JP2002531815A - オキシダント・ストレス症候群および疾病における脂質の過酸化のレベルを決定する方法および組成物 - Google Patents

オキシダント・ストレス症候群および疾病における脂質の過酸化のレベルを決定する方法および組成物

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Abstract

(57)【要約】 本発明はアルツハイマー病の診断および哺乳動物の脂質の過酸化のレベルの上昇を評価する方法に関する。この方法では、哺乳動物の脂質の過酸化に対する感度の良い安定なセンサーとしてイソプロスタンを利用する。アルツハイマー病の治療に有用な化合物を識別する方法、または哺乳動物の脂質の過酸化のレベルを減少させる方法も含まれている。本発明にはまたアルツハイマー病の診断キット、および哺乳動物の脂質の過酸化のレベルを評価する方法も含まれている。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （関連出願に対する相互参照） 本出願は、３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に基づき１９９８年１２月２日
付けの米国仮特許出願Ｎｏ．６０／１１０，５６９号に対する優先権を保有して
いる。
【０００２】 （米国連邦政府による支援研究および開発に関する事項） 本発明は米国政府基金（ＮＩＨ助成金ＨＬ５４００、ＡＧ−０９２１５および
ＡＧ−１０１２４）により一部支援を受けており、従って米国政府は本発明に一
定の権利を有するものである。
【０００３】 （本発明の背景） アルツハイマー病（ＡＤ）は神経変性障害であり、ＡＤの患者では認知機能が
次第に低下すること、および多数のアミロイド・プラーク（ｐｌａｑｕｅ）、神
経原繊維の絡み合い（ＮＦＴ）および脳の中のニューロンの広範な喪失の特徴を
もっている（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ−Ｂｏｇｏｒａｄ等、１９９７年、Ｔｈｅ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ、第２版、Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎｅｍ
ａｎｎ編、５８１〜６００頁）。疫学的研究によりＡＤの単一の原因を突き止め
ることは失敗しているが、遺伝的な研究では、家族性のＡＤ（ＦＡＤ）をもつ血
縁者のサブセットの中で常染色体を優性的に受け継いだＡＤの原因として、アミ
ロイド（Ａ）前駆体蛋白質（ＡＰＰ）、プレセニリン−１（ＰＳ−１）およびプ
レセニリン−２（ＰＳ−２）をコードする異なった染色体上の３種の別々の遺伝
子のいくつかの突然変異が示唆されている（Ｖａｎ Ｄｕｉｊｉｎ、１９９６年
、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ誌、６０巻、４７８〜４８８頁
；Ｇｏｅｄｅｒｔ等、１９９７年、Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ、
第２版、Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ編、６１３〜６２８頁）
。また、アポリポ蛋白質Ｅ（ＡＰＯＥ）の遺伝子の４種の対立遺伝子はＡＤに対
する遺伝的な危険因子であることが示されている（Ｓｅｌｋｏｅ、１９９７年、
Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、２７５巻、６３０〜６３１頁）。しかし既知のすべてのＦＡ
Ｄの突然変異では５％未満の罹病患者を説明できるに過ぎない。何故なら大部分
のＡＤの場合散発性であり、家族によるクラスター化を支持する証拠はあまりな
いからである（Ｈａｒｄｙ、１９９７年。Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
誌、９４巻、２０９５〜２０９７頁）。
【０００４】 このような不均一性にも拘らず、遺伝性および散発性のＡＤの病因には共通の
因子が含まれているようである。これらの因子はＡの沈積およびＮＦＴの形成、
並びにすべてのＡＤの脳の選ばれた区域におけるニューロンの大量の退化を促進
す可能性がある（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ−Ｂｏｇｏｒａｄ等、１９９７年、Ｔｈｅ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ、第２版、Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎ
ｅｍａｎｎ編、５８１〜６００頁）。Ａの異常な処理または生成およびプラーク
の生成はこの病気の病因論において枢要な徴候であることが示唆されている（Ｓ
ｃｈｅｕｎｅｒ等、１９９６年、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．誌、２巻、８６４〜８
７０頁；Ｍａｔｔｓｏｎ等、１９９２年、Ｎｅｕｒｏｓｃ．誌、１２巻、３７６
〜３８９頁）。集合してはいるが単一体ではないＡの種は或る範囲の機構によっ
て試験管内におけるニューロンの機能不全および死を誘発すると仮定されている
（Ｂｕｓｃｉｇｌｉｏ等、１９９５年、Ｎｅｕｒｏｎ誌、１４巻、８７９〜８８
８頁、Ｔｏｍａｓ等、１９９６年、Ｎａｔｕｒｅ誌、３８０巻、１６８〜１７１
頁；Ｂｅｈｌ等、１９９４年、Ｃｅｌｌ誌、７７巻、８１７〜８２７頁）。多数
のＡに富んだ老いたプラーク（ＳＰ）が蓄積したＡＤの脳の区域は上昇したオキ
シダントによるストレスの座であり、恐らく炎症反応を反映している（Ｈｅｎｓ
ｌｅｙ等、１９９４年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、９
１巻、３２７０〜３２７４頁）。さらに、オキシダント・ストレスはＡＤの病因
論において機能的に重要であり、脳の中で反応性酸素種（ＲＯＳ）が生成すると
、ＡＤの場合脂質の過酸化およびニューロンの変質が起こることが示唆された（
Ｇｏｔｚ等、１９９４年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、
９１巻、３２７０〜３２７４頁）。
【０００５】 ＡＤにおいてＲＯＳが重要な役割を演ずることができるという多くの推論があ
るが、この仮説を支持するデータは殆どなかった。生体内における脂質の過酸化
およびオキシダント・ストレスの役割を説明する努力は、信頼できる定量性をも
った分子マーカーが不足していることによって妨げられてきた。現在入手できる
分子マーカーは、化学的に不安定であるか或いは感度または特異性が欠けている
ために、その価値は限定されている（ＧｕｔｔｅｒｉｄｇｅおよびＨａｌｌｉｗ
ｅｌｌ、１９９０年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．誌、１５巻、１
３６５頁）。
【０００６】 ＡＤの脳内における脂質の過酸化について報告したこれまでの数少ない研究に
より、チオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）を測定することにより脂質
の過酸化が増加したことの証拠が提出された（Ｓｕｂｂａｒａｏ等、１９９０年
、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．誌、５５巻、３４２〜３４５頁；Ｐａｌｍｅｒおよ
びＢｕｒｎｓ、１９９４年、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．誌、６４５巻、３３８〜３４
２頁；Ｌｏｖｅｌｌ等、１９９５年、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ誌、４５巻、１５９４
〜１６０１頁；ＢａｌａｚｓおよびＬｅｏｎ、１９９４年、Ｎｅｕｒｏｃｈ．Ｒ
ｅｓ．誌、１９巻、１１３１〜１１３７頁）。しかし、この方法は他のアルデヒ
ドに共役したＴＢＡＲＳ、並びに非脂質に関連した色原体も測定しているので、
その有効性は限られている。最近、ＡＤにおけるＴＢＡＲＳおよび脂質ヒドロパ
ーオキシドのレベルは、対照の検体の脳に対し差がないことが二つの別のグルー
プの研究者によって報告された（Ｌｙｒａｓ等、１９９７年、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃ
ｈｅｍ．誌、６８巻、２０６１〜２０６９頁；Ｈａｙｎ等、１９９６年、Ｌｉｆ
ｅ Ｓｃｉ．誌、５９巻、５３７〜５４４頁）。免疫組織化学的なデータは、Ａ
Ｄの脳の中に脂質の過酸化の安定な副成物が存在することを示唆している（Ｍｏ
ｎｔｉｎｅ等、１９９７年、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ．Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒｏ
ｌ．誌、５６巻、８６６〜８７１頁；Ｓａｙｒｅ等、１９９７年、Ｊ．Ｎｅｕｒ
ｏｃｈｅｍ．６８巻、２０９２〜２０９７頁）。ＡＤ患者の死後のＣＳＦの中で
４−ヒドロキシノネナールのレベルが増加していることが報告されたが、ＡＤの
脳の中におけるこの化合物について定量的なデータは得られていない（Ｌｏｖｅ
ｌｌ等、１９９７年、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ誌、１８巻、４５７〜４
６１頁）。
【０００７】 従って、哺乳動物のオキシダント・ストレスまたは脂質の過酸化に対する分子
マーカーに関連して、アルツハイマー病のようなオキシダント・ストレスが現わ
れる病気の診断、治療および治療法の開発に使用するための組成物および方法に
対して、当業界においてかってなかった要求が存在している。本発明はこの要求
に応えるものである。
【０００８】 （本発明の簡単な概要） 本発明はオキシダント・ストレス症候群または疾病をもつと疑わしい哺乳動物
において脂質の過酸化を測定する方法に関する。この方法は（ａ）該哺乳動物か
らの組織または体液の第１の試料の入手し、（ｂ）該第１の試料中に存在する脂
質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベルの検定、（ｃ）該第１
の試料中に存在する該イソプロスタン分子マーカーのレベルの、オキシダント・
ストレス症候群または疾病に罹っていないが他の点に関しては同じ哺乳動物から
得た組織または体液の第２の試料中に存在する該イソプロスタン分子マーカーの
レベルとの比較（ここで、該第２の試料中の該イソプロスタン分子マーカーのレ
ベルに対する該第１の試料中に存在するイソプロスタン分子マーカーのレベルの
上昇を該哺乳動物における脂質の過酸化のレベルの上昇の指標にし、これによっ
て該哺乳動物にオキシダント・ストレス症候群または疾病が存在することを示す
）を含んで成る。
【０００９】 一態様においてこの方法は（ａ）の後、（ｂ）の前において該第１の試料から
該イソプロスタン分子マーカーを分離することを含んで成る。
【００１０】 他の態様においては、脂質の過酸化のレベルの上昇が反応性酸素種（ＲＯＳ）
のレベルの上昇を含んで成る。
【００１１】 さらに他の態様においては、脂質の過酸化のレベルの上昇が炎症のレベルの上
昇を含んで成る。
【００１２】 一態様においては、脂質の過酸化のレベルの上昇がシクロオキシゲナーゼ（Ｃ
ＯＸ）活性の上昇を含んで成る。
【００１３】 さらに他の態様においては、該オキシダント・ストレスの疫病がアルツハイマ
ー病である。
【００１４】 さらに他の態様においては、該イソプロスタン分子マーカーがｉＰＦ2α−Ｉ
ＩＩ、ｉＰＦ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩから成る群か
ら選ばれる。
【００１５】 さらに他の態様においては、該組織は脳の組織である。
【００１６】 一態様においては、該の脳の組織が大脳前頭極および側頭極から成る群から選
ばれる。
【００１７】 他の態様においては、該体液が髄液（ＣＳＦ）、血漿および尿から成る群から
選ばれる。
【００１８】 また本発明は、哺乳動物のオキシダント・ストレス症候群または疾病を診断す
る方法に関する。この方法は（ａ）該哺乳動物からの組織または体液の第１の試
料の入手、（ｂ）該第１の試料中に存在する脂質の過酸化に対するイソプロスタ
ン分子マーカーのレベルの検定、（ｃ）該第１の試料中に存在する該イソプロス
タン分子マーカーのレベルの、オキシダント・ストレス症候群または疾病に罹っ
ていないが他の点に関しては同じ哺乳動物から得た組織または体液の第２の試料
中に存在する該イソプロスタン分子マーカーのレベルとの比較（ここで該第２の
試料中の該イソプロスタン分子マーカーのレベルに対する該第１の試料中に存在
するイソプロスタン分子マーカーのレベルの上昇を該哺乳動物における脂質の過
酸化のレベルの上昇の指標にし、これによって該哺乳動物にオキシダント・スト
レス症候群または疾病が存在することを示す）、を含んで成る。
【００１９】 一態様においては、この方法はさらに（ａ）の後、（ｂ）の前において該第１
の試料から該イソプロスタン分子マーカーを分離することを含んで成る。
【００２０】 また本発明はオキシダント・ストレス症候群または疾病をもつと疑われる哺乳
動物の脂質の過酸化のレベルを測定する方法を含んでいる。この方法は（ａ）該
哺乳動物からの組織または体液の試料の入手、（ｂ）全脂質溶媒抽出法を用いる
該試料から該イソプロスタン分子マーカーの分離、（ｃ）（ｂ）から得た該イソ
プロスタン分子マーカーの検定の実施、（ｄ）該イソプロスタン分子マーカーの
レベルの定量、を含んで成る方法。
【００２１】 一態様においては、該検定は合成した均質なイソプロスタン標準を含むガス
クロマトグラフ／質量分析法の使用を含んで成り、該定量がピークの面積または
ピークの高さを使用して行われる。
【００２２】 他の態様においては、該オキシダント・ストレスの病気がアルツハイマー病で
ある。
【００２３】 さらに他の態様においては、該イソプロスタン分子マーカーがｉＰＦ2α−Ｉ
ＩＩ、ｉＰＦ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩから成る群か
ら選ばれる。
【００２４】 さらに他の態様においては、該組織が脳の組織である。
【００２５】 一態様においては、該脳の組織が大脳前頭極および側頭極から成る群から選ば
れる。
【００２６】 他の態様においては、該体液が髄液（ＣＳＦ）、血漿および尿から成る群から
選ばれる。
【００２７】 本発明はさらに哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の決定方法
に関する。この方法は、（ａ）該化合物を投与する前に第１の哺乳動物から得た
組織または体液の試料、あるいは該化合物を投与しないが他の点に関しては同じ
第２の哺乳動物から得た組織または体液の試料のいずれかの中の脂質の過酸化に
