JP2002296282A - 外因性内分泌攪乱物質の検出方法 - Google Patents

外因性内分泌攪乱物質の検出方法

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JP2002296282A
JP2002296282A JP2001103129A JP2001103129A JP2002296282A JP 2002296282 A JP2002296282 A JP 2002296282A JP 2001103129 A JP2001103129 A JP 2001103129A JP 2001103129 A JP2001103129 A JP 2001103129A JP 2002296282 A JP2002296282 A JP 2002296282A
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Haruki Mizukami
春樹 水上
Kazuto Nishi
和人 西
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Enbiotec Lab Kk
ENBIOTEC LABORATORIES KK
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Enbiotec Lab Kk
ENBIOTEC LABORATORIES KK
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Abstract

(57)【要約】 【目的】真に、鋭敏、かつ、簡便な、外因性内分泌攪乱
物質の検出方法を提供すること。 【解決手段】エストロゲンレセプターのコ・アクチベー
ターを構成する蛋白質のアミノ酸配列うち、１０〜５０
アミノ酸残基からなる配列のペプチドを選択して、かか
るペプチドのエストロゲンレセプターに対する反応と外
因性内分泌攪乱物質の存在とを関連付けて、外因性内分
泌攪乱物質を検出する、外因性内分泌攪乱物質の検出方
法を提供することにより、上記の課題を解決し得ること
を見出した。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微量物質の検出方
法に関する発明である。
【０００２】
【従来の技術】近代工業の発展の歪みにより、様々な環
境汚染物質の存在が、現在、問題となりつつある。特
に、極めて微量で、生物の内分泌系に影響を与える外因
性内分泌攪乱物質（いわゆる、環境ホルモン）の存在
は、最近、非常に深刻な問題と考えられている。他の外
因性内分泌攪乱物質と同様に、外因性内分泌攪乱物質
も、簡便で鋭敏な検出法を開発することが、この物質に
よる汚染をくい止める前提となると考えられる。しかし
ながら、厄介なのは、上述したように、外因性内分泌攪
乱物質が、極めて微量で、生物の内分泌系に影響を起こ
し得るということである。つまり、陽性として検出され
るべき場合でも、従来の微量物質の検出方法では、陰性
として検出されるおそれが強いということである。ま
た、鋭敏性を追求すれば、当然、コスト高となり、汎用
性に限界を生ずることとなる。
【０００３】そこで、現在、鋭敏で、かつ、簡便な外因
性内分泌攪乱物質の検出手段を提供するための様々な試
みが行われている。例えば、外因性内分泌攪乱物質のエ
ストロゲン作用（女性ホルモン様作用）を検出する方法
として、エストロゲンレセプター等のホルモンレセプタ
ーに結合する外因性内分泌攪乱物質を検出する、ホルモ
ンレセプター結合アッセイが知られている。ホルモンレ
セプター結合アッセイは、ホルモンレセプターに、標識
ホルモンと外因性内分泌攪乱物質を反応させ、外因性内
分泌攪乱物質がホルモンレセプターに対して親和性を有
している場合における、標識ホルモンのホルモンレセプ
ターへの結合を競合的に阻害する、阻害反応を指標とし
た検出法である。
【０００４】また、コ・アクチベーターを利用した方法
として、組換えコ・アクチベータをセンサーチップに固
定化して、外因性内分泌攪乱物質とホルモンレセプター
の反応を、ＳＲＰ（表面プラズモン共鳴）により検出す
る方法も知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の試みにもかかわらず、未だ、様々な問題点が解決され
ずに認められる。
【０００６】まず、ホルモンレセプター結合アッセイに
おいては、外因性内分泌攪乱物質のホルモンレセプター
への結合のみを検出する方法であるために、被検物質
