JP2002528509A - オリゴヌクレオチドを用いるパーキンソン病の治療 - Google Patents
オリゴヌクレオチドを用いるパーキンソン病の治療Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、パーキンソン病の治療方法、ならびにパーキンソン病の脳において過剰作動することが知られている脳回路の機能を低下させるために標的化された脳構造中に導入されたアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは三重鎖オリゴヌクレオチドの使用に関する。アンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチドは内部淡そう球および／または黒漆網状部（ＳＮｒ）を標的とし、そこでグルタミン酸ダケルボキシラーゼ（ＧＡＤ６７、ＧＡＤ６５、または当該２つの形態の組み合わせ）がダウンレギュレーションされる。また本発明は、グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレーションのために治療上有効量のアンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡そう球および／または黒質網状部に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法にも関する。さらに本発明は、ＧＡＢＡ受容体のダウンレギュレーションのためにアンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチドが視床運動核に標的化されるパーキンソン病の治療方法にも関する。
Description
【０００１】 （関連出願の相互参照） 本出願は、1998年11月5日に出願された米国暫定特許出願第60/107,191号に基
づいて３５ Ｕ.Ｓ.Ｃ. §１０９の下に優先権を主張する。
づいて３５ Ｕ.Ｓ.Ｃ. §１０９の下に優先権を主張する。
【０００２】 （発明の分野） 本発明は、一般に、パーキンソン病の遺伝子療法の分野および治療方法、より
詳しくは、パーキンソン症候群患者の脳において過敏性であることが知られてい
る脳回路の機能を低下させるための特定の脳構造に導入されるアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドまたは三重鎖オリゴヌクレオチドの使用に関する。
詳しくは、パーキンソン症候群患者の脳において過敏性であることが知られてい
る脳回路の機能を低下させるための特定の脳構造に導入されるアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドまたは三重鎖オリゴヌクレオチドの使用に関する。
【０００３】 （発明の背景） 脳幹神経節の神経化学的回路における特定の異常がパーキンソン病を引き起こ
すことが知られている。ドーパミンニューロンが死ぬ（パーキンソン病の主要な
病状）と、線条（尾状核および被殻）に対するドーパミンの喪失が、線条から下
流に位置する他の脳核の神経活性の一連の変化を推進する。図１は、脳幹神経節
の正常な神経化学的回路を示す。
すことが知られている。ドーパミンニューロンが死ぬ（パーキンソン病の主要な
病状）と、線条（尾状核および被殻）に対するドーパミンの喪失が、線条から下
流に位置する他の脳核の神経活性の一連の変化を推進する。図１は、脳幹神経節
の正常な神経化学的回路を示す。
【０００４】 この問題点に対する現行の神経外科的アプローチは、淡蒼球切除術により内部
淡蒼球（ＧＰｉ）を破壊することまたは脳のこの領域の電気刺激用に電極を移植
することを包含する。これらの現行の神経外科的アプローチには、重要な不利益
がある。淡蒼球切除術は、永久的であり；損傷の精度に依存して重篤な副作用を
もたらすことがあり；ＧＰｉ ｅｎ経路を介して他の構造まで進む通路の線維の
破壊による痴呆および他の問題を引き起こすことがある。電気刺激法は、脳にお
ける電極の移植、および皮膚の下におけるコントロールボックスの移植を必要と
する。時間が経過すると、組織反応が生じ、これにより、電極が無能または機能
不全になる。さらにまた、慢性的な電気刺激は、組織に損傷を与えることがあり
、癲癇性焦点興奮が慢性的な電気刺激の結果として発生することがある。
淡蒼球（ＧＰｉ）を破壊することまたは脳のこの領域の電気刺激用に電極を移植
することを包含する。これらの現行の神経外科的アプローチには、重要な不利益
がある。淡蒼球切除術は、永久的であり；損傷の精度に依存して重篤な副作用を
もたらすことがあり；ＧＰｉ ｅｎ経路を介して他の構造まで進む通路の線維の
破壊による痴呆および他の問題を引き起こすことがある。電気刺激法は、脳にお
ける電極の移植、および皮膚の下におけるコントロールボックスの移植を必要と
する。時間が経過すると、組織反応が生じ、これにより、電極が無能または機能
不全になる。さらにまた、慢性的な電気刺激は、組織に損傷を与えることがあり
、癲癇性焦点興奮が慢性的な電気刺激の結果として発生することがある。
【０００５】 伝統的な薬物療法は、また、標的構造においてダウンレギュレートされること
が必要である神経化学物質が脳中に遍在しているという重大な不利益を有する。
これらの神経化学物質の阻害剤の全身投与は、発作、精神病、昏睡、および死さ
え引き起こすことがある。
が必要である神経化学物質が脳中に遍在しているという重大な不利益を有する。
これらの神経化学物質の阻害剤の全身投与は、発作、精神病、昏睡、および死さ
え引き起こすことがある。
【０００６】 本発明は、パーキンソン病の現行治療法の改良を表す多くの新しい特徴を有す
る。本発明において、分子神経外科を使用する。特定のアンチセンスまたは三重
鎖オリゴヌクレオチドの使用によるこのアプローチは、慣用的な神経外科的およ
び薬物療法的アプローチによりもたらされる問題をうまく回避する。以下にさら
に十分に記載する分子神経外科を介して、本発明は、選択的に、特定のグループ
のニューロンの機能状態を、近くにある他のニューロンの機能化を妨害せずに改
変する。この選択的アプローチは、特定の神経構造における神経化学物質へのオ
リゴヌクレオチドの適用を目標にすることにより可能になる。さらに正確には、
選択的ターゲティングは、遺伝子発現においてより長期間の変化を提供するため
にアンチセンスまたは三重鎖発現ベクターを導入することにより起こる。この方
法において、結果は、脳の静止におけるこれらの神経化学物質の正常な機能化を
妨害せずにパーキンソン症候群患者の脳における特定の神経回路の異常な機能化
を選択的に阻害することである。さらに、オリゴヌクレオチドの濃度または配列
を変更することにより、本発明は、異常な活性が標的回路において阻害される程
度を滴定することが可能になる。この滴定能は、確実に、該治療が異常な機能を
妨害するだけであり、望ましくない副作用を引き起こさないようにする。
る。本発明において、分子神経外科を使用する。特定のアンチセンスまたは三重
鎖オリゴヌクレオチドの使用によるこのアプローチは、慣用的な神経外科的およ
び薬物療法的アプローチによりもたらされる問題をうまく回避する。以下にさら
に十分に記載する分子神経外科を介して、本発明は、選択的に、特定のグループ
のニューロンの機能状態を、近くにある他のニューロンの機能化を妨害せずに改
変する。この選択的アプローチは、特定の神経構造における神経化学物質へのオ
リゴヌクレオチドの適用を目標にすることにより可能になる。さらに正確には、
選択的ターゲティングは、遺伝子発現においてより長期間の変化を提供するため
にアンチセンスまたは三重鎖発現ベクターを導入することにより起こる。この方
法において、結果は、脳の静止におけるこれらの神経化学物質の正常な機能化を
妨害せずにパーキンソン症候群患者の脳における特定の神経回路の異常な機能化
を選択的に阻害することである。さらに、オリゴヌクレオチドの濃度または配列
を変更することにより、本発明は、異常な活性が標的回路において阻害される程
度を滴定することが可能になる。この滴定能は、確実に、該治療が異常な機能を
妨害するだけであり、望ましくない副作用を引き起こさないようにする。
【０００７】 本発明はパーキンソン病の分子生物学的治療方法を用いる。本発明のアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドはホスホロチオエートヌクレオチドの短い配列であり、
研究室にて設計されたものである。これらのオリゴヌクレオチドは、リボソーム
におけるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の蛋白への翻訳をブロックする（図
２）。
ンスオリゴヌクレオチドはホスホロチオエートヌクレオチドの短い配列であり、
研究室にて設計されたものである。これらのオリゴヌクレオチドは、リボソーム
におけるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の蛋白への翻訳をブロックする（図
