JP2002533402A - 癌を処置するためおよび樹状細胞の走化性を媒介するための方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、哺乳動物被験体において、癌または過剰増殖性障害を処置する方法を提供する。この方法は、被験体に治療的有効量のＳＬＣを投与する工程を包含する。本発明の方法において有用であるＳＬＣは、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ改変体およびＳＬＣフラグメントならびに関連のＳＬＣ核酸を含む。さらに、本発明は、哺乳動物において樹状細胞の機能を調節する方法を提供する。この方法は、哺乳動物に治療的有効量のＳＬＣ薬剤を投与する工程を含む。このような方法を用いて、哺乳動物における免疫応答、特に一次免疫応答を上昇または減少させ得る。この方法は、移植拒絶の予防および自己免疫疾患の処置において特に有用である。あるいは、この方法を用いて、免疫応答を高め得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、癌および過剰増殖性細胞増殖の処置ならびに免疫応答の調節に有用
なケモカインに関する。

【０００２】 （発明の背景） ケモカインは、３０を超える小さな（８〜１２ｋＤａ）、共通の構造的特徴を
有するヘパリン結合サイトカインの一群を構成し、これらは、炎症および免疫応
答の部位への白血球遊走を媒介する。さらに、いくつかのケモカインは、造血の
調節、血管新生、アポトーシスの抑制、およびＨＩＶ−１吸収のような他の生物
学的活性を有することが示されている。大半のケモカインは、４個の保存された
システイン残基を含み、そしてそれらの保存されたシステイン残基の位置に基づ
いて、４つの主要なサブファミリー（ＣＸＣ、ＣＣ、Ｃ、およびＣＸ₃Ｃ）に分
類される。ＣＣケモカインでは、２個のアミノ末端システイン残基が隣接する。
ＣＣケモカインは、一般的に、種々の選択性を伴って、単球、好酸球、好塩基球
、および／またはリンパ球に対して走化性である。

【０００３】 二次リンパ系ケモカイン（ＳＬＣ）と称される新規なヒトＣＣケモカイン（６
Ｃｋｉｎｅ、Ｅｘｏｄｕｓ−２および胸腺由来化学誘引物質４（ＴＣＡ４）とし
てもまた公知）が、近年同定された。ＳＬＣは、構造、染色体局在性、組織発現
のパターン、およびレセプター使用（ｕｓａｇｅ）において、他の大半のＣＣケ
モカインとは異なる。他のＣＣケモカインとは対照的に、ＳＬＣは、リンパ球に
対して走化性である（未刺激のＴ細胞に対して優先的な活性を有する）が、単球
または好中球に対しては走化性ではないことが報告された。Ｎａｇｉｒａら（１
９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１９５１８−１９５２４；およびＧ
ｕｎｎら（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５：
２５８。さらに、ＳＬＣは、血管新生のラット角膜ミクロポケット（ｍｉｃｒｏ
ｐｏｃｋｅｔ）モデルにおいて、血管新生抑制（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｃ）活性
を有することが、近年示された。Ｓｏｔｏら（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５：８２０５。ＳＬＣは主に、リンパ節、パイア
ー斑、垂、脾臓、および複数の器官のリンパ内皮のようなリンパ系組織において
、そしてまた、ＨＥＶ内皮細胞において、発現される。ＳＬＣは、二次リンパ系
器官（例えば、パイアー斑およびリンパ節）へのリンパ球の補充において主要な
役割を果たすと仮定されている。Ｐａｃｈｙｎｓｋｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１６１：９５２−９５６を参照のこと。

【０００４】 癌および過剰増殖性障害の処置のためのサイトカインの種々の適用が、試みら
れている。例えば、サイトカイン遺伝子（例えば、ＩＬ−２またはＧＭ−ＣＳＦ
）でトランスフェクトされた自己腫瘍細胞の導入は、腫瘍に対して防御的なＴ細
胞応答を誘導した。しかし、本発明の前に、癌の処置においてＳＬＣを使用する
試みは存在していない。

【０００５】 １つの局面では、本明細書中に記載される本発明は、癌および過剰増殖性障害
の処置において、サイトカインＳＬＣを使用する新規な方法に関する。

【０００６】 別の局面では、本発明の方法は、一次免疫応答の調節における、ＳＬＣの新規
な使用に関する。すべての免疫応答は複雑であり、そしていくつかの細胞型が関
与する、複雑に調節された一連の事象である。これは、抗原が身体内に侵入し、
そして抗原提示細胞（ＡＰＣ）と呼ばれる特殊化されたクラスの細胞に遭遇した
場合に誘発される。これらのＡＰＣは、微量の抗原を捕捉し、そして抗原特異的
ヘルパーＴリンパ球によって認識され得る形態でそれを提示する。ヘルパーＴ（
Ｔ_H）細胞は活性化され、次いで、他のクラスのリンパ球（例えば、Ｂ細胞また
は細胞傷害性Ｔ細胞）の活性化を促進する。次いで、活性化されたリンパ球が増
殖し、そしてそれらの特異的なエフェクター機能（これは、多くの場合において
、抗原を首尾良く活性化または排除する）を実行する。このプロセスの各段階で
、リンパ球およびＡＰＣは、直接的な接触を通してか、または活性化分子である
調節性サイトカインを分泌することによって互いに連絡し、そして他の細胞を通
して間接的に連絡し得る。

【０００７】 ＡＰＣと抗原特異的Ｔ_H細胞との間の接触もまた、ＡＰＣに対して効果を有す
る。最も重要な効果の１つは、ＡＰＣが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）と
呼ばれるサイトカインの放出を開始させ得るということである。ＩＬ−１は、ク
ラスＩＩ ＭＨＣタンパク質および種々の接着分子の表面発現を増加させ、それ
によってＴ_H細胞の結合を強化し、そして抗原提示を増強させる。Ｔ_H細胞は活性
化されて、サイトカインならびに他の増殖因子および分化因子を放出する。

【０００８】 用語「抗原提示細胞（ＡＰＣ）」は、クラスＩＩ ＭＨＣ分子を構成的に発現
し、そして刺激性抗原をＴ_H細胞に提示する細胞をいう。ＡＰＣとして機能する
、３つの主要なクラスの細胞が存在する。これらのクラスは、マクロファージ、
樹状細胞、およびＢ細胞である。樹状細胞は、抗原提示細胞のなかで最も強力で
あり、そして一次免疫応答の開始に不可欠であると考えられている（Ｌａｎｚａ
ｖｅｃｃｈｉａ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９３７；およびＧｒａｂ
ｂｅら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １６：１１７）。

【０００９】 樹状細胞（ＤＣ）は、Ｔ細胞依存性免疫応答を刺激する専門的抗原提示細胞で
ある（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９２、６６７３：
２４５；Ｈａｒｔ，Ｄ．Ｎ．Ｊ．（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ９０、９：３２４５
）。このプロセスは、末梢におけるＤＣによる抗原の捕捉およびプロセシング、
リンパ管を介した局所的リンパ節へのそれらの遊走、ならびにＴ細胞へのプロセ
スされた抗原の提示を含む。細菌性産物（例えば、ＬＰＳおよび炎症シグナル（
例えば、ＴＮＦ およびＩＬ−１））は、ＤＣの成熟を誘導することが示された
。このＤＣの成熟は、ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩタンパク質の表面発現の
増加、Ｔ細胞補助的刺激分子（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ４０）
のアップレギュレーション、ならびにＴ細胞を刺激する能力の増強によって特徴
付けられる（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９２、６６
７３：２４５）。ケモカイン（例えば、Ｃ５ａ、ｆＭＬＰ ＳＤＦ−１、ＭＣＰ
−３、ＭＣＰ−４、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＭＩＰ−５、およ
びＭＤＣ）は、インビトロで未成熟ＤＣの遊走を誘導することが報告された（Ｓ
ｏｚｚａｎｉら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５、７：３２９２；Ｍｏ
ｒｅｌｌｉら（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８９、１：１２６；Ｘｕら（
１９９６）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６０、３：３６５；Ｓｏｚｚａｎｉら
（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９、４：１９９３；Ｇｏｄｉｓｋａら（
１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５、９：１５９５）。

【００１０】 臨床免疫学の発展によって、異常な免疫応答に起因するますます多くの疾患が
明らかとなった。例えば、異常な免疫応答から生じると考えられる４０を超える
疾患が、免疫応答を阻害し得る薬剤によって、潜在的に処置され得る。従って、
免疫応答の調節のための方法および治療は、これらの疾患の処置において、そし
て移植拒絶を予防する際に有用である。

【００１１】 従って、第２の局面では、本発明は、樹状細胞（ＤＣ）の操作を通して免疫応
答を調節する方法を提供する。

【００１２】 （発明の要旨） 本発明は、ＳＬＣが、インビボで腫瘍の増殖を阻害し、そして樹状細胞（ＤＣ
）に対する強力なケモカインであるという、本明細書中で報告される新規の観察
に基づく。従って、本発明は、哺乳動物被験体において癌または過剰増殖性障害
を処置する方法を提供する。この方法は、その被験体に治療的有効量のＳＬＣを
投与する工程を包含する。本発明の方法において有用なＳＬＣとしては、ＳＬＣ
のポリペプチド、改変体およびフラグメント、ならびに関連の核酸が挙げられる
。本発明の方法は、癌および過剰増殖性障害の処置において有用である。

【００１３】 さらに、本発明は、哺乳動物において樹状細胞の機能を調節するための方法を
提供する。この方法は、その哺乳動物に治療的有効量のＳＬＣ薬剤を投与する工
程を包含し、この薬剤は、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣポリペプチド改変体、Ｓ
ＬＣポリペプチドフラグメント、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チド、ＳＬＣポリペプチド改変体をコードするポリヌクレオチド、およびＳＬＣ
ポリペプチドフラグメントをコードするポリヌクレオチド、抗ＳＬＣ抗体、なら
びにＣＣＲ７レセプターに対するリガンドからなる群から選択される。このよう
な方法を使用して、哺乳動物における免疫応答（特に、一次免疫応答）を増加ま
たは減少させ得る。この方法は、特に、移植片拒絶の予防および自己免疫疾患の
処置において有用である。あるいは、この方法を使用して、免疫応答を増強し得
る。

【００１４】 （発明の詳細な説明） 本発明は、二次リンパ系組織ケモカイン（ＳＬＣ）が、腫瘍の増殖を阻害し、
そして成熟樹状細胞（ＤＣ）に対して走化性であるという、本明細書中で開示さ
れる新規の発見に基づく。本発明は、本明細書中で提案される機構によって限定
されないが、ＳＬＣは、免疫学的応答を媒介することによって、および血管新生
を阻害することによって、腫瘍増殖および過剰増殖性障害を阻害すると考えられ
る。特に、ＳＬＣは、ＤＣ、未刺激のＴ細胞、および活性化Ｔ細胞に対する化学
誘引物質として作用する。ＳＬＣが、ラット角膜モデルにおいて、ｂＦＧＦまた
はＶＥＧＦに誘導される血管新生を阻害することは以前に示されているが、本発
明は、インビボでのＳＬＣの抗腫瘍活性を実証する最初の報告である。

【００１５】 従って、１つの局面では、本発明は、哺乳動物被験体において癌または過剰増
殖性細胞増殖を処置する方法に関する。この方法は、この被験体に治療的有効量
のＳＬＣを投与する工程を包含する。

【００１６】 「ＳＬＣポリペプチドまたはタンパク質」とは、二次リンパ系組織ケモカイン
を意味する。ＳＬＣとしては、以下に規定されるような、天然に存在する哺乳動
物ＳＬＣ、ならびにその改変体およびフラグメントが挙げられる。好ましくは、
ＳＬＣは、ヒトまたはマウス起源のＳＬＣである。最も好ましくは、ＳＬＣはヒ
トＳＬＣである。ヒトＳＬＣは、クローン化され、そして配列決定されている。
Ｎａｇｉｒａら（１９９７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：１９５１８（こ
の内容は、参考として援用される）。ヒトＳＬＣのｃＤＮＡ配列およびアミノ酸
配列を、図１に示す（それぞれ、配列番号１および配列番号２）。ヒトＳＬＣの
シグナル配列は切断されて成熟形態を産生し、配列番号２の残基２４〜１３４（
配列番号５）を示す。マウスのＳＬＣもまた、クローン化され、そして配列決定
されている。Ｈｒｏｍａｓら（１９９７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９：２５５
４；Ｈｅｄｒｉｃｋら（１９９７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９：１５８９；お
よびＴａｎａｂｅら（１９９７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９：５６７１（これ
らの内容は、参考として援用される）。マウスＳＬＣのｃＤＮＡ配列およびアミ
ノ酸配列を、図２に示す（それぞれ、配列番号３および配列番号４）。マウスＳ
ＬＣのシグナル配列は切断されて成熟形態を産生し、配列番号２の残基２４〜１
３３（配列番号６）を示す。

