JP2002537357A - 受容体脱感作に関連する症状を治療するための生産物及び方法 - Google Patents

受容体脱感作に関連する症状を治療するための生産物及び方法

Info

Publication number
JP2002537357A
JP2002537357A JP2000600691A JP2000600691A JP2002537357A JP 2002537357 A JP2002537357 A JP 2002537357A JP 2000600691 A JP2000600691 A JP 2000600691A JP 2000600691 A JP2000600691 A JP 2000600691A JP 2002537357 A JP2002537357 A JP 2002537357A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
receptor
component
compound
ligand binding
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2000600691A
Other languages
English (en)
Inventor
ジェイ． ヴァイレン、バーバラ
シー． キャンビアー、ジョン
Original Assignee
ナショナル ジューイッシュ メディカル アンド リサーチ センター
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ナショナル ジューイッシュ メディカル アンド リサーチ センター filed Critical ナショナル ジューイッシュ メディカル アンド リサーチ センター
Publication of JP2002537357A publication Critical patent/JP2002537357A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A61P5/16—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4 for decreasing, blocking or antagonising the activity of the thyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G01N33/5041—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects involving analysis of members of signalling pathways
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/5052—Cells of the immune system involving B-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Abstract

(57)【要約】 受容体、特にＢ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）、プレＢ細胞受容体（プレＢＣＲ）、プロＢ細胞受容体（プロＢＣＲ）、Ｉｇ Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）、及びＮＫ受容体のマルチサブユニットの免疫認識受容体（ＭＩＰＲ）ファミリーの遠く定のメンバーは、関連トランスデューサから物理的に解離され得る。本発明では、受容体脱感作の目的若しくは受容体の脱感作かその代わりに受容体感作の増強又は延長かが望まれる症状の治療の目的でそのような解離／不安定化を模倣するための調節化合物及び方法について説明する。受容体の感作を増強又は延長する化合物及び方法と、本発明での使用に適した調節化合物の同定方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の属する技術分野） 本発明は、一般的には、受容体を脱感作する方法及び調節化合物に関する。特
に、本発明は、Ｂ細胞受容体、Ｆｃ受容体及びＮＫ受容体を脱感作する方法及び
調節化合物に関する。本発明はさらに、受容体を感作する化合物及び方法にも関
する。
【０００２】 （発明の背景） Ｂ細胞抗原受容体複合体はＩｇ−α及びＩｇ−βヘテロ二量体と共有結合した
膜免疫グロブリンからなる。これらのシグナル伝達サブユニットは、シグナル伝
達に必要な保存されたＩＴＡＭモチーフ（免疫受容体チロシンベース活性化モチ
ーフ）を有している（Ｃａｍｂｉｅｒ，１９９５）。多価抗原を介してＢＣＲが
凝集すると、Ｉｇ−α及びＩｇ−β ＩＴＡＭモチーフのトランスリン酸化及び
受容体会合キナーゼの活性化が開始される（概説については、ＤｅＦｒａｎｃｏ
，１９９７；Ｋｉｍら，１９９３；Ｋｕｒｏｓａｋｉ，１９９７参照）。リン酸
化ＩＴＡＭは、ＰＩ３−Ｋ、ＰＬＣ−γなどの追加エフェクター及びＲａｓ／Ｍ
ＡＰＫ経路のメンバーを補充する。これらのシグナル伝達事象は、Ｂ細胞の増殖
や、Ｂ細胞がその後Ｔｈ細胞との相互反応を開始させるのに必要なＭＨＣクラス
ＩＩ及びＣＤ８６などの活性化マーカーの発現増大の原因となっている。
【０００３】 Ｂ細胞レパートリーは、自己反応性の不在下に最大限の受容体多様性を含むよ
うに細かく調整されている。自己反応性クローンは、アポトーシス又は受容体編
集によるクローンの欠失及びアネルギー（無反応）を含めたプロセスにより脱離
する（Ｇｏｏｄｎｏｗら，１９８８；Ｈａｒｔｌｅｙら，１９９３；Ｈｅｒｔｚ
及びＮｅｍａｚｅｅ，１９９７；Ｎｅｍａｚｅｅ及びＢｕｒｋｉ，１９８９；Ｒ
ａｔｈｍｅｌｌら，１９９６）。後者の場合、自己特異的細胞は存続するが、抗
原には非応答性になる。Ｂ細胞非応答性を引き起こす分子メカニズムが、ＢＣＲ
トランスジェニックマウス及びいくつかの試験管内受容体脱感作モデルで研究さ
れた（Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋら，１９９４；Ｃａｍｂｉｅｒら，１９８８；Ｃａｍ
ｂｉｅｒら，１９９０；Ｅｒｉｋｓｏｎら，１９９１；Ｇａｙら，１９９３；Ｎ
ｅｍａｚｅｅ及びＢｕｒｋｉ、１９８９；Ｏｋａｍｏｔｏら，１９９２；Ｖｉｌ
ｅｎら，１９９７）。ＨＥＬ／抗ＨＥＬ二重トランスジェニックマウスでの研究
は、自己抗原耐性Ｂ細胞が、細胞表面でのＩｇＭの発現低下を示し、もはや抗原
誘導ＣＤ８６発現ができず、かつＦａｓ仲介アポトーシス感受性であることを示
した（Ｇｏｏｄｎｏｗら，１９８９；Ｈｏら，１９９４；Ｒｔｈｍｅｌｌら，１
９９６）。これらのモデルの多くにおいて、受容体の脱感作は、抗原が、抗原結
合受容体を連続発現するにもかかわらず、チロシンリン酸化反応又はＣａ2+動員
の回復を誘導し得ないことを特徴とする。
【０００４】 最近、脱感作Ｂ細胞における受容体近接シグナル伝達事象の破壊が研究された
（Ｃｏｏｋｅら，１９９４；Ｖｉｌｅｎら，１９９７）。これらの研究の結果は
、Ｌｙｎ，Ｂｌｋ及びＳｙｋなどの受容体会合キナーゼの抗原誘導リン酸化及び
活性化の欠如を示している。Ｊｏｈｎｓｏｎらは、二重リン酸化ＩＴＡＭペプチ
ドに暴露することにより受容体会合キナーゼを活性化し得ることを示したが、こ
れは、脱感作受容体がシグナル経路を活性化できないのは、キナーゼ固有の欠陥
によるものではなく、受容体及びそのＬｙｎ結合能のレベルにおける欠陥を示す
ものであったことを示唆している（Ｊｏｈｎｓｏｎら，１９９５）。Ｊｏｈｎｓ
ｏｎらは、受容体の非応答性が、インタクトなｍＩｇ／Ｉｇαβ複合体からのＬ
ｙｎの脱共役によるか、あるいは受容体における過剰なホスホチロシンホスファ
ターゼ活性の結果であるとの仮説を立てている。
【０００５】 この分野で多くの研究が行われたにも拘わらず、これまでの研究者は、本発明
者らが脱感作受容体の非応答性表現型の維持の原因であることを証明した分子事
象を教示又は示唆することができなかった。したがって、本発明以前には、この
分子事象を特異的に標的とする治療化合物は同定されていない。
【０００６】 多種多様な医学的療法で患者の免疫応答の調節が必要である。そのような療法
には、例えば、予防接種や、自己免疫疾患、免疫不全病、免疫増殖性疾患の治療
、ならびに臓器及び皮膚の移植を伴う治療が挙げられる。患者の免疫応答の調節
に用いられる慣用的な試薬及び方法は、望ましくない副作用をもたらすことが多
い。例えば、シクロスポリンＡ、アザチオプリン及びプレドニゾンなどの免疫抑
制試薬は、自己免疫疾患を有する患者又は移植を受ける患者の免疫系の抑制に用
いられている。しかし、そのような試薬は、患者の全免疫応答を阻害し、それに
よって、もとの病気には関与しない感染性物質に対する免疫応答を獲得する患者
の能力を損う。そのような有害な副作用及び免疫調節の医学的重要性のために、
免疫系の特定部分を調節する試薬及び方法が長年にわたり研究主題となっている
。
【０００７】 本発明は、免疫調節試薬を用いてインビボで特定の細胞及び免疫受容体を標的
とすることにより、従来からの問題の克服に用いることができる。 （発明の概要） 本発明は一般に、Ｂ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）、プロＢ細胞受容体（プロＢＣ
Ｒ）、プレＢ細胞受容体（プレＢＣＲ）、免疫グロブリンＦｃ受容体（ＦｃＲ）
及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体から成る群より選択された受容体を脱
感作する方法及び化合物に関する。該方法は、トランスデューサ成分と細胞外リ
ガンド結合成分とを備えた該受容体を化合物と接触させる工程から成り、該化合
物との接触により、（１）２つの化合物が前記調節化合物との接触前に互いに会
合されている場合には、前記トランスデューサ成分から前記細胞外リガンド結合
成分が解離されるか、及び／又は（２）前記トランスデューサ成分と前記細胞外
リガンド結合成分とが前記調節化合物との接触前に互いに解離されている場合に
は、前記細胞外リガンド結合成分の前記トランスデューサ成分との会合が阻害さ
れ、それによって受容体が脱感作される。
【０００８】 本発明は、ＢＣＲ、プロＢＣＲ、プレＢＣＲ、ＦｃＲ、及びＮＫ受容体から成
る群より選択された受容体を感作するか、感作を増強又は延長する方法及び化合
物にも関する。該方法は、細胞外リガンド結合成分とトランスデューサ成分とを
備えた該受容体と化合物を接触させる工程から成り、該化合物は、（１）前記２
つの成分が該化合物による接触前に互いに会合されていない場合には前記細胞外
リガンド結合成分を前記トランスデューサ成分と会合させるか、及び／又は（２
）前記２つの成分が前記化合物による接触前に会合されている場合には前記細胞
外リガンド結合成分が前記トランスデューサ成分と会合する時間を延長又は増強
し、それによって受容体が感作される。
【０００９】 詳細には、本発明の１実施形態は、好ましくは特定の抗原と結合するＢ細胞抗
原受容体を選択的に脱感作することにより、Ｂ細胞抗原受容体を脱感作する方法
に関する。該方法は、Ｂ細胞抗原受容体の脱感作が単独か他の治療と組み合わさ
れて治療効果を与える、任意のＢ細胞関連障害の治療に有効である。該方法は、
研究及び診断検定用並びに推定調節化合物のスクリーニング用にも有効である。
該方法は、調節化合物をｍＩｇ成分とＩｇα及び／又はＩｇβを始めとするトラ
ンスデューサ成分とを有するＢ細胞抗原受容体と接触させる工程から成り、該化
合物との接触により、（１）前記２つの成分が前記調節化合物との接触前に互い
に会合されている場合には、前記トランスデューサ成分から前記ｍＩｇ成分が解
離されるか、又は（２）前記２つの成分が該調節化合物との接触前に互いに解離
されている場合には、前記ｍＩｇ成分の前記トランスデューサ成分との会合が阻
害され、それによってＢ細胞抗原受容体が脱感作される。ｍＩｇ成分はＩｇＤ又
はＩｇＭであり得る。この方法によって治療可能なＡＢ細胞障害には、自己免疫
疾患（例えば慢性関節リウマチや全身性エリテマトーデス）、悪性腫瘍、及び移
植が含まれるが、それらに限定されるわけではない。本発明の方法を用いて治療
するのに特に好適な障害は、自己免疫疾患である。好ましくは化合物は、自己抗
原に特異的に結合するＢ細胞抗原受容体等の特定の抗原特異性を有するＢＣＲを
選択的に標的とする。そのような方法は、正常な若しくは好ましいＢ細胞の機能
をそのまま残し、異常な若しくは望ましくないＢ細胞の機能を阻害する点で有効
である。
【００１０】 本発明の別の実施形態は、ＢＣＲを感作するか、感作を延長／増強する方法に
関する。該方法は、例えば任意の１又は複数の抗原に対するＢ細胞応答を増大さ
せるか誘導するのに有効であり、ワクチン又はアジュバント系に使用可能である
。１実施形態において、該方法は、ｍＩｇ成分とＩｇα及びＩｇβを始めとする
トランスデューサ成分とを備えたＢ細胞抗原受容体と化合物を接触させる工程か
ら成り、該化合物は、（１）該２つの成分が前記化合物による接触前に互いに会
合されていない場合には該ｍＩｇ成分を前記トランスデューサ成分と会合させ、
又は（２）前記２つの成分が前記化合物による接触前に会合されている場合には
前記ｍＩｇ成分が前記トランスデューサ成分と会合する時間を延長又は増強し、
それによって該障害の治療のためにＢ細胞抗原前記受容体の感作を増強する。こ
の方法の１実施形態において、任意の抗原に対するワクチン接種又は細胞抗原応
答の増強を高める抗原又は他の因子等の追加因子をＢ細胞抗原受容体と接触させ
ることが可能である。
【００１１】 本発明の１実施形態は、自己免疫疾患を治療する方法であって、自己反応性ｍ
Ｉｇ成分とＩｇα及びＩｇβを始めとするトランスデューサ成分とを備えたＢ細
胞抗原受容体と化合物を接触させる工程から成り、該化合物との接触により、（
１）前記２つの成分が前記化合物による接触前に会合されている場合にはｍＩｇ
成分をトランスデューサ成分から解離させ、及び／又は（２）前記２つの成分が
前記化合物による接触前に解離されている場合にはｍＩｇ成分がトランスデュー
サ成分と会合するのを阻害し、それによって自己免疫疾患の治療用にＢ細胞抗原
受容体が脱感作される方法に関する。
【００１２】 本発明の別の実施形態は、Ｉｇ Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を脱感作する方法に関
する。該方法は、ＦｃＲ（特に特異的ＦｃＲ）の脱感作、が単独か他の治療と組
み合わされて治療効果を与える、任意の障害の治療に有効である。該方法は、研
究及び診断検定用並びに推定調節化合物のスクリーニング用にも有効である。そ
のような障害には、アレルギー障害や、抗体依存性細胞媒介細胞毒、炎症媒介物
の放出及び抗体産生の調節等の炎症反応に関する障害が含まれるが、それらに限
定されるわけではない。より詳細には、そのような障害には、血小板減少性紫斑
病、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、ＩＩ型及びＩＩＩ型過敏症反
応、及びアレルギーの炎症が含まれるが、それらに限定されるわけではない。該
方法は、化合物をα受容体成分とトランスデューサ成分とを備えたＦｃ受容体と
接触させる工程から成り、該化合物との接触によって（１）該２つの成分が前記
化合物による接触前に会合されている場合にはα受容体成分をトランスデューサ
成分から解離させるか、及び／又は（２）該２つの成分が前記化合物による接触
前に解離されている場合にはα受容体成分のトランスデューサ成分との会合を阻
害し、それによってＦｃ受容体が脱感作される。
【００１３】 本発明の別の実施形態は、アレルギー障害を治療する方法であって、化合物を
α受容体成分とトランスデューサβ／γ成分とを備えたＦｃεＲＩ受容体と接触
させる工程から成り、該化合物との接触により（１）該２つの成分が前記化合物
による接触前に会合されている場合にはα受容体成分をトランスデューサ成分か
ら解離させ、及び／又は（２）該２つの成分が前記化合物による接触前に解離さ
れている場合にはα受容体成分のトランスデューサ成分との会合を阻害し、それ
によってアレルギー障害の治療用にＦｃεＲＩ受容体が脱感作される方法に関す
る。
【００１４】 本発明の別の実施形態は、受容体の脱感作に有効な化合物を同定する方法であ
って、（１）Ｂ細胞抗原受容体、プロＢ細胞受容体、プレＢ細胞受容体又はＦｃ
受容体から選択され、細胞外リガンド結合成分と少なくとも１つのトランスデュ
ーサ成分とを備え、細胞外リガンド結合成分がトランスデューサ成分と会合して
いる受容体を含む検定系を設ける工程と、（２）該受容体を、評価する化合物と
接触させる工程と、（３）該化合物が、該受容体と接触させた場合に、トランス
デューサ成分から細胞外リガンド結合成分を解離させることができるかどうかを
決定する工程とから成る方法に関する。Ｂ細胞抗原受容体の場合、細胞外リガン
ド結合成分はｍＩｇであり、トランスデューサ成分はＩｇα及びＩｇβである。
ＦｃＲ受容体の場合、細胞外リガンド結合受容体は一般にα受容体鎖であり、ト
ランスデューサ成分は当該技術分野において周知なように、特異的ＦｃＲによっ
て変わる。ＦｃεＲＩの場合、トランスデューサ成分はβ及びγ鎖である。
【００１５】 本発明のさらに別の実施形態は、受容体の脱感作に有効な化合物を同定する方
法であって、（１）受容体が細胞外リガンド結合成分と少なくとも１つのトラン
スデューサ成分とを備え、細胞外リガンド結合成分がトランスデューサ成分と会
合していない、Ｂ細胞抗原受容体又はＦｃ受容体から選択された受容体を含む検
定系を設ける工程と、（２）受容体を、評価する化合物と接触させる工程と、（
３）該化合物が、該受容体と接触させた場合に、細胞外リガンド結合成分がトラ
ンスデューサ成分と会合するのを阻害できるかどうかを決定する工程とから成る
方法に関する。
【００１６】 上記の方法は、細胞に基づく検定及び細胞に基づかない検定のいずれも含み得
る。上記方法によって同定された化合物は、自己免疫疾患及びアレルギー障害を
含めた様々なＢ細胞及びＦｃＲ関連障害の治療に有効である該方法に有効な／受
容体及び化合物の脱感作／感作は、インビボ（in vivo 、生体内）、インビトロ
（in vitro、試験管内）、及び／又はエキソビボ（ex vivo 、生体外）で行われ
る／使用される。また、本発明により同定された調節化合物を含めた上述の調節
化合物は、治療組成物や本発明の治療方法又は脱感作方法に使用することが可能
である。
【００１７】 本発明のさらに別の実施形態は、Ｂ細胞関連障害及びＦｃＲ関連障害から成る
群より選択された症状を治療するのに有効な化合物に関する。該化合物は、（１
）前記２つの成分が該化合物による接触前に会合されている場合にはＢ細胞抗原
受容体又はＦｃ受容体において細胞外リガンド結合成分をトランスデューサ成分
から解離させ、及び／又は（２）前記２つの成分が前記化合物による接触前に互
いに会合されていない場合には細胞外リガンド結合成分がトランスデューサ成分
と会合するのを阻害し、それによって受容体を脱感作するという能力によって特
徴づけられる。好ましい実施形態において、該化合物は、抗体、ペプチド、又は
それらのミメトープから選択される。１実施形態において、該化合物は抗体であ
る。該抗体は一価抗体、二価抗体、又は二種特異的抗体であり得る。
【００１８】 本発明の別の実施形態は、ＢＣＲに選択的に結合する単離抗体であって、該単
離抗体がＩｇα及びＩｇβ成分と会合されたｍＩｇを有するそのようなＢＣＲに
結合すると、ｍＩｇ成分をＩｇα及びＩｇβ成分から解離させることができ、そ
れによってＢＣＲを脱感作する単離抗体に関する。１実施形態において、ＢＣＲ
はＢ細胞によって発現される。該抗体は、Ｂ細胞抗原受容体を脱感作させるため
の本発明の方法に使用することが可能である。
【００１９】 本発明の別の実施形態は、ＦｃＲに選択的に結合する単離抗体であって、該単
離抗体が少なくとも１つのトランスデューサ成分と会合されたα受容体成分を有
するそのようなＦｃＲに結合すると、α受容体成分を該トランスデューサ成分か
ら解離させることができ、それによってＦｃＲを脱感作する単離抗体に関する。
１実施形態において、ＦｃＲはＦｃεＲＩであり、トランスデューサ成分はβ及
びγ鎖である。別の実施形態において、ＦｃεＲＩはマスト細胞、好塩基球、又
は好酸球により発現される。該抗体は、Ｆｃ受容体を脱感作させるための本発明
の方法に使用することが可能である。
【００２０】 本明細書に引用したすべての特許及び刊行物は、その全体が参照により組み込
まれる。 （発明の詳細な説明） Ｂ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）連結反応は、ＢＣＲが抗原との結合にはコンピテ
ントなままであるがシグナルの伝達はできない受容体脱感作を引き起こす。脱感
作ＢＣＲは、受容体複合体を介したシグナル伝達不能に密接に結びつく、シグナ
ル伝達の最も基端レベルでの欠陥を示す。本発明者らは、抗原刺激が、Ｉｇ−α
／Ｉｇ−βをｍＩｇと共同免疫沈降できないことによりもたらされるＢＣＲの解
離又は不安定化を引き起こすことを発見した。この不安定化は、一時的に脱感作
と相関し、ｍＩｇＭ及びｍＩｇＤを含むＢＣＲにて発生する。ＢＣＲ不安定化の
誘導には、チロシンキナーゼの活性化を必要とするが、これは、ホスファターゼ
インヒビターによっては誘導されない。ＢＣＲの不安定化は細胞表面で起こり、
「解離した」Ｉｇ−α／Ｉｇ−β複合体は抗ＩＧ−β刺激に対して応答性のまま
であり、これは、ｍＩｇトランスデューサの脱共役が受容体の脱感作を仲介する
ことを示している。より特定的に言えば、本発明者らは、中程度から低程度に親
和性抗原が結合すると、ＢＣＲのＩｇ−α／Ｉｇ−βサブユニットは不安定にな
るか、又は物理的にｍＩｇから脱共役することを証明した。この事象は、ＢＣＲ
シグナル伝達カスケードの特異的活性化を必要とする。最も興味深いことに、脱
感作受容体は受容体連結反応には応答しないが、Ｉｇ−α／Ｉｇ−β複合体は凝
集してもシグナル伝達機能を維持しており、これは、トランスデューサのｍＩｇ
からの解離が非応答性状態を仲介することを示している。
【００２１】 本発明は、一般的には、受容体の多サブユニット免疫認識受容体（ＭＩＲＲ）
ファミリーの特定のメンバー、特に、Ｂ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）、プレＢ細胞
受容体（プレＢＣＲ）、プロＢ細胞受容体（プロＢＣＲ）、ＩｇＦｃ受容体（Ｆ
ｃＲ）、及びＮＫ受容体が、物理的にそれらの会合トランスデューサから脱共役
し得るという発見に関する。本発明の１つの実施形態は、Ｂ細胞抗原受容体、プ
ロＢ細胞受容体、プレＢ細胞受容体及びＩｇＦｃ受容体からなる群から選択され
る受容体を脱感作する方法に関する。本発明の別の実施形態は、Ｂ細胞抗原受容
体、プロＢ細胞受容体、プレＢ細胞受容体、ＩｇＦｃ受容体及びＮＫ受容体から
なる群から選択される受容体を脱感作する方法に関する。この方法は、トランス
デューサ成分と細胞外リガンド結合成分とを有するそのような受容体を調節化合
物と接触させる工程を含む。調節化合物は：（１）この化合物と接触する前には
互いに会合している細胞外リガンド結合成分とトランスデューサ成分とを解離さ
せるか、又は（２）調節化合物と接触する前には互いから解離している細胞外リ
ガンド結合成分とトランスデューサ成分との会合を阻害する。
【００２２】 Ｂ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）の場合、本発明者らは、受容体の脱感作がＩｇ−
α／Ｉｇ−βのｍＩｇからの脱共役を結果として伴うことを発見した。本発明者
らは、本明細書で、ＢＣＲトランスデューサ（Ｉｇ−α／β）の抗原結合受容体
（ｍＩｇ重鎖及び軽鎖）からの脱共役が抗原刺激後にＢ細胞により呈示される脱
感作表現型の原因であるという証拠を提供する。ＢＣＲに関する本発明者らの発
見から、ＦｃＲ、特にＦｃεＲＩが、マスト細胞のこの受容体を脱感作すると、
トランスデューサ成分（例えば、ＦｃεＲＩに関してはβ／γサブユニット）の
受容体からの脱共役を示すという付加的結論が導かれた。この発見は、これらの
受容体を介したシグナル伝達に干渉しかつシグナル伝達を防止し得るという点で
治療上大きな可能性を有している。マスト細胞の脱顆粒の場合、この脱感作メカ
ニズムは、例えば、アレルギー疾患の治療のために操作することができる。ＢＣ
Ｒの場合、そのようなメカニズムは、例えば、自己免疫疾患の治療のために操作
し得る。さらに、本発明の方法を用いると、ＫＩＲＤＬと称されるナチュラルキ
ラー（ＮＫ）細胞受容体の細胞外リガンド結合成分は、ＫＩＲＤＬと、ＤＡＰ１
２と称されるそのトランスデューサとの会合に変化をもたらすことにより脱感作
し得る。
【００２３】 本発明によれば、トランスデューサ、又はトランスデューサ成分は、受容体の
成分（すなわち、部分、構成物質、因子）であって、通常、受容体の１つ以上の
鎖であり、受容体がそのリガンドを介して連結されると、シグナルを受容体から
細胞内の他のシグナル伝達分子へ伝達する。より具体的に言えば、トランスデュ
ーサ成分は、細胞外リガンド結合成分と会合することにより、受容体の細胞外リ
ガンド結合成分を、細胞外リガンド成分がリガンド又は同等刺激物質を介して結
合するときに細胞内シグナル伝達手段を提供する細胞質ゾル酵素と間接的に結合
させる。プロＢ、プレＢ、未熟及び成熟Ｂ細胞を含めたＢ細胞において、トラン
スデューサ成分は、通常、二量体を構成するＩｇα及びＩｇβ鎖である。Ｆｃ受
容体の場合、トランスデューサ成分は、通常、受容体のα鎖と会合している１つ
以上の鎖であり、これらの鎖は、細胞外リガンド結合成分がそのリガンド又は同
