JP2002509695A - 一本鎖ｄｎａ又は二本鎖ｄｎａ、コード化融合タンパク質，ウイルス，パッケージング細胞及びこれらの使用ヒト補体システムによる不活化に耐えるウイルスの開発 - Google Patents
一本鎖ｄｎａ又は二本鎖ｄｎａ、コード化融合タンパク質，ウイルス，パッケージング細胞及びこれらの使用ヒト補体システムによる不活化に耐えるウイルスの開発Info
- Publication number
- JP2002509695A JP2002509695A JP2000522262A JP2000522262A JP2002509695A JP 2002509695 A JP2002509695 A JP 2002509695A JP 2000522262 A JP2000522262 A JP 2000522262A JP 2000522262 A JP2000522262 A JP 2000522262A JP 2002509695 A JP2002509695 A JP 2002509695A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- virus
- complement
- stranded dna
- double
- env
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 60
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims description 32
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title claims description 31
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 title claims description 27
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims description 22
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims description 22
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 title claims description 14
- 230000004154 complement system Effects 0.000 title claims description 12
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 title abstract description 10
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 63
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims abstract description 36
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 67
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 10
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 claims description 8
- 101000897400 Homo sapiens CD59 glycoprotein Proteins 0.000 claims description 8
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 claims description 8
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 claims description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 8
- 108010027225 gag-pol Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 claims description 5
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 claims description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 claims description 4
- 238000005215 recombination Methods 0.000 claims description 4
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims description 3
- 241000713813 Gibbon ape leukemia virus Species 0.000 claims description 2
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 claims description 2
- 241001068263 Replication competent viruses Species 0.000 claims description 2
- 101000868488 Saimiriine herpesvirus 2 (strain 11) Complement control protein homolog Proteins 0.000 claims description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 claims description 2
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 claims description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 2
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 claims 2
- 241000283730 Bos primigenius Species 0.000 claims 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 abstract description 6
- 230000009545 invasion Effects 0.000 abstract description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 4
- 239000004074 complement inhibitor Substances 0.000 abstract description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 abstract description 3
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 abstract description 3
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 abstract description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 21
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 12
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 12
- 102100039373 Membrane cofactor protein Human genes 0.000 description 9
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 101710121996 Hexon protein p72 Proteins 0.000 description 6
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000010523 cascade reaction Methods 0.000 description 5
- 102100039715 Endogenous retrovirus group K member 6 Gag polyprotein Human genes 0.000 description 4
- 101000653679 Homo sapiens Translationally-controlled tumor protein Proteins 0.000 description 4
- 101000800524 Loxosceles intermedia Translationally-controlled tumor protein homolog Proteins 0.000 description 4
- 101000851936 Mus musculus Endothelial PAS domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 4
