N2O9 529.2186; FABMS (noba) m/z 551 (MNa+、100%)、529 (6)、511 (10)、23
9 (12)。ロバタミドＥ: [α]D-26.7°(c 0.06、MeOH); UV (MeOH) λmax 282 (l
ogε4.25) IR (film) νmax 3591-3110 (br)、2924、1734、1652、1539、1269、
1046、668 cm-1; HRFABMS (m-bullet) MH+ m/z (529.2184)、calcd. for C27H3 3 N2O9 529.2186; FABMS (glyc) m/z 551 (MNa+、5%)、511 (17)、239 (33)、217
(30)、112 (100). ロバタミドＦ: [α]D-19.2° (c 0.067、MeOH); UV (MeOH)
λmax 280 (log ε4.17) IR (film) νmax 3591-3108 (br)、2912、1737、1657
、1607、1525、1481、1268、1214、1167、1114、1042、973、755、668 cm-1; HR
FABMS (noba) MNa+ m/z 551.2015、calcd. for C27H33N2O9 529.2186; FABMS (
magic bullet) m/z 551 (MNa+、50)、511 (20)、301 (40)、239 (10)、112 (100
)。
【０１３５】 ロバタミドＣ−Ｆについての13Ｃ ＮＭＲデータ（１２５ＭＨＺ、ＣＤ3ＯＤ
）は下記の表５に記載される。ロバタミドＣ−Ｆについての1Ｈ ＮＭＲデータ
（５００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）は下記の表６に記載される。
【０１３６】
【表５】
【０１３７】
【表６】
【０１３８】 （実施例４） 本実施例は、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングを用いて本発明の化合物の活性
プロファイルを得るための一般的な手順を例示する。本実施例では、サリシリハ
ラミドＡおよびロバタミドＡを以下のように試験した。化合物は、Boyd and Pau
ll、Drug Dev. Res.、34、91-109 (1995); and Monks et al.、J. Natl. Cancer
Inst.、83、757-766 (1991)に記載されるように、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニ
ングを用いて試験した。簡潔には、最初に、化合物のストック溶液をジメチルス
ルホキシド中で、所望の最終的な最高試験濃度の４００倍に調製し、用時まで−
７０°Ｃで保管した。本実施例で検討された最終的な最高試験濃度は、１０-5お
よび１０-8モル濃度の間で変動した。スクリーニング時には、解凍ストックのア
リコートを、５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを含む完全培地で希釈して、最終
的な最高試験濃度の２倍の濃度を与えた。次いで、四回の付加的な一連の１０倍
希釈を行い、４つのｌｏｇ10の濃度領域にわたる全部で五つの濃度を与えた。中
間希釈物のうちの１００μｌのアリコートをただちに適切なマイクロタイターウ
ェルに加え（各々は１００μｌの培地中に適切な数および型の細胞を予め含んで
いた）、所望の五つの最終濃度を与えた。
【０１３９】 用いた６０細胞株および各接種密度は、Boyd and Paull、Drug Dev. Res.、34
、91-109 (1995)、および Monks et al.、J. Natl. Cancer Inst.、83、757-766
(1991)に記載の通りであった。化合物の添加の後、プレートを５％ＣＯ2／空気
雰囲気および湿度１００％下、３７°Ｃにて４８時間にわたって培養した。次い
で、付着細胞（白血病以外の全ての株）を、冷トリクロル酢酸（５０％ｗ／ｖの
５０μｌ）を緩やかに添加することによってインサイチュで固定し、４°Ｃにて
６０分にわたって培養した。上澄みを捨て、プレートを脱イオン水で５回洗浄し
風乾した。スルホローダミンＢ溶液（ＳＲＢ；１％酢酸中０．４％ｗ／ｖの１０
０μｌ）を各プレートに加え、その後さらに１０分間室温で培養した。次いで、
過剰の未結合染料を１％酢酸で５回の洗浄により除去し、その後風乾した。各ウ
ェルの結合した染料を、１０ｍＭ未緩衝トリス塩基を１００μｌ添加して可溶化
した；その後、自動プレート読取機で光学密度（５１５ｎｍ）を測定した。懸濁
細胞培地液（白血病）については、薬物の培養期間の終わりに、定着させた細胞
を、５０μｌの８０％トリクロル酢酸を緩やかに添加することによってマイクロ
タイターウェルの底にインサイチュで固定したこと以外は同じ方法であった。適
切なコントロールウェルはプレートフォーマットに含まれ(Monks et al.、J. Na
tl. Cancer Inst.、83、757-766 (1991))、バックグラウンドの光学密度のサブ
トラクション、薬物−ブランク補正、および０時間（化合物が添加された時間）
での細胞密度の測定が可能になった。
【０１４０】 ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける純粋なサリシリハラミドＡの４回の
試験により、以下の平均の各々のサブパネルおよび細胞株認識子で示された特定
の負のｌｏｇ10 ＧＩ50値が得られた: (白血病) CCRF-CEM (7.89)、HL-60-TB (
9.04)、K-562 (8.41)、MOLT-4 (7.96)、RPMI-8226 (7.89)、SR (8.44); (肺) A5
49/ATCC (8.54)、EKVX (7.52)、HOP-62 (8.38)、HOP-92 (7.77)、NCI-H226 (8.8
0)、NCI-H23 (6.55)、NCI-H322M (6.72)、NCI-H460 (9.01)、NCI-H522 (7.26);
[結腸] COLO 205 (8.07)、HCC-2998 (6.74)、HCT-116 (8.74)、HCT-15 (8.44)、
HT29 (8.54)、KM12 (8.30)、SW-620 (7.54); (脳) SF-268 (7.55)、SF-295 (8.9
6)、SF-539 (7.89)、SNB-19 (6.47)、SNB-75 (6.21)、U251 (7.57); (メラノー
マ) LOX-IMVI (9.11)、MALME-3M (7.62)、M14 (8.92)、SK-MEL-2 (7.47)、SK-ME
L-28 (7.00)、SK-MEL-5 (9.00)、UACC-257 (8.47)、UACC-62 (8.38); (卵巣) IG
ROV1 (7.89)、OVCAR-3 (7.03)、OVCAR-4 (5.30)、OVCAR-5 (8.11)、OVCAR-8 (8.