等刺激物質を介して結合するときに細胞内シグナル伝達手段を提供する細胞質ゾ
ル酵素と会合するのに十分である。例えば、ＦｃεＲＩのトランスデューサ成分
は、β鎖と、γ鎖二量体とを含む。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩ
ｃ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃαＲは、通常、γ鎖二量体トランスデューサ成分を
有する。ＮＫ細胞のトランスデューサ成分はＤＡＰ１２である。本明細書に用い
る場合、トランスデューサ成分は、本明細書に記載されているように細胞外リガ
ンド結合成分と相互作用し、かつ適切な刺激を受けるたときに受容体からのシグ
ナルを変換するのに十分な天然トランスデューサ成分又はその任意の部分を含み
得る。
【００２４】 本発明によれば、細胞外リガンド結合成分は、受容体の成分（すなわち、部分
、構成物質、因子）であって、通常、受容体の１つ以上の鎖であり、少なくとも
その１部分は細胞表面から伸びており（すなわち、細胞外にあり）、かつ受容体
のリガンド結合部分である。また、細胞外リガンド結合成分は、膜貫通と細胞質
部分とを有し得る。通常、細胞外リガンド結合成分は、受容体による細胞内シグ
ナル伝達に関与する受容体成分ではない。例を挙げると、未熟Ｂ細胞の細胞外リ
ガンド結合成分は、Ｂ細胞抗原受容体の抗原結合部分を含むｍＩｇＭであり、刺
激を受けたことのない成熟Ｂ細胞上の受容体の細胞外リガンド結合成分は、ｍＩ
ｇＭとｍＩｇＤとを含む。Ｆｃ受容体の場合、細胞外リガンド結合成分は、通常
、受容体のα鎖であり、受容体の免疫グロブリンＦｃ領域結合部分である。ＮＫ
受容体の場合、細胞外リガンド結合成分はＫＩＲＤＬと称されている。本明細書
に用いる場合、細胞外リガンド成分は、本明細書に記載されているようにトラン
スデューサ成分と相互作用しかつ／又は受容体のリガンド又は同等刺激物質に結
合するに十分な天然細胞外リガンド結合成分又はその任意の部分を含み得る。
【００２５】 上述のように、本発明の方法に適した標的であるＢ細胞受容体には、（例えば
、未熟又は成熟Ｂ細胞上の）Ｂ細胞抗原受容体、プロＢ細胞受容体、及びプレＢ
細胞受容体が含まれる。プロＢ細胞は、免疫グロブリン遺伝子の転位が始まる前
のＢ細胞の分化中に出現し、Ｉｇα−Ｉｇβトランスデューサ成分と会合し得る
細胞外成分（例えば、カルネキシン）を含めたＢ細胞特有の表面マーカーによっ
て識別される。後期プロＢ細胞発生において、ＶHセグメントはＤＪHセグメント
（以下に詳細に説明する）と結合状態になって、低レベルの表面μ重鎖と高レベ
ルの細胞質μ重鎖レベルとを発現するプレＢ細胞を産生する。未熟Ｂ細胞は、表
面ＩｇＭ分子（すなわち、ｍＩｇＭ）として軽鎖とμ重鎖とを発現する。最後に
、刺激を受けたことのない成熟Ｂ細胞は、ｍＩｇＭもｍＩｇＤも発現する。一般
に、本明細書で細胞外リガンド結合成分と称されているこれらの膜貫通Ｂ細胞受
容体成分の細胞質テールは、わずか数個のアミノ酸からなり、短すぎて細胞内シ
グナル伝達に要求されるタンパク質と相互作用することができない。その代わり
に、シグナル伝達は、細胞外リガンド結合成分と会合している他の２つの鎖に依
存する。これらのトランスデューサ成分はＩｇα及びＩｇβと称されている。こ
れらのトランスデューサ成分は、受容体の細胞外リガンド結合成分を、Ｂ細胞が
抗原と接触したときに細胞内シグナル伝達手段を提供する細胞質酵素と結合させ
る。
【００２６】 本発明によれば、「Ｂ細胞」又は「Ｂリンパ球」とは、脾臓Ｂ細胞、リンパ節
Ｂ細胞、骨髄腫細胞、末梢血Ｂ細胞、骨髄Ｂ細胞及びハイブリドーマ細胞を含む
。ハイブリドーマ細胞とは、例えば、免疫グロブリン分子を産生し得る脾臓細胞
と融合させた骨髄腫細胞（組織培養では維持し得るが、免疫グロブリンを産生し
ない腫瘍細胞）を含むハイブリッド細胞系を表す。「Ｂ細胞抗原受容体」又は「
ＢＣＲ」とは、Ｂ細胞抗原受容体を表すものとし、この受容体には、膜免疫グロ
ブリン（ｍＩｇ）抗原結合成分（すなわち、細胞外リガンド結合成分）、又はそ
の生物学的に活性な部分（すなわち、リガンドと結合可能でありかつ／又はトラ
ンスデューサ成分と会合し得る部分）、ならびにトランスデューサＩｇ−α及び
Ｉｇ−β成分、又はその生物学的に活性な部分（すなわち、細胞内シグナルを変
換し得るかかつ／又は細胞外リガンド結合部分と会合し得る部分）が含まれる。
【００２７】 本発明によれば、Ｆｃ受容体には、γ免疫グロブリン（ＩｇＧ）に結合するＦ
ｃγ受容体（ＦｃγＲ）、ε免疫グロブリン（ＩｇＥ）に結合するＦｃε受容体
（ＲｃεＲ）、α免疫グロブリン（ＩｇＡ）に結合するＦｃα受容体（ＦｃαＲ
）が含まれる。ＦｃγＲには、ＩｇＧ高親和性受容体であるＦｃγＲＩ、免疫複
合体集塊に結合する低親和性受容体であるＦｃγＲＩＩ、及び免疫複合体に結合
する低親和性受容体であるＦｃγＲＩＩＩが含まれる。
【００２８】 本発明によれば、ＮＫ受容体には、細胞外リガンド結合成分、ＫＩＲＤＬ、及
びトランスデューサ成分、ＤＡＰ１２が含まれる。 本発明によれば、「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」とは、免疫グロブリンのＦｃ
受容体に特異的に結合する高度に関連した受容体ファミリーの１以上のメンバー
を表す。本明細書において、ＦｃＲは、免疫グロブリンＦｃ受容体又はＩｇＦｃ
受容体（ＩｇＦｃＲ）とも称される。これらの受容体は、感染に対する正常な免
疫及び耐性において重要な役割を有しており、細胞エファクターアームを有する
体液免疫系を提供する。受容体は、各免疫グロブリンクラスに関して定義されて
おり、したがって、受容体が結合するＩｇクラスに従って定義される〔すなわち
、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）はγ免疫グロブリン（ＩｇＧ）と結合し、Ｆｃε受
容体（ＦｃεＲ）はε免疫グロブリン（ＩｇＥ）と結合し、Ｆｃα受容体（Ｆｃ
αＲ）はα免疫グロブリン（ＩｇＡ）と結合する〕。ＦｃγＲ受容体の中では、
３つのサブファミリーメンバー：ＩｇＧ高親和性受容体であるＦｃγＲＩ；免疫
複合体集塊に強力に結合するＩｇＧ低親和性受容体であるＦｃγＲＩＩ；及び免
疫複合体に結合する低親和性受容体であるＦｃγＲＩＩＩが明らかにされている
。これらの受容体は構造的には高度に関連しているが、異なる機能を果たす。
【００２９】 ＦｃγＲは殆どの造血細胞上で発現され、ＩｇＧの結合を介して、免疫系の恒
常性及び感染に対する宿主の保護に重要な役割を果たす。ＦｃγＲＩＩは、実質
的にＩｇＧ免疫複合体にのみ結合するＩｇＧ低親和性受容体であり、例えば、単
球、マクロファージ、好中球、好酸球、血小板及びＢリンパ球を含めた多様な細
胞型上で発現される。ＦｃγＲＩＩは、抗体依存性細胞仲介細胞毒性、免疫複合
体のクリアランス、炎症メディエータの放出及び抗体産生の調節を含めた種々の
免疫及び炎症応答に関与する。ＩｇＧがＦｃγＲと結合すると、ＦｃγＲによる
調節を含む疾患徴候を引き起こし得る。例えば、自己免疫疾患血小板減少性紫斑
病は、ＦｃγＲ＋食細胞による血小板のＦｃγＲ依存性ＩｇＧ免疫複合体の活性
化又はそれらの破壊に起因する組織（血小板）損傷を結果として伴う。さらに、
種々の炎症性疾患は、ＩＩ型及びＩＩＩ型過敏症反応を含めたＩｇＧ免疫複合体
（例えば、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス）を含むことが知られて
いる。ＩＩ型及びＩＩＩ型過敏症反応は、ＩｇＧによって仲介され、補体仲介性
又は食細胞性エフェクターメカニズムを活性化し、組織損傷を引き起こし得る。
【００３０】 ＦｃεＲは、マスト細胞、好塩基球及び好酸球上で発現され、ＩｇＥの結合を
介して、主として、マスト細胞の脱顆粒反応時の炎症メディエータ（例えば、ヒ
スタミン及びセロトニン）の放出による炎症性免疫応答を開始させる。これらの
メディエータの放出は、局在血管透過性及び多形核細胞の局所組織への流入を含
めた局所組織における体液増大を引き起こす。したがって、ＩｇＥがＦｃεＲＩ
と結合すると、腸からの体液の分泌及び粘液分泌の増大及び気管支収縮を含む疾
患徴候を引き起こし得、そのような徴候は、通常、アレルギー性炎症を伴う疾患
に関連する。
【００３１】 ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、前以て免疫感作又は活性化する必要無くイ
ンビトロである種のリンパ球様腫瘍細胞系を殺すそれらの能力によって識別され
る。インビボでは、ＮＫ細胞は、広範な病原からの初期保護を提供することによ
り先天免疫においてある役割を果たす。そのようなメカニズムは、適応免疫応答
が発生している間に感染をその初期段階で抑えることができる。
【００３２】 本発明によれば、「受容体脱感作」とは、受容体の「非応答性」状態、言いか
えれば、受容体が、リガンドとの結合にはコンピテントなままであるが、シグナ
ル伝達はできないか、又は伝達能力が低下している状態を表す。本発明者らは、
脱感作受容体は、細胞内シグナルの伝達により受容体連結反応に応答することは
できないとはいえ、そのトランスデューサ成分は、例え凝集しても、シグナル伝
達機能を保持することを発見したが、これは、トランスデューサの細胞外リガン
ド結合成分からの解離が非応答状態を仲介することを示している。受容体の脱感
作は、例えば、受容体を発現する細胞では、リガンド結合受容体を連続発現する
にも拘わらず、リガンドがチロシンリン酸化反応又はＣａ2+動員の回復を誘導し
得ないことを特徴とする。より特定的に言えば、受容体の脱感作は、本発明にし
たがって、受容体の細胞外リガンド結合成分を受容体のトランスデューサ成分か
ら物理的に脱共役、解離又は不安定化することにより生じる。
【００３３】 本発明の方法にしたがって、受容体を調節化合物と接触させる。本明細書に用
いる場合、調節化合物は、本発明の受容体と接触させると、（１）細胞外リガン
ド結合成分とトランスデューサ成分とが互いに会合しているときには（すなわち
、化合物との接触前には）両成分を解離させるか、又は（２）細胞外リガンド結
合成分とトランスデューサ成分とが互いから解離しているときには（すなわち、
化合物との接触前には）両成分の会合を阻害する、任意の化合物であってよい。
調節化合物は、これらの受容体のトランスデューサの脱共役を誘導することによ
って脱感作状態を模倣する化合物である。したがって、本発明の受容体を脱感作
するための調節化合物は、受容体と接触したときに受容体を刺激しないか、又は
、例えば、天然リガンドもしくはその相当刺激物質に比べて、刺激能力が実質的
に低いのが好ましい。そのような化合物は本発明の受容体脱感作法に有用である
。本発明者らは、受容体がそのトランスデューサ成分から脱共役するのは、ＢＣ
Ｒ中のμ（すなわち、ｍＩｇ）などの細胞外リガンド結合成分のＴＭ（膜貫通）
ドメインのセリン／トレオニン／チロシン残基のリン酸化を含むメカニズムによ
ると考えるが、この仮説には拘束されない。ＢＣＲでは、このリン酸化仲介メカ
ニズムは、脱共役／解離の速度及びＢＣＲ不安定化におけるキナーゼ活性化要件
によって支持される。これは、μＴＭがその脂質二重層における位置によってキ
ナーゼから遮蔽されると仮定すると、いくらか反直感的に見えるかもしれない。
しかし、「ＴＭ」残基対「細胞質」残基の定義はタンパク質アルゴリズムをベー
スとしており、かつ、Ｋｙｌｅ／Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅがこれを埋設された脂質と
定義しているが、本発明者らは、これらの残基はある種の条件下には（抗原結合
下には）細胞質であり得ると考える。本発明者らは、この領域は、抗原結合後に
のみ、キナーゼがアクセス可能であると考える。というのは、（１）先ず、受容
体は抗原結合前には共役しており、かつ（２）抗Ｉｇ−β、抗Ｉｇ−α、もしく
は過バナジン酸塩ではなく、抗原又は抗イディオタイプのみが解離を誘導し得る
からである。これは、標的残基を細胞質に位置するキナーゼにアクセス可能にさ
せる抗原誘導コンホメーションの変化を示唆している。さらに、本発明者らは、
ＢＣＲの細胞外部分の一部が抗原結合前にはＩｇ−α又はＩｇ−β鎖と会合して
おり、そのような領域は抗原結合後には移動してリン酸化にアクセス可能になる
と考えるが、この仮説には拘束されない。Ｆｃ受容体にも、同等なシナリオが適
用される。
【００３４】 したがって、本発明の１つの実施形態において、本発明に有用な調節化合物は
、抗原結合部位又は抗原／リガンド結合前には細胞外にある部位を含み、受容体
のトランスデューサ成分に会合しているかかつ／又は抗原／リガンド結合後に細
胞質領域でリン酸化される受容体上の部位に結合するのが好ましい。適当な部位
としては、トランスデューサ成分又は細胞外リガンド結合成分上の部位がある。
部位はトランスデューサ成分上にあるものが好ましい。部位が細胞外リガンド結
合成分上にある場合、細胞外リガンド結合部位の膜形態に固有の部位を標的とす
るか、又は低レベルの循環性（可溶性）受容体を有する受容体中のこの成分を標
的とするのが好ましい。代替標的部位には、受容体成分の会合に関与するかかつ
／又は抗原／リガンド結合時にリン酸化される膜貫通及び／又は細胞質部位が含
まれる。そのような膜貫通又は細胞質部位は、当業では公知の輸送担体を用いて
利用可能にされ、リポソーム及びウイルス輸送系を包含する。本発明の方法が受
容体の脱感作を目的とする場合、その標的部位は、成分解離前の受容体を介した
シグナルの誘導を最小限にするために、抗原／リガンド結合部位以外の部位であ
るのが好ましいが、抗原結合部位は標的部位として除外されない。本発明の方法
が受容体の感作を目的とする場合、その標的部位は、受容体を介したシグナルの
誘導を最適化、強化かつ／又は延長するために、抗原／リガンド結合部位を含む
のが好ましい。
【００３５】 好ましい実施形態において、調節化合物は、細胞外リガンド結合成分とトラン
スデューサ成分とが互いから解離しているときに両成分の会合を防止又は阻害す
る部位に結合する。１つの実施形態において、調節化合物は、受容体がその天然
リガンドを介して結合するとき細胞外リガンド結合成分の一部と接触するトラン
スデューサ成分の部分に選択的に結合する。したがって、調節化合物は、トラン
スデューサ成分と細胞外リガンド結合成分との接触を防止又は阻害する。別の実
施形態において、調節化合物は、受容体がその天然リガンドを介して結合すると
きにリン酸化される細胞外リガンド結合成分の一部と接触するトランスデューサ
成分の部分に選択的に結合する。したがって、調節化合物は、細胞外リガンド結
合成分のリン酸化を防止又は阻害する。１つの実施形態において、受容体がＢ細
胞抗原受容体の場合、調節化合物は、Ｉｇα−Ｉｇβ二量体とｍＩｇとの会合を
防止又は阻害するこの二量体の１部分に結合する。
【００３６】 上記説明は、受容体の感作を延長又は強化する化合物に関して、主として受容
体を脱感作するための化合物に関連しており、標的結合部位は類似であっても同
一であってもよいが、これらの化合物は、受容体成分の解離を防止又は阻害し、
受容体成分を会合させ、かつ／又は刺激後に受容体成分が受容体リガンドなどを
介して会合している時間を延長し得ることに基づいて選択されることに留意され
たい。
【００３７】 本明細書に言及されている調節化合物は、例えば、合理的なドラッグデザイン
の産物である化合物、天然産物、及び部分的に定義されているシグナル伝達調節
特性を有する化合物である。推定化合物は、タンパク質基化合物、炭水化物基化
合物、脂質基化合物、核酸基化合物、天然有機化合物、化学合成有機化合物、抗
イディオタイプ抗体及び／もしくは触媒抗体、又はそれらのフラグメントであっ
てよい。１つの実施形態において、本発明に用いるのに適した調節化合物は、抗
体（すなわち、免疫グロブリン）、ペプチド、又はそれらのミメトープを包含し
得る。１つの実施形態において、調節化合物は抗体である。
【００３８】 天然免疫グロブリン分子は、免疫グロブリンドメインを含む血漿タンパク質で
ある。免疫グロブリン分子は２種のタイプの鎖を含んでいる。１方のタイプの鎖
は重鎖又はＨ鎖と称され、他方は軽鎖又はＬ鎖と称される。これら２種の鎖は等
モル比で存在し、各免疫グロブリン分子は、少なくとも２つのＨ鎖と少なくとも
２つのＬ鎖を有している。２つのＨ鎖はジスルフィド結合によって互いに連結さ
れ、各Ｈ鎖はジスルフィド結合によってＬ鎖に連結されている。Ｌ鎖には、ラム
ダ（λ）鎖及びカッパ（κ）鎖と称される２種のタイプの鎖しか存在しない。そ
れに対し、Ｈ鎖には、アイソタイプと称される５種の主要クラスが存在する。こ
れら５種のクラスは、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ又はμ）、免疫グロブリンＤ（
ＩｇＤ又はδ）、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ又はλ）、免疫グロブリンＡ（Ｉｇ
Ａ又はα）、及び免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ又はε）を含む。そのようなアイソ
タイプ間の顕著な特徴は、免疫グロブリンの定常ドメインによって定義されるが
、これは以下に詳細に説明されている。ヒト免疫グロブリン分子は、９種のアイ
ソタイプ、ＩｇＭと、ＩｇＤと、ＩｇＥと、ＩｇＧ１（γ１）、ＩｇＧ２（γ２
）、ＩｇＧ３（γ３）及びＩｇＧ４（γ４）を含めた４種のＩｇＧサブクラスと
、ＩｇＡ１（α１）及びＩｇＡ２（α２）を含めた２種のＩｇＡサブクラスとを
含んでいる。
【００３９】 免疫グロブリン分子の各Ｈ鎖又はＬ鎖は、Ｌ鎖可変領域（ＶL領域）及びＬ鎖
Ｃ領域（ＣL）と、Ｈ鎖Ｖ領域（ＶH領域）及びＨ鎖Ｃ領域（ＣL領域）と称され
る２種のドメインを含んでいる。完全ＣH領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメ
インとヒンジ領域とを有する。１つのＨ鎖と１つのＬ鎖が一緒になって、免疫グ
ロブリンＶ領域を有する免疫グロブリン分子のアームを構成している。完全免疫
グロブリン分子は、各アームのＨ鎖Ｃ領域を介してジスルフィド結合している２
つのアームを有している。したがって、免疫グロブリン分子の各アームは、ＶH+ L 領域とＣH+L領域と称される２つのドメインを含んでいる。本明細書に用いる場
合、用語「可変領域」又は「Ｖ領域」とは、ＶH+L領域、ＶL領域又はＶH領域を
表す。また、本明細書に用いる場合、用語「定常領域」又は「Ｃ領域」とは、ＣH+L 領域、ＣL領域又はＣH領域を表す。
【００４０】 免疫グロブリンをプロテアーゼで制限消化すると、２つのフラグメントが生成
する。抗原結合プロテアーゼフラグメントはＦａｂ又はＦ（ａｂ′）2フラグメ
ントと称される。抗原結合能を欠くプロテアーゼフラグメントはＦｃフラグメン
トと称される。Ｆａｂフラグメントは、ＶH領域及びＣH領域の一部（ＣＨ１ドメ
イン）と対になったＬ鎖（ＶL領域＋ＣL領域）を含む１本の免疫グロブリン分子
アームを含んでいる。Ｆ（ａｂ′）2フラグメントは、免疫グロブリン分子の２
本のジスルフィド結合アームに対応し、各アームは、ＶH領域及びＣＨ１ドメイ
ンと対になったＬ鎖（ＶL領域＋ＣL領域）を含んでいる。
【００４１】 ＣH領域は、免疫グロブリンのアイソタイプを規定し、アイソタイプに応じて
異なる機能特性を付与する。例えば、μＣ領域は、ＩｇＭ分子の五量体集塊の生
成を可能にし、αＣ領域は二量体の生成を可能にする。
【００４２】 免疫グロブリン分子の抗原特異性は、可変領域すなわちＶ領域のアミノ酸配列
によって付与される。したがって、種々の免疫グロブリン分子からなるＶ領域は
それらの抗原特異性に応じて有意に異なり得る。Ｖ領域の特定の部分は不変であ
り、枠組み構造領域（ＦＷ領域）と称される。それに対し、Ｖ領域の特定の部分
は、極めて可変であり、超可変領域と称される。免疫グロブリン分子中でＶLド
メインとＶHドメインとが対になると、各ドメインの超可変領域は会合して、抗
原結合部位を構成する超可変ループを創出する。したがって、超可変ループが、
免疫グロブリンの特異性を決定し、それらの表面が抗原と相補的であるために、
相補性決定部位（ＣＤＲ）と称される。
【００４３】 Ｖ領域のさらなる可変性は、免疫グロブリンのＶ領域をコードする遺伝子セグ
メントの組合せ可変性によって付与される。免疫グロブリン遺伝子は、体細胞を
転位して免疫グロブリン分子をコードする転位免疫グロブリン遺伝子を形成する
複生殖系列遺伝子セグメントを含んでいる。ＶL領域はＬ鎖のＶ遺伝子セグメン
ト及びＪ遺伝子セグメント（結合セグメント）によってコードされる。ＶＨ領域
は、Ｈ鎖Ｖ遺伝子セグメント、Ｄ遺伝子セグメント（多様セグメント）及びＪ遺
伝子セグメント（結合セグメント）によってコードされる。
【００４４】 Ｌ鎖及びＨ鎖のＶ遺伝子セグメントはどちらも３つの実質的に可変性のアミノ
酸配列領域を含んでいる。そのような可変領域は、それぞれ、Ｌ鎖ＣＤＲ１、Ｃ
ＤＲ２及びＣＤＲ３、ならびにＨ鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称される
。Ｌ鎖ＣＤＲ１の長さは、異なるＶL領域間で大きく異なり得る。例えば、ＣＤ
Ｒ１の長さは、約７〜約１７アミノ酸だけ異なり得る。それに対し、Ｌ鎖ＣＤＲ
２及びＣＤＲ３の長さは、通常、異なるＶL領域間で変わらない。Ｈ鎖ＣＤＲ３
の長さは、異なるＶH領域間で大きく異なり得る。例えば、ＣＤＲ３の長さは約
１〜約２０アミノ酸異なり得る。それに対し、Ｈ鎖ＣＤＲ１及びＣＤＲ２の長さ
は、通常、異なるＶH領域間で変わらない。各Ｈ鎖及びＬ鎖ＣＤＲ領域はＦＷ領
域に隣接している。
【００４５】 本発明の目標側面において重要な免疫グロブリン分子の別の部分はスペーサー
又は膜貫通全長領域である。 免疫グロブリン分子の他の機能側面には、免疫グロブリン分子の結合価、免疫
グロブリン分子の親和性、及び免疫グロブリン分子の結合活性が含まれる。本明
細書に用いる場合、親和性とは、免疫グロブリン分子がその特定の部位（すなわ
ち、一価抗原に結合する一価Ｆａｂフラグメント）で抗原に結合する強さを表す
。親和性は、免疫グロブリンが抗原に結合する強さの総和を表す結合活性とは異
なる。免疫グロブリンの結合親和性は、競合的結合法、平衡透析法又はＢＩＡｃ
ｏｒｅ法などの当業で標準的な方法を用いて測定できる。本明細書に用いる場合
、結合価とは、免疫グロブリン分子が一度に結合できる異なる分子の数を表す。
例えば、一価免疫グロブリン分子は一度に１つの抗原にしか結合できないのに対
し、二価免疫グロブリン分子は一度に２つ以上の抗原に結合できる。
【００４６】 本発明の１つの実施形態において、調節化合物は一価抗体である。そのような
抗体は、受容体を凝集させることができない。これは、細胞が発現する受容体を
脱感作するそのような抗体の能力を高めると考えられるが、この仮説には拘束さ
れるわけではない。本発明には二価抗体を用いることもできる。本発明の調節化
合物として適当な二価抗体の例は実施例９に詳細に記載されている。
【００４７】 １つの実施形態において、二価抗体は、キメラ抗体などの二種特異性抗体であ
る。二種特異性抗体は、二価抗体の場合のように、２つ以上の抗原に結合し得る
が、この場合、抗原は異なる抗原である（すなわち、その抗体は二重特異性を示
す）。本発明に用いるのに適した二種特異性抗体としては、（ａ）受容体に結合
して、（１）化合物に接触させる前に細胞外リガンド結合成分とトランスデュー
サ成分とが互いに会合しているときには両成分を解離させるか、又は（２）化合
物に接触させる前に細胞外リガンド結合成分とトランスデューサ成分とが互いか
ら解離しているときには両成分の会合を阻害する第１部分（例えば、第１抗原結
合領域）と、（ｂ）受容体を発現する細胞によって発現される細胞表面分子に結
合する第２部分とを有する抗体が含まれる。この実施形態において、第２部分は
、脱感作すべき受容体（すなわち、二種特異性抗体の第１部分とは異なる受容体
領域に結合する二種特異性抗体の第２部分）を含めた任意の細胞表面分子に結合
し得る。好ましい実施形態において、第２部分は、特定の受容体に対する調節抗
体を標的とし得る（すなわち、この調節抗体は、標的受容体を特異的に認識する
故に標的受容体に結合し、他の異なる受容体には結合しない）。例えば、二種特
異性抗体の第２部分は、Ｂ細胞抗原受容体の抗原結合領域に結合するような抗イ
ディオタイプ抗体であってよい。Ｆｃ受容体の場合、二種特異性抗体の第２部分
は、特異的に（すなわち、選択的に）特定のＦｃ受容体型（例えば、ＦｃεＲＩ
）を認識し、したがって、他のＦｃ受容体型（例えば、ＦｃγＲ、ＦｃαＲ）に
は実質的に結合しない抗体であってよい。しかし、そのような抗体は受容体を実
質的に刺激しないのが好ましい。
【００４８】 １つの実施形態において、第２部分は自己反応性Ｂ細胞が発現する細胞表面分
子に結合する。そのような細胞表面分子は、自己反応性Ｂ細胞を他のＢ細胞と区
別するのが好ましい。別の実施形態において、第２部分は、移植拒絶反応に関与
するＢ細胞が発現する細胞表面分子に結合する。
【００４９】 本発明の単離抗体は、そのような抗体を含む血清、又は種々の精製度の抗体を
包含し得る。本発明の抗体は、抗体フラグメントなどのポリクローナル又はモノ
クローナル機能的等価物（例えば、Ｆａｂフラグメント又はＦａｂ2フラグメン
ト）、及び２つ以上のエピトープに結合し得る一本鎖抗体又はキメラ抗体（すな
わち、二重特異的抗体）を含めた遺伝子操作によって合成された抗体であってよ
い。
【００５０】 一般に、抗体を産生させる際には、ウサギ、ハムスター、モルモット又はマウ
スなどの適当な実験動物を、抗体が得ようとする抗原に暴露する。通常、動物に
有効量の抗原を注入して動物を免疫感作する。有効量の抗原とは、動物による抗
