JP2002504154A

JP2002504154A - 治療用組成物および治療方法

Info

Publication number: JP2002504154A
Application number: JP50463299A
Authority: JP
Inventors: サイケス，トーマス，アール．; マディヤラカン，ラグパシー．; バウム，リチャード，ピー．; ヌージャイム，アントイン，エイ．
Original assignee: アルタレックスコーポレイション
Priority date: 1997-06-17
Filing date: 1998-06-16
Publication date: 2002-02-05
Also published as: WO1998057661A1; EP1009433A1; AU732505B2; EP1009433A4; AU8143998A; CA2292912A1

Abstract

(57)【要約】本発明は免疫応答を引き起こす、または増大させることのできる光活性化抗体を含む方法よび組成物である。

Description

【発明の詳細な説明】治療用組成物および治療方法技術分野本発明は有利な結果、好ましくは免疫原性の増大を達成するために、変性タンパク質を調製するための方法および組成物並びに変性タンパク質を使用するための方法および組成物に関する。背景技術紫外（ＵＶ）線はすべての動物、微生物、細胞およびこれらの成分を含む生存系に対して様々な影響を及ぼす。生物学的材料をＵＶ線に直接暴露すると一般的に構造の変性並びに物理的、化学的、生物化学的および生物学的性質における変化がもたらされる。変性は微細なものから劇的なものまで起こり得、性質の変化は取るに足らないものから重大な（または場合によって致命的な）ものまで起こり得る。これらの作用は以前から認められ、例えば疾患原因となるウイルスの不活化などで有利に利用されてきた。従来技術によれば、ＵＶ線に暴露されたタンパク質は未処理のタンパク質に対する抗体の反応性を変化させる。従来の技術によれば、ＵＶ暴露されたタンパク質に対するｉｎｖｉｖｏでの免疫学的応答は、一部には新たな抗原決定基が発生するために低下する。この変化はタンパク質と抗体との間の結合部位の構造的成分に反映されることもよく知られている。最後に、従来技術によれば、ＵＶ線への暴露はタンパク質を結合させる目的で変性させるための有効な方法であるが、そのような手法の免疫学的意味は検討されていない。免疫原性を高めるための基本的な紫外（ＵＶ）光活性化過程は、標的分子の潜在的光化学反応に影響する２つの大きな要因のカテゴリーに制御される。第１のカテゴリーはＵＶ光源の性質に関連しており、発光波長スペクトル：暴露持続期間；ＵＶ光源（フィルタ付きまたはフィルタなし）の特性（出力、ユニット数、使用期間など）によって決まる暴露の全体的強度、システムにおける暴露の幾何学（配置、容積、距離、反射、吸収など）および標的サンプル容器の特性（構造、厚み、光学的特性）が含まれる。これらのパラメータにより入射ＵＶ暴露の強度とエネルギーが決まる。要因の第２のカテゴリーは暴露されたマトリックスの性質に関連しており、媒体成分（光化学的および化学的特性に関連する溶液添加物の種類、濃度、ｐＨなど）が含まれる。これらにより光活性化過程の行われる吸収マトリックスの性質が決まる。温度およびそのコントロールなどの外来要因も何らかの役割を演じている可能性がある。パラメータがこのように多数に上るため、異なったシステムの条件を別の条件と比較することはしばしば困難である。比較する上での１つの推定量は暴露継続時間の間に標的溶液の境界面に入射したエネルギーであり、平方センチメートル（ｃｍ²）当たりのジュール（Ｊ）として表される。暴露条件は典型的には９Ｊ／ｃｍ²と推定され、上述した他の潜在的理由を考えれば、効果的な暴露は０．０１〜１０００Ｊ／ｃｍ²の範囲であると予測する。脊椎動物はすべて免疫系を有している。脊椎動物が感染性微生物、毒素、ウイルスまたはその他の外来高分子に対して自己を保護するための能力は免疫と呼ばれる。免疫は特異性が高く、免疫応答の基本的性質である。多くの免疫系の応答により、侵入する微生物およびそれらにより産生される毒性分子の破壊および排除が開始される。これら免疫反応の性質は本来破壊的であるため、応答は正確に外来分子に限定され、宿主自身の分子には応答しないことが必須である。この外来分子と自己分子とを区別する能力は免疫系のもう１つの基本的特徴である。獲得したまたは特異的な免疫には、外来物質への暴露により誘発されるまたは刺激される防御機構が含まれる。特異的免疫の機構が外来物質に対する防御において関与する事象は免疫応答と称する。脊椎動物は２つの大まかな種類の免疫応答を有する：それらは抗体応答、または体液性免疫、および細胞媒介性免疫応答、または細胞性免疫である。体液性免疫は、増殖と分化の後、血液中とリンパ液中を循環する抗体（免疫グロブリンとしても知られるタンパク質）を産生するＢリンパ球により提供される。これらの抗体はこれらを誘発した抗原に特異的に結合する。抗体の結合により、ウイルスのような外来物質は標的細胞上のレセプターに結合する能力が妨げられて不活性化される。体液性応答は主に細菌およびウイルスの感染における細胞外段階に対して防御する。体液性免疫では、血清のみで応答を伝達することができ、応答のエフェクターは抗体と呼ばれる可溶性タンパク質分子である。免疫応答の第２の種類は細胞性免疫であり、他の宿主細胞の表面上にある外来抗原と反応するＴリンパ球のような特殊細胞の産生が含まれる。細胞性免疫応答は特に、真菌、寄生虫、細胞内ウイルス感染、癌細胞およびその他の外来物質に対して有効である。実際Ｔリンパ球の多くは免疫を調節する役割を演じており、他の白血球の応答を高めたり抑制したりする働きをしている。それぞれヘルパーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞と呼ばれるこれらの細胞は、一括して調節細胞と呼ばれる。細胞傷害性Ｔ細胞と呼ばれる他のＴリンパ球は、ウイルス感染した細胞を死滅させる。細胞傷害性Ｔ細胞およびＢリンパ球はともに感染に対する防御に直接含まれ、一括してエフェクター細胞と呼ばれる。免疫系は宿主の正常な構成物質でない高分子の表面特徴を認識できるように発達している。