が、ホルモンレセプターに対するアゴニストであるのか
アンタゴニストであるのかの区別がつかなかった。ま
た、コ・アクチベーターのＳＲＰ検出法においては、遺
伝子組換えコ・アクチベーターを用いているために、現
状では、開発コストや製造コストがかかり、その結果、
アッセイキットが高価になると共に、特に、βエストラ
ジオール（女性ホルモン）をサンプルとした場合の検出
感度が、期待ほど高くない。
【０００７】そこで、本発明が解決すべき課題は、真
に、鋭敏、かつ、簡便な、外因性内分泌攪乱物質の検出
方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、この課題の
解決に向けて、コ・アクチベーターを用いた外因性内分
泌攪乱物質の検出方法について、さらに深く検討を行っ
た。
【０００９】その結果、外因性内分泌攪乱物質による雄
の雌化に深く関連する、エストロゲンレセプターの、コ
・アクチベーターを構成する蛋白質のアミノ酸配列の一
部を、外因性内分泌攪乱物質の指標とすることにより、
エストロゲンレセプターに作用する外因性内分泌攪乱物
質を、簡便、かつ、鋭敏に検出可能であることを見出
し、本発明を完成した。
【００１０】すなわち、本発明は、エストロゲンレセプ
ターのコ・アクチベーターを構成する蛋白質のアミノ酸
配列うち、１０〜５０アミノ酸残基からなる配列のペプ
チド（以下、特定ペプチドともいう）を選択して、かか
るペプチドのエストロゲンレセプターに対する反応と外
因性内分泌攪乱物質の存在とを関連付けて、外因性内分
泌攪乱物質を検出する、外因性内分泌攪乱物質の検出方
法（以下、本検出方法ともいう）を提供する発明であ
る。
【００１１】コ・アクチベーターとは、核内ホルモン受
容体と基本転写因子を仲介する、一種の転写調節因子で
あり、核内ホルモン受容体にリガンドが結合して、はじ
めて受容体に結合し、かかる結合により、基本転写因子
を受容体において作動させ得る因子である。すでに、エ
ストロゲンレセプターに対するコ・アクチベーター（Ｒ
ＡＣ３等）が見出され、これを構成する蛋白質のアミノ
酸配列も解析され、その遺伝子組換え蛋白質も得られて
いる（配列番号１に示すアミノ酸配列の蛋白質であ
る）。
【００１２】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を説明
する。本検出方法に用いる、特定ペプチドは、上述した
通り、エストロゲンレセプターのコ・アクチベーターを
構成する蛋白質のアミノ酸配列うち、１０〜５０アミノ
酸残基からなる配列のペプチドである。エストロゲンレ
セプターのコ・アクチベーターを構成する蛋白質のアミ
ノ酸配列の一例として、ＲＡＣ３蛋白質のアミノ酸配列
（配列番号１）の他に、ＳＲＣ１、ＴＩＦ１、ＴＩＦ
２、ＲＩＰ４０等が挙げられる。特定ペプチドのアミノ
酸残基数を１０〜５０アミノ酸残基としたのは、この範
囲のアミノ酸残基数であれば、エストロゲンレセプター
のコ・アクチベーターを構成する蛋白質の特徴を損なわ
ず、かつ、化学合成が可能であって実用的であるからで
ある。すなわち、特定ペプチドのアミノ酸残基数が、仮
に１０未満であれば、エストロゲンレセプターのコ・ア
クチベーターを構成する蛋白質の特徴を損なう可能性が
強くなり、５０を超えると、化学合成が難しくなり、コ
スト高になってしまう。なお、この範囲のアミノ酸残基
数のペプチドは、蛋白質自体等に比べて安定性に優れて
いるために、これを用いた検出系の検出感度に優れてい
る。
【００１３】また、特に好適な特定ペプチドのアミノ酸
残基数は、１０〜３０程度である。この範囲内であれ
ば、十分にエストロゲンレセプターのコ・アクチベータ
ーを構成する蛋白質の特徴が担保され、かつ、化学合成
も比較的容易である。
【００１４】特定ペプチドの一例として、配列番号２で
表されるアミノ酸配列のペプチドを挙げることができ
る。この配列番号２のアミノ酸配列（ＫＧＨＫＫＫＬＬ
ＱＬＬＴＣＳＳＤ：一文字標記）は、ＲＡＣ３蛋白質の
アミノ酸配列（配列番号１）の６１６〜６３０番目のア
ミノ酸配列に該当する。
【００１５】なお、ペプチドの化学合成は、通常公知の
方法、例えば、逐次伸長法、固相法、液相法等により行
うことが可能であり、特に、固相法を自動的に行うペプ
チド合成機を用いて、所望する特定ペプチドを合成する
ことが好適である。
【００１６】本検出方法においては、このようにして得
られる特定ペプチドのエストロゲンレセプターに対する
反応と外因性内分泌攪乱物質の存在とを関連付けて、外