対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定し、（ｂ）該第１の哺乳動物
に該化合物を投与し、（ｃ）しかる後該第１の哺乳動物から得た組織または体液
中の該イソプロスタン分子マーカーのレベルを測定し、（ｄ）（ｃ）で測定され
た該イソプロスタン分子マーカーのレベルを（ａ）で測定された該イソプロスタ
ン分子マーカーのレベルと比較し、ここで（ｃ）で測定された該イソプロスタン
分子マーカーのレベルが（ａ）で測定された該イソプロスタン分子マーカーのレ
ベルに比べて減少している場合、該化合物は哺乳動物のアルツハイマー病の治療
に有用であると同定することを含んで成る。
【００２８】 一態様においては、該イソプロスタン分子マーカーがｉＰＦ2α−ＩＩＩ、ｉ
ＰＦ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩから成る群から選ばれ
る。 他の態様においては、該脳の組織が大脳前頭極および側頭極から成る群か
ら選ばれる。
【００２９】 他の態様においては、該体液が髄液（ＣＳＦ）、血漿および尿から成る群から
選ばれる。
【００３０】 また本発明は哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の有効量の決
定方法に関する。この方法は、（ａ）該化合物を投与する前に第１の哺乳動物か
ら得た組織または体液の試料、あるいは該化合物を投与しないが他の点に関して
は同じ第２の哺乳動物から得た組織または体液の試料のいずれかの中の脂質の過
酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定し、（ｂ）該第１の哺
乳動物に該化合物の或る量を投与し、（ｃ）しかる後該第１の哺乳動物から得た
組織または体液中の該イソプロスタン分子マーカーのレベルを測定し、（ｄ）（
ｃ）で測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルを（ａ）で測定された
該イソプロスタン分子マーカーのレベルと比較し、ここで（ｃ）で測定された該
イソプロスタン分子マーカーのレベルが（ａ）で測定された該イソプロスタン分
子マーカーのレベルに比べて減少している場合、該量が哺乳動物のアルツハイマ
ー病の治療に有用な該化合物の有効量であると同定することを含んでなる。
【００３１】 また本発明は哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の最適濃度の
決定方法に関する。この方法は、一連の濃度において該化合物を投与された一連
の系列の哺乳動物の脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベル
を監視し、一つまたはそれ以上の系列の哺乳動物の中で該イソプロスタン分子マ
ーカーのレベルの減少が最大になり、それが該哺乳動物に対し毒性を与えない場
合、該化合物の濃度を最適濃度と同定することを含んで成る。
【００３２】 さらに本発明は哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の最適投与
周期の決定方法に関する。この方法は、一連の投与周期において該化合物を投与
された一連の系列の哺乳動物の脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカ
ーのレベルを監視し、一つまたはそれ以上の系列の哺乳動物の中で該イソプロス
タン分子マーカーのレベルの減少が最大になり、該哺乳動物に対し毒性を与えな
い場合、該化合物の投与周期を最適投与周期と認定することを含んで成る。
【００３３】 一態様においては、該化合物が抗酸化性化合物である。
【００３４】 他の態様においては、該化合物が抗炎症性化合物であり、該化合物は哺乳動物
のシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素の活性を阻害するのに有効な一連の濃度
で投与される。
【００３５】 さらにまた本発明は第１の哺乳動物から得られた組織または体液の試料中の脂
質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを減少させるのに有用
な化合物の決定方法に関する。この方法は、（ａ）該化合物を投与する前に第１
の哺乳動物から得た組織または体液の試料、あるいは該化合物を投与しないが他
の点に関しては同じ第２の哺乳動物から得た組織または体液の試料のいずれかの
中の脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定し、（ｂ
）該第１の哺乳動物に該化合物を投与し、（ｃ）しかる後該第１の哺乳動物から
得た組織または体液中の該イソプロスタン分子マーカーのレベルを測定し、（ｄ
）（ｃ）で測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルを（ａ）で測定さ
れた該イソプロスタン分子マーカーのレベルと比較し、ここで（ｃ）で測定され
た該イソプロスタン分子マーカーのレベルが（ａ）で測定された該イソプロスタ
ン分子マーカーのレベルに比べて減少している場合、該化合物は哺乳動物のイソ
プロスタン分子マーカーのレベルを減少させるのに有用と認めることを含んで成
る。
【００３６】 一態様においては、該化合物が該哺乳動物の脳の組織の中のシクロオキシゲナ
ーゼ酵素の活性を阻害するのに有効な量で存在している。
【００３７】 他の態様においては、該化合物が該哺乳動物の脳の組織の中の反応酸素種のレ
ベルを減少させるのに有効な量で存在している。
【００３８】 さらに他の態様においては、該イソプロスタン分子マーカーがｉＰＦ2α−Ｉ
ＩＩ、ｉＰＦ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩから成る群か
ら選ばれる。
【００３９】 また哺乳動物のアルツハイマー病の診断用キットもふくんでいる。このキット
は、（ａ）該哺乳動物から得た組織または体液の試料を入れる試料容器、（ｂ）
該哺乳動物から得た該組織または該体液から脂質の過酸化に対するイソプロスタ
ン分子マーカーを抽出するのに使用する溶液、（ｃ）アルツハイマー病に罹って
いない哺乳動物の組織または体液中に存在する該イソプロスタン分子マーカーの
濃度にほぼ等しい濃度で存在する脂質の過酸化に対する該イソプロスタン分子マ
ーカーの負の対照溶液、（ｄ）アルツハイマー病に罹っている哺乳動物の組織ま
たは体液中に存在する該イソプロスタン分子マーカーの濃度にほぼ等しい濃度で
存在する脂質の過酸化に対する該イソプロスタン分子マーカーの正の対照溶液、
（ｅ）脂質の過酸化に対する該イソプロスタン分子マーカーに対する抗体、およ
び（ｆ）使用説明資料を含んで成る。
【００４０】 さらに哺乳動物から得られた組織または体液中の脂質の過酸化に対するイソプ
ロスタン分子マーカーのレベルの測定用キットが含まれる。このキットは、（ａ
）該哺乳動物から得た組織または体液の試料を入れる試料容器、（ｂ）該哺乳動
物から得た該組織または該体液から脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マ
ーカーを抽出するのに使用する溶液、（ｃ）アルツハイマー病に罹っていない哺
乳動物の組織または体液中に存在する該イソプロスタン分子マーカーの濃度にほ
ぼ等しい濃度で存在する脂質の過酸化に対する該イソプロスタン分子マーカーの
負の対照溶液、（ｄ）アルツハイマー病に罹っている哺乳動物の組織または体液
中に存在する該イソプロスタン分子マーカーの濃度にほぼ等しい濃度で存在する
脂質の過酸化に対する該イソプロスタン分子マーカーの正の対照溶液、（ｅ）脂
質の過酸化に対する該イソプロスタン分子マーカーに対する抗体、および（ｆ）
使用説明資料を含んで成る。
【００４１】 上記の本発明の概要、並びに下記の本発明の詳細な説明は添付図面を参照すれ
ばさらに良く理解されるであろう。
【００４２】 （本発明の詳細な記述） 本発明は哺乳動物の脂質の過酸化のレベルを検定するのに有用な組成物および
方法に関する。哺乳動物の脂質の過酸化のレベルが高いことはオキシダント・ス
トレス症候群または疾病、例えばアルツハイマー病の存在の有用な指標となる。
このような脂質の過酸化のレベルが高いことは、それだけに止まらないが例えば
反応性酸素種（ＲＯＳ）のレベルが高いこと、炎症レベルが高いこと、およびオ
キシダント・ストレスのレベルが高いことを含む幾つかの因子の一つによって生
じる。
【００４３】 本発明の方法および組成物では脂質の過酸化に対する分子マーカーとしてイソ
プロスタンと称する一群の分子を使用する。イソプロスタン（ｉＰ）は膜の燐脂
質の中でフリー・ラジカルがアラキドン酸を攻撃することによりその場でつくら
れるプロスタグランジン（ＰＧ）異性体である（Ｍｏｒｒｏｗ等、１９９２年、
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、２６８巻、４１６１〜４１６９頁）。イソプロス
タンは脂質の過酸化に対する従来の指標よりも有利な点をもっている。
【００４４】 例えば、迅速に分解する脂質のヒドロパーオキシドとは対照的に、イソプロス
タンは脂質の過酸化反応の化学的に安定な最終生成物であり、これはフォスフォ
リパーゼによって放出され、血漿中を循環し、尿の中に排泄される（Ａｗａｄ等
、１９９３年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、２６８巻、４１６１〜４１６９頁
）。このようにしてプロスタグランジン、ロイコトリエンおよびエポキシエイコ
サトリエン酸の異性体が生じるが、その中でＰＧＦ2の異性体、即ちＦ2−イソプ
ロスタン（Ｆ2−ｉＰｓ）に注目が集められてきた。
【００４５】 本発明は３種の異なったＦ2−イソプロスタン、即ち８−ｉｓｏ−ＰＦＧ2（現
在ｉＰＦ2−ＩＩＩとして知られている）、ＩＰＦ２−Ｉ（現在ｉＰＦ2−ＶＩと
して知られている）および８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2を、試験管内および生体
内で脂質の過酸化に対する分子マーカーとして測定する特異的で感度の高い方法
に関する（Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、２７
０巻、９８００〜９８０８頁；Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、９５巻、３４４９〜３４５４頁；Ｒｏｋａ
ｃｈ等、１９９７年、Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ誌、５４巻、８５３〜８７
３頁；Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９６年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、２７１巻
、８９１９〜８９２４頁；Ｒｅｉｌｌｙ等、１９９６年、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏ
ｎ誌、９４巻、１９〜２５頁；Ｄｅｌａｎｔｙ等、１９９７年、Ｃｉｒｃｕｌａ
ｔｉｏｎ誌、９５巻、２４９２〜２４９９頁）。
【００４６】 生成と消滅の所定の機構では、イソプロスタンはフリー・ラジカルが生成する
組織の部位、或いは例えば髄液（ＣＳＦ）のような体液の中において生じる脂質
の過酸化を反映している。以前ＩＰＦ2−ＩＩＩは人のアテローム性動脈硬化症
の血小板の中で上昇すると報告されおり、この場合イソプロスタンは単球／大食
細胞および平滑筋の細胞の中、および循環する低密度のリポ蛋白質の中、並びに
コレステロール過剰症患者の尿の中に局在していることが見出だされている（Ｐ
ｒａｔｉｃｏ等、１９９７年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ．誌、１００巻、２０２７
〜２０３４頁；Ｒｅｉｌｌｙ等、１９９７年、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ誌、９４
巻、３７２７（Ａ））。
【００４７】 生体内で安定な化合物であるイソプロスタンの生成は非侵襲性の分析方法によ
り高い信頼性をもって監視することができる。即ち、これらの分子は哺乳動物の
脂質の過酸化のレベルの感度の良い特異的な分子マーカーとして有用である（Ｐ
ａｔｒｏｎａおよびＦｉｔｚＧｅｒａｄ、１９９７年、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌ．
Ｔｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．誌、１７巻、２３０９〜２３１５頁；Ｍｏｒ
ｒｏｗおよびＲｏｂｅｒｔｓ、１９９６年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．誌、５１巻、１〜９頁）。これらの理由のために、本発明は３種の特殊なｉ
ＰＦ2−ＩＩＩ、ｉＰＦ2−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2によって例示
されるイソプロスタンのレベルを測定する特異的で感度の良い方法を含んでいる
。ｉＰＦ2−ＩＩＩの生成は、喫煙および冠状動脈の再潅流を含む生体内のオキ
シダント・ストレスに伴うと推定される種々の症候群において増加する（Ｐｒａ
ｔｉｃｏおよびＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ、１９９６年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
誌、２７１巻、８９１９〜８９２４頁；Ｒｅｉｌｌｙ等、１９９６年、Ｃｉｒｃ
ｕｌａｔｉｏｎ誌、９４巻、１９〜２５頁；Ｒｅｉｌｌｙ等、１９９７年、Ｃｉ
ｒｃｕｌａｔｉｏｎ誌、９６巻、３３１４〜３３２０頁）。Ｆ２−イソプロスタ
ンは人のアテローム性動脈硬化症のプラークの中でそれが生成する部位において
その場で増加し、その場合生体内で脂質の過酸化が起こると考えられる（Ｐｒａ
ｔｉｃｏ等、１９９７年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ．誌、１００巻、２０２７〜２
０３４頁）。しかし本発明に至るまで、アルツハイマー病のような神経変性病の
診断、治療および治療法の開発に有用な方法および組成物にこれらの特定のイソ
プロスタンが使用できることは示されていない。
【００４８】 定義 本明細書において下記の用語はこの節に定義するような意味をもつものとする
。
【００４９】 冠詞「ａ」および「ａｎ」はこの品詞のもつ文法的な意味においての一つまた
は一つよりも多い（即ち少なくとも一つ）を意味するものとする。例えば「ａｎ
ｅｌｅｍｅｎｔ」は一つの要素または一つよりも多い要素を意味する。
【００５０】 本明細書において「イソプロスタン」の語は、アラキドン酸からフリー・ラジ
