JP2002530429A - Ｇｉｔ輸送受容体を標的とするレトロ反転ペプチド及び関連する方法 - Google Patents
Ｇｉｔ輸送受容体を標的とするレトロ反転ペプチド及び関連する方法Info
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Abstract
(57)【要約】
特異的受容体部位をｉｎ ｖｉｖｏで標的とし、及び／又は活性剤の取り込みを増進し、及び／又はＧＩＴを経由する全身系の循環への活性剤の放出を向上する、ＧＩＴを標的とする薬剤のレトロ反転型が提供される。これらのレトロ反転されたペプチド及びこれらのレトロ反転されたペプチドを含む組成物は、薬物又は薬物を含むナノ又はミクロ粒子のような活性剤を、薬物を必要とする患者の状態の治療のために、ｉｎ ｖｉｖｏで放出するために使用することができる。更に、本発明は、レトロ反転されたペプチドを免疫特異的に結合することが可能な抗体を提供する。
Description
【０００１】 技術の分野 本発明は、一般的に胃腸管（ＧＩＴ）の輸送受容体を標的とするか、又はそれ
と特異的に結合することが可能なペプチドに関する。特に本発明は、ＧＩＴの管
腔側の内側を覆う上皮細胞のような組織を経由する薬物の運搬及び輸送を増強す
るペプチド配列及びモチーフのレトロ反転された型（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｔ
ｅｄ ｆｏｒｍ）、並びにその誘導体に関する。ペプチド及び抗体の製造法も更
に提供される。本発明は、更に医薬組成物、調剤物及び関連する方法にも関する
。
と特異的に結合することが可能なペプチドに関する。特に本発明は、ＧＩＴの管
腔側の内側を覆う上皮細胞のような組織を経由する薬物の運搬及び輸送を増強す
るペプチド配列及びモチーフのレトロ反転された型（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｔ
ｅｄ ｆｏｒｍ）、並びにその誘導体に関する。ペプチド及び抗体の製造法も更
に提供される。本発明は、更に医薬組成物、調剤物及び関連する方法にも関する
。
【０００２】 発明の背景 プロテアーゼは、隣接するＬ−アミノ酸間のペプチド結合を切断し、これらの
ペプチドをＧＩＴ中での分解を受けやすくする。Ｄ−アミノ酸を含む人工のタン
パク質又はペプチドは、タンパク質分解に対して充分に抵抗性がある。然しなが
ら、ペプチド／タンパク質の全てのＬ−アミノ酸をＤ−アミノ酸が置換した場合
、対応するＤ−ペプチド／タンパク質は、本来のペプチド／タンパク質の鏡像で
あり、そしてこのコンホメーションの変化のために、恐らくは改変され又は生物
学的活性を失う。レトロ反転されたペプチドは、全てＤ−アミノ酸を有するペプ
チドであるが、しかし本来のＬ−ペプチド／タンパク質と比較して、反転された
順序又は配列で合成される。本来のペプチド／タンパク質のカルボキシ末端は、
レトロ反転されたペプチド／タンパク質のアミノ末端（そして逆も同じ）となり
、そして得られたレトロ反転されたペプチド／タンパク質の側鎖の面は、本来の
Ｌ−ペプチド／タンパク質と同じである。Ｄ−鏡像体及び反転された合成の組み
合わせの最終的な結果は、それぞれのアミド結合のカルボニル及びアミン基の位
置が交換され、一方、側鎖基の位置は保持されることになる（Ｂｒａｄｙ，Ｌ．
及びＤｏｄｓｏｎ，Ｇ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８Ｌ：６９２−６９３（１９９４
）；Ｊａｍｅｓｏｎ等、Ｎａｔｕｒｅ，３６８；７４４−７４６（１９９４））
。このタンパク質骨格の変更は、水素結合供与体が水素結合受容体となり（アミ
ドカルボニル基）、そして逆も同じであることにおいて自己補償である。骨格に
対する側鎖の位置が変化しない場合、レトロ反転されたペプチド／タンパク質の
改変された面は、本来のＬ−ペプチド／タンパク質と対比してたいてい変わらな
い。
ペプチドをＧＩＴ中での分解を受けやすくする。Ｄ−アミノ酸を含む人工のタン
パク質又はペプチドは、タンパク質分解に対して充分に抵抗性がある。然しなが
ら、ペプチド／タンパク質の全てのＬ−アミノ酸をＤ−アミノ酸が置換した場合
、対応するＤ−ペプチド／タンパク質は、本来のペプチド／タンパク質の鏡像で
あり、そしてこのコンホメーションの変化のために、恐らくは改変され又は生物
学的活性を失う。レトロ反転されたペプチドは、全てＤ−アミノ酸を有するペプ
チドであるが、しかし本来のＬ−ペプチド／タンパク質と比較して、反転された
順序又は配列で合成される。本来のペプチド／タンパク質のカルボキシ末端は、
レトロ反転されたペプチド／タンパク質のアミノ末端（そして逆も同じ）となり
、そして得られたレトロ反転されたペプチド／タンパク質の側鎖の面は、本来の
Ｌ−ペプチド／タンパク質と同じである。Ｄ−鏡像体及び反転された合成の組み
合わせの最終的な結果は、それぞれのアミド結合のカルボニル及びアミン基の位
置が交換され、一方、側鎖基の位置は保持されることになる（Ｂｒａｄｙ，Ｌ．
及びＤｏｄｓｏｎ，Ｇ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８Ｌ：６９２−６９３（１９９４
）；Ｊａｍｅｓｏｎ等、Ｎａｔｕｒｅ，３６８；７４４−７４６（１９９４））
。このタンパク質骨格の変更は、水素結合供与体が水素結合受容体となり（アミ
ドカルボニル基）、そして逆も同じであることにおいて自己補償である。骨格に
対する側鎖の位置が変化しない場合、レトロ反転されたペプチド／タンパク質の
改変された面は、本来のＬ−ペプチド／タンパク質と対比してたいてい変わらな
い。
【０００３】 以前に、本明細書中にその全てが参考文献として援用される、ＷＯ９８／５１
３２５で開示し、そして特許請求したように、Ｄ２Ｈ、ｈＳＩ、ＨＰＴ１及びｈ
ＰＥＰＴ１受容体のようなＧＩＴの輸送受容体に特異的に結合することが可能な
、ランダムペプチド及びその断片、モチーフ、誘導体、類似体又はそのペプチド
模倣体が同定された（本明細書中で以降“ＧＩＴ標的剤”）。これらのＧＩＴ標
的剤は、ヒト又は動物の胃腸組織を経由して活性剤の輸送を促進することが可能
であり、そして例えば、ＧＩＴの管腔側から全身の血液系への活性剤の輸送を促
進すること及び／又は活性剤にＧＩＴを標的とさせることにおいて用途を有する
。従って、例えばＧＩＴ標的剤を経口投与される活性剤と結合する（共有結合的
又は非共有結合的に）ことによって、活性剤にヒトの胃腸管で機能していること
が知られている、特定の受容体部位又は輸送経路を標的とさせ、従ってその全身
系への吸収を促進することができる。好ましくは、活性剤は、薬物又は薬物を含
むナノ又はミクロ粒子である。
３２５で開示し、そして特許請求したように、Ｄ２Ｈ、ｈＳＩ、ＨＰＴ１及びｈ
ＰＥＰＴ１受容体のようなＧＩＴの輸送受容体に特異的に結合することが可能な
、ランダムペプチド及びその断片、モチーフ、誘導体、類似体又はそのペプチド
模倣体が同定された（本明細書中で以降“ＧＩＴ標的剤”）。これらのＧＩＴ標
的剤は、ヒト又は動物の胃腸組織を経由して活性剤の輸送を促進することが可能
であり、そして例えば、ＧＩＴの管腔側から全身の血液系への活性剤の輸送を促
進すること及び／又は活性剤にＧＩＴを標的とさせることにおいて用途を有する
。従って、例えばＧＩＴ標的剤を経口投与される活性剤と結合する（共有結合的
又は非共有結合的に）ことによって、活性剤にヒトの胃腸管で機能していること
が知られている、特定の受容体部位又は輸送経路を標的とさせ、従ってその全身
系への吸収を促進することができる。好ましくは、活性剤は、薬物又は薬物を含
むナノ又はミクロ粒子である。
【０００４】 発明の開示 驚くべきことに、ＧＩＴ標的剤のレトロ反転された型が、ｉｎ ｖｉｖｏで特
定の受容体部位を標的とし、及び／又は活性剤の取り込みを増進し、及び／又は
ＧＩＴを経由する全身の循環系への活性剤の運搬を向上させることが見出された
。レトロ反転されたＤ−ペプチドの合成を使用することによって、ＧＩＴ標的剤
と同じ機能を保有するが、しかしヒト又は動物のＧＩＴ中のプロテアーゼに対す
る増強した安定性を有するＧＩＴ標的剤のレトロ反転されたＤ−ペプチドが見出
された。これらのレトロ反転されたペプチド及びこれらのレトロ反転されたペプ
チドを含む組成物は、薬物又は薬物を含むナノ又はミクロ粒子のような活性剤を
、薬物を必要とする患者の状態の治療のために、ｉｎ ｖｉｖｏで上記に引用し
たＷＯ９８／５１３２５中で開示されている任意の用途又は方法によって、運搬
するために使用することができる。更に、本発明は、本発明のレトロ反転された
ペプチドを免疫特異的に結合することが可能な抗体を提供する。
定の受容体部位を標的とし、及び／又は活性剤の取り込みを増進し、及び／又は
ＧＩＴを経由する全身の循環系への活性剤の運搬を向上させることが見出された
。レトロ反転されたＤ−ペプチドの合成を使用することによって、ＧＩＴ標的剤
と同じ機能を保有するが、しかしヒト又は動物のＧＩＴ中のプロテアーゼに対す
る増強した安定性を有するＧＩＴ標的剤のレトロ反転されたＤ−ペプチドが見出
された。これらのレトロ反転されたペプチド及びこれらのレトロ反転されたペプ
チドを含む組成物は、薬物又は薬物を含むナノ又はミクロ粒子のような活性剤を
、薬物を必要とする患者の状態の治療のために、ｉｎ ｖｉｖｏで上記に引用し
たＷＯ９８／５１３２５中で開示されている任意の用途又は方法によって、運搬
するために使用することができる。更に、本発明は、本発明のレトロ反転された
ペプチドを免疫特異的に結合することが可能な抗体を提供する。
【０００５】 発明の実施の形態 本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏで特定の受容体部位を標的とする、及び／又は活性
剤の取り込みを増進する及び／又はＧＩＴを経由する全身、門脈又は肝臓の循環
系への活性剤の運搬を増強する、レトロ反転されたペプチド（本明細書中ではま
た“標的化するレトロ反転されたペプチド”又は“標的化するレトロ反転ペプチ
ド”としても呼ばれる）に関する。特に、これらのレトロ反転されたペプチドは
、一つ又はそれ以上のヒトの胃腸管の受容体ＨＰＴ１、ＨＰＥＰＴ１、Ｄ２Ｈ又
はｈＳＩ又は他の動物のこれらの対等物に特異的に結合し、そして活性剤に、受
容体が発現された身体中の選択された部位及び／又は選択された組織を標的とさ
せる一般的な用途を有する。これらのペプチドは、Ｄ−アミノ酸から合成され、
そして上記に引用したＷＯ９８／５１３２５に開示され、そして特許請求されて
いるＧＩＴ標的剤と反転された配列順序を有する。本発明は、更にこれらのレト
ロ反転されたペプチドの誘導体（制限されるものではないが断片を含む）にも関
し、これら誘導体は機能的にレトロ反転されたペプチドと同様である（即ち、一
つ又はそれ以上の、レトロ反転されたペプチドの既知の機能的活性を示すことが
可能である）。これらの機能的活性は、制限されるものではないが、胃腸管の受
容体ＨＰＴ１、ＨＰＥＰＴ１、Ｄ２Ｈ又はｈＳＩとの結合又は結合に競合する能
力、或いはレトロ反転されたペプチドに対して指向された抗体によって結合され
る能力を含む。誘導体は、所望の活性に対して、受容体ドメイン又はＣａｃｏ−
２細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏで、或いは腸管組織にｉｎ ｖｉｔｒｏで又はｉｎ
ｖｉｖｏで結合することを含む、当該技術分野において既知の方法によって試験
することができる。
剤の取り込みを増進する及び／又はＧＩＴを経由する全身、門脈又は肝臓の循環
系への活性剤の運搬を増強する、レトロ反転されたペプチド（本明細書中ではま
た“標的化するレトロ反転されたペプチド”又は“標的化するレトロ反転ペプチ
ド”としても呼ばれる）に関する。特に、これらのレトロ反転されたペプチドは
、一つ又はそれ以上のヒトの胃腸管の受容体ＨＰＴ１、ＨＰＥＰＴ１、Ｄ２Ｈ又
はｈＳＩ又は他の動物のこれらの対等物に特異的に結合し、そして活性剤に、受
容体が発現された身体中の選択された部位及び／又は選択された組織を標的とさ
せる一般的な用途を有する。これらのペプチドは、Ｄ−アミノ酸から合成され、
そして上記に引用したＷＯ９８／５１３２５に開示され、そして特許請求されて
いるＧＩＴ標的剤と反転された配列順序を有する。本発明は、更にこれらのレト
ロ反転されたペプチドの誘導体（制限されるものではないが断片を含む）にも関
し、これら誘導体は機能的にレトロ反転されたペプチドと同様である（即ち、一
つ又はそれ以上の、レトロ反転されたペプチドの既知の機能的活性を示すことが
可能である）。これらの機能的活性は、制限されるものではないが、胃腸管の受
容体ＨＰＴ１、ＨＰＥＰＴ１、Ｄ２Ｈ又はｈＳＩとの結合又は結合に競合する能
力、或いはレトロ反転されたペプチドに対して指向された抗体によって結合され
る能力を含む。誘導体は、所望の活性に対して、受容体ドメイン又はＣａｃｏ−
２細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏで、或いは腸管組織にｉｎ ｖｉｔｒｏで又はｉｎ
ｖｉｖｏで結合することを含む、当該技術分野において既知の方法によって試験
することができる。
【０００６】 誘導体は、レトロ反転されたペプチドの配列を、機能的に対等な活性を与える
置換、付加又は欠失により変更することによって、製造することができる。誘導
体は、制限されるものではないが、一次アミノ酸配列として、機能的に対等なア
ミノ酸残基が配列中の残基を置換して、サイレント変化となっている、変更され
た配列を含む全て又は一部のレトロ反転されたペプチドのアミノ酸配列を含むも
のを含む。例えば、配列中の一つ又はそれ以上のアミノ酸残基は、機能的に対等
に作用する同じ極性の他のアミノ酸で置換されて、サイレント変化となることが
できる。配列中のアミノ酸の置換体は、そのアミノ酸が属する種類の他のものか
ら選択される。例えば非極性（疎水性）アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソ
ロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン及びメチオニ
ンを含む。極性が中性アミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、システイン
、チロシン、アスパラギン、及びグルタミンを含む。正に荷電された（塩基性）
アミノ酸は、アルギニン、リシン及びヒスチジンを含む。負に荷電された（酸性
）アミノ酸は、アスパラギン酸及びグルタミン酸を含む。
置換、付加又は欠失により変更することによって、製造することができる。誘導
体は、制限されるものではないが、一次アミノ酸配列として、機能的に対等なア
ミノ酸残基が配列中の残基を置換して、サイレント変化となっている、変更され
た配列を含む全て又は一部のレトロ反転されたペプチドのアミノ酸配列を含むも
のを含む。例えば、配列中の一つ又はそれ以上のアミノ酸残基は、機能的に対等
に作用する同じ極性の他のアミノ酸で置換されて、サイレント変化となることが
できる。配列中のアミノ酸の置換体は、そのアミノ酸が属する種類の他のものか
ら選択される。例えば非極性（疎水性）アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソ
ロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン及びメチオニ
ンを含む。極性が中性アミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、システイン
、チロシン、アスパラギン、及びグルタミンを含む。正に荷電された（塩基性）
アミノ酸は、アルギニン、リシン及びヒスチジンを含む。負に荷電された（酸性
）アミノ酸は、アスパラギン酸及びグルタミン酸を含む。