【００１７】 用語「ＳＬＣポリペプチド」はまた、配列番号５および６のＳＬＣの改変体お
よびフラグメントを含む。本発明の目的のために、ＳＬＣポリペプチドおよび改
変体は、配列番号４または配列番号５のポリペプチドと少なくとも７０％配列同
一性を有する。％配列同一性を決定するための方法を、以下に考察する。

【００１８】 「ＳＬＣポリペプチド改変体」は、ネイティブなタンパク質のＮ末端および／
またはＣ末端への１つ以上のアミノ酸の欠失または付加；ネイティブなタンパク
質中の１つ以上の部位での１つ以上のアミノ酸の欠失または付加；あるいは、ネ
イティブなタンパク質中の１つ以上の部位での１つ以上のアミノ酸の置換によっ
て、配列番号５または６のＳＬＣタンパク質から誘導されるポリペプチドをいう
。このような改変体としては、ネイティブなＳＬＣポリペプチド配列の変異体、
フラグメント、対立遺伝子改変体、相同なオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）、お
よび融合体が挙げられる。本発明の方法において有用なＳＬＣポリペプチド、Ｓ
ＬＣポリペプチド改変体、およびＳＬＣフラグメントは、グリコシル化、リン酸
化、天然ではないアミノ酸アナログの置換などによって改変され得る。

【００１９】 本発明の目的のために、ＳＬＣ改変体は、配列番号５または６のアミノ酸配列
に対して、少なくとも７０％、一般的には少なくとも７５％、８０％、８５％、
好ましくは、約９０％〜９５％以上、そして最も好ましくは、約９８％以上の配
列同一性を有する。本発明の方法において有用なＳＬＣタンパク質の改変体は、
１〜３３程度の少数のアミノ酸残基、１〜３０程度の少数のアミノ酸残基、１〜
２０程度の少数のアミノ酸残基、１〜１５程度の少数のアミノ酸残基、１〜１０
程度の少数（例えば、６〜１０）のアミノ酸残基、５程度の少数のアミノ酸残基
、４、３、２、またはさらに１程度の少数のアミノ酸残基によって、配列番号５
または６のポリペプチドとは異なり得る。

【００２０】 同一性および類似性を計算するための方法は、当該分野において公知である。
例えば、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａ
ｔａ、第１部、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編、
Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ
Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８７；ならびにＳｅ
ｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およ
びＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編、Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ、１９９１を参照のこと。一般的に、２つのアミノ酸配列の％同一性を決
定するため、配列を、最適な比較目的のために整列する。２つの配列間の％同一
性は、これらの配列によって共有される同一な位置の数の関数である（すなわち
、％同一性＝同一な位置の数／位置の数の合計（例えば、重複する位置）×１０
０）。例えば、参照アミノ酸配列に対して少なくとも９５％「同一」なアミノ酸
配列を有するポリペプチドとは、そのポリペプチド配列が、参照アミノ酸配列の
各１００アミノ酸あたり５個までのアミノ酸変更を含み得ることを除いて、その
ポリペプチドのアミノ酸配列が参照配列に同一であることを意図する。参照配列
のこれらの変更は、参照アミノ酸配列のアミノ末端位置もしくはカルボキシ末端
位置で生じ得るか、または参照配列内の残基の間で個々にか、もしくは参照配列
内の１つ以上の連続した群においてのいずれかで散在して、これらの末端の間の
どこかで生じ得る。

【００２１】 ２つの配列間の％同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得
る。本発明の目的のために、２つのポリペプチド配列間の％配列同一性は、デフ
ォルトの設定を用いて、ＢＥＳＴＦＩＴコンピュータープログラム（Ｗｉｓｃｏ
ｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｕｎｉｘ（
登録商標）用バージョン８、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ
、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ Ｄｒｉｖｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７１１）を使用して決定される
。本発明に従って、特定の配列が、参照配列に対して、例えば、９５％同一であ
るか否かを決定するためにＢＥＳＴＦＩＴを使用する場合、パラメーターは、当
然ながら、同一性のパーセントが参照アミノ酸配列の全長にわたって計算される
ように、そして参照配列中のアミノ酸残基の総数の５％までの相同性におけるギ
ャップが許容されるように設定される。

【００２２】 本発明の方法において有用なＳＬＣ改変体は、アミノ酸の置換、欠失、短縮化
（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）、および挿入によって、獲得され得る。好ましいＳＬ
Ｃポリペプチド改変体は、配列番号５または６のポリペプチドの１つ以上の保存
的アミノ酸置換を有する。例えば、保存的アミノ酸置換は、１つ以上のアミノ酸
残基でなされ得る。好ましくは、置換は非必須アミノ酸残基でなされる。

【００２３】 「非必須」アミノ酸残基は、生物学的活性のいずれも変更することなく、ＳＬ
Ｃタンパク質の野生型配列（例えば、配列番号５または６の配列）から変更され
得る残基である。一方、「必須」アミノ酸残基は、所定の生物学的活性に必要と
される。

【００２４】 「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミノ酸残
基で置換する置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当
該分野で規定されている。これらのファミリーとしては、以下が挙げられる：塩
基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性
側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性
側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン
、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば
、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、
メチオニン、トリプトファン）、β−分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレ
オニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば
、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。例えば、Ｂｏ
ｗｉｅら（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６（本明細書中で参考と
して援用される）を参照のこと。好ましくは、このような置換は、保存されたシ
ステイン残基（例えば、アミノ末端に隣接したシステイン残基）では、なされな
い。

【００２５】 本発明の方法において有用なＳＬＣ改変体は、天然に存在する改変体から単離
され得るか、変異誘発もしくは組換え操作後に単離され得るか、または合成的に
生成され得る。天然に存在する対立遺伝子改変体は、周知の分子生物学的技術（
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）およびハイブリダイゼーション技術を
用いるような）を使用して同定され得る。このような操作の方法は、当該分野に
おいて一般的に知られている。さらに、ＳＬＣタンパク質の改変体は、変異誘発
または組換え操作によって調製され得る。変異誘発およびヌクレオチド配列の変
更のための方法は、当該分野において周知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９
８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：４８８−４９２
；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４
：３６７−３８２；米国特許第４，８７３，１９２号；ＷａｌｋｅｒおよびＧａ
ａｓｔｒａ編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ
、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ならびに、それらにおいて引用される参考文献を参照の
こと。目的のタンパク質の生物学的活性に影響しない、適切なアミノ酸置換に関
する指針は、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．
Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）（本明細書中で参考
として援用される）のモデルにおいて見出され得る。

【００２６】 従って、本発明の方法において有用なポリペプチドは、天然に存在するタンパ
ク質、ならびにその改変体および改変された形態の両方を包含する。このような
改変体は、所望されるＳＬＣ活性を保有し続ける。改変体をコードするＤＮＡに
おいてなされる変異は、明らかに、読み取り枠を外して配列を置換してはならず
、そして好ましくは、二次的なｍＲＮＡ構造を生成し得る相補的領域を作製しな
い。ＥＰ特許出願公開番号第７５，４４４号を参照のこと。

【００２７】 「ＳＬＣポリペプチドフラグメント」とは、配列番号５または６のアミノ酸配
列の一部分を意図する。本明細書中で使用される場合、ＳＬＣポリペプチドフラ
グメントは、配列番号５または６のポリペプチドの少なくとも３０％の樹状細胞
化学誘引活性、抗腫瘍活性、または血管新生抑制活性を保持する。さらに、本発
明の目的のために、ＳＬＣフラグメントは、配列番号５または６のポリペプチド
の少なくとも１０個の連続したアミノ酸残基を含む。従って、ＳＬＣポリペプチ
ドフラグメントは、配列番号５または６の少なくとも１０個の連続したアミノ酸
残基（約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約４０個、約５０個、約６０
個、約７０個、約８０個、約９０個、約１００個）から、配列番号５または６の
ポリペプチドの１１０〜１１１個の連続したアミノ酸残基までの範囲であり得る
。

【００２８】 本発明の方法において有用な改変体ＳＬＣタンパク質およびＳＬＣポリペプチ
ドフラグメントは、ＳＬＣの生物学的活性を有さなければならない。詳細には、
これらは、そのネイティブタンパク質の所望の生物学的活性（すなわち、本明細
書中に記載されるような、樹状細胞化学誘引活性、血管新生抑制活性または抗腫
瘍活性）を有さなければならない。本発明の目的のためには、「ＳＬＣ改変体」
は、配列番号５または６のポリペプチドの少なくとも３０％の樹状細胞化学誘引
活性、腫瘍阻害活性または血管新生抑制活性を示す。より代表的には、改変体は
、これらの活性の少なくとも１つの６０％を超える活性を示す；さらにより代表
的には、改変体は、これらの活性の少なくとも１つの８０％を超える活性を示す
。

【００２９】 本明細書において有用なタンパク質配列番号の欠失、挿入および置換は、その
タンパク質の特徴において過激な変化を生じるとは予想されない。しかし、置換
、欠失または挿入を行う前に置換、欠失または挿入の正確な効果を予測すること
が困難な場合、当業者は、その効果が慣用的なスクリーニングアッセイによって
評価されることを認識する。すなわち、樹状細胞化学誘引活性は、例えば、以下
の実施例２に記載される走化性アッセイのような、標準的な走化性アッセイによ
って、および当業者に公知の他の走化性アッセイによって評価され得る。例えば
、Ｒｕｂｂｅｒｔら，（１９９８）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６０：３９３３およ
びＮａｇｉｒａら（１９９７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：１９５１８（
本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。同様に、血管新生抑制活性
は、血管新生の卵絨毛尿膜モデルまたはげっ歯類角膜モデルにおいて測定され得
る。例えば、Ｓｏｔｏら（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
ＵＳＡ ９５：８２０５（この内容は、本明細書中に参考として援用される）を
参照のこと。抗腫瘍活性は、実施例６および７に記載されるように、非ヒト哺乳
動物被験体における腫瘍細胞の移植を用いて決定され得る。

【００３０】 樹状細胞へのＳＬＣの結合に関与するアミノ酸は、樹状細胞に対するＳＬＣの
走化性活性に必須である。このようなアミノ酸は、当該分野で公知の方法によっ
て同定され得る。このような方法としては、アラニンスキャニング変異誘発、分
子進化（Ｃｒａｍｅｒｉら（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（
３）：３１５−３１９；Ｃｒａｍｅｒｉら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ １５：２
８８−２９１；Ｐａｔｔｅｎら（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌ．８：７２４−７３３；Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ｗ．Ｐ．（１９９４）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１０７４７−５１；Ｓｔｅｍ
ｍｅｒ，Ｗ．Ｐ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３７０：３８９−３９１）、また
は部位特異的変異誘発が挙げられる。Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１を参照のこと。得られる変異体は、生物学的活性
について試験され得る。結合に重要な部位は、結晶化、光学的親和性標識または
核磁気共鳴のような構造解析によって決定され得る。ｄｅＶｏｓら（１９９２）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６およびＳｍｉｔｈら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．２２４：８９９を参照のこと。

【００３１】 本発明の方法は、過剰増殖性障害および癌の処理に有用であり、そして固形腫
瘍の処置に特に有用である。本発明の方法に従って処置され得る固形腫瘍の型と
しては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：黒色腫、乳癌、頭部および
頸部の腫瘍、卵巣癌、子宮内膜癌、尿路癌、胃癌、精巣癌、前立腺癌、肺癌、膀
胱癌、膵臓癌、骨の癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、上記の転移物、ならびに原発
起源が未知の転移物。本発明の方法によって処置され得る過剰増殖性障害として
は、以下が挙げられるがこれらに限定されない：前立腺過形成、増殖乳房疾患、
増殖性網膜症および色素性皮膚損傷。

【００３２】 血管新生、すなわち、新たな血管の発生は、腫瘍形成、転移および腫瘍増殖、
網膜症、血管新生性眼障害、ならびに血管形成後または粥腫切除術後の再狭窄を
含む、宿主の疾患に関与する（Ｂｉｃｋｎｅｌｌら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ
ｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：６０−６５；Ｇａｒｉａｎｏら（１９９６）Ｓｕｒｖｅ
ｙ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．４０：４８１−４９０；およびＷｉｌｃｏｘ，Ｊ．
Ｎ．（１９９３）Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．７２：８８Ｅ−９５Ｅ）。本発明
の方法は、血管新生を（特に癌、腫瘍形成、転移および腫瘍増殖に関与する血管
新生）を抑制する際に有用である。従って、本発明は、哺乳動物被験体における
癌または過剰増殖性障害の処置のための方法を提供し、この方法は、治療的有効
量のＳＬＣをこの被験体に投与する工程を含む。

【００３３】 ＳＬＣは、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ改変体またはＳＬＣフラグメントをこ
の被験体にまたは被験体上に導入することによって直接投与され得る。あるいは
、ＳＬＣは、被験体に導入され得る、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ改変体または
ＳＬＣフラグメントをコードするポリヌクレオチドの投与後に、インサイチュで
生成され得る。哺乳動物被験体中にポリヌクレオチドを導入し、そして発現させ
る方法は、当業者に公知である。このような方法としては、遺伝子治療法が挙げ
られるがこれに限定されない。従って、１つの実施形態では、ＳＬＣの投与は、
ＳＬＣポリヌクレオチドを哺乳動物に導入する工程を含む。

