JP2002503702A - 神経細胞の細胞増殖および分化を促進する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、アンギオテンシノーゲン、ＡＩ、ＡＩ類似体、ＡＩ断片、およびその類似体、ＡＩＩ、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片、およびその類似体、および／またはＡＩＩ ＡＴ_２２型受容体アゴニストの単独、または他の成長因子およびサイトカインとの組み合わせ存在下での増殖による、神経細胞の増殖および／または分化を促進する方法、改良細胞培養培地、およびキットを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （相互参照） 本出願は、１９９８年２月１９日に出願された米国特許出願第６０／０７５，
２３２号の一部継続出願である。

【０００２】 （技術分野） 本発明は、神経細胞の増殖および／または分化を促進する方法及びキットに関
する。

【０００３】 （発明の背景） 中枢神経系（以下、「ＣＮＳ」とする）の幹細胞は、神経細胞、アストロサイ
ト、およびオリゴデンドロサイトに分化する、および自己複製する可能性を有す
る（ＭｃＫａｙ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：６６−７１、１９９７；そのまま参
考として本明細書に組込む）。ＣＮＳ前駆細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌ
ｌ）は幹細胞より制限された可能性を有し、ＣＮＳ前駆細胞（ｐｒｅｃｕｒｓｏ
ｒ ｃｅｌｌ）は完全に分化していないＣＮＳ細胞型を含む（ＭｃＫａｙ、１９
９７）。

【０００４】 神経細胞とグリア細胞を生じる哺乳動物の胎児の前駆細胞が単離されている（
Ｆｒｅｄｅｒｉｋｓｅｎら、Ｎｅｕｒｏｎ １：４３９（１９８８）；Ｒｅｙｎ
ｏｌｄｓとＷｅｉｓｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：１７０７（１９９２）；Ｄａ
ｖｉｓとＴｅｍｐｌｅ、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：２６３（１９９４））。成体の
ＣＮＳも、神経細胞、アストロサイト、およびオリゴデンドロサイトとなる多能
性前駆細胞を含む（ＭｃＫａｙ、１９９７）。ｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖した胎児
および成体ＣＮＳ由来の培養細胞は、分化し、神経細胞に特有な形態学的、電気
生理学的特徴を示すことが可能である（Ｇｒｉｔｔｉら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ
．１６：１０９１（１９９６）；Ｖｉｃａｒｉｏ−Ａｂｅｊｏｎら、Ｎｅｕｒｏ
ｎ １５：１０５（１９９５）。これらのデータは、ＣＮＳ由来細胞の多能性の
性質を示す。

【０００５】 胎児脳の多能性細胞は、均質であり安定であることが実証されている（Ｊｏｈ
ｅら、Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１０：３１２９（１９９６））。ｉｎ ｖｉｔｒｏ
では、少なくとも培養の最初の月には、これらの細胞は毎日分裂し、効率的に神
経細胞およびグリア細胞を産生する。これらの細胞は多能性および自己複製の基
準を満たすため、幹細胞であるとみなされ得る。

【０００６】 成体脳の細胞は組織培養において、胎児幹細胞で見られた神経細胞分化と同様
の効率、および細胞外リガンドへの同様の応答で、増殖し神経細胞およびグリア
細胞に分化する（Ｍｃｋａｙ、１９９７）。このように、同様の共通した機構が
、胎児または成体の幹細胞の分化を調節する。成体前脳における前駆細胞の増殖
は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて分裂促進的な成長因子の直接的投与により刺激され
ることが可能であり、このように処理した動物では、ｓｕｂｖｅｎｔｒｉｃｕｌ
ａｒ ｚｏｎｅの増殖性細胞は神経細胞およびグリア細胞に分化する（Ｃｒａｉ
ｇら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６：２６４９（１９９６））。しかしながら、
ｉｎ ｖｉｖｏにおいては、ブロモデオキシウリジンで標識された増殖性細胞の
３％以下が、神経細胞に分化する（ＭｃＫａｙ、１９９７）。ｉｎ ｖｉｔｒｏ
での成体幹細胞の効率的な神経細胞の分化とｉｎ ｖｉｖｏでのそれらの非効率
的な分化との矛盾は、この分野において重大であるものの未解決な問題である（
同上）。分化する神経細胞の欠除は、適当な可能性をもつ細胞の欠除というより
は、むしろ成体脳における情報伝達環境の機能の欠除の結果かもしれない（同上
）。

【０００７】 脳におけるタンパク質の長期送達は、遺伝子治療の重要な目標である。成長因
子を産生するように操作された細胞の移植は、タンパク質送達用ベクターとして
の移植細胞の可能性を示す（Ｂｅｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：３３９（１９
９５）；Ｔｏｍａｃら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：３３５（１９９５）；Ｍｏｏｒ
ｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３８２：７６（１９９６））。成長しているＣＮＳから多
くの様々な不死化細胞を作製することが可能である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大し
た初代細胞を移植することも可能である。海馬由来でありｉｎ ｖｉｔｒｏで長
期培養された初代成体細胞が、成体嗅球において神経細胞を補充するのに利用さ
れる遊走経路（ｍｉｇｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ）に再移植される場合に、
依然として神経細胞に分化可能であることが実験により示唆されている（Ｓｕｈ
ｏｎｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３８３：６２４（１９９６））。ｉｎ ｖｉｖｏで
オリゴデンドロサイトに分化するｉｎ ｖｉｔｒｏで操作された供与細胞の利用
が他の研究により例証されるように、移植された神経細胞の宿主回路への組込み
が可能であることが、動物モデルでの実験的移植により示唆される（Ｔｏｎｔｓ
ｃｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．９１：１１６１６（１９９４）；Ｇｒｏ
ｖｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３６２：４５３（１９９３））。さらに、パーキンソ
ンおよびハンチントン病のような神経変性病のための神経細胞代償療法が実現可
能であることが、臨床試験により示される（Ｋｏｒｄｏｗｅｒら、Ｎｅｗ Ｅｎ
ｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３２：１１１８（１９９５）；Ｌｉｎｄｖａｌｌら、Ａｎ
ｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３５：１７２（１９９４））。このように、臨床応用に、細
胞培養は神経病の細胞ベースの療法において高度な遺伝学を利用するのに重要な
機会を提供する（ＭｃＫａｙ、１９９７）。

【０００８】 ＣＮＳ幹細胞は、上皮成長因子（ＥＧＦ）および塩基性繊維芽細胞成長因子（
ｂＦＧＦ）を利用することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大されている（ＭｃＫ
ａｙ、１９９７）。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ＥＧＦはアストロサイトの分化
因子であることも示されている。

【０００９】 これらの研究により幹細胞と神経細胞代償療法の可能性が明らかになる一方で
、成体神経細胞幹細胞の綿密な分析は始まったばかりである。神経細胞幹細胞の
多能性、自己複製、および運命の制限を調節する機構のさらなる特徴付けが、成
体神経系における細胞の再生および置換の新しい療法を開発するのに明らかに重
要である（Ｊｏｈｅら、１９９６）。

【００１０】 神経細胞の幹細胞と前駆細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｅｘ ｖｉｖｏでの増
殖および分化を増加させる方法は、パーキンソンおよびアルツハイマー病、およ
び筋萎縮性側索硬化症等の様々な神経変性病の神経細胞代償療法の有用性を大き
く増すであろう。同様に、神経細胞の幹細胞と前駆細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの増
殖および分化を増加させる方法は、治療の位置で神経細胞の幹細胞と前駆細胞の
局部的濃度を迅速に増加させることにより、神経細胞の代償療法の有用性を増す
であろう。