【０００７】 本発明の範囲に含まれるものは、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化
、アミド化、既知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解による切断
、抗体分子又は他の細胞のリガンドへの結合、等によって修飾されるレトロ反転
されたペプチド又は誘導体である。多くの化学的修飾のいずれをも、既知の技術
によって行うことができる。特定の態様において、アミノ末端及び／又はカルボ
キシ末端は修飾される。更に、所望する場合、非古典的アミノ酸又は化学的アミ
ノ酸類似体を、レトロ反転されたペプチド配列に置換又は付加として導入するこ
とができる。非古典的アミノ酸は、制限されるものではないが、α−アミノイソ
酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６
−アミノへキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、
オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シ
トルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニル
グリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロ−アミノ酸、デザ
イナーアミノ酸、例えばβ−メチルアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、Ｎα−メ
チルアミノ酸、及び一般的なアミノ酸類似体を含む。
、アミド化、既知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解による切断
、抗体分子又は他の細胞のリガンドへの結合、等によって修飾されるレトロ反転
されたペプチド又は誘導体である。多くの化学的修飾のいずれをも、既知の技術
によって行うことができる。特定の態様において、アミノ末端及び／又はカルボ
キシ末端は修飾される。更に、所望する場合、非古典的アミノ酸又は化学的アミ
ノ酸類似体を、レトロ反転されたペプチド配列に置換又は付加として導入するこ
とができる。非古典的アミノ酸は、制限されるものではないが、α−アミノイソ
酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６
−アミノへキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、
オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シ
トルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニル
グリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロ−アミノ酸、デザ
イナーアミノ酸、例えばβ−メチルアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、Ｎα−メ
チルアミノ酸、及び一般的なアミノ酸類似体を含む。
【０００８】 本発明は、更に治療及び診断の方法並びに標的化するレトロ反転されたペプチ
ドを含む組成物に関する。 本発明は、活性剤を含む物質に結合された、本発明の標的化するレトロ反転さ
れたペプチドを含む組成物を提供する。このような組成物は、活性剤にＧＩＴを
標的にさせること及び／又はヒト又は動物の対象のＧＩＴの管腔を経由する全身
循環への輸送を促進することにおいて用途を有する。レトロ反転されたＤ−ペプ
チドは、更にヒト又は動物の対象の、受容体又は他の関連する受容体が発現して
いる、選択された部位／選択された組織を活性剤に標的とさせることにおいて一
般的な用途を有する。例えば、レトロ反転されたＤ−ペプチドが、関連する受容
体のような他の受容体、受容体のスプライス変異体又はスーパーファミリーとし
て存在する関連する受容体に結合している場合、或いはペプチドが、非特異的イ
オン対の会合、水素結合又は疎水対結合のような非特異的相互反応により結合し
ている場合、これらは、薬物をこれらの受容体が発現している哺乳動物又はヒト
の組織若しくはセルタイプに運搬するために使用することができる。更に、活性
剤が画像化剤の場合、このような組成物はＧＩＴ（又はその特定の輸送受容体）
のような選択された部位／選択された組織を画像化するためにｉｎ ｖｉｖｏで
投与することができる。他の活性剤は、制限されるものではないが、ヒト又は動
物の生物学的反応を導き出すことが可能な、いかなる薬物又は抗原、或いはいか
なる薬物若しくは抗原を充填された、又は薬物若しくは抗原をカプセル化したナ
ノ粒子、ミクロ粒子、リポソーム、又はミセル製剤を含む。薬物若しくは抗原を
充填された又は薬物若しくは抗原をカプセル化した製剤の例は、活性剤が、生分
解可能なナノ若しくはミクロ粒子のような、ナノ若しくはミクロ粒子中にカプセ
ル化され又は充填され、そしてこれがナノ若しくはミクロ粒子の表面に吸着、被
覆又は直接結合或いは結合分子を経由して結合しているような、共有的に結合さ
れた、標的化するレトロ反転されたペプチドを有するものを含む。更に、標的化
するレトロ反転されたペプチドは、ナノ又はミクロ粒子そのものを形成すること
ができ、或いは標的化するレトロ反転されたペプチドは、生分解可能なナノ若し
くはミクロ粒子或いは薬剤を充填された又は薬剤をカプセル化したナノ若しくは
ミクロ粒子の製造に使用されるポリマー又は複数のポリマーに共有結合的に結合
されることができ、或いはペプチドは活性剤に直接結合することができる。この
ような活性剤への結合は、レトロ反転されたペプチドが、対象となるタンパク質
又はペプチド活性剤と直接結合しているタンパク質を含む。更に、本発明のレト
ロ反転されたペプチドは、基剤ポリマーの合成に使用される構成単位又はサブユ
ニット或いはポリマーのモノマーに結合させることができる。
ドを含む組成物に関する。 本発明は、活性剤を含む物質に結合された、本発明の標的化するレトロ反転さ
れたペプチドを含む組成物を提供する。このような組成物は、活性剤にＧＩＴを
標的にさせること及び／又はヒト又は動物の対象のＧＩＴの管腔を経由する全身
循環への輸送を促進することにおいて用途を有する。レトロ反転されたＤ−ペプ
チドは、更にヒト又は動物の対象の、受容体又は他の関連する受容体が発現して
いる、選択された部位／選択された組織を活性剤に標的とさせることにおいて一
般的な用途を有する。例えば、レトロ反転されたＤ−ペプチドが、関連する受容
体のような他の受容体、受容体のスプライス変異体又はスーパーファミリーとし
て存在する関連する受容体に結合している場合、或いはペプチドが、非特異的イ
オン対の会合、水素結合又は疎水対結合のような非特異的相互反応により結合し
ている場合、これらは、薬物をこれらの受容体が発現している哺乳動物又はヒト
の組織若しくはセルタイプに運搬するために使用することができる。更に、活性
剤が画像化剤の場合、このような組成物はＧＩＴ（又はその特定の輸送受容体）
のような選択された部位／選択された組織を画像化するためにｉｎ ｖｉｖｏで
投与することができる。他の活性剤は、制限されるものではないが、ヒト又は動
物の生物学的反応を導き出すことが可能な、いかなる薬物又は抗原、或いはいか
なる薬物若しくは抗原を充填された、又は薬物若しくは抗原をカプセル化したナ
ノ粒子、ミクロ粒子、リポソーム、又はミセル製剤を含む。薬物若しくは抗原を
充填された又は薬物若しくは抗原をカプセル化した製剤の例は、活性剤が、生分
解可能なナノ若しくはミクロ粒子のような、ナノ若しくはミクロ粒子中にカプセ
ル化され又は充填され、そしてこれがナノ若しくはミクロ粒子の表面に吸着、被
覆又は直接結合或いは結合分子を経由して結合しているような、共有的に結合さ
れた、標的化するレトロ反転されたペプチドを有するものを含む。更に、標的化
するレトロ反転されたペプチドは、ナノ又はミクロ粒子そのものを形成すること
ができ、或いは標的化するレトロ反転されたペプチドは、生分解可能なナノ若し
くはミクロ粒子或いは薬剤を充填された又は薬剤をカプセル化したナノ若しくは
ミクロ粒子の製造に使用されるポリマー又は複数のポリマーに共有結合的に結合
されることができ、或いはペプチドは活性剤に直接結合することができる。この
ような活性剤への結合は、レトロ反転されたペプチドが、対象となるタンパク質
又はペプチド活性剤と直接結合しているタンパク質を含む。更に、本発明のレト
ロ反転されたペプチドは、基剤ポリマーの合成に使用される構成単位又はサブユ
ニット或いはポリマーのモノマーに結合させることができる。
【０００９】 好ましい態様において、本発明は治療用化合物（本明細書中で、“治療剤”と
名付ける）の投与による各種の疾病及び疾患の治療を提供する。このような“治
療剤”は、制限されるものではないが、疾病又は疾患（好ましくは哺乳動物、更
に好ましくはヒトの疾病又は疾患）の治療又は予防に価値のある活性剤に結合し
ている、標的化するレトロ反転されたペプチドを含む。活性剤は好ましくは薬物
である。
名付ける）の投与による各種の疾病及び疾患の治療を提供する。このような“治
療剤”は、制限されるものではないが、疾病又は疾患（好ましくは哺乳動物、更
に好ましくはヒトの疾病又は疾患）の治療又は予防に価値のある活性剤に結合し
ている、標的化するレトロ反転されたペプチドを含む。活性剤は好ましくは薬物
である。
【００１０】 治療又は予防される疾病或いは疾患、及び薬物が投与される対象の種類にもよ
るが、当該技術分野において既知のいかなる薬物も使用することができる。本明
細書中で使用される“薬物”の用語は、制限するものではないが、いかなる医薬
的に活性な薬剤をも含む。代表的な薬物は、制限されるものではないが、ペプチ
ド又はタンパク質、ホルモン、鎮痛剤、抗偏頭痛剤、抗凝血剤、抗嘔吐剤、心臓
血管剤、抗高血圧剤、麻薬拮抗薬、キレート化剤、抗狭心症剤、化学治療剤、鎮
静剤、抗腫瘍剤、プロスタグランジン、及び抗利尿剤を含む。典型的な薬物は、
ペプチド、タンパク質又はインスリンのようなホルモン、カルシトニン、カルシ
トニン遺伝子調節タンパク質、心房性ナトリウム利尿タンパク質、コロニー刺激
因子、ベタセロン（ｂｅｔａｓｅｒｏｎ）、エリトロポエチン（ＥＰＯ）、α、
β又はγインターフェロンのようなインターフェロン、ソマトロピン、ソマトト
ロピン、ソマトスタチン、インスリン様成長因子（ソマトメジン）、黄体ホルモ
ン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）
、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、オキシトシン、エストラジオール、
成長ホルモン、酢酸ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）、第ＶＩＩＩ因子、
インターロイキン例えばインターロイキン−２、及びその類似体；鎮痛剤例えば
フェンタニル、スフェンタニル（ｓｕｆｅｎｔａｎｉｌ）、ブトルファノール（
ｂｕｔｏｒｐｈａｎｏｌ）、ブプレノルフィン、レボルファノール、モルヒネ、
ヒドロモルホン、ヒドコドン（ｈｙｄｃｏｄｏｎｅ）、オキシモルホン、メサド
ン、リドカイン、ブピバカイン、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、
ナプロキセン、パベリン（ｐａｖｅｒｉｎ）、及びこれらの類似体；抗偏頭痛剤
例えばヘパリン、ヒルジン、及びこれらの類似体；抗凝血剤例えばスコポラミン
、オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）、ドムペリドン（ｄｏｍｐｅｒ
ｉｄｏｎｅ）、エトクロプラミド（ｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）、及びこれら
の類似体；心臓血管剤、抗高血圧剤及び血管拡張剤例えばジルチアゼム、クロニ
ジン、ニフェジピン、ベラパミル、イソソルビド（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ）−５
−モノニトラート、有機硝酸塩、心臓疾患の治療に使用される薬剤及びこれらの
類似体；沈静剤例えばベンゾジアゼイン（ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｉｎｅ）、フェ
ノチオジン、及びこれらの類似体；麻薬拮抗薬例えばナルトレキソン、ナロキソ
ン及びこれらの類似体；キレート化剤例えばデフェロキサミン（ｄｅｆｅｒｏｘ
ａｍｉｎｅ）、及びこれらの類似体；抗利尿剤例えばデスモプレシン、バソプレ
シン及びこれらの類似体；抗アンギナ剤例えばニトログリセリン及びその類似体
；抗腫瘍剤例えば５−フルオロウラシル、ブレオマイシン及びこれらの類似体；
プロスタグランジン及びその類似体；化学治療剤例えばビンクリスチン及びその
類似体を含む。代表的な薬物は、制限されるものではないが、更にアンチセンス
オリゴヌクレオチド、遺伝子、遺伝子補正ハイブリッドオリゴヌクレオチド、リ
ボザイム、アプタメリック（ａｐｔａｍｅｒｉｃ）オリゴヌクレオチド、三重ヘ
リックス形成オリゴヌクレオチド、シグナル伝達経路の阻害剤、チロシンキナー
ゼ阻害剤及びＤＮＡ修飾剤を含む。使用することができる薬物は、制限するもの
ではないが、更に治療剤遺伝子を運搬するための非ウィルス並びにウィルス精製
にレトロ反転されたペプチドより修飾された治療剤遺伝子のためのウィルスベク
ター系を含む遺伝子治療剤を含む系を含む。
るが、当該技術分野において既知のいかなる薬物も使用することができる。本明
細書中で使用される“薬物”の用語は、制限するものではないが、いかなる医薬
的に活性な薬剤をも含む。代表的な薬物は、制限されるものではないが、ペプチ
ド又はタンパク質、ホルモン、鎮痛剤、抗偏頭痛剤、抗凝血剤、抗嘔吐剤、心臓
血管剤、抗高血圧剤、麻薬拮抗薬、キレート化剤、抗狭心症剤、化学治療剤、鎮
静剤、抗腫瘍剤、プロスタグランジン、及び抗利尿剤を含む。典型的な薬物は、
ペプチド、タンパク質又はインスリンのようなホルモン、カルシトニン、カルシ
トニン遺伝子調節タンパク質、心房性ナトリウム利尿タンパク質、コロニー刺激
因子、ベタセロン（ｂｅｔａｓｅｒｏｎ）、エリトロポエチン（ＥＰＯ）、α、
β又はγインターフェロンのようなインターフェロン、ソマトロピン、ソマトト
ロピン、ソマトスタチン、インスリン様成長因子（ソマトメジン）、黄体ホルモ
ン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）
、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、オキシトシン、エストラジオール、
成長ホルモン、酢酸ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）、第ＶＩＩＩ因子、
インターロイキン例えばインターロイキン−２、及びその類似体；鎮痛剤例えば
フェンタニル、スフェンタニル（ｓｕｆｅｎｔａｎｉｌ）、ブトルファノール（
ｂｕｔｏｒｐｈａｎｏｌ）、ブプレノルフィン、レボルファノール、モルヒネ、
ヒドロモルホン、ヒドコドン（ｈｙｄｃｏｄｏｎｅ）、オキシモルホン、メサド
ン、リドカイン、ブピバカイン、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、
ナプロキセン、パベリン（ｐａｖｅｒｉｎ）、及びこれらの類似体；抗偏頭痛剤
例えばヘパリン、ヒルジン、及びこれらの類似体；抗凝血剤例えばスコポラミン
、オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）、ドムペリドン（ｄｏｍｐｅｒ
