JP2002520374A - Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染のための多糖ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓの莢膜多糖／付着因子（ＰＳ／Ａ）の組成物に関する。ＰＳ／Ａは、単離または合成され得、そしてＰＳ／Ａの化学的特徴付けに基づく、ネイティブなＰＳ／Ａの構造に対する種々の改変を含む。本発明はまた、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、他の関連するコアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓおよびｉｃａ（細胞内付着因子）遺伝子座を保有する生物によって引き起こされる感染に対する能動免疫を誘導するためのワクチンとしてのＰＳ／Ａの使用に関し、そして同じクラスの感染に対する受動免疫を誘導するための、ＰＳ／Ａに対する抗体の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染の予防のために免疫を誘導する
に有用な多糖組成物に関する。本発明はまた、多糖物質および多糖物質に対する
抗体を用いて、診断キットを作製および使用する方法、ならびに能動免疫および
受動免疫を誘導するための方法に関する。詳細には、この多糖は、莢膜多糖／付
着因子である。

【０００２】 （発明の背景） Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓは、通常、ヒトの皮膚および粘膜（ｍｕｃｕｓ
ｍｅｍｂｒａｎｅ）に住み着き、そしてコロニーを形成する、グラム陽性細菌
である。皮膚または粘膜が、手術または他の外傷の間に損傷を受けた場合、Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓは、内部組織に接近できるようになって、感染を発症
させ得る。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓが、局所的に増殖するかまたはリンパ
もしくは血液系に侵入する場合、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌症に関連した
合併症のような、深刻な感染合併症がもたらされ得る。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓ菌血症に関連した合併症としては、敗血症性ショック、心内膜症、関節炎
、骨髄炎、肺炎、および種々の器官における膿瘍が挙げられる。

【０００３】 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓとしては、遊離のコアグラーゼを生成するコア
グラーゼ陽性生物およびこの遊離のコアグラーゼを生成しないコアグラーゼ陰性
生物の両方が挙げられる。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓは、最
も普通のコアグラーゼ陽性形態のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓである。Ｓ．ａ
ｕｒｅｕｓは一般に、感染を、脈管外または脈管内のいずれかの局所部位で引き
起こし、これは最終的に菌血症をもたらし得る。Ｓ．ａｕｒｅｕｓはまた、急性
骨髄炎の主な原因であり、そして少数のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ肺炎感染
を引き起こす。さらに、Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、約１〜９％の細菌性髄膜炎の症例
および１０〜１５％の脳膿瘍の原因である。少なくとも２１種の公知のコアグラ
ーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓが存在し、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ
、Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｓ．ｗａｒｎｅｒｉ
、Ｓ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｉｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｃｏ
ｈｎｉｉ、Ｓ．ｘｙｌｏｓｕｓ、Ｓ．ｓｉｍｕｌａｎｓ、およびＳ．ｃａｐｉｔ
ｉｓが挙げられる。Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓは、静脈内アクセスデバイスに
関連した最も頻繁な感染原因因子であり、そして一次院内菌血症において最も頻
繁な単離体である。Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓはまた、補てつ弁心内膜炎に関
連する。

【０００４】 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓはまた、動物における一般的な細菌感染源であ
る。例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ乳腺炎は、ウシ、ヒツジおよびヤギ
を含む反芻動物における共通の問題である。この疾患は一般に、感染を減少させ
るために抗生物質を用いて処置されるが、この処置は費用のかかる手順であり、
そしてさらに乳汁生産の損失をもたらす。今日までに同定された最も有効なワク
チンは、皮下投与される、生のインタクトなＳ．ａｕｒｅｕｓワクチンである。
しかし、生ワクチンの投与は、感染の危険を伴う。この理由から、多くの研究者
は、死菌Ｓ．ａｕｒｅｕｓワクチンを生成することおよび／またはＳ．ａｕｒｅ
ｕｓに対する免疫を誘導する莢膜多糖もしくは細胞壁成分を単離することを試み
てきた。しかし、これらの試みはいずれも成功しなかった。

【０００５】 Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、この生物が不利な浸透条件下で生存するのを可能にする
、ペプチドグリカン複合体から構成される細胞壁成分を含み、そしてまた、この
ペプチドグリカンに連結した独特のテイコ酸を含む。細胞壁に対して外側に、薄
い多糖莢膜が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの大部分の単離体を覆う。この血清学的に異な
る莢膜は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの種々の単離体を血清型に分類するために用いられ
得る。臨床的に有意な単離体の多くは、２つの莢膜型ＣＰ５およびＣＰ８を含む
ことが示されている。

【０００６】 ＣＰ５型は、以下の化学構造を有する： →４）−β−Ｄ−ＭａｎｐＮＡｃＡ３Ａｃ−（１→４）−α−Ｌ−ＦｕｃｐＮ
Ａｃ−（１→３）−β−Ｄ−ＦｕｃｐＮＡｃ−（１→。

【０００７】 ＣＰ８型は、以下の化学構造を有する： →３）−β−Ｄ−ＭａｎｐＮＡｃＡ４Ａｃ−（１→３）−α−Ｌ−ＦｕｃｐＮ
Ａｃ−（１→３）−β−Ｄ−ＦｕｃｐＮＡｃ−（１→。

【０００８】 １６００を超えるＳ．ａｕｒｅｕｓ単離体についての研究は、９３％が、５型
または８型の莢膜多糖のいずれかのものであることを示した。さらに、乳腺炎を
有するヒツジ、ヤギおよびウシ、ならびに骨髄炎を有するニワトリから単離され
た、８０％を超えるＳ．ａｕｒｅｕｓは、これらの２つの莢膜型のうちの少なく
とも１つを含むことが実証された。ＣＰ５およびＣＰ８は構造的に類似するが、
これらは免疫学的に異なることが実証されている。

【０００９】 （発明の要旨） 本発明は、コアグラーゼ陰性およびコアグラーゼ陽性のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓによる感染に対する、ヒトおよび動物の受動免疫および能動免疫のため
の方法および生成物に関する。本発明によれば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの真の「莢膜
」は、ＣＰ５層もしくはＣＰ８層を超えて外に広がるか、またはＣＰ５層もしく
はＣＰ８層の代わりに生成されることが見出された。この物質は、莢膜多糖／付
着因子（ＰＳ／Ａ）抗原であり、ほぼ均質になるまで精製され、そしてその構造
が同定された。Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓのようなＳｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓから単離され得るネイティブなＰＳ／Ａ抗原は、コハク
酸残基で高度に置換されている高分子量ポリグルコサミンであり、そしてポリ−
β−１−６−Ｄ−Ｎ−スクシニルグルコサミン（ＰＮＳＧ）と呼ばれる。単離お
よび精製されたＰＳ／Ａ抗原は、インビボで高度に免疫原性であることが見出さ
れた。

【００１０】 １つの局面では、本発明は、以下の構造：

【００１１】

【化５】 を有する純粋なＰＳ／Ａの組成物であり、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯ
ＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、
および−ＮＨ₂からなる群より選択され、ｍは２〜５であり、そしてこのＲ基の
うちの少なくとも１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（
ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群よ
り選択される。他の好ましい実施態様では、このＲ基のうちの少なくとも５０％
、７５％、または９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（
ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群よ
り選択される。この組成物は、１つの実施態様では、ワクチンとして処方される
。好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａは、少なくとも９５％、９７％または９
９％純粋である。好ましい骨格結合は、β１−６結合である。

【００１２】 好ましい実施態様では、ＰＳ／Ａのモノマー単位は、スクシネートで置換され
る。この実施態様では、このＲ基は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨで
ある。他の実施態様では、このＲ基は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ
Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯ
ＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、および
−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂からなる群より選
択される。このＰＳ／Ａは、一種類のＲ基置換基で置換されてもよいし、または
１より多くの種類のＲ基置換基で置換されてもよい。ＰＳ／Ａが一種類のＲ基置
換基で置換される場合、このＰＳ／Ａは、ホモ置換ポリマーである。ＰＡ／Ｓが
１より多くの種類のＲ基置換基で置換される場合、このＰＳ／Ａはヘテロ置換ポ
リマーである。

【００１３】 本発明のＰＳ／Ａは、３以上の反復モノマー単位のポリマーであり、それゆえ
、低分子量を有し得る。本発明の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａは、２５
，０００より大きな分子量を有する。別の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａ
は、３０，０００より大きな分子量を有する。なお別の実施態様では、このＰＳ
／Ａは、１００，０００より大きな分子量を有する。

【００１４】 この組成物はまた、このＰＳ／Ａに結合体化されたキャリア化合物を含み得る
。このＰＳ／Ａがワクチンとして用いられ、そしてこのＰＳ／Ａが低分子量を有
する場合、このＰＳ／Ａは、キャリア化合物に結合体化されることが好ましい。
１つの実施態様では、このキャリア化合物は、リンカーを介してＰＳ／Ａに結合
体化される。

【００１５】 別の実施態様では、このＰＳ／Ａは、実質的にホスフェートを含まない。なお
別の実施態様では、このＰＳ／Ａは、テイコ酸を実質的に含まない。

【００１６】 別の局面では、本発明は、以下の構造：

【００１７】

【化６】 を有するＰＳ／Ａの組成物であり、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）₃〜₅−
ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯ
Ｈ、および−ＮＨ₂からなる群より選択され、ｍは２〜５であり、そしてこのＲ
基のうちの少なくとも１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）₃〜₅−ＣＯＯＨ、−
ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨから
なる群より選択される。他の好ましい実施態様では、このＲ基のうちの少なくと
も５０％、７５％、または９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）₃〜₅−ＣＯＯＨ
、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ
からなる群より選択される。この組成物は、１つの実施態様では、ワクチンとし
て処方される。好ましい骨格結合は、β１−６結合である。

【００１８】 １つの実施態様では、このＰＳ／Ａは、一種類のＲ基置換基で置換されてもよ
いし、または１より多くの種類のＲ基置換基で置換されてもよい。ＰＳ／Ａが一
種類のＲ基置換基で置換される場合、このＰＳ／Ａは、ホモ置換ポリマーである
。ＰＳ／Ａが１より多くの種類のＲ基置換基で置換される場合、このＰＳ／Ａは
ヘテロ置換ポリマーである。

【００１９】 本発明の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａは、２５，０００より大きな分
子量を有する。別の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａは、３０，０００より
大きな分子量を有する。なお別の実施態様では、このＰＳ／Ａは、１００，００
０より大きな分子量を有する。

【００２０】 この組成物はまた、このＰＳ／Ａに結合体化されたキャリア化合物を含み得る
。このＰＳ／Ａがワクチンとして用いられ、そしてこのＰＳ／Ａが低分子量を有
する場合、このＰＳ／Ａは、キャリア化合物に結合体化されることが好ましい。
１つの実施態様では、このキャリア化合物は、リンカーを介してＰＳ／Ａに結合
体化される。

【００２１】 別の局面によれば、本発明は、以下の構造：

【００２２】

【化７】 を有するＰＳ／Ａの組成物であり、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｃ
ＯＯＨおよび−ＮＨ₂からなる群より選択され、そしてこのＲ基のうちの１０％
と９０％との間の％は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである。他の好
ましい実施態様では、このＲ基のうちの２０％と８０％との間の％、３０％と７
０％との間の％、または４０％と６０％との間の％が、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−
ＣＨ₂−ＣＯＯＨである。この組成物は、１つの実施態様では、ワクチンとして
処方される。好ましい骨格結合は、β１−６結合である。

【００２３】 １つの実施態様では、このＰＳ／Ａは、一種類のＲ基置換基で置換されてもよ
いし、または１より多くの種類のＲ基置換基で置換されてもよい。ＰＳ／Ａが一
種類のＲ基置換基で置換される場合、このＰＳ／Ａは、ホモ置換ポリマーである
。ＰＡ／Ｓが１より多くの種類のＲ基置換基で置換される場合、このＰＳ／Ａは
ヘテロ置換ポリマーである。

【００２４】 本発明の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａは、２５，０００より大きな分
子量を有する。別の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａは、３０，０００より
大きな分子量を有する。なお別の実施態様では、このＰＳ／Ａは、１００，００
０より大きな分子量を有する。

【００２５】 この組成物はまた、このＰＳ／Ａに結合体化されたキャリア化合物を含み得る
。このＰＳ／Ａがワクチンとして用いられ、そしてこのＰＳ／Ａが低分子量を有
する場合、このＰＳ／Ａが、キャリア化合物に結合体化されることが好ましい。
１つの実施態様では、このキャリア化合物は、リンカーを介してＰＳ／Ａに結合
体化される。

【００２６】 本発明のなお別の局面によれば、反復モノマー単位から構成されるＰＳ／Ａの
組成物であって、ここでこのモノマー単位は、β−１−６ポリグルコース、α−
１−４ポリグルコース、α−１−３ポリグルコース、β−１−４ポリグルコース
、β−１−３ポリグルコースおよびα−１−４ポリガラクトサミンからなる群よ
り選択され、このモノマー単位のＣ２は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ
、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、およ
び−ＮＨ₂からなる群より選択されるＲ基によって置換されており、ｍは２〜５
であり、そしてこのＲ基のうちの少なくとも１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂
）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂
）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、組成物が提供される。この組成物は
、１つの実施態様では、ワクチンとして処方される。

【００２７】 好ましくは、このモノマー単位は、β−１−６ポリグルコース、α−１−４ポ
リグルコース、α−１−３ポリグルコース、β−１−４ポリグルコースおよびβ
−１−３ポリグルコースからなる群より選択される。好ましくは、このポリグル
コースの骨格は、α−１−６フォーメーションにある。別の実施態様では、この
ポリグルコースの骨格は、β−１−４フォーメーションにある。別の実施態様に
よれば、このポリグルコースの骨格は、β−１−３フォーメーションにある。

【００２８】 好ましい実施態様によれば、このＲ基のうちの少なくとも５０％、７５％、ま
たは９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（
ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される
。

【００２９】 好ましい実施態様では、ＰＳ／Ａのモノマー単位は、スクシネートで置換され
る。この実施態様では、このＲ基は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨで
ある。他の実施態様では、このＲ基は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ
Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯ
ＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、および
−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂からなる群より選
択される。このＰＳ／Ａは、一種類のＲ基置換基で置換されてもよいし、または
１より多くの種類のＲ基置換基で置換されてもよい。ＰＳ／Ａが一種類のＲ基置
換基で置換される場合、このＰＳ／Ａは、ホモ置換ポリマーである。ＰＡ／Ｓが
１より多くの種類のＲ基置換基で置換される場合、このＰＳ／Ａはヘテロ置換ポ
リマーである。

【００３０】 本発明のＰＳ／Ａは、３以上の反復モノマー単位のポリマーであり、それゆえ
、低分子量を有し得る。本発明の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａは、２５
，０００より大きな分子量を有する。別の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａ
は、３０，０００より大きな分子量を有する。なお別の実施態様では、このＰＳ
／Ａは、１００，０００より大きな分子量を有する。

【００３１】 この組成物はまた、このＰＳ／Ａに結合体化されたキャリア化合物を含み得る
。このＰＳ／Ａがワクチンとして用いられ、そしてこのＰＳ／Ａが低分子量を有
する場合、このＰＳ／Ａは、キャリア化合物に結合体化されることが好ましい。
１つの実施態様では、このキャリア化合物は、リンカーを介してＰＳ／Ａに結合
体化される。

【００３２】 別の実施態様では、このＰＳ／Ａは、実質的にホスフェートを含まない。なお
別の実施態様では、このＰＳ／Ａは、テイコ酸を実質的に含まない。

【００３３】 本発明の別の局面によれば、以下の構造：

【００３４】

【化８】 を有するＰＳ／Ａの組成物であって、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯ
ＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、
および−ＮＨ₂からなる群より選択され、ｍは２〜５であり、そしてこのＲ基の
うちの少なくとも１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（
ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群よ
り選択され、そしてこのＰＳ／Ａがテイコ酸を実質的に含まない、組成物が提供
される。他の好ましい実施態様では、このＲ基のうちの少なくとも５０％、７５
％、または９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂
）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択
される。この組成物は、１つの実施態様では、ワクチンとして処方される。好ま
しい骨格結合は、β１−６結合である。

【００３５】 好ましい実施態様では、ＰＳ／Ａのモノマー単位は、スクシネートで置換され
る。この実施態様では、このＲ基は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨで
ある。他の実施態様では、このＲ基は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ
Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯ
ＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、および
−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂からなる群より選
択される。このＰＳ／Ａは、一種類のＲ基置換基で置換されてもよいし、または
１より多くの種類のＲ基置換基で置換されてもよい。ＰＳ／Ａが一種類のＲ基置
換基で置換される場合、このＰＳ／Ａは、ホモ置換ポリマーである。ＰＡ／Ｓが
１より多くの種類のＲ基置換基で置換される場合、このＰＳ／Ａはヘテロ置換ポ
リマーである。

【００３６】 本発明のＰＳ／Ａは、３以上の反復モノマー単位のポリマーであり、それゆえ
、低分子量を有し得る。本発明の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａは、２５
，０００より大きな分子量を有する。別の好ましい実施態様では、このＰＳ／Ａ
は、３０，０００より大きな分子量を有する。なお別の実施態様では、このＰＳ
／Ａは、１００，０００より大きな分子量を有する。

【００３７】 この組成物はまた、このＰＳ／Ａに結合体化されたキャリア化合物を含み得る
。このＰＳ／Ａがワクチンとして用いられ、そしてこのＰＳ／Ａが低分子量を有
する場合、このＰＳ／Ａは、キャリア化合物に結合体化されることが好ましい。
１つの実施態様では、このキャリア化合物は、リンカーを介してＰＳ／Ａに結合
体化される。

【００３８】 別の実施態様では、このＰＳ／Ａは、実質的にホスフェートを含まない。

【００３９】 別の局面では、本発明は、以下の方法に従って調製された純粋なＰＳ／Ａの多
糖である：粗ＰＳ／Ａ調製物を細菌培養物から抽出する工程；高分子量ＰＳ／Ａ
濃縮材料を、この粗ＰＳ／Ａ調製物から単離する工程；不純なＰＳ／Ａを、この
高分子量ＰＳ／Ａ濃縮材料から沈澱させる工程；この不純なＰＳ／Ａを塩基とと
もにインキュベートして、半ば純粋なＰＳ／Ａ調製物を得る工程；この調製物を
酸で中和する工程；およびこの中和された調製物を、フッ化水素酸中でインキュ
ベートして純粋なＰＳ／Ａを得る工程。

【００４０】 好ましい実施態様では、この細菌培養物は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ培養物である。別の好ましい実施態様では、この細菌培養物は、コ
アグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ培養物である。

【００４１】 別の局面では、本発明は、被験体におけるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓによ
る感染に対する能動免疫を誘導する方法である。この方法は、Ｓｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓに対する能動免疫を誘導するために有効な量の、上記のいずれかの
組成物を被験体に投与する工程を含む。

【００４２】 １つの実施態様では、この方法は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅ
ｕｓによる感染に対する免疫を誘導するための方法である。別の実施態様では、
この方法は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓによる感染に
対する免疫を誘導するための方法である。

【００４３】 本発明の別の局面によれば、被験体におけるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓによる感染に対する受動免疫を誘導する方法が提供される。この方
法は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓのオプソニン作用を誘導す
るために有効な量の、抗ＰＳ／Ａ抗体を被験体に投与する工程を含む。

【００４４】 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓは、入院患者における細菌感染
の最も普通の原因である。本発明の１つの局面によれば、被験体におけるＳｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓによる感染に対する能動免疫を誘導する
方法が提供される。この方法は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ
に対する能動免疫を誘導するために有効な量の、ポリグルコサミン骨格を有する
高分子量多糖を被験体に投与する工程を含み、ここでこのポリグルコサミン骨格
の個々のグルコサミン単位のうちの少なくとも１０％が、スクシネートに結合体
化されている。好ましい実施態様では、このポリグルコサミン骨格は、β−１−
６フォーメーションにある。

【００４５】 純粋な多糖を調製する方法もまた、本発明の別の局面である。本方法は、粗Ｐ
Ｓ／Ａ調製物を細菌培養物から抽出する工程、高分子量ＰＳ／Ａ濃縮材料を、こ
の粗ＰＳ／Ａ調製物から単離する工程、不純なＰＳ／Ａを、この高分子量ＰＳ／
Ａ濃縮材料から沈澱させる工程、この不純なＰＳ／Ａを塩基または酸とともにイ
ンキュベートして、半ば純粋なＰＳ／Ａ調製物を得る工程、この調製物を中和す
る工程、およびこの中和された調製物を処理して、純粋なＰＳ／Ａを得る工程を
含む。

【００４６】 いくつかの実施態様では、この不純なＰＳ／Ａは、塩基とともにインキュベー
トされ、酸で中和され、次いでフッ化水素酸で処理されて純粋なＰＳ／Ａを生成
する。他の実施態様では、この純粋なＰＳ／Ａは、塩基または酸とともにインキ
ュベートされ、そしてそれぞれ、酸または塩基で中和される。次いで、この調製
物は、脱イオン水に対する透析によって処理され、凍結乾燥され、そして緩衝液
中に再懸濁される。

【００４７】 本発明の別の局面では、純粋な多糖を調製する別の方法が提供される。この方
法は、細菌培養物を、強塩基または強酸とともにインキュベートすることによっ
て酸または塩基の溶液を調製する工程を含む。次いで、この酸または塩基の溶液
は、ｐＨ７へと中和して、粗抗原懸濁液を生成する。粗抗原懸濁液は、脱イオン
水のような溶液に対して透析され、そして不溶性粗抗原が収集され得る。いくつ
かの実施態様では、この不溶性粗抗原が、凍結乾燥され得、次いで緩衝液中に再
懸濁され得る。いくつかの実施態様では、この緩衝液は、５０ｍＭ ＰＢＳと１
５０ｍＭ ＮａＣｌを有する１００ｍＭ Ｔｒｉｓとからなる群より選択される
。他の実施態様では、強塩基または強酸は、１Ｍより大きいＮａＯＨまたはＨＣ
ｌである。他の実施態様では、強塩基または強酸は、５Ｍ ＮａＯＨまたはＨＣ
ｌである。別の実施態様では、細菌培養抽出物は、強塩基または強酸中で、１８
〜２４時間攪拌される。なお別の実施態様では、この強塩基抽出または強酸抽出
が繰り返される。