因性内分泌攪乱物質を検出することができる。
【００１７】本発明における、外因性内分泌攪乱物質
は、本来は、女性ホルモンではない化学合成物質等が、
エストロゲンレセプターに対するリガンドとして作用
し、その結果、本来のエストロゲン以外に、女性ホルモ
ン（エストロゲン）様の作用を生体において惹起する物
質（以下、エストロゲン様物質ともいう）であり、この
ような性質を有する物質であれば、全て、本検出方法の
検出対象となり得る。かかるエストロゲン様物質として
は、例えば、ノニルフェノール等のアルキルフェノール
類、ビスフェノールＡ、フタル酸エステル類等が挙げら
れる。
【００１８】エストロゲンレセプターのリガンド結合部
位に、リガンド（エストロゲンやエストロゲン様物質）
が結合すると、エストロゲンレセプターの立体構造が変
化して、コ・アクチベーターが結合可能な状態となる。
このような状態のリガンドが結合したエストロゲンレセ
プターには、コ・アクチベーターと同様の結合特性を有
する特定ペプチドも結合可能であるために、この特定ペ
プチドのエストロゲンレセプターにおける結合、すなわ
ち、特定ペプチドの同レセプターに対する反応を検出
し、これを指標としてエストロゲンレセプターにおける
リガンド（アゴニスト）の結合と関連付けることで、エ
ストロゲンレセプターに結合したエストロゲン様物質を
検出することができる。
【００１９】従来から用いられてる競合法等では、アゴ
ニストとアンタゴニストを区別することが困難であっ
た。これに対して、上記のようなエストロゲンレセプタ
ーの構造変化は、アゴニストがリガンド結合部位に結合
した場合にのみ惹起されるので、本検出方法において
は、明確にアゴニスト、すなわち、エストロゲン活性を
有する物質のレセプターにおける結合のみを検出するこ
とが可能である。また、本来のエストロゲンレセプター
へのリガンドであるエストラジオールとアンタゴニスト
としての候補物質を競合させることにより、アンタゴニ
ストを検出することも可能である。これに加えて、本検
出方法では、コ・アクチベーター（蛋白質）ではなく、
より安定な低分子の特定ペプチドを、検出手段として用
いているので、より鋭敏にエストロゲン様物質を検出す
ることが可能である。
【００２０】エストロゲンレセプターに結合した特定ペ
プチドを検出するための方法は、特に限定されない。例
えば、担体に結合したエストロゲンレセプターに対し
て、被検物と標識を行った特定ペプチドを共存させて、
特定ペプチドのエストロゲンレセプターに対する結合工
程を行った後、かかる標識を検出することにより、エス
トロゲンレセプターに結合した特定ペプチドを検出する
ことができる。
【００２１】特定ペプチドに対する標識態様としては、
例えば、ビオチンを結合させた特定ペプチドに対して、
標識（発色酵素、蛍光色素、放射性同位元素等）を行っ
たアビジン又はストレプトアビジンを反応させて、アビ
ジン又はストレプトアビジンの標識を検出する態様や、
特定ペプチドに標識（発色酵素、蛍光色素、放射性同位
元素等）を直接施して、この標識を検出する態様等を挙
げることができる。
【００２２】このようにして、エストロゲンレセプター
に結合した特定ペプチドを検出することによって、エス
トロゲンレセプターのリガンド結合部位に結合したレセ
プター作動性のアゴニスト、すなわち、被検物における
エストロゲン様物質の検出を行うことができる。
【００２３】また、上述のように、競合法を用いて、エ
ストロゲンレセプターに対するアンタゴニストを検出す
ることも可能である。さらに、本発明においては、本検
出方法を行うための検出用キットをも提供する（以下、
これを本検出用キットともいう）。
【００２４】本検出用キットは、本検出方法を行うため
に必要な要素の全部又は一部を、その構成要素として含
むキットである。典型的には、固定化エストロゲンレセ
プター、及び、標識又は非標識の特定ペプチド、さらに
は特定ペプチドを検出するために必要な要素を最低限含
む態様が挙げられる。また、必要に応じて、希釈液、標
準液、基質液、反応停止液等をキットの要素として含め
ることもできる。
【００２５】なお、標識又は非標識の特定ペプチド、及
び、特定ペプチドを検出するために必要な要素の組み合
わせは、本検出用キットの検出態様に応じて選択するこ
とができる。
【００２６】例えば、本検出用キットにおいて、上記の
ビオチン−アビジンの反応を用いる場合には、ビオチン
標識を行った特定ペプチドと、発色酵素、蛍光色素、放
射性同位元素等で標識を行ったアビジン又はストレプト
アビジンを、キットの構成要素として含めることができ