カルを触媒として生じたプロスタグランジン異性体を意味する。
【００５１】 本明細書において「オキシダント・ストレス」の語は、関与する特定のフリー
・ラジカル或いは標的の相対的な重要性には無関係に、蛋白質、ＤＮＡおよび／
または脂質に対するフリー・ラジカルに起因した損傷の結果を意味する。「オキ
シダント・ストレス」は、哺乳動物の内因性の対オキシダント防御機構により抑
制（対処）できるよりも過剰にフリー・ラジカルが生成する場合を含み、また哺
乳動物における組織および器官の機能不全を含み、従って疾病の潜在的な機構で
ある。
【００５２】 本明細書において「オキシダント・ストレス症候群または疾病」という語は、
オキシダント・ストレスが原因であるか、或いはオキシダント・ストレスが症状
として現れる疾病または症候群を意味する。例えば神経変性的なオキシダント・
ストレス病はオキシダント・ストレスが原因であるか、或いはオキシダント・ス
トレスが症状として現れる神経変性的な疾病である。
【００５３】 本明細書において「脂質の過酸化」という語は、フリー・ラジカルによる脂質
の損傷を意味する。
【００５４】 本明細書において「脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカー」とい
う語は、脂質の過酸化の過程で生じた誘導体を意味し、該過程の出現を定量的に
反映する。
【００５５】 本明細書において「アルツハイマー病の治療」という語は、下記の一つまたは
それ以上の目的で薬物学的または栄養学的に介入治療を行うことを意味する：ア
ルツハイマー病の症状の緩解、その発病または再発傾向の低減化を含むアルツハ
イマー病の進行を阻止または遅延させる目的、或いはその一つまたはそれ以上の
症状を軽減する目的。
【００５６】 本明細書において「実質的に精製された」または「実質的に純粋な」という語
は、天然に付随する成分を分離した例えば蛋白質または脂質のような化合物に対
して使用する。典型的には試料中の全材料の少なくとも１０％、好ましくは少な
くとも２０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、もっと好ましくは少なくと
も６０％、さらに好ましくは少なくとも７５％、さらに好ましくは少なくとも９
０％、最も好ましくは少なくとも９９％（割合は容積、湿った重量、乾燥重量、
またはモル％、或いはモル分率にいずれかの基準）が問題の化合物である時に、
その化合物は実質的に純粋である。純度は適当な方法、例えば蛋白質の場合はカ
ラムクロマトグラフ法、ゲル電気泳動法またはＨＰＬＣ分析法で測定することが
できる。例えば蛋白質のような化合物は、それが天然に付随した成分を含まない
場合、或いは天然産の状態でそれに付随した天然の不純物から分離されている場
合、実質的に精製されている。本明細書において「実質的に純粋な」という言葉
には、蛋白質または脂質のような化合物で、均質に純粋であり、例えば試料中の
全蛋白質または全脂質の少なくとも９５％（割合は容積、湿った重量、乾燥重量
、またはモル％、或いはモル分率にいずれかの基準）が問題の蛋白質または脂質
である場合を含んでいる。
【００５７】 説明 本明細書に記載された本発明のすべての方法および組成物において、哺乳動物
は任意の哺乳動物であることができ、好ましくは人である。本発明方法は、オキ
シダント・ストレス症候群または疾病の一つまたはそれ以上の症状を示す哺乳動
物、或いはオキシダント・ストレス症候群または疾病の一つまたはそれ以上の症
状を示していない哺乳動物のいずれかに使用することができる。さらに本発明方
法は、オキシダント・ストレス症候群または疾病が進行している段階の哺乳動物
に対し使用することができる。さらに、本発明方法は、環境的な要因または遺伝
的な要因によりオキシダント・ストレス症候群または疾病に罹っていることが疑
われている哺乳動物に対し使用することができる。
【００５８】 本明細書に記載された本発明のすべての方法および組成物において、オキシダ
ント・ストレス症候群または疾病は神経変性的な症候群および疾病、例えばアル
ツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ダウン症候群、およびパーキンソン病（黒
質症に限定）である。疾病はアルツハイマー病の場合が好適である。
【００５９】 また本明細書に記載された本発明のすべての方法および組成物において、組織
の試料は任意のタイプの組織から得られた組織試料であり、体液の試料は任意の
タイプの体液から得ることができる。
【００６０】 第１の哺乳動物から得られた第１の試料を他の点では同じ第２の哺乳動物から
得られた第２の試料と比較するような本発明の方法においては、第２の試料は第
１の試料と同じタイプの組織または体液から得ることが好ましい。組織の試料は
脳の組織から得ることが好適である。体液の試料は髄液（ＣＳＦ）、血漿および
尿から成る群から得た試料であることが好ましい。好適な試料の量としては、髄
液では約１００μＬ（マイクロリットル）またはそれ以上、血漿では約２ｍＬ（
ミリリットル）またはそれ以上、尿では約５ｍＬまたはそれ以上である。
【００６１】 本発明の方法は非侵襲的な方法で行うことができ、例えば外来患者に対して、
或いは臨床的な設定基準で使用することができる。これらの態様は、オキシダン
ト・ストレス症候群または疾病に罹っていることを疑われる患者に対して便宜的
なスクリーニングを行うのに有用である。
【００６２】 また本発明は、例えば生検試料、または外科手術の間に得られる試料を必要と
する非侵襲的な方法として行うことができる。また侵襲的方法を剖検の一部とし
て行うことができる。これらの態様においては、組織の試料は脳の組織であるこ
とが好ましい。好ましくは、脳の組織は大脳前頭極の組織および側頭極の組織か
ら成る群から選ばれる脳の組織である。本発明方法には重さがほぼ数ｇまたはそ
れ以上の脳組織の試料を使用する。これらの侵襲的な態様における体液の試料の
例には、特に心膜液、胆嚢液、および局所的なオキシダント・ストレスの起こる
部位の体液が含まれる。
【００６３】 さらに、本発明のすべての方法および組成物において、脂質の過酸化に対する
イソプロスタン分子マーカーは好ましくはｉＰＦ2α−ＩＩＩ、ｉＰＦ2α−ＶＩ
および８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩから成る群から選ばれるイソプロスタ
ンである。
【００６４】 本発明のいずれの方法も、場合により、哺乳動物からの組織または体液の試料
の入手後、該試料から脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーを分離
する工程を含むことができる。好ましくはイソプロスタン分子マーカーはｉＰＦ 2α −ＩＩＩ、ｉＰＦ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩから成
る群から選ばれるイソプロスタンである。イソプロスタン分子マーカーはプロス
タグランジン分子を分離する当業界の専門家に公知の任意の方法により試料から
分離することができる（例えばＰｒａｔｉｃｏ等、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．誌、２７０巻、９８００〜９８０８頁；Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９８
年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、９５巻、３４４９〜３
４５４頁参照）。
【００６５】 このような方法は、限定されるものでないが例えば溶媒抽出、固相抽出、クロ
マトグラフ法、薄層クロマトグラフ法、遠心分離および沈降法のような分離法を
含んでいる。分離法の一例は下記実施例に記載されている。
【００６６】 さらに、本発明方法は随時当業界の専門家には公知の、或いはプロスタグラン
ジン分子を分離するために本明細書に記載された方法および技術を使用して実質
的に純粋なイソプロスタン分子を分離する工程を含むことができる。
【００６７】 また本発明のすべての方法は、哺乳動物から得られた組織または体液の試料の
中の脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを検定し、測定
し、分析し、或いは定量する過程を含んでいる。プロスタグランジン分子を検定
し、測定し、分析し、或いは定量する技術および方法は当業界の専門家には公知
である。このような方法には例えばプロスタグランジンを検定し定量する方法が
含まれる。このような方法は例えばＬａｗｓｏｎ等の文献に記載されている（１
９９９年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、３７４巻（５号）、２４４４１〜２４
４４４頁）。これらの方法には、限定されるものではないが例えば定量的および
半定量的な方法、例えば薄層クロマトグラフ法、低圧、中圧、高圧液体クロマト
グラフ法を含むクロマトグラフ法、質量分析法、ガスクロマトグラフ法、ガスク
ロマトグラフ／質量分析法、並びに免疫学的方法が含まれる。組織または体液中
のイソプロスタン分子マーカーを検定する例は下記実施例に記載されている。
【００６８】 また本発明には、本発明方法を実施するための適切な化合物の薬物学的組成物
、適当な化合物と薬物学的に許容される担体とから成る組成物を使用することが
含まれる。この化合物は、それだけに限らないが例えば抗酸化性化合物または抗
炎症性化合物である。
【００６９】 本明細書において使用される「薬物学的に許容される担体」という語は、適当
な化合物と組み合わせることができ組み合わせた後適当な化合物を哺乳動物に投
与するのに使用することができる化学的な組成物を意味する。
【００７０】 本発明を実施するのに有用な薬物学的組成物は１日当たり体重１ｋｇについて
約１ｎｇ（ナノグラム）〜約１００ｇの投与量で投与することができる。
【００７１】 本発明方法に有用な薬物学的組成物は、経口用固体組成物、眼科用組成物、座
薬、エーロゾル、局所剤または他の同様な組成物の形で全身的に投与することが
できる。適当な化合物の他に、このような薬物学的組成物は薬物学的に許容され
る担体および薬物の投与を補強し容易にすることが知られている他の成分を含む
ことができる。他の可能な組成物、例えばナノ粒子（ｎｍ程度の大きさの粒子）
、リポゾーム、再封した赤血球、並びに免疫学的なシステムも本発明方法により
適当な化合物を投与するのに使用することができる。
【００７２】 本発明はオキシダント・ストレス症候群および疾病の疑いがある哺乳動物にお
ける脂質の過酸化レベルを測定する方法を含んでいる。
【００７３】 この方法は、哺乳動物からの組織または体液の第１の試料の入手、この第１の
試料の中に存在する脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベル
の検定、第１の試料の中に存在するイソプロスタン分子マーカーのレベルの、オ
キシダント・ストレス症候群または疾病に罹っていないが他の点では同一の哺乳
動物から採取した組織または体液の第２の試料との比較を含んでなる。組織また
は体液の第２の試料は第１の試料と同じまたは異なったタイプの組織または体液
から得ることができる。
【００７４】 好ましい態様では、第２の試料を第１の試料と同じタイプの組織または体液か
ら採取する。第１および第２の体液試料は髄液であることが好ましい。また他の
好ましい態様では、組織の第１および第２の試料は両方とも脳の組織である。脳
の組織は大脳前頭極の組織および側頭極の組織から成る群から選ばれる脳の組織
であることが好ましい。
【００７５】 他の態様では、組織または体液の第２の試料は哺乳動物から得られる組織また
は体液の試料であり、この組織または体液は典型的なオキシダント・ストレス症
候群または疾病により影響を受けていないものである。例えばアルツハイマー病
の場合、組織の第２の試料は小脳の組織である。何故なら小脳は典型的にアルツ
ハイマー病の影響を受けないからである。
【００７６】 第２の試料の中に存在するイソプロスタン分子マーカーのレベルは、第１の試
料のイソプロスタン分子マーカーのレベルを検定するのに使用した方法と同じ方
法によって検定することが好ましい。第１の試料のイソプロスタン分子マーカー
のレベルを第２の試料のイソプロスタン分子マーカーのレベルと比較する場合、
第２の試料のイソプロスタン分子マーカーのレベルに比べ第１の試料のイソプロ
スタン分子マーカーのレベルが高いことは、その哺乳動物において脂質の過酸化
のレベルが高いことの指標である。このことは、その哺乳動物においてオキシダ
ント・ストレス症候群または疾病が存在することを示すものとして採択される。
好ましくは、高いレベルとは第２の試料のイソプロスタン分子マーカーのレベル
よりも少なくとも約２０％高いレベルである。
【００７７】 本発明方法によって検出される高い脂質の過酸化のレベルは、いくつかの因子
の中の一つまたはそれ以上が存在することによって生じることができる。一態様
においては、高い脂質の過酸化のレベルは哺乳動物の組織または体液の中の反応
性酸素種のレベルが高いことに起因している。
【００７８】 他の態様においては、高い脂質の過酸化のレベルは哺乳動物の組織または体液
の中に高い炎症レベルが存在することによって生じる。好ましくは、高い炎症レ
ベルはシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素活性のレベルが高いことによって生
じる。
【００７９】 本発明はまた哺乳動物のオキシダント・ストレス症候群または疾病の診断法を
含んでいる。この方法は哺乳動物の脂質の過酸化レベルを測定することを含んで
成る。哺乳動物の高い脂質の過酸化レベルはオキシダント・ストレス症候群また
は疾病が存在する指標である。何故なら、オキシダント・ストレス症候群または
疾病の症状は哺乳動物の組織または体液に高いレベルのＲＯＳが存在することで
あり、ＲＯＳのレベルが高いと哺乳動物の組織または体液の中の脂質の過酸化の
レベルが増加する原因になる。
【００８０】 この方法では、組織または体液の第１の試料は哺乳動物から得られる。次に第
１の試料中に存在するイソプロスタン分子マーカーのレベルを本明細書に記載さ
れた或いは当業界の専門家に公知の方法または技術によって検定する。次に第１
の試料の中に存在するイソプロスタン分子マーカーのレベルを、オキシダント・
ストレス症候群または疾病に罹っていないが他の点では同じ哺乳動物から採取し
た組織または体液の第２の試料と比較する。
【００８１】 好ましくは、組織または体液の第２の試料はオキシダント・ストレス症候群ま
たは疾病に罹っていないが他の点では同じ哺乳動物から得る。組織または体液の
第２の試料の中に存在するイソプロスタン分子マーカーのレベルは第１の試料の
中のイソプロスタン分子マーカーのレベルを検定するのに使用したのと同じ方法
で検定すことが好ましい。
【００８２】 レベルを比較する場合、第２の試料のイソプロスタン分子マーカーのレベルに