【００４８】 別の局面では、本発明は、抗ＰＳ／Ａ抗体の組成物であり、ここでこの抗体は
、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓのオプソニン作用を誘導し、そ
してこの抗体は、不純なＰＳ／Ａ調製物と交叉反応しない。好ましい実施態様で
は、抗ＰＳ／Ａ抗体は、モノクローナル抗体である。別の好ましい実施態様では
、抗ＰＳ／Ａ抗体は、ポリクローナル抗体である。

【００４９】 本発明の各々の限定は、本発明の種々の実施態様を包含し得る。それゆえ、い
ずれか１つの要素または要素の組み合わせを含む本発明の各々の限定が、本発明
の各々の局面において含まれ得ることが予想される。

【００５０】 （配列の簡単な説明） 配列番号１は、ＧｅｎＢａｎｋに登録番号Ｕ４３３６６の下で寄託したｉｃａ
遺伝子座の核酸配列である（先行技術）。

【００５１】 配列番号２は、ｉｃａについての正方向プライマー配列である。

【００５２】 配列番号３は、ｉｃａについての逆方向プライマー配列である。

【００５３】 （発明の詳細な説明） 本発明は、細菌感染に対する免疫を誘導するため、そしてまた診断および治療
の目的のための抗体を生成するために有用であるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
菌由来のマイクロカプセルに関する。このマイクロカプセルは、Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓもしくはコアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓから単離され得るか、またはデノボで合成され得る、ＰＳ／Ａ調製物で
ある。ＰＳ／Ａは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ細胞外層の成
分であるとは以前には同定されていない。本発明の前には、２つの化学的に関連
する血清型の莢膜（莢膜多糖ＣＰ５およびＣＰ８と呼ばれる）がＳｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ株のうちの９０％によって生成されることが実証
されていた。これらの莢膜多糖は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの免疫認識を誘導すること
の原因であると考えられていた。Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、ＣＰ５層またはＣＰ８層
を超えて外に広がるかまたはそれらを置換するかのいずれかである真の莢膜を含
み、そして免疫応答を誘発することの原因であることが本発明に従って見出され
た。本明細書中に提示される実施例において実証されるように、このＰＳ／Ａ抗
原は、インビボで投与される場合、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびコアグラーゼ陰性Ｓ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓに対するオプソニン防御性抗体を生成し得る。

【００５４】 本発明の前には、本願の発明者は、ＰＳ／Ａであるコアグラーゼ陰性Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓの莢膜の一部の同定および特徴付けを行った（Ｇｅｒａｌ
ｄ Ｂ．Ｐｉｅｒに対して発行された米国特許第５，０５５，４５５号）。コア
グラーゼ陰性ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓのＰＳ／Ａが、細胞表面および生体
膜（ｂｉｏｆｉｌｍ）層の一成分であり、そして細菌細胞を宿主防御（例えば、
オプソノファゴサイトーシス（ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ））から
保護することに関与することが見出された（Ｋｏｊｉｍａ，Ｙ．，Ｍ．Ｔｏｊｏ
，Ｄ．Ａ．Ｇｏｌｄｍａｎｎ，Ｔ．Ｄ．ＴｏｓｔｅｓｏｎおよびＧ．Ｂ．Ｐｉｅ
ｒ．（１９９０）Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．１６２：４３５．Ｔｏｊｏ，Ｍ．
，Ｎ．Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｄ．Ａ．ＧｏｌｄｍａｎｎおよびＧ．Ｂ．Ｐｉｅｒ
．（１９８８）Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．１５７：７１３．Ｇｏｌｄｍａｎ，
Ｄ．Ａ．およびＧ．Ｂ．Ｐｉｅｒ．（１９９３）Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
Ｒｅｖ．６：１７６）。しかし、ＰＳ／Ａの化学構造は、単離されたＰＳ／Ａ
を精製することに関連する困難性によって、同定されなかった。約９０％の純度
の調製物を達成することのみが可能であった。本発明の方法に従って、ＰＳ／Ａ
抗原が単離され、そして精製されて、純粋なＰＳ／Ａ調製物が達成された。

【００５５】 本明細書中で用いられる場合、「純粋な莢膜多糖／付着因子」は、単離または
合成され、そして９２％より高い純度で夾雑物を含まない、ＰＳ／Ａ調製物であ
る。好ましくは、この物質は、９５％より高い純度で、さらには９７％または９
９％より高い純度で夾雑物を含まない。このＰＳ／Ａ抗原の純度の程度は、当該
分野で公知の任意の手段によって評価され得る。例えば、この純度は、この物質
の構造的局面を立証するために化学分析アッセイならびにガスクロマトグラフィ
ーおよび核磁気共鳴によって評価され得る。

【００５６】 先行技術のＰＳ／Ａ抗原の１つの主要な夾雑物は、リン酸含有テイコ酸であっ
た。先行技術の抗原のテイコ酸夾雑物は、この抗原の化学的特徴付けおよび免疫
原性の両方を妨害した。ＰＳ／Ａを単離するために先行技術において用いられる
手順は、夾雑しているテイコ酸をＰＳ／Ａ調製物から除去するためには充分では
なく、ＰＳ／Ａ抗原の化学的特徴付けを不可能にした。本明細書中に記載される
本発明の方法は、テイコ酸を実質的に含まない、単離されたＰＳ／Ａ抗原調製物
を生成し得る。テイコ酸を実質的に含まないＰＳ／Ａ調製物は、１．０％未満の
ホスフェートを有するものである。いくつかの実施態様では、テイコ酸を実質的
に含まないＰＳ／Ａ調製物は、０．１％未満のホスフェートを有するものである
。このサンプル中に存在するホスフェートの量は、当該分野で公知の任意の手段
によって評価され得る。以下の実施例に記載されるように、ホスフェート夾雑物
量は、本明細書中に参考として援用されるＫｅｌｅｔｉ，Ｇ．およびＷ．Ｈ．Ｌ
ｅｄｅｒｅｒ（１９７４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｍｅｔｈｏｄｓ
ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｖａｎ Ｎｏｓ
ｔｒａｎｄ Ｒｅｉｎｈｏｌｄ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載される方法を
用いて評価され得る。手短には、このアッセイは以下の通りに行われる：１００
μｇのサンプルに対して、４３．５ｍｌの水、６．５ｍｌの７０％過塩素酸（Ｈ
ＣＬＯ₄）および５０ｍｌの２０Ｎ硫酸（Ｈ₂ＳＯ₄）を一緒に添加することによ
り作製される１００μｌの溶液を添加する。これを、大理石をチューブの頂部に
おいた状態でチューブ中で９５℃にて２時間加熱する。次いで、この混合物を１
６５℃のオーブン中に配置し、そしてさらに２時間加熱し、次いで室温まで冷ま
す。次いで、１ｍｌの試薬５（以下の方法により作製される）をこのサンプルに
添加する： 試薬１：１０ｍｌの水に溶解した１．３６ｇの酢酸ナトリウム．３Ｈ₂Ｏ； 試薬２：２０ｍｌの水中に溶解した５００ｍｇモリブデン酸アンモニウム； 試薬３：２ｍｌの試薬１、２ｍｌの試薬２および１６ｍｌの水； 試薬４：使用の直前に調製した、２０ｍｌの水に溶解した２ｇのアスコルビン
酸； 試薬５：氷浴中で９ｍｌの試薬３および１ｍｌの試薬４を添加する。

【００５７】 試薬５を添加した後、このチューブを徹底的に混合し、そして光学密度を分光
光度計で８２０ナノメートルで読み取る。第一リン酸ナトリウム（チューブ１本
当り０．１〜５μｇの範囲）からなる標準曲線を用いて、試験サンプル中に存在
するホスフェートの量を算出する（Ｌｏｗｒｙ，Ｏ．Ｈ．，Ｎ．Ｒ．Ｒｏｂｅｒ
ｔｓ，Ｋ．Ｙ．Ｌｅｉｎｅｒ，Ｍ．Ｌ．ＷｕおよびＡ．Ｌ．Ｆａｒｒ．，（１９
５４）Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０７，１）。

【００５８】 １つの局面では、本発明は、以下の構造：

【００５９】

【化９】 を有する純粋なＰＳ／Ａの組成物であり、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯ
ＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、
および−ＮＨ₂からなる群より選択され、ｍは２〜５であり、そしてこのＲ基の
うちの少なくとも１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（
ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群よ
り選択される。ネイティブな物質は、β１−６結合を有する。これは、本発明の
ＰＳ／Ａ抗原における好ましい骨格結合である。

【００６０】 本発明のこの局面では、ＰＳ／Ａ抗原は、互いに連結された少なくとも部分的
に置換されたグルコサミン残基のホモポリマーである。グルコサミン残基のうち
の少なくとも１０％は、一般式ＣＯＯＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、ＣＨ₃−（Ｃ
Ｈ₂）_m-1−（ＣＯＯＨ）₂、またはＣＨ₃−（ＣＨ₂）_m-1−ＣＯＯＨの短鎖脂肪酸
基で置換され、ここでｍ＝２〜５である。他の実施態様では、このガラクトサミ
ン残基は、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％
、９５％、９７％または１００％の上記に提供された式の短鎖脂肪酸で置換され
得る。好ましくは、このグルコサミン残基は、式ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯ
ＯＨのジカルボン酸で置換される。より好ましくは、このグルコサミン残基は、
コハク酸で置換される。この置換は、ホモ置換またはへテロ置換であり得る。ホ
モ置換は、グルコサミン残基が一種類の置換基で置換されているものである。例
えば、グルコサミン残基は、コハク酸残基のみで置換され得る。ヘテロ置換では
、このグルコサミン残基は、１より多くの種類の置換基で置換され得る。例えば
、一部のグルコサミン残基はコハク酸で置換され得、そして他のグルコサミン残
基は酪酸で置換され得る。本発明によるＰＳ／Ａの組成物としては、全てのホモ
置換ＰＳ／Ａ分子もしくは全てのヘテロ置換ＰＳ／Ａ分子、またはそれらの組合
せが挙げられる。

【００６１】 このＰＳ／Ａは、好ましくは、以下の化学構造から選択されるモノマーから構
成されるポリマーである：

【００６２】

【化１０】

【００６３】

【化１１】 別の局面による本発明は、ネイティブな抗原とは置換の程度および型が異なる
合成ＰＳ／Ａを含む。ネイティブなＰＳ／Ａ抗原は、コハク酸でほぼ１００％置
換されている（１グルコサミン：１コハク酸）。本発明による１つの型のＰＳ／
Ａ抗原は、グルコサミン残基のうちの１０％と９５％との間の％が、コハク酸で
置換された抗原を含む。本発明はまた、１０％と１００％との間の、コハク酸以
外の短鎖脂肪酸での置換、または短鎖脂肪酸およびコハク酸の混合物での置換を
有するＰＳ／Ａ抗原を含む。

【００６４】 ネイティブなＰＳ／Ａ抗原は、１００，０００ダルトンよりも大きな高分子量
ホモポリマーである。しかし、本発明の組成物は、置換されたモノマーの低分子
量および高分子量のホモポリマーを含む。本発明に従う有用な多糖のサイズは大
いに変動する。５００ダルトンと２０，０００，０００ダルトンとの間の多糖が
代表的である。治療剤または診断剤として用いられる場合、より小さな分子量の
多糖は、キャリアに対して結合体化され得るか、または単独で使用され得る。好
ましくは、本発明の多糖組成物は、少なくとも２５，０００ダルトンの分子量、
より好ましくは少なくとも３０，０００ダルトンの分子量を有する。

【００６５】 ネイティブな物質は、β−１−６結合によって一緒に連結されたグルコサミン
モノマーを含む。しかし、本発明の多糖は、α−またはβ−の１−６、１−４ま
たは１−３結合のいずれかまたはそれらの組合せによって一緒に連結されたモノ
マーを含む。好ましい実施態様では、この多糖は、β−１−６結合によって一緒
に連結される。

【００６６】 本発明の組成物は、天然の供給源から単離され得るかまたは合成され得る。本
発明は、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓからＰＳ／Ａ抗原を単離および精製する
ための方法を含む。本発明の１つの方法は、粗ＰＳ／Ａ調製物を細菌培養物から
抽出する工程、高分子量ＰＳ／Ａ濃縮材料を、この粗ＰＳ／Ａ調製物から単離す
る工程、不純なＰＳ／Ａを、この高分子量ＰＳ／Ａ濃縮材料から沈澱させる工程
、この不純なＰＳ／Ａを塩基とともにインキュベートして、半ば純粋なＰＳ／Ａ
調製物を生成する工程、この調製物を酸で中和する工程、およびこの中和された
調製物を、フッ化水素酸中でインキュベートして純粋なＰＳ／Ａを生成する工程
を含む。粗ＰＳ／Ａ調製物を抽出する工程、ならびに不純なＰＳ／Ａ抗原調製物
を単離および沈澱させる工程は、米国特許第５，０５５，４５５号を含む方法の
ような、当該分野で公知の任意の方法によって行われる。次いで、この不純な物
質は精製されて、本発明の組成物を生成する。精製工程は、不純なＰＳ／Ａ抗原
を塩基（例えば、ＮａＯＨ）とともにインキュベートし、次いで酸（例えば、Ｈ
Ｃｌ）で中和することによって達成される。次いで、中性の物質が、フッ化水素
酸中でインキュベートされて、本発明の純粋なＰＳ／Ａ抗原を生成する。本発明
の別の方法は、細菌を強塩基または強酸とともにインキュベートすることによっ
て粗抗原懸濁物を細菌培養物から抽出する工程を含む。好ましくは、この細菌は
、強塩基または強酸中で少なくとも２時間、そしてより好ましくは少なくとも５
、１０、１５、１８または２４時間攪拌される。強塩基または強酸は、任意の型
の強塩基または強酸であり得るが、好ましくは、１モル濃度のＮａＯＨまたはＨ
Ｃｌよりも大きい。いくつかの実施態様では、この強塩基または強酸は、５モル
濃度のＮａＯＨまたはＨＣｌである。次いで、この酸溶液または塩基溶液は、遠
心分離に供されて、細胞本体が収集される。いくつかの実施態様では、この抽出
手順は何回か繰り返される。得られる酸溶液または塩基溶液は、ｐＨ７になるよ
うに中和され、次いで透析されて不溶性の粗抗原を生成する。ＰＳ／Ａは、ｉｃ
ａ遺伝子座を発現する任意の細菌株から精製され得る。これらの株としては、例
えば、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、およびｉｃａ遺伝子座中の
遺伝子で形質転換されたＳ．ｃａｒｎｏｓｕｓのような他の株が挙げられる。詳
細には、純粋なＰＳ／Ａは、特定の株（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ＲＰ６２Ａ（
ＡＰＣＣ番号：３５９８４）、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ＲＰ１２（ＡＰＣＣ番
号：３５９８３）、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ Ｍ１８７、Ｓ．ｃａｒｎｏｓｉｓ
ＴＭ３００（ｐＣＮ２７）、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＲＮ４２２０（ｐＣＮ２７）
およびＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８ムコイドを含む）から単離および精製されてい
る。

【００６７】 本発明に従って有用なＰＳ／Ａはまた、ネイティブなＰＳ／Ａの置換されたモ
ノマー単位を保有しない天然に存在する多糖から合成され得る。例えば、本発明
のＰＳ／Ａ抗原は、ポリグルコサミン様モノマー残基のポリマーを、これらの残
基がコハク酸および／または短鎖脂肪酸で置換されるように化学的に改変するこ
とによって合成され得る。得られる多糖は、ポリグルコースのＣ２原子にて置換
を有する、β１−６，α１−６、α１−４、α１−３、β１−４、およびβ１−
３のポリグルコースからなる群より選択されるモノマー反復単位のポリマーであ
る。例えば、特定の天然に存在する多糖は、Ｎ−アセチル部分の反復単位をポリ
グルコースモノマー上に有する。このような多糖は、脱Ｎ−アセチル化されて、
Ｎ−アセチル部分を遊離アミノ部分へと変換され得、この遊離アミノ部分は、上
記に提供される式の脂肪酸構造で誘導体化され得、それによって必要な構造モチ
ーフを作製する。他の天然に存在する多糖は、遊離アミノ部分を形成するように
還元され得、誘導体化され得、それによって必要な構造モチーフを作製するイミ
ン基を含む。

【００６８】 これらの合成反応のために有用である化合物は、本明細書中に開示されるＰＳ
／Ａ構造を考慮すれば当業者に分かる。このような化合物としては以下が挙げら
れるがこれらに限定されない：キチン、キトサン、ポリグルコース（すなわち、
デキストラン）、ポリグルコサミンおよびポリグルコサミノウロン酸（ｐｏｌｙ
ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｏｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）。例えば、キチンは、以下の
構造を有するβ−１−４結合を有するポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンである：

【００６９】

【化１２】 キチンのＮ−アセチル基は、塩基を用いる処理（例えば、１．０〜５．０Ｍ Ｎ
ａＯＨで、９５℃にて１時間）によって容易に除去されて、以下の構造を有する
β−１−４結合を有するポリグルコサミンであるキトサンを生成し得る：

【００７０】

【化１３】 次いで、この化合物の遊離のアミノ基は、この酸を、キトサン物質とともに、遊
離アミノ基の遊離カルボキシル基へのカップリングを促進する水溶性カルボジイ
ミド試薬の存在下でインキュベートすることによってスクシネートまたは任意の
他の短鎖脂肪酸で置換され得る。

【００７１】 デキストランは、以下の構造を有するα−１−６結合を有するポリグルコース
分子である：

【００７２】

【化１４】 記載されるＰＳ／Ａ抗原によって包含されない種々の置換基を有するポリグル
コサミンはまた、改変されて本発明のＰＳ／Ａ抗原を生成し得る。例えば、多糖
細胞間付着因子（ＰＩ／Ａ）は、アミン基がアセテートで置換されたβ−１−６
結合されたグルコサミン残基のポリマーである。このアセテートを除去して、遊
離アミン基を生成し得、次いでこのアミン基を置換して本発明のＰＳ／Ａを生成
し得る。ＰＩ／Ａは以下の構造を有する：

【００７３】

【化１５】 ポリグルコサミノウロン酸はまた改変されて、本発明のＰＳ／Ａ抗原を生成し
得る。ポリグルコサミノウロン酸は、ネイティブの供給源から合成または単離さ
れ得る。

【００７４】 他の実施態様では、ポリガラクトサミノウロン酸はまた改変されて、本発明の
ＰＳ／Ａ抗原を生成し得る。例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉの莢膜
多糖（Ｖｉ抗原）は、完全に、ガラクトサミノウロン酸のα−１−４結合された
モノマーの反復から形成される。この酸は、改変されて遊離アミノ基を生成し得
るＮ−アセチル部分を含み、この遊離アミノ基は改変されてＰＳ／Ａの置換基を
付加し得る。このウロン酸のカルボキシル基はまた、ＣＨ₂ＯＨ基へと改変され
得、これは、水溶性カルボジイミド（実施例２に記載される）を用いて容易に達
成される。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉの莢膜Ｖｉ抗原の単離および調製
は、Ｓｚｕ，Ｓ．Ｃ．，Ｘ．Ｌｉ，Ａ．Ｌ．ＳｔｏｎｅおよびＪ．Ｂ．Ｒｏｂｂ
ｉｎｓ，Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｖｉ ｃａｐｓ
ｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍ
ｍｕｎｉｔｙ．５９：４５５５−４５６１（１９９１）に記載される。このＶｉ
抗原は以下の構造を有する：

【００７５】

【化１６】 一般に、脱Ｎ−アセチル化は、当業者に周知の従来の化学技術によって達成さ
れ得る。１つの適切な方法は、水素化ホウ素ナトリウムを含むかまたは含まない
アルカリの使用を含む。２０ｍｇの多糖を、２Ｍ ＮａＯＨ（３ｍｌ）中に溶解
し、そして水素化ホウ素ナトリウムを添加する（５０ｍｇ）。この溶液を１００
℃になるように５時間加熱する。酸での中和の後、この溶液を、低温中で、蒸留
水に対して透析し、そして凍結乾燥する（ＤｉＦａｂｉｏ，Ｊ．Ｌ．，Ｍｉｃｈ
ｏｎ，Ｆ．，Ｂｒｉｓｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．，Ｊｅｎｎｉｎｇｓ，Ｈ．Ｊ．，Ｗｅｓ
ｓｅｌｓ，Ｍ．Ｒ．Ｂｅｎｅｄｉ，Ｖ．Ｊ．，Ｋａｓｐｅｒ、Ｄ．Ｌ．Ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ ｔｙｐｅ ＩＶ ｇｒｏｕｐｓ Ｂ Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ．１９８９．Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ，６７：８７７−８８２）。

【００７６】 イミン部分（Ｃ−ＮＨ）を含む多糖に関しては、遊離アミノ基は、当業者に公
知の従来の化学技術によって形成され得る。１つの適切な方法は、水素化ホウ素
ナトリウムの使用を含む。このイミン基は、水素化ホウ素ナトリウムで還元され
て、遊離のアミノ基を生成し得る。このことは、過剰の５ｍｇの水素化ホウ素を
、室温にて２時間、攪拌しながら、蒸留水中に溶解した多糖へと添加することに
よって行われる。次いでこの混合物は、水に対して透析され、そして凍結乾燥さ
れる（ＤｉＦａｂｉｏ，Ｊ．Ｌ．ら，同書）。