【００３４】 本発明の方法において有用なＳＬＣポリヌクレオチドとしては、以下が挙げら
れるがこれらに限定されない： ａ）配列番号１または３のポリヌクレオチド； ｂ）配列番号１または３のポリヌクレオチドと少なくとも７０％配列同一性を
有するポリヌクレオチド； ｃ）配列番号１または３のポリヌクレオチドのコード領域と少なくとも７０％
配列同一性を有するポリヌクレオチド； ｄ）配列番号５または６のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； ｅ）配列番号５または６に対して少なくとも７０％配列同一性を有するポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドであって、ここでこのポリペプチドは、配
列番号５または６のポリペプチドの血管新生抑制活性、腫瘍阻害活性、および／
または樹状細胞化学誘引活性の少なくとも３０％の活性を有する、ポリヌクレオ
チド；ならびに ｆ）配列番号５または６のポリペプチドのフラグメントをコードするポリヌク
レオチドであって、ここでこのフラグメントは、配列番号５または６のポリペプ
チドの血管新生抑制活性、腫瘍阻害活性、および／または樹状細胞化学誘引活性
の少なくとも３０％の活性を有する、ポリヌクレオチド；そしてこのフラグメン
トは、配列番号５または６の少なくとも２０個の連続したアミノ酸残基を含む。

【００３５】 なお別の局面では、本発明は、哺乳動物において樹状細胞の機能を調節する方
法を含み、この方法は、治療的有効量のＳＬＣ薬剤をこの哺乳動物に投与する工
程を含み、この薬剤は、以下からなる群より選択される：ＳＬＣポリペプチド、
ＳＬＣポリペプチド改変体、ＳＬＣポリペプチドフラグメント、ＳＬＣポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチド、ＳＬＣポリペプチド改変体をコードするポ
リヌクレオチドおよびＳＬＣポリペプチドフラグメントをコードするポリヌクレ
オチド、抗ＳＬＣ抗体およびＣＣＲ７レセプターについてのリガンド。

【００３６】 本発明は、二次リンパ系ケモカイン（ＳＬＣ）が、成熟ＤＣならびにＴ細胞を
含む他の免疫細胞に対して走化性であることを認識する。本発明はいかなる機構
にも結びつけられないが、ＳＬＣが、二次リンパ器官へのＤＣおよび他の細胞の
結合および遊走の誘導に関与すると考えられる。本発明のＳＬＣ薬剤が、本明細
書中に記載される免疫カスケードの別の局面に効果を発揮し得ることが認識され
る。従って、「樹状細胞の機能の調節」とは、レセプター結合または樹状細胞活
性の調節、ならびに免疫応答およびＴ細胞機能の調節に対する下流の効果の調節
が意図される。成熟ＤＣ細胞およびＴ細胞の両方に対するその走化性活性を考慮
すると、ＳＬＣは、これらの細胞についての重要な同時局在シグナル（ｃｏ−ｌ
ｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌ）として役立ち得、免疫応答の開始を媒
介する。従って、本発明の組成物は、炎症および免疫応答の部位への白血球の補
充を媒介する際、特に樹状細胞および他の細胞の走化性において、用途を見出す
。本発明の組成物はさらに、腫瘍細胞の増殖を防止する際に、ならびに腫瘍後退
に、過剰増殖性細胞増殖を予防する際に、血管新生を阻害する際に、そして一般
に癌の処置に有用である。

【００３７】 「免疫治療介入」によって、免疫応答の調節；（例えば、移植片拒絶を予防す
る際の）免疫応答の抑制；自己免疫疾患の予防および処置；免疫応答の増強；新
生物または腫瘍の増殖の阻害；血管新生の阻害などが意図される。

【００３８】 免疫応答の「調節」によって、本発明の組成物を用いて、免疫応答を促進、増
強、アップレギュレートまたは開始し得ること、あるいは本発明の組成物を用い
て免疫応答を抑制またはダウンレギュレートし得ることが意図される。重要なこ
とには、樹状細胞は免疫応答の開始に関与するので、本発明の組成物を用いて、
一次免疫応答を予防し得る。「一次免疫応答」によって、上記のような免疫カス
ケードの始まり（ｏｎｓｅｔ）または開始（ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ）が意図され
る。このような応答は、抗原の捕獲および提示、ならびにＴ細胞を刺激する身体
全体での抗原の輸送を、ブロックすることにより少なくとも予防され得る。

【００３９】 本発明のＳＬＣ薬剤は、ネイティブなＳＬＣポリペプチド、ネイティブなＳＬ
Ｃ核酸配列、ポリペプチドおよび核酸改変体、抗体、モノクローナル抗体、なら
びにＳＬＣの発現、活性およびレセプター結合の操作を通して免疫応答をブロッ
クし得る他の成分を含む。このような成分としては、例えば、ＳＬＣプロモータ
ー活性を妨害または増強する、タンパク質または低分子；転写調節因子を誘引す
る、タンパク質または低分子；ＳＬＣ ｍＲＮＡを安定化または分解する、ポリ
ヌクレオチド、タンパク質または低分子；レセプター結合を妨害する、タンパク
質または低分子などが挙げられる。

【００４０】 本発明は、どの特定の方法にも束縛されないことが認識される。ＳＬＣが成熟
樹状細胞およびＴ細胞に対して走化性であることが認識されたので、例えば、レ
セプター結合を妨害すること、ＳＬＣプロモーター活性を妨害すること、遺伝子
発現、ｍＲＮＡ安定性またはタンパク質安定性を妨害することなどにより、ＳＬ
Ｃ活性を抑制または増強する任意の手段を用いて一次免疫応答を調節し得、そし
てこれは本発明に含まれる。ＳＬＣのアミノ酸およびＤＮＡ配列は、当該分野で
公知である。例えば、Ｐａｃｈｙｎｓｋｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１６１：９５２；Ｙｏｓｈｉｄａら（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７
３：７１１８，Ｎａｇｉｒａら（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８
：１５１６−１５２３；Ｎａｇｉｒａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２７２：１９５１８を参照のこと。これらの全ては、本明細書中に参考として援
用される。

【００４１】 ＳＬＣ活性を保持するＳＬＣ改変体を利用して、免疫応答を増強し得、腫瘍の
進行を予防し得、過剰増殖性の細胞増殖を予防し得るなどである。いくつかのＳ
ＬＣ改変体またはＳＬＣ誘導体は、レセプターと結合する能力を保持し得るが、
走化性活性も免疫応答の開始に必須の活性も保持しないことが認識される。従っ
て、このような改変体または誘導体は、免疫応答を抑制するために有用である。
免疫応答を抑制し得るが、ＳＬＣレセプターを介して走化性細胞に結合し得るポ
リペプチドを選択するための方法は、当該分野で利用可能である。実験の節に示
されるアッセイ系のようなアッセイ系が利用され得る。コンビナトリアルケミス
トリーアプローチを用いて、免疫応答を抑制するために有用であり得る、ＳＬＣ
改変体またはＳＬＣ誘導体を決定し得る。このようなアプローチは、選択のため
に利用可能な分子多様性の範囲を増大させ、そして生物学的活性について調査さ
れる分子のランダムなコレクションの範囲を大いに広げる。一般的に、Ｊｏｈｎ
Ｎ．Ａｂｅｌｓｏｎ（編）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｃ
ｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７，Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；米国特許第５，２７０，１７０号；米国特許第５，４
９８，５３０号（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。ＳＬＣの
アゴニストまたはアンタゴニストのいずれかとして機能するＳＬＣタンパク質の
改変体は、変異体タンパク質のコンビナトリアルライブラリーを、ＳＬＣタンパ
ク質のアゴニスト活性または血管新生抑制活性についてスクリーニングすること
によって同定され得る。

【００４２】 適切なＳＬＣポリペプチドは、ＳＬＣ改変体、ＳＬＣフラグメント、アナログ
および誘導体であり得る。「アナログ」によって、１以上のアミノ酸の置換、挿
入または欠失を有する、ネイティブなＳＬＣの配列および構造を含む、ＳＬＣま
たはＳＬＣフラグメントのいずれかのアナログが意図される。１以上のペプトイ
ド（ペプチド模倣物）を有するペプチドもまた、用語アナログによって包含され
る（ＷＯ ９１／０４２８２）。「誘導体」によって、所望の活性が保持される
限り、ＳＬＣ、ＳＬＣフラグメントまたはそれらのそれぞれのアナログの任意の
適切な改変物（例えば、グリコシル化、リン酸化または他の外来部分の付加）が
意図される。ＳＬＣのフラグメント、アナログおよび誘導体を作製するための方
法は、当該分野で利用可能である。

【００４３】 本発明のＳＬＣポリペプチドまたはその改変体を利用して、ＳＬＣのポリペプ
チドおよびその改変体に特異的な抗体を生成し得る。抗体は、ポリクローナルま
たはモノクローナルであり得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例
えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）₂、ならびにＳｃＦＶ）が利用され得る。抗体
を作製または選択するための方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｋｏｈｌ
ｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９
７（ハイブリドーマ技術）；Ｃｏｌｅら（１９８５），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ
．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．７７−９６頁；Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．Ｔｏｄａｙ ４：７２；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９４）Ｃｏｌｉｇａｎら（編）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ
＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇａｌｆｒｅら（１９７７
）Ｎａｔｕｒｅ ２６６：５５０５２；Ｌｅｒｎｅｒ（１９８１）Ｙａｌｅ Ｊ
．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．５４：３８７−４０２を参照のこと。さらに、キメラ抗体
およびヒト化モノクローナル抗体が、例えば、以下に記載されるように、組換え
ＤＮＡ技術によって生成され得る：ＥＰＡ １７１，４９６；ＥＰＡ １８４，
１８７；ＷＯ ８６／０１５３３；ＷＯ ８７／０２６７１；Ｂｅｔｔｅｒら（
１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９；Ｓｕｎら（１９８７
）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４；Ｗｏｏｄら
（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２；Ｄｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ ４：２１４；Ｂｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１
：４０５３；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５
３４；米国特許第５，２２５，５３９号および同第４，８１６，５６７号；Ｍａ
ｒｋｓら（１９９３）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １１：１１４５−４９；Ｒ
ｏｂｅｒｔｓら（１９９３）Ｇｅｎｅ １２８：６７−６９；Ｆｉｇｉｎｉら（
１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：９９１−９９６；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏ
ｍら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１−８８；ＭｃＧｕｉｎ
ｎｅｓｓら（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：１１４９−５４
；Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９
−３１４；Ｓｔｅｖｅｎｓら（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７３：２
８７４−８４；Ｗｉｎｔｅｒら（１９９４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１２：４３３−４５５；Ｗｉｎｔｅｒら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄ
ａｙ １４：２４３−６；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ
３４８：５５２−４；Ｇｏｒｍａｎ（１９９０）Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
２：４５７−６６。

【００４４】 この抗体は、処置が、ＳＬＣ機能を阻害することを含む、治療の状況で適用さ
れ得る。抗体は、例えば、ＳＬＣ結合をブロックするために用いられ得る。抗体
は、機能（例えば、結合）に必要な部位を含む特定のフラグメントに対して調製
され得る。

【００４５】 抗抗体（例えば、抗イディオタイプ抗体）もまた、調製され得、ここで、この
ような抗抗体は、レセプターに結合し得、そして免疫応答のＳＬＣ活性化を予防
し得る。このような抗体もまた、ＳＬＣ活性の阻害が所望される治療の状況で有
用である。

【００４６】 上記のように、本発明のＳＬＣ薬剤はまた、ＳＬＣポリペプチド、誘導体、ア
ナログ、改変体またはそれらのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含
む。この組成物はさらに、改変体ポリヌクレオチドおよびそのフラグメントを含
む。このような「改変体ポリヌクレオチド」は、ＳＬＣポリペプチドをコードす
るが、遺伝暗号の縮重に起因してそのネイティブな配列とは異なる、ポリヌクレ
オチドを含む。改変体ヌクレオチド配列はまた、例えば、部位特異的変異誘発を
用いることによって作製された、合成的に誘導されたヌクレオチド配列を含む。
一般に、本発明のヌクレオチド配列改変体は、配列番号１または３に対して、少
なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは約９０〜９
５％以上、そして最も好ましくは約９８％以上の配列同一性を有する。

【００４７】 本発明のポリヌクレオチドは、天然に存在し得る（例えば、対立遺伝子改変体
、ホモログ、オルソログ）か、または組換えＤＮＡ法もしくは化学合成により構
築され得る。あるいは、改変体ポリペプチドは、天然に存在しなくともよく、そ
して当該分野で公知の技術（変異誘発を含む）によって作製され得る。ポリヌク
レオチド改変体は、ヌクレオチドの置換、欠失、逆位および挿入を含み得る。