- 102100029887 Translationally-controlled tumor protein Human genes 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 102100030886 Complement receptor type 1 Human genes 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 101000727061 Homo sapiens Complement receptor type 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000961414 Homo sapiens Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 102100025680 Complement decay-accelerating factor Human genes 0.000 description 2
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 2
- 102000030902 Galactosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108060003306 Galactosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 101000856022 Homo sapiens Complement decay-accelerating factor Proteins 0.000 description 2
- 101000879758 Homo sapiens Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 102100037330 Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Human genes 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 125000003169 alpha-Gal epitope group Chemical group [C@H]1([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](O[C@@H]([C@@H]1O)CO)O[C@H]1[C@@H]([C@H](C(O[C@@H]1CO)*)NC(C)=O)O)O 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100033040 Carbonic anhydrase 12 Human genes 0.000 description 1
- 102100033779 Collagen alpha-4(IV) chain Human genes 0.000 description 1
- 102000016574 Complement C3-C5 Convertases Human genes 0.000 description 1
- 108010067641 Complement C3-C5 Convertases Proteins 0.000 description 1
- 108010034753 Complement Membrane Attack Complex Proteins 0.000 description 1
- 101710170658 Endogenous retrovirus group K member 10 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710186314 Endogenous retrovirus group K member 21 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710162093 Endogenous retrovirus group K member 24 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710094596 Endogenous retrovirus group K member 8 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710177443 Endogenous retrovirus group K member 9 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 102100036738 Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-11 Human genes 0.000 description 1
- 101000867855 Homo sapiens Carbonic anhydrase 12 Proteins 0.000 description 1
- 101000710870 Homo sapiens Collagen alpha-4(IV) chain Proteins 0.000 description 1
- 101100283445 Homo sapiens GNA11 gene Proteins 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000282695 Saimiri Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000246358 Thymus Species 0.000 description 1
- 235000007303 Thymus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000711517 Torovirus Species 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 101150047047 gag-pol gene Proteins 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150088264 pol gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000010469 pro-virus integration Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001585 thymus vulgaris Substances 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 230000006514 viral protein processing Effects 0.000 description 1
- 230000010464 virion assembly Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
- C12N2740/13022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
- C12N2740/13041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/13043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
- C12N2740/13041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/13045—Special targeting system for viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
- C12N2740/13051—Methods of production or purification of viral material
- C12N2740/13052—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
- C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
- C12N2810/60—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
- C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
- C12N2810/80—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates
- C12N2810/85—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian
- C12N2810/855—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian from receptors; from cell surface antigens; from cell surface determinants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