ｉｄｏｎｅ）、エトクロプラミド（ｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）、及びこれら
の類似体；心臓血管剤、抗高血圧剤及び血管拡張剤例えばジルチアゼム、クロニ
ジン、ニフェジピン、ベラパミル、イソソルビド（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ）−５
−モノニトラート、有機硝酸塩、心臓疾患の治療に使用される薬剤及びこれらの
類似体；沈静剤例えばベンゾジアゼイン（ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｉｎｅ）、フェ
ノチオジン、及びこれらの類似体；麻薬拮抗薬例えばナルトレキソン、ナロキソ
ン及びこれらの類似体；キレート化剤例えばデフェロキサミン（ｄｅｆｅｒｏｘ
ａｍｉｎｅ）、及びこれらの類似体；抗利尿剤例えばデスモプレシン、バソプレ
シン及びこれらの類似体；抗アンギナ剤例えばニトログリセリン及びその類似体
；抗腫瘍剤例えば５−フルオロウラシル、ブレオマイシン及びこれらの類似体；
プロスタグランジン及びその類似体；化学治療剤例えばビンクリスチン及びその
類似体を含む。代表的な薬物は、制限されるものではないが、更にアンチセンス
オリゴヌクレオチド、遺伝子、遺伝子補正ハイブリッドオリゴヌクレオチド、リ
ボザイム、アプタメリック（ａｐｔａｍｅｒｉｃ）オリゴヌクレオチド、三重ヘ
リックス形成オリゴヌクレオチド、シグナル伝達経路の阻害剤、チロシンキナー
ゼ阻害剤及びＤＮＡ修飾剤を含む。使用することができる薬物は、制限するもの
ではないが、更に治療剤遺伝子を運搬するための非ウィルス並びにウィルス精製
にレトロ反転されたペプチドより修飾された治療剤遺伝子のためのウィルスベク
ター系を含む遺伝子治療剤を含む系を含む。
【００１１】 好ましい態様において、治療剤は治療的に又は予防的にヒトの患者に投与され
る。 本発明によって使用することができる治療剤の更なる説明及び出典は、本明細
書中の種々の文節に見出される。
る。 本発明によって使用することができる治療剤の更なる説明及び出典は、本明細
書中の種々の文節に見出される。
【００１２】 本発明は、本発明の治療剤の効果的な量を対象に投与することによる、治療（
及び予防）の方法を提供する。好ましい側面において、治療剤は実質的に精製さ
れる。対象は好ましくは、制限されるものではないが、ウシ、ブタ、ウマ、ニワ
トリ、ネコ、イヌ、等を含む動物であり、そして好ましくは哺乳動物、そして更
に好ましくはヒトである。
及び予防）の方法を提供する。好ましい側面において、治療剤は実質的に精製さ
れる。対象は好ましくは、制限されるものではないが、ウシ、ブタ、ウマ、ニワ
トリ、ネコ、イヌ、等を含む動物であり、そして好ましくは哺乳動物、そして更
に好ましくはヒトである。
【００１３】 明白になるように、薬物をｉｎ ｖｉｖｏで全身的に与えることによる、或い
は薬物に、ｉｎ ｖｉｖｏで、受容体又は、関連する受容体、受容体のスプライ
ス変異体、スーパーファミリーとして存在する又はレトロ反転されたペプチドが
非特異的イオン対結合若しくは水素結合又は疎水対結合のような非特異的相互作
用によって、これに相互作用する関連する受容体のような、他の受容体を含むＧ
ＩＴ又は他の選択された部位、選択された組織若しくはセルタイプを標的とさせ
る（本発明の標的化するレトロ反転されたペプチドとの結合により）ことによる
、治療又は予防による影響を受けやすい、対象となるいかなる疾病又は疾患は（
いかなる投与経路を使用しても）、本発明の治療剤を投与することによって治療
又は予防することができる。このような疾病は、制限されるものではないが、い
くつかの名前を挙げれば、高血圧、糖尿病、骨粗鬆症、血友病、貧血、癌、偏頭
痛及び狭心症を含む。
は薬物に、ｉｎ ｖｉｖｏで、受容体又は、関連する受容体、受容体のスプライ
ス変異体、スーパーファミリーとして存在する又はレトロ反転されたペプチドが
非特異的イオン対結合若しくは水素結合又は疎水対結合のような非特異的相互作
用によって、これに相互作用する関連する受容体のような、他の受容体を含むＧ
ＩＴ又は他の選択された部位、選択された組織若しくはセルタイプを標的とさせ
る（本発明の標的化するレトロ反転されたペプチドとの結合により）ことによる
、治療又は予防による影響を受けやすい、対象となるいかなる疾病又は疾患は（
いかなる投与経路を使用しても）、本発明の治療剤を投与することによって治療
又は予防することができる。このような疾病は、制限されるものではないが、い
くつかの名前を挙げれば、高血圧、糖尿病、骨粗鬆症、血友病、貧血、癌、偏頭
痛及び狭心症を含む。
【００１４】 制限されるものではないが、経口、経鼻、局所、静脈、腹腔内、皮内、粘膜、
鞘内、筋肉等を含む、当該技術分野において既知のいかなる投与経路も使用する
ことができる。好ましくは投与は経口である；このような態様において、本発明
による標的化するレトロ反転されたペプチドは、都合よくＧＩＴの管腔を経由す
る門脈、肝臓又は全身の循環系への治療活性剤の輸送を促進するように作用する
。
鞘内、筋肉等を含む、当該技術分野において既知のいかなる投与経路も使用する
ことができる。好ましくは投与は経口である；このような態様において、本発明
による標的化するレトロ反転されたペプチドは、都合よくＧＩＴの管腔を経由す
る門脈、肝臓又は全身の循環系への治療活性剤の輸送を促進するように作用する
。
【００１５】 本発明は、更に治療用組成物又は製剤を提供する。本発明の特定の態様におい
て、標的化するレトロ反転されたペプチドは、治療的又は予防的な活性剤、好ま
しくは薬物又は薬物を含むナノ若しくはミクロ粒子に伴なわれる。更に好ましく
は、活性剤は、薬物をカプセル化して含む又は薬物を充填されたナノもしくはミ
クロ粒子であり、例えばその中にペプチドが物理的に吸着又は被覆された、或い
はナノ若しくはミクロ粒子の表面に直接結合又は結合分子を経由して結合してい
るような共有結合的に結合した、生分解可能なナノ若しくはミクロ粒子である。
別の方法として、ペプチドはナノ若しくはミクロ粒子そのものを形成することが
でき、又は活性剤に直接結合することができる。好ましくは粒子の大きさの範囲
は、１０ｎｍないし５００μｍ、さらに好ましくは５０ないし８００ｎｍ、最も
好ましくは２００−６００ｎｍである。
て、標的化するレトロ反転されたペプチドは、治療的又は予防的な活性剤、好ま
しくは薬物又は薬物を含むナノ若しくはミクロ粒子に伴なわれる。更に好ましく
は、活性剤は、薬物をカプセル化して含む又は薬物を充填されたナノもしくはミ
クロ粒子であり、例えばその中にペプチドが物理的に吸着又は被覆された、或い
はナノ若しくはミクロ粒子の表面に直接結合又は結合分子を経由して結合してい
るような共有結合的に結合した、生分解可能なナノ若しくはミクロ粒子である。
別の方法として、ペプチドはナノ若しくはミクロ粒子そのものを形成することが
でき、又は活性剤に直接結合することができる。好ましくは粒子の大きさの範囲
は、１０ｎｍないし５００μｍ、さらに好ましくは５０ないし８００ｎｍ、最も
好ましくは２００−６００ｎｍである。
【００１６】 従って、特定の態様において、標的化するレトロ反転されたペプチドは、薬物
を含む遅延放出（制御放出）デバイスに結合される。特定な態様において、高分
子物質を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓ
ｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄ
ａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌ
ｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａ
ｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏ
ｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１（１９８３
）を参照されたく、更にＬｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１
９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５
：３５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ
．７１：１０５（１９８９）を参照されたい）。
を含む遅延放出（制御放出）デバイスに結合される。特定な態様において、高分
子物質を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓ
ｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄ
ａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌ
ｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａ
ｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏ
ｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１（１９８３
）を参照されたく、更にＬｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１
９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５
：３５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ
．７１：１０５（１９８９）を参照されたい）。
【００１７】 本発明は、更に医薬組成物を提供する。このような組成物は、治療的に有効な
量の治療剤及び医薬的に受容可能な担体を含む。特定の態様において、“医薬的
に受容可能な”の用語は、連邦又は州政府の監督機関によって認可された、或い
は米国薬局方又は他の一般的に認められた薬局方に、動物、そして更に特にヒト
に対する使用が記載されていること意味する。“担体”の用語は、治療剤がこれ
らと共に投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はベヒクルを指す。こ
のような医薬的な担体は、滅菌液体、例えば水、及び石油、動物、植物又は合成
起源のもの例えばピーナツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等を含む油であることがで
きる。医薬組成物が静脈から投与される場合、水が好ましい担体である。生理食
塩水溶液及びブドウ糖水溶液並びにグリセリン溶液も、特に注射用溶液のための
液体担体として更に使用することができる。適当な医薬的賦形剤は、デンプン、
グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、白亜（
ｃｈａｌｋ）、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセ
リン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プロピレン、
グリコール、水、エタノール、ソルビトール、トレハロース等を含む。組成物は
、所望する場合、更に少量の湿潤剤又は乳化剤、或いはｐＨ緩衝剤を含むことが
できる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳液、錠剤、丸薬、カプセル、粉剤
、継続放出製剤等の形態をとることができる。組成物は、トリグリセリドのよう
な伝統的な結合剤及び担体と共に、座薬として処方することができる。経口用製
剤は、標準的な担体、例えば医薬級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ス
テアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウ
ム、等を含むことができる。適当な医薬的担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに
よる“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ”中に記載されている。このような組成物は、治療的に有効な量の治療剤を、
好ましくは精製された形で適当な量の担体と共に含み、患者に対する適切な投与
の形態を提供する。
量の治療剤及び医薬的に受容可能な担体を含む。特定の態様において、“医薬的
に受容可能な”の用語は、連邦又は州政府の監督機関によって認可された、或い
は米国薬局方又は他の一般的に認められた薬局方に、動物、そして更に特にヒト
に対する使用が記載されていること意味する。“担体”の用語は、治療剤がこれ
らと共に投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はベヒクルを指す。こ
のような医薬的な担体は、滅菌液体、例えば水、及び石油、動物、植物又は合成
起源のもの例えばピーナツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等を含む油であることがで
きる。医薬組成物が静脈から投与される場合、水が好ましい担体である。生理食
塩水溶液及びブドウ糖水溶液並びにグリセリン溶液も、特に注射用溶液のための
液体担体として更に使用することができる。適当な医薬的賦形剤は、デンプン、
グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、白亜（
ｃｈａｌｋ）、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセ
リン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プロピレン、
グリコール、水、エタノール、ソルビトール、トレハロース等を含む。組成物は
、所望する場合、更に少量の湿潤剤又は乳化剤、或いはｐＨ緩衝剤を含むことが
できる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳液、錠剤、丸薬、カプセル、粉剤
、継続放出製剤等の形態をとることができる。組成物は、トリグリセリドのよう
な伝統的な結合剤及び担体と共に、座薬として処方することができる。経口用製
剤は、標準的な担体、例えば医薬級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ス
テアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウ
ム、等を含むことができる。適当な医薬的担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに
よる“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ”中に記載されている。このような組成物は、治療的に有効な量の治療剤を、
好ましくは精製された形で適当な量の担体と共に含み、患者に対する適切な投与
の形態を提供する。
【００１８】 本発明の活性剤は、中性即ち塩の形で処方することができる。医薬的に受容可
能な塩は、遊離アミノ基と共に形成されたもの、例えば塩酸、リン酸、酢酸、シ
ュウ酸、酒石酸等から誘導されたもの、及び遊離カルボキシル基と共に形成され
たもの、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二
鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒ
スチジン、プロカイン等から誘導されたものを含む。
能な塩は、遊離アミノ基と共に形成されたもの、例えば塩酸、リン酸、酢酸、シ