【００７７】 １つの局面では、本発明は、この分子が完全にはＮ−スクシニル化されていな
いように脂肪酸基（例えば、スクシニル）がアミノ基から部分的に除去された場
合、正に荷電した基（アミノ）および負に荷電した基（スクシニルのような脂肪
酸）を含むポリマーの組成物である。このポリマーは、上記の通りのポリグルコ
サミン骨格を有し、そしてまた上記の通りの短鎖脂肪酸基で部分的に置換されて
いる。短鎖脂肪酸基で置換されない他の骨格モノマーは、アミンで置換される。
このアミンは正に荷電しており、そして脂肪酸は負に荷電している。その結果は
、いくつかの負電荷およびいくつかの正電荷で置換されたポリマーである。この
電荷は、ブロックで存在し得る。例えば、１００個の連続するモノマーは、アミ
ノ置換を有し得、そして１００個の連続するモノマーは、脂肪酸置換を有し得る
。あるいは、この電荷は、ランダムに混合され得るか、または繰返しパターンで
あり得るか、あるいは１つおきのモノマーが、アミノ基を有し得、そしてこのモ
ノマーは、脂肪酸基を有するモノマーの間に存在し得る。

【００７８】 本発明の組成物は、感染のような病的状態のインビトロ、インサイチュおよび
インビボでの診断を含む種々の異なる適用において有用である。さらに、これら
の組成物を用いて、インビボで被験体を免疫して、感染を予防し得る。この組成
物をまた用いて、本発明のＰＳ／Ａ組成物と同じ目的のために有用である、抗体
および他の結合ペプチドを開発し得る。従って、本発明は、ＰＳ／Ａに特異的で
あって感染性障害の診断および処置において使用され得る抗体を生成するための
方法を含む。

【００７９】 本発明によって有用な抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体
のいずれかであり得る。ポリクローナル抗体は、一般に、抗原およびアジュバン
トの複数回の皮下注射または腹腔内注射によって、動物において惹起される。Ｐ
Ｓ／Ａ抗原に対するポリクローナル抗体は、ＰＳ／Ａ抗原を単独で、もしくはア
ジュバントと組合せて注射することによって、またはキャリア化合物に結合体化
したＰＳ／Ａを注射することによって生成され得る。例えば、ＰＳ／Ａ抗原を、
免疫される動物種において免疫原性であるタンパク質（例えば、キーホールリン
ペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリンまたはダイズトリプ
シンインヒビター）に結合体化することが有用であり得る。

【００８０】 多糖をタンパク質に結合体化するための多くの方法が当該分野で公知である。
一般に、この多糖は、活性化されるべきであるかまたは他の点で結合体化が実行
可能にされるべきである。すなわち、少なくとも１つの部分が、タンパク質また
は他の分子に共有結合し得るようにされねばならない。このような多くの方法は
当該分野で公知である。例えば、Ｊｅｎｎｉｎｇｓに対して発行された米国特許
第４，３５６，１７０号は、多糖上でアルデヒド基を生成するための過ヨウ素酸
の使用を記載し、次いでシアノ水素化ホウ素（ｃｙａｎｏｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄ
ｅ）を用いる還元的アミノ化を行う。Ｔｓａｙらに対して発行された米国特許第
４，６６３，１６０号はまた、過ヨウ素酸を用いて、アルデヒド基を生成したが
、次いで多糖を、４〜１２炭素部分（縮合剤の存在下で調製される）を用いて誘
導体化したタンパク質に、Ｓｃｈｉｆｆ塩基反応を用いて還元剤（例えば、シア
ノ水素化ホウ素）の存在下で連結した。Ｇｏｒｇｏｎに対して発行された米国特
許第４，６１９，８２８号は、臭化シアンを用いて多糖を活性化し、次いでこれ
を４〜８炭素原子のスペーサー架橋を通してタンパク質へと結合体化させた。Ａ
ｎｄｅｒｓｏｎおよびＣｌｅｍｅｎｔｓに対して発行された米国特許第４，８０
８，７００号では、多糖を改変して、ペリオデートによる制限された酸化的切断
、グリコシダーゼによる加水分解、または酸加水分解を用いて少なくとも１つの
還元末端を生成し、そしてシアノ水素化ホウ素の存在下で還元的アミノ化を通し
てタンパク質へと結合体化した。ＰｏｒｒｏおよびＣｏｓｔａｎｔｉｎｏに対し
て発行された米国特許第４，７１１，７７９号は、シアノ水素化ホウ素ナトリウ
ムを用いる末端還元基への一級アミノ基の導入による多糖の活性化、続いてアジ
ピン酸誘導体存在下でのエステルへの変換、およびジメチルスルホキシドのよう
な有機溶媒の存在下でのトキソイドへの結合体化を記載した。結合体化の他の多
くの方法は当該分野で公知である。

【００８１】 キャリア化合物は、ＰＳ／Ａ抗原へと直接連結され得るか、またはリンカーも
しくはスペーサーを介してＰＳ／Ａ抗原へと連結され得る。多糖は、当該分野で
公知の任意の手段によって、例えば、多糖の遊離還元末端を用いて、リンカーま
たはスペーサーへとカップリングされて、スペーサーまたはリンカーとの共有結
合を生成し得る。共有結合は、ＰＳ／Ａ抗原の遊離還元末端を、遊離１−アミノ
グリコシドへと変換することによって生成され得、遊離１−アミノグリコシドは
続いて、アシル化によってスペーサーへと共有結合され得る（Ｌｕｎｄｑｕｉｓ
ｔら，Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍ．，１０：３７７（１９９１）
）。あるいは、ＰＳ／Ａ抗原は、スペーサー上の活性化基としてＮ−ヒドロキシ
スクインイミド活性エステルを用いてスペーサーへと共有結合され得る（Ｋｏｃ
ｈｅｔｋｏｗ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１４６：Ｃ１（
１９８６））。ＰＳ／Ａ抗原の遊離還元末端はまた、ヨウ素および水酸化カリウ
ムを用いてラクトンへと変換され得る（Ｉｓｅｂｅｌｌら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏ
ｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９６２））。このラクトンは、スペーサーまたは
リンカー上の一級アミノ基によってスペーサーへと共有結合され得る。ＰＳ／Ａ
抗原の遊離の還元末端はまた、還元的アミノ化を用いてリンカーまたはスペーサ
ーへと共有結合され得る。

【００８２】 ＰＳ／Ａ抗原へと連結されるキャリア化合物は、免疫学的に活性かまたは不活
性なタンパク質であり得る。タンパク質としては、例えば、血漿タンパク質（例
えば、血清アルブミン、免疫グロブリン、アポリポタンパク質およびトランスフ
ェリン）、細菌ポリペプチド（例えば、ＴＲＰＬＥ、β−ガラクトシダーゼ）、
ポリペプチド（例えば、ヘルペスｇＤタンパク質、アレルゲン、ジフテリアトキ
ソイドおよび破傷風トキソイド、サルモネラフラジェリン、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕ
ｓピリン、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓの１５ｋＤａ、２８〜３０ｋＤａ、および４０
ｋＤａの膜タンパク質、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、熱不安定性エンテ
ロトキシンｌｔｂ、コレラトキシンならびにウイルスタンパク質（ロタウイルス
ＶＰならびにＲＳウイルスｆタンパク質およびｇタンパク質を含む））が挙げら
れる。本発明によって有用であるタンパク質としては、哺乳動物への投与が安全
であり、そして免疫学的に有効なキャリアタンパク質として作用する、任意のタ
ンパク質が挙げられる。

【００８３】 ポリクローナル抗体を調製するために、ＰＳ／Ａ抗原または抗原結合体は、一
般に、Ｆｒｅｕｎｄ完全アジュバントまたは他のアジュバント（ウサギまたはマ
ウスについては、３容量のＦｒｅｕｎｄ中でそれぞれ、１ｍｇまたはμｇの結合
体）と合わされ、そして皮内に複数の部位で注射される。約１ヶ月後、この動物
は、Ｆｒｅｕｎｄ完全アジュバント中の抗原または抗原結合体の元の量の１／５
〜１／１０で、複数の部位での皮下注射によって追加免疫される。１〜２週間後
、この動物が採血され、そして血清が、抗体の存在についてアッセイされる。こ
の動物は、抗体力価がプラトーに達するまで繰返し追加免疫され得る。この動物
は、ＰＳ／Ａ抗原単独で、ＰＳ／Ａ抗原結合体で、または異なるキャリア化合物
に結合体化されたＰＳ／Ａで追加免疫され得る。凝集因子（例えば、ミョウバン
）もまた、免疫応答を増強するために用いられ得る。

【００８４】 ポリクローナル抗体の供給源を供給することに加えて、免疫された動物は、Ｐ
Ｓ／Ａ抗原特異的モノクローナル抗体を生成するために用いられ得る。本明細書
中で用いられる場合、用語「モノクローナル抗体」とは、ＰＳ／Ａの１つのエピ
トープ（すなわち、抗原決定基）に特異的に結合する免疫グロブリンの均質集団
をいう。モノクローナル抗体は、当該分野で公知の任意の方法によって、例えば
、免疫された動物から単離された脾細胞を、例えば、骨髄腫細胞との融合または
エプスタイン−バーウイルスでの形質転換によって不死化し、そして所望の抗体
を発現するクローンについてスクリーニングすることによって調製され得る。モ
ノクローナル抗体を調製および使用するための方法は当該分野で周知である。

【００８５】 マウス抗ＰＳ／Ａモノクローナル抗体は、ＰＳ／Ａを免疫原として利用するこ
れらの方法のいずれかによって作製され得る。抗ＰＳ／Ａモノクローナル抗体を
開発するための方法についての以下の記載は例示であり、そして説明の目的のた
めにのみ提供される。Ｂａｌｂ／ｃマウスは、完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバント中
の約７５〜１００μｇの精製されたＰＳ／Ａを用いて腹腔内免疫される。不完全
Ｆｒｅｕｎｄアジュバント中での約２５〜５０μｇのＰＳ／Ａの追加免疫注射は
、初回注射の約１５日後および約３５日後に投与される。６０〜６５日目に、こ
のマウスは、アジュバントの非存在下での約２５μｇのＰＳ／Ａの追加免疫注射
を受ける。３日後、このマウスを殺し、そして単離された脾細胞を、Ｏｉ（Ｏｉ
ＶＴ：Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｈｙｂｒｉｄ
ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｉｎ Ｈｅｚｅｎｂｅｒｇ ＬＡ（編）：ｓｅｌｅｃｔ
ｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓａｎ Ｆ
ｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ，Ｆｒｅｅｍａｎ（１９８０））によって記載された手
順のような手順によってポリエチレングリコールを用いてマウス骨髄腫ＮＳ−１
細胞に融合する。ハイブリドーマ細胞を、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよ
びチミジンを用いて選択し、そして培養して増殖させる。融合の１４〜１５日後
、抗ＰＳ／Ａモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマ細胞を、固相放射免
疫アッセイを用いて、抗ＰＳ／Ａ抗体を、固定化ヤギ抗マウスＩｇＧを用いて馴
化培地から捕獲し、続いて特異的に結合した¹²⁵Ｉ標識ＰＳ／Ａを定量すること
によって同定する。ＰＳ／Ａに対する抗体について陽性と試験されるハイブリド
ーマを、限界希釈によってサブクローン化し、そして再度試験する。次いで、こ
のハイブリドーマについての腹水を、プリスタン（ｐｒｉｓｔａｎｅ）で処理し
たＢＡＬＢ／ｃマウスに約１×１０⁶細胞／マウスを注射することによって調製
する。選択されたモノクローナル抗体が濃縮された濃縮物を、Ｓ−２００でのゲ
ル濾過によって腹水から生成し、そして（ＮＨ₄）ＳＯ₄を用いて濃縮する。この
ペレットを適切な保存溶液（例えば、５０％グリセロール／Ｈ₂Ｏ）中に溶解し
、そして４℃にて保存する。

【００８６】 本明細書中で用いられる「抗ＰＳ／Ａ抗体」としては、ヒト化抗体および抗体
フラグメント、ならびにインタクトなモノクローナル抗体およびインタクトなポ
リクローナル抗体が挙げられる。

【００８７】 好ましい実施態様では、本発明の方法に従って有用な抗ＰＳ／Ａ抗体は、単離
された形態または薬学的調製物中のインタクトなヒト化抗ＰＳ／Ａモノクローナ
ル抗体である。本明細書中に用いられる場合、「ヒト化モノクローナル抗体」は
、ヒトモノクローナル抗体、またはヒトの定常領域およびヒト以外の哺乳動物種
由来のＰＳ／Ａ結合領域を有する、その機能的に活性なフラグメントである。

【００８８】 ヒトモノクローナル抗体は、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋらに対して発行された米国
特許第５，５６７，６１０号、Ｏｓｔｂｅｒｇに対して発行された米国特許第５
，５６５，３５４号、Ｂａｋｅｒらに対して発行された米国特許第５，５７１，
８９３号、Ｋｏｚｂｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）
、Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃ
ｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，５１−
６３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）
およびＢｏｅｒｎｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６−９５（１９９
１）に開示される方法のような、当該分野で公知の任意の方法によって作製され
得る。ヒトモノクローナル抗体を調製するための従来の方法に加えて、このよう
な抗体はまた、ヒト抗体を生成し得るトランスジェニック動物を免疫することに
よって調製され得る（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，９
０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：
２５５−２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）およびＬｏｂｅｒｇに対して発行された米
国特許第５，５６９，８２５号）。

【００８９】 ＰＳ／Ａと相互作用するヒト化モノクローナル抗体を調製するための方法につ
いての以下の実施例は、例示であり、そして実証の目的のために提供するだけで
ある。ヒト化モノクローナル抗体は、例えば、元々の抗体のエピトープ特異性を
保持しながらも、非ヒト哺乳動物抗体の非ＣＤＲ領域を、ヒト抗体の類似の領域
で置換することによって構築され得る。例えば、非ヒトＣＤＲおよび必要に応じ
ていくつかのフレームワーク領域は、ヒトのＦＲおよび／またはＦｃ／ｐＦｃ’
領域と共有結合されて、機能的抗体を生成し得る。米国には、特定のマウス抗体
領域から商業的にヒト化抗体を合成する実体（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓ
ｉｇｎ Ｌａｂｓ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ））が
存在する。

【００９０】 欧州特許出願０２３９４００（その内容全体は、本明細書中に参考として援用
される）は、マウス（または他の非ヒト哺乳動物）抗体の少なくともＣＤＲ領域
がヒト化抗体中に含まれている、ヒト化モノクローナル抗体の生成および使用の
例示的な教示を提供する。手短には、以下の方法は、マウスＣＤＲの少なくとも
一部分を含むヒト化ＣＤＲモノクローナル抗体を構築するために有用である。Ｉ
ｇ重鎖またはＩｇ軽鎖の少なくとも可変ドメイン、およびヒト抗体由来のフレー
ムワーク領域を含む可変ドメイン、ならびにマウス抗体のＣＤＲ領域をコードす
るＤＮＡ配列に作動可能に連結された適切なプロモーターを含む第１の複製可能
な発現ベクターが調製される。必要に応じて、それぞれ、相補的なヒトＩｇ軽鎖
またはヒトＩｇ重鎖の少なくとも可変ドメインをコードするＤＮＡ配列に作動可
能に連結された適切なプロモーターを含む、第２の複製可能な発現ベクターが調
製される。次いで、細胞株が、これらのベクターで形質転換される。好ましくは
、この細胞株は、リンパ系起源の不死化された哺乳動物細胞株（例えば、骨髄腫
、ハイブリドーマ、トリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）またはクアドローマ（ｑｕａｄ
ｒｏｍａ）の細胞株）であるか、ウイルスでの形質転換によって不死化された正
常リンパ系細胞である。次いで、形質転換された細胞株は、当業者に公知の条件
下で培養されて、ヒト化抗体を生成する。

【００９１】 欧州特許出願０２３９４００に示されるように、複製可能なベクター中に挿入
されるべき特定の抗体ドメインを作製するためのいくつかの技術が当該分野にお
いて周知である（好ましいベクターおよび組換え技術は、以下でより詳細に考察
される）。例えば、このドメインをコードするＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチ
ド合成によって調製され得る。あるいは、４つのフレームワーク領域が連結部で
適切な制限部位と一緒に融合されている、ＣＤＲ領域を欠く合成遺伝子が、その
結果、二本鎖の合成ＣＤＲ活性カセットまたは粘着末端を有する制限処理された
サブクローン化ＣＤＲカセットが、このフレームワーク領域の連結部で連結され
得る。別の方法は、オリゴヌクレオチド部位特異的変異誘発による、可変ＣＤＲ
含有ドメインをコードするＤＮＡ配列の調製を含む。これらの方法の各々は、当
該分野で周知である。それゆえ、当業者は、そのエピトープに対する抗体の特異
性を破壊することなく、マウスＣＤＲ領域を含むヒト化抗体を構築し得る。

【００９２】 ヒト化抗体は、これらがＰＳ／Ａを特異的に認識するが、抗体自体に対してヒ
トにおいて免疫応答が惹起されないという点で特定の臨床的有用性を有する。最
も好ましい実施態様では、マウスＣＤＲは、ヒト抗体のフレームワーク領域に移
植されて、「ヒト化抗体」が調製される。例えば、Ｌ．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，
Ｎａｔｕｒｅ ３３２、３２３（１９８８）；Ｍ．Ｓ．Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、
Ｎａｔｕｒｅ ３１４、２６８（１９８５）およびＥＰＡ ０ ２３９ ４００
（１９８７年９月３０日公開）を参照のこと。

【００９３】 ＰＳ／Ａ結合抗体フラグメントもまた、本発明によって包含される。当該分野
で公知であるように、抗体分子の小さい一部分（パラトープ）しかそのエピトー
プへの抗体の結合に関与しない（一般に、Ｃｌａｒｋ，Ｗ．Ｒ．（１９８６）Ｔ
ｈｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒ
ｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ；Ｒｉｔｔ，Ｉ．（１９９１）Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ、第７版，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉ
ｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）。例えば、この抗体のｐＦｃ’およびＦｃ領域は、補体
カスケードのエフェクターであるが、抗原結合に関与しない。ｐＦｃ’領域が酵
素的に切断された抗体、またはｐＦｃ’領域を伴わずに生成された抗体（Ｆ（ａ
ｂ’）₂フラグメントと称される）は、インタクトな抗体の両方の抗原結合部位
を保持する。単離されたＦ（ａｂ’）₂フラグメントは、その２つの抗原結合部
位のおかげで二価のモノクローナルフラグメントと呼ばれる。同様に、Ｆｃ領域
が酵素的に切断される抗体、またはＦｃ領域を伴わずに生成された抗体（Ｆａｂ
フラグメントと称される）は、インタクトな抗体分子の一方の抗原結合部位を保
持する。さらに進んで、Ｆａｂフラグメントは、共有結合された抗体軽鎖および
Ｆｄ（重鎖可変領域）と称される抗体重鎖の一部分からなる。Ｆｄフラグメント
は、主要な抗原特異性決定基であり（単一のＦｄフラグメントが、抗体特異性を
変更することなく、１０までの異なる軽鎖と会合し得）、そしてＦｄフラグメン
トは、エピトープ結合能力を分離して保持する。

【００９４】 用語Ｆａｂ、Ｆｃ、ｐＦｃ’、Ｆ（ａｂ’）₂およびＦｖは、いずれかの標準
的な免疫学的意味で用いられる［Ｋｌｅｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８２）；Ｃｌａｒｋ，Ｗ．Ｒ．（
１９８６）Ｔｈｅ Ｅｘｐｒｉｍｅｎｔａｌ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ ｏｆ
Ｍｏｄｅｒｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｒｏｉｔｔ，Ｉ．（１９９１）Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ，第７版（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕ
ｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）］。周知の機能的に活性な抗体フラグメ
ントとしては、抗体のＦ（ａｂ’）₂、Ｆａｂ、ＦｖおよびＦｄフラグメントが
挙げられるがこれらに限定されない。インタクトな抗体のＦｃフラグメントを欠
くこれらのフラグメントは、インタクトな抗体よりも迅速に循環から浄化され、
そしてインタクトな抗体よりも低い非特異的組織結合を有する（Ｗａｈｌら，Ｊ
．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６−３２５（１９８３））。例えば、単鎖抗体
は、Ｌａｄｎｅｒに対する米国特許第４，９４６，７７８号に記載される方法に
従って構築され得る。このような単鎖抗体としては、可撓性リンカー部分によっ
て連結された軽鎖および重鎖の可変領域が挙げられる。単離された可変重鎖単一
ドメインを含む単一ドメイン抗体（「Ｆｄ」）を得るための方法もまた報告され
ている（例えば、その標的エピトープに対する充分な親和性を有して、単離され
た形態でそれに結合する、抗体重鎖可変領域（Ｖ_H単一ドメイン抗体）をスクリ
ーニングして同定するための方法を開示する、Ｗａｒｄら，Ｎａｔｕｒｅ ３４
１：６４４−６４６（１９８９）を参照のこと）。公知の抗体重鎖および抗体軽
鎖の可変領域の配列に基づく、組換えＦ_vフラグメントを作製するための方法は
、当該分野で公知であり、そして例えば、Ｍｏｏｒｅら、米国特許第４，４６２
，３３４号に記載されている。抗体フラグメントの使用および生成を記載する他
の参考文献としては、例えば、Ｆａｂフラグメント（Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｐｒａｃ
ｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａ
ｙｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５））、Ｆｖフラグメ
ント（Ｈｏｃｈｍａｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １２：１１３０（１９７
３）；Ｓｈａｒｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １５：１５９１（１９７６
）；Ｅｈｒｉｌｃｈら，米国特許第４，３５５，０２３号）、および抗体分子の
一部分（Ａｕｄｉｌｏｒｅ−Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ，米国特許第４，４７０，９
２５号）が挙げられる。従って、当業者は、ＰＳ／Ａエピトープについての抗体
の特異性を破壊することなく、抗体フラグメントを、インタクトな抗体の種々の
部分から構築し得る。