【００１１】 （発明の要約） 本発明は、神経細胞代償療法で利用する神経細胞の幹細胞と前駆細胞の大きな
集団を迅速に提供し、神経細胞代償療法で利用する形質移入された細胞の大きな
集団を作製するのに有効である、神経細胞の幹細胞と前駆細胞の増殖または分化
を増加させる方法を提供する。

【００１２】 一つの態様において、本発明は、細胞をアンギオテンシノーゲン、アンギオテ
ンシンＩ（ＡＩ）、ＡＩ類似体、ＡＩ断片、およびその類似体、アンギオテンシ
ンＩＩ（ＡＩＩ）、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片、またはその類似体、またはＡＩ
Ｉ ＡＴ_２２型受容体アゴニストと単独でまたは他の成長因子およびサイトカイ
ンと組み合わせて接触させることにより、神経細胞の増殖あるいは分化を促進す
る方法を提供する。

【００１３】 本発明の別の態様において、改良細胞培養培地が神経細胞の増殖または分化の
ために提供され、ここで改良は有効量のアンギオテンシノーゲン、ＡＩ，ＡＩ類
似体、ＡＩ断片、およびその類似体、ＡＩＩ、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片、また
はその類似体、またはＡＩＩ ＡＴ_２２型受容体アゴニストを細胞培養培地に添
加することを含む。

【００１４】 さらなる態様において、本発明は、神経細胞の増殖または分化のためのキット
を提供するものであって、該キットは有効量のアンギオテンシノーゲン、ＡＩ，
ＡＩ類似体、および／またはＡＩ断片、およびその類似体、ＡＩＩ、ＡＩＩ類似
体、ＡＩＩ断片、またはその類似体、および／またはＡＩＩ ＡＴ_２２型受容体
アゴニスト、および細胞を培養するための説明書を含む。好ましい実施形態にお
いて、該キットはさらに、細胞培養増殖培地、無菌容器、および抗生物質補充を
含む。

【００１５】 （好ましい実施形態の詳細な説明） 本明細書で定義した「神経細胞」なる語は、神経細胞、アストロサイト、およ
びオリゴデンドロサイトに分化し、および自己複製する可能性を有する初代細胞
または株化細胞、さらに、完全に分化したＣＮＳおよび末梢神経系（「ＰＮＳ」
）細胞型を含むそれら由来の分化した細胞を含む。神経細胞幹細胞および前駆細
胞の例には、以下を含むがこれに限定されない；Ｇｒｉｔｔｉら、Ｊ．ｏｆ Ｎ
ｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １６：１０９１−１１００（１９９６）；Ｆｒｅｄｅ
ｒｉｋｓｅｎら、（１９８８）；ＲｅｙｎｏｌｄｓとＷｅｉｓｓ、（１９９２）
；ＤａｖｉｓとＴｅｍｐｌｅ、（１９９４）；ＭｃＫａｙ、（１９９７）；Ｖｉ
ｃａｒｉｏ−Ａｂｅｊｏｎら、（１９９５）；Ｃｒａｉｇら、（１９９６）；Ｔ
ｏｎｔｓｃｈら、（１９９４）；Ｇｒａｖｅｓら、（１９９３），およびＪｏｈ
ｅら、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐ．１０：３１２９−３１４２（１９
９６）；全参考文献をそのまま本明細書に組込む。本明細書で定義した「増殖」
は、細胞自己複製および分化を伴う細胞増殖の両方を包含する。

【００１６】 特記しない限り、本明細書で使用した「活性剤」なる語は、アンギオテンシノ
ーゲン、アンギオテンシンＩ（ＡＩ），ＡＩ類似体、ＡＩ断片、およびその類似
体、アンギオテンシンＩＩ（ＡＩＩ）、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片、またはその
類似体、およびＡＩＩ ＡＴ_２２型受容体アゴニストを含む化合物群を意味する
。

【００１７】 特記しない限り、本明細書で利用される技術は以下のようないくつかの既知参
考文献に見出される：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋら、１９８９、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
（Ｄ．Ｇｏｅｄｄｅｌ編集によるＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
、Ｖｏｌ．１８５、１９９１、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、サンディエゴ、
カリフォルニア）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ中の“Ｇｕｉ
ｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ”（Ｍ．Ｐ．Ｄｅｕｔ
ｓｈｃｅｒら、（１９９０）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）；ＰＣ
Ｒ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａ
ｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓら、１９９０．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓサンディエゴ、カリフォルニア）、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ
Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ、２^{ｎ ｄ} Ｅｄ．（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ．１９８７．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．ニュー
ヨーク、ニューヨーク）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、１０９−１２８ページ、ｅｄ．Ｅ．Ｊ．Ｍｕｒ
ｒａｙ、Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．、クリフトン、ニュージ
ャージー）、およびＡｍｂｉｏｎ １９９８ Ｃａｔａｌｏｇ（Ａｍｂｉｏｎ、
オースチン、テキサス）。

【００１８】 ＤｉＺｅｒｅｇａの米国特許第５，０１５，６２９号（その全開示を参考とし
て本明細書に組込む）は創傷組織の治癒速度を増加させる方法を記載し、これは
該組織への該増加に十分な量のアンギオテンシンＩＩ（ＡＩＩ）の投与を含む。
創傷組織へのＡＩＩの投与により創傷治癒速度は有意に増加し、より迅速な再上
皮化および組織修復がもたらされる。ＡＩＩなる語は、配列Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖ
ａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号１］を有する、ヒト
および他の種に存在するオクタペプチドを意味する。アンギオテンシンの生物学
的形成は、血漿基質のアンギオテンシノーゲンに対するレニンの作用により開始
される。かくして形成された物質はアンギオテンシンＩ（ＡＩ）と呼ばれるデカ
ペプチドであり、これはＡＩ（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉ
ｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ［配列番号３７］）からＣ末端Ｈｉｓ−Ｌ
ｅｕ残基を除去する変換酵素アンギオテンシナーゼによりＡＩＩに変換される。
ＡＩＩは既知の昇圧剤であり、市販で入手できる。ＡＩＩ類似体と断片、ＡＴ２
アゴニスト、またＡＩＩＩおよびＡＩＩＩ類似体と断片の創傷治癒における利用
も記述されている（米国特許第５，６２９，２９２号；米国特許第５，７１６，
９３５号；国際出願番号ＷＯ ９６／３９１６４号；全参考文献をそのまま本明
細書に組込む。）。

【００１９】 研究により、ＡＩＩは創傷治癒に関与する細胞培養における有糸分裂誘発およ
び走化性を増加させ、また、その成長因子および細胞外基質の放出も増加させる
ことが示された（ｄｉＺｅｒｅｇａ、米国特許第５，０１５，６２９号；Ｄｚａ
ｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２１：Ｓ７（補刊ＩＩＩ）１９
８９；Ｂｅｒｋら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １３：３０５−１４（１９８９
）；Ｋａｗａｈａｒａら、ＢＢＲＣ １５０：５２−９（１９８８）；Ｎａｆｔ
ｉｌａｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８３：１４１９−２３（１９８９）
；Ｔａｕｂｍａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６４：５２６−５３０（１９
８９）；Ｎａｋａｈａｒａら、ＢＢＲＣ １８４：８１１−８（１９９２）；Ｓ
ｔｏｕｆｆｅｒとＯｗｅｎｓ、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７０：８２０（１９９２）；
Ｗｏｌｆら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４０：９５−１０７（１９９２）；Ｂ
ｅｌｌとＭａｄｒｉ、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３７：７−１２（１９９０）
）。さらに、ＡＩＩは、ウサギ角膜眼およびヒヨコ絨毛尿膜モデルにおいて血管
形成性であることが示された（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．
Ｍｅｄ．１０５：１４１（１９８５）；ＬｅＮｏｂｌｅら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．１９５：３０５−６（１９９１）。したがって、ＡＩＩは、増加
した新血管新生、成長因子の放出、再上皮化、および／または細胞外基質の生成
を通して、創傷治癒を促進するのかもしれない。