ュウ酸、酒石酸等から誘導されたもの、及び遊離カルボキシル基と共に形成され
たもの、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二
鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒ
スチジン、プロカイン等から誘導されたものを含む。
【００１９】 特定の疾患及び状態の治療に効果的な本発明の治療剤の量は、疾患及び状態の
特質に依存するであろうし、そして標準的な臨床技術によって決定することがで
きる。更に、最適な投与量の範囲を確認することを援助するために、所望により
ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用することができる。処方に使用される正確な投
与量は、更に投与経路及び疾病又は疾患の重大さに依存するであろうし、そして
開業医の判断及びそれぞれの患者の状況によって決定されなければならない。
特質に依存するであろうし、そして標準的な臨床技術によって決定することがで
きる。更に、最適な投与量の範囲を確認することを援助するために、所望により
ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用することができる。処方に使用される正確な投
与量は、更に投与経路及び疾病又は疾患の重大さに依存するであろうし、そして
開業医の判断及びそれぞれの患者の状況によって決定されなければならない。
【００２０】 本発明によれば、標的化するレトロ反転されたペプチドは、更に抗体を発生す
る免疫原として使用して、このような免疫原を免疫特異的に結合することができ
る。このような抗体は、制限されるものではないが、ポリクローナル、モノクロ
ーナル、キメラ、単一鎖、Ｆａｂ断片、及びＦａｂ発現ライブラリーを含む。
る免疫原として使用して、このような免疫原を免疫特異的に結合することができ
る。このような抗体は、制限されるものではないが、ポリクローナル、モノクロ
ーナル、キメラ、単一鎖、Ｆａｂ断片、及びＦａｂ発現ライブラリーを含む。
【００２１】 これらの抗体は、定位及び本発明の標的化するレトロ反転されたペプチドの局
在及び活性に関係する方法、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ投与後のこれらのペプチド
の画像化（例えば治療効果のモニター）、適当な生理学的試料中のその濃度の測
定、診断法、等のために使用することができる。例えば、標的化するレトロ反転
されたペプチドのドメインに特異的な抗体又は抗体の断片、例えばダンシル基又
はペプチドに導入されたある種の他のエピトープは、１）ナノ粒子又は他の基質
上のペプチドの存在の確認；２）ナノ粒子上のペプチドの量の定量；３）適当な
生理学的試料中のペプチドの濃度の測定；４）組織試料の免疫組織学の実行；５
）ｉｎ ｖｉｖｏ投与後のペプチドの画像化；６）免疫アフィニティーカラムを
使用した混合物からのペプチドの精製；７）ナノ粒子の表面のペプチドの結合又
は固定；又は８）活性剤を含む粒子又は活性剤そのもののいずれかに、更に標識
が付けられた場合、粒子／活性剤及び標的化するレトロ反転されたペプチドの両
者の最終結果を追跡して、これらが分離するか否か、及び／又は何処で分離する
かを決定することに使用することができる。上記７）の使用は、抗体（又は抗体
の断片）を、薬物を充填されたナノ粒子又は他の基質の表面に結合し、そして次
いでこの複合物をペプチドと共にインキュベートすることを考慮している。この
方法は、ペプチドをある固定した方向付けで結合することになり、ペプチドが完
全に活性であるような方法で抗体に結合したペプチドを含む粒子が得られる。更
に、標的化するレトロ反転されたペプチドのドメインに特異的な抗体又は抗体の
断片は、９）ナノ若しくはミクロ粒子の表面上のペプチドの存在箇所（ｌｏｃａ
ｔｉｏｎ）又は局在を、証明又は確認或いは確定するための共焦点顕微鏡画像技
術又は他の画像技術に使用することができ、１０）同様に更に蛍光剤を付加され
たナノ若しくはミクロ粒子の表面上のペプチドの存在箇所又は局在を、証明又は
確認或いは確定するための共焦点顕微鏡画像技術又は他の画像技術に使用するこ
とができ、１１）ミクロトーム又は他の適当な技術で半分にスライスされたペプ
チドで被覆されたナノ粒子又はミクロ粒子の場合、抗体は、ナノ粒子又はミクロ
粒子の表面及びナノ粒子又はミクロ粒子の表面下の内部基質間のペプチドの相対
的分布を確定又は定量するために、共焦点顕微鏡画像技術又は他の定量的画像技
術のような適当な定量的技術に使用することができ、１２）ナノ粒子若しくはミ
クロ粒子の表面上の、ＴＲＭＡ又はフルオラセン（ｆｌｕｏｒａｓｃｅｎｅ）の
ような蛍光剤で付加されたペプチドの存在箇所を、証明又は確認或いは確定する
ための共焦点顕微鏡画像技術又は他の画像技術に使用することができ、１３）ペ
プチドのどのエピトープ又はドメインが抗体による同定の原因であるのかを確定
するために使用することができ；環状又は鎖中のジスルフィド結合若しくは他の
鎖中結合を含む誘導体のようなペプチド誘導体も、更にペプチドのどのドメイン
又はエピトープが抗体による認識の原因であるかの確定のためのマッピング研究
に使用することができ；１４）標的の受容体に結合する原因であるエピトープ又
はドメインが、ジスルフィド結合若しくは他の鎖中結合によって近接しており、
そしてこのドメインが更に抗体との結合の原因であるペプチド誘導体の場合、抗
体は、エピトープ又はドメインが、抗体に暴露されているか又は結合に利用可能
であるか否かを決定するために、ペプチド又は誘導体がナノ粒子、ミクロ粒子又
は他の基質の表面上に被覆されている場合、使用することができ；１５）ペプチ
ドのエピトープ又はドメインがヒトの胃腸管中の標的受容体或いはＣａｃｏ−２
細胞又は極性化されたＣａｃｏ−２細胞のようなモデル上皮細胞上の標的受容体
に結合する場合であって、そしてこのペプチドのエピトープ又はドメインが、更
に抗体による結合の原因である場合、抗体は、ペプチドのその標的受容体部位へ
の結合を競合させる競合研究に使用することができ；そして１６）ペプチドのエ
ピトープ又はドメインがヒトの胃腸中の標的受容体或いはＣａｃｏ−２細胞又は
極性化されたＣａｃｏ−２細胞のようなモデル上皮細胞上の標的受容体に結合す
る場合であって、そしてこのペプチドのエピトープ又はドメインが、更に抗体に
よる結合の原因である場合、抗体は、ナノ粒子又はミクロ粒子がペプチドで被覆
され、そしてこれが細胞結合研究及び／又は受容体結合研究に使用される競合研
究に使用することができる。
在及び活性に関係する方法、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ投与後のこれらのペプチド
の画像化（例えば治療効果のモニター）、適当な生理学的試料中のその濃度の測
定、診断法、等のために使用することができる。例えば、標的化するレトロ反転
されたペプチドのドメインに特異的な抗体又は抗体の断片、例えばダンシル基又
はペプチドに導入されたある種の他のエピトープは、１）ナノ粒子又は他の基質
上のペプチドの存在の確認；２）ナノ粒子上のペプチドの量の定量；３）適当な
生理学的試料中のペプチドの濃度の測定；４）組織試料の免疫組織学の実行；５
）ｉｎ ｖｉｖｏ投与後のペプチドの画像化；６）免疫アフィニティーカラムを
使用した混合物からのペプチドの精製；７）ナノ粒子の表面のペプチドの結合又
は固定；又は８）活性剤を含む粒子又は活性剤そのもののいずれかに、更に標識
が付けられた場合、粒子／活性剤及び標的化するレトロ反転されたペプチドの両
者の最終結果を追跡して、これらが分離するか否か、及び／又は何処で分離する
かを決定することに使用することができる。上記７）の使用は、抗体（又は抗体
の断片）を、薬物を充填されたナノ粒子又は他の基質の表面に結合し、そして次
いでこの複合物をペプチドと共にインキュベートすることを考慮している。この
方法は、ペプチドをある固定した方向付けで結合することになり、ペプチドが完
全に活性であるような方法で抗体に結合したペプチドを含む粒子が得られる。更
に、標的化するレトロ反転されたペプチドのドメインに特異的な抗体又は抗体の
断片は、９）ナノ若しくはミクロ粒子の表面上のペプチドの存在箇所（ｌｏｃａ
ｔｉｏｎ）又は局在を、証明又は確認或いは確定するための共焦点顕微鏡画像技
術又は他の画像技術に使用することができ、１０）同様に更に蛍光剤を付加され
たナノ若しくはミクロ粒子の表面上のペプチドの存在箇所又は局在を、証明又は
確認或いは確定するための共焦点顕微鏡画像技術又は他の画像技術に使用するこ
とができ、１１）ミクロトーム又は他の適当な技術で半分にスライスされたペプ
チドで被覆されたナノ粒子又はミクロ粒子の場合、抗体は、ナノ粒子又はミクロ
粒子の表面及びナノ粒子又はミクロ粒子の表面下の内部基質間のペプチドの相対
的分布を確定又は定量するために、共焦点顕微鏡画像技術又は他の定量的画像技
術のような適当な定量的技術に使用することができ、１２）ナノ粒子若しくはミ
クロ粒子の表面上の、ＴＲＭＡ又はフルオラセン（ｆｌｕｏｒａｓｃｅｎｅ）の
ような蛍光剤で付加されたペプチドの存在箇所を、証明又は確認或いは確定する
ための共焦点顕微鏡画像技術又は他の画像技術に使用することができ、１３）ペ
プチドのどのエピトープ又はドメインが抗体による同定の原因であるのかを確定
するために使用することができ；環状又は鎖中のジスルフィド結合若しくは他の
鎖中結合を含む誘導体のようなペプチド誘導体も、更にペプチドのどのドメイン
又はエピトープが抗体による認識の原因であるかの確定のためのマッピング研究
に使用することができ；１４）標的の受容体に結合する原因であるエピトープ又
はドメインが、ジスルフィド結合若しくは他の鎖中結合によって近接しており、
そしてこのドメインが更に抗体との結合の原因であるペプチド誘導体の場合、抗
体は、エピトープ又はドメインが、抗体に暴露されているか又は結合に利用可能
であるか否かを決定するために、ペプチド又は誘導体がナノ粒子、ミクロ粒子又
は他の基質の表面上に被覆されている場合、使用することができ；１５）ペプチ
ドのエピトープ又はドメインがヒトの胃腸管中の標的受容体或いはＣａｃｏ−２
細胞又は極性化されたＣａｃｏ−２細胞のようなモデル上皮細胞上の標的受容体
に結合する場合であって、そしてこのペプチドのエピトープ又はドメインが、更
に抗体による結合の原因である場合、抗体は、ペプチドのその標的受容体部位へ
の結合を競合させる競合研究に使用することができ；そして１６）ペプチドのエ
ピトープ又はドメインがヒトの胃腸中の標的受容体或いはＣａｃｏ−２細胞又は
極性化されたＣａｃｏ−２細胞のようなモデル上皮細胞上の標的受容体に結合す
る場合であって、そしてこのペプチドのエピトープ又はドメインが、更に抗体に
よる結合の原因である場合、抗体は、ナノ粒子又はミクロ粒子がペプチドで被覆
され、そしてこれが細胞結合研究及び／又は受容体結合研究に使用される競合研
究に使用することができる。
【００２２】 標的化するレトロ反転されたペプチドのドメインに特異的なアブチド（ａｂｔ
ｉｄｅ）（即ち抗原結合ペプチド）、例えばダンシル基又はペプチドに導入され
たある種の他のエピトープは、抗体に対して上記で明確にしたと同様な目的に使
用することができる。
ｉｄｅ）（即ち抗原結合ペプチド）、例えばダンシル基又はペプチドに導入され
たある種の他のエピトープは、抗体に対して上記で明確にしたと同様な目的に使
用することができる。
【００２３】 本発明のレトロ反転されたペプチドは、当該技術分野において既知の方法によ
って調製することができる。例えば、簡単には、固相ペプチド合成は、Ｃ−末端
アミノ酸のカルボキシル基と樹脂とのカップリング及びその後のＮ−アルファ保
護アミノ酸の付加からなる。保護基は当該技術分野において既知のいかなるもの
であってもよい。それぞれの新しいアミノ酸を成長する鎖に付加する前に、鎖に
付加したその前のアミノ酸の保護基は除去される。アミノ酸の適当な樹脂とのカ
ップリングは、Ｒｉｖｉｅｒ等によって米国特許第４，２４４，９４６号に記載
されている。このような固相合成は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，１９６４
，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９；Ｖａｌｅ等、１９８１，Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２１３：１３９４−１３９７；Ｍａｒｋｉ等、１９８１，Ｊ．Ａｍ
．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０３：３１７８並びに米国特許第４，３０５，８７２号
及び４，３１６，８９１号によって記載されている。好ましい側面において、自
動化ペプチド合成機が使用される。
って調製することができる。例えば、簡単には、固相ペプチド合成は、Ｃ−末端
アミノ酸のカルボキシル基と樹脂とのカップリング及びその後のＮ−アルファ保
護アミノ酸の付加からなる。保護基は当該技術分野において既知のいかなるもの
であってもよい。それぞれの新しいアミノ酸を成長する鎖に付加する前に、鎖に
付加したその前のアミノ酸の保護基は除去される。アミノ酸の適当な樹脂とのカ
ップリングは、Ｒｉｖｉｅｒ等によって米国特許第４，２４４，９４６号に記載
されている。このような固相合成は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，１９６４
，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９；Ｖａｌｅ等、１９８１，Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２１３：１３９４−１３９７；Ｍａｒｋｉ等、１９８１，Ｊ．Ａｍ
．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０３：３１７８並びに米国特許第４，３０５，８７２号
及び４，３１６，８９１号によって記載されている。好ましい側面において、自
動化ペプチド合成機が使用される。
【００２４】 制限するものではないが、例として、ペプチドは、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓ
ｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．（“ＡＢＩ”）モデル４３１Ａ自動ペプチド合成機によ
って、ＡＢＩによって提供された“Ｆａｓｔｍｏｃ”合成プロトコルを使用して
、ヘキサフルオロリン酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１
，３，３−テトラメチルウロニウム（“ＨＢＴＵ”）（Ｒ．Ｋｎｏｒｒ等、１９
８９，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，３０：１９２７）をカップリング剤として使用して
、合成することができる。合成は、０．２５ｍｍｏｌの商業的に入手可能な４−
（２’，４’−ジメトキシフェニル−（９−フルオレニル−エトキシカルボニル
）−アミノメチル）−フェノキシポリスチレン樹脂（“Ｒｉｎｋ樹脂”Ａｄｖａ
ｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈから入手）（Ｈ．Ｒｉｎｋ，１９８７，Ｔｅｔ．Ｌ
ｅｔｔ．２８：３７８７）で行うことができる。Ｆｍｏｃアミノ酸（１ｍｍｏｌ
）をＦａｓｔｍｏｃプロトコルに従ってカップリングさせる。次の側鎖保護Ｆｍ
ｏｃアミノ酸誘導体を使用する：ＦｍｏｃＡｒｇ（Ｐｍｃ）ＯＨ；ＦｍｏｃＡｓ
ｎ（Ｍｂｈ）ＯＨ；ＦｍｏｃＡｓｐ（tＢｕ）ＯＨ；ＦｍｏｃＣｙｓ（Ａｃｍ）
ＯＨ；ＦｍｏｃＧｌｕ（tＢｕ）ＯＨ；ＦｍｏｃＧｌｎ（Ｍｂｈ）ＯＨ；Ｆｍｏ
