JP2002509122A - 癌および自己免疫疾患のための治療における放射性標識化モノクローナルＩｇＭの使用 - Google Patents

癌および自己免疫疾患のための治療における放射性標識化モノクローナルＩｇＭの使用

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Abstract

(57)【要約】 大きな抗体凝集体または分子（例えば、ＩｇＭまたは結合体化ＩｇＧまたはＩｇＧ融合タンパク質）が、毒素に結合した抗腫瘍抗体の区画内投与または腫瘍内投与によって腫瘍を処置するために使用され得ることが発見された。この方法はまた、免疫複合体の沈着によって特徴付けられる特定の障害（例えば、慢性関節リウマチ）の処置において使用され得る。好ましい実施態様において、この抗体はＩｇＭであり、そしてこの毒素は、放射性同位体であり、最も好ましくは、11 1Ｉｎ標識化ＩｇＭまたは90Ｙ標識化ＩｇＭである。実施例は、マウスモデルにおける有効性を実証する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、一般に、腫瘍または抗体産生細胞に対して特異的な放射性標識化Ｉ
ｇＭ抗体を使用する、癌および自己免疫疾患の治療の分野である。
【０００２】 米国政府は、アメリカ国立衛生研究所補助金ＣＡ５１１６１およびＣＡ１６６
７２によって本発明において特定の権利を有する。
【０００３】 （発明の背景） 癌は、主な健康上の問題である。例として、２つのヒト癌患者の集団に注目す
る。
【０００４】 （頭部および頸部の癌） 米国において毎年、およそ５３，０００の新しい症例の頭部および頸部の癌が
存在する。Ｐａｒｋｅｒら、ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．Ｃｌｉｎ．６５：５−２
７（１９９６）。９０％より多くは、上方の空気消化管（ｕｐｐｅｒ ａｅｒｏ
ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｔｒａｃｔ）の粘膜表面上から生ずる扁平上皮癌である。
Ｓｈａｈら、ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．Ｃｌｉｎ．４５：３５２−３６８（１９
９５）。提示の時、１０％より少ない患者は、遠位への転移を有し、そして３分
の１の患者のみが、局所放射線治療または手術を用いて治癒され得る、直径４ｃ
ｍ未満の小さな原発性腫瘍を有する。Ｈａｒａｆら、Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃ
ｋ Ｃａｎｃｅｒ：Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ、
１７３〜１９８頁、Ｗ．Ｋ．ＨｏｎｇおよびＲ．Ｓ．Ｗｅｂｅｒ編、Ｋｌｕｗｅ
ｒ、Ｎｏｒｗｅｌｌ、ＭＡ（１９９４）。進行した疾患（大きな原発性腫瘍およ
び局所的リンパ節関与（ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）によって特徴付けられる）は
、しばしば治癒のために、周辺の正常組織により寛容され得るより多くの放射線
量を必要とする。そして一方、かさ高く扱いにくい疾患が放射線手術により除去
され得るが、この手順はしばしば、不自由であり、そして長引くリハビリテーシ
ョンおよび残りの病的状態に関連した問題を伴う。
【０００５】 放射線治療および手術は、しばしば進行した疾患を有する患者のために組み合
せられる。しかし、それらの６０％がなお、局所的再発を経験する。Ｔｕｐｃｈ
ｏｎｇら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．２０
：２１−２８（１９９１）。
【０００６】 （卵巣癌） 卵巣癌は、女性において癌による第４番目の死因であり、米国においては毎年
１４，２００人が亡くなっている（１４６Ｎｅｉｊｔ、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅ
ｄ．３３４，５０−５１（１９９６）；Ｐａｒｋｅｒら、ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ
Ｊ．Ｃｌｉｎ．１９９，４７：５−２７（１９９７））。この５年間の生存率は
、卵巣に限定された腫瘍を有する患者についての５０％から、第３期および第４
期の疾患を有する患者についての２０％未満の範囲である（Ｔｅｎｅｒｉｅｌｌ
ｏ，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．Ｃｌｉｎ．４５：７１−８７（１９９５））。診
断において、全患者の７５〜８５％は、進行した疾患を患っている（ＭｃＧｕｉ
ｒｅ、Ｃａｎｃｅｒ（増刊）７１：１５４１−１５０（１９９３））。これらの
患者のための現時点の第一線の治療は、細胞減少手術、続いてｉ．ｖ．プラチナ
ベース化学療法（ここで、パクリタキセルを含む）からなる。応答速度は、６０
％〜８０％の範囲である（ＭｃＧｕｉｒｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３
４：１−６（１９９６）；ＣｈｒｉｓｔｉａｎおよびＴｒｉｂｌｅ Ｇｙｎｅｃ
ｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．５５：Ｓ１４３−Ｓ１５０（１９９４）；Ｔｈｉｇｐｅｎら
、Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８：２４８−１５４（１９９１））；しかし、こ
れらの患者の大部分は、再発する。
【０００７】 ほとんどの患者が腹膜腔において疾患を有し、それが最も一般的な再発部位で
あるという観察によって、局地的処置のアプローチに対する注意が集められてい
る。腹腔内化学療法、ｉ．ｐ．コロイド状32Ｐ、および腹部全体の外部ビーム放
射線治療が報告されている（Ｍａｒｋｍａｎ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８、
２４８−２５４（１９９１）；Ｏｚｏｌｓら、Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｏｖａｒ
ｉａｎ ｃａｎｃｅｒ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏ
ｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｈｏｓｋｉｎｓら(編）（Ｊ ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９２）７３１〜
７８１頁）。腫瘍応答および生存の延長は、微視的または非常に小さな巨視的疾
患を有する患者に制限される。ｉ．ｐ．投与された化学療法薬物による組織浸透
は、腫瘍表面の外側１〜２ｍｍに限られる（Ｌｏｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．
４９、３３８０−３３８４（１９８９）；Ｏｚｏｌｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
．３９、３２０９−３２１４（１９７９））。ほとんどの化学療法薬物は、腹膜
腔内において短い半減期を有する。そして、半減期は小さい分子サイズに比例す
る（Ｄｅｄｒｉｃｋら、Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｐ．６２：１−１１（
１９７））。腹腔内コロイド状32Ｐは、腹膜腔の表面を非選択的に放射する（Ｂ
ｏｙｅら、Ｂｒ．Ｊ．Ｒａｄｉｏｌ．５７：３９５−４０２（１９８４）；Ｃｕ
ｒｒｉｅら、Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１２：１９３−２１８（１９８１）
）。それはまた、不均質な量の分布を生じる凝集となる傾向がある（Ｋａｐｌａ
ｎら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １３８：６８３−６８８（１９８１））。腹部領域
における放射感受性の器官の存在は、高い線量の外部ビーム放射の送達を妨げる
。低い線量の外部ビーム放射を用いて測定可能な疾患（５ｍｍ以上の癌の塊）を
根絶する可能性は、小さい。
【０００８】 化学療法抵抗性悪性細胞は、通常、放射に応答し、そして先の放射線治療は、
放射抵抗性を誘導しない。90Ｙを用いて放射性標識されたマウスＩｇＧの腹腔内
投与は、アジュバントとしての効力を実証した（Ｓｔｅｗａｒｔら、Ｊ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９４１−１９５０（１９９０）；Ｍａｒａｖｅｙａｓら、Ｃ
ａｎｃｅｒ（増刊）７３：１０６７−１０７５（１９９４））。しかし、骨髄毒
性は、３０ｍＣｉの活性（ａｃｔｉｖｉｔｙ）を超える線量の増大を妨げた。
【０００９】 新規の放射免疫治療の適用は、これらの例で強調された腫瘍学的問題の解決に
大いに寄与し得る。
【００１０】 （放射免疫治療（ＲＩＴ）） ＲＩＴは、治療用放射を腫瘍へ選択的に送達するために腫瘍関連抗原を認識す
る抗体を使用する。抗体がそれらの抗原に対して提示する特異性、および高い親
和性は、放射性標識化抗体が非常に高い治癒比を有する癌に対する「特効薬」で
あると楽観的な予想を導いた。Ｐｒｅｓｓｍａｎ Ｄ．，Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏ
ｏｋ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗａｔｅｒｓ Ｈ（編）、
第５巻、３０〜５０頁（Ｇａｒｌａｎｄ ＳＴＰＭ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ、１９７８）。この最初の興味は、このような高分子を血流を通じて腫瘍へ
送達することに課される薬理学的抑制を無視した。従って、臨床上のＲＩＴ試験
（特に、固形腫瘍についての試験）は、期待通りのものではなかった。これらの
試薬の制限を理解するため、ならびに改良された試薬および方法論を開発するた
めに、研究が続けられている。ＲＩＴは現在、血液学的悪性腫瘍の全身的処置に
おいて大きな影響を与える境目にある。しかし、固形腫瘍の処置においては効果
がないままである。
【００１１】 （全身的または静脈内ＲＩＴ） 固形腫瘍の処置のための放射性標識されたマウスＩｇＧの静脈内（ｉ．ｖ．）
投与は、放射能の腫瘍沈着の低さ、骨髄毒性、およびヒト抗マウス抗体（ＨＡＭ
Ａ）の誘導によって制限されてきた。ｉ．ｖ．投与後の腫瘍における放射能の沈
着は、頻繁に、１グラムあたり０．００１％および０．０１％注射線量（％ＩＤ
／ｇ）の間の範囲であり、これは、ほとんど腫瘍応答を生じない。Ｅｐｅｎｅｔ
ｏｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４６：３１８３−３１９１（１９８８）。骨髄
毒性は、頻繁に、血液で運ばれた免疫結合体による骨髄細胞の放射を介するｉ．
ｖ．ＲＩＴの後、線量限定性の正常組織の毒性である。Ｓｔｅｉｎら、Ｂｒ．Ｊ
．Ｈａｅｍａｔｏｌ．８０：６９−７６（１９９２）；Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏｒｐ
ら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２４、１１８３−１１９０（１９９６）。臨床的
に使用されるほとんどのモノクローナル抗体は、マウス起源のモノクローナル抗
体であり、そして頻繁にヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）の形成、および免疫コン
ピテントの患者における抗−抗体応答を誘導する。再投与における放射免疫結合
体は、抗−抗体によって結合され得、そして腫瘍に達するのを妨げられ得る。さ
らに、これらの免疫複合体は、肝臓および脾臓への放射線量を有意に増加し得る
細網内皮系によって容易に除去される。患者の免疫抑制および血漿搬出は、ＨＡ
ＭＡの誘導を妨げるために導入されるが、成功するとは限らない。
【００１２】 血液学的悪性腫瘍について放射性標識化ＩｇＧを利用する全身的ＲＩＴは、固
形腫瘍についてのＲＩＴよりも成功している。しかし、同じ制限が存在する：低
い腫瘍標的化、骨髄毒性および、より低い程度のＨＡＭＡ形成。ホジキン病を罹
患している患者（Ｔｕｐｃｈｏｎｇら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ
．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．２０，２１−２８−１９９１；Ｖｒｉｅｓｅｎｄｒｏｐ
ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（増刊）：５８８８ｓ−５８９２ｓ（１９９５
））、ならびにＢ細胞リンパ腫を罹患している患者（Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏｒｐら
、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２４、１１８３−１１９０（１９９６）、Ｗａｈｌ
ら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２８、１７３６−１７４４（１９８７）、Ｗａｌｄ
ｍａｎｎら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ、
Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ａｌｌｅｒｇｙ，１３，３５頁、Ｋａｌｌｏｓら編、
（Ｋａｒｇｅｒ，ＮＹ １９６９）、およびＷｅｉｎｓｔｅｉｎら、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２２２、４２３−４２６（１９８３））、ならびにＴ細胞リンパ腫を罹患
している患者（Ｗｈｅｌｄｏｎ、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４、４０
８−４１０（１９９３））についての全身性ＲＩＴで有望な結果が得られている
。
【００１３】 （区画内ＲＩＴ） 固形腫瘍を有する患者についての全身性ＲＩＴ後の低いレベルの腫瘍応答を考
慮して、放射性標識化ＩｇＧまたはそのフラグメントを使用して、区画内（ｉｎ
ｔｒａｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ）ＲＩＴが試みられた。種々の固形腫瘍（例
えば、結腸癌、神経膠腫、および卵巣癌）を有する少数のヒト癌患者は、腫瘍ま
たは腫瘍を含む身体腔への直接投与を通じて処置された。組み合わされ引用され
た研究についての総応答比は、３１％であった。Ｒｉｖａ Ｐ．ら、Ｉｎｔ．
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ８：１９２−１９７（１９９３）。Ｐａｐａｎａ
ｓｔａｓｓｉｏｕ Ｖ．ら、Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ６７：１４５−１５１（
１９９３）。Ｆｉｎｋｌｅｒ Ｎ．Ｊ．ら、Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ ３４
：３３９−３４４（１９８９）。
【００１４】 たとえ放射性標識化マウスＩｇＧの区画内投与が、より高い放射能の腫瘍沈着
を生じ得（Ｓｃｈｌｏｍら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（増刊）５０、８２０ｓ−
８２７ｓ（１９９０）、Ｍａｌａｍｉｔｓｉら、Ｊ．Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．２９、１
９２０−１９２５（１９８８）、およびＨａｉｓｍａら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅ
ｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．１５９、８４３−８４８（１９８８））、そしてｉ．ｖ．
投与より高い腫瘍応答比を生じ得るとしても、腫瘍における放射能の沈着は低い
ままであり、骨髄毒性が生じ（Ｈｏｐｋｉｎｓら、Ｒａｄｉｏｔｈｅｒ．Ｏｎｃ
ｏｌ．３４、１２１−１３１（１９９５）、Ｍａｒａｖｅｙａｓら、Ｃａｎｃｅ
ｒ（増刊）７３、１０６７−１０７５（１９９４）、Ｈｉｒｄら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃ
ａｎｃｅｒ ６８、４０３−４０６（１９９３）、Ｂｒｅｉｔｚら、Ｊ．Ｎｕｃ
ｌ．Ｍｅｄ．３６、７５４−７６１（１９９５））、そしてＨＡＭＡが誘導され
る（Ｒｉｖａら、Ｉｎｉｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ ８、１９２−１９
７（１９９３）、Ｆｉｎｋｌｅｒら、Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．３４、３３
９−３４４（１９８９）、Ｊａｃｏｂｓら、Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．８
２，５８６−５９３（１９９３）、Ｓｔｅｗａｒｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏ
ｌ．８、１９４１−１９５０（１９９０）、Ｍａｒａｖｅｙａｓら、Ｃａｎｃｅ
ｒ（増刊）７３、１０６７−１０７５（１９９４）、ならびにＨｉｒｄら、Ｂｒ
．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６８、４０３−４０６（１９９３））。
【００１５】 従って、本発明の目的は、固形腫瘍のより有効な処置のための手段を提供する
ことである。
【００１６】 本発明のさらなる目的は、非ヒト抗体と比較して免疫原性を低下させ、そして
抗腫瘍ＩｇＧでの処置と比較して骨髄毒性を減少するための手段を手供すること
である。
【００１７】 本発明の別の目的は、腫瘍における高いレベルの放射能の沈着で固形腫瘍を局
所的または区画内で処置するための手段を提供することである。
【００１８】 （発明の要旨） 大きな抗体凝集体または分子（例えば、ＩｇＭまたは結合したＩｇＧ（ダイマ
ー、トリマーなど）またはＩｇＧ融合タンパク質）が、毒素に結合する抗腫瘍抗
体の区画内投与または腫瘍内投与によって腫瘍を処置するために使用され得るこ
とが発見された。好ましい実施態様において、この抗体はＩｇＭであり、そして
この毒素は、放射性同位体であり、最も好ましくは、診断もしくは線量測定を目
的とした111Ｉｎ標識化ＩｇＭ、または治療を目的とした90Ｙ標識化ＩｇＭであ る。
【００１９】 実施例は、マウスモデルにおける有効性を実証し、そして腹膜癌腫症および再
発性もしくは持続性ホジキン病、カポージ肉腫、および頭部および頸部の癌の処
置に対するプロトコルを含む。
【００２０】 抗体結合体はまた、規定された表面（例えば、慢性関節リウマチ）で免疫複合
体を生成する抗体の産生によって特徴付けられる自己免疫疾患を処置するために
使用され得る。ここで、この結合体は関節に拡散し、障害に関連する炎症の除去
を提供する。
【００２１】 （発明の詳細な説明） ｉ．ｖ．ＲＩＴが固形腫瘍を効果的に処置し得ないのは、主に投与経路ならび
に免疫グロブリンのサイズおよび種に由来する。静脈内投与は、多量の放射免疫
結合体を血液中（ここで結合体は希釈され、循環系中に分布される）に置く。免
疫グロブリンは、高分子であり（１５０〜９５０ｋＤａ）、主に対流によって移
動する（Ｊａｉｎ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ ２７１、５８−
６５（１９９４））。腫瘍は頻繁に高い間隙圧（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｐ
ｒｅｓｓｕｒｅ）をうけており、これにより放射免疫結合体が対流によって腫瘍
間隙に進入するのを妨げている。
【００２２】 ＩｇＧの全身性投与の制限は、（１）抗体の病巣内投与または区画内投与を使
用することにより、ならびに（２）高い用量の毒素（好ましくは、放射性同位体
）を送達し、そして抗体の大きなサイズおよび腫瘍細胞に対する親和性に起因し
て、投与され、そして腫瘍に標的化される場所のだいたいの近傍において存在す
る抗体の選択、によって回避される。
【００２３】 循環中、または貧弱な静脈アクセスを有する患者において、血管周囲の空間に
偶然に沈着された、抗原に結合しないＩｇＧは、短い半減期を有する。これは、
循環および尿排出を介した、迅速な異化作用および小さな放射能分子の消失に起
因する。血液中もしくは腫瘍中の抗原に結合したＩｇＧ、または腫瘍抗原に結合
したＩｇＭは、ずっと緩やかに異化作用される。このことは、放射に対するキャ
リアとしての抗原特異的ＩｇＭの可能性を強調する。循環において改変されなか
ったＩｇＭは、たった５日間の半減期を有し、イットリウム−９０の半減期の２
倍より短い。抗原結合によってＩｇＭ異化作用における減少は、より多くの放射
の送達およびより高い臨床効力を可能にする。同時に、ＩｇＭの腫瘍結合はまた
、必要とされる場所に限って放射を保ち続ける。
【００２４】 高い放射能の腫瘍沈着を達成し、そして全身的な毒性を避けるための最も良い
方法は、疾患部位で放射免疫結合体を直接投与することである。この投与経路は
、代表的には、それらの臨床上の歴史に渡って区画（ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）
に限定されたままである疾患に通用される。この適用において、区画は、腹膜腔
または胸膜腔のような物理的空間としてか、あるいは大きな原発性腫瘍としてか
のいずれかとして規定される。放射性標識されるＩｇＭの病巣内（ｉｎｔｒａｌ