43)、SK-OV-3 (5.54); (腎臓) 786-0 (7.92)、A498 (6.55)、ACHN (8.01)、CAKI
-1 (8.96)、RXF-393 (9.07)、SN-12C (7.77)、TK-10 (5.74)、UO-31 (8.31); (
前立腺) PC-3 (7.51)、DU-145 (8.26); [乳房] MCF-7 (7.12)、MCF-7-ADR-RES (
8.07)、MDA-MB-231/ATCC (6.92)、HS-578T (5.85)、MDA-MB-435 (7.82)、MDA-N
(8.00)、BT-549 (9.30)、T-47D (8.34)。
【０１４１】 サリシリハラミドＡのスクリーニングから得られた、完全なデータセットのＧ
Ｉ50およびＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥ分析は、この化合物が、本発明の特定の化合
物に特徴的である（例えば、ロバタミドＡおよびＢでの０．７−０．８より大き
いか同等のピアソン相関係数）が、いかなる公知の通常の抗癌剤クラスとも異な
る、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける各毒性の際立ったパターンを与え
る事を明らかにした。サリシリハラミドＡの平均グラフプロファイルのＣＯＭＰ
ＡＲＥパターン認識分析は、ＮＣＩの標準薬剤データベースに含まれる公知の抗
癌剤化合物のプロファイルに対しいかなる重要な相関をも示さなかった。サリシ
リハラミドＡの平均パネルＧＩ50濃度は約１５ｎＭであり、ＮＣＩパネルを構成
する６０細胞株間の各感度の幅は、１０3と同等またはそれ以上であった。
【０１４２】 同様に、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおけるロバタミドＡ（図１０Ａ−
１０Ｃ）およびロバタミドＢの三回の試験により、互いに高く相関（例えば、Ｔ
ＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥピアソン相関係数が０．９と同等かそれ以上）し、本発明
の特定の化合物に非常に特徴的な（例えば、０．７−０．８と同等かそれ以上の
サリシリハラミドＡのＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥピアソン相関係数）と相関する平
均グラフプロファイルが得られた。ロバタミドＤ、ロバタミドＥ、およびロバタ
ミドＦもまた本実施例に従って試験された。
【０１４３】 これらのデータは、平均グラフ“フィンガープリント”の生成に用いられ得、
これは特定の化合物あるいは化合物クラスについての分子ターゲットを同定する
のに用いられ得る。特定の化合物についての分子ターゲット（および、それ故、
生物学的活性）は、実施例５においてさらに示されるように、問題の化合物の平
均グラフ“フィンガープリント”と、プロトタイプ（“種”）化合物のそれとの
相関により決定され得る。
【０１４４】 ロバタミドＡとＤについて、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングから得られる、
代表的な平均グラフ“フィンガープリント”が生成される。ロバタミドＡについ
ての、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングから得られる、平均グラフ“フィンガー
プリント”は、図１０Ａ−１０Ｃにおいて図示される。図１０Ａは、ロバタミド
ＡについてのＧＩ50平均グラフ“フィンガープリント”を図示する。図１０Ｂは
、ロバタミドＡについてのＴＧＩ平均グラフ“フィンガープリント”を図示する
。図１０Ｃは、ロバタミドＡについてのＬＣ50平均グラフ“フィンガープリント
”を図示する。
【０１４５】 （実施例５） 本実施例は、本発明の特定の化合物の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制活性
を記述する。この方法は、ＮＣＩ６０細胞株インビトロスクリーンを用いて、所
望の機械的に決定されたプロトタイプ化合物の平均グラフ“フィンガープリント
”を得、次いで、ＣＯＭＰＡＲＥと呼ばれるコンピュータに基づくサーチアルゴ
リズムを用いて、構造的に非関連の化合物の平均グラフ“フィンガープリント”
のデータベースを調べて、それにより、非常に類似したフィンガープリントをも
つ化合物を同定し、区別できない場合には、選択されたプロトタイプ（あるいは
“種”）から同定する。類似の程度は、ＣＯＭＰＡＲＥ相関係数の計算によって
決定され、これは最小値ゼロ（これは相関なしを示す）から最大値１（これは完
全な相関を示す）まで変化し得る。異なる化合物の平均グラフ“フィンガープリ
ント”の間の、高いＣＯＭＰＡＲＥ相関（すなわち、類似性の高さを示す）は、
化合物が同一あるいは同様の分子ターゲットに対して作用すること、それ故、実
質的に同一あるいは類似の生物学的活性の機構を共有することを示す。実際には
、約０．９あるいはそれ以上のＣＯＭＰＡＲＥ相関係数は、スクリーニングプロ
セスの実験誤差の範囲内で、比較化合物の平均グラフ“フィンガープリント”は
、実質的に同等かあるいは区別できないほどであり、それ故、その化合物は同一
の分子ターゲットに対して作用することを示唆する。ＮＣＩ６０細胞株スクリー
ニングの適切なバックグラウンドおよびＣＯＭＰＡＲＥの方法と応用は、Boyd、
In: Current Therapy in Oncology (Niederhuber、J.E.、ed) Philadelphia: B.
C. Decker、1993、pp. 11-22; Boyd and Paull、Drug Dev. Res.、34、91-109、
1995; Paull et al.、In: Cancer Chemotherapeutic Agents、Washington、D.C.