【００４８】 本発明のポリヌクレオチド配列は、アンチセンスヌクレオチドを含む。アンチ
センス技術は、遺伝子の発現を調節する際に、核酸塩基対の認識を利用し、そし
て高度の特異性を達成する。一般に、一本鎖ＤＮＡに似ている、小さな、合成の
オリゴヌクレオチドを細胞内で用いて、特異的なメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮ
Ａ）標的におけるコード配列に対してワトソン−クリック塩基対合によってハイ
ブリダイズする。アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドは、主要なクラスの
潜在的な医薬として認識されている。本発明において用いられるアンチセンスオ
リゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）は、ＳＬＣ ｍＲＮＡに相補的に結合し得
、そしてＳＬＣ活性を調節し得る。

【００４９】 アンチセンス分子として用いられるＯＤＮの配列は、ＳＬＣ ｍＲＮＡ配列ま
たはＳＬＣプロモーター領域の任意の部分に実質的に相補的であり得る。好まし
くは、アンチセンス配列は、別のｍＲＮＡについての配列にもｒＲＮＡもしくは
ｔＲＮＡにも同一でも相補的でもない。一般に、ＯＤＮは、選択されたＳＬＣ配
列の一部に約４０％〜約１００％相補的であり、好ましくは約５０％〜約８５％
、より好ましくは約６０％〜約８０％相補的である。本発明の１つの実施形態で
は、ＯＤＮ配列は、有意に相補的であるように、すなわち、翻訳開始コドンＡＵ
Ｇに隣接したＳＬＣ ｍＲＮＡ配列に対して約８０％〜約１００％相補的である
ように、設計され得る。

【００５０】 ＯＤＮの長さは、約１０ヌクレオチド〜約３００ヌクレオチド、好ましくは約
１０ヌクレオチド〜約１００ヌクレオチド、そしてより好ましくは約１５ヌクレ
オチド〜約５０ヌクレオチドの範囲であり得る。

【００５１】 本発明のポリヌクレオチドの発現のための方法が、一般に当該分野において利
用可能である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ，ＮＹ，（１９８９）を参照のこと。種々の発現ベクターを用いて、本発
明のポリヌクレオチドを発現し得る。適切なポリヌクレオチドを含むベクターは
、周知の技術を用いて、増殖および発現のために宿主細胞中に導入され得る。例
えば、Ｓｔｕｄｉｅｒら，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５：６０−８９（１
９９０）；Ｗａｄａら（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０
：２１１１−２１１８；Ｓｃｈｕｌｔｚら（１９８７）Ｇｅｎｅ ５４：１１３
−１２３；Ｌｕｃｋｌｏｗら（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３
９；Ｓｅｅｄ，Ｂ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２９：８４０；Ｋａｕｆｍａ
ｎら（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ．６：１８７−１９５；およびＳｍｉｔｈら（１
９８８）Ｇｅｎｅ ６７：３１を参照のこと。

【００５２】 上記で議論したタンパク質および低分子薬剤は、当該分野で利用可能な方法に
よって同定され得る。例えば、上記で議論したように、コンビナトリアルケミス
トリーまたはファージディスプレイアプローチを用いて、ペプチドをランダムに
生成し得、そしてレセプター結合またはＳＬＣ活性を調節する能力について選択
し得る。

【００５３】 本発明の方法において有用な、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣポリペプチド改変
体、ＳＬＣポリペプチドフラグメント、このポリペプチド、改変体およびフラグ
メントをコードするＳＬＣポリヌクレオチド、ならびにＳＬＣ薬剤は、被験体へ
の投与に適切な薬学的組成物中に組み込まれ得る。被験体としては、哺乳動物（
例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマなど）が挙げられる。このような組成物は代表
的に、少なくとも１つのＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣポリペプチド改変体、ＳＬ
Ｃポリペプチドフラグメント、このポリペプチド、改変体もしくはフラグメント
をコードするＳＬＣポリヌクレオチド、ならびにＳＬＣ薬剤、またはそれらの組
み合わせ、ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含む。本発明のＳＬＣ化合物
を薬学的投与のために処方するための方法は、当業者に公知である。例えば、Ｒ
ｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版，Ｇｅｎｎａｒｏ（編）１９９５，Ｍａｃｋ Ｐ
ｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡを参照のこと。

【００５４】 本明細書中で使用される場合、用語「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学
的投与に適合する、任意のおよび全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗微生
物剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。薬
学的に活性な物質についてのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周
知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合な範囲を除いて、
このような媒体は、本発明の組成物中で使用され得る。補助活性化合物もまた、
この組成物中に組み込まれ得る。本発明の薬学的組成物は、その意図される投与
経路と適合するように処方される。

【００５５】 投与経路は、所望の結果に依存して変化する。一般に、免疫応答の開始のため
には、所望の炎症部位または応答部位でかまたはそれらの部位の付近での薬剤の
注射が利用される。あるいは、疾患の状態に依存して、他の投与経路が認可され
得る。すなわち、新生物または腫瘍の増殖の抑制のためには、腫瘍部位または腫
瘍部位付近での薬学的組成物の注射が好ましい。あるいは、移植片拒絶の予防の
ためには、全身投与が用いられ得る。同様に、自己免疫疾患の処置または予防の
ためには、全身投与が好適であり得る。全身投与の経路の例としては、非経口投
与（例えば、静脈内投与、皮内投与、皮下投与）、経口投与（例えば、吸入）、
経皮投与（局所投与）、経粘膜投与および直腸投与が挙げられる。非経口適用、
皮内適用または皮下適用のために用いられる溶液または懸濁液は、以下の成分を
含み得る：滅菌希釈剤（例えば、注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリ
エチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）
；抗細菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン類（ｍｅｔｈｙ
ｌ ｐａｒａｂｅｎ）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナ
トリウム）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；緩衝剤（例えば、アセテート、
シトレートまたはホスフェートおよび張度の調整のための薬剤（例えば、塩化ナ
トリウムまたはデキストロース）。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または
水酸化ナトリウム）を用いて調整され得る。非経口調製物は、ガラスまたはプラ
スチックで作製された、アンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量バイアルに
封入され得る。

【００５６】 注射可能物質としての用途に適切な薬学的組成物としては、滅菌水性溶液（水
溶性の場合）または分散物および滅菌注射可能な溶液もしくは分散物の即時調製
のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与に関して、適切なキャリアとしては
、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ^TM（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐ
ｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全て
の場合、この組成物は、無菌でなければならず、そして容易な注射可能性が存在
する程度に液体であるべきである。この組成物は、製造条件下および保存条件下
で安定であるべきであり、そして細菌および真菌のような微生物の混入作用から
保護されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール
（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコ
ールなど）ならびにそれらの適切な混合物を含む、溶媒または分散媒体であり得
る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、
分散の場合、必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用
によって、維持され得る。微生物作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤
（例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメ
ロサールなど）によって達成され得る。多くの場合、等張剤（例えば、糖、ポリ
アルコール（例えば、マンニトール）、ソルビトール、塩化ナトリウム）を組成
物中に含むことが好ましい。注射可能組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる
薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物中に含
むことによってもたらされ得る。

【００５７】 滅菌注射可能な溶液が、要求される量の活性化合物（例えば、タンパク質また
は抗体）を、適切な溶媒中に、必要ならば上記に列挙した成分の１つまたは組み
合わせとともに混合すること、続いて滅菌濾過することによって、調製され得る
。一般的に、分散物は、基本的分散媒体および上記に列挙した成分からの必要な
他の成分を含む滅菌ビヒクル中にこの活性化合物を混合することによって、調製
される。滅菌注射可能な溶液の調製のための滅菌粉末の場合は、好ましい調製方
法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、この方法は、この活性成分および以前に
滅菌濾過したその溶液からのさらなる任意の所望の成分の、粉末を生じる。

【００５８】 経口組成物は、一般に、不活性賦形剤または食用キャリアを含む。この経口組
成物は、ゼラチンカプセル中に封入され得るし、または圧縮して錠剤にもされ得
る。経口投与のために、この薬剤は、胃で残存するために腸溶性形態で包まれる
得るし、あるいは公知の方法によって胃腸管の特定の領域にて放出されるように
さらにコーティングまたは混合され得る。経口治療投与の目的のために、この活
性化合物は、賦形剤と混合され得、そして錠剤、トローチ、またはカプセルの形
態にて使用され得る。経口組成物はまた、マウスウォッシュとして使用するため
に液体キャリアを使用して調製され得る。このマウスウォッシュの状態では、こ
の液体キャリア中のこの化合物は、経口適用され、そしてうがいされ、そして吐
き出されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤および／またはアジ
ュバント物質が、この組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル、
トローチなどは、以下の成分または類似の性質の化合物のうちのいずれかをも含
み得る：結合剤（例えば、微晶質セルロース、トランガントゴムまたはゼラチン
）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）；崩壊剤（例えば、アルギン
酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはコーンスターチ）；潤滑剤（ｌｕｂｒｉｃａｎｔ）
（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅ）；潤滑剤（ｇｌｉ
ｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、ショ糖また
はサッカリン）；あるいは香味剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、
またはオレンジフレーバー）。

【００５９】 全身投与はまた、経粘膜手段または経皮手段によってであり得る。経粘膜投与
または経皮投与のために、浸透すべき障壁に適切な浸透剤が、処方物において使
用される。このような浸透剤は、一般に当該分野で周知であり、そして例えば、
経粘膜投与のためには、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が、挙
げられる。

【００６０】 １つの実施形態において、この活性化合物は、身体からの迅速な除去からこの
化合物を防御するキャリアとともに調製され、例えば、徐放性処方物（移殖片お
よび微小カプセル送達系を含む）である。生分解性の生体適合性ポリマー（例え
ば、エチレンビニル酢酸、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオ
ルソエステル、およびポリ乳酸）が使用され得る。このような処方物の調製のた
めの方法は、当業者には明らかである。これらの材料はまた、Ａｌｚａ Ｃｏｒ
ｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．
から商業的に入手され得る。リポソーム性懸濁物（ウイルス抗原に対するモノク
ローナル抗体を用いて感染細胞を標的とするリポソームを含む）もまた、薬学的
に受容可能なキャリアとして使用され得る。これらは、当業者に公知の方法（例
えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるような方法）に従って調製
され得る。

【００６１】 経口組成物または非経口組成物を、投薬単位形態で処方することが、投与の容
易さおよび投薬の均一性に特に有利である。投薬単位形態とは、本明細書中で使
用される場合、処置される被験体にとっての単位投薬として適切な、物理的に分
散した単位をいい、各単位は、必要な薬学的キャリアと共同して所望の治療効果
を生成するように計算された、所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位形
態についての仕様は、その活性化合物の独特の特徴、および達成すべき特定の治
療効果、および個体の処置のためにこのような活性化合物を配合する当該分野に
固有の制限により示され、かつこれらに直接依存する。

【００６２】 本発明の核酸分子は、ベクター中に挿入され得、そして遺伝子治療ベクターと
して使用され得る。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈注射、局所投与（米国
特許第５，３２８，４７０号）、移殖によってか、または定位注射（例えば、Ｃ
ｈｅｎら、ＰＮＡＳ ９１：３０５４〜３０５７（１９９４）を参照のこと）に
よって、被験体に送達され得る。哺乳動物宿主における発現のためのベクターは
、Ｗｕら（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１４３３８；Ｗｕおよ
びＷｕ（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１４６２１；ならびにＺ
ｅｎｋｅら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
７：３６５５（これらすべてが、本明細書中にて参考として援用される）に開示
される。この遺伝子治療ベクターの薬学的調製物は、受容可能な希釈剤中にある
遺伝子治療ベクターを含み得るし、またはその遺伝子送達ビヒクルが埋め込まれ
ている徐放性マトリクスを含み得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベクターが、
組換え細胞から無傷で生成され得る場合（例えば、レトロウイルスベクター）、
この薬学的調製物は、この遺伝子送達系を生成する１つ以上の細胞を含み得る。

【００６３】 １つの実施形態において、この薬学的組成物は、ＳＬＣタンパク質またはＳＬ
Ｃタンパク質の発現に適切なＤＮＡ構築物を含む、徐放性の処方物またはマトリ
クスを介して、身体中の部位またはその周囲に送達され得る。この様式で、一過
性リンパ節が、所望の移殖位置で生成され得、免疫応答を開始する樹状細胞およ
びＴ細胞を誘引し得る。

【００６４】 この薬学的組成物は、投与の説明書とともに、容器、パック、または投薬器中
に含まれ得る。その結果は、疾患の徴候、症状、または原因の減少および／また
は改善、あるいは生物学的系の他の任意の所望の変化であり得る。