比べ第１の試料のイソプロスタン分子マーカーのレベルが高いことは、哺乳動物
の脂質の過酸化レベルが高いことの指標である。このことは哺乳動物にオキシダ
ント・ストレス症候群または疾病が存在する積極的な診断として採択される。高
いレベルとは組織または体液の第２の試料のイソプロスタン分子マーカーのレベ
ルよりも少なくとも約２０％高いレベルである。組織または体液の第２の試料は
負の対照（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）の役目をする。一態様において
は、第２の試料は診断されるオキシダント・ストレス症候群に罹っているが他の
点では同じ哺乳動物から採取されるが、この試料は典型的にはこの病気の影響を
受けていない組織または体液から得られる。例えばオキシダント・ストレス病が
アルツハイマー病の場合組織の第２の試料の組織のタイプは小脳の組織であるこ
とができる。何故なら小脳は通常この病気の影響を受けないからである。
【００８３】 さらに本発明はオキシダント・ストレス症候群または疾病の疑いのある哺乳動
物の脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーを測定する方法を含んで
いる。この方法は哺乳動物から組織または体液の試料を採取する過程を含んでい
る。次いでイソプロスタン分子マーカーを試料から分離する。このイソプロスタ
ン分子マーカーは本明細書に記載された或いは当業界の専門家に公知の任意の方
法で分離することができる。イソプロスタン分子マーカーを分離する好適な方法
では、組織の試料の場合には先ず組織試料を均質化する。体液の試料の場合には
均質化の段階は不必要である。次いで氷冷したＦｌｏｃｈ溶液、即ちクロロフォ
ルム／メタノール（２：１、容積／容積）を用い試料から全脂質を抽出する。次
にこの溶液を短時間遠心分離し、抽出された脂質を含む有機層を窒素下で乾燥す
る。次に水酸化カリウムを用いて脂質を加水分解し、イソプロスタン分子マーカ
ーを分離させる。
【００８４】 上記の方法で分離したイソプロスタン分子マーカーを次にイソプロスタンに対
する検定方法で検定する。この検定は定量的な検定であることが好ましい。この
場合イソプロスタン分子マーカーのレベルは、例えばピークの面積またはピーク
の高さを使用する結果に基づいて定量する。イソプロスタンに対する好適な定量
的検定の例は下記実施例に記載されている（またＰｒａｔｉｃｏ等、１９９８年
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、９５巻、３４４９〜３４
５４頁参照のこと）。
【００８５】 上記方法で分離されたイソプロスタンは例えば次のようにして効力を検定する
ことができる。水酸化カリウムで加水分解した後しばらくして、イソプロスタン
を含む試料に既知量の均質な合成内部標準を加える。この内部標準は例えば放射
性元素でラベルした合成した均質なイソプロスタン分子であることができる。次
いでこの試料を固相で抽出し、誘導体化し、薄層クロマトグラフで精製する。薄
層クロマトグラフにかけた後、ガスクロマトグラフ−質量分析法を用いて各試料
をイソプロスタン含量について分析し、ピークの面積またはピークの高さの比に
よって定量する。
【００８６】 また本発明は哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物を決める方法
を含んでいる。この方法は、該化合物を投与する前に第１の哺乳動物から得られ
た組織または体液の試料、或いは該化合物を投与されていないが他の点では同じ
第２の哺乳動物から得た組織または体液の試料のいずれかの中の脂質の過酸化に
対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定する過程を含んでいる。この
化合物は任意の化合物であることができ、またそれだけに限定されないが例えば
抗酸化性または抗炎症性をもった化合物であることができる。この化合物は抗酸
化性または抗炎症性をもった化合物として有効であると考えられる任意の量で哺
乳動物に投与される。例えば酸化防止性をもった化合物はビタミンＥおよびビタ
ミンＣを含むことができ、ビタミンＥに対しては１日に約２００〜約２，０００
国際単位、ビタミンＣに対しては１日に約２０〜約２，０００ｍｇの範囲の量で
投与される。またこれだけに限定されないが例えば抗炎症性をもった化合物は、
１日に約２００〜約１，６００ｍｇの範囲の量で投与されるイブプロフェン、１
日に約８０〜約２，０００ｍｇの範囲の量で投与されるアスピリン、１日に約１
００〜約４００ｍｇの範囲の量で投与されるシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤の
ような非ステロイド系の抗炎症薬であることができる。
【００８７】 この化合物を哺乳動物に投与した後、第１の哺乳動物から得た組織または体液
の試料中のイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定する。イソプロスタン分
子マーカーのレベルは本明細書記載の或いは当業界の専門家に公知の任意の方法
によって測定することができる。次に、該化合物投与後第１の哺乳動物から得ら
れた試料中で測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベルを、該化合物投与
前に第１の哺乳動物から得られた試料中で測定されたイソプロスタン分子マーカ
ーのレベル、或いは該化合物を投与しなかった哺乳動物から得られた試料中で測
定されたイソプロスタン分子マーカーのレベルと比較する。
【００８８】 上記最後の節に記載された比較の結果、該化合物投与前に第１の哺乳動物から
得られた試料中で測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベル、或いは該化
合物を投与しなかった哺乳動物から得られた試料中で測定されたイソプロスタン
分子マーカーのレベルに比べ該化合物投与後第１の哺乳動物から得られた試料中
で測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベルが減少しているとされた場合
、この化合物はアルツハイマー病の治療に有用であると認定される。
【００８９】 減少したレベルは、未処置の哺乳動物（他の点では同じ第２の哺乳動物）から
得られた試料または化合物投与前の第１の哺乳動物から得られた試料中のイソプ
ロスタン分子マーカーのレベルよりも約６０％〜約１００％低いレベルであるこ
とが好ましい。
【００９０】 本発明はまた哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の有効量を決
める方法を含んでいる。この方法は、脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子
マーカーのレベルを、該化合物投与前に第１の哺乳動物から得られた組織または
体液の試料、或いは該化合物を投与しなかったが他の点では同じ第２の哺乳動物
から得られた組織または体液の試料の中で測定する過程を含んでいる。次いでア
ルツハイマー病の治療に有効と思われる量を第１の哺乳動物に投与する。この化
合物は本明細書に記載された任意のタイプの化合物を含む任意のタイプの化合物
であることができる。このような化合物を投与する量は１日に体重１ｋｇ当たり
約１ｎｇ〜約１００ｍｇの範囲であることができる。
【００９１】 有効と考えられる量の化合物を投与した後、第１の哺乳動物から得られた組織
または体液のイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定する。イソプロスタン
分子マーカーのレベルは本明細書記載の或いは当業界の専門家に公知の任意の方
法によって測定することができる。次に、該有効と思われる量の化合物を投与し
た後、第１の哺乳動物から得られた試料中で測定されたイソプロスタン分子マー
カーのレベルを、該化合物投与前に第１の哺乳動物から得られた試料中で測定さ
れたイソプロスタン分子マーカーのレベル、或いは該化合物を投与しなかった哺
乳動物から得られた試料中で測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベルと
比較する。
【００９２】 上記最後の節に記載された比較の結果、該化合物投与前に第１の哺乳動物から
得られた試料中で測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベル、或いは該化
合物を投与しなかった哺乳動物から得られた試料中で測定されたイソプロスタン
分子マーカーのレベルに比べ、有効量と思われる該化合物を投与した後の第１の
哺乳動物から得られた試料中で測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベル
が減少しているとされた場合、この量がこの化合物のアルツハイマー病の治療に
対する有効量であると認定される。
【００９３】 減少したレベルは、未処置の哺乳動物（他の点では同じ第２の哺乳動物）から
得られた試料または化合物投与前の第１の哺乳動物から得られた試料中のイソプ
ロスタン分子マーカーのレベルよりも約４０％〜約１００％低いレベルであるこ
とが好ましい。
【００９４】 また本発明はアルツハイマー病の治療に有用な化合物の最適濃度を決定する方
法を含んでいる。この方法では、一連の濃度で該化合物を投与された一連の系列
の哺乳動物に関し、脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベル
を監視する。哺乳動物に対し毒性を与えることなく１匹またはそれ以上の哺乳動
物においてイソプロスタン分子マーカーのレベルの減少が最大になる化合物の濃
度が最適濃度である。
【００９５】 一態様においてこの方法は、オキシダント・ストレス症候群または疾病の治療
、例えばアルツハイマー病の治療のために患者に投与する化合物の最適濃度を決
定するための臨床的な試行方法である。一連の哺乳動物において脂質の過酸化に
対するイソプロスタン分子マーカーのレベルは、本明細書記載の或いは当業界の
専門家に公知の任意の方法を用い一連の時点においてイソプロスタンのレベルを
測定することにより監視される。
【００９６】 化合物は抗酸化性化合物であることが好ましい。他の好適な化合物は抗炎症性
化合物であり、この場合該化合物は哺乳動物のシクロオキシゲナーゼ酵素の活性
を阻害するのに有効な一連の濃度で投与される。該化合物は１日に体重１ｋｇ当
たり約１ｎｇ〜約１００ｇの量で投与される。
【００９７】 酸化防止性および抗炎症性を示す化合物を臨床的に試験するための、一連の哺
乳動物の中に含まれる哺乳動物の数の範囲、該化合物の期待される作用持続期間
、および投与すべき化合物の量は当業界に公知である。例えば抗酸化性および抗
炎症性を示す化合物の投与量の範囲は本明細書に記載されている。抗酸化性およ
び抗炎症性を示す両方の化合物の好適な作用継続時間は、化合物投与後一晩（即
ち８〜１２時間）、および投与直後化合物の活性のスポット・チェックを行う時
間（即ち約１〜２時間）の範囲である。
【００９８】 これだけに限定されないが、本発明方法が有用な臨床的状況は例えば下記のよ
うに例示することができる。アルツハイマー病が治療手段を施し易い炎症成分を
含んでいることは当業界に公知である。炎症成分の烈しさはアルツハイマー病を
もつ個人の間およびアルツハイマー病をもつ個人の罹病時間の範囲で異なるから
、或る与えられた時点において例えば抗酸化剤または抗炎症剤を用いる治療手段
に合理的な基盤があるかどうかを研究している医学者は、アルツハイマー病の生
存中の治療を確立し臨床的研究を設計する際の進行性炎症過程を確立して日常的
な医療を施す助けとなる方法を必要としている。例えば新規抗酸化性または抗炎
症性化合物の臨床試験、或いはこのような薬物の利益を受けると患者を診断する
日常的な医療に使用するために、また薬物の最適濃度および投与周期を選ぶ手段
としての両方において、炎症の酸化成分を非侵入的に評価するのに本発明方法は
有用である。酸化防止剤の効果は内因性の酸化防止剤による防衛の減少の度合い
と逆の関係をもつ傾向がある。本発明方法は、例えばオキシダント・ストレスが
明白な患者であると診断するのに使用することができる。抗酸化性化合物により
炎症成分が抑制されたことが本発明方法で測定されると、このことはその患者に
対する有効濃度を決定し、しかる後該薬物の最適濃度を決定するのに用いること
ができる。
【００９９】 本発明はまたアルツハイマー病の治療に有用な化合物の最適投与周期を決定す
る方法を含んでいる。この方法は一連の投与周期で該化合物を投与された一連の
系列の哺乳動物において脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレ
ベルを監視する方法を含んでいる。哺乳動物に対し毒性を与えることなく一つま
たはそれ以上の系列の哺乳動物においてイソプロスタン分子マーカーのレベルの
減少が最大になる該化合物の投与周期が最適の投与周期である。一態様において
この方法は、オキシダント・ストレス症候群または疾病の治療、例えばアルツハ
イマー病の治療のために患者に投与する化合物の最適の投与周期を決定するため
の臨床的な試行方法である。一連の哺乳動物において脂質の過酸化に対するイソ
プロスタン分子マーカーのレベルは、本明細書記載の或いは当業界の専門家に公
知の任意の方法を用い一連の時点においてイソプロスタンのレベルを測定するこ
とにより監視される。
【０１００】 化合物は抗酸化性化合物であることが好ましい。他の好適な化合物は抗炎症性
化合物であり、この場合該化合物は哺乳動物のシクロオキシゲナーゼ酵素の活性
を阻害するのに有効な一連の濃度で投与される。
【０１０１】 本発明はまた第１の哺乳動物から得られた組織または体液の試料中の脂質に対
するイソプロスタン分子マーカーのレベルを減少させるのに有用な化合物を同定
する方法を含んでいる。この方法では、該化合物を投与する前に第１の哺乳動物
から得られた組織または体液の試料、或いは該化合物を投与されていないが他の
点では同じ第２の哺乳動物から得た組織または体液の試料のいずれかの中の脂質
の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定する。またこの方
法では第１の哺乳動物に該化合物を投与する。この化合物は本明細書に記載され
た任意のタイプの化合物を含む任意の化合物であることができる。この化合物は
１日に体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約１００ｇの量で投与することができる。該
化合物投与後、第１の哺乳動物から得られた組織または体液の試料中のイソプロ
スタン分子マーカーのレベルを本明細書記載の或いは当業界の専門家に公知の任
意の方法で測定する。
【０１０２】 次に、該化合物投与後測定された第１の哺乳動物から得られた組織または体液