【００２０】 ＡＩＩは、また、細胞増殖および分化の両方にも結び付けられている（Ｍｅｆ
ｆｅｒｔら、Ｍｏｌ．ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．１２２：５９
（１９９６））。ＡＩＩ受容体の二つの主要なクラス、ＡＴ_１とＡＴ_２が同定さ
れている（Ｍｅｆｆｅｒｔ、１９９６）。ＡＩＩの増殖促進効果はＡＴ１受容体
に起因すると考えられており、いくつかの証拠によって、ＡＴ２受容体がＡＩＩ
の細胞分化効果の媒介に関与すると示唆される（Ｂｅｄｅｃｓら、Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｊ．３２５：４４９（１９９７））。

【００２１】 ＡＩＩ受容体およびＡＩＩ受容体アゴニストの効果は、血管損傷および修復の
２つのモデルで調べられ、これにより、両方のＡＩＩ受容体サブタイプ（ＡＴ１
とＡＴ２）が創傷治癒に役割を果たしていることが示唆される（Ｊａｎｉａｋら
、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ２０：７３７−４５（１９９２）；Ｐｒｅｓｃｏ
ｔｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３９：１２９１−１２９６（１９９１）；
Ｋａｕｆｆｍａｎら、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．４９：２２３−２２８（１９９１）；
Ｖｉｓｗａｎａｔｈａｎら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １３：７８３−７８６（１９９
２）；Ｋｉｍｕｒａら、ＢＢＲＣ １８７：１０８３−１０９０（１９９２））
。

【００２２】 多くの研究は、ＡＩＩ（１−７）（ＡＩＩ残基１−７）またはＡＩＩの他の断
片にその活性を評価するために焦点を当てた。ＡＩＩ（１−７）は、ＡＩＩに顕
現される効果の全範囲ではなく、いくらかを顕現する。Ｐｆｅｉｌｓｃｈｉｆｔ
ｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２５：５７−６２（１９９２）；
Ｊａｉｓｗａｌら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １９（補刊ＩＩ）：ＩＩ−４９
−ＩＩ−５５（１９９２）；ＥｄｗａｒｄｓとＳｔａｃｋ、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ．Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．２６６：５０６−５１０（１９９３）；Ｊａｉｓ
ｗａｌら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．２６５：６６４−
６７３（１９９１）；Ｊａｉｓｗａｌら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １７：１
１１５−１１２０（１９９１）；Ｐｏｒｔｓｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．１１１．６５２−６５４（１９９４）。

【００２３】 研究により、ＡＩＩは不死化神経細胞株（クロム親和細胞腫由来ＰＣ１２Ｗ、
Ｍｅｆｆｅｒｔ、１９９６）および１８日齢ラット胚からのｒｅｔｒｏｃｈｉａ
ｍａｔｉｃ視床下部の解離初期培養（Ｊｉｒｉｋｏｗｓｋｉら、Ｄｅｖｅｌｏｐ
．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１４：１７９−１８３８１９８４））の両方を阻害する
ことが示された。他の研究により、ラット脳中のＡＴ_１とＡＴ_２受容体の比率は
発達過程で変化し、胎児組織はより多くのＡＴ_２受容体サブタイプを発現し、成
体動物はより多くのＡＴ_１サブタイプを発現することが示された（Ｍｅｆｆｅｒ
ｔ、１９９６）。しかしながら、ほとんどのＣＮＳあるいは末梢神経系（「ＰＮ
Ｓ」）細胞型に対するＡＩＩの効果についてはほとんど知られていない。さらに
、神経細胞幹細胞あるいは前駆細胞によってどのようなＡＩＩ受容体サブタイプ
が発現されているのか、またその増殖能力に対してＡＩＩがどのような効果をも
つのかは知られていない。

【００２４】 ＡＴ２受容体に選択的なペプチドアゴニスト（ＡＩＩはＡＴ１よりもＡＴ２に
１００倍高い親和性を有する）は、ｐ−アミノフェニルアラニン６−ＡＩＩ［「
（ｐ−ＮＨ_２−Ｐｈｅ）６−ＡＩＩ」］、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉ
ｌｅ−Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号３６］であり、ここでＸａａはｐ−Ｎ
Ｈ_２−Ｐｈｅである（ＳｐｅｔｈとＫｉｍ、ＢＢＲＣ １６９：９９７−１００
６（１９９０））。このペプチドは、試験した実験モデルでＡＴ２アンタゴニス
トと同等な結合特徴を与えた（Ｃａｔａｌｉｏｔｏら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ．２５６：９３−９７（１９９４）；Ｂｒｙｓｏｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐ
ｈａｒｍａｃｏｌ．２２５：１１９−１２７（１９９２）。

【００２５】 本発明の特に目的である活性ＡＩ、ＡＩ類似体、ＡＩ断片、およびその類似体
、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片、およびその類似体は、 一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ ［式中、 Ｒ^１およびＲ^２は共に、式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ− で示される基を形成し、 ここで、ＸはＨまたは１−３個のペプチド基であり、 Ｒ^Ａは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタンカルボ
ン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇｌｙ、
Ａｓｐ（ＮＨ_２）、およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａｒ、Ｄ−Ａｒ
ｇ、およびＤ−Ｌｙｓから適切に選択され； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｉ
ｂ、Ａｃｐｃ、Ｌｙｓ、およびＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ａｌａ、
およびアザＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙからなる
群から選択され； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、または６−ＮＨ_２−Ｐｈｅであり； Ｒ^７は、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；および Ｒ^８は、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（Ｂｒ）、Ｉｌｅ、およびＴｙｒからなる群から選択さ
れ、末端Ｔｙｒ基のようにＲ^４を含む配列を除外する］ で示される配列のＲ^１−Ｒ^８基の少なくとも３つ連続したアミノ酸からなる配列
を含む特徴を有する。

【００２６】 本発明の実施に有用なＡＴ２アゴニストのカテゴリー内に該当する化合物は、
Ｒ^６がｐ−ＮＨ_２−Ｐｈｅであるという制限を課した上記で示したＡＩＩ類似体
を含む。ペプチド剤に加えて、必須のＡＴ２アゴニスト活性を有する様々な非ペ
プチド剤（例えば、ペプチドミメティック）が、さらに本発明での利用に考えら
れる。

【００２７】 Ｒ^ＡおよびＲ^Ｂに特に好ましい組合せは、Ａｓｐ−Ａｒｇ、Ａｓｐ−Ｌｙｓ、
Ｇｌｕ−Ａｒｇ、およびＧｌｕ−Ｌｙｓである。このクラスの特に好ましい実施
形態は以下を含む：ＡＩＩ、ＡＩＩＩ、またはＡＩＩ（２−８）、Ａｒｇ−Ｖａ
ｌ−Ｔyｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号２］；ＡＩＩ（３−８ ）、これはデス１−ＡＩＩＩまたはＡＩＶとしても知られる、Ｖａｌ−Ｔｙｒ−
Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号３］；ＡＩＩ（１−７）、Ａｓｐ−
Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ［配列番号４］；ＡＩＩ（２
−７）、Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ［配列番号５］；Ａ
ＩＩ（３−７）、Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ［配列番号６］；Ａ
ＩＩ（５−８）、Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号７］；ＡＩＩ（１
−６）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ［配列番号８］；Ａ
ＩＩ（１−５）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ［配列番号９］；Ａ
ＩＩ（１−４）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ［配列番号１０］；およびＡ
ＩＩ（１−３）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ［配列番号１１］。他の好ましい実施
形態は：Ａｒｇ−ノルＬｅｕ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列
番号１２］、およびＡｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ノルＬｅｕ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｈｅ［配列番号１３］を含む。本発明の範囲内に包含されるさらに別の好ましい
実施形態は、配列Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−
Ｐｈｅ［配列番号３１］を有するペプチドである。ＡＩＩ（６−８）、Ｈｉｓ−
Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号１４］、およびＡＩＩ（４−８）、Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−
Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号１５］も試験し、効果のないことが判明した
。