体産生の誘導に必要な量を表す。次いで、予決定期間にわたり動物の免疫系に応
答させる。免疫感作プロセスは、免疫系が抗原に対する抗体を産生することがわ
かるまで繰返してよい。抗原特異的ポリクローナル抗体を得るためには、所望の
抗体を含む動物から血清を採取する。そのような血清は試薬として有用である。
例えば、血清を硫酸アンモニウムで処理して、血清からポリクローナル抗体をさ
らに精製し得る。モノクローナル抗体を得るためには、免疫感作した動物を殺し
、脾臓からＢリンパ球を回収する。次いで、Ｂリンパ球の分化、増殖娘細胞を骨
髄腫細胞と融合させて、適当な培地中で連続増殖し得るハイブリドーマ細胞集団
を得る。所望の抗体を産生するハイブリドーマは、ハイブリドーマが産生した抗
体の抗原結合能を試験して選択する。
【００５１】 本発明の好ましい抗体産生法は、（ａ）有効量の本発明のタンパク質、ペプチ
ド又はそのミメトープを動物に投与して抗体を産生させる工程と、（ｂ）抗体を
回収する工程とを含む。別の方法では、本発明の抗体は組換えによって産生する
。明確なタンパク質又はミメトープに対して産生された抗体は有利であり得る。
何故なら、そのような抗体は、治療組成物中に用いた場合に、診断検定において
干渉又は副作用を生じ得る他の物質に対する抗体で実質的に汚染されていないか
らである。本明細書に用いる場合、用途「選択的に結合する」とは、特定のタン
パク質及びそのミメトープに優先的に結合する本発明の抗体の能力を表す。結合
は、エンザイムイムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、イムノブロット検定な
どを含めた当業において標準的な多様な方法を用いて測定し得る。
【００５２】 本明細書に用いる場合、本発明の単離タンパク質は、全長タンパク質であって
も、そのようなタンパク質の任意のホモログ、例えば、アミノ酸が欠失（ペプチ
ドなどのタンパク質の切断体）、挿入、逆位、置換かつ／又は誘導体化（例えば
、グリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミ
チン化、アミド化及び／又はグリコシルホスファチジルイノシトールの付加）さ
れたタンパク質などであってもよい。タンパク質ホモログは、このホモログをコ
ードする核酸配列がストリンジェントな条件下に天然タンパク質をコードする核
酸分子（すなわち、天然タンパク質のアミノ酸配列をコードする核酸鎖の補体）
に（すなわち、と）ハイブリダイズし得る天然タンパク質アミノ酸配列に十分に
類似したアミノ酸配列を有するタンパク質である。
【００５３】 本明細書に用いる場合、本発明のタンパク質又は抗体のミメトープすなわち模
倣体とは、所与のタンパク質又は抗体の活性を模倣し得る任意の化合物を表すが
、それは、ミメトープが所与のタンパク質又は抗体を模倣する構造を有している
ことが多いからである。ミメトープは、それらの分解性を低下させるように修飾
されたペプチド、抗イディオタイプ及び／もしくは触媒抗体、又はそれらのフラ
グメント、単離タンパク質の非タンパク性免疫原性部分（例えば、炭水化物構造
）、ならびに核酸を含めた合成もしくは天然有機分子であってよいが、それらに
は限定されない。そのようなミメトープは、タンパク質又は抗体のコンピュータ
生成構造を用いて設計し得る。ミメトープは、オリゴヌクレオチド、ペプチド又
は他の有機もしくは無機分子などの分子の無作為標本を作製し、そのような標本
を対応結合パートナーを用いたアフィニティークロマトグラフィー法によりスク
リーニングして得ることもできる。
【００５４】 本発明によれば、単離された核酸分子は、その天然環境から取り出した（すな
わち、ヒト操作を受けた）核酸分子であり、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はＤＮＡもしく
はＲＮＡの誘導体を包含し得る。したがって、「単離された」とは、核酸の精製
度を表してはいない。本発明の単離核酸分子は、その天然源から単離することも
できるし、組換えＤＮＡテクノロジー〔例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ
）増幅、クローニング〕又は化学合成を用いて産生させることもできる。単離核
酸分子には、例えば、天然対立遺伝子変異体や、修飾が核酸分子のタンパク質コ
ード能又はストリンジェントな条件下での天然遺伝子分離体との安定ハイブリッ
ド形成能に実質的に干渉しないように、ヌクレオチドの挿入、欠失、置換及び／
又は逆位によって修飾された核酸分子を包含し得る。単離核酸分子は縮重を含み
得る。本明細書に用いる場合、ヌクレオチド縮重とは、１つのアミノ酸が異なる
ヌクレオチドコドンによってコードされ得る現象を表す。したがって、タンパク
質をコードする核酸分子の核酸配列は縮重により異なり得る。
【００５５】 核酸分子ホモログは、当業者には公知の多くの方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏ
ｋら参照）を用いて産生し得る。例えば、核酸分子は、古典的突然変異誘発及び
組換えＤＮＡ法（例えば、部位特異的突然変異誘発、化学処理、制限酵素切断、
核酸フラグメントの連結及び／もしくはＰＣＲ増幅）、又はオリゴヌクレオチド
混合物の合成及び核酸分子混合物を「構築」するための混合物群の連結、ならび
にそれらの組合せを含むがそれらには限定されない多様な方法を用いて修飾し得
る。核酸分子ホモログは、天然遺伝子とハイブリダイズさせるか、又は核酸分子
がコードするタンパク質の機能をスクリーニングすることにより選択し得る。
【００５６】 本明細書に用いる場合、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件とは
、核酸分子を類似の核酸分子の同定に用いる標準ハイブリダイゼーション条件を
表す。そのような標準条件は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｓ Ｐｒｅｓｓ，１９８９年に開示されてい
る。Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前掲は、その全文が本明細書に文献援用される（特に
、９．３１−９．６２ページ、１１．７ページ及び１１．４５−１１．６１ペー
ジ参照）。さらに、種々のミスマッチ度のヌクレオチドを得ることができるハイ
ブリダイゼーションの達成に適したハイブリダイゼーション及び洗浄条件を計算
する式が、例えば、Ｍｅｉｎｋｏｔｈら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．第１３８
巻，２６７−２８４ページ，１９８４年に開示されており、Ｍｅｉｎｋｏｔｈら
，前掲は、その全文が本明細書に文献援用される。
【００５７】 より特定的に言えば、本明細書に言及されているストリンジェントなハイブリ
ダイゼーション条件とは、ハイブリダイゼーション反応においてプローブに用い
られている核酸分子と約７０％以上、より特定的には約７５％以上、最も特定的
には約８０％以上の核酸配列同一性を有する核酸分子の単離を可能にする条件を
表す。そのような条件は、ＤＮＡ：ＲＮＡ又はＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッドが形
成されるかどうかに応じて異なるであろう。ＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッドの計算
融解温度は、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッドの場合より１０℃低い。特定の実施形
態において、ＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッドのストリンジェントなハイブリダイゼ
ーション条件は、約２０〜約３５℃、より好ましくは約２８〜約４０℃、さらに
好ましくは約３５〜約４５℃の温度下に０．１Ｘ ＳＳＣ（０．１５７Ｍ Ｎａ+ ）のイオン強度でのハイブリダイゼーションを含む。特定の実施形態において
、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッドのストリンジェントなハイブリダイゼーション条
件は、約３０〜約４５℃、より好ましくは約３８〜約５０℃、さらに好ましくは
約４５〜約５５℃の温度下に０．１Ｘ ＳＳＣ（０．１５７Ｍ Ｎａ+）のイオ
ン強度でのハイブリダイゼーションを含む。これらの値は、約１００ヌクレオチ
ドより大きい分子、０％ホルムアミド及び約５０％のＧ＋Ｃ含有量に関する融解
温度の計算に基づいている。あるいは、Ｔmは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前掲，１
１．５５−１１．５７ページに記載されているように、経験的に計算することが
できる。
【００５８】 本明細書に用いる場合、同一パーセント（％）とは、製造業者が認定したデフ
ォルトパラメータによるＢＬＡＳＴ相同性検索を表す。 抗体、タンパク質、ペプチド及びそれらのミメトープを含めた本発明の調節化
合物及び治療化合物は、構造に基づくドラッグデザインを用いて設計し得る。構
造に基づくドラッグデザインとは、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質のコン
ホメーション、又はペプチドもしくはポリペプチドと治療化合物とのコンホメー
ション相互作用を予測するコンピュータシミュレーションの使用を表す。例えば
、一般に、治療化合物と効率的に相互作用するタンパク質の場合、治療化合物の
三次元構造は、結合したときに所望の結果が得られるように治療化合物をタンパ
ク質に結合させる適合性コンホメーションをとる必要がある。本発明によれば、
設計工程は、新規化学化合物の創製又は既知化合物（例えば、既知化合物の三次
元構造を含むコンピュータスクリーニングデータベースにリストされている化合
物）ライブラリーデータベースの検索を含み得る。設計は、いくつかの構造特徴
に代替部分を有する化学化合物をシミュレートすることによっても実施し得る。
設計工程は、化合物の既知機能に基づいて化学化合物を選択することを含み得る
。好ましい設計工程は、化合物の三次元構造がわかっていて、（例えば、Ｈｕｍ
ｂｌｅｔ及びＤｕｎｂａｒ，Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃ
ｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２８巻，２７５−２８３ページ，Ｍ．Ｖｅｎ
ｕｔｉ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９３年に記載されているように
）コンピュータにより本発明の受容体の三次元構造と相互作用する（例えば、ド
ッキング、整列、マッチ、インターフェースする）化合物の１つ以上のデータベ
ースのコンピュータスクリーニングを含む。適当な化学化合物の合成法は、当業
者には公知であり、合成される化学物質の構造に依存する。合成された化合物の
生物活性の評価法は、その化合物の生物活性（例えば、抑制性又は刺激性）に依
存し、本明細書に開示されている。
【００５９】 他の種々の構造ベースドラッグデザイン法が、Ｍａｕｌｉｋら，Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｐｐｌｉｃ
ａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ
．，１９９７年に開示されており、この論文はその全文が本明細書に文献援用さ
れる。Ｍａｕｌｉｋらは、例えば、ユーザーが、適切に選択されたフラグメント
のフラグメントライブラリーから新規分子を創製する方法を指示する指示設計法
；ユーザーが、フラグメント及びそれらの組合せを無作為に変異させる遺伝子又
は他のアルゴリズムを用い、同時に候補リガンドの適合性を評価する選択基準を
適用する無作為設計；及びユーザーが、受容体の三次元構造と小フラグメントプ
ローブとの相互作用エネルギーを計算し、次いで好ましいプローブ部位を結合さ
せるグリッドベース法を開示している。
【００６０】 上述のように、本発明の１つの実施形態において、受容体は、Ｂ細胞抗原受容
体、プロＢ細胞受容体、及びプレＢ細胞受容体からなる群から選択される。この
実施形態では、トランスデューサ成分は、Ｉｇα及びＩｇβからなる群から選択
される。本発明の１つの態様において、調節化合物は、トランスデューサ成分に
選択的に結合し、細胞外リガンド結合成分とトランスデューサ成分との会合を防
止又は阻害する。１つの実施形態において、細胞外結合成分は、ｍＩｇＤ及びｍ
ＩｇＭからなる群から選択されたｍＩｇを含むが、例えば、受容体を発現するＢ
細胞がプロＢ細胞又はプレＢ細胞の場合、細胞外リガンド結合成分は異なってい
てもよい。１つの実施形態において、Ｂ細胞抗原受容体は、自己免疫疾患に関連
する抗原に選択的に結合する。別の実施形態では、Ｂ細胞抗原受容体は、移植細
胞に関連する抗原に選択的に結合する。本発明の脱感作に適した受容体を発現す
るＢ細胞には、自己反応性Ｂ細胞、移植片上の抗原に選択的に結合するＢ細胞抗
原受容体を含むＢ細胞、Ｂ細胞リンパ腫及び慢性リンパ球白血病細胞が含まれる
が、それらには限定されない。本発明の感作に適したＢ細胞には、任意の正常Ｂ
細胞が含まれる。本発明の１つの実施形態において、調節化合物は、慢性関節リ
ウマチ、全身性エリテマトーデス、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、重
症筋無力症、グレーブズ病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑
病、グッドパスチャー症候群、尋常性天疱瘡、急性リウマチ熱、連鎖球菌後糸球
体腎炎、又は結節性多発性動脈炎からなる群から選択される自己免疫疾患を有す
る患者に投与することによりＢ細胞受容体と接触させる。
【００６１】 本発明の別の実施形態において、本発明の方法により標的とされる受容体は、
ＦｃαＲＩ、ＦｃεＲＩ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、Ｆｃ
γＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択されるヒトＩｇＦｃ受容体で
ある。この実施形態では、調節化合物は、Ｆｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメ
インに選択的に結合する。通常、細胞外結合成分はα受容体を含む。１つの実施
形態において、受容体は、α受容体の細胞外リガンド結合成分とβ／γトランス
デューサ成分とを含むＦｃεＲＩ受容体である。別の実施形態では、受容体は、
マスト細胞及び好塩基球からなる群から選択される細胞によって発現される。１
つの実施形態において、調節化合物を、炎症関連症状を有する患者に投与するこ
とにより受容体と接触させる。１つの実施形態では、症状はアレルギー性炎症に
関連する。本発明の方法を用いた療法に適した種々の炎症性症状は以下に記載さ
れている。
【００６２】 本発明の方法は、調節化合物を脱感作すべき受容体と接触させる工程を含む。
本発明によれば、接触工程は、生体内、試験管内及び／又は生体外で実施し得る
。検定におけるように接触工程を試験管内で実施する場合、接触工程は、調節化
合物と受容体とを例えば培養中で混合又は組み合わせて接触させることを含み得
る。本発明の方法を検定に用いる場合、受容体は、遊離型受容体であってもよい
し、細胞が発現するものでもよい（すなわち、細胞ベース検定）。本明細書に用
いる場合、インビボ送出とは、調節化合物を直接患者に投与することを表す。適
当な投与法は以下に記載されている。調節化合物のエキソビボ送出とは、患者か
ら取出した細胞集団と調節化合物とを、調節化合物が標的細胞型（すなわち、Ｔ
細胞）と相互作用する条件下に接触させる工程と、接触させた細胞を患者に戻す
工程とを含む方法を表す。そのような相互作用を達成する方法には、トランスフ
ェクション、レトロウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクション
、細菌移入、スフェロプラスト融合、及び吸着が含まれるが、それらには限定さ
れない。
【００６３】 有効な方法で組成物を投与するのに許容し得るプロトコルには、個々の用量サ
イズ、用量数、用量投与頻度及び投与様式が含まれる。そのようなプロトコルは
当業者が決定し得る。適当な単位用量は、適当な時間にわたって、１回又は複数
回に分けて投与したときに、少なくとも１つの細胞上の標的受容体の約１０％以
上、好みの増大オーダーで、少なくとも１つの細胞上の標的受容体のより好まし
くは約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％
、約９０％、最も好ましくは約１００％を脱感作し得る用量である。例えば、調
節化合物の好ましい単位用量は、動物の体重１ｋｇ当たり、約１ｎｇ（ナノグラ
ム）〜１マイクログラム（μｇとも表示される）〜約１０ミリグラム（ｍｇ）の
組成物の範囲であってよい。動物の応答が所望の脱感作効果の達成に不十分にな
ったときには、追加用量を投与するのが好ましい。
【００６４】 本発明の調節化合物及び／又は治療組成物の投与法は、特定の送出目的（例え
ば、疾患の治療、診断試薬としての使用）、受容者の全身の健康状態及び症状及
び標的担体を投与する医師又は技術者の判断に依存し得る。本発明の治療組成物
は、多様な方法を用いて動物に投与し得る。そのような送出法は、非経口、局所
、経口、又は皮内もしくはエアゾールなどの局所投与を含み得る。治療試薬は、
投与法に応じて多様な単位用量形式で投与し得る。例えば、動物の腸領域に経口
投与するのに適した単位用量形式としては、散剤、錠剤、丸剤及びカプセル剤が
ある。本発明の治療組成物の好ましい送出法は、例えば、注射、皮内注射、筋肉
内注射及び吸入による、非経口、局所、経口又は局部投与を包含し得る。本発明
の治療組成物は、特定の送出様式に合わせて本発明の担体又は賦形剤中に配合す
ることができる。
【００６５】 本明細書に用いる場合、医薬上許容し得る担体とは、適当な試験管内又は生体
内部位の作用に向けて化合物又は治療組成物を送出するための担体として適当な
任意の物質を表す。したがって、担体は、治療用又は実験用試薬の製剤用賦形剤
としての働きをし得る。好ましい担体は、化合物又は治療組成物を本発明の受容
体と相互作用し得る形態で保持することができる。そのような担体の例としては
、水、リン酸緩衝塩類溶液、塩類溶液、リンゲル液、デキストロース液、血清含
有液、ハンクス液及び他の生理的平衡水溶液が含まれるが、それらには限定され
ない。水性担体はさらに、受容者の生理的状態に近づけるため、例えば、化学的
安定性の強化及び等張性に要求される適当な補助物質を含んでいてよい。適当な
補助物質には、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩
化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタ
ノールアミン、ならびにリン酸緩衝液、トリス緩衝液及び重炭酸塩緩衝液の生成
に用いられる他の物質が含まれる。補助物質はさらに、チメロサール、ｍ又はｏ
−クレゾール、ホルマリン及びベンジルアルコールなどの保存剤を含んでいてよ
い。エアゾール送出に好ましい補助物質としては、受容者に対して毒性でない界
面活性物質、例えば、約６〜約２２個の炭素原子を含む脂肪酸のエステル又は部
分エステルがある。エステルの例には、カプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、
パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン酸（ｏｌ
ｅｓｔｅｒｉｃ ａｃｉｄ）、及びオレイン酸が含まれる。本発明の試薬は、慣
用法及び／又は凍結乾燥によって滅菌し得る。標準配合物は、注射可能な液体で
も、適当な液体に溶解して注射用懸濁剤又は溶剤とし得る固体であってもよい。
したがって、非液体配合物において、賦形剤は、投与前に滅菌水又は塩類溶液を
加えることができるデキストロース、ヒト血清アルブミン、保存剤などを包含し
得る。担体は、さらに、治療を受ける動物中での治療組成物の半減期を増大させ
る化合物を包含し得る。そのような適当な担体には、高分子徐放担体、生物分解
性インプラント、リポソーム、細菌、ウイルス、他の細胞、油脂、エステル及び
グリコールが含まれる。
【００６６】 本発明によれば、受容体の脱感作法は、アレルギー性炎症などの炎症に関連す
る症状の治療に用いることができる。アレルギー性炎症は、アレルゲンなどの感
作物質に対する１つの免疫応答型（例えば、Ｔｈ２型免疫応答）が誘発されると
、哺乳動物の炎症に関与する細胞を補充する炎症メディエータが放出され、その
存在が組織損傷及びときに組織死を引き起こし得る症状である。本発明の方法及
び組成物を用いて治療するのが好ましいアレルギー性炎症に関連する好ましい疾
患には、アレルギー性気道疾患、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、及び
食物アレルギーがある。炎症に関連する他の症状は、当業では公知であり、自己
免疫疾患や感染性疾患が含まれるが、それらには限定されない。
【００６７】 治療すべき自己免疫疾患は、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、イ
ンスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、グレーブズ病、自己免疫
性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、グッドパスチャー症候群、尋常
性天疱瘡、急性リウマチ熱、連鎖球菌後糸球体腎炎、及び結節性多発性動脈炎を
含むがそれらには限定されない任意の自己免疫疾患であってよい。標的とするの
に好ましいＢＣＲ自己抗原特異部位には、甲状腺刺激ホルモン受容体の少なくと
も一部、膵臓Ｂ細胞抗原、上皮カドヘリン、アセチルコリン受容体、血小板抗原
、核酸、核酸：タンパク質複合体、ミエリンタンパク質、甲状腺抗原、関節抗原
、神経系抗原、唾液腺タンパク質、皮膚抗原、腎臓抗原、心臓抗原、肺抗原、眼
抗原、赤血球抗原、肝臓抗原及び胃抗原が含まれるが、それらには限定されない
。
【００６８】 本発明の方法は、好ましくは、哺乳類クラスＭａｍｍａｌｉａの動物、より好
ましくは、家畜、市場価値のある動物、実験動物及びヒトを含めた任意の動物の
治療に用い得る。
【００６９】 本発明の１つの実施形態は、Ｂ細胞抗原受容体及びＩｇＦｃ受容体からなる群
から選択される受容体を脱感作する単離調節化合物に関し、受容体は細胞外リガ
ンド結合成分とトランスデューサ成分とを有し、調節化合物は、受容体に選択的
に結合して、結合すると、（１）細胞外リガンド結合成分のトランスデューサ成
分からの解離を誘導し得るか；かつ／又は（２）細胞外リガンド結合成分と前記
トランスデューサ成分との会合を阻害し得るその能力によって同定される。本発
明の別の実施形態は、ＢＣＲ、プロＢＣＲ、プレＢＣＲ、ＦｃＲ及びＮＫ受容体
からなる群から選択される受容体の感作を強化又は延長する単離調節化合物に関
する。そのような化合物は、（１）細胞外リガンド結合成分とトランスデューサ
成分とが化合物との接触前には互いに会合していないときには両成分を会合させ
得るか、又は（２）細胞外リガンド結合成分とトランスデューサ成分とが化合物
との接触前に会合しているときには両成分の会合時間を延長又は強化し、それに
よって受容体を感作し得るものであると確認される。そのような調節化合物の種
々の側面は上記に詳細に記載されている。
【００７０】 本発明の１つの実施形態は、ＢＣＲ、プロＢＣＲ、プレＢＣＲ、ＦｃＲ及びＮ
Ｋ受容体からなる群から選択される受容体の感作法又は感作強化法に関する。そ
のような方法は、化合物と、細胞外リガンド結合成分及びトランスデューサ成分
を有する受容体とを接触させる工程を含み、化合物は、（１）細胞外リガンド結
合成分とトランスデューサ成分とが化合物との接触前に互いに会合していないと
きに両成分を会合させるか、又は（２）細胞外リガンド結合成分とトランスデュ
ーサ成分とが化合物との接触前に会合しているときには両成分の会合時間を延長
又は強化し、それによって受容体を感作する。そのような方法は、受容体が感作
に対して不応になり、感作が望ましい場合、又は、受容体応答の強化（すなわち
、本発明の方法が、通常、感作を延長させて受容体の感作を増大させること）が
望ましい場合に特に有用である。例えば、延長又は強化された免疫応答は、ガン
又はＨＩＶ感染などの特定の病気に対する予防接種プロトコル又は療法において
望ましい。一般に、受容体脱感作に関して本明細書に記載されている方法は、受
容体感作及び受容体感作を強化又は延長する調節化合物の同定法に適切に応用す
ることができる。この方法の１つの実施形態では、所与の抗原に対する予防接種
又はＢ細胞抗原応答の強化を促進する抗原又は他の因子などの追加因子をＢ細胞
抗原受容体と接触させ得る。
【００７１】 本発明の別の実施形態は、受容体の脱感作に有用な化合物を同定する方法に関
する。そのような方法の１つは、（ａ）推定調節化合物を、Ｂ細胞抗原受容体、
プロＢ細胞受容体、プレＢ細胞受容体、Ｆｃ受容体、及びＮＫ受容体からなる群
から選択され、細胞外リガンド結合成分と少なくとも１つのトランスデューサ成
分とを含み、細胞外リガンド結合成分が受容体と推定調節化合物との接触前には
トランスデューサ成分と会合している受容体と接触させる工程と、（ｂ）推定調