の試料中のイソプロスタン分子マーカーのレベルを、該化合物を投与する前に第
１の哺乳動物から得られた組織または体液の試料、或いは該化合物を投与されて
いないが他の点では同じ第２の哺乳動物から得た組織または体液の試料のいずれ
かの中の測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベルと比較する。
【０１０３】 上記最後の節に記載された比較の結果、該化合物投与前に第１の哺乳動物から
得られた試料中で測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベル、或いは該化
合物を投与しなかった哺乳動物から得られた試料中で測定されたイソプロスタン
分子マーカーのレベルに比べ、該化合物を投与した後の第１の哺乳動物から得ら
れた試料中で測定されたイソプロスタン分子マーカーのレベルが減少したことが
分かった場合、哺乳動物において脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マー
カーのレベルを減少させるのに有効な化合物が決定される。イソプロスタン分子
マーカーの減少したレベルは上記に定義した通りである。
【０１０４】 一態様においては、該化合物は哺乳動物の脳組織中のシクロオキシゲナーゼ（
ＣＯＸ）酵素の活性を阻害するのに有用な量で投与される。
【０１０５】 他の態様においては、該化合物は哺乳動物の脳組織中の反応性酸素種（ＲＯＳ
）のレベルを減少させるのに有用な量で投与される。
【０１０６】 本発明はまた哺乳動物のアルツハイマー病の診断キットを含んでいる。このキ
ットは哺乳動物から得られた組織または体液の試料を入れる試料容器を含んでい
る。
【０１０７】 このキットはまた、哺乳動物から得られた組織または体液の試料から脂質の過
酸化に対するイソプロスタン分子マーカーを抽出するのに用いられる溶液を含ん
でいる。この溶液はエタノール溶液であることが好ましい。
【０１０８】 またこのキットは、アルツハイマー病に罹っていない哺乳動物の組織または体
液の試料に存在するイソプロスタン分子マーカーの濃度とほぼ等しい濃度でイソ
プロスタン分子マーカーを含む負の対照溶液を含んでいる。イソプロスタン分子
マーカーはエタノール溶液に懸濁していることが好ましい。このような濃度の範
囲は本明細書の実施例に記載されている。
【０１０９】 またこのキットは、アルツハイマー病に罹っている哺乳動物の組織または体液
の試料に存在するイソプロスタン分子マーカーの濃度とほぼ等しい濃度でイソプ
ロスタン分子マーカーを含む正の対照溶液を含んでいる。イソプロスタン分子マ
ーカーはエタノール溶液に懸濁していることが好ましい。このような濃度の範囲
は本明細書の実施例に記載されている。
【０１１０】 さらに、このキットは脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーに対
する抗体を含んでいる。抗体の製造法および精製法は当業界に公知であり、例え
ばＨａｒｌｏｗ等著、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍ
ａｎｕａｌ」、米国ニューヨークのＣｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ １
９８８年発行、に記載されている。抗体は当業界に公知の任意のタイプの抗体で
あることができる。
【０１１１】 このキットは随時イソプロスタン分子に対して特異的な抗体に対する二次抗体
を含むことができる。
【０１１２】 さらに、このキットは哺乳動物のアルツハイマー病の診断に使用する使用説明
資料を含んでいる。この使用説明資料は哺乳動物のアルツハイマー病の診断に対
しこのキット中の本発明方法の有用性を伝えるのに用い得る刊行物、記録、図面
、または他の表現媒体であることができる。本発明のキットの使用説明資料は例
えばキットの他の内容物を含む容器に付属しているか、或いはこのキットを含む
容器と一緒に出荷することができる。別法として、使用説明資料とキットの内容
が受取人によって一緒に使用される意図の下に、使用説明資料を容器とは別に出
荷することもできる。
【０１１３】 本発明はまた哺乳動物から得られた組織または体液の試料の中の脂質の過酸化
のイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定するキットを含んでいる。このキ
ットは哺乳動物から得られた組織または体液の試料を入れる使用容器を含んでい
る。
【０１１４】 このキットはまた、哺乳動物から得られた組織または体液の試料から脂質の過
酸化に対するイソプロスタン分子マーカーを抽出するのに用いられる溶液を含ん
でいる。この溶液はエタノール溶液であることが好ましい。
【０１１５】 またこのキットは、アルツハイマー病に罹っていない哺乳動物の組織または体
液の試料に存在するイソプロスタン分子マーカーの濃度とほぼ等しい濃度でイソ
プロスタン分子マーカーを含む負の対照溶液を含んでいる。イソプロスタン分子
マーカーはエタノール溶液に懸濁していることが好ましい。このような濃度の範
囲は本明細書の実施例に記載されている。
【０１１６】 またこのキットは、アルツハイマー病に罹っている哺乳動物の組織または体液
の試料に存在するイソプロスタン分子マーカーの濃度とほぼ等しい濃度でイソプ
ロスタン分子マーカーを含む正の対照溶液を含んでいる。イソプロスタン分子マ
ーカーはエタノール溶液に懸濁していることが好ましい。このような濃度の範囲
は本明細書の実施例に記載されている。
【０１１７】 さらに、このキットは脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーに対
する抗体を含んでいる。抗体の製造法および精製法は当業界に公知であり、例え
ばＨａｒｌｏｗ等著、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍ
ａｎｕａｌ」、米国ニューヨークのＣｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ １
９８８年発行、に記載されている。抗体は当業界に公知の任意のタイプの抗体で
あることができる。
【０１１８】 このキットは随時イソプロスタン分子に対して特異的な抗体に対する二次抗体
を含むことができる。
【０１１９】 さらに、このキットは哺乳動物のアルツハイマー病の診断に使用する使用説明
資料を含んでいる。この使用説明資料は哺乳動物から得られた組織または体液の
試料中のイソプロスタン分子マーカーのレベルを測定する上でこのキット中の本
発明方法の有用性を伝えるのに用い得る刊行物、記録、図面、または他の表現媒
体であることができる。本発明のキットの使用説明資料は例えばキットの他の内
容物を含む容器に付属しているか、或いはこのキットを含む容器と一緒に出荷す
ることができる。別法として、使用説明資料とキットの内容が受取人によって一
緒に使用される意図の下に、使用説明資料を容器とは別に出荷することもできる
。
【０１２０】 次に下記実施例により本発明を具体的に説明する。これらの実施例は単に例示
のためのものであり、本発明を限定するものではなく、本明細書の説明の結果明
らかになった多くの変形を包含するものである。
【０１２１】 実施例１ 本実施例に記載された実験において、２種のイソプロスタン（ｉＰＦ2−ＩＩ
ＩおよびｉＰＦ2−ＶＩ）のレベルはＡＤ（アルツハイマー病）に罹った脳の冒
された領域（即ち大脳前頭極および側頭極であるが、小脳皮質内にはない）で選
択的に増加することが見出だされた。また、パーキンソン病（ＰＤ）、精神分裂
症（ＳＣＨＩ）の患者、または神経学的に正常な対照の脳から得られた試料にお
けるレベルに比べ、ＡＤの大脳前頭極および側頭極の組織の試料ではｉＰＦ2−
ＩＩＩおよびｉＰＦ2−ＶＩが高いレベルで検出された。さらに、心室ＣＳＦ中
におけるこれらのイソプロスタンのレベルはＡＤの脳の中で高かった。従ってこ
れらの研究は、オキシダント・ストレスがＡＤの病原論において重要な役割を演
じていること、およびＣＳＦまたは他の体液、例えば血漿および尿の中のイソプ
ロスタンのレベルの決定を、生存している患者のＡＤの診断、または哺乳動物の
脂質の高い過酸化のレベルの評価法の開発に利用できることを示唆している。ま
たこれらのデータは、ＡＤの脳の中のオキシダント・ストレスの機構が哺乳動物
でのＡＤの進行を停止または遅延させるための新しい治療化合物の設計の標的に
なり得ることを意味している。
【０１２２】 脳組織の試料の調製 １９人のＡＤの患者、６人のＰＤの患者、１０人のＳＣＨＩの患者および８人
の対照の死体から剖検時において脳の試料を得た。この実験で研究された患者お
よび対照の死後における診断の評価は、従来報告された方法および基準に従って
行った（Ｓｃｈｍｉｄｔ等、１９９１年、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．誌、６４巻、
３５２〜３５７頁；Ａｒｎｏｌｄ等、１９９５年、Ａｍ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈ．誌、
１５２巻、７３１〜７３７頁；Ｓｃｈｍｉｄｔ等、１９９６年、Ａｃｔａ ｎｅ
ｕｒｏｐａｔｈｏｌ．誌、９１巻、４７５〜４６８頁）。対照検体は痴呆、他の
神経的な病気、或いは脳に影響する全身性の病気の履歴をもっていなかった。対
照の脳では神経病的な検査によって顕著な異常性は示されなかった。固定しない
冷凍した（−８０℃）大脳前頭極（ＦＰ）、側頭極（ＴＰ）および小脳の組織に
ついてイソプロスタンのレベルの検定を行った。透明で血液を含んでいないＣＳ
Ｆは他のＡＤ患者（総数１０人、男性１０人、女性５人、年齢６５〜８５歳）お
よびＡＤ患者でない対照（総数１０人、男性７人、女性３人、年齢６７〜８６歳
）の脳の側脳室から剖検時に得た。ＣＳＦを１，５００ｒｐｍで１０分間遠心分
離にかけ、部分標本にし、分析を行うまで−８０℃で貯蔵した。ＣＳＦおよび脳
のすべての試料をコード化し、これらの試料の以後の分析は、年齢または個人か
ら得られる診断結果或いは脳組織の地域的な身元に関する知識なしで行った。
【０１２３】 脳の試料の抽出物の調製 ＦＰ、ＴＰおよび小脳の組織の試料を刻み、１０ｍＭのＥＤＴＡおよび１ｍＭ
のブチル化されたヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）を含む燐酸塩で緩衝された塩水
の中に再び懸濁させて自動酸化を防ぐ。１０μｇの［2Ｈ8］−アラキドン酸を試
料に加え、試料の抽出および処理の間Ｆ2−イソプロスタンが人工的に生成する
のを監視できるようにした。刃による均質化装置で均質化した後、２０ｍＬの氷
冷したＦｏｌｃｈ溶液、即ちクロロフォルム／メタノール（２：１、容積／容積
）で全脂質を抽出した。次にこの溶液を撹拌し、４℃において８００×ｇにおい
て１５分間遠心分離にかける。抽出された脂質を含む有機相を窒素下で乾燥し、
次いで水酸化カリウム水溶液（１５％）を加え、この混合物を４５℃で１時間加
温し、加水分解させて全ｉＰＦ2−ＩＩＩおよびｉＰＦ2−ＶＩを放出させる。こ
こに記載したの同じ試料について６−ケトＰＧＦ1のレベルの検定を行った。
【０１２４】 生化学的分析 前記のガスクロマトグラフ／質量分析法による検定法を用いｉＰＦ2−ＩＩＩ
およびｉＰＦ2−ＶＩ並びに６−ケトＰＧＦ1のレベルを検定した（Ｐｒａｔｉｃ
ｏ等、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、２７０巻、９８００〜９８０
８頁；Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ誌、９５巻、３４４９〜３４５４頁）。簡単に説明すると、既知量の内
部標準［18Ｏ2］−ｉＰＦ2−ＩＩＩ、［2Ｈ4］−ｉＰＦ2−ＶＩまたは［2Ｈ4］
−６−ケトＰＧＦ1を試料に加える。次いで試料に対し固相抽出を行い、誘導体
化し、薄層クロマトグラフに２回かけて精製した。最後にＦｉｓｏｎｓ ＭＤ−
８００（イタリー、ミラノのＦｉｓｏｎｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製）ガスク
ロマトグラフ／質量分析計を用い各試料についてイソプロスタンおよび６−ケト
ＰＧＦ1の分析を行い、ピークの比を用いて定量した。
【０１２５】 統計分析 平均値±ＳＥＭとしてデータを提示する。ｉＰＦ2−ＩＩＩおよびｉＰＦ2−Ｖ
Ｉ並びに６−ケトＰＧＦ1に対する平均値および範囲を与える。適宜後で２−テ
イルド−ｔ−試験（２ ｔａｉｌｅｄ ｔ ｔｅｓｔ）による一対にして比較す
る分散分析を行った。０．０５より小さいｐ値だけを統計的に有意な値と見做し
た。線形回帰法を用い２種のイソプロスタンの間で、イソプロスタンと死後の期
間（ＰＭＩ）、年齢またはＡＤ患者の罹病期間との相関を調べた。
【０１２６】 患者および対照のグループの臨床的な結果および剖検の結果を表１に示す。グ
ループ間において年齢およびＰＭＩには顕著な差異は観測されなかった。ＡＤの
脳の大脳前頭極（ＦＰ）から得た組織試料のｉＰＦ2−ＩＩＩのレベル［湿った
組織１ｇ当たり平均値（範囲）ｐｇ］は、図１に示すように、ＰＤの患者から得
たＦＰ脳組織のレベル［湿った組織１ｇ当たり２３０（８０〜３００）ｐｇ、ｐ
＝０．００４］、ＳＣＨＩ患者のレベル［湿った組織１ｇ当たり２８０（１３０
〜３８０）ｐｇ、ｐ＜０．００１］、または正常な対照の検体［湿った組織１ｇ
当たり２００（８１〜２６０）ｐｇ、ｐ＝０．００２］に比べて著しく高いこと
が見出だされた。ＡＤ患者の側頭極（ＴＰ）から得られた組織試料においても対
照検体に対しｉＰＦ2−ＩＩＩのレベルについて同様な評価結果が得られた。こ
れらの結果［湿った組織１ｇ当たり平均値（範囲）ｐｇ］は次の通りである。Ａ
Ｄ患者に対して［４４５（２５０〜６８５）］、ＰＤ患者に対し［３０３（１６
０〜３５０］、ＳＣＨＩ患者に対し［２２３（１３０〜３００）］、および正常
な対照に対し［２０５（１１０〜３００）］。ＡＤ患者の脳から得られたＦＰま
たはＴＰの組織試料において年齢、ＰＭＩ、または罹病期間とｉＰＦ2−ＩＩＩ
のレベルとの間には実質的に顕著な関係は見られなかった。
【０１２７】 ＡＤ患者の脳の中のｉＰＦ2−ＶＩのレベルはｉＰＦ2−ＩＩＩの場合よりも高
く、ＡＤ患者のＦＰ中で湿った組織１ｇ当たり６０５〜１７９０ｐｇの範囲に亙
り、平均値は９５０ｐｇであった。対応する値は図２に示すように、ＰＤの脳で
は６５０（４００〜８９４）（ｐ＝０．００４）、ＳＣＨＩの脳では４００（２
９０〜５１０）（ｐ＜０．００１）、正常な対照では４６０（３００〜７００）
（ｐ＜０．００１）ｐｇ／ｇである。注目すべきことには、ＴＰの試料のｉＰＦ 2 −ＶＩのレベルの検定でも同様な結果が得られ、この場合の値［湿った組織１
ｇ当たり平均値（範囲）ｐｇ］は次の通りである。ＡＤ患者に対して［１１００
（７００〜１８００）］、ＰＤ患者に対し［７００（５００〜９５０］、ＳＣＨ
Ｉ患者に対し［３５５（２２０〜４２０）］、および正常な対照に対し［４８０
