JP2002308765A - 血管新生抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 血管新生抑制効果の高い血管新生抑制剤を提
供する。 【解決手段】 ドコサペンタエン酸とその誘導体の少な
くとも一方を有効成分とする。ドコサペンタエン酸ある
いはその誘導体で血管新生を促進する因子である増殖因
子の受容体の発現量を変化させることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、炎症、癌等の腫瘍
増殖や転移、網膜症、動脈硬化の治療などに用いられる
血管新生抑制剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】血管新生は既存の血管より血管内皮細胞
が浸潤、増殖、遊走などの過程を経て形成されるもので
ある。この血管新生は炎症、創傷治癒、網膜症、動脈硬
化、固形腫瘍、慢性関節リウマチなどの血管新生症に認
められるものであり、これらの疾患との関係に興味が集
まっている。そのため、これら疾患の治療目的で各種の
血管新生抑制剤が開発されており、例えば、ドコサヘキ
サエン酸（ＤＨＡ）やイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を
有効成分とする血管新生抑制剤が提案されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ＤＨＡ
やＥＰＡを有効成分とする血管新生抑制剤よりもさらに
効果の高い血管新生抑制剤が望まれていた。

【０００４】本発明は上記の点に鑑みてなされたもので
あり、血管新生抑制効果の高い血管新生抑制剤を提供す
ることを目的とするものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明の請求項１に係る
血管新生抑制剤は、ドコサペンタエン酸とその誘導体の
少なくとも一方を有効成分とすることを特徴とするもの
であり、ドコサペンタエン酸あるいはその誘導体が、血
管新生を促進する因子である増殖因子（ＶＥＧＦ；Vasc
uar Endothelial Growth Factor）の受容体（ＶＥＧＦ
受容体）の発現量を変化させることにより、血管新生を
抑制することができると考えられる。

【０００６】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を説明
する。

【０００７】本発明の血管新生抑制剤はドコサペンタエ
ン酸及び／又はその誘導体を有効成分とするものであ
る。ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）はｎ−３系の不飽和
脂肪酸（２２：５，ｎ−３）であって、魚類より抽出し
た魚油やアザラシ（タテゴトアザラシ、頭巾アザラシ等
を含む）等の海洋哺乳動物から抽出した油に遊離酸とし
て含まれている。特に、アザラシ油にはドコサペンタエ
ン酸が豊富に含まれている。本発明では魚油やアザラシ
油を単離精製して得たドコサペンタエン酸を用いること
ができるが、魚油やアザラシ油には他の有用な不飽和脂
肪酸（ＥＰＡやＤＨＡ）なども含まれているので、これ
ら他の成分を含んだ状態で精製したものを用いても良
い。また、上記魚油やアザラシ油からの抽出以外に、遺
伝子組み換え技術を用いた方法によって微生物が産生し
たものを精製して得られるドコサペンタエン酸及びその
誘導体を用いても良い。

【０００８】ドコサペンタエン酸の誘導体はドコサペン
タエン酸のエステルやグリセリド及び塩類などであっ
て、ドコサペンタエン酸のエステルとしてはエチルエス
テルやメチルエステルなどを、ドコサペンタエン酸のグ
リセリドとしてはモノグリセリド、ジグリセリド、トリ
グリセリドを、ドコサペンタエン酸の塩類としてはナト
リウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などをそれぞれ例
示することができる。本発明では魚油やアザラシ油から
単離精製したドコサペンタエン酸の誘導体を用いること
ができる。また、本発明では上記の精製されたドコサペ
ンタエン酸からドコサペンタエン酸の誘導体を合成して
用いても良い。

【０００９】そして、本発明ではドコサペンタエン酸あ
るいはドコサペンタエン酸の誘導体を血管新生抑制剤と
するものである。

【００１０】本発明の血管新生抑制剤は他の成分と混合
せずにそのままで経口的あるいは非経口的に投与するこ
とができる。また、本発明の血管新生抑制剤は製薬上容
認しうる他の成分と混合して経口投与剤や非経口投与剤
の医薬組成物を調製し、これらを投与することができ
る。経口投与剤としては粉末、顆粒、錠剤、カプセル
剤、シロップ剤および液剤等を例示することができる。
粉末、顆粒、錠剤等として処方される場合は公知の製薬
担体を用いることができ、例えば、澱粉やブドウ糖等の
賦形剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、結晶セ
ルロース等の崩壊剤、アラビアゴム等の結合剤などを用
いて構成することができる。また、カプセル剤として処
方される場合は公知の成分、例えば、ゼラチン等で作製
したカプセルに内包させて構成することができる。ま
た、シロップや液剤として処方される場合は公知の成
分、例えば、エデト酸ナトリウム等などの安定剤、アラ
ビアゴム等の懸濁化剤、ブドウ糖等の矯味剤などを用い
て構成することができる。また、非経口投与剤としては
注射剤等を例示することができる。注射剤として処方さ
れる場合、例えば、注射用蒸留水や生理食塩水等の溶
剤、エデト酸ナトリウム等の安定化剤、塩酸やクエン酸
等のｐＨ調整剤、メチルセルロース等の懸濁化剤などを
用いて構成することができる。