節化合物が、受容体と接触したときに、細胞外リガンド結合成分をトランスデュ
ーサ成分から解離させるかどうかを検出する工程とを含む。解離を起こす推定調
節成分が調節化合物であると同定される。
【００７２】 別のそのような方法は、（ａ）推定調節化合物を、Ｂ細胞抗原受容体、Ｆｃ受
容体、及びＮＫ受容体からなる群から選択され、細胞外リガンド結合成分と少な
くとも１つのトランスデューサ成分とを含み、かつ細胞外リガンド結合成分が推
定調節化合物と接触する前にはトランスデューサ成分と会合していない受容体と
接触させる工程と、（ｂ）推定調節化合物が、受容体と接触したときに、細胞外
リガンド結合成分のトランスデューサ成分との会合を阻害するかどうかを検出す
る工程とを含む。会合を阻害する推定調節成分が調節化合物であると同定される
。本明細書に用いる場合、用語「推定」とは、少なくとも、本明細書に記載され
ている受容体を脱感作するそのような化合物の能力に関して、未知の調節活性を
有する化合物を表す。
【００７３】 本発明の調節化合物同定法の両実施形態において、この方法は、細胞に基づく
検定であっても、細胞に基づく検定であってもよい。好ましい実施形態において
、受容体は、細胞によって発現される（すなわち、細胞に基づく検定である）。
本発明によれば、そのような方法は、本発明の方法に有用な調節化合物のスクリ
ーニングに有効な条件下で実施される。有効条件には、細胞増殖を可能にする適
切な培地、温度、ｐＨ及び酸素条件が含まれるが、それらには限定されない。適
切又は有効な培地とは、本発明の細胞を培養すると、細胞を増殖させ、かつＢＣ
Ｒ、ＦｃＲ又はＮＫ受容体を発現させる任意の培地を表す。そのような培地は、
通常、成長因子や、生物同化性炭素、窒素及びリン酸源だけでなく、適切な塩、
ミネラル、金属及び他の栄養素、例えばビタミンを含む固体又は液体培地である
。培養は、細胞に適した温度、ｐＨ及び酸素含量下に実施する。そのような培養
条件は当業者の専門的技術の範囲内にある。
【００７４】 第１の実施形態において、混合などにより、本発明の受容体を推定調節化合物
と接触させる条件は、調節化合物が実質的に存在しなければ、受容体成分が会合
している条件である。例えば、そのような条件には、受容体に対する天然リガン
ド、抗イディオタイプ抗体、又は他の同等刺激物質などの刺激化合物不在下の正
常培養条件が含まれる。この実施形態では、検定が細胞ベース検定の場合には、
推定調節化合物を受容体と接触させる。本明細書に提供されている実験データを
考えると、本発明者らは、受容体複合体は、通常、安定配置と不安定配置の間の
平衡状態で存在すると考えるが、この仮説には拘束されない。したがって、受容
体の天然リガンド、抗イディオタイプ担体又は同等刺激物質などの適切な刺激物
質の不在下には、細胞表面には会合受容体も解離受容体も存在する可能性がある
。したがって、そのような検定における検出工程は、成分間の物理的会合が推定
調節化合物によって破壊され得るかどうかを示すように設計される。
【００７５】 第２実施形態において、混合などにより、本発明の受容体を推定調節化合物と
接触させる条件は、調節化合物が実質的に存在しなければ、通常、受容体成分が
会合していない条件である。そのような条件は、例えば、前記受容体と、受容体
成分を解離させる刺激物質分子との接触を含み得る。あるいは、そのような条件
には、上述のような刺激物質不在下の正常培養条件が含まれる。というのは、本
発明者らは、複合体が、通常、安定配置と不安定配置の間の平衡状態で存在する
と考えるからである。しかし、そのような条件は、受容体とその天然リガンド又
は同等刺激物質の解離を誘発するように、両成分を接触させることを含むのが好
ましい。
【００７６】 本発明の検定は細胞に基づかない検定であってもよい。この実施形態では、推
定調節化合物を、直接、単離受容体、又は受容体成分（すなわち、単離トランス
デューサ成分又は単離細胞外リガンド結合成分）と接触させることができ、推定
調節化合物の受容体又は受容体成分との結合能は、イムノアッセイ又は他の結合
検定などにより評価し得る。その場合、検定は、受容体の一部（例えば、トラン
スデューサ成分又は細胞外リガンド結合成分の一部）に結合する推定調節化合物
が、受容体成分の会合を阻害し得るか、又は受容体成分を解離し得るかどうかを
さらに分析する工程を含み得る。そのようなさらなる工程は、上述のような細胞
に基づく検定又は細胞に基づかない検定によって実施し得る。
【００７７】 本発明のいずれの実施形態においても、検出工程は、（１）受容体刺激の結果
としてシグナルを変換する受容体の能力（ここで、推定調節化合物と接触させた
とき、刺激の結果として受容体のシグナル伝達能力が推定調節化合物と接触して
いないときと比べて低下していれば、この化合物は受容体を脱感作することを示
す）及び／又は（２）トランスデューサ成分及び細胞外リガンド結合成分の物理
的会合状態又は解離状態を測定する任意の方法を含む。そのような検定としては
、カルシウム動員検定、リン酸化検定、キナーゼ検定、免疫蛍光顕微鏡検査、フ
ローサイトメトリー、免疫沈降検定、イムノブロット、酵素結合性免疫吸着剤検
定、ラジオイムノアッセイ及び他の結合検定、生物学的検定ならびに／又はそれ
らの組合せが含まれる。そのような検定のいくつかは、実施例の項に記載されて
いる。
【００７８】 実施例９に記載されている抗体などに関して、同定された本発明の調節化合物
がどこで受容体成分と接触するか及び／又はそのような成分が明確にどのように
して受容体を不安定化させるかについてさらに細かく特異性を分析することによ
り、受容体成分の標的配列（すなわち、ブロック、結合、改変又は破壊されると
、受容体の解離／不安定化を起こすか、又は会合を阻害する受容体部分の配列）
を同定し、例えば、合理的なドラッグデザインに用いることができる。
【００７９】 以下の実施例は、例証を目的として提供されており、本発明の範囲を限定する
ものではない。 （実施例）以下の実施例で使用する材料及び方法 細胞の単離と刺激：先に記載したように（Ｈｏｍｂａｃｈら，１９９０；Ｋｉ
ｍら，１９７９；Ｒｅｔｈら，１９８７；Ｖｉｌｅｎら，１９８７）、ＮＰに特
異的なｍＩｇＭを発現するＫ４６μリンパ腫細胞を培養した。細胞を、２５〜５
００ｍｇ／５×１０6／ｍｌの量のＮＰ7ＢＳＡを用いて３７℃で１〜２時間刺激
した。以前に特徴付けられたように（Ｖｉｌｅｎら，１９９７）、脱感作の条件
下で（２５ｎｇ／５×１０6／ｍｌ＝２５％受容体占有率）、受容体の大部分は
、攻撃量の抗原（２μｇ／５×１０6／０．１ｍｌ ＮＰ7ＢＳＡ）に依然として
結合することができた。あるいは、細胞を、１０μｇ／５×１０6／ｍｌのビオ
チン化抗μ（ｂ−７−６）で刺激した。非刺激細胞をアビジンにより免疫沈降す
るために（図１、レーン７）、ビオチン化ｂ−７−６を、細胞溶解前に４℃で２
分間結合させた。表面ビオチン化実験のために、細胞を、３７℃で１時間又は室
温で１５分間、その後、細胞表面受容体の減少を遅らせるために４℃で４５分間
刺激した。
【００８０】 以前に記載されたように（Ｃａｍｂｉｅｒら，１９８８；Ｒｕｓｓｅｌｌら，
１９９１）、休止期（ρ＞１．０６６又は１．０７０）のＢリンパ細胞を、３−
８３μδＩｇトランスジェニックマウス（Ｂ１０．Ｄ２バックグラウンド）の脾
臓から単離した。これらのトランスジェニックマウスは、非トランスジェニック
Ｂ１０．Ｄ２マウスと比較して正常レベルの脾臓Ｂリンパ細胞を含んでいる。休
止期３−８３Ｂ細胞は、Ｈ−２ＫKに特異的なＩｇＭ受容体とＩｇＤ受容体の両
方を発現し、Ｂ１０．Ｄ２由来Ｂ細胞と比較して、Ｃａ2+動員及びチロシルリン
酸化による受容体架橋に反応する。２μｇ／５×１０6ｍｌの量の抗原模倣ペプ
チド−デキストラン結合体（３−８３ａｇＩ50Ｄｅｘ）を用いた３−８３μδ
Ｂ細胞の刺激（Ｖｉｌｅｎら，１９９７）。Ａｇ模倣配列、ＣＡＨＤＷＲＳＧＦ
ＧＧＦＱＨＬＣＣＧＡＡＧＡは、３−８３免疫グロブリンを用いてファージディ
スプレイライブラリーをスクリーニングすることにより明らかにされた（Ｓｐａ
ｒｋｓら，１９９５）。この模倣ペプチドの３−８３免疫グロブリンへの結合は
、同位体適合免疫グロブリンを用いたＥＬＩＳＡアッセイに基づいて抗原結合部
位に特異的であることが示された。さらに、３−８３受容体に特異的な抗イディ
オタイプ抗体（５４．１）がペプチド結合を競合した（Ｃａｒｂｏｎｅ及びＣａ
ｍｂｉｅｒ，未発表データ）。
【００８１】 過バナジン酸塩（ｐｅｒｖａｎａｄａｔｅ）刺激及びヘルビマイシン（ｈｅｒ ｂｉｍｙｃｉｎ）処理。 細胞を、新しく調製した１０ｍＭオルトバナジン酸ナト
リウム溶液／３０ｍＭ過酸化水素を用いて、最終濃度３０μＭのオルトバナジン
酸ナトリウムで１０分間刺激した。あるいは、脱感作の前に、細胞（２×１０6
細胞／ｍｌ）を、５μＭヘルビマイシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，ＬａＪｏｌｌ
ａ）で１６時間処理した。
【００８２】 抗体及び免疫沈降。モノクローナル抗体ｂ−７−６（抗μ）、ＨＭ７９（抗Ｉ
ｇ−β）、及びＬ２２．１２．４（抗λ）を培養上清から精製した（Ｋｏｙａｍ
ａ，１９９７）。Ｆｒｅｄ Ｆｉｎｋｌｅｍａｎにより、免疫沈降に用いるＨＢ
−δ６（抗δ）とイムノブロッティング用のポリクローナルヤギ抗マウスＩｇＤ
が提供された。ウサギポリクローナル抗Ｉｇ−α及び抗Ｉｇ−βを、分子の細胞
質尾部（マウスＩｇ−αの残基１６０〜２２０及びマウスＩｇ−βの残基１８１
〜２４６）に対して調製した。ウサギポリクローナル抗Ｌｙｎ及び抗Ｓｙｋは以
前に記載されている（Ｖｉｌｅｎら，１９９７）。ウエスタンブロッティング用
の他の一次抗体として、ヤギ抗マウスＩｇＭ−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ
）及び抗ホスホチロシン抗体Ａｂ２（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍａ
ｎｈａｓｓｅｔ，ＮＹ）が挙げられる。ＨＲＰ結合二次抗体として、ラット抗マ
ウスＩｇＧ1（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｌ．Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）、
プロテインＡ（Ｚｙｍｅｄ，Ｓ．Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ウサギ
抗ヤギＩｇ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、及びストプレプトアビジ
ン（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）が挙げられる。
【００８３】 １５〜２５×１０6細胞の細胞溶解物を、０．３３％ＣＨＡＰＳ、１５０ｍＭ
ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、２ｍＭ ｏ−バナジン酸ナトリ
ウム、１ｍＭ ＰＭＳＦ、０．４ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＮａＦ、及び各１
μｇ／ｍｌのアプロチニン、ロイペプチン、及びα１−アンチトリプシンを含む
緩衝液中に調製した。溶解物を、１０分間、氷上に置き、次いで、粒子状物質を
、１２，０００×ｇで１０分間、遠心分離することにより除去した。免疫沈降に
用いる抗体を、製造業者の指示（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐ
ｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）に従ってＣＮＢｒ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂに
結合させた。ストレプトアビジン免疫沈降を、ストレプトアビジンアガロース（
Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いて行った。約０．５〜１μの沈
降用抗体を、清澄化溶解物の１×１０6細胞相当量と４℃で３０分間インキュベ
ートした。免疫沈降物を溶解緩衝液で２回洗浄し、次いで、１０％ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥゲルを用いて分画した。分画されたタンパク質を、製造業者（Ｍｉｌｌｉｐ
ｏｒｅ Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）により推奨される条件に従ってセ
ミドライブロッティング装置を用いてポリ二フッ化ビニリデン膜に移した。免疫
反応性タンパク質を、化学発光増幅検出（ＥＣＬ，ＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ
）により検出した。
【００８４】 表面ビオチン化。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、次いで、１０×１０6／ｍｌで
、５０μｇ／ｍｌスルホ−ＮＨＳ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ
，ＩＬ）を含むＰＢＳに再懸濁した。室温で１０分間インキュベーションした後
、細胞を、１５ｍＭグリシンを含む冷ＰＢＳで２回洗浄し、次いで、５×１０6
／ｍｌで、２％ＦＣＳを含むＩＭＤＭに再懸濁し、次いで、前記のように刺激し
た。
【００８５】 表面染色。Ｋ４６μ細胞を処理しなかったか、又は非ビオチン化ＮＰ7ＢＳＡ
を用いて３７℃で２時間処理し（２５ｎｇ／５×１０6細胞／ｍｌ）、次いで、
０．２％アジ化物の存在下で、ビオチン化抗Ｉｇ−β（ＨＭ７９）又はビオチン
化ＮＰ7ＢＳＡを用いて４℃で染色して、それぞれ、表面Ｉｇ−β及び抗原結合
受容体の存在を決定した。試料を、冷染色培地（２％ウシ血清及び０．２％アジ
化物を含む平衡塩溶液）で広範に洗浄し、続いて、フィコエリトリン共役アビジ
ンを用いて二次染色を２０分間行った。ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃ
ｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）で分析を行った。
【００８６】実施例１ 以下の実施例は、ＢＣＲのＩｇ−α及びＩｇ−βシグナル伝達サブユニットが
、抗原刺激後にＩｇＭから不安定化されることを示す。 脱感作細胞の以前の研究から、ＢＣＲシグナル伝達の異常は、ｓｒｃファミリ
ーキナーゼ活性化の上流（おそらく受容体レベル）にあることが示唆された（Ｖ
ｉｌｅｎら，１９９７）。受容体脱感作の条件下でのＢＣＲ構造の変化に取り組
むために、μ重鎖、Ｉｇ−α、又はＩｇ−βを、脱感作したＫ４６μ細胞溶解物
から免疫沈降し、共沈したＢＣＲ成分を定量した。簡単に述べると、非刺激Ｋ４
６μ細胞、ＮＰ7ＢＳＡ（５００ｍｇ／５×１０6／ｍｌ）で１時間刺激した細胞
、又はビオチン化ｂ−７−６（１０μｇ／５×１０6／ｍｌ）で１時間刺激した
細胞におけるｍＩｇ−Ｉｇ−α／Ｉｇ−β会合の比較分析を行った。ビオチン化
ｂ−７−６は、溶解前に４℃で２分間、未刺激細胞に予め結合されていた（１０
μｇ／５×１０6／ｍｌ）。図１は、以下のような分析の結果を示す。パネル１
：レーン１及び２は、抗μ免疫沈澱物のＩｇＭ及びＩｇ−αイムノブロットを示
す。パネル２：レーン３及び４は、抗Ｉｇ−β免疫沈澱物のＩｇＭ、Ｉｇ−β、
及びＩｇ−αイムノブロットを示す。パネル３：レーン５及び６は、抗Ｉｇ−α
免疫沈澱物のＩｇＭ及びＩｇ−αイムノブロットを示す。パネル４：レーン７及
び８は、ストレブトアビジン免疫沈澱物のＩｇＭ及びＩｇ−αイムノブロットを
示す。
【００８７】 図１、パネル１に示すように、抗原で１時間刺激した（脱感作した）細胞から
のＩｇＭ（μ重鎖）は、非刺激細胞のＩｇＭと比較して約６７％少ない（デンシ
トメトリーで決定した）Ｉｇ−αと共沈した。同様に、１時間刺激した細胞から
のＩｇ−β及びＩｇ−α（図１、パネル２及び３）は、非刺激細胞より５０〜６
６％少ないＩｇＭ（μ重鎖）と共沈した。ＩｇＭ（パネル１）又はＩｇ−α／Ｉ
ｇ−β（パネル２及び３）のレベルが一定なままであるので、この共沈可能なＩ
ｇ−αの減少は、単に、受容体の細胞骨格画分／界面活性剤不溶性画分への移動
によるものではなかった。高親和性の抗受容体抗体と、抗原との長期インキュベ
ーション（＞３時間）が受容体ダウンモジュレーションを引き起こしたので（図
１、パネル４及びデータ示さず）、Ｋ４６μ細胞のトランスフェクトされたＩｇ
Ｍ受容体が迅速にダウンモジュレートしないことは細胞骨格会合の異常によるも
のでなかった。前記の結果から、中程度の親和性の抗原（ＮＰ結合Ｂ−１−８に
ついてはＫD＝１．５×１０-5（データ示さず）、Ｈ−２Ｋb結合３−８３につい
ては約１０-5〜１０-6と定義された（Ｌａｎｇら，１９９６））によるＢＣＲ凝
集の１時間以内に、著しく少ないＩｇ−α／Ｉｇ−β二量体がｍＩｇＭに会合す
ることが分かる。このことから、抗原脱感作細胞におけるＢＣＲ複合体の解離又
は不安定化が示唆される。
【００８８】実施例２ 以下の実施例は、ＢＣＲ不安定化のタイミングが受容体脱感作と一致すること
を示す。 ＢＣＲ不安定化と受容体脱感作との時間的関係を証明するために、時間経過を
分析して、ＢＣＲを脱感作及び不安定化するために必要な時間を決定した。図２
Ａは、少量のＮＰ7ＢＳＡ（２５ｎｇ／５×１０6細胞／ｍｌ）を用いて１５分間
（レーン５）、３０分間（レーン７）、１時間（レーン９）、２時間（レーン１
１）、及び３時間（レーン１２）脱感作し、次いで、多量のＮＰ7ＢＳＡ（２μ
ｇ／５×１０6細胞／０．１ｍｌ）を用いて１分間、攻撃したＫ４６μ細胞の抗
ホスホチロシンイムノブロットである。あるいは、攻撃前のベースラインチロシ
ンリン酸化を証明するために、対照細胞を、脱感作量のＮＰ7ＢＳＡ（２５ｎｇ
／５×１０6細胞／ｍｌ）を用いて１分間（レーン２）、８分間（レーン３）、
１５分間（レーン５）、３０分間（レーン６）、１時間（レーン８）、及び２時
間（レーン１０）刺激した。図２Ａに示すように、３０分より早い時点では、脱
感作抗原（２５％受容体占有率）により誘導されるチロシンリン酸化は、受容体
が攻撃に反応できたかを評価できるほど十分に減少しなかった（レーン４とレー
ン２を比較せよ）。しかしながら、３０分までには、基底チロシンリン酸化は、
抗原により誘導された反応が分かるほど著しく低下したが、これらの細胞は、後
の受容体結合（１００％受容体占有率）に反応しなかった。これは、この時点で
のＢＣＲの脱感作を反映している。
【００８９】 ＢＣＲ複合体の不安定化に必要とされる時間を決定するために、時間経過の分
析を再度行った。図２Ｂは、非刺激Ｋ４６μ細胞（レーン１）、５００ｍｇ／５
×１０6細胞／ｍｌのＮＰ7ＢＳＡを用いて１分間（レーン２）、８分間（レーン
３）、１５分間（レーン４）、３０分間（レーン５）、１時間（レーン６）、及
び２時間（レーン７）刺激した細胞からの抗μ免疫沈降物の抗Ｉｇ−α及び抗μ
イムノブロットを示す。図２Ｂの上パネルに示すように、１５分間刺激した細胞
は、共沈可能なＩｇ−αの５０％減少を示し、３０分では８０％減少を示した。
時間経過にわたって沈降可能なＩｇＭの量が比較的一定のままであったので（図
２Ｂ、下パネル）、これは、界面活性剤に溶ける細胞表面受容体の減少を反映す
るものではなかった。
【００９０】 ＢＣＲ不安定化が用量依存的に起こるかどうかを決定するために、細胞を、漸
増量のＮＰ7ＢＳＡを用いて処理した。図２Ｃは、非刺激Ｋ４６μ細胞（レーン
１）、２．５ｎｇ／５×１０6細胞／ｍｌ（レーン２）、２５ｎｇ／５×１０6細
胞／ｍｌ（レーン３）、２５０ｎｇ／５×１０6細胞／ｍｌ（レーン４）、２．
５μｇ／５×１０6細胞／ｍｌ（レーン５）、２５μｇ／５×１０6細胞／ｍｌ（
レーン６）を用いて１時間刺激した細胞からの抗μ免疫沈降物、又はブロックさ
れたアガロースビーズを用いて免疫沈降された溶解物（レーン７）の抗Ｉｇ−α
及び抗μイムノブロットを示す。図２Ｃに示すように、脱感作せず、シグナルを
誘導しない抗原量（２．５ｎｇ／５×１０6細胞／ｍｌ）（Ｖｉｌｅｎら，１９
９７）は、著しいＢＣＲ不安定化を誘導しなかった。しかしながら、より多量の
抗原（２５ｎｇ〜２５μｇ）は、似たレベルの受容体不安定化を誘導した。これ
らのデータから、ＢＣＲ不安定化は用量依存的であり、少量の抗原のみを必要と
し、漸増する抗原量は受容体不安定化レベルを高めないことが分かる。さらに、
ＢＣＲ不安定化のタイミングと用量必要条件は、受容体脱感作と一致していると
思われる。
【００９１】実施例３ 以下の実施例は、ＩｇＭを含むＢＣＲとＩｇＤを含むＢＣＲが抗原刺激後に不
安定化されることを証明する。 ＢＣＲ不安定化がＩｇＭを含む受容体とＩｇＤを含む受容体の両方で起こるか
どうかに取り組むために、以前に記載されたように（Ｖｉｌｅｎら，１９９７）
、３−８３μδトランスジェニックマウスに由来する休止期脾臓Ｂ細胞を脱感作
した。図３は、抗μ又は抗δ免疫沈降物の抗Ｉｇ−α又は抗δイムノブロットを
示し、ｍＩｇ−Ｉｇ−α／Ｉｇ−β不安定化が、ＩｇＭを含む受容体とＩｇＤを
含む受容体の両方で起こることを証明している。３−８３μδトランスジェニッ
クＢ細胞に由来するＩｇＭ受容体及びＩｇＤ受容体を、非刺激細胞（レーン１及
びレーン４）、２μｇ／３−８３ａｇＩ50Ｄｅｘ／５×１０6細胞／ｍｌを用い
て１時間刺激した細胞（レーン２及びレーン５）、又は２μｇ／３−８３ａｇＩ50 Ｄｅｘ／５×１０6細胞／ｍｌを用いて２時間刺激した細胞（レーン３及びレ
ーン６）から免疫沈降した。抗μ、次いで、抗δを用いて連続免疫沈降した後に
、Ｉｇ−αイムノブロッティングを行うことにより、両方のアイソタイプを含む
ＢＣＲは、抗原に１時間（図３、レーン２及びレーン５）又は２時間（レーン３
及びレーン６）暴露した後に不安定化されたことが分かった。これもまた、膜免
疫グロブリンの不均一な免疫沈降によるものでなかった。これらのデータから、
抗原は、Ｂリンパ球におけるＢＣＲ複合体の不安定化を誘導することが証明され
、μを含む受容体とδを含む受容体の両方は、この影響を受けることが分かる。
【００９２】実施例４ 以下の実施例は、ＢＣＲ不安定化には受容体凝集とタンパク質チロシンキナー
ゼ活性化が必要とされることを示す。 ＢＣＲ不安定化と受容体脱感作との関係をさらに明確にするために、低い結合
価をもつ抗原がこれらの効果を媒介できるかを決定した。図４Ａは、ＮＰ7ＢＳ
Ａ（左パネル、レーン５）又はＮＰ2ＢＳＡ（右、レーン５）を用いて脱感作し
たＫ４６μ細胞の抗ホスホチロシンイムノブロットを示す。非刺激細胞（各パネ
ルのレーン１）、攻撃量のＮＰ7ＢＳＡ（２μｌ／５×１０6細胞／０．１ｍｌ）
を用いて刺激した細胞（各パネルのレーン２）、脱感作量（２５ｎｇ／５×１０6 細胞／ｍｌ）で刺激した細胞（レーン３、パネル：ＮＰ7ＢＳＡ、レーン３、右
パネル：ＮＰ2ＢＳＡ）、５００ｎｇ／５×１０6細胞／ｍｌで刺激した細胞（レ
ーン４、左パネル：ＮＰ7ＢＳＡ、レーン４、右パネル：ＮＰ2ＢＳＡ）、２５ｎ
ｇ／５×１０6細胞／ｍｌのＮＰ7ＢＳＡで２時間脱感作し、次いで、２μｇ／５
×１０6細胞／０．１ｍｌのＮＰ7ＢＳＡで攻撃した細胞（各パネルのレーン５）
。図４Ａに示すように、高い結合価をもつ抗原（ＮＰ7ＢＳＡ）は受容体脱感作
を誘導したが、低い結合価をもつ抗原（ＮＰ2ＢＳＡ）は受容体脱感作を誘導し
なかった（各パネルのレーン５をレーン２と比較）。
【００９３】 図４Ｂは、非刺激細胞（各パネルのレーン１）と、２種類の用量（２５ｎｇ／
５×１０6細胞／ｍｌ（各パネルのレーン２）、５００ｎｇ／５×１０6細胞／ｍ
ｌ（各パネルのレーン３））のＮＰ7ＢＳＡ又はＮＰ2ＢＳＡで刺激した細胞から
のＩｇＭ免疫沈降物の抗Ｉｇ−α及び抗μイムノブロットを示す。図４Ｂ、上段
左に示すように、ＮＰ7ＢＳＡは、受容体脱感作を誘導した抗原量（２５ｎｇ／
ｍｌ）とさらに高い用量（５００ｎｇ／ｍｌ）で、ｍＩｇＭからのＩｇ−α／Ｉ
ｇ−βの解離を誘導した。対照に、ＮＰ2ＢＳＡは、チロシンリン酸化すなわち
受容体脱感作を誘導せず（図４Ａ）、ＢＣＲ不安定化を誘導することができなか
った（図４Ｂ、上段右）。これらの結果から、受容体脱感作を誘導するのに十分
に高い結合価の抗原のみがＢＣＲ不安定化を誘導することも分かる。
【００９４】実施例５ 以下の実施例は、受容体により媒介されるＳｙｋ及びＬｙｎ活性化の阻害がＢ
ＣＲ不安定化を妨げることを証明する。 前記データは、受容体凝集及び／又は特異的タンパク質チロシンキナーゼカス
ケード活性化がＢＣＲ不安定化の原因となっていることを示唆している。シグナ
ル伝達が受容体不安定化に必要とされるどうかに取り組むために、タンパク質チ
ロシンキナーゼ、Ｌｙｎ及びＳｙｋの活性化を、薬物ヘルビマイシンを用いて阻
害した。図５Ａは、タンパク質チロシンキナーゼの阻害がＢＣＲ不安定化を妨げ
ることを示す。この図では、抗Ｌｙｎ（左パネル）又は抗Ｓｙｋ（右パネル）免
疫沈降物の抗ホスホチロシンイムノブロットを示す。ＢＣＲ感受性を評価するた
めに、Ｋ４６μ細胞を処理しなかったか（各パネルのレーン１及び２）、又はヘ
ルビマイシン処理し（各パネルのレーン３）、次いで、ＮＰ7ＢＳＡ（５００ｎ
ｇ／５×１０6細胞／ｍｌ）で刺激した。次いで、タンパク質レベルを評価する
ために、膜をストリップし、それぞれ抗Ｌｙｎ及び抗Ｓｙｋでリプローブした。
図５Ｂは、非刺激細胞（レーン１）、抗原で２時間刺激した細胞（レーン２）、
ヘルビマイシン処理したが刺激していない細胞（レーン３）、及びヘルビマイシ
ン処理し、抗原で２時間刺激した細胞（レーン４）からのＩｇＭ免疫沈降物の抗
Ｉｇ−α及び抗μイムノブロットを示す。各免疫沈降物のμ重鎖レベルを抗μイ