【００９５】 本発明の抗体フラグメントはまた、「ヒト化抗体フラグメント」を包含する。
当業者が認識するように、このようなフラグメントは、インタクトなヒト化抗体
の伝統的な酵素的切断によって調製され得る。しかし、インタクトな抗体が、含
まれる構築物の性質によってこのような切断を受けない場合、上記の構築物は、
出発物質として用いられる免疫グロブリンフラグメントを用いて調製され得るか
；または組換え技術が用いられる場合、このＤＮＡ配列はそれ自体が、所望の「
フラグメント」をコードするように調製され得、このフラグメントは、発現され
た場合、化学的手段または生物学的手段によってインビボまたはインビトロで合
わされて、最終的な所望のインタクトな免疫グロブリンフラグメントを調製し得
る。

【００９６】 以下に示す、本発明の診断方法のためのＰＳ／Ａについての結合特異性を有す
る抗体フラグメントおよび他のＰＳ／Ａ結合ポリペプチドはまた、本発明によっ
て包含される。いくつかの慣用的アッセイを用いて、このようなペプチドを容易
に同定し得る。本発明のペプチドを同定するためのスクリーニングアッセイは、
例えば、Ｈａｒｔら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１２４６８（１９９４
）に記載される手順のようなファージディスプレー手順を用いて行われる。Ｈａ
ｒｔらは、哺乳動物細胞レセプターについての新規なペプチドリガンドを同定す
るための糸状ファージディスプレーライブラリーを報告する。一般に、例えば、
Ｍ１３またはｆｄファージを用いる、ファージディスプレーライブラリーは、上
記の参考文献において記載される手順のような従来の手順を用いて調製される。
このライブラリーは、４〜８０アミノ酸残基を含む挿入物を提示する。この挿入
物は必要に応じて、完全に縮重したまたは偏ったペプチドアレイを提示する。Ｐ
Ｓ／Ａに選択的に結合するリガンドは、表面にＰＳ／Ａに結合するリガンドを発
現するファージを選択することによって入手される。次いで、これらのファージ
は、何回かの再選択に供されて、最も有用な結合特性を有するペプチドリガンド
発現ファージが同定される。代表的には、最良の結合特性（例えば、最大の親和
性）を示すファージは、核酸分析によってさらに特徴付けられて、ファージ表面
上に発現されるペプチドの特定のアミノ酸配列、およびＰＳ／Ａに対する最適結
合を達成するために最適の発現ペプチド長が同定される。あるいは、このような
ペプチドリガンドは、１以上のアミノ酸を含むペプチドのコンビナトリアルライ
ブラリーから選択され得る。天然に存在する対応物と比較して酵素分解にあまり
供されない非ペプチド性合成部分を含むこのようなライブラリーはさらに合成さ
れ得る。

【００９７】 ペプチドがＰＳ／Ａに結合するか否かを決定するために、任意の公知の結合ア
ッセイが用いられ得る。例えば、ペプチドは、表面に固定化され得、次いで標識
されたＰＳ／Ａと接触させ得る。次いで、このペプチドと相互作用するＰＳ／Ａ
の量またはこのペプチドに結合しなかった量が定量されて、このペプチドがＰＳ
／Ａに結合するか否かが決定される。抗ＰＳ／Ａ抗体が固定された表面は、ポジ
ティブコントロールとして役立ち得る。

【００９８】 本発明の組成物は、インビボおよびインビトロでの多くの目的のために有用で
ある。例えば、本発明の組成物は、抗体応答を生成するために、例えば、Ｓ．ａ
ｕｒｅｕｓ感染およびＰＳ／Ａ抗原を作製する他の細菌種によって引き起こされ
る感染を予防するためのヒトおよび動物の能動免疫のためのワクチンとして；他
のヒトまたは動物に投与されてＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染を予防または
処置し得る抗ＰＳ／Ａ抗体を生成するためのヒトまたは動物の免疫のワクチンと
して；重要な生物学的因子（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染を予防し得るモノク
ローナル抗体、抗体の作製に関与する遺伝子のライブラリー、またはペプチド模
倣物）についてスクリーニングするための抗原として；Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染お
よびＰＳ／Ａ抗原を作製する他の細菌種によって引き起こされる感染についての
診断試薬として；ならびにＳ．ａｕｒｅｕｓ感染およびＰＳ／Ａ抗原を作製する
他の細菌種によって引き起こされる感染に対する感受性に関して、ヒトまたは動
物の免疫学的状態を決定するための診断試薬として、有用である。

【００９９】 本発明のＰＳ／Ａは、被験体におけるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染に対
する能動免疫を誘導することによって、ＰＳ／Ａ莢膜をその表面に有する細菌で
の感染に対して被験体を防御するために用いられ得る。この方法は、Ｓｔａｐｈ
ｙｌｏｃｏｃｃｕｓに対する能動免疫を誘導するために有効な量の、上記の本発
明の任意のＰＳ／Ａ組成物を被験体に投与することにより達成される。

【０１００】 本明細書中で用いられる場合、「能動免疫」は、抗原が、抗体を生成する細胞
へのいくつかのリンパ系細胞の分化および記憶細胞への他のリンパ系細胞の分化
を引き起こすような、被験体への抗原の導入を含む。この記憶細胞は、抗体を分
泌しないが、むしろ、抗原が再度身体に投与された場合にその抗原を感知するた
めに、抗体をその膜に取り込む。

【０１０１】 この方法は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓによる感染に対する免疫を誘導す
るために有用である。本明細書中で用いられる場合、「Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓ」とは、ＰＳ／Ａ含有莢膜を発現する全てのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ菌種をいう。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓとして分類される細菌は、当業者
に周知であり、そして微生物学の文献に記載される。ＰＳ／Ａ含有莢膜を発現す
るＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓとしては、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅ
ｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（ＲＰ６２Ａ（ＡＴＣＣ番号：３５９８４）、ＲＰ１２（
ＡＴＣＣ番号：３５９８３）、およびＭ１８７を含む）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＲＮ４２２０（ｐＣＮ２７）およびＭＮ８ムコイドを
含む）、ならびにｉｃａ遺伝子座における遺伝子（ＴＭ３００（ｐＣＮ２７）を
含む）で形質転換されたＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｒｎｏｓｕｓのよ
うな株が挙げられるがこれらに限定されない。ＰＳ／Ａ含有莢膜を発現する他の
細菌株は、当業者によって容易に同定され得る。例えば、ｉｃａ遺伝子座を発現
するＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌は、ＰＳ／Ａ含有莢膜を発現する。当業者
は、ｉｃａ遺伝子座に関連したｍＲＮＡまたはタンパク質の発現について容易に
スクリーニングし得る。なぜなら、ｉｃａ遺伝子座の核酸配列は公知であるから
である（配列番号１、そしてＨｅｉｌｍａｎｎ，Ｃ．，Ｏ．Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅ
ｒ，Ｃ．Ｇｅｒｋｅ，Ｎ．Ｖａｎｉｔｔａｎａｋｏｍ，Ｄ．ＭａｃｋおよびＦ．
Ｇｏｔｚ（１９９６）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｃｅ
ｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｏｆｉｌｍ−ｆｏｒｍｉ
ｎｇ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ．Ｍｏｌｅｃ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０：１０８３に元々記載される）。Ｈｅｉｌｍａｎｎの
刊行物は、ｉｃａ遺伝子座の核酸配列を記載するが、この刊行物は、この遺伝子
座が、ＰＩＡ抗原の生成をコードすると誤って述べている。ｉｃａが、実際にＰ
Ｓ／Ａの生成に関与するタンパク質をコードすることが本発明によって見出され
た。ＰＳ／Ａ含有莢膜を発現する細菌株もまた、以下の実施例６に記載される通
りに、抗ＰＳ／Ａ抗体を用いる免疫電子顕微鏡（または他の免疫アッセイ）によ
って同定されて、細菌の表面上の莢膜の存在を検出し得る。さらに、細菌株の莢
膜は、実施例１に記載の通りに単離され得、そして以下の実施例４に記載の通り
に液体クロマトグラフィーおよび質量分析法を用いて分析され得る。

【０１０２】 本明細書中で記載される場合、「被験体」は、温血哺乳動物であり、そして例
えば、ヒト、霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、ニワトリ、イヌおよび
ネコを含む。

【０１０３】 本発明のＰＳ／Ａは、抗原に対する免疫応答を誘導し得る任意の被験体に投与
され得るが、免疫応答を誘導し得、かつＳａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染を発症
する危険性がある被験体において、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓによって引き
起こされる全身感染に対する能動免疫を誘導するために特に適応される。免疫応
答を誘導し得、かつＳａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染を発症する危険性がある被
験体は、環境のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓに曝露される危険性のある、正常な
健常な免疫系を保有する哺乳動物である。例えば、他の点では免疫無防備状態に
ない入院患者は、病院の環境におけるこの細菌への曝露の結果として、Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染を発症する危険性がある。詳細には、Ｓ．ａｕｒｅｕ
ｓによる感染を発症することについての危険性が高い集団としては、例えば、透
析される腎臓疾患患者、および危険性の高い手術を受ける個体が挙げられる。Ｓ
．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓによる感染を発症する危険性が高い集団としては、例
えば、留置医療デバイスを有する患者が挙げられる。なぜなら、臨床的単離体は
、しばしば、生体膜またはスライムと呼ばれる細胞外物質の結果として、プラス
チック表面に対して高度に接着性であるからである。

【０１０４】 本発明のＰＳ／Ａは、抗体応答を誘導するために有効な量で被験体に投与され
る。本明細書中で用いられる場合、「抗体応答を誘導するために有効な量」は、
以下を行うに充分であるＰＳ／Ａの量である：（ｉ）例えば、被験体における抗
ＰＳ／Ａ抗体の生成を誘導すること、記憶細胞の生成を誘導すること、細胞傷害
性リンパ球反応を誘導することなどによって、それ自体の免疫防御を生成するこ
とにおいて被験体を補助すること、および／または（ｉｉ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ
ｏｃｃｕｓによる感染が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓに曝露された被験体に
おいて引き起こされるのを防御すること。

【０１０５】 当業者は、当該分野で公知の慣用方法によって、ＰＳ／Ａの量が、能動免疫を
誘導するために充分であるか否かを評価し得る。例えば、特定の抗原が哺乳動物
において抗体を生成する能力は、マウスまたは他の被験体においてＰＳ／Ａ抗原
をスクリーニングすることによって評価され得る。

【０１０６】 本発明の好ましい方法は、被験体において特にＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓによる感染に対する能動免疫を誘導するための方法である。本発
明の前には、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓが、その表面にＰＳ
／Ａを発現することは公知でなかった。ＣＰ５およびＣＰ８がＳｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの外部莢膜を構成し、そしてこれらの莢膜が免疫を
誘導するための有用な抗原であり得ると考えられていた。しかし、本発明によっ
て、ＰＳ／Ａが、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓによる感染に対
する能動免疫を誘導する際に抗原として有用であることが見出された。それゆえ
、本発明は、ポリグルコサミン骨格を有する高分子量多糖を被験体に投与するこ
とにより免疫を誘導する方法を含み、ここでこのポリグルコサミン骨格の個々の
グルコサミン単位の少なくとも１０％は、Ｃ２原子のアミンを通してスクシネー
トに結合体化されている。

【０１０７】 本発明の抗ＰＳ／Ａ抗体は、感染性因子への曝露の危険性がある被験体におけ
る全身感染の発症を予防することにより、被験体における受動免疫を誘導するた
めに有用である。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓによる感染に対
する受動免疫を誘導するための方法は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒ
ｅｕｓのオプソニン作用を誘導するために有効な量の抗ＰＳ／Ａ抗体を被験体に
投与することによって行われる。

【０１０８】 本明細書中で用いられる場合、「受動免疫」は、被験体への抗体の投与を含み
、ここでこの抗体は、異なる被験体（同種および異種の被験体を含む）において
生成され、その結果、この抗体はこの細菌の表面に付着し、そしてこの細菌を食
菌させる。

【０１０９】 本発明の抗ＰＳ／Ａ抗体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染を発症する危
険性のある任意の被験体に対して投与されて、受動免疫を誘導し得る。抗ＰＳ／
Ａ抗体は、抗原に対する免疫応答を誘導できない被験体に対してさらに投与され
得る。ＰＳ／Ａ抗原でのワクチン接種は危険性の高い免疫無防備状態の被験体に
おいては有効でないかもしれないが、これらの被験体は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓに対
して惹起された抗体調製物での処置によって利益を受ける。免疫応答を誘導でき
ない被験体は、免疫無防備状態の被験体（例えば、化学療法を受けている患者、
ＡＩＤＳ患者など）または免疫系がまだ発達していない被験体（例えば、早産児
）である。抗ＰＳ／Ａ抗体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染を発症する危
険性のある被験体に投与されて、感染性因子が身体中で増殖するのを予防し得る
か、または感染性因子を殺傷し得る。抗ＰＳ／Ａ抗体はまた、Ｓｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓによって引き起こされる感染を既に有する被験体に投与されて、感
染性因子が身体中で増殖するのを予防し得るか、または感染性因子を殺傷し得る
。

【０１１０】 本発明の抗ＰＳ／Ａ抗体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに
対する免疫応答を誘導するに有効な量で被験体に投与される。本明細書中で用い
られる場合、「Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに対する免疫応答
を誘導するために有効な量」は、以下を行うに充分であるＰＳ／Ａの量である：
（ｉ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓによる感染が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓに曝露された被験体において引き起こされるのを防御すること；（ｉｉ）感
染が発症するのを阻害すること、すなわち、その発症を阻止または遅延させるこ
と；および／または（ｉｉｉ）感染を軽減すること、すなわち、この感染を引き
起こす細菌の根絶。

【０１１１】 当業者に公知の慣用手順を用いて、抗ＰＳ／Ａ抗体の量が、「Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに対する免疫応答を誘導するために有効な量」で
あるか否かを、抗体のオプソニン作用の程度を示す、インビトロでのオプソニン
作用アッセイにおいて決定し得る。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌にオプソニ
ンを作用させる抗体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌のサンプルに添加され
た場合にこの細菌のファゴサイトーシスを引き起こす抗体である。オプソニン作
用アッセイは、比色アッセイ、化学発光アッセイ、蛍光または放射標識取り込み
アッセイ、細胞媒介殺菌アッセイまたは物質のオプソニン能を測定する他のアッ
セイであり得る。例えば、以下のオプソニン作用アッセイを用いて、抗ＰＳ／Ａ
抗体の有効量を決定し得る。この抗ＰＳ／Ａ抗体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ菌および真核生物ファゴサイト性細菌、ならびに必要に応じて補体タンパク
質とともにインキュベートされる。抗ＰＳ／Ａ抗体のオプソニン作用能力は、イ
ンキュベーション後に残存するＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓの量に基づいて決
定される。このことは、生存するＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓの数を２つの類
似のアッセイ（一方のみがオプソニンを作用させる免疫グロブリンを含む）の間
で比較することにより、またはアッセイの前および後で生存Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ
ｏｃｃｕｓの数を測定することにより、達成され得る。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓの数の減少は、オプソニン作用を示す。

【０１１２】 本発明の方法はまた、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓのオプ
ソニン作用を誘導するために有効な量の抗ＰＳ／Ａ_pure抗体を被験体に投与する
ことによって、被験体においてコアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
に対する受動免疫を誘導するために有用である。コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｕｓから単離されたＰＳ／Ａに対する抗体は当該分野で開発されて
おり、かつコアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓに対する受動免疫を
誘導するために用いられているが、抗ＰＳ／Ａ_pure抗体は、以前にはこの目的の
ために用いられていない。本明細書中で用いられる場合、抗ＰＳ／Ａ_pure抗体は
、本発明の純粋なＰＳ／Ａ抗原と特異的に相互作用する抗体であって、コアグラ
ーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓのオプソニン作用を誘導するが、先行技
術のＰＳ／Ａの不純な調製物とは相互作用しない抗体である。上記で考察される
ように、先行技術の不純なＰＳ／Ａ調製物は、テイコ酸が混入しており、テイコ
酸は、この抗原の免疫原性を妨害した。本発明の抗ＰＳ／Ａ_pure抗体は、テイコ
酸が混入したＰＳ／Ａ調製物と相互作用しない。当業者は、慣用的な結合アッセ
イを用いることにより、抗ＰＳ／Ａ抗体が、不純なＰＳ／Ａ調製物と交叉反応し
ない抗ＰＳ／Ａ_pure抗体であるか否かを容易に同定し得る。例えば、抗ＰＳ／Ａ
抗体を、表面に固定化し得、次いで標識された不純なＰＳ／Ａ調製物または標識
された純粋なＰＳ／Ａ調製物と接触させ得る。次いで、この抗体と相互作用する
ＰＳ／Ａ調製物（純粋な調製物対不純な調製物）の量、または抗体に結合しない
量を定量して、この抗体が不純なＰＳ／Ａ調製物に結合するか否かを決定し得る
。この抗体が純粋なＰＳ／Ａ調製物と相互作用するが不純なＰＳ／Ａ調製物と相
互作用しないならば、この抗体は、本発明の抗ＰＳ／Ａ_pure抗体である。

【０１１３】 Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓによる感染を発症する高い危険性を有する被験体
としては、早産児、化学療法を受けている患者、および留置医療デバイスを有す
る他の患者が挙げられる。臨床的単離体はしばしば、それらが生体膜またはスラ
イムと呼ばれる細胞外物質を合成する結果として、プラスチック表面に対して高
度に接着性である。

【０１１４】 ＰＳ／Ａ抗原を用いて細菌感染を予防する場合、ＰＳ／Ａ抗原はワクチンとし
て処方される。ワクチンを処方するために適切なキャリア媒体としては、リン酸
ナトリウム緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）またはｐＨ６でリン酸ナトリウム緩
衝化生理食塩水中に懸濁した０．１２５Ｍリン酸アルミニウムゲル、および従来
の他の媒体が挙げられる。一般に、ワクチンは、約５μｇ〜約１００μｇを含み
、好ましくは約１０μｇ〜約５０μｇの抗原が、温血哺乳動物においてＰＳ／Ａ
抗原に対する有効なレベルの抗体を惹起するために適切である。ワクチンとして
投与される場合、ＰＳ／Ａは、必要に応じてアジュバントを含み得る。

【０１１５】 用語「アジュバント」は、本発明のＰＳ／Ａ中に取り込まれるか、または本発
明のＰＳ／Ａと同時に投与される、被験体における免疫応答を増強する任意の物
質を含むことが意図される。アジュバントとしては、アルミニウム化合物（例え
ば、ゲル、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム）、ならびにＦｒｅｕ
ｎｄ完全アジュバントまたはＦｒｅｕｎｄ不完全アジュバント（ここで、ＰＳ／
Ａ抗原は、パラフィンオイルエマルジョン中の安定化された水の水相において取
り込まれる）が挙げられる。このパラフィンオイルは、異なる型のオイル（例え
ば、スクアレンまたはラッカセイオイル）で置換され得る。アジュバント特性を
有する他の物質としては、ＢＣＧ（弱毒化Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂ
ｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、リン酸カルシウム、レバミゾール、イソプリノシン（ｉ
ｓｏｐｒｉｎｏｓｉｎｅ）、ポリアニオン（例えば、ポリＡ：Ｕ）、レンチナン
、百日咳毒素、リピドＡ、サポニン、およびペプチド（例えば、ムラミルジペプ
チド）が挙げられる。希土類塩（例えば、ランタンおよびセリウム）もまたアジ
ュバントとして用いられ得る。アジュバントの量は、被験体および用いられる特
定のＰＳ／Ａ抗原に依存し、そして過度の実験を伴わずに当業者によって容易に
決定され得る。

【０１１６】 一般に、治療目的で投与される場合、本発明の処方物は、薬学的に受容可能な
溶液中で適用される。このような調製物は、慣用的に、薬学的に受容可能な濃度
の塩、緩衝剤、保存剤、適合性のキャリア、アジュバントおよび必要に応じて他
の治療成分を含み得る。

【０１１７】 本発明の組成物は、それ自体（ニート）で、または薬学的に受容可能な塩の形
態で投与され得る。医療で用いられる場合、この塩は、薬学的に受容可能である
べきであるが、薬学的に受容可能でない塩も便利に用いられて、その薬学的に受
容可能な塩を調製し得、そして薬学的に受容可能でない塩は、本発明の範囲から
除外されない。このような薬理学的および薬学的に受容可能な塩としては、以下
の酸から調製される塩が挙げられるがこれらに限定されない：塩酸、臭化水素酸
、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン
酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸、マロン酸、コハク酸、ナフタ
レン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、薬学的に受容可能な
塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類塩（例えば、カルボン酸基のナトリウム
塩、カリウム塩またはカルシウム塩）として調製され得る。

【０１１８】 適切な緩衝剤としては、酢酸および塩（１〜２％ Ｗ／Ｖ）；クエン酸および
塩（１〜３％ Ｗ／Ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ Ｗ／Ｖ）；なら
びにリン酸および塩（０．８〜２％ Ｗ／Ｖ）が挙げられる。適切な保存剤とし
ては、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ Ｗ／Ｖ）；クロロブタ
ノール（０．３〜０．９％ Ｗ／Ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ Ｗ／
Ｖ）およびチメロサール（０．００４〜０．０２％ Ｗ／Ｖ）が挙げられる。