【００６５】 本発明の薬学的組成物（上記に規定するような、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣ
ポリペプチド改変体、ＳＬＣポリペプチドフラグメント、これらのＳＬＣのポリ
ペプチド、改変体、およびフラグメントをコードするポリヌクレオチド、および
ＳＬＣ薬剤を含む）は、治療的有効量で投与される。この「治療的有効量」とは
、所望の生物学的結果を誘導するに十分な、非毒性の投薬量レベルをいう。投与
のための量は、所望の活性、処置される哺乳動物の疾患状態、投薬形態、投与の
方法、患者の因子（例えば、年齢、性別、および疾患の重篤度）に基づいて変化
し得る。治療的有効量は、広範囲の濃度にて提供されることが、認識される。そ
のような範囲は、結合アッセイ、走化性アッセイ、およびインビボアッセイに基
づいて決定され得る。一般的には、薬学的組成物は、約０．１ｎｇ／ｍｌ〜約１
ｍｇ／ｍｌ；約１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／
ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ、３００ｎｇ／ｍｌ、４００ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／
ｍｌ〜約６００ｎｇ／ｍｌ、７００ｎｇ／ｍｌ、８００ｎｇ／ｍｌ、９００ｎｇ
／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、２００μｇ／ｍｌ
、３００μｇ／ｍｌ、４００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、９００μｇ／ｍｌ
、１ｍｇ／ｍｌを含む。これらの組成物は、特定の標的部位に注射（約２０μｌ
、５００μｌ、３０μｌ、４０μｌ、５０μｌ、７５μｌ、１００μｌ〜約２０
０μｌ、３００μｌ、４００μｌ、５００μｌ、１ｍｌ、２ｍｌ、３ｍｌ、４ｍ
ｌ、５ｍｌ、そして約１０ｍｌまでの注射）のため、あるいは他の投与のために
、使用され得る。

【００６６】 投与のレジメンは、変化し得る。この薬剤の単回注射または複数回注射が使用
され得る。同様に、発現ベクターが、この薬剤の継続的発現のために標的部位で
使用され得る。このようなレジメンは、その疾患の重篤度および所望の結果に依
存して変化する。

【００６７】 好ましい実施形態において、ＳＬＣまたはＳＬＣ組成物が、腫瘍中または腫瘍
周囲部位に直接注射される。腫瘍周囲とは、腫瘍の外縁から約１５ｃｍ未満の部
位を意味する。ＳＬＣの投与は、１つ以上の部位に対してであり得る。好ましく
は、ＳＬＣの投与は、腫瘍内および／または腫瘍周辺の複数の部位にてである。

【００６８】 １つの実施形態において、癌または過剰増殖性細胞増殖は、このＳＬＣの投与
の前および／または後に、外科的除去される。従って、１つの実施形態において
、本発明は、癌、腫瘍、または過剰増殖性細胞障害を処置する方法を含む。この
方法は、以下の工程を包含する：（ａ）癌、腫瘍、または過剰増殖性細胞増殖の
部位にこのＳＬＣを投与する工程；（ｂ）この癌または過剰増殖性細胞増殖を外
科的除去する工程；および（ｃ）外科的除去の部位にこのＳＬＣを投与する工程
。

【００６９】 本発明のＳＬＣ組成物は、癌、血管新生、過剰増殖性細胞増殖または免疫応答
の調節の阻害に関与し得る他の薬剤と、同時投与され得るし、あるいは共同処方
され得る。このような薬剤の例としては、メトトレキサート、タモキシフェン、
ネランドロン（ｎｅｌａｎｄｒｏｎ）、ニルタミド、アドリアマイシン、５ＦＵ
、インターフェロンなどが、挙げられる。好ましい薬剤は、ＩＬ−２である。好
ましくは、このＩＬ−２は、組換えヒトＩＬ−２である。最も好ましくは、この
組換えＩＬ−２は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ^TM（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．、Ｅｍｅ
ｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）である。ＩＬ−２の好ましい投与経路としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：ＩＶ（静脈内）投与経路、ＳＱ（皮下）
投与経路、経口投与経路、粘膜投与経路、鼻腔内投与経路、経皮投与経路、腹腔
内投与経路、腫瘍内投与経路、および腫瘍周囲投与経路。最も好ましくは、ＩＬ
−２は、ヒトにＩＶ投与またはＳＱ投与される。

【００７０】 Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎは、２２００万ＩＵ／バイアルを含む、ＩＶ（ＳＱ）注射
用凍結乾燥粉末の状態で入手され得る。注射用に調製するために、１．２ｍｌの
滅菌水が、このバイアルに添加されて、１８００万ＩＵ／バイアル（すなわち、
１．３ｍｇタンパク質／ｍｌ）が作製される。この溶液は、室温で４８時間安定
である。アルブミンが、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎの添加前にＤ５Ｗに添加されなけれ
ばならない。５％アルブミン１ｍｌ（または２５％アルブミン０．２ｍｌ）が、
Ｄ５Ｗ各５０ｍｌに添加されて、０．１％アルブミンを含むＤ５Ｗが作製される
。最終用量は、０．１％アルブミンを含むＤ５Ｗ（上記を参照のこと）中で、１
ｍｌあたり５〜６０ｍｃｇタンパク質に希釈され得る。

【００７１】 投薬量は、高用量プロトコル６００，０００ＩＵ／ｋｇ〜６，０００，０００
ＩＵ／Ｍ２を与える低用量プロトコルまで広く変化する。経路は、ＳＱ〜ＩＶ−
連続またはボーラス（３０分以下をかけてのＩＶ注射により与えられる）に変化
する。

【００７２】 以下の例は、例として提供され、かつ限定としては提供されない。

【００７３】 （実験） （材料および方法） （ケモカインおよび抗体） ヒト組換えＳＬＣ（ＭＷ＝１２ｋＤ）、ＥＬＣ（ＭＷ＝８．８ｋＤ）およびＲ
ＡＮＴＥＳ（ＭＷ＝７．８ｋＤ）、ならびにフィコエリトリン（ＰＥ）結合抗ヒ
トＣＣＲ６抗体を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）
から購入した。ＰＥ結合抗ヒトＣＤ１ａ、ＣＤ１４およびフルオレセインイソチ
オシアネート（ＦＩＴＣ）結合抗ヒトＣＤ８６、ＣＤ４０およびＨＬＡ−ＤＲ抗
体を、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から入手した。ＰＥ
結合抗ヒトＣＤ８３を、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ／Ｃｏｕｌｔｅｒ（Ｍｉａｍｉ、
ＦＬ）から入手した。

【００７４】 （ＤＣの生成） ＤＣを、以前に記載（Ｂｅｎｄｅｒら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ １９６：１２１）のように、末梢血単球から誘導した。健常なドナ
ー由来のバフィコートを、Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉ
ｓｉｃ（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）から得た。Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉ
ｓｏｌａｔｉｏｎ ＫｉｔｓをＭＡＣＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅ
ｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）とともに使用して、ＣＤ１４単球をネガティブ除去に
よって単離した。細胞を培地（１０％胎仔ウシ血清（ＦＣＳ）（Ｓｕｍｍｉｔ，
Ｉｎｃ．、Ｆｏｒｔ Ｃｏｌｌｉｎｓ、ＣＯ）、２ｍＭグルタミン、ペニシリン
およびストレプトマイシンを補充し、１，０００Ｕ／ｍｌの組換えヒト顆粒球−
マクロファージコロニー刺激因子（ｒｈＧＭ−ＣＳＦ）（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、
Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ、ＣＡ）および１，０００Ｕ／ｍｌのｒｈＩＬ−４（Ｐｅ
ｐｒｏｔｅｃｈ）を含む、ＲＰＭＩ １６４０）中で０．６×１０⁶／ｍｌに培
養した。サイトカインを含む新鮮な培養培地を、２日ごとに添加した。単球馴化
培地（ＭＣＭ）を、以前に記載（Ｂｅｄｅｒら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．Ｍｅｔｈｏｄｓ １９６：１２１）のように調製し、そしてさらに３日間の培
養開始の後５日目または６日目のいずれかに、３０％でＤＣ培養物に添加した。
いくつかの実験において、細胞を、５０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＴＮＦα（Ｃｅ
ｔｕｓ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）をＭＣＭの代わりに使用して、成熟させ
た。ＭＣＭ処理に際する表面マーカーの発現を、フローサイトメトリーによって
分析した。

【００７５】 （走化性アッセイ） 遊走アッセイを、以前に記載（Ｒｕｂｂｅｒｔら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１６０：３９３３）のように、わずかに改変して実施した。簡潔には、１
０，０００〜１５，０００個の細胞を、９６ウェルマイクロ走化性プレート（１
０１−５ Ｎｅｕｒｏｐｒｏｂｅ、Ｃａｂｉｎ Ｊｏｈｎ、ＭＤ）の一番上のチ
ャンバー各々に添加した。マイクロ走化性プレートを、３７℃で２時間インキュ
ベートした。一番下のチャンバー中の細胞の数を、Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒ
ａｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ ＷＳＴ−１（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ
ｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を製造業者のプロトコルに従って使用し
て、測定した。各測定を３連で設定し、そしてその平均値および標準偏差を算出
した。いくつかの実験においては、その細胞を、１００ｎｇ／ｍｌの百日咳毒素
（ＰＴ）とともに３７℃で２時間プレインキュベートしておいた。

【００７６】 （カルシウム動員） 細胞を、培地（上記を参照のこと）（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび２μＭ Ｆ
ｌｕｏ−３ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を
含む）１ｍｌあたり１０⁶個で３７℃にて３０分間インキュベートした。細胞を
洗浄し、続いて１μｇ／ｍｌのヨウ化ピロピジウム（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏ
ｄｉｔｅ）とともに室温で１５分間インキュベートした。細胞を再び洗浄し、そ
して４×１０⁵／ｍｌにて１０ｍＭ ＨＥＰＥＳを含む培地中に再懸濁した。生
存細胞のＦｌｕｏ−３蛍光（ヨウ化ピリジウム排除に基づく）をフローサイトメ
トリーによって分析した。

【００７７】 （フローサイトメトリー分析） 分析をＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉ
ｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）において実施し、そしてそのデータをＭａｃｉｎｔｏｓ
ｈ ７１００（Ａｐｐｌｅ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ）でＣｅｌｌＱｕｅｓｔ
ｖ３．１ソフトウェアを作動させて得た。得られたデータを、ＦｌｏｗＪｏ（
Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ、ＣＡ）を使用して分析
し、そして表示した。

【００７８】 （ＲＴ−ＰＣＲおよびＬｉｇｈｔ ＣｙｃｌｅｒによるＲＮＡ発現の定量） ＲＴ−ＰＣＲ：全ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を製造
業者のプロトコルを使用して細胞から単離した。ＲＮａｓｅを含まないＤＮａｓ
ｅでの処理後、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ Ｐｒｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を
製造業者のプロトコルに従って使用して、オリゴｄＴ_12-18でプライムすること
によって第１鎖ｃＤＮＡを合成した。ＲＮａｓｅＨ処理後、このｃＤＮＡを分光
測光法によって定量した。ＣＣＲ１〜９、ＣＸＣＲ１〜５、ＣＸ₃ＣＲ１および
３つのオーファンレセプターについての公開されたヒト配列に基づいて、ケモカ
インレセプター間で最も分岐したコード領域の３’末端付近の領域を標的とする
、ＰＣＲオリゴヌクレオチドを設計した。各遺伝子についてのフォワード（ｆ）
プライマーおよびリバース（ｒ）プライマー、配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．
）、予想フラグメントサイズならびにＧｅｎＢａｎｋ登録番号を、以下のように
示す。

【００７９】

【化１】

【００８０】 ＧＡＰＤＨプライマーを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ、＃
５４０６）から得た。各ＰＣＲ反応について、ｃＤＮＡ ０．５μｇを以下を含
む２５μｌ反応物中で使用した：１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂
、５０ｍＭ ＫＣｌ（ｐＨ８．３）、１．２５Ｕ Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼ
（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）、０．２ｍＭ ｄＮＴＰおよび５
０ｐｍｏｌの各プライマー。ＰＣＲ反応は、９４℃にて１分、６０℃にて１分、
７２℃にて１分を３０サイクル実施し、そして２％アガロースゲル上に分析した
。いくつかのＰＣＲ反応は、６０℃での代わりに５５℃で１分間のアニーリング
工程を用いて、実施した。各遺伝子についての各プライマー対の特異性は、各Ｐ
ＣＲ産物をｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ
、ＣＡ）中にクローニングすることによって確認し、そして配列を確認した（デ
ータは示さず）。