上述したように、免疫系により認識される（すなわち、抗体により結合される）外来分子は、それ自身が応答を誘発するかどうかに関わりなく「抗原」と呼ばれ、抗体が結合する抗原部分は「抗原決定基」または「エピトープ」と呼ばれる。例えば卵巣癌または乳癌抗原のような腫瘍関連抗原などのある種の抗原は、多数の抗体結合部位を有している。抗体−抗原結合の特異性が高いため、抗原同士を区別するまたは同一抗原上の異なったエピトープ同士を区別する主たる方法は、抗体の結合特性、例えば抗原結合部位および結合の強さによるものである。従来の抗原の定義は、脊椎動物の宿主において特異的抗体の形成、または分子と反応するリンパ球の特異的集団の発生を誘発できるその分子のことである。しかし、科学でしばしば起こるように、現在ではこの定義は間違ってはいないが完全ではないことが知られている。例えば、ある種の疾患状態では宿主の免疫応答を抑制または不活化することが現在知られている。このような状況下では、腫瘍抗原は抗体を誘発しないかまたは特定のリンパ球を発生させない。このように抗原すべてがヒト免疫応答を誘発できるわけではない。定義の不備は免疫応答の２つの面に集中している：免疫応答の第１段階は外来実体の存在の認識であり；第２段階は複雑な反応系列またはカスケード、すなわち応答である。上述の腫瘍抗原例では、免疫系は外来抗原の存在を認識できるが応答できない。別の例では、自己と非自己を区別する免疫系の能力の欠損が多くの自己免疫疾患の原因であると思われる。また、これは認識の欠損であり、応答の欠損ではない。したがって本明細書中では、抗原が免疫系により認識されることができる場合、抗原性があるという。免疫系が抗原に対して能動的応答も行うことができる場合、免疫原性があるという。免疫原性のある抗原は通常分子量が少なくとも５０００ダルトンの高分子（タンパク質、核酸、炭水化物および脂質など）である。ハプテンおよび抗原性小分子などのより小さな非免疫原性分子は十分な大きさの担体分子と結合させた場合は免疫応答を刺激することができる。免疫グロブリンとしても知られている抗体はタンパク質である。抗体は２つの本質的機能を有している。第１は外来抗原を認識（結合）することである。第２は免疫系のほかの要素を動員して外来実体を破壊することである。抗体の抗原認識構造は可変領域であり、抗原結合の原因である。抗体の第２の機能である免疫系の動員構造は、定常領域であり；これらの領域は様々なエフェクター機能で満たされる。その機能とは、増殖および分化を行うためのＢ細胞の刺激、補体細胞溶解系の活性化、オプソニン化、侵入物を摂取するためのマクロファージ誘引などである。アイソタイプの異なる抗体は定常領域が異なり、したがってエフェクター機能が異なる。最も研究されているアイソタイプはＩｇＧおよびＩｇＭである。抗体はそれ自身がオリゴマー分子であり、その構造によりクラス（例えば、ＩｇＧ）およびサブクラス（例えばＩｇＧ１）に分類される。ＩｇＧ分子は体液性免疫応答で最も重要な成分であり、２本のＨ鎖（長鎖）と２本のＬ鎖（短鎖）からなり、ジスルフィド結合により「Ｙ」字構造に結合している。分子は２つの可変領域（「Ｙ」字の腕の部分）を有している。異なる抗原に応答して特定の固体により産生される特定のサブクラスの抗体は、定常領域では異ならないが可変領域では異なるため、これらの領域はこのように名づけられた。可変領域自体は比較的変動しない枠組み構造と、特定エピトープに対する特異性を抗体に与える超可変ループの両方からなる。抗体は分子の相補性の結果として抗原のエピトープに結合する。相互反応に直接関与する抗体部分は「抗原結合部位」または「パラトープ」と呼ばれる。特定抗体により結合された抗原はその「コグネイト（ｃｏｇｎａｔｅ）抗原」と呼ばれる。ある動物の抗体は他の動物の免疫系により外来抗原として認められ、したがって免疫応答を誘発する。発生した抗体のいくつかは免疫した抗体の可変領域に独特なエピトープ（イディオタイプ）に特異的であり、したがって抗イディオタイプ抗体といわれる。これらは時として、免疫した抗体に対するコグネイト抗原の特性と同様の免疫学的特性を有している。他方、抗アイソタイプ抗体は免疫した抗原の定常領域のエピトープと結合する。抗原の抗体に対する結合は可逆的である。これは比較的弱い多くの非共有結合を合わせて行われ、それらには疎水性結合および水素結合、ファンデルワールス力、およびイオン性相互作用が含まれる。これらの弱い力は、抗原分子がその原子のいくつかが抗体表面上の相補的なくぼみの中に合致できるまで十分に接近した場合にのみ効果がある。４本鎖の抗体単位の相補的領域は２種の同一な抗原結合部位であり；抗原上の対応する領域は抗原決定基である。多くの抗原性高分子は多くの異なった抗原決定基を有する。３種類の免疫療法が現在研究されており：１）受動免疫療法；２）抗原による能動免疫療法；および３）抗体による能動免疫療法である。不幸にもそれぞれ限定された成功しか収めていない。しかし免疫療法は癌の一病期において、ピリミジンアナログやプリンアナログのような抗増殖性化学療法剤よりも好まれている。アナログは細胞成長周期の際に使用される構成単位としてピリミジンおよびプリンと競合する。そのため成長が非周期性または休止中の場合はアナログは効果がない。微小転移性細胞の多くは非周期性または休止中であると考えられる。免疫療法の細胞傷害性効果は細胞周期と関係なく作用する。「受動免疫療法」には患者への抗体投与が含まれる。抗体療法は患者が抗体の産生源でないため、従来受動的とされている。しかし受動的という用語は誤解を招きやすい、なぜなら、患者は抗イディオタイプの二次抗体を産生でき、今度は元の抗原と交差反応する免疫応答を引き起こすことができるからである。「能動免疫療法」はワクチン形態での患者への抗原の投与であり、防御免疫応答を誘発する。サイトカイニンおよび補助的刺激分子を発現する遺伝子をトランスフェクションされた遺伝子組換え腫瘍細胞ワクチンも腫瘍特異的免疫応答の不足を緩和するために使用されている。ヒトへのマウス抗体投与はそれらが「異物」として認識されるため、一次抗体分子のマウス特異的部分およびマウスアイソタイプ特異的部分に対して向けられるヒト抗マウス抗体応答（「ＨＡＭＡ」）を引き起こすことができる。この免疫反応はマウスとヒトの免疫グロブリンの定常領域における一次アミノ酸配列が異なるために起きる。