ｅｓｉｏｎａｌ）（ｉ．ｌ．）または腹腔内（ｉ．ｐ．）投与は、腫瘍において
かなりより高いレベルの放射能を提供する。病巣内または区画内に投与される放
射免疫結合体が腫瘍もしくは区画において局所化されたままであるため、骨髄毒
性は避けられる。診断目的のための放射性標識化ヒトＩｇＭを利用する初期の臨
床試験は、低い程度の免疫原性を実証している。Ｄｅ Ｊａｇｅｒ，Ｒら、Ｓｅ
ｍ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２３：１６５−１７９、（１９９３）。他の適用は、大
きな腫瘍が待機的に処置され得た疾患を含む。
【００２５】 高いアビディティ（１０抗原結合部位）および大きな質量のＩｇＭ（９００ｋ
Ｄａ）を有する腫瘍細胞抗原と、抗体との反応性は、腫瘍内で放射免疫結合体を
保つ。なぜならば、ＩｇＭは可溶性であるので、放射免疫結合体は腫瘍を通じて
経時的に拡散すべきであるからである。従って、不規則な腫瘍の容量のより選択
性の高線量放射は、従来の放射線治療を用いるよりもｉ．ｌ．ＲＩＴを用いた方
が可能である。
【００２６】 ＲＩＴは、免疫学的効果および放射効果の混合を生じ得る。ホジキン病を有す
る患者における研究は、明らかにＲＩＴの放射局面を確立した。標的化されない
腫瘍の塊は、収縮しない。線量の増加は、腫瘍応答に対する機会を増加する。小
さいサイズの画分は、有効ではない。ＲＩＴ後の腫瘍の再発は、放射抵抗性では
ない。これら全ての局面は、外部ビーム放射を経ている患者において長年にわた
って観察されたものと類似している。このことは、別の形態であるが、ＲＩＴが
、外部ビーム放射に基づき、そして外部ビーム放射（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｂｅａ
ｍ ｒａｄｉａｔｉｏｎ）と等価な効果を有することを示す。従って、放射に対
して感受性であるが毒性の問題に起因して放射で首尾良く処置され得ない身体に
おける任意の病的過程は、ＲＩＴで処置され得る。ＲＩＴは当然のことながら、
他の放射非特異的送達系より高い治癒比を有する。他の障害の例は、以下により
詳細に議論されるように、慢性関節リウマチおよび再狭窄を含む。
【００２７】 （ＲＩＴの成分） （インビトロ） いくつかの成分は治療用放射免疫結合体の設計および合成を決定する：腫瘍抗
原、その腫瘍抗原と免疫反応性である抗体、細胞傷害性剤（例えば、放射性同位
体）、および細胞傷害性剤を、抗体の免疫反応性を変化しない抗体に結合するた
めの手段。これらのインビトロ成分は、以下で議論される。続いて、投与後の放
射免疫結合体のインビボでの分布に影響する変数について議論する。
【００２８】 （抗体） ５つのクラスの抗体が存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩ
ｇＭ。これらのうち、ＩｇＧおよびＩｇＭのみが放射免疫結合体として用いられ
ている。これは、部分的には、技術的理由に起因する。なぜなら、マウス由来の
脾臓Ｂ細胞は、通常、ＩｇＧ1およびＩｇＧ2aを分泌するハイブリドーマを生成 し（Ｋｅｅｎａｎら，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２６：５３１−５３７（１９８５
））、一方、ヒトリンパ球から生成されたハイブリドーマはしばしば、ＩｇＭを
分泌するからである。ＩｇＧおよびＩｇＭは、構造および機能が非常に類似する
。ＩｇＧはモノマーであり、一方、ＩｇＭは５つの同一のモノマーから構成され
るペンタマーである。各モノマーは、２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖
から構成される。軽鎖は、２つのドメインから構成される：抗原結合部位を含む
、アミノ末端上の可変ドメイン、およびカルボキシ末端上の定常ドメイン。重鎖
は、アミノ末端上の１つの可変ドメインと類似の配置、続いてＩｇＧについては
３つの定常ドメインおよびＩｇＭについては４つの定常ドメインを有する。各重
鎖は、ジスルフィド結合を介して軽鎖に対して結合する。この会合は、抗体にそ
の特異性を与える、より有効な抗原結合部位を生成する。重鎖の２つの最後の定
常ドメインは、Ｆｃ領域を含み、これは、抗体のエフェクター機能を調節する。
軽鎖および重鎖から構成される２つの鎖は、ジスルフィド結合によって重鎖を介
して一緒に連結されて、モノマーを形成する。ＩｇＭは、さらなるポリペプチド
鎖である、Ｊ鎖を保有し、Ｊ鎖は、ペンタマーのポリマー化を補助すると考えら
れる。
【００２９】
【化１】 ＩｇＭを参照して主に記載されるが、他の抗体分子（ＩｇＧの結合体またはポ
リマー、免疫グロブリン融合タンパク質、および組換えフラグメントまたはヒト
化ＩｇＭ抗体を含む）でＩｇＭを置換し得、抗体分子が局在したままである部位
または区画に送達され得ることが理解されるべきである。これらは、特に記載さ
れない限り、本明細書中で、集合的に、「ＩｇＭ」と呼ばれる。
【００３０】 （ポリクローナル抗体） ＩｇＧおよびＩｇＭは、免疫した動物の血清から単離され得る。これらの抗体
は、これらが、抗原で刺激されたＢ細胞の多くの異なるクローンから惹起される
ので、ポリクローナルと命名される。免疫のために用いられた抗原と反応性であ
るポリクローナル抗体の百分率は、低い（２０％未満）。アフィニティー精製は
時々、この百分率を増加させるために用いられる。ポリクローナル抗体は、現在
、まれにしか使用されない。なぜなら、十分な特異性および力価の抗体を生成す
るためには免疫に数ヶ月間かかり、かつロット毎に変動が存在するからである。
【００３１】 （モノクローナル抗体） ハイブリドーマ技術の導入は、規定された特異性および非常に高い反応性を有
するモノクローナル抗体の、細胞培養技術を介しての、大規模生成を可能にした
。臨床的用途のために開発された大部分のモノクローナル抗体は、刺激されたＢ
細胞の供給源としての脾臓組織の最初の必要条件に起因して、起源がマウスであ
る。マウスモノクローナル抗体は、免疫応答性患者において頻繁にＨＡＭＡを誘
導する。多くの試みが、ＨＡＭＡの有害な効果を減少させることについて行われ
た。いくつかは、血漿搬出（Ｚｉｍｍｅｒら，Ｌ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２９：１
７４−１８０（１９８８））および患者の免疫抑制（Ｒｉｖａら，Ｉｎｔ．Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ ８：１９２−１９７（１９９３）；Ｗｅｉｄｅｎら
，Ｃａｎｃｅｒ ７３：１０９３−１０９７（１９９４））のように、薬理学的
である。他は、ペプシンおよびパパインのような酵素を用いて、Ｆｃ領域をＩｇ
Ｇから切断して、抗原に結合する能力を保持するが免疫グロブリンのエフェクタ
ー部分を欠く、より小さなフラグメントを投与のために生成する（Ｃａｒｒａｓ
ｑｕｉｌｌｏら，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｐ．６８：３１７−３２８（
１９８４））。より最近では、遺伝子操作が、マウス抗体の免疫原性領域をヒト
領域で置換するために用いられている。最初の試みでは、マウス抗体の定常ドメ
インが、ヒト抗体の定常ドメインで置換された（Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３１２：６４３−６４６（１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１−６８５５（１９８４））。得
られる抗体は、キメラ抗体と命名され、そして依然として免疫原性であり得る（
Ｋｈａｚａｅｌｉら，Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．５１：５４６１−５４６６（１９
９１））。ヒト抗体の可変ドメイン上へのマウス抗体の超可変領域の移植による
さらなる改良が、減少した免疫原性を有し得る、ヒト化抗体と命名された抗体を
生成した（Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１９８６）
）。
【００３２】 ヒト抗体は、ヒト患者について免疫原性が最小の抗体であるので、好ましい選
択である（Ｄｅ Ｊａｇｅｒら，Ｓｅｍｉｎ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２３：１６５
−１７９（１９９３））。さらに、ヒト抗体は、正常なヒト組織抗原とは反応性
がより少なく、そしてヒト腫瘍抗原についてさらに特異的であり得る。悪性疾患
を有する患者が、彼らの腫瘍排出リンパ節中および彼らの末梢血中に、彼らの癌
に対する免疫グロブリンを生成する、刺激されたＢ細胞を有し得るとの理解は、
ヒトＢ細胞の重要な供給源を提供した（Ｆｒｅｅｄｍａｎら，Ｈｙｂｒｉｄｏｍ
ａｎ １０：２１−３３（１９９１）；Ｃｈｅｎら，Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５：１３１−１４２（１９９４）；Ｎｉｓｈｉｎ
ａｋａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６：５６６６−５６７１（１９９６））。
骨髄腫細胞との融合後、多くのヒトハイブリドーマは、不安定であり、そして低
い力価の免疫グロブリンしか生成しない。生成の問題は、遺伝子操作技術（例え
ば、酵母人工染色体の構築および細胞培養またはトランスジェニック動物におけ
るそれらの発現（Ｐｅｎｎｉｓｉ，Ｓｃｉ．Ｎｅｗｓ １４３：３６０−３６３
（１９９３））により克服され得る。
【００３３】 （抗原） 放射免疫結合体を標的化するために用いられる腫瘍抗原は、ほとんど排他的に
腫瘍関連抗原である。これらは大部分の場合、腫瘍細胞について特異的なマーカ
ーではない；むしろ、これらは、腫瘍細胞において、正常組織と比較して過剰発
現されるか、またはこれらは正常な胎児組織（例えば、ＣＥＡ（Ｇｏｌｄら，Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１２２，４６７−４８１（１９６５）），ＡＦＰ（Ａｂｅｌ
ｅｖ，Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４，２９５−３５０（１９７１）））
もしくは成体におけるその器官（ＣＥＡ）の正常前駆細胞において見出される。
腫瘍抗原は、腫瘍間隙に、腫瘍細胞膜上に、または腫瘍細胞の細胞質もしくは核
に局在し得る。
【００３４】 腫瘍抗原の局在は、放射免疫結合体の投与経路、および有効な腫瘍滅菌のため
に必要とされる治療用放射性同位体の型の選択を指向する。循環中の白血病細胞
上に見出される抗原、および腫瘍新生血管系上に発現される抗原は、ｉ．ｖ．で
投与される試薬に容易に接近可能である。腫瘍細胞の表面に発現される抗原は、
ｉ．ｌ．またはｉ．ｐ．によって投与された放射免疫結合体に容易に接近可能で
ある。腫瘍間隙に分泌された抗原は、ｉ．ｌ．投与に最も接近可能である。
【００３５】 好ましい抗腫瘍抗体は、腫瘍細胞膜上に発現されるかまたは腫瘍間隙に分泌さ
れる腫瘍関連抗原を認識するヒトＩｇＭである。表１は、好ましい抗体、疾患適
用、および供給源を列挙する。
【００３６】
【表１】 （細胞傷害性化合物：放射性同位体） 放射性同位体（特に診断目的に有用であるインジウム（「Ｉｎ」）および細胞
傷害性であるイットリウム（「Ｙ」））を主に参照して記載するとはいえ、細胞
を殺傷する他の物質で、放射性同位体を置換し得る。放射性同位体は、好ましい
。なぜなら、これらは小さく、かつ良く特徴付けられており、そして診断薬とし
て用いられ得、そして投与後に標準的な非侵襲性の放射性画像化（ｒａｄｉｏｉ
ｍａｇｉｎｇ）技術を用いて追跡され得るからである。非放射性同位体は、宿主
を誘発して腫瘍細胞を攻撃させる、毒素および物質、ならびに合成または天然の
化学療法薬物（Ｈａｌｐｅｒｎら，Ｊ．Ｎｕｄｅ．Ｍｅｄ．２９：１６８８−１
６９６（１９８８）；Ｑｕａｄｒｉら，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２０：５
５９−５７０（１９９３）；Ｗａｎｇら，Ｒａｄｉａｔ．Ｒｅｓ．１４１：２９
２−３０２（１９９５））、オリゴヌクレオチド（Ｍｕｊｏｏら，Ｏｎｃｏｇｅ
ｎｅ １２：１６１７−１６２３（１９９６））、サイトカイン（Ｍａｒｋｍａ
ｎ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８：２４８−２５４（１９９１）；Ｄｅｄｒｉ
ｃｋら，Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｒｅａｔ Ｒｅｐ．６２：１−１１（１９７８））、
および放射性コロイド（Ｒｏｗｌｉｎｓｏｎら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：
６５２８−６５３１（１９８７）））を含み得る。これらは、標準的な化学技術
を用いて、またはいくつかの場合には、組換え技術（例えば、融合タンパク質）
を用いて、抗体に結合体化され得る。
【００３７】 放射性同位体が崩壊するにつれて、これらは、特徴的な光子もしくは粒子また
は両方を放射する。光子（通常、γ線と呼ばれる）は、貫通性である。光子のエ
ネルギーレベルが充分に高い場合、光子は、身体を通過し、そして診断装置によ
って検出され得る。光子を放出する放射性同位体は、抗体に結合され得、そして
診断画像化に用いられ得る。この適用は、放射性免疫シンチグラフィ（ｒａｄｉ
ｏｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ）（ＲＩＳ）と命名される。
【００３８】 抗原と標的（腫瘍細胞ＤＮＡ）との距離が短くなるほど、放射性同位体の放射
の必要とされる範囲が短くなる。オージェ電子は、非常に短いパス長（５〜１０
ｎｍ）を有し、そして細胞傷害性であるためにはインターナリゼーションされる
必要がある（Ａｄｅｌｓｔｅｉｎら，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．１４：１６
５−１６９（１９８７））。細胞への結合後にインターナリゼーションされた抗
体のみが、オージェ電子を放出する放射性同位体とみなされる。α粒子は、有効
であるためには、細胞に近づく（３〜４の細胞直径以内）必要があり（Ｖｒｉｅ
ｓｅｎｄｏｒｐら，Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｇｌｏｕｂｌｉｎ ｔｈｅｒａｐｙ
． Ｈｉｇｈ Ｄｏｓｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ． Ａｒｍｉｔａｇｅ
ら（編）（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ
１９９２）８４−１２３頁）、そのため、間隙の抗原を標的化する抗体は望ま
しくない。オージェ電子およびα放射体はともに、高い選択性を有する。なぜな
ら、それらの短距離放射は、隣接する正常細胞に照射しないからである。逆に、
標的化されていない隣接悪性細胞もまた放射を回避する。オージェ電子またはα
放射体を保有する放射免疫結合体による腫瘍滅菌は、全てのクローン原性腫瘍細
胞の標的化によってのみ達成され得る。
【００３９】 長範囲β放射は、有利である。なぜなら、長距離β放射は、より均質な分布の
放射を腫瘍内に生じて、隣接領域からの放射のクロスファイアにより、標的化さ
れていない細胞を致死的に放射することによる「コールド（ｃｏｌｄ）」スポッ
トを防ぐからである（Ｗｈｅｌｄｏｎ，Ｎｕｃｌ．ｍｅｄ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４
：４０８−４１０（１９９３））。長距離放射の欠点は、長距離放射は選択性が
低く、そしてβ粒子のパス長よりも小さい腫瘍塊を処置するためには、有効性が
低いことである。より小さな塊については、大部分のエネルギーは、腫瘍塊の外
側に蓄積する。これは、正常組織毒性を増加させ、そして腫瘍用量を減少させる
。
【００４０】 放射性金属（ｒａｄｉｏｍｅｔａｌ）である111Ｉｎおよび90Ｙは、それぞれ 、純粋なγ放射体および純粋なβ放射体である。ヨウ素−１２５は、最も通常に
用いられるオージェ電子放射体であり、６０日間の半減期を有し、そしてインビ
ボで免疫結合体によって頻繁に放出される（脱ハロゲン化（ｄｅｈａｌｏｇｅｎ
ａｔｉｏｎ））（Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏｒｐら，１９９２）。臨床的用途のために
最も通常に考慮されるα放射体である、アスタチン−２１１およびビスマス−２
１２は、短い半減期を有し（それぞれ、７．２時間および１．０時間）、そして
放射性同位体へと崩壊し、そしてこの放射性同位体は、最初のα放射の後で免疫
結合体によって保持されないかもしれない（Ｗｉｌｂｕｒ，Ａｎｔｉｂｉｏｔ．
Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ ４：８５−９７（１９９１
））。111Ｉｎで放射性標識された免疫結合体の使用は、画像化能が低い90Ｙ標 識免疫結合体の挙動を予測すると提唱されている（Ｋｏｒｎｇｏｌｄら，Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ．２０：１４８８−１４９４（１９６０）；Ｗｅｌｔら，Ｊ．Ｃ
ｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２：１５６１−１５７１（１９９４）；Ｂｒｅｉｔｚら
，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３３：１０９９−１１１２（１９９２）；Ｖｒｉｅｓ
ｅｎｄｏｒｐら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（増刊）５５：５８８８ｓ−５８９２
ｓ（１９９５））。安定な放射性金属キレート化を用いた以前の研究は、111Ｉ ｎおよび90Ｙで標識した放射免疫結合体と類似の生体分布を実証した（Ｗｅｌｔ
ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２：１５６１−１５７１（１９９４）；Ｂｒ
ｅｉｔｚら，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３３：１０９９−１１１２（１９９２））
。実際に、111Ｉｎ標識抗体の投与後に患者の免疫シンチグラフィー（ｉｍｍｕ ｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ）は、医師が腫瘍局在について患者をスクリーニ
ングし、そして放射免疫結合体のインビボでの安定性を決定することを可能にす
る。次いで、処置の利益が期待される患者のみが抗体を再度受け、この抗体はこ
こでは、治療量の90Ｙで標識される。この処置アプローチは、患者が外来患者と
して処置されることを可能にする。なぜなら、111Ｉｎの投与された活性は低く 、そして90Ｙからの放射は腫瘍付近に大部分吸収されるからである。
【００４１】 ＲＩＴについてのβ放出同位体は、９０％γを有する131Ｉ、および６０％γ を有する67Ｃｕのような、混合型βおよびγ放射体（Ｓｃｈｕｂｉｇｅｒら，Ｂ
ｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．７：１６５−１７９（１９９６））、または90Ｙ
および32Ｐのような純粋なβ放射体のいずれかであり得る。両方の型の放射性同
位体は、それらの支持体を有する。混合型放射体を有する放射性同位体の擁護物
は、γカメラ画像化での腫瘍標的化を実証するために同じ放射免疫結合体を低活
性で用いる単純さを好み、そして活性を上昇させることにより、治療を次の処置
において施す。このようにして、放射免疫結合体の薬物動態は、タンパク質用量
が一定に保たれる場合、両方の投与について同一であるべきであり、そして最初
の投与は、第２の投与の前兆であるべきである。しかし、この単純さは、治療活
性が用いられる場合、患者を高線量のγ線に曝露するという代償を払って生じる
。さらに、精巧な入院患者の管理は、受け入れられないレベルの放射への医療従
事者および一般的公衆の曝露を防ぐために必要になる。
【００４２】 （抗体に対する細胞傷害性化合物または放射性同位体の結合） いくつかの放射性同位体は、抗体に対して直接結合され得る；他の放射性同位
体は、間接的な形態の結合を必要とする。放射性同位体である125Ｉ、131Ｉ、99 m Ｔｃ、186Ｒｅ、および188Ｒｅは、タンパク質（抗体を含む）に対してアミノ 酸官能基を介して共有結合され得る。放射性ヨウ素については、それは、通常、
チロシン上に見出されるフェノール基を介してである。これを達成するための多
数の方法が存在する：クロラミン−Ｔ（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄら，Ｂｉｏｃｈｅｍ
Ｊ．８９：１１４−１２３（１９６３））；およびヨードゲン（Ｉｏｄｏｇｅ
ｎ）（Ｓａｌａｃｉｎｓｋｉら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１７：１３６−
１４６（１９８１））。ＴｃおよびＲｅは、システインのスルフヒドリル基を介
して共有結合され得る（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：
４５９４−４６０２（１９９１））。ほとんどの技術についての問題は、身体が
、これらの共有結合を切断して、放射性同位体を循環系に放出し戻すのに効率的
な方法を有することである。一般に、これらの方法は、画像化目的のために受容
可能である（99mＴｃ）が治療目的のためには受容可能ではない。
【００４３】 多数の型の細胞傷害性化合物が、細胞傷害性化合物上の反応基の使用を介して
、または架橋剤の使用を介してタンパク質に連結され得る。インビボでアミンと
安定な共有結合を形成する通常の反応基は、イソチオシアネートである（Ｍｅａ