【０１１９】 本発明は、本発明のＰＳ／Ａを１以上の薬学的に受容可能なキャリアおよび必
要に応じて他の治療成分とともに含む医学的使用のための薬学的組成物を提供す
る。本明細書中で使用され、そして以下でより充分に記載される場合、用語「薬
学的に受容可能なキャリア」は、ヒトまたは他の動物への投与のために適切であ
る、１以上の適合性の固形または液体の充填剤、希釈剤またはカプセル化物質を
意味する。本発明では、用語「キャリア」は、適用を促進するために活性成分が
合わされる、天然または合成の、有機成分または無機成分を示す。薬学的組成物
の成分はまた、所望の薬学的効率を実質的に損なう相互作用が存在しない様式て
本発明のＰＳ／Ａ抗原と、および互いに、混合され得る。

【０１２０】 非経口投与に適切な組成物は便利に、レシピエントの血液と等張であり得る、
多糖の無菌の水性調製物を含む。用いられ得る受容可能なビヒクルおよび溶媒の
中には、水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液および等張の塩化ナトリウム溶液がある。さらに
、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁培地として従来通りに用いられる。この
目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意のブレンド
不揮発性油が用いられ得る。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能物
質の調製において用途を見出す。皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内などでの投与に
適切なキャリア処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍｅｃｅｕｔｉｃ
ａｌ Ｓｃｉｅｎｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅ
ａｓｔｏｎ，ＰＡに見出され得る。

【０１２１】 本発明の調製物は、有効量で投与される。上記の通り、有効量は、単独で、ま
たはさらなる用量と一緒に、それぞれ能動免疫または感染性細菌のオプソニン作
用を誘導する、ＰＳ／Ａ抗原または抗ＰＳ／Ａ抗体の量である。１ナノグラム／
キログラム〜１００ミリグラム／キログラムの範囲の用量が、投与の態様に依存
して有効であると考えられる。好ましい範囲は、５００ナノグラム／キログラム
と５００ミリグラム／キログラムとの間であり、最も好ましくは１マイクログラ
ム／キログラムと１００マイクログラム／キログラムとの間であると考えられる
。絶対量は、投与が、まだ細菌に感染していない、危険性の高い被験体について
行われるか、または既に感染を有する被験体について行われるか、同時処置、用
量の数、および個々の患者のパラメーター（年齢、身体状態、大きさおよび体重
を含む）を含む種々の因子に依存する。これらは、当業者に周知の因子であり、
そして単なる慣用実験によって取り組まれ得る。最大用量、すなわち、信頼でき
る医学的判断による最大の安全な用量が用いられることが一般に好ましい。

【０１２２】 本発明の薬学的組成物の複数用量が意図される。全身免疫スキームは、高用量
の抗原の投与、続いて、数週間の期間をあけた後の引き続くより低用量の抗原の
投与を含む。さらなる用量も投与され得る。受動免疫のための投薬スケジュール
は、必要な場合、より頻繁な投与を伴い、全く異なる。細菌感染および／または
その後の感染からの防御に対して増強された免疫応答をもたらす任意のレジメン
が用いられ得る。特定のＰＳ／Ａの複数用量の送達のための所望の時間間隔は、
単なる慣用実験を用いて当業者によって決定され得る。

【０１２３】 種々の投与経路が利用可能である。選択される特定の形態は、もちろん、選択
される特定のＰＳ／Ａ、処置される特定の状態、および治療の効力に必要とされ
る投薬量に依存する。本発明の方法は、一般的に言って、医学的に受容可能であ
る任意の投与形態を用いて実施され得、このことは、臨床的に受容できない有害
な効果を引き起こすことなく、有効レベルの免疫応答を生じる任意の形態を意味
する。好ましい投与形態は、非経口経路である。用語「非経口」は、皮下注射、
静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨下での注射または注入技術を含む。

【０１２４】 この組成物は、単位投薬形態で便利に存在し得、そして薬学の分野で周知の任
意の方法によって調製され得る。全ての方法は、活性なＰＳ／Ａを、１以上の補
助成分を構成するキャリアと会合させる工程を含む。一般に、この組成物は、こ
のポリマーを、液体キャリア、微細に分割した固形キャリアまたは両方と均質か
つ密接に会合させ、次いで、必要な場合は製品に成形することによって調製され
る。このポリマーは、凍結乾燥されて保存され得る。

【０１２５】 他の送達系は、時間放出（ｔｉｍｅ−ｒｅｌｅａｓｅ）送達系、遅延性（ｄｅ
ｌａｙｅｄ）放出送達系または持続性（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ）放出送達系を含み
得る。このような系は、本発明の多糖の反復投与を回避し得、被験体および医師
への利便性を増加する。多くの型の放出送達系が、当業者に利用可能であり、そ
して公知である。これらとしては、ポリマー（例えば、ポリ乳酸およびポリグリ
コール酸、ポリ無水物およびポリカプロラクトン）ベースの系；脂質（ステロー
ル（例えば、コレステロール）、コレステロールエステルおよび脂肪酸または中
性脂肪（例えば、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド）を含
む）である非ポリマー系；ヒドロゲル放出系；シラスティック系；ペプチドベー
スの系；ロウ被覆剤、従来の結合剤および賦形剤を使用する圧縮錠剤、部分的に
融合した移植物などが挙げられる。特定の例としては、以下が挙げられるが、こ
れらに限定されない：（ａ）米国特許第４，４５２，７７５号（Ｋｅｎｔ）；同
第４，６６７，０１４号（Ｎｅｓｔｏｒら）；ならびに同第４，７４８，０３４
号および同第５，２３９，６６０号（Ｌｅｏｎａｒｄ）に見出される、多糖がマ
トリクス中の形態に包含されている侵食性の系、ならびに（ｂ）米国特許第３，
８３２，２５３号（Ｈｉｇｕｃｈｉら）および同３，８５４，４８０号（Ｚａｆ
ｆａｒｏｎｉ）に見出される、活性成分が制御された速度でポリマーを透過する
拡散系。さらに、ポンプベースのハードウェア送達系が使用され得、そのいくつ
かは移植に適合される。

【０１２６】 本発明のＰＳ／Ａ抗原は、それ自体がアジュバント特性を有することもまた、
当業者に理解される。本明細書中に記載の多糖がヒト免疫応答を強化する程度に
、この多糖は、他の材料と組み合わせてアジュバントとして使用され得る。

【０１２７】 本発明のＰＳ／Ａ抗原および抗ＰＳ／Ａ抗体は、別の抗菌性抗生物質薬物と組
合せてか、または抗菌性抗生物質カクテルの形態で、または他の細菌抗原もしく
は細菌抗体とともに送達され得る。抗菌性抗生物質カクテルは、本発明による有
用な任意の組成物と、抗菌性抗生物質薬物との混合物である。細菌感染の処置に
おける抗生物質の使用は慣用的である。能動免疫を誘導するための抗原の使用、
および受動免疫を誘導するための抗体の使用もまた、慣用的である。本実施態様
において、一般的投与ビヒクル（例えば、錠剤、移植物、注入可能な溶液など）
は、本発明において有用な組成物と、抗菌性抗生物質薬物および／または抗原／
抗体との両方を含み得る。あるいは、抗菌性抗生物質薬物および／または抗原／
抗体は、別々に投与され得る。

【０１２８】 抗菌性抗生物質薬物は周知であり、以下が挙げられる：ペニシリンＧ、ペニシ
リンＶ、アンピシリン、アモキシシリン、バカンピシリン、シクラシリン（ｃｙ
ｃｌａｃｉｌｌｉｎ）、エピシリン、ヘタシリン、ピバンピシリン、メチシリン
、ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキ
サシリン、カルベニシリン、チカルシリン、アブロシリン（ａｖｏｌｏｃｉｌｉ
ｎ）、メズロシリン、ピペラシリン、アムジノシリン、セファレキシン、セフラ
ジン、セファドキシル（ｃｅｆａｄｏｘｉｌ）、セファクロル、セファゾリン、
セフロキシムアキセチル、セファマンドール、セフォニシド、セフォキシチン、
セフォタキシム、セフチゾキシム、セフメノキシム（ｃｅｆｍｅｎｏｘｉｎｅ）
、セフトリアキソン、モキサラクタム、セフォテタン、セフォペラゾン、セフタ
ジジム、イミペネム、クラブラネート、チメンチン（ｔｉｍｅｎｔｉｎ）、スル
バクタム、ネオマイシン、エリスロマイシン、メトロニダゾール、クロラムフェ
ニコール、クリンダマイシン、リンコマイシン、バンコマイシン、トリメトプリ
ム−スルファメトキサゾール、アミノグリコシド、キノロン、テトラサイクリン
およびリファンピシン（ｒｉｆａｍｐｉｎ）。（ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍ
ａｎ’ｓ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｃｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａ
ｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、１９９３、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ Ｉｎｃ．を参照
のこと）。

【０１２９】 他の多糖抗原および抗体が、当該分野で周知である。例えば、以下の多糖抗原
および／またはそれに対する抗体が、ＰＳ／Ａ抗原および／または抗体と組合せ
て投与され得る：Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ莢膜Ｖｉ抗原（Ｓｚｕ，Ｓ
．Ｃ．、Ｘ．Ｌｉ，Ａ．Ｌ．ＳｔｏｎｅおよびＪ．Ｂ．Ｒｏｂｂｉｎｓ、Ｒｅｌ
ａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｖｉ ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏ
ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、
５９：４５５５〜４５６１（１９９１））；Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ５莢膜（Ｖａｎｎ
，Ｗ．、Ｍ．Ａ．Ｓｃｈｍｉｄｔ、Ｂ．ＪａｎｎおよびＫ．Ｊａｎｎ、Ｔｈｅ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ
ｒｉｄｅ（Ｋ５ ａｎｔｉｇｅｎ）ｏｆ ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔ ｉｎｆ
ｅｃｔｉｖｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，０１０：Ｋ５：Ｈ４．Ａ
ｐｏｌｙｍｅｒ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｄｅｓｕｌｆｏ−ｈｅｐａｒｉｎ、Ｅ
ｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１１６：
３５９〜３６４（１９８１））；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ
５型莢膜（Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ｊ．−Ｍ．、Ｋ．Ｈａｎｎｏｎ、Ｍ．Ｍｏｒｅ
ａｕ、Ｗ．Ｗ．ＫａｒａｋａｗａおよびＷ．Ｆ．Ｖａｎｎ、Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｙｐｅ ５ ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆ
ｒｏｍ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ａｎｎ．Ｉｎｓｔ．Ｐ
ａｓｔｅｕｒ／Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（Ｐａｒｉｓ）．１３８：５６１〜５６７
（１９８７））；Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｒｉ エキソポリサッカリ
ド（ｅｘｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）ＩＩ（Ｇｌａｚｅｂｒｏｏｋ，Ｊ．お
よびＧ．Ｃ．Ｗａｌｋｅｒ、ａ ｎｏｖｅｌ ｅｘｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄ
ｅ ｃａｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｐｌａｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｌｃｏ
ｆｌｕｏｒ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ ｎ
ｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｆａｌｆａ ｂｙ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅ
ｌｉｌｏｔｉ，Ｃｅｌｌ．６５：６６１〜６７２（１９８９）；Ｇｒｏｕｐ Ｂ
ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｙｐｅ ＩＩＩ（Ｗｅｓｓｅｌｓ，Ｍ．Ｒ．
、Ｖ．Ｐｏｚｓｇａｙ、Ｄ．Ｌ．ＫａｓｐｅｒおよびＨ．Ｊ．Ｊｅｎｎｉｎｇｓ
、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ａｎ
ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｒｅｐｅａｔｉｎｇ ｕｎｉｔ ｏｆ ｔ
ｈｅ ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｆ ｔｙｐｅ Ｉ
ＩＩ ｇｒｏｕｐ Ｂ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２６２：８２６２〜８２６７（１
９８７））；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ Ｆｉｓｈｅｒ
７ Ｏ特異的側鎖（Ｋｎｉｒｅｌ，Ｙ．Ａ．、Ｎ．Ａ．Ｐａｒａｍｏｎｏｖ、Ｅ
．Ｖ．Ｖｉｎｏｇｒａｄｏｖ、Ａ．Ｓ．Ｓｈａｓｈｋｏｗ、Ｂ．Ａ．Ｎ．Ｋ．Ｋ
ｏｃｈｅｔｋｏｖ、Ｅ．Ｓ．ＳｔａｎｉｓｌａｖｓｋｙおよびＥ．Ｖ．Ｋｈｏｌ
ｏｄｋｏｖａ、Ｓｏｍａｔｉｃ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ Ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｏ−ｓｐｅ
ｃｉｆｉｃ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｈａｉｎｓ ｏｆ ｌｉｐｏｐ
ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｆ Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ Ｏ３（Ｌａ
ｎｙｉ），０２５（Ｗｏｋａｔｓｃｈ）ａｎｄ Ｆｉｓｈｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔ
ｙｐｅ ３ ａｎｄ ７、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ．１６７：５４９（１９８７））；Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎ
ｎｅｉ Ｏ特異的側鎖（Ｋｅｎｎｅ，Ｌ．、Ｂ．ＬｉｎｄｂｅｒｇおよびＫ．Ｐ
ｅｔｅｒｓｓｏｎ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｏ
−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｄｅ−ｃｈａｉｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｈｉｇｅｌｌ
ａ ｓｏｎｎｅｉ ｐｈａｓｅ Ｉ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、
Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７８：１１９〜１２６（１９８
０））；Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｉ型莢膜（Ｌｉｎｄｂｅｒｇ，Ｂ．、Ｌｉ
ｎｄｑｖｉｓｔ，Ｂ．、Ｌｏｎｎｇｒｅｎ，Ｊ．、Ｐｏｗｅｌｌ，Ｄ．Ａ．、Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏ
ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅ ｔｙｐｅ １、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．
７８：１１１〜１１７（１９８０））；ならびにＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ グループ抗原（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ，Ｈ．Ｊ．、Ｃ．Ｌｕ
ｇｏｗｓｋｉおよびＮ．Ｍ．Ｙｏｕｎｇ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ
ｃｏｍｐｌｅｘ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｃ−ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｆ
ｒｏｍ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｔｙｐｅ １、
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９：４７１２〜４７１９（１９８０））。

【０１３０】 他の非ポリペプチド抗原およびそれに対する抗体が、当業者に周知であり、そ
して本発明のＰＳ／Ａ組成物と共に使用され得る。

【０１３１】 ＰＳ／Ａ抗原および抗体はまた、被験体またはサンプルの免疫学的状態を決定
するための診断アッセイに有用であるか、あるいは免疫アッセイにおける試薬と
して使用され得る。例えば、抗体は、表面上にＰＳ／Ａ抗原を有する細菌の、サ
ンプル中での存在を検出するために使用され得る。その細菌がサンプル中に存在
する場合、抗体は、感染した被験体を処置するために使用され得る。抗体はまた
、ＰＳ／Ａ抗原の存在について細菌をスクリーニングするため、そしてＰＳ／Ａ
抗原およびＰＳ／Ａ抗原を含む細菌を複雑な混合物から単離するために使用され
得る。

【０１３２】 上記のアッセイおよび当該分野で公知の他の任意のアッセイは、ＰＳ／Ａまた
は抗体を標識することによって、そして／あるいはＰＳ／Ａまたはその抗体を不
溶性マトリクス上に固定することによって、達成され得る。ＰＳ／Ａまたは抗体
を使用する分析方法および診断方法は、以下の試薬のうちの少なくとも１つを使
用する：標識された分析物アナログ、固定された分析物アナログ、標識された結
合パートナー、固定された結合パートナー、および立体結合体。使用される標識
は、分析物とその結合パートナーとの結合に干渉しない、任意の検出可能な官能
基であり得る。免疫アッセイにおけるこのような使用のための多数の標識が公知
である。例えば、直接検出可され得る化合物（例えば、蛍光色素標識、化学発光
標識、および放射性標識）ならびに反応または誘導体化を通じて検出され得る化
合物（例えば、酵素）。これらの型の標識の例として、以下が挙げられる：³²Ｐ
、¹⁴Ｃ、¹²⁵Ｉ、³Ｈ、および¹³¹Ｉ放射性同位体、発蛍光団（例えば、希土類キ
レートまたはフレオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、
ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼ
および細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号））、ルシフェリ
ン、２，３−ジヒドロフタラビンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ
）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾ
チーム、糖オキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキ
シダーゼ）およびグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ）。過酸化水
素を使用して色素前駆体を酸化する酵素（例えば、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダ
ーゼ、またはミクロペルオキシダーゼ）とカップリングされたヘテロサイクリッ
クオキシダーゼ（例えば、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ）、ビオチ
ン、アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、および安定なフリーラジ
カル。

【０１３３】 標識は、当業者に公知の方法によってＰＳ／Ａまたは抗体に結合体化され得る
。例えば、米国特許第３，９４０，４７５号および同３，６４５，０９０号は、
発蛍光団および酵素の、抗体への結合体化を示す。抗原および抗体と一般的に使
用されると伝えられ、そして本発明に従って、使用され得る他のアッセイは、競
合アッセイおよびサンドイッチアッセイを含む。

【０１３４】 先行技術は、多糖の生成をもたらすと報告されているタンパク質（多糖細胞内
付着因子（ＰＩ／Ａ）として公知）をコードするいくつかの遺伝子を記載してい
る。これらの遺伝子は、クローンニングされ、そしてｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓの他の種で発現されている。しかし、ＰＳ／Ａの発達を生じ、そしてＰＩ／
Ａの発達を生じないタンパク質の生成をこれらの遺伝子が実際にコードすること
は、本発明により発見された。従って、本発明は、ＰＳ／Ａを発現する宿主細胞
を生成し、そしてＰＳ／Ａ抗原を単離することによって、ＰＳ／Ａ抗原を調製す
る方法を含む。

【０１３５】 ＰＳ／Ａ宿主細胞は、細胞を、ｉｃａ遺伝子をコードする核酸（配列番号１）
でトランスフェクションまたは形質転換することによって、調製され得る。この
細胞は、真核生物細胞であっても原核生物細胞であってもよいが、好ましくは細
菌細胞である。より好ましくは、この細胞は、通常はＰＳ／Ａを発現しないｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓである。

【０１３６】 １つの実施態様において、ｉｃａ核酸は、真核生物細胞または原核生物細胞内
でのｉｃａ核酸の発現を指向する遺伝子発現配列に作動可能に連結される。この
「遺伝子発現配列」は、これが作動可能に連結されているｉｃａ核酸の効率的な
転写および翻訳を容易にする、任意の調節ヌクレオチド配列（例えば、プロモー
ター配列またはプロモーター−エンハンサーの組合せ）である。この遺伝子発現
配列は、例えば、哺乳動物プロモーターまたはウイルスプロモーター（例えば、
構成的プロモーターまたは誘導性プロモーター）であり得る。構成的哺乳動物プ
ロモーターとしては、以下の遺伝子のプロモーターが挙げられるが、これらに限
定されない：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＴＲ）、
アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、およびβ−アクチン。細胞中で
構成的に機能する例示的ウイルスプロモーターとしては、例えば、以下に由来す
るプロモーターが挙げられる：シミアンウイルス、パピローマウイルス、アデノ
ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガ
ロウイルス、モロニー白血病ウイルスおよび他のレトロウイルスの長末端反復（
ＬＴＲ）、ならびに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター。他
の構成的プロモーターは、当業者に公知である。本発明の遺伝子発現配列として
有用なプロモーターはまた、誘導性プロモーターを含む。誘導性プロモーターは
、誘導物質の存在下で発現される。例えば、メタロチオネインプロモーターは、
特定の金属イオンの存在下で、転写および翻訳を促進するように誘導される。他
の誘導性プロモーターが、当業者に公知である。

【０１３７】 一般に、これらの遺伝子発現配列は、必要な場合、それぞれ、転写および翻訳
の開始に関与する、５’非転写配列および５’非翻訳配列を含む。このような５
’非転写配列は、作動可能に連結されたｉｃａ核酸の転写制御のためのプロモー
ター配列を含むプロモーター領域を含む。この遺伝子発現配列は、必要に応じて
、所望するように、エンハンサー配列または上流アクチベーター配列を含む。

【０１３８】 ｉｃａ核酸配列および遺伝子発現配列は、これらが、ｉｃａコード配列の転写
および／または翻訳を遺伝子発現配列の影響または制御下に置くような様式で共
有結合されている場合、「作動可能に連結」されていると言われる。ｉｃａ配列
が機能性タンパク質への翻訳されることが所望されるならば、以下の場合に、２
つのＤＮＡ配列は、作動可能に連結されていると言われる：５’遺伝子発現配列
中のプロモーターの誘導がｉｃａ配列の転写を生じ、そしてこの２つのＤＮＡ配
列間の結合の性質が、(１）フレームシフト変異の誘導を生じず、（２）プロモ
ーター領域がｉｃａ配列の転写を指向する能力に干渉せず、（３）対応するＲＮ
Ａ転写物がタンパク質へと翻訳される能力に干渉もしない場合。従って、遺伝子
発現配列は、その遺伝子発現配列がｉｃａ核酸配列の転写をもたらし得、その結
果、生じた転写物が所望のタンパク質またはポリペプチドへと翻訳され得る場合
に、そのｉｃａ核酸配列に作動可能に連結されている。

【０１３９】 本発明のｉｃａ核酸は、宿主細胞単独でか、またはベクターと会合して送達さ
れ得る。その最も広い意味において、「ベクター」とは、以下を容易にし得る任
意のビヒクルである：（１）ＰＳ／Ａ分子を合成するタンパク質の生成をコード
する、ｉｃａ遺伝子座中の遺伝子を含む核酸分子の送達、または（２）ＰＳ／Ａ
分子を合成するタンパク質の生成をコードするｉｃａ遺伝子座中の遺伝子を含む
核酸分子の、標的細胞による取り込み。好ましくは、ベクターは、ｉｃａ分子を
標的細胞へと輸送し、そのベクターの非存在下で生じる分解の程度と比較して、
分解が減少している。一般的に、本発明において有用なベクターは、２つのクラ
ス（生物学的ベクターおよび化学的／物理学的ベクター）に分けられる。生物学
的ベクターは、ｉｃａ核酸の、標的細胞への送達／標的細胞による取り込みに有
用である。化学的／物理学的ベクターは、ｉｃａ核酸またはｉｃａポリペプチド
の、標的細胞への送達／標的細胞による取り込みに有用である。