【００２８】 別の好ましい実施形態において、本発明は、一般式： Ｒ１−ＡＲＧ−ＶＡＬ−ＴＹＲ−Ｒ２−ＨＩＳ−ＰＲＯ−Ｒ３ ［式中、 Ｒ１は、ＨまたはＡｓｐからなる群から選択され； Ｒ２は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、およびＡｌａからなる群から選
択され、 Ｒ３は、ＰｈｅまたはＨである］ からなる配列を含む、増殖または分化を促進するのに十分な量の少なくとも１つ
の活性剤を神経細胞に接触させることを含む、神経細胞の増殖または分化を促進
する方法を提供する。

【００２９】 最も好ましい実施形態では、活性剤は、配列番号１、配列番号２、配列番号４
、配列番号１３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２６、および配列番号
３４からなる群から選択される。

【００３０】 本発明の特に目的である別のクラスの化合物は、一般式ＩＩ Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ ［式中、 Ｒ^２は、Ｈ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａｒ、Ｄ−
Ａｒｇ、およびＤ−Ｌｙｓからなる群から選択され； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｉ
ｂ、Ａｃｐｃ、およびＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、およびア
ザＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙからなる
群から選択され； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、または６−ＮＨ_２−Ｐｈｅであり； Ｒ^７は、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；および Ｒ^８は、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（Ｂｒ）、Ｉｌｅ、およびＴｙｒからなる群から選択さ
れる］ で示される化合物である。

【００３１】 一般式ＩＩの化合物に特に好ましいサブクラスは、式、 Ｒ^２−Ｒ^３−Ｔｙｒ−Ｒ^５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号１６］ ［式中、 Ｒ^２、Ｒ^３、およびＲ^５は、前記で定義した通りである］ を有する。特に好ましいのは、式Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号２］のアンギオテンシンＩＩＩである。他の好ましい化
合物は、構造Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列
番号１７］、およびＡｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ
［配列番号１８］を有するペプチドを含む。断片ＡＩＩ（４−８）は反復試験で
効果がなく；これはＮ末端に露出したチロシンに起因すると信じられている。

【００３２】 上記の式において、アミノ酸残基について標準的な３文字略称を使用する。反
対に表記してない場合、Ｌ型のアミノ酸を意図する。他の残基は以下のように略
する：

【表１】 ＡＩＩおよびその類似体は、γまたはβターンのいずれかをとることが示唆さ
れている（Ｒｅｇｏｌｉら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ
２６：６９（１９７４）。一般に、Ｒ^３、Ｒ^５、およびＲ^７位の中性側鎖は、
受容体への結合および／または固有活性に主に関与するＲ^４、Ｒ^６、およびＲ^８ 位の活性基の間における適切な距離の維持に関与し得る。Ｒ^３、Ｒ^５、およびＲ ^８ 位の疎水性側鎖は、ペプチド全体のコンフォメーションに重要な役割を果たし
得、および／または、仮定上の疎水性ポケットの形成に寄与し得る。

【００３３】 Ｒ^２位のアミノ酸上の適切な側鎖は、標的受容体に対する化合物の親和性に寄
与し得、および／または、ペプチドのコンフォメーションに重要な役割を果たし
得る。この理由から、ＡｒｇおよびＬｙｓは、Ｒ^２として特に好ましい。

【００３４】 本発明の目的において、Ｒ^３は、Ｒ^５（γターンモデルにおいて）またはＲ^６ （βターンモデルにおいて）との線形または非線形水素結合の形成に関与し得る
。Ｒ^３はまた、β逆平行構造（これも可能な構造として提唱されている）の最初
のターンに関与する。一般式Ｉの他の位置とは対照的に、βおよびγ分枝は、こ
の位置で等しく効果的であるようである。さらに、比較的安定なコンフォメーシ
ョンを維持するには１つの水素結合で十分であり得る。したがって、Ｒ^３は、Ｖ
ａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃｐ
ｃ、およびＴｙｒから適切に選択され得る。他の好ましい実施形態において、Ｒ ³ はＬｙｓである。

【００３５】 Ｒ^４に関して、コンフォメーション解析により、この位置（並びにＲ^３および
Ｒ^５）そ側鎖は、受容体の占有および刺激に不可欠であると信じられている疎水
性クラスターに寄与することが示唆された。したがって、Ｒ^４は、好ましくは、
Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、ホモＳｅｒ、Ｓｅｒ、およびアザＴｙｒ
から選択される。フェノール性ヒドロキシルからの水素を受用できる受容体部位
と水素結合を形成し得るため、この位置にはＴｙｒが特に好ましい（Ｒｅｇｏｌ
ｉら、（１９７４）、上記）。さらに好ましい実施形態において、Ｒ^４はＡｌａ
である。

【００３６】 Ｒ^５位には、β脂肪族または脂環式鎖を有するアミノ酸が特に好ましい。それ
ゆえ、ＧｌｙがＲ^５位に適切であるが、この位置のアミノ酸は、Ｉｌｅ、Ａｌａ
、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｇｌｙ、およびＶａｌから選択することが好ましい。

【００３７】 本発明の特に目的であるＡＩ、ＡＩ類似体、ＡＩ断片、およびその類似体、Ａ
ＩＩ、ＡＩＩ類似体、断片、および断片の類似体において、Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａ
ｒｇ、または６−ＨＮ_２−Ｐｈｅである。ヒスチジンのイミダゾール環の独特な
特性（例えば、生理学的ｐＨでのイオン化、プロトンドナーまたはアクセプター
として作用可能であること、芳香族的特徴）は、Ｒ^６としてのその特定の有用性
に寄与すると信じられている。例えば、コンフォメーションモデルにより、Ｈｉ
ｓは、Ｒ^７の配向に影響を与えることにより、水素結合形成（βモデルにおいて
）または逆平行構造の第２ターンに関与し得ることが示唆される。同様に、Ｒ^７ は、Ｒ^８の最も好ましい配向を提供するためにＰｒｏであるべきと現在考えられ
ている。Ｒ^８位において、疎水性環およびアニオン性カルボキシル末端は両方と
も、目的の類似体の受容体への結合に特に有用であるようであり；それゆえ、Ｔ
ｙｒおよび特にＰｈｅが本発明の目的に好ましい。

【００３８】 特に目的である類似体は以下を含む：

【表２】 本発明のポリペプチドは、Ｊ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔとＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ、固
相ペプチド合成、第２版、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ．Ｃｏ．、ロックフ
ォード、イリノイ（１９８４）、および固相合成のためのＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆ
ｅｒ、ホルモン性タンパク質とペプチド、第２巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ、ニューヨーク、（１９７３）、および溶液合成のためのＥ．Ｓｃｈｒｏｄｅ
ｒとＫ．Ｌｕｂｋｅ、ペプチド、第１巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ニュ
ーヨーク、（１９６５）に述べらた方法等の方法により合成され得る。

【００３９】 一般に、これらの方法は、成長ペプチド鎖への保護アミノ酸の連続的添加を含
む（米国特許第５，６９３，６１６号、そのまま参考として本明細書に組込む）
。普通、最初のアミノ酸のアミノまたはカルボキシル基および任意の反応性側鎖
基を保護する。この保護されたアミノ酸を、次いで、不活性固体支持体に付着さ
せるか、または溶液中で使用し、配列における次のアミノ酸（これも適切に保護
する）を、アミド連鎖の形成を受けやすい条件下で加える。すべての所望のアミ
ノ酸を適切な配列で連結させた後、保護基および任意の固体支持体を除去すると
、粗ポリペプチド鎖が得られる。ポリペプチドを脱塩し、好ましくはクロマトグ
ラフィーにより精製すると、最終生成物が得られる。