: Am. Chem. Soc. Books、1995、pp. 11-45を参照されたい。
【０１４６】 最も強力な既知の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤であるコンカナマイシ
ンＡ（図１１Ａを参照されたい）を、本実施例の目的のためのＣＯＭＰＡＲＥ分
析において使用するために、機械的に決定されるプロトタイプとして選択した。
効力はより低いが、別の公知の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤であるバフ
ィロマイシンＡ1（図１１Ｂを参照されたい）を、“ポジティブコントロール”
としての使用のために選択した。コンカナマイシンおよびバフィロマイシンにつ
いての適切なバックグラウンドとしては、Bowman et al.、Proc. Natl. Acad. S
ci. USA、85、7972-7976 (1988); Droese et al.、Biochemistry、32、3902-390
6 (1993); Droese and Altendorf、J. Exp. Biol.、200、1-8 (1997)を参照され
たい。
【０１４７】 コンカナマイシンＡおよびバフィロマイシンＡ1の最初の選択は、独自に、Ｎ
ＣＩの歴史的なデータベースに含まれる、公知の機械的に決定されるプロトタイ
プ化合物（例えば、コンカナマイシンＡ）の“フィンガープリント”を有する偶
然以上（例えば、ＣＯＭＰＡＲＥ相関係数が０．５）の、ＮＣＩデータベースの
調査に基づいた(例えば、Boyd and Paull、Drug Dev. Res. 34、91-109、1995を
参照されたい)。本実施例においては、確かな、十分に特徴付けされ、かつ実証さ
れたコンカナマイシンＡおよびバフィロマイシンＡ1の参照サンプルを、商業上
の供給者（Ｋａｍｉｙａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｔｕｋｗ
ｉｌａ、ＷＡ）から得た。本実施例のために選択された本発明の代表的な試験化
合物は、サリシリハラミドＡ、ロバタミドＡ、ロバタミドＢ、ロバタミドＣ、ロ
バタミドＤ、ロバタミドＥ、およびロバタミドＦを含んだ。
【０１４８】 前述の“種”化合物、ポジティブコントロール化合物、および試験化合物は、
それぞれＤＭＳＯおよび完全培地中で処方し、そして得られた組成物を実施例４
に記載したように、ＮＣＩ６０細胞株試験の手順に同時に供した。各化合物を、
上限濃度１０-6モル濃度、および１回のｌｏｇ10希釈を用いて、四回試験した。
各化合物について得られたデータを、対応する平均グラフ“フィンガープリント
”を構築するのに用い、ＣＯＭＰＡＲＥ相関分析は下記にさらに記載するように
実施された。
【０１４９】 図１２Ａ−１２Ｃはそれぞれ、機械的に決定されるプロトタイプ（あるいは“
種”）化合物であるコンカナマイシンＡの、ＧＩ50、ＴＧＩおよびＬＣ50平均グ
ラフ“フィンガープリント”を例示する。本実施例で用いられ、そして、コンカ
ナマイシンＡ“種”を用いて調査されたデータベースは、前記の化合物（すなわ
ち、選択された“種”化合物、ポジティブコントロールおよび試験化合物）の同
時の試験から得られた平均グラフ“フィンガープリント”に加え、構造的に異な
る純粋化合物の先行する試験からの８０００以上の平均グラフ“フィンガープリ
ント”を含んだ。そのデータベースはまた、粗製の抽出物および部分的に精製さ
れたそれらの画分から得られた平均グラフ“フィンガープリント”も含み、これ
は“種”化合物、本発明のポジティブコントロールあるいは試験化合物、あるい
は公知である、あるいは推測される、前記の化合物のいずれかの画分を有する抽
出物あるいは画分と非相関であった。
【０１５０】 この例証に適切であるので、コンカナマイシンＡ（図１２Ｂ）の同時の試験か
ら導かれるＴＧＩ平均グラフを前記のデータベースに含まれるＴＧＩ平均グラフ
に対して調査するための“種”として、およびＣＯＭＰＡＲＥ係数の計算の基礎
として用いた。本研究で試験された各化合物のＧＩ50平均グラフは、平均パネル
ＧＩ50値の算出のために用いられた。
【０１５１】 表７は、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける、コンカナマイシンＡ、バ
フィロマイシンＡ1、サリシリハラミドＡおよびロバタミドＡ−Ｆの試験から得
られる、ＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥ相関係数および平均パネルＧＩ50値を要約する
。平均パネルＧＩ50値もまた表７に示される。表７に示されたＣＯＭＰＡＲＥ相
関は、“種”としてのコンカナマイシンＡのＴＧＩ平均グラフを用いて求めた。
【０１５２】
【表７】
【０１５３】 種化合物（コンカナマイシンＡ）それ自身の予想される完全な相関（ＣＯＭＰ
ＡＲＥ相関係数、１．０）によって示されるように、コンピュータに基づくアル
ゴリズム分析は本例証のために正しくかつ正確に機能していた。そのうえ、ポジ
ティブコントロール化合物であるバフィロマイシンＡ1は、種化合物と約０．９
６の相関を示し、このことは、この分析が、種とは構造的に異なるにもかかわら
ず同一の分子ターゲット（すなわち、端的には、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ
）を共有する化合物を正しく同定できることを確証した。もっとも注目すべきは
、本実施例において選ばれた試験化合物全てが、“種”に対し、少なくとも０．
８５あるいはそれ以上のＣＯＭＰＡＲＥ相関係数を示し、それ故、それらの分子
ターゲットが同様に空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼであることを実証した。実際
、注目すべきことに、本分析によって調査されたデータベースを含む、８０００
を越える“フィンガープリント”を、種に対する相関が最高のものから最低のも
のに順序付けたとき、合致する上位七つは、ロバタミドＡ、ロバタミドＢ、ロバ
タミドＣ、ロバタミドＤ、ロバタミドＥ、ロバタミドＦ、およびサリシリハラミ
ドＡであった。平均パネルＧＩ50値は、本発明の化合物が、空胞型（Ｈ＋）−Ａ
ＴＰアーゼに対するある範囲の絶対的な効力を示し得ることを示唆する。
【０１５４】 本例証において用いたＣＯＭＰＡＲＥ分析のさらなる繰り返しにおいて、前記
のデータベースを調べるためにロバタミドＤの平均グラフ“フィンガープリント
”を“種”としてかわりに用いた。ＣＯＭＰＡＲＥ分析のさらなる繰り返しの結
果を以下の表８に記載する。これは、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける
、コンカナマイシンＡ、バフィロマイシンＡ1、サリシリハラミドＡおよびロバ
タミドＡ−Ｄの試験による、ＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥ相関係数を示している。表
８に示したＣＯＭＰＡＲＥ相関は、“種”としてのロバタミドＤのＴＧＩ平均グ
ラフを用いて求めた。
【０１５５】
【表８】
【０１５６】 このケースでは、得られた相関係数はもっと高く、０．９０（サリシリハラミ
ドＡ）から０．９７（ロバタミドＣおよびロバタミドＦ）にわたり、さらに、本
実施例において試験された化合物は全て同一の分子ターゲットである空胞型（Ｈ
＋）−ＡＴＰアーゼを共有することが確かめられた。それ故、試験された本発明
の化合物は、これまで知られた最も強力な空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤
と少なくともほぼ同等の効力を有する。本発明の化合物は、コンカナマイシンあ
るいはバフィロマイシン（例えば、図１１Ａおよび１１Ｂを参照されたい）より
、構造的にはるかに複雑でないことに利点があり、それによって当業者に公知の
合成方法により、本発明の化合物をより容易に合成する手段を提供する。
【０１５７】 （実施例６） 本実施例は、代表的なヒト空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制アッセイを用い
て、サリシリハラミドＡおよびロバタミドＡの空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑
制活性を実証する。
【０１５８】 バフィロマイシン−感受性空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性の抑制を、破骨
細胞腫細胞（ｈＯｃ）、ヒト腎臓皮質細胞（ｈＫ）、およびマクロファージ細胞
（Ｊ７７４）由来の、部分的に精製された膜小嚢製剤において測定した。小嚢は
、Gagliardi et al.、J. Med. Chem.、41、1568-1573 (1998); and Gagliardi e
t al.、J. Med. Chem.、41、1883-1893 (1998)に記載された方法の適切な適用に
よって作成された。
【０１５９】 空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼアッセイは、Ｆ− およびＰ−ＡＴＰアーゼの
抑制剤としてのオリゴマイシン（５μｇ／ｍｌ）およびバナジウム酸塩（１ｍＭ
）のそれぞれの存在下で行った。比色法を用いて残存のバフィロマイシン感受性
空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を定量した(Chan et al.、Anal. Biochem.、
157、375-380 (1986)を参照されたい)。このアッセイは、３０分の培養中の３７
℃におけるＡＴＰからの無機リン酸塩の放出を測定する。反応は、ＭｇＳＯ4（
最終濃度５Ｍ）の添加により始まる。
【０１６０】 ヒト破骨細胞腫細胞（ｈＯｃ）、ヒト腎臓細胞（ｈＫ）、およびマクロファー
ジ細胞（Ｊ７７４）から導出されたサリシリハラミドＡおよびロバタミドＡの、
空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼに対する抑制活性を、下記の表９に示す。