ｃＨｉｓ（Ｔｒ）ＯＨ；ＦｍｏｃＬｙｓ（Ｂｏｃ）ＯＨ；ＦｍｏｃＳｅｒ（tＢ
ｕ）ＯＨ；ＦｍｏｃＴｈｒ（tＢｕ）ＯＨ；ＦｍｏｃＴｙｒ（tＢｕ）ＯＨ。［略
語：Ａｃｍ、アセトアミドメチル；Ｂｏｃ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル；t
Ｂｕ、ｔｅｒｔ−ブチル；Ｆｍｏｃ、９−フルオレニルメトキシカルボニル；Ｍ
ｂｈ、４，４’−ジメトキシベンズヒドリル；Ｐｍｃ、２，２，５，７，８−ペ
ンタメチルクロマン−６−スルホニル；Ｔｒ、トリチル］。
ｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．（“ＡＢＩ”）モデル４３１Ａ自動ペプチド合成機によ
って、ＡＢＩによって提供された“Ｆａｓｔｍｏｃ”合成プロトコルを使用して
、ヘキサフルオロリン酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１
，３，３−テトラメチルウロニウム（“ＨＢＴＵ”）（Ｒ．Ｋｎｏｒｒ等、１９
８９，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，３０：１９２７）をカップリング剤として使用して
、合成することができる。合成は、０．２５ｍｍｏｌの商業的に入手可能な４−
（２’，４’−ジメトキシフェニル−（９−フルオレニル−エトキシカルボニル
）−アミノメチル）−フェノキシポリスチレン樹脂（“Ｒｉｎｋ樹脂”Ａｄｖａ
ｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈから入手）（Ｈ．Ｒｉｎｋ，１９８７，Ｔｅｔ．Ｌ
ｅｔｔ．２８：３７８７）で行うことができる。Ｆｍｏｃアミノ酸（１ｍｍｏｌ
）をＦａｓｔｍｏｃプロトコルに従ってカップリングさせる。次の側鎖保護Ｆｍ
ｏｃアミノ酸誘導体を使用する：ＦｍｏｃＡｒｇ（Ｐｍｃ）ＯＨ；ＦｍｏｃＡｓ
ｎ（Ｍｂｈ）ＯＨ；ＦｍｏｃＡｓｐ（tＢｕ）ＯＨ；ＦｍｏｃＣｙｓ（Ａｃｍ）
ＯＨ；ＦｍｏｃＧｌｕ（tＢｕ）ＯＨ；ＦｍｏｃＧｌｎ（Ｍｂｈ）ＯＨ；Ｆｍｏ
ｃＨｉｓ（Ｔｒ）ＯＨ；ＦｍｏｃＬｙｓ（Ｂｏｃ）ＯＨ；ＦｍｏｃＳｅｒ（tＢ
ｕ）ＯＨ；ＦｍｏｃＴｈｒ（tＢｕ）ＯＨ；ＦｍｏｃＴｙｒ（tＢｕ）ＯＨ。［略
語：Ａｃｍ、アセトアミドメチル；Ｂｏｃ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル；t
Ｂｕ、ｔｅｒｔ−ブチル；Ｆｍｏｃ、９−フルオレニルメトキシカルボニル；Ｍ
ｂｈ、４，４’−ジメトキシベンズヒドリル；Ｐｍｃ、２，２，５，７，８−ペ
ンタメチルクロマン−６−スルホニル；Ｔｒ、トリチル］。
【００２５】 合成は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）を溶媒として使用して、Ｎ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解したＨＢＴＵで行われる。Ｆｍｏｃ基の脱
保護は、ＮＭＰ中の約２０％のピペリジンを使用して行われる。それぞれの合成
の終了時に存在するペプチドの量を、紫外分光分析によって分析する。乾燥した
ペプチド樹脂の試料（約３−１０ｍｇ）を秤量し、次いでＤＭＡ（１０ｍｌ）中
の２０％ピペリジンを加える。３０分間の超音波処理後、ジベンゾフルベン−ピ
ペリジン付加物（Ｎ−末端Ｆｍｏｃ基の切断により形成される）のＵＶ（紫外）
吸光度を３０１ｎｍで記録する。ペプチド置換（ｍｍｏｌ ｇ-1）は、等式： 置換＝［（Ａ×ｖ）／（７８００×ｗ）］×１０００ によって計算することができて、式中、Ａは、３１０ｎｍでの吸光度、ｖは、Ｄ
ＭＡ中の２０％ピペリジンの体積（ｍｌ）、７８００は、ジベンゾフルベン−ピ
ペリジン付加物の吸光係数（ｍｏｌ-1ｄｍ3ｃｍ-1）、そしてｗは、ペプチド樹
脂試料の重量（ｍｇ）である。
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解したＨＢＴＵで行われる。Ｆｍｏｃ基の脱
保護は、ＮＭＰ中の約２０％のピペリジンを使用して行われる。それぞれの合成
の終了時に存在するペプチドの量を、紫外分光分析によって分析する。乾燥した
ペプチド樹脂の試料（約３−１０ｍｇ）を秤量し、次いでＤＭＡ（１０ｍｌ）中
の２０％ピペリジンを加える。３０分間の超音波処理後、ジベンゾフルベン−ピ
ペリジン付加物（Ｎ−末端Ｆｍｏｃ基の切断により形成される）のＵＶ（紫外）
吸光度を３０１ｎｍで記録する。ペプチド置換（ｍｍｏｌ ｇ-1）は、等式： 置換＝［（Ａ×ｖ）／（７８００×ｗ）］×１０００ によって計算することができて、式中、Ａは、３１０ｎｍでの吸光度、ｖは、Ｄ
ＭＡ中の２０％ピペリジンの体積（ｍｌ）、７８００は、ジベンゾフルベン−ピ
ペリジン付加物の吸光係数（ｍｏｌ-1ｄｍ3ｃｍ-1）、そしてｗは、ペプチド樹
脂試料の重量（ｍｇ）である。
【００２６】 最後に、Ｎ−末端のＦｍｏｃ基は、ＤＭＡ中の２０％ピペリジンを使用して切
断され、次いで無水酢酸及びＤＭＡ中のピリジンを使用してアセチル化される。
ペプチド樹脂は、ＤＭＡ、ＣＨ2Ｃｌ2及び最終的にジエチルエーテルで完全に洗
浄される。
断され、次いで無水酢酸及びＤＭＡ中のピリジンを使用してアセチル化される。
ペプチド樹脂は、ＤＭＡ、ＣＨ2Ｃｌ2及び最終的にジエチルエーテルで完全に洗
浄される。
【００２７】 制限するものではないが、例として、切断及び脱保護は、次のように行うこと
ができる：空気乾燥されたペプチド樹脂を、硫化エチルメチル（ＥｔＳＭｅ）、
エタンジチオール（ＥＤＴ）、及びチオアニソール（ＰｈＳＭｅ）で約２０分間
処理してから、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の９５％水溶液を加える。全体積約
５０ｍｌのこれらの試薬を、ペプチド樹脂１グラム当たり使用する。次の比を使
用する：ＴＦＡ：ＥｔＳＭｅ：ＥＤＴ：ＰｈＳＭｅ（１０：０．５：０．５：０
．５）。混合物をＮ2雰囲気下の室温で３時間撹拌する。混合物を濾過し、そし
て樹脂をＴＦＡ（２×３ｍｌ）で洗浄する。混合した濾液を真空中で蒸発し、そ
して無水ジエチルエーテルを黄色／橙色の残留物に加える。得られた白色の沈殿
物を濾過により分離する。各種の切断方法に関しては、Ｋｉｎｇ等、１９９０，
Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．３６：２５５−２６６
を参照されたい。
ができる：空気乾燥されたペプチド樹脂を、硫化エチルメチル（ＥｔＳＭｅ）、
エタンジチオール（ＥＤＴ）、及びチオアニソール（ＰｈＳＭｅ）で約２０分間
処理してから、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の９５％水溶液を加える。全体積約
５０ｍｌのこれらの試薬を、ペプチド樹脂１グラム当たり使用する。次の比を使
用する：ＴＦＡ：ＥｔＳＭｅ：ＥＤＴ：ＰｈＳＭｅ（１０：０．５：０．５：０
．５）。混合物をＮ2雰囲気下の室温で３時間撹拌する。混合物を濾過し、そし
て樹脂をＴＦＡ（２×３ｍｌ）で洗浄する。混合した濾液を真空中で蒸発し、そ
して無水ジエチルエーテルを黄色／橙色の残留物に加える。得られた白色の沈殿
物を濾過により分離する。各種の切断方法に関しては、Ｋｉｎｇ等、１９９０，
Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．３６：２５５−２６６
を参照されたい。
【００２８】 合成されたペプチドの精製は、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、ア
フィニティー、及びサイジングカラムクロマトグラフィー、高性能液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ））、遠心、溶解度の差、又は他のいかなる標準的な技術
を含む、標準的な方法によって行うことができる。
フィニティー、及びサイジングカラムクロマトグラフィー、高性能液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ））、遠心、溶解度の差、又は他のいかなる標準的な技術
を含む、標準的な方法によって行うことができる。
【００２９】 本発明のペプチドは、当該技術分野において公知の方法によって、他の分子（
例えば、本発明の各種の態様によって、検知可能な標識、固体基質への吸着を促
進する分子、又は毒素）に結合させることができる。このような方法は、同種二
官能基性及び異種二官能基性架橋分子の使用を含む。
例えば、本発明の各種の態様によって、検知可能な標識、固体基質への吸着を促
進する分子、又は毒素）に結合させることができる。このような方法は、同種二
官能基性及び異種二官能基性架橋分子の使用を含む。
【００３０】 同種二官能基性分子は、同一の少なくとも二つの反応性官能基を有する。同種
二官能基性分子の反応性官能基は、例えばアルデヒド基及び活性なエステル基を
含む。アルデヒド基を有する同種二官能基性分子は、例えばグルタルアルデヒド
及びスベルアルデヒドを含む。グルタルアルデヒドの架橋剤としての使用は、Ｐ
ｏｚｎａｎｓｋｙ等、１９８４，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２３：１３０４−１３０６
によって開示された。
二官能基性分子の反応性官能基は、例えばアルデヒド基及び活性なエステル基を
含む。アルデヒド基を有する同種二官能基性分子は、例えばグルタルアルデヒド
及びスベルアルデヒドを含む。グルタルアルデヒドの架橋剤としての使用は、Ｐ
ｏｚｎａｎｓｋｙ等、１９８４，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２３：１３０４−１３０６
によって開示された。
【００３１】 少なくとも二つの活性エステル単位を有する同種二官能基性分子は、ジカルボ
ン酸及びＮ−ヒドロキシスクシンイミドのエステルを含む。このようなＮ−スク
シンイミジルエステルのいくつかの例は、スベリン酸ジスクシンイミジル及びジ
チオ−ビス−（プロピオン酸スクシンイミジル）、並びにこれらの可溶性ビス−
スルホン酸及びこれらのナトリウム及びカリウム塩のようなビス−スルホン酸塩
を含む。これらの同種二官能基性試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉ
ｌｌｉｎｏｉｓから入手可能である。
ン酸及びＮ−ヒドロキシスクシンイミドのエステルを含む。このようなＮ−スク
シンイミジルエステルのいくつかの例は、スベリン酸ジスクシンイミジル及びジ
チオ−ビス−（プロピオン酸スクシンイミジル）、並びにこれらの可溶性ビス−
スルホン酸及びこれらのナトリウム及びカリウム塩のようなビス−スルホン酸塩
を含む。これらの同種二官能基性試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉ
ｌｌｉｎｏｉｓから入手可能である。
【００３２】 異種二官能基性分子は、少なくとも二つの異なった反応基を有する。反応性ジ
スルフィド結合を含む、異種二官能基性試薬のいくつかの例は、３−（２−ピリ
ジル−ジチオ）プロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル（Ｃａｒｌｓｓｏｎ等、１９
７８，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１７３：７２３−７３７）、Ｓ−４−スクシンイミ
ジルオキシカルボニル−アルファ−メチルベンジルチオ硫酸ナトリウム及び４−
スクシンイミジルオキシカルボニル−アルファ−メチル−（２−ピリジルジチオ
）トルエンを含む。３−（２−ピリジル−ジチオ）プロピオン酸Ｎ−スクシンイ
ミジルが好ましい。チオール基と反応する二重結合を有する反応基を含む、異種
二官能基性試薬のいくつかの例は、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサ
ン−１−カルボン酸スクシンイミジル及びｍ−マレイミド安息香酸スクシンイミ
ジルを含む。
スルフィド結合を含む、異種二官能基性試薬のいくつかの例は、３−（２−ピリ
ジル−ジチオ）プロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル（Ｃａｒｌｓｓｏｎ等、１９
７８，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１７３：７２３−７３７）、Ｓ−４−スクシンイミ
ジルオキシカルボニル−アルファ−メチルベンジルチオ硫酸ナトリウム及び４−
スクシンイミジルオキシカルボニル−アルファ−メチル−（２−ピリジルジチオ
）トルエンを含む。３−（２−ピリジル−ジチオ）プロピオン酸Ｎ−スクシンイ
ミジルが好ましい。チオール基と反応する二重結合を有する反応基を含む、異種
二官能基性試薬のいくつかの例は、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサ
ン−１−カルボン酸スクシンイミジル及びｍ−マレイミド安息香酸スクシンイミ
ジルを含む。
【００３３】 他の異種二官能基性分子は、３−（マレイミド）プロピオン酸スクシンイミジ
ル、４−（ｐ−マレイミド−フェニル）酪酸スルホスクシンイミジル、４−（Ｎ
−マレイミドメチル−シクロヘキサン）−１−カルボン酸スルホスクシンイミジ
ル、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステルを含む。
ｍ−マレイミド安息香酸スクシンイミジルのスルホン酸ナトリウム塩が好ましい
。先に記載した異種二官能基性試薬及びそのスルホン酸塩の多くは、Ｐｉｅｒｃ
ｅから入手可能である。
ル、４−（ｐ−マレイミド−フェニル）酪酸スルホスクシンイミジル、４−（Ｎ
−マレイミドメチル−シクロヘキサン）−１−カルボン酸スルホスクシンイミジ
ル、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステルを含む。
ｍ−マレイミド安息香酸スクシンイミジルのスルホン酸ナトリウム塩が好ましい
。先に記載した異種二官能基性試薬及びそのスルホン酸塩の多くは、Ｐｉｅｒｃ
ｅから入手可能である。
【００３４】 これらの並びに他の多官能基性試薬をいかに製造し、そしていかに使用するか
に関する更なる情報は、以下の刊行物又は当該技術分野において入手可能な他の
刊行物から得ることができる：Ｃａｒｌｓｓｏｎ等、１９７８，Ｂｉｏｃｈｅｍ
．Ｊ．１７３：７２３−７３７；Ｃｕｍｂｅｒ等、１９８５，Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １１２：２０７−２２４；Ｊｕｅ等、１９７８，
Ｂｉｏｃｈｅｍ １７：５３９９−５４０５；Ｓｕｎ等、１９７４，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．１３：２３３４−２３４０；Ｂｌａｔｔｌｅｒ等、１９８５，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．２４：１５１７−１５２；Ｌｉｕ等、１９７９，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８：
６９０−６９７；Ｙｏｕｌｅ及びＮｅｖｉｌｌｅ、１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４８３−５４８６；Ｌｅｒｎｅｒ等、
１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：３４０３−
３４０７；Ｊｕｎｇ及びＭｏｒｏｉ、１９８３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ａｃｔａ ７６１：１６２；Ｃａｕｌｆｉｅｌｄ等、１９８４，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．８１：７７７２−７７７６；Ｓｔａｒｏｓ、１９８２，Ｂｉｏｃｈｅｍ．