マウスレトロウイルスは、ヒト遺伝子治療に対する最も重要な伝達システムである。しかし、その適用には現在のところ限界がある。生体内に適用する場合の主な制限の内の一つは、このタイプのウイルスがヒトの補体因子による不活化に敏感な点にあるという問題が挙げられる。本発明は、この制限を克服する。本発明者らは、マウス組換えレトロウイルスを、それらがヒト補体因子に対して抵抗性があるように修飾した。これは、受容体相互作用の原因となるレトロウイルスの表面タンパク質ｅｎｖの遺伝子修飾によって達成された。ｅｎｖの受容体相互作用の領域を、ヒトの補体不活化因子の活性領域と触媒作用により融合させた。この修飾したｅｎｖは、補体に敏感な細胞の中で発現され、ウイルス粒子の中に特異的に組み込まれる。この方法によって、補体の侵襲に対して充分抵抗できる細胞とウイルスが得られる。従って、この方法は生体の中での遺伝子療法における補体抵抗性細胞の確立とのウイルスの産生に対する手段を提供する。
Description
【０００１】
マウスレトロウイルスは、ヒト遺伝子治療に対する最も重要な伝達システムで
ある。しかし、その適用には現在のところ限界がある。生体内に適用する場合の
主な制限の内の一つは、このタイプのウイルスがヒトの補体因子による不活化に
敏感な点にあるという問題が挙げられる。本発明は、この制限を克服する。 本発明者らは、マウス組換えレトロウイルスを、それらがヒト補体因子に対し
て抵抗性があるように修飾した。これは受容体相互作用の原因となるレトロウイ
ルスの表面タンパク質ｅｎｖの遺伝子修飾によって達成された。即ちｅｎｖの受
容体相互作用の領域を、ヒトの補体不活化因子の活性領域と触媒作用により融合
させた。この修飾したｅｎｖは、補体に敏感な細胞の中で発現され、ウイルス粒
子の中に特異的に組み込まれる。この方法により、補体の侵襲に対して充分抵抗
できる細胞とウイルスが得られる。従って、この方法は生体の中での遺伝子療法
における補体抵抗性細胞の確立とのウイルスの産生に対する手段を提供する。
ある。しかし、その適用には現在のところ限界がある。生体内に適用する場合の
主な制限の内の一つは、このタイプのウイルスがヒトの補体因子による不活化に
敏感な点にあるという問題が挙げられる。本発明は、この制限を克服する。 本発明者らは、マウス組換えレトロウイルスを、それらがヒト補体因子に対し
て抵抗性があるように修飾した。これは受容体相互作用の原因となるレトロウイ
ルスの表面タンパク質ｅｎｖの遺伝子修飾によって達成された。即ちｅｎｖの受
容体相互作用の領域を、ヒトの補体不活化因子の活性領域と触媒作用により融合
させた。この修飾したｅｎｖは、補体に敏感な細胞の中で発現され、ウイルス粒
子の中に特異的に組み込まれる。この方法により、補体の侵襲に対して充分抵抗
できる細胞とウイルスが得られる。従って、この方法は生体の中での遺伝子療法
における補体抵抗性細胞の確立とのウイルスの産生に対する手段を提供する。
【０００２】
１．マウスレトロウイルスの生物学 マウスレトロウイルスは、ウイルス形成と感染とに必須のポリタンパク質をコ
ードする３種の遺伝子（ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ）を有する。ｇａｇ遺伝子はウ
イルス内部のキャプシド形成のための構造タンパク質をコードし、ｐｏｌ遺伝子
は、ウイルスタンパク質のプロセッシング、パッケージングしたＲＮＡ分子の逆
転写及び最後にプロウイルスの組込みに必要な酵素的タンパク質を提供する。ｅ
ｎｖ遺伝子は、小胞体を介して伝達され、細胞性酵素によりタンパク質分解的に
プロセスされ、グリコシル化され、最後に細胞膜に組み込まれるポリタンパク質
をコードする。このポリタンパク質は次のような異なる領域、即ち小胞体に輸送
された後で分割されるシグナルペプチド（信号ペプチド）、細胞外表面の領域（
ＳＵ）及び膜貫通領域（ＴＭ）からなり、両者は非共有的であり、ＴＭはＳブリ
ッジを介してＳＵに結合し、その際タンパク質複合体を細胞膜の中にに固定する
。ＳＵは、分泌的経路を通ってのポリタンパク質の輸送／プロセッシングの間に
細胞性プロテアーゼによりＴＭから分割される。
ードする３種の遺伝子（ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ）を有する。ｇａｇ遺伝子はウ
イルス内部のキャプシド形成のための構造タンパク質をコードし、ｐｏｌ遺伝子
は、ウイルスタンパク質のプロセッシング、パッケージングしたＲＮＡ分子の逆
転写及び最後にプロウイルスの組込みに必要な酵素的タンパク質を提供する。ｅ
ｎｖ遺伝子は、小胞体を介して伝達され、細胞性酵素によりタンパク質分解的に
プロセスされ、グリコシル化され、最後に細胞膜に組み込まれるポリタンパク質
をコードする。このポリタンパク質は次のような異なる領域、即ち小胞体に輸送
された後で分割されるシグナルペプチド（信号ペプチド）、細胞外表面の領域（
ＳＵ）及び膜貫通領域（ＴＭ）からなり、両者は非共有的であり、ＴＭはＳブリ
ッジを介してＳＵに結合し、その際タンパク質複合体を細胞膜の中にに固定する
。ＳＵは、分泌的経路を通ってのポリタンパク質の輸送／プロセッシングの間に
細胞性プロテアーゼによりＴＭから分割される。
【０００３】 細胞からウイルスが放出される最終段階の中で、ｅｎｖタンパク質で覆われた
細胞膜の部位の所でｇａｇ及びｇａｇｐｏｌタンパク質のアセンブリーによりレ
トロウイルス粒子がは形成される。ある種のウイルスに対しては、ＴＭの細胞内
の部分がｇａｇポリタンパク質のＭＡ（マトリックス）領域と相互作用をしてし
（Brody等, 1994; Dorfman等, 1994）、それによってｅｎｖタンパク質の特異的
組込みに関連することが見出された。その後で細胞膜を通しての、ウイルスキャ
プシドの出芽が行われる。その結果、レトロウイルスの粒子は細胞膜に覆われ、
ｅｎｖタンパク質のホモ三量体がスパイク状に突出する。レトロウイルスのｅｎ
ｖタンパク質はウイルスの膜の中に高度に発現されるが、同様な高レベルはこれ
まで他のどんな細胞表面マーカーにも認められなかった。従って、特異的ｅｎｖ
とは対照的に、細胞タンパク質ウイルスの外側の膜への細胞タンパク質の組み込
みはランダムであると想定される。 感染プロセスの間で、ＳＵタンパク質はそれぞれの受容体との相互作用が必要
であるが、一方ＴＭタンパク質はその後のウイルス粒子と相互作用細胞との融合
の原因となる。
細胞膜の部位の所でｇａｇ及びｇａｇｐｏｌタンパク質のアセンブリーによりレ
トロウイルス粒子がは形成される。ある種のウイルスに対しては、ＴＭの細胞内
の部分がｇａｇポリタンパク質のＭＡ（マトリックス）領域と相互作用をしてし
（Brody等, 1994; Dorfman等, 1994）、それによってｅｎｖタンパク質の特異的
組込みに関連することが見出された。その後で細胞膜を通しての、ウイルスキャ
プシドの出芽が行われる。その結果、レトロウイルスの粒子は細胞膜に覆われ、
ｅｎｖタンパク質のホモ三量体がスパイク状に突出する。レトロウイルスのｅｎ
ｖタンパク質はウイルスの膜の中に高度に発現されるが、同様な高レベルはこれ
まで他のどんな細胞表面マーカーにも認められなかった。従って、特異的ｅｎｖ
とは対照的に、細胞タンパク質ウイルスの外側の膜への細胞タンパク質の組み込
みはランダムであると想定される。 感染プロセスの間で、ＳＵタンパク質はそれぞれの受容体との相互作用が必要
であるが、一方ＴＭタンパク質はその後のウイルス粒子と相互作用細胞との融合
の原因となる。
【０００４】 ２．遺伝子伝達用及びパッケージング細胞用のレトロウイルス 遺伝子伝達に、固定化して宿主細胞から離脱できなくなった修飾レトロウイル
スが用いられるが、それは尚それぞれのウイルス遺伝子を発現する。この所謂パ
ッケージング細胞乃至ヘルパー細胞の中では、レトロウイルスの転写ユニットが
、ウイルスＲＮＡをウイルス粒子に特異的に取込むために必要なパッケージング
配列の欠失により修飾された。この配列は、レトロウイルスのゲノムの野生型ウ
イルスへの伝達を準備する。それぞれの治療遺伝子とパッケージング配列とを有
するレトロウイルスのベクターと共にパッケージング細胞をトランスフェクショ
ンすれば、組換えウイルス粒子が形成される。ウイルス遺伝子自体は固定されて
いるので、ベクターＲＮＡだけがウイルス粒子の中にパッケージングされて感染
細胞へ形質導入される。
スが用いられるが、それは尚それぞれのウイルス遺伝子を発現する。この所謂パ
ッケージング細胞乃至ヘルパー細胞の中では、レトロウイルスの転写ユニットが
、ウイルスＲＮＡをウイルス粒子に特異的に取込むために必要なパッケージング
配列の欠失により修飾された。この配列は、レトロウイルスのゲノムの野生型ウ
イルスへの伝達を準備する。それぞれの治療遺伝子とパッケージング配列とを有
するレトロウイルスのベクターと共にパッケージング細胞をトランスフェクショ
ンすれば、組換えウイルス粒子が形成される。ウイルス遺伝子自体は固定されて
いるので、ベクターＲＮＡだけがウイルス粒子の中にパッケージングされて感染
細胞へ形質導入される。
【０００５】 ３．ｅｎｖの遺伝子修飾によるウイルス向性の変化 この数年の間に、レトロウイルスのｅｎｖタンパク質を変質してレトロウイル
スの宿主領域を修飾する多くの研究が行われ、レトロウイルス用の機能的即ち感
染性融合タンパク質を創造する多くの試みがなされたが、その多くは失敗した。
幾つかのグループは、ＳＵのＮ末端基の標識表示が可能であることを示すことが
できた。ウイルスを他の細胞受容体に向けなおすことはマウスレトロウイルスに
ついてはこれまで達成されなかったけれども、幾つかの場合ｅｎｖに標識を付け
ることは受容体の相互作用を妨げてはいない。
スの宿主領域を修飾する多くの研究が行われ、レトロウイルス用の機能的即ち感
染性融合タンパク質を創造する多くの試みがなされたが、その多くは失敗した。
幾つかのグループは、ＳＵのＮ末端基の標識表示が可能であることを示すことが
できた。ウイルスを他の細胞受容体に向けなおすことはマウスレトロウイルスに
ついてはこれまで達成されなかったけれども、幾つかの場合ｅｎｖに標識を付け
ることは受容体の相互作用を妨げてはいない。
【０００６】 ４．補体システム 侵入した生物体の攻撃に対するヒトの防御機構の一つが、補体の媒介する侵入
生物体の溶解である。補体の媒介する不活化は多段階の酵素的カスケード反応で