【００４０】 本発明の１つの実施形態において、アンギオテンシノーゲン、ＡＩ、ＡＩ類似
体、ＡＩ断片、およびその類似体、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片、またはその類似
体、またはＡＩＩ ＡＴ_２ ２型受容体アゴニスト（「活性剤」）への曝露によ
り、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、およびｅｘ ｖｉｖｏで神経細胞幹細
胞および前駆細胞の増殖を増加させる方法が開示される。神経細胞幹細胞および
前駆細胞の単離、精製、ｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏ増殖、およびｉｎ
ｖｉｔｒｏ動員の実験条件が報告されている（Ｆｒｅｄｅｒｉｋｓｅｎら、１９
８８；ＲｅｙｎｏｌｄｓとＷｅｉｓｓ、１９９２；Ｇｒｉｔｔｉら、１９９６；
Ｖｉｃａｒｉｏ−Ａｂｅｊｏｎら、１９９５；Ｊｏｈｅら、１９９６；Ｃｒａｉ
ｇら、１９９６；Ｓｏｈｏｎｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３８３：６２４−６２７、
１９９６、およびＴｏｎｔｓｃｈら、１９９４）。

【００４１】 増殖は、当分野で既知の様々な技術のいずれかを利用して定量され得り、ブロ
モデオキシウリジンの取り込み（Ｖｉｃａｒｉｏ−Ａｂｅｊｏｎら、１９９５）
、^３Ｈ−チミジンの取り込み（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋｓｅｎら、１９８８）、ある
いは非増殖細胞と比べて増殖細胞において高い濃度で存在するタンパク質の抗体
標識を含むがこれに限定されない。好ましい実施形態において、神経細胞幹細胞
および前駆細胞の増殖は、非増殖細胞と比べて増殖細胞において高い濃度で存在
すると知られているタンパク質に対する抗体への反応性により評価され、増殖細
胞核抗原（ＰＣＮＡ、またはサイクリン；Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ、サウスサンフランシスコ、カリフォルニア）を含むがこれに限定されない。

【００４２】 １つの実施形態において、神経細胞は標準の方法にしたがって初期細胞集団か
ら単離し（Ｊｉｒｉｋｏｗｓｋｉら、１９８４；ＲａｙｎｏｌｄｓとＷｅｉｓｓ
、１９９２；Ｊｏｈｅら、１９９６；Ｇｒｉｔｔｉら、１９９６；Ｖｉｃａｒｉ
ｏ−Ａｂｅｊｏｎら、１９９５；Ｋｏｒｄｏｗｅｒら、１９９５；Ｎａｕｅｒｔ
とＦｒｅｅｍａｎ、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ３：１４７−１５１、１
９９４；ＦｒｅｅｍａｎとＫｏｒｄｏｗｅｒ、Ｉｎ：Ｌｉｎｖａｌｌら、ｅｄｓ
．Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｏ
ｖｅｍｅｎｔ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．ニューヨーク：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ、１６３−１７０、１９９１）、細胞培地に懸濁し、好ましくは約０．
１ｎｇ／ｍｌないし約１０ｍｇ／ｍｌの本発明の活性剤存在下でインキュベート
する。該細胞を８ないし２１日間拡大し、細胞増殖を上記したように評価する。

【００４３】 好ましい実施形態において、神経細胞幹細胞および前駆細胞は、成体ラット哺
乳動物前脳あるいはラット胚性海馬から単離された初期細胞から単離する（Ｊｏ
ｈｅら、１９９６）。機械的粉砕あるいはハンクス緩衝食塩液（ＨＢＳＳ）中で
細かくした組織をインキュベートすることにより、細胞集団を解離する。細胞を
遠心分離により回収し、ダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２、グ
ルコース、グルタミン、炭酸水素ナトリウム、２５μｇ／ｍｌインシュリン、１
００μｇ／ｍｌヒトアポトランスフェリン、２０ｎｍプロゲステロン、１００μ
ｍプトレシン、３０ｎｍ亜セレン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）、１０ｎｇ／ｍｌ
組換え体塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ；Ｒ＆Ｄ．Ｉｎｃ）を含む、無血
清培地に再懸濁する（Ｊｏｈｅ、１９９６）。細胞を、当分野で既知のように、
細胞接着因子で予めコーティングした組織培養プレートにプレーティングする。
ＢＦＧＦは毎日添加し、２日ごとに培地を交換する。細胞は、ＨＢＳＳで少しイ
ンキュベートし、セルスクレーパーで剥がすことにより、５０％コンフルエンス
で継代する。

【００４４】 別に、神経細胞幹細胞および前駆細胞は、抗体を介した細胞捕獲により解離細
胞集団から単離される（「パニング」；Ｂａｒｒｅｓら、Ｃｅｌｌ ７０：３１
−４６、１９９２）。神経細胞幹細胞および前駆細胞を単離するのに利用される
抗体は、ネスチン抗体を含むがこれに限定されない（Ｖｉｃａｒｉｏ−Ａｂｅｊ
ｏｎら、１９９５）。次に、細胞を上記のように処理する。

【００４５】 上記のように活性剤に曝露した神経細胞幹細胞および前駆細胞は、パーキンソ
ン病、アルツハイマー病、および筋萎縮性側索硬化症を含むがこれに限定されな
い病気を治療するため、神経細胞代償療法に利用され得る。細胞は、上記のよう
にｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで培養する。細胞をリンスして培養液
をすべて除去し、適切な培地に再懸濁し、その後ペレット化し、数回リンスする
。最後のリンスの後、細胞を０．７×１０^６ないし５０×１０^６細胞／ｍｌで適
切な培地に再懸濁し、以前に述べられた方法にしたがって移植に利用する（Ｋｏ
ｒｄｏｗｅｒら、１９９５；Ｆｒｅｅｄら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２７
：１５４９−１５５５、１９９２；Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３１：１５５−１６
５、１９９２；Ｐｅｓｃｈａｎｓｋｉら、Ｂｒａｉｎ １１７：４８７−４９９
、１９９４；Ｓｐｅｎｃｅｒら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２７：１５４１
−１５４８、１９９２；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．４８
：８２２−８２７、１９９２；Ｈｉｔｃｈｃｏｃｋら、Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．
１２９：３、１９９４；Ｌｉｎｄｖａｌｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：５７４
−５７７、１９９０；Ｗｉｄｎｅｒら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２７：１
５５６−１５６３、１９９２；Ｂａｎｋｉｅｗｉｃｚら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒ
ｇ．７２：２３１−２４４、１９９０；Ｋｏｒｄｏｗｅｒら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒ
ｏｌ．２９：４０５−４１２、１９９１）。

【００４６】 好ましい実施形態において、移植後にグリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮ
Ｆ；Ｂｅｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：３３９−３４１、１９９５；Ｔｏｍａ
ｃら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：３３５−３３９、１９９５）を含むがこれに限定
されない治療タンパク質を発現するために、移植に利用される神経細胞幹細胞お
よび前駆細胞に発現ベクターを形質移入する。