２１：３９５０−３９５５；Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ等、１９７９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．１０１：３９５−３９９；Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ等、１９８２，Ｊ
．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９２：１４１３−１４２４；Ｐｉｌｃｈ及びＣｚｅｃｈ、１
９７９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４：３３７５−３３８１；Ｎｏｖｉｃｋ
等、１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８４８３−８４８７；Ｌｏｍ
ａｎｔ及びＦａｉｒｂａｎｋｓ、１９７６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１０４：２
４３−２６１；Ｈａｍａｄａ及びＴｓｕｒｕｏ、１９８７，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．１６０：４８３−４８８；Ｈａｓｈｉｄａ等、１９８４，Ｊ．Ａｐｐｌ
ｉｅｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．６：５６−６３。
に関する更なる情報は、以下の刊行物又は当該技術分野において入手可能な他の
刊行物から得ることができる：Ｃａｒｌｓｓｏｎ等、１９７８，Ｂｉｏｃｈｅｍ
．Ｊ．１７３：７２３−７３７；Ｃｕｍｂｅｒ等、１９８５，Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １１２：２０７−２２４；Ｊｕｅ等、１９７８，
Ｂｉｏｃｈｅｍ １７：５３９９−５４０５；Ｓｕｎ等、１９７４，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．１３：２３３４−２３４０；Ｂｌａｔｔｌｅｒ等、１９８５，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．２４：１５１７−１５２；Ｌｉｕ等、１９７９，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８：
６９０−６９７；Ｙｏｕｌｅ及びＮｅｖｉｌｌｅ、１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４８３−５４８６；Ｌｅｒｎｅｒ等、
１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：３４０３−
３４０７；Ｊｕｎｇ及びＭｏｒｏｉ、１９８３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ａｃｔａ ７６１：１６２；Ｃａｕｌｆｉｅｌｄ等、１９８４，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．８１：７７７２−７７７６；Ｓｔａｒｏｓ、１９８２，Ｂｉｏｃｈｅｍ．
２１：３９５０−３９５５；Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ等、１９７９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．１０１：３９５−３９９；Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ等、１９８２，Ｊ
．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９２：１４１３−１４２４；Ｐｉｌｃｈ及びＣｚｅｃｈ、１
９７９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４：３３７５−３３８１；Ｎｏｖｉｃｋ
等、１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８４８３−８４８７；Ｌｏｍ
ａｎｔ及びＦａｉｒｂａｎｋｓ、１９７６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１０４：２
４３−２６１；Ｈａｍａｄａ及びＴｓｕｒｕｏ、１９８７，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．１６０：４８３−４８８；Ｈａｓｈｉｄａ等、１９８４，Ｊ．Ａｐｐｌ
ｉｅｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．６：５６−６３。
【００３５】 更に、架橋の方法は、Ｍｅａｎｓ及びＦｅｅｎｅｙ、１９９０，Ｂｉｏｃｏｎ
ｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１：２−１２によって報告されている。 標的化するレトロ反転されたペプチドの合成及び特徴付け 先に引用したＷＯ９８／５１３２５に記載されている方法と同様に、合成ダン
シル化ペプチドを、Ｇｅｎｏｓｙｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＫ及
びＡｎａｓｐｅｃ Ｉｎｃ．，ＵＳＡで製造した。特徴付け項目は、外観、溶解
度、ＨＰＬＣ及び質量分析を含んでいた（最小純度＞９５％）。表１は、特定の
ＧＩＴ標的剤を参照して合成されたレトロ反転されたペプチド及び本来のＧＩＴ
標的剤それ自体の両者の一次配列を示す。
ｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１：２−１２によって報告されている。 標的化するレトロ反転されたペプチドの合成及び特徴付け 先に引用したＷＯ９８／５１３２５に記載されている方法と同様に、合成ダン
シル化ペプチドを、Ｇｅｎｏｓｙｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＫ及
びＡｎａｓｐｅｃ Ｉｎｃ．，ＵＳＡで製造した。特徴付け項目は、外観、溶解
度、ＨＰＬＣ及び質量分析を含んでいた（最小純度＞９５％）。表１は、特定の
ＧＩＴ標的剤を参照して合成されたレトロ反転されたペプチド及び本来のＧＩＴ
標的剤それ自体の両者の一次配列を示す。
【００３６】
【表１】
【００３７】 ＥＬＩＳＡによるダンシル化ペプチドのＣａｃｏ−２細胞膜画分への結合の分
析 先に引用したＷＯ９８／５１３２５に記載されている方法と同様に、Ｃａｃｏ
−２細胞膜（Ｐ１００）及び細胞質ゾル（Ｓ１００）の画分を、Ｋｉｎｓｅｌｌ
ａ，Ｂ．Ｔ．，Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ，Ｄ．Ｊ．及びＧ．Ａ．ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ
，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（４７）：２９９１４−２９９１
９に記載されている方法の改変を使用して調製した。コンフルエントのＣａｃｏ
−２細胞単層（７５ｃｍ2フラスコ中で３７℃及び５％ＣＯ2で１週間まで成長し
た）を、ダルベッコＰＢＳ（ＤＰＢＳ）で２回洗浄し、そして、１０ｍＭのＥＤ
ＴＡ−ＤＰＢＳで処理した後、細胞を１０００ｒｐｍの遠心により回収した。細
胞をＤＰＢＳで３回洗浄し、そして最終の細胞のペレットを、３体積の氷冷ＨＥ
Ｄ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６７）、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．５
ｍＭのジチオトレイトール、１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳ
Ｆ））に再懸濁した。細胞を氷の上で５分間膨潤させてから、３０秒間ホモジナ
イズした。ホモジネートを４０，０００ｒｐｍで４５分間４℃で遠心した。上清
（Ｓ１００）を除去し、そしてペレット（Ｐ１００）をＨＥＤＧ緩衝液（２０ｍ
ＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６７）、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．５ｍＭのジチオトレ
イトール、１００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセリン、１ｍＭのＰＭＳＦ）に
再懸濁した。タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ
，Ｍ．Ｍ．，１９７６，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７２：２４８−２５４）を
使用して測定した。
析 先に引用したＷＯ９８／５１３２５に記載されている方法と同様に、Ｃａｃｏ
−２細胞膜（Ｐ１００）及び細胞質ゾル（Ｓ１００）の画分を、Ｋｉｎｓｅｌｌ
ａ，Ｂ．Ｔ．，Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ，Ｄ．Ｊ．及びＧ．Ａ．ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ
，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（４７）：２９９１４−２９９１
９に記載されている方法の改変を使用して調製した。コンフルエントのＣａｃｏ
−２細胞単層（７５ｃｍ2フラスコ中で３７℃及び５％ＣＯ2で１週間まで成長し
た）を、ダルベッコＰＢＳ（ＤＰＢＳ）で２回洗浄し、そして、１０ｍＭのＥＤ
ＴＡ−ＤＰＢＳで処理した後、細胞を１０００ｒｐｍの遠心により回収した。細
胞をＤＰＢＳで３回洗浄し、そして最終の細胞のペレットを、３体積の氷冷ＨＥ
Ｄ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６７）、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．５
ｍＭのジチオトレイトール、１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳ
Ｆ））に再懸濁した。細胞を氷の上で５分間膨潤させてから、３０秒間ホモジナ
イズした。ホモジネートを４０，０００ｒｐｍで４５分間４℃で遠心した。上清
（Ｓ１００）を除去し、そしてペレット（Ｐ１００）をＨＥＤＧ緩衝液（２０ｍ
ＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６７）、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．５ｍＭのジチオトレ
イトール、１００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセリン、１ｍＭのＰＭＳＦ）に
再懸濁した。タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ
，Ｍ．Ｍ．，１９７６，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７２：２４８−２５４）を
使用して測定した。
【００３８】 ペプチドの膜（Ｐ１００）への結合は、ペプチドに組み込まれたダンシル分子
の検出によって評価した。Ｃｏｓｔａｒ９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、Ｐ１
００画分（０．０５ＭのＮａＨＣＯ3（ｐＨ９．６）中の１００μｇ／ｍｌ；１
００μｌ／ウェル）で４℃で一晩コートした。プレートを２％のＭａｒｖｅｌ−
ＤＰＢＳで室温で１時間ブロックし、そして１％のＤＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中で３
回洗浄した。ペプチド（２％のＭａｒｖｅｌ−ＤＰＢＳ中の２００μｇ／ｍｌ）
を、プレート上で連続的に希釈し、そして室温で１時間インキュベートした。プ
レートを５回洗浄し、そしてダンシル化ペプチドを、ｉ）マウスの抗ダンシル抗
血清（Ｃｙｔｏｇｅｎ ＤＢ３−２２６．３；２％のＭａｒｖｅｌ−ＤＰＢＳ中
の１：１３４０希釈）又はｉｉ）ウサギの抗ダンシル抗血清（Ｌａ Ｊｏｌｌａ
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＬＡＪＤ−１１９；１：１０００希釈）を使用して
室温で１時間検出した。プレートを３回洗浄してから、ｉ）ヤギ抗マウスＩｇＧ
λ：ＨＰＲ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０６０−
０５；２％のＭａｒｖｅｌ−ＤＰＢＳ中の１：１０，０００希釈）又はｉｉ）抗
ウサギＩｇＧ ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ Ａ−０５４５、１：８，０００）と共に室
温で１時間インキュベートした。３回の洗浄後、反応物を、Ｋ Ｂｌｕｅ Ｓｕ
ｂｓｔｒａｔｅ及びＲｅｄ Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（それぞれＮｅｏｇｅ
ｎ Ｃｏ．３００１７６＆３０１４７５）を使用して、６５０ｎｍで可視化した
。
の検出によって評価した。Ｃｏｓｔａｒ９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、Ｐ１
００画分（０．０５ＭのＮａＨＣＯ3（ｐＨ９．６）中の１００μｇ／ｍｌ；１
００μｌ／ウェル）で４℃で一晩コートした。プレートを２％のＭａｒｖｅｌ−
ＤＰＢＳで室温で１時間ブロックし、そして１％のＤＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中で３
回洗浄した。ペプチド（２％のＭａｒｖｅｌ−ＤＰＢＳ中の２００μｇ／ｍｌ）
を、プレート上で連続的に希釈し、そして室温で１時間インキュベートした。プ
レートを５回洗浄し、そしてダンシル化ペプチドを、ｉ）マウスの抗ダンシル抗
血清（Ｃｙｔｏｇｅｎ ＤＢ３−２２６．３；２％のＭａｒｖｅｌ−ＤＰＢＳ中
の１：１３４０希釈）又はｉｉ）ウサギの抗ダンシル抗血清（Ｌａ Ｊｏｌｌａ
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＬＡＪＤ−１１９；１：１０００希釈）を使用して
室温で１時間検出した。プレートを３回洗浄してから、ｉ）ヤギ抗マウスＩｇＧ
λ：ＨＰＲ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０６０−
０５；２％のＭａｒｖｅｌ−ＤＰＢＳ中の１：１０，０００希釈）又はｉｉ）抗
ウサギＩｇＧ ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ Ａ−０５４５、１：８，０００）と共に室
温で１時間インキュベートした。３回の洗浄後、反応物を、Ｋ Ｂｌｕｅ Ｓｕ
ｂｓｔｒａｔｅ及びＲｅｄ Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（それぞれＮｅｏｇｅ
ｎ Ｃｏ．３００１７６＆３０１４７５）を使用して、６５０ｎｍで可視化した
。
【００３９】 ＺＥｌａｎ０２１即ちＨＡＸ４２［Ｋ（ｄｎｓ）−ＳＤＨＡＬＧＴＮＬＲＳＤ
ＮＡＫＥＰＧＤＹＮＣＣＧＮＧＮＳＴＧＲＫＶＦＮＲＲＲＰＳＡＩＰＴ］の全長