【０１６１】
【表９】
【０１６２】 前述のデータは、ナノ分子からサブナノ分子の範囲内のＩＣ50において、サリ
シリハラミドＡおよびロバタミドＡが強力な空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制
剤であることのさらに別の確証を提供する。
【０１６３】 そのうえ、サリシリハラミドＡおよびロバタミドＡは、“プロトタイプの”空
胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制剤、コンカナマイシンおよびバフィロマイシン
に対する際立った差異から、哺乳動物空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの高度に選
択的な抑制剤であることが分かってきた。サリシリハラミドＡおよびフォリマイ
シン（コンカナマイシンＡ）を（クロム塩染色の顆粒膜由来の）哺乳動物空胞型
（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼおよび（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ由来の）
菌性空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼに対する抑制活性について一緒に試験した。
抑制データは、Bowman et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、85、7972-7976 (
November 1988)に記載された、同一の手順および生物学的製剤を用いて得られた
。それによって得られたデータは、フォリオマイシンは哺乳動物と菌の両方の酵
素の強力な抑制剤であり、一方、サリシリハラミドＡは哺乳動物の酵素の強力な
抑制剤であったが、菌の酵素に対してはほとんどあるいは全く抑制活性を有しな
いことが確認された。哺乳動物空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの同様の選択性は
またロバタミドＡについても観察された。これらの結果は、本発明のサリシリハ
ラミドおよびロバタミドは、公知の“プロトタイプの”抑制剤のそれとは著しく
異なった機構によって作用することを実証する。これらの結果は、さらに、本発
明のサリシリハラミドおよびロバタミドが、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの哺
乳動物イソフォームに対して先例のない選択性を有することを実証する。
【０１６４】 本明細書中引用された、特許、特許出願、および公開公報を含む参考文献は、
引用することによって本明細書全体に含まれる。
【０１６５】 本発明は、好ましい実施態様を強調して記載されてきたが、好ましい実施態様
のバリエーションが用いられ得ること、および、本発明が本明細書中で特に記載
された以外の形態で実施され得ることが意図されていることは、当業者に明らか
であろう。したがって、本発明は、特許請求の範囲によって定義されるような本
発明の精神および範囲内に包含される全ての改変を含む。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、本発明の特定の化合物の一般的表記であり、式中、Ｈ1−Ｈ10は、特
徴的なＮＭＲシグナルを生成する水素置換基（hydrogen substituents）を表す
。
【図２】 図２は、本発明の化合物の構成成分を例示する。
【図３】 図３は、サリシリハラミドＡの絶対的な立体化学構造を例示する。
【図４】 図４Ａは、サリシリハラミドＡの構造分析において用いられる構成要素の部分
構造を記載する。 図４Ｂは、サリシリハラミドＡの構造分析において用いられる構成要素の部分
構造を記載する。 図４Ｃは、サリシリハラミドＡの構造分析において用いられる構成要素の部分
構造を記載する。
【図５】 図５は、サリシリハラミドＡに関する様々なｎＯｅ関係を記載する。
【図６】 図６は、サリシリハラミドＡのコンフォメーションのコンピュータ生成モデル
を示す。
【図７】 図７Ａは、サリシリハラミドＡの（Ｒ）−モシェール誘導体の部分構造を描写
するニューマン投影図を記載する。 図７Ｂは、サリシリハラミドＡの（Ｓ）−モシェール誘導体の部分構造を描写
するニューマン投影図を記載する。
【図８】 図８は、ロバタミドＡの構造分析に用いられる部分構造（太字で示した）を記
載する。
【図９】 図９は、ロバタミドＡについての質量スペクトルのフラグメンテーション分析
を記載する。
【図１０】 図１０Ａは、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける、ロバタミドＡのＧＩ 50 に基づく平均グラフ“フィンガープリント”を記載する。 図１０Ｂは、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける、ロバタミドＡのＴＧ
Ｉに基づく平均グラフ“フィンガープリント”を記載する。 図１０Ｃは、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける、ロバタミドＡのＬＣ 50 に基づく平均グラフ“フィンガープリント”を記載する。
【図１１】 図１１Ａは、コンカナマイシンＡの構造を記載する。 図１１Ｂは、バフィロマイシンＡ1の構造を記載する。
【図１２】 図１２Ａは、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける、コンカナマイシンＡ
のＧＩ50に基づく平均グラフ“フィンガープリント”を記載する。 図１２Ｂは、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける、コンカナマイシンＡ
のＴＧＩに基づく平均グラフ“フィンガープリント”を記載する。 図１２Ｃは、ＮＣＩ６０細胞株スクリーニングにおける、コンカナマイシンＡ
のＬＣ50に基づく平均グラフ“フィンガープリント”を記載する。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１３年４月１１日（２００１．４．１１）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【化１】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれは、Ｈ、直鎖また
は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
ル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和また
は不飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであ
り；芳香環は、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキ
シル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくと
も一つの置換基で置換されており；Ｒ1−Ｒ3およびＲ6中で定義される飽和アル
キル、不飽和アルキルおよびアリール置換基は、未置換であるか、あるいはハロ
ゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノ
からなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されており；Ｚは、ＯＲ 1 とメタ位の関係にある式（Ｉ）の芳香環の炭素で始まり、式（Ｉ）のラクトン
のアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカーＺの両端
に共有結合する）と共に、一体として５−１７員環を形成する、０から１２原子
の鎖を有する連続的なリンカーである］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩
、エステル、あるいはプロドラッグを患者へ投与することを含む方法（ただし、
前記状態は癌ではない）。
【化２】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれは、Ｈ、直鎖また
は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
ル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和また
は不飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであ
り；Ｒ4は、Ｈ、アルキル、あるいはＲ7ＣＨ2−（式中、Ｒ7は、Ｒ6Ｏ−、Ｒ6Ｃ
Ｏ2−、あるいはＲ6ＳＯ3−である）であり；Ｒ5およびＲ5’は同一あるいは異
なっており、それぞれはＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル、アリ
ール、グリコシド、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−であり；Ｒ1−
Ｒ3、Ｒ5、Ｒ5’、およびＲ6中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキルおよ
びアリール、およびＲ4中で定義されるアルキルは未置換であるか、あるいはハ
ロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシア
ノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されており；式（Ｉ）
の芳香環は、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ
ル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくとも
一つの置換基で置換されている］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エス
テル、あるいはプロドラッグからなる群から選ばれる、請求項１または２のいず
れかに記載の方法。
【化３】
【化４】 あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、またはプロドラッグからなる
群から選ばれる、請求項３に記載の方法。
【化５】 ［式中、Ｒ1−Ｒ3は請求項１において定義された通りであり；Ｒ5''は、Ｈ、直
鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、グリコシド、Ｒ6ＣＨ2−
、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、請求項１において定義された
通りである）であり；Ｒ5''中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキルおよ
びアリールは、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキ
シル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくと
も一つの置換基で置換されており；Ａは共有結合であるか、あるいは未置換ある
いはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およ
びシアノからなる群から選ばれた一つまたはそれ以上の置換基で置換されたＣ1
−Ｃ6の直鎖の飽和または不飽和アルキルリンカーであり；Ｘは共有結合である
か、あるいは未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ
ル、チオ、アシル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた一
つまたはそれ以上の置換基で置換されたＣ1−Ｃ5の直鎖の飽和または不飽和アル
キルリンカーであり；ＷはＯ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）nあるいはＮ
−Ｒ4'（式中、Ｒ4'はＨ、Ｃ1−Ｃ6の直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
ル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は請求
項１で定義された通りである）である）であり、ｎは０−２の整数である］から
なる群から選ばれる、請求項１あるいは５のいずれかに記載の方法。
【化６】 ［式中、Ｒ5''はＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンである］からなる群から
選ばれる請求項６に記載の方法。
【化７】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれは、Ｈ、直鎖また
は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
ル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和また
は不飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであ
り；Ｒ1−Ｒ3およびＲ6中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキルおよびア
リール置換基は、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロ
キシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なく
とも一つの置換基で置換されており；芳香環は、未置換であるか、あるいはハロ
ゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノ
からなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されており；Ｚは、ＯＲ 1 とメタ位の関係にある式（Ｉ）の芳香環の炭素で始まり、式（Ｉ）のラクトン
のアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカーＺの両端
に共有結合する）と共に、一体として５−１１員環を形成する、０から６原子の
鎖を有する連続的なリンカーである］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩、
エステル、あるいはプロドラッグ；および医薬上許容される担体を含む組成物（
ただし、前記化合物はアピクラレンＡあるいはＢではない）。
【化８】 ［式中、Ｒ1−Ｒ3は請求項１７において定義された通りであり；Ａは共有結合で
あるか、あるいは未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロ
キシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた一つま
たはそれ以上の置換基で置換されたＣ1−Ｃ5の直鎖の飽和または不飽和アルキル
リンカーであり；Ｘは共有結合であるか、あるいは未置換あるいはハロゲン、ニ
トロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる
群から選ばれた一つまたはそれ以上の置換基で置換されたＣ1−Ｃ5の直鎖の飽和
または不飽和アルキルリンカーであり；ＷはＯ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（
Ｏ）nあるいはＮ−Ｒ4'（式中、Ｒ4'はＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和
アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6 は請求項１８で定義された通りである）である）であり、ｎは０−２の整数であ
る］；からなる群から選ばれる、請求項１８に記載の組成物。
【化９】 からなる群から選ばれる請求項１９に記載の組成物。
【化１０】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれは、Ｈ、直鎖また
は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
ル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和また
は不飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであ
り；芳香環は、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキ
シル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくと
も一つの置換基で置換されており；Ｒ1−Ｒ3およびＲ6中で定義される飽和アル
キル、不飽和アルキルおよびアリール置換基は、未置換であるか、あるいはハロ
ゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノ
からなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されており；Ｚは、ＯＲ 1 とメタ位の関係にある式（Ｉ）の芳香環の炭素で始まり、式（Ｉ）のラクトン
のアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカーＺの両端
に共有結合する）と共に、一体として５−１１員環を形成する、０から６原子の
鎖を有する連続的なリンカーである］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩、
エステル、あるいはプロドラッグ、の患者への投与を含む方法（ただし、前記化
合物はアピクラレンＡあるいはＢではない）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
【化１１】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
【化１２】
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
【化１３】
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
【化１４】
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
【化１５】
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】 ＣＪ−１２，９５０およびＣＪ−１３，３５７として称された化合物は、Dekk
er et al.、J. Antibiotics、51、14-20 (1998)に記載されている。オキシミジ
ン１および２はKim et al.、J. Org. Chem.、64、153-155 (1999)に記載されて
いる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】 式（ＩＦ）の空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制化合物の例には、次式の化合
物が挙げられる：
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
【化１６】
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
【化１７】
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