【００８１】 Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｉｄａｈｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｄａｈｏ
Ｆａｌｌｓ、ＩＤ）：最適なライトサイクル（ｌｉｇｈｔ ｃｙｃｌｅ）条件
を、これらの半定量的（ｓｅｍｉ−ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ）ＰＣＲ反応につ
いて使用した。各ライトサイクル反応物（１０μｌ）は、以下を含んだ：５０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、２５０μｇ／
ｍｌウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．２ｍＭ ｄＮＴＰ、１Ｕ ＤＮＡ Ｔ
ａｑ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、０．１ｐｍｏｌの各プライマー、および１：５０
００ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）。４つ
の反応を、色素インターカレーション算出用の濃度曲線（２５０ｎｇ、１２５ｎ
ｇ、６２．５ｎｇおよび３１．２５ｎｇのｃＤＮＡ）を確立するように、各プラ
イマーセットについて実行した。このＬｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒプログラムは、
以下からなる：１つの標準化サイクル（６５℃〜８５℃〜９５℃、２０秒固定）
、続いて４５サイクルの変性（９５℃を５秒間）、アニーリング（Ｔ_mより３℃
低く２秒間）および伸長（７２℃を３０秒間）。この４５サイクルの後に、１回
の「大融解（Ｂｉｇ Ｍｅｌｔ）」工程（６０℃を５秒間、９５℃を５秒間およ
び３２℃を２０秒間）が続く。各プライマー対は、２℃以下のＴ_mの差異を有し
、そしてＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ色素定量に最適な範囲（１００〜５００ｂｐ
）内の産物を生じる。使用するプライマーの配列およびアニーリング温度は、以
下の通りである：ＣＣＲ１（５８℃）、ＣＣＲ２（６２℃）、ＣＣＲ３（６２℃
）、ＣＣＲ４（６０℃）、ＣＣＲ５（５８℃）、ＣＣＲ６（ＲＴ−ＰＣＲと同じ
、６０℃）、ＣＣＲ７（５８℃）およびアクチン（５７℃）。アクチン増幅物は
、未成熟ＤＣのｃＤＮＡサンプルおよび成熟ＤＣのｃＤＮＡサンプルの両方につ
いて、同様のプロフィールを生じたので、アクチンを参照として使用し、そして
ＣＣＲサンプルすべてを、その豊富さに関して、そのｃＤＮＡサンプルのアクチ
ンに対して評価した。

【００８２】 （実施例１） （未成熟樹状細胞および成熟樹状細胞の生成） 未成熟ＤＣを、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４を使用して、ヒト末梢血から単離
した単球から誘導した。成熟ＤＣを生成するために、本発明者らは、これらの細
胞を単球馴化培地（ＭＣＭ）またはＴＮＦαで処理した。ＭＣＭ処理は、ＤＣ成
熟と関連するマーカー（例えば、ＣＤ８６、ＣＤ８３およびＭＨＣクラスＩＩ表
面発現）の有意なアップレギュレーションを誘導した。ＭＣＭ処理なしのＤＣま
たはＭＣ処理ありのＤＣについての平均蛍光チャネルは、それぞれ、ＣＤ８６に
ついて４１７および３６２４、ＣＤ８３について１８６および７２１、ＣＤ４０
について６６７および７９０、ＣＤ１４について２０２および１３２、ＣＤ１ａ
について２４０１および２４１３、そしてＨＬＡ−ＤＲについて１２４２および
３１０６であった。これらの細胞をまた、同種異系ＭＬＲアッセイにて試験した
。そしてＤＣ：Ｔ比１：１００でのその平均刺激指数は、ＭＣＭ処理の前および
後のＤＣについて、それぞれ１７．６および４７．２であった（データは示さず
）。従って、このインビトロ培養モデルにて分化したＤＣは、免疫表現型および
機能の両方によって、これらのインビボでの対応物と似ている。

【００８３】 （実施例２） （ＳＬＣおよびＥＬＣは、成熟ＤＣに走化性である） ＥＬＣ（二次リンパ器官において発現するケモカイン）（Ｄｉｅｕら（１９９
８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：３７３；Ｙｏｓｈｉｄａら（１９９７）Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１３８０３；Ｒｏｓｓｉら（１９９７）Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１５８：１０３３）は、以前に、成熟ＤＣについて走化性であるこ
とが示されている。ＳＬＣは、未刺激のＴ細胞について走化性であることが以前
に示された、リンパ組織で発現する別のケモカインである。ＣＣＲ７は、ＳＬＣ
およびＥＬＣのレセプターであり、そしてＤＣ成熟の際にアップレギュレートさ
れる（Ｇｕｎｎら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
９５：２５８；Ｗｉｌｌｉｍａｎｎら（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．２８：２０２５；Ｙｏｓｈｉｄａら（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２７３：７１１８；Ｓｏｚｚａｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１
：１０８３；Ｄｉｅｕら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：３７３；Ｓ
ａｌｌｕｓｔｏら（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：２７６０）
。これらの実験は、ＳＬＣが、成熟ＤＣについてもまた走化性であるか否かを、
Ｂｏｙｄｅｎチャンバーアッセイを使用して試験した。ＳＬＣ（図１ａ）および
ＥＬＣ（図１ｂ）の両方に応答して、ＭＣＭ処理（成熟）ＤＣの遊走に、用量依
存性の増加が観察された。対照的に、成熟ＤＣは、ＲＡＮＴＥＳには応答しなか
った（図１ｃ）。ＲＡＮＴＥＳは、未成熟ＤＣに走化性であることが以前に示さ
れたケモカインである（Ｓｏｚｚａｎｉら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
５５：７：３２９２）。類似の結果が、ＭＣＭの代わりにＴＮＦαで処理したＤ
Ｃを用いてもまた観察された（図１ａ〜ｂ）。ＳＬＣおよびＥＬＣに対するＤＣ
の遊走応答は、ＤＣの成熟段階に依存した。なぜなら、未成熟ＤＣは、ＳＬＣに
もＥＬＣにも応答しなかった（図１ａ、ｂ）が、ＲＡＮＴＥＳに応答して遊走し
得た（図１ｃ）からである。

【００８４】 成熟ＤＣによるＳＬＣおよびＥＬＣに対する遊走応答は、走化性であって、ケ
モキネシスに起因しなかった。なぜなら、遊走は、ケモカイン勾配（図１ａ、ｂ
、最右欄）がない場合に観察されなかったからである。百日咳毒素による成熟Ｄ
Ｃの事前処理によって、ＳＬＣおよびＥＬＣの両方へのこの成熟ＤＣの遊走は完
全に阻害された（図１ｄ）。このことは、これら２つのケモカインによる成熟Ｄ
Ｃの走化性は、Ｇα_i共役型レセプター（Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉら（１９９７）
Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：６７５）によって媒介されたことを
示唆する。

【００８５】 （実施例３） （ＳＬＣおよびＥＬＣに応答性の成熟ＤＣによる、細胞内カルシウム動員） ケモカインは、応答細胞中の細胞内カルシウム動員の迅速な増加を生じ得る（
Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉら（１９９７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５
：６７５）ので、本発明者らは、次に、ＳＬＣおよびＥＬＣが、本発明者らの成
熟ＤＣおよび未成熟ＤＣにおけるカルシウム動員を誘導するか否かを試験した。
ＳＬＣおよびＥＬＣは両方が、成熟ＤＣにおいて迅速なカルシウム動員を誘導し
た（図２ｂ、ｃ）が、未成熟ＤＣでは誘導しなかった（図２ａ）。対照的に、Ｒ
ＡＮＴＥＳは、未成熟ＤＣにおいて迅速なカルシウム応答を誘導した（図２ａ）
が、成熟ＤＣでは誘導しなかった（図２ｂ、ｃ）。これらの結果は、遊走アッセ
イにおいて観察された示差的走化性応答（図１）を密接に類似した。走化性応答
と同様に、ＳＬＣおよびＥＬＣに対するＭＣＭ処理細胞のカルシウム応答は、用
量依存性であった（図２ｄ〜ｅ）。

【００８６】 （実施例４） （ＳＬＣ誘導性Ｃａ²⁺動員およびＥＬＣ誘導性Ｃａ²⁺動員の交差脱感作） ＳＬＣが等価な用量のＥＬＣよりも、成熟ＤＣにおいて強力なカルシウム応答
を誘導した（図２）ことが、一貫して観察された。また、成熟ＤＣのＳＬＣ誘導
性動員は、６ｎｇ／ｍｌのＥＤ₅₀を有するが、ＥＬＣについてのＥＤ₅₀は３５ｎ
ｇ／ｍｌであった（図１ａ、ｂ）。まとめると、これらの観察は、本発明者らの
商業的供給源由来のＳＬＣが、ＥＬＣよりも高い比活性を有することを示唆した
。実際、１００ｎｇ／ｍｌのＳＬＣでのＤＣの事前処理は、５００ｎｇ／ｍｌの
ＥＬＣに対するカルシウム応答を完全に阻害するに十分であった（図２ｆ）。反
対に、５００ｎｇ／ｍｌのＥＬＣでの事前処理は、このＳＬＣ誘導性カルシウム
応答のほとんどを排除した（図２ｇ）。ＳＬＣおよびＥＬＣは、カルシウム動員
において互いに脱感作し得ることが、ＣＣＲ−７でトランスフェクトされた細胞
において以前に示されている（Ｗｉｌｌｉｍａｎｎら（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：２０２５；Ｙｏｓｈｉｄａら（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７３：７１１８）。本発明者らの結果は、ＳＬＣおよびＥＬＣが
また、ＤＣにおいて類似のシグナル伝達経路を共有することを示した。成熟ＤＣ
がオートクライン様式でＥＬＣを生成することが、最近報告された。従って、本
発明者らはまた、本発明者らの未成熟ＤＣおよび成熟ＤＣにおけるＳＬＣのｍＲ
ＮＡの発現をＲＴ−ＰＣＲによって試験したが、いずれの細胞集団がＳＬＣのｍ
ＲＮＡを発現することも見出さなかった（データは示さず）。

【００８７】 （実施例５） （ＭＣＭ処理前およびＭＣＭ処理後のケモカインレセプターｍＲＮＡの発現） 指示薬としてのケモカインレセプターのアップレギュレーションの有用性を考
え、ＭＣＭ処理前およびＭＣＭ処理後のＤＣにおけるケモカインレセプターの発
現に関する包括的な調査を実施した。ＣＣＲ４、ＣＣＲ７およびＣＸＣＲ５／Ｂ
ＬＲ１のｍＲＮＡの発現の有意な増加、ならびにＣＣＲ１、ＣＣＲ５およびＣＸ
ＣＲ２の有意な減少を、ＤＣの成熟の際に観察した（図３）。ＣＸＣＲ１の発現
はまた、低い基底レベルであるが、ＭＣＭ処置の際に一貫して低減されていた。
ＣＣＲ２のわずかな減少およびＣＣＲ８のわずかな上昇をまた観察したが、ＣＣ
Ｒ３、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ３およびＣＸＣＲ４に関して、有意な変化
は検出されなかった。オーファンレセプターＧＰＲ−９−６についてメッセージ
は、検出されず、そして成熟ＤＣおよび未成熟ＤＣにおけるＣＸ₃ＣＲ１、Ｂｏ
ｎｚｏおよびＧＰＲ５の発現レベルに差異はなかった（データは示さず）。半定
量的ＲＴ−ＰＣＲの結果の正当性を確認するために、報告されたところによると
、ＲＡＮＴＥＳ、ＥＬＣおよびＳＬＣ（ＣＣＲ１、３〜７）の結合に関与する、
レセプターの発現レベルを、ＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎ／Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ
を用いて試験した。表１に示されるように、Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒからの定
量的データは、アガロースゲル分析（図３）からの結果で観察される傾向と密接
に類似する。Ｓａｌｌｕｓｔｏおよび共同研究者らは、近年、ＲＮａｓｅプロテ
クションアッセイを用いて、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７およびＣ
ＸＣＲ１の発現における同様の変化を報告した（Ｓａｌｌｕｓｔｏら、（１９９
８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：２７６０）。

【００８８】 ＣＣＲ６ ＲＮＡは、単球由来のＤＣにおいて検出されないことが以前に報告
された（Ｐｏｗｅｒら、（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：８２５；Ｇ
ｒｅａｖｅｓら、（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：８３７）。対照的
に、本発明者らは、本発明者らの単球由来のＤＣにおけるＣＣＲ６ ｍＲＮＡの
発現を検出し得たが、ＭＣＭ処理の際に発現の有意な変化は、観察されなかった
（図３）。本発明者らはまた、Ｐｏｗｅｒら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．
１８６：８２５により用いられたプライマーを用いた場合に、同様の結果を得た
（データは示さず）。本発明者らのＰＣＲ産物の正体をまた、ＣＣＲ６をｍＲＮ
Ａレベルで実際に発現したことを示す直接的な配列決定により確認した（データ
は示さず）。しかし、ヒトＣＣＲ６に対する抗体を用いる成熟ＤＣおよび未成熟
ＤＣの両方のフローサイトメトリー分析は、いずれの細胞型においてもＣＣＲ６
の表面発現は、存在しないことを示した（データは示さず）。