（３２０〜６５０）］。この場合もこれらのＡＤ患者の年齢、ＰＭＩまたは罹病
期間とｉＰＦ2−ＶＩのレベルとの間には顕著な相関は認められなかった。しか
しＦＰ脳皮質（Ｒ＝０．７３，ｐ＝０．０００５）およびＡＤ患者のＴＰ試料の
両方ともこれら２種のイソプロスタンのレベルの間には顕著な相関が見られた。
処理の際［2Ｈ8］−アラキドン酸（１０μｇ）を組織と一緒に加温し、イソプロ
スタンの分析において死後の処理により脳試料中のアラキドニル含有燐脂質から
８−ｉｓｏ−ＰＧＦ2またはＩＰＦ２−Ｉが人工的に生成するかどうかを確かめ
た。ここで使用した処理中には［2Ｈ8］−ｉＰＦ2−ＩＩＩまたは［2Ｈ8］−ｉ
ＰＦ2−ＶＩのいずれも生成しなかった。
【０１２８】 同じ試料についてプロスタサイクリンの加水分解生成物、プロスタグランジン
６−ケトＰＧＦ1（アラキドン酸のシクロオキシゲナーゼ依存代謝生成物）のレ
ベルの検定も行った。注目すべきことに、イソプロスタンとは全く対照的に、Ａ
Ｄ患者のグループとＡＤ患者ではない対照検体のグループとの間に差は見られな
かった（表２参照）。同じ検体から得た小脳の試料についてもこの２種のＦ2−
イソプロスタンのレベルの検定を行った。何故なら、典型的には小脳に対してＡ
Ｄによる障害はないからである。ｉＰＦ2−ＩＩＩおよびｉＰＦ2−ＶＩのレベル
は新皮質におけるよりも小脳の中の方が低かった。またＡＤの小脳中のレベルを
ＡＤでない対照の小脳と比較した場合、Ｆ2−イソプロスタンのレベルに差は認
められなかった（表３参照）。
【０１２９】 また、他のＡＤ患者（ｎ＝１５）および非ＡＤ対照検体（ｎ＝１０）から得た
死後の心室のＣＳＦに対しＦ2−イソプロスタンの検定を行った。ｉＰＦ2−ＩＩ
Ｉのレベルは非ＡＤの患者に比べＡＤのＣＳＦの方が高いが、その差は統計的に
有意であるとは言えなかった［４９（３０〜８４）対４１（２２〜６０）ｐｇ／
ｇ、ｐ＝０．１４］。これとは対照的にｉＰＦ2−ＶＩのレベルは非ＡＤのＣＳ
Ｆに比べＡＤのＣＳＦの方が著しく高かった［１０２（３３〜２２０）対３８（
２２〜８０）ｐｇ／ｇ、ｐ＝０．００９］。この２種のイソプロスタンのＣＳＦ
レベルと年齢、ＰＭＩまたは罹病期間との間には相関も見られなかった。
【０１３０】
【表１】
【０１３１】 年齢、死後経過期間（ＰＭＩ）は平均値±ＳＥＭで示し、範囲は括弧の中に報
告されている。Ｍ／Ｆは男女比である。
【０１３２】
【表２】
【０１３３】
【表３】
【０１３４】 実施例２ 本実施例で説明する実験は，ＡＤと臨床的に診断された人の患者から得られた
髄液（ＣＳＦ）、血漿および尿中の脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マ
ーカー、８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルを健康な対照検体のレベル
と比較した検定である。８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩが人の尿中に最も豊
富に存在するＦ2イソプロスタンであることの証拠はＬａｗｓｏｎ等によって論
じられている（１９９８年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、２７３巻、２９２９
５〜２９３０１頁）。恐らくＡＤであると診断された患者２５人、ＡＤの可能性
があると診断された患者１０人、および２５人の健康な対照検体について研究を
行った。ＣＳＦ、血漿および尿、並びにＣＳＦ−τ蛋白質、ＣＳＦ Ａβ1-40、
Ａβ1-42およびａｐｏＥ遺伝子型の中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレ
ベルの検定を行った。その結果、恐らくＡＤである並びにＡＤの可能性があると
診断された患者は健康な対照に比べＣＳＦ、血漿および尿中において８，１２−
ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルが高いことが示された。ＣＳＦ中および血漿中
の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルの間、およびＣＳＦ中および尿中
の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルの間には直接の相関が見られた。
さらにＣＳＦのイソプロスタン・レベルはＣＳＦ−τ蛋白質および痴呆重症度評
価尺度（Ｄｅｍｅｎｔｉａ Ｓｅｒｅｒｉｔｙ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ，Ｄ
ＳＲＤ）と直接相関があり、Ａβ1-42および簡易精神状態検査（Ｍｉｎｉ Ｍｅ
ｎｔａｌ Ｓｔａｔｅ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ，ＭＭＳＥ）と逆の相関をもっ
ていた。ａｐｏＥ ε４対立遺伝子に対しホモ接合したＡＤ患者は、ａｐｏＥ
ε４対立遺伝子をもたないかまたはａｐｏＥ ε４対立遺伝子の一つのコピーを
もっている患者に比べてイソプロスタンのレベルが高かった。
【０１３５】 臨床的にＡＤであると診断された患者はこの病気の早期の段階においてＣＳＦ
、血漿および尿中において生体内で脂質の過酸化のレベルが増加することをこれ
らの実験結果は示唆している。脂質の過酸化のレベルの増加とこの病気の他の危
険な要因との間に見られる相関は、本明細書に記載された非侵入的な方法を用い
酸化防止剤による治療が効果的な患者を決めることができることを示唆している
。この研究によれば、ＣＳＦばかりではなく血漿および尿中においても健康な個
体に比べＡＤ患者ではイソプロスタンのレベルが上昇しており、８，１２−ｉｓ
ｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルはＡＤに対して当業界に公知の他のマーカーおよび
危険因子と相関がある。さらに、尿中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレ
ベルとＣＳＦ中のイソプロスタンのレベルとの相関は、尿中の脂質の過酸化に対
するこの分子マーカーの非侵入的な測定結果が脳中のオキシダント・ストレスの
レベルを反映していることを示している。
【０１３６】 これらの研究に使用した材料および方法は次の通りである。
【０１３７】 患者の選択 検体患者はペンシルバニア大学（米国ペンシルバニア州、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐ
ｈｉａ）の記憶障害クリニック（Ｍｅｍｏｒｙ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ｃｌｉｎ
ｉｃ，ＭＤＣ）から募集した。すべての患者からこの研究に対する告知による同
意（インフォームド・コンセント）を得た。恐らくＡＤである並びにＡＤの可能
性があるという臨床的な診断はＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ
Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａ
ｓｅｓ ａｎｄ Ｓｔｒｏｋｅ−Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａ
ｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｒｉ
ｔｅｒｉａ（Ｒａｄｅｂａｕｇｈ等、１９９６年、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄ
ｉｓｅａｓｅ ＆ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ １０，Ｓｕｐ
ｐ １：１５）に基づいて行った。日常的な認識に関する検定の一部として、す
べての患者は記憶、言語および習慣の評価のためのＣｏｎｓｏｒｔｈｉｕｍ ｔ
ｏ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ
’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＥＲＡＤ）の心理測定用電池を持たされている。痴呆
重症度評価尺度（ＤＳＲＳ）および簡易精神状態検査（ＭＭＳＥ）を行い、この
病気の臨床的な重症度を評価した。広範な実験室での研究、並びに磁気共鳴画像
診断法および単光子放射型コンピューター断層撮影法（ｓｉｎｇｌｅ−ｐｈｏｔ
ｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）を行い、
他の痴呆障害を除外した。多発性梗塞状態を含む痴呆を説明し得る他の医学的な
症状をもった患者はこの研究から除外した。急性の感染症または炎症を伴う病気
、慢性肝炎、アルコール中毒症、癌をもつ患者、および卵胞ホルモン置換術およ
びビタミン治療を受けている患者も除外した。
【０１３８】 この研究には２５人の患者を登録し、各患者から尿および血液試料を得た。こ
の試料を得た後、腰椎穿刺法を用い母集団のサブグループからＣＳＦの試料を得
た。ＣＳＦ試料を捕集すると共にさらに尿の試料を捕集した。対照検体はＡｌｚ
ｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｅｎｔｅｒの知覚的に正常な集団から、
またＭＤＣに同伴した患者の配偶者から選んだ。
【０１３９】 イソプロスタン分析用の試料の調製 尿、血漿およびＣＳＦを集めて抗酸化剤のブチル化されたヒドロキシトルエン
０．１％を含む管に入れ、分析するまで−８０℃で貯蔵する。試料に［4Ｈ2］−
８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩを加え、固相抽出カラムで抽出し、薄層クロ
マトグラフ法で精製し、陰イオン化学イオン化ガスクロマトグラフ／質量分析法
（ＧＣ／ＭＳ）により下記に説明するようなＰｒａｔｉｃｏ等の方法（１９９８
年、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．誌、４巻、１１８９〜１１９２頁；および１９９９
年、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ．誌、１４７巻、１〜１０頁）で検定した。この方
法の検定内および検定間の変動率は尿および血漿に対しそれぞれ±４％および５
％、±４．５％および４％であった。尿のイソプロスタン（ｉＰ）のレベルはク
レアチン１ｍｇ当たりのｎｇとして表される。ＥＤＴＡで凝固を防止した血液を
直ちに３，０００ｒｐｍで１５分間、４℃において遠心分離して血漿を得て−８
０℃で貯蔵する。分析の前に上記のように血漿を処理する。血漿中のイソプロス
タンのレベルは血漿１ｍｇ中のｐｇで表される。
【０１４０】 目で見て血液の汚染が起こらないようにしてＣＳＦを捕集し、１，５００ｒｐ
ｍで１５分間遠心分離にかけ、分割した試料（１ｍＬ）を直ちに−８０℃で凍結
させる。ＣＳＦ中のイソプロスタンのレベルはＣＳＦ １ｍＬ中のｐｇで表され
る。すべての検定はコード化様式で行った。
【０１４１】 ガスクロマトグラフ／質量分析法による検定 ガスクロマトグラフ／質量分析法による検定（ＧＣ／ＭＳ）は、被検体と内部
標準とが不均質である以前の文献記載の方法とは異なり、合成した均質な標準を
用いて行った。均質標準はＨｗａｎｇ等（１９９４年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．誌、１１６巻、１０８２９〜１０８３０頁）およびＰｕｄｕｋｕｌａｔｈ
ａｎ等（１９９８年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．誌、１２０巻、１１９５３
〜１１９６１頁）により報告されたようにして合成し調製した。均質標準を用い
、単一のイソプロスタン異性体の定量を可能にする検定条件をつくった。
【０１４２】 ｉＰＦ2−ＩＩＩは、試験管内および生体内において生活性をもつ優れたＦ2−
ｉＰであると報告されている（Ｂａｎｅｒｊｅｅ等、１９９２年、Ａｍ．Ｊ．Ｐ
ｈｙｓｉｏｌ．誌、２６３巻、Ｈ６６０〜Ｈ６６３頁；Ｔａｋａｈａｓｈｉ等、
１９９２年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．誌、９０巻、１３６〜１４１頁）か
ら、ＧＣ／ＭＳによる最初の検定をこのイソプロスタンに集中した。［18Ｏ2］
ｉＰＦ2−ＩＩＩを合成し、トリメチルシリルエーテエルの代りにｔ−ブチルジ
メチルシリルエーテルを用いて（Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．誌、２７０巻、９８００〜９８０８頁）ＧＣ／ＭＳの特性を改善す
ることにより単一の異性体を測定する検定法を開発した。この検定法は一回の固
相抽出段階、２回の薄層クロマトグラフ段階、および２回の誘導体化段階を含ん
でおり、技術的に厳しい要求をもっている。ｉＰＦ2−ＩＩＩまたは他のＦ2イソ
プロスタンと異なり、ＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２酵素によって生成させること
ができる（Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、２７
０巻、９８００〜９８０８頁）から、このことは試験管内における脂質の過酸化
の指標としてｉＰＦ2−ＩＩＩを使用する価値を潜在的に低下させている。従っ
てこの検定法の開発にはその代わりにイソプロスタンｉＰＦ2−ＶＩ（以前はｉ
ＰＦ2−Ｉとして知られていた）を使用した（Ａｄｉｙａｍａｎ等、１９９６年
、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．誌、３７巻、４８４９〜４８５２頁）。
イソプロスタンｉＰＦ2−ＶＩは目標の被分析体として有望であった。何故なら
このものは容易に環式ラクトンに変わり、ＩＩＩ、ＩＶおよびＶの種類の他のＦ 2 イソプロスタンからこの異性体を手軽に分離できるからである。またｉＰＦ2−
ＶＩはｉＰＦ2−ＩＩＩよりも高い濃度で尿中に存在し、またｉＰＦ2−ＶＩはＣ
ＯＸ酵素に依存する方法では生成しない（Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９８年、Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．誌、９５巻、３４４９〜３４５４頁）。
【０１４３】 ＣＳＦ−τ、ＣＳＦ Ａβ1-40、Ａβ1-42の測定 Ｉｎｎｏｔｅｓｔ ｈＴＡＵ−Ａｎｔｉｇｅｎキット（ベルギー、Ｚｗｉｊｎ
ｄｒｅｃｈｔ、Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ社）を使い、サンドイッチ−ＥＬＩＳ
Ａ法を用いてτ蛋白質のレベルを測定した（Ａｒａｉ等、１９９５年、Ａｎｎ．
Ｎｅｕｒｏｌ．誌、３８巻、６４９〜６５２頁）。Ａβ1-40およびＡβ1-42のレ