２）。
【０００８】 悪影響のある遺伝子の発現を防止または低下させるためのもう１つの方法は、
ＤＮＡの転写をブロックすることである。このアプローチもまた本発明において
用いられる。研究室にて設計されたオリゴヌクレオチドは三重鎖構造を形成し、
標的ＤＮＡｓ上の転写部位をブロックする。
ＤＮＡの転写をブロックすることである。このアプローチもまた本発明において
用いられる。研究室にて設計されたオリゴヌクレオチドは三重鎖構造を形成し、
標的ＤＮＡｓ上の転写部位をブロックする。
【０００９】 アンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチドは内部淡そう球および／または
黒質網状部（ＳＮｒ）に標的化され、そこでグルタミン酸デカルボキシラーゼ（
ＧＡＤ６７、ＧＡＤ６５、または当該２つのイソ形態の組み合わせ）の発現がダ
ウンレギュレーションされる。グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６７、
ＧＡＤ６５、または当該２つのイソ形態の組み合わせ）は、阻害性神経伝達物質
ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の生成のための合成酵素である。グルタミン酸デ
カルボキシラーゼのダウンレギュレーションの結果として、ＧＰｉおよびＳＮｒ
による異常に高いＧＡＢＡアウトプットの減少が起こり、パーキンソン病の徴候
が改善される。
黒質網状部（ＳＮｒ）に標的化され、そこでグルタミン酸デカルボキシラーゼ（
ＧＡＤ６７、ＧＡＤ６５、または当該２つのイソ形態の組み合わせ）の発現がダ
ウンレギュレーションされる。グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６７、
ＧＡＤ６５、または当該２つのイソ形態の組み合わせ）は、阻害性神経伝達物質
ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の生成のための合成酵素である。グルタミン酸デ
カルボキシラーゼのダウンレギュレーションの結果として、ＧＰｉおよびＳＮｒ
による異常に高いＧＡＢＡアウトプットの減少が起こり、パーキンソン病の徴候
が改善される。
【００１０】 本発明のアンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチド治療の他の標的は、Ｇ
ＰｉおよびＳＮｒ中のニューロン上のグルタミン酸受容体である。これらの受容
体の発現低下は、視床下部核（ＳＴＮ）からＧＰｉおよびＳＮｒへの発射により
放出されるグルタミン酸の増大したレベルに対するこれらのニューロンの応答を
鈍化させる（図３）。本発明のアンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチド治
療のもう１つの潜在的な標的は、ＧＰｉおよびＳＮｒからの過剰な阻害性インプ
ットを受け取る視床運動核中のニューロンに対するＧＡＢＡ受容体である。
ＰｉおよびＳＮｒ中のニューロン上のグルタミン酸受容体である。これらの受容
体の発現低下は、視床下部核（ＳＴＮ）からＧＰｉおよびＳＮｒへの発射により
放出されるグルタミン酸の増大したレベルに対するこれらのニューロンの応答を
鈍化させる（図３）。本発明のアンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチド治
療のもう１つの潜在的な標的は、ＧＰｉおよびＳＮｒからの過剰な阻害性インプ
ットを受け取る視床運動核中のニューロンに対するＧＡＢＡ受容体である。
【００１１】 まとめると、本発明は、合成酵素ＧＡＤをコードする転写物に指向されたアン
チセンスオリゴヌクレオチドを投与することにより行われるパーキンソン病の治
療であり、アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することにより非常に選択的
なＧＡＢＡのブロックが誘導されるものである。アンチセンスの作用は選択的で
あるが、それらは比較的寿命が短い。文献によれば、アンチセンスオリゴヌクレ
オチドでの治療を止めてから２〜３日で系が正常に戻る。典型的には、蛋白生成
に対する効果を示すためには、アンチセンスオリゴヌクレオチドを繰り返し、あ
るいは連続的輸液により投与する必要がある。結果として、本発明はＲＮＡ発現
ベクターを使用する。ＧＡＤ６５またはＧＡＤ６７に対するＲＮＡアンチセスを
生成するこれらの真核発現ベクターを必要な脳領域に注入してニューロンをトラ
ンスフェクションすると、細胞がＧＡＢＡ産生シグナルを受け取った場合にアン
チセンスが活性化され、ＧＡＢＡが生成されなくなる。
チセンスオリゴヌクレオチドを投与することにより行われるパーキンソン病の治
療であり、アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することにより非常に選択的
なＧＡＢＡのブロックが誘導されるものである。アンチセンスの作用は選択的で
あるが、それらは比較的寿命が短い。文献によれば、アンチセンスオリゴヌクレ
オチドでの治療を止めてから２〜３日で系が正常に戻る。典型的には、蛋白生成
に対する効果を示すためには、アンチセンスオリゴヌクレオチドを繰り返し、あ
るいは連続的輸液により投与する必要がある。結果として、本発明はＲＮＡ発現
ベクターを使用する。ＧＡＤ６５またはＧＡＤ６７に対するＲＮＡアンチセスを
生成するこれらの真核発現ベクターを必要な脳領域に注入してニューロンをトラ
ンスフェクションすると、細胞がＧＡＢＡ産生シグナルを受け取った場合にアン
チセンスが活性化され、ＧＡＢＡが生成されなくなる。
【００１２】発明の概要 したがって、グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレーションのた
めに治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与するこ
とを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供することが本発明
の１の目的である。
めに治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与するこ
とを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供することが本発明
の１の目的である。
【００１３】 イソ形態がＧＡＤ６５であるグルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュ
レーションのために治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状
部に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供す
ることが本発明のさらなる目的である。
レーションのために治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状
部に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供す
ることが本発明のさらなる目的である。
【００１４】 イソ形態がＧＡＤ６７であるグルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュ
レーションのために治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状
部に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供す
ることが本発明のさらなる目的である。
レーションのために治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状
部に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供す
ることが本発明のさらなる目的である。
【００１５】 イソ形態がＧＡＤ６７およびＧＡＤ６５の組み合わせであるグルタミン酸デカ
ルボキシラーゼのダウンレギュレーションのために治療上有効量のアンチセンス
オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与することを含む、哺乳動物におけるパー
キンソン病の治療方法を提供することが本発明のさらなる目的である。
ルボキシラーゼのダウンレギュレーションのために治療上有効量のアンチセンス
オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与することを含む、哺乳動物におけるパー
キンソン病の治療方法を提供することが本発明のさらなる目的である。