ｎｓら，Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ（Ｈｏｌｄｅｎ−Ｄａｙ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ １９７１）１０５
−１１０頁）。この基は、リジンのεアミン基と優先的に反応する。マレイミド
は、インビボで安定な共有結合をシステイン上のスルフヒドリル基と形成するた
めに通常使用される反応基である（Ｊｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ９
１：５８０−６０９（１９８３））。モノクローナル抗体は、共有結合を放射性
金属イオンと形成することができないが、モノクローナル抗体は、抗体に共有結
合されるキレート剤の使用を介して抗体に間接的に結合され得る。キレート剤は
、アミノ酸残基のアミン（Ｍｅａｒｅｓら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４２
：６８−７８（１９８４））およびスルフヒドリル基（Ｋｏｙａｍａ Ｃｈｅｍ
．Ａｂｓｔｒ．１２０：２１７２６２ｔ（１９９４））を介して、そしてまた炭
水化物基を介して結合され得る（Ｒｏｄｗｅｌｌら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．８３：２６３２−２６３６（１９８６）；Ｑｕａｄｒｉら，Ｎｕ
ｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２０：５５９−５７０（１９９３））。これらのキレ
ート剤が、２つの型の官能基を有し、一方は金属イオンを結合し、そして他方は
キレートを抗体に連結するので、これらは通常、２官能性キレート剤と呼ばれる
（Ｓｕｎｄｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ ２５０：５８７−５８８（１９７４））
。
【００４４】 架橋剤は、２つの反応性官能基を有し、そしてとホモ２官能性およびヘテロ２
官能性であると分類される。ホモ２官能性架橋剤の例は、スルフヒドリル基と反
応性であるビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）（Ｃｈｅｎら，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃ
ｈｅｍ ２６６：１８２３７−１８２４３（１９９１）およびアミノ基と反応性
であるエチレングリコールビス［スクシンイミジルスクシエート］ＥＧＳ（Ｂｒ
ｏｗｎｉｎｇら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：１８５９−１８６７（１９８９
））を含む。ヘテロ２官能性架橋剤の例は、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）（Ｍｙｅｒｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．Ｍｅｔｈ．１２１：１２９−１４２（１９８９））である。これらの方法論
は単純であり、そして通常用いられる。
【００４５】 111Ｉｎおよび90Ｙは、塩酸水溶液（ｐＨ１）中で３価のイオンとして利用可 能である。これらは、Ｉｎについては３．４よりも高いｐＨで、そしてＹについ
ては７よりも高いｐＨで、不溶性の水酸化物として沈澱する（Ｂｒｕｎｎｅｒら
，Ｒａｄｉｏｍｅｔａｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｈｅｌａｔｅｓ．Ｐｒｉｎ
ｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｗａｇｎｅｒら（編
）（第２版，Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ １９９５））。３
価のインジウムは、少なくとも６個のドナーリガンドを有するキレートを用いて
イオンの配位部位を飽和させる場合は、中性ｐＨで安定化され得る。３価のイッ
トリウムのイオン半径は、インジウムのイオン半径よりも１５％大きく、そして
少なくとも８個のリガンドを寄与し得るキレート基を必要とする。ポリアミノポ
リカルボン酸リガンドである、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）は、８
個のリガンドを有し、そしてインジウムおよびイットリウムの両方を強くキレー
トする。ＤＴＰＡの構造を以下に示す。最初に、ＤＴＰＡを、環状無水物として
、ＤＴＰＡのカルボン酸のうちの１つと抗体上のアミンのとの間で形成されたア
ミド結合によって、抗体に結合させた（Ｋｒｅｊｃａｒｅｋら，Ｂｉｏｃｈｅｍ
．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．７７：５８１−５８５（１９７６）
；Ｈｎａｔｏｗｉｃｈら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２０：６１３−６１５（１９８３
））。このキレート化構造は、インビボでイットリウムを用いて不安定であった
（Ｈｎａｔｏｗｉｃｈら，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２９：１４２８−１４３４（
１９８８））。なぜなら、カルボキシル基の喪失が、ドナーリガンドの数を７ま
で減少させたからである。分子の炭素骨格に対する置換は、結合に必要なリガン
ドのうちの１つを失うことなく、キレート基を抗体に結合させるための手段とし
て開発された（Ｂｒｅｃｈｂｉｅｌら，Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２５：２７７２
−２７８１（１９８６）；Ｂｒｅｃｈｉｂｉｅｌら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ
Ｃｈｅｍ．２：１８７−１９４（１９９１）；Ｇａｎｓｏｗ，Ｎｕｃｌ．Ｍｅ
ｄ．Ｂｉｏｌ．１８：３６９−３８１（１９９１）；Ｑｕａｄｒｉら，Ｂｉｏｏ
ｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２：１６６１−１６６４（１９９２））。
この様式で抗体に結合された２官能性キレート剤は、インビトロおよびインビボ
でのイットリウムの安定なキレート化を実証する（Ｋｏｚａｋら，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．４９：２６３９−２６４４（１９８９））。本明細書中に記載した骨
格置換ＤＴＰＡである２Ｂ３Ｍ−ＤＴＰＡ（Ｑｕａｄｒｉら，１９９２））を以
下に示す。数字は、ベンジル基（２Ｂ）およびメチル基（３Ｍ）の位置を示す。
第３炭素上のメチル基は、配位錯体に対してさらなる安定性を提供する（Ｍａｒ
ｇｅｒｕｍら，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｃｏ
ｍｐｌｅｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｇａｎｄ ｅｘｃｈａｎｇｅ．
Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｍｏｎｏｇｒａｐｈ １７４
，Ｍａｒｔｅｌｌ（編）第２巻（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃ
ｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９７８）１−２２０頁）。第２炭
素に結合したベンジル基は、リンカーとして作用して、イソチオシアネート基（
Ｓ＝Ｃ＝Ｎ）と抗体由来のアミノ基との反応から生成されるチオ尿素結合を介し
て、キレート基を抗体に連結する（Ｍｅａｒｅｓら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．１４２：６８−７８（１９８４））。リンカーは、インビボで安定であり、そ
して放射免疫結合体の適用に依存して、正常組織毒性を増加させ得る。腫瘍より
も正常組織においての方がより不安定であるリンカーキレート構造は、正常組織
毒性を減少させるために開発された（Ｄｅｓｈｐａｎｄｅら，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ
．Ｂｉｏｌ．１６：５８７−５９７（１９８９）；Ｑｕａｄｒｉら，Ｊ．Ｎｕｃ
ｌ．Ｍｅｄ．３４：９３８−９４５（１９９３））。
【００４６】
【化２】 （放射性金属についてのキレート化構造） 免疫グロブリン上でのキレート化基の位置は、リンカー上の反応基が共有結合
を形成し得る官能基の位置および接近可能性に依存する。イソチオシアネート基
は、リジンのεアミノ基と優先的に反応する。抗体に結合されるキレート化基の
数は、一緒に反応させる場合には、キレート化基と抗体との間の化学量論比によ
って制御される。一旦免疫結合体が放射性標識されたら、合理的な範囲内（90Ｙ
について１０ｍＣｉ／ｍｇ）で抗原結合部位のブロッキングの機会を減少させ、
そして比活性を保持するために、少数のキレート化基が望ましく、代表的にはＩ
ｇＧについては１つの基、そしてＩｇＭについては４つの基が望ましい。より高
い活性が、放射性分解、すなわち、キレートとタンパク質との間の結合の、β放
射による切断を増加させる。
【００４７】 ヒンジ特異的構造体（Ａｌｉら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．７：５７６
−５８３（１９９６））および大環状構造体（Ｌｉら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃ
ｈｅｍ．４：２７５−２８３（１９９３）；Ｃｏｘら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．
Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１：２５６７−２５７６（１９９０）；Ｍｏｉら，
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０：６２６６（１９８８））を含む他の２官
能性キレート化構造物が開発されている。ヒンジ特異的２官能性キレート剤は、
スルフヒドリル基を介して抗体に結合され、そしてヒンジ領域において、２つの
重鎖の間に単一の共有架橋を形成する。これは、抗原結合部位から離れた公知の
位置において正確に１つのキレートを有する免疫結合体を生成する。さらに、こ
れらのキレート化基は、フラグメントを一緒に保持する不安定なジスルフィド結
合を置換することにより、免疫結合体フラグメントを安定化し得る。修飾されて
いないＦ（ａｂ’）2フラグメントは、迅速に腎臓に蓄積するＦａｂ’フラグメ ントへとインビボで迅速に還元される（Ｑｕａｄｒｉら，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ
．３４：２１５２−２１５９（１９９３））。大環状キレートは、ＤＴＰＡのよ
うな開いた鎖とは対照的に、環状ポリアミノポリカルボキシレートである。大環
状分子とで形成されたキレート化錯体は、ＤＴＰＡとで形成されたキレート化錯
体よりも高い熱力学的安定性を有する（Ｈａｒｒｉｓｏｎら，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ
．Ｂｉｏｌ．１８：４６９−４７６（１９９１））が、これらは、低い比活性、
不便な標識手順、および免疫原性を欠点として有する（Ｋｏｓｍａｓら，Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：９０４−９１１（１９９２））。
【００４８】 （インビボでの処置に必要とされる方法および線量） 標的化される細胞傷害性分子は、病巣内または域内に投与され得、その結果、
この分子は、標的領域において、殺傷されるべき組織への結合に十分な時間残存
する。主に腫瘍に関して記載したが、殺傷することが望まれ得る多くの他の組織
型（例えば、子宮内膜症に特有の過剰増殖性組織、もしくはＲＡの場合の関節内
層（ｊｏｉｎｔ ｌｉｎｉｎｇ）または免疫複合体の沈着、炎症、および組織の
過剰増殖によって特徴付けられる他の障害）が存在する。上記で議論したように
、標的化する分子を２つの特性を有するように設計する：標的化される組織への
選択的な結合、および大きなサイズ、標的化する分子が投与される領域または組
織の外への低い拡散性。病巣内投与は、代表的には、殺傷されるべき組織（通常
、固形腫瘍）内に対して行われる。域内投与は、腔（例えば、腹膜もしくは肺）
に対して行われる。処置され得る癌の型としては、腺癌、扁平上皮癌、肉腫、グ
リア芽細胞腫（ｇｌｉａｌｂｌａｓｔｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫（ｎｅｕ
ｒａｌｂｌａｓｔｏｍａ）、およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫以外の再発性ま
たは持続性のホジキン病）が挙げられる。処置されるべき領域もしくは区画とし
ては、胸膜腔内区画、頭部および頸部の癌、乳房、卵巣、腹膜（腹膜癌腫症）、
脳、前立腺（ｐｒｏｓｔｒａｔｅ）、ならびに他の固形腫瘍および過剰増殖性の
組織（例えば、子宮および腹膜における子宮内膜症）が挙げられる。
【００４９】 治療されるべき疾患について、適切な標的化される細胞傷害性分子（好ましく
は、抗原−抗体−放射性同位体の組み合わせ）を選択した後、投与変数（例えば
、投与経路、投与される放射能、単回投与もしくは分割投与、タンパク質の用量
、比放射能、非標識抗体の予備投与）を判断しなければならない。好ましい実施
態様において、投与される放射能レベルは、先行研究、もしくはＲＩＴのＲＩＳ
位相において診断的放射性同位体を用いて得られたデータを使用して実施された
線量測定計算において使用されるレベルに基づき得る。放射免疫結合体は、１回
もしくはより小さな放射能に分けて、短期間（１〜２週間）にわたって（すなわ
ち、細分されて）投与され得る。細分化は、正常組織の毒性を減少させすること
によって、治療指数を増加させ得る（Ｓｃｈｌｏｍら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｉｎｓｔ．８２：７６３−７７１（１９９０）；Ｍｅｒｅｄｉｔｈら、Ｊ
．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３３：１６４８−１６５３（１９９２））。細分化線量は
、長期の細分化計画および迅速な増殖腫瘍を研究する場合を除いては、腫瘍に対
するＲＩＴの効果を漸減させないようである（Ｍｏｌｔｈｏｆｆら、Ｉｎｔ．Ｊ
．Ｃａｎｃｅｒ ５０：４７４−４８０（１９９２））。細胞殺傷の放射線生物
学的な原則は、ＲＩＴを介する低い減性の線量率放射および高い線量率外部ビー
ム放射に対してわずかに異なる。しかし、ＲＩＴまたは外部ビームからの類似の
線量の放射後の、クローン原性の悪性細胞（およびまた推定ではクローン原性の
正常組織細胞）の生存割合は類似する（Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏｒｐら、Ｒａｄｉｏ
ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｈｉｇｈ Ｄｏｓｅ Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ．Ａｒｍｉｔａｇｅら（編）（Ｗｉｌｌｉａｍｓおよび
Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ １９９２）８４−１２３頁）。
【００５０】 高いタンパク質用量は補体を活性化し得る。この補体は次に、発熱、悪寒およ
び息切れといった副作用を引き起こす。高いタンパク質レベルを伴う場合、腫瘍
細胞は、補体依存的な腫瘍細胞溶解もしくは抗体に媒介される細胞性の細胞溶解
のような免疫学的機構を通じて殺傷され得る。腫瘍に対するＲＩＴ効果の分析は
、腫瘍応答が免疫学的な効果および放射効果の組み合わせに起因する場合、さら
に複雑になる。高いレベルのタンパク質もまた、さらに免疫原性である。一般に
、低いタンパク質用量（１投与あたり約５ｍｇ）を使用することは、初期の臨床
的な研究にとって有利である。
【００５１】 放射免疫結合体の比放射能は、その免疫反応性、安定性および治療的な有効性
に関連する。比放射能があまりに高い場合、免疫グロブリン分子あたりに要求さ
れる多数のキレートは、免疫反応性を減少させ得る。高い比放射能は、放射線分
解を増加させる。その反面、比放射能があまりに低いことは、非標識免疫結合体
が、放射性標識免疫結合体と抗原結合について競合するため、腫瘍の処置不足（
ｕｎｄｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を生じ得る。このことは、腫瘍細胞において低
密度で発現される抗原については、特に重要である。
【００５２】 非放射性抗体（ｃｏｌｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）の予備投与は、静脈内投与を使
用するいくつかの臨床試験において、放射能の腫瘍蓄積を増加した（ＤｅＮａｒ
ｄｏら、Ｃａｎｃｅｒ ７３：１０２３−１０３２（１９９４））。これは、免
疫グロブリンの代謝に関連するレセプター部位の飽和を介して、または腫瘍が放
射免疫結合体にさらに接近可能になる免疫学的機構を介して生じ得る。
【００５３】 （２段階画像化／治療） γ線カメラ画像化による放射免疫結合体の体内分布および腫瘍標的化の実証は
、他の癌の処置様式では利用不可能である、ＲＩＴの主要な強みである。画像化
を使用して患者をスクリーニングし得、その結果、処置から恩恵を受けると見込
まれる患者のみが、高い活性の治療的な放射性同位体で標識された免疫学的結合
体を受ける。しかし、ＲＩＴの診断的な部分は、同種の免疫結合体を２度利用す
るが、各投与について異なる放射性同位体で放射性標識することによって、ＲＩ
Ｔの治療的な部分と分けられ得る。診断的な投与のために、免疫結合体を、イン
ジウム−１１１（111Ｉｎ）もしくはテクネチウム−９９ｍ（99mＴｃ）のような
純粋なγ放射放射性同位体で放射性標識する。これらのアイソトープの両方は、
画像化に適切なエネルギー範囲（１００〜２５０ｋｅＶ）内でγ線を放射する。
この範囲未満のエネルギーは、外部画像化デバイスに達するに十分なほど透過し
ない。より高いエネルギーレベルではコリメートすることが困難であり、乏しい
解像度で診断的な画像を提供する。短い半減期の99mＴｃは、その使用を、迅速 な腫瘍の取り込みを有する免疫結合体に制限する。111Ｉｎで標識された免疫結 合体の使用は、90Ｙ（純粋なβ放射体）で放射性標識された免疫結合体のインビ
ボでの振る舞いを予測することが提唱された。なぜなら、これらは類似する半減
期および同等なキレート化化学を有するからである（Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏｒｐら
、Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．（増刊）５５：５８８８ｓ−５８９２ｓ（１９９５）
；Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏｒｐら、Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｔｈ
ｅｒａｐｙ．（１９９２）；ＤｅＮａｒｄｏら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３６：
８２９−８３６（１９９５）；Ｌｅｉｃｈｎｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ
．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．１４：１０３３−１０４２（１９９８））
。
【００５４】 ２つの別々の放射性同位体（１つは画像化のため、そして１つは治療のため）
を使用するさらなる利点は、外来患者の処置を可能にすることである。診断的な
線量に使用される少量の放射能は、放射線障害を提示せず、その上、治療的に純
粋なβ放射体により放射された放射線は、腫瘍近傍においてその大部分が吸収さ
れる。この処置体系は、放射性標識された両試薬についての類似する薬物動態学
に依存し、そして両放射性金属を抗体に結合する安定な手段（これは以下で議論
する）を必要とする。
【００５５】 腫瘍標的化を、処置についての選択基準として使用する処置プログラムには、
測定可能な疾患、すなわち、１ｃｍより大きな直径を有する腫瘍の存在が含まれ
る。１ｃｍより小さな腫瘍は、通常、ＣＴによって、ＭＲＩによって、または11 1 Ｉｎで標識された放射免疫結合体を用いて測定することは不可能である。測定 可能な疾患（１ｃｍより大きい）について、その長距離のβ放射を有する90Ｙは
、より短距離を有するβ放射体より、より高くかつさらに同質の腫瘍線量を提供
する利点を有する（Ｌｅｉｃｈｎｅｒら、Ｍｅｄ．Ｐｈｙｓ．２０：５２９−５
３４（１９９３））。
【００５６】 腹膜（ｐｅｒｉｏｔｏｎｅａｌ）癌腫症の処置のためのＩｇＭの腹腔内投与に
ついて、そしてホジキン病、カポージ肉腫、ならびに頭部および頸部の癌の処置
のための抗フェリチンＩｇＭの病巣内投与について、詳細なプロトコルを以下に
記載する。
【００５７】 実施例に記載されるように、このプロトコルは、腫瘍標的化を実証するため、
および線量測定情報を提供するために使用される111Ｉｎ標識ＩｇＭ、そして保 証された場合、次いで90Ｙで標識されたＩｇＭでの治療を用いる２段階アプロー
チとして記載される。カポージ肉腫のようないくつかの適用については、この11 1 Ｉｎで標識されたＩｇＭは、初期試験後、必要とされないかもしれない。
【００５８】 （腹腔内投与） 留置カテーテルを経皮的に挿入する。腹腔内での自由な流動が、放射線写真造