る。
【００２７】また、標識を施した特定ペプチドの検出を
行う場合には、発色酵素、蛍光色素、放射性同位元素等
で標識を行った特定ペプチドを、キットの構成要素とし
て含めることができる。
【００２８】
【実施例】以下、本発明を実施例により、さらに具体的
に説明する。 １．プレート作製 エストロゲンレセプター（エストロゲンレセプターα：
宝酒造社）を、０．１Ｍ ＮａＨＣＯ3 (pH8.4) で５０
pM/mL に希釈し、これを９６穴マイクロタイタープレー
トに、１００μL/wellの割合で添加して、４℃で一晩放
置した。放置後、ＴＫＥＧ緩衝液（20mM Tris,100mM KC
l,0.25mM EDTA,5 ％Glycerol,0.5mM DTT,0.05 ％Tween2
0,pH7.4 ）で、各ウエルの洗浄を３回行った。洗浄後、
ブロッキング緩衝液（20mM Tris,100mM KCl,0.25mM EDT
A,5 ％Glycerol,1％BSA,pH7.4 ）を、１００μL/wellの
割合で添加して、４℃で一晩放置して、エストロゲンレ
セプター結合プレートを作製した。
【００２９】２．エストロゲン様物質の検出 エストロゲンレセプター結合プレートに、ＴＫＥＧ緩衝
液で適切な濃度に希釈した被検物、及び、ビオチン標識
コ・アクチベーターペプチド〔配列番号２で表されるア
ミノ酸配列の１６アミノ酸よりなるペプチド（島津SynP
roPep,PSSM-8により化学合成を行った）に、Biotmylati
on kit（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて、ペプチドのＮＨ
2 基にビオチンを結合してビオチン標識を施したもの〕
１００ng/100μL を、それぞれ１００μL ずつ添加し
て、４℃で一晩放置した。放置後、プレートをＴＫＥＧ
緩衝液で３回洗浄した後、ＨＲＰ標識ストレプトアビジ
ン（ザイメット社製：ＴＫＥＧ緩衝液で４０００倍希
釈）を、各ウエルに１００μL添加して、室温で１時間
放置した。再び、プレートをＴＫＥＧ緩衝液で３回洗浄
した後、各ウエルに発色液（ＴＭＢ：テトラメチルベン
チジン）を１００μL 添加して、室温で１０分間放置し
て発色を行い、４５０nmで吸光度測定を行った。
【００３０】被検物として、エストラジオールレセプ
ターのアンタゴニストであるタモキシフェンを用いた場
合の結果を第１図に示す。第１図において、縦軸は、４
５０nmの吸光度であり、横軸は被検物の濃度（対数表
示）である。第１図に示すように、βエストラジオール
は、１０-11 Ｍの低濃度から検出された。また、タモキ
シフェンの濃度に依存してエストラジオール活性が減少
することより、本検出方法により、アンタゴニストの検
出が可能であることが明らかになった。
【００３１】被検物として、βエストラジオールと代
表的なエストラジオール様物質であるノニルフェノール
を用いた場合の結果を第２図に示す。第２図において、
縦軸は、４５０nmの吸光度であり、横軸は被検物の濃度
（対数表示）である。第２図に示すように、βエストラ
ジオールは、１０-11 Ｍの低濃度から検出された。これ
に対してノニルフェノールは、１０-6Ｍの低濃度から検
出された。この結果より、本検出方法により、エストラ
ジオール様物質も感度良く検出することができることが
明らかとなった。
【００３２】
【発明の効果】本発明により、真に、鋭敏、かつ、簡便
な、外因性内分泌攪乱物質の検出方法が提供される。
【００３３】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Enbio Laboratories, Inc. <120> Method of Detecting Extrinsic Endocrine Disrupting Substances <130> PEBL5 <140> <141> <160> 2 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 1417 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ser Gly Leu Gly Glu Asn Leu Asp Pro Leu Ala Ser Asp Ser Arg 1 5 10 15 Lys Arg Lys Leu Pro Cys Asp Thr Pro Gly Gln Gly Leu Thr Cys Ser 20 25 30 Gly Glu Lys Arg Arg Arg