ベルは異なった種のＡβに特異的な単クローン性の抗体を使用しサンドイッチ−
ＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。合成Ａβ1-40およびＡβ1-42を使用して標準曲
線をつくった。サンドイッチ−ＥＬＩＳＡ法の検出限界は１試料当たり合成Ａβ
１ヘムトモルより小さい。すべての検定はコード化方式で行った。
【０１４４】 ＡｐｏＥ遺伝子型の検定 末梢血管の白血球からＤＮＡを抽出し、患者の臨床的診断の知識なしに（Ｗｅ
ｈｈａｍ等、１９９１年、Ｌａｎｃｅｔ誌、３３７巻、１１５８〜１１５９頁）
記載のようにして遺伝子型の分類を行った。しばらくしてＤＮＡ分離後一段階の
ポリメラーゼ連鎖反応を行った。この方法は日常的な作業の目的に対しても非常
に効率的で特異的なことが示されている（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ等、１９９５年、Ｊ
ＡＭＡ誌、２７３巻（１６号）、１２７４〜８頁）。
【０１４５】 統計分析 グループ間の比較はＤｕｎｎの事後調査法を使用するパラメータなしの一方向
分散分析法（Ｋｒｕｓｋａｌｌ−Ｗａｌｌｉｓの試験）を用いて行った。線形回
帰分析法を使用して相関を求めた。統計的有意性はｐ＜０．０５に設定した。
【０１４６】 結果 ＮＩＮＣＤＳ−ＡＤＲＤＡ基準に従って恐らくＡＤであるかＡＤの可能性があ
ると診断された患者の特性、並びに対照検体の特性を表４に示す。対照検体では
８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩの尿中のレベルは、図５に示されているよう
に、クレアチン１ｍｇ当たり０．７５〜４．１ｎｇの範囲にあり、８，１２−ｉ
ｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩの血漿中のレベルは、図６に示されているように、１ｍＬ
当たり０．１〜０．２ｐｇの範囲ににある。臨床的に恐らくＡＤであると診断さ
れた患者では、８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩの尿および血漿中のレベルは
、図５および６に示されているように、対照検体よりも高い（両方ともｐ＜０．
０００１）。図５および６に示されるように、ＡＤの可能性があると臨床的に診
断された患者についても同様なパターンが観測された。ＣＳＦは、恐らくＡＤで
あると診断された患者１０人、ＡＤの可能性があると診断された患者４人、対照
１０人からなる母集団についての研究のサブグループから得た。ＣＳＦの試料を
集めると共に、第２の尿の試料も集めた。この尿の試料で測定された８，１２−
ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルは、図４に示すように、１ｍＬ当たり６〜３８
ｐｇの範囲であった。恐らくＡＤであるかまたはＡＤの可能性があると診断され
た患者では、８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルは著しく高く、図４に
示されているように、それぞれ１ｍＬ当たり４７〜９１ｐｇ（ｐ＜０．０００１
）、および４３〜１０５ｐｇ（ｐ＜０．０００１）であった。尿中およびＣＳＦ
中の間において８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルに直接の相関が認め
られ（ｒ2＝０．５５、ｐ＜０．００１）、また血漿中およびＣＳＦ中の間にお
いても８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルに直接の相関が認められた（
ｒ2＝０．６４、ｐ＜０．００１）。
【０１４７】 表５に示されているように、ＣＳＦ−τ蛋白質のレベルも対照検体に比べ恐ら
くＡＤと思われるかＡＤの可能性がある患者の方が高かった。これとは対照的に
、ＣＳＦ Ａβ1-40およびＡβ1-42の間の百分率は対照検体に比べ恐らくＡＤと
思われるかＡＤの可能性がある患者の方が小さかった（表５）。ＣＳＦ中におけ
るＣＳＦ−τ蛋白質のレベルと８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルとの
間には著しい直接の相関（ｒ2＝０．４３、ｐ＜０．０００１）があるが、Ａβ1 -42 のＣＳＦ百分率と８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルとの間には逆の
相関（ｒ2＝−０．２５、ｐ＜０．０３）が見られた。
【０１４８】 ＣＳＦ中に見られるイソプロスタン・レベルの上昇に対するａｐｏＥ遺伝子型
の影響を研究するために、検体をそれがもっているａｐｏＥのε４対立遺伝子の
コピーの数によって組分けした。ε４対立遺伝子の二つのコピーをもっている（
同型接合）検体は、ε４対立遺伝子のコピーをもたないか一つしかもっていない
検体（異型接合）に比べ、ＣＳＦ中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベ
ルは著しく高かった（ｐ＝０．０４）。ＣＳＦ−τ蛋白質のレベルとε４対立遺
伝子のコピーの数との間にはこのような相関はなかった。
【０１４９】 最後に、ＡＣ患者の痴呆の程度を臨床的に評価するのに持いっられるもっとも
普通の二つの認識試験（痴呆重症度評価尺度｛ＤＳＲＤ｝および簡易精神状態検
査｛ＭＭＳＥ｝）の結果の間に直接の相関が見られた。ＤＳＲＤの結果とＣＳＦ
中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルとの間には直接の相関が見られ
た（ｒ2＝０．２２、ｐ＝０．０２）が、ＭＭＳＥの結果とＣＳＦ中の８，１２
−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルとの間には逆の相関が観測された（ｒ2＝−０
．１５、ｐ＝０．０４）。
【０１５０】 結果の考察 ＡＤと臨床的に診断された（ＡＤの可能性がある、および恐らくＡＤである）
患者は、健康な対照に比べ、生体内での脂質の過酸化に対する信頼すべき分子マ
ーカーであるＣＳＦ、血漿および尿中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレ
ベルが上昇していることの証拠をこれらの実験の結果は提示している。さらに、
血漿および尿の両方の中におけるこのイソプロスタンのレベルがＣＳＦ中のこの
イソプロスタンのレベルと相関をもっているという発見は、オキシダント・スト
レスがＡＤの初期の段階で起こり、これがこの病気の進展に寄与しているであろ
うということを示している。また、本発明の方法はＡＤにおける脂質の過酸化の
レベルの研究に対する最初の非侵入的な方法である。当業界において脂質の過酸
化およびオキシダント・ストレスはＡＤの可能な発病機構として広く認められて
きている。
【０１５１】 以前のいくつかの研究によれば、ＣＳＦ−τレベルの上昇はＡＤの脳のニュー
ロンが次第に死滅していることを反映しており、上昇したＣＳＦ−τレベルはＡ
Ｄの信頼すべき早期の診断試験になり得ることが示されている（Ｔａｔｏ等、１
９９５年、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ誌、５
９巻、２８０〜２８３頁；Ｋａｎａｉ等、１９９８年、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．
誌、４４巻、１７〜２６頁）。これとは対照的に、ＣＳＦ Ａβ1-42のレベルは
、恐らくはＡβ1-42の分離片形成のために、この病気の進行と共に次第に減少す
ることが以前に報告されている（Ｎａｋａｍｕｒａ等、１９９４年、Ａｎｎ．Ｎ
ｅｕｒｏｌ．誌、３６巻、９０３〜９１１頁）。
【０１５２】 本実施例に記載した実験においては、ＣＳＦ−τ蛋白質のレベルとＣＳＦ中の
８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルとの間に直接の相関があり、ＣＳＦ
Ａβ1-42のレベルとＣＳＦ中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベルと
の間には逆の相関があることが示された。これらを一緒に考えると、これらの発
見は、ＡＤ患者において脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーがこ
の病気の進行と直接関係しているＣＮＳ オキシダント・ストレスの増加を反映
していることを示している。イソプロスタンのレベルがこの病気の進行と関連が
あるという事実は、さらにＣＳＦ中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2−ＶＩのレベ
ルと上記の認識試験の結果との間に見られる相関によってさらに確証が与えられ
る。何故なら、このイソプロスタンのＣＳＦ中のレベルはＤＳＲＤの尺度と直接
相関しており、ＭＭＳＥの評価値と逆の相関をもっているからである。
【０１５３】 以前から散在性のＡＤの発病の危険は人のアポリポ蛋白質Ｅ（ａｐｏＥ）の多
形成性と結び付けられてきた。独立した研究により、人のａｐｏＥの４種の対立
遺伝子はＡＤ患者の方がそれに対応した対照検体に比べコピーの数が多いことが
見出だされた（Ｍａｙｅｕｘ等、１９９３年、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．誌、３４
巻、７５２〜７５４頁；Ｖａｎ Ｄｕｉｊｉｎ等、１９９４年、Ｎａｔｕｒｅ
Ｇｅｎｅｔ．誌、７巻、７４〜７８頁）。本実施例のこの実験の結果は、ＣＳＦ
中のイソプロスタンのレベルとａｐｏＥの４種のコピーの数との間に直接の相関
を示している。これらの発見はａｐｏＥのイソ形が脳の障害に対する応答に影響
を与える証拠となる（Ｍａｈｌｅｙ等、１９９５年、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉ
ｐｉｄｏｌ．誌、６巻、８６〜９１頁；Ｐｒａｔｉｃｏ等、１９９９年、Ｊ．Ｎ
ｅｕｒｏｃｈｅｍ．誌、７３巻、７３６〜７４１頁）。従って、なお議論される
べき機構によってａｐｏＥの特定のｉｓｏ形が脳中の脂質の過酸化のレベルを変
化させる可能性もあろう。
【０１５４】 ＡＤの神経病理学的な変化は通常この病気の臨床的な診断が可能になる数年前
に始まるから、早期の段階でＡＤを検出するために使用できる脂質の過酸化に対
する分子マーカーの決定が重要な目標である。このような分子マーカーを使用す
ると、ＡＤの症状の発症を遅延させるためにできるだけ早くＡＤの治療を開始す
るのことが容易になる。ＡＤの患者から得られたＣＳＦ中の８，１２−ｉｓｏ−
ｉＰＦ2−ＶＩのレベルと対照検体から得られたものとの間に全く重複がないこ
とは、このイソプロスタンの定量が温和な形のＡＤの早期の検出に特に有用であ
ることを強く示唆している。さらに本発明方法によるイソプロスタンの上昇した
レベルの検出は、ＡＤの症状を治癒させるかその進行を遅延させる抗酸化性化合
物または抗炎症性化合物のような治療用化合物の効力の評価についての将来の臨
床試験において検体を選ぶ場合の合理的な基礎として使用することができる。
【０１５５】
【表４】
【０１５６】
【表５】
【０１５７】 本明細書に記載した特許、特許出願および刊行物は引用することによりそれら
の全体が組み込まれる。
【０１５８】 以上特定の態様を参照して本発明を説明したが、当業界の専門家は本発明の精
神および範囲を逸脱することなく本発明の他の態様および変更を行い得ることは
明らかであろう。添付特許請求の範囲はこのようなすべての態様および同等な変
形を包含するものとする。
【図面の簡単な説明】
【図１】 正常な対照検体（Ｃ）、アルツハイマー病患者（ＡＤ）、パーキンソン病患者
（ＰＤ）、および精神分裂症患者（ＳＣＨＩ）の大脳前頭極から採取されたイソ
プロスタンｉＰＨ2α−ＩＩＩのレベルを示すグラフ。ｉＰＨ2α−ＩＩＩのレベ
ルは湿った組織試料１ｇ当たりのｐｇで表されている。
【図２】 正常な対照検体（Ｃ）、アルツハイマー病患者（ＡＤ）、パーキンソン病患者
（ＰＤ）、および精神分裂症患者（ＳＣＨＩ）の大脳前頭極から採取されたイソ
プロスタンｉＰＨ2α−ＶＩのレベルを示すグラフ。ｉＰＨ2α−ＶＩのレベルは
湿った組織試料１ｇ当たりのｐｇで表されている。
【図３】 アルツハイマー病患者（ＡＤ）の大脳前頭極から採取されたイソプロスタンｉ
ＰＨ2α−ＩＩＩおよびｉＰＨ2α−ＶＩのレベルを示すグラフ。イソプロスタン
のレベルは湿った組織試料１ｇ当たりのｐｇで表されている。
【図４】 ＡＤの診断で恐らくＡＤ（ＡＤｐｒ）またはＡＤの可能性がある（ＡＤｐｏ）
と診断された生きている人の患者から採取したＣＳＦ中の８，１２−ｉｓｏ−ｉ
ＰＨ2α−ＶＩのレベルを示すグラフ。対照のグループには穏やかな認識障害（
ＭＣＩ）の患者、前頭痴呆症（ＦＤ）の患者、およびそれに合わせた健康に加齢
した人から成る対照（Ｃｏｎ）が含まれている。イソプロスタンのレベルはｐｇ
／ｍＬで表されている。
【図５】 ＡＤの診断で恐らくＡＤ（ＡＤｐｒ）またはＡＤの可能性がある（ＡＤｐｏ）
と診断された生きている人の患者から採取した尿中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＨ 2α −ＶＩのレベルを示すグラフ。対照のグループには穏やかな認識障害（ＭＣ
Ｉ）の患者、前頭痴呆症（ＦＤ）の患者、およびそれに合わせた健康に加齢した
人から成る対照（Ｃｏｎ）が含まれている。イソプロスタンのレベルはｎｇ／ｍ
Ｌで表されている。
【図６】 ＡＤの診断で恐らくＡＤ（ＡＤｐｒ）またはＡＤの可能性がある（ＡＤｐｏ）
と診断された生きている人の患者から採取した血漿中の８，１２−ｉｓｏ−ｉＰ
Ｈ2α−ＶＩのレベルを示すグラフ。対照のグループには穏やかな認識障害（Ｍ
ＣＩ）の患者、前頭痴呆症（ＦＤ）の患者、およびそれに合わせた健康に加齢し
た人から成る対照（Ｃｏｎ）が含まれている。イソプロスタンのレベルはｐｇ／
ｍＬで表されている。
【図７】 図７Ａ、７Ｂ、および７Ｃから成り、それぞれｉＰＦ2α−ＩＩＩ、ｉＰＦ2α −ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩの化学構造を表す一連の式を
示す図。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/61 Ｃ１２Ｑ 1/61 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｅ 33/53 33/53 Ｓ (72)発明者 フイツジエラルド，ギヤレツト・エイ アメリカ合衆国ペンシルベニア州19087ウ エイン・チヤーチロード730 (72)発明者 ロカシユ，ジヨシユア アメリカ合衆国フロリダ州32937サテライ トビーチ・ランターバツクドライブ100 (72)発明者 プラテイコ，ドメニコ アメリカ合衆国ペンシルベニア州19103フ イラデルフイア・ユニツト131・ノースト エンテイセカンドストリート100 (72)発明者 トロジヤノウスキ，ジヨン・キユー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19103フ イラデルフイア・パインストリート2005 Ｆターム(参考） 2G045 DA60 FB01 FB03 FB06 4B063 QA19 QQ03 QQ23 QQ70 QQ79 QQ96 QR48 QS14 QS33 QX01 4C084 AA17 MA01 NA05 ZA162 ZB212