影剤を用いて実証されることが必要である。造影剤の分散に対して重篤な妨害（
例えば、付着）が存在しないならば、１〜１．５ｌのＤ５−１／４ＮＳ（デキス
トロース−生理食塩水溶液）の注入後に、放射免疫結合体を投与する。
【００５９】 111Ｉｎで標識されたＩｇＭについては、１ｍＣｉで標識された約０．５ｍｇ のＩｇＭを使用する。
【００６０】 90Ｙで標識されたＩｇＭについては、初期用量は、５ｍＣｉで標識された１．
０ｍｇのＩｇＭである。次のセットの患者には、１０ｍＣｉで標識された１．０
ｍｇのＩｇＭが投与される。最後のセットの患者には、５ｍＣｉで標識された２
×１．０ｍｇのＩｇＭが投与される。他の有効な投薬量の範囲は、慣用的な試験
を用いて、同様の様式で決定され得る。
【００６１】 （病巣内投与） 腫瘍の部位および大きさに依存して、１回以上の注射を行う。
【００６２】 111Ｉｎで標識されたＩｇＭについては、０．３ｍＣｉの111Ｉｎで標識された
約０．５ｍｇのＩｇＭを注射する。
【００６３】 90Ｙで標識されたＩｇＭについては、初期活性は、腫瘍容積１ｃｃ3あたり、 ０．１ｍＣｉの90Ｙで標識された約０．０１ｍｇのＩｇＭである。試験されるべ
き次の活性は、腫瘍容積１ｃｃ3あたり０．２ｍＣｉである。この活性に十分に 耐えられるならば、最終活性は、腫瘍容積１ｃｃ3あたり０．４ｍＣｉである。 他の有効な投薬量の範囲は、慣用的な試験を用いて、同様の様式で決定され得る
。
【００６４】 （腫瘍以外の障害の処置） 本明細書において、主に、腫瘍もしくは他の型の良性組織の過剰増殖（例えば
、子宮内膜症）の処置に関して記載されるが、結合体はまた、例えば、ＲＡにお
ける免疫複合体の蓄積または組織の過剰増殖によって誘起される障害の処置のた
めに投与され得る。
【００６５】 ＲＡは、原因不明の慢性的な炎症性関節症であるが、その病因において疑わし
い自己免疫成分を伴う。ＲＡは、その高い発生率および有病率に起因して、西洋
世界全体を通じて、重大な社会経済的影響を有する、重篤な失効性かつ生命を短
縮する疾患である。ＲＡは、６０歳を超える女性に最も普通であるが、青年期に
さえ生じ得る。治療的な療法は、現時点では利用可能ではない。重篤な医原性の
副作用を伴う慢性的な待期療法が使用される。より大きな関節の疼痛性の炎症に
ついては、外科的介入（滑膜切除（ｓｙｎｏｖｉｅｃｔｏｍｙ））は無効であり
、そして多くの病院において放棄されてきた。
【００６６】 ＲＡにおいて、滑膜増殖は、関節を取り囲む組織での自己反応性の免疫細胞に
より誘発されるリンホカインによって誘起される。免疫細胞の放射は、これらの
細胞において致死的なＤＮＡ損傷を引き起すことによって、リンホカインの産生
を減少させ、そして滑膜増殖を妨げる。膨張および疼痛は、ＲＡに罹患した関節
において減少する。コロイド状Ｙ−９０の関節内滴注は、主に、ヨーロッパで適
用されてきた（約２年間の持続期間の５０％の応答率）（ＤＪＭｃＣａｒｔｈｙ
およびＷＪＫｏｏｐｍａｎ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ａｌｌｉｅｄ Ｃｏ
ｎｄｉｔｉｏｎｓ 第１２版 １９９３，Ｌｅａ ＆ Ｆｅｂｉｇｅｒ，Ｐｈｉ
ｌａｄｅｌｐｈｉａ）。多数の論文が、動物モデルおよびヒトの臨床的な研究に
おいて、滑膜切除を誘導する放射によるＲＡの処置の有効性について報告された
。これらの研究は、コロイド状リン酸クロム３２Ｐ、コロイド状１９８Ａｕ、レ
ニウム１８６、ジスプロシウム−１６５、９０Ｙ−ケイ酸を使用した（例えば、
Ｓｐｏｏｒｅｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．１０（９−１０）：４４１
−４４５（１９８５）；Ｂｏｅｒｂｏｏｍｓら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ
．１０（９−１０）：４４６−４４９（１９８５）；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎら、Ｉ
ｎｔ．Ｊ．Ｒａｄ．Ａｐｐｌ．Ｉｎｓｔｒｕｍ［Ｂ］１４（３）：２１１−２１
８（１９８７）；Ａｇｕｉｌｅｒａら、Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．Ｃｈｉｌ．１２２（１
１）１２８３−１２８８（１９９４）を参照のこと）。
【００６７】 ＲＡの処置のための好ましい実施態様において本明細書中で使用される、正常
なヒトＩｇＭはＹ−９０で標識され、そしてＹ−９０で標識されたＩｇＭの滴注
はコロイド状Ｙ−９０の代わりに使用される。正常なヒトＩｇＭは、例えば、Ｃ
ｅｎｔｒａ処理血液製剤から入手され得、これは通常、臨床的用途のためにこの
タンパク質を廃棄する。ＩｇＭの利点は、ＩｇＭが、関節液においてさらに良い
拡散、および全ての滑膜に対してさらに良い用量分配を導く可溶性産物であるこ
とである。ＩｇＭの大きさは、ＩｇＭが血管に進入すること、および関節内空間
から離脱することを妨げる。ある程度の放射性ＩｇＭは、リンパ管に共通する開
口部を通じてのリンパ管におけるＩｇＭの挿入に起因して、関節を流れ出てリン
パ節にトランスロケーションし得る。このことは、これらの節が放射線感受性の
自己反応性リンパ球を含む場合、いくつかのさらなる治療的な利点になり得る。
毒性は予想されない。線量決定は、関節内液の容積に基づき、初期研究について
１ｃｃあたり０．１ｍＣｉである。研究のための初期患者集団は、大きな関節の
ＲＡ患者（Ｂｒｏｏｋｅｒグレード２〜３）である。要約すると、この適用は、
外来患者、患者に好意的な、安価なＲＡ処置を提供する。
【００６８】 本発明は、以下の限定されない実施例を参照して、さらに理解される。
【００６９】 （実施例１：治療的に放射性標識された抗腫瘍ＩｇＭの調製） （モノクローナル抗体） ＡＣ６Ｃ３へテロハイブリドーマによって分泌されたヒトモノクローナル抗体
をこれらの実験に使用した（Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １０：
２１−３３（１９９１）；Ｃｈｅｎら、Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂ
ｒｉｄｏｍａｓ ５：１３１−１４２（１９９４））。このモノクローナル抗体
は、ＩｇＭのイソ型のものであり、そしてヒトの卵巣、乳房および結腸の癌腫、
ならびに他の特定の悪性疾患の細胞膜と反応性を有するである。ほぼ年１回の間
隔で、このハイブリドーマを再クローニングに供し、そして分泌された抗体を、
蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）分析によって、卵巣腫瘍細胞株（ＳＫＯＶ
３，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒ
ｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に対する反応性について試験する。本明細書に示され
る実験を、再クローニングされた細胞株（ＡＣ６Ｃ３ ２Ｂ１２（以後、２Ｂ１
２という））により分泌された抗体を用いて行った。イソ型が適合したヒトモノ
クローナル抗体ＩｇＭ（ＣＨ−１Ｂ９）を、無関係なコントロールとして利用し
た。
【００７０】 ヒトモノクローナルＩｇＭ ＣＲ４Ｅ８（Ｃｈｅｎら、Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５：１３１ １４２（１９９４））は、ヒト
頸部癌腫細胞株（ＳＷ７５６）に見出される５５ｋＤａの細胞表面膜タンパク質
を認識する。このモノクローナル抗体は、乳房悪性疾患および結腸悪性疾患に加
え、頸部起源ならびに頭部および頸部の起源の両方の扁平上皮癌と反応性である
。イソ型が適合したヒトモノクローナルＩｇＭ（ＣＨ−１Ｂ９）を、特異性のコ
ントロールとして役立てた。
【００７１】 （抗体産生） ハイブリドーマを、組織培養フラスコもしくはスピン培養フラスコのいずれか
で、２０％ ｖ／ｖ胎児ウシ血清（ＦＢＳ）、１０％ＮＣＴＣ１０９（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、インスリン
（５μｇ／ｍｌ）、およびトランスフェリン（５μｇ／ｍｌ）を有するイスコク
改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）中で培養した。細胞が適切な密度でかつ良好な
生存率になった後に、増殖培地を、滅菌遠心ボトルにて培養物を遠心分離するこ
とによって除去した。この培地を流し出し、次いで細胞を産生培地中に再懸濁し
、そして滅菌培養フラスコに再配置した。産生培地はＩＭＤＭおよびインスリン
（５μｇ／ｍｌ）のみを含むため、モノクローナル抗体と同時精製される血清免
疫グロブリンを欠いている。３〜４日後、生存率が２０〜４０％まで低下した場
合、この細胞培養上清を、滅菌５００ｍｌの遠心チューブにて培養物を遠心分離
することによって回収した。この上清を流し出し、そして保管し、次いで、０．
２２ｍフィルターを使用して滅菌濾過した。アジ化ナトリウム（０．００５％
ｗ／ｖ）を上清に加え、次いで、この上清を４℃で保存した。
【００７２】 （抗体精製） 上清（１〜３Ｌ）を、１ｆｔ2、３０Ｋもしくは１００Ｋ ＭＷカットオフ膜 を備えるＣＨ２ＲＳスパイラルカートリッジコンセントレーター（Ａｍｉｃｏｎ
，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）にて濃縮した。装置をポンプ速度７〜８および２５〜
３０ｐｓｉのバックプレッシャーで運転することによって、液体容積を２００ｍ
ｌ未満にまで濃縮した。次に、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む１Ｌの０．１Ｍ ＰＢＳ
、ｐＨ７．３を加え、そしてこの溶液を２００ｍｌ未満にまで再濃縮した。これ
を０．１Ｍ ＰＢＳを用いて繰り返し、次いで、濃縮された上清溶液を回収した
。次いで、この濾過装置を約２００ｍｌの０．１Ｍ ＰＢＳで２回洗浄し、これ
を回収した。
【００７３】 次いで、濃縮された上清溶液を、１００Ｋ ＭＷカットオフ膜を備えそして１
０〜１５ｐｓｉの窒素ガスを充填した８２００攪拌セル（Ａｍｉｃｏｎ，Ｂｅｖ
ｅｒｌｙ，ＭＡ）を使用してさらに濃縮した。この溶液を約３０ｍｌにまで濃縮
し、次いで、上記の第１洗浄液を加えた。この溶液を再濃縮し、次いで、第２洗
浄液を加えた。この溶液を約２５ｍｌにまで再濃縮し、次いで回収した。装置を
１０ｍｌのＰＢＳで洗浄し、次いでこれを濃縮された溶液に加えた。
【００７４】 この時点での溶液は、約１００倍に濃縮されている。金属イオンをＥＤＴＡで
のキレート化によって除去し、そしてほとんどのタンパク質および大きさが１０
０ｋＤａ未満の他の分子を濾過して除去した。大きなタンパク質がまだ存在し、
次いでこのタンパク質を、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−３００ＨＲ（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を充填した２．５×１
００ｃｍカラムを使用して、サイズ排除クロマトグラフィーによって除去した。
約５〜６ｍｌの濃縮された抗体溶液をカラムにロードし、そして抗体を、０．０
０１％ＮａＮ3を含む０．１Ｍ ＰＢＳで溶出した。画分を、溶出開始後１６０ 分から始めて、７０秒毎に回収した。
【００７５】 ＩｇＭ画分が最初に溶出され、通常、視覚的に同定され得る。ピークの一致を
、画分の吸光度を２８０ｎｍで測定することによって得た。ＩｇＭ画分の完全性
および純度を、移動相として、０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）
を用いてＢｉｏ−Ｓｉｌｅｃｔ ＳＥＣ ２５０−５カラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，
Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用して、サイズ排除ＨＰＬＣによって確認した。
公知の標準ＩｇＭの保持時間と等しい保持時間を有する単一のピークを有する画
分を保存した。何回かカラム精製することで得られた画分を組み合わせ、そして
この物質をＨＰＬＣによって再分析した。精製したＩｇＭを４℃にて保存した。
【００７６】 （蛍光活性化セルソーター分析） 免疫グロブリンの、これらの実験に使用されるそれぞれの細胞株の細胞表面と
の反応性を、ＦＡＣＳによって実証した。ヒト卵巣癌腫細胞株（ＳＫＯＶ３）を
２Ｂ１２について使用した。これらの細胞を、１０％（ｖ／ｖ）胎児ウシ血清（
ＦＢＳ）を含むＬ１５培地中で、５％ＣＯ2の存在下において３７℃で培養した 。ヒト頭部および頸部の扁平上皮細胞頸部癌腫細胞株（８８６）を、Ｗａｌｔｅ
ｒ Ｈｉｔｔｌｅｍａｎ博士（Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａ
ｓ Ｍ．Ｄ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）（Ｓａｃｋｓら
、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４４：９２６−９３３（１９８９））から得、そ
してＣＲ４Ｅ８と共に使用した。これらの細胞を、１０％ ｖ／ｖ ＦＢＳを含
む、イスコフ改変ダルベッコ培地およびマッコイ５Ａ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）の１：１の混合物中で、
５％のＣＯ2の存在下において３７℃にて培養した。
【００７７】 細胞を、バーシーン（Ｖｅｒｓｅｎｅ）で組織培養フラスコから剥離し、そし
て２％ＦＢＳおよび０．０２％ＮａＮ3（ｗ／ｖ）を含むリン酸緩衝化生理食塩 水（ＰＢＳ）ｐＨ７．３で洗浄した。次いで、これらを１００μｌ（１００μｇ
）のヒトＩｇＭと共に６０分間、４℃でインキュベートし、洗浄し、次いで１：
１００に希釈したＦＩＴＣ結合体化ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）2中で、３０分間、 ４℃でインキュベートした。次いで、この細胞を洗浄し、そして２％ＦＣＳおよ
び０．０２％ＮａＮ3を有するＰＢＳ中に再懸濁し、次いで２．０％（ｖ／ｖ） パラホルムアルデヒド中で固定した。細胞結合を、ＥＰＩＣＳプロフィールアナ
ライザー（Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ）で試験した。
【００７８】 （免疫結合体の調製） ０．０５Ｍ Ｈｅｐｅｓ緩衝液、ｐＨ８．６中のＩｇＭ溶液（１×１０-5ｍｍ
ｏｌ）に、イソチオシアネートベンジル−３−メチル−ジエチレントリアミン五
酢酸（ＩＴＣ−２Ｂ３Ｍ−ＤＴＰＡ）（１×１０-4ｍｍｏｌ）を加えた。この溶
液を穏やかに攪拌し、ＩＴＣ−２Ｂ３Ｍ−ＤＴＰＡを溶解した。次いで、トリエ
チルアミン（１．５Ｍ、ｐＨ８．６）をこの溶液に加え、アミンの最終濃度を７
．５〜１０ｍｍｏｌの範囲にした。次いで、この溶液を４℃にて１２時間インキ
ュベートした。免疫結合体を、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−３０（Ａｍｉｃｏｎ Ｃｏ
ｒｐ．，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）における濾過によって、未反応のＩＴＣ−２Ｂ
３Ｍ−ＤＴＰＡから精製し、そして０．１Ｍ ＰＢＳ、ｐＨ７．３で洗浄した。
純度を、移動相として、０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２を有する
Ｂｉｏ−Ｓｉｌｅｃｔ ＳＥＣ ２５０−５カラムを使用して、サイズ排除ＨＰ
ＬＣによって確認した。次いで、ＩｇＭあたりのＤＴＰＡ分子の平均数を決定し
た（Ｑｕａｄｒｉら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３４：９３８−９４５（１９９３
））。
【００７９】 （ＩｇＭ−２Ｂ３Ｍ−ＤＴＰＡ結合体の放射性標識） （111Ｉｎで標識された免疫結合体） 111Ｉｎで標識された免疫結合体を、等量の０．６Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液， ｐＨ５．３、０．０６Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液，ｐＨ５．５および免疫結合
体溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を混合することによって調製した。代表的には、１０
０μｌの容積を使用した。次に、純粋な111ＩｎＣｌ3溶液（代表的には、５μｌ
、１ｍＣｉ；Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）
を緩衝化した免疫結合体に加え、十分に混合し、そして４０分間インキュベート
させた。標識混合物を０．０１Ｍジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ），ｐ
Ｈ６．５と共に１０分間インキュベートすることによって、放射免疫結合体を過
剰のキレート剤で攻撃した。放射性標識されたＩｇＭを、溶出液として０．１Ｍ
ＰＢＳを使用し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０ゲルカラム（１．５×２０ｃｍ）
で精製した。画分を回収し、ＣＲＣ−１５Ｒ線量キャリブレーター（Ｃａｐｉｎ
ｔｅｃ，Ｒａｍｓｅｙ，ＮＪ）を用いてアッセイした。放射性金属の取り込みの
程度および放射免疫結合体の純度を、移動相として生理食塩水を用いるインスタ
ント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）、ならびに移動相として１：１の割合
のメタノールおよび１０％（ｗ／ｖ）酢酸アンモニウム水溶液を使用する薄層ク
ロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって、各工程で評価した。ストリップ（ｓｔｒ
ｉｐ）を半分に切断し、そしてＣｏｂｒａ ＩＩ γカウンター（Ｐａｃｋａｒ
ｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）でカウントした。
【００８０】 （90Ｙで標識された免疫結合体） 90Ｙで標識された放射免疫結合体を、等量の２．０Ｍ酢酸ナトリウム，ｐＨ６
．０を免疫結合体溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）と混合することによって調製した。組
み合わせた容積は、生体分布研究のための１００〜２００ｌから、治療的研究の
ための３００〜６００μｌに及んだ。これに、純粋な90ＹＣｌ3溶液（Ｂａｔｔ ｅｌｌｅ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，
Ｒｉｃｈｌａｎｄ，ＷＡ）を加えた。容積および活性は、体内分布研究のための
１〜５μｌ、２．０〜５．０ｍＣｉ、および治療的研究のための１０〜２０μｌ
、２０〜５０ｍＣｉに及んだ。この溶液を十分に混合し、そして６０分間インキ
ュベートさせた。反応を、０．０１Ｍ ＤＴＰＡ，ｐＨ６．５を使用して、１０
０倍過剰のキレート剤でクエンチした。１０分のインキュベーション後、この溶
液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１００ゲルカラム（１．５×５０ｃｍ）にロードし、
そして放射免疫結合体を０．１Ｍ ＰＢＳ，ｐＨ７．３を用いて溶出した。この
画分を回収し、線量キャリブレーターを使用して放射能についてアッセイした。
純度を、移動相として生理食塩水を用いるＩＴＬＣによって、ならびに移動相と
して１：４の割合の３０％水酸化アンモニウムおよびエタノールを使用するＴＬ
Ｃによって、各工程で評価した。
【００８１】 精製した全ての放射免疫結合体溶液を濾過滅菌し、次いで滅菌０．１Ｍ ＰＢ
Ｓ，ｐＨ７．３を使用して適切な活性まで希釈した。放射免疫結合体は、９５％
を超える純度を有し、それらの調製の２時間以内で使用した。
【００８２】 （実施例２：生体分布を決定するための放射性同位体標識された抗体の腫瘍
への投与） （材料および方法） （放射性標識された抗体） 放射性標識された抗腫瘍抗体を実施例１に記載されるように調製した。
【００８３】 精製した抗体は、ＦＡＣＳによって、ＣＲ４Ｅ８について８６％の細胞表面反
応性を示したのに対して、ＣＨ−１Ｂ９について１２％の細胞表面反応性を示し
た。サイズ排除ＨＰＬＣ分析は、誘導体化後の免疫結合体について、９８％の純
度を示した。４つの２Ｂ３Ｍ−ＤＴＰＡ分子の平均を、各免疫グロブリンに結合
体化した。さらに、放射免疫結合体の精製後、少なくとも９６％の放射能が抗体
に結合されており、ヒト血清中で７２時間まで３７℃でインキュベートした場合
、９０％を超える放射能が結合したままであった。
【００８４】 （90Ｙ凝集体の調製） ５μｌのＹＣｌ3（３．３〜７．７ｍＣｉ）を、５０μｌの０．０５Ｎ Ｎａ ＯＨと混合した。この溶液を、力強くボルテックスした。ＰＢＳ中のヒト血清ア
ルブミンの１２．５％溶液（ｐＨ７．３）１００μｌを添加した。この混合物を
再びボルテックスし、次いで、放置し１時間インキュベートした。ゼラチン物質
が形成した。この凝集体のアリコートを、マウスへの注射のために、滅菌した０
．１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．３）で再懸濁した。この懸濁液を、放射能の存在が凝
集体相に限定されることを確認するために、ＩＴＬＣおよびＴＬＣによって調べ
た。90Ｙ−凝集体調製物を、９９％よりも純粋にし、そしてこれらの調製の１時
間以内に投与した。
【００８５】 （腫瘍接種） （腹腔内（Ｉ．Ｐ．）モデル） ヒト上皮卵巣癌細胞株、ＳＫＯＶ３−ＮＭＰ２（Ｍｕｊｏｏら、Ｏｎｃｏｇｅ