【００１６】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレーションのために治療上有
効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与することを含む、哺乳動物
におけるパーキンソン病の治療方法を提供することが本発明のもう１つの目的で
ある。
効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与することを含む、哺乳動物
におけるパーキンソン病の治療方法を提供することが本発明のもう１つの目的で
ある。
【００１７】 イソ形態がＧＡＤ６５であるグルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュ
レーションのために治療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投
与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供すること
が本発明のさらなる目的である。
レーションのために治療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投
与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供すること
が本発明のさらなる目的である。
【００１８】 イソ形態がＧＡＤ６７であるグルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュ
レーションのために治療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投
与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供すること
が本発明のさらなる目的である。
レーションのために治療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投
与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供すること
が本発明のさらなる目的である。
【００１９】 イソ形態がＧＡＤ６７およびＧＡＤ６５であるグルタミン酸デカルボキシラー
ゼのダウンレギュレーションのために治療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチド
を黒質網状部に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方
法を提供することが本発明のさらなる目的である。
ゼのダウンレギュレーションのために治療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチド
を黒質網状部に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方
法を提供することが本発明のさらなる目的である。
【００２０】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレーションのために治療上有
効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡そう球に投与することを含む、
哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供することが本発明の１の目的
である。
効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡そう球に投与することを含む、
哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供することが本発明の１の目的
である。
【００２１】 イソ形態がＧＡＤ６５であるグルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュ
レーションのために治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡そ
う球に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供
することが本発明のさらなる目的である。
レーションのために治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡そ
う球に投与することを含む、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療方法を提供
することが本発明のさらなる目的である。
【００２２】 本発明のさらなる目的は、グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレ
ーションのために治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に
投与する工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧ
ＡＤ６７である、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することで
ある。
ーションのために治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に
投与する工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧ
ＡＤ６７である、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することで
ある。
【００２３】 本発明のさらなる目的は、グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレ
ーションのために治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に
投与する工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧ
ＡＤ６７とＧＡＤ６５との組合せである、哺乳動物におけるパーキンソン病の処
置方法を提供することである。
ーションのために治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に
投与する工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧ
ＡＤ６７とＧＡＤ６５との組合せである、哺乳動物におけるパーキンソン病の処
置方法を提供することである。
【００２４】 本発明の別の目的は、グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレーシ
ョンのために治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与する工
程を包含する、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することであ
る。
ョンのために治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与する工
程を包含する、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することであ
る。
【００２５】 本発明のさらなる目的は、グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレ
ーションのために治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与す
る工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧＡＤ６ ５ である、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
ーションのために治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与す
る工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧＡＤ６ ５ である、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
【００２６】 本発明のさらなる目的は、グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレ
ーションのために治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与す