Glu Gln Glu Ser Lys Tyr Ile Glu Glu Leu 35 40 45 Ala Glu Leu Ile Ser Ala Asn Leu Ser Asp Ile Asp Asn Phe Asn Val 50 55 60 Lys Pro Asp Lys Cys Ala Ile Leu Lys Glu Thr Val Arg Gln Ile Arg 65 70 75 80 Gln Ile Lys Glu Gln Gly Lys Thr Ile Ser Asn Asp Asp Asp Val Gln 85 90 95 Lys Ala Asp Val Ser Ser Thr Gly Gln Gly Val Ile Asp Lys Asp Ser 100 105 110 Leu Gly Pro Leu Leu Leu Gln Ala Leu Asp Gly Phe Leu Phe Val Val 115 120 125 Asn Arg Glu Ala Asn Ile Val Phe Val Ser Glu Asn Val Thr Gln Tyr 130 135 140 Leu Gln Tyr Lys Gln Glu Asp Leu Val Asn Thr Ser Val Tyr Asn Ile 145 150 155 160 Leu His Glu Glu Asp Arg Lys Asp Phe Leu Lys Asn Leu Pro Lys Ser 165 170 175 Thr Val Asn Gly Val Ser Trp Thr Asn Glu Pro Gln Arg Gln Lys Ser 180 185 190 His Thr Phe Asn Cys Arg Met Leu Met Lys Thr Pro His Asp Ile Leu 195 200 205 Glu Asp Ile Asn Ala Ser Pro Glu Met Arg Gln Arg Tyr Glu Thr Met 210 215 220 Gln Cys Phe Ala Leu Ser Gln Pro Arg Ala Met Met Glu Glu Gly Glu 225 230 235 240 Asp Leu Gln Ser Cys Met Ile Cys Val Ala Arg Arg Ile Thr Thr Gly 245 250 255 Glu Arg Thr Phe Pro Ser Asn Pro Glu Ser Phe Ile Thr Arg His Asp 260 265 270 Leu Ser Gly Lys Val Val Asn Ile Asp Thr Asn Ser Leu Arg Ser Ser 275 280 285 Met Arg Pro Gly Phe Glu Asp Ile Ile Arg Arg Cys Leu Gln Arg Phe 290 295 300 Phe Ser Leu Asn Asp Gly Gln Ser Trp Ser Gln Lys Arg His Tyr Gln 305 310 315 320 Glu Ala Tyr Leu Asn Gly His Ala Glu Thr Pro Val Tyr Arg Phe Ser 325 330 335 Leu Ala Asp Gly Thr Ile Val Thr Ala Gln Thr Lys Ser Lys Leu Phe 340 345 350 Arg Asn Pro Val Thr Asn Asp Arg His Gly Phe Val Ser Thr His Phe 355 360 365 Leu Gln Arg Glu Gln Asn Gly Tyr Arg Pro Asn Pro Asn Pro Val Gly 370 375 380 Gln Gly Ile Arg Pro Pro Met Ala Gly Cys Asn Ser Ser Val Gly Gly 385 390 395 400 Met Ser Met Ser Pro Asn Gln Gly Leu Gln Met Pro Ser Ser Arg Ala 405 410 415 Tyr Gly Leu Ala Asp Pro Ser Thr Thr Gly Gln Met Ser Gly Ala Arg 420 425 430 Tyr Gly Gly Ser Ser Asn Ile Ala Ser Leu Thr Pro Gly Pro Gly Met 435 440 445 Gln Ser Pro Ser Ser Tyr Gln Asn Asn Asn