Claims (34)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 オキシダント・ストレス症候群または疾病をもつと疑われる
    哺乳動物の脂質の過酸化のレベルを測定する方法であって、 （ａ）該哺乳動物からの組織または体液の第１の試料を入手し、 （ｂ）該第１の試料中に存在する脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マ
    ーカーのレベルを検定し、そして （ｃ）該第１の試料中に存在する該イソプロスタン分子マーカーのレベルを、
    オキシダント・ストレス症候群または疾病に罹っていないが他の点に関しては同
    じ哺乳動物から得た組織または体液の第２の試料中に存在する該イソプロスタン
    分子マーカーのレベルと比較し、ここで該第２の試料中の該イソプロスタン分子
    マーカーのレベルに対する該第１の試料中に存在するイソプロスタン分子マーカ
    ーのレベルの上昇を該哺乳動物における脂質の過酸化のレベルの上昇の指標にし
    、これによって該哺乳動物にオキシダント・ストレス症候群または疾病が存在す
    ることを示すことを含んでなる方法。
  2. 【請求項２】 （ａ）の後、（ｂ）の前において該第１の試料から該イソプ
    ロスタン分子マーカーを分離することを含んで成る請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 脂質の過酸化のレベルの上昇が反応性酸素種（ＲＯＳ）のレ
    ベルの上昇を含んで成る請求項１記載の方法。
  4. 【請求項４】 脂質の過酸化のレベルの上昇が炎症のレベルの上昇を含んで
    成る請求項１記載の方法。
  5. 【請求項５】 脂質の過酸化のレベルの上昇がシクロオキシゲナーゼ（ＣＯ
    Ｘ）活性の上昇を含んで成る請求項１記載の方法。
  6. 【請求項６】 該オキシダント・ストレスの病気がアルツハイマー病である
    請求項１記載の方法。
  7. 【請求項７】 該イソプロスタン分子マーカーがｉＰＦ2α−ＩＩＩ、ｉＰ
    Ｆ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩから成る群から選ばれる
    請求項１記載の方法。
  8. 【請求項８】 該組織が脳の組織である請求項１記載の方法。
  9. 【請求項９】 該の脳の組織が大脳前頭極および側頭極から成る群から選ば
    れる請求項８記載の方法。
  10. 【請求項１０】 該体液が髄液（ＣＳＦ）、血漿および尿から成る群から選
    ばれる請求項１記載の方法。
  11. 【請求項１１】 哺乳動物のオキシダント・ストレス症候群または疾病を診
    断する方法であって、 （ａ）該哺乳動物からの組織または体液の第１の試料を入手し、 （ｂ）該第１の試料中に存在する脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マ
    ーカーのレベルを検定し、そして （ｃ）該第１の試料中に存在する該イソプロスタン分子マーカーのレベルを、
    オキシダント・ストレス症候群または疾病に罹っていない他の点に関しては同じ
    哺乳動物から得た組織または体液の第２の試料中に存在する該イソプロスタン分
    子マーカーのレベルと比較し、ここで該第２の試料中の該イソプロスタン分子マ
    ーカーのレベルに対する該第１の試料中に存在するイソプロスタン分子マーカー
    のレベルの上昇を該哺乳動物における脂質の過酸化のレベルの上昇の指標にし、
    これによって該哺乳動物にオキシダント・ストレス症候群または疾病が存在する
    ことを示すことを含んでなる方法。
  12. 【請求項１２】 （ａ）の後、（ｂ）の前において該第１の試料から該イソ
    プロスタン分子マーカーを分離することを含んで成る請求項１記載の方法。
  13. 【請求項１３】 オキシダント・ストレス症候群または疾病をもつと疑われ
    る哺乳動物の脂質の過酸化のレベルを測定する方法であって、 （ａ）該哺乳動物からの組織または体液の試料を入手し、 （ｂ）全脂質溶媒抽出法を用いて該試料から該イソプロスタン分子マーカーを
    分離し、 （ｃ）（ｂ）由来の該イソプロスタン分子マーカーの検定を行い、そして （ｄ）該イソプロスタン分子マーカーのレベルを定量することを含んでなる方
    法。
  14. 【請求項１４】 該検定が合成した均質なイソプロスタン標準を含むガスク
    ロマトグラフ／質量分析法を使用する方法であり、該定量がピークの面積または
    ピークの高さを使用することを含んで成る請求項１３記載の方法。
  15. 【請求項１５】 該オキシダント・ストレスの病気がアルツハイマー病であ
    る請求項１３記載の方法。
  16. 【請求項１６】 該イソプロスタン分子マーカーがｉＰＦ2α−ＩＩＩ、ｉ
    ＰＦ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩから成る群から選ばれ
    る請求項１３記載の方法。
  17. 【請求項１７】 該組織が脳の組織である請求項１３記載の方法。
  18. 【請求項１８】 該脳の組織が大脳前頭極および側頭極から成る群から選ば
    れる請求項１７記載の方法。
  19. 【請求項１９】 該体液が髄液（ＣＳＦ）、血漿および尿から成る群から選
    ばれる請求項１３記載の方法。
  20. 【請求項２０】 哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の同定
    方法であって、 （ａ）該化合物を投与する前に第１の哺乳動物から得た組織または体液の試料
    、あるいは該化合物を投与しないが他の点に関しては同じ第２の哺乳動物から得
    た組織または体液の試料のいずれかの中の脂質の過酸化に対するイソプロスタン
    分子マーカーのレベルを測定し、 （ｂ）該第１の哺乳動物に該化合物を投与し、 （ｃ）しかる後該第１の哺乳動物から得た組織または体液中の該イソプロスタ
    ン分子マーカーのレベルを測定し、そして （ｄ）（ｃ）で測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルを（ａ）で
    測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルと比較し、そしてここで（ｃ
    ）で測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルが（ａ）で測定された該
    イソプロスタン分子マーカーのレベルに比べて減少している場合、該化合物は哺
    乳動物のアルツハイマー病の治療に有用であると同定することを含んで成る方法
    。
  21. 【請求項２１】 該イソプロスタン分子マーカーがｉＰＦ2α−ＩＩＩ、ｉ
    ＰＦ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩから成る群から選ばれ
    る請求項２０記載の方法。
  22. 【請求項２２】 該脳の組織が大脳前頭極および側頭極から成る群から選ば
    れる請求項２０記載の方法。
  23. 【請求項２３】 該体液が髄液（ＣＳＦ）、血漿および尿から成る群から選
    ばれる請求項２０記載の方法。
  24. 【請求項２４】 哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の有効
    量の同定方法であって、 （ａ）該化合物を投与する前に第１の哺乳動物から得た組織または体液の試料
    、あるいは該化合物を投与しないが他の点に関しては同じ第２の哺乳動物から得
    た組織または体液の試料のいずれかの中の脂質の過酸化に対するイソプロスタン
    分子マーカーのレベルを測定し、 （ｂ）該第１の哺乳動物に該化合物の或る量を投与し、 （ｃ）しかる後該第１の哺乳動物から得た組織または体液中の該イソプロスタ
    ン分子マーカーのレベルを測定し、そして （ｄ）（ｃ）で測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルを（ａ）で
    測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルと比較し、ここで（ｃ）で測
    定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルが（ａ）で測定された該イソプ
    ロスタン分子マーカーのレベルに比べて減少している場合、該量が哺乳動物のア
    ルツハイマー病の治療に有用な該化合物の有効量であると同定することを含んで
    成る方法。
  25. 【請求項２５】 哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の最適
    濃度の決定方法であって、一連の濃度において該化合物を投与された一連の系列
    の哺乳動物の脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを監視
    し、一つまたはそれ以上の系列の哺乳動物の中で該イソプロスタン分子マーカー
    のレベルの減少が最大になり、それが該哺乳動物に対し毒性を与えない場合、該
    化合物の濃度を最適濃度とすることを含んでなる方法。
  26. 【請求項２６】 哺乳動物のアルツハイマー病の治療に有用な化合物の最適
    投与周期の決定方法であって、一連の投与周期において該化合物を投与された一
    連の系列の哺乳動物の脂質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベ
    ルを監視し、一つまたはそれ以上の系列の哺乳動物の中で該イソプロスタン分子
    マーカーのレベルの減少が最大になり、該哺乳動物に対し毒性を与えない場合、
    該化合物の投与周期を最適投与周期と認定することを含んで成る方法。
  27. 【請求項２７】 該化合物が抗酸化性化合物である請求項２５記載の方法。
  28. 【請求項２８】 該化合物が抗炎症性化合物であり、該化合物が哺乳動物の
    シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素の活性を阻害するのに有効な一連の濃度で
    投与される請求項２５記載の方法。
  29. 【請求項２９】 第１の哺乳動物から得られた組織または体液の試料中の脂
    質の過酸化に対するイソプロスタン分子マーカーのレベルを減少させるのに有用
    な化合物の同定方法であって、 （ａ）該化合物を投与する前に第１の哺乳動物から得た組織または体液の試料
    、あるいは該化合物を投与しないが他の点に関しては同じ第２の哺乳動物から得
    た組織または体液の試料のいずれかの中の脂質の過酸化に対するイソプロスタン
    分子マーカーのレベルを測定し、 （ｂ）該第１の哺乳動物に該化合物を投与し、 （ｃ）しかる後該第１の哺乳動物から得た組織または体液中の該イソプロスタ
    ン分子マーカーのレベルを測定し、そして （ｄ）（ｃ）で測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルを（ａ）で
    測定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルと比較し、ここで（ｃ）で測
    定された該イソプロスタン分子マーカーのレベルが（ａ）で測定された該イソプ
    ロスタン分子マーカーのレベルに比べて減少している場合、該化合物は哺乳動物
    のイソプロスタン分子マーカーのレベルを減少させるのに有用であると同定する
    ことを含んで成る方法。
  30. 【請求項３０】 該化合物が該哺乳動物の脳の組織の中のシクロオキシゲナ
    ーゼ酵素の活性を阻害するのに有効な量で存在する請求項２９記載の方法。
  31. 【請求項３１】 該化合物が該哺乳動物の脳の組織の中の反応性酸素種のレ
    ベルを減少させるのに有効な量で存在する請求項２９記載の方法。
  32. 【請求項３２】 該イソプロスタン分子マーカーがｉＰＦ2α−ＩＩＩ、ｉ
    ＰＦ2α−ＶＩおよび８，１２−ｉｓｏ−ｉＰＦ2α−ＶＩから成る群から選ばれ
    る請求項２９記載の方法。
  33. 【請求項３３】 哺乳動物のアルツハイマー病の診断用キットであって、 （ａ）該哺乳動物からの組織または体液の試料を入れる試料容器、 （ｂ）該哺乳動物から得た該組織または該体液から脂質の過酸化に対するイソ
    プロスタン分子マーカーを抽出するのに使用する溶液、 （ｃ）アルツハイマー病に罹っていない哺乳動物の組織または体液中に存在す
    る該イソプロスタン分子マーカーの濃度にほぼ等しい濃度で存在する脂質の過酸
    化に対する該イソプロスタン分子マーカーの負の対照溶液、 （ｄ）アルツハイマー病に罹っている哺乳動物の組織または体液中に存在する
    該イソプロスタン分子マーカーの濃度にほぼ等しい濃度で存在する脂質の過酸化
    に対する該イソプロスタン分子マーカーの正の対照溶液、 （ｅ）脂質の過酸化に対する該イソプロスタン分子マーカーに対する抗体、お
    よび （ｆ）使用説明資料 を含んで成るキット。
  34. 【請求項３４】 哺乳動物から得られた組織または体液中の脂質の過酸化に
    対するイソプロスタン分子マーカーのレベルの測定用キットであって、 （ａ）該哺乳動物からの組織または体液の試料を入れる試料容器、 （ｂ）該哺乳動物から得た該組織または該体液から脂質の過酸化に対するイソ
    プロスタン分子マーカーを抽出するのに使用する溶液、 （ｃ）アルツハイマー病に罹っていない哺乳動物の組織または体液中に存在す
    る該イソプロスタン分子マーカーの濃度にほぼ等しい濃度で存在する脂質の過酸
    化に対する該イソプロスタン分子マーカーの負の対照溶液、 （ｄ）アルツハイマー病に罹っている哺乳動物の組織または体液中に存在する
    該イソプロスタン分子マーカーの濃度にほぼ等しい濃度で存在する脂質の過酸化
    に対する該イソプロスタン分子マーカーの正の対照溶液、 （ｅ）脂質の過酸化に対する該イソプロスタン分子マーカーに対する抗体、お
    よび （ｆ）使用説明資料 を含んで成るキット。
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