【化１８】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 19/00 Ａ６１Ｐ 19/00 19/10 19/10 35/00 35/00 35/04 35/04 43/00 １１１ 43/00 １１１ // Ｃ０７Ｄ 313/00 Ｃ０７Ｄ 313/00 321/00 321/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C022 MA02 4C062 JJ70 4C086 AA01 AA02 BA15 BA17 BB05 BC72 CA01 MA01 MA02 MA04 NA14 ZA86 ZA96 ZA97 ZB26 ZC20 ZC31 【要約の続き】

Claims (36)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの抑制によって治療可能な状
    態の治療または予防の方法であって、空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量
    の少なくとも一つの次式の化合物： 【化１】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれは、Ｈ、直鎖また
    は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
    いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
    ル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和また
    は不飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであ
    り；芳香環は、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキ
    シル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくと
    も一つの置換基で置換されており；Ｒ1−Ｒ3およびＲ6中で定義される飽和アル
    キル、不飽和アルキルおよびアリール置換基は、未置換であるか、あるいはハロ
    ゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノ
    からなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されており；Ｚは、ＯＲ 1 とメタ位の関係にある芳香環の炭素で始まり、ラクトンのアルキル酸素に直接
    結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカーＺの両端に共有結合する）と共
    に、一体として５−１７員環を形成する、０から１２原子の鎖を有する連続的な
    リンカーである］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、あるいは
    プロドラッグを患者へ投与することを含む方法。
  2. 【請求項２】 Ｚが、ＯＲ1とメタ位の関係にある芳香環の炭素で始まり、
    ラクトンのアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカー
    Ｚの両端に共有結合する）と共に、一体として１２−１７員環を形成し、７から
    １２原子の鎖を有する連続的なリンカーである、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 前記化合物が、 【化２】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれは、Ｈ、直鎖また
    は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
    いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
    ル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和また
    は不飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであ
    り；Ｒ4は、Ｈ、アルキル、あるいはＲ7ＣＨ2−（式中、Ｒ7は、Ｒ6Ｏ−、Ｒ6Ｃ
    Ｏ2−、あるいはＲ6ＳＯ3−である）であり；Ｒ5およびＲ5’は同一あるいは異
    なっており、それぞれはＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル、アリ
    ール、グリコシド、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−である；Ｒ1−
    Ｒ3、Ｒ5、Ｒ5’、およびＲ6中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキルおよ
    びアリール、およびＲ4中で定義されるアルキルは未置換であるか、あるいはハ
    ロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシア
    ノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されている；芳香環は
    、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、
    アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換
    基で置換されている］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、ある
    いはプロドラッグからなる群から選ばれる、請求項１または２のいずれかに記載
    の方法。
  4. 【請求項４】 前記化合物が、 【化３】 【化４】 あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、またはプロドラッグからなる
    群から選ばれる、請求項３に記載の方法。
  5. 【請求項５】 Ｚが、ＯＲ1とメタ位の関係にある芳香環の炭素で始まり、
    ラクトンのアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカー
    Ｚの両端に共有結合する）と共に、一体として５−１１員環を形成し、０から６
    原子の鎖を有する連続的なリンカーである、請求項１に記載の方法。
  6. 【請求項６】 前記化合物が、 【化５】 ［式中、Ｒ1−Ｒ3は請求項１において定義された通りであり；Ｒ5''は、Ｈ、直
    鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、グリコシド、Ｒ6ＣＨ2−
    、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、請求項１において定義された
    通りである）であり；Ｒ5''中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキルおよ
    びアリールは、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキ
    シル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくと
    も一つの置換基で置換されており；Ａは共有結合であるか、あるいは未置換ある
    いはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およ
    びシアノからなる群から選ばれた一つまたはそれ以上の置換基で置換されたＣ1
    −Ｃ6の直鎖の飽和または不飽和アルキルリンカーであり；Ｘは共有結合である
    か、あるいは未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ
    ル、チオ、アシル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた一
    つまたはそれ以上の置換基で置換されたＣ1−Ｃ5の直鎖の飽和または不飽和アル
    キルリンカーであり；ＷはＯ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）nあるいはＮ
    −Ｒ4（式中、Ｒ4はＨ、Ｃ1−Ｃ6の直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル
    、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は請求項
    １で定義された通りである）である）であり、ｎは０−２の整数である］からな
    る群から選ばれる、請求項１あるいは５のいずれかに記載の方法。
  7. 【請求項７】 前記化合物が、 【化６】 ［式中、Ｒ5''はＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンである］からなる群から
    選ばれる請求項６に記載の方法。
  8. 【請求項８】 治療上の有効量の、請求項１−７のいずれかにおいて定義さ
    れた化合物以外の少なくとも一つの付加的な化合物を、それらを必要とする患者
    に共投与することをさらに含む、請求項１−７のいずれかに記載の方法。
  9. 【請求項９】 前記付加的な化合物が、バフィロマイシンおよびコンカナマ
    イシンからなる群から選ばれる、請求項８に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 前記付加的な化合物がコンカナマイシンＡである、請求項
    ９に記載の方法。
  11. 【請求項１１】 前記付加的な化合物がバフィロマイシンＡ1である、請求