Tyr Gly Leu Asn Met Ser 450 455 460 Ser Pro Pro His Gly Ser Pro Gly Leu Ala Pro Asn Gln Gln Asn Ile 465 470 475 480 Met Ile Ser Pro Arg Asn Arg Gly Ser Pro Lys Ile Ala Ser His Gln 485 490 495 Phe Ser Pro Val Ala Gly Val His Ser Pro Met Ala Ser Ser Gly Asn 500 505 510 Thr Gly Asn His Ser Phe Ser Ser Ser Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala 515 520 525 Ile Ser Glu Gly Val Gly Thr Ser Leu Leu Ser Thr Leu Ser Ser Pro 530 535 540 Gly Pro Lys Leu Asp Asn Ser Pro Asn Met Asn Ile Thr Gln Pro Ser 545 550 555 560 Lys Val Ser Asn Gln Asp Ser Lys Ser Pro Leu Gly Phe Tyr Cys Asp 565 570 575 Gln Asn Pro Val Glu Ser Ser Asn Cys Gln Ser Asn Ser Arg Asp His 580 585 590 Leu Ser Asp Lys Glu Ser Lys Glu Ser Ser Val Glu Gly Ala Glu Asn 595 600 605 Gln Arg Gly Pro Leu Glu Ser Lys Gly His Lys Lys Leu Leu Gln Leu 610 615 620 Leu Thr Cys Ser Ser Asp Asp Arg Gly His Ser Ser Leu Thr Asn Ser 625 630 635 640 Pro Leu Asp Ser Ser Cys Lys Glu Ser Ser Val Ser Val Thr Ser Pro 645 650 655 Ser Gly Val Ser Ser Ser Thr Ser Gly Gly Val Ser Ser Thr Ser Asn 660 665 670 Met His Gly Ser Leu Leu Gln Glu Lys His Arg Ile Leu His Lys Leu 675 680 685 Leu Gln Asn Gly Asn Ser Pro Ala Glu Val Ala Lys Ile Thr Ala Glu 690 695 700 Ala Thr Gly Lys Asp Thr Ser Ser Ile Thr Ser Cys Gly Asp Gly Asn 705 710 715 720 Val Val Lys Gln Glu Gln Leu Ser Pro Lys Lys Lys Glu Asn Asn Ala 725 730 735 Leu Leu Arg Tyr Leu Leu Asp Arg Asp Asp Pro Ser Asp Ala Leu Ser 740 745 750 Lys Glu Leu Gln Pro Gln Val Glu Gly Val Asp Asn Lys Met Ser Gln 755 760 765 Cys Thr Ser Ser Thr Ile Pro Ser Ser Ser Gln Glu Lys Asp Pro Lys 770 775 780 Ile Lys Thr Glu Thr Ser Glu Glu Gly Ser Gly Asp Leu Asp Asn Leu 785 790 795 800 Asp Ala Ile Leu Gly Asp Leu Thr Ser Ser Asp Phe Tyr Asn Asn Ser 805 810 815 Ile Ser Ser Asn Gly Ser His Leu Gly Thr Lys Gln Gln Val Phe Gln 820 825 830 Gly Thr Asn Ser Leu Gly Leu Lys Ser Ser Gln Ser Val Gln Ser Ile 835 840 845 Arg Pro Pro Tyr Asn Arg Ala Val Ser Leu Asp Ser Pro Val Ser Val 850 855 860 Gly Ser Ser Pro