【００８９】 ＣＣＲ４およびＣＸＣＲ５が、ＤＣのＭＣＭ処理の際にアップレギュレートさ
れるという観察は、興味深い。なぜなら、これらの２つのレセプターは、それぞ
れＭＤＣ（Ｇｏｄｉｓｋａら、（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：１５
９５；Ｉｍａｉら、（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：１７６４）
およびＢＬＣ／ＢＣＡ−１（Ｌｅｇｌｅｒら、（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ
．１８７：６５５；Ｇｕｎｎら、（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９１：７９９）
を結合することが実証されているからである。ＭＤＣは、胸腺において、および
より低いレベルで脾臓において発現され、そして単球由来のＤＣに対する走化性
を示した（Ｇｏｄｉｓｋａら、（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：１５
９５）。ＭＤＣのマウスホモログはまた、Ｂ細胞小節に隣接するリンパ節のＴ細
胞領域において発現されることが見出された（Ｔａｎｇら、（１９９８）Ｊ．Ｌ
ｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６４：８１）。他方で、ＢＬＣは、パイアー斑の小節、
脾臓およびリンパ節において発現される（Ｇｕｎｎら、（１９９８）Ｎａｔｕｒ
ｅ ３９１：７９９）。従って、ＣＣＲ４およびＣＸＣＲ５のアップレギュレー
ションは、ＤＣが二次リンパ器官への侵入のためにそれらを導くさらなるケモカ
インを感知することを可能にし得る。一旦、二次リンパ器官内になると、ＤＣは
、ケモカイン（例えば、ＤＣ−ＣＫ１）を分泌することによりナイーブＴ細胞を
誘引し、免疫応答を開始する。Ｒａｎｄｏｌｐｈら（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８
）２８２：４８０）は、組織からリンパ管へのＤＣのインビボでの移動を模倣す
る培養系において、内皮単層を横切る際の単球のＤＣへの分化を報告した。

【００９０】 要約すると、本発明者らは、ＳＬＣが、ＥＬＣと同様に、成熟ＤＣのための化
学誘引物質であるが、未成熟ＤＣの化学誘引物質でないことを実証した。ＭＣＭ
処理の際のＤＣにおけるＣＣＲ７のアップレギュレーションは、この発見と一致
する。炎症性ケモカイン（ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２）についてのレセプ
ターのダウンレギュレーションおよび二次リンパ器官において発現されるケモカ
インについての成熟ＤＣにおけるレセプターのアップレギュレーションは、免疫
応答を開始するためにＤＣを炎症および抗原取り込みの部位に残存させて、局所
的なリンパ器官に遊走させる機構を提供すると考えられる。

【００９１】 表１．未成熟ＤＣおよび成熟ＤＣ由来のｃＤＮＡにおけるケモカインレセプタ
ーの発現のＬｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ定量

【００９２】

【表１】 未成熟（−ＭＣＭ）ＤＣまたは成熟（＋ＭＣＭ）ＤＣ由来のｃＤＮＡサンプルを
、材料および方法に記載したようにライトサイクルＰＣＲ反応において使用した
。各々のＰＣＲ反応についての産物の量を、蛍光色素（ＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎ）
の取り込みから計算し、そして同じｃＤＮＡサンプルから得られたアクチン産物
の量のパーセンテージとして示した。結果をＭＣＭの添加の際の倍数変化として
表す。これらのデータは、１つのｃＤＮＡサンプルについて複数、および３つの
独立したｃＤＮＡのセットにおける反復の代表である。

【００９３】 （実施例６） （ＳＬＣを用いての、マウスにおける腫瘍増殖の阻害） マウス黒色腫細胞株、Ｂ１６−ＢＬ６を使用して、６〜８週齢のピンクスキン
雌ＢＤＦ−１マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）において皮下腫瘍を確立した。
Ｂ１６−ＢＬ６細胞を、１０％胎仔ウシ血清および２０ｍＭ Ｌ−グルタミン（
Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含むＥＭＥＭ培地（Ｂｉｏ−Ｗｈｉｔ
ｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）において単層として維持した。
細胞を１〜２分間のトリプシンでの処理によって回収し、次いで培地で洗浄した
。細胞を、引き続くマウスへの注射のために、５×１０⁶細胞／ｍｌの濃度で培
地中に再懸濁した。

【００９４】 皮下腫瘍を生成するために、０．２ｍｌの培地中の１０⁶個のＢ１６−ＢＬ６
細胞を、２７．５ゲージ針を用いて、６〜８週齢の雌ＢＤＦ−１マウスの上背領
域に注射した（０日目）。細胞の生存率を、細胞注射の前および後にトリパンブ
ルー圧排色素法により評価した。注射前の死滅細胞の数は、全細胞の１０％以下
であった。６日目まで、腫瘍の直径は、約５〜１０ｍｍであった。次いで、腫瘍
の容量を、６〜２７日間、毎日測定した。

【００９５】 腫瘍増殖に対するＳＬＣの効果を、評価した。組換えマウスＳＬＣを、バキュ
ロウイルス発現系を用いて産生し、そしてＳ１カラムおよびヘパリンカラムで精
製した。精製されたマウスＳＬＣを、注射の前にＰＢＳ、ｐＨ７．４に希釈した
。ＳＬＣの全ての注射物を、３日目および４日目に、１日あたり０．０２ｍｌの
注射を２回（１日あたり０．０４ｍｌの全注射容量）皮下に投与した。ＳＬＣ注
射は、各回で異なる部位であり、そして各部位は、腫瘍の縁から約３ｍｍ離れて
いた。注射されたＳＬＣの濃度は、ＰＢＳ中で０．０２５〜２５０μｇ／ｍｌの
範囲であった。ＰＢＳをネガティブコントロールとして使用し、そして１０ｍｇ
／ｍｌであった。ダカルバジン（ＤＴＩＣ；Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ｄ２３９
０）を腫瘍増殖の阻害のためのポジティブコントロールとして使用した。いくつ
かのマウスを、ＳＬＣ注射の２日後または４日後に屠殺した。残りの全てのマウ
スを、腫瘍の容量が４０００ｍｍ³に達した後に、屠殺した。組織検体を、屠殺
後、直ちに収集し、ＯＣＴゲル（Ｓａｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ）に包埋し、そ
してドライアイスで予め冷却した２−メチルブタン中で凍結した。

【００９６】 ＢＤＦ−１マウス生存に対するＳＬＣ処理の効果を試験する実験の結果を、図
４に示す。図４に示されるように、ＳＬＣでの処理は、腫瘍増殖を阻害し、そし
て０．２５μｇ／ｍｌおよび２５μｇ／ｍｌの濃度（１ｎｇ／日および１００ｎ
ｇ／日）で最も有効であった。一連の同様の実験からの結果は、Ｂ１６−ＢＬ６
腫瘍（腫瘍＜２０００ｍｍ³）を有するＢＤＦ−１マウスのＳＬＣ処理またはＤ
ＴＩＣ処理が、１８日間（コントロール群）から２７日間（ＳＬＣ処理およびＤ
ＴＩＣ処理群）に生存が伸びたことを示す。

【００９７】 ＳＬＣまたはＤＴＩＣで処理されたＢＤＦ−１マウスおよびコントロールＢＤ
Ｆ−１マウスにおける腫瘍増殖速度を、図５に示す。最大の原発性腫瘍増殖阻害
は、１３日目に生じた。ＳＬＣ（２５μｇ／ｍｌ）は、腫瘍増殖を５８％阻害し
た。ＤＴＩＣは、腫瘍増殖を６９％阻害した（図６）。

【００９８】 腫瘍および周辺組織を、免疫細胞の存在について免疫蛍光染色することにより
分析した。ナイーブＴ細胞を、ＳＬＣ注射後、２日目で１００μｇ／ｍｌのＳＬ
Ｃで小節形成とともに検出した。対照的に、ナイーブＴ細胞は、ＰＢＳコントロ
ールにおいてＳＬＣ注射後の２日目に検出されず、また２５０μｇ／ｍｌのＳＬ
Ｃを用いて処理されたマウスにおいても検出されなかった。ＳＬＣ処理後４日目
に、小節形成とともに活性化Ｔ細胞を、１００μｇ／ｍｌのＳＬＣを用いて処理
されたマウス中で検出したが、ＰＢＳまたは２５０μｇ／ｍｌのＳＬＣで処理さ
れたマウス中では、検出されなかった。ＳＬＣでの処理後、１１日目、活性化Ｔ
細胞腫瘍の浸潤が、１０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌのＳＬＣを用いて処
理された腫瘍中で検出されたが、ＰＢＳまたは２５０μｇ／ｍｌのＳＬＣで処理
された腫瘍中では、検出されなかった。

【００９９】 ＳＬＣ注射後２日目および４日目に、成熟樹状細胞を、１０μｇ／ｍｌおよび
１００μｇ／ｍｌのＳＬＣ濃度で、小節形成とともに、容量依存様式で検出した
。樹状細胞を、ネガティブＰＢＳコントロールまたは２５０μｇ／ｍｌのＳＬＣ
で処理した腫瘍部位において検出しなかった。マクロファージを、ＳＬＣ処理腫
瘍およびＰＢＳ処理腫瘍の両方で、検出した。対照的に、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好
中球、好塩基球、および好酸球を、ＳＬＣ処理腫瘍部位においても、またＰＢＳ
処理腫瘍部位においても検出しなかった。

【０１００】 ＣＴ２６−１３結腸癌細胞を皮下に注射したマウスにおいて、ＳＬＣが腫瘍形
成を阻害する能力を、上記したのと同様の一連の実験で試験した。腫瘍増殖の最
大の阻害は、２５日目に生じた。１１日目および１２日目での２５μｇ／ｍｌま
たは７５μｇ／ｍｌのＳＬＣの投与は、ＣＴ２６−１３腫瘍増殖を２５日目に４
３％阻害したが、２５０μｇ／ｍｌのＳＬＣでは、腫瘍増殖を１９％阻害した。

【０１０１】 （実施例７） （ＳＬＣおよびＩＬ−２併用療法を用いての、マウスにおける腫瘍増殖の阻害
） ＩＬ−２と組み合わせたＳＬＣが、ＢＤＦ−１マウスに皮下移植されたＢ１６
−ＢＬ６黒色腫細胞の増殖を阻害する能力を試験した。Ｂ１６−Ｂｌ６マウス黒
色腫細胞を調製し、そして実施例６に記載したようにＢＤＦ−１マウスの皮下に
注射した（０日目）。ＳＬＣ（０．２５μｇ／ｍｌまたは２．５μｇ／ｍｌを１
日あたり２回、０．０２ｍｌ注射）を上記のように３日目および４日目に投与し
た。３日目および４日目に、ＰＢＳ，ｐＨ７．４での処理をネガティブコントロ
ールとして実施した。３〜９日目に腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により投与された０
．２ｍｌの０．０５Ｎ ＨＣｌ中０．０１％ＤＴＩＣでの処理をポジティブコン
トロールとして、実施した。

【０１０２】 ＩＬ−２を以下のように、注射のために調製した。１６．８ｍｌの１．１ｍｇ
／ｍｌのＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ^TM，Ｃｈｉｒｏｎ ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）を０．７４ｍｌの５％ヒト血清アルブミン
（ＨＡＳ）および１９．４４ｍｌの５％デキストロースに添加した。ＩＬ−２を
３〜９日目に０．２ｍｌでの静脈内（ＩＶ）注射により毎日投与した。

【０１０３】 この結果を図９に示す。ポジティブコントロール、ＤＴＩＣを用いる処理は、
１４日目で腫瘍増殖を約７０％減少させた。２．５μｇ／ｍｌのＳＬＣ単独、Ｉ
Ｌ−２単独またはＩＬ−２と組み合わせた２．５μｇ／ｍｌのＳＬＣでの処理は
、１４日目で腫瘍増殖を約６０％減少させた。ＩＬ−２と組み合わせた０．２５
μｇ／ｍｌのＳＬＣでの処理は、最大の効果を有し、腫瘍増殖を約８５％減少さ
せた。

【０１０４】 本明細書中に言及された全ての刊行物および特許出願は、本発明が関与する当
該分野の当業者の水準を示すものである。全ての刊行物および特許出願は、各個
々の刊行物または特許出願が、具体的にかつ個々に参考として援用されるように
示されるのと同程度に、本明細書中で参考として援用される。

【０１０５】 上記発明は、理解の明確さの目的のために例示および実施例により幾分詳細に
記載されたが、特定の変化および改変が、添付の特許請求の範囲の範囲内で実施
され得ることが明白である。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１．ヒトＳＬＣのｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列（それぞれ、配列番号１
および配列番号２）。アミノ酸残基２３と２４との間の矢印は、シグナル配列の
推定切断部位を示す。

【図２】 図２．マウスＳＬＣのｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列（それぞれ、配列番号
３および配列番号４）。

【図３】 図３．ＲＡＮＴＥＳではなく、ＳＬＣおよびＥＬＣに誘導される成熟ＤＣの走
化性。（ａ〜ｂ）示される濃度（ｎｇ／ｍｌ）の（ａ）ＳＬＣまたは（ｂ）ＥＬ
Ｃへの応答における、処理されていない未成熟細胞（白色棒）と比較した、ＭＣ
Ｍ（黒色棒）またはＴＮＦ （斜線棒）を用いて成熟させたヒト単球由来ＤＣの
遊走。％遊走（＋／− ＳＥ）は、上部チャンバーに添加された細胞数に基づく
。（ｃ）示される濃度（ｎｇ／ｍｌ）のＲＡＮＴＥＳへの応答における、ＭＣＭ
処理された成熟ＤＣまたは未刺激（未成熟）ＤＣの遊走。走化性指数は、ケモカ
インの非存在下における細胞数に対する、試験ケースの下部チャンバーにおける
細胞数の比率である。（ｄ）１００ｎｇ／ｍｌの百日咳毒素（ＰＴ）とのプレイ
ンキュベーションは、ＭＣＭ処理した成熟ＤＣのＳＬＣ誘導遊走を阻害した。こ
れらの結果は、少なくとも３回の独立した実験の代表である。