ｎｅ １２：１６１７〜１６２３（１９９６)を、Ｄｒ．Ｋａｌｐａｎａ Ｍｕ ｊｏｏ（Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｍ．Ｄ．Ａｎｄｅ
ｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）から入手した。これを、３７℃で、１
０％ ウシ胎仔血清および５％ ＣＯ2を補充したＭＥＭ中で増殖させた。細胞 を、３７℃で２分間、０．２５％トリプシンで剥離した。このトリプシンを培地
で中和し、次いでこの細胞を８００×ｇで遠心分離した。次いでこの細胞ペレッ
トを、必要な細胞濃度で培地中に再懸濁した。雌の無胸腺症ヌードマウス（６〜
１０週齡）は、３０口径の針を使用する腹腔内投与を介して、０．２ｍｌのこの
細胞懸濁液を受けた。体内分布、治療および腫瘍負荷量の実験のために、マウス
は、２．５×１０6の細胞を受けた。生存における細胞数の効果の研究のために 、マウスは、５×１０4、５×１０5、２．５×１０6または１０7の細胞を受けた
。
【００８６】 （病巣内（Ｉ．Ｌ．）モデル） ヒト頭部および頸部扁平上皮癌細胞株、８８６を、上記のように培養した。細
胞を、３７℃で２分間、０．１％トリプシンで剥離した。このトリプシンを培地
で中和し、そしてこの細胞を８００×ｇで遠心分離した。この細胞ペレットを、
８×１０7細胞／ｍｌの濃度で培地中に再懸濁した。雄の無胸腺症ヌードマウス （６〜１０週齡）に、３０口径の針を使用して、皮下に０．１ｍｌの細胞懸濁液
を注射した。
【００８７】 このマウスを、上部がフィルターであるかごに入れ、そして滅菌した食物およ
び水を提供した。動物の研究を、ＵＳＤＡ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｗａｌｆａ
ｒｅ Ａｃｔに従って行った。動物のプロトコルは、Ｍ．Ｄ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ
Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒにある、Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓ
ｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって認可された。
【００８８】 （体内分布の研究） （腹腔内（Ｉ．Ｐ．）モデル) 腫瘍細胞接種物を受けたマウスに対して、１２日後に試薬を投与した。腹腔内
および静脈内の両方に処置されたマウスは、およそ２００μｌの放射免疫結合体
を受けた。111Ｉｎ処置されたマウスは、全身の放射能の保持の測定のために処 置されたマウスを除いて、１０〜１５μＣｉを受けた。これらは、５５μＣｉを
受けた。90Ｙ−ＩｇＭ処置されたマウスは、４０μＣｉを受けた。90Ｙ凝集体を
、マウスに対して、腹腔内に投与した。これらは、およそ２００μlにおいて３ ０μＣｉを受けた。
【００８９】 腹腔内に処置されたマウスを、注射後３、２４、４８、および９６時間で安楽
死させた。静脈内に処置されたマウスを、処置後２４および４８時間で安楽死さ
せた。血液を、心臓穿刺によって得、そして秤量した。正常組織および腫瘍小結
節を切除し、ＰＢＳ中でリンスし、乾燥してブロットし、秤量し、次いで血液サ
ンプルと共にγ計数管でカウントした。この結果を、放射能の減衰について補正
し、そして組織のグラム当たりの注射された線量のパーセント（％ＩＤ／ｇ）と
して表した。
【００９０】 （病巣内（Ｉ．Ｌ．）モデル） 腫瘍細胞で接種されたマウスに対して、４〜５週後に試薬を投与した。腫瘍の
大きさは、投与の時点で直径８〜１２ｍｍの範囲であった。病巣内に処置された
全てのマウスは、これらの腫瘍の中央内に、およそ１０〜２０μｌの放射免疫結
合体を伴う単回注射を受けた。静脈内に処置されたマウスは、およそ２００μｌ
の放射免疫結合体を受けた。111Ｉｎ−ＩｇＭ処置されたマウスは、およそ５〜 １０μＣｉの放射能を受け、そして90Ｙ−ＩｇＭ処置されたマウスは、およそ２
０μＣｉの放射能を受けた。90Ｙ凝集体で処置されたマウスは、１０〜２０μＣ
ｉの放射能範囲で、およそ５〜１０μlを受けた。
【００９１】 病巣内に放射免疫結合体で処置されたマウスを、注射後３、２４、４８、９６
および１４４時間で安楽死させた。静脈内投与によって処置されたマウスを、処
置後２４および４８時間で安楽死させた。病巣内に90Ｙ凝集体で処置されたマウ
スを、投与後３、２４、４８、および９６時間で屠殺した。血液を、心臓穿刺に
よって得、そして秤量した。正常組織および腫瘍小結節を切除し、ＰＢＳ中でリ
ンスし、ブロットし、秤量し、次いで血液サンプルと共にγ計数管でカウントし
た。放射能の取り込みを、％ＩＤ／ｇとして表した。
【００９２】 （治療の研究） （腹腔内の治療） ２．５×１０6のＳＫＯＶ３ ＮＭＰ２細胞で腹腔内に接種されたヌードマウ スは、１２日後に２００μｌ容量の０．１Ｍ ＰＢＳ中の非標識化免疫結合体（
１０μｇ）を腹腔内に受けた。
【００９３】 ２．５×１０6のＳＫＯＶ３ ＮＭＰ２細胞で腹腔内に接種されたヌードマウ スは、１２日後に２００μｌの容量中で90Ｙ標識化２Ｂ１２の段階的な放射能（
５０、１００、２００、３００、４００および５００μＣｉ）を受けた。１０匹
の動物を、各放射能のために使用した。さらに５匹の動物は、１ｍｌの容量中で
２００μＣｉを受けた。マウスを、５０ｍｌの遠心管の内側にこれらを置くこと
によって、放射能の保持について４時間後にスクリーニングし、次いで線量キャ
リブレータの内側に置いた。マウスを、キャリブレータによって示される線量範
囲に確保した。
【００９４】 ２．５×１０6のＳＫＯＶ３ ＮＭＰ２細胞で腹腔内に接種されたヌードマウ スは、１２日後に毎週７５μＣｉ×２；３週間毎に別々に１００μＣｉ×２；毎
週１６５μＣｉ×２；毎週１７０μＣｉ×３；または３週間毎に別々に２００μ
Ｃｉ×２のいずれかを受けた。注射物の容量は２００μｌであった。マウスを、
これらが投与された放射能を保持することを確認するために、線量キャリブレー
タ中で各投与後にスクリーニングした。
【００９５】 （病巣内の治療） 直径８〜１２ｍｍの皮下腫瘍を有するヌードマウスは、１０μｌ容量の０．１
Ｍ ＰＢＳ中の１０μｇの非標識化免疫結合体を病巣内に受けた。
【００９６】 直径５〜１２ｍｍの皮下腫瘍を有するヌードマウスは、５〜２０μｌの容量で
、段階的な放射能（２０〜１０００μＣｉ）の放射免疫結合体を受けた。マウス
を、投与後に線量キャリブレータ中に置き、腫瘍中に保持されている放射能レベ
ルを調べた。
【００９７】 直径８〜１１ｍｍの皮下腫瘍を有するヌードマウスに、５〜１０μｌの容量に
おいて１００〜４００μＣｉの90Ｙ凝集体を注射した。
【００９８】 （腫瘍サイズの計算） 腫瘍サイズを３〜４週間毎に調べた。腫瘍の容量を、以下の式によって計算し
た： 容量＝π／６×長さ×幅×高さ 111Ｉｎ標識化ＣＲ４Ｅ８（腫瘍反応性）抗体および111Ｉｎ標識化ＣＨ−１Ｂ
９（非反応性）抗体の両方について腫瘍の％ＩＤ／ｇを、病巣内体内分布実験か
ら得、そして横軸を％ＩＤ／ｇおよび縦軸を時間としてプロットした。両方の放
射免疫結合体について、曲線下の面積を、グラフ上における台形の面積の合計に
よって得た。
【００９９】 腹腔内モデルにおける腫瘍応答の測定は、手術の実行かまたは動物の屠殺のい
ずれかなしには可能でないので、腫瘍応答を測定する間接的な方法を探求した。
マウス中に生存している腫瘍細胞の数を、これらの平均生存時間（Ｓ50）と、異
なる数の腫瘍細胞で接種された、未処置マウスの平均生存時間とを比較すること
によって入手し得ることが確証された。所定のＳ50を得るために必要な細胞の数
を見出し得る。この数を、生存率（ＳＦ）を提供する処置されたマウスにおいて
、最初に注射される標準的な細胞の数（２．５×１０6）で除算する。このこと は、処置されたマウスにおける細胞の生存率と投与された放射能との間の対数直
線関係を示す。この生存曲線は、高線量の線量率、低密度の電離放射線後に代表
的に観察される２次関数を欠失する。このモデルを使用して、一般に、低密度の
電離放射線によって生成される放射線生存曲線が直線−２次モデルであることを
示す（Ｃｈａｄｗｉｃｋら、Ｐｈｙｓ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．１８：７８〜８７（
１９７３））。このモデルを用いて、
【０１００】
【数１】 ここで、Ｄ＝線量、ｅ-[αD]＝直線成分による細胞死およびｅ-[βD2]＝２次成 分によって生成される細胞死である。この放射線生存曲線モデルの独自の仮説は
、この成分が、核ＤＮＡにおける二重鎖破壊を生成する単一の電離追跡を記載す
ることを仮定する。一方、この成分は、単鎖破壊を各々生成する２つの電離追跡
を記載した。空間および時間において、共に密接に生じる２つの「β」崩壊は、
ＤＮＡにおいて二重鎖崩壊を形成し得る。二重鎖ＤＮＡ崩壊のみが、細胞上の放
射線の致死的な効果に相関すると考えられる。この直線−２次モデルは、臨床的
に使用されるＸ線およびγ線（高線量であるが短時間）が、成分を欠失するＲＩ
Ｔよりも、より効率的であることを予測する。低線量のＲＩＴは、単鎖崩壊の修
復を可能にする。しかし、ＲＩＴは、細胞殺傷の他の様式（例えば、細胞周期の
、より放射線感受性なＧ2期における腫瘍細胞の蓄積（Ｍａｒｉｎら、Ｉｎｔ． Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．２１：３９７〜４０２（
１９９１）；Ｋｎｏｗｘら、Ｒａｄｉａｔ．Ｒｅｓ．１３５：２４〜３１（１９
９２））、遅延性曝露感作（ｐｒｏｔｒａｃｔｅｄ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｓｅｎ
ｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ）（ＰＥＳ）として記載されるプロセスによって促進され
た線量送達および増加した腫瘍細胞殺傷（Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒ
ａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．２４：６９９〜７０４（１９９
２））を最適化する。腫瘍細胞殺傷のこれらのさらなる機構は、低い最初の線量
率のＲＩＴによって失われるいくつかの腫瘍細胞殺傷について構成される。ＲＩ
Ｔの等価な線量と外部ビーム放射線との間の生存率におけるごくわずかな差異が
、実験動物モデルにおいて見られている（Ｆｏｗｌｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄ
ｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｐｈｙｓ．１２６１〜１２６９（１９９０）
；Ｆｏｗｌｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙ
ｓ．１８：１２６１〜１２６９（１９９０；Ｋｎｏｘ、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．
５０：４９３５〜４９５０（１９９０）；Ｎｅａｃｙら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ
．２７：９０２〜９０３（１９８６））。
【０１０１】 腹膜の癌腫症モデルの欠点は、放射免疫結合体の投与の時間での腫瘍容量が正
確にわからないことである。従って、線量の直接的な計算（所定の容量において
堆積されたエネルギー）は可能でない。ＲＩＴからの腫瘍線量の間接的な評価は
、観察された生物学的応答を外挿することによってなされ得る。腫瘍細胞の生存
率についての節において、計算を、腹腔内ＲＩＴ後に生存する腫瘍細胞の数を決
定するために与えた。この節において、放射線生存曲線の形を記載するために使
用した、別のモデルである、多重標的単一ヒットモデル（Ｊｏｈｎら、Ｔｈｅ
Ｐｈｙｓｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ．第４版 Ｃｈａｒｌｅｓ Ｃ．Ｔ
ｈｏｍａｓ（Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＩＬ １９８３）６７９〜６８１頁）を
使用して、腹腔内ＲＩＴから吸収された放射線量を評価するために計算を単純化
する。多重標的モデルにおいて、
【０１０２】
【数２】 ここで、ｄ＝生存曲線の初期勾配、ｄ0＝最終勾配、およびｎ＝曲線の肩の幅（ 外挿数）である。最も高い総放射線量が腹腔内に投与された後、腫瘍殺傷は３．
５ｌｏｇであると推定された。外部ビーム放射線および腹腔内ＲＩＴが同様の放
射線量の後、類似の生存率を示す場合、およびＳＫＯＶ３ ＮＭＰ２：の放射線
生存曲線の特徴としてｎが３、およびＤ0が２．０Ｇｙと仮定する場合、３．５ ｌｏｇの腫瘍細胞殺傷を得るために、１日あたり２．０Ｇｙの割合において必要
な外部ビーム放射線の量は、およそ５２Ｇｙである。しかし、外部ビームによる
、ヒトの患者の腹部全体に対する最大許容線量は、３０Ｇｙ未満である。ＳＫＯ
Ｖ３ ＮＭＰ２細胞株の放射線生存曲線のパラメーターが、より放射線感受性で
ある腫瘍（ｎ＝３、Ｄ0＝１．０Ｇｙ）を反映するために選択される場合、２Ｇ ｙの割合において外部ビーム放射線の１４Ｇｙのみが、０．０００５のＳＦに到
達するために必要である。従って、ＲＩＴによって腫瘍に送達される線量につい
ての現在の評価は、１００μＣｉの90Ｙあたり３Ｇｙと１０Ｇｙの間である（５
００μＣｉによって分配される１４〜５２Ｇｙ）。
【０１０３】 （オートラジオグラフィー） （全身） 腹腔内に111Ｉｎ標識化２Ｂ１２を受けた２匹のマウスを、注射後２４時間で 屠殺した。これらの四肢を取り除き、そしてこれらの体を４％のカルボキシメチ
ルセルロース中で凍結した。この凍結した塊を、低温ミクロトーム（ｃｒｙｏｍ
ｉｃｒｏｔｏｍｅ）（Ｈａｃｋｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｆａｉｒｆｉｅ
ｌｄ，ＮＪ）上でマウントし、そして５０ｍの厚さの冠状切片に切り出した。写
真を切片から作製し、次いでこれをテープ上でマウントし、そして凍結乾燥した
。続いて、切片を画像の現像の４８時間前にＸ線フィルム（Ｘ−Ｏｍａｔ ＡＲ
，Ｋｏｄａｋ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に曝露した。
【０１０４】 （腫瘍オートラジオグラフィーおよび組織学） ８〜１２ｍｍの皮下腫瘍を有する雄のヌードマウスに、５〜１０μｌの容量の
５〜１０μＣの90Ｙ標識化ＣＲか、または90Ｙ凝集体のいずれかを注射した。マ
ウスを、３、２４、４８、９６および１４４時間で屠殺した。この腫瘍を切り取
り、ＰＢＳでリンスし、ブロットし、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ包埋培地（Ｍｉｌｅ
ｓ Ｉｎｃ．，Ｅｌｋｈａｒｔ，ＩＮ）で被覆し、次いで−２０℃で凍結した。
この凍結した塊を後日切り取り、そして冷蔵低温保持装置中で冷却チャックでマ
ウントした。８ｍの厚さの連続切片を、オートラジオグラフィーの目的のために
、腫瘍全体を介しておよそ８０ｍ毎に得た。４ｍの厚さの近隣切片を、組織学の
ために得た。これらの部分を、スライド上で集めた。組織学標本を、ヘマトキシ
リンおよびエオシンで染色した。オートラジオグラフ切片を、堅い紙の上で連続
的にマウントし、プラスチックフィルムで覆い、次いで、亜リン貯蔵スクリーン
（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ ｓｔｏｒａｇｅ ｓｃｒｅｅｎ）（Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いてカセット中に置
いた。このスクリーンを、１〜２日間曝露し、次いでＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇ
ｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）上
で読み取った。コードを、スクリーン上で腫瘍画像を横切って得、そして、カウ
ントをコードの長さに従って得た。オートラジオグラフを、フィルムを曝露する
数時間から数日の間、ハイパーフィルム−ＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒｌｉ
ｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）上にスライドを置くことによって得た。
【０１０５】 （γカメラ画像化） 病巣内に111Ｉｎ標識化ＣＲ４Ｅ８を受けた４匹のマウスを、注射後２４、４ ４、６８、１１６および１６４時間でスキャンした。病巣内に111Ｉｎ標識化Ｃ Ｈ−１Ｂ９を受けた５匹のマウスを、２４、４８、９６および１１４時間でスキ
ャンした。画像化を、中エネルギーコリメータを取り付けた、Ｓｔａｒｐｏｒｔ
γカメラ（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｃｏ．，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ
，ＷＩ）で行った。次いで、このデータを、Ｔｒｉａｄ γカメラ（Ｔｒｉｏｎ
ｉｘ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）に移した。目的の領域（ＲＯＩ）を腫瘍にわ
たって得、そして各々の時点についてカウントを得た。１秒あたりのカウントを
計算し、そして２番目および引き続く時点について、これらを物理的減衰につい
て補正した。このデータを、ＲＯＩ対時間において、残存する放射能のパーセン
トとしてプロットした。次いで、放射免疫結合体の生物学的半減期を、このグラ
フから得た。
【０１０６】 （結果） （病巣内または腹腔内のいずれかで投与されたＣＲ４Ｅ８の体内分布） 111Ｉｎ標識化ＣＲ４Ｅ８の病巣内投与および腹腔内投与を比較する体内分布 データは、病巣内の投与が２４時間で高い腫瘍の取り込み（１０８％ＩＤ／ｇ）
を生じ、そしてこの取り込みが４８時間で高く残存（１０４％ＩＤ／ｇ）するこ
とを示した。正常器官は低い取り込みを有し、腎臓（３％ＩＤ／ｇ）および肝臓
（２％ＩＤ／ｇ）が２４時間で最も高く、そして、両方の器官は４８時間で３％
ＩＤ／ｇであった。他の全ての器官は、両時点において２％ＩＤ／ｇ未満の取り
込みを有した。血液の放射能は、両時点において１％ＩＤ／ｇ未満であった。比
較において、静脈内投与は、両時点において非常に低い腫瘍標的（＜１％ＩＤ／
ｇ）を生じた。２４時間および４８時間の両方において、肝臓の取り込みは高く
（３５％ＩＤ／ｇ）、そして脾臓の取り込みは中位（≒１４％ＩＤ／ｇ）であっ
た。腎臓は、両方の時点において、次に高い取り込み（４％ＩＤ／ｇ）を有した
。放射能の血液クリアランスは、２４時間でほぼ完全（１％ＩＤ／ｇ）であった
。
【０１０７】 111Ｉｎ標識化ＣＲ４Ｅ８または90Ｙ標識化ＣＲ４Ｅ８の病巣内投与を比較す る体内分布データは、放射能の腫瘍沈着が３時間で高く（111Ｉｎについて１０ ９％ＩＤ／ｇおよび90Ｙについて１０２％ＩＤ／ｇ、Ｐ＝０．４３８）、そして
１１４時間で111Ｉｎについて５６％ＩＤ／ｇおよび90Ｙについて４４％ＩＤ／ ｇ（Ｐ＝０．３２４）を有し、この研究中、高く維持されることを示す。統計的
に有意な差異は、放射免疫結合体についての腫瘍沈着と放射能の保持との間で見
出されなかった。正常な器官は、両方の放射性物質を伴う、放射能の低い取り込
みを実証した。腎臓（111Ｉｎについて２４および４８時間で、ならびに90Ｙに ついて９６時間で３％ＩＤ／ｇ）ならびに肝臓（111Ｉｎについて４８時間で３ ％ＩＤ／ｇ）は、最も高い取り込みを有した。血液および骨の放射能は、両方の
放射性物質について、全ての時点で０．７％ＩＤ／ｇ未満であった。正常な器官
は、２４時間（Ｐ＝０．００３）で腎臓について111Ｉｎ保有＞90Ｙ、ならびに ９６時間（Ｐ＝０．００５）および１１４時間（Ｐ＝０．０２６）で大腿につい
て90Ｙ＞111Ｉｎであることを除いては、ほとんどの時点で両方の放射免疫結合 体について同様のレベルの放射能の取り込みを有した。
【０１０８】 病巣内投与された腫瘍反応性および非反応性111Ｉｎ放射性標識化ＩｇＭの腫 瘍沈着および放射能の保持は、３時間で、腫瘍反応性ＩｇＭが非反応性ＩｇＭ（
９０％ＩＤ／ｇ）よりも、高い放射能の沈着（１０９％ＩＤ／ｇ）を有したこと
を示す。しかし、これは、統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．３２４）。１４
４時間で、非反応性ＩｇＭは、中位の腫瘍保持（３４％ＩＤ／ｇ）を示し、一方
、腫瘍反応性ＩｇＭは、より効率的に保持された（５６％ＩＤ／ｇ）。この差異
は、統計的に有意である（Ｐ＝０．０２１）。非反応性ＩｇＭに対する腫瘍反応
性の腫瘍取り込みの割合は、３時間で１．２、２４時間で１．３、４８時間で１
．２、９６時間で１．７および１４４時間で１．６であった。非反応性ＩｇＭの
正常な器官の取り込みは、４８および９６時間で最高値（２％ＩＤ／ｇ）を有す
る腎臓で低かった。非反応性ＩｇＭの血液放射能は、全ての時点において、１％
ＩＤ／ｇ未満であった。
【０１０９】 90Ｙ標識化腫瘍反応性ＩｇＭの病巣内投与を90Ｙ凝集体と比較する体内分布デ
ータは、腫瘍沈着および放射性の保持が90Ｙ標識化ＩｇＭ（３時間で１０２％Ｉ
Ｄ／ｇおよび９６時間で７７％ＩＤ／ｇ）に比較して、90Ｙ凝集体（３時間で１
２６％ＩＤ／ｇおよび９６時間で１０９％ＩＤ／ｇ）を用いた実験の過程を通し
て、より高かったことを示す。しかし、90Ｙ凝集体のサンプルの大きさはあまり
に小さく（ｎ＝３）、統計的分析が可能でなかった。90Ｙ凝集体を用いて、骨は
、２４および９６時間で最も高い放射能の取り込み（３％ＩＤ／ｇ）を有し、次
いで腎臓が高い取り込み（１〜２％ＩＤ／ｇ）を有した。他の正常な器官は、低