、最後に侵入生物体の膜の穿孔とその後の溶解とを媒介する膜侵襲複合体（ＭＡ
Ｃ）が形成される。この反応は、抗原抗体複合体により開始される（古典経路）
か、或いは抗体とは無関係のある種の多糖類、ウイルス及び細菌により活性化さ
れる経路（代替経路）をたどる。
生物体の溶解である。補体の媒介する不活化は多段階の酵素的カスケード反応で
、最後に侵入生物体の膜の穿孔とその後の溶解とを媒介する膜侵襲複合体（ＭＡ
Ｃ）が形成される。この反応は、抗原抗体複合体により開始される（古典経路）
か、或いは抗体とは無関係のある種の多糖類、ウイルス及び細菌により活性化さ
れる経路（代替経路）をたどる。
【０００７】 ヒトの器官と細胞自体は、補体媒介の溶解に対して保護される。この保護作用
は所謂補体不活化因子の発現によって達成される。これまでに５種のヒトの因子
が知られている。ＣＤ３５（ＣＲ１）は、細胞から放出され主として外因的に作
用する。それに対して、ＣＤ５９、ＣＤ４６（ＭＣＰ）、ＣＤ５５（ＤＡＦ）お
よびＨＲＦ（補体制御因子）は細胞膜に組み込まれている。ＣＤ４６（ＭＣＰ）
は古典的膜貫通タンパク質で、一方、ＨＲＦ、ＣＤ５９及びＣＤ５５はＧＰＩ（
グリコシルホスファチジルイノシトール）に固定されている。これらの因子は、
補体のカスケード反応を次の２つの異なる段階で中断することができる：ＤＡＦ
、ＣＲ１及びＭＣＰは、代替経路と古典的経路の両方の初期段階で作用し、一方
ＣＤ５９とＨＲＦは、チャンネル形成と溶解とに終わる両方の経路の最終段階で
ある膜侵襲複合体のアセンブリーを阻止する。
は所謂補体不活化因子の発現によって達成される。これまでに５種のヒトの因子
が知られている。ＣＤ３５（ＣＲ１）は、細胞から放出され主として外因的に作
用する。それに対して、ＣＤ５９、ＣＤ４６（ＭＣＰ）、ＣＤ５５（ＤＡＦ）お
よびＨＲＦ（補体制御因子）は細胞膜に組み込まれている。ＣＤ４６（ＭＣＰ）
は古典的膜貫通タンパク質で、一方、ＨＲＦ、ＣＤ５９及びＣＤ５５はＧＰＩ（
グリコシルホスファチジルイノシトール）に固定されている。これらの因子は、
補体のカスケード反応を次の２つの異なる段階で中断することができる：ＤＡＦ
、ＣＲ１及びＭＣＰは、代替経路と古典的経路の両方の初期段階で作用し、一方
ＣＤ５９とＨＲＦは、チャンネル形成と溶解とに終わる両方の経路の最終段階で
ある膜侵襲複合体のアセンブリーを阻止する。
【０００８】 自然のヒトの宿主領域を備えたウイルスはこの防御システムを克服する方法を
発展させた。例えばヘルプスウイルスサイミリ（Herpes Saimiri) については、
これが補体制御タンパク質相同体（ＣＣＰＨ）をコードするウイルスをもたらす
ことによって補体媒介の溶解を克服したと報告された（Fodor等, 1995）。この ウイルスは、カスケード反応を初期段階で阻止することができる。ＨＩＶ（ヒト
免疫不全ウイルス）は、補体媒介破壊を防止するレベルで細胞性ＤＡＦ、ＭＣＰ
及びＣＤ５９を取り込むことができる（Saifuddin等, 1995; 1997）。
発展させた。例えばヘルプスウイルスサイミリ（Herpes Saimiri) については、
これが補体制御タンパク質相同体（ＣＣＰＨ）をコードするウイルスをもたらす
ことによって補体媒介の溶解を克服したと報告された（Fodor等, 1995）。この ウイルスは、カスケード反応を初期段階で阻止することができる。ＨＩＶ（ヒト
免疫不全ウイルス）は、補体媒介破壊を防止するレベルで細胞性ＤＡＦ、ＭＣＰ
及びＣＤ５９を取り込むことができる（Saifuddin等, 1995; 1997）。
【０００９】 ５．マウスレトロウイルスのヒト補体媒介による不活化 これまでの研究によって、マウスレトロウイルスが補体の媒介する侵襲により
不活化される証拠が提供された（Welsh等, 1975）。その当時、ＴＭ領域の細胞 外領域を古典経路の第１の酵素であるＣ１（補体の第１成分）と直接結合するこ
とによってカスケード反応が開始され、その結果古典経路が免疫グロブリンに関
係なく直接活性化される証拠が示された（Cooper等, 1976; Bartholemew等, 198
0）。その間にマウスレトロウイルスの補体の不安定性に対するもう一つの理由 が明らかになった（Rother等, 1995; Takeuchi等, 1996）。即ち、非旧世界霊長
類細胞が示されたα−ガラクトシルエピトープに向けられた自然のヒト抗体が、
代替経路を介する補体媒介の不活化の原因となることが示された。例えば、宿主
細胞のグリコシル化のパターンが、それらから生ずるトロウイルスの補体感受性
に寄与すると思われる。実際、ある種のヒト細胞系から作られたマウスレトロウ
イルスは、補体媒介による侵襲に対して安定である（Cosset等, 1995）。しかし
、この変更したグリコシル化にもかかわらず、全てのヒト細胞がこの保護を提供
するのに適していると言うわけではなく（Takeuchi等, 1994）、補体媒介の溶解
の問題をこの特異的なグリコシル化のパターンのみに求めることはできないこと
を示している。例えば補体のＴＭ媒介による活性化及び／又はその他のなお未知
の機構がヒト細胞からでも補体感受性ウイルスの形成に寄与するかもしれない。
不活化される証拠が提供された（Welsh等, 1975）。その当時、ＴＭ領域の細胞 外領域を古典経路の第１の酵素であるＣ１（補体の第１成分）と直接結合するこ
とによってカスケード反応が開始され、その結果古典経路が免疫グロブリンに関
係なく直接活性化される証拠が示された（Cooper等, 1976; Bartholemew等, 198
0）。その間にマウスレトロウイルスの補体の不安定性に対するもう一つの理由 が明らかになった（Rother等, 1995; Takeuchi等, 1996）。即ち、非旧世界霊長
類細胞が示されたα−ガラクトシルエピトープに向けられた自然のヒト抗体が、
代替経路を介する補体媒介の不活化の原因となることが示された。例えば、宿主
細胞のグリコシル化のパターンが、それらから生ずるトロウイルスの補体感受性
に寄与すると思われる。実際、ある種のヒト細胞系から作られたマウスレトロウ
イルスは、補体媒介による侵襲に対して安定である（Cosset等, 1995）。しかし
、この変更したグリコシル化にもかかわらず、全てのヒト細胞がこの保護を提供
するのに適していると言うわけではなく（Takeuchi等, 1994）、補体媒介の溶解
の問題をこの特異的なグリコシル化のパターンのみに求めることはできないこと
を示している。例えば補体のＴＭ媒介による活性化及び／又はその他のなお未知
の機構がヒト細胞からでも補体感受性ウイルスの形成に寄与するかもしれない。
【００１０】
図１：補体不活化因子の接触的活性領域を含む溶融タンパク質の構造（ＤＡＦ
、ＭＣＰ及びＣＤ５９は図示の通り）及びびレトロウイルスのｅｎｖタンパク質
の種々の領域（ハッチング：ＳＵ、白：ＴＭ、あざやかなハッチング：ＴＭの膜
貫通領域）。
、ＭＣＰ及びＣＤ５９は図示の通り）及びびレトロウイルスのｅｎｖタンパク質
の種々の領域（ハッチング：ＳＵ、白：ＴＭ、あざやかなハッチング：ＴＭの膜
貫通領域）。
【００１１】 図２：融合タンパク質は、細胞の補体媒介の溶解を克服することができる。 マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞を種々の融合遺伝子で安定にトランスフェクションし
た。細胞表面の発現をＦＡＣＳ（蛍光標示式細胞分取器）により確認した（ａ）
。補体の安定度は生存率分析によって測定した（ｂ）。 ａ） トランスフェクションした細胞（太線）およびトランスフェクションし
ていない細胞（細線）とのＦＡＣＳ分析を、それぞれのヒト補体不活化因子に向
けられた抗体を使用して実施した。 ｂ） トランスフェクションした細胞とトランスフェクションしていない細胞
を、活性又は熱で不活化にした補体抵抗因子を含むヒト血清を加えてインキュベ
ートしてから、生存率をトリパンブルー色素排除試験によって測定した。活性血
清試料と不活性試料から得られた生存細胞の相対数を生存率％で示した。
た。細胞表面の発現をＦＡＣＳ（蛍光標示式細胞分取器）により確認した（ａ）
。補体の安定度は生存率分析によって測定した（ｂ）。 ａ） トランスフェクションした細胞（太線）およびトランスフェクションし
ていない細胞（細線）とのＦＡＣＳ分析を、それぞれのヒト補体不活化因子に向
けられた抗体を使用して実施した。 ｂ） トランスフェクションした細胞とトランスフェクションしていない細胞
を、活性又は熱で不活化にした補体抵抗因子を含むヒト血清を加えてインキュベ
ートしてから、生存率をトリパンブルー色素排除試験によって測定した。活性血
清試料と不活性試料から得られた生存細胞の相対数を生存率％で示した。
【００１２】 図３：ｇａｇｐｏｌ発現細胞の中でのＤＡＦＦ２Ａの発現により、補体媒介の
溶解に対して抵抗性のある感染レトロウイルスが生成する。 野生型ｅｎｖ及びＤＡＦＦ２Ａを、それぞれ安定にＧＰ−ｐａｃ細胞（レトロ
ウイルスｇａｇｐｏｌ遺伝子とピューロマイシンに対する抵抗性を付与されたレ
トロウイルスベクターとを発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞）の中にトランスフェクシ
ョンした。ＤＡＦＦ２Ａをトランスフェクションした細胞に対しては、１×１０ 5 ｃｆｕ／ｍｌであり、野生型ｅｎｖをトランスフェクションした対照細胞に対
しては２〜９×１０5 ｃｆｕ／ｍｌの力価が測定された。 ａ） ウイルス粒子を集めて、抗ｅｎｖ抗体を用いたウエスタンブロット分析
に掛けた。 バンド１： 野生型ｅｎｖを発現するＰＡ３１７パッケージング細胞から生じ
たウイルス粒子。 バンド２： 野生型ｅｎｖをトランスフェクションしたＧＰ−ｐａｃ細胞から
生じたウイルス粒子。 バンド３： ＤＡＦＦ２ＡをトランスフェクションしたＧＰ−ｐａｃ細胞から
生じたウイルス粒子。 ｂ） ＧＰ−ｐａｃ＋ｅｎｖ（白いバー）及びＧＰ−ｐａｃ＋ＤＡＦＦ２Ａ細