に、信号／雑音比のデータから決定された一定のペプチド濃度における、Ｐ１０
０に対する結合に対して１．００という任意の値を与えた。表２は、ＨＡＸ４２
関連のペプチドＺＥｌａｎ０２１、ＺＥｌａｎ０９１及びＺＥｌａｎ１４６によ
るＰ１００アッセイの結果を示す。アッセイ番号１は、２０μｇ／ｍｌにおける
ものであり；２及び３は５０μｇ／ｍｌであり；そして４ないし８は２５μｇ／
ｍｌである。レトロ反転型ＺＥｌａｎ１４６の結果は、ＨＡＸ４２断片ＺＥｌａ
ｎ０９１と比較して妥当な結合を示し、そしてＧＩＴ標的剤の活性は、これがレ
トロ反転型に転換されても排除されないことを示した。
ＮＡＫＥＰＧＤＹＮＣＣＧＮＧＮＳＴＧＲＫＶＦＮＲＲＲＰＳＡＩＰＴ］の全長
に、信号／雑音比のデータから決定された一定のペプチド濃度における、Ｐ１０
０に対する結合に対して１．００という任意の値を与えた。表２は、ＨＡＸ４２
関連のペプチドＺＥｌａｎ０２１、ＺＥｌａｎ０９１及びＺＥｌａｎ１４６によ
るＰ１００アッセイの結果を示す。アッセイ番号１は、２０μｇ／ｍｌにおける
ものであり；２及び３は５０μｇ／ｍｌであり；そして４ないし８は２５μｇ／
ｍｌである。レトロ反転型ＺＥｌａｎ１４６の結果は、ＨＡＸ４２断片ＺＥｌａ
ｎ０９１と比較して妥当な結合を示し、そしてＧＩＴ標的剤の活性は、これがレ
トロ反転型に転換されても排除されないことを示した。
【００４０】
【表２】
【００４１】 ＫD値、即ちＣａｃｏ−２のＰ１００画分に対する最大結合の半分に達するた
めに必要なペプチドの濃度を、ＺＥｌａｎ０２１即ちＨＡＸ４２［Ｋ（ｄｎｓ）
−ＳＤＨＡＬＧＴＮＬＲＳＤＮＡＫＥＰＧＤＹＮＣＣＧＮＧＮＳＴＧＲＫＶＦＮ
ＲＲＲＰＳＡＩＰＴ］の全長、ＨＡＸ４２の断片ＺＥｌａｎ０９１、及びこの断
片のレトロ反転型ＺＥｌａｎ１４６、並びにＺＥｌａｎ０１８即ちＰＡＸ２［Ｋ
（ｄｎｓ）−ＳＴＰＰＳＲＥＡＹＳＲＰＹＳＶＤＳＤＳＤＴＮＡＫＨＳＳＨＮＲ
ＲＬＲＴＲＳＲＰＮＧ］の全長、ＰＡＸ２の断片ＺＥｌａｎ１２９、及びこの断
片のレトロ反転型ＺＥｌａｎ１４４について、表３に示す。
めに必要なペプチドの濃度を、ＺＥｌａｎ０２１即ちＨＡＸ４２［Ｋ（ｄｎｓ）
−ＳＤＨＡＬＧＴＮＬＲＳＤＮＡＫＥＰＧＤＹＮＣＣＧＮＧＮＳＴＧＲＫＶＦＮ
ＲＲＲＰＳＡＩＰＴ］の全長、ＨＡＸ４２の断片ＺＥｌａｎ０９１、及びこの断
片のレトロ反転型ＺＥｌａｎ１４６、並びにＺＥｌａｎ０１８即ちＰＡＸ２［Ｋ
（ｄｎｓ）−ＳＴＰＰＳＲＥＡＹＳＲＰＹＳＶＤＳＤＳＤＴＮＡＫＨＳＳＨＮＲ
ＲＬＲＴＲＳＲＰＮＧ］の全長、ＰＡＸ２の断片ＺＥｌａｎ１２９、及びこの断
片のレトロ反転型ＺＥｌａｎ１４４について、表３に示す。
【００４２】
【表３】
【００４３】 ペプチドで被覆されたインスリン充填ＰＬＧＡ粒子の製造及び分析 インスリンを充填されたＰＬＧＡ粒子を、先に引用したＷＯ９８／５１３２５
に記載されているコアセルベーション法によって、本発明によるレトロ反転され
たペプチド又はＧＩＴ標的剤で被覆する。特に、活性剤を含む固体粒子は、ポリ
マーから形成され、そして約１０ｎｍないし約５００μｍ、最も好ましくは５０
ないし８００ｎｍの粒子の大きさを有する。更に、粒子は、以下に概略記載され
るような、及び先に引用したＷＯ９８／５１３２５に記載されているような多く
の方法を使用して粒子中に組み込まれた標的化するレトロ反転されたペプチドを
含む。
に記載されているコアセルベーション法によって、本発明によるレトロ反転され
たペプチド又はＧＩＴ標的剤で被覆する。特に、活性剤を含む固体粒子は、ポリ
マーから形成され、そして約１０ｎｍないし約５００μｍ、最も好ましくは５０
ないし８００ｎｍの粒子の大きさを有する。更に、粒子は、以下に概略記載され
るような、及び先に引用したＷＯ９８／５１３２５に記載されているような多く
の方法を使用して粒子中に組み込まれた標的化するレトロ反転されたペプチドを
含む。
【００４４】 以下に示した一般的方法の、有機相（Ｂ）のポリマーは、可溶性、透過性、非
透過性、生分解可能又は胃保持性であってもよい。ポリマーは、ポリマー又は共
重合体の混合物からなることができ、そして天然又は合成のポリマーであること
ができる。代表的な生分解可能なポリマーは、制限するものではないが、ポリグ
リコリド；ポリラクチド；ＤＬ、Ｌ及びＤ型を含むポリ（ラクチド−コ−グリコ
リド）；コポリオキサラート；ポリカプロラクトン；ポリエステルアミド；ポリ
オルトエステル；ポリアンヒドリド；ポリアルキルシアノアクリラート；ポリヒ
ドロキシブチラート；ポリウレタン；アルブミン；カゼイン；シトサン誘導体；
ゼラチン；アカシア；セルロース；ポリサッカリド；アルギン酸；ポリペプチド
；等、これらの共重合体、これらの混合物並びにこれらの立体異性体を含む。代
表的な合成ポリマーは、アルキルセルロース；ヒドロキシアルキルセルロース；
セルロースエーテル；セルロースエステル；ニトロセルロース；アクリル酸及び
メタクリル酸のポリマー並びにこれらのエステル；デキストラン；ポリアミド；
ポリカーボナート；ポリアルキレン；ポリアルキレングリコール；ポリアルキレ
ンオキシド；ポリアルキレンテレフタラート；ポリビニルアルコール；ポリビニ
ルエーテル；ポリビニルエステル；ポリハロゲン化ビニル；ポリビニルピロリド
ン；ポリシロキサン及びポリウレタン並びにこれらの共重合体を含む。
透過性、生分解可能又は胃保持性であってもよい。ポリマーは、ポリマー又は共
重合体の混合物からなることができ、そして天然又は合成のポリマーであること
ができる。代表的な生分解可能なポリマーは、制限するものではないが、ポリグ
リコリド；ポリラクチド；ＤＬ、Ｌ及びＤ型を含むポリ（ラクチド−コ−グリコ
リド）；コポリオキサラート；ポリカプロラクトン；ポリエステルアミド；ポリ
オルトエステル；ポリアンヒドリド；ポリアルキルシアノアクリラート；ポリヒ
ドロキシブチラート；ポリウレタン；アルブミン；カゼイン；シトサン誘導体；
ゼラチン；アカシア；セルロース；ポリサッカリド；アルギン酸；ポリペプチド
；等、これらの共重合体、これらの混合物並びにこれらの立体異性体を含む。代
表的な合成ポリマーは、アルキルセルロース；ヒドロキシアルキルセルロース；
セルロースエーテル；セルロースエステル；ニトロセルロース；アクリル酸及び
メタクリル酸のポリマー並びにこれらのエステル；デキストラン；ポリアミド；
ポリカーボナート；ポリアルキレン；ポリアルキレングリコール；ポリアルキレ
ンオキシド；ポリアルキレンテレフタラート；ポリビニルアルコール；ポリビニ
ルエーテル；ポリビニルエステル；ポリハロゲン化ビニル；ポリビニルピロリド
ン；ポリシロキサン及びポリウレタン並びにこれらの共重合体を含む。
【００４５】 典型的には、粒子は、以下の一般的な方法を使用して形成される： ポリマー、表面活性剤、表面安定若しくは改良剤又は塩、或いは界面活性剤、
好ましくは５０−１００％の加水分解％及び５００−５００，０００の範囲の分
子量、最も好ましくは８０−１００％の加水分解及び１０，０００−１５０，０
００の分子量を持つ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）又は誘導体の水溶液（Ａ
）を、容器に導入する。混合物（Ａ）を低い剪断力下で１０−２０００ｒｐｍ、
好ましくは１００−６００ｒｐｍで撹拌する。この溶液のｐＨ及び／又はイオン
強度は、塩、緩衝液又は他の改良剤を使用して改変することができる。この溶液
の粘度は、ポリマー、塩又は他の粘度向上若しくは改良剤を使用して改変するこ
とができる。
好ましくは５０−１００％の加水分解％及び５００−５００，０００の範囲の分
子量、最も好ましくは８０−１００％の加水分解及び１０，０００−１５０，０
００の分子量を持つ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）又は誘導体の水溶液（Ａ
）を、容器に導入する。混合物（Ａ）を低い剪断力下で１０−２０００ｒｐｍ、
好ましくは１００−６００ｒｐｍで撹拌する。この溶液のｐＨ及び／又はイオン
強度は、塩、緩衝液又は他の改良剤を使用して改変することができる。この溶液
の粘度は、ポリマー、塩又は他の粘度向上若しくは改良剤を使用して改変するこ
とができる。
【００４６】 標的リガンドを含む、ポリマー、好ましくはポリ（ラクチド−コ−グリコリド
）、ポリラクチド、ポリグリコリド又はこれらの組み合わせ或いはこれらのポリ
マーのいかなる鏡像異性体又は共有結合複合体を、水混和性の有機溶媒に溶解し
て、有機相（Ｂ）を形成する。最も好ましくは、アセトン及びエタノールの組み
合わせを、使用するポリマーによるが、０：１００のアセトン：エタノールない
し１００：０のアセトン：エタノールの比の範囲で使用する。
）、ポリラクチド、ポリグリコリド又はこれらの組み合わせ或いはこれらのポリ
マーのいかなる鏡像異性体又は共有結合複合体を、水混和性の有機溶媒に溶解し
て、有機相（Ｂ）を形成する。最も好ましくは、アセトン及びエタノールの組み
合わせを、使用するポリマーによるが、０：１００のアセトン：エタノールない
し１００：０のアセトン：エタノールの比の範囲で使用する。
【００４７】 付加的なポリマー、ペプチド、糖、塩、天然／生物学的ポリマー又は他の薬剤
を、有機相（Ｂ）に更に加えて、得られる粒子産物の物理的及び化学的特性を改
良することができる。
を、有機相（Ｂ）に更に加えて、得られる粒子産物の物理的及び化学的特性を改
良することができる。
【００４８】 薬剤又は生理活性物質を、水性相（Ａ）又は有機相（Ｂ）のいずれかに導入す
ることができる。標的化するレトロ転換されたペプチド又はＧＩＴ標的剤も、更
に水性相（Ａ）又は有機相（Ｂ）のいずれかに、この時点で導入することができ
る。
ることができる。標的化するレトロ転換されたペプチド又はＧＩＴ標的剤も、更
に水性相（Ａ）又は有機相（Ｂ）のいずれかに、この時点で導入することができ
る。
【００４９】 有機相（Ｂ）を、撹拌された水性相（Ａ）に連続した速さで加える。溶媒を、
好ましくは温度を周囲より上昇する及び／又は真空ポンプを使用することによっ
て蒸発する。粒子は、このとき懸濁液（Ｃ）として存在する。標的化するレトロ
転換されたペプチド又はＧＩＴ標的剤を、撹拌された懸濁液中にこの時点で導入
することができる。
好ましくは温度を周囲より上昇する及び／又は真空ポンプを使用することによっ
て蒸発する。粒子は、このとき懸濁液（Ｃ）として存在する。標的化するレトロ
転換されたペプチド又はＧＩＴ標的剤を、撹拌された懸濁液中にこの時点で導入
することができる。
【００５０】 ポリマー、ペプチド、糖、塩、天然／生物学的ポリマー又は他の薬剤の第２の
層を、先に形成された粒子の核にこの段階で、いかなる適当な方法によっても沈
積することができる。
層を、先に形成された粒子の核にこの段階で、いかなる適当な方法によっても沈
積することができる。
【００５１】 次いで粒子（Ｄ）を、標準的なコロイド分離技術を使用して、好ましくは高“
ｇ”力の遠心、濾過、十字流濾過、ゲル透過クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー又は電荷分離技術によって、懸濁液（Ｃ）から分離する。
上清を捨て、そして粒子（Ｄ）を、洗浄溶液（Ｅ）、好ましくは水、塩溶液、緩
衝液又は有機溶媒に再懸濁する。粒子（Ｄ）を、先に記載したと同様な方法で洗
浄液から分離し、そして通常２回再洗浄する。標的リガンドは、最初、中間及び
／又は最後の洗浄段階で洗浄溶液（Ｅ）に溶解してもよく、そして粒子（Ｄ）の
洗浄に使用することができる。
ｇ”力の遠心、濾過、十字流濾過、ゲル透過クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー又は電荷分離技術によって、懸濁液（Ｃ）から分離する。
上清を捨て、そして粒子（Ｄ）を、洗浄溶液（Ｅ）、好ましくは水、塩溶液、緩
衝液又は有機溶媒に再懸濁する。粒子（Ｄ）を、先に記載したと同様な方法で洗
浄液から分離し、そして通常２回再洗浄する。標的リガンドは、最初、中間及び
／又は最後の洗浄段階で洗浄溶液（Ｅ）に溶解してもよく、そして粒子（Ｄ）の
洗浄に使用することができる。
【００５２】 次いで粒子は、乾燥してもよい。次いで粒子は更に加工、例えば錠剤化、カプ
セル化又は噴霧乾燥することができる。 上記で形成した粒子の放出特性は、使用及び／又は所望の処方によって、即時
から制御又は遅延放出まで変化させることができる。
セル化又は噴霧乾燥することができる。 上記で形成した粒子の放出特性は、使用及び／又は所望の処方によって、即時
から制御又は遅延放出まで変化させることができる。
【００５３】 薬物の充填は、０−９０重量／重量％の範囲であることができる。標的化する
レトロ転換されたペプチド又はＧＩＴ標的剤の充填は、０−９０重量／重量％に
範囲であることができる。
レトロ転換されたペプチド又はＧＩＴ標的剤の充填は、０−９０重量／重量％に
範囲であることができる。
【００５４】 インスリンを充填されたＰＬＧＡ（ＲＧ５０４Ｈ）ナノ粒子を、次の標的リガ
ンドについて、先に示したように製造した：ＨＡＸ４２の全長（ＺＥｌａｎ０２
１）、ＰＡＸ２の全長（ＺＥｌａｎ０１８）、ＨＡＸ４２断片のＺＥｌａｎ０９
１、ＰＡＸ２断片のＺＥｌａｎ１２９、ＨＡＸ４２断片のレトロ反転ペプチドＺ
Ｅｌａｎ１４６及びＰＡＸ２断片のレトロ反転ペプチドＺＥｌａｎ１４４。ウシ
インスリンの効力（ＨＰＬＣ）及びペプチド充填（ダンシル蛍光）を評価してか
ら、オープンループモデルを使用したＷｉｓｔａｒラットのインスリン運搬を分
析した。表４は、ＰＬＧＡ粒子のインスリン効力及び標的化するペプチドの充填
を示す。
ンドについて、先に示したように製造した：ＨＡＸ４２の全長（ＺＥｌａｎ０２
１）、ＰＡＸ２の全長（ＺＥｌａｎ０１８）、ＨＡＸ４２断片のＺＥｌａｎ０９
１、ＰＡＸ２断片のＺＥｌａｎ１２９、ＨＡＸ４２断片のレトロ反転ペプチドＺ
Ｅｌａｎ１４６及びＰＡＸ２断片のレトロ反転ペプチドＺＥｌａｎ１４４。ウシ
インスリンの効力（ＨＰＬＣ）及びペプチド充填（ダンシル蛍光）を評価してか
ら、オープンループモデルを使用したＷｉｓｔａｒラットのインスリン運搬を分
析した。表４は、ＰＬＧＡ粒子のインスリン効力及び標的化するペプチドの充填
を示す。
【００５５】
【表４】
【００５６】 動物における研究 各種の標的化するレトロ転換されたペプチドの、経口インスリンの生物学的利
用能のｉｎ ｖｉｖｏの評価を、オープンループ研究を使用して行い、先に記載
した（表４）ナノ粒子を含む試験溶液を、先に引用したＷＯ９８／５１３２５に
記載されているプロトコールと同様に、Ｗｉｓｔａｒラットの回腸に直接注射し
た。要約すれば、Ｗｉｓｔａｒラット（３００−３５０ｇ）を４時間絶食させ、
そして試験溶液の投与の１５ないし２０分前に、ケタミン溶液［０．５２５ｍｌ
のケタミン（１００ｍｇ／ｍｌ）及び０．８７５ｍｌのアセトプロマジンマレイ
ン酸塩−ＢＰ ＡＣＰ（２ｍｇ／ｍｌ）］を筋内投与することによって麻酔をか
けた。次いでラットに、幽門の２−３ｃｍ下の十二指腸内に試験溶液（注射体積
：１．５ｍｌ ＰＢＳ）を注射した。インスリン（速効性ウシ；２８．１ｉｕ／
ｍｇ）を、合計３００ｉｕのインスリンとなるように先に記載したように粒子中
に組み込んだ（約２１０ｍｇの粒子）。ラットの血液グルコース値を、Ｇｌｕｃ
ｏｍｅｔｅｒ（商標）（Ｂａｙｅｒ；０．１ないし３３．３ｍ／ｍｏｌ／Ｌ）を
使用して測定し；血漿インスリン値は、Ｐｈａｄｅｓｅｐｈ ＲＩＡキット（商
標）（Ｕｐｊｏｈｎ Ｐｈａｒｍａｃｉａ；３ないし２４０μＵ／ｍｌ−二系列
分析）を使用して測定した。全身系及び門脈血液を試料として採取した。
用能のｉｎ ｖｉｖｏの評価を、オープンループ研究を使用して行い、先に記載
した（表４）ナノ粒子を含む試験溶液を、先に引用したＷＯ９８／５１３２５に
記載されているプロトコールと同様に、Ｗｉｓｔａｒラットの回腸に直接注射し
た。要約すれば、Ｗｉｓｔａｒラット（３００−３５０ｇ）を４時間絶食させ、