る工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧＡＤ６ ７ である、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
ーションのために治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与す
る工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧＡＤ６ ７ である、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
【００２７】 本発明のさらなる目的は、グルタミン酸デカルボキシラーゼのダウンレギュレ
ーションのために治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与す
る工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧＡＤ６ ７ とＧＡＤ６５との組合せである、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法
を提供することである。
ーションのために治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与す
る工程を包含し、グルタミン酸デカルボキシラーゼのアイソフォームがＧＡＤ６ ７ とＧＡＤ６５との組合せである、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法
を提供することである。
【００２８】 本発明の別の目的は、グルタミン酸受容体のダウンレギュレーションのために
治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与する工程を包
含する、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与する工程を包
含する、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
【００２９】 本発明の別の目的は、グルタミン酸受容体のダウンレギュレーションのために
治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与する工程を包含する
、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与する工程を包含する
、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
【００３０】 本発明の別の目的は、グルタミン酸受容体のダウンレギュレーションのために
治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与する工程を包
含する、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与する工程を包
含する、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
【００３１】 本発明の別の目的は、グルタミン酸受容体のダウンレギュレーションのために
治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与する工程を包含する
、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
治療有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与する工程を包含する
、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
【００３２】 本発明の別の目的は、ＧＡＢＡ受容体のダウンレギュレーションのために治療
有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを視床運動核に投与する工程を包含す
る、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを視床運動核に投与する工程を包含す
る、哺乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
【００３３】 本発明の別の目的は、ＧＡＢＡ受容体のダウンレギュレーションのために治療
有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを視床運動核に投与する工程を包含する、哺
乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを視床運動核に投与する工程を包含する、哺
乳動物におけるパーキンソン病の処置方法を提供することである。
【００３４】
【００３５】 詳細な説明 オリゴデオキシヌクレオチド ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドをBiosynthesis Inc., Lewisville, T
Xによって合成した。最初の実施可能性研究をラットにおいて実施したので、最
初に生成したアンチセンスオリゴヌクレオチドはラットＧＡＤ配列に対するもの
であった。ラットＧＡＤ６７アンチセンスを生成するために使用した配列は5'TG
GAAGATGCCATCAGCTCGG3'（配列番号１）であった。ラットＧＡＤ６５アンチセン
スを生成するために使用した配列は5'CCGGAGATGCCATGGGTTCTG3'（配列番号２）
であった。ヒトＧＡＤ６５を生成するために使用した配列は5'CCGGAGATGCCATCGG
CTTTG'（配列番号３）であった。ヒトＧＡＤ６７を生成するために使用した配列
は5'TCGAAGACGCCATCAGCTCGG3'（配列番号４）であった。サル（Saimiri sciureu
s）研究用に使用したアンチセンス配列はGAD67: 5'-GAAGATGGGGTCGAAGACGC-3'（
配列番号５）であった。サルおよびラットＧＡＤ６７研究用のコントロールオリ
ゴヌクレオチドはサルＧＡＤ６７アンチセンス配列のスクランブルしたヌクレオ
チド配列であった：5'-TAGGAGCAGACTGAGAGGGCG-3'（配列番号６）。
Xによって合成した。最初の実施可能性研究をラットにおいて実施したので、最
初に生成したアンチセンスオリゴヌクレオチドはラットＧＡＤ配列に対するもの
であった。ラットＧＡＤ６７アンチセンスを生成するために使用した配列は5'TG
GAAGATGCCATCAGCTCGG3'（配列番号１）であった。ラットＧＡＤ６５アンチセン
スを生成するために使用した配列は5'CCGGAGATGCCATGGGTTCTG3'（配列番号２）
であった。ヒトＧＡＤ６５を生成するために使用した配列は5'CCGGAGATGCCATCGG
CTTTG'（配列番号３）であった。ヒトＧＡＤ６７を生成するために使用した配列
は5'TCGAAGACGCCATCAGCTCGG3'（配列番号４）であった。サル（Saimiri sciureu
s）研究用に使用したアンチセンス配列はGAD67: 5'-GAAGATGGGGTCGAAGACGC-3'（
配列番号５）であった。サルおよびラットＧＡＤ６７研究用のコントロールオリ
ゴヌクレオチドはサルＧＡＤ６７アンチセンス配列のスクランブルしたヌクレオ
チド配列であった：5'-TAGGAGCAGACTGAGAGGGCG-3'（配列番号６）。
【００３６】 これらの配列は適当な遺伝子名についてのＧｅｎｂａｎｋ検索によって得られ
た。バイオテクノロジー情報国立センター（National Center for Biotechnolog
y Information）のワールドワイドウェブサイト（http://www.ncbi.nlm.nih.gov
/cgi-bin/gorf/orfig）でオープンリーディングフレーム ファインダープログ
ラムを用いて、これらの配列を分析した。翻訳開始部位が見出され、開始トリプ
レットに対し、８塩基５’から１３塩基３’（−８かた＋１３）にわたる領域に
相補的な２１塩基アンチセンス分子を選択した。これらの２１塩基オリゴヌクレ
オチドを、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ サーバー（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/cg
i-bin/BLAST）他の遺伝子との交叉反応性について分析した。 この検索の結果は、該オリゴは、それらが反対に対向する遺伝子とのみ相同で
あることをしめした。ＢＬＡＳＴアルゴリズムに基づけば、ラットアンチセンス
分子はラット（Rattus noevegicus）およびマウス（mus musculus）のＧＡＤ
ＲＮＡと反応しうる。さらなるＧＡＤ６７マニュアル分析により、翻訳開始部位
周辺のｍＲＮＡレベルでの、ラット、ブタ（Sus scrofa）およびヒト（Homo sap