    項９に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、細胞内
    器官の器官内の酸性化を抑制するのに有効な量である、請求項１−１１のいずれ
    かに記載の方法。
  13. 【請求項１３】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、尿の酸
    性化を抑制するのに有効な量である、請求項１−１１のいずれかに記載の方法。
  14. 【請求項１４】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、骨吸収
    を抑制するのに有効な量である、請求項１−１１のいずれかに記載の方法。
  15. 【請求項１５】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、骨粗し
    ょう症を治療するのに有効な量である、請求項１４に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、受精を
    抑制するのに有効な量である、請求項１−１１のいずれかに記載の方法。
  17. 【請求項１７】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、腫瘍細
    胞の薬剤耐性の増大を抑制するのに有効な量である、請求項１−１１のいずれか
    に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、血管形
    成、細胞の浸潤、あるいは転移を抑制するのに有効な量である、請求項１−１１
    のいずれかに記載の方法。
  19. 【請求項１９】 空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量の少なくとも一
    つの次式の化合物： 【化７】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれは、Ｈ、直鎖また
    は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
    いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
    ル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和また
    は不飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであ
    り；Ｒ1−Ｒ3およびＲ6中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキルおよびア
    リール置換基は、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロ
    キシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なく
    とも一つの置換基で置換されており；芳香環は、未置換であるか、あるいはハロ
    ゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノ
    からなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されており；Ｚは、ＯＲ 1 とメタ位の関係にある芳香環の炭素で始まり、ラクトンのアルキル酸素に直接
    結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカーＺの両端に共有結合する）と共
    に、一体として５−１７員環を形成する、０から１２原子の鎖を有する連続的な
    リンカーである］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、あるいは
    プロドラッグ；および医薬上許容される担体を含む組成物。
  20. 【請求項２０】 Ｚが、ＯＲ1とメタ位の関係にある芳香環の炭素で始まり
    、そしてラクトンのアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子（両炭素は
    リンカーＺの両端に共有結合する）と共に、一体として１２−１７員環を形成し
    、７から１２原子の鎖を有する連続的なリンカーである、請求項１９に記載の組
    成物。
  21. 【請求項２１】 前記化合物が、 【化８】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は同一あるいは異なっており、それぞれは、Ｈ、直鎖また
    は分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、ある
    いはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキ
    ル、あるいはアリールである）であり；Ｒ3は、Ｈ、直鎖または分枝の飽和また
    は不飽和アルキル、アリール、オキシム、あるいはオキシムメチルエーテルであ
    り；Ｒ4は、Ｈ、アルキル、あるいはＲ7ＣＨ2−（式中、Ｒ7は、Ｒ6Ｏ−、Ｒ6Ｃ
    Ｏ2−、あるいはＲ6ＳＯ3−である）であり；Ｒ5およびＲ5’は同一あるいは異
    なっており、それぞれはＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル、アリ
    ール、グリコシド、Ｒ6ＣＨ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−であり；Ｒ1−
    Ｒ3、Ｒ5、Ｒ5’、およびＲ6中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキルおよ
    びアリール、およびＲ4中で定義されるアルキルは未置換であるか、あるいはハ
    ロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシア
    ノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換基で置換されており；芳香環は
    、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、
    アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少なくとも一つの置換
    基で置換されている］；あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、また
    はプロドラッグ、からなる群から選ばれる、請求項１９または２０のいずれかに
    記載の組成物。
  22. 【請求項２２】 前記化合物が、 【化９】 【化１０】 あるいは医薬上許容されるそれらの塩、エステル、またはプロドラッグ、からな
    る群から選ばれる、請求項２１に記載の組成物。
  23. 【請求項２３】 Ｚが、ＯＲ1とメタ位の関係にある芳香環の炭素で始まり
    、ラクトンのアルキル酸素に直接結合する炭素で終わる５原子（両炭素はリンカ
    ーＺの両端に共有結合する）と共に、一体として５−１１員環を形成し、０から
    ６原子の鎖を有する連続的なリンカーである、請求項１９に記載の組成物。
  24. 【請求項２４】 前記化合物が、 【化１１】 ［式中、Ｒ1−Ｒ3は請求項１８において定義された通りであり；Ｒ5''は、Ｈ、
    直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、グリコシド、Ｒ6ＣＨ2 −、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は、請求項１８において定義さ
    れた通りである）であり；Ｒ5''中で定義される飽和アルキル、不飽和アルキル
    およびアリールは、未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒド
    ロキシル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた少な
    くとも一つの置換基で置換されており；Ａは共有結合であるか、あるいは未置換
    あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、
    およびシアノからなる群から選ばれた一つまたはそれ以上の置換基で置換された
    Ｃ1−Ｃ6の直鎖の飽和または不飽和アルキルリンカーであり；Ｘは共有結合であ
    るか、あるいは未置換であるか、あるいはハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキ
    シル、チオ、アシル、アルキル、およびシアノからなる群から選ばれた一つまた
    はそれ以上の置換基で置換されたＣ1−Ｃ5の直鎖の飽和または不飽和アルキルリ
    ンカーであり；ＷはＯ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）nあるいはＮ−Ｒ4（
    式中、Ｒ4はＨ、直鎖または分枝の飽和または不飽和アルキル、アリール、Ｒ6Ｃ
    Ｈ2−、Ｒ6ＣＯ−、あるいはＲ6ＳＯ2−（式中、Ｒ6は請求項１８で定義された
    通りである）である）であり、ｎは０−２の整数である］；からなる群から選ば
    れる、請求項１９あるいは２３のいずれかに記載の組成物。
  25. 【請求項２５】 前記化合物が、 【化１２】 ［式中、Ｒ5''はＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンである］からなる群から
    選ばれる請求項２４に記載の組成物。
  26. 【請求項２６】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制の有効量の、請求