【００１１】尚、上記の他に、公知の方法を用いて経口
投与剤や非経口投与剤の医薬組成物を調製することがで
きる。

【００１２】また、本発明の血管新生抑制剤は公知の食
品、例えば、ジュース、清涼飲料、パン、クッキー、菓
子等に添加し、健康食品や栄養補助食品等を形成しても
良い。

【００１３】本発明の血管新生抑制剤の投与量は疾患の
種類や患者の年齢、性別、体重、症状によって異なる
が、成人一日当たり３ｍｇ以上にするのが好ましく、こ
れよりも少ないと血管新生抑制の効果を充分に得ること
ができなくなる恐れがある。また、本発明の血管新生抑
制剤は多量に摂取しても人体に害はなく、特に一日当た
り投与量の上限は設定されない。

【００１４】そして、本発明の血管新生抑制剤はドコサ
ペンタエン酸あるいはその誘導体が血管新生を促進する
因子である増殖因子（ＶＥＧＦ；Vascuar Endothelial
Growth Factor）の受容体（ＶＥＧＦ受容体）の発現量
を変化させることにより、血管新生を抑制することがで
きると考えられる。すなわち、ドコサペンタエン酸ある
いはその誘導体がＶＥＧＦ受容体のうちFlt-1の発現量
を通常（ドコサペンタエン酸あるいはその誘導体を投与
しない場合）よりも上昇(up-regulation)させ、且つド
コサペンタエン酸あるいはその誘導体がＶＥＧＦ受容体
のうちKDR(F1k-1)の発現量を通常よりも抑制(down-regu
lation)させることにより、血管新生が抑制されるもの
と考えられる。

【００１５】そして、本発明の血管新生抑制剤は、炎
症、癌等の腫瘍増殖や転移、網膜症、動脈硬化、慢性関
節リウマチなどの血管新生症の治療に好適に用いること
ができる。特に、癌細胞をγ線照射や従来の制癌剤でた
たいた後又は手術で摘出した後に、癌の転移を抑制する
ために本発明の血管新生抑制剤を用いることができる。
又、従来の制癌剤の副作用の軽減を目的として、制癌剤
の投与量を減らして本発明の血管新生抑制剤を投与する
のが好ましい。

【００１６】

【実施例】以下本発明を実施例によって具体的に説明す
る。

【００１７】［ウシ頸動脈内皮細胞の培養］ウシの頸動
脈をDispase（合同酒精株式会社製のメタロプロテアー
ゼ）を用いて処理してウシ頸動脈内皮細胞を得た。Disp
aseの濃度は１０００ユニット/ミリリットル、温度は３
７℃とし、処理時間を１５分間とした。次に、分離した
ウシ頸動脈内皮細胞をイーグル最小必須培地（Gibco研
究所製のＭＥＭであって、１．０ｇ／リットルのグルコ
ース）で培養した。この時、イーグル最小必須培地には
２０％の胎児ウシ血清（Whittaker社製のＦＢＳ）と、
１００ユニット／ミリリットルのペニシリンと、１００
μｇ／ミリリットルのストレプロマイシンを添加した。
また、ウシ頸動脈内皮細胞は二酸化炭素濃度が５％のし
めった空気中で３７℃の温度で培養した。また、上記の
抗生物質は培養の最初に添加した。

【００１８】次に、上記のウシ頸動脈内皮細胞を１：４
の割合に機械的に分けると共に分けたウシ頸動脈内皮細
胞を１０％の胎児ウシ血清を添加した培地で培養した。
培養したウシ頸動脈内皮細胞には電子顕微鏡により細胞
質のWeibel-Palade小体がある内皮細胞が観測され、そ
れらはフルオレセイン・トレースのアセチル低濃度リポ
タンパク質組込調査によってその均質性が確認された。