Pro Val Lys Asn Ile Ser Ala Phe Pro Met Leu Pro 865 870 875 880 Lys Gln Pro Met Leu Gly Gly Asn Pro Arg Met Met Asp Ser Gln Glu 885 890 895 Asn Tyr Gly Ser Ser Met Gly Gly Pro Asn Arg Asn Val Thr Val Thr 900 905 910 Gln Thr Pro Ser Ser Gly Asp Trp Gly Leu Pro Asn Ser Lys Ala Gly 915 920 925 Arg Met Glu Pro Met Asn Ser Asn Ser Met Gly Arg Pro Gly Gly Asp 930 935 940 Tyr Asn Thr Ser Leu Pro Arg Pro Ala Leu Gly Gly Ser Ile Pro Thr 945 950 955 960 Leu Pro Leu Arg Ser Asn Ser Ile Pro Gly Ala Arg Pro Val Leu Gln 965 970 975 Gln Gln Gln Gln Met Leu Gln Met Arg Pro Gly Glu Ile Pro Met Gly 980 985 990 Met Gly Ala Asn Pro Tyr Gly Gln Ala Ala Ala Ser Asn Gln Leu Gly 995 1000 1005 Ser Trp Pro Asp Gly Met Leu Ser Met Glu Gln Val Ser His Gly Thr 1010 1015 1020 Gln Asn Arg Pro Leu Leu Arg Asn Ser Leu Asp Asp Leu Val Gly Pro 1025 1030 1035 1040 Pro Ser Asn Leu Glu Gly Gln Ser Asp Glu Arg Ala Leu Leu Asp Gln 1045 1050 1055 Leu His Thr Leu Leu Ser Asn Thr Asp Ala Thr Gly Leu Glu Glu Ile 1060 1065 1070 Asp Arg Ala Leu Gly Ile Pro Glu Leu Val Asn Gln Gly Gln Ala Leu 1075 1080 1085 Glu Pro Lys Gln Asp Ala Phe Gln Gly Gln Glu Ala Ala Val Met Met 1090 1095 1100 Asp Gln Lys Ala Gly Leu Tyr Gly Gln Thr Tyr Pro Ala Gln Gly Pro 1105 1110 1115 1120 Gln Met Gln Gly Gly Phe His Leu Gln Gly Gln Ser Pro Ser Phe Asn 1125 1130 1135 Ser Met Met Asn Gln Met Asn Gln Gln Gly Asn Phe Pro Leu Gln Gly 1140 1145 1150 Met His Pro Arg Ala Asn Ile Met Arg Pro Arg Thr Asn Thr Pro Lys 1155 1160 1165 Gln Leu Arg Met Gln Leu Gln Gln Arg Leu Gln Gly Gln Gln Phe Leu 1170 1175 1180 Asn Gln Ser Arg Gln Ala Leu Glu Leu Lys Met Glu Asn Pro Thr Ala 1185 1190 1195 1200 Gly Gly Ala Ala Val Met Arg Pro Met Met Gln Pro Gln Gln Gly Phe 1205 1210 1215 Leu Asn Ala Gln Met Val Ala Gln Arg Ser Arg Glu Leu Leu Ser His 1220 1225 1230 His Phe Arg Gln Gln Arg Val Ala Met Met Met Gln Gln Gln Gln Gln 1235 1240 1245 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 1250 1255 1260 Gln Gln Gln Gln Gln Thr Gln Ala Phe Ser Pro Pro Pro