ien）の間の９０．５％の配列同一性が明らかになった。ＧＡＤ６５配列のマニ
ュアル分析は翻訳開始部位周辺のヒトＧＡＤ６５との８５．７％の同一性をしめ
す。ＢＬＡＳＴアルゴリズムに基づけば、ヒトＧＡＤ６５アンチセンス分子はヒ
トＧＡＤ−２ ｍＲＮＡ（ヒト膵臓で見出されたグルタミン酸デカルボキシラー
ゼ遺伝子）およびヒトＧＡＤ６５と反応しうる。ヒトＧＡＤ６７アンチセンス分
子はヒトＧＡＤ６７（ヒト脳および膵臓の両方でアイソフォーム）およびブタお
よびネコ（Felis cattus）両方由来のＧＡＤ６５と反応しうる。 ラットＧＡＤ６７アンチセンス（配列番号：１）は２３．８％アデノシン、２
３．８％シトシン、３３．３％グアニン、および１９．０％チミンから構成され
る。ラットＧＡＤ６５アンチセンス（配列番号：２）は１４．３％アデノシン、
２３．８％シトシン、３８．１％グアニン、および２３．８％チミンから構成さ
れる。ヒトＧＡＤ６７アンチセンス（配列番号：４）は２３．８％アデノシン、
３３．３％シトシン、２８．６％グアニン、および１４．３％チミンから構成さ
れる。ヒトＧＡＤ６５アンチセンス（配列番号：３）は１４．３％アデノシン、
２８．６％シトシン、３３．３％グアニン、および２３．８％チミンから構成さ
れる。対照実験に用いたミスセンス分子は、アンチセンス分子の塩基順序のスク
ランブリングによって設計した。ＧＡＤ６７研究用のこの対照オリゴヌクレオチ
ドは、サル（Saimiri sciureus）ＧＡＤ６７アンチセンス配列：５’−ＴＡＧＧ
ＡＧＣＡＧＡＣＴＧＡＧＡＧＧＧＣＧ−３’（配列番号：６）のスクランブルさ
れたヌクレオチド配列であった。該ミスセンスはアンチセンスと同じ割合の各ヌ
クレオチドを有するが、配列は異なる。ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴサーバーを用いて
ミスセンスオリゴヌクレオチドを分析した。この分析の結果は、いかなる既知の
遺伝子とも検出可能な相同性がないことを示す。 アンチセンスオリゴヌクレオチドを滅菌人工脳脊髄液（１２４ｍＭ ＮａＣｌ
、１ｍＭ ＫＣｌ、２．４ｍＭ ＣａＣｌ２、２６ｍＭ ＮａＨＣＯ３、１．２
４ ＮａＨ２ＰＯ４、２ｍＭ Ｄ−グルコース、および１．３ｍＭ ＭｇＳＯ４ ）に溶解し、最終濃度を４３．１μＭにした。その結果は、２週間にわたる、２
１．５μＭ／ｈｒの注入となった。
た。バイオテクノロジー情報国立センター（National Center for Biotechnolog
y Information）のワールドワイドウェブサイト（http://www.ncbi.nlm.nih.gov
/cgi-bin/gorf/orfig）でオープンリーディングフレーム ファインダープログ
ラムを用いて、これらの配列を分析した。翻訳開始部位が見出され、開始トリプ
レットに対し、８塩基５’から１３塩基３’（−８かた＋１３）にわたる領域に
相補的な２１塩基アンチセンス分子を選択した。これらの２１塩基オリゴヌクレ
オチドを、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ サーバー（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/cg
i-bin/BLAST）他の遺伝子との交叉反応性について分析した。 この検索の結果は、該オリゴは、それらが反対に対向する遺伝子とのみ相同で
あることをしめした。ＢＬＡＳＴアルゴリズムに基づけば、ラットアンチセンス
分子はラット（Rattus noevegicus）およびマウス（mus musculus）のＧＡＤ
ＲＮＡと反応しうる。さらなるＧＡＤ６７マニュアル分析により、翻訳開始部位
周辺のｍＲＮＡレベルでの、ラット、ブタ（Sus scrofa）およびヒト（Homo sap
ien）の間の９０．５％の配列同一性が明らかになった。ＧＡＤ６５配列のマニ
ュアル分析は翻訳開始部位周辺のヒトＧＡＤ６５との８５．７％の同一性をしめ
す。ＢＬＡＳＴアルゴリズムに基づけば、ヒトＧＡＤ６５アンチセンス分子はヒ
トＧＡＤ−２ ｍＲＮＡ（ヒト膵臓で見出されたグルタミン酸デカルボキシラー
ゼ遺伝子）およびヒトＧＡＤ６５と反応しうる。ヒトＧＡＤ６７アンチセンス分
子はヒトＧＡＤ６７（ヒト脳および膵臓の両方でアイソフォーム）およびブタお
よびネコ（Felis cattus）両方由来のＧＡＤ６５と反応しうる。 ラットＧＡＤ６７アンチセンス（配列番号：１）は２３．８％アデノシン、２
３．８％シトシン、３３．３％グアニン、および１９．０％チミンから構成され
る。ラットＧＡＤ６５アンチセンス（配列番号：２）は１４．３％アデノシン、
２３．８％シトシン、３８．１％グアニン、および２３．８％チミンから構成さ
れる。ヒトＧＡＤ６７アンチセンス（配列番号：４）は２３．８％アデノシン、
３３．３％シトシン、２８．６％グアニン、および１４．３％チミンから構成さ
れる。ヒトＧＡＤ６５アンチセンス（配列番号：３）は１４．３％アデノシン、
２８．６％シトシン、３３．３％グアニン、および２３．８％チミンから構成さ
れる。対照実験に用いたミスセンス分子は、アンチセンス分子の塩基順序のスク
ランブリングによって設計した。ＧＡＤ６７研究用のこの対照オリゴヌクレオチ
ドは、サル（Saimiri sciureus）ＧＡＤ６７アンチセンス配列：５’−ＴＡＧＧ
ＡＧＣＡＧＡＣＴＧＡＧＡＧＧＧＣＧ−３’（配列番号：６）のスクランブルさ
れたヌクレオチド配列であった。該ミスセンスはアンチセンスと同じ割合の各ヌ
クレオチドを有するが、配列は異なる。ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴサーバーを用いて
ミスセンスオリゴヌクレオチドを分析した。この分析の結果は、いかなる既知の
遺伝子とも検出可能な相同性がないことを示す。 アンチセンスオリゴヌクレオチドを滅菌人工脳脊髄液（１２４ｍＭ ＮａＣｌ
、１ｍＭ ＫＣｌ、２．４ｍＭ ＣａＣｌ２、２６ｍＭ ＮａＨＣＯ３、１．２
４ ＮａＨ２ＰＯ４、２ｍＭ Ｄ−グルコース、および１．３ｍＭ ＭｇＳＯ４ ）に溶解し、最終濃度を４３．１μＭにした。その結果は、２週間にわたる、２
１．５μＭ／ｈｒの注入となった。
【００３７】 動物 最初の実験を雄性Sprague Dawleyラット（２２６〜２５０ｇ）で実施した。動
物をペントバービタルナトリウムで麻酔し、標準定位固定フレームに置いた。神
経毒 ６−ヒドロクシドーパミン−臭化水素（６−ＯＨＤＡ−ＨＢｒ）を用いて
黒質線条体ドーパミン系の片側性障害を与えた。１．４ｍＭアスコルビン酸を含
有する０．９％ ＮａＣｌ中の８ｍＭ ６−ＯＨＤＡ−ＨＢｒの脳の片側の黒質
緻密層（ＳＮｃ）への２回の注入を行った。注入の１回はＳＮｃの中央へ、もう
１回はＳＮｃの側方へ行った。破壊の４週間後、ドーパミンアゴニスト アポモ
ルヒネを用いる注入後の回転非対称性についてラットを評価した。破壊側から離
れた方向におけるアポモルヒネ誘導回転は、ラットにおける実験的誘導パーキソ
ニズムの標準的な測定である。アポモルヒネ誘導回転を減衰させる医薬の効力は
抗パーキンソン有効性の一般に認められた測定である。完全な３６０°の回転の
数を５分間、合計１時間の観察期間で計数した。１分間あたり平均５回以上のラ
ット回転は、少なくとも９０％の黒質線条体ドーパミン系が破壊されていると考
えられる。より回転が少ない動物はドーパミン系のダメージの度合いが少ない。
物をペントバービタルナトリウムで麻酔し、標準定位固定フレームに置いた。神
経毒 ６−ヒドロクシドーパミン−臭化水素（６−ＯＨＤＡ−ＨＢｒ）を用いて
黒質線条体ドーパミン系の片側性障害を与えた。１．４ｍＭアスコルビン酸を含
有する０．９％ ＮａＣｌ中の８ｍＭ ６−ＯＨＤＡ−ＨＢｒの脳の片側の黒質
緻密層（ＳＮｃ）への２回の注入を行った。注入の１回はＳＮｃの中央へ、もう
１回はＳＮｃの側方へ行った。破壊の４週間後、ドーパミンアゴニスト アポモ
ルヒネを用いる注入後の回転非対称性についてラットを評価した。破壊側から離
れた方向におけるアポモルヒネ誘導回転は、ラットにおける実験的誘導パーキソ
ニズムの標準的な測定である。アポモルヒネ誘導回転を減衰させる医薬の効力は
抗パーキンソン有効性の一般に認められた測定である。完全な３６０°の回転の
数を５分間、合計１時間の観察期間で計数した。１分間あたり平均５回以上のラ
ット回転は、少なくとも９０％の黒質線条体ドーパミン系が破壊されていると考
えられる。より回転が少ない動物はドーパミン系のダメージの度合いが少ない。
【００３８】 アンチセンス処理 一旦、動物がアポモルヒネ投与に応じて病変に誘導されるローテーションを有
することが示されると、それらを無作為にアンチセンス処理または虚偽の注入を
受けるように割り当てた。アンチセンスはAlzet model 2002 mini asmoticポン
プ（Alza Corp. Palo Alto, CA）およびPlastics One Inc（Roanoke, VA）によ