【０１４０】 生物学的ベクターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：プ
ラスミド、ファージミド、ウイルス、本発明の核酸配列の挿入または組み込みに
より操作されたウイルス供給源または細菌供給源に由来する他のビヒクル、なら
びに本発明の核酸配列に結合され得る遊離核酸フラグメント。ウイルスベクター
は、生物学的ベクターの好ましい型であり、そして以下のウイルス由来の核酸配
列を含むが、これらに限定されない：モロニーマウス白血病ウイルス；ハーベイ
マウス肉腫ウイルス：マウス乳ガンウイルス；ラウス肉腫ウイルス；アデノウイ
ルス；アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプス
タイン−バーウイルス；パピローマウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウ
イルス；ポリオウイルス；ならびにＲＮＡウイルス（例えば、任意のレトロウイ
ルス）のようなレトロウイルス。当業者は、名を挙げていないが当該分野で公知
の他のベクターを容易に使用し得る。

【０１４１】 好ましいウイルスベクターは、必須でない遺伝子が目的の遺伝子で置換されて
いる非細胞障害性真核生物ウイルスに基く。非細胞障害性ウイルスは、レトロウ
イルスを含み、その生活環は、ゲノムウイルスＲＮＡからＤＮＡへの逆転写、続
く宿主細胞ＤＮＡへのプロウイルス組み込みを含む。一般的に、このレトロウイ
ルスは、複製欠損性である（すなわち、所望のタンパク質の合成を指向し得るが
、感染性粒子を生成し得ない）。複製欠損性レトロウイルスを生成する標準的プ
ロトコル（プラスミドへの外因性遺伝物質の組み込み工程、プラスミドでのパッ
ケージング細胞株のトランスフェクション工程、このパッケージング細胞株によ
る組換えレトロウイルスの生成工程、組織培養培地からのウイルス粒子の収集工
程、およびウイルス粒子による標的細胞の感染工程を包含する）が、Ｋｒｉｅｇ
ｌｅｒ，Ｍ．、「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ
．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０）およびＭｕｒｒｙ，Ｅ．Ｊ．編、「Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」第７巻、Ｈｕｍａｎａ
Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｃｌｉｆｆｔｏｎ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）
に提供されている。

【０１４２】 特定の適用に好ましい別のウイルスは、アデノ随伴ウイルス（二本鎖ＤＮＡウ
イルス）である。アデノ随伴ウイルスは、複製欠損性であるように操作され得、
そして広い範囲の細胞型および種に感染し得る。アデノ随伴ウイルスは、さらに
利点を有し、それは例えば、熱および脂質溶媒安定性；多様な系統の細胞におけ
る高い形質導入頻度；ならびに重感染阻害の欠失により複数系列の形質導入が可
能であることである。報告されることによると、アデノ随伴ウイルスは、部位特
異的様式でヒト細胞ＤＮＡに組み込み得、それにより挿入変異誘発の可能性およ
び挿入された遺伝子発現の多様性が最小になる。さらに、野生型アデノ随伴ウイ
ルス感染は、組織培養において、選択圧の非存在下で１００継代を超える間追跡
され、このことは、アデノ随伴ウイルスゲノムの組み込みが比較的安定な事象で
あることを意味する。アデノ随伴ウイルスはまた、染色体外の様式で機能し得る
。

【０１４３】 生物学的ベクターに加えて、化学的／物理学的ベクターが使用されて、ｉｃａ
分子が標的細胞へと送達され得、そしてその結果、取り込みが容易になり得る。
本明細書中で使用される場合、「化学的／物理学的ベクター」とは、天然分子ま
たは合成分子をいい、これは、細菌学的供給源またはウイルス供給源に由来する
もの以外であり、ｉｃａ分子を細胞に送達し得る。

【０１４４】 本発明の好ましい化学的／物理学的ベクターは、コロイド状分散系である。コ
ロイド状分散系は、脂質ベースの系（水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセル
、およびリポソームを含む）を含む。本発明の好ましいコロイド状の系は、リポ
ソームである。リポソームは、インビボまたはインビトロで送達ベクターとして
有用な人工的膜管である。大きな単ラメラの管（ＬＵＶ）（サイズ０．２〜４．
０μｍの範囲）は、大きな高分子をカプセル化し得ることが示されている。ＲＮ
Ａ、ＤＮＡおよびインタクトなビリオンは、水性内部中にカプセル化され得、そ
して生物学的に活性な形態で細胞に送達され得る（Ｆｒａｌｅｙら、Ｔｒｅｎｄ
ｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．、（１９８１）６：７７）。リポソームが効率的
な遺伝子移入ベクターであるために、以下のうちの１つ以上の特徴が存在すべき
である：（１）生物学的活性を保持しながらの高効率での目的遺伝子のカプセル
化；（２）高効率での標的細胞細胞質への小胞の水性内容物の送達；ならびに（
３）遺伝情報の正確かつ有効な発現。

【０１４５】 リポソームは、例えば、Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬから、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ^TMお
よびＬＩＰＯＦＥＣＴＡＣＥ^TMとして市販されており、これらは、カチオン性脂
質（例えば、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）−プロピル］−Ｎ，Ｎ，
Ｎ，−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）およびジメチルジオク
タデシルアンモニウムブロマイド（ＤＤＡＢ））から構成される。リポソームを
作製する方法は、当該分野で周知であり、そして多くの刊行物に記載されている
。リポソームはまた、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８５）３：２３５〜２４１に概説されている。

【０１４６】 圧縮（ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎ）剤もまた、単独か、または本発明の生物学的ベ
クターもしくは化学的／物理学的ベクターと組合せて使用され得る。「圧縮剤」
とは、本明細書中で使用される場合、核酸上の負電荷を中和し、それによりその
核酸を微小の顆粒へと圧縮することを可能にする、ヒストンのような薬剤をいう
。核酸の圧縮は、標的細胞によるその核酸の取り込みを容易にする。圧縮剤はま
た、単独で（すなわち、細胞によって、より効率良く取り込まれる形態でｉｃａ
分子を送達するために）か、あるいはより好ましくは、１つ以上の上記のベクタ
ーと組合せて使用され得る。

【０１４７】 ｉｃａ核酸の標的細胞による取り込みを容易にするために使用され得る他の例
示的組成物は、リン酸カルシウムおよび細胞内輸送の他の化学的媒介物質、マイ
クロインジェクション組成物、エレクトロポレーションおよび相同組換え組成物
（例えば、ｉｃａ核酸を標的細胞染色体内の所定の位置に組み込むため）を含む
。

【０１４８】 （実施例） （実施例１：ＰＳ／Ａ抗原の精製） ＰＳ／Ａがｉｃａ遺伝子座を発現する任意の細菌株から精製され得ることが、
本発明に従って発見されている。詳細には、これらの細菌としては、Ｓｔａｐｈ
ｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ、および他のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ株（例えば、ｉｃａ
遺伝子座中の遺伝子で形質転換されたＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｒｎ
ｏｓｕｓ）が挙げられる。ＰＳ／Ａを精製するために、本発明に従って用いられ
た、以下の特定の株としては、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ＲＰ６２Ａ（ＡＴ
ＣＣ番号：３５９８４）、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ＲＰ１２（ＡＴＣＣ番
号：３５９８３）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ
Ｍ１８７、Ｓ．ｃａｒｎｏｓｕｓ ＴＭ３００（ｐＣＮ２７）、Ｓ ａｕｒｅｕ
ｓ ＲＮ４２２０（ｐＣＮ２７）、およびＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８ムコイドが
挙げられる。

【０１４９】 （１．ＰＳ／Ａを合成するのに必要であるタンパク質の産生をコードするｉｃ
ａ遺伝子座を含有するコアグラーゼ陰性ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓからのＰ
Ｓ／Ａの精製方法） 出発材料を、ｉｃａ遺伝子を発現するＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ株の増殖
を支持する任意の増殖培地においてこの細菌を増殖させることにより、このＳｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓの培養物から調製した。好ましい培地は、オートクレ
ーブ処理による滅菌を可能にするように改変されたＲＰＭＩ−１６４０調製物で
ある、ＲＰＭＩ−１６４０ ＡＵＴＯ−ＭＯＤ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）（開始ベースとして）から構成される、出
発ベースとして化学的に規定された培地（ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｄｅｆｉｎｅ
ｄ ｍｅｄｉｕｍ：ＣＤＭ）（Ｈｕｓｓａｉｎ，Ｍ．，Ｊ．Ｇ．Ｍ．Ｈａｓｔｉ
ｎｇｓおよびＰ．Ｊ．Ｗｈｉｔｅ．１９９１．「Ａ ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｄ
ｅｆｉｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｓｌｉｍｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂ
ｙ ｃｏａｇｕｌａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ」Ｊ
．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３４：１４３）である。フェノールレッドは、
省略した。なぜなら、それは、精製されたＰＳ／Ａに容易に結合するからである
。このＣＤＭに、さらなるアミノ酸、ビタミンおよびヌクレオチドを補充し、こ
れを他の場所（Ｈｕｓｓａｉｎ，Ｍ．，Ｊ．Ｇ．Ｍ．ＨａｓｔｉｎｇｓおよびＰ
．Ｊ．Ｗｈｉｔｅ．１９９１「Ａ ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｄｅｆｉｎｅｄ ｍ
ｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｓｌｉｍｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｃｏａｇｕｌ
ａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ．３４：１４３）で記載されたのと類似の最終組成物とする。この
培地に、デキストロースおよびショ糖をさらに補充した；それぞれは、別々にオ
ートクレーブし、次いで、最終濃度１％になるように添加した。

【０１５０】 培養物に、トリプチカーゼ（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ）ダイズ寒天のような寒天
プレート（３７℃で一晩インキュベートした）からＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓの単一コロニーを接種した（Ｍｕｌｌｅｒ，Ｅ．，Ｊ．Ｈｕｅｂｎｅｒ，Ｎ．
Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ，Ｓ．Ｔａｋｅｄａ、Ｄ．Ａ．ＧｏｌｄｍａｎｎおよびＧ．
Ｂ．Ｐｉｅｒ．１９９３．「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒ
ｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ Ｓｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎ
ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ／ａｄｈｅｓｉｎ ａｎｄ
ｓｌｉｍｅ」Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．６１：５５１）。スパージャーから
の２ＬのＯ₂／分のバブリングをし、ｐＨ滴定機で自動的に５Ｍ ＮａＯＨを添
加することによりｐＨを７．０に維持しながら、３７℃での激しく撹拌しながら
培養物を増殖させた。ｐＨを７．０に維持するためのＮａＯＨの添加が不要にな
るまで培養物を増殖させた（すなわち、４８〜７２時間）。

【０１５１】 粗抗原を、二価のカチオン、低ｐＨ、および熱の使用により、細菌細胞から直
接培養上清に抽出した。好ましい方法は、最終濃度１００ｍＭになるように培養
物にＭｇＣｌ₂を添加することであり、そしてｐＨを５．０に調節することであ
る。次いで、この培養物を加熱し、そして撹拌した。９０分間６５℃の温度が十
分であった。細胞本体を９０００×ｇにて１５分間で沈殿させた。上清を接線流
（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ−ｆｌｏｗ）濾過（１０，０００分子量（ＭＷ）カット
オフフィルター）で約１０００ｍｌに濃縮し、そして溶液を濾過デバイスの中に
おいたまま、以下の緩衝液交換および処理を行った：この緩衝液は、ｐＨ５．０
に調節された脱イオンＨ₂Ｏで交換した（過剰のＭｇ₂₊イオンを除くため）。次
に、０．１Ｍ ＴＲＩＳ−０．１５Ｍ ＮａＣｌを用いてｐＨを７．４に調整し
、そしてこの溶液をそれぞれ５ｍｇのＲＮａｓｅおよびＤＮａｓｅを用いて室温
で４時間処理し、次いで５ｍｇのトリプシンを用いて２時間処理した。この緩衝
液を接線流デバイスで、１０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ ８．６）に交換し、そして
デオキシコール酸（ＤＯＣ）ナトリウムを最終濃度が３％になるように添加した
。

【０１５２】 本発明の多糖抗原を単離するための別の好ましい方法は、５モル濃度のＮａＯ
ＨまたはＨＣｌのような強塩基または強酸との細菌のインキュベートを含む。細
菌を強塩基または強酸中で１８〜２４時間、撹拌する。次いで細胞本体を遠心分
離により収集し、そしてさらに２回再抽出する。それぞれの抽出からの上清をプ
ールし、酸または塩基を用いてｐＨ７になるように中和する。得られた粗抗原懸
濁物を２〜２４時間脱イオン水に対して透析する。残りの不溶性の粗抗原を遠心
分離により収集する。上清を公知のアッセイ（例えば、免疫学的手段）により可
溶性抗原の存在について試験する。上清が可溶性抗原について陽性である場合、
上清を凍結乾燥し、そして再抽出してさらなる粗抗原を入手し得る。不溶性の粗
抗原を５０ｍＭ ＰＢＳまたは１００ｍＭ Ｔｒｉｓ（１５０ｍＭ ＮａＣｌを
含有）の緩衝溶液に再懸濁する。

【０１５３】 この懸濁した粗抗原を３７℃で４時間、それぞれ５ｍｇのＲＮａｓｅおよびＤ
Ｎａｓｅで処理し、次いで５ｍｇのトリプシンで２時間処理した；この細胞を沈
殿させ、そしてこの上清を、トリプシンで処理しながら、濃縮した培養上清に添
加した。残りの細胞本体を１０ｍＭのＥＤＴＡ／３％ ＤＯＣ（ｐＨ８．６）に
再懸濁した；２時間撹拌しそして３回目に沈殿させた。得られた上清を、１０ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ／３％ ＤＯＣ（ｐＨ８．６）で処理しながら、濃縮した培養上清
に添加した。別の代替物は、ｐＨ＞１０の緩衝液である。好ましい緩衝液は、ｐ
Ｈ１１の、０．４Ｍ 炭酸アンモニウムである。最終的に、プールした上清を、
例えば、３０，０００ＭＷのカットオフ膜フィルターを用いる、撹拌された細胞
の濾過により濃縮した。粒子状物質または不溶性物質を２，０００×ｇで３０分
間の遠心分離により沈殿させ、上清を保持した。

【０１５４】 溶解された粗抗原を得るための上記の抽出およびＤＯＣ緩衝液を用いる代替物
として、粗抗原をまた、抽出物のｐＨを塩基（例えば、水酸化ナトリウム）を用
いて８．０より大きく調節し、エタノールのようなアルコールの４容量を添加し
、遠心分離により沈殿物を回収し、そして０．１Ｍ ＨＣｌまたはｐＨが４．０
未満の任意の緩衝液中での沈殿物の再溶解により、細胞の初回抽出物から得た。

【０１５５】 次に、高分子量ＰＳ／Ａ濃縮材料を分子ふるいクロマトグラフィーにより、粗
スライム抽出物から単離した。５．０ｃｍ×１００ｃｍのカラムにＳｅｐｈａｒ
ｏｓｅ ＣＬ−４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）また
は匹敵する分子ふるいゲルを充填し、そして１％ＤＯＣ（ｐＨ８．６）を含有す
る１０ｍＭ ＥＤＴＡで洗浄した。代替物として、ｐＨ４．０未満の緩衝液が時
々用いられる。好ましい緩衝液は、ｐＨ２．０の０．１Ｍ グリシン−ＨＣｌで
あった。粗スライムを１０〜２０ｍｌの容積で適用し、そしてＰＳ／Ａ含有画分
を２０６ｎｍでのＵＶ光の吸収の測定、およびＰＳ／Ａ抗原に特異的なポリクロ
ーナルウサギ抗血清を用いたイムノドットブロット分析により同定した。

【０１５６】 ＤＯＣを基礎とする緩衝液を用いるカラムのボイド容積画分中に溶出する物質
（ＭＷ＞１００，０００ダルトン）をプールし、そしてプロテイナーゼＫ（０．
１ｍｇ／ｍｌ）（１％ＤＯＣ中でタンパク質分解性が活性である）で処理した；
この物質を、同時に、撹拌セル濾過ユニット（３０，０００ＭＷカットオフ膜）
を用いて１００ｍｌに濃縮した。低ｐＨ緩衝液（＜４．０）を用いて分子ふるい
カラムのボイド容積中に溶出する物質をプールし、少なくとも０．１Ｍの最終濃
度でかつ少なくとも８．０のｐＨになるように２塩基性リン酸ナトリウムを添加
し、次いで、４容積のアルコール（例えば、９５％エタノール）を添加し、ＰＳ
／Ａ抗原を沈殿させた。

【０１５７】 ＤＯＣカラムから回収された物質のさらなる精製には、調製物中に存在するア
ルカリ不安定性細胞壁抗原の残留物を破壊する工程を用いた。プロテイナーゼＫ
で消化した物質をＮａＯＨの添加により処理して５００ｍＭの最終濃度にし、そ
してこの混合物を２２℃で２時間撹拌し、次いでＨＣｌで中和した。ＰＳ／Ａを
アルコール（例えば、５０％ｖ／ｖに添加されたメタノール）沈殿により回収し
、そして３０，０００×ｇで３０分間の遠心分離により沈殿させた。残留ＤＯＣ
および不純物を、純粋メタノールでの沈殿物の多数の洗浄により除去した。

【０１５８】 ＤＯＣ緩衝液系または低ｐＨ緩衝液系のいずれかを用いて流れたカラムのボイ
ド容積中に回収された物質からの残留テイコ酸の除去のために、アルコール沈殿
物を、４℃で４８時間、２４％（ｖ／ｖ）フッ化水素酸（ＨＦ）に懸濁した。こ
のＨＦ溶液を１２％ＨＦの濃度になるように水中に希釈し、次いで、ＮａＯＨで
中和し、そして流水に対して透析した。ＰＳ／Ａは、この点で最も不溶性であっ
た。残留する可溶性ＰＳ／Ａを５０％になるようなメタノールの添加により全て
沈殿させ、このペレットを純粋メタノールで３〜５回洗浄し、脱イオンＨ₂Ｏに
懸濁し、凍結し、そして凍結乾燥した。

【０１５９】 （２．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓからのＰＳ／Ａの精製） ＰＳ／Ａをまた、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓについての
上記手順または上記手順の変法のいずれかを用いてＳ．ａｕｒｅｕｓから精製し
た。Ｓ．ａｕｒｅｕｓからのＰＳ／Ａの回収を、好ましくはＭＮ８ムコイド株の
ようなＰＳ／Ａを構成的に作製する株を用いることにより促進した。このような
株を、それらの増殖を支持する任意の培地において増殖させ得るが、好ましい培
地はコロンビアブロス（ｃｏｌｕｍｂｉａ ｂｒｏｔｈ）である。あるいは、イ
ンタクトなｉｃａ遺伝子座を有する任意のＳ．ａｕｒｅｕｓ株が０．２５％（ｖ
／ｖ）以上のグルコースが補充された脳心臓滲出物ブロス（ｂｒａｉｎ ｈｅａ
ｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｂｒｏｔｈ）中で増殖され、ＰＳ／Ａを生成し得る。

【０１６０】 培養物に、３７℃で一晩インキュベートされた任意の適切な培地からＳｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの単一コロニーを接種した。スパージャー
から２ＬのＯ₂／分のバブリングをし、ｐＨ滴定機で自動的に５Ｍ ＮａＯＨを
添加することによりｐＨを７．０に維持しながら、３７℃で激しく撹拌そながら
培養物を増殖させた。ｐＨ７．０に維持するためのＮａＯＨの添加が不要になる
まで培養物を慣用的に増殖させた（すなわち、４８〜７２時間）。

【０１６１】 次いで、細菌細胞を遠心分離により培養物から回収し、そして緩衝化生理食塩
水に再懸濁した。次いで、リゾチームおよびリソスタフィン酵素を０．１ｍｇ／
ｍｌより高い濃度になるように添加した。この懸濁物を３７℃で２〜２４時間撹
拌し、その後プロテアーゼを添加した。好ましいプロテアーゼは、少なくとも０
．１ｍｇ／ｍｌの濃度のプロテイナーゼＫであったが、他のプロテイナーゼ（例
えば、プロナーゼＥまたはトリプシン）が使用され得る。この混合物を少なくと
も２時間３７℃で撹拌した。次いで、この懸濁物のｐＨをＨＣｌのような酸を用
いて、４．０未満に（しかし好ましくは２．０になるように）低下させた。不溶
性物質を遠心分離により取り出し、そして沈殿物を、低ｐＨ（＜４．０、好まし
くは２．０）溶液における再懸濁、次いで、１０分以上撹拌することおよび不溶
性物質を取り出すための遠心分離により３回再抽出した。低ｐＨ抽出物をプール
し、０．１Ｍ以上の濃度になるようなリン酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウム
のような塩基の両方を添加することによりｐＨを８．０より高く上昇させ、次い
で、９５％エタノールのような４容積のアルコールを添加した。別の代替物は、
ｐＨが１０を越える緩衝液である。好ましい緩衝液はｐＨ１１の０．４Ｍ 炭酸
アンモニウムである。