い放射能の取り込み（１％ＩＤ／ｇ未満）を示した。血液の放射能は、全ての時
点で非常に低かった（０．１％ＩＤ／ｇ未満）。
【０１１０】 90Ｙ標識化ＣＲ４Ｅ８または90Ｙ凝集体を病巣内で処置された腫瘍由来の切片
の代表的なオートラジオグラフは、90Ｙ標識化ＣＲ４Ｅ８を用いた放射能の大部
分が投与後３時間で注射部位に局在化されることを示す。さらなる放射能は、針
の跡および腫瘍の表面に沿って明らかである。２４時間までに、放射能は広範囲
に及び、そして実験の目的を通して保持される。対照的に、90Ｙ凝集体は、注射
部位に局在したままであるか、または実験全体について放射能の別個の点供給源
のような針の跡に沿って局在したままである。
【０１１１】 ４８時間で得られた腫瘍画像を越えて得られた、線に沿った放射能レベルは、
投与された放射能の分布のより大きな容量が可溶性の放射性標識化ＩｇＭで達成
されたことを確認する。
【０１１２】 111Ｉｎ標識化腫瘍反応性ＩｇＭで病巣内に注射された代表的なヌードマウス の画像は、放射能の腫瘍沈着が高く、正常な器官によってほとんど取り込まれな
いことを示す。放射能は局在化されて残存し、そして時間が経てば腫瘍内で、よ
り均一になることが明らかである。ＲＯＩ分析は、腫瘍反応性ＩｇＭについて１
５７時間の腫瘍の半減期を生じ、そして非反応性ＩｇＭについて９６時間の腫瘍
の半減期を生じた。ＲＯＩ分析によって決定された腫瘍の半減期は、体内分布の
研究において得られた半減期に類似する。
【０１１３】 111Ｉｎ標識化腫瘍反応性ＩｇＭもしくは90Ｙ標識化腫瘍反応性ＩｇＭまたは9 0 Ｙ凝集体の病巣内投与後の、ヌードマウスにおける放射能の全身保持は、この 排出が全ての試薬において単相性であったことを示す。111Ｉｎ標識化ＩｇＭに ついておよそ７３時間、90Ｙ標識化ＩｇＭについて８８時間および90Ｙ凝集体に
ついて２２００時間の半減期が観察された。体内分布実験から得られた放射免疫
結合体の腫瘍の半減期（111Ｉｎ標識化ＩｇＭについて１４３時間および90Ｙ標 識化ＩｇＭについて１２８時間）は、全身の半減期よりも長かった。対照的に、 90 Ｙ凝集体の腫瘍半減期は、全身の半減期（２２００時間）よりも短かった（４
７５時間）。
【０１１４】 （病巣内投与後の腫瘍の増殖） 標識されていない免疫結合体が病巣内に投与された場合、全てのマウスは、未
処置のマウスのような連続的な腫瘍の増殖を示し、そしてこれらの腫瘍が直径１
５ｍｍ以上に達した場合に安楽死させた。「非放射性の」免疫結合体は、効果的
な免疫治療剤ではない。転移（リンパ性または血行性）は、このモデルにおいて
観察されなかった。
【０１１５】 放射免疫結合体が病巣内に投与された場合、腫瘍が１００μＣｉの90Ｙ標識化
ＩｇＭあたり８０Ｇｙを受けるように計算された。種々の放射能の90Ｙ標識化Ｃ
Ｒ４Ｅ８で処置された動物の応答を、図１に示す。処置された動物は全て応答し
た。大部分の腫瘍が速やかに切断され、そして腫瘍の再発が絶対的確実性を有す
る最初の事物に結合し得なかったので、この結果は、最初の処置容量として表さ
れ、そして腫瘍は、切除された（完全応答）かまたは消失された（部分的応答）
かを表す。このグラフは、明白な線量を実証するが、線量／容量の効果はない。
恣意的な切断地点として１５０μＣｉを設定し、このレベル以上および以下の腫
瘍応答における差異は、統計的に有意であった（Ｐ＝０．００１）。腫瘍の消失
は、上に重なった皮膚に対する損傷を有して、および損傷を有さずに生じた。腫
瘍の消失を、生存腫瘍のピンクがかった白色から、土色の黄色っぽい色への腫瘍
における色の変化によって特徴付けた。
【０１１６】 腫瘍の切除は、腫瘍全体の一面の痂皮（ｃｒｕｓｔｉｎｇ）およびかさぶた（
ｓｃａｂｂｉｎｇ）かまたはこの腫瘍のいずれかを含み、そして周囲の正常な皮
膚は、かつて腫瘍が存在した場所の中央に孔を有する湿性の剥離の領域に生じて
脱落される。腫瘍は、痂皮に覆われる前に処置した後、約４〜６日でしばしば紫
色がかったピンク色に変化した。他の腫瘍は白っぽく変わり、そして中央の外側
から壊死した。９〜１３日までに、腫瘍に対して１５０μＣｉより多く受けた動
物は、図２に示されるように、本来の腫瘍の縁を越えて２〜４ｍｍ伸長した、大
きな領域の湿性の剥離を有した。腫瘍からの、および周囲の皮下組織内への、放
射免疫結合体の漏出から生じると考えられる、広範な湿性の剥離を有する数匹の
マウスが存在した。
【０１１７】 評価し得る３４匹のマウス中の１４匹が、図３によって示されるように、腫瘍
再発を経験した。実験の開始において１つより多い単一の腫瘍小結節を有する動
物の排除のために、腫瘍応答および湿性の剥離の誘導の分析においてよりも、腫
瘍応答期間の分析において、より少数のマウスが含まれる。この動物モデルは、
互いに近接している、より多い腫瘍小結節の形成を生じ得る、細胞懸濁液の皮下
接種に依存する。体内分布実験は、近接する腫瘍集団および反対側の足の未処置
の集団の両方が有意な放射能の取り込みを有さないことを実証した。腫瘍の再発
は、１５０μＣｉ未満を投与した場合に、より頻繁であった（Ｐ＝０．０３９）
。大部分の腫瘍の再発は、本来の腫瘍の部位の底部で生じた。腫瘍の再発は、湿
性の剥離を示した動物において、頻繁なほどではなかった。
【０１１８】 90Ｙ凝集体が病巣内に投与された場合、全ての動物は、完全な応答を有した。 90 Ｙ凝集体処置後に腫瘍に生じる形態学的な変化は、放射免疫結合体治療後の腫
瘍における変化とは顕著に異なっていた。注射部位での中心の壊死を伴う、高放
射能の90Ｙ凝集体で処置された腫瘍は、９〜１４日において、しばしばインタク
トであった。対照的に、放射免疫結合体で処置された腫瘍は、この時点までに痂
皮であった。湿性の剥離は、90Ｙ凝集体で処置されたマウスにおいて遅く現れ、
そして本来の明瞭な腫瘍の縁を越えて広がらなかった。
【０１１９】 腫瘍は、90Ｙ凝集体で処置された８匹のマウス中４匹で再発した。対照的に、
等価な放射能の放射性標識化ＩｇＭで処置された１２匹のマウス中２匹のみが、
腫瘍の再発を有した（Ｐ＝０．０６）。
【０１２０】 （病巣内投与に伴う副作用） 明白な全身性の毒性は、90Ｙ標識化ＣＲ４Ｅ８で処置されたいかなるマウス（
４００〜１０００μＣｉを受けたマウスを含む）においても観察されなかった。
この事実および体内分布の研究において正常な器官で見出された非常に低レベル
の放射能に基づいて、マウスの体重を測定しなかった。体内分布データは、90Ｙ
凝集体で処置されたマウスにおいて、骨の取り込みおよび90Ｙの長時間の全身で
の保持を示したので、これらの体重をモニターした。これらは、明白な全身性の
毒性がこの治療と関係ないことを示す、これらの前処置の体重の２％以内の体重
を維持した。
【０１２１】 有意な湿性の剥離は、１５０μＣｉより多い放射免疫結合体で処置された１３
匹のマウス中１３匹において観察された一方、１５０μＣｉ未満で処置されたマ
ウスは、２２匹のマウス中６匹において湿性の剥離を有した。この差異は、統計
的に有意である（Ｐ＝０．００００２）。90Ｙ凝集体で処置されたマウスは、同
様の放射能の放射免疫結合体で処置されたマウスと比較して、減少した範囲の湿
性の剥離を有した。
【０１２２】 単一線量の90Ｙ標識化ＣＲ４Ｅ８（平均放射能３０８μＣｉ）での処置後の腫
瘍保有マウスにおける血液計数を、測定した。処置後１９日目に、セグメント化
された好中球はこれらの初期値の４０％に低下し、そしてリンパ球は２１％に低
下した。ＲＢＣ数は、初期値の９２％であった。処置後４０日目に、セグメント
化された好中球およびリンパ球は、両方とも初期値の５８％であった。ＲＢＣ数
は、初期値の９０％であった。
【０１２３】 単一線量の90Ｙ凝集体（平均放射能２８７μＣｉ）での処置後の腫瘍保有マウ
スにおける血液計数を、測定した。処置後２１日目に、セグメント化された好中
球はこれらの初期値の７１％であり、そしてリンパ球は４０％であった。ＲＢＣ
数は、初期値の１０３％で安定であった。処置後４４日目に、セグメント化され
た好中球は、初期値の５１％まで低下し続けた。リンパ球は回復し、そして処置
前の値の９８％であった。ＲＢＣ数は、初期値の１０１％であった。
【０１２４】 低放射能の（１００μＣｉ以下）放射免疫結合体で処置されたマウスは、減少
したまたは存在しない付属器（毛包、皮脂腺および汗腺）の形成において、穏や
かな皮膚損傷を有した。より高放射能で処置された何匹かのマウスは、減少また
は存在しない付属器に加えて、真皮の線維症、皮下組織および骨格筋、骨格筋の
血管症および壊死を有した。皮膚付属器の欠失は、放射線損傷を示さず、そして
おそらく剥皮された領域の二次的な治癒のためである。線維症および血管症は、
放射線傷害に帰因した。
【０１２５】 （腹腔内投与後の腫瘍の増殖） 放射免疫結合体の腹腔内投与は、腫瘍保有マウスの生存を延長可能であったが
非標識の免疫結合体ではできなかった。実際、投与された放射活性の量と生存の
延長との間には強い正の相関がある。０〜３００μＣｉで、それぞれ１００μＣ
ｉの活性ごとに、生存は平均１２日延長した。高い活性（３００μＣｉ以上）で
は、処置後１２〜１４日で早期の死亡が生じた。
【０１２６】 放射免疫結合体の分割された投与はまた、画分が適切な時間期間内に投与され
た場合、線量反応的な様式で、処置されたマウスの生存を延長した。１画分あた
り低放射能（７５〜１００μＣｉ）を受けるマウスについて、この画分は、３週
間より離れて投与され得ない。１画分あたり中等度のレベルの活性（１６５〜２
００μＣｉ）で、画分の間の間隔は、１〜３週間であり得た。この様式で処置し
たマウスは、１５０〜５１０μＣｉで、投与された活性の１００μＣｉごとに１
３日の生存延長を実証した。画分は、治療効力を維持する同じ時間の間、体重減
少または早期死亡を生じることなく投与され得る総活性を増加した。
【０１２７】 単回線量として投与された高放射能（３００μＣｉ以上）は、明白な毒性を生
じた。最初の体重の１０％を越える体重減少および早期死亡の両方が、このよう
な線量で処置された群において注目された。対照的に、分割された投与は、５１
０Ｃｉまででさえ明白な毒性を生じなかった。
【０１２８】 血球数算定を、単回線量として平均１３３Ｃｉで処置したマウスから、および
２週間間隔で、７５μＣｉ×２を投与されたマウスから得た。処置の開始から約
４週間、両方のセットのマウスは、セグメント化された好中球の増加を実証した
。単独線量で処置したマウスは、分割投与されたマウスよりも２倍より多くのセ
グメント化された好中球を有した。両方の群のマウスのリンパ球は、同等のレベ
ル、初期値の２８％に低下した。
【０１２９】 末梢血中のリンパ球数の低下は、予想された。なぜなら、リンパ球は、放射線
感受性として公知であり、そして低線量の放射線を受けた後にアポトーシスによ
り迅速に死滅することが公知であるからである（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ａｄｖ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２１５〜３３５（１９７６）。一方で末梢血におけるセ
グメント化された好中球の増加は、予想外であり、そして腹膜腔における腫瘍細
胞または他の細胞によるセグメント化された好中球に特異的な増殖因子の分泌に
より最もよく説明され得る。実際、種々の増殖因子が、悪性のヒト腹水に見出さ
れている（Ｈｉｒｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ａｎｎ．Ｍｅｅｔ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．３５：Ａ２５８（要約）（１９９４）；Ｈｉｒｔｅら、Ｐ
ｒｏｃ．Ａｎｎ．Ｍｅｅｔ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．３４：
Ａ１４２８（Ａｂｓｔｒａｃｔ）（１９９３））、そしてセグメント化された好
中球に特異的な増殖因子は、単離されそしてクローン化された：顆粒球コロニー
刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）（Ｎａｇａｔａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１９：４１５〜４
１８（１９８６）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ
）（Ｗｏｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２２８：８１０〜８１５（１９８５））。
【０１３０】 セグメント化された好中球の増加がマウスの腫瘍負荷に起因し、そして放射に
応答する代償的な機構ではないことを確認するため、腫瘍負荷研究のマウスは、
異なる時点でその血液をサンプリングされた。経時的にセグメント化された好中
球数の増加があった。思いがけなくどんな腫瘍沈着も有さないマウスにおいては
、セグメント化された好中球の増加は観察されなかった。
【０１３１】 腫瘍接種および引き続くＲＩＴの後、リンパ球、顆粒球および赤血球について
認められた異なる応答は、腫瘍が造血の顆粒球系統に特異的な効果を有し、そし
て造血系幹細胞には効果を有さないことを示す。同様に、腹腔内のＲＩＴは、顆
粒球と同等に赤血球またはリンパ球を抑制しない。また、これは、低下した腫瘍
負荷が顆粒球増殖因子の産生を低下させること、そして比較的わずかな幹細胞の
損傷が腹腔内のＲＩＴによって与えられたことを示す。
【０１３２】 （考察） 本研究の主な目的は、ヒトのモノクローナル腫瘍反応性ＩｇＭを用いて区画内
のＲＩＴの概念を試験することであった。これは、ヒトの癌の２つのヌードマウ
スモデルの使用および投与の２つの局所様式（ｉ．ｐ．（腹腔内）およびｉ．ｌ
．（病巣内））により成し遂げられた。投与の両方のルートをｉ．ｖ．（静脈内
）投与に対して比較した。腹腔内投与および病巣内投与の両方は、静脈内投与後
に観察されたよりも低い正常な組織放射活性を有する、放射活性の高い、選択的
な腫瘍沈着を実証した。
【０１３３】 治療活性を探索した場合、腹腔内投与は、明白な毒性なしに、少なくとも３対
数の活動的に増殖する腫瘍を殺傷し得た。病巣内のＲＩＴは、最小限の正常な組
織毒性に対する長期間の完全な腫瘍応答を生じた。非標識の「冷たい（ｃｏｌｄ
）」免疫結合体は、治療的効果を有さないので、すべての治療的応答は、放射線
に起因した。
【０１３４】 病巣内の90Ｙ標識したＣＲ４Ｅ８は、単回投与における有効な治療的薬剤であ
った。注目された唯一の有意な急性の正常組織の副作用は、腫瘍の上および周囲
の皮膚の湿性の剥離であった。この毒性を低下させる分割の実験は行わなかった
。
【０１３５】 残った90Ｙ凝集体は、腫瘍節の中心に位置し、そして有効性の低い治療剤であ
った。残った90Ｙ凝集体は、また、おそらく放射性同位体と皮膚との間のより大
きい距離に起因して、より少ない湿性の剥離を生じ、皮膚に対するより低い放射
線量を導く。
【０１３６】 この前臨床試験は、放射線標識したヒト腫瘍反応性ＩｇＭの病巣内投与は、高
い腫瘍放射活性を生じるが、静脈内投与では生じないことを実証する。病巣内に
投与された放射線標識されたＩｇＭは、腫瘍内に局在化して残り、血液内で低レ
ベルの放射活性を有し、そして引き続き、正常器官において放射活性の低い取り
こみを示した。対照的に、静脈内投与された放射線標識されたＩｇＭは、高い肝
臓取りこみおよび中度の脾臓取りこみで、血液から迅速に排除された。放射線標
識されたヒトＩｇＭの静脈内投与は、他のマウスモデルにおいてと同様の体内分
布を生じた［Ａｂｅｌｅｖｅ，Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４：２９５〜
３５０（１９７１）；Ｍａｒｋｏｅら、Ｆｒｏｎｔ Ｒａｄｉａｔ．Ｔｈｅｒ．
Ｏｎｃｏｌ．２４：２１４〜２２４（１９９０）、そしてヒトにおける有意な肝
臓取り込みを実証し得る（Ｍａｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４３：５５９３
〜５６００（１９８３））。
【０１３７】 111Ｉｎまたは90Ｙで標識された腫瘍反応性ＩｇＭの病巣内投与は、類似の高 い腫瘍取りこみおよび保持を実証した。放射活性の正常組織での取りこみは低く
、腎臓および肝臓で最高の取り込みを有した（１と３％ＩＤ／ｇとの間）。腎臓
の活性は、キレート化された軽鎖の代謝（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇら、Ｊ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｏｎｃｏｌ．９：５４８〜５６４（１９９１））かまたは放射活性の低分子
量種の尿中排泄と関連し得た。； 血液の放射活性は、すべての時点で、腫瘍反応性放射免疫結合体について０．
７％ＩＤ／ｇより小さかった；これは、骨髄毒性が線量限定的な正常組織毒性で
はないことを示唆する。線量限定的な正常組織（定義されるままである）は、お
そらく処置された腫瘍の近傍にある。この組織は、腫瘍の位置に依存して変化し
得、そしてこれには、血管系組織、神経系組織、または間質性組織が挙げられ得
る。
【０１３８】 骨の放射活性は、すべての時点において、腫瘍反応性放射免疫結合体について
０．７％ＩＤ／ｇより低かった。骨からの放射活性のクリアランスは、111Ｉｎ 標識したＩｇＭについてより速かった。これは、２４時間および４８時間で111 Ｉｎ標識されたＩｇＭについてみられたより高値の腎活性を説明し得る。骨に組
み込まれた少量の90Ｙは、90Ｙのより遅い骨クリアランスを説明し得る。低レベ
ルの骨放射活性（０．５〜０．６％のＩＤ／ｇ）が、有意な生物学的効果を有す
ることは期待外である（Ｌｅｗｉｓら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １４：１１５〜１
２９（１９９５））。
【０１３９】 腫瘍における放射免疫結合体の長い生物学的半減期（４〜６日）は、放射免疫
結合体のより大きい有効半減期、およびその放射線量が90Ｙ（２．７日）より長
い半減期を有する治療的放射性同位体の使用を通じて得られ得ることを示す。こ
のような同位元素で、腫瘍反応性ＩｇＭと的外れのＩｇＭとの間の腫瘍保持にお
いて観察された差異（１４４時間で統計学的有意になる）は、治療的重要性がよ
り大きい。
【０１４０】 90Ｙ凝集体の病巣内投与は、放射活性の高い腫瘍沈着を生じ、この放射活性は
、90Ｙ標識した腫瘍反応性ＩｇＭより長く上昇したままであり、そして腫瘍にお
いて２０日の生物学的半減期を生じた。この長い半減期は、腫瘍へのより高い放
射線量が90Ｙ凝集体と投与され得ることを示唆するが、腫瘍の半減期と全身の半
減期の比較および腫瘍のオートラジオグラフの検査は、90Ｙ標識したＩｇＭ全般
が優れた治療剤であることを予想する。
【０１４１】 90Ｙ凝集体と比較した放射免疫結合体の異なる腫瘍半減期および全身半減期は
、これらの試薬の代謝における基礎的な違いを示唆する。放射免疫結合体の腫瘍
半減期は、その全身半減期よりも長い。放射免疫結合体の代謝から産生された放
射活性フラグメントは、体から迅速に排除されるようである。これは、90Ｙ凝集
体から遊離した90Ｙが骨マトリックスへの転移キレート化により体内に保持され
るようである90Ｙ凝集体で観察されたことと対照的である。
【０１４２】 部分的な腫瘍からのオートラジオグラフは、腫瘍反応性ＩｇＭが腫瘍を通じて
拡散し、一方、90Ｙ凝集体は、注射部位に局在化して残ることを実証する。腫瘍
の画像上にひかれた横線の１画素あたりのカウントの分布の分析は、放射免疫結
合体で放射活性のより大きい分布を確認した。従って、この放射活性結合体は、 90 Ｙ凝集体よりも腫瘍内において、より均一な線量分布を提供する。腫瘍内にお
けるより均一な線量分布および代謝された放射免疫結合体の迅速な排除の組み合
わせの利点は、放射免疫結合体に治療的利点を提供する。
【０１４３】 連続γ線カメラ画像処理は、体内分布研究の結果を実証した。このイメージは
、放射活性の高い初期腫瘍沈着が、放射線標識化ＩｇＭの病巣内投与で得られ、
そして放射活性が局所に残存することを示す。さらに、この活性は、時間が経て
ばより同種になるようであった。放射活性の非常にわずかな正常組織取り込みは
、腫瘍反応性ＩｇＭかまたは無関係の放射性標識ＩｇＭのいずれかで明らかであ
った。ＲＯＩ分析により算出された腫瘍半減期は、体内分布実験において得られ
た半減期と一致する。一緒に、これらの結果は、γ線カメラでの少数群の動物の
連続画像処理が局所投与についての放射免疫結合体の初期のスクリーニングにお
ける、より動物集中的な体内分布実験に代わり得ることを示唆する。
【０１４４】 （実施例３：腹膜癌腫症の処置のための腹腔内ＩｇＭのプロトコル） 一般に腹膜癌腫症の患者は、この試験で言及された４つの原発性の１つを有す
る：卵巣、結腸、膵臓、乳房。現在、利用可能な処置は、不十分であり、そして
生存時間の中央値は、およそ３ケ月である。
【０１４５】 （要約） プロトコル： （患者の資格：） １．組織学的にまたは細胞学的に確認した、卵巣外腹膜併発を伴う上皮性卵巣癌
腫（−腹膜腔における結腸癌、乳癌、または膵臓癌）。 ２．測定可能の疾患。 ３．小腸の閉塞がない。 ４．ツーブロート０，１，２。年齢１８歳以上。妊娠試験陰性。 ５．インフォームドコンセントに署名。
【０１４６】 （処置計画：） １．一時的な腹腔内カテーテルを設置する。 ２．Ｘ線撮影の造影により自由流の確認をする。 ３．１〜１．５ ＬＤ５−１／４ＮＳを滴下する。 ４．イムノペルオキシダーゼ染色および放射薬物動態的ベースライン研究のため
に腹水サンプル、血液サンプル、尿サンプルを入手する。 ５．標識したＡＣ６Ｃ３−Ｈ８ ＩＰで１ｍＣｉ111を投与する。 ６．２，２０，４０，７２および１５０時間で腹水、血液、尿をサンプリング。 ７．２，２０，４０，７２および１５０時間で全身のγ線スキャンニング。 ８．腹部の４１時間でのＳＰＥＣＴ。 ９．１ ５９ ３の工程の反復後、90Ｙ標識したＡＣ６Ｃ３−Ｈ８ ＩＰの５、
１０または３×５ｍＣｉを投与する。
【０１４７】 （患者の評価：） １．完全な歴史と身体的評価。 ２．異なる血小板、ＰＴ／ＰＴＴでのＣＢＣ。 ３．ＳＧＯＴ、ＳＧＰＴ、アルカリホスファターゼおよびビリルビンを含む肝機