ＨＡＭＡのＩｇＧとＩｇＭのサブクラスは調べられている。ＩｇＧ応答は遅れて現れるが典型的なＩｇＭ応答よりも長く続き、血漿搬出による除去に対してより耐えることができる。しかし臨床的には、ＨＡＭＡは：１）マウス抗体投与に続いて起こるアナフィラキシーまたは血清病のような反応の危険性を増し；２）続けて注入したマウス抗体の免疫療法の効果を、これらの抗体と複合化し、体からのクリアランスを高め、腫瘍の局在性を低下し、肝臓および脾臓への取り込みを増やし、および／または治療剤から腫瘍を覆い隠すことにより、妨げる可能性があり；３）免疫診断薬の妨げとなり、したがって疾患の進行および治療の経過のモニタリングを妨害する。様々な臨床治験で固体腫瘍に対する治療剤として抗体が使用されている。応答または生存改善の一貫したパターンはまだ明らかでない。これに反し、抗体療法はＢ細胞リンパ腫またはＴ細胞リンパ腫あるいは白血病において、完全な寛解および長期継続する寛解を高頻度で誘導している。固体腫瘍でうまくいかないことの説明には、抗原の不均一性と、補体またはエフェクター細胞のような第２エフェクター分子と同様に、注入された抗体に対する上皮細胞の接近容易性が十分でないことが含まれる。ある動物から得られた特異抗体が免疫原として適切な第２の動物に注入されると、注入された抗体は免疫応答を誘発する（例えば、注入抗体に対して産生された抗体−「抗抗体」）。これらの抗抗体のあるものは注入抗体の可変領域における独特なエピトープ（イディオトープ）に特異的であろう。これらのエピトープは集合的に一次抗体のイディオタイプとして知られており；これらのエピトープに結合する二次（抗）抗体は抗イディオタイプ抗体として知られている。抗体の可変部分上に存在するすべてのイディオタイプをまとめて、そのイディオタイプと呼ぶ。抗原のエピトープに結合する一次抗体の注入が抗イディオタイプ抗体の産生を誘導する可能性があるため、イディオタイプは血清学的に定義される。一次抗体と抗イディオタイプ抗体との結合が一次抗体の向けられる抗原により阻害される場合、イディオタイプは結合部位またはエピトープ関連のものである。他の二次抗体は注入抗体の定常領域エピトープに特異的であり、したがって抗アイソタイプ抗体として知られている。本明細書では、抗イディオタイプ、抗イディオタイプ抗体、エピトープ、またはエピトープ性は当技術で認められている意味で使用する。「ネットワーク」理論では、免疫応答で最初に産生された抗体は生体に耐性のない独特な新規エピトープを有し、したがって一次抗体（Ａｂ１）のイディオタイプに対して向けられた二次抗体（Ａｂ２）の産生を誘発すると述べられている。これらの二次抗体は同様に三次抗体（Ａｂ３）の産生を誘導するイディオタイプを有し、以下同様である。Ａｂ₁→Ａｂ₂→Ａｂ₃ ネットワーク理論ではこれら二次抗体（Ａｂ２）のあるものは元の抗原と相補的である部分に相補的である結合部位を有し、元抗原の「内部イメージ」を再現することも示唆する。いいかえれば、抗イディオタイプ抗体は代用抗原である。癌免疫療法の従来の取り組みは抗腫瘍抗体、すなわち腫瘍細胞上のエピトープを認識する抗体を患者に投与することである。しかし「ネットワーク」理論の発達により、外因的に産生された抗イディオタイプ抗体、すなわち抗腫瘍抗体のイディオタイプに対して力価の上昇した抗体の直接投与が研究者に示唆された。そのような方法は米国特許第５，０５３，２２４号（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ他）に開示されている。Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉは患者の体でこれらの抗イディオタイプ抗体だけでなく元の腫瘍エピトープも認識する抗抗体が産生されると推定している。抗イディオタイプ抗体は大きく４つの型に分けられる。アルファ型は一次抗体のパラトープから離れたエピトープと結合する。ベータ型は元の抗原のエピトープに常に似たパラトープを有する。ガンマ型は、抗原結合を妨げるのに十分なほど近く一次抗体のパラトープに結合する。イプシロン型は定常領域抗原性構造に似たイディオタイプ決定基を認識する。２つの治療応用がネットワーク理論から生まれた：１）患者によるＡｂ２産生を誘導する抗原として作用するＡｂ１の投与；および２）腫瘍抗原を機能的に模倣するＡｂ２の投与。卵巣癌患者に対してモノクローナル抗体ＯＣ１２５のＦ（Ａｂ’）₂フラグメントを繰り返し静注する能動免疫法により、何名かの患者において顕著な抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２）応答が誘発されたことが報告された。予備試験結果からＡｂ２の血清濃度が高い患者はＡｂ２血清濃度が低いまたは検出されない患者に比べて生存率の優れていることが示唆された。Ｗａｇｎｅｒ、Ｕ他の「ＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｕｒｓｅｏｆＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＯｖａｒｉａｎＣａｒｃｉｎｏｍａｓＡｆｔｅｒＩｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆＡｎｔｉ −ｉｄｉｏｔｙｐｉｃＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＡｇａｉｎｓｔａＴｕｍｏｒ−ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＡｎｔｉｇｅｎ」、ＴｕｍｏｒＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ＆Ｔｈｅｒａｐｉｅ、１１：１−４、（１９９０年）参照。ヒト抗イディオタイプモノクローナル抗体（Ａｂ２）は動物における抗腫瘍細胞性応答を誘導することが示されており、転移性結腸直腸癌患者の生存を延ばすように考えられる。Ｄｕｒｒａｎｔ，Ｌ．