ムノブロットに示す。図５Ａに示すように、ヘルビマイシン非存在下で細胞を抗
原刺激すると、Ｓｙｋ及びＬｙｎのチロシンリン酸が起こり（各パネルのレーン
１及び２）、一方、ヘルビマイシン処理すると、Ｌｙｎのチロシンリン酸化は完
全に阻害され（左パネル、レーン２とレーン３を比較せよ）、Ｓｙｋのリン酸化
は部分的に阻害された（右パネル、レーン２とレーン３を比較せよ）。抗原が、
Ｌｙｎ活性化の非存在下でＢＣＲ不安定化を誘導する能力を試験するために、本
発明者らは、抗原刺激前にヘルビマイシン処理されている細胞からの免疫沈降Ｂ
ＣＲ複合体を分析した。図５Ｂのデータから、ヘルビマイシン処理細胞において
抗原は受容体不安定化を誘導しないことが分かる。これらの結果により、ｍＩｇ
からのＩｇ−α／Ｉｇ−βの解離にはタンパク質チロシンキナーゼ活性化が必要
であることが分かる。
【００９５】実施例６ 以下の実施例は、ＢＣＲ不安定化にはＢＣＲを介した特異的シグナルが必要で
あることを証明する。 細胞タンパク質のチロシンリン酸化が脱共役を誘導するのに十分であるかどう
かに取り組むために、細胞を、ホスファターゼ阻害によりチロシンリン酸化を誘
導する過バナジン酸塩で処理した。過バナジン酸塩が、ＢＣＲシグナル伝達に関
与するエフェクターのリン酸化を誘導する能力に取り組むために、Ｉｇ−α／Ｉ
ｇ−βを、抗原処理細胞に匹敵するレベルで免疫沈降した。これだけで脱共役を
誘導するのに十分であるかどうかを決定するために、抗μ免疫沈降物中のＩｇ−
α／Ｉｇ−β量を分析した。図５Ｃ及び５Ｄは、Ｉｇ−α／Ｉｇ−βからのｍＩ
ｇの解離にはＢＣＲを通る特異的シグナルが必要であることを示す。図５Ｃ（左
パネル）は、抗Ｉｇ−α免疫沈降物の抗ホスホチロシンイムノブロットを示す。
非刺激細胞（レーン１）、ＮＰ7ＢＳＡ（２μｇ／５×１０6細胞／０．１ｍｌ）
で処理した細胞（レーン２）、及び過バナジン酸塩処理した細胞（レーン３）。
図５Ｃ（右パネル）は、膜をストリップし、次いで、Ｉｇ−α及びＩｇ−βに対
して連続的にブロットしたことを示す。図５Ｄは、ＩｇＭ免疫沈降物の抗Ｉｇ−
α（左パネル）及び抗μ（右パネル）イムノブロットを示す。非刺激細胞（レー
ン１）、ＮＰ7ＢＳＡ（２μｇ／５×１０6細胞／０．１ｍｌ）で処理した細胞（
レーン２）、及び過バナジン酸塩処理した細胞（レーン３）。図５Ｄに示すよう
に、過バナジン酸塩により誘導されるチロシンリン酸化は、ＢＣＲ複合体を不安
定化しなかった（レーン２及び３とレーン１を比較せよ）。しかしながら、過バ
ナジン酸塩処理が、抗原と同じパターンのチロシルリン酸化を誘導しない可能性
、従って、受容体不安定化を促進できない可能性を除くことはできない。これら
のデータから、過バナジン酸塩により誘導されるＩｇ−α及びＩｇ−βのリン酸
化は、ＢＣＲ不安定化を伝えるのに十分な「シグナル」ではないことが分かる。
【００９６】実施例７ 以下の実施例は、抗原により誘導されるＢＣＲ不安定化が細胞表面上で起こる
ことを示す。 受容体不安定化が細胞表面上で起こるかどうかを確かめるために、本発明者ら
は、細胞表面ビオチン化を利用して、細胞表面受容体プールを追跡した。細胞を
表面ビオチン化し、次いで、ＢＣＲ不安定化を誘導するために抗原で刺激した（
模式的な図６Ａを参照のこと）。受容体免疫沈降物のストレプトアビジンイムノ
ブロッティングにより、μ鎖の完全グリコシル化（８７ｋＤ）プールだけがビオ
チン化され、誘導温度にかかわらず抗原刺激（１時間）後では、受容体レベルは
著しく減少しなかったことが明らかになった（図６Ａ、レーン１〜３）。最も重
要なことだが、共沈したビオチン標的化Ｉｇ−αのレベルは、抗原刺激後に著し
く減少した。これは、ＢＣＲの細胞表面プールが不安定化されたことを示してい
る。細胞質受容体プールも不安定化されたかどうか評価するために、本発明者ら
は、ストレプトアビジン免疫沈降によりビオチン化表面プールを枯渇させ、次い
で、抗μを用いて残りの受容体を免疫沈降した（模式的な図６Ａを参照のこと）
。図６Ａは、実験計画の模式図（上段）であり、以下のようなビオチン化細胞：
非刺激細胞（レーン１）、３７℃で刺激した細胞（５００ｎｇ／５×１０6／ｍ
ｌ；レーン２）、及びＲＴ／４℃で刺激した細胞（５００ｎｇ／５×１０6／ｍ
ｌ；ＲＴで１５分、次いで４℃で４５分間；レーン３）からの抗μ免疫沈降物の
ストレプトアビジンイムノブロットを示す。下段右：ビオチンが枯渇された受容
体の抗μ又は抗Ｉｇ−αイムノブロット。非刺激細胞（レーン１）、３７℃で刺
激した細胞（５００ｎｇ／５×１０6／ｍｌ；レーン２）、及びＲＴ／４℃で刺
激した細胞（５００ｎｇ／５×１０6／ｍｌ；ＲＴで１５分、次いで４℃で４５
分間；レーン３）。結果から、ストレプトアビジン枯渇後では、μの部分的グリ
コシル化８２ｋＤ細胞質形態だけが残り、さらに、抗原刺激後では共沈Ｉｇ−α
量が変化しなかったことが分かる（図６Ａ、レーン４〜６）。これらのデータに
より、受容体結合後にＢＣＲの膜プールしか不安定化されなかったことが確認さ
れた。
【００９７】 不安定化されたＢＣＲ成分が細胞表面上に残っていたかどうかに取り組むため
に、表面Ｉｇ−β及び抗原結合受容体のレベルを、フローサイトメトリー分析に
より測定した。図６Ｂは、脱感作された細胞が表面Ｉｇ−βと抗原結合ＢＣＲを
維持することを示す。詳細に述べると、図６Ｂは、抗Ｉｇ−β（左パネル）又は
ＮＰ7ＢＳＡ（右パネル）を用いた、抗原により脱感作した細胞の表面染色を示
す。黒い実線は、フィコエリトリン−ストレプトアビジン（左パネル）又はビオ
チン化ＢＳＡ（右パネル）で処理したナイーブ細胞の染色を示す。各パネルの太
線は、Ｉｇ−β（左パネル）又は攻撃量のＮＰ7ＢＳＡ（２μｇ／５×１０6細胞
／０．１ｍｌ；右パネル）を用いて氷上で１０分間染色したナイーブ細胞の染色
を示す。点線は、ＮＰ7ＢＳＡ（２５ｎｇ／５×１０6細胞／ｍｌ）で２時間、脱
感作した細胞のＩｇ−β染色（左パネル）又はＮＰ7ＢＳＡ染色を示す（２μｇ
／５×１０6細胞／０．１ｍｌ；右パネル）。各集団の平均蛍光強度（ＭＦＴ）
を、各パネルの上段右に示す。図６Ｂに示すように、抗原処理細胞は、未処理細
胞と比較して表面Ｉｇ−βの約７１％を、抗原結合能の８２％を保った。ｍＩｇ
会合Ｉｇ−α／Ｉｇ−βの８０％減少を考えると、これは、ＢＣＲ成分の不安定
化が細胞表面上で起こることを示している。
【００９８】実施例８ 以下の実施例はＩｇ−α／Ｉｇ−β二量体が引き続き抗原脱感作化細胞に続け
てシグナルを伝達できることを示している。 我々のこれまでの知見は、受容体もＬｙｎも、脱感作化細胞の刺激を受けてリ
ン酸化されたチロシンではないことを示している。これらの細胞から単離された
受容体結合Ｌｙｎは二重にリン酸化したＩＴＡＭペプチド類に結合することで活
性化される場合がある（Vilen et al., 1997）。このことは、ＢＣＲシグナル伝
達に関与するエフェクター分子が脱感作化細胞では機能を発揮できるが、受容体
活性化の初期段階には欠陥があることを示唆している。これらの結果を考え合わ
せて、本発明者らは、脱感作化がｍＩｇからＩｇ−α／Ｉｇ−β二量体へ、そし
て下流のエフェクターへシグナル伝達できないことを反映していると考える。も
しこれが事実であれば、脱感作細胞表面にあるＩｇ−α／Ｉｇ−βサブユニット
はシグナルを伝達する能力を維持するはずである。Ｉｇ−α／Ｉｇ−βサブユニ
ットが細胞集合化した場合にシグナルを伝える能力を維持するかどうかをテスト
するために、モノクローナル抗Ｉｇ−β抗体ＨＭ７９が抗原脱感作化細胞へのシ
グナル伝達を誘発するかどうかが調べられた。図７（上側）は、抗λ（２μｇ／
５ｘ１０6／細胞／０．１ｍｌ；レーン２及び５）及び抗Ｉｇ−β（１μｇ／５
ｘ１０6／細胞／０．１ｍｌ；レーン３及び６）あるいは高用量のＮＰ7ＢＳＡ（
２μｇ／５ｘ１０6／細胞／０．１ｍｌ；レーン４及び７）で刺激を与えた、Ｋ
４６μ細胞（レーン１−４）あるいはＮＰ7ＢＳＡで２時間脱感作された天然の
Ｋ４６μ細胞（２５ｎｇ／５ｘ１０6細胞／ｍｌ；レーン５−７）の抗ホスホチ
ロシン免疫ブロットを示している。図７の下側の部分は、ストリップ後、負荷の
違いを明らかにするために抗Ｉｇ−αで再プローブした膜を示している。図７に
示されているように、抗原で脱感作されたＫ４６μ細胞は抗βに対しては依然と
して反応性を示すが（レーン３とレーン６を比較）、高用量の抗原による刺激（
レーン４とレーン７の比較）、あるいは高λによる刺激（レーン２とレーン５の
比較）に対しては反応を示さなかった。チロシンリン酸化におけるこれらの違い
はＩｇ−α免疫ブロットによって示されるようにタンパク質全細胞溶解物の量の
違いによるものではない。用いられた条件の下では、細胞は未処理の細胞とほぼ
同様の抗原結合ｍＩｇ及びＩｇ−βレベルを保有していることに留意しておくこ
とは重要である。これらの結果は脱感作化細胞が脱感作された表面ＢＲＣを有し
ているが、Ｉｇ−α／Ｉｇ−βシグナル伝達サブユニットは依然としてシグナル
伝達できることを示している。これらの結果は、ＢＣＲ複合体の脱安定化が脱感
作受容体の非応答状態に少なくとも部分的に関与していることを示唆している。
【００９９】 上に述べたデータは、受容体の細胞凝集がＢ細胞抗原受容体の脱感作と物理的
不安定化の両方を誘発することを示している。不安定化はＩｇ−α／Ｉｇ−βと
ｍＩｇとの会合度の低下を特徴としていた。ＢＣＲ不安定化と受容体脱感作は両
方とも、受容体結合から１５−３０分後に起き、両方とも受容体の凝集とタンパ
ク質チロシンキナーゼの活性化を必要とする。ホスファターゼの抑制によるタン
パク質チロシンリン酸化の増強は抗原と比較して量的に同様のレベルのエフェク
ターリン酸化を誘発するにも拘わらずこうした事象を引き起こさないので、ＢＣ
Ｒを不安定にするシグナルは受容体特異的なものである。さらに、抗原脱感作化
細胞はトランスデューササブユニットを通じてシグナルを送りつづけることがで
き、このことは脱感作化が抗原がｍＩｇＭに結合した後、Ｉｇ−α／Ｉｇ−βト
ランスデューサ複合体にシグナルを送ることができないことによって引き起こさ
れることを示唆している。これらを考え合わせると、これらのデータは受容体脱
感作化が脱感作化された抗原とそして恐らくはアネルジー性Ｂ細胞の不応答性を
媒介する上で一定の役割を果たしていることを示唆している。
【０１００】 受容体／トランスデューサ複合体の物理的な解離はこれまでにもＴ細胞につい
て述べてきた。Ｔ細胞受容体ＣＤ３複合体（ＴＣＲ−ＣＤ３）はＴＣＲ−α／β
あるいはγ／δで構成されており、解離されたＣＤ３複合体はγ、δ及びεとＴ
ＣＲ−ζファミリータンパク質の二量体（ζとη）で構成されている。抗ＣＤ３
ライゲーションが起きると、ＴＣＲ−α／βはＣＤ３ε複合体の表面発現には何
にも影響を及ぼさないまま細胞表面からモジュレートされる（Kishimoto et al.
, 1995）。同様に、ＣＤ３ηはその他のＴＣＲサブユニットの半減期とは異なっ
た半減期を示すことが報告されている（Ono et al., 1995）。これらの結果は受
容体ライゲーションに続いてＴＣＲ複合体の物理的な解離が起きるが、これらの
実験をＢ細胞（つまり、ＩｇαあるいはＩｇβ）に直接外挿するとＢＣＲシグナ
ル伝達がもたらされることを明らかにした。従って、本発明以前は、受容体ライ
ゲーションに続くこうした生理学的解離がＢ細胞抗原受容体、プレＢ細胞受容体
、プロＢ細胞受容体そしてＩｇＦｃＲなどの他のマルチサブユニット抗原受容体
の特徴であることを示す示唆はなかった。
【０１０１】 本明細書で開示されているデータは受容体脱感作化細胞において、下流キナー
ゼが薬学的に活性化され得ること、そして、非応答状態にある欠陥保有脱感作化
細胞が受容体のレベルにあること（Vilen et al., 1997）を示している従来の研
究に対して予想外の説明を提供する。ここに示されているデータは抗Ｉｇ−βに
よる脱感作化細胞の刺激がシグナル伝達をもたらすことを示しており、脱感作化
された受容体の非応答性がｍＩｇからＩｇ−α／Ｉｇ−β二量体への「シグナル
」を伝達することができないことを反映していることを示唆している。ＢＣＲラ
イゲーションによって「トランス」で脱感作化されない表面Ｉｇα／βの他のプ
ールがＩｇ−βを通じてのシグナル伝達に関与しているということも有り得る。
【０１０２】 理論に拘束されるわけではないが、本発明者らによって発見された受容体解離
に対しては２つの作用メカニズムを想定することができる。第１は、すべての細
胞表面のＢＣＲが実際に不安定化され、従って脱感作化されるということであり
、第２はＩｇ−α／Ｉｇ−βと共沈着し続けるｍＩｇの割合に比例してシグナル
伝達能力が保持されるということである。後者が事実であるなら、データは、不
安定化される受容体以上（６０−８０％）に希釈されると、これら「能力を有す
る（コンピテントな）」ＢＣＲはシグナル閾値を達成することができないことを
示唆している。脱感作化細胞上の能力を有する受容体の密度は受容体の凝集及び
シグナル伝達の再開を防ぐのに十分な程度に低いことは公式に証明されているが
、Ｔ細胞に対する本データの外挿は抗原に対する感作性の決定には受容体の絶対
的な数が重要であることを示唆している。Ｔ細胞受容体の表面密度を３５％程度
まで低くすると、活性化閾値に到達するのに必要な抗原の量が不釣合いな程増大
した（Viola and Lanzavecchia, 1996）。表面ＴＣＲ密度の変化の影響測定はリ
ガンド結合及びその後の受容体のダウンモジュレーションによって行われ、この
プロセスは数日を要した。ＢＣＲ不安定化モデルでは、こうした結果は受容体ダ
ウンモジュレーションの前に１５−３０分で行うことができる。この初期の刺激
後効果が受容体複合体の不安定化によってほとんどの受容体を不活性化して機能
性ＢＣＲの数を急激に減少させるメカニズムをもたらしている。
【０１０３】 この研究で用いられた受容体脱感作化のインビトロモデルは最大のＣａ2+動員
及び最大の誘導チロシンリン酸化をもたらすために滴下される抗原の量による表
面受容体の脱感作化の報告に基づいている。２５ｎｇ／５×２１０6細胞／ｍｌ
という抗原の用量は残りの受容体の抗原ライゲーションによるこれらの細胞の刺
激を可能にする総表面受容体の総細胞のわずか２５％を占めるに過ぎない。この
受容体に対するＮＰの親和性は温和であるから（ＫD＝５／１０6）、内部結合さ
れた受容体が解離された場合に抗原によって結合されたのかどうかは明らかでは
ない。しかしながら、脱感作化後のビオチン化抗原による細胞染色が、それら細
胞が非応答状態ではあるものの、最初の細胞表面受容体の７０％が依然として刺
激を受けると抗原を結合させる能力を保有していることを明らかにした（Vilen
et al.,1997 ）。従って、受容体の占有率に対する脱感作化の依存性の評価は困
難である。理論に拘束されるわけではないが、本発明者らは図２Ｃ及び図４で、
受容体の２５％程度しか占めないことが分かっている抗原の用量が脱感作化と不
安定化を誘発するのであるから、ＢＣＲの不安定化には受容体のうちの小部分だ
けのライゲーションを必要とするのだと考えている。しかしながら、抗原の量が
低い場合に、ここで述べているような不安定化と脱感作化にすべての受容体の本
格的な関与が必要であるという可能性も排除できない。受容体の本格的な関与と
いう可能性を排除するための（抗ＨＥＬ形質転換マウスなどの）より高い親和性
受容体／抗原システムを用いた試みは、凝集後に受容体が可溶化剤不溶性部分に
急速に移行してしまうので、結論的なことは言えない（図１、パネル４）。
【０１０４】 Ｋ４６μリンパ腫及び３−８３μδ脾臓Ｂ細胞（図１及び３）の両方で抗原結
合の後に受容体を急速にダウンモジュレーションできないということは、刺激し
ていない細胞と刺激した細胞の両方からｍＩｇＭが等量づつ免疫沈降する能力と
の一貫性を示しているが、抗受容体混合体ライゲーションが受容体のキャッピン
グとエンドサイトーシスを刺激するというこれまでの観察（Albrecht and Noell
e, 1988; Braun et al., 1982; Goroff et al., 1986; Woda and MacFadden,198
3; Woda and Woodin, 1984）とは対照的である。本明細書に述べられているデー
タは、この異なる挙動が抗原のその受容体に対する異なった親和性から来ている
ことを示唆している。細胞骨格に対するｍＩｇＭの付着に関するこれまでの研究
では一貫して高親和性の抗受容体抗体が用いられた。本研究では、細胞表面から
の喪失と一致した抗原結合受容体の可溶化剤不溶画分への急速な移行は長時間の
中程度親和性抗原結合（３時間より長い）後だけ、ただしＢＣＲへの親和性高受
容体抗体結合にすぐ続いて観察された（Vilen and Cambier, 未発表観察結果、
及び図１、パネル４）。この反応の親和性に対する依存は、本発明者らのデータ
と、ＢＣＲ複合体の画分としての膜骨格へのリガンドによって誘発されるＩｇ−
αのトランスロケーションを示すＪｕｇｌｏｆｆ及びＪｏｎｇｓｔｒａ−Ｂｉｌ
ｅｎによって発表されたデータ（Jugloff and Jongstra-Bilen, 1997）との見か
け上の矛盾を説明するかも知れない。受容体が膜のラフトに移動する速度もリガ
ンド親和性の関数であるかどうかはまだわかっていない。今日までの研究が、ラ
フトあるいは可溶化剤抵抗性膜領域へのリガンドに誘発された受容体の移行を証
明するために、高親和性相互作用（抗ＴＣＲ及びＤＮＰ−ＩｇＥ／Ｆｃε／Ｒ１
）だけを用いていることは注目すべきことである（Field et al., 1997; Xavier et al., 1998; Zhang et al.,1998）。明らかに、温和な親和性を有する抗原（
ＮＰ−ＫD＝１．５ｘ１０-6及び３−３８ａｇＩ50Ｄｅｘ−ＫD＝約１０-5から１
０-6）は一次免疫反応中のＢ細胞の抗原との相互作用により適した状況を示して
いる。
【０１０５】 ｍＩｇからのＩｇ−α／Ｉｇ−β解離の正確なメカニズムはこれまで分からな
かった。これまでの研究はＩｇ−α／Ｉｇ−βとｍＩｇとの会合にはｍＩｇの膜
貫通領域及び細胞外スペーサとＩｇ−α／Ｉｇ−βの未確認領域との間の相互作
用が関与していることを示している。Ｉｇ−α／Ｉｇ−β会合が存在しない状況
の下で小胞体内のｍＩｇの保持を媒介し、Ｉｇ−α／Ｉｇ−βとの相互作用を安
定化させるｍＩｇの膜貫通領域内で２つの極性領域が確認されている（Campbell
et al., 1994; Pao et al., 1997 で概説）。本発明者等は、理論に拘束される
わけではないが、転写後の事象としてＢＣＲ複合体の誘発された安定化が急速に
起きることはトランスデューササブユニットのｍＩｇからの分離が媒介している
に違いないと考えている（図２Ｂ）。加えて、タンパク質チロシンキナーゼ活性
化が受容体不安定化に必要であるというこの知見は特定のキナーゼの活性化がそ
の事象を起こり易くさせているかもしれないことを示唆している（図４及び５Ａ
）。メカニズム的に言えば、これにはＩｇ−α／Ｉｇ−βあるいはｍＩｇの膜貫
通領域内の残基の修飾が関与しているかもしれない。しかしながら、何か別の細
胞表面分子の修飾が受容体の不安定化に関与していることもあり得る。受容体の
脱感作化に続くＢＣＲ成分の抗ホスホチロシン免疫ブロットで量的な違いが見ら
れないことから、操作可能な修飾に受容体のチロシンリン酸化が関与しているこ
とはありそうにもない（Vilen and Cambier 、未公開データ）。
【０１０６】 ＢＣＲの不安定化はＴ細胞−Ｂ細胞相互作用中の不応答性期間の促進と寛容性
Ｂ細胞の不応答性の維持に重要な生理学的機能を果たしているかもしれない。Ｂ
ＣＲに対する内因性と外因性の抗原のＢＣＲに対する結合は区別できないような
「第１の」シグナルを伝達し、それがＣＤ８６及びＭＨＣクラスＩＩ発現を増強
させて、Ｂ細胞のＴh細胞との生産的な相互作用開始の条件を整える。Ｂ細胞が
アネルギー性になるか、あるいは増殖及び分化するかどうかは抗原固有Ｔh細胞
からの「第２」のシグナルに依存している。ＢＣＲ不安定化の１つの機能は不応
答性期間をもたらし、Ｂ細胞が適切なＴ細胞相互作用に必要な共刺激性分子を増
大させるのかもしれない。この増強された発現は一過性で、ＣＤ８６及びＭＨＣ
クラスＩＩの場合１８−４８時間継続するが、興味深いことにＣＤ８６はアネル
ギー性細胞の抗原による再刺激によってもアップレギュレートされない（Ho et
al., 1994 ）。この不応答性期間は細胞に対して「第２」のシグナルを受け取る
ひとつの機会を与え、それによって自動反応性クローンが拡大されないようにし
ているチェックポイントを提供しているのかもしれない。従って、抗原によって
刺激を受けても（シグナル１）、Ｔ細胞援助（シグナル２）を受け取ることがで
きない細胞は不応答性状態を持続し、そして死ぬようになっているのである（ha
rtley et al., 1993）。従って、ＢＣＲ不安定化の第２の機能は自動反応性細胞
を不応答状態に保持することかもしれない。ＢＣＲの不安定化がアネルギーに関
連した長期間の不応答性に関与しているかどうかは明らかではないが、こうした
メカニズムは報告されているアネルギーを維持するための抗原の持続的必要性と
一貫しているであろう（Vilen and Cambier 、未発表観察結果、Goodnow et al.
, 1991）。新たに合成された受容体を不安定化させるために抗原の持続的存在が
必要であるかもしれない。
【０１０７】実施例９ 以下の実施例はＢ細胞における受容体脱感作化を誘発することができる抗体の
生産と特徴づけを示すものである。 抗原誘発受容体脱感作化が受容体不安定化と関係しているという上記の知見は
本発明者らに対して、受容体複合体が安定した構成と不安定な構成の平衡状態で
通常存在している可能性があることを示唆した。さらに、不安定な受容体はシグ
ナル伝達を行うことができないから、不安定な構成で受容体を捕捉する抗体は抗
原に対する不応答性を誘発する可能性がある。こうした抗体は自己免疫疾患の治
療に有効な治療剤となるであろうし、免疫抑止が望ましい場合にも使用すること
ができるであろう。
【０１０８】 従って、抗体が受容体脱感作化のための化合物として役立つ可能性をテストす
るため、Ｉｇ−α／Ｉｇ−βの細胞外ドメインに対するモノクローナル抗体を作
製して、シグナル伝達を示すものとしてのこれらの抗体のカルシウム動員の抗原
による刺激を阻止する能力についてテストした。
【０１０９】マウスＩｇ−α／Ｉｇ−βペプチドの作製 マウスＩｇ−α／Ｉｇ−βの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をコードするｃＤＮＡ
を遺伝子生成物の最終的な精製を可能にするペプチド配列であるフラッグタグを
含むバキュロウイルス伝達ベクター内に結合させた。この伝達ベクターを用いて
クローン性ウイルスをつくり、それを用いてＳＦ９細胞に感染させた。このＳＦ
９細胞はＩｇ−α／Ｉｇ−β ＥＤＣを二量体として発現し、これは後で抗フラ
ッグカラムで精製した。
【０１１０】ハムスターにおけるモノクローナル抗体の作製 上に述べたようにして作製されたＩｇ−α／Ｉｇ−β ＥＣＤ（５０μｇ）を
ミョウバンで沈積させて、アメリカンハムスターの腹膜内に注射した。ハムスタ
ーは１ヶ月の間隔を置いて２回の５０μｇ沈積ペプチドの腹膜内注射を受け、４
ヵ月後の、ハムスターの脾臓細胞をＳＰ２／Ｏ（マウスＢ細胞骨髄腫親細胞株）
との融合を行う日より７日前に最後の注射を受けた。このハムスターをＣＯ2で
麻酔にかけ、ポジティブコントロール血清のために心臓穿刺によって血液を引き
出し、脾臓を無菌状態で取り出した。単一細胞脾臓細胞懸濁液を作成して約１０
：１の比率でＳＰ２／０細胞と混ぜ合わせた。組み合わされた細胞を遠心分離で
ペレット化し、その後、４０％ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）８０００ｗｔ
／ｖｏｌを用いて融合させた。融合された細胞をＩＭＤＭ培地内で洗浄してＢ１
０．Ｄ２マウスからの３０００ラッドで照射した１ｘ１０4／ｍｌ腹膜滲出液細
胞を含むＨＡＴ培地（ＩＭＤＭ＋１０％ウシ胎児血清、グルタミン、２−メルカ
プトエタノール、ピルビン酸ナトリウム、ペニシリン−ストレプトマイシン、ゲ
ンタマイシン、ヒポキサンチン、チミジン及びアミノプテリン）内にゆっくり再
懸濁させ、９６ウェル平底プレートで培養した。通常のＳＰ／２細胞もＨＡＴ培
地内で比較対象として培養した。ＳＰ／２０細胞はＨＡＴ培地内で死んだが、ハ
イブリッド細胞は生き延びた。得られた２４６の培養体をＩＭＤＭ内に保持して
、最終的に５週間かけてＨＡＴ培地（ヒポキサンチン、チミジン、アミノプテリ
ンを含む）から離した。上澄液をアッセイのために回収して、細胞を後の利用に
備えて液体窒素内で凍結保存した。
【０１１１】ＥＬＩＳＡによるハイブリッド上澄液のアッセイ Ｉｇ−α／Ｉｇ−β ＥＣＤタンパク質を基質として用いるサンドウィッチＥ
ＬＩＳＡによって上澄液を最初にスクリーニングした。１０μｇ／ｍｌに希釈し
た基質を９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに結合させて、洗浄した。上澄液を１：
１０に希釈して基質に結合させ、洗浄した。用いた生成用抗体はヤギ抗アメリカ
ンハムスターＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ）−ホースラディッシュ：ペルオキシダーゼを１：
５０，０００で混合したものであった。抗体の反応性は結合に基づいて０−３で
採点し、３を最高の結合状態とした。３３個のクローンがＥＬＩＳＡで基質と反
応性を示した。これらのクローンのうちの１５個をその反応性について２あるい
は３に分類して、さらなる特徴づけを行うために選択した。
【０１１２】抗体の精製 選択された抗体を生成する細胞を１−４リットル体積内で９５％以上の細胞死