Asn Val Thr 1265 1270 1275 1280 Ala Ser Pro Ser Met Asp Gly Leu Leu Ala Gly Pro Thr Met Pro Gln 1285 1290 1295 Ala Pro Pro Gln Gln Phe Pro Tyr Gln Pro Asn Tyr Gly Met Gly Gln 1300 1305 1310 Gln Pro Asp Pro Ala Phe Gly Arg Val Ser Ser Pro Pro Asn Ala Met 1315 1320 1325 Met Ser Ser Arg Met Gly Pro Ser Gln Asn Pro Met Met Gln His Pro 1330 1335 1340 Gln Ala Ala Ser Ile Tyr Gln Ser Ser Glu Met Lys Gly Trp Pro Ser 1345 1350 1355 1360 Gly Asn Leu Ala Arg Asn Ser Ser Phe Ser Gln Gln Gln Phe Ala His 1365 1370 1375 Gln Gly Asn Pro Ala Val Tyr Ser Met Val His Met Asn Gly Ser Ser 1380 1385 1390 Gly His Met Gly Gln Met Asn Met Asn Pro Met Pro Met Ser Gly Met 1395 1400 1405 Pro Met Gly Pro Asp Gln Lys Tyr Cys 1410 1415 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Lys Gly His Lys Lys Lys Leu Leu Gln Leu Leu Thr Cys Ser Ser Asp 1 5 10 15
【図面の簡単な説明】
【図１】本検出方法を用いて、エストラジオールレセプ
ターに対するアンタゴニストを検出した結果を示した図
面である。
【図２】本検出方法を用いて、エストラジオール様物質
を検出した結果を示した図面である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA24 DA36 DA80 FA29 FB01 FB03 FB07 FB20 GC10 JA20

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】エストロゲンレセプターのコ・アクチベー
    ターを構成する蛋白質のアミノ酸配列うち、１０〜５０
    アミノ酸残基からなる配列のペプチドを選択して、かか
    るペプチドのエストロゲンレセプターに対する反応と外
    因性内分泌攪乱物質の存在とを関連付けて、外因性内分
    泌攪乱物質を検出する、外因性内分泌攪乱物質の検出方
    法。
  2. 【請求項２】エストロゲンレセプターのコ・アクチベー
    ターを構成する蛋白質のアミノ酸配列が、配列番号１で
    示されるアミノ酸配列である、請求項１記載の外因性内
    分泌攪乱物質の検出方法。
  3. 【請求項３】エストロゲンレセプターのコ・アクチベー
    ターを構成する蛋白質のアミノ酸配列うち、１０〜５０
    アミノ酸残基からなる配列のペプチドが、配列番号２で
    示されるペプチドである、請求項１または２記載の外因
    性内分泌攪乱物質の検出方法。
  4. 【請求項４】請求項１〜３のいずれかの請求項記載の検
    出方法を行うための検出用キット。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998045423A1 (en) * 1997-04-04 1998-10-15 The Regents Of The University Of California Methods to screen for transcription factor-coactivator interactions
WO1999050658A2 (en) * 1998-03-30 1999-10-07 The Regents Of The University Of California Methods and compounds for modulating nuclear receptor activity

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