って製造された３２ゲージの注文製のカニューレ（軸受台より下９．５ｍｍ）を
介してデリバリーされた。これらのポンプは、１４日間、約０．５μＬ／時間の
速度で汲み上げるように設計されている。これは、７，２４１ピコモルの全アン
チセンス注入をもたらす。ポンプおよびカニューレは、製造者の指示にしたがっ
て準備された。簡単に言うと、ポンプは滅菌条件下で２５０マイクロリットルの
ラットＧＡＤ６７アンチセンス（配列番号１）または対照またはミスセンス（配
列番号６）ビヒクル溶液のいずれかで満たされた。流速調節器、脳注入用のカニ
ューレおよび４ｍｍの連結管を連結し、ポンプに取り付けた。次いで、ポンプ組
み立て品を滅菌セーライン中、３７℃で一晩呼び水を差した。次の日、ポンプを
動物中に差し込んだ。
することが示されると、それらを無作為にアンチセンス処理または虚偽の注入を
受けるように割り当てた。アンチセンスはAlzet model 2002 mini asmoticポン
プ（Alza Corp. Palo Alto, CA）およびPlastics One Inc（Roanoke, VA）によ
って製造された３２ゲージの注文製のカニューレ（軸受台より下９．５ｍｍ）を
介してデリバリーされた。これらのポンプは、１４日間、約０．５μＬ／時間の
速度で汲み上げるように設計されている。これは、７，２４１ピコモルの全アン
チセンス注入をもたらす。ポンプおよびカニューレは、製造者の指示にしたがっ
て準備された。簡単に言うと、ポンプは滅菌条件下で２５０マイクロリットルの
ラットＧＡＤ６７アンチセンス（配列番号１）または対照またはミスセンス（配
列番号６）ビヒクル溶液のいずれかで満たされた。流速調節器、脳注入用のカニ
ューレおよび４ｍｍの連結管を連結し、ポンプに取り付けた。次いで、ポンプ組
み立て品を滅菌セーライン中、３７℃で一晩呼び水を差した。次の日、ポンプを
動物中に差し込んだ。
【００３９】 ポンプの差し込みのために、ペントバルビタールナトリウムでラットに麻酔を
かけ、恒温ブランケット上の標準的な定位装置中に置いた。中心温度は３７℃に
維持した。いくつかの動物において、脳注入カニューレを内部脚核(entopeduncu
lar nucleus)の真上に差し込んだ（全身麻酔のげっ歯類類似体、PaxinosおよびW
atsonの図解書にしたがって、ブレグマの後ろ２．３ｍｍ、中線に対して側部２
．５ｍｍおよび頭蓋表面の下７．７ｍｍ）。他の動物は、黒質網状部の真上（Pa
xinosおよびWatsonの図解書にしたがって、ブレグマの後ろ５．３ｍｍ、中線に
対して側部２．５ｍｍおよび頭蓋表面の下８．２ｍｍ）に差し込まれた脳注入カ
ニューレを有した。基底核の２つの主要なアウトプット範囲を示すので、これら
の２つの標的が選択された。これらの脳領域におけるＧＡＢＡ含有ニューロンの
過剰活性は、最もパーキンソン症候群の発現の原因でありそうである。カニュー
レは、歯科用アクリル樹脂を用いて適所に固定された。全動物は、背中の肩甲骨
の間に位置する皮下ポケット中に置かれたAlzetポンプを有した。頭皮の創傷は
、Autoclip創傷クリップで閉じ、意識が回復するまでラットを温かく維持した。
かけ、恒温ブランケット上の標準的な定位装置中に置いた。中心温度は３７℃に
維持した。いくつかの動物において、脳注入カニューレを内部脚核(entopeduncu
lar nucleus)の真上に差し込んだ（全身麻酔のげっ歯類類似体、PaxinosおよびW
atsonの図解書にしたがって、ブレグマの後ろ２．３ｍｍ、中線に対して側部２
．５ｍｍおよび頭蓋表面の下７．７ｍｍ）。他の動物は、黒質網状部の真上（Pa
xinosおよびWatsonの図解書にしたがって、ブレグマの後ろ５．３ｍｍ、中線に
対して側部２．５ｍｍおよび頭蓋表面の下８．２ｍｍ）に差し込まれた脳注入カ
ニューレを有した。基底核の２つの主要なアウトプット範囲を示すので、これら
の２つの標的が選択された。これらの脳領域におけるＧＡＢＡ含有ニューロンの
過剰活性は、最もパーキンソン症候群の発現の原因でありそうである。カニュー
レは、歯科用アクリル樹脂を用いて適所に固定された。全動物は、背中の肩甲骨
の間に位置する皮下ポケット中に置かれたAlzetポンプを有した。頭皮の創傷は
、Autoclip創傷クリップで閉じ、意識が回復するまでラットを温かく維持した。
【００４０】 ラットを再び、浸透性ポンプ埋め込みの７および１４日後にアポモルヒネ誘導
ローテーションに関して試験した。ポンプ埋め込みの１５〜１７日後、動物を断
頭によって殺し、直ちに、分析用に脳を取り出した。脳を取り出し、免疫組織化
学用にドライアイス上で急速冷凍するか、またはＧＡＢＡ含量のＨＰＬＣ分析用
に顕微解剖した。
ローテーションに関して試験した。ポンプ埋め込みの１５〜１７日後、動物を断
頭によって殺し、直ちに、分析用に脳を取り出した。脳を取り出し、免疫組織化
学用にドライアイス上で急速冷凍するか、またはＧＡＢＡ含量のＨＰＬＣ分析用
に顕微解剖した。
【００４１】 ９匹のラットにアンチセンスオリゴヌクレオチドの単一注射を行う付加的なア
ンチセンス実験を行った。これらの９匹のラットは、上記のように、６−ＯＨＤ
Ａで障害を起こさせた。障害を起こさせた約３〜４週後、上記のように、ラット
をアポモルヒネ誘導ローテーション非対称について試験した。一旦、正のローテ
ーション応答によって病変の無欠性が確認されると、動物に内部脚核上にある脳
に位置を定めたガイドカニューレを差し込んだ。外科手術からの回復の週の間に
、ローテーション非対称を再び評価して、ベースライン応答を再確立した。次い
で、イソフルオラン／酸素混合物を用いてラットに軽く麻酔をかけ、ガイドカニ
ューレによって挿入された注入カニューレを介してＧＡＤ６７に対するアンチセ
ンスオリゴヌクレオチド（配列番号１）をゆっくりと内部脚核に注入した。各注
入は、０．５μｌ中２５０ｎｇのアンチセンスを含有した。
ンチセンス実験を行った。これらの９匹のラットは、上記のように、６−ＯＨＤ
Ａで障害を起こさせた。障害を起こさせた約３〜４週後、上記のように、ラット
をアポモルヒネ誘導ローテーション非対称について試験した。一旦、正のローテ
ーション応答によって病変の無欠性が確認されると、動物に内部脚核上にある脳
に位置を定めたガイドカニューレを差し込んだ。外科手術からの回復の週の間に
、ローテーション非対称を再び評価して、ベースライン応答を再確立した。次い
で、イソフルオラン／酸素混合物を用いてラットに軽く麻酔をかけ、ガイドカニ
ューレによって挿入された注入カニューレを介してＧＡＤ６７に対するアンチセ
ンスオリゴヌクレオチド（配列番号１）をゆっくりと内部脚核に注入した。各注
入は、０．５μｌ中２５０ｎｇのアンチセンスを含有した。
【００４２】 ３匹のリスザル（１匹が雄、２匹が雌）を該予備的研究に用いた。全動物は、
自動のドップラーに基づく活性モニタリングシステムを用いて、観察ケージ中に
おいて総体的な活性測定値が記録された。活性測定は、最初、動物が正常な場合
に記録された。少なくとも３〜５活性セッションが記録され、各々、少なくとも
２〜３時間続いた。次いで、神経毒ＭＰＴＰ（１．５〜２．５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．
ｍ．）の数回の投与によって動物をパーキンソン症候群にした。動物が安定なパ
ーキンソン症候群を発症するまで、毒を投与した。動物は、アンチセンス処理前
に少なくとも６ヶ月間、安定なパーキンソン症候群であった。アンチセンス投与
の調製において、動物に淡そう球の内部セグメント上に左右対称に位置するデュ
アルカニューレを差し込んだ。手術後、活性測定値を再度記録して、ベースライ
ン活性測定値の変動がないことを確認した。外科手術から少なくとも１週間の回
復期間をおいた後、サルを霊長類用イスに固定し、移植されたガイトガニューレ
を介して挿入された内部カニューレを通してアンチセンスオリゴヌクレオチドを
内部淡そう球部位中に輸液した。各実験につき、ＧＡＤ６７（配列番号：５）オ
リゴヌクレオチドを滅菌人工脳脊髄液（ＣＳＦ）で希釈した。脳の各側上の各部
位に２５０ｎｇを注入して５００ｎｇの全注入を行った。注入体積は１．０μｌ
ないし２．０μｌとした。アンチセンスの投与後、動物をケージに戻し、活動度
モニタリングを２４ないし４８時間後に開始し、その後２〜３週間にわたり種々
の時点において記録した。アンチセンスに関する研究を行った後、アンチセンス
オリゴヌクレオチドの配列をかき集めたミスセンスオリゴヌクレオチドを用いて
同じ手順を繰り返した。アンチセンスを用いる研究とちょうど同じようにしてミ
スセンスオリゴヌクレオチド（配列番号：５）を用いる研究を行った。
自動のドップラーに基づく活性モニタリングシステムを用いて、観察ケージ中に
おいて総体的な活性測定値が記録された。活性測定は、最初、動物が正常な場合
に記録された。少なくとも３〜５活性セッションが記録され、各々、少なくとも
２〜３時間続いた。次いで、神経毒ＭＰＴＰ（１．５〜２．５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．