が達成されるまで増殖させて、上澄液をタンパク質Ａセファロースカラムで精製
した。２つのクローンはタンパク質Ｇセファロースでの精製を必要とした。
【０１１３】ハイブリッド細胞抗体によるＫ４６μ細胞の染色 ２つの別個の染色実験を行った。最初の実験で、Ｋ４６μ細胞（ｍＩｇＭ抗ニ
トロフェニル受容体を発現するマウスＢリンパ腫）（９６ウェルプレートで１ウ
ェルあたり１０．５ｘ１０6個）を染色媒体（ＰＢＳ＋２％ウシ胎児血清＋０．
２％アジ化ナトリウム）内で１００λのハイブリドーマ抗体（１００μｇあるい
は１０μｇ）を用いて４℃の温度下で３０分間培養した。プレートを回転させて
、細胞を染色媒体内で洗浄して、１００μｌ二次抗体、ヤギ抗アメリカンハムス
ターＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ）−ＦＩＣＴ（１：５００）内に再懸濁させた。プレートを
４℃で３０分間培養してから回転させ、細胞を染色媒体内で洗浄して、ＦＡＣＳ
分析を行うために再懸濁させた。ハイブリッドクローンのうちの２つはポジティ
ブで（１７２番及び３２番）、クローン１７２番の方がクローン３２番よりさら
にポジティブであった。
【０１１４】 第２の実験で、ハイブリドーマ抗体濃度は一定量に標準化しなかった。テスト
された抗体のタンパク質濃度は０．４１９ｍｇ／ｍｌ（３２番）及び１ｍｇ／ｍ
ｌ（１７２番）であった。Ｋ４６μをＩＭＤＭ内で２ｍｌあたり１．６６ｘ１０6 の割合で接種し、抗体を加えないか、あるいはテストされた各抗体の濃度を１
：１０として一晩（２０時間）培養した。従って、この一晩実験での細胞は、１
ｍｌあたり１００μｇの１７２番及び１ｍｌあたり４１．９ μｇの３２番で培
養した。約０．５×１０6個の細胞を各培地から９６ウェルプレートに移し、回
転し、細胞を染色媒体で洗浄してから１００λの二次抗体（上のパラグラフ参照
）内に再懸濁させた。プレートを４℃の温度下で３０分間培養してから、回転さ
せ、細胞を染色媒体で洗浄し、そしてＦＡＣＳ分析のために再懸濁させた。クロ
ーン１７２とクローン３２は両方ともポジティブに染色されたが、クローン３２
番は２０時間の培養後染色で最高の増大を示した。細胞（約２００，０００）を
各培地から９６ウェル内に移して、回転させ、細胞を染色媒体で洗浄してから１
００λ ｂ７６−ＦＩＴＣ １：１００（抗−μ）内に再懸濁させた。プレート
を４℃の温度下で３０分間培養してから、回転させ、細胞を染色媒体で洗浄して
から、ＦＡＣＳ分析のために再懸濁させた。細胞表面からの受容体の流動は一晩
の培養期間中は起きなかった。これらの一晩培養した細胞はカルシウムフラック
ス実験にも用いた。
【０１１５】ハイブリッド抗体によるＫ４６μ細胞のカルシウムフラックス １００μｇ／ｍｌのクローン１７２番あるいは４１．９μｇ／ｍｌのクローン
３２番の抗体の存在下でＫ４６μ細胞を上と同様に一晩培養した。これらと、未
処理のＫ４６μ細胞を取り出して、カルシウムインジケータＩｎｄｏ−１ＡＭに
入れた。その後、細胞内カルシウム濃度を１ｎｇ抗原（ＮＰ７ＢＳＡ）／１ｘ１
０6細胞／ｍｌ）で刺激を与える前と後でフローサイトメトリで観察した。図８
はこの実験の結果を示す。クローン３２番あるいはクローン１７２番を用いて行
った一晩培養すると、未処理の細胞と比較して抗原受容体媒介カルシウム動員を
かなり抑制した。クローン３２及び１７２の急性カルシウム応答を調べるために
、未処理のＫ４６μ細胞を５μｇの各抗体（１ｘ１０6細胞／ｍｌ）で刺激を与
えた。クローン１７２番による刺激は無視できる程度の反応をもたらしたが、ク
ローン３２番の場合はカルシウム濃度の変化はなかった。
【０１１６】 要約すると、上に述べた結果は、最初に選択した１５の抗Ｉｇα／βのうちの
２つの抗体は抗原への応答を阻止したが、それら自体が細胞に刺激を与えること
はないことを示した。これらのデータは、受容体複合体が通常は安定した構成と
不安定な構成の平衡状態にあるという本発明者の仮定と、不安定な受容体がシグ
ナル伝達の能力をもっていないように見えるために不安定な構成の受容体を捕捉
する抗体は抗原に対する不応答性を誘発することができるという結論とを、支持
している。理論に拘束されるわけではないが、本発明者らが免疫抑制性であると
考えるこれらの抗体は、今後、免疫応答を阻止する能力や生化学的に定義された
不安定な構成の受容体を捕捉する能力について試験されるであろう。
【０１１７】 参考文献 Albrecht, DL. and Noelle, R.J. (1988). Membrane Ig-cytoskeletal interact
ions. I.Flow cytofluorometric and biochemical analysis of membrane IgM-c
ytoskeletal interactions. J. Immunol. 141, 3915-22. Braun, J., Hochman, P.S., and Unanue, E.R. (1982). Ligand-induced associ
ation of surface immunoglobulin with the detergent-insoluble cytoskeleta
l matrix of the B lymphocyte. J. Immunol. 128, 1198-204. Brunswick, M., June, CH., and Mond, J.J. (1994). B lymphocyte immunoglob
ulin receptor desensitization is downstream of tyrosine kinase activatio
n. Cell. Immunol. 156, 240-4. Cambier, J., Chen, Z.Z., Pasternak, J., Ransom, J., Sandoval, V. and Pic
kles, H. (1988). Ligand-induced desensitization of B-cell membrane immun
oglobulin-mediated Ca2+ mobilization and protein kinase C translocation.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 6493-7. Cambier, J.C. (1995). New nomenclature for the Reth motif (or ARH1/TAM/A
RA.MJYXXL) [letter]. Immunol. Today 16, 110. Cambier, J.C., Fisher, C.L., Pickles, H., and Morrison, D.C. (1990). Dua
l molecular mechanisms mediate ligand-induced membrane Ig desensitizatio
n. J. Immunol. 145, 13-9. Campbell, K.S., Backstrom, B.T., Tiefenthaler, G., and Palmer, E. (1994)
. CART: a conserved antigen receptor transmembrane motif. Semin. Immunol
. 6, 393-410. Cooke, M.P., Heath, A.W., Shokat, K.M., Zeng, Y., Finkelman, F.D., Linsl
ey, P.S., Howard, M. and Goodnow, C.C. (1994). Immunoglobulin signal tra
nsduction guides the specificity of B cell-T cell interactions and is bl
ocked in tolerant self-reactive B cells. J.Exp.Med. 179, 425-38. DeFranco, A.L. (1997). The complexity of signaling pathways activated by
the BCR. Curr. Opin. Immunol. 9, 296-308. Erikson, J., Radic, M.Z., Camper, S.A., Hardy, R.R., Carmack, C., and We
igert, M. (1991). Expression of anti-DNA immunoglobulin transgenes in no
n-autoinnune mice. Nature (Lond.) 349, 33 1-4. Field, K.A., Holowka, D., and Baird, B. (1997). Compartmentalized activa
tion of the high affinity immunoglobulin E receptor with membrane domain
s. J. Biol. Chem. 272, 4276-80. Gay , D., Saunders, T., Camper, S., and Weigert, M. (1993). Receptor edi
ting: an approach by autoreactive B cells to escape tolerance. J. Exp. M
ed. 177, 999-1008. Goodnow, C.C., Brink, R., and Adams, E. (1991). Breakdown of self-tolera
nce in anergic B lymphocytes. Nature (Land.) 352, 532-6. Goodnow, C.C., Crosbie, J., Adelstein, S., Lavoie, T.B., Smith-Gill, S.J
., Brink, R.A., Pritchard-Briscoe, H., Wotherspoon, J.S., Loblay, R.H.,
Raphael, K., et al. (1988). Altered immunoglobulin expression and functi
onal silencing of self-reactive B lymphocytes in transgenic mice. Nature
(Lond.) 334, 676-82. Goodnow, C.C., Crosbie, J., Jorgensen, H., Brink, R.A., and Basten, A. (
1989). Induction of self-tolerance in mature peripheral B lymphocytes [s
ee comments]. Nature (Lond.) 342, 385-91. Goroff, D.K., Stall, A., Mond, J.J. and Finkelman, F.D. (1986). In vitro
and in vivo B lymphocyte-activating properties ofmonoclonal anti-delta
antibodies. I. Determinants of B lymphocyte activating properties. J. Im
munol. 136, 2382-92. Hartley, S.B., Cooke, Mr., Fulcher, D.A., Harris, A.W., Cory, S., Basten
, A., and Goodnow, C.C. (1993). Elimination of self-reactive B lymphocyt
es proceeds in two stages; arrested development and cell death. Cell 72,
325-35. Hertz, M. and Nemazee, D. (1997). BCR ligation induces receptor editing
in IgM-IgD bone marrow B cells in vitro. Immunity 6, 429-36. Ho, W.Y., Cook; M.P., Goodnow, C.C., and Davis, M.M. (1994). Resting and
anergic B cells are defective in CD28-dependent costimulation of naive
CD4+ T cells. J. Exp. Med. 179, 1539-49. Hombach, J., Tsubata, T., Leclercq, L., Stappert, H., and Reth, M. (1990
). Molecular components of the B-cell antigen receptor complex of the Ig
M class. Nature (Land.) 343, 760-2. Johnson, S.A., Plieman, C.M., Pao, L., Schneringer, J., Hippen, K., and
Cambier, J.C. (1995). Phosphorylated immunoreceptor signaling motifs (IT
AMs) exhibit unique abilities to bind and activate Lyn and Syk tyrosine
kinases. J. Immunol. 155, 4596-603. Jugloff L.S. and Jongstra-Bilen, J. (1977). Cross-linking of the IgM rec
eptor induces rapid translocation of IgM-associated Ig alpha, Lyn, and S
yk tyrosine kinases to the membrane skeleton. J. Immunol. 159, 1096-106.
Kim, K.J., Kannelopoulos-Langevin C., Merwin, R.M., Sachs, D.H., and Aso
fsky, R. (1979). Establishment and characterization of BALB/c lymphoma
lines with B cell properties. J. Immunol. 122, 549-54. Kim, K.M., Alber, G., Weiser, P. and Reth, M. (1993). Signalling functio
n of the B-cell antigen receptors. Immun. Rev. 132, 125-46. Kishimoto, H., Kubo, R.T., Yorifuji, H., Nakayama, T., Asano, Y., and Ta
da, T. (1995). Physical dissociation of the TCR-CD3 complex accompanies
receptor ligation. J. Exp. Med. 182, 1997-2006. Koyama, M., Ishihara, K., Karasuyama, H., Cordell, J.L., Iwamoto, A., an
d Nakamura, T. (1997). CD79 alpha/CD79 beta heterodimers are expressed o
n pro-B cell surfaces without associated mu heavy chain. Int. Immunol. 9
, 1767-72. Kurosaki, T. (1997). Molecular mechanisms in B cell antigen receptor sig
naling. Curr. Opin. Immunol. 9, 309-18. Lang, J., Jackson, M., Teyton, L., Brunmark, A., Kane, K. and Nemazee, D
. (1996). B cells are exquisitely sensitive to central tolerance and rec
eptor editing induced by ultralow affinity, membrane-bound antigen. J. E
xp. Med. 184, 1685-97. Nemazee, D.A. and Burki, K. (1989). Clonal deletion of B lymphocytes in
a transgenic mouse bearing anti-MHC class I antibody genes. Nature (Lond
.) 337, 562-6. Okamoto, M., Murakami, M., Shimizu, A., Ozaki, S., Tsubata, T., Kumagai,
S., and Honjo, T. (1992). A transgenic model of autoimmune hemolytic an
emia. I. Exp. Med. 175, 71-9. Ono, S., Ohno, H., and Saito, T. (1995). Rapid turnover of the CD3 zeta
chain independent of the TCR-CD3 complex in normal T cells. Immunity 2,
639-44. Pao, L., Carbone, A.M., and Cambier, J.C. (1997). Antigen Receptor Struc
ture and Signaling in B cells. In Lymphocyte Signalling: Mechanisms, Sub
versions and Manipulation, M.M. Harnett and R.K.P., eds.: John Wiley & S
ons Ltd.), pp. 3-29. Rathmell, J.C., Townsend, S.E., Xu, J.C., Flavell, R.A., and Goodnow, C.
C. (1996). Expansion or elimination of B cells in vivo: dual roles for C
D4O and Fas (GD95)-ligands modulated by the B cell antigen receptor. Cel
l 87, 319-29. Reth, M., Petrac, E., Wiese, P., Lobel, L., and Alt, F.W. (1987). Activa
tion of V kappa gene rearrangement in pre-B cells follows the expression
of membrane-bound immunoglobulin heavy chains. EMBO J. 6, 3299-305. Russell, D.M., Dembic, Z., Morahan, G., Miller, J.F., Burki, K., and Nem
azee, D. (1991). Peripheral deletion of self-reactive B cells. Nature (L
ond.) 354, 308-11. Sparks, A.B., Adey,N.B., Quilliam, L.A., Thorn, J.M., and Kay, BK. (1995
). Screening phage-displayed random peptide libraries for 5113 ligands.
Meth. Enzymol. 255,498-509. Vilen, B.J., Famiglietti, S.J., Carbone, A.M., Kay, B.K., and Cambier, J
.C. (1997). B cell antigen receptor desensitization: disruption of recep
tor coupling to tyrosine kinase activation. J. Immunol. 159, 231-43. Viola, A., and Lanzavecchia, A. (1996). T cell activation determined by
T cell receptor number and tunable thresholds [see comments]. Science 27
3, 104-6. Woda, B.A., and McFadden, M.L. (1983). Ligand-induced association of rat
lymphocyte membrane proteins with the detergent-insoluble lymphocyte cy
toskeletal matrix. J. Immunol. 131, 1917-9. Woda, B.A., and Woodin, M.B. (1984). The interaction of lymphocyte membr
ane proteins with the lymphocyte cytoskeletal matrix. J. Immunol. 133, 2
767-72. Xavier, R., Brennan, T., Li, Q., McCormack, C. and Seed, B. (1998). Memb
rane compartmentation is required for efficient T cell activation. Immun
ity 8, 723-32. Zhang, W., Trible, R.P., and Samelson, L.E. (1998). LAT palmitoylation:
its essential role in membrane microdomain targeting and tyrosine phosph
orylation during T cell activation. Immunity 9, 239-46.
【図面の簡単な説明】
【図１】 刺激していないＫ４６μ細胞、ＮＰ7ＢＳＡで１時間刺激した細
胞、又はビオチン化ｂ−７−６で１時間刺激した細胞におけるｍＩｇ−Ｉｇ−α
／Ｉｇ−β会合の比較分析を示すイムノブロットのデジタル化画像。
【図２Ａ】 低用量のＮＰ7ＢＳＡで脱感作したＫ４６μ細胞の抗ホスホチ
ロシンイムノブロットのデジタル化画像。
【図２Ｂ】 刺激していないＫ４６μ細胞及び時間コースにわたってＮＰ7
ＢＳＡで刺激した細胞由来の抗μ免疫沈降物の抗Ｉｇ−α及び抗μイムノブロッ
トのデジタル化画像。
【図２Ｃ】 刺激していないＫ４６μ細胞及び増大用量のＮＰ7ＢＳＡで刺
激した細胞由来の抗μ免疫沈降物の抗Ｉｇ−α及び抗μイムノブロットのデジタ
ル化画像。
【図３】 ＩｇＭとＩｇＤとを含む受容体におけるｍＩｇ−Ｉｇ−α／Ｉｇ
−β不安定化の発生を示すデジタル化画像。
【図４Ａ】 ＮＰ7ＢＳＡ又はＮＰ2ＢＳＡで脱感作したＫ４６μ細胞の抗ホ
スホチロシンイムノブロットを示すデジタル化画像。
【図４Ｂ】 刺激していない細胞と２用量のＮＰ7ＢＳＡ又はＮＰ2ＢＳＡで
感作した細胞由来のＩｇＭ免疫沈降物の抗Ｉｇ−α及び抗μイムノブロットを示
すデジタル化画像。
【図５Ａ】 抗Ｌｙｎ又は抗Ｓｙｋ免疫沈降物の抗ホスホチロシンイムノブ
ロットを示すデジタル化画像。
【図５Ｂ】 刺激していない細胞、抗原で２時間刺激した細胞、ハービマイ
シンで処理したが刺激はしていない細胞、及びハービマイシンで処理し２時間抗
原刺激した細胞由来のＩｇＭ免疫沈降物の抗Ｉｇ−α及び抗μイムノブロットを
示すデジタル化画像。
【図５Ｃ】 抗Ｉｇ−α免疫沈降反応の抗ホスホチロシンイムノブロットを
示すデジタル化画像。
【図５Ｄ】 ＩｇＭ免疫沈降物の抗Ｉｇ−α及び抗μイムノブロットを示す
デジタル化画像。
【図６Ａ】 ビオチン化細胞由来の抗μ免疫沈降物の実験的設計及びストレ
プトアビジンイムノブロットの略図を示すデジタル化画像。
【図６Ｂ】 抗Ｉｇ−β又はＮＰ7ＢＳＡによる表面染色を示すグラフ。
【図７】 脱感作した細胞がＩｇ−βを介したシグナルに対してコンピテン
トなままであることを示すデジタル化画像。
【図８】 本発明の２種の抗体が抗原に対するＢ細胞応答を減衰させること
を示すグラフ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 7/00 Ａ６１Ｐ 7/06 7/06 9/10 9/10 13/12 13/12 21/04 21/04 25/00 １０１ 25/00 １０１ 29/00 29/00 １０１ １０１ 37/00 37/00 37/08 37/08 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ 33/50 33/566 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2G045 AA25 CA19 FB03 JA04 JA20 4C084 AA01 AA16 CA56 NA14 ZA02 ZA36 ZA55 ZA81 ZA94 ZA96 ZB05 ZB07 ZB08 ZB09 ZB11 ZB13 ZB15 ZC35 4C085 AA14 AA34 AA37 BB34 BB37 BB42