胞（黒いバー）から生じたウイルス粒子を種々の供与者（１、３、７及びプール
）からの活性および熱不活化したヒト血清と共にインキュベートしてから、感染
力価を測定した。熱不活化した血清試料と共にインキュベートしたウイルスから
得られたクローンの数を１００として、活性血清試料から得られたクローンの数
を安定度％として示した。 ｃ） 補体による溶解に対するＤＡＦＦ２Ａウイルスの保護は、触媒的活性領
域をブロックすることによって排除することができる。 野生型ｅｎｖ（白いバー）及びＤＡＦＦ２Ａ（黒いバー）によりトランスフェ
クションしたＧＰ−ｐａｃ細胞から得られたウイルスを、予め活性および不活化
血清試料を加えてインキュベートした抗ＤＡＦ抗体と共にインキュベートした。
ウイルスの安定度を上述のように測定した。ＤＡＦＦ２Ａウイルスを抗ＤＡＦ抗
体と共にインキュベーションすると、ヒト血清に対する感受性が低下する。
溶解に対して抵抗性のある感染レトロウイルスが生成する。 野生型ｅｎｖ及びＤＡＦＦ２Ａを、それぞれ安定にＧＰ−ｐａｃ細胞（レトロ
ウイルスｇａｇｐｏｌ遺伝子とピューロマイシンに対する抵抗性を付与されたレ
トロウイルスベクターとを発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞）の中にトランスフェクシ
ョンした。ＤＡＦＦ２Ａをトランスフェクションした細胞に対しては、１×１０ 5 ｃｆｕ／ｍｌであり、野生型ｅｎｖをトランスフェクションした対照細胞に対
しては２〜９×１０5 ｃｆｕ／ｍｌの力価が測定された。 ａ） ウイルス粒子を集めて、抗ｅｎｖ抗体を用いたウエスタンブロット分析
に掛けた。 バンド１： 野生型ｅｎｖを発現するＰＡ３１７パッケージング細胞から生じ
たウイルス粒子。 バンド２： 野生型ｅｎｖをトランスフェクションしたＧＰ−ｐａｃ細胞から
生じたウイルス粒子。 バンド３： ＤＡＦＦ２ＡをトランスフェクションしたＧＰ−ｐａｃ細胞から
生じたウイルス粒子。 ｂ） ＧＰ−ｐａｃ＋ｅｎｖ（白いバー）及びＧＰ−ｐａｃ＋ＤＡＦＦ２Ａ細
胞（黒いバー）から生じたウイルス粒子を種々の供与者（１、３、７及びプール
）からの活性および熱不活化したヒト血清と共にインキュベートしてから、感染
力価を測定した。熱不活化した血清試料と共にインキュベートしたウイルスから
得られたクローンの数を１００として、活性血清試料から得られたクローンの数
を安定度％として示した。 ｃ） 補体による溶解に対するＤＡＦＦ２Ａウイルスの保護は、触媒的活性領
域をブロックすることによって排除することができる。 野生型ｅｎｖ（白いバー）及びＤＡＦＦ２Ａ（黒いバー）によりトランスフェ
クションしたＧＰ−ｐａｃ細胞から得られたウイルスを、予め活性および不活化
血清試料を加えてインキュベートした抗ＤＡＦ抗体と共にインキュベートした。
ウイルスの安定度を上述のように測定した。ＤＡＦＦ２Ａウイルスを抗ＤＡＦ抗
体と共にインキュベーションすると、ヒト血清に対する感受性が低下する。
【００１３】 図４：配列をコードするｇａｇ-ｐｏｌおよびｅｎｖタンパク質を、野生型レ トロウイルスゲノムの中の５８ｂｐの領域の中に重ねる（ヌクレオチド５７７７
〜５８３５）。現在使用されているパッケージング細胞で、ｇａｇｐｏｌ及びｅ
ｎｖは種々の染色体に分割されて、野生型を形成する危険が少なくなる。しかし
、固有の配列相同性によって組換えはなお可能である。ＤＡＦＦ２Ａのような融
合タンパク質に基づくパッケージング細胞の中では、この配列の相同性は除かれ
、組換えはできなくなる。
〜５８３５）。現在使用されているパッケージング細胞で、ｇａｇｐｏｌ及びｅ
ｎｖは種々の染色体に分割されて、野生型を形成する危険が少なくなる。しかし
、固有の配列相同性によって組換えはなお可能である。ＤＡＦＦ２Ａのような融
合タンパク質に基づくパッケージング細胞の中では、この配列の相同性は除かれ
、組換えはできなくなる。
【００１４】
Bartholomew R. M.及びEsser A. F. "レトロウイルス膜の補体（C1）の第１成分の抗体に無関係な活性の機構" Biochemistry 19: 2847-2853 (1980) Brody B. A., Kimball M. G.及びHunteer E. "メイソン−フィツァー・サルウイルスの膜貫通糖タンパクの突然変異： SU-TM
会合の損失と感染性に対する影響" Virology 66: 3466-3475 (1992) Cooper N. R. Jensen F. C., Welsh R. M.及びOldstone M. B. A. "ヒト血清によるRNA腫瘍ウイルスの溶解：古典的補体経路の抗体に無関係の直 接の誘発" J. Exp. Med. 144: 970-984 (1976) Cosset F. l., Takeuchi Y., Battini J. L., Weiss R. A.及びCollins M. K. L
. "ヒト血清に抵抗性のある組換えレトロウイルスを産生する高力価パッケ−ジン
グ細胞" J. Virol. 69 (12) : 7430-7436 (1995) Dorfman T., Mammano F., Haseltine W. A.及びGottlinger H. G. "ヒト免疫不全ウイルスタイプ1のエンベロープタンパク質のビリオン会合にお けるマトリックスタンパクの役割" J. Virol. 68 : 1689-1696 (1994) Fodor W. L., Rollins S. A., Bianco-Caron S., Rother R. P., Guilmette E.
R., Burton W. V., Albrecht J.-C., Fleckenstein B.及びSquinto S. P. “ヘルペスウイルスサイミリの補体制御タンパク質ホモロジーは、C3変換酵素の
活性を抑制して血清補体の調節する" J. Virol. 69 : 3889-3892 (1995) Rother R. P., Fodor W. L., Soringhorn J. P., Birks C. w., Setter E., San
drin M. S., Squinto S. P.及びRollins S. A. “抗αガラクトシル天然抗体により媒介されたヒトの血清におけるレトロウイル
ス失活の新機構" J. Exp. Med. 182: 1345-1355 (1995) Rother R. P., Squinto S. P. Mason J. M.及びRollins S. A. “補体の抑制によるヒトの血液中でのレトロウイルスベクター粒子の保護" Hum. Gene Ther. 6: 429-435 (1995) Saifuddin M., Hedayati T., Atkinson J. P., Holguin M. H., Parker C. J.及
びSpear G. T. “ヒトの免疫不全ウイルスタイプ1が、グリコシル・ホスファチジルイノシトー ル固定CD5とCD59及び完全体CD46のと両方を補体媒介の破壊から保護するレベル で取り込む" J. Gen. Virol. 78： 1907-1911 (1997) Takeuchi Y., Cosset F. L., Lachmann P. J., Okada H., Weiss R. A.及びColl
ins M. K. L. "ヒトの補体によるタイプCレトロウイルス失活は、ウイルスゲノムと生産細胞 の両方により規定される” J. Virol. 68： 8001-8007 (1994) Takeuchi Y., Porter C. D., Strahan K. M., Preece A. F., Gustafsson K., C
osset F. L., Weiss R. A.及びCollins M. K. L. “（α-3）ガラクトシルトランスフェラーゼによるヒトの血清への細胞とレトロ
ウイルスとの感作" Nature (London) 379: 85-88 (1996) Takeuchi Y., Porter C. D., Strahan K. M., Preece A. F., Gustafsson K., C
osset F. L., Weiss R. A.及びCollins M. K. L. “（α-3）ガラクトシルトランスフェラーゼによるヒトの血清への細胞とレトロ
ウイルスとの感作" Nature (London) 379: 85-88 (1996) Welsh R. M., Cooper J. R., Jensen F. C. 及びOldstone M. B. A. “ヒトの血清によるRNA腫瘍ウイルスの溶解" Nature (London) 257: 612-614 (1975)
会合の損失と感染性に対する影響" Virology 66: 3466-3475 (1992) Cooper N. R. Jensen F. C., Welsh R. M.及びOldstone M. B. A. "ヒト血清によるRNA腫瘍ウイルスの溶解：古典的補体経路の抗体に無関係の直 接の誘発" J. Exp. Med. 144: 970-984 (1976) Cosset F. l., Takeuchi Y., Battini J. L., Weiss R. A.及びCollins M. K. L
. "ヒト血清に抵抗性のある組換えレトロウイルスを産生する高力価パッケ−ジン
グ細胞" J. Virol. 69 (12) : 7430-7436 (1995) Dorfman T., Mammano F., Haseltine W. A.及びGottlinger H. G. "ヒト免疫不全ウイルスタイプ1のエンベロープタンパク質のビリオン会合にお けるマトリックスタンパクの役割" J. Virol. 68 : 1689-1696 (1994) Fodor W. L., Rollins S. A., Bianco-Caron S., Rother R. P., Guilmette E.