Ｇ他、「ＥｎｈａｎｃｅｄＣｅｌｌ −ＭｅｄｉａｔｅｄＴｕｍｏｒＫｉｌｌｉｎｇｉｎＰａｔｉｅｎｔｓＩｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈＨｕｍａｎＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉ −ＩｄｉｏｔｙｐｉｃＡｎｔｉｂｏｄｙ１０５ＡＤ７」、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、５４：４８３７〜４８４０（１９９４年）参照。癌の免疫療法に関する抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２）の使用はＢｈａｔｔａｃｈａｒｙａ− Ｃｈａｔｔｅｒｊｅ他、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３８：７５〜８２（１９９４年）によっても調べられる。発明の概要従来技術の多くは、治療上有利な抗体を減じるまたは中和する宿主の能力を低下させるという明確な理由のため、注入抗体に対する免疫応答を減少させることに焦点を当てている。ＰＣＴ出願ＰＴＣ／ＩＢ９６／００４６１号では、宿主の免疫系を欺いて以前認識されなかった抗原に対する応答を生じさせるために注入抗体を使用することに焦点を当てた。また抗体自体を調製するための機構に焦点を当てていることも当技術分野で知られている。例えば、ＵＶ線に抗体を暴露して、抗体の定常部（すなわち、Ｆｃ部分）に対するそのアイソタイプ免疫原性または免疫原性を低下させることに付随して、その結合性を高めることはよく知られている。例えばＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＣＡ９３／００１１０号を参照のこと。これに反し、本発明は抗体全体の免疫原性を増大させるためにＵＶ線を用いて抗体を調製することに重点が置かれている。本明細書中で用いる免疫原性を増大させるということは、抗イディオタイプ抗体および／または抗アイソタイプ抗体の認識および／または応答を増大させることを意味する。本発明の最も好ましい実施態様では、本方法は、その抗原性に変化または悪影響を与えることなく、免疫原の免疫原性を増大させる。本発明によれば、治療上の利益を生むために高められた応答を発生させることは有益である。例えば、本発明によれば、癌患者にＵＶ暴露抗体を投与することは、ＵＶ暴露抗体に対する免疫応答（すなわち、抗イディオタイプ抗体の産生）を生じるという特定目的において望ましい可能性がある。この応答は、癌細胞に向けられた体液性および細胞性の結果を通して治療上の利点を提供するかもしれない。本発明の一側面によれば、ＵＶ暴露タンパク質は免疫原性の増大を示し、したがって疾病の治療に有用かもしれない。本発明の方法は、抗原に結合する抗体のような結合剤の生物学的機能のためでなく、むしろ免疫原として作用する能力のために今まで報告されていない変化となる。前述で示唆したように、光活性化はジスルフィドを切断して結合目的で有用なメルカプト基を生じることになるが、このタイプのＵＶ暴露の他の使用では免疫原性を低下させる結果が示唆されている［Ｋｌｅｃｚｋｏｗｓｋｉ他；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、１：２９４−３０４（１９６２）；Ｄｅｅｇ他；米国特許第４，９９８，９３１号］。これに反し、本発明のタンパク質変性方法は免疫原性潜在性が高められた修飾タンパク質を生じる。おそらく、疎水性／親水性はメルカプト基生成と協力して僅かなトリプトファン破壊により変化して免疫細胞による認識／応答を高める。抗体の定常部は、Ｆｃ媒介抗原提示細胞認識を高める、重要なアミノ酸特異変化を有するという更なる可能性がある。これはタンパク質の重合体状態における変化には関連しないが、これによって（ＵＶ暴露後のヒト免疫グロブリンで観察されるような）凝集形が食細胞に向けられ、本発明の光活性化産生物は単量体状態を維持する。抗体／抗原複合体の提示と応答の最終的な程度も、抗体を注入された抗原陽性患者のＨＡＭＡ応答により検出されたような光活性化の結果として向上した。図面の説明図１は、本発明による組成物を様々な濃度で投与したラットにおけるＡｂ２量を、未処理の抗体と比較して示す。発明の開示本発明は、その免疫原性がタンパク質のＵＶ線への暴露により高められる、タンパク質または抗体のような結合剤の調製を含む。本発明はまた、治療効果を達成するために患者へのＵＶ暴露タンパク質の投与も含む。本発明により調製された組成物は増大した治療効力を示す。典型的には、増大した治療効力または治療効果の達成には変性免疫原性、好ましくは抗原性を維持しながらの変性免疫原性が含まれる。癌およびそれに類似したある種の抗原では変性免疫原性は増大免疫原性を意味する。自己免疫状態（例えば、炎症）のような他の抗原では、変性免疫原性は免疫原性の低下を意味することがある。本発明の最も好ましい実施態様では、変性した結合剤が体液性免疫応答と細胞性免疫応答の両方を誘導する。タンパク質、好ましくは抗体は、臨床的意味のある全ての抗原を対象にできるが、好ましくは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）のような可溶性抗原を対象とする。ＴＡＡの場合、癌には、肺、結腸、直腸、乳、卵巣、前立腺、頭部、頸部、骨、免疫系、または他の全ての解剖学的部位を含むことができるが、これらに限定されない。ヒトまたは動物を対象とすることができる。実例となる腫瘍および腫瘍マーカーは米国特許第５，０７５，２１８号に列挙されている。本発明の方法は、可溶性ＴＡＡ、好ましくは多エピトープ抗原を産生する癌を含む。本明細書中で使用するように、可溶性は、体液すなわち血液、血清、腹水、唾液、またはそれらに類似するものの中に検出されるあらゆる抗原の記載に使用される。本発明によれば、好ましい腫瘍は次のようなものである：表面抗原または細胞内抗原とは対照的に、血流に流れ込んだ腫瘍抗原などの可溶性腫瘍抗原を与える腫瘍；多エピトープ腫瘍関連抗原、好ましくは炭水化物または糖タンパク質（例えばムチン）の性質を持つものを示す腫瘍；および患者の体液に健常者コントロールに通常存在するよりも高い濃度で認められ、そのような高い量が患者の予後不良の兆しとなるが免疫応答の起きていない腫瘍。当技術分野の当業者によりよく知られているように、ＴＡＡ濃度が疾病の再発を予測できるほど高いか否かを決定する１つの方法は患者の濃度を健常者コントロールの濃度と比較することである。