    項１９−２５のいずれかにおいて定義された化合物以外の少なくとも一つの付加
    的な化合物をさらに含む、請求項１９−２５のいずれかに記載の組成物。
  27. 【請求項２７】 前記付加的な化合物が、バフィロマイシンおよびコンカナ
    マイシンからなる群から選ばれる、請求項２６に記載の組成物。
  28. 【請求項２８】 前記付加的な化合物がコンカナマイシンＡである、請求項
    ２６または２７のいずれかに記載の組成物。
  29. 【請求項２９】 前記付加的な化合物がバフィロマイシンＡ1である、請求
    項２６または２７のいずれかに記載の組成物。
  30. 【請求項３０】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、細胞内
    器官の器官内の酸性化を抑制するのに有効な量である、請求項１９、２０、２２
    、２３、２５、あるいは２７のいずれかに記載の組成物。
  31. 【請求項３１】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、尿の酸
    性化を抑制するのに有効な量である、請求項１９、２０、２２、２５、あるいは
    ２７のいずれかに記載の組成物。
  32. 【請求項３２】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、骨吸収
    を抑制するのに有効な量である、請求項２０、２１、２２、２５、あるいは２７
    のいずれかに記載の組成物。
  33. 【請求項３３】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、骨粗し
    ょう症を治療するのに有効な量である、請求項３２に記載の組成物。
  34. 【請求項３４】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、受精を
    抑制するのに有効な量である、請求項１９、２０、２２、２５、あるいは２７の
    いずれかに記載の組成物。
  35. 【請求項３５】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、腫瘍細
    胞の薬剤耐性の増大を抑制するのに有効な量である、請求項１９、２０、２２、
    ２５、あるいは２７のいずれかに記載の組成物。
  36. 【請求項３６】 前記空胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ抑制有効量が、血管形
    成、細胞の浸潤、あるいは転移を抑制するのに有効な量である、請求項１９、２
    ０、２２、２５、あるいは２７のいずれかに記載の組成物。
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7381744B1 (en) 1999-03-05 2008-06-03 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of treating osteoporosis comprising vacuolar-type (H+)-ATPase-inhibiting compounds
AU8083401A (en) 2000-07-24 2002-02-05 Us Health Biologically active macrolides, compositions, and uses thereof
JP2004506620A (ja) * 2000-08-04 2004-03-04 ボード　オブ　リージェンツ，　ザ　ユニバーシティ　オブ　テキサス　システム 合成サリチリハラミド（ｓａｌｉｃｙｌｉｈａｌａｍｉｄｅ）、アピキュラーレン（ａｐｉｃｕｌａｒｅｎ）およびその誘導体
US6734209B2 (en) 2001-08-03 2004-05-11 Board Of Regents The University Of Texas System Synthetic salicylihalamides, apicularens and derivatives thereof
EP1944307A3 (en) 2000-08-04 2008-07-30 Board of Regents, The University of Texas System Synthetic Salicylihalamides, Apicularens and Derivatives Thereof
GB0102562D0 (en) 2001-02-01 2001-03-21 Unilever Plc Cosmetic products for the reduction of sweat acidity
AU2002349211A1 (en) * 2001-11-29 2003-06-10 John E Davies Resorption-controlled bone implants
US7205334B2 (en) 2002-07-24 2007-04-17 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chondropsin-class antitumor v-atpase inhibitor compounds, compositions and methods of use thereof
US20110038852A1 (en) * 2009-06-10 2011-02-17 3-V Biosciences, Inc. Antivirals that target transporters, carriers, and ion channels
LU91725B1 (en) 2010-09-02 2012-03-05 Ct De Rech Public De La Sante Novel uses of V-ATPASE inhibitors
KR101973906B1 (ko) * 2018-08-22 2019-04-29 성균관대학교산학협력단 V-atp6voc의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는, 식도암 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999005136A1 (en) * 1997-07-25 1999-02-04 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Macrocyclic lactones, compositions, and methods of use

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5324720A (en) * 1992-03-20 1994-06-28 Merck & Co., Inc. Methods of achieving antitumor activity using 16-membered-macrolide-type compounds
US20020042079A1 (en) * 1994-02-01 2002-04-11 Sanford M. Simon Methods and agents for measuring and controlling multidrug resistance
AUPP003197A0 (en) * 1997-09-03 1997-11-20 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. New heterocyclic compounds
US7381744B1 (en) * 1999-03-05 2008-06-03 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of treating osteoporosis comprising vacuolar-type (H+)-ATPase-inhibiting compounds

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999005136A1 (en) * 1997-07-25 1999-02-04 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Macrocyclic lactones, compositions, and methods of use

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN5002003761, ＥＲＩＣＫＳＯＮ Ｌ， ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｏｏｇ． Ｃｈｅｍ．, ６２（２３）, ｐｐ．８１８８−８１９２ （１９９７） *
JPN5002003763, ＫＩＭ， Ｊ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｏｏｇ． Ｃｈｅｍ．, ６４（１）, ｐｐ．１５３−１５５ （１９９９） *
JPN6010032236, ＮＩＳＨＩＨＡＲＡ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ．, Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．, ２１２（１）, ｐｐ．２５５−２６２ （１９９５） *
JPN6010032237, 太田 哲生ら, 癌と化学療法, ２３（１２）, ｐｐ．１６６０−１６６４ （１９９６） *
JPN6010032247, ＯＨＴＡ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ．, １８５, ｐｐ．３２４−３３０ （１９９８） *

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