【００４７】 本発明のさらなる態様において、神経細胞幹細胞および前駆細胞に対する活性
剤の効果は、遺伝子発現、表現型、形態の変化を検査することにより、あるいは
完全に分化した細胞から幹細胞および／または前駆細胞を区別するいずれかの他
の方法により評価する。それに対する抗体が得られるそのような分化マーカーの
例には、神経細胞特異的微小管関連タンパク質２（ＭＡＰ２；Ｖｉｃａｒｉｏ−
Ａｂｅｊｏｎら、１９９５；抗体はベーリンガーマンハイム、ドイツから入手可
能）、アストログリア特異的グリア繊維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ；Ｖｉｃａｒ
ｉｏ−Ａｂｅｊｏｎら、１９９５；抗体はＩｎｃｓｔａｒから入手可能）、神経
細胞特異的τタンパク質（Ｊｏｈｅら、１９９６；抗体はシグマ、セントルイス
、ミズーリから入手可能）、ニューロフィラメントＬおよびＭ（Ｊｏｈｅら、１
９９６；抗体はベーリンガーマンハイムから入手可能）、およびオリゴデンドロ
サイト特異的Ｏ４およびガラクトセレブロシド（ＧａｌＣ；Ｊｏｈｅら、１９９
６）が含まれるがこれに限定されない。すべてのこれら分化特異的マーカーのＤ
ＮＡ配列が知られており、よって、分化マーカーの遺伝子発現を評価するＰＣＲ
増幅および／またはハイブリダイゼーション研究が、当分野で標準の方法にした
がって実施可能である（Ｊｏｈｅら、１９９６）。

【００４８】 好ましい実施形態において、神経細胞幹細胞および前駆細胞は、上記のように
単離し培養する。該細胞に、ｂＦＧＦ非存在化の無血清培地で上記のように活性
剤を作用させ、分化を開始する。上記した抗体を利用して、様々な時点で分化特
異的マーカーの免疫検出することにより、分化を評価する（Ｊｏｈｅら、１９９
６）。別に、神経突起の成長を測定することにより、分化を形態学的に評価する
。

【００４９】 本発明の別の態様では、活性剤はｉｎ ｖｉｖｏでの神経細胞幹細胞および前
駆細胞の増殖を増加させるのに使用される。神経細胞幹細胞および前駆細胞の増
殖増加に使用するために、活性剤は、経口、非経口、吸入スプレー、経直腸、ま
たは局所を含む適切な経路により、慣用的な医薬的に許容される担体、アジュバ
ント、および賦形剤を含む投薬単位製剤で投与し得る。本明細書で使用した非経
口なる語は、皮下、静脈内、動脈内、脳室内、筋肉内、胸骨内、腱内、脊髄内、
頭蓋内、胸腔内、注入技術、または腹腔内を含む。

【００５０】 活性剤は、固体形（顆粒、粉末、または坐剤を含む）または液体形（例えば、
溶液、懸濁液、またはエマルジョン）に製造され得、滅菌等の慣用的な医薬的操
作にかけ得、および／または保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤等の慣用
的なアジュバントを含み得る。

【００５１】 活性剤は単一の活性な医薬として投与することができるが、それらは１つ以上
の他の化合物と組み合わせて使用することもできる。組み合わせとして投与する
場合、活性剤および他の化合物は、同じまたは異なる時間に投与する別々の組成
物として製剤化できるか、またあ活性剤および他の化合物は単一の組成物として
投与できる。

【００５２】 投与用に、活性剤は、通常、指示された投与経路に適切な１つ以上のアジュバ
ントと組み合わせる。該化合物は、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、ア
ルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシ
ウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、
アカシア、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および／
またはポリビニルアルコールと混合し得、および慣用的な投与用に錠剤化または
カプセル化し得る。別に、本発明の化合物は、食塩水、水、ポリエチレングリコ
ール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド状溶液、エ
タノール、コーン油、落花生油、綿実油、ゴマ油、トラガカントゴム、および／
または様々な緩衝液に溶解し得る。他のアジュバントおよび投与形態も、医薬分
野で既知である。担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリルまたはジス
テアリン酸グリセリル等の時間遅延物質を、単独で、またはワックスまたは当分
野で既知の他の物質と共に含み得る。

【００５３】 局所的に適切な製剤は、皮膚の透過に適切な液体または半液体製剤（例えば、
リニメント、ローション、軟膏、クリーム、またはペースト）、および眼、耳、
または鼻への投与に適した液剤を含む。

【００５４】 本発明の活性剤を用いて神経細胞幹細胞および前駆細胞のｉｎ ｖｉｖｏ増殖
または分化を増加させる投与計画は、損傷の型、年齢、体重、性、個体の医学的
状態、状態の重度、投与経路、および使用する特定の化合物を含む、様々な因子
に基づく。したがって、投与計画は様々に変化し得るが、標準的な方法を使用し
て医者により日常的に決定できる。約０．１ｎｇ／ｋｇないし約１０ｍｇ／ｋｇ
のアンギオテンシノーゲン、ＡＩ、ＡＩ類似体、ＡＩ断片、およびその類似体、
ＡＩＩ、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片、およびその類似体、および／またはＡＩＩ
ＡＴ_２２型受容体アゴニスト／体重の次元の用量レベルが、本明細書で開示し
た使用の全方法に有用である。

【００５５】 本発明の好ましい実施形態において、活性剤は、Ｃｒａｉｇら、Ｊ．ｏｆ Ｎ
ｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １６：２６４９−２６５８（１９９６）に記載されて
いるように、注入位置に埋め込まれた３０ゲージのカニューレに接続した浸透圧
ポンプ（Ａｌｚａ Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、カリフォルニア）を利用して、哺乳動
物脳側脳室へ片側直接注入することにより投与する。活性剤の活性成分の適切な
注入用量は、好ましくは、１日２回、約０．１ｎｇ／ｋｇないし約１０ｍｇ／ｋ
ｇの投与である。活性成分は、０．００１％〜１０％ｗ／ｗ、例えば、１重量％
〜２重量％の製剤を含み得るが、１０％ｗ／ｗという多くを含んでもよい。しか
し、好ましくは５％ｗ／ｗ以下、より好ましくは０．１％〜１％の製剤を含み得
る。

【００５６】 本発明の別の実施形態において、改良培養培地が神経細胞の増殖および分化の
ために提供され、ここで改良は、有効量の上記の活性剤を細胞培養培地に添加す
ることを含む。神経細胞幹細胞および前駆細胞の成長を支持できる任意の細胞培
養培地を、本発明に使用できる。かかる細胞培養培地は、基礎培地イーグル、ダ
ルベッコ修飾イーグル培地、イスコーブ（Ｉｓｃｏｖｅ）修飾ダルベッコ培地、
マックコイ（ＭｃＣｏｙ）培地、最小必須培地、Ｆ−１０栄養混合物、Ｏｐｔｉ
−ＭＥＭ（登録商標）減少血清培地、ＲＰＭＩ培地、およびマクロファージ−Ｓ
ＦＭ培地、またはその組み合わせを含むがこれに限定されない。

【００５７】 改良培養培地は、濃縮（すなわち１０×）または非濃縮形で供給され得、液体
、粉末、または凍結乾燥物として供給され得る。細胞培養物は、化学的に定めら
れ得るか、または血清補充を含み得る。培養培地は、ギブコＢＲＬ（ガイザーズ
バーグ、メリーランド）およびシグマ（セントルイス、ミズーリ）等の多くの源
から市販で入手可能である。

【００５８】 さらなる態様において、本発明は、神経細胞幹細胞および前駆細胞の増殖のた
めのキットを提供するものであって、該キットは有効量の本発明の活性剤を含む
。

【００５９】 好ましい実施形態において、該キットは、さらに細胞培養増殖培地を含む。神
経細胞幹細胞および前駆細胞の増殖を支持できる任意の細胞培養培地を、本発明
で使用できる。かかる細胞培養培地の例は、上記している。

【００６０】 改良細胞培養培地は、濃縮（すなわち１０×）または非濃縮形で供給され得、
液体、粉末、または凍結乾燥物として供給され得る。細胞培養物は、化学的に定
められ得るか、または血清補充を含み得る。