ＴＡＡ濃度が健常者コントロールよりも高い場合、患者の濃度から疾病の予後不良が予測される。本明細書中ではタンパク質は免疫学的対の一方を意味し、例えば腫瘍抗原上に発現する１つのエピトープに結合できる結合部分である。典型的な結合剤には以下のものが含まれるが、それらに限定されない：モノクローナル抗体（「ＭＡｂ」）；ヒト化抗体を含む、キメラモノクローナル抗体（「Ｃ−ＭＡｂ」）；遺伝子操作されたモノクローナル抗体（「Ｇ−ＭＡｂ」）；モノクローナル抗体のフラグメント（限定されないが、「Ｆ（Ａｂ）₂」、「Ｆ（Ａｂ）」および「Ｄａｂ」を含む）；モノクローナル抗体の反応部に相当する単鎖（「ＳＣ−ＭＡｂ」）；腫瘍結合ペプチド；エフェクターの機能を媒介する分子に結合した上述のいずれかのもの；および上述のいずれかに類似したもの。抗体はポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体とすることができる。腫瘍免疫療法で最も有望な研究方法の１つは、抗体フラグメントまたはエフェクター領域をもつ抗体フラグメントを使用して腫瘍細胞に標的を合わせて殺すことである。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）はリコンビナント融合タンパク質として遺伝子操作され、人工的な架橋により結合されたＨ鎖（Ｖｈ）およびＬ鎖（Ｖｌ）の可変領域からなる。ヒトが対象の場合、抗体は、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、ウサギまたはその他の適当な実験動物のような、抗原に対して使用に適した免疫応答ができる動物に免疫することにより得ることができる。モノクローナル抗体の場合、免疫した動物の抗体産生細胞は「無限分裂できる」または「無限分裂化した」ヒト細胞または動物細胞と融合させて抗体を産生するハイブリドーマを得る。望むなら、１本以上の免疫グロブリン鎖をコード化した遺伝子は、抗体が異なった宿主細胞で産生できるようにクローン化でき、望むなら、遺伝子は配列を変えるように、したがって産生された抗体の免疫学的性質を変えるように突然変異させることができる。フラグメントまたは結合剤のフラグメントは次のような従来技術で得ることができる。ペプシン、パパイン、または類似物を使用した結合剤のタンパク分解消化；または所望のフラグメントをコード化したＤＮＡを様々な宿主でクローン化および発現する組換えＤＮＡ技術である。外来実体に対する例えば紫外線光による暴露は、類似の条件下における多エピトープ抗原に対する免疫応答を高める。本発明の好ましい実施態様では、ＣＤＣまたはＡＤＣＣを媒介するエフェクター機能は要求されない。免疫グロブリンのＦｖフラグメントは、固体腫瘍組織の病巣浸透に優れ、血中クリアランスがより迅速であり、その上Ｆｃ媒介免疫原性の可能性が低いことを含め、医学画像の目的および標的腫瘍療法において全免疫グロブリンよりも多くの重要な利点を有している。本研究の単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は抗ＣＡ１２５（全卵巣癌の８０％に認められる腫瘍マーカー）抗体の可変領域より分離した遺伝子から設計した。本発明の実施態様では、抗原関連卵巣癌に対する適切な組成物としてＣＡ１２５抗原に結合する変性タンパク質を含む。本発明の別の実施態様では、消化器癌に対する適切な組成物としてＣＡ１９．９抗原に結合する結合剤を含む。本発明のさらに別の実施態様では、乳癌に対する適切な組成物としてＣＡ１５．３抗原に結合する結合剤を含む。様々な結合剤、抗体、抗原、および抗体を調製、分離および使用する方法は米国特許第４，４７１，０５７号（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ）および米国特許第５，０７５，２１８号（Ｊｅｔｔｅら）に記載されており、両方とも本明細書に参照により組み入れられている。さらに、これらの抗体の多くはＣｅｎｔｏｃｏｒ、ＡｂｂｏｔｔＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＣｏｍｍｉｓｓａｒｉａｔａＬ’ＥｎｅｒｇｉｅＡｔｏｍｉｑｕｅ、Ｈｏｆｆｍａｎ− ＬａＲｏｃｈｅ、Ｉｎｃ．、ＳｏｒｉｎＢｉｏｍｅｄｉｃａおよびＦｕｊｉＲｅｂｉｏから市販されている。本発明によれば、抗体のような結合剤は、放射線に暴露することにより免疫応答を誘発する目的のため光活性化され、その変性した最終結合剤は、その本来の形態に対し一般的に免疫応答する動物に投与すると免疫応答を引き起こすことができる。本発明の好ましい実施態様では、抗体を紫外線に暴露する。最も好ましい実施態様では、抗体を波長が約２００ｎｍから約４００ｎｍの紫外線に、約０．１から約１０００ジュール／ｃｍ²で、約１から約１８０分間（より好ましくは、約１０から約３０分間）暴露する。本発明による変性タンパク質を含む組成物はｉｎｖｉｖｏでの免疫応答を開始するために使用することができる。組成物には１種類以上のアジュバント、１種類以上の担体、１種類以上の補形剤、１種類以上の安定剤、１種類以上の撮像試薬、および／または、生理的に許容しうる食塩水を含むことができる。一般的に、アジュバントはより際立った免疫応答を誘発するために免疫原と混ぜた物質である。アジュバントを添加しないコントロールのワクチン接種では体液性免疫応答となる。組成物には薬剤学的に許容しうる担体も含むことができる。薬剤学的に許容しうる担体には生理食塩水、滅菌水、リン酸緩衝化生理食塩水、およびその類似物が含まれるがそれらに限定されない。その他の緩衝剤、分散剤、および患者への送達に適した不活性非毒性物質を本発明の組成物に含めることができる。組成物は投与に適した溶液にすることができ、典型的には無菌および望ましくない粒子成分を含まないものである。組成物は従来の滅菌技術により滅菌することができる。本発明の好ましい実施態様では、組成物はｐＨが約５から約１０までのリン酸緩衝化生理食塩水またはピロリン酸化生理食塩水中の光活性化抗体を含む。本発明の方法によれば、変性タンパク質は免疫学的に適した経路により患者に投与することができる。