能。 ４．ＢＵＮ、クレアチニンおよび尿検査を含む腎機能試験。 ５．腹部および骨盤のＣＴ±造影、胸部Ｘ線および腫瘍の考証に必要な任意の他
の試験。 ６．免疫学的研究のための５ｃｃの血清。 ７．すべてのカルテおよび病理所見の再評価。診断を確定するための利用可能な
試料の病理上の再評価。
【０１４８】 （統計学的考察：） この研究の主な目的は、安全性を樹立し、そして潜在的な有用性の情報を得る
ことである。この研究から得られるデータは、より多くの患者での将来の試験（
ｔｒｉａｌｓ）の設計において用いられ得る。この試験的なトライアルは、腫瘍
の局在が最初の６名の患者でみられない場合、または患者の１／３以上でグレー
ドＩＩＩまたはより高い毒性が生じる場合、中止される。最初の６名の患者は、
５ｍＣｉの90Ｙを受け、次の６名の患者は、１０ｍＣｉの90Ｙを受け、最後の６
名の患者は、１週間の間隔で５ｍＣｉの90Ｙを３回受ける。
【０１４９】 （試薬：） （抗体） ＡＣ６Ｃ３−Ｈ８は、上皮性卵巣癌腫（ＥＯＣ）の患者由来のリンパ節のリン
パ球をＳＰＡＺ４異種ハイブリドーマ株の細胞と融合することにより得られた新
しいヒト腫瘍細胞表面反応性モノクローナル抗体（ＨＭＡＢ）である（Ｆｒｅｅ
ｄｍａｎら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １０：２１〜３３（１９９１））。この抗体
は、ＩｇＭ２であり、そして蛍光活性化セルソーター分析（ＦＡＣＳ）により検
出され得る卵巣癌腫細胞株の細胞表面に発現された決定基を認識する（Ｑｕａｄ
ｒｉら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ、３４：９３８〜９４５（１９９３））。このＡ
Ｃ６Ｃ３は、ナイロンウール精製された正常ドナー由来の非接着性の末梢血リン
パ球または赤血球を染色しない。ＡＣ６Ｃ３は、間接的なイムノペルオキシダー
ゼを用いて、卵巣癌腫の非透過性の組織部分および卵巣腫瘍異種移植片を染色す
る。脳、肝臓、心臓、および腎臓を含むほとんどの正常組織は、ＡＣ６Ｃ３に対
して陰性かまたは弱い応答を示す。この抗体はまた、乳癌、および結腸癌を含む
他の腺癌と反応し、従って「汎−応答性（ｐａｎ−ｒｅａｃｔｉｖｅ）」と記載
され得る。この抗体は、補体依存性の細胞傷害性を媒介し、そして培養された卵
巣癌細胞ＳＫＯＶ3で行われたウエスタンブロットの免疫沈降実験により３２Ｋ ｄのバンドを沈降する。ＡＣ６Ｃ３についての結合定数は、飽和結合試験（Ｑｕ
ａｄｒｉら、１９９３）により決定された２．３×１０10Ｍ-1である。ＡＣ６Ｃ
３は、腹膜癌腫症の患者での臨床試験において特有の利点を有し得る：（ｉ）ヒ
トｍＡｂは、抗ヒト抗体が産生されないと仮定して、反復用量スケジュールで用
いられ得る。（ｉｉ）ＩｇＧモノクローナル抗体は、臨床試験のために好まれ得
るが、ＩｇＭもまた、そのサイズの大きさおよび残留時間の延長の可能性によっ
て、腔内の処置のために魅力的であり得る。腹膜腔におけるモノクローナル抗体
の残留時間の延長は、腫瘍細胞のモノクローナル抗体の濃度をより高値に促進し
得る。ＡＣ６Ｃ３−Ｈ８は、卵巣腫瘍のインビボ診断および治療のための潜在的
な役割を有する新規な存在である。
【０１５０】 （培養培地からのヒトモノクローナルＩｇＭ抗体（ＨｕＭｏＡｂ）の精製：
） 培地の上清を、冷室で４℃で、ＰＭ３０膜を装着したＡｍｉｃｏｎ Ｓｔｉｒ
ｒｒｅｄ Ｃｅｌｌ ユニットを用いることにより濃縮した。ＩｇＭを含有する
濃縮液をＳｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−３００カラム（２．５×５０ｃｍ）で精製し
、純粋なＩｇＭ画分を単離した。このカラムを１分あたり１．５ｍｌの流速で、
０．０５ＭのＰＢＳ ｐＨ７．４で溶出した。ＩｇＭの純度を、直列につないだ
２つのゲル濾過カラム（ＧＦ２５０＆ＧＦ４５０；内径２５×０．９４ｃｍ）を
用いて分子サイズ排除ＨＰＬＣ、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ技術により分析した。
タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計により、２８０ｎｍでの吸光度で測定した。
ＩｇＭタンパク質は、０．２μｍのＡｃｒｏｄｉｓｃを通して滅菌濾過し、そし
て滅菌チューブに４℃でＰＢＳ中の４．０ｍｇ／ｍｌのアリコートに保管した。
【０１５１】 （抗体の結合） ヒトＩｇＭ ＡＣ６Ｃ３−Ｈ８を精製し、そしてＩｇＭの１分子あたり平均２
つのＩＴＣＢ−ＤＴＰＡキレート剤と結合した（Ｌｅｉｃｈｎｅｒら、Ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ２：１２５〜１４４（１９８９））。精製した免疫結合
体は、インビトロにおける卵巣癌腫細胞株（ＳＫＯＶ3）に対して活性の損失は 示さなかった。111Ｉｎ標識した免疫結合体を、ヒト卵巣癌腫（ＳＫＯＶ3）異種
移植片を保有するヌードマウスに静脈注射した。ヒトＩｇＭ結合体は、１０時間
未満の血中Ｔ１／２（半減期）で循環から迅速に排除された。活性のほとんどは
、ＩｇＭ分子の大きい分子サイズのために肝臓中に残存した。腫瘍標的化は４８
時間でピークであった。腫瘍 対 筋肉の比、および腫瘍 対 血液の比は６日
でそれぞれ、４：１および２：１であった。この免疫シンチグラフィー研究は、
放射活性がＩｇＭ投与後２日で腫瘍塊にわたってピークとなったことを実証した
。生体分布研究における腫瘍取り込みは、４８時間で注射線量／腫瘍のグラムの
４〜６％を示した（ｎ＝３）。より高い腫瘍放射活性（注射線量／腫瘍のｇの６
０％）を用いるヌードマウスへのＡＣ６Ｃ３−Ｈ８の直接の腹腔内投与（90Ｙで
標識したＩｇＭでの治療）は、広範な腹膜の癌腫症を有するマウスの生存を３倍
延長した。マウスにおいて、分割した治療（１週あたり１回）は、より効果的で
あり、そして単独画分の治療よりも毒性が少ない。
【０１５２】 （免疫結合体の調製：） キレート剤であるイソチオシアナトベンジル−ＤＴＰＡ誘導体（ＩＴＣＢ−Ｄ
ＴＰＡ）は、以前に報告された技術により合成される。ＩＴＣＢ−ＤＴＰＡは、
抗体のリジン残基のアミノ基と反応し、チオ尿素結合を通じて結合した。ｐＨ７
．６の０．０５ＭのＨｅｐｅｓ緩衝液中の抗体（９．０ｍｇ、１×１０-5ｍｍｏ
ｌ）を、１：１０のモル比で、新鮮に調整した１００μｌのＩＴＣＢ−ＤＴＰＡ
（６０μｇ、１×１０-4ｍｍｏｌ）の水溶液と反応させた。反応混合物のｐＨを
、０．２ｍのＮａＨＣＯ3溶液により７．６に調節し、そして混合物を室温で２ 時間インキュベートした。抗体分子１つについて、２つのＤＴＰＡリガンドを結
合した。放射性標識の前に、モノクローナル抗体−チオ尿素−ＤＴＰＡ結合体を
、ＰＢＳに対する透析により非結合体化ＤＴＰＡから精製した。
【０１５３】 （免疫結合体の放射性標識化：） ０．０５ＮのＨＣｌ中の純粋な111ＩｎＣｌ3（８．０ｍＣｉ）のアリコート（
１００μｌ）を１００ｌの０．５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．３）および１００μｌ
の０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ５．５）で平衡化した。２００μｌのＰＢＳ
中の免疫結合体（２．０ｍｇ）溶液を、緩衝化されたインジウムに添加し、よく
混合し、そして３０分間、室温でインキュベートした。標識された免疫結合体は
、溶出液として０．０５ＭのＰＢＳを用いて、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０ゲルカ
ラム（１．５×２０ｃｍ）クロマトグラフィーにより、低分子量の化合物から分
離する。標識した免疫結合物を収集し、そして線量キャリブレーターでアッセイ
し、そして標識化の有効性をＩＴＬＣによって決定する。抗体への結合の放射活
性パーセンテージは、ＴＬＣおよびＨＰＬＣ分析により決定する。90Ｙ Ｃｌ3 標識化のための手順は、わずかに高いｐＨを有する異なる緩衝液およびＧ−５０
のカラムの代わりにＧ１００カラムを用いることを除いて同様である。
【０１５４】 （クオリティーコントロール分析：） （即時薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）） 免疫結合体の放射性標識化産物は、展開溶媒として生理食塩水を用いてＩＴＬ
Ｃにより決定する。放射免疫結合体は起点に残り、一方、標識したＤＴＰＡは、
溶媒の前線で動く。ＩＴＬＣの条片を３つの部分に切断し、そしてガンマカウン
ターでカウントする。
【０１５５】 （薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）） シリカゲルＴＬＣの条片（１×１２）を、放射性標識した結合体で目印をつけ
、そして移動相としてメタノール：１０％ＮＨ4ＯＡｃ（１：１）を用いること により展開する。このＴＬＣ分析において、放射性標識された抗体は、Ｒf＝０ で出現し、そしてインジウム標識されたＤＴＰＡ／クエン酸は、Ｒf＝１．０で 出現した。ＴＬＣの条片は、放射クロマトグラフィースキャナーでモニターする
。抗体画分に結合した活性のパーセントは、γ線カウンターでＴＬＣ条片をカウ
ントすることにより決定する。
【０１５６】 （ＨＰＬＣ 分析） Ｂｉｏ−Ｓｉｌ ＳＥＣ２５０カラム（３００×７．８ｍｍ 内径）を用いる
サイズ排除ＨＰＬＣ分析を放射免疫結合体の分子量および純度を決定するために
用いる。
【０１５７】 このカラムは、１ｍｌ／分の流速で、緩衝液（５０ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4、５０
ｍＭのＮａ2ＨＰＯ4、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．９を含有）で溶出した。
【０１５８】 （無菌性およびＬＡＬアッセイ） ＰＢＳ溶液中の放射免疫結合体を、０．２μのＡｃｒｏｄｉｓｃフィルターを
通して濾過し、リムルス（カブトガニ）アメーバ様細胞分解産物試験（ＬＡＬ）
による発熱物質の欠如について試験する。抗体バッチの少量のアリコート（０．
２５ｍｌ）を０．９％の塩化ナトリウムで５ｍｌの最終用量に希釈し、そしてＦ
ＤＡのＣｏｄｅ ｏｆ Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ＣＦＲ ２１
、Ｐａｒｔ２１０に概説されたプロトコルを用いて無菌性を試験する。２ｍｌの
アリコートを液体チオグリコール酸培地および大豆カゼイン消化物に接種する。
このサンプルをそれぞれ１４日間、３０〜３５℃でインキュベートする。このア
リコートを細菌の増殖について視覚的にチエックする。発熱物質試験は、放射性
標識抗体の投与前に行い、一方、無菌性試験は、全バッチについてのみ行い、個
々の患者の投与については行わない。
【０１５９】 （薬物組成） ５．０ｍｌのＰＢＳ溶液中のインジウム−１１１で標識したヒトモノクローナ
ルＩｇＭ−ＤＴＰＡ結合体。この薬物は、以下の成分を含む： ヒトモノクローナルＩｇＭ−ＤＴＰＡ ２．０ｍｇ キレート化インジウム−１１１ ５．０ｍＣｉ ０．０５Ｍ リン酸緩衝生理食塩水 ５．０ｍｌ ヒト血清アルブミン（０．１％） ５．０ｍｇ。
【０１６０】 （患者） （患者の適性） 組織学的にまたは細胞学的に確認した、上皮性卵巣癌腫、結腸癌、乳癌、または
膵臓癌。 小腸の完全閉塞または亜全閉塞を有する患者は適合しない。 臨床の書類、以前の手術、コンピュータートモグラフィー（ＣＴ）または磁気共
鳴画像（ＭＲＩ）による腹膜の癌腫症の考証。 カルノフスキー６０以上、ＥＣＯＧ０，１，２． 年齢１８歳以上。 妊娠の恐れがある女性で妊娠試験陰性。 未処置の活性な感染がない。 １０００／ｍｍ3を超える絶対顆粒球および５０，０００／ｍｍ3を超える血小板
。
【０１６１】 （試験前の評価） 兆候および症状ならびに能力状態の完全な歴史および身体的考証（身長および
体重を含む）を試験開始の前週に行う（添付Ｂ）。
【０１６２】 （実験室での研究および放射線学的な研究） 異なる血小板、ＰＴ／ＰＴＴでのＣＢＣ。 ＳＧＰＴ、アルカリホスファターゼおよびビリルビンを含む肝機能。 ＢＵＮ、クレアチニンおよび尿検査を含む腎機能試験。 腹部および骨盤のＣＴ±造影、胸部Ｘ線および腫瘍の考証に必要な任意の他の試
験。 将来のＦ／Ｕ研究のための基準としての５ｃｃの血清。 すべてのカルテおよび病理所見の再評価。診断を確定するための研究における利
用可能な試料の病理上の再評価。
【０１６３】 （研究の間の評価） 薬物動態、腫瘍標的化および臨床的または放射線学的所見についての取り込み
の関係を、以下に記載されるように行う。
【０１６４】 血液、腹水、尿をサンプリングし、全身γ線カメラは２時間の時点でスキャン
する。患者のサンプルを、放射線治療における放射線安全対策に従って得、そし
てサンプル化した。スキャンを、核医学によって行う。
【０１６５】 ６．３．１に記載された研究を、２０，４０，７２および１５０時間目に繰り
返す。スキャンは腹膜に対して評価し、そして血液の半減期は、目的の領域（Ｒ
ＯＩ）分析によって評価する。組織分布を、スキャンによって同様に評価する。
放射免疫結合体分布における不均質性を、ＳＰＥＣＴで（４０時間で）で評価す
る。ＣＴにおいて観察された腫瘍沈着物を用いて比較をする。必要とされるソフ
トウェアが、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒで操作可能とな
るとすぐに、腫瘍の線量測定を、Ｎｅｂｒａｓｋａ大学のプロトコル（Ｄｒｓ．
Ｌｅｉｃｈｎｅｒ，Ｈａｗｋｉｎｓ，Ａｋａｂａｎｉ）（Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｉ
ＥＥＥ Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．Ｉｍａｇ．７：１３５−１４８（１９８８））に
従って行なう。
【０１６６】 直近の放射線学の所見（４週間以内）は、スキャニングの結果と相関している
。
【０１６７】 （処置：） 参加する前に、プロトコルの議論、そしてインフォームドコンセントにサイン
した。
【０１６８】 一時的な腹腔内カテーテルを、経皮的に挿入する。
【０１６９】 約５０ｃｃの放射線造影の腹腔内（ＩＰ）注射することによって自由流（ｆｒ
ｅｅ ｆｌｏｗ）を検証する。透視検査の下、直交Ｘ線を文書化する。
【０１７０】 腹腔内（ＩＰ）に３７℃に温められた１−１．５Ｌ Ｄ５−１／４ＮＳを注入
する。
【０１７１】 １００ｃｃの液体を、ＨｕＭｏＡｂおよび無関係のＨｕＭｏＡｂを結合したビ
オチン化ペルオキシダーゼでの腫瘍細胞の免疫ペルオキシダーゼ染色から取り除
く。そして研究のためのベースラインをｔ．６に列挙した。
【０１７２】 約１０ｃｃ中１ｍのＣｉ111Ｉｎ標識化ＡＣ６Ｃ３−Ｈ８ ＩＰを投与する。 この抗体は、内科医の監督の下投与される。
【０１７３】 バイタルサインは、１５分おきに２時間。褥瘡の患者は、褥瘡に対して、左臥
位および右臥位、腹臥位および仰臥位をそれぞれ２０分間する。
【０１７４】 ５、１０または３×５ ｍＣｉの90Ｙ標識化ＡＣ６Ｃ３−Ｈ８を、111Ｉｎ標 識化産物について記載されるような以下の同一の方法で投与する。111Ｉｎ標識 化ＩｇＭが腹腔内に限局（＞投与線量の７５％）されており、かつ標的の腫瘍が
観察される場合のみ、90Ｙ標識化ＩｇＭを投与する。
【０１７５】 （ＭｏＡｂの用量：） 開始用量は、０．５ｍｇである。イメージが観察されない、または乏しいイメ
ージが観察される場合、初めの６人の患者の次の用量レベルは、５ｍｇとなる。
【０１７６】 （毒性の評価および管理：） いずれかのグループにおいて最初の６人の患者の２人以上が、３度または４度
の毒性に進展する場合、このプロトコルは中止される。ＣＢＣおよびＳＭＡＣは
、各投与の後に初めの８週間は毎週、そしてその後は一月に一度繰り返される。
スキャンは２ヶ月の間隔で繰り返される。
【０１７７】 （研究の指標：） （薬物動態：） 区画および非区画の薬物動態の技術が、濃度曲線下時間面積、ピーク濃度、ピ
ーク濃度到達時間、分布容積の平均の残留時間、クリアランス、腹膜内の標識化
抗体の濃度を決定するために用いられる。
【０１７８】 （免疫標的化：） 放射免疫結合体の取り込みおよび排出は、（１）腹腔；（２）腫瘍小結節；（
３）血液；（４）肝臓および脾臓；（５）腎臓；（６）尿について研究される。
インビボにおける放射活性の減退は、γ線カメラの平面図によって定量され得る
。腫瘍容積ならびに腫瘍およびより少ない容量の正常組織の放射活性含有量は、
ＳＰＥＣＴを必要とする。理想的な放射免疫結合体は、腫瘍を標的とし、腹腔内
において、血液中にわずかに溢れ出すかまたは溢れ出さないで長い残留時間を有
する。正常組織の取り込みは乏しいはずである。得られるべきデータポイントは
、列挙された区画において経時的に放射免疫結合体の相対的体内分布を計算する
ことを考慮に入れる。
【０１７９】 （腫瘍線量測定） 腫瘍容量に累積する放射活性を、曲線下面積の技術によって算出する。適切な
コンピュータープログラムがレトロスペクティブにインストールされ、そして検
証されている場合、インジウム放射活性からイットリウムへの変換／外挿の線量
測定を、１キログラムあたり５、１０、または３×５ｍＣｉのイットリウム標識
化放射免疫結合体の計画的投与のために行う。
【０１８０】 （本研究からの除外に関する判定基準：） 服薬不履行または研究の経過観察の完了が不能である。ＩＩＩ度の毒性または
腫瘍の進行。
【０１８１】 （実施例４：ホジキン病、カポージ肉腫、ならびに頭部および頸部の癌の再
発または持続についての病巣内の放射性標識化抗フェリチンＩｇＭに関するプロ
トコル） ホジキン病（ＨＤ）について約７０００の新しい症例が、毎年米国で診断され
る。化学療法、放射線、またはこれら２つを組み合わせての初期の処置は、患者
の大部分において応答を誘導することに成功する。それにもかかわらず、約３０
〜４０％の患者が、再発するかまたはに初期の寛解を達成することに失敗する。
大量化学療法を用いるセカンドラインの処置は、小集団の患者において治効があ
る。高容量化学療法を用いるセカンドまたはサードラインの処置に次ぐ自己骨髄
移植は、特定の患者に治効があり得る。第二のまたは「より高い」ラインの処置
に失敗した患者および骨髄移植に適格ではない患者は、めったに治癒されず、そ
してフェーズＩ研究の候補者である。90Ｙ標識化ポリクローナル抗フェリチンを
用いるフェーズＩ−ＩＩ研究が完了した。多量に前処置をした予後の好ましくな
いグループの患者において約６５％の応答率を有する、再発したホジキン病に対
する活性シグナル薬剤であることを見出した。患者の一部において、単一の大き
な塊（例えば、縦隔）は、広範な前述の化学／放射線治療の後に残留性の問題が
ある。
【０１８２】 カポージ肉腫（ＫＳ）は、中真皮（ｍｉｄｄｅｒｍｉｓ）から生じる血管の腫
瘍である。それは、紡錘細胞の織り合わされたバンド、ならびに網状およびコラ
ーゲン線維に埋め込まれた不規則な細隙様の血管のチャネル、単核細胞の浸潤、
ならびに形質細胞からなる。それは、初めにオーストリアの皮膚科医Ｋａｐｏｓ
ｉによって記述された。カポージ肉腫（ＫＳ）は、免疫不全の患者（例えば、Ｈ
ＩＶ陽性の患者または同種移植片受容者）で頻繁に生じる。皮膚、口腔粘膜、リ
ンパ節および内臓器官（例えば、胃腸管の粘膜下組織、肺、肝臓、および腎臓）
が含まれ得る。カポージ肉腫に対する全身治療は、先在する免疫不全または骨髄
抑制のために耐性に乏しい。ＫＳ腫瘍は、放射線感受性であると考えられ、そし
て寛解は、１６Ｇｙ程度の低い容量で得られ得、外部ビーム放射線（ｅｘｔｅｒ
ｎａｌ ｂｅａｍ ｒａｄｉａｔｉｏｎ）は、（特に粘液性を誘導する強い放射
線に関して）ＫＳ患者に有害であり得る。全ての試験されたＫＳ病巣は、フェリ
チンを含む（Ｎ＝４０）。
【０１８３】 タバコおよびアルコールの習慣の組み合わせは最も確証されており、そして頭
部および頸部における粘膜悪性腫瘍の最も重大な発癌物質である。患者の大多数
は、扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣａ）を有し、そして広い（＞６ｃｍ）原発性および
／または広いリンパ節転移を表す。根治手術および高線量外部ビーム放射線の組
み合わせは、一部の患者においては疾患を制御し得る。しかし、疾患は、少なく
とも３０％の患者において再発し、ついでこの患者はフェーズＩ化学療法の候補
者となる。離れた転移は、このような患者においては比較的珍しく、そして病巣
内のＩｇＭの使用は、前述の高線量放射線後のこのような患者に対して新しい処
置の選択肢を提供し得る。頭部および頸部の扁平上皮癌の５０％までが、有意な
量のフェリチンを含むと思われる。
【０１８４】 （要約） （プロトコル：） （患者：） ホジキン病、カポージ肉腫、ならびに頭部および頸部の癌の再発または持続の組
織学的証明。 患者は、＞１０歳の年齢でなければならない。 患者は、測定可能な疾患にかかっていなければならない。
【０１８５】 （処置計画：） ０．３ｍＣｉのインジウム−１１１標識化抗フェリチンを、腫瘍塊に沈着する
。全身γ線カメラ画像診断を、投与後、１、２０、４０、１２０、および１６５
時間目に行う。ＳＰＥＣＴスキャンを、投与後の４０および１６５時間目に腫瘍
を含む領域に行う。血液および尿サンプルを、全身γ線カメラ画像診断と同時点
で得る。全ての尿を、投与後の初めの４８時間目について収集する。
【０１８６】 患者に、腫瘍の１グラムあたり０．１ｍＣｉのイットリウム９０標識化抗アン
チフェリン（（病巣内の）３つの異なる部位の腫瘍に直接的に３つの等容量（０
．５ｃｃ）に別けられる）を与える。インジウム−１１１投与後の研究が、沈着
した放射免疫結合体の９０％以上が、腫瘍および排出リンパ節に局在化して残存
することを示す場合のみ、このイットリウム−９０標識化抗フェリチンを、患者
に投与する。血液および尿サンプルを、イットリウム−９０の投与後、１、２０
、４０、１２０および１６５時間目に収集する。初めの４８時間の尿もまた収集
する。制動放射スキャンを、同じ時点で行う。