【０１６２】 本発明の多糖抗原を単離するための別の好ましい方法は、５Ｍ ＮａＯＨまた
はＨＣｌのような強塩基または強酸との細菌のインキュベートを含む。細菌を強
塩基または強酸中で１８〜２４時間、撹拌する。次いで細胞本体を遠心分離によ
り収集し、そしてさらに２回の再抽出する。それぞれの抽出からの上清をプール
し、酸または塩基を用いてｐＨ７に中和する。得られた粗抗原懸濁物を２〜２４
時間脱イオン水に対して透析する。残りの不溶性の粗抗原を遠心分離により収集
する。この上清を公知のアッセイ（例えば、免疫学的手段）により可溶性抗原の
存在について試験する。この上清が可溶性抗原について陽性である場合、この上
清を凍結乾燥し、そして再抽出してさらなる粗抗原を入手し得る。不溶性の粗抗
原を５０ｍＭ ＰＢＳまたは１００ｍＭ Ｔｒｉｓ（１５０ｍＭ ＮａＣｌを含
有）の緩衝溶液に再懸濁する。次いで、この物質を、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓからのＰＳ／Ａの精製方法に関して上記されたのと同じ酵
素処理に供した。

【０１６３】 次いで、この不溶性物質を遠心分離により回収し、低ｐＨ（＜４．０、好まし
くは１．０）溶液に再溶解し、不溶性物質を遠心分離により除去し、そして、可
溶性画分中の高分子量の物質をｐＨ４．０未満の緩衝液中で平衡化された分子ふ
るいカラムへの適用により回収した。好ましい緩衝液は、ｐＨ２．０の０．１Ｍ
グリシン−ＨＣｌであった。代表的分子ふるいカラムは、２．６×１００ｃｍ
の寸法を有し、そしてこのカラムにＳｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−５００（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ）のようなゲルを充填した。ＰＳ／Ａ含有画分を２０６ｎｍでのＵＶ
光の吸収の測定、およびＰＳ／Ａに対するポリクローナルウサギ抗血清を用いた
イムノドットブロット分析により同定した。高分子量（＞１００，０００）の範
囲に溶出する免疫学的反応性の画分をプールし、０．１Ｍ以上の濃度になるよう
なリン酸ナトリウムおよび塩基（例えば、水酸化ナトリウム）の両方の添加によ
りｐＨを＞８に上昇させ、次いで４容積のアルコール（例えば、エタノール）を
添加し、得られた沈殿物を遠心分離で回収した。次に、このアルコール沈殿物を
、４℃で４８時間、２４％（ｖ／ｖ）フッ化水素酸（ＨＦ）に懸濁した。このＨ
Ｆ溶液を１２％ＨＦの濃度になるように水中に希釈し、次いで、ＮａＯＨで中和
し、そして流水に対して透析した。ＰＳ／Ａは、この点で最も不溶性であった。
残留する可溶性ＰＳ／Ａを最終濃度＞５０％になるようなアルコールの添加によ
り全て沈殿し、このペレットをアルコール（例えば、９５％エタノールまたは純
粋メタノール）で３〜５回洗浄し、そしてこのペレットを脱イオンＨ₂Ｏに懸濁
し、凍結し、そして凍結乾燥した。

【０１６４】 （実施例２：ＰＳ／Ａ抗原の化学合成） （方法：） ＰＳ／Ａは、キチン（β−１−４結合を有するポリ−Ｎ−アセチル−グルコサ
ミン）およびキトサン（β−１−４結合を有するポリ−グルコサミン）に化学的
に類似している。キチンのＮ−アセチル基を、温和な塩基で処理（１．０Ｍ Ｎ
ａＯＨ、９５℃、１時間）することにより容易に除去して、キトサンを生じる。
次いで、遊離のアミノ基を、遊離のカルボキシル基への遊離のアミノ基のカップ
リングを促進する水溶性のカルボジイミド試薬の存在下でこれらの物質へ添加し
たコハク酸を用いて、スクシネートで置換した。

【０１６５】 １０ｍｇのキトサンを、１．０の０．１Ｍ ＨＣｌに懸濁し、そしてゲル様懸
濁物が得られるまで撹拌した。次いで、１００ｍｇのコハク酸を、その後、７５
ｍｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド−ＨＣ
ｌ（ＥＤＣ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、そしてこの懸濁物を室温で２日間撹拌した
。次いで、この溶液を２Ｍの水酸化ナトリウムで中和し、水に対して透析して未
結合コハク酸および遊離ＥＤＣを除去し、そしてスクシニル化したキトサンを凍
結乾燥した。

【０１６６】 （結果：） 得られた物質は、ＰＳ／Ａの天然のポリ−Ｎ−スクシニルグルコサミンと類似
しており、個々のグルコサミン残基の間の結合の性質が異なっていた。しかし、
本発明者らは、ＰＳ／Ａに対して惹起された抗体が、Ｎ−スクシニル化キトサン
に反応することを本発明に従って、見出した。これは、キチンおよびキトサンの
適切な化学的修飾がＰＳ／Ａに対する抗体を惹起する能力を有する分子を生じる
ことを示す。

【０１６７】 （実施例３：ＰＳ／Ａ抗原の分析） 混入物を分解するための塩基（ＮａＯＨ）およびフッ化水素酸の両方の処理の
使用は、以前に得られた先行技術の調製物を上回ってＰＳ／Ａの純度を有意に改
善する。ＰＳ／Ａは、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂカラムの高分子量のボイド容積
画分（＞１００，０００ｋＤａ）に溶出し、そして、以前に示されたように、免
疫拡散において単一の沈降バンドを与えた（Ｔｏｊｏ，Ｍ．，Ｎ．Ｙａｍａｓｈ
ｉｔａ，Ｄ．Ａ．ＧｏｌｄｍａｎｎおよびＧ．Ｂ．Ｐｉｅｒ．１９８８「Ｉｓｏ
ｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃａｐ
ｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ／ａｄｈｅｓｉｎ ｆｒｏｍ Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ」Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉ
ｓ．１５７：７１３）。さらに、０．０２μｇ／ウェルまでＰＳ／Ａの希釈物で
のＥＬＩＳＡウェルの感作は、免疫前血清の結合よりも、有意に大きい精製され
たＰＳ／Ａに対する抗体の１：５００希釈物の結合を生じた。精製の間にＰＳ／
Ａを可溶化するための３％ＤＯＣまたは低ｐＨ（＜４．０）緩衝液の使用は、重
要であることが見出されたが、一旦ＰＳ／Ａが、メタノールによりこれらの溶液
から沈殿されれば、それはＤＯＣ緩衝液中でさえ、４．０を超えるｐＨでは再溶
解され得ない。ＰＳ／Ａは、５０％プロパノール−５０％ブタノールにおいて、
およびピリジンにおいてわずかに可溶性であった（約５００μｇ／ｍｌ）。この
ＰＳ／Ａ抗原は、検出可能なリン酸を欠いていた（＜０．０１％）（Ｋｅｌｅｔ
ｉ、Ｇ．およびＷ．Ｈ．Ｌｅｄｅｒｅｒ．１９７４．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ
Ｍｉｃｒｏｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ．Ｖａｎ Ｎｏｓｔｒａｎｄ Ｒｅｉｎｈｏｌｄ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ）。

【０１６８】 （実施例４：ＰＳ／Ａの化学的特性の分析） 本発明者らが、高温（９５〜１００℃）での１４時間の４Ｍ ＨＣｌ酸におけ
る加水分解後、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ Ｍ１８７、Ｓ．ｃａｒｎｏｓｕｓ
（ｐＣＮ２７）およびＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８ムコイドから単離されたＰＳ／
Ａを分析したとき、本発明者らは、気−液クロマトグラフィー−質量分析法（Ｇ
ＬＣ−ＭＳ）および核磁気共鳴（ＮＭＲ）の組み合わせを用いて、グルコサミン
が、ＰＳ／Ａにおける単一の糖成分であることを見出した。例示的ＮＭＲスペク
トルは図１に示される。さらに、高品質のスクシネート（グルコサミンとほぼ等
モル濃度）をまた、調製物中に同定した。スクシネートは、９５℃で１０分以上
の５Ｍ ＮａＯＨにおける加水分解により抗原から遊離したが、同じ条件下での
１Ｍ ＮａＯＨでは遊離しなかった。より低い量のＮａＯＨは、カルボキシルエ
ステル連結スクシネートを容易に遊離させる。ＮＭＲの結果とともに、これは、
スクシネートがグルコサミンのアミノ基に連結しており、グルコサミンのヒドロ
キシル基に連結していないことを確認する。オゾンによるＰＳ／Ａの少糖フラグ
メントへの加水分解およびＮＭＲによる分析は、糖間の連結がβ結合であると確
認した。これらの株から単離されたＰＳ／Ａは、過ヨウ素酸ナトリウムでの処理
（０．２Ｍで１４時間）後、血清学的な反応性、およびＧＬＣ−ＭＳにより検出
可能な化学的特性を消失する。このことは、グルコサミン残基の間の１−６結合
を示す。また、５Ｍ ＮａＯＨでの５分を越える加水分解は、血清学的活性を破
壊する。

【０１６９】 従って、天然のＰＳ／Ａ物質は、β１−６結合で互いに連結するＮ−スクシニ
ルＤ−グルコサミン残基の高分子量（＞１００，０００ダルトン）ホモポリマー
である。このグルコサミンのアミノ基上のスクシネート基の置換のレベルは、ネ
イティブな分子において１００％にほぼ等しい。

【０１７０】 （実施例５：精製されたＰＳ／Ａでの免疫は、この抗原と反応性の抗体を惹起
する） （方法：）ウサギの免疫によりＰＳ／Ａに対する抗体を惹起するための、以前
に記載された方法（Ｋｏｊｉｍａ，Ｙ．，Ｍ．Ｔｏｊｏ，Ｄ．Ａ．Ｇｏｌｄｍａ
ｎｎ，Ｔ．Ｄ．ＴｏｓｔｅｓｏｎおよびＧ．Ｂ．Ｐｉｅｒ．１９９０．「Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ ｔｏ ｔｈｅ ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
／ａｄｈｅｓｉｎ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｒａｂｂｉｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｃａ
ｔｈｅｔｅｒ ｒｅｌａｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｅｍｉａ ｄｕｅ ｔｏ ｃｏａ
ｇｕｌａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ」Ｊ．Ｉｎｆｅ
ｃｔ Ｄｉｓ．１６２：４３５；Ｔｏｊｏ，Ｍ．，Ｎ．Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｄ
．Ａ．ＧｏｌｄｍａｎおよびＧ．Ｂ．Ｐｉｅｒ．１９８８．「Ｉｓｏｌａｔｉｏ
ｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃａｐｓｕｌａｒ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ／ａｄｈｅｓｉｎ ｆｒｏｍ Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ」Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．１５７
：７１３；Ｔａｋｅｄａ，Ｓ．，Ｇ．Ｂ．Ｐｉｅｒ，Ｙ．Ｋｏｊｉｍａ，Ｍ．Ｔ
ｏｊｏ，Ｅ．Ｍｕｌｌｅｒ，Ｔ．ＴｏｓｔｅｓｏｎおよびＤ．Ａ．Ｇｏｌｄｍａ
ｎｎ．１９９１．「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｅｎｄｏｃａｒｄ
ｉｔｉｓ ｄｕｅ ｔｏ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄ
ｉｓ ｂｙ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌ
ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ／ａｄｈｅｓｉｎ．」Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．８４：
２５３９）を、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ Ｍ１８７およびＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８ムコイドから単離された抗原から抗血清を調製するために用いた。 （結果：）両方の細菌株由来の調製物により惹起された抗体は、両方の抗原に対
して同等の力価の抗体を誘導した（表１）。

【０１７１】

【表１】 （実施例６：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ株におけるＰＳ／Ａ抗原の物理的
位置） （方法：）Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８ムコイドおよびＲＮ４２２０（ｐＣＮ２７
）をトリプチカーゼダイズ寒天上で増殖させ、そしてＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８
を０．２５％以上のグルコースを補充した脳心臓滲出物ブロス中で増殖させた。
次いで、この細胞をＰＳ／Ａに対するポリクローナルウサギ抗血清でまずプロー
ブし、次いで、金標識したプロテインＡ、または金標識した抗ウサギＩｇＧでプ
ローブし、そして顕微鏡写真を得た。

【０１７２】 ＰＳ／Ａは、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓの細菌莢膜を表すことが以前に示さ
れている。本発明者らはｉｃａ遺伝子座を保有する株が莢膜に包まれているか否
かを免疫電子顕微鏡を用いて試験した。以下の一連の免疫電子顕微鏡写真を撮っ
た：（ａ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８ムコイド上のＰＳ／Ａ莢膜と抗ＰＳ／Ａ抗
体との相互作用；（ｂ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８ムコイドの正常ウサギ血清（
ＮＲＳ）染色を用いるネガティブコントロール；（ｃ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＲＮ
４２２０（ｐＣＮ２７）上のＰＳ／Ａ莢膜と抗ＰＳ／Ａ抗体との相互作用；（ｄ
）Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＲＮ４２２０のＮＲＳ染色を用いるネガティブコントロー
ル；（ｅ）０．２５％グルコースを補充した脳心臓滲出物ブロス中で増殖したＳ
．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８と抗ＰＳ／Ａ抗体との相互作用；および（ｆ）０．２５
％グルコースを補充した脳心臓滲出物ブロス中で増殖させたＳ．ａｕｒｅｕｓ株
ＭＮ８のＮＲＳ染色を用いたネガティブコントロール。この顕微鏡写真は、ＰＳ
／Ａに対する抗体が、これらの株における細胞外莢膜に結合することを実証する
。

【０１７３】 （実施例７：Ｓ．ａｕｒｅｕｓのヒト臨床単離体によるＰＳ／Ａ抗原の発現） Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓの多数のヒト臨床単離体は、ＰＳ／Ａ抗原を構成
的に（すなわち、種々の増殖条件下で常に）発現する。また、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ
のいくつかの株（すなわち、ＭＮ８ムコイド）も、同じく発現する。しかし、ほ
とんどのヒト臨床単離体は、正常な実験条件下で増殖させた場合、それほどＰＳ
／Ａを発現しない。本発明者らは、これらのＳ．ａｕｒｅｕｓ株を、０．２５％
以上のグルコースを含有する脳心臓滲出物ブロス培地中で増殖させれば、ＰＳ／
Ａの発現は、ＥＬＩＳＡ阻害アッセイのような血清学的手段により検出され得る
ことを見出した（図２に示す）。さらに、本発明者らは、マウスの感染の前に検
出可能なＰＳ／Ａを発現しないＳ．ａｕｒｅｕｓの単離体が、腎臓のような感染
組織から回収された場合、ＰＳ／Ａを生成することが示され得ることを見出した
。従って、特定のインビトロ条件下、または動物での実験的感染後、他の場合に
は検出可能なＰＳ／Ａを生成しないＳ．ａｕｒｅｕｓの株が、ここでＰＳ／Ａを
生成する。別の培地では、本発明者らは、インビトロにおいてＰＳ／Ａ発現を増
強するのはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ１１０培地であることを見出した。

【０１７４】 ＰＳ／Ａ発現を検出するために寒天から新鮮に単離し、そして（ａ）抗ＰＳ／
Ａ抗体で染色したヒト臨床単離体（ＡＳＥＡＮ）、または（ｂ）ＮＲＳコントロ
ールで染色したヒト臨床単離体（ＡＳＥＡＮ）の免疫電子顕微鏡写真を撮影した
。本発明者らは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓのヒト臨床単離体は、この株を、液体または
組織のサンプルにおける感染を検出するために最初に用いられた寒天プレートか
らの透過型電子顕微鏡により試験した場合、ＰＳ／Ａを発現することを見出した
。従って、もしヒト臨床単離体が、実験培地での細菌の過度の継代なしに、ＰＳ
／Ａ発現について試験されれば、それらはＰＳ／Ａ抗原を生成することが示され
得る。

【０１７５】 （実施例８：Ｓ．ａｕｒｅｕｓの動物単離体によるＰＳ／Ａ抗原の発現） Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、動物における乳腺炎感染の主な原因であり、かなりの経
済的損失を生じる。本発明者らはまた、ＰＳ／Ａの発現について、動物（ウシお
よびヒツジ）からのＳ．ａｕｒｅｕｓ単離体を分析した。本発明者らは、血清学
的試験によって決定した場合、分析された単離体の多くが、ＰＳ／Ａ抗原を生成
することを見出した。試験した４０の動物単離体のうち２３がＰＳ／Ａに対する
抗体を用いたイムノドットブロットにおいて強力な反応を有した。これは、単離
体が、たとえヒト単離体について行わねばならないようなＰＳ／Ａの生成を増強
する特別の培地での増殖をさせていない場合であっても検出可能であった（ので
）。従って、Ｓ．ａｕｒｅｕｓのヒト臨床単離体と異なり、多数の動物単離体は
、構成的にＰＳ／Ａを生成し得るようである。

【０１７６】 （実施例９：ＰＳ／Ａに対する抗体によるＳ．ａｕｒｅｕｓ感染に対する防御
） （方法：）ＰＳ／Ａ抗原１〜１００μｇ（好ましくは１００μｇ／マウス）を
用いて、マウスを免疫し、抗体を惹起した。次いで、このマウスに、生きたＳ．
ａｕｒｅｕｓ菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＲｅｙｎｏｌｄｓまたはＭＮ８株のいずれ
か）をチャレンジした。そしてＰＳ／Ａに対する抗体を有するマウスは感染に対
して防御されたことが示された。

【０１７７】 （結果：）マウスをＰＳ／Ａで能動免疫し、続いてＳ．ａｕｒｅｕｓで静脈内
チャレンジすることは、動物を殺傷しそして試験した場合、５日後の腎臓中の菌
数を減少させた（図３）。

【０１７８】 同様に、ウサギ中でＰＳ／Ａ抗原に対して惹起した抗体をマウスに与えること
、続いてＳ．ａｕｒｅｕｓ株でこのマウスをチャレンジすることは、Ｓ．ａｕｒ
ｅｕｓ感染に対してこのマウスを防御する（図４）。このようにＰＳ／Ａに対す
る抗体は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染に対してマウスを防御する。上記のように、非
免疫コントロールマウスの感染腎臓から回収された単離体の分析は、動物におけ
る感染の間、感染がＰＳ／Ａの発現を誘導していたことを示した。

【０１７９】 （実施例１０：Ｓ．ａｕｒｅｕｓの単離体におけるＰＳ／Ａ産生遺伝子の検出
） （方法：細菌からのＤＮＡ抽出、ＰＣＲ分析およびサザンブロット分析：） ＤＮＡ調製：細菌を１０−２−ｍｌのトリプチカーゼソイブロス（ＴＸＢ）に
接種し、そして３７℃で一晩増殖させた。得られる増殖物を遠心分離により回収
した。細菌細胞を溶解緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、２５ｍＭ Ｅ
ＤＴＡ、３００ｍＭスクロース）に再懸濁した。次いで、細胞を、リソスタフィ
ン（０．２ｍｇ／ｍｌ）およびリゾチーム（２ｍｇ／ｍｌ）とともに、３７℃で
１〜３時間インキュベートした。この酵素消化の後、４５％エタノール中の５％
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を０．５ｍｌ添加し、ボルテックスし、そし
て室温で３０分間インキュベートした。次いで、１ｍｌの緩衝化フェノール／ク
ロロホルム／イソアミルアルコール（２７：１２：１の容積比）を添加し、その
後ボルテックスおよび遠心分離（１５分、５０００ｒｐｍ、４℃）した。上部の
水層を取り出し、クロロホルム：イソアミルアルコール（２４：１比）に添加し
た。再度、これを遠心分離（１５分、５０００ｒｐｍ、４℃）した。上部の水層
中のＤＮＡを回収し、次いで、出発容積の２に等しい量の９５％エタノールの添
加により沈殿させ、そして沈殿したＤＮＡをガラス棒上に巻き付けた。次いで、
このＤＮＡを蒸留水に溶解した。

【０１８０】 サザンブロット分析のためのＤＮＡの制限酵素消化を製造業者（Ｇｉｂｃｏ
ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）のプロトコールに従って行った。Ｄ
ＮＡのプローブを、製造業者の指示書に従って、ＥＣＬプロトコール（Ａｍｅｒ
ｓｈａｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐｌｃ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉ
ｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を用いて標識した。

【０１８１】 ＰＣＲをタッチダウン（ｔｏｕｃｈ ｄｏｗｎ）プロトコールを用いて実行し
た。手短には、プライマー（配列番号２〜３）をＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
株から得たＤＮＡに添加し（最終濃度２００ｎＭ）、そしてサーマルサイクラー
をプログラムして、９５℃でのＤＮＡ融解を実施し、そして６０℃でポリメラー
ゼ伸長を開始し、４５℃に達するまで各サイクルでアニーリング温度を０．５℃
ずつ下げた。

【０１８２】 （結果：）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、本発明者らは、Ｓ．ａ
ｕｒｅｕｓの単離体がＰＳ／Ａを生成する遺伝子を有することを示した。これら
の遺伝子は、ｉｃａと名付けられた遺伝子座に含まれ、そしてＨｅｉｌｍａｎｎ
らにより初めて単離および配列決定された（Ｈｅｉｌｍａｎｎ，Ｃ．，Ｏ．Ｓｃ
ｈｗｅｉｔｚｅｒ，Ｃ．Ｇｅｒｋｅ，Ｎ．Ｖａｎｉｔｔａｎａｋｏｍ，Ｄ．Ｍａ
ｃｋおよびＦ．Ｇｏｔｚ．１９９６．「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ
ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｏｆｉ
ｌｍ−ｆｏｒｍｉｎｇ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉ
ｓ．」Ｍｏｌｅｃ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０：１０８３）。本明細書において
、本発明者らは、ｉｃａ遺伝子座が、ポリ−Ｎ−スクシニルグルコサミン分子Ｐ
Ｓ／Ａを合成するタンパク質をコードし、ＰＩＡと名付けられたポリ−Ｎ−アセ
チル化ポリグルコサミン分子を合成するタンパク質をコードするのではないこと
を実証する。