R., Burton W. V., Albrecht J.-C., Fleckenstein B.及びSquinto S. P. “ヘルペスウイルスサイミリの補体制御タンパク質ホモロジーは、C3変換酵素の
活性を抑制して血清補体の調節する" J. Virol. 69 : 3889-3892 (1995) Rother R. P., Fodor W. L., Soringhorn J. P., Birks C. w., Setter E., San
drin M. S., Squinto S. P.及びRollins S. A. “抗αガラクトシル天然抗体により媒介されたヒトの血清におけるレトロウイル
ス失活の新機構" J. Exp. Med. 182: 1345-1355 (1995) Rother R. P., Squinto S. P. Mason J. M.及びRollins S. A. “補体の抑制によるヒトの血液中でのレトロウイルスベクター粒子の保護" Hum. Gene Ther. 6: 429-435 (1995) Saifuddin M., Hedayati T., Atkinson J. P., Holguin M. H., Parker C. J.及
びSpear G. T. “ヒトの免疫不全ウイルスタイプ1が、グリコシル・ホスファチジルイノシトー ル固定CD5とCD59及び完全体CD46のと両方を補体媒介の破壊から保護するレベル で取り込む" J. Gen. Virol. 78： 1907-1911 (1997) Takeuchi Y., Cosset F. L., Lachmann P. J., Okada H., Weiss R. A.及びColl
ins M. K. L. "ヒトの補体によるタイプCレトロウイルス失活は、ウイルスゲノムと生産細胞 の両方により規定される” J. Virol. 68： 8001-8007 (1994) Takeuchi Y., Porter C. D., Strahan K. M., Preece A. F., Gustafsson K., C
osset F. L., Weiss R. A.及びCollins M. K. L. “（α-3）ガラクトシルトランスフェラーゼによるヒトの血清への細胞とレトロ
ウイルスとの感作" Nature (London) 379: 85-88 (1996) Takeuchi Y., Porter C. D., Strahan K. M., Preece A. F., Gustafsson K., C
osset F. L., Weiss R. A.及びCollins M. K. L. “（α-3）ガラクトシルトランスフェラーゼによるヒトの血清への細胞とレトロ
ウイルスとの感作" Nature (London) 379: 85-88 (1996) Welsh R. M., Cooper J. R., Jensen F. C. 及びOldstone M. B. A. “ヒトの血清によるRNA腫瘍ウイルスの溶解" Nature (London) 257: 612-614 (1975)
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年５月１９日（２０００．５．１９）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１３
【補正方法】変更
【補正内容】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００９】 ５．マウスレトロウイルスのヒト補体の媒介による不活化 これまでの研究によって、マウスレトロウイルスが補体の媒介する侵襲により
不活化された証拠が提供された（Welsh等, 1975）。その当時とき、ＴＭ領域の 細胞外領域を古典経路の第１の酵素であるＣ１（補体の第１成分）と直接結合す
ることによってカスケード反応が開始され、その結果古典経路が免疫グロブリン
に関係なく直接活性化される証拠が得られた（Cooper等, 1976; Bartholemew等,
1980）。その間にマウスレトロウイルスの補体の不安定性に対するもう一つの 理由が明らかになった（Rother等, 1995; Takeuchi等, 1996）。即ち、非旧世界
霊長類細胞が示されたα−ガラクトシルエピトープに向けられた自然のヒト抗体
が、代替経路を介する補体媒介の不活化の原因となることが示された。例えば、
宿主細胞のグリコシル化のパターンが、それらから生ずるトロウイルスの補体感
受性に寄与すると思われる。実際、ある種のヒト細胞系から作られたマウスレト
ロウイルスが補体媒介による侵襲に対して安定である（Cosset等, 1995）。しか
し、この変更したグリコシル化にもかかわらず、全てのヒト細胞がこの保護を提
供するのに適していると言うわけではなく（Takeuchi等, 1994）、補体媒介の溶
解の問題をこの特異的なグリコシル化のパターンのみに求めることはできないこ
とを示している。例えば補体のＴＭ媒介による活性化及び／又はその他のなお未
知の機構がヒト細胞からでも補体感受性ウイルスの形成に寄与するかもしれない
。 即ち、本発明は、 − その膜貫通領域を含むレトロウイルス表面タンパク質（ＥＮＶ）またはその
一部と、 − 補体不活化因子の触媒的に活性な領域 との融合タンパク質をコードする一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡに関する。 ＥＮＶ部分については、前述のように、それぞれの受容体との相互作用には細
胞外表面領域（ＳＵ）が必要であることに留意すべきである。実施例の図１〜４
も参照。 本発明の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡは、前記補体不活化因子の触媒的に活
性な領域がそのＮ末端基により、前記レトロウイルス表面タンパク質（ＥＮＶ）
またはその一部のＣ末端基と融合していることを特徴とすることができる。 更に、本発明の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡは、ヒトの補体不活化因子、特
にＤＡＦ、ＣＤ５９、ＭＣＰ又はＨＲＦ、又はウイルス補体不活化因子、特にＣ
ＣＰＨを特徴とすることができる。 更に、本発明の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡは、レトロウイルスＳＵタンパ
ク質、レトロウイルスＴＭタンパク質、又はこれらのタンパク質の一部、特にア
ンホトロピック(amphotropic) ＥＮＶ １０ Ａ １、ＥＮＶ ４０７０ Ａ、
エコトロピック(ecotropic) ＥＮＶ、ＧＡＬＶ ＥＮＶ又はそれらのキメラを特
徴とすることができる。 更に、本発明は、ウイルスまたは細胞、特にパッケージング細胞に、補体シス
テム、特にヒト補体システムに対する抵抗性を付与し、且つ、 − ウイルス又は細胞、特に、前記請求の範囲の何れか１項に記載の融合タンパ
ク質を特徴とするパッケージング細胞を、補体システム、特にヒト補体システム
に作用させ、 − 安定に保持されたウイルスまたは細胞を選択し、 − 前記ウイルスまたは細胞から前記一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡを同定して
分離して、得ることができる一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡに関する。 更に、本発明は、本発明の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡによりコードされる
融合タンパク質に関する。 更に、本発明は、エンベロープタンパク質として本発明の少なくとも１つの融
合タンパク質を特徴とする、形質導入に有効でヒト補体システムに対して安定な
ウイルスに関する。 更に、本発明のウイルスは、前記ウイルスがレトロウイルス、特に、マウスウ
イルス、またはレトロウイルス以外のウイルス、または複合ウイルス、または擬
似型ウイルスであることを特徴とすることができる。 更に、本発明は、本発明の組み込まれた又は組み込まれていない二本鎖ＤＮＡ
を特徴する本発明のウイルスを産生するためのパッケージング細胞に関する。 更に、本発明の前記パッケージング細胞は、それがヒト細胞またはヒト以外の
細胞、特に、マウス細胞であることを特徴とすることができる。 更に、本発明の前記パッケージング細胞は、それが更に、その受容体相互作用
範囲を含む野生型レトロウイルスエンベロープタンパク質またはその一部をコー
ドするｄｓＤＮＡを含むことを特徴とすることができる。 更に、本発明によるパッケージング細胞は、それが公知のパッケージング細胞
、特にＰＡ ３１７またはＧＰ＋ＡＭ １２から誘導されていることを特徴とす
ることができる。 更に、本発明は、ヒト遺伝子治療法のためのウイルスの形質導入の効果を高め
るウイルスの使用に関する。 更に、本発明は、移植用の補体に耐える細胞の生成のための本発明の融合タン
パク質の使用に関する。 更に、本発明は、レトロウイルスのｇａｇｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子の固有配列
の重複の除去による組換えを介して、パッケージング細胞による複製能力のある
ウイルス形成の危険をすくなくするための本発明の融合タンパク質の使用に関す
る。 更に、本発明は、野生型ＥＮＶタンパク質と本発明の融合タンパク質の共発現
による補体に対して安定化したパッケージング細胞を生成するための本発明の融
合タンパク質の使用に関する。 更に、本発明は、本発明の補体に対して安定化したウイルスを生成するための
本発明による融合タンパク質の使用に関する。
不活化された証拠が提供された（Welsh等, 1975）。その当時とき、ＴＭ領域の 細胞外領域を古典経路の第１の酵素であるＣ１（補体の第１成分）と直接結合す
ることによってカスケード反応が開始され、その結果古典経路が免疫グロブリン
に関係なく直接活性化される証拠が得られた（Cooper等, 1976; Bartholemew等,
1980）。その間にマウスレトロウイルスの補体の不安定性に対するもう一つの 理由が明らかになった（Rother等, 1995; Takeuchi等, 1996）。即ち、非旧世界
霊長類細胞が示されたα−ガラクトシルエピトープに向けられた自然のヒト抗体
が、代替経路を介する補体媒介の不活化の原因となることが示された。例えば、
宿主細胞のグリコシル化のパターンが、それらから生ずるトロウイルスの補体感
受性に寄与すると思われる。実際、ある種のヒト細胞系から作られたマウスレト
ロウイルスが補体媒介による侵襲に対して安定である（Cosset等, 1995）。しか
し、この変更したグリコシル化にもかかわらず、全てのヒト細胞がこの保護を提
供するのに適していると言うわけではなく（Takeuchi等, 1994）、補体媒介の溶
解の問題をこの特異的なグリコシル化のパターンのみに求めることはできないこ
とを示している。例えば補体のＴＭ媒介による活性化及び／又はその他のなお未
知の機構がヒト細胞からでも補体感受性ウイルスの形成に寄与するかもしれない
。 即ち、本発明は、 − その膜貫通領域を含むレトロウイルス表面タンパク質（ＥＮＶ）またはその
一部と、 − 補体不活化因子の触媒的に活性な領域 との融合タンパク質をコードする一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡに関する。 ＥＮＶ部分については、前述のように、それぞれの受容体との相互作用には細