【０１８７】 手順を、一週間の間隔で２回繰り返し、そして患者は、２週間わたる３回の処
置において腫瘍の１グラムあたり総放射能０．３ｍＣｉのイットリウム−９０を
受ける。
【０１８８】 １つの組織学的腫瘍型あたり５人の患者が、急性の副作用を伴わずにこの手順
に耐性を示した場合、イットリウム−９０活性を、腫瘍の１グラムあたり０．２
ｍＣｉに漸増する。さらに５人の患者が、腫瘍の１グラムあたり０．２ｍＣｉの
レベルで急性の副作用を示さない場合、さらなる５人の患者を、腫瘍の１グラム
あたり０．４ｍＣｉのレベルで行う。カポージ肉腫を患う患者は、腫瘍の１グラ
ムあたり０．２ｍＣｉのイットリウム−９０より多くは受けない。
【０１８９】 （統計学的考察：） ５人の患者のうち２人が、任意のイットリウム−９０レベルで３−４度の急性
の副作用に進展する場合、この研究は中止される。研究の下、３つの腫瘍組織学
の１つまたは２つのみについてこれが起こる場合、この研究は影響のなかった腫
瘍型で続けられる。
【０１９０】 （試薬：） 放射免疫結合体は、４つの連続したフェーズで調製される：抗フェリチン抗体
の調製；免疫結合体の合成；免疫結合体の放射性標識化；臨床投与の前の放射免
疫結合体の品質管理。
【０１９１】 （モノクローナル抗体の調製：） ホジキン病を患う患者の脾臓から単離されたヒトフェリチンを、モノクローナ
ル抗体を産生するためにマウスにアジュバントと共に繰り返し注射した。融合後
、クローンをスクリーニングした。ＭＤＡ１０１は、高親和性抗フェリチンを生
成した。このクローンを、ホローファイバー培養に適応し、そしてＩｇＭのバッ
チを、産生しそして精製した。抗体を、患者一人ずつのバイアルに分注し、そし
て免疫反応性の（フェリチンに対する）活性、無菌性および発熱性についてチェ
ックした。
【０１９２】 （免疫結合体の合成：） イソチオシアネートベンジル−ＤＴＰＡキレートを、上述のように合成する。
【０１９３】 （免疫結合体の放射性標識化：） キレート結合化抗体を、使用まで４℃で保存する。放射性標識化を、キャリア
フリーに精製され、新しく調製された、酢酸およびクエン酸緩衝液の混合物にｐ
Ｈ５．５で溶解される[1]ＩｎＣｌ3に室温で、免疫結合体の（２ｍｇ／ｍｌ）ア
リコートを添加することによって達成する。[1]Ｉｎのキレート化は、３０分以 内に生じる。このキレートを、１００倍過剰よりも多い遊離のＤＴＰＡで試す。
インジウム標識化免疫結合体を、０．０５Ｍリン酸緩衝化生理食塩水を用いて、
Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０ゲルカラムクロマトグラフィー（１．５×２０ｃｍ）
で精製する。90Ｙ放射性標識化を、[1]Ｉｎキレートと同様に室温で酢酸緩衝液 （２．０Ｍ）、ｐＨ６．０を用いることによって達成する。90Ｙ標識化免疫結合
体は、０．０５Ｍ ＰＢＳで溶出するＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１００カラム（１
．５×３０ｃｍ）クロマトグラフィーで精製する。
【０１９４】 （放射免疫結合体の品質管理分析：） 放射免疫結合体を、０．２２ミクロン滅菌フィルターを通してろ過し、そして
Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ 溶解物（ＬＡＬ）アッセイによって発熱
物質の欠如について試験した。
【０１９５】 精製した抗体を、１：１の比率（ＴＬＣシリカ）か、または０．９％生理食塩
水（ＩＴＬＣシリカ）で１０％酢酸アンモニウムおよびメタノールを含む溶媒混
合液を用いた薄層クロマトグラフィーによって非結合体化[1]Ｉｎ−ＤＴＰＡの 存在について試験する。これらの溶媒系は、起点に標識化抗体、そしてＲf１． ０に非結合化[1]Ｉｎ−ＤＴＰＡを残す。ＴＬＣおよびＩＴＬＣを、抗体の投与 の前に完了する。
【０１９６】 放射性標識化免疫結合体をまた、サイズ排除ＨＰＬＣによって分析し、任意の
コロイド形成を決定し、放射化学的純度について試験する。放射性標識化抗体の
結合性を、投与の前に、ＨＰＬＣを用いて試験する。分析を、１５０ｍＭ塩化ナ
トリウムを含む１００ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８で平衡化されたサイズ
排除ろ過Ｂｉｏ−ｓｉｌｅｃｔ ＳＥＣ ２５０−５（０．７８×３０ｃｍ）カ
ラムを用いて行う。抗体サンプル（２５μｌ）をアプライし、そしてカラムを流
速１．０ｍｌ／分で実行する。タンパク質を、２８０ｎｍでの吸収によって検出
する；画分を、１．０分の間隔で収集し、そして放射活性をγシンチレーション
カウンターで測定する。
【０１９７】 （患者：） ホジキン病、カポージ肉腫、ならびに頭部および頸部の癌の組織学的証明。患
者は測定可能な疾患を有し、そして以前に強力な治療的処置の投薬計画、化学療
法、手術、放射線治療、または組み合わせに失敗していなければならない。強力
な治療薬のプロトコルは、先例をこのプロトコルに引き継ぐ。
【０１９８】 患者は、少なくとも１０歳で、余命３ヶ月以上、そして妊娠していない。患者
に、研究の間、効果的な受胎調節を実行することを忠告する。
【０１９９】 ツーブロードパフォーマンスステータス（Ｚｕｂｒｏｄ ｐｅｒｆｏｒｍａｎ
ｃｅ ｓｔａｔｕｓ）は０、１、または２。
【０２００】 患者は、以下に定義されるような適当な器官機能を有していなければならない
：顆粒球カウント≧１５００／ｍｍ3；血小板カウント≧１００，０００／ｍｍ3 ；ビリルビン≦２．０、ＨＤまたはＫＳが原因とされる場合、より高い値が許容
可能である；クレアチニン≦２．０。これがそれらの悪性腫瘍（原発性または転
移性）に起因する場合は、異常な血清化学または器官機能を有する患者は、やは
り研究に適格であり得る。
【０２０１】 （処置：） （インジウム−１１１標識化抗フェリチンＩｇＭ：） 局所麻酔下、３つの異なる針（２３Ｇ）を、腫瘍塊の３つの異なる部位に配置
する。針の先端部の位置を、２つの直交Ｘ線フィルム、リアルタイム超音波診断
、またはＣＴで確認する。確認方法の選択は、腫瘍の解剖学的な位置に依存する
。０．１ｍＣｉのインジウム−１１１で標識化した０．１ｍｇの抗フェリチンＩ
ｇＭを含む０．５ｃｃの容量を、注射部位あたり利用する。全身スキャンを、投
与後の１、２０、４０、１２０、および１６５時間目にγ線カメラによって得る
。中エネルギーコリメーター（ｍｅｄｉｕｍ ｅｎｅｒｇｙ ｃｏｌｌｉｍａｔ
ｏｒ）を、インジウム−１１１（１７３，２４７ＫｅＶ）のピークを中心に収集
することに利用する。腫瘍を有する範囲のＳＰＥＣＴスキャンを、４０時間およ
び１６５時間目に行う。血液および尿サンプルを、１、２０、４０、１２０、お
よび１６５時間目に得、そして放射活性レベルについてチェックする。投与後の
初めのおよび２度目の２４時間、全ての尿を、放射活性を試験するために収集す
る。初めのおよび２度目の２４時間の尿における注射された線量の割合を定量す
る。１時間に腫瘍に存在する放射線活性の量を定量する。腫瘍における放射免疫
結合体の効果的半減期および生物学的半減期を定量し、次いで血液の放射活性の
排出を定量する：単相性、二相性Ｔα、Ｔβおよびα／β。９０％を超える沈着
化線量が、５０時間を超える生物学的半減期で腫瘍に保持される場合、患者に、
イットリウム−９０標識化抗フェリチンの病巣内投与に取りかかる。
【０２０２】 （イットリウム−９０標識化抗フェリチンＩｇＭ：） 腫瘍塊の容量を、腫瘍を取り囲んでいる全ての横断ＣＴ切片の累計によって定
量する。投与の活性は、腫瘍の１グラムあたり０．１ｍＣｉである（腫瘍の密度
を１と仮定する）。投与を、５．１に記載されるように行う。同様の研究を、投
与後に、低エネルギーコリメーターおよび１４７ＫｅＶより低いピークのカウン
トの使用を例外とし、以下の５．１で定められたように行う。得られた結果を、
５．１の結果と比較し、インジウム−１１１標識化ＩｇＭが、イットリウム−９
０標識化ＩｇＭと同様の体内分布および薬物動態を有することを可能な限り十分
に検証する。
【０２０３】 腫瘍が依然として検出可能な場合、イットリウムの投与を、１週間の間隔で２
回繰り返す。初めの５人の患者が、急性の副作用を示さない場合、腫瘍の全ての
組織学的型について、活性の漸増を続ける。新しい活性は、１投与につき、腫瘍
の１グラムあたり０．２ｍＣｉのイットリウム−９０標識化抗フェリチン×３で
ある。二回目のレベル（０．２ｍＣｉ×３）が、５人の患者に急性の副作用を引
き起こさない場合、ホジキン病、ならびに頭部および頸部の癌の患者についての
み、３倍高い活性（腫瘍の１グラムあたり０．４ｍＣｉのイットリウム−９０標
識化抗フェリチン×３）を利用する。１腫瘍あたりの放射線の線量は、０．１、
０．２および０．４ｍＣｉの活性レベルに対して、それぞれ３０、６０および１
２０Ｇｙであると予想される。
【０２０４】 （再処置：） 患者の応答を得るか、または応答の完了の後に再発する場合、患者を、同じか
またはより高い活性レベルで再処置し得る。急性のまたは遅発性の副作用を、初
めのサイクルの後にレベル３以上の強度で起こした場合、患者を再処置するので
はなく、研究からはずす。
【０２０５】 （研究中の評価：） （急性の副作用（ｅａｒｌｙ ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔ）：） 低用量（２．５ｍｇ）の抗フェリチン放射免疫結合体に対するアレルギーおよ
びアナフィラキシー反応は、過去において観察されていない。患者のバイタルサ
インを、放射免疫結合体の注射後１５分毎に６０分間チェックする。抗−抗体形
成を、静脈中の（Ｉ．Ｖ．）抗フェリチン後にホジキン病を患う８０人を超える
の患者の過去の研究においてのみ、一人の患者において観察している11。抗−抗
体（ＨＡＭＡ）は、ＫＳならびに頭部および頸部の癌を患う患者において予想さ
れる。ＨＡＭＡは、グリア芽細胞腫多形（ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ）を患う患者に
おいて注目され、そして処置の新しいサイクルと干渉しなかった。ＨＡＭＡを、
抗フェリチンＩｇＭの投与の２ヶ月後および新しいサイクルの前に定量する。
【０２０６】 （遅発性の副作用：） 血清病または免疫結合体疾患は、以前に研究したホジキン病患者（ｎ＞８０）
において観察されていない。インジウム標識化免疫結合体から正常な組織または
ホジキン病の組織に受けた放射線量は、診断用のＸ線／核医学の範囲内（２ｒａ
ｄより低い）であり、そして生物学的な影響を引き起こさない。イットリウム標
識化免疫結合体は、殺腫瘍性効果および潜在的にいくつかの急性または遅発性の
副作用を引き起こすことが予想される。副作用の評価を、以下の第８．０節−毒
性の評価に記載する。
【０２０７】 （腫瘍応答：） 応答を、物理的検査、ＣＴスキャン、ガリウム−６７スキャンおよび／または
インジウム−１１１抗フェリチンスキャンを繰り返すことによって評価する。完
全な応答（ＣＲ）、部分的応答（ＰＲ）、安定な疾患（ＳＤ）、および進行性の
疾患（ＰＤ）を、指標として用い、そして全ての既に公知の疾患（ＣＲ）の完全
な消失、新しい病巣の出現を伴わない古い腫瘍部位における腫瘍の直交直径の値
の５０％以上の減少（ＰＲ）、腫瘍の直交直径の値の５０％未満の減少または２
５％未満の増加（ＳＤ）、腫瘍の直交直径の値の２５％より大きい増加（ＰＤ）
、として定義する。
【０２０８】 （毒性の評価：） 全ての毒性の程度は、サイクルを再開する前は１または０であるはずである。
任意の毒性の指標について３度または４度の毒性は、特定の患者に対するこのプ
ロトコルのさらなる処置を妨げ、そして第１１．０節に示したように他の患者の
処置に影響する。毒性の程度を、一般的な毒性を類別する判定基準に従って定め
る。処置サイクルの完了後、患者を、月に一度二ヶ月間の追跡調査で再評価する
。その後の追跡調査は、二ヶ月ごとに二回、次いで３ヶ月ごとに２回である。そ
の後、患者は、研究からはずされる。
【０２０９】 （腫瘍応答についての判定基準：） 急性および遅発性の副作用を評価する。腫瘍応答および持続時間を、それぞれ
の患者について選択され、そして物理的検査および反復診断用の放射線医学研究
（胸部Ｘ線、ＣＴスキャン、頭部および頸部、胸部、腹部、骨盤、ガリウムスキ
ャン、骨スキャン、インジウム−１１１抗フェリチンスキャン）の選択からなる
方法を再現することによって測定する。これらの診断研究を、他の試験によって
すでに公知である情報を複製するのみならず、特有の情報を提供し得るように繰
り返す。さらに、最も安価に実行出来る診断試験を、初めに選択する。
【０２１０】 （統計学的考察：） ５人の患者を、第１活性レベルで試験する。療法が十分耐性である場合、次の
５人の患者で漸増を行う。この漸増が耐性である場合、残りの患者を、第三の放
射活性レベルで処置する。第三の活性漸増を、カポージ肉腫を患う患者について
は行わない。
【０２１１】 毒性に対する中止規則がある。毒性が、５人の集団あたり２人の患者について
２度を上回る場合、この部分の研究を中止する。
【０２１２】 （本研究からの除外に関する判定基準） 進行する疾患または３度以上の毒性の場合に患者を研究から除く。研究から除
かれた患者は、生存そして遅発性の毒性について追跡する。
【０２１３】 本明細書で引用される参考の教示は、特に本明細書で援用される。本発明の変
更および改変は、前述の詳細な説明から当業者には明らかであり、そして請求の
範囲によって包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、腫瘍容量（ｍｍ3）および投与された放射能の関数としての、90Ｙ標 識化ＣＲ４Ｅ８のｉ．ｌ．投与後の腫瘍応答のグラフである。
【図２】 図２は、初期腫瘍容量（ｍｍ3）および投与された放射能の関数としての、90 Ｙ標識化ＣＲ４Ｅ８で処置されたマウスにおける湿性剥離の発生のグラフである
。
【図３】 図３は、初期腫瘍容量（ｍｍ3）および投与された放射能の関数としての、90 Ｙ標識化ＣＲ４Ｅ８でｉ．ｌ．処置されたマウスの腫瘍再発の発生のグラフであ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） // Ａ６１Ｋ 103:32 Ａ６１Ｋ 43/00 49/02 Ｃ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 ブリーゼンドープ， ヒューバート エ ム． アメリカ合衆国 テキサス 77005−3755， ヒューストン， ウェストチェスター ストリート 6641 (71)出願人 クアドリ， サイド エム． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 20854， ポトマック， カウンセルマン ロード 10108 (72)発明者 ボーチャート， ポール イー． アメリカ合衆国 テキサス 76205， デ ントン， バーナード ストリート （番 地なし) (72)発明者 ブリーゼンドープ， ヒューバート エ ム． アメリカ合衆国 テキサス 77005−3755， ヒューストン， ウェストチェスター ストリート 6641 (72)発明者 クアドリ， サイド エム． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 20854， ポトマック， カウンセルマン ロード 10108 Ｆターム(参考） 4C076 AA95 CC03 CC07 CC27 EE41 FF31 FF68 4C084 AA12 BA23 DA32 DA39 DA41 DA58 MA65 NA13 ZB151 ZB152 ZB261 ZB262 4C085 AA21 AA25 AA26 AA27 BB17 BB36 BB37 GG02 GG06

Claims (29)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 固形組織のサイズを減少させる方法であって、以下の工程： 抗体組成物を病巣内または区画内に投与する工程であって、ここで、該抗体組
    成物は、該部位でまたは該区画内で組織を殺傷するのに有効な量で局在化された
    ままである工程、 を包含し、 ここで、該抗体組成物は、以下： 該殺傷される組織を選択的に結合し、そしてそれらが投与される該組織または
    領域において局在化されたままの形態である、抗体、および 該抗体と結合する細胞傷害性剤、を含む、 方法。
  2. 【請求項２】 前記抗体が、ＩｇＭ、ＩｇＧの結合体もしくはポリマー、免
    疫グロブリン融合タンパク質、組換えＩｇＭフラグメント、およびヒト化ＩｇＭ
    抗体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 前記細胞傷害性剤が、放射性同位体、毒素、前記組織を攻撃
    するように宿主を誘発する物質、化学療法薬、細胞増殖または複製を妨害するオ
    リゴヌクレオチド、およびサイトカインからなる分子の群より選択される、請求
    項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記細胞傷害性剤が細胞傷害性放射性同位体である、請求項
    ３に記載の方法。
  5. 【請求項５】 前記細胞傷害性剤が毒素である、請求項３に記載の方法。
  6. 【請求項６】 前記抗体がＩｇＭである、請求項２に記載の方法。
  7. 【請求項７】 前記抗体が前記細胞傷害性剤を該抗体に結合する結合体を含
    む、請求項１に記載の方法。
  8. 【請求項８】 請求項１に記載の方法であって、さらに以下の工程： 前記細胞傷害性剤と同じ組織に標的化される診断用剤を投与する工程であって
    、ここで、該診断用剤は、該細胞傷害性剤の投与より前に投与される工程、およ
    び 該診断用剤の該組織への結合を検出する工程、 を包含する、方法。
  9. 【請求項９】 前記診断用剤が、診断的に検出可能な放射性同位体を用いて
    標識化された、該殺傷される組織に選択的に結合する抗体である、請求項８に記
    載の方法。
  10. 【請求項１０】 前記殺傷される組織が、固形腫瘍組織である、請求項１に
    記載の方法。
  11. 【請求項１１】 前記腫瘍が、腺癌、扁平上皮癌、肉腫、グリア芽細胞腫、
    黒色腫、神経芽細胞腫、およびリンパ腫からなる群より選択される、請求項１０
    に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 前記殺傷される組織が子宮内膜症である、請求項１の方法
    。
  13. 【請求項１３】 前記処置される領域または区画が、胸膜腔内区画、頭部お
    よび頸部の癌、乳房、卵巣、腹膜、脳、ならびに前立腺からなる群より選択され
    る、請求項１に記載の方法。
  14. 【請求項１４】 前記抗体組成物が腹腔内に投与される、請求項１に記載の
    方法。
  15. 【請求項１５】 前記抗体組成物が病巣内に投与される、請求項１に記載の
    方法。
  16. 【請求項１６】 免疫複合体の沈着によって特徴付けられる障害、組織の炎
    症および過剰増殖を処置するための方法であって、結合した細胞傷害性剤を有す
    る抗体を免疫複合体の沈着の部位に投与する工程を包含する、方法。
  17. 【請求項１７】 前記抗体が、ＩｇＭ、ＩｇＧの結合体もしくはポリマー、
    免疫グロブリン融合タンパク質、組換えＩｇＭフラグメント、およびヒト化Ｉｇ
    Ｍ抗体からなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記細胞傷害性剤が、放射性同位体、毒素、前記組織を攻
    撃するように宿主を誘発する物質、化学療法薬、細胞増殖または複製を妨害する
    オリゴヌクレオチド、およびサイトカインからなる分子の群より選択される、請
    求項１６に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 前記細胞傷害性剤が細胞傷害性放射性同位体であり、前記
    障害が慢性関節リウマチである、請求項１８に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 抗体組成物であって、以下： 殺傷される組織を選択的に結合し、そしてそれらが投与される組織または領域
    において局在化されたままの形態である抗体、および 該抗体と結合する細胞傷害性剤、 を含む、抗体組成物。
  21. 【請求項２１】 前記抗体が、ＩｇＭ、ＩｇＧの結合体もしくはポリマー、
    免疫グロブリン融合タンパク質、組換えＩｇＭフラグメント、およびヒト化Ｉｇ
    Ｍ抗体からなる群より選択される、請求項２０に記載の組成物。
  22. 【請求項２２】 前記細胞傷害性分子が、放射性同位体、毒素、前記組織を
    攻撃するように宿主を誘発する物質、化学療法薬、細胞増殖または複製を妨害す
    るオリゴヌクレオチド、およびサイトカインからなる群より選択される、請求項
    ２０に記載の組成物。
  23. 【請求項２３】 前記細胞傷害性剤が細胞傷害性放射性同位体である、請求
    項２２に記載の組成物。
  24. 【請求項２４】 前記細胞傷害性剤が毒素である、請求項２２に記載の組成
    物。
  25. 【請求項２５】 前記抗体がＩｇＭである、請求項２０に記載の組成物。
  26. 【請求項２６】 前記抗体が前記細胞傷害性剤を該抗体と結合する結合体を
    含む、請求項２０に記載の組成物。
  27. 【請求項２７】 前記結合体が、放射性同位体を用いて標識化されたジエチ
    レントリアミンペンタ酢酸化合物である、請求項２６に記載の組成物。
  28. 【請求項２８】 前記細胞傷害性剤と同じ組織に標的化される診断用剤をさ
    らに含むキット中の請求項２０に記載の組成物。
  29. 【請求項２９】 前記抗体が、腺癌、扁平上皮癌、肉腫、グリア芽細胞腫、
    黒色腫、神経芽細胞腫、およびリンパ腫からなる群より選択される腫瘍に標的化
    される、請求項２０に記載の組成物。
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