ｍ．）の数回の投与によって動物をパーキンソン症候群にした。動物が安定なパ
ーキンソン症候群を発症するまで、毒を投与した。動物は、アンチセンス処理前
に少なくとも６ヶ月間、安定なパーキンソン症候群であった。アンチセンス投与
の調製において、動物に淡そう球の内部セグメント上に左右対称に位置するデュ
アルカニューレを差し込んだ。手術後、活性測定値を再度記録して、ベースライ
ン活性測定値の変動がないことを確認した。外科手術から少なくとも１週間の回
復期間をおいた後、サルを霊長類用イスに固定し、移植されたガイトガニューレ
を介して挿入された内部カニューレを通してアンチセンスオリゴヌクレオチドを
内部淡そう球部位中に輸液した。各実験につき、ＧＡＤ６７（配列番号：５）オ
リゴヌクレオチドを滅菌人工脳脊髄液（ＣＳＦ）で希釈した。脳の各側上の各部
位に２５０ｎｇを注入して５００ｎｇの全注入を行った。注入体積は１．０μｌ
ないし２．０μｌとした。アンチセンスの投与後、動物をケージに戻し、活動度
モニタリングを２４ないし４８時間後に開始し、その後２〜３週間にわたり種々
の時点において記録した。アンチセンスに関する研究を行った後、アンチセンス
オリゴヌクレオチドの配列をかき集めたミスセンスオリゴヌクレオチドを用いて
同じ手順を繰り返した。アンチセンスを用いる研究とちょうど同じようにしてミ
スセンスオリゴヌクレオチド（配列番号：５）を用いる研究を行った。
【００４３】 結果 ＧＡＤ６７アンチセンス（配列番号１）を淡蒼球に移植した正常なラットにお
いて、ＨＰＬＣ分析により、対側性の未処理半球体と比較した場合に、２週間の
内部脚核へのアンチセンスの注入がＧＡＢＡレベルで平均６５％の低下をもたら
すことがわかった。
いて、ＨＰＬＣ分析により、対側性の未処理半球体と比較した場合に、２週間の
内部脚核へのアンチセンスの注入がＧＡＢＡレベルで平均６５％の低下をもたら
すことがわかった。
【００４４】 ＧＡＤ６７アンチセンス（配列番号１）を内部脚核上に注いだラットは、アポ
モルフィン誘発の回転数を平均５２％まで減少させた。ＧＡＤ６７アンチセンス
（配列番号１）を黒質網状部（ＳＮｒ）上に注いだラットはアポモルフィン誘発
の回転数を平均３１％まで減少させた。両方の群の動物からの回転非対称におい
て組み合わせた改良は約３９％である。図４はこれらの結果を示すグラフである
。外科用コオーディネートの変化はＳＮｒアンチセンス注入に対する応答を改良
することができる。両方の構造物への同時注入もまた、その応答を改良すること
ができる。比較において、疑似注入物を投与したラットは同じ時間で２３％のア
ポモルフィン誘発の回転数の増加を示した。
モルフィン誘発の回転数を平均５２％まで減少させた。ＧＡＤ６７アンチセンス
（配列番号１）を黒質網状部（ＳＮｒ）上に注いだラットはアポモルフィン誘発
の回転数を平均３１％まで減少させた。両方の群の動物からの回転非対称におい
て組み合わせた改良は約３９％である。図４はこれらの結果を示すグラフである
。外科用コオーディネートの変化はＳＮｒアンチセンス注入に対する応答を改良
することができる。両方の構造物への同時注入もまた、その応答を改良すること
ができる。比較において、疑似注入物を投与したラットは同じ時間で２３％のア
ポモルフィン誘発の回転数の増加を示した。
【００４５】 単一注射法を受けたラットでは、注入後２４時間で測定した場合、アポモルフ
ィン誘発の回転数が平均３４％まで減少した。注入後６日までに、回転数はプレ
アンチセンスレベルより５％高かった。同じラットにスクランブルドオリゴヌク
レオチド（配列番号６）の注入物を投与し、これらの動物は対照物を注入した後
、２４時間および６日の各々でアポモルフィン誘発の回転にて２５％増および３
８％増を示した。 これらのデータは、可能性のある新規な抗パーキンソン治療薬の効能をスクリ
ーニングするために許容されるモデルにて、パーキンソン症の徴候を減少させる
手段としてこの治療薬の実行可能性および効能を示すものである。
ィン誘発の回転数が平均３４％まで減少した。注入後６日までに、回転数はプレ
アンチセンスレベルより５％高かった。同じラットにスクランブルドオリゴヌク
レオチド（配列番号６）の注入物を投与し、これらの動物は対照物を注入した後
、２４時間および６日の各々でアポモルフィン誘発の回転にて２５％増および３
８％増を示した。 これらのデータは、可能性のある新規な抗パーキンソン治療薬の効能をスクリ
ーニングするために許容されるモデルにて、パーキンソン症の徴候を減少させる
手段としてこの治療薬の実行可能性および効能を示すものである。
【００４６】 サルのパイロット実験の結果は、タイムコースおよび効果の大きさが３匹の動
物でわずかに異なるが、すべての動物は、アンチセンス（配列番号５）治療を行
うが、ミスセンスオリゴヌクレオチド（配列番号６）治療を行わないで、自発的
な活性（無運動および運動緩慢の減少）の増加を示した。個々の動物の違いは、
注射用カニューレの位置のわずかな違いならびにパーキンソン病の程度および自
発活性のレベルの個々の違いによるものである。これらのヒト以外の霊長類実験
は該療法がパーキンソン病の主たる徴候に対して潜在的な有効な効果を有すると
いう原理を示すものである。
物でわずかに異なるが、すべての動物は、アンチセンス（配列番号５）治療を行
うが、ミスセンスオリゴヌクレオチド（配列番号６）治療を行わないで、自発的
な活性（無運動および運動緩慢の減少）の増加を示した。個々の動物の違いは、
注射用カニューレの位置のわずかな違いならびにパーキンソン病の程度および自
発活性のレベルの個々の違いによるものである。これらのヒト以外の霊長類実験
は該療法がパーキンソン病の主たる徴候に対して潜在的な有効な効果を有すると
いう原理を示すものである。
【配列表】
【図１】 脳の基底核の神経化学回路における正常直接および間接ドーパミ
ン効果のダイアグラム。
ン効果のダイアグラム。
【図２】 いかにしてアンチセンスオリゴヌクレオチドが、相補的グルタミ
ン酸デカルボキシラーゼｍＲＮＡにハイブリダイズすることによってタンパク質
翻訳をブロックできるかの模式図。アンチセンスオリゴヌクレオチドは相補的標
的ｍＲＮＡにハイブリダイズし、タンパク質翻訳のブロックを引き起こす。
ン酸デカルボキシラーゼｍＲＮＡにハイブリダイズすることによってタンパク質
翻訳をブロックできるかの模式図。アンチセンスオリゴヌクレオチドは相補的標
的ｍＲＮＡにハイブリダイズし、タンパク質翻訳のブロックを引き起こす。
【図３】 パーキンソン病の脳においてドーパミン損失が生じた場合の、脳
の基底核の神経化学回路の異常のダイアグラム。
の基底核の神経化学回路の異常のダイアグラム。
【図４】 実験的に誘発したパーキンソン病を有する、ＧＡＤ６７輸液動物
の、アポモルフィン誘導回転の減少の割合を示す棒グラフ。
の、アポモルフィン誘導回転の減少の割合を示す棒グラフ。
【図５】 実験的に誘発したパーキンソン病を有する、ＧＡＤ６７輸液動物
の、処置前後の活動の相対的変化を示す棒グラフ。
の、処置前後の活動の相対的変化を示す棒グラフ。
【図６】 実験的に誘発したパーキンソン病を有する、ＧＡＤ６７輸液動物
の、処置前後の活動の相対的変化を示す棒グラフ。
の、処置前後の活動の相対的変化を示す棒グラフ。
【図７】 実験的に誘発したパーキンソン病を有する、ＧＡＤ６７輸液動物
の、処置前後の活動の相対的変化を示す棒グラフ。
の、処置前後の活動の相対的変化を示す棒グラフ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA01 CA01 HA17 4C084 AA13 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA04 MA55 NA14 ZA02
Claims (22)
- 【請求項１】 グルタミン酸デカルボキシラーゼをダウンレギュレートする
ために、治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与す
ることを特徴とする、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項２】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ６ ５ である、請求項１記載の方法。
- 【請求項３】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ６ ７ である、請求項１記載の方法。
- 【請求項４】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ６ ５ とＧＡＤ６７の組み合わせである、請求項１記載の方法。
- 【請求項５】 グルタミン酸デカルボキシラーゼをダウンレギュレートする
ために、治療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与すること