例えば、変性タンパク質を含む組成物は、静脈内、皮下、腹腔内、皮内、筋肉内、またはリンパ管内経路により溶液、錠剤または噴霧の形態で患者に導入することができる。リポソーム、生物分解性マイクロスフェア、ミセル、または類似物はまた、担体、賦形剤または送達システムとして使用することもできる。さらに、当該技術でよく知られたｅｘｖｉｖｏ手法を使用して、血液または血清を患者から採取することができ；任意で、患者血液中の抗原を精製することが望ましく；次いで血液または血清は、本発明による結合剤を含む組成物と混合してもよく；そして処理した血液または血清を患者に戻す。臨床医は最も効果的な投与経路を決めるためにこれらの異なった経路と関連する抗イディオタイプ応答および抗アイソタイプ応答を比較することができる。本発明の好ましい実施態様では、組成物は静脈内投与される。本発明ではタンパク質の患者への導入を特定の方法に限定すべきでない。投与量本発明の方法によれば、変性タンパク質を含む組成物は予定された腫瘍関連抗原を認識して結合するために十分な量を投与することができる。本発明の好ましい実施態様では、投与量はＴＡＡに対する免疫応答を引き起こすまたは誘発するのに十分な量である。免疫学的にまたは治療的に効果的なまたは許容しうる結合剤の量は、ｉｎｖｉｖｏまたはｅｘｖｉｖｏで予定された抗原に結合するのに十分な量であり、抗原に対する免疫応答を誘発することができる。その応答は、新規の認知可能なエピトープを伝達および提示する腫瘍細胞を阻害または死滅させ、それにより抗原を産生する疾病または病的状態を改善または排除する。免疫応答は体液性応答、細胞媒介性応答またはその両方の形態で行われる。本発明の好ましい実施態様では、モノクローナル抗体の投与量はＡＤＣＣまたはＣＤＣを誘発するために必要な投与量よりも少ない。組成物中のタンパク質の濃度または量は、例えば重量で約０．０１％よりも少ない量から約１５から２０％に至るまで、広範囲に変えることができる。前述したように、組成物は抗原に対する免疫応答を刺激するのに十分な量で投与される。本使用での効果的な量はある程度は疾病の重篤度および患者の免疫系状態により決まる。一般的に、組成物にはタンパク剤が体重キログラム当たり約０．１μｇから約２ｍｇ以上まで含まれ、より一般的には体重キログラム当たり約１μｇから約２００μｇ含まれる。濃度は通常少なくとも０．５％であり；特定の投与方法にしたがって、全ての量を主に溶液容量、粘度、抗原性などに基づいて選択することができる。投与は、例えば長期間で３回など１回以上実施することができる。本発明の組成物は重篤な疾病状態、すなわち生命に関わるまたは生命に関わる可能性のある患者に使用することできるため、望むなら過剰量の結合剤を投与することができる。医薬組成物を投与する実際の方法およびプロトコールは、本発明組成物の注入の際における希釈技術を含め、当技術分野の当業者にはよく知られているかまたは明らかであろう。これらの方法およびプロトコールのいくつかはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．（１９８２年）に記載されている。投与にはｅｘｖｉｖｏ投与プロトコールも含めることができる、例えば、患者体液の部分採取、ｉｎｖｉｔｒｏでの体液と治療用組成物との接触、そして処置した体液を患者へ戻すことである。結合剤は他の結合剤と組み合わせて投与することができ、または他の治療プロトコールもしくは化学療法剤などの薬剤と組み合わせて投与することができる。本発明のタンパク質の効果はｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでモニターすることができる。体液性応答はｉｎｖｉｔｒｏで通常のイムノアッセイによりモニターでき、応答の抗腫瘍活性は補体媒介細胞性細胞傷害アッセイおよび／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイにより測定できる。アッセイ方法はよく知られており、ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．２、ＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９８６年）に記載されている。他のアッセイは、患者の体内または組織内の抗原量を決定するものである。細胞媒介性免疫は遅延型過敏性反応の発生によりｉｎｖｉｖｏでモニターでき、または当該技術分野の当業者に知られているその他のｉｎｖｉｖｏもしくはｉｎｖｉｔｒｏの方法でモニターでき、それには皮膚試験反応プロトコール、標準的な放射性放出アッセイを使用して腫瘍細胞に対する対象者のリンパ球の毒性を測定するリンパ球刺激アッセイ、限定希釈測定による測定、または標準的なＥＬＩＳＡアッセイを使用するＩＬ−２の血漿量測定が含まれるが限定はされない。実施例実施例１．ラットでの試験正常で健常なＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットを使用した。動物は無作為に群別（１群４匹）し、２種類の調製薬を４つの異なる投与量（５μｇ、１０ μｇ、２５μｇ、および５０μｇ）で投与した。注入前の血液サンプルを注入計画の開始前に採取した。各ラットには滅菌済０．０１Ｍリン酸緩衝化生理食塩水で希釈したＭＡｂの適当量を静脈内投与した。第２群には不完全フロイントアジュバンド（ＩＦＡ）と一緒にまたはそれ無しで調製したそれぞれのＭＡｂ２０μ ｇを投与した。血液サンプルは０、２１、４２、６３および７７日目で投与する直前に採取した。ＭＡｂ−Ｂ４３．１３はＣＡ１２５と反応するネズミＩｇＧである。抗体調製剤は未処理の形態またはＵＶ暴露された形態（例えば光活性化された）のＭＡｂ −Ｂ４３．１３からなる。未処理のＭＡｂは５ｍｇ／ｍＬの保存濃度から０．０１Ｍリン酸緩衝化生理食塩水で５、１０、２５および５０μｇ／１００μＬに希釈した。ＵＶ暴露ＭＡｂは凍結乾燥形態から０．０１Ｍリン酸緩衝化生理食塩水で戻し（２．２ｍｇ／０．４７ｍＬ）、未処理ＭＡｂと同一投与量が得られるように希釈した。注入された動物の血清中のラット抗マウス応答測定のためのアッセイが開発された。抗アイソタイプのラット抗マウス抗体はアイソタイプのあうコントロール抗体であるＭＯＰＣ２１でコートしたＥＬＩＳＡプレートを使用して測定した。