【００６１】 別の好ましい実施形態において、該キットは、さらに無菌容器を含む。該無菌
容器は、細胞培養フラスコ、ローラーボトル、または遠心チューブ等の封入容器
、または細胞培養プレートまたはマイクロタイタープレート（ヌンク；Ｎａｐｅ
ｒｖｉｌｌｅ、イリノイ）等の封入のない容器を含むことができる。

【００６２】 さらなる好ましい実施形態において、該キットは、さらに、戻した細胞増殖培
地に包含させるための抗生物質補充を含む。適切な抗生物質補充の例は、アクチ
ノマイシンＤ、フンジゾン（登録商標）、カナマイシン、ネオマイシン、ナイス
タチン、ペニシリン、ストレプトマイシン、またはその組み合わせ（ギブコ）を
含むがこれに限定されない。

【００６３】 本発明は、添付の実施例を参照してより良く理解され、これは説明の目的のみ
のためであり、添付の特許請求の範囲に定義されるような本発明の範囲を制限す
るものと解釈するべきではない。

【００６４】実施例１ 正常ヒト神経細胞前駆細胞の増殖および分化に対するＡＩＩの効果 正常ヒト前駆細胞はＣｌｏｎｅｔｉｃｓ（サンディエゴ、カリフォルニア）か
ら購入し、神経前駆細胞維持培地（ＮＰＭＭ）（ヒト組換え体線維芽細胞成長因
子β、ヒト組換え体上皮成長因子、神経生存因子、ゲンタマイシン、およびアン
ホテリシンＢを含む、神経細胞前駆細胞基礎培地）で培養した。細胞を融解し、
ＮＰＭＭで希釈し、７５ｃｍ^２フラスコで２４時間培養した。細胞は、分化を評
価する研究を実施するまで、脱分化した球状体で培養した。接着と分化を可能に
する培養基質上に細胞を置く前に（後述）、１、１０、または１００μｇ／ｍｌ
ＡＩＩ存在下の懸濁培養で４〜７日間培養した時点で、分化可能な細胞数の増
加（すなわち、増殖）を観察した（表１）。

【００６５】

【表３】 分化の評価 神経細胞の分化を評価するため、ホウ酸緩衝液中の０．０５％ポリエチレンイ
ミン（ＰＥＩ）基質でコーティングしたウェルに、細胞を播種した。０．０５ｍ
ｌのこの溶液で、９６ウェルプレートのウェルを、室温にて一晩コーティングし
た。インキュベート後、吸引によりこの基質を除去し、滅菌水でリンスし、細胞
を播種する前に乾燥させた。

【００６６】 ＡＩＩ存在下で４〜７日間細胞を培養した後（増殖を評価するため）、細胞を
洗浄し、分化を評価するためにＰＥＩコーティングしたウェルにプレーティング
した。プレーティングから４日後、神経突起の成長によって評価することにより
、分化している細胞数を測定した（表１を参照）。

【００６７】 さらなる研究において、神経細胞前駆細胞の分化に対するＡＩＩの効果を評価
した。ＰＥＩ基質への接着後、細胞は増殖を止めて分化および神経突起の成長を
起こす。様々な濃度のＡＩＩ存在下または非存在下で、各ウェルに１，０００個
の細胞をプレーティングした。培養開始から４および７日後、分化している細胞
の神経突起のサイズ（接眼ミクロメーターでの測定による）、および分化してい
る細胞数を評価した。ＡＩＩ存在下での細胞の培養では、神経突起の成長の比率
が増加し（図１を参照）、分化している細胞数はおよそ５０％増加した（データ
は示さず）。

【００６８】 これらの研究から、ＡＩＩへの曝露が、正常ヒト神経細胞前駆細胞の増殖およ
び分化を促進することが示される。

【００６９】実施例２ 正常ヒト神経前駆細胞の増殖に対するＡＩＩ、ＡＩＩ（１−７）、お
よびＡｌａ４−ＡＩＩＩの効果 正常ヒト前駆細胞はＣｌｏｎｅｔｉｃｓ（サンディエゴ、カリフォルニア）か
ら購入し、神経細胞前駆細胞維持培地（ＮＰＭＭ）（ヒト組換え体線維芽細胞成
長因子β、ヒト組換え体上皮成長因子、神経生存因子、ゲンタマイシン、および
アンホテリシンＢを含む、神経細胞前駆細胞基礎培地）で培養した。細胞を融解
し、ＮＰＭＭで希釈し、７５ｃｍ^２フラスコで２４時間培養した。分化を評価す
る研究を実施するまで、細胞は脱分化した球状体で培養した。接着を可能にする
コラーゲンコーティングしたプレートに細胞を置く前に、１０μｇ／ｍｌ ＡＩ
Ｉ［配列番号１］、ＡＩＩ（１−７）［配列番号４］、またはＡｌａ４−ＡＩＩ
Ｉ［配列番号１８］の存在下の懸濁培養で細胞を培養した時点で、分化可能な細
胞数の増加を観察した（図２）。ウェル中のヒト神経前駆細胞は数の増加は、Ａ
ＩＩ存在下で３００％、Ａｌａ４−ＡＩＩＩ存在下で１７５％、ＡＩＩ（１−７
）存在下で１００％である一方、コントロールウェルではたったの３３％であっ
た。これらの研究により、これらのペプチドが正常ヒト神経細胞前駆細胞の増殖
を促進することが示される。

【００７０】 本発明は、神経細胞の増殖を促進する方法を提供することにより、神経細胞幹
細胞および前駆細胞の移植の臨床的利点を大きく増大するであろう。様々な神経
細胞型に分化可能な幹細胞をより多く供給するであろう神経細胞幹細胞の「自己
複製」の増加、および適切な位置で神経細胞前駆細胞および分化した細胞をより
多く供給するであろう分化を伴う増殖のどちらとも、真実である。同様に、神経
細胞幹細胞、前駆細胞、および分化した細胞のｉｎ ｖｉｖｏ増殖を増加する方
法は、パーキンソン病、アルツハイマー病、および筋萎縮性側索硬化症を含む多
くの神経変性病を治療する上で、有益である。

【００７１】 本発明の方法は、形質移入に用いるそのような細胞をより効率的に多数供給す
ることにより、また、形質移入した神経細胞幹細胞および前駆細胞を迅速に拡大
するより効率的な方法を提供することにより、中枢および末梢神経系の病気にお
ける遺伝子治療の媒介としての、神経細胞幹細胞および前駆細胞の可能性ある有
用性も増大させる。

【００７２】 本発明は、前記の特定の好ましい実施形態により限定されない。様々な変更を
、本発明の概念から逸脱することなく、開示された好ましい実施形態に施し得る
ことは、当業者に理解されるであろう。すべてのかかる変更は、本発明の範囲に
ある。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒト神経細胞前駆細胞の神経突起成長に対するＡＩＩの効果。

【図２】 正常ヒト神経前駆細胞の増殖に対するＡＩＩ、ＡＩＩ（１−７）、およびＡｌ
ａ４−ＡＩＩＩの効果。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者 ディゼレガ、 ギーア アメリカ合衆国 91106 カリフォルニア 州 パサデナ ヒルクレスト アヴェニュ ー 1270 Ｆターム(参考） 4B065 AA93X BB19 BB34 CA44 CA46 4C084 AA02 BA01 BA15 BA16 BA17 BA18 DB59 ZA012 4H045 AA10 BA12 BA15 BA17 CA40 DA01 EA20 EA50 FA74