を特徴とする、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項６】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ６ ５ である、請求項５記載の方法。
- 【請求項７】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ６ ７ である、請求項５記載の方法。
- 【請求項８】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ６ ５ およびＧＡＤ６７である、請求項５記載の方法。
- 【請求項９】 グルタミン酸デカルボキシラーゼをダウンレギュレートする
ために、治療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与す
ることを特徴とする、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項１０】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ ６５ である、請求項９記載の方法。
- 【請求項１１】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ ６７ である、請求項９記載の方法。
- 【請求項１２】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ ６５ およびＧＡＤ６７である、請求項９記載の方法。
- 【請求項１３】 グルタミン酸デカルボキシラーゼをダウンレギュレートす
るために、治療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与するこ
とを特徴とする、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項１４】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ ６５ である、請求項１３記載の方法。
- 【請求項１５】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ ６７ である、請求項１３記載の方法。
- 【請求項１６】 グルタミン酸デカルボキシラーゼのイソフォームがＧＡＤ ６５ およびＧＡＤ６７である、請求項１３記載の方法。
- 【請求項１７】 グルタメート受容体をダウンレギュレートするために、治
療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与することを特
徴とする、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項１８】 グルタメート受容体をダウンレギュレートするために、治
療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを黒質網状部に投与することを特徴とす
る、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項１９】 グルタメート受容体をダウンレギュレートするために、治
療上有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与することを特
徴とする、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項２０】 グルタメート受容体をダウンレギュレートするために、治
療上有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを内部淡蒼球に投与することを特徴とす
る、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項２１】 ＧＡＢＡ受容体をダウンレギュレートするために、治療上
有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを視床運動核に投与することを特徴と
する、哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。 - 【請求項２２】 ＧＡＢＡ受容体をダウンレギュレートするために、治療上
有効量の三重鎖オリゴヌクレオチドを視床運動核に投与することを特徴とする、
哺乳動物におけるパーキンソン病の治療法。
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|---|---|---|---|
| US10719198P | 1998-11-05 | 1998-11-05 | |
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| PCT/US1999/026128 WO2000025798A1 (en) | 1998-11-05 | 1999-11-05 | Treatment of parkinson's disease with oligonucleotides |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002528509A true JP2002528509A (ja) | 2002-09-03 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2021502095A (ja) * | 2017-11-09 | 2021-01-28 | アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． | Ｓｎｃａ発現を低下させるための化合物及び方法 |
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| KR20050053607A (ko) * | 2002-08-07 | 2005-06-08 | 유니버시티 오브 델라웨어 | 단백질 오조립 및 응집을 나타내는 질병을 치료하기 위한조성물 및 방법 |
| ES2266432T3 (es) * | 2002-12-13 | 2007-03-01 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Procedimiento para el diagnostico de la obesidad. |
| KR100616742B1 (ko) * | 2004-02-27 | 2006-08-28 | 한국원자력연구소 | 글루타메이트 디카르복실라제 67의 안티센스 유전자를유효성분으로 포함하는 항암제, 상기 유전자를 포함하는발현 벡터 및 이를 형질도입한 형질전환체 |
| WO2006013457A2 (en) * | 2004-03-19 | 2006-02-09 | Diamyd Medical Ab | Gad2 gene for possible treatment of nervous system disorders |
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- 1999-11-05 WO PCT/US1999/026128 patent/WO2000025798A1/en active Application Filing
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- 1999-11-05 US US09/435,249 patent/US20030060436A1/en not_active Abandoned
- 1999-11-05 AT AT99971323T patent/ATE409487T1/de not_active IP Right Cessation
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- 1999-11-05 EP EP99971323A patent/EP1135113B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-09-09 US US10/937,824 patent/US7414034B2/en not_active Expired - Fee Related
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| JP7167148B2 (ja) | 2017-11-09 | 2022-11-08 | アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド | Ｓｎｃａ発現を低下させるための化合物及び方法 |
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