胞外表面領域（ＳＵ）が必要であることに留意すべきである。実施例の図１〜４
も参照。 本発明の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡは、前記補体不活化因子の触媒的に活
性な領域がそのＮ末端基により、前記レトロウイルス表面タンパク質（ＥＮＶ）
またはその一部のＣ末端基と融合していることを特徴とすることができる。 更に、本発明の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡは、ヒトの補体不活化因子、特
にＤＡＦ、ＣＤ５９、ＭＣＰ又はＨＲＦ、又はウイルス補体不活化因子、特にＣ
ＣＰＨを特徴とすることができる。 更に、本発明の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡは、レトロウイルスＳＵタンパ
ク質、レトロウイルスＴＭタンパク質、又はこれらのタンパク質の一部、特にア
ンホトロピック(amphotropic) ＥＮＶ １０ Ａ １、ＥＮＶ ４０７０ Ａ、
エコトロピック(ecotropic) ＥＮＶ、ＧＡＬＶ ＥＮＶ又はそれらのキメラを特
徴とすることができる。 更に、本発明は、ウイルスまたは細胞、特にパッケージング細胞に、補体シス
テム、特にヒト補体システムに対する抵抗性を付与し、且つ、 − ウイルス又は細胞、特に、前記請求の範囲の何れか１項に記載の融合タンパ
ク質を特徴とするパッケージング細胞を、補体システム、特にヒト補体システム
に作用させ、 − 安定に保持されたウイルスまたは細胞を選択し、 − 前記ウイルスまたは細胞から前記一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡを同定して
分離して、得ることができる一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡに関する。 更に、本発明は、本発明の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡによりコードされる
融合タンパク質に関する。 更に、本発明は、エンベロープタンパク質として本発明の少なくとも１つの融
合タンパク質を特徴とする、形質導入に有効でヒト補体システムに対して安定な
ウイルスに関する。 更に、本発明のウイルスは、前記ウイルスがレトロウイルス、特に、マウスウ
イルス、またはレトロウイルス以外のウイルス、または複合ウイルス、または擬
似型ウイルスであることを特徴とすることができる。 更に、本発明は、本発明の組み込まれた又は組み込まれていない二本鎖ＤＮＡ
を特徴する本発明のウイルスを産生するためのパッケージング細胞に関する。 更に、本発明の前記パッケージング細胞は、それがヒト細胞またはヒト以外の
細胞、特に、マウス細胞であることを特徴とすることができる。 更に、本発明の前記パッケージング細胞は、それが更に、その受容体相互作用
範囲を含む野生型レトロウイルスエンベロープタンパク質またはその一部をコー
ドするｄｓＤＮＡを含むことを特徴とすることができる。 更に、本発明によるパッケージング細胞は、それが公知のパッケージング細胞
、特にＰＡ ３１７またはＧＰ＋ＡＭ １２から誘導されていることを特徴とす
ることができる。 更に、本発明は、ヒト遺伝子治療法のためのウイルスの形質導入の効果を高め
るウイルスの使用に関する。 更に、本発明は、移植用の補体に耐える細胞の生成のための本発明の融合タン
パク質の使用に関する。 更に、本発明は、レトロウイルスのｇａｇｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子の固有配列
の重複の除去による組換えを介して、パッケージング細胞による複製能力のある
ウイルス形成の危険をすくなくするための本発明の融合タンパク質の使用に関す
る。 更に、本発明は、野生型ＥＮＶタンパク質と本発明の融合タンパク質の共発現
による補体に対して安定化したパッケージング細胞を生成するための本発明の融
合タンパク質の使用に関する。 更に、本発明は、本発明の補体に対して安定化したウイルスを生成するための
本発明による融合タンパク質の使用に関する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 7/00 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (72)発明者 ハウザー，ハンスヨールグ ドイツ Ｄ−38124 ブラウンシュバイグ， マッシーオーダー ヴェグ １ Ｆターム(参考） 4B024 AA20 BA32 CA04 DA02 DA03 DA20 EA02 GA11 HA17 4B065 AA91X AA93X AA97X AC20 CA24 CA44 4C084 AA13 CA01 CA23 NA14 ZB012 4C087 AA03 BC83 CA12 NA14 ZC01 4H045 AA10 BA10 CA01 CA40 DA01 DA50 EA20 FA74
Claims (17)
- 【請求項１】 その膜貫通ドメインを含むレトロウイルス表面タンパク質（
ＥＮＶ）又はその一部、および補体不活化因子の触媒的に活性な領域との融合タ
ンパク質をコードする一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡ。 - 【請求項２】 前記補体不活化因子の前記触媒的に活性な領域は、そのＮ末
端基により、前記レトロウイルス表面タンパク質（ＥＮＶ）又はその一部のＣ末
端と融合していることを特徴とする、請求項１記載の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖Ｄ
ＮＡ。 - 【請求項３】 ヒト補体不活化因子、特にＤＡＦ、ＣＤ５９、ＭＣＰ又はＨ
ＲＦ、又はウイルス補体不活化因子、特にＣＣＰＨを特徴とする請求項１又は２
記載の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡ。 - 【請求項４】 レトロウイルスＳＵタンパク質、レトロウイルスＴＭタンパ
ク質又はこれらのタンパク質の一部、特にアンフォトロピック(amphotropic) Ｅ
ＮＶ １０ Ａ １、ＥＮＶ ４０７０ Ａ、エコトロピック(ecotropic) ＥＮ
Ｖ、ＧＡＬＶ ＥＮＶ又はそれらのキメラを特徴とする、前記請求項のいずれか
に記載の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡ。 - 【請求項５】 ウイルス又は細胞、特に、パッケージング細胞に、補体シス
テム、特に、ヒトの補体システムに対する抵抗性を付与し、かつ、 − ウイルス又は細胞、特に前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質を特
徴とするパッケージング細胞を、補体システム、特にヒト補体システムに作用さ
せ、 − 安定に保持されたウルス又は細胞を選択し、 − このウイルス又は細胞から前記一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡを同定して分
離して、 得ることのできる前記請求項のいずれかに記載の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮＡ
。 - 【請求項６】 前記請求項のいずれかに記載の一本鎖ＤＮＡ又は二本鎖ＤＮ
Ａによりコードされる融合タンパク質。 - 【請求項７】 エンベロープタンパク質として前記請求項のいずれかに記載
の少なくとも一つの融合タンパク質を特徴とする前記ヒト補体システムに対して
安定なウイルス。 - 【請求項８】 ウイルスが、レトロウイルス、特に、マウスウイルス、又は
レトロウイルス以外のウイルス、又は複合ウイルス、又は擬似型ウイルスである
ことを特徴とする請求項７記載のウイルス。 - 【請求項９】 請求項１〜５のいずれかに記載の組み込まれた又は組み込ま
れていない二本鎖ＤＮＡを特徴とする、請求項７又は８記載のウイルスを産生す
るためのパッケージング細胞。 - 【請求項１０】 それがヒト細胞又はヒト以外の細胞、特にマウス細胞であ
ることを特徴とする請求項９記載のパッケージング細胞。 - 【請求項１１】 それが更に、その受容体相互作用領域を含む野生型レトロ
ウイルスエンベロープタンパク質又はその一部をコードする二本鎖ＤＮＡを更に
含むことを特徴とする請求項９又は１０記載のパッケージング細胞。 - 【請求項１２】 それが公知のパッケージング細胞、特にＰＡ ３１７又は
ＧＰ＋ＡＭ １２から誘導されていることを特徴とする請求項９〜１１のいずれ
かに記載のパッケージング細胞。 - 【請求項１３】 ヒトの遺伝子治療法のためにウイルスの形質導入の効率を
高めるための請求項７又は８記載のウイルスの使用。 - 【請求項１４】 移植用の補体に耐える細胞の生成のための請求項６記載の
融合タンパク質の使用。 - 【請求項１５】 レトロウイルスｇａｇｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子の固定配列
の重複の除去による組換えを介して、パッケージング細胞による複製能力のある
ウイルスの形成の危険を少なくするための請求項６記載の融合タンパク質の使用
。 - 【請求項１６】 野生型ＥＮＶタンパク質と請求項６記載の融合タンパク質
との共発現による補体に対して安定化したパッケージング細胞を生成するための
請求項６記載の融合タンパク質の使用。 - 【請求項１７】 請求項７又は８記載の補体に対して安定化したウイルスを
生成するための、請求項６に記載の融合タンパク質の使用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97120402.9 | 1997-11-21 | ||
| EP97120402 | 1997-11-21 | ||
| PCT/EP1998/007484 WO1999027121A1 (en) | 1997-11-21 | 1998-11-20 | Development of viruses resistant to inactivation by the human complement system |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002509695A true JP2002509695A (ja) | 2002-04-02 |
Family
ID=8227652
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000522262A Pending JP2002509695A (ja) | 1997-11-21 | 1998-11-20 | 一本鎖ｄｎａ又は二本鎖ｄｎａ、コード化融合タンパク質，ウイルス，パッケージング細胞及びこれらの使用ヒト補体システムによる不活化に耐えるウイルスの開発 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6475756B1 (ja) |
| EP (1) | EP1030928A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002509695A (ja) |
| WO (1) | WO1999027121A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005070459A1 (ja) * | 2004-01-22 | 2005-08-04 | Dnavec Research Inc. | 繰返し投与を伴うベクターの発現を継続させる方法 |