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 神経細胞の増殖または分化を促進する方法であって、 一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ ［式中、 Ｒ^１およびＲ^２は共に、式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ− で示される基を形成し、 ここで、ＸはＨまたは１〜３個のペプチド基であり、 Ｒ^Ａは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
   Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）、およびＳｕｃから選択
   され； Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａｒ、Ｄ−Ａｒ
   ｇ、およびＤ−Ｌｙｓから選択され； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｉ
   ｂ、Ａｃｐｃ、Ｌｙｓ、およびＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ａｌａ、
   およびアザＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙからなる
   群から選択され； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、または６−ＮＨ_２−Ｐｈｅであり； Ｒ^７は、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；および Ｒ^８は、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（Ｂｒ）、Ｉｌｅ、およびＴｙｒからなる群から選択さ
   れ、末端Ｔｙｒ基のようにＲ^４を含む配列を除外する］ で示される配列のＲ^１−Ｒ^８基の少なくとも３つ連続したアミノ酸からなる配列
   を含む、少なくとも１つの活性剤の、増殖または分化を促進するのに有効な量と
   、神経細胞を接触させることを含む、上記方法。
2. 【請求項２】 活性剤が、アンギオテンシノーゲン、配列番号１、配列番号２、
   配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、
   配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列
   番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番
   号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号
   ２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３
   １、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６
   、および配列番号３７からなる群から選択される、請求項１の方法。
3. 【請求項３】 活性剤が、配列番号１、配列番号４、または配列番号１８である
   、請求項１の方法。
4. 【請求項４】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｋｇないし約１０．０ｍｇ／ｋ
   ｇである、請求項１の方法。
5. 【請求項５】 神経細胞の増殖または分化促進のための改良細胞培養培地であっ
   て、改良は、一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ ［式中、 Ｒ^１およびＲ^２は共に、式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ− で示される基を形成し、 ここで、ＸはＨまたは１−３個のペプチド基であり、 Ｒ^Ａは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
   Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）、およびＳｕｃから選択
   され； Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａｒ、Ｄ−Ａｒ
   ｇ、およびＤ−Ｌｙｓから選択され； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｉ
   ｂ、Ａｃｐｃ、Ｌｙｓ、およびＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ａｌａ、
   およびアザＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙからなる
   群から選択され； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、または６−ＮＨ_２−Ｐｈｅであり； Ｒ^７は、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；および Ｒ^８は、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（Ｂｒ）、Ｉｌｅ、およびＴｙｒからなる群から選択さ
   れ、末端Ｔｙｒ基のようにＲ^４を含む配列を除外する］ で示される配列のＲ^１−Ｒ^８基の少なくとも３つ連続したアミノ酸からなる配列
   を含む、少なくとも１つの活性剤の、神経細胞の増殖または分化を促進するのに
   有効な量を、細胞培養培地に添加することを含む、上記改良細胞培養培地。
6. 【請求項６】 活性剤が、アンギオテンシノーゲン、配列番号１、配列番号２、
   配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、
   配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列
   番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番
   号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号
   ２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３
   １、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６
   、および配列番号３７からなる群から選択される、請求項５の改良細胞培養培地
   。
7. 【請求項７】 活性剤が、配列番号１、配列番号４、または配列番号１８である
   、請求項５の改良細胞培養培地。
8. 【請求項８】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｋｇないし約１０．０ｍｇ／ｋ
   ｇである、請求項５の改良細胞培養培地。
9. 【請求項９】 神経細胞の増殖または分化を促進するキットであって、 （ａ）一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ ［式中、 Ｒ^１およびＲ^２は共に、式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ− で示される基を形成し、 ここで、ＸはＨまたは１−３個のペプチド基であり、 Ｒ^Ａは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
   Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）、およびＳｕｃから選択
   され； Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａｒ、Ｄ−Ａｒ
   ｇ、およびＤ−Ｌｙｓから選択され； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｉ
   ｂ、Ａｃｐｃ、Ｌｙｓ、およびＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ａｌａ、
   およびアザＴｙｒからなる群から選択され； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙからなる
   群から選択され； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、または６−ＮＨ_２−Ｐｈｅであり； Ｒ^７は、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；および Ｒ^８は、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（Ｂｒ）、Ｉｌｅ、およびＴｙｒからなる群から選択さ
   れ、末端Ｔｙｒ基のようにＲ^４を含む配列を除外する］ で示される配列のＲ^１−Ｒ^８基の少なくとも３つ連続したアミノ酸からなる配列
   を含む、少なくとも１つの活性剤の、神経細胞の増殖または分化を促進するのに
   有効な量；および （ｂ）神経細胞の増殖または分化を促進するのに有効な量の活性剤を使用するた
   めの説明書を含む、上記キット。
10. 【請求項１０】 活性剤が、アンギオテンシノーゲン、配列番号１、配列番号２
    、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８
    、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配
    列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列
    番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番
    号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号
    ３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３
    ６、および配列番号３７からなる群から選択される、請求項９のキット。
11. 【請求項１１】 活性剤が、配列番号１、配列番号４、または配列番号１８であ
    る、請求項９のキット。
12. 【請求項１２】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｋｇないし約１０．０ｍｇ／
    ｋｇである、請求項９のキット。
13. 【請求項１３】 神経細胞の増殖または分化を促進する方法であって、 以下の一般式： Ｒ１−ＡＲＧ−ＶＡＬ−ＴＹＲ−Ｒ２−ＨＩＳ−ＰＲＯ−Ｒ３ ［式中、 Ｒ１は、ＨまたはＡｓｐからなる群から選択され； Ｒ２は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、およびＡｌａからなる群から選
    択され、 Ｒ３は、ＰｈｅまたはＨである］ からなる配列を含む、少なくとも１つの活性剤の、増殖または分化を促進するの
    に有効な量と、神経細胞を接触させることを含む、上記方法。
14. 【請求項１４】活性剤が、配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号１３
    、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２６、および配列番号３４からなる群
    から選択される、請求項１３の方法。
15. 【請求項１５】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｋｇないし約１０．０ｍｇ／
    ｋｇである、請求項１３の方法。
16. 【請求項１６】 神経細胞の増殖または分化促進のための改良細胞培養培地であ
    って、改良は、一般式Ｉ Ｒ１−ＡＲＧ−ＶＡＬ−ＴＹＲ−Ｒ２−ＨＩＳ−ＰＲＯ−Ｒ３ ［式中、 Ｒ１は、ＨまたはＡｓｐからなる群から選択され； Ｒ２は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、およびＡｌａからなる群から選
    択され、 Ｒ３は、ＰｈｅまたはＨである］ からなる配列を含む、少なくとも１つの活性剤の、神経細胞の増殖または分化を
    促進するのに有効な量を、細胞培養培地に添加することを含む、上記改良細胞培
    養培地。
17. 【請求項１７】 活性剤が、配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号１
    ３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２６、および配列番号３４からなる
    群から選択される、請求項１６の改良細胞培養培地。
18. 【請求項１８】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｋｇないし約１０．０ｍｇ／
    ｋｇである、請求項１６の改良細胞培養培地。
19. 【請求項１９】 神経細胞の増殖または分化を促進するキットであって、 （ａ）一般式 Ｒ１−ＡＲＧ−ＶＡＬ−ＴＹＲ−Ｒ２−ＨＩＳ−ＰＲＯ−Ｒ３ ［式中、 Ｒ１は、ＨまたはＡｓｐからなる群から選択され； Ｒ２は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、およびＡｌａからなる群から選
    択され、 Ｒ３は、ＰｈｅまたはＨである］ からなる配列を含む、少なくとも１つの活性剤の、神経細胞の増殖または分化を
    促進するのに有効な量；および （ｂ）神経細胞の増殖または分化を促進するのに有効な量の活性剤を使用するた
    めの説明書を含む、上記キット。
20. 【請求項２０】 活性剤が、配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号１
    ３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２６、および配列番号３４からなる
    群から選択される、請求項１８のキット。
21. 【請求項２１】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｋｇないし約１０．０ｍｇ／
    ｋｇである、請求項１８のキット。