サンプルを１／１００希釈し、コートした抗体と反応させ、洗浄してからヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）に結合させたペルオキシダーゼを使用してＡＢＳ基質で結合抗体を検出した。未知の値は市販のラット抗マウス抗体を使用して描いた標準曲線から読み取った。未処理のおよびＵＶ暴露のＭＡｂ−Ｂ４３．１３を注入した種々の群のラットから採取した血清のラット抗マウス（ＲＴＡＭＡ）を分析した結果を表１および表２に示す。調製剤に対する免疫学的応答は、表で定めたカットオフ値を用いて、各群ごとで応答したラットの数で表示した。この値（注入前のすべてのサンプル（ブランク）平均＋３Ｓ．Ｄ．）により、真の陽性応答が測定され、結果が測定変動によるものでないことが確実になる。応答の大きさの変動が非常に大きくなり、したがって解釈の妨げになる可能性があると仮定すると、応答ラットの作表は、おそらくより意義があるものである。 ^*４匹の群で応答した動物数（ＲＴＡＭＡ値≧注入前サンプル平均＋３Ｓ．Ｄ．）^** ＮＡ＝該当せずデータは、２１日目のグループのすべての投与量群において応答ラット数がより多いことで示されるように、ＵＶ暴露ＭＡｂ−Ｂ４３．１３への応答は、より早期（１回のみの注入後）に発生することを立証する傾向がある。さらに、他のすべての期間（および多数回の注入後）において、ＵＶ暴露ＭＡｂ−Ｂ４３．１３を静注した各群では比例応答がより増大している。未処理ＭＡｂ−Ｂ４３．１３が２３日から７７日までで低下した応答比を示しているように見え、ＵＶ暴露ＭＡｂ−Ｂ４３．１３で応答がより長く持続することが示唆される可能性がある。７７日目で増大した応答の実際の値を表２に示す。ｎ＝３；^*ｐ＝０．０４９６実施例２．比較分析本発明を第ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＣＡ９３／００１１０号に開示された組成物および方法と比較した。以下の表に、様々な方法および組成物間の例示的な違いを示す。本発明をＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＢ９６／００４６１号に開示された組成物および方法とも比較した。以下の表に、様々な方法および組成物間の例示的な違いを示す。実施例３．ヒトでの試験モノクローナル抗体の免疫原性を高めた有用性について、卵巣癌患者３０名以上に、生存期間の延長を試みて特別の理由でＵＶ暴露ＭＡｂ−Ｂ４３．１３を静脈内注入することで実証した。前述のデータからＭＡｂ−Ｂ４３．１３は進行した卵巣癌患者の生存を延ばすことが示唆された。それぞれの患者にＵＶ暴露ＭＡｂ−Ｂ４３．１３を２ｍｇ投与し、種々の期間でヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）の形成について血清サンプルを分析することにより、その免疫学的応答をモニターした。表４にこれらの患者におけるＨＡＭＡおよびＡｂ₂応答をまとめる。したがってＵＶ暴露によってタンパク質の免疫学的応答を高める本方法により、疾病の治療に対して改善された治療薬を生産することができる。実施例４．免疫原性を高めた試験におけるＵＶ暴露条件典型的な実験装置は、適切な関連電子装置、シールドなどと共に直径約１５センチメートルの円柱形が同心に配置された８灯式フォトリアクターユニット（典型的には２００〜４００ｎｍスペクトル、３００＋／−２０ｎｍで９０％；３〜９ワット／ランプ）からなる。このフォトリアクターユニット（ＲＭＲ−６００、ＳｏｕｔｈｅｒｎＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＵｌｔｒａｖｉｏｌｅｔＣｏｍｐａｎｙ）の中に、暴露するサンプルをいくつかの配置で設定した：（１）チャンバー内で、０〜１８０分間（典型的には３０分間）１〜５ｒｐｍ回転する８ユニットカルーセル（直径約５ｃｍ）に設置された、１．５ｍｌ（ホウケイ酸ガラスまたは石英）バイアル；（２）暴露光源の中心に設置され同一時間枠で暴露された２本のバイアル／試験管（上述のもの）；または（３）標的溶液が約０〜１８０分間、典型的には１０〜２０分間、の種々の時間枠でフォトリアクターユニットを通過するようにした螺旋型ガラス（上述のもの）コイル（外径約３ｍｍ）。この後者の設定では、大規模製造目的のために大容量の標的溶液を連続的に暴露することができる。これらの暴露条件下では、様々な要求に適した低モル濃度緩衝液（典型的にはリン酸塩、ピロリン酸塩、または酒石酸塩；ｐＨ５〜１０）中の０．５〜１０ｍｇ／ｍＬ（典型的には５ｍｇ／ｍＬ）濃度の標的タンパク質溶液は、標的タンパク質免疫原性への効果を測定するために暴露することができる。実施例５．ＵＶ暴露の結果としてのタンパク質修飾光活性化後の最終的な化学種は所与の一連の暴露条件およびマトリックス溶液（上述）の組成に特有である。３種類の一次ＵＶ吸収（ＵＶ−Ｂ）アミノ酸（システイン、トリプトファン、チロシン）のいずれかを含む単純ペプチドでは、ＵＶ暴露の結果、アミド結合切断、ジスルフィド結合切断、吸収アミノ酸の変性、および隣接または近接したアミノ酸の変性が引き起こされる。これらの変化は直接的な光イオン化または光励起および間接的な他の構成成分からのラジカル形成によりもたらされる。これらの修飾の性質および程度は、生成された種類の化学的反応性、および反応性傾向または安定化／クエンチング特性のあるその他の構成物質に強く依存している。この大きさの分子では、一般的にどのような変性でも生物学的機能に劇的な変化をもたらす。同様な反応は大きなタンパク質でも起こるが、二次および三次構造要素は同様なアミノ酸配列にも関わらずＵＶ暴露に対して異なる基質を示す。したがって、上述の他構成物質の問題に加え、疎水性／親水性の性質およびフォールディングの結果として離れた鎖の配列に近接したアミノ酸が微小環境を変化させ、したがって修飾の程度と性質に影響する。このＵＶバンド幅におけるトリプトファンの吸収特性が優れているため、これが最初の光活性化過程の主な部位と考えられているが、システインおよびチロシンへの直接作用も起こりえる。間接的なアミノ酸変性の機構は、局所水和電子生成または一次吸収部位からの直接的エネルギー転移であると提言されている。