Claims (49)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】Ｂ細胞抗原受容体、プロＢ細胞受容体、プレＢ細胞受容体、及
    びＩｇ Ｆｃ受容体から成る群より選択された受容体を脱感作する方法であって
    、 Ｂ細胞抗原受容体、プロＢ細胞受容体、プレＢ細胞受容体、Ｉｇ Ｆｃ受容体
    、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体から成る群から選択された、トラン
    スデューサ成分と細胞外リガンド結合成分とを備えた受容体を調節化合物と接触
    させる工程から成り、 前記調節化合物との接触により、（１）前記トランスデューサ成分と前記細胞
    外リガンド結合成分とが前記調節化合物との接触前に互いに会合されている場合
    には、前記トランスデューサ成分から前記細胞外リガンド結合成分が解離される
    か、又は（２）前記トランスデューサ成分と前記細胞外リガンド結合成分とが前
    記調節化合物との接触前に互いに解離されている場合には、前記細胞外リガンド
    結合成分の前記トランスデューサ成分との会合が阻害される、方法。
  2. 【請求項２】前記調節化合物が前記トランスデューサ成分と結合する請求項
    １に記載の方法。
  3. 【請求項３】前記調節化合物が前記細胞外リガンド結合成分と結合する請求
    項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】前記トランスデューサ成分と前記細胞外リガンド結合成分とが
    互いに解離されている場合に前記調節化合物が前記細胞外リガンド結合成分の前
    記トランスデューサ成分との会合を阻害する請求項１に記載の方法。
  5. 【請求項５】前記調節化合物は、前記受容体が該受容体の天然リガンドによ
    って結合されると、前記細胞外リガンド結合成分の一部と接触する前記トランス
    デューサ成分の一部に選択的に結合し、それによって前記細胞外リガンド結合成
    分の前記トランスデューサ成分との接触が阻害される請求項４に記載の方法。
  6. 【請求項６】前記調節化合物は、前記受容体が該受容体の天然リガンドによ
    って結合されると、リン酸化される前記細胞外リガンド結合の一部と接触する前
    記トランスデューサ成分の一部に選択的に結合し、それによって前記細胞外リガ
    ンド結合成分のリン酸化が阻害される請求項４に記載の方法。
  7. 【請求項７】前記調節化合物は、抗体、ペプチド及びそれらのミメトープか
    ら成る群より選択される請求項１に記載の方法。
  8. 【請求項８】前記調節化合物は抗体である請求項１に記載の方法。
  9. 【請求項９】前記抗体は一価である請求項８に記載の方法。
  10. 【請求項１０】前記抗体は二価である請求項８に記載の方法。
  11. 【請求項１１】前記抗体は前記トランスデューサ成分と結合する請求項８に
    記載の方法。
  12. 【請求項１２】前記抗体は、 ａ．前記受容体と結合し、（１）前記トランスデューサ成分と前記細胞外リガ
    ンド結合成分とが前記調節化合物との接触前に互いに会合されている場合には、
    前記トランスデューサ成分から前記細胞外リガンド結合成分を解離させるか、又
    は（２）前記トランスデューサ成分と前記細胞外リガンド結合成分とが前記調節
    化合物との接触前に互いに解離されている場合には、前記細胞外リガンド結合成
    分の前記トランスデューサ成分との会合を阻害する第１の部分と、 ｂ．前記受容体を発現する細胞によって発現された細胞表面分子と選択的に結
    合する第２の部分と を備えた二種特異的抗体である請求項８に記載の方法。
  13. 【請求項１３】前記第２の部分が自己反応性Ｂ細胞により発現された細胞表
    面分子と結合する請求項１２に記載の方法。
  14. 【請求項１４】前記第２の部分が前記Ｂ細胞抗原受容体の抗原結合領域と結
    合する請求項１２に記載の方法。
  15. 【請求項１５】前記受容体が、Ｂ細胞抗原受容体、プロＢ細胞受容体、及び
    プレＢ細胞受容体から成る群より選択される請求項１に記載の方法。
  16. 【請求項１６】前記トランスデューサ成分がＩｇα及びＩｇβから成る群よ
    り選択される請求項１５に記載の方法。
  17. 【請求項１７】前記調節化合物が前記トランスデューサ成分と選択的に結合
    し、前記細胞外リガンド結合成分の前記トランスデューサ成分との会合を阻害す
    る請求項１５に記載の方法。
  18. 【請求項１８】前記細胞外結合成分がＩｇＤ及びＩｇＭから成る群より選択
    されるｍＩｇを含む請求項１５に記載の方法。
  19. 【請求項１９】前記Ｂ細胞抗原受容体が、自己免疫疾患に関連する抗原に選
    択的に結合する請求項１５に記載の方法。
  20. 【請求項２０】前記Ｂ細胞抗原受容体が、移植片細胞に関連する抗原に選択
    的に結合する請求項１５に記載の方法。
  21. 【請求項２１】前記受容体が、自己反応性Ｂ細胞、移植片上の抗原に選択的
    に結合するＢ細胞抗原受容体を有するＢ細胞、Ｂ細胞リンパ腫及び慢性リンパ球
    白血病細胞から成る群より選択される請求項１５に記載の方法。
  22. 【請求項２２】前記調節化合物が、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトー
    デス、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、グレーブズ病、
    自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、グッドパスチャー症候群、
    尋常性天疱瘡、急性リウマチ熱、連鎖球菌後糸球体腎炎、及び結節性多発動脈炎
    から成る群より選択された自己免疫疾患を有する患者に投与される、請求項１５
    に記載の方法。
  23. 【請求項２３】前記受容体は、ＦｃαＲＩ、ＦｃεＲＩ、ＦｃγＲＩ、Ｆｃ
    γＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＩＩＩｂから成る群より
    選択されたヒトＩｇ Ｆｃ受容体であり、前記調節化合物は、前記Ｆｃ受容体の
    細胞外リガンド結合ドメインに選択的に結合する請求項１に記載の方法。
  24. 【請求項２４】前記細胞外結合成分はα受容体を有する請求項２３に記載の
    方法。
  25. 【請求項２５】前記受容体は受容体細胞外リガンド結合成分とβ／γトラン
    スデューサ成分とを備えたＦｃεＲＩ受容体である請求項２３に記載の方法。
  26. 【請求項２６】前記受容体はマスト細胞及び好塩基球から成る群より選択さ
    れた細胞により発現される請求項２３に記載の方法。
  27. 【請求項２７】前記調節化合物は炎症に関連する症状を有する患者に投与さ
    れる請求項２３に記載の方法。
  28. 【請求項２８】前記症状はアレルギーの炎症に関連する請求項２７に記載の
    方法。
  29. 【請求項２９】前記受容体は細胞外リガンド結合成分ＫＩＲＤＬとトランス
    デューサ成分ＤＡＰ１２とを備えたＮＫ受容体である請求項１に記載の方法。
  30. 【請求項３０】前記調節化合物は医薬として許容される担体と前記化合物と
    を含む治療組成物として患者に投与される請求項１に記載の方法。
  31. 【請求項３１】前記治療組成物がインビボで投与される請求項３０に記載の
    方法。
  32. 【請求項３２】前記治療組成物がエキソビボで投与される請求項３０に記載
    の方法。
  33. 【請求項３３】前記調節化合物をインビトロ検定で前記受容体と接触させる
    請求項１に記載の方法。
  34. 【請求項３４】Ｂ細胞抗原受容体、Ｉｇ Ｆｃ受容体、及びＮＫ受容体から
    成る群より選択された受容体を脱感作する単離調節化合物であって、前記受容体
    は細胞外リガンド結合成分とトランスデューサ成分とを有し、前記調節化合物は
    、前記受容体と選択的に結合すると共にその結合によって（１）前記細胞外リガ
    ンド結合成分を前記トランスデューサ成分から解離させるか、及び／又は（２）
    前記細胞外リガンド結合成分が前記トランスデューサ成分と会合するのを阻害す
    るという能力によって同定される、単離調節化合物。
  35. 【請求項３５】前記単離調節化合物がペプチド、抗体及びそれらのミメトー
    プから成る群より選択される請求項３４に記載の単離調節化合物。
  36. 【請求項３６】前記化合物は抗体である請求項３４に記載の単離調節化合物
    。
  37. 【請求項３７】前記抗体は一価である請求項３６に記載の単離調節化合物。
  38. 【請求項３８】前記抗体は、 ａ．前記受容体と結合し、（１）前記トランスデューサ成分と前記細胞外リガ
    ンド結合成分とが前記調節化合物との接触前に互いに会合されている場合には、
    前記トランスデューサ成分から前記細胞外リガンド結合成分を解離させるか、又
    は（２）前記トランスデューサ成分と前記細胞外リガンド結合成分とが前記調節
    化合物との接触前に互いに解離されている場合には、前記細胞外リガンド結合成
    分の前記トランスデューサ成分との会合を阻害する第１の部分と、 ｂ．前記受容体を発現する細胞によって発現された細胞表面分子と選択的に結
    合する第２の部分と を備えた二種特異的抗体である請求項３６に記載の単離調節化合物。
  39. 【請求項３９】前記抗体が前記トランスデューサ成分と結合する請求項３６
    に記載の単離調節化合物。
  40. 【請求項４０】前記抗体が前記細胞外リガンド結合成分の前記トランスデュ
    ーサ成分との会合を阻害する請求項３６に記載の単離調節化合物。
  41. 【請求項４１】前記受容体がＢ細胞抗原受容体であり、前記抗体はＩｇα及
    びＩｇβから成る群より選択されたトランスデューサ成分と結合する請求項３６
    に記載の単離調節化合物。
  42. 【請求項４２】前記抗体は、前記受容体が該受容体の天然リガンドによって
    結合されると、前記細胞外リガンド結合成分の一部と接触する前記トランスデュ
    ーサ成分の一部に選択的に結合し、それによって前記細胞外リガンド結合成分の
    前記トランスデューサ成分との接触が阻害される請求項３６に記載の単離調節化
    合物。
  43. 【請求項４３】前記抗体は、前記受容体が該受容体の天然リガンドによって
    結合されると、リン酸化される前記細胞外リガンド結合の一部と接触する前記ト
    ランスデューサ成分の一部に選択的に結合し、それによって前記細胞外リガンド
    結合成分のリン酸化が阻害される請求項３６に記載の単離調節化合物。
  44. 【請求項４４】受容体を脱感作するのに有効な化合物を同定する方法であっ
    て、 ａ．Ｂ細胞抗原受容体、プロＢ細胞受容体、プレＢ細胞受容体、Ｆｃ受容体、
    及びＮＫ受容体から成る群より選択された、細胞外リガンド結合成分と少なくと
    も１つのトランスデューサ成分とを備えた受容体を推定調節化合物と接触させる
    工程であって、前記受容体を前記推定調節化合物と接触させる前に前記細胞外リ
    ガンド結合成分を前記トランスデューサ成分と会合させる工程と、 ｂ．前記推定調節化合物を前記受容体と接触させた場合に、前記推定調節化合
    物が前記トランスデューサ成分から前記細胞外リガンド結合成分を解離させるか
    どうかを検出する工程であって、前記解離を起こした推定調節化合物を調節化合
    物と同定する工程と から成る方法。
  45. 【請求項４５】前記受容体を細胞によって発現させる請求項４４に記載の方
    法。
  46. 【請求項４６】前記検出する工程が、前記受容体を刺激した結果としてのシ
    グナルを伝達するという前記受容体の能力を測定するバイオ検定から成り、前記
    推定調節化合物と接触させた場合に、該化合物と接触させない場合と比較して、
    刺激した結果としてのシグナルを伝達する前記受容体の能力が減小することで、
    該化合物が前記受容体を脱感作することが示される、請求項４４に記載の方法。
  47. 【請求項４７】受容体を脱感作するのに有効な化合物を同定する方法であっ
    て、 ａ．Ｂ細胞抗原受容体、Ｆｃ受容体、及びＮＫ受容体から成る群より選択され
    た、細胞外リガンド結合成分と少なくとも１つのトランスデューサ成分とを備え
    た受容体を推定調節化合物と接触させる工程であって、前記推定調節化合物と接
    触させる前には前記細胞外リガンド結合成分を前記トランスデューサ成分と会合
    させない工程と、 ｂ．前記推定調節化合物を前記受容体と接触させた場合に、前記推定調節化合
    物が前記トランスデューサ成分との前記細胞外リガンド結合成分の会合を阻害す
    るかどうかを検出する工程であって、前記会合を阻害する推定調節化合物を調節
    化合物と同定する工程と から成る方法。
  48. 【請求項４８】前記細胞外リガンド結合成分は、刺激物質により前記受容体
    が結合される結果として、前記トランスデューサ成分と会合しない請求項４７に
    記載の方法。
  49. 【請求項４９】ＢＣＲ、プロＢＣＲ、プレＢＣＲ、ＦｃＲ、及びＮＫ受容体
    から成る群より選択された受容体を感作するか、感作を増強又は延長する方法で
    あって、 細胞外リガンド結合成分とトランスデューサ成分とを備えた受容体と化合物を
    接触させる工程から成り、前記化合物が、 （１）前記２つの成分が前記化合物による接触前に互いに会合されていない場
    合には前記細胞外リガンド結合成分を前記トランスデューサ成分と会合させるか
    、又は（２）前記２つの成分が前記化合物による接触前に会合されている場合に
    は前記細胞外リガンド結合成分が前記トランスデューサ成分と会合する時間を延
    長又は増強するかし、それによって前記受容体を感作する方法。
JP2000600691A 1999-02-25 2000-02-25 受容体脱感作に関連する症状を治療するための生産物及び方法 Pending JP2002537357A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12195499P 1999-02-25 1999-02-25
US60/121,954 1999-02-25
PCT/US2000/004791 WO2000050081A1 (en) 1999-02-25 2000-02-25 Product and method for treatment of conditions associated with receptor-desensitization