【００１９】そして、このようにして４−７代継代した
ウシ頸動脈内皮細胞を得た。

【００２０】（実施例）以下の実験は複製された直径１
２ｍｍで１２−Ｗｅｌｌの培地を用いて行った。

【００２１】まず、１０％のＦＢＳを添加した１．５ミ
リリットルのＭＥＭ中で１×１０⁵個に培養されたウシ
頸動脈内皮細胞（４−７代継代）にドコサペンタエン酸
（Biomol研究所から入手した純度９７％以上のもの）を
５μｇ／ミリリットルになるように添加し、４８時間静
置して前処理を行った。次に、前処理されたウシ頸動脈
内皮細胞を０．７５ミリリットルのコラーゲンゲルで培
養した。このコラーゲンゲルとしては、８体積部のVitr
ogen100（９５〜９８％のタイプＩコラーゲンと、残部
をタイプIIIコラーゲンで構成したものであって、コラ
ーゲン社製）と、１体積部の水酸化ナトリウム水溶液
（濃度０．１Ｎ）と、１体積部のＭＥＭ（ｐＨ７．４で
１０倍に希釈したもの）とを混合したものを用い、培養
時間は２４時間とした。

【００２２】この後、上記のコラーゲンゲルの培地の上
澄み液を吸引除去し、次に、この培地に０．５ミリリッ
トルのコラーゲンゲルを被せて蓋をした。この状態で３
日間培養した後、形成された管腔の長さを測定した。

【００２３】（比較例１）ドコサペンタエン酸の代わり
に、アラキドン酸（ＡＡ；２０：４，ｎ−６）を用いた
以外は実施例１と同様にした。

【００２４】（比較例２）ドコサペンタエン酸の代わり
に、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ；２０：５，ｎ−
３）を用いた以外は実施例１と同様にした。

【００２５】（比較例３）ドコサペンタエン酸の代わり
に、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ；２２：６，ｎ−３）
を用いた以外は実施例１と同様にした。

【００２６】（比較例４）ドコサペンタエン酸を用いな
かった以外は実施例１と同様にした。

【００２７】上記の結果を図１にグラフで示す。

【００２８】図１から明らかなように、ドコサペンタエ
ン酸で前処理した実施例は比較例１〜４と対比して、形
成された管腔の長さが短く、血管形成が抑制されたこと
が確認された。

【００２９】また、ドコサペンタエン酸及びその誘導体
を用いて以下のような試験を行った。

【００３０】ラットにＤＰＡ、ＤＰＡエチルエステル、
ＤＰＡ含有トリグリセリドをそれぞれ摂取させた。上記
の成分はＤＰＡ量として６０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙになる
ように食餌に添加して４週間後の肝臓のリン脂質に含有
されるＤＰＡ量をガスクロマトグラフィーで分析したと
ころ、全脂肪酸に対するＤＰＡの割合は投与前値の０．
３±０．１からそれぞれ１．７±０．３（ＤＰＡを投与
したもの）、１．９±０．４（ＤＰＡエチルエステルを
投与したもの）、２．１±０．３（ＤＰＡ含有トリグリ
セリドを投与したもの）とほぼ同様な上昇が認められ
た。

【００３１】この結果より、ＤＰＡの種々の誘導体は生
体内でＤＰＡとして同様な作用を有することが推測され
る。

【００３２】尚、この試験の条件は以下の通りである。 動物：１４週雄性ラット、各群６匹 食餌：脂肪として１０％となるように調整、１日あたり
摂取量１５ｇ、各々摂取されたＤＰＡとしてはおよそ６
０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ 投与期間：４週間 脂肪酸分析：肝臓リン脂質分画中の各種脂肪酸をメチル
エステル化して下記条件のガスクロマトグラフィーで分
析 ガスクロマトグラフィーの分析条件 GC:HP5890II AutoSampler:HP7673B Integrator:HP3396II Sample:脂肪酸メチルエステル Columm:DB225(50%シアノプロピルフェニルメチルポリシ
ロキサン) 内径0.5mm,膜厚0.25μm,長さ30m Carrier:He1.2ml/min,20.0psi,CONST FLOW Oven:160℃(2min)to 220℃ 5℃/min Injector:250℃ split 150:1 Detector:FID300℃ He35ml/min,Air400ml/min,MakeupHe30ml Sample size:1μl

【００３３】

【発明の効果】上記のように本発明の請求項１の発明
は、ドコサペンタエン酸とその誘導体の少なくとも一方
を有効成分とすることを特徴とするものであり、ドコサ
ペンタエン酸あるいはその誘導体で血管新生を促進する
因子である増殖因子の受容体の発現量を変化させること
ができ、血管新生抑制効果を高くすることができるもの
である。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例及び比較例１〜４の実験結果を示すグラ
フである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ドコサペンタエン酸とその誘導体の少な
   くとも一方を有効成分とすることを特徴とする血管新生
   抑制剤。