| JP2020519230A (ja) * | 2017-05-10 | 2020-07-02 | ウェルスタット イミューノ セラピューティクス， エルエルシーＷｅｌｌｓｔａｔ Ｉｍｍｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｌｌｃ | がんの治療のための、補体不活性化に耐性のエンベロープウイルス |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69938931D1 (de) * | 1998-09-23 | 2008-07-31 | Inst Virologie Teilrechtsfaehi | Retrovirale partikel, geschützt gegen komplementvermittelte lyse |
| AU2003228751A1 (en) | 2002-05-01 | 2003-11-17 | Cell Genesys, Inc. | Lentiviral vector particles resistant to complement inactivation |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4825723A (en) * | 1987-09-04 | 1989-05-02 | Allied-Signal Inc. | Compound planetary gear assembly |
| GB9412844D0 (en) * | 1994-06-27 | 1994-08-17 | Medical Res Council | Improvements in or relating to therapeutic methods |
| US5562904A (en) * | 1994-07-21 | 1996-10-08 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Retroviral transduction of cells using soluble complement inhibitors |
| JPH10507905A (ja) * | 1994-08-17 | 1998-08-04 | ジェネティック セラピー インコーポレイテッド | ヒト血清による溶解耐性生産者細胞系で生産されるレトロウイルスベクター |
-
1998
- 1998-11-20 EP EP98964423A patent/EP1030928A1/en not_active Withdrawn
- 1998-11-20 US US09/554,838 patent/US6475756B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-11-20 JP JP2000522262A patent/JP2002509695A/ja active Pending
- 1998-11-20 WO PCT/EP1998/007484 patent/WO1999027121A1/en not_active Application Discontinuation
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005070459A1 (ja) * | 2004-01-22 | 2005-08-04 | Dnavec Research Inc. | 繰返し投与を伴うベクターの発現を継続させる方法 |
| JP2020519230A (ja) * | 2017-05-10 | 2020-07-02 | ウェルスタット イミューノ セラピューティクス， エルエルシーＷｅｌｌｓｔａｔ Ｉｍｍｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｌｌｃ | がんの治療のための、補体不活性化に耐性のエンベロープウイルス |
| JP7161940B2 (ja) | 2017-05-10 | 2022-10-27 | ウェルスタット イミューノ セラピューティクス， エルエルシー | がんの治療のための、補体不活性化に耐性のエンベロープウイルス |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1030928A1 (en) | 2000-08-30 |
| WO1999027121A1 (en) | 1999-06-03 |
| US6475756B1 (en) | 2002-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cosset et al. | High-titer packaging cells producing recombinant retroviruses resistant to human serum | |
| Blond et al. | An envelope glycoprotein of the human endogenous retrovirus HERV-W is expressed in the human placenta and fuses cells expressing the type D mammalian retrovirus receptor | |
| US5886166A (en) | Retroviral vector, a replication system for said vector and avian or mammalian cells transfected with said vector | |
| Goff | Intracellular trafficking of retroviral genomes during the early phase of infection: viral exploitation of cellular pathways | |
| Lu et al. | A leucine triplet repeat sequence (LXX) 4 in p6gag is important for Vpr incorporation into human immunodeficiency virus type 1 particles | |
| Christodoulopoulos et al. | Sequences in the cytoplasmic tail of the gibbon ape leukemia virus envelope protein that prevent its incorporation into lentivirus vectors | |
| Łopata et al. | Porcine endogenous retrovirus (PERV)–molecular structure and replication strategy in the context of retroviral infection risk of human cells | |
| EP0630409B1 (en) | Defective packaging non-oncoviral vectors based on mpmv | |
| Swiersy et al. | Orthoretroviral-like prototype foamy virus Gag-Pol expression is compatible with viral replication | |
| Balliet et al. | Efficient infection mediated by viral receptors incorporated into retroviral particles | |
| Zhao et al. | Functional interactions between monomers of the retroviral envelope protein complex | |
| Nitta et al. | Moloney murine leukemia virus glyco-gag facilitates xenotropic murine leukemia virus-related virus replication through human APOBEC3-independent mechanisms | |
| Celma et al. | Domains in the simian immunodeficiency virus gp41 cytoplasmic tail required for envelope incorporation into particles | |
| US6277601B1 (en) | Expression of a foamy virus envelope protein | |
| JP2002509695A (ja) | 一本鎖ｄｎａ又は二本鎖ｄｎａ、コード化融合タンパク質，ウイルス，パッケージング細胞及びこれらの使用ヒト補体システムによる不活化に耐えるウイルスの開発 | |
| Erdie et al. | Myristylation of Rous sarcoma virus Gag protein does not prevent replication in avian cells | |
| Landázuri et al. | Complexation with chondroitin sulfate C and Polybrene rapidly purifies retrovirus from inhibitors of transduction and substantially enhances gene transfer | |
| AU6328999A (en) | Retroviral particles protected against complement mediated destruction | |
| US6762031B2 (en) | Targeting viral vectors to specific cells | |
| Tsukahara et al. | Characterization of envelope glycoprotein mutants for human T-cell leukemia virus type 1 infectivity and immortalization | |
| US7132237B2 (en) | Avian leukosis viruses and polypeptide display | |
| US11965173B2 (en) | Plasmid system | |
| AU733948B2 (en) | Expression of a modified foamy virus envelope protein | |
| US6150138A (en) | Expression of a foamy virus envelope protein | |
| US8703480B1 (en) | Biological function effecting viral vectors and chimeric cells useful as packaging cell lines and target cells |