【０１８３】 プライマーをｉｃａ遺伝子の配列に基いて、ＰＣＲ分析のために設計し、２．
７ｋＢのＤＮＡフラグメントを増幅した（配列番号２および３）。これらのプラ
イマーを、ｉｃａ遺伝子がもともとクローニングされたＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄ
ｉｓ株ＲＰ６２Ａ由来のＤＮＡとともに、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８、ＭＮ８ム
コイド、ＲＮ４５０、Ｂｅｃｋｅｒ、Ｒｅｙｎｏｌｄｓおよび１Ａから単離した
ＤＮＡと混合し、そしてＰＣＲ反応に用いた場合、本発明者らはＳ．ａｕｒｅｕ
ｓ株のすべてがｉｃａ遺伝子座を有することを見出した（図５）。増幅された２
．７ｋＢのフラグメントを標識し、これらのＳ．ａｕｒｅｕｓ株から抽出された
ＤＮＡのサザンブロット反応にプローブとして用いて、本発明者らはまた、ｉｃ
ａ遺伝子座中の遺伝子の存在を検出した（図６）。このように、本発明者らは、
ＰＳ／Ａ抗原を合成するタンパク質を生成するために必要な遺伝子がＳ．ａｕｒ
ｅｕｓ中に存在することを示した。

【０１８４】 前述の明細書は、当業者が本発明を実施するのを可能にするに十分であると考
えられる。本発明は、提供された実施例による範囲内に限定されない。なぜなら
、実施例は、本発明の１つの局面の単一の例示として意図され、そして他の機能
的に等価な実施態様は本発明の範囲内であるからである。本明細書に示され、そ
して記載されるものに加えて、本発明の種々の改変が前述の記載から当業者に明
白となり、そして特許請求の範囲の範囲内に入る。本発明の利点および目的は、
本発明のそれぞれの実施態様により必らずしも包含されない。

【０１８５】 本出願に引用される全ての参考文献、特許、および特許出願は、その全体が参
考として本明細書に援用される。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８からのＰＳ／ＡのＮＭＲスペクトルである
。

【図２】 図２は、０．５％グルコースを補充した脳心臓滲出物ブロス中で一晩、２回増
殖させた、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの種々の株が、ＥＬＩ
ＳＡプレートを感作したＰＳ／Ａ抗原に結合する抗体を除去する能力を示す、Ｅ
ＬＩＳＡ阻害の結果を表すグラフである（斑点の棒）。感度についてのコントロ
ールとして、別個のアリコートの同じ細菌を、０．４Ｍメタ過ヨウ素酸ナトリウ
ムで処理して、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株の表面上のＰＳ／Ａ抗原を破壊した（灰色の
棒）。結合阻害百分率を、試験株に吸着されたＰＳ／Ａに対する抗体、および公
知のＰＳ／Ａ陰性株（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ｓｎ−３）に吸着したＰＳ
／Ａに対する抗体を用いて達成された光学密度の比から決定した。

【図３】 図３は、ＰＳ／Ａ抗原が、マウスにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓ感染に対する能動
免疫を誘導する能力を示すグラフである。

【図４】 図４は、抗ＰＳ／Ａ抗体が、マウスにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓ感染に対する受
動免疫を誘導する能力を示すグラフである。

【図５】 図５は、ＰＣＲフラグメントゲルの写真を示す。

【図６】 図６は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓにおけるｉｃａ（細胞間付着因子遺伝子座）遺伝子
のサザンブロットの写真を示す。ＰＣＲを、コントロールおよびＳ．ａｕｒｅｕ
ｓの８つの単離体からの染色体ＤＮＡについて行った（１）分子量マーカー、（
２）Ｓ．ｃａｒｎｏｓｕｓ ＴＭ３００（ネガティブコントロール）、（３）Ｓ
．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ＲＰ６２ＡからのポジティブコントロールＤＮＡ、（４
）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ株Ｒｅｙｎｏｌｄｓ、（５）Ｓ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８、（６）Ｓｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ株５８２７、（７）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ株Ｓ８３６、（８）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ
ｓ株Ｖａｓ、（９）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ株ＶＰ、（１
０）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ株２６５、（１１）Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ株Ｐｏｒ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マッキンニー， デイビッド アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02115， ボストン， ロングウッド ア ベニュー 121 (72)発明者 ワン， イン アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02115， ボストン， ロングウッド ア ベニュー 121 Ｆターム(参考） 4C085 AA03 AA13 AA14 BA13 DD21 DD31 DD38 EE03 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA02 EA22 EA25 MA02 MA04 NA05 NA14 ZA59 ZA96 ZB11 ZB32 ZB35

Claims (98)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 組成物であって、以下： 以下の構造： 【化１】 を有する純粋な莢膜多糖／付着因子を含み、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯ
   Ｈ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、お
   よび−ＮＨ₂からなる群より選択され、ｍは２〜５であり、そして該Ｒ基のうち
   の少なくとも１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ ₂ ）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選
   択される、組成物。
2. 【請求項２】 前記Ｒ基のうちの少なくとも５０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（Ｃ
   Ｈ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（Ｃ
   Ｈ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
3. 【請求項３】 前記Ｒ基のうちの少なくとも７５％が、−ＮＨ−ＣＯ−（Ｃ
   Ｈ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（Ｃ
   Ｈ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
4. 【請求項４】 前記Ｒ基のうちの少なくとも９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（Ｃ
   Ｈ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（Ｃ
   Ｈ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
5. 【請求項５】 前記Ｒ基のうちの少なくとも１０％が、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ₂ −ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項１に記載の組成物。
6. 【請求項６】 前記Ｒ基のうちの少なくとも５０％が、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ₂ −ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項１に記載の組成物。
7. 【請求項７】 前記Ｒ基のうちの少なくとも９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ₂ −ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項１に記載の組成物。
8. 【請求項８】 前記莢膜多糖／付着因子が、２５，０００より大きな分子量
   を有する、請求項１に記載の組成物。
9. 【請求項９】 前記莢膜多糖／付着因子が、３０，０００より大きな分子量
   を有する、請求項１に記載の組成物。
10. 【請求項１０】 前記莢膜多糖／付着因子が、１００，０００より大きな分
    子量を有する、請求項１に記載の組成物。
11. 【請求項１１】 前記莢膜多糖／付着因子が、ホモ置換ポリマーである、請
    求項１に記載の組成物。
12. 【請求項１２】 前記莢膜多糖／付着因子が、ヘテロ置換ポリマーである、
    請求項１に記載の組成物。
13. 【請求項１３】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、
    −ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、および−ＮＨ−ＣＯ−
    ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請
    求項１に記載の組成物。
14. 【請求項１４】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂
    −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、
    および−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨからなる群より
    選択される、請求項１に記載の組成物。
15. 【請求項１５】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−
    ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
    （ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯ
    Ｈ）₂からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
16. 【請求項１６】 前記莢膜多糖／付着因子が、ワクチンとして処方される、
    請求項１に記載の組成物。
17. 【請求項１７】 前記莢膜多糖／付着因子に結合体化されたキャリア化合物
    をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
18. 【請求項１８】 前記キャリア化合物が、リンカーを介して前記莢膜多糖／
    付着因子に結合体化されている、請求項１７に記載の組成物。
19. 【請求項１９】 前記莢膜多糖／付着因子が、少なくとも９５％純粋である
    、請求項１に記載の組成物。
20. 【請求項２０】 前記莢膜多糖／付着因子が、少なくとも９７％純粋である
    、請求項１に記載の組成物。
21. 【請求項２１】 前記莢膜多糖／付着因子が、少なくとも９９％純粋である
    、請求項１に記載の組成物。
22. 【請求項２２】 組成物であって、以下： 以下の構造： 【化２】 を有する莢膜多糖／付着因子を含み、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）₃〜₅−Ｃ
    ＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ
    、および−ＮＨ₂からなる群より選択され、ｍは２〜５であり、そして該Ｒ基の
    うちの少なくとも１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）₃〜₅−ＣＯＯＨ、−ＮＨ
    −（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる
    群より選択される、組成物。
23. 【請求項２３】 前記Ｒ基のうちの少なくとも５０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）₃〜₅−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−
    （ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項２２に記載の組成物。
24. 【請求項２４】 前記Ｒ基のうちの少なくとも７５％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）₃〜₅−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−
    （ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項２２に記載の組成物。
25. 【請求項２５】 前記Ｒ基のうちの少なくとも９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）₃〜₅−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−
    （ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項２２に記載の組成物。
26. 【請求項２６】 前記莢膜多糖／付着因子が、２５，０００より大きな分子
    量を有する、請求項２２に記載の組成物。
27. 【請求項２７】 前記莢膜多糖／付着因子が、３０，０００より大きな分子
    量を有する、請求項２２に記載の組成物。
28. 【請求項２８】 前記莢膜多糖／付着因子が、１００，０００より大きな分
    子量を有する、請求項２２に記載の組成物。
29. 【請求項２９】 前記莢膜多糖／付着因子が、ホモ置換ポリマーである、請
    求項２２に記載の組成物。
30. 【請求項３０】 前記莢膜多糖／付着因子が、ヘテロ置換ポリマーである、
    請求項２２に記載の組成物。
31. 【請求項３１】 前記莢膜多糖／付着因子が、ワクチンとして処方される、
    請求項２２に記載の組成物。
32. 【請求項３２】 前記莢膜多糖／付着因子に結合体化されたキャリア化合物
    をさらに含む、請求項２２に記載の組成物。
33. 【請求項３３】 前記キャリア化合物が、リンカーを介して前記莢膜多糖／
    付着因子に結合体化されている、請求項３２に記載の組成物。
34. 【請求項３４】 組成物であって、以下： 以下の構造： 【化３】 を有する莢膜多糖／付着因子を含み、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯ
    ＯＨおよび−ＮＨ₂からなる群より選択され、そして該Ｒ基のうちの１０％と９
    ０％との間の％は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、組成物。
35. 【請求項３５】 前記Ｒ基のうちの２０％と８０％との間の％が、−ＮＨ−
    ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項３４に記載の組成物。
36. 【請求項３６】 前記Ｒ基のうちの３０％と７０％との間の％が、−ＮＨ−
    ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項３４に記載の組成物。
37. 【請求項３７】 前記Ｒ基のうちの４０％と６０％との間の％が、−ＮＨ−
    ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項３４に記載の組成物。
38. 【請求項３８】 前記莢膜多糖／付着因子が、２５，０００より大きな分子
    量を有する、請求項３４に記載の組成物。
39. 【請求項３９】 前記莢膜多糖／付着因子が、３０，０００より大きな分子
    量を有する、請求項３４に記載の組成物。
40. 【請求項４０】 前記莢膜多糖／付着因子が、１００，０００より大きな分
    子量を有する、請求項３４に記載の組成物。
41. 【請求項４１】 前記莢膜多糖／付着因子が、ホモ置換ポリマーである、請
    求項３４に記載の組成物。
42. 【請求項４２】 前記莢膜多糖／付着因子が、ヘテロ置換ポリマーである、
    請求項３４に記載の組成物。
43. 【請求項４３】 前記莢膜多糖／付着因子が、ワクチンとして処方される、
    請求項３４に記載の組成物。
44. 【請求項４４】 前記莢膜多糖／付着因子に結合体化されたキャリア化合物
    をさらに含む、請求項３４に記載の組成物。
45. 【請求項４５】 前記キャリア化合物が、リンカーを介して前記莢膜多糖／
    付着因子に結合体化されている、請求項４４に記載の組成物。
46. 【請求項４６】 組成物であって、以下： 反復モノマー単位から構成される莢膜多糖／付着因子を含み、ここで、該モノ
    マー単位が、α−１−６ポリグルコース、α−１−４ポリグルコース、α−１−
    ３ポリグルコース、β−１−４ポリグルコース、β−１−３ポリグルコースおよ
    びα−１−４ポリガラクトースからなる群より選択され、該モノマー単位のＣ２
    が、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ） ₂ 、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、および−ＮＨ₂からなる群より選択されるＲ
    基によって置換されており、ｍが２〜５であり、そして該Ｒ基のうちの少なくと
    も１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（Ｃ
    ＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、
    組成物。
47. 【請求項４７】 前記モノマー単位が、α−１−６ポリグルコース、α−１
    −４ポリグルコース、α−１−３ポリグルコース、β−１−４ポリグルコースお
    よびβ−１−３ポリグルコースからなる群より選択される、請求項４６に記載の
    組成物。
48. 【請求項４８】 前記ポリグルコースの骨格が、α−１−６フォーメーショ
    ンにある、請求項４７に記載の組成物。
49. 【請求項４９】 前記ポリグルコースの骨格が、β−１−４フォーメーショ
    ンにある、請求項４７に記載の組成物。
50. 【請求項５０】 前記ポリグルコースの骨格が、β−１−３フォーメーショ
    ンにある、請求項４７に記載の組成物。
51. 【請求項５１】 前記Ｒ基のうちの少なくとも５０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項４７に記載の組成物。
52. 【請求項５２】 前記Ｒ基のうちの少なくとも７５％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項４７に記載の組成物。
53. 【請求項５３】 前記Ｒ基のうちの少なくとも９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項４７に記載の組成物。
54. 【請求項５４】 前記Ｒ基のうちの少なくとも１０％が、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ
    Ｈ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項４７に記載の組成物。
55. 【請求項５５】 前記Ｒ基のうちの少なくとも５０％が、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ
    Ｈ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項４７に記載の組成物。
56. 【請求項５６】 前記Ｒ基のうちの少なくとも９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ
    Ｈ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項４７に記載の組成物。
57. 【請求項５７】 前記莢膜多糖／付着因子が、２５，０００より大きな分子
    量を有する、請求項４７に記載の組成物。
58. 【請求項５８】 前記莢膜多糖／付着因子が、１００，０００より大きな分
    子量を有する、請求項４７に記載の組成物。
59. 【請求項５９】 前記莢膜多糖／付着因子が、ホモ置換ポリマーである、請
    求項４７に記載の組成物。
60. 【請求項６０】 前記莢膜多糖／付着因子が、ヘテロ置換ポリマーである、
    請求項４７に記載の組成物。
61. 【請求項６１】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、
    −ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、および−ＮＨ−ＣＯ−
    ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請
    求項４７に記載の組成物。
62. 【請求項６２】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂
    −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、
    および−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨからなる群より
    選択される、請求項４７に記載の組成物。
63. 【請求項６３】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−
    ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
    （ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯ
    Ｈ）₂からなる群より選択される、請求項４７に記載の組成物。
64. 【請求項６４】 前記莢膜多糖／付着因子が、実質的にテイコ酸を含まない
    、請求項４７に記載の組成物。
65. 【請求項６５】 前記莢膜多糖／付着因子が、ワクチンとして処方される、
    請求項４７に記載の組成物。
66. 【請求項６６】 前記莢膜多糖／付着因子に結合体化されたキャリア化合物
    をさらに含む、請求項４７に記載の組成物。
67. 【請求項６７】 前記キャリア化合物が、リンカーを介して前記莢膜多糖／
    付着因子に結合体化されている、請求項６６に記載の組成物。
68. 【請求項６８】 組成物であって、以下： 以下の構造： 【化４】 を有する莢膜多糖／付着因子を含み、 ここで、ｎは、３以上の整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯ
    Ｈ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、お
    よび−ＮＨ₂からなる群より選択され、ｍは２〜５であり、そして該Ｒ基のうち
    の少なくとも１０％は、−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ ₂ ）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選
    択され、そして該莢膜多糖／付着因子はテイコ酸を実質的に含まない、組成物。
69. 【請求項６９】 前記Ｒ基のうちの少なくとも５０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項６８に記載の組成物。
70. 【請求項７０】 前記Ｒ基のうちの少なくとも７５％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項６８に記載の組成物。
71. 【請求項７１】 前記Ｒ基のうちの少なくとも９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−（ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−（
    ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項６８に記載の組成物。
72. 【請求項７２】 前記Ｒ基のうちの少なくとも１０％が、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ
    Ｈ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項６８に記載の組成物。
73. 【請求項７３】 前記Ｒ基のうちの少なくとも５０％が、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ
    Ｈ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項６８に記載の組成物。
74. 【請求項７４】 前記Ｒ基のうちの少なくとも９０％が、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ
    Ｈ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨである、請求項６８に記載の組成物。
75. 【請求項７５】 前記莢膜多糖／付着因子が、２５，０００より大きな分子
    量を有する、請求項６８に記載の組成物。
76. 【請求項７６】 前記莢膜多糖／付着因子が、３０，０００より大きな分子
    量を有する、請求項６８に記載の組成物。
77. 【請求項７７】 前記莢膜多糖／付着因子が、１００，０００より大きな分
    子量を有する、請求項６８に記載の組成物。
78. 【請求項７８】 前記莢膜多糖／付着因子が、ホモ置換ポリマーである、請
    求項６８に記載の組成物。
79. 【請求項７９】 前記莢膜多糖／付着因子が、ヘテロ置換ポリマーである、
    請求項６８に記載の組成物。
80. 【請求項８０】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、
    −ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、および−ＮＨ−ＣＯ−
    ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨからなる群より選択される、請
    求項６８に記載の組成物。
81. 【請求項８１】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂
    −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、
    および−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨからなる群より
    選択される、請求項６８に記載の組成物。
82. 【請求項８２】 Ｒが、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−
    ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯＨ）₂、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
    （ＣＯＯＨ）₂、および−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−（ＣＯＯ
    Ｈ）₂からなる群より選択される、請求項６８に記載の組成物。
83. 【請求項８３】 前記莢膜多糖／付着因子が、ワクチンとして処方される、
    請求項６８に記載の組成物。
84. 【請求項８４】 前記莢膜多糖／付着因子に結合体化されたキャリア化合物
    をさらに含む、請求項６８に記載の組成物。
85. 【請求項８５】 前記キャリア化合物が、リンカーを介して前記莢膜多糖／
    付着因子に結合体化されている、請求項８４に記載の組成物。
86. 【請求項８６】 多糖であって、以下： 以下の方法： 粗莢膜多糖／付着因子調製物を細菌培養物から抽出する工程、 高分子量莢膜多糖／付着因子濃縮材料を、該粗莢膜多糖／付着因子調製物から
    単離する工程、 不純な莢膜多糖／付着因子を、該高分子量莢膜多糖／付着因子濃縮材料から沈
    澱させる工程、 該不純な莢膜多糖／付着因子を塩基とともにインキュベートして、半ば純粋な
    莢膜多糖／付着因子調製物を得る工程、 該調製物を酸で中和する工程、および 該中和された調製物を、フッ化水素酸中でインキュベートして純粋な莢膜多糖
    ／付着因子を得る工程、 に従って調製された純粋な莢膜多糖／付着因子を含む、多糖。
87. 【請求項８７】 前記細菌培養物が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕ
    ｒｅｕｓ培養物である、請求項８６に記載の多糖。
88. 【請求項８８】 前記細菌培養物が、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ
    ｏｃｃｕｓ培養物である、請求項８６に記載の多糖。
89. 【請求項８９】 被験体におけるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓによる感染
    に対する能動免疫を誘導する方法であって、以下： Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓに対する能動免疫を誘導するために有効な量の
    、請求項１、２２、３４、４６、６８および８６のいずれか１項に記載の組成物
    を被験体に投与する工程、 を包含する、方法。
90. 【請求項９０】 前記方法が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ
    ｓによる感染に対する免疫を誘導するための方法である、請求項８９に記載の方
    法。
91. 【請求項９１】 前記方法が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅ
    ｒｍｉｓによる感染に対する免疫を誘導するための方法である、請求項８９に記
    載の方法。
92. 【請求項９２】 被験体におけるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅ
    ｕｓによる感染に対する受動免疫を誘導する方法であって、以下： Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓのオプソニン作用を誘導するた
    めに有効な量の、抗莢膜多糖／付着因子抗体を被験体に投与する工程、 を包含する、方法。
93. 【請求項９３】 被験体におけるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅ
    ｕｓによる感染に対する能動免疫を誘導する方法であって、以下： Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに対する能動免疫を誘導するた
    めに有効な量の、ポリグルコサミン骨格を有する高分子量多糖を被験体に投与す
    る工程であって、該ポリグルコサミン骨格の個々のグルコサミン単位のうちの少
    なくとも１０％が、スクシネートに結合体化されている、工程、 を包含する、方法。
94. 【請求項９４】 前記ポリグルコサミン骨格が、β−１−６フォーメーショ
    ンにある、請求項９３に記載の方法。
95. 【請求項９５】 純粋な多糖を調製する方法であって、以下： 粗莢膜多糖／付着因子調製物を細菌培養物から抽出する工程、 高分子量莢膜多糖／付着因子濃縮材料を、該粗莢膜多糖／付着因子調製物から
    単離する工程、 不純な莢膜多糖／付着因子を、該高分子量莢膜多糖／付着因子濃縮材料から沈
    澱させる工程、 該不純な莢膜多糖／付着因子を塩基または酸とともにインキュベートして、半
    ば純粋な莢膜多糖／付着因子調製物を得る工程、 該調製物を中和する工程、および 該中和された調製物を処理して、純粋な莢膜多糖／付着因子を得る工程、 を包含する、方法。
96. 【請求項９６】 組成物であって、以下： 抗莢膜多糖／付着因子_pure抗体を含み、ここで該抗体が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ
    ｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓのオプソニン作用を誘導し、そして該抗体が、不純な
    ＰＳ／Ａ調製物と交叉反応しない、組成物。
97. 【請求項９７】 前記抗莢膜多糖／付着因子_pure抗体が、モノクローナル抗
    体である、請求項９６に記載の組成物。
98. 【請求項９８】 前記抗莢膜多糖／付着因子_pure抗体が、ポリクローナル抗
    体である、請求項９６に記載の組成物。