大きなタンパク質で観察される最初の変化は、全体的な修飾に関連する芳香族アミノ酸の吸収および蛍光の測定などの測定可能な化学的／生化学的変化に焦点が当てられる。このタンパク質グループで検出される個別のアミノ酸変性は、メルカプト基の量がシステインのジスルフィド切断の証明として測定できる場合、および／または機能上重要なアミノ酸が含まれている場合である。小さいタンパク質ではアミノ酸加水分解および完全な定量化を行うことができる。したがって、酵素、レセプター、または抗体のような機能的な大きなタンパク質の主な問題は特定アミノ酸の修飾ではなく、それらの生物学的機能上でのあらゆる変化の結果であり、常に酵素機能、レセプター認識、または抗原結合の喪失として述べられてきた。実施例６．ＵＶ暴露Ｂ４３−１３／ＣＡ１２５抗体／抗原複合体による優れたＣＡ１２５特異的細胞性免疫応答および優れた体液性応答。ＵＶ暴露抗体が抗原と関連してＴ細胞に提示されるとき優れた細胞性免疫応答が認められた。マウスの腹膜腔から分離されたマクロファージはＣＡ１２５と関連する未処理Ｂ４３．１３またはＵＶ暴露Ｂ４３．１３により刺激され、ＣＡ１２５を注入されたマウスから分離されたＣＡ１２５特異的マウスＴ細胞に提示された。対照実験には抗原を伴わないマクロファージの刺激が含まれていた。［³ Ｈ］−チミジン摂取量でモニターしたＴ細胞の増殖は次の通りであり、最適な刺激指標は、ＵＶ暴露Ｂ４３．１３−ＣＡ１２５複合体で刺激されたマクロファージで認められた。１．１μｇ／ｍＬの抗体および１００μ／ｍＬのＣＡ１２５を使用した。２．三連で行った個別の３実験の平均表６に、体液性応答が患者血清中に存在するＣＡ１２５の存在に依存していることを示す。実施例７．図１に本発明による組成物（光活性化Ｂ４３．１３）を様々な濃度で注入したラットのＡｂ２量を未処理Ｂ４３．１３との比較で示す。図は５回目に採血した血清中のＡｂ２の投与量での比較、および光活性化結合剤で産生されたＡｂ２量が未処理のものよりも有意に高いことを示す。本発明を例示および実施例によって詳細に説明したが、本発明は様々な変更および代替形式を受け入れることができ、記載した特定の実施態様に限定されないことを理解されたい。これらの特定の実施態様は本発明を限定するものでないこと、その意図は本発明の精神および範囲に含まれるすべての変更物、均等物および代替物をカバーするものであることを理解されたい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者バウム，リチャード，ピー. ドイツディー―60590 フランクフルトセオドア―スターン―カイ―７（番地なし) (72)発明者ヌージャイム，アントイン，エイ. カナダティー６エム３ケーエイアルバータエドモントンウィルキンロード 58

Claims

【特許請求の範囲】１．紫外線により抗体の結合領域上の少なくとも１つの反応性メルカプト基が暴露される条件下で、抗体を紫外線に暴露して変性抗体を産生することと、未処理の前記抗体に対する免疫応答を起こすことができる宿主に、その変性抗体を投与することと、未処理抗体に対して宿主が行う免疫応答よりも大きな免疫応答を、宿主が変性抗体に対して起こすことができるようにすることを含むことを特徴とする治療方法。２．変性抗体に対する免疫応答を引き起こすことが、癌細胞に対する免疫応答を引き起こすことを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。３．変性抗体に対する免疫応答を引き起こすことが、宿主の免疫応答を誘発する抗イディオタイプ抗体を生成することを含むことを特徴とする請求項２に記載の方法。４．予定された癌細胞が卵巣癌であることを特徴とする請求項２に記載の方法。５．変性抗体が腫瘍関連卵巣癌抗原に特異的に結合することを特徴とする請求項１に記載の方法。６．宿主に免疫応答を引き起こさせることが宿主の生存期間を延ばす結果をもたらすことを特徴とする請求項１に記載の方法。７．抗体を紫外線に暴露して変性抗体を形成することを含むことを特徴とする免疫応答を増大させることのできる治療薬の調製方法。８．抗体を紫外線に暴露することが、抗体を、約２００から約４００ｎｍの波長の間に、約０．１から約１０００ジュール／ｃｍ²の間で、約１分間から１８０分間暴露することを含むことを特徴とする請求項７に記載の方法。９．抗体を紫外線に暴露することが、少なくとも次の性質：活性メルカプト基、予定された抗原に結合する能力、予定された抗原に対する宿主免疫応答を誘導する能力、および予定された抗原に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体の形成を誘発する能力、のうちの１つを有する変性抗体をもたらすことを特徴とする請求項７に記載の方法。１０．変性抗体に対する免疫応答を引き起こすことが、可溶性抗原と複合化した投与抗体に対する免疫応答を引き起こすことを含むことを特徴とする請求項２に記載の方法。１１．免疫応答を宿主に引き起こすことが、変性抗体の免疫原性を変性させることを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。１２．変性抗体の抗原性を維持することをさらに含むことを特徴とする請求項１１に記載の方法。１３．免疫応答を宿主に引き起こすことが、体液性免疫応答および細胞性免疫応答を誘導することを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。１４．抗体を紫外線に暴露することおよび結合剤の結合領域上の少なくとも１つの反応性メルカプト基を暴露することを含むことを特徴とする結合剤の免疫原性を高める方法。１５．結合剤の結合領域上に露出した少なくとも１つの反応性メルカプト基を有する変性結合剤を含む治療組成物であって前記変性結合剤が変性免疫原性を有するものを含むことを特徴とする治療組成物。１６．変性結合剤が免疫原であることを特徴とする請求項１５に記載の治療組成物。１７．免疫原が体液性応答および細胞性応答を誘導することを特徴とする請求項１６に記載の治療組成物。１８．請求項１の方法により製造されることを特徴とする製品。１９．請求項７の方法により製造されることを特徴とする製品。２０．請求項１４の方法により製造されることを特徴とする製品。