そして試験溶液の投与の１５ないし２０分前に、ケタミン溶液［０．５２５ｍｌ
のケタミン（１００ｍｇ／ｍｌ）及び０．８７５ｍｌのアセトプロマジンマレイ
ン酸塩−ＢＰ ＡＣＰ（２ｍｇ／ｍｌ）］を筋内投与することによって麻酔をか
けた。次いでラットに、幽門の２−３ｃｍ下の十二指腸内に試験溶液（注射体積
：１．５ｍｌ ＰＢＳ）を注射した。インスリン（速効性ウシ；２８．１ｉｕ／
ｍｇ）を、合計３００ｉｕのインスリンとなるように先に記載したように粒子中
に組み込んだ（約２１０ｍｇの粒子）。ラットの血液グルコース値を、Ｇｌｕｃ
ｏｍｅｔｅｒ（商標）（Ｂａｙｅｒ；０．１ないし３３．３ｍ／ｍｏｌ／Ｌ）を
使用して測定し；血漿インスリン値は、Ｐｈａｄｅｓｅｐｈ ＲＩＡキット（商
標）（Ｕｐｊｏｈｎ Ｐｈａｒｍａｃｉａ；３ないし２４０μＵ／ｍｌ−二系列
分析）を使用して測定した。全身系及び門脈血液を試料として採取した。
【００５７】 研究グループは、表４に示した以下のペプチドで被覆された粒子を含む試験溶
液を受けたラットを含んでいた。対照グループは：１）ＰＢＳ対照（１．５ｍｌ
）オープンループ；２）インスリン溶液（１ｉｕ／０．２ｍｌ）皮下；３）ペプ
チドを含まないインスリン粒子、を含んでいた。
液を受けたラットを含んでいた。対照グループは：１）ＰＢＳ対照（１．５ｍｌ
）オープンループ；２）インスリン溶液（１ｉｕ／０．２ｍｌ）皮下；３）ペプ
チドを含まないインスリン粒子、を含んでいた。
【００５８】 表５は、投与された経口投与量の、インスリンの参照皮下投与量と比較した生
物学的利用能の％で表記された、先に記載したインスリンを充填したナノ粒子（
表面は標的化するレトロ反転されたペプチド又はＧＩＴ標的剤で改変されている
）のインスリンの生物学的利用能を示す。図１及び図２は、対照（ＰＢＳ）；Ｚ
Ｅｌａｎ０２１で被覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ０１８で被覆した
インスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ０９１で被覆したインスリンを含む粒子、Ｚ
Ｅｌａｎ１２９で被覆したインスリンを含む粒子及び本発明によるＺＥｌａｎ１
４４で被覆したインスリンを含む粒子（インスリン充填３００ｉｕ）の腸管投与
に続く、（１）全身系血液グルコース濃度及び（２）インスリン濃度を示す。
物学的利用能の％で表記された、先に記載したインスリンを充填したナノ粒子（
表面は標的化するレトロ反転されたペプチド又はＧＩＴ標的剤で改変されている
）のインスリンの生物学的利用能を示す。図１及び図２は、対照（ＰＢＳ）；Ｚ
Ｅｌａｎ０２１で被覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ０１８で被覆した
インスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ０９１で被覆したインスリンを含む粒子、Ｚ
Ｅｌａｎ１２９で被覆したインスリンを含む粒子及び本発明によるＺＥｌａｎ１
４４で被覆したインスリンを含む粒子（インスリン充填３００ｉｕ）の腸管投与
に続く、（１）全身系血液グルコース濃度及び（２）インスリン濃度を示す。
【００５９】
【表５】
【００６０】 本発明は、本明細書中に記載された特定の態様の範囲に制限されるものではな
い。実際に、本明細書中に記載されているものに加えて、本発明の各種の改変は
、前記の説明及び付属する図から、当業者にとって明白となるであろう。このよ
うな改変は、本発明の特許請求の範囲に入ることを意図している。
い。実際に、本明細書中に記載されているものに加えて、本発明の各種の改変は
、前記の説明及び付属する図から、当業者にとって明白となるであろう。このよ
うな改変は、本発明の特許請求の範囲に入ることを意図している。
【図１】 図１は、対照（ＰＢＳ）；ＺＥｌａｎ０２１で被覆したインスリ
ンを含む粒子、ＺＥｌａｎ０１８で被覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ
０９１で被覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ１２９で被覆したインスリ
ンを含む粒子及び本発明によるＺＥｌａｎ１４４で被覆したインスリンを含む粒
子（インスリン３００ｉｕを充填している）の腸管投与に続く全身系血液のグル
コース濃度を示す；そして
ンを含む粒子、ＺＥｌａｎ０１８で被覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ
０９１で被覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ１２９で被覆したインスリ
ンを含む粒子及び本発明によるＺＥｌａｎ１４４で被覆したインスリンを含む粒
子（インスリン３００ｉｕを充填している）の腸管投与に続く全身系血液のグル
コース濃度を示す；そして
【図２】 図２は、対照、ＺＥｌａｎ０２１で被覆したインスリンを含む粒
子、ＺＥｌａｎ０１８で被覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ０９１で被
覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ１２９で被覆したインスリンを含む粒
子及び本発明によるＺＥｌａｎ１４４で被覆したインスリンを含む粒子（インス
リン３００ｉｕを充填している）の腸管投与に続く全身系のインスリン濃度を示
す。
子、ＺＥｌａｎ０１８で被覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ０９１で被
覆したインスリンを含む粒子、ＺＥｌａｎ１２９で被覆したインスリンを含む粒
子及び本発明によるＺＥｌａｎ１４４で被覆したインスリンを含む粒子（インス
リン３００ｉｕを充填している）の腸管投与に続く全身系のインスリン濃度を示
す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｐ 9/04 9/04 9/12 9/12 19/10 19/10 25/06 25/06 35/00 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/00 Ｃ０７Ｋ 14/00 16/44 16/44 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 AA30 BB01 CC01 CC11 CC21 CC27 EE41 4C084 AA02 AA07 AA17 DC50 MA41 MA52 ZA08 ZA36 ZA42 ZA97 ZB26 ZC35 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA16 BA17 BA50 DA75 EA20 FA33
Claims (43)
- 【請求項１】 ＨＰＴ１、ｈＰＥＰＴ１、Ｄ２Ｈ、及びｈＳＩからなる群か
ら選択される胃腸管の受容体と特異的に結合するレトロ反転されたペプチド又は
その誘導体。 - 【請求項２】 前記ペプチドが、ＺＥｌａｎ１４４、ＺＥｌａｎ１４５又は
ＺＥｌａｎ１４６或いはそれらの結合部分からなる群から選択されるアミノ酸配
列を含む、請求項１に記載のレトロ反転されたペプチド。 - 【請求項３】 胃腸管を経由して全身、門脈又は肝臓の循環系への活性剤の
運搬を向上するレトロ反転されたペプチド。 - 【請求項４】 前記ペプチドが、５０以下のアミノ酸残基を含む、請求項１
ないし３のいずれか１項に記載のペプチド。 - 【請求項５】 前記ペプチドが、４０以下のアミノ酸残基を含む、請求項１
ないし３のいずれか１項に記載のペプチド。 - 【請求項６】 前記ペプチドが、３０以下のアミノ酸残基を含む、請求項１
ないし３のいずれか１項に記載のペプチド。 - 【請求項７】 前記ペプチドが、２０以下のアミノ酸残基を含む、請求項１
ないし３のいずれか１項に記載のペプチド。 - 【請求項８】 活性剤を含む物質に結合している請求項１ないし７のいずれ
か１項に記載のペプチドを含む組成物であって、前記活性剤が哺乳動物の疾病又
は疾患の治療に価値がある、前記組成物。 - 【請求項９】 前記活性剤が薬物である、請求項８に記載の組成物。
- 【請求項１０】 前記物質が、前記活性剤を含む粒子である、請求項８に記
載の組成物。 - 【請求項１１】 前記物質が薬物を含む遅延放出デバイスである、請求項８
に記載の組成物。 - 【請求項１２】 前記ペプチドが、前記物質に共有結合的に又は非共有結合
的に結合している、請求項８に記載の組成物。 - 【請求項１３】 活性剤を含む物質に結合しているキメラタンパク質を含む
組成物であって、前記キメラタンパク質が、第２のタンパク質のアミノ酸配列に
共有結合を経由して融合している、ＺＥｌａｎ１４４、ＺＥｌａｎ１４５又はＺ
Ｅｌａｎ１４６或いはそれらの結合部分からなる群から選択される配列を含み、
前記活性剤が哺乳動物の疾病又は疾患の治療に価値がある、前記組成物。 - 【請求項１４】 薬物を含む粒子に非共有結合的に結合している、請求項１
、２、３、４、５、６、又は７のペプチドを含む組成物。 - 【請求項１５】 薬物を含む粒子に共有結合的に結合している、請求項１、
２、３、４、５、６、又は７のペプチドを含む組成物。 - 【請求項１６】 ヒト又は動物の胃腸の組織を経由して活性剤の輸送を促進
する、請求項８に記載の組成物。 - 【請求項１７】 前記活性剤がヒト又は動物の選択された部位又は選択され
た組織を標的とする、請求項８に記載の組成物。 - 【請求項１８】 精製された請求項８に記載の組成物を対象に投与すること
を含む、活性剤をｉｎ ｖｉｖｏで運搬する方法。 - 【請求項１９】 精製された請求項１４に記載の組成物を患者に投与するこ
とを含む、薬物をｉｎ ｖｉｖｏで運搬する方法。 - 【請求項２０】 精製された請求項１５に記載の組成物を患者に投与するこ
とを含む、薬物をｉｎ ｖｉｖｏで運搬する方法。 - 【請求項２１】 前記投与が経口である、請求項１８に記載の方法。
- 【請求項２２】 前記活性剤が薬物である、請求項１８に記載の方法。
- 【請求項２３】 前記対象がヒトである、請求項１８に記載の方法。
- 【請求項２４】 前記対象がヒトである、請求項２１に記載の方法。
- 【請求項２５】 前記組成物が、ヒト又は動物の胃腸の組織を経由する前記
活性剤の輸送を促進する、請求項１８に記載の方法。 - 【請求項２６】 前記投与が経口である、請求項１９に記載の方法。
- 【請求項２７】 ヒトにｉｎ ｖｉｖｏで使用するために適した医薬的に受
容可能な担体中に請求項８に記載の組成物を含む医薬組成物。 - 【請求項２８】 請求項１ないし７のいずれか１項に記載のペプチドを、免
疫特異的に結合することが可能である抗体。 - 【請求項２９】 請求項２８に記載の抗体の断片を含む分子であって、前記
断片が前記ペプチドを免疫特異的に結合することが可能である、前記分子。 - 【請求項３０】 前記ペプチドの一つ又はそれ以上の機能的活性を示す、請
求項１、２又は３のペプチドの精製された誘導体。 - 【請求項３１】 前記ペプチドに対して指向された抗体によって結合される
ことが可能である、請求項３０に記載の誘導体。 - 【請求項３２】 前記ペプチドのドメインを含む、請求項２に記載のペプチ
ドの断片。 - 【請求項３３】 前記ペプチドのドメインを含む、請求項３に記載のペプチ
ドの断片。 - 【請求項３４】 請求項１ないし７のいずれか１項に記載のペプチド及び医
薬的に受容可能な担体を含む組成物の、治療的に有効な量を含む医薬組成物。 - 【請求項３５】 疾病又は疾患を治療又は予防する方法であって、このよう
な治療又は予防が望ましい対象に、治療的に有効な量の請求項８に記載の組成物
を投与することを含む、前記方法。 - 【請求項３６】 疾病又は疾患を治療又は予防する方法であって、このよう
な治療又は予防が望ましい対象に、治療的に有効な量の請求項１４に記載の組成
物を投与することを含む、前記方法。 - 【請求項３７】 疾病又は疾患を治療又は予防する方法であって、このよう
な治療又は予防が望ましい対象に、治療的に有効な量の請求項１５に記載の組成
物を投与することを含む、前記方法。 - 【請求項３８】 前記疾病又は疾患が、高血圧、糖尿病、骨粗鬆症、血友病
、貧血、癌、偏頭痛、及び狭心症からなる群から選択される、請求項３５に記載
の方法。 - 【請求項３９】 前記対象がヒトである、請求項３８に記載の方法。
- 【請求項４０】 請求項１、２、３、４、５、６、又は７のペプチドを含む
組成物であって、前記ペプチドがナノ又はミクロ粒子の表面に、被覆又は吸収或
いは共有結合されたペプチドである、前記組成物。 - 【請求項４１】 請求項１、２、３、４、５、６、又は７のペプチドから形
成された、ナノ又はミクロ粒子。 - 【請求項４２】 前記ナノ又はミクロ粒子が、薬物を充填した又は薬物をカ
プセル化したナノ又はミクロ粒子である、請求項４０に記載の組成物。 - 【請求項４３】 前記薬物が、インスリン又はロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏ
ｌｉｄｅ）である、請求項８に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10903898P | 1998-11-19 | 1998-11-19 | |
| US60/109,038 | 1998-11-19 | ||
| PCT/IE1999/000117 WO2000031123A2 (en) | 1998-11-19 | 1999-11-19 | Retro-inversion peptides that target gastro-intestinal tract transport receptors and use thereof |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002530429A true JP2002530429A (ja) | 2002-09-17 |
| JP2002530429A5 JP2002530429A5 (ja) | 2006-12-28 |
| JP4566406B2 JP4566406B2 (ja) | 2010-10-20 |
Family
ID=22325486
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000583950A Expired - Fee Related JP4566406B2 (ja) | 1998-11-19 | 1999-11-19 | Ｇｉｔ輸送受容体を標的とするレトロ反転ペプチド及び関連する方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
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| EP (1) | EP1131344B1 (ja) |
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| CA (1) | CA2349290A1 (ja) |
| DE (1) | DE69926531T2 (ja) |
| WO (1) | WO2000031123A2 (ja) |
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- 1999-11-19 CA CA002349290A patent/CA2349290A1/en not_active Abandoned
-
2009
- 2009-01-21 US US12/356,646 patent/US20090238886A1/en not_active Abandoned
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