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2002537357A true JP2002537357A (ja) 2002-11-05

Family

ID=22399732

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000600691A Pending JP2002537357A (ja) 1999-02-25 2000-02-25 受容体脱感作に関連する症状を治療するための生産物及び方法

Country Status (9)

Country Link
US (5) US6503509B1 (ja)
EP (1) EP1156826B1 (ja)
JP (1) JP2002537357A (ja)
AT (1) ATE432083T1 (ja)
AU (1) AU766882B2 (ja)
CA (1) CA2364160C (ja)
DE (1) DE60042265D1 (ja)
NZ (1) NZ514374A (ja)
WO (1) WO2000050081A1 (ja)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7553809B2 (en) * 1998-02-06 2009-06-30 Ilexus Pty Limited Fc receptor modulators and uses thereof
AU766882B2 (en) * 1999-02-25 2003-10-23 National Jewish Medical And Research Center Product and method for treatment of conditions associated with receptor-desensitization
MXPA01011279A (es) * 1999-05-07 2002-07-02 Genentech Inc Tratamiento de enfermedades autoinmunes con antagonistas que se unene a los marcadores de superficie, de celulas b.
WO2005027841A2 (en) * 2003-09-16 2005-03-31 University Of North Carolina At Chapel Hill Cells, compositions and methods for repressing b cell autoantibody secretion and for treating autoimmune disease
US8222376B2 (en) 2005-01-06 2012-07-17 Novo Nordisk A/S KIR-binding agents and methods of use thereof
CN106349390B (zh) 2008-04-02 2019-12-10 宏观基因有限公司 Bcr-复合体-特异性抗体和其使用方法
JP2011233714A (ja) * 2010-04-27 2011-11-17 Canon Inc 半導体素子
GB201412659D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
GB201412658D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
GB201601073D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201601075D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies molecules
GB201601077D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecule

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH09512704A (ja) * 1994-03-17 1997-12-22 ナシヨナル・ジユーイツシユ・センター・フオー・イミユノロジー・アンド・レスピラトリー・メデイシン シグナル変換経路を調節するための産物および方法
JPH11501622A (ja) * 1995-02-28 1999-02-09 ナショナル ジューイッシュ センター フォー イミュノロジー アンド レスピラトリー メディスン 造血機能を調整するｉｔｉｍモチーフを含むペプチジル化合物とその利用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5770396A (en) * 1992-04-16 1998-06-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Isolation characterization, and use of the human beta subunit of the high affinity receptor for immunoglobulin E
US5644033A (en) * 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US6037453A (en) * 1995-03-15 2000-03-14 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants
US6103713A (en) * 1998-03-05 2000-08-15 Eli Lilly And Company Therapeutic treatment for autoimmune diseases
US7118743B2 (en) * 1998-11-17 2006-10-10 Tanox, Inc. Bispecific molecules cross-linking ITIM and ITAM for therapy
AU766882B2 (en) * 1999-02-25 2003-10-23 National Jewish Medical And Research Center Product and method for treatment of conditions associated with receptor-desensitization
DK1534335T4 (en) * 2002-08-14 2015-10-05 Macrogenics Inc FCGAMMARIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND PROCEDURES FOR USE THEREOF

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH09512704A (ja) * 1994-03-17 1997-12-22 ナシヨナル・ジユーイツシユ・センター・フオー・イミユノロジー・アンド・レスピラトリー・メデイシン シグナル変換経路を調節するための産物および方法
JPH11501622A (ja) * 1995-02-28 1999-02-09 ナショナル ジューイッシュ センター フォー イミュノロジー アンド レスピラトリー メディスン 造血機能を調整するｉｔｉｍモチーフを含むペプチジル化合物とその利用

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN5002003524, ＬＡＮＩＥＲ， Ｌ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ．, "Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＡＰ１２ ｗｉｔｈ Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ ＮＫ Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ", ＩＭＭＵＮＩＴＹ, 199806, Ｖｏｌ．８, ｐ．６９３−７０１ *
JPN5002003525, ＶＩＬＥＮ， Ｂ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．, ＩＭＭＵＮＩＴＹ, 199902, Ｖｏｌ．１０, ｐ．２３９−２４８ *
JPN5002003526, ＰＡＮＩ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ．, "Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ＰＴＰ１Ｃ ａｓ ａ Ｂ Ｃｅｌｌ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｖ", Ｊ．ＥＸＰ．ＭＥＤ．, 199506, Ｖｏｌ．１８１, ｐ．２０７７−２０８４ *
JPN5002003527, ＷＥＩＮＥＲ， Ｌ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ．, "Ｈｕｍａｎ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ＦｃγＲＩＩＩ", ＣＡＮＣＥＲ ＩＭＭＵＮＯＬ ＩＭＭＵＮＯＴＨＥＲ, 199603, Ｖｏｌ．４２, ｐ．１４１−１５０ *
JPN5002003528, ＰＥＲＵＳＳＩＡ， Ｂ．， ｅｔ ａｌ．, "ＨＵＭＡＮ ＮＡＴＵＲＡＬ ＫＩＬＬＥＲ ＣＥＬＬＳ ＡＮＮＡＬＹＺＥＤ ＢＹ Ｂ７３．１， Ａ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＢＬＯＣＫＩＮＧ Ｆｃ ＲＥＣＥＰＴＯＲ ＦＵＮＣＴＩＯＮＳ", ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ, 198305, Ｖｏｌ．１３０， Ｎｏ．５, ｐ．２１４２−２１４８ *
JPN5002003529, ＢＥＮＤＡＬＬ， Ｈ．Ｈ．， ｅｔ ａｌ．, ＭＥＬＥＣＵＬＡＲ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ, 199902, Ｖｏｌ．３６， Ｎｏ．３, ｐ．１８７−１９５ *
JPN5002003530, ＦＡＲＲＡＲ， Ｍ．Ａ．， ｅｔ ａｌ．, "Ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ αβ Ｔ ｃｅｌｌｓ", ＢＩＯＣＨＩＭＩＣＡ ＥＴ ＢＩＯＰＨＹＳＩＣＡ ＡＣＴＡ, 1998, Ｖｏｌ．１３７７, ｐ．Ｆ３５−Ｆ７８ *
JPN6010016434, ＶＩＬＥＮ， Ｂ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．, "Ｂ Ｃｅｌｌ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ", Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ, 19970701, Ｖｏｌ．１５９， Ｎｏ．１, ｐ．２３１−２４３ *
JPN6010016436, ＲＯＴＴ， Ｏ．， ｅｔ ａｌ．, "Ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｐｒｉｍｅｓ Ｂ Ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｕｐｅｒｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ", ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＮＦＬＡＭＭＡＴＩＯＮ, 1996, Ｖｏｌ．４６, ｐ．５１−６０ *
JPN6010016437, ＺＨＡＮＧ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ．, "Ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ−ＣＤ７９ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂ−ｃｅｌｌ ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ", Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ, 1995, Ｖｏｌ．２, ｐ．１９１−２０２ *

Also Published As

Publication number Publication date
US7825224B2 (en) 2010-11-02
AU766882B2 (en) 2003-10-23
DE60042265D1 (de) 2009-07-09
NZ514374A (en) 2003-10-31
ATE432083T1 (de) 2009-06-15
US20080064103A1 (en) 2008-03-13
CA2364160A1 (en) 2000-08-31
US20110097327A1 (en) 2011-04-28
WO2000050081A1 (en) 2000-08-31
EP1156826A4 (en) 2005-10-12
US20120148566A1 (en) 2012-06-14
CA2364160C (en) 2014-05-20
EP1156826B1 (en) 2009-05-27
US20030077284A1 (en) 2003-04-24
AU3605500A (en) 2000-09-14
US6503509B1 (en) 2003-01-07
WO2000050081A9 (en) 2002-07-04
EP1156826A1 (en) 2001-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7825224B2 (en) Product and method for treatment of conditions associated with receptor-desensitization
Vilen et al. Antigen-stimulated dissociation of BCR mIg from Ig-α/Ig-β: implications for receptor desensitization
US7741271B2 (en) Methods of modulating immune responses by modulating tim-1, tim-2 and tim-4 function
JP6277127B2 (ja) インスリン様成長因子１による細胞の活性化を阻害するための方法
KR100333120B1 (ko) 세포간 부착 분자-3 및 그것의 결합 리간드
De Klerck et al. Enhanced osteoclast development in collagen-induced arthritis in interferon-γ receptor knock-out mice as related to increased splenic CD11b+ myelopoiesis
RU2447449C2 (ru) Модуляторы нейрональной регенерации
Codolo et al. Orchestration of inflammation and adaptive immunity in Borrelia burgdorferi–induced arthritis by neutrophil‐activating protein A
JP2009203245A (ja) 免疫複合体関連疾患を処置するための方法および組成物
AU2008335245A1 (en) Modulators of neuronal regeneration
EP1941282A1 (en) Methods for identifying gpr83 agonists and antagonists capable of modulating regulatory t cell function
US20170360888A1 (en) Methods for treating inflammatory arthritis
de Souza TIM-1 and TIM-2 as regulators of T-cell activation [TIM: T-cell immunoglobulin and mucin containing molecule]
US6514696B1 (en) Transcriptionally regulated G protein-coupled receptor G2A
Wemlinger Anti-Human CD79 Therapeutic Monoclonal Antibodies: Induction of B Cell Anergy and Translational Studies for Prospective Use in the Treatment of Human Autoimmune Disease
Georgiev Chemokine orchestration of leukocyte-skin interactions
Weetall Studies on the high affinity receptor for IgE (FcepsilonRI): Binding of chimeric IgE/IgG and desensitization of cellular responses
Billard Diversity in T cell costimulation by α4β1 integrin
Block Saldana Novel insights into the role of BAFFR and CVID-associated BAFFR variants
Kersh Identification, functional analysis and regulation of distinct signals originating from the T cell receptor complex
Sloan-Lancaster Altered peptide ligand stimulation of CD4 (+) T cells: Partial activation, anergy induction and signal transduction
Smith Regulation of antigen-dependent T cell interactions with antigen presenting cells and T cell activation by the adapter protein, ADAP
Martin NDPK activity and mast cell exoytosis
Stolpa The structural basis of MHC class II signal transduction

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20070226

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20100330

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20100907