【図４Ａ】 図４．ＳＬＣおよびＥＬＣによって誘導された、ＭＣＭ処理した成熟ＤＣにお
けるカルシウム動員。ＭＣＭ処理なしＤＣ（ａ）、またはＭＣＭ処理ありＤＣ（
ｂ〜ｅ）を、Ｆｌｕｏ−３ＡＭにロードした。ケモカインを、矢印によって示さ
れる時点で添加し、そしてカルシウム応答を、フローサイトメトリーによって分
析した。（ａ〜ｃ）５００ｎｇ／ｍｌのＳＬＣ、ＥＬＣまたはＲＡＮＴＥＳに対
するカルシウム応答。（ｄ〜ｅ）５００、１５０、５０、１５、５、および１．
５ｎｇ／ｍｌの（ｄ）ＳＬＣまたは（ｅ）ＥＬＣによって誘導される、用量依存
性カルシウム応答。（ｆ〜ｇ）ＭＣＭ処理したＤＣを、Ｆｌｕｏ−３ＡＭにロー
ドし、そしてカルシウム動員を、フローサイトメトリーによって分析した。添加
されたケモカインの濃度は、以下の通りであった：（ｆ）１００ｎｇ／ｍｌ Ｓ
ＬＣ、５００ｎｇ／ｍｌ ＥＬＣ、（ｇ）５００ｎｇ／ｍｌ ＥＬＣ、１００ｎ
ｇ／ｍｌ ＳＬＣ。これらの結果は、２回以上の独立した実験の代表である。

【図４Ｂ】 図４．ＳＬＣおよびＥＬＣによって誘導された、ＭＣＭ処理した成熟ＤＣにお
けるカルシウム動員。ＭＣＭ処理なしＤＣ（ａ）、またはＭＣＭ処理ありＤＣ（
ｂ〜ｅ）を、Ｆｌｕｏ−３ＡＭにロードした。ケモカインを、矢印によって示さ
れる時点で添加し、そしてカルシウム応答を、フローサイトメトリーによって分
析した。（ａ〜ｃ）５００ｎｇ／ｍｌのＳＬＣ、ＥＬＣまたはＲＡＮＴＥＳに対
するカルシウム応答。（ｄ〜ｅ）５００、１５０、５０、１５、５、および１．
５ｎｇ／ｍｌの（ｄ）ＳＬＣまたは（ｅ）ＥＬＣによって誘導される、用量依存
性カルシウム応答。（ｆ〜ｇ）ＭＣＭ処理したＤＣを、Ｆｌｕｏ−３ＡＭにロー
ドし、そしてカルシウム動員を、フローサイトメトリーによって分析した。添加
されたケモカインの濃度は、以下の通りであった：（ｆ）１００ｎｇ／ｍｌ Ｓ
ＬＣ、５００ｎｇ／ｍｌ ＥＬＣ、（ｇ）５００ｎｇ／ｍｌ ＥＬＣ、１００ｎ
ｇ／ｍｌ ＳＬＣ。これらの結果は、２回以上の独立した実験の代表である。

【図５】 図５．ＤＣにおけるケモカインレセプターの発現プロフィール。処理されてい
ない（−）か、または５〜８日目からＭＣＭで処理された（＋）かのいずれかの
ＤＣから、８日間の培養後に総ＲＮＡを調製した。第一鎖ｃＤＮＡを合成し、そ
して半定量的ＰＣＲ分析に使用した。３０サイクルの増幅からのＰＣＲ産物を、
エチジウムブロミド染色した２％アガロースゲル上で可視化した。分子量マーカ
ー（ｋｂ）を、ゲルの左側に示す。ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ３
、ＣＸＣＲ５、ＣＸ₃ＣＲ１を除き、すべてのＰＣＲ反応について、アニーリン
グ温度は５５℃であった。ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣ
Ｒ５、ＣＸ₃ＣＲ１は、６０℃であった。これらの結果は、３つの独立したｃＤ
ＮＡ対を用いた、７回以上の実験の代表である。

【図６】 図６．Ｂ１６−ＢＬ６マウス黒色腫細胞を皮下注射されたマウスの生存に対す
る、ＳＬＣの腫瘍周囲投与の効果。

【図７】 図７．マウスに皮下注射されたＢ１６−ＢＬ６マウス黒色腫細胞の原発性腫瘍
増殖に対する、ＳＬＣの腫瘍周囲投与の効果。

【図８】 図８．１３日目のＢ１６−ＢＬ６マウス黒色腫細胞の原発性腫瘍増殖に対する
、ＳＬＣの腫瘍周囲投与の効果。

【図９】 図９．マウスにおける皮下Ｂ１６−ＢＬ６腫瘍増殖に対する、ＩＬ−２と組み
合わせたＳＬＣの効果。

【手続補正書】

【提出日】平成１３年１０月１６日（２００１．１０．１６）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１６

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００１６】 「ＳＬＣポリペプチドまたはタンパク質」とは、二次リンパ系組織ケモカイン
を意味する。ＳＬＣとしては、以下に規定されるような、天然に存在する哺乳動
物ＳＬＣ、ならびにその改変体およびフラグメントが挙げられる。好ましくは、
ＳＬＣは、ヒトまたはマウス起源のＳＬＣである。最も好ましくは、ＳＬＣはヒ
トＳＬＣである。ヒトＳＬＣは、クローン化され、そして配列決定されている。
Ｎａｇｉｒａら（１９９７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：１９５１８（こ
の内容は、参考として援用される）。ヒトＳＬＣのｃＤＮＡ配列およびアミノ酸
配列を、図１に示す（それぞれ、配列番号１および配列番号２）。ヒトＳＬＣの
シグナル配列は切断されて成熟形態を産生し、配列番号２の残基２４〜１３４（
配列番号５）を示す。マウスのＳＬＣもまた、クローン化され、そして配列決定
されている。Ｈｒｏｍａｓら（１９９７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９：２５５
４；Ｈｅｄｒｉｃｋら（１９９７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９：１５８９；お
よびＴａｎａｂｅら（１９９７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９：５６７１（これ
らの内容は、参考として援用される）。マウスＳＬＣのｃＤＮＡ配列およびアミ
ノ酸配列を、図２に示す（それぞれ、配列番号３および配列番号４）。マウスＳ
ＬＣのシグナル配列は切断されて成熟形態を産生し、配列番号４の残基２４〜１
３３（配列番号６）を示す。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００７９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００７９】

【化１】

【手続補正３】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図１】

【手続補正４】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図２】

【手続補正５】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図３

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図３】

【手続補正６】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図４Ａ

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図４Ａ】

【手続補正７】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図４Ｂ

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図４Ｂ】

【手続補正８】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図５

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図５】

【手続補正９】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図６

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図６】

【手続補正１０】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図７】

【手続補正１１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図８】

【手続補正１２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図９】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 37/00 37/00 43/00 １０５ 43/00 １０５ Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｎ 15/02 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＤ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 チャン， ビビアン ダブリュー． エ フ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94608， エメリービル， ホートン ストリート 4560 (72)発明者 コサコタ， スリニバス アメリカ合衆国 カリフォルニア 90403， サンタ モニカ， アパートメント 10， ７ティーエイチ ストリート 932 (72)発明者 ウィリアムズ， ルイス ティー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94920， ティブロン， ミラフロアーズ ３ (72)発明者 ウィンター， ジル エイ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94805， リッチモンド， マウント ストリート 435 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA21 CA04 DA02 HA17 4C084 AA02 AA13 AA17 BA03 BA21 CA18 CA35 DA06 DC50 MA02 MA52 MA56 MA59 MA63 MA65 MA66 NA14 ZB212 ZB262 4C085 AA13 AA14 BB11 CC02 4C086 AA01 AA02 AA03 EA16 MA01 MA02 MA04 MA52 MA56 MA59 MA63 MA65 MA66 NA14 ZB07 ZB11 ZB21 ZB26 4H045 AA10 CA40 DA01 EA28 FA74

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 哺乳動物被験体において癌または過剰増殖性障害を処置する
   方法であって、該方法は、該被験体に治療的有効量のＳＬＣを投与する工程を包
   含する、方法。
2. 【請求項２】 前記ＳＬＣがヒトＳＬＣである、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記ヒトＳＬＣが配列番号５のポリペプチド配列を有する、
   請求項２に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記ヒトＳＬＣが配列番号５のポリペプチドと少なくとも７
   ０％配列同一性を有する、請求項３に記載の方法。
5. 【請求項５】 請求項１に記載の方法であって、前記ＳＬＣが配列番号５ま
   たは６のポリペプチドの活性改変体であり； ここで、該改変体が、配列番号５または６のポリペプチドの少なくとも３０％
   の血管新生抑制活性、抗腫瘍活性、および／または樹状細胞化学誘引活性を有し
   ；そして 該誘導体が、配列番号５または６のポリペプチドと少なくとも７０％配列同一
   性を有する、 方法。
6. 【請求項６】 請求項１に記載の方法であって、前記ＳＬＣが配列番号５ま
   たは６のポリペプチドの活性フラグメントであり； ここで、該フラグメントが、配列番号５または６のポリペプチドの少なくとも
   ３０％の血管新生抑制活性、抗腫瘍活性、および／または樹状細胞化学誘引活性
   を有し；そして 該フラグメントが、配列番号５または６の少なくとも１０個の連続するアミノ
   酸残基を含む、 方法。
7. 【請求項７】 前記癌が固形腫瘍である、請求項１に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記腫瘍が黒色腫である、請求項７に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記投与が前記腫瘍への注射による、請求項７に記載の方法
   。
10. 【請求項１０】 前記投与が、前記腫瘍の縁から１５ｃｍ以内の１つ以上の
    部位への腫瘍周囲注射による、請求項７に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記ＳＬＣの投与が、前記哺乳動物にＳＬＣポリヌクレオ
    チドを導入する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
12. 【請求項１２】 請求項１１に記載の方法であって、前記ＳＬＣポリヌクレ
    オチドが、以下： ａ）配列番号１または３のポリヌクレオチド； ｂ）配列番号５または６のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； ｃ）配列番号５または６に対して少なくとも７０％配列同一性を有するポリペ
    プチドをコードするポリヌクレオチドであって、該ポリペプチドは、配列番号５
    または６のポリペプチドの少なくとも３０％の血管新生抑制活性、腫瘍阻害活性
    、および／または樹状細胞化学誘引活性を有する、ポリヌクレオチド；ならびに ｄ）配列番号５または６のポリペプチドのフラグメントをコードするポリヌク
    レオチドであって、該フラグメントは、配列番号５または６の少なくとも３０％
    のポリペプチドの血管新生抑制活性、腫瘍阻害活性、および／または樹状細胞走
    化性活性を有し；そして該フラグメントは、配列番号５または６の少なくとも１
    ０個の連続するアミノ酸残基を含む、ポリヌクレオチド、 からなる群より選択される、方法。
13. 【請求項１３】 前記ＳＬＣと組み合わせた治療的有効量のＩＬ−２の投与
    をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記ＩＬ−２が組換えヒトＩＬ−２である、請求項１３に
    記載の方法。
15. 【請求項１５】 ＩＬ−２の前記投与の経路が、静脈内投与経路、経口投与
    経路、粘膜投与経路、鼻腔内投与経路、経皮投与経路、腹腔内投与経路、腫瘍内
    投与経路、および腫瘍周囲投与経路からなる群より選択される、請求項１３に記
    載の方法。
16. 【請求項１６】 ＩＬ−２の前記治療的有効量が約６，０００，０００ＩＵ
    ／Ｍ２〜６００，０００ＩＵ／ｋｇである、請求項１３に記載の方法。
17. 【請求項１７】 前記癌または過剰増殖性細胞増殖の外科的除去をさらに包
    含する、請求項１に記載の方法。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法であって、以下： （ａ）癌、腫瘍、または過剰増殖性細胞増殖の部位に前記ＳＬＣを投与する工
    程； （ｂ）該癌または過剰増殖性細胞増殖を外科的除去する工程；および （ｃ）外科的除去の部位に該ＳＬＣを投与する工程、 を包含する、方法。
19. 【請求項１９】 哺乳動物において樹状細胞の機能を調節するための方法で
    あって、該方法が、該哺乳動物に治療的有効量のＳＬＣ薬剤を投与する工程を包
    含し、該薬剤が、ＳＬＣポリペプチド、ＳＬＣポリペプチド改変体、ＳＬＣポリ
    ペプチドフラグメント、ＳＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、Ｓ
    ＬＣポリペプチド改変体をコードするポリヌクレオチドおよびＳＬＣポリペプチ
    ドフラグメントをコードするポリヌクレオチド、抗ＳＬＣ抗体ならびにＣＣＲ７
    レセプターに対するリガンドからなる群より選択される、方法。
20. 【請求項２０】 前記調節が、一次免疫応